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TW202312995A - 氮雜芳基化合物、其製備方法及應用 - Google Patents

氮雜芳基化合物、其製備方法及應用 Download PDF

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TW202312995A
TW202312995A TW111130281A TW111130281A TW202312995A TW 202312995 A TW202312995 A TW 202312995A TW 111130281 A TW111130281 A TW 111130281A TW 111130281 A TW111130281 A TW 111130281A TW 202312995 A TW202312995 A TW 202312995A
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TW
Taiwan
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alkyl
independently
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cancer
methyl
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TW111130281A
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Inventor
馬世超
Original Assignee
大陸商上海青煜醫藥科技有限公司
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Abstract

本發明公開了一種氮雜芳基化合物、其製備方法及應用。具體地，本發明提供了一種如式I所示的氮雜芳基化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或它們的同位素標記化合物，此外本發明也提供了該類化合物的製備方法、含有該類化合物的組合物以及該類化合物用於製備治療與EED蛋白和/或PRC2蛋白複合物作用機理相關疾病或障礙的藥物用途。

Description

氮雜芳基化合物、其製備方法及應用
本申請要求申請日為2021年8月11日的中國專利申請2021109212000的優先權。本申請引用上述中國專利申請的全文。
本發明涉及一種氮雜芳基化合物、其製備方法及應用。
PcG(Polycomb Group)蛋白是一類重要的染色質修飾酶。它通過對染色質的修飾達到調控基因的轉錄，從而對幹細胞的生長、分化及長期的細胞記憶有重要作用。在哺乳動物細胞中，PcG蛋白主要分為兩類轉錄抑制複合物，分別是PRC1(Polycomb Repressive Complex 1)和PRC2(Polycomb Repressive Complex 2)。其中，PRC2是通過對染色質中組蛋白3的27位離胺酸(H3K27)的甲基化修飾來抑制相關基因的表達。PRC2蛋白複合物主要由EZH2(Enhancer of Zeste Homolog 2)(或其非常類似的同源蛋白EZH1)，EED(Embryonic Ectoderm Development)以及SUZ12(Suppressor of Zeste 12)等核心蛋白組成。其中，EZH2具有酶催化活性，通過SET(Su(var), E(Z) and Trithorax)蛋白結構域能夠把底物SAM(S-adenosyl-L-methionine)的甲基轉移到H3K27上，從而達到H3K27的一到三甲基化修飾。EZH2的酶催化活性也依賴於PRC2其他組成部分，比如屬於WD40重複結構蛋白家族的EED蛋白。EED與三甲基化的H3K27Me3的結合作用一方面對EZH2的酶催化功能有很大的變構促進作用，另一方面也能把PCR2複合物定位在需要修飾的染色質上。PRC2的功能異常，比如EZH2的過表達或功能獲得性突變，與臨床上許多腫瘤疾病相關，包括肺癌，乳腺癌，直腸癌，前列腺癌，膀胱癌，胰臟癌，肉瘤以及淋巴癌等等。PRC2也與多種細胞免疫功能相關，比如EZH2參與調節淋巴細胞活化，也能與糖酵解共同促進T細胞對腫瘤細胞的應答。因此，研發PRC2小分子抑制劑有重要且廣闊的藥物開發價值。
圍繞PRC2抑制劑的研發主要是開發EZH2抑制劑以及EED抑制劑兩個策略。目前進入臨床的EZH2抑制劑有EPZ-6438(Epizyme，臨床二期)，GSK2816126(GSK，臨床一期)，以及CPI-1205(Constellation，臨床一期)等等。儘管EZH2抑制劑研發有多個進入臨床研究階段，但這些抑制劑都含有一個共同的2-吡啶酮的藥效團。並且，在已有EZH2抑制劑用於臨床治療中，已經開始出現二次突變。EED抑制劑對EZH2酶功能有變構抑制的作用，可以達到與EZH2相同或類似的生物功能。而且一方面EED抑制劑很好的克服了EZH2的耐藥性問題，另一方面EED抑制劑可以與EZH2抑制劑聯用達到更好的協同作用效果，因此，開發新的EED抑制劑具有非常重要的意義。
本發明所要解決的技術問題在於現有技術中的EED抑制劑結構單一。為此，本發明提供了一種氮雜芳基化合物、其製備方法及應用。本發明的氮雜芳基化合物表現出對腫瘤細胞很好的抑制活性，具有廣闊的藥物開發前景。
本發明提供了一種如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或它們的同位素標記化合物：
Figure 02_image001
（ I） 其中，A獨立地為
Figure 02_image003
或
Figure 02_image005
； X為N或CR 2； R 1、R 2和R 3獨立地為H、鹵素、氰基、R 5b取代或未取代的胺基、R 5b-O-、R 5取代或未取代的C 1- 4烷基、R 5取代或未取代的C 3- 6的環烷基、R 5取代或未取代的C 1-C 4鹵代烷基、-C(=O)R 6、-CO 2R 6、-C(=O)NR 6R 7、-SO 2R 6或-SO 2NR 6R 7；當取代基為多個時，相同或不同； R 4獨立地為H、鹵素、氰基、C 1-4鹵代烷基、-C(=O)NR 4a1R 4a2、-S(=O) 2R 4b或-C(=O)R 4c； R 4a1、R 4a2和R 4b獨立地為H或C 1-4烷基； R 4c獨立地為H、C 1-4烷基或-O-C 1-4烷基； R 5獨立地為C 1-4烷基-O-、C 1-4烷基、C 1-4鹵代烷基、-N(R 5bR 5b)、N保護基團保護的胺基、氟、羥基； R 5b、R 6和R 7獨立地為H、C 1-4烷基、C 1-4鹵代烷基； “*”表示帶“*”的碳原子為手性碳原子時，其為R構型、S構型或其混合。
在本發明某些優選實施方案中，所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或它們的同位素標記化合物中的某些基團如下定義，未提及的基團同本申請任一方案所述（簡稱“在本發明某些優選實施方案中”）： 式（ I）所示的化合物選自如下所示的化合物：
Figure 02_image007
上述化合物中，X、R 1、R 3和R 4的定義如上所述。
在本發明某些優選實施方案中：
Figure 02_image005
為
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
、
Figure 02_image013
、
Figure 02_image015
或其混合物。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 1、R 2、R 3和R 4獨立地為鹵素時，所述的鹵素為氟、氯、溴或碘，優選氯。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 1、R 2和R 3獨立地為R 5取代或未取代的C 1- 4烷基時，所述的C 1-4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基，優選甲基或乙基。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 1、R 2和R 3獨立地為R 5取代或未取代的C 3- 6的環烷基時，所述的C 3- 6的環烷基為環丙基、環丁基、環戊基或環己基。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 1、R 2和R 3獨立地為R 5取代或未取代的C 1-C 4鹵代烷基時，所述的鹵為氟、氯、溴或碘，優選氟。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 1、R 2和R 3獨立地為R 5取代或未取代的C 1-C 4鹵代烷基時，所述的C 1-C 4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基，優選甲基或乙基。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 1、R 2和R 3獨立地為R 5取代或未取代的C 1-C 4鹵代烷基時，所述的鹵代的個數為1、2、3、4或5個；例如3個。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 1、R 2和R 3獨立地為R 5取代或未取代的C 1-C 4鹵代烷基時，所述C 1-C 4鹵代烷基為三氟甲基。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 4、R 5、R 5b、R 6和R 7獨立地為C 1-C 4鹵代烷基時，所述的鹵為氟、氯、溴或碘，優選氟。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 4、R 5、R 5b、R 6和R 7獨立地為C 1-C 4鹵代烷基時，其中的C 1-C 4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基，優選甲基或乙基。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 5獨立地為C 1-C 4鹵代烷基時，其中的C 1-C 4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基，優選甲基或乙基。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 4、R 5b、R 6和R 7獨立地為C 1-C 4鹵代烷基時，其中的C 1-C 4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基，優選甲基或乙基。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 4、R 5、R 5b、R 6和R 7獨立地為C 1-C 4鹵代烷基時，所述的鹵代的個數為1、2、3、4或5個；例如3個。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 4、R 5、R 5b、R 6和R 7獨立地為C 1-C 4鹵代烷基時，所述的C 1-C 4鹵代烷基為三氟甲基。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 4a1、R 4a2、R 4b、R 5b、R 6和R 7獨立地為C 1-4烷基時，所述的C 1-C 4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基，優選甲基或乙基。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 4c獨立地為C 1-4烷基或-O-C 1-4烷基時，所述的C 1-C 4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基，優選甲基或乙基。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 5獨立地為C 1-4烷基、C 1-4烷基-O-、C 1-4鹵代烷基時，所述的C 1-4烷基、C 1-4烷基-O-和C 1-4鹵代烷基裡的C 1-4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基，優選甲基。
在本發明某些優選實施方案中： 當R 5獨立地為N保護基團保護的胺基時，所述的保護基團可以為
Figure 02_image017
，R 5a為C 1-4烷基或C 1-4烷基-O-；C 1-4烷基和C 1-4烷基-O-裡的C 1-4烷基可獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基； 例如
Figure 02_image019
可以為第三丁氧羰基。
在本發明某些優選實施方案中： X為N。
在本發明某些優選實施方案中： R 1選自甲基、氰基、三氟甲基、二氟甲基、
Figure 02_image020
、
Figure 02_image022
或
Figure 02_image024
。
在本發明某些優選實施方案中： R 2為H。
在本發明某些優選實施方案中： R 3選自H、甲基、鹵素或氰基。
在本發明某些優選實施方案中： R 4選自氰基、-C(=O)NR 4a1R 4a2、-S(=O) 2R 4b或-C(=O)R 4c。
在本發明某些優選實施方案中： R 4a1、R 4a2、R 4b、R 4c、R 5b、R 6和R 7獨立地為甲基。
在本發明某些優選實施方案中： X為N； R 1選自甲基、氰基、三氟甲基、二氟甲基、
Figure 02_image020
、
Figure 02_image022
或
Figure 02_image024
； R 3選自H、甲基、鹵素或氰基； R 4選自氰基、-C(=O)NR 4a1R 4a2、-S(=O) 2R 4b或-C(=O)R 4c； R 4a1、R 4a2、R 4b和R 4c的定義如上所述。
在本發明某些優選實施方案中： X為N； R 1為氰基、R 5b取代或未取代的胺基、R 5取代或未取代的C 1- 4烷基；例如R 5取代或未取代的胺基、R 5取代或未取代的C 1- 4烷基； R 3為H、R 5取代或未取代的C 1- 4烷基、鹵素或氰基；例如H； R 5獨立地為C 1-4烷基、-N(R 5bR 5b)、羥基； R 4選自氰基、-C(=O)NR 4a1R 4a2、-S(=O) 2R 4b或-C(=O)R 4c；例如R 4選自氰基或-S(=O) 2R 4b；例如R 4b獨立地為C 1-4烷基； R 5b獨立地為H或C 1-4烷基。
在本發明某些優選實施方案中： X為N； R 1為R 5取代或未取代的C 1- 4烷基； R 3為H； R 5獨立地為C 1-4烷基、-N(R 5bR 5b)、羥基； R 4選自氰基或-S(=O) 2R 4b； R 4b獨立地為C 1-4烷基； R 5b獨立地為H或C 1-4烷基。
在本發明某些優選實施方案中，所述式（ I）所示的化合物選自如下所示的化合物：
Figure 02_image026
上述化合物中，R 1的定義如上所述。
在本發明某些優選實施方案中，式（ I）所述的化合物選自如下所示的化合物：
編號 結構 名稱
BR-1
Figure 02_image028
 8-(5-((二甲胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲腈
BR-2
Figure 02_image030
 5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-8-(5-(2-羥基丙烷-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲腈
BR-3
Figure 02_image032
 8-(5-(二甲胺基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲腈
BR-4
Figure 02_image034
 8-(5-((二甲胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-1-(甲磺醯)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺
BR-5
Figure 02_image036
 2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-1-(甲磺醯)咪唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇
BR-6
Figure 02_image038
 8-(5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-1-(甲磺醯)咪唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-N,N-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-胺
BR-7
Figure 02_image040
 N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(5-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-1-(甲基磺醯基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺
BR-8
Figure 02_image042
 5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-8-(5-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-氰基
18
Figure 02_image044
 8-(5-((二甲基胺)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺
19
Figure 02_image046
 8-(5-((二甲基胺)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-1-碘代咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺
本發明還提供所述如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體或其溶劑化物的同位素標記化合物。所述同位素標記化合物中所述同位素選自 2H、 3H、 11C、 13C、 14C、 15N、 17O、 18O、 18F、 31P、 32P、 35S、 36Cl和 125I。式（ I）化合物中能夠被同位素標記的原子包括但不局限於氫、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘等，它們可分別被同位素 2H、 3H、 11C、 13C、 14C、 15N、 17O、 18O、 18F、 31P、 32P、 35S、 36Cl和 125I等代替。
本發明還提供所述如式（ I）所示的化合物的製備方法，其包含如下步驟： 將鹵代中間體 B 0 與中間體 E 0 進行偶聯反應得到如式（ I）所示的化合物；
Figure 02_image048
其中，W代表鹵素(例如Br)；R x為-B(OH) 2或
Figure 02_image050
；A、R 1、R 3、R 4、X的定義如上所述。
本發明還提供一種中間體化合物 B 0 的製備方法，其可為如下任一方案： 方案一、包括以下步驟： 步驟（1）化合物 SM-5在催化劑（例如三氯氧磷）作用下關環得到化合物 SM-6， 步驟（2）化合物 SM-6在氧化劑（例如間氯過氧苯甲酸）作用下反應得到化合物 SM-7， 步驟（3）化合物 SM-7與H 2N-CH 2-A在鹼（例如碳酸鈉）存在下反應得到化合物 B 0 ； 方案二、其如方案一中步驟（2）至步驟（3）所示； 方案三、其如方案一中步驟（3）所示； 反應方程式如下：
Figure 02_image052
其中，W、A、R 4的定義如上所述。
在本發明某些優選實施方案中：所述的溶劑化物為水合物。
本發明所涉及到的溶劑例如可選自：甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯、二甲苯、氯苯、水、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、二氧六環、DMF、乙腈、DMSO、NMP、THF或其組合；例如選自二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、二氧六環、DMF、乙腈、DMSO、NMP、THF或其組合。
本發明所涉及到的鹼可包括有機鹼和無機鹼。
本發明所涉及到的有機鹼例如可選自：TEA、DIPEA或其組合。
本發明所涉及到的無機鹼例如可選自：氫化鈉、甲醇鈉、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、第三丁醇鉀、第三丁醇鈉、第三丁醇鋰、LiHMDS、LDA、丁基鋰、氫氧化鉀、醋酸鉀、氫化鋁鋰或其組合；例如選自氫化鈉、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、第三丁醇鉀、第三丁醇鈉、LiHMDS、LDA、丁基鋰或其組合。
本發明所述的如式（ I）所示化合物的同位素標記化合物可通過與未標記化合物類似的合成方法來製備，所不同的是把未標記的起始原料和/或試劑換成同位素標記的起始原料和/或試劑。
本發明還提供了一種藥物組合物，其包含治療有效量的如上所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、其溶劑化物或它們的同位素標記化合物以及藥學上可接受的輔料。所述藥學上可接受的輔料可以為稀釋劑、吸收劑、潤濕劑、粘合劑、崩解劑和潤滑劑中的一種或多種。
本發明還提供了如上所述的式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、其溶劑化物或它們的同位素標記化合物，或如上所述的藥物組合物在製備藥物中的用途。所述的藥物優選治療癌症的藥物。
本發明還提供了如上所述的式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、其溶劑化物或它們的同位素標記化合物，或如上所述的藥物組合物在製備治療與EED蛋白和/或PRC2蛋白複合物介導的癌症藥物方面的用途。
優選地，所述癌症包括但不局限於瀰漫型大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤等淋巴癌、白血病、多發性骨髓瘤、間皮瘤、胃癌、惡性橫紋肌瘤、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、腦瘤包括神經母細胞瘤、膠質瘤、膠質母細胞瘤和星形細胞瘤、子宮頸癌、結腸癌、黑色素瘤、子宮內膜癌、食道癌、頭頸癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰臟癌、腎癌、直腸癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺腫瘤、子宮腫瘤和軟組織肉瘤等等。
優選地，所述化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、其溶劑化物或它們的同位素標記化合物與其他藥物聯合使用；更優選地，所述其他藥物選自抗癌藥、腫瘤免疫藥物、抗過敏藥、止吐藥、鎮痛藥或細胞保護藥物。
本發明還提供了一種藥物製劑，其包含如上所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、其溶劑化物或它們的同位素標記化合物，或如上所述的藥物組合物。所述藥物製劑優選為片劑、膠囊（如持續釋放或定時釋放的膠囊）、藥丸、粉末、顆粒（如小顆粒）、酏劑、酊劑、懸浮液（如奈米混懸液、微懸浮液）和噴霧乾燥的分散體等形式的懸浮物、糖漿、乳液、溶液等形式。所述藥物製劑優選的投藥方式為口服、舌下含服、包括皮下注射、靜脈注射、肌肉注射、胸骨內注射、注入等形式的注射、鼻部服用（比如鼻膜吸入）、局部表面（如乳霜和藥膏）投藥、直腸投藥（如栓劑）等等方式。本發明公開的化合物可以單獨服用也可以與適當的藥物載體一起服用。
本發明還提供了前述的藥物製劑可配方成適當的藥物劑量以方便並控制藥物的服用量。本發明公開的化合物的劑量方案根據具體的因素有所不同，比如藥效學及服用的方式、服用對象、性別、年齡、健康狀況以及服藥對象的體重、病情特徵、其它同時服藥狀況、服藥的頻率、肝腎功能以及想達到的效果等等。本發明公開的化合物可以每天單劑量的服用，也可以總劑量分多次服用（比如每天兩至四次）。
本發明還提供了一種治療癌症的方法，其包括向需要此治療的患者給予治療有效量的如上所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體或其溶劑化物或它們的同位素標記化合物，或如上所述的藥物組合物。所述的癌症包括但不局限於瀰漫型大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤等淋巴癌、白血病、多發性骨髓瘤、間皮瘤、胃癌、惡性橫紋肌瘤、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、腦瘤包括神經母細胞瘤、膠質瘤、膠質母細胞瘤和星形細胞瘤、子宮頸癌、結腸癌、黑色素瘤、子宮內膜癌、食道癌、頭頸癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰臟癌、腎癌、直腸癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺腫瘤、子宮腫瘤和軟組織肉瘤等等。
本發明還提供了式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體或其溶劑化物或前述同位素標記化合物與其他藥物聯合使用，所述其他藥物選自：抗癌藥、腫瘤免疫藥物、抗過敏藥、止吐藥、鎮痛藥和細胞保護藥物等等，一起聯用具有更好的效果。
本發明中，所述的癌症優選與EED蛋白和/或PRC2蛋白複合物介導的癌症。
本發明還提供了一種抑制EED蛋白和/或PRC2蛋白複合物活性的方法，其包括給予受試者治療有效量的如上所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體或其溶劑化物或它們的同位素標記化合物，或如上所述的藥物組合物。
本發明還提供了一種阻斷EED與H3K27（例如H3K27Me3）結合的方法，其包括給予受試者治療有效量的如上所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體或其溶劑化物或它們的同位素標記化合物，或如上所述的藥物組合物。
應理解，在本發明範圍內中，本發明的上述各技術特徵和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特徵之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限於篇幅，在此不再一一累述。
術語說明
除非另外定義，否則本文中所用的全部技術與科學術語均具有如本發明所屬領域的普通技術人員通常理解的相同含義。
如本文所用，在提到具體列舉的數值中使用時，術語“約”意指該值可以從列舉的值變動不多於1%。例如，如本文所用，表述“約100”包括99和101和之間的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
如本文所用，術語“含有”或“包括(包含)”可以是開放式、半封閉式和封閉式的。換言之，所述術語也包括“基本上由…構成”、或“由…構成”。
基團定義
可在參考文獻(包括Carey and Sundberg "ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4TH ED." Vols. A (2000) and B (2001), Plenum Press, New York)中找到對標準化學術語的定義。除非另有說明，否則採用本領域技術範圍內的常規方法，如質譜、NMR、IR和UV/VIS光譜法和藥理學方法。除非提出具體定義，否則本文在分析化學、有機合成化學以及藥物和藥物化學的有關描述中採用的術語是本領域已知的。可在化學合成、化學分析、藥物製備、製劑和遞送，以及對患者的治療中使用標準技術。例如，可利用廠商對套組的使用說明，或者按照本領域公知的方式或本發明的說明來實施反應和進行純化。通常可根據本說明書中引用和討論的多個概要性和較具體的文獻中的描述，按照本領域熟知的常規方法實施上述技術和方法。在本說明書中，可由本領域技術人員選擇基團及其取代基以提供穩定的結構部分和化合物。
當通過從左向右書寫的常規化學式描述取代基時，該取代基也同樣包括從右向左書寫結構式時所得到的在化學上等同的取代基。舉例而言，-CH 2O-等同於-OCH 2-。
本文所用的章節標題僅用於組織文章的目的，而不應被解釋為對所述主題的限制。本申請中引用的所有文獻或文獻部分包括但不限於專利、專利申請、文章、書籍、操作手冊和論文，均通過引用方式整體併入本文。
在本文中定義的某些化學基團前面通過簡化符號來表示該基團中存在的碳原子總數。例如，C 1-6烷基是指具有總共1至6個碳原子（如1,2,3,4,5,6個碳原子）的如下文所定義的烷基。簡化符號中的碳原子總數不包括可能存在於所述基團的取代基中的碳。
當所列舉的取代基中沒有指明其通過哪一個原子連接到化學結構通式（包括但未具體提及的化合物）中時，這種取代基可以通過其任何原子相鍵合。取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。
除前述以外，當用於本申請的說明書及申請專利範圍中時，除非另外特別指明，否則以下術語具有如下所示的含義。
在本說明書的各部分，本發明公開化合物的取代基按照基團種類或範圍公開。特別指出，本發明包括這些基團種類和範圍的各個成員的每一個獨立的次級組合。術語“C x-C y烷基"或“C x-y烷基"是指含有x至y個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴。例如，術語“C 1-C 6烷基”或“C 1-6烷基”特別指獨立公開的甲基、乙基、C 3烷基、C 4烷基、C 5烷基和C 6烷基；“C 1-4烷基”或“C 1-C 4烷基”特指獨立公開的甲基、乙基、C 3烷基（即丙基，包括正丙基和異丙基）、C 4烷基（即丁基，包括正丁基、異丁基、第二丁基和第三丁基）。
當所列舉的基團中沒有明確指明其具有取代基時，這種基團僅指未被取代。例如當“C 1-C 4烷基”前沒有“取代或未取代的”的限定時，僅指“C 1-C 4烷基”本身或“未取代的C 1-C 4烷基”。
在本發明的各部分，描述了連接取代基。當該結構清楚地需要連接基團時，針對該基團所列舉的馬庫西變數應理解為連接基團。例如，如果該結構需要連接基團並且針對該變數的馬庫西基團定義列舉了“烷基”，則應該理解，該“烷基”代表連接的亞烷基基團。
在一些具體的結構中，當烷基基團清楚地表示為連接基團時，則該烷基基團代表連接的亞烷基基團，例如，基團“鹵代-C 1-C 6烷基”中的C 1-C 6烷基應當理解為C 1-C 6亞烷基。
另外，需要說明的是，除非以其他方式明確指出，在本發明中所採用的描述方式“…獨立地為”應做廣義理解，是指所描述的各個個體之間是相互獨立的，可以獨立地為相同或不同的具體基團。更詳細地，描述方式“…獨立地為”既可以是指在不同基團中，相同符號之間所表達的具體選項之間互相不影響；也可以表示在相同的基團中，相同符號之間所表達的具體選項之間互相不影響。
應該理解，在本發明中使用的單數形式，如“一種”，包括複數指代，除非另有規定。
術語“一種（個）或多種（個）”或“一種（個）或兩種（個）以上”是指即1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多。
在本申請中，術語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。
“
Figure 02_image054
”表示單鍵時，是指
Figure 02_image056
和
Figure 02_image058
的混合。
本領域技術人員可以理解，根據本領域中使用的慣例，本申請描述基團的結構式中所使用的“
Figure 02_image060
”及“
Figure 02_image062
”是指，相應的基團R通過該位點與化合物中的其它片段、基團進行連接。
“羥基”是指-OH基團。
“羰基”是指-C(=O)-基團。當
Figure 02_image064
中的R為羰基時，
Figure 02_image064
為
Figure 02_image066
。
“氰基”是指-CN。
“胺基”是指-NH 2。
“R 5b取代的胺基”，R 5b可以為一個或兩個，當R 5b為兩個時，可以是相同基團，也可以是不同基團。
“羧基”是指-COOH。
在本申請中，作為基團或是其它基團的一部分(例如用在鹵素取代的烷基等基團中)，術語“烷基”是指完全飽和的直鏈或支鏈的烴鏈基，僅由碳原子和氫原子組成、具有例如1至12個(優選1至8個，更優選1至6個，更優選1至4個)碳原子，且通過單鍵與分子的其餘部分連接，例如包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、2-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、正己基、庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、辛基、壬基和癸基等。
在本申請中，作為基團或是其它基團的一部分，術語“鹵代烷基”是指烷基（如本發明中所定義）中的一個或多個氫原子被鹵素（如本發明中所定義）所取代，鹵素的個數可以為一個或多個；當鹵素的個數為多個時，鹵素相同或不同。例如，氟代烷基是指烷基被一個或多個氟取代。鹵代烷基的例子包括但不限於三氟甲基、二氟甲基和一氟甲基。
本申請中，優選地，“雜環烷基”中碳原子數為3、4、5或6個，雜原子選自N、O和S，雜原子數為1、2、3或4個，進一步優選地，碳原子數為4或5個，雜原子選自N和O，雜原子數為1或2個；例如
Figure 02_image068
、
Figure 02_image070
、
Figure 02_image072
或
Figure 02_image074
。
本申請中，優選地，“雜螺環烷基”中碳原子數為4、5或6個，雜原子選自N、O和S，雜原子數為1、2、3或4個，進一步優選地，雜原子選自N和O，雜原子數為1或2個；例如
Figure 02_image076
。
在本申請中，作為基團或是其它基團的一部分，術語“環烴基”意指僅由碳原子和氫原子組成的穩定的非芳香族單環或多環烴基，其可包括稠合環體系、橋環體系或螺環體系，具有3至15個碳原子，優選具有3至10個碳原子，更優選具有3至8個碳原子，且其為飽和或不飽和並可經由任何適宜的碳原子通過單鍵與分子的其餘部分連接。除非本說明書中另外特別指明，環烴基中的碳原子可以任選地被氧化。環烴基的實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環辛基、1H-茚基、2,3-二氫化茚基、1,2,3,4-四氫-萘基、5,6,7,8-四氫-萘基、8,9-二氫-7H-苯并環庚烯-6-基、6,7,8,9-四氫-5H-苯并環庚烯基、5,6,7,8,9,10-六氫-苯并環辛烯基、芴基、二環[2.2.1]庚基、7,7-二甲基-二環[2.2.1]庚基、二環[2.2.1]庚烯基、二環[2.2.2]辛基、二環[3.1.1]庚基、二環[3.2.1]辛基、二環[2.2.2]辛烯基、二環[3.2.1]辛烯基、金剛烷基、八氫-4,7-亞甲基-1H-茚基和八氫-2,5-亞甲基-并環戊二烯基等。
在本申請中，作為基團或是其它基團的一部分，術語“環烷基”意指飽和的環烴基。
在本申請中，作為基團或是其它基團的一部分，術語“環烯基”意指具有至少一個雙鍵（如碳碳雙鍵）的環烴基。環烯基可以通過其中的雙鍵的原子與分子的其餘部分連接。
在本申請中，作為基團或是其它基團的一部分，術語“雜環基”意指由2至14個碳原子以及1至6個選自氮、磷、氧和硫的雜原子組成的穩定的3元至20元非芳香族環狀基團。除非本說明書中另外特別指明，否則雜環基可以為單環、雙環、三環或更多環的環體系，其可包括稠合環體系、橋環體系或螺環體系；其雜環基中的氮、碳或硫原子可任選地被氧化；氮原子可任選地被季銨化；且雜環基可為部分或完全飽和。雜環基可以經由碳原子或者雜原子並通過單鍵與分子其餘部分連接。在包含稠環的雜環基中，一個或多個環可以是下文所定義的芳基或雜芳基，條件是與分子其餘部分的連接點為非芳香族環原子。就本發明的目的而言，雜環基優選包含1至3個選自氮、氧和硫的雜原子的穩定的4元至11元非芳香性單環、雙環、橋環或螺環基團，更優選包含1至3個選自氮、氧和硫的雜原子的穩定的4元至8元非芳香性單環、雙環、橋環或螺環基團。雜環基的實例包括但不限於：吡咯烷基、嗎啉基、哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基、硫代嗎啉基、2,7-二氮雜-螺[3.5]壬烷-7-基、2-氧雜-6-氮雜-螺[3.3]庚烷-6-基、2,5-二氮雜-雙環[2.2.1]庚烷-2-基、氮雜環丁烷基、吡喃基、四氫吡喃基、噻喃基、四氫呋喃基、噁嗪基、二氧環戊基、四氫異喹啉基、十氫異喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、喹嗪基、噻唑烷基、異噻唑烷基、異噁唑烷基、二氫吲哚基、八氫吲哚基、八氫異吲哚基、吡咯烷基、吡唑烷基、鄰苯二甲醯亞胺基等。
在本申請中，作為基團或是其它基團的一部分，術語“芳基”意指具有6至18個碳原子(優選具有6至10個碳原子)的共軛烴環體系基團。就本發明的目的而言，芳基可以為單環、雙環、三環或更多環的環體系，還可以與上文所定義的環烷基或雜環基稠合，條件是芳基經由芳香環上的原子通過單鍵與分子的其餘部分連接。芳基的實例包括但不限於苯基、萘基、蒽基、菲基、芴基、2,3-二氫-1H-異吲哚基、2-苯并噁唑啉酮、2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮-7-基等。
在本申請中，術語“芳基烷基”是指被上文所定義的芳基所取代的上文所定義的烷基。
在本申請中，作為基團或是其它基團的一部分，術語“雜芳基”意指環內具有1至15個碳原子(優選具有1至10個碳原子)和1至6個選自氮、氧和硫的雜原子的5元至16元共軛環系基團。除非本說明書中另外特別指明，否則雜芳基可為單環、雙環、三環或更多環的環體系，還可以與上文所定義的環烷基或雜環基稠合，條件是雜芳基經由芳香環上的原子通過單鍵與分子的其餘部分連接。雜芳基中的氮、碳或硫原子可任選地被氧化；氮原子可任選地被季銨化。就本發明的目的而言，雜芳基優選包含1至5個選自氮、氧和硫的雜原子的穩定的5元至12元芳香性基團，更優選包含1至4個選自氮、氧和硫的雜原子的穩定的5元至10元芳香性基團或者包含1至3個選自氮、氧和硫的雜原子的5元至6元芳香性基團（例如雜芳基為C 1-C 5的雜芳基，其中雜原子選自N、O和S，雜原子數為1、2、3或4）。雜芳基的實例包括但不限於噻吩基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、噁二唑基、異噁唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、吲哚基、呋喃基、吡咯基、三唑基、四唑基、三嗪基、吲嗪基、異吲哚基、吲唑基、異吲唑基、嘌呤基、喹啉基、異喹啉基、二氮萘基、萘啶基、喹噁啉基、蝶啶基、咔唑基、咔啉基、菲啶基、菲咯啉基、吖啶基、吩嗪基、異噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、噁三唑基、噌啉基、喹唑啉基、苯硫基、中氮茚基、鄰二氮雜菲基、異噁唑基、吩噁嗪基、吩噻嗪基、4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩基、萘并吡啶基、[1,2,4]三唑并[4,3-b]噠嗪、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪、[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶、咪唑并[1,2-a]吡啶、咪唑并[1,2-b]噠嗪、咪唑并[1,2-a]吡嗪等。
在本申請中，“任選地”表示隨後描述的事件或狀況可能發生也可能不發生，且該描述同時包括該事件或狀況發生和不發生的情況。例如，“任選地被取代的芳基”表示芳基被取代或未被取代，且該描述同時包括被取代的芳基與未被取代的芳基。本發明申請專利範圍和說明書部分所述的“任選地”的取代基選自烷基、烯基、炔基、鹵素、鹵代烷基、鹵代烯基、鹵代炔基、氰基、硝基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的環烴基、任選取代的雜環烴基。
在本發明中，術語“取代”或“取代基”是指一個或多個氫原子被指定的基團所代替。當沒有指明取代基的個數時，取代基可以為一個或多個；當沒有指明取代位置時，取代可以在任何位置，但是只有形成一個穩定的或者是化學意義上可行的化學物才是被允許的。
當任何變數（例如R）在化合物的組成或結構中出現一次以上時，其在每一種情況下的定義都是獨立的。因此，例如，如果一個基團被0-2個R所取代，則所述基團可以任選地至多被兩個R所取代，並且每種情況下的R都有獨立的選項。例如，在
Figure 02_image078
中，當n為2時，表示苯環被2個R取代，並且每個R都有獨立的選項，即2個R可以相同，也可以不同。此外，取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。
本文所用術語“部分”、“結構部分”、“化學部分”、“基團”、“化學基團”是指分子中的特定片段或官能團。化學部分通常被認為是嵌入或附加到分子上的化學實體。
當本發明的化合物中含有烯雙鍵時，除非另有說明，否則本發明的化合物旨在包含E-和Z-幾何異構體。
“互變異構體”是指質子從分子的一個原子轉移至相同分子的另一個原子而形成的異構體。本發明的化合物的所有互變異構形式也將包含在本發明的範圍內。
本發明的化合物或其藥學上可接受的鹽可能含有一個或多個手性碳原子，且因此可產生對映異構體、非對映異構體及其它立體異構形式。每個手性碳原子可以基於立體化學而被定義為(R)-或(S)-。本發明旨在包括所有可能的異構體，以及其外消旋體和光學純形式。本發明的化合物的製備可以選擇外消旋體、非對映異構體或對映異構體作為原料或中間體。光學活性的異構體可以使用手性合成子或手性試劑來製備，或者使用常規技術進行拆分，例如採用結晶以及手性色譜等方法。本發明的化合物的立體異構體可有為(R)-或(S)-異構體。
製備/分離個別異構體的常規技術包括由合適的光學純前體的手性合成，或者使用例如手性高效液相色譜法拆分外消旋體(或鹽或衍生物的外消旋體)，例如可參見Gerald Gübitz and Martin G. Schmid (Eds.), Chiral Separations, Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Vol. 243, 2004；A.M. Stalcup, Chiral Separations, Annu. Rev. Anal. Chem. 3:341-63, 2010；Fumiss et al. (eds.), VOGEL’S ENCYCLOPEDIA OF PRACTICAL ORGANIC CHEMISTRY 5.sup.TH ED., Longman Scientific and Technical Ltd., Essex, 1991, 809-816； Heller, Acc. Chem. Res. 1990, 23, 128。
在本申請中，術語“藥學上可接受的鹽”包括藥學上可接受的酸加成鹽和藥學上可接受的鹼加成鹽。
“藥學上可接受的酸加成鹽”是指能夠保留游離鹼的生物有效性而無其它副作用的，與無機酸或有機酸所形成的鹽。無機酸鹽包括但不限於鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽等；有機酸鹽包括但不限於甲酸鹽、乙酸鹽、2,2-二氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙酸鹽、己酸鹽、辛酸鹽、癸酸鹽、十一碳烯酸鹽、乙醇酸鹽、葡糖酸鹽、乳酸鹽、癸二酸鹽、己二酸鹽、戊二酸鹽、丙二酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、油酸鹽、肉桂酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、麩胺酸鹽、焦麩胺酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、水楊酸鹽、4-胺基水楊酸鹽、萘二磺酸鹽等。這些鹽可通過本專業已知的方法製備。
“藥學上可接受的鹼加成鹽”是指能夠保持游離酸的生物有效性而無其它副作用的、與無機鹼或有機鹼所形成的鹽。衍生自無機鹼的鹽包括但不限於鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽、鋁鹽等。優選的無機鹽為銨鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽及鎂鹽。衍生自有機鹼的鹽包括但不限於以下的鹽：第一胺類、第二胺類及第三胺類，被取代的胺類，包括天然的被取代胺類、環狀胺類及鹼性離子交換樹脂，例如胺、異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲胺基乙醇、2-二乙胺基乙醇、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡因、普魯卡因、膽鹼、甜菜鹼、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可鹼、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺樹脂等。優選的有機鹼包括異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環己基胺、膽鹼及咖啡因。這些鹽可通過本專業已知的方法製備。
在本申請中，“藥物組合物”是指本發明化合物與本領域通常接受的用於將生物活性化合物輸送至哺乳動物(例如人)的介質的製劑。該介質包括藥學上可接受的載體。藥物組合物的目的是促進生物體的投藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
本文所用術語“藥學上可接受的”是指不影響本發明化合物的生物活性或性質的物質(如載體或稀釋劑)，並且相對無毒，即該物質可施用於個體而不造成不良的生物反應或以不良方式與組合物中包含的任意組分相互作用。
在本申請中，“藥學上可接受的輔料”包括但不限於任何被相關的政府管理部門許可為可接受供人類或家畜使用的佐劑、載體、賦形劑、助流劑、增甜劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、矯味劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、助懸劑、穩定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑。
本文所用術語“預防的”、“預防”和“防止”包括使病患減少疾病或病症的發生或惡化的可能性。
本文所用的術語“治療”和其它類似的同義詞包括以下含義： (i)預防疾病或病症在哺乳動物中出現，特別是當這類哺乳動物易患有該疾病或病症，但尚未被診斷為已患有該疾病或病症時； (ii)抑制疾病或病症，即遏制其發展； (iii)緩解疾病或病症，即，使該疾病或病症的狀態消退；或者 (iv)減輕該疾病或病症所造成的症狀。
本文所使用術語“有效量”、“治療有效量”或“藥學有效量”是指服用後足以在某種程度上緩解所治療的疾病或病症的一個或多個症狀的至少一種藥劑或化合物的量。其結果可以為跡象、症狀或病因的消減和/或緩解，或生物系統的任何其它所需變化。例如，用於治療的“有效量”是在臨床上提供顯著的病症緩解效果所需的包含本文公開化合物的組合物的量。可使用諸如劑量遞增試驗的技術測定適合於任意個體病例中的有效量。
本文所用術語“服用”、“施用”、“投藥”等是指能夠將化合物或組合物遞送到進行生物作用的所需位點的方法。這些方法包括但不限於口服途徑、經十二指腸途徑、胃腸外注射(包括靜脈內、皮下、腹膜內、肌內、動脈內注射或輸注)、局部投藥和經直腸投藥。本領域技術人員熟知可用於本文所述化合物和方法的施用技術，例如在Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current ed.; Pergamon; and Remington’s, Pharmaceutical Sciences (current edition), Mack Publishing Co., Easton, Pa中討論的那些。在優選的實施方案中，本文討論的化合物和組合物通過口服施用。
本文所使用術語“藥物組合”、“藥物聯用”、“聯合用藥”、“施用其它治療”、“施用其它治療劑”等是指通過混合或組合不止一種活性成分而獲得的藥物治療，其包括活性成分的固定和不固定組合。術語“固定組合”是指以單個實體或單個劑型的形式向患者同時施用至少一種本文所述的化合物和至少一種協同藥劑。術語“不固定組合”是指以單獨實體的形式向患者同時施用、合用或以可變的間隔時間順次施用至少一種本文所述的化合物和至少一種協同製劑。這些也應用到雞尾酒療法中，例如施用三種或更多種活性成分。
本領域技術人員還應當理解，在下文所述的方法中，中間體化合物官能團可能需要由適當的保護基保護。這樣的官能團包括羥基、胺基、巰基及羧酸。合適的羥基保護基包括三烷基甲矽烷基或二芳基烷基甲矽烷基(例如第三丁基二甲基甲矽烷基、第三丁基二苯基甲矽烷基或三甲基甲矽烷基)、四氫吡喃基、苄基等。合適的胺基、脒基及胍基的保護基包括第三丁氧羰基、苄氧羰基等。合適的巰基保護基包括-C(O)-R”(其中R”為烷基、芳基或芳烷基)、對甲氧基苄基、三苯甲基等。合適的羧基保護基包括烷基、芳基或芳烷基酯類。
保護基可根據本領域技術人員已知的和如本文所述的標準技術來引入和除去。保護基的使用詳述於Greene, T. W.與P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organi Synthesis, (1999), 4th Ed., Wiley中。保護基還可為聚合物樹脂。
在不違背本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。
本發明所用試劑和原料均市售可得。
本發明的積極進步效果在於：與US20160176882A1，WO2017219948A1中的化合物N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-8-(2-甲基吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑并[4,3-c]嘧啶-5-胺相對比，本發明的化合物抗細胞增殖活性增加了約10倍。本發明公開的化合物在與EED蛋白的結合時，在結合的“口袋”外側的雙環結構能使化合物具有更好的代謝穩定性。
下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但並不因此將本發明限制在所述的實施例範圍之中。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，按照常規方法和條件，或按照商品說明書選擇。
下述實施例中所用的起始物可由化學品銷售商如Aldrich、TCI、Alfa Aesar、畢得、安耐吉等處購得，或者可通過已知的方法來合成。
下述實施例中，冰浴是指-5攝氏度至0攝氏度，室溫是指10攝氏度至30攝氏度，回流溫度一般是指常壓下溶劑回流溫度。反應過夜是指時間為8小時至15小時。下述實施例中，未限定具體操作溫度的，均在室溫下進行。
下述實施例中，中間體和最終產物的分離提純是通過正相或反相色譜柱分離或者其它合適的方法。正相快速色譜柱是用乙酸乙酯和正己烷或甲醇和二氯甲烷等作為流動相。反相製備性高壓液相色譜(HPLC)是用C18柱並用UV 214 nm 和254 nm來檢測，其流動相為A（水和0.1%甲酸）、B（乙腈）或者流動相A（水和0.1%碳酸氫銨）、B（乙腈）。
各實施例中： LCMS 儀器：Pump：Agilent 1260，UV 檢測器：Agilent 1260 DAD，Mass Spectrometer API 3000 色譜柱：Waters sunfire C18, 4.6×50mm, 5μm 流動相：A-H 2O (0.1% HCOOH)；B-乙腈 NMR儀器：Bruker Ascend 400M ( 1H NMR: 400MHz; 13C NMR: 100 MHz)。
〈實施例 1 〉
中間體4-（胺基甲基）-5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-3-醇（ A）
步驟一：中間體2-溴-3,6-二氟苯甲醛（ A-2）
Figure 02_image080
在500 mL乾燥的三口燒瓶中加入 A-1（22 g，114 mmol）和乾燥的THF（200 mL），冷卻至–70℃。二異丙基胺基鋰（2 M，68.4 mL）緩慢滴加入反應液中。反應液在相同溫度下攪拌45分鐘後，加入DMF（17.8 mL，228 mmol）。反應液在相同溫度下攪拌兩小時後升至0℃。飽和氯化銨（200 mL）加入到反應液中。反應液用EtOAc（200 mL X 2）萃取。合併的有機相用鹽水洗滌一次，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，在減壓下濃縮。殘餘物在矽膠上純化（石油醚：乙酸乙酯=100：1），得到 A-2（20 g，79.4%產率），為淡黃色固體。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 10.34 (s, 1H), 7.34 (ddd, J =9.2, 7.4, 4.5 Hz, 1H), 7.16 (td, J =9.3, 4.0 Hz, 1H) ppm.
步驟二：中間體2-溴-3-氟-6-甲氧基苯甲醛（ A-3）
Figure 02_image082
在2 L的三口燒瓶中加入 A-2（20 g，90.5 mmol），用無水THF（1000 mL）和MeOH（200 mL）攪拌溶解。加入甲醇鈉（5.87 g，108.6 mmol），反應液在60℃下攪拌18小時。減壓濃縮除去大部分溶劑，加入500 mL水。懸濁液攪拌30分鐘後過濾，收集固體。固體用石油醚和乙酸乙酯（5:1）混合液打漿，過濾得到固體，減壓乾燥得到 A-3（18 g，85%產率），為黃色固體。
LC-MS: m/z 233.1 [M+H] +.
步驟三：中間體2-溴-3-氟-6-羥基苯甲醛（ A-4）
Figure 02_image084
在1 L的單口燒瓶中加入 A-3（16.8 g，72.1 mmol）和二氯甲烷（300 mL）。在-78℃下緩慢滴加三溴化硼（21.7 g，86.5 mmol），反應液升至室溫，並攪拌18小時。反應液用二氯甲烷（300 mL）稀釋，緩慢加入飽和碳酸氫鈉（300 mL）。有機相用鹽水洗滌兩次，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，在減壓下濃縮。殘餘物在矽膠上純化（石油醚：乙酸乙酯=50：1），得到 A-4（10 g，63.3%產率），為淡黃色固體。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 11.77 (s, 1H), 10.34 (s, 1H), 7.29 (dt, J =12.7, 6.3 Hz, 1H), 6.94 (dd, J =9.3, 4.1 Hz, 1H) ppm.
步驟四：中間體4-溴-5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-3-醇（ A-5）
Figure 02_image086
在乾燥的三口燒瓶中加入三甲基碘化亞碸（9.73 g，44.2 mmol）和DMSO（50 mL）。在冰水浴下加入第三丁醇鈉（4.25 g，44.2 mmol）。反應液在室溫下攪拌2小時，加入 A-4（8.8 g，40.2 mmol）。反應液在室溫下攪拌18小時後，加入乙酸乙酯（250 mL）和水（250 mL），用乙酸乙酯萃取（250 mL X 2）。有機相用水和鹽水分別洗滌一次，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，在減壓下濃縮。殘餘物在矽膠上純化（石油醚：乙酸乙酯=10：1），得到 A-5（6.2 g，66.2%產率），為白色固體。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.03 (t, J =8.7 Hz, 1H), 6.76 (dd, J =8.8, 3.5 Hz, 1H), 5.51-5.40 (m, 1H), 4.58 (ddd, J =13.4, 10.8, 4.6 Hz, 2H), 2.33 (d, J =4.9 Hz, 1H) ppm.
步驟五：中間體5-氟-3-羥基-2,3-二氫苯并呋喃-4-甲腈（ A-6）
Figure 02_image088
在乾燥的單口燒瓶中依次加入 A-5（2.7 g，11.6 mmol），氰化鋅（2.04 g，17.4 mmol），DMF（50 mL）和四三苯基膦鈀（1.34 g，1.16 mmol)。反應液在氮氣保護下加熱至120℃，攪拌18小時。反應液冷卻至室溫，用乙酸乙酯（200 mL X 3）和水（200 mL）萃取。有機相用水和鹽水分別洗滌一次，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，在減壓下濃縮。殘餘物在矽膠上純化（石油醚：乙酸乙酯=5：1），得到 A-6（1.6 g，77%產率），為白色固體。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.20-6.99 (m, 2H), 5.63 (dd, J =6.9, 2.9 Hz, 1H), 4.69 (dd, J =10.8, 7.1 Hz, 1H), 4.55 (dd, J =10.8, 3.1 Hz, 1H), 2.74 (s, 1H) ppm.
步驟六：中間體（5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基）甲胺（ A2）
Figure 02_image090
在100 mL單口瓶中依次加入 A-6（1.55 g，8.65 mmol），三氟乙酸（1.09 g，8.65 mmol），甲醇（20mL）和10%鈀碳（2 g，含50%水）。反應混合物用氫氣鼓氣5分鐘，用氫氣球換氣三次，在氫氣球下60℃攪拌48小時。混合物經矽藻土過濾，用甲醇（50 mL X 2）洗滌，濾液減壓濃縮加入二氧六環（10 mL）和10 M氫氧化鈉水溶液（1 mL），用二氧六環（10 mL X 2）萃取，有機相經無水硫酸鈉乾燥，過濾，在減壓下濃縮。得到化合物 A2（1.4 g，90%純度，87%產率），直接用於下一步。
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 3.27 (t, 2H), 3.77 (s, 2H), 4.56 (t, 2H), 6.59 (dd 1H), 6.81 (dd, 1H) ppm；LC-MS: m/z 168.1 [M+H] +.
〈實施例 2 〉
8-(5-((二甲胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈（ BR-1）
步驟一：2-(5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-2-((二苯亞甲基)胺基)乙腈（ 2）
Figure 02_image092
在零度下往氫化鈉（3.63 g，90.8 mmol，60%純度）的N,N-二甲基甲醯胺（60.0 mL）溶液中加入N-(二苯亞甲基)胺基乙腈 1（10.0 g，45.4mmol）的N,N-二甲基甲醯胺（50.0 mL）溶液，2分鐘之後零度下加入5-溴-4-氯-2-(甲硫基)嘧啶（10.8 g，45.4 mmol）的N,N-二甲基甲醯胺溶液（30.0 mL），於40℃反應2小時。LCMS監測反應結束，氯化銨水溶液淬滅，乙酸乙酯萃取旋乾得到粗品2-(5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-2-((二苯亞甲基)胺基)乙腈 2（15.0 g，粗品），直接用於下一步。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.58 - 7.52 (m, 7H), 7.44 - 7.40 (m, 3H), 7.26 - 7.23 (m, 2H), 4.37 (s, 3H) ppm; LCMS m/z 424.7 [M+H] +.
步驟二：2-胺基-2-(5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)乙腈（ 3）
Figure 02_image094
在零度的條件下將2-(5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-2-((二苯亞甲基)胺基)乙腈 2（15.0 g，粗品）的四氫呋喃（200 mL）和水溶液（150 mL）加入濃鹽酸（12 M，23.6 mL），於20℃反應2小時。TLC監測反應結束，反應液旋掉四氫呋喃後加入氫氧化鈉水溶液（1.00 M）調節pH到8.0左右，用乙酸乙酯萃取，乾燥，旋乾得到粗品2-胺基-2-(5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)乙腈 3（9.00 g，粗品）直接用於下一步。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.86 (s, 1H), 5.28 (s, 1H), 2.89 (s, 2H), 2.57 (s, 3H) ppm; LCMS m/z 260.9 [M+H] +.
步驟三：N-((5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)(氰基)甲基)甲醯胺（ 4）
Figure 02_image096
將甲酸（39.0 g，848 mmol）和醋酐（34.8 g，341 mmol）混合後在50°C反應1小時，冷到0度後加入到2-胺基-2-(5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)乙腈 3（9.00 g，粗品）二氯甲烷(100 mL）溶液中。在20度下反應2h。TLC監測反應結束，在零度下用氫氧化鈉水溶液（1.00 M）調pH值到8，乙酸乙酯萃取，乾燥，旋乾得到粗品後柱層析得到的N-((5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)(氰基)甲基)甲醯胺 4（7.00 g，22.6 mmol，73.2%產率）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.86 (s, 1H), 5.28 (s, 1H), 2.89 (s, 2H), 2.57 (s, 3H) ppm; LCMS m/z 260.9 [M+H] +.
步驟四：8-溴-5-(甲硫基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈（ 5）
Figure 02_image098
往N-((5-溴-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)(氰基)甲基)甲醯胺 4（7.00 g，24.3 mmol）加入三氯氧磷（28.8 g，188 mmol)，在110度反應1小時。TLC監測反應結束，反應液旋掉一部分三氯氧磷，然後在＜30度下用水淬滅，最後用NaOH水溶液（6.00 M）調減到8，乙酸乙酯萃取，乾燥，旋乾得到粗品用石油醚/乙酸乙酯(5:1，100 mL)打漿，濾出固體得到純品，濾液柱層析得到少量產品，最後合併得到8-溴-5-(甲硫基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈 5（3.20 g，11.7 mmol，48.1%產率）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.81 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 2.76 (s, 3H) ppm; LCMS m/z 270.9 [M+H] +.
步驟五：8-溴-5-(甲磺醯基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈（ 6）
Figure 02_image100
將8-溴-5-(甲硫基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈 5（0.60 g，2.23 mmol）溶於二氯甲烷（5 mL），在0℃下加入85%的間氯過氧苯甲酸（1.40 g，6.91 mmol）在20℃攪拌12小時。LCMS監測反應結束，反應液直接用於下一步。
LCMS m/z 302.9 [M+H] +.
步驟六：8-溴-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈（ 7）
Figure 02_image102
將8-溴-5-(甲磺醯基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈 6（671 mg，2.23 mmol）以及(5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲胺 A（453 mg，2.23 mmol）溶在二氯甲烷（5 mL），加入碳酸鈉（1.18 g，11.1 mmol），在20℃攪拌4小時。LCMS監測反應結束，反應液用二氯甲烷稀釋，鹽水洗滌，有機相乾燥旋乾後經過柱層析得到棕色固體產物8-溴-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈 7（400 mg，46.2%產率）。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.90 - 8.77 (m, 2H), 7.75 (s, 1H), 6.93 (t, J= 9.4 Hz, 1H), 6.69 (dd, J= 4.0, 8.8 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.53 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 3.29 - 3.24 (m, 3H) ppm; LCMS m/z 388.0 [M+H] +.
步驟七：8-溴-5-(溴甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶（ 9）
Figure 02_image104
在100mL圓底燒瓶中加入8-溴-5-甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶 8（2 g，9.43 mmol）和四氯化碳（20 mL），在冰水浴下加入NBS（2 g，11.3 mmol）和AIBN（310 mg，0.2 mmol）。加料完成後，將反應常溫升至80℃，保持反應16h過夜。反應液用亞硫酸鈉水溶液洗滌後旋乾後得到紅褐色固體，用快速分離柱（洗提劑為石油醚：乙酸乙酯=3:1）純化得到紅褐色固體。真空乾燥後得到純的8-溴-5-(溴甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶 9（1.7 g，62%產率）。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.48 (s, 1H), 7.77 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 4.90 (s, 2H) ppm; LCMS: m/z 291.9 [M+H] +.
步驟八：1-(8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-N, N-二甲基甲胺（ 10）
Figure 02_image106
在100mL圓底燒瓶中加入8-溴-5-(溴甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶 9（1 g，3.44 mmol）和四氫呋喃（15 mL），在冰水浴下加入1 M的二甲胺四氫呋喃溶液（17 mL，17.2 mmol）和碳酸鉀（0.59 g，1.43 mmol）。加料完成後，將反應常溫升至80℃，保持反應3h。反應完成後，反應液旋乾後得到黃褐色固體，用快速分離柱（石油醚：乙酸乙酯=5:1）洗提純化後得到黃色固體1-(8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-N, N-二甲基甲胺 10,（0.6 g，68.3%產率）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.74-8.38 (m, 1H), 8.14-7.85 (m, 1H), 7.31-6.90 (m, 1H), 4.03-3.78 (m, 2H), 2.38-2.20 (m, 6H) ppm; LCMS: m/z 255.0, 257.0 [M+H] +.
步驟九：(5-((二甲基胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸（ 11）
Figure 02_image108
將1-(8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-N,N-二甲基甲胺 10（100 mg，391 μmol），聯硼酸頻那醇酯（159 mg，627 μmol），醋酸鉀（115 mg，1.18 mmol），[1,1-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷（64.0 mg，78.4 μmol）在手套箱中溶於二氧六環（6 mL），在125℃反應5小時。LCMS監測反應結束，反應液直接用於下一步反應。
LCMS m/z 221.1 [M+H] +.
步驟十：8-(5-((二甲胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈（ BR-1）
Figure 02_image110
向上一步的硼酸反應液中加入8-溴-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈 7（151 mg，390 μmol），碳酸鉀（108 mg，781 μmol），[1,1-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷（31.9 mg，39.0 μmol），水（1 mL），二氧六環（3 mL），在100℃反應2小時。LCMS監測反應結束，反應液濃縮後通過柱層析純化和prep-HPLC得到的溶液用飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH為8，濃縮除去有機溶劑，過濾得到白色固體8-(5-((二甲胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈 BR-1（70.0 mg，36.8%產率）。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.93 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.85 - 7.76 (m, 2H), 7.32 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.96 (t, J= 9.6 Hz, 1H), 6.72 (dd, J= 4.0, 8.8 Hz, 1H), 4.77 (s, 2H), 4.56 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.35 - 3.35 (m, 2H), 2.34 (s, 6H) ppm; LCMS m/z 484.4 [M+H] +.
〈實施例 3 〉
5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-8-(5-(2-羥基丙烷-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈（ BR-2）
步驟一：(E)-5-溴-6-(((二甲胺基)亞甲基)胺基)-吡啶-2-甲酸甲酯（ E-2）
Figure 02_image112
將(E)-5-溴-6-(((二甲胺基)亞甲基)胺基)-吡啶-2-甲酸甲酯（5.0 g，21.6 mmol），1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺（5.16 g，43.3 mmol）溶於甲苯（100 mL），反應液升溫至110℃下反應4小時，TLC檢測無原料剩餘，反應液濃縮得到粗品(E)-5-溴-6-(((二甲胺基)亞甲基)胺基)-吡啶-2-甲酸甲酯 E-2（6.00g）。
LCMS: m/z 585.7 [M+H] +.
步驟二：(E)-5-溴-6-(((羥胺基)亞甲基)胺基)-吡啶-2-甲酸甲酯（ E-3）
Figure 02_image114
在反應瓶中依次加入(E)-5-溴-6-(((二甲胺基)亞甲基)胺基)-吡啶-2-甲酸甲酯 E-2（6.0 g，20.97 mmol），鹽酸羥胺（2.91 g，41.94 mmol），乙酸鈉（3.44 g，41.9 mmol)，乙醇（60 mL）。反應液於氮氣氛圍下升溫至50℃反應4小時，LCMS監測反應結束，降至室溫，過濾得到(E)-5-溴-6-(((羥胺基)亞甲基)胺基)-吡啶-2-甲酸甲酯 E-3（5.9 g，85.0%產率）。
1H NMR (400MHz, CDCl 3) δ 8.27 (br d, J=8.5 Hz, 1H), 8.19 - 8.13 (m, 1H), 7.85 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.50 (d, J=7.9 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H) ppm; LCMS: m/z 273.7 [M+H] +.
步驟三：8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯（ E-4）
Figure 02_image116
在室溫下往(E)-5-溴-6-(((羥胺基)亞甲基)胺基)-吡啶-2-甲酸甲酯 E-3（10 g，36.49 mmol）的四氫呋喃（100 mL）溶液中逐滴加入三氟乙酸酐（23.0 g，109 mmol）。然後緩慢升至75℃，並攪拌反應3小時。反應結束後，在0℃向混合物中加入飽和的碳酸氫鈉水溶液（100 mL）進行淬滅，用乙酸乙酯（100 mL X 3）進行萃取，合併的有機相乾燥，濃縮。濃縮物用矽膠柱（石油醚：乙酸乙酯=5:1到4:1）純化得到白色固體產物8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯 E-4（5.00 g，53.5%產率）。
步驟四： 2-(8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇（ E-5）
Figure 02_image118
在-30℃下，往8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-甲酸甲酯 E-4（500 mg，1.95 mmol）的四氫呋喃溶液中（10 mL）滴加甲基溴化鎂（3 M，2.60 mL）並在此溫度下攪拌三小時。反應結束後，向反應液中加入水（10 mL）進行淬滅，用乙酸乙酯（10 mL X 3）進行萃取，合併的有機相用乾燥，濃縮後用快速矽膠柱純化得到2-(8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇 E-5（400mg，80.0%產率）。
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 8.61 (s, 1H), 8.05 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J=8.0 Hz, 1H), 5.91 (s, 1H), 1.72 (s, 6H) ppm; LCMS: m/z 255.9 [M+H] +.
步驟五：(5-(2-羥基丙烷-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸（ 12）
Figure 02_image120
將2-(8-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)第三醇 E-5（100 mg，390 μmol），聯硼酸頻那醇酯（158 mg，624 μmol），醋酸鉀（114 mg，1.17 mmol），[1,1-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷（63.7 mg，78.0 μmol）在手套箱中溶於二氧六環（6 mL），在125℃反應6小時。LCMS監測反應結束，反應液直接用於下一步反應。
LCMS m/z 222.2 [M+H] +.
步驟六：5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-8-(5-(2-羥基丙烷-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈（ BR-2）
Figure 02_image122
向上一步的(5-(2-羥基丙烷-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸 12的反應液中加入8-溴-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈 7（151 mg，389 μmol），碳酸鉀（107 mg，778 μmol），[1,1-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷（31.7 mg，38.9 μmol），水（1 mL），二氧六環（3 mL），在100℃反應2小時。LCMS監測反應結束，反應液濃縮後通過柱層析純化和prep-HPLC得到的溶液用飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH為8，濃縮除去有機溶劑，過濾得到白色固體5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-8-(5-(2-羥基丙烷-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈 BR-2（50.0 mg，26.0%產率）。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.90 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.83 - 7.78 (m, 2H), 7.44 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.95 (t, J= 9.4 Hz, 1H), 6.75 - 6.67 (m, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.77 (s, 2H), 4.56 (t, J= 8.6 Hz, 2H), 3.37 - 3.32 (m, 2H), 1.77 (s, 6H) ppm; LCMS m/z 485.4 [M+H] +.
〈實施例 4 〉
8-(5-(二甲胺基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲腈（ BR-3）
步驟一：8-碘-N,N-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-胺（ 14）
Figure 02_image124
向二甲胺的四氫呋喃溶液（4 mL，2 M/L）中加入5-氯-8-碘-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶 13（200 mg，0.72 mmol）。混合物在90℃攪拌16h。LCMS顯示反應結束，濃縮並純化（石油醚：乙酸乙酯=1:1），得到8-碘-N,N-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-胺 14（190 mg，90%產率）。
LCMS: m/z 288.9 [M+H] +.
步驟二：(5-(二甲胺基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸（ 15）
Figure 02_image126
將8-碘-N,N-二甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-胺 14（100 mg，414 μmol），聯硼酸頻那醇酯（168 mg，663 μmol），醋酸鉀（122 mg，1.24 mmol），[1,1-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷（67.7 mg，82.9 μmol）在手套箱中溶於二氧六環（5 mL），在125℃反應6小時。LCMS監測反應結束，反應液直接用於下一步反應。
LCMS m/z 207.2 [M+H] +.
步驟三：8-(5-(二甲胺基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈（BR-3）
Figure 02_image128
向上一步的(5-(二甲胺基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸 15反應液中加入8-溴-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈（160 mg，412 μmol），碳酸鉀（114 mg，825 μmol），[1,1-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷（33.6 mg，41.2 μmol），水（1 mL），二氧六環（3 mL）在100℃反應2小時。LCMS監測反應結束，反應液濃縮後通過柱層析純化和prep-HPLC得到的溶液用飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH為8，濃縮除去有機溶劑，過濾得到白色固體8-(5-(二甲胺基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-腈 BR-3（13.0 mg，6.61%產率）。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ = 8.90 - 8.68 (m, 2H), 8.40 (s, 1H), 7.70 - 7.61 (m, 2H), 6.94 (t, J= 9.2 Hz, 1H), 6.74 - 6.66 (m, 1H), 6.56 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.74 (s, 2H), 4.55 (t, J= 8.6 Hz, 2H), 3.37 - 3.33 (m, 2H), 3.17 (s, 6H) ppm; LCMS m/z 470.4 [M+H] +.
〈實施例 5 〉
8-(5-((二甲胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-1-(甲磺醯)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺（ BR-4）
步驟一: 8-溴-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺（ 17）
Figure 02_image130
將8-溴-5-(甲硫基)咪唑并[1,5-c]嘧啶 16（4.0 g，16.4 mmol）溶於二氯甲烷（60 mL）中，在0℃加入間氯過氧苯甲酸（4.99 g，24.6 mmol，85%純度）並在0℃下反應55分鐘，然後在0℃滴加三乙胺（6.63 g，65.5 mmol）並攪拌5分鐘，最後將(5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲胺 A（3.34 g，16.4 mmol，HCl）加入反應液中，升溫至20℃攪拌3小時，TLC顯示無原料剩餘，向反應液中加入水淬滅，用二氯甲烷萃取，將有機相洗滌，乾燥，濃縮，粗品用快速矽膠柱純化得到8-溴-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)咪唑并 [1,5-c]嘧啶-5-胺 17（4.0 g，40.3%產率）。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.23 (s, 1H), 7.41 - 7.30 (m, 2H), 6.87 - 6.77 (m, 1H), 6.71 - 6.58 (m, 1H), 6.10 (br s, 1H), 4.79 - 4.71 (m, 2H), 4.60 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 3.37 (t, J= 8.8 Hz, 2H) ppm; LCMS: m/z 363.0 [M+H] +.
步驟二：用實施例2步驟十的方法，以8-溴-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺（ 17）和(5-((二甲基胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸（ 11）為原料可以得到：8-(5-((二甲基胺)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺（ 18）
Figure 02_image132
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 8.22 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.71 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.30 - 7.27 (m, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.87 - 6.72 (m, 1H), 6.65 (dd, J= 3.9, 8.6 Hz, 1H), 4.82 (s, 2H), 4.60 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 4.16 (s, 2H), 3.67 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 3.43 (br t, J= 8.6 Hz, 2H), 2.52 (s, 6H) ) ppm; LCMS: m/z 459.2 [M+H] +.
步驟三：8-(5-((二甲基胺)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-1-碘代咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺（ 19）
Figure 02_image134
將8-(5-((二甲基胺)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺 18（400 mg，0.782 mmol）溶於醋酸（2 mL），在0℃加入N-碘代丁二醯亞胺（137 mg，0.62 mmol），升溫至20℃反應0.25小時，TLC和LCMS監測反應結束，將反應液的pH調至7，用乙酸乙酯萃取，有機相洗滌，乾燥濃縮，粗品用快速矽膠柱純化得到8-(5-((二甲基胺)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-1-碘代咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺 19（190 mg，33.9%產率）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.73 (s, 1H), 8.53 - 8.47 (m, 1H), 8.47 - 8.43 (m, 1H), 7.64 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 7.33 - 7.26 (m, 2H), 6.95 (t, J= 9.4 Hz, 1H), 6.74 - 6.66 (m, 1H), 4.74 (d, J= 4.9 Hz, 2H), 4.55 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.30 (br s, 2H), 2.35 (s, 6H) ppm; LCMS: m/z 585.5 [M+H] +.
步驟四：8-(5-((二甲基胺)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-1-(甲磺醯基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺（ BR-4）
Figure 02_image136
將8-(5-((二甲基胺)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-1-碘代咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺 19（100 mg，0.172 mmol），碘化亞銅（98 mg，0.513 mmol），甲基亞磺酸鈉（52.4 mg，0.513 mmol）溶於二甲基亞碸（1 mL），鼓氮氣5分鐘，在120℃微波20分鐘，然後降至100℃反應3小時，LCMS監測反應結束，將反應液濃縮，粗品用prep-HPLC純化得到8-(5-((二甲基胺)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-1-(甲磺醯基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺 BR-4（30 mg，32.3%產率）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.94 (s, 1H), 8.89 - 8.80 (m, 1H), 8.36 (br s, 1H), 7.66 - 7.56 (m, 2H), 7.26 - 7.15 (m, 1H), 6.96 (t, J= 9.4 Hz, 1H), 6.75 - 6.67 (m, 1H), 4.82 - 4.72 (m, 2H), 4.56 (t, J= 8.7 Hz, 2H), 3.99 (br s, 2H), 3.31 - 3.31 (m, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.33 (br s, 6H) ppm; LCMS: m/z 537.2 [M+H] +.
〈實施例 6 〉
按照實施例5的方法，用(5-(2-羥基丙烷-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸（ 12） 替換(5-((二甲基胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)硼酸（ 11）可以得到如下化合物：2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-1-(甲磺醯)咪唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇（ BR-5）。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.94 (s, 1H), 8.88 - 8.76 (m, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.65 - 7.57 (m, 2H), 7.34 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.96 (t, J= 9.4 Hz, 1H), 6.80 - 6.62 (m, 1H), 5.82 (s, 1H), 4.85 - 4.68 (m, 2H), 4.56 (t, J= 8.7 Hz, 2H), 3.32 - 3.31 (m, 2H), 2.88 (s, 3H), 1.76 (s, 6H) ppm; LCMS: m/z 538.2 [M+H] +.
Figure 02_image036
藥理學及應用
EED作為PRC2蛋白複合物的主要組成部分之一，雖然並不具有酶催化的活性，但是它對PRC2的整體功能具有重要的作用。EED對PRC2的作用具體表現為兩個方面：1）EED直接與三甲基化的H3K27Me3結合，這樣能夠把PCR2複合物定位在需要修飾的染色質上；2）EED對EZH2的酶催化功能有很大的變構促進作用。因此，開發作為變構蛋白EED的標的化合物為提供抑制EZH2酶活性提供了新策略。而且這樣的抑制劑具有比EZH2酶催化位點抑制劑具有更好或互補的優勢，比如當病人對於EZH2酶抑制劑產生耐藥性時，EED抑制劑同樣可以起到抑制EZH2酶活性的作用。本發明公開了化合物可以作為EED標的抑制劑，並對與EED和/或PRC2作用機理相關的疾病有治療作用。
本發明公開化合物的生物學功能在生化以及細胞水平的測試中得到了證明。比如在生化測試中，本發明公開的化合物能夠與和EED蛋白結合的H3K27Me3多肽有很強的競爭結合作用（IC 50可達＜1 nM）。在細胞水平上，本發明公開化合物不僅可以抑制組蛋白H3K27的甲基化水平而且也可以通過這一作用抑制癌細胞的增殖（IC 50可達＜1 nM）。
〈實施例 7 〉
ELISA(H3K27三甲基化)分析
將代表性的本公開內容的化合物用DMSO中進行3-倍梯度稀釋，每化合物檢測10個濃度梯度，最高測定濃度為10 μM。化合物200-倍稀釋到在96-孔盤中培養的G401細胞中（DMSO終濃度為0.5%）。投藥細胞培養72小時後，ELISA方法檢測組蛋白H3K27三甲基化水平。
組蛋白提取：96-孔盤中化合物處理的細胞用1 x PBS（10 x PBS緩衝液（80 g NaCl（Sigma，產品號S3014），2 g KCl（Sigma，產品號60128），14.4 g Na 2HP04（Sigma，產品號S5136），2.4 g KH 2P04（Sigma，產品號P9791）至1 L水中，pH至7.4）洗滌三次，每孔加入100 μL 0.4 N HCl，置於4℃，溫和震搖2小時裂解細胞。細胞裂解液再用80 μL中和緩衝液（0.5 M磷酸氫二鈉，pH 12.5，2.5 mM DTT；1% cocktail（Sigma，產品號P8340））中和（充分混勻細胞裂解液與中和緩衝液）。
ELISA檢測方法：將細胞裂解液平行轉移至2個384-孔檢測盤（PerkinElmer，OptiPlate-384HB，產品號6007290）中，一塊盤用於檢測H3K27三甲基化水平，另一塊盤用於測定H3的水平，PBS調至終體積為50 μL/孔，4℃包被過夜。次日，棄去孔內溶液，用TBST緩衝液（l x TBS（10 x TBS：24.2 g Tris（Sigma，產品號T6066），80 g NaCl（Sigma，產品號S3014）至1 L水中，HCl調pH至7.6），0.1% Tween-20）洗滌5次，於吸水紙上扣乾水分。將70 μL封閉緩衝液（TBST，5% BSA）加入已包被之反應孔中，於室溫培育1小時。棄去封閉緩衝液，加入一級抗體（30 μL/孔）。所需一級抗體均用封閉緩衝液稀釋，稀釋倍數如下：抗H3K27Me3抗體（Cell Signaling Technology，產品號9733），1:2000稀釋；抗H3抗體（Cell Signaling Technology，產品號4499），1：10000稀釋。加入一級抗體後，置室溫培育1小時。TBST洗滌5次後，扣乾水分，各反應孔加入二級抗體（30 μL/孔），室溫培育1小時。二級抗體（抗兔抗體（Jackson ImmunoResearch，產品號111-035-003））用封閉緩衝液稀釋2000倍後使用。1小時後，TBST洗滌，扣乾水分。於各孔中加入30 μL的ECL底物（Pierce，產品號34080），2000 rpm離心30秒。利用Molecular Devices, SpectraMax檢測各樣品訊號。數據處理：H3K27甲基化讀數先用H3訊號進行標準化，0.5% DMSO處理的樣品作為對照，計算出化合物的抑制百分率。採用GraphPad prisim5程式將數據擬合為劑量響應曲線，得到測試化合物的IC 50值。
下表1顯示了部分化合物的IC 50值。
表1
編號 名稱 Elisa-G401 IC 50(nm)
BR-1 8-(5-((二甲胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲腈 0.403
BR-2 5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-8-(5-(2-羥基丙烷-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲腈 1.066
BR-3 8-(5-(二甲胺基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲腈 1.458
BR-4 8-(5-((二甲胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-1-(甲磺醯)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺 0.278
BR-5 2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-1-(甲磺醯)咪唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇 0.198
〈實施例 8 〉
細胞增殖分析
採用標準細胞培養條件，人類B細胞非霍奇金氏淋巴瘤細胞KARPAS-422 S培養在培養瓶中。培養基為含15%胎牛血清（FBS，Invitrogen，產品號10099-141），1%青黴素/鏈黴素溶液(P/S) RPMI-1640（Invitrogen，產品號11875），培養瓶置於溫度37℃，相對濕度95%，5% CO 2的無菌培養箱中培養。為了檢測PRC2抑制劑對細胞增殖的影響，取指數生長期的細胞，以1x10 4細胞/孔的密度接種到96-孔盤（Corning，產品號3904）中，每孔加入100 μL培養基。隨後，將本文公開內容的、不同濃度的化合物加入到已接種細胞的孔中（每個化合物設置9個濃度梯度，最高檢測濃度為10 μM，3-倍梯度稀釋），每個處理濃度設置2個平行重複，DMSO終濃度為0.5%。之後每隔3~4天用Vi-CELL（Beckman Coulter）測定存活細胞數。每次計過數的細胞以同等密度（1 X 10 4個細胞/孔）接種到新的96-孔盤中，補充新鮮培養基至100 μL，同時加入不同濃度的化合物。培養至第13天，每孔加入100 μL的CellTiter -Glo（CellTiter-GloCellTiter-GloCellTiter-GloCTG）（Promega，產品號G7573），室溫避光放置10~20分鐘，利用Molecular Devices, SpectraMax i3X讀取發光訊號。採用GraphPad prisim5 將數據擬合為劑量響應曲線，從而得到測試化合物的IC 50值。
下表5顯示了部分化合物的IC 50值。
表2
編號 名稱 Proliferation-Karpas422 IC 50(nm)
BR-1 8-(5-((二甲胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲腈 0.458
BR-2 5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-8-(5-(2-羥基丙烷-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲腈 0.976
BR-3 8-(5-(二甲胺基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲腈 1.603
BR-4 8-(5-((二甲胺基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-基)-N-((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)-1-(甲磺醯)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺 0.589
BR-5 2-(8-(5-(((5-氟-2,3-二氫苯并呋喃-4-基)甲基)胺基)-1-(甲磺醯)咪唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)丙烷-2-醇 0.399
上述本發明公開的化合物可用於治療與EED蛋白和/或PRC2蛋白複合物作用機理相關的癌症，包括但不局限於瀰漫型大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤等淋巴癌、白血病、多發性骨髓瘤、間皮瘤、胃癌、惡性橫紋肌瘤、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、腦瘤包括神經母細胞瘤、膠質瘤、膠質母細胞瘤和星形細胞瘤、子宮頸癌、結腸癌、黑色素瘤、子宮內膜癌、食道癌、頭頸癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰臟癌、腎癌、直腸癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺腫瘤、子宮腫瘤和軟組織肉瘤等等。
Figure 111130281-A0101-11-0001-1
無。

Claims (12)

  1. 一種如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或它們的同位素標記化合物，其中：
    Figure 03_image001
    （ I） A獨立地為
    Figure 03_image003
    或
    Figure 03_image005
    ； X為N或CR 2； R 1、R 2和R 3獨立地為H、鹵素、氰基、R 5b取代或未取代的胺基、R 5b-O-、R 5取代或未取代的C 1- 4烷基、R 5取代或未取代的C 3- 6的環烷基、R 5取代或未取代的C 1- 4鹵代烷基、-C(=O)R 6、-CO 2R 6、-C(=O)NR 6R 7、-SO 2R 6或-SO 2NR 6R 7；當取代基為多個時，相同或不同； R 4獨立地為H、鹵素、氰基、C 1-4鹵代烷基、-C(=O)NR 4a1R 4a2、-S(=O) 2R 4b或-C(=O)R 4c； R 4a1、R 4a2和R 4b獨立地為H或C 1-4烷基； R 4c獨立地為H、C 1-4烷基或-O-C 1-4烷基； R 5獨立地為C 1-4烷基-O-、C 1-4烷基、C 1-4鹵代烷基、-N(R 5bR 5b)、N保護基團保護的胺基、氟、羥基； R 5b、R 6和R 7獨立地為H、C 1-4烷基或C 1-4鹵代烷基； “*”表示帶“*”的碳原子為手性碳原子時，其為R構型、S構型或其混合。
  2. 如請求項1所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或它們的同位素標記化合物，其中： 所述式（ I）所示的化合物選自如下所示的化合物：
    Figure 03_image007
    和/或，當R 1、R 2、R 3和R 4獨立地為鹵素時，所述的鹵素為氟、氯、溴或碘； 和/或，當R 1、R 2和R 3獨立地為R 5取代或未取代的C 1- 4烷基時，所述的C 1-4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基； 和/或，當R 1、R 2和R 3獨立地為R 5取代或未取代的C 3- 6的環烷基時，所述的C 3- 6的環烷基為環丙基、環丁基、環戊基或環己基； 和/或，當R 1、R 2和R 3獨立地為R 5取代或未取代的C 1- 4鹵代烷基時，所述的鹵為氟、氯、溴或碘； 和/或，當R 1、R 2和R 3獨立地為R 5取代或未取代的C 1- 4鹵代烷基時，所述的C 1- 4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基； 和/或，當R 1、R 2和R 3獨立地為R 5取代或未取代的C 1- 4鹵代烷基時，所述的鹵代的個數為1、2、3、4或5個； 和/或，當R 4、R 5、R 5b、R 6和R 7獨立地為C 1- 4鹵代烷基時，所述的鹵為氟、氯、溴或碘； 和/或，當R 4、R 5、R 5b、R 6和R 7獨立地為C 1- 4鹵代烷基時，其中的C 1- 4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基； 和/或，當R 4、R 5、R 5b、R 6和R 7獨立地為C 1- 4鹵代烷基時，所述的鹵代的個數為1、2、3、4或5個； 和/或，當R 4a1、R 4a2、R 4b、R 5b、R 6和R 7獨立地為C 1-4烷基時，所述的C 1- 4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基； 和/或，當R 4c獨立地為C 1-4烷基或-O-C 1-4烷基時，所述的C 1- 4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基； 和/或，當R 5獨立地為C 1-4烷基、C 1-4烷基-O-、C 1-4鹵代烷基時，所述的C 1-4烷基、C 1-4烷基-O-和C 1-4鹵代烷基裡的C 1-4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基； 和/或，當R 5獨立地為N保護基團保護的胺基時，所述的保護基團為
    Figure 03_image017
    ，R 5a為C 1-4烷基或C 1-4烷基-O-。
  3. 如請求項1或2所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或它們的同位素標記化合物，其中： 當R 5獨立地為N保護基團保護的胺基、所述的保護基團為
    Figure 03_image017
    、R 5a為C 1-4烷基或C 1-4烷基-O-時，C 1-4烷基和C 1-4烷基-O-裡的C 1-4烷基獨立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基； 和/或，X為N； 和/或，R 1選自甲基、氰基、三氟甲基、二氟甲基、
    Figure 03_image020
    、
    Figure 03_image022
    或
    Figure 03_image024
    ； 和/或，R 2為H； 和/或，R 3選自H、甲基、鹵素或氰基； 和/或，R 4選自氰基、-C(=O)NR 4a1R 4a2、-S(=O) 2R 4b或-C(=O) R 4c； 和/或，R 4a1、R 4a2、R 4b、R 4c、R 5b、R 6和R 7獨立地為甲基。
  4. 如請求項1所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或它們的同位素標記化合物，其中： 所述如式（ I）所述的化合物選自如下所示的化合物：
    Figure 03_image026
    上述化合物中，R 1的定義如請求項1所示； 和/或，
    Figure 03_image005
    為
    Figure 03_image009
    、
    Figure 03_image011
    、
    Figure 03_image013
    、
    Figure 03_image015
    或其混合物。
  5. 如請求項1至4任一項所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或它們的同位素標記化合物，其中： 所述式（ I）所示的化合物選自如下所示的化合物：
    Figure 03_image152
    、
    Figure 03_image154
    、
    Figure 03_image156
    、
    Figure 03_image158
    、
    Figure 03_image160
    、
    Figure 03_image038
    、
    Figure 03_image040
    、
    Figure 03_image042
    、
    Figure 03_image044
    和
    Figure 03_image046
    。
  6. 如請求項1至5任一項所述的式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、溶劑化物或它們的同位素標記化合物，其中： 所述同位素選自 2H、 3H、 11C、 13C、 14C、 15N、 18F、 31P、 32P、 35S、 36Cl和 125I。
  7. 一種如請求項1至5任一項所述如式（ I）所示的化合物的製備方法，其中： 其包含如下步驟： 將鹵代中間體 B 0 與中間體 E 0 進行偶聯反應得到如式（ I）所示的化合物：
    Figure 03_image048
    其中， W代表鹵素，例如Br；R x為-B(OH) 2或
    Figure 03_image050
    ； A、R 1、R 3、R 4、X的定義如請求項1至5任一項所述。
  8. 一種中間體化合物 B 0 的製備方法，其中： 其為如下任一方案： 方案一、包括以下步驟： 步驟（1）化合物 SM-5在催化劑作用下關環得到化合物 SM-6， 步驟（2）化合物 SM-6在氧化劑作用下反應得到化合物 SM-7， 步驟（3）化合物 SM-7與H 2N-CH 2-A在鹼存在下反應得到化合物 B 0 ； 方案二、其如方案一中步驟（2）至步驟（3）所示； 方案三、其如方案一中步驟（3）所示； 反應方程式如下：
    Figure 03_image052
    其中，W、A、R 4的定義如請求項1至5任一項所述。
  9. 一種藥物組合物，其中：其包含治療有效量的如請求項1至6中任一項所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、其溶劑化物或它們的同位素標記化合物以及藥學上可接受的輔料。
  10. 一種物質A在製備藥物中的應用，其中：所述的物質A為如請求項1至6中任一項所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、其溶劑化物或它們的同位素標記化合物或如請求項9所述的藥物組合物；所述的藥物優選為治療癌症的藥物；所述的藥物更優選為治療與EED蛋白和/或PRC2蛋白複合物介導的癌症的藥物。
  11. 如請求項10所述的應用，其中： 所述癌症選自瀰漫型大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤等淋巴癌、白血病、多發性骨髓瘤、間皮瘤、胃癌、惡性橫紋肌瘤、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、腦瘤包括神經母細胞瘤、膠質瘤、膠質母細胞瘤和星形細胞瘤、子宮頸癌、結腸癌、黑色素瘤、子宮內膜癌、食道癌、頭頸癌、肺癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰臟癌、腎癌、直腸癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺腫瘤、子宮腫瘤和軟組織肉瘤；優選瀰漫型大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤等淋巴癌； 和/或，所述的物質A與其他藥物聯合使用；優選地，所述其他藥物選自抗癌藥、腫瘤免疫藥物、抗過敏藥、止吐藥、鎮痛藥和細胞保護藥物。
  12. 一種藥物製劑，其中：其包含如請求項1至6中任一項所述的如式（ I）所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、立體異構體、其溶劑化物或它們的同位素標記化合物或如請求項9所述的藥物組合物，所述藥物製劑優選片劑、膠囊、藥丸、粉末、顆粒、酏劑、酊劑、懸浮物、糖漿、乳液和溶液；更優選地，所述藥物製劑的給予方式選自口服、舌下含服、皮下注射、靜脈注射、肌肉注射、胸骨內注射、鼻部服用、局部表面投藥和直腸投藥； 和/或，所述藥物製劑每天單次服用或多次服用。
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