TW202325165A - 飼料添加物組合物及使用方法 - Google Patents

Abstract

本揭示內容提供能刺激肌肉功能及健康之用於馴養動物之飼料添加物以及用於促進馴養動物之肌肉功能及健康及畜牧學性能之相關方法。所提供之該動物飼料添加物含有高山醋栗( Ribes alpinum)或其提取物。本揭示內容亦闡述經由飲食包含高山醋栗或其提取物來改善肌肉功能及健康之方法。

Description

飼料添加物組合物及使用方法

本發明係關於動物飼料添加物之領域，且更特定而言係關於用於改善馴養動物性能之組合物及方法。

據預測，世界人口將在未來20年內增加一倍，此使得所需動物製食品之數量增加一倍。此係之前已解決之挑戰，此乃因在20世紀下半葉，動物製食品已增加一倍。然而，在挑戰相類似似之情況下，達成其之方法卻截然不同。實際上，在20世紀，動物產量之驚人增加係藉由古典營養學、農場管理、遺傳學及抗生素與化學化合物之準系統使用之形式中之進步而使成為可能。現今，一些國家禁止在動物飼料中使用抗生素，其他國家限制在農場層面使用治療藥物，以及全球範圍內非傳統飼料在農場動物飲食中之使用增加，該等無疑改變了飲食與農場動物之間之相互作用，導致飲食在營養上不如過去。即使對動物製食品之需求增加一倍，食品亦必須在尊重動物福祉的同時以及慮及消費者對環境安全及無藥物飼料之逐漸上升之期望來進行生產。

由於在過去50年內遺傳潛力之驚人改良，現代農場動物具有極強大代謝，此係由其快速生長驅動。藉由提供營養物質及非營養物質最佳化此新陳代謝係餵給該等動物之飲食的關鍵作用。飼養、傳統營養或科學知識方面之進步改善該等動物之性能。舉例而言，肝臟或最近腸道作用方面之科學進步促進探討農場動物飲食投入之新途徑。然而，有一個器官仍未經考慮。顯然，骨骼肌係產肉動物中最有價值之部分。此外，肌肉在動物發育中之可能作用尚未充分瞭解。舉例而言，骨骼肌使用高達25-30%之餐後葡萄糖，且骨骼肌健康對葡萄糖及能量穩態至關重要。因此，在人類中，改善骨骼肌代謝功能及胰島素敏感性可對整體生理學具有重大影響並改善生活品質。在農場動物環境中無處不在之幾個因素係骨骼肌代謝功能之已知擾動因素，包括氧化壓力及慢性發炎。促發炎及抗發炎細胞介素之間之不平衡對肌肉健康具有有害效應。例如，循環促炎性細胞介素(例如TNFα)之升高引起胰島素抗性並改變葡萄糖穩態。此在遭受慢性發炎(REF)之農場動物中加劇，或對於該等動物而言，骨骼肌之代謝功能極為強大，此使得其易受氧化壓力之影響。

因此，業內極需要開發能夠代替對抗生素及其他成分之需求、同時在無藥物情況下改善農場動物性能之飼料添加物。另外，業內極需要用於改善農場動物肌肉健康之飼料添加物。

在一個實施例中，本揭示內容提供包含有效量之高山醋栗( Ribes alpinum)或其提取物之動物飼料成分組合物，其中該有效量改善添加該成分之動物飼料之性能。如本文所用，「動物」係指除人類以外之所有動物。動物之實例係非反芻動物及反芻動物。舉例而言，反芻動物包括諸如綿羊、山羊、牛(例如，肉牛、乳用母牛、母牛及幼犢)、鹿、駱駝、駱馬及袋鼠。非反芻動物包括單胃動物，例如仔豬或豬(包括但不限於仔豬、生長豬及母豬)；家禽，例如火雞、鴨及雞(包括但不限於肉雞、蛋雞)；馬(包括但不限於熱血馬、冷血馬、恒溫馬)、魚(包括但不限於鰤魚、舌魚、巴西鮋、鱸魚、鯥魚、褐菖鮋(bocachico)、鯛魚、鮰魚、大蓋巨脂鯉(cachama)、鯉魚、鯰魚、卡特拉鲃(catla)、虱目魚(chanos)、紅點鮭、麗鯛、海鱺、鱈魚、苺鱸、金頭鯛(dorada)、石首魚、鰻、虎魚、金魚、密鱸、石斑魚、副麗魚(guapote)、比目魚、爪哇魚(java)、野鯪、鰍、泥鰍、鯖、虱目魚(milkfish)、銀鱸、新南乳魚、鯔、鋸脂鯉(paco)、綠腹麗魚(pearl spot)、銀漢魚、鱸魚、梭子魚、鯧鯵、擬鯉、鮭魚、長絲異鰓鯰(sampa)、鱗頭沙鱸(sauger)、海鱸、海鯛、美洲鱥、塘鱧、鱧魚、笛鯛、鋸蓋魚、鰨、眼帶臭肚魚、鱘、太陽魚、香魚、丁鱥、皇冠魚(terror)、吳郭魚、鱒魚、鮪魚、大菱鮃、白鱒魚、白眼魚及白鮭)；及甲殼動物(包括但不限於蝦及對蝦)。根據本發明可使用包括其中之動物係寵物，包括但不限於狗及貓。

在某些實施例中，本文提供之動物飼料包含至少一種選自由以下組成之群之動物飼料組分：維生素、礦物質、益生菌、酶、矯味劑、胺基酸、脂肪、精油及防腐劑。維生素之非限制性實例包括例如脂溶性維生素，包括維生素A、維生素D3、維生素E及維生素K，例如維生素K3；及水溶性維生素，包括維生素B12、生物素及膽鹼、維生素B1、維生素B2、維生素B6、菸鹼酸、葉酸及泛酸鹽(D-泛酸鈣)及其組合。礦物質之非限制性實例包括例如鈣、鎂、鉀及鈉且痕量礦物質包括硼、鈷、氯化物、鉻、銅、氟化物、碘、鐵、錳、鉬、硒及鋅。益生菌之非限制性實例包括例如枯草桿菌( Bacillus subtilis)、地衣芽孢桿菌( Bacillus licheniformis)、芽孢枯草桿菌( Bacillus amyloliquefaciens)、蠟狀芽孢桿菌( Bacillus cereus)、短小芽孢桿菌( Bacillus pumilus)、多黏芽孢桿菌( Bacillus polymyxa)、巨大芽胞桿菌( Bacillus megaterium)、凝結芽孢桿菌( Bacillus coagulans)、環狀芽孢桿菌( Bacillus circulans)、兩叉雙歧乳桿菌( Bifidobacterium bifidum)、動物雙歧乳桿菌( Bifidobacterium animalis)、雙歧桿菌屬( Bifidobacteriumsp.)、肉桿菌屬( Carnobacteriumsp.)、酪酸梭菌( Clostridium butyricum)、梭菌屬( Clostridiumsp.)、屎腸球菌( Enterococcus faecium)、腸球菌屬( Enterococcussp.)、乳桿菌屬( Lactobacillussp.)、嗜酸乳桿菌( Lactobacillus acidophilus)、香腸乳桿菌( Lactobacillus farciminus)、鼠李糖乳桿菌( Lactobacillus rhamnosus)、羅伊氏乳桿菌( Lactobacillus reuteri)、唾液乳桿菌( Lactobacillus salivarius)、乳酸乳球菌( Lactococcus lactis)、乳球菌屬( Lactococcussp.)、明串珠菌屬( Leuconostocsp.)、埃氏巨球型菌( Megasphaera elsdenii)、巨球型菌屬( Megasphaerasp.)、乳酸片球菌( Pediococcus acidilactici)、片球菌屬( Pediococcussp.)、特氏丙酸桿菌( Propionibacterium thoenii)、丙酸桿菌屬( Propionibacteriumsp.)及鏈球菌屬( Streptococcussp.)或其任一組合。酶之非限制性實例包括例如乙醯木聚糖酯酶、醯基甘油脂酶、澱粉酶、α-澱粉酶、β-澱粉酶、阿拉伯呋喃醣酶、纖維二糖水解酶、纖維素酶、阿魏醯酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-聚葡萄糖酶、β-葡萄糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚醣酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、聚三葡萄糖酶、果膠酯酶、三酸甘油酯脂酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任一組合。矯味劑之非限制性實例包括例如花香味、漿果味、堅果味、焦糖味、巧克力味、胡椒味、煙熏味、乾酪味或肉味矯味劑、薄荷味(例如薄荷)、柑橘味矯味劑(例如甜橙及檸檬)、人工香草、肉桂及各種水果味矯味劑。胺基酸之非限制性實例包括例如丙胺酸(Ala；A)、精胺酸(Arg；R)、天冬醯胺(Asn；N)、天冬胺酸(天冬胺酸鹽、Asp；D)、半胱胺酸(Cys；C)、麩醯胺酸(Gln；Q)、麩胺酸(麩胺酸鹽、Glu；E)、甘胺酸(Gly；G)、組胺酸(His；H)、異白胺酸(Ile；I)、白胺酸(Leu；L)、離胺酸(Lys；K)、甲硫胺酸(Met；M)、苯丙胺酸(Phe；F)、脯胺酸(Pro；P)、絲胺酸(Ser；S)、蘇胺酸(Thr；T)、色胺酸(Trp；W)、酪胺酸(Tyr；Y)及纈胺酸(Val；V)及其任何組合。防腐劑之非限制性實例包括例如山梨酸鈉、山梨酸鉀、苯甲酸鈉及苯甲酸鉀及其組合。

在一些實施例中，高山醋栗組合物係自來自植物或其部分之提取物獲得。在其他實施例中，提取物係自植物之莖、葉、花、枝、根或果實或其部分、或其任一組合產生。在仍其他實施例中，提取物係水、乙醇、甲醇、異丙醇、乙酸乙酯、丙酮或己烷提取物、或其混合物或超臨界CO ₂提取物。

在本文所提供組合物之其他實施例中，高山醋栗或其提取物以組合物計為約5%與100%之間，包括例如組合物之至少約10%。在其他實施例中，該組合物中高山醋栗或其提取物以該組合物計至少10%。

在其他實施例中，本揭示內容提供動物飼料，其包含本文所述之包含有效量之高山醋栗或其提取物之動物飼料成分組合物，該動物飼料成分組合物之量相對於缺乏該動物飼料成分組合物之對照飼料有效改善餵食該動物飼料之動物的畜牧學性能。在某些實施例中，動物飼料係雞飼料、豬飼料、乳用母牛飼料或肉牛飼料。在特定實施例中，經改善之畜牧學性能係改良肌肉功能及健康、或增加平均每日增重、增加飼料效率或降低飼料轉化率。

如本文所用，術語「飼料轉化率」係指為使動物重量增加規定量而餵給動物之飼料量。經改善之飼料轉化率意指較低或降低之飼料轉化率。「較低或降低之飼料轉化率」或「經改善之飼料轉化率」意指與當飼料不包含該飼料成分或添加物組合物時動物重量增加相同量所需之飼料量相比，在飼料中使用飼料添加物組合物導致動物重量增加規定量所需之飼料量較低。

術語「飼料效率」係指當動物在一段時間內隨意餵食或餵食特定量之食物時每單位飼料之增重量。「增加之飼料效率」係指與在不存在飼料成分或添加物組合物之情況下餵食之動物相比，在飼料中使用根據本發明之飼料添加物組合物導致每單位攝食量增加之增重。

在各個實施例中，高山醋栗或其提取物係每公噸動物飼料以約3公克至約100公克至約200公克或約500公克之量存在。在某些實施例中，高山醋栗或其提取物係每公斤動物飼料以約100毫克之量存在。

在另一實施例中，本揭示內容提供改善動物飼料之性能之方法，其包含將有效量之包含如本文所述之高山醋栗或其提取物之組合物添加至動物飼料。在某些實施例中，相對於未添加動物飼料成分組合物之對照動物飼料，經改善之性能包含餵食該動物飼料之動物中改善之肌肉健康及性能、改變之攝食量、增加之平均每日增重、增加之飼料效率、降低之飼料轉化率或增加之產乳量。在各個實施例中，動物飼料係雞飼料、豬飼料、乳用母牛飼料或肉牛飼料。

在另一實施例中，本揭示內容亦提供改善動物之畜牧學性能之方法，其包含給動物餵食包含動物飼料成分組合物之動物飼料，該動物飼料成分組合物包含有效量之高山醋栗或其提取物，該動物飼料成分組合物之量相對於缺乏該動物飼料成分組合物之對照飼料有效改善餵食該動物飼料之動物的畜牧學性能。在一些實施例中，動物係雞、豬、乳用母牛或肉牛。在其他實施例中，經改善畜牧學性能係改善肌肉健康及性能、改變攝食量、增加平均每日增重、增加飼料效率、降低飼料轉化率或增加產乳量。

相關申請案之參考

本申請案主張2021年10月14日提出申請之美國臨時申請案第63/255,892號之權利，其全部內容皆以引用方式併入本文中。

本揭示內容提供能刺激肌肉功能及健康之用於馴養動物之飼料添加物以及用於促進馴養動物之肌肉功能及健康以及畜牧學性能之相關方法。本文提供之動物飼料添加物含有高山醋栗或其提取物。本揭示內容亦闡述經由飲食包含高山醋栗或其提取物改善肌肉功能及健康之方法。

鞣花單寧係對人類健康具有有益效應之可水解多酚。在胃腸道中，鞣花單寧水解成鞣花酸，其然後藉由結腸微生物區代謝成尿石素。在本說明書中，此將表示為鞣花酸/尿石素。鞣花酸/尿石素顯示多種健康促進效應，即，癌細胞模型中之抗增殖、抗發炎、最佳化脂質代謝及誘導自體吞噬。動物研究已顯示其對粒線體及肌肉功能之積極效應。

本揭示內容提供包括在農場動物之飲食中以增加蛋白質合成、肌肉質量及/或肌肉強度之新穎組合物之實例性實施例。實例闡述在動物之食物中包括植物高山醋栗或其提取物，其中意圖係改善性能、肌肉生長及肌肉健康。

鞣花酸/尿石素已知對肌肉生長具有效應。舉例而言，在隱桿線蟲分析中理由尿石素之實驗顯示，需要50 µM (11.4 µg/ml)之濃度以獲得積極正面的肌肉功能。換言之，需要11.4 µg/mL濃度之尿石素以觸發肌肉功能反應。已建議將分別包含尿石素以及蛋白質或中鏈甘油三酯或菸鹼醯胺核糖苷之來源之組合物用於治療肌肉相關之病理狀況。包括尿石素之組合物亦已建議用於增加肌細胞大小。綜上所述，很明顯，鞣花酸/尿石素促進肌肉功能及肌肉生長。

尿石素產生可藉由在個體消耗之飲食中包括飲食來源之鞣花單寧來觸發，鞣花單寧將被消化為鞣花酸且隨後發酵成尿石素。鞣花單寧之熟知飲食來源係某些植物物種之果實、堅果、葉及種子。例如，在石榴及屬懸鉤子屬及醋栗屬物種之漿果中發現高含量。基於以上匯總之結果，需要最少11.4 mg/mL之尿石素以促進肌細胞健康及功能。

然而，本揭示內容驚訝地發現包括不含或含有極低量之鞣花酸/尿石素之植物對肌肉生長及功能之積極效應。 動物飼料組分

本文提供新穎動物飼料組合物，其由於包含本文所述之動物飼料成分組合物而具有經改善性能。不同的馴養動物具有不同的飼料需求。舉例而言，雞飼料中之主要成分通常係穀物(包括但不限於小麥、玉米、高粱、燕麥、大麥或黑麥)、蛋白質(其可來自油籽粕)及脂肪或油。然而，其他成分可添加至雞飼料中，包括(但不限於)鈣、鹽、礦物質、益生菌、維生素、胺基酸、矯味劑及防腐劑的來源。用於小雞及小母雞之實例性雞飼料包括蛋白質、離胺酸、甲硫胺酸、脂肪、纖維、鈣、磷、NaCl、錳、維生素A及維生素E。

豬飼料中主要成分通常係穀物(包括但不限於米糠、碎米及玉米)、蛋白質(其可來自油籽粕，例如紫苜蓿粕或大豆粕)、礦物質及維生素。然而，其他成分可添加至豬飼料中，包括(但不限於)鈣、鹽、礦物質、益生菌、維生素、胺基酸、矯味劑及防腐劑之來源。實例性豬飼料包括能量源(穀物)、蛋白質、維生素、礦物質、纖維、益菌生(prebiotics)及植物藥。

乳牛飼料中主要成分通常係穀物、蛋白質(其可來自油籽粕，例如棉籽粕或大豆粕)、糖及脂肪。然而，其他成分可添加至乳牛飼料中，包括(但不限於)纖維、鈣、鹽、礦物質、益生菌、維生素、胺基酸、矯味劑及防腐劑之來源。

肉牛飼料中主要成分通常係穀物(包括但不限於小麥、玉米、高粱、燕麥、大麥或稻穀)及蛋白質(其可來自去油米糠、精米、麥麩或玉米麩)。然而，其他成分可添加至肉牛飼料中，包括(但不限於)纖維、脂肪、鹽、礦物質、益生菌、維生素、胺基酸、矯味劑及防腐劑。

綿羊飼料中主要成分通常係穀物(例如紫苜蓿及玉米)、維生素(例如維生素A、維生素D及維生素E)、硒、礦物質鹽及磷。然而，其他成分可添加至綿羊飼料中，包括(但不限於)脂肪、益生菌、胺基酸、矯味劑及防腐劑。用於成熟母羊及公羊之實例性綿羊飼料包括穀物、蛋白質、脂肪、纖維、鈣、氯化銨、磷、NaCl、硒及維生素A。

山羊飼料中主要成分通常係穀物(例如乾草、紫苜蓿、大麥、玉米及燕麥)、蛋白質(其可來自蒸餾穀物及粕)、脂肪、纖維及礦物質(例如鈣、磷、NaCl、銅、硒)及維生素(例如維生素A、維生素D及維生素E)。然而，其他成分可添加至山羊飼料中，包括(但不限於)益生菌、胺基酸、矯味劑及防腐劑。實例性山羊飼料包括穀類產品、蛋白質、脂肪、纖維、酸性洗滌纖維及鈣、磷、NaCl、以及銅、硒及維生素(例如維生素A、維生素D及維生素E)。

如本文所述，任何改的動物飼料之性能均可藉由添加本揭示內容所提供之動物飼料成分來改善。所添加之量端視飼料之類型、動物生理學、所餵食動物被飼養之條件以及熟習此項技術者根據本揭示內容之教導應理解之其他條件來最佳化。 實例 實例 1

藉由HPLC分析各種漿果品種之葉的鞣花酸含量。對葉樣品進行提取以獲得鞣花單寧，然後將其酸水解，產生鞣花酸。鞣花酸含量係藉由HPLC方法使用鞣花酸作為外部標準進行測定。

圖1給出水解後鞣花酸含量之概述。不同歐洲黑莓( Rubus fruticosus)品種之葉中鞣花酸含量自0.68至1.65 mg/100 g乾重變化。在醋栗葉中，含量自6.9至19.4 mg/100g變化。在黑穗醋栗( Ribes nigrum)葉樣品中看到更高量，其中含量自6.6至32.5 mg/100g變化。在花醋栗( Ribes aureum)或更確切地金醋栗( R. odoratum) (同義詞)樣品中檢測到絕對最高含量之鞣花酸，即146.6 mg/100g。發現高山醋栗之鞣花酸含量最低，即0.188 mg/100 g，其中5個樣品中有4個樣品僅具有痕量鞣花酸。此分析證實，高山醋栗儘管係醋栗屬植物，但僅含有痕量鞣花酸。 實例 2

在隱桿線蟲測試模型中測試高山醋栗對肌肉生長之潛在效應。高山醋栗葉提取物係作為300 µg/mL於50%乙醇中之溶液提供。此提取物含有0.58 µg/100 mg之鞣花單寧(以水解後之鞣花酸表示)。假定鞣花酸完全轉化為尿石素，利用高山醋栗提取物處理之隱桿線蟲中之尿石素含量僅為0.0017 µg/ml。

對於所有實驗，補充有提取物之線蟲生長培養基(NGM)係如下製備：使單一等分樣品在水浴中在45℃下解凍15分鐘。將完全溶解之樣品藉助0.2 μm無菌過濾器利用乙酸纖維素膜過濾至乾淨的1.5 mL埃彭道夫管(Eppendorf tube)中。將每一提取物添加至NGM達300 µg/mL之最終濃度並傾倒於皮氏培養皿中。相關對照包括0.15%及0.075%之陰性對照及乙醇溶劑對照。對於所有條件，NGM經製備亦含有100 μM 5-氟-2'-去氧尿苷(FuDR)以防止後代孵化。將年齡同步之蟲自L1至L4階段放置於化合物補充之NGM上，並評價活動性及肌細胞之數量。當L4時，將蟲轉移至化合物板。在L4後7天時(繁殖期結束後)進一步評價動物之活動性及肌肉形態。

評價肌細胞增殖。使用蟲株AW306，其係一種表現體壁肌核之核標記之野生型動物。蟲在每一化合物板上自L1生長至L4。當蟲達到L4階段時，計數右腹象限中肌細胞核之數量(n = 40)。

評價蟲之活動性。將每一條件之野生型蟲(株，N2)(20-25隻)放置於M9緩衝液中並使用具有Leica DMC2900照相機以及LAS v4.12軟體之Leica S8aP0雙目顯微鏡獲取視訊。使用ImageJ v1.53分析影片。使用ImageJ之wrMTrck外掛程式(組建110622)量化身體彎曲之次數。計算每分鐘身體彎曲(BBPM)並使用GraphPad Prism生成展示平均值及平均值之標準誤差之圖表，其中每一點代表所計數之一隻蟲。

觀察到以下結果。含有0.0017 µg/ml鞣花單寧(以水解後之鞣花酸表示)之高山醋栗提取物藉由增加隱桿線蟲L4階段之肌肉增殖顯示對肌肉生長之積極效應(圖2)。提供0.0017 µg/ml鞣花單寧(以水解後之鞣花酸表示)之高山醋栗提取物藉由在L4後7天增加隱桿線蟲之肌肉擺動顯示對肌肉功能之積極效應(圖3)。慮及產生肌肉功能反應之尿石素之最小濃度係11.4 mg/mL之尿石素，如上所述，鞣花酸/尿石素之包含量較最小劑量小1.49123E-07。此一極低劑量之鞣花酸/尿石素不能促進肌肉生長。令人驚訝地，提供0.0017 µg/mL鞣花酸/尿石素之0.3 mg高山醋栗葉提取物對肌肉生長顯示積極效應。可得出結論，高山醋栗對肌肉生長之效應並非由鞣花單寧引起。 實例 3

此實例在基於細胞之生物分析中評估高山醋栗提取物對肌細胞之生理學之效應。

該生物分析係利用稱為C2C12之小鼠肌母細胞系實施。高山醋栗提取物以不同濃度一式三份進行測試。量測兩種結果。首先，肌細胞增殖分析旨在研究以300 µg/ml施加之高山醋栗提取物對肌細胞增殖及生長之影響。將蛋白質含量之測定作為活體外應用模型中鑑別細胞增殖之手段。C2C12小鼠肌母細胞細胞株利用高山醋栗提取物之首次補充係在接種後24小時實施。5天後，開始細胞之分化。高山醋栗提取物之第二次補充係在分化開始後24小時實施。在分化期之第3天，實施高山醋栗提取物之最後一次補充。在分化開始7天後裂解細胞並使用Bradford分析測定蛋白質含量。每一批次均實施培養基對照。所有分析均一式三份實施。第二，葡萄糖攝取分析旨在研究高山醋栗提取物對肌細胞中葡萄糖攝取之影響。C2C12細胞經接種並生長以匯合(3天)。細胞分化4天以形成肌管且然後利用高山醋栗提取物處理24小時。補充後，使葡萄糖消耗24小時，隨後過夜消耗血清。洗滌後，將稱為2-NBDG (2-(N-(7-硝基苯并-2-噁-1,3-二唑-4-基)-胺基)-2-去氧葡萄糖)之用於監測葡萄糖攝取至活細胞中之螢光葡萄糖類似物添加至培養基。30分鐘後，在洗滌及溶解細胞後量測螢光。分析係在n=6中實施。

結果指示，300 µg/mL之高山醋栗提取物增加肌肉細胞增殖(圖4)且30 µg/ml增加葡萄糖攝取(圖5)。該等結果證實高山醋栗之肌肉生長反應並非由鞣花酸/尿石素介導之實施。在此實例中，使用利用C2C12細胞之基於細胞之分析。眾所周知，僅腸道駐留細胞可將鞣花酸轉化為尿石素(REF)。亦眾所周知，此基於細胞之生物分析不允許觀察到需要微生物進行生物轉化之組分之效應。因此，高山醋栗提取物對肌肉細胞增殖及功能之效應不依賴於鞣花酸，鞣花酸需要藉由腸道微生物轉變為尿石素。

綜上所述，在農場動物之飲食中包括少量高山醋栗可用於促進肌肉健康及功能。在某些實施例中，高山醋栗可以高達500 g植物/公噸飼料包括於飲食中，而在其他實施例中，劑量係介於100與200 g植物/公噸飼料之間。

為便於理解本揭示內容，下文定義一些術語。本文定義之術語具有熟習與本揭示內容相關領域之技術者通常理解之含義。在申請專利範圍及/或說明書中，詞語「一(a或an)」在與術語「包含」連用時可能意指「一個」，但亦與「一或多個」、「至少一個」及「一個或一個以上」之含義一致。除非明確指示僅指替代或該等替代相互排斥，否則在申請專利範圍中使用術語「或」用來指「及/或」，儘管本發明支持僅指替代及「及/或」之定義。在整個本申請案中，術語「約」用於指示一值包括用於測定該值之裝置、方法之固有誤差變化或各研究個體之間存在之變化。

在本說明書及申請專利範圍中，詞語「包含(comprising)」(及包含(comprising)之任何形式，例如「包含(comprise, comprises)」)、「具有(having)」(及具有(having)之任何形式，例如「具有(have, has)」)、「包括(including)」(及包括(including)之任何形式，例如「包括(includes, include)」)或「含有(containing)」(及含有(containing)之任何形式，例如「含有(contains, contain)」)係包容性或開放性的且不排除其他額外、未提及之要素或方法步驟。在本文所提供之組合物及方法之任一者的實施例中，「包含」可替換為「基本上由……組成」或「由……組成」。如本文所用，片語「基本上由……組成」要求規定之整數或步驟以及彼等不會實質上影響所主張發明之特性或功能之整數或步驟。如本文所用，術語「由……組成」用於指示僅存在所列舉整數(例如，特徵、要素、特性、性質、方法/製程步驟或限制)或一組整數(例如，特徵、要素、特性、性質、方法/製程步驟或限制)。

如本文所用，術語「或其組合」係指在該術語前所列舉項目之所有排列及組合。舉例而言，「A、B、C或其組合」意欲包括以下中之至少一者：A、B、C、AB、AC、BC或ABC，且若順序在特定上下文中極為重要，則亦包括BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。繼續此實例，明確地包括含有一或多個項目或術語之重複的組合，例如BB、AAA、AB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等等。熟習此項技術者將理解，除非另外自上下文可明顯看出，否則通常對於任一組合中之項目或術語之數量沒有限制。

如本文所用，諸如但不限於「約」、「大量」或「實質上」等近似詞語係指如下情況：當如此修飾時被理解為未必係絕對或完美的，但對於熟習此項技術者而言將視為足夠接近，以保證指定之情況存在。闡述可變化之程度將取決於可進行多大程度之改變且仍使熟習此項技術者認識到修改後之特徵仍具有未修改特徵所需之特性及能力。一般而言，但根據前面的討論，本文中由諸如「約」之近似詞修飾之數值可與所述數值相差至少±1、2、3、4、5、6、7、10、12或15%。

根據本發明無需過多實驗即可製作並執行本文所揭示及主張之所有組合物及/或方法。儘管已根據較佳實施例闡述本揭示內容之組合物及方法，但熟習此項技術者應明瞭，可對該等組合物及/或方法及本文所述方法之步驟或步驟順序進行改變，而不背離本發明之概念、精神及範圍。舉例而言，較佳及替代實施例之所有揭示組分均係可互換的，以在此提供具有所有較佳及替代實施例組分之組合之許多系統之揭示內容。因此，本申請案意欲涵蓋使用本揭示內容一般原理之任何變化、使用或更改。此外，本申請案意欲涵蓋與本發明相背離但歸屬於與本發明相關的技術中的已知或慣例實踐內且屬隨附申請專利範圍限制內之此些內容。對熟習此項技術者顯而易見之所有該等類似替代物及修改皆視為在由隨附申請專利範圍所界定之本發明之精神、範圍及概念內。

熟習此項技術者將理解，下文闡述之圖式僅用於圖解說明目的。圖式並非意欲以任何方式限制本發明教示之範圍。

圖1呈現幾種懸鉤子屬( Rubus)及醋栗屬( Ribes)植物中鞣花酸(ellagic acid)之濃度。數據顯示鞣花酸在幾種植物中之平均濃度及其標準偏差。

圖2顯示對照處理及高山醋栗葉提取物處理之隱桿線蟲( C. elegans)之肌細胞計數。高山醋栗提取物提供300 µg/ml，其含有0.0017 µg/ml之鞣花單寧(以水解後之鞣花酸表示)。具有不同字母之條顯著不同(P ＜ 0.01)。

圖3顯示對照處理及高山醋栗葉提取物處理之隱桿線蟲在L4階段後7天之擺動。高山醋栗提取物提供300 µg/ml，其含有0.0017 µg/ml之鞣花單寧(以水解後之鞣花酸表示)。具有不同字母之條顯著不同(P ＜ 0.02)。

圖4顯示包含300 µg/mL之高山醋栗提取物在活體外刺激C2C12細胞中之蛋白質形成及肌細胞增殖。Y軸顯示以對照之百分比表示之蛋白質含量，其用作肌細胞增殖估計。黑色條係未添加植物提取物之對照；陰影條係高山醋栗提取物處理。標準偏差顯示於條上。

圖5顯示添加增加劑量之高山醋栗提取物使活體外C2C12肌細胞對葡萄糖攝取增加。y軸係植物處理(陰影條)與對照(黑色條)相比之反應。標準偏差顯示於條上。

Claims (18)

1. 一種動物飼料成分組合物，其包含有效量的高山醋栗( Ribes alpinum)或其提取物，其中該有效量改善經添加該成分的動物飼料之性能。
2. 如請求項1之組合物，其進一步定義為包含至少一種選自由以下組成之群之動物飼料組分：維生素、礦物質、益生菌、酶、矯味劑、胺基酸、脂肪、精油及防腐劑。
3. 如請求項1之組合物，其中該提取物係產自高山醋栗植物之莖、葉、花、根或果實或其部分、或其任一組合。
4. 如請求項1之組合物，其中該提取物係水、乙醇、甲醇、異丙醇、乙酸乙酯、丙酮、己烷、或其混合物或超臨界CO ₂提取物。
5. 如請求項1之組合物，其中該高山醋栗或其提取物以該組合物計約3公克/公噸與約500公克/公噸之間。
6. 如請求項5之組合物，其中該高山醋栗或其提取物以該組合物計約9公克/公噸與約90公克/公噸之間。
7. 一種動物飼料，其包含如請求項1之動物飼料成分組合物，相對於缺乏該動物飼料成分組合物之對照飼料，該動物飼料成分組合物之量有效改善餵食該動物飼料之動物的畜牧學性能。
8. 如請求項7之動物飼料，其中該動物飼料係雞飼料、豬飼料、乳用母牛飼料或肉牛飼料。
9. 如請求項7之動物飼料，其中該經改善畜牧學性能係改善肌肉功能或健康、改變攝食量、增加平均每日增重、增加飼料效率、降低飼料轉化率或增加產乳量。
10. 如請求項7之動物飼料，其中該高山醋栗或其提取物係每公噸動物飼料以約3公克至約500公克之量存在。
11. 一種改善動物飼料性能之方法，其包含將有效量之如請求項1之組合物添加至該動物飼料。
12. 如請求項11之方法，其中相對於未添加動物飼料成分組合物之對照動物飼料，該經改善性能包含餵食該動物飼料之動物中改善肌肉功能或健康、改變攝食量、增加平均每日增重、增加飼料效率、降低飼料轉化率或增加產乳量。
13. 如請求項11之方法，其中該動物飼料係雞飼料、豬飼料、乳用母牛飼料或肉牛飼料。
14. 如請求項11之方法，其中該高山醋栗或其提取物係每公噸動物飼料以約3公克至約500公克之量存在。
15. 一種改善動物畜牧學性能之方法，其包含向該動物餵食如請求項7之動物飼料。
16. 如請求項15之方法，其中該動物係雞、豬、乳用母牛或肉牛。
17. 如請求項15之方法，其中該經改善畜牧學性能係改善肌肉功能或健康、改變攝食量、增加平均每日增重、增加飼料效率、降低飼料轉化率或增加產乳量。
18. 如請求項15之方法，其中該動物飼料包含該高山醋栗或其提取物呈每公噸動物飼料約3公克至約500公克之量。