TW202424194A

TW202424194A - 用於治療神經肌肉病症之組成物及方法

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Publication number: TW202424194A
Application number: TW112136358A
Authority: TW
Inventors: 卡洛斯方克; 維理陳; 狄威帕言森
Original assignee: 美商安斯泰來基因治療股份有限公司
Priority date: 2022-09-23
Filing date: 2023-09-22
Publication date: 2024-06-16
Also published as: JP2025531998A; WO2024064895A3; EP4590314A2; WO2024064895A2; AR130561A1

Abstract

本揭露係關於腺相關病毒(AAV)介導之核酸遞送，用於治療有需要之患者之神經肌肉病症，例如X連鎖肌微管性肌病(XLMTM)。本揭露之AAV載體可包括，例如，可操作連接至一或多個轉錄調控元件的編碼肌微管蛋白之轉殖基因。在一些實施例中，該一或多個轉錄調控元件在肌肉組織及/或肝組織中具有特異性活性。

Description

用於治療神經肌肉病症之組成物及方法

X連鎖肌微管性肌病(XLMTM)係一種致命的骨骼肌單基因疾病，由肌微管蛋白1 (MTM1)基因之突變引起。大約每50,000名新生男孩中就有一名患有XLMTM，其通常表現為明顯的肌張力減退及呼吸衰竭。在極其罕見的情況下，女性會患上重度形式之XLMTM。超過產後期之存活需要強化支持，包括85%-90%患者於出生時之呼吸支持(亦即機械通氣)，近50%患者之持續24小時呼吸機依賴，及約60%患者之氣管造口術。直到最近，僅支持性治療選擇可用，諸如使用呼吸機或飼管。最近，已經開發了涉及MTM1之遞送之基因療法方法用於治療XLMTM。然而，此項技術需要向患有XLMTM之患者投與基因療法之改進方法。

本揭露提供了可用於治療神經肌肉病症，特定而言係X連鎖肌微管性肌病(XLMTM)之組成物及方法。使用本文所述之組成物及方法，可以向患有XLMTM之患者(例如人類患者)投與具有編碼肌微管蛋白1 (MTM1)之轉殖基因的病毒載體，諸如腺相關病毒(AAV)載體。本揭露之示範性組成物及方法描述如下。

在第一態樣，本揭露提供了包含編碼MTM1之轉殖基因的重組AAV載體，其中該轉殖基因可操作地連接至在肝組織中有活性之啟動子。

在一些實施例中，啟動子在肝組織中選擇性地有活性。在一些實施例中，在同等條件下將載體分別與一或多種肝細胞及一或多種非肝細胞接觸(例如，體外或體內)後，載體導致一或多種肝細胞中轉殖基因之表現水準高於一或多種非肝細胞中轉殖基因之表現水準，例如2倍至1,000倍高(例如係一或多種非肝細胞中轉殖基因之表現水準的2倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍或1,000倍高)。在一些實施例中，當載體分別與一或多種肝細胞及一或多種非肝細胞接觸時，載體導致一或多種肝細胞中轉殖基因之表現水準係一或多種非肝細胞中轉殖基因之表現水準的10倍至1,000倍高。在一些實施例中，當載體分別與一或多種肝細胞及一或多種非肝細胞接觸時，載體導致一或多種肝細胞中轉殖基因之表現水準係一或多種非肝細胞中轉殖基因之表現水準的50倍至1,000倍高。在一些實施例中，當載體分別與一或多種肝細胞及一或多種非肝細胞接觸時，載體導致一或多種肝細胞中轉殖基因之表現水準係一或多種非肝細胞中轉殖基因之表現水準的100倍至1,000倍高。在一些實施例中，當載體分別與一或多種肝細胞及一或多種非肝細胞接觸時，載體導致一或多種肝細胞中轉殖基因之表現水準係一或多種非肝細胞中轉殖基因之表現水準的至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍或至少100倍高。

在一些實施例中，非肝細胞係肌肉細胞或神經細胞。在一些實施例中，非肝細胞係心肌細胞。

在一些實施例中，當載體與一或多種肝細胞(例如，患有神經肌肉病症之患者的)接觸時，載體導致一或多種肝細胞中轉殖基因之表現水準更接近於野生型/健康肝細胞中MTM1之表現，例如，轉殖基因之表現可為野生型/健康肝細胞中MTM1之表現水準的0.2倍至10倍(例如，0.2倍、0.3倍、0.4倍、0.5倍、0.6倍、0.7倍、0.8倍、0.9倍、1倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、5.5倍、6倍、6.5倍、7倍、7.5倍、8倍、8.5倍、9倍、9.5倍或10倍)。在一些實施例中，當載體與一或多種肝細胞(例如，患有神經肌肉病症之患者的)接觸時，載體導致一或多種肝細胞中轉殖基因之表現水準係健康肝細胞中野生型MTM1表現水準的至少0.2倍、至少0.5倍、至少1倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍。

在一些實施例中，啟動子包含LP1啟動子。在一些實施例中，LP1啟動子具有與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少75%一致之核酸序列： GTCCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGcACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAA (SEQ ID NO: 3)。

在一些實施例中，LP1啟動子具有與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少80%一致之核酸序列(例如，與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列)。在一些實施例中，LP1啟動子具有SEQ ID NO: 3之核酸序列。

在一些實施例中，啟動子包含載脂蛋白E (ApoE)啟動子。在一些實施例中，ApoE啟動子具有與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少75%一致之核酸序列： CCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGG (SEQ ID NO: 8)。

在一些實施例中，ApoE啟動子具有與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少80%一致之核酸序列(例如，與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列)。在一些實施例中，ApoE啟動子具有SEQ ID NO: 8之核酸序列。

在一些實施例中，啟動子包含α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)啟動子。在一些實施例中，A1AT啟動子具有與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少75%一致之核酸序列： AATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAAT (SEQ ID NO: 9)。

在一些實施例中，A1AT啟動子具有與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少80%一致之核酸序列(例如，與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列)。在一些實施例中，A1AT啟動子具有SEQ ID NO: 9之核酸序列。

在一些實施例中，啟動子係包含ApoE啟動子及A1AT啟動子之嵌合啟動子。在一些實施例中，嵌合啟動子具有與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少75%一致之核酸序列： CGTGATCTAGTAGGCTCAGAGGCACACAGGAGTTTCTGGGCTCACCCTGCCCCCTTCCAACCCCTCAGTTCCCATCCTCCAGCAGCTGTTTGTGTGCTGCCTCTGAAGTCCACACTGAACAAACTTCAGCCTACTCATGTCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATGATCCCCCTGATCTGCGGCCTCGACGGTATCGATAAG (SEQ ID NO: 2)。

在一些實施例中，嵌合啟動子具有與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少80%一致之核酸序列(例如，與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列)。在一些實施例中，嵌合啟動子具有SEQ ID NO: 2之核酸序列。

在一些實施例中，啟動子包含組成型啟動子。在一些實施例中，組成型啟動子係磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子、延伸因子-1α (EF1α)啟動子、甘油醛3-磷酸脫氫酶(GAPDH)啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子或雞-β-肌動蛋白(CBA)啟動子。

在一些實施例中，AAV載體進一步包含編碼MTM1之第二轉殖基因。在一些實施例中，編碼MTM1之第二轉殖基因可操作連接至在肌肉組織中有活性的啟動子。在一些實施例中，在肌肉組織中有活性的啟動子係在肌肉組織中選擇性地有活性。

在一些實施例中，在肌肉組織中選擇性地有活性的啟動子實現(例如，體外或體內)肌肉細胞中MTM1轉殖基因之表現水準高於非肌肉細胞中由相同啟動子實現的MTM1轉殖基因之表現水準，例如，2倍至1,000倍高(例如係非肌肉細胞中由相同啟動子實現的MTM1轉殖基因之表現水準的2倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍或1,000倍高)。在一些實施例中，在肌肉組織中選擇性地有活性的啟動子實現肌肉細胞中MTM1轉殖基因之表現水準係非肌肉細胞中由相同啟動子實現的MTM1轉殖基因之表現水準的10倍至1,000倍高。在一些實施例中，在肌肉組織中選擇性地有活性的啟動子實現肌肉細胞中MTM1轉殖基因之表現水準係非肌肉細胞中由相同啟動子實現的MTM1轉殖基因之表現水準的50倍至1,000倍高。在一些實施例中，在肌肉組織中選擇性地有活性的啟動子實現肌肉細胞中MTM1轉殖基因之表現水準係非肌肉細胞中由相同啟動子實現的MTM1轉殖基因之表現水準的100倍至1,000倍高。在一些實施例中，在肌肉組織中選擇性地有活性的啟動子實現肌肉細胞中MTM1轉殖基因之表現水準係非肌肉細胞中由相同啟動子實現的MTM1轉殖基因之表現水準的至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍或至少100倍高。

在一些實施例中，編碼MTM1之轉殖基因可操作連接至肌肉肌酸激酶(MCK)啟動子或結蛋白(DES)啟動子。

在一些實施例中，編碼MTM1的各轉殖基因獨立地具有與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少75%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1的各轉殖基因獨立地具有與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少80%一致之核酸序列(例如，與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列具有至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98 %、99%或100%一致之核酸序列)。在一些實施例中，編碼MTM1的各轉殖基因具有SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列。

在一些實施例中，編碼MTM1的各轉殖基因獨立地具有與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少75%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1的各轉殖基因獨立地具有與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少80%一致之核酸序列(例如，與SEQ ID NO: 6之核酸序列具有至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98 %、99%或100%一致之核酸序列)。在一些實施例中，編碼MTM1的各轉殖基因具有SEQ ID NO: 6之核酸序列。

在一些實施例中，編碼MTM1的各轉殖基因獨立地具有與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少75%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1的各轉殖基因獨立地具有與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少80%一致之核酸序列(例如，與SEQ ID NO: 7之核酸序列具有至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98 %、99%或100%一致之核酸序列)。在一些實施例中，編碼MTM1的各轉殖基因具有SEQ ID NO: 7之核酸序列。

在一些實施例中，MTM1序列係密碼子最佳化的。

在一些實施例中，AAV為AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAVrh10或AAVrh74血清型。在一些實施例中，AAV載體為假型AAV。在一些實施例中，假型AAV為AAV2/8或AAV2/9。

在另一態樣，本揭露提供了一種治療有需要之人類患者之XLMTM的方法，其係藉由向患者投與治療有效量的本揭露之上述態樣或實施例中任一者的AAV載體。

在一些實施例中，患者在投與AAV載體時為五歲或更小。在一些實施例中，患者在投與AAV載體時為四歲或更小，視情況其中患者係三歲或更小、兩歲或更小、一歲或更小、或六個月或更小。

在一些實施例中，AAV載體以小於3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以小於2.5 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與，視情況其中AAV載體以小於2 x 10 ¹⁴vg/kg、小於1.5 x 10 ¹⁴vg/kg或小於1.4 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以3 x 10 ¹³vg/kg至2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與，視情況其中AAV載體以8 x 10 ¹³vg/kg至1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg至1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg /kg至1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、或1.2 x 10 ¹⁴vg/kg至1.4 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約1.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AAV載體藉由靜脈內、肌內、肝內、皮內、或皮下投與之方式向患者投與。

在一些實施例中，進一步向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，抗膽汁淤積劑選自由以下組成之群：膽汁酸、法尼醇X受體(FXR)配體、纖維母細胞生長因子19 (FGF-19)模擬物、Takeda-G蛋白受體5 (TGR5)促效劑、過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)促效劑、PPAR-α促效劑、PPAR-δ 促效劑、雙重PPAR-α及PPAR-δ促效劑、頂端鈉依賴性膽汁酸轉運蛋白(ASBT)抑制劑、免疫調節藥物、抗纖維化療法及菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)抑制劑。在一些實施例中，(i) FXR配體係奧貝膽酸(obeticholic acid)、西洛法索(cilofexor)、特羅法索(tropifexor)、維A酸(tretinoin)或EDP-305；(ii) FGF-19模擬物係阿爾達弗敏(aldafermin)；(iii) TGR5促效劑係INT-777或INT-767；(iv) PPAR促效劑係苯扎貝特(bezafibrate)、非諾貝特(fenofibrate)、塞拉德爾帕(seladelpar)或艾拉貝諾(elafibrinor)；(v) PPAR-α促效劑係非諾貝特；(vi) PPAR-δ促效劑係塞拉德爾帕；(vii) 雙重PPAR-α及PPAR-δ促效劑係艾拉菲諾(elafibranor)；(viii) ASBT抑制劑係奧德維昔巴特(odevixibat)、馬拉利昔巴特(maralixibat)或利奈昔巴特(linerixibat)；(ix) 免疫調節藥物係利妥昔單抗(rituximab)、阿巴西普(abatacept)、優特克單抗(ustekinumab)、英夫利昔單抗(infliximab)、巴瑞替尼(baricitinib)或FFP-104；(x) 抗纖維化療法係維生素D受體促效劑或辛妥珠單抗(simtuzumab)；及/或(xi) NOX抑制劑係塞塔那昔布(setanaxib)。

在一些實施例中，膽汁酸係熊去氧膽酸、去甲熊去氧膽酸、或其醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，患者沒有膽汁淤積或高膽紅素血症之病史。在一些實施例中，患者沒有任一潛在肝病之病史。

在一些實施例中，該方法包括向患者投與治療有效量：(i) 包含在肝組織中有活性(例如，選擇性地有活性)之啟動子控制下的編碼MTM1之轉殖基因的AAV載體，及(ii)包含在肌肉組織中有活性(例如，選擇性地有活性)之啟動子控制下的編碼MTM1之轉殖基因的AAV載體。

在一些實施例中，在肝組織中有活性的啟動子包含LP1啟動子。在一些實施例中，LP1啟動子具有與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少75%一致之核酸序列。在一些實施例中，LP1啟動子具有與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少80%一致之核酸序列(例如，與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98 %、99%或100%一致之核酸序列)。在一些實施例中，LP1啟動子具有SEQ ID NO: 3之核酸序列。

在一些實施例中，在肝組織中有活性的啟動子包含ApoE啟動子。在一些實施例中，ApoE啟動子具有與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少75%一致之核酸序列。在一些實施例中，ApoE啟動子具有與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少80%一致之核酸序列(例如，與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98 %、99%或100%一致之核酸序列)。在一些實施例中，ApoE啟動子具有SEQ ID NO: 8之核酸序列。

在一些實施例中，在肝組織中有活性的啟動子包含A1AT啟動子。在一些實施例中，A1AT啟動子具有與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少75%一致之核酸序列。在一些實施例中，A1AT啟動子具有與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少80%一致之核酸序列(例如，與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98 %、99%或100%一致之核酸序列)。在一些實施例中，A1AT啟動子具有SEQ ID NO: 9之核酸序列。

在一些實施例中，在肝組織中有活性的啟動子係包含ApoE啟動子及A1AT啟動子之嵌合啟動子。在一些實施例中，嵌合啟動子具有與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少75%一致之核酸序列。在一些實施例中，嵌合啟動子具有與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少80%一致之核酸序列(例如，與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98 %、99%或100%一致之核酸序列)。在一些實施例中，嵌合啟動子具有SEQ ID NO: 2之核酸序列。

在又一態樣，本揭露提供了一種治療有需要之人類患者之XLMTM的方法，其係藉由向患者投與治療有效量：(i) 非病毒組成物，其包含可操作連接至在肝組織中有活性(例如，選擇性地有活性)之啟動子的編碼MTM1之核酸，及(ii) AAV載體，其包含在肌肉組織中有活性(例如，選擇性地有活性)之啟動子控制下的編碼MTM1之轉殖基因。

在一些實施例中，非病毒組成物為脂質體、囊泡、合成囊泡、外泌體、合成外泌體、樹枝狀聚合物或奈米粒子。在一些實施例中，奈米粒子為脂質奈米粒子，其可遞送在組成及大小上與經由AAV衣殼遞送之彼等相似的DNA構築體。

在一些實施例中，啟動子係DES啟動子。在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自獨立地具有與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少75%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自獨立地具有與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少80%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自獨立地具有與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自具有SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列。

在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自獨立地具有與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少75%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自獨立地具有與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少80%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自獨立地具有與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自具有SEQ ID NO: 6之核酸序列。

在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自獨立地具有與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少75%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自獨立地具有與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少80%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自獨立地具有與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼MTM1之核酸及編碼MTM1之轉殖基因各自具有SEQ ID NO: 7之核酸序列。

在一些實施例中，AAV載體為比瑞崙基(resamirigene bilparvovec)。

在又一態樣，本揭露提供了一種套組，其包含本揭露之上述態樣或實施例中任一者之AAV載體。該套組可進一步包括指導用戶向診斷為患有XLMTM之患者投與AAV載體的包裝插頁。

在另一態樣，本揭露提供了一種套組，其包含：(i) 包含編碼MTM1之核酸的非病毒組成物(例如，上述之非病毒組成物)，及(ii)包含在肌肉組織中有活性(例如，選擇性地有活性)之啟動子控制下的編碼MTM1之轉殖基因的AAV載體(例如，上述之AAV載體)。該套組可進一步包括指導用戶向診斷為患有XLMTM之患者投與非病毒組成物及AAV載體的包裝插頁。

定義

如本文所用，術語「約」係指在所描述值以上或以下10%內之值。例如，如在本文所述之重量之背景中使用之「100磅」包括在高於或低於100磅之10%內的量。此外，當在數值量列表之背景中使用時，應理解術語「約」在數值量列表之前時適用於列表中列舉之各單獨量。

如本文所用，術語「投與(administering/administration)」等係指藉由任何有效途徑直接給予患者治療劑(例如，包括病毒載體之醫藥組成物，該病毒載體包括可操作連接至啟動子的編碼肌微管蛋白1 (MTM1)基因之核酸序列)。示範性投與途徑在本文中描述且包括全身投與途徑，諸如靜脈內注射，以及直接向患者中樞神經系統投與之途徑，諸如藉由鞘內注射或腦室內注射，及直接向患者肝臟投與之途徑等。

如本文所用，術語「年齡調整規範」係指按年齡對資料進行正規化之過程，其係用於在群體年齡概況不同時允許對受試者群體進行比較之技術。如本文所用，術語「規範」係指未按年齡進行正規化之資料，因為受試者群體之年齡概況係相似的。

如本文所用，術語「丙胺酸胺基轉移酶」及「ALT」係指其胺基酸序列包含天然存在的野生型ALT蛋白(例如，ALT1及ALT2)之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之蛋白質，以及其胺基酸序列包含天然存在的ALT等位基因變體(GPT或GPT2，例如剪接變體或等位基因變體)之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之蛋白質。人類GPT核酸序列以NCBI RefSeq登錄號NM_005309.2提供，且示範性野生型ALT1胺基酸序列以NCBI RefSeq登錄號NP_005300.1提供。人類GPT2核酸序列以NCBI RefSeq登錄號NM_001142466.2提供，且示範性野生型ALT2胺基酸序列以NCBI RefSeq登錄號NP_001135938.1提供。

如本文所用，術語「鹼性磷酸酶」及「ASP」係指其胺基酸序列包含天然存在的野生型ASP蛋白之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之蛋白質，以及其胺基酸序列包含天然存在的ASP等位基因變體(例如，剪接變體或等位基因變體)之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之蛋白質。人類ASP核酸序列以NCBI RefSeq登錄號NM_000478.5提供，且示範性野生型ASP胺基酸序列以NCBI RefSeq登錄號NP_000469.3提供。

如本文所用，術語「抗膽汁淤積劑」係指用於增加膽汁形成及/或拮抗疏水性膽汁酸對生物膜之作用之一種物質，諸如小分子。如本文所用，關於蛋白質之術語「拮抗」係指一種分子減少由蛋白質與其一或多種結合配偶體之相互作用產生之訊號轉導。相對於不存在拮抗劑時兩種蛋白質之結合，拮抗劑可導致蛋白質與其一或多種結合配偶體之結合減少。

如本文所用，術語「天冬胺酸胺基轉移酶」及「AST」係指其胺基酸序列包含天然存在的野生型AST蛋白之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之蛋白質，以及其胺基酸序列包含天然存在的AST等位基因變體(例如，剪接變體或等位基因變體)之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之蛋白質。人類AST核酸序列以NCBI RefSeq登錄號NM_002079.2提供，且示範性野生型ASP胺基酸序列以NCBI RefSeq登錄號NP_002070.1提供。

如本文所用，術語「膽汁酸測試」及「血清膽汁酸測試」係指其中收集餐前(亦即進食前)血液樣品作為基線、隨後進餐、並且隨後約兩個小時後收集餐後(亦即進食後)血液樣品之程序。測試兩種血液樣品之膽汁酸水準，並且將餐前樣品用作參考。如本文所用，「膽汁酸」係指主要存在於哺乳動物及其他脊椎動物膽汁中之類固醇酸。

如本文所用，術語「費城兒童醫院神經肌肉病症嬰兒測試」及「CHOP INTEND」係指為評估病弱嬰兒(諸如患有骨骼肌疾病(例如，X連鎖肌微管性肌病(XLMTM))之嬰兒)而開發的經驗證之運動結果量度。CHOP INTEND使用0–64分量表，評分越高表示運動功能越好。如本文所用，術語「運動功能評分」係指CHOP INTEND之0-64分量表(例如，CHOP INTEND量表＞45)之評分。

如本文所用，術語「膽汁淤積」係指膽汁不能自肝臟流向十二指腸之情況。兩種臨床區別係「阻塞性」膽汁淤積症類型，其中存在膽結石或惡性腫瘤可能導致的管道系統之機械阻塞；以及「代謝性」膽汁淤積症類型，其係可能因為遺傳缺陷而導致的或作為許多藥物之副作用而獲得的膽汁形成干擾。如本文所用，術語「膽汁」係指由肝臟分泌以幫助消化脂肪之消化液。

如本文所用，「組合療法」意指向受試者投與兩種(或更多種)不同的劑或治療作為特定疾病或疾患(例如神經肌肉病症)定義之治療方案之一部分。在一些實施例中，「組合療法」可包括手術。治療方案定義每一劑之劑量及投與週期，使得單獨劑對受試者之效果重疊。在一些實施例中，兩種或更多種劑之遞送係同時或同步的且各劑可共調配。在其他實施例中，兩種或更多種劑並非共調配且作為處方方案之一部分以依序方式投與。在一些實施例中，兩種或更多種劑或治療之組合投與使得症狀或與病症相關之其他參數的減小大於使用單獨或在另一劑或治療不存在下遞送之一種劑或治療觀察到的情況。兩種治療之效果可為部分加和、完全加和或大於加和的(例如協同)。依序或實質上同時投與每一治療劑可藉由任一適當途徑來實現，該任一適當途徑包括(但不限於)口服途徑、靜脈內途徑、肌內途徑、肝內途徑及經由黏膜組織直接吸收。治療劑可藉由相同途徑或藉由不同途徑投與。例如，組合之第一治療劑可藉由靜脈內注射投與，而組合之第二治療劑可腸內投與。在另一實例中，治療組合之劑可藉由靜脈內注射投與，並且可進行治療組合之手術(例如，鼻膽引流(NBD))。

如本文所用，術語「劑量」係指治療劑諸如本文所述之病毒載體之量，其在特定情況下投與至受試者以治療病症，諸如治療或改善本文所述之神經肌肉病症(例如，XLMTM)之一或多種症狀。如本文所述之治療劑可在治療期之過程中以單個劑量或多個劑量投與，如本文所定義。在各情況下，治療劑可使用治療劑之一或多種單位劑型投與，單位劑型係指一或多種含有治療劑之離散組成物之術語，該等離散組成物共同構成該劑之單個劑量。

如本文所用，術語「有效量」、「治療有效量」等在關於治療組成物諸如本文所述之載體構築體使用時，係指在投與至受試者(包括哺乳動物，例如人類)時足以產生有益或期望之結果(例如臨床結果)的量。例如，在治療神經肌肉病症諸如XLMTM之背景中，這些術語係指與未投與感興趣組成物時所獲得的反應相比，足以實現治療反應的組成物之量。組成物諸如本揭露之載體構築體之「有效量」、「治療有效量」等亦包括與對照相比在受試者中產生有益或期望結果之量。

如本文所用，術語「γ-麩胺醯基轉移酶」及「GGT」係指其胺基酸序列包含天然存在的野生型GGT蛋白之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之蛋白質，以及其胺基酸序列包含天然存在的GGT等位基因變體(GGT1、GGT2、及GGT3，例如，剪接變體或等位基因變體)之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之蛋白質。人類GGT1核酸序列以NCBI RefSeq登錄號NM_001288833.1提供，且示範性野生型GGT1胺基酸序列以NCBI RefSeq登錄號NP_001275762.1提供。

如本文所用，術語「高膽紅素血症」係指血液中膽紅素水準高於正常之疾患。如本文所用，術語「膽紅素」係指在脊椎動物中分解血基質(heme)之正常分解代謝路徑中出現的化合物。此分解代謝係身體清除因老化或異常紅血球之破壞而產生的廢物的必要過程。如本文所用，「膽紅素測試」係指量測患者血液中膽紅素之量。

如本文所用，術語「水準」係指與參考相比的蛋白質水準。參考可為如本文所定義之任一有用的參考。蛋白質之「降低的水準」及「增加的水準」意指與參考相比蛋白質水準之降低或增加(例如降低或增加約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約100%、約150%、約200%、約300%、約400%、約500%或更大；與參考相比降低或增加大於約10%、約15%、約20%、約50%、約75%、約100%或約200%；降低或增加小於約0.01倍、約0.02倍、約0.1倍、約0.3倍、約0.5倍、約0.8倍或更小；或增加大於約1.2倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.8倍、約2.0倍、約3.0倍、約3.5倍、約4.5倍、約5.0倍、約10倍、約15倍、約20倍、約30倍、約40倍、約50倍、約100倍、約1000倍或更大)。蛋白質之水準可以質量/體積(例如g/dL、mg/mL、μg/mL、ng/mL)或相對於樣品中之總蛋白質之百分比表示。

如本文所用，術語「肝功能測試」及「LFT」係指肝組套(例如，提供關於患者肝臟狀態之資訊的一組血液檢查)。肝組套可包括量測γ-麩胺醯基轉移酶水準、鹼性磷酸酶水準、天冬胺酸胺基轉移酶水準、丙胺酸胺基轉移酶水準、白蛋白水準、膽紅素水準、凝血酶原時間、活化部分凝血激酶時間、或其組合。

如本文所用，術語「最大吸氣壓力」及「MIP」係指機械通氣中之變量，包括輸送的總氣道壓力，通常用於克服呼吸系統順應性以及氣道阻力。在壓力控制模式下，MIP包括呼氣末正壓與「差量壓力」之和。如本文所用，術語「差量壓力」係指機械通氣中之變量，包括MIP與呼氣末正壓之間的差值。

如本文所用，術語「機械通氣支持」係指人工通氣之醫學術語，其中使用機械構件輔助或替代自主呼吸。如本文所用，術語「有創機械通氣支持」係指人工通氣之醫學術語，其中空氣藉由經由嘴或鼻子插入患者氣管之管輸送，並且使用機械構件輔助或替代自主呼吸。如本文所用，術語「無創機械通氣支持」係指機械通氣支持，其中空氣藉由可放置在嘴、鼻子、或整個面部上的密封面罩輸送至患者。

如本文所用，術語「可操作連接」係指連結至第二分子之第一分子，其中該等分子如此排列以使得第一分子影響第二分子之功能。兩種分子可為或可不為單個鄰接分子之一部分且可為或可不為相鄰的。例如，若啟動子調節感興趣可轉錄多核苷酸分子在細胞中之轉錄，則啟動子可操作連接至可轉錄多核苷酸分子。另外，若轉錄調控元件之兩部分經連接使得一部分之轉錄活化功能不因另一部分之存在而受到不利影響，則該兩部分彼此可操作連接。兩個轉錄調控元件可藉助連接子核酸(例如間插非編碼核酸)彼此可操作連接或可在不存在間插核苷酸時在不存在間插的核苷酸時彼此可操作連接。

如本文所用，術語「醫藥組成物」係指欲投與至受試者(諸如哺乳動物，例如人類)以預防、治療或控制侵襲或可能侵襲受試者之特定疾病或疾患之含有治療化合物之混合物。

如本文所用，術語「醫藥上可接受之」係指該等化合物、材料、組成物及/或劑型合適於接觸受試者諸如哺乳動物(例如，人類)組織，而無過度毒性、刺激、過敏反應及其他與合理的效益/風險比相稱的問題併發症。

如本文所用，術語「啟動子」係指DNA上由RNA聚合酶結合之識別位點。聚合酶驅動轉殖基因之轉錄。適用於本文所述之組成物及方法之示範性啟動子描述於例如Sandelin等人, Nature Reviews Genetics 8:424(2007)，其揭示內容以引用方式併入本文，因為它係關於核酸調控元件。另外，術語「啟動子」可指合成的啟動子，它們是生物系統中不天然存在的調控性DNA序列。合成啟動子含有天然存在之啟動子之部分與自然界中不存在之多核苷酸序列的組合，且可經最佳化以使用各種轉殖基因、載體及靶細胞類型表現重組DNA。

如本文在啟動子之背景中所用，術語「選擇性地有活性」係指在一種細胞或組織類型中與另一種細胞或組織類型中相比，優先驅動基因表現的啟動子。例如，在肝細胞中「選擇性地有活性」的啟動子可在肝細胞中實現的基因表現水準高於相同啟動子在實質上相同的條件下在一或多種非肝細胞中實現的基因表現水準，例如2倍至1,000倍高(例如2倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍或1,000倍更高的表現水準)。用於量測基因表現之示範性方法係此項技術中已知且在本文中描述。

如本文所用，若向患者直接投與治療劑，或者若向患者投與在體內加工或代謝以內源性產生治療劑的物質，則認為治療劑係「提供」給患者。例如，可藉由直接投與核酸分子或藉由投與在體內加工以產生期望的核酸分子之物質(例如，病毒載體或細胞)，向患者諸如患有本文所述之神經肌肉病症之患者提供編碼治療性蛋白質(例如，MTM1)之核酸分子。

如本文所用，術語「患者」及「受試者」係指接受如本文所述之特定疾病或疾患(諸如神經肌肉病症，例如XLMTM)之治療之生物體。受試者及患者之實例包括接受用於本文所述之疾病或疾患之治療的哺乳動物，諸如人類。

「參考」意指用於比較與膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀有關之蛋白質水準之任一有用參考。參考可為用於比較目的之任何樣品、標準、標準曲線或水準。參考可為正常參考樣品或參考標準或水準。「參考樣品」可為例如對照，例如預定陰性對照值，諸如「正常對照」或取自同一受試者之先前樣品；來自正常健康受試者之樣品，諸如正常細胞或正常組織；來自沒有膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀之受試者之樣品(例如，細胞或組織)；來自經診斷為患有膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀之受試者之樣品；來自已針對膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀進行治療的受試者之樣品；或已知正常濃度的純化蛋白質(例如，任一本文所述之蛋白質)之樣品。「參考標準或水準」意謂衍生自參考樣品之值或數值。「正常對照值」係指示非疾病狀態之預定值，例如健康對照受試者中預期之值。通常，正常對照值表示為範圍(「X與Y之間」)、高閾值(「不高於X」)或低閾值(「不低於X」)。所量測值在特定生物標誌物之正常對照值內之受試者通常稱為「在該生物標誌物之正常限值內」。正常參考標準或水準可為源自沒有膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀之正常受試者之值或數值。在較佳實施例中，參考樣品、標準或水準藉由以下基準中之至少一者與樣品受試者樣品匹配：年齡、體重、性別、疾病階段及總體健康狀況。在正常參考範圍內之經純化蛋白質(例如，任一本文所述之蛋白質)水準之標準曲線亦可用作參考。

如本文所用，術語「足月齡」係指在37週胎齡及42週胎齡之間出生的患者(例如，新生兒)之年齡。例如，若患者出生時為35週胎齡，則患者足月齡為14天。

如本文所用，術語「轉殖基因」係指編碼基因產物(例如，本文所述之基因產物)之重組核酸(例如，DNA或cDNA)。基因產物可為RNA、肽或蛋白質。除基因產物之編碼區之外，轉殖基因可包括或可操作連接至一或多個元件以促進或增強表現，諸如啟動子、增強子、去穩定域、響應元件、報告元件、絕緣子元件、多腺苷酸化訊號、及/或其他功能元件。本揭露之實施例可利用任一已知的適宜啟動子、增強子、去穩定域、響應元件、報告元件、絕緣子元件、多腺苷酸化訊號及/或其他功能元件。

如本文所用，術語「治療(treat)」及「治療(treatment)」係指治療性治療，其中目的係預防或減緩(減輕)不期望的生理變化或障礙，諸如神經肌肉病症之進展，諸如XLMTM，等。有益或期望的臨床結果包括但不限於緩解症狀(例如，僵硬及/或關節攣縮)；減弱疾病程度；穩定(亦即不惡化)疾病狀態；延遲或減緩疾病進展；改善或緩和疾病狀態；及緩解(無論部分或完全)，無論可偵測或不可偵測。在神經肌肉病症(諸如XLMTM)之背景中，對患者的治療可表現出一或多種可偵測的變化，諸如MTM1蛋白或編碼MTM1之核酸(例如，DNA或RNA，諸如mRNA)濃度增加，或MTM1活性增加(例如，增加1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、200%、300%、400%、500%、600%、700%、800%、900%、或更多。MTM1蛋白之濃度可以使用此項技術中已知之蛋白質偵測檢定來確定，包括本文描述之ELISA檢定。編碼MTM1之核酸的濃度可以使用本文所述之核酸偵測檢定(例如，RNA Seq檢定)來確定。此外，對罹患神經肌肉病症(諸如XLMTM)之患者的治療可表現為患者肌肉功能(例如，骨骼肌功能)之改進以及肌肉協調性之改進。例如，改進之表現可包括增加膈肌及/或呼吸肌進展。

如本文所用，術語「X連鎖肌微管性肌病」及「XLMTM」係指由MTM1基因突變引起的遺傳性神經肌肉病症，並且其特徵在於症狀包括輕度至重度肌無力、肌張力減退(減弱的肌張力)、餵養困難及/或重度呼吸併發症。人類MTM1具有NCBI基因ID編號4534。示範性野生型人類MTM1核酸序列以NCBI RefSeq登錄號NM_000252.3提供，且示範性野生型肌微管蛋白1胺基酸序列以NCBI RefSeq登錄號NP_000243.1提供。

如本文所用，術語「載體」係指可以用作例如出於復製及/或表現之目的將感興趣基因遞送到細胞(例如哺乳動物細胞，諸如人類細胞)中之媒劑的核酸，例如DNA或RNA。可用於與本文所述之組成物及方法結合的示範性載體為質體、DNA載體、RNA載體、病毒體或其他合適的複製子(例如，病毒載體)。已開發出多種載體用於將編碼外源蛋白質之多核苷酸遞送至原核細胞或真核細胞中。此類表現載體之實例揭示於例如WO 1994/11026中，該專利之揭示內容以引用方式併入本文中。本文所述之表現載體含有多核苷酸序列以及例如用於表現蛋白質及/或將該等多核苷酸序列整合至哺乳動物細胞之基因體中之額外序列元件。可用於表現如本文所述之轉殖基因之某些載體包括含有引導基因轉錄之調控序列(例如啟動子及增強子區域)之載體。可用於表現轉殖基因之其他載體含有增強該等基因之轉譯速率或改善由基因轉錄產生之mRNA之穩定性或核輸出的多核苷酸序列。該等序列元件包括例如5’及3’非轉譯區、內部核糖體進入位點(IRES)及引導表現載體上所攜帶基因之有效轉錄的多腺苷酸化訊號位點。本文所述之表現載體亦可含有編碼用於選擇含有該載體之細胞之標誌物的多核苷酸。適合標誌物之實例包括編碼抗生素(諸如胺苄青黴素、氯黴素、康黴素或諾爾斯菌素(nourseothricin))抗性之基因。 序列表

本申請案含有序列表，其已以XML格式以電子方式提交且全文以引用方式併入本文中。該XML副本創建於2023年9月14日，名稱為「51037-075WO2_Sequence_Listing_9_14_23」，大小為27,146位元組。

本揭露提供了可用於治療神經肌肉病症，特定而言係X連鎖肌微管性肌病(XLMTM)之組成物及方法。根據本文所述之組成物及方法，可以向患有XLMTM之患者(例如人類患者)投與含有編碼肌微管蛋白1 (MTM1)之轉殖基因的病毒載體，諸如腺相關病毒(AAV)載體。AAV載體可為例如假型AAV載體，諸如含有包裝在來自AAV8之衣殼蛋白內之AAV2反向末端重複序列的AAV載體(AAV2/8)。

在一些實施例中，MTM1轉殖基因可操作連接至轉錄調控元件，諸如在肝細胞中驅動基因表現之啟動子。本揭露之該態樣至少部分地基於以下發現：在XLMTM患者之肝組織中表現MTM1轉殖基因可提高MTM1基因療法之安全性。在一些實施例中，啟動子含有LP1啟動子、載脂蛋白E (ApoE)啟動子及/或α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)啟動子(例如，本文所述之LP1啟動子、ApoE啟動子及/或A1AT啟動子)。

在一些實施例中，MTM1轉殖基因可操作地連接至組成型轉錄調控元件，諸如磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子、延伸因子-1α (EF1α)啟動子、甘油醛3-磷酸脫氫酶(GAPDH )啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子或雞-β-肌動蛋白(CBA)啟動子。在一些實施例中，病毒載體包括兩個MTM1轉殖基因：一個在肝組織中有活性之啟動子控制下，另一個在肌肉組織中有活性之啟動子控制下。本揭露之此等特徵至少部分地基於以下發現：在多個組織(例如肝組織及肌肉組織)中同時表現MTM1轉殖基因可提高MTM1基因療法之安全性。

本文亦描述了藉由向患者投與兩種組成物來治療有需要之患者之XLMTM的方法：(i) 非病毒組成物，其含有可操作連接至在肝組織中有活性(例如，選擇性地有活性)之啟動子的編碼MTM1之核酸，及(ii)病毒載體，其含有可操作連接至肌肉特異性啟動子的MTM1轉殖基因。可與本揭露之此態樣結合使用的非病毒組成物包括但不限於脂質體、囊泡、合成囊泡、外泌體、合成外泌體、樹枝狀聚合物及奈米粒子。在一些實施例中，奈米粒子係脂質奈米粒子。可與本揭露之此態樣結合使用的病毒載體包括但不限於比瑞崙基。

在一些實施例中，本揭露描述了藉由投與本文所述之一或多種組成物來減少診斷為患有XLMTM之人類患者之僵硬及/或關節攣縮的方法。

在一些實施例中，本揭露描述了藉由投與本文所述之一或多種組成物來增加診斷為患有XLMTM之人類患者之膈肌及/或呼吸肌進展的方法。

在一些實施例中，本揭露描述了藉由投與本文所述之一或多種組成物來預防診斷為患有XLMTM之人類患者之膽汁淤積或高膽紅素血症的方法。

以下部分提供了用於評估膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀的治療劑及參數之描述。以下部分亦描述了可與本揭露之組成物及方法結合使用之各種轉導劑。 X 連鎖肌微管性肌病

XLMTM係一種罕見的、危及生命的先天性肌病，由MTM1基因之突變引起，並且大多數患者的特徵在於出生時嚴重的肌肉無力及張力減退，導致重度呼吸功能不全，無法坐起、站立或行走，及早逝。

與XLMTM相關之肌病會損害運動技能，諸如坐立、站立及行走之發育。受影響的嬰兒亦可能由於肌肉無力而難以餵食。患有此疾患之個體通常沒有自己呼吸的肌肉力量，且必須依靠機械通氣來支持。一些受影響的個體僅需要定期進行機械通氣，諸如在睡眠期間，而其他人則需要持續進行機械通氣。患有XLMTM之患者亦可能出現控制眼球運動之肌肉無力(眼肌麻痺)、面部其他肌肉無力、及反射缺失(反射消失)。

在XLMTM中，肌肉無力通常會擾亂正常骨骼發育，並可能導致骨骼脆弱、脊柱彎曲異常(脊柱側彎)、以及髖部及膝部關節畸形(攣縮)。患有XLMTM之患者可能有大頭、窄而細長的臉、及高而拱形的嘴部(上顎)。患者亦可能患有肝病、反復耳部及呼吸道感染、或癲癇發作。

由於其重度呼吸困難，患有XLMTM之患者通常僅存活至兒童早期；然而，一些患有此疾患之患者已經活到成年。本揭露之組成物及方法提供了重要的醫學益處，亦即能夠藉由恢復功能性MTM1表現來延長該等患者之壽命。此外，本文所述之組成物及方法可用於改良患者治療後之生活質量(例如，減少僵硬及/或關節攣縮、或增加膈肌及/或呼吸肌進展)，因為本揭露提供了一系列可用於確定患者脫離機械通氣之資格之指南。 治療方法

在一些實施例中，在投與病毒載體時患者係新生兒(例如，0-4個月)、嬰兒(例如，0-5個月)、幼兒(例如，6-12個月)、1–⁠3歲之兒童、或3–⁠5歲之兒童。

在一些實施例中，在投與病毒載體時患者係新生兒(例如，0-4個月)。例如，在一些實施例中，患者係約0至約4個月(例如，0個月至約4個月、1個月至約4個月、2個月至約4個月、或3個月至4個月)的新生兒。在一些實施例中，患者係0個月。在一些實施例中，患者係1個月。在一些實施例中，患者係2個月。在一些實施例中，患者係3個月。在一些實施例中，患者係4個月。

在一些實施例中，在投與病毒載體時患者係新生兒(例如，小於約4個月)。例如，在一些實施例中，患者係小於約4個月的新生兒。在一些實施例中，患者係小於約4個月。在一些實施例中，患者係小於約3個月。在一些實施例中，患者係小於約2個月。在一些實施例中，患者係小於約1個月。

在一些實施例中，在投與病毒載體時患者係嬰兒(例如，0-5個月)。例如，在一些實施例中，患者係約0個月至約5個月(例如，0個月至約5個月、1個月至約5個月、2個月至約5個月、3個月至約5個月、或4個月至約5個月)的嬰兒。在一些實施例中，患者係0個月。在一些實施例中，患者係1個月。在一些實施例中，患者係2個月。在一些實施例中，患者係3個月。在一些實施例中，患者係4個月。在一些實施例中，患者係3個月。在一些實施例中，患者係5個月。

在一些實施例中，在投與病毒載體時患者係嬰兒(例如，小於約5個月)。例如，在一些實施例中，患者係小於約5個月的嬰兒。在一些實施例中，患者係小於約5個月。在一些實施例中，患者係小於約4個月。在一些實施例中，患者係小於約3個月。在一些實施例中，患者係小於約2個月。在一些實施例中，患者係小於約1個月。

在一些實施例中，在投與病毒載體時患者係幼兒(例如，6-12個月)。例如，在一些實施例中，患者係約6個月至約12個月(例如，6個月至約12個月、7個月至約12個月、8個月至約12個月、9個月至約12個月、10個月至約12個月、或11個月至約12個月)的嬰兒。在一些實施例中，患者係6個月。在一些實施例中，患者係7個月。在一些實施例中，患者係8個月。在一些實施例中，患者係9個月。在一些實施例中，患者係10個月。在一些實施例中，患者係11個月。在一些實施例中，患者係12個月。

在一些實施例中，在投與病毒載體時患者係幼兒(例如，小於約12歲)。例如，在一些實施例中，患者係小於約12個月之幼兒。在一些實施例中，患者係小於約12個月。在一些實施例中，患者係小於約11個月。在一些實施例中，患者係小於約10個月。在一些實施例中，患者係小於約9個月。在一些實施例中，患者係小於約8個月。在一些實施例中，患者係小於約7個月。在一些實施例中，患者係小於約6個月。在一些實施例中，患者係小於約5個月。在一些實施例中，患者係小於約4個月。在一些實施例中，患者係小於約3個月。在一些實施例中，患者係小於約2個月。在一些實施例中，患者係小於約1個月。

在一些實施例中，在投與病毒載體時患者係1-⁠3歲之兒童。例如，在一些實施例中，患者係約1歲至約3歲(例如，1歲至約3歲、或2歲至約3歲)之兒童。在一些實施例中，患者係1歲。在一些實施例中，患者係2歲。在一些實施例中，患者係3歲。

在一些實施例中，在投與病毒載體時患者係兒童(例如，小於約3歲)。例如，在一些實施例中，患者係小於約3歲之兒童。在一些實施例中，患者係小於約3歲。在一些實施例中，患者係小於約2歲。在一些實施例中，患者係小於約1歲。在一些實施例中，患者係小於約12個月。在一些實施例中，患者係小於約11個月。在一些實施例中，患者係小於約10個月。在一些實施例中，患者係小於約9個月。在一些實施例中，患者係小於約8個月。在一些實施例中，患者係小於約7個月。在一些實施例中，患者係小於約6個月。在一些實施例中，患者係小於約5個月。在一些實施例中，患者係小於約4個月。在一些實施例中，患者係小於約3個月。在一些實施例中，患者係小於約2個月。在一些實施例中，患者係小於約1個月。

在一些實施例中，在投與病毒載體時患者係3-5歲之兒童。例如，在一些實施例中，患者係約3歲至約5歲(例如，3歲至約5歲、或4歲至約5歲)之兒童。在一些實施例中，患者係3歲。在一些實施例中，患者係4歲。在一些實施例中，患者係5歲。

在一些實施例中，在投與病毒載體時患者係兒童(例如，小於約5歲)。例如，在一些實施例中，患者係小於約5歲之兒童。在一些實施例中，患者係小於約5歲。在一些實施例中，患者係小於約4歲。在一些實施例中，患者係小於約3歲。在一些實施例中，患者係小於約2歲。在一些實施例中，患者係小於約1歲。在一些實施例中，患者係小於約12個月。在一些實施例中，患者係小於約11個月。在一些實施例中，患者係小於約10個月。在一些實施例中，患者係小於約9個月。在一些實施例中，患者係小於約8個月。在一些實施例中，患者係小於約7個月。在一些實施例中，患者係小於約6個月。在一些實施例中，患者係小於約5個月。在一些實施例中，患者係小於約4個月。在一些實施例中，患者係小於約3個月。在一些實施例中，患者係小於約2個月。在一些實施例中，患者係小於約1個月。

在一些實施例中，患者在投與病毒載體時為約1個月至約5歲(例如，約1個月至約5歲、約2個月至約5歲、約3個月至約5歲、約4個月至約5歲、約5個月至約5歲、約6個月至約5歲、約1歲至約5歲、約2歲至約5歲、約3歲至約5歲、或約4歲至約5歲)。

在一些實施例中，患者出生時大於或等於35週胎齡(例如，35週胎齡、36週胎齡、37週胎齡、38週胎齡、39週胎齡、40週胎齡、41週胎齡、及 42週胎齡)，並且在投與病毒載體時在經調整的足月齡(例如，37週胎齡或更大)至約5歲之間。例如，若患者出生時為35週胎齡，則患者足月齡為14天。

在一些實施例中，患者出生時為35週胎齡，並且在投與病毒載體時在經調整的足月齡至約5歲之間(例如，14天至約5歲、15天至約5歲、16天至約5歲、17天至約5歲、18天至約5歲、19天至約5歲、20天至約5歲、25天至約5歲、一個月至約5歲、兩個月至約5歲、3個月至約5歲、4個月至約5歲、5個月至約5歲、6個月至約5歲、1歲至約5歲、2歲至約5歲、3歲至約5歲、及4歲至約5歲)。

在一些實施例中，患者出生時為36週胎齡，並且在投與病毒載體時在經調整的足月齡至約5歲之間(例如，7天至約5歲、8天至約5歲、9天至約5歲、10天至約5歲、11天至約5歲、12天至約5歲、13天至約5歲、14天至約5歲、15天至約5歲、16天至約5歲、17天至約5歲、18天至約5歲、19天至約5歲、20天至約5歲、25天至約5歲、一個月至約5歲、兩個月至約5歲、3個月至約5歲、4個月至約5歲、5個月至約5歲、6個月至約5歲、1歲至約5歲、2歲至約5歲、3歲至約5歲、及4歲至約5歲)。

在一些實施例中，患者出生時為37週胎齡，並且在投與病毒載體時在經調整的足月齡至約5歲之間(例如，1天至約5歲、2天至約5歲、3天至約5歲、4天至約5歲、5天至約5歲、6天至約5歲、7天至約5歲、8天至約5歲、9天至約5歲、10天至約5歲、11天至約5歲、12天至約5歲、13天至約5歲、14天至約5歲、15天至約5歲、16天至約5歲、17天至約5歲、18天至約5歲、19天至約5歲、20天至約5歲、25天至約5歲、一個月至約5歲、兩個月至約5歲、3個月至約5歲、4個月至約5歲、5個月至約5歲、6個月至約5歲、1歲至約5歲、2歲至約5歲、3歲至約5歲、及4歲至約5歲)。

在一些實施例中，患者係男性。

在一些實施例中，患者係女性。 膽汁淤積及高膽紅素血症

膽汁淤積係膽汁酸自肝臟流出減慢或阻塞的任一情況，而高膽紅素血症係指血液中膽紅素積聚且血清膽汁酸似乎保持正常的情況。相比之下，膽汁淤積症候群的特徵在於明顯的膽汁酸血症且膽紅素水準正常至輕微升高。

在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積之發展。在一些實施例中，監測患者高膽紅素血症之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀之發展。在一些實施例中，藉由評估自患者獲得的血液樣品之參數來監測患者之膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀之發展，其中發現該參數高於參考水準將患者確定為患有膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀。

在一些實施例中，如在血清膽汁酸測試及/或血液測試(例如，肝功能測試(LFT))中所量測的，當患者表現出一或多種參數(例如，總膽汁酸水準、γ-麩胺醯基轉移酶(GGT)水準、鹼性磷酸酶(ASP)水準、天冬胺酸胺基轉移酶(AST)水準及/或丙胺酸胺基轉移酶(ALT)水準)大於或小於經年齡調整的規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀。

在一些實施例中，如在血液測試(例如，膽紅素測試)中所量測的，當患者表現出膽紅素水準大於規範時，確定患者表現出高膽紅素血症或其一或多種症狀。

在一些實施例中，患者沒有膽汁淤積或高膽紅素血症之病史。在一些實施例中，患者沒有任一潛在肝病之病史。 用於將外源核酸遞送至靶細胞之載體 用於核酸遞送之病毒載體

重組病毒基因體提供可用於將感興趣基因(例如，編碼MTM1之轉殖基因)有效遞送至靶細胞(例如哺乳動物細胞，諸如人類細胞)之基因體中的豐富載體來源。重組病毒基因體係對於基因傳遞特別有用的載體，因為它們將感興趣基因遞送至靶細胞之細胞核。為了選擇病毒，可將此類基因體內所含之多核苷酸藉由一般型轉導或特殊型轉導摻入至靶細胞之基因體中。此等過程作為天然病毒複製週期之一部分出現，且無需添加蛋白質或試劑。用於遞送感興趣基因的重組病毒載體之實例包括AAV、腺病毒(例如Ad5、Ad26、Ad34、Ad35及Ad48)、小病毒(例如腺相關病毒)、冠狀病毒、負股RNA病毒(例如正黏液病毒，例如流行性感冒病毒)、棒狀病毒(例如狂犬病及水皰性口炎病毒)、副黏液病毒(例如麻疹及仙台病毒(Sendai))、正股RNA病毒(例如微小核醣核酸病毒及α病毒)、及雙股DNA病毒(包括腺病毒、疱疹病毒(例如1型及2型單純疱疹病毒、艾司坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus)、巨細胞病毒))、及痘病毒(例如牛痘、經修飾安卡拉牛痘(modified vaccinia Ankara，MVA)、雞痘及金絲雀痘)。可用於遞送編碼本發明之抗體輕鏈及重鏈或抗體片段之多核苷酸的其他病毒包括例如諾沃克病毒(Norwalk virus)、披衣病毒、黃病毒、呼腸孤病毒、乳多泡病毒、嗜肝DNA病毒及肝炎病毒。反轉錄病毒之實例包括：禽白血病肉瘤、哺乳動物C型病毒、B型病毒、D型病毒、HTLV-BLV組、慢病毒、泡沫病毒

(Coffin, J. M., Retroviridae: The viruses and their replication, In Fundamental Virology, 第三版, B. N. Fields等人編, Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996)。其他實例包括鼠類白血病病毒、鼠類肉瘤病毒、小鼠乳房腫瘤病毒、牛白血病病毒、貓白血病病毒、貓肉瘤病毒、禽白血病病毒、人類T細胞白血病病毒、狒狒內源病毒、長臂猿白血病病毒、梅森菲舍猴病毒(Mason Pfizer monkey virus)、猿猴免疫缺失病毒、猿猴肉瘤病毒、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)及慢病毒。載體之其他實例闡述於例如美國專利第5,801,030號中，該專利關於用於基因療法中之病毒載體之揭示內容係以引用方式併入本文中。 用於核酸遞送之 AAV 載體

在一些實施例中，將本文所述之組成物及方法之核酸併入重組AAV(rAAV)載體及/或病毒體中以促進其引入到細胞中。可用於本發明中之rAAV載體為重組核酸構築體，其包括(1)欲表現之轉殖基因(例如編碼MTM1蛋白之多核苷酸)及(2)促進異源基因之穩定性及表現之病毒核酸。病毒序列可包括將DNA順式複製及包裝(例如功能性ITR)至病毒體中所需之彼等AAV序列。在典型應用中，轉殖基因編碼MTM1，其可用於糾正患有神經肌肉病症(例如XLMTM)之患者之MTM1突變。該等rAAV載體亦可含有標誌物或報告基因。有用的rAAV載體具有一或多個整體或部分缺失之AAV野生型基因，但保留功能性側接ITR序列。AAV ITR可具有適用於特定應用之任何血清型(例如衍生自血清型2)。用於使用rAAV載體之方法描述於例如Tal等人, J. Biomed. Sci. 7:279-291 (2000) 及 Monahan 及 Samulski, Gene Delivery 7:24-30 (2000) ，該等文獻中之每一者關於用於基因遞送之AAV載體之揭示內容皆以引用方式併入本文中。

本文所描述之核酸及載體可摻入rAAV病毒體中以促進核酸或載體引入細胞中。AAV之衣殼蛋白構成外部，病毒體之非核酸部分係由AAV cap基因編碼。cap基因編碼三種病毒外殼蛋白VP1、VP2及VP3，其為病毒體組裝所必需。rAAV病毒體之構築已描述於例如US 5,173,414；US 5,139,941；US 5,863,541；US 5,869,305；US 6,057,152；及US 6,376,237；以及Rabinowitz等人, J. Virol. 76:791-801 (2002)及Bowles等人, J. Virol. 77:423-432 (2003)中，該等文獻中之每一者關於用於基因遞送之AAV載體之揭示內容皆以引用方式併入本文中。

可用於與本文所描述之組成物及方法結合使用的rAAV病毒體包括衍生自多種AAV血清型之病毒體，該等血清型包括AAV 1、2、3、4、5、6、7、8及9。為了靶向肌肉細胞，包括至少一種血清型1衣殼蛋白之rAAV病毒體可為特別有用的。包括至少一種血清型6衣殼蛋白之rAAV病毒體亦可為特別有用的，因為血清型6衣殼蛋白在結構上類似於血清型1衣殼蛋白，且因此預期亦會導致MTM1在肌肉細胞中高度表現。亦發現rAAV血清型9為肌肉細胞之有效傳感器。不同血清型之AAV載體及AAV蛋白之構築及使用描述於例如Chao等人, Mol. Ther. 2:619-623 (2000)；Davidson等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA97:3428-3432 (2000)；Xiao等人, J. Virol. 72:2224-2232 (1998)；Halbert等人, J. Virol. 74:1524-1532 (2000)；Halbert等人, J. Virol. 75:6615-6624 (2001)；以及Auricchio等人, Hum. Molec. Genet. 10:3075-3081 (2001)中，該等文獻中每一者關於用於基因遞送之AAV載體之揭示內容皆以引用方式併入本文中。

假型rAAV載體亦可用於與本文所描述之組成物及方法結合使用。假型載體包括經衍生自除給定血清型(例如AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8等)外之血清型之衣殼基因假型化之給定血清型(例如AAV9)之AAV載體。例如，代表性假型載體係編碼經衍生自AAV血清型2之衣殼基因假型化之治療性蛋白質之AAV8載體。涉及構築及使用假型rAAV病毒體之技術為此項技術中已知的且描述於例如Duan等人, J. Virol. 75:7662-7671(2001)；Halbert等人, J. Virol.74:1524-1532 (2000)；Zolotukhin等人, Methods, 28:158-167 (2002)；及Auricchio等人, Hum. Molec. Genet., 10:3075-3081 (2001) 中。

病毒體衣殼內具有突變之AAV病毒體可比未突變的衣殼病毒體更有效地感染特定細胞類型。例如，適宜AAV突變體可具有幫助AAV靶向特定細胞類型之配體插入突變。AAV衣殼突變體之構築及表徵(包括插入突變體、丙胺酸篩選突變體及抗原決定基標籤突變體)描述於Wu等人, J. Virol. 74:8635-45 (2000)中。可用於本發明之方法中之其他rAAV病毒體包括藉由病毒之分子育種以及藉由外顯子改組產生之彼等衣殼雜合體。例如，參見Soong等人, Nat. Genet., 25:436-439 (2000)以及Kolman及Stemmer, Nat. Biotechnol. 19:423-428 (2001)。 比瑞崙基

如本文所述，假型AAV載體包括編碼MTM1基因之核酸序列，其可操作連接至側翼為AAV2 ITR之結蛋白啟動子且包裝於來自AAV8之衣殼蛋白內(AAV2/8)，以及表 1中列出的其他遺傳組分，係指以比瑞崙基之國際專有名稱(INN)已知的化合物。

比瑞崙基係非複製型重組AAV8載體，其在肌肉特異性人類結蛋白啟動子的控制下表現非密碼子最佳化的人類 MTM1cDNA。 MTM1表現盒係藉由克隆與1.05 kb人類結蛋白增強子/啟動子區域下游之野生型人類 MTM1轉錄物(NCBI Ref. Seq NM_000252.3)之編碼部分(核苷酸43-1864)互補的合成DNA序列構建的。人類β-珠蛋白基因( HBB)之第二內含子及多腺苷酸化序列分別插入 MTM1合成cDNA之上游及下游以介導RNA加工。表現盒側翼為AAV血清型2 (AAV2)反向末端重複序列(ITR)。載體係藉由完整GMP過程中在生物反應器懸浮培養的HEK293細胞中之雙質體轉染於AAV8衣殼中產生的。

在一些實施例中，治療有需要之人類患者的病症(例如，XLMTM)或緩解有需要之人類患者的病症(例如，XLMTM)之一或多種症狀(例如，僵硬及/或關節攣縮或膈肌及/或呼吸肌進展之需要)之方法，包括在治療期內向患者投與治療有效量的比瑞崙基。

在一些實施例中，使人類患者脫離機械通氣之方法包括先前已投與治療有效量的比瑞崙基之患者。比瑞崙基之組分如下表 1所示：表 1. 比瑞崙基核酸序列 (SEQ ID NO: 1)

範圍(核苷酸，相對於SEQ ID NO: 1)	長度(核苷酸)	遺傳組分
3080-3198	119	AAV2 ITR
3199-3256	58	連接子序列
3257-4316	1,060	人類結蛋白啟動子
4317-4354	38	連接子序列
4355-4460	106	人類β-珠蛋白內含子
4373-4848	476	人類β-珠蛋白內含子
4458-4902	445	人類β-珠蛋白內含子
4927-6748	1,822	人類MTM1編碼序列
6749-6759	11	連接子序列
6760-7519	760	人類β-珠蛋白多腺苷酸化序列
7520-7551	32	連接子序列
7552	7,696	AAV2 ITR

如本文所述，比瑞崙基係指具有SEQ ID NO: 1之核酸序列之AAV載體，如下所示： 轉錄調控元件

可與本文所描述之組成物及方法結合使用的轉錄調控元件可含有彼此可操作連接的各個部分。例如，本文所描述之轉錄調控元件可含有ApoE及/或A1AT啟動子，諸如SEQ ID NO: 2所示的嵌合啟動子或其功能部分。可與本文所描述之組成物及方法結合使用的額外核酸調控元件包括相對於以上核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99,9%或更高序列一致性)的核酸分子。

另外或替代地，本文所描述之轉錄調控元件可含有LP1啟動子或其功能部分。例如，調控元件可含有如SEQ ID NO: 3所示之LP1啟動子或其功能部分。可與本文所描述之組成物及方法結合使用的額外核酸調控元件包括相對於以上核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99,9%或更高序列一致性)的核酸分子。

可與本文所描述之組成物及方法結合使用的轉錄調控元件包括刺激與肝臟特異性啟動子可操作連接的轉殖基因之表現的啟動子。此類啟動子之實例係ApoE/A1At及LP1啟動子或其變體(例如，與野生型啟動子基因座之核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.9%或更高序列一致性)的變體，並且在引入細胞中後能夠刺激與其可操作連接之轉殖基因的轉錄)或其功能部分。

可與本文所描述之組成物及方法結合使用的轉錄調控元件包括刺激與肌肉特異性啟動子可操作連接的轉殖基因之表現的啟動子。此類啟動子之實例係結蛋白或MCK啟動子或其變體(例如，與野生型啟動子基因座之核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.9%或更高序列一致性)的變體，並且在引入細胞中後能夠刺激與其可操作連接之轉殖基因的轉錄)或其功能部分。

可與本文所描述之組成物及方法結合使用的轉錄調控元件包括刺激與泛在啟動子可操作連接的轉殖基因之表現的啟動子。此類啟動子之實例係PGK、Ef1a及GAPDH或其變體(例如，與野生型啟動子基因座之核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.9%或更高序列一致性)的變體，並且在引入細胞中後能夠刺激與其可操作連接之轉殖基因的轉錄)或其功能部分。

本文所描述之轉錄調控元件可含有SV40增強子或其功能部分。例如，調控元件可含有如SEQ ID NO: 4所示之SV40啟動子或其功能部分。可與本文所描述之組成物及方法結合使用的額外核酸調控元件包括相對於以上核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99,9%或更高序列一致性)的核酸分子。

本文所描述之轉錄調控元件可含有β-珠蛋白增強子或其功能部分。例如，調控元件可含有如SEQ ID NO: 5所示之β-珠蛋白增強子或其功能部分。可與本文所描述之組成物及方法結合使用的額外核酸調控元件包括相對於以上核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99,9%或更高序列一致性)的核酸分子。

可與本文所描述之組成物及方法結合使用的轉錄調控元件包括增強轉殖基因之表現的增強子。此類啟動子之實例係PGK、Ef1a及GAPDH或其變體(例如，與野生型啟動子基因座之核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.9%或更高序列一致性)的變體，並且在引入細胞中後能夠刺激與其可操作連接之轉殖基因的轉錄)或其功能部分。

前述核酸調控元件匯總於下表 2中。表 2. 示範性核酸調控元件

SEQ ID NO.	轉錄調控元件之描述	核酸序列
2	ApoE/A1AT啟動子(775 nt)	CGTGATCTAGTAGGCTCAGAGGCACACAGGAGTTTCTGGGCTCACCCTGCCCCCTTCCAACCCCTCAGTTCCCATCCTCCAGCAGCTGTTTGTGTGCTGCCTCTGAAGTCCACACTGAACAAACTTCAGCCTACTCATGTCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGTACCCGGGGATCTTGCTACCAGTGGAACAGCCACTAAGGATTCTGCAGTGAGAGCAGAGGGCCAGCTAAGTGGTACTCTCCCAGAGACTGTCTGACTCACGCCACCCCCTCCACCTTGGACACAGGACGCTGTGGTTTCTGAGCCAGGTACAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGGACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAATGATCCCCCTGATCTGCGGCCTCGACGGTATCGATAAG
3	LP1啟動子(449 nt)	GTCCCCTAAAATGGGCAAACATTGCAAGCAGCAAACAGCAAACACACAGCCCTCCCTGCCTGCTGACCTTGGAGCTGGGGCAGAGGTCAGAGACCTCTCTGGGCCCATGCCACCTCCAACATCCACTCGACCCCTTGGAATTTCGGTGGAGAGGAGCAGAGGTTGTCCTGGCGTGGTTTAGGTAGTGTGAGAGGGGAATGACTCCTTTCGGTAAGTGCAGTGGAAGCTGTACACTGCCCAGGCAAAGCGTCCGGGCAGCGTAGGCGGGCGACTCAGATCCCAGCCAGTGcACTTAGCCCCTGTTTGCTCCTCCGATAACTGGGGTGACCTTGGTTAATATTCACCAGCAGCCTCCCCCGTTGCCCCTCTGGATCCACTGCTTAAATACGGACGAGGACAGGGCCCTGTCTCCTCAGCTTCAGGCACCACCACTGACCTGGGACAGTGAA
4	SV40增強子(66 nt)	AGGTAAATATAAAATTTTTAAGTGTATAATGTGTTAAACTACTGATTCTAATTGTTTCTCTCTTTT
5	β-珠蛋白增強子(476 nt)	AGGGTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGTCATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATACTTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATAAATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTATGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCATGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCA

可與本文所描述之組成物及方法結合使用的額外核酸調控元件包括相對於表 2中所示之核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99,9%或更高序列一致性)的核酸分子。 轉殖基因

本文所描述之假型AAV載體可包括編碼MTM1基因之核酸序列，其可操作連接至側翼為AAV2 ITR之啟動子且包裝於來自AAV8之衣殼蛋白內(AAV2/8)。在一些實施例中，編碼MTM1基因之核酸序列編碼人類MTM1基因。在一些實施例中，編碼MTM1基因之核酸序列編碼小鼠MTM1基因。在一些實施例中，MTM1基因係密碼子最佳化的。在一些實施例中，啟動子係肝臟特異性啟動子。在一些實施例中，啟動子係肌肉特異性啟動子。在一些實施例中，啟動子係泛在表現之啟動子。在一些實施例中，可使用同一AAV載體上的不同啟動子同時表現兩個MTM1基因。

可與本文所描述之組成物及方法結合使用的轉殖基因可含有人類MTM1轉殖基因，如SEQ ID NO: 6所示，或其功能部分。可與本文所描述之組成物及方法結合使用的額外轉殖基因包括相對於以上核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99,9%或更高序列一致性)的核酸分子。

可與本文所描述之組成物及方法結合使用的轉殖基因可含有小鼠MTM1轉殖基因，如SEQ ID NO: 7所示，或其功能部分。可與本文所描述之組成物及方法結合使用的額外轉殖基因包括相對於以上核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99,9%或更高序列一致性)的核酸分子。

在一些實施例中，治療有需要之人類患者的病症(例如，XLMTM)或緩解有需要之人類患者的病症(例如，XLMTM)之一或多種症狀(例如，僵硬及/或關節攣縮或膈肌及/或呼吸肌進展之需要)之方法，包括在治療期內向患者投與治療有效量的假型AAV載體，該假型AAV載體包括編碼MTM1基因之核酸序列，其可操作連接至側翼為AAV2 ITR之肝臟特異性或肌肉特異性啟動子且包裝於來自AAV8之衣殼蛋白內(AAV2/8)，以及表 2中列出之其他遺傳組分。

在一些實施例中，使人類患者擺脫機械通氣之方法包括先前已投與治療有效量的假型AAV載體之患者，該假型AAV載體包括編碼MTM1基因之核酸序列，其可操作連接至側翼為AAV2 ITR之肝臟特異性或肌肉特異性啟動子且包裝於來自AAV8之衣殼蛋白內(AAV2/8)，以及表 2中列出之其他遺傳組分。

前述轉殖基因匯總於下表 3中。表 3. 示範性轉殖基因

SEQ ID NO.	轉殖基因之描述	核酸序列
6	人類MTM1編碼序列(1812 nt)	ATGGCTTCTGCATCAACTTCTAAATATAATTCACACTCCTTGGAGAATGAGTCTATTAAGAGGACGTCTCGAGATGGAGTCAATCGAGATCTCACTGAGGCTGTTCCTCGACTTCCAGGAGAAACACTAATCACTGACAAAGAAGTTATTTACATATGTCCTTTCAATGGCCCCATTAAGGGAAGAGTTTACATCACAAATTATCGTCTTTATTTAAGAAGTTTGGAAACGGATTCTTCTCTAATACTTGATGTTCCTCTGGGTGTGATCTCGAGAATTGAAAAAATGGGAGGCGCGACAAGTAGAGGAGAAAATTCCTATGGTCTAGATATTACTTGTAAAGACATGAGAAACCTGAGGTTCGCTTTGAAACAGGAAGGCCACAGCAGAAGAGATATGTTTGAGATCCTCACGAGATACGCGTTTCCCCTGGCTCACAGTCTGCCATTATTTGCATTTTTAAATGAAGAAAAGTTTAACGTGGATGGATGGACAGTTTACAATCCAGTGGAAGAATACAGGAGGCAGGGCTTGCCCAATCACCATTGGAGAATAACTTTTATTAATAAGTGCTATGAGCTCTGTGACACTTACCCTGCTCTTTTGGTGGTTCCGTATCGTGCCTCAGATGATGACCTCCGGAGAGTTGCAACTTTTAGGTCCCGAAATCGAATTCCAGTGCTGTCATGGATTCATCCAGAAAATAAGACGGTCATTGTGCGTTGCAGTCAGCCTCTTGTCGGTATGAGTGGGAAACGAAATAAAGATGATGAGAAATATCTCGATGTTATCAGGGAGACTAATAAACAAATTTCTAAACTCACCATTTATGATGCAAGACCCAGCGTAAATGCAGTGGCCAACAAGGCAACAGGAGGAGGATATGAAAGTGATGATGCATATCATAACGCCGAACTTTTCTTCTTAGACATTCATAATATTCATGTTATGCGGGAATCTTTAAAAAAAGTGAAGGACATTGTTTATCCTAATGTAGAAGAATCTCATTGGTTGTCCAGTTTGGAGTCTACTCATTGGTTAGAACATATCAAGCTCGTTTTGACAGGAGCCATTCAAGTAGCAGACAAAGTTTCTTCAGGGAAGAGTTCAGTGCTTGTGCATTGCAGTGACGGATGGGACAGGACTGCTCAGCTGACATCCTTGGCCATGCTGATGTTGGATAGCTTCTATAGGAGCATTGAAGGGTTCGAAATACTGGTACAAAAAGAATGGATAAGTTTTGGACATAAATTTGCATCTCGAATAGGTCATGGTGATAAAAACCACACCGATGCTGACCGTTCTCCTATTTTTCTCCAGTTTATTGATTGTGTGTGGCAAATGTCAAAACAGTTCCCTACAGCTTTTGAATTCAATGAACAATTTTTGATTATAATTTTGGATCATCTGTATAGTTGCCGATTTGGTACTTTCTTATTCAACTGTGAATCTGCTCGAGAAAGACAGAAGGTTACAGAAAGGACTGTTTCTTTATGGTCACTGATAAACAGTAATAAAGAAAAATTCAAAAACCCCTTCTATACTAAAGAAATCAATCGAGTTTTATATCCAGTTGCCAGTATGCGTCACTTGGAACTCTGGGTGAATTACTACATTAGATGGAACCCCAGGATCAAGCAACAACAGCCGAATCCAGTGGAGCAGCGTTACATGGAGCTCTTAGCCTTACGCGACGAATACATAAAGCGGCTTGAGGAACTGCAGCTCGCCAACTCTGCCAAGCTTTCTGATCCCCCAACTTCACCTTCCAGTCCTTCGCAAATGATGCCCCATGTGCAAACTCACTTCTGA
7	小鼠MTM1編碼序列(1812 nt)	ATGGCTTCTGCATCAGCATCTAAGTATAATTCACACTCCTTGGAGAATGAATCCATTAAGAAAGTGTCTCAAGATGGAGTCAGTCAGGATGTGAGTGAGACTGTCCCTCGGCTCCCAGGGGAGTTACTAATTACTGAAAAAGAAGTTATTTACATATGTCCTTTCAATGGCCCCATTAAGGGAAGAGTTTACATCACAAATTATCGTCTTTATTTAAGAAGTTTGGAAACGGATTCTGCTCTAATACTTGATGTTCCTCTGGGTGTGATATCAAGAATTGAAAAAATGGGAGGCGCGACAAGTAGAGGAGAAAATTCCTATGGTCTAGATATTACTTGTAAAGATTTGAGAAACCTGAGGTTTGCATTGAAGCAAGAAGGCCACAGCAGAAGAGATATGTTTGAGATCCTTGTAAAACATGCCTTTCCTCTGGCACACAATCTGCCATTATTTGCATTTGTAAATGAAGAGAAGTTTAACGTGGATGGGTGGACTGTTTATAATCCAGTTGAAGAATATAGAAGGCAGGGCCTGCCCAATCACCATTGGAGGATAAGTTTTATTAACAAGTGCTATGAGCTCTGTGAGACATACCCTGCTCTTTTGGTGGTTCCCTATCGGACCTCAGATGATGATCTTAGGAGGATCGCAACGTTTAGATCCCGAAATCGGCTTCCTGTACTGTCGTGGATTCACCCAGAAAACAAAATGGTCATTATGCGCTGCAGTCAGCCTCTTGTCGGTATGAGTGGTAAAAGAAATAAAGATGACGAGAAATACCTGGATGTGATCAGGGAAACTAACAAACAAACTTCTAAGCTCATGATTTATGATGCACGACCCAGTGTAAATGCAGTCGCCAACAAGGCAACAGGAGGAGGATATGAAAGTGATGACGCATATCAAAACTCAGAACTTTCCTTCTTAGACATTCATAATATTCATGTTATGCGAGAATCTTTAAAAAAAGTGAAAGATATTGTTTATCCCAACATAGAAGAATCTCATTGGTTGTCCAGTTTGGAGTCTACTCATTGGTTAGAACATATCAAGCTTGTTCTGACCGGTGCCATTCAAGTGGCAGACCAAGTGTCTTCAGGAAAGAGCTCGGTACTTGTGCACTGCAGTGACGGATGGGACAGGACCGCTCAGCTGACATCCTTGGCCATGCTGATGTTGGACAGCTTCTACAGAACTATTGAAGGCTTTGAGATATTGGTACAGAAAGAGTGGATAAGTTTTGGCCATAAATTTGCATCTAGAATAGGTCATGGTGATAAAAACCATGCTGATGCTGATCGATCTCCTATTTTTCTTCAGTTTATTGACTGTGTGTGGCAGATGTCGAAACAGTTCCCCACAGCTTTTGAGTTCAATGAAGGCTTTTTGATTACCGTTTTGGATCATCTGTATAGCTGTCGATTTGGTACTTTCTTATTCAACTGTGACTCGGCTCGAGAAAGACAGAAACTTACAGAAAGAACAGTTTCTCTATGGTCGCTAATTAACAGCAATAAAGACAAATTCAAAAACCCCTTCTATACAAAAGAAATCAATCGGGTTTTGTATCCAGTTGCCAGCATGCGTCACTTGGAACTGTGGGTGAATTATTACATCCGATGGAATCCCAGGGTCAAGCAGCAACAGCCCAACCCAGTGGAGCAGCGTTACATGGAGCTTTTGGCCTTGCGTGACGATTATATAAAGAGGCTCGAGGAATTGCAGCTGGCCAACTCCGCCAAGCTTGCTGATGCCCCCGCTTCGACTTCCAGTTCGTCACAGATGGTGCCCCATGTGCAGACGCACTTCTGA

可與本文所描述之組成物及方法結合使用的額外轉殖基因包括相對於表 3中列出之核酸序列具有至少85%序列一致性(例如，86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99,9%或更高序列一致性)的核酸分子。 用於將外源核酸遞送至靶細胞之方法 轉染技術

可用於將轉殖基因(例如本文所述之MTM1轉殖基因)引入到靶細胞(例如哺乳動物細胞)中之技術為此項技術中所熟知。例如，可使用電穿孔來藉由將靜電勢施加至感興趣細胞使哺乳動物細胞(例如人類靶細胞)透化。以此方式經受外部電場之哺乳動物細胞(例如人類細胞)隨後易於攝取外源核酸(例如，能夠在例如神經元、神經膠細胞或非神經細胞諸如結腸及腎細胞中表現之核酸)。哺乳動物細胞之電穿孔詳細描述於例如Chu等人，Nucleic Acids Research 15:1311 (1987)中，該文獻之揭示內容係以引用方式併入本文中。類似技術NUCLEOFECTION™利用施加之電場來刺激外源多核苷酸攝取至真核細胞之核中。NUCLEOFECTION™及可用於實施此技術之方案詳細描述於例如Distler等人，Experimental Dermatology 14:315 (2005)以及US 2010/0317114中，該等文獻各自之揭示內容係以引用方式併入本文中。

可用於轉染靶細胞之額外技術係擠壓-穿孔方法。此技術誘導細胞之快速機械變形以刺激經由回應於所施加應力形成之膜孔攝取外源DNA。此技術之優點在於，載體並非係將核酸遞送至細胞(諸如人類靶細胞)中所必需的。擠壓-穿孔詳細描述於例如， Sharei 等人 , J. Vis. Exp. 81:e50980 (2013)中，其揭示內容係以引用方式併入本文中。

脂轉染代表可用於轉染靶細胞之另一技術。此方法涉及將核酸加載至脂質體中，該脂質體通常呈現朝向脂質體外部之陽離子官能基，諸如四級或質子化胺。此因細胞膜之陰離子性質而促進脂質體與細胞之間的靜電相互作用，最終例如藉由引導脂質體與細胞膜融合或藉由複合物之胞吞作用攝取外源核酸。脂轉染詳細描述於例如US 7,442,386中，該文獻之揭示內容以引用之方式併入本文。利用與細胞膜之離子相互作用來引起外來核酸攝取之類似技術係使細胞與陽離子聚合物-核酸複合物接觸。與多核苷酸締合以賦予有利於與細胞膜相互作用之正電荷之示範性陽離子分子係活化樹枝狀聚合物(描述於例如Dennig, Top Curr Chem.228:227 (2003)中，該文獻之揭示內容係以引用方式併入本文中)、聚乙亞胺、及DEAE-聚葡萄糖，其作為轉染劑之使用詳細描述於例如Gulick等人, Curr Protoc Mol Biol. 40:1:9.2:9.2.1 (1997)中，該文獻之揭示內容係以引用方式併入本文中。

另一可用於誘導靶細胞對外源核酸之攝取之工具係雷射轉染，亦稱為光學轉染，其係涉及使細胞曝露於特定波長之電磁輻射以溫和地透化細胞並允許多核苷酸透過細胞膜之技術。此技術之生物活性類似於電穿孔，且在一些情形下發現優於電穿孔。

穿刺轉染係可用以將遺傳物質遞送至靶細胞之另一技術。其依賴於奈米材料(諸如碳奈米纖維、碳奈米管及奈米線)之使用。垂直於基板之表面來合成針樣奈米結構。將含有意欲細胞內遞送之基因之DNA附接至奈米結構表面。隨後將具有此等針之陣列之晶片按壓在細胞或組織上。由奈米結構穿刺之細胞可表現所遞送之基因。此技術之實例描述於Shalek等人, PNAS107:25 1870 (2010)中，該文獻之揭示內容以引用之方式併入本文。

亦可使用MAGNETOFECTION™將核酸遞送至靶細胞。MAGNETOFECTION™之原理係使核酸與陽離子磁性奈米粒子締合。磁性奈米粒子係由完全生物可降解之氧化鐵製成，且塗覆有根據應用變化之特定陽離子專有分子。其與基因載體(DNA、siRNA、病毒載體等)之締合係藉由鹽誘導之膠質聚集及靜電相互作用來達成。隨後藉由影響磁鐵所產生之外部磁場使磁性顆粒集中於靶細胞上。此技術詳細描述於Scherer等人, Gene Ther.9:102 (2002)中，該文獻之揭示內容以引用之方式併入本文。磁珠係可用於以溫和且有效之方式轉染靶細胞之另一工具，此係因為此方法利用所施加之磁場來引導核酸之攝取。此技術詳細描述於例如US2010/0227406中，該文獻之揭示內容以引用之方式併入本文。

可用於誘導靶細胞對外源核酸之攝取的另一工具係聲致穿孔，其為涉及使用聲音(通常超音波頻率)來修飾細胞質膜之滲透性以滲透細胞且允許多核苷酸透過細胞膜之技術。此技術詳細描述於例如Rhodes等人, Methods Cell Biol.82:309 (2007)，該文獻之揭示內容以引用之方式併入本文。

微泡表示可用以根據本文所描述之方法修飾靶細胞之基因體的另一潛在媒劑。例如，已藉由糖蛋白VSV-G與例如基因體修飾蛋白(諸如核酸酶)之共過表現誘導之微泡可用以將蛋白質有效遞送至細胞中，隨後催化內源多核苷酸序列之位點特異性切割以使細胞之基因體準備用於共價併入目標多核苷酸(諸如基因或調控序列)。此類囊泡(亦稱為奈米囊泡(Gesicle))於真核細胞之遺傳修飾之用途詳細描述於例如Quinn等人, Genetic Modification of Target Cells by Direct Delivery of Active Protein [摘要]中、描述於Methylation changes in early embryonic genes in cancer [摘要]中、描述於Proceedings of the 18th Annual Meeting of the American Society of Gene and Cell Therapy; 2015年5月13日, 摘要編號122中。 藉由基因編輯技術摻入靶基因

除了上述之外，已開發了多種工具，可用於將感興趣基因摻入靶細胞中，諸如人類細胞中。一種可用於將編碼靶基因之多核苷酸摻入靶細胞中之方法涉及使用轉位子。轉位子係編碼轉位酶之多核苷酸，並含有側翼為5'及3'切除位點之多核苷酸序列或感興趣基因。一旦轉位子經遞送到細胞中，轉位酶基因之表現就會開始並產生活性酶，該等活性酶將感興趣基因自轉位子上切割下來。該活性由轉位酶對轉位子切除位點之位點特異性識別介導。在一些情況下，該等切除位點可為末端重複序列或反向末端重複序列。一旦自轉位子中切除，感興趣基因可藉由轉位酶催化切割存在於細胞核基因體中之類似切除位點而整合到哺乳動物細胞之基因體中。這允許感興趣基因在互補切除位點插入到切割的核DNA中，隨後將感興趣基因與哺乳動物細胞基因體之DNA連接的磷酸二酯鍵之共價連接完成了摻入過程。在某些情況下，轉位子可為反轉錄轉位子，從而使得編碼靶基因之基因首先經轉錄為RNA產物，然後在摻入哺乳動物細胞基因體中之前反轉錄為DNA。示範性轉位子系統係piggybac轉位子(詳細描述於例如WO 2010/085699中)及睡美人轉位子(詳細描述於例如US 2005/0112764中)，該等專利各自之關於用於將基因遞送至感興趣細胞中之轉位子之揭露內容係以引用方式併入本文中。

另一將靶基因整合到靶細胞基因體中之工具係規律間隔短迴文重複序列簇(CRISPR)/Cas系統，該系統最初係作為細菌及古生菌抵抗病毒感染之適應性防禦機制。CRISPR/Cas系統包括質體DNA內的回文重複序列及相關Cas9核酸酶。該DNA與蛋白質之集合藉由首先將外源DNA摻入CRISPR基因座中來指導靶序列之位點特異性DNA切割。含有此等外源序列之多核苷酸及CRISPR基因座之重複序列-間隔元件繼而在宿主細胞中轉錄以產生指導RNA，該指導RNA隨後可與靶序列黏接並將Cas9核酸酶定位至該位點。以該方式，可在外源多核苷酸中產生高度位點特異性cas9介導的DNA切割，因為使cas9靠近靶DNA分子的相互作用受RNA:DNA雜交控制。因此，人們可設計CRISPR/Cas系統來切割任一感興趣靶DNA分子。該技術已用於編輯真核基因體(Hwang等人, Nature Biotechnology 31:227 (2013))，並可用作位點特異性編輯靶細胞基因體之高效手段，以在摻入編碼靶基因之基因前切割DNA。使用CRISPR/Cas調節基因表現已描述於例如美國專利第8,697,359號中，該專利關於使用CRISPR/Cas系統用於基因編輯之揭示內容係以引用方式併入本文中。在將感興趣基因摻入靶細胞前進行位點特異性切割基因體DNA之替代方法包括使用鋅指核酸酶(ZFN)及轉錄激活因子樣效應核酸酶(TALEN)。與CRISPR/Cas系統不同，此等酶不含用於定位至特定靶序列之指導多核苷酸。相反，靶標特異性由此等酶內的DNA結合域控制。ZFN及TALEN於基因體編輯應用中之用途描述於例如Urnov等人, Nat. Rev. Genet.11:636 (2010)；以及Joung等人, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 14:49 (2013)中，該等文獻各自之關於用於基因體編輯之組成物及方法之揭示內容係以引用方式併入本文中。

可用於將編碼靶基因之多核苷酸摻入靶細胞基因體中之其他基因體編輯技術包括使用ARCUSTM大範圍核酸酶，其可經合理設計以便位點特異性切割基因體DNA。鑒於已為此類酶建立的確定的結構-活性關係，使用此等酶將編碼靶基因之基因摻入哺乳動物細胞之基因體中係有利的。單鏈大範圍核酸酶可在某些胺基酸位置進行修飾，以產生在期望位置選擇性切割DNA之核酸酶，從而使靶基因能夠位點特異性摻入靶細胞之核DNA中。此等單鏈核酸酶已廣泛描述於例如美國專利第8,021,867號及US 8,445,251中，該等專利各自之關於用於基因體編輯的組成物及方法之揭示內容係以引用方式併入本文中。 醫藥組成物及投與途徑

本文所述之基因治療劑可含有轉殖基因，諸如編碼MTM1之轉殖基因，且可摻入媒劑中以投與於患者，諸如患有神經肌肉病症(例如，XLMTM)之人類患者。含有含可操作連接至治療性轉殖基因之本文所述之轉錄調控元件(例如，ApoE/A1AT 啟動子)之載體(諸如病毒載體)之醫藥組成物可使用此項技術中已知之方法來製備。例如，此類組成物可使用例如生理上可接受之載劑、賦形劑、或穩定劑(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版, Osol, A. 編輯 (1980)；以引用方式併入本文中)且以期望形式(例如，以凍乾調配物或水溶液之形式)來製備。

含有可操作連接至治療性轉殖基因之轉錄調控元件之病毒載體，諸如AAV載體及本文所述之其他載體，可藉由多種投與途徑向患者(例如，人類患者)投與。投與途徑可例如隨疾病之發病及嚴重程度而變化，並且可包括例如皮內、經皮、腸胃外、靜脈內、肌內、肝內、鼻內、皮下、經皮、氣管內、腹膜內、動脈內、血管內、吸入、灌注、灌洗、及口服投與。血管內投與包括遞送至患者之脈管系統中。在一些實施例中，投與係進入被認為係靜脈之血管(靜脈內)，並且在一些投與中，投與係進入被認為係動脈之血管(動脈內)。靜脈包括但不限於頸內靜脈、外周靜脈、冠狀靜脈、肝靜脈、門靜脈、大隱靜脈、肺靜脈、上腔靜脈、下腔靜脈、胃靜脈、脾靜脈、腸系膜下靜脈、腸系膜上靜脈、頭靜脈及/或股靜脈。動脈包括但不限於冠狀動脈、肺動脈、肱動脈、頸內動脈、主動脈弓、股動脈、外周動脈及/或睫狀動脈。預期可藉由小動脈或毛細血管進行遞送，或遞送至小動脈或毛細血管。

本文所述之核酸及病毒載體之混合物可於水與一或多種賦形劑、載劑或稀釋劑之適合混合物中製備。分散液亦可於甘油、液體聚乙二醇及其混合物中及油中製備。在普通儲存及使用條件下，此等製劑可含有防止微生物生長之防腐劑。適於可注射用途之醫藥形式包括無菌水溶液或分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末(闡述於US 5,466,468中，其揭示內容係以引用方式併入本文中)。在任一情形下，調配物可為無菌的且可為容易注射之流體。調配物在製造及儲存條件下可為穩定的且可防止微生物(諸如細菌及真菌)之污染作用。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、及液體聚乙二醇、及諸如此類)、其適宜混合物及/或植物油之溶劑或分散介質。可例如藉由使用包衣(諸如卵磷脂)、在分散液之情形下藉由維持所需粒徑及藉由使用表面活性劑來維持適當流動性。可藉由多種抗細菌及抗真菌劑(例如對羥苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞、及諸如此類)來防止微生物之作用。在許多情形下，較佳應包括等滲劑，例如糖或氯化鈉。可注射組成物之延長吸收可藉由在組成物中使用延遲吸收劑(例如單硬脂酸鋁及明膠)來達成。

例如，若需要，可適當地緩衝含有本文所述之醫藥組成物之溶液，並且首先用足夠的鹽水或葡萄糖使液體稀釋劑等滲。此等特定水溶液尤其適用於靜脈內、肌內、肝內、皮下及腹膜內投與。鑒於此，根據本揭露，熟習此項技術者將知道可採用無菌水性介質。例如，可將一劑量溶解於1 mL NaCl等滲溶液中且添加至1000 mL皮下灌注液中或在所提出之輸注位點處注射。端視所治療受試者之疾患，劑量必然將發生一些變化。負責投與之人在任一情形下將決定個別受試者之適宜劑量。此外，對於人類投與，製劑應符合FDA生物製品標準辦公室(FDA Office of Biologics Standards)所要求之無菌性、熱原性、一般安全性及純度標準。套組

本文所述之組成物可於用於治療神經肌肉病症(例如，XLMTM)之套組中提供。在一些實施例中，套組可包括一或多種如本文所述之病毒載體。套組可包括指導套組之使用者(諸如熟悉此項技術之醫師)實施本文所述方法中任一者之包裝插頁。該套組可視情況地包括注射器或用於投與組成物之其他裝置。在一些實施例中，套組可包括一或多種額外治療劑。

該套組可包括指導套組使用者(例如熟習此項技術之醫師)實施任一種本文所述之方法的包裝插頁。該套組可視情況地包括注射器或用於投與組成物之其他裝置。在一些實施例中，套組可包括一或多種額外的治療劑。 給藥方案 涉及 AAV-MTM1 載體之給藥方案

使用本揭露之組成物及方法，可向患有神經肌肉病症(例如，XLMTM)之患者投與含有編碼MTM1之轉殖基因之AVV載體，其量為約1.3 x 10 ¹⁴vg/kg。以該量向患者投與載體可實現增加患者中MTM1表現之有益效果，例如增加至野生型水準之50%或200%以內，而不會引起毒副作用。

在一些實施例中，AVV載體以小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg之量(例如，小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2.8 x 10 ¹⁴vg/kg、2.7 x 10 ¹⁴vg/kg、2.6 x 10 ¹⁴vg/kg、2.5 x 10 ¹⁴vg/kg、2.4 x 10 ¹⁴vg/kg、2.3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg、或更小之量)向患者投與。例如，AAV載體可以約3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2.8 x 10 ¹⁴vg/kg、2.7 x 10 ¹⁴vg/kg、2.6 x 10 ¹⁴vg/kg、2.5 x 10 ¹⁴vg/kg、2.4 x 10 ¹⁴vg/kg、2.3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AVV載體以小於約2.5 x 10 ¹⁴vg/kg之量(例如，小於約2.5 x 10 ¹⁴vg/kg、2.4 x 10 ¹⁴vg/kg、2.3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg、或更小之量)向患者投與。例如，AAV載體可以約2.5 x 10 ¹⁴vg/kg、2.4 x 10 ¹⁴vg/kg、2.3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AVV載體以小於約2 x 10 ¹⁴vg/kg之量(例如，小於約2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg、或更小之量)向患者投與。例如，AAV載體可以約2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AVV載體以小於約1.5 x 10 ¹⁴vg/kg之量(例如，小於約1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg、或更小之量)向患者投與。例如，AAV載體可以約1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AVV載體以小於約1 x 10 ¹⁴vg/kg之量(例如，小於約1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg、或更小之量)向患者投與。例如，AAV載體可以約1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AAV載體以約3 x 10 ¹³vg/kg至約2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量(例如，約3 x 10 ¹³vg/kg至約2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量)向患者投與。例如，AVV載體可以約3 x 10 ¹³vg/kg、3.1 x 10 ¹³vg/kg、3.2 x 10 ¹³vg/kg、3.3 x 10 ¹³vg/kg、3.4 x 10 ¹³vg/kg、3.5 x 10 ¹³vg/kg、3.6 x 10 ¹³vg/kg、3.7 x 10 ¹³vg/kg、3.8 x 10 ¹³vg/kg、3.9 x 10 ¹³vg/kg、4 x 10 ¹³vg/kg、4.1 x 10 ¹³vg/kg、4.2 x 10 ¹³vg/kg、4.3 x 10 ¹³vg/kg、4.4 x 10 ¹³vg/kg、4.5 x 10 ¹³vg/kg、4.6 x 10 ¹³vg/kg、4.7 x 10 ¹³vg/kg、4.8 x 10 ¹³vg/kg、4.9 x 10 ¹³vg/kg、5 x 10 ¹³vg/kg、5.1 x 10 ¹³vg/kg、5.2 x 10 ¹³vg /kg、5.3 x 10 ¹³vg/kg、5.4 x 10 ¹³vg/kg、5.5 x 10 ¹³vg/kg、5.6 x 10 ¹³vg/kg、5.7 x 10 ¹³vg/kg、5.8 x 10 ¹³vg/kg、5.9 x 10 ¹³vg/kg、6 x 10 ¹³vg/kg、6.1 x 10 ¹³vg/kg、6.2 x 10 ¹³vg/kg、6.3 x 10 ¹³vg/kg、6.4 x 10 ¹³vg/kg、6.5 x 10 ¹³vg/kg、6.6 x 10 ¹³vg/kg、6.7 x 10 ¹³vg/kg、6.8 x 10 ¹³vg/kg、6.9 x 10 ¹³vg/kg、7 x 10 ¹³vg/kg、7.1 x 10 ¹³vg/kg、7.2 x 10 ¹³vg/kg、7.3 x 10 ¹³vg/kg、7.4 x 10 ¹³vg/kg、7.5 x 10 ¹³vg/kg、7.6 x 10 ¹³vg/kg、7.7 x 10 ¹³vg /kg、7.8 x 10 ¹³vg/kg、7.9 x 10 ¹³vg/kg、8 x 10 ¹³vg/kg、8.1 x 10 ¹³vg/kg、8.2 x 10 ¹³vg/kg、8.3 x 10 ¹³vg/kg、8.4 x 10 ¹³vg /kg、8.5 x 10 ¹³vg/kg、8.6 x 10 ¹³vg/kg、8.7 x 10 ¹³vg/kg、8.8 x 10 ¹³vg/kg、8.9 x 10 ¹³vg/kg、9 x 10 ¹³vg/kg、9.1 x 10 ¹³vg/kg、9.2 x 10 ¹³vg/kg、9.3 x 10 ¹³vg/kg、9.4 x 10 ¹³vg/kg、9.5 x 10 ¹³vg/kg、9.6 x 10 ¹³vg/kg、9.7 x 10 ¹³vg/kg、9.8 x 10 ¹³vg/kg、9.9 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg /kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、或2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AVV載體以約4 x 10 ¹³vg/kg至約2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量，諸如以約4 x 10 ¹³vg/kg、4.1 x 10 ¹³vg/kg、4.2 x 10 ¹³vg/kg、4.3 x 10 ¹³vg/kg、4.4 x 10 ¹³vg/kg、4.5 x 10 ¹³vg/kg、4.6 x 10 ¹³vg/kg、4.7 x 10 ¹³vg/kg、4.8 x 10 ¹³vg/kg、4.9 x 10 ¹³vg/kg、5 x 10 ¹³vg/kg、5.1 x 10 ¹³vg/kg、5.2 x 10 ¹³vg/kg、5.3 x 10 ¹³vg/kg、5.4 x 10 ¹³vg/kg、5.5 x 10 ¹³vg/kg、5.6 x 10 ¹³vg/kg、5.7 x 10 ¹³vg/kg、5.8 x 10 ¹³vg/kg、5.9 x 10 ¹³vg/kg、6 x 10 ¹³vg/kg、6.1 x 10 ¹³vg/kg、6.2 x 10 ¹³vg/kg、6.3 x 10 ¹³vg/kg、6.4 x 10 ¹³vg/kg、6.5 x 10 ¹³vg/kg、6.6 x 10 ¹³vg/kg、6.7 x 10 ¹³vg/kg、6.8 x 10 ¹³vg/kg、6.9 x 10 ¹³vg/kg、7 x 10 ¹³vg/kg、7.1 x 10 ¹³vg/kg、7.2 x 10 ¹³vg/kg、7.3 x 10 ¹³vg/kg、7.4 x 10 ¹³vg/kg、7.5 x 10 ¹³vg/kg、7.6 x 10 ¹³vg/kg、7.7 x 10 ¹³vg/kg、7.8 x 10 ¹³vg/kg、7.9 x 10 ¹³vg/kg、8 x 10 ¹³vg/kg、8.1 x 10 ¹³vg/kg、8.2 x 10 ¹³vg/kg、8.3 x 10 ¹³vg/kg、8.4 x 10 ¹³vg/kg、8.5 x 10 ¹³vg/kg、8.6 x 10 ¹³vg/kg、8.7 x 10 ¹³vg/kg、8.8 x 10 ¹³vg/kg、8.9 x 10 ¹³vg/kg、9 x 10 ¹³vg/kg、9.1 x 10 ¹³vg/kg、9.2 x 10 ¹³vg/kg、9.3 x 10 ¹³vg/kg、9.4 x 10 ¹³vg/kg、9.5 x 10 ¹³vg/kg、9.6 x 10 ¹³vg/kg、9.7 x 10 ¹³vg/kg、9.8 x 10 ¹³vg/kg、9.9 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、或2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AVV載體以約5 x 10 ¹³vg/kg至約2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量，諸如以約5 x 10 ¹³vg/kg、5.1 x 10 ¹³vg/kg、5.2 x 10 ¹³vg/kg、5.3 x 10 ¹³vg/kg、5.4 x 10 ¹³vg/kg、5.5 x 10 ¹³vg/kg、5.6 x 10 ¹³vg/kg、5.7 x 10 ¹³vg/kg、5.8 x 10 ¹³vg/kg、5.9 x 10 ¹³vg/kg、6 x 10 ¹³vg/kg、6.1 x 10 ¹³vg/kg、6.2 x 10 ¹³vg/kg、6.3 x 10 ¹³vg/kg、6.4 x 10 ¹³vg/kg、6.5 x 10 ¹³vg/kg、6.6 x 10 ¹³vg/kg、6.7 x 10 ¹³vg/kg、6.8 x 10 ¹³vg/kg、6.9 x 10 ¹³vg/kg、7 x 10 ¹³vg/kg、7.1 x 10 ¹³vg/kg、7.2 x 10 ¹³vg/kg、7.3 x 10 ¹³vg/kg、7.4 x 10 ¹³vg/kg、7.5 x 10 ¹³vg/kg、7.6 x 10 ¹³vg/kg、7.7 x 10 ¹³vg/kg、7.8 x 10 ¹³vg/kg、7.9 x 10 ¹³vg/kg、8 x 10 ¹³vg/kg、8.1 x 10 ¹³vg/kg、8.2 x 10 ¹³vg/kg、8.3 x 10 ¹³vg/kg、8.4 x 10 ¹³vg/kg、8.5 x 10 ¹³vg/kg、8.6 x 10 ¹³vg/kg、8.7 x 10 ¹³vg/kg、8.8 x 10 ¹³vg/kg、8.9 x 10 ¹³vg/kg、9 x 10 ¹³vg/kg、9.1 x 10 ¹³vg/kg、9.2 x 10 ¹³vg/kg、9.3 x 10 ¹³vg/kg、9.4 x 10 ¹³vg/kg、9.5 x 10 ¹³vg/kg、9.6 x 10 ¹³vg/kg、9.7 x 10 ¹³vg/kg、9.8 x 10 ¹³vg/kg、9.9 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、或2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AVV載體以約6 x 10 ¹³vg/kg至約2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量，諸如以約6 x 10 ¹³vg/kg、6.1 x 10 ¹³vg/kg、6.2 x 10 ¹³vg/kg、6.3 x 10 ¹³vg/kg、6.4 x 10 ¹³vg/kg、6.5 x 10 ¹³vg/kg、6.6 x 10 ¹³vg/kg、6.7 x 10 ¹³vg/kg、6.8 x 10 ¹³vg/kg、6.9 x 10 ¹³vg/kg、7 x 10 ¹³vg/kg、7.1 x 10 ¹³vg/kg、7.2 x 10 ¹³vg/kg、7.3 x 10 ¹³vg/kg、7.4 x 10 ¹³vg/kg、7.5 x 10 ¹³vg/kg、7.6 x 10 ¹³vg/kg、7.7 x 10 ¹³vg/kg、7.8 x 10 ¹³vg/kg、7.9 x 10 ¹³vg/kg、8 x 10 ¹³vg/kg、8.1 x 10 ¹³vg/kg、8.2 x 10 ¹³vg/kg、8.3 x 10 ¹³vg/kg、8.4 x 10 ¹³vg/kg、8.5 x 10 ¹³vg/kg、8.6 x 10 ¹³vg/kg、8.7 x 10 ¹³vg/kg、8.8 x 10 ¹³vg/kg、8.9 x 10 ¹³vg/kg、9 x 10 ¹³vg/kg、9.1 x 10 ¹³vg/kg、9.2 x 10 ¹³vg/kg、9.3 x 10 ¹³vg/kg、9.4 x 10 ¹³vg/kg、9.5 x 10 ¹³vg/kg、9.6 x 10 ¹³vg/kg、9.7 x 10 ¹³vg/kg、9.8 x 10 ¹³vg/kg、9.9 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、或2 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AVV載體以約7 x 10 ¹³vg/kg至約2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量，諸如以約7 x 10 ¹³vg/kg、7.1 x 10 ¹³vg/kg、7.2 x 10 ¹³vg/kg、7.3 x 10 ¹³vg/kg、7.4 x 10 ¹³vg/kg、7.5 x 10 ¹³vg/kg、7.6 x 10 ¹³vg/kg、7.7 x 10 ¹³vg/kg、7.8 x 10 ¹³vg/kg、7.9 x 10 ¹³vg/kg、8 x 10 ¹³vg/kg、8.1 x 10 ¹³vg/kg、8.2 x 10 ¹³vg/kg、8.3 x 10 ¹³vg/kg、8.4 x 10 ¹³vg/kg、8.5 x 10 ¹³vg/kg、8.6 x 10 ¹³vg/kg、8.7 x 10 ¹³vg/kg、8.8 x 10 ¹³vg/kg、8.9 x 10 ¹³vg/kg、9 x 10 ¹³vg/kg、9.1 x 10 ¹³vg/kg、9.2 x 10 ¹³vg/kg、9.3 x 10 ¹³vg/kg、9.4 x 10 ¹³vg/kg、9.5 x 10 ¹³vg/kg、9.6 x 10 ¹³vg/kg、9.7 x 10 ¹³vg/kg、9.8 x 10 ¹³vg/kg、9.9 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、或2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AVV載體以約8 x 10 ¹³vg/kg至約2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量，諸如以約8 x 10 ¹³vg/kg、8.1 x 10 ¹³vg/kg、8.2 x 10 ¹³vg/kg、8.3 x 10 ¹³vg/kg、8.4 x 10 ¹³vg/kg、8.5 x 10 ¹³vg/kg、8.6 x 10 ¹³vg/kg、8.7 x 10 ¹³vg/kg、8.8 x 10 ¹³vg/kg、8.9 x 10 ¹³vg/kg、9 x 10 ¹³vg/kg、9.1 x 10 ¹³vg/kg、9.2 x 10 ¹³vg/kg、9.3 x 10 ¹³vg/kg、9.4 x 10 ¹³vg/kg、9.5 x 10 ¹³vg/kg、9.6 x 10 ¹³vg/kg、9.7 x 10 ¹³vg/kg、9.8 x 10 ¹³vg/kg、9.9 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、或2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AVV載體以約9 x 10 ¹³vg/kg至約2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量，諸如以9 x 10 ¹³vg/kg、9.1 x 10 ¹³vg/kg、9.2 x 10 ¹³vg/kg、9.3 x 10 ¹³vg/kg、9.4 x 10 ¹³vg/kg、9.5 x 10 ¹³vg/kg、9.6 x 10 ¹³vg/kg、9.7 x 10 ¹³vg/kg、9.8 x 10 ¹³vg/kg、9.9 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、或2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AVV載體以約1 x 10 ¹⁴vg/kg至約2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量，諸如以1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、或2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AAV載體以約3 x 10 ¹³vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約4 x 10 ¹³vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約5 x 10 ¹³vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約6 x 10 ¹³vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約7 x 10 ¹³vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約8 x 10 ¹³vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約9 x 10 ¹³vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約1 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約1.1 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約1.2 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約1.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約1.4 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約1.5 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約1.6 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約1.7 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約1.8 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約1.9 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約2 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約2.1 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約2.2 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約2.4 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約2.5 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約2.6 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約2.7 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約2.8 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約2.9 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。在一些實施例中，AAV載體以約3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向患者投與。

在一些實施例中，AAV載體以包含該量(例如，小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg)之單個劑量向患者投與。

在一些實施例中，AAV載體以一起包含該量(例如，小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg)之二或更多個(例如，二、三、四、五、六、七、八、九、或十個)劑量向患者投與。

在一些實施例中，AAV載體以各自獨立地包含該量(例如，小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg)之二或更多個(例如，二、三、四、五、六、七、八、九、或十個)劑量向患者投與。

在一些實施例中，二或更多個(例如，二、三、四、五、六、七、八、九、或十個)劑量彼此間隔一年或更長時間(例如，一年、一年零一天、一年零一個月、一年零六個月、兩年、三年、四年、或五年)。

在一些實施例中，二或更多個(例如，二、三、四、五、六、七、八、九、或十個)劑量在彼此之約12個月(例如，約12個月、約11個月、約10個月、約9個月、約8個月、約7個月、約6個月、約5個月、約4個月、約3個月、約2個月、或約1個月)內向患者投與。 組合療法

含有本文所述之編碼MTM1之轉殖基因之AAV載體可與一或多種額外的含有本文所述之編碼MTM1之轉殖基因之AAV載體組合或與一或多種治療手術(例如，鼻膽引流(NBD))及/或劑(例如，抗膽汁淤積劑)組合投與，用於治療神經肌肉病症(例如，XLMTM)。 治療手術

在一些實施例中，一或多種額外的治療手術係NBD。NBD係一種幫助排出膽汁的治療手術(例如，當膽管阻塞時，膽道引流可幫助膽汁自肝臟流入腸道)。在一些實施例中，NBD係用膽道引流管(也稱為膽道支架)進行的，它係一種細的、中空的、柔性的管子，沿著側面有幾個小孔。可將膽道引流管插入患者之膽道以使其引流。 治療劑

在一些實施例中，一或多種額外的治療劑係抗膽汁淤積劑(例如，膽汁酸、法尼醇X受體(FXR)配體、纖維母細胞生長因子19 (FGF-19)模擬物、Takeda-G蛋白受體5 (TGR5)促效劑、過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)促效劑、PPAR-α促效劑、PPAR-δ促效劑、雙重PPAR-α及PPAR-δ促效劑、頂端鈉依賴性膽汁酸轉運蛋白(ASBT)抑制劑、免疫調節藥物、抗纖維化療法及菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)抑制劑)或其組合。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑以在向患者投與病毒載體前或後約六週(例如，投與前或後約六週、投與前或後約五週、投與前或後約四週、投與前或後約三週、投與前或後約兩週、或投與前或後約一週)內開始之一或多個(例如，一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十五、二十、三十、四十、五十、六十及七十個)劑量向患者投與。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑以在向患者投與病毒載體前或後約五週(例如，投與前或後約五週、投與前或後約四週、投與前或後約三週、投與前或後約兩週、或投與前或後約一週)內開始之一或多個(例如，一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十五、二十、三十、四十、五十、六十及七十個)劑量向患者投與。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑以在向患者投與病毒載體前或後約一週(例如，投與前或後約一週、投與前或後約六天、投與前或後約五天、投與前或後約四天、投與前或後約三天、投與前或後約兩天、或投與前或後約一天)內開始之一或多個(例如，一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十五、二十、三十、四十、五十、六十及七十個)劑量向患者投與。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑以在向患者投與病毒載體同一天(例如，第24小時、第23小時、第22小時、第21小時、第20小時、第19小時、第18小時、第17小時、第16小時、第15小時、第14小時、第13小時、第12小時、第11小時、第10小時、第9小時、第8小時、第7小時、第6小時、第5小時、第4小時、第3小時、第2小時、第1小時、第60分鐘、第59分鐘、第58分鐘、第57分鐘、第56分鐘、第55分鐘、第50分鐘、第40分鐘、第30分鐘、第20分鐘、第10分鐘、或同一分鐘 )內開始之一或多個(例如，一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十五、二十、三十、四十、五十、六十及七十個)劑量向患者投與。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑係膽汁酸。在一些實施例中，膽汁酸係熊去氧膽酸或其衍生物或去甲熊去氧膽酸。在一些實施例中，膽汁酸係熊二醇。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑係FXR配體。在一些實施例中，FXR配體係奧貝膽酸、西洛法索、特羅法索、維A酸、或EDP-305。

在一些實施例中，一或多種抗膽汁淤積劑係FGF-19模擬物。在一些實施例中，FGF-19模擬物係阿爾達弗敏。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑係TGR5促效劑。在一些實施例中，TGR5促效劑係INT-777或INT-767。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑係PPAR促效劑。在一些實施例中，PPAR促效劑係苯扎貝特、塞拉德爾帕、或艾拉貝諾。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑係PPAR-α促效劑。在一些實施例中，PPAR-α促效劑係非諾貝特。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑係PPAR-δ促效劑。在一些實施例中，PPAR-δ促效劑係塞拉德爾帕。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑係雙重PPAR-α及PPAR-δ促效劑。在一些實施例中，雙重PPAR-α-δ促效劑係艾拉菲諾。

在一些實施例中，一或多種抗膽汁淤積劑係ASBT抑制劑。在一些實施例中，ASBT抑制劑係奧德維昔巴特、馬拉利昔巴特、或利奈昔巴特。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑係免疫調節藥物。在一些實施例中，免疫調節藥物係利妥昔單抗、阿巴西普、優特克單抗、英夫利昔單抗、巴瑞替尼、或FFP104。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑係抗纖維化療法。在一些實施例中，抗纖維化療法係維生素D受體(VDR)促效劑或辛妥珠單抗。

在一些實施例中，抗膽汁淤積劑係NOX抑制劑。在一些實施例中，NOX抑制劑係塞塔那昔布。 用於監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展之推薦臨床參數

在一些實施例中，如本文所述，藉由血清膽汁酸測試及/或血液測試(例如，LFT)監測患者之膽汁淤積之發展。

在一些實施例中，如本文所述，藉由血液測試(例如，膽紅素測試)監測患者高膽紅素血症之發展。

在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，監測患者高膽紅素血症之發展，並且若患者表現出高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，藉由血液測試(例如，血清膽汁酸測試或肝功能測試)監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展。在一些實施例中，藉由血液測試(例如，血清膽汁酸測試或肝功能測試)監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，藉由發現患者在血液測試(例如，血清膽汁酸測試)中表現出參數(例如，血清膽汁酸水準)相對於參考水準增加，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀。

在一些實施例中，藉由發現患者在血液測試(例如，血清膽汁酸測試)中表現出血清膽汁酸(例如，膽酸、鵝去氧膽酸、去氧膽酸、或熊去氧膽酸)相對於參考水準增加，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀。

在一些實施例中，血液測試係肝功能測試。

在一些實施例中，藉由肝功能測試監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，藉由發現患者在肝功能測試中表現出參數(例如，天冬胺酸胺基轉移酶水準或丙胺酸胺基轉移酶水準)相對於參考水準增加或減少，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀。 I. 血清膽汁酸測試

在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展。在一些實施例中，藉由血清膽汁酸測試監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由血清膽汁酸測試監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，藉由如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者之膽汁酸(例如，膽酸、鵝去氧膽酸、去氧膽酸，或熊去氧膽酸)水準監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症。

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者之膽汁酸(例如，膽酸、鵝去氧膽酸、去氧膽酸、或熊去氧膽酸)水準中一或多者大於規範時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者膽酸水準大於5 nmol/mL (例如，5 nmol/ mL、6 nmol/mL、7 nmol/mL、8 mol/mL、9 nmol/mL、10 nmol/mL、15 nmol/mL、20 nmol/mL、30 nmol/mL、40 nmol/mL、50 nmol/mL、60 nmol/mL、70 nmol/mL、80 nmol/mL、90 nmol/mL、及100 nmol/mL)時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀。

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者膽酸水準大於5 nmol/mL (例如，5 nmol/ mL、6 nmol/mL、7 nmol/mL、8 mol/mL、9 nmol/mL、10 nmol/mL、15 nmol/mL、20 nmol/mL、30 nmol/mL、40 nmol/mL、50 nmol/mL、60 nmol/mL、70 nmol/mL、80 nmol/mL、90 nmol/mL、及100 nmol/mL)時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者鵝去氧膽酸水準大於6 nmol/mL (例如，6 nmol/mL、7 nmol/mL、8 mol/mL、9 nmol/mL、10 nmol/mL、15 nmol/mL、20 nmol/mL、30 nmol/mL、40 nmol/mL、50 nmol/mL、60 nmol/mL、70 nmol/mL、80 nmol/mL、90 nmol/mL、及100 nmol/mL)時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀。

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者鵝去氧膽酸水準大於6 nmol/mL (例如，6 nmol/mL、7 nmol/mL、8 mol/mL、9 nmol/mL、10 nmol/mL、15 nmol/mL、20 nmol/mL、30 nmol/mL、40 nmol/mL、50 nmol/mL、60 nmol/mL、70 nmol/mL、80 nmol/mL、90 nmol/mL、及100 nmol/mL)時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者去氧膽酸水準大於6 nmol/mL (例如，6 nmol/mL、7 nmol/mL、8 mol/mL、9 nmol/mL、10 nmol/mL、15 nmol/mL、20 nmol/mL、30 nmol/mL、40 nmol/mL、50 nmol/mL、60 nmol/mL、70 nmol/mL、80 nmol/mL、90 nmol/mL、及100 nmol/mL)時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀。

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者去氧膽酸水準大於6 nmol/mL (例如，6 nmol/mL、7 nmol/mL、8 mol/mL、9 nmol/mL、10 nmol/mL、15 nmol/mL、20 nmol/mL、30 nmol/mL、40 nmol/mL、50 nmol/mL、60 nmol/mL、70 nmol/mL、80 nmol/mL、90 nmol/mL、及100 nmol/mL)時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者熊去氧膽酸水準大於2 nmol/mL (例如，2 nmol/mL、3 nmol/mL、4 nmol/mL、5 nmol/mL、6 nmol/mL、7 nmol/mL、8 mol/mL、9 nmol/mL、10 nmol/mL、15 nmol/mL、20 nmol/mL、30 nmol/mL、40 nmol/mL、50 nmol/mL、60 nmol/mL、70 nmol/mL、80 nmol/mL、90 nmol/mL、及100 nmol/mL)時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀。

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者熊去氧膽酸水準大於5 nmol/mL (例如，5 nmol/mL、6 nmol/mL、7 nmol/mL、8 mol/mL、9 nmol/mL、10 nmol/mL、15 nmol/mL、20 nmol/mL、30 nmol/mL、40 nmol/mL、50 nmol/mL、60 nmol/mL、70 nmol/mL、80 nmol/mL、90 nmol/mL、及100 nmol/mL)時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 II. 肝功能測試

在一些實施例中，藉由LFT監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由LFT監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者LFT之參數(例如，ASP水準或AST水準)大於如本文所述之經年齡調整的規範時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 IIa. 天冬胺酸胺基轉移酶

在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之AST水準來監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之AST水準來監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之AST水準來監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展，並且當患者之AST水準大於規範時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者之AST水準大於50 U/L (例如，51 U/L、52 U/L、53 U/L、54 U/L、55 U/L、56 U/L、57 U/L、58 U/L、59 U/L、60 U/L、61 U/L、62 U/L、63 U/L、64 U/L、65 U/L、66 U/L、67 U/L、68 U/L、69 U/L、70 U/L、75 U/L、80 U/L、85 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、200 U/L、300 U/L、400 U/L、及500 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀。

在一些實施例中，當患者之AST水準大於50 U/L (例如，51 U/L、52 U/L、53 U/L、54 U/L、55 U/L、56 U/L、57 U/L、58 U/L、59 U/L、60 U/L、61 U/L、62 U/L、63 U/L、64 U/L、65 U/L、66 U/L、67 U/L、68 U/L、69 U/L、70 U/L、75 U/L、80 U/L、85 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、200 U/L、300 U/L、400 U/L、及500 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 IIb. 丙胺酸胺基轉移酶

在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之ALT水準來監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之ALT水準來監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之ALT水準來監測患者之膽汁淤積或高膽紅素血症之發展，並且當患者之ALT水準大於規範時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者之ALT水準大於50 U/L (例如，51 U/L、52 U/L、53 U/L、54 U/L、55 U/L、56 U/L、57 U/L、58 U/L、59 U/L、60 U/L、61 U/L、62 U/L、63 U/L、64 U/L、65 U/L、66 U/L、67 U/L、68 U/L、69 U/L、70 U/L、75 U/L、80 U/L、85 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、200 U/L、300 U/L、400 U/L、及500 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀。

在一些實施例中，當患者之ALT水準大於50 U/L (例如，51 U/L、52 U/L、53 U/L、54 U/L、55 U/L、56 U/L、57 U/L、58 U/L、59 U/L、60 U/L、61 U/L、62 U/L、63 U/L、64 U/L、65 U/L、66 U/L、67 U/L、68 U/L、69 U/L、70 U/L、75 U/L、80 U/L、85 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、200 U/L、300 U/L、400 U/L、及500 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 用於監測患者之膽汁淤積之發展之推薦臨床參數 I. 血清膽汁酸測試

在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積之發展。在一些實施例中，藉由血清膽汁酸測試監測患者之膽汁淤積之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由血清膽汁酸測試監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者之總膽汁酸水準大於規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的，患者之總膽汁酸水準大於14 μmol/L (例如，15 µmol/L、16 µmol/L、17 µmol/L、18 µmol/L、19 µmol/L、20 µmol/L、21 µmol/L、22 µmol/L、23 µmol/L、24 µmol/L、25 µmol/L、26 µmol/L、27 µmol/L、28 µmol/L、29 µmol/L、30 µmol/L、31 µmol/L、32 µmol/L、33 µmol/L、34 µmol/L、35 µmol/L、36 µmol/L、37 µmol/L、38 µmol/L、39 µmol/L、40 µmol/L、41 µmol/L、42 µmol/L、43 µmol/L、44 µmol/L、45 µmol/L、46 µmol/L、47 µmol/L、48 µmol/L、49 µmol/L、50 µmol/L、51 µmol/L、52 µmol/L、53 µmol/L、54 µmol/L、55 µmol/L、56 µmol/L、57 µmol/L、58 µmol/L、59 µmol/L、60 µmol/L、61 µmol/L、62 µmol/L、63 µmol/L、64 µmol/L、65 µmol/L、66 µmol/L、67 µmol/L、68 µmol/L、69 µmol/L、70 µmol/L、71 µmol/L、72 µmol/L、73 µmol/L、74 µmol/L、75 µmol/L、76 µmol/L、77 µmol/L、78 µmol/L、79 µmol/L、80 µmol/L、81 µmol/L、82 µmol/L、83 µmol/L、84 µmol/L、85 µmol/L、86 µmol/L、87 µmol/L、88 µmol/L、89 µmol/L、90 µmol/L、91 µmol/L、92 µmol/L、93 µmol/L、94 µmol/L、95 µmol/L、96 µmol/L、97 µmol/L、98 µmol/L、99 µmol/L、及100 µmol/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 II. 血液測試

在一些實施例中，藉由血液測試(例如，LFT或膽紅素測試)監測患者之膽汁淤積之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由LFT監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者血液測試(例如，LFT或膽紅素測試)之一或多個參數(例如，GGT水準、ASP水準、AST水準、ALT水準、及膽紅素水準)大於如本文所述之經年齡調整的規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 IIa. 肝功能測試

在一些實施例中，藉由LFT監測患者之膽汁淤積之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由LFT監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者LFT之一或多個參數(例如，GGT水準、ASP水準、AST水準、及ALT水準)大於如本文所述之經年齡調整的規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 IIai. γ- 麩胺醯基轉移酶

在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之GGT水準來監測患者之膽汁淤積之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之GGT水準來監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者表現出GGT水準大於經年齡調整的規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係新生兒(例如，0-6個月)、幼兒(例如，6-12個月)、或1-5歲的兒童。在一些實施例中，患者係0-6個月的新生兒。在一些實施例中，患者係6-12個月的幼兒。在一些實施例中，患者係1-5歲的兒童。

在一些實施例中，患者係新生兒(例如，0-6個月)，並且當患者之GGT水準在正常範圍約12-122 U/L (如 12-122 U/L、13-122 U/L、14-122 U/L、15-122 U/L、16-122 U/L、17-122 U/L、18-122 U/L、19-122 U/L、20-122 U/L、25-122 U/L、30-122 U/L、40-122 U/L、50-122 U/L、60-122 U/L、70-122 U/L、80-122 U/L、90-122 U/L、100-122 U/L、110-122 U/L、120-122 U/L、或121-122 U/L)之外時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係男性新生兒(例如，0-6個月)，並且當患者之GGT水準小於12 U/L (例如，11 U/L、10 U/L、9 U/L、8 U/L、7 U/L、6 U/L、5 U/L、4 U/L、3 U/ L、2 U/L、或1 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係男性新生兒(例如，0-6個月)，並且當患者之GGT水準大於122 U/L (例如，123 U/L、124 U/L、125 U/L、126 U/L、127 U/L、128 U/L、129 U/L、130 U/L、135 U/L、140 U/L、150 U/L、160 U/L、170 U/L、180 U/L、190 U/L、及200 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係男性幼兒(例如，6-12個月)，並且當患者之GGT水準在正常範圍1-39 U/L (例如，2-39 U/L、3-39 U/L、4-39 U/L、5-39 U/L、6-39 U/L、7-39 U/L、8-39 U/L、9-39 U/L、10-39 U/L、11-39 U/L、12-39 U/L、13-39 U/L、14-39 U/L、15-39 U/L、16-39 U/L、17-39 U/L、18-39 U/L、19-39 U/L、20-39 U/L、21-39 U/L、22-39 U/L、23-39 U/L、24-39 U/L、25-39 U/L、26-39 U/L、27-39 U/L、28-39 U/L、29-39 U/L、30-39 U/L、31-39 U/L、32-39 U/L、33-39 U/L、34-39 U/L、35-39 U/L、36-39 U/L、37-39 U/L、或38-39 U/L)之外時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係男性幼兒(例如，6-12個月)，並且當患者之GGT水準大於39 U/L (例如，40 U/L、41 U/L、42 U/L、43 U/L、44 U/L、45 U/L、46 U/L、47 U/L、48 U/L、49 U/L、50 U/L、55 U/L、60 U/L、70 U/L、80 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、1120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、160 U/L、170 U/L、180 U/L、190 U/L、及200 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係1-⁠5歲的男性兒童，並且當患者之GGT水準在正常範圍約3-22 U/L (例如，約3-22 U/L、4-22 U/L、5-22 U/L、6-22 U/L、7-22 U/L、8-22 U/L、9-22 U/L、10-22 U/L、11-22 U/L、12-22 U/L、13-22 U/L、14-22 U/L、15-22 U/L、16-22 U/L、17-22 U/L、18-22 U/L、19-22 U/L、20-22 U/L、及21-22 U/L)之外時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係1-⁠5歲的男性兒童，並且當患者之GGT水準小於3 U/L (例如，2 U/L及1 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係1-⁠5歲的男性兒童，並且當患者之GGT水準大於22 U/L (例如，23 U/L、24 U/L、25 U/L、26 U/L、27 U/L、28 U/L、29 U/L、30 U/L、35 U/L、40 U/L、50 U/L、60 U/L、70 U/L、80 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、1120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、160 U/L、170 U/L、180 U/L、190 U/L、及200 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係女性新生兒(例如，0-6個月)，並且當患者之GGT水準在正常範圍約15-132 U/L (例如，15-132 U/L、16-132 U/L、17-132 U/L、18-132 U/L、19-132 U/L、20-132 U/L、25-132 U/L、30-132 U/L、40-132 U/L、50-132 U/L、60-132 U/L、70-132 U/L、80-132 U/L、90-132 U/L、100-132 U/L、110-132 U/L、120-132 U/L、130-132 U/L、及131-132 U/L)之外時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係女性新生兒(例如，0-6個月)，並且當患者之GGT水準小於15 U/L (例如，14 U/L、13 U/L、12 U/L、11 U/L、10 U/L、9 U/L、8 U/L、7 U/L、6 U/L、5 U/L、4 U/L、3 U/L、2 U/L、或1 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係女性新生兒(例如，0-6個月)，並且當患者之GGT水準大於132 U/L (例如，133 U/L、134 U/L、135 U/L、136 U/L、137 U/L、138 U/L、139 U/L、140 U/L、145 U/L、150 U/L、160 U/L、170 U/L、180 U/L、190 U/L、及200 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係女性幼兒(例如，6-12個月)，當患者之GGT水準在正常範圍1-39 U/L (例如，2-39 U/L、3-39 U/L、4-39 U/L、5-39 U/L、6-39 U/L、7-39 U/L、8-39 U/L、9-39 U/L、10-39 U/L、11-39 U/L、12-39 U/L、13-39 U/L、14-39 U/L、15-39 U/L、16-39 U/L、17-39 U/L、18-39 U/L、19-39 U/L、20-39 U/L、21-39 U/L、22-39 U/L、23-39 U/L、24-39 U/L、25-39 U/L、26-39 U/L、27-39 U/L、28-39 U/L、29-39 U/L、30-39 U/L、31-39 U/L、32-39 U/L、33-39 U/L、34-39 U/L、35-39 U/L、36-39 U/L、37-39 U/L、或38-39 U/L)之外時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係女性幼兒(例如，6-12個月)，並且當患者之GGT水準大於39 U/L (例如，40 U/L、41 U/L、42 U/L、43 U/L、44 U/L、45 U/L、46 U/L、47 U/L、48 U/L、49 U/L、50 U/L、55 U/L、60 U/L、70 U/L、80 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、1120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、160 U/L、170 U/L、180 U/L、190 U/L、及200 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係1-⁠5歲的女性兒童，當患者之GGT水準在正常範圍約3-22 U/L (例如，約3-22 U/L、4-22 U/L、5-22 U/L、6-22 U/L、7-22 U/L、8-22 U/L、9-22 U/L、10-22 U/L、11-22 U/L、12-22 U/L、13-22 U/L、14-22 U/L、15-22 U/L、16-22 U/L、17-22 U/L、18-22 U/L、19-22 U/L、20-22 U/L、及21-22 U/L)之外時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係1-⁠5歲的女性兒童，並且當患者之GGT水準小於3 U/L (例如，2 U/L及1 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係1-⁠5歲的女性兒童，並且當患者之GGT水準大於22 U/L (例如，23 U/L、24 U/L、25 U/L、26 U/L、27 U/L、28 U/L、29 U/L、30 U/L、35 U/L、40 U/L、50 U/L、60 U/L、70 U/L、80 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、1120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、160 U/L、170 U/L、180 U/L、190 U/L、及200 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 IIaii. 鹼性磷酸酶

在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之ASP水準來監測患者之膽汁淤積之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之ASP水準來監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之ASP水準來監測患者之膽汁淤積之發展，並且當患者之ASP水準大於規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者之ASP水準在正常範圍約50至300 U/L (例如，約51至300 U/L、約52至U/L、約53至300 U/L、約54至300 U/L、約55至300 U/L、約56至300 U/L、約57至300 U/L、約58至300 U/L、約59至300 U/L、約60至300 U/L、約65至300 U/L、約70至300 U/L、約80至300 U/L、約90至300 U/L、約100至300 U/L、約125至300 U/L、約150至300 U/L、約175至300 U/L、約200至300 U/L、約225至300 U/L、約250至300 U/L、或約275至300 U/L)之外時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者之ASP水準小於50 U/L (例如，50 U/L、49 U/L、48 U/L、47 U/L、46 U/L、45 U/L、44 U/L、43 U/L、42 U/L、41 U/L、40 U/L、39 U/L、38 U/L、37 U/L、36 U/L、35 U/L、34 U/L、33 U/L、32 U/L、31 U/L、30 U/L、29 U/L、28 U/L、27 U/L、26 U/L、25 U/L、24 U/L、23 U/L、22 U/L、21 U/L、20 U/L、19 U/L、18 U/L、17 U/L、16 U/L、15 U/L、14 U/L、13 U/L、12 U/L、11 U/L、10 U/L、9 U/L、8 U/L、7 U/L、6 U/L、5 U/L、4 U/L、3 U/L、2 U/L、及1 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者之ASP水準大於300 U/L (例如，300 U/L、301 U/L、302 U/L、303 U/L、304 U/L、305 U/L、306 U/L、307 U/L、308 U/L、309 U/L、310 U/L、311 U/L、312 U/L、313 U/L、314 U/L、315 U/L、316 U/L、317 U/L、318 U/L、319 U/L、320 U/L、321 U/L、322 U/L、323 U/L、324 U/L、325 U/L、330 U/L、340 U/L、350 U/L、400 U/L、及500 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 IIaiii. 天冬胺酸胺基轉移酶

在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之AST水準來監測患者之膽汁淤積之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之AST水準來監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之AST水準來監測患者之膽汁淤積之發展，並且當患者之AST水準大於規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者之AST水準大於50 U/L (例如，51 U/L、52 U/L、53 U/L、54 U/L、55 U/L、56 U/L、57 U/L、58 U/L、59 U/L、60 U/L、61 U/L、62 U/L、63 U/L、64 U/L、65 U/L、66 U/L、67 U/L、68 U/L、69 U/L、70 U/L、75 U/L、80 U/L、85 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、200 U/L、300 U/L、400 U/L、及500 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 IIaiv. 丙胺酸胺基轉移酶

在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之ALT水準來監測患者之膽汁淤積之發展。在一些實施例中，監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之ALT水準來監測患者之膽汁淤積之發展，並且若患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，藉由在LFT中量測患者之ALT水準來監測患者之膽汁淤積之發展，並且當患者之ALT水準大於規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者之ALT水準大於50 U/L (例如，51 U/L、52 U/L、53 U/L、54 U/L、55 U/L、56 U/L、57 U/L、58 U/L、59 U/L、60 U/L、61 U/L、62 U/L、63 U/L、64 U/L、65 U/L、66 U/L、67 U/L、68 U/L、69 U/L、70 U/L、75 U/L、80 U/L、85 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、200 U/L、300 U/L、400 U/L、及500 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 用於監測患者高膽紅素血症之發展之推薦臨床參數 膽紅素測試

在一些實施例中，監測患者高膽紅素血症之發展。在一些實施例中，藉由膽紅素測試監測患者高膽紅素血症之發展。在一些實施例中，監測患者高膽紅素血症之發展，並且若患者表現出高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。在一些實施例中，藉由膽紅素測試監測患者高膽紅素血症之發展，並且若患者表現出高膽紅素血症或其一或多種症狀，則向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者表現出膽紅素水準大於規範時，確定患者表現出高膽紅素血症或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者之總膽紅素水準大於1.2 mg/dL (例如，1.2 mg/dL、1.3 mg/dL、1.4 mg/dL、1.5 mg/dL、1.6 mg/dL、1.7 mg/dL、1.8 mg/dL、1.9 mg/dL、2 mg/dL、2.1 mg/dL、2.2 mg/dL、2.3 mg/dL、2.4 mg/dL、2.5 mg/dL、2.6 mg/dL、2.7 mg/dL、2.8 mg/dL、2.9 mg/dL、3 mg/dL、3.1 mg/dL、3.2 mg/dL、3.3. mg/dL、3.4 mg/dL、3.5 mg/dL、3.6 mg/dL、3.7 mg/dL、3.8 mg/dL、3.9 mg/dL、4 mg/dL、4.1 mg/dL、4.2 mg/dL、4.3 mg/dL、4.4 mg/dL、4.5 mg/dL、4.6 mg/dL、4.7 mg/dL、4.8 mg/dL、4.9 mg/dL、5 mg/dL、10 mg/dL、15 mg/dL、20 mg/dL、30 mg/dL、40 mg/dL、50 mg/dL、60 mg/dL、70 mg/dL、80 mg/dL、90 mg/dL、及100 mg/dL)時，確定患者表現出高膽紅素血症或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者之直接膽紅素水準大於0.2 mg/dL (例如，0.2 mg/dL、0.3 mg/dL、0.4 mg/dL、0.5 mg/dL、0.6 mg/dL、0.7 mg/dL、0.8 mg/dL、0.9 mg/dL、1 mg/dL、1.1 mg/dL、1.2 mg/dL、1.3 mg/dL、1.4 mg/dL、1.5 mg/dL、1.6 mg/dL、1.7 mg/dL、1.8 mg/dL、1.9 mg/dL、2 mg/dL、2.1 mg/dL、2.2 mg/dL、2.3 mg/dL、2.4 mg/dL、2.5 mg/dL、2.6 mg/dL、2.7 mg/dL、2.8 mg/dL、2.9 mg/dL、3 mg/dL、3.1 mg/dL、3.2 mg/dL、3.3. mg/dL、3.4 mg/dL、3.5 mg/dL、3.6 mg/dL、3.7 mg/dL、3.8 mg/dL、3.9 mg/dL、4 mg/dL、4.1 mg/dL、4.2 mg/dL、4.3 mg/dL、4.4 mg/dL、4.5 mg/dL、4.6 mg/dL、4.7 mg/dL、4.8 mg/dL、4.9 mg/dL、5 mg/dL、10 mg/dL、15 mg/dL、20 mg/dL、30 mg/dL、40 mg/dL、50 mg/dL、60 mg/dL、70 mg/dL、80 mg/dL、90 mg/dL、及100 mg/dL)時，確定患者表現出高膽紅素血症或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者在膽紅素測試中表現出膽紅素水準大於1 mg/dL (例如，大於1 mg/dL、1.1 mg/dL、1.2 mg/dL、1.3 mg/dL、1.4 mg/dL、1.5 mg/dL、1.6 mg/dL、1.7 mg/dL、1.8 mg/dL、1.9 mg/dL、2 mg/dL、2.1 mg/dL、2.2 mg/dL、2.3 mg/dL、2.4 mg/dL、2.5 mg/dL、2.6 mg/dL、2.7 mg/dL、2.8 mg/dL、2.9 mg/dL、3 mg/dL、3.1 mg/dL、3.2 mg/dL、3.3. mg/dL、3.4 mg/dL、3.5 mg/dL、3.6 mg/dL、3.7 mg/dL、3.8 mg/dL、3.9 mg/dL、4 mg/dL、4.1 mg/dL、4.2 mg/dL、4.3 mg/dL、4.4 mg/dL、4.5 mg/dL、4.6 mg/dL、4.7 mg/dL、4.8 mg/dL、4.9 mg/dL、5 mg/dL、10 mg/dL、15 mg/dL、20 mg/dL、30 mg/dL、40 mg/dL、50 mg/dL、60 mg/dL、70 mg/dL、80 mg/dL、90 mg/dL、或100 mg/dL)時，確定患者表現出高膽紅素血症或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 用於確定患者表現出膽汁淤積或高膽紅素血症或其症狀之推薦臨床參數

在一些實施例中，藉由確定患者血清膽汁酸測試及/或血液測試(例如，LFT)之一或多個參數(例如，總膽汁酸水準、GGT水準、ASP水準、AST水準、及ALT水準)大於或小於如本文所述之經年齡調整的規範，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀。

在一些實施例中，藉由確定患者血液測試(例如，膽紅素測試)之一或多個參數(例如，膽紅素水準)大於如本文所述之規範，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者LFT之參數(例如，ASP水準或AST水準)大於如本文所述之經年齡調整的規範時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 I. 血清膽汁酸測試

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者熊去氧膽酸水準大於5 nmol/mL (例如，2 nmol/mL、3 nmol/mL、4 nmol/mL、5 nmol/mL、6 nmol/mL、7 nmol/mL、8 mol/mL、9 nmol/mL、10 nmol/mL、15 nmol/mL、20 nmol/mL、30 nmol/mL、40 nmol/mL、50 nmol/mL、60 nmol/mL、70 nmol/mL、80 nmol/mL、90 nmol/mL、及100 nmol/mL)時，確定患者表現出膽汁淤積、高膽紅素血症、或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 II. 肝功能測試

在一些實施例中，當患者之ALT水準大於50 U/L (例如，51 U/L、52 U/L、53 U/L、54 U/L、55 U/L、56 U/L、57 U/L、58 U/L、59 U/L、60 U/L、61 U/L、62 U/L、63 U/L、64 U/L、65 U/L、66 U/L、67 U/L、68 U/L、69 U/L、70 U/L、75 U/L、80 U/L、85 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、200 U/L、300 U/L、400 U/L、及500 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 用於確定患者表現出膽汁淤積或其症狀之推薦臨床參數 I. 血清膽汁酸測試

在一些實施例中，當如藉由血清膽汁酸測試所量測的患者表現出膽汁酸水準大於規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當如LFT所量測的患者表現出GGT水準大於經年齡調整的規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係新生兒(例如，0-6個月)，並且當患者之GGT水準在正常範圍約12-122 U/L (如 12-122 U/L、13-122 U/L、14-122 U/L、15-122 U/L、16-122 U/L、17-122 U/L、18-122 U/L、19-122 U/L、20-122 U/L、25-122 U/L、30-122 U/L、40-122 U/L、50-122 U/L、60-122 U/L、70-122 U/L、80-122 U/L、90-122 U/L、100-122 U/L、110-122 U/L、120-122 U /L、或121-122 U/L)之外時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係1-⁠5歲的男性兒童，並且當患者之GGT水準小於約3 U/L (例如，2 U/L及1 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係女性新生兒(例如，0-6個月)，並且當患者之GGT水準小於約15 U/L (例如，14 U/L、13 U/L、12 U/L、11 U/L、10 U/L、9 U/L、8 U/L、7 U/L、6 U/L、5 U/L、4 U/L、3 U/L、2 U/L、或1 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係女性幼兒(例如，6-12個月)，並且當患者之GGT水準在正常範圍1-39 U/L (例如，2-39 U/L、3-39 U/L、4-39 U/L、5-39 U/L、6-39 U/L、7-39 U/L、8-39 U/L、9-39 U/L、10-39 U/L、11-39 U/L、12-39 U/L、13-39 U/L、14-39 U/L、15-39 U/L、16-39 U/L、17-39 U/L、18-39 U/L、19-39 U/L、20-39 U/L、21-39 U/L、22-39 U/L、23-39 U/L、24-39 U/L、25-39 U/L、26-39 U/L、27-39 U/L、28-39 U/L、29-39 U/L、30-39 U/L、31-39 U/L、32-39 U/L、33-39 U/L、34-39 U/L、35-39 U/L、36-39 U/L、37-39 U/L、或38-39 U/L)之外時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，患者係1-⁠5歲的女性兒童，並且當患者之GGT水準小於約3 U/L (例如，2 U/L及1 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當如LFT所量測的患者表現出ASP水準大於規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者之ASP水準小於約50 U/L (例如，50 U/L、49 U/L、48 U/L、47 U/L、46 U/L、45 U/L、44 U/L、43 U/L、42 U/L、41 U/L、40 U/L、39 U/L、38 U/L、37 U/L、36 U/L、35 U/L、34 U/L、33 U/L、32 U/L、31 U/L、30 U/L、29 U/L、28 U/L、27 U/L、26 U/L、25 U/L、24 U/L、23 U/L、22 U/L、21 U/L、20 U/L、19 U/L、18 U/L、17 U/L、16 U/L、15 U/L、14 U/L、13 U/L、12 U/L、11 U/L、10 U/L、9 U/L、8 U/L、7 U/L、6 U/L、5 U/L、4 U/L、3 U/L、2 U/L、及1 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當如LFT所量測的患者表現出AST水準大於規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當如LFT所量測的患者表現出ALT水準大於規範時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者之ALT水準大於50 U/L (例如，51 U/L、52 U/L、53 U/L、54 U/L、55 U/L、56 U/L、57 U/L、58 U/L、59 U/L、60 U/L、61 U/L、62 U/L、63 U/L、64 U/L、65 U/L、66 U/L、67 U/L、68 U/L、69 U/L、70 U/L、75 U/L、80 U/L、85 U/L、90 U/L、100 U/L、110 U/L、120 U/L、130 U/L、140 U/L、150 U/L、200 U/L、300 U/L、400 U/L、及500 U/L)時，確定患者表現出膽汁淤積或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。 用於確定患者表現出高膽紅素血症或其症狀之推薦臨床參數 膽紅素測試

在一些實施例中，如在血液測試(例如，膽紅素測試)中所量測的，當患者表現出膽紅素水準大於規範時，確定患者表現出高膽紅素血症或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。

在一些實施例中，當患者在膽紅素測試中表現出膽紅素水準大於1 mg/dL (例如，大於1 mg/dL、1.1 mg/dL、1.2 mg/dL、1.3 mg/dL、1.4 mg/dL、1.5 mg/dL、1.6 mg/dL、1.7 mg/dL、1.8 mg/dL、1.9 mg/dL、2 mg/dL、2.1 mg/dL、2.2 mg/dL、2.3 mg/dL、2.4 mg/dL、2.5 mg/dL、2.6 mg/dL、2.7 mg/dL、2.8 mg/dL、2.9 mg/dL、3 mg/dL、3.1 mg/dL、3.2 mg/dL、3.3. mg/dL、3.4 mg/dL、3.5 mg/dL、3.6 mg/dL、3.7 mg/dL、3.8 mg/dL、3.9 mg/dL、4 mg/dL、4.1 mg/dL、4.2 mg/dL、4.3 mg/dL、4.4 mg/dL、4.5 mg/dL、4.6 mg/dL、4.7 mg/dL、4.8 mg/dL、4.9 mg/dL、5 mg/dL、10 mg/dL、15 mg/dL、20 mg/dL、30 mg/dL、40 mg/dL、50 mg/dL、60 mg/dL、70 mg/dL、80 mg/dL、90 mg/dL、或100 mg/dL)時，確定患者表現出高膽紅素血症或其一或多種症狀，並向患者投與抗膽汁淤積劑。實例

提出以下實例以向熟習此項技術者提供可如何使用及評估本文所描述之組成物及方法之描述，且僅意欲為本發明之例示而並不意欲限制本發明者視為其發明之範疇。實例1. 在X連鎖肌微管性肌病小鼠模型中評估包括編碼肌微管蛋白1基因之核酸序列之假型AAV8載體的安全性及功效 目的及研究方法

本研究之目的係使用肌微管蛋白 1 (MTM1)半合子(「HEMI」)敲除(KO)小鼠進行功效及採樣研究，並確定小鼠中肝臟特異性MTM1表現之可能影響。小鼠在約4週齡時靜脈給予不同的測試物品。小鼠在約16週齡(給藥後約12週)採樣。組織樣品用於肌微管蛋白及膽鹽轉運蛋白表現、膽汁酸水準量測及組織病理學。全血樣品用於血液學分析，而血清樣品用於臨床化學分析。此外，在約5週齡時對一組初始MTM1 KO小鼠採樣，並將組織用於組織病理學分析。

此研究係根據適當方法及標準作業程序(SOP)在測試設施或測試地點進行。此研究符合標準動物福利倫理學。 材料及方法

本研究使用MTM1 KO小鼠，其中28隻雄性野生型(WT)小鼠及70隻雄性KO小鼠。在約5週及約16週時對動物採樣。每隻動物都根據測試設施之SOP進行永久識別，帶有唯一永久識別碼。使用腳趾及尾巴編號以及耳標來識別動物。給藥前有約3至4天適應期。將動物分組飼養，每籠最多3至4只，每個籠子中放置至少一隻WT小鼠用於社交目的。使用獨立通風籠養系統(IVC)及II型聚碳酸酯長籠來飼養小鼠。

在整個研究過程中提供獸醫護理，動物由經過培訓的負責人員檢查，並根據臨床症狀或其他變化由獸醫監督。

在生命階段開始之前，任何被認為不適合在研究中使用的動物都被獲自同一批貨物且維持在相同環境條件下的替代動物替換。健康狀況不佳或體重處於範圍極端值之動物不被分組。在為此研究設組時，將KO小鼠隨機分組，從而使得整窩小鼠不會被分到一個測試組中，以避免「同窩效應」。將小鼠分組飼養，每組最多4至5隻。每個籠子包括3至4隻KO小鼠及1至2隻用於社交目的的WT小鼠。沒有一隻KO小鼠被單獨飼養。

測試了四種物品：1)含有在結蛋白啟動子控制下之小鼠MTM1 (mMTM1)基因的AAV8載體(AAV8-Des-mMTM1)， 2)含有在APoE-A1AT啟動子控制下之mMTM1的AAV8載體(AAV8-APoE-A1AT-mMTM1)，3)含有在結蛋白啟動子控制下之帶有終止密碼子之人類MTM1 (hMTM1)基因的AAV8載體(AAV8-Des-hMTM1-STOP) ，以及4) AAV8空衣殼。使用含有0.01%普朗尼克之格林氏乳酸溶液安慰劑之媒劑對照。根據先前對小鼠之研究選擇劑量水準。高劑量係小鼠先前高劑量之倍數，因為先前高劑量展示出顯著藥理作用且無毒性。藉由向尾靜脈中緩慢靜脈(IV)推注注射來向動物給藥。劑量體積(總計16.33 mL/kg)以分次靜脈推注劑量投與，投與之間間隔2至3小時。記錄劑量部位、結束時間及劑量體積。必要時用異氟烷將動物麻醉。此投與途徑與擬定的人類投與途徑一致，並有望為研究及相關藥理活性提供適當的全身暴露。投與頻率為第1天一劑。預期劑量水準可確定可達成的相關藥理活性。給藥後約12週進行屍檢。治療/研究組匯總於下表 4。此外，在約5 (5.3)週齡時對一組10隻初始MTM1 KO小鼠採樣。表 4. 小鼠研究組

組	基因型	動物數	治療組	劑量 (vg/kg)	體積 (ml/kg)	採樣年齡 ( 週 )	給藥年齡 ( 週 )
1	野生型	14	媒劑	0	16.33	~16.4	~4.1
2	MTM1 KO (HEMI)	14	AAV8-Des-mMTM1	4e14 vg/kg	16.33	~16.3	~4.1
3	MTM1 KO (HEMI)	13	AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP	4e14 vg/kg + 2e14 vg/kg	16.33	~16.4	~4.2
4	MTM1 KO (HEMI)	14	AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼	4e14 vg/kg + 與第3組等效衣殼/kg	16.33	~16.6	~4.1
5	MTM1 KO (HEMI)	14	AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1	4e14 vg/kg + 2e14 vg/kg	16.33	~16.7	~4.2
6	MTM1 KO (HEMI)	12	AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP	4e14 vg/kg + 6e13 vg/kg + 1.4e14 vg/kg	16.33	~16.8	~4.1
7	野生型	14	AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP	4e14 vg/kg + 2e14 vg/kg	16.33	~16.4	~4.1

給藥前所使用的測試物品體積匯總於下表 5。表 5. 給藥前之測試物品體積

組	治療組	劑量 (vg/kg)	AAV8-Des-mMTM1 (mL)	AAV8-Des-hMTM1-STOP (mL)	AAV8 空衣殼 (mL)	AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 (mL)	安慰劑體積 (ml)	總體積 (mL)	總體積 (ml/kg)
1	媒劑	0	NA	NA	NA	NA	5	5	16.33
2	AAV8-Des-mMTM1	4e14 vg/kg	2.25	NA	NA	NA	2.75	5	16.33
3	AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP	4e14 vg/kg + 2e14 vg/kg	2.25	1.05	NA	NA	1.7	5	16.33
4	AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼	4e14 vg/kg + 與第3組等效衣殼/kg	2.25	NA	2.75	NA	NA	5	16.33
5	AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1	4e14 vg/kg + 2e14 vg/kg	2.25	NA	NA	0.5	2.25	5	16.33
6	AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP	4e14 vg/kg + 6e13 vg/kg + 1.4e14 vg/kg	2.25	0.74	NA	0.15	1.86	5	16.33
7	AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP	4e14 vg/kg + 2e14 vg/kg	2.25	1.05	NA	NA	1.7	5	16.33

以下人道終點基準適用於此研究。若小鼠符合預定義之人道終點基準，出於福利原因，它們將接受計劃之安樂死。若出於福利原因需要對任何小鼠實施安樂死，則將它們打開且記錄宏觀觀察結果。在動物之整體健康狀況顯著惡化之情況下，若有可能，則應用縮短的組織分離方案。縮短的組織分離方案包括在液態氮中收集骨骼肌(股四頭肌)及1個肝葉，以及在福馬林中收集1個肝葉及心臟(背側)組織。骨骼肌及肝葉儲存在-80℃，而福馬林中之肝葉及心臟(背側)則儲存在室溫下。由於晚上及週末對需要立即行動之急性病例採樣之工作人員能力有限，藉由過劑量CO ₂對小鼠實施安樂死且斬首。在此情況下，沒有進行採樣。

每週三次量測體重且記錄死亡率。若存活到研究結束，即在終點，即約16-17週齡(給藥後約12-13週)時，藉由戊巴比妥鈉(180 mg/kg)深度麻醉對小鼠實施安樂死。經由心臟穿刺收集儘可能多的全血。首先收集血液用於血液學檢查(100 μL EDTA全血)，然後用於臨床化學檢查(200 μL全血，以分離最少80 μL血清)。收集任何剩餘血清。然後，用肝素化鹽水對小鼠進行經心灌注以去除組織中之血液。在約5週齡時對該組10隻初始MTM1 KO小鼠採樣。採樣包括血液採樣(全血及血清)、灌注及樣品解剖用於組織學及組織病理學。沒有樣品用於其他分析。

組織樣品用於肌微管蛋白及膽鹽轉運蛋白表現、膽汁酸水準量測及組織病理學。生命中及終點全血樣品用於血液學分析，而血清樣品用於臨床化學分析。每次分析均使用來自每隻小鼠之樣品的相同部分。將心臟與左心房及右心房一起收集，然後沿額狀面分成兩半。組織收集與分析匯總於下表 6。表 6. 小鼠組織採集與分析

組織	組織學及組織病理學	藉由 IHC 分析肌微管蛋白及膽鹽轉運蛋白	肌微管蛋白 (ELISA) 、載體拷貝數 (VCN) 及 / 或膽汁酸分析 (ELISA)	額外樣品
股四頭肌	左側肌肉(½)	左側肌肉(½)	右側肌肉	NA
膈肌	1個樣品	1個樣品	1個樣品	NA
肝臟	左外側葉及右內側葉一小部分(含膽囊)	左內側葉及剩餘右內側葉	剩餘葉(右葉、右外側葉、尾狀葉)	NA
心臟	½心臟(背側)	NA	½心臟 (腹側)分成2個樣品(對於每隻動物，樣品1，小瓶1；樣品2，小瓶2；相同部分)	NA
三頭肌(右) 腓腸肌(右) 脛前肌(右)	NA	NA	NA	全肌肉
肺	1個樣品	NA	NA	NA
腎	左+右，2個樣品	NA	NA	NA
脾	1個樣品	NA	NA	NA
腦	1個樣品	NA	NA	NA

組織學及組織病理學

解剖以下組織樣品，並將其置於10%中性緩衝福馬林中： ● 股四頭肌(左側肌肉，½) ● 膈肌(1個樣品) ● 肝臟(左外側葉，及右內側葉一小部分(含膽囊)) ● 心臟(1/2，背側) ● 肺(1個樣品) ● 腎(左 + 右，2個樣品) ● 脾(1個樣品) ● 腦(1個樣品)

將樣品包埋在石蠟中，切成切片，並用蘇木精及曙紅(H&E)染色以進行顯微鏡評估。 樣品採集： 肌微管蛋白 (ELISA) 、載體拷貝數 (VCN) 及 / 或膽汁酸分析 (ELISA) ；藉由免疫組織化學 (IHC) 進行肌微管蛋白及膽汁酸鹽轉運蛋白分析；及儲備組織

用於生物分析分析之無菌集合(肌微管蛋白(ELISA)、載體拷貝數(VCN)及/或膽汁酸分析(ELISA)；藉由IHC進行之肌微管蛋白及膽汁酸鹽轉運蛋白分析；以及儲備組織)：每個組織均收集在無RNAse螺旋蓋聚丙烯管中，在無菌條件下於液態氮中快速冷凍，且根據測試設施SOP儲存在-80℃下。樣品在儲存前存放在乾冰上。在處理新小鼠之前更換/清潔手術刀刀片、稱重船(小盤)及解剖儀器。在收集每個組織之間，用RNAse Zap(或類似物)擦拭所有儀器。採取了預防措施，以防止組織採集過程中之交叉污染。 肌微管蛋白 (ELISA) 、 載體拷貝數 (VCN) 及 / 或膽汁酸分析 (ELISA)

解剖以下組織樣品並冷凍在液態氮中： ● 股四頭肌(右側肌肉) ● 膈肌(1個樣品) ● 肝臟(右葉、右外側葉、尾狀葉) ● 心臟(1/2，腹側)(分成兩個樣品) 藉由 IHC 分析肌微管蛋白及膽汁酸鹽轉運蛋白

解剖以下組織樣品並冷凍在液態氮中： ● 股四頭肌(左側肌肉，½) ● 膈肌(1個樣品) ● 肝臟(左內側葉及剩餘右內側葉，不含膽囊) 儲備組織

解剖以下組織樣品並冷凍在液態氮中： ● 三頭肌(右側肌肉) ● 腓腸肌(右側肌肉) ● 脛前肌(右側肌肉) 臨床化學組套

在生命中採樣及末期屍檢時，對未溶血血清中的臨床生化標誌物組套進行以下參數分析：丙胺酸胺基轉移酶(ALAT)、天冬胺酸胺基轉移酶(ASAT)、鹼性磷酸酶(AFOS)、γ-麩胺醯基轉移酶(GGT) 、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、白蛋白、總膽紅素、總蛋白、肌酸酐、膽汁酸、計算球蛋白、計算白蛋白/球蛋白比率及尿素氮。

若血液樣品有限，則依下列次序優先分析： 1. 丙胺酸胺基轉移酶(ALAT) 2. 總膽紅素/直接膽紅素 3. 膽汁酸 4. 天冬胺酸胺基轉移酶(ASAT) 5. 鹼性磷酸酶(AFOS) 6. γ-麩胺醯基轉移酶(GGT) 7. 乳酸脫氫酶(LDH) 8. 肌酸激酶(CK) 9. 白蛋白 10. 總蛋白 11. 肌酸酐 12. 尿素氮

由於血清樣品有限，僅對生命中樣品之ALAT進行了分析。 血液學組套

在生命中採樣及末期屍檢時，對EDTA全血中之血液學標誌物組套進行以下參數分析：血紅素、紅血球計數、白血球計數(包括相對及絕對差異計數)、絕對網狀紅血球計數、網狀紅血球%、及凝血細胞計數。若全血之檢定量允許，則包括額外參數：血球比容、平均紅血球體積、平均紅血球血紅素及平均紅血球血紅素濃度。 基因分型樣品

在終點採樣處採集尾部樣品，以便透過常規PCR進行可能的重新基因分型。 統計分析與資料圖形呈現

在進一步統計分析之前，進行資料品質檢查及驗證。在此過程中，潛在的異常值被識別及評估。若沒有明確的刪除理由(例如，實驗室記錄中發現的量測錯誤)，則不會自資料中刪除任何異常值。

本研究計劃的比較為： ● 第1組相對於第2組及第7組 ● 第2組相對於第3-6組

每個資料集之常態性假設主要基於經驗(例如，已知群體內之資料近似為高斯分佈)及驗證階段之觀察結果。已知一些生物學變數遵循對數常態分佈——在此等情況下，首先將資料轉換為對數，然後可使用參數統計檢驗。相同的常態性假設用於一系列實驗或來自檢定的一組類似讀數。此外，D’Agostino-Pearson綜合(omnibus)常態性檢驗用於臨床化學及血液學資料，以支持是否使用參數檢驗或非參數檢驗之決定。用於統計分析及視覺化之讀數總結匯總於下表 7。表 7. 用於統計分析及視覺化之讀數總結

測試 / 檢定	正規化	視覺化
體重	無	線形圖
血液學	無	長條圖
臨床化學	無	長條圖

為每個參數提供了描述性統計資料，包括組別大小、平均值、SD及SEM。 單時間點資料之統計分析

使用未配對Welch氏t檢驗進行兩組之間的簡單比較，或者，當不滿足常態性或對數常態性假設時，使用Mann-Whitney U檢驗進行。 對相同受試者之重複觀察 ( 縱向資料 )

使用帶有Geisser-Greenhouse校正(不假設球形)之雙因子混合效應模型(Mixed Anova)進行兩組之間的比較，然後在每個時間點進行兩組之間的Fisher氏LSD檢驗。時間、組別以及時間×組別之交互係固定效應，且個別受試者為隨機效應。

在三組或更多組縱向比較之情況下，利用帶有Geisser-Greenhouse校正之雙因子混合效應模型，然後進行Dunnett氏多重比較檢驗。每時間點設定一個家庭。時間、組別以及時間×組別之交互係固定效應，且個別受試者為隨機效應。

以下部分提供了上表 6中提到的某些參數之詳細結果。結果

本研究之結果提供了上述組成物及方法之安全性及功效的指示。體重

在所有時間點，與WT媒劑小鼠相比，HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠之體重均顯著較低(雙因子變異數分析：組別：p＜0.0001)(Fisher氏LSD多重比較：p ＜0.001，對於所有)( 圖 5)。

在第7-16週，WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP小鼠之體重顯著低於 WT媒劑小鼠(雙因子變異數分析：組別：p ＜ 0.05)(Fisher氏LSD多重比較： p ＜ 0.05，對於所有)( 圖 5)。

HEMI小鼠之體重顯著改變(雙因子變異數分析：組別效應：NS，組別 x 時間交互效應：p ＜ 0.0001)。事後比較揭示，與HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相比，在第4週及第5週，HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8 空衣殼小鼠之體重顯著降低(Dunnett氏多重比較：p ＜ 0.05，對於兩者)以及在第5-6週及第8-9週，HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP小鼠之體重顯著降低(Dunnett氏多重比較：p ＜ 0.05，對於所有) 。 死亡率

沒有展示給藥前死亡或實施安樂死之動物的資料。第1-3組、第5組及第7組中沒有觀察到死亡率。第4組、第6組及初始組中各有兩隻小鼠在給藥前因與測試物品無關之因素而死亡。 臨床化學

所有組別之所有臨床化學評估均僅由末期樣品(初始小鼠第16週或第5週)進行，但ALAT除外，其係自生命中樣品及末期樣品(第4-10週)分析的。臨床化學分析之資料如圖 6A 至圖 19B所示。 鹼性磷酸酶 (AFOS)

16週齡時各組之間的AFOS水準沒有統計學顯著差異( 圖 6A)。

5週齡時初始小鼠之AFOS水準如圖 6B所示。 丙胺酸胺基轉移酶 (ALAT)

與WT媒劑小鼠相比，在6週及16週時間點時HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠之ALAT水準顯著增加(雙因子變異數分析：組別效應：p = 0.0005)(Fisher氏LSD多重比較：p ＜ 0.05，對於兩者)( 圖 7A)。

與HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相比，10週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1小鼠之ALAT水準顯著增加(單因子變異數分析：組別效應：p = 0.0026 ，Dunnett氏事後比較：p＜0.05)( 圖 7A)。

5週齡時初始小鼠之ALAT水準如圖 7B所示。 天冬胺酸胺基轉移酶 (ASAT)

與WT媒劑小鼠相比，16週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠之ASAT水準顯著增加(t檢驗：p＜0.01)( 圖 8A)。

5週齡時初始小鼠之ASAT水準如圖 8B所示。 白蛋白

在16週齡時各組的白蛋白水準之間不存在統計學顯著差異( 圖 9A)。

5週齡時初始小鼠之白蛋白水準如圖 9B所示。 γ- 麩胺醯基轉移酶 (GGT)

與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比，16週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼小鼠及HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP小鼠之GGT水準顯著增加(單因子變異數分析：組別效應：p=0.0013，Dunnett氏事後比較：p＜0.05，對於兩者) ( 圖 10A)。

5週齡時初始小鼠之GGT水準如圖 10B所示。 總蛋白

16週齡時各組之間的總蛋白水準不存在統計學顯著差異( 圖 11A)。

5週齡時初始小鼠之總蛋白水準如圖 11B所示。尿素

16週齡時各組之間的尿素水準不存在統計學顯著差異( 圖 12A)。

5週齡時初始小鼠之尿素水準如圖 12B所示。 乳酸脫氫酶 (LDH)

16週齡時各組之間的LDH水準不存在統計學顯著差異( 圖 13A)。

5週齡時初始小鼠之LDH水準如圖 13B所示。 膽汁酸

與HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相比，16週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼小鼠之膽汁酸水準顯著增加(單因子變異數分析：組別效應：p = 0.0258，Dunnett氏事後比較：p＜0.05)( 圖 14A)。然而，值得注意的是，所有治療組中大部分膽汁酸值均低於偵測水準。

5週齡時初始小鼠之膽汁酸水準如圖 14B所示。 總膽紅素

16週齡時各組之間的總膽紅素水準不存在統計學顯著差異( 圖 15)。

未獲得5週齡時初始小鼠之總膽紅素資料(所有數值均低於偵測水準)。 計算球蛋白

與WT媒劑小鼠相比，16週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠之計算球蛋白水準顯著增加(t檢驗：p ＜ 0.05)( 圖 16A)。

5週齡時初始小鼠之計算球蛋白水準如圖 16B所示。 計算白蛋白 / 球蛋白比率

16週齡時各組之間的計算白蛋白/球蛋白比率不存在統計學顯著差異( 圖 17A)。

5週齡時初始小鼠之白蛋白/球蛋白比率水準如圖 17B所示。 肌酸激酶

與WT媒劑小鼠相比，16週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠之CK水準顯著增加(t檢驗：p ＜ 0.05)( 圖 18A)。

5週齡時初始小鼠之CK水準如圖 18B所示。 肌酸酐

16週齡時各組之間的肌酸酐水準不存在統計學顯著差異( 圖 19A)。

5週齡時初始小鼠之肌酸酐水準如圖 19B所示。 血液學

由於生命中採樣(大隱靜脈、無麻醉)及末期採樣(心臟穿刺、戊巴比妥麻醉)之間的血液採樣技術不同，分別對生命中樣品(第4-10週)及末期樣品(第16週)進行統計分析。據報導，不同的血液採樣技術會導致血液參數(例如白血球總數)有顯著差異(Hoggatt等人. Exp Hematol. 44(2):132–137.e1. (2016) )。來自血液學分析之資料如圖 20A 至圖 41B所示。 白血球計數 (WBC)

與WT媒劑小鼠相比，16週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠之白血球計數顯著增加(t檢驗， p＜0.05)( 圖 20A)。與HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相比，7週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼小鼠之白血球計數顯著增加(雙因子變異數分析：組別效應：NS，組別 x 時間交互效應：p＜0.05，Dunnett氏事後比較：p＜0.05)( 圖 20A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之白血球計數如圖 20B所示。 紅血球計數 (RBC)

各組之間的紅血球計數不存在統計學顯著差異( 圖 21A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之紅血球計數如圖 21B所示。 血紅素 (HGB)

各組之間的血紅素水準不存在統計學顯著差異( 圖 22A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之血紅素水準如圖 22B所示。 血球比容 (HCT)

與HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相比，6週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1小鼠之血球比容水準顯著增加(雙因子變異數分析：組別效應：p ＜ 0.05，Dunnett氏事後比較：p＜0.05)( 圖 23A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之血球比容水準如圖 23B所示。 平均紅血球體積 (MCV)

與WT媒劑小鼠相比，4及5週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠之 MCV水準顯著降低(t檢驗，p＜0.01，對於所有) ( 圖 24A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之MCV水準如圖 24B所示。 平均紅血球血紅素 (MCH)

各組之間的MCH水準不存在統計學顯著差異( 圖 25A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之MCH水準如圖 25B所示。 平均紅血球血紅素濃度 (MCHC)

與HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相比，5週齡及16週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼小鼠以及6週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1小鼠之MCHC水準顯著降低，而7週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP小鼠之MCHC水準顯著增加(雙因子變異數分析：組別效應：NS，組別x時間交互效應：p＜0.01，Dunnett氏事後比較：p＜0.05，對於所有)( 圖 26A)

4週齡及5週齡時初始小鼠之MCHC水準如圖 26B所示。 凝血細胞計數 (PLT)

與WT媒劑小鼠相比，6週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠之凝血細胞或血小板計數顯著減少(雙因子變異數分析：組別效應：p ＜ 0.05，Dunnett氏事後比較：p ＜ 0.01)( 圖 27A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之凝血細胞或血小板計數如圖 27B所示。 嗜中性球計數 ( 相對 )(Neut(%))

各組之間的相對嗜中性球計數不存在統計學顯著差異( 圖 28A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之相對嗜中性球計數如圖 28B所示。 嗜中性球計數 ( 絕對 )(Neut)

各組之間的絕對嗜中性球計數不存在統計學顯著差異( 圖 29A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之絕對嗜中性球計數如圖 29B所示。 淋巴球計數 ( 相對 )(Lymph(%))

與HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相比，5及6週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼小鼠之相對淋巴球計數顯著減少(雙因子變異數分析：組別效應：NS，組別 x 時間交互效應：p＜0.05，Dunnett氏事後比較：p＜0.05，對於所有)( 圖 30A)。

初始小鼠之相對淋巴球計數如圖 30B所示。 淋巴球計數 ( 絕對 )(Lymph)

與WT媒劑小鼠相比，16週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠之絕對淋巴球計數顯著增加(t檢驗，p＜0.01)( 圖 31A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之絕對淋巴球計數如圖 31B所示。 單核球計數 ( 相對 )(Mono(%))

與WT媒劑小鼠相比，16週齡時WT AAV8-Des-mMTM1+AAV8-Des-hMTM1-STOP小鼠中之相對單核球計數顯著增加(t檢驗，p＜0.05)( 圖 32A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之相對單核球計數如圖 32B所示。 單核球計數 ( 絕對 )(Mono)

與WT媒劑小鼠相比，16週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠之絕對單核球計數顯著增加(t檢驗：p＜0.01)( 圖 33A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之絕對單核球計數如圖 33B所示。 嗜酸性球計數 ( 相對 )(Eos(%))

與HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相比，4週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼小鼠之嗜酸性球計數顯著增加(雙因子變異數分析：組別效應：p ＜ 0.05， Dunnett氏事後比較：p＜0.01)( 圖 34A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之嗜酸性球計數如圖 34B所示。 嗜酸性球計數 ( 絕對 )(Eos)

與HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相比，5週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼小鼠之絕對嗜酸性球計數顯著增加(雙因子變異數分析：組別效應：p = 0.0001， Dunnett氏事後比較：p ＜ 0.05)( 圖 35A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之絕對嗜酸性球計數如圖 35B所示。 嗜鹼性球計數 ( 相對 )(Baso(%))

與HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相比，5週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼小鼠及HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP小鼠之相對嗜鹼性球計數顯著降低(雙因子變異數分析：組別效應：NS，組別x時間交互效應：p＜0.01，Dunnett氏事後比較：p＜0.05)( 圖 36A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之相對嗜鹼性球計數如圖 36B所示。 嗜鹼性球計數 ( 絕對 )(Baso)

各組之間的絕對嗜鹼性球計數不存在統計學顯著差異( 圖 37A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之絕對嗜鹼性球計數如圖 37B所示。 大型未染色細胞計數 ( 相對 )(LUC(%))

與WT媒劑小鼠相比，7週齡時WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP小鼠中相對大型未染色細胞計數顯著增加(雙因子變異數分析：組別效應：p ＜ 0.05，Dunnett氏事後比較：p＜0.01)( 圖 38A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之相對大型未染色細胞計數如圖 38B所示。 大型未染色細胞計數 ( 絕對 )(LUC)

與HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相比，6週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP小鼠及10週齡時HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1小鼠之絕對大型未染色細胞計數顯著減少(雙因子變異數分析：組別效應：NS，組別x時間交互效應：p ＜ 0.05，Dunnett氏事後比較：p ＜ 0.05 ) ( 圖 39A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之絕對大型未染色細胞計數如圖 39B所示。 網狀紅血球計數 ( 相對 )(Retic(%))

各組之間的相對網狀紅血球計數不存在統計學顯著差異( 圖 40A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之相對網狀紅血球計數如圖 40B所示。 網狀紅血球計數 ( 絕對 )(Retic)

各組之間的絕對網狀紅血球計數不存在統計學顯著差異( 圖 41A)。

4週齡及5週齡時初始小鼠之絕對網狀紅血球計數如圖 41B所示。結論

上述實驗之結果支持了編碼在肝臟定向調控元件控制下之MTM1轉殖基因的AAV載體，視情況與編碼在肌肉定向調控元件控制下之MTM1轉殖基因的AAV載體組合，用於治療XLMTM之安全性及功效。實例2. 藉由同步投與包括可操作連接至肝臟特異性啟動子之編碼肌微管蛋白1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體及包括可操作連接至結蛋白啟動子之編碼肌微管蛋白1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體來治療人類患者之X連鎖肌微管性肌病

使用本揭露之組成物及方法，可向患有XLMTM之患者同步投與包括可操作連接至肝臟特異性啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體( 圖 1 及圖 2)及包括可操作連接至結蛋白啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體(例如，比瑞崙基)，各自劑量為小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg (例如，其量小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2.8 x 10 ¹⁴vg/kg、2.7 x 10 ¹⁴vg/kg、2.6 x 10 ¹⁴vg/kg、2.5 x 10 ¹⁴vg/kg、2.4 x 10 ¹⁴vg/kg、2.3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg或更小)。

在向患者同步投與包括可操作連接至肝臟特異性啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體( 圖 1 及圖 2)及包括可操作連接至結蛋白啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體(例如，比瑞崙基)後，患者展現出最大吸氣壓力相對於基線之變化。例如，在向患者同步投與包括可操作連接至肝臟特異性啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體( 圖 1 及圖 2)及包括可操作連接至結蛋白啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體(例如，比瑞崙基)後，患者展現出最大吸氣壓力相對於基線約24週(例如，約20週、16週、12週、8週或4週)之變化。實例3. 藉由包括可操作連接至肝臟特異性啟動子之編碼肌微管蛋白1基因之核酸序列及可操作連接至結蛋白啟動子之編碼肌微管蛋白1基因之核酸序列二者的假型AAV2/8載體來治療人類患者之X連鎖肌微管性肌病

使用本揭露之組成物及方法，可向患有XLMTM之患者投與包括可操作連接至肝臟特異性啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列及可操作連接至肌肉特異性啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列二者的假型AAV2/8載體( 圖 3)，其劑量為小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg (例如，其量小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2.8 x 10 ¹⁴vg/kg、2.7 x 10 ¹⁴vg/kg、2.6 x 10 ¹⁴vg/kg、2.5 x 10 ¹⁴vg/kg、2.4 x 10 ¹⁴vg/kg、2.3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg或更小)。

在向患者投與包括可操作連接至肝臟特異性啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列及可操作連接至肌肉特異性啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列二者的假型AAV2/8載體( 圖 3)後，患者表現出機械通氣支持之小時數隨時間推移相對於基線之變化。例如，在向患者投與包括可操作連接至肝臟特異性啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列及可操作連接至肌肉特異性啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列二者的AAV2/8載體( 圖 3)後，患者表現出機械通氣支持之小時數隨時間推移相對於基線約24週(例如，約20週、16週、12週、8週或4週)之變化。實例4. 藉由包括可操作連接至泛在啟動子的編碼肌微管蛋白1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體治療人類患者之X連鎖肌微管性肌病

使用本揭露之組成物及方法，可向患有XLMTM之患者投與包括可操作連接至泛在啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列的假型AAV2/8載體( 圖 4)，其劑量為小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg (例如，其量小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2.8 x 10 ¹⁴vg/kg、2.7 x 10 ¹⁴vg/kg、2.6 x 10 ¹⁴vg/kg、2.5 x 10 ¹⁴vg/kg、2.4 x 10 ¹⁴vg/kg、2.3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg或更小)。

在向患者投與包括可操作連接至泛在啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列的假型AAV2/8載體( 圖 4)後，患者實現功能獨立坐立至少30秒。例如，在向患者投與包括可操作連接至泛在啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列的假型AAV2/8載體( 圖 4)後，患者在約24週(例如，約20週、16週、12週、8週、或4週)實現功能獨立坐立。實例5. 藉由包括肝臟表現構築體之非病毒載體與包括可操作連接至結蛋白啟動子的編碼肌微管蛋白1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體組合來治療人類患者之X連鎖肌微管性肌病

使用本揭露之組成物及方法，可向患有XLMTM之患者投與包括肝臟表現構築體之非病毒載體(例如，脂質奈米粒子)與包括可操作連接至結蛋白啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體(例如，比瑞崙基)組合，該AAV2/8載體之投與劑量為小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg(例如，其量為小於約3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.9 x 10 ¹⁴vg/kg、2.8 x 10 ¹⁴vg/kg、2.7 x 10 ¹⁴vg/kg、2.6 x 10 ¹⁴vg/kg、2.5 x 10 ¹⁴vg/kg、2.4 x 10 ¹⁴vg/kg、2.3 x 10 ¹⁴vg/kg、2.2 x 10 ¹⁴vg/kg、2.1 x 10 ¹⁴vg/kg、2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.9 x 10 ¹⁴vg/kg、1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1.7 x 10 ¹⁴vg/kg、1.6 x 10 ¹⁴vg /kg、1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、1.4 x 10 ¹⁴vg/kg、1.3 x 10 ¹⁴vg/kg、1.2 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹³vg/kg、1 x 10 ¹²vg/kg、1 x 10 ¹¹vg/kg、1 x 10 ¹⁰vg/kg、1 x 10 ⁹vg/kg、1 x 10 ⁸vg/kg或更小)。

在向患者投與包括肝臟表現構築體之非病毒載體(例如，脂質奈米粒子)與包括可操作連接至結蛋白啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體(例如，比瑞崙基)組合後，患者實現功能獨立坐立至少30秒。例如，在向患者投與包括肝臟表現構築體之非病毒載體(例如，脂質奈米粒子)與包括可操作連接至結蛋白啟動子的編碼MTM1基因之核酸序列之假型AAV2/8載體(例如，比瑞崙基)組合後，患者在約24週(例如，約20週、16週、12週、8週或4週)實現功能獨立坐立至少30秒。

圖 1係用於表現人類或小鼠肌微管蛋白1 (MTM1)基因的示範性腺相關病毒(AAV)載體之示意圖(例如，假型AAV載體，諸如含有包裝於來自AAV8之衣殼蛋白內之AAV2反向末端重複序列的AAV載體)。自左至右，陰影箭頭及矩形表示編碼以下之核酸序列：可操作連接至β-珠蛋白內含子(b-globin intron)之ApoE/A1AT肝臟特異性啟動子(ApoE/A1AT)、人類或小鼠MTM1基因、SV40多腺苷酸化訊號(SV40-polyA)及側翼反向末端重複序列(ITR)。圖 2係用於表現人類或小鼠肌微管蛋白1 (MTM1)基因的示範性AAV載體之示意圖(例如，假型AAV載體，諸如含有包裝於來自AAV8之衣殼蛋白內之AAV2反向末端重複序列的AAV載體)。自左至右，陰影箭頭及矩形表示編碼以下之核酸序列：可操作連接至SV40內含子之LP1肝臟特異性啟動子(LP1啟動子)、人類或小鼠MTM1基因、SV40多腺苷酸化訊號(SV40-polyA)及側翼反向末端重複序列(ITR)。圖 3係用於表現人類肌微管蛋白1 (hMTM1)基因的示範性AAV載體之示意圖(例如，假型AAV載體，諸如含有包裝於來自AAV8之衣殼蛋白內之AAV2反向末端重複序列的AAV載體)。自左至右，陰影箭頭及矩形表示編碼以下之核酸序列：可操作連接至hMTM1及多腺苷酸化訊號(polyA)之肌肉特異性啟動子(例如，MCK、結蛋白)、轉錄暫停位點、可操作連接至hMTM1之肝臟特異性啟動子(例如，ApoE/A1AT、LP1)、多腺苷酸化訊號 (polyA)及側翼反向末端重複序列(ITR)。圖 4係用於表現人類肌微管蛋白1 (hMTM1)基因的示範性AAV載體之示意圖(例如，假型AAV載體，諸如含有包裝於來自AAV8之衣殼蛋白內之AAV2反向末端重複序列的AAV載體)。自左至右，陰影箭頭及矩形表示編碼以下之核酸序列：可操作連接至hMTM1之泛在啟動子(例如，PGK、Ef1a、GAPDH)、多腺苷酸化訊號(polyA)及側翼反向末端重複序列(ITR)。圖 5係展示在一段時間內(以週為單位之年齡)的體重(g)之圖，均值+SEM (n＝10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。統計學意義：HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠相對於WT媒劑小鼠：對於所有時間點p ＜ 0.001；WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP小鼠相對於WT媒劑小鼠：對於第7-16週p ＜ 0.05；HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼小鼠相對於HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠：第4週及第5週p ＜ 0.05；HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP小鼠相對於HEMI AAV8-Des-mMTM1小鼠：第5-6週及第8-9週p ＜ 0.05。圖5縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子。圖 6A係展示鹼性磷酸酶(AFOS)(U/L)水準之圖，均值+SEM (n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。沒有觀察到統計學差異。圖6A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；AFOS，鹼性磷酸酶。圖 6B係展示初始小鼠(naïve mice)中鹼性磷酸酶(AFOS)(U/L)水準之圖，均值+SEM (n=11)，。圖6B縮寫：AFOS，鹼性磷酸酶。圖 7A係展示丙胺酸胺基轉移酶(ALAT)(U/L)水準之圖，均值+SEM (生命中樣品(第4-10週)：n＝0-7；末期樣品(第16週)：n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。未展示低於偵測限之組的資料。統計學差異：*p＜0.05，與WT媒劑相比； ^#p＜0.05，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖7A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；ALAT，丙胺酸胺基轉移酶。圖 7B係展示初始小鼠中丙胺酸胺基轉移酶(ALAT)(U/L)水準之圖，均值+SEM (n＝5-11)，以下面實例1中描述之方式量測。圖7B縮寫：ALAT，丙胺酸胺基轉移酶。圖 8A係展示天冬胺酸胺基轉移酶(ASAT) (U/L)水準之圖，均值+SEM (n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。統計學差異：**p＜0.01，與WT媒劑相比。圖8A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；ASAT，天冬胺酸胺基轉移酶。圖 8B係展示初始小鼠中天冬胺酸胺基轉移酶(ASAT)(U/L)水準之圖，均值+SEM (n=11)，以下面實例1中描述之方式量測。圖8B縮寫：ASAT，天冬胺酸胺基轉移酶。圖 9A係展示白蛋白(g/L)水準之圖，均值+SEM (n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。沒有觀察到統計學差異。圖9A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子。圖 9B係展示初始小鼠中白蛋白(g/L)水準之圖，均值+SEM (n=11)，以下面實例1中描述之方式量測。圖 10A係展示γ-麩胺醯基轉移酶(GGT) (U/L)水準之圖，均值+SEM (n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。統計學差異： ^#p＜0.05， ^##p＜0.01，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖10A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；GGT，γ-麩胺醯基轉移酶。圖 10B係展示初始小鼠中γ-麩胺醯基轉移酶(GGT) (U/L)水準之圖，均值+SEM (n=11)，以下面實例描述之方式量測。圖10B縮寫：GGT，γ-麩胺醯基轉移酶。圖 11A係展示總蛋白質(g/L)水準之圖，均值+SEM (n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。沒有觀察到統計學差異。圖11A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子，Prot tot，總蛋白質。圖 11B係展示初始小鼠中總蛋白質(g/L)水準之圖，均值+SEM (n=11)，以下面實例1中描述之方式量測圖11B縮寫：Prot tot，總蛋白質。圖 12A係展示尿素(mmol/L)水準之圖，均值+SEM (n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。沒有觀察到統計學差異。圖12A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子。圖 12B係展示初始小鼠中尿素(mmol/L)水準之圖，均值+SEM (n=11)，以下面實例1中描述之方式量測。圖 13A係展示乳酸脫氫酶(LDH) (U/I)水準之圖，均值+SEM (n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。沒有觀察到統計學差異。圖13A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；LDH，乳酸脫氫酶。圖 13B係展示初始小鼠中乳酸脫氫酶(LDH) (U/I)水準之圖，均值+SEM (n=11)，以下面實例1中描述之方式量測。圖13B縮寫：LDH，乳酸脫氫酶。圖 14A係展示膽汁酸(µmol/L)水準之圖，均值+SEM (n=0-3，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。未展示低於偵測限之組的資料。統計學差異： ^#p＜0.05，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖14A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子。圖 14B係展示初始小鼠中膽汁酸(µmol/L)水準之圖，均值+SEM (n=11)，以下面實例1中描述之方式量測。圖 15係展示總膽紅素(µmol/L) 水準之圖，均值+SEM (n=0-8，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。未展示低於偵測限之組的資料。沒有觀察到統計學差異。圖15縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；BilTot，總膽紅素。圖 16A係展示計算球蛋白(g/L)水準之圖，均值+SEM (n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。統計學差異：*p＜0.05，與WT媒劑相比。圖16A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子。圖 16B係展示初始小鼠中計算球蛋白(g/L)水準之圖，均值+SEM (n=11)，以下面實例1中描述之方式量測。圖 17A係展示計算白蛋白/球蛋白比率水準之圖，均值+SEM (n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。沒有觀察到統計學差異。圖17A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子。圖 17B係展示初始小鼠中計算白蛋白/球蛋白比率水準之圖，均值+SEM (n=11)，以下面實例1中描述之方式量測。圖 18A係展示肌酸激酶(U/L)水準之圖，均值+SEM (n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。統計學差異：*p＜0.05，與WT媒劑相比。圖18A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；CK，肌酸激酶。圖 18B係展示初始小鼠中肌酸激酶(U/L)水準之圖，均值+SEM (n=11)，以下面實例1中描述之方式量測圖18B縮寫：CK，肌酸激酶。圖 19A係展示肌酸酐(umol/L)水準之圖，均值+SEM (n=10-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。沒有觀察到統計學差異。圖19A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子。圖 19B係展示初始小鼠中肌酸酐(umol/L)水準之圖，均值+SEM (n=11)，以下面實例1中描述之方式量測。圖 20A係展示白血球計數(WBC) (x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異：*p＜0.05，與WT媒劑相比； ^#p＜0.05，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖20A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；WBC，白血球計數。圖 20B係展示初始小鼠中白血球計數(WBC) (x10 ⁹細胞/L)水準之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖20B縮寫：WBC，白血球計數。圖 21A係展示紅血球計數(RBC) (x10 ¹²細胞/L)之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。沒有觀察到統計學差異。圖21A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；RBC，紅血球計數。圖 21B係展示初始小鼠中紅血球計數(RBC) (x10 ¹²細胞/L)水準之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖21B縮寫：RBC，紅血球計數。圖 22A係展示血紅素(g/L)水準之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。沒有觀察到統計學差異。圖22A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；HGB，血紅素。圖 22B係展示初始小鼠中血紅素(g/L)水準之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測圖22B縮寫：HGB，血紅素。圖 23A係展示血球比容(HCT) (%)水準之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異： ^#p＜0.05，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖23A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；HCT，血球比容。圖 23B係展示初始小鼠中血球比容(HCT) (%)水準之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測圖23B縮寫：HCT，血球比容。圖 24A係展示平均紅血球體積(MCV) (fL)水準之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異：*p＜0.05，與WT媒劑相比； ^#p＜0.05，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖24A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；MCV，平均紅血球體積。圖 24B係展示初始小鼠中平均紅血球體積(MCV) (fL)水準之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例描述之方式量測。圖24B縮寫：MCV，平均紅血球體積。圖 25A係展示平均紅血球血紅素(MCH) (pg)水準之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。沒有觀察到統計學差異。圖25A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；MCH，平均紅血球血紅素。圖 25B係展示初始小鼠中平均紅血球血紅素(MCH) (pg)水準之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例描述之方式量測。圖25B縮寫：MCH，平均紅血球血紅素。圖 26A係展示平均紅血球血紅素濃度(MCHC) (g/L)水準之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異： ^#p＜0.05，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖26A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；MCHC，平均紅血球血紅素濃度。圖 26B係展示初始小鼠中平均紅血球血紅素濃度(MCHC) (g/L)水準之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例描述之方式量測。圖26B縮寫：MCHC，平均紅血球血紅素濃度。圖 27A係展示凝血細胞計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異：*p＜0.05，與WT媒劑相比。圖27A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；PLT，血小板或凝血細胞計數。圖 27B係展示初始小鼠中凝血細胞計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖27B縮寫：PLT，血小板或凝血細胞計數。圖 28A係展示相對嗜中性球計數(嗜中性球(%))之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。沒有觀察到統計學差異。圖28A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；%NEUT，嗜中性球(%)。圖 28B係展示初始小鼠中相對嗜中性球計數(嗜中性球(%))之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖28B縮寫：%NEUT，嗜中性球 (%)。圖 29A係展示絕對嗜中性球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。沒有觀察到統計學差異。圖29A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；Abs/絕對NEUT，絕對嗜中性球計數。圖 29B係展示初始小鼠中絕對嗜中性球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖29B縮寫：Abs/絕對NEUT，絕對嗜中性球計數。圖 30A係展示相對淋巴球計數(淋巴球(%))之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異： ^#p＜0.05，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖30A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；%LYM，淋巴球(%)。圖 30B係展示初始小鼠中相對淋巴球計數(淋巴球(%))之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例描述之方式量測。圖30B縮寫：%LYM，淋巴球(%)。圖 31A係展示絕對淋巴球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異：*p＜0.05，與WT媒劑相比。圖31A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；Abs/絕對LYMPHS，絕對淋巴球計數。圖 31B係展示初始小鼠中絕對淋巴球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖31B縮寫：Abs/絕對LYMPHS，絕對淋巴球計數。圖 32A係展示相對單核球計數(單核球(%))之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異：*p＜0.05，與WT媒劑相比。圖32A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；%MONO，單核球(%)。圖 32B係展示初始小鼠中相對單核球計數(單核球(%))之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例描述之方式量測。圖32B縮寫：%MONO，單核球(%)。圖 33A係展示絕對單核球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異：*p＜0.05，與WT媒劑相比。圖33A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；Abs/絕對MONOS，絕對單核球計數。圖 33B係展示初始小鼠中絕對單核球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖33B縮寫：Abs/絕對MONOS，絕對單核球計數。圖 34A係展示相對嗜酸性球計數(嗜酸性球(%))之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異： ^##p＜0.05，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖34A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；%EOS，嗜酸性球(%)。圖 34B係展示初始小鼠中相對嗜酸性球計數(嗜酸性球(%))之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖34B縮寫：%EOS，嗜酸性球(%)。圖 35A係展示絕對嗜酸性球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異： ^#p＜0.05，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖35A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；Abs/絕對EOS，絕對嗜酸性球計數。圖 35B係展示初始小鼠中絕對嗜酸性球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖35B縮寫：Abs/絕對EOS，絕對嗜酸性球計數。圖 36A係展示相對嗜鹼性球計數(嗜鹼性球(%))之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。未展示低於偵測限之組的資料。統計學差異： ^#p＜0.05，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖36A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；%BASO，嗜鹼性球(%)。圖 36B係展示初始小鼠中相對嗜鹼性球計數(嗜鹼性球(%))之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖36B縮寫：%BASO，嗜鹼性球(%)。圖 37A係展示絕對嗜鹼性球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。沒有觀察到統計學差異。未展示低於偵測限之組的資料。圖37A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；Abs/絕對BASOS，絕對嗜鹼性球計數。圖 37B係展示初始小鼠中絕對嗜鹼性球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。未展示低於偵測限之組的資料。圖37B縮寫：Abs/絕對BASOS，絕對嗜鹼性球計數。圖 38A係展示相對大型未染色細胞計數(大型未染色細胞(%))之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。統計學差異：**p＜0.01，與WT媒劑相比。圖38A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；%LUC，大型未染色細胞(%)。圖 38B係展示初始小鼠中相對大型未染色細胞計數(大型未染色細胞(%))之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖38B縮寫：%LUC，大型未染色細胞(%)。圖 39A係展示絕對大型未染色細胞計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。未展示低於偵測限之組的資料。統計學差異： ^#p＜0.05， ^##p＜0.01，與HEMI AAV8-Des-mMTM1相比。圖39A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；Abs/絕對LUCS，絕對大型未染色細胞計數。圖 39B係展示初始小鼠中絕對大型未染色細胞計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。未展示低於偵測限之組的資料。圖39B縮寫：Abs/絕對LUCS，絕對大型未染色細胞計數。圖 40A係展示相對網狀紅血球計數(網狀紅血球(%))之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。沒有觀察到統計學差異。圖40A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；%Retic，網狀紅血球(%)。圖 40B係展示初始小鼠中相對網狀紅血球計數(網狀紅血球(%))之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例描述之方式量測。圖40B縮寫：%Retic，網狀紅血球(%)。圖 41A係展示絕對網狀紅血球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=5-14，對於所有)，以下面實例1中描述之方式量測。在第4、5、6、7、10及16週之各時間點，自左至右對以下組進行測試：WT媒劑、HEMI AAV8-Des-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8空衣殼、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1、HEMI AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-APoE-A1AT-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP、及WT AAV8-Des-mMTM1 + AAV8-Des-hMTM1-STOP。沒有觀察到統計學差異。圖41A縮寫：WT，野生型；HEMI，半合子；Abs/絕對Retic，絕對網狀紅血球計數。圖 41B係展示初始小鼠中絕對網狀紅血球計數(x10 ⁹細胞/L)之圖，均值+SEM (n=3/9)，以下面實例1中描述之方式量測。圖41B縮寫：Abs/絕對Retic，絕對網狀紅血球計數。

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Claims

一種重組腺相關病毒(AAV)載體，其包含編碼肌微管蛋白1 (MTM1)之轉殖基因，其中該轉殖基因可操作連接至在肝組織中有活性之啟動子。
如請求項1之AAV載體，其中該啟動子在肝組織中選擇性地有活性。
如請求項2之AAV載體，其中在同等條件下將該載體分別與一或多種肝細胞及一或多種非肝細胞接觸(例如，體外或體內)後，該載體導致該一或多種肝細胞中該轉殖基因之表現水準高於該一或多種非肝細胞中該轉殖基因之表現水準。
如請求項3之AAV載體，其中將該載體分別與該一或多種肝細胞及該一或多種非肝細胞接觸後，該載體導致該一或多種肝細胞中該轉殖基因之表現水準係該一或多種非肝細胞中該轉殖基因之表現水準的2倍至1,000倍高。
如請求項4之AAV載體，其中將該載體分別與該一或多種肝細胞及該一或多種非肝細胞接觸後，該載體導致該一或多種肝細胞中該轉殖基因之表現水準係該一或多種非肝細胞中該轉殖基因之表現水準的50倍至1,000倍高。
如請求項5之AAV載體，其中將該載體分別與該一或多種肝細胞及該一或多種非肝細胞接觸後，該載體導致該一或多種肝細胞中該轉殖基因之表現水準係該一或多種非肝細胞中該轉殖基因之表現水準的100倍至1,000倍高。
如請求項2之AAV載體，其中將該載體與該一或多種肝細胞接觸後，該載體導致該一或多種肝細胞中該轉殖基因之表現水準係健康肝細胞中野生型MTM1表現水準之至少0.2倍、至少0.5倍、至少1倍、至少2倍、至少5倍、或至少10倍。
如請求項3至6中任一項之AAV載體，其中該等非肝細胞係肌肉細胞或神經細胞。
如請求項3至6中任一項之AAV載體，其中該等非肝細胞係心肌細胞。
如請求項1至9中任一項之AAV載體，其中該啟動子包含LP1啟動子。
如請求項10之AAV載體，其中該LP1啟動子包含與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少75%一致之核酸序列。
如請求項11之AAV載體，其中該LP1啟動子包含與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中該LP1啟動子包含與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。
如請求項12之AAV載體，其中該LP1啟動子包含SEQ ID NO: 3之核酸序列。
如請求項1至13中任一項之AAV載體，其中該啟動子包含載脂蛋白E (ApoE)啟動子。
如請求項14之AAV載體，其中該ApoE啟動子包含與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少75%一致之核酸序列。
如請求項15之AAV載體，其中該ApoE啟動子包含與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中該ApoE啟動子包含與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。
如請求項16之AAV載體，其中該ApoE啟動子包含SEQ ID NO: 8之核酸序列。
如請求項1至17中任一項之AAV載體，其中該啟動子包含α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)啟動子。
如請求項18之AAV載體，其中該A1AT啟動子包含與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少75%一致之核酸序列。
如請求項19之AAV載體，其中該A1AT啟動子包含與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中該A1AT啟動子包含與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。
如請求項20之AAV載體，其中該A1AT啟動子包含SEQ ID NO: 9之核酸序列。
如請求項1至21中任一項之AAV載體，其中該啟動子係包含ApoE啟動子及A1AT啟動子之嵌合啟動子。
如請求項22之AAV載體，其中該嵌合啟動子包含與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少75%一致之核酸序列。
如請求項23之AAV載體，其中該嵌合啟動子包含與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中該嵌合啟動子包含與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。
如請求項24之AAV載體，其中該嵌合啟動子包含SEQ ID NO: 2之核酸序列。
如請求項1至25中任一項之AAV載體，其中該啟動子包含組成型啟動子。
如請求項26之AAV載體，其中該組成型啟動子係磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子、延伸因子-1α (EF1α)啟動子、甘油醛3-磷酸脫氫酶(GAPDH )啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子或雞-β-肌動蛋白(CBA)啟動子。
如請求項1至27中任一項之AAV載體，其中該載體進一步包含編碼MTM1之第二轉殖基因。
如請求項28之AAV載體，其中編碼MTM1之該第二轉殖基因可操作連接至在肌肉組織中有活性之啟動子。
如請求項29之AAV載體，其中在肌肉組織中有活性之該啟動子係在肌肉組織中選擇性地有活性。
如請求項30之AAV載體，其中在肌肉組織中選擇性地有活性的該啟動子實現(例如，體外或體內)肌肉細胞中該MTM1轉殖基因之表現水準係非肌肉細胞中由相同啟動子實現的該MTM1轉殖基因之表現水準的2倍至1,000倍高。
如請求項31之AAV載體，其中在肌肉組織中選擇性地有活性的該啟動子實現肌肉細胞中該MTM1轉殖基因之表現水準係非肌肉細胞中由相同啟動子實現的該MTM1轉殖基因之表現水準的10倍至1,000倍高。
如請求項32之AAV載體，其中在肌肉組織中選擇性地有活性的該啟動子實現肌肉細胞中該MTM1轉殖基因之表現水準係非肌肉細胞中由相同啟動子實現的該MTM1轉殖基因之表現水準的50倍至1,000倍高。
如請求項33之AAV載體，其中在肌肉組織中選擇性地有活性的該啟動子實現肌肉細胞中該MTM1轉殖基因之表現水準係非肌肉細胞中由相同啟動子實現的該MTM1轉殖基因之表現水準的100倍至1,000倍高。
如請求項34之AAV載體，其中在肌肉組織中選擇性地有活性的該啟動子實現肌肉細胞中該MTM1轉殖基因之表現水準係非肌肉細胞中由相同啟動子實現的該MTM1轉殖基因之表現水準的至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍或至少100倍高。
如請求項28至35中任一項之AAV載體，其中編碼MTM1之該第二轉殖基因可操作連接至肌肉肌酸激酶(MCK)啟動子或結蛋白(DES)啟動子。
如請求項1至36中任一項之AAV載體，其中編碼MTM1之各轉殖基因獨立地包含：與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少75%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少75%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少75%一致之核酸序列。
如請求項37之AAV載體，其中編碼MTM1之各轉殖基因獨立地包含：與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中編碼MTM1之各轉殖基因獨立地包含與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中編碼MTM1之各轉殖基因獨立地包含與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中編碼MTM1之各轉殖基因獨立地包含與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。
如請求項38之AAV載體，其中編碼MTM1之各轉殖基因包含： SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列；或者 SEQ ID NO: 6之核酸序列；或者 SEQ ID NO: 7之核酸序列。
如請求項1至39中任一項之AAV載體，其中該AAV為AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAVrh10或AAVrh74血清型。
如請求項1至40中任一項之AAV載體，其中該AAV載體為假型AAV。
如請求項41之AAV載體，其中該假型AAV為AAV2/8或AAV2/9，視情況其中該假型AAV為AAV2/8。
一種治療有需要之人類患者之X連鎖肌微管性肌病(XLMTM)的方法，該方法包括向該患者投與治療有效量的如請求項1至42中任一項之AAV載體。
如請求項43之方法，其中該患者在投與該AAV載體時為五歲或更小。
如請求項44之方法，其中該患者在投與該AAV載體時為四歲或更小，視情況其中該患者係三歲或更小、兩歲或更小、一歲或更小、或六個月或更小。
如請求項43至45中任一項之方法，其中該AAV載體以小於3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向該患者投與。
如請求項46之方法，其中該AAV載體以小於2.5 x 10 ¹⁴vg/kg之量向該患者投與，視情況其中該AAV載體以小於2 x 10 ¹⁴vg/kg、小於1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、或小於1.4 x 10 ¹⁴vg/kg之量向該患者投與。
如請求項43至45中任一項之方法，其中該AAV載體以3 x 10 ¹³vg/kg至2.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向該患者投與，視情況其中該AAV載體以8 x 10 ¹³vg/kg至1.8 x 10 ¹⁴vg/kg、1 x 10 ¹⁴vg/kg至1.6 x 10 ¹⁴vg/kg、1.1 x 10 ¹⁴vg /kg至1.5 x 10 ¹⁴vg/kg、或1.2 x 10 ¹⁴vg/kg至1.4 x 10 ¹⁴vg/kg之量向該患者投與。
如請求項43至48中任一項之方法，其中該AAV載體以約1.3 x 10 ¹⁴vg/kg之量向該患者投與。
如請求項43至49中任一項之方法，其中該AAV載體藉由靜脈內、肌內、肝內、皮內、或皮下投與之方式向該患者投與。
如請求項43至50中任一項之方法，其中向該患者進一步投與抗膽汁淤積劑。
如請求項51之方法，其中該抗膽汁淤積劑選自由以下組成之群：膽汁酸、法尼醇X受體(FXR)配體、纖維母細胞生長因子19 (FGF-19)模擬物、Takeda-G蛋白受體5 (TGR5)促效劑、過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)促效劑、PPAR-α促效劑、PPAR-δ 促效劑、雙重PPAR-α及PPAR-δ促效劑、頂端鈉依賴性膽汁酸轉運蛋白(ASBT)抑制劑、免疫調節藥物、抗纖維化療法及菸鹼醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)抑制劑。
如請求項52之方法，其中： (i) 該FXR配體係奧貝膽酸(obeticholic acid)、西洛法索(cilofexor)、特羅法索(tropifexor)、維A酸(tretinoin)、或EDP-305； (ii) 該FGF-19模擬物係阿爾達弗敏(aldafermin)； (iii) 該TGR5促效劑係INT-777或INT-767； (iv) 該PPAR促效劑係苯扎貝特(bezafibrate)、塞拉德爾帕(seladelpar)、或艾拉貝諾(elafibrinor)； (v) 該PPAR-α促效劑係非諾貝特(fenofibrate)； (vi) 該PPAR-δ促效劑係塞拉德爾帕； (vii) 該雙重PPAR-α及PPAR-δ促效劑係艾拉菲諾(elafibranor)； (viii) 該ASBT抑制劑係奧德維昔巴特(odevixibat)、馬拉利昔巴特(maralixibat)、或利奈昔巴特(linerixibat)； (ix) 該免疫調節藥物係利妥昔單抗(rituximab)、阿巴西普(abatacept)、優特克單抗(ustekinumab)、英夫利昔單抗(infliximab)、巴瑞替尼(baricitinib)、或FFP-104； (x) 該抗纖維化療法係維生素D受體促效劑或辛妥珠單抗(simtuzumab)；且/或 (xi) 該NOX抑制劑係塞塔那昔布(setanaxib)。
如請求項52之方法，其中該膽汁酸係熊去氧膽酸、去甲熊去氧膽酸、或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項43至54中任一項之方法，其中該患者沒有膽汁淤積或高膽紅素血症之病史。
如請求項43至55中任一項之方法，其中該患者沒有任一潛在肝病之病史。
如請求項43至56中任一項之方法，其中該方法包括向患者投與治療有效量：(i)包含在肝組織中有活性(例如，選擇性地有活性)之啟動子控制下的編碼MTM1之轉殖基因的AAV載體，及(ii)包含在肌肉組織中有活性(例如，選擇性地有活性)之啟動子控制下的編碼MTM1之轉殖基因的AAV載體。
如請求項57之方法，其中在肝組織中有活性之該啟動子包含LP1啟動子。
如請求項58之方法，其中該LP1啟動子包含與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少75%一致之核酸序列。
如請求項59之方法，其中該LP1啟動子包含與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中該LP1啟動子包含與SEQ ID NO: 3之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。
如請求項60之方法，其中該LP1啟動子包含SEQ ID NO: 3之核酸序列。
如請求項57至61中任一項之方法，其中在肝組織中有活性之該啟動子包含ApoE啟動子。
如請求項62之方法，其中該ApoE啟動子包含與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少75%一致之核酸序列。
如請求項63之方法，其中該ApoE啟動子包含與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中該ApoE啟動子包含與SEQ ID NO: 8之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。
如請求項64之方法，其中該ApoE啟動子包含SEQ ID NO: 8之核酸序列。
如請求項57至65中任一項之方法，其中在肝組織中有活性之該啟動子包含A1AT啟動子。
如請求項66之方法，其中該A1AT啟動子包含與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少75%一致之核酸序列。
如請求項67之方法，其中該A1AT啟動子包含與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中該A1AT啟動子包含與SEQ ID NO: 9之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。
如請求項68之方法，其中該A1AT啟動子包含SEQ ID NO: 9之核酸序列。
如請求項57至69中任一項之方法，其中在肝組織中有活性之該啟動子係包含ApoE啟動子及A1AT啟動子之嵌合啟動子。
如請求項70之方法，其中該嵌合啟動子包含與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少75%一致之核酸序列。
如請求項71之方法，其中該嵌合啟動子包含與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中該嵌合啟動子包含與SEQ ID NO: 2之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。
如請求項72之方法，其中該嵌合啟動子包含SEQ ID NO: 2之核酸序列。
如請求項57至73中任一項之方法，其中在肌肉組織中有活性之該啟動子包含MCK啟動子或DES啟動子。
一種治療有需要之人類患者之XLMTM的方法，該方法包括向該患者投與治療有效量：(i)非病毒組成物，其包含可操作連接至在肝組織中有活性(例如，選擇性地有活性)之啟動子的編碼MTM1之核酸，及(ii) AAV載體，其包含在肌肉組織中有活性(例如，選擇性地有活性)之啟動子控制下的編碼MTM1之轉殖基因。
如請求項75之方法，其中該非病毒組成物為脂質體、囊泡、合成囊泡、外泌體、合成外泌體、樹枝狀聚合物或奈米粒子。
如請求項76之方法，其中該奈米粒子係脂質奈米粒子。
如請求項75至77中任一項之方法，其中該啟動子係DES啟動子。
如請求項75至78中任一項之方法，其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自獨立地包含：與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少75%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少75%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少75%一致之核酸序列。
如請求項79之方法，其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自獨立地包含：與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自獨立地包含與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自獨立地包含與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自獨立地包含與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。
如請求項80之方法，其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自包含： SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列；或者 SEQ ID NO: 6之核酸序列；或者 SEQ ID NO: 7之核酸序列。
如請求項75至81中任一項之方法，其中該AAV載體係比瑞崙基(resamirigene bilparvovec)。
一種套組，其包含如請求項1至42中任一項之AAV載體，其中該套組進一步包含指導用戶向診斷為患有XLMTM之患者投與該AAV載體的包裝插頁。
一種套組，其包含：(i)包含編碼MTM1之核酸的非病毒組成物，及(ii)包含在肌肉組織中有活性(例如，選擇性地有活性)之啟動子控制下的編碼MTM1之轉殖基因的AAV載體，其中該套組進一步包含指導用戶向診斷為患有XLMTM之患者投與該非病毒組成物及該AAV載體的包裝插頁。
如請求項84之套組，其中該非病毒組成物為脂質體、囊泡、合成囊泡、外泌體、合成外泌體、樹枝狀聚合物或奈米粒子。
如請求項85之套組，其中該奈米粒子係脂質奈米粒子。
如請求項84至86中任一項之套組，其中該啟動子係DES啟動子。
如請求項84至87中任一項之套組，其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自獨立地包含：與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少75%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少75%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 1之核酸序列至少75%一致之核酸序列。
如請求項88之套組，其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自獨立地包含：與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自獨立地包含與SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自獨立地包含與SEQ ID NO: 6之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列；或者與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少80%一致之核酸序列，視情況其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自獨立地包含與SEQ ID NO: 7之核酸序列至少81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之核酸序列。
如請求項89之套組，其中編碼MTM1之該核酸及編碼MTM1之該轉殖基因各自包含： SEQ ID NO: 1之殘基4927-6748之核酸序列；或者 SEQ ID NO: 6之核酸序列；或者 SEQ ID NO: 7之核酸序列。
如請求項84至90中任一項之套組，其中該AAV載體為比瑞崙基。