TW202426017A

TW202426017A - 非包膜病毒的藥物組合物

Info

Publication number: TW202426017A
Application number: TW112142883A
Authority: TW
Inventors: 狄密特里托爾斯泰; 亞歷姍卓索佐諾瓦; 葉卡琳娜洛姆科娃; 琳娜芬朵蘭科; 葛琳娜那幾比奈; 狄密崔摩羅佐
Original assignee: 俄羅斯聯邦商拜奧卡德聯合股份公司
Priority date: 2022-11-24
Filing date: 2023-11-07
Publication date: 2024-07-01
Also published as: UY40524A; CN118414175A; GEAP202516788A; IL321096A; JP2025539388A; MX2025006088A; EP4622627A1; PE20251889A1; WO2024112230A1; AU2023385019A1; CL2025001538A1; KR20250105674A; DOP2025000121A; AR131087A1; CU20250010A7; CO2025006850A2

Abstract

本發明涉及藥物、基因治療和醫學領域，具體而言涉及基於重組非包膜病毒、特別是重組腺相關病毒(rAAV)的載體的藥物組合物，所述組合物可以被用於各種疾病的治療和預防。

Description

非包膜病毒的藥物組合物

非包膜病毒的典型代表是細小病毒、諾如病毒以及輪狀病毒和腺病毒。簡單或非包膜病毒由核酸和被稱為衣殼的蛋白質包膜組成。衣殼由被稱為衣殼體的重複形態亞基組成。核酸和衣殼彼此相互作用以形成核衣殼。在每種病毒中，衣殼蛋白在衣殼組裝過程中的寡聚化通常導致某種類型的對稱四級結構。大多數病毒具有螺旋或二十面體結構的衣殼(Lidmar J, Mirny L, Nelson Dr. Virus shapes and buckling transitions in spherical shells. Phys Rev E Stat Nonlin Soft Matter Phys. 2003 Nov;68(5 Pt 1):051910. doi: 10.1103/ PhysRevE.68.051910. Epub 2003 Nov 25. PMID: 14682823)。與非包膜病毒不同，包膜病毒的衣殼被稱為超衣殼(supercapsid)的脂質膜覆蓋。包膜由來自病毒的宿主中的細胞內膜的衣殼獲得；實例包括內核膜、高爾基體膜和細胞的外膜。脂質包膜的存在使病毒對物理和化學應激的抵抗性較差(Alberts B，Bray D，Lewis J，Raff M，Roberts K，Watson JD (1994). Molecular Biology of the Cell (第4版).第280頁)。非包膜病毒的衣殼執行在長期儲存期間保護基因組的功能，以及保護基因組免受化學和物理應激，例如UV輻射、極端pH或溫度、蛋白酶解劑和溶核劑的功能。非包膜病毒可以在各種表面(多孔和無孔兩者)上長時間保持其在乾燥狀態下的性質(Abad FX, Pinto RM, Bosch A. Survival of enteric viruses on environmental fomites. Appl Environ Microbiol. 1994 Oct;60(10):3704-10. doi: 10.1128/aem.60. 10.3704-3710.1994. PMID: 7986043; PMCID: PMC201876)。病毒將其遺傳材料引入宿主細胞的基因組內，因此提出將它們用作用於將遺傳信息遞送至細胞的載體。採用基於逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒(AAV)、單純皰疹病毒等等的載體用於治療目的。在這些病毒中，腺病毒和AAV指非包膜病毒。基於重組AAV和重組腺病毒的載體是目前最廣泛使用和開發的基因治療產物，並且它們也被用於疫苗開發中。迄今為止，基因治療被認為是治療以下廣譜疾病的潛在通用方法：傳染病、遺傳疾病、惡性贅生物等等。病毒或病毒載體(病毒顆粒)必須保持其結構完整性，以便在生產、運輸、儲存和使用過程中發揮感染性和生物活性。病毒載體的結構完整性可能在包含病毒載體的疫苗或產品的生產、運輸、儲存和使用過程中被破壞，因此排除了其作為遞送載體的用途。現有技術提供了AAV的液體藥物組合物(WO2018/128689、WO2019/094253、WO2020/014479、WO2020/214929)、腺病毒的液體藥物組合物(WO00/29024、WO2017/013169)。儘管如此，仍然需要改進的高度穩定的藥物組合物，其包含基於重組非包膜病毒的載體。

及

本發明的作者令人驚訝地生產了包含基於重組非包膜病毒、特別是重組腺相關病毒(rAAV)的載體的穩定的藥物組合物，其具有增加的膠體穩定性(更高的聚集溫度)，對DNA保留的穩定性(更高的DNA提取溫度)，在以冷凍形式以及液體形式儲存時提供了穩定性(在(5±3)℃下儲存時無滴度下降，以及在熱應激下的滴度下降降低)。所開發的藥物組合物可以被用於各種疾病的治療和預防。定義除非本文另外定義，否則與本發明結合使用的所有技術和科學術語均將具有與本領域技術人員通常理解相同的含義。此外，除非上下文另有要求，否則單數術語應該包括複數術語，並且複數術語應該包括單數術語。如本說明書和隨後的申請專利範圍中使用的，除非上下文另有規定，否則詞語“包括(include)”和“包含(comprise)”或其變體，例如“包括(includes)”、“包括(including)”、“包含(comprises)”或“包含(comprising)”，應被理解為暗示包括所陳述的整數或整數組，但不排除任何其它整數或整數組。術語“藥物組合物”指包含呈治療有效量的基於重組非包膜病毒的載體和賦形劑或輔助物質(載劑、稀釋劑、填料、溶劑等等)的組合物和/或製劑，其選擇和比例取決於施用的類型和途徑以及劑量。如本文使用的，術語“水性組合物”指基於水的組合物，組合物中的水可以是：水、注射用水、生理鹽水(0.9%-1.0%氯化鈉水溶液)。如本文使用的，術語“凍乾的”指已經受本領域中被稱為冷凍乾燥的過程的製劑，所述冷凍乾燥包括將製劑冷凍，隨後從冷凍內容物中去除冰。如果活性劑在儲存溫度例如(5±3)℃下在指定的儲存期限期間保持其物理穩定性和/或化學穩定性和/或生物活性，則藥物組合物是“穩定的”。進一步地，活性劑可以保持物理和化學穩定性以及生物活性。儲存期限基於在加速或自然老化條件下的穩定性測試的結果進行調整。如本文使用的，術語“載體”意指這樣的核酸分子，其能夠轉運其所連接的另一種核酸。此外，本文中的術語“載體”指能夠轉運核酸的重組病毒顆粒。術語“長期儲存”或“長期穩定性”應該被理解為意指藥物組合物可以儲存三個月或更久、六個月或更久、一年或更久，並且組合物還可以具有至少兩年的最小穩定儲存期限。一般來說，術語“長期儲存”和“長期穩定性”進一步包括穩定的儲存持續時間，其至少與當前可獲得的商業製劑通常所需的穩定儲存期限可比或更佳，而無致使製劑不適合於其預期藥物應用的穩定性喪失。術語“緩衝劑”指緩衝劑或緩衝溶液的酸或鹼組分(通常為弱酸或弱鹼)。緩衝劑幫助將溶液的pH值維持在預定值處或接近預定值，並且一般選擇緩衝劑以達到預定值。緩衝劑可以是產生所期望的緩衝效應的單一化合物，尤其是當所述緩衝劑與適當量(取決於所期望的預定值)的其相應的“酸/鹼共軛物”混合(並且適當地能夠與其質子交換)時。術語“緩衝液”或“緩衝溶液”指包含酸(通常為弱酸，例如乙酸、檸檬酸)及其共軛鹼(例如乙酸鹽或檸檬酸鹽，例如乙酸鈉、檸檬酸鈉，以及所述鹽的水合物，例如乙酸鈉三水合物)的混合物，或者可替代地鹼(通常為弱鹼，例如組胺酸)與其共軛酸(例如組胺酸鹽酸鹽或組胺酸鹽酸鹽一水合物或L-組胺酸鹽酸鹽(h/c)一水合物(m/h)或L-組胺酸h/c m/h或組胺酸h/c m/h)的混合物的水溶液。由於通過“緩衝劑”賦予的“緩衝效應”，“緩衝溶液”的pH值在對其添加小數量的強鹼或強酸時以及在稀釋或濃縮時僅輕微變化。通常，胺基酸是L-胺基酸。例如，如果使用組胺酸和組胺酸鹽酸鹽一水合物，則它通常是L-組胺酸和L-組胺酸鹽酸鹽一水合物。例如，如果使用精胺酸，則它通常是L-精胺酸。還可以使用胺基酸等價物，例如藥學上可接受的脯胺酸鹽(例如脯胺酸鹽酸鹽)。縮寫 AAV - 腺相關病毒 BHQ-1 - PCR中使用的螢光熄滅劑 Ct - 循環閾值 FAM - 羧基螢光素染料 GFP - 綠色螢光蛋白 GOI - 感興趣的基因 MOI - 感染複數(每個細胞的病毒顆粒數目) rAAV - 重組腺相關病毒 TU - 轉導單位 Vg - 病毒基因組 PCR - 聚合酶鏈反應 ELISA - 酶聯免疫吸附測定 FA - 功能活性 SE HPLC - 尺寸排阻高效液相色譜本發明公開了基於重組非包膜病毒、特別是重組腺相關病毒(rAAV)的載體的穩定藥物組合物，所述組合物可以被用於各種疾病的治療和預防。在一個方面，本發明涉及基於重組非包膜病毒的載體的藥物組合物，該組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸， (iii) 精胺酸， (iv) 氯化鈉， (v) 氯化鎂， (vi) 表面活性劑，和 (vii) 注射用水。在本發明的一些實施方案中，組胺酸以2.0-3.58 mg/ml，或2.3-3.2 mg/ml，或2.6-3.0 mg/ml，或2.7-2.8 mg/ml，或2.79 mg/ml的濃度存在。在本發明的一些實施方案中，精胺酸以0.248-0.448 mg/ml，或0.28-0.416 mg/ml，或0.3-0.396 mg/ml，或0.340-0.350 mg/ml，或0.348 mg/ml的濃度存在。在本發明的一些實施方案中，氯化鈉以8.0-15.0 mg/ml，或9.5-13.5 mg/ml，或10.5-12.5 mg/ml，或11.0-12.0 mg/ml，或11.7 mg/ml的濃度存在。氯化鎂可以以無水氯化鎂的形式和以其水合物的形式使用。在本發明的一些實施方案中，氯化鎂是氯化鎂六水合物。在本發明的一些實施方案中，氯化鎂以0.15-0.50 mg/ml，或0.16-0.35 mg/ml，或0.18-0.25 mg/ml，0.200-0.210 mg/ml，或0.203 mg/ml的濃度存在。任何藥學上可接受的表面活性劑都可以被用作表面活性劑。表面活性劑是本領域眾所周知的，並且包括但不限於聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、各種泊洛沙姆和普朗尼克(pluronic)以及其混合物。在本發明的一些實施方案中，表面活性劑以0.01-1.0 mg/ml，或0.01-0.5 mg/ml，或0.01-0.2 mg/ml，或0.03-0.15 mg/ml，或0.05 mg/ml，或0.1 mg/ml的濃度存在。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.0-3.58 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.248-0.448 mg/ml， (iv) 氯化鈉 8.0-15.0 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.15-0.50 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.01-1.0 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.3-3.2 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.28-0.416 mg/ml， (iv) 氯化鈉 9.5-13.5 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.16-0.35 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.01-0.2 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.6-3.0 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.3-0.396 mg/ml， (iv) 氯化鈉 10.5-12.5 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.18-0.25 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.03-0.15 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.7-2.8 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.340-0.350 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.0-12.0 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.200-0.210 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.03-0.15 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.79 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.348 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.7 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.203 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.05 mg/ml， (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.79 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.348 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.7 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.203 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.1 mg/ml， (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，氯化鎂是氯化鎂六水合物。在本發明的一些實施方案中，表面活性劑是泊洛沙姆188。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.0-3.58 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.248-0.448 mg/ml， (iv) 氯化鈉 8.0-15.0 mg/ml， (v) 氯化鎂六水合物 0.15-0.50 mg/ml， (vi) 為泊洛沙姆188的表面活性劑 0.01-1.0 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.3-3.2 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.28-0.416 mg/ml， (iv) 氯化鈉 9.5-13.5 mg/ml， (v) 氯化鎂六水合物 0.16-0.35 mg/ml， (vi) 為泊洛沙姆188的表面活性劑 0.01-0.2 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.6-3.0 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.3-0.396 mg/ml， (iv) 氯化鈉 10.5-12.5 mg/ml， (v) 氯化鎂六水合物 0.18-0.25 mg/ml， (vi) 為泊洛沙姆188的表面活性劑 0.03-0.15 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.7-2.8 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.340-0.350 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.0-12.0 mg/ml， (v) 氯化鎂六水合物 0.200-0.210 mg/ml， (vi) 為泊洛沙姆188的表面活性劑 0.03-0.15 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.79 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.348 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.7 mg/ml， (v) 氯化鎂六水合物 0.203 mg/ml， (vi) 為泊洛沙姆188的表面活性劑 0.05 mg/ml， (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.79 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.348 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.7 mg/ml， (v) 氯化鎂六水合物 0.203 mg/ml， (vi) 泊洛沙姆188的表面活性劑 0.1 mg/ml， (vii) 注射用水補足到1.0 ml。在本發明的一些實施方案中，組胺酸是L-組胺酸。在本發明的一些實施方案中，精胺酸是L-精胺酸。在本發明的一些實施方案中，藥物組合物具有pH 7.0-9.0、7.5-8.5或7.7-8.7，或8.0，或8.2。在本發明的一些實施方案中，以上藥物組合物適合於凍乾，即它們可以充當凍乾前溶液。在一個方面，本發明涉及基於重組非包膜病毒的載體的藥物組合物，所述組合物以乾燥(即粉末或顆粒)形式提供，以在施用之前溶解於合適的溶劑(例如水)中。此類藥物組合物可以通過例如凍乾來製備，所述凍乾即本領域中被稱為冷凍乾燥的方法，其涉及將產物冷凍，隨後從冷凍內容物中去除溶劑。在一個方面，本發明涉及基於重組非包膜病毒的載體的凍乾藥物組合物，所述組合物通過將以上任何藥物組合物凍乾來產生。相應地，根據本發明的藥物組合物可以是水性藥物組合物或凍乾藥物組合物(凍乾物)。所描述的藥物組合物適合於將治療劑遞送至受試者，用於各種疾病或病症的治療或預防。它們可以被用於治療疾病例如血友病A、血友病B、惡性贅生物、脊髓性肌萎縮等等的基因治療中，以及用於預防例如傳染病的疫苗開發中。根據本發明的藥物組合物可以包含各種濃度的基於重組非包膜病毒的載體。病毒載體的濃度可以取決於例如以上藥物組合物將被用於預防或治療的疾病，以及取決於患者的年齡、重量和健康狀況，並且因此可以在患者間不同。合適的劑量可以通過主治醫師的決定進行調整，使得它可以一次或通過幾次注射施用於患者。在本發明的一些實施方案中，基於重組非包膜病毒的載體以以下濃度存在：1.0*10 ⁵-1.0*10 ¹⁴個病毒基因組/ml，或1.0*10 ⁹-1.0*10 ¹⁴個病毒基因組/ml，或1.0*10 ⁹-5.0*10 ¹³個病毒基因組/ml，或1.0*10 ⁹-1.0*10 ¹³個病毒基因組/ml，或(1.0±0.3)*10 ⁵個病毒基因組/ml，或(2.0±0.6)*10 ⁵個病毒基因組/ml，(5.0±1.5)*10 ⁵個病毒基因組/ml，或(1.0±0.3)*10 ⁶個病毒基因組/ml，或(2.0±0.6)*10 ⁶個病毒基因組/ml，(5.0±1.5)*10 ⁶個病毒基因組/ml，或(1.0±0.3)*10 ⁷個病毒基因組/ml，或(2.0±0.6)*10 ⁷個病毒基因組/ml，(5.0±1.5)*10 ⁷個病毒基因組/ml，或(1.0±0.3)*10 ⁸個病毒基因組/ml，或(2.0±0.6)*10 ⁸個病毒基因組/ml，(5.0±1.5)*10 ⁸個病毒基因組/ml，或(1.0±0.3)*10 ⁹個病毒基因組/ml，或(2.0±0.6)*10 ⁹個病毒基因組/ml，(5.0±1.5)*10 ⁹個病毒基因組/ml，或(1.0±0.3)*10 ¹⁰個病毒基因組/ml，或(2.0±0.6)*10 ¹⁰個病毒基因組/ml，(5.0±1.5)*10 ¹⁰個病毒基因組/ml，或(1.0±0.3)*10 ¹¹個病毒基因組/ml，或(2.0±0.6)*10 ¹¹個病毒基因組/ml，(5.0±1.5)*10 ¹¹個病毒基因組/ml，或(1.0±0.3)*10 ¹²個病毒基因組/ml，或(2.0±0.6)*10 ¹²個病毒基因組/ml，(5.0±1.5)*10 ¹²個病毒基因組/ml，或(1.0±0.3)*10 ¹³個病毒基因組/ml，或(2.0±0.6)*10 ¹³個病毒基因組/ml，(5.0±1.5)*10 ¹³個病毒基因組/ml，或(1.0±0.3)*10 ¹⁴個病毒基因組/ml。以上藥物組合物中的重組非包膜病毒可以是rAAV、重組腺病毒以及其它類型的重組非包膜病毒。基於重組腺病毒的載體可以使用腺病毒或嵌合腺病毒的任何物種、毒株、血清型或者物種、毒株或血清型的任何組合來產生。人腺病毒血清型包括血清型2、4、5、7、11、26、34、35、36、48、49或50中的任何一種或其組合、衍生物、修飾或假型。在本發明的一些實施方案中，基於重組非包膜病毒的載體是基於rAAV的載體。它可以使用任何毒株、AAV血清型(例如AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV14、AAV15和AAV16)或毒株、血清型(例如基於包括兩種或更多種血清型的rAAV的載體)的任何組合來產生；可以含有任何血清型(AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV14、AAV15和AAV16)或其組合、衍生物、修飾或假型的AAV衣殼蛋白(衣殼)。在本發明的一些實施方案中，基於rAAV的載體包含AAV5或AAV6或AAV9衣殼。在本發明的一些實施方案中，AAV5或AAV6或AAV9衣殼可以是修飾的衣殼。基於rAAV的載體可以進行遺傳和/或化學修飾。基於rAAV的載體可以進行遺傳修飾，以產生具有改變的受體使用、抗原性、轉導效率和/或組織向性的基於rAAV的載體，並且將肽配體、抗體、抗體片段、MHC (主要組織相容性複合物)和/或受體插入病毒衣殼內。例如，基於rAAV的載體可以通過引入一種或多種胺基酸突變(例如點突變)進行遺傳修飾。短語“更多點突變”指二、三、四、五、六、七、八、九或十個點突變。特別優選的實施方案包括性質上保守的取代(突變)，即在其側鏈中連接的胺基酸家族內發生的取代。特別地，胺基酸通常被分成四個家族：(1) 酸性胺基酸是天冬胺酸和麩胺酸；(2) 鹼性胺基酸是離胺酸、精胺酸、組胺酸；(3) 非極性胺基酸是丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫氨酸、色胺酸，以及(4) 不帶電荷的極性胺基酸是甘胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、半胱胺酸、絲胺酸、穌胺酸、酪胺酸。苯丙胺酸、色胺酸和酪胺酸有時被分類為芳香族胺基酸。例如，可合理地預測，白胺酸對異白胺酸或纈胺酸的單獨取代、天冬胺酸對麩胺酸的單獨取代、穌胺酸對絲胺酸的單獨取代，或者胺基酸對結構上相關的胺基酸的類似保守取代，將對生物活性沒有重大影響。例如，感興趣的多肽可以包括至多約5-10個保守或非保守胺基酸取代，只要分子的所期望功能保持完整。使用胺基酸取代在AAV蛋白VP1、VP2或VP3序列中的點突變的變體是AAV蛋白VP1、VP2或VP3中的至少一個胺基酸殘基被另一個胺基酸殘基的取代。保守取代顯示於表A中的“優選取代”下。例如，國際申請WO2012/145601描述了具有變體衣殼蛋白的腺相關病毒(AAV)病毒粒子，其中與野生型AAV相比，當經由玻璃體內注射進行施用時，AAV病毒粒子顯示出更大的視網膜細胞感染性。國際申請WO2013/158879描述了用於向受試者遞送包含衣殼蛋白VP1的異源核酸序列的腺相關病毒(AAV)載體，所述衣殼蛋白VP1包含一個或多個離胺酸取代，其中一個離胺酸取代是K137R，其中所述離胺酸取代有效抑制所述衣殼蛋白的泛素化，由此增加所述AVV載體在靶細胞中的轉導效率。基於rAAV的載體可以進行化學修飾以改變組織向性。另外，基於rAAV的化學修飾的載體可能顯示出改變的受體使用、抗原性、轉導效率和/或組織向性。基於rAAV的化學修飾的載體通過使用例如化學選擇性反應來創建，所述化學選擇性反應可以靶向胺基酸的特定側鏈，可以被用於改變AAV衣殼上的受體結合結構域內的電荷、極性、疏水性和氫鍵電位。在本發明的一些實施方案中，根據本發明的基於重組非包膜病毒的載體的所述藥物組合物預期用於腸胃外施用。在本發明的一些實施方案中，根據本發明的基於重組非包膜病毒的載體的所述藥物組合物預期用於眼內施用，包括玻璃體內、視網膜下或脈絡膜上施用，以及用於肌內、靜脈內或皮下施用。在本發明的一些實施方案中，根據本發明的基於重組非包膜病毒的載體的所述藥物組合物可以作為輸注劑靜脈內施用。根據本發明的基於重組非包膜病毒的載體的藥物組合物可以在稀釋之後使用。為此，將所需體積的組合物從小瓶轉移到包含無菌0.9%氯化鈉溶液、無菌5%右旋糖溶液或其它輸注溶液的輸注容器中。通過輕輕翻轉輸注容器來攪拌所得到的溶液。在本發明的一些實施方案中，治療的受試者或患者是哺乳動物，優選人類受試者。所述受試者可以是任何年齡的男性或女性。根據本發明的藥物組合物可以被儲存於任何合適的容器中。例如，所需體積的玻璃或塑料容器、小瓶、安瓿、注射器、藥液筒或瓶。容器可以提供有另外的施用手段，例如滴管、自動注射器。根據本發明的藥物組合物可以以現成製劑的形式，以單一單位劑量或多個單一單位劑量的形式進行製造、包裝或銷售。如本文使用的，術語“單一單位劑量”指含有預定數量的活性成分的離散數量的藥物組合物。活性成分的數量通常等於待在受試者中施用的活性成分的劑量，或此類劑量的方便部分，例如此類劑量的一半或三分之一。藥物組合物可以作為單一治療劑進行施用或根據需要與另外的治療劑組合進行施用。因此，在一個實施方案中，用於治療和/或預防的本方法與治療有效量的另一種活性劑的施用組合使用。其它活性劑可以在根據本發明的藥物組合物的施用之前、期間或之後進行施用。其它活性劑可以作為本文組合物的部分進行施用，或者可替代地作為分開的製劑進行施用。 實施例提供以下實施例用於本發明的更好理解。這些實施例僅用於說明的目的並且不應被解釋為以任何方式限制本發明的範圍。儘管為了清楚理解的目的已通過說明和實例的方式詳細描述了前述發明，但按照本發明的教導，對於本領域普通技術人員將為顯而易見的是，可以對其做出某些改變和修改，而不脫離所附實施方案的精神或範圍。方法 1. 通過PCR確定AAV產物中感興趣的基因(GOI)的濃度。使用正向引物、反向引物以及與FAM染料和BHQ-1猝滅劑綴合的探針，通過定量聚合酶鏈式反應來確定AAV產物中GOI的濃度。引物與編碼GOI蛋白的基因區域相匹配。在樣品製備過程中，將樣品首先用DNA酶進行處理以便除去殘留的質粒DNA，然後用蛋白酶進行處理以便破壞衣殼。使用(相應GOI的)線性化質粒來繪製校準線。為了繪製對數濃度作為循環閾值(Ct)的函數的校準線，使用具有10倍濃度遞減的標準物。產物中的病毒基因組/ml (vg/ml)濃度通過對數濃度作為Ct的函數的校準線進行確定。 2. 通過酶聯免疫吸附測定確定病毒顆粒的濃度。使用如下商業試劑盒借助於酶聯免疫吸附測定來測量病毒載體顆粒(腺相關病毒(AAV)衣殼)的濃度：PROGEN AAV5滴定ELISA、PROGEN AAV6滴定ELISA和PROGEN AAV9滴定ELISA。高結合96孔板塗布有抗AAV衣殼結合單克隆小鼠抗體，其識別特定血清型的構象表位。AAV衣殼蛋白在溫育溫度下與抗體結合，樣品中未結合的組分通過多次洗滌板來去除。在板的溫育溫度下與AAV衣殼蛋白結合的生物素化的抗體被用作檢測抗體。未結合的組分通過多次洗滌板來去除。將鏈霉親和素蛋白-辣根過氧化物酶綴合物應用於板孔以檢測顏色。鏈霉親和素蛋白與生物素結合，未結合的組分通過多次洗滌板來去除。四甲基聯苯胺充當發色團。辣根過氧化物酶、過氧化氫和四甲基聯苯胺發色團的相互作用發展顯色反應。通過加入終止液(1當量H ₂SO4)來停止ELISA反應，並且在450 nm的波長處測量孔中溶液的光密度。通過使用具有已知濃度的AAV顆粒的標準溶液的光密度數據繪製的校準曲線圖來確定產物中的病毒載體顆粒的濃度。 3. 基於包含GFP基因的重組腺相關病毒載體確定產物的功能活性。通過產物誘導的CHO-K1細胞中的GFP表達來測量基於包含GFP基因的重組腺相關病毒載體的產物的轉導活性。為了轉導，在分析當天時，將CHO-K1細胞以1x10 ⁴個細胞/cm ²(19,000個細胞/孔)的比率鋪板到24孔板內具有抗生素的生長培養基(MQD-用於定量確定的培養基)中，並且在+37℃的溫度下在具有5% CO2的氣氛中溫育4-8小時，用於細胞附著到塑料表面。然後將以3個劑量的測試樣品(每個劑量3個重複)引入具有細胞的孔內。預先選擇每種AAV血清型的產物劑量(MOI)，以便在轉導之後分別產生約5、10和20%的GFP陽性細胞。使用下式計算單孔轉導所需的產物體積： 𝑉=𝑀𝑂𝐼×𝑆×𝐾C，其中V是每孔所需的產物體積(ml)，S是單孔面積(cm2)，MOI是所需的產物劑量，感染複數(vg/cl)，K是孔中的細胞接種密度(細胞/cm2)，C是產物中包含基因組的衣殼的濃度(vg/ml)。使具有轉導細胞的板在CO2培養箱(5% CO2，+37℃)中溫育2-3天。在溫育期之後，從孔中收集培養液，用Hanks溶液洗滌細胞，並且使用TrypLE溶液(以150 μl/孔)從塑料中取出細胞。在細胞從塑料中脫離之後，將Hanks溶液(與TrypLE 1:1)引入孔內，將細胞收集到1.5 ml微管內，並且以300g離心5分鐘。將細胞沉澱重懸浮於150 µl Hanks溶液中。除了1個同種型對照孔之外，向每個樣品中加入50 ml工作染料溶液，用於確定Hanks溶液中的活細胞，使細胞在室溫下在黑暗中溫育20分鐘。將染色的細胞以300g離心5分鐘，小心地選擇上清液，並且向每個樣品中添加100 µl BD Cytofix固定緩衝液。將細胞重懸浮，並且將所得到的細胞懸浮液的全部體積都轉移到用於流式細胞儀的96孔V形底板內，使具有細胞的板在室溫下在黑暗中溫育20分鐘。在溫育期之後，將板以1200 rpm離心5分鐘，收集固定緩衝液，並且用染色緩衝液(具有0.1%疊氮化鈉和0.5% BSA的PBS)以100 µl/孔洗滌細胞。再次將板離心並收集緩衝液，這之後以150 µl/孔引入染色緩衝液，並且小心地使細胞重懸浮。在流式細胞儀上分析細胞。評估細胞活力和GFP表達。根據下式對於每個產物劑量計算FA (功能活性)或TU (轉導單位)/ml的值： 𝑇𝑈=𝑃×𝑁V×D，其中P是作為百分比的GFP陽性活細胞的數目，N是初始鋪板細胞的數目(N=S×K)，V是每孔引入的產物體積(ml)，D是產物預稀釋因子。 3個樣品劑量的平均TU值被視為最終結果。 4. 通過尺寸排阻高效液相色譜確定病毒顆粒的濃度。病毒顆粒的濃度通過在具有UV檢測器的Agilent高效液相色譜儀上測量測試物品和標準物的峰面積來確定。檢測器波長：260和280 nm。柱：TSK-凝膠G3000SWXL 7.8×300 mm，5 μm，300 Å。 A相：0.1M磷酸鹽緩衝液中的0.1M Na2SO4，pH =6.7。進樣體積：30 µl。流速：1 ml/分鐘。柱溫：35℃。檢測器波長：260 nm(4 nm)，參考波長(360 nm，bw 100 nm)；280 nm (4 nm)，參考波長(360 nm，bw100 nm)。洗脫模式：等度。色譜時間：15分鐘。在所得到的色譜圖上在280和260 nm的波長處鑒定峰，並且確定其面積。基於校準溶液的色譜圖上所得到的峰數據，對於每個波長創建了線性回歸方程。使用在280 nm的波長下的線性回歸方程，計算病毒顆粒的濃度。使用尺寸排阻高效液相色譜作為用於確定病毒顆粒濃度的正交方法。 5. 藥物組合物的製備。在壓力下在Stirred Cell (Millipore)濃縮池中製備具有靶含量的病毒基因組的樣品。為此，將含有病毒顆粒的初始溶液製劑置於滲濾容器中，然後將至少10倍體積的具有靶製劑的水溶液引入池內，所述水溶液包括緩衝劑、滲透劑以及必要時另外的水溶性穩定劑。在滲濾過程之後，將溶液濃縮至超過靶密度的光密度，從儀器中卸載，通過PCR確定病毒基因組的濃度。然後將相應的賦形劑溶液加入樣品中，以產生具有靶水準的病毒基因組的溶液。另外，在Pellicon (Millipore)盒中以切向流模式製備含有病毒顆粒的溶液樣品。為此，將初始溶液製劑置於滲濾罐中，然後將至少10倍體積的具有靶製劑的溶液供應至系統，所述溶液包含緩衝劑、滲透劑以及必要時另外的水溶性穩定劑。滲透劑和水溶性穩定劑的濃縮物可以在滲濾之後添加。在滲濾過程之後，將溶液濃縮至超過靶密度的光密度，從系統中卸載，並且確定光密度和病毒基因組濃度的精確值。然後將相應的賦形劑溶液加入樣品中，以產生具有靶水準的病毒基因組的溶液。在無菌填充到最終容器(例如玻璃/塑料容器、小瓶或注射器)內之前，使用0.22 µm膜在無菌條件下過濾溶液。 6. 穩定性研究。將測試樣品分成幾個等分試樣，並且置於不同的無菌玻璃小瓶內：將關於每個對照點的1個小瓶置於恆溫器中，在25℃下溫育4周且在(5±3)℃下溫育6個月，伴隨根據時間表在對照點的定期收集。在對照點收集時以及在儲存之後，將小瓶從恆溫器或冰箱中取出，並且轉移用於分析。 7. 熱應激。將測試樣品分成三個等分試樣，並且置於玻璃小瓶內：將關於每種製劑的一個小瓶儲存於在(5±3)℃下的冰箱中，將剩餘小瓶置於恆溫器中，並且在給定溫度下溫育給定時間段。當在對照點或加熱之後收集時，將小瓶從恆溫器中取出，在室溫下保持約15分鐘，並且轉移用於分析。 8. 振盪。將測試樣品分成2個等分試樣，並且置於玻璃小瓶內：將每製劑1個小瓶儲存於在(5±3)℃下的冰箱中，將剩餘小瓶置於熱振盪器中，並且在(5±3)℃下以800 rpm的速度振盪給定時間段。在對照點或應激之後收集時，將小瓶從熱振盪器中取出，並且轉移用於分析。 9. 凍融。將測試樣品分成兩個等分試樣，並且加入玻璃小瓶中：將小瓶置於冰箱中並且儲存在-20℃或更低的溫度下。大多數基因治療產品儲存於不超過-70℃的溫度下；已選擇不超過-20℃的溫度作為“最壞情況”，因為在此類儲存方法中，樣品儲存於高於玻璃化轉化溫度的溫度下，因此使樣品經受與在冷凍下發生的類似的另外應激。在樣品的完全冷凍之後(在8-16小時後)，將小瓶從冰箱中取出，保持在室溫下直至內容物完全解凍，並且在必要時重複凍融循環。在給定次數的凍融循環之後，將樣品轉移用於分析。 10. 通過動態光散射的等溫研究。使用DynaPro Plate Reader II儀器分析測試樣品的膠體穩定性。將35 μl每種測試樣品加入具有光學透明底部的384孔黑色聚合物板的孔中，其後用耐熱自黏膜將板密封。將密封的板在3000 rpm和不低於20℃的溫度下離心3分鐘。將測量在給定溫度下進行給定時間。測量設置： ● 在θ(散射光測量的角度)=158°處的散射光強度。 ● 測量次數/重複-3。 ● 時間/測量-5 s。使用Dynamics軟體(Wyatt，USA)分析時間趨勢。 11. 聚集溫度的確定。使用DynaPro Plate Reader II確定聚集溫度。將35 μl每種測試樣品加入具有光學透明底部的384孔黑色聚合物板的孔中，其後用耐熱自黏膜將板密封。將密封的板在3000 rpm和不低於20℃的溫度下離心3分鐘。測量設置： ● 初始測量溫度-25℃。 ● 在θ=158°處的散射光強度。 ● 測量次數/重複-3。 ● 時間/測量-5 s。 ● 加熱速率-0.15℃/分鐘。 ● 最終溫度-80℃。使用Dynamics軟體(Wyatt，USA)確定溫度趨勢和聚集點。 12. 衣殼蛋白熔點的確定。通過差示掃描螢光測定法，來確定重組腺相關病毒的衣殼蛋白的熔點。將5 µl稀釋的與蛋白質分子的疏水位點特異性結合的SyproOrange螢光染料(Thermo Fisher Scientific，USA)加入45 µl測試樣品中，直至染料的1000倍的最終稀釋。將所得到的混合物轉移到96孔PCR板，用自黏耐熱膜密封，以3000 rpm離心3分鐘，並且置於具有螢光檢測器的放大器中。加熱從25℃進行到85℃，溫度增量為0.15℃，按照製造商的說明書檢測在加熱期間的螢光。使用CFX Manager (Bio-Rad，USA)軟體來處理結果。 13. DNA提取溫度的確定。通過差示掃描螢光測定法，來確定DNA從基於重組腺相關病毒的載體的衣殼提取的溫度。將5 µl稀釋的與核酸特異性結合的SybrGOLD螢光染料(Thermo Fisher Scientific，USA)加入45 µl測試樣品中，直至染料的2000倍的最終稀釋。將所得到的混合物轉移到96孔PCR板，用自黏耐熱膜密封，以3000 rpm離心3分鐘，並且置於具有螢光檢測器的放大器中。加熱從25℃進行到85℃，溫度增量為0.15℃，按照製造商的說明書檢測在加熱期間的螢光。使用CFX Manager (Bio-Rad，USA)軟體來處理結果。 14. 通過動態光散射確定樣品均勻性。使用DynaPro Plate Reader II通過動態光散射確定樣品均勻性。將35 μl每種測試樣品加入具有光學透明底部的384孔黑色聚合物板的孔中，其後用耐熱自黏膜將板密封。將密封的板在3000 rpm和不低於20℃的溫度下離心3分鐘。測量設置： ● 測量溫度：25℃。 ● 在起始測量前，在該溫度下保持1分鐘。 ● 在θ=158°處的散射光強度。 ● 測量次數/重複-10。 ● 時間/測量-5 s。使用Dynamics軟體(Wyatt，USA)確定樣品大小和多分散性。實施例1. 賦形劑製劑的選擇。該研究旨在評價在(5±3)℃的溫度條件下以液體形式儲存重組腺相關病毒載體產物的可能性，以及旨在選擇最佳賦形劑製劑以進一步研究具有各種血清型的產物的穩定性。賦形劑溶液必須提供病毒載體在預計儲存條件下的穩定性。使以下賦形劑經受篩選：三(羥甲基)胺基甲烷(緩衝劑，維持所需的pH水準)、氯化鈉(穩定劑、滲透物)、氯化鎂六水合物(穩定劑)、海藻糖二水合物(穩定劑、滲透物、冷凍保護劑)、泊洛沙姆p188 (增溶劑)、L-組胺酸(緩衝劑，維持所需的pH水準，穩定劑)、L-精胺酸(緩衝劑，維持所需的pH水準，穩定劑)、L-脯胺酸(穩定劑)。用於測試藥物組合物的賦形劑製劑顯示於表1中。該研究對於包含約1*10 ¹⁰vg/ml基於攜帶GOI的rAAV血清型5的載體的樣品進行。按照方法5通過滲濾製備具有各種賦形劑製劑的樣品。為了鑒定各種賦形劑對載體穩定性的作用，按照方法7、8、9，使測試製劑中的樣品經受應激。在應激之前和之後，按照方法1、2、3、4，對樣品進行分析。結果顯示於表2-5中。應激實驗物件組令人驚訝地揭示了使用組胺酸-精胺酸緩衝溶液對AAV穩定性的積極作用。令人驚訝地發現包括組胺酸-精胺酸緩衝溶液的製劑顯示出高的熱穩定性。在50℃熱應激之後，如通過ELISA和PCR方法分析的，基於給定緩衝系統的藥物組合物顯示了載體顆粒濃度的最小減少。另外，按照方法6，使表1中所示的製劑2經受加速穩定性研究。按照方法1、2、3，對在對照點的樣品進行分析。分析的結果顯示於表6-8中。按照在(5±3)℃下6個月和在(25±2)℃下1個月的所得到的穩定性數據，製劑2在儲存期自始至終顯示良好的穩定性。實施例2. 基於重組腺相關病毒血清型9的載體的藥物組合物的研究。該研究使用了顯示於表9中並且包含主要由空衣殼組成的基於重組腺相關病毒血清型9的載體的5種藥物組合物，所述載體處於如下的兩種濃度：1*10 ¹²和1*10 ¹³個顆粒/ml。按照方法5通過滲濾來產生測試樣品。在升高的溫度下膠體穩定性的研究。為了測量膠體穩定性，我們按照方法11確定了5種製劑中基於重組腺相關病毒顆粒的載體的聚集溫度。結果顯示於表10中。另外，我們按照方法7通過熱應激研究了熱穩定性。在經受65℃的溫度96小時之前和之後，按照方法14通過動態光散射分析樣品的均勻性。結果顯示於表11中。另外，控制樣品，同時按照方法10通過動態光散射使其經受65℃的升高溫度，持續120分鐘。數據顯示於圖1中。藥物組合物HisArg AAV9表現出在升高溫度下的膠體穩定性方面的最佳性質。給定的藥物組合物表現出最高的聚集溫度76.0℃，在經受升高溫度時以及在熱應激之後最小的平均顆粒半徑。在多重凍融循環下的膠體穩定性研究。在兩種濃度的測試樣品下，按照方法9進行多重凍融循環對基於重組腺相關病毒顆粒的載體的膠體穩定性的作用的研究。在應激之前和之後，按照方法14通過動態光散射分析樣品的均勻性。結果顯示於表12中。藥物組合物HisArg AAV9具有最小半徑和多分散水準，指示了與其它溶液相比在冷凍下降低的聚集水準。實施例3. 基於重組腺相關病毒血清型6的載體的藥物組合物的研究。該研究使用了5種藥物組合物，其包含基於攜帶GOI的rAAV血清型6的載體材料。測試藥物組合物在表13中列出。按照方法5通過滲濾來產生測試樣品。在升高的溫度下膠體穩定性的研究。為了測量膠體穩定性，我們按照方法11確定了5種製劑中基於重組腺相關病毒顆粒的載體的聚集溫度。我們使用了具有濃度為1*10 ¹²vg/ml的病毒載體的藥物組合物。結果顯示於表14中。結果使用Microsoft Excel熱圖工具進行分析。藥物組合物HisArg AAV6表現出升高溫度下最佳的膠體穩定性性質。給定的藥物組合物表現出最高聚集溫度72.9℃。藥物組合物HisArg AAV6的構象和化學穩定性的研究。通過按照方法12確定衣殼蛋白的變性溫度和按照方法13確定DNA從衣殼提取的溫度，使用濃度為1*10 ¹²vg/ml的重組腺相關病毒血清型6載體材料進行構象和化學穩定性研究。結果顯示於表17中。藥物組合物HisArg AAV6變現出高的構象和化學穩定性，具有高DNA提取溫度和高衣殼蛋白變性溫度。實施例4. 基於重組腺相關病毒血清型5的載體的藥物組合物的研究。該研究使用了5種藥物組合物，其包含基於攜帶GOI的rAAV血清型5的載體材料。測試藥物組合物在表18中列出。按照方法5通過滲濾來產生測試樣品。在升高的溫度下膠體穩定性的研究。為了測量膠體穩定性，我們按照方法11確定了5種製劑中的重組腺相關病毒顆粒的聚集溫度。我們使用了具有10 ¹²vg/ml的病毒載體濃度的藥物組合物。結果顯示於表19中。另外，我們按照方法7通過熱應激研究了熱穩定性。在經受40℃的溫度96小時之前和之後，按照方法14通過動態光散射分析樣品的均勻性。結果顯示於表20中。另外，控制樣品，同時按照方法10通過動態光散射使其經受40℃的升高溫度，持續200分鐘。數據顯示於圖2中。藥物組合物HisArg AAV5表現出升高溫度下最佳的膠體穩定性性質。給定的組合物表現出最高的聚集溫度59.3℃，在經受升高溫度時最小的平均顆粒半徑，以及在熱應激之後的最小平均半徑和多分散性。在多重凍融循環下的膠體穩定性研究。按照方法9，研究多重凍融循環對重組腺相關病毒顆粒的膠體穩定性的作用。在應激之前和之後，按照方法14通過動態光散射分析樣品的均勻性。結果顯示於表21中。藥物組合物HisArg AAV5顯示出在測試樣品之中最小的尺寸和多分散性。構象和化學穩定性的研究。通過按照方法12確定衣殼蛋白的變性溫度和按照方法13確定DNA從衣殼提取的溫度，使用濃度為1*10 ¹³vg/ml的重組腺相關病毒血清型5材料，進行構象和化學穩定性研究。結果顯示於表22中。藥物組合物HisArg AAV5顯示出最高的DNA提取溫度，指示了其高穩定性質。藥物組合物HisArg AAV5還顯示出高的衣殼蛋白變性溫度87.0℃。實施例5. 賦形劑製劑對基於重組腺相關病毒的載體提取DNA的傾向的作用的研究。為了研究藥物組合物對從衣殼中提取DNA的傾向的作用，我們使用了表23中所示的兩種藥物組合物。給定的製劑在濃度為1*10 ¹³vg/ml的重組腺相關血清型5顆粒的研究中顯示出最佳結果。該研究使用濃度為1*10 ¹²vg/ml的基於攜帶GOI的rAAV血清型2、5、6、8、9的載體材料進行。按照方法5通過滲濾來產生測試樣品。按照方法13進行分析。對於基於各種血清型的腺相關病毒顆粒的所有測試載體，如與基於組胺酸緩衝系統的備選藥物組合物相比，以下的藥物組合物的使用： L-組胺酸 2.79 mg/ml L-精胺酸 0.348 mg/ml 氯化鈉 11.7 mg/ml 氯化鎂 0.203 mg/ml 泊洛沙姆188 0.1 mg/ml 導致DNA提取的溫度升高，指示了給定製劑中的測試項目的衣殼內的DNA保留的穩定性更佳。所開發的組合物可以被應用於腺相關病毒和其它類型的非包膜病毒。

[圖1]是顯示在65℃熱應激下在測試製劑中，基於腺相關病毒血清型9的載體的粒徑變化作為時間的函數的曲線圖。 HisArg、His、Tris、PBS、PhosCitr-藥物組合物HisArg AAV9、His AAV9、Tris AAV9、PBS AAV9、PhosCitr AAV9分別顯示於表9中。 [圖2]是顯示在40℃熱應激下在測試製劑中，基於腺相關病毒血清型5的載體的粒徑變化作為時間的函數的曲線圖。 HisArg、His、Tris、PBS、PhosCitr-藥物組合物HisArg AAV5、His AAV5、Tris AAV5、PBS AAV5、PhosCitr AAV5分別顯示於表18中。

Claims

一種基於重組非包膜病毒的載體的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸， (iii) 精胺酸， (iv) 氯化鈉， (v) 氯化鎂， (vi) 表面活性劑，和 (vii) 注射用水。
根據請求項1的藥物組合物，其中組胺酸以2.0-3.58 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中組胺酸以2.3-3.2 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中組胺酸以2.6-3.0 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中組胺酸以2.7-2.8 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中精胺酸以0.248-0.448 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中精胺酸以0.28-0.416 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中精胺酸以0.3-0.396 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中精胺酸以0.340-0.350 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中氯化鈉以8.0-15.0 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中氯化鈉以9.5-13.5 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中氯化鈉以10.5-12.5 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中氯化鈉以11.0-12.0 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中氯化鎂以0.15-0.50 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中氯化鎂以0.16-0.35 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中氯化鎂以0.18-0.25 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中氯化鎂以0.200-0.210 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述表面活性劑以0.01-1.0 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述表面活性劑以0.01-0.5 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述表面活性劑以0.01-0.2 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述表面活性劑以0.03-0.15 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.0-3.58 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.248-0.448 mg/ml， (iv) 氯化鈉 8.0-15.0 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.15-0.50 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.01-1.0 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.3-3.2 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.28-0.416 mg/ml， (iv) 氯化鈉 9.5-13.5 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.16-0.35 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.01-0.2 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.6-3.0 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.3-0.396 mg/ml， (iv) 氯化鈉 10.5-12.5 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.18-0.25 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.03-0.15 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.7-2.8 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.340-0.350 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.0-12.0 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.200-0.210 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.03-0.15 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
一種藥物組合物，其中組胺酸以2.79 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中精胺酸以0.348 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中氯化鈉以11.7 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中氯化鎂以0.203 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述表面活性劑以0.05 mg/ml或0.1 mg/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.79 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.348 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.7 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.203 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.05 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.79 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.348 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.7 mg/ml， (v) 氯化鎂 0.203 mg/ml， (vi) 表面活性劑 0.1 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
根據請求項1的藥物組合物，其中氯化鎂是氯化鎂六水合物。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述表面活性劑是泊洛沙姆188。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.0-3.58 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.248-0.448 mg/ml， (iv) 氯化鈉 8.0-15.0 mg/ml， (v) 為氯化鎂六水合物的氯化鎂 0.15-0.50 mg/ml， (vi) 為泊洛沙姆188的表面活性劑 0.01-1.0 mg/ml， (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.3-3.2 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.28-0.416 mg/ml， (iv) 氯化鈉 9.5-13.5 mg/ml， (v) 為氯化鎂六水合物的氯化鎂 0.16-0.35 mg/ml， (vi) 為泊洛沙姆188的表面活性劑 0.01-0.2 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.6-3.0 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.3-0.396 mg/ml， (iv) 氯化鈉 10.5-12.5 mg/ml， (v) 為氯化鎂六水合物的氯化鎂為0.18-0.25 mg/ml， (vi) 為泊洛沙姆188的表面活性劑 0.03-0.15 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.7-2.8 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.340-0.350 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.0-12.0 mg/ml， (v) 為氯化鎂六水合物的氯化鎂 0.200-0.210 mg/ml， (vi) 為泊洛沙姆188的表面活性劑 0.03-0.15 mg/ml，和 (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.79 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.348 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.7 mg/ml， (v) 為氯化鎂六水合物的氯化鎂 0.203 mg/ml， (vi) 為泊洛沙姆188的表面活性劑 0.05 mg/ml， (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
根據請求項1的藥物組合物，其包含： (i) 基於重組非包膜病毒的載體， (ii) 組胺酸 2.79 mg/ml， (iii) 精胺酸 0.348 mg/ml， (iv) 氯化鈉 11.7 mg/ml， (v) 為氯化鎂六水合物的氯化鎂 0.203 mg/ml， (vi) 為泊洛沙姆188的表面活性劑 0.1 mg/ml， (vii) 注射用水補足到1.0 ml。
根據請求項1的藥物組合物，其中組胺酸是L-組胺酸。
根據請求項1的藥物組合物，其中精胺酸是L-精胺酸。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述藥物組合物具有pH 7.0-9.0。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述藥物組合物具有pH 7.7-8.7。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述藥物組合物具有pH 7.5-8.5。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述藥物組合物具有pH 8.2。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述基於重組非包膜病毒的載體以1.0*10 ⁹-1.0*10 ¹⁴個病毒基因組/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述基於重組非包膜病毒的載體以1.0*10 ⁹-1.0*10 ¹⁴個病毒基因組/ml的濃度存在。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述基於重組非包膜病毒的載體以以下濃度存在：(1.0±0.3)*10 ⁹個病毒基因組/ml、(2.0±0.6)*10 ⁹個病毒基因組/ml、(5.0±1.5)*10 ⁹個病毒基因組/ml、(1.0±0.3)*10 ¹⁰個病毒基因組/ml、(2.0±0.6)*10 ¹⁰個病毒基因組/ml、(5.0±1.5)*10 ¹⁰個病毒基因組/ml、(1.0±0.3)*10 ¹¹個病毒基因組/ml、(2.0±0.6)*10 ¹¹個病毒基因組/ml、(5.0±1.5)*10 ¹¹個病毒基因組/ml、(1.0±0.3)*10 ¹²個病毒基因組/ml、(2.0±0.6)*10 ¹²個病毒基因組/ml、(5.0±1.5)*10 ¹²個病毒基因組/ml、(1.0±0.3)*10 ¹³個病毒基因組/ml、(2.0±0.6)*10 ¹³個病毒基因組/ml、(5.0±1.5)*10 ¹³個病毒基因組/ml或(1.0±0.3)*10 ¹⁴個病毒基因組/ml。
根據請求項1的藥物組合物，其中所述重組非包膜病毒載體是基於rAAV的載體。
根據請求項50的藥物組合物，其中所述基於rAAV的載體包含AAV5血清型、AAV6血清型或AAV9血清型的衣殼。
根據請求項51的藥物組合物，其中所述AAV5血清型、AAV6血清型或AAV9血清型的衣殼可以是修飾的衣殼。
根據請求項1至52中任一項的藥物組合物，其適合於凍乾。