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TW202504612A - 使用抗psgl-1抗體組合jak抑制劑來治療t細胞介導發炎性疾病或癌症的方法 - Google Patents

使用抗psgl-1抗體組合jak抑制劑來治療t細胞介導發炎性疾病或癌症的方法 Download PDF

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TW202504612A
TW202504612A TW111143701A TW111143701A TW202504612A TW 202504612 A TW202504612 A TW 202504612A TW 111143701 A TW111143701 A TW 111143701A TW 111143701 A TW111143701 A TW 111143701A TW 202504612 A TW202504612 A TW 202504612A
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acid sequence
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antibody
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TW111143701A
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林士瑤
蔣鳳琳
葉又嘉
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美商美國全心醫藥生技股份有限公司
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Abstract

本文提供治療或預防有需要之受試者之T細胞介導發炎性疾病或癌症的方法，包括向受試者投與治療有效量的特異性結合至人類PSGL-1之抗體組合Janus激酶(JAK)抑制劑。在一些實施例中，該T細胞介導發炎性疾病為GVHD，例如 ，急性GVHD或慢性GVHD。

Description

使用抗PSGL-1抗體組合JAK抑制劑來治療T細胞介導發炎性疾病或癌症的方法
相關申請案之交互參考
本申請案主張2021年11月17日申請之美國臨時申請案第63/280,463號之權益，該案據此以全文引用的方式併入。 參考電子序列表
電子序列表(606592001640seqlist.xml；大小：38,629個位元組；及建置日期：2022年11月14日)之內容以全文引用方式併入本文。
本文提供治療或預防有需要之受試者之T細胞介導發炎性疾病或癌症的方法，包括向受試者投與治療有效量的特異性結合至人類PSGL-1之抗體組合Janus激酶(Janus kinase；JAK)抑制劑。
T細胞介導發炎性疾病，如移植物抗宿主病(graft-versus-host disease；GVHD)、皮膚病症、多發性硬化、類風濕性關節炎、幼年關節炎、I型糖尿病、狼瘡、發炎性腸病、克羅恩病、重症肌無力、免疫球蛋白腎病、心肌炎及自體免疫性甲狀腺病症，以及白血病及淋巴瘤等癌症代表嚴重健康狀況。例如，急性GvHD (acute GvHD；aGvHD)為造血細胞移植(hematopoietic cell transplantation；HCT)之主要併發症，它導致了大多數非復發死亡。aGvHD之標準一線治療包括1-2 mg/kg普賴松或等效物之劑量的類固醇，完全緩解率(complete response；CR)在25-41%之間。(a)在用2 mg/kg/天當量之甲基普賴蘇穠(methylprednisolone；MP)治療3天後進展，(b)用2 mg/kg/天當量之MP治療7天後沒有改善，(c)在用1 mg/kg/天當量之MP治療皮膚及上消化道GVHD後進展到新器官，或(d)在類固醇減量期間或之後復發的患者被視為類固醇難治性的(Przepiorka 等人, (2019) The oncologist, 24:1-7)。
已知Janus激酶/信號轉導劑及轉錄活化劑(Janus kinase/signal transducer and activator of transcription；JAK/STAT)信號通路與許多血液學及實體癌之發展及進展有關[Waldmann及Chen (2017) Annu Rev Immunol 35:533- 550；Vainchenker及Constantinescu (2013) Oncogene 32(21):2601-2613；Thomas 等人, (2015) Br J Cancer,113:365-71；O’Shea 等人, (2013) N Engl J Med 368:161-70 ]，並且亦與發炎細胞因子對免疫系統之影響有關(Villarino 等人, (2017) Nat Immunol, 18:374-384)。STAT及其上游活化劑JAK正被作為癌症及發炎疾病治療之靶點來予以廣泛研究(Qureshy等人, (2020) J Cancer Metastasis Treat 6:27-44；Hosseini等人, (2020) J Cell Physiol. 235(9):5903-5924)。許多JAK抑制劑已經在發炎疾病或癌症患者的臨床試驗中作為單一療法或與其他藥物組合進行測試或正在積極測試；此等抑制劑中至少有五種已經被美國食品及藥物管理局(Food and Drug Administration；FDA)批准用於治療發炎疾病或癌症，包括類風濕性關節炎、潰瘍性結腸炎、GvHD (Qureshy等人, (2020) J Cancer Metastasis Treat 6:27-44; Damsky 等人, (2021) Journal of Allergy and Clinical Immunology 147(3):814-826)及骨髓纖維化。
盧佐替尼(Ruxolitinib)為JAK 1/2抑制劑，最近被批准用於治療類固醇難治性急性GVHD (steroid-refractory acute GVHD；sr-aGvHD)及慢性GVHD (cGVHD)。儘管盧佐替尼及幾種類型之二級療法獲得批准，但sr-aGvHD之長期結果非常差，死亡率在70-80%之間(Levine 等人, (2010) BBMT, 16(12): 1693-1699)。二線療法失敗(治療難治性)的受試者之結果更令人沮喪。
急性GvHD由來源於供體之同種異體反應性T細胞引起，此等細胞識別並破壞患者組織，包括皮膚、胃腸道及肝臟。靶向及控制或消除高度增殖及高度活化之同種異體反應性T細胞為治療GvHD之基本策略。
長期以來，已知作為參與白細胞運輸之黏附分子的PSGL-1，已被確認為下調慢性增殖/活化T細胞之免疫檢查點調節因子(Chen 等人, (2004) Blood, 104(10): 3233-3242; Huang 等人, (2005) Eur J Immunol, 35(7): 2239-2249)。內胡利珠單抗(Neihulizumab) (AbGn-168H)是一種針對PSGL-1之人源化IgG4κ單株抗體(monoclonal antibody；mAb)，在與PSGl-1結合時優先誘導晚期活化T細胞之凋亡(程序性細胞死亡)。內胡利珠單抗已在GVHD中進行了試驗，臨床結果令人鼓舞。
幾項研究表明，PSGL-1可能為幾種血液惡性腫瘤免疫治療之潛在靶點。例如，基因表現剖析顯示，PSGL-1在多發性骨髓瘤及間變性大T細胞淋巴瘤之細胞中強烈表現，對活體外治療引起之效應的進一步評估亦指明了此等惡性腫瘤之體液免疫治療的一個有前途的候選物(Tripodo等人, (2009) Curr Cancer Drug Targets, 9(5):617-625; Azab等人, (2012) Blood,119(6):1468-1478; Belmonte等人, (2021) Cancers, 13(12):2958-2973)。
仍然需要T細胞介導發炎性疾病及癌症之更有效治療。
本文引用之所有公開案、專利、及專利申請案均出於所有目的在此以全文引用之方式併入。
為了滿足此需要，本文提供使用抗PSGL-1抗體組合JAK抑制劑來治療或預防T細胞介導發炎性疾病或癌症的方法。此等方法至少部分地基於本文中的以下證明：發現抗PSGL-1抗體組合JAK抑制劑協同地起作用以便促進誘導活化T細胞之細胞凋亡並且改善患有GVHD之患者之結果。
因此，在一態樣中，本文提供治療或預防T細胞介導發炎性疾病之方法，該方法包括投與有需要之受試者治療有效量的特異性結合至人類PSGL-1之抗體組合Janus激酶(Janus kinase；JAK)抑制劑。在另一態樣中，本文提供治療或預防癌症( 例如，T細胞介導癌症諸如T細胞白血病或T細胞淋巴瘤)的方法，該方法包括投與有需要之受試者治療有效量的特異性結合至人類PSGL-1之抗體組合Janus激酶(Janus kinase；JAK)抑制劑。在一些實施例中，特異性結合至人類PSGL-1之抗體包含有包含重鏈可變(heavy chain variable；VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(light chain variable；VL)域之輕鏈。在一些實施例中，VH域包含有包含胺基酸序列SFGMH (SEQ ID NO:8)之CDR-H1、包含胺基酸序列YINGGSSTIFYANAVKG (SEQ ID NO:9)之CDR-H2、及包含胺基酸序列YASYGGGAMDY (SEQ ID NO:10)之CDR-H3；並且VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVHNDGNTYFE (SEQ ID NO:5)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:6)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSYVPLT (SEQ ID NO:7)之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含有包含胺基酸序列AYYIH(SEQ ID NO:24)之CDR-H1、包含胺基酸序列RVNPNTGGTSYNPKFKG (SEQ ID NO:25)之CDR-H2、及包含胺基酸序列SGSPYYRYDD(SEQ ID NO:26)之CDR-H3；並且VL域包含有包含胺基酸序列RASSTVNSTYLH (SEQ ID NO:28)之CDR-L1、包含胺基酸序列GSSNLAS (SEQ ID NO:29)之CDR-L2、及包含胺基酸序列QQYSGYPLT (SEQ ID NO:30)之CDR-L3。在一些實施例中，VH域包含有包含胺基酸序列TNAMN (SEQ ID NO:32)之CDR-H1、包含胺基酸序列RIRSKSNNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:33)之CDR-H2、及包含胺基酸序列GGSYWYFDV (SEQ ID NO:34)之CDR-H3；並且VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVNSNGNTYLE (SEQ ID NO:36)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:37)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSHVPWT (SEQ ID NO:38)之CDR-L3。
在一些實施例中，JAK抑制劑抑制JAK1及/或JAK2。在一些實施例中，JAK抑制劑抑制JAK1及/或JAK3。在一些實施例中，JAK抑制劑為盧佐替尼或托法替尼(tofacitinib)。在一些實施例中，抗體為人源化抗體。在一些實施例中，VH域包括胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYINGGSSTIFYANAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYASYGGGAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:4)。在一些實施例中，VL域包括胺基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHNDGNTYFEWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFATYYCFQGSYVPLTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:3)。在一些實施例中，重鏈進一步包含抗體恆定域。在一些實施例中，恆定域為人類IgG4恆定域。在一些實施例中，恆定域為在位置228處包含S228P胺基酸取代的人類IgG4恆定域，其中編號根據EU編號。在一些實施例中，輕鏈為人類κ或λ輕鏈。在一些實施例中，重鏈包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列。在一些實施例中，VH域包含SEQ ID NO:27之胺基酸序列之VH域序列且/或VL域包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之VL域序列。在一些實施例中，重鏈包含SEQ ID NO:27之胺基酸序列且/或輕鏈包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列。在一些實施例中，VH域包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列之VH域序列且/或VL域包含SEQ ID NO:39之胺基酸序列之VL域序列。在一些實施例中，重鏈包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列且/或輕鏈包含SEQ ID NO:39之胺基酸序列。在一些實施例中，特異性結合至人類PSGL-1之抗體包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列。在一些實施例中，輕鏈包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列。
在一些實施例中，T細胞介導發炎性疾病為移植物抗宿主疾病(graft-versus-host disease；GVHD)。在一些實施例中，T細胞介導發炎性疾病為急性GVHD或慢性GVHD。在一些實施例中，T細胞介導發炎性疾病為類固醇難治性急性GVHD (steroid-refractory acute GVHD；SR-aGVHD)或治療難治性急性GVHD (treatment-refractory acute GVHD；TR-aGVHD)。在一些實施例中，T細胞介導發炎性疾病選自由以下組成之群：皮膚病症、多發性硬化、類風濕性關節炎、幼年關節炎、I型糖尿病、狼瘡、發炎性腸病、克羅恩病、重症肌無力、免疫球蛋白腎病、心肌炎及自體免疫性甲狀腺病症。在一些實施例中，癌症為T細胞介導癌症。在一些實施例中，癌症為T細胞白血病或T細胞淋巴瘤。在一些實施例中，人類PSGL-1包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:22之胺基酸序列。在一些實施例中，受試者為人類。在一些實施例中，抗體藉由靜脈內輸注來投與。在一些實施例中，JAK抑制劑經口投與。在一些實施例中，抗體為單株抗體。在一些實施例中，JAK抑制劑在投與抗體之前、之後、或同時投與受試者。在一些實施例中，在投與抗體及JAK抑制劑之前，受試者已經用皮質類固醇治療。在一些實施例中，投與抗體及JAK抑制劑導致受試者中之T細胞介導發炎性疾病之一或多個症狀減少。
在另一態樣中，本文提供在 例如根據以上實施例中之任一者之治療或預防受試者之T細胞介導發炎性疾病或癌症的方法中使用之特異性結合至人類PSGL-1之抗體。在一些實施例中，該方法包括向受試者投與治療有效量的抗體組合Janus激酶(Janus kinase；JAK)抑制劑。在一些實施例中，抗體包含有包含重鏈可變(heavy chain variable；VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(light chain variable；VL)域之輕鏈；其中VH域包含有包含胺基酸序列SFGMH (SEQ ID NO:8)之CDR-H1、包含胺基酸序列YINGGSSTIFYANAVKG (SEQ ID NO:9)之CDR-H2、及包含胺基酸序列YASYGGGAMDY (SEQ ID NO:10)之CDR-H3；並且其中VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVHNDGNTYFE (SEQ ID NO:5)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:6)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSYVPLT (SEQ ID NO:7)之CDR-L3。在一些實施例中，抗體包含有包含重鏈可變(heavy chain variable；VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(light chain variable；VL)域之輕鏈；其中VH域包含有包含胺基酸序列AYYIH(SEQ ID NO:24)之CDR-H1、包含胺基酸序列RVNPNTGGTSYNPKFKG(SEQ ID NO:25)之CDR-H2、及包含胺基酸序列SGSPYYRYDD(SEQ ID NO:26)之CDR-H3；並且VL域包含有包含胺基酸序列RASSTVNSTYLH (SEQ ID NO:28)之CDR-L1、包含胺基酸序列GSSNLAS (SEQ ID NO:29)之CDR-L2、及包含胺基酸序列QQYSGYPLT (SEQ ID NO:30)之CDR-L3。在一些實施例中，抗體包含有包含重鏈可變(heavy chain variable；VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(light chain variable；VL)域之輕鏈；其中VH域包含有包含胺基酸序列TNAMN (SEQ ID NO:32)之CDR-H1、包含胺基酸序列RIRSKSNNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:33)之CDR-H2、及包含胺基酸序列GGSYWYFDV (SEQ ID NO:34)之CDR-H3；並且VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVNSNGNTYLE (SEQ ID NO:36)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:37)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSHVPWT(SEQ ID NO:38)之CDR-L3。
在另一態樣中，本文提供特異性結合至人類PSGL-1之抗體在製造供治療或預防T細胞介導發炎性疾病或癌症之藥物中的用途；其中抗體與Janus激酶(Janus kinase；JAK)抑制劑組合來投與。在另一態樣中，本文提供特異性結合至人類PSGL-1之抗體及Janus激酶(Janus kinase；JAK)抑制劑在製造供治療或預防T細胞介導發炎性疾病或癌症之藥物中的用途。在一些實施例中，該抗體包含有包含重鏈可變(heavy chain variable；VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(light chain variable；VL)域之輕鏈；其中VH域包含有包含胺基酸序列SFGMH (SEQ ID NO:8)之CDR-H1、包含胺基酸序列YINGGSSTIFYANAVKG (SEQ ID NO:9)之CDR-H2、及包含胺基酸序列YASYGGGAMDY (SEQ ID NO:10)之CDR-H3；並且其中VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVHNDGNTYFE (SEQ ID NO:5)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:6)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSYVPLT (SEQ ID NO:7)之CDR-L3。在一些實施例中，該抗體包含有包含重鏈可變(heavy chain variable；VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(light chain variable；VL)域之輕鏈；其中VH域包含有包含胺基酸序列AYYIH (SEQ ID NO:24)之CDR-H1、包含胺基酸序列RVNPNTGGTSYNPKFKG (SEQ ID NO:25)之CDR-H2、及包含胺基酸序列SGSPYYRYDD (SEQ ID NO:26)之CDR-H3；並且VL域包含有包含胺基酸序列RASSTVNSTYLH (SEQ ID NO:28)之CDR-L1、包含胺基酸序列GSSNLAS (SEQ ID NO:29)之CDR-L2、及包含胺基酸序列QQYSGYPLT (SEQ ID NO:30)之CDR-L3。在一些實施例中，該抗體包含有包含重鏈可變(heavy chain variable；VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(light chain variable；VL)域之輕鏈；其中VH域包含有包含胺基酸序列TNAMN (SEQ ID NO:32)之CDR-H1、包含胺基酸序列RIRSKSNNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:33)之CDR-H2、及包含胺基酸序列GGSYWYFDV (SEQ ID NO:34)之CDR-H3；並且VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVNSNGNTYLE (SEQ ID NO:36)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:37)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSHVPWT (SEQ ID NO:38)之CDR-L3。
在另一態樣中，本文提供套組或製品，該套組或製品包括特異性結合至人類PSGL-1之抗體及包裝插頁，該包裝插頁包括使用抗體組合Janus激酶(Janus kinase；JAK)抑制劑來治療或預防受試者之T細胞介導發炎性疾病或癌症的說明書。在一些實施例中，該抗體包含有包含重鏈可變(heavy chain variable；VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(light chain variable；VL)域之輕鏈；其中VH域包含包含胺基酸序列SFGMH (SEQ ID NO:8)之CDR-H1、包含胺基酸序列YINGGSSTIFYANAVKG (SEQ ID NO:9)之CDR-H2、及包含胺基酸序列YASYGGGAMDY (SEQ ID NO:10)之CDR-H3；並且其中VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVHNDGNTYFE (SEQ ID NO:5)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:6)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSYVPLT (SEQ ID NO:7)之CDR-L3。在一些實施例中，該抗體包含有包含重鏈可變(heavy chain variable；VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(light chain variable；VL)域之輕鏈；其中VH域包含有包含胺基酸序列AYYIH (SEQ ID NO:24)之CDR-H1、包含胺基酸序列RVNPNTGGTSYNPKFKG (SEQ ID NO:25)之CDR-H2、及包含胺基酸序列SGSPYYRYDD (SEQ ID NO:26)之CDR-H3；並且VL域包含有包含胺基酸序列RASSTVNSTYLH (SEQ ID NO:28)之CDR-L1、包含胺基酸序列GSSNLAS (SEQ ID NO:29)之CDR-L2、及包含胺基酸序列QQYSGYPLT (SEQ ID NO:30)之CDR-L3。在一些實施例中，該抗體包含有包含重鏈可變(heavy chain variable；VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(light chain variable；VL)域之輕鏈；其中VH域包含有包含胺基酸序列TNAMN (SEQ ID NO:32)之CDR-H1、包含胺基酸序列RIRSKSNNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:33)之CDR-H2、及包含胺基酸序列GGSYWYFDV (SEQ ID NO:34)之CDR-H3；並且VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVNSNGNTYLE (SEQ ID NO:36)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:37)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSHVPWT (SEQ ID NO:38)之CDR-L3。在一些實施例中，套組或製品進一步包含JAK抑制劑。
應瞭解，本文所述之各個實施例的一種、一些或所有特性可經組合以形成本發明之其他實施例。對於熟習此項技術者而言，本發明之此等及其他態樣變得顯而易知。
本文提供治療或預防有需要之受試者之T細胞介導發炎性疾病或癌症的方法，包括向受試者投與治療有效量的特異性結合至人類PSGL-1之抗體組合Janus激酶(Janus kinase；JAK)抑制劑。在一些實施例中，該抗體包含有包含重鏈可變(heavy chain variable；VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(light chain variable；VL)域之輕鏈；其中VH域包含包含胺基酸序列SFGMH (SEQ ID NO:8)之CDR-H1、包含胺基酸序列YINGGSSTIFYANAVKG (SEQ ID NO:9)之CDR-H2、及包含胺基酸序列YASYGGGAMDY (SEQ ID NO:10)之CDR-H3；並且其中VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVHNDGNTYFE (SEQ ID NO:5)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:6)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSYVPLT (SEQ ID NO:7)之CDR-L3。本文進一步提供相關用途及套組/製品。 I. 定義
「抗體」為一種免疫球蛋白分子，能夠藉由位於免疫球蛋白之可變區中的至少一個抗原識別位點與目標(如碳水化合物、多核苷酸、脂質、多肽 等)特異性結合。如本文所用，該術語不僅包括完整多株或單株抗體，亦包括包含其片段的多肽(例如Fab、Fab′、F(ab′) 2、Fv)；單鏈可變片段(scFv)、單鏈雙功能抗體(scDb)、串聯單鏈可變片段(scFv)單元(對於串聯scFv，稱為taFv)及其突變體或其他構型；包含抗體部分之融合蛋白；以及包含抗原識別位點的免疫球蛋白分子之任何其他修飾構型。
抗體包括任何種類之抗體，例如IgG、IgA或IgM (或其亞類)，並且抗體不需要為任何特定種類。視抗體(免疫球蛋白)重鏈恆定域之胺基酸序列而定，可將其歸為不同類別。存在五種主要類別之免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG、及IgM，並且此等類別中之多個可進一步劃分為子類(同種型)， 例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、及IgA2。對應於不同類別之免疫球蛋白的重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。不同類別免疫球蛋白之次單元結構及三維構型是眾所周知的。
本揭示案之抗體進一步意欲包括具有對於藉由抗體之至少一個CDR區賦予之多肽之親和力的雙特異性、多特異性、嵌合、人源化、及重組構建分子。作為抗體重鏈之可變域或抗體輕鏈之可變域的單域抗體在此項技術中為已知的。參見 例如Holt 等人, Trends Biotechnol.21:484-490, 2003。製造包含含有抗體之六個天然存在互補決定區中之三個互補決定區的抗體重鏈之可變域或抗體輕鏈之可變域的抗體之方法亦在此項技術中已知。參見 例如Muyldermans, Rev. Mol. Biotechnol.74:277-302, 2001。
如本文所用，「單株抗體」是指實質上同質抗體的抗體， 亦即，除可以微量存在的可能天然存在之突變之外，構成群體之單獨抗體為相同的。單株抗體通常針對單個抗原位點具有高度特異性。此外，與通常包括針對不同決定子(表位)之不同抗體之多株抗體製劑相反，每種單株抗體是針對抗原上之單一決定子。修飾語「單株」表明抗體是從實質上均質之抗體群體獲得的特性，且不應解釋為需要藉由任何特定方法來生產抗體。例如，欲根據本發明使用之單株抗體可藉由首先由Kohler及Milstein, 1975, Nature, 256:495所述之融合瘤方法製成，或可藉由例如美國專利第4,816,567號描述之重組DNA方法製成。單株抗體亦可自使用例如McCafferty 等人, 1990, Nature, 348:552-554所描述之技術來產生之噬菌體文庫中分離。
如本文使用，「嵌合抗體」是指具有來自第一物種之可變區或可變區之一部分及來自第二物種之恆定區的抗體。完整嵌合抗體包含嵌合輕鏈之兩個複本及嵌合重鏈之兩個複本。嵌合抗體之產生在此項技術中已知(Cabilly 等人(1984), Proc. Natl. Acad. Sci. USA,81:3273-3277; Harlow及Lane (1988), Antibodies: a Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory)。通常，在此等嵌合抗體中，輕及重鏈之可變區模擬衍生自一個哺乳動物物種之抗體之可變區，而恆定部分與衍生自另一物種之抗體中之序列同源。此等嵌合形式之一個明顯優勢為例如可變區可使用來自非人類宿主有機體的易於得到之融合瘤或B細胞，便利地來源於目前已知來源，並且恆定區來源於例如人類細胞製劑。雖然可變區具有易於製備之優勢，並且特異性不受其來源影響，但是與來自非人類來源之恆定區相比，在注射抗體時，人類的恆定區不太可能引起來自人類受試者之免疫反應。然而，定義不限於此特定實例。在一些實施例中，在可變及/或恆定區中產生胺基酸修飾。
如本文所用，「人源化」抗體是指以下形式之非人類( 例如，鼠類)抗體，其為特異性嵌合免疫球蛋白、其免疫球蛋白鏈或片段(諸如Fv、Fab、Fab'、F(ab') 2、或抗體之其他抗原結合子序列)，其含有來源於非人類免疫球蛋白之最小序列。在大多數情況下，人源化抗體為人類免疫球蛋白(受者抗體)，其中來自受者之互補決定區(complementary determining region；CDR)之殘基經來自具有所需特異性、親和力及載量之非人類物種(供者抗體)諸如小鼠、大鼠或兔之CDR的殘基置換。在一些情況下，人類免疫球蛋白之Fv構架區(framework region；FR)殘基由相應的非人類殘基置換。此外，人源化抗體可包含既不存在於受者抗體中亦不存在於輸入CDR或構架序列中的殘基，但包含此等殘基以進一步細化及優化抗體效能。一般而言，人源化抗體將包含實質上所有至少一個、且通常兩個可變域，其中所有或實質上所有CDR區對應於非人類免疫球蛋白之彼等區，並且所有或實質上所有FR區均為人類免疫球蛋白共有序列之彼等區。人源化抗體最佳亦將包含免疫球蛋白恆定區或域( 例如Fc域)之至少一部分，通常為人類免疫球蛋白之恆定區或域之至少一部分。抗體可具有如WO 99/58572所描述經修飾之Fc區。其他形式之人源化抗體具有一或多個CDR (一個、兩個、三個、四個、五個、或六個)，其相對於原始抗體而改變，亦稱為「來源於」來自原始抗體之一或多個CDR之一或多個CDR。
如本文使用，「人類抗體」意謂以下抗體，該抗體具有對應於由人類產生之抗體之胺基酸序列的胺基酸序列且/或使用在此項技術中已知或本文揭示之製得人類抗體之任何技術來產生。人類抗體之此定義包括包含至少一個人類重鏈多肽或至少一個人類輕鏈多肽的抗體。一個此類實例為包含鼠科輕鏈及人類重鏈多肽的抗體。人類抗體可以使用在此項技術中已知的各種技術來產生。在一個實施例中，人類抗體選自噬菌體文庫，其中噬菌體文庫表現人類抗體(Vaughan 等人, 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314; Sheets 等人, 1998, PNAS, (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom及Winter, 1991, J. Mol. Biol., 227:381; Marks 等人, 1991, J. Mol. Biol., 222:581)。可藉由將人類免疫球蛋白基因座引入轉殖基因動物( 例如小鼠)中來製造人類抗體，在該轉基因動物中內源性免疫球蛋白基因已部分或完全失活。此方法描述於美國專利第5,545,807號；第5,545,806號；第5,569,825號；第5,625,126號；第5,633,425號；及第5,661,016號。或者，人類抗體可藉由使產生針對靶抗原之抗體的人類B淋巴球永生化來製備(此等B淋巴球可自個體回收或可 在活體外免疫接種)。參見 例如，Cole 等人, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner 等人, 1991, J. Immunol., 147 (1):86-95；及美國專利第5,750,373號。
抗體之「可變區」(術語「可變域」可在本文中可互換使用)是指單獨或組合的抗體輕鏈之可變區(VL)或抗體重鏈之可變區(VH)。重鏈及輕鏈之可變區各自由四個藉由三個互補決定區(complementarity determining region；CDR) (亦稱作高變區)連接之構架區(framework region；FR)組成。各鏈中之CDR藉由FR緊密地保持在一起且與來自另一鏈之CDR一起促進形成抗體之抗原結合位點。存在至少兩種用於決定CDR之技術：(1)基於跨物種序列變化性之方法( 亦即，Kabat 等人Sequences of Proteins of Immunological Interest, (第5版, 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD))；及(2)基於抗原-抗體複合物之晶體學研究的方法(Al-lazikani等人(1997) J. Molec. Biol. 273:927-948))。如本文使用，CDR可為指藉由任一方法或兩種方法之組合來定義之CDR。
多種HVR描繪可供使用且涵蓋於本文中。Kabat互補決定區(Complementarity Determining Region；CDR)基於序列變化性並且為最常使用的(Kabat等人 , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。Chothia替代地涉及結構環之位置(Chothia及Lesk, J. Mol. Biol.196:901-917 (1987))。AbM HVR代表Kabat HVR與Chothia結構環之間的平衡(compromise)，且由Oxford Molecular之AbM抗體建模軟體使用。「接觸型(contact)」HVR是基於可用複雜晶體結構之分析。來自此等HVR中各者之殘基如下所述。
環 Kabat AbM Chothia 接觸型
L1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
L2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
L3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B (Kabat編號)
H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35 (Chothia編號)
H2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101
當提及可變域之殘基(大約輕鏈之殘基1-107及重鏈之殘基1-113)時，通常使用Kabat編號系統(例如，Kabat 等人, Sequences of Immunological Interest. 第5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))。在提及免疫球蛋白重鏈恆定區中之殘基時，通常使用「EU編號系統」或「EU索引」(例如，在Kabat 等人出處同上 或及Edelman, G.M. 等人(1969) Proc. Natl. Acad. Sci. USA63:78-85中報告之EU索引)。
如本文使用之「Fv」可為指含有完整抗原識別及結合位點的最小抗體片段。此片段由緊密非共價結合之一重鏈可變區域及一輕鏈可變區域之二聚體組成。由此兩個域之折疊產生六個高度變異環(各有3個環來自H鏈及L鏈)，此等環提供用於抗原結合之胺基酸殘基且賦予抗體抗原結合特異性。然而，即使單一可變域(或僅包含三個對抗原有特異性之HVR的Fv之一半)具有識別並結合抗原之能力，但是親和力低於整個結合位點。
抗體之「恆定區」(術語「恆定域」可在本文中可互換使用)是指單獨或組合的抗體輕鏈之恆定區(CL)或抗體重鏈之恆定區(CH)。抗體之恆定區通常提供結構穩定性及其他生物功能諸如抗體鏈締合、分泌、經胎盤移動性、及補體結合，但是不涉及與抗原之結合。恆定區之胺基酸序列及其基因中之對應外顯子序列取決於產生其之物種；然而對於物種內之特定恆定區而言，導致同種異型之胺基酸序列之變化相對有限。各鏈之可變區藉由連接多肽序列來連接至恆定區。連接序列藉由輕鏈基因中之「J」序列來編碼，及重鏈基因中之「D」序列與「J」序列之組合來編碼。取決於抗體同種型，重鏈恆定區可包括CH1域、鉸鏈區、CH2域、CH3域，及/或CH4域。在某些實施例中，重鏈恆定區包含CH1域、鉸鏈區、CH2域，及CH3域。
本文中之術語「Fc區」(術語「Fc域」可在本文中可互換使用)用於定義免疫球蛋白重鏈之C末端區，包括天然序列Fc區及變異體Fc區。免疫球蛋白重鏈之Fc區之邊界可以變化；在一些實施例中，Fc區可包括鉸鏈區之一或多個胺基酸。在一些實施例中，人類IgG重鏈Fc區被定義為自EU位置216處之胺基酸殘基延伸至其羧基末端。用於本揭示案之抗體之合適天然序列Fc區包括人類IgG1、IgG2(IgG2A、IgG2B)、IgG3及IgG4。
「單鏈Fv」(亦縮寫為「sFv」或「scFv」)為包含連接至單一多肽鏈中之V H及V L抗體域的抗體片段。較佳地，sFv多肽進一步包含V H與V L域之間的多肽連接子，該多肽連接子能夠使sFv形成用於抗原結合的所要結構。關於sFv之綜述，參見Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 第113卷, Rosenburg及Moore編, Springer-Verlag, New York, 第269-315頁 (1994)。
術語「雙功能抗體」是指以下抗體片段，其藉由在V H與V L域之間以短連接子( 例如約5-12個殘基)構築sFv片段(參見前一段落)來製備，使得達成V域之鏈內而非鏈間配對，從而得到二價片段， 亦即具有兩個抗原結合位點之片段。雙特異性雙功能抗體為兩個「交叉」sFv片段之異二聚體，其中兩種抗體之V H及V L域存在於不同多肽鏈上。雙功能抗體更詳細地描述於例如EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger 等人 , Proc. Natl. Acad. Sci. USA90: 6444-6448 (1993)中。
相對於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對參考多肽序列與候選序列且必要時引入間隙以達成最大序列一致性百分比之後，且在不將保守性取代視為序列一致性之一部分之情況下，候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基一致的胺基酸殘基之百分比。可以此項技術中之技能範圍內之多種方式，例如使用可公開獲得之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體來比對以便測定胺基酸序列一致性百分比。熟習此項技術者可決定用於比對序列之適當參數，包括在所比較之序列之全長範圍內達成最大比對所需之任何演算法。
術語「多肽」、「寡肽」、「肽」及「蛋白」在本文中可互換使用以指任何長度之胺基酸的聚合物。聚合物可為直鏈型或分支型，其可包含經過修飾之胺基酸，並且其可由非胺基酸中斷。該等術語亦涵蓋已天然地或藉由干預經修飾之胺基酸聚合物；例如二硫鍵形成、醣基化、脂質化、乙醯化、磷酸化或任何其他操縱或修飾，諸如與標記組分結合。在定義內亦包括，例如，含有胺基酸之一種或多種類似物(包括，例如，非天然胺基酸 等)的多肽、以及在此項技術中已知的其他修飾。應瞭解，因為本揭示案之多肽基於四價抗體，所以多肽可作為單一鏈或締合鏈出現。
如本文中可互換使用之「多核苷酸」或「核酸」是指任何長度的核苷酸之聚合物，且包括DNA及/或RNA。核苷酸可為脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾之核苷酸或鹼基、及/或其類似物，或可藉由DNA或RNA聚合酶併入聚合物中之任何基質。多核苷酸可包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。若存在核苷酸結構之修飾，則其可在聚合物之組裝之前或之後賦予。核苷酸之序列可由非核苷酸組分中斷。多核苷酸可在聚合之後進一步經修飾，諸如藉由與標記組分結合。其他類型之修飾包括例如一或多種天然存在之核苷酸用類似物進行的「帽」取代；核苷酸間修飾，諸如具有不帶電之鍵(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、胺基磷酸酯、胺基甲酸酯等)及具有帶電之鍵(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的彼等、含有諸如蛋白質(例如，核酸酶、毒素、抗體、信號肽、聚L-離胺酸等)之懸垂部分的彼等、具有嵌入劑(例如，吖啶、補骨脂素等)之彼等、含有螯合劑(例如，金屬、放射性金屬、硼、氧化性金屬等)之彼等、含有烷基化劑的彼等、具有經修飾之鍵(例如，α異頭核酸等)之彼等，以及聚核苷酸的未經修飾形式。此外，通常存在於糖中之任何羥基皆可例如由膦酸酯基、磷酸酯基置換，由標準保護基保護，或經活化以製備與額外核苷酸之額外鍵聯，或可與固體支持物接合。5'及3'端OH可經磷酸化或經胺或1至20個碳原子之有機加帽基團部分取代。其他羥基亦可經衍生化至標準保護基。多核苷酸亦可含有此項技術中一般已知之核糖或去氧核糖的類似形式，包括例如2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基-、2'-氟-或2'-疊氮基-核糖、碳環糖類似物、α-異頭糖、差向異構體糖(諸如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖)、哌喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、無環類似物及非鹼性核苷酸類似物(諸如甲基核糖苷)。一或多種磷酸二酯鍵可由替代連接基團置換。此等替代連接基團包括但不限於如下實施例，其中磷酸酯由P(O)S (「硫代酯」)、P(S)S (「二硫代酯」)、「(O)NR 2(「醯胺化物」)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH 2(「甲縮醛」)置換，其中各R或R'獨立地為H或視情況含有醚(-O-)鍵、芳基、烯基、環烷基、環烯基或芳烷基之經取代或未經取代烷基(1-20C)。並非多核苷酸中之所有鍵均需要一致。先前描述適用於本文中所提及之所有多核苷酸，包括RNA及DNA。
如本文使用，「載體」意謂能夠遞送所關注之一或多個基因或序列並且將其在宿主細胞中合意地表現的構建體。載體之實例包括但不限於病毒載體、裸DNA或RNA表現載體、質體、黏接質體或噬菌體載體、與陽離子縮合劑締合之DNA或RNA表現載體、囊封於脂質體中之DNA或RNA表現載體、及某些真核細胞諸如生產細胞。
如本文使用，「表現控制序列」意謂引導核酸之轉錄的核酸序列。表現控制序列可為啟動子，諸如組成性或可誘導啟動子，或增強子。表現控制序列可操作地連接至待轉錄之核酸序列。
如本文使用，藥物、化合物、或醫藥組成物之「有效劑量」或「治療有效量」為足以實現有益、所需，及/或治療結果的量。關於預防性用途，有益或所需結果包括諸如以下的結果：消除或降低疾病(包括疾病之生物化學、組織學及/或行為症狀、其併發症、及在疾病之發展期間呈現之中間病理學表型)之風險、減輕疾病之嚴重程度、或延遲疾病之發作。關於治療性用途，有益或所需結果包括諸如以下的臨床結果：減少由疾病產生之一或多種症狀、增加患疾病者之生活品質、減少治療疾病所需要之其他藥物之劑量、諸如經由靶向輸送來增強另一種藥物之作用、延遲疾病之進展、及/或延長存活。在例如治療等待移植之個體的情況下，藥物之有效量可在一定程度上降低個體中之同種異體抗體及/或PRA之位凖。在治療接受移植或輸注之個體的情況下，藥物之有效量可在與移植或輸血相關之一個或多個症狀或病狀(諸如T細胞介導發炎性疾病)中具有作用及/或在一定程度上減輕該等症狀或病狀。有效量可在一或多次投與中投與。出於本揭示案之目的，藥物、化合物或醫藥組成物之有效量為足以直接或間接地實現預防性或治療性治療之量。有效劑量可在一或多次投與中投與。出於本發明之目的，藥物、化合物或醫藥組成物之有效劑量為足以直接或間接地實現預防性或治療性治療之量。如臨床背景中應瞭解，藥物、化合物、或醫藥組成物之有效劑量可聯合或可不聯合另一藥物、化合物或醫藥組成物( 例如JAK抑制劑)來達成。因此，「有效劑量」可在投與一或多種治療劑的情況下考慮，且單一劑若聯合一或多種其他劑可達成或達成所需結果，則可視為以有效量給予。
如本文使用，「與……聯合」或「與……組合」是指將一種治療模式連同另一種治療模式一起投與。因此，「與……聯合」或「與……組合」是指在向個體投與一種治療模式之前、期間、或之後投與另一種治療模式。
如本文所用，「治療(treatment)」或「治療(treating)」為用於獲得有益或所要結果，包括合意地臨床結果之方法。有益、期望及/或治療性臨床結果包括但不限於以下一項或多項：減少或消除一種或多種發炎或自體免疫症狀(例如源自T細胞介導發炎性疾病)，增加患者成功結果之可能性及/或減輕一個或多個與醫學治療相關(例如，與移植或輸血相關)的禁忌症或有害結果，減少由疾病產生之症狀、增加患疾病者之生活品質、減少治療疾病所需要之其他藥物之劑量、延遲疾病之進展、及/或延長個體之存活。
如本文所用，「延遲疾病之進展」意指推遲、阻礙、減緩、延緩、穩定及/或推遲疾病(諸如癌症)之發展。根據病史及/或正治療的個體，此延遲可為不同時間長度。如熟習此項技術者顯而易知，足夠或顯著延遲可事實上涵蓋預防，只要個體未發展該疾病。例如，發炎性疾病諸如T細胞介導發炎性疾病之症狀可得以延遲。
「個體」或「受試者」為哺乳動物，更合意地人類。哺乳動物亦包括但不限於農畜、運動動物、寵物(諸如貓、犬、或馬)、靈長類動物、小鼠、及大鼠。
如本文使用，術語「特異性識別」或「特異性結合」是指在包括生物分子之異質分子群體的存在下，決定靶標之存在的標靶與抗體(例如，全長抗體、抗體片段、或抗體VH-VL結合單元)之間的可量測及可重現相互作用諸如吸引或結合。例如，特異性或優先結合至表位之抗體、抗體片段、或抗體VH-VL結合單元為與其結合至靶標之其他表位或非靶表位相比，更容易以更大親和力、親合力，及/或以更大持續時間來結合此表位的抗體。藉由閱讀此定義，亦應理解：特異性或優先地結合至第一靶標之抗體、抗體片段、或抗體VH-VL結合單元可或可不特異性或優先地結合至第二靶標。因而，「特異性結合」或「優先結合」未必需要(儘管其可包括)唯一結合。特異性或優先地結合至第一靶標之抗體、抗體片段、或抗體VH-VL結合單元可具有大於或約10 3M -1或約10 4M -1，有時約10 5M -1或約10 6M -1，在其他情況下約10 6M -1或約10 7M -1、約10 8M -1至約10 9M -1，或約10 10M -1至約10 11M -1或更高的締合常數。各種免疫檢定方式可用於選擇特異性地與特定蛋白免疫反應的抗體、抗體片段、或抗體VH-VL結合單元。例如，固相ELISA免疫檢定常規用於選擇特異性地與蛋白免疫反應的單株抗體。關於可用於決定特定免疫反應性之免疫檢定方式及條件之描述，參見 例如，Harlow及Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York。
「包裝插頁」是指通常包含於藥物之商業封裝中的說明書，該等說明書含有關於適應症、用法、劑量、投與、禁忌症、待與封裝產品組合之其他藥物，及/或關於使用此類藥物之警告 等的資訊。
除非上下文另外明確規定，否則如本文及隨附請求項中所用，單數形式「一(a/an)」及「該」包括複數個指示物。例如，對「抗體」之提及是對一個至許多抗體，諸如莫耳量之提及，並且包括熟習此項技術者已知的其等效物、諸如此類。
對「約」本文中之值或參數的提及包括(且描述)針對彼值或參數本身之實施例。例如，關於「約X」之描述包括對「X」之描述。
應理解，本文所述之本揭示案的態樣及變化形式包括「由態樣及變化形式組成」及/或「基本上由態樣及變化形式組成」。 II. 抗 PSGL-1 抗體及使用方法
本揭示案之某些態樣涉及藉由投與治療有效量的特異性結合至人類PSGL-1之抗體組合本揭示案之Janus激酶(Janus kinase；JAK)抑制劑來治療或預防T細胞介導疾病的方法。本揭示案之任何抗PSGL-1抗體可適用於本文揭示之方法中。在一些實施例中，T細胞介導疾病為T細胞介導發炎性疾病。在一些實施例中，T細胞介導疾病為T細胞介導癌症( 例如，T細胞白血病或淋巴瘤)。
在一些實施例中，本文提供抗PSGL-1抗體，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5之CDR-L1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6之CDR-L2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7之CDR-L3。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5之CDR-L1；(b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6之CDR-L2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7之CDR-L3， 例如如表A中展示。
在一些實施例中，本文提供抗PSGL-1抗體，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8之CDR-H1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9之CDR-H2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10之CDR-H3。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8之CDR-H1；(b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9之CDR-H2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10之CDR-H3，例如如表A中展示。
在一些實施例中，本文提供包含以下的抗PSGL-1抗體：(a)包含至少一個、至少兩個、或全部三個選自以下之VL CDR序列的VL域：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO：5之CDR-L1；(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：6之CDR-L2；及(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：7之CDR-L3；及(b)包含至少一個、至少兩個、或全部三個選自以下之VH CDR序列的VH域：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO：8之CDR-H1；(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：9之CDR-H2；及(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：10之CDR-H3，例如，如表A展示。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含以下中之至少一者：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：10之CDR-H3；及(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：5之CDR-L1，例如，如表A展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有包含胺基酸序列SEQ ID NO：10之CDR-H3。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有包含胺基酸序列SEQ ID NO：5之CDR-L1。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：10之CDR-H3；及(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：5之CDR-L1。
在一些實施例中，本文提供包含以下之抗PSGL-1抗體：(a)包含以下之重鏈可變域(VH)：包含胺基酸序列SEQ ID NO：8之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO：9之CDR-H2、及包含胺基酸序列SEQ ID NO：10之CDR-H3；及(b)包含以下之輕鏈可變域(VL)：包含胺基酸序列SEQ ID NO：5之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO：6之CDR-L2、及包含胺基酸序列SEQ ID NO：7之CDR-L3， 例如，如表A展示。
在一些實施例中，本文提供抗PSGL-1抗體，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28之CDR-L1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29之CDR-L2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30之CDR-L3。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28之CDR-L1；(b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29之CDR-L2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30之CDR-L3，例如如表A中展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含來自輕鏈序列SEQ ID NO:31之VL域。
在一些實施例中，本文提供抗PSGL-1抗體，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 24之CDR-H1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 25之CDR-H2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 26之CDR-H3。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 24之CDR-H1；(b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 25之CDR-H2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 26之CDR-H3，例如如表A中展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含來自重鏈序列SEQ ID NO:27之VH域。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有包含以下之VH域：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：24之CDR-H1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：25之CDR-H2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO：26之CDR-H3；及包含以下之VL域：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：28之CDR-L1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：29之CDR-L2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO：30之CDR-L3， 例如，如表A展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含來自重鏈序列SEQ ID NO:27之VH域及/或來自輕鏈序列SEQ ID NO:31之VL域。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27之重鏈及/或包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31之輕鏈。
在一些實施例中，本文提供抗PSGL-1抗體，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL CDR序列：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 36之CDR-L1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37之CDR-L2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38之CDR-L3。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 36之CDR-L1；(b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37之CDR-L2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 38之CDR-L3，例如如表A中展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含來自輕鏈序列SEQ ID NO:39之VL域。
在一些實施例中，本文提供抗PSGL-1抗體，該抗體包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH CDR序列：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32之CDR-H1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 33之CDR-H2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34之CDR-H3。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32之CDR-H1；(b) 包含胺基酸序列SEQ ID NO: 33之CDR-H2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34之CDR-H3，例如如表A中展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含來自重鏈序列SEQ ID NO:35之VH域。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有包含以下之VH域：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：32之CDR-H1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：33之CDR-H2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO：34之CDR-H3；及包含以下之VL域：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：36之CDR-L1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：37之CDR-L2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO：38之CDR-L3， 例如，如表A展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含來自重鏈序列SEQ ID NO:35之VH域及/或來自輕鏈序列SEQ ID NO:39之VL域。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有包含胺基酸序列SEQ ID NO: 35之重鏈及/或包含胺基酸序列SEQ ID NO: 39之輕鏈。
示例性抗PSGL-1抗體序列，以及示例性人類PSGL-1多肽序列提供於表A中。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含抗體15A7H之6個CDR序列，例如，如表A展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含抗體15A7H之VH及/或VL域序列，例如，如表A展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體(例如，四價抗PSGL-1抗體)包含胺基酸序列SEQ ID NO:23。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含抗體c43B6之6個CDR序列，例如，如表A展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含抗體c43B6之VH及/或VL域序列，例如，如表A展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含抗體h9F9之6個CDR序列，例如，如表A展示。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含抗體h9F9之VH及/或VL域序列，例如，如表A展示。在一些實施例中，抗體為人源化抗體、或嵌合抗體。在一些實施例中，抗體為四價抗PSGL-1抗體。 表A. 示例性抗PSGL-1抗體序列。
描述 序列 SEQ ID NO
15A7H輕鏈胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHNDGNTYFEWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFATYYCFQGSYVPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 1
15A7H重鏈胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYINGGSSTIFYANAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYASYGGGAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 2
15A7H VL域胺基酸 序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHNDGNTYFEWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFATYYCFQGSYVPLTFGQGTKVEIK 3
15A7H VH域胺基酸 序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYINGGSSTIFYANAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYASYGGGAMDYWGQGT LVTVSS 4
15A7H CDR-L1 胺基酸序列 RSSQSIVHNDGNTYFE 5
15A7H CDR-L2 胺基酸序列 KVSNRFS 6
15A7H CDR-L3 胺基酸序列 FQGSYVPLT 7
15A7H CDR-H1 胺基酸序列 SFGMH 8
15A7H CDR-H2 胺基酸序列 YINGGSSTIFYANAVKG 9
15A7H CDR-H3 胺基酸序列 YASYGGGAMDY 10
人類PSGL-1之胺基酸序列 MPLQLLLLLILLGPGNSLQLWDTWADEAEKALGPLLARDRRQATEYEYLDYDFLPETEPPEMLRNSTDTTPLTGPGTPESTTVEPAARRSTGLDAGGAVTELTTELANMGNLSTDSAAMEIQTTQPAATEAQTTQPVPTEAQTTPLAATEAQTTRLTATEAQTTPLAATEAQTTPPAATEAQTTQPTGLEAQTTAPAAMEAQTTAPAAMEAQTTPPAAMEAQTTQTTAMEAQTTAPEATEAQTTQPTATEAQTTPLAAMEALSTEPSATEALSMEPTTKRGLFIPFSVSSVTHKGIPMAASNLSVNYPVGAPDHISVKQCLLAILILALVATIFFVCTVVLAVRLSRKGHMYPVRNYSPTEMVCISSLLPDGGEGPSATANGGLSKAKSPGLTPEPREDREGDDLTLHSFLP 11
15A7H IgG4鉸鏈區胺基酸序列 ESKYGPPCPPCPA 12
15A7H VL FR1胺基酸序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC 13
15A7H VL FR2胺基酸序列 WYQQKPGKAPKLLIY 14
15A7H VL FR3胺基酸序列 GVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFATYYC 15
15A7H VL FR4胺基酸序列 FGQGTKVEIK 16
15A7H VH FR1胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS 17
15A7H VH FR2胺基酸序列 WVRQAPGKGLEWVA 18
15A7H VH FR3胺基酸序列 RFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 19
15A7H VH FR4胺基酸序列 WGQGTLVTVSS 20
IgG4野生型鉸鏈區 胺基酸序列 ESKYGPPCPSCPA 21
PSGL-1 變異體 胺基酸序列 MPLQLLLLLILLGPGNSLQLWDTWADEAEKALGPLLARDRRQATEYEYLDYDFLPETEPPEMLRNSTDTTPLTGPGTPESTTVEPAARRSTGLDAGGAVTELTTELANMGNLSTDSAAMEIQTTQPAATEAQTTPLAATEAQTTRLTATEAQTTPLAATEAQTTPPAATEAQTTQPTGLEAQTTAPAAMEAQTTAPAAMEAQTTPPAAMEAQTTQTTAMEAQTTAPEATEAQTTQPTATEAQTTPLAAMEALSTEPSATEALSMEPTTKRGLFIPFSVSSVTHKGIPMAASNLSVNYPVGAPDHISVKQCLLAILILALVATIFFVCTVVLAVRLSRKGHMYPVRNYSPTEMVCISSLLPDGGEGPSATANGGLSKAKSPGLTPEPREDREGDDLTLHSFLP 22
LH10 胺基酸序列(CDR加 下劃線) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RSSQSIVHNDGNTYFEWYQQKPGKAPKLLIY KVSNRFSGVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFATYYC FQGSYVPLTFGQGTKVEIKggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS SFGMHWVRQAPGKGLEWVA YINGGSSTIFYANAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR YASYGGGAMDYWGQGTLVTVSSggggsggggsggggsggggsggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RSSQSIVHNDGNTY FEWYQQKPGKAPKLLIY KVSNRFSGVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFATYYC FQGSYVPLTFGQGTKVEIKggggsggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS SFGMHWVRQAPGKGLEWVA YINGGSSTIFYANAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR YASYGGGAMDYWGQGTLVTVSSggggsaaaESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 23
c43B6 CDR-H1 胺基酸序列 AYYIH 24
c43B6 CDR-H2 胺基酸序列 RVNPNTGGTSYNPKFKG 25
c43B6 CDR-H3 胺基酸序列 SGSPYYRYDD 26
c43B6重鏈胺基酸序列 EVQLQQSGPDLVKPGALVKISCKASGYSFT AYYIHWVKQSHGKSLEWIG RVNPNTGGTSYNPKFKGKAILNVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCAR SGSPYYRYDDWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 27
c43B6 CDR-L1 胺基酸序列 RASSTVNSTYLH 28
c43B6 CDR-L2 胺基酸序列 GSSNLAS 29
c43B6 CDR-L3 胺基酸序列 QQYSGYPLT 30
c43B6輕鏈胺基酸序列 ENVLTQSPAIMSASPGEKVTMTC RASSTVNSTYLHWFQQKSGASPKLWIY GSSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDAATYYC QQYSGYPLTFGAGTTLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 31
h9F9 CDR-H1 胺基酸序列 TNAMN 32
h9F9 CDR-H2 胺基酸序列 RIRSKSNNYATYYADSVKD 33
h9F9 CDR-H3 胺基酸序列 GGSYWYFDV 34
h9F9重鏈 胺基酸序列 EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFN TNAMNWVRQAPGKGLEWVA RIRSKSNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKSIIYLQMNSLKTEDTGIYYCVR GGSYWYFDVWGTGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPPVAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 35
h9F9 CDR-L1 胺基酸序列 RSSQSIVNSNGNTYLE 36
h9F9 CDR-L2 胺基酸序列 KVSNRFS 37
h9F9 CDR-L3 胺基酸序列 FQGSHVPWT 38
h9F9輕鏈 胺基酸序列 DVIMTQSPLSLPVSLGQPASISC RSSQSIVNSNGNTYLEWYLQKPGQSPRLLIY KVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC FQGSHVPWTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 39
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體為人源化抗PSGL1抗體。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含如本文提供之任何實施例中的CDR，並且進一步包含人類免疫球蛋白構架或人類共有構架。在一些實施例中，人源化抗PSGL1抗體包含：(a)包含以下之重鏈可變域(VH)：包含胺基酸序列SEQ ID NO：8之CDR-H1、包含胺基酸序列SEQ ID NO：9之CDR-H2、及包含胺基酸序列SEQ ID NO：10之CDR-H3；及(b)包含以下之輕鏈可變域(VL)：包含胺基酸序列SEQ ID NO：5之CDR-L1、包含胺基酸序列SEQ ID NO：6之CDR-L2、及包含胺基酸序列SEQ ID NO：7之CDR-L3， 例如，如表A展示。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含至少一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、或八個選自以下之構架區(framework region；FR)：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：13之VL FR1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：14之VL FR2；(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO：15之VL FR3；(d)包含胺基酸序列SEQ ID NO：16之VL FR4；(e)包含胺基酸序列SEQ ID NO：17之VH FR1；(f)包含胺基酸序列SEQ ID NO：18之VH FR2；(g)包含胺基酸序列SEQ ID NO：19之VH FR3；及(h)包含胺基酸序列SEQ ID NO：20之VH FR4， 例如，如表A展示。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含至少一個、兩個、三個、或全部四個選自以下之VL FR序列：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：13之VL FR1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：14之VL FR2；(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO：15之VL FR3；及(d)包含胺基酸序列SEQ ID NO：16之VL FR4。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含至少一個、兩個、三個、或全部四個選自以下之VH FR序列：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：17之VH FR1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：18之VH FR2；(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO：19之VH FR3；及(d)包含胺基酸序列SEQ ID NO：20之VH FR4。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：13之VL FR1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：14之VL FR2；(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO：15之VL FR3；及(d)包含胺基酸序列SEQ ID NO：16之VL FR4。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：17之VH FR1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：18之VH FR2；(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO：19之VH FR3；及(d)包含胺基酸序列SEQ ID NO：20之VH FR4。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含：(a)包含至少一個、至少兩個、至少三個、或全部四個選自以下之VL FR序列的VL域：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO：13之VL FR1；(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：14之VL FR2；(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：15之VL FR3；及(iv)包含胺基酸序列SEQ ID NO：16之VL FR4；及(b)包含至少一個、至少兩個、至少三個、或全部四個選自以下之VH FR序列的VH域：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO：17之VH FR1；(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：18之VH FR2；(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：19之VH FR3；及(iv)包含胺基酸序列SEQ ID NO：20之VH FR4。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含：(a)包含以下之VL域：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO：13之VL FR1；(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：14之VL FR2；(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：15之VL FR3；及(iv)包含胺基酸序列SEQ ID NO：16之VL FR4；及(b)包含以下之VH域：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO：17之VH FR1；(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：18之VH FR2；(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：19之VH FR3；及(iv)包含胺基酸序列SEQ ID NO：20之VH FR4。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含：(a)包含以下之VL域：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO：13之VL FR1；(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：5之CDR-L1；(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：14之VL FR2；(iv)包含胺基酸序列SEQ ID NO：6之CDR-L2；(v)包含胺基酸序列SEQ ID NO：15之VL FR3；(vi)包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7之CDR-L3；及(vii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：16之VL FR4。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含：(a)包含以下之VH域：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO：17之VH FR1；(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：8之CDR-H1；(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：18之VH FR2；(iv)包含胺基酸序列SEQ ID NO：9之CDR-H2；(v)包含胺基酸序列SEQ ID NO：19之VH FR3；(vi)包含胺基酸序列SEQ ID NO：10之CDR-H3；及(vii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：20之VH FR4。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含：(a)包含以下之VL域：(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO：13之VL FR1；(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：5之CDR-L1；(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：14之VL FR2；(iv)包含胺基酸序列SEQ ID NO：6之CDR-L2；(v)包含胺基酸序列SEQ ID NO：15之VL FR3；(vi)包含胺基酸序列SEQ ID NO：7之CDR-L3；及(vii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：16之VL FR4；及(b)包含以下之VH域：(viii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：17之VH FR1；(ix)包含胺基酸序列SEQ ID NO：8之CDR-H1；(x)包含胺基酸序列SEQ ID NO：18之VH FR2；(xi)包含胺基酸序列SEQ ID NO：9之CDR-H2；(xii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：19之VH FR3；(xiii)包含胺基酸序列SEQ ID NO：10之CDR-H3；及(xiv)包含胺基酸序列SEQ ID NO：20之VH FR4。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有包含與胺基酸序列SEQ ID NO：4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%序列一致性之序列的重鏈可變域(VH)。在一些實施例中，相對於參照序列，與胺基酸序列SEQ ID NO: 4具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代( 例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗PSGL-1抗體保留結合PSGL-1之能力。在一些實施例中，在SEQ ID NO: 4中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在一些實施例中，在SEQ ID NO: 4中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在一些實施例中，取代、插入或缺失發生在CDR外的區域中( 亦即，FR中)。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含SEQ ID NO：4之VH序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一些實施例中，VH包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：8之CDR-H1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：9之CDR-H2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO：10之CDR-H3。 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS SFGMHWVRQAPGKGLEWVA YINGGSSTIFYANAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR YASYGGGAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 4)
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO：3具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%序列一致性的輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中，相對於參照序列，與胺基酸序列SEQ ID NO: 3具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代( 例如保守性取代)、插入或缺失，但包含彼序列之抗PSGL-1抗體保留結合PSGL-1之能力。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 3中，總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，在SEQ ID NO: 3中，總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中，取代、插入或缺失發生在CDR外的區域中( 亦即，FR中)。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含SEQ ID NO：3之VL序列，包括彼序列之轉譯後修飾。在一些實施例中，VL包含一個、兩個或三個選自以下之CDR：(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO：5之CDR-L1；(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO：6之CDR-L2；及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO：7之CDR-L3。 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RSSQSIVHNDGNTYFEWYQQKPGKAPKLLIY KVSNRFSGVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFATYYC FQGSYVPLTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:3)
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含如本文提供之任何實施例中的VH及如本文提供之任何實施例中的VL。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體分別包含SEQ ID NO: 4及SEQ ID NO: 3中之VH序列及VL序列，包括彼等序列之轉譯後修飾。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含結合至與本文提供之抗PSGL-1抗體相同表位的抗PSGL-1抗體。例如，在一些實施例中，抗PSGL-1抗體結合至與包含有包含序列SEQ ID NO：4之VH及包含序列SEQ ID NO：3之VL的抗PSGL-1抗體相同的表位。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體為單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體、或人類抗體。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體為本文所述之抗PSGL-1抗體之抗原結合片段， 例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙功能抗體或F(ab’) 2片段。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含實質上全長抗PSGL-1抗體，例如，IgG4抗體或如本文描述之其他抗體類別或同種型。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體為IgG、IgM、或IgA類別。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體具有人類IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4恆定域。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體具有人類IgG4恆定域。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含重鏈，其中重鏈包含根據EU編號之殘基位置228處之S228P胺基酸取代。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有包含根據EU編號之殘基位置228處之S228P胺基酸取代的IgG4鉸鏈域。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有包含胺基酸序列ESKYGPPCPPCPA(SEQ ID NO：12)之IgG4鉸鏈域。
在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2之重鏈，及/或包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1之輕鏈。在一些實施例中，抗PSGL-1抗體包含有包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2之重鏈，及包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1之輕鏈。 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RSSQSIVHNDGNTYFEWYQQKPGKAPKLLIY KVSNRFSGVPSRFSGSGSGTHFTLTISSLQPEDFATYYC FQGSYVPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 1) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS SFGMHWVRQAPGKGLEWVA YINGGSSTIFYANAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR YASYGGGAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHN HYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 2)
在一些實施例中，本揭示案之抗PSGL-1抗體包含根據Kabat等人之編號的抗PSGL-1抗體15A7H之CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、及CDR-L3。在一些實施例中，本揭示案之抗PSGL-1抗體包含抗PSGL-1抗體15A7H之CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、及CDR-L3。在一些實施例中，本揭示案之抗PSGL-1抗體包含抗PSGL-1抗體15A7H之VH域及/或VL域。在一些實施例中，本揭示案之抗PSGL-1抗體包含抗PSGL-1抗體15A7H之VH域及VL域。在一些實施例中，本揭示案之抗PSGL-1抗體包含抗PSGL-1抗體15A7H之重鏈及/或輕鏈。在一些實施例中，本揭示案之抗PSGL-1抗體包含抗PSGL-1抗體15A7H之重鏈及輕鏈。抗PSGL-1抗體15A7H描述於US20130209449及US20130011391中。可用於本文提供之方法中之額外抗PSGL-1抗體描述於美國專利第7,604,800號及第8,361,472號中。
在一些實施例中，本揭示案之抗PSGL-1抗體為四價抗PSGL-1抗體。示例性四價抗PSGL-1抗體揭示於WO2017120534中。
人類PSGL-1亦可被稱為選擇素P配位體、 SELPG 、 CLA 、 CD162 、或 PSGL1。在一些實施例中，本揭示案之抗體結合至藉由 例如NCBI RefSeq Gene ID No. 6404所描述之人類 SELPG基因來編碼之多肽。在一些實施例中，本揭示案之抗體結合至包含以下胺基酸序列之多肽 MPLQLLLLLILLGPGNSLQLWDTWADEAEKALGPLLARDRRQATEYEYLDYDFLPETEPPEMLRNSTDTTPLTGPGTPESTTVEPAARRSTGLDAGGAVTELTTELANMGNLSTDSAAMEIQTTQPAATEAQTTQPVPTEAQTTPLAATEAQTTRLTATEAQTTPLAATEAQTTPPAATEAQTTQPTGLEAQTTAPAAMEAQTTAPAAMEAQTTPPAAMEAQTTQTTAMEAQTTAPEATEAQTTQPTATEAQTTPLAAMEALSTEPSATEALSMEPTTKRGLFIPFSVSSVTHKGIPMAASNLSVNYPVGAPDHISVKQCLLAILILALVATIFFVCTVVLAVRLSRKGHMYPVRNYSPTEMVCISSLLPDGGEGPSATANGGLSKAKSPGLTPEPREDREGDDLTLHSFLP (SEQ ID NO:11)。在一些實施例中，本揭示案之抗體結合至包含以下胺基酸序列之多肽 MPLQLLLLLILLGPGNSLQLWDTWADEAEKALGPLLARDRRQATEYEYLDYDFLPETEPPEMLRNSTDTTPLTGPGTPESTTVEPAARRSTGLDAGGAVTELTTELANMGNLSTDSAAMEIQTTQPAATEAQTTPLAATEAQTTRLTATEAQTTPLAATEAQTTPPAATEAQTTQPTGLEAQTTAPAAMEAQTTAPAAMEAQTTPPAAMEAQTTQTTAMEAQTTAPEATEAQTTQPTATEAQTTPLAAMEALSTEPSATEALSMEPTTKRGLFIPFSVSSVTHKGIPMAASNLSVNYPVGAPDHISVKQCLLAILILALVATIFFVCTVVLAVRLSRKGHMYPVRNYSPTEMVCISSLLPDGGEGPSATANGGLSKAKSPGLTPEPREDREGDDLTLHSFLP (SEQ ID NO：22)。SEQ ID NO:11之胺基酸序列描繪全長人類PSGL-1，GenBank™登錄號AAA74577.1，GL902797，並且SEQ ID NO:22之胺基酸序列描繪較短402胺基酸人類PSGL-1蛋白(GenBank™登錄號XP_005269133)。在特定實施例中，本文所述抗體特異性結合至人類PSGL-1，如例如藉由ELISA或在此項技術中已知或本文描述之其他抗原結合檢定來決定。
本揭示案涵蓋對於本文所述抗體或多肽之修飾，包括不顯著影響其性質的功能等效抗體及具有增強或減少活性及/或親和力的變異體。多肽之修飾為此項技術中之常規實務並且不必在本文中詳細描述。經修飾之多肽之實例包括具有胺基酸殘基之保守取代、不顯著有害地改變功能活性的胺基酸之一或多個缺失或添加、或使用化學類似物的多肽。
胺基酸序列插入包括在一個殘基至含有一百個或更多個殘基之多肽之長度範圍內的胺基及/或羧基末端融合，以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入物之實例包括具有N-末端甲硫胺醯基殘基之抗體或融合至表位標籤之抗體。該抗體分子之其他插入變異體包括該抗體之N端或C端融合至酶或增加該抗體之血清半衰期的多肽。
取代變異體使抗體分子中之至少一個胺基酸殘基得以移除並且在其位置中插入不同殘基。取代誘變最感興趣之位點包括高變區，但亦涵蓋FR改變。保守取代在「保守取代」之標題下在下表中展示。若該等取代導致生物活性之改變，則可引入更多實質性改變(在下表中經命名「例示性取代」，或如下文參考胺基酸類別進一步描述)且篩選產物。 胺基酸取代
原始殘基 保守取代 例示性取代
Ala (A) Val Val; Leu; Ile
Arg (R) Lys Lys; Gln; Asn
Asn (N) Gln Gln; His; Asp, Lys; Arg
Asp (D) Glu Glu; Asn
Cys (C) Ser Ser; Ala
Gln (Q) Asn Asn; Glu
Glu (E) Asp Asp; Gln
Gly (G) Ala Ala
His (H) Arg Asn; Gln; Lys; Arg
Ile (I) Leu Leu; Val; Met; Ala; Phe; 正白胺酸
Leu (L) Ile 正白胺酸; Ile; Val; Met; Ala; Phe
Lys (K) Arg Arg; Gln; Asn
Met (M) Leu Leu; Phe; Ile
Phe (F) Tyr Leu; Val; Ile; Ala; Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser(S) Thr Thr
Thr (T) Ser Ser
Trp (W) Tyr Tyr; Phe
Tyr (Y) Phe Trp; Phe; Thr; Ser
Val (V) Leu Ile; Leu; Met; Phe; Ala; 正白胺酸
在抗體之生物特性中的實質性修飾可藉由選擇對保持下列特徵之作用顯著不同的取代而實現：(a)多肽主鏈在取代之區域內的結構，例如作為片狀或螺旋構形，(b)在靶位點處的分子之電荷或疏水性，或(c)側鏈之大小。天然存在之殘基基於共同的側鏈性質分成以下各組： (1) 非極性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2) 極性沒有電荷：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3) 酸性(帶負電荷)：Asp、Glu； (4) 鹼性(帶正電荷)：Lys、Arg； (5) 影響鏈取向之殘基：Gly、Pro；及 (6) 芳族：Trp、Tyr、Phe、His
非保守取代需要將此等類別之一的成員交換為另一類別。
未參與保持抗體之適當構形的任何半胱胺酸殘基一般亦可經絲胺酸取代，以便改良分子之氧化穩定性並防止異常交聯。相反，可向抗體添加一或多個半胱胺酸鍵以改良其穩定性(特別是當抗體為抗體片段諸如Fv片段時)。
在一些實施例中，本揭示案之抗PSGL-1抗體包含抗體恆定域。在一些實施例中，抗體恆定域為人類抗體恆定域。在某些實施例中，抗體恆定域為人類IgG4恆定域。在一些實施例中，人類IgG4恆定域包含根據EU索引來編號之重鏈之胺基酸位置228(使用Kabat編號，亦稱為位置241)處的絲胺酸至脯胺酸胺基酸取代。
在一些實施例中，抗體之重鏈恆定區及/或輕鏈恆定區中之一或多個胺基酸殘基經修飾。在一些實施例中，抗體之Fc區經修飾以便增強或減少抗體之ADCC及/或CDC活性。參見Shields 等人, J. Biol. Chem. 276:6591-6604 (2001); Presta 等人, Biochem. Soc. Trans. 30:487-490 (2002)。
本揭示案亦提供包括編碼本文所述任何四價抗體及/或多肽之多核苷酸的多核苷酸。在一些實施例中，多肽包括輕鏈及重鏈可變區之序列。在一些實施例中，多核苷酸為分離多核苷酸( 例如，自宿主細胞或一或多種不同多核苷酸中分離)。
普通熟習此項技術者認識到，由於遺傳密碼之簡並性，存在編碼如本文描述之多肽的許多核苷酸序列。一些此等多核苷酸具有與任何天然基因之核苷酸序列的最少同源性。因此，本揭示案特別涵蓋由於密碼子使用之差異而導致變化的多核苷酸。此外，包含本文提供之多核苷酸序列的基因之等位基因在本揭示案之範圍內。等位基因是由於核苷酸之一或多個突變，諸如缺失、添加，及/或取代而導致改變的內源性基因。所得mRNA及蛋白可能但是不一定具有改變的結構或功能。等位基因可使用標準技術(諸如雜交、擴增，及/或資料庫序列比較)來鑑別。
本揭示案之多核苷酸可使用化學合成、重組方法、或PCR來獲得。化學多核苷酸合成方法在此項技術中為熟知的並且不必在本文中詳細描述。熟習此項技術者可使用本文提供之序列及商業DNA合成器來產生所需DNA序列。
對於使用重組方法來製備多核苷酸，包含所需序列之多核苷酸可插入合適載體中，並且載體轉而可引入合適宿主細胞中以便進行複製及擴增，如本文進一步論述。多核苷酸可藉由在此項技術中已知之任何手段來插入宿主細胞中。細胞藉由直接吸收、胞吞、轉染、F配合、或電穿孔來引入外源多核苷酸而得以轉型。一旦引入，外源多核苷酸可作為非整合載體(諸如質體)來保持在細胞內或整合至宿主細胞基因組中。以此方式擴增之多核苷酸可藉由此項技術中熟知之方法，自宿主細胞中分離。 參見例如Sambrook 等人(1989)。
或者，PCR允許再現DNA序列。PCR技術在此項技術中為熟知的並且描述於美國專利第4,683,195號；第4,800,159號；第4,754,065號；及第4,683,202號，以及PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis 等人編, Birkauswer Press, Boston (1994)。
本揭示案亦提供包含編碼本文所述任何多肽(包括抗體)之核酸序列的載體( 例如，選殖載體或表現載體)。合適選殖載體可根據標準技術來建構或可選自在此項技術中可利用之大量選殖載體。雖然所選之選殖載體可根據預期使用之宿主細胞而改變，有用選殖載體通常具有自我複製能力，可具有特定限制性內切核酸酶之單一靶標，且/或可攜帶可用於選擇含有該載體之純系的標記物的基因。合適實例包括質體及細菌病毒， 例如pUC18、pUC19、Bluescript ( 例如pBS SK+)及其衍生物、mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌體DNA、及穿梭載體諸如pSA3及pAT28。該等及許多其他選殖載體可獲自商業供應商，諸如BioRad、Strategene、及Invitrogen。
表現載體通常為含有根據本揭示案之多核苷酸的可複製多核苷酸構建體。表現載體可在宿主細胞中複製，呈遊離體形式或作為染色體DNA之整體部分。合適表現載體包括但不限於質體、病毒載體，包括腺病毒、腺病毒相關病毒、逆轉錄病毒、黏接質體、及PCT公開案第WO 87/04462中揭示之表現載體。載體組分可通常包括但不限於以下中之一或多者：信號序列；複製起點；一或多個標記基因；及合適轉錄控制元件(諸如啟動子、增強子、或終止子)。對於表現( 亦即，轉譯)，亦通常需要一或多個轉譯控制元件，諸如核糖體結合位點、轉譯啟始位點、或終止密碼子。
製造抗體及衍生自抗體之多肽的方法在此項技術中為已知的並且在本文中揭示。可使用確立已久的方法來鑑別抗PSGL抗體( 例如，特異性結合至人類PSGL-1之抗體)，來自該等抗體之可變域( 例如，VH及/或VL域)可用於本揭示案之抗體中。示例性抗人類PSGL-1抗體，以及篩檢、產生、及純化此等抗體之方法描述於國際申請公開案第WO 2012/174001號中。
用於真核細胞之多種重組宿主-載體表現系統為已知的並且可用於本揭示案中。例如，在真核微生物之中， 釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)，或常見麵包酵母為最常用的，但是可利用許多其他菌株，諸如 巴斯德畢赤酵母 (Pichia pastoris)。可自ATCC獲得的諸如Sp2/0或中國倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary；CHO)之衍生自多細胞有機體之細胞株亦可用作宿主。適合於真核細胞轉型之典型載體質體為例如pSV2neo及pSV2gpt (ATCC)、pSVL及pSVK3 (Pharmacia)、及pBPV-1/pML2d (International Biotechnology, Inc.)。
適用於本揭示案之真核宿主細胞為例如融合瘤、骨髓瘤、漿細胞瘤、或淋巴瘤細胞。然而，可適當地利用其他真核宿主細胞，只要哺乳動物宿主細胞能夠識別用於表現蛋白之轉錄及轉譯DNA序列；藉由裂解前導序列及分泌蛋白來處理前導肽；並且提供蛋白之轉譯後修飾， 例如，醣化。
因此，本揭示案提供藉由重組表現載體來轉型的宿主細胞( 例如，真核宿主細胞)，該等載體包含本文揭示之DNA構建體並且能夠表現本揭示案之四價抗體或多肽。在一些實施例中，本揭示案之轉型宿主細胞包括至少一個DNA構建體，該構建體包含本揭示案之多核苷酸，或表現本揭示案之單體、二聚體、或四價抗體的多核苷酸，及相對於編碼DNA序列來定位以便引導抗體或多肽之表現的轉錄及轉譯調控序列。
能夠過度表現異源DNA之任何宿主細胞均可以用於分離編碼目標抗體、多肽或蛋白質之基因的目的。哺乳動物宿主細胞之非限制性實例包括但不限於COS、HeLa及CHO細胞。亦參見PCT公開案第WO 87/04462號。合適非哺乳動物宿主細胞包括原核生物(諸如 大腸桿菌 (E. coli)或 枯草芽孢桿菌 (B. subtillis))及酵母(諸如 釀酒酵母 (S. cerevisae)、 裂殖酵母 (S. pombe)、或 乳酸克魯維斯酵母 (K. lactis))。
用於本揭示案之宿主細胞可以各種方法藉由在此項技術中熟知之標準轉染程序來轉型。在可使用之標準轉染程序之中為電穿孔技術、原生質體融合及磷酸鈣沉澱技術。此等技術通常藉由F. Toneguzzo 等人(1986), Mol. Cell. Biol., 6:703-706; G. Chu 等人, Nucleic Acid Res. (1987), 15:1311-1325; D. Rice 等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1979), 79:7862-7865; 及V. Oi 等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1983), 80:825-829來描述。含有所關注之多核苷酸的載體可藉由許多合適手段中之任一者來引入宿主細胞中，包括電穿孔，使用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、DEAE-葡聚糖、或其他物質之轉染；微粒轟擊；脂質轉染；及感染( 例如，當載體為感染物諸如痘苗病毒時)。引入載體或多核苷酸之選擇經常視宿主細胞之特徵而定。
本揭示案之某些態樣涉及 例如可用作本文所述四價抗體之成分的抗體可變域及/或抗體片段。抗體片段可含有抗體之活性結合區，諸如Fab、F(ab’) 2、scFv、Fv片段、及其類似物。在此項技術中已知之各種方法可用於產生及/或分離抗體片段，該等片段可 例如基於本文所述概念，藉由在此項技術中已知的標準重組技術來併入本揭示案之四價抗體中。
單鏈Fv片段可諸如Iliades 等人, 1997, FEBS Letters, 409:437-441所描述來產生。使用各種連接子來偶聯此等單鏈片段描述於Kortt 等人, 1997, Protein Engineering, 10:423-433中。抗體之重組產生及調處的各種技術在此項技術中為熟知的。此等片段可使用在此項技術中確立已久的技術，自本文描述之單株抗體來產生(Rousseaux 等人(1986), in Methods Enzymol., 121:663-69 Academic Press)。
製備抗體片段之方法在此項技術中為熟知的。例如，抗體片段可藉由將抗體用胃蛋白酶來酶促裂解，以便提供稱為F(ab’) 2之100 Kd片段而產生。此片段可使用硫醇還原劑來進一步裂解，並且視情況對於二硫鍵之裂解所產生之巰基，使用封端基團，從而產生50 Kd Fab’單價片段。或者，使用木瓜蛋白酶之酶促裂解直接產生兩個單價Fab片段及一個Fc片段。此等方法例如藉由美國專利第4,036,945號及第4,331,647號及其中包含之參考文獻來描述，該等專利以引用方式併入本文。亦參見Nisonoff 等人(1960), Arch Biochem. Biophys. 89: 230; Porter (1959), Biochem. J. 73: 119; Smyth (1967), Methods in Enzymology 11: 421-426。或者，Fab可藉由將編碼抗體之Fab的DNA插入原核生物之表現載體或真核生物之表現載體中，並且將載體引入原核生物或真核生物中以便表現Fab來產生。
修飾亦包括醣基化及非醣基化多肽，以及具有其他轉譯後修飾之多肽，例如像使用不同糖之醣基化、乙醯化、及磷酸化。抗體在其恆定區中之保守位置處經醣基化(Jefferis及Lund, 1997, Chem. Immunol. 65:111-128; Wright及Morrison, 1997, TibTECH 15:26-32)。免疫球蛋白之寡醣側鏈影響蛋白之功能(Boyd 等人, 1996, Mol. Immunol. 32:1311-1318; Wittwe及Howard, 1990, Biochem. 29:4175-4180)及醣蛋白之部分之間的分子內相互作用，從而可影響醣蛋白之構造及呈現三維表面(Hefferis及Lund，同上；Wyss及Wagner, 1996, Current Opin. Biotech. 7:409-416)。寡醣亦可用來基於特定識別結構，將給定醣蛋白靶向輸送至某些分子。抗體之醣基化亦報道影響抗體依賴性細胞毒性(antibody-dependent cellular cytotoxicity；ADCC)。具體而言，作為一種催化形成二等分GlcNAc的醣基轉移酶，β(1,4)-N-乙醯葡糖胺基轉移酶III (GnTIII)之表現受四環素調控的CHO細胞已報道具有經改良之ADCC活性(Umana 等人, 1999, Mature Biotech. 17:176-180)。
抗體之醣基化通常為N-連接或O-連接的。經N-連接是指該碳水化合物部分連接至天冬醯胺殘基之側鏈。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸、天冬醯胺-X-蘇胺酸及天冬醯胺-X-半胱胺酸(其中X為除了脯胺酸外之任何胺基酸)為用於將該碳水化合物部分酶促連接至天冬醯胺側鏈之識別序列。因此，此等三肽序列中任一者於多肽中之存在均會產生潛在醣基化位點。經O-連接之醣基化是指糖N-乙醯半乳糖胺、半乳糖、或木糖中之一者連接至羥基胺基酸，最通常為絲胺酸或蘇胺酸，但亦可使用5-羥基脯胺酸或5-羥基離胺酸。
醣基化位點向抗體中之添加宜藉由改變胺基酸序列以使得其含有上述三肽序列中之一或多個(對於N-連接之醣基化位點)來完成。該變化亦可藉由添加一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基至原始抗體之序列中或藉由一或多個絲胺酸或蘇胺酸之取代來製造(對於O-連接之醣基化位點)。
抗體之醣基化模式亦可在不改變潛在核苷酸序列的情況下加以改變。醣基化很大程度上視用於表現抗體之宿主細胞而定。由於用於表現作為潛在治療劑之重組醣蛋白 例如抗體的細胞類型很少為天然細胞，因此可預期抗體之醣基化模式之變化( 參見， 例如，Hse 等人, 1997, J. Biol. Chem. 272:9062-9070)。
除了宿主細胞之選擇以外，在抗體之重組產生期間，影響醣基化之因素包括生長模式、培養基調配物、培養物密度、氧合作用、pH、純化方案、及其類似因素。已提出改變在特定宿主有機體中達成之醣基化模式的各種方法，包括引入或過度表現在寡醣產生中所涉及的某些酶(美國專利第5,047,335號；第5,510,261號；及第5,278,299號)。醣基化，或某些類型之醣基化，可自醣蛋白中酶促移除，例如使用內切糖苷酶H(Endo H)、N-糖苷酶F、內切糖苷酶F1、內切糖苷酶F2、或內切糖苷酶F3。另外，重組宿主細胞可經基因工程化以便在處理某些類型之多醣方面為有缺陷的。此等及類似技術在此項技術中為熟知的。
在一些實施例中，本揭示案之抗體使用在此項技術中已知的偶合技術來修飾，包括但不限於酶促手段、氧化取代、及螯合。修飾可用於例如連接用於免疫檢定之標記物。
在一些實施例中，本揭示案之抗體可偶聯(例如，連接)至試劑諸如治療劑或標記物。治療劑之實例為放射性部分、細胞毒素、及化學治療分子。 III. JAK 抑制劑
本揭示案之某些態樣涉及JAK抑制劑。本揭示案之任何JAK抑制劑可適用於本文揭示之方法， 例如，與本揭示案之抗PSGL-1抗體組合投與。
在一些實施例中，JAK抑制劑抑制JAK1及/或JAK2。在一些實施例中，JAK抑制劑抑制JAK1及/或JAK3。在一些實施例中，JAK抑制劑為JAK1/JAK2抑制劑、JAK2/FLT3抑制劑、JAK2 V617F抑制劑、JAK2抑制劑、JAK1抑制劑、或JAK2/Src抑制劑，包括其醫藥學上可接受之鹽。JAK抑制劑之示例性及非限制性描述可發現於WO2007070514、WO2008157208、及WO2019171326。
在一些實施例中，JAK抑制劑為盧佐替尼或其醫藥學上可接受之鹽。如在此項技術中已知，盧佐替尼為下式JAK1/JAK2抑制劑(R)-3-(4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3-環戊基丙腈，亦被稱為3(R)-環戊基-3-[4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基]丙腈：
在一些實施例中，盧佐替尼是指盧佐替尼磷酸鹽。在一些實施例中，盧佐替尼為單位劑型(例如錠劑)。在一些實施例中，盧佐替尼經口投與。
在一些實施例中，JAK抑制劑為托法替尼或其醫藥學上可接受之鹽。 IV. 方法及用途
本揭示案之某些態樣涉及本文描述之抗體之方法及用途， 例如，藉由與本揭示案之JAK抑制劑組合來投與受試者以便治療或預防T細胞介導疾病， 例如，T細胞介導發炎性疾病或癌症( 例如，T細胞白血病或淋巴瘤)。在一些實施例中，受試者為人類。
如本文描述，PSGL-1已知涉及發炎及T細胞生物學。特異性結合至人類PSGL-1之本揭示案之抗體可 尤其適用於治療患有與T細胞功能相關之疾病( 例如，T-細胞介導發炎性疾病)的個體，或需要可導致發炎性病狀諸如免疫反應之醫學程序( 例如，移植或輸血)，或由於醫學程序所導致的此等病狀預先得到控制的個體， 例如與本揭示案之JAK抑制劑組合。
在一些實施例中，T細胞介導發炎性疾病為移植物抗宿主疾病(graft-versus-host disease；GVHD)， 例如，急性或慢性GVHD。在一些實施例中，T細胞介導發炎性疾病為類固醇難治性急性GVHD (steroid-refractory acute GVHD；SR-aGVHD)或治療難治性急性GVHD (treatment-refractory acute GVHD；TR-aGVHD)。 參見例如Przepiorka等人, (2019) The Oncologist, 24:1-7及Mothy等人, (2020) Blood, 136(17):1903-1906。
在一些實施例中，T細胞介導發炎性疾病選自由以下組成之群：皮膚病症、多發性硬化、類風濕性關節炎、幼年關節炎、I型糖尿病、狼瘡、發炎性腸病、克羅恩病、重症肌無力、免疫球蛋白腎病、心肌炎及自體免疫性甲狀腺病症。
本揭示案之某些態樣涉及本文描述之抗體之方法及用途， 例如，藉由與本揭示案之JAK抑制劑組合來投與受試者以便治療或預防T細胞白血病或T細胞淋巴瘤( 例如，成人T細胞白血病/淋巴瘤(dult T cell leukemia/lymphoma；ATLL)、間變性大細胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma；ALCL)、或皮膚T細胞淋巴瘤(cutaneous T-cell lymphoma；CTCL))。在一些實施例中，受試者為人類。
在一些實施例中，JAK抑制劑在投與抗體之前、之後、或同時投與受試者。
在一些實施例中，在投與抗體及/或JAK抑制劑之前，受試者已經進行 例如針對本揭示案之T細胞介導發炎性疾病諸如GVHD的一次或多次全身治療。在一些實施例中，在投與抗體及/或JAK抑制劑之前，受試者已經用皮質類固醇來治療。
在一些實施例中，藉由本文所述方法來治療之病症或疾病可為T細胞介導疾病。可治療，或其一個或多個症狀可使用本文所述抗體及JAK抑制劑來改善或預防之病症及疾病的非限制性實例包括牛皮癬、克羅恩氏病、強直性脊柱炎、關節炎(包括類風濕性關節炎、幼年類風濕性關節炎、骨關節炎、及牛皮癬性關節炎)、糖尿病、多發性硬化、腦脊髓炎、重症肌無力、全身性紅斑狼瘡、自體免疫性甲狀腺炎、皮膚炎(包括異位性皮膚炎及濕疹皮膚炎)、休格倫氏症候群、口瘡潰瘍、虹膜炎、結膜炎、角膜結膜炎、I型糖尿病、炎症性腸病、潰瘍性結腸炎、哮喘、變應性哮喘、皮膚紅斑狼瘡、硬皮病、陰道炎、直腸炎、藥疹、麻風逆轉反應、麻風結節性紅斑、自體免疫葡萄膜炎、過敏性腦脊髓炎、急性壞死性出血腦病、特發性雙側進行性感覺神經聽力損失、再生障礙性貧血、單純性紅細胞貧血、特發性血小板減少症、多軟骨炎、韋格納氏肉芽腫病、慢性活動性肝炎、Stevens-Johnson症候群、特發性口炎性腹瀉、扁平苔蘚、格雷夫斯病、移植物抗宿主疾病(GVHD)( 例如，急性或慢性GVHD)、移植排斥反應、白斑病、斑禿、細胞介素釋放症候群、化膿性汗腺炎、肉狀瘤病、原發性膽汁性肝硬變、後葡萄膜炎、間質性肺纖維化、過敏症諸如異位性過敏症、AIDS、及T細胞腫瘤諸如白血病或淋巴瘤。
在另一實施例中，根據本文所述方法來治療之疾病或病症為斑塊狀牛皮癬。斑塊狀牛皮癬或尋常性牛皮癬為最常見牛皮癬形式並且由銀色鱗屑覆蓋的界限分明、凸起的紅斑性皮膚斑塊來表徵。病變傾向於累及四肢伸肌表面、腰骶部區域及頭皮。相應組織病理學發現包括真皮及表皮之顯著炎性細胞浸潤，擴張血管數量增加，表皮明顯增厚，角質形成細胞分化紊亂及角化過度。大約三分之一的斑塊狀牛皮癬患者被歸類為中度或重度疾病，因此他們還可以接受除了局部治療外之治療。
在另一實施例中，根據本文所述方法來治療之病症為慢性斑塊狀牛皮癬。斑塊狀慢性牛皮癬之症狀包括但不限於身體任何部位(包括但不局限於膝蓋、肘部、腰骶部、頭皮及指甲)上的單個或多個凸起的發紅皮膚斑塊，從硬幣大小到更大。
在另一實施例中，根據本文所述方法來治療之病症為滴狀牛皮癬。滴狀牛皮癬之症狀包括但不限於皮膚上水滴狀鱗狀斑塊之閃光，隨後感染，如鏈球菌咽喉感染。
在另一實施例中，根據本文所述方法來治療之疾病或病症為皮褶牛皮癬。皮褶牛皮癬之症狀包括但不限於以下一個或多個身體部位：腋下、腹股溝、乳房下方，以及生殖器及臀部周圍的其他皮膚褶皺處，發紅並且發炎的光滑、通常潮濕皮膚，不同於與斑塊狀牛皮癬相關的起鱗屑。
在另一實施例中，根據本文所述方法來治療之疾病或病症為膿皰性牛皮癬。膿皰性牛皮癬之症狀包括但不限於大小及位置不同的膿皰，但主要發生在手及腳上。
在另一實施例中，根據本文所述方法來治療之疾病或病症為紅斑性牛皮癬。紅斑性牛皮癬之症狀包括但不限於皮膚之間歇性、廣泛、紅腫性發紅以及呈薄片狀，而不是較小雪花狀的鱗屑脫落。皮膚發紅及脫落通常伴有嚴重瘙癢及疼痛、心率增加及體溫波動。
在另一實施例中，根據本文所述方法來治療之疾病或病症為類風濕性關節炎。類風濕性關節炎之症狀包括但不限於疲勞、食欲不振、低燒、腺體腫脹、虛弱、手腕、肘部、肩部、臀部、膝蓋、腳踝、腳趾、下頜、手、腳、手指及/或頸部關節疼痛、晨僵、呼吸時胸痛(胸膜炎)、眼睛灼熱、瘙癢及分泌物、皮膚下結節、麻木、刺痛、或者手及腳上灼痛。
在另一實施例中，根據本文所述方法來治療之疾病或病症為克羅恩氏病。克羅恩氏病之症狀但不限於腹部(肚子區域)痙攣疼痛、發燒、疲勞、食欲不振、大便疼痛(裡急後重)、持續性水樣腹瀉、無意中的體重減輕、便秘、眼部炎症、瘺管(通常在直腸區域周圍，可能會導致膿液、黏液或糞便排出)、關節疼痛、肝臟炎症、口腔潰瘍、直腸出血及便血、皮膚腫塊或瘡(潰瘍)以及牙齦腫脹。
在另一實施例中，根據本文所述方法來治療之疾病或病症為強直性脊柱炎。強直性脊柱炎之症狀包括但不限於下背部及臀部、脊柱及/或頸部經常疼痛及僵硬；疼痛及壓痛蔓延到肋骨、肩胛骨、臀部、大腿及腳跟；眼部炎症(虹膜睫狀體炎及葡萄膜炎)，導致發紅、眼部疼痛、視力下降、漂浮物及畏光；疲勞及噁心。
在另一實施例中，根據本文所述方法來治療之疾病或病症為糖尿病。糖尿病之症狀包括但不限於體重減輕、多尿(尿頻)、多飲(口渴加劇)、多食(饑餓加劇)、心血管疾病、糖尿病視網膜病變、糖尿病神經病變、高滲性非酮症狀態及糖尿病酮症酸中毒。
在一些實施例中，在移植之前、同時，及/或之後，本揭示案之抗體或組成物可與JAK抑制劑組合來投與個體。
如本文使用，治療需要移植之個體可為指治療性治療及預防性或防範措施中之一或多者( 例如，增加有利治療結果之可能性，該等有利治療結果諸如移植物存活、移植物功能，或降低不利結果的可能性，該等不利結果諸如對於治療之不利反應、或減少有利治療諸如移植發生可能性的狀況)。治療可包括但不限於緩解或預防與病症或病狀相關之病狀及症狀，及/或干擾或限制個體獲得病症或病狀治療選項的問題或病狀，例如敏感化，高群體反應性抗體(panel reactive antibody；PRA)位凖及/或存在預先存在之同種異體抗體，此等同種異體抗體限制了等待移植之個體的移植物可用性。需要治療之彼等包括已患有病症或病狀之彼等以及其中病症或病狀有待預防之彼等。疾病或病症之治療可抑制與病症或病狀相關的免疫介導事件，改善病症或病狀之症狀，降低病症或病狀之嚴重程度，改變病症或病狀進展過程，及/或改善或治癒基本病症或病狀。
例如，對等待移植之個體的成功治療包括但不限於降低同種異體抗體位凖、降低群體反應性抗體(panel reactive antibody；PRA)、使個體具有更多交叉匹配相容供體、增加個體接受移植之可能性或概率、縮短個體對移植物之預期等待時間、使個體脫敏、降低移植相關症狀或病狀(如下文所述的免疫介導事件)之風險、或其任何組合。
例如，對接受移植之個體的成功治療包括但不限於長期保護及維持移植器官或組織，包括控制、逆轉、減輕、延遲或預防與器官移植相關的一種或多種症狀或不良狀況，例如免疫介導事件，包括但不限於產生供體特異性同種異體抗體(donor-specific alloantibody；DSA)、GVHD、抗體介導之排斥反應(antibody-mediated rejection；AMR)、超急性移植物排斥反應、慢性移植物排斥反應、移植物功能障礙及移植物丟失，如藉由症狀或病狀之功能或組織學體征來量測。能夠控制病症或病狀( 例如，移植排斥)之治療可包括減慢疾病過程之進展的治療，該治療在觀察到病症或病狀( 例如，移植排斥)之功能或組織學體征之後開始。此外，能夠逆轉疾病或病狀( 例如，移植排斥)之治療可包括以下治療，該治療在疾病或病狀( 例如，移植排斥)之功能或組織學體征出現後開始時，逆轉疾病過程並且使功能及組織學發現結果返回到更接近於正常。能夠「延遲病症或病狀( 例如移植排斥)之進展」之治療可能包括延期、阻礙、減緩、延緩、穩定及/或推遲病症或病狀( 例如移植排斥)之發展。根據病史及/或正治療之個體，此延遲可為不同時間長度。如熟習此項技術者顯而易見的，充分或顯著延遲實際上可以包括預防，因為個體， 例如有患上病症或病狀風險之個體不會患上病症或病狀。
在一些實施例中，本揭示案之移植可為一個或多個組織或器官之移植，包括但不限於骨髓、腎臟、心臟、肝臟、神經組織、肺、胰腺、皮膚及腸( 例如，小腸及/或大腸，以及其任何子組織)。
此外與JAK抑制劑組合之抗體可用於預防及/或治療某些病症及疾病，該等病症及疾病與相對於在健康個體或沒有特定病症或疾病之個體中發現的活化T細胞之增殖及/或數量，活化T細胞之增殖及/或數量增加相關或由其引起(全部或部分)。可使用本文描述之抗體組合JAK抑制劑來預防及/或治療之病症及疾病之非限制性實例包括移植物抗宿主疾病及移植排斥(包括使用同種異體或異種組織之移植排斥)之病例，諸如骨髓移植、肝移植、腎移植、或任何器官或組織之移植。
在一些實施例中，在輸血之前、同時，及/或之後，本揭示案之抗體或組成物可與JAK抑制劑組合來投與個體。例如，如下文更詳細描述，可投與本揭示案之四價抗體或組成物以便增加有利治療結果之可能性，減少不利結果之可能性，及/或減輕或預防在輸血完成之前、同時、或之後出現之症狀。
如本文使用，治療需要輸血之個體可為指治療性治療及預防性或防範措施中之一或多者( 例如，增加有利治療結果之可能性，該等有利治療結果諸如置換或補充血液組分/細胞，或降低不利結果的可能性，該等不利結果諸如對於治療之不利反應、治療無效果、或免疫反應、或減少有利治療諸如輸血發生可能性的狀況)。治療可包括但不限於緩解或預防與病症或病狀相關之病狀及症狀，及/或干擾或限制個體獲得病症或病狀治療選項的問題或病狀。需要治療之彼等包括已患有病症或病狀之彼等以及其中病症或病狀有待預防之彼等。疾病或病症之治療可抑制與病症或病狀相關的免疫介導事件，改善病症或病狀之症狀，降低病症或病狀之嚴重程度，改變病症或病狀進展過程，及/或改善或治癒基本病症或病狀。
在一些實施例中，輸血為包含白血球、紅血球、及血小板中之一或多者的輸血。在一些實施例中，輸血包含全血或一或多種血液製品，包括但不限於白血球、紅血球、血小板、新鮮冷凍血漿、冷沉澱物或血凝固因子、抗體，及/或血液代用品。可藉由輸血(例如輸注血液或血液製品)來治療的示例性病狀包括但不限於出血或失血、血球比容或血紅蛋白降低(例如貧血)、鐮狀細胞病、地中海貧血、外科手術期間或之後的血液補充、心臟病、創傷性損傷、一種或多種血液因子缺乏(例如血友病、血管性血友病、低纖維蛋白原血症、或因子II、V、VII、IX、X或XI缺乏)，需要補充纖維蛋白原之病狀(例如肝病、輸血等)、骨髓衰竭、血小板功能病症、血小板減少、免疫缺陷(例如來自治療或疾病)及其類似病狀。與輸血相關之實務、給藥、反應、適應症、及製劑的描述可發現於 例如American Red Cross Compendium of Transfusion Practice Guidelines中。
在一些實施例中，將本揭示案之抗體與本揭示案之JAK抑制劑組合來投與受試者導致受試者中之本揭示案之T細胞介導發炎性疾病之一或多個症狀減少。
本文所述抗體及/或JAK抑制劑或其醫藥組成物之投與劑量及頻率根據在最小化副作用的同時，預防及/或治療的方法來投與。待與JAK抑制劑組合來投與特定受試者之本文所述抗體或其醫藥組成物之精確劑量可鑒於與需要治療之受試者相關之因素，由醫生來決定。可考慮之因素包括疾病狀態之嚴重程度，受試者之一般健康狀況，受試者之年齡、及體重，飲食，投與時間及頻率，與其他治療劑或藥物之組合，反應敏感性，及對於治療之耐受性/反應。與JAK抑制劑組合的本文所述抗體或其醫藥組成物之投與劑量及頻率可隨著時間的推移來調整以便提供足夠抗體或JAK抑制劑位凖，或保持所需效應。
待用於調配物中之精確劑量亦取決於投與途徑，及發炎性病症或疾病之嚴重性，並且應根據醫生之判斷及各患者情況來決定。
有效劑量可自來源於 活體外或動物模型試驗系統之劑量-反應曲線外推。
在一個實施例中，本文所述抗體及/或JAK抑制劑中之任一者被配製成藉由腹膜內、靜脈內、皮下、或肌肉內注射、或其他投與形式諸如經口、黏膜、經由吸入、舌下等來投與。在一些實施例中，抗體藉由靜脈內輸注來投與且/或JAK抑制劑經口投與。
在一個實施例中，本文亦涵蓋非經腸投與藉由皮下、肌肉內或靜脈內注射來表徵。注射劑可以習知形式來製備，呈液體溶液或懸浮液、適合於在注射之前溶解或懸浮於液體中之固體形式，或呈乳液形式。注射劑、溶液及乳液亦含有一或多種賦形劑。合適賦形劑為例如水、鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇。另外，若需要，待投與之醫藥組成物亦可含有少量無毒輔助物質諸如潤濕或乳化劑、pH緩衝劑、穩定劑、溶解度增強劑、及其他此類試劑。其他投與途徑可包括腸道投與、大腦內投與、鼻腔投與、動脈內投與、心臟內投與、骨內輸注、鞘內投與、靜脈內輸注、皮下植入或注射、肌肉內投與、直腸內投與陰道內投與、胃內投與、氣管內投與、肺內投與及腹膜內投與。用於非經腸投與之製劑包括準備注射之無菌溶液，無菌乾燥可溶性製品，諸如準備恰好在使用之前與溶劑組合的凍乾粉末，包括準備注射之無菌懸浮液，準備恰好在使用之前與媒劑組合之無菌乾燥不溶性製品及無菌乳液。溶液可為水性或非水性。若靜脈內投與，合適載劑包括生理鹽水或磷酸鹽緩衝鹽水(phosphate buffered saline；PBS)、水、及含有增稠及增溶劑諸如葡萄糖、聚乙二醇、及聚丙二醇及其混合物的溶液。
在另一實施例中，本揭示案亦涵蓋投與包含偶聯至其他分子諸如可偵測標記物、或治療劑或細胞毒性劑之本揭示案之抗體的組成物。該等試劑可包括但不限於放射性同位素、毒素、類毒素、發炎劑、酶、反義分子、肽、細胞因子、及化學治療劑。將抗體與此等分子偶聯之方法通常為熟習此項技術者已知的。參見 例如PCT公開案WO 92/08495；WO 91/14438；WO 89/12624；美國專利第5,314,995號；及EP 396,387。
在一個實施例中，組成物包含偶聯至細胞毒性劑的抗體或多肽。細胞毒性劑可包括對於細胞有害的任何試劑。可偶聯至抗體或片段之細胞毒性劑之示例性類別可包括但不限於紫杉醇、細胞鬆弛素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、依米丁(emetine)、絲裂黴素、依託泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、長春新鹼、長春花鹼、秋水仙素、多柔比星(doxorubicin)、柔紅黴素(daunorubicin)、二羥基炭疽菌素二酮、米托蒽醌(mitoxantrone)、光神黴素、放線菌素D、1-去氫睾固酮、糖皮質激素、普魯卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、嘌呤黴素、及其類似物或同源物。 V. 醫藥組成物
本揭示案亦提供包含本文所述抗體或JAK抑制劑，及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑的醫藥組成物。醫藥組成物可適用於 例如本揭示案之方法、用途，及/或套組中。
醫藥學上可接受之載劑或賦形劑在此項技術中為已知的，並且為促進投與藥理學有效物質的相對惰性物質。例如，賦形劑可給予形狀或堅實度，或充當稀釋劑。合適賦形劑包括但不限於穩定劑、潤濕及乳化劑、改變滲透性之鹽、囊封劑、緩衝劑、及皮膚滲透增強劑。在某些實施例中，本文所述四價抗體呈液體醫藥組成物形式。液體醫藥學上可投與組成物可例如藉由將本文所述抗體溶解、分散、或以其他方式混合於載劑例如像水、鹽水、水性葡萄糖、甘油、二醇、乙醇、及其類似物中，由此形成溶液或懸浮液來製備。若需要，待投與之醫藥組成物亦可含有少量無毒輔助物質諸如潤濕劑、乳化劑、增溶劑、及pH緩衝劑及其類似物。用於非經腸及非注射藥物遞送之賦形劑以及調配物在 Remington, The Science and Practice of Pharmacy第20版 Mack Publishing (2000)中闡明。
以單劑型來提供投與人類及動物之醫藥組成物，諸如含有合適數量之本文所述四價抗體的無菌非經腸溶液或懸浮液。在一個實施例中，四價抗體以單劑型或多劑型配製並投與。如本文所用，單劑型是指適合於人類及動物受試者且如此項技術中已知單獨包裝之物理上獨立的單元。各單位劑量含有與所需醫藥載劑、媒劑或稀釋劑締合的足以產生所需治療效果的預定數量之抗體或抗體衍生抗原結合片段。單劑型之實例包括安瓿及注射器。單劑型可以其分率或倍數來投與。多劑型為待以分離之單劑型投與之包裝於單個容器中之複數個相同單劑型。多劑型之實例包括小瓶、或數品脫或數加侖之瓶子。因此，多劑型為在包裝中未分離的單位劑量之倍數。
醫藥組成物中之抗體之濃度取決於例如抗體之物理化學特性、給藥時程、及投與量以及為熟習此項技術者已知的其他因素。
在一些實施例中，本揭示案提供用於本文描述之任何方法的抗體及組成物(諸如本文所述之醫藥組成物)，不論是否在用作藥物及/或用於製造藥物，待投與或調配以便與本揭示案之JAK抑制劑一起投與的情形中。 VI. 套組
本揭示案之某些態樣涉及包括本揭示案之抗PSGL-1抗體及/或本揭示案之JAK抑制劑的套組或製品。視情況，本文所述套組可含有一或多種醫藥學上可接受之載劑，諸如本文所述示例性載劑。在一些實施例中，本揭示案之套組包括本揭示案之醫藥組成物。本文所述套組可適用於 例如本揭示案之方法或用途中。
套組可視情況提供其他組分，諸如緩衝液及解釋性資訊。通常，套組包含容器及在容器上或與容器締合的標籤或包裝插頁。容器可為單位劑量、大包裝( 例如，多劑量包裝)或亞單位劑量。在本揭示案之套組中提供之說明書通常為標籤或包裝插頁( 例如，包含於套組中之紙張)上的書面說明書，但是機器可讀說明書( 例如，承載於磁或光存儲碟上之說明書)亦為可接受的。
在一些實施例中，套組進一步包括包含與JAK抑制劑組合來投與抗體以便治療T細胞介導疾病 例如T細胞介導發炎性疾病或癌症之說明書的包裝插頁。在一些實施例中，套組進一步包括JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之調配物。
本揭示案之套組在合適包裝中。合適包裝包括但不限於小瓶、瓶、罐、可撓性包裝( 例如密封Mylar或塑膠袋)及其類似物。亦涵蓋與特定裝置諸如吸入器、鼻腔投與裝置( 例如，霧化器)、或輸注裝置諸如微型泵組合來使用的包裝。套組可具有無菌入口孔(例如容器可以為具有可由皮下注射針刺穿之塞子的靜脈內溶液袋或小瓶)。容器亦可具有無菌入口孔(例如容器可以為具有可由皮下注射針刺穿之塞子的靜脈內溶液袋或小瓶)。組成物中之至少一種活性劑為本文描述之四價抗體或多肽。容器可進一步包括第二醫藥學上活性劑。在一些實施例中，套組可進一步包括適用於治療( 例如，輸血或移植)的任何其他材料或裝置，包括但不限於一或多個容器、導管、滅菌劑或設備、套管、注射器、及其類似物。 實例
本發明將藉由參考以下實例來更充分理解。然而，該等實例不應視為限制本發明之範疇。應瞭解，本文所述之實例及實施例僅用於說明性目的，且建議熟悉此項技藝者根據其進行各種修改或變化，且該等修改或變化將包括在本申請的精神及權限以及所附請求項的範圍內。 實例 1 ： 藉由使用抗 PSGL-1 抗體及 JAK 抑制劑之組合治療的細胞凋亡檢定。
以下提供之實例描述一種Janus激酶(Janus kinase；JAK)抑制劑盧佐替尼與抗PSGL-1抗體15A7H組合來誘導活化T細胞細胞凋亡之用途的臨床前研究。 方法 人類 T 細胞製備
在以下描述之細胞凋亡檢定之前，T細胞刺激經由植物血凝素-L(PHA)治療來達成。簡言之，用於研究中之人類血液樣品獲自健康人類供體。藉由在室溫下，以2400轉/分(revolutions per minute；rpm)，Ficoll-Hypaque梯度離心(Ficoll-Paque PLUS, GE Healthcare, 目錄#17-1440-03)15分鐘，將周邊血單核細胞(Peripheral blood mononuclear cell；PBMC)自全血中新鮮分離。收集含有單核細胞之血沉棕黃層並且用磷酸鹽緩衝鹽水(phosphate-buffered saline；PBS)洗滌3次以便最大限度地減少血小板污染。所收穫PBMC用於藉由在含有10%胎牛血清(fetal bovine serum；FBS)之RPMI-1640培養基中與PHA (3 μg/mL, SIGMA, 目錄：L2769-10mg)一起孵育2天，隨後再在含有重組人類介白素-2 (5 ng/mL, R&D Systems, 目錄#202-IL-050)之培養基中保持約4與約6天之間，從而產生活化T細胞。 細胞凋亡檢定
使用膜聯蛋白V/碘化丙啶(propidium iodide；PI)染色法之螢光活化細胞分選(Fluorescence-activated cell sorting；FACS)分析用於決定藥物及對照治療細胞中之凋亡率。簡言之，在添加或不添加抗體15A7H及/或JAK抑制劑的情況下，將1-1.5x10 5活化T細胞(通常PHA刺激後第5天至第7天)接種並培養。在完全RPMI-1640培養基(10% FBS，1%青黴素/鏈黴素及2 ng/mL介白素-2)中新鮮製備指示濃度下之抗體15A7H或盧佐替尼，僅用於抗體15A7H之最高濃度下的人類IgG4同種型對照，及抗體15A7H濃度之一半下的交聯劑(cross-linker；CL，小鼠抗人類IgG抗體；Jackson Immuno Research，目錄#209-005-098)的等分試樣，並且以100 μL之最終體積，添加至測試孔。板在37℃下孵育48小時。
然後，將細胞用冰冷膜聯蛋白結合緩衝液洗滌並且以300xg離心5分鐘。細胞球團重新懸浮於冰冷膜聯蛋白結合緩衝液中，並且與PI (Strong Biotech, AVK250)一起，添加膜聯蛋白-V-FITC。染色程序使用膜聯蛋白-V FITC細胞凋亡偵測套組(Strong Biotech, AVK250)根據製造商之說明書來執行。
樣品在流式細胞儀(BD LSR scanner; BD Biosciences, San Diego)上運作，並且細胞生存力及細胞凋亡使用膜聯蛋白-V-FITC/PI直方圖上之象限來計算。活細胞被鑑別為兩種螢光染料均陰性染色之彼等，早期凋亡細胞被鑑別為僅膜聯蛋白-V-FITC陽性之彼等，壞死細胞被鑑別為僅PI陽性之彼等，並且晚期凋亡細胞被鑑別為兩種螢光染料均陽性染色之彼等。膜聯蛋白-V陽性細胞、PI陽性細胞、及膜聯蛋白-V及PI陽性細胞計數為凋亡細胞。 固定比率組合細胞毒性檢定
活化T細胞以1-1.5x10 5細胞/毫升接種於96孔板中並且用盧佐替尼及抗體15A7H單獨，或在固定濃度比率下組合地治療。對於盧佐替尼及抗體15A7H之組合，在來自四個供體之T細胞上測試3.3:1及1.1:1之固定比率。另外，在來自兩個供體之T細胞上測試0.37:1之固定比率之盧佐替尼及抗體15A7H。
細胞凋亡使用膜聯蛋白-V FITC細胞凋亡偵測套組(Strong Biotech, AVK250)，根據製造商之說明書來量測。組合藥物效應藉由使用Calcusyn軟體(版本2.0，Biosoft)基於Chou-Talalay方法( 參見，例如，Chou TC, (2010) Cancer Res., 70:440-446；及 Bijnsdorp IV. 等人, (2011) Methods Mol Biol., 731:421-434)計算組合指數(combination index；CI)來評估，其中CI＜1指示協同作用，CI=1指示相加性，並且CI＞1指示拮抗作用。 試劑
JAK抑制劑盧佐替尼(「RUXO」)獲自LC Laboratories (目錄# R- 6688)，並且根據製造商說明書，溶解於二甲亞碸(dimethylsulfoxide；DMSO)中。盧佐替尼為發現抑制一種以上JAK的第一代JAK抑制劑之一部分；盧佐替尼抑制JAK1及JAK2。 結果
單獨或組合的0.03 μg/mL、0.3 μg/mL、及3 μg/mL之濃度下的抗體15A7H，及10 μM、3.3 μM、1.1 μM、0.367 μM、及0.122 μM之濃度下的盧佐替尼最初在來源於三個供體之PBMC之活化T細胞中測試以便決定初步組合效應。
如第1A-1C圖展示，3 μg/mL之濃度下並且在抗體交聯劑存在下的單獨抗體15A7H在48小時治療之後，在活化T細胞中觸發最佳細胞凋亡誘導。0.03 μg/mL及0.3 μg/mL之次佳抗體15A7H濃度通常在所治療細胞中產生最小至中等細胞凋亡誘導，此取決於供體。用0.122-10 μM範圍內之濃度下的單獨盧佐替尼治療T細胞48小時導致相對於背景位凖的細胞凋亡之最小增加或沒有增加。然而，盧佐替尼與抗體15A7H之組合，尤其在0.03 μg/mL及0.3 μg/mL之次佳抗體濃度下，導致與用相同濃度下之單獨抗體15A7H來治療之細胞相比，或與用盧佐替尼及同種型對照抗體來治療之細胞相比，細胞凋亡位凖增加。
為了進一步確認抗體15A7H及盧佐替尼對於活化T細胞中之細胞凋亡誘導的組合效應，使用Chou-Talalay中值效應分析，使用固定比率之抗體15A7H及盧佐替尼來評估組合效應(Chou TC. Cancer Res. 2010;70:440-446)。細胞使用單獨及組合的各藥物來治療，並且細胞凋亡使用膜聯蛋白-V FITC細胞凋亡偵測套組(Strong Biotech, AVK250)來量測。基於與未治療對照相比，經治療樣品之量測螢光計數，結果表示為細胞凋亡分率(所實現之分率)。使用Calcusyn軟體(Biosoft)，表示具有固定藥物比率之各種劑量-效應曲線的七個對角用於量測該等組合中之每一者之組合指數(combination index；CI)。當CI分別為＜1、1及＞1時，組合效應定義為「協同」、「相加」或「拮抗」。
如第2圖展示，固定比率組合細胞凋亡檢定確認在3.3:1、1.1:1、及0.37:1之比率下，抗體15A7H與盧佐替尼協同作用，因為對於所實現的供體T細胞之25%至75%分率而言，所計算的大多數CI值保持低於0.9。
對於藥物組合評估，0.1-0.3範圍內之CI值被視為指示較強協同作用，0.3-0.7指示協同作用，並且0.7-0.85指示中度協同作用。表1示出在所測試的所有藥物比率及供體中，EC 50位凖下的CI指數。與盧佐替尼組合之抗體15A7H之CI指數在0.3-0.6範圍內，指示與盧佐替尼組合之抗體15A7H之協同作用( 參見，例如，Karagianni F. 等人 ,(2021) PLoS ONE, 16(3): e0248298)。 表1. 在所測試的所有藥物比率及供體中，EC 50位凖下的抗體15A7H及盧佐替尼(「RUXO」)之組合的CI指數。
藥物組合： RUXO+15A7H ；比率： [3.3:1]
單一治療 組合治療
供體 EC50 RUXO[μM] EC50 15A7H[μg/ml] EC50 RUXO[μM] EC50 15A7H[μg/ml] DRI RUXO DRI 15A7H CI
N089 1.9959 0.8654 0.4788 0.1436 4.1685 6.0249 0.4059
N084 4.2210 0.3275 0.3727 0.1118 11.3242 2.9286 0.4298
N102 10.0995 0.9589 1.1519 0.3456 8.7676 2.7749 0.4744
N103 9.1683 1.4030 1.0086 0.3026 9.0902 4.6368 0.3257
藥物組合： RUXO+15A7H ；比率： [1.1:1]
單一治療 組合治療
供體 EC50 RUXO[μM] EC50 15A7H[μg/ml] EC50 RUXO[μM] EC50 15A7H[μg/ml] DRI RUXO DRI 15A7H CI
N089 2.3633 0.8155 0.3938 0.3544 6.0012 2.3009 0.6012
N084 4.2210 0.3275 0.2011 0.1810 20.9884 1.8093 0.6003
N102 10.0995 0.9589 0.4993 0.4494 20.2269 2.1339 0.5181
N103 9.1683 1.4030 0.5537 0.4984 16.5574 2.8153 0.4156
藥物組合： RUXO+15A7H ；比率： [0.37:1]
單一治療 組合治療
供體 EC50 RUXO[μM] EC50 15A7H[μg/ml] EC50 RUXO[μM] EC50 15A7H[μg/ml] DRI RUXO DRI 15A7H CI
N102 10.0995 0.9589 0.1648 0.4450 61.2797 2.1549 0.4804
N103 9.1683 1.4030 0.2664 0.7192 34.4195 1.9508 0.5417
DRI：劑量減少指數(Dose-Reduction Index；DRI)為在給定效應位凖下，與各單獨藥物之劑量相比，協同組合中之各藥物之劑量可減少之倍數的度量。
實例2：使用具有抗PSGL-1抗體及mTOR抑制劑之組合治療的細胞凋亡檢定。
以下提供之實例描述使用單獨或與抗PSGL-1抗體15A7H組合的一種mTOR抑制劑雷帕黴素的 活體外細胞毒性研究。有效免疫抑制藥物雷帕黴素干擾T細胞活化及生長所需要的信號轉導途徑。其臨床上被批准用於預防器官排斥及一些癌症適應症。 方法 試劑
雷帕黴素獲自AdooQ Bioscience (目錄#A10782-5)並且根據製造商說明書，溶解於二甲亞碸(dimethylsulfoxide；DMSO)中。 人類T細胞製備
PBMC獲自健康供體之周邊血。藉由血液在Ficoll (GE Healthcare, 目錄#17-1440-03)上之密度離心來執行分離。所收穫PBMC用於藉由在RPMI-1640培養基(10% FBS，1%青黴素/鏈黴素及2-巰基乙醇)中與PHA (3 μg/mL, SIGMA, 目錄：L2769-10mg)一起孵育2天，隨後再在含有重組人類介白素-2 (5 ng/mL, R&D Systems, 目錄#202- IL-050)之培養基中保持約4與約6天之間，從而產生活化T細胞。 細胞凋亡檢定
雷帕黴素為展現有效免疫抑制活性之巨環內酯。為了評估藥物組合效應，將1-1.5x10 5活化T細胞塗鋪在96孔中並且用指示濃度下的單獨或組合的15A7H(含有交聯劑，小鼠抗人類IgG抗體，Jackson，目錄#209-005-098)及雷帕黴素治療48hr。細胞毒性藉由膜聯蛋白V/碘化丙啶(propidium iodide；PI)染色法來評估以便決定藥物治療細胞中之凋亡率。 結果
用0.122至10 μM範圍內之單獨雷帕黴素治療細胞在48hr之後不產生任何顯著位凖之細胞凋亡(第3A-3C圖)。與用相同劑量位凖之單獨15A7H治療之細胞相比，雷帕黴素及15A7H之組合治療不增加凋亡細胞之位凖。此等資料暗示15A7H加上雷帕黴素之治療不具有對於活化T細胞之任何加性效應。 實例3：使用盧佐替尼及抗PSGL-1抗體的固定比率組合細胞毒性檢定。
以下提供之實例描述除了15A7H以外，具有細胞毒性功能之其他抗PSGL-1抗體可與盧佐替尼協同作用來誘導活化T細胞細胞凋亡。 方法 試劑
JAK抑制劑盧佐替尼(「RUXO」)獲自LC Laboratories (目錄# R- 6688)並且根據製造商說明書，溶解於二甲亞碸(dimethylsulfoxide；DMSO)中。 人類T細胞製備
PBMC獲自健康供體之周邊血。藉由血液在Ficoll (GE Healthcare, 目錄#17-1440-03)上之密度離心來執行分離。所收穫PBMC用於藉由在RPMI-1640培養基(10% FBS，1%青黴素/鏈黴素及2-巰基乙醇)中與PHA (3 μg/mL, SIGMA, 目錄：L2769-10mg)一起孵育2天，隨後再在含有重組人類介白素-2 (5 ng/mL, R&D Systems, 目錄#202- IL-050)之培養基中保持約4與約6天之間，從而產生活化T細胞。 固定比率組合細胞毒性檢定
除了15A7H以外，測試抗PSGL-1抗體LH10、c43B6及h9F9誘導活化T細胞之細胞死亡的能力。此研究之目的是決定是否細胞凋亡誘導抗PSGL-1抗體加上盧佐替尼產生對於活化T細胞之更好細胞毒性效應。在細胞毒性檢定中使用固定比率之抗體及盧佐替尼，使用Chou-Talalay中值效應分析來評估組合效應。活化T細胞以1-1.5x10 5細胞/毫升接種於96孔板中並且用盧佐替尼及抗PSGL1抗體單獨，或在固定3.3:1、1.1:1及0.37:1濃度比率下組合地治療48hr。在此等檢定中測試單獨或組合的以0.004 μg/mL至3 μg/mL之3倍滴定來測試之抗PSGL-1抗體LH10、c43B6、及h9F9 (含有抗PSGL-1抗體濃度之一半的交聯劑，小鼠抗人類IgG抗體Jackson，目錄#209-005-098)及0.0015 μM至10 μM之3倍滴定的盧佐替尼。 結果
細胞凋亡如實例1所描述來決定，並且組合藥物效應組合指數(combination index；CI)使用允許自動模擬協同作用或拮抗作用的CalcuSyn (Biosoft, Ferguson, MO, USA)來分析，其中CI＜1指示協同作用，CI=1指示相加性，並且CI＞1指示拮抗作用。如第4A圖(LH10)、第4B圖(c43B6)及(h9F9)展示，在活化T細胞中具有細胞毒性能力之抗PSGL-1抗體LH10、c43B6及h9F9之組合在3.3:1、1.1:1、及0.37:1之比率下與盧佐替尼協同作用，因為對於所實現的供體T細胞之35%至85%分率而言，所計算的大多數CI值保持低於0.9。 實例4：使用托法替尼及抗PSGL-1抗體的固定比率組合細胞毒性檢定。
以下提供之實例描述一種Janus激酶(Janus kinase；JAK) 1/3抑制劑托法替尼與抗PSGL-1抗體15A7H及LH10組合來誘導活化T細胞細胞凋亡之用途的研究。 方法 試劑
JAK抑制劑托法替尼(「TOFA」)獲自AdooQ Bioscience (A10241-10)並且根據製造商說明書，溶解於二甲亞碸(dimethylsulfoxide；DMSO)中。 人類T細胞製備
PBMC獲自健康供體之周邊血。藉由血液在Ficoll (GE Healthcare, 目錄#17-1440-03)上之密度離心來執行分離。所收穫PBMC用於藉由在RPMI-1640培養基(10% FBS，1%青黴素/鏈黴素及2-巰基乙醇)中與PHA (3 μg/mL, SIGMA, 目錄：L2769-10mg)一起孵育2天，隨後再在含有重組人類介白素-2 (5 ng/mL, R&D Systems, 目錄#202- IL-050)之培養基中保持約4與約6天之間，從而產生活化T細胞。 固定比率組合細胞毒性檢定
抑制JAK3、JAK1，並且在較小程度上抑制JAK2之第一代jakinib托法替尼為經研發用於治療發炎性疾病包括類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis；RA)、牛皮癬性關節炎及活動性潰瘍性結腸炎的第一種JAK抑制劑。在此實驗中，在用1:1固定組合比率之托法替尼(在0.01至3 μM之濃度下)及抗PSGL-1抗體15A7H或LH10 (在0.01至3 μg/mL之濃度下)來治療之活化T細胞中，執行細胞毒性檢定以便評估組合效應。簡言之，1-1.5x10 5活化T細胞用抗體15A7H或LH10加上托法替尼接種並治療。在完全RPMI-1640培養基(10% FBS，1%青黴素/鏈黴素及2 ng/mL介白素-2)中新鮮製備指示濃度下之抗體或托法替尼，及抗PSGL-1抗體濃度之一半下的交聯劑(小鼠抗人類IgG抗體；Jackson，目錄#209-005-098)的等分試樣，並且以100 μL之最終體積，添加至測試孔。板在37℃下孵育48小時。如實例1所描述，組合效應使用Calcusyn軟體來評估，以便基於單一及組合治療之細胞凋亡檢定結果來計算組合指數(combination index；CI)。細胞凋亡使用膜聯蛋白-V FITC細胞凋亡偵測套組(Strong Biotech, AVK250)，根據製造商之說明書來量測。 結果
如第5圖展示，實驗結果指示托法替尼加上15A7H或LH10之組合顯現顯著協同功效，因為對於所實現的供體T細胞之25%至75%分率而言，所計算的大多數CI值保持低於0.5。 實例5：異種移植物抗宿主疾病(graft-versus-host disease；GvHD)小鼠模型中之盧佐替尼及抗PSGL-1抗體組合治療
以下提供之實例描述盧佐替尼與抗PSGL-1抗體15A7H組合來改良植入人類PBMC，導致異種GvHD之小鼠之存活率之用途的研究。 方法 試劑
JAK抑制劑盧佐替尼(「RUXO」)獲自LC Laboratories (目錄# R- 6688)並且根據製造商之說明書，溶解於二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide；DMSO)中並且在0.5%甲基纖維素媒劑中配製以便進行灌胃投與。 人類PBMC製備
PBMC獲自健康供體之周邊血。藉由血液在Ficoll (GE Healthcare, 目錄#17-1440-03)上之密度離心來執行分離。將所收穫PBMC洗滌並且分裝於PBS中。 小鼠實驗
8-9週齡雌性晚期嚴重免疫缺陷(Advanced Severe Immuno-Deficiency；ASID)小鼠(NOD.Cg- Prkdc scidIl2rg t m1Wj1/YckNarl; NLAC NARLabs Taiwan)接受2.0 Gy之全身輻照劑量並且在輻照後24小時，藉由尾靜脈注射來植入3 × 10 6人類PBMC。小鼠保持在無病原體條件下並且在設定於22±1℃之溫度下，以12小時光/暗循環，在標準化方法下飼養，自由取用食物及水。接受最少3天適應環境過程之後，將實驗動物隨機地劃分至治療組。
在接受3 × 10 6人類PBMC之ASID小鼠(n=5~7/組)中，誘導異種GvHD (xGvHD)。人類PBMC植入72小時後，每天兩次經口投與45 mg/kg之盧佐替尼或媒劑持續15天，並且每3至4天靜脈內投與10 mg/kg之抗PSGL-1 15A7H抗體或媒劑總共5個劑量。每天評估小鼠之存活率。開始治療時間指定為第1天。 結果
如第6圖展示，單獨或組合治療之盧佐替尼及抗PSGL-1抗體15A7H改善藉由人類淋巴球來誘導之異種GVHD。另外，雖然沒有來自媒劑治療組(具有未填實正方形之虛線)之動物存活超過第16天，但是接受單獨盧佐替尼(具有未填實圓形之實線)或抗體15A7H(具有未填實三角形之實線)之治療的小鼠展示延遲死亡，然而沒有一個存活超過第18天。組合治療組具有最佳存活率，因為43%(7個中的3個)之小鼠保持存活直到實驗結束(第21天)。 實例 6 ：在患有類固醇難治性急性移植物抗宿主疾病 (steroid-refractory acute graft-versus-host disease ； SR-aGVHD) 或治療難治性急性移植物抗宿主疾病 (treatment-refractory acute graft-versus-host disease ； TR-aGVHD) 之患者中，抗 PSGL-1 抗體之臨床研究。
以下提供之實例描述在患有類固醇難治性急性移植物抗宿主疾病(steroid-refractory acute graft-versus-host disease；SR-aGVHD)或治療難治性急性移植物抗宿主疾病(treatment-refractory acute graft-versus-host disease；TR-aGVHD)之患者中，抗PSGL-1抗體15A7H之1期、開放標籤研究。 研究設計
使用抗體之多個劑量，在患有SR-aGVHD或TR-aGVHD之患者中測試抗PSGL-1抗體15A7H。指派研究參與者接受6 mg/kg之抗體15A7H之第一劑量，隨後每週一次4 mg/kg之抗體15A7H之劑量，持續3週(6-4-4-4方案)。
此研究包括除了皮質類固醇以外，沒有任何先前全身治療的患有SR-aGVHD之患者，以及除了皮質類固醇以外，具有一次先前包括JAK抑制劑之aGVHD全身治療的患有TR-aGVHD之患者。用與額外全身治療組合的抗體15A7H來治療之參與者亦包括在研究中。 結果
在此項研究中登記24個參與者之後，進行功效分析以便決定達到預先設定無效標準之可能性。在24個參與者中，12個參與者被歸類為類固醇難治性(steroid refractory；SR)並且12個參與者為治療難治性(treatment refractory；TR)。
如與具有SR之參與者(4/12=33%總體反應)相比，在具有TR之參與者(8/12=67%總體反應)中觀察到經改良之臨床反應。此發現為意外的，因為已接受先前全身療法之患者咸信患有更嚴重或進行性疾病。進一步分析展示在除了抗體15A7H以外，接受伴隨JAK抑制療法之參與者中，臨床反應得以改良。
在患有T細胞介導疾病之患者中，在用與JAK抑制組合之抗體15A7H來治療之患者中結果得以改良的觀察結果得到例如本文中之實例1所描述之臨床前實驗的支持，展示當抗體15A7H與JAK抑制劑諸如盧佐替尼組合時的協同反應。
雖然前述實施例出於理解清楚之目的經由說明及實例較詳細地描述，但該等描述及實例不應被視為限制本發明之範圍。
無
第1A-1C圖提供測試盧佐替尼(「RUXO」)與抗PSGL-1抗體15A7H組合之協同效應的T細胞細胞凋亡檢定之結果。在衍生自來自三個供體(供體1，第1A圖；供體2；第1B圖；供體3，第1C圖)之周邊血單核細胞(peripheral blood mononuclear cell；PBMC)之活化T細胞中，盧佐替尼及抗體15A7H單獨或組合以指示濃度(RUXO：10 μM、3.3 μM、1.1 μM、0.367 μM、及0.122 μM；抗體15A7H：0.03 μg/mL、0.3 μg/mL、及3 μg/mL)來測試。單獨或與盧佐替尼組合之同種型對照抗體(「同種型對照」)亦以3 μg/mL對照抗體之濃度來測試。如y軸展示之細胞凋亡位凖如本文中之實例1所描述來評估。
第2圖提供測試盧佐替尼(「RUXO」)與抗PSGL-1抗體15A7H組合對於活化T細胞細胞凋亡之組合效應的實驗之結果，使用如本文中之實例1所描述之Chou-Talalay中值效應分析來評估。盧佐替尼及抗體15A7H針對其對於衍生自指示供體(N089、N084、N102、及N103)之細胞中之活化T細胞細胞凋亡的效應，以指示固定比率(3.3:1、1.1:1、及0.37:1)來測試。x軸示出如與未治療對照細胞相比的觀察細胞凋亡分率，並且y軸示出對應組合指數(combination index；CI)。當CI分別為＜1、1及＞1時，組合效應定義為「協同」、「相加」或「拮抗」。
第3A-3C圖提供測試雷帕黴素(「RAPA」)與抗PSGL-1抗體15A7H組合的T細胞細胞凋亡檢定之結果。在衍生自來自三個供體(供體1，第3A圖；供體2；第3B圖；供體3，第3C圖)之周邊血單核細胞(peripheral blood mononuclear cell；PBMC)之活化T細胞中，雷帕黴素及抗體15A7H單獨或組合以指示濃度(RAPA：10 μM、3.3 μM、1.1 μM、0.367 μM、及0.122 μM；抗體15A7H：0.03 μg/mL、0.3 μg/mL、及3 μg/mL)來測試。單獨或與盧佐替尼組合之同種型對照抗體(「同種型對照」)亦以3 μg/mL對照抗體之濃度來測試。如y軸展示之細胞凋亡位凖如本文中之實例2所描述來評估。
第4A-4C圖提供測試盧佐替尼(「RUXO」)與抗PSGL-1抗體LH10 (第4A圖)、c43B6 (第4B圖)、或h9F9 (第4C圖)組合對於活化T細胞細胞凋亡之組合效應的實驗之結果，使用如本文中之實例3所描述之Chou-Talalay中值效應分析來評估。盧佐替尼及抗PSGL-1抗體針對其對於衍生自指示供體(N98、M1、及N136)之細胞中之活化T細胞細胞凋亡的效應，以指示固定比率(3.3:1、1.1:1、及0.37:1)來測試。x軸示出如與未治療對照細胞相比的觀察細胞凋亡分率，並且y軸示出對應Log 10組合指數(combination index；CI)。當CI分別為＜1、1及＞1時，組合效應定義為「協同」、「相加」或「拮抗」。
第5圖提供測試托法替尼(「TOFA」)與抗PSGL-1抗體15A7H或LH10組合對於活化T細胞細胞凋亡之組合效應的實驗之結果，使用如本文中之實例4所描述之Chou-Talalay中值效應分析來評估。托法替尼及抗體15A7H或LH10針對其對於衍生自指示供體(M1、N93、及N95)之細胞中之活化T細胞細胞凋亡的效應，以1:1之指示固定比率來測試。x軸示出如與未治療對照細胞相比的觀察細胞凋亡分率，並且y軸示出對應Log 10組合指數(combination index；CI)。當CI分別為＜1、1及＞1時，組合效應定義為「協同」、「相加」或「拮抗」。
第6圖提供測試盧佐替尼、抗PSGL-1抗體15A7H、或兩者之組合在移植物抗宿主疾病(graft-versus-host disease；GvHD)之異種小鼠模型中之效應的實驗之結果。將晚期嚴重免疫缺陷(Advanced Severe Immuno-Deficiency；ASID)小鼠照射並植入人類PBMC以誘導異種GvHD。人類PBMC植入72小時後，開始治療(指派為第1天)。每天兩次經口投與45 mg/kg (45 mpk)之盧佐替尼或媒劑持續15天，並且每3至4天靜脈內投與10 mg/kg (10 mpk)之抗PSGL-1 15A7H抗體或媒劑總共5個劑量。每天評估小鼠之存活率。展示所有4個治療組的治療後隨著時間之存活率(每組n=5~7)。組合治療之群組展示最佳存活率。
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Claims (52)

  1. 一種治療或預防T細胞介導發炎性疾病的方法，該方法包括以下步驟：向有需要之受試者投與治療有效量的特異性結合至人類PSGL-1之抗體組合Janus激酶(JAK)抑制劑。
  2. 一種治療或預防癌症之方法，該方法包括以下步驟：向有需要之受試者投與治療有效量的特異性結合至人類PSGL-1之抗體組合Janus激酶(JAK)抑制劑。
  3. 如請求項1或請求項2所述之方法，其中該JAK抑制劑抑制JAK1及/或JAK2。
  4. 如請求項1或請求項2所述之方法，其中該JAK抑制劑抑制JAK1及/或JAK3。
  5. 如請求項1或請求項2所述之方法，其中該JAK抑制劑為盧佐替尼。
  6. 如請求項1或請求項2所述之方法，其中該JAK抑制劑為托法替尼。
  7. 如請求項1-6中任一項所述之方法，其中該特異性結合至人類PSGL-1之抗體包含有包含重鏈可變(VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(VL)域之輕鏈；其中該VH域包含有包含胺基酸序列SFGMH (SEQ ID NO:8)之CDR-H1、包含胺基酸序列YINGGSSTIFYANAVKG (SEQ ID NO:9)之CDR-H2、及包含胺基酸序列YASYGGGAMDY (SEQ ID NO:10)之CDR-H3；並且其中該VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVHNDGNTYFE (SEQ ID NO:5)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:6)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSYVPLT (SEQ ID NO:7)之CDR-L3。
  8. 如請求項1-7中任一項所述之方法，其中該抗體為人源化抗體。
  9. 如請求項1-7中任一項所述之方法，其中該VH域包含胺基酸序列SEQ ID NO:4。
  10. 如請求項1-9中任一項所述之方法，其中該VL域包含胺基酸序列SEQ ID NO:3。
  11. 如請求項1-6中任一項所述之方法，其中該特異性結合至人類PSGL-1之抗體包含有包含重鏈可變(VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(VL)域之輕鏈；其中該VH域包含有包含胺基酸序列AYYIH (SEQ ID NO:24)之CDR-H1、包含胺基酸序列RVNPNTGGTSYNPKFKG (SEQ ID NO:25)之CDR-H2、及包含胺基酸序列SGSPYYRYDD (SEQ ID NO:26)之CDR-H3；並且其中該VL域包含有包含胺基酸序列RASSTVNSTYLH (SEQ ID NO:28)之CDR-L1、包含胺基酸序列GSSNLAS (SEQ ID NO:29)之CDR-L2、及包含胺基酸序列QQYSGYPLT (SEQ ID NO:30)之CDR-L3。
  12. 如請求項11所述之方法，其中該重鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO:27。
  13. 如請求項11或請求項12所述之方法，其中該輕鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO:31。
  14. 如請求項1-6中任一項所述之方法，其中該特異性結合至人類PSGL-1之抗體包含有包含重鏈可變(VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(VL)域之輕鏈；其中該VH域包含有包含胺基酸序列TNAMN (SEQ ID NO:32)之CDR-H1、包含胺基酸序列RIRSKSNNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:33)之CDR-H2、及包含胺基酸序列GGSYWYFDV (SEQ ID NO:34)之CDR-H3；並且其中該VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVNSNGNTYLE (SEQ ID NO:36)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:37)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSHVPWT (SEQ ID NO:38)之CDR-L3。
  15. 如請求項14所述之方法，其中該重鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO:35。
  16. 如請求項14或請求項15所述之方法，其中該輕鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO:39。
  17. 如請求項1-11及14中任一項所述之方法，其中該重鏈進一步包含抗體恆定域。
  18. 如請求項17所述之方法，其中該恆定域為人類IgG4恆定域。
  19. 如請求項18所述之方法，其中該恆定域為在位置228處包含S228P胺基酸取代的人類IgG4恆定域，其中該編號根據EU編號。
  20. 如請求項1-19中任一項所述之方法，其中該輕鏈為人類κ輕鏈。
  21. 如請求項1-10中任一項所述之方法，其中該重鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO:2。
  22. 如請求項1-10及21中任一項所述之方法，其中該輕鏈包含胺基酸序列SEQ ID NO:1。
  23. 如請求項1-10中任一項所述之方法，其中該特異性結合至人類PSGL-1之抗體包含胺基酸序列SEQ ID NO:23。
  24. 如請求項1及3-23中任一項所述之方法，其中該T細胞介導發炎性疾病為移植物抗宿主疾病(GVHD)。
  25. 如請求項24所述之方法，其中該T細胞介導發炎性疾病為急性GVHD。
  26. 如請求項24所述之方法，其中該T細胞介導發炎性疾病為類固醇難治性急性GVHD(SR-aGVHD)。
  27. 如請求項24所述之方法，其中該T細胞介導發炎性疾病為治療難治性急性GVHD(TR-aGVHD)。
  28. 如請求項24所述之方法，其中該T細胞介導發炎性疾病為慢性GVHD。
  29. 如請求項1及3-23中任一項所述之方法，其中該T細胞介導發炎性疾病選自由以下組成之群：皮膚病症、多發性硬化、類風濕性關節炎、幼年關節炎、I型糖尿病、狼瘡、發炎性腸病、克羅恩病、重症肌無力、免疫球蛋白腎病、心肌炎及自體免疫性甲狀腺病症。
  30. 如請求項2-23中任一項所述之方法，其中該癌症為T細胞白血病或T細胞淋巴瘤。
  31. 如請求項30所述之方法，其中該T細胞白血病或淋巴瘤為成人T細胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、間變性大細胞淋巴瘤(ALCL)、或皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)。
  32. 如請求項1-31中任一項所述之方法，其中人類PSGL-1包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO:22。
  33. 如請求項1-32中任一項所述之方法，其中該受試者為人類。
  34. 如請求項1-33中任一項所述之方法，其中該抗體藉由靜脈內輸注來投與。
  35. 如請求項1-34中任一項所述之方法，其中該抗體為單株抗體。
  36. 如請求項1-35中任一項所述之方法，其中該JAK抑制劑在投與該抗體之前、之後、或同時投與該受試者。
  37. 如請求項1-36中任一項所述之方法，其中該JAK抑制劑經口投與該受試者。
  38. 如請求項1-37中任一項所述之方法，其中在投與該抗體及該JAK抑制劑之前，該受試者已經用皮質類固醇治療。
  39. 如請求項1-38中任一項所述之方法，其中投與該抗體及該JAK抑制劑導致該受試者中之T細胞介導發炎性疾病或癌症之一或多個症狀減少。
  40. 一種用於治療或預防受試者之T細胞介導發炎性疾病的方法中的特異性結合至人類PSGL-1之抗體；其中該方法包括以下步驟：向該受試者投與治療有效量的該抗體組合Janus激酶(JAK)抑制劑。
  41. 一種用於治療或預防受試者之癌症的方法中的特異性結合至人類PSGL-1之抗體；其中該方法包括以下步驟：向該受試者投與治療有效量的該抗體組合Janus激酶(JAK)抑制劑。
  42. 一種特異性結合至人類PSGL-1之抗體在製造供治療或預防T細胞介導發炎性疾病之藥物中的用途；其中該抗體與Janus激酶(JAK)抑制劑組合來投與。
  43. 一種特異性結合至人類PSGL-1之抗體在製造供治療或預防癌症之藥物中的用途；其中該抗體與Janus激酶(JAK)抑制劑組合來投與。
  44. 如請求項40-43中任一項所述之用途或抗體或用途，其中該抗體包含有包含重鏈可變(VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(VL)域之輕鏈；其中該VH域包含有包含胺基酸序列SFGMH (SEQ ID NO:8)之CDR-H1、包含胺基酸序列YINGGSSTIFYANAVKG (SEQ ID NO:9)之CDR-H2、及包含胺基酸序列YASYGGGAMDY (SEQ ID NO:10)之CDR-H3；並且其中該VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVHNDGNTYFE (SEQ ID NO:5)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:6)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSYVPLT (SEQ ID NO:7)之CDR-L3。
  45. 如請求項40-43中任一項所述之用途或抗體或用途，其中該特異性結合至人類PSGL-1之抗體包含有包含重鏈可變(VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(VL)域之輕鏈；其中該VH域包含有包含胺基酸序列AYYIH (SEQ ID NO:24)之CDR-H1、包含胺基酸序列RVNPNTGGTSYNPKFKG (SEQ ID NO:25)之CDR-H2、及包含胺基酸序列SGSPYYRYDD (SEQ ID NO:26)之CDR-H3；並且其中該VL域包含有包含胺基酸序列RASSTVNSTYLH (SEQ ID NO:28)之CDR-L1、包含胺基酸序列GSSNLAS (SEQ ID NO:29)之CDR-L2、及包含胺基酸序列QQYSGYPLT (SEQ ID NO:30)之CDR-L3。
  46. 如請求項40-43中任一項所述之用途或抗體或用途，其中該特異性結合至人類PSGL-1之抗體包含有包含重鏈可變(VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(VL)域之輕鏈；其中該VH域包含有包含胺基酸序列TNAMN (SEQ ID NO:32)之CDR-H1、包含胺基酸序列RIRSKSNNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:33)之CDR-H2、及包含胺基酸序列GGSYWYFDV (SEQ ID NO:34)之CDR-H3；並且其中該VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVNSNGNTYLE (SEQ ID NO:36)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:37)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSHVPWT (SEQ ID NO:38)之CDR-L3。
  47. 一種套組，該套組包括特異性結合至人類PSGL-1之抗體及包裝插頁，該包裝插頁包括使用該抗體組合Janus激酶(JAK)抑制劑來治療或預防受試者之T細胞介導發炎性疾病的說明書。
  48. 一種套組，該套組包括特異性結合至人類PSGL-1之抗體及包裝插頁，該包裝插頁包括使用該抗體組合Janus激酶(JAK)抑制劑來治療或預防受試者之癌症的說明書。
  49. 如請求項46或請求項48所述之套組，進一步包含該JAK抑制劑。
  50. 如請求項46-49中任一項所述之套組，其中該抗體包含有包含重鏈可變(VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(VL)域之輕鏈；其中該VH域包含有包含胺基酸序列SFGMH (SEQ ID NO:8)之CDR-H1、包含胺基酸序列YINGGSSTIFYANAVKG (SEQ ID NO:9)之CDR-H2、及包含胺基酸序列YASYGGGAMDY (SEQ ID NO:10)之CDR-H3；並且其中該VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVHNDGNTYFE (SEQ ID NO:5)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS (SEQ ID NO:6)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSYVPLT (SEQ ID NO:7)之CDR-L3。
  51. 如請求項46-49中任一項所述之套組，其中該特異性結合至人類PSGL-1之抗體包含有包含重鏈可變(VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(VL)域之輕鏈；其中該VH域包含有包含胺基酸序列AYYIH (SEQ ID NO:24)之CDR-H1、包含胺基酸序列RVNPNTGGTSYNPKFKG (SEQ ID NO:25)之CDR-H2、及包含胺基酸序列SGSPYYRYDD (SEQ ID NO:26)之CDR-H3；並且其中該VL域包含有包含胺基酸序列RASSTVNSTYLH (SEQ ID NO:28)之CDR-L1、包含胺基酸序列GSSNLAS (SEQ ID NO:29)之CDR-L2、及包含胺基酸序列QQYSGYPLT (SEQ ID NO:30)之CDR-L3。
  52. 如請求項46-49中任一項所述之套組，其中該特異性結合至人類PSGL-1之抗體包含有包含重鏈可變(VH)域之重鏈及包含輕鏈可變(VL)域之輕鏈；其中該VH域包含有包含胺基酸序列TNAMN (SEQ ID NO:32)之CDR-H1、包含胺基酸序列RIRSKSNNYATYYADSVKD (SEQ ID NO:33)之CDR-H2、及包含胺基酸序列GGSYWYFDV (SEQ ID NO:34)之CDR-H3；並且其中該VL域包含有包含胺基酸序列RSSQSIVNSNGNTYLE (SEQ ID NO:36)之CDR-L1、包含胺基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:37)之CDR-L2、及包含胺基酸序列FQGSHVPWT (SEQ ID NO:38)之CDR-L3。
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