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TW202245814A - 用於治療抗血小板誘導的凝血病之凍乾血小板衍生物組成物 - Google Patents

用於治療抗血小板誘導的凝血病之凍乾血小板衍生物組成物 Download PDF

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TW202245814A
TW202245814A TW111105888A TW111105888A TW202245814A TW 202245814 A TW202245814 A TW 202245814A TW 111105888 A TW111105888 A TW 111105888A TW 111105888 A TW111105888 A TW 111105888A TW 202245814 A TW202245814 A TW 202245814A
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fdpd
platelets
platelet
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TW111105888A
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凱斯 安德魯 莫斯科維茨
布拉登 卡爾 伊斯勒
威廉 馬修 迪克森
納倫德拉 納斯 坦登
安柏 妮可 李
斯蒂芬 愛德華 阿莫斯
拉斐爾 喬達
邁克爾 亞歷山大 馬修斯
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美商賽菲爾公司
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Abstract

在本文提供之一些實施例中，提供一種治療正在投予或已經投予抗血小板劑之對象之凝血病之方法，該方法包含：(a) 確定該對象之一或多個凝血參數之評估結果異常；及(b) 在(a)之後，向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝劑、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。

Description

用於治療抗血小板誘導的凝血病之凍乾血小板衍生物組成物
[相關申請案之交叉引用]
本申請案主張2021年2月17日申請之美國臨時申請案第63/150,338號、2021年11月4日申請之美國臨時申請案第63/275,937號、2021年11月5日申請之美國臨時申請案第63/276,420號及2021年11月17日申請之美國臨時申請案第63/264,227號的優先權，此等申請案各自藉由引用以其整體併入本文。 [政府利益聲明]
本發明係在美國政府的支持下根據由美國衛生與公眾服務部生物醫學高級研究與發展局(Biomedical Advanced Research and Development Authority, BARDA)授予之合同號HHSO100201300021完成的。政府擁有本發明中之某些權利。
本揭露係關於血小板衍生物作為用於抗血栓形成劑誘導的凝血病(coagulopathy)的治療之用途。使用抗血小板劑可能導致出血可能性增加。此處，我們證明血小板衍生物可以規避或克服這種抑制，以恢復止血。
抗血小板藥物（本文亦被稱為抗血小板劑）在美國成年人群中很常見，且採用多種抑制血小板的作用的機制。抗血小板藥物係用於治療及/或預防多種腦血管及心血管疾病。
然而，抗血小板藥物係許多藥物相關不良事件(adverse drug-related event；ADE)的原因。與此等藥物相關的用藥過量及不良事件會在患者群體中帶來嚴重出血及相關併發症的風險。此外，用抗血小板藥物治療的對象亦面臨手術併發症，因為對象可能需要在手術前逐漸停用藥物，儘管停止療法可能會使對象處於心臟病發作、中風或死亡的增加的風險。
因此，在此項技術領域中需要治療凝血病，諸如抗血小板劑誘導的凝血病，以及需要為服用抗血小板藥物的對象做好手術準備的解決方案。
因此，使用抗血栓形成劑（即抗血小板劑及/或抗凝血劑）可能導致對象之出血可能性增加。本文提供了血小板衍生物，在說明性實施例中係凍乾血小板衍生物(freeze-dried platelet derivative；FDPD)及包含其之組成物，其可降低對象之此種增加的出血可能性，且在某些說明性實施例中，規避或克服此類抗血栓形成劑對血小板之此種抑制，以恢復止血。
在一些態樣或實施例中，本文提供了一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括向需要其之該對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或在說明性實施例中包括血小板衍生物且在進一步說明性實施例中包括FDPD。本文提供了此類FDPD之示例性實施例之各種性質。
在本專利申請案通篇中提供了關於本揭露之態樣及實施例之進一步細節。本發明內容部分中之前述段落並非本文所揭露之態樣及實施例之詳盡列表。部分及部分標題係為了易於閱讀，而非旨在限制本揭露之組合，諸如跨部分之方法、組成物及試劑盒或其中之功能元件。
在詳細地描述本發明的實施例之前，應當理解，本文使用的術語僅僅係用於描述特定的實施例的目的，而不是旨在進行限制。除非另有定義，否則本文使用的所有技術用語及科學用語具有與該用語所屬技術領域中具有通常知識者通常理解的含義相同的含義。儘管在本發明的實踐中可以使用類似於或等同於本文所述之方法及材料的任何方法及材料，但是現在描述較佳之方法及材料。本文提及的所有出版物都藉由引用併入本文，以揭露及描述與引用此等出版物相關之方法及/或材料。本揭露在其與任何併入的出版物相衝突時以本揭露為准。
如本文所用，單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該(the)」包括複數指代物，除非上下文另有明確說明。因此，例如，提及「一種糖」包括提及一或多種糖及其所屬技術領域中具有通常知識者已知的等同物。此外，可以使用等同用語描述的用語的使用包括彼等等同用語的使用。因此，例如，用語「對象」的使用應被理解為包括用語「患者」、「人」、「動物」、「人類」以及所屬技術領域中用於表示接受醫學治療的人的其他用語。使用多個用語來包含單個概念不應被解釋為將該概念僅限於所使用的彼等用語。
應當理解，本文使用的術語僅僅係用於描述特定的實施例的目的，而不是旨在進行限制。此外，在揭露值的範圍的情況下，所屬技術領域中具有通常知識者將理解，所揭露的範圍內的所有其他特定值固有地由此等值及它們所代表的範圍揭露，而不需要在本文中揭露每個特定值或範圍。例如，揭露的1-10的範圍包括1-9、1-5、2-10、3.1-6、1、2、3、4、5等。此外，每個揭露的範圍包括範圍的低值低多達5%及範圍的高值高多達5%。例如，揭露的4-10的範圍包括3.8-10.5。這一概念在本文件中被用語「約」所捕捉。
應當理解，為了清楚起見，在單獨實施例之上下文中描述之本發明之某些特徵亦可以在單個實施例中組合提供。相反，為了簡潔起見，在單個實施例之上下文中描述之本發明之各種特徵亦可以單獨或以任何合適之子組合來提供。與本發明有關之實施例之所有組合皆被本發明明確地包含，並且在本文中揭露，如同各個及每個組合皆被單獨及明確地揭露那樣。此外，各種實施例及其要素之所有子組合亦被本發明明確地包含，並且在本文中被揭露，如同各個及每個此類子組合在本文中被單獨地及明確地揭露那樣。
如本文所用，用語「凝血病」意指導致過度出血或凝血之任何止血紊亂。由對對象投予抗血小板或抗凝血劑引起之凝血病通常包括出血可能性增加。因此，在說明性實施例中，本文中用於治療凝血病之方法係用於降低對象之出血可能性之方法。
如本文所用，用語「血小板」可以包括全血小板、碎片化的血小板、血小板衍生物或FDPD。上述定義內的「血小板」可以包括，例如，全血中的血小板、血漿中的血小板、可選地補充有選擇的血漿蛋白的緩衝液中的血小板、冷儲存的血小板、乾燥的血小板、低溫冷藏的血小板、解凍的低溫冷藏的血小板、再水合的乾燥的血小板、再水合的低溫冷藏的血小板、冷凍保存的血小板、解凍的冷凍保存的血小板或再水合的冷凍保存的血小板。「血小板」可以係哺乳動物的「血小板」，諸如人類的「血小板」，或諸如非人的哺乳動物的「血小板」。如本文所用，「製劑」可以包括任何合適之組分。在一些實施例中，製劑可以包含液體介質。在一些實施例中，製劑可包含一或多種鹽，其選自磷酸鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及任何其他可在血液或血液製品中發現之鹽，或已知可用於乾燥血小板之鹽，或該等鹽中二或更多種之任何組合。在一些實施例中，製劑包含一或多種鹽，諸如磷酸鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及任何其他可在血液或血液製品中發現之鹽。示例性鹽包括氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KCl)及其組合。在一些實施例中，製劑包括約0.5 mM至約100 mM的一或多種鹽。在一些實施例中，製劑包括約0.5 mM至約100 mM（例如，約0.5至約2 mM、約2 mM至約90 mM、約2 mM至約6 mM、約50 mM至約100 mM、約60 mM至約90 mM、約70至約85 mM）的一或多種鹽。在一些實施例中，製劑包括約5 mM、約75 mM或約80 mM的一或多種鹽。在一些實施例中，製劑包含濃度為約0.5 mM至約2 mM之選自鈣鹽、鎂鹽以及兩者的組合之一或多種鹽。
如本文所用，「fhrombosomes」（本文中有時亦被稱為「Tsomes」或「Ts」，特別係在實例及圖式中）係已經用培養劑（例如本文所述的任何培養劑）處理並冷凍保存（即凍乾）的血小板衍生物。因此，血栓小體係凍乾血小板衍生物(FDPD)。在一些情況下，可以從彙集的血小板製備FDPD。在環境溫度下，FDPD在乾燥形式下可以具有2-3年的保存期，並且可以在數分鐘內用無菌水再水合，以用於立即輸注。FDPD之一個實例係FHROMBOSOMES®，其正處於治療血小板減少患者中之急性出血之臨床試驗中，且係塞爾菲爾公司(Cellphire, Inc)之產品。在非限制性說明性實施例中，本文之FDPD組成物或說明性凍乾血小板衍生物（即「FDPD」）組成物，諸如根據本文的實例15製備之彼等，係包括具有降低之聚集傾向之血小板衍生物群體之組成物，使得該群體中不超過10%之血小板衍生物在包含促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集，且其中該等血小板衍生物具有每10 6個血小板衍生物至少1.5個凝血酶生成效價單位(thrombin generation potency unit；TGPU)之效價。在非限制性說明性實施例中，FDPD組成物或本文中之說明性FDPD組成物（諸如根據本文中之實例15製備之彼等）係包括血小板衍生物之組成物，其中至少50%之血小板衍生物係CD 41陽性血小板衍生物，其中小於15%、10%或在另外的非限制性說明性實施例中小於5%之CD 41陽性血小板衍生物係直徑小於0.5 µm之微粒，且其中該等血小板衍生物具有每10 6個血小板衍生物至少0.5、1.0以及在另外的非限制性說明性實施例中1.5個凝血酶生成效價單位(TGPU)之效價。在某些說明性實施例中，包括前一句中說明性實施例之非限制性實例，血小板衍生物之直徑在0.5與2.5 um之間。
如本文所用，「抗凝血劑」係不包括抗血小板劑之抗血栓形成劑。一般，抑制因子IIa、VIIa、IX、Xa、XI、組織因子或維生素K依賴性凝血因子（例如，因子II、VII、IX或X）合成或啟動抗凝血酶（例如抗凝血酶III）的藥劑被視為抗凝血劑。抗凝血劑的其他作用機制係已知的。抗凝血劑包括達比加群、阿加曲班、水蛭素、利伐沙班、阿呱沙班、依度沙班、磺達肝癸鈉(fondaparinux)、華法林、肝素及低分子量肝素。
如本文所用，「抗血小板劑」係抗血栓形成劑，且不包括抗凝血劑。一般，抑制P2Y受體（例如P2Y12）、醣蛋白IIb/IIIa（即CD 41）或拮抗凝血脂素合酶或凝血脂素受體之藥劑被視為抗血小板劑。抗血小板劑之其他機制係已知的。如本文所用，阿司匹靈被視為抗血小板劑，但並非抗凝血劑。抗血小板劑的示例包括阿司匹靈（亦被稱為乙醯水楊酸或ASA）、坎格雷洛（例如，KENGREAL®）、替卡格雷（例如，BRILINTA®）、氯吡格雷（例如，PLAVIX®）、普拉格雷（例如，EFFIENT®）、依替巴肽（例如，INTEGRILIN®）、替羅非班（例如，AGGRASTAT®）及阿昔單抗（例如，REOPRO®）。出於本揭露的目的，抗血小板劑包括抑制P2Y受體（例如P2Y 12）、糖蛋白IIb/IIIa或拮抗血栓烷(thromboxane)合酶或血栓烷受體的藥劑。血栓烷A 2拮抗劑的非限制性實例為阿司匹靈、特魯曲班(terutroban)及匹考他胺(picotamide)。P2Y受體拮抗劑的非限制性實例包括坎格雷洛、替卡格雷、依利格雷、氯吡格雷、普拉格雷及噻氯匹定(ticlopidine)。糖蛋白IIb/IIIa的非限制性實例包括阿昔單抗、依替巴肽及替羅非班。出於本揭露的目的，NSAIDS（如布洛芬）亦被視為抗血小板劑。抗血小板劑的其他機制係已知的。抗血小板劑亦包括PAR1拮抗劑、PAR4拮抗劑GPVI拮抗劑及α2β1膠原受體拮抗劑。PAR-1拮抗劑的非限制性實例包括沃拉帕沙(vorapaxar)及阿托帕沙(atopaxar)。如本文所用，阿司匹靈被認為係抗血小板劑，但不是抗凝血劑。抗血小板劑的另外的非限制性實例包括西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉及沙格雷酯(sarpogrelate)。
在一些實施例中，抗血小板劑可以選自由阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗及其組合組成之群組。在一些實施例中，抗血小板劑可以選自由阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙及其組合組成之群組。在一些實施例中，抗血小板劑可以選自由阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉、沙格雷酯及其組合組成之群組。在一些實施例中，抗血小板劑可以包括多種抗血小板劑，諸如本文所述的任何抗血小板劑中的2種（或更多種）。在一些實施例中，抗血小板劑可以係阿司匹靈及氯吡格雷。
與氯吡格雷、替卡格雷及普拉格雷一樣，坎格雷洛阻斷血小板上的P2Y 12(ADP)受體。在一些情況下，可以使用坎格雷洛作為此類藥物的代表。與氯吡格雷及普拉格雷不同，坎格雷洛不需要肝臟代謝來變成生物學上活性的。
依替巴肽係一種肽治療藥，其阻斷血小板上GPIIb-IIIa受體的纖維蛋白結合作用。該藥物一般以180 μg/kg推注經由IV投予，隨後藉由2 μg/kg/分鐘連續輸注投予。依替巴肽的血液濃度一般為約1-2 μM。出血時間通常在停藥後約1小時內恢復正常。
阿司匹靈係一種不可逆的環氧化酶(cyclooxygenase, COX)抑制劑。血小板中的COX酶負責血栓烷A2、前列腺素E2及前列環素(PGI2)的合成。阿司匹靈會使血小板中的COX酶永久失活，並且由於血小板不具有合成新酶的核材料，因此必須產生新的血小板以克服阿司匹靈效應。在沒有血栓烷A2、前列腺素E2及前列環素(PGI2)的情況下，血小板的促聚集活性會受到限制。許多人維持低劑量的阿司匹靈，以防止不期望的凝血事件。阿司匹靈的生物利用度在很大程度上會隨投予途徑而變化，其中單次500 mg劑量IV的峰值為500 μM，而相同劑量的口服劑量的峰值為44 μM。
抗血小板類藥物被廣泛用於預防導致心力衰竭、中風等的不期望的凝血發作。在許多情況下，可能需要逆轉或停用抗血小板藥物，或者在對象的血流中具有抗血小板藥物之對象中需要以某種其他方式降低出血可能性，使得對象的出血可能性增加。在提前通知的情況下，如在預先計畫的手術情況下，有時可以在手術前停止抗血小板藥物劑量，以防止手術期間不期望的出血。在抗血小板劑需要快速逆轉的情況下，逆轉劑一般不容易獲得、昂貴或對患者來說具有重大風險。在需要快速抗血小板逆轉的情況下，一般投予血小板輸注，儘管對此的應答通常只係部分逆轉。這種逆轉過程的限制性係，新輸注的血小板本身易受迴圈藥物抗血小板活性的影響，而在一些實施例中，如本文所述的組成物（例如，包括FDPD）不受此影響。在一些實施例中，如本文所述的組成物（例如，包括FDPD）係活性逆轉劑。在一些實施例中，如本文所述的組成物（例如，包括FDPD）的止血活性不屈服於抗血小板藥物。
下面描述了一些示例性的抗血小板劑及潛在的逆轉方法。
乙醯水楊酸（ASA；阿司匹靈）-阿司匹靈在血小板中充當COX-1阻斷劑，其藉由不可逆地抑制血小板衍生的血栓烷形成而使血小板失活。臨床上，阿司匹靈有時會在緊急情況下藉由血小板輸注或在未來計畫手術的情況下藉由停止治療而被逆轉。
氯吡格雷（例如，PLAVIX®）-氯吡格雷用於防止ADP與其血小板上的受體結合。ADP結合導致血小板形態改變及聚集。氯吡格雷係不可逆的。臨床上，氯吡格雷有時會在緊急情況下藉由血小板輸注或在未來計畫手術的情況下藉由停止治療而被逆轉。
坎格雷洛（例如，KENGREAL®）-坎格雷洛用於防止ADP與其血小板上的受體結合。ADP結合導致血小板形態改變及聚集。氯吡格雷係可逆的，並且在停止輸注約1小時後血小板功能被恢復。臨床上，當手術後需要逆轉時，它通常係較佳的。
替卡格雷（例如，BRILINTA®）-替卡格雷用於防止ADP與其受體結合，並且充當可逆促效劑。替卡格雷係可逆轉的，並且在末次給藥大約72小時後血小板功能可以恢復。替卡格雷的作用的逆轉可能受末次給藥後時間的影響。若最後一次給藥時間長於之前的24小時，則血小板輸注有時可以係治療性的，以逆轉結果。
普拉格雷（例如，PRASUGREL®）-普拉格雷用於防止ADP與其受體結合，並且充當不可逆拮抗劑。它係一種不可逆的拮抗劑，必須形成新的血小板才能克服它的作用。臨床上，普拉格雷在緊急情況下藉由血小板輸注或在未來計畫進行手術的情況下藉由停止治療而被逆轉。
依替巴肽（埃替非巴肽(Integrilin)）-依替巴肽用於阻斷GpIIb/IIIa，並且充當可逆拮抗劑。臨床上，埃替非巴肽在緊急情況下藉由血小板輸注或在未來計畫手術的情況下藉由停止治療而被逆轉。
血小板輸注目前被用作抗血小板藥物的治療方法，但血小板輸注僅用於稀釋此等藥物的作用。在一些實施例中，FDPD對此等藥物不具有反應性，並且維持其輔助凝血的能力。這使得經由FDPD的治療變得完全獨特，並且為產品引入新的應用。
當抗血栓形成劑（即抗凝血劑或抗血小板藥物）之活性可能對對象產生有害後果或對對象造成不可接受的風險時，例如在手術過程中或作為創傷事件的結果，血小板衍生的產品目前未被用作對抗此類活性之治療方法。目前亦沒有經批准的用於抗血小板劑之逆轉劑或以其他方式降低對象之出血可能性或在用抗凝血劑及/或抗血小板劑治療後恢復止血之藥劑。因此，緊急治療（術前、外傷等）一般需要避免或減輕出血之全面預防措施。非限制性實例包括輸注血漿、紅細胞及抗纖溶藥。血小板衍生物（在說明性實施例中為本文提供之凍乾血小板衍生物(FDPD)）克服此種長期需求，並且係此等通常治療或風險緩解策略之有效替代物或補充劑。
本文實例部分中之眾多實例中提供之結果證明瞭包含FDPD製品之組成物在服用抗血小板藥物之對象體外模型中之影響。FDPD組成物及其他凍乾血小板製品係經設計用於在診斷出創傷或止血失敗後輸注至對象的血流中。此等抗血小板藥物利用多種形式的血小板抑制機制，僅舉幾個實例而言，此等血小板抑制機制抑制血小板對二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸、纖維蛋白原及馮威里氏因子結合等的反應。此等藥物包括阿司匹靈、氯吡格雷、替卡格雷、普拉格雷(effient)、坎格雷洛或依替巴肽等。無論機制如何，本文提供之FDPD能夠降低服用此類抗血小板劑之對象之出血可能性，並且在一些實施例中，恢復對象之正常止血。
不受任何特定理論之束縛，據信某些血小板衍生物（在說明性實施例中，本文提供之FDPD）可以至少部分地藉由提供促凝血劑的帶負電荷的表面來工作，以增加凝血酶生成高於及超過抗凝血劑所抑制的凝血酶生成。類似地，不受任何特定理論之束縛，據信某些血小板衍生物（在說明性實施例中，本文提供之FDPD）可以至少部分地藉由結合至循環血小板並與循環血小板共聚集而發揮作用。因此，儘管聚集能力降低並且儘管保留了至少一些（若並非全部）抗血小板劑靶向之至少一些（若並非全部）表面標記物，但此類FDPD提供了能夠降低服用抗血栓形成劑（即抗凝血劑或抗血小板劑）之對象之出血可能性的令人驚訝的性質。
本文描述了用於控制出血及改善癒合的產品及方法。本文所述之組成物、產品及方法亦可以用於對抗本文所揭露之抗血小板劑（例如，作為非限制性實例，阿司匹靈（亦被稱為乙醯水楊酸或ASA）、坎格雷洛（例如KENGREAL®）、替卡格雷（例如BRILINTA®）、氯吡格雷（例如PLAVIX®）、普拉格雷（例如EFFIENT®）、依替巴肽（例如INTEGRILIN®）、替羅非班（例如AGGRASTAT®）或阿昔單抗（例如REOPRO®））的活性。在某些實施例中，本文所揭露之產品及方法針對可以有助於傷口之閉合及癒合之實施例。
在本文提供的某些態樣中，包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）之組成物可以被遞送至患者的表面上或患者內部的傷口。在各種實施例中，包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）之組成物可以以選擇的形式施用，包括但不限於黏合繃帶、壓迫繃帶、液體溶液、氣溶膠、基質組成物及塗覆的縫合線或其它醫用封閉物。在實施例中，可以將包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）之組成物投予至患者之表面上的全部或僅一部分受影響的區域。在其他實施例中，包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）之組成物可以例如經由血流全身性投予。在實施例中，施用血小板衍生物可以產生2或3天，較佳地5至10天，或最佳地最多14天的止血效果。
一些態樣提供了一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）之組成物。在一些實施例中，包含FDPD之組成物進一步包含額外組分，諸如當此類FDPD被凍乾時存在之組分。此類額外組分可包括培養劑之組分，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、以及在某些實施例中冷凍保護劑（亦被稱為凍乾劑）及/或有機溶劑。例如，如本文進一步提供的，此類組成物可以包含一或多種糖，其在說明性實施例中包括海藻糖，並且在進一步說明性實施例中包括多糖。
一些態樣提供了一種治療對象中凝血病之方法，該方法包含向需要之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑的培養劑培養以形成組成物的製程來製備。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，凝血病係對象之血液中抗血小板劑存在之結果。
一些態樣提供了一種治療對象中之凝血病之方法，其中該對象已經用抗血小板劑治療或正在用抗血小板劑治療，該方法包含向需要其之對象投予有效量之包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）及培養劑之組成物，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
一些態樣提供了一種治療對象中之凝血病之方法，其中該對象已經用抗血小板劑治療或正在用抗血小板劑治療，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑的培養劑培養以形成組成物的製程來製備。
一些態樣提供了一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）之組成物。在一些實施例中，包含FDPD之組成物進一步包含額外組分，諸如當此類FDPD被凍乾時存在之組分。此類額外組分可包含培養劑之組分，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、及在某些實施例中冷凍保護劑（亦稱為凍乾劑）及/或有機溶劑。例如，如本文進一步提供的，此類組成物可以包含一或多種糖，其在說明性實施例中包括海藻糖，並且在進一步說明性實施例中包括多糖。
一些態樣提供了一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑的培養劑培養之方法製備。
一些態樣提供了在對象中恢復正常止血之方法，其中該對象已經用抗血小板劑治療或正在用抗血小板劑治療，該方法包含向需要其之對象投予有效量之包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）之組成物。在一些實施例中，包含FDPD之組成物進一步包含額外組分，諸如當此類FDPD被凍乾時存在之組分。此類額外組分可包括培養劑之組分，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、及在某些實施例中冷凍保護劑（亦稱為凍乾劑）及/或有機溶劑。例如，如本文進一步提供的，此類組成物可以包含一或多種糖，其在說明性實施例中包括海藻糖，並且在進一步說明性實施例中包括多糖。
一些實施例提供了一種在對象中恢復正常止血之方法，其中該對象已經用抗血小板劑治療或正在用抗血小板劑治療，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑的培養劑培養以形成組成物的製程來製備。
在一些情況下，亦可以投予如本文所述的組成物以使對象做好手術準備。對於一些服用抗血小板劑的患者，在手術前減少抗血小板劑的劑量可能係困難的或不可能的（例如，在外傷或其他緊急手術的情況下）。對於一些服用抗血小板劑的患者，術前減少抗血小板劑的劑量可能係不可取的（例如，若隨著時間的推移減少抗血小板劑的劑量，患者將有血栓形成事件（例如，深靜脈血栓形成、肺栓塞或中風）的風險）。
因此，一些實施例提供了一種使對象做好手術準備之方法，該方法包含向需要之對象投予有效量之包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）之組成物。在一些實施例中，包含FDPD之組成物進一步包含額外組分，諸如當此類FDPD被凍乾時存在之組分。此類額外組分可包括培養劑之組分，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、及在某些實施例中冷凍保護劑（亦稱為凍乾劑）及/或有機溶劑。例如，如本文進一步提供的，此類組成物可以包含一或多種糖，其在說明性實施例中包括海藻糖，並且在進一步說明性實施例中包括多糖。
一些實施例提供了一種使對象做好手術準備之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑的培養劑培養以形成組成物的製程來製備。
一些實施例提供了一種使對象做好手術準備之方法，其中該對象已經用抗血小板劑治療或正在用抗血小板劑治療，該方法包含向需要其之對象投予有效量之包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）之組成物。在一些實施例中，包含FDPD之組成物進一步包含額外組分，諸如當此類FDPD被凍乾時存在之組分。此類額外組分可包括培養劑之組分，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、及在某些實施例中冷凍保護劑（亦稱為凍乾劑）及/或有機溶劑。例如，如本文進一步提供的，此類組成物可以包含一或多種糖，其在說明性實施例中包括海藻糖，並且在進一步說明性實施例中包括多糖。
一些實施例提供了一種使對象做好手術準備之方法，其中該對象已經用抗血小板劑治療或正在用抗血小板劑治療，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑的培養劑培養以形成組成物的製程來製備。
在一些實施例中，手術可以係緊急手術（例如，在外傷的情況下）或預約手術。
在一些實施例中，在說明性實施例中，在向對象投予包含血小板衍生物之組成物之前，可以停止用抗凝血劑之治療（例如，為手術做準備）。在一些實施例中，在向對象投予包含血小板衍生物之組成物之後，可以繼續用抗凝血劑之治療持續一定時間段。此類時間段可包括1、2、3、4、5、6、或7天、或1、2、3、或4周、或1、2、或3月、或更長。
一些實施例提供了一種改善抗血小板劑在對象中之作用之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）及培養劑之組成物，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
一些態樣提供了一種改善抗血小板劑在對象中之作用之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑的培養劑培養以形成組成物的製程來製備。
在一些實施例中，由於抗血小板劑之不正確的劑量，可能需要改善抗血小板劑之作用。例如，在一些實施例中，抗血小板劑的作用可以在抗血小板劑的過劑量後被改善。在一些實施例中，由於可能與另一種藥物（例如，第二種抗血小板劑）相互作用，可能需要改善抗血小板劑的作用。例如，在一些實施例中，抗血小板劑的作用可以在兩或更多種藥物（其中至少一種係抗血小板劑）的錯誤給藥之後被改善。
在本文所述的任何方法的一些實施例中，組成物可以進一步包含活性劑，諸如抗纖維蛋白溶解劑。抗纖維蛋白溶解劑的非限制性實例包括ε-胺基己酸(ε-aminocaproic acid；EACA)、胺甲環酸(tranexamic acid)、抑肽酶、胺基甲基苯甲酸及纖維蛋白原。在一些實施例中，血小板或血小板衍生物可以載入有活性劑，諸如抗纖維蛋白溶解劑。
在某些實施例中，本文包含FDPD之組成物具有令人驚訝之性質，即它們可以降低出血可能性，並且在說明性實施例中，在血液具有升高之出血可能性之對象中恢復止血，而與投予FDPD後對象之出血可能性之實驗室測試是陰性還是陽性無關。在說明性實施例中，此種升高之出血可能性一般係由於有效量之抗血小板劑被遞送至對象並且在對象之血液中。因此，在本文之任一態樣中，在一些實施例中，包含FDPD之組成物具有其能夠降低對象之出血可能性之性質，而與出血可能性之投予後評價（若執行）產生正常結果還是異常結果無關。在一些實施例中，此種投予後評價包含在向對象投予包含FDPD之組成物後之一段時間（例如，在1與4小時之間、或1與3小時之間、或1與2小時之間）所採集或抽取之樣本上執行之體外實驗室測試。在本文任一態樣之其他實施例中，其中包含FDPD之組成物具有其能夠降低對象之出血可能性之性質，使得在具有增加之出血可能性之對象中恢復正常止血，而與出血可能性之投予後評估產生正常結果還是異常結果無關。在一些實施例中，此種投予後評價（若執行）包含在向對象投予包含FDPD之組成物後之一段時間（例如，在1與4小時之間、或1與3小時之間、或1與2小時之間）所採集或抽取之樣本上進行之體外實驗室測試。在向對象投予包含血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物之後，該段時間可以係例如0分鐘與72小時以內，或在10分鐘與72小時之間，或在10分鐘與48小時之間，或在10分鐘24小時之間，或在10分鐘與4小時之間，或在10分鐘與1小時之間，或在10分鐘與30分鐘之間，或在30分鐘與24小時之間，或在30分鐘與4小時之間，或在30分鐘與1小時之間。在某些實施例中，實驗室測試係本文揭露之出血參數中之一或多者、或二或更多者、或三或更多者。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，包含血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物具有其能夠降低具有升高之出血可能性之對象之出血可能性之性質。此外，包含FDPD之組成物一般具有額外及令人驚訝之性質，即在以有效量（例如用於降低對象之出血可能性）投予對象之後，對象可能具有一或多個體外實驗室測試之異常值，例如在使用在投予包含FDPD之組成物後之15分鐘與4小時、30分鐘與4小時、1小時與4小時之間採集、或在15分鐘與2小時、30分鐘與2小時、或1小時與2小時之間採集、或在15分鐘與1小時、或30分鐘與1小時之間採集之血液樣本上執行之一體外實驗室測試或該體外實驗室測試執行之投予後評價中，具有一或多個凝血參數之異常值。在該實施例之一些子實施例中，包含FDPD之組成物具有此種性質，即當不服用抗血小板劑時，其能夠將對象之出血可能性降低至約正常止血或處於正常止血或約對象之止血水平或處於對象之止血水平。然而，在此等實施例中，包含FDPD之組成物保留了額外及令人驚訝之性質，即在以有效量投予對象後，此種性質與出血可能性之投予後實驗室測試無關。因此，在一些實施例中，對象將在投予包含FDPD之組成物後之1與4小時之間或在上文剛剛列舉之任何時間範圍內採集之血液樣本上執行之一體外實驗室測試或該體外實驗室測試執行之投予後評價中，具有一或多個凝血參數之異常值。應當理解，在包括包含具有此類性質或在包括評估或測試之任何性質之FDPD之組成物之方法中，實際上不需要執行測試來實踐此類方法，除非此類測試步驟實際上被列舉作為該方法之一步驟。
在某些實施例中，血小板衍生物，且特別係本文提供之（例如使用本文提供之方法生產之）FDPD具有本文揭露之許多鑑定之性質。例如，在一些實施例中，FDPD包含（可偵測量之）被抗血小板逆轉劑靶向之生物分子（例如，受體）。例如，FDPD可包含一或多個被一或多種抗血小板逆轉劑靶向之生物分子，該一或多種抗血小板逆轉劑被投予或正被投予包含FDPD之組成物被投予之同一對象。在一些實施例中，FDPD上存在之受體選自P2Y受體（例如，P2Y12受體）、醣蛋白IIb（即，CD41）/IIIa（即，CD61）、凝血脂素合酶或凝血脂素受體、PAR1、PAR4、VPVI或膠原蛋白受體（例如α2β1膠原蛋白受體）。在某些實施例中，至少55%、60%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之血小板衍生物（在說明性實施例中，係FDPD）對於被投予對象之抗血小板劑靶向及/或可在對象血液中偵測之生物分子係陽性的（即具有可偵測水平）。作為幾個值得注意之非限制性實例，FDPD上存在之生物標記物可以係CD41，或者其可以係CD41/CD61錯合物。在一些實施例中，FDPD上之CD41/CD61錯合物與纖維蛋白原（因子1）結合。
在某些實施例中，包含FDPD之組成物包含降低的聚集傾向之FDPD群體，使得群體中不超過2%、3%、4%、5%、7.5%、10%、12.5%、15%、17.5%、20%、22.5%或25%之FDPD在包含促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集。在某些實施例中，FDPD具有每10 6個顆粒至少1.2（例如，至少1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4或2.5）個凝血酶生成效價單位(TGPU)之效價。
在某些實施例中，FDPD具有超活化血小板之一或多種特性。此類特性可包括以下一或多項： A)血小板反應蛋白(TSP)在其表面上存在之水平大於在靜息血小板表面上之水平； B)馮威里氏因子(vWF)在其表面上存在之水平大於在靜息血小板表面上之水平；及 C)相較於促效劑不存在下血小板活化標記物之表現，在促效劑存在下無法增加血小板活化標記物之表現。
在一些實施例中，小於5%之FDPD群體，並且在說明性實施例中，CD 41陽性FDPD係直徑小於0.5 µm之微粒。已經觀察到本文中之血小板衍生物具有眾多令人驚訝之性質，如本文進一步詳細揭露的。應當理解，如本文提供之實例中所示，儘管在一些態樣及實施例中，血小板衍生物係固體，諸如粉末形式，但是當包含此類血小板衍生物之組成物係液體形式時，可以鑒定、確認及/或測量此類血小板衍生物之性質。
在一些實施例中，血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）具有至少約0.5 µm（例如，至少約至少約0.6 µm、至少約0.7 µm、至少約0.8 µm、至少約0.9 µm、至少約1.0 µm、至少約1.2 µm、至少約1.5 µm、至少約2.0 µm、至少約2.5 µm或至少約5.0 µm）之粒徑（例如，直徑、最大尺寸）。在一些實施例中，粒徑小於約5.0 µm（例如，小於約2.5 µm、小於約2.0 µm、小於約1.5 µm、小於約1.0 µm、小於約0.9 µm、小於約0.8 µm、小於約0.7 µm、小於約0.6 µm、小於約0.5 µm、小於約0.4 µm、或小於約0.3 µm）。在一些實施例中，粒徑為約0.5 µm至約5.0 µm（例如，約0.5 µm至約4.0 µm、約0.5 µm至約2.5 µm、約0.6 µm至約2.0 µm、約0.7 µm至約1.0 µm、約0.5 µm至約0.9 µm、或約0.6 µm至約0.8 µm）。
在一些實施例中，至少50%（例如，至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約99%）之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）具有在約0.5 µm至約5.0 µm（例如，約0.5 µm至約4.0 µm、約0.5 µm至約2.5 µm、約0.6 µm至約2.0 µm、約0.7 µm至約1.0 µm、約0.5 µm至約0.9 µm或約0.6 µm至約0.8 µm）範圍內之粒徑。在一些實施例中，至多99%（例如，至多約95%、至多約80%、至多約75%、至多約70%、至多約65%、至多約60%、至多約55%、或至多約50%）之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）在約0.5 µm至約5.0 µm（例如，約0.5 µm至約4.0 µm、約0.5 µm至約2.5 µm、約0.6 µm至約2.0 µm、約0.7 µm至約1.0 µm、約0.5 µm至約0.9 µm或約0.6 µm至約0.8 µm）之範圍內。在一些實施例中，約50%至約99%（例如，約55%至約95%、約60%至約90%、約65%至約85%、約70%至約80%）之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）在約0.5 µm至約5.0 µm（例如，約0.5 µm至約4.0 µm、約0.5 µm至約2.5 µm、約0.6 µm至約2.0 µm、約0.7 µm至約1.0 µm、約0.5 µm至約0.9 µm或約0.6 µm至約0.8 µm）之範圍內。本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可具有細胞表面標記物。細胞表面標記物之存在可以使用任何合適之方法來確定。在一些實施例中，細胞表面標記物之存在可以使用對一或多種細胞表面標記物具有特異性之結合蛋白（例如，抗體）及流式細胞術（例如，作為陽性百分比，例如，使用約2.7x10 5個FDPD/µL；及約4.8 µL抗CD41抗體、約3.3 µL抗CD42抗體、約1.3 µL膜聯蛋白V或約2.4 µL抗CD62抗體）來確定。細胞表面標記物之非限制性實例包括CD41（亦稱為醣蛋白IIb或GPIIb，其可使用例如抗CD41抗體來測定）、CD42（其可使用例如抗CD42抗體來測定）、CD62（亦稱為CD62P或P選擇素，其可使用例如抗CD62抗體來測定）、磷脂醯絲氨酸（其可使用例如膜聯蛋白V (AV)來測定）及CD47（其用於自我識別）；缺少此種標記物，在一些情況下，可導致吞噬作用）。任何細胞表面標記物之陽性百分比可為任何適當之陽性百分比。例如，血小板衍生物（例如，FDPD）之群體（諸如藉由本文所述之方法製備並包括在本文之組成物中之彼等）可具有至少55%（例如，至少60%、至少65%、至少67%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%）之平均CD41陽性百分比。在一些實施例中，對於CD 41呈陽性之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%之血小板衍生物具有在0.5 µm至2.5 µm範圍內之大小。在一些實施例中，對於CD 41呈陽性之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之血小板衍生物具有在0.4-2.8 µm範圍內之大小。在一些實施例中，對於CD 41呈陽性之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之血小板衍生物具有在0.3-3 µm範圍內之大小。
作為另一實例，血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）（諸如本文所述之彼等）可具有至少65%（例如，至少67%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%）之平均CD42陽性百分比。在一些實施例中，對於CD 42呈陽性之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之血小板衍生物具有在0.5-2.5 µm範圍內之大小。在一些實施例中，對於CD 42呈陽性之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之血小板衍生物具有在0.4-2.8 µm之範圍內之大小。在一些實施例中，對於CD 42呈陽性之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之血小板衍生物具有在0.3-3 µm之範圍內之大小。
作為另一實例，血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）（諸如藉由本文所述之方法製備之彼等）可具有至少10%（例如，至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少90%或至少95%）之平均CD62陽性百分比。在一些實施例中，至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之對於CD 62呈陽性之血小板衍生物具有在0.5-2.5 µm範圍內之大小。在一些實施例中，至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之對於CD 62呈陽性之血小板衍生物具有在0.4-2.8 µm範圍內之大小。在一些實施例中，至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之對於CD 62呈陽性之血小板衍生物具有在0.3-3 µm範圍內之大小。
作為又一實例，血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）（諸如藉由本文所述之方法製備之彼等）可具有至少25%（例如，至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%或至少99%）之平均膜聯蛋白V陽性。在一些實施例中，對於膜聯蛋白V呈陽性之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%之血小板衍生物具有在0.5-2.5 µm範圍內之大小。在一些實施例中，對於膜聯蛋白V呈陽性之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%之血小板衍生物具有在0.4-2.8 µm範圍內之大小。在一些實施例中，對於膜聯蛋白V呈陽性之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%之血小板衍生物具有在0.3-3 µm範圍內之大小。
作為另一實例，血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）（諸如藉由本文所述之方法製備之彼等）可具有至少約8%（例如，至少約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%或55%）之平均CD47陽性百分比。
本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可以能夠生成凝血酶，例如當在含有組織因子及磷脂之試劑存在下時。例如，在一些情況下，本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）（例如，在約4.8x10 3個顆粒/µL之濃度下）在以下情況下可生成至少25 nM（例如，至少30 nM、35 nM、40 nM、45 nM、50 nM、52 nM、54 nM、55 nM、56 nM、58 nM、60 nM、65 nM、70 nM、75 nM或80 nM）之凝血酶峰高(thrombin peak height, TPH)：當在含有組織因子（例如，在0.25 pM、0.5 pM、1 pM、2 pM、5 pM或10 pM下）及可選地磷脂之試劑存在下時。例如，在一些情況下，本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）（例如，在約4.8x10 3個顆粒/µL之濃度下）在以下情況下可生成約25 nM至約100 nM（例如，約25 nM至約50 nM、約25至約75 nM、約50至約100 nM、約75至約100 nM、約35 nM至約95 nM、約45至約85 nM、約55至約75 nM 或約60至約70 nM）之TPH：當在含有組織因子及（例如在0.25 pM、0.5 pM、1 pM、2 pM、5 pM或10 pM下）及可選地磷脂之試劑存在下時。在一些情況下，本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）（例如，在約4.8x10 3個顆粒/µL之濃度下）在以下情況下可生成至少25 nM（例如，至少30 nM、35 nM、40 nM、45 nM、50 nM、52 nM、54 nM、55 nM、56 nM、58 nM、60 nM、65 nM、70 nM、75 nM或80 nM）之TPH：當PRP試劑（來自Thrombinoscope 之cat# TS30.00）存在下時，例如使用包含20 µL之PRP試劑及80 µL之包含約4.8 x 10 3個顆粒/µL血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物之條件。在一些情況下，本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）（例如，在約4.8x10 3個顆粒/µL之濃度下）在以下情況下可生成約25 nM至約100 nM（例如，約25 nM至約50 nM、約25至約75 nM、約50至約100 nM、約75至約100 nM、約35 nM至約95 nM、約45至約85 nM、約55至約75 nM或約60至約70 nM）之TPH：當PRP試劑（來自Thrombinoscope 之cat# TS30.00）存在下時，例如使用包含20 µL之PRP試劑及80 µL之包含約4.8 x 10 3個顆粒/µL血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物之條件。
本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可以能夠生成凝血酶，例如當在含有組織因子及磷脂之試劑存在下時。例如，在一些情況下，血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可具有每10 6個顆粒至少1.2（例如，至少1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4或2.5）個凝血酶生成效價單位(TGPU)之效價。例如，在一些情況下，血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可具有每10 6個顆粒1.2與2.5個TPGU（例如每10 6個顆粒在1.2與2.0個TPGU之間、1.3與1.5個TPGU之間、1.5與2.25個TPGU之間、1.5與2.0個TPGU之間、1.5與1.75個TPGU之間、1.75與2.5個TPGU之間、2.0與2.5個TPGU之間或2.25與2.5個TPGU）之間之效價。TPGU可計算如下：TGPU/百萬個顆粒= [TPH（單位：nM）] * [效價係數（單位：IU/(nM)] / [孔內0.576百萬個顆粒]。類似地，凝血酶樣本之效價係數可計算如下：效價係數=計算之校準品活性(IU)/有效校準品活性(nM)。在一些情況下，校準品活性可以基於WHO國際凝血酶標準。
如本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可以能夠凝血，如例如藉由使用總血栓形成分析系統(T-TAS®)所確定。在一些情況下，如本文所述之血小板或血小板衍生物當在至少70x10 3個顆粒/µL（例如，至少73 x10 3、100 x10 3、150 x10 3、173 x10 3、200 x10 3、250 x10 3或255 x10 3個顆粒/µL）之濃度下時，例如在血小板減少的檸檬酸化全血中，可導致小於14分鐘（例如，小於13.5、13、12.5、12、11.5或11分鐘）之T-TAS閉塞時間（例如達到80 kPa之時間）。在一些情況下，如本文所述之血小板或血小板衍生物當在至少70x10 3個顆粒/µL（例如，至少73 x10 3、100 x10 3、150 x10 3、173 x10 3、200 x10 3、250 x10 3或255 x10 3個顆粒/µL）之濃度下時，例如在血小板減少的檸檬酸化全血中，可導致至少1300（例如，至少1380、1400、1500、1600或1700）之曲線下麵積(AUC)。
如本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可以能夠在凝血酶存在下進行凝血酶誘導之捕獲。在一些情況下，如本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）在凝血酶存在下可具有至少5%（例如，至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、67%、70%、75%、85%、90%或99%）之凝血酶誘導捕獲百分比。在一些情況下，本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）在凝血酶存在下可具有約25%至約100%（例如，約25%至約50%、約25%至約75%、約50%至約100%、約75%至約100%、約40%至約95%、約55%至約80%、或約65%至約75%）之凝血酶誘導捕獲百分比。凝血酶誘導之捕獲可藉由任何合適之方法（例如，光透射聚集法）來確定。不受任何特定理論之束縛，據信凝血酶誘導之捕獲係血小板衍生物表面上存在之纖維蛋白原與凝血酶相互作用之結果。
如本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可在例如聚集促效劑及新鮮血小板存在下共聚集。聚集促效劑之非限制性實例包括膠原蛋白、腎上腺素、瑞斯特黴素、花生四烯酸、二磷酸腺苷及凝血酶受體相關蛋白(TRAP)。在一些情況下，如本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）在聚集促效劑及新鮮血小板存在下可具有至少5%（例如，至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、67%、70%、75%、85%、90%或99%）之共聚集百分比。在一些情況下，如本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）在聚集促效劑存在下可具有約25%至約100%（例如，約25%至約50%、約25%至約75%、約50%至約100%、約75%至約100%、約40%至約95%、約55%至約80%、或約65%至約75%）之共聚集百分比。共聚集百分比可以藉由任何合適之方法例如光透射聚集法來確定。
血小板衍生物組成物（其在本文之某些說明性實施例中係FDPD組成物）包含血小板衍生物（例如，FDPD）群體，相較於新鮮血小板及/或活化血小板在包含促效劑但不包含新鮮血小板之聚集條件下之聚集傾向，其在此等條件下具有降低之聚集傾向。相較於新鮮血小板及/或活化血小板在包含促效劑但不含新鮮血小板之聚集條件下之聚集傾向，在如本文說明性實施例中所述之血小板衍生物（例如，FDPD）在此等條件下顯示出降低之聚集傾向。令人驚訝的是，在抗血栓形成劑（諸如抗凝血劑及抗血小板劑）存在下，在此類抗血栓形成劑減少凝血及/或聚集之條件下，包括在兩種此類藥劑存在下，此類FDPD在體外及體內測定中具有增加血小板凝血及聚集之能力。值得注意的是，血小板衍生物之聚集不同於共聚集，因為聚集條件一般不包括新鮮血小板，而共聚集條件包括新鮮血小板。本文之實例中提供了示例性之聚集及共聚集條件。因此，在一些實施例中，相較於新鮮血小板在此等條件下之聚集傾向，如本文所述之血小板衍生物在新鮮血小板及促效劑存在下具有更高之共聚集傾向，而在新鮮血小板及促效劑不存在下具有降低之聚集傾向。在一些實施例中，血小板衍生物組成物包含降低的聚集傾向之血小板衍生物群體，其中群體中不超過2%、3%、4%、5%、7.5%、10%、12.5%、15%、17.5%、20%、22.5%或25%之血小板衍生物在包含促效劑但不含血小板（在說明性實施例中不含新鮮血小板）之聚集條件下聚集。在一些實施例中，血小板衍生物之群體在包含促效劑但不含血小板（在說明性實施例中不含新鮮血小板）之聚集條件下在血小板衍生物之2-30%、5-25%、10-30%、10-25%或12.5-25%之範圍內聚集。
如本文實例中所提供，示例性聚集條件及相關方法包括在室溫下用最終促效劑濃度為20 µM ADP之促效劑、0.5 mg/mL花生四烯酸、10 µg/mL膠原蛋白、200 µM腎上腺素、1 mg/mL瑞斯特黴素及10 µM TRAP-6處理FDPD樣本製劑，並藉由LTA測量，例如在向FDPD樣本中加入促效劑後5分鐘，此可與加入促效劑之前樣本之LTA測量結果進行比較。
在一些實施例中，本文所述之血小板衍生物被最大程度地活化，使得在促效劑存在下，相較於暴露於促效劑之前存在之血小板活化標記物之水平，血小板衍生物不能顯示出它們上之血小板活化標記物之增加。在一些實施例中，相較於促效劑不存在下血小板活化標記物之表現，如本文所述之血小板衍生物顯示出在促效劑存在下無法增加血小板活化標記物之表現。在一些實施例中，促效劑選自由膠原蛋白、腎上腺素、瑞斯特黴素、花生四烯酸、二磷酸腺苷及凝血酶受體相關蛋白(TRAP)組成之群組。在一些實施例中，血小板活化標記物選自由膜聯蛋白V及CD 62組成之群組。在一些實施例中，如本文所述之血小板衍生物顯示出在TRAP存在下無法增加膜聯蛋白V之表現。血小板上血小板活化標記物之量增加表明血小板之活性狀態。然而，在一些實施例中，如本文所述之血小板衍生物即使在促效劑存在下仍無法增加其上之血小板活化標記物之量。該性質表明本文所述之血小板衍生物被最大程度地活化。在一些實施例中，該性質在需要血小板最大活化之情況下可能係有益的，因為如本文所述之血小板衍生物能夠在促效劑不存在下顯示最大活化狀態。
血小板反應蛋白P係血小板α顆粒在活化後分泌之醣蛋白。在二價陽離子存在下，分泌之蛋白與活化的血小板之表面結合，並負責與活化的血小板相關之內源性凝集素樣活性。在一些實施例中，血小板衍生物在其表面上存在之血小板反應蛋白(TSP-1)水平高於靜息血小板、活化的血小板或凍乾固定血小板表面上之水平。在一些實施例中，血小板衍生物在其表面上存在之血小板反應蛋白(TSP-1)水平較靜息血小板或凍乾固定血小板表面上之水平高至少10%、20%、25%、30%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。在一些實施例中，血小板衍生物在其表面上存在之血小板反應蛋白(TSP-1)水平較靜息血小板或凍乾固定血小板表面上高超過100%。在一些實施例中，當使用流式細胞術分析抗血小板反應蛋白(TSP)抗體與血小板衍生物之結合時，相較於抗TSP抗體與靜息血小板之結合之平均螢光強度(MFI)，在促效劑不存在下，血小板衍生物表現出高至少2倍、5倍、7倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍之MFI。在一些實施例中，當使用流式細胞術分析抗血小板反應蛋白(TSP)抗體與血小板衍生物之結合時，相較於抗TSP抗體與凍乾固定血小板之結合之平均螢光強度(MFI)，在促效劑不存在下，血小板衍生物表現出高至少2倍、5倍、7倍、10倍、20倍、30倍或40倍之MFI。在一些實施例中，當使用流式細胞術分析抗血小板反應蛋白(TSP)抗體與血小板衍生物之結合時，相較於抗TSP抗體與靜息血小板之結合之平均螢光強度(MFI)，在促效劑不存在下，血小板衍生物表現出高10-800倍、20-800倍、100-700倍、150-700倍、200-700倍或250-500倍之MFI。在一些實施例中，當使用流式細胞術分析抗血小板反應蛋白(TSP)抗體與血小板衍生物之結合時，相較於抗TSP抗體與活性血小板之結合之平均螢光強度(MFI)，在促效劑不存在下，血小板衍生物表現出高至少2倍、5倍、7倍、10倍、20倍、30倍或40倍之MFI。在一些實施例中，當使用流式細胞術分析抗血小板反應蛋白(TSP)抗體與血小板衍生物之結合時，相較於抗TSP抗體與活性血小板之結合之平均螢光強度(MFI)，在促效劑不存在下，血小板衍生物表現出高2-40倍、5-40倍、5-35倍、10-35倍或10-30倍之MFI。
馮威里氏因子(vWF)P係在凝血過程中起主要作用之多聚醣蛋白。vWF用作橋接分子，其促進血小板與內皮下細胞及其他血小板結合，從而促進血小板黏附及聚集。vWF亦與膠原蛋白結合，從而促進損傷部位之血凝血形成。在一些實施例中，如本文所述之血小板衍生物在其表面上存在之馮威里氏因子(vWF)之水平高於靜息血小板、活化的血小板或凍乾固定血小板表面上之水平。在一些實施例中，血小板衍生物在其表面上存在之馮威里氏因子(vWF)之水平比靜息血小板或凍乾固定血小板之表面上之水平高至少10%、20%、25%、30%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。在一些實施例中，當使用流式細胞術分析抗馮威里氏因子(vWF)抗體與血小板衍生物之結合時，相較於抗vWF抗體與靜息血小板或凍乾固定血小板之結合之平均螢光強度(MFI)，在促效劑不存在下，血小板衍生物表現出高至少1.5倍、2倍、或3倍或4倍之MFI。在一些實施例中，當使用流式細胞術分析抗馮威里氏因子(vWF)抗體與血小板衍生物之結合時，相較於抗vWF抗體與靜息血小板或凍乾固定血小板之結合之平均螢光強度(MFI)，在促效劑不存在下，血小板衍生物表現出高2-4倍或2.5-3.5倍之MFI。
血小板衍生物（在說明性實施例中，係FDPD）在本文之進一步說明性態樣及實施例中被受損之質膜包圍。在此等進一步說明性態樣及實施例中，血小板衍生物在其周圍缺乏整合之膜。相反，圍繞此類血小板衍生物（例如，FDPD）之膜包含較活細胞上觀察到之孔隙更大之孔隙。不受理論之限制，據信在血小板衍生物具有受損膜之實施例中，此類血小板衍生物具有降低之將一般在活血小板中轉導之來自外部環境之訊號轉導為顆粒內之反應之能力，或不能將來自外部環境之訊號轉導為顆粒內之反應。此外，此類血小板衍生物（例如，FDPD）被認為不能進行線粒體活化或醣解。
相較於新鮮血小板、或冷藏血小板或冷凍保存的血小板，藉由血小板衍生物不能保留超過50%之乳酸去氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)，可鑑定受損膜。在一些實施例中，相較於保留在新鮮血小板、或冷藏血小板、或冷凍保存的血小板中之乳酸去氫酶，血小板衍生物不能保留超過35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或75%之乳酸去氫酶。在一些實施例中，血小板衍生物對抗體表現出增加之滲透性。在一些實施例中，抗體可以係IgG抗體。增加之滲透性可藉由靶向抗穩定細胞內抗原之IgG抗體來鑑定。一種非限制性類型之穩定細胞內抗原係β微管蛋白。血小板衍生物之受損膜亦可以藉由流式細胞術研究來確定。
本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可保留一定之代謝活性，例如如乳酸去氫酶(LDH)活性所證實。在一些情況下，如本文所述之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可保留供體單採血小板之至少約10%（例如，至少約12%、15%、20%、25%、30%、35%、40%或45%）之LDH活性。不受任何特定理論之約束，據信添加增加量之聚蔗糖會增加剩餘之LDH活性量（例如，具有8%聚蔗糖之製劑之產品較具有4%聚蔗糖之製劑之產品具有更多保留之LDH活性）。類似地，不受任何特定理論之約束，據信對包含血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）之凍乾組成物進行熱處理會增加保留之LDH活性量。作為另一實例，代謝活性可以藉由保留之酯酶活性諸如細胞裂解羧基螢光素二乙酸琥珀醯亞胺酯(CFDASE)上之乙酸酯基團以暴露螢光團之能力來證實。
可以在本文所述方法期間的任何適當時間評估血液（例如，對象的血液）的凝血參數。例如，可以在投予如本文所述的包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）之組成物之前評估血液的一或多個凝血參數，例如，以便確定投予如本文所述的包含血小板或血小板衍生物之組成物之需要。例如，可使用投予前評價或測試（諸如體外實驗室測試）評估此類凝血參數。此種測試可以在向對象投予包含血小板衍生物之組成物之前之7、5、3、2或1天內，或12、8、6、4、2或1小時內採集之液體樣本例如血液樣本上執行。作為另一個示例，在投予如本文所述的包含血小板或血小板衍生物的組成物之後，可以評估血液的一或多個凝血參數，例如，以便確定投予的組成物的有效性，確定是否需要額外投予組成物，或確定進行手術程式是否安全。此種投予後評價或測試可在向對象投予包含血小板衍生物之組成物後之7、5、3、2或1天內，或在12、8、6、4、2或1小時內在液體樣本，例如血液樣本上執行。
因此，本文所述的任何方法可以包括在投予如本文所述的包含血小板或血小板衍生物的組成物之前評估血液的一或多個凝血參數、在投予如本文所述的包含血小板或血小板衍生物的組成物之後評估血液的一或多個凝血參數或兩者的步驟。
任何適當之方法均可以用於評估（或評價）血液的凝血參數。方法的非限制性實例包括世界衛生組織(World Health Organization, WHO)出血量表、凝血酶原時間(prothrombin time；PT)測定、凝血酶生成（thrombin generation；TGA；其可以用於產生參數，諸如例如，峰值凝血酶、內源性凝血酶電位(endogenous thrombin potential；ETP)及滯後時間）、凝血彈性成像(thromboelastography；TEG)、多電極聚集法、光透射聚集法(light transmission aggregometry；LTA)、活化凝血時間(activated clotting time；ACT)、P2Y12反應單位(P2Y12 Reaction Unit；PRU)或阿司匹靈反應單位元(Aspirin Reaction Unit, ARU)及部分促凝血酶原激酶時間（partial thromboplastin time；PTT或aPTT）。
WHO出血量表旨在幫助臨床醫生及研究人員評估出血情況，尤其係在癌症治療之毒性報告之上下文中，但其亦用於其他上下文中。
促凝血酶原激酶時間(PT)係血液凝結需要多長時間之度量，一般在組織因子存在下。在一些情況下，PT可能會受到實驗室試劑之影響，因此更常使用標準化比率(normalized ratio；INR)。
活化的部分促凝血酶原激酶時間(aPTT)係血液凝結需要多長時間之度量，一般在活化劑（諸如二氧化矽、矽藻土、高嶺土或鞣花酸）存在下進行。在一些情況下，aPTT可能會受到實驗室試劑之影響，因此有時會使用INR代替aPTT或除aPTT之外使用INR。
凝血酶生成測定法藉由促凝劑測量樣品活化後凝血酶的產生，該促凝劑導致凝血酶酶促切割螢光肽並釋放螢光分子。峰值凝血酶係對產生的最大凝血酶、滯後時間（開始產生凝血酶之時間）及ETP（可能產生的總凝血酶）的度量。
在一些實施例中，在投予如本文所述的包含血小板或血小板衍生物的組成物之前，患者可以具有約60 nM至約170 nM，諸如約65 nM至約170 nM，諸如約65 nM至約120 nM，諸如約80 nM的峰值凝血酶。
凝血酶凝血時間(thrombin clotting time, TCT)係在加入過量凝血酶後，血液凝結需要多長時間之度量。
TEG藉由血塊強度隨時間的變化圖來評估內在止血作用。氯化鈣(CaCl 2)一般用作引發試劑。TEG波形（參見，例如，圖16）具有多個可以提供關於凝血的資訊的參數。 R-時間=反應時間-從測試開始到初始纖維蛋白形成的潛伏期時間。 K=動力學-初始纖維蛋白形成的速度，達到一定水平的凝血強度（例如，20 mm的幅度）所用的時間 α角=R與K之間直線的斜率-測量凝血形成的速率。 MA=最大振幅(mm)-表示纖維蛋白凝血的極限強度。 A 30=達到最大振幅後30分鐘的振幅-表示溶解期的速率。
在低凝血液狀態下，R-時間增加，並且MA減少。R-時間一般比MA提供更寬的回應範圍。
亦可使用多電極聚集法(Multiple electrode aggregometery；MEA)來評價血液之凝血參數。MEA測量血小板聚集在金屬電極上時電阻抗之變化。一般，使用聚集促效劑（諸如ADP、腎上腺素、膠原蛋白或瑞斯特黴素）來起始聚集。
有時使用光透射聚集法(LTA)來評價血液之凝血參數；未聚集之血液允許很少的光通過，但是聚集（一般藉由促效劑來起始）導致聚集增加。
在總血栓形成分析系統(T-TAS®，FUJIMORI KOGYO CO., LTD)中，使用礦物油迫使樣品通過膠原包被的微通道。壓力的變化用於評估血栓形成。閉塞開始時間係達到10 kPa所需的時間，並且閉塞時間=使用AR晶片（例如，Zacros Item No, TC0101）達到每個∆80 kPa所需的時間。根據製造商，AR晶片可以用於分析主要由纖維蛋白及活化血小板組成的混合白色血栓的形成。它具有塗覆有膠原蛋白及組織因子的流動通道（300 μm寬×50 μm高）並且可以用於分析凝血功能及血小板功能。相比之下，PL晶片可以用於分析主要由活化血小板組成的血小板血栓的形成。PL晶片只具有塗覆有膠原蛋白的流動通道，並且可以用於分析血小板功能。
ACT測定係測量凝血時間(t ACT)的最基本但亦可能係最可靠之方法，凝血時間由磁體在其周圍形成凝血時對重力的阻力決定。一般供體血液具有僅使用CaCl 2的t ACT~ 200-300秒。
VerifyNow測量在P2Y12抑制劑(PRU))存在下以PRU單位（P2Y12反應單位）表示之血小板聚集，或在阿司匹靈存在下以ARU單位（阿司匹靈反應單位）表示之血小板功能障礙。VerifyNow系統係利用微珠之基於濁度法之光學偵測系統，其測量血小板誘導的聚集，作為透光率之增加，可從Werfren（https://www.werfen.com）獲得。
VerifyNow-P2Y12測定/VerifyNow PRU測試係使用ADP在PGE 1 [前列腺素E1]存在下刺激血小板，並抑制第二ADP受體P2Y1之下遊活化，從而使測定對P2Y12受體之活性及與P2Y12受體結合之藥物之活性更敏感及更特異。測定系統試劑旨在特異性地測量P2Y12介導之血小板聚集。
VerifyNow阿司匹靈測定方法與VerifyNow-P2Y12測定/VerifyNow PRU測試非常相似，其中加入了花生四烯酸來測量血小板對阿司匹靈之反應。在服用阿司匹靈之個體中，阿司匹靈不可逆地抑制COX-1，COX-1係將花生四烯酸轉化為凝血脂素A [TxA2]，且最終活化參與血小板聚集之GPIIb/IIIa受體之酶。在阿司匹靈存在下，不發生聚集。
一些此等凝血參數之示例性正常範圍示於下表E1中。一般，超出以下所示範圍之值被視為異常。
[表E1]
評價 示例性正常範圍
出血（WHO量表） 0 (4)
LTA（聚集百分比）   
5 µmol/L ADP 70 ± 10 (1)
2 µg/mL膠原蛋白 80 ± 13 (1)
1 mmol/L花生四烯酸 77 ± 10 (1)
2 mmol/L花生四烯酸 80 ± 11 (1)
5 mmol/L花生四烯酸 78 ± 5 (1)
TEG   
1 mmol/L花生四烯酸（聚集%） 95 ± 9 (1)
MA (mm) 50 – 60 (6)
R-時間（分鐘） 7.5 – 1 (6)
K（分鐘） 3 – 6 (6)
α角（度） 45 – 45 (6)
PT（秒） 10 –14 (5)
aPTT（秒） 22 – 35 (2)
TCT（秒） 20 – 30 (2)
t ACT（秒） 200 - 300
MEA（單位）   
ADP誘導的 53 – 122 (3)
花生四烯酸誘導的 76 – 136 (3)
VerifyNow   
PRU 180-376 (7)
ARU 550-700 (7)
(1)DiChiara等人「The effect of aspirin dosing on platelet function in diabetic and nondiabetic patients: an analysis from the aspirin-induced platelet effect (ASPECT) study.」Diabetes 56.12 (2007): 3014-3019. (2)Thrombosis Canada. Use And Interpretation Of Laboratory Coagulation Tests In Patients Who Are Receiving A New Oral Anticoagulant (Dabigatran, Rivaroxaban, Apixaban). 2013 (3)Beynon, 等人 「Multiple electrode aggregometry in antiplatelet-related intracerebral haemorrhage.」 Journal of Clinical Neuroscience20.12 (2013): 1805-1806。 (4)Rodeghiero, Francesco, 等人「Standardization of bleeding assessment in immune thrombocytopenia: report from the International Working Group.」 Blood121.14 (2013): 2596-2606。 (5)Cleveland Clinic 「Prothrombin Time (PT) test」 https://my.clevelandclinic.org/health/diagnostics/17691-prothrombin-time-pt-test#results-and-follow-up . 2021年2月15日存取。 (6)Bose及Hravnak.「Thromboelastography: a practice summary for nurse practitioners treating hemorrhage.」 The Journal for Nurse Practitioners11.7 (2015): 702-709。 (7)Regional Medical Laboratory 「VerifyNow PRU testing」. https://www.rmlonline.com/site/sections/684. 2021年2月15日存取。
一些實施例提供了一種增加對象的凝血酶生成之方法，該方法包含需要其之對象投予有效量之包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）及培養劑之組成物，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
一些實施例提供了一種增加對象的凝血酶生成之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑的培養劑培養以形成組成物的製程來製備。
一些實施例提供了一種增加對象的峰值凝血酶之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之包含血小板之組成物或在說明性實施例中包含血小板衍生物（在進一步說明性實施例中，其係FDPD）及培養劑之組成物，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
一些實施例提供了一種增加對象的峰值凝血酶之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑的培養劑培養以形成組成物的製程來製備。
在一些實施例中，在投予前，對象的峰值凝血酶係低於66 nM（例如，低於64 nM、62 nM、60 nM、55 nM、50 nM、45 nM、40 nM、35 nM、30 nM、25 nM、20 nM、15 nM、10 nM或5 nM）。在一些實施例中，在投予後，對象的峰值凝血酶係高於66 nM（例如，高於68 nM、70 nM、75 nM、80 nM、85 nM、90 nM、95 nM、100 nM、110 nM、120 nM、130 nM、140 nM或150 nM）。在一些實施例中，在投予後，對象的峰值凝血酶係在66與166 nM之間。可以藉由任何合適之方法來測定峰值凝血酶。
在一些實施例中，由於在一或多個凝血參數之評價中之異常結果，例如指示對象處於低凝狀態，因此可以向對象投予如本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物。
一些實施例包括在正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中治療凝血病之方法，該方法包括：(a)確定該對象之一或多個凝血參數之評價結果異常；及(b)在(a)之後，向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
一些實施例包括在正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中治療凝血病之方法，該方法包括：(a)確定對象之一或多個凝血參數之評價結果異常；及(b)在(a)之後，向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
一些實施例包括在正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中治療凝血病之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中在投予之前，已確定該對象之一或多種凝血參數之評價結果異常。
一些實施例包括在正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中治療凝血病之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中在投予之前，已確定該對象之一或多個凝血參數之評價結果異常。
在本文任何方法之一些實施例中，已在任何合適之時間範圍內向對象投予了抗血小板劑或正在投予抗血小板劑。例如，在一些情況下，在先前劑量之抗血小板劑之作用消退之前，已向對象投予了抗血小板劑及/或包含血小板衍生物之組成物（在說明性實施例中，係FDPD）。例如，在一些情況下，正在向對象投予抗血小板劑，且抗血小板劑之作用並未消退。作為另一實例，在一些情況下，已經在約1周、約5天、約3天、約36小時、約24小時、約18小時、約12小時、約8小時、約6小時、約4小時、約2小時或約1小時內向對象投予了抗血小板劑（例如，最近劑量）。作為另一實例，在一些情況下，正在向對象投予抗血小板劑，並且最後劑量（例如，由醫療專業人員規定或由對象自行投予之最近劑量）係在約1周、約5天、約3天、約36小時、約24小時、約18小時、約12小時、約8小時、約6小時、約4小時、約2小時或約1小時內。
在本文任何方法之一些實施例中，一或多個凝血參數之評價結果異常之確定可以在任何適當之時間。例如，一或多個凝血參數之評價結果異常之確定可以在異常結果返回至正常結果之前。作為另一實例，一或多個凝血參數之評價結果異常之確定可以在投予之約1周、約5天、約3天、約36小時、約24小時、約18小時、約12小時、約8小時、約6小時、約4小時、約2小時或約1小時內。
在一些實施例中，該方法可以進一步包括在投予之後確定一或多個凝血參數之評價結果。例如，在一些實施例中，投予之後對一或多個凝血參數之評價顯示出一或多個凝血參數中之至少一者之正常結果。在一些實施例中，投予之後一或多個凝血參數之評價結果較投予之前一或多個參數之評價結果有所改善。
在一些情況下，可以向對象投予抗血小板劑，但實際情況並非如此，例如，若對象感到困惑或若出現醫療錯誤。在一些此類情況下，可以向對象投予本文提供之任何組成物或藉由本文描述之任何方法生產之組成物。
一些實施例包括一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括：(a)確定該對象與醫學指導相反地被投予抗血小板劑；及(b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
一些實施例包括一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括：(a)確定該對象違反醫學指導被投予了抗血小板劑；及(b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
一些實施例包括一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中確定該對象違反醫學指導已被投予了抗血小板劑。
一些實施例包括一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中確定該對象違反醫學指導已被投予了抗血小板劑。
一些實施例包括一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括：(a)確定該對象違反醫學指導被投予了抗血小板劑；及(b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
一些實施例包括一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括：(a)確定該對象違反醫學指導被投予了抗血小板劑；及(b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
一些實施例包括一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中確定該對象違反醫學指導已被投予了抗血小板劑。
一些實施例包括一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中確定該對象違反醫學指導已被投予了抗血小板劑。
在本文任何方法之一些實施例中，可以在任何適當之時間確定該對象違反醫學指導已被投予了抗血小板劑。例如，可以在抗血小板劑消退之前，確定對象違反醫學指導已被投予了抗血小板劑。作為另一實例，確定對象違反醫學指導已被投予了抗血小板劑可以係在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之約1周、約5天、約3天、約36小時、約24小時、約18小時、約12小時、約8小時、約6小時、約4小時、約2小時或約1小時內。
抗血小板劑之投予可以包括任何適當之方法，包括對象自行投予或由醫療專業人員投予。
醫學指導可以係任何適當之方法，包括口頭指導、書面指導或口頭及書面指導。
在一些情況下，對象可能已經被投予或正在被投予影響（例如，降低）血小板功能之第二藥劑。例如，此種投予可使對象進入低凝狀態。
一些實施例包括一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括：(a)確定該對象被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑；及(b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
一些實施例包括一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括：(a)確定該對象被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑；及(b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
一些實施例包括一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中確定該對象已被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑。
一些實施例包括一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中確定該對象已被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑。
一些實施例包括一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括：(a)確定該對象被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑；及(b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
一些實施例包括一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括：(a)確定該對象被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑；及(b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
一些實施例包括一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中該對象被鑒定為已被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑。
一些實施例包括一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中該對象被鑒定為已被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑。
在一些實施例中，停止投予第二藥劑（例如，若停止第二藥劑之益處大於停止第二藥劑之成本）。在一些實施例中，繼續投予第二藥劑（例如，若除去第二藥劑將對對象有害，如某些醫藥諸如抗抑鬱藥之情況可能如此）。
第二藥劑可以係影響（例如，降低）血小板功能之任何適當之第二藥劑。例如，第二藥劑可以包括抗高血壓藥、質子泵抑制劑或其組合（或選自由其組成之群組）。作為另一實例，第二藥劑可以包括化療劑、抗生素、心血管藥劑、H2拮抗劑、神經精神藥劑或其組合（或選自由其組成之群組）。在一些實施例中，第二藥劑可以包括（或可以係）抗抑鬱劑（例如，選擇性羥色胺再攝取抑制劑(selective serotonin reuptake inhibitor；SSRI)、羥色胺拮抗劑及再攝取抑制劑(serotonin antagonist and reuptake inhibitor；SARI)、羥色胺及去甲腎上腺素再攝取抑制劑(serotonin and norepinephrine reuptake inhibitor；SNRI)、或其組合）。在一些實施例中，第二藥劑不是抗凝血劑。
在本文提供之任何方法之一些實施例中，停止投予抗血小板劑。在本文提供之任何方法之一些實施例中，繼續投予抗血小板劑。
在情況諸如某些緊急情況下，可能無法及時確定對象是否正在被投予抗血小板劑。在一些此類情況下，本文提供之組成物或藉由本文提供之方法生產之組成物可投予對象以預防凝血病。在一些實施例中，本文提供之組成物或藉由本文提供之方法生產之組成物可投予對象以減輕對象中之凝血病之可能性。
一些實施例包括一種在對象中預防或減輕凝血病之可能性之方法，該方法包括：(a)確定關於該對象是否被投予了抗血小板劑之資訊不可用；及(b)向該對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
一些實施例包括一種在對象中預防或減輕凝血病之可能性之方法，該方法包括：(a)確定關於該對象是否被投予了抗血小板劑之資訊不可用；及(b)向該對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
一些實施例包括一種在對象中預防或減輕凝血病之可能性之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中該對象已被確定為關於該對象是否被投予了抗血小板劑之資訊不可用之對象。
一些實施例包括一種在對象中預防或減輕凝血病之可能性之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中該對象已被確定為關於該對象是否被投予了抗血小板劑之資訊不可用之對象。
在本文任何方法之一些實施例中，確定關於對象是否被投予了抗血小板劑之資訊不可用可以在任何適當之時間。例如，確定關於對象是否被投予了抗血小板劑之資訊不可用可以在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之約1周、約5天、約3天、約36小時、約24小時、約18小時、約12小時、約8小時、約6小時、約4小時、約2小時或約1小時內。
有多種原因導致關於對象是否被投予了抗血小板劑之資訊不可用。例如，原因可以包括無法鑑定對象、對象之病史不可用、對象需要緊急治療、對象需要緊急手術、對象正在進行緊急手術或其組合。
在本文提供之任何方法之一些實施例中，該方法可以進一步包括確定對象之凝血參數之一或多次評價結果異常。在本文提供之任何方法之一些實施例中，已經確定對象之凝血參數之一或多次評價結果異常。
在一些情況下，在確定異常結果之前，對象之一或多個凝血參數中之至少一者先前被鑑定為具有正常結果。
在本文提供之任何方法之一些實施例中，該方法可進一步包括在投予本文提供之組成物或藉由本文提供之方法生產之組成物之後，確定一或多個凝血參數之評價結果。在一些此類情況下，投予後一或多個凝血參數之評價顯示出正常結果，諸如表E1中針對一或多個凝血參數中之至少一者所定義。在一些實施例中，投予之後一或多個凝血參數之評價結果較投予之前一或多個參數之評價結果有所改善。
在一些實施例中，對象被鑒定為對於手術（例如，緊急手術或預約手術）期間凝血參數之一或多次評價具有異常結果
一或多個凝血參數之評價可以係凝血參數之任何適當評價，諸如本文提供之凝血參數之任何評價。在一些實施例中，凝血參數之評價可以選自由世界衛生組織(WHO)出血量表、凝血酶原時間(PT)測定、國際標準化比率(international normalized ratio；INR)、凝血酶生成(TGA)、凝血彈性成像(TEG)、多電極聚集法(MEA)、光透射聚集法(LTA)、活化凝血時間(ACT)、VerifyNow及部分促凝血酶原激酶時間（例如，PTT或aPTT）、次參數、及其任何組合組成之群組。
在一些實施例中，一或多個凝血參數包括出血評價（例如，基於世界衛生組織(WHO)出血量表執行的）。在一些實施例中，在投予之前，對象發生基於WHO出血量表之2級、3級、或4級出血。在一些實施例中，在投予之後，對象發生基於WHO出血量表之0級、或1級出血。在一些實施例中，在投予之後，對象發生基於WHO出血量表較投予之前低一級之出血。在一些實施例中，在投予之後，對象發生基於WHO出血量表較投予之前低兩級之出血。在一些實施例中，在投予之後，對象發生基於WHO出血量表較投予之前低三級之出血。
在一些實施例中，一或多個凝血參數包括凝血酶原時間(PT)之評價。在一些實施例中，PT之異常結果包括大於約14秒（例如，大於約15秒、18秒、20秒、25秒或更多）之PT。在一些實施例中，在投予之後，對象之PT降低至少1秒（例如，至少2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多秒）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之正常PT。
在一些實施例中，一或多個凝血參數包括活化部分促凝血酶原激酶時間(aPTT)之評價。在一些實施例中，aPTT之異常結果包括大於約40秒（例如，大於約43秒、45秒、50秒、55秒、60秒、65秒、70秒或更長）之aPTT。在一些實施例中，在投予之後，對象之aPTT降低至少5秒（例如，至少10、15、20、25、30或更多秒）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之正常aPTT。
在一些實施例中，一或多個凝血參數包括凝血酶凝血時間(thrombin clot time, TCT)之評價。在一些實施例中，TCT之異常結果包括大於約35秒（例如，大於約38秒、40秒、45秒、50秒、55秒、60秒、或更多）之TCT。在一些實施例中，在投予之後，對象之TCT降低至少5秒（例如，至少10、15、20、25、30或更多秒）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之正常TCT。
在一些實施例中，一或多個凝血參數之評價包括凝血彈性成像(TEG)。在一些實施例中，TEG之異常結果包括小於約50 mm（例如，小於約48 mm、45 mm、40 mm、35 mm、或更小）之最大幅度(MA)。在一些實施例中，在投予之後，對象之MA增加至少5 mm（例如，至少10 mm、15 mm、20 mm、25 mm、30 mm或更多）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之正常MA。在一些實施例中，TEG之異常結果包括小於約85%（例如，小於約83%、80%、75%、70%或更少）之聚集百分比（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）。在一些實施例中，在投予之後，對象之聚集百分比增加（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）至少2個百分點（例如，至少3、5、8、10、12、15、18、20或更多個百分點）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之正常聚集百分比（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）。在一些實施例中，使用TEG評價二磷酸腺苷誘導之血小板-纖維蛋白凝血強度。在一些實施例中，使用TEG評價花生四烯酸誘導之血小板-纖維蛋白凝血強度。
在一些實施例中，一或多個凝血參數之評價包括VerifyNow。在一些實施例中，VerifyNow之異常結果包含小於約195（例如，小於約190、185、180、170、165、160、155、或更少）之P2Y12反應單位(PRU)。在一些實施例中，在投予之後，對象之PRU增加至少25（例如，至少30、35、40、45、50、75、100、或更多）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之正常PRU。在一些實施例中，VerifyNow之異常結果包含小於約550（例如，小於約540、530、520、510、500、490、480、470、或更小）之阿司匹靈反應單位(ARU)。在一些實施例中，在投予之後，對象之ARU增加至少25（例如，至少30、35、40、45、50、75、100、或更多）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之正常ARU。
在一些實施例中，一或多個凝血參數之評價包括多電極聚集法(MEA)。在一些實施例中，MEA之異常結果包含ADP誘導之血小板活性之異常結果。在一些實施例中，MEA之異常結果包含對於ADP誘導之血小板活性小於約50個單位(U)（例如，小於約48、45、40、35或更少U）之結果。在一些實施例中，在投予之後，對象之ADP誘導之血小板活性增加至少5個U（例如，至少8、10、15、20或更多個U）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之ADP誘導之血小板活性之正常值。在一些實施例中，MEA之異常結果包含花生四烯酸誘導之血小板活性之異常結果。在一些實施例中，MEA之異常結果包含對於花生四烯酸誘導之血小板活性小於約70個單位(U)（例如，小於約68、65、60、55、50、45或更少U）之結果。在一些實施例中，在投予之後，對象之花生四烯酸誘導之血小板活性增加至少5（例如，至少8、10、15、20或更多個單位）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之花生四烯酸誘導之血小板活性之正常值。
在一些實施例中，一或多個凝血參數之評價包括光透射聚集法(LTA)。在一些實施例中，LTA之異常結果包括，在5 µmol/L二磷酸腺苷存在下，小於約60%（例如，小於約58%、55%、50%、45%或更低）之聚集百分比。在一些實施例中，LTA之異常結果包括，在2 µg/mL膠原蛋白存在下，小於約65%（例如，小於約63%、60%、55%、50%、45%或更低）之聚集百分比。）。在一些實施例中，LTA之異常結果包括，在1 mmol/L花生四烯酸存在下，小於約65%（例如，小於約63%、60%、55%、50%、45%或更低）之聚集百分比。）。在一些實施例中，LTA之異常結果包括，在2 mmol/L花生四烯酸存在下，小於約69%（例如，小於約67%、65%、60%、55%、50%、45%或更低）之聚集百分比。）。在一些實施例中，LTA之異常結果包括，在5 mmol/L花生四烯酸存在下，小於約73%（例如，小於約70%、65%、60%、55%、50%或更低）之聚集百分比。在一些實施例中，在投予之後，對象之聚集百分比增加（在5 µmol/L二磷酸腺苷存在下）至少2個百分點（例如，至少3、5、8、10、12或更多個百分點）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之正常聚集百分比（在5 µmol/L二磷酸腺苷存在下）。在一些實施例中，在投予之後，對象之聚集百分比增加（在2 µg/mL膠原蛋白存在下）至少2個百分點（例如，至少3、5、8、10、12或更多個百分點）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之正常聚集百分比（在2 µg/mL膠原蛋白存在下）。在一些實施例中，在投予之後，對象之聚集百分比增加（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）至少2個百分點（例如，至少3、5、8、10、12或更多個百分點）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之正常聚集百分比（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）。在一些實施例中，在投予之後，對象之聚集百分比增加（在2 mmol/L花生四烯酸存在下）至少2個百分點（例如，至少3、5、8、10、12或更多個百分點）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有諸如表E1中所定義之正常聚集百分比（在2 mmol/L花生四烯酸存在下）。在一些實施例中，在投予之後，對象之聚集百分比增加（在5 mmol/L花生四烯酸存在下）至少2個百分點（例如，至少3、5、8、10、12或更多個百分點）。在一些實施例中，在投予之後，對象具有如表E1中所定義之正常聚集百分比（在5 mmol/L花生四烯酸存在下）。
在一些實施例中，除了本文提供之組成物或藉由本文所述之方法製備之組成物之外，可向對象投予額外的抗血小板劑逆轉劑。額外的抗血小板劑逆轉劑可以與本文提供之組成物或藉由本文提供之方法生產之組成物以任何次序投予。在一些實施例中，組成物之投予與額外的抗血小板劑逆轉劑之投予同時進行。在一些實施例中，組成物之投予發生在額外的抗血小板劑逆轉劑投予之後。在一些實施例中，組成物之投予發生在額外的抗血小板劑逆轉劑投予之前。
在本文任何實施例之一個態樣中，對象沒有癌症。
本文所用之「有效量」係有效治療對象之包含一定量之血小板通常係血小板衍生物（在說明性實施例中，係FDPD）之組成物之量。此種治療（例如關於治療凝血病之方法或對抗本文中對象之抗血栓形成劑（即抗血小板劑或抗凝血劑）之作用之方法）會降低對象之出血可能性。在一些實施例中，出血可能性可以降低到使對象恢復正常止血之程度，諸如降低到該對象體內沒有任何抗血小板劑之水平至少持續一段時間。因此，在一些實施例中，包含血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物之有效量係導致對象之出血可能性降低，在一些實施例中導致正常止血持續任何時間段之量。在一些實施例中，在投予一定劑量之有效量之血小板衍生物（例如，FDPD）或第二、第三、第四、第五或第六劑量之包含血小板衍生物之組成物後，出血可能性降低持續至少10、20、30、40、50或60分鐘，該等劑量各自、或者二或更多者或者全部累積起來構成有效劑量。
此種量之血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）包括可以投予對象（在說明性實施例中導致對象之出血可能性降低）之如本文所述之包含血小板衍生物之組成物的任何適當劑量。例如，在一些實施例中，包含血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物之劑量可以包括約或恰好1.0 x 10 7至1.0 x 10 11個顆粒（例如，FDPD）/kg對象、1.0 x 10 7至1.0 x 10 10個顆粒（例如，FDPD）/kg對象、1.6 x 10 7至1.0 x 10 10個顆粒（例如，FDPD/kg對象、1.6 x 10 7至5.1 x 10 9個顆粒（例如，FDPD/kg對象、1.6 x 10 7至3.0 x 10 9個顆粒（例如，FDPD）/kg對象、1.6 x 10 7至1.0 x 10 9個顆粒（例如，FDPD）/kg對象、1.6 x 10 7至5.0 x 10 8個顆粒（例如，FDPD）/kg對象、1.6 x 10 7至1.0 x 10 8個顆粒（例如，FDPD）/kg對象、1.6 x10 7至5.0 x 10 7個顆粒（例如，FDPD）/kg對象、5.0 x 10 7至1.0 x 10 8個顆粒（例如，FDPD）/kg對象、1.0 x 10 8至5.0 x 10 8個顆粒（例如，FDPD）/kg對象、5.0 x 10 8至1.0 x 10 9個顆粒（例如，FDPD）/kg對象、1.0 x 10 9至5.0 x 10 9個顆粒（例如，FDPD）/kg對象或5.0 x 10 9至1.0 x 10 10個顆粒（例如，FDPD）/kg對象。在一些實施例中，包含FDPD之組成物之有效量係基於活性之量，其具有250至5000 TGPU/kg對象之效力。此種基於活性之量可以與本段中之任何顆粒數範圍/kg相組合。
在某些實施例中，以上提供之任何劑量範圍以及在說明性實施例中包括小於1 x 10 11個顆粒/kg之彼等可以向對象投予多於1次。例如，在自第一劑量起之1、2、3、4、5或7天內之時間範圍內，1.0 x 10 7個顆粒至約1.0 x 10 10個顆粒之劑量範圍可以投予2至10次、或2至8次、或2至6次、或3至8次、或3至6次或4至6次。
在本文方法之一些實施例中，局部投予組成物。在一些實施例中，局部投予可以包括經由溶液、乳膏、凝膠、懸浮液、油灰、顆粒或粉末投予。在一些實施例中，局部投予可以包括經由繃帶（例如，黏性繃帶或壓迫性繃帶）或醫學封閉物（例如，縫線、釘）投予；例如，血小板衍生物（例如，冷凍保存的血小板（例如，FDPD））可以被包埋於其中或包被在其上），如對應於美國專利申請案序號15/776,255的PCT公布號WO2017/040238（例如，段落[013]-[069]）中所述，其全部內容藉由引用併入本文。
在本文方法之一些實施例中，組成物被腸胃外投予。在本文方法之一些說明性實施例中，組成物被靜脈內投予。在本文方法之一些實施例中，組成物被肌內投予。在本文方法之一些實施例中，組成物被鞘內投予。在本文方法之一些實施例中，組成物被皮下投予。在本文方法之一些實施例中，組成物被腹膜內投予。
在本文方法之一些實施例中，組成物在投予步驟之前被乾燥。在本文方法之說明性實施例中，組成物在投予步驟之前被冷凍乾燥。在說明性實施例中，此種FDPD組成物係根據本文實例中提供之方法來製備。在本文方法之說明性實施例中，在乾燥或冷凍乾燥步驟後，例如在投予對象之前的24、12、8、6、4、3、2或1小時內或在30、20。15、10或5分鐘內組成物被再水合。
在一些實施例中，抗血小板劑選自由阿司匹靈（亦被稱為乙醯水楊酸或ASA）；P2Y12抑制劑諸如坎格雷洛（例如KENGREAL®）、替卡格雷（例如BRILINTA®）、氯吡格雷（例如PLAVIX®）或普拉格雷（例如EFFIENT®）；糖蛋白IIb/IIIa抑制劑，諸如依替巴肽（例如INTEGRILIN®）、替羅非班（例如AGGRASTAT®）或阿昔單抗（例如REOPRO®））；補充劑，諸如草藥補充劑；或其任何組合組成之群組。補充劑的實例包括生薑、人參、銀杏、綠茶、卡瓦胡椒(kava)、鋸棕櫚(saw palmetto)、波耳多葉( Peumus boldus)、丹參( Salvia miltiorrhiza)、當歸( Angelica sinensis)木瓜(papaya) ( Carica papaya)、魚油及維生素E。草藥補充劑的實例包括生薑、人參及銀杏。本文提供之經FDA批准之抗凝血劑中每一者之處方資訊皆藉由引入全文併入本文中。此種處方資訊包括，例如：
DURLAZA®（阿司匹靈）處方資訊概要，2019年12月修訂。
KENGREAL®（坎格雷洛）處方資訊概要，修訂：2015年6月。
BRILINTA®（替卡格雷）處方資訊概要，修訂： 2016年9月。
PLAVIX®（硫酸氫氯吡格雷）處方資訊概要，修訂：2010年8月。
EFFIENT®（普拉格雷）處方資訊概要，2011年9月修訂。
INTEGRILIN®（依替巴肽）處方資訊概要，2013年3月修訂。
AGGRASTAT®（替羅非班）處方資訊概要，2016年8月修訂。
REOPRO®（阿昔單抗）處方資訊，修訂日期：1997年11月。
TICLID®（鹽酸噻氯匹定）批准包，2001年3月修訂。
說明書- MOTRIN®（布洛芬），有效日期：2007年1月。
ZONTIVITY™（沃拉帕沙）處方資訊概要，2014年5月修訂。
PLETAL®（西洛他唑）處方資訊概要，2017年5月修訂。
VELETRI®（依前列醇）處方資訊概要，2012年6月修訂。
PERSANTINE®（雙嘧達莫）處方資訊，2019年12月修訂。
REMODULIN®（苊香豆醇）處方資訊概要，2014年12月。
在一些實施例中，抗血小板劑係阿司匹靈。在一些實施例中，抗血小板劑係坎格雷洛（例如KENGREAL®）。在一些實施例中，抗血小板劑係替卡格雷（例如BRILINTA®）。在一些實施例中，抗血小板劑係氯吡格雷（例如PLAVIX®）。在一些實施例中，抗血小板劑係普拉格雷（例如EFFIENT®）。在一些實施例中，抗血小板劑係依替巴肽（例如INTEGRILIN®）。在一些實施例中，抗血小板劑係替羅非班（例如AGGRASTAT®）。在一些實施例中，抗血小板劑係阿昔單抗（例如REOPRO®）。在一些實施例中，抗血小板劑係特魯曲班。在一些實施例中，抗血小板劑係匹考他胺。在一些實施例中，抗血小板劑係依利格雷。在一些實施例中，抗血小板劑係噻氯匹定。在一些實施例中，抗血小板劑係布洛芬。在一些實施例中，抗血小板劑係沃拉帕沙。在一些實施例中，抗血小板劑係阿托帕沙。在一些實施例中，抗血小板劑係西洛他唑。在一些實施例中，抗血小板劑係前列腺素E1。在一些實施例中，抗血小板劑係依前列醇。在一些實施例中，抗血小板劑係雙嘧達莫。在一些實施例中，抗血小板劑係曲前列素鈉。在一些實施例中，抗血小板劑係沙格雷酯。在一些實施例中，抗血小板劑係補充劑。在一些實施例中，抗血小板劑係草藥補充劑。
在一些實施例中，抗血小板劑以相對於將包含血小板衍生物之組成物投予對象之時間之劑量及時間點被最後投予，使得對象之血液包含抗血小板劑，在說明性實施例中，包含可偵測數量之抗血小板劑。一般，在向對象投予包含含有血小板衍生物之組成物之劑量之組成物時，此種藥劑存在於對象之血液中，並且以足以增加對象之出血可能性之量存在於對象之血液中。例如，抗血小板劑以足以例如在體外測試中產生一或多個凝血參數之異常值之濃度存在。在一些實施例中，在投予包含FDPD之組成物時，抗血小板劑以增加對象之出血可能性之水平存在於對象中。在一些實施例中，抗血小板劑在投予包含FDPD之組成物之時間或投予包含FDPD之組成物之第一劑量或最後劑量之時間之15、30或45分鐘內，或1、2、3、4、6或8小時內以Cmax存在。
在一些實施例中，抗血小板劑包含阿司匹靈，劑量為約80 mg至約700 mg（例如，80 mg、100 mg、150 mg、200 mg、250 mg、300 mg、400 mg、500 mg、600 mg或700 mg），每日一次、兩次、三次或四次。在一些實施例中，抗血小板劑包含阿司匹靈，並且對象達到約3 mg/L至約25 mg/L（例如，對於約100 mg之劑量為約3 mg/L至約5 mg/L，對於約300 mg之劑量為約10 mg/L至約15 mg/L，或對於約500 mg之劑量為約20 mg/L至約25 mg/L）之C max。另外參見例如，Nagelschmitz 等人，「Pharmacokinetics and pharmacodynamics of acetylsalicylic acid after intravenous and oral administration to healthy volunteers.」 Clinical Pharmacology : Advances and Applicationsvol. 6 51-9. 19 Mar. 2014, doi:10.2147/CPAA.S47895。在一些實施例中，抗血小板劑包含阿司匹靈，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之前，對象具有約350至約549 ARU（例如，約400至約500 ARU）之ARU。在一些實施例中，抗血小板劑包含阿司匹靈，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物後，對象具有約550至約700 ARU（例如，約600至約700 ARU）之ARU。在一些實施例中，抗血小板劑包含阿司匹靈，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之前，對象使用大於約30個單位（例如，大於約33、35、40、45、50或更多個單位）之MEA具有高之治療中血小板反應性（high on-treatment platelet reactivity, HPR）。參見，例如Krüger, Jan-Christopher等人，「Monitoring ASA and P2Y12-specific platelet inhibition–comparison of conventional (single) and multiple electrode aggregometry.」。 Scandinavian journal of clinical and laboratory investigation74.7 (2014): 568-574。
在一些實施例中，抗血小板劑包含初始劑量為約25至約35 µg/kg對象體重（例如，約30 µg/kg對象體重）或隨後劑量為約3至約5 µg/kg/min對象體重（例如，約4 µg/kg/min對象體重）之坎格雷洛。在一些實施例中，抗血小板劑包含坎格雷洛，並且對象達成了約400至約500 ng/mL之C max。參見例如製造商提供之KENGREAL®概況介紹，發現於https://resources.chiesiusa.com/Kengreal/KENGREAL_Dosing_and_Administration_Fact_Sheet.pdf。在一些實施例中，抗血小板劑包含坎格雷洛，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之前，對象具有小於約50 mm（例如，小於約48 mm、45 mm、40 mm或更小）之最大振幅(TEG-ADP)。在一些實施例中，抗血小板劑包含坎格雷洛，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之後，對象具有至少約50 mm（例如，至少53 mm、55 mm、50 mm、60 mm、65 mm、70 mm或更大）之最大振幅(TEG-ADP)。參見例如Corliss BM, Polifka AJ, Harris NS, Hoh BL, Fox WC.血管內神經外科治療性血小板抑制之實驗室評估：Laboratory assessments of therapeutic platelet inhibition in endovascular neurosurgery: comparing results of the VerifyNow P2Y12 assay to thromboelastography with platelet mapping. J Neurosurg. 2018 Nov 1;129(5):1160-1165. doi: 10.3171/2017.6.JNS17535. PMID: 29271717。
在一些實施例中，抗血小板劑包含替卡格雷，其初始劑量為約170至約190 mg（例如，約180 mg），或第一年治療之後續劑量為約80至約100 mg（例如，約90 mg），每日兩次，或第二年治療之後續劑量為約50至約70 mg，每日兩次（例如，約60 mg），可選地與阿司匹靈組合。在一些實施例中，抗血小板劑包含替卡格雷，並且對象達成了約550至約650 ng/mL（例如，約600 mg/L）之C max。參見例如Teng R, Muldowney S, Zhao Y, Berg JK, Lu J, Khan ND. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of 替卡格雷 in 對象s on hemodialysis and 對象s with normal renal function. Eur J Clin Pharmacol. 2018 Sep;74(9):1141-1148. doi: 10.1007/s00228-018-2484-7. Epub 2018 May 30. PMID: 29850937; PMCID: PMC6096709。在一些實施例中，抗血小板劑包含替卡格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之前，對象具有小於約180（例如，小於約175、170、165、160、155、150或更小）之PRU。在一些實施例中，抗血小板劑包含替卡格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之後，對象具有至少180（例如，至少180、185、190、195、200、225、250、275、300、350或更多）之PRU。在一些實施例中，抗血小板劑包含替卡格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物後，對象具有約180至約376 PRU（例如，約200至約300 PRU）之PRU。在一些實施例中，抗血小板劑包含替卡格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之前，對象具有小於約50 mm（例如，小於約48 mm、45 mm、40 mm或更小）之最大振幅(TEG-ADP)。在一些實施例中，抗血小板劑包含替卡格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之後，對象具有至少約50 mm（例如，至少53 mm、55 mm、50 mm、60 mm、65 mm、70 mm或更大）之最大振幅(TEG-ADP)。參見例如Corliss BM, Polifka AJ, Harris NS, Hoh BL, Fox WC. Laboratory assessments of therapeutic platelet inhibition in endovascular neurosurgery: comparing results of the VerifyNow P2Y12 assay to thromboelastography with platelet mapping. J Neurosurg. 2018 Nov 1;129(5):1160-1165. doi: 10.3171/2017.6.JNS17535. PMID: 29271717。
在一些實施例中，抗血小板劑包含氯吡格雷，初始劑量為約275至約325 mg（例如，約300 mg），或後續劑量為約70至約80 mg（例如，約75 mg），每日一次，可選地與阿司匹靈組合。在一些實施例中，抗血小板劑包括氯吡格雷，並且對象達成了約1至約40 mg/L（例如，對於約75 mg之劑量為約1至約15 ng/mL，或對於約300 mg之劑量為約1至約40 ng/mL）之C max。參見例如Karaźniewicz-Łada, Marta等人，「Clinical pharmacokinetics of clopidogrel and its metabolites in patients with cardiovascular diseases.」 Clinical Pharmacokineticsvol. 53,2 (2014): 155-64. doi:10.1007/s40262-013-0105-2。在一些實施例中，抗血小板劑包含氯吡格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之前，對象具有小於約180（例如，小於約175、170、165、160、155、150或更小）之PRU。在一些實施例中，抗血小板劑包含氯吡格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之後，對象具有至少180（例如，至少180、185、190、195、200、225、250、275、300、350或更多）之PRU。在一些實施例中，抗血小板劑包括氯吡格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物後，對象具有約180至約376 PRU（例如，約200至約300 PRU）之PRU。在一些實施例中，抗血小板劑包含氯吡格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之前，對象使用大於約47個單位（例如，大於約48、50、55或更多個單位）之MEA具有高之治療中血小板反應性(HPR)。參見例如Krüger, Jan-Christopher等人，「Monitoring ASA and P2Y12-specific platelet inhibition–comparison of conventional (single) and multiple electrode aggregometry.」 Scandinavian journal of clinical and laboratory investigation74.7 (2014): 568-574。在一些實施例中，抗血小板劑包含氯吡格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之前，對象具有小於約50 mm（例如，小於約48 mm、45 mm、40 mm或更小）之最大振幅(TEG-ADP)。在一些實施例中，抗血小板劑包含氯吡格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之後，對象具有至少約50 mm（例如，至少53 mm、55 mm、50 mm、60 mm、65 mm、70 mm或更大）之最大振幅(TEG-ADP)。參見例如Corliss BM, Polifka AJ, Harris NS, Hoh BL, Fox WC. Laboratory assessments of therapeutic platelet inhibition in endovascular neurosurgery: comparing results of the VerifyNow P2Y12 assay to thromboelastography with platelet mapping. J Neurosurg. 2018 Nov 1;129(5):1160-1165. doi: 10.3171/2017.6.JNS17535. PMID: 29271717。
在一些實施例中，抗血小板劑包含普拉格雷，初始劑量為約50至約70 mg（例如，約60 mg），或後續劑量為約3至約12 mg（例如，約5 mg或約10 mg），每日一次，可選地與阿司匹靈組合。在一些實施例中，抗血小板劑包含普拉格雷，並且對象達成了約200至約525 ng/mL（例如，對於約20 mg之劑量為約330至約350 ng/mL）之C max。參見例如Umemura, Kazuo, 及Takayuki Iwaki.「The Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of Prasugrel and Clopidogrel in Healthy Japanese Volunteers.」 Clinical Pharmacology in Drug Developmentvol. 5,6 (2016): 480-487. doi:10.1002/cpdd.259。在一些實施例中，抗血小板劑包含普拉格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之前，對象具有小於約180（例如，小於約175、170、165、160、155、150或更小）之PRU。在一些實施例中，抗血小板劑包含普拉格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之後，對象具有至少180（例如，至少180、185、190、195、200、225、250、275、300、350或更多）之PRU。在一些實施例中，抗血小板劑包含普拉格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物後，對象具有約180至約376 PRU（例如，約200至約300 PRU）之PRU。在一些實施例中，抗血小板劑包含普拉格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之前，對象具有小於約50 mm（例如，小於約48 mm、45 mm、40 mm或更小）之最大振幅(TEG-ADP)。在一些實施例中，抗血小板劑包含普拉格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之後，對象具有至少約50 mm（例如，至少53 mm、55 mm、50 mm、60 mm、65 mm、70 mm或更大）之最大振幅(TEG-ADP)。參見例如Corliss BM, Polifka AJ, Harris NS, Hoh BL, Fox WC. Laboratory assessments of therapeutic platelet inhibition in endovascular neurosurgery: comparing results of the VerifyNow P2Y12 assay to thromboelastography with platelet mapping. J Neurosurg. 2018 Nov 1;129(5):1160-1165. doi: 10.3171/2017.6.JNS17535. PMID: 29271717。在一些實施例中，抗血小板劑包含普拉格雷，並且在投予本文提供之組成物或藉由本文描述之方法生產之組成物之前，對象使用大於約47個單位（例如，大於約48、50、55或更多個單位）之MEA具有高之治療中血小板反應性(HPR)。參見例如Krüger, Jan-Christopher等人，「Monitoring ASA and P2Y12-specific platelet inhibition–comparison of conventional (single) and multiple electrode aggregometry.」 Scandinavian journal of clinical and laboratory investigation74.7 (2014): 568-574。
在一些實施例中，抗血小板劑包含依替巴肽，初始劑量為約170至約190 mcg/kg對象體重（例如，約180 mcg/kg對象體重），可選地第二初始劑量為約170至約190 mcg/kg對象體重（例如，約180 mcg/kg對象體重），或後續劑量為約1至約2 mcg/kg對象體重/分鐘（例如，約1.5 mcg/kg對象體重/分鐘）。
在一些實施例中，抗血小板劑包含替羅非班，初始劑量為約0.3至約0.5 µg/kg對象體重/分鐘（例如，約0.5 µg/kg對象體重/分鐘），持續約30分鐘，或後續劑量為約0.1 µg/kg對象體重/分鐘。
在一些實施例中，抗血小板劑包含阿昔單抗，初始劑量為約0.2至約0.3 mg/kg對象體重（例如，約0.25 mg/kg對象體重），或後續劑量為約0.10至約0.15 µg/kg對象體重/分鐘（例如，約0.125 µg/kg對象體重/分鐘）。在一些實施例中，抗血小板劑包含阿昔單抗，初始劑量為約0.2至約0.3 mg/kg對象體重（例如，約0.25 mg/kg對象體重），或後續劑量為約8至約10 µg/min（例如，約9 µg/min）。
在一些實施例中，抗血小板劑包含噻氯匹定，劑量為約240至約260 mg（例如，約250 mg），每日兩次。
在一些實施例中，抗血小板劑包含布洛芬，劑量為約100 mg至約600 mg（例如，約100 mg、200 mg、250 mg、300 mg、400 mg、500 mg或600 mg），每日一次、兩次、三次或四次。
在一些實施例中，抗血小板劑包含沃拉帕沙，劑量為約2至約3 mg（例如，約2.5 mg），每日一次，可選地與阿司匹靈或氯吡格雷一起。
在一些實施例中，抗血小板劑包含西洛他唑，劑量為約40至約110 mg（例如，約50 mg、75 mg或100 mg），每日兩次。
在一些實施例中，抗血小板劑包含依前列醇，初始劑量為約2 ng/kg對象體重/分鐘，或後續劑量為約4、6、8、10、12、14、16、18或20 ng/kg對象體重/分鐘。
在一些實施例中，抗血小板劑包含雙嘧達莫，劑量為約60至約110 mg（例如，約75 mg或100 mg），每日四次。
在一些實施例中，抗血小板劑包含曲前列素鈉，劑量為約0.5至約3.0 ng/kg對象體重/分鐘（例如，約0.625 ng/kg對象體重/分鐘、約1.25 ng/kg對象體重/分鐘或約2.5 ng/kg對象體重/分鐘）。
在一些實施例中，再水合包含血小板衍生物之組成物包含向血小板衍生物（例如，FDPD）中加入水性液體。在一些實施例中，水性液體係水。在一些實施例中，水性液體係水溶液（例如，緩衝液）。在一些實施例中，水性液體係鹽水溶液。在一些實施例中，水性液體係懸浮液。
在一些實施例中，再水合的血小板衍生物（例如，FDPD）具有以40國際單位(international unit, IU)或更高顯示與血液凝固相關的所有單獨的因子（例如，因子VII、VIII及IX）的凝血因子水平。
在一些實施例中，血小板衍生物（例如，FDPD）具有小於約10%，諸如小於約8%，諸如小於約6%，諸如小於約4%，諸如小於約2%，諸如小於約0.5%的血小板膜經由膜上存在的蛋白質及/或脂質的交聯。在一些實施例中，再水合的血小板衍生物（例如，FDPD）具有少於約10%，諸如少於約8%，諸如少於約6%，諸如少於約4%，諸如少於約2%，諸如少於約0.5%的血小板膜經由存在於膜上的蛋白質及/或脂質的交聯。
在一些實施例中，血小板（一般係血小板衍生物且在說明性實施例中係FDPD）具有至少約0.2 μm（例如，至少約0.3 μm、至少約0.4 μm、至少約0.5 μm、至少約0.6 μm、至少約0.7 μm、至少約0.8 μm、至少約0.9 μm、至少約1.0 μm、至少約1.2 μm、至少約1.5 μm、至少約2.0 μm、至少約2.5 μm或至少約5.0 μm）之粒徑（例如，直徑、最大尺寸）。在一些實施例中，粒徑小於約5.0 μm（例如，小於約2.5 μm、小於約2.0 μm、小於約1.5 μm、小於約1.0 μm、小於約0.9 μm、小於約0.8 μm、小於約0.7 μm、小於約0.6 μm、小於約0.5 μm、小於約0.4 μm或小於約0.3 μm）。在一些實施例中，粒徑為約0.3 μm至約5.0 μm（例如，約0.4 μm至約4.0 μm、約0.5 μm至約2.5 μm、約0.6 μm至約2.0 μm、約0.7 μm至約1.0 μm、約0.5 μm至約0.9 μm或約0.6 μm至約0.8 μm）。
在一些實施例中，至少50%（例如，至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約99%）之血小板或在說明性實施例中血小板衍生物（例如，FDPD）具有在約0.3 μm至約5.0 μm的範圍內（例如，約0.4 μm至約4.0 μm、約0.5 μm至約2.5 μm、約0.6 μm至約2.0 μm、約0.7 μm至約1.0 μm、約0.5 μm至約0.9 μm或約0.6 μm至約0.8 μm）之粒徑。在一些實施例中，至多99%（例如，至多約95%、至多約80%、至多約75%、至多約70%、至多約65%、至多約60%、至多約55%或至多約50%）之血小板或在說明性實施例中血小板衍生物（例如，FDPD）在約0.3 μm至約5.0 μm的範圍內（例如，約0.4 μm至約4.0 μm、約0.5 μm至約2.5 μm、約0.6 μm至約2.0 μm、約0.7 μm至約1.0 μm、約0.5 μm至約0.9 μm或約0.6 μm至約0.8 μm）。在一些實施例中，約50%至約99%（例如，約55%至約95%、約60%至約90%、約65%至約85%、約70%至約80%）之血小板或在說明性實施例中血小板衍生物（例如，FDPD）在約0.3 μm至約5.0 μm的範圍內（例如，約0.4 μm至約4.0 μm、約0.5 μm至約2.5 μm、約0.6 μm至約2.0 μm、約0.7 μm至約1.0 μm、約0.5 μm至約0.9 μm或約0.6 μm至約0.8 μm）。
在一些說明性實施例中，微粒可為粒徑（例如直徑，最大尺寸）小於約0.5 µm（小於約0.45 µm或0.4 µm）之顆粒。在一些情況下，微粒可為粒徑為約0.01 µm至約0.5 µm（例如約0.02 µm至約0.5 µm）之顆粒。
包含血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物（諸如根據本文所述方法製備之彼等）可具有微粒含量，其對組成物中半徑為約1 nm至約60,000 nm之所有顆粒之總散射強度之貢獻小於約5.0%（例如，小於約4.5%、4.0%、3.5%、3.0%、2.5%、2.0%、1.5%、1.0%或0.5%）。在一些實施例中，血小板衍生物組成物包含了包含CD41陽性血小板衍生物在內之血小板衍生物群體，其中小於15%、10%、7.5%、5%、4.5%、4%、3.5%、3%、2.5%、2%、1.5%、1%、0.5%或0.1%之CD41陽性血小板衍生物係直徑小於1 µm、0.9 µm、0.8 µm、0.7 µm、0.6 µm、0.5 µm、0.4 µm、0.3 µm、0.2 µm或0.1 µm（在某些說明性實施例中其小於0.5 µm）之微粒。在一些實施例中，血小板衍生物組成物包含了包含CD42陽性血小板衍生物在內之血小板衍生物群體，其中小於15%、10%、7.5%、5%、4.5%、4%、3.5%、3%、2.5%、2%、1.5%、1%、0.5%或0.1%之CD42陽性血小板衍生物係直徑小於1 µm、0.9 µm、0.8 µm、0.7 µm、0.6 µm、0.5 µm、0.4 µm、0.3 µm、0.2 µm或0.1 µm（在某些說明性實施例中其小於0.5 µm）之微粒。在一些實施例中，血小板衍生物組成物包含了包含CD61陽性血小板衍生物在內之血小板衍生物群體，其中小於15%、10%、7.5、5%、4.5%、4%、3.5%、3%、2.5%、2%、1.5%、1%、0.5%或0.1%之CD61陽性血小板衍生物係直徑小於1 µm、0.9 µm、0.8 µm、0.7 µm、0.6 µm、0.5 µm、0.4 µm、0.3 µm、0.2 µm或0.1 µm（在某些說明性實施例中其小於0.5 m）之微粒。在一些說明性實施例中，微粒具有小於0.5 µm之直徑。在本文之任何態樣及實施例之包括粉末形式之血小板衍生物組成物之一些實施例中，微粒之直徑在用適當溶液再水合血小板衍生物組成物之後確定。在一些實施例中，用於再水合血小板衍生物組成物之溶液之量等於在冷凍乾燥步驟中存在之緩衝液或製劑之量。如本文所用，「藉由散射強度」得到之微粒含量係指基於組成物中半徑為約1 nm至約60,000 nm之所有顆粒之散射強度之微粒含量。微粒含量可以藉由任何適當方法測量，例如藉由動態光散射(DLS)來測量。在一些情況下，用於DLS之樣本黏度可以為約1.060 cP（或調整為此值），因為此為血漿之近似黏度。在一些實施例中，根據任何態樣或實施例之血小板衍生物組成物包含血小板衍生物及微粒之群體，其中血小板衍生物與微粒之數值比係至少90:1、91:1、92:1、93:1、94:1、95:1、96:1、97:1、98:1或99:1。在一些實施例中，血小板衍生物具有在0.5-2.5 µm範圍內之直徑，並且微粒具有小於0.5 µm之直徑。
在一些實施例中，例如在處理以形成血小板衍生物之前或在直接投予對象之前，例如在液體介質中分離血小板。
在一些實施例中，血小板係供體來源的血小板。在一些實施例中，血小板藉由包含單採步驟的製程獲得。在一些實施例中，血小板係彙集的血小板。
在一些實施例中，從複數個供體彙集血小板。此類從複數個供體彙集的血小板在本文中亦可以被稱為彙集的血小板。在一些實施例中，供體係多於5個，諸如多於10個，諸如多於20個，諸如多於50個，諸如至多約100個供體。在一些實施例中，供體為約5至約100，諸如約10至約50，諸如約20至約40，諸如約25至約35。彙集的血小板可以用於製備本文所述的任何組成物。
在一些實施例中，血小板係體外衍生的。在一些實施例中，血小板係在培養物中衍生或製備的。在一些實施例中，製備血小板包含從巨核細胞的培養物衍生或生長血小板。在一些實施例中，製備血小板包含從人多能幹細胞(pluripotent stem cell, PCS)（包括胚胎幹細胞(embryonic stem cell, ESC)及/或誘導多能幹細胞(induced pluripotent stem cell, iPSC)）的培養物衍生或生長血小板（或巨核細胞）。
因此，在一些實施例中，如本文所述在治療對象之前製備血小板。在一些實施例中，將血小板凍乾。在一些實施例中，將血小板低溫冷藏保存。
在一些實施例中，在用培養劑培養之前，可以將血小板或彙集的血小板酸化至約6.0至約7.4的pH。在一些實施例中，該方法包含將血小板酸化至約6.5至約6.9的pH。在一些實施例中，該方法包含將血小板酸化至約6.6至約6.8的pH。在一些實施例中，酸化包含向彙集的血小板中加入包含檸檬酸葡萄糖酸(Acid Citrate Dextrose, ACD)的溶液。
在一些實施例中，切向流過濾(tangential flow filtration；TFF)用於處理血小板以製作血小板衍生物，在說明性實施例中係FDPD，以用於此處之態樣。例如，TFF可用於濃縮及/或緩衝液或其他溶液交換，使得血小板以適當濃度範圍懸浮在適當介質例如培養劑及/或凍乾劑或者為或包含凍乾劑之培養劑中，例如然後對組成物進行乾燥以形成血小板衍生物，或在說明性實施例中，然後將血小板組成物凍乾以形成FDPD。
在一些實施例中，該方法可包括初始稀釋步驟，例如，起始材料（例如，未處理之血液製品（例如，供體單採材料（例如，彙集之供體單採材料））可用製劑（例如，本文所述之任何製劑）稀釋以形成經稀釋之起始材料。在一些情況下，初始稀釋步驟可以包括用製劑進行稀釋，製劑之質量等於起始材料質量之至少約10%（例如，起始材料質量之至少約15%、25%、50%、75%、100%、150%或200%）。在一些實施例中，可以使用TFF設備進行初始稀釋步驟。
在一些實施例中，該方法可以包括濃縮（例如將血小板濃縮）（例如將起始材料或經稀釋之起始材料濃縮）以形成經濃縮之血小板組成物。例如，濃縮可包括濃縮至約1000 x 10 3至約4000 x 10 3個血小板/µL（例如，約1000 x 10 3至約2000 x 10 3、約2000 x 10 3至約3000 x 10 3或約4000 x 10 3個血小板/µL）。在一些實施例中，可以使用TFF設備進行濃縮步驟。
可藉由任何適當之方法確定血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）之濃度。例如，可使用計數器使用阻抗來量化懸浮液中之血細胞之濃度（例如，Beckman Coulter AcT 10或AcT diff 2）。
在一些實施例中，TFF可包括起始材料、經稀釋之起始材料、經濃縮之血小板組成物或其組合之滲濾（有時稱為「洗滌」）。在一些實施例中，滲濾可以包括用至少2（例如，至少3、4、5、6、7、8、9、10或更多）個滲濾體積進行洗滌。在一些實施例中，TFF可以包括緩衝液交換。在一些實施例中，可以在TFF使用緩衝液。緩衝液可為任何適當之緩衝液。在一些實施例中，緩衝液可為製劑（例如本文所述之任何製劑）。在一些實施例中，緩衝液可為用於稀釋之相同製劑。在一些實施例中，緩衝液可為與用於稀釋之製劑不同之製劑。在一些實施例中，緩衝液可以包括凍乾劑，包括緩衝劑、鹼、增重劑、可選之鹽及可選之至少一種有機溶劑，諸如選自由乙醇、乙酸、丙酮、乙腈、二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、二噁烷、甲醇、正丙醇、異丙醇、四氫呋喃(tetrahydrofuran, THF)、N-甲基吡咯啶酮、二甲基乙醯胺(dimethylacetamide；DMAC)或其組合組成之群組之有機溶劑。緩衝劑可為任何適當之緩衝劑。在一些實施例中，緩衝劑可為HEPES（(4-(2-羥乙基)-1-呱嗪乙磺酸）。鹼可為任何適當之鹼。在一些實施例中，鹼可為碳酸氫鈉。在一些實施例中，糖可為單糖。在一些實施例中，增重劑可為糖。在一些實施例中，糖可以包括蔗糖、麥芽糖、海藻糖、葡萄糖（例如，右旋糖）、甘露糖或木糖。在一些實施例中，單糖可為海藻糖。在一些實施例中，增重劑可以包括聚蔗糖。鹽可為任何適當之鹽。在一些實施例中，鹽可為選自由氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KCl)或其組合組成之群組。
在一些實施例中，在TFF中可以使用孔徑為約0.1 µm至約1 µm（例如，約0.1 µm至約1 µm、約0.1 µm至約0.5 µm、約0.2 µm至約0.45 µm、約0.45 µm至約1 µm、約0.1 µm、約0.2 µm、約0.45 µm、約0.65 µm或約1 µm）之膜。膜可以由任何適當之材料製成。在一些情況下，膜可為親水膜。在一些實施例中，膜可為疏水膜。在一些實施例中，在TFF中可使用標稱分子量截點(nominal molecular weight cutoff；NMWCO)為至少約100 kDa（例如，至少約200、300 kDa、500 kDa或1000 kDa）之膜。可以使用0.1 µm至1.0 µm範圍內之任何適當孔徑進行TFF，目的為降低組成物中微粒之含量並增加組成物中血小板衍生物之含量。熟習此項技術者可以理解孔徑之所需最佳化以保留血小板衍生物並允許微粒通過膜。在說明性實施例中，孔徑使得微粒通過膜，從而允許經TFF處理之組成物具有小於5%之微粒。在說明性實施例中，孔徑使得在該製程中保留最大量之血小板衍生物從而允許經TFF處理之組成物具有在100 x 10 3至20,000 x 10 3範圍內之血小板衍生物濃度。可以利用TFF製程中之孔徑來獲得血小板衍生物組成物中更高濃度之血小板衍生物，使得將血小板衍生物投予需要其之對象之人必須再水合/重構更少之小瓶，因此，在製備用於下遊程式（例如本文提供之治療方法）之此類血小板衍生物之製程中在時間及精力方面為高效的。TFF可以在任何適當之溫度下執行。在一些實施例中，TFF可以在約20℃至約37℃（例如，約20℃至約25℃、約20℃至約30℃、約25℃至約30℃、約30℃至約35℃、約30℃至約37℃、約25℃至約35℃或約25℃至約37℃）之溫度下執行。在一些實施例中，TFF可以以約100 ml/min至約800 ml/min（例如，約100至約200 ml/min、約100至約400 ml/min、約100至約600 ml/min、約200至約400 ml/min、約200至約600 ml/min、約200至約800 ml/min、約400至約600 ml/min、約400至約800 ml/min、約600至約800 ml/min、約100 ml/min、約200 ml/min、約300 ml/min、約400 ml/min、約500 ml/min、約600 ml/min、約700 ml/min、或約800 ml/min）之流速（例如，循環流速）進行。
在一些實施例中，可以進行TFF，直至達到特定終點，從而形成經TFF處理之組成物。終點可為任何適當之終點。在一些實施例中，終點可為殘留血漿之百分比（例如，小於或等於約50%、40%、30%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%或0.1%之殘留血漿）。在一些實施例中，終點可為280 nm處之相對吸光度(A280)。例如，終點可為A280（例如，使用0.5 cm之路徑長度），其小於或等於（例如，起始材料或經稀釋之起始材料之）TFF之前的A280（例如，使用0.5 cm之路徑長度）之約50%（例如，小於或等於約40%、30%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%或0.1%）。在一些實施例中，A280可以相對於測量7.5%血漿= 1.66 AU之系統。在一些實施例中，用於測量A280之儀器可如下組態：0.5 cm間隙流動池可附接至TFF系統之濾液管線。流動池可以連接至光度計，光纖電纜附接至流動池之每一側（光源電纜及光偵測器電纜）。可以在光纖電纜之每一側上使用矽玻璃透鏡製作流動池。除了水性介質中蛋白質之相對蛋白質濃度之外，水性介質中之蛋白質濃度亦可以用絕對項來測量。在一些實施例中，水性介質中之蛋白質濃度小於或等於15%、或14%、或13%、或12%、或11%、或10%、或9%、或8%、或7%、或6%、或5%、或4%、或3%、或2%、或1%、或0.1%、或0.01%。在一些示例性實施例中，蛋白質濃度小於3%或4%。在一些實施例中，在經TFF處理之組成物中，蛋白質濃度在0.01-15%、或0.1-15%、或1-15%、或1-10%、或0.01-10%、或3-12%、或5-10%之範圍內。在一些實施例中，終點可為絕對A280（例如，使用0.5 cm之路徑長度）。例如，終點可為小於或等於2.50 AU、2.40 AU、2.30 AU、2.20 AU、2.10 AU、2.0 AU、1.90 AU、1.80 AU或1.70 AU（例如，小於或等於1.66、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或0.1 AU）之A280（例如，使用0.5 cm之路徑長度）。在一些實施例中，基於包含血小板及水性介質之組成物之水性介質，可以確定殘留血漿之百分比、相對A280或A280。在一些實施例中，可基於與A280之已知相關性來確定殘留血漿之百分比。在一些實施例中，終點可為血小板濃度，因為TFF可以包括樣本之濃度或稀釋（例如，使用製劑）。例如，終點可為至少約2000 x 10 3個血小板/µL（例如，至少約2050 x 10 3、2100 x 10 3、2150 x 10 3、2200 x 10 3、2250 x 10 3、2300 x 10 3、2350 x 10 3、2400 x 10 3、2450 x 10 3或2500 x 10 3個血小板/µL）之血小板濃度。作為另一實例，終點可為約1000 x 10 3至約2500個血小板/µL（例如，約1000 x 10 3至約2000 x 10 3、約1500 x 10 3至約2300 x 10 3或約1700 x 10 3至約2300 x 10 3個血小板/µL）之血小板濃度。在一些實施例中，終點可為經TFF處理之組成物中之血小板濃度，為至少100 x 10 3個血小板/µL、200 x 10 3個血小板/µL、400 x 10 3個血小板/µL、1000 x 10 3個血小板/µL、1250 x 10 3個血小板/µL、1500 x 10 3個血小板/µL、1750 x 10 3個血小板/µL、2000 x 10 3個血小板/µL、2250 x 10 3個血小板/µL、2500 x 10 3個血小板/µL、2750 x 10 3個血小板/µL、3000 x 10 3個血小板/µL、3250 x 10 3個血小板/µL、3500 x 10 3個血小板/µL、3750 x 10 3個血小板/µL、4000 x 10 3個血小板/µL、4250 x 10 3個血小板/µL、4500 x 10 3個血小板/µL、4750 x 10 3個血小板/µL、5000 x 10 3個血小板/µL、5250 x 10 3個血小板/µL、5500 x 10 3個血小板/µL、5750 x 10 3個血小板/µL、6000 x 10 3個血小板/µL、7000 x 10 3個血小板/µL、8000 x 10 3個血小板/µL、9000 x 10 3個血小板/µL、10,000 x 10 3個血小板/µL、11,000 x 10 3個血小板/µL、12,000 x 10 3個血小板/µL、13,000 x 10 3個血小板/µL、14,000 x 10 3個血小板/µL、15,000 x 10 3個血小板/µL、16,000 x 10 3個血小板/µL、17,000 x 10 3個血小板/µL、18,000 x 10 3個血小板/µL、19,000 x 10 3個血小板/µL、20,000 x 10 3個血小板/µL。在一些實施例中，經TFF處理之組成物中之血小板或血小板衍生物在100 x 10 3– 20,000 x 10 3個血小板/µL、或1000 x 10 3– 20,000 x 10 3個血小板/µL、或1000 x 10 3– 10,000 x 10 3個血小板/µL、或500 x 10 3– 5,000 x 10 3個血小板/µL、或1000 x 10 3– 5,000 x 10 3個血小板/µL、或2000 x 10 3– 8,000 x 10 3個血小板/µL、或10,000 x 10 3– 20,000 x 10 3個血小板/µL、或15,000 x 10 3– 20,000 x 10 3個血小板/µL之範圍內。
在一些實施例中，終點可包括多於一個標準（例如，殘餘血漿之百分比及血小板濃度、相對A280及血小板濃度、或絕對A280及血小板濃度）。
一般，隨後將經TFF處理之組成物凍乾，可選地伴有熱處理步驟，以形成最終血液製品（例如，血小板、冷凍保存之血小板、FDPD）。但是，在一些情況下，經TFF處理之組成物可被視為最終血液製品。
在一些實施例中，血液製品可以使用血液製品（例如，未處理之血液製品（例如，供體單採材料（例如，彙集之供體單採材料））或部分處理之血液製品（例如，已經歷TFF之血液製品））之離心來製備。在一些實施例中，血液製品可以在不離心血液製品（例如，未處理之血液製品（例如，供體單採材料），或部分處理之血液製品（例如，已經歷TFF之血液製品））之情況下製備。離心可以包括任何適當之步驟。在一些實施例中，離心可以包括緩慢加速、緩慢減速或其組合。在一些實施例中，離心可以包括以約1400 x g至約1550 x g（例如，約1400至約1450 x g、約1450至約1500 x g或1500至約1550 x g、約1400 x g、約1410 x g、約1430 x g、約1450 x g、約1470 x g、約1490 x g、約1500 x g、約1510 x g、約1530 x g或約1550 x g）進行離心。在一些實施例中，離心之持續時間可為約10 min至約30 min（例如，約10至約20 min、約20至約30 min、約10 min、約20 min或約30 min）。
在一些實施例中，可以使用TFF及離心二者（例如，TFF後進行離心或離心後進行TFF）製備最終血液製品。
本文亦提供了藉由本文所述之任何方法製備之組成物。
在一些實施例中，如本文所述之組成物可以在處理過程中在多個點進行分析。在一些實施例中，可以分析起始材料（例如，供體單採材料（例如，彙集之供體單採材料））之抗體含量（例如，HLA或HNA抗體含量）。在一些實施例中，可以分析起始材料（例如供體單採材料（例如，彙集之供體單採材料））之蛋白質濃度（例如，藉由280 nm處之吸光度（例如，使用0.5 cm之路徑長度））。在一些實施例中，可以分析處理中間步驟中（例如，當蛋白質濃度降低至小於或等於未處理血液製品之蛋白質濃度之75%（例如，小於或等於70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更低）時）之組成物之抗體含量（例如，HLA或HNA抗體含量）。在一些實施例中，相較於起始材料之抗體含量，處理之中間步驟中之血液製品之抗體含量（例如，HLA或HNA抗體含量）可減少至少5%（例如，減少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多）。在一些實施例中，可以分析最終血液製品（例如，（例如，血小板，冷凍保存之血小板、FDPD）之抗體含量（例如，HLA或HNA抗體含量）。在本文所述之一些實施例中，最終血液製品可為包括血小板及水性介質之組成物。在一些實施例中，相較於起始材料之抗體含量，最終血液製品（例如，（例如，血小板，冷凍保存之血小板、FDPD之抗體含量（例如，HLA或HNA抗體含量）可減少至少5%（例如，減少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多）。在一些實施例中，最終血液製品可以沒有可偵測水平之選自由HLA I類抗體、HLA II類抗體及HNA抗體組成之群組之抗體。在一些實施例中，本文所述組成物之水性介質可如本文所述進行分析。
在一些實施例中，在用培養劑及/或凍乾劑培養之前分離血小板。在一些實施例中，培養劑為或包含本文中更詳細揭露之凍乾劑。在一些實施例中，方法進一步包含藉由使用離心來分離血小板。在一些實施例中，離心發生在約1000 × g至約2000 × g的相對離心力(RCF)。在一些實施例中，離心發生在約1300 × g至約1800 × g的相對離心力(RCF)。在一些實施例中，離心發生在約1500 × g的相對離心力(RCF)。在一些實施例中，離心進行約1分鐘至約60分鐘。在一些實施例中，離心進行約10分鐘至約30分鐘。在一些實施例中，離心進行約30分鐘。
培養劑可以包括任何合適的組分。在一些實施例中，培養劑可以包含液體介質。在一些實施例中，培養劑可以包含一或多種鹽，該鹽選自磷酸鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及可以在血液或血液製品中發現的、或已知可用於乾燥血小板的任何其它鹽，或此等中的兩或更多種的任何組合。
在一些實施例中，培養劑包含一或多種鹽，諸如磷酸鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及可以在血液或血液製品中發現的任何其它鹽。示例性的鹽包括氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KCl)及其組合。在一些實施例中，培養劑包括約0.5 mM至約100 mM的一或多種鹽。在一些實施例中，培養劑包括約0.5 mM至約100 mM（例如，約0.5 mM至約2 mM、約2 mM至約90 mM、約2 mM至約6 mM、約50 mM至約100 mM、約60 mM至約90 mM、約70 mM至約85 mM）約的一或多種鹽。在一些實施例中，培養劑包括約5 mM、約60 mM、約65 mM、約70 mM、約75 mM或約80 mM的一或多種鹽。在一些實施例中，培養劑包含濃度為約0.5 mM至約2 mM的一或多種選自鈣鹽、鎂鹽及兩者的組合的鹽。
較佳地，此等鹽以與在全血中發現的量大致相同的量存在於包含血小板或血小板衍生物諸如凍乾的血小板的組成物中。
在一些實施例中，培養劑進一步包含載體蛋白。在一些實施例中，載體蛋白包含人血清白蛋白、牛血清白蛋白或其組合。在一些實施例中，載體蛋白以約0.05%至約1.0% (w/v)的量存在。
培養劑可以為對血小板無毒的任何緩衝液，並且在本文提供的製程期間溶液將暴露的溫度下為溶液提供足夠的緩衝能力。因此，緩衝液可以包含任何市售的已知生物相容性緩衝液，例如磷酸鹽緩衝液，諸如磷酸鹽緩衝鹽水(phosphate buffered saline；PBS)，碳酸氫鹽/碳酸緩衝液，諸如碳酸氫鈉緩衝液，N-2-羥乙基呱嗪-N'-2-乙磺酸(N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2- ethanesulfonic acid；HEPES)，及基於tris之緩衝液，諸如tris緩衝鹽水(tris-buffered saline；TBS)。同樣，它可以包含下列緩衝液中的一或多種：丙烷-1,2,3-三羧酸（丙三羧酸）；苯五羧酸；馬來酸；2,2-二甲基琥珀酸；EDTA；3,3-二甲基戊二酸；雙(2-羥乙基)亞胺基-三(羥甲基)-甲烷(bis(2-hydroxyethyl)imino­ tris(hydroxymethyl)-methane, BIS-TRIS)；苯六羧酸（苯六酸）；N-(2-乙醯胺基)亞胺基-二乙酸(N-(2- acetamido)imino-diacetic acid；ADA)；丁烷-1,2,3,4-四羧酸；焦磷酸；1,1-環戊烷二乙酸（3,3-四亞甲基-戊二酸）；呱嗪-1,4-雙-(2-乙磺酸) (piperazine-1,4-bis-(2-ethanesulfonic acid), PIPES)；N-(2-乙醯胺基)-2-胺基乙烷磺酸(N-(2-acetamido )-2- amnoethanesulfonic acid；ACES)；1,1-環己烷二乙酸；3,6-橋亞甲基-1,2,3,6-四氫鄰苯二甲酸(3,6-endomethylene-1,2,3,6-tetrahydrophthalic acid, EMTA；ENDCA)；咪唑；2-(胺乙基)三甲基氯化銨(CHOLAMINE)；N,N-雙(2-羥乙基)-2-胺基乙磺酸(N,N-bis(2- hydroxyethyl)-2-aminoethanesulfonic acid；BES)；2-甲基丙烷-1,2,3-三羧酸(β-甲基三丙羧酸)；2-(N-嗎啉代)丙烷-亞磺酸(2-(N-morpholino)propane-sulfonic acid；MOPS)；磷酸；及N-三(羥甲基)甲基-2-胺基乙烷磺酸(N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-amminoethane sulfonic acid, TES)。在一些實施例中，培養劑包括一或多種緩衝液，例如N-2-羥乙基呱嗪-N'-2-乙烷磺酸(HEPES)或碳酸氫鈉(NaHCO 3)。在一些實施例中，培養劑包括約5至約100 mM的一或多種緩衝液。在一些實施例中，培養劑包括約5至約50 mM（例如，約5 mM至約40 mM、約8 mM至約30 mM、約10 mM至約25 mM）約的一或多種緩衝液。在一些實施例中，培養劑包括約10 mM、約20 mM、約25 mM或約30 mM的一或多種緩衝液。
在一些實施例中，培養劑包括一或多種糖，諸如單糖及二糖，包括蔗糖、麥芽糖、海藻糖、葡萄糖、甘露糖、右旋糖及木糖。在一些實施例中，糖為單糖。在一些實施例中，糖為二糖。在一些實施例中，糖包含單糖、二糖或其組合。在一些實施例中，糖為非還原二糖。在一些實施例中，糖包含蔗糖、麥芽糖、海藻糖、葡萄糖（例如，右旋糖）、甘露糖或木糖。在一些實施例中，糖包含海藻糖。在一些實施例中，培養劑包含澱粉。在一些實施例中，培養劑包括聚蔗糖、及蔗糖及表氯醇的聚合物。在一些實施例中，培養劑包括約10 mM至約1,000 mM的一或多種糖。在一些實施例中，培養劑包括約50至約500 mM的一或多種糖。在實施例中，一或多種糖以10 mM 10至500 mM的量存在。在一些實施例中，一或多種糖以50 mM至200 mM的量存在。在實施例中，一或多種糖以100 mM至150 mM的量存在。在一些實施例中，一或多種糖為凍乾劑；例如，在一些實施例中，凍乾劑包含海藻糖、多糖或其組合。
在一些實施例中，包含血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）的組成物可以包含水或鹽水溶液中的一或多種。在一些實施例中，包含血小板或血小板衍生物諸如凍乾的血小板的組成物可以包含DMSO。
在一些實施例中，培養劑包含有機溶劑，諸如醇（例如乙醇）。在這種培養劑中，溶劑的量可以在0.1%至5.0% (v/v)的範圍內。在一些實施例中，有機溶劑可以在約0.1% (v/v)至約5.0% (v/v)，諸如約0.3% (v/v)至約3.0% (v/v)、或約0.5% (v/v)至約2% (v/v)的範圍內。
在一些實施例中，合適的有機溶劑包括但不限於醇、酯、酮、醚、鹵化溶劑、烴、腈、二醇、烷基硝酸鹽、水或其混合物。在一些實施例中，合適的有機溶劑包括但不限於甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、乙酸、丙酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、四氫呋喃、異丙醚(IPE)、叔丁基甲基醚、二噁烷（例如，1,4-二噁烷）、乙腈、丙腈、二氯甲烷、氯仿、甲苯、苯甲醚、環己烷、己烷、庚烷、乙二醇、硝基甲烷、二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、N-甲基吡咯烷酮、二甲基乙醯胺及其組合。在一些實施例中，有機溶劑選自由乙醇、乙酸、丙酮、乙腈、二甲基甲醯胺、二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide；DMSO)、二噁烷、甲醇、正丙醇、異丙醇、四氫呋喃(THF)、N-甲基吡咯烷酮、二甲基乙醯胺(DMAC)或其組合組成的群組。在一些實施例中，有機溶劑包含乙醇、DMSO或其組合。有機溶劑諸如乙醇的存在可以有益於血小板、血小板衍生物或FDPD（例如，凍乾的血小板衍生物）的加工。
在一些實施例中，在水性介質的存在下將培養劑培養到血小板中。在一些實施例中，在包含DMSO的培養基的存在下培養培養劑。
在一些實施例中，一或多種其它組分可以在血小板中培養。示例性的組分可以包括前列腺素E1或前列環素及或EDTA/EGTA，以防止在培養過程期間血小板的聚集及活化。
在表1-5中顯示了可以使用的培養劑組成物的非限制性實例。
[表1]   
緩衝液
組分 濃度（mM，除非另有說明）
NaCl 75.0
KCl 4.8
HEPES 9.5
NaHCO 3 12.0
右旋糖 3
海藻糖 100
乙醇（可選的） 1% (v/v)
[表2]   
緩衝液A
組分 濃度（mM，除非另有說明）
CaCl 2 1.8
MgCl 2 1.1
KCl 2.7
NaCl 137
NaH 2PO 4 0.4
HEPES 10
D-葡萄糖 5.6
pH 6.5
[表3]   
緩衝液B
組分 濃度（mM，除非另有說明）
緩衝劑及鹽 表4（下麵）
BSA 0.35%
右旋糖 5
pH 7.4
[表3. 當培養血小板時，可以使用緩衝液B，例如用於流式細胞術。此類培養可以在室溫下在黑暗中進行。白蛋白係緩衝液B的可選組分。] [表4]
緩衝液B中HEPES的濃度及鹽的濃度
組分 濃度（mM，除非另有說明）
HEPES 25
NaCl 119
KCl 5
CaCl 2MgCl 2葡萄糖 2 2 6 g/l
表4係另一種示例性的培養劑。使用NaOH可以將pH調節至7.4。白蛋白係緩衝液B的可選組分。
[表5]
Tyrode的HEPES緩衝液（加上PGE1）
組分 濃度（mM）
CaCl 2 1.8
MgCl 2 1.1
KCl 2.7
NaCl 137
NaH 2PO 4 0.4
HEPES 10
D-葡萄糖 5.6
pH 6.5
前列腺素E1 (PGE1) 1 µg/ml
表5係另一種示例性的培養劑。
在一些實施例中，血小板（例如，單採血小板、從全血分離的血小板、彙集的血小板或其組合）與培養劑在或在15-45℃或約37℃的不同溫度下培養不同的持續時間。
在一些實施例中，血小板（例如，單採血小板、從全血分離的血小板、彙集的血小板或其組合）在包含濃度為10,000個血小板/μL至10,000,000個血小板/μL，諸如50,000個血小板/μL至2,000,000個血小板/μL，諸如100,000個血小板/μL至500,000個血小板/μL，諸如150,000個血小板/μL至300,000個血小板/μL，諸如200,000個血小板/μL的液體介質的培養劑及/或凍乾劑或者為或包含凍乾劑之培養劑中形成懸浮液。
血小板（例如，單採血小板、從全血分離的血小板、彙集的血小板或其組合）可以與例如為或包含凍乾劑之培養劑一起培養不同的持續時間，諸如例如至少約5分鐘（分鐘）（例如，至少約20分鐘、約30分鐘、約1小時（小時）、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約7小時、約8小時、約9小時、約10小時、約12小時、約16小時、約20小時、約24小時、約30小時、約36小時、約42小時、約48小時或至少約48小時。在一些實施例中，血小板可以與培養劑一起培養不超過約48小時（例如，不超過約20分鐘、約30分鐘、約1小時（小時）、約2小時、約3小時、約4小時、約5小時、約6小時、約7小時、約8小時、約9小時、約10小時、約12小時、約16小時、約20小時、約24小時、約30小時、約36小時或不超過約42小時）。在一些實施例中，血小板可以與培養劑一起培養約10分鐘至約48小時（例如，約20分鐘至約36小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約20小時、約2小時至約16小時、約10分鐘至約24小時、約20分鐘至約12小時、約30分鐘至約10小時或約1小時至約6小時。在一些實施例中，血小板、血小板衍生物或FDPD與培養劑一起培養5分鐘至48小時，諸如10分鐘至24小時，諸如20分鐘至12小時，諸如30分鐘至6小時，諸如1小時分鐘至3小時，諸如約2小時的時間段。
在一些實施例中，將血小板（例如，單採血小板、從全血中分離的血小板、彙集的血小板或其組合）與培養劑在不同的溫度下培養。在實施例中，培養在37℃下進行。在某些實施例中，培養在4℃至45℃，諸如15℃至42℃下進行。例如，在實施例中，培養在35℃至40℃（例如37℃）下進行110至130（例如120）分鐘，並持續長達24-48小時。在一些實施例中，血小板與培養劑在如本文所揭露之不同持續時間內並且在15-45℃或約37℃的溫度下培養。
在一些實施例中，血小板（例如，單採血小板、從全血分離的血小板、彙集的血小板或其組合）載入有一或多種活性劑。在一些實施例中，血小板可以載入有抗纖維蛋白溶解劑。抗纖維蛋白溶解劑的非限制性實例包括ε-胺基己酸(ε-aminocaproic acid；EACA)、胺甲環酸、抑肽酶、胺基甲基苯甲酸及纖維蛋白原。
使血小板（例如，單採血小板、從全血分離的血小板、彙集的血小板或其組合）載入有活性劑（例如，抗纖維蛋白溶解劑）可以藉由任何合適之方法進行。參見例如PCT公布號WO2020113090A1、WO2020113101A1、WO2020113035A1及WO2020112963A1。通常，載入包括使血小板與抗纖維蛋白溶解劑接觸。在一些實施例中，可以藉由將活性劑與培養劑結合來進行載入。在一些實施例中，載入可以在與培養步驟分離的步驟中進行。例如，可以在培養步驟之前的步驟中進行載入。在一些這樣的實施例中，活性劑可以作為本文所述的任何培養劑中的溶液或懸浮液提供給血小板，溶液或懸浮液可以與在培養步驟中使用的培養劑相同或者可以不與在培養步驟中使用的培養劑相同。在一些實施例中，載入步驟可以在培養步驟期間進行。在一些這樣的實施例中，可以在培養期間）將活性劑加入到培養劑中（例如，作為固體或在溶液或懸浮液中）。在一些實施例中，載入步驟可以在培養步驟之後的步驟中進行。在一些這樣的實施例中，作為本文所述的任何培養劑中的溶液或懸浮液提供給血小板，溶液或懸浮液可以與在培養步驟中使用的培養劑相同或者可以不與在培養步驟中使用的培養劑相同。
活性劑可以以任何合適的濃度施加到血小板上。在一些實施例中，活性劑可以以約1 μM至約100 mM（例如，約1 μM至約10 μm、約1 μM至約50 μM、約1 μM至約100 μM、約1 μM至約500 μM、約1 μM至約1 mM、約1 μM至約10 mM、約1 μM至約25 mM、約1 μM至約50 mM、約1 μM至約75 mM、約10 μM至約100 mM、約50 μM至約100 mM、約100 μM至約100 mM、約500 μM至約100 mM、約1 mM至約100 mM、約10 mM至約100 mM、約25 mM至約100 mM、約50 mM至約100 mM、約75 mM至約100 mM、約10 μM至約100 mM、約200 μM至約1 mM、約800 μM至約900 μM、約400 μM至約800 μM、約500 μM至約700 μM、約600 μM、約5 mM至約85 mM、約20 mM至約90 mM、約25 mM至約75 mM、約30 mM至約90 mM、約35 mM至約65 mM、約40 mM至約60 mM、約50 mM至約60 mM、約40 mM至約70 mM、約45 mM至約55 mM或約50 mM）的濃度施加至血小板（例如，作為培養劑或另一種溶液或懸浮液的一部分）。
在一些實施例中，該方法進一步包含乾燥血小板。在一些實施例中，乾燥步驟包含凍乾血小板。在一些實施例中，乾燥步驟包含冷凍乾燥血小板。在一些實施例中，該方法進一步包含將從乾燥步驟獲得的血小板再水合。
在一些實施例中，在用於療法或功能性測定之前，將血小板冷儲存、低溫冷藏保存或凍乾（例如，以產生FDPD）。
根據本揭露，可以使用任何已知的用於乾燥血小板的技術，只要該技術可以獲得小於5%的最終殘餘水分含量。較佳地，該技術獲得小於2%，諸如1%、0.5%或0.1%的最終殘餘水分含量。合適技術的非限制性實例為冷凍乾燥（凍乾）及噴霧乾燥。合適的凍乾方法在表A中呈現。另外的示例性凍乾方法可以在美國專利第7,811,558號、美國專利第8,486,617號及美國專利第8,097,403中找到。一種示例性的噴霧乾燥方法包括：將作為乾燥氣體的氮氣與根據本揭露的培養劑結合，然後將混合物引入到具有雙流體噴嘴構造的來自GEA Processing Engineering, Inc. (Columbia MD, USA)的GEA移動式小型噴霧乾燥器中，在150℃至190℃的範圍內的入口溫度下，在65℃至100℃的範圍內的出口溫度下，在0.5至2.0巴的範圍內的原子速率下，在5至13 kg/小時的範圍內的原子速率下，在60至100 kg/小時的範圍內的氮用量下及10至35分鐘的執行時間下噴霧乾燥混合物。噴霧乾燥的最後一步係優先地收集乾燥的混合物。在一些實施例中，乾燥的組成物在-20℃或更低至90℃或更高的範圍內的溫度下在至少六個月內係穩定的。
[表A] 示例性的凍乾方案
   步驟 溫度設置 類型 持續時間 壓力設置
冷凍步驟 F1 F2 -50ºC -50ºC 斜升 保持 變化 3小時 N/A N/A
真空下拉 F3 -50° 保持 變化 N/A
初級乾燥 P1 -40° 保持 1.5小時 0 mT
P2    -35° 斜升 2小時 0 mT
P3 -25° 斜升 2小時 0 mT
P4 -17℃ 斜升 2小時 0 mT
P5 0℃ 斜升 1.5小時 0 mT
P6 27℃ 斜升 1.5小時 0 mT
P7 27℃ 保持 16小時 0 mT
二次乾燥 Sl 27℃ 保持 ＞ 8小時 0 mT
在一些實施例中，乾燥如本文所揭露獲得的血小板以產生用於本文中之任何態樣或實施例中之血小板衍生物的步驟，諸如冷凍乾燥如本文所揭露獲得的血小板以產生用於本文中之任何態樣或實施例中之FDPD的步驟，包含將血小板與凍乾劑（例如，非還原性二糖）一起培養。因此，在一些實施例中，用於製備血小板之方法進一步包含將血小板與凍乾劑一起培養。在一些實施例中，凍乾劑為糖。在一些實施例中，糖為二糖，諸如非還原性二糖。
在一些實施例中，將血小板與凍乾劑一起培養足夠量的時間，並在合適的溫度下將血小板與凍乾劑一起培養。在一些實施例中，培養劑為凍乾劑。合適的凍乾劑的非限制性實例為糖，諸如單糖及二糖，包括蔗糖、麥芽糖、海藻糖、葡萄糖（例如，右旋糖）、甘露糖及木糖。在一些實施例中，凍乾劑的非限制性實例包括血清白蛋白、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone；PVP)、澱粉及羥乙基澱粉(hydroxyethyl starch；HES)。在一些實施例中，示例性的凍乾劑可以包括高分子量聚合物。「高分子量」意指平均分子量為約或高於70 kDa且高達1,000,000 kDa的聚合物。非限制性實例為蔗糖及表氯醇的聚合物（例如，聚蔗糖）。在一些實施例中，凍乾劑為聚蔗糖。儘管可以使用任何量的高分子量聚合物作為凍乾劑，但較佳的是使用達到約3%至10% (w/v)諸如3%至7%例如6%的最終濃度的量。
用於本文所揭露之組成物的示例性的糖為海藻糖。無論糖的特性如何，它都可以以任何合適的量存在於組成物中，該組成物經乾燥形成血小板衍生物或經冷凍乾燥形成FDPD，且存在於此類乾燥的血小板衍生物與FDPD之再水合組成物中。例如，它可以以1 mM至1 M的量存在。在實施例中，它以10 mM 10至500 mM的量存在。在一些實施例中，它以20 mM至200 mM的量存在。在實施例中，它以40 mM至100 mM的量存在。在各種實施例中，糖以在上述範圍內的不同特定濃度存在，並且所屬技術領域中具有通常知識者可以立即理解各種濃度，而不需要在本文中具體列舉每一種濃度。在組成物中存在多於一種糖的情況下，每種糖可以以根據上述範圍及特定濃度的量存在。
在本文提供的用於製備本文提供的組成物的製程中，加入凍乾劑可以為乾燥前的最後一步。然而，在一些實施例中，凍乾劑與組成物的其它組分諸如鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑或其它組分同時或在它們之前加入。在一些實施例中，將凍乾劑加入到培養劑中，充分地混合以形成乾燥溶液，分配到乾燥容器（例如，玻璃或塑膠血清小瓶、凍乾袋）中，並且經受允許乾燥溶液以形成乾燥的組成物的條件。
將血小板與冷凍保護劑一起培養的步驟可以包括將血小板培養一段適合載入的時間，只要該時間與溫度相結合，足以使冷凍保護劑與血小板接觸，並且較佳地，至少在一定程度上被摻入血小板中。在實施例中，培養進行約1分鐘至約180分鐘或更長。
將血小板與冷凍保護劑一起培養的步驟可以包括在一定溫度下培養血小板及冷凍保護劑，當結合所分配的時間量進行選擇時，該溫度適合於培養。通常，將組成物在高於冷凍的溫度下培養至少足夠的時間，以使冷凍保護劑與血小板接觸。在實施例中，培養在37℃下進行。在某些實施例中，培養在20℃至42℃下進行。例如，在實施例中，培養在35℃至40℃（例如，37℃）下進行110至130（例如，120）分鐘。
在各種實施例中，凍乾袋為氣體可滲透袋，該氣體可滲透袋經組態以在加工期間允許氣體通過袋的至少一部分或所有部分。氣體可滲透袋可以允許袋的內部的氣體與周圍環境中存在的大氣氣體交換。氣體可滲透袋可以為氣體可滲透的，諸如氧氣、氮氣、水、空氣、氫氣及二氧化碳，允許在本文提供的組成物中發生氣體交換。在一些實施例中，氣體可滲透袋通過允許二氧化碳透過其壁而允許去除存在於袋內部的一些二氧化碳。在一些實施例中，從袋中釋放二氧化碳可以有利於保持袋中包含的組成物的所需pH水平。
在一些實施例中，本文製程的容器係封閉或密封的氣體可滲透容器。在一些實施例中，容器為封閉或密封的且其一部分為氣體可滲透的容器。在一些實施例中，可以調節封閉的或密封的容器（例如，袋）的氣體可滲透部分的表面積相對於容器中包含的產品的體積（在下文中被稱為「SA/V比」）以改善本文提供的組成物的pH維持。例如，在一些實施例中，容器的SA/V比可以為至少約2.0 cm 2/mL（例如，至少約2.1 cm 2/mL、至少約2.2 cm 2/mL、至少約2.3 cm 2/mL、至少約2.4 cm 2/mL、至少約2.5 cm 2/mL、至少約2.6 cm 2/mL、至少約2.7 cm 2/mL、至少約2.8 cm 2/mL、至少約2.9 cm 2/mL、至少約3.0 cm 2/mL、至少約3.1 cm 2/mL、至少約3.2 cm 2/mL、至少約3.3 cm 2/mL、至少約3.4 cm 2/mL、至少約3.5 cm 2/mL、至少約3.6 cm 2/mL、至少約3.7 cm 2/mL、至少約3.8 cm 2/mL、至少約3.9 cm 2/mL、至少約4.0 cm 2/mL、至少約4.1 cm 2/mL、至少約4.2 cm 2/mL、至少約4.3 cm 2/mL、至少約4.4 cm 2/mL、至少約4.5 cm 2/mL、至少約4.6 cm 2/mL、至少約4.7 cm 2/mL、至少約4.8 cm 2/mL、至少約4.9 cm 2/mL或至少約5.0 cm 2/mL。在一些實施例中，容器的SA/V比可以為至多約10.0 cm 2/mL（例如，至多約9.9 cm 2/mL、至多約9.8 cm 2/mL、至多約9.7 cm 2/mL、至多約9.6 cm 2/mL、至多約9.5 cm 2/mL、至多約9.4 cm 2/mL、至多約9.3 cm 2/mL、至多約9.2 cm 2/mL、至多約9.1 cm 2/mL、至多約9.0 cm 2/mL、至多約8.9 cm 2/mL、至多約8.8 cm 2/mL、至多約8.7 cm 2/mL、至多約8.6, cm 2/mL至多約8.5 cm 2/mL、至多約8.4 cm 2/mL、至多約8.3 cm 2/mL、至多約8.2 cm 2/mL、至多約8.1 cm 2/mL、至多約8.0 cm 2/mL、至多約7.9 cm 2/mL、至多約7.8 cm 2/mL、至多約7.7 cm 2/mL、至多約7.6 cm 2/mL、至多約7.5 cm 2/mL、至多約7.4 cm 2/mL、至多約7.3 cm 2/mL、至多約7.2 cm 2/mL、至多約7.1 cm 2/mL、至多約6.9 cm 2/mL、至多約6.8 cm 2/mL、至多約6.7 cm 2/mL、至多約6.6 cm 2/mL、至多約6.5 cm 2/mL、至多約6.4 cm 2/mL、至多約6.3 cm 2/mL、至多約6.2 cm 2/mL、至多約6.1 cm 2/mL、至多約6.0 cm 2/mL、至多約5.9 cm 2/mL、至多約5.8 cm 2/mL、至多約5.7 cm 2/mL、至多約5.6 cm 2/mL、至多約5.5 cm 2/mL、至多約5.4 cm 2/mL、至多約5.3 cm 2/mL、至多約5.2 cm 2/mL、至多約5.1 cm 2/mL、至多約5.0 cm 2/mL、至多約4.9 cm 2/mL、至多約4.8 cm 2/mL、至多約4.7 cm 2/mL、至多約4.6 cm 2/mL、至多約4.5 cm 2/mL、至多約4.4 cm 2/mL、至多約4.3 cm 2/mL、至多約4.2 cm 2/mL、至多約4.1 cm 2/mL、或至多約4.0 cm 2/mL。在一些實施例中，容器的SA/V比可以在約2.0至約10.0 cm 2/mL（例如，約2.1 cm 2/mL至約9.9 cm 2/mL、約2.2 cm 2/mL至約9.8 cm 2/mL、約2.3 cm 2/mL至約9.7 cm 2/mL、約2.4 cm 2/mL至約9.6 cm 2/mL、約2.5 cm 2/mL至約9.5 cm 2/mL、約2.6 cm 2/mL至約9.4 cm 2/mL、約2.7 cm 2/mL至約9.3 cm 2/mL、約2.8 cm 2/mL至約9.2 cm 2/mL、約2.9 cm 2/mL至約9.1 cm 2/mL、約3.0 cm 2/mL至約9.0 cm 2/mL、約3.1 cm 2/mL至約8.9 cm 2/mL、約3.2 cm 2/mL至約8.8 cm 2/mL、約3.3 cm 2/mL至約8.7 cm 2/mL、約3.4 cm 2/mL至約8.6 cm 2/mL、約3.5 cm 2/mL至約8.5 cm 2/mL、約3.6 cm 2/mL至約8.4 cm 2/mL、約3.7 cm 2/mL至約8.3 cm 2/mL、約3.8 cm 2/mL至約8.2 cm 2/mL、約3.9 cm 2/mL至約8.1 cm 2/mL、約4.0 cm 2/mL至約8.0 cm 2/mL、約4.1 cm 2/mL至約7.9 cm 2/mL、約4.2 cm 2/mL至約7.8 cm 2/mL、約4.3 cm 2/mL至約7.7 cm 2/mL、約4.4 cm 2/mL至約7.6 cm 2/mL、約4.5 cm 2/mL至約7.5 cm 2/mL、約4.6 cm 2/mL至約7.4 cm 2/mL、約4.7 cm 2/mL至約7.3 cm 2/mL、約4.8 cm 2/mL至約7.2 cm 2/mL、約4.9 cm 2/mL至約7.1 cm 2/mL、約5.0 cm 2/mL至約6.9 cm 2/mL、約5.1 cm 2/mL至約6.8 cm 2/mL、約5.2 cm 2/mL至約6.7 cm 2/mL、約5.3 cm 2/mL至約6.6 cm 2/mL、約5.4 cm 2/mL至約6.5 cm 2/mL、約5.5 cm 2/mL至約6.4 cm 2/mL、約5.6 cm 2/mL至約6.3 cm 2/mL、約5.7 cm 2/mL至約6.2 cm 2/mL或約5.8 cm 2/mL至約6.1 cm 2/mL的範圍內。
氣體可滲透的密閉容器（例如，袋）或其部分可以由一或多種各種氣體可滲透材料製成。在一些實施例中，氣體可滲透袋可以由一或多種聚合物製成，該聚合物包括含氟聚合物（諸如聚四氟乙烯(polytetrafluoroethylene；PTFE)及全氟烷氧基(perfluoroalkoxy；PFA)聚合物）、聚烯烴（諸如低密度聚乙烯(low-density polyethylene；LDPE)、高密度聚乙烯(high-density polyethylene；HDPE)）、氟化乙烯丙烯(fluorinated ethylene propylene；FEP)、聚苯乙烯、聚氯乙烯(polyvinylchloride；PVC)、矽酮及其任何組合。
在一些實施例中，乾燥的血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可以經受熱處理。加熱可以在高於約25℃（例如，大於約40℃、50℃、60℃、70℃、80℃或更高）的溫度下進行。在一些實施例中，加熱在約70℃與約85℃之間（例如，在約75℃與約85℃之間，或在約75℃或80℃下）進行。可以結合要進行加熱的時間長度來選擇加熱溫度。儘管可以使用任何合適的時間，但一般將凍乾的血小板加熱至少1小時，但不超過36小時。因此，在實施例中，加熱進行至少2小時、至少6小時、至少12小時、至少18小時、至少20小時、至少24小時、或至少30小時。例如，凍乾的血小板可以加熱18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時、25小時、26小時、27小時、28小時、29小時、或30小時。非限制性的示例性組合包括：在高於30℃的溫度下加熱乾燥的血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）至少30分鐘；在高於50℃的溫度下加熱乾燥的血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）至少10小時；在高於75℃的溫度下加熱乾燥的血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）至少18小時；及在80℃下加熱乾燥的血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）24小時。在一些實施例中，加熱可以在密封的容器諸如有蓋的小瓶中進行。在一些實施例中，密封的容器在加熱之前經受真空。已經發現熱處理步驟，特別係在存在諸如白蛋白或聚蔗糖的冷凍保護劑的情況下，可改善冷凍乾燥的血小板的穩定性及保存期。實際上，相較於沒有熱處理步驟的彼等冷凍保護劑，使用血清白蛋白或聚蔗糖的特定組合及凍乾後熱處理步驟已經獲得了有利的結果。冷凍保護劑（例如，蔗糖）可以以任何合適的量（例如，以血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）的品質或體積計，約3%至約10%）存在。
在一些實施例中，如本文所揭露的藉由包含用培養劑培養的製程製備的血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）具有至少約等於培養前血小板的儲存穩定性的儲存穩定性。
在一些實施例中，該方法進一步包含在投予血小板或血小板衍生物（例如，與培養劑，例如，本文所述的培養劑）之前低溫冷藏保存血小板或血小板衍生物。
在一些實施例中，該方法進一步包含在投予血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）之前乾燥包含血小板或血小板衍生物（例如，與培養劑，例如本文所述的培養劑）的組成物。在一些實施例中，該方法可以進一步包含在乾燥步驟之後加熱組成物。在一些實施例中，該方法可以進一步包含在冷凍乾燥步驟或加熱步驟之後再水合組成物。
在一些實施例中，該方法進一步包含在投予血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）之前將包含血小板或血小板衍生物（例如，與培養劑，例如本文所述的培養劑）的組成物冷凍乾燥在一些實施例中，該方法可以進一步包含在冷凍乾燥步驟之後加熱組成物。在一些實施例中，該方法可以進一步包含在冷凍乾燥步驟或加熱步驟之後再水合組成物。
在一些實施例中，該方法進一步包含在投予血小板、血小板衍生物、或FDPD（例如，與培養劑，例如，本文所述的培養劑）之前冷儲存血小板、血小板衍生物、或FDPD。
儲存條件包括例如標準室溫儲存（例如，在約20至約30℃的範圍內的溫度下儲存）或冷儲存（例如，在約1至約10℃的範圍內的溫度下儲存）。在一些實施例中，該方法進一步包含在投予血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）之前，將包含血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）（例如，與培養劑，例如，本文所述的培養劑）的組成物低溫冷藏保存、冷凍乾燥、解凍、再水合及其組合。例如，在一些實施例中，該方法進一步包含在投予血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）之前乾燥（例如，冷凍乾燥）包含血小板或血小板衍生物（例如，與培養劑，例如本文所述的培養劑）的組成物（例如，以形成FDPD）。在一些實施例中，該方法可以進一步包含將從乾燥步驟獲得的組成物再水合。
在一些實施例中，本文提供了包含血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）、聚蔗糖、及海藻糖的組成物，其藉由以下製程製備：獲得新鮮的血小板，可選地在DMSO中培養血小板，藉由離心分離血小板，將血小板再懸浮在包含海藻糖及乙醇的培養劑中從而形成第一混合物，培養第一混合物，將聚蔗糖與第一混合物混合從而形成第二混合物，及凍乾第二混合物以形成包含血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）、聚蔗糖、及海藻糖的冷凍乾燥的組成物。
在一些實施例中，本文提供了一種製備包含血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）、聚蔗糖、及海藻糖的冷凍乾燥的血小板組成物之方法，該方法包含獲得新鮮的血小板，可選地在DMSO中培養血小板，藉由離心分離血小板，將血小板再懸浮在包含海藻糖及乙醇的培養劑中從而形成第一混合物，培養第一混合物，將聚蔗糖與第一混合物混合從而形成第二混合物，及凍乾第二混合物以形成包含血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）、聚蔗糖、及海藻糖的冷凍乾燥的組成物。
在一些實施例中，本文提供了一種用於製備冷凍乾燥的血小板的製程，該製程包含在至少一種糖的存在下在20℃至42℃的溫度下培養分離的血小板持續約10分鐘至約180分鐘，向血小板中添加至少一種冷凍保護劑，以及凍乾血小板，其中該製程可選地不包括在培養步驟與添加步驟之間分離血小板，並且可選地其中該製程不包括將血小板暴露於血小板活化抑制劑。冷凍保護劑可以為多糖（例如，聚蔗糖）。該製程可以進一步包括將凍乾的血小板在70℃至80℃的溫度下加熱8至24小時。向血小板中添加至少一種冷凍保護劑的步驟可以進一步包括將血小板暴露於乙醇。在至少一種糖的存在下培養分離的血小板的步驟可以包括在至少一種糖的存在下培養。在至少一種糖的存在下培養分離的血小板的步驟可以包括在至少一種糖的存在下培養。用於培養的條件可以包括培養約100分鐘至約150分鐘。用於培養的條件可以包括培養約110分鐘至約130分鐘。用於培養的條件可以包括培養約120分鐘。用於培養的條件可以包括在35℃至40℃下培養。用於培養的條件可以包括在37℃下培養。用於培養的條件可以包括在35℃至40℃下培養110分鐘至130分鐘。用於培養的條件可以包括在37℃下培養120分鐘。該至少一種糖可以為海藻糖、蔗糖、或海藻糖及蔗糖兩者。該至少一種糖可以為海藻糖。該至少一種糖可以為蔗糖。
在一些實施例中，本文提供了一種製備冷凍乾燥的血小板之方法，該方法包括提供血小板，將血小板懸浮在包括約100 mM海藻糖及約1% (v/v)乙醇的鹽緩衝液中以製備第一組成物，在約37℃下培養第一組成物約2小時，加入聚蔗糖（例如，聚蔗糖400）至約6% (w/v)的最終濃度以製備第二組成物，凍乾第二組成物以製備冷凍乾燥的血小板，以及在80℃下加熱冷凍乾燥的血小板持續24小時。
本文所揭露之特定實施例可以在申請專利範圍中使用「由……組成」或「基本上由……組成」的語言來進一步限制。
[示例性的實施例]
在該示例性實施例部分中提供本文提供並在本說明書中通篇中進一步討論之非限制性示例性態樣及實施例。為了簡潔及方便起見，本文所揭露之所有態樣及實施例，以及所揭露之態樣及實施例之所有可能組合未在本部分中列出。在本文之其他部分中提供了額外的實施例及態樣。此外，應當理解，所提供之實施例係用於許多態樣之特定實施例，並且可以與任何其他實施例組合，例如如在整個揭露內容中所討論的。鑒於本文之全部揭露內容，以下或本全部揭露內容中所述之任何單個實施例可與以下或本全部揭露內容中所述之任何態樣組合，其中其為可添加至態樣之額外要件，或因為其為針對態樣中已存在之要件之較窄要件。這種組合有時作為非限制性示例性組合提供，及/或在本詳細描述之其他部分中更具體地討論。
在一個態樣中，本文提供了一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之包含血小板或在說明性實施例中包含血小板衍生物且在進一步說明性實施例中包含FDPD之組成物，從而治療凝血病。在說明性實施例中，投予包含血小板衍生物之組成物使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中使得在對象中恢復正常止血。
在一個態樣中，本文提供了一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑、及可選地有機溶劑之培養劑一起培養，並且在說明性實施例中冷凍乾燥經培養之血小板以形成該組成物之製程來製備，其中該組成物包括血小板衍生物，並且在說明性實施例中包括FDPD，從而治療凝血病。在說明性實施例中，投予包含血小板衍生物之組成物使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中使得在對象中恢復正常止血。
在一個態樣中，本文提供了一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之包括血小板或在說明性實施例中包括血小板衍生物並且在進一步說明性實施例中包括FDPD之組成物，從而治療凝血病。在說明性實施例中，投予包含血小板衍生物之組成物使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中使得在對象中恢復正常止血。
在一個態樣中，本文提供了一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑、及可選地有機溶劑之培養劑一起培養，並且在說明性實施例中冷凍乾燥經培養之血小板以形成該組成物之製程來製備，其中該組成物包含血小板衍生物，並且在進一步說明性實施例中包含FDPD，從而治療凝血病。在說明性實施例中，投予包含血小板衍生物之組成物使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中使得在對象中恢復正常止血。
在一個態樣中，本文提供了一種使對象做好手術準備之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之包括血小板或在說明性實施例中包括血小板衍生物並且在進一步說明性實施例中包括FDPD之組成物。本文提供了此類FDPD之示例性實施例之各種性質，從而治療凝血病。在說明性實施例中，投予包含血小板衍生物之組成物使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中使得在對象中恢復正常止血。實現方式可以包括以下特徵中之一或多者。手術可為緊急手術。手術可為預約手術。
在一個態樣中，本文提供了一種使對象做好手術準備之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養，並且在說明性實施例中冷凍乾燥經培養之血小板以形成該組成物之製程來製備，其中該組成物包括血小板衍生物，並且在進一步說明性實施例中包括FDPD，從而治療凝血病。在說明性實施例中，投予包含血小板衍生物之組成物使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中使得在對象中恢復正常止血。本文提供了此類FDPD之示例性實施例之各種性質。實現方式可以包括以下特徵中之一或多者。手術可為緊急手術。手術可為預約手術。
在一個態樣中，本文提供了一種改善抗血小板劑在對象中之作用之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物血小板，或在說明性實施例中係血小板衍生物，並且在進一步說明性實施例中係FDPD，從而治療凝血病。在說明性實施例中，投予包含血小板衍生物之組成物使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中使得在對象中恢復正常止血。
在一個態樣，本文提供了一種改善抗血小板劑在對象中之作用之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中該組成物包括血小板衍生物，並且在進一步說明性實施例中包括FDPD，從而治療凝血病。在說明性實施例中，投予包含血小板衍生物之組成物使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中使得在對象中恢復正常止血。
在一個態樣中，本文提供了一種治療對象中之凝血病、或在對象中恢復止血、或降低正在投予或已經投予抗血小板劑之對象之出血可能性之方法，該方法包括：向需要其之對象投予有效量之包含血小板衍生物之組成物，從而治療凝血病。在說明性實施例中，血小板衍生物是凍乾的血小板衍生物(FDPD)。在進一步說明性實施例中，投予包含血小板衍生物之組成物使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中使得在對象中恢復正常止血。
在另一態樣中，本文提供了一種治療對象中之凝血病、或在對象中恢復止血、或降低對象之出血可能性之方法，其中該對象正在被投予或已經被投予抗血小板劑，該方法包含向需要其之對象投予有效量之包含FDPD之組成物，其中包含FDPD之組成物包含具有降低之聚集傾向之FDPD群體，使得該群體中不超過10%之FDPD在包含促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集，從而治療凝血病。在進一步說明性實施例中，投予包含FDPD之組成物使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中使得在對象中恢復正常止血。。
在另一態樣中，本文提供了一種預防或減輕對象中之凝血病之可能性之方法，該方法包含：(a)確定關於該對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用；及(b)向對象投予有效量之包含凍乾的血小板衍生物(FDPD)之組成物。在此種方法之一些實施例中，關於對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用，其原因包含無法鑑別對象。在該方法之一些實施例中，關於對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用，其原因包含對象之病史不可用。在進一步實施例中，關於對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用，其原因包含對象需要緊急治療。
在另一態樣中，本文提供了一種治療對象中之凝血病或降低對象之出血可能性或在對象中恢復止血之方法，其中該方法包含：向需要其之對象投予有效量之包含血小板衍生物，在說明性實施例中包含FDPD之組成物，其中在投予包含血小板衍生物之組成物之前，向對象投予抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑，從而治療凝血病。在進一步說明性實施例中，投予包含血小板衍生物之組成物使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中使得在對象中恢復正常止血。
在一些實施例中，例如其中向對象投予抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑之態樣，此種方法進一步包含在投予包含FDPD之組成物之前，確定向對象投予抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑。在一些實施例中，抗血小板劑係第一抗血小板劑，且第二藥劑係第二抗血小板劑。在一些實施例中，第一抗血小板劑及第二抗血小板劑各自係不同之抗血小板劑，其選自阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉、及沙格雷酯。在一些實施例中，第一抗血小板劑及第二抗血小板劑具有不同之作用機制。在一些實施例中，第一抗血小板劑及第二抗血小板劑各自係不同之抗血小板劑，其選自阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉及沙格雷酯。
在一些實施例中，例如其中向對象投予抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑之態樣，例如在投予包含血小板衍生物之組成物之前，停止投予第二藥劑。在此類態樣之其他實施例中，例如在投予包含血小板衍生物之組成物之後，繼續投予第二藥劑。
在本文提供之任何態樣之某些實施例中，該方法進一步包含在投予包含血小板衍生物之組成物之前，在投予前評價中確定對象具有一或多個凝血參數之異常值。在說明性實施例中，投予前評價係體外實驗室測試。
在本文提供之任何態樣之某些實施例中，抗血小板劑選自阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉、及沙格雷酯。在其他實施例中，抗血小板劑選自坎格雷洛、替卡格雷、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉、及沙格雷酯。
在本文提供之任何態樣之某些實施例中，FDPD包含（可偵測量之）由已投予或正在投予對象之抗血小板逆轉劑靶向之生物分子（例如，受體）。在一些實施例中，受體選自P2Y受體（例如，P2Y12受體）、醣蛋白IIb（即CD41）、醣蛋白IIIa (CD61)、醣蛋白IIb/IIIa錯合物、凝血脂素合酶或凝血脂素受體、PAR1、PAR4、VPVI、或膠原蛋白受體（例如，α2β1膠原蛋白受體）。在其他部分中，本文提供了靶向此等特定生物分子之抗血小板劑之實例。在某些實施例中，至少55%、60%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之血小板衍生物（在說明性實施例中，係FDPD）對於由投予對象之抗血小板劑靶向之及/或在對象血液中可偵測之生物分子係陽性的（即具有可偵測水平）。作為值得注意的非限制性實例，抗血小板劑抑制醣蛋白CDIIb/IIIa錯合物，並且至少55%、60%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之血小板衍生物（在說明性實施例中，係FDPD）係CD41陽性的（即包含可偵測CD41）及/或對於CDIIb/IIIa錯合物係陽性的。
在本文提供之任何態樣之某些實施例中，包含FDPD之組成物包含具有降低之聚集傾向之FDPD群體，使得該群體中不超過2%、3%、4%、5%、7.5%、10%、12.5%、15%、17.5%、20%、22.5%或25%之FDPD在包含促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集。在本文提供之任何態樣之某些實施例中，包括例如其中組成物包含FDPD之實施例包含降低的聚集傾向之FDPD群體，使得該群體中不超過10%之FDPD在包含促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集，FDPD具有至少1.2（例如，至少1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4或2.5）個凝血酶生成效價單位(TGPU)/10 6個顆粒之效價。例如，在一些情況下，血小板或血小板衍生物（例如，FDPD）可具有1.2至2.5 TPGU/10 6個顆粒（例如，1.2至2.0、1.3至1.5、1.5至2.25、1.5至2.0、1.5至1.75、1.75至2.5、2.0至2.5、或2.25至2.5 TPGU/10 6個顆粒）之效價。
在本文提供之任何態樣之某些實施例中，包括例如其中組成物包含FDPD之實施例包含具有降低之聚集傾向之FDPD群體，使得該群體中不超過10%之FDPD在包含促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集，該等FDPD具有超活化的血小板之一或多種特徵，其選自 A)血小板反應蛋白(TSP)在其表面上存在之水平大於在靜息血小板表面上之水平； B)馮威里氏因子(vWF)在其表面上存在之水平大於在靜息血小板表面上之水平；及 C)相較於促效劑不存在下血小板活化標記物之表現，在促效劑存在下無法增加血小板活化標記物之表現。
在本文提供之其中包含FDPD之組成物包含了包含CD 41陽性血小板衍生物之FDPD群體之任何態樣之某些實施例中，包括其中該群體包含FDPD之非限制性實施例具有降低之聚集傾向，使得該群體中不超過10%之FDPD在包含促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集，相較於促效劑不存在下血小板活化標記物之表現，FDPD在促效劑存在下無法增加血小板活化標記物之表現。在此類方法之一些實施例中，FDPD具有至少1.5個凝血酶生成效價單位(TGPU)/10 6個血小板衍生物之效價。在此類方法之一些實施例中，小於5%之CD 41陽性FDPD係直徑小於0.5 µm之微粒。
在本文提供之任何態樣之某些實施例中，包括其中該群體包含FDPD之非限制性實施例具有降低之聚集傾向，使得該群體中不超過10%之FDPD在包含促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集，該等FDPD進一步具有以下之一或兩者：血小板反應蛋白(TSP)在其表面上存在之水平大於在靜息血小板表面上之水平；以及馮威里氏因子(vWF)在其表面上存在之水平大於在靜息血小板表面上之水平。
在本文提供之任何態樣之某些實施例中，包含FDPD之組成物包含FDPD群體，其包含 血小板衍生物群體，其包含CD 41陽性血小板衍生物，其中小於5%之CD 41陽性血小板衍生物係直徑小於0.5 µm之微粒，並且包含具有一或多個或在說明性實施例中具有所有以下特徵之血小板衍生物： 降低的聚集傾向，使得群體中不超過10%之血小板衍生物在包含促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集； 相較於促效劑不存在下血小板活化標記物之表現，在促效劑存在下無法增加血小板活化標記物之表現； 血小板反應蛋白(TSP)在其表面上存在之水平大於在靜息血小板表面上之水平； 馮威里氏因子(vWF)在其表面上存在之水平大於在靜息血小板表面上之水平；及 至少1.5個凝血酶生成效價單位(TGPU)/10 6個血小板衍生物之效價。
在本文任何態樣之一些實施例中，血小板衍生物及在說明性實施例中FDPD被受損之質膜包圍。在此類實施例中，血小板衍生物缺乏圍繞它們之整合膜。在此類實施例中，血小板衍生物不被整合膜包圍。相反，膜包含較在活細胞上觀察到的孔隙更大之孔隙。因此，此類血小板衍生物將一般在活血小板中轉導之來自外部環境之訊號轉導為顆粒內之反應之能力降低，或不能將來自外部環境之訊號轉導為顆粒內之反應。此外，此類血小板衍生物（例如，FDPD）被認為不能進行線粒體活化或醣解。
在本文任何態樣之一些實施例中，包含FDPD之組成物之有效量係1.0 X 10 7至1.0 X 10 11個顆粒或FDPD/kg對象。在本文任一態樣之一些實施例中，包含FDPD之組成物之有效量係1.6 X 10 7至5.1 X 10 9個顆粒或FDPD/kg對象。在可與具有一定範圍之顆粒或FDPD/kg之上述實施例中之任一者組合之本文任何態樣之一些實施例中，包含FDPD之組成物之有效量係具有250至5000 TGPU/kg對象之效價之量。在本文不同章節中提供了有效量之進一步實例。
在一個態樣中，本文提供了一種治療對象中之凝血病、或在對象中恢復止血、或降低正在被投予或已經被投予抗血小板劑之對象之出血可能性之方法，該方法包含：向需要其之對象投予有效量之包含血小板衍生物之組成物，從而治療凝血病，其中包含FDPD之組成物具有其能夠降低對象之出血可能性之性質，而與出血可能性之投予後評價（若進行）是否將產生正常結果還是異常結果無關。
在本文之任一態樣，在一些實施例中，包含FDPD之組成物具有能夠降低對象出血可能性之性質，而與出血可能性之投予後評估（若進行）將產生正常結果還是異常結果無關。在一些可選實施例中，此種投予後評價包含在向對象投予包含FDPD之組成物後之一段時間內或在任何一段時間對所採集或抽取之樣本進行之體外實驗室測試。在本文任何態樣之其他實施例中，其中包含FDPD之組成物具有其能夠降低具有增加之出血可能性，並且在一些實施例中在體外實驗室測試中具有一或多個凝血參數之異常值之對象之出血可能性之性質，使得在對象中恢復正常止血，而與出血可能性之投予後評價（若進行）將產生正常結果還是異常結果無關。在一些實施例中，此類投予後評價包含在向對象投予包含FDPD之組成物後之一段時間內對所採集或抽取之樣本進行之體外實驗室測試。在向對象投予包含血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物之後，該時間段可為例如0分鐘至72小時內、或介於10分鐘與72小時之間、或介於10分鐘與48小時之間、或介於10分鐘24小時之間、或介於10分鐘與4小時之間、或介於10分鐘與1小時之間、或介於10分鐘與30分鐘之間、或介於30分鐘與24小時之間、或介於30分鐘與4小時之間、或介於30分鐘與1小時之間。例如，在某些實施例中，該時間段在投予包含血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物後介於1與4小時之間。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，包含血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物具有其能夠降低具有增加之或升高之出血可能性之對象之出血可能性之性質。在一些實施例中，此種增加或升高之出血可能性可以藉由對在投予包含血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物之前的以下時間內採集之樣本進行之體外實驗室測試中之一或多個凝血參數之異常值來確定：0分鐘至72小時內、或介於10分鐘與72小時之間、或介於10分鐘與48小時之間、或介於10分鐘24小時之間、或介於10分鐘與4小時之間、或介於10分鐘與1小時之間、或介於10分鐘與30分鐘之間、或介於30分鐘與24小時之間、或介於30分鐘與4小時之間或介於30分鐘與1小時之間。此外，包含FDPD之組成物一般具有額外及令人驚訝之性質，即在以有效量（例如，用於降低對象之出血可能性）投予對象後，對象對於一或多個體外實驗室測試具有異常值，例如在使用體外實驗室測試或該體外實驗室測試進行之投予後評價中具有一或多個凝血參數之異常值，該體外實驗室測試係對在投予包含FDPD之組成物後之15分鐘與4小時、30分鐘與4小時、1小時與4小時之間採集、或15分鐘與2小時、30分鐘與2小時、或1小時與2小時之間採集、或15分鐘與1小時、或30分鐘及1小時之間採集之血液樣本進行。在該實施例之一些次實施例中，包含FDPD之組成物具有此種性質，即當不服用抗血小板劑時，其能夠將對象之出血可能性降低至約正常止血或處於正常止血或約對象之止血水平或處於對象之止血水平。然而，在此等實施例中，包含FDPD之組成物保留了額外及令人驚訝之性質，即在以有效量投予對象後，此種性質與出血可能性之投予後實驗室測試無關。因此，在一些實施例中，對象將在投予後評價中具有一或多個凝血參數之異常值，該投予後評價使用對在投予包含FDPD之組成物後之1與4小時之間或上述任何時間範圍內採集之血液樣本進行之體外實驗室測試或該體外實驗室測試進行。應當理解，在包括包含具有此類性質或包括評價或測試之任何性質之FDPD之組成物之方法中，實際上不需要進行測試來實施此類方法，除非此類測試步驟實際上被描述為方法步驟。
在本文之任何態樣中，在說明性實施例中，包含血小板衍生物或FDPD之組成物進一步包含額外組分，諸如在乾燥此類血小板衍生物或冷凍乾燥FDPD時存在之組分。此種額外組分可以包括培養劑及/或有機溶劑之組分，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液以及在某些實施例中冷凍保護劑（亦稱為凍乾劑）。例如，如本文進一步提供的，此類組成物可以包含一或多種糖（在說明性實施例中其包括海藻糖），並且在進一步說明性實施例中包括聚蔗糖。
在本文之任何態樣，在一些實施例中，使用離心法製備FDPD。在一些說明性實施例中，使用TFF製備FDPD，在進一步說明性實施例中，在該製程中不藉由離心法分離血小板。
在本文任何態樣之一些實施例中，該方法進一步包括在投予後評價中確定一或多個凝血參數之值，其中該投予後評價在投予後進行。在一些實施例中，一或多個凝血參數之投予後評價顯示出一或多個凝血參數中之至少一者之正常值。在該方法之進一步實施例中，一或多個凝血參數之投予後評價之結果較投予前一或多個參數之評價結果有所改進。
在該方法之進一步實施例中，違反醫學指導投予抗血小板劑係對象自行投予、由另一對象投予或由醫學專業人員投予。
在包括第二藥劑，一般係降低血小板功能之第二藥劑之本文任何態樣或實施例之一些實施例中，第二藥劑選自由抗高血壓藥、質子泵抑制劑、及其組合組成之群組。在一些實施例中，第二藥劑選自由化療劑、抗生素、心血管劑、H2拮抗劑、神經精神藥劑、及其組合組成之群組。在一些實施例中，第二藥劑包含抗抑鬱劑。在進一步實施例中，抗抑鬱劑選自由選擇性羥色胺再攝取抑制劑(SSRI)、羥色胺拮抗劑及再攝取抑制劑(SARI)、羥色胺及去甲腎上腺素再攝取抑制劑(SNRI)、及其組合組成之群組。在一些實施例中，第二藥劑不是抗凝血劑。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，在向對象投予包含血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物之前或之時停止投予抗血小板劑。在該方法之一些態樣中，在向對象投予包含血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物之後，繼續投予抗血小板劑。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，進一步包含確定對象在投予前評價中具有一或多個凝血參數之異常值。在該方法之一些態樣中，該方法包含在投予後評價中確定一或多個凝血參數之值。在一些實施例中，一或多個凝血參數之投予後評價顯示出一或多個凝血參數中之至少一者之正常結果。在一些實施例中，一或多個凝血參數之投予後評價結果較投予前一或多個參數之評價結果有所改善。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，對於手術期間之凝血參數之一或多個投予前評價，對象被鑑定為具有異常結果。在一些實施例中，手術係緊急手術。在一些實施例中，手術係預約手術。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，凝血參數包括出血之評價。在一些實施例中，基於世界衛生組織(WHO)出血量表進行出血評價。在該方法之一些實施例中，在投予之前，對象發生基於WHO出血量表之2級、3級、或4級出血；在該方法之一些實施例中，在投予之後，對象發生基於WHO出血量表之0級或1級出血。在一些實施例中，在投予之後，對象發生基於WHO出血量表較投予之前低一級之出血。在一些實施例中，在投予之後，對象發生基於WHO出血量表較投予之前低兩級之出血。在一些實施例中，在投予之後，對象發生基於WHO出血量表較投予之前低三級之出血。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，凝血參數之評價包括凝血酶原時間(PT)之評價。在一些實施例中，PT之異常結果包含大於約14秒之PT。在一些實施例中，在投予之後，對象之PT降低至少1、2、3、4、5或更多秒。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常PT。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，一或多個凝血參數包括活化的部分促凝血酶原激酶時間(aPTT)之評價。在一些實施例中，aPTT之異常結果包含大於約40秒之aPTT。在一些實施例中，在投予之後，對象之aPTT降低至少5、10、15、20或更多秒。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常aPTT。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，一或多個凝血參數包括凝血酶凝血時間(TCT)之評價。在一些實施例中，TCT之異常結果包含大於約35秒之TCT。在一些實施例中，在投予之後，對象之TCT降低至少5、10、15、20或更多秒。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常TCT。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，使用凝血彈性成像(TEG)來測量對一或多個凝血參數之評價。在一些實施例中，TEG之異常結果包含小於約50 mm之最大振幅(MA)。在一些實施例中，在投予之後，對象之MA增加至少5、10、15、20 mm或更多。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常MA。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，TEG之異常結果包含小於約85%之聚集百分比（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）。在一些實施例中，在投予之後，對象之聚集百分比增加（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）係至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）。在一些實施例中，使用TEG評價二磷酸腺苷誘導之血小板-纖維蛋白凝血強度。在該方法之某些態樣中，使用TEG評價花生四烯酸誘導之血小板-纖維蛋白凝血強度。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，使用P2Y12反應單位(PRU)或阿司匹靈反應單位(ARU)測試方法測量對一或多個凝血參數之評價。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，P2Y12反應單位測試方法之異常結果包含小於約195或小於約180之PRU。在一些實施例中，在投予之後，對象之PRU增加至少25、50、75、100或更多。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常PRU。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，阿司匹靈反應單位測試方法之異常結果包含小於約550或小於約500之ARU。在一些實施例中，在投予之後，對象之ARU增加至少25、50、75、100或更多。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常ARU。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，使用多電極聚集法(MEA)測量一或多個凝血參數。在一些實施例中，使用MEA之異常結果包含ADP誘導之血小板活性之異常結果。在一些實施例中，MEA之異常結果包含ADP誘導之血小板活性低於約50個單位(U)之結果。在一些實施例中，如請求項67或請求項68之所述方法，其中在投予之後，對象之ADP誘導之血小板活性增加5、10、15、20或更多個單位。在一些實施例中，在投予之後，對象具有ADP誘導之血小板活性之正常值。在一些實施例中，MEA之異常結果包含花生四烯酸誘導之血小板活性之異常結果。在一些實施例中，MEA之異常結果包含花生四烯酸誘導之血小板活性小於約70個單位(U)之結果。在一些實施例中，在投予之後，對象之花生四烯酸誘導之血小板活性增加5、10、15、20或更多個單位。在一些實施例中，在投予之後，對象具有花生四烯酸誘導之血小板活性之正常值。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，使用光透射聚集法(LTA)測量一或多個凝血參數。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，LTA之異常結果包含以下一或多者：(a)在5 µmol/L二磷酸腺苷存在下，聚集百分比小於約60%；(b)在2 µg/mL膠原蛋白存在下，聚集百分比小於約65%；(c)在1 mmol/L花生四烯酸存在下，聚集百分比小於約65%；(d)在2 mmol/L花生四烯酸存在下，聚集百分比小於約69%；或(e)在5 mmol/L花生四烯酸存在下，聚集百分比小於約73%。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，在投予之後，對象之聚集百分比增加（在5 µmol/L二磷酸腺苷存在下）至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在5 µmol/L二磷酸腺苷存在下）。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，在投予之後，對象之聚集百分比增加（在2 µg/mL膠原蛋白存在下）至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在2 µg/mL膠原蛋白存在下）。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，
在投予時，對象之聚集百分比增加（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）。在一些實施例中，在投予之後，對象之聚集百分比增加（在2 mmol/L花生四烯酸存在下）至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在2 mmol/L花生四烯酸存在下）。在一些實施例中，在投予之後，對象之聚集百分比增加（在5 mmol/L花生四烯酸存在下）至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。在一些實施例中，在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在5 mmol/L花生四烯酸存在下）。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，該方法進一步包含向對象投予額外的抗血小板劑逆轉劑。在一些實施例中，組成物之投予與額外的抗血小板劑逆轉劑之投予同時進行。在一些實施例中，組成物之投予發生在額外的抗血小板劑逆轉劑投予之後。在一些實施例中，組成物之投予發生在額外的抗血小板劑逆轉劑投予之前。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，該組成物進一步包含抗纖維蛋白溶解劑。在一些實施例中，抗纖維蛋白溶解劑選自由ε-胺基己酸(EACA)、凝血酸、抑肽酶、胺甲基苯甲酸、纖維蛋白原及其組合組成之群組。在一些實施例中，血小板或血小板衍生物負載有抗纖維蛋白溶解劑。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，投予包含局部、腸胃外、靜脈內、肌內、鞘內、皮下、腹膜內或其組合投予。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，在投予步驟之前乾燥組成物。在一些實施例中，在乾燥步驟後再水合組成物。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，在投予步驟之前冷凍乾燥組成物。在一些實施例中，在冷凍乾燥步驟後再水合組成物。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，培養劑包含選自磷酸鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及其二或更多者之組合之一或多種鹽。在一些實施例中，培養劑包含載劑蛋白。在一些實施例中，培養劑包含緩衝液，該緩衝液包含HEPES、碳酸氫鈉(NaHCO 3)或其組合。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，組成物包含一或多種糖。在一些實施例中，一或多種糖包含海藻糖。在一些實施例中，一或多種糖包含聚蔗糖。在一些實施例中，一或多種糖包含右旋糖。
在該方法之一些態樣中，組成物包含有機溶劑。
在本文任何態樣之一些實施例中，當投予包含FDPD之組成物時，抗血小板劑以增加對象之出血可能性之水平存在於對象中。在一些實施例中，在投予包含FDPD之組成物之時間或投予包含FDPD之組成物之第一劑量或最後劑量之時間之15、30或45分鐘內，或1、2、3、4、6或8小時內，抗血小板劑以Cmax存在。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含阿司匹靈，其已經以約80 mg至約700 mg之劑量每日一次、兩次、三次或四次投予或正在投予。在一些實施例中，抗血小板劑包含阿司匹靈，其已經投予或正在投予對象，使得對象達成了約3至約25 mg/L之C max。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含坎格雷洛，其已經以約25至約30 µg/kg對象體重之初始劑量或約3至約5 µg/kg/min對象體重之後續劑量投予或正在投予對象。在一些實施例中，抗血小板劑包含坎格雷洛，其已經投予或正在投予對象，使得對象達成了約400至約500 ng/mL之C max。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含替卡格雷，其已經以約170至約190 mg之初始劑量、或在治療之第一年約80至約100 mg每日兩次之後續劑量、或在治療之第二年約50至約70 mg每日兩次之後續劑量投予或正在投予對象，可選地與阿司匹靈組合。在一些實施例中，抗血小板劑包含替卡格雷，其已經投予或正在投予對象，使得對象達成了約550至約650 ng/mL之C max。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含氯吡格雷，其已經以約275至約325 mg之初始劑量或約70至約80 mg每日一次之後續劑量投予或正在投予對象，可選地與阿司匹靈組合。在一些實施例中，抗血小板劑包含氯吡格雷，其已經投予或正在投予對象，使得對象達成了約6至約20 ng/mL之C max。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含普拉格雷，其已經以約50至約70 mg之初始劑量或約3至約12每日一次之後續劑量投予或正在投予對象，可選地與阿司匹靈組合。在一些實施例中，抗血小板劑包含普拉格雷，其已經投予或正在投予對象，使得對象達成了約200至約525 ng/mL之C max。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含依替巴肽，其已經以約170至約190 mcg/kg對象體重之初始劑量、可選地約170至約190 mcg/kg對象體重之第二初始劑量、或約1至約2 mcg/kg對象體重/min之後續劑量投予或正在投予對象。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含替羅非班，其已經以約0.3至約0.5 µg/kg對象體重/min之初始劑量持續約30分鐘或約0.1 µg/kg對象體重/min之後續劑量投予或正在投予對象。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含阿昔單抗，其已經或正在以約0.2至約0.3 mg/kg對象體重之初始劑量或約0.10至約0.15 µg/kg對象體重/min之後續劑量投予或正在投予對象。在一些實施例中，抗血小板劑包含阿昔單抗，其已經以約0.2至約0.3 mg/kg對象體重之初始劑量或約8至約10 µg/min之後續劑量投予或正在投予對象。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含噻氯匹定，其已經以約240至約260 mg之劑量每日兩次投予或正在投予對象。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含布洛芬，其已經以約100至約600 mg之劑量每日一次、兩次、三次或四次投予或正在投予對象。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含沃拉帕沙，其已經以約2至約3 mg之劑量每日一次投予或正在投予對象，可選地與阿司匹靈或氯吡格雷一起。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含西洛他唑，其已經以約40至約110 mg之劑量每日兩次投予或正在投予對象。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含依前列醇，其已經以約2 ng/kg對象體重/min之初始劑量或約4、6、8、10、12、14、16、18或20 ng/kg對象體重/min之後續劑量投予或正在投予對象。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含雙嘧達莫，其已經以約60至約110 mg之劑量每日四次投予或正在投予對象。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，抗血小板劑包含曲前列素鈉，其已經以約0.5至約1.3 ng/kg對象體重/min之劑量投予或正在投予對象。
在本文之任何態樣中，在一些實施例中，該方法之一些態樣，對象沒有癌症。
本文之任何方法態樣可以係本文提供之包含血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物之用途，或包含此類組成物之試劑盒之用途，如包括此類「用途」語言之以下態樣所述。應理解，當此類態樣參考FDPD時，該等態樣可改為參考血小板衍生物。進一步應當理解，此類態樣可以包括本文針對方法態樣提供之任何要件，以及本文提供之任何實施例。例如，投予有效量之包含血小板衍生物（例如，FDPD）之組成物可以使得對象之出血可能性降低，並且在說明性實施例中恢復正常止血。當此類態樣參考病症時，在說明性實施例中之病症係出血病症。此種病症可以被鑑定，例如，因為來自具有此種病症之對象之樣本產生一或多個凝血參數之異常值。
在一個態樣中，本文提供了一種包含血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物在製造用於治療正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中之凝血病之試劑盒中之用途，其中該試劑盒之用途包含：(a)在投予前評價中確定對象具有一或多個凝血參數之異常值；及(b)在(a)之後，向需要其之對象投予有效量之包含凍乾的血小板衍生物(FDPD)之組成物。在一些實施例中，該用途進一步包含在投予之前，確定對象被投予了抗血小板劑。在一些實施例中，該用途進一步包含在投予之前，確定關於對象是否投予了抗血小板劑之資訊不可用。在一些實施例中，該用途進一步包含在投予包含凍乾的血小板衍生物之組成物之前在投予前評價中確定對象具有一或多個凝血參數之異常值。在一些實施例中，抗血小板劑係第一抗血小板劑，且第二藥劑係第二種抗血小板劑。
在一個態樣中，本文提供了一種包含血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物在製造用於治療正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中之凝血病之試劑盒中之用途，其中該試劑盒之用途包含：向需要其之對象投予有效量之FDPD，其中包含FDPD之組成物包含具有降低之聚集傾向之FDPD群體，使得該群體中不超過10%之FDPD在包含促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集。
在一個態樣中，本文提供了一種包含血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物在製造用於治療對象中之凝血病之試劑盒中之用途，其中該試劑盒之用途包含：向需要其之對象投予有效量之包含凍乾的血小板衍生物(FDPD)之組成物，其中對象被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑。
在一個態樣中，本文提供了一種包含本文提供之任何態樣之血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物在製造用於治療正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中之凝血病之試劑盒中之用途。
在一個態樣中，本文提供了一種包含本文提供之任何態樣之血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物在製造用於治療正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中之凝血病之醫藥中之用途。
在一個態樣中，本文提供了一種包含本文提供之任何態樣之血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物，其用於製造用於治療正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中之凝血病之試劑盒。
在一個態樣中，本文提供了一種包含本文提供之任何態樣之血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物，其用作用於治療正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中之凝血病之醫藥。
在一個態樣中，本文提供了一種包含本文提供之任何態樣之血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物，其用於治療正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中之凝血病。
在一個態樣中，本文提供了一種包含本文提供之任何態樣之血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物，其用於製造用於治療正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中之病症之試劑盒。
在一個態樣中，本文提供了一種包含本文提供之任何態樣之血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物，其用作用於治療正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中之病症之醫藥。
在一個態樣中，本文提供包含本文提供之任何態樣之血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物，其用於治療正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中之病症。
在本文提供之包括包含血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物用於治療病症或用於製造試劑盒，或用作醫藥之任何態樣中，該病症選自由斑禿、血管性血友病、血友病、血栓性疾病、血小板減少症、血小板減少性紫癜、創傷或其組合組成之群組。
在本文提供之包括包含血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物用於治療凝血病或病症或用於製造試劑盒或用作醫藥之任何態樣中，抗血小板劑選自由阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉、沙格雷酯及其組合組成之群組。
在本文提供之包括包含血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物用於治療凝血病或病症或用於製造試劑盒或用作醫藥之任何態樣中，其中治療，或試劑盒或醫藥之用途包含：向需要其之對象投予有效量之FDPD，其中包含FDPD之組成物包含具有降低之聚集傾向之FDPD群體，使得該群體中不超過10%之FDPD在包含促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集。在一些實施例中，FDPD具有每10 6個血小板衍生物至少1.5個凝血酶生成效價單位(TGPU)之效價。
在本文提供之包括包含血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物用於治療凝血病或病症或用於製造試劑盒或用作醫藥之任何態樣中，其中至少50%之FDPD係CD 41陽性血小板衍生物，其中少於5%之CD 41陽性FDPD係直徑小於0.5 µm之微粒，且其中FDPD具有每10 6個血小板衍生物至少1.5個凝血酶生成效價單位(TGPU)之效價。
在本文提供之包括包含血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物用於治療凝血病或病症或用於製造試劑盒或用作醫藥之任何態樣中，其中FDPD具有超活化的血小板之一或多個特徵，其選自A)血小板反應蛋白(TSP)在其表面上存在之水平大於在靜息血小板表面上之水平；b)馮威里氏因子(vWF)在其表面上存在之水平大於在靜息血小板表面上之水平；及C)相較於促效劑不存在下血小板活化標記物之表現，在促效劑存在下無法增加血小板活化標記物之表現。
在本文提供之包括包含血小板衍生物（在說明性實施例中，係凍乾的血小板衍生物(FDPD)）之組成物用於治療凝血病或病症或用於製造試劑盒或用作醫藥之任何態樣中，其中包含FDPD之組成物之有效量係1.0 X 10 7至1.0 X 10 11/kg對象。在一些實施例中，包含FDPD之組成物之有效量在1.6 X 10 7至5.1 X 10 9/kg對象之間。在一些實施例中，包含FDPD之組成物之有效量在每千克對象具有250至5000 TGPU之效價之量之間。在一些實施例中，包含FDPD之組成物之有效量在具有每千克300至3800 TGPU之效價之量之間。
進一步之示例性態樣及實施例提供如下。
在一些實施例中，本文提供了一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
在一些實施例中，本文提供了一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
在一些實施例中，本文提供了一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
在一些實施例中，本文提供了一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
在一些實施例中，本文提供了一種使對象做好手術準備之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。實作方式可以包括以下特徵中之一或多者。手術可為緊急手術。手術可為預約手術。
在一些實施例中，本文提供了一種使對象做好手術準備之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。實作方式可以包括以下特徵中之一或多個者。手術可為緊急手術。手術可為預約手術。
在上述方法之一些實施例中，對象已經用或正在用抗血小板劑治療。在一些實施例中，可以停止用抗血小板劑治療。在一些實施例中，可以繼續用抗血小板劑治療。
在一些實施例中，本文提供了一種改善抗血小板劑在對象中之作用之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包括血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包括一或多種鹽、緩衝劑、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
在一些實施例中，本文提供了一種改善抗血小板劑在對象中之作用之方法，該方法包括向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包括將血小板與包括一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
在一些實施例中，抗血小板劑之作用可為抗血小板劑過劑量之結果。
在一些實施例中，抗血小板劑可選自由阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗及補充劑組成之群組。
本文任何方法之一些實施例可以包括以下特徵中之一或多者。投予可以包括局部投予。投予可以包括腸胃外投予。投予可以包括靜脈內投予。投予可以包括肌內投予。投予可以包括鞘內投予。投予可以包括皮下投予。投予可包括腹膜內投予。該組成物可以在投予步驟之前乾燥。該組成物可在乾燥步驟後再水合。該組成物可以在投予步驟之前冷凍乾燥。該組成物可在冷凍乾燥步驟後再水合。培養劑可以包括選自鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及其二或更多者之組合之一或多種鹽。培養劑可以包括載劑蛋白。緩衝液可以包括HEPES、碳酸氫鈉(NaHCO3)或其組合。該組成物可以包括一或多種糖。一或多種糖可以包括海藻糖。一或多種糖可以包括聚蔗糖。一或多種糖可以包括右旋糖。該組成物可以包括有機溶劑。血小板或血小板衍生物可包括FDPD。
進一步非限制性示例性實施例以編號形式提供如下：
實施例1係一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
實施例2係一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成組成物之製程來製備。
實施例3係一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
實施例4係一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成組成物之製程來製備。
實施例5係一種使對象做好手術準備之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
實施例6係一種使對象做好手術準備之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑培養以形成組成物之製程來製備。
實施例7係實施例5至6中任一項所述之方法，其中該手術係緊急手術。
實施例8係實施例5至6中任一項所述之方法，其中該手術係預約手術。
實施例9係實施例1至8中任一項所述之方法，其中該對象已經用或正在用抗血小板劑治療。
實施例10係實施例9所述之方法，其中停止用抗血小板劑的治療。
實施例11係實施例9所述之方法，其中繼續用抗血小板劑的治療。
實施例12係一種改善抗血小板劑在對象中之作用之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
實施例13係一種改善抗血小板劑在對象中之作用之方法，該方法包含向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑培養以形成組成物之製程來製備。
實施例14係實施例12或實施例13所述之方法，其中該抗血小板劑之作用係抗血小板劑之過劑量之結果。
實施例15係實施例1至14中任一項所述之方法，其中該組成物進一步包含抗纖維蛋白溶解劑。
實施例16係實施例15所述之方法，其中該抗纖維蛋白溶解劑選自由Ɛ-胺基己酸(EACA)、胺甲環酸、抑肽酶、胺基甲基苯甲酸、纖維蛋白原及其組合組成之群組。
實施例17係實施例15或實施例16所述之方法，其中該血小板或血小板衍生物載入有抗纖維蛋白溶解劑。
實施例18係實施例9至16中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑選自由阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、補充劑及其組合組成之群組。
實施例19係實施例9至16中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑選自由阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙及其組合組成之群組。
實施例20係實施例9至16中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑選自由阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉、沙格雷酯及其組合組成之群組。
實施例21係實施例1至20中任一項所述之方法，其中投予包含局部投予。
實施例22係實施例1至20中任一項所述之方法，其中投予包含腸胃外投予。
實施例23係實施例1至20中任一項所述之方法，其中投予包含靜脈內投予。
實施例24係實施例1至20中任一項所述之方法，其中投予包含肌內投予。
實施例25係實施例1至20中任一項所述之方法，其中投予包含鞘內投予。
實施例26係實施例1至20中任一項所述之方法，其中投予包含皮下投予。
實施例27係實施例1至20中任一項所述之方法，其中投予包含腹膜內投予。
實施例28係實施例1至27中任一項所述之方法，其中在投予步驟之前乾燥組成物。
實施例29係實施例28所述之方法，其中該組成物在乾燥步驟後再水合。
實施例30係實施例1至28中任一項所述之方法，其中該組成物在投予步驟之前被冷凍乾燥。
實施例31係實施例30所述之方法，其中該組成物在冷凍乾燥步驟後再水合。
實施例32係實施例1至31中任一項所述之方法，其中該培養劑包含一或多種選自磷酸鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及其兩或更多種之組合之鹽。
實施例33係實施例1至32中任一項所述之方法，其中該培養劑包含載體蛋白。
實施例34係實施例1至33中任一項所述之方法，其中該緩衝液包括HEPES、碳酸氫鈉(NaHCO3)或其組合。
實施例35係實施例1至34中任一項所述之方法，其中該組成物包含一或多種糖。
實施例36係實施例35所述之方法，其中該一或多種糖包含海藻糖。
實施例37係實施例35或實施例36所述之方法，其中該一或多種糖包含多糖。
實施例38係實施例35至37中任一項所述之方法，其中該一或多種糖包含右旋糖。
實施例39係實施例1至38中任一項所述之方法，其中該組成物包含有機溶劑。
實施例40係實施例1至39中任一項所述之方法，其中該血小板或血小板衍生物包含FDPD。
實施例41係一種在正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中治療凝血病之方法，該方法包含： (a)確定該對象之一或多個凝血參數之評價結果異常；及 (b)在(a)之後，向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑、及可選地有機溶劑。
實施例42係一種在正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中治療凝血病之方法，該方法包含： (a)確定該對象之一或多個凝血參數之評價結果異常；及 (b)在(a)之後，向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
實施例43係一種在正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中治療凝血病之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中在投予之前，已確定該對象之一或多個凝血參數之評價結果異常。
實施例44係一種在正在投予或已經投予抗血小板劑之對象中治療凝血病之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中在投予之前，已確定該對象之一或多個凝血參數之評價結果異常。
實施例45係實施例41至44中任一項所述之方法，進一步包含在投予之後確定一或多個凝血參數之評價結果。
實施例46係實施例45所述之方法，其中在投予之後對一或多個凝血參數之評價顯示出一或多個凝血參數中之至少一者之正常結果。
實施例47係實施例45所述之方法，其中在投予之後一或多個凝血參數之評價結果較在投予之前一或多個參數之評價結果有所改善。
實施例48係一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包含： (a)確定該對象違反醫學指導被投予了抗血小板劑；及 (b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
實施例49係一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包含： (a)確定該對象違反醫學指導被投予了抗血小板劑；及 (b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
實施例50係一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中確定該對象違反醫學指導已被投予了抗血小板劑。
實施例51係一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中確定該對象違反醫學指導已被投予了抗血小板劑。
實施例52係一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含： (a)確定該對象違反醫學指導被投予了抗血小板劑；及 (b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
實施例53係一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含： (a)確定該對象違反醫學指導被投予了抗血小板劑；及 (b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
實施例54係一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中確定該對象違反醫學指導已被投予了抗血小板劑。
實施例55係一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中確定該對象違反醫學指導已被投予了抗血小板劑。
實施例56係實施例48至55中任一項所述之方法，其中違反醫學指導投予抗血小板劑係對象自行投予。
實施例57係實施例48至55中任一項所述之方法，其中違反醫學指導投予抗血小板劑係由醫學專業人員投予。
實施例58係實施例48至57中任一項所述之方法，其中該醫學指導係醫學專業人員之口頭指導。
實施例59係實施例48至57中任一項所述之方法，其中該醫療指導係書面指導。
實施例60係一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包含： (a)確定該對象被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑；及 (b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
實施例61係一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包含： (a)確定該對象被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑；及 (b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
實施例62係一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中確定該對象已被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑。
實施例63係一種治療對象中之凝血病之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中確定該對象已被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑。
實施例64係一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含： (a)確定該對象被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑；及 (b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
實施例65係一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含： (a)確定該對象被投予了抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑；及 (b)向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
實施例66係一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中該對象被鑑定為已被投予抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑。
實施例67係一種在對象中恢復正常止血之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中該對象被鑑定為已被投予抗血小板劑及降低血小板功能之第二藥劑。
實施例68係實施例60至67中任一項所述之方法，其中停止投予第二藥劑。
實施例69係實施例60至67中任一項所述之方法，其中繼續投予第二藥劑。
實施例70係實施例60至69中任一項所述之方法，其中該第二藥劑選自由抗高血壓藥、質子泵抑制劑及其組合組成之群組。
實施例71係實施例60至69中任一項所述之方法，其中該第二藥劑選自由化療劑、抗生素、心血管藥劑、H2拮抗劑、神經精神藥劑及其組合組成之群組。
實施例72係實施例60至69中任一項所述之方法，其中該第二藥劑包含抗抑鬱劑。
實施例73係實施例72所述之方法，其中該抗抑鬱劑選自由選擇性羥色胺再攝取抑制劑(SSRI)、羥色胺拮抗劑及再攝取抑制劑(SARI)、羥色胺及去甲腎上腺素再攝取抑制劑(SNRI)及其組合組成之群組。
實施例74係實施例60至73中任一項所述之方法，其中該第二藥劑並非抗凝血劑。
實施例75係實施例41至74中任一項所述之方法，其中停止投予抗血小板劑。
實施例76係實施例41至74中任一項所述之方法，其中繼續投予抗血小板劑。
實施例77係一種在對象中預防或減輕凝血病之可能性之方法，該方法包含： (a)確定關於該對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用；及 (b)向該對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑。
實施例78係一種在對象中預防或減輕凝血病之可能性之方法，該方法包含： (a)確定關於該對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用；及 (b)向該對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備。
實施例79係一種在對象中預防或減輕凝血病之可能性之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物包含血小板或血小板衍生物及培養劑，該培養劑包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑，其中該對象已被確定為關於該對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用之對象。
實施例80係一種在對象中預防或減輕凝血病之可能性之方法，該方法包含： 向需要其之對象投予有效量之組成物，該組成物藉由包含將血小板與包含一或多種鹽、緩衝液、可選地冷凍保護劑及可選地有機溶劑之培養劑一起培養以形成該組成物之製程來製備，其中該對象已被確定為關於該對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用之對象。
實施例81係實施例77至80中任一項所述之方法，其中關於該對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用，其原因包含無法鑑定對象。
實施例82係實施例77至81中任一項所述之方法，其中關於該對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用，其原因包含對象之病史不可用。
實施例83係實施例77至82中任一項所述之方法，其中關於對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用，其原因包含對象需要緊急治療。
實施例84係實施例77至83中任一項所述之方法，其中關於對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用，其原因包含對象需要緊急手術。
實施例85係實施例77至84中任一項所述之方法，其中關於對象是否被投予抗血小板劑之資訊不可用，其原因包含對象正在進行緊急手術。
實施例86係實施例48至85中任一項所述之方法，其中該方法進一步包含確定該對象之凝血參數之一或多個評價具有異常結果。
實施例87係實施例48至86中任一項所述之方法，其中該對象之凝血參數之一或多個評價已被確定具有異常結果。
實施例88係實施例84至87中任一項所述之方法，其中該對象之一或多個凝血參數中之至少一者先前被鑑定為具有正常結果。
實施例89係實施例84至88中任一項所述之方法，進一步包含在投予之後確定一或多個凝血參數之評價結果。
實施例90係實施例89所述之方法，其中在投予之後一或多個凝血參數之評價顯示出一或多個凝血參數中之至少一者之正常結果。
實施例91係實施例89所述之方法，其中在投予之後一或多個凝血參數之評價結果較在投予之前一或多個參數之評價結果有所改善。
實施例92係實施例41至47或86至91中任一項所述之方法，其中在手術期間該對象之凝血參數之一或多個評價被鑑定為具有異常結果。
實施例93係實施例92所述之方法，其中手術係緊急手術。
實施例94係實施例92所述之方法，其中手術係預約手術。
實施例95係實施例41至47或86至94中任一項所述之方法，其中一或多個凝血參數包括出血之評價。
實施例96係實施例95所述之方法，其中出血之評價基於世界衛生組織(WHO)出血量表進行。
實施例97係實施例96所述之方法，其中在投予之前，對象發生基於WHO出血量表之2級、3級、或4級出血。
實施例98係實施例97所述之方法，其中在投予之後，對象發生基於WHO出血量表之0級或1級出血。
實施例99係實施例96所述之方法，其中在投予之後，對象發生基於WHO出血量表較投予之前低一級之出血。
實施例100係實施例96所述之方法，其中在投予之後，對象發生基於WHO出血量表較投予之前低兩級之出血。
實施例101係實施例96所述之方法，其中在投予之後，對象發生基於WHO出血量表較投予之前低三級之出血。
實施例102係實施例41至47或86至101中任一項所述之方法，其中一或多個凝血參數包括凝血酶原時間(PT)之評價。
實施例103係實施例所述102之方法，其中PT之異常結果包含PT大於約14秒。
實施例104係實施例102或實施例103之方法，其中在投予之後，對象之PT降低至少1、2、3、4、5或更多秒。
實施例105係實施例102至104中任一項所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常PT。
實施例106係實施例41至47或86至105中任一項所述之方法，其中一或多個凝血參數包括活化的部分促凝血酶原激酶時間(aPTT)之評價。
實施例107係實施例106之方法，其中aPTT之異常結果包含大於約40秒之aPTT。
實施例108係實施例106或實施例107之方法，其中在投予之後，對象之aPTT降低至少5、10、15、20或更多秒。
實施例109係實施例106至108中任一項所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常aPTT。
實施例110係實施例41至47或86至109中任一項所述之方法，其中一或多個凝血參數包括凝血酶凝血時間(TCT)之評價。
實施例111係實施例110之方法，其中TCT之異常結果包含TCT大於約35秒。
實施例112係實施例110或實施例111所述之方法，其中在投予之後，對象之TCT降低至少5、10、15、20或更多秒。
實施例113係實施例110至111中任一項所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常TCT。
實施例114係實施例41至47或86至113中任一項所述之方法，其中一或多個凝血參數之評價包括凝血彈性成像(TEG)。
實施例115係實施例114之方法，其中TEG之異常結果包含小於約50 mm之最大振幅(MA)。
實施例116係實施例114或實施例115之方法，其中在投予之後，對象之MA增加至少5、10、15、20 mm或更多。
實施例117係實施例114至116中任一項所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常MA。
實施例118係實施例114至117中任一項所述之方法，其中TEG之異常結果包含小於約85%之聚集百分比（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）。
實施例119係實施例118所述之方法，其中在投予之後，對象之聚集百分比（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）增加至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。
實施例120係實施例118或實施例119所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）。
實施例121係實施例105至120中任一項所述之方法，其中使用TEG評價二磷酸腺苷誘導之血小板-纖維蛋白凝血強度。
實施例122係實施例105至120中任一項所述之方法，其中使用TEG評價花生四烯酸誘導之血小板-纖維蛋白凝血強度。
實施例123係實施例41至47或86至122中任一項所述之方法，其中一或多個凝血參數之評價包括VerifyNow。
實施例124係實施例123所述之方法，其中VerifyNow之異常結果包含小於約195或小於約180之P2Y12反應單位(PRU)。
實施例125係實施例123或實施例124之方法，其中在投予之後，對象之PRU增加至少25、50、75、100或更多。
實施例126係實施例123至125中任一項所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常PRU。
實施例127係實施例123至126中任一項所述之方法，其中VerifyNow之異常結果包含小於約550或小於約500之阿司匹靈反應單位(ARU)。
實施例128係實施例126或實施例127所述之方法，其中在投予之後，對象之ARU增加至少25、50、75、100或更多。
實施例129係實施例126至128中任一項所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常ARU。
實施例130係實施例41至47或86至129中任一項所述之方法，其中一或多個凝血參數包括多電極聚集法(MEA)。
實施例131係實施例130所述之方法，其中MEA之異常結果包含ADP誘導之血小板活性之異常結果。
實施例132係實施例131所述之方法，其中MEA之異常結果包含ADP誘導之血小板活性小於約50個單位(U)之異常結果。
實施例133係實施例131或實施例132所述之方法，其中在投予之後，對象之ADP誘導之血小板活性增加5、10、15、20或更多個單位。
實施例134係實施例131至133中任一項所述之方法，其中在投予之後，對象具有ADP誘導之血小板活性之正常值。
實施例135係實施例131至134中任一項所述之方法，其中MEA之異常結果包含花生四烯酸誘導之血小板活性之異常結果。
實施例136係實施例135所述之方法，其中MEA之異常結果包含花生四烯酸誘導之血小板活性小於約70個單位(U)之結果。
實施例137係實施例135或實施例136所述之方法，其中在投予之後，對象之花生四烯酸誘導之血小板活性增加5、10、15、20或更多個單位。
實施例138係實施例135至137中任一項所述之方法，其中在投予之後，對象具有花生四烯酸誘導之血小板活性之正常值。
實施例139係實施例41至47或86至138中任一項所述之方法，其中一或多個凝血參數包括光透射聚集法(LTA)。
實施例140係實施例139所述之方法，其中LTA之異常結果包含以下一或多者： (a)在5 µmol/L二磷酸腺苷存在下，聚集百分比小於約60%； (b)在2 µg/mL膠原蛋白存在下，聚集百分比小於約65%； (c)在1 mmol/L花生四烯酸存在下，聚集百分比小於約65%； (d)在2 mmol/L花生四烯酸存在下，聚集百分比小於約69%；或者 (e)在5 mmol/L花生四烯酸存在下，聚集百分比小於約73%。
實施例141係實施例140之方法，其中在投予之後，對象之聚集百分比增加（在5 µmol/L二磷酸腺苷存在下）至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。
實施例142係實施例140或實施例141所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在5 µmol/L二磷酸腺苷存在下）。
實施例143係實施例140之方法，其中在投予之後，對象之聚集百分比增加（在2 µg/mL膠原蛋白存在下）至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。
實施例144係實施例140或實施例143所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在2 µg/mL膠原蛋白存在下）。
實施例145係實施例140所述之方法，其中在投予之後，對象之聚集百分比增加（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。
實施例146係實施例140或實施例145所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在1 mmol/L花生四烯酸存在下）。
實施例147係實施例140所述之方法，其中在投予之後，對象之聚集百分比增加（在2 mmol/L花生四烯酸存在下）至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。
實施例148係實施例140或實施例147所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在2 mmol/L花生四烯酸存在下）。
實施例149係實施例140所述之方法，其中在投予之後，對象之聚集百分比增加（在5 mmol/L花生四烯酸存在下）至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。
實施例150係實施例140或實施例149所述之方法，其中在投予之後，對象具有正常聚集百分比（在5 mmol/L花生四烯酸存在下）。
實施例151係實施例41至150中任一項所述之方法，其中該方法進一步包含向該對象投予額外的抗血小板劑逆轉劑。
實施例152係實施例151所述之方法，其中該組成物之投予與額外的抗血小板劑逆轉劑之投予同時進行。
實施例153係實施例151所述之方法，其中該組成物之投予發生在該額外的抗血小板劑逆轉劑之投予之後。
實施例154係實施例151所述之方法，其中該組成物之投予發生在該額外的抗血小板劑逆轉劑之投予之前。
實施例155係實施例41至154中任一項所述之方法，其中該組成物進一步包含抗纖維蛋白溶解劑。
實施例156係實施例155所述之方法，其中抗纖維蛋白溶解劑選自由ε-胺基己酸(EACA)、凝血酸、抑肽酶、胺甲基苯甲酸、纖維蛋白原及其組合組成之群組。
實施例157係實施例155或實施例156所述之方法，其中血小板或血小板衍生物負載有抗纖維蛋白溶解劑。
實施例158係實施例41至157中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑選自由阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、補充劑及其組合組成之群組。
實施例159係實施例41至157中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑選自由阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、及其組合組成之群組。
實施例160係實施例41至157中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑選自由阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉、沙格雷酯及其組合組成之群組。
實施例161係實施例41至160中任一項所述之方法，其中投予包含局部、腸胃外、靜脈內、肌內、鞘內、皮下、腹膜內或其組合投予。
實施例162係實施例41至161中任一項所述之方法，其中組成物在投予步驟之前被乾燥。
實施例163係實施例162所述之方法，其中組成物在乾燥步驟後被再水合。
實施例164係實施例41至161中任一項所述之方法，其中該組成物在投予步驟之前被冷凍乾燥。
實施例165係實施例164所述之方法，其中組成物在冷凍乾燥步驟後被再水合。
實施例166係實施例41至165中任一項所述之方法，其中該培養劑包含選自磷酸鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、以及其二或更多者之組合之一或多種鹽。
實施例167係實施例41至166中任一項所述之方法，其中該培養劑包含載劑蛋白。
實施例168係實施例41至167中任一項所述之方法，其中該緩衝液包含HEPES、碳酸氫鈉(NaHCO3)或其組合。
實施例169係實施例41至168中任一項所述之方法，其中該組成物包含一或多種糖。
實施例170係實施例169所述之方法，其中該一或多種糖包含海藻糖。
實施例171係實施例169或實施例170所述之方法，其中該一或多種糖包含聚蔗糖。
實施例172係實施例169至171中任一項所述之方法，其中該一或多種糖包含右旋糖。
實施例173係實施例41至172中任一項所述之方法，其中該組成物包含有機溶劑。
實施例174係實施例41至173中任一項所述之方法，其中血小板或血小板衍生物包含FDPD。
實施例175係實施例41至174中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含阿司匹靈，其劑量為約80 mg至約700 mg，每日一次、兩次、三次或四次。
實施例176係實施例41至175中任一項所述之方法，其中抗血小板劑包含阿司匹靈，且對象達成了約3至約25 mg/L之Cmax。
實施例137係實施例41至176中任一項所述之方法，其中抗血小板劑包含177約25至約30 µg/kg對象體重之初始劑量或約3至約5 µg/kg/min對象體重之後續劑量。
實施例178係實施例41至177中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含坎格雷洛，且對象達成了約400至約500 ng/mL之Cmax。
實施例179係實施例41至178中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含替卡格雷，其初始劑量為約170至約190 mg，或第一年治療中之後續劑量為約80至約100 mg，每日兩次，或在第二年治療中後續劑量為約50至約70 mg，每日兩次，可選地與阿司匹靈組合。
實施例180係實施例41至179中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含替卡格雷，且對象達成了約550至約650 ng/mL之Cmax。
實施例181係實施例41至180中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含氯吡格雷，其初始劑量為約275至約325 mg，或後續劑量為約70至約80 mg，每日一次，可選地與阿司匹靈組合。
實施例182係實施例41至181中任一項所述之方法，其中抗血小板劑包含氯吡格雷，且對象達成了約6至約20 ng/mL之Cmax。
實施例183係實施例41至182中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含普拉格雷，其初始劑量為約50至約70 mg，或後續劑量為約3至約12，每日一次，可選地與阿司匹靈組合。
實施例184係實施例41至183中任一項所述之方法，其中抗血小板劑包含普拉格雷，且對象達成了約200至約525 ng/mL之Cmax。
實施例185係實施例41至184中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含依替巴肽，其初始劑量為約170至約190 mcg/kg對象體重，可選地第二初始劑量為約170至約190 mcg/kg對象體重，或後續劑量為約1至約2 mcg/kg對象體重/min。
實施例186係實施例41至185中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含替羅非班，其初始劑量為約0.3至約0.5 µg/kg對象體重/min，持續約30分鐘，或後續劑量為約0.1 µg/kg對象體重/min。
實施例187係實施例41至186中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含阿昔單抗，其初始劑量為約0.2至約0.3 mg/kg對象體重，或後續劑量為約0.10至約0.15 µg/kg對象體重/min。
實施例188係實施例41至187中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含阿昔單抗，其初始劑量為約0.2至約0.3 mg/kg對象體重，或後續劑量為約8至約10 µg/min。
實施例189係實施例41至188中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含噻氯匹定，其劑量為約240至約260 mg，每日兩次。
實施例190係實施例41至189中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含布洛芬，其劑量為約100至約600 mg，每日一次、兩次、三次或四次。
實施例191係實施例41至190中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含沃拉帕沙，其劑量為約2至約3 mg，每日一次，可選地與阿司匹靈或氯吡格雷一起。
實施例192係實施例41至191中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含西洛他唑，其劑量為約40至約110 mg，每日兩次。
實施例193係實施例41至192中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含依前列醇，其初始劑量為約2 ng/kg對象體重/min，或後續劑量為約4、6、8、10、12、14、16、18或20 ng/kg對象體重/min。
實施例194係實施例41至193中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含雙嘧達莫，其劑量為約60至約110 mg，每日四次。
實施例195係實施例41至194中任一項所述之方法，其中該抗血小板劑包含曲前列素鈉，其劑量為約0.5至約1.3 ng/kg對象體重/min。
實施例196係請求項1至195中任一項所述之方法，其中該對象沒有癌症。 [實例]
實例1 - P2Y 12抑制劑
與氯吡格雷、替卡格雷及普拉格雷一樣，坎格雷洛會阻斷血小板上的P2Y 12(ADP)受體。此處使用坎格雷洛作為此類藥物的代表。
按照實例4中的程式來製備FDPD。根據實例4進行透射光聚集測定法及T-TAS®實驗。
坎格雷洛對富含血小板之血漿中的血小板的聚集的影響（PRP；取自人全血並加工以分離血漿中沒有白細胞(white blood cell；WBC)或紅細胞(red blood cell；rbc)的血小板，藉由透射光聚集測定法進行評估。回應於促效劑誘導的活化的血小板的聚集（富含血小板之血漿）顯示，坎格雷洛在0.5 μM-3.5 μM的治療濃度下完全抑制10 μM二磷酸腺苷(ADP)誘導的聚集（圖1）。所研究的所有劑量的坎格雷洛完全消除了PRP中ADP誘導的血小板聚集。
藉由T-TAS®來評估坎格雷洛對剪切下血小板閉塞的影響。用10 μM的ADP在體外刺激的新鮮富含血小板之血漿（血小板濃度278,000 μL；PRP通常具有約200,000/μL至約300,000/μL的血小板濃度）在高剪切下比未刺激的血小板(PRP)更早地閉塞，如藉由AR晶片（膠原蛋白及組織促凝血酶原激酶）使用T-TAS®技術確定的（圖2）。單獨的坎格雷洛(1 μM)對閉塞沒有呈現出抑制作用，但當與ADP (10 μM)結合時，血小板黏附及閉塞基本上被消除。此等結果在圖3及4中進一步說明。不受任何特定理論之束縛，據信觀察到這種模式係因為血小板具有未被坎格雷洛阻斷的其他ADP受體，此等受體對ADP有反應並導致形狀改變及聚集，其中ADP受體P2Y12阻斷抑制膠原蛋白結合，因此，血小板可能由於ADP刺激而彼此結合，但可能會阻止與包被的晶片上的膠原蛋白結合。
在圖3中，曲線下面積(AUC)值（來源於圖2中的資料；複製品被平均並繪製一次）表示血栓發生速度有多快及血栓確實發生時有多嚴重的組合值。隨著ADP刺激，PRP AUC升高。坎格雷洛對AUC值幾乎沒有影響，但當與ADP刺激組合時，AUC降至接近零。
在圖4中，評估了在藥物治療時AR T-TAS®晶片的閉塞時間。在大約20分鐘時，PRP使晶片通道閉塞，並且用ADP刺激血小板在彼時間減少。坎格雷洛對閉塞時間幾乎沒有影響，但在PRP樣品中加入ADP刺激基本上完全抑制了閉塞。
在以顯示出抑制血小板的濃度用ADP刺激的坎格雷洛的存在下，血栓小體或FDPD（圖5-7中的「thromb」）沒有被抑制，表明即使在治療水平的坎格雷洛的存在下，FDPD亦可以幫助凝血形成。
藉由T-TAS®來評估坎格雷洛在剪切下對FDPD的影響。圖5顯示，在存在ADP (10 Um)的情況下，FDPD（如所示，在再水合60、90、或115分鐘後）在不存在或存在坎格雷洛（1 uM）的情況下保持止血功能。與血小板不同，T-TAS® AR晶片的血栓小體閉塞不受坎格雷洛+ADP的抗血小板作用的影響。這表明，當被注入到接受坎格雷洛及類似藥劑的患者體內時，FDPD將保持預期的功能。此等結果在圖6及7中進一步說明。
在圖6中，AUC值（來自圖5中的資料）表示血栓形成。坎格雷洛+ADP對血漿中T-TAS® AR晶片的血栓小體黏附及閉塞沒有影響；FDPD引起血栓形成，而與坎格雷洛及ADP無關。相同劑量的坎格雷洛及ADP完全抑制新鮮收穫的血小板。
在圖7中，評估了在藥物治療的情況下AR T-TAS®晶片上的FDPD的閉塞時間（來自圖5中的資料）。使用血漿中的T-TAS® AR晶片，坎格雷洛+ADP對血栓小體閉塞時間沒有影響。相同劑量的坎格雷洛及ADP完全抑制新鮮收穫的血小板。
實例2. GPIIb-IIIa抑制劑。
以下結果證明了FDPD在服用GPIIb-IIIa抑制劑的患者的體外模型中的影響。依替巴肽（一種常見的抗血小板藥物）競爭性地抑制血小板上與纖維蛋白原及馮威里氏因子相互作用的GPIIb-IIIa受體。
依替巴肽係一種肽治療劑，其阻斷血小板上GPIIb-IIIa受體的纖維蛋白結合作用。該藥物一般以180 μg/kg推注經由IV投予，然後以2 μg/kg/分鐘的連續輸注被投予。依替巴肽的血液濃度一般為約1-2 μM。出血時間通常在停藥後約1小時內恢復到正常。
按照實例4中的程式來製備FDPD。根據實例4進行透射光聚集測定法及T-TAS®實驗。
使用透射光聚集測定法來評估血小板的聚集（在富含血小板之血漿中）。在所有測試的濃度下，依替巴肽完全抑制在PRP中膠原蛋白誘導的(10 μg/mL)血小板聚集，如在PRP中藉由光透射聚集法測定法偵測的。（圖8）。
亦研究了在存在依替巴肽的情況下FDPD對縮短凝血時間的作用。在T-TAS®系統上研究了FDPD恢復閉塞時間的能力。T-TAS®系統在膠原蛋白及促凝血酶原激酶刺激下測量剪切力下的閉塞時間。在依替巴肽的情況下，AR T-TAS®晶片上的閉塞的全血概況及AUC分別被延長及減少。依替巴肽以劑量依賴性方式延長了全血在T-TAS AR®晶片上的閉塞時間。在本實驗中，全血在8分鐘時閉塞，且在6 μM依替巴肽的情況下閉塞時間延長至16分鐘（圖9）。FDPD逆轉了依替巴肽對血栓形成的抑制作用。藉由添加約200,000/μL (N=3)的FDPD，逆轉了依替巴肽在T-TAS® AR晶片上對全血閉塞的抑制。當FDPD（大約200 k/μL）加入到用依替巴肽抑制的全血的樣品中時，閉塞時間在9分鐘時降至「正常」（圖10）。
相較於正常全血樣品，在血栓小體處理的情況下曲線值下的面積值亦隨著FDPD而增加。圖11顯示了在藥物治療的情況下AR T-TAS®晶片上FDPD閉塞的時間；依替巴肽對T-TAS® AR晶片閉塞的抑制藉由添加FDPD (200,000/μL; N=3)幾乎被完全逆轉。在圖12中，曲線值下的面積值指示血栓形成，其中FDPD藉由依替巴肽的抑制而恢復至正常水平；藉由添加FDPD (200,000/μL; N=3)克服了依替巴肽對T-TAS® AR晶片的血小板黏附及閉塞的抑制作用。
與血小板不同，在存在依替巴肽的情況下，FDPD在剪切下閉塞的能力不受抑制（圖13）。圖13顯示了AR T-TAS®系統上不同批次血栓小體的血栓形成的概況在依替巴肽治療的情況下未發生變化。貧血小板血漿（PPP）中的FDPD流經含或不含6 uM依替巴肽的T-TAS® AR晶片。依替巴肽對血栓小體黏附及閉塞沒有影響。所有血栓小體濃度係大約300,000/μL。
T-TAS對血漿中FDPD（大約300,000/μL）的AUC及閉塞值在使用及不使用依替巴肽的情況下相同（圖14-15）。圖14顯示曲線下面積值指示血栓形成，且在貧血小板血漿中在依替巴肽的情況下沒有觀察到變化。6 uM依替巴肽對FDPD T-TAS® AR晶片閉塞的AUC沒有影響。圖15顯示了在AR T-TAS®晶片上FDPD的閉塞時間在依替巴肽的情況下沒有改變。6 μM依替巴肽對貧血小板血漿中T-TAS® AR晶片的FDPD閉塞時間沒有顯著影響。
實例3. COX抑制劑。
以下結果證明了FDPD在服用COX抑制劑的患者的體外模型中的影響。阿司匹靈（一種常見的抗血小板藥物）阻斷血小板中的COX1酶。COX1負責將花生四烯酸轉化為前列腺素。
阿司匹靈係一種不可逆的環氧化酶(COX)抑制劑。血小板中的COX酶負責血栓烷A2、前列腺素E2及前列環素(PGI2)的合成。阿司匹靈會使血小板中的COX酶永久失活，且由於血小板不具有合成新酶的核物質，因此必須產生新的血小板以克服阿司匹靈效應。在沒有血栓烷A2、前列腺素E2及前列環素(PGI2)的情況下，血小板的促聚集活性會受到限制。許多人以低劑量的阿司匹靈維持，以防止不期望的凝血事件。阿司匹靈的生物利用度在很大程度上因投予途徑而異，其中單次500 mg劑量IV的峰值係500 μM，且相同劑量口服的峰值係44 μM。
按照實例4中的程式來製備FDPD。根據實例4進行透射光聚集測定法及T-TAS®實驗。
血小板在膠原蛋白及花生四烯酸刺激下將聚集。藉由花生四烯酸的刺激可以被完全抑制，而膠原蛋白刺激聚集僅可以在100-400 μM阿司匹靈的濃度下被部分抑制（圖16）。圖16顯示了在PRP中在使用膠原蛋白(10 ug/mL)及花生四烯酸(AA; 500 ug/mL)情況下的光透射聚集法測定法，其誘導血小板聚集，並且該聚集被測試的所有劑量的阿司匹靈(ASA)抑制。阿司匹靈完全消除了花生四烯酸誘導的血小板聚集。使用T-TAS®上的PL晶片系統來類比體外血小板結合及聚集，這係在剪切條件下脈管系統中的膠原蛋白的暴露所致。在100及500 μM的阿司匹靈的存在下，血小板的這種作用在很大程度上受到限制，但在存在FDPD的情況下可以至少部分地被恢復（大約200,000至400,000/μL；圖17）。圖17經由全血的曲線測量下的面積顯示，PL T-TAS®晶片上的血栓形成被阿司匹靈抑制，其中血栓形成與FDPD部分恢復。
實例4. 規程
FDPD的生成。按照美國專利第8,486,617號（諸如例如，實例1-5）及第8,097,403號（諸如例如，實例1-3）中所述的程式來製備FDPD，此等專利藉由引用以其整體併入本文。
透射光聚集測定法
將含有血小板或FDPD或兩者的組合的血漿樣品裝入比色皿中，並放入聚集測定法室中。該室加熱樣品並提供恒定的攪拌。可以藉由多種類型的抑制劑（不限於凝血酶、ADP、膠原蛋白及任何已知刺激血小板聚集的藥劑）啟動聚集。樣品亦可以被離體採集，或在體外補充有抑制劑。儀器藉由首先記錄刺激前2分鐘的光傳輸開始測定。然後，藉由技術人員引入所關注刺激物，並記錄光傳輸隨時間的變化。光傳輸的增加對應於血小板聚集的增加。
使用AR晶片藉由T-TAS®進行的評估。AR晶片藉由含有膠原蛋白及組織因子的單個通道來表徵；它們可以用於分析凝血及血小板功能。
按照製造商的說明準備使用T-TAS®儀器。將AR晶片（Diapharma Cat. # TC0101）及AR晶片鈣玉米胰蛋白酶抑制劑（CaCTI；Diapharma Cat. # TR0101）加熱至室溫。將300 uL的再水合的FDPD轉移至1.7 mL的微量離心管中，並以3900 g×10分鐘離心，以形成沉澱。將FDPD沉澱重新懸浮在George King (GK)混合的正常人血漿或自體血漿（含或不含自體血小板）中至約100,000-450,000/uL的濃度，如藉由AcT計數(Beckman Coulter AcT Diff 2 Cell Counter)測定的。使用溫和移液器混合20 uL的CaCTI與480 uL的GK血漿中的FDPD樣品。根據製造商的說明，將樣品裝載並在T-TAS®上運行。
使用PL晶片藉由T-TAS®進行的評估。
PL晶片與AR晶片類似地運行，但該晶片僅包被有膠原蛋白。
凝血酶生成
試劑製備。對於凝血酶生成，如下使用了來自製造商的以下材料：FluCa試劑盒（Diagnostica Stago, Cat. No. 86197），凝血酶校準品（Diagnostica Stago, Cat. No. 86197），PRP試劑（Diagnostica Stago, Cat. No. 86196），OCTOPLAS®（一種溶劑去汙劑處理的人混合血漿）（Octapharma, Cat. No. 8-68209-952-04）。在使用前，將所有冷凍的試劑在37℃水浴中解凍。使用印在試劑標籤上的體積，用無菌水對所有試劑進行再水合。在再水合後約2分鐘，藉由將小瓶倒置5次來混合試劑，因此沒有大塊或粉末殘留；未使用渦流。在再水合後約10分鐘重複該程式。所有試劑在室溫下再培養約10分鐘（在再水合後總計約20分鐘）。藉由將4.66 ml的FDPD對照緩衝液（表B）與2 ml的OCTOPLAS®混合來製備30%的OCTOPLAS®溶液。
[表B]  FDPD對照緩衝液
組分 濃度 （mg/mL，除非另有說明）
NaCl 6.08
KCl 0.28
HEPES 2.47
NaHCO 3 0.77
右旋糖 0.41
海藻糖 28.83
乙醇 0.76% (v/v)
樣品分析 - 板製備及測試。對於包含FDPD的實驗，為每個實驗FDPD及參考FDPD生成FDPD稀釋系列（一般使用194.4 K/µL、64.8 K/µL、21.6 K/µL及7.2 K/µL的稀釋度；細胞計數藉由流式細胞術確定）。除非另有說明，否則將FDPD再水合。藉由組合FDPD、OCTAPLAS®及FDPD對照緩衝液來製備最高濃度的稀釋液（例如194.4 k FDPD）。稀釋系列的其餘部分係藉由在OCTAPLAS®中按1:3連續稀釋製備的。對於每個測試樣品，將20 uL的PRP試劑添加到每個樣品孔（Immulon 2HB Clear，圓底96孔板（VWR, Cat. No. 62402-954）），並將20 uL的凝血酶校準品添加到每個校準品孔中。向每個樣品孔及校準品孔中加入80 uL的FDPD稀釋系列中的每一個。繼續直到最後一種稀釋液。然後將板在Fluoroskan Ascent 96孔螢光板讀取器（Thrombinoscope）（ThermoFisher Scientific）中培養10分鐘。在此培養階段期間，藉由將40 μL的FluCa底物添加到1.6 ml的解凍的Fluo-Buffer中，渦旋，並將溶液返回到水浴中來製備FluCa溶液。當培養完成時，根據製造商的說明書將FluCa溶液添加到Fluroskan儀器中。在40-41℃的溫度以20秒的間隔監測板螢光75分鐘。
實例5.
用坎格雷洛及阿司匹靈進行了另外的實驗。按照實例4中的程式製備FDPD。根據實例4進行透射光聚集測定法、T-TAS®及凝血酶生成實驗。
使用T-TAS®技術及AR晶片來評估FDPD對血栓形成恢復的影響。圖18顯示了用FDPD（濃度係250,000個FDPD/µL）、阿司匹靈(200 µM)、坎格雷洛(1 µM)、抗整合素α-2 (CD49B)抗體6F1（40 µg；關於產品/製造商資訊，參見dshb.biology.uiowa.edu/integrin-alpha-2-alpha2beta1?sc=7&category=-107）及抗GPIIb/IIIa受體抗體AP2（20 ug/mL；關於產品/製造商資訊，參見kerafast.com/product/2010/anti-glycoprotein-gpiiiagpiib-complex-ap-2-antibody）的多種組合處理的全血的閉塞時間。圖19顯示了未處理的全血及用FDPD（濃度為250,000個FDPD/µL），含有6F1（40 ug/mL；抗CD49b）、ASA（阿司匹靈；200 uM）及坎格雷洛(1 uM)的混合物或其組合處理的全血隨時間推移的閉塞。
亦使用T-TAS®技術及PL晶片來評估FDPD對血栓形成恢復的影響。圖20顯示了僅用緩衝液、阿司匹靈(500 µM)或阿司匹靈(500 µM)及FDPD（濃度為250,000個FDPD/µL）處理的全血的閉塞時間。圖21顯示了全血、用阿司匹靈(500 µM)處理的全血、或用阿司匹靈(500 µM)及FDPD (250,000/µL)處理的全血隨時間推移的閉塞。圖22及23顯示了使用100 µM阿司匹靈代替500 µM阿司匹靈的類似實驗資料。
測量了阿司匹靈治療（濃度）對凝血酶生成的影響。在來自每天服用嬰兒阿司匹靈及標準血漿(INR=1)的患者的PPP中以1450 k/uL、1150 k/uL、850 k/uL、650 k/uL、450 k/uL、150 k/uL、50 k/uL及0 k/uL的濃度評估FDPD。圖24顯示了阿司匹靈血漿的峰值凝血酶值在沒有FDPD的情況下低於正常範圍（約45 nM；正常範圍為約66 nM-166 nM），但在添加FDPD的情況下，它又回到正常範圍內，即使係使用最低FDPD濃度(50 k/µL)。值再次在約800 k FDPD時達到飽和並上升到220 nM——係沒有FDPD時這一血漿值的5倍（從45增加到220 nM）。
實例6. FDPD逆轉了由坎格雷洛誘導的延長的PRP閉塞時間
用坎格雷洛進行了另外的實驗。按照實例4中的程式來製備FDPD。根據實例4進行T-TAS®。
圖25A及25B顯示了用100 ng/mL坎格雷洛及ADP處理的富含血小板之血漿在T-TAS®流動系統（膠原蛋白及組織因子包被的通道）上將閉塞時間從19分鐘延長到26分鐘。添加150 k/µL FDPD將時間縮短至15.3分鐘。
實例7. FDPD而非隨機供體血小板（RDP）逆轉了在PRP中由替羅非班誘導的延長的閉塞時間
用替羅非班進行了另外的實驗。按照實例4中的程式來製備FDPD。根據實例4進行T-TAS®。從全血製備隨機供體血小板。
圖26A及26B顯示了用100 ng/mL替羅非班處理的富含血小板之血漿將T-TAS®流動系統（膠原蛋白及組織因子包被的通道）上的閉塞時間從18.43延長至無閉塞。添加150 k/µL的FDPD將時間縮短至12.94分鐘，但RDP在相同計數下僅部分恢復。
實例8. FDPD而非隨機供體血小板逆轉了PRP中由依替巴肽誘導的延長的閉塞時間
用依替巴肽進行了另外的實驗。按照實例4中的程式來製備FDPD。根據實例4進行T-TAS®。從全血製備隨機供體血小板。
圖27A及27B顯示了用9 μM依替巴肽處理的富含血小板之血漿在T-TAS®流動系統（膠原蛋白及組織因子包被的通道）上將閉塞時間從18.43延長到超過30分鐘。添加150 k/µL的FDPD可將時間縮短至11.56分鐘，但在相同數量的RDP下未見閉塞。
實例9. FDPD逆轉了PRP中由AP2（抗-GpIIb/IIIa）誘導的延長的閉塞時間
用AP2進行了另外的實驗。按照實例4中的程式來製備FDPD。根據實例4進行T-TAS®。從全血製備隨機供體血小板。
圖28A及28B顯示了用10 μg/mL的AP-2處理的富含血小板之血漿在T-TAS®流動系統（膠原蛋白及組織因子包被的通道）上將閉塞時間從18.43延長到超過30分鐘。添加150 k/µL的FDPD將時間縮短至13.14分鐘，且在17.43分鐘時在相同數量的RDP的情況下看到閉塞。
實例10. FDPD逆轉了來自接受阿司匹靈療法的對象的PRP中的長期閉塞
用阿司匹靈進行了另外的實驗。按照實例4中的程式來製備FDPD。根據實例4進行T-TAS®。從全血製備隨機供體血小板。對象服用標準劑量81 mg/天的阿司匹靈。
圖29A及29B顯示了取自阿司匹靈患者的富含血小板之血漿未能在T-TAS®流動系統（膠原蛋白及組織因子包被的通道）上閉塞。添加200 k/µL的FDPD使正常閉塞時間恢復到16分鐘。
實例11. FDPD在離體阿司匹靈富含血小板之血漿中恢復凝血酶生成
用阿司匹靈進行了另外的實驗。按照實例4中的程式來製備FDPD。根據實例4進行凝血酶生成。
圖30A顯示，來自阿司匹靈患者的富含血小板之血漿的凝血酶生成相對於用PRP試劑刺激的正常人被50 k/μL的FDPD逆轉。圖30B顯示了在使用FDPD (50 k/µL)的三次重複阿司匹靈離體取樣中，自正常凝血酶產生及恢復到正常凝血酶產生的變化、達到峰值產生的時間及滯後時間。（n=3個血栓小體批次，n=2個個體）。
實例12. FDPD在來自接受NSAID布洛芬療法的對象的PRP中恢復止血。
用布洛芬（一種NSAID）進行了另外的實驗。按照實例4中的程式來製備FDPD。根據實例4進行聚集測定法及T-TAS®。
富含血小板之血漿取自服用800 mg布洛芬的對象。圖31A顯示，回應於花生四烯酸的聚集的缺乏證實了在PRP中存在NSAID。圖31B顯示了T-TAS®流動系統（膠原蛋白及組織因子包被的通道）上的閉塞；來自布洛芬患者的PRP顯示閉塞，而添加ADP消除了閉塞。添加150 k/µL血栓小體恢復了閉塞。
實例13. FDPD®恢復用超藥理學氯吡格雷治療的NOD-SCID小鼠的出血時間
用氯吡格雷進行了另外的實驗。按照實例4中的程式來製備FDPD。
用氯吡格雷處理小鼠5天。將小鼠麻醉，剪掉尾端，然後立即投予FDPD。藉由目測來記錄從斷尾到斷尾止血的時間。
NOD/SCID小鼠用約3倍臨床劑量的氯吡格雷處理5天，然後在斷尾出血模型中進行評估。用氯吡格雷處理出血時間（分鐘）延長至17.8分鐘，而未處理係9分鐘（資料未顯示）。用8 µL/g的FDPD（在200 µL時1.8×10^9個顆粒/mL）的處理將出血減少到12.31分鐘（圖32）。
實例14. FDPD逆轉替卡格雷及坎格雷洛之閉塞抑制之可重複性
根據實例15中之程式製備人凍乾血小板衍生物(FDPD)，亦稱為凍乾人血小板(lyophilized human platelets；LHP)。根據實例4，使用AR晶片進行T-TAS®實驗，以測量閉塞時間。
使用T-TAS®實驗評估了在有及無FDPD之情況下，坎格雷洛及替卡格雷對富含血小板之血漿(PRP)之閉塞時間之影響。藥劑之濃度如下：坎格雷洛1 µM，替卡格雷500 ng/mL，FDPD 150 k/µL，及ADP 2 µM。結果顯示在圖33A及33B中。二磷酸腺苷(ADP)刺激的PRP樣品在19.5±1.5分鐘(n=4)時表現出閉塞，用坎格雷洛(n=4)治療時閉塞增加到28.0±3.0分鐘，或用替卡格雷(n=5)治療時增加到28.0±3.0分鐘（圖33A-33B）。在P2Y12抑制的PRP中加入150 k/µL凍乾人血小板可將血栓形成時間縮短至低於單獨使用PRP之時間；在坎格雷洛存在下係15.5 ±0.5分鐘(n=3)，而在替卡格雷存在下係17.5 ±1.5分鐘(n=5) （圖33）。每個測定的試驗次數係列為「(n=_)」值。
此等結果表明，在存在人FDPD之情況下，T-TAS® AR晶片上之血小板閉塞不受坎格雷洛及替卡格雷之抗血小板作用之影響。此等結果表明，當將人FDPD輸注給接受坎格雷洛、替卡格雷及/或類似藥物之患者時，其將保持預期的功能。
實例15. 血小板衍生物製備之切向流過濾(TFF)法
根據標準操作程式對單採血小板進行切向流過濾，包括以下製程步驟：血小板稀釋、血小板濃縮、及血小板洗滌。
血小板供體單元最初被匯集到一個共同的容器中。血小板最初可以用或不用酸化的洗滌緩衝液（例如，對照緩衝液）稀釋，以減少處理過程中血小板之活化。血小板可以經歷兩種加工途徑；1)在濃縮至最終產品濃度之前，用對照緩衝液洗滌，直到達到所需的殘留成分（例如，供體血漿），或者2)在用對照緩衝液洗滌之前，將血小板濃縮至最終產品濃度，直到達到所需的殘留成分（例如，供體血漿）。然後將TFF處理過的血小板裝入小瓶，冷凍乾燥並進行熱處理。
下面係一種特定的協定。
對於本實例中TFF過程之所有步驟，使用緩衝液F。該過程在18-24℃之溫度下進行。
緩衝液F
組分 值 (± 1%)
HEPES 7.6 mM
NaCl 60 mM
KCl 3.84 mM
右旋糖 2.4 mM
NaHCO 3 9.6 mM
海藻糖 80 mM
乙醇 0.8%
聚蔗糖 6% (w/v)
pH 6.6-6.8
將血小板裝載到TFF（PendoTECH控制器系統(PendoTECH ® Princeton, NJ; https://www.pendotech.com)，該系統由Repligen TFF Cassette (XPM45L01E)製備。TFF過程使用孔徑為0.45 µm之膜進行。用等重量(±10%)之緩衝液F稀釋血小板。將血小板濃縮至約2250×10 3細胞/µL (±250 x 10 3)，然後用約2倍透析體積(DV)之緩衝液F洗滌。目標血漿百分比一般小於15%相對血漿（由血漿蛋白含量確定）。血漿蛋白之去除通過280 nm紫外吸光度對照已知相關性進行監測。
在一些情況下，在與約51%相對血漿體積、約8.1%相對血漿體積、約6.0%相對血漿體積及約1.3%相對血漿體積相關的紫外吸光度讀數下抽取樣品。在每個加工步驟中，用約6.0%及以下的樣品對小體積等分試樣進行取樣。
洗滌後，若細胞濃度不是2000×10 3細胞/µL (±300 x 10 3)，則用緩衝液F稀釋細胞或濃縮至該範圍內。在所有情況下，只要細胞與緩衝液F接觸，都係在18-24℃之溫度範圍內進行的。為了更好地澄清，細胞在18-24℃之溫度範圍內加載緩衝液F之試劑。然後細胞一般被冷凍乾燥（即凍乾），然後在80℃下加熱（熱處理）24小時，從而形成凍乾血小板衍生物(FDPD)，當由Cellphire, Inc.製備用於臨床或商業用途時，亦被稱為THROMBOSOMES®。
用於製備人FDPD之凍乾程式如表LA2所示。
[表LA2]
凍乾機方法
30 g填充    10 g填充
冷凍 冷凍
過渡至 -40℃ 0分鐘 o毫托 過渡至 -40℃ 0分鐘 0毫托
保持在 -40℃ 180分鐘 0毫托 保持在 -40℃ 180分鐘 O毫托
最後冷凍 最後冷凍
保持在 -40℃ 0分鐘 100毫托 保持在 -40℃ O分鐘 100毫托
初步乾燥    初步乾燥
過渡至 .5℃ 420分鐘 O毫托 過渡至 -10℃ 360分鐘 O毫托
保持在 .5℃ 1200分鐘 0毫托 保持在 -10℃ 360分鐘 o毫托
過渡至 +5℃ 120分鐘 0毫托 過渡至 +S℃ 180分鐘 O毫托
保持在 +S℃ 1380分鐘 0毫托 保持在 +S℃ 360分鐘 0毫托
過渡至 +30℃ 300分鐘 0毫托 過渡至 +30℃ 300分鐘 0毫托
保持在 +30℃ 720分鐘 0毫托 保持在 +30℃ 720分鐘 0毫托
保持在 +30℃ 720分鐘 200毫托 保持在 +30℃ 720分鐘 200毫托
保持在 +30℃ 60分鐘 0毫托 保持在 +30℃ 60分鐘 0毫托
二次乾燥 二次乾燥
保持在 +30℃ 9999分鐘 0毫托 保持在 +30℃ 9999分鐘 0毫托
方法總時間la-85小時    方法總時間la-54小時
為了進行諸如凝血酶生成研究(TGPU)及聚集研究，FDPD一般在室溫下用水再水合超過10分鐘。一般來說，再水合體積等於在乾燥前用細胞填充每個小瓶之體積。凍乾後加熱（熱處理）的血小板衍生物亦稱為烘烤之FDPD。而凍乾後未加熱（熱處理）之FDPD稱為未烘烤之FDPD。
凍乾後以粉末形式獲得的人FDPD可用於商業應用，諸如將乾燥形式之人FDPD（例如THROMBOSOMES®）以瓶裝形式提供給例如可以用適量液體對瓶子進行再水合之醫生。
實例16. FDPD恢復用超藥理學氯吡格雷治療之NOD-SCID小鼠之出血時間
按照實例15中之程式製備人FDPD。
用5 mg/kg之氯吡格雷處理小鼠3天。麻醉小鼠，剪下直徑1 mm之尾端，浸泡在溫生理鹽水中，記錄凝血時間。給動物靜脈或動脈注射生理鹽水或1.6×10 9/kg之FDPD，同時剪斷尾巴，開始剪尾試驗。通過肉眼觀察止血情況，記錄從截尾到止血之時間。
這項實驗之結果如圖34所示。用氯吡格雷處理出血時間（秒）延長至1661+/-257.9秒，而未處理係758.6 +/- 623.4秒。用1.6 x 10 9/kg FDPD治療後出血減少到417.9 +/- 166.6 秒。資料採用單因素方差分析軟體進行統計分析。
此等結果表明，人FDPD對氯吡格雷作用具有抗性並在小鼠剪尾模型中恢復止血。在接受氯吡格雷治療之患者人群中，人FDPD有可能成為一種有效的臨床止血工具。
實例17. FDPD恢復用超藥理學氯吡格雷治療之紐西蘭白兔之出血時間
用氯吡格雷處理之紐西蘭白兔進行了其他實驗。按照實例15中之程式製備人FDPD。
氯吡格雷劑量係23 mg/kg，連續給藥5天處理兔。將兔麻醉，取耳血，記錄凝血時間。用鹽水或1.6×10 9/kg之人FDPD處理動物，將其注射到靜脈或動脈中，同時剪下耳朵，開始剪耳試驗。藉由目測檢查記錄從耳朵出血到止血之時間。
本實驗之結果如圖35所示。用氯吡格雷處理出血時間（秒）延長至206.8 +/- 104.2秒，而未處理係87.1 +/- 18.2秒。用1.6 x 10 9/kg FDPD治療後出血減少到417.9 +/- 166.6秒（圖35）。資料採用單因素方差分析進行分析。
此等結果表明，人FDPD對氯吡格雷作用具有抗性並在在兔耳出血模型中恢複止血。在接受氯吡格雷治療之患者中，凍乾人血小板有可能成為一種有效的臨床止血工具。
實例18. 在25 ng/mL利伐沙班處理的OCTAPLAS® PRP試劑存在下，FDPD對凝血酶生成之貢獻
根據實例15所述之方法製備人FDPD。本實例中使用之OCTAPLAS®血漿係經溶劑/洗滌劑處理之混合人血漿，可從Octapharma USA, Inc., 117 W. Century Road Paramus, NJ 07652; www.octapharmausa.com獲得。
進行凝血酶生成測定(TGA)，以偵測(1)含富含血小板之血漿(PRP)及遞增FDPD濃度(0、10、20、40、80、160) x 10 3/µL之OCTAPLAS®及(2)含富含血小板之血漿試劑(PRP)、25 ng/mL利伐沙班及遞增FDPD濃度(0、10、20、40、80、160) x 10 3/µL之OCTAPLAS®中的凝血酶生成及內源性凝血酶潛能。25 ng/mL劑量之利伐沙班在生理劑量範圍內，係抑制凝血酶生成之有效劑量。
本實驗之結果如圖36A及36B所示。此等結果表明，在含有PRP試劑之OCTAPLAS®中存在25 ng/mL劑量之利伐沙班之情況下，即使低劑量之FDPD亦能夠催化一些凝血酶之生成（圖36A）並部分恢復內源性凝血酶潛能（圖36B）。
實例19. 加入FDPD後，經25 ng/mL利伐沙班處理之全血(WB)之閉塞時間部分恢復
使用AR晶片（膠原蛋白及組織因子F刺激劑）在總凝血酶形成分析系統(T-TAS®) 01上測量閉塞時間。按照製造商之說明準備使用T-TAS® 01 (Diapharma®, https://diapharma.com)儀器。AR晶片(Diapharma # 19001)及鈣玉米胰蛋白酶抑製劑(CaCTI; Diapharma Cat.# TR0101)分別加熱到37℃或室溫。在測定開始前30分鐘將全血收集在檸檬酸鈉管中。FDPD被再水合、計數（Beckman Coulter AcT Diff 2細胞計數器），並以指定之最終濃度添加到全血中。將利伐沙班(Cayman Chemical cat #16043)溶解在100% DMSO中，製成10 ug/mL儲備溶液，並以所示之最終濃度加入到樣品中，產生0.25%之最終DMSO含量。將480 uL樣品與20 uL鈣CTI試劑混合，並在T-TAS® 01上之AR晶片上運行。
根據實例15之程式製備FDPD。使用AR晶片一般方法及OCTAPLAS®血漿之TAS® 01測定在上面之實例18中進行了描述。TAS® 01測定在沒有利伐沙班、25 ng/mL利伐沙班、25 ng/mL利伐沙班及20 k/µL FDPD之情況下運行。
壓力隨時間之變化如圖37所示，壓力升高表示閉塞。結果表明，在經利伐沙班處理之全血中加入FDPD後，閉塞時間部分恢復。
實例20. 在經利伐沙班處理之OCTAPLAS®或經利伐沙班處理之新鮮PRP中加入FDPD，用血栓動力學分析系統(T2T)顯示纖維蛋白及凝血酶之恢復
血栓動力學®分析系統(T2T) (Diapharma®, https://diapharma.com)用於偵測凝血酶生成及纖維蛋白形成。按照實例15中之程式製備人FDPD。
除不添加磷脂試劑外，根據製造商之建議進行血栓動力學設置及樣品製備。該實驗使用OCTAPLAS®或新鮮PRP進行。OCTAPLAS®及PRP各自與300ng/mL之利伐沙班一起培養2分鐘，向樣品中加入FDPD，然後將樣品加入試劑1（T2T測定之接觸途徑抑制劑及凝血酶螢光底物）；OCTAPLAS®運行時添加20k/µL FDPD，PRP運行時添加2k/µL FDPD。根據儀器規程，將樣品在37℃下培養3分鐘(PRP)或15分鐘(OCTAPLAS®)。培養後，將樣品添加到含有TF塗層塑料插件之比色皿中並開始運行。降低新鮮PRP運行中之成分濃度，以觀察使用新鮮血小板與OCTAPLAS®（一種經去汙劑處理之血漿）時之動態回應。
該實驗之結果顯示在經利伐沙班處理之OCTAPLAS中藉由FDPD恢復了纖維蛋白及凝血酶之生成（圖38A-38C）。結果亦示了在內源性血小板之生理比率下，經利伐沙班處理之新鮮PRP樣品中纖維蛋白及凝血酶生成之部分恢復（圖39A-39C）：若在臨床上使用，則可以預期FDPD FDPD FDPD。
實例21：添加FDPD以少於臨床建議劑量之魚精蛋白挽救經肝素處理樣品之凝血形成能力
本實驗評估了肝素及魚精蛋白之臨床比例對FDPD功能之影響。按照實例15中之程式製備FDPD。進行活化凝血時間(Activating Clotting Time, ACT)測定以測量凝血時間，進行TGA以測量凝血酶生成。使用ACT進行肝素初始滴定，以找到達到異常凝血時間所需的最小肝素劑量。結果顯示，至少需要0.8U/mL之肝素才能達到異常凝血之形成。
圖40顯示了在抗凝血劑存在之情況下，使用ACT測試，FDPD對凝血時間之影響。活化凝血時間係使用合併的正常血漿及肝素(H)及魚精蛋白(P)測量的，如x軸上標記的那樣；1/2 P、P及3/2 P分別代表4、8及12 µg/ml之魚精蛋白劑量。FDPD（在圖40中稱為「Tsomes」）以10、25或50 K/μl添加。標記為「0」Tsomes之樣品在合併之正常血漿中加入了等體積之對照緩衝液。圖例中之「K」代表10 3個FDPD。所有的樣本都係一式兩份。N = 2。該實驗在不同的日子重複進行，以提高統計相關性。
圖41A-C顯示了使用TGA，FDPD在肝素及魚精蛋白存在之情況下保留凝血酶生成峰。圖41A顯示0.1 U肝素對合併正常血漿中凝血酶生成之影響，在5K及50K血小板/µL濃度下，比較了單採單位(APU)及FDPD。圖41B顯示了0.8 U/mL肝素被4μg/ml魚精蛋白（推薦逆轉劑量之1/2）逆轉之影響，FDPD係10K及50K血小板/µL濃度。圖41A及圖41B之TGA係由含有磷脂及組織因子之混合物之PRP試劑引發。圖41A及41B中之虛線表示在該測定中看到的典型凝血酶峰。圖41C顯示了用肝素及魚精蛋白處理的樣品之凝血酶生成之峰高，如x軸所示。空（白色填充）柱代表用對照緩衝液稀釋之樣品，填充柱代表用FDPD處理之樣品。所有樣品一式三份運行。該實驗在不同的日子重複進行，以提高統計相關性。
該實驗之結果表明，若在經肝素處理之樣品中存在少於臨床劑量之魚精蛋白，那麼FDPD會導致凝血時間(ACT)之劑量依賴性減少及凝血酶峰高(TGA)之增加。
實例22. 阿司匹靈(ASA)阻斷抑制FDPD逆轉之可重複性。
按照實例15中之程式製備人凍乾血小板衍生物(FDPD)。根據實例4，使用AR晶片進行T-TAS®實驗。
使用T-TAS測定評估阿司匹靈對有及無FDPD之PRP閉塞時間之影響。試劑之濃度如下：PRP濃度係30K/µL，阿司匹靈濃度係500µM，及FDPD濃度係20k/µL。結果如圖42所示：PRP樣本顯示，使用阿司匹靈處理之PRP樣本顯示閉塞＞30分鐘，而僅使用PRP之時間係25:56分鐘；在P2Y12抑制之PRP中添加20k/µL FDPD會將血栓形成之時間縮短至低於單獨使用PRP之時間；在存在阿司匹靈之情況下，血栓形成之時間係23:29分鐘（圖42）。
此等結果表明，在人FDPD存在之情況下，T-TAS AR晶片上之血小板閉塞不受阿司匹靈抗血小板作用之影響。這表明，當輸注給接受阿司匹靈及/或類似藥物之患者時，人FDPD將保持預期之功能。
實例23. 替卡格雷及阿司匹靈(ASA)聯合阻斷抑制FDPD逆轉之可重複性。
按照實例15中之程式製備人凍乾血小板衍生物(FDPD)。根據實例4，使用AR晶片進行T-TAS®實驗。
使用T-TAS測定評估替卡格雷及阿司匹靈一起對有及無FDPD之PRP閉塞時間之影響。試劑之濃度如下：50K/µL之PRP、1.5µg/mL之替卡格雷、500µM之阿司匹靈及50k/µL之FDPD。結果如圖43所示。在經替卡格雷及阿司匹靈聯合處理之PRP中添加20k/µL FDPD將血栓形成之時間縮短至19:36分鐘，而單獨使用替卡格雷及阿司匹靈時血栓閉塞時間＞30分鐘。
此等結果表明，在人FDPD存在之情況下，血小板在T-TAS®AR晶片上之封閉作用不受替卡格雷及阿司匹靈聯合抗血小板作用之影響。這表明，當輸注給接受替卡格雷及阿司匹靈聯合治療之患者時，人FDPD將保持預期之功能。
實例24. FDPD在有促效劑及缺乏新鮮血小板之情況下不能聚集
在已知的血小板聚集促效劑存在之情況下，使用光透射聚集法(LTA)來觀察FDPD之聚集情況。將FDPD聚集資料與新鮮血小板聚集資料進行比較。
FDPD，亦稱為「TFF-FDPD」，經由實例15中描述之TFF方法生產。富含血小板之血漿(PRP)中之新鮮血小板係從收集在酸-檸檬酸-葡萄糖(ACD)收集管（BD Vacutainer ACD Solution A Blood Collection Tubes ref# 364606）中之全血製備的。藉由使用Beckman Coulter Avanti J-15R離心機在22℃下將ACD全血以180 g離心15分鐘來製備富含血小板之血漿(PRP)。藉由將ACD全血在22℃下以2000 g離心20分鐘來製備貧血小板血漿(PPP)。
為了製備用於聚集度研究之樣品，用PPP將PRP稀釋至250,000 plts/ul之血小板濃度（plt計數）。使用Coulter Ac•T diff2血液分析儀確定血小板計數。如實例15所述，使用切向流過濾製備經凍乾及熱處理之TFF FDPD。用30 mL細胞培養級水(Corning Cat# 25-055-CI)對30 mL小瓶裝FDPD進行再水合。將小瓶在室溫下培養總共10分鐘。在10分鐘之再水合期間，在0、5、及10分鐘時輕輕旋轉小瓶以促進凍乾物之溶解。根據本實例之聚集度研究係在沒有新鮮血小板之情況下進行的。因此，聚集度研究僅支持FDPD之聚集能力，而不支持共聚集能力。對於聚集度研究之樣品製備，再水合之FDPD在緩衝液中稀釋至血小板計數為250,000/µL。用於瑞斯特黴素聚集研究之FDPD樣品製劑由20%枸櫞酸鈉血漿(George King Bio-Medical, Inc. Pooled Normal Plasma product# 0010-1)及緩衝液組成。在37℃下使用光透射聚集法法(LTA) (BIO/DATA PAP-8E Platelet Aggregometer Cat#106075)來觀察FDPD（圖44A）及PRP樣品（圖44B）在最終濃度為20 µM ADP、10 µg/mL膠原蛋白、200 µM腎上腺素（來自Helena Laboratories Platelet Aggregation Kit cat.#5369之ADP、膠原蛋白及腎上腺素試劑）、0.5 mg/mL花生四烯酸(Helena Arachidonic Acid Reagent cat.)、1 mg/mL瑞斯特黴素(Helena Ristocetin for Aggregation Assays cat.)、及10 µM凝血酶受體啟動肽6 (TRAP-6) (Sigma Aldrich Cat# T1573-5MG)之聚集反應。PPP、緩衝液或含有20%枸櫞酸鈉血漿之緩衝液分別用作PRP、FDPD、及含有20%枸櫞酸鈉血漿樣品之FDPD之空白。在促效劑處理之前，在裝有攪拌棒之試管中反向輸送225 µL之FDPD或PRP樣品。然後將試管放入聚集計之非攪拌培養孔中1分鐘。然後將樣品放入攪拌之培養孔中1分鐘。然後將樣品放入攪拌測試孔中並開始聚集測試。在基線觀察1分鐘後，用促效劑處理樣品並記錄聚集反應。使用與測試運行相同的程式，在所有運行中同時包括25 µL緩衝液之陰性對照，以確定所有樣品組之自發基線-聚集反應。
在室溫下，用促效劑處理1.7 mL微量離心管中之FDPD樣品製劑，促效劑之最終濃度為20 µM ADP、0.5 mg/mL花生四烯酸、10 µg/mL膠原蛋白、200 µM腎上腺素、1 mg/mL瑞斯特黴素、及10 µM TRAP-6或25 µL緩衝液。在促效劑處理前及處理後5分鐘確定FDPD計數。當藉由LTA測量時，ADP（圖44C）、膠原蛋白（圖44D）、腎上腺素（圖44E）、瑞斯特黴素（圖44F）、及TRAP-6（圖44G）在TFF FDPD中不引起聚集反應。上述促效劑之TFF FDPD反應係相當於從無促效劑或緩衝液陰性對照獲得之基線聚集值。當用花生四烯酸(AA)處理TFF FDPD並經由LTA觀察時（圖44H）,存在明顯的聚集反應，然而在目測聚集比色杯後，觀察到溶液變得明顯透明，並且沒有觀察到聚集物，這表明明顯的聚集反應來自FDPD之溶解，而不是AA誘導之聚集。藉由細胞計數確定TFF FDPD之聚集產生了與所有促效劑之LTA結果相似的結果。藉由對新鮮PRP進行LTA來證實促效劑之功能性（圖44B）。ADP、花生四烯酸、膠原蛋白、腎上腺素、瑞斯特黴素、及TRAP-6引起正常的聚集曲線及聚集幅度，其代表了PRP之強烈聚集反應。腎上腺素在PRP中之聚集反應降低，然而腎上腺素仍然能夠引起高於基線聚集之聚集反應。PRP緩衝液之陰性對照表明，在添加促效劑之前，PRP沒有被活化。在聚集試驗後對PRP樣品之目測檢查表明，沒有發生細胞溶解，且在所有促效劑之聚集試管中肉眼觀察到血小板聚集，表明所有的聚集反應都來自血小板聚集。在上述促效劑存在下觀察到的FDPD及新鮮PRP之聚集百分比見表6。
[表6]
促效劑 TFF FDPD 聚集%(n=3) PRP 聚集% (n=2)
20 µM ADP 1% 66%
0.5 mg/mL 花生四烯酸 28%* 73%
10 µg/mL膠原蛋白 2% 83%
300 µM腎上腺素 1% 11%
1 mg/mL瑞斯特黴素 0% 98%
10 µM TRAP-6 1% 73%
25 µL緩衝液 1% 2%
*-由於FDPD之溶解而不是聚集
實例25. FDPD被最大程度地激活-在TRAP存在之情況下，膜聯蛋白V與FDPD之結合
用TFF製程製備並經TRAP-6處理之FDPD被測試其表面磷脂醯絲氨酸(phosphatidylserine, PS)之存在，該磷脂醯絲氨酸表示活化之血小板。藉由分析膜聯蛋白(Annexin V, AV)與FDPD之結合來評估PS之存在。
使用30 mL細胞培養級水(Corning Cat# 25-055-CI)將一小瓶用實例15中所述之TFF製程制備之30 mL FDPD再水合。將水加入小瓶後，將小瓶在室溫下培養10分鐘。在10分鐘期間，每隔2分鐘輕輕旋轉小瓶，以促進結塊之完全溶解。一旦FDPD完全再水合，將兩份475 µL等分試樣轉移到兩個單獨之1.7 mL微量離心管中。將二十五微升HEPES改良的Tryode白蛋白緩衝液(HMTA) (Cellphire RGT-004)添加到第一個試管中之樣品中，以產生不含TRAP-6之FDPD。將二十五微升之400 µM凝血酶受體啟動肽6 (TRAP-6) (Sigma Aldrich Cat# T1573-5MG)加入到第二個試管中，以產生具有TRAP-6之FDPD。TRAP-6在培養過程中之最終濃度係20 µM。將兩根試管倒置5次，以混合並在室溫下培養10分鐘。
用HMTA緩衝液或TRAP-6培養後，藉由將10 µL FDPD樣品添加到190 µL HMTA中，將樣品進一步稀釋至1:20。將此等與HMTA培養之FDPD稀釋樣品及與TRAP-6培養之FDPD稀釋樣品在1.7 mL微量離心管中染色，結果如下：藉由10 µL之FDPD與20 µL之HMTA結合生成未染色之對照樣品；藉由10 µL之FDPD、5 µL之膜聯蛋白V (AV) - ACP (BD Pharmingen Cat# 550475)及15 µL之HMTA結合生成無鈣對照樣品；藉由10 µL之FDPD、5 µL之AV - ACP、及15 µL之補充有9 mM CaCl 2之HMTA(Cellphire RGT-012 Lot# LAB-0047-21)生成膜聯蛋白V (AV)染色測試樣品。AV染色之測試樣品中CaCl 2之最終濃度係3 mM。用HMTA培養之FDPD及用TRAP-6培養之FDPD之所有染色樣品都係一式三份生成。樣品在室溫下避光培養20分鐘。
培養後，將500 µL HEPES緩衝鹽水(HBS) (Cellphire RGT-017)添加到所有未染色之對照及無鈣對照樣品中。在AV染色之測試樣本中添加五百毫升之HBS及3 mM之CaCl 2。將每個樣品中之一百毫升轉移到96孔板中之單個孔中，並使用Agilent Quanteon流式細胞儀對樣品進行分析。
在暴露於或不暴露於藉於TRAP-6之情況下，測量人單採血小板中CD62P之表達，證實了TRAP-6之活性。將兩份475 µL單採血小板等分試樣轉移到兩個獨立的1.7 mL微量離心管中。將二十五微升HMTA緩衝液添加到第一個試管中之樣品中，以生成不含TRAP-6之單採血小板。將二十五毫升400 µM TRAP-6添加到第二個試管中以生成帶有TRAP-6之FDPD。TRAP-6在培養過程中之最終濃度係20 µM。將兩根試管倒置5次，以混合並在室溫下培養10分鐘。
用HMTA緩衝液或TRAP-6培養後，藉由將10 µL單採血小板添加到190 µL HMTA中，將樣品進一步稀釋至1:20。將與HMTA培養後之單採血小板及與TRAP-6培養後之單採血小板兩者之此等經稀釋之樣品置於1.7 mL微離心管中進行染色，結果如下：藉由將10 µL單採血小板與20 µL HMTA結合，生成未染色之對照樣品；藉由將10 µL之單採血小板、5 µL之抗CD62P-PE抗體(BD Pharmingen Cat# 550561 Lot# 6322976)及15 µL之HMTA結合，生成抗CD62P染色測試樣品。用HMTA培養之單採血小板及用TRAP-6培養之單採血小板之所有染色樣品都係一式三份生成。樣品在室溫下避光培養20分鐘。
培養後，將500 µL磷酸鹽緩衝鹽水(PBS) (Corning Cat# 21-040-CV1)添加到所有樣品中。將每個樣品中之一百微升轉移到96孔板中之單個孔中，並使用Agilent Quanteon流式細胞儀對樣品進行分析。
使用TFF製程製造之FDPD與TRAP-6或緩衝液一起培養，並用膜聯蛋白V (AV)染色，以確定磷脂醯絲氨酸(PS)之相對存在。單採血小板用於確認TRAP-6活性（圖45A及表7），暴露於TRAP-6後CD62P表現增加證實了TRAP-6能夠促進血小板表現。外膜小葉上之PS表現係血小板活化之標誌，PS膜表現之增加導致更大量之AV結合。未染色之樣品及用AV染色但未添加鈣之樣品在流式細胞儀上作為陰性對照進行分析。未染色之樣品幾乎不產生熒光訊號，表明FDPD在選擇用於測量AV之波長處不是自發熒光的（圖45B）。無鈣對照樣品亦幾乎不產生螢光訊號。由於AV與PS之結合依賴於鈣離子之存在，無鈣對照樣品訊號之缺乏表明AV-ACP綴合物不以非特異性方式與FDPD膜結合。在鈣存在之情況下，所有用AV染色之樣品都提供了強烈的熒光訊號，該訊號平均比未染色之對照亮約695倍。該結果表明所有FDPD樣品都表現或包含PS。藉由平均螢光強度(MFI)測量，將FDPD與TRAP-6一起培養沒有引起AV結合之顯著增加（圖45B）。用緩衝液培養之FDPD及用TRAP-6培養之FDPD之平均MFI值分別係68,179及68,783（表8）。
[表 7]
單採血小板CD62P MFI
樣品類型 - TRAP +TRAP
未染色 100 107
染色之CD62P 2,351 126,598
[表8]
FDPD膜聯蛋白MFI
樣品類型 - TRAP +TRAP
未染色 98 99
無鈣對照 203 198
AV染色 68,179 68,783
藉由膜聯蛋白V (AV)與FDPD之結合，使用TFF製程製造之FDPD顯示在膜上含有磷脂醯絲氨酸(PS)。AV與活化血小板之結合係鈣依賴性結合，因此AV與再水合FDPD結合之鈣離子依賴性進一步支持了AV綴合物不以非特異性方式與FDPD膜結合。
雖然TRAP-6被證明激活單採血小板，這可以藉由CD62P表現增加及AV與活化血小板之結合增加來證明，但對於FDPD，情況並非如此。具有或不具有TRAP-6培養之FDPD表現出相同的高水平AV結合，並表明TRAP-6不會促進FDPD之PS進一步表面表現，可能係因為FDPD在凍乾及/或再水合過程中被最大程度地激活，並且進一步的刺激/激活係不可能的。
實例26. FDPD表面存在血小板反應蛋白(TSP1)
血小板反應蛋白(TSP1)係一種糖蛋白，一般被發現覆蓋活化血小板之外膜，被發現在沒有激活之情況下覆蓋FDPD。藉由抗血小板反應蛋白-1 (TSP-1)抗體之熒光偵測TSP1之存在。
藉由將收集在檸檬酸葡萄糖酸(ACD)中之全血以180 g離心10分鐘來分離新鮮之富含血小板之血漿(PRP)。將經分離之PRP再次以823 g離心10分鐘。然後將血漿取出並丟棄，將血小板顆粒重新懸浮在HEPES改良的Tyrode’s白蛋白(HMTA)緩衝液中。在含有2 mM GPRP多肽(BaChem Cat# H-1998.0025)、2 mM CaCl 2、0.5 U/mL凝血酶(EDM Milliporte Cat# 605190-1000U)、及0.5 µg/mL膠原蛋白(ChronoPar Cat# 385)之情況下，藉由將血小板在室溫下培養10分鐘，將所得經洗滌之血小板樣品之等分試樣活化。將經洗滌過之血小板之單獨等分試樣放在一邊用作靜息陰性對照。
所有FDPD樣品均使用實例15中所述之TFF製程製造。本實例中研究之FDPD係烘烤之FDPD，其在凍乾後在80℃加熱24小時。使用適量之細胞培養級水對所有小瓶進行再水合處理。將水加入後，將小瓶在室溫下培養10分鐘。在10分鐘期間，每隔2分鐘輕輕旋轉小瓶，以促進結塊之完全溶解。一旦再水合，就使用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS) (Corning Cat# 21-040-CV)將來自每個小瓶之FDPD樣品以及來自靜息及活化之新鮮洗滌之血小板等分試樣之樣品一式三份按1:500稀釋。經稀釋之樣品在Quanteon流式細胞儀上分析，並確定血小板及FDPD之濃度。基於此等濃度，每個FDPD或新鮮血小板樣品之等分試樣被稀釋至每微升100,000 FDPD之濃度。
藉由將10 µL稀釋之FDPD或血小板添加到含有4 µg/mL抗血小板反應蛋白-1 (TSP-1)抗體之20 µL HMTA中(Santa Cruz Biotech Cat# sc-59887 AF594)，生成每瓶FDPD以及靜息及活化的新鮮血小板之染色樣本。藉由將10 µL稀釋之FDPD或血小板添加到20 µL HMTA中，生成未染色之對照樣品。所有樣品在室溫下避光培養20分鐘。培養後，將500 µL PBS添加到所有樣品中。將每個樣品中之一百微升轉移到96孔板中之單個孔中，並使用Agilent Quanteon流式細胞儀對樣品進行分析。
新鮮血小板及FDPD之未染色樣品幾乎不產生熒光訊號，表明樣品在選擇用於測量TSP-1表現或存在之波長下沒有自發熒光。如使用流式細胞術分析平均螢光強度(MFI)增加顯示，經膠原蛋白及凝血酶活化後，抗TSP-1抗體與新鮮血小板之結合略有增加(1,223比3,306)。FDPD樣品上TSP-1之表現或存在因批次而異，平均MFI值係91,448（圖46）。對於所有被測試之FDPD樣本，螢光訊號顯著高於靜息或新鮮血小板產生之訊號，表明大量的TSP-1可能結合到再水合之FDPD之表面。該資料表明，不需要活化步驟之FDPD表現出在某些實例及應用中優於活化的血小板性質之性質。
實例27. 馮威里氏因子(vWF)在FDPD表面之存在
藉由將收集在檸檬酸葡萄糖酸(ACD)中之全血以180 g離心10分鐘來分離新鮮之富含血小板之血漿(PRP)。將經分離之PRP再次以823 g離心10分鐘。然後將血漿取出並丟棄，將血小板顆粒重新懸浮在HEPES改良的Tyrode’s白蛋白(HMTA)緩衝液中。在含有2 mM GPRP多肽(BaChem Cat# H-1998.0025)、2 mM CaCl 2、0.5 U/mL凝血酶(EDM Milliporte Cat# 605190-1000U)、及0.5 µg/mL膠原蛋白(ChronoPar Cat# 385)之情況下，藉由將血小板在室溫下培養10分鐘，將所得經洗滌之血小板樣品之等分試樣活化。將經洗滌之血小板之單獨等分試樣放在一邊用作靜息陰性對照。所有FDPD樣品均使用實例15中所述之TFF製程製備。本實例中研究之FDPD係烘烤之FDPD，其在凍乾後在80℃加熱24小時。使用適量之細胞培養級水(Corning Cat# 25-055-CI)對所有小瓶進行再水合處理。將水加入後，將小瓶在室溫下培養10分鐘。在10分鐘期間，每隔2分鐘輕輕旋轉小瓶，以促進結塊之完全溶解。一旦再水合，就使用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)將來自每個小瓶之FDPD樣品以及來自靜息及活化之新鮮經洗滌血小板等分試樣之樣品一式三份按1:500稀釋。經稀釋之樣品在Quanteon流式細胞儀上分析，並確定其濃度。基於此等濃度，每個FDPD或新鮮血小板樣品之等分試樣被稀釋至每微升100,000 FDPD之濃度。
在染色之前，將抗馮威里氏因子抗體(Novus Biologicals Cat# NBP2-54379PE)稀釋10倍。藉由將10 µL稀釋之FDPD或血小板添加到10 µL之稀釋抗體及10 µL之HMTA中，生成每瓶FDPD以及靜息及活化的新鮮血小板之染色樣本。藉由將10 µL稀釋之FDPD或血小板添加到20 µL HMTA中，生成未染色之對照樣品。所有樣品在室溫下避光培養20分鐘。培養後，將500 µL PBS添加到所有樣品中。將每個樣品中之一百毫升轉移到96孔板中之單個孔中，並使用Agilent Quanteon流式細胞儀對樣品進行分析。
新鮮血小板及FDPD之未染色樣品幾乎不產生熒光訊號，表明樣品在選擇用於測量vWF表現或存在之波長下沒有自發熒光。如使用流式細胞術分析平均螢光強度(MFI)增加顯示，經膠原蛋白及凝血酶活化後，抗vWF抗體與新鮮血小板之結合增加(4,771比19,717)。FDPD樣品上vWF之表現或存在因批次而異，平均MFI值係13,991（圖47）。對於所有測試之FDPD樣品，熒光訊號介於靜息及活化血小板產生之訊號之間。這表明vWF存在於再水合FDPD之表面上，並且存在的vWF量大於在靜息血小板上看到的量。資料表明，即使在沒有任何活化之情況下，FDPD亦表現出優於靜息血小板並與活化血小板相似的特性。
實例28. FDPD-受損膜
測試了凍乾後在80℃加熱24小時（烘烤之FDPD）或不加熱（未烘烤之FDPD）之FDPD之膜完整性。藉由對預凍乾材料之前向散射分析標準制定之烘烤及未烘烤之FDPD，並藉由使用針對穩定的細胞內抗原β-微管蛋白之抗體，以確定FDPDs是否可滲透到IgG (150 kDa)。前向散射係一種鐳射沿鐳射路徑散射之流式細胞術測量。前向散射(FSC)係通常用作細胞大小之指示，因為較大的細胞會產生更多的散射光。然而，前向散射亦可以經由光密度（即光透射）指示樣品之膜完整性；相較於相同細胞（若完整）（儘管大小相同），具有較少胞質物質及多孔膜之細胞將透射更多的光（具有較低的FSC）。
藉由使用針對穩定的細胞內抗原β-微管蛋白之抗體，研究實例15之FDPD以確定FDPD是否可滲透IgG (150 kDa)。新鮮血小板、未烘烤之FDPD及烘烤之FDPD被固定並用有及無細胞通透性之抗β微管蛋白IgG染色。新鮮血小板之IgG與通透性之結合顯著增加，而烘烤及未烘烤之FDPD對通透性之反應均無變化（表9）。新鮮血小板及FDPD之結果固定後用0.2% Triton-X 100滲透或未滲透，然後用結合螢光團AF594之抗β微管蛋白IgG染色。未染色之樣品包括在背景螢光中。
[表9]
樣品 平均FSC-H AF594 MFI
未染色之血小板 120,301 115
血小板 118,782 636
透性化血小板 49,062 9,009
未染色之未烘烤FDPD 23,140 75
未烘烤FDPD 23,280 546
透性化未烘烤FDPD 7,069 562
未染色之烘烤FDPD 49,740 362
烘烤FDPD 49,587 2,720
透性化烘烤FDPD 27,527 2,523
IgG結合研究表明，FDPD之膜完整性嚴重受損，以至於大分子可以通過細胞膜。另外值得注意的是，透化作用導致前向散射值降低，證實了膜完整性與相同尺寸顆粒之光密度之間的關係。
此外，將藉由如實例15中所述之TFF方法製備之FDPD之前向光散射之平均強度與現有儲存之人血小板單採單位進行比較。方法如下所述。
所有FDPD樣品均使用TFF製程生產。使用適量的細胞培養級水對所有小瓶進行再水合處理(Corning Cat# 25-055-CI)。添加水後，將小瓶在室溫下培養10分鐘。在10分鐘期間，每隔2分鐘輕輕旋轉小瓶，以促進結塊之完全溶解。再水合後，每小瓶FDPD樣品，連同現有儲存之人血小板單採單位之樣品，用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS) (Corning Cat# 21-040-CV)按1:500稀釋一式三份。經稀釋之樣品在Quanteon流式細胞儀上採集並確定其濃度。基於此等濃度，將每份FDPD或單採血小板樣品之等分試樣在HEPES改良Tyrode白蛋白(HMTA)緩衝液(Cellphire RGT-004)中稀釋至每微升100,000 FDPD之濃度。
將未染色之FDPD樣品及含有10 6個細胞之HMTA中之人單採血小板用500 µL之PB稀釋。將每個樣品中之一百微升轉移到96孔板中之單個孔中，並使用Agilent Quanteon流式細胞儀對樣品進行分析。
平均強度如圖48所示。可以觀察到，相較於單採血漿，FDPD用流式細胞術測量之前向光散射之平均強度明顯較低（約50%）。因此，與之前表9之結果相一致的是，相較於相同細胞（若完整）（儘管大小相同），具有較少胞質物質及多孔膜之細胞將透射更多的光（具有較低的FSC）。
總體結果表明，FDPD中之膜完整性大大降低。血小板胞內內容物已被釋放（如LDH），大分子可進入細胞胞質溶膠（如抗β-微管蛋白IgG）。FDPD之質膜可能會因乾燥（昇華）或再水合過程而受損，因為冷凍保存之血小板之冷凍似乎不足以引起嚴重的膜功能障礙。此等結果亦暗示來自細胞外部之訊號轉導在FDPD中是不可能的，這被缺乏聚集反應所證實（如實例24中所觀察到的）。烘烤雖然增加了光密度，但似乎並沒有顯著改善膜之完整性（例如，IgG β-微管蛋白結合）。因此，本實例中討論之結果表明本文揭露之血小板衍生物具有受損之質膜。
實例29. 表面標誌物及凝血酶生成。
藉由實例15中描述之TFF方法生產FDPD批料，並使用流式細胞術分析細胞表面標記物之表現或存在或不存在。
流式細胞術用於評估FDPD之表現或CD41、CD62及磷脂醯絲氨酸(PS)之存在。在染色過程中，樣品包括約270,000/µL之FDPD，並在細胞分析儀中分析樣品之前以約1:34之比例稀釋。將FDPD樣品再水合，並在去離子水中以1:2稀釋。藉由向52.4 µL HMTA中添加47.6 µL抗體來稀釋抗CD41儲備液。藉由向10 µL HMTA及10 µL稀釋之CD41抗體中添加10 µL稀釋之FDPD來製備抗CD41染色之樣品。藉由將12 µL抗CD62與23.8 µL抗CD41及64.2 µL HMTA組合來製備抗CD62主混合物。以相同的方式製備同型對照混合物。藉由將10 µL稀釋之FDPD添加到20 µL抗CD62母料中，製備抗CD62染色之樣品。以相同的方式使用同型母料混合物製備同型對照樣品。藉由將11.7 µL AV與83.3 µL抗CD41及80 µL HMTA混合來製備膜聯蛋白V (AV)母料混合物。藉由將20 µL含有50 mM GPRP之稀釋FDPD添加到20 µL含有15 mM CaCl 2之HMTA及20 µL AV母料混合物中來製備用AV染色之樣品。使用不含鈣之HMTA以相同的方式製備陰性門控對照樣品，以防止AV與PS結合。所有樣品在室溫下培養20分鐘。培養後，將1 mL HBS添加到所有樣品中。用於稀釋AV測試樣品之HBS含有5 mM CaCl 2。抗CD41結合用於鑒定所關注之群體。CD62及PS之表現或存在藉由CD41陽性群體中之抗CD62及AV結合來評估。
使用抗CD41抗體(4.8 µL, Beckman Coulter part #IM1416U)分析糖蛋白IIb（GPIIb，也稱為抗原CD41）之表現或存在。測定之FDPD顯示出CD41陽性（表10；圖49）
[表10]
批次 CD41陽性(%)
1 81.5
2 79.4
3 85.7
4 78.2
5 81.5
6 84.0
7 78.5
平均值 81.3
使用膜聯蛋白V (AV) (1.3 µL, BD Biosciences Cat. No. 550475)測定磷脂醯絲氨酸(PS)之表現或存在。AV係一種鈣依賴性磷脂結合蛋白。測定之FDPD顯示出AV陽性（表11；圖50）。
[表11]
批次 AV陽性(%)
1 96.7
2 89.9
3 95.3
4 95.4
5 95.9
6 96.2
7 93.5
平均值 94.7
使用抗CD62P抗體(2.4 µL, BD Biosciences Cat. No. 550888)檢測P-選擇素（也稱為CD62P）之表現或存在。測定之FDPD顯示出CD62陽性（表12；圖51）
[表12]
批次 CD62陽性(%)
1 94.2
2 93.1
3 89.8
4 92.4
5 92.5
6 87.3
7 90.7
平均值 91.4
在含有組織因子及磷脂之PRP試劑存在之情況下，用4.8x10 3FDPD/µl測量凝血酶生成。平均而言，FDPD樣品之凝血酶峰高(TPH)係60.3 nM。腦磷脂用作陽性對照。（表13；圖52）
對於每個測試之小瓶，使用30%之Octaplas對照緩衝液溶液，根據流式細胞儀顆粒計數，將FDPD之再水合樣品稀釋至7,200個顆粒/µL。在96孔板中，藉由添加20 µL PRP試劑(Diagnostica Stago Catalog No. 86196)及80 µL稀釋之FDPD產生樣品孔。藉由向80 µL稀釋之FDPD中添加20 µL凝血酶校準試劑(Diagnostica Stago Catalog No. 86197)產生校準孔。將平板裝入平板閱讀器中，並在40℃之黑暗中培養10分鐘。在樣品培養期間，藉由將40 µL FluCa底物(Diagnostica Stago Catalog No. 86197)添加到1.6 mL溫熱至37℃之Fluo緩衝液(Diagnostica Stago Catalog No. 86197)並渦旋混合來製備FluCa溶液。將FluCa溶液抽吸到分配注射器中，並將20 µL機械分配到每個反應孔中，使每個孔中之最終FDPD濃度達到4,800個顆粒/µL，並開始凝血酶生成反應。在75分鐘之過程中，經由每個孔中之螢光來測量凝血酶生成。
示例性之分步規程如下：
打開CAT軟體；設置儀器；及根據製造商指南製備PRP試劑（包括組織因子及一些磷脂）、校準品、及氟緩衝液及氟底物。
在37°C水浴中解凍Octaplas及TGA稀釋緩衝液10分鐘。
將解凍之Octaplas添加到TGA稀釋緩衝液中，以產生含有30% Octaplas之緩衝液。
使用30% Octaplas混合物以1:50之比例稀釋重組腦磷脂，用作陽性對照。
用細胞培養級水將FDPD再水合10分鐘，然後用30% Octaplas稀釋至7,200 FDPD/µL。
使用多道移液器，向每個測試孔中添加20 µL PRP試劑。向每個校準孔中添加20 µL校準品。
向每個測試及校準孔中添加80 µL樣品。向陰性對照孔中添加80 µL 30% Octaplas，及向陽性對照孔中添加1:50腦磷脂。
將平板插入托盤並在40°C下培養10分鐘。培養後，將氟緩衝液及氟底物混合物（包括熒光標記之肽，當被凝血酶切割時會產生熒光訊號）分配到活性孔中。
以20秒之間隔讀取平板75分鐘，以獲取完整之凝血酶生成曲線。
[表13]
批次 TPH (nM)
1 61.5
2 71.4
3 67.8
4 52.0
5 60.2
6 54.7
7 54.4
平均值 60.3
表14總結了此等測定之資料。
[表14]
TFF批次
批次    平均TPH (nM) 平均CD41陽性 平均AV陽性(0.5µm - 2.5µm) 1 平均CD62陽性(0.5µm - 2.5µm) 1
批次B 61.5 81.5 96.7 94.2
批次C 71.4 79.4 89.9 93.1
批次D 67.8 85.7 95.3 89.8
批次E 52.0 78.2 95.4 92.4
批次F 60.2 81.5 95.9 92.5
批次G 54.7 84.0 96.2 87.3
批次H 54.4 78.5 93.5 90.7
平均值 60.3 81.3 94.7 91.4
1使用流式細胞術前向散射法之sizing beat測定顆粒直徑。
實例30. 微粒含量減少
使用動態光散射法比較根據實例15製備（但未冷凍乾燥）之現有儲存之人血小板(hIDSP)及FDPD之微粒含量。結果如圖53A-C及表15所示。圖53A-C係相對強度歸一化之直方圖，使得每個資料點之強度之和等於1.0。例如，若特定資料點之y軸值係0.1，則一般可以解釋為該資料點佔樣品散射強度之10%。
用於生產一批FDPD之單採單元池被製成用於分析。這種樣本類型被稱為「hIDSP」。取該hIDSP（現有儲存之人血小板）池之1 mL等分試樣用於動態光散射(DLS; Thrombolux- Light Integra)分析。然後將來自該等分試樣之樣品吸入毛細管並插入DLS儀器。毛細管在儀器中放置1分鐘，使溫度及移動達到平衡。機器之內部溫度係37℃。平衡1分鐘後，選擇樣品之黏度設置。DLS儀器具有用於血漿樣品之內置黏度設置，諸如單採裝置。該黏度設置用於hIDSP樣品。此設置之黏度係1.060 cP（厘泊）。選擇血漿黏度設置後，對樣品進行分析。從相同的hIDSP等分試樣中，將第2份及第3份樣品吸入毛細管，並使用該hIDSP規程進行分析，進行三次重複分析。然後根據資料確定微粒百分比。預凍乾樣品係來自FDPD製造過程之過程中樣品。這種樣品類型係在凍乾前取出之材料。對樣品進行黏度測量，以便用DLS分析此等樣品。黏度計(Rheosense µVISC)具有一個內置之烘箱，用於將樣品加熱到DLS儀器之溫度(37℃)。在對樣品進行黏度分析之前，必須將烘箱加熱到37°C。為確定預凍乾樣品之黏度，將400-350 µL樣品吸入註射器並插入黏度計。將樣品插入黏度計後，儀器溫度需要再次達到37°C。在烘箱達到37℃後，除了「測量體積」設置係400 µL之外，在所有設置都係自動的情況下分析樣品。該黏度用於同一樣品之DLS測量。取該預凍乾樣品之1 mL等分試樣用於動態光散射(DLS; Thrombolux - LightIntegra)分析。然後將來自該等分試樣之樣品吸入毛細管並插入DLS儀器。毛細管在儀器中放置1分鐘，使溫度及移動達到平衡。機器之內部溫度係37℃。平衡1分鐘後，將之前測量之黏度輸入DLS儀器之黏度設置中。輸入黏度後，對樣品進行分析。從相同的預凍乾等分試樣中，將第2份及第3份樣品吸入毛細管中，並使用該預凍乾規程進行分析，進行三次重複分析。然後從資料中確定微粒百分比。
根據標準規程將FDPD再水合，並在SeraSub (CST Technologies， Inc .)及ACD之混合物中以1:5稀釋。SeraSub/ACD稀釋液由SeraSub中ACD之1:9稀釋液組成。製備1 mL 1:5稀釋之FDPD用於DLS分析。將FDPD稀釋樣品吸入毛細管並插入DLS儀器。毛細管在儀器中放置1分鐘，使溫度及移動達到平衡。機器之內部溫度係37℃。平衡1分鐘後，選擇樣品之黏度設置。用於樣品之黏度係1.200cP。輸入黏度後，對樣品進行分析。將第2份、第3份及第4份樣品吸入毛細管，用FDPD規程進行分析，進行四次重複分析。然後根據資料（及血小板半徑，若適用）確定微粒百分比。
[表15]
批次號 hIDSP MP% 預凍乾MP%
批次J 9.47% 0.49%
批次K 7.55% 0.65%
批次L 7.73% 0.59%
平均值 8.25% 0.58%
在另外的實驗中，使用動態光散射(DLS)比較現有儲存之人血小板(hIDSP)與根據實例15製備之再水合FDPD之微粒含量。結果如圖54A-C及表16所示。
[表16]
批次號    hIDSP MP% FDPD MP%
批次D 7.43% 2.82%
批次E 5.95% 3.40%
批次F 12.39% 2.37%
平均值 8.59% 2.86%
實例31. 9F9及PAC-1結合
活化的血小板之聚集係由GPIIb/IIIa錯合物之形成所介導的，該錯合物可以與纖維蛋白原（也稱為因子1）結合並形成凝血。GPIIb/IIIa係一種血小板纖維蛋白原受體，也稱為CD41/CD61錯合物。在這個過程中，ADP促進GPIIb/IIIa錯合物之活性形式。抗體9F9結合與細胞膜相關之纖維蛋白原。因此，細胞膜上纖維蛋白原之存在表明FDPD能夠形成凝血。
使用10 mL去離子水將根據實例15製備之小瓶裝之FDPD再水合。使用HMTA（HEPES修飾之Tyrode’s白蛋白）將FDPD之等分試樣稀釋至1×10 5顆粒/µL之最終濃度。如表17所示製備樣品。藉由向20 µL HMTA中添加10 µL稀釋之FDPD來製備未染色之樣品。藉由將10 µL稀釋之FDPD添加到10 µL同型對照抗體(BD Biosciences Cat. No. 555748)及10 µL HMTA中，制備FITC同型對照樣品。藉由將10 µL稀釋之FDPD添加到10 µL之9F9抗體(BD Biosciences Cat. No.340507及10 µL HMTA中，製備9F9染色之樣品。藉由將10 µL稀釋之FDPD添加到5 µL同型對照抗體及15 µL HMTA中，製備用PAC-1染色之樣品。每個反應混合物使用總共1×10 6個顆粒，一式兩份製備所有樣品。樣品在室溫下避光培養20分鐘。培養後，所有樣品用1 mL HBS稀釋，並使用ACEA NovoCyte流式細胞儀進行分析。由PAC-1產生之螢光訊號用於確定未結合纖維蛋白原之活化GPIIb/IIIa受體之表現或存在。來自9F9之螢光訊號用於確定纖維蛋白原與FDPD表面受體之結合。
HTMA（HEPES修飾Tyrode’s白蛋白）。
組分 濃度 （mM，除非另有說明）
HEPES 9.5
NaCl 145.0
KCl 4.8
NaHCO 3 12.0
右旋糖 5.0
牛血清白蛋白 0.35% w/v
[表17]
   未染色 FITC Iso 9F9 PAC-1
細胞(uL) 10 10 10 10
HMTA(uL) 20 10 10 15
抗體(uL) 0 10 10 5
藉由流式細胞術分析樣品，證明再水合後存在表面結合之纖維蛋白原（圖55），而抗PAC-1抗體沒有顯示出顯著的結合（圖56）。這進一步證明，由TFF製備之FDPD包括與GPIIb/GPIIIa活性形式結合之纖維蛋白原，因為PAC-1與相同的錯合物結合。
儘管前面之描述針對本發明之較佳實施例，但是應當注意，其他變化及修改對於所屬技術領域中具有通常知識者來說將是顯而易見的，且可以在不背離本發明之精神或範圍之情況下進行。此外，結合本發明之一個實施例描述之特徵可以結合其他實施例使用，即使上面沒有明確說明。此外，所屬技術領域中具有通常知識者將容易地理解，如上討論的本發明可以用不同順序之步驟及/或用與所揭露的組態不同的組態的硬體元件來實踐。因此，儘管已經基於此等較佳的實施例描述了本發明，但是對於所屬技術領域中具有通常知識者來說顯而易見的是，某些修改、變化及替代結構將是顯而易見的，同時保持在本發明之精神及範圍內。所要求保護的本發明之實施例在本文中固有地或明確地描述及實現。因此，為了確定本發明之標準及界限，應當參考所附申請專利範圍。
無
圖1示出了在富含血小板之血漿中，在有及無增加濃度的坎格雷洛的情況下由10 μM二磷酸腺苷(adenosine diphosphate；ADP)活化誘導的坎格雷洛(cangrelor, 「Cang」)的透射光聚集測定，其被表示為綜合聚集曲線。 圖2示出了使用T-TAS®技術，坎格雷洛、ADP或其組合對血小板閉塞的影響。 圖3係來自圖2的資料集的曲線下面積(area under the curve；AUC)的橫條圖。來自圖2的重復資料集作為平均值呈現。 圖4係來自圖2的資料集的閉塞時間的橫條圖。來自圖2的重復資料集以平均值呈現。 圖5示出了使用T-TAS®技術，在再水合後60、90或115分鐘，在ADP及坎格雷洛的存在及不存在的情況下，補充到富含血小板之血漿中的FDPD (「thromb」; 300,000/μL)對血小板閉塞的影響。 圖6係來自圖5的資料集的AUC的橫條圖。來自圖5的重復資料集被顯示為平均值。 圖7係來自圖5的資料集的閉塞時間的橫條圖。來自圖5的重復資料集被顯示為平均值。 圖8係來自用膠原蛋白(10 μg/mL)及各種濃度的依替巴肽(eptifibatide, 「Epti」)處理的血小板（濃度為250,000個血小板/μL）的聚集實驗的AUC的橫條圖。 圖9示出了使用T-TAS®技術，不同濃度的依替巴肽對全血的影響。 圖10示出了使用T-TAS®技術在有及無不同濃度的依替巴肽的情況下FDPD (「Tsomes」)補充（大約200,000/μL）對全血的影響。 圖11係來自圖10的資料集的閉塞時間的橫條圖。 圖12係來自圖10的資料集的AUC的橫條圖。 圖13顯示在貧血小板血漿(platelet-poor plasma, PPP)中存在依替巴肽時，FDPD（不同批次）產生閉塞。 圖14係來自圖13的資料集的AUC的橫條圖。來自圖13的複製資料集被顯示為平均值。 圖15係來自圖13的資料集的閉塞時間的橫條圖。來自圖13的複製資料集被顯示為平均值。 圖16係來自用含有及不含不同濃度的阿司匹靈(aspirin, 「ASA」)的膠原蛋白(10 μg/mL)或花生四烯酸(arachidonic acid, 「AA」; 500 μg/Ml)處理的血小板的聚集實驗的AUC的橫條圖。 圖17係全血、用各種濃度的阿司匹靈(ASA)處理的全血及用各種濃度的阿司匹靈處理並補充有FDPD（約200,000-400,000 μL）的全血的閉塞時間的橫條圖，如藉由使用T-TAS®技術在剪切下對膠原塗覆的塑膠的回應所測量的。 圖18示出了在存在ASA（200微莫耳）、坎格雷洛（1微莫耳）、AP2 6F1（40微克）時，由全血中的FDPD促進的血栓形成的恢復，如在塗覆有促凝血酶原激酶及膠原的T-TAS AR晶片上藉由閉塞時間測量的。 圖19示出了在存在ASA（200微莫耳）、坎格雷洛（1微莫耳）及6F1（40微克/mL）時，由全血中的FDPD促進的血栓形成的恢復情況，如藉由隨時間變化的閉塞（壓力）所測量的。 圖20示出了在高剪切下，向阿司匹靈(ASA)抑制的全血（500微莫耳）中補充FDPD對與塑膠固定的豬膠原蛋白相互作用的影響，如藉由AUC測量的。 圖21示出了在高剪切下，向阿司匹靈(ASA)抑制的全血（500微莫耳）中補充FDPD對與塑膠固定的豬膠原蛋白相互作用的影響，如藉由隨時間變化的閉塞（壓力）所測量的。 圖22示出了在高剪切下，向阿司匹靈(ASA)抑制的全血（100微莫耳）中補充FDPD對與塑膠固定的豬膠原蛋白相互作用的影響，如藉由AUC測量的。 圖23示出了在高剪切下，向阿司匹靈(ASA)抑制的全血（100微莫耳）中補充FDPD對與塑膠固定的豬膠原相互作用的影響，如藉由隨時間變化的閉塞（壓力）所測量的。 圖24示出了向正常及阿司匹靈抑制的血漿中補充FDPD對峰值凝血酶的影響。 圖25A示出了使用T-TAS®技術，單獨的坎格雷洛或坎格雷洛加上FDPD對血小板閉塞的影響。 圖25B係來自圖25A的資料集的閉塞時間的橫條圖。 圖26A示出了使用T-TAS®技術，單獨的替羅非班，或替羅非班與隨機供體血小板(random donor platelet, RDP)或FDPD一起對血小板閉塞的影響。 圖26B係來自圖26A的資料集的閉塞時間的橫條圖。 圖27A示出了使用T-TAS®技術，單獨的依替巴肽，或依替巴肽與RDP或FDPD一起對血小板閉塞的影響。 圖27B係來自圖27A的資料集的閉塞時間的橫條圖。 圖28A示出了使用T-TAS®技術，單獨的AP2，或AP2與RDP或FDPD一起對血小板閉塞的影響。 圖28B係來自圖28A的資料集的閉塞時間的橫條圖。 圖29A示出了使用T-TAS®技術，FDPD對從接受阿司匹靈療法的對象獲取的PRP的影響。 圖29B係來自圖29A的資料集的閉塞時間的橫條圖。 圖30A示出了取自接受阿司匹靈療法的對象的PRP的FDPD對凝血酶生成的影響。 圖30B係取自接受阿司匹靈療法的對象（在有或沒有添加FDPD的情況下）的PRP的凝血酶生成參數的橫條圖。 圖31A示出了取自接受布洛芬療法的對象的PRP的聚集測定，其中添加了緩衝液、花生四烯酸或膠原蛋白。 圖31B示出了ADP對取自接受布洛芬療法（含或不含FDPD）的對象的PRP的影響。 圖32示出了給藥FDPD對用超藥理劑量的氯吡格雷治療的小鼠的出血時間的影響。 圖33A示出了在有及無FDPD的情況下，坎格雷洛及替卡格雷對富含血小板之血漿(Platelet Rich Plasma, PRP)之閉塞時間之影響。 圖33B示出了在有及無FDPD的情況下，坎格雷洛及替卡格雷對富含血小板之血漿(PRP)之閉塞時間之影響。 圖34示出了用於描繪FDPD在用超藥理學氯吡格雷治療之NOD-SCID小鼠中恢復出血時間之能力的尾切測試。 圖35示出了在用超藥理學氯吡格雷治療之紐西蘭白兔中FDPD恢復出血時間之能力。 圖36A示出了在25 ng/ml之利伐沙班存在下，FDPD能夠催化凝血酶生成。 圖36B示出了在25 ng/ml之利伐沙班存在下，FDPD能夠部分地恢復內源性凝血酶潛能。 圖37示出了在經利伐沙班治療之全血中加入FDPD情況下，閉塞時間部分恢復。 圖38A示出了藉由經利伐沙班治療之Octaplas中之FDPD得到之活化劑凝血酶潛能。 圖38B示出了藉由經利伐沙班治療之Octaplas中之FDPD得到之最大凝血酶濃度。 圖38C示出了藉由經利伐沙班治療之Octaplas中之FDPD得到之ATG滯後時間。 圖39A示出了藉由經利伐沙班治療之新鮮富含血小板之血漿(PRP)中之FDPD得到之活化劑凝血酶潛能。 圖39B示出了藉由經利伐沙班治療之新鮮富含血小板之血漿(PRP)中之FDPD得到之最大凝血酶濃度。 圖39C示出了藉由經利伐沙班治療之富含血小板之血漿(PRP)中之FDPD得到之ATG滯後時間。 圖40示出了使用ACT測試得出之在抗凝血劑存在下FDPD對凝血時間之影響。 圖41A示出了在彙集的正常血漿中0.1 U肝素對凝血酶生成之影響，比較了單採單位(apheresis unit, APU)與5K及50K血小板/µL之FDPD。 圖41B示出了在10K及50K血小板/µL之FDPD條件下被4 µg/ml魚精蛋白（推薦逆轉劑量之½）逆轉之0.8 U/mL肝素之影響。 圖41C示出了用肝素及魚精蛋白處置之樣本之凝血酶生成之峰高，如在x軸上所述。 圖42示出了在FDPD存在下相對於僅PRP，使用阿司匹靈治療之閉塞時間。 圖43示出了在FDPD存在下相對於僅PRP，利用替卡格雷及阿司匹靈二者之閉塞時間。 圖44A示出了在促效劑存在下但新鮮血小板不存在下FDPD之聚集反應。 圖44B示出了在促效劑存在下但新鮮血小板不存在下富含血小板之血漿(PRP)之聚集反應。 圖44C示出了在20 µM ADP存在下FDPD及PRP聚集之比較。 圖44D示出了在10 µg/ml膠原蛋白存在下FDPD及PRP聚集之比較。 圖44E示出了在300 µM腎上腺素存在下FDPD及PRP聚集之比較。 圖44F示出了在1 mg/ml瑞斯特黴素存在下FDPD及PRP聚集之比較。 圖44G示出了在10 µM TRAP-6存在下FDPD及PRP聚集之比較。 圖44H示出了在5 mg/ml花生四烯酸存在下FDPD及PRP聚集之比較。 圖45A示出了藉由觀察單採血小板上CD62P之表現，TRAP-6肽能夠促進血小板活化。 圖45B示出了TRAP-6肽無法增加FDPD上CD62P之表現。 圖46示出了在靜息新鮮血小板、活化的新鮮血小板及不同批次的FDPD中藉由流式細胞術根據平均螢光強度(mean fluorescent intensity；MFI)測量血小板反應蛋白(thrombospondin；TSP-1)。 圖47示出了在靜息新鮮血小板、活化的新鮮血小板及不同批次的FDPD中，藉由流式細胞術根據平均螢光強度(MFI)測量馮威里氏因子(von Willebrand facto；vWF)。 圖48示出了藉由流式細胞術測量的單採血小板及FDPD之前向散射(forward scatter, FSC)。 圖49示出了未染色（深色資料點）或用抗CD-41抗體染色（淺色資料點）的FDPD之示例性流式細胞術資料。 圖50示出了在有（淺色資料點）及無（深色資料點）鈣情況下，與膜聯蛋白V一起培養之FDPD之示例性直方圖。 圖51示出了與抗CD62抗體（淺色資料點）或與同型對照物（深色資料點）一起培養之FDPD之示例性直方圖。 圖52示出了在含有組織因子及磷脂（實線及長劃線）以及對照腦磷脂（點）之PRP試劑存在下FDPD之凝血酶峰高曲線圖。 圖53A係藉由動態光散射(dynamic light scattering；DLS)確定之現有儲存之人血小板（J批）及由其衍生之血小板衍生物（凍乾前）中不同半徑之顆粒之百分比佔有率曲線圖。 圖53B係藉由DLS確定之現有儲存之人血小板（K批）及由其衍生的血小板衍生物（凍乾前）中不同半徑之顆粒之百分比佔有率曲線圖。 圖53C係藉由DLS確定之現有儲存之人血小板（L批）及由其衍生之血小板衍生物（凍乾前）中不同半徑之顆粒之百分比佔有率曲線圖。 圖54A係藉由DLS確定之現有儲存之人血小板（D批）及由其衍生之血小板衍生物（凍乾前）中不同半徑之顆粒之百分比佔有率曲線圖。 圖54B係藉由DLS確定之現有儲存之人血小板（E批）及由其衍生之血小板衍生物（凍乾前）中不同半徑之顆粒之百分比佔有率曲線圖。 圖54C係藉由DLS確定之現有儲存之人血小板（F批）及由其衍生之血小板衍生物（凍乾前）中不同半徑之顆粒之百分比佔有率曲線圖。 圖55示出了未染色（黑色）或用同型對照抗體（深灰色）或FITC標記之9F9抗體（淺灰色）染色之低血漿FDPD之示例性直方圖比較，以及示出兩次重複之平均螢光強度之表格。 圖56示出了未染色（黑色）或用抗-PAC-1抗體染色（淺灰色）之低血漿FDPD之示例性直方圖比較，以及示出兩次重複之平均螢光強度之表格。

Claims (72)

  1. 一種包含凍乾血小板衍生物(FDPD)之組成物，其係用於治療正在投予或已經投予一抗血小板劑之一對象之一凝血病，其中該治療包含： (a)在一投予前評價中確定該對象具有一或多個凝血參數之一異常值；及 在(a)之後，給需要其之該對象投予一有效量之包含FDPD之該組成物，使得該對象之出血可能性降低，從而治療該凝血病。
  2. 一種包含凍乾血小板衍生物(FDPD)之組成物，其係用於治療正在投予或已經投予一抗血小板劑之一對象之一凝血病，其中該治療包含： 向該對象投予一有效量之包含FDPD之該組成物，使得該對象之該出血可能性降低，其中包含FDPD之該組成物包含具有一降低的聚集傾向之FDPD之一群體，使得該群體中不超過10%之該FDPD在包含一促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集，其中在該投予包含FDPD之該組成物之前，該對象由於正在投予或已經投予該抗血小板劑而處於增加之出血風險中，從而治療該凝血病。
  3. 如請求項2所述之組成物，其中該治療進一步包含在該投予之前，確定該對象被投予了一抗血小板劑。
  4. 一種用於治療對象中凝血病之包含凍乾血小板衍生物(FDPD)之組成物，其中該治療包含： 給需要其之該對象投予一有效量之包含FDPD之組成物，使得該對象之該出血可能性降低，其中給該對象投予一抗血小板劑及降低血小板功能之一第二藥劑， 其中在該投予包含FDPD之該組成物之前，該對象需要該組成物，因為投予該抗血小板劑及該第二藥劑會增加出血之風險， 從而治療該凝血病。
  5. 如請求項4所述之組成物，其中該治療進一步包含在該投予包含FDPD之該組成物之前，確定該對象被投予了該抗血小板劑及降低血小板功能之該第二藥劑。
  6. 如請求項2至5中任一項所述之組成物，其中該治療進一步包含在該投予包含凍乾血小板衍生物之該組成物之前，在投予前評價中確定該對象具有一或多個凝血參數之一異常值。
  7. 如請求項4所述之組成物，其中該抗血小板劑係一第一抗血小板劑且該第二藥劑係一第二抗血小板劑。
  8. 如請求項6所述之組成物，其中該第一抗血小板劑及該第二抗血小板劑各自係不同的抗血小板劑，其選自阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉、及沙格雷酯。
  9. 如請求項6所述之組成物，其中該第一抗血小板劑及該第二抗血小板劑具有不同的作用機制。
  10. 如請求項8所述之組成物，其中該第一抗血小板劑及該第二抗血小板劑各自係不同的抗血小板劑，其選自阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉、及沙格雷酯。
  11. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該抗血小板劑選自阿司匹靈、坎格雷洛、替卡格雷、氯吡格雷、普拉格雷、依替巴肽、替羅非班、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、噻氯匹定、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉及沙格雷酯。
  12. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該抗血小板劑選自坎格雷洛、替卡格雷、阿昔單抗、特魯曲班、匹考他胺、依利格雷、布洛芬、沃拉帕沙、阿托帕沙、西洛他唑、前列腺素E1、依前列醇、雙嘧達莫、曲前列素鈉、及沙格雷酯。
  13. 如請求項1及3至5中任一項所述之組成物，其中包含FDPD之該組成物包含具有降低之聚集傾向之FDPD之群體，使得該群體中不超過10%之該FDPD在包含一促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集。
  14. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該FDPD具有每10 6個血小板衍生物至少1.5個凝血酶生成效價單位(TGPU)之效價。
  15. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中至少50%之該FDPD係CD 41陽性血小板衍生物，其中少於5%之該CD 41陽性FDPD係直徑小於0.5 µm之微粒，且其中該FDPD具有每10 6個血小板衍生物至少1.5個凝血酶生成效價單位(TGPU)之效價。
  16. 如請求項15所述之組成物，其中該抗血小板劑抑制CD 41。
  17. 如請求項16所述之組成物，其中至少75%之該FDPD係CD 41陽性血小板衍生物。
  18. 如請求項16所述之組成物，其中該抗血小板劑選自阿昔單抗、依替巴肽、及替羅非班中之一或多者。
  19. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中包含FDPD之該組成物包含：具有一降低的聚集傾向之FDPD之一群體，使得在包含一促效劑但不包含血小板之聚集條件下，該群體中不超過10%之血小板衍生物聚集；及 具有超活化血小板之一或多種特徵，選自： A) 血小板反應蛋白(TSP)在其表面上存在之一水平大於在靜息血小板表面上之一水平； B) 馮威里氏因子(vWF)在其表面上存在之一水平大於在靜息血小板表面上之一水平；及 C) 相較於一促效劑不存在下一血小板活化標記物之表現，在一促效劑存在下無法增加該血小板活化標記物之表現。
  20. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中含有FDPD之該組成物包含含有CD 41陽性血小板衍生物之FDPD之一群體， 其中該群體包含具有一降低的聚集傾向之FDPD，使得該群體中不超過10%之FDPD在包含一促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集， 其中相較於一促效劑不存在下血小板活化標記物之表現，該FDPD在該促效劑存在下無法增加該血小板活化標記物之表現， 其中該FDPD具有每10 6個血小板衍生物至少1.5個凝血酶生成效價單位(TGPU)之效價；且 其中少於5%之CD 41陽性FDPD係直徑小於0.5 μm之微粒。
  21. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中包含FDPD之該組成物包含：具有一降低的聚集傾向之FDPD之一群體，使得在包含一促效劑但不包含血小板之聚集條件下，該群體中不超過10%之血小板衍生物聚集；並進一步具有以下一或兩項： 血小板反應蛋白(TSP)在其表面存在之一水平大於在靜息血小板表面上之一水平；且 馮威里氏因子(vWF)在其表面存在一水平大於在靜息血小板表面上之一水平。
  22. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中包含FDPD之該組成物包含FDPD之一群體，該群體包含： 包含CD 41陽性血小板衍生物之血小板衍生物之一群體，其中少於5%之該CD 41陽性血小板衍生物係直徑小於0.5 μm之微粒，及 包含血小板衍生物，其具有： 降低的聚集傾向，使得該群體中不超過10%之該血小板衍生物在包含一促效劑但不包含血小板之聚集條件下聚集； 相較於一促效劑不存在下血小板活化標記物之表現，在該促效劑存在下無法增加該血小板活化標記物之表現； 血小板反應蛋白(TSP)在其表面上存在之一水平大於在靜息血小板表面上之一水平； 馮威里氏因子(vWF)在其表面之存在一水平大於在靜息血小板表面上之一水平；且 每10 6個血小板衍生物至少1.5個凝血酶生成效價單位(TGPU)之效價。
  23. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該FDPD包含被投予或正在投予對象之抗血小板逆轉劑靶向的受體。
  24. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該對象之包含FDPD之該組成物之該有效量係1.0×10 7/kg至1.0×10 11/kg之間。
  25. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該對象之包含FDPD之該組成物之該有效量係1.6×10 7/kg至5.1×10 9/kg之間。
  26. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該對象之包含FDPD之該組成物之該有效量係具有250 TGPU/kg與5000 TGPU/kg之間之一效價之量。
  27. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該治療該凝血病降低該對象之出血可能性，使得該對象恢復正常止血。
  28. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中含有FDPD之該組成物具有能夠降低該對象之出血可能性之特性，而與出血可能性之投予後評價若執行將產生正常結果還是異常結果無關。
  29. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中含有FDPD之該組成物之性質係，其能夠降低在一體外實驗室測試中具有一或多個凝血參數之一異常值之對象之出血可能性，使得在該對象體內恢復正常止血，而與出血可能性之投予後評價若執行將產生正常結果還是異常結果無關。
  30. 如請求項4至5或7至10中任一項所述之組成物，其中該第二藥劑不是抗凝血劑。
  31. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中在投予該組成物時停止投予該抗血小板劑。
  32. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中在投予該組成物之後繼續投予該抗血小板劑至少1天。
  33. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該對象被識別為在手術期間對凝血參數之一或多個預投予評價具有一異常結果。
  34. 如請求項33所述之組成物，其中該手術係一急診手術。
  35. 如請求項33所述之組成物，其中該手術係一預約手術。
  36. 如請求項6所述之組成物，其中該一或多個凝血參數包括對出血之一評價。
  37. 如請求項36所述之組成物，其中出血之該評價係基於世界衛生組織(WHO)出血量表進行的。
  38. 如請求項37所述之組成物，其中在該投予之前，該對象具有基於WHO出血量表之2、3、或4級出血。
  39. 如請求項38所述之組成物，其中在該投予之後，該對象具有基於WHO出血量表之0或1級出血。
  40. 如請求項37所述之組成物，其中在該投予之後，該對象發生基於WHO出血量表較該投予之前低一級之出血。
  41. 如請求項37所述之組成物，其中在該投予之後，該對象發生基於WHO出血量表較該投予之前低兩級之出血。
  42. 如請求項37所述之組成物，其中在該投予之後，該對象發生基於WHO出血量表較該投予之前低三級之出血。
  43. 如請求項6所述之組成物，其中該一或多個凝血參數之評價包括凝血彈性成像(TEG)，且其中獲得TEG之一異常結果。
  44. 如請求項43所述之組成物，其中TEG之該異常結果包含小於約50 mm之最大振幅(MA)。
  45. 如請求項44所述之組成物，其中在該投予之後，該對象之MA增加至少5、10、15、20 mm或更多。
  46. 如請求項44所述之組成物，其中在該投予之後，該對象具有一正常之MA。
  47. 如請求項43所述之組成物，其中在1 mmol/L花生四烯酸存在下，該TEG之該異常結果包含小於約85%之聚集百分比。
  48. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中在1 mmol/L花生四烯酸存在下，在該投予之後，該對象之聚集百分比增加至少2、3、5、8、10、12或更多個百分點。
  49. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中在1 mmol/L花生四烯酸之存在下，在投予之後，該對象具有正常之聚集百分比。
  50. 如請求項43所述之組成物，其中該TEG係用於評價二磷酸腺苷誘導之血小板-纖維蛋白凝血強度。
  51. 如請求項43所述之組成物，其中該TEG係用於評價花生四烯酸誘導之血小板-纖維蛋白凝血強度。
  52. 如請求項6所述之組成物，其中使用P2Y12反應單位(PRU)及/或阿司匹靈反應單位(ARU)測試來測量一或多個凝血參數之評價，且獲得一異常PRU及/或一異常ARU。
  53. 如請求項52所述之組成物，其中該P2Y12反應單位測試之該異常結果係小於約195或小於約180之PRU。
  54. 如請求項53所述之組成物，其中在該投予之後，該對象之PRU增加至少25、50、75、100、或更多。
  55. 如請求項53所述之組成物，其中在該投予之後，該對象具有一正常的PRU。
  56. 如請求項52之組成物，其中該阿司匹靈反應單位測試之該異常結果係小於約550或小於約500之ARU。
  57. 如請求項56所述之組成物，其中在該投予之後，該對象之ARU增加至少25、50、75、100、或更多。
  58. 如請求項56所述之組成物，其中在該投予之後，該對象具有一正常的ARU。
  59. 如請求項6所述之組成物，其中該一或多個凝血參數係使用一凝血酶生成測定(TGA)測量之凝血酶生成，並且獲得一異常的TGA結果。
  60. 如請求項6所述之組成物，其中該一或多個凝血參數係總血栓形成之分析。
  61. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該用途進一步包含向該對象投予一額外的抗血小板劑逆轉劑。
  62. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該組成物進一步包含一抗纖維蛋白溶解劑。
  63. 如請求項62所述之組成物，其中該抗纖維蛋白溶解劑選自由ε-胺基己酸(EACA)、胺甲環酸、抑肽酶、胺基甲基苯甲酸、纖維蛋白原、及其組合組成之群組。
  64. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該投予包含靜脈內投予。
  65. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該組成物包含海藻糖。
  66. 如請求項65所述之組成物，其中該組成物進一步包含含有一或多種鹽及緩衝劑之培養劑。
  67. 如請求項66所述之組成物，其中該培養劑包含選自磷酸鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及其兩或更多種之組合之一或多種鹽，其中該緩衝劑包含HEPES、碳酸氫鈉(NaHCO 3)或其組合，且其中該組成物包含一或多種另外的糖。
  68. 如請求項67所述之組成物，其中該組成物進一步包含多糖。
  69. 如請求項67所述之組成物，其中該組成物包含一有機溶劑。
  70. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中，在包含FDPD之該組成物以增加該對象之出血可能性之水平被投予時，該抗血小板劑存在於該對象中。
  71. 如請求項70所述之組成物，其中在將包含FDPD之該組成物投予於該對象之時間之1小時內，該抗血小板劑以C max存在。
  72. 如請求項1至5中任一項所述之組成物，其中該FDPD被一受損之質膜包圍。
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