TW202426499A - 具有pH依賴性的抗CTLA4抗體或抗原結合片段 - Google Patents
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Abstract
本發明揭露了一種在不同pH條件下與CTLA4抗原具有不同結合常數的抗CTLA4抗體或抗原結合片段。與在中性條件下相比，在腫瘤微環境的酸性條件下，本發明的抗體具有更高的結合常數。本發明的抗體或抗原結合片段具有針對腫瘤增強的治療效果。
Description
交叉引用
本申請要求2022年9月16日提交的中國專利申請號202211128540.9的優先權，其全部內容藉由引用併入本文。
本發明屬於生物醫藥領域，具體地，涉及一種具有pH依賴性的抗CTLA4抗體或抗原結合片段。
免疫檢查點是一大類免疫抑制類分子，包括細胞毒T淋巴細胞相關抗原-4(Cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4，CTLA-4)。在正常的生理狀態下，免疫檢查點可以調節免疫反應、防止自身組織損傷，以及對於維持免疫耐受具有重要的意義。但是在腫瘤發生發展過程中，免疫檢查點分子的活化和高表現會抑制免疫細胞的功能，減弱免疫細胞細胞對腫瘤細胞的殺傷能力從而介導腫瘤免疫逃逸。免疫檢查點阻滯劑就是藉由抑制負調節信號，調節免疫細胞活性來提高抗腫瘤免疫反應的治療方法。
其中，CTLA-4又名CD152，是T細胞上表現的一種免疫抑制性受體，在T細胞增殖過程中起抑制作用，同時對相關細胞週期進程和細胞因數如白介素-2(IL-2)，干擾素γ(IFN-γ)的分泌也有不同程度的抑制。已上市的Ipilimumab（伊匹單抗）是一種抗CTLA-4免疫調節的單殖株抗體(monoclonal antibody，mAb)，目前以單藥或聯用的形式，在黑色素瘤，肺癌，腎癌等多個腫瘤適應症上獲批或進行臨床試驗，並取得顯著成效。
儘管在臨床上取得了很好的效果，但伊匹單抗仍表現出劑量限制性毒性。這極大限制了腫瘤治療的更高劑量給藥。由此，需要對伊匹單抗進行一定的形式的改造，以期其展現出增強的抗腫瘤活性，同時減少副作用。
本發明提供了一種抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1具有一個組胺酸(H)殘基；
（2）所述的HCDR2具有至少一個組胺酸(H)殘基；
（3）所述的HCDR3具有零或1個組胺酸(H)殘基；
（4）所述的LCDR1具有至少一個酸性胺基酸殘基；
（5）所述的LCDR2具有與伊匹單抗LCDR2一致的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3具有與伊匹單抗LCDR3一致的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的重鏈可變區HCDR1包含31H、32H中的任意一種殘基，並且第35位胺基酸不為H。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的重鏈可變區HCDR1包含31H。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的重鏈可變區HCDR1包含32H。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的重鏈可變區HCDR1區，其中第35位胺基酸不為組胺酸(H)。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的重鏈可變區HCDR1區包含35A、35G、35V、35L、35I、35F、35W、35Y、35D、35N、35E、35K、35Q、35M、35S、35T、35C、35P、35R中的任意一種殘基。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的重鏈可變區HCDR1區包含35A、35V、35L、35I、35F、35Y、35S、35N中的任意一種殘基。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的重鏈可變區包含30H。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的重鏈可變區，其中，所述的重鏈可變區HCDR1區包含35H。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的重鏈可變區HCDR2包含56H殘基。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的重鏈可變區HCDR3包含零個H殘基。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的輕鏈可變區LCDR1中的酸性胺基酸殘基選自天冬胺酸(D)或麩胺酸(E)。
在本發明的較佳技術方案中，其中，所述的輕鏈可變區LCDR1包含24D、26D、28E、31E、33E、35D中的任意一種胺基酸殘基。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的一些技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中：
（1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列；
（2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列；
（3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列；
（4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列；
（5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列；
（6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含選自以下的重鏈可變區和輕鏈可變區序列對：
（1）包含有SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（2）包含有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（3）包含有SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（4）包含有SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（5）包含有SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（6）包含有SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（7）包含有SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（8）包含有SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（9）包含有SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（10）包含有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（11）包含有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（12）包含有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（13）包含有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列的輕鏈可變區；
（14）包含有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列的輕鏈可變區。
在本發明的較佳技術方案中，其中，該抗體或片段包含選自以下的重鏈序列和輕鏈序列：
（1）包含有SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈；
（2）包含有SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈；
（3）包含有SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈；
（4）包含有SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈；
（5）包含有SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈；
（6）包含有SEQ ID NO：43所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈；
（7）包含有SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈；
（8）包含有SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈；
（9）包含有SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈；
（10）包含有SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈；
（11）包含有SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列的輕鏈；
（12）包含有SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列的輕鏈；
（13）包含有SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列的輕鏈；
（14）包含有SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列的輕鏈。
在本發明的較佳技術方案中，所述的抗體或抗原結合片段為單殖株抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、重組抗體、嵌合抗體、雙價抗體、抗獨特型抗體或融合蛋白。
除此之外，本發明還提供了一種核酸分子，其編碼本發明上述任一項所述的抗體或抗原結合片段。
較佳地，本發明所述的核酸分子，可操作地連接至啟動子。
除此之外，本發明還提供了一種重組表現載體，所述的重組表現載體包含有本發明所述的核酸分子。
除此之外，本發明還提供了一種質粒，含有本發明所述的核酸分子。
除此之外，本發明還提供了一種宿主細胞，含有本發明所述的核酸分子、本發明所述的重組表現載體或本發明所述的質粒。
除此之外，本發明還提供了一種藥物組合物，包括本發明上述任一項的抗體或其抗原結合片段，以及藥學上可接受的載體。
除此之外，本發明還提供了一種試劑盒，包括本發明上述的任一項的抗體或其抗原結合片段。
除此之外，本發明還提供了一種治療癌症的方法，其包括向有此需要的物件施用本發明上述的任一項的抗體或其抗原結合片段。
術語定義：
本發明所述的抗體或抗原結合片段較佳是全人源的。該全人源是指抗體或其抗原結合片段在本文中被定義為是非嵌合的（例如，非“人源化的”）並且不來自（無論是整體還是部分）非人物種。全人源抗體或其抗原結合片段可源自人，或者可以為合成的人抗體。全人源抗體或其抗原結合片段的另一個實例是從人來源的抗體序列的文庫（例如，基於采自人天然來源的抗體的這種文庫）中分離的核酸所編碼的人抗體。
本發明的抗體或其抗原結合片段，其為單殖株抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、重組抗體、嵌合抗體、雙價抗體、抗獨特型抗體或融合蛋白。
本發明還提供了能夠結合CTLA4的抗體或抗原結合片段，其是雙特異性抗體或雙特異性抗原結合片段。在一些實施方式中，該雙特異性抗體或雙特異性抗原結合片段可以被分離。術語“雙特異性”是指抗原結合分子能夠特異性結合至少兩個不同的抗原決定簇。在一些實施方式中，該雙特異性抗體和雙特異性抗原結合片段包含根據本發明的抗原結合片段。在一些實施方式中，該雙特異性抗體和雙特異性抗原結合片段包含能夠與CTLA4結合的抗原結合片段，其中能夠與CTLA4結合的抗原結合片段包含根據本發明的抗原結合片段。在一些實施方式中，該雙特異性抗體和雙特異性抗原結合片段包含能夠與CTLA4結合的抗原結合片段，和能夠與另一靶蛋白結合的抗原結合片段。在一些實施方式中，該雙特異性抗體或抗原結合片段包含能夠結合CTLA4的抗原結合分子和能夠結合CTLA4以外的抗原結合分子。在一些實施方式中，CTLA4以外的抗原是免疫細胞表面分子。在一些實施方式中，CTLA4以外的抗原是癌細胞抗原。在一些實施方式中，CTLA4以外的抗原是受體分子，例如細胞表面受體。
本發明提供了編碼該單殖株抗體或抗原結合片段或雙特異性抗體或嵌合抗原受體的核酸。本發明提供了包含該核酸的質粒，任選地，可操作地連接調控序列，如啟動子、增強子等。本發明提供了包含該質粒的宿主細胞，以及用於生產和任選地回收該單殖株抗體或抗原結合片段或雙特異性抗體或嵌合抗原受體的方法。本發明所述的宿主細胞可以是任何原核細胞或真核細胞，包括但不限於細菌細胞（例如大腸桿菌、枯草桿菌）、昆蟲細胞（例如利用桿狀病毒表現系統）、酵母或哺乳動物細胞（例如CHO或BHK細胞系）。其它合適的宿主細胞為本領域技術人員所知。
較佳的，本發明所述的疾病為癌症，包括但不限於淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤（包括脂肉瘤）、神經內分泌腫瘤、間皮瘤、神經鞘瘤、腦膜瘤、腺瘤、黑素瘤以及非白血性白血病或淋巴惡性腫瘤。上述癌症更具體的實例包括鱗狀細胞癌（如，鱗狀上皮細胞癌）、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌以及肺鱗狀細胞癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌、胃腸癌、胰腺癌、惡性膠質瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳腺癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌、睪丸癌、食道癌、膽管腫瘤、頭頸癌、骨髓基質瘤、破骨細胞瘤、多發性骨髓瘤、溶骨性癌（osteolytic bone cancers）、中樞神經系統腫瘤、腦腫瘤（神經膠質瘤、成神經細胞瘤、星細胞瘤、成神經管細胞瘤、室管膜細胞瘤和視網膜成神經細胞瘤）、鼻咽癌、基底細胞癌、膽管癌、卡波氏肉瘤、原發性肝癌或子宮內膜癌、以及血管系統腫瘤（血管肉瘤和hemagiopericytoma）、血液瘤、何傑金氏淋巴瘤、非何傑金淋巴瘤（Burkitt’s淋巴瘤、小淋巴細胞淋巴瘤/慢性淋巴細胞性白血病、蕈樣肉芽腫病、外套細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、彌漫性巨大B細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、毛細胞性白血病以及淋巴漿細胞性白血病）、淋巴細胞前體細胞腫瘤、B細胞急性成淋巴細胞性非白血性白血病/淋巴瘤、T細胞急性成淋巴細胞性非白血性白血病/淋巴瘤、胸腺瘤、成熟T和NK細胞腫瘤、外周T細胞非白血性白血病、成熟T細胞非白血性白血病/T細胞淋巴瘤、大顆粒狀淋巴細胞性白血病、朗罕氏細胞組織細胞增多症、急性骨髓性粒細胞性白血病的骨髓瘤、成熟的急性骨髓性白血病（AML）、分化的急性骨髓性白血病、急性前髓細胞性白血病、急性骨髓單核細胞性白血病、急性單核細胞性白血病、脊髓發育不良症候群、慢性骨髓增生病、慢性髓細胞性白血病、血液惡性腫瘤諸如多發性骨髓瘤（MM）、骨髓增生異常症候群（MDS）和急性骨髓性白血病（AML）。在一些實施方案中，該癌症選自CTLA4相關的癌症。該癌症可以選自例如黑色素瘤、肺癌、腎癌、前列腺癌、肝癌。
本發明的抗體或抗原結合片段或雙特異性抗體或嵌合抗原受體或其核酸分子、質粒或表現該嵌合抗原受體的細胞、以及藥用組合物可以藉由各種不同的給藥途徑給予人或動物受試者，該給藥途徑通常取決於待治療的疾病本身的特徵。一般而言，可利用醫學上可接受的任何給藥模式來實施本發明的方法，該給藥模式包括經口、直腸、局部、眼內、腦池內、腦室內、氣管內、鼻內滴入、透皮、皮下、鞘內、肌內、腹腔、腹膜內、顱內輸注或者靜脈輸注。
為了能更徹底地理解發明，以下列出一些定義。上述定義意在包含語法等同成分。
本文中“抗體”意指由基本上為公認的免疫球蛋白基因的全部或部分所編碼的一種或多種多肽組成的蛋白質。該公認的免疫球蛋白基因，例如在人中，包括kappa(κ)、lambda(λ)和重鏈基因座，其中包含了無數的可變區基因，以及分別編碼IgM、IgD、IgG、IgE和IgA同種型的恆定區基因mu (μ)、delta (δ)、gamma (γ)、epsilon (ε)、alpha (α)。本文中的抗體意指包括全長抗體和抗體片段，以及來自任意生物體的天然抗體、工程抗體、或為試驗、治療目的或其它如下所進一步規定的目的而重組產生的抗體。術語“抗體”包括抗體片段，為本領域所公知，諸如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv或抗體的抗原結合的其它亞序列，或藉由修飾完整抗體或使用重組DNA技術重新合成的那些抗體而產生的抗體片段。術語“抗體”包括單殖株以及多殖株抗體。抗體可以是拮抗劑、激動劑、中和性抗體、或抑制性抗體、或刺激性抗體。本發明的抗體可以是非人抗體、嵌合抗體、人源化抗體或完全人抗體。
本文使用的術語“單殖株抗體”是指獲自基本上同質的抗體群體的抗體，即，該包含單一抗體的群體除了可能以極少量存在的可能突變（例如天然突變）之外是相同的。因此，該術語“單殖株”表明該抗體的性質，即不是不相關（discrete）抗體的混合物。與通常包括針對不同決定簇（表位）的不同抗體的多殖株抗體製劑相反，單殖株抗體製劑的每個單殖株抗體均針對抗原上的單獨一個決定簇。除了其特異性之外，單殖株抗體製劑的優點在於它們通常不會被其他免疫球蛋白污染。該術語“單殖株”不應被理解為需要藉由任何特定的方法產生該抗體。該術語單殖株抗體具體地包括全人源抗體。（ref CN201280067865-抗FGFR2的抗體及其用途-審定授權）。
用於本文時術語“互補決定區”（CDR，例如CDR1、CDR2和CDR3）是指抗體可變區的胺基酸殘基，互補決定區的存在對於抗原結合來說是必需的。抗體的“抗原結合區”通常存在於抗體的一個或多個高變區中，例如CDR1、CDR2和CDR3的CDR區域。每個互補決定區可包含來自如Kabat所定義的“互補決定區”的胺基酸殘基，例如，輕鏈可變區中的殘基24-34（L1）、50-56（L2）和89-97（L3）和重鏈可變區中的26-33（H1）、51-57（H2）和96-105（H3）（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immμlological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, 1991）。在一些實施方案中，本文中CDR區的編號方式採用Kabat編號，例如，本文所述的“31H”、“32H”、“第35位胺基酸”等分別指的是按照Kabat編號在第31位的組胺酸、第32位的組胺酸、第35位的胺基酸。
抗體序列中的可變區和CDR還可以根據本領域已經開發的其它一般規則（例如Chothia、IMGT、Contact編號系統等）或藉由將序列與已知可變區的資料庫比對來鑒定。在Kontermann和Dubel編, Antibody Engineering, Springer, New York, NY, 2001和Dinarello等人, Current Protocols in Immunology, John Wiley and Sons Inc., Hoboken, NJ, 2000中描述了鑒定這些區域的方法。
本文中使用的“抗原”意指可以在動物體內刺激抗體產生或T細胞反應的化合物、組合物或物質，包括注射或吸收到動物體內的組合物，可以是蛋白質、糖類、脂質或其它病原體。
抗體/免疫球蛋白的“功能片段”或“抗原結合片段”在本文中被定義為保留抗原結合區的抗體/免疫球蛋白的片段（例如IgG的可變區）。抗體的“抗原結合區”通常存在於抗體的一個或多個高變區中，例如CDR1、-2及/或–3區；然而，可變“框架”區也可以在抗原結合中起重要作用，例如藉由提供CDR的支架。較佳地，該“抗原結合區”至少包括可變輕鏈（VL）的胺基酸殘基4-103和可變重鏈（VH）的胺基酸殘基5-109，更佳VL的胺基酸殘基3-107和VH的胺基酸殘基4-111，並且特別較佳完整的VL和VH鏈（VL的胺基酸第1-109位和VH的胺基酸第1-113位；編號根據WO97/08320進行）。本發明中使用的較佳的免疫球蛋白類為IgG。
本文中使用的“胺基酸”意指20種天然存在的胺基酸之一或任一非天然類似物，它們可位於具體規定的位置。本文中“蛋白質”意指至少兩個共價連接的胺基酸，其包括蛋白質、多肽、寡肽和肽。蛋白質可由天然存在的胺基酸和肽鍵構成，或由合成的肽類比物結構構成，該肽類比物即“類似物”。因此本文中使用的“胺基酸”或“肽殘基”意指天然存在和合成的胺基酸。舉例來說，對於本發明目的而言，高苯基丙胺酸、瓜胺酸和降亮胺酸被認為是用於本發明目的的胺基酸。“胺基酸”也包括諸如脯胺酸和羥脯胺酸的亞胺基酸殘基。側鏈可以是（R）或（S）構型。在較佳的實施方案中，胺基酸以（S）或L-構型存在。如果使用非天然存在的側鏈，可使用非胺基酸取代，例如以阻止或延遲體內降解。
本文中使用的“一致性”意指核苷酸或胺基酸序列之間的相似性，或者稱為序列同一性。序列同一性通常根據百分比同一性（或相似性或同源性）來衡量；百分比越高，兩個序列越相似。當使用標準方法比對時，同源物或變體將具有相對高程度的序列同一性。用於比較的序列比對方法是本領域熟知的。各種程式和對準演算法描述於：Smith and Waterman，Adv Appl. Math.，2: 482, 1981；Needlema and Wunsch，J. Mol. Biol. 48: 443, 1970；Pearson and Lipman，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2444, 1988；Higgins and Sharp，Gene 73：237-244，1988；Higgins and Sharp，CABIOS 5：151-153，1989；Corpet等，Nucleic Acids Research 16：10881-10890,1988; 和Altschμl等，Nature Genet.，1994, 6：119-129。
可從若干來源獲得NCBI基本局部比對搜尋工具（BLAST TM）（Altschμl等，J. Mol. Biol.，215：403-410,1990。），包括國家生物技術資訊中心（NCBI，Bethesda，Md.）和在網際網路上有關用於序列分析程式blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx。
本文所使用的“核酸”意指由核苷酸單元（核糖核苷酸，去氧核糖核苷酸，相關的天然存在的結構變體及其合成的非天然存在的類似物）藉由磷酸二酯鍵組成的聚合物。因此，該術語包括核苷酸聚合物，其中核苷酸和它們之間的鍵包括非天然存在的合成類似物，例如但不限於硫代磷酸酯、胺基磷酸酯、甲基磷酸酯、手性甲基磷酸酯、2'-O-甲基核糖核苷酸、肽核酸（PNA）等。例如，可以使用自動DNA合成儀合成這些多核苷酸。術語“寡核苷酸”通常是指短多核苷酸，通常不大於約50個核苷酸。應當理解，當核苷酸序列由DNA序列（即A、T、G、C）表示時，這也包括其中“U”取代“T”的RNA序列（即A、U、G、C）。
本文使用常規符號來描述核苷酸序列：單鏈核苷酸序列的左手末端5'末端；雙鏈核苷酸序列的左手方向稱5'方向。向新生RNA轉錄物添加5'至3'核苷酸的方向稱為轉錄方向。具有與mRNA相同序列的DNA鏈被稱為編碼鏈。
本文中所使用的“編碼”意指多核苷酸中特定核苷酸序列的固有特性，例如基因，cDNA或mRNA，用作在具有確定的核苷酸序列的生物過程中合成其他聚合物和大分子的範本，或確定的胺基酸序列和由此產生的生物學特性。因此，如果由該基因產生的mRNA的轉錄和翻譯在細胞或其他生物系統中產生蛋白質，則基因編碼蛋白質。編碼鏈（其核苷酸序列與mRNA序列相同並且通常在序列表中提供）和非編碼鏈（用作轉錄範本，基因或cDNA）可以被稱為編碼蛋白質。或該基因或cDNA的其他產物。除非另有說明，否則“編碼胺基酸序列的核苷酸序列”包括彼此簡並形式且編碼相同胺基酸序列的所有核苷酸序列。編碼蛋白質和RNA的核苷酸序列可包括內含子。
本文中使用的“質粒”意指在天然質粒的基礎上為適應實驗室操作而進行人工建構的質粒。可將核酸分子導入宿主細胞，從而產生轉化的宿主細胞。載體可包括允許其在宿主細胞中複製的核酸序列，例如複製起點，還可以包括一種或多種選擇標記基因和本領域已知的其他遺傳元件。
本文所使用的“宿主細胞”也稱為受體細胞，是指在轉化和轉導（感染）中接受外源基因的宿主細胞。
本文中使用的“藥學可接受載體”意指常規的藥學上可接受的載體。Remington's Pharmaceutical Sciences，EWMartin，Mack Publishing Co.，Easton, Pa.，第15版（1975），描述了適用於藥物遞送一種或多種治療化合物或分子（例如一種或多種抗體）的組合物和製劑，以及另外的藥劑。
本文中所使用的“診斷”疾病是指在給病人做檢查之後判定病人的病症及其發展情況。“預防”疾病是指抑制疾病的完全發展。“治療”是指在其開始發展後改善疾病或病理狀況的體徵或症狀的治療性干預。
本文中“施用”意指選擇合適的途徑將該物質引入受試者。例如，如果所選擇的途徑是靜脈內的，則藉由將該物質引入受試者的靜脈來施用組合物。
本文中“有效預防/治療劑量”意指足以在用該藥劑治療的受試者中達到所需效果的一定量的特定藥劑。精確的劑量將依賴於治療的目的，並可為本領域技術人員藉由使用公知技術所確定。劑量範圍可為0.01-100 mg/kg體重或更大，例如0.1、1、10或50mg/kg體重，較佳1-10mg/kg。如本領域所公知，對於抗體或Fc融合體降解、全身性或局部性遞藥和新蛋白酶合成速率，以及年齡、體重、大致健康狀況、性別、飲食、給藥時間、藥物相互作用以及病症的嚴重程度而言，調整可以是必需的，並可由本領域那些技術人員藉由常規的實驗方法來確定。此類試劑包括本文所述的單體Fc結構域分子。在一個非限制性實例中，這可以是用於預防，治療或改善HIV感染的HIV特異性單體Fc結構域（或HIV特異性CH3結構域分子）的量。理想地，治療有效量的抗體是足以預防，治療或改善感染或疾病的量，例如由受試者中的HIV感染引起而不會在受試者中引起顯著的細胞毒性作用。用於預防，改善及/或治療受試者的治療有效量的藥劑將取決於所治療的受試者，痛苦的類型和嚴重程度，以及治療組合物的施用方式。
本文中的“癌症”為實體瘤或血源性癌。本發明所述的實體瘤是肉瘤或癌，例如纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、成骨肉瘤，或另一種肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤文氏瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結腸癌、淋巴惡性腫瘤、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝細胞癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝細胞癌、膽管癌、絨毛膜癌、腎母細胞瘤、子宮頸癌、睪丸腫瘤、膀胱癌或中樞神經系統腫瘤（如膠質瘤、星形細胞瘤、成神經管細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體、血管母細胞瘤、聽神經瘤、少突神經膠質瘤、血管瘤、黑素瘤、神經母細胞瘤或視網膜母細胞瘤）。本發明所述的血源性癌症是白血病，如急性白血病（如急性淋巴細胞白血病、急性髓細胞白血病、急性髓性白血病和成髓細胞、早幼粒細胞、髓單核細胞、單核細胞和紅白血病）；慢性白血病（如慢性粒細胞性（粒細胞）白血病、慢性粒細胞白血病和慢性淋巴細胞白血病）、真性紅細胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤（惰性和高級形式）、多發性骨髓瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、重鏈性疾病、骨髓增生異常症候群、多毛細胞白血病或骨髓增生異常。
除非另外說明，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本揭露所屬領域的普通技術人員通常理解的含義相同的含義。除非上下文另有明確說明，否則單數術語“一”，“一個”和“該”包括複數指示物。還應理解，對於核酸或多肽給出的所有鹼基大小或胺基酸大小，以及所有分子量或分子量值是近似的，並且提供用於描述。儘管與本文描述的那些類似或等同的方法和材料可用於本揭露的實踐或測試，但下文描述了合適的方法和材料。術語“包含”表示“包括”。本文提及的所有出版物、專利申請、專利和其他參考文獻均藉由引用整體併入。如果發生衝突，將以本說明書（包括術語解釋）為準。另外，材料、方法和實施例僅是說明性的而不是限制性的。
抗 CTLA4 抗體
本申請的抗體包括所有類別的抗體（即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM）和所有亞類（即IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2）。該抗體可以是嵌合的、人源化的或全人源的單殖株抗體。
抗體通常包含重鏈可變區（VH）和輕鏈可變區（VL），VH和VL區可以進一步分為由相對保守的區域（稱為框架區（FR））間隔開的高變區（稱為互補決定區（CDR））。每個VH和VL由以下順序的3個CDR和4個FR組成：從N端到C端的FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。每個重鏈/輕鏈對的可變區（VH和VL）分別形成抗原結合位點。已知CDR負責抗原結合，然而，已經發現並非所有的6個CDR都是必不可少的或不可改變的。換言之，可以替換或改變或修飾一個或多個CDR，但仍基本上保留甚至改善對CTLA4的特異性結合親和力。此外，重鏈CDR3區位於抗原結合位點的中心，因此被認為與抗原接觸最多，並為抗體與抗原的親和力提供最多的自由能。還認為，重鏈CDR3是迄今在長度、胺基酸組成和構象方面藉由多種多樣化機制而導致的抗原結合位點中最多樣化的CDR（Tonegawa S. Nature.302:575-81）。重鏈CDR3中的多樣性足以產生大多數抗體特異性（Xu JL，Davis MM.Immunity.13:37-45）以及所需的抗原結合親和力（Schier R等，J Mol Biol.263:551-67）。
在一些實施方案中，該抗體或其抗原結合部分包含包括SEQ ID NO：3的胺基酸序列或由SEQ ID NO：3的胺基酸序列組成的重鏈CDR3（HCDR3）。在一些實施方案中，該抗體或其抗原結合部分包含：包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的重鏈CDR2、包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的重鏈CDR3、包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的輕鏈CDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些進一步的實施方案中，該抗體或其抗原結合部分包含：包含選自SEQ ID NO：7-16中任一項的胺基酸序列的重鏈CDR1、包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的重鏈CDR2、包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的重鏈CDR3、包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的輕鏈CDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的輕鏈CDR3。
在一些實施方案中，該抗體或其抗原結合部分包含：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的重鏈CDR1、包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的重鏈CDR2、包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的重鏈CDR3、包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的輕鏈CDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的輕鏈CDR3。在一些進一步的實施方案中，該抗體或其抗原結合部分包含：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的重鏈CDR1、包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列的重鏈CDR2、包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列的重鏈CDR3、包含選自SEQ ID NO：4和17-19中任一項的胺基酸序列的輕鏈CDR1、包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的輕鏈CDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的輕鏈CDR3。
在一些實施方案中，該抗體或其抗原結合部分包含重鏈可變區（VH）和輕鏈可變區（VL）：
該VH包含：（i）SEQ ID NO：22-31中任一項所示的胺基酸序列；或（ii）與SEQ ID NO：22-31中任一項所示的胺基酸序列至少85％、90％或95％相同且與VL區聯合仍保留對CTLA4的特異性結合親和力的胺基酸序列；和
該VL包含：（i）SEQ ID NO：21和32-35中任一項所示的胺基酸序列；或（ii）與SEQ ID NO：21和32-35中任一項所示的胺基酸序列至少85％、90％或95％相同且與VH區聯合仍保留對CTLA4的特異性結合親和力的胺基酸序列。
較佳地，上文所述的至少85％、90％或95％相同的胺基酸序列的變體包含的突變發生在框架區而非CDR區中，例如在框架區中具有一個或多個（例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個）胺基酸的添加、缺失及/或取代。較佳地，該取代為保守取代。
如本文所用的術語“保守取代”是指胺基酸取代，其不會不利地影響或改變包含胺基酸序列的蛋白質/多肽的基本性質。例如，保守取代可以藉由本領域已知的標準技術（例如定點誘變和PCR介導的誘變）引入。保守胺基酸取代包括其中胺基酸殘基被具有相似側鏈的另一胺基酸殘基取代的取代，例如物理或功能相似的殘基（例如具有相似的大小、形狀、電荷、化學性質，包括形成共價鍵或氫鍵的能力等）至相應的胺基酸殘基的取代。本領域已經定義了具有相似側鏈的胺基酸殘基家族。這些家族包括具有鹼性側鏈的胺基酸（例如賴胺酸、精胺酸和組胺酸）、具有酸性側鏈的胺基酸（例如天冬胺酸和麩胺酸）、具有不帶電荷的極性側鏈的胺基酸（例如甘胺酸、天冬醯胺、穀胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸）、具有非極性側鏈的胺基酸（例如丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸）、具有β-分支側鏈的胺基酸（例如蘇胺酸、纈胺酸、異亮胺酸）和具有芳香族側鏈的胺基酸（例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸）。因此，相應的胺基酸殘基較佳被來自相同側鏈家族的另一個胺基酸殘基取代。用於鑒定胺基酸保守取代的方法在本領域中是公知的（參見例如Brummell等人, Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi等人, Protein Eng. 12(10): 879-884 (1999); 和Burks等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 412-417 (1997)，其藉由引用併入本文）。
本文中提供的抗體和抗原結合片段可進一步包含人IgG恆定區，該人IgG恆定結構區包含Fc區和任選的鉸鏈區。該人IgG恆定區可以是人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恆定區。在一些實施方案中，該抗體包含人IgG1或IgG4 Fc區。該Fc區可以是野生型Fc區，或者Fc區可以包含改變抗體依賴性細胞毒性（ADCC）或其他效應器功能的一個或多個胺基酸修飾（例如Leu234Ala/Leu235Ala或LALA取代）。
在某些實施方案中，Fc修飾包含LALA突變，即根據Kabat等人的EU編號L234A和L235A的突變。LALA突變可能是破壞抗體效應器功能的最常用突變，例如消除Fc與特異性FcγR的結合，降低由PBMC和單核細胞介導的ADCC活性。Fc修飾的非限制性實例還包括，例如在涉及人IgG4 Fc區的情況下，在胺基酸序列的第228位絲胺酸（“S”）突變為脯胺酸（“P”）。S228P突變藉由穩定IgG4分子核心鉸鏈中的二硫鍵來減少Fab臂交換，因此屬於有助於防止半抗體形成的IgG4穩定突變。
當提及免疫球蛋白重鏈恆定區中的殘基時，通常使用“EU編號系統”或“EU索引”（例如，上文Kabat等人報導的EU索引）。因此，提及抗體恆定結構域中的殘基編號是指藉由EU編號系統進行的殘基編號。
抗體序列資訊：
抗體互補決定區胺基酸序列
| 抗體編號 | 胺基酸序列 | SEQ ID NO. | ||
| IPD52 ipi.105 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | HYTMH | 1 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELA | 4 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD53 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | HYTMA | 7 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELA | 4 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD54 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | HYTMV | 8 |
| HCDR2 | TFISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELA | 4 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD55 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | HYTML | 9 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELA | 4 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD56 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | HYTMI | 10 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELA | 4 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD57 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | HYTMF | 11 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELA | 4 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD58 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | HYTMY | 12 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELA | 4 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD59 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | HYTMS | 13 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELA | 4 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD60 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | HYTMN | 14 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELA | 4 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD61 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | SHTMS | 15 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELA | 4 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD62 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | SYTMH | 16 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELA | 4 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD63、IPD64 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | SYTMH | 16 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | DASQEVGESELA | 17 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD65 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | SYTMH | 16 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RADQEVGESELA | 18 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 | ||
| IPD66 | 重鏈互補決定區 | HCDR1 | SYTMH | 16 |
| HCDR2 | FISYDGHNKYYADSVKG | 2 | ||
| HCDR3 | TGWLGPFDY | 3 | ||
| 輕鏈互補決定區 | LCDR1 | RASQEVGESELD | 19 | |
| LCDR2 | GAFSRAT | 5 | ||
| LCDR3 | QQYGSSPWT | 6 |
抗體可變區胺基酸序列：
| 抗體 | 胺基酸序列 | SEQ ID NO. | |
| IPD52 ipi.105 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 20 |
| 輕鏈可變區 (VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 21 | |
| IPD53 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMAWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 22 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 21 | |
| IPD54 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMVWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 23 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 21 | |
| IPD55 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMLWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 24 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 21 | |
| IPD56 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMIWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 25 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 21 | |
| IPD57 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMFWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 26 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 21 | |
| IPD58 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMYWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 27 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 21 | |
| IPD59 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMSWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 28 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 21 | |
| IPD60 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMNWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 29 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 21 | |
| IPD61 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFS SHTMS WVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 30 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 21 | |
| IPD62 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFHSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 31 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 21 | |
| IPD63 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFHSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 31 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCDASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 32 | |
| IPD64 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFHSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 31 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCDASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTRFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 33 | |
| IPD65 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFHSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 31 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRADQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 34 | |
| IPD66 | 重鏈可變區(VH) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFHSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS | 31 |
| 輕鏈可變區(VL) | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELDWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK | 35 |
抗體全長胺基酸序列
實施例
1
：本發明的重組抗體的製備
| 抗體 | 胺基酸序列 | SEQ ID NO. | |
| IPD52 ipi.105 | 重鏈全長 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 36 |
| 輕鏈全長 | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 37 | |
| IPD53 | 重鏈全長 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMAWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 38 |
| 輕鏈全長 | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 37 | |
| IPD54 | 重鏈全長 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMVWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 39 |
| 輕鏈全長 | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 37 | |
| IPD55 | 重鏈全長 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMLWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 40 |
| 輕鏈全長 | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 37 | |
| IPD56 | 重鏈全長 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMIWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 41 |
| 輕鏈全長 | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 37 | |
| IPD57 | 重鏈全長 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMFWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 42 |
| 輕鏈全長 | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 37 | |
| IPD58 | 重鏈全長 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMYWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 43 |
| 輕鏈全長 | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 37 | |
| IPD59 | 重鏈全長 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSHYTMSWVRQAPGKGLEWVTFISYDGHNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 44 |
| 輕鏈全長 | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQEVGESELAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 37 | |
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1、轉染與表現
實驗方法：
1、取1.45E8 個ExpiCHO細胞，離心去上清。
2、將0.5ml左右電轉液加入細胞，混勻後添加適量的包含各不同分子序列的相應質粒（濃度500ng/μl）。
3、上述細胞質粒混懸液充分混勻後取1ml加入1ml電擊管，把電擊管放入電轉儀進行電擊。
4、電擊完成後，將電擊管內細胞分裝進提前準備好含有20ml培養液搖瓶內，靜止孵育40min。
5、孵育結束後將搖瓶放入37°C，270rpm，8%CO2培養，24h後添加補料/丁酸鈉/雙抗，繼續培養3-7d。
2 、抗體純化實驗方法：Protein A親和層析柱純化
1）平衡層析柱：用1xPBS緩衝液，設定流速為1ml/min，上樣體積為20ml
2）上樣：流速設定為1ml/min
3）洗雜：以1xPBS緩衝液，流速設定為1ml/min，體積為20ml
4）洗脫：用檸檬酸緩衝液(pH 3.4)，流速設定為1ml/min，分管收集，每管約500μl。共收集10管，使用NanoDrop儀器讀取280nm吸光度值。
5）透析：將高濃度蛋白吸至透析袋放1XPBS的燒杯中透析。
3 、抗體基礎質控 1 ） 純度檢測（ SDS-PAGE ）實驗方法：
1、準備工作電泳槽的安裝：取出製好膠的玻璃夾，放入電極架，矮玻璃朝向電極紅色膠條方向，將電極架放入電機座，合上開關。取出製好膠的玻璃夾，放入電極架，矮玻璃朝向電極紅色膠條方向，將電極架放入電機座，合上開關。將底座放入電泳槽內，向電極架中間加入電泳緩衝液直至濃縮膠上1cm處。再向電泳槽內加入電泳緩衝液，液面高度至濃縮膠頂部。
2、樣品加熱處理
還原膠的樣品99℃下，加熱6min；非還原膠的樣品在99℃下，加熱3min。
3、上樣，跑電泳凝膠，染脫，拍照
上樣量：每孔10微升
電泳條件：180v，45min
蛋白染色儀：染脫時間為15min。
凝膠成相儀：設定參數為白光並進行拍照。
2 ） 純度檢測（ SEC-HPLC ）實驗方法：
使用高效液相色譜儀LC-20AT及凝膠色譜柱進行SEC實驗，實驗條件如下：
將水更換為流動相，流速緩慢升至1.000 ml/min，至基線平穩。取50μl的抗體至對應編號的進樣瓶中，將樣品瓶放入儀器相應的位置，進樣時間是15min，分析處理資料並保存，將流動相更換成去離子水，沖洗1.5h。
3 ） 內毒素檢測實驗方法：
1）樣品陽性對照液配製：2倍供試液濃度溶液+內毒素標準品（0.24EU/ml），1:1混合
2）供試液製備：
樣品稀釋倍數：MVD=C·L/λ
*注：MVD：供試品最大有效稀釋倍數
L：供試品細菌內毒素限值（1EU/mg）
C：供試品濃度
λ：鱟試劑標示靈敏度
110μl供試液取樣量=C/MVD*110μl
封閉管口，輕輕搖勻，垂直放入37℃恆溫培養箱孵育60min
實施例 2 ：本發明的伊匹單抗變體的結合參數的 pH 依賴性• 包被2ug/mL的抗原（分別用pH 6.0和7.4的碳酸鹽碳酸氫鹽緩衝液稀釋）在Elisa平板，4℃孵育過夜；
• 分別用pH 6.0和7.4的washing buffer將對應的平板清洗3次，再加入150μl/孔pH分別為6.0和7.4的5%脫脂牛奶室溫封閉1小時；
• 分別用pH 6.0和7.4的washing buffer將對應的平板清洗3次，再加入50μl/孔分別用pH 6.0和7.4稀釋液梯度稀釋的抗體（從100nM開始3倍梯度稀釋），室溫孵育1小時；
• 分別用pH 6.0和7.4的washing buffer將對應的平板清洗3次，再加入50μl/孔分別用pH 6.0和7.4稀釋液1:5000稀釋的anti-hIgG1Fc HRP抗體，室溫孵育1小時；
• 分別用pH 6.0和7.4的washing buffer將對應的平板清洗6次，加入TMB顯色後測OD450。
| 參數 | 數值 |
| 流速 | 1 ml/min |
| 進樣量 | 20 μl |
| 柱溫 | 35 ℃ |
| 檢測波長 | 214nm，280nm |
| 收集時間 | 15min |
| 鱟試劑（0.06EU/ml） | 內毒素檢查用水 | 樣品 |
| 陰性對照管 | 200μl | 無 |
| 陽性對照管 | 100μl | 100μl內毒素標準品（0.12EU/ml） |
| 樣品陽性對照管 | 100μl | 100μl樣品陽性對照液 |
| 供試品管 | 100μl | 100μl供試液 |
圖1顯示了隨著pH而變化的本發明的各種抗體pH依賴性的結合參數。其中，IPD52為對照抗體伊匹單抗，IPD53-IPD66為伊匹單抗變體。與在中性條件下相比，在腫瘤微環境的酸性條件下，本發明的抗體具有更高的結合（EC50更低或OD450更高）。
IPD:抗體編號
圖1顯示了本發明的選擇的伊匹單抗序列變體在pH 6.0和pH 7.4下的結合參數。
TW202426499A_112135337_SEQL.xml
IPD:抗體編號
Claims (37)
- 一種抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1具有一個組胺酸(H)殘基； （2）所述的HCDR2具有至少一個組胺酸(H)殘基； （3）所述的HCDR3具有零或1個組胺酸(H)殘基； （4）所述的LCDR1具有至少一個酸性胺基酸殘基； （5）所述的LCDR2具有SEQ ID NO：5的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3具有SEQ ID NO：6的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的重鏈可變區HCDR1包含31H、32H中的任意一種殘基，並且第35位胺基酸不為H。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的重鏈可變區HCDR1包含31H。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的重鏈可變區HCDR1包含32H。
- 如請求項1至請求項4中任一項所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的重鏈可變區HCDR1區，其中第35位胺基酸不為組胺酸(H)。
- 如請求項1至請求項5中任一項所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的重鏈可變區HCDR1區包含35A、35G、35V、35L、35I、35F、35W、35Y、35D、35N、35E、35K、35Q、35M、35S、35T、35C、35P、35R中的任意一種殘基。
- 如請求項1至請求項6中任一項所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的重鏈可變區HCDR1區包含35A、35V、35L、35I、35F、35Y、35S、35N中的任意一種殘基。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的重鏈可變區包含30H。
- 如請求項8所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的重鏈可變區HCDR1區包含35H。
- 如請求項1至請求項9中任一項所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的重鏈可變區HCDR2包含56H殘基。
- 如請求項1至請求項10中任一項所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的重鏈可變區HCDR3包含零個H殘基。
- 如請求項1至請求項11中任一項所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的輕鏈可變區LCDR1中的酸性胺基酸殘基選自天冬胺酸(D)或麩胺酸(E)。
- 如請求項1至請求項12中任一項所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，所述的輕鏈可變區LCDR1包含24D、26D、28E、31E、33E、35D中的任意一種胺基酸殘基。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含有HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重鏈可變區序列以及LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的輕鏈可變區序列，其中： （1）所述的HCDR1包括如SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列； （2）所述的HCDR2包括如SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列； （3）所述的HCDR3包括如SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列； （4）所述的LCDR1包括如SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列； （5）所述的LCDR2包括如SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列； （6）所述的LCDR3包括如SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含選自以下的重鏈可變區和輕鏈可變區序列對： （1）包含有SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （2）包含有SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （3）包含有SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （4）包含有SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （5）包含有SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （6）包含有SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （7）包含有SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （8）包含有SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （9）包含有SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （10）包含有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （11）包含有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （12）包含有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （13）包含有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列的輕鏈可變區； （14）包含有SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列的重鏈可變區以及包含有SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列的輕鏈可變區。
- 如請求項1所述的抗CTLA4抗體或抗原結合片段，其中，該抗體或片段包含選自以下的重鏈序列和輕鏈序列： （1）包含有SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈； （2）包含有SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈； （3）包含有SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈； （4）包含有SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈； （5）包含有SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈； （6）包含有SEQ ID NO：43所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈； （7）包含有SEQ ID NO：44所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈； （8）包含有SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈； （9）包含有SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈； （10）包含有SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列的輕鏈； （11）包含有SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：48所示的胺基酸序列的輕鏈； （12）包含有SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列的輕鏈； （13）包含有SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：50所示的胺基酸序列的輕鏈； （14）包含有SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列的重鏈以及包含有SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列的輕鏈。
- 如請求項1至請求項27中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其為單殖株抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、重組抗體、嵌合抗體、雙價抗體、抗獨特型抗體或融合蛋白。
- 一種核酸分子，其編碼如請求項1至請求項29中任一項所述的抗體或抗原結合片段。
- 如請求項30所述的核酸分子，可操作地連接至啟動子。
- 一種重組表現載體，所述的重組表現載體包含有如請求項30或請求項31所述的核酸分子。
- 一種質粒，含有如請求項30或請求項31所述的核酸分子。
- 一種宿主細胞，含有如請求項30或請求項31所述的核酸分子、如請求項32所述的重組表現載體或如請求項33所述的質粒。
- 一種藥物組合物，包括如請求項1至請求項29中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，以及藥學上可接受的載體。
- 一種試劑盒，包括如請求項1至請求項29中任一項所述的抗體或其抗原結合片段。
- 如請求項1至請求項29中任一項所述的抗體或其抗原結合片段在製備用於治療癌症的藥物中的用途。
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