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TW202509079A - 雙特異性抗體 - Google Patents

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TW202509079A
TW202509079A TW113140164A TW113140164A TW202509079A TW 202509079 A TW202509079 A TW 202509079A TW 113140164 A TW113140164 A TW 113140164A TW 113140164 A TW113140164 A TW 113140164A TW 202509079 A TW202509079 A TW 202509079A
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TW
Taiwan
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amino acid
acid sequence
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arm
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TW113140164A
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English (en)
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柴山史朗
手智也
馬克 特爾斯白
克夫 科內利斯 亞德里恩 迪
羅 彼得 福克 凡
林斯 克羅斯特
羅伯特斯 科內利斯 羅弗斯
Original Assignee
日商小野藥品工業股份有限公司
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Abstract

本發明之課題係提供一種用於對自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制或治療的新穎藥劑。
本發明之發明人等專心檢討的結果，著眼於PD-1/CD19雙特異性抗體等作為可解決該課題之物質，確認該雙特異性抗體可成為用於自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制或治療的新穎藥劑。再者，確認該雙特異性抗體具有容許PD-1與屬於其配體之PD-L1之間的相互作用的特徴。

Description

雙特異性抗體
本發明係關於可與PD-1及CD19分別特異性結合之雙特異性抗體(以下，簡稱為「PD-1/CD19雙特異性抗體」)或其抗體斷片(以下，將此等簡稱為「PD-1/CD19雙特異性抗體等」)、包含其作為有效成分的醫藥組成物以及彼等之醫藥治療用途。
PD-1為屬於免疫球蛋白家族的免疫抑制受體，為具有抑制B細胞之免疫活化信號之功能的分子，其中該B細胞係藉由來自抗原受體之刺激而活化。從PD-1基因剔除小鼠之解析等，已知PD-1信號在自體免疫性擴張型心肌症、狼瘡樣症候群、自體免疫性腦脊髓炎、全身性紅斑性狼瘡、移植物對抗宿主疾病(Graft-versus-host disease)、I型糖尿病及風濕性關節炎等自體免疫疾病之抑制上扮演重要的角色。因此，指出增強PD-1信號之物質可成為自體免疫疾病等之預防或治療劑。
另一方面，CD19為表現於B細胞的膜蛋白，為與B細胞受體複合物一起將刺激傳達至B細胞的分子。
關於以預防或治療自體免疫疾病為目的之PD-1雙特異性抗體，迄今已有數個報導(專利文獻1至3)，惟，其一標的係屬於T細胞受體複合物之成員的CD3。
再者，雖亦有以癌治療為目的之關於以PD-1及CD19為標的之雙特異性抗體的報導(專利文獻4)，然而關於以自體免疫疾病之預防、症狀之進展抑制、復發抑制或治療為目的之PD-1/CD19雙特異性抗體尚未被報導。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1]國際公開第2003/011911號
[專利文獻2]國際公開第2004/072286號
[專利文獻3]國際公開第2013/022091號
[專利文獻4]中國專利申請公開第106939050號說明書
本發明之目的，為提供一種自體免疫疾病等之預防、症狀進展抑制、復發抑制或治療用的新穎藥劑。
本發明之發明人等專心檢討的結果，著眼於本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體作為解決該課題之物質，進而完成本發明。
再者，本發明之發明人等，確認該PD-1/CD19雙特異性抗體具有容許PD-1與為其配體之PD-L1間之相互作用的特徴。另外，本發明之發明人等對構成該PD-1/CD19雙特異性抗體之與CD19特異性結合的第二臂之重鏈，置換或附加一個或複數個胺基酸，藉此，在其精製步驟中，發現容易與副產物分離的PD-1/CD19雙特異性抗體。
亦即，本發明如下述。
[1]一種PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，係與PD-1及CD19分別特異性結合，並且，具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD19特異性結合之第二臂，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂具有選自下列(A)至(E)之任一重鏈可變區域(以下，將「重鏈可變區域」簡稱為「VH」)：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號6之胺基酸序列構成的重鏈可變區域之互補性決定區域1(以下，將「重鏈可變區域之互補性決定區域1」簡稱為VH-CDR1)、
(b)由序列編號7之胺基酸序列構成的重鏈可變區域之互補性決定區域2(以下，將「重鏈可變區域之互補性決定區域2」簡稱為VH-CDR2)、及
(c)由序列編號8之胺基酸序列構成的重鏈可變區域之互補性決定區域3(以下，將「重鏈可變區域之互補性決定區域3」簡稱為VH-CDR3)，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號9之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號10之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號11之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號12之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號13之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號14之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號15之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號16之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號17之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號18之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號19之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號20之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
該與CD19特異性結合之第二臂具有選自下列(A)至(E)之任一VH：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
在該與PD-1特異性結合之第一臂中之選自VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3之任一個或複數個VH-CDR中，各個任意1至5個胺基酸殘基可被置換成其他胺基酸，及/或在該與CD19特異性結合之第二臂中之選自VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3之任一個或複數個VH-CDR中，各個任意1至5個胺基酸殘基可被置換成其他胺基酸。
[2]如前項[1]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂具有選自下列(A)至(E)之任一VH：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號6之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號7之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號8之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號9之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號10之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號11之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號12之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號13之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號14之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號15之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號16之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號17之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號18之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號19之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號20之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
該與CD19特異性結合之第二臂具有選自下列(A)至(E)之任一VH：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[3]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號6之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號7之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號8之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[4]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號9之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號10之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號11之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[5]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號12之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號13之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號14之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[6]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號15之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號16之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號17之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[7]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號18之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號19之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號20之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)與CD19特異性結合之第二臂的VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[8]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號6之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號7之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號8之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[9]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號6之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號7之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號8之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[10]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號6之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號7之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號8之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[11]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號6之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號7之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號8之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[12]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號6之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號7之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號8之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[13]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號9之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號10之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號11之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[14]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號9之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號10之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號11之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[15]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號9之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號10之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號11之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[16]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號9之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號10之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號11之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[17]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號9之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號10之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號11之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[18]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號12之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號13之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號14之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[19]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號12之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號13之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號14之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[20]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號12之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號13之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號14之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[21]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號12之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號13之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號14之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[22]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號12之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號13之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號14之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[23]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號15之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號16之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號17之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[24]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號15之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號16之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號17之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[25]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號15之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號16之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號17之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[26]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號15之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號16之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號17之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[27]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號15之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號16之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號17之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[28]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號18之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號19之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號20之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[29]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號18之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號19之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號20之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[30]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號18之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號19之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號20之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[31]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號18之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號19之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號20之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)之：
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[32]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
(i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號18之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號19之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號20之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
(ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[33]如前項[1]至[32]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH之框架(以下，將「框架」簡稱為FR)區域中，框架1(以下，簡稱為FR1)、框架2(以下，簡稱為FR2)及框 架3(以下，簡稱為FR3)區域，係分別對應於生殖細胞系列型V基因IGHV7-4-1或其經受體細胞突變之該基因所編碼的胺基酸序列。
[34]如前項[33]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH之框架4(以下，將「框架4」簡稱為FR4)區域，係由生殖細胞系列型J基因JH6c或其經受體細胞突變之該基因所編碼的胺基酸序列(惟，排除包含於VH-CDR3區域之胺基酸序列)構成。
[35]如前項[33]或[34]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中該與PD-1特異性結合之第一臂的VH之FR區域係包含FR1區域，該FR1區域係由生殖細胞系列型V基因IGHV7-4-1之可經受體細胞突變的該基因所編碼，並且，藉由該體細胞突變，序列編號21之胺基酸序列中之位置13之離胺酸被置換成麩醯胺酸、位置16之丙胺酸被置換成纈胺酸、或位置19之離胺酸被置換成甲硫胺酸，或者經彼等之任意複數個之組合置換或可被彼等之任意複數個之組合置換。
[36]如前項[33]至[35]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH之FR區域係包含FR2區域，該FR2區域係由生殖細胞系列型V基因IGHV7-4-1之可經受體細胞突變的該基因所編碼，並且，藉由該體細胞突變，序列編號21之胺基酸序列中之位置37的纈胺酸經置換或可被置換成白胺酸。
[37]如前項[33]至[36]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH之FR區域係包含FR3區域，該FR3區域係由生殖細胞系列型V基因IGHV7-4-1之可經受體細胞突變的該基因所編碼，並且，藉由該體細胞突變，序列編號21之胺基酸序列中之位置 77的絲胺酸被置換成蘇胺酸、或位置84之半胱胺酸被置換成絲胺酸或天冬醯胺酸，或者經彼等之任意複數個之組合置換或可被彼等之任意複數個之組合置換。
[38]如前項[33]至[37]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH之FR4區域，係由生殖細胞系列型J基因JH6c之可經受體細胞突變的該基因(惟，排除編碼VH-CDR3區域之基因區域)編碼，其FR4區域之胺基酸序列(Trp-Gly-Lys-Gly-Thr-Thr*-Val-Thr-Val-Ser-Ser)(序列編號61)中之離胺酸(Lys)經置換或可被置換成麩醯胺酸或天冬醯胺酸，及/或*記號之蘇胺酸(Thr)經置換或可被置換成白胺酸。
[39]如前項[1]至[38]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂的VH之FR區域中，FR1、FR2及FR3區域分別對應於生殖細胞系列型V基因IGHV5-51或其經受體細胞突變之該基因所編碼的胺基酸序列。
[40]如前項[39]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂的VH之FR區域，係包含FR1區域，該FR1區域係由生殖細胞系列型V基因IGHV5-51之可經受體細胞突變的該基因所編碼，並且，藉由該體細胞突變，序列編號22之胺基酸序列中之位置1之麩胺酸被置換成麩醯胺酸、位置14之脯胺酸被置換成絲胺酸、位置27之酪胺酸被置換成苯丙胺酸、或位置30之蘇胺酸被置換成異白胺酸，或者經彼等之任意複數個之組合置換或可被彼等之任意複數個之組合置換。
[41]如前項[39]或[40]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂的VH之FR區域，係包含生殖細胞系列型V基因IGHV5-51之可經受體細胞突變的該基因所編碼之FR2區域。
[42]如前項[39]至[41]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂的VH之FR區域，係包含FR3區域，該FR3區域係由生殖細胞系列型V基因IGHV5-51之可經受體細胞突變的該基因所編碼並且，，藉由該體細胞突變，序列編號22之胺基酸序列中之位置76之異白胺酸被置換成苯丙胺酸、位置77之絲胺酸被置換成蘇胺酸或天冬醯胺酸、位置78之蘇胺酸被置換成纈胺酸、位置84之絲胺酸被置換成天冬醯胺酸、位置93之甲硫胺酸被置換成異白胺酸或白胺酸、或位置97之丙胺酸被置換成纈胺酸，或者經彼等之任意複數個之組合置換或可被彼等之任意複數個之組合置換。
[43]如前項[1]至[42]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH係由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中之任一個胺基酸序列構成，或者由與該VH之胺基酸序列至少80%、90%、95%、98%或99%相同的胺基酸序列構成。
[44]如前項[1]至[43]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH係由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中的任一個胺基酸序列構成。
[45]如前項[1]至[44]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂的VH係由選自序列編號30、序列 編號31、序列編號32、序列編號33及序列編號34中之任一個胺基酸序列構成，或者由與該VH之胺基酸序列至少80%、90%、95%、98%或99%相同的胺基酸序列構成。
[46]如前項[1]至[45]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂的VH，係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33及序列編號34中的任一個胺基酸序列構成，並且，該序列中第114號之麩醯胺酸經置換或可被置換成精胺酸的胺基酸序列。
[47]如前項[1]至[45]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂的VH，係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中的任一個胺基酸序列構成。
[48]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH係由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中的任一個胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中的任一個胺基酸序列構成。
[49]一種PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其係具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD19特異性結合之第二臂，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH係由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中的任一個胺基酸序列構成，或由與該VH之胺基酸序列至少 80%、90%、95%、98%或99%相同的胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中的任一個胺基酸序列構成，或由與該VH之胺基酸序列至少80%、90%、95%、98%或99%相同的胺基酸序列構成。
[50]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號1之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中的任一個胺基酸序列構成。
[51]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號2之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中的任一個胺基酸序列構成。
[52]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號3之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中的任一個胺基酸序列構成。
[53]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號4之胺基酸序列構成；該 與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中的任一個胺基酸序列構成。
[54]如前項[1]或[2]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號5之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中的任一個胺基酸序列構成。
[55]如前項[1]、[2]或[8]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號1之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號30或序列編號62之胺基酸序列構成。
[56]如前項[1]、[2]或[9]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號1之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號31或序列編號63之胺基酸序列構成。
[57]如前項[1]、[2]或[10]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號1之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號32或序列編號64之胺基酸序列構成。
[58]如前項[1]、[2]或[11]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號1之胺基酸序列構 成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號33或序列編號65之胺基酸序列構成。
[59]如前項[1]、[2]或[12]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號1之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號34或序列編號66之胺基酸序列構成。
[60]如前項[1]、[2]或[13]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號2之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號30或序列編號62之胺基酸序列構成。
[61]如前項[1]、[2]或[14]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號2之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號31或序列編號63之胺基酸序列構成。
[62]如前項[1]、[2]或[15]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號2之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號32或序列編號64之胺基酸序列構成。
[63]如前項[1]、[2]或[16]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號2之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號33或序列編號65之胺基酸序列構成。
[64]如前項[1]、[2]或[17]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號2之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號34或序列編號66之胺基酸序列構成。
[65]如前項[1]、[2]或[18]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號3之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號30或序列編號62之胺基酸序列構成。
[66]如前項[1]、[2]或[19]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號3之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號31或序列編號63之胺基酸序列構成。
[67]如前項[1]、[2]或[20]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號3之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號32或序列編號64之胺基酸序列構成。
[68]如前項[1]、[2]或[21]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號3之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號33或序列編號65之胺基酸序列構成。
[69]如前項[1]、[2]或[22]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號3之胺基酸序列構 成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號34或序列編號66之胺基酸序列構成。
[70]如前項[1]、[2]或[23]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號4之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號30或序列編號62之胺基酸序列構成。
[71]如前項[1]、[2]或[24]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號4之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號31或序列編號63之胺基酸序列構成。
[72]如前項[1]、[2]或[25]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號4之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號32或序列編號64之胺基酸序列構成。
[73]如前項[1]、[2]或[26]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號4之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號33或序列編號65之胺基酸序列構成。
[74]如前項[1]、[2]或[27]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號4之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號34或序列編號66之胺基酸序列構成。
[75]如前項[1]、[2]或[28]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號5之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號30或序列編號62之胺基酸序列構成。
[76]如前項[1]、[2]或[29]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號5之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號31或序列編號63之胺基酸序列構成。
[77]如前項[1]、[2]或[30]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號5之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號32或序列編號64之胺基酸序列構成。
[78]如前項[1]、[2]或[31]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號5之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號33或序列編號65之胺基酸序列構成。
[79]如前項[1]、[2]或[32]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號5之胺基酸序列構成；該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由序列編號34或序列編號66之胺基酸序列構成。
[80]如前項[1]至[79]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂及/或該與CD19特異性結合之第二 臂，分別具有下列(a)至(c)之輕鏈可變區域(以下，將「輕鏈可變區域」簡稱為「VL」)：
(a)由序列編號26之胺基酸序列構成的輕鏈可變區域之互補性決定區域1(以下，將「輕鏈可變區域之互補性決定區域1」簡稱為VL-CDR1)、
(b)由序列編號27之胺基酸序列構成的輕鏈可變區域之互補性決定區域2(以下，將「輕鏈可變區域之互補性決定區域2」簡稱為VL-CDR2)、及
(c)由序列編號28之胺基酸序列構成的輕鏈可變區域之互補性決定區域3(以下，將「輕鏈可變區域之互補性決定區域3」簡稱為VL-CDR3)。
[81]如前項[1]至[80]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂及/或該與CD19特異性結合之第二臂，分別具有由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
[82]一種PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其係與PD-1及CD19分別特異性結合，且具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD19特異性結合之第二臂，並且，包含：
(A)與PD-1特異性結合之第一臂，係具有由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL，以及
(B)與CD19特異性結合之第二臂，係具有由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
[83]一種PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其係與PD-1及CD19分別特異性結合，並且，具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD19特異性結合之第二臂，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂係與下列(1)或(2)交叉競爭對PD-1之結合：(1)與PD-1特異性結合的第一臂，係具有選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中之任一個胺基酸序列構成的VH以及序列編號25之胺基酸序列構成的VL；(2)與PD-1特異性結合的單株抗體之可變區域，係由該VH及VL構成者。
[84]一種PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其係與PD-1及CD19分別特異性結合，並且，具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD19特異性結合之第二臂，其中，該與PD-1特異性結合的第一臂與下列(1)或(2)交叉競爭對PD-1之結合：(1)與PD-1特異性結合的第一臂，係具有由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL，且；(2)與PD-1特異性結合的單株抗體的可變區域，係由該VH及VL構成者。
[85]如前項[83]或[84]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合的第二臂進一步與下列(1)或(2)交叉競爭對CD19之結合：(1)與CD19特異性結合的第二臂，係具有由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL；(2)與CD19特異性結合的單株抗體之可變區域，係由該VH及VL構成者。
[86]如前項[83]或[84]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合的第二臂進一步與下列(1)或(2)交叉競爭對CD19之結合：(1)與CD19特異性結合的第二臂，係具有由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL；(2)與CD19特異性結合的單株抗體之可變區域，係由該VH及VL構成者。
[87]如前項[83]或[84]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂係選自下列(A)至(E)之任一VH：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
[88]如前項[83]或[84]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中的任一個胺基酸序列構成，或由與該VH之胺基酸序列至少80%、90%、95%、98%或99%相同的胺基酸序列構成。
[89]如前項[83]或[84]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合的第二臂之VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中的任一個胺基酸序列構成。
[90]如前項[83]至[89]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合的第一臂及/或該與CD19特異性結合的第二臂具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號26之胺基酸序列構成的VL-CDR1、
(b)由序列編號27之胺基酸序列構成的VL-CDR2、及
(c)由序列編號28之胺基酸序列構成的VL-CDR3。
[91]如前項[83]至[89]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合的第一臂及/或該與CD19特異性結合的第二臂，具有由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
[92]如前項[1]至[91]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該PD-1/CD19雙特異性抗體為IgG抗體。
[93]如前項[92]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，前項[92]記載之IgG抗體為IgG1抗體或IgG4抗體。
[94]如前項[92]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，前項[92]記載之IgG抗體為IgG1抗體。
[95]如前項[92]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，前項[92]記載之IgG抗體為IgG4抗體。
[96]如前項[94]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，前項[94]記載之IgG1抗體中的2個重鏈恆定區域中，EU編號系統的第235號之白胺酸，分別被置換成甘胺酸，及/或第236號之甘胺酸分別被置換成精胺酸。
[97]如前項[94]或[96]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈之恆定區域中，根據EU編號系統的第351號之白胺酸及第366號之蘇胺酸皆被置換成離胺酸，具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈之恆定區域中，第351號之白胺酸被置換成天冬胺酸，且第368號之白胺酸被置換成麩胺酸。
[98]如前項[94]或[96]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈之恆定區域中，根據EU編號系統的第351號之白胺酸被置換成天冬胺酸，且第368號之白胺酸被置換成 麩胺酸；具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈之恆定區域中，第351號之白胺酸及第366號之蘇胺酸皆被置換成離胺酸。
[99]如前項[94]及[96]至[98]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，前項[94]及[96]至[98]中任一項記載之IgG1抗體的2個重鏈恆定區域中，根據EU編號系統的第447號之離胺酸分別欠缺。
[100]如前項[95]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，前項[95]記載之IgG4抗體中的2個重鏈恆定區域中，根據EU編號系統的228號之絲胺酸分別被置換成脯胺酸。
[101]如前項[94]及[96]至[99]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈，係在其C末端進一步具有Gly(甘胺酸)、Gly-Lys-Lys-Ala(序列編號67)、Gly-Lys-Ala-Lys-Ala(序列編號68)、Gly-Arg-Arg-Ala(序列編號69)或Gly-Arg-Ala-Arg-Ala(序列編號70)。
[102]如前項[1]至[94]、[96]、[98]、[99]及[101]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈，係包含由序列編號23之胺基酸序列構成的重鏈恆定區域。
[103]如前項[1]至[94]、[96]、[98]、[99]、[101]及[102]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈，係包含由選自序列編號24、序列編號71、序列編號72、序列編號73、序列編號74及序列編號75中之任一個胺基酸序列構成的重鏈恆定區域。
[104]如前項[1]至[103]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該具有與PD-1特異性結合之第一臂之VL的輕鏈及/或該具有與CD19特異性結合之第二臂之VL的輕鏈，係包含由序列編號29之胺基酸序列構成的輕鏈恆定區域。
[105]一種PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其係與PD-1及CD19分別特異性結合，並且，具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD19特異性結合之第二臂，其中，
(A)具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈，係包含由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號23之胺基酸序列構成的重鏈恆定區域，
(B)具有與PD-1特異性結合之第一臂之VL的輕鏈，係包含由序列編號25之胺基酸序列構成的VL及由序列編號29之胺基酸序列構成的輕鏈恆定區域，
(C)具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈，係包含由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號24之胺基酸序列構成的重鏈恆定區域，及
(D)具有與CD19特異性結合之第二臂之VL的輕鏈，係包含由序列編號25之胺基酸序列構成的VL及由序列編號29之胺基酸序列構成的輕鏈恆定區域。
[106]如前項[1]至[105]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂容許PD-1與PD-L1間之相互作用。
[107]如前項[1]至[106]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，由該與PD-1特異性結合之第一臂的重鏈及輕鏈所構成的複合物之等電點為約7.4至約7.7(較佳為約7.5至約7.6)。
[108]如前項[1]至[107]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，由該與CD19特異性結合之第二臂的重鏈及輕鏈所構成的複合物之等電點為約8.3至約8.8(較佳為約8.4至約8.6)。
[109]如前項[1]至[108]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其係在投予中或投予後24小時以內，充分地減低血中或組織中之細胞激素產生。
[110]如前項[1]至[108]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂容許PD-1及PD-L1間之相互作用，且充分地減低細胞激素產生。
[111]如前項[109]或[110]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，細胞激素至少為IL-2、IFN-γ或TNF-α。
[112]如前項[1]至[111]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其係藉由與在相同B細胞上分別表現的PD-1及CD19結合，而抑制B細胞之活化。
[113]如前項[1]至[111]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其係抑制T細胞(較佳為記憶T細胞)之活化。
[114]如前項[113]記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其係藉由分別與在B細胞上表現的CD19及T細胞上表現的PD-1結合，而抑制T細胞之活化。
[115]如前項[1]至[114]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，PD-1及CD19分別為人類PD-1及人類CD19。
[116]如前項[1]至[115]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該PD-1/CD19雙特異性抗體為單株抗體。
[117]如前項[1]至[116]中任一項記載之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該PD-1/CD19雙特異性抗體為單離抗體。
[1-1]一種醫藥組成物，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分。
[1-2]如前項[1-1]記載之醫藥組成物，其進一步包含至少一種藥學上可容許之載體。
[2-1]一種自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分。
[2-2]如前項[2-1]記載之劑，其中，該自體免疫疾病為貝賽特氏症候群(Behcet's disease)、全身性紅斑性狼瘡、慢性圓板狀紅斑性狼瘡、多發性硬化症(全身性硬皮症、進行性全身性硬化症)、硬皮症、多發性肌炎、皮膚肌炎、結節性動脈周圍炎(結節性多發動脈炎、顯微鏡性多發血管炎)、大動脈炎症候群(高安動脈炎)、惡性關節風濕病、關節風濕病、青年性特發性關節炎、脊椎關節炎、混合性結締組織病、薛格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、成人史迪爾氏病(Adult Onset Still's Disease)、血管炎、過敏性肉芽腫性血管炎、過敏性血管炎、類風濕血管炎、大型血管炎、ANCA關連血管炎(例如，多發血管炎性肉芽 腫症及嗜酸性球性多發血管炎性肉芽腫症)、Cogan氏症候群、RS3PE症候群、顳動脈炎、風濕性多發肌痛症、纖維肌痛症、抗磷脂質抗體症候群、嗜酸性球性肌膜炎、IgG4關連疾病(例如，原發性硬化性膽管炎、自體免疫性胰炎等)、格林巴利症候群(Guillain-Barre Syndrome)、重症肌無力症、慢性萎縮性胃炎、自體免疫性肝炎、非酒精性脂肪肝炎、原發性膽汁性肝硬變、古德巴斯捷症候群(Goodpasture syndrome)、急速進行性絲球體腎炎、巨紅血球性貧血、自體免疫性溶血性貧血、惡性貧血、自體免疫性嗜中性球減少症、特發性血小板減少性紫斑病、Basedow病(格雷夫茲病(甲狀腺功能亢進症))、橋本病、自體免疫性副腎功能不全、原發性甲狀腺功能降低症、艾迪生氏病(Addison's disease)(慢性副腎皮質功能降低症)、特發性艾迪生氏病、I型糖尿病、緩慢進行性I型糖尿病(成人潛在性自體免疫性糖尿病)、局部性硬皮症、乾癬、乾癬性關節炎、水皰性類天皰瘡、天皰瘡、類天皰瘡、妊娠性皰疹、線狀IgA水皰性皮膚症、後天性表皮水皰症、圓形脫毛症、白斑、尋常性白斑、視神經脊髓炎、慢性炎症性脫髓性多發神經炎、多灶性運動神經病、結節病、巨細胞性動脈炎、肌萎縮性側索硬化症、原田病、自體免疫性視神經症、特發性無精子症、習慣性流產、炎症性腸疾病(例如，潰瘍性大腸炎、克隆氏病(Crohn's disease))、乳糜瀉病、強直性脊椎炎、重度氣喘、慢性蕁麻疹、移植免疫、家族性地中海熱、嗜酸性球性副鼻腔炎、擴張型心肌症、全身性肥胖細胞症或封入體肌炎。
[2-3]一種移植物對抗宿主疾病(GVHD)之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分。
[2-4]一種I型糖尿病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分，其特徵為與選自下列之任一種以上之藥劑一起投予：胰島素(insulin)製劑(例如，人類胰島素、甘精胰島素(Insulin glargine)、離脯胰島素(Insulin lispro)、地特胰島素(Insulin detemir)、門冬胰島素(Insulin aspart)等)、磺醯脲(sulfonylurea)劑(例如，格列本脲(glibenclamide)、格列齊特(gliclazide)、格列美脲(glimepiride)等)、速攻型胰島素分泌促進藥(例如，那格列奈(nateglinide)等)、雙胍類(biguanide)製劑(例如，二甲雙胍(metformin)等)、胰島素抗性改善藥(例如，吡格列酮(pioglitazone)等)、α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)抑制藥(例如，阿卡波糖(acarbose)、伏格列波糖(voglibose)等)、糖尿病性神經症治療藥(例如，伊帕司他(epalrestat)、脈序律(mexiletine)、咪達普利(imitapril)等)、GLP-1類似物製劑(例如，利拉鲁肽(liraglutide)、艾塞那肽(exenatide)、利西拉來(lixisenatide)等)及DPP-4抑制劑(例如，西他列汀(sitagliptin)、維格列汀(vildagliptin)、阿格列汀(alogliptin)等)。
[2-5]一種多發性硬化症之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分，其特徵為與選自下列之任一種以上之藥劑一起投予：類固醇藥(例如，乙酸可體松(cortisone acetate)、氫化可體松(hydrocortisone)、磷酸氫化可體松鈉、琥珀酸氫化可體松鈉、乙酸氟可體松、潑尼松龍(Prednisolone)、乙酸潑尼松龍、琥珀酸潑尼松龍鈉、丁基乙酸潑尼松龍、磷酸潑尼松龍鈉、乙酸鹵潑尼松(halopredone acetate)、甲基潑尼松龍、乙酸甲基潑尼松龍、琥珀酸甲基潑尼松龍鈉、安西諾隆(triamcinolone)、乙酸安西諾隆、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、地塞米松(dexamethasone)、乙酸地塞米松、磷酸地塞米松鈉、棕櫚酸地塞米松、乙酸帕拉米松(paramethasone acetate)、倍他米松(betamethasone)等)、干擾素β-1a、干擾素β-1b、乙酸格拉替雷(glatiramer acetate)、米托蒽醌(mitoxanthone)、硫唑嘌呤(azathioprine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、環孢黴素(cyclosporine)、甲胺蝶呤(methotrexate)、可拉屈濱(cladribine)、副腎皮質刺激荷爾蒙(ACTH)、促腎上腺皮質激素(corticotropin)、咪唑立濱(mizoribine)、他克莫司(tacrolimus)、芬戈莫德(fingolimod)及阿侖單抗(alemtulumab)。
[2-6]一種全身性紅斑性狼瘡之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分，其特徵為與選自下列之任一種以上之藥劑一起投予：類固醇藥(例如，前項[2-5]記載之類固醇藥)、免疫抑制劑(例如，環孢黴素、他克莫司、芬戈莫德等)及貝利木單抗(belimumab)。
[2-7]一種關節風濕病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分，其特徵為與選自下列之任一種以上之藥劑一起投予：類固醇藥(例如，前項[2-5]記載之類固醇藥)、抗風濕病藥(例如，甲胺蝶呤、撒樂腸溶錠(sulfasalazine)、布西拉明(bucillamine)、來氟米特(leflunomide)、咪唑立濱、他克莫司等)、抗細胞激素藥(例如，英夫利昔單抗(infliximab)、阿達木單抗(adalimumab)、托珠單抗(tocilizumab)、依那西普(etanercapt)、戈利木單抗(golimumab)、塞妥珠單抗(certolizumab))及阿巴西普(abatacept)。
[2-8]一種自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片 作為有效成分，其特徵為與前項[2-4]至[2-7]中所列舉的任一種以上之藥劑一起投予。
[2-9]如前項[2-4]至[2-8]記載之各疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其特徵為被投予至經投予前項[2-4]至[2-7]中所列舉的任一種以上之藥劑的患者。
[2-10]如前項[2-4]至[2-8]記載之各疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其特徵為於前項[2-4]至[2-7]中所列舉的任一種以上之藥劑投予後投予。
[2-11]如前項[2-4]至[2-8]記載之各疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其特徵為於前項[2-4]至[2-7]中所列舉的任一種以上之藥劑投予前投予。
[3-1]一種靜脈內注射用製劑，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片及至少一種藥學上可容許之載體。
[3-2]如前項[3-1]記載之靜脈內注射用製劑，其係用於自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療。
[3-3]如前項[3-1]或[3-2]記載之靜脈內注射用製劑，其為點滴用。
[4-1]一種單離多核苷酸或其斷片，其係編碼重鏈，該重鏈構成選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體且具有與CD19特異性結合之第二臂的VH。
[4-2]一種單離多核苷酸或其斷片，其係編碼構成選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體且與CD19特異性結合之第二臂的VH。
[4-3]如前項[4-1]或[4-2]記載之單離多核苷酸或其斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂的VH，係藉由選自序列編號56至60及序列編號76至80之鹼基序列構成的多核苷酸編碼。
[4-4]一種單離多核苷酸或其斷片，其係包含由選自序列編號56至60及序列編號76至80之鹼基序列構成的多核苷酸。
[5-1]一種表現載體，其係包含前項[4-1]至[4-4]中任一項記載之多核苷酸。
[6-1]一種動物細胞，其係導入前項[5-1]記載之表現載體，或藉由該載體之導入而轉形。
[7-1]一種自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療方法，其係包含對患者投予有效量之選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片。
[8-1]如選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其係使用於自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療。
[9-1]如選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片之用途，其係用以製造用於自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療之醫藥。
[10-1]一種單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其係和與CD19特異性結合的抗體交叉競爭對CD19的結合，該與CD19特異性結合的抗體係具有由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL，。
[10-2]一種抗體或其抗體斷片，其為單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其中該抗體或其抗體斷片，並且，其係和與CD19特異性結合的抗體交叉競爭對CD19之結合，該與CD19特異性結合的抗體係具有由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
[10-3]一種單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其具有VH及VL，該VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH、
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
該VL具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號26之胺基酸序列構成的VL-CDR1、
(b)由序列編號27之胺基酸序列構成的VL-CDR2、及
(c)由序列編號28之胺基酸序列構成的VL-CDR3。
[10-4]一種單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其具有VH及VL，該VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
(A)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(B)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(C)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
(D)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
(E)具有下列(a)至(c)之VH，
(a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
(b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
(c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
該VL具有下列(a)至(c)：
(a)由序列編號26之胺基酸序列構成的VL-CDR1、
(b)由序列編號27之胺基酸序列構成的VL-CDR2、及
(c)由序列編號28之胺基酸序列構成的VL-CDR3；
其中，在選自該VH中之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3的任一個或複數個CDR中，其任意1至5個胺基酸殘基可被其他胺基酸置換。
[10-5]如前項[10-1]至[10-4]中任一項記載之單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其係具有由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33及序列編號34中之任一個胺基酸序列構成的VH、或由與該VH之胺基酸序列至少80%、90%、95%、98%或99%相同之胺基酸序列構成的VH，以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
[10-6]如前項[10-1]至[10-4]中任一項記載之單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其具有由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33及序列編號34中之任一個胺基酸序列中第114號之麩醯胺酸經置換或可被置換成精胺酸之胺基酸序列構成的VH以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
[10-7]如前項[10-1]至[10-4]中任一項記載之單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其具有由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
[10-8]如前項[10-1]至[10-7]中任一項記載之單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其中，CD19為人類CD19。
[10-9]如前項[10-1]至[10-8]中任一項記載之單離CD19單株抗體或其抗體斷片，其中，抗CD19抗體為IgG抗體。
[10-10]如前項[10-9]記載之單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其中，前項[10-9]記載之IgG抗體為IgG1抗體或IgG4抗體。
[10-11]如前項[10-9]記載之單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其中，前項[10-9]記載之IgG抗體為IgG1抗體。
[10-12]如前項[10-9]記載之單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其中，前項[10-9]記載之IgG抗體為IgG4抗體。
[10-13]如前項[10-1]至[10-11]中任一項記載之單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其中，(1)該重鏈恆定區域中第351號之白胺酸被置換成天冬胺酸，且 第368號之白胺酸被置換成麩胺酸，或(2)該重鏈恆定區域中第351號之白胺酸及第366號之蘇胺酸皆被置換成離胺酸。
[10-14]如前項[10-1]至[10-13]中任一項記載之單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其中，該重鏈之C末端進一步具有Gly(甘胺酸)、Gly-Lys-Lys-Ala(序列編號67)、Gly-Lys-Ala-Lys-Ala(序列編號68)、Gly-Arg-Arg-Ala(序列編號69)或Gly-Arg-Ala-Arg-Ala(序列編號70)。
[10-15]如前項[10-1]至[10-14]中任一項記載之單離抗CD19單株抗體或其抗體斷片，其中，該重鏈包含由選自序列編號24、序列編號71、序列編號72、序列編號73、序列編號74及序列編號75中之任一個胺基酸序列構成的重鏈恆定區域。
[11-1]一種自體反應性B細胞媒介性疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分。
[11-2]如前項[11-1]記載之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其中，自體反應性B細胞媒介性疾病為：全身性紅斑性狼瘡、格雷夫茲病、重症肌無力症、自體免疫性溶血性貧血、自體免疫性血小板減少症、氣喘、冷凝球蛋白血症、原發性膽管硬化症或惡性貧血。
[12-1]一種自體反應性B細胞抑制劑，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分。
[12-2]如前項[12-1]記載之自體反應性B細胞抑制劑，其中，自體反應性B細胞抑制為免疫球蛋白產生抑制。
[12-3]如前項[12-2]記載之自體反應性B細胞抑制劑，其中，該免疫球蛋白為IgG或IgM。
[13-1]一種T細胞活化抑制劑，其係包含選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分。
[13-2]如前項[13-1]記載之T細胞活化抑制劑，其中，該T細胞活化抑制為細胞激素產生抑制。
[13-3]如前項[13-1]或[13-2]記載之T細胞活化抑制劑，其中，該T細胞活化抑制為記憶T細胞抑制。
[14-1]一種自體反應性B細胞抑制或T細胞活化抑制方法，其中，包含對患者投予有效量之選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片。
[15-1]如選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，其係使用於自體反應性B細胞抑制或T細胞活化抑制。
[16-1]如選自前項[1]至[117]中任一項之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片之用途，其係用於自體反應性B細胞抑制劑或T細胞活化抑制劑之製造。
本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體，係容許PD-1及PD-L1間之相互作用，可期待增強或持續自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療之效果。
圖1係顯示共通輕鏈之VL及恆定區域的胺基酸序列。
圖2係顯示共通輕鏈之VL之各CDR的胺基酸序列。
圖3係顯示分別由生殖細胞系列型V基因IGHV7-4-1及IGHV5-51編碼的胺基酸序列。
圖4係顯示與PD-1特異性結合之抗體(以下，簡稱為抗PD-1抗體)之各殖株(clone)的VH，與生殖細胞系列型基因IGHV7-4-1及JH6c之序列比對。圖中，各殖株之胺基酸序列中之“-”表示與對應之生殖細胞系列型基因IGHV7-4-1或JH6c之胺基酸序列相同的胺基酸，記載胺基酸簡稱的部分表示與該生殖細胞系列型基因之胺基酸序列相異的胺基酸。
圖5係顯示與CD19特異性結合之抗體(以下，簡稱為「抗CD19抗體」)之各殖株的VH，與由生殖細胞系列型基因IGHV5-51編碼之胺基酸序列的序列比對。圖中之各記號表示與圖4者相同的意義。
圖6係顯示抗PD-1抗體各殖株之VH的胺基酸序列。
圖7係顯示抗PD-1抗體各殖株之VH中之各CDR的胺基酸序列。
圖8係顯示抗CD19抗體各殖株之VH的胺基酸序列。
圖9係顯示抗CD19抗體各殖株之VH中之各CDR的胺基酸序列。
圖10係顯示PD-1/CD19雙特異性抗體之各重鏈恆定區域的胺基酸序列。
圖11係顯示分別確認PD-1/CD19雙特異性抗體之各殖株對PD-1及CD19之結合活性的生物分子交互作用分析(Biacore)測定結果。
圖12係顯示分別確認PD-1/CD19雙特異性抗體各殖株CD19-1(Bi)至CD19-3(Bi)對CD19之結合性的流式細胞術。
圖13係顯示分別確認PD-1/CD19雙特異性抗體各殖株CD19-4(Bi)及CD19-5(Bi)對CD19之結合性的流式細胞術。
圖14係顯示分別確認PD-1/CD19雙特異性抗體各殖株CD19-1(Bi)至CD19-3(Bi)對PD-1之結合性的流式細胞術。
圖15係顯示分別確認PD-1/CD19雙特異性抗體各殖株CD19-4(Bi)及CD19-5(Bi)對PD-1之結合性的流式細胞術。
圖16係顯示分別確認PD-1/CD19雙特異性抗體各殖株CD19-6(Bi)對PD-1及CD19之結合性的流式細胞術。
圖17係顯示分別確認PD-1/CD19雙特異性抗體各殖株對PD-1及CD19之同時結合性的流式細胞術。
圖18係顯示分別確認PD-1/CD19雙特異性抗體各殖株對PD-1/PD-L1相互作用之影響的流式細胞術。
圖19係分別顯示PD-1/CD19雙特異性抗體各殖株對試管(in-vitro)中的人類B細胞活化時之IgM產生的作用結果。再者，圖中之「Ctrl」表示對照群。
圖20係分別顯示PD-1/CD19雙特異性抗體各殖株(CD19-1(Bi)至CD19-4(Bi))對生體(in-vivo)中的人類B細胞活化時之IgG2產生的作用結果。再者，圖中之「Ctrl」表示對照群。
圖21係分別顯示PD-1/CD19雙特異性抗體殖株CD19-5(Bi)及CD19-6(Bi)對生體中的人類B細胞活化時之IgG2產生的作用結果。再者，圖中之「Ctrl」表示對照群。
圖22係顯示PD-1/CD3雙特異性抗體殖株CD19-6(Bi)對從人類末梢血單核細胞之細胞激素產生的作用結果。再者，圖中之「培養基(medium)」表示對照群。
PD-1(Programmed Cell Death-1)(程序性細胞死亡-1)係在人類中以GenBank登錄編號NP_005009表示之由胺基酸序列構成的膜型蛋白質。在本說明書中，記載為「PD-1」時，只要無特別限定，也有包含其全部同功型(isoform)、及保存有本發明記載之「與PD-1特異性結合之第一臂」的抗原決定基(epitope)之該等的改變體者。在本發明中，就PD-1而言，較佳為人類PD-1。
CD19係在人類中以GenBank登錄編號NP_001171569或NP_001761所表示之由胺基酸序列構成且表現於B細胞的膜蛋白，並且，與B細胞受體複合物一起對B細胞傳遞刺激的分子。在本說明書中，記載為「CD19」時，只要無特別限定，也有包含保存有本發明記載之「與CD19特異性結合之第二臂」的抗原決定基之彼等之改變體者。在本發明中，就CD19而言，較佳為人類CD19。
在本說明書中，「單離」意指從宿主細胞萃取之包含複數種至無數種成分的夾雜物中，藉由鑑定、分離及/或精製，成為實質上單一之純成分。
在本說明書中，「單株抗體」意指從對相同的特定抗原進行結合，且實質上均勻之抗體集團得到的抗體。
在本說明書中，「雙特異性抗體」意指在一分子中具備對於二個相異的抗原分子或抗原決定基之結合特異性的抗體，「雙特異性單株抗體」意指進一步從實質上均勻之抗體集團得到的雙特異性抗體。
本發明係關於可分別與PD-1及CD19特異性結合的雙特異性抗體(在本說明書中，簡稱為「PD-1/CD19雙特異性抗體」)。在本發明中，就PD-1/CD19雙特異性抗體而言，較佳為PD-1/CD19雙特異性單株抗體，更佳為單離PD-1/CD19雙特異性單株抗體，進一步更佳為單離人類PD-1/人類CD19雙特異性單株抗體。其中，「單離人類PD-1/人類CD19雙特異性單株抗體」意指針對人類PD-1及人類CD19且經單離的雙特異性單株抗體。
其中，雙特異性抗體之型態方面，例如，雙抗體(diabody)、雙特異性sc(Fv)2、雙特異性迷你抗體、雙特異性F(ab')2、雙特異性雜交抗體、共價鍵型雙抗體(雙特異性DART)、雙特異性(FvCys)2、雙特異性F(ab'-拉鍊)2、雙特異性(Fv-拉鍊)2、雙特異性三鏈抗體及雙特異性mAb2等。
雙抗體意指識別相異抗原之VH、VL彼此以肽連接子連結成之單鏈肽之二聚物(參照Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1993),Vol.90,No.14：p.6444-6448)。
雙特異性sc(Fv)2意指將可識別相異抗原之2個抗體的2組VH/VL經由肽連接子以連續單股之型態產生之經改變的低分子化抗體(參照J.Biological Chemistry(1994),Vol.269：p.199-206)。
雙特異性F(ab')2意指可識別相異之2個抗原之抗體的Fab'斷片，藉由二硫鍵等共價鍵結而成的低分子化抗體。
雙特異性迷你抗體意指將於可低分子抗體斷片藉由其CH3結構域上之二硫鍵等共價鍵結而成的低分子化抗體，該低分子抗體斷片係以使各個識別相異抗原之scFv與抗體之恆定區域CH3結構域連結之方式而改變者(參照Biochemistry(1992),Vo.31,No.6,p.1579-1584)。
雙特異性雜交抗體意指識別相異之2個抗原的抗體之重鏈/輕鏈複合物，藉由二硫鍵等共價鍵結而成之完整抗體。
在本發明中，較佳雙特異性抗體之型態為雙特異性雜交抗體。
雙特異性雜交抗體，例如，可從以雜交融合瘤法(參照US4474893)製作的融合瘤產生。再者，可於哺乳動物細胞中使分別編碼識別相異抗原之抗體的重鏈及輕鏈合計4種cDNA共同表現及分泌而製造。
本發明中所使用的單株抗體，可利用融合瘤法(例如，參照Kohler及Milstein等，Nature(1975)，Vol.256,p.495-97；Hongo等，Hybridoma(1995),Vol.14,No.3,p.253-260；Harlow等，Antibodies：A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press(1988),Vol.2)及Hammerling等，Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas,p.563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重組DNA法(例如，參照US4816567)、噬菌體顯示方法(例如，參照Ladner等之US5223409、US5403484及US5571698、Dower等之US5427908及US5580717、McCafferty等之US5969108及US6172197及Griffiths等之US5885793、US6521404、US6544731、US6555313、US6582915及US6593081)製作。
抗體或單株抗體，在對人類投予時，為了使其抗原性減低或消失，可以嵌合抗體、人類化抗體或完全人類型抗體之型態製作。
「嵌合抗體」意指可變區域序列及恆定區域序列源自不同哺乳動物的抗體，例如，可變區域序列源自小鼠抗體，恆定區域序列源自人類抗體者。嵌合抗體，可從以上述融合瘤法、重組DNA法或噬菌體顯示方法所單離之產生抗體的融合瘤，將利用周知之手法單離出之編碼抗體可變區域的基因，使用周知之方法與編碼源自人類之抗體恆定區域的基因連結而製作(例如，參照Cabilly等之US4816567)。
「人類化抗體」意指將源自如小鼠之其他哺乳動物之生殖細胞型的互補性決定區域(CDR)序列，移植至人類框架序列上的抗體。在人類化抗體之情況，亦可從以上述方法單離出之產生抗體之融合瘤，將利用周知之手法單離出之編碼抗體CDR區域的基因，使用周知之方法與編碼源自人類之抗體框架區域的基因連結而製作(例如，參照Winter之US5225539及US5530101、Queen等之US5585089號及US6180370)。
「人類抗體」或「完全人類型抗體」意指由框架區域及CDR區域所構成的可變區域以及恆定區域兩者皆為源自人類生殖細胞型免疫球蛋白序列的抗體。在本發明中所使用的人類抗體，可藉由使用轉形成可產生人類抗體的小鼠，例如，Humab小鼠(例如，參照Lonberg及Kay等提出之US5545806、US5569825、US5625126、US5633425、US5789650、US5877397、US5661016、US5814318、US5874299及US5770429)、KM小鼠(例如，參照Ishida等之WO2002/43478)、Xeno小鼠(例如，參照US5939598、US6075181、US6114598、US6150584及US6162963)或Tc小鼠(例如，參照Tomizuka等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2000),p.722-727)的方法製作。再者，亦可以藉由免疫引起人類抗體應答之方式，使用再構築人類免疫細胞之SCID 小鼠(例如，參照Wilson等之US5476996及US5698767)進行調製。再者，本發明中所使用之人類抗體，亦可藉由上述噬菌體顯示方法製作。
在本說明書中，PD-1/CD19雙特異性抗體之「抗體斷片」意指全長抗體之一部分，且具有針對PD-1之抗原結合部分及針對CD19之抗原結合部分的抗體，例如，可列舉F(ab')2等。在此，抗原結合部分意指抗體可與其抗原結合之最少單位，例如，由配置有CDR的框架區域構成，其中該CDR係被配置成：在VH及VL中各具有之3個CDR及藉由此等CDR的組合而可識別目標抗原。
在本說明書中，「共通輕鏈」意指與相異之2種以上之重鏈會合，並且，可對各個抗原顯示結合能力的輕鏈(De Wildt RM等，J.Mol.Biol.(1999),Vol.285,p.895-901、De Kruif等，J.Mol.Biol.(2009),Vol.387,p.548-58、WO2004/009618、WO2009/157771及WO2014/051433)。如此之共通輕鏈較佳為例如，藉由人類κ輕鏈IgVκ1-39*01/IGJκ1*01(根據IMGT資料庫之命名法)生殖細胞系列型基因所編碼的輕鏈(以下，簡稱為IGVK1-39/JK1共通輕鏈)，更佳為例如，具有VL的輕鏈，該VL包含由序列編號26之胺基酸序列構成之VL-CDR1、由序列編號27之胺基酸序列構成之VL-CDR2及由序列編號28之胺基酸序列構成之VL-CDR3；進一步更佳為例如，具有由序列編號25之胺基酸序列構成之VL的輕鏈。再者，共通輕鏈之恆定區域較佳為由序列編號29之胺基酸序列構成的輕鏈恆定區域。將本發明中所使用的共通輕鏈之VL及恆定區域之各個胺基酸序列示於圖1，將其可變區域之各CDR的胺基酸序列示於圖2。
在本說明書中，「同型(isotype)」意指被用來稱呼由重鏈恆定區域基因編碼之抗體類型(例如，IgM或IgG)者。本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體較佳之同型為IgG，更佳為IgG1或IgG4。在此，就IgG1而言，以對Fc受體之結合經消失或減弱者為較佳。具體而言，藉由將其重鏈恆定區域之任意胺基酸置換、缺失或插入，可得到對Fc受體之結合經消失或減弱的IgG1抗體。例如，可列舉在雙特異性抗體之分別二個重鏈恆定區域或鉸鍊(hinge)區域上，依據EU編號系統的第235號之白胺酸被置換成甘胺酸，及/或第236號之甘胺酸被置換成精胺酸的抗體。再者，為了使抗體之不均勻性減低，以缺失C末端之胺基酸，例如，依據EU編號系統的第447號之離胺酸的抗體為較佳。再者，在雙特異性抗體為IgG4時，為了抑制抗體分子內之調換(swapping)，以其重鏈恆定區域之任意胺基酸被置換、缺失或插入而成的改變體為更佳。例如，以將位於鉸鍊區域，依據EU編號系統的第228號之絲胺酸置換成脯胺酸的抗體為較佳。此外，在本說明書中，指定抗體可變區域之CDR及框架的胺基酸位置，有依照Kabat編號系統規定(參照Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institute of Health,Bethesda,Md.,(1987)及(1991))之情形。再者，恆定區域之胺基酸係依照以Kabat之胺基酸位置為基準的EU編號系統(參照Sequences of proteins of immunological interest,NIH Publication No.91-3242)表示。
本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體之Fc區域，為了使二個相異之重鏈容易會合，該區域之任意胺基酸可被置換。較佳之態樣例如可舉出：「具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈之恆定區域中，依據EU編號系統的第351號之白胺酸被置換成離胺酸，且第366號之蘇胺酸被置換成離胺 酸；具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈之恆定區域中，第351號的白胺酸被置換成天冬胺酸，且第368號之白胺酸被置換成麩胺酸」的PD-1/CD19雙特異性抗體。再者，亦可舉出「具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈的恆定區域中，依據EU編號系統的第351號之白胺酸被置換成天冬胺酸，且第368號之白胺酸被置換成麩胺酸；具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈的恆定區域中，第351號之白胺酸被置換成離胺酸，且第366號之蘇胺酸被置換成離胺酸」的PD-1/CD19雙特異性抗體。
與PD-1特異性結合的第一臂
在本說明書中，「與PD-1特異性結合的第一臂」(以下，簡稱為「第一臂」)意指包含於抗體或抗體斷片之一部份，或不是其一部分，不管其自體是否以單獨體存在，至少包含與PD-1特異性結合之抗體的VH，且可與PD-1特異性結合的抗體部分，例如，如此之第一臂由抗PD-1抗體之VH及構成該抗PD-1抗體的共通輕鏈之VL所構成，再者，第一臂中，亦包含含有該VH及VL之抗體的Fab部分。在此，「與PD-1特異性結合」係以下列為特徵被使用：能以具有至少高於1x10-5M，較佳為1x10-7M，更佳為1x10-9M之親和性(解離常數(Kd值))的結合活性，對PD-1直接結合；至少實質上不結合屬於CD28、CTLA-4及ICOS等所謂CD28家族受體以外之受體成員。再者，「與PD-1特異性結合的抗體」或「抗PD-1抗體」中的「抗體」，意指全長抗體，亦即，以二硫鍵連結之2個重鏈及2個輕鏈所構成的全長抗體，較佳為其單株抗體。
在此，「與PD-1特異性結合的第一臂」，例如可舉出具有VH者，該VH具有下列(a)至(c)：
(a)由HYJ1LH表示之胺基酸序列[序列中，J1表示G(甘胺酸)或A(丙胺酸)，其他字母分別表示胺基酸之一字簡稱]構成的VH-CDR1；
(b)由以WJ2NTNTU2NPTX2AQGFTG表示之胺基酸序列[序列中，J2表示L(白胺酸)或I(異白胺酸)，U2表示E(麩胺酸)或G(甘胺酸)，X2表示F(苯丙胺酸)或Y(酪胺酸)，其他字母分別表示與上述相同意義]構成的VH-CDR2；以及
(c)由以GDJ3VVPTTIWNYYU3X3MZ3V表示之胺基酸序列[序列中，J3表示M(甲硫胺酸)或L(白胺酸)，U3表示H(組胺酸)或Y(酪胺酸)，X3表示F(苯丙胺酸)或Y(酪胺酸)，Z3表示D(天冬胺酸)或E(麩胺酸)，其他字母分別表示與上述相同意義]構成的VH-CDR3。
再者，「與PD-1特異性結合的第一臂」之其他態樣例如可舉出具有選自下列(1b)至(5b)之任一VH者：
(1b)包含由序列編號6之胺基酸序列構成之VH-CDR1、由序列編號7之胺基酸序列構成之VH-CDR2及由序列編號8之胺基酸序列構成之VH-CDR3的VH；
(2b)包含由序列編號9之胺基酸序列構成之VH-CDR1、由序列編號10之胺基酸序列構成之VH-CDR2及由序列編號11之胺基酸序列構成之VH-CDR3的VH；
(3b)包含由序列編號12之胺基酸序列構成之VH-CDR1、由序列編號13之胺基酸序列構成之VH-CDR2及由序列編號14之胺基酸序列構成之VH-CDR3的VH；
(4b)包含由序列編號15之胺基酸序列構成之VH-CDR1、由序列編號16之胺基酸序列構成之VH-CDR2及由序列編號17之胺基酸序列構成之VH-CDR3的VH；以及
(5b)包含由序列編號18之胺基酸序列構成之VH-CDR1、由序列編號19之胺基酸序列構成之VH-CDR2及由序列編號20之胺基酸序列構成之VH-CDR3的VH。
再者，在本發明中的「與PD-1特異性結合的第一臂」中，亦包含在選自上述(1b)至(5b)之任一VH中的各VH-CDR中，其任意1至5個胺基酸殘基被置換成其他胺基酸(較佳為其保守性胺基酸)，並且，具有與未被該胺基酸置換之原始第一臂對PD-1之結合活性實質上同等的結合活性者。例如可舉出，在VH-CDR1之情況中，1個胺基酸殘基被置換成其他胺基酸(較佳為其保守性胺基酸)，在VH-CDR2或VH-CDR3之情況中，1至5個胺基酸殘基分別被置換成其他胺基酸(較佳為其保守性胺基酸)者。再者，如圖4所示，分別對應於與PD-1特異性結合之第一臂的抗PD-1抗體殖株之各CDR中，各殖株間不同的各胺基酸或彼等之任意複數個組合，係可在該等殖株間相互置換。在此，由保守性胺基酸所致之置換，意指具有類似側鏈的殘基之可換性，例如，在具有脂肪族側鏈之胺基酸的群組，為甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸；在具有脂肪族羥基側鏈之胺基酸的群組中，為絲胺酸及蘇胺酸；在具有含醯胺基之側鏈的胺基酸之群組中，為天冬醯胺酸及麩醯胺酸；在具有芳香族側鏈之胺基酸的群組中，為苯丙胺酸、酪胺酸及色胺酸，在具有鹼性側鏈的胺基酸之群組中，為離胺酸、精胺酸及組胺酸；在具有含硫之側鏈的胺基酸之群組中，為半胱胺酸及甲硫胺酸。較佳之由保守性胺基酸所致之置換之例可列 舉：纈胺酸、白胺酸及異白胺酸間之置換、苯丙胺酸及酪胺酸間之置換、離胺酸及精胺酸間之置換、丙胺酸及纈胺酸間之置換以及天冬醯胺酸及麩醯胺酸間之置換。再者，在此，上述之「具有與未被該胺基酸置換之原始第一臂對PD-1之結合活性實質上同等的結合活性」，意指被置換成該胺基酸的第一臂對PD-1之結合活性，為未被該胺基酸置換之原始第一臂之結合活性的95%以上，較佳為98%以上，更佳為99%以上。
再者，本發明中的「與PD-1特異性結合之第一臂」亦包含具有VH者，在該VH中，包含具有上述特定胺基酸序列的各VH-CDR，以及該VH之框架的胺基酸序列係由特定之生殖細胞系列型基因或其經受體細胞突變的該基因編碼。例如，選自上述(1b)至(5b)之任一者所示的VH，係可由生殖細胞系列型V基因為IGHV7-4-1，生殖細胞系列型J基因為JH6c的VDJ重組基因或其經受體細胞突變的該基因編碼。在此，藉由生殖細胞系列型之V基因IGHV7-4-1分別編碼的胺基酸序列，係對應序列編號21之胺基酸序列(圖3)。
本發明之與PD-1特異性結合之第一臂的VH之框架，有由生殖細胞系列型之VDJ重組基因經受體細胞突變之該基因編碼之情形。例如，在生殖細胞系列型V基因為IGHV7-4-1時，選自上述(1b)至(5b)之任一者所示的VH之FR1、FR2、FR3，在圖4所示的胺基酸位置中，由於與IGHV7-4-1基因所編碼之胺基酸序列不同，意指在該各位置經受體細胞突變。例如，關於FR1區域，可將序列編號21之胺基酸序列中位置13之離胺酸置換成麩醯胺酸、將位置16之丙胺酸置換成纈胺酸、或將位置19之離胺酸置換成甲硫胺酸，或者可以彼等之任意複數個組合進行置換。關於FR2區域，可將序列編號21之胺基酸序列中位置37之纈胺酸置換成白胺酸。關於FR3區域，可將序列編號21之 胺基酸序列中位置77之絲胺酸置換成蘇胺酸、將位置84之半胱胺酸置換成絲胺酸或天冬醯胺酸、或者可以彼等之任意複數個組合進行置換。再者，關於選自上述(1b)至(5b)之任一者所示的VH之FR4區域，源自J基因JH6c之FR4區域胺基酸序列(Trp-Gly-Lys-Gly-Thr-Thr*-Val-Thr-Val-Ser-Ser)(序列編號41)中的離胺酸(Lys)，可被置換成麩醯胺酸或天冬醯胺酸，及/或*記號之蘇胺酸(Thr)可被置換成白胺酸。具有上述任何胺基酸置換之組合的各FR1、FR2、FR3及FR4，不會實質地影響與PD-1特異性結合之第一臂的功能，亦可作為框架使用。
再者，在本發明中之「與PD-1特異性結合之第一臂」亦包含具有VH者，該VH包含具有上述特定胺基酸序列的各CDR，且該VH之FR的胺基酸序列係由特定之生殖細胞系列型基因或其經受體細胞突變之該基因編碼。例如，如此之第一臂可列舉具有由選自序列編號1至5之胺基酸序列構成的VH者。
再者，在如此之「與PD-1特異性結合之第一臂」中，例如，亦包含：具有由與選自序列編號1至5中之任一個胺基酸序列至少80%相同，較佳為至少90%相同，更佳為至少95%相同，進一步更佳為至少98%相同，再進一步更佳為至少99%相同的胺基酸序列構成的VH，並且，與原始第一臂之VH之胺基酸序列的差異不會對PD-1之結合活性造成實質上影響者(以下，簡稱為同源第一臂)。在此，在關於胺基酸序列之相同性之比較中所使用的「%相同」，係定義為使2個序列對準排列，並且，與參照之胺基酸序列(在此，為了達成最大百分率之相同性，在必要時，參照之胺基酸序列係導入間隙(gap)者)相同的胺基酸序列之百分率。再者，其中，「與原始之第一臂之VH之胺基酸 序列的差異不會對PD-1之結合活性造成實質上影響」，意指同源第一臂對PD-1之結合活性為原始第一臂之該結合活性的95%以上，較佳為98%以上，更佳為99%以上。
再者，在其他態樣中，在本發明中之「與PD-1特異性結合之第一臂」中，亦包含與下述(1)或(2)交叉競爭對PD-1之結合的具有抗PD-1抗體之可變區域(在此，該可變區域包含構成其之VH及VL)者：(1)具有選自上述(1b)至(5b)之任一者所示的VH或由選自序列編號1至5中之任一個胺基酸序列構成的VH，以及本說明書中之共通輕鏈的VL(較佳為由序列編號25之胺基酸序列構成的VL)的第一臂，(2)由該VH及VL構成且與PD-1特異性結合的單株抗體之可變區域；再者，亦包含對PD-1之結合係藉由下述(3)或(4)進行交叉競爭的具有抗PD-1抗體之可變區域者：(3)具有選自上述(1b)至(5b)之任一者所示的VH或由選自序列編號1至5中之任一個胺基酸序列構成的VH，以及該共通輕鏈之VL的第一臂，(4)具有由該VH及VL構成且與PD-1特異性結合的單株抗體之可變區域。在此，「交叉競爭對PD-1之結合」，意指藉由與在本說明書例示之第一臂相同或一部分重複的抗原決定基結合，該第一臂對PD-1之結合無論其程度如何皆受到抑制，或者是，由與該例示之第一臂相同或一部分重複的抗原決定基結合之抗體所致之對PD-1的結合，係無論其程度如何皆受到該例示之第一臂抑制；是否進行交叉競爭係可藉由競爭結合檢定進行評估。例如，可使用下列方法進行判斷：Biacore分析、ELISA檢定、流式細胞術、酵素結合免疫吸附檢定法(ELISA)、螢光能量轉移測定法(FRET)或螢光微量測定技術(FMAT(註冊商標))。
例如，就與具有上述(5b)所示之VH及該共通輕鏈之VL的第一臂所致之對PD-1之結合進行交叉競爭者而言，例如可列舉：具有選自上述(1b)至(4b)之任一者所示之VH及該共通輕鏈之VL(較佳為具有由序列編號26之胺基酸序列構成之VL-CDR1、由序列編號27之胺基酸序列構成之VL-CDR2及由序列編號28之胺基酸序列構成之VL-CDR3的VL)的第一臂；再者，具有由選自序列編號1至4之胺基酸序列構成的VH及該共通輕鏈之VL(較佳為由序列編號25之胺基酸序列構成的VL)的第一臂。
再者，例如，就與具有選自上述(1b)至(4b)之任一者所示之VH或由選自序列編號1至4之胺基酸序列構成的VH及該共通輕鏈之VL的第一臂所致之對PD-1之結合進行交叉競爭者而言，例如可列舉：具有上述(5b)所示之VH及該共通輕鏈之VL(較佳為具有由序列編號26之胺基酸序列構成的VL-CDR1、由序列編號27之胺基酸序列構成的VL-CDR2及由序列編號28之胺基酸序列構成的VL-CDR3之VL)的第一臂；再者，具有由序列編號5之胺基酸序列構成的VH及該共通輕鏈之VL(較佳為由序列編號25之胺基酸序列構成的VL)的第一臂。
在此，本發明中的「與PD-1特異性結合之第一臂」較佳可舉出具有上述(1b)至(5b)所示之VH的第一臂，再者，在此較佳之第一臂中，如上述，亦包含在其VH之各CDR中，其任意之1至5個胺基酸殘基被其他胺基酸(較佳為其保守性胺基酸)置換，並且，該胺基酸置換不會對PD-1之結合活性造成實質上影響者；再者，如上述，亦包含具有VH且該VH之框架之胺基酸序列係由生殖細胞系列型V基因IGHV7-4-1或J基因JH6c或經受彼等之體細胞 突變的該基因編碼者。再者，該第一臂更佳可舉出具有由選自序列編號1至5中之任一個胺基酸序列構成的VH者。
再者，本發明中的「與PD-1特異性結合之第一臂」以包含本說明書中的共通輕鏈之VL者為較佳，如此之共通輕鏈較佳為例如IGVK1-39/JK1共通輕鏈，更佳為例如具有VL的輕鏈，該VL包含由序列編號26之胺基酸序列構成的VL-CDR1、由序列編號27之胺基酸序列構成的VL-CDR2及由序列編號28之胺基酸序列構成的VL-CDR3；進一步更佳為例如具有由序列編號25之胺基酸序列構成之VL的輕鏈。再者，共通輕鏈之恆定區域較佳為由序列編號29之胺基酸序列構成的輕鏈恆定區域。
再者，「與PD-1特異性結合之第一臂」，以容許PD-1與PD-L1間之相互作用、PD-1與PD-L2間之相互作用、或此二相互作用者為更佳。在此，「容許PD-1與PD-L1間之相互作用、PD-1與PD-L2間之相互作用、或此二相互作用」意指即使在本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體以可溶型PD-L1或PD-L2之濃度之20倍的過剩量存在之狀況下，該PD-L1與PD-1間之相互作用、該PD-L2與PD-1間之相互作用、或此二相互作用，相對於本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體不存在時之該等相互作用，係維持50%以上，較佳維持70%以上，更佳維持80%以上。再者，「容許PD-1及PD-L1間之相互作用、PD-1及PD-L2間之相互作用、或此二相互作用」之定義係以與「實質上不抑制PD-1及PD-L1間之相互作用、PD-1及PD-L2間之相互作用、或此二相互作用」同意義地使用。
為了構築本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體，將取得的抗PD-1單株抗體之各殖株，與彼等之VH之胺基酸序列及其序列編號之對應關示於圖 6，以及將該抗PD-1單株抗體之各殖株之VH中各CDR之胺基酸序列與其序列編號之對應關係示於圖7。
與CD19特異性結合之第二臂
在本說明書中，「與CD19特異性結合之第二臂」(以下，簡稱為「第二臂」)意指包含於抗體或抗體斷片之一部分中，或不是其一部分，不管其自體是否以單體存在，至少包含與CD19特異性結合之抗體之VH，且可與CD19特異性結合的抗體部分，例如，如此之第二臂係由抗CD19抗體之VH及構成該抗CD19抗體的共通輕鏈之VL構成，再者，第二臂中亦含有包含該VH及VL之抗體的Fab部分。在此，「與CD19特異性結合」係以下列作為特徵而使用：至少能以具有高於1x10-5M，較佳1x10-7M，更佳1x10-9M高之親和性(解離常數(Kd值))的結合活性對CD19直接結合，並且，實質上不與其他蛋白質結合。再者，「與CD19特異性結合之抗體」或「抗CD19抗體」中的「抗體」意指全長抗體，亦即，藉由二硫鍵連結之2個重鏈及2個輕鏈所構成的全長抗體，較佳為其單株抗體。
在此，就「與CD19特異性結合之第二臂」而言，例如，可列舉包含VH者，該VH具有下列(a)至(c)：
(a)以SYWIJ4表示之胺基酸序列[序列中，J4表示G(甘胺酸)或A(丙胺酸)，其他字母分別表示胺基酸之一字簡稱]構成的VH-CDR1；
(b)以IIU4PGDSDTRYSPSFQG表示之胺基酸序列[序列中，U4表示W(色胺酸)或Y(酪胺酸)，其他字母分別表示與上述相同意義]構成的VH-CDR2；及
(c)以X4TIVZ4J5U5X5Z5AJ6DU6表示之胺基酸序列[序列中，X4表示K(離胺酸)、Q(麩醯胺酸)、H(組胺酸)或R(精胺酸)，Z4表示G(甘胺酸)或A(丙胺酸)，J5表示T(蘇胺酸)或V(纈胺酸)，U5表示V(纈胺酸)、I(異白胺酸)或T(蘇胺酸)，X5表示M(甲硫胺酸)、Y(酪胺酸)、G(甘胺酸)或H(組胺酸)，Z5表示T(蘇胺酸)、N(天冬醯胺酸)、L(白胺酸)或W(色胺酸)，J6表示F(苯丙胺酸)或S(絲胺酸)，U6表示I(異白胺酸)、F(苯丙胺酸)或Y(酪胺酸)，其他字母分別表示與上述相同意義]構成的VH-CDR3。
再者，「與CD19特異性結合之第二臂」之其他態樣例如可列舉具有選自下列(1d)至(5d)之任一VH者：
(1d)包含由序列編號35之胺基酸序列構成之VH-CDR1、由序列編號36之胺基酸序列構成之VH-CDR2及由序列編號37之胺基酸序列構成之VH-CDR3的VH；
(2d)包含由序列編號38之胺基酸序列構成之VH-CDR1、由序列編號39之胺基酸序列構成之VH-CDR2及由序列編號40之胺基酸序列構成之VH-CDR3的VH；
(3d)包含由序列編號41之胺基酸序列構成之VH-CDR1、由序列編號42之胺基酸序列構成之VH-CDR2及由序列編號43之胺基酸序列構成之VH-CDR3的VH；
(4d)包含由序列編號44之胺基酸序列構成之VH-CDR1、由序列編號45之胺基酸序列構成之VH-CDR2及由序列編號46之胺基酸序列構成之VH-CDR3的VH；以及
(5d)包含由序列編號47之胺基酸序列構成之VH-CDR1、由序列編號48之胺基酸序列構成之VH-CDR2及由序列編號49之胺基酸序列構成之VH-CDR3的VH。
再者，在本發明中，「與CD19特異性結合之第二臂」中，亦包含在選自上述(1d)至(5d)之任一VH之各VH-CDR中，其任意之1至5個胺基酸殘基被置換成其他胺基酸(較佳為其保守性胺基酸)，且與未被置換成該等胺基酸之原始第二臂對CD19之結合活性相比，具有實質上同等的結合活性者。可列舉例如：在VH-CDR1之情況，1個胺基酸殘基被置換成其他胺基酸(較佳為其保守性胺基酸)，在VH-CDR2或VH-CDR3之情況，1至5個胺基酸殘基分別被置換成其他胺基酸(較佳為其保守性胺基酸)者。再者，如圖5所示，在分別對應於與CD19特異性結合之第二臂的抗CD19抗體殖株之各CDR中，各殖株間不同之各胺基酸或彼等之任意複數個組合，係可在該殖株間相互地置換。在此，「具有與未被置換成該等胺基酸之原始第二臂對CD19之結合活性實質上同等的結合活性」意指被置換成該胺基酸之第二臂對CD19的結合活性，為未被置換成該胺基酸之原始第二臂之結合活性的95%以上，較佳為98%以上，更佳為99%以上。此外，第二臂之各VH-CDR中的「藉由保守性胺基酸所致之置換」，可列出例如上述之第一臂中的胺基酸置換之例。
又進一步，在本發明之「與CD19特異性結合之第二臂」中，亦包含具有VH者，於該VH中，包含具有上述特定胺基酸序列的各CDR，並且，該VH之FR之胺基酸序列係由特定之生殖細胞系列型基因或其經受體細胞突變之該基因所編碼。例如，選自上述(1d)至(5d)之任一VH，係可由生殖細胞系列型V基因為IGHV5-51的VDJ重組基因或其經受體細胞突變的該基因編 碼。在此，藉由生殖細胞系列型之V基因IGHV5-51編碼之胺基酸序列，係對應序列編號22所示之胺基酸序列(圖3)。
本發明之與CD19特異性結合之第二臂的VH之框架，有由生殖細胞系列型之VDJ重組基因經受體細胞突變的該基因編碼之情形。例如，在生殖細胞系列型V基因為IGHV5-51時，選自上述(1d)至(5d)之任一者所示之VH的FR1及FR3，於圖5所示之胺基酸位置，由於與IGHV5-51基因所編碼的胺基酸序列有差異，意指該各位置受到體細胞突變。例如，關於FR1區域，序列編號22之胺基酸序列中之位置1之麩胺酸可被置換成麩醯胺酸、位置14之脯胺酸可被置換成絲胺酸、位置27之酪胺酸可被置換成苯丙胺酸、或位置30之蘇胺酸可被置換成異白胺酸，或者是可以彼等之任意複數個組合置換。關於FR3區域，序列編號22之胺基酸序列中之位置76的異白胺酸可被置換成苯丙胺酸、位置77之絲胺酸可被置換成蘇胺酸或天冬醯胺酸、位置78之蘇胺酸可被置換成纈胺酸、位置84之絲胺酸可被置換成天冬醯胺酸、位置93之甲硫胺酸可被置換成異白胺酸或白胺酸、或位置97之丙胺酸可被置換成纈胺酸，或者是可以任意之複數個組合置換。具有上述任一胺基酸置換之組合的各個FR1及FR3，不會對與CD19特異性結合之第二臂的功能造成實質上影響，亦可作為框架使用。
再者，本發明中的「與CD19特異性結合之第二臂」亦包含具有VH者，該VH包含具有上述特定胺基酸序列的各CDR，並且，該VH之FR之胺基酸序列係由特定之生殖細胞系列型基因或其經受體細胞突變之該基因所編碼。例如，就如此之第二臂可列舉具有由選自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列構成的VH者。
再者，如此之「與CD19特異性結合之第二臂」亦包含例如：具有由與選自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列至少80%相同，較佳至少90%相同，更佳至少95%相同，進一步更佳至少98%相同，再進一步更佳至少99%相同之胺基酸序列構成的VH，並且，與原始之第二臂之VH之胺基酸序列間的差異，不會對CD19之結合活性造成實質上影響者(以下，簡稱為同源第二臂)。在此，「與原始之第二臂之VH之胺基酸序列的差異，不會對CD19之結合活性造成實質上影響」，意指同源第二臂對CD19之結合活性，為原始之第二臂的該結合活性之95%以上，較佳為98%以上，更佳為99%以上。
再者，在其他態樣中，本發明中的「與CD19特異性結合之第二臂」亦包含與下述(1)或(2)交叉競爭對CD19之結合的具有抗CD19抗體之可變區域(其中，該可變區域包含構成其之VH及VL)者：(1)具有選自上述(1d)至(5d)之任一者所示之VH或由選自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列構成之VH以及本說明書中之共有輕鏈之VL(較佳為由序列編號25之胺基酸序列構成的VL)的第二臂；(2)具有由該VH及VL構成且與CD19特異性結合的單株抗體之可變區域；再者，亦包含藉由下述(3)或(4)交叉競爭對CD19之結合的具有抗CD19抗體之可變區域者：(3)具有選自上述(1d)至(5d)之任一者所示的VH或由選自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列構成的VH以及該共有輕鏈之VL的第二臂，(4)具有由該VH及VL構成且與CD19特異性結合的單株抗體之可變區域。在此，「交叉競爭對CD19之結合」意指藉由與在本說明書中例示之第二臂相同或一部分重複之抗原決定基結合，該第二臂對CD19之結合無論其程度如何皆受到抑制，或者是，由與該例示之第二臂相同或一部分重複之抗原決定基結合的抗體所致之對CD19之結合，係無論其程度如何皆受 到該例示之第二臂抑制。在此，是否進行交叉競爭係可以關於「與PD-1特異性結合之第一臂」的說明中記載的方法為基準，同樣地進行測定。
在此，本發明中的「與CD19特異性結合之第二臂」較佳可舉出具有上述(1d)至(5d)所示之VH的第二臂，再者，此較佳之第二臂，如上述，亦包含在其VH之各CDR中，其任意之1至5個胺基酸殘基被置換成其他胺基酸(較佳為其保守性胺基酸)，且該胺基酸置換不會對CD19之結合活性造成實質上影響者，又進一步，如上述，亦包含具有VH者，該VH之框架之胺基酸序列係由生殖細胞系列型V基因IGHV5-51或經受其之體細胞突變之該基因編碼。再者，第二臂更佳可舉出具有由選自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列構成的VH者。
再者，在其他態樣中，本發明中的「與CD19特異性結合之第二臂」較佳可舉出具有由選自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列構成之VH的第二臂，其中，序列編號30至34之各胺基酸序列中第114號之胺基酸經置換或可被置換成精胺酸；更佳為具有由選自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列構成之VH的第二臂，其中，序列編號30至34之各胺基酸序列中的第114號之麩醯胺酸被置換成精胺酸；彼等相當於具有分別由選自序列編號62至66中之任一個胺基酸序列構成之VH的第二臂。藉由此等胺基酸置換，可使具有該第二臂之重鏈及輕鏈所構成的複合物(以下，稱為第二臂重鏈/輕鏈複合物)之等電點(pI值)增加，藉此，在本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體的精製步驟中，尤其是，將該雙特異性抗體與第二臂重鏈/輕鏈複合物之同型二聚物(homodimer)的分離變得容易。此外，在本發明中，第二臂重鏈/輕鏈複合物之等電點較佳為約8.3至約8.9，更佳為約8.4至約8.8。再者，由具有第一臂之重 鏈及輕鏈所構成的複合物(以下，稱為第一臂重鏈/輕鏈複合物)之等電點較佳為約7.4至約7.7，更佳為約7.5至約7.6。
再者，本發明中的「與CD19特異性結合之第二臂」，係以包含本說明書中之共通輕鏈之VL者為較佳，如此之共通輕鏈較佳為例如IGVK1-39/JK1共通輕鏈，更佳為例如具有包含由序列編號26之胺基酸序列構成的VL-CDR1、由序列編號27之胺基酸序列構成的VL-CDR2及由序列編號28之胺基酸序列構成之VL-CDR3的VL的輕鏈，進一步更佳為例如具有由序列編號25之胺基酸序列構成之VL的輕鏈。再者，共通輕鏈之恆定區域較佳可舉出由序列編號29之胺基酸序列構成的輕鏈恆定區域。
以下，將用以構築本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體之抗CD19抗體的各殖株，及彼等之VH之胺基酸序列及與其序列編號的對應關係示於圖8，以及將該抗CD19抗體之各殖株之VH中各CDR的胺基酸序列及與其序列編號之對應關係示於圖9。
另一方面，就本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體之較佳態樣而言，例如可舉出一種PD-1/CD19雙特異性抗體，其特徵為：
與PD-1特異性結合之第一臂具有：
(A)VH，其係選自上述(1b)至(5b)之任一者所示之VH，其中之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3之任一個或複數個CDR中，各任意1至5個胺基酸殘基可被置換成其他胺基酸(較佳為其保守性胺基酸)，及
(B)VL，其係包含由序列編號26之胺基酸序列構成的VL-CDR1、由序列編號27之胺基酸序列構成的VL-CDR2及由序列編號28之胺基酸序列構成的VL-CDR3；以及
與CD19特異性結合之第二臂具有：
(C)VH，其係選自上述(1d)至(5d)之任一者所示的VH，選自其中之VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3的任一個或複數個CDR中，各任意1至5個胺基酸殘基可被置換成其他胺基酸(較佳為保守性胺基酸)，及
(D)VL，其係包含由序列編號26之胺基酸序列構成的VL-CDR1、由序列編號27之胺基酸序列構成的VL-CDR2及由序列編號28之胺基酸序列構成的VL-CDR3。
更佳是例如可舉出一種PD-1/CD19雙特異性抗體，其特徵為：
與PD-1特異性結合之第一臂具有：
(A)選自上述(1b)至(5b)之任一項所示VH，及
(B)包含由序列編號26之胺基酸序列構成的VL-CDR1、由序列編號27之胺基酸序列構成的VL-CDR2及由序列編號28之胺基酸序列構成的VL-CDR3之VL；以及
與CD19特異性結合之第二臂具有：
(C)選自上述(1d)至(5d)之任一項所示之VH者，及
(D)包含由序列編號26之胺基酸序列構成的VL-CDR1、由序列編號27之胺基酸序列構成的VL-CDR2及由序列編號28之胺基酸序列構成的VL-CDR3之VL。
再者，就本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體之較佳其他態樣而言，例如可舉出一種PD-1/CD19雙特異性抗體，其特徵為：
與PD-1特異性結合之第一臂具有：
(A)由選自序列編號1至5中之任一個胺基酸序列構成的VH、或由與該VH之胺基酸序列至少80%相同之胺基酸序列構成的VH，及
(B)由序列編號25之胺基酸序列構成的VL；以及，
與CD19特異性結合之第二臂具有：
(C)由選自序列編號30至34及62至66中之任一個胺基酸序列構成的VH、或由與該VH之胺基酸序列至少80%相同之胺基酸序列構成的VH，及
(D)由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
其他態樣更佳是例如可舉出一種PD-1/CD19雙特異性抗體，其特徵為：
與PD-1特異性結合之第一臂具有：
(A)由選自序列編號1至5中之任一個胺基酸序列構成的VH、及
(B)由序列編號25之胺基酸序列構成的VL；以及，
與CD19特異性結合之第二臂具有：
(C)由選自序列編號30至34及62至66中之任一個胺基酸序列構成的VH、及
(D)由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
再者，其他態樣進一步更佳是例如可舉出一種PD-1/CD19雙特異性抗體，其特徵為：
與PD-1特異性結合之第一臂具有：
(A)由選自序列編號1至5中之任一個胺基酸序列構成的VH、及
(B)由序列編號25之胺基酸序列構成的VL；以及
與CD19特異性結合之第二臂具有：
(C)由選自序列編號62至66中之任一個胺基酸序列構成的VH、及
(D)由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
就本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體而言，較佳同型為IgG抗體，進一步更佳為IgG1或IgG4抗體，再進一步更佳為IgG1抗體。在該抗體為IgG1抗體時，以分別在二個重鏈恆定區域或鉸鍊區域上，依照EU編號系統的第235號之白胺酸被置換成甘胺酸，及/或第236號之甘胺酸被置換成精胺酸的IgG1抗體為較佳。再者，彼等雙特異性抗體之重鏈C末端之胺基酸，例如，以將依據EU編號系統的第447號之離胺酸缺失的抗體為更佳。再者，在PD-1/CD19雙特異性抗體為IgG4抗體時，以將位於其鉸鍊區域之依據EU編號系統的第228號之絲胺酸置換成脯胺酸的抗體為較佳。
再者，該等PD-1/CD19雙特異性抗體為IgG1抗體時的較佳態樣可列舉：具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈中，恆定區域之依據EU編號系統的第351號之白胺酸被置換成離胺酸，且第366號之蘇胺酸被置換成離胺酸，具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈中，恆定區域之第351號之白胺酸被置換成天冬胺酸，且第368號之白胺酸被置換成麩胺酸的IgG1抗體。再者，亦同樣較佳的是：具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈中，恆定區域之依據EU編號系統的第351號之白胺酸被置換成天冬胺酸，且第368號之白胺酸被置換成麩胺酸，具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈中，恆定區域之第351號之白胺酸被置換成離胺酸，且第366號之蘇胺酸被置換成離胺酸的IgG1抗體。
就重鏈恆定區域中納入上述全部胺基酸置換的PD-1/CD19雙特異性IgG1抗體之較佳態樣而言，可列舉例如：具有與PD-1特異性結合之第一臂 之VH的重鏈，係具有由序列編號23之胺基酸序列構成的重鏈恆定區域，具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈，係具有由選自序列編號24及序列編號71至75中之任一個胺基酸序列構成的重鏈恆定區域的抗體。將彼等之胺基酸序列例示於圖10。
在此，具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈，在其C末端，經由與其C末端胺基酸間之醯胺鍵，可進一步具有Gly(甘胺酸)、Gly-Lys-Lys-Ala(序列編號67)、Gly-Lys-Ala-Lys-Ala(序列編號68)、Gly-Arg-Arg-Ala(序列編號69)或Gly-Arg-Ala-Arg-Ala(序列編號70)。藉由此等胺基酸或肽之附加，可使該第二臂重鏈/輕鏈複合物之等電點(pI值)增加，藉此，與上述第二臂之VH中的胺基酸置換之事例同樣地，尤其是，將該雙特異性抗體與第二臂重鏈/輕鏈複合物之同型二聚物的分離變得容易。此外，關於其C末端附加有該胺基酸或肽之第二臂重鏈/輕鏈複合物，就其等電點而言，亦較佳為約8.3至約8.9，更佳為約8.4至約8.8。
本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體之態樣最佳可列舉：本說明書實施例12中所製作的殖株CD19-1(Bi)、殖株CD19-2(Bi)、殖株CD19-3(Bi)、殖株CD19-4(Bi)及殖株CD19-5(Bi)，以及實施例13中所製作的殖株CD19-6(Bi)。
本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體之較佳特徴可列舉：容許PD-1及PD-L1間之相互作用、PD-1及PD-L2間之相互作用、或此二相互作用。其中，「容許PD-1及PD-L1間之相互作用、PD-1及PD-L2間之相互作用、或此二相互作用」，表示與關於「與PD-1特異性結合之第一臂」之說明中記載之定義相同的意義。
再者，本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體之較佳特徴可舉出使細胞激素產生充分地減低者。在此，「使細胞激素產生充分地減低」意指例如將本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體藉由點滴等進行靜脈內投予時、或投予後24小時以內，例如，血中或組織中之包含IL-2、IFN-γ及/或TNF-α之細胞激素的濃度未增加，或即使增加，亦為可藉由類固醇投予而抑制之程度。
再者，本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體之較佳特徴可列舉對T細胞(例如，記憶T細胞)之活化具有抑制效果者。相同抑制效果，係可作為抑制來自包含T細胞之末梢血單核球的細胞激素(例如，IL-2)產生之效果進行評估。
PD-1/CD19雙特異性抗體之製造及精製方法
本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體及其抗體斷片亦可以WO2014/051433、WO2013/157953或WO2013/157954所揭示的方法製造。
具體而言，可將分別插入有(1)編碼具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈的多核苷酸、(2)編碼具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈的多核苷酸、及(3)編碼共通輕鏈的多核苷酸之表現載體，基因導入至哺乳動物細胞並使其轉形，以使兩重鏈及共有輕鏈一起表現及分泌而製造。
在此，表現本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體的宿主細胞，可為能將表現載體進行基因導入，並可使被導入之表現載體表現的任何宿主細胞。較佳可列舉：如SF-9及SF-21細胞之昆蟲細胞；更佳可列舉：包含CHO細胞、BHK細胞、SP2/0細胞及NS-0骨髓瘤細胞之小鼠細胞，如COS及Vero細胞之靈長類細胞；如MDCK細胞、BRL 3A細胞、融合瘤、腫瘤細胞、不死化 之初代細胞、W138、HepG2、HeLa、HEK293、HT1080或PER.C6之胚性網膜細胞等哺乳類細胞。此外，在表現系統之選擇方面，有以抗體使進行適當糖基化之方式，使用哺乳類之細胞之表現載體及宿主之情形。人類細胞株，較佳為PER.C6，係有利於使用在得到與人類之糖基化模式一致的抗體。
藉由表現載體之基因導入而轉形之宿主細胞中的蛋白質之產生，例如，可參考Current Protocols in Protein Science(1995),Coligan JE,Dunn BM,Ploegh HL,Speicher DW,Wingfield PT,ISBN 0-471-11184-8，Bendig,1988而實施，再者，用以將宿主細胞培養之生產性最大化的一般指南、程序及實用方法，係可參考Mammalian Cell Biotechnology：a Practical Approach(M.Butler,ed.,IRL Press,1991)而實施。宿主細胞中之抗體的表現，例如，記載於EP0120694、EP0314161、EP0481790、EP0523949、US4816567及WO2000/63403等之公開公報。
在此，宿主細胞之培養條件，可藉由周知之方法進行最佳化，可將蛋白質之生產量最佳化。培養，可在例如培養皿、滾瓶或反應槽中，實施批次培養、分批補料培養、連續培養、中空纖維培養。為了藉由細胞培養進行大規模且連續的重組蛋白質之生產，較佳為使細胞於懸浮液中增殖。再者，以在源自動物或人類之血清、或者非源自動物或人類之血清作為構成要素的條件下進行細胞之培養為較佳。
藉由宿主細胞表現，從該細胞或細胞培養基以周知之方法回收的抗體，係可使用周知之方法精製。精製方法包含：免疫沉降法、離心法、過濾、大小排除層析、親和性層析、陽離子及/或陰離子交換層析、疏水性相互作 用層析等。再者，亦有適當使用蛋白質A或蛋白質G親和性層析的情況(例如，參照US4801687及US5151504)。
抗CD19單株抗體
本發明包含用以構築本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體的「與CD19特異性結合之單株抗體」(以下，簡稱為「抗CD19單株抗體」)及彼等之抗體斷片。
本發明之抗CD19單株抗體之一態樣，係藉由VH與本發明中的共通輕鏈之VL會合，而可與CD19特異性結合之單株抗體。在此，「與CD19特異性結合」係以下列為特徵而使用：可以至少具有高於1x10-5M，較佳1x10-7M，更佳1x10-9M之親和性(解離常數(Kd值))的結合活性對CD19直接結合，並也不與其他蛋白質實質上結合。其中，「與CD19特異性結合之單株抗體」中的「抗體」意指全長抗體，亦即，以二硫鍵連結之2個重鏈及2個輕鏈構成的全長抗體。再者，「與CD19特異性結合之單株抗體之斷片」意指為全長抗體之一部分，至少包含抗原結合部分的抗體，例如，可列舉Fab、Fab'、Fv、scFv及F(ab')2等。
本發明之抗CD19單株抗體可列舉例如具有構成「與CD19特異性結合之第二臂」之VH的選自上述(1d)至(5d)之任一VH或選自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列構成的VH及本說明書中的共通輕鏈之VL(較佳為由序列編號25之胺基酸序列構成的VL)者。
再者，本發明之抗CD19單株抗體，亦包含具有VH者，該VH在選自上述(1d)至(5d)之任一VH中的各個CDR中，其任意之1至5個胺基酸 殘基被置換成其他胺基酸(較佳為保守性胺基酸)，並且，與具有未被置換成該等胺基酸之原始VH的抗CD19單株抗體對CD19之結合活性相比，具有實質上同等的結合活性。例如，在VH之CDR1之情況，可列舉1個胺基酸殘基被置換成其他胺基酸(較佳為保守性胺基酸)；在CDR2或CDR3之情況，可列舉各1至5個胺基酸殘基被置換成其他胺基酸(較佳為保守性胺基酸)者。再者，如圖5所示，在抗CD19單株抗體殖株之各CDR中，各殖株間不同的各胺基酸或彼等之任意複數個組合在該殖株間可相互地置換。在此，「與具有未被置換成該等胺基酸之原始VH的抗CD19單株抗體對CD19之結合活性相比，實質上具有同等之結合活性」意指置換成該等胺基酸的抗PD-1單株抗體對CD19之結合活性，為具有未被置換成該等胺基酸之原始VH的抗PD-1單株抗體之結合活性的95%以上，較佳為98%以上，更佳為99%以上。
再者，本發明之抗CD19單株抗體亦包含具有VH者，在該VH中，包含具有上述特定胺基酸序列的各CDR，並且，該VH之框架之胺基酸序列係由特定之生殖細胞系列型基因或其經受體細胞突變之該基因所編碼；例如，在上述關於「與CD19特異性結合之第二臂」之說明中所列舉的：具有由特定之生殖細胞系列型基因或其經受體細胞突變之該基因所編碼的特定VH者等。
再者，在本發明之抗CD19單株抗體中，係具有VH者，該VH包含選自上述(1d)至(5d)之任一VH中的各個CDR，該VH之FR之胺基酸序列係由具有特定之生殖細胞系列型基因或其經受體細胞突變之該基因所編碼，就具有該VH者而言，可舉出例如具有由選自序列編號30至34之胺基酸序列構成的VH者。再者，在如此之抗CD19單株抗體中，例如，亦包含具有由與選 自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列至少80%相同，較佳至少90%相同，更佳至少95%相同，進一步更佳至少98%相同，再進一步更佳至少99%相同之胺基酸序列構成的VH，且與具有原始VH之抗CD19單株抗體對CD19之結合活性相比，具有實質上同等的結合活性者。在此，「與具有原始VH之抗CD19單株抗體對CD19之結合活性相比，具有實質上同等的結合活性」意指具有由該任一個胺基酸序列構成之VH的抗CD19單株抗體對CD19之結合活性的95%以上，較佳為98%以上，更佳為99%以上。
在又一其他態樣中，本發明之抗CD19單株抗體中，亦包含：(1)與具有選自上述(1d)至(5d)之任一VH或由選自序列編號30至34之胺基酸序列構成之VH，以及本說明書中之共通輕鏈之VL(較佳為序列編號25之胺基酸序列構成的VL)的抗CD19單株抗體交叉競爭對CD19之結合的抗PD-1單株抗體；以及(2)與具有選自上述(1d)至(5d)之任一VH或由選自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列構成之VH、以及該共通輕鏈之VL的抗CD19單株抗體交叉競爭對CD19之結合的抗CD19單株抗體。
再者，在又一其他態樣中，本發明之抗CD19單株抗體可舉出：具有由選自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列中之第114號之胺基酸經置換或可被置換成精胺酸之胺基酸序列構成的VH及本說明書中之共通輕鏈之VL(較佳為序列編號25之胺基酸序列構成的VL)者；更佳為具有由選自序列編號30至34中之任一個胺基酸序列中第114號之麩醯胺酸被置換成精胺酸之胺基酸序列構成的VH及該共通輕鏈之VL者，該等相當於分別具有由選自序列編號62至66中之任一個胺基酸序列構成的VH及該共通輕鏈之VL的抗CD19單株抗體。
編碼PD-1/CD19雙特異性抗體之多核苷酸
編碼PD-1/CD19雙特異性抗體之多核苷酸係由下列(1)至(3)構成：(1)編碼具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈的多核苷酸、(2)編碼具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈的多核苷酸、及(3)編碼共通輕鏈的多核苷酸。在此，編碼具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈的多核苷酸，係由編碼與PD-1特異性結合之第一臂之VH的多核苷酸及編碼具有該VH之重鏈之恆定區域的多核苷酸所構成，同樣地，編碼具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈的多核苷酸，係由編碼與CD19特異性結合之第二臂之VH的多核苷酸及編碼具有該VH之重鏈之恆定區域的多核苷酸所構成。
編碼PD-1/CD19雙特異性抗體之多核苷酸，只要是具有分別編碼構成此等PD-1/CD19雙特異性抗體之部分的多核苷酸者，則可為任意者，亦可為基因組DNA、cDNA、合成DNA、RNA、DNA-RNA雜交之任一者。編碼一個胺基酸之密碼子已知有1至6種，例如，Phe對應於TTT或TTC，Leu對應於TTA、TTG、CTT、CTC、CTA或CTG，Ile對應於ATT、ATC或ATA，Met對應於ATG，Val對應於GTT、GTC、GTA或GTG，Ser對應於TCT、TCC、TCA或TCG，Pro對應於CCT、CCC、CCA或CCG，Thr對應於ACT、ACC、ACA或ACG，Ala對應於GCT、GCC、GCA或GCG，Tyr對應於TAT或TAC，His對應於CAT或CAC，Gln對應於CAA或CAG，Asn對應於AAT或AAC，Lys對應於AAA或AAG，Asp對應於GAT或GAC，Glu對應於GAA或GAG，Cys對應於TGT或TGC，Trp對應於TGG，Arg對應於CGT、CGC、CGA或CGG，Ser對應於AGT或AGC，Arg對應於AGA或 AGG，及Gly對應於GGT、GGC、GGA或GGG，因此，在編碼PD-1/CD19雙特異性抗體之多核苷酸中，包含對應各胺基酸之各密碼子為任意組合的多核苷酸。編碼與PD-1特異性結合之第一臂之VH的多核苷酸較佳可舉出例如：由選自分別編碼殖株PD1-1至PD1-5之VH的序列編號50至54之任一個鹼基序列所構成的多核苷酸；編碼與CD19特異性結合之第二臂之VH的多核苷酸較佳可舉出例如：由選自分別編碼殖株CD19-5、CD19-1、CD19-4、CD19-2及CD19-3之VH的序列編號56至60及序列編號76至80之任一個鹼基序列所構成的多核苷酸。再者，編碼共通輕鏈之可變區域的多核苷酸較佳可舉出由序列編號55之鹼基序列構成的多核苷酸。
醫藥用途
本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等，係可用於自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病(GVHD)之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療。
本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等可預防、症狀進展抑制及/或治療的自體免疫疾病可列舉例如：貝賽特氏症候群、全身性紅斑性狼瘡、慢性圓板狀紅斑性狼瘡、多發性硬化症(全身性硬皮症、進行性全身性硬化症)、硬皮症、多發性肌炎、皮膚肌炎、結節性動脈周圍炎(結節性多發動脈炎、顯微鏡性多發血管炎)、大動脈炎症候群(高安動脈炎)、惡性關節風濕病、關節風濕病、青年性特發性關節炎、脊椎關節炎、混合性結締組織病、薛格連氏症候群、成人史迪爾氏病、血管炎、過敏性肉芽腫性血管炎、過敏性血管炎、類風濕血管炎、大型血管炎、ANCA關連血管炎(例如，多發血管炎性肉芽腫症及嗜酸性球性多發血管炎性肉芽腫症)、Cogan氏症候群、RS3PE症候群、顳動脈 炎、風濕性多發肌痛症、纖維肌痛症、抗磷脂質抗體症候群、嗜酸性球性肌膜炎、IgG4關連疾病(例如，原發性硬化性膽管炎、自體免疫性胰炎等)、格林巴利症候群、重症肌無力症、慢性萎縮性胃炎、自體免疫性肝炎、非酒精性脂肪肝炎、原發性膽汁性肝硬變、古德巴斯捷症候群、急速進行性絲球體腎炎、巨紅血球性貧血、自體免疫性溶血性貧血、惡性貧血、自體免疫性嗜中性球減少症、特發性血小板減少性紫斑病、Basedow病(格雷夫茲病(甲狀腺功能亢進症))、橋本病、自體免疫性副腎功能不全、原發性甲狀腺功能降低症、艾迪生氏病(慢性副腎皮質功能降低症)、特發性艾迪生氏病、I型糖尿病、徐緩進行性I型糖尿病(成人潛在性自體免疫性糖尿病)、局部性硬皮症、乾癬、乾癬性關節炎、水皰性類天皰瘡、天皰瘡、類天皰瘡、妊娠性皰疹、線狀IgA水皰性皮膚症、後天性表皮水皰症、圓形脫毛症、白斑、尋常性白斑、視神經脊髓炎、慢性炎症性脫髓性多發神經炎、多灶性運動神經病、結節病、巨細胞性動脈炎、肌萎縮性側索硬化症、原田病、自體免疫性視神經症、特發性無精子症、習慣性流產、炎症性腸疾病(例如，潰瘍性大腸炎、克隆氏病)、乳糜瀉病、強直性脊椎炎、重症氣喘、慢性蕁麻疹、移植免疫、家族性地中海熱、嗜酸性球性副鼻腔炎、擴張型心肌症、全身性肥胖細胞症及封入體肌炎等。
本發明中，「治療」意指例如使某種疾病或其症狀治癒或改善，「預防」意指使某種疾病或症狀之表現防範於於未然，或延遲一定期間，「症狀進展抑制」意指抑制症狀之進展或惡化，而停止病態之進行。再者，「預防」之意義亦包含復發抑制。「復發抑制」意指防止某種疾病或症狀之復發，或使復發之可能性減低。
再者，在其他態樣中，本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等可用於自體反應性B細胞媒介性疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療。自體反應性B細胞媒介性疾病可列舉：全身性紅斑性狼瘡、格雷夫茲病、重症肌無力症、自體免疫性溶血性貧血、自體免疫性血小板減少症、氣喘、冷凝球蛋白血症、原發性膽管硬化症及惡性貧血等。在該醫藥用途中，本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等，係介入對自體反應性B細胞的抑制作用。在此，對自體反應性B細胞的抑制作用中，包含抑制IgG及IgM等免疫球蛋白產生之作用。再者，本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等，具有對記憶T細胞活化之抑制作用。在此，對記憶T細胞活化之抑制作用，包含抑制細胞激素產生之作用。
本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等通常以全身性或局部性，非經口之形式投予。就其投予方法而言，具體而言，可列舉注射投予、經鼻投予、經肺投予、經皮投予等。注射投予可列舉例如：靜脈內注射、肌肉內注射、腹腔內注射等，靜脈內注射時，較佳為由點滴進行之投予。其投予量雖隨年齡、體重、症狀、治療效果、投予方法、處理時間等而異，惟，通常成人每一人，每一次在0.1μg/kg至300mg/kg之範圍，特佳為0.1mg/kg至10mg/kg之範圍內，以一日一次至數次非經口投予，或在一日30分至24小時之範圍進行靜脈內持續投予。當然，如前述，由於投予量隨各種條件而變動，有少於上述投予量之量即充分的情況，再者，亦有必須超過範圍進行投予之情況。
製劑
本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等，在作為注射劑或點滴用之輸液而製劑化使用時，該注射劑或輸液可為水溶液、懸浮液或乳化液之任一種型態，再者，亦可在使用時藉由添加溶劑而使其溶解、懸浮或乳化而使用的方式，與藥學上可容許之載體一起被製劑化成固體製劑。就注射劑或點滴用之輸液所使用的溶劑而言，可使用例如：注射用蒸餾水、生理食鹽水、葡萄糖溶液及等張液(例如，氯化鈉、氯化鉀、甘油、甘露醇、山梨醇、硼酸、硼砂、丙二醇等之溶液)等。
在此，藥學上可容許之載體可列舉例如：穩定劑、溶解輔助劑、懸浮化劑、乳化劑、無痛化劑、緩衝劑、保存劑、防腐劑、pH調整劑及抗氧化劑等。穩定劑可使用例如：各種胺基酸、白蛋白、球蛋白、明膠、甘露醇、葡萄糖、葡萄聚糖、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、抗壞血酸、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、乙底酸鈉、檸檬酸鈉、二丁基羥基甲苯等。溶解輔助劑可使用例如：醇(例如，乙醇等)、聚醇(例如，丙二醇、聚乙二醇等)、非離子性界面活性劑(例如，Polysorbate 20(註冊商標)、Polysorbate 80(註冊商標)、HCO-50等)等。懸浮化劑可使用例如：甘油單硬脂酸酯、單硬脂酸鋁、甲基纖維素、羧基甲基纖維素、羥基甲基纖維素、月桂基硫酸鈉等。乳化劑可使用例如：阿拉伯膠、海藻酸鈉、黃蓍膠等。無痛化劑可使用例如：苄醇、氯丁醇、山梨醇等。緩衝劑可使用例如：磷酸緩衝液、乙酸緩衝液、硼酸緩衝液、碳酸緩衝液、檸檬酸緩衝液、TRIS緩衝液、麩胺酸緩衝液、ε胺基己酸緩衝液等。保存劑可使用例如：對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、氯丁醇、苄醇、苯札氯銨(benzalkonium chloride)、脫氫乙酸鈉、乙底酸鈉、硼酸、硼砂等。防腐劑可使用例如：苯札氯銨、對羥基苯甲酸、氯 丁醇等。pH調整劑可使用例如：鹽酸、氫氧化鈉、磷酸、乙酸等。抗氧化劑可使用例如：(1)如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉等水溶性抗氧化劑、(2)如棕櫚酸抗壞血酸酯、丁基化羥基茴香醚、丁基化羥基甲苯、卵磷酯、沒食子酸丙酯、α-生育酚等油溶性抗氧化劑及(3)如檸檬酸、伸乙基二胺四乙酸、山梨醇、酒石酸、磷酸等金屬螯合劑等。
注射劑或點滴用之輸液，可在其最後步驟中滅菌，或藉由無菌操作法，例如，以過濾器等過濾而滅菌，繼而充填於無菌之容器中而製造。再者，注射劑或點滴用之輸液，亦可將藉由真空乾燥及凍結乾燥所致之無菌粉末(可包含藥學上可容許之載體的粉末)，於用時溶解於適當溶劑而使用。
併用或摻合劑
再者，本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等亦可與於自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療的其他藥劑一起組合使用。在本發明中，與其他藥劑一起組合使用(併用)時的投予形態，可為1個製劑中摻合兩成分之摻合劑的形態，再者，亦可呈各別製劑之投予形態。藉由其併用，可補足其他藥劑之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療效果，亦可使投予量或投予次數維持或減低。在將本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等與其他藥劑分別投予時，可於一定期間同時投予，之後，只投予PD-1/CD19雙特異性抗體等或只投予其他藥劑。再者，亦可先投予本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等，於其投予完成後再投予其他藥劑，或先投予其他藥劑，於其投予完成後，隨後投予本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等，各別之投予方法可相同，亦可相異。亦可提供包含本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等之製劑與包含其他藥劑之製 劑的套組。在此，其他藥劑之投予量可依照臨床上所用之用量作為基準而適當地選擇。再者，其他藥劑亦可將任意2種以上以適當之比例組合而投予。再者，該其他藥劑，不僅為迄今已發現者，亦包含今後被發現者。
例如，在將本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等適當使用於I型糖尿病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療的情況，亦可與選自胰島素製劑(例如，人類胰島素、甘精胰島素、離脯胰島素、地特胰島素、門冬胰島素等)、磺醯脲劑(例如，格列本脲、格列齊特、格列美脲等)、速攻型胰島素分泌促進藥(例如，那格列奈等)、雙胍類製劑(例如，二甲雙胍等)、胰島素抗性改善藥(例如，吡格列酮等)、α-葡萄糖苷酶抑制藥(例如，阿卡波糖、伏格列波糖等)、糖尿病性神經症治療藥(例如，伊帕司他、脈序律、咪達普利等)、GLP-1類似物製劑(例如，利拉鲁肽、艾塞那肽、利西拉來等)及DPP-4抑制劑(例如，西他列汀、維格列汀、阿格列汀等)等的任何一種以上之藥劑組合使用。
再者，例如，將本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等適用於多發性硬化症之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療時，可與選自下列的任何一種以上之藥劑組合使用：類固醇藥(例如，乙酸可體松、氫化可體松、磷酸氫化可體松鈉、琥珀酸氫化可體松鈉、乙酸氟可體松、潑尼松龍、乙酸潑尼松龍、琥珀酸潑尼松龍鈉、丁基乙酸潑尼松龍、磷酸潑尼松龍鈉、乙酸鹵潑尼松、甲基潑尼松龍、乙酸甲基潑尼松龍、琥珀酸甲基潑尼松龍鈉、安西諾隆、乙酸安西諾隆、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、地塞米松、乙酸地塞米松、磷酸地塞米松鈉、棕櫚酸地塞米松、乙酸帕拉米松、倍他米松等)、干擾素β-1a、干擾素β-1b、乙酸格拉替雷、米托蒽醌、硫唑嘌呤、環磷醯胺、環孢黴 素、甲胺蝶呤、可拉屈濱、副腎皮質刺激荷爾蒙(ACTH)、促腎上腺皮質激素、咪唑立濱、他克莫司、芬戈莫德及阿侖單抗等。
再者，例如，在將本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等適用於全身性紅斑性狼瘡之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療時，亦可與選自下列的任何一種以上之藥劑組合使用：類固醇藥(例如，上述記載之類固醇藥)、免疫抑制劑(例如，環孢黴素、他克莫司、芬戈莫德等)及貝利木單抗。
例如，在將本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等適用於關節風濕病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療時，可與選自下列的任何一種以上之藥劑組合使用：類固醇藥(例如，上述記載之類固醇藥)、抗風濕病藥(例如，甲胺蝶呤、撒樂腸溶錠、布西拉明、來氟米特、咪唑立濱、他克莫司等)或抗細胞激素藥(例如，英夫利昔單抗、阿達木單抗、托珠單抗、依那西普、戈利木單抗及塞妥珠單抗等)及阿巴西普等。
在適用於其他自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療的情況，可將本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體等與上述記載的其他藥劑之任何一種以上組合使用。
藉由下述實施例進一步詳細地說明本發明，然而本發明之範圍不以此為限。所屬技術領域具有通常知識者可依據本發明之記載進行各種變更、修飾，此等變更、修飾亦包含於本發明。
[實施例]
實施例1：使用重組人類PD-1-Fc融合蛋白對MeMo(註冊商標)小鼠之免疫
就取得本發明之與PD-1特異性結合之第一臂的方法而言，選擇對MeMo(註冊商標)小鼠(參照WO2009/157771)以重組人類PD-1蛋白質進行免疫之方法。MeMo(註冊商標)小鼠，係將包含非重組人類重鏈V基因區域、D基因區域及J基因區域以及重組人類κ輕鏈IgVκ1-39*01/IGJκ1*01生殖細胞系列型基因之基因斷片，以連結於小鼠恆定區域基因之方式而使基因經改變的小鼠，藉由將抗體之標的蛋白質進行直接免疫，而可產生由具有多樣性之重鏈及共通輕鏈構成的抗體。
對12至16週齡之12隻MeMo(註冊商標)小鼠，分別以使用Gerbu adjuvant MM(Gerbu Biotechnik，型號#3001)乳液化後的重組人類PD-1-Fc融合蛋白質(R&D Systems，型號1086-PD)，每隔14日進行免疫。在免疫第0日、第14日及第28日，將該重組人類PD-1-Fc融合蛋白質進行皮下投予，隨後之時程，則以溶解於PBS之該重組人類PD-1-Fc融合蛋白質進行皮下投予。在免疫第21日、第35日、第56日、第77日及第98日，使用強制表現人類PD-1之HEK293T細胞株，藉由流式細胞術評估血清中抗體價。在稀釋1000倍之血清中將強制表現人類PD-1之HEK293T細胞株染色時，將相對於作為對照的人類PD-1非表現HEK293T細胞株，MFI值增加3倍以上之小鼠之淋巴組織，使用於噬菌體顯示庫之構築。滿足進入基因庫構築基準的小鼠，從抗體價之評估日開始至3日，以重組PD-1-Fc融合蛋白質進行追加免疫，回收脾臟及鼠蹊部淋巴節。亦回收下列小鼠之脾臟及鼠蹊部淋巴節，該小鼠係相對於人類PD-1及食蟹猴PD-1之血清中抗體價為1/100以上，且經由追加免疫而抗體價未上升者。從該等淋巴組織萃取RNA後，進行cDNA合成。
實施例2：用於抗PD-1抗體取得之噬菌體顯示庫的構築(蛋白免疫)
使用實施例1中所調製之DNA，使用對免疫球蛋白重鏈可變區域家族特異之引子進行PCR反應。將該PCR產物以限制酵素SfiI及XhoI切斷後，將其插入至使用該限制酵素切斷之噬菌粒(phargemid)載體[包含編碼共通輕鏈之基因(人類κ輕鏈IgVκ1-39*01/IGJκ1*01生殖細胞系列型基因)]，而構築該基因庫。
實施例3：抗PD-1抗體之篩選
使用塗覆有人類PD-1-Fc融合蛋白質、人類PD-1-His標籤融合蛋白質、食蟹猴PD-1-His標籤融合蛋白質或小鼠PD-1-His標籤融合蛋白質之盤，根據對PD-1之結合性實施噬菌體選拔。在使用人類PD-1-Fc融合蛋白質時，與噬菌體培育間，藉由添加人類IgG(SIGMA，型號I4506)，吸收Fc反應性殖株。將與人類PD-1、食蟹猴PD-1及小鼠PD-1結合的結合噬菌體濃縮。藉由強制表現食蟹猴PD-1之HEK293T細胞株的選拔，將與食蟹猴PD-1結合之噬菌體濃縮。取得利用藉由選拔所得到之噬菌體而經轉形的大腸菌株TG1之殖株，並製作出母盤(master plate)。
再者，根據吸附有人類PD-1-Fc融合蛋白質之盤上之對PD-1的結合性，從上述選拔得到的殖株之周質(periplasm)萃取物，實施噬菌體選拔。此外，就選擇之基準而言，相對於以陰性對照孔(PBS)得到之信號(OD450值)，將得到3倍以上之信號者當作陽性殖株。
實施例4：抗PD-1抗體之候補殖株之DNA定序
實施藉由實施例3之篩選取得的陽性殖株之重鏈可變區域基因之DNA定序。所解析之DNA序列被分類為超級叢集(super cluster)(重鏈CDR3為相同長度，該CDR3之胺基酸序列為70%以上相同之一群)及叢集(cluster)(重鏈CDR3之胺基酸序列為相同之一群)。取得數百個殖株，將彼等分類為超級叢集及叢集。
實施例5：藉由對於PD-1表現細胞之結合性評估進行的篩選
從所分類之各個超級叢集，選取滿足以下條件的抗PD-1單株抗體殖株並單離。
(1)體細胞突變被高頻率地導入至CDR區域，
(2)具有使用頻率高之VH的生殖細胞系列型基因，及
(3)在對人類PD-1-Fc融合蛋白質之結合性篩選中得到高信號。
使用該等周質萃取物所含的Fab斷片，以抗小鼠IgG多株抗體檢測其對強制表現人類PD-1之CHO-S細胞株、強制表現食蟹猴PD-1之CHO-S細胞株的結合性，藉此進行評估。在所評估之117個殖株(105種叢集)中，於包含抗PD-1單株抗體殖株PD1-1、PD1-2、PD1-3及PD1-4的22個殖株，確認對人類PD-1表現CHO-S細胞株之結合性。
實施例6：抗PD-1單株抗體之胺基酸置換體之製作
殖株PD1-1及PD1-4係在其重鏈可變區域之框架4包含脫醯胺化模體(motif)(Asn-Gly)。以取得脫醯胺化之風險經降低的PD-1臂為目的，製作該脫醯胺化模體經變換的變異體。製造並單離殖株PD1-5，該殖株PD1-5係殖株 PD1-4之依據EU編號系統之第119號的天冬醯胺酸(Asn)藉由周知之部位特異性變異法改變成為麩醯胺酸者。該殖株PD1-5對強制表現人類PD-1之CHO-S細胞的結合性，係與殖株PD1-4同等。
實施例7：使用CD19表現質體載體對MeMo(註冊商標)小鼠之免疫
就取得本發明之與CD19特異性結合之第二臂的方法而言，選擇以人類CD19表現質體載體及食蟹猴CD19表現質體載體對MeMo(註冊商標)小鼠(參照WO2009/157771)進行免疫的方法。
MeMo(註冊商標)小鼠，係以使包含非重組人類重鏈V基因區域、D基因區域及J基因區域以及重組人類κ輕鏈IgVκ1-39*01/IGJκ1*01生殖細胞系列型基因的基因斷片與小鼠恆定區域基因連結之方式，而使基因經改變的小鼠，藉由表現抗體之標的蛋白質的質體載體，對MeMo(註冊商標)進行免疫，而可產生由具有多樣性之重鏈及共通輕鏈構成的抗體。
以人類CD19表現質體載體及/或食蟹猴CD19表現質體載體各別或交互地對12至16週齡之12隻MeMo(註冊商標)小鼠進行免疫。表現質體載體係於免疫第0日、第3日、第6日、第14日、第17日、第28日、第31日、第42日、第49日、第63日及/或第70日投予。藉由使用人類CD19表現細胞株之流式細胞術，評估血清中抗體價。在稀釋100倍之血清中將人類CD19表現細胞株染色時，將與作為對照的人類CD19非表現細胞株相比，MFI值增加3倍以上之小鼠的淋巴組織，用於噬菌體顯示庫(phage display library)之構築。滿足進入庫構築之基準的小鼠，於追加免疫後，回收脾臟及鼠蹊部淋巴 節。從該等淋巴組織萃取RNA後，藉由使用IgG恆定區域特異性引子之逆轉錄反應，進行cDNA合成。
實施例8：取得CD19抗體用之噬菌體顯示庫的構築
從於實施例7調製之DNA，使用對免疫球蛋白重鏈可變區域家族具特異性之引子進行PCR反應。將該PCR產物以限制酵素切斷後，插入至使用該限制酵素切斷後之噬菌粒載體[包含編碼共通輕鏈之基因(人類κ輕鏈IgVκ1-39*01/IGJκ1*01生殖細胞系列型基因)]，而構築該庫。
實施例9：抗CD19抗體之篩選
使用人類CD19-Fc融合蛋白質(R&D systems，型號9269-CD)、食蟹猴CD19-Fc融合蛋白質(NovoPro Bioscience，型號504385)、人類B細胞株Raji或強制表現食蟹猴CD19之HEK293T細胞株，依據對CD19之結合性實施噬菌體選拔。取得以藉由選拔所得到之噬菌體轉形後的大腸菌株TG1之殖株，製作母盤。此外，就選擇基準而言，相對於陰性對照所得到之信號(OD450值或MFI)，將得到3倍以上之信號者當作陽性殖株。
實施例10：抗CD19抗體之候選殖株之DNA定序
實施藉由實施例9之篩選所取得的陽性殖株之重鏈可變區域基因的DNA定序。所解析之DNA序列，被分類為超級叢集(重鏈CDR3為相同之長度，重鏈可變區域之胺基酸序列相互地為70%以上相同之一群)及叢集(重鏈CDR3及重鏈可變區域之胺基酸序列分別彼此相同之一群)。
在初次篩選中，取得數百個殖株，將該等分類為超級叢集、叢集及4種生殖細胞系列。在第2次篩選中，取得數百個殖株，分類為超級叢集、叢集及8種生殖細胞系列。其中，19種超級叢集與初次篩選不同。
實施例11：藉由對CD19之結合性評估進行之的篩選
從分類之各超級叢集，選取滿足以下條件的抗CD19單株抗體殖株並單離。
(1)體細胞突變被高頻率地導入至CDR區域，
(2)具有使用頻率高的VH之生殖細胞系列型基因，及
(3)在對CD19之結合性篩選中得到高信號。
使用該等周質萃取物所含的Fab斷片，評估對CD19之結合性。
在所評估之殖株中，於包含抗CD19單株抗體殖株CD19-1、CD19-2、CD19-3、CD19-4及CD19-5之複數個殖株中，確認對人類CD19表現細胞株之結合性。
實施例12：PD-1/CD19雙特異性抗體之調製
表現與PD-1特異性結合之第一臂的各個重鏈之表現載體，係將編碼實施例5及實施例6所選出之抗PD-1單株抗體殖株PD1-1至PD1-5之各個重鏈可變區域的DNA，分別連結編碼IgG1重鏈恆定區域之DNA而製作。另一方面，表現與CD19特異性結合之第二臂的重鏈之表現載體，係將編碼實施例11所選出的抗CD19單株抗體殖株CD19-1至CD19-5之重鏈可變區域的DNA，與編碼IgG1重鏈恆定區域之DNA連結而製作。在此，表現該等重鏈恆定區域的基 因中，在與PD-1特異性結合之第一臂的情況，使用表現具有L351D/L368E變異(DE變異)之Fc區域者；在與CD19特異性結合之第二臂的情況，使用具有L351K/T366K變異(KK變異)之Fc區域者。此等表現載體中，為一起表現IGVK1-39/JK1共通輕鏈，以包含編碼其之基因的方式構築。再者，表現此等重鏈恆定區域之基因中，為了分別使Fc效應子活性消失，以重鏈恆定區域之第235號白胺酸被置換成甘胺酸，第236號甘胺酸被置換成精胺酸而表現的方式改變，再者，為了迴避轉譯後之程序，使用改變成重鏈恆定區域C末端第447號之離胺酸缺失者。將此等表現載體一起對Free Style 293F細胞進行基因導入，於培養上清液中使抗體產生。回收培養上清液，藉由蛋白質A親和性層析處理，分別精製出本發明之PD-1/CD19雙特異性單株抗體的殖株CD19-1(Bi)、殖株CD19-2(Bi)、殖株CD19-3(Bi)、殖株CD19-4(Bi)及殖株CD19-5(Bi)。
此外，此等PD-1/CD19雙特異性抗體殖株，在具有與CD19特異性結合之第二臂係源自其製作中所使用的抗CD19單株抗體殖株CD19-1、CD19-2、CD19-3、CD19-4及CD19-5的觀點而言，係分別對應於該等抗CD19單株抗體殖株。再者，此等PD-1/CD19雙特異性抗體殖株，任一者皆具有源自PD1-5之與PD-1特異性結合之第一臂。
實施例13：抗CD19單株抗體之變異體及對應該等的PD-1/CD19雙特異性抗體之製作
在實施例12中所製作之PD-1/CD19雙特異性抗體殖株，在為了醫藥品化之放大規模的生產步驟中，有無法充分地達成與第一臂重鏈/輕鏈複合物、第二 臂重鏈/輕鏈複合物及/或屬於該等之各同型二聚物的副產物之分離精製之情形。因此，在陽離子交換層析精製時，以提升該雙特異性抗體與該副產物之分離為目的，製作出等電點經提升的抗CD19單株抗體之胺基酸變異體。
將表示殖株CD19-5之VH之胺基酸序列的序列編號30中之第114號之麩醯胺酸，藉由周知之部位特異性變異法製造出置換成精胺酸之變異體。此外，在本發明中，將該變異體命名為「CD19-6」。再者，各抗體之等電點，係使用基因及胺基酸序列解析軟體Genetyx(Genetyx股份有限公司)來計算。
再者，藉由周知之基因改變手法，製作出於具有CD19-6之VH的重鏈之C末端(惟，具有屬於C末端胺基酸之離胺酸)分別附加有甘胺酸及序列編號67至70所示之肽之型態的各變異體(以下，將此等統合記載為「CD19-6/C末端肽附加物」)。此外，在本發明中，於CD19-6之該C末端附加有序列編號67所示之肽之型態的變異體被命名為「CD19-7」。
依照與實施例12同樣之手法，將此等分別插入有編碼抗CD19單株抗體之變異體的各DNA及編碼殖株PD1-5之DNA之該實施例記載之各表現載體，基因導入至Free Style 293F細胞，並於培養上清液中使抗體產生。回收培養上清液，藉由用蛋白質A親和性層析進行處理，分別將本實施例中所製作的源自各變異體的本發明之雙特異性抗體精製。此等之中，將源自CD19-6之該雙特異性抗體命名為「CD19-6(Bi)」，將源自CD19-7之該雙特異性抗體殖株命名為「CD19-7(Bi)」。
實施例14：PD-1/CD19雙特異性抗體與副產物之精製分離的檢討
針對在實施例12及13中分別製作的PD-1/CD19雙特異性抗體，檢討與該等製造中可能生成之副產物間的精製分離是否成功。
將實施例12及13中分別回收之該雙特異性抗體所包含的培養上清液，另外藉由蛋白質A親和性層析及大小排除層析處理，將該雙特異性抗體及相當於副產物之抗PD-1抗體及抗CD19抗體分別精製。
將包含此等各精製抗體之溶劑，以成為pH6.0之方式，藉由超過濾法(Ultrafiltration method)進行緩衝液置換。將緩衝液置換後之各精製抗體施加於使用緩衝液A(pH7.0)平衡化後的陽離子交換管柱TSKgel SP-STAT Column(東曹，型號0021964)中。藉由使用了包含1mol/L氯化鈉之緩衝液B(pH7.0)的鹽梯度，將結合於管柱之各精製抗體溶出。此外，將移動相之流速設為0.5mL/分鐘，溶出設定成緩衝液A至緩衝液B之直線性梯度，將施加各精製抗體開始後0至10分鐘，緩衝液B設為0%，經10至40分鐘將緩衝液B從0%直線性地增加至100%，於40至50分時將緩衝液B設為100%。
殖株CD19-2(等電點：8.32)、CD19-5(等電點：8.40)、CD19-6(等電點：8.49)及CD19-7(等電點：8.75)之陽離子交換管柱中的保持時間(分鐘)，分別為15.167、15.185、15.749及17.521；針對殖株CD19-6及CD19-7係延長保持時間。另一方面，殖株PD1-3(等電點：7.67)及PD1-5(等電點：7.52)未結合於陽離子交換管柱而溶出。
另一方面，PD-1/CD19雙特異性抗體殖株CD19-2(Bi)及CD19-5(Bi)未結合於陽離子交換管柱而溶出，惟，殖株CD19-6(Bi)及CD19-7(Bi)之保持時間(分)為13.715及14.955。
如上述，藉由第二臂中的胺基酸置換或對其重鏈C末端之附加特定肽而提昇等電點，藉此，在陽離子交換層析精製時，謀求提升屬於目標物之本發明之雙特異性抗體與屬於副產物之抗PD-1抗體及抗CD19抗體的分離，而成為可提供該副產物之混入經極度地減低的本發明之雙特異性抗體。
實施例15：PD-1/CD19雙特異性抗體之結合性評估
藉由使用人類IgG1-Fc融合人類PD-1細胞外區域重組蛋白質(R&D systems，型號1086-PD)之Biacore測定，評估實施例12及13中所取得的PD-1/CD19雙特異性單株抗體之第一臂對PD-1重組蛋白質的結合親和性。此外，該重組蛋白質之固定化，係使用Series S Sensor Chip CM5感測晶片(GE Healthcare，型號29-1049-88)。
同樣地，藉由使用人類IgG1-Fc融合人類CD19細胞外區域重組蛋白質(R&D systems，型號9269-CD)的Biacore測定，評估該抗體之第二臂的CD19結合親和性。將各殖株之第一臂對PD-1之結合親和性(Kd值)以及第二臂對CD19之結合親和性示於圖11。與具有未受實施例13之胺基酸置換之結構的CD19-5(Bi)之活性相比，確認提升了CD19-6(Bi)對PD-1及CD19之各結合親和性。
實施例16：PD-1/CD19雙特異性抗體之結合性確認
確認實施例12及13中所取得的PD-1/CD19雙特異性抗體分別與人類PD-1、食蟹猴PD-1、人類CD19及食蟹猴CD19特異性結合。對於強制表現人類PD-1之CHO-S細胞株、強制表現食蟹猴PD-1之CHO-S細胞株、CHO-S細胞 株、強制表現人類CD19之CHO-K1細胞株、強制表現食蟹猴CD19之CHO-K1細胞株及CHO-K1細胞株，分別添加殖株CD19-1(Bi)至CD19-6(Bi)，於冰上進行20分鐘培育。將細胞洗淨後，添加100μL之PE標識山羊抗人類IgG-FcF(ab’)2斷片抗體(ThermoFisher，型號H10104)，並於冰上培育20分鐘。將細胞洗淨後，藉由流式細胞術評估該抗體之第一臂之PD-1結合性及第二臂之CD19結合性。將該檢定之結果示於圖12至圖16。
任一殖株均與人類PD-1、食蟹猴PD-1、人類CD19及食蟹猴CD19結合。再者，未檢驗出此實驗系統之非特異性結合。
確認實施例12中所取得的PD-1/CD19雙特異性單株抗體同時與PD-1及CD19分別特異性結合。首先，對於強制表現人類CD19之CHO-K1細胞株及CHO-K1細胞株，分別添加殖株CD19-1(Bi)至CD19-5(Bi)，並於冰上培育20分鐘。將細胞洗淨後，添加100μL之6×His標籤融合人類PD-1細胞外區域重組蛋白質(R&D systems，型號8986-PD)，並於冰上培育20分鐘。將細胞洗淨後，添加100μL之AlexaFluor488標識小鼠抗His標籤抗體(MBL，型號D291-A48)，並於冰上培育20分鐘。將細胞洗淨後，藉由流式細胞術，評估人類PD-1細胞外區域重組蛋白質之結合量。將該檢定之結果示於圖17。
任一殖株均同時與PD-1及CD19結合。再者，未檢驗出此實驗系統中的非特異性結合。
實施例17：PD-1/CD19雙特異性抗體之第一臂的結合特性評估
為了評估實施例12中所取得的PD-1/CD19雙特異性抗體之第一臂對PD-1/PD-L1結合之影響，進行關於該雙特異性抗體殖株及可溶性PD-L1重組蛋白 質對PD-1之結合的競爭結合檢定。首先，對於強制表現人類PD-1之CHO-S細胞株，於冰上分別添加殖株CD19-1(Bi)至CD19-5(Bi)、尼武單抗(nivolumab)及抗人類PD-1抗體J105(Immunology Letters,2002,Vol.83,Issue 3,p.215-220)。再者，使用生物素標識用套組(同仁化學研究所，型號LK03)，於冰上添加生物素化的可溶性PD-L1重組蛋白質(R&D systems，型號156-B7)。將細胞洗淨後，於冰上添加APC標識鏈黴親和素(streptavidin)(BioLegend，型號405207)。將細胞洗淨後，藉由流式細胞術，評估可溶性PD-L1重組蛋白質之結合量。將其結果示於圖18。
殖株CD19-1(Bi)至CD19-5(Bi)係容許可溶性PD-L1重組蛋白質對PD-1之結合。另一方面，尼武單抗及J105係在相同條件下，完全地抑制可溶性PD-L1重組蛋白質對PD-1之結合。
再者，將實施例5中取得的抗PD-1單株抗體殖株PD1-1至PD1-4分別作為第一臂的雙特異性抗體，藉由同樣之評估，確認其容許可溶性PD-L1重組蛋白質對PD-1之結合。
實施例18：PD-1/CD19雙特異性抗體對活化B細胞之試管中(in vitro)抑制作用
從來自健康人類之末梢血單核細胞(LONZA，型號CC-2702)，藉由B Cell分離套組(Isolation Kit)II,human(Miltenyi Biotec，型號130-091-151)分離B細胞，使用該B細胞評估對人類IgM產生之抑制作用。在細胞培養盤中播種人類B細胞，添加抗人類CD79B抗體(LifeSpan Biosciences，型號LS-C134648)、人類CD40L重組蛋白質(Enzo Life Sciences，型號ALX-522-110)、人類IL-21重組蛋白質(R&D systems，型號8879-IL)，並進行活化處置。處置殖株CD19- 1(Bi)至CD19-5(Bi)或對照抗體，藉由ELISA法(ThermoFisher，型號BMS2098)定量活化處置後之培養上清液中所含的IgM。將其結果示於圖19。殖株CD19-1(Bi)至CD19-5(Bi)均抑制IgM產生。此外，圖中之IgM產生量(ng/mL)，係以平均值±標準誤差(N=4)表示。
實施例19：PD-1/CD19雙特異性抗體對活化B細胞之生體中(in vivo)抑制作用
使用移植了來自健康人類之末梢血單核細胞(LONZA，型號CC-2702)的NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ小鼠(以下，簡稱為NSG小鼠)，評估對人類IgG2產生之抑制作用。對每1隻NSG小鼠移植1×107個來自健康人類之末梢血單核細胞。在移植第3日、第7日、第10日、第14日及第17日，將殖株CD19-1(Bi)至CD19-4(Bi)或對照抗體以3mg/kg之投予量，分別以1日1次進行腹腔內投予。在移植第21日，從尾靜脈進行採血並調製血清。另一方面，關於殖株CD19-5(Bi)及CD19-6(Bi)，在移植第3日、第7日及第10日，以同樣之用法用量，分別進行腹腔內投予。此時亦以並行方式，將對照抗體進行腹腔內投予。在移植第14日從尾靜脈進行採血並調製血清。藉由ELISA法(ThermoFisher，型號BMS2093)定量血清中所含的人類IgG2。在圖20及21中顯示其結果。殖株CD19-1(Bi)至CD19-6(Bi)均抑制IgG2產生。此外，圖中之IgG2產生量(μg/mL)，係以平均值±標準誤差(N=4至8)表示。
實施例20：對於PD-1/CD19雙特異性抗體對PD-1之結合的交叉競爭性之評估
為了評估雙特異性抗體對PD-1之結合的交叉競爭性，進行競合結合檢定，該雙特異性抗體係將在PD-1/CD19雙特異性抗體之製作中所使用的抗PD-1單株抗體之各殖株PD1-1至PD1-5作為第一臂者。
首先，對於表現人類PD-1之CHO-S細胞株，於冰上添加以殖株PD1-5作為第一臂的雙特異性抗體。再者，分別添加各以生物素標識之殖株PD1-1至PD1-5作為第一臂的雙特異性抗體，並於冰上培育。將細胞洗淨後，添加PE標識鏈黴親和素(BD Pharmingen，型號554061)，並於冰上培育。將細胞洗淨後藉由流式細胞術，評估生物素標識之該抗體的結合量。
以殖株PD1-5作為第一臂之雙特異性抗體，抑制分別以殖株PD1-1至PD1-4作為第一臂之該抗體對PD-1的結合，可確認彼等對PD-1之結合進行交叉競爭。
實施例21：PD-1/CD19雙特異性抗體在試管中(in vitro)對於從人類末梢血單核細胞之細胞激素釋出的作用的評估
以解析PD-1/CD19雙特異性抗體之細胞激素釋出活性為目的，分別實施本發明之雙特異性抗體殖株及小鼠抗人類CD3抗體OKT3(BioLegend，型號317304)添加至人類末梢血單核細胞(以下，稱為人類PBMC)的實驗。
對人類PBMC(LONZA，型號CC-2702)添加殖株CD19-6(Bi)及OKT3並進行培養。藉由使用了細胞計數珠陣列(Cytometric Bead Array)(BD Biosciences，型號551809)之流式細胞術，定量培養上清液中所含的IL-2。將其結果示於圖22。此外，圖中之IL-2產生量(pg/mL)，係以平均值±標準誤差(N=3)表示。
與OKT3顯著地誘導IL-2產生相比，未觀察到藉由CD19-6(Bi)所致的IL-2產生。
實施例22：PD-1/CD19雙特異性抗體之物理化學穩定性評估
本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體，在藉由示差掃描熱析法(DSC)之結構穩定性評估、藉由擴散係數變化率(DLS)測定之膠體穩定性及應力條件下(例如，pH3至4/5℃下或pH7/5℃下/凍結熔解5次)的化學穩定性(例如，蛋白質濃度變化、分子構造變化、有無會合/凝集、有無電荷變異體(charge variant)生成、構造變化及對CD19之結合性)的任一項物理化學穩定性評估中，均確認顯示良好之性能。
[產業上之可利用性]
本發明之PD-1/CD19雙特異性抗體或其抗體斷片，在自體免疫疾病或移植物對抗宿主疾病(GVHD)之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療上有用。

Claims (41)

  1. 一種雙特異性抗體或其抗體斷片，係與PD-1及CD19分別特異性結合，並且，具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD19特異性結合之第二臂，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂具有選自下列(A)至(E)之任一VH：
    (A)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號6之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號7之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號8之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (B)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號9之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號10之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號11之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (C)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號12之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號13之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號14之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (D)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號15之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號16之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號17之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
    (E)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號18之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號19之胺基酸序列構成的VH-CDR2及
    (c)由序列編號20之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
    該與CD19特異性結合之第二臂具有選自下列(A)至(E)之任一VH：
    (A)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (B)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (C)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (D)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
    (E)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2及
    (c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
    在此，在與PD-1特異性結合之第一臂的VH中之選自VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3之任一個或複數個CDR中，各個任意1至5個胺基酸殘基可經置換成保守性胺基酸，及/或，在與CD19特異性結合之第二臂的VH中之選自VH-CDR1、VH-CDR2及VH-CDR3之任一個或複數個CDR中，各個任意1至5個胺基酸殘基可經置換成保守性胺基酸。
  2. 如請求項1所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂具有選自下列(A)至(E)之任一VH：
    (A)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號6之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號7之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號8之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (B)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號9之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號10之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號11之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (C)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號12之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號13之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號14之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (D)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號15之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號16之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號17之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
    (E)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號18之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號19之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號20之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
    該與CD19特異性結合之第二臂具有選自下列(A)至(E)之任一VH：
    (A)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (B)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (C)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (D)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
    (E)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
  3. 如請求項1或2所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
    (i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
    (a)由序列編號6之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號7之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號8之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
    (ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
    (A)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (B)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (C)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (D)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
    (E)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
  4. 如請求項1或2所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
    (i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
    (a)由序列編號9之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號10之胺基酸序列構成的VH-CDR2及
    (c)由序列編號11之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
    (ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
    (A)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (B)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (C)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (D)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
    (E)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
  5. 如請求項1或2所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
    (i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
    (a)由序列編號12之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號13之胺基酸序列構成的VH-CDR2及
    (c)由序列編號14之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
    (ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
    (A)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (B)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (C)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (D)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
    (E)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
  6. 如請求項1或2所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
    (i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
    (a)由序列編號15之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號16之胺基酸序列構成的VH-CDR2及
    (c)由序列編號17之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
    (ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
    (A)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (B)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (C)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (D)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
    (E)具有下列(a)至(c)之VH、
    (a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
  7. 如請求項1或2所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，
    (i)該與PD-1特異性結合之第一臂的VH具有下列(a)至(c)：
    (a)由序列編號18之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號19之胺基酸序列構成的VH-CDR2及
    (c)由序列編號20之胺基酸序列構成的VH-CDR3；
    (ii)該與CD19特異性結合之第二臂的VH係選自下列(A)至(E)之任一VH：
    (A)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號35之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號36之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號37之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (B)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號38之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號39之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號40之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (C)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號41之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號42之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號43之胺基酸序列構成的VH-CDR3，
    (D)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號44之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號45之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號46之胺基酸序列構成的VH-CDR3，以及
    (E)具有下列(a)至(c)之VH，
    (a)由序列編號47之胺基酸序列構成的VH-CDR1、
    (b)由序列編號48之胺基酸序列構成的VH-CDR2、及
    (c)由序列編號49之胺基酸序列構成的VH-CDR3。
  8. 如請求項1至7中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH之FR1、FR2及FR3區域，係分別對應於生殖細胞系列型V基因IGHV7-4-1之可經受體細胞突變的該基因所編碼的胺基酸序列；FR4區域係由生殖細胞系列型J基因JH6c之可經受體細胞突變之該基因所編碼的胺基酸序列構成，惟，排除包含於VH-CDR3區域之胺基酸序列。
  9. 如請求項1至8中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂的VH之FR1、FR2及FR3區域，係分別對應於生殖細胞系列型V基因IGHV5-51之可經受體細胞突變的該基因所編碼之胺基酸序列。
  10. 如請求項1至9中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH係由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5的任一個胺基酸序列、或與該VH之胺基酸序列至少80%相同的胺基酸序列構成。
  11. 如請求項1至10中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列、或與該VH之胺基酸序列至少80%相同的胺基酸序列構成。
  12. 如請求項1或2所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂的VH係由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中之任一個胺基酸序列構成，該與CD19特異性結合之第二臂的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成。
  13. 如請求項1至3中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號1之胺基酸序列構成，該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中的任一個胺基酸序列構成。
  14. 如請求項1、2或4所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號2之胺基酸序列構成，該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成。
  15. 如請求項1、2或5所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號3之胺基酸序列構成，該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成。
  16. 如請求項1、2或6所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號4之胺基酸序列構成，該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由選自序列編號30、序列編號31、 序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成。
  17. 如請求項1、2或7所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂中的VH係由序列編號5之胺基酸序列構成，該與CD19特異性結合之第二臂中的VH係由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成。
  18. 如請求項1至17中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂及/或該與CD19特異性結合之第二臂分別具有VL，該VL具有下列(a)至(c)：
    (a)由序列編號26之胺基酸序列構成的VL-CDR1、
    (b)由序列編號27之胺基酸序列構成的VL-CDR2、及
    (c)由序列編號28之胺基酸序列構成的VL-CDR3。
  19. 如請求項1至17中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂及/或該與CD19特異性結合之第二臂，係分別具有由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
  20. 一種雙特異性抗體或其抗體斷片，係與PD-1及CD19分別特異性結合，且具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD19特異性結合之第二臂，並且其係包含：
    (A)與PD-1特異性結合之第一臂，係具有由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中之任一個胺基酸序列構成的VH，以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL，以及
    (B)與CD19特異性結合之第二臂，係具有由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成的VH，以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL。
  21. 一種雙特異性抗體或其抗體斷片，係與PD-1及CD19分別特異性結合，並且，具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD19特異性結合之第二臂，其中，該與PD-1特異性結合之第一臂係與下列(1)或(2)交叉競爭對PD-1之結合：(1)與PD-1特異性結合的第一臂，係具有由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL；(2)與PD-1特異性結合之單株抗體的可變區域，係由該VH及VL構成者。
  22. 一種雙特異性抗體或其抗體斷片，係與PD-1及CD19分別特異性結合，並且，具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD19特異性結合之第二臂，其中，由該與PD-1特異性結合之第一臂所致之對PD-1之結合，係藉由下列(1)或(2)進行交叉競爭，(1)與PD-1特異性結合的第一臂，係具有由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號25之胺基酸序列構成的VL；(2)與PD-1特異性結合之單株抗體的可變區域，係由該VH及VL構成者。
  23. 如請求項21或22所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與CD19特異性結合之第二臂進一步與下列(1)或(2)交叉競爭對CD19之結合：(1)與CD19特異性結合的第二臂，係具有由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成的VH以及 由序列編號25之胺基酸序列構成的VL；(2)與CD19特異性結合之單株抗體的可變區域，係由該VH及VL構成者。
  24. 如請求項1至23中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該與PD-1特異性結合的第一臂容許PD-1與PD-L1間之相互作用。
  25. 如請求項1至24中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該雙特異性抗體為IgG抗體。
  26. 如請求項25所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該IgG抗體為IgG1抗體或IgG4抗體。
  27. 如請求項25所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該IgG抗體為IgG1抗體。
  28. 如請求項27所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，係對Fc受體之結合經消失或減弱者。
  29. 如請求項28所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該雙特異性抗體的2個重鏈恆定區域中，依據EU編號系統的第235號之白胺酸分別被置換成甘胺酸，及/或第236號之甘胺酸分別被置換成精胺酸。
  30. 如請求項27至29中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈之恆定區域中，依據EU編號系統的第351號之白胺酸被置換成離胺酸，且第366號之蘇胺酸被置換成離胺酸；具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈之恆定區域中，第351號之白胺酸被置換成天冬胺酸，且第368號之白胺酸被置換成麩胺酸。
  31. 如請求項27至29中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈之恆定區域中，依據EU編號系統的第351號之白胺酸被置換成天冬胺酸，且第368號之白胺酸被 置換成麩胺酸；具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈之恆定區域中，第351號之白胺酸被置換成離胺酸，且第366號之蘇胺酸被置換成離胺酸。
  32. 如請求項27至31中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該雙特異性抗體之2個重鏈恆定區域中，依據EU編號系統的第447號之離胺酸分別欠缺。
  33. 如請求項1至28中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈，係包含由序列編號23之胺基酸序列構成的重鏈恆定區域。
  34. 如請求項1至29、31及33中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，該具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈，係包含由選自序列編號24、序列編號71、序列編號72、序列編號73、序列編號74及序列編號75中之任一個胺基酸序列構成的重鏈恆定區域。
  35. 如請求項1至34中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，其中，具有與PD-1特異性結合之第一臂之VL的輕鏈及/或具有與CD19特異性結合之第二臂之VL的輕鏈，係包含由序列編號29之胺基酸序列構成的輕鏈恆定區域。
  36. 一種雙特異性抗體或其抗體斷片，係與PD-1及CD19分別特異性結合，並且，具有與PD-1特異性結合之第一臂及與CD19特異性結合之第二臂，其中：
    (A)具有與PD-1特異性結合之第一臂之VH的重鏈，係包含由選自序列編號1、序列編號2、序列編號3、序列編號4及序列編號5中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號23之胺基酸序列構成的重鏈恆定區域，
    (B)具有與PD-1特異性結合之第一臂之VL的輕鏈，係包含由序列編號25之胺基酸序列構成的VL及由序列編號29之胺基酸序列構成的輕鏈恆定區域，
    (C)具有與CD19特異性結合之第二臂之VH的重鏈，係包含由選自序列編號30、序列編號31、序列編號32、序列編號33、序列編號34、序列編號62、序列編號63、序列編號64、序列編號65及序列編號66中之任一個胺基酸序列構成的VH以及由序列編號24之胺基酸序列構成的重鏈恆定區域，及
    (D)具有與CD19特異性結合之第二臂之VL的輕鏈，係包含由序列編號25之胺基酸序列構成的VL及由序列編號29之胺基酸序列構成的輕鏈恆定區域。
  37. 一種醫藥組成物，係包含選自請求項1至36中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片，及藥學上可容許之載體。
  38. 一種自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，係包含選自請求項1至36中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分。
  39. 如請求項38所述之自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，其中，自體免疫疾病為貝賽特氏症候群、全身性紅斑性狼瘡、慢性圓板狀紅斑性狼瘡、多發性硬化症、硬皮症、多發性肌炎、皮膚肌炎、結節性動脈周圍炎、大動脈炎症候群、惡性關節風濕病、關節風濕病、青年性特發性關節炎、脊椎關節炎、混合性結締組織病、薛格連氏症候群、成人史迪爾氏病、血管炎、過敏性肉芽腫性血管炎、過敏性血管炎、類風濕血管炎、大型血管炎、ANCA關連血管炎、Cogan氏症候群、RS3PE症候群、顳動脈炎、風濕性多發肌痛症、纖維肌痛症、抗磷脂質抗體症候群、嗜酸性球性肌膜炎、IgG4關連疾病、格林巴利症候群、重症肌無力症、慢性萎縮性胃炎、自體免疫性肝炎、非酒精性脂肪肝炎、原發性膽汁性肝硬變、古德巴斯捷症候群、急速進行性絲球體腎 炎、巨紅血球性貧血、自體免疫性溶血性貧血、惡性貧血、自體免疫性嗜中性球減少症、特發性血小板減少性紫斑病、Basedow病(格雷夫茲病(甲狀腺功能亢進症))、橋本病、自體免疫性副腎功能不全、原發性甲狀腺功能降低症、艾迪生氏病、特發性艾迪生氏病、I型糖尿病、徐緩進行性I型糖尿病、局部性硬皮症、乾癬、乾癬性關節炎、水皰性類天皰瘡、天皰瘡、類天皰瘡、妊娠性皰疹、線狀IgA水皰性皮膚症、後天性表皮水皰症、圓形脫毛症、白斑、尋常性白斑、視神經脊髓炎、慢性炎症性脫髓性多發神經炎、多灶性運動神經病、結節病、巨細胞性動脈炎、肌萎縮性側索硬化症、原田病、自體免疫性視神經症、特發性無精子症、習慣性流產、炎症性腸疾病、乳糜瀉病、強直性脊椎炎、重症氣喘、慢性蕁麻疹、移植免疫、家族性地中海熱、嗜酸性球性副鼻腔炎、擴張型心肌症、全身性肥胖細胞症或封入體肌炎。
  40. 如請求項38或39所述之自體免疫疾病之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，係與選自下列之任一種以上藥劑一起投予：胰島素(insulin)製劑、磺醯脲(sulfonylurea)劑、速攻型胰島素分泌促進藥、雙胍類(biguanide)製劑、胰島素抗性改善藥、α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)抑制藥、糖尿病性神經症治療藥、GLP-1類似物製劑、DPP-4抑制劑、類固醇藥、干擾素β-1a、干擾素β-1b、乙酸格拉替雷(glatiramer acetate)、米托蒽醌(mitoxanthone)、硫唑嘌呤(azathioprine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、環孢黴素(cyclosporine)、甲胺蝶呤(methotrexate)、可拉屈濱(cladribine)、副腎皮質刺激荷爾蒙(ACTH)、促腎上腺皮質激素(corticotropin)、咪唑立濱(mizoribine)、他克莫司(tacrolimus)、芬戈莫德(fingolimod)、阿侖單抗(alemtulumab)、免疫抑制劑、貝利木單抗(belimumab)、抗風濕病藥、抗細胞激素藥及阿巴西普(abatacept)。
  41. 一種移植物對抗宿主疾病(GVHD)之預防、症狀進展抑制、復發抑制及/或治療劑，係包含選自請求項1至36中任一項所述之雙特異性抗體或其抗體斷片作為有效成分。
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