TW202124446A

TW202124446A - 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法

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Publication number: TW202124446A
Application number: TW109131969A
Authority: TW
Inventors: 黛博拉Ａ妮; 麥可迪多納多; 麥爾克多斯泰萊克; 克里斯多福艾爾可; 迪茨哈維爾埃斯特拉達; 安娜加爾金; 史考特馬汀葛拉瑟; 克勞斯菲利克斯哈特萊普; 咏賈; 亞歷山卓拉克勞斯; 焯華李; 路易吉馬嫩蒂; 莎拉蜜雪兒如; 建昕施; 夏尼亞卡羅拉維茲勒; 淑敏黃
Original assignee: 瑞士商諾華公司
Priority date: 2019-09-18
Filing date: 2020-09-16
Publication date: 2021-07-01
Also published as: EP4031248A1; BR112022004570A2; WO2021053560A1; MX2022003191A; AU2020349116A1; CN114502589A; KR20220063235A; US20220340685A1; IL290407A; CA3149707A1; JP2022548664A

Abstract

本文提供了如下組合，該組合包含特異性結合ENTPD2(例如人ENTPD2蛋白)的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段，和特異性結合CD73(例如人CD73蛋白)的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段，以及使用該等組合之方法。

Description

與ENTPD2抗體之組合療法

本申請要求2019年9月18日提交的美國臨時申請案號62/902,161和2020年5月12日提交的美國臨時申請案號63/023,446的權益，將其內容藉由引用以其全文特此併入。

序列表

本申請含有已經以ASCII格式電子遞交的序列表並且該序列表特此藉由引用以其全文併入。所述ASCII副本創建於2020年9月11日，命名為PAT058705-WO-PCT_SL.txt且大小為683,463位元組。

本發明關於組合療法，其包含特異性結合胞外酶外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)的抗體或其抗原結合片段和特異性結合CD73(分化簇73)的抗體或其抗原結合片段。視需要，組合療法可包含至少一種另外的藥劑。

癌症係藉由避開免疫系統而發展的，這可以藉由許多機制發生。參與免疫逃逸的一種重要途徑包括藉由腫瘤中細胞外ATP(eATP)的水解大量產生腺苷，從而導致免疫抑制性腫瘤微環境。eATP水解為腺苷的過程係藉由胞外核苷酶(例如ENTPD2)逐步進行的。

據報導，減少eATP和增加腺苷對腫瘤微環境具有多效性免疫抑制作用，包括：(1)增強T調節細胞功能；(2)抑制CD4+和CD8+ T效應細胞功能；(3)樹突狀細胞引發IFNg分泌性T輔助細胞1(Th1)應答的能力下降；(4)抑制NK細胞功能；和(5)巨噬細胞轉化為免疫抑制性亞群。

用拮抗性抗ENTPD2抗體(Ab)治療ENTPD2陽性腫瘤被認為導致eATP增加並導致免疫細胞大量湧入。

需要使用抗ENTPD2抗體靶向疾病如癌症的改進策略。

本文提供了如下組合，該組合包含特異性結合胞外酶外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段，和特異性結合CD73(分化簇73)的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段。ENTPD2抗體或其抗原結合片段和CD73抗體或其抗原結合片段的組合可用於治療ENTPD2相關疾病，例如癌症。

在一個方面，本發明關於如下組合，其包含：a)抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含表1中提供的任何抗體或抗原結合片段的重鏈互補決定區1(HCDR1)、重鏈互補決定區2(HCDR2)、重鏈互補決定區3(HCDR3)、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、輕鏈互補決定區2(LCDR2)和輕鏈互補決定區3(LCDR3)，和b)抗人CD73抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含表2中提供的任何抗體或抗原結合片段的重鏈互補決定區1(HCDR1)、重鏈互補決定區2(HCDR2)、重鏈互補決定區3(HCDR3)、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、輕鏈互補決定區2(LCDR2)和輕鏈互補決定區3(LCDR3)。

在一些實施方式中，此類抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3選自表1中提供的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列。

在一些實施方式中，此類抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含表1中提供的重鏈可變區(VH)。在一些實施方式中，此類抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含表1中提供的輕鏈可變區(VL)。

在另一方面，本發明關於包含選自以下中的任一項的抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的組合：

1)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：2的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：14的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；

2)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：5的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；

3)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：8的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：9的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；

4)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：38的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：50的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

5)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：41的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：53的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；

6)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：44的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：45的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：56的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

7)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：38的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：61的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

8)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：41的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：62的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；

9)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：44的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：45的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：63的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

10)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：38的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：68的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：50的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

11)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：41的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：68的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：53的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；

12)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：44的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：69的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：56的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

13)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：82的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：83的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：84的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：95的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：96的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：97的LCDR3序列；

14)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：85的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：86的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：84的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：98的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：100的LCDR3序列；

15)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：88的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：89的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：90的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：101的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：97的LCDR3序列；

16)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：106的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：107的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：108的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：119的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：120的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：121的LCDR3序列；

17)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：109的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：110的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：108的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：122的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：123的LCDR3序列；

18)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：112的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：113的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：114的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：124的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：121的LCDR3序列；

19)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：106的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：129的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：108的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：119的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：120的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：121的LCDR3序列；

20)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：109的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：130的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：108的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：122的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：123的LCDR3序列；

21)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：112的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：131的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：114的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：124的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：121的LCDR3序列；

22)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：136的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：137的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：138的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：149的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：150的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：151的LCDR3序列；

23)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：139的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：140的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：138的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：152的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：153的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：154的LCDR3序列；

24)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：142的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：143的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：144的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：155的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：153的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：151的LCDR3序列；

25)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：160的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：161的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：162的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：173的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：150的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：174的LCDR3序列；

26)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：163的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：164的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：162的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：175的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：153的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：176的LCDR3序列；

27)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：166的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：167的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：168的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：177的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：153的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：174的LCDR3序列；

28)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：220的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：221的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：61的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

29)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：222的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：221的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：62的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；

30)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：223的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：224的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：63的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

31)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：220的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：68的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：61的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

32)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：222的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：68的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：62的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；

33)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：223的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：69的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：63的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

34)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：245的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：246的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：255的LCDR3序列；

35)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：247的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：246的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：256的LCDR3序列；

36)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：248的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：249的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：255的LCDR3序列；

37)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：261的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：262的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；

38)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：247的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：262的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；

39)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：248的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：263的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；

40)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：272的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：273的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：274的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：285的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；

41)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：275的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：276的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：274的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：286的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；

42)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：278的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：279的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：280的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：286的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列。

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：10或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：21或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：25或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：29或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：33或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：29或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：46或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：57或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：46或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：64或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：70或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：74或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：25或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：78或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：91或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：102或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：115或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：125或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：132或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：125或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：145或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：156或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：169或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：178或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：225或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：229或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：233或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：237或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：241或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：229或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：250或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：257或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：264或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：268或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或

包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：281或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：287或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。

1)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：12或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：23或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

2)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：27或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：31或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

3)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：35或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：31或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

4)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：48或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：59或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

5)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：48或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：66或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

6)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：72或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：76或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

7)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：27或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：80或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

8)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：93或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：104或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

9)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：117或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：127或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

10)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：134或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：127或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

11)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：147或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：158或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

12)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：171或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：180或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

13)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：227或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：231或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

14)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：235或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：239或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

15)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：243或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：231或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

16)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：252或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：259或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

17)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：266或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：270或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或

18)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：283或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：289或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。

在實施方式中，本發明關於包含抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：2的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：14的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列。

包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：5的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列。

包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：8的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：9的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列。

在實施方式中，本發明關於包含抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：10或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：21或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。

在實施方式中，本發明關於包含抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含：SEQ ID NO：12或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；以及包含SEQ ID NO：23或與其具有至少約95%或更高同一性的序列的輕鏈。

在實施方式中，本發明關於包含特異性結合人ENTPD2中的表位的抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的組合，其中該表位包含以下殘基中的至少一個(例如，至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少十個、至少十一個、至少十二個、至少十三個、至少十四個、至少十五個、至少二十個)：His50、Asp76、Pro78、Gly79、Gly80、Tyr85、Asp87、Asn88、Gly91、Gln94、Ser95、Gly98、Glu101、Gln102、 Gln105、Asp106、Arg245、Thr272、Gln273、Leu275、Asp278、Arg298、Ala347、Ala350、Thr351、Arg392、Ala393、Arg394、或Tyr398。

在實施方式中，本發明進一步關於包含特異性結合人ENTPD2中的表位的抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的組合，其中該表位包含以下殘基中的至少一個(例如，至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少十個、至少十一個、至少十二個、至少十三個、至少十四個、至少十五個、至少二十個)：Gly79、Gln250、Leu253、Trp266、Arg268、Gly269、Phe270、Ser271、Thr272、Gln273、Val274、Leu275、Asp278、Arg298、Ser300、Ser302、Gly303、Thr380、Trp381、Ala382、Gly390、Gln391、Arg392、Ala393、Arg394、或Asp397。

在本發明之組合的一些實施方式中，該抗人CD73抗體或其抗原結合片段的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3選自表2中提供的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列。

在本發明之組合的一些實施方式中，該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含表2中提供的重鏈可變區。

在本發明之組合的一些實施方式中，該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含表2中提供的輕鏈可變區。

在如本發明所述之組合的一些實施方式中，抗人CD73抗體或其抗原結合片段選自以下中的任一項：

i)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：363的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：361的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：362的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：375的LCDR3序列；

ii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：363的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：385的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：362的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：375的LCDR3序列；

iii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：395的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

iv)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：420的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：419的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：362的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：375的LCDR3序列；

v)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：431的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：430的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

vi)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：430的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

vii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：494的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：493的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

viii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：494的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：503的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

ix)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：494的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：511的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

x)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：520的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：519的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：362的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：375的LCDR3序列；

xi)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：541的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：545的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：546的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：547的LCDR3序列；

xii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：554的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：545的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：546的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：547的LCDR3序列；

xiii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：561的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：559的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：560的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：569的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：570的LCDR3序列；

xiv)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：578的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：576的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：577的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：585的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：586的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：587的LCDR3序列；

xv)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：596的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：594的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：595的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：604的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：605的LCDR3序列；

xvi)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：420的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：611的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：612的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：620的LCDR3序列；

或

xvii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：626的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：624的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：625的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：634的LCDR3序列。

在如本發明所述之組合的較佳的實施方式中，抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：395的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列。

i)包含如下重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)的抗體或其抗原結合片段，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：369或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：380或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

ii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：390或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：380或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

iii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：403或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

iv)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：425或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：380或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

v)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：436或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

vi)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：443或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

vii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：499或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

viii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：508或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

ix)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：516或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

x)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：525或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：380或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xi)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：544或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：553或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：557或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：553或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xiii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：568或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：574或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xiv)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：584或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：592或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xv)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：603或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：609或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xvi)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：619或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：622或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或

xvii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：633或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：636或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。

在如本發明所述之組合的較佳的實施方式中，抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含：包含如下VH和VL，該VH包含SEQ ID NO：403或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。

在如本發明所述之組合的另一個較佳的實施方式中，抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO：403的VH，和包含SEQ ID NO：414的VL。

i)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：371或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：382或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

ii)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：392或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：382或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

iii)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：405或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

iv)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：427或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：382或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

v)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：438或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或

vi)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：445或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。

在如本發明所述之組合的較佳的實施方式中，該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：405或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。

在如本發明所述之組合的另一個較佳的實施方式中，該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：405，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416。

在如本發明所述之組合的另一個較佳的實施方式中，抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：2的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：14的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列

並且該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：395的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列。

在如本發明所述之組合的較佳的實施方式中，該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：10或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：21或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，該VH包含SEQ ID NO：403或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。

在如本發明所述之組合的另一個較佳的實施方式中，該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：10，並且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：21，並且該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，該VH包含SEQ ID NO：403，並且該VL包含SEQ ID NO：414。

在如本發明所述之組合的較佳的實施方式中，該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：12或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：23或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：405或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。

在如本發明所述之組合的另一個較佳的實施方式中，該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：12，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：23，並且該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：405，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416。

在如本發明所述之組合的另一個較佳的實施方式中，該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含抗ENTPD2 mAb1，並且該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含抗CD73 mAb 373。

在本發明之組合的一些實施方式中，本文所述之抗人ENTPD2或抗人CD73抗體或其抗原結合片段具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同種型。在一些實施方式中，本文所述之抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段具有IgG1同種型。在一些實施方式中，本文所述之抗人CD73抗體或其抗原結合片段具有IgG4同種型。在一些實施方式中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含Fc區，該Fc區選自IgG1 Fc區、IgG2 Fc區、IgG4 Fc區、或IgG2/IgG4雜合Fc區。在一些實施方式中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含Fc區，該Fc區選自IgG1 Fc區。在一些實施方式中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含修飾的Fc區。在一些實施方式中，本文所述之抗體或其抗原結合片段包含修飾的Fc區，該修飾的Fc區相比於親本抗體具有降低的抗體依賴性細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)活性。

在如本發明所述之組合的另一方面，抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段係與表1中提供的任何抗體或抗原結合片段競爭結合人ENTPD2蛋白的那些抗體或其抗原結合片段。

在如本發明所述之組合的另一方面，抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段係與表1中提供的任何抗體或抗原結合片段基本上結合相同的ENTPD2表位的那些抗體或其抗原結合片段。

在一些實施方式中，本文所述之抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段結合人ENTPD2蛋白，其中解離常數(KD)小於10nM，例如KD小於5nM或KD小於3nM，例如如藉由Biacore測量的。在一些實施方式中，在25℃藉由Biacore測量針對人ENTPD2的本文所述之抗體或其抗原結合片段。

在一些實施方式中，本文所述之抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段抑制至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%的人ENTPD2酶活性。在一些實施方式中，使用體外FRET測定測量人ENTPD2的酶活性，該體外FRET測定藉由在細胞表面表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP至ADP的水解。

在一些實施方式中，本文所述之抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段抑制ENTPD2水解三磷酸腺苷(ATP)的能力。在一些實施方式中，使用體外FRET測定測量ENTPD2水解ATP的能力，該體外FRET測定藉由在細胞表面表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP至ADP的水解。

在一些實施方式中，本文所述之抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段干擾ATP與ENTPD2的結合或在ENTPD2的催化結構域內捕獲ATP。在一些實施方式中，使用體外FRET測定測量ENTPD2水解ATP的能力，該體外FRET測定藉由在細胞表面表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP至ADP的水解。

在一些實施方式中，本文所述之抗人ENTPD2或抗人CD73抗體或其抗原結合片段係人或人源化抗體或其片段。

本文提供了編碼本文所述之抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的核酸。此類核酸可編碼包含本文所述之ENTPD2抗體或其抗原結合片段的區段或結構域的多肽。

還提供了包含編碼本文所述之抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的核酸的運載體。在一些實施方式中，運載體選自DNA運載體、RNA運載體、質體、黏接質體或病毒運載體。在一些實施方式中，運載體係基於以下病毒中的任何一種的病毒運載體：慢病毒、腺病毒、腺相關病毒(AAV)、單純皰疹病毒(HSV)、細小病毒、逆轉錄酶病毒、牛痘病毒、辛德畢斯病毒、流感病毒、呼腸孤病毒、新城疫病毒(NDV)、麻疹病毒、水皰性口炎病毒(VSV)、脊髓灰質炎病毒、痘病毒、塞內卡谷病毒、柯薩奇病毒、腸道病毒、黏液瘤病毒或馬拉巴病毒。在一些實施方式中，運載體係AAV運載體。在一些實施方式中，運載體係慢病毒運載體。在一些實施方式中，運載體進一步包含啟動子，例如組織特異性啟動子。在一些實施方式中，運載體進一步包含可檢測標記。

本文還提供了包含編碼本文所述之抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的核酸或核酸組的細胞或者包含這種核酸或核酸組的運載體。

本文提供了藉由如下步驟產生抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段之方法：培養包含編碼抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段的核酸或核酸組的細胞或包含這種核酸或核酸組的運載體，並從培養基中收集抗體或其抗原結合片段。

根據本發明之另一方面關於藥物組成物，其包含根據本發明之組合，該組合包含本文所述之抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗人CD73抗體或其抗原結合片段，以及藥學上可接受的載體。

根據本發明之另外的方面關於用作藥物的如本文所述之本發明之組合或如本文所述之藥物組成物。

根據本發明之另一方面關於用於治療癌症的如本文所述之本發明之組合或如本文所述之藥物組成物。

根據本發明之另外的方面關於如本文所述之本發明之組合或如本文所述之藥物組成物在製造用於治療癌症的藥物中之用途。

在實施方式中，癌症係ENTPD2+癌症。在另一個實施方式中，癌症表現PD-L1。在另一個實施方式中，癌症係實性瘤，例如晚期實性瘤。較佳的是，該癌症選自由以下各項組成之群組：MSS大腸直腸癌(CRC)、膽管癌(肝內或肝外)、胰臟癌、食道癌、食道胃結合部(EGJ)癌和胃癌。

在本發明之實施方式中，將該組合或藥物組成物藉由靜脈內、腫瘤內或皮下途徑向該受試者投與。

在本發明之實施方式中，將該組合或藥物組成物與至少一種另外的治療劑或程序一起投與。在本發明之又另一個實施方式中，將該組合或藥物組成物與至少兩種另外的治療劑或程序一起施用。

在實施方式中，另外的治療劑係PD-1抑制劑，例如抗PD-1抗體。在實施方式中，該PD-1抑制劑選自斯巴達珠單抗、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591和AMP-224。在較佳的實施方式中，另外的治療劑係斯巴達珠單抗。

在另一個實施方式中，該另外的治療劑係A2aR拮抗劑，其選自由以下各項組成之群組：NIR178、CPI444/V81444、AZD4635/HTL-1071、維帕迪南、GBV-2034、AB928、茶鹼、伊曲茶鹼、托紮迪南/SYN-115、KW-6356、ST-4206和普瑞迪南/SCH 420814。在較佳的實施方式中，另外的治療劑係NIR178。

如本發明所述之另一方面關於藉由向有需要的受試者投與如本發明所述之組合在該受試者中治療癌症之方法，該組合包含治療有效量的本文所述之抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段和治療有效量的本文所述之抗人CD73抗體或其抗原結合片段。在一些實施方式中，將組合中的抗體或其抗原結合片段藉由靜脈內、腫瘤內或皮下途徑向受試者投與。

在實施方式中，癌症係ENTPD2+癌症。在另一個實施方式中，癌症表現PD-L1。在一些實施方式中，癌症表現PD-L1。在另一個實施方式中，癌症係實性瘤，例如晚期實性瘤。較佳的是，該癌症選自由以下各項組成之群組：MSS大腸直腸癌(CRC)、膽管癌(肝內或肝外)、胰臟癌、食道癌、食道胃結合部(EGJ)癌和胃癌。

在另一方面，本發明關於藉由向該受試者投與有效刺激該免疫應答的量的如本文所述之本發明之組合或如本文所述之藥物組成物刺激受試者中的免疫應答之方法。

在一些實施方式中，此類方法可以進一步包括向受試者投與至少一種另外的治療劑。

在一些實施方式中，此類方法可以進一步包括向受試者投與至少兩種另外的治療劑。

在實施方式中，該至少一種另外的治療劑係PD-1抑制劑，例如抗PD-1抗體。在實施方式中，該PD-1抑制劑選自斯巴達珠單抗、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591和AMP-224。在較佳的實施方式中，另外的治療劑係斯巴達珠單抗。

在另一個實施方式中，該另外的治療劑係A2aR拮抗劑，其選自由以下各項組成之群組：NIR178、CPI444/V81444、AZD4635/HTL-1071、維帕迪南、GBV-2034、AB928、茶鹼、伊曲茶鹼、托紮迪南/SYN-115、KW-6356、 ST-4206和普瑞迪南/SCH 420814。在較佳的實施方式中，另外的治療劑係NIR178。

在另一個實施方式中，另外的治療劑係PD-L1抑制劑，例如抗PD-L1抗體。在另外的實施方式中，該至少一種另外的治療劑係TGFβ抑制劑，例如抗TGFβ抗體。

在本發明之一個實施方式中，將該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段和/或該抗人CD73抗體或其抗原結合片段以1小時(如果臨床有指示則長達2小時)輸注的方式靜脈內投與至受試者。

在本發明之另一個實施方式中，將該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段和/或該抗人CD73抗體或其抗原結合片段每二或四週一次以10mg、30mg、100mg、150mg、300mg、400mg、600mg、800mg、1200mg或2400mg投與至該受試者。

在本發明之另外的另一個實施方式中，投與至少一種另外的治療劑，該治療劑為斯巴達珠單抗，其中將斯巴達珠單抗每四週一次以400mg投與至該受試者。

在本發明之另外的另一個實施方式中，投與至少一種另外的治療劑，該治療劑為NIR178，其中將NIR178每週兩次(BID)以80mg或160mg連續投與至該受試者。

本文提及的所有公開物、專利和登錄號均藉由引用以其全文特此併入，如同每個單獨的出版物或專利被明確且單獨地表明藉由引用而併入。

[圖1A]描繪了藉由流動式細胞測量術測定的跨代表性癌細胞系之ENTPD2表現。圖1B係顯示跨代表性癌細胞系的ENTPD2受體密度的表(表20)。

[圖2]描繪了福馬林固定的石蠟包埋之原發性大腸直腸、食道和卵巢腫瘤組織中ENTPD2之代表性IHC染色圖像。

[圖3A]顯示了抗人ENTPD2 FAb22重鏈(SEQ ID NO：330)和輕鏈(SEQ ID NO：334)之胺基酸序列，其中CDR加底線(如由卡巴特(Kabat)定義)，並且位於抗體-抗原介面的殘基針對每個Fab標記為(*)。圖3B顯示了抗人ENTPD2 FAb23重鏈(SEQ ID NO：336)和輕鏈(SEQ ID NO：239)的胺基酸序列，其中CDR加底線(如由卡巴特定義)，並且位於抗體-抗原介面的殘基用(*)標記。圖3C顯示了抗小鼠ENTPD2 FAb24重鏈(SEQ ID NO：338)和輕鏈(SEQ ID NO：340)的胺基酸序列，其中CDR加底線(如由卡巴特定義)，並且位於抗體-抗原介面的殘基用(*)標記。

[圖4A]顯示了晶體學研究中使用的重組人ENTPD2(殘基29-462，Y350A突變體)之胺基酸序列(SEQ ID NO：691)，其中二級結構元件示於胺基酸序列下面。條狀代表α-螺旋，並且箭頭代表β-股。由於序列格式化中斷的未標記箭頭和條狀與前面標記的結構元件相鄰。非結構化區域未標記。人ENTPD2的可溶性細胞外結構域跨越殘基29-462。構建體利用N-末端GP67分泌訊息肽(前面的以灰色突出顯示的38個殘基)，其具有最後一個殘基後的訊息肽切割位點和C-末端六組胺酸(SEQ ID NO：639)金屬親和標籤以促進純化。Asn129、Asn294、Asn378和Asn443係預測的N-連接糖基化位點，在晶體結構中觀察到該等糖基化位點並以斜體顯示。Asn64也是在該等晶體結構中未觀察到的預測的N-連接糖基化位點。位於FAb22和FAb23複合物的抗原-Fab介面的殘基分別由胺基酸序列下面的(*)和(：)符號指示。圖4B顯示了用於晶體學研究中的重組鼠ENTPD2(殘基29-462)的胺基酸序列(SEQ ID NO：692)，其中二級結構元件示於胺基酸序列下面。條狀代表α-螺旋，並且箭頭代表β-股。由於線條中斷的未標記箭頭和條狀與前面標記的結構元件相鄰。非結構化區域未標記。成熟的小鼠ENTPD2從Thr29開始。構建體利用N-末端GP67分泌訊息肽(殘基1-38)，其具有殘基38後的訊息肽切割位點和C-末端六組胺酸(SEQ ID NO：639)金屬親和標籤以促進純化。Asn129、Asn294、Asn378和Asn443係斜體顯示的潛在的N-連接糖基化位點。位於抗原-FAb24介面的殘基用胺基酸序列下的(#)符號指示。

[圖5A]顯示了具有所示殘基33-453的人ENTPD2胞外域apo晶體結構之動畫演示圖。兩個視圖旋轉90度。標記了連續的二級結構元件。二硫化物顯示為棒狀。胺基和羧基末端分別標記為NT和CT。膜近端葉包含N-和C-末端(亞結構域1：Pro36-Ser161和Lys427-Phe461)，並且陰影比膜遠端葉(亞結構域2：Gly162-Gln426)更暗。底物ATP在葉間裂隙內深處結合。ATP結合位點的位置如圖5B所示。顯示的是ATP模擬物AMP-PNP，其疊加在來自大鼠ENTPD2共結構(PDB 3CJA)的人ENTPD2活性位點中。

[圖6]示出了與人ENTPD2複合的抗人ENTPD2 FAb22之概觀。兩個視圖相差90度顯示。基於與大鼠ENTPD2共結構PDB 3CJA的疊加，AMP-PNP在ENTPD2活性位點中建模。Fab的重鏈陰影更暗。

[圖7]示出了與人ENTPD2複合的抗人ENTPD2 FAb23之概觀。兩個視圖相差90度顯示。基於與大鼠ENTPD2共結構PDB 3CJA的疊加，AMP-PNP在ENTPD2活性位點中建模。Fab的重鏈陰影更暗。

[圖8]示出了與小鼠ENTPD2複合的抗鼠ENTPD2 FAb24之概觀。基於與大鼠ENTPD2共結構PDB 3CJA的疊加，AMP-PNP在ENTPD2活性位點中建模。Fab的重鏈陰影更暗。

[圖9]係說明在同基因B16LM3腫瘤模型中抗小鼠ENTPD2 mAb13與抗PD-1 Ab組合的長期功效之圖。

[圖10A-10C]係說明在同基因B16F10腫瘤模型中抗小鼠ENTPD2 mAb13與抗PD-1 Ab組合的功效之圖，其與治療後第8天腫瘤部位活化的CD8和CD4 T輔助細胞的流入增加相關。

[圖11A-11B]描繪了人ENTPD2工程化模型B16LM3殖株B5之表徵，說明藉由FACS在體外表現人ENTPD2和藉由IHC與Novus抗人CD39L1 Ab(1：40稀釋)在體內腫瘤中人ENTPD2表現的持續性。

[圖12A-12B]係說明人ENTPD2工程化B16LM3殖株B5模型中抗人ENTPD2 mAb1和mAb6與抗PD-1 Ab組合的劑量應答功效之圖。

[圖13A-13B]係顯示在人ENTPD2工程化B16LM3殖株B5異種移植模型(C57BL/6隻小鼠)中用抗人ENTPD2 mAb1或同種型對照處理後的血漿IL-1b(圖13A)和MCP-1(圖13B)水平之點狀圖。圖13C-13D係顯示在人ENTPD2工程化B16LM3殖株B5異種移植模型(C57BL/6隻小鼠)中用抗人ENTPD2 mAb1或同種型對照處理後的IL-1β(圖13C)和MCP-1(圖13D)水平的點狀圖。

[圖14]係顯示抗ENTPD2 mAb1與A2AR拮抗劑NIR178組合在人ENTPD2工程化B16LM3異種移植物模型(C57BL/6隻小鼠)中之體內功效的圖。

[圖15]係顯示抗ENTPD2 Ab在生物化學人ENTPD2功能測定中的代表性活性之圖。抗人ENTPD2 mAb1、mAb17、mAb19和mAb21有效抑制重組人ENTPD2的催化活性。

[圖16A-16B]描繪了在人或食蟹猴(cyno)ENTPD2 NIH/3T3或RKO的基於細胞的功能測定中抗人ENTPD2抗體之代表性活性。

[圖17]描繪了說明抗小鼠ENTPD2 mAb13、mAb14、mAb15在小鼠ENTPD2 NIH/3T3的基於細胞的功能測定中的體外功能活性之圖。

[圖18]描繪了說明在Jurkat-NFAT-V158報告基因測定中抗ENTPD2 mAb1增加FcγR IIIa傳訊之圖。

[圖19]描繪了說明在第1天(實線)和第15天(虛線)向雄性食蟹猴靜脈內投與後抗ENTPD2 mAb1的血漿濃度-時間曲線之圖。

[圖20]描繪了說明FIH、開放標籤、I/Ib期、多中心研究的研究設計之圖。

[圖21]描繪了說明抗ENTPD2 mAb1 Q2W、生檢的研究流程圖之圖。

[圖22]描繪了說明抗ENTPD2 mAb1 Q2W、斯巴達珠單抗Q4W、生檢的研究流程圖之圖。

[圖23]描繪了說明抗ENTPD2 mAb1 Q2W、NIR178 BID、生檢的研究流程圖之圖。

[圖24]描繪了說明抗ENTPD2 mAb1 Q2W、抗CD73 Ab Q2W、生檢的研究流程圖之圖。

[圖25]描繪了說明腫瘤(淺灰色)和(深灰色)正常組織中ENTPD2表現的對比之圖。從癌症基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas)獲得的腫瘤數據和從基因型組織表現數據庫(Genotype-Tissue Expression database)獲得的正常組織數據。使用GEPIA進行圖形和表現比較(Tang,Z.等人(2017)GEPIA：a web server for cancer and normal gene expression profiling and interactive analyses.[GEPIA：用於癌症和正常基因表現譜分析以及互動式分析的web伺服器]Nucleic Acids Res[核酸研究]，10.1093/nar/gkx247)。

[圖26]描繪了說明TCGA數據集的分析之圖，其顯示A2AR和CD39 RNA表現與免疫特徵相關，而ENTPD2與免疫特徵反相關。CD73在免疫細胞和腫瘤細胞中表現。

[圖27]描繪了對小鼠ENTPD2工程化的模型4T1殖株45之表徵，示出了體外藉由FACS的小鼠ENTPD2的表現。

[圖28]描繪了說明抗ENTPD2 mAb15與抗CD73mAb 350組合在小鼠ENTPD2工程化的4T1殖株45模型中的功效之圖。

[圖29]描繪了抗ENTPD2 mAb15對腫瘤細胞上ENTPD2表現之影響。

[圖30A-30D]描繪了抗ENTPD2 mAb15和抗CD73mAb 350的組合對治療後第12天的腫瘤浸潤之影響。

[圖31A-31D]描繪了抗ENTPD2mAb15和抗CD73mAb 350的組合對治療後24小時的血清細胞介素和炎症標記之影響。

本文提供了組合療法，其包含特異性結合胞外酶外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)的抗體或其抗原結合片段和特異性結合CD73(分化簇73)的抗體或其抗原結合片段。這樣的組合可用於治療與ENTPD2相關的疾病，例如癌症。

定義

如在說明書和請求項中所用，除非上下文另外明確指出，否則單數形式「一個/一種(a/an)」和「該」包括複數指示物。例如，術語「細胞」包括多個細胞，包括其混合物。

在整個說明書和隨後的申請專利範圍中，除非上下文另有要求，除非另有說明，否則單詞「包含(comprise)」和變體例如「包含(comprises)」和「包含(comprising)」在本文中以其開放式和非限制性的意義使用。

當在本文中使用時，「由......組成」不包括在方面、實施方式和/或申請專利範圍部分中未指定的任何元素、步驟或成分。當在本文中使用時，「基本上由......組成」不排除不會實質上影響該方面、實施方式和/或請求項的基本和新穎特徵的材料或步驟。

在本文的每個例子中，術語「包含」、「基本上由......組成」和「由......組成」中的任何一個可以用其他兩個術語中的任一個替換。

所有數字標記，例如pH、溫度、時間、濃度和分子量(包括範圍)，皆為近似值，其以0.1的增量變化(+)或(-)。應當理解，儘管並非總是明確說明，但是所有數字指定前面都有術語「約」。還應理解，儘管並非總是明確說明，但本文描述的試劑僅是實例，並且其等效物係本領域已知的。

如本文所用，外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)(也稱為CD39抗原-樣1、CD39-樣-1、CD39L1、外-ATP二磷酸水解酶2、外-ATP酶、外-ATP酶2、外-ATPD酶2、NTPD酶-2、NTPD酶2)係指外-核苷三磷酸酯二磷酸水解酶家族(E-NTPD酶)(其係水解5'-三磷酸的外-核苷酶家族)的2型酶。ENTPD2酶由基因ENTPD2編碼。人ENTPD2 基因映射於染色體位置9q34.3，並且人ENTPD2基因的基因組序列可在GenBank中NC_000009.12處找到。ENTPD2人轉錄物變體的mRNA和蛋白質序列可在GenBank中找到，其登記號如下：

同種型1：NM_203468.2(mRNA)→NP_982293.1(具有495 aa的蛋白質)；

同種型2：NM_001246.3(mRNA)→NP_001237.1(具有472 aa的蛋白質)；

外核苷三磷酸二磷酸水解酶2同種型1[智人，NP_982293.1]

(SEQ ID NO：291)

智人外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)，轉錄物變體1，mRNA[NM_203468.2]

(SEQ ID NO：292)

外核苷三磷酸二磷酸水解酶2同種型2[智人，NP_001237.1]

．(SEQ．ID．NO：．293)

智人外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)，轉錄物變體2，mRNA[NM_001246.3]

(SEQ ID NO：294)

如本文所用，人ENTPD2蛋白還涵蓋在其全長上與ENTPD2同種型中的任何一種具有至少約70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的蛋白質。鼠、食蟹猴和其他動物ENTPD2蛋白的序列係本領域已知的。

如本文所用，術語「抗體」係指源自與抗原特異性地結合的免疫球蛋白分子的蛋白質或多肽序列。抗體可以是多株或單株、多鏈或單鏈、或完整免疫球蛋白，並且可以源自天然來源或來自重組來源。例如，天然存在的IgG抗體可以是包含藉由二硫鍵相互連接的至少兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈的糖蛋白。每條重鏈包含重鏈可變區(本文中縮寫為VH)和重鏈恒定區。重鏈恒定區包含三個結構域，即CH1、CH2和CH3。每條輕鏈包含輕鏈可變區(本文中縮寫為VL)和輕鏈恒定區。輕鏈恒定區包含一個結構域，即CL。VH和VL區可進一步細分為高變區，稱為互補決定區(CDR)，它們散佈著稱為框架區(FR)的較保守的區。每個VH和VL由從胺基末端排到羧基末端按以下順序排列的三個CDR和四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈和輕鏈的可變區含有與抗原相互作用的結合結構域。抗體的恒定區可以介導免疫球蛋白與宿主組織或因子(包括免疫系統的各種細胞(例如，效應細胞)和經典補體系統的第一成分(C1q))的結合。抗體可以是單株抗體、人抗體、人源化抗體、駱駝源化(camelised)抗體或嵌合抗體。該等抗體可以屬於任何同種型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亞類。

術語「抗體片段」或「抗原結合片段」係指抗體的至少一部分，該至少一部分保留與抗原表位特異性地相互作用(例如，藉由結合、空間位阻、穩定/去穩定、空間分佈)的能力。抗體片段的實例包括但不限於Fab、Fab’、 F(ab’)2、Fv片段、scFv抗體片段、二硫鍵連接的Fv(sdFv)、由VH和CH1結構域組成的Fd片段、線性抗體、單結構域抗體如sdAb(VL或VH)、駱駝科VHH結構域、由抗體片段(如包含在鉸鏈區藉由二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段)形成的多特異性抗體、和分離的CDR、或抗體的其他表位結合片段。抗原結合片段還可以摻入到單結構域抗體、大型抗體(maxibodies)、微型抗體(minibodies)、奈米抗體、細胞內抗體、雙體抗體、三體抗體、四體抗體、v-NAR和bis-scFv中(參見例如，Hollinger和Hudson,Nature Biotechnology[自然生物技術]23：1126-1136,2005)。還可以將抗原結合片段移植到基於多肽如纖網蛋白III型(Fn3)的支架中(參見美國專利號6,703,199，其描述了纖網蛋白多肽微型抗體)。術語「scFv」係指融合蛋白，其包含至少一個包含輕鏈可變區的抗體片段和至少一個包含重鏈可變區的抗體片段，其中該輕鏈可變區和重鏈可變區例如藉由合成連接子(例如短柔性多肽連接子)係連續連接的並且能夠表現為單鏈多肽，並且其中scFv保留了它所來源的完整抗體的特異性。除非另有說明，否則如本文所用，scFv可以例如相對於多肽的N末端和C末端以任何順序具有VL和VH可變區，該scFv可以包含VL-連接子-VH或者可以包含VH-連接子-VL。

如本文所用的，該術語「互補決定區」或「CDR」係指抗體可變區內賦予抗原特異性和結合親和力的胺基酸的序列。例如，一般來說，每個重鏈可變區中存在三個CDR(例如HCDR1、HCDR2、和HCDR3)，並且每個輕鏈可變區中存在三個CDR(例如LCDR1、LCDR2、和LCDR3)。給定CDR的精確胺基酸序列邊界可以使用許多眾所周知的方案中的任一種來確定，該等方案包括由以下文獻描述的那些：Kabat等人(1991),「Sequences of Proteins of Immunological Interest」[具有免疫學重要性的蛋白序列]，第5版，美國國立衛生研究院，公共衛生事業部，馬里蘭州貝塞斯達市(「卡巴特」編號方案)； Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273,927-948(「喬西亞」編號方案)或其組合，和ImMunoGenTics(IMGT)編號(Lefranc,M.-P.,The Immunologist[免疫學者]，7,132-136(1999)；Lefranc,M.-P.等人，Dev.Comp.Immunol.[發育免疫學與比較免疫學]，27,55-77(2003)(「IMGT」編號方案)。在針對給定CDR區(例如，HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2或LC CDR3)的組合卡巴特和喬西亞編號方案中，在一些實施方式中，該等CDR對應於被定義為卡巴特CDR的一部分的胺基酸殘基，以及被定義為喬西亞CDR的一部分的胺基酸殘基。如本文所用，根據「喬西亞」編號方案定義的CDR有時也稱為「高變環」。

例如，根據卡巴特，重鏈可變結構域(VH)中的CDR胺基酸殘基編號為31-35(HCDR1)(例如在位置35後的一個或多個插入)、50-65(HCDR2)、和95-102(HCDR3)；並且輕鏈可變結構域(VL)中的CDR胺基酸殘基編號為24-34(LCDR1)(例如在位置27後的一個或多個插入)、50-56(LCDR2)、和89-97(LCDR3)。作為另一個實例，根據喬西亞，VH中的CDR胺基酸編號為26-32(HCDR1)(例如在位置31後的一個或多個插入)、52-56(HCDR2)、和95-102(HCDR3)；並且VL中的胺基酸殘基編號為26-32(LCDR1)(例如在位置30後的一個或多個插入)、50-52(LCDR2)、和91-96(LCDR3)。藉由結合卡巴特和喬西亞的CDR定義，CDR包含例如人VH中的胺基酸殘基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)和人VL中的胺基酸殘基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)或由其組成。根據IMGT，VH中的CDR胺基酸殘基編號為大約26-35(CDR1)、51-57(CDR2)和93-102(CDR3)，並且VL中的CDR胺基酸殘基編號為大約27-32(CDR1)、50-52(CDR2)和89-97(CDR3)(根據「卡巴特」編號)。在IMGT下，可以使用程式IMGT/DomainGap Align確定抗體的CDR區。通常，除非特別指出，否則該抗體分子可包括一種或多種卡巴特CDR和/或喬西亞CDR的任何組合。

術語「表位」包括能夠特異性結合免疫球蛋白或以其他方式與分子相互作用的任何蛋白質決定簇。表位決定簇通常由分子的化學活性表面基團組成，如胺基酸或碳水化合物或糖側鏈，並且可以具有特定的三維結構特徵以及特定的電荷特徵。表位可以是「線性的」或「構象的」。構象表位和線性表位差別在於：在變性溶劑的存在下，對構象表位(而不是非構象表位)的結合喪失。

如本文所用的術語「單價抗體」係指結合靶分子上的單個表位的抗體。

如本文所用的術語「二價抗體」係指結合至少兩個相同靶分子上的兩個表位的抗體。二價抗體還可以使靶分子彼此交聯。「二價抗體」還指結合至少兩個相同靶分子上的兩個不同表位的抗體。

術語「多價抗體」係指具有多於一個化合價的單個結合分子，其中「化合價」被描述為每分子抗體構建體中存在的抗原結合部分的數目。因此，單個結合分子可以結合靶分子上多於一個結合位點。多價抗體的實例包括但不限於二價抗體、三價抗體、四價抗體、五價抗體等，以及雙特異性抗體和雙互補位抗體。例如，對於ENTPD2，多價抗體(例如，ENTPD2雙互補位抗體)分別具有針對ENTPD2的兩個結構域的結合部分。

術語「多價抗體」還指對於兩個分開的靶分子具有多於一個抗原結合部分的單個結合分子。例如，結合ENTPD2的抗體(例如，人ENTPD2蛋白)和不是ENTPD2的第二靶分子。在一個實施裡中，多價抗體係具有四個表位結合結構域的四價抗體。對於該靶分子上的每個結合位點，四價分子可以是雙特異性和二價的。

如本文所用的術語「雙特異性抗體」係指結合兩種或更多種不同表位的抗體。在一些實施方式中，雙特異性抗體與兩種不同的靶標結合。在一些實施方式中，雙特異性抗體結合單個靶分子上的兩個不同表位。結合單個靶分子上的兩個不同表位的抗體也稱為「雙互補位抗體」。

如本文所用的短語「單株抗體」或「單株抗體組成物」係指具有基本上相同的胺基酸序列或源自相同的遺傳來源的多肽(包括抗體、雙特異性抗體等)。該術語還包括具有單分子組成的抗體分子的製劑。單株抗體組成物表現出對特定表位的單一結合特異性和親和力。

如本文所用，短語「人抗體」包括具有可變區的抗體，其中框架區和CDR區兩者均源自人來源的序列。此外，如果抗體含有恒定區，則恒定區還源自此類人序列，例如人種系序列或突變形式的人種系序列，或含有衍生自人框架序列分析的共有框架序列的抗體，例如，如描述於Knappik等人(2000.J Mol Biol[分子生物學雜誌]296,57-86)。免疫球蛋白可變結構域(例如CDR)的結構和位置可使用眾所周知的編號方案來定義，例如，卡巴特編號方案，喬西亞編號方案，或卡巴特和喬西亞的組合，和ImMunoGenTics(IMGT)編號(參見，例如Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學相關蛋白質序列]，美國衛生與公眾服務部(U.S.Department of Health and Human Services)(1991)，編輯Kabat等人；Al Lazikani等人，(1997)J.Mol.Bio.[分子生物學雜誌]273：927 948；Kabat等人，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學相關蛋白質序列]，第5版，NIH公開號91-3242美國衛生與公眾服務部(U.S.Department of Health and Human Services)；Chothia等人，(1987)J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]196：901-917；Chothia等人，(1989)Nature[自然]342：877-883；Al-Lazikani等人，(1997)J.Mal.Biol.273：927-948和Lefranc,M.-P.,The Immunologist[免疫學家]，7,132-136(1999)；Lefranc,M.-P.等人，Dev.Comp.Immunol.[發育與比較免疫學]，27,55-77(2003))。

本發明之人抗體可以包括不是由人序列編碼的胺基酸殘基(例如，藉由在體外隨機誘變或位點特異性誘變或藉由在體內體細胞突變來引入的突變，或保守的替代，以促進穩定性或製造)。然而，如本文所用的術語「人類抗體」不旨在包括其中源自另一種哺乳動物物種(如小鼠)種系的CDR序列已被移植到人類框架序列中的抗體。

如本文所用的短語「重組人抗體」包括藉由重組方式製備、表現、產生或分離的所有人抗體，如從動物(例如，小鼠)(該動物對於人免疫球蛋白基因係轉基因的或轉染色體的)或由其製備的雜交瘤中分離的抗體；從轉化以表現人抗體的宿主細胞中(例如，從轉染瘤中)分離的抗體；從重組組合的人抗體文庫中分離的抗體；以及藉由任何其他方式(其涉及將全部或部分的人免疫球蛋白基因、序列剪接到其他DNA序列)製備、表現、產生或分離的抗體。此類重組人抗體具有可變區，其中構架區和CDR區衍生自人種系免疫球蛋白序列。然而，在某些實施方式中，可以對此類重組人抗體進行體外誘變(或，當使用轉基因人Ig序列的動物時，進行體內體細胞誘變)，並因此重組抗體的VH和VL區的胺基酸序列係衍生自人種系VH和VL序列的和與其相關的序列，該等序列在體內可能不天然存在於人抗體種系庫中。

如本文所用的術語「Fc區」係指包含抗體的恒定結構域的CH3、CH2和鉸鏈區的至少一部分的多肽。視需要，Fc區可以包含在一些抗體種類中存在的CH4結構域。Fc區可以包含抗體恒定區的整個鉸鏈區。在一個實施方式中，本發明包括抗體的Fc區和CH1區。在一個實施方式中，本發明包括抗體的Fc區和CH3區。在另一個實施方式中，本發明包括Fc區、CH1區和來自抗體恒定結構域的Cκ/λ區。在一個實施方式中，本發明之結合分子包含恒定區，例如重鏈恒定區。在一個實施方式中，與野生型恒定區相比，這類恒定區係經修飾的。即，本文公開的本發明之多肽可以包含對三個重鏈恒定結構域(CH1、CH2或CH3)中的一個或多個和/或對輕鏈恒定區結構域(CL)的改變或修飾。實例修飾包括在一個或多個結構域中添加、缺失或取代一個或多個胺基酸。可以包括此類改變，以優化效應子功能、半衰期等。

如本文所用，術語「親和力」係指在單個抗原位點處抗體和抗原之間的相互作用強度。在每個抗原位點內，抗體「臂」的可變區藉由弱非共價力在許多位點處與抗原相互作用；相互作用越多，親和力越強。如本文所用，針對IgG抗體或其片段(例如，Fab片段)的術語「高親和力」係指對靶抗原具有10^-8 M或更低、10^-9 M或更低、或10^-10 M、或10^-11 M或更低、或10^-12 M或更低、或10^-13 M或更低的敲低的抗體。然而，對於其他抗體同種型，「高親和力」結合可以變化。例如，對於IgM同種型的「高親和力」結合係指抗體具有10^-7 M或更低或10^-8 M或更低的敲低。

如本文所用，術語「親合力」係指抗體-抗原複合物的總體穩定性或強度的資訊量度。它受三個主要因素控制：抗體表位親和力；抗原和抗體二者的化合價；以及相互作用部分的結構佈置。最終，該等因素決定了抗體的特異性，即特定抗體與精確抗原表位結合的可能性。

如本文所用，術語「結合特異性」係指單個抗體結合位點與一種抗原決定簇而不與不同的抗原決定簇反應的能力。抗體的結合位點位於分子的Fab部分中，並且由重鏈和輕鏈的高變區構建。抗體的結合親和力係單個抗原決定簇與抗體上的單個結合位點之間的反應強度。它係在抗原決定簇與抗體的結合位點之間運行的吸引力和排斥力的總和。

術語「治療」(「treat」和「treatment」)係指治療性治療和預防性或防護性措施，其中目的是預防或減緩不期望的生理變化或障礙。出於本發明之目的，有益或期望的臨床結果包括但不限於減輕症狀、降低疾病程度、疾病狀態穩定(即，不惡化)、延遲或減緩疾病進展、改善或緩和疾病狀態以及緩解(無論是部分還是全部)，無論是可檢測的還是不可檢測的。「治療」還可以意指與不接受治療的預期存活相比延長存活。在其他實施方式中，術語「治療(treat、treatment和treating)」係指藉由例如穩定可辨別的症狀來物理地，或藉由例如穩定物理參數來生理地，或藉由兩者，抑制增殖性障礙的進展。在其他實施方式中，該術語「治療(treat、treatment和treating)」係指減少或穩定腫瘤大小或癌細胞計數。

術語「受試者」係指向其提供根據本發明之方法的治療的動物、人、或非人。考慮了獸醫應用和非獸醫應用。該術語包括但不限於哺乳動物，例如人、其他靈長類動物、豬、齧齒動物如小鼠和大鼠、兔、豚鼠、倉鼠、牛、馬、貓、狗、綿羊和山羊。典型的受試者包括人、農場動物和家養寵物，如貓和狗。在一些實施方式中，受試者係人。

「有效量」係指足以實現有益的或希望的結果的量。例如，治療量為達到所需療效的量。該量可與預防上有效量相同或不同，該預防上有效量為預防疾病或疾病症狀的發作所需的量。可以在一次或多次投與或應用或給藥時投與有效量。治療化合物的治療有效量(即，有效劑量)取決於所選擇的治療化合物。可以從每天一次或多次至每週一次或多次來投與組成物。技術人員將理解，某些因素可以影響有效治療受試者所需的劑量和時程，包括但不限於疾病或障礙的嚴重性、先前的治療、受試者的一般健康狀況和/或年齡，以及存在的其他疾病。此外，用治療有效量的在此描述的治療化合物對受試者進行的治療可以包括單一治療或一系列治療。

術語「核酸」或「多核苷酸」係指單股或雙股形式的去氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其聚合物。術語「核酸組」可以例如包括編碼抗體的輕鏈和重鏈或雙特異性或多特異性抗體的結構域的分開的分離的核酸。除非特別限定，否則該術語涵蓋含有已知的天然核苷酸類似物的核酸，該等核酸具有與參考核酸類似的結合特性並且以與天然存在的核苷酸類似的方式進行代謝。除非另外指出，否則特定的核酸序列還隱含地涵蓋其保守修飾的變體(例如，簡並密碼子取代)、等位基因、異種同源物、SNP和互補序列以及明確指明的序列。具體地，簡並密碼子取代可以藉由產生如下序列而獲得，在該等序列中，一個或多個所選的(或全部)密碼子的第三位被混合鹼基和/或去氧肌苷殘基取代(Batzer等人，Nucleic Acid Res.[核酸研究]19：5081(1991)；Ohtsuka等人，J.Biol.Chem.[生物化學雜誌]260：2605-2608(1985)；和Rossolini等人，Mol.Cell.Probes[分子與細胞探針]8：91-98(1994))。

術語「肽」、「多肽」和「蛋白質」可互換使用，並且是指包含由肽鍵共價連接的胺基酸殘基的化合物。蛋白質或肽必須含有至少兩個胺基酸，並且對可構成蛋白質或肽序列的胺基酸的最大數量沒有限制。多肽包括包含由肽鍵彼此相連的兩個或更多個胺基酸的任何肽或蛋白質。如本文所用，該術語係指短鏈，例如其在本領域中通常也稱為肽、寡肽和寡聚體，並且還是指較長的鏈，其在本領域中通常稱為蛋白質，存在有很多類型的蛋白質。「多肽」包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同源二聚體、異源二聚體、多肽的變體、經修飾的多肽、衍生物、類似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重組肽或其組合。

術語「保守序列修飾」係指不顯著影響或改變含有胺基酸序列的抗體或抗體片段的結合特徵的胺基酸修飾。此類保守修飾包括胺基酸取代、添加和缺失。可以藉由本領域已知的標準技術(如定點誘變和PCR介導的誘變)將修飾引入本發明之抗體或抗體片段中。保守胺基酸取代係其中胺基酸殘基被具有類似側鏈的胺基酸殘基置換的取代。具有相似側鏈的胺基酸殘基的家族已在本領域中進行了定義。該等家族包括具有鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電荷的極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、β分支側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)以及芳香族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)的胺基酸。

術語「同源的」或「同一性」係指兩個聚合分子之間，例如兩個核酸分子(如兩個DNA分子或兩個RNA分子)之間或兩個多肽分子之間的亞模體列同一性。當這兩個分子中的亞基位置被相同的單體亞基佔據時；例如，如果兩個DNA分子中的每一個中的位置被腺嘌呤佔據，則它們在該位置係同源的或相同的。兩個序列之間的同源性係匹配位置或同源位置的數量的直接函數；例如，如果兩個序列中一半的位置(例如，長度為十個亞基的聚合物中的五個位置)係同源的，則這兩個序列係50%同源的；如果90%的位置(例如，10個中的9個)係匹配的或同源的，則這兩個序列係90%同源的。可以藉由在比較窗口上比較兩個最佳比對的序列來確定「序列同一性」的百分比，其中比較窗口中的胺基酸序列的片段可以包含與參考序列(其不包含添加或缺失)相比的添加或缺失(例如，空位或突出端)以使兩個序列最佳比對。可以藉由以下方法計算該百分比：測定在這兩個序列中出現相同胺基酸殘基的位置的數目以產生匹配位置數，將該匹配位置數除以該比較窗口中的位置總數，並將結果乘以100，從而得到序列同一性百分比。輸出係主題序列關於查詢序列的百分比同一性。

術語「分離的」意指從天然狀態改變的或去除的。例如，天然存在於活體動物中的核酸或肽不是「分離的」，但是與其天然狀態的共存材料部分或完全分開的相同核酸或肽係「分離的」。分離的核酸或蛋白質能以基本上純化的形式存在，或者可以存在於非天然環境(例如像，宿主細胞)中。「分離的抗體」基本上不含具有不同抗原特異性的其他抗體(例如，特異性結合ENTPD2的分離的抗體基本上不含特異性結合除ENTPD2以外的抗原的抗體)。然而，特異性結合靶分子的分離的抗體可以與來自其他物種的相同抗原具有交叉反應性，例如，特異性結合ENTPD2的分離的抗體可以結合來自其他物種的ENTPD2分子。此外，分離的抗體可以基本上不含其他細胞物質和/或化學品。

除非另外定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的普通技術人員通常理解的相同含義。儘管可以使用與本文所述那些方法和材料類似或等同之方法和材料來實踐本發明，但是下面描述了合適之方法和材料。本文所提到的所有出版物、專利申請、專利和其他參考文獻均藉由引用以其全文併入。在衝突存在的情況下，則以包括定義在內的本說明書為准。此外，材料、方法和實施方式僅是說明性的而不旨在限制。

本發明之一個或多個實施方式的細節陳述於附圖和下文的描述中。根據說明書和附圖並且根據申請專利範圍，本發明之其他特徵、目標和優點將是顯而易見的。

與人ENTPD2特異性結合的抗體和抗原結合片段

在一個方面，本發明關於如下組合，其包含特異性結合胞外酶外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(ENTPD2)的抗體或其抗原結合片段和特異性結合CD73(分化簇73)的抗體或其抗原結合片段。

在本發明之組合的一個實施方式中，其中的抗ENTPD2抗體係特異性結合ENTPD2蛋白(「ENTPD2抗體或抗原結合片段」或「抗ENTPD2抗體或抗原結合片段」)的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段。在本發明之組合的一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段，特異性結合人ENTPD2蛋白(「人ENTPD2抗體或抗原結合片段」或「抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段」)。

在本發明之組合的一些實施方式中，本文提供的抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段(例如，抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段)包括重鏈CDR1(HCDR1)、重鏈CDR2(HCDR2)、重鏈CDR3(HCDR3)和輕鏈CDR1(LCDR1)、輕鏈CDR2(LCDR2)和輕鏈CDR3(LCDR3)。在一些實施方式中，本文提供的抗ENTPD2抗體或抗原結合片段(例如，抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段)包括包含CDR1、CDR2和CDR3的重鏈可變區(VH)和包含CDR1、CDR2和CDR3的輕鏈可變區(VL)。在一些實施方式中，本文提供的抗ENTPD2抗體或抗原結合片段(例如，抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段)包括全長重鏈序列(HC)和全長輕鏈序列(LC)。

表1列出了特異性結合人ENTPD2蛋白的ENTPD2抗體或抗原結合片段的示例性序列。

在本發明之組合的一些實施方式中，抗人ENTPD2抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表1中所述之任何VH結構域的胺基酸序列的VH結構域。其他合適的抗人ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)可包括如下胺基酸，該胺基酸已經突變但在VH結構域中與表1中描述的序列中描繪的VH區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。在某些實施方式中，本公開還提供了特異性結合人ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，其中該等抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表1中列出的任一VH CDR的胺基酸序列的VH CDR。在具體實施方式中，本發明之組合提供了特異性結合人ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，該抗體或抗體片段包含一個、兩個、三個、四個、五個或更多個具有表1中列出的任一VH CDR的胺基酸序列的VH CDR(或視需要，由其組成)。

在本發明之組合的一些實施方式中，抗人ENTPD2抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表1中所述之任何VL結構域的胺基酸序列的VL結構域。其他合適的抗人ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)可包括如下胺基酸，該胺基酸已經突變但在VL結構域中與表1中描述的序列中描繪的VL區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。在某些實施方式中的本發明之組合還關於特異性結合人ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，其中該等抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表1中列出的任一VL CDR的胺基酸序列的VL CDR。具體地，在一些實施方式中的本發明之組合關於特異性結合人ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，該抗體或抗體片段包含一個、兩個、三個或更多個具有表1中列出的任一VL CDR的胺基酸序列的VL CDR(或視需要，由其組成)。

本文公開的其他抗人ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)包括如下胺基酸，該胺基酸已經突變但在CDR區中與表1中描述的序列中描繪的CDR區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。在一些實施方式中，其包括突變胺基酸序列，其中當與表1中描述的序列中描繪的CDR區相比時，CDR區中不超過1、2、3、4或5個胺基酸已經突變。

本文還提供了編碼特異性結合人ENTPD2(例如表1中的核酸序列)的抗體及其抗原結合片段的VH、VL、全長重鏈和全長輕鏈的核酸序列。可優化此類核酸序列以在哺乳動物細胞中表現。

本文公開的其他抗人ENTPD2抗體包括如下那些抗體，其中該等胺基酸或編碼該等胺基酸的核酸已經突變但與表1中描述的序列具有至少 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段包括突變胺基酸序列，其中當與表1中描述的序列中描繪的可變區相比時，在可變區中不超過1、2、3、4或5個胺基酸已經突變，但同時基本上保持相同的治療活性。

由於本文所述之抗ENTPD2抗體或抗原結合片段與人ENTPD2結合，因此VH、VL、全長輕鏈和全長重鏈序列(胺基酸序列和編碼該胺基酸序列的核苷酸序列)可以是「混合且匹配的」以產生本文揭露的其他ENTPD2結合抗體。可以使用本領域已知的結合測定法(例如，ELISA，實例中描述的測定法)測試這種「混合且匹配的」ENTPD2結合抗體。當鏈被混合且匹配時，來自特定VH/VL配對的VH序列應當用結構上相似的VH序列替代。來自特定全長重鏈/全長輕鏈配對的全長重鏈序列應當用結構上相似的全長重鏈序列替代。來自特定VH/VL配對的VL序列應當用結構上相似的VL序列替代。來自特定全長重鏈/全長輕鏈配對的全長輕鏈序列應當用結構上相似的全長輕鏈序列替代。

因此，在一個實施方式中，本發明之組合關於分離的抗ENTPD2單株抗體或其抗原結合片段，該單株抗體或其抗原結合片段具有：包含選自以下中任一項的胺基酸序列的重鏈可變區(VH)：SEQ ID NO：10、25、33、46、70、91、115、132、145、169、225、233、241、250、264、281、328；和包含選自以下中任一項的胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)：SEQ ID NO：21、29、57、64、74、78、102、125、156、178、229、237、257、268、287、332；其中該抗體特異性結合人ENTPD2。

在另一個實施方式中，本發明之組合提供了(i)分離的抗ENTPD2單株抗體，該單株抗體具有：包含選自以下中任一項的胺基酸序列的全長重鏈(HC)：SEQ ID NO：12、27、35、48、72、93、117、134、147、171、227、 235、243、252、266、283、330；和包含選自以下中任一項的胺基酸序列的全長輕鏈(LC)：SEQ ID NO：23、31、59、66、76、80、104、127、158、180、231、239、259、270、289、334；或(ii)包含其抗原結合部分的功能性蛋白質。

在另一個實施方式中，本發明之組合關於人ENTPD2結合抗體或其抗體片段，該抗體或其抗體片段包含如表1中所述之重鏈CDR1、CDR2和CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2和CDR3，或其組合。抗體的VH CDR1的胺基酸序列示於SEQ ID NO：1、4、6、7、37、40、42、43、82、85、87、88、106、109、111、112、136、139、141、142、160、163、165、166、185、187、188、206、207、208、213、214、215、272、275、277。抗體的VH CDR2的胺基酸序列示於SEQ ID NO：2、5、8、38、41、44、83、86、89、107、110、113、129、130、131、137、140、143、161、164、167、186、189、220、222、223、245、247、248、261、273、276、279。抗體的VH CDR3的胺基酸序列示於SEQ ID NO：3、39、68、84、108、138、162、221、246、262、277、274、9、45、69、90、114、144、168、190、224、249、263、274、280。抗體的VL CDR1的胺基酸序列示於SEQ ID NO：14、17、20、50、53、56、61、62、63、95、98、101、119、122、124、149、152、155、173、175、177、198、201、254。抗體的VL CDR2的胺基酸序列示於SEQ ID NO：15、18、51、54、96、99、120、150、153、199、285、286。抗體的VL CDR3的胺基酸序列示於SEQ ID NO：16、19、52、55、97、100、121、123、151、154、174、176、200、255、256。

鑒於該等抗體中的每一種都可以與ENTPD2結合且抗原結合特異性主要由CDR1、CDR2和CDR3區提供，VH CDR1、CDR2和CDR3序列以及VL CDR1、CDR2和CDR3序列可以是「混合且匹配的」(即，來自不同抗體的CDR可以被混合且匹配)，但每種抗體必須含有VH CDR1、CDR2和CDR3以及VL CDR1、CDR2和CDR3以產生本文揭露的其他ENTPD2結合分子。可以使用本領域已知的結合測定和實例中描述的那些結合測定(例如，ELISA)來測試這種「混合且匹配的」ENTPD2結合抗體。當VH CDR序列混合且匹配時，來自特定VH序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列應該用結構上相似的一個或多個CDR序列替代。同樣地，當VL CDR序列混合且匹配時，來自特定VL序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列應該用結構上相似的一個或多個CDR序列替代。對於普通技術人員來說容易清楚的是，可以藉由取代來自對於本揭露單株抗體的本文所示CDR序列的具有結構相似序列的一個或多個VH和/或VL CDR區序列來產生新的VH和VL序列。

在本發明之組合的一些實施方式中，抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段係分離的單株抗體或其抗原結合區，該單株抗體或其抗原結合區包含重鏈CDR1，該重鏈CDR1包含選自由以下各項組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO：1、4、6、7、37、40、42、43、82、85、87、88、106、109、111、112、136、139、141、142、160、163、165、166、182、187、188、206、207、208、213、214、215、272、275、277；重鏈CDR2，該重鏈CDR2包含選自由以下組成之群組之胺基酸序列：SEQ ID NO：2、5、8、38、41、44、83、86、89、107、110、113、129、130、131、137、140、143、161、164、167、183、189、220、222、223、245、247、248、261、273、276；重鏈CDR3，該重鏈CDR3包含選自由以下組成之群組之胺基酸序列：SEQ ID NO：3、39、68、84、108、138、162、221、246、262、277、274、9、45、69、90、114、144、168、190、224、249、263、274、280；輕鏈CDR1，該輕鏈CDR1包含選自由以下組成之群組之胺基酸序列：SEQ ID NO：14、17、20、50、53、56、61、62、63、95、98、101、119、122、124、149、152、155、173、175、177、195、201、254；輕鏈CDR2，該輕鏈CDR2包含選自由以下組成之群組之胺基酸序列：SEQ ID NO：15、18、51、54、96、99、120、150、153、196、285、286；和輕鏈CDR3，該輕鏈CDR3 包含選自由以下組成之群組之胺基酸序列：SEQ ID NO：16、19、52、55、97、100、121、123、151、154、174、176、197、255、256；其中該抗體特異性結合人ENTPD2。

在某些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體係表1中描述的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈互補決定區1(HCDR1)，其包含SEQ ID NO：1、4、6或7的胺基酸序列；重鏈互補決定區2(HCDR2)，其包含SEQ ID NO：2、5或8的胺基酸序列；重鏈互補決定區3(HCDR3)，其包含SEQ ID NO：3或9的胺基酸序列；輕鏈互補決定區1(LCDR1)，其包含SEQ ID NO：14、17或20的胺基酸序列；輕鏈互補決定區2(LCDR2)，其包含SEQ ID NO：15或18的胺基酸序列；和輕鏈互補決定區3(LCDR3)，其包含SEQ ID NO：16或19的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：2的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：3的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37、40、42或43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38、41或44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39或45的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：50、53或56的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51或54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52或55的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列； LCDR1，其包含SEQ ID NO：53的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37、40、42或43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38、41或44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39或45的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61、62或63的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51或54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52或55的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37、40、42或43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38、41或44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68或69的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：50、53或56的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51或54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52或55的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列； LCDR1，其包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：53的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：82、85、87或88的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：83、86或89的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：84或90的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：95、98或101的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：96或99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：97或100的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：82的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：95的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：96的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：97的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：98的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：100的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：95的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：96的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：97的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：88的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：89的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：97的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：106、109、111或112的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：107、110或113的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108或114的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：119、122 或124的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99或120的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121或123的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：110的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：122的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：123的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：124的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：106、109、111或112的胺基酸序列； HCDR2，其包含SEQ ID NO：129、130或131的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108或114的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：119、122或124的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99或120的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121或123的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：129的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：109的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：130的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：122的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：123的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：129的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：131的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：124的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：99的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：121的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：136、139、141或142的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：137、140或143的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：138或144的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：149、152或155的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150或153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：151或154的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：136的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：149的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：151的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：139的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：140的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：152的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：154的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：141的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：138的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：149的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：151的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：142的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：143的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：144的胺基酸序列； LCDR1，其包含SEQ ID NO：155的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：151的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：160、163、165或166的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：161、164或167的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：162或168的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：173、175或177的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150或153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：174或176的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：160的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：161的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：162的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：173的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：163的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：164的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：162的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：175的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：176的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：165的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：161的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：162的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：173的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：150的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：166的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：167的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：168的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：177的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：153的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：174的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37、40、42或43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220、222或223的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：221或224的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61、62或63的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51或54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52或55的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：221的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：222的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：221的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：221的胺基酸序列； LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：223的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：224的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37、40、42或43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220、222或223的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68或69的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61、62或63的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51或54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52或55的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：222的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：220的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：223的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：52的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1、4、6或7的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：245、247或248的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：246或249的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17、20或254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15或18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：255或256的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：245的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：246的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：255的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：247的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：246的胺基酸序列； LCDR1，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：256的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：246的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：255的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：248的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：249的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：255的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1、4、6或7的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：247、248或261的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：262或263的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17、20或254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15或18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16或19的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：261的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：262的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：247的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：262的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：261的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：262的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：248的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：263的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：272、275或278的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：273、276或279的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：274、277或280的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17、20或254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：285或286的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16或19的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：272的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：273的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：274的胺基酸序列； LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：285的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：275的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：276的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：274的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：17的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：286的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：277的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：273的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：274的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：254的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：285的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：HCDR1，其包含SEQ ID NO：278的胺基酸序列；HCDR2，其包含SEQ ID NO：279的胺基酸序列；HCDR3，其包含SEQ ID NO：280的胺基酸序列；LCDR1，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；LCDR2，其包含SEQ ID NO：286的胺基酸序列；和LCDR3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：70的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：78的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：91的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：102的胺基酸序列(或與其具有至少約 90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：115的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：125的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：132的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：125的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：145的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：156的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：169的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：178的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：225的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：229的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：233的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：237的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：241的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：229的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：250的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：257的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：264的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：268的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體或其抗原結合區包含：重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區(VH)包含SEQ ID NO：281的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區(VL)包含SEQ ID NO：287的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：35的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：66的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：76的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：80的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：93的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：104的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：117的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：134的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：127的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：147的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：158的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：171的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：180(或與其具有至少約90%、 95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：227的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：231的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：235的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：239的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：243的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：231的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：252的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：259的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：266的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：270的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在一些實施方式中，特異性結合人ENTPD2的抗體包含：重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：283的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)和輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：289的胺基酸序列(或與其具有至少約90%、95%、99%或更高同一性的序列，和/或具有一個、兩個、三個或更多個取代、插入、缺失或修飾的序列)。

在本發明之組合的一些實施方式中，結合人ENTPD2蛋白的抗體或其抗原結合片段與所述蛋白結合的解離常數(KD)小於10nM，例如KD小於9nM、小於8nM、小於7nM、小於6nM、小於5nM、小於4nM、小於3nM、小於2nM、小於1nM，例如如藉由Biacore測量的。在一些實施方式中，結合人ENTPD2蛋白的本文提供的抗體或抗原結合片段與所述蛋白結合的解離常數(KD)小於5nM，例如如藉由Biacore測量的。在一些實施方式中，結合人ENTPD2蛋白的本文提供的抗體或抗原結合片段與所述蛋白結合的解離常數(KD)小於3nM，例如如藉由Biacore測量的。在一些實施方式中，結合人ENTPD2蛋白的本文提供的抗體或抗原結合片段與所述蛋白結合的解離常數(KD)小於1nM，例如如藉由Biacore測量的。在一些實施方式中，在25℃ 藉由Biacore測量結合人ENTPD2的本文所述之抗體或其抗原結合片段的解離常數。

在本發明之組合的一些實施方式中，提供了特異性結合人ENTPD2中的表位的抗體或其抗原結合片段，其中該表位包含以下殘基中的至少一個(例如，至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少十個、至少十一個、至少十二個、至少十三個、至少十四個、至少十五個、至少二十個)：His50、Asp76、Pro78、Gly79、Gly80、Tyr85、Asp87、Asn88、Gly91、Gln94、Ser95、Gly98、Glu101、Gln102、Gln105、Asp106、Arg245、Thr272、Gln273、Leu275、Asp278、Arg298、Ala347、Ala350、Thr351、Arg392、Ala393、Arg394、或Tyr398。在本發明之組合的一些實施方式中，此類抗體或抗原結合片段包括但不限於如表1中揭露的MAb1、MAb2、MAb3、MAb7、MAb17、MAb19、MAb20、MAb21、和Fab23。

在本發明之組合的一些實施方式中，還提供了特異性結合人ENTPD2中的表位的抗體或其抗原結合片段，其中該表位包含以下殘基中的至少一個(例如，至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少十個、至少十一個、至少十二個、至少十三個、至少十四個、至少十五個、至少二十個)：Gly79、Gln250、Leu253、Trp266、Arg268、Gly269、Phe270、Ser271、Thr272、Gln273、Val274、Leu275、Asp278、Arg298、Ser300、Ser302、Gly303、Thr380、Trp381、Ala382、Gly390、Gln391、Arg392、Ala393、Arg394、或Asp397。在本發明之組合的一些實施方式中，此類抗體或抗原結合片段包括但不限於如表1中揭露的MAb4、MAb5、MAb6、MAb16、MAb18、和Fab22。

一旦確定了抗原上的所需表位，就有可能例如使用本發明中所述之技術生成針對該表位的抗體。可替代地，在發現過程中，抗體的產生和表徵可以闡明關於所需表位的資訊。根據該資訊，然後可以競爭性地篩選抗體以結合相同的表位。實現該目的之方法係進行交叉競爭研究以找到彼此競爭性結合的抗體，例如抗體競爭結合抗原。在國際專利申請案號WO 2003/48731中描述了基於抗體的交叉競爭將該等抗體「分箱」的高通量方法。如熟悉該項技術者所理解的，實際上抗體可以特異性結合的任何東西都可以是表位。表位可包含抗體結合的那些殘基。

通常，對特定靶抗原有特異性的抗體將優先識別蛋白質和/或大分子的複雜混合物中靶抗原上的表位。

可以使用本領域公知的任何數量的表位作圖技術鑒定包含表位的給定多肽的區域。參見，例如Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology[分子生物學方法中的表位映射方案]，卷66(Glenn E.Morris，編輯，1996,Humana Press(胡瑪納出版社)，托托華(Totowa)，新澤西州)。例如，線性表位可以藉由例如在固體支持物上同時合成大量肽來確定，該肽對應於蛋白質分子的部分且肽與抗體反應的同時肽仍然附著於支持物。該等技術在本領域中是已知的並且描述於，例如美國專利號4,708,871；Geysen等人，(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]8：3998-4002；Geysen等人，(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]82：78-182；Geysen等人，(1986)Mol.Immunol.[分子免疫學]23：709-715。類似地，藉由測定胺基酸的空間構象如藉由X射線晶體學和二維核磁共振，可以容易地鑒定構象表位。參見例如，Epitope Mapping Protocols[表位作圖方案]，同上。還可以使用標準抗原性和親水性圖來鑒定蛋白質的抗原區域，如使用例如可從牛津分子集團(Oxford Molecular Group)獲得的Omiga 1.0版軟體程式計算的那些圖。該電腦程式採用Hopp/Woods方法(Hopp等人，(1981)Proc.Natl.Acad.Sci USA[美國國家科學院院刊]78： 3824-3828)用於確定抗原性曲線且採用Kyte-Doolittle技術(Kyte等人，(1982)J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]157：105-132)用於親水性圖。

抗體分子可以是多株或單株抗體。單株抗體可以藉由雜交瘤技術或不使用雜交瘤技術之方法(例如重組方法)製備。在一些實施方式中，可以重組地產生抗體，例如藉由噬菌體展示或藉由組合方法產生。

用於產生抗體的噬菌體展示和組合方法在本領域中是已知的(如在以下文獻中所述之：例如Ladner等人，美國專利號5,223,409；Kang等人，國際公開號WO 92/18619；Dower等人，國際公開號WO 91/17271；Winter等人，國際公開WO 92/20791；Markland等人，國際公開號WO 92/15679；Breitling等人，國際公開WO 93/01288；McCafferty等人，國際公開號WO 92/01047；Garrard等人，國際公開號WO 92/09690；Ladner等人，國際公開號WO 90/02809；Fuchs等人(1991)Bio/Technology[生物/技術]9：1370-1372；Hay等人(1992)Hum Antibod Hybridomas[人類抗體雜交瘤]3：81-85；Huse等人(1989)Science[科學]246：1275-1281；Griffths等人(1993)EMBO J[歐洲分子生物學學會雜誌]12：725-734；Hawkins等人(1992)J Mol Biol[分子生物學雜誌]226：889-896；Clackson等人(1991)Nature[自然]352：624-628；Gram等人(1992)PNAS[美國國家科學院院刊]89：3576-3580；Garrad等人(1991)Bio/Technology[生物技術]9：1373-1377；Hoogenboom等人(1991)Nuc Acid Res[核酸研究]19：4133-4137；和Barbas等人(1991)PNAS[美國國家科學院院刊]88：7978-7982)。

在一個實施方式中，抗體係全人抗體(例如，在已經基因工程化為從人免疫球蛋白序列產生抗體的小鼠中製備的抗體)，或非人抗體，例如齧齒動物(小鼠或大鼠)、山羊、靈長類動物(例如，猴)、駱駝抗體。

抗體可以是可變區或其一部分(例如，CDR)在非人生物(例如，大鼠或小鼠)中產生的抗體分子。嵌合抗體、CDR移植的抗體、和人源化抗體屬於本發明。在非人生物(例如，大鼠或小鼠)中產生並且然後在例如可變框架或恒定區中修飾以降低在人中的抗原性的抗體屬於本發明。

可以工程化嵌合和/或人源化抗體以使人患者對非人受試者中產生的抗體或來自非人抗體基因表現的抗體的免疫應答最小化。嵌合抗體包含非人動物抗體可變區和人抗體恒定區。此類抗體保留了原始單株抗體的表位結合特異性，但當向人投與時可能具有較低的免疫原性，並且因此更可能被患者耐受。例如，小鼠抗體(例如小鼠單株抗體)的一條或多條輕鏈的可變區中的一個或全部(例如，一個、兩個或三個)和/或一條或多條重鏈的可變區中的一個或全部(例如，一個、兩個或三個)各自都可以連接到人恒定區，例如但不限於IgG1人恒定區。嵌合單株抗體可藉由本領域已知的重組DNA技術產生。例如，編碼非人抗體分子的恒定區的基因可以用編碼人恒定區的基因取代(參見Robinson等人，PCT專利公開PCT/US 86/02269；Akira，等人，歐洲專利申請184,187；或Taniguchi,M.，歐洲專利申請171,496)。另外，可以用於產生嵌合抗體的其他合適技術描述於例如美國專利號4,816,567、4,978,775、4,975,369、和4,816,397。

藉由用來自人可變區的等效部分替換不參與抗原結合的可變區的部分，可以進一步「人源化」嵌合抗體。人源化抗體包含可變區中的一個或多個人框架區以及重鏈和/或輕鏈的非人(例如小鼠、大鼠或倉鼠)互補決定區(CDR)。在一些實施方式中，人源化抗體包含除CDR區外的完全人序列。相對於非人源化抗體，人源化抗體通常對人類的免疫原性較低，並且因此在某些情況下提供治療益處。可以使用本領域已知之方法產生人源化ENTPD2抗體。參見例如Hwang等人，Methods[方法]36：35,2005；Queen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美國國家科學院院刊]86：10029-10033,1989；Jones等人，Nature[自然]321：522-25,1986；Riechmann等人，Nature[自然]332：323-27,1988；Verhoeyen 等人，Science[科學]239：1534-36,1988；Orlandi等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美國國家科學院院刊]86：3833-3837,1989；美國專利號5,225,539、5,530,101、5,585,089；5,693,761、5,693,762、和6,180,370；以及WO 90/07861。

可以使用本領域已知之方法生成人ENTPD2抗體。例如，人類工程化技術用於將非人抗體轉化為工程化人抗體。美國專利公開號20050008625描述了一種體內方法，其用於採用抗體中的人可變區替代非人抗體可變區，同時保持相對於非人抗體的相同結合特徵或提供更好的結合特徵的體內方法。該方法依賴於表位引導的採用完全人抗體替代非人參考抗體的可變區。得到的人抗體通常與參考非人抗體在結構上不相關，但結合與參考抗體的相同抗原上的相同表位。簡而言之，在存在響應測試抗體與抗原的結合的報告系統的情況下，藉由在細胞中「競爭物」和參考抗體(「測試抗體」)的多種雜合體的文庫之間建立針對結合有限量的抗原的競爭來實現連續表位引導的互補替代方法。競爭物可以是參考抗體或其衍生物，如單鏈Fv片段。競爭物也可以是抗原的天然或人工配位基，其結合與參考抗體相同的表位。對競爭物的唯一要求係它結合與參考抗體相同的表位，並且它與參考抗體競爭抗原結合。測試抗體具有來自非人參考抗體的一個共同的抗原結合V區，以及從多種來源(如人抗體的文庫)中隨機選擇的另一個V區。來自參考抗體的共同V區用作指導，從而將測試抗體定位在抗原上的相同表位上並且以相同方向定位，使得選擇偏向於對參考抗體的最高抗原結合保真度。

許多類型的報告系統可用於檢測測試抗體與抗原之間的所需的相互作用。例如，互補報告片段可以分別與抗原和測試抗體連接，使得藉由片段互補的報告基因激活僅在該測試抗體與該抗原結合時發生。當測試抗體和抗原報告片段融合物與競爭物共表現時，報告基因激活變得依賴於測試抗體與競爭物競爭的能力，該能力與測試抗體對抗原的親和力成正比。可以使用的其他報告系統包含如美國專利申請系列號10/208,730(公開號20030198971)中揭露的自身抑制的報告基因再激活系統(RAIR)或美國專利申請系列號10/076,845(公開號20030157579)中揭露的競爭激活系統的再激活物。

利用連續表位引導的互補替代系統，進行選擇以鑒定表現單個測試抗體以及競爭物、抗原和報告組分的細胞。在該等細胞中，每種測試抗體與競爭物一對一競爭結合有限量的抗原。報告基因的活性與結合至測試抗體的抗原的量成正比，而結合至測試抗體的抗原的量與測試抗體對抗原的親和力和測試抗體的穩定性成比例。當表現為測試抗體時，測試抗體最初基於其相對於參考抗體的活性進行選擇。第一輪選擇的結果係一組「雜合」抗體，其中每個抗體由來自參考抗體的相同非人V區和來自文庫的人V區組成，並且每個抗體都結合與參考抗體相同的抗原表位。在第一輪中選擇的一種或多種雜合抗體具有與參考抗體相當或更高的對抗原的親和力。

在第二V區替代步驟中，在第一步中選擇的人V區用作指導，用於選擇其餘非人參考抗體V區進行多樣的同源人V區文庫的人替代。在第一輪中選擇的雜合抗體也可以用作對於第二輪選擇的競爭物。第二輪選擇的結果係一組完全人抗體，其在結構上不同於參考抗體，但其與參考抗體競爭結合相同抗原。一些選擇的人抗體結合與參考抗體的相同抗原上的相同表位。在該等選擇的人抗體中，一種或多種以相當於或比參考抗體的親和力更高的親和力與相同表位結合。

使用小鼠或嵌合ENTPD2抗體，可以產生與人ENTPD2結合的具有相同結合特異性和相同或更好結合親和力的人抗體。另外，這種人ENTPD2抗體也可以從通常生產人抗體的公司例如KaloBios,Inc.(山景城(Mountain View)，加利福尼亞州(Calif.))商業獲得。

在本發明之組合的一些實施方式中，存在結合人ENTPD2蛋白並調節一種或多種ENTPD2活性/功能的抗體或其抗原結合片段，例如抑制例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%的人ENTPD2的酶活性。在一些實施方式中，使用體外FRET測定測量人ENTPD2的酶活性，該體外FRET測定藉由在細胞表面表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP至ADP的水解。

在本發明之組合的一些實施方式中，本文所述之抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段抑制ENTPD2水解三磷酸腺苷(ATP)的能力。在一些實施方式中，使用體外FRET測定測量ENTPD2水解ATP的能力，該體外FRET測定藉由在細胞表面表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP至ADP的水解。

在本發明之組合的一些實施方式中，本文所述之抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段干擾ATP與ENTPD2的結合或在ENTPD2的催化結構域內捕獲ATP。在一些實施方式中，使用體外FRET測定法測量對ATP與ENTPD2結合的干擾或在ENTPD2催化結構域內捕獲ATP，該體外FRET測定法藉由在細胞表面上表現的重組ENTPD2或ENTPD2測量ATP水解成ADP。

與小鼠ENTPD2特異性結合的抗體和抗原結合片段

本發明還提供了特異性結合小鼠ENTPD2蛋白的抗體或其抗原結合片段，例如單株抗體或其抗原結合片段。表23列出了特異性結合小鼠ENTPD2蛋白的ENTPD2抗體或抗原結合片段的示例性序列。

在一些實施方式中，抗小鼠ENTPD2抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表23中所述之任何VH結構域的胺基酸序列的VH結構域。其他合適的抗小鼠ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)可包括如下胺基酸，該胺基酸已經突變但在VH結構域中與表23中描述的序列中描繪的VH區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。在某些實施方式中，本公開還提供了特異性結合小鼠ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，其中該等抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表23中列出的任一VH CDR的胺基酸序列的VH CDR。在具體實施方式中，本發明提供了特異性結合小鼠ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，該抗體或抗體片段包含一個、兩個、三個、四個、五個或更多個具有表23中列出的任一VH CDR的胺基酸序列的VH CDR(或視需要，由其組成)。

在一些實施方式中，抗小鼠ENTPD2抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表23中所述之任何VL結構域的胺基酸序列的VL結構域。其他合適的抗小鼠ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)可包括如下胺基酸，該胺基酸已經突變但在VL結構域中與表23中描述的序列中描繪的VL區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。本公開還提供了特異性結合小鼠ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，該等抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)包含具有表23中列出的任一VL CDR的胺基酸序列的VL CDR。具體地，本發明提供了特異性結合小鼠ENTPD2的抗體或抗體片段(例如，抗原結合片段)，該抗體或抗體片段包含一個、兩個、三個或更多個具有表23中列出的任一VL CDR的胺基酸序列的VL CDR(或視需要，由其組成)。

本文公開的其他抗小鼠ENTPD2抗體或抗體片段(例如抗原結合片段)包括如下胺基酸，該胺基酸已經突變但在CDR區中與表23中描述的序列中描繪的CDR區具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性。在一些實施方式中，其包括突變胺基酸序列，其中當與表23中描述的序列中描繪的CDR區相比時，CDR區中不超過1、2、3、4或5個胺基酸已經突變。

本文還提供了編碼特異性結合小鼠ENTPD2(例如表23中的核酸序列)的抗體及其抗原結合片段的VH、VL、全長重鏈和全長輕鏈的核酸序列。可優化此類核酸序列以在哺乳動物細胞中表現。

本文還提供了特異性結合小鼠ENTPD2中的表位的抗體或其抗原結合片段，其中該表位包含以下殘基中的至少一個(例如，至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個、至少八個、至少九個、至少十個、至少十一個、至少十二個、至少十三個、至少十四個、至少十五個、至少二十個)：Ser74、Cys75、Asp76、Tyr349、Tyr350、Asp353、Phe354、Thr357、Val358、Gly360、Gln385、Ala386、Arg387、Val388、Pro389、Gly390、Gln391、Thr393、Arg394、或Tyr398。

框架和工程化或修飾的抗體

本發明之抗體還可以使用具有一種或多種VH和/或VL序列的抗體作為起始材料來製備，以將修飾的抗體工程化，該修飾的抗體可以具有與起始抗體相比改變的特性。可以藉由修飾一個或兩個可變區(即VH和/或VL)內例如在一個或多個CDR區內和/或在一個或多個框架區內的一個或多個殘基將抗體工程化。另外或可替代地，可以藉由修飾一個或多個恒定區內的殘基將抗體工程化，例如從而改變抗體的一個或多個效應子功能。

可以進行的一種可變區工程化係CDR移植。抗體主要藉由位於六個重鏈和輕鏈互補決定區(CDR)中的胺基酸殘基與靶抗原相互作用。因此，CDR內的胺基酸序列在各個抗體之間比CDR外部的序列更加多樣化。因為CDR序列與大多數抗體-抗原相互作用有關，所以可以藉由構建表現運載體來表現模擬特定天然存在的抗體的特性的重組抗體，該表現運載體包含被移植在來自具有不同特性的不同抗體的框架序列上的來自該特定天然存在的抗體的CDR序列(參見例如，Riechmann,L.等人，1998 Nature[自然]332：323-327；Jones,P.等人，1986 Nature[自然]321：522-525；Queen,C.等人，1989 Proc.Natl.Acad.,U.S.A.[美國國家科學院院刊]86：10029-10033；Winter的美國專利號5,225,539和Queen等人的美國專利號5,530,101、5,585,089、5,693,762和6,180,370)。

此類框架序列可以從包含種系抗體基因序列或重新排列的抗體序列的公共DNA數據庫或公開參考文獻獲得。例如，人重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列可以在「VBase」人種系序列數據庫(可從網際網路www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase獲得)中找到，以及在卡巴特，E.A.，等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學相關蛋白質序列]，第五版，美國衛生與公眾服務部(U.S.Department of Health and Human Services),NIH公開號91-3242；Tomlinson,I.M.，等人，1992 J.fol.Biol.227：776-798；和Cox,J.P.L.等人，1994 Eur.J Immunol.[歐洲免疫學雜誌]24：827-836中找到。；例如，人重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列和重新排列的抗體序列可以在「IMGT」數據庫(可從網際網路www.imgt.org獲得；參見Lefranc,M.P.等人，1999 Nucleic Acids Res.[核酸研究]27：209-212)中找到。

用於本發明之抗體及其抗原結合片段的框架序列的實例係與本發明之選擇的抗體及其抗原結合片段所使用的框架序列在結構上相似的那些序列，例如，共有序列和/或本發明之單株抗體使用的框架序列。可以將VH CDR1、2和3序列以及VL CDR1、2和3序列移植到框架區上，該框架區具有與框架序列所來源的種系免疫球蛋白基因中發現的序列相同的序列，或可以將CDR序列移植到與種系序列相比含有一個或多個突變的框架區上。例如，已經發現在某些情況下使框架區內的殘基突變以維持或增強抗體的抗原結合能力係有益的(參見例如，Queen等人的美國專利號5,530,101、5,585,089、5,693,762和6,180,370)。

另一種類型的可變區修飾係使VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3區內的胺基酸殘基突變，從而改善感興趣的抗體的一種或多種結合特性(例如，親和力)，稱為「親和力成熟」。可以進行定點誘變或PCR介導的誘變以引入一個或多個突變，並且可以在如本文所述且在實例中提供的體外或體內測定中評估對抗體結合或其他感興趣的功能特性的影響。可以引入保守修飾(如上所討論的)。該突變可以是胺基酸取代、添加或缺失。此外，通常CDR區內不超過一個、兩個、三個、四個或五個殘基被改變。

可以使用多種抗體/免疫球蛋白框架或支架，只要所得多肽包含至少一個特異性結合靶標，例如ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白)的結合區即可。這種框架或支架包括5種主要獨特型的人免疫球蛋白、其抗原結合片段，並且包括其他動物物種的免疫球蛋白，較佳的是具有人源化方面。就這點而言，單個重鏈抗體如在駱駝科動物中鑒定的那些抗體係特別令人感興趣的。熟悉該項技術者將繼續發現和開發新的框架、支架和片段。

在一個方面，本文揭露了使用非免疫球蛋白支架生成基於非免疫球蛋白的抗體之方法，在該非免疫球蛋白支架上可以移植本發明之CDR。可以使用已知的或未來的非免疫球蛋白框架和支架，只要它們包含對靶標例如ENTPD2蛋白有特異性的結合區即可。已知的非免疫球蛋白框架或支架包括但不限於纖網蛋白(化合物治療劑公司(Compound Therapeutics,Inc.)，沃爾瑟姆(Waltham)，麻塞諸塞州(Mass.))、錨蛋白(分子配偶體公司(Molecular Partners AG，蘇黎世(Zurich)，瑞士(Switzerland))、結構域抗體(Domantis,Ltd.，坎布裡奇(Cambridge)，麻塞諸塞州(Mass.)，和Ablynx nv,Zwijnaarde，比利時)、脂質運載蛋白(Pieris Proteolab AG，弗賴辛(Freising)，德國)、小型模組化免疫藥物(Trubion Pharmaceuticals Inc.，西雅圖(Seattle)，華盛頓州(Wash.))、maxybody(Avidia,Inc.，山景城(Mountain View)，加利福尼亞州(Calif.))、蛋白質A(親合體公司(Affibody AG)，瑞典)和affilin(γ-晶體蛋白或泛素)(SciI Proteins GmbH，哈雷(Halle)，德國)。

纖網蛋白支架基於纖網蛋白III型結構域(例如，III型纖網蛋白的第十個模組(10 Fn3結構域))。纖網蛋白III型結構域具有分佈在兩個β片層之間的7或8個β股，它們自身彼此包裹以形成蛋白質的核心且還含有將β股彼此連接且暴露於溶劑中的環(類似於CDR)。在β片層夾心的每個邊緣處存在至少三個這樣的環，其中該邊緣係垂直於β股方向的蛋白質的邊界(參見美國專利號6,818,418)。該等基於纖網蛋白的支架不是免疫球蛋白，但整體折疊與最小功能性抗體片段(重鏈可變區)的折疊密切相關，該最小功能性抗體片段包含駱駝和美洲駝IgG中的完整抗原識別單元。由於這種結構，非免疫球蛋白抗體模擬抗原結合特性，其在性質和親和力上與抗體的那些抗原結合特性相似。該等支架可用於體外環隨機化和改群組原則，其類似於體內抗體親和力成熟的過程。該等基於纖網蛋白的分子可以用作支架，其中可以使用標準選殖技術用本發明之CDR替代分子的環區。

錨蛋白技術基於使用具有錨蛋白衍生的重複模組的蛋白質作為支架，該支架用於承載可用於結合不同的靶標的可變區。錨蛋白重複模組係33個胺基酸多肽，其由兩個反平行的α-螺旋和β-轉角組成。可變區的結合主要藉由使用核糖體展示來優化。

Avimer源自含有天然A結構域的蛋白質，如LRP-1。該等結構域天然地用於蛋白質間相互作用，並且在人類中超過250種蛋白質在結構上基於A結構域。Avimer由經由胺基酸連接子連接的許多不同的「A結構域」單體(2-10)組成。可以使用例如美國專利申請公開號20040175756、20050053973、20050048512、和20060008844中描述之方法產生可與靶抗原結合的Avimer。

親合體(affibody)親和配位基係由基於蛋白質A的IgG結合結構域之一的支架的三螺旋束組成的小而簡單的蛋白質。蛋白質A係來自細菌金黃色葡萄球菌的表面蛋白。該支架結構域由58個胺基酸組成，其中13個隨機化以生成具有大量配位基變體的親合體文庫(參見例如，美國專利號5,831,012)。親合體分子類似抗體，其分子量為6kDa，而抗體的分子量為150kDa。儘管其尺寸小，但是親合體分子的結合位點與抗體的結合位點相似。

Anticalin係由Pieris ProteoLab AG公司開發的產品。它們源自脂質運載蛋白，脂質運載蛋白係一種廣泛分佈的小而健壯的蛋白質，其通常參與化學敏感或不溶性化合物的生理運輸或儲存。幾種天然脂質運載蛋白存在於人體組織或體液中。蛋白質結構讓人聯想到免疫球蛋白，其中高變環在剛性框架的頂部。然而，與抗體或其重組片段相反，脂質運載蛋白由僅略微大於單個免疫球蛋白結構域的具有160至180個胺基酸殘基的單個多肽鏈組成。構成結合口袋的四個環的組顯示出明顯的結構可塑性並且容許各種側鏈。因此，結合位點可以在專有過程中重新成形，以便以高親和力和特異性識別不同形狀的規定靶分子。脂質運載蛋白家族的一種蛋白質，歐洲粉蝶的後膽色素結合蛋白(BBP)已被用於藉由誘變四個環的組來產生anticalin。描述anticalin的專利申請的一個實例係PCT公開號WO 199916873。

Affilin分子係小的非免疫球蛋白蛋白質，其針對對於蛋白質和小分子的特定親和力而設計。可以從兩個文庫中非常快速地選擇新的affilin分子，每個文庫基於不同的人源支架蛋白。Affilin分子不顯示與免疫球蛋白蛋白質的任何結構同源性。目前，使用兩種affilin支架，其中一種係γ晶體，即人結構性眼晶狀體蛋白質，而另一種係「泛素」超家族蛋白質。兩種人支架都非常小，顯示出高溫穩定性並且幾乎耐受pH變化和變性劑。這種高穩定性主要是由於蛋白質的擴大的β片層結構。WO 200104144中描述了γ晶體衍生蛋白的實例，並且WO 2004106368中描述了「泛素類」蛋白質的實例。

蛋白質表位模擬物(PEM)係中等大小的環狀肽類分子(MW 1-2kDa)，其模擬蛋白質的β-髮夾二級結構，它係參與蛋白質間相互作用的主要二級結構。

本發明之工程化抗體及其抗原結合片段包括如下該等：其中已對VH和/或VL內的框架殘基進行了修飾，例如以改善抗體的特性。典型地，進行此類框架修飾以降低抗體的免疫原性。例如，一種方法係將一個或多個框架殘基「回復突變」為對應的種系序列。更具體地，已經歷體細胞突變的抗體可以含有與衍生出抗體的種系序列不同的框架殘基。可以藉由將抗體框架序列與衍生抗體的種系序列進行比較來鑒定這種殘基。為了使框架區序列恢復為其種系構型，可以藉由例如定點誘變將體細胞突變「回復突變」為種系序列。此類「回復突變的」抗體也旨在為本發明所涵蓋。

另一種類型的框架修飾包括使框架區內或甚至一個或多個CDR區內的一個或多個殘基突變以去除T細胞表位，從而降低抗體的潛在免疫原性。此方法也稱為「去免疫化」，並且在Carr等人的美國專利公開號20030153043中有進一步詳細描述。

除了在框架或CDR區內進行的修飾之外或作為在框架或CDR區內進行的修飾的替代方案，可以將本發明之抗體工程化以包含Fc區內的修飾，通常是為了改變抗體的一種或多種功能特性，如血清半衰期、補體結合、Fc受體結合和/或抗原依賴性細胞毒性。此外，本發明之抗體可以被化學修飾的(例如，一個或多個化學部分可以附接至抗體)或被修飾以改變其糖基化，從而再次改變抗體的一種或多種功能特性。以下更詳細地描述了該等實施方式中的每一個。Fc區中殘基的編號係卡巴特的EU索引的編號。

在一個實施方式中，修飾CH1的鉸鏈區，使得鉸鏈區中半胱胺酸殘基的數目改變，例如增加或減少。該方法在Bodmer等人的美國專利號5,677,425中進一步描述。改變CH1鉸鏈區中半胱胺酸殘基的數目，以便例如促進輕鏈和重鏈的組裝或增加或降低抗體的穩定性。

在另一個實施方式中，使抗體的Fc鉸鏈區突變以降低抗體的生物半衰期。更具體地，將一個或多個胺基酸突變引入Fc鉸鏈片段的CH2-CH3結構域介面區域中，使得抗體具有相對於天然Fc鉸鏈結構域SpA結合而言受損的葡萄球菌蛋白質A(SpA)結合。該方法在Ward等人的美國專利號6,165,745中進一步詳細描述。

在另一個實施方式中，修飾抗體以增加其生物半衰期。可以採用各種方法。例如，可以引入以下突變中的一種或多種：T252L、T254S、T256F，如Ward的美國專利號6,277,375中所述。可替代地，為了增加生物半衰期，可以在CH1或CL區內改變抗體，以含有從IgG的Fc區的CH2結構域的兩個環採集的補救受體結合表位，如Presta等人的美國專利號5,869,046和6,121,022中所述。

在一個實施方式中，藉由用不同的胺基酸殘基替代至少一個胺基酸殘基來改變Fc區，以改變抗體的效應子功能。例如，可以用不同的胺基酸殘基替代一個或多個胺基酸，使得抗體對效應配位基具有改變的親和力，但保留親本抗體的抗原結合能力。改變親和力的效應配位基可以是例如Fc受體或補體的C1組分。該方法在Winter等人的美國專利號5,624,821和5,648,260中進一步詳細描述。

在另一個實施方式中，選自胺基酸殘基的一個或多個胺基酸可以用不同的胺基酸殘基替代，使得抗體具有改變的C1q結合和/或降低或消除的補體依賴性細胞毒性(CDC)。該方法在Idusogie等人的美國專利號6,194,551中進一步詳細描述。

在另一個實施方式中，改變一個或多個胺基酸殘基，從而改變抗體固定補體的能力。該方法在Bodmer等人的PCT公開WO 94/29351中進一步描述。

在一些實施方式中，ENTPD2結合抗體或其抗原結合片段含有人IgG1恒定區。在一些實施方式中，人IgG1恒定區包括Fc區。

在一些實施方式中，ENTPD2結合抗體或其抗原結合片段的Fc區包括一個或多個突變，該突變介導減少的或不介導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)。在一些實施方式中，IgG1恒定區的胺基酸殘基L234和L235被取代為A234和A235。在一些實施方式中，IgG1恒定區的胺基酸殘基N267被取代為A267。在一些實施方式中，IgG1恒定區的胺基酸殘基D265和P329被取代為A265和A329。在某些實施方式中，Fc區視需要包含選自以下中任何一種的賦予降低的效應子功能的突變或突變組合：D265A、P329A、P329G、N297A、D265A/P329A、D265A/N297A、L234/L235A、P329A/L234A/L235A、和P329G/L234A/L235A。在一些實施方式中，Fc區包含選自以下中任何一種的賦予降低的效應子功能的突變或突變組合：D265A、P329A、P329G、N297A、D265A/P329A、D265A/N297A、L234/L235A、P329A/L234A/L235A、和P329G/L234A/L235A(所有位置藉由EU編號)。

在另一個實施方式中，修飾Fc區以增加抗體介導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)的能力和/或藉由修飾一個或多個胺基酸來增加抗體對Fc-γ受體的親和力。該方法由Presta在PCT公開WO 00/42072中進一步描述。此外，已經繪製了人IgG1上針對Fc-γ RI、Fc-γ RII、Fc-γ RIII和FcRn的結合位點，並且已經描述了具有改善的結合的變體(參見Shields,R.L.等人，2001 J.Biol.Chen.[生物化學雜誌]276：6591-6604)。例如，Fc區包含選自以下中任何一種的賦予增加的效應子功能的突變或突變組合：S239D、I332E、A330L、S298A、E333A、E333S、K334A、K236A、K236W、F243L、P247I、D280H、K290S、R292P、S298D、S298V、Y300L、V305I、A339D、A339Q、A339T、P396L(所有位置藉由EU編號)。

在又另一個實施方式中，修飾抗體的糖基化。例如，可以製備非糖基化的抗體(即，抗體缺乏糖基化)。可以改變糖基化以例如增加抗體對抗原的親和力。此類碳水化合物修飾可以藉由例如改變抗體序列內的一個或多個糖基化位點來實現。例如，可以進行一個或多個胺基酸取代，其導致消除一個或多個可變區框架糖基化位點，從而消除該位點的糖基化。這種無糖基化可以增加抗體對於抗原的親和力。這樣之方法在Co等人的美國專利號5,714,350和6,350,861中進一步詳細描述。

另外或可替代地，可以製備具有改變的糖基化類型的抗體，如具有減少量的岩藻糖基殘基的低岩藻糖基化抗體或具有增加的二等分GlcNac結構的抗體。已經證明這類改變的糖基化模式增加了抗體的ADCC能力。此類碳水化合物修飾可以藉由例如在具有改變的糖基化機制的宿主細胞中表現抗體來完成。具有改變的糖基化機制的細胞已在本領域中描述，並且可用作宿主細胞，在該宿主細胞中表現本發明之重組抗體，從而產生具有改變的糖基化的抗體。例如，Hang等人的EP 1,176,195描述了具有功能破壞的FUT8基因的細胞系，其編碼岩藻糖基轉移酶，使得在這種細胞系中表現的抗體顯示出低岩藻糖基化。Presta的PCT公開WO 03/035835描述了變體CHO細胞系LecI3細胞，其將岩藻糖附接至Asn(297)連接的碳水化合物的能力降低，還導致在該宿主細胞中表現的抗體的低岩藻糖基化(還參見Shields,R.L.等人，2002 J.Biol.Chem.[生物化學雜誌]277：26733-26740)。Umana等人的PCT公開WO 99/54342描述了如下細胞系，該細胞系被工程化以表現糖蛋白修飾糖基轉移酶(例如，β(1,4)-N乙醯基葡糖胺基轉移酶III(GnTIII))，使得在工程化細胞系中表現的抗體顯示出增加的二等分GlcNac結構，該二等分GlcNac結構導致抗體的ADCC活性增加(還參見Umana等人，1999 Nat.Biotech.[自然生物技術]17：176-180)。

在一些實施方式中，ENTPD2抗體具有IgG1同種型，其具有一個或多個突變(例如，相對於相同同種型的野生型Fc區)。在一些實施方式中，該一個或多個突變選自N297A、N297Q(BoltS等人(1993)Eur J Immunol[歐洲免疫學雜誌]23：403-411)、D265A、L234A、L235A(McEarchern等人，(2007)Blood[血液]，109：1185-1192)、C226S、C229S(McEarchern等人，(2007)Blood[血液]，109：1185-1192)、P238S(Davis等人，(2007)J Rheumatol[風濕病學雜誌]，34：2204-2210)、E233P、L234V(McEarchern等人，(2007)Blood[血液]，109：1185-1192)、P238A、A327Q、A327G、P329A(Shields RL.等人，(2001)J Bioi Chern.[生物化學雜誌]276(9)：6591-604)、K322A、L234F、L235E(Hezareh等人，(2001)J Viral[病毒學雜誌]75,12161-12168；Oganesyan等人，(2008).Acta Crystallographica[晶體學報]64,700-704)、P331S(Oganesyan等人，(2008)Acta Crystallographica[晶體學報]64,700-704)、T394D(Wilkinson等人(2013)MAbs 5(3)：406-417)、A330L、M252Y、S254T、和/或T256E，其中胺基酸位置係根據EU或Kabat編號慣例進行的。在某些實施方式中，Fc區在對應於甘胺酸236的位置(根據EU或Kabat編號慣例)處進一步包含胺基酸缺失。

在一些實施方式中，根據EU或卡巴特編號慣例，抗體具有IgG1同種型，該IgG1同種型具有重鏈恒定區，該重鏈恒定區含有C220S突變。

在一些實施方式中，根據EU或卡巴特編號慣例，Fc區含有選自L234F、L235E、P331S、D265A和/或N297Q的一個或多個突變。在一些實施方式中，根據EU或卡巴特編號慣例，Fc區含有選自L234A、L235A、D265A、P329A、N297A、N297Q的一個或多個突變。

在某些實施方式中，抗體具有IgG2同種型。在一些實施方式中，抗體含有人IgG2恒定區。在一些實施方式中，人IgG2恒定區包括Fc區。在一些實施方式中，Fc區包含一個或多個修飾。例如，在一些實施方式中，Fc區含有一個或多個突變(例如，相對於相同同種型的野生型Fc區)。在一些實施方式中，該一個或多個突變選自V234A、G237A、P238S、H268A、H268E、H268Q、V309L、N297A、N297Q、V309L、A330S、P331S、C232S、C233S、M252Y、S254T、和/或T256E，其中胺基酸位置根據EU或卡巴特編號慣例。

在某些實施方式中，抗體具有IgG4同種型。在一些實施方式中，抗體含有人IgG4恒定區。在一些實施方式中，人IgG4恒定區包括Fc區。在一些實施方式中，Fc區包含一個或多個修飾。例如，在一些實施方式中，Fc區含有一個或多個突變(例如，相對於相同同種型的野生型Fc區)。在一些實施方式中，該一個或多個突變選自E233P、F234V、L234A、L235A、G237A、E318A(Hutchins等人(1995)Proc Natl A cad Sci USA[美國國家科學院院刊]，92：11980-11984)、S228P、L236E、S241P、L248E(Reddy等人，(2000)J Immunol[免疫學雜誌]，164：1925-1933；Angal等人，(1993)Mol Immunol.[分子免疫學]30(1)：105-8；US 8614299 B2)、T394D、M252Y、S254T、T256E、N297A、和/或N297Q，其中胺基酸位置係根據EU或卡巴特編號慣例進行的。

在一些實施方式中，Fc區還含有一個或多個選自M252Y、S254T和/或T256E的其他突變，其中胺基酸位置根據EU或卡巴特編號慣例。

在一些實施方式中，本文所述之一種或多種IgG1變體可與A330L突變組合(Lazar等人，(2006)Proc Natl Acad Sci USA[美國國家科學院院刊]，103：4005-4010)，或與L234F、L235E、和/或P331S突變中的一種或多種組合(Sazinsky等人，(2008)Proc Natl Acad Sci USA[美國國家科學院院刊]，105：20167-20172)以消除補體活化，其中胺基酸位置根據EU或卡巴特編號慣例。在一些實施方式中，本文所述之IgG變體可與一種或多種突變(例如根據EU或卡巴特編號慣例，M252Y、S254T、T256E突變)組合以增強人血清中的抗體半衰期(Dall’Acqua等人，(2006)J Biol Chern,281：23514-23524；和Strohl等人，(2009)Current Opinion in Biotechnology[生物技術當前觀點]，20：685-691)。

在一些實施方式中，根據EU或卡巴特編號慣例，本公開的IgG4變體可以與S228P突變組合(Angal等人，(1993)Mol Immunol[分子免疫學]，30：105-108)和/或與Peters等人，(2012)J Biol Chern.13；287(29)：24525-33中描述的一種或多種突變組合以增強抗體穩定性。

在一些實施方式中，抗體具有如下Fc區，該Fc區選自IgG2 Fc區、IgG4 Fc區、或IgG2/IgG4雜合Fc區。

駱駝科動物抗體

從包括新的世界成員如美洲駝物種(Lama paccos、大羊駝和瘦駝)在內的駱駝和單峰駱駝(雙峰駱駝和Calelus dromaderius)家族成員獲得的抗體蛋白質已經關於大小、結構複雜性和對於人類受試者的抗原性進行了表徵。來自自然界中發現的該哺乳動物家族的某些IgG抗體缺乏輕鏈，因此在結構上不同於來自其他動物的抗體的具有兩條重鏈和兩條輕鏈的典型四鏈四級結構。參見PCT/EP93/02214(1994年3月3日公開的WO 94/04678)。

藉由基因工程化獲得駱駝科動物抗體的區域(它係被鑒定為VHH的小的單個可變結構域)以產生對靶標具有高親和力的小蛋白質，從而產生稱為「駱駝科動物奈米抗體」的低分子量抗體衍生蛋白。參見提交於1998年6月2日的美國專利號5,759,808；還參見Stijlemans,B.等人，2004 J Biol Chem[生物化學雜誌]279：1256-1261；Dumoulin,M.等人，2003 Nature[自然]424：783-788；Pleschberger,M.等人，2003 Bioconjugate Chem[生物軛合化學]14：440-448；Cortez-Retamozo,V.等人，2002 Int J Cancer[國際癌症雜誌189：456-62；和Lauwereys,M.等人，1998 EMBO J[歐洲分子生物學組織雜誌]17：3512-3520。駱駝科動物抗體和抗體片段的工程化文庫可例如從比利時根特(Ghent)的Ablynx公司商購獲得。與非人來源的其他抗體及其抗原結合片段一樣，可以重組改變駱駝科動物抗體的胺基酸序列以獲得更接近地類似於人序列的序列，即奈米抗體可以是「人源化的」。因此，可以進一步降低駱駝科動物抗體對人的天然低抗原性。

駱駝科動物奈米抗體的分子量為人IgG分子的約十分之一，並且該蛋白質的物理直徑僅為幾奈米。小尺寸的一個結果係駱駝科動物奈米抗體結合抗原位點的能力，該抗原位點對於較大的抗體蛋白質係功能上不可見的，即，駱駝科動物奈米抗體可用作檢測對於使用經典免疫學技術而言隱蔽的抗原的試劑，以及可用作可能的治療劑。因此，小尺寸的又另一個結果係駱駝科動物奈米抗體可以由於結合靶蛋白的溝槽或狹窄裂縫中的特異性位點而抑制，因此可以具有與經典抗體相比更接近地類似於經典低分子量藥物的功能的能力。

低分子量和緊湊的尺寸還導致駱駝科動物奈米抗體極其熱穩定、對極端pH和蛋白水解消化穩定，並且抗原性差。另一個結果係駱駝科動物奈米抗體容易從循環系統移動到組織中，甚至穿過血腦屏障並且可以治療影響神經組織的障礙。奈米抗體還可以促進跨越血腦屏障的藥物轉運。參見2004年8月19日公開的美國專利申請20040161738。該等特徵與對人的低抗原性相結合顯示了巨大的治療潛力。此外，該等分子可以在原核細胞如大腸桿菌中完全表現，並且表現為具有噬菌體的融合蛋白並且是功能性的。

因此，本發明之特徵係對ENTPD2具有高親和力的駱駝科動物抗體或奈米抗體。在本文的一個實施方式中，駱駝科動物抗體或奈米抗體在駱駝科動物中天然產生，即，在使用對於其他抗體的本文所述之技術用ENTPD2或其肽片段免疫後，由駱駝科動物產生。可替代地，ENTPD2結合駱駝科動物奈米抗體被工程化，即如本文實例中所述藉由以ENTPD2為靶標使用淘選程序，例如從展現出適當誘變的駱駝科動物奈米抗體蛋白質的噬菌體文庫中選擇產生。藉由基因工程可以進一步定製工程化奈米抗體，以在受體受試者中具有45分鐘至兩週的半衰期。在一個具體實施方式中，駱駝抗體或奈米抗體藉由將本發明之人抗體的重鏈或輕鏈的CDR序列移植到奈米抗體或單結構域抗體框架序列中而獲得，如例如PCT/EP 93/02214中所述。

雙特異性分子和多價抗體

本文揭露了包含本發明之ENTPD2結合抗體或其片段的雙特異性或多特異性分子。本發明之抗體或其抗原結合區可以衍生化或連接至另一種功能分子，例如另一種肽或蛋白質(例如，另一種抗體或受體的配位基)，以生成結合至少兩個不同的結合位點或靶分子的雙特異性分子。事實上，本發明之抗體可以衍生化或連接至多於一種的其他功能分子，以生成結合多於兩個不同結合位點和/或靶分子的多特異性分子；這種多特異性分子也旨在由本文所用的術語「雙特異性分子」涵蓋。為了產生本發明之雙特異性分子，本發明之抗體可以功能性地連接(例如，藉由化學偶聯、基因融合、非共價締合或其他方式)至一種或多種其他結合分子，如另一種抗體、抗體片段、肽或結合模擬物，從而產生雙特異性分子。

因此，本文揭露了雙特異性分子，其包含對ENTPD2的至少一種第一結合特異性和對第二靶表位的第二結合特異性。例如，第二靶表位係不同於第一靶表位的ENTPD2的另一表位。

另外，在雙特異性分子係多特異性的情況下，除了第一和第二靶表位之外，該分子還可以包含第三結合特異性。

本文揭露的雙特異性分子包含至少一種抗體或其抗體片段作為結合特異性，包括例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv或單鏈Fv。抗體也可以是輕鏈或重鏈二聚體或其任何最小片段，如Ladner等人的美國專利號4,946,778中所述之Fv或單鏈構建體。

雙抗體係二價雙特異性分子，其中VH和VL結構域在單個多肽鏈上表現，藉由連接子連接，該連接子太短而不允許在同一鏈上的兩個結構域之間配對。VH和VL結構域與另一條鏈的互補結構域配對，從而產生兩個抗原結合位點(參見例如，Holliger等人，1993 Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]90：6444-6448；Poijak等人，1994 Structure[結構]2：1121-1123)。可以藉由在相同細胞內表現具有結構VHA-VLB和VHB-VLA(VH-VL構型)或VLA-VHB和VLB-VHA(VL-VH構型)的兩條多肽鏈來產生雙抗體。它們中的大多數可以在細菌中以可溶性形式表現。單鏈雙抗體(scDb)藉由將兩個形成雙抗體的多肽鏈與約15個胺基酸殘基的連接子連接而產生(參見Holliger和Winter,1997 Cancer Immunol.Immunother.[癌症免疫學，免疫療法]，45(3-4)：128-30；Wu等人，1996 Immunotechnology[免疫技術]，2(1)：21-36)。scDb可以在細菌中以可溶的活性單體形式表現(參見Holliger和Winter,1997 Cancer Immunol.Immunother.[癌症免疫學，免疫療法]，45(34)：128-30；Wu等人，1996 Immunotechnology[免疫技術]，2(1)：21-36；Pluckthun和Pack,1997 Immunotechnology[免疫技術]，3(2)：83-105；Ridgway等人，1996 Protein Eng.[蛋白質工程]，9(7)：617-21)。雙抗體可以與Fc融合以生成「二-雙抗體」(參見Lu等人，2004 J.Biol.Chem.[生物化學雜誌]，279(4)：2856-65)。

可用於本發明雙特異性分子的其他抗體係鼠嵌合和人源化單株抗體。

本發明之雙特異性分子可以藉由使用本領域已知之方法軛合組分結合特異性來製備。例如，雙特異性分子的每種結合特異性可以單獨生成，然後彼此軛合。當結合特異性係蛋白質或肽時，可以使用多種偶聯劑或交聯劑進行共價軛合。交聯劑的實例包括蛋白質A、碳二亞胺、N-琥珀醯亞胺基-5-乙醯基-硫代乙酸酯(SATA)、5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、鄰亞苯基二馬來醯亞胺(oPDM)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)和4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧酸磺基琥珀醯亞胺酯(磺基-SMCC)(參見例如Karpovsky等人，1984 J.Exp.Med.[實驗醫學雜誌]160：1686；Liu,M A等人，1985 Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]82：8648)。其他方法包括Paulus,1985 Behring Ins.Mitt.第78期，118-132；Brennan等人，1985 Science[科學]229：81-83)和Glennie等人，1987 J.Immunol.[免疫學雜誌]139：2367-2375)中描述的那些方法。軛合劑係SATA和磺基-SMCC，兩者均可從Pierce Chemical Co.(羅克福德(Rockford)，伊利諾州)獲得。

當結合特異性係抗體時，它們可以藉由兩條重鏈的C-末端鉸鏈區的巰基鍵合而軛合。在具體實施方式中，鉸鏈區被修飾為例如在軛合之前含有奇數個巰基殘基。

可替代地，兩種結合特異性可以在相同運載體中編碼，並在相同宿主細胞中表現和組裝。當雙特異性分子係mAb×mAb、mAb×Fab、Fab×F(ab')2或配位基×Fab融合蛋白時，該方法特別有用。本發明之雙特異性分子可以是包含一個單鏈抗體和一個結合決定簇的單鏈分子，或包含兩個結合決定簇的單鏈雙特異性分子。雙特異性分子可包含至少兩個單鏈分子。用於製備雙特異性分子之方法描述於例如在美國專利號5,260,203；美國專利號5,455,030；美國專利號4,881,175；美國專利號5,132,405；美國專利號5,091,513；美國專利號5,476,786；美國專利號5,013,653；美國專利號5,258,498；和美國專利號5,482,858中。

雙特異性分子與其特異性靶標的結合可以藉由例如酶聯免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定(REA)、FACS分析、生物測定(例如生長抑制)或蛋白質印跡測定來證實。該等測定中的每一種通常藉由使用對感興趣的複合物有特異性的標記試劑(例如，抗體)來檢測特別感興趣的蛋白質-抗體複合物的存在。

在另一方面，本發明提供了多價化合物，其包含與ENTPD2結合的本發明抗體及其抗原結合片段的至少兩個相同或不同的抗原結合部分。抗原結合部分可以經由蛋白質融合或共價或非共價連接而連接在一起。可替代地，已經描述了雙特異性分子的連接方法。四價化合物可以例如藉由將本發明之抗體及其抗原結合片段與結合本發明之抗體及其抗原結合片段的恒定區(例如Fc或鉸鏈區)的抗體或抗原結合片段交聯而獲得。

三聚結構域描述於例如歐洲專利EP 1 012 280 B1中。五聚模組描述於例如PCT/EP 97/05897中。

在一些實施方式中，ENTPD2-結合抗體或其抗原結合片段係識別第一抗原和第二抗原的雙特異性抗體。在一些實施方式中，該第一抗原係人ENTPD2或其天然存在的變體。在一些實施方式中，第二抗原可以是在一種或多種腫瘤細胞上表現的蛋白質、脂質、多糖或糖脂。

具有延長半衰期的抗體

在一些實施方式中，本發明之組合關於特異性結合ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白)的抗體並在體內具有延長的半衰期。

許多因素可以影響蛋白質在體內的半衰期。例如，腎過濾、肝代謝、蛋白水解酶(蛋白酶)降解和免疫原性應答(例如藉由抗體中和蛋白質和藉由巨噬細胞和樹突細胞攝取)。可以使用多種策略來延長本發明之抗體及其抗原結合片段的半衰期。例如，藉由與聚乙二醇(PEG)、reCODE PEG、抗體支架、聚唾液酸(PSA)、羥乙基澱粉(HES)、白蛋白結合配位基和碳水化合物遮罩的化學連接；藉由與結合血清蛋白(如白蛋白、IgG、FcRn)的蛋白質的基因融合和轉移；藉由與結合血清蛋白的其他結合部分(如奈米抗體、Fab、DARPin、avimer、親合體和anticalin)偶聯(遺傳地或化學地)；藉由與rPEG、白蛋白、白蛋白的結構域、白蛋白結合蛋白和Fc的基因融合；或藉由摻入奈米載體、緩釋配製物或醫療裝置中。

為了延長體內抗體的血清循環，可以藉由PEG與抗體的N-末端或C-末端的位點特異性軛合或經由離胺酸殘基上存在的ε-胺基，將惰性聚合物分子(如高分子量PEG)附接至具有或不具有多功能連接子的抗體或其片段。為了使抗體聚乙二醇化，通常在一個或多個PEG基團附接至該抗體或抗體片段的條件下使該抗體、其抗原結合片段與聚乙二醇(PEG)(如PEG的反應性酯或醛衍生物)反應。聚乙二醇化可以藉由醯化反應或烷基化反應採用反應性PEG分子(或類似的反應性水溶性聚合物)來進行。如本文所用，術語「聚乙二醇」旨在涵蓋已用於衍生化其他蛋白質的任何形式的PEG，如單(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-馬來醯亞胺。在一個實施方式中，待聚乙二醇化的抗體係非糖基化抗體。將使用導致最小生物活性損失的直鏈或支鏈聚合物衍生化。可以藉由SDS-PAGE和質譜法密切監測軛合程度，以確保PEG分子與抗體的適當軛合。未反應的PEG可以藉由尺寸排阻層析法或藉由離子交換層析法與抗體-PEG軛合物分離。可以使用熟悉該項技術者熟知之方法，例如藉由本文所述之免疫測定，測試PEG衍生化抗體的結合活性以及體內功效。聚乙二醇化蛋白質之方法係本領域已知的，並且可以應用於本發明之抗體及其抗原結合片段。參見，例如，Nishimura等人的EP 0154316和Ishikawa等人的EP 0401384。

其他改良的聚乙二醇化技術包括重構化學正交定向工程技術(ReCODE PEG)，其經由包含tRNA合成酶和tRNA的重構系統將化學上指定的側鏈摻入生物合成蛋白中。該技術能夠將超過30個新胺基酸摻入大腸桿菌、酵母和哺乳動物細胞中的生物合成蛋白中。tRNA在琥珀密碼子所定位的任何位置摻入規範性胺基酸，從而將琥珀從終止密碼子轉換成發出摻入化學上指定的胺基酸的訊號的密碼子。

重組聚乙二醇化技術(rPEG)也可用於血清半衰期延長。該技術一般包括將300-600個胺基酸非結構化蛋白質尾部與現有的藥物蛋白質基因融合。由於這種非結構化蛋白質鏈的表觀分子量約為其實際分子量的15倍，因此該蛋白質的血清半衰期大大增加。與需要化學軛合和再純化的傳統PEG化相反，該製備過程大大簡化並且產物係均勻的。

聚唾液酸化係另一種技術，它利用天然聚合物聚唾液酸(PSA)來延長活性壽命和提高治療性肽和蛋白質的穩定性。PSA係唾液酸的聚合物(一種糖)。當用於蛋白質和治療肽藥物遞送時，聚唾液酸對軛合提供保護性微環境。這增加治療性蛋白在循環中的有效壽命並防止它被免疫系統識別。PSA聚合物天然存在於人體中。它被某些細菌採用，該等細菌已經進化了數百萬年以用它來包被其細胞壁。該等天然聚唾液酸化的細菌則能夠藉由分子擬態挫敗身體的防禦系統。PSA可以容易地大量產自這種細菌並具有預定的物理特徵。即使與蛋白質偶聯，細菌PSA也是完全非免疫原性的，因為它在化學上與人體中的PSA相同。

另一種技術包括使用與抗體連接的羥乙基澱粉(「HES」)衍生物。HES係一種源自蠟質玉米澱粉的改性天然聚合物，並可以藉由人體的酶代謝。通常投與HES溶液以替代缺乏的血液體積並改善血液的流變學特性。抗體的Hes化能夠藉由增加分子的穩定性以及藉由降低腎清除率來延長循環半衰期，從而導致生物活性增加。藉由改變不同的參數如HES的分子量，可以定製多種HES抗體軛合物。

還可以生成具有增加的體內半衰期的抗體，其將一個或多個胺基酸修飾(即，取代、插入或缺失)引入IgG恒定結構域或其FcRn結合片段(較佳的是Fc或鉸鏈Fc結構域片段)。參見，例如，國際公開號WO 98/23289；國際公佈號WO 97/34631；和美國專利號6,277,375。

此外，抗體可以與白蛋白軛合，以使抗體或抗體片段在體內更穩定或在體內具有更長的半衰期。該等技術係本領域中公知的，參見例如，國際公開號WO 93/15199、WO 93/15200和WO 01/77137；和歐洲專利號EP 413,622。

增加半衰期的策略尤其可用於奈米抗體、基於纖網蛋白的結合劑以及需要增加體內半衰期的其他抗體或蛋白質。

抗體軛合物

本文揭露了抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性地結合與異源蛋白質或多肽(或其抗原結合片段，較佳的是與至少10、至少20、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90、或至少100個胺基酸的多肽)重組融合或化學軛合(包括共價和非共價軛合)的ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白質)的細胞外結構域以生成融合蛋白。特別地，本發明提供了融合蛋白，其包含本文所述抗體的抗原結合片段(例如，Fab片段、Fd片段、Fv片段、F(ab)2片段、VH結構域、VH CDR、VL結構域或VL CDR)和異源蛋白質、多肽或肽。將蛋白質、多肽或肽與抗體或抗體片段融合或軛合之方法係本領域已知的。參見，例如，美國專利號5,336,603、5,622,929、5,359,046、5,349,053、5,447,851、和5,112,946；歐洲專利號EP 307,434和EP 367,166；國際公開號WO 96/04388和WO 91/06570；Ashkenazi等人，1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]88：10535-10539；Zheng等人，1995,J. Immunol.[免疫學雜誌]154：5590-5600；和Vil等人，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]89：11337-11341。

可以藉由基因改組、模體改組、外顯子改組和/或密碼子改組(統稱為「DNA改組」)的技術生成另外的融合蛋白。DNA改組可用於改變本發明之抗體及其抗原結合片段的活性(例如，具有更高親和力和更低解離速率的抗體及其抗原結合片段)。通常參見，美國專利號5,605,793、5,811,238、5,830,721、5,834,252、和5,837,458；Patten等人，1997,Curr.Opinion Biotechnol.[當前生物技術觀點]8：724-33；Harayama,1998,Trends Biotechnol.[生物技術趨勢]16(2)：76-82；Hansson，等人，1999,J.Mol.Biol.[分子生物學雜誌]287：265-76；以及Lorenzo和Blasco,1998,Biotechniques[生物技術]24(2)：308-313)。抗體及其抗原結合片段或編碼的抗體及其抗原結合片段可以藉由在重組之前藉由易錯PCR、隨機核苷酸插入或其他方法進行隨機誘變來改變。編碼特異性地結合ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白質)的抗體或其抗原結合片段的多核苷酸可以與一種或多種異源分子的一個或多個組分、模體、區域(section)、部分、結構域、片段等重組。

此外，抗體及其抗原結合片段可以與標記序列如肽融合以促進純化。在一個實施方式中，標記胺基酸序列係六組胺酸肽(SEQ ID NO：639)，如pQE運載體中提供的標籤(凱傑公司(QIAGEN,Inc.)，伊頓大街(Eton Avenue)9259號，查茨沃思(Chatsworth)，加利福尼亞州，91311)等，其中許多係商購可得的。如Gentz等人，1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]86：821-824中所述，例如六組胺酸(SEQ ID NO：639)提供了融合蛋白的方便純化。用於純化的其他肽標籤包括但不限於對應於源自流感血凝素蛋白的表位(Wilson等人，1984,Cell 37：767)的血凝素(「HA」)標記以及「旗幟(FLAG)」標籤。

在一個實施方式中，本發明之抗體及其抗原結合片段與診斷劑或可檢測劑軛合。這種抗體可用於監測或預後疾病或病症的發作、發展、進展和/或嚴重程度，其作為臨床試驗程序(如確定特定療法的效果)的一部分。這種診斷和檢測可以藉由將抗體與可檢測物質偶聯來實現，該可檢測物質包括但不限於各種酶，例如但不限於辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；輔基，例如但不限於鏈黴親和素/生物素和親和素/生物素；螢光材料，例如但不限於傘形酮、螢光素、異硫氰酸螢光素、羅丹明、二氯三

基胺螢光素、丹磺醯氯或藻紅蛋白；發光材料，例如但不限於魯米諾；生物發光材料，例如但不限於螢光素酶、螢光素和水母素；放射性物質，例如但不限於碘(131I、125I、123I和121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(115In、113In、112In和111In)、鍀(99Tc)、鉈(201Ti)、鎵(68Ga、67Ga)、鈀(103Pd)、鉬(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn和117Tin；以及使用各種正電子發射斷層掃描的正電子發射金屬和非放射性順磁金屬離子。

此外，抗體及其抗原結合片段可以與治療部分或藥物部分軛合。治療部分或藥物部分不應解釋為限於經典的化學治療劑。例如，藥物部分可以是具有所需生物活性的蛋白質、肽或多肽。這種蛋白質可包括例如毒素，如相思豆毒素、蓖麻毒素A、假單胞菌外毒素、霍亂毒素或白喉毒素；蛋白質，如腫瘤壞死因子、α-干擾素、β-干擾素、神經生長因子、血小板衍生生長因子、組織纖溶酶原活化物、凋亡劑、抗血管生成劑；或生物反應調節劑如淋巴因子。

此外，抗體可以與治療部分如放射性金屬離子(如α-發射體，如213Bi)或用於將放射性金屬離子(包括但不限於131In、131LU、131Y、131Ho、131Sm)與多肽軛合的大環螯合劑軛合。在一個實施方式中，大環螯合劑係 1,4,7,10-四氮雜環十二烷-N,N',N",N'''-四乙酸(DOTA)，其可以經由連接子分子附接至抗體。這種連接子分子係本領域公知的，並描述於Denardo等人，1998,Clin Cancer Res.[臨床癌症研究]4(10)：2483-90；Peterson等人，1999,Bioconjug.Chem.[生物軛合化學]10(4)：553-7；和Zimmerman等人，1999,Nucl.Med.Biol.[核醫學和生物學]26(8)：943-50，該等文獻中的每一個均藉由引用以其全文併入。

用於將治療部分與抗體軛合的技術係公知的，參見例如，Amon等人，「Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy」[癌症療法中用於藥物免疫靶向的單株抗體]，在Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy[單株抗體和癌症療法]，Reisfeld等人，(編)，第243-56頁(艾倫麗思出版社公司(Alan R.Liss,Inc.)1985)中；Hellstrom等人，「Antibodies For Drug Delivery[用於藥物遞送的抗體]」，在Controlled Drug Delivery[藥物控制釋放](第2版)、Robinson等人(編)，第623-53頁(馬塞爾德克爾出版社公司(Marcel Dekker,Inc.)1987)中；Thorpe,「Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy：A Review[癌症療法中細胞毒性劑的抗體載體：綜述]」，在Monoclonal Antibodies[單株抗體]84：Biological And Clinical Applications[生物和臨床應用]、Pinchera等人(編)，第475-506頁(1985)中；「Analysis,Results,And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy[放射標記的抗體在癌症療法中的治療用途的未來前景]」，在Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy[用於癌症檢測和治療的單株抗體]，Baldwin等人(編)，第303-16頁(Academic Press[學術出版社]1985)中以及Thorpe等人，1982,Immunol.Rev.[免疫學綜述]62：119-58。

抗體也可以附接至固體支持物，這尤其科用於免疫測定或靶抗原的純化。這種固體支持物包括但不限於玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、尼龍、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。

編碼抗體的核酸、運載體和宿主細胞

本文還提供的是編碼本文所述之抗體或其抗原結合片段的核酸。此類核酸可以編碼包含上述ENTPD2抗體或其抗原結合片段的區段或結構域的多肽。此類核酸或多核苷酸可編碼至少一個CDR區，並且通常編碼來自本文所述之ENTPD2抗體的重鏈或輕鏈的所有三個CDR區。此類核酸或多核苷酸還可以編碼本文所述之ENTPD2抗體的重鏈和/或輕鏈的所有或基本上所有的可變區序列。此類核酸或多核苷酸還可以編碼抗體的可變區和恒定區。由於密碼的簡並性，多種核酸序列將編碼免疫球蛋白胺基酸序列中的每一種。例如，本發明之特徵在於分別編碼選自本文揭露的一種或多種抗體分子的抗人ENTPD2抗體分子的重鏈和輕鏈可變區的第一和第二核酸。核酸可以包含如在表1中列出的核苷酸序列或與其基本上相同的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性，或與表1中示出的序列相差不多於3、6、15、30、或45個核苷酸的序列)。

在某些實施方式中，核酸可以包含編碼來自重鏈可變區的至少一個、兩個、或三個CDR或高變環的核苷酸序列，該重鏈可變區具有如表1中列出的胺基酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列，和/或具有一個或多個取代，例如保守取代的序列)。在其他實施方式中，核酸可以包含編碼來自輕鏈可變區的至少一個、兩個或三個CDR或高變環的核苷酸序列，該輕鏈可變區具有如表1中列出的胺基酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列，和/或具有一個或多個取代，例如保守取代的序列)。在又另一個實施方式中，核酸可以包含編碼來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個CDR或高變環的核苷酸序列，該等重鏈和輕鏈可變區具有如在表1中列出的胺基酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列，和/或具有一個或多個取代，例如保守取代的序列)。

在某些實施方式中，核酸可以包含編碼來自重鏈可變區的至少一個、兩個、或三個CDR或高變環的核苷酸序列，該重鏈可變區具有如在表1中列出的核苷酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列)。在另一個實施方式中，核酸可以包含編碼來自輕鏈可變區的至少一個、兩個、或三個CDR或高變環的核苷酸序列，該輕鏈可變區具有如在表1中列出的核苷酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列)。在又另一個實施方式中，核酸可以包含編碼來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個CDR或高變環的核苷酸序列，該等重鏈和輕鏈可變區具有如在表1中列出的核苷酸序列，或與其基本上同源的序列(例如，與其具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的序列)。

多核苷酸序列可以藉由從頭固相DNA合成或藉由PCR誘變編碼ENTPD2-結合抗體或其結合片段的現有序列來產生。核酸的直接化學合成可以藉由本領域已知之方法完成，例如Narang等人，1979,Meth.Enzymol.[酶學方法]68：90的磷酸三酯方法；Brown等人，Meth.Enzymol.[酶學方法]68：109,1979的磷酸二酯方法；Beaucage等人，Tetra.Lett.[四面體快報]，22：1859,1981的二乙基亞磷醯胺方法；和美國專利號4,458,066的固體支持方法。藉由PCR向多核苷酸序列引入突變可以如以下文獻中所述進行，例如PCR Technology：Principles and Applications for DNA Amplification[PCR技術：用於DNA擴增的原理和應用]，H.A.Erlich(編輯)，弗裡曼出版社，紐約，紐約州(Freeman Press,NY,N.Y.),1992；PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications[PCR方案：方法和應用指南]，Innis等人，(編輯)，學術出版社，聖地牙哥，加利福尼亞州(Academic Press,San Diego,Calif.),1990；Mattila等人，Nucleic Acids Res.[核酸研究]19：967,1991；以及Eckert等人，PCR Methods and Applications[PCR方法和應用]1：17,1991。

本文還提供了運載體(例如，表現運載體)，該運載體包含編碼多肽的核酸，該多肽包含本文所述之ENTPD2抗體或其抗原結合片段的區段或結構域。此類運載體可用於表現和/或產生ENTPD2-結合抗體或其抗原結合片段。術語「表現載體」係指載體核酸分子，可以將所需的編碼序列插入該載體核酸分子中以引入可以表現該編碼序列的細胞中。運載體可以是DNA運載體、RNA運載體、質體、黏接質體、或病毒運載體、或人工染色體(參見，例如，Harrington等人，Nat Genet[自然遺傳學]15：345,1997)。例如，用於在哺乳動物(例如人)細胞中表現ENTPD2-結合抗體或其抗原結合片段的非病毒運載體包括pThioHis A、B和C；pcDNA3.1/His；pEBVHis A、B和C(英傑公司(Invitrogen)，聖地牙哥(San Diego)，加利福尼亞州(Calif.))；MPSV載體；以及本領域已知的用於表現蛋白質的許多其他運載體。例如，一類運載體利用衍生自動物病毒的DNA元件，例如牛乳頭瘤病毒，多瘤病毒、腺病毒、牛痘病毒、桿狀病毒、逆轉錄酶病毒(勞氏肉瘤病毒，MMTV或MOMLV)或SV40病毒。另一類運載體利用衍生自RNA病毒的RNA元件，例如塞姆利基森林病毒(Semliki Forest virus)，東部馬腦炎病毒(Eastern Equine Encephalitis virus)和黃病毒。

有用的病毒運載體包括基於以下病毒中任一種的運載體：逆轉錄酶病毒、慢病毒、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒(例如，單純性皰疹病毒(HSV))、基於SV40的運載體、乳頭狀瘤病毒、HBP Epstein Barr病毒、牛痘病毒、Sinbis病毒、流感病毒、呼腸孤病毒、新城疫病毒(NDV)、麻疹病毒、水泡性口炎病毒(VSV)、細小病毒、脊髓灰質炎病毒、痘病毒、塞內卡穀病毒(Seneca Valley virus)、柯薩奇病毒、腸病毒、黏液瘤病毒、馬拉巴病毒(maraba virus)、或塞姆利基森林病毒(SFV)。參見，Brent等人，同上；Smith,Annu.Rev.Microbiol.[微生物學年度評論]49：807,1995；和Rosenfeld等人，Cell[細胞]68：143,1992。

在一些實施方式中，運載體係慢病毒運載體。衍生自逆轉錄病毒如慢病毒的運載體係實現長期基因轉移的合適工具，因為它們允許轉基因的長期穩定整合及其在子細胞中的繁殖。慢病毒運載體相對於衍生自腫瘤逆轉錄病毒如鼠白血病病毒的運載體具有附加優點，因為它們可以轉導非增殖性細胞，例如肝細胞。它們還具有低免疫原性的附加優點。逆轉錄病毒運載體還可以是例如γ逆轉錄病毒運載體。γ逆轉錄病毒運載體可以包括例如啟動子、包裝訊號(ψ)、引物結合位點(PBS)、一個或多個(例如兩個)長末端重複序列(LTR)、和感興趣的轉基因(例如編碼CAR的基因)。γ逆轉錄病毒運載體可能缺少病毒結構基因(如gag、pol、和env)。示例性γ逆轉錄病毒運載體包括鼠白血病病毒(MLV)、形成脾臟病灶病毒(SFFV)、和骨髓增殖性肉瘤病毒(MPSV)，以及由其衍生的運載體。其他γ逆轉錄病毒載體描述於例如Tobias Maetzig等人，「Gammaretroviral Vectors：Biology,Technology and Application[γ逆轉錄病毒載體：生物學/技術和應用]」Viruses.[病毒]2011年6月；3(6)：677-713)。

在一些實施方式中，運載體係腺相關病毒(AAV)運載體，例如，重組AAV(rAAV)運載體。「AAV」係腺相關病毒的縮寫，並且可以用於指病毒本身或其衍生物。除非另有要求，否則該術語覆蓋所有亞型以及天然存在的和重組的形式二者。縮寫「rAAV」係指重組腺相關病毒，也稱為重組AAV載體(或「rAAV載體」)。術語「AAV」包括例如，AAV 1型(AAV1)、AAV 2型(AAV2)、AAV 3型(AAV3)、AAV 4型(AAV4)、AAV 5型(AAV5)、AAV 6型(AAV6)、AAV 7型(AAV7)、AAV 8型(AAV8)、AAV 9型(AAV9)、 AAV 10型(AAV10，包括AAVrh10)、AAV 12型(AAV12)、鳥AAV、牛AAV、大AAV、馬AAV、靈長類AAV、非靈長類AAV和綿羊AAV。「靈長類AAV」係指感染靈長類的AAV，「非靈長類AAV」係指感染非靈長類哺乳動物的AAV，「牛AAV」係指感染牛哺乳動物的AAV等。

各種血清型AAV的基因組序列，以及天然反向末端重複(ITR)序列，Rep蛋白和衣殼亞基的序列係本領域已知的。此類序列可以在文獻中或在諸如GenBank的公共數據庫中找到。參見，例如，GenBank登錄號NC-002077(AAV1)、AF063497(AAV1)、NC-001401(AAV2)、AF043303(AAV2)、NC-001729(AAV3)、NC-001829(AAV4)、U89790(AAV4)、NC-006152(AAV5)、AF513851(AAV7)、AF513852(AAV8)、和NC-006261(AAV8)；或在例如WO 2005033321(AAV1-9)的出版物中，其揭露的內容藉由引用結合在此。還參見，例如，Srivistava等人，(1983)J.Virology[病毒學雜誌]45：555；Chiorini等人，(1998)J.Virology[病毒學雜誌]71：6823；Chiorini等人，(1999)J.Virology[病毒學雜誌]73：1309；Bantel-Schaal等人，(1999)J.Virology[病毒學雜誌]73：939；Xiao等人，(1999)J.Virology[病毒學雜誌]73：3994；Muramatsu等人(1996)Virology[病毒學]221：208；Shade等人，(1986)J.Virol.[病毒學雜誌]58：921；Gao等人，(2002)Proc.Nat.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]99：11854；Moris等人，(2004)Virology[病毒學]33：375-383；國際專利公開WO 00/28061、WO 99/61601、WO 98/11244；以及美國專利號6,156,303。

如本文所用，「rAAV載體」係指包含非AAV來源的多核苷酸序列(即，與AAV異源的多核苷酸)的AAV載體，該多核苷酸序列通常是用於細胞遺傳轉化的目的序列。在一些實施方式中，異源多核苷酸可以側接至少一個(有時兩個)AAV反向末端重複序列(ITR)。術語rAAV運載體包括rAAV運載體顆粒和rAAV運載體質體。rAAV運載體可以是單股(ssAAV)或自身互補序列(scAAV)。「AAV病毒」或「AAV病毒粒子」或「rAAV載體粒子」係指由至少一種AAV衣殼蛋白(通常由野生型AAV的所有衣殼蛋白)和包衣殼的多核苷酸rAAV載體構成的病毒粒子。如果該粒子包含異源多核苷酸(即，除了野生型AAV基因組之外的多核苷酸，例如待遞送至哺乳動物細胞的轉基因)，則該粒子通常被稱為「rAAV載體粒子」或簡稱為「rAAV載體」。因此，rAAV顆粒的產生必然包括rAAV運載體的產生，因為這樣的運載體包含在rAAV顆粒內。

在一些實施方式中，運載體可以是含有核酸的重組DNA分子，該核酸編碼結合人ENTPD2蛋白的抗體。如本文所用的「重組」係指載體、多核苷酸、多肽或細胞係選殖；限制或連接步驟；和/或導致與自然界中發現的產物不同的構建體的其他過程的各種組合的產物(例如，關於其中包含的多核苷酸或多肽)。重組病毒或運載體係包含重組多核苷酸的病毒顆粒。該術語分別包括原始多核苷酸構建體的複製和原始病毒構建體的重複。

重組運載體通常包括與待表現的核酸序列可操作地連接的一個或多個調節序列。術語「調節序列」包括啟動子、增強子和其他表現控制元件(例如，聚腺苷酸化訊號)。調節序列包括指導核苷酸序列的組成型表現的序列，以及組織特異性調節和/或誘導序列。表現運載體還可以包括設計用於優化信使RNA穩定性和宿主細胞中可翻譯性的元件，和/或用於建立永久、穩定的細胞殖株的藥物選擇標記，該等殖株表現結合人ENTPD2蛋白的抗體。表現運載體的設計可以取決於諸如以下的這樣的因素：待轉化的宿主細胞的選擇、所需蛋白質的表現水平等。用於生成這樣的重組表現運載體的通用方法可以在以下文獻中發現：Sambrook和Russell編輯.(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual[分子選殖：實驗室手冊]，第3版；Ausubel等人編輯系列(2007年更新至2010年)Current Protocols in Molecular Biology[當代分子生物學實驗指南]，以及本領域已知的其他方法。

「啟動子」係控制序列，其係核酸序列的區域，在該區域中控制轉錄的起始和速率。它可能含有遺傳元件，在該等元件上調節蛋白質和分子可能結合如RNA聚合酶和其他轉錄因子。短語「可操作地定位」、「可操作地連接」、「受控制」和「受轉錄控制」意指啟動子處於與核酸序列相關的正確功能位置和/或方向以控制轉錄起始和/或該序列的表現。可以將啟動子與「增強子」結合或不結合使用，該「增強子」係指參與核酸序列轉錄活化的順式作用調節序列。

啟動子可以是與基因或序列天然相關的啟動子，如可以藉由分離位於編碼區段和/或外顯子上游的5’非編碼序列而獲得。這樣的啟動子可以被稱為「內源的」。類似地，增強子可以是與核酸序列天然相關的增強子，位於該序列的下游或上游。可替代地，藉由將編碼核酸區段定位在重組或異源啟動子的控制下，將獲得某些優點，該重組或異源啟動子係指在其天然環境中通常不與核酸序列相關的啟動子。重組或異源增強子還指在其天然環境中通常不與核酸序列相關的增強子。此類啟動子或增強子可以包括其他基因的啟動子或增強子、以及從任何其他原核、病毒或真核細胞分離的啟動子或增強子、以及不「天然存在」的啟動子或增強子(即，含有不同轉錄調節區的不同元件、和/或改變表現的突變)。除了合成地產生啟動子和增強子的核酸序列之外，可以使用重組選殖和/或核酸擴增技術(例如PCR)結合本文公開的組成物產生序列(參見US 4683202，US 5928906)。此外，預期也可以使用在非核細胞器(如線粒體，葉綠體等)中指導轉錄和/或序列表現的控制序列。

所用的啟動子可以是組成型的、誘導型的、合成的、組織或細胞特異性的、和/或在適當的條件下用於指導所引入的DNA區段的高水平表現係有用的，例如有利於大規模生產重組蛋白和/或肽。另外，還可以摻入其他調節元件以改善編碼結合人ENTPD2蛋白的抗體的核酸表現，例如增強子、核糖體結合位點、轉錄終止序列等。

在一些實施方式中，使用組成型啟動子以提供抗人ENTPD2抗體的恒定表現。組成型啟動子的實例包括但不限於即時早期巨細胞病毒(CMV)啟動子、猿猴病毒40(SV40)早期啟動子、小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)啟動子、人免疫缺陷病毒(HIV)長末端重複序列(LTR)啟動子、MoMuLV啟動子、禽類白血病病毒啟動子、愛潑斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus)即時早期啟動子、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)啟動子、以及人基因啟動子，如但不限於肌動蛋白啟動子、肌球蛋白啟動子、延伸因子-1α啟動子、血紅蛋白啟動子和肌酸激酶啟動子。

誘導型啟動子也被考慮作為本揭露的一部分。誘導型啟動子的使用提供了分子開關，該分子開關能夠當需要該啟動子可操作地連接的多核苷酸序列的表現時激活這種表現，或者當不需要表現時關閉表現。誘導型啟動子的實例包括但不限於金屬硫蛋白啟動子、糖皮質激素啟動子、孕酮啟動子和四環素啟動子。

在一些實施方式中，使用組織或細胞特異性啟動子從而僅在特定組織或細胞中提供抗人ENTPD2抗體的表現。組織或細胞特異性啟動子或元件的特性以及表徵其活性的測定法係熟悉該項技術者熟知的。實例包括人LIMK2基因(Nomoto等人，1999,Gene[基因]，236(2)：259-271)、生長激素抑制素受體2基因(Kraus等人，1998,FEES Lett.[FEES快報]，428(3)：165-170)、鼠附睾視黃酸結合基因(Lareyre等人，1999,J.Biol.Chem.[生物化學雜誌]，274(12)：8282-8290)、人CD4(Zhao-Emonet等人，1998,Biochirn.Biophys.Acta[生物化學與生物物理學報]，1442(2-3)：109-119)、小鼠α2(XI)膠原(Tsumaki等人，1998, J.Biol.Chem.[生物化學雜誌]，273(36)：22861-22864)、D1A多巴胺受體基因(Lee等人，1997,J.Auton.Nerv.Syst.[自主神經系統雜誌]，74(2-3)：86-90)、胰島素樣生長因子II(Wu等人，1997,Biochem.Biophys.Res.Commun.[生物化學與生物物理研究通訊]，233(1)：221-226)、人血小板內皮細胞黏附分子-1(Almendro等人，1996,J.Immunol.[免疫學雜誌]，157(12)：5411-5421)、肌肉肌酸激酶(MCK)啟動子(Wang等人，Gene Ther.[基因療法]2008年11月；15(22)：1489-99)。

在一些實施方式中，使用合成型啟動子以提供抗人ENTPD2抗體的表現。合成型啟動子可以顯著超過天然啟動子的轉錄效力。例如，可以選擇不被內源性細胞機器或因子關閉或降低活性的合成型啟動子。可以將其他元件(包括反式作用因子結合位點和增強子)插入合成型啟動子中以提高轉錄效率。合成型啟動子可以被合理設計和化學合成，以結合合成型和生物型啟動子的最佳特徵。將合成的寡核苷酸退火並藉由若干過程連接以產生全長化學合成的啟動子。合成型啟動子可以是誘導型或細胞型特異性啟動子。

特定的起始訊號也可能需要編碼序列的有效翻譯。該等訊號包括ATG起始密碼子或相鄰序列。可能需要提供外源翻譯控制訊號，包括ATG起始密碼子。熟悉該項技術者將能夠容易地確定這一點並提供必要的訊號。眾所周知，起始密碼子必須與所需編碼序列的閱讀框「同框(in-frame)」，以確保整個插入物的翻譯。外源翻譯控制訊號和起始密碼子可以是天然的或合成的。藉由包含合適的轉錄增強子元件可以提高表現效率。

表現可以使用本領域已知的任何適當的宿主細胞，例如，哺乳動物宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆蟲宿主細胞等。原核和真核表現系統皆為廣泛可用的。在一些實施方式中，該表現系統係哺乳動物細胞表現，例如CHO細胞表現系統。在一些實施方式中，可以對核酸進行密碼子優化以促進在期望的宿主細胞中表現。重要的是使用啟動子和/或增強子，該啟動子和/或增強子有效指導DNA區段在選擇用於表現的細胞類型、細胞器和生物體中的表現。分子生物學領域中的技術人員通常知道用於蛋白質表現的啟動子、增強子和細胞類型組合之用途，例如，參見Sambrook等人，(2001)。

大多數轉錄的真核RNA分子將經歷RNA剪接以從初級轉錄物中去除內含子。含有基因組真核生物序列的載體可能需要供體和/或受體剪接位點以確保用於蛋白質表現的轉錄物的正確加工(參見Chandler等人，1997,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]，94(8)：3596-601)。

本揭露的運載體或構建體通常包含至少一個終止訊號。「終止訊號」或「終止子」由參與RNA聚合酶特異性終止RNA轉錄物的DNA序列組成。因此，在某些實施方式中，考慮了終止RNA轉錄物產生的終止訊號。在體內可能需要終止子以達到所希望的資訊水平。在真核系統中，終止子區還可以包含特定的DNA序列，該序列允許新轉錄物的位點特異性切割，從而暴露聚腺苷酸化位點。這表示專門的內源聚合酶在轉錄物的3’末端添加一段約200個A殘基(聚A)。用這種聚A尾修飾的RNA分子似乎更穩定並且更有效地翻譯。因此，在關於真核生物的其他實施方式中，較佳的是終止子包含用於切割RNA的訊號，並且更較佳的是終止子訊號促進資訊的聚腺苷酸化。終止子和/或聚腺苷酸化位點元件可用於增強資訊水平和/或使從盒到其他序列的讀數最小化。預期用於本揭露的終止子包括本文所述或熟悉該項技術者已知的任何已知的轉錄終止子，包括但不限於，例如，基因的終止序列(例如像牛生長激素終止子)或病毒終止序列(例如SV40終止子)。在某些實施方式中，終止訊號可以是缺乏可轉錄或可翻譯的序列，例如由於序列截短。

在表現中，特別是真核表現中，通常將包括聚腺苷酸化訊號以實現轉錄物的適當聚腺苷酸化。不認為聚腺苷酸化訊號的性質對於本揭露的成功實踐係至關重要的，和/或可以採用任何這樣的序列。較佳的實施方式包括方便和/或已知在各種靶細胞中良好地起作用的SV40聚腺苷酸化訊號和/或牛生長激素聚腺苷酸化訊號。聚腺苷酸化可以增加轉錄物的穩定性或可以促進細胞質轉運。

為了在宿主細胞中繁殖載體，它可以含有一個或多個複製位點起點(通常稱為「ori」)，該起點係激活複製的特定核酸序列。可替代地，如果宿主細胞係酵母，則可以使用自主複製序列(ARS)。

在本揭露的某些實施方式中，可以藉由在表現載體中包括標記來在體外或在體內鑒定含有本揭露的核酸構建體的細胞。此類標記物將賦予細胞可鑒定的變化，從而允許容易地鑒定含有表現運載體的細胞。通常，可選擇標記係賦予允許選擇的屬性的標記。陽性可選擇標記係其中標記的存在允許其選擇的標記，而陰性可選擇標記係其存在阻止其選擇的標記。陽性可選擇標記的實例係抗藥性標記。

通常，包含藥物選擇標記有助於選殖和鑒定轉化體，例如，賦予對新黴素、嘌呤黴素、潮黴素、DHFR、GPT、博萊黴素和組胺醇的抗性的基因係有用的選擇標記。除了賦予允許基於條件的實施來區分轉化體的表型的標記之外，還考慮了其他類型的標記，包括可篩選的標記(例如GFP)，該標記係基於比色分析。可替代地，可以使用可篩選的酶，如單純皰疹病毒的胸苷激酶(HSV-tk)或氯黴素乙醯轉移酶(CAT)。熟悉該項技術者還將知道可能結合FACS分析如何使用免疫標記。所使用的標記物不被認為係重要的，只要它能夠與編碼基因產物的核酸同時表現即可。可選擇和可篩選的標記的其他實例係熟悉該項技術者公知的。

表現運載體還可以提供分泌訊號序列位置，以與藉由插入的ENTPD2-結合抗體序列編碼的多肽形成融合蛋白。更常見的是，所插入的ENTPD2-結合抗體序列在包含在運載體中之前與訊號序列連接。用於接收編碼 ENTPD2-結合抗體輕鏈和重鏈可變結構域的序列的運載體有時也編碼恒定區或其部分。這種運載體允許可變區表現為具有恒定區的融合蛋白，從而導致產生完整抗體及其抗原結合片段。通常，這種恒定區係人類的。

表現運載體的產生可利用包含多株位點(MCS)的運載體，該多株位點係含有多個限制酶位點的核酸區域，可以將其中任何一個與標準重組技術結合使用以消化運載體。參加Carbonelli等人，1999,Levenson等人，1998，和Cocea,1997。「限制性酶切消化」係指用僅在核酸分子中的特定位置處起作用的酶催化切割核酸分子。該等限制性內切酶中的許多係可商購的。熟悉該項技術者廣泛理解此類酶之用途。通常，使用在MCS內切割的限制性內切酶使運載體線性化或片段化，以使外源序列與運載體連接。「連接」係指在兩個核酸片段之間形成磷酸二酯鍵的過程，該等核酸片段可以彼此鄰接或不鄰接。涉及限制性內切酶和連接反應的技術係重組技術領域的技術人員所熟知的。

用於引入含有感興趣的多核苷酸序列的表現運載體之方法根據細胞宿主的類型而變化。例如，氯化鈣轉染通常用於原核細胞，而磷酸鈣處理或電穿孔可用於其他細胞宿主(通常參見Sambrook等人，同上)。其他方法包括例如電穿孔、磷酸鈣處理、脂質體介導的轉化、注射和顯微注射、衝擊法/基因槍、病毒體、免疫脂質體、聚陽離子：核酸軛合物、裸DNA、人工病毒粒子、與皰疹病毒結構蛋白VP22的融合物、藥劑增強的DNA攝取、離體轉導、原生質體融合、逆轉錄轉導、病毒轉染、基於脂質的轉染或其他常規技術。在原生質體融合的情況下，使細胞在培養基中生長並篩選適當的活性。對於重組蛋白的長期高產量生產，通常需要穩定的表現。例如，可以使用含有病毒複製起點或內源性表現元件和可選擇標記基因的表現運載體來製備穩定表現多肽的細胞系。在引入運載體後，可以使細胞在富集培養基中生長1-2天，然後將它們轉換為選擇性培養基。該可選擇標記的目的是給選擇帶來阻力，並且它的存在允許能在選擇性培養基中成功地表現引入的序列的細胞的生長。可以使用適合於細胞類型的組織培養技術來增殖抗性的、穩定轉染的細胞。用於培養所得轉染細胞和回收產生的抗體分子之方法和條件係熟悉該項技術者已知的，並且可以根據本說明書中所用的特定表現運載體和哺乳動物宿主細胞進行改變或優化。

本文還提供了包含本文所述之任何一種表現運載體的細胞。在一些實施方式中，本揭露內容的特徵在於包括本文所述之核酸分子的宿主細胞。此類細胞可以是宿主細胞或治療細胞。術語「宿主細胞」和「重組宿主細胞」在本文中可互換使用，其不僅是指特定的受試細胞，而且指這種細胞的子代或潛在子代。因為某些變化可在後代中由於突變或環境影響而發生，這種子代可能在事實上與親代細胞不同，但是仍然包括在如在此使用的術語範圍內。

在一個實施方式中，該等宿主細胞被基因工程化以包含編碼抗體分子的核酸。在一個實施方式中，藉由使用表現盒使宿主細胞基因工程化。短語「表現盒」係指核苷酸序列，該序列能夠影響在與該等序列相容的宿主中的基因的表現。此類盒可以包括啟動子，具有或不具有內含子的開放閱讀框和終止訊號。還可以使用在實現表現中必需或有幫助的其他因子，例如誘導型啟動子。

用於包含和表現ENTPD2-結合抗體鏈的宿主細胞可以是，但不限於，真核細胞或原核細胞，例如細菌細胞、昆蟲細胞或人細胞。大腸桿菌係一種可用於選殖並表現本發明之多核苷酸的原核宿主。適合使用的其他微生物宿主包括芽孢桿菌，諸如枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，和其他腸桿菌科(enterobacteriaceae)，諸如沙門氏菌屬(Salmonella)、沙雷菌屬(Serratia)和各種假單胞菌屬(Pseudomonas)種。在該等原核宿主中，還可以製備表現運載體，其通常含有與宿主細胞相容的表現控制序列(例如，複製的起點)。此外，將存在任何數量的各種公知的啟動子，如乳糖啟動子系統、色胺酸(trp) 啟動子系統、β-內醯胺酶啟動子系統或來自噬菌體λ的啟動子系統。啟動子通常視需要採用操縱基因序列控制表現且具有核糖體結合位點序列等，以用於激活和完成轉錄和翻譯。其他微生物如酵母也可用於表現本發明之ENTPD2-結合多肽。也可以使用與桿狀病毒運載體組合的昆蟲細胞。合適的昆蟲細胞包括，但不限於Sf9細胞。

在一個實施方式中，哺乳動物宿主細胞用於表現和產生本發明之ENTPD2-結合抗體。例如，它們可以是表現內源免疫球蛋白基因的雜交瘤細胞系(例如，1D6.C9骨髓瘤雜交瘤細胞)或含有外源表現運載體的哺乳動物細胞系(例如，SP2/0骨髓瘤細胞)。該等包括任何正常的必死或正常或異常的永生的動物或人類細胞。例如，已經開發了許多能夠分泌完整免疫球蛋白的合適宿主細胞系，包括CHO細胞系、各種Cos細胞系、HeLa細胞、骨髓瘤細胞系、轉化的B細胞和雜交瘤。利用哺乳動物組織細胞培養表現多肽一般在例如Winnacker,FROM GENES TO CLONES[從基因到殖株]，VCH出版商，紐約，紐約州，1987中討論。哺乳動物宿主細胞的表現運載體可包括表現控制序列如複製的起點、啟動子和增強子(參見例如，Queen，等人，Immunol.Rev.[免疫學評論]89：49-68,1986)和必要的處理資訊位點如核糖體結合位點、RNA剪接位點、多腺苷酸化位點和轉錄終止子序列。該等表現運載體通常含有源自哺乳動物基因或源自哺乳動物病毒的啟動子。合適的啟動子可以是組成型的、細胞類型特異性的、階段特異性的和/或可調製的或可調節的。有用的啟動子包括但不限於金屬硫蛋白啟動子、組成型腺病毒主要晚期啟動子、地塞米松誘導型MMTV啟動子、SV40啟動子、MRP pol III啟動子、組成型MPSV啟動子、四環素誘導型CMV啟動子(如人類即早期CMV啟動子)、組成型CMV啟動子和本領域已知的啟動子-增強子組合。

宿主細胞可用於產生或表現結合人ENTPD2蛋白的抗體。因此，本揭露的特徵還在於使用宿主細胞產生結合人ENTPD2蛋白的抗體之方法。在一個實施方式中，該方法包括在合適的培養基中培養宿主細胞(其中已經引入編碼抗體的重組表現運載體)，從而產生結合人ENTPD2蛋白的抗體。在另一個實施方式中，該方法進一步包括從培養基或宿主細胞中分離抗體。適合的真核細胞包括，但不限於Vero細胞、HeLa細胞、COS細胞、CHO細胞、HEK293細胞、BHK細胞、和MDCKII細胞。

產生單株抗體

單株抗體(mAb)可藉由多種技術產生，包括常規單株抗體方法，例如Kohler和Milstein,1975 Nature[自然]256：495的標準體細胞雜交技術。可以使用許多用於產生單株抗體的技術，例如B淋巴細胞的病毒或致癌轉化。

用於製備雜交瘤的動物系統係鼠系統。小鼠中的雜交瘤產生係建立良好的程序。免疫方案和分離免疫脾細胞用於融合的技術係本領域已知的。融合配偶體(例如鼠骨髓瘤細胞)和融合程序也是已知的。

在一些實施方式中，本發明之該等抗體係人源化的單株抗體。可以基於如上所述製備的鼠單株抗體的序列製備本發明之嵌合或人源化抗體及其抗原結合片段。編碼重鏈和輕鏈免疫球蛋白的DNA可以從感興趣的鼠雜交瘤中獲得，並使用標準分子生物學技術工程化以含有非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。例如，為了產生嵌合抗體，可以使用本領域已知之方法將鼠可變區與人恒定區連接(參見例如Cabilly等人的美國專利號4,816,567)。為產生人源化抗體，可以使用本領域已知之方法將鼠科動物CDR區域插入人框架中。參見例如，美國專利號5,225,539(屬於Winter)和美國專利號5,530,101；5,585,089；5,693,762和6180370(屬於Queen等人)。

在一些實施方式中，本發明之該等抗體係人單株抗體。可以使用攜帶部分人免疫系統而不是小鼠系統的轉基因或轉染色體小鼠來生成這種針對ENTPD2的人單株抗體。該等轉基因和轉染色體小鼠包括在本文中分別稱為HuMAb小鼠和KM小鼠的小鼠，並且在本文中統稱為「人Ig小鼠」。

HuMAb Mouse®(Medarex,Inc.)含有編碼未重排的人重鏈(μ和γ)和κ輕鏈免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因miniloci，以及使內源性μ和κ鏈基因座失活的靶向突變(參見例如，Lonberg，等人，1994 Nature[自然]368(6474)：856-859)。因此，小鼠表現出小鼠IgM或K的表現降低，並且響應於免疫，引入的人重鏈和輕鏈轉基因經歷類別轉換和體細胞突變以產生高親和力人IgG-κ單株(Lonberg,N.等人，1994同上；在Lonberg,N.,1994 Handbook of Experimental Pharmacology[實驗藥理學手冊]113：49-101中的綜述；Lonberg,N.和Huszar,D.,1995 Intern.Rev.Immunol.[國際免疫學評述]13：65-93，以及Harding,F.和Lonberg,N.,1995 Ann.N.Y.Acad.Sci.[紐約科學學術年報]764：536-546)。HuMAb小鼠的製備和用途以及由這樣的小鼠進行的基因組修飾被進一步描述於以下文獻中：Taylor,L.等人，1992 Nucleic Acids Research[核酸研究]20：6287-6295；Chen,J.等人，1993 International Immunology[國際免疫學]5：647-656；Tuaillon等人，1993 Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]94：3720-3724；Choi等人，1993 Nature Genetics[自然遺傳學]4：117-123；Chen,J.等人，1993 EMBO J.[歐洲分子生物學學會雜誌]12：821-830；Tuaillon等人，1994 J.Immunol.[免疫學雜誌]152：2912-2920；Taylor,L.等人，1994 International Immunology[國際免疫學]579-591；和Fishwild,D.等人，1996 Nature Biotechnology[自然生物技術]14：845-851。另外參見美國專利號5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,789,650；5,877,397；5,661,016；5,814,318；5,874,299；和5,770,429；全部屬於Lonberg和Kay；美國專利號5,545,807(屬於Surani等人)；PCT公開號WO 92103918、WO 93/12227、WO 94/25585、WO 97113852、WO 98/24884和WO 99/45962(均屬於Lonberg和Kay)；以及PCT公開號WO 01/14424(屬於Korman等人)。

在一些實施方式中，人抗體可以使用在轉基因和轉染色體上攜帶人免疫球蛋白序列的小鼠，如攜帶人重鏈轉基因和人輕鏈轉染色體的小鼠中產生。此類小鼠(在本文中被稱為「KM小鼠」)在PCT公開WO 02/43478(屬於Ishida等人)中有詳細描述。

仍此外，表現人免疫球蛋白基因的備選轉基因動物系統係本領域可獲得的，並且可用於產生ENTPD2-結合抗體及其抗原結合片段。例如，可以使用被稱為Xenomouse(安根尼克斯公司(Abgenix,Inc.))的可替代的轉基因系統。這樣的小鼠描述於例如，美國專利號5,939,598；6,075,181；6,114,598；6,150,584和6,162,963(屬於Kucherlapati等人)。

此外，表現人免疫球蛋白基因的備選轉基因動物系統係本領域可獲得的，並且可用於產生本發明之ENTPD2-結合抗體。例如，可以使用攜帶人重鏈轉染色體和人輕鏈轉染色體的稱為「TC小鼠」的小鼠；這樣的小鼠描述於Tomizuka等人，2000 Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美國國家科學院院刊]97：722-727中。此外，本領域已經描述了攜帶人重鏈和輕鏈轉染色體的牛(Kuroiwa等人，2002 Nature Biotechnology[自然生物技術]20：889-894)，並且可以用於產生本發明之ENTPD2結合抗體。

還可以使用針對篩選人免疫球蛋白基因文庫的噬菌體展示方法來製備人單株抗體。用於分離人抗體的這種噬菌體展示方法在本領域中建立或在以下實例中描述。參見例如：美國專利號5,223,409；5,403,484；和5,571,698(屬於Ladner等人)；美國專利號5,427,908和5,580,717(屬於Dower等人)；美國專利號5,969,108和6,172,197(屬於McCafferty等人)；以及美國專利號 5,885,793；6,521,404；6,544,731；6,555,313；6,582,915和6,593,081(屬於Griffiths等人)。

本發明之人單株抗體也可以使用SCID小鼠製備，人免疫細胞已經重建至該SCID小鼠中，使得免疫時可以產生人抗體應答。這種小鼠描述於Wilson等人的美國專利號5,476,996和5,698,767中。

使經修飾的抗體工程化之方法

如上所述，本文所示的具有VH和VL序列或全長重鏈和輕鏈序列的ENTPD2-結合抗體可用於藉由修飾全長重鏈和/或輕鏈序列、VH和/或VL序列或與其附接的一個或多個恒定區來產生新的ENTPD2-結合抗體。因此，在本發明之另一個方面，本發明之ENTPD2-結合抗體的結構特徵用於產生結構上相關的ENTPD2-結合抗體，其保留本發明之抗體及其抗原結合片段的至少一種功能特性，如與人ENTPD2結合並且抑制人ENTPD2的功能特性。

例如，本發明之抗體及其抗原結合片段的一個或多個CDR區或其突變可以與已知的構架區和/或其他CDR重組組合以產生另外的重組工程化的本發明ENTPD2結合抗體及其抗原結合片段，如上所討論。其他類型的修飾包括先前部分中描述的那些修飾。用於工程化方法的起始材料係本文提供的一種或多種VH和/或VL序列，或其一個或多個CDR區。為了產生工程化抗體，不必實際製備(即，表現為蛋白質)具有本文提供的一種或多種VH和/或VL序列的抗體、或其一個或多個CDR區。相反，該一個或多個序列中包含的資訊用作起始材料以產生衍生自一個或多個初始序列的一個或多個「第二代」序列，然後將該一個或多個「第二代」序列製備並表現為蛋白質。

還可以藉由篩選具有如US 20050255552所述之固定的CDR3序列或最小必需結合決定簇以及CDR1和CDR2序列的多樣性的抗體文庫來製備改變的抗體序列。該篩選可以根據適合於篩選來自抗體文庫的抗體的任何篩選技術進行，如噬菌體展示技術。

可以使用標準分子生物學技術來製備並表現改變的抗體序列。由一種或多種改變的抗體序列編碼的抗體係保留本文所述之ENTPD2-結合抗體的一種、一些或全部功能特性的抗體，該功能特性包括但不限於與人ENTPD2蛋白特異性結合並穩定人ENTPD2蛋白。

可以使用本領域可獲得的和/或本文描述的標準測定如實例中所述之那些測定(例如，ELISA)評估改變的抗體的功能特性。

在一些實施方式中，使本發明之抗體及其抗原結合片段工程化之方法中，可以沿著ENTPD2-結合抗體編碼序列的全部或部分隨機或選擇性地引入突變，並且可以針對結合活性和/或如本文所述之其他功能特性篩選所得的經修飾的ENTPD2-結合抗體。本領域中已經描述了突變方法。例如，PCT公開WO 02/092780描述了使用飽和誘變、合成連接組裝或其組合用於產生並篩選抗體突變之方法。可替代地，PCT公開WO 03/074679描述了使用計算篩選方法來優化抗體的生理化學特性之方法。

抗體的特徵

本發明之抗體及其抗原結合片段可藉由各種功能測定來表徵。例如，他們可以被表徵為結合ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白)的能力。

抗體與ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白)結合的能力可以藉由直接標記感興趣的抗體來檢測，或者該抗體可以是未標記的並且使用本領域已知的各種夾心式測定形式間接檢測結合。

在一些實施方式中，本發明之ENTPD2-結合抗體及其抗原結合片段阻斷參考ENTPD2-結合抗體結合ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白) 或與參考ENTPD2-結合抗體競爭結合ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白)。該等可以是上述完全人或人源化ENTPD2-結合抗體。它們還可以是與參考抗體結合相同表位的其他人、小鼠、嵌合或人源化ENTPD2-結合抗體。阻斷參考抗體結合或與參考抗體競爭結合的能力表明測試中的ENTPD2-結合抗體結合與參考抗體所定義的相同或相似的表位，或結合與參考ENTPD2-結合抗體所結合的表位足夠接近的表位。這種抗體尤其可能具有針對參考抗體鑒定的有利特性。阻斷參考抗體或與參考抗體競爭的能力可以藉由例如競爭結合測定來確定。使用競爭結合測定，檢查該測試中的抗體抑制參考抗體與共同抗原(如ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白))的特異性結合的能力。如果過量的測試抗體實質上抑制參考抗體的結合，則測試抗體與參考抗體競爭與抗原的特異性結合。實質性抑制意指測試抗體通常使參考抗體的特異性結合降低至少10%、25%、50%、75%或90%。

許多已知的競爭結合測定可用於評估抗體與參考抗體競爭結合特定蛋白質，該特定蛋白質在這種情況下是ENTPD2(例如，人ENTPD2蛋白)。該等測定法包括，例如固相直接或間接放射免疫測定(RIA)、固相直接或間接酶免疫測定(EIA)、夾心式競爭測定(參見Stahli等人，Methods in Enzymology[酶學方法]9：242-253,1983)；固相直接生物素-親和素EIA(參見Kirkland等人，J.Immunol.[免疫學雜誌]137：3614-3619,1986)；固相直接標記測定，固相直接標記夾心式測定(參見Harlow和Lane，同上)；使用I-125標記的固相直接標記RIA(參見Morel等人，Molec.Immunol.[分子免疫學]25：7-15,1988)；固相直接生物素-親和素EIA(Cheung等人，Virology[病毒學]176：546-552,1990)；和直接標記的RIA(Moldenhauer等人，Scand.J.Immunol.[斯堪的納維亞免疫學雜誌]32：77-82,1990)。典型地，這種測定涉及使用結合固體表面或細胞的純化抗原，該固體表面或細胞攜帶該等未標記的測試ENTPD2-結合抗體和標記的參考抗體中的任何一種。藉由確定在測試抗體存在下結合固體表面或細胞的標籤的量來測量競爭性抑制。通常，測試抗體過量存在。藉由競爭測定(即，競爭抗體)鑒定的抗體包括與參考抗體結合相同表位的抗體和結合鄰近表位的抗體，該鄰近表位與參考抗體所結合的表位足夠接近以發生位阻。

為了確定所選擇的ENTPD2-結合單株抗體是否結合唯一的表位，可以使用可商購獲得的試劑(例如來自伊利諾州羅克福德的皮爾斯公司(Pierce,Rockford,Ill.)的試劑)將每種抗體生物素化。可以使用ENTPD2蛋白包被的ELISA平板來進行使用未標記單株抗體和生物素化單株抗體的競爭研究。可以用鏈黴親和素-鹼性磷酸酯酶探針檢測生物素化MAb結合。為確定經純化的ENTPD2-結合抗體的同種型，可以進行同種型ELISA。例如，可用1微克/ml抗人IgG在4℃下過夜包被微量滴定板的孔。在用1% BSA封閉之後，將該等板與1微克/ml或更少的單株ENTPD2-結合抗體或經純化的同種型對照在環境溫度下反應1至2個小時。該等孔然後可以與人IgG1或人IgM特異性鹼性磷酸酯酶軛合的探針反應。然後將板顯色，並對其進行分析，以便確定純化抗體的同種型。

為證明單株ENTPD2-結合抗體與表現ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白)的肝細胞的結合，可以使用流動式細胞測量術。簡言之，可以將表現ENTPD2的細胞系(在標準生長條件下生長)與含0.1% BSA和10%胎牛血清的PBS中各種濃度的ENTPD2-結合抗體混合，並在37℃下孵育1小時。洗滌後，細胞與螢光素標記的抗人IgG抗體在與一級抗體染色相同的條件下反應。可藉由FACScan儀器使用光和側向散射特性門控單個細胞來分析樣本。(除了或者替代)流動式細胞測量術測定，還可使用利用螢光顯微術的備選測定法。可將細胞如上所述那樣染色並且藉由螢光顯微術檢查。該方法允許視覺化單個細胞，但可以根據抗原的密度具有降低的靈敏度。

可以藉由蛋白質印跡法進一步測試本發明之ENTPD2-結合抗體及其抗原結合片段與ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白)或抗原片段的反應性。簡言之，可以製備經純化的ENTPD2蛋白(例如，人ENTPD2蛋白)或融合蛋白，或來自表現ENTPD2的細胞的細胞提取物，並且進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳。電泳之後，將分離的抗原轉移至硝酸纖維素膜，用10%胎牛血清進行封閉，並且用有待測試的單株抗體進行探測。可以使用抗人IgG鹼性磷酸酯酶檢測人IgG結合，並且用BCIP/NBT底物片劑(密蘇里州聖路易斯的西格瑪化學公司(Sigma Chem.Co.,St.Louis,Mo.))進行顯色。

可以進一步測試本發明之ENTPD2-結合抗體及其抗原結合片段調節一種或多種ENTPD2活性/功能的能力。

還可以使用實例中描述的任何方法或測定測試本發明之ENTPD2-結合抗體及其抗原結合片段。

治療方法和治療用途

本文揭露的抗體具有許多體外和體內診斷和治療用途，涉及診斷和治療具有ENTPD2依賴性病理生理學的障礙。例如，可以將該等分子體外或離體投與至在培養基中的細胞，或(例如，體內)投與至人受試者以用ENTPD2依賴性病理生理學治療、預防和診斷多種障礙。因此，在一個方面，本文提供了藉由向受試者投與如下組合，該組合包含以下各項來治療有需要的受試者的癌症之方法：治療有效量的本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和治療有效量的本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段，編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸，含有編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸的一種或多種運載體，包含這種核酸或運載體的細胞，或包含這種抗體或抗原結合片段、核酸、運載體或細胞的藥物組成物。在一個方面，本發明提供抑制或減少受試者中腫瘤細胞生長之方法，該方法包括向受試者投與治療有效量的如本文揭露的抗人ENTPD2抗體和治療有效量的如本文揭露的抗人CD73抗體。

在另一個方面，提供了一種治療受試者，例如減輕或改善受試者的過度增生性病狀或病症(例如，癌症)、例如實性瘤、血液學癌症、軟組織腫瘤或轉移性病灶之方法。

因此，在一個實施方式中，本發明提供了抑制受試者中腫瘤細胞生長之方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量的一種或多種如本文所述之抗人ENTPD2抗體分子或其功能片段和治療有效量的一種或多種如本文所述之抗人CD73抗體分子或其功能片段；視需要與其他藥劑，例如治療劑或治療方式組合。

在一些實施方式中，此類方法可以進一步包括測定獲得自受試者(例如，受試者的組織生檢)的樣本中ENTPD2的表現水平的步驟。

術語「癌症」意欲包括所有類型的癌性生長或致癌性過程、轉移性組織或惡性轉化的細胞、組織或器官，而不考慮組織病理學類型或侵襲的階段。癌症障礙的實例包括，但不限於實性瘤，軟組織腫瘤和轉移性病變。實性瘤的實例包括各種器官系統的惡性腫瘤，例如肉瘤、腺癌和癌，如影響肝、肺、乳腺、淋巴、胃腸(例如結腸)、泌尿生殖道(例如，腎、尿路上皮細胞)、前列腺和咽的那些。腺癌包括惡性腫瘤，例如大多數大腸癌(例如MSS大腸直腸癌)、膽管癌(肝內或肝外)、胰臟癌、食道癌、食道胃結合部(EGJ)癌、或胃癌、直腸癌、腎細胞癌、肝癌(肝腫瘤，例如晚期肝腫瘤，具有或不具有病毒感染，例如慢性病毒性肝炎)、肺的非小細胞癌、小腸癌和食道癌。鱗狀細胞癌包括惡性腫瘤，例如在肺、食管、皮膚、頭頸部區域、口腔、肛門和子宮頸中。

還可以使用本發明之方法和組合來治療或預防上述癌症的轉移性病灶。

可以使用本文揭露的抗體分子抑制其生長的示例性癌症包括通常對免疫療法有應答的癌症。用於治療的較佳的癌症的非限制性實例包括胃腸癌(例如胃部(胃)癌、大腸直腸癌(CRC))和食道癌(例如食道鱗狀細胞癌(ESCC))。另外，可以使用本文描述的抗體分子來治療難治性或復發性惡性腫瘤。

可以治療的其他癌症的實例包括肺癌(例如，非小細胞肺癌(NSCLC)(例如，具有鱗狀和/或非鱗狀組織學的NSCLC，或NSCLC腺癌))、黑素瘤(例如，晚期黑素瘤)、腎癌(例如，腎細胞癌，例如，透明細胞腎細胞癌)、肝癌、骨髓瘤(例如，多發性骨髓瘤)、前列腺癌、乳癌(例如，不表現雌激素受體、孕酮受體、或Her2/neu的一種、兩種或所有的乳癌，例如，三陰性乳癌)、胰臟癌、頭頸癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCC))、肛門癌、胃食道癌、甲狀腺癌、宮頸癌、淋巴增生性疾病(例如，移植後淋巴增生性疾病)或血液癌、T細胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、或白血病(例如，骨髓性白血病)、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭癌或頸部癌、皮膚或眼內惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門癌、胃食道癌、胃癌、睾丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、骨髓瘤(例如，多發性骨髓瘤)、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病(包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴球性白血病、慢性淋巴細胞性白血病)、兒童實性瘤、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎癌(例如腎癌，例如腎細胞癌(RCC)(例如，轉移性RCC或透明細胞腎細胞癌))、輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經系統瘤(CNS)、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊髓軸腫瘤、腦幹膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘導的癌症(包括由石棉誘導的癌症)，和所述癌症的組合。

在一些實施方式中，此處的療法可用於治療患有(或被鑒定為具有)與感染相關的癌症(例如，病毒或細菌感染)的患者。示例性癌症包括宮頸癌、肛門癌、HPV相關的頭頸部鱗狀細胞癌、HPV相關的食管乳頭狀瘤、HHV6相關的淋巴瘤、EBV相關的淋巴瘤(包括柏基特氏淋巴瘤)、胃MALT淋巴瘤、其他感染相關的MALT淋巴瘤、HCC、和卡波西氏肉瘤。

在其他實施方式中，癌症係血液惡性腫瘤或癌症，包括但不限於白血病或淋巴瘤。例如，可以使用抗人ENTPD2抗體分子或其抗原結合片段和抗人CD73抗體分子或其抗原結合片段的組合(視需要與其他藥劑(例如治療劑)組合)用於治療癌症和惡性腫瘤，包括但不限於例如，急性白血病，包括但不限於但不限於，例如，B細胞急性淋巴細胞性白血病(「BALL」)、T細胞急性淋巴細胞性白血病(「TALL」)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)；一種或多種慢性白血病，包括但不限於例如慢性髓細胞性白血病(CML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)；另外的血液癌症或血液病狀包括但不限於，例如B細胞幼淋巴細胞性白血病、母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤、柏基特氏淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、毛細胞白血病、小細胞或大細胞濾泡性淋巴瘤、惡性淋巴組織增生性病狀、MALT淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常和骨髓增生異常綜合症、非霍奇金氏淋巴瘤、漿母細胞性淋巴瘤、漿細胞樣樹突細胞腫瘤、瓦爾登斯特倫(Waldenstrom)巨球蛋白血症、和為由骨髓血細胞的無效產生(或發育異常)聯合在一起的多種血液病狀集合的「白血病前期」等。

在一個實施方式中，癌症選自大腸癌(例如大腸直腸癌(CRC)或大腸直腸腺癌)、胃癌(例如胃腺癌，胃癌)、食道癌(例如食道鱗狀細胞癌(ESCC))、肺癌(例如，小細胞肺癌)、乳癌(例如，乳腺腺癌)或卵巢癌。

在一個實施方式中，癌症係大腸直腸癌(CRC)或大腸直腸腺癌。在另一個實施方式中，癌症係MSS大腸直腸癌(CRC)。

在另一個實施方式中，癌症係食道癌。

在另一個實施方式中，癌症係胃癌。

在另一個實施方式中，癌症係食道胃結合部(EGJ)癌。

在又另一個實施方式中，癌症係食管鱗狀細胞癌(ESCC)。

在另外的實施方式中，癌症係膽管癌。膽管癌可以是肝內或肝外的。

在另一個實施方式中，癌症係胰臟癌。

在又另一個實施方式中，癌症過表現ENTPD2(ENTPD2陽性/ENTPD2+)，例如ENTPD2+CRC、ENTPD2+胃癌(例如，ENTPD2胃癌)、ENTPD2+食管鱗狀細胞癌(ENTPD2+ESCC)。

可以將以下各項藉由靜脈內、瘤內或皮下途徑投與受試者：本文所述之抗體或其抗原結合片段；編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸；或包含編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸的運載體或細胞；或包含這種抗體或抗原結合片段、核酸、運載體、或細胞的藥物組成物。在一些實施方式中，將這種抗體或其片段、核酸、運載體、細胞或藥物組成物靜脈內投與。

還提供了用於在治療癌症中使用的本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或抗原結合片段的組合、包含這種抗體或抗原結合片段的藥物組成物、編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸、或包含編碼這種抗體或抗原結合片段的一種或多種核酸的一種或多種運載體。

本揭露還包括以下各項在製造用於治療癌症的藥物中之用途：本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或抗原結合片段的組合、包含這種抗體或抗原結合片段的藥物組成物、編碼這種抗體或抗原結合片段的核酸、或包含編碼這種抗體或抗原結合片段的一種或多種核酸的一種或多種運載體。

與其他療法的組合

本發明還關於包含本文所述之本發明之組合的藥物組成物。在實施方式中，根據本發明之藥物組成物可以用於治療癌症。此外，可以另外地將本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段的組合與以下中的一種或多種組合：護理治療的標準品(例如，針對癌症)、另一種抗體分子、免疫調節劑(例如，共刺激性分子的活化劑或共抑制性分子的抑制劑)；疫苗，例如治療性癌症疫苗；或如下所述之其他形式的細胞療法。

因此，用本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段的本發明之組合來治療本文所述之癌症之方法可進一步包括向需要治療的受試者投與至少一種另外的治療劑。還提供了治療癌症之方法，該方法包括向需要治療的受試者投與本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段的本發明之組合和至少兩種另外的治療劑。

術語「組合」係指一種劑量單位形式的固定組合，或組合投與(其中本發明之化合物與至少一種組合配偶體(partner)(例如下文所解釋的至少一種其他的藥物，也稱為一種或多種「治療劑」或「共同藥劑(co-agent)」)可以在同一時間獨立地投與或在時間間隔內分開地投與，特別是在該等時間間隔允許組合配偶體顯示協作，例如協同效應的情況下)。在根據本發明之組合中，本發明之化合物和至少一種組合配偶體包含本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段。在根據本發明之組合中，本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段可以為呈一個劑量單位形式的固定組合，或可以為組合的投與，其中本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段可以同時獨立投與或在時間間隔內單獨投與。單個組分可以包裝在一個套盒中或分開包裝。可在投與之前將一種或兩種組分(例如粉末或液體)重構或稀釋至所希望的劑量。如本文所用，術語「共同投與」或「組合投與」等意指涵蓋向有需要的單個受試者(例如患者)投與所選擇的組合配偶體，並且旨在包括其中藥劑不一定藉由相同的投與途徑投與或同時投與的治療方案。在根據本發明之組合的實施方式中，藉由組合投與來投與本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段，將它們投與至有需要的單個受試者(例如患者)，並且意在包括治療方案，其中本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段不是必須藉由相同的投與途徑或在同一時間投與。

術語「固定組合」意指治療劑(例如，本發明化合物和組合配偶體)以單一實體或劑量的形式同時地向患者投與。在本發明之組合的實施方式中，本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段呈固定組合的形式，並且因此，兩者都以單一單位劑型的形式同時投與於患者。術語「固定劑量組合」可以與「固定組合」可互換地使用。術語「非固定組合」意指治療劑(例如，本發明之化合物和至少一種組合配偶體)作為分開的實體同時地、並行地或依序地投與至患者(沒有特定的時間限制)，其中這種投與在患者體內提供治療有效水平的至少兩種化合物。後者也適用於雞尾酒療法，例如三種或更多種治療劑的投與。在本發明之組合的實施方式中，本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段呈「非固定組合」的形式，使得將本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段作為單獨實體同時地、並行地或依序地投與於患者，沒有特定的時間限制，其中這樣的投與在患者體內提供了治療有效水平的至少兩種化合物。

術語「組合療法」係指投與兩種或更多種治療劑以治療在本揭露中描述的所治療的病症或障礙。這種投與涵蓋以基本上同時的方式共同投與該等治療劑，如以具有固定比率活性成分的單個膠囊投與。可替代地，這種投與涵蓋在多個容器中或在每種活性成分的獨立容器(例如，片劑、膠囊、粉末、和液體)中共同投與。可以將粉末和/或液體在投與之前重構或稀釋到所需的劑量。此外，這類投與也涵蓋在大致相同的時間或在不同的時間順序使用每種類型的治療劑。在任何一種情況下，治療方案將在治療本文所述之病症或障礙方面提供藥物組合的有益作用。

可以將抗ENTPD2抗體分子和抗CD73分子的組合與其他療法組合使用。例如，組合療法可包括本發明之組成物，例如包含本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段和本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段的組合的藥物組成物，該組合與一種或多種另外的治療劑(例如一種或多種抗癌劑、細胞毒性或細胞抑制劑)、激素治療、疫苗和/或其他免疫療法共同配製和/或共同投與。在其他實施方式中，抗體分子與其他治療性治療方式組合投與，包括手術、放射、冷凍手術和/或熱療。此類組合療法可以有利地使用較低劑量的所投與的治療劑，從而避免與各種單一療法相關的可能的毒性或併發症。

「與......組合」並不旨在暗示必需同時投與療法或治療劑和/或配製其用於一起遞送，儘管該等遞送方法也在本文所述之範圍內。

該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段和該抗人CD73抗體或其抗原結合片段可以彼此並行地，或者以彼此之前或之後的任何順序進行投與。還可以將抗人ENTPD2抗體分子和抗人CD73抗體分子的組合與至少一種或多種其他另外的療法或治療劑並行、在其之前或之後投與。抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段、抗人CD73抗體或其抗原結合片段和視需要的至少一種其他藥劑或治療方案可以任何順序投與。通常，每種藥劑將以針對該藥劑確定的劑量和/或日程表投與。還將認識到，抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段、抗人CD73抗體或其抗原結合片段和視需要的至少一種另外的治療劑可以在單一組成物中一起投與或在不同的組成物中分開投與。通常，預期組合中使用的其他治療劑的以不超過它們單獨使用時的水平使用。在一些實施方式中，組合中使用的水平將低於單獨使用的水平。

本發明關於用於同時、分開或順序使用的組合產品，例如組合製劑或藥物固定組合，或該等製劑和組合的組合。

與人CD73特異性結合的抗體及其抗原結合片段

如本文所用，術語「CD73」係指「分化簇73」，也稱為5’-核苷酸酶(5’-NT)或胞外5’-核苷酸酶。術語「CD73」包括全長野生型CD73的突變體、片段、變體、同種型和同源物。在一個實施方式中，CD73蛋白由NT5E基因編碼。示例性CD73序列可在Uniprot數據庫中以登錄號Q6NZX3和P21589獲得。示例性的未成熟CD73胺基酸序列提供為SEQ ID NO：464-466。「CD73單體」係指包含CD73的胞外結構域的多肽。在一個實施方式中，CD73單體係全長CD73。「CD73二聚體」係指由彼此相互作用形成穩定的二聚體(例如，藉由CD73單體的C-末端結構域之間的蛋白質-蛋白質相互作用形成的二聚體)的兩個CD73單體(例如，兩個相同的CD73單體)組成的兩個多肽(例如，兩個非共價締合的多肽)。在一個實施方式中，CD73二聚體係天然存在的CD73二聚體。

藉由CD73靶向腺苷的細胞外產生可降低腺苷的免疫抑制作用。抗CD73抗體具有一系列活性，例如，抑制CD73外核苷酸酶活性，減輕AMP介導的淋巴細胞抑制，以及抑制同基因腫瘤生長。抗CD73抗體可以驅動腫瘤微環境中骨髓和淋巴浸潤白血球群的變化。該等變化包括例如CD8效應細胞和活化的巨噬細胞的增加，以及骨髓源性抑制細胞(MDSC)和調節性T淋巴細胞的比例的降低。在本發明之組合的一個實施方式中，抗CD73抗體分子係完全抗體分子或其抗原結合片段。在一些實施方式中，該抗CD73抗體分子選自表2中列出的任何抗體分子。在其他實施方式中，抗CD73抗體分子包含如在表2中揭露的重鏈可變結構域序列、輕鏈可變結構域序列、或二者。在某些實施方式中，該抗CD73抗體分子結合CD73蛋白質並減少例如，抑制或拮抗CD73(例如，人CD73)的活性。在一些實施方式中，抗CD73抗體分子在公開為WO 2018/237157的PCT申請案號PCT/US 2018/038775中有所描述，其內容藉由引用以其全文特此併入。

PD-1抑制劑

在某些實施方式中，將如本文所述之ENTPD2抗體或其抗原結合片段與如本文所述之CD73抗體或其抗原結合片段的組合與PD-1抑制劑組合投與。在一些實施方式中，PD-1抑制劑選自PDR001(諾華公司(Novartis))、納武單抗(百時美施貴寶公司)、派姆單抗(默克公司(Merck & Co))、匹地利珠單抗(CureTech公司)、MEDI0680(醫學免疫公司)、REGN2810(再生元公司(Regeneron))、TSR-042(Tesaro公司)、PF-06801591(輝瑞製藥公司(Pfizer))、BGB-A317(百濟神州公司(Beigene))、BGB-108(百濟神州公司)、INCSHR1210(因賽特公司(Incyte))、或AMP-224(Amplimmune公司)。

示例性PD-1抑制劑

在一個實施方式中，該PD-1抑制劑係抗PD-1抗體分子。在一個實施方式中，該PD-1抑制劑係抗PD-1抗體分子，如題為「PD-1的抗體分子及其用途」的2015年7月30日公佈的US 2015/0210769(將其藉由引用以其整體併入)中所述之。

在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個互補決定區(CDR)(或總體上全部CDR)，該重鏈和輕鏈可變區包含表7(例如，來自表7中揭露的BAP049-殖株-E或BAP049-殖株-B的重鏈和輕鏈可變區序列)中所示的胺基酸序列，或由表7中所示的核苷酸序列編碼的胺基酸序列。在一些實施方式中，CDR根據卡巴特定義(例如，如表7中所列出的)。在一些實施方式中，CDR根據喬西亞定義(例如，如表中所列出的)。在一些實施方式中，CDR根據卡巴特和喬西亞兩者的組合CDR定義(例如，如表7中所列出的)。在一個實施方式中，VH CDR1的卡巴特和喬西亞CDR的組合包含胺基酸序列GYTFTTYWMH(SEQ ID NO：638)。在一個實施方式中，相對於表7中所示的胺基酸序列，或由表7中所示的核苷酸序列編碼的胺基酸序列，CDR中的一種或多種(或總體上全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代(例如，保守胺基酸取代)或缺失。

在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：295的VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：296的VHCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：297的VHCDR3胺基酸序列的重鏈可變區(VH)；以及含有SEQ ID NO：304 的VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：305的VLCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：306的VLCDR3胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)，各自揭露於表7中。

在一個實施方式中，該抗體分子包含：含有由SEQ ID NO：318的核苷酸序列編碼的VHCDR1、由SEQ ID NO：319的核苷酸序列編碼的VHCDR2、和由SEQ ID NO：320的核苷酸序列編碼的VHCDR3的VH；以及含有由SEQ ID NO：323的核苷酸序列編碼的VLCDR1、由SEQ ID NO：324的核苷酸序列編碼的VLCDR2、和由SEQ ID NO：325的核苷酸序列編碼的VLCDR3的VL，各自揭露於表7中。

在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：300的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：300具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的VH。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：314的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：314具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：310的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：310具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：300的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：314的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：300的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：310的胺基酸序列的VL。

在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：301的核苷酸序列、或與SEQ ID NO：301具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的核苷酸序列編碼的VH。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：315或311的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：315或311具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼的VL。在一個實施方式中，該抗體分子包含：由SEQ ID NO：301的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO：315或311的核苷酸序列編碼的VL。

在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：302的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：302具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的重鏈。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：316的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：316具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：312的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：312具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，該抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：302的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：316的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，該抗PD-1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：302的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NQ：312的胺基酸序列的輕鏈。

在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：303的核苷酸序列、或與SEQ ID NO：303具有至少85%、90%、95%、或99%、或更高同一性的核苷酸序列編碼的重鏈。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：317或313的核苷酸序列，或與SEQ ID NO：317或313具有至少85%、90%、95%、或99%或更高同一性的核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施方式中，該抗體分子包含：由SEQ ID NO：303的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO：317或313的核苷酸序列編碼的輕鏈。

本文所述之該等抗體分子可以藉由運載體、宿主細胞、和在US 2015/0210769中描述之方法製得，該申請藉由引用以其全文併入。

其他示例性PD-1抑制劑

在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係納武單抗(Bristol-Myers Squibb)，也稱為MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538、BMS-936558、或OPDIVO®。納武單抗(殖株5C4)和其他抗PD-1抗體揭露在US 8,008,449和WO 2006/121168中，該等文獻藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一種或多種：納武單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，如表中所揭露的。

在一個實施方式中，該抗PD-1抗體分子係派姆單抗(默克公司(Merck & Co))，也稱為Lambrolizumab、MK-3475、MK03475、SCH-900475、或KEYTRUDA®。派姆單抗和其他抗PD-1抗體揭露於Hamid,O.等人(2013)New England Journal of Medicine[新英格蘭醫學雜誌]369(2)：134-44、US 8,354,509和WO 2009/114335，其藉由引用以其整體併入本文。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一種或多種：派姆單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，如表8中所揭露的。

在一個實施方式中，該抗PD-1抗體分子係匹地利珠單抗(CureTech)，也稱為CT-011。匹地利珠單抗和其他抗PD-1抗體揭露於Rosenblatt,J.等人，(2011)J Immunotherapy[免疫療法雜誌]34(5)：409-18；US 7,695,715；US 7,332,582；和US 8,686,119(將其藉由引用以其整體併入)中。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一種或多種：匹地利珠單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，如表8中所揭露的。

在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係MEDI0680(醫學免疫公司)，也稱為AMP-514。MEDI0680和其他抗PD-1抗體在US 9,205,148和WO 2012/145493中揭露，該等文獻藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：MEDI0680的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。

在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係REGN2810(再生元公司)。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：REGN2810的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。

在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係PF-06801591(輝瑞公司)。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：PF-06801591的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。

在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係BGB-A317或BGB-108(百濟神州公司)。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：BGB-A317或BGB-108的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。

在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係INCSHR1210(Incyte公司)，也稱為INCSHR01210或SHR-1210。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：INCSHR1210的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。

在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子係TSR-042(Tesaro公司)，也稱為ANB011。在一個實施方式中，抗PD-1抗體分子包含以下中的一個或多個：TSR-042的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列。

其他已知的抗PD-1抗體包括描述於例如以下中的那些：WO 2015/112800、WO 2016/092419、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2014/194302、WO 2014/209804、WO 2015/200119、US 8,735,553、US 7,488,802、US 8,927,697、US 8,993,731、和US 9,102,727(將其藉由引用以其整體併入)。

在一個實施方式中，抗PD-1抗體係與本文所述之抗PD-1抗體之一競爭與PD-1上的相同表位結合和/或結合PD-1上的相同表位的抗體。

在一個實施方式中，PD-1抑制劑係例如如US 8,907,053(將其藉由引用以其全文併入)中所述之抑制PD-1傳訊途徑的肽。在一個實施方式中，該PD-1抑制劑係免疫黏附素(例如包含融合到恒定區(例如免疫球蛋白序列的Fc區)的PD-L1或PD-L2的細胞外或PD-1結合部分的免疫黏附素)。在一些實施方式中，該PD-1抑制劑係AMP-224(B7-DCIg(安普利公司)，例如，揭露於WO 2010/027827和WO 2011/066342(藉由引用以其全文併入)中。

示例性PD-L1抑制劑

在某些實施方式中，將如本文所述之ENTPD2抗體或其抗原結合片段與如本文所述之CD73抗體或其抗原結合片段的組合與PD-L1抑制劑組合投與。PD-L1抑制劑可以是抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、或寡狀。在一些實施方式中，該PD-L1抑制劑選自FAZ053(諾華公司)；阿特利珠單抗(基因泰克公司/羅氏公司)；阿維魯單抗(默克雪蘭諾公司(Merck Serono)和輝瑞製藥公司)；度伐魯單抗(英商梅迪繆思有限公司/阿斯利康公司)；或BMS-936559(百時美施貴寶)。

示例性抗PD-L1抗體分子

在一個實施方式中，該PD-L1抑制劑係抗PD-L1抗體分子。在一個實施方式中，該PD-L1抑制劑係抗PD-L1抗體分子，如題為「PD-L1的抗體分子及其用途」的2016年4月21日公開的US 2016/0108123(將其藉由引用以其整體併入)中所揭露的。

在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含來自重鏈和輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個、或六個互補決定區(CDR)(或總體上全部CDR)，該重鏈和輕鏈可變區包含表25(例如，來自表25中揭露的BAP058-殖株O、或BAP058-殖株N的重鏈和輕鏈可變區序列)中所示的胺基酸序列、或由表25中所示的核苷酸序列編碼的胺基酸序列。在一些實施方式中，CDR根據卡巴特定義(例如，如表25中所列出的)。在一些實施方式中，CDR根據喬西亞定義(例如，如表25中所列出的)。在一些實施方式中，CDR根據卡巴特和喬西亞兩者的組合CDR定義(例如，如表25中所列出的)。在一個實施方式中，VH CDR1的卡巴特和喬西亞CDR的組合包含胺基酸序列GYTFTSYWMY(SEQ ID NO：640)。在一個實施方式中，相對於表25中所示的胺基酸序列，或由表25中所示的核苷酸序列編碼的胺基酸序列，CDR中的一種或多種(或總體上全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或更多個變化，例如胺基酸取代(例如，保守胺基酸取代)或缺失。

在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：641的VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：642的VHCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：643的VHCDR3胺基酸序列的重鏈可變區(VH)；以及含有SEQ ID NO：649的VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO：650的VLCDR2胺基酸序列、和SEQ ID NO：651的VLCDR3胺基酸序列的輕鏈可變區(VL)，各自揭露於表25中。

在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有由SEQ ID NO：668的核苷酸序列編碼的VHCDR1、由SEQ ID NO：669的核苷酸序列編碼的VHCDR2、和由SEQ ID NO：670的核苷酸序列編碼的VHCDR3的VH；以及含有由SEQ ID NO：673的核苷酸序列編碼的VLCDR1、由SEQ ID NO：674的核苷酸序列編碼的VLCDR2、和由SEQ ID NO：675的核苷酸序列編碼的VLCDR3的VL，各自揭露於表25中。

在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：646的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：646具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的胺基酸序列的VH。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：656的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：656具有至少約85%、90%、95%、或99%或更高序列同一性的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：660的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：660具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的胺基酸序列的VH。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：664的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：664具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：646的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：656的胺基酸序列的VL。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：660的胺基酸序列的VH和含有SEQ ID NO：664的胺基酸序列的VL。

在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：647的核苷酸序列、或與SEQ ID NO：647具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的核苷酸序列編碼的VH。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：657的核苷酸序列、或與SEQ ID NO：657具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的核苷酸序列編碼的VL。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：661的核苷酸序列、或與SEQ ID NO：661具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的核苷酸序列編碼的VH。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：665的核苷酸序列、或與SEQ ID NO：665具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的核苷酸序列編碼的VL。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO：647的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO：657的核苷酸序列編碼的VL。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO：661的核苷酸序列編碼的VH和由SEQ ID NO：665的核苷酸序列編碼的VL。

在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：648的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：648具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的胺基酸序列的重鏈。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：658的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：658具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：662的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：662具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的胺基酸序列的重鏈。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：666的胺基酸序列、或與SEQ ID NO：666具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：648 的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：658的胺基酸序列的輕鏈。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含：含有SEQ ID NO：662的胺基酸序列的重鏈和含有SEQ ID NO：666的胺基酸序列的輕鏈。

在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：655的核苷酸序列、或與SEQ ID NO：655具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的核苷酸序列編碼的重鏈。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：659的核苷酸序列、或與SEQ ID NO：659具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：663的核苷酸序列、或與SEQ ID NO：663具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的核苷酸序列編碼的重鏈。在一個實施方式中，抗體分子包含：由SEQ ID NO：667的核苷酸序列、或與SEQ ID NO：667具有至少約85%、90%、95%、或99%序列同一性的核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO：655的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO：659的核苷酸序列編碼的輕鏈。在一個實施方式中，抗體分子包含由SEQ ID NO：663的核苷酸序列編碼的重鏈和由SEQ ID NO：667的核苷酸序列編碼的輕鏈。

本文所述之該等抗體分子可以藉由運載體、宿主細胞、和在US 2016/0108123中描述之方法製得，該申請藉由引用以其全文併入。

其他示例性PD-L1抑制劑

在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子係阿特利珠單抗(基因泰克公司/羅氏公司(Genentech/Roche))，也稱為MPDL3280A、RG7446、RO5541267、YW243.55.S70、或TECENTRIQ^TM 。阿特利珠單抗和其他抗PD-L1抗體在US 8,217,149中揭露，該等抗體藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，抗PD-L1抗體分子包含以下的一種或多種：阿特利珠單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，在表26中所揭露的。

在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子係阿維魯單抗(默克雪蘭諾公司和輝瑞公司)，也稱為MSB0010718C。阿維魯單抗和其他抗PD-L1抗體揭露在WO 2013/079174中，藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含以下中的一種或多種：阿維魯單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，如表26中所揭露的。

在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子係度伐魯單抗(英商梅迪繆思有限公司/阿斯利康公司)，也稱為MEDI4736。度伐魯單抗和其他抗PD-L1抗體揭露在US 8,779,108中，藉由引用以其全文併入。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含以下中的一種或多種：度伐魯單抗的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，如表26中所揭露的。

在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子係BMS-936559(百時美施貴寶公司(Bristol-Myers Squibb))，也稱為MDX-1105或12A4。BMS-936559和其他抗PD-L1抗體揭露在US 7,943,743和WO 2015/081158中，該等申請藉由引起以其全文併入。在一個實施方式中，該抗PD-L1抗體分子包含以下中的一種或多種：BMS-936559的CDR序列(或總體上全部CDR序列)、重鏈或輕鏈可變區序列、或重鏈或輕鏈序列，例如，如表26中所揭露的。

其他已知的抗PD-L1抗體包括描述於例如以下中的那些：WO 2015/181342、WO 2014/100079、WO 2016/000619、WO 2014/022758、WO 2014/055897、WO 2015/061668、WO 2013/079174、WO 2012/145493、WO 2015/112805、WO 2015/109124、WO 2015/195163、US 8,168,179、US 8,552,154、US 8,460,927、和US 9,175,082(將其藉由引用以其全文併入)。

在一個實施方式中，抗PD-L1抗體係與本文所述之抗PD-L1抗體之一競爭與PD-L1上的相同表位結合和/或結合PD-L1上的相同表位的抗體。

示例性TGF-β抑制劑

在某些實施方式中，將如本文所述之ENTPD2抗體或其抗原結合片段與如本文所述之CD73抗體或其抗原結合片段的組合與轉化生長因子β(TGF-β)抑制劑組合投與。在一些實施方式中，將組合用於治療癌症，例如，本文所述之癌症。

TGF-β屬於結構相關的細胞介素的大家族，包括例如骨成形性蛋白質(BMP)、生長和分化因子、活化素和抑制素。在一些實施方式中，本文所述之TGF-β抑制劑可以結合和/或抑制TGF-β的一種或多種同種型(例如，TGF-β1、TGF-β2、或TGF-β3中的一種、兩種、或全部)。

在一些實施方式中，該TGF-β抑制劑係夫蘇木單抗(CAS登記號：948564-73-6)。夫蘇木單抗也稱為GC1008。夫蘇木單抗係結合和抑制TGF-β同種型1、2和3的人單株抗體。

夫蘇木單抗的重鏈具有以下胺基酸序列：

(SEQ ID NO：687)。

夫蘇木單抗的輕鏈具有以下胺基酸序列：

(SEQ ID NO：688)。

例如，在WO 2006/086469、US 8,383,780、和US 8,591,901中揭露了夫蘇木單抗。

在一些實施方式中，該TGF-β抑制劑係XOMA 089。XOMA 089也稱為XPA.42.089。XOMA 089係完全人單株抗體，該抗體結合並中和TGF-β 1和2配位基。

XOMA 089的重鏈可變區具有以下胺基酸序列：

(SEQ ID NO：689)(在WO 2012/167143中揭露為SEQ ID NO：6)。

XOMA 089的輕鏈可變區具有以下胺基酸序列：

(SEQ ID NO：690)(在WO 2012/167143中揭露為SEQ ID NO：8)。

在某些實施方式中，組合包括ENTPD2的抑制劑(例如，本文所述之抗ENTPD2抗體分子)和CD73的抑制劑(例如，本文所述之抗CD73抗體分子)和TGF-β抑制劑(例如，本文所述之TGF-β抑制劑)。

在一些實施方式中，組合包括TGF-β抑制劑XOMA 089或PCT公開號WO 2012/167143中揭露的化合物，和ENTPD2的抑制劑(例如，本文所述之抗ENTPD2抗體)以及CD73的抑制劑(例如本文所述之抗CD73抗體)。

在一個實施方式中，將TGF-β抑制劑XOMA 089或PCT公開號WO 2012/167143中公開的化合物與ENTPD2的抑制劑(例如本文所述之抗ENTPD2抗體)和CD73的抑制劑(例如，抗CD73抗體分子)組合投與以治療癌症，其中癌症係MSS大腸直腸癌(CRC)、膽管癌(肝內或肝外)、胰臟癌、食道癌、食道胃結合部(EGJ)癌或胃癌。

腺苷A2A受體拮抗劑

在某些實施方式中，將本文所述之抗人ENTPD2分子和本文所述之抗CD73分子與如下文所述之至少一種腺苷A2A受體(A2AR)拮抗劑組合投與。在某些實施方式中，將本文所述之抗人ENTPD2分子和本文所述之抗CD73分子與如下文所述之至少兩種腺苷A2A受體(A2AR)拮抗劑組合投與。示例性A2AR拮抗劑包括，但不限於例如，PBF509/NIR178(帕羅生物製藥公司/諾華公司(Palobiofarma/Novartis))、CPI444/V81444(卡沃斯公司/基因泰克公司(Corvus/Genentech))、AZD4635/HTL-1071(阿斯利康公司/海普泰公司(AstraZeneca/Heptares))、維帕迪南(Redox/Juno)、GBV-2034(Globavir)、AB928(阿克斯生物科學公司(Arcus Biosciences))、茶鹼、伊曲茶鹼(協和發酵工業株式會社(Kyowa Hakko Kogyo))、托紮迪南/SYN-115(Acorda)、KW-6356(協和發酵工業株式會社(Kyowa Hakko Kogyo))、ST-4206(理地安生物科學公司(Leadiant Biosciences))、和普瑞迪南/SCH 420814(默克公司/謝林公司(Merck/Schering))。

在某些實施方式中，A2AR拮抗劑係PBF509/NIR178，也僅稱為NIR178。PBF509/NIR178和其他A2AR拮抗劑在US 8,796,284和WO 2017/025918中揭露，該等申請藉由引用以其全文併入。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係5-溴-2,6-二-(1H-吡唑-1-基)嘧啶-4-胺、或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑具有以下結構：

，或其藥學上可接受的鹽。

在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係CPI444/V81444。CPI-444和其他A2AR拮抗劑在WO 2009/156737中揭露，該申請藉由引用以其全文併入本文。在某些實施方式中，A2AR拮抗劑係(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，A2AR拮抗劑係(R)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其外消旋物，或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，A2AR拮抗劑係7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氫呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑具有以下結構：

，或其藥學上可接受的鹽。

在某些實施方式中，A2AR拮抗劑係AZD4635/HTL-1071。A2AR拮抗劑在WO 2011/095625中揭露，該申請藉由引用以其全文併入本文。在某些實施方式中，A2AR拮抗劑係6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三

-3-胺，或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑具有以下結構：

，或其藥學上可接受的鹽。

在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係ST-4206(理地安生物科學公司(Leadiant Biosciences))。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係在 US 9,133,197中描述的A2AR拮抗劑，該申請藉由引用以其全文併入本文。在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑具有以下結構：

，或其藥學上可接受的鹽。

在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係在US 8114845、US 9029393、US 20170015758、或US 20160129108中描述的A2AR拮抗劑，藉由引用以其全文並於本文中。

在某些實施方式中，該A2AR拮抗劑係伊曲茶鹼(CAS登記號：155270-99-8)。伊曲茶鹼也稱為KW-6002或8-[(E)-2-(3,4-二甲氧基苯基)乙烯基]-1,3-二乙基-7-甲基-3,7-二氫-1H-嘌呤-2,6-二酮。例如，在LeWitt等人，(2008)Annals of Neurology[神經病學年鑒]63(3)：295-302)中揭露了伊曲茶鹼。

在某些實施方式中，該A2aR拮抗劑係托紮迪南(Biotie)。托紮迪南也稱為SYN115或4-羥基-N-(4-甲氧基-7-

啉-4-基-1,3-苯并噻唑-2-基)-4-甲基哌啶-1-甲醯胺。托紮迪南阻斷在A2a受體上的內源性腺苷的作用，導致多巴胺對D2受體的作用增強，並抑制mGluR5受體上的麩胺酸的作用。在一些實施方式中，該A2aR拮抗劑係普瑞迪南(CAS登記號：377727-87-2)。普瑞迪南也稱為SCH 420814或2-(2-呋喃基)-7-[2-[4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-1-哌

基]乙基]7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺。普瑞迪南被開發為一種藥物，可作為腺苷A2A受體的有效和選擇性拮抗劑。

在某些實施方式中，該A2aR拮抗劑係維帕迪南。維帕迪南也稱為BIIB014、V2006、或3-[(4-胺基-3-甲基苯基)甲基]-7-(呋喃-2-基)三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺。

其他示例性A2aR拮抗劑包括例如，ATL-444、MSX-3、SCH-58261、SCH-412,348、SCH-442,416、VER-6623、VER-6947、VER-7835、CGS-15943、或ZM-241,385。

樣本製備

可以使用本領域已知的任何一種方法(例如藉由生檢或手術)從受試者獲得本文所述方法中使用的樣本。樣本可以快速冷凍並儲存在-80℃以備後用。樣本也可以用固定劑(例如甲醛、多聚甲醛或乙酸/乙醇)固定。可以從新鮮、冷凍或固定的樣本中提取RNA或蛋白質用於分析。

藥物組成物、劑量和投與方法

本發明之實施方式關於用於在治療ENTPD2相關的疾病(例如，如本文所述之癌症)中使用的組成物(例如，藥物組成物)。此類組成物包含如本文所述之抗ENTPD2抗體或其抗原結合片段與如本文所述之抗CD73抗體或其抗原結合片段的組合、編碼此類抗體或抗原結合片段的核酸、或包含編碼此類抗體或抗原結合片段的一種或多種核酸的一種或多種運載體。此類組成物可以視需要進一步包含另一種藥劑，例如針對待治療疾病的當前護理標準。

藥物組成物典型地包含藥學上可接受的載體。如本文所用，表述「藥學上可接受的載體」包括與藥物投與相容的鹽水、溶劑、分散介質、塗料、抗細菌的和抗真菌的藥劑、等滲劑和吸收延遲劑等。典型地，藥物組成物被配製成與預期的投與途徑相容。投與途徑的實例包括腸胃外(例如，靜脈內、動脈內、腹膜內)、顱內、鞘內或鼻內(例如，吸入)、皮內、皮下或腫瘤內投與。

本文使用的短語「藥學上可接受的」係指在合理的醫學判斷的範圍內，適合用於與人類和動物的組織接觸而不產生過度毒性、刺激、過敏反應、或其他問題或併發症，與合理的受益/風險比相稱的那些化合物、材料、組成物和/或劑型。

在一些實施方式中，該等藥物組成物包含一種或多種藥學上可接受的載體，包括例如，離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、緩衝物質(例如磷酸鹽)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質(例如硫酸魚精蛋白)、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化矽、三矽酸鎂、聚乙烯吡咯啶酮、纖維素基物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟類、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

配製適合的藥物組成物之方法在本領域中是已知的，參見，例如，Remington：The Science and Practice of Pharmacy.[雷明頓：藥物科學與實踐]第21版，2005；和在Drugs and the Pharmaceutical Sciences：a Series of Textbooks and Monographs[藥物和藥物科學：一系列教科書和專著](Dekker,NY)系列中的書籍。例如，被用於胃腸外或皮下應用的溶液或懸浮液可以包括以下組分：無菌稀釋劑，如注射用水、鹽水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗細菌劑，如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，如乙二胺四乙酸；緩衝劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；並且用於調節滲透壓的試劑如氯化鈉或葡萄糖。可以用酸或鹼(例如鹽酸或氫氧化鈉)調節pH。製劑可以被封裝在由玻璃或塑膠製成的安瓿、一次性注射器或多劑量小瓶中。

適合於可注射使用的藥物組成物可以包括無菌水溶液(在水溶性的情況下)或分散體、以及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末。對於靜脈內的投與，適當的載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor EL^TM (巴斯夫公司(BASF)，帕西波尼(Parsippany)，新澤西州(NJ))或磷酸酯緩衝鹽水(PBS)。在所有情況下，該組成物必須是無菌的並且必須具有達到容易注射的程度的流動性。它在製造和儲存條件下應該穩定並且必須抗諸如細菌和真菌的微生物污染作用而保存。該載體可以是包含以下物質的溶劑或分散介質：例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)，以及其適合的混合物。可以例如藉由使用塗層(如卵磷脂)、藉由在分散液的情況下維持所需顆粒大小以及藉由使用表面活性劑來維持適當的流動性。防止微生物的作用可以藉由不同的抗細菌以及抗真菌劑，例如對羥苯甲酸酯、三氯三級丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等來實現。在許多情況下，將較佳的是在組成物中包含等滲劑例如糖、多元醇(如甘露醇或山梨糖醇)和氯化鈉。可以藉由在組成物中包含延遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鋁和明膠)來實現可注射組成物的長時間吸收。

可以藉由以下各項來製備無菌可注射溶液：將活性化合物以所需的量，根據需要，與一種以上列舉的成分或該等成分的組合併入適當的溶劑中，然後進行過濾滅菌。

總體上，藉由將有效化合物摻入無菌媒介物來製備分散體，該無菌媒介物含有基礎分散介質以及來自以上列舉的所需其他成分。就用於製備無菌可注射溶液的無菌粉末而言，較佳的製備方法係真空乾燥和冷凍乾燥，該等方法產生活性成分的粉末以及來自其以前的無菌過濾溶液的任何另外的所希望的成分。

胃腸外配製物可以是單次推注劑量，輸注或載入推注劑量，然後是維持劑量。可以按具體的固定或可變的間隔，例如每天一次，或「按需」投與該等組成物。

用於注射的合適的藥物組成物可以包含緩衝液(例如，乙酸鹽、磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝液)；表面活性劑(例如聚山梨醇酯)；視需要的穩定劑(例如，人白蛋白)等。外周投與的製劑包括無菌水溶液或非水溶液、懸浮液和乳液。非水溶劑的例子係丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油和可注射用有機酯如油酸乙酯。含水載體包括例如水、醇/水溶液、乳劑或懸液，包括鹽水和緩衝的介質。在一些實施方式中，該藥物組成物包含0.01-0.1M磷酸鹽緩衝液或0.8%鹽水。其他常見的胃腸外媒介物包括磷酸鈉溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化鈉、乳酸林格氏液或不揮發性油。靜脈內媒介物可以包括流體和營養補充物、電解質補充物，如基於Ringer右旋糖的那些等。防腐劑和其他添加物也可以存在，如，例如抗微生物藥、抗氧化劑、螯合劑、和惰性氣體等。

在一個實施方式中，將該等治療性化合物與保護該等治療性化合物免於從體內快速消除的載體一起製備，如控釋配製物，包括植入物和微囊化的遞送系統。

藥物組成物可以與投與的說明書一起包括在容器、包裝、或分配器中。

可以藉由細胞培養或實驗動物中的標準製藥程序來確定治療性化合物的劑量、毒性和治療效果，例如，用於確定LD50(使50%的群體致死的劑量)和ED50(在50%的患者群體中治療有效的劑量)。在毒性和治療效果之間的劑量比為治療指數，它可以表示為比率LD50/ED50。表現出高治療指數的化合物係較佳的。儘管可以使用表現出有毒副作用的化合物，但是應該小心設計將此類化合物靶向至受影響的組織的部位的遞送系統，從而將對未感染的細胞的潛在損傷最小化，並且由此減少副作用。

從細胞培養測定和動物研究獲得的數據可以用於配製一系列的用於在人類中使用的劑量。較佳的是該等化合物的劑量處於包括ED50在內的有很小毒性或沒有毒性的循環濃度範圍內。該劑量可根據所應用的劑型和所使用的投與途徑在該範圍內變化。對於用於本發明方法的任何化合物，均可根據細胞培養試驗初步估計治療有效劑量。一種劑量可以在動物模型中被配製以達到在細胞培養中確定的一種循環血漿濃度範圍，該範圍包括IC50(即該測試化合物的完成半最大症狀的抑制的濃度)。該資訊可用於更精確地確定在人中有用的劑量。可以例如藉由高效液相層析法來測量血漿中的水平。

套盒

本文還提供了套盒，該套盒包括一種或多種本文提供的組成物和使用說明書。使用說明書可以包括用於診斷或治療如本文所述之ENTPD2相關疾病(例如癌症)的說明書。本文提供的套盒可根據本文所述之任何一種方法使用。熟悉該項技術者將知道本文提供的套盒的其他合適用途，並且將能夠針對此類用途使用該套盒。本文提供的套盒還可以包括郵寄物(例如，郵資支付信封或郵寄包)，其可以用於將用於分析的樣本返回到例如實驗室。套盒可以包括一個或多個用於樣本的容器，或樣本可以在標準血液收集瓶中。套盒還可以包括以下的一種或多種：知情同意書，試驗申請表和關於如何在本文所述方法中使用套盒的說明。本文還包括使用此類套盒之方法。可以對一個或多個表格(例如，測試申請表)和裝有樣本的容器進行編碼，例如，用條碼來鑒定提供樣本的受試者。

熟悉該項技術者將認識到許多類似於或等同於本文所述那些之方法和材料，該等方法和材料可用於實踐本發明。實際上，本發明決不限於所描述之方法和材料。

實例

雖然已經討論了本發明之特定實施方式，但上述說明係說明性而非限制性的。在綜述本說明書和以下申請專利範圍之後，本發明之許多修改對於熟悉該項技術者將是顯而易見的。應當藉由參考申請專利範圍及其等同形式的全範圍以及說明書連同此類變化來確定本發明之全範圍。在以下實例中進一步描述了本發明，該等實例不限制申請專利範圍中描述的本發明之範圍。

實例1：癌症中ENTPD2的表現

外核苷三磷酸二磷酸水解酶2(也稱為ENTPD2、NTPD酶2、NTPD酶-2、外-ATP酶2、外-ATPD酶2、CD39抗原樣1、CD39L1、外-ATP-二磷酸水解酶2)屬於調節嘌呤傳訊(特別地ATP、UTP、以及細胞外空間中的ADP和UDP)的細胞外ATP水解酶家族(關於綜述參見Robson等人Purinergic Signaling[嘌呤傳訊]2：409-430(2006))。ATP/ADP水解的終產物5’AMP隨後藉由外-5’-核苷酸酶(也稱為外5’Nt酶或CD73)去磷酸化為腺苷。

ENTPD2在癌症中的功能作用尚未得到很好的描述。早期報導集中在大鼠膠質瘤模型中ENTPD2的過表現，該過表現藉由ADP介導的血小板調節和腫瘤微環境導致體內腫瘤生長增強，並促進增強腫瘤擴散的炎症狀態(Braganhol等人Cancer Sci[癌症科學]100(8)：1434-42(2009)；Braganhol等人Purinergic Signal[嘌呤訊號]8(2)：235-43(2012))。最近報導了在肝細胞癌中ENTPD2的升高的表現，其中該表現與預後較差相關，該預後是由於增強的髓樣來源的抑制細胞積累/維持而導致的(Chiu等人Nature Communications[自然通訊]8(1)：517(2017))。

儘管ENTPD2在癌症中的功能特徵在公共結構域中受到限制，但釋放到細胞外空間的嘌呤介質(如ATP和腺苷)已被證明在免疫和炎症中起重要作用。從受壓、受損或凋亡的細胞釋放的ATP藉由活化P2RX和P2RY受體引發快速炎症，該等受體增強免疫細胞的募集，增強T細胞中TCR傳訊並促進樹突細胞和巨噬細胞活化。另一方面，腺苷傳訊藉由抑制效應T細胞以及單核吞噬細胞的失調而導致免疫抑制性生態位(關於綜述，參見Cekic等人Nature Reviews Immunology[自然免疫學綜述]16：177-192(2016),Antonioli等人Nature Reviews Cancer[自然癌症綜述]13：842-857(2013))。在腫瘤部位的臨床前腺苷傳訊的阻斷物或細胞外ATP的恢復已經證明誘導淋巴細胞募集和抗腫瘤反應(Michaud等人Science[科學]334(6062)：1573-7(2011)；Allard等人Clinical Cancer Research[臨床癌症研究]19(20)：5626-35(2013))。

癌細胞中ENTPD2的升高的表現有可能顯著改變腫瘤微環境中嘌呤傳訊的平衡，使其轉向更具免疫抑制的狀態。因此，ENTPD2催化功能的靶向抑制可提供將平衡轉向ATP驅動的促炎性Th-1樣狀態的機會，從而增強抗腫瘤免疫應答。

尚未在不同的腫瘤亞型中仔細檢查ENTPD2表現。將抗人ENTPD2 mAb1用於評估來自不同適應症的癌細胞系的ENTPD2表現。將細胞用抗人ENTPD2 mAb1按5μg/ml在冰上染色45min，然後與山羊抗人IgG、Fcγ特異性、Alexa Fluor 647或APC軛合的二級Ab(1：400稀釋；傑克遜免疫研究實驗室公司(Jackson ImmunoResearch Laboratories)，西格羅夫，賓夕法尼亞州)孵育。所有的孵育和洗滌均在FACS緩衝液中進行，該緩衝液由以下項組成：1x HyClone磷酸鹽緩衝鹽水(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)、1% HyClone 胎牛血清(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)、2mM EDTA(賽默飛世爾公司(ThermoFisher)，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)。

如圖1A所示，在來自大腸直腸癌、食管癌、胃癌、乳癌和肺癌適應症的代表性癌細胞系中觀察到ENTPD2之表現升高。根據製造商的說明，使用來自班斯實驗室(Bangs Laboratories)(Fishers,IN)的Quantum Simply Cellular抗人IgG對ENTPD2受體密度進行定量(表20，圖1B)。

為了評估原發性腫瘤組織中ENTPD2蛋白表現，從Cureline(布里斯班，加利福尼亞州)獲得具有匹配的相鄰正常組織的福馬林固定的石蠟包埋的腫瘤組織微陣列。用抗CD39L1/ENTPD2 IHC Ab(NBP1-85752，諾烏斯，立托頓，科羅拉多州(Novus,Littleton,CO))，使用自動Ventana方案進行IHC染色，其中在95℃下標準高pH CC1抗原修復，並隨後與Ventana DISCOVERY® OmniMap抗Rb HRP二級Ab和Ventana DISCOVERY® ChromoMap DAB套盒(Ventana，Tuscon AZ)孵育。

在大腸直腸癌、食管癌和卵巢腫瘤樣本的亞組中觀察到定位於細胞膜的升高的ENTPD2表現。在匹配的正常組織切片中未檢測到或檢測到非常低的ENTPD2表現背景水平(圖2)。

實例2：結合人ENTPD2的人源化單株抗體的產生

人、大鼠、小鼠和食蟹猴ENTPD2的表現構建體的產生

編碼來自人、食蟹猴(cyno)、大鼠和小鼠的全長ENTPD2以及來自人和小鼠的ENTPD1(CD39)的核苷酸序列基於來自GenBank®或UniProtKB數據庫的胺基酸序列合成(參見表9)。將所有合成的DNA片段選殖到合適的表現運載體中。

來自HEK培養基的重組小鼠ENTPD1以及小鼠和大鼠ENTPD2的表現和純化

如下產生重組單體小鼠或大鼠ENTPD2以及小鼠ENTPD1：將FreeStyle^TM 293-F細胞(賽默飛世爾科技公司)在Gibco^TM FreeStyle^TM 293表現介質中培養，並用含有CMV啟動子、小鼠IgK訊息肽、小鼠或大鼠ENTPD2(細胞外結構域)的殘基29-462、或小鼠ENTPD1的殘基38-478、以及聚組胺酸(His6)標籤(SEQ ID NO：639)的質體暫態轉染。轉染後4天，將來自1L培養物的細胞以2600×g沈澱10分鐘，並通過0.22μm過濾器過濾使上清液澄清。向上清液中補充20mM Tris-HCl pH 8.0和20mM咪唑，並載入到用6mL Ni-NTA瓊脂糖(Qiagen)預包裝的柱上。將該柱用10倍柱體積的洗滌緩衝液[20mM Tris(pH 8.0)、150mM NaCl、20mM咪唑]洗滌，並用5倍柱體積的洗脫緩衝液[20mM Tris(pH 8.0)、150mM NaCl、250mM咪唑]洗脫。使用PD-10脫鹽柱(GE醫療集團)將蛋白質緩衝液交換到TBS pH 7.4中並冷凍儲存。

來自昆蟲細胞的人ENTPD1以及人和食蟹猴ENTPD2的表現和純化

將Bac-to-Bac^® 桿狀病毒表現系統(賽默飛世爾科技公司(Thermo Fisher Scientific))用於表現重組人ENTPD1以及人和食蟹猴ENTPD2蛋白。將人ENTPD1的殘基38-478或人或食蟹猴ENTPD2的殘基29-462選殖到具有GP67訊息肽和C-末端Avi-His₆ 標籤(「His₆ 」揭露為SEQ ID NO：639)的表現運載體pFastBac^TM 1(賽默飛世爾科技公司)中。將該等選殖的運載體轉化到DH10Bac^TM 大腸桿菌(Escherichia coli )(賽默飛世爾科技公司)感受態細胞中以製備重組桿粒。然後使用PureLink^® HiPure質體微量製備套盒(賽默飛世爾科技公司)提取重組桿粒，並使用FuGene^® HD(普洛麥格公司(Promega))轉染到Sf9(草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda))細胞中以產生重組桿狀病毒(BV)。在一輪擴增後，將所得BV用於在1L懸浮培養液中以2×10⁶ 個細胞/ml的密度且按感染複數(MOI)為10感染High Five^TM (粉紋夜蛾(Trichoplusia ni ))細胞(賽默飛世爾科技公司)。在感染後72小時，藉由以2600×g 離心10分鐘將細胞沈澱，並收集含有分泌的、糖基化的重組蛋白的介質。然後向上清液中補充50mM Tris pH 8.0、1mM NiCl₂ 、5mM CaCl₂ 並然後以2600×g 離心30分鐘。將上清液通過0.22μm過濾器進行過濾，並載入到包裝有6mL Ni-NTA瓊脂糖(凱傑公司(Qiagen))的柱上。用10倍柱體積的上述洗滌緩衝液洗滌柱，並用洗脫緩衝液(也如上所述)洗脫。使用PD-10柱(GE醫療集團)將蛋白質緩衝液交換到TBS(20mM Tris pH 7.4，150mM NaCl)中並冷凍儲存。

穩定表現ENTPD1或ENTPD2的細胞系的產生

使用逆轉錄病毒轉導產生穩定的ENTPD1或ENTPD2表現細胞系。根據製造商的建議，為產生逆轉錄病毒，使用FuGene^® 6轉染試劑(普洛麥格公司，目錄號E2692)，將293T細胞與表現ENTPD1或ENTPD2的逆轉錄病毒表現運載體和pCL-Eco或pCL-10A1包裝運載體(羅福斯生物製劑公司(Novus Biologicals)，目錄號NBP2-29540或NBP2-2952)共轉染。將細胞在37℃且在5% CO₂ 下保持在濕潤的培養箱中，並在轉染後48小時收集含病毒的細胞上清液。使NIH/3T3和300.19細胞(ATCC^® )在6孔板中生長至接近匯合。從細胞中去除生長介質，並在8ug聚凝胺/ml(EMD密理博公司(EMD Millipore)，目錄號TR-1003-G)的存在下添加病毒上清液。在37℃下孵育3-6小時後，添加新鮮的介質。然後在合適的選擇條件下培養細胞以產生穩定的ENTPD1或ENTPD2表現細胞系。

病毒樣顆粒(VLP)的產生、表現和純化

將300.19細胞保持在具有10% FBS的DMEM中。為製備VLP，將細胞交換到具有4% FBS的DMEM中，然後與人ENTPD2表現質體和逆轉錄病毒Gag表現質體按μg比率為3：2共轉染。轉染後48小時，收集細胞上清液，並在臺式離心機中藉由以2500×g 離心5分鐘使上清液澄清，並保持在冰上。在Sorvall^TM RC 6 Plus超速離心機中的Beckman Coulter^® SW 32 Ti轉子中，藉由以100,000×g 超速離心通過在Ultra-Clear^TM 38.5ml離心管(Beckman Coulter^® ，目錄號344058)中的20%蔗糖墊將VLP進行純化。將所得沈澱重懸於300μl冷的無菌PBS中，並使用Pierce BCA測定(賽默飛世爾科技公司，目錄號23225)進行定量。

雜交瘤的產生

使用要求在多個位點處的重複免疫(RIMMS)的步驟，將Bcl-2轉基因小鼠[C57BL/6-Tgn(bcl-2)22 WEHI株]用抗原進行免疫(K.E.Kilpatrick等人，Hybridoma[雜交瘤]1997)。簡言之，在鄰近外周淋巴結(PLN)的8個特定位點處向小鼠注射22.5μg的His₆ -加標籤的人ENTPD2 29-462 ECD蛋白質(「His6」揭露為SEQ ID NO：639)。該過程在20天期間內重複8次。在第18天，收集測試出血並藉由FACS和ELISA分析血清抗體滴定度。在一些情況下，將BALB/c小鼠用以下項進行免疫：在弗氏完全，西格瑪佐劑系統(Sigma Adjuvant System^® )、或弗氏不完全佐劑中的50μg的His₆ -加標籤的人ENTPD2 29-462 ECD(「His6」揭露為SEQ ID NO：639)蛋白質；PBS中50μg的人ENTPD2表現VLP；或PBS中穩定過表現人ENTPD2(SEQ ID NO：291)的5 x 10e6 300.19細胞。間隔兩週對動物皮下或腹膜內注射兩次，隨後在大約兩週後用PBS中的50μg的人ENTPD2表現VLP或His₆ -加標籤的人ENTPD2 29-462 ECD蛋白質(「His6」揭露為SEQ ID NO：639)進行靜脈內加強。第二次免疫後十天，收集測試出血並藉由FACS和ELISA分析血清抗體滴定度。從高滴定度小鼠中取出脾和彙集的外周淋巴結(PLN)。為收穫淋巴細胞，將脾和PLN在PBS中洗滌一次，並然後通過70微米篩網(Falcon#352350)解離。將所得淋巴細胞在Cytofusion^® 介質(BTXpress Cytofusion^® 電穿孔介質，目錄號47001)中融合之前再洗滌2次。

對於融合，將F0骨髓瘤細胞與淋巴細胞按1：4比率混合。將細胞混合物離心，懸浮在Cytofusion^® 介質中，並隨後添加到電熔室(哈佛儀器同軸腔室9 ML第470020部分)中。按照製造商的說明書，使用CEEF-50B雜交免疫(Hybrimune)/雜交瘤系統(細胞波科學公司(Cyto Pulse Sciences,Inc))進行電融合。允許融合的細胞在室中恢復5分鐘，在不含次黃嘌呤-胺蝶呤-胸苷(HAT)[DMEM+20% FBS、1%青黴素-鏈黴素-麩醯胺酸(PSG)、1X非必需胺基酸(NEAA)、0.5 X雜交瘤融合和選殖補充(羅氏公司(Roche)；HFCS))的介質中按1：10稀釋，並置於37℃和5% CO₂ 下持續一小時。接下來，添加4X HAT介質(DMEM+20% FBS、1% PSG、1X NEAA、4X HAT、0.5X HFCS)以使HAT濃度達到1 X，並將密度調節至66,000個細胞/ml。將細胞以60ul/孔鋪板於384孔板中。

FACS篩選

融合後10天，使用流動式細胞測量術篩選雜交瘤平板中ENTPD2特異性抗體的存在，以確認使用以下三種細胞系，候選抗體與細胞表面表現的人ENTPD2的特異性結合：親本NIH/3T3細胞、穩定過表現人ENTPD2的NIH/3T3細胞、和RKO細胞(ATCC^® )，其表現內源人ENTPD2。用PBS徹底沖洗細胞，用Accutase(密理博公司#SCR005)處理以將它們從生長板中提起，並重懸於冷的PBS中。根據製造商的說明書，將細胞生物素化並用的螢光染料(FluoReporter^TM 細胞表面生物素化套盒，賽默飛世爾科技公司目錄號F-20650；PE-Cy7鏈黴親和素，賽默飛世爾科技公司目錄號SA1012)標記。將細胞以大約1 X 10⁶ 個細胞/ml重懸浮與FACS緩衝液(具有2% FBS+0.1% NaN₃ 的PBS)中。在384孔板中，將20μL的雜交瘤上清液預接種並添加20μL的細胞懸浮液。將細胞在4℃下孵育1小時，用了冷的FACS緩衝液洗滌兩次，並重懸浮於含有按1：400稀釋(別藻藍素軛合的F(ab’)₂ 山羊抗小鼠IgG，Fcγ特異性的；傑克遜免疫研究實驗室公司，目錄號115-136-071)的二級抗體的20μL的FACS緩衝液中。在4℃下另外孵育45分鐘後，將細胞用FACS緩衝液洗滌兩次並重懸浮於具有2μg/ml碘化丙啶(西格瑪奧德里奇公司(Sigma Aldrich)目錄號P4864)的20μL的FACS緩衝液中。使用FlowJo^TM 軟體在活的單一細胞上計算幾何平均螢光強度。

在二次流式細胞儀篩選中確認來自該基於原代細胞的流動式細胞測量術篩選的命中。將表現與NIH/3T3-hENTPD2和RKO細胞結合的抗體的雜交瘤擴增到雜交瘤無血清介質中的45mL蛋白質生產培養物中，該介質具有在CellStar^® Autotlasks^TM (Greiner Bio-One)中的HT介質補充物(50×)Hybri-Max^TM (西格瑪公司(Sigma)，目錄號H0137)。將培養物在37℃且在5% CO₂ 下在振盪培養箱中保持約8天，並然後沈澱細胞，並藉由蛋白G樹脂純化獲得上清液。使用NAP-10^TM 柱(GE醫療集團)隨後將蛋白質緩衝液交換到PBS中。

重組抗體產生

針對由ENTPD2抑制ATP水解，在基於細胞的測定中篩選雜交瘤衍生的mAb。在該測定中鑒定出兩種先導抑制性mAb：mAb17和mAb16。

製備由鼠可變區和人恒定區組成的嵌合抗體。獲得了雜交瘤的可變區(VH和VL)DNA序列，用於選殖和抗體優化(人源化、去除潛在的翻譯後修飾等)。使用標準方法，藉由5’RACE從獲自每種所選雜交瘤細胞系的RNA擴增來自鼠單株抗體的可變區DNA。分別針對mAb17和mAb16，將每種鼠可變重鏈/輕鏈的多肽序列示出在表1中。針對每種雜交瘤的對應可變重鏈/輕鏈核苷酸序列示出在SEQ ID NO：234/SEQ ID NO：238和SEQ ID NO：226/SEQ ID NO：230中。為製備嵌合抗體，將編碼藉由5’RACE-PCR擴增的雜交瘤VL和VH的DNA序列選殖到含有相應人野生型重鏈和人輕鏈恒定區序列(IgG1，κ)的表現運載體中。使用QIAprep Spin微量製備套盒(凱傑公司，目錄號27106)將該等運載體小量製備，並使用Amaxa^TM 4D-Nucleofector^TM (龍沙公司(Lonza))核轉染到專有CHO細胞系中。將轉染的細胞置於選擇性培養基中以穩定庫產生，並將所得庫進行14天分批補料蛋白質生產過程。藉由以3000×g 離心15分鐘使含蛋白質的細胞上清液澄清並通過0.22μm過濾器過濾。使用MabSelect SuRe^TM 樹脂(GE醫療集團)在ÄKTA^TM Pure或ÄKTA^TM 純化器上純化蛋白質，並且使用Pierce^TM IgG洗脫緩衝液(賽默飛世爾科技公司目錄號21004)進行洗脫，然後藉由透析或使用HiPrep脫鹽柱(GE醫療集團)緩衝液交換到PBS中。在藉由分析性尺寸排阻層析(AnSEC)，使用Superdex^® 200 Increase所得蛋白質為<95%二聚體的情況下，使用HiLoad^® Superdex^® 200柱(GE醫療集團)，用PBS作為流動相使蛋白質進行製備型SEC。

人源化

還使用內部軟體程式設計可變區構建體用於人源化和序列優化(例如，去除潛在的翻譯後修飾位點)。在游標帶(Vemier Zones)中選擇具有回復突變的每個小鼠VH和VL的一個或多個人框架(Foote和Winter 1992,Jouraal of Molecular Biology[分子生物學雜誌]；224(2)：487-499)以保持親和力和所需的功能活性。使用基於三維晶體結構的設計還對mAb17和mAb16人源化。簡言之，將晶體結構載入到分子操作環境(MOE^TM )(化學計算組ULC)中，並使用具有Amber10EHT力場的標準結構製備方法製備。然後使用稱為「cdr_grafter SVL」的定製腳本在結構上將Fab與人源化Fab的內部文庫進行比較。該腳本在內部數據庫中將輸入的鼠Fab結構與人Fab結構在結構上進行比較，並列出了關於在鼠(供體)和人(受體)Fab之間的結構相似性的詳細參數。該等參數包括框架和莖區RMSD和CDR長度比較。基於該等參數，選擇四個候選受體Fab用於從mAb17中移植供體CDR，並選擇三個候選受體Fab用於移植來自mAb16的供體CDR。mAb17的人源化導致mAb1、mAb2、mAb3、和mAb7的產生。mAb16的人源化和優化導致mAb4、mAb5、和mAb6的產生。

編碼來自兩種人源化策略的設計的人源化VL和VH結構域的DNA序列從GeneArt(生命技術公司(Life Technologies Inc.)，雷根斯堡(Regensburg)，德國)訂購，其中針對灰倉鼠(Cricetulus griseus )進行密碼子優化。使用標準方法將該等可變區亞選殖到含有相應人野生型重鏈和人輕鏈恒定區序列(IgG1，κ)的表現載體中。

藉由將編碼重鏈和輕鏈的運載體共轉染到FreeStyle^TM 293-F細胞(賽默飛世爾科技公司(Thermo Fisher Scientific))中來產生重組抗體。在37℃和5% CO₂ 下將轉染的細胞在容納於振盪培養箱中的CellStar® Autoflasks^TM (Greiner Bio-One)中的Gibco® FreeStyle^TM 293表現介質(賽默飛世爾科技公司目錄號12338018)裡保持大約5天，並然後將細胞沈澱，並經MabSelect SuRe^TM 樹脂(GE醫療集團)藉由純化獲得含蛋白質的上清液。使用NAP-10^TM 柱(GE醫療集團)隨後將蛋白質緩衝液交換到PBS中。

實例3. 使用噬菌體展示產生人抗人ENTPD2抗體及其Fab片段

使用MorphoSys HuCAL PLATINUM^® 噬菌體展示技術產生特異性結合人ENTPD2(SEQ ID NO：291)的Fab。噬菌粒文庫基於HuCAL^® 概念(Knappik等人，2000,J Mol Biol[分子生物學雜誌]296 ,57-86)採用CysDisplayTM技術在噬菌體表面(Lohning,WO 2001/05950)上展示Fab。

進行四種類型的淘選：針對直接包被的重組人ENTPD2(hENTPD2)的固相淘選、針對ENTPD2的溶液淘選、全細胞淘選和親和力成熟淘選。

基於珠的淘選

在基於珠的淘選之前，將抗原固定在磁性羧酸包被的珠上(Dynabeads^TM M-270羧酸，賽默飛世爾科技公司目錄號14306D)。每個噬菌體庫，1 x 10⁷ 個抗原包被的珠被封閉1x化學阻斷劑(ChemiBlocker)(EMD密理博公司)。同時，用50%人血清/0.33x化學阻斷劑/0.05% Tween20阻斷適量的噬菌體抗體。為防止選擇珠結合的噬菌體，使用具有固定的無關蛋白質的珠預孵育阻斷的噬菌體顆粒。將阻斷的抗原包被的珠加入到預吸附和阻斷的噬菌體顆粒中，並使噬菌體-抗體與抗原包被的珠結合。藉由磁分離收集與抗原包被的珠結合的噬菌體顆粒。若干洗滌步驟去除了非特異性結合的噬菌體。最後，從抗原包被的珠上洗脫特異性結合的噬菌體。將洗脫液轉移到14ml大腸桿菌TG1培養物中並孵育用於噬菌體感染。

離心後，將感染的細菌沈澱並重懸於2xYT介質中，鋪板於LB/氯黴素瓊脂平板上並孵育過夜。將菌落從平板上刮下並用於噬菌體拯救、所選選殖的多株擴增和噬菌體生產。用經純化的噬菌體開始下一輪淘選。使用與第一輪相同的方案進行第二輪和第三輪固相淘選，除了使用較少的抗原和更嚴格的洗滌條件。

溶液淘選

阻斷適量的鏈黴親和素珠(Dynabeads^TM M-280鏈黴親和素，賽默飛世爾科技公司目錄號11206D)。同時，阻斷適量的噬菌體-抗體。為了去除鏈黴親和素或珠結合噬菌體，使用用生物素化的無關蛋白包被的經阻斷的鏈黴親和素珠進行經阻斷的噬菌體顆粒的預吸附。因此，將生物素化的ENTPD2添加到預吸附的和經阻斷的噬菌體顆粒中，並允許噬菌體-抗體在溶液中結合抗原。使用阻斷鏈黴親和素珠捕獲噬菌體-抗原複合物，並且用磁性分離器收集與鏈黴親和素珠結合的噬菌體顆粒。藉由若干洗滌步驟將非特異性結合的噬菌體洗掉。從鏈黴親和素珠中洗脫特異性結合的噬菌體。將洗脫液轉移到14ml大腸桿菌TG1培養物中並孵育用於噬菌體感染。根據基於珠的淘選方案進行隨後的噬菌體感染和噬菌體產生，並開始下一輪淘選。除了應用具有增加嚴格性的洗滌條件之外，使用與第一輪淘選相同的方案進行第二輪和第三輪基於珠的溶液淘選。

全細胞淘選

針對每次淘選，將適量的噬菌體-抗體阻斷。同時，針對每個噬菌體庫，阻斷表現ENTPD2的適量的靶細胞和不表現抗原ENTPD2的適量的吸附細胞。將阻斷的靶細胞旋轉沈降，重懸於預阻斷的噬菌體顆粒中，並允許噬菌體-抗體與細胞上呈遞的抗原結合。將噬菌體-細胞複合物洗滌若干次。從靶細胞中洗脫特異性結合的噬菌體。離心後，將上清液(洗脫液)應用於抗原陰性吸附細胞，以去除與除靶抗原以外的細胞表面分子結合的噬菌體(吸附後)。將最終的上清液轉移到大腸桿菌TG1培養物中用於噬菌體感染。使用與第一輪淘選相同的方案進行第二輪和第三輪全細胞淘選。

親和力成熟淘選

HuCAL PLATINUM^® 成熟文庫的產生

選擇四種Fab候選物用於親和力成熟。為增加所選抗體的親和力和生物活性，使用三核苷酸定向誘變藉由盒誘變優化CDR-L3和CDR-H2區，同時框架區保持恒定(Virnekäs等人，1994,Nucleic Acids Research [核酸研究]22(25)，第5600-5607頁)。針對CDR-L3優化，藉由限制酶切消化將編碼CDR-L3、框架4以及輕鏈恒定區的約400bp DNA片段才編碼親本抗體的序列中去除，並且被編碼多樣化的CDR-L3區連同框架4和恒定結構域的DNA片段儲庫替換。在第二個文庫集中，CDR-H2編碼序列係多樣化的，而連接框架區保持恒定。為減少親本非多樣化序列的背景，藉由限制酶切消化和連接，將含有親本CDR-H2和框架3序列的約150bp DNA片段替換為約590bp的虛擬序列，然後還藉由限制酶切消化和連接插入多樣化的CDR-H2盒(包括框架3)。連接混合物的電穿孔在MC1061F' 細胞中產生大約>5 x 10⁶ 個獨立的菌落中10⁸ 至10⁹ 。如前所述進行文庫的擴增(Rauchenberger等人，2003,J biol chem [生物化學雜誌]278(40)，第38194-38205頁)。針對品質控制，隨機挑選每個文庫中大約10-20個單一菌落並定序。

為選擇親和力改善的候選物，將衍生自成熟文庫的噬菌體進行2至3輪成熟淘選。藉由降低每輪淘選中的抗原濃度來提高淘選的嚴格性(Low等人，1996,J.Mol.Biol. [分子生物學雜誌]260，第359-368頁)。除抗原減少外，還進行瞭解離速率選擇(Hawkins等人，1992,J.Mol.Biol. [分子生物學雜誌]226(3)，第889-896頁)。該等策略與延長的洗滌步驟相結合。

表現

針對大腸桿菌從展示運載體亞選殖到Fab-表現運載體中

為促進可溶性Fab的快速表現，將所選擇的HuCAL PLATINUM^® 噬菌體的Fab編碼插入物從pMORPH^® 30展示運載體亞選殖到pMORPH^® x11表現運載體pMORPH^® x11_FH中。大腸桿菌TG1 F-單一殖株表現轉化後，並且如前所述進行含有HuCAL^® -Fab片段的周質提取物的製備(Rauchenberger等人，2003,J Biol Chem[生物化學雜誌]278：38194-38205)。

His加標籤的Fab片段的微量生產

在大腸桿菌TG1 F細胞中由細菌表現運載體編碼的Fab片段的表現在50mL Falcon管中使用25mL的2xYT介質進行，該介質補充有0.1%葡萄糖、34μg/mL氯黴素和1mM IPTG(異丙基-ß-D-硫代半乳糖苷)。將培養物在30℃下振盪18h。收穫細胞，並使用溶菌酶和Bug Buster^® 蛋白質提取試劑(默克公司，德國)的組合進行破壞。藉由IMAC(GE醫療集團，德國)分離His6加標籤的Fab片段(「His6」揭露為SEQ ID NO：639)並使用咪唑進行洗脫。使用「PD MultiTrap^TM G-25」平板(GE醫療集團，德國)進行緩衝液交換到1X Dulbecco的PBS(pH 7.2)中。藉由UV-分光光度法測定蛋白質濃度。在變性的非還原性15% SDS-PAGE中分析代表性所選樣本的純度。

亞選殖到IgG和FabCys表現運載體中並在HKB11細胞中表現

針對HKB11細胞中的全長IgG表現，將所選候選物或候選庫選殖到pMORPH^® 4_IgG1f運載體中。按兩步法進行亞選殖，以便方便且有效地將大量序列特異性Fab殖株轉化為IgG形式。

用編碼IgG的重鏈和輕鏈的哺乳動物表現運載體DNA轉染真核HKB11細胞。在轉染後第3或6天收穫細胞培養物上清液，並進行標準蛋白A親和層析(MabSelect^TM SuRe^TM ，GE醫療集團)。除非另有說明，將緩衝液交換進行到1x Dulbcecco的PBS(pH 7.2，英傑公司(Invitrogen))中，並將樣本無菌過濾(0.2μm孔徑)。

藉由UV-分光光度法測定蛋白質濃度，並使用CE-SDS(LabChip GXII，珀金埃爾默公司(Perkin Elmer)，美國)在變性、還原和非還原條件下分析IgG的純度。進行HP-SEC以分析處於天然狀態的IgG製劑。

抗體匯總

表1列出了衍生自鼠雜交瘤的抗人ENTPD2抗體的序列資訊。

實例4. 抗人ENTPD2抗體的生物化學特徵

在以下測定中評估抗人ENTPD2抗體。

FACS篩選：藉由流動式細胞測量術評估候選抗體與內源表現的ENTPD2的特異性結合。用1xPBS徹底沖洗細胞，並用Accutase(密理博公司目錄號SCR005)處理以從生長板上提起，並按大約1 x 10⁵ 個細胞/90μL重懸浮於1x FACS緩衝液(PBS中2% FBS+0.1% NaN3)中。在96孔U形底平板中，將FACS緩衝液中10μL的10x抗體溶液預接種並添加90μL的細胞懸浮液。將細胞在4℃下孵育30分鐘，用冷的PBS洗滌，並重懸浮於100μL的1：500二級抗體1x FACS緩衝液(別藻藍素軛合的F(ab’)2山羊抗人IgG,Fcγ特異性；傑克遜免疫研究公司，目錄號109-136-098)中。在4℃下另外孵育15分鐘後，將細胞用PBS洗滌兩次並重懸浮於具有4μg/mL碘化丙啶(生命技術公司(Life Technologies)，目錄號P3566)的100μL的1xFACS緩衝液中。使用FlowJo軟體在活的單一細胞上計算幾何平均螢光強度。

直接包被的抗原上的ELISA篩選：將Maxisorp^TM 384孔板(Thermo Nunc)用稀釋於PBS中的2μg/ml的重組ENTPD2包被。在室溫下，在PBS中用2% BSA(牛血清白蛋白)阻斷1小時，用TBST(TBS中的0.05% Tween 20，西格瑪公司目錄號T9039)將平板洗滌3x，以連續稀釋添加TBST中的第一抗體和2% BSA，並在室溫下孵育1小時。將平板再次洗滌，並藉由與軛合辣根過氧化物酶(HRP；傑克森免疫研究實驗室公司，目錄號115-035-098，在1 x TBST+2% BSA中按1：5000稀釋)的抗hFc γ在室溫下孵育1小時來檢測未結合的抗體，隨後用TBST洗滌並之後添加SureBlue過氧化物酶底物(KPL，目錄號#52-00-03)底物。15分鐘後，記錄在650nM處的吸光度並在GraphPad Prism6中分析。

Biacore篩選：在Biacore T200或T100與T200靈敏度升級儀器(Biacore，GE醫療集團)上使用表面等離振子共振(SPR)藉由測定動力學速率常數來測量親和力。在與表面偶聯的小鼠抗人IgG Fc抗體(賽默飛世爾科技公司目錄號05-4200)胺製備的CM5感測器晶片(Biacore，GE醫療集團)上捕獲抗體。根據抗體的親和力，在從0.78nM至500nM的濃度範圍內在25℃下檢測人和食蟹猴(cyno)ENTPD2 ECD的結合。允許ENTPD2分析物聯繫180秒並解離長達1800秒，這取決於抗體在30μL/min流速下的解離速率。運行緩衝液係PBS pH 7.2(由Corning 10X儲備液製備，目錄號46-013-CM)+0.05% Tween 20。藉由30秒注射3M或4M的MgCl2完成再生以從表面去除所有捕獲的抗體和剩餘複合物，之後捕獲新鮮抗體。使用Biacore T200評估軟體版本1.0分析原始數據並擬合為1：1結合模型，其中所有參數設置為全域擬合(除了RI被設置為局部擬合)。

確認了mAb1-mAb10的抗體特異性。所有殖株顯示與人ENTPD2的顯著nM與亞nM結合。抗體mAb8、mAb9、和mAb10顯示出對小鼠ENTPD2的弱親和力。所選的抗體均不與大鼠ENTPD2結合。參見表10和表11。

交叉反應性使用逆轉錄病毒轉導方法產生表現NIH/3T3細胞的人ENTPD1(NP_001767)。轉導後72小時，將工程化的細胞用抗人CD39/ENTPD1 APC軛合的抗體(R & D系統公司，明尼阿波里斯市，明尼蘇達州)染色，並且藉由螢光激活細胞分選將表現人ENTPD1的活細胞與其餘群體分離。藉由FACS用上述抗人CD39/ENTPD1 APC軛合的抗體(1：100)定期重新確認ENTPD1的穩定表現。

藉由Taqman將H520細胞鑒定為具有ENTPD3(Ct 25)和ENTPD8(Ct 26)表現的癌細胞系，並用於選擇性篩選。

用任何測試的抗人ENTPD2抗體均未觀察到與任何對照細胞系的顯著結合(表12)。

使用Octet Red96系統的表位分級(Epitope binning)

使用測量生物膜層干涉技術(BLI)的Octet Red96系統(ForteBio公司，美國)進行抗人ENTPD2抗體的表位分級。根據製造商的建議(Avidity， LLC，美國目錄號BirA500)，藉由AviTag^TM ，利用BirA生物素連接酶將人ENTPD2-Avi-His₆ 蛋白質(「His6」揭露為SEQ ID NO：639)生物素化。將生物素化的免疫原支架按0.5μg/mL載入到預平衡的鏈黴親和素感測器(ForteBio公司，美國)上。然後將感測器轉移到含有在1X動力學緩衝液(ForteBio公司，美國)中的100nM抗體A的溶液裡。將感測器在1X動力學緩衝液中簡單洗滌並轉移至含有100nM競爭者抗體的第二溶液中。使用Octet Red96系統分析軟體(版本9.0，ForteBio公司，美國)根據原始數據測定結合動力學。在所有成對組合中測試抗體，作為與hENTPD2結合的第一(阻斷)抗體和作為第二(競爭者)抗體的抗體。在該測定中，所有抗體均顯示出顯著的交叉阻斷，表明mAb1-10可具有相似的表位。

實例5. 抗人ENTPD2 FAb22的晶體學和表位作圖

在該實例中，抗人ENTPD2 FAb22與人ENTPD2(Y350A突變體)胞外結構域複合結晶，並測定相應的結構。基於X射線數據分析抗人ENTPD2 FAb22與人ENTPD2的結合，提供了抗原參與的分子細節和對Fab互補位和對所揭示的抗原表位的見解。

材料與方法

Fab片段的表現和純化

將編碼經鑒定的VH和VL結構域的DNA序列亞選殖到含有相應人野生型CH1和人κ輕鏈恒定區序列的哺乳動物表現運載體中。藉由使用轉染劑將運載體暫態共轉染到細胞中來產生重組人Fab。轉染後，將細胞培養5至6天，並進行抗體純化。藉由離心(2600 xg ，持續10分鐘)沈澱細胞，並通過0.22微 M過濾器進行過濾使含有抗體的細胞上清液澄清。藉由蛋白質G(GE醫療生命科學公司集團)柱純化Fab，並使用酸性洗脫緩衝液條件進行洗脫。

人ENTPD2和抗人ENTPD2 FAb22複合物的製備

為製備ENTPD2-FAb22複合物，將1.3倍莫耳過量的FAb22與hENTPD2 Y350A在具有150mM NaCl的20mM Tris pH 7.5中混合以給出終濃度為5.65mg/mL。將複合物樣本在冰上孵育2小時，並進行結晶篩選。

結晶和X射線數據收集

藉由沈滴式蒸氣擴散，使晶體在96孔板(Greiner Bio-One Crystalquick Plus plates)中生長。詳細地，將0.2μl蛋白質儲備液與0.2μl儲庫溶液混合，並在20℃下將滴劑與50μl相同的儲庫溶液平衡。使用Phoenix機器人系統(阿特羅賓斯儀器公司(Art Robbins Instruments))建立實驗，並儲存在內部定製工程化晶體成像儀和門架(諾華GNF內部系統)中。

對於X射線數據收集，將單晶直接安裝在低溫回路中並快速冷卻成液氮。使用0.9765Å X射線輻射，用Quantum Q315 CCD檢測器在高級光源(Advanced Light Source)，BL5.03上收集X射線數據。180個1.0°振盪圖像各自按晶體-檢測器距離為350mm被記錄，並用HKL2000(Z.Otwinowski和W.Minor,「Processing of X-ray Diffraction Data Collected in Oscillation Mode[在振盪模式中收集的X射線衍射數據的處理]」，Methods in Enzymology[酶學方法]，第276卷：Macromolecular Crystallography[大分子晶體學]，A部分，第307-326頁，1997,C.W.Carter,Jr.和R.M.Sweet，編輯，學術出版社(紐約))處理。

結構確定和分析

使用先前在內部確定的人ENTPD2的精修結構和抗RSV Fab B21m(PDB代碼3QRG)的座標作為獨立搜索模型，藉由用Phaser程式(McCoy等人，2007,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]40：658-674)的分子置換來確定FAb22-ENTPD2複合物的結構。使用模型構建的迭代循環，隨後用以下程式自動結晶細化來精修結構：Coot 0.8.0(結晶目標定向的工具(Crystallographic Object-Oriented Toolkit)；Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和Autobuster 2.11.5(Bricogne等人，2011,BUSTER版本2.11.2.劍橋，英國：全球定相公司(Global Phasing Ltd.))。

使用Coot(Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和PyMOL(分子圖形系統；DeLano Scientific公司：帕羅奧圖，加利福尼亞州)程式進行晶體結構的目視檢查。使用Coot和PROCHECK v3.3(Laskowski等人，1992,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]；26：283-291)程式評估最終精修模型的品質。藉由CCP4程式套件(協同計算計畫(Collaborative Computational Project)，第4期，1994)的程式AREAIMOL鑒定在抗人ENTPD2 FAb22結合後變得溶劑難以接近的人ENTPD2的殘基。使用4.0Å的截止距離定義分子間接觸，並用CCP4程式NCONT鑒定。

結果

與人ENTPD2複合的抗hENTPD2 FAb22的晶體結構

在20℃下，藉由沈滴式蒸氣擴散之方法，與人ENTPD2 Y350A突變體複合的抗hENTPD2 FAb22在96孔板中結晶。晶體在0.1M HEPES pH 7.5、20%聚乙二醇3350、0.2M氯化鎂中生長。在大約6週後出現晶體並在幾天內生長至完整尺寸。

FAb22-ENTPD2複合物的晶體在單斜晶系空間群C2中，其中每個不對稱單元具有一個複合物。針對複合物收集完整的衍射數據集至2.75埃解析度。

使用先前確定的人ENTPD2座標和來自PDB代碼3QRG的Fab座標進行藉由分子置換來進行結構確定。用AutoBuster進行精修可以獲得良好的精修統計數據和整體幾何結構。兩個FAb22殘基(Ala55L和Tyr33H)和四個ENTPD2殘基(Gly120、Thr122、Tyr229、和Ala430)係FAb22-ENTPD2複合物結構中的拉馬錢德蘭異常值。除Fab殘基(Ala55L和Tyr33H)之外的ENTPD2殘基(Gly120和Thr122)在電子密度方面限定明確，並可能是真正的幾何異常值。值得注意的是，如下所述，Tyr33H係參與ENTPD2結合的CDR殘基。ENTPD2殘基(Tyr229和Ala430)在電子密度上鬆散地建模。

圖3A提供了抗人ENTPD2 FAb22重鏈和輕鏈的胺基酸序列，其中將CDR加底線(如由卡巴特，1991,Sequences of proteins of immunological interest[免疫目的蛋白的序列]，國家衛生研究院出版(NIH Publication)第91-3242期的定義)，並且位於Fab-抗原介面的殘基用*標記。圖6描繪了抗人ENTPD2 FAb22/ENTPD2 Y350A複合物三維結構的整體視圖。

圖4A提供了該實例中使用的重組人ENTPD2的胺基酸序列(SEQ ID NO：291)。人ENTPD2的可溶性細胞外結構域跨越殘基29-462。Y350A的工程化突變存在於構建體中並以灰色斜體突出顯示。在此使用的構建體利用N-末端GP67分泌訊息肽(前38個殘基)和C末端6x組胺酸標籤(SEQ ID NO：639)。Asn64、Asn129、Asn294、Asn378、和Asn443係預測的N-連接糖基化位點，其中僅在以灰色斜體中突出顯示在晶體結構中觀察到糖基化的那些。二級結構元件顯示在胺基酸序列下方，其中條形代表α-螺旋，箭頭代表β-股。沒有標記二級結構元件的殘基表示非結構化環和回轉區段。

人ENTPD2胺基酸序列與齧齒動物物種和其他哺乳動物具有高度序列同源性，並且該結構具有與對大鼠ENTPD2描述的幾乎相同的整體折疊(即，PDB代碼3CJA,Zebisch,M.,Strater,N.(2008)Proc.Natl.Acad.Sci.Usa[美國國家科學院院刊]105：6882-6887)。針對Cys75/Cys99、Cys242/Cys284、Cys265/Cys310、Cys323/Cys328和Cys377/Cys399觀察到不變和保守的二硫鍵對。人和大鼠ENTPD2結構之間388個C-α碳的RMSD(均方根偏差)約為0.365Å。

FAb22/ENTPD2複合物的最終模型含有ENTPD2的殘基37-448。ATP水解的活性位點位於兩個亞結構域(亞結構域1：Pro36-Ser161和Lys427-Phe461；亞結構域2：Gly162-Gln426)之間。從最終模型中省略的ENTPD2殘基包括N-末端的殘基29-36和對應於連接股β2和β3的環殘基的60-65，對應於膜相互作用環(MIL)的殘基179-193，以及C-末端Ile448以外的殘基。除末端半胱胺酸(Cys228重鏈/Cys218輕鏈)外，所有重鏈和輕鏈Fab殘基都包括在最終精製模型中。

FAb22主要藉由涉及參與重鏈和輕鏈可變結構域的所有6個CDR的相互作用而預測的膜遠端葉的接合來結合ENTPD2抗原。沒有FAb22 CDR殘基似乎明顯滲透到ENTPD2活性位點裂縫中以影響ATP底物結合。重鏈CDR3和CDR2殘基隔絕殘基，包括和側翼有由股β10/β11組成的反平行2股β-折疊。末端重鏈CDR3殘基與螺旋α14的N-末端殘基以及α8和α13螺旋形成額外的結合接觸。與ENTPD2的輕鏈可變結構域結合相互作用主要涉及CDR1和CDR3殘基，該等殘基主要結合螺旋α14的N-末端。FAb22/ENTPD2複合物的形成隱藏了總結合溶劑可接觸表面總量的約16700 Å2，其中重和輕Fab鏈的貢獻幾乎相等。表13中列出了在4.0Å距離截止值內計算的直接分子間接觸中涉及的表位和互補位殘基，並在圖3A和4A中標記。總共25個Fab殘基和26個ENTPD2殘基參與直接分子間接觸，其中重鏈CDR比輕鏈CDR產生更多結合殘基。在該等Fab互補位殘基中，CDR酪胺酸與所涉及的14個CDR Tyr殘基中的10個殘基貢獻大量的ENTPD2接觸。分子間接觸中的重鏈CDR殘基包括CDR1殘基Ser31、Gly32、Tyr33、和Tyr34；CDR2殘基Tyr54、Asp55、Asp57；和CDR3殘基Tyr100、Tyr101、Arg102、Tyr103、Ser106、Tyr107、Asp112、Tyr113。重鏈FR1的Tyr27還與ENTPD2抗原接觸。參與ENTPD2結合的輕鏈CDR1殘基包括Tyr31、Asp32、Gly33、和Tyr36；以及CDR2輕鏈殘基Glu59、Ser60；和CDR3殘基Ser95、Asn96、和Asp 98。除了FR3的Gly61之外，其側鏈無序且未以複合結構建模的Glu1在針對ENTPD2抗原的Asn294觀察到的N-連接糖基化的接觸距離內，並在圖3A中突出顯示。

實例6. 抗人ENTPD2 FAb23的晶體學和表位作圖

在該實例中，抗人ENTPD2 FAb23與人ENTPD2(Y350A突變體)胞外結構域複合結晶，並測定相應的結構。基於X射線數據分析抗人ENTPD2 FAb23與人ENTPD2的結合，提供了抗原參與的分子細節和對Fab互補位和對所揭示的抗原表位的見解。

材料與方法

人ENTPD2和抗人ENTPD2 FAb23複合物的製備

為製備ENTPD2-FAb23複合物，將1.6倍莫耳過量的ENTPD2與FAb23在20mM Tris pH 7.5和100mM NaCl中合併，並藉由超濾濃縮至9.08mg/mL，在冰上孵育10分鐘，並進行結晶試驗建立。

結晶和X射線數據收集

在20℃下，藉由沈滴式蒸氣擴散之方法，與人ENTPD2 Y350A突變體複合的抗hENTPD2 FAb23在96孔板(Greiner Bio-One)中結晶。詳細地，將0.2μl蛋白質儲備液與0.2μl儲庫溶液混合，並在20℃下將滴劑與50μl相同的儲庫溶液平衡。使用Phoenix機器人系統(阿特羅賓斯儀器公司(Art Robbins Instruments))建立實驗，並儲存在內部定製工程化晶體成像儀和門架(諾華GNF內部系統)中。

對於X射線數據收集，將單晶直接安裝在低溫回路中並快速冷卻成液氮。使用0.9765Å X射線輻射，用Quantum Q315r CCD檢測器在高級光源(Advanced Light Source)，BL5.03上收集X射線數據集。140個1.0°振盪圖像各自按晶體-檢測器距離為300mm被記錄，並用HKL2000(Z.Otwinowski和W.Minor,「Processing of X-ray Diffraction Data Collected in Oscillation Mode[在振盪模式中收集的X射線衍射數據的處理]」，Methods in Enzymology[酶學方法]，第276卷：Macromolecular Crystallography[大分子晶體學]，A部分，第307-326頁，1997,C.W.Carter,Jr.和R.M.Sweet，編輯，學術出版社(紐約))處理。

結構確定和分析

藉由用Phaser程式(McCoy等人，2007,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]40：658-674)的分子置換，使用先前在內部確定的人ENTPD2的精修座標和使用MOE軟體(分子操作環境(MOE),2013.08；化學計算組(Chemical Computing Group)ULC,1010 Sherbooke St.West,Suite #910,Montreal,QC,Canada[加拿大魁北克省蒙特利爾市910號室舍布魯克西街1010號]，H3A 2R7,2018)中的抗體建模工具生成的FAb23的同源模型，來確定FAb23-ENTPD2複合物的結構，該同源模型顯示作為獨立的搜索模型與ICSM 18-抗PRP的Fab片段具有高的序列相似性(PDB代碼4W9D)。使用模型構建的迭代循環，隨後用以下程式自動結晶細化來精修結構：Coot 0.8.0(結晶目標定向的工具(Crystallographic Object-Oriented Toolkit)；Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和Autobuster 2.11.5(Bricogne等人，2011,BUSTER版本2.11.2.劍橋，英國：全球定相公司(Global Phasing Ltd.))。

使用Coot(Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和PyMOL(分子圖形系統；DeLano Scientific公司：帕羅奧圖，加利福尼亞州)程式進行晶體結構的目視檢查。使用Coot和PROCHECK v3.3(Laskowski等人，1992,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]；26：283-291)程式評估最終精修模型的品質。藉由CCP4程式套件(協同計算計畫(Collaborative Computational Project)，第4期，1994)的程式AREAIMOL鑒定在抗人ENTPD2 MAB17 Fab結合後變得溶劑難以接近的人ENTPD2的殘基。使用4.0Å的截止距離定義分子間接觸，並用CCP4程式NCONT鑒定。

結果

抗hENTPD2 FAb23/ENTPD2複合物的晶體結構

在20℃下，藉由沈滴式蒸氣擴散之方法，與人ENTPD2 Y350A突變體複合的抗hENTPD2 FAb23在96孔板中結晶。晶體在0.08M Bis-Tris丙烷(pH 8.8)、0.02M檸檬酸、16% PEG3350中生長。在大約6週後出現晶體並在幾天內生長至完整尺寸。

FAb23-ENTPD2複合物的晶體在單斜晶系空間群P21中，其中每個不對稱單元具有一個複合物。針對複合物收集完整的衍射數據集至2.0埃解析度。使用AutoBuster對與ENTPD2複合的FAb23的最終模型進行了精修，具有良好的精修統計和整體幾何形狀。在最終模型中總共存在四個拉馬錢德蘭異常值，其中兩個殘基來自FAb23輕鏈(Ser39和Thr50)，以及兩個來自ENTPD2(Thr122和Ala430)。針對Fab輕鏈的Ser39的電子密度差並且暫時建模。所有其他殘基都在電子密度中得到了充分的定義，並且可能是真正的拉馬錢德蘭異常值。從最終模型中省略的ENTPD2殘基包括N-末端的殘基29-34和C-末端448以外的殘基。從最終模型中還省略了FAb23鏈恒定區的殘基139-144和末端半胱胺酸(Cys227)。由於無序，FAb23輕鏈的最後兩個殘基(Glu212和Cys213)也不存在於最終模型中。

圖3B提供了抗人ENTPD2 FAb23重鏈和輕鏈的胺基酸序列，其中將CDR加底線(如由卡巴特，1991,Sequences of proteins of immunological interest[免疫目的蛋白的序列]，國家衛生研究院出版(NIH Publication)第91-3242期的定義)，並且位於Fab-抗原介面的殘基用*標記。圖7描繪了FAb23/ENTPD2 Y350A複合物三維結構的整體視圖。

與FAb22相反，FAb23與ENTPD2的結合涉及重鏈和輕鏈可變結構域對膜近端和遠端葉的顯著接合。重鏈可變區環CDR2和CDR3參與ENTPD2結合，其中沒有來自CDR1的貢獻。來自輕鏈可變區的所有3個CDR的殘基參與ENTPD2結合。與ENTPD2膜遠端葉的接觸主要由以下項賦予：來自重鏈CDR3、輕鏈CDR2的殘基；和與α13和α14之間的ENTPD2環區殘基的殘基結合的輕鏈FR3殘基；以及FR3與反平行股β10/β11和螺旋α9的相互作用。CDR3輕鏈和CDR2重鏈殘基賦予與α2螺旋的廣泛結合以及連接ENTPD2的膜近端葉的β3和α1的環殘基。重鏈CDR3將末端殘基Tyr104、Tyr105和Gly106投射到在膜遠端葉的螺旋α8、α11和α14的N-末端之間的ENTPD2活性位點裂縫中。來自結合的大鼠ENTPD2晶體結構PDB 3CJA的ATP類似物AMP-PNP的疊加表明Tyr105位於預測 ATP的腺嘌呤環結合的位置，可能在空間上阻礙底物結合。重鏈CDR3末端的Tyr105和Tyr104也可以擾亂ENTPD2活性位點殘基，包括針對π-π和陽離子-π堆積與底物ATP的腺嘌呤環的相互作用所必需的Tyr350和Arg394。FAb23與ENTPD2的結合隱藏了大約17500 Å2的結合溶劑可接觸表面。表14中列出了在4.0Å距離截止值內計算的直接分子間接觸中涉及的表位和互補位殘基，並在圖3B和4A中標記。25個Fab殘基和29個ENTPD2殘基參與直接分子間接觸。CDR2的重鏈殘基Tyr55、Ile57、Thr59、Gln62，以及CDR3的Phe102、Tyr105、Ile107、Tyr110有助於ENTPD2結合，其中沒有來自CDR1殘基的貢獻。有助於ENTPD2結合的輕鏈殘基包括來自CDR1的Ser27和Tyr31，來自CDR2的Ser49和Asn52，以及來自CDR3的Trp90、Ser91、Ser92、Tyr93、和Trp95。有助於ENTPD2結合的非CDR輕鏈殘基包括Glu1，該Glu1被觀察到並模擬為在晶體結構中的焦麩胺酸，FR1的Thr22，以及FR3的Ser64、Gly65、Ser66、Gly67、Thr68、和Phe69。

實例7. 抗小鼠ENTPD2 FAb24的晶體學和表位作圖

在該實例中，抗鼠ENTPD2 Fab MAB13與鼠ENTPD2胞外結構域複合結晶，並測定相應的結構。基於X射線數據分析抗小鼠ENTPD2 FAb24與鼠ENTPD2的結合，提供了抗原參與的分子細節和對Fab互補位和對所揭示的抗原表位的見解。

材料與方法

鼠ENTPD2和抗小鼠ENTPD2 FAb24複合物的製備

為製備鼠ENTPD2 FAb24複合物，將經純化的鼠ENTPD2和FAb24在20mM Tris(pH 7.5)和100mM NaCl中按1：1莫耳比合併，在4攝氏度下在冰上孵育過夜。第二天早晨，藉由超濾將樣本濃縮至9.88mg/mL，並進行結晶試驗建立。

結晶和X射線數據收集

在20℃下，藉由沈滴式蒸氣擴散之方法，與ENTPD2 Y350A突變體複合的抗小鼠ENTPD2 FAb24複合物在96孔板中結晶。詳細地，將0.2μl蛋白質儲備液與0.2μl儲庫溶液混合，並在20℃下將滴劑與50μl相同的儲庫溶液平衡。使用Phoenix機器人系統(阿特羅賓斯儀器公司(Art Robbins Instruments))建立實驗，並儲存在內部定製工程化晶體成像儀和門架(諾華GNF內部系統)中。

對於X射線數據收集，將單晶直接安裝在低溫回路中並快速冷卻成液氮。使用裝備有ADSC Quantum 315r CCD檢測器的1.1808Å X射線輻射在SSRL，束線7-1處收集X射線數據集。340個0.5°振盪圖像各自按晶體-檢測器距離為400mm被記錄，並用HKL2000(Z.Otwinowski和W.Minor,「Processing of X-ray Diffraction Data Collected in Oscillation Mode[在振盪模式中收集的X射線衍射數據的處理]」，Methods in Enzymology[酶學方法]，第276卷：Macromolecular Crystallography[大分子晶體學]，A部分，第307-326頁，1997,C.W.Carter,Jr.和R.M.Sweet，編輯，學術出版社(紐約))處理。

結構確定和分析

使用先前在內部確定的鼠ENTPD2和FAb24的精修結構作為獨立搜索模型，藉由用Phaser程式(McCoy等人，2007,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]40：658-674)的分子置換來確定FAb24-小鼠ENTPD2複合物的結構。使用模型構建的迭代循環，隨後用以下程式自動結晶細化來精修結構：Coot 0.8.0(結晶目標定向的工具(Crystallographic Object-Oriented Toolkit)；Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501) 和Autobuster 2.11.5(Bricogne等人，2011,BUSTER版本2.11.2.劍橋，英國：全球定相公司(Global Phasing Ltd.))。

使用Coot(Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和PyMOL(分子圖形系統；DeLano Scientific公司：帕羅奧圖，加利福尼亞州)程式進行晶體結構的目視檢查。使用Coot和PROCHECK v3.3(Laskowski等人，1992,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]；26：283-291)程式評估最終精修模型的品質。藉由CCP4程式套件(協同計算計畫(Collaborative Computational Project)，第4期，1994)的程式AREAIMOL鑒定在抗小鼠ENTPD2 FAb24結合後變得溶劑難以接近的鼠ENTPD2的殘基。使用4.0Å的截止距離定義分子間接觸，並用CCP4程式NCONT鑒定。

使用先前在內部確定的鼠ENTPD2和FAb24的精修結構作為獨立搜索模型，藉由用Phaser程式(McCoy等人，2007,J Appl Crystallogr[應用晶體學雜誌]40：658-674)的分子置換來確定FAb24-小鼠ENTPD2複合物的結構。使用模型構建的迭代循環，隨後用以下程式自動結晶細化來精修結構：Coot 0.8.0(結晶目標定向的工具(Crystallographic Object-Oriented Toolkit)；Emsley等人，2010,Acta Crystallogr Sect D：Biol Crystallogr[晶體學報D輯：生物晶體學]；66：486-501)和Autobuster 2.11.5(Bricogne等人，2011,BUSTER版本2.11.2.劍橋，英國：全球定相公司(Global Phasing Ltd.))。

結果

抗小鼠ENTPD2 FAb24/小鼠ENTPD2複合物的晶體結構

在20℃下，藉由沈滴式蒸氣擴散之方法，與鼠ENTPD2複合的抗小鼠ENTPD2 FAb24複合物在96孔板中結晶。晶體在0.2M檸檬酸三銨(pH 7.0)，20% PEG3350中生長。在大約1個月後出現晶體並在幾天內生長至完整尺寸。

FAb24-小鼠ENTPD2複合物的晶體在單斜晶系空間群P21中，其中每個不對稱單元具有一個複合物。針對複合物收集完整的衍射數據集至3.0埃解析度。使用AutoBuster對與小鼠ENTPD2複合的FAb24的最終模型進行了精修，具有良好的精修統計和整體幾何形狀。在最終模型中存在兩個拉馬錢德蘭異常值(小鼠ENTPD2的Thr122和FAb24的Ala57)，這兩個異常值在電子密度中限定明確。Asn129和Asn378僅在觀察到N-連接的糖基化處係殘基。觀察到FAb24重鏈的Glu1並將其模擬為焦麩胺酸。從最終模型中省略的小鼠ENTPD2殘基包括N-末端的殘基29-35、對應於連接股β2和β3的環殘基的61-66、對應於膜相互作用環(MIL)的殘基182-194、α9和β11之間的環殘基290-293、以及C-末端Ala450以外的殘基。除了重鏈Cys225的末端半胱胺酸，FAb24的所有的重鏈和輕鏈殘基包括在最終精修的模型中。

圖3C提供了抗小鼠ENTPD2 FAb24重鏈和輕鏈的胺基酸序列，其中將CDR加底線(如由卡巴特，1991,Sequences of proteins of immunological interest[免疫目的蛋白的序列]，國家衛生研究院出版(NIH Publication)第91-3242期的定義)，並且位於Fab-抗原介面的殘基用*標記。圖8描繪了FAb24/mENTPD2複合物三維結構的整體視圖。

抗小鼠ENTPD2 FAb24主要參與ENTPD2抗原的假定的膜遠端葉(殘基G162-E426)。針對重鏈和輕鏈可變結構域的CDR殘基，觀察到對ENTPD2結合的相等貢獻。

與結合人ENTPD2的FAb22和FAb23相比，FAb24從與FAb22中觀察到的方向完全不同的方向接合鼠ENTPD2，並且FAb23與hENTPD2複合。 FAb24主要藉由廣泛的重鏈CDR相互作用和相對較少的輕鏈CDR相互作用結合鼠ENTPD2膜遠端葉。與輕鏈CDR1和CDR2殘基結合的重鏈CDR1和CDR3殘基與mENTPD2的螺旋α11和α13結合。重鏈CDR2的殘基與α13和α14之間的互連環殘基發生相互作用。CDR3重鏈CDR3在其彎曲接近90度的構象中被觀察到並且在其末端採用短的β-轉角模體。FR3重鏈的兩個殘基藉由與5股反平行折疊的β3相互作用而與小鼠ENTPD2近端葉接觸。沒有觀察到MAB13 CDR延伸足夠遠至小鼠ENTPD2位點，藉由直接阻塞底物結合位點而影響ATP水解活性。FAb24與鼠ENTPD2的結合隱藏了大約16300 Å2的總結合溶劑可接觸表面。表15中列出了在4.0Å距離截止值內計算的直接分子間接觸中涉及的表位和互補位殘基並在圖3C和4B中標記。22個Fab殘基和18個鼠ENTPD2殘基參與直接分子間接觸，並包含在Fab/ENTPD2接合中觀察到的互補位和表位。重鏈CDR殘基包括CDR1 Thr28、Thr30、His31、Tyr32、和Gly33；CDR2 Trp50、Asn52、Thr53、和Asp54、Thr55；CDR3 Tyr99、Gly100、Thr101、Leu102、Tyr103、和Phe110。來自重鏈的兩個FR3殘基(Thr74和Ser75)還有助於結合。有助於結合的輕鏈CDR殘基包括來自CDR1的Thr34和Lys36、來自CDR2的Tyr56、和來自CDR3的Trp97。

實例8. 在同基因的B16LM3腫瘤模型中由抗ENTPD2 MAB13與抗PD-1 Ab組合對腫瘤生長的抑制

在雌性C57BL/6小鼠中藉由將0.5 x 10⁶ 個細胞皮下注射到每隻小鼠的右肋部建立B16LM3模型。植入後的當天將小鼠隨機化到治療組中(n=10/組)。在第1、5、8、12、15天按15mg/kg的終劑量使小鼠接受抗小鼠ENTPD2 mAb13或非特異的mIgG2a同種型對照(殖株MOPC-173，Biolegend公司，聖地牙哥，加利福尼亞)的治療。

將抗PD-1 Ab(殖株RMP1-14 Bio X Cell，西黎巴嫩，新罕布什爾州)或非特異性rIgG2a同種型對照(殖株RTK2758，Biolegend公司，聖地牙哥，加利福尼亞)在第1、5、8、12、15天按終劑量為10mg/kg進行腹膜內遞送。將所有劑量調整至個體小鼠體重。

所有測試藥劑在研究中均耐受，並且在任何治療組中均未觀察到毒性或體重減輕的明顯臨床症狀。抗小鼠ENTPD2 mAb13與抗PD-1 Ab治理的組合相對於無治療(p<0.005)、同種型對照(p<0.05)或抗PD-1 Ab(p<0.01)顯著延長小鼠的存活期(對數秩(Mantel-Cox)測試用於確定存活曲線是否顯著不同))(圖9)。

實例9. 在同基因的B16F10腫瘤模型中抗ENTPD2 mAb13與抗PD-1 Ab的組合治療誘導活化T細胞的腫瘤流入

在雌性C57BL/6小鼠中藉由將0.5 x 10⁶ 個細胞皮下注射到每隻小鼠的右肋部建立B16F10模型。在第7天當腫瘤達到大約30mm³ 時，根據腫瘤體積將小鼠隨機分入治療組(n=10隻/組)。在第1、5和8天，小鼠接受以下治療：按最終劑量為15mg/kg的抗小鼠ENTPD2 mAb13、按最終劑量為10mg/kg腹膜內給予抗PD-1 Ab(殖株RMP1-14 Bio X Cell，西黎巴嫩，新罕布什爾州)、或兩種治療的組合。將所有劑量調整至個體小鼠體重。

在用抗小鼠ENTPD2 mAb13或單獨地抗PD-1 Ab治療之後觀察到不顯著的抗腫瘤效果，然而相對於無治療對照，在抗小鼠ENTPD2 mAb13和抗PD-1 Ab的組合臂中觀察到腫瘤生長的顯著降低(p<0.05單向方差分析(One-Way ANOVA)/Tukey多重比較測驗(Tukey’s Multiple Comparisons Test))(圖10A-10B)。

為理解治療對腫瘤微環境的影響，在第8天對小鼠實施安樂死，並在HyClone RPMI1640介質(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)中使用gentleMacs C-管(美天旎生物技術公司(Miltenyi Biotec)，奧本，加利福尼亞州)在gentleMacs Octo解離器(美天旎生物技術公司，奧本，加利福尼亞州)中將腫瘤解離。大約2 x 10⁶ 個解離的腫瘤細胞被大鼠抗小鼠CD16/CD32 Ab(Biolegend公司，聖地牙哥，加利福尼亞)阻斷以減少非特異性FcyRIII/II結合，並隨後用以下Ab混合物染色：將大鼠抗小鼠CD45-BUV395(殖株30-F11)(BD 生物科技公司(BD Biosciences)，聖約瑟，加利福尼亞州B)、大鼠抗小鼠CD8a-BUV737(殖株53-6.7)(BD生物科技公司，聖約瑟，加利福尼亞州B)、大鼠抗小鼠CD4-BV510(殖株RM4-5)(BD生物科技公司，聖約瑟，加利福尼亞州B)、抗小鼠CD69-PercPCy5.5(殖株H1-2F3)(BD生物科技公司，聖約瑟，加利福尼亞州B)和大鼠抗小鼠CD25-eFluor450(殖株eBio3C7)(eBioscience公司，聖地牙哥，加利福尼亞州)按製造商的建議稀釋。所有的孵育和洗滌均在FACS緩衝液中進行，該緩衝液由以下項組成：1x HyClone磷酸鹽緩衝鹽水(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)、1% HyClone胎牛血清(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)、2mM EDTA(賽默飛世爾公司(ThermoFisher)，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)。用細胞表面抗原抗體混合物染色後，在FACS緩衝液中洗滌解離的腫瘤細胞，使用eBioscience Foxp3/轉錄因子染色緩衝液套盒(賽默飛世爾科技公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)固定並透化，以允許用小鼠抗小鼠FOXP3-eFluor660(殖株150D/E4)(eBioscience公司，聖地牙哥，加利福尼亞州)進行細胞內染色。

相對於所有其他治療組，用抗小鼠ENTPD2 mAb13和抗PD-1 Ab組合治療時觀察到活化的CD4 T輔助細胞(定義為CD45+ CD8- CD4+ FOXP3- CD69+ CD25+)(相對於無治療，7.0倍增加，p<0.0001單向方差分析/Tukey多重比較測驗)和CD8 T細胞(定義為CD45+ CD4- CD8+ CD69+ CD25+)(相對於無治療，5.8倍變化，p<0.05單向方差分析/Tukey多重比較測驗)的顯著流入(圖10C)。

實例10. 在C57BL/6小鼠中，在人ENTPD2工程化的B16LM3異種移植模型中，抗人ENTPD2 mAb1和mAb6與抗PD-1 Ab組合的劑量依賴性體內效果

為證明體內抗人ENTPD2 Ab的靶向抗腫瘤活性，開發了人ENTPD2工程化的模型，B16LM3殖株5。該模型衍生自B16LM3黑素瘤模型，其中藉由CAS9蛋白的暫態電穿孔敲除內源性小鼠ENTPD2表現，該蛋白具有針對小鼠ENTPD2的CRISPR指導RNA序列，並且使用逆轉錄病毒轉導方法過表現人ENTPD2。藉由FACS用人ENTPD2選擇性抗人ENTPD2 mAb17在體外證實模型中的人ENTPD2表現。使用小鼠ENTPD2選擇性抗小鼠ENTPD2 mAb13來證明內源性小鼠ENTPD2的完全敲除(圖11A)。B16LM3殖株B5顯示出與親本系相當的生長動力學和在同基因宿主中持續的人ENTPD2表現(圖11B)。

在雌性C57BL/6小鼠中藉由將0.5 x 10⁶ 個細胞皮下注射到每隻小鼠的右肋部建立人ENTPD2工程化的B16LM3殖株B5模型。一旦腫瘤達到大約35-50mm³ 時，根據腫瘤體積將小鼠隨機分入治療組(n=8隻/組)。在研究的第1天，小鼠接受按最終劑量為0.1、1或10mg/kg的抗人ENTPD2 mAb1或mAb6或10mg/kg的非特異性人IgG1同種型對照的靜脈內治療。在D1和D5，按最終劑量為10mg/kg腹膜內給予抗PD-1 Ab(殖株RMP1-14 Bio X Cell，西黎巴嫩，新罕布什爾州)。將所有劑量調整至個體小鼠體重。所有測試藥劑在研究中均耐受，並且在任何治療組中均未觀察到毒性或體重減輕的明顯臨床症狀(表16)。

在用抗人ENTPD2 mAb1或mAb6作為單一藥劑或非特異性同種型對照和抗PD-1 Ab的組合之後，觀察到無顯著的抗腫瘤效果。抗人ENTPD2 mAb1與抗PD-1 Ab(固定劑量為10mg/kg)的組合方案表明劑量依賴性抗腫瘤效應，其中△T/△C值為18.4%(10mg/kg)、35.7%(1mg/kg)和33.4%(0.1mg/kg)。抗人ENTPD2 mAb6與抗PD-1 Ab(固定劑量為10mg/kg)的類似的組合方案還表明劑量依賴性抗腫瘤效應，其中△T/△C值為29.2%(10mg/kg)、27.3%(1mg/kg)和41.0%(0.1mg/kg)(表16和圖12A-12B)。

實例11. 在C57BL/6小鼠中，在人ENTPD2工程化的B16LM3殖株B5異種移植模型中抗人ENTPD2 mAb活性

為了從免疫途徑參與角度理解ENTPD2阻斷的直接影響，在用抗人ENTPD2 mAb1或同種型對照(10mg/kg)治療後24小時從C57BL/6小鼠中收集血漿和B16LM3殖株B5腫瘤(平均腫瘤體積約170mm³ )。抗人ENTPD2 mAb1不是小鼠ENTPD2交叉反應，因此在外周中的任何細胞介素調節都將反映腫瘤微環境中的變化。

簡言之，藉由採集血液將血漿分離到Microvette MV-H-300毛細管血漿鋰肝素血液收集管(Capillary Plasma Lithium Heparin Blood Collection tube)(賽輸注技術公司(Sai Infusion technologies)，Lake Villa，IL)中，將其在1000-2000 X g下旋轉沈降10分鐘。將血漿樣本儲存在-80℃直至使用。藉由外科手術切除腫瘤樣本並立即在液氮中冷凍。然後使用TissueLyser(凱傑公司，德國)儀器，將腫瘤組織在T-PER組織蛋白質提取物試劑(賽默飛世爾科技公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)中勻質化。將腫瘤裂解物樣本以11,000rpm旋轉沈降15分鐘，並且使用Pierce BCA蛋白質測定套盒(賽默飛世爾科技公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)收集上清液用於蛋白質濃度分析。根據製造商的建議，使用V-PLEX小鼠細胞介素29-Plex套盒(MSD，羅克維爾市，馬里蘭州)將200μg蛋白質或25μl未稀釋的血漿用於細胞介素分析。

用抗人ENTPD2 mAb1治療(圖13B和13D)觀察到血漿MCP1顯著降低(p<0.05未配對T檢驗)，伴隨腫瘤部位MCP1大約2倍的增加，這可能反映出骨髓細胞接合和腫瘤部位的募集。此外，在來自抗人ENTPD2 mAb1處理的動物的血漿中觀察到IL-1β的大約2倍的降低(p=0.05未配對T檢驗)，和表明腫瘤部位處平行減少的趨勢(圖13A和13C)。

實例12. 在C57BL/6小鼠中，在人ENTPD2工程化的B16LM3殖株B5異種移植模型中與A2AR拮抗劑組合的抗人ENTPD2 mAb活性

在雌性C57BL/6小鼠中藉由將0.5 x 10⁶ 個細胞皮下注射到每隻小鼠的右肋部建立人ENTPD2工程化的B16LM3殖株B5。一旦腫瘤達到大約50mm³ 時，根據腫瘤體積將小鼠隨機分入治療組(n=8隻/組)。在研究的第1天，小鼠接受按最終劑量為10mg/kg的抗ENTPD2 mAb1或10mg/kg的非特異性人IgG1同種型對照的靜脈內(i.v.)治療。在研究開始時以50mg/kg或200mg/kg.按口服(p.o.)投與NIR178，投與4天和停藥3天。將所有劑量調整至個體小鼠體重。該研究在治療開始後進行了13天，並且每隔一天評估腫瘤體積以評估效果。所有測試藥劑在研究中均耐受，並且在任何治療組中均未觀察到毒性或體重減輕的明顯臨床症狀(表17)。

在用非特異性同種型對照和A2AR拮抗劑NIR178的組合按50或200mg/kg處理後未觀察到顯著的抗腫瘤效果。抗ENTPD2 mAb1(10mg/kg)與NTR178(50mg/kg)的組合方案表明抗腫瘤效應，其中T/△C值為61.6%(表17和圖14)。該等數據表明，當阻斷腺苷途徑中的多個節點時，抗腫瘤功效增強。

實例13. 在生物化學和基於細胞的功能測定中評估抗ENTPD2 Ab

內部開發了生物化學和基於細胞的功能測定，以理解抗ENTPD2 Ab對ENTPD2經純化的細胞外結構域(殘基29-462)的功能影響，以及在基於天然細胞構象的背景下針對完全完整蛋白質的功能影響。ENTPD2將ATP水解為ADP，隨後可以使用HTRF Transcreener ADP2 TR-FRET Red測定(貝爾布魯克實驗室(BellBrook Labs)，麥迪森，威斯康辛州)檢測，其中ENTPD2產生的ADP將與ADP示蹤劑競爭結合抗ADP-Tb抗體。所得訊號與樣本中ADP的濃度成反比。

為評估在ENTPD2生物化學測定中抗ENTPD2 Ab的活性，將抗ENTPD2 Ab和重組ENTPD2(殘基29-462)在反應緩衝液(50mM HEPES(pH 7.1)、10mM MgCl₂ 、0.01% BSA)中稀釋至所需濃度。將4μL/孔的ENTPD2溶液和2μL/孔的抗ENTPD2 Ab溶液轉移至ProxiPlate(珀金埃爾默公司(PerkinElmer)，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)中並在室溫下孵育30分鐘。然後藉由添加2μl ATP(最終測定濃度為1μM)開始反應，並將樣本在室溫下孵育25分鐘。用200mM EDTA/200mM EGTA(5μL/孔)將反應淬滅，並將檢測試劑添加到孔(5μL/孔)中，其中終濃度為孔中的4nM ADP2抗體和4nM ADP失蹤劑(貝爾布魯克實驗室，麥迪森，威斯康辛州)。然後將平板在室溫下孵育60分鐘，然後測量HTRF訊號。

為建立基於細胞的功能測定，將具有內源性ENTPD2表現的人/食蟹猴/小鼠ENTPD2工程化的NIH/3T3細胞或RKO(ATCC，Manassa VA)大腸直腸癌細胞按分別針對NIH/3T3小鼠、食蟹猴和人ENTPD2系的150、200和250個細胞/孔鋪板過夜，或針對RKO在384孔組織培養板中1000個細胞/孔以30μl/孔(鉑金埃爾默公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)鋪板。在第二天，在37℃，5% CO₂ 下將細胞與抗ENTPD2 Ab在劑量反應中預孵育60分鐘(10μl的5X抗體劑量/孔)，並隨後用終濃度為10μM ATP(天惠華公司(Teknova)，霍利斯特，利福尼亞州)在室溫下刺激20分鐘(10μl的5X(50μM)ATP/孔)。用40mM EDTA/40mM EGTA將反應淬滅(25μl/孔)，並且將15μl的淬滅介質轉移到低體積的Proxiplates(珀金埃爾默公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)中用於ADP檢測。用Transcreener ADP2 TR-FRET Red測定(貝爾布魯克實驗室，麥迪森，威斯康辛州)檢測ADP產生，其中終濃度為在孔中4nM ADP2抗體和13.4nM的ADP示蹤劑(製備4X溶液，並且將5μL的「檢測試劑混合物」添加至淬滅條件介質中)。將平板與檢測試劑在室溫下孵育1小時，然後以HTRF模式讀板。

使用HTRF模式的Envision讀板器(珀金埃爾默公司，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)在兩種測定中評估HTRF訊號(620nm和665nm處的發射)。使用以下公式確定HTRF比率：HTRF比率=R=665nm處的發射/620nm處的發射x 10,000。如下確定之後的%殘留活性和%抑制：

100；

。

其中R_0% 係陰性對照(0%酶活性)的HTRF比率，並且R_100% 係陽性對照(100%酶活性)的HTRF比率。在Microsoft Excel中分析數據並使用 GraphPad的Prism 7.0軟體繪圖，並使用非線性回歸，log(促效劑)相對反應變數斜率(四個參數)分析獲得IC₅₀ 值。

在生物化學人ENTPD2功能測定中抗ENTPD2 Ab的代表性活性

來自雜交瘤和噬菌體展示活動的抗ENTPD2 Ab在生物化學人ENTPD2測定中針對功能活性被分類。抗ENTPD2 Ab的代表性活性和其IC₅₀ 示出在圖15和表18中。針對許多Ab觀察到一系列活性，其中一些在具有亞納莫耳IC₅₀ 和完全靶抑制或其他顯示出更弱的活性和僅部分酶抑制(數據未顯示)的測定中顯示出非常有效的活性。

在基於細胞的人和食蟹猴ENTPD2功能測定中抗ENTPD2 Ab的活性

在生物化學ENPTD2測定中對Ab的初步分析鑒定了許多對ENTPD2的重組細胞外結構域具有強抑制性活性的有效命中，然而在生物化學和基於細胞的功能測定之間觀察到一部分Ab的差異行為特徵，表明在經純化的重組蛋白和基於天然細胞的構象之間可能存在構象差異(數據未顯示)。為了確定Ab對天然ENTPD2的有效活性，使用人或食蟹猴-ENTPD2工程化的NIH/3T3細胞或具有內源ENTPD2表現的RKO細胞系分析抗ENTPD2Ab的抑制性活性。表19中捕獲了針對人或食蟹猴ENTPD2 NIH/3T3或RKO的基於細胞的測定的抗 ENTPD2 Ab活性譜的概述。描述針對抗ENTPD2 Ab亞組的所有三種功能測定的有效活性的代表性圖示出在圖16中。

實例14. 結構指導的工程化確定的更有效的替代抗小鼠ENTPD2 Ab

抗ENTPD2 mAb13被鑒定為不與人或食蟹猴ENTPD2結合的小鼠ENTPD2選擇性Ab(FACS EC₅₀ 3-4nM)。使用NIH3T3-小鼠ENTPD2工程化的細胞系評估抗ENTPD2 mAb13的活性，其中抗ENTPD2 mAb13顯示出作為部分酶抑制劑的活性，具有2.8nM IC₅₀ 和最大44%靶抑制。抗ENTPD2 mAb13 Fab/mENTPD2複合物晶體結構的檢測以及來自mENTPD2活性位點內的PDB代碼3CJA rENTPD2的ATP-底物類似物的疊加，揭示了抗ENTPD2 mAb13 HC的CDR1中T30作為其中取代更大的胺基酸將被預計在空間上阻斷ATP結合的最佳位點。在抗ENTPD2 mAb13 CDR1的T30位置處具有取代的構建體的子集被工程化，包括抗ENTPD2 mAb14和mAb15。在小鼠ENTPD2 NIH/3T3的基於細胞的功能測定中，對抗ENTPD2 mAb14和mAb15的工程化變體的評估表明，與親本抗ENTPD2 mAb13相比顯著改善的靶抑制，達到大約76%-79%的小鼠ENTPD2抑制，其中IC50為5-6nM(表24，圖17)。

實例15. 抗ENTPD2 mAb1在FcγR IIIa傳訊測定中的功能活性

抗ENTPD2 mAb1係人IgG1抗體，因此具有藉由FcγR IIIa發出訊號並誘導ADCC/ADCP的潛力，從而導致表現ENTPD2的細胞耗竭。為了評估抗ENTPD2 mAb1誘導ADCC的能力，我們開發了一種替代的ADCC測定，該測定利用在細胞表面表現46-68,000個ENTPD2分子的RKO大腸直腸癌細胞。將該等RKO細胞與表現人FcγRIIIa、V158(高親和力變體)和NFAT螢光素酶報告基因的工程化Jurkat細胞混合，比率為15 Jurkat：1 RKO。向細胞中添加抗ENTPD2 mAb1後，將平板在37℃、5% CO₂ 下孵育5hr，然後轉移至RT持續15min。用Bright Glo測定螢光素酶活性水平。EC₅₀ 係使用非線性回歸分析獲得的。在圖18中，已顯示抗ENTPD2 mAb1介導FcγRIIIa傳訊，其EC₅₀ 為17.3nM(2.55μg/mL)。

實例16. 食蟹猴藥物動力學

用抗ENTPD2 mAb1進行了食蟹猴單劑量和多劑量藥物動力學非GLP研究、4週食蟹猴非GLP毒理學研究和4週食蟹猴GLP毒理學研究。

在以3、10、30和100mg/kg靜脈注射一個或兩個劑量後，在雄性食蟹猴中測定了抗ENTPD2 mAb1(一種ENTPD2抗體)的血漿暴露。兩次連續給藥之間的間隔為14天。將所有接受抗ENTPD2 mAb1的動物暴露於測試物品。單次i.v.劑量後抗ENTPD2 mAb1的血漿暴露從3mg/kg增加到10mg/kg。劑量增加3.3倍導致AUC(0-336h)增加5.3倍，並且AUC(0-inf)增加5.9倍。當劑量從3mg/kg增加到10mg/kg時，抗ENTPD2 mAb1的血漿清除率從約12mL/天/kg降低到7mL/天/kg，這表明非線性消除可能歸因於靶標介導的藥物處置(TMDD)。在10到100mg/kg的劑量範圍內，抗ENTPD2 mAb1的血漿暴露與劑量成比例地增加。劑量增加10倍導致AUC(0-336h)和AUC(0-inf)都增加約9.5倍，這表明劑量等於或大於10mg/kg時呈線性藥物動力學。在10至100mg/kg的劑量範圍內，血漿清除率約為7ml/天/kg，這表明非線性消除在10mg/kg或更高劑量下達到飽和。

在這項研究中還檢查了抗藥物抗體(ADA)的形成。僅在研究中使用的九隻動物中的一隻(10mg/kg)中檢測到了ADA。ADA的存在降低了ADA陽性動物中抗ENTPD2 mAb1的血漿暴露。

每個劑量組的血漿抗ENTPD2 mAb1濃度繪製在圖19中。表21列出了每個劑量組的平均PK參數。

實例17. 抗ENTPD2 mAb1作為單一藥劑並與斯巴達珠單抗、抗CD73 mAb 373和NIR178組合在晚期實性瘤患者中的I/Ib期、開放標籤、多中心研究

研究設計

這項研究(圖20)係一項FIH、開放標籤、I/Ib期、多中心研究，其由抗ENTPD2 mAb1作為單一藥劑並與斯巴達珠單抗、抗CD73 mAb 373或NIR178組合的劑量遞增部分、和隨後的擴展部分組成。此外，在評估所有安全性和有效性數據並確定雙重組合的MTD/RD之後，可以考慮使用視需要的三重組合。招募僅限於患有MSS CRC、膽管癌、胰臟癌、食道癌、EGJ或胃癌的受試者。

在遞增部分期間，以未經測試的抗ENTPD2 mAb1(作為單一藥劑(圖21)，或與斯巴達珠單抗(圖22)、NIR178(圖23)或抗CD73 mAb 373(圖24)組合)劑量水平治療的前兩個受試者的第一劑量將錯開24小時。在確定至少2種劑量的抗ENTPD2 mAb1單一藥劑係安全且耐受後，可開始遞增組合劑量。一旦確定了作為單一藥劑的抗ENTPD2 mAb1和與斯巴達珠單抗、抗CD73 mAb 373或NIR178組合的抗ENTPD2 mAb1的RD或MTD，就可以開始相應的一個或多個擴展部分。

研究設計的基本原理

選擇該I/Ib期、開放標籤研究的設計來表徵安全性、耐受性，確定推薦的一個或多個劑量，並評估抗ENTPD2 mAb1作為單一藥劑並與斯巴達珠單抗、抗CD73 Ab或NIR178組合在患有選擇的晚期惡性腫瘤的受試者中的抗腫瘤活性。必要時，劑量遞增可允許建立抗ENTPD2 mAb1作為單一藥劑並與斯巴達珠單抗、抗CD73 mAb 373或NIR178組合的MTD/RD，並由貝葉斯層次邏輯回歸模型(BHLRM)指導。

BHLRM係係一種公認的在癌症受試者中鑒定MTD之方法。適應性BHLRM將以控制過量用藥的劑量遞增(escalation with overdose control，EWOC)原則為指導，以控制研究中未來受試者的DLT風險。EMEA已接受貝葉斯響應自我調整模型在小型數據集上之用途(「Guideline on clinical trials in small populations[小群體臨床試驗指南]」，2007年2月15日)，並得到眾多出版物的認可(Babb等人1998,Neuenschwander B等人(2008)Critical aspects of the Bayesian approach to phase I cancer trials.[貝葉斯方法進行I期癌症試驗的關鍵方面]Statistics in Medicine[醫學統計學]，27(13)：2420-39,Bailey等人2009年)，並且其發展和適當使用係FDA的關鍵路徑發端(FDA’s Critical Path Initiative)的一個方面。

研究由兩個部分組成，即劑量遞增和劑量擴展。該研究的劑量遞增部分首先將每兩週(Q2W)評估抗ENTPD2 mAb1給藥，並可能包括對如表22中所述之抗ENTPD2 mAb1的不同給藥方案(例如Q4W)進行評估，以及對以下的雙重組合的評估：抗ENTPD2 mAb1與斯巴達珠單抗組合、抗ENTPD2 mAb1 與NIR178組合、以及抗ENTPD2 mAb1與抗CD73 mAb 373組合。不同的給藥方案提供了解決方案，以解決可能需要更高的抗體劑量以達到靶標飽和度和/或新出現的PK/PD數據，該等數據支持以更長的間隔進行給藥。可以根據新出現的安全性、PK和功效數據評估抗ENTPD2 mAb1與斯巴達珠單抗和NIR178組合以及抗ENTPD2 mAb1與斯巴達珠單抗和抗CD73 mAb 373組合以及抗ENTPD2 mAb1與NIR178和抗CD73 mAb 373組合的視需要三重組合。

三重組合組群將使劑量遞增至該等化合物的單一藥劑研究中宣佈的單一藥劑MTD(例如480mg NIR178 BID和400mg斯巴達珠單抗(PDR001)Q4W)。沒有化合物遞增超過100%，並且一次只會遞增一種研究治療。在研究的劑量遞增部分期間，將3至6位可評估患者的組群用抗ENTPD2 mAb1和組合配偶體治療，直至達到MTD或確定較低的推薦劑量(RD)。為了確保RD不超過MTD，每次劑量遞增將遵循EWOC原則由適應性BHLRM指導。如果認為某組的所有劑量水平都毒性太大，則將不為治療和方案定義MTD或RD，並且將終止該治療組的招募。

在遞增部分中確定的劑量和方案將用於劑量擴展部分，在該劑量擴展部分中，將在RD處以單一藥劑(視需要的)及組合對受試者進行治療。一旦建立了RD，便開始在MSS CRC中進行組合擴展。在其他選定腫瘤中的組合擴展係可選的，並且如果已觀察到單一藥劑或組合療效，可以開始組合擴展。

選擇組合藥物的基本原理

在食道癌、胃癌、大腸直腸癌、膽管癌和胰臟癌中發現了高水平的ENTPD2以及CD73和A2AR(參見圖25)，並且對TCGA數據集的分析表明，A2AR和CD39 RNA表現與免疫特徵相關而ENTPD2與免疫特徵抗反相關(參見圖26)。CD73在免疫細胞和腫瘤細胞中表現。假設抗ENTPD2 mAb1與抗CD73 mAb 373或A2aR抑制劑(NIR178)組合可增強抗腫瘤作用。此外，考慮到腫瘤內免疫細胞浸潤的可預期的增加，與抗PD-1抗體(斯巴達珠單抗)組合可能會進一步增加腫瘤的殺傷能力。

當與抗PD-1拮抗劑mAb或A2aR拮抗劑NIR178組合時，抗ENTPD2 mAb1的體內治療導致表現人ENTPD2的B16同基因的細胞系的腫瘤生長延遲。抗ENTPD2 mAb1治療同基因的腫瘤導致腫瘤內M1巨噬細胞增加。

CD73和PD-1阻斷的組合在MC38-OVA(大腸癌)皮下腫瘤中表現出驚人的協同功效，所有小鼠均具有完全的腫瘤排斥反應(Beavis PA,Divisekera U,Paget C等人(2013)Blockade of A2a receptors potently suppresses the metastasis of CD73+ tumors.[阻斷A2a受體可有效抑制CD73+腫瘤的轉移]Proc Natl Acad Sci USA[美國國家科學院院刊]；110(36)14711-16)。

適用於納入本研究的受試者的一些納入標準：

˙

18歲的成年男性和女性。

˙經組織學確認並記錄的晚期惡性腫瘤(局部晚期惡性腫瘤、不能藉由手術或放療治癒、和轉移性疾病)，具有標準療法後的進展記錄，或者研究者認為尚無合適的標準療法存在。如根據RECIST v1.1所確定的，疾病必須可測量。

˙必須具有適合生檢的疾病部位，並且根據治療機構的準則係腫瘤生檢的候選者。受試者必須願意在篩選時和治療期間進行新的腫瘤生檢。

˙ECOG體能狀態<2

˙患者必須具有可測量的疾病，該疾病被定義為在至少一個維度(對於非結節性病灶，記錄最長直徑，對於結節性病灶，記錄短軸)上，可以使用常規技術準確測量為>20mm或者使用螺旋電腦斷層攝影術(CT)掃描、磁共振成像(MRI)或臨床檢查用卡尺準確測量為>10mm的至少一個病灶。

˙注意：如果由於毒性而終止了先前的治療，則受試者必須具有持續的可測量或可評估的疾病的證據。

本研究的受試者的一些納入標準：

˙有症狀或無法控制的腦轉移需要並行治療，包括但不限於手術、放射和/或皮質類固醇。經治療的有症狀的腦轉移受試者在進入研究前應在治療後4週內保持神經學穩定，並在投與任何研究治療前，每天接受劑量

10mg的潑尼松或等效物至少2週。

˙在過去3年內有已知的其他惡性腫瘤正在進展或需要積極治療。例外情況包括已經進行了潛在治療療法的皮膚基底細胞癌或皮膚鱗狀細胞癌，或原位宮頸癌或其他不會影響預期壽命的腫瘤。

˙在過去2年內，先前記錄的活動性或疑似自體免疫性疾病，但以下情況除外：

不應排除患有白斑病、I型糖尿病、僅需要激素替代的殘留甲狀腺功能減退症、不需要全身治療的牛皮癬或預期不會復發的疾病的受試者。有間質性肺病病史或當前患有該疾病，或非感染性肺炎等級

2

僅針對日本-有藥物和/或非藥物誘發的間質性肺病(ILD)病史或當前患有該疾病，或肺炎

2級。

˙活動性或先前記錄的炎症性腸病(例如克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎)

˙對一種或多種研究藥物的任何成分和其他mAb和/或其賦形劑發生嚴重超敏反應的病史。

˙受試者在篩選期間和研究治療的第一劑之前均具有超出範圍的實驗室值。超出範圍的實驗室值定義為：

˙嗜中性細胞絕對計數(ANC)<1.0×10⁹ /L

˙血小板<75×10⁹ /L

˙血紅蛋白(Hgb)<9g/dL

˙使用Cockcroft-Gault公式，血清肌酐>1.5×ULN或肌酐清除率<40mL/min

˙總膽紅素>1.5×ULN，患有捷倍耳氏症候群>3.0×ULN或直接膽紅素>1.5×ULN的患者除外

˙天冬胺酸轉胺酶(AST)>3×ULN

˙丙胺酸轉胺酶(ALT)>3×ULN

˙儘管有足夠的補充，血清電解質

2級。

˙受損的心功能或臨床顯著的心臟疾病，包括下列任意一項：

˙臨床上顯著的和/或不受控的心臟病，諸如需要治療的充血性心臟衰竭(NYHA等級

2)、不受控的高血壓或臨床上顯著的心律不整；

˙在篩查心電圖或先天性長QT綜合症時使用Fridericia校正(QTcF)(對女性>470msec或對男性>450msec)具有校正的QT的受試者

˙在進入研究之前<3個月具有急性心肌梗塞或不穩定性心絞痛

˙需要藥物療法的中風或短暫性缺血事件的病史

˙有症狀的跛行

˙在研究治療的第一劑後2週內進行全身抗癌治療。對於具有重大延遲毒性的細胞毒性劑，例如絲裂黴素C和亞硝基脲，要求6週為清除期

˙在研究治療的第一劑量之前2週內進行非姑息性放療。允許在有限領域進行姑息放療，例如用於治療骨痛或局灶性疼痛性腫塊。為了評估對治療的應答，受試者必須患有尚未輻射的其餘可測量疾病。

˙在第一劑量研究治療的2週內進行大手術(縱隔鏡檢查、插入中央靜脈通路裝置和插入飼管不視為大手術)。

˙感染：

˙HIV感染

˙活動性HBV或HCV感染(根據機構指南)。接受受抗病毒療法(干擾素除外)控制的慢性HBV或HCV疾病的受試者可在擴展部分但不能在遞增部分中進行。

˙已知結核病史

˙需要全身抗生素療法的感染。需要全身性抗生素感染的受試者必須在開始篩查之前完成治療。

˙在研究治療開始的4週內使用任何針對傳染病的活疫苗。

˙根據國家癌症研究所(NCI)不良事件通用術語標準(CTCAE)，存在

2級毒性，來自先前的癌症治療，但神經病變(允許包括2級或以下神經病變的受試者)、耳毒性和脫髮除外。

˙在研究治療的第一劑量的7天內，在腎上腺功能不全的情況下進行全身性慢性類固醇療法(>10mg/天潑尼松或等效物)或任何免疫抑制療法，但替代劑量類固醇除外。允許局部、吸入、鼻和眼用類固醇。

˙在開始研究治療前

2週使用造血細胞集落刺激性生長因子(例如G-CSF、GM-CSF、M-CSF)、促血小板生成素模擬物或紅血球刺激劑。如果在研究治療的第一劑量前2週以上開始使用促血小板生成素模擬物或紅血球刺激劑，並且受試者處於穩定劑量，則可以繼續維持。

研究治療

對於本研究，術語「研究藥物(investigational drug或study drug)」係指抗ENTPD2 mAb1、抗CD73 Ab、斯巴達珠單抗(PDR001)和NIR178。研究治療定義為單獨的抗ENTPD2 mAb1或與斯巴達珠單抗(PDR001)、抗CD73 mAb 373或NIR178組合。

在研究期間規定和分配給受試者的所有劑量和所有劑量改變都必須記錄在適當的劑量投與記錄eCRF上。

研究藥物和對照藥物

抗ENTPD2 mAb1、抗CD73 mAb 373和斯巴達珠單抗(PDR001)

抗ENTPD2 mAb1將以針對治療組指定的頻率IV輸注1小時(如果臨床有指示則長達2小時)。

抗CD73 mAb 373將以針對治療組指定的頻率IV輸注1小時(如果臨床有指示則長達2小時)。

斯巴達珠單抗(PDR001)將以針對治療組指定的頻率IV輸注30分鐘(如果臨床有指示則長達2小時)。

當組合使用時，每次輸注應使用單獨的輸注材料(袋、管線、過濾器)在同一天投與抗ENTPD2 mAb1、抗CD73 mAb 373或斯巴達珠單抗(PDR001)。相同的進入部位可用於兩種輸注。將先注入抗ENTPD2 mAb1，然後中斷，然後再注入抗CD73 mAb 373或斯巴達珠單抗。所有受試者均應遵循相同的投與順序。抗ENTPD2 mAb1作為單一藥劑，或當與抗CD73 mAb 373或斯巴達珠單抗組合使用時，應在循環1第1天和循環1第15天輸注中觀察受試者至少4小時。從循環2第1天開始，然後應在最後一次輸注研究治療藥物或按照當地IV輸注指南監測受試者約2小時。

如果在投與研究藥物後發生輸注反應，則必須推遲隨後的研究治療輸注，直到根據研究者的臨床判斷對受試者進行研究治療係安全的為止。

出於任何原因，循環中的下一劑量的研究治療可能會延遲長達7天。如果由於持續的AE而不能在上述7天窗口內再次服用一個或多個下一劑量，則應跳過該一個或多個劑量。在下一個循環的第1天，當AE得到解決/改善後，可重新開始給藥，評估方案也將隨之改變。

NIR178

NIR178膠囊每天連續口服兩次(BID)。在將抗ENTPD2 mAb1作為單一藥劑或組合投與的訪視中，應首先服用NIR178劑量。在NIR178投與和隨後的研究藥物輸注之間不需要中斷。輸注應儘快開始，並且在給予NIR178後不超過60分鐘內開始。

受試者應早晨和傍晚大約每天同一時間服用兩次NIR178(BID)。在獲得PK樣本的當天，應按照研究人員的指示，在臨床前訪視期間，在給藥前PK樣本之後和給藥後PK樣本之前服用NIR178。

受試者應至少在飯前1小時或飯後2小時空腹服用NIR178。每個劑量可以用一杯水(約8盎司或約235mL)送服。

應該指導受試者吞咽整個膠囊，而不咀嚼或打開它們。

如果在治療過程中出現嘔吐，則受試者不應在下次安排的劑量之前再次服用NIR178。

應該指導受試者不要彌補漏服的劑量。漏服的劑量定義為在通常的每日給藥的大約時間之後的4小時內未服用全劑量的情況。當天的劑量應省略，受試者應以下一個安排的劑量繼續治療。

在抗ENTPD2 mAb1和NIR178的情況下，應在前兩次輸注後觀察受試者2小時。如果醫學上有指示，則可將其應用於隨後的給藥。

PD-L1表現與抗腫瘤活性之間的關係

次要目標包括根據RECIST 1.1和iRECIST評估腫瘤中PD-L1表現水平與總體響應率(ORR)和無進展生存率(PFS)之間的關係。

PD-L1表現與總應答率(ORR)之間的關係

PD-L1的表現將藉由基於ORR的應答者和非應答者的描述性統計進行總結。

PD-L1表現與無進展生存率(PFS)之間的關係

Cox比例風險模型將用於評估PD-L1表現與PFS之間的關係。此外，將使用卡普蘭-梅爾(Kaplan-Meier，KM)方法匯總基線時具有高/低PD-L1表現的受試者的PFS。將提供中位PFS，和對應的90 CI，以及第25和75百分位數(Brookmeyer和Crowley,Biometrics[生物計量學]，第29-41頁(1982)；Klein和Moeschberger(1997)Survival analysis：techniques for censored and truncated data.[生存分析：用於審查和刪節數據的技術]施普林格出版社(Springer))。還將提供特定時間點的PFS比例的KM估計值以及90% CI(Greenwood公式， Kalbfleisch和Prentice(2002)The Statistical Analysis of Failure Time Data.[故障時間數據的統計分析]Wiley Series in Probability and Statistics[Wiley系列：概率論與統計])。

實例18. 抗ENTPD2 mAb15與抗CD73 Ab組合在BALB/c小鼠的4T1同基因的模型中的體內功效

為證明體內抗小鼠ENTPD2抗體的靶向抗腫瘤活性，開發了小鼠ENTPD2工程化的模型：4T1殖株45。該模型源自4T1鼠類乳癌模型，其中使用逆轉錄病毒轉導方法過表現小鼠ENTPD2。藉由螢光激活細胞分選，將顯示小鼠ENTPD2表現的活細胞與其餘種群分離，並藉由有限稀釋進行選殖選擇。藉由使用小鼠ENTPD2選擇性抗小鼠ENTPD2 mAb15的流動式細胞測量術在體外證實模型中穩定的小鼠ENTPD2表現(約479,000個受體)(圖27)。4T1殖株45在體外顯示出與親本系相當的生長動力學和在同基因的宿主中持續的小鼠ENTPD2表。

在雌性BALB/c小鼠中藉由將0.5 x 10⁶ 個細胞皮下注射到每隻小鼠的右肋部建立小鼠ENTPD2工程化的4T1殖株45模型。一旦腫瘤達到大約50-80mm³ 時，根據腫瘤體積將小鼠隨機分入治療組(n=10隻/組)。在第0、2、5和9天，小鼠接受最終劑量為10mg/kg的抗mENTPD2 mAb 15或非特異性小鼠IgG2a同種型對照的i.p.治療。在第0天和第5天以20mg/kg的最終劑量i.p.給予抗CD73 mAb 350或非特異性人IgG4。所有劑量均耐受，並且在任何治療組中均未觀察到毒性或體重減輕的明顯臨床症狀(表27)。

用抗CD73 mAb 350和小鼠IgG2同種型組合治療後，未觀察到明顯的抗腫瘤功效。但是，抗ENTPD2 mAb 15和人IgG4同種型組合治療後具有抗腫瘤功效，△T/△C值為76.61。抗ENTPD3 mAb 15和抗CD73 mAb 350的組合方案顯示出顯著的抗腫瘤作用，△T/△C值為44.09(表27和圖28)。

在治療後第12天評價實驗，* p<0.05 **p<0.005相比於人IgG4和小鼠IgG2同種型組(單向方差分析/Tukey多重比較檢驗)。%△T/△C=100△T/△C，其中△T=在研究的D12藥物治療組的平均腫瘤體積在初始給藥日藥物治療組的平均腫瘤體積；△C=在研究的D12對照組的平均腫瘤體積在D0對照組的平均腫瘤體積。△體重(%)=(D12平均體重-D0平均體重)^* 100/治療D0的平均體重。

用抗ENTPD2 mAb15和抗CD73 mAb 350的組合治療誘導BALB/c小鼠中小鼠ENTPD2工程化的4T1殖株45同基因的模型的免疫浸潤變化。

為理解單獨使用抗ENTPD2 mAb15或與抗CD73 mAb 350組合治療對腫瘤微環境的影響，在第12天對小鼠實施安樂死，並在HyClone RPMI1640介質(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)中使用gentleMacs C-管(美天旎生物技術公司(Miltenyi Biotec)，奧本，加利福尼亞州)在gentleMacs Octo解離器(美天旎生物技術公司，奧本，加利福尼亞州)中將腫瘤解離。大約2 x 10⁶ 個解離的腫瘤細胞被大鼠抗小鼠CD16/CD32 Ab(Biolegend公司，聖地牙哥，加利福尼亞)阻斷以減少非特異性FcyRIII/II結合，並隨後用來自骨髓細胞或T細胞組的抗體混合物染色：

我們還用抗ENTPD2抗體對細胞進行染色，該抗體與ENTP2的結合不受抗ENTPD2 mAb15的阻斷。所有的孵育和洗滌均在FACS緩衝液中進行，該緩衝液由以下項組成：1 x Hyclone磷酸鹽緩衝鹽水(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)、1% HyClone胎牛血清(GE醫療集團，匹茲堡，賓夕法尼亞州)、2mM EDTA(賽默飛世爾公司(ThermoFisher)，沃爾瑟姆，麻塞諸塞州)。

來自用hIgG4和mIgG2同種型抗體治療的小鼠的4T1殖株45個腫瘤的流式細胞儀分析表明，當用hIgG4和mIgG2同種型抗體治療小鼠時，ENTPD2的細胞表面表現得以維持(圖29)。但是，用抗ENTPD2 mAb15和人IgG4同種型治療的小鼠顯示出細胞表面ENTPD2染色減少(圖29)。這與先前的IHC結果一致，表明在用抗ENTPD2 Ab治療後細胞表面ENTPD2表現喪失。

用抗CD73 mAb 350和抗ENTPD2 mAb15的組合治療顯著增加了腫瘤中CD11b+樹突狀細胞(定義為CD45+CD11b+)上表現的活化標記(CD80或CD86)(圖30A和B)。

在抗ENPTD2 mAb15與hIgG4同種型或抗CD73 mAb 350組合治療後，發現CD4+中央記憶細胞(定義為CD45+ MHCII- CD49- CD4+ CD62L+ CD44+)和活化的CD8+ T細胞(定義為CD45+ MHCII- CD49- CD8+ CD25+)顯著增加(圖30C和D)。

用抗ENTPD2 mAb15和抗CD73 mAb 350的組合治療誘導BALB/c小鼠中小鼠ENTPD2工程化的4T1殖株45同基因的模型的血清細胞介素水平變化。

為了從免疫途徑參與/生物標記的角度研究ENTPD2阻斷的即時影響，在單獨用抗mENTPD2 mAb15或與抗CD73 mAb 350組合治療後24hr從BALB/c小鼠收集血漿。

在雌性BALB/c小鼠中藉由將0.5 x 10⁶ 個細胞皮下注射到每隻小鼠的右肋部建立小鼠ENTPD2工程化的4T1殖株45模型。一旦腫瘤達到大約100-150mm³ 時，根據腫瘤體積將小鼠隨機分入治療組(n=8隻/組)。在第0、2、5和9天，小鼠接受最終劑量為10mg/kg的抗mENTPD2 mAb 15或非特異性小鼠IgG2a同種型對照的i.p.治療。在第0天和第5天以20mg/kg的最終劑量i.p.給予抗CD73 mAb 350或非特異性人IgG4(表28)。所有劑量均耐受，並且在任何治療組中均未觀察到毒性或體重減輕的明顯臨床症狀。

為了測量細胞介素和血清澱粉樣蛋白P(一種小鼠炎症的標記)，在第0天和第1天首次治療後的24小時內，在給藥前收集血漿。

簡言之，藉由採集血液將血漿分離到Microvette MV-H-300毛細管血漿鋰肝素血液收集管(Capillary Plasma Lithium Heparin Blood Collection tube)(賽輸注技術公司(Sai Infusion technologies)，Lake Villa，IL)中，將其在1000-2000 X g下旋轉沈降10分鐘。將血漿樣本儲存在-80C直至使用。根據製造商的建議，將10μL的1：5稀釋的血清用於使用MSD小鼠促炎性系列1(MSD Mouse Pro-Inflammatory Panel 1，MSD公司，羅克維爾(Rockville)，馬里蘭州)進行細胞介素分析，並將5μL的1：10稀釋的血清用於使用MSD小鼠細胞介素系列1(MSD公司，羅克維爾，馬里蘭州)進行細胞介素分析。為了確定SAP的水平，根據製造商的建議，將10μL的未稀釋的血清用於在SAP Quantikine^® ELISA(RnD系統)中進行分析。

在單獨使用抗ENTPD2 mAb15或與抗CD73 mAb 350組合治療後，檢測到血漿MCP1、MIP-2和IP10(圖31A-C)和SAP(圖31D)顯著增加。這表明抗ENTPD2 mAb15能夠影響骨髓細胞並誘發小鼠炎症。

除非另有定義，否則本文使用的技術和科學術語具有與熟知本揭露所屬領域的專業人員通常理解的相同含義。

除非另有說明，否則所有未詳細描述之方法、步驟、技術和操作可以以本身已知如熟悉該項技術者所知的方式執行並且已經以此方式執行。再次對例如本文提及的標準手冊和普通背景技術和本文引用的另外的參考文獻進行引用。除非另有說明，否則本文引用的每篇參考文獻均藉由引用以其全文併入。

本發明之申請專利範圍係非限制性的，並在下文提供。

儘管本文已經詳細揭露了特定方面和申請專利範圍，但是這僅僅是出於說明的目的藉由示例的方式進行的，並且不旨在限制所附申請專利範圍的範圍或任何相應的未來申請的申請專利範圍的主題的範圍。具體而言，諸位發明人考慮到可以對本揭露進行各種替換、改變和修改而不脫離申請專利範圍所限定的本揭露的精神和範圍。認為核酸起始材料、目標殖株或文庫類型的選擇對於具有本文所述各方面知識的熟悉該項技術者而言係常規工作。認為其他方面、優點和修改在所附申請專利範圍的範圍內。熟悉該項技術者僅使用常規實驗就將認識到或能夠確定本文所述之本發明之具體方面的許多等同方面。這種等同物旨在由以下申請專利範圍涵蓋。在今後提交的相應申請中重撰寫申請專利範圍的範圍可歸因於不同國家專利法的限制，而不應被理解為放棄申請專利範圍的主題。

<110> 瑞士商諾華公司(NOVARTIS AG)

<120> 與ENTPD2抗體之組合療法

<130> PAT058705-WO-PCT

<140>

<141>

<150> 63/023,446

<151> 2020-05-12

<150> 62/902,161

<151> 2019-09-18

<160> 692

<170> PatentIn3.5版

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<213> 人工序列

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<220>

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<220>

<221> 來源

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<220>

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<221> 來源

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<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 287

<210> 288

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 288

<210> 289

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 289

<210> 290

<211> 639

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 290

<210> 291

<211> 495

<212> PRT

<213> 智人

<400> 291

<210> 292

<211> 2156

<212> DNA

<213> 智人

<400> 292

<210> 293

<211> 472

<212> PRT

<213> 智人

<400> 293

<210> 294

<211> 2084

<212> DNA

<213> 智人

<400> 294

<210> 295

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 295

<210> 296

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 296

<210> 297

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 297

<210> 298

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 298

<210> 299

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 299

<210> 300

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 300

<210> 301

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 301

<210> 302

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 302

<210> 303

<211> 1329

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 303

<210> 304

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 304

<210> 305

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 305

<210> 306

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 306

<210> 307

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 307

<210> 308

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 308

<210> 309

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 309

<210> 310

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 310

<210> 311

<211> 339

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 311

<210> 312

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 312

<210> 313

<211> 660

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 313

<210> 314

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 314

<210> 315

<211> 339

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 315

<210> 316

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 316

<210> 317

<211> 660

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 317

<210> 318

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 318

<210> 319

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 319

<210> 320

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 320

<210> 321

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 321

<210> 322

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 322

<210> 323

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 323

<210> 324

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 324

<210> 325

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 325

<210> 326

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 326

<210> 327

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 327

<210> 328

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 328

<210> 329

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 329

<210> 330

<211> 227

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 330

<210> 331

<211> 681

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 331

<210> 332

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 332

<210> 333

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 333

<210> 334

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 334

<210> 335

<211> 654

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 335

<210> 336

<211> 228

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 336

<210> 337

<211> 684

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 337

<210> 338

<211> 226

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 338

<210> 339

<211> 678

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 339

<210> 340

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 340

<210> 341

<211> 660

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 341

<210> 342

<211> 1485

<212> DNA

<213> 智人

<400> 342

<210> 343

<211> 495

<212> PRT

<213> 食蟹猴

<400> 343

<210> 344

<211> 1485

<212> DNA

<213> 食蟹猴

<400> 344

<210> 345

<211> 495

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 345

<210> 346

<211> 1485

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 346

<210> 347

<211> 495

<212> PRT

<213> 大家鼠

<400> 347

<210> 348

<211> 1485

<212> DNA

<213> 大家鼠

<400> 348

<210> 349

<211> 510

<212> PRT

<213> 智人

<400> 349

<210> 350

<211> 1530

<212> DNA

<213> 智人

<400> 350

<210> 351

<211> 510

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 351

<210> 352

<211> 1530

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 352

<210> 353

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 353

<210> 354

<211> 440

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 354

<210> 355

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 355

<210> 356

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 356

<210> 357

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 357

<210> 358

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 358

<210> 359

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 359

<210> 360

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 360

<210> 361

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 361

<210> 362

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 362

<210> 363

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 363

<210> 364

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 364

<210> 365

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 365

<210> 366

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 366

<210> 367

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 367

<210> 368

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 368

<210> 369

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 369

<210> 370

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 370

<210> 371

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (448)..(448)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(448)

<223> /注釋=“序列中給出的變體殘基相對於變體位置的注釋中的那些沒有偏好”

<400> 371

<210> 372

<211> 1344

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<220>

<221> 變異

<222> (1342)..(1344)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1342)..(1344)

<223> /注釋=“此區域可能會以其整體存在，也可能不會以其整體存在”

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1)..(1344)

<223> /注釋=“序列中給出的變體核苷酸相對於變體位置的注釋中的那些沒有偏好”

<400> 372

<210> 373

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 373

<210> 374

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 374

<210> 375

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 375

<210> 376

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 376

<210> 377

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 377

<210> 378

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 378

<210> 379

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 379

<210> 380

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 380

<210> 381

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 381

<210> 382

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 382

<210> 383

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 383

<210> 384

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 384

<210> 385

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 385

<210> 386

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 386

<210> 387

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 387

<210> 388

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 388

<210> 389

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 389

<210> 390

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 390

<210> 391

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 391

<210> 392

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (448)..(448)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(448)

<400> 392

<210> 393

<211> 1344

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<220>

<221> 變異

<222> (1342)..(1344)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1342)..(1344)

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1)..(1344)

<400> 393

<210> 394

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 394

<210> 395

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 395

<210> 396

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 396

<210> 397

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 397

<210> 398

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 398

<210> 399

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 399

<210> 400

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 400

<210> 401

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 401

<210> 402

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 402

<210> 403

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 403

<210> 404

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 404

<210> 405

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (451)..(451)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(451)

<400> 405

<210> 406

<211> 1353

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<220>

<221> 變異

<222> (1351)..(1353)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1351)..(1353)

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1)..(1353)

<400> 406

<210> 407

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 407

<210> 408

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 408

<210> 409

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 409

<210> 410

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 410

<210> 411

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 411

<210> 412

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 412

<210> 413

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 413

<210> 414

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 414

<210> 415

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 415

<210> 416

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 416

<210> 417

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 417

<210> 418

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 418

<210> 419

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 419

<210> 420

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 420

<210> 421

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 421

<210> 422

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 422

<210> 423

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 423

<210> 424

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 424

<210> 425

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 425

<210> 426

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 426

<210> 427

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (448)..(448)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(448)

<400> 427

<210> 428

<211> 1344

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<220>

<221> 變異

<222> (1342)..(1344)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1342)..(1344)

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1)..(1344)

<400> 428

<210> 429

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 429

<210> 430

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 430

<210> 431

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 431

<210> 432

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 432

<210> 433

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 433

<210> 434

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 434

<210> 435

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 435

<210> 436

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 436

<210> 437

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 437

<210> 438

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (451)..(451)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(451)

<400> 438

<210> 439

<211> 1353

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<220>

<221> 變異

<222> (1351)..(1353)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1351)..(1353)

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1)..(1353)

<400> 439

<210> 440

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 440

<210> 441

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 441

<210> 442

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 442

<210> 443

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 443

<210> 444

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 444

<210> 445

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (451)..(451)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(451)

<400> 445

<210> 446

<211> 1353

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<220>

<221> 變異

<222> (1351)..(1353)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1351)..(1353)

<220>

<221> 尚未歸類的特徵

<222> (1)..(1353)

<400> 446

<210> 447

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /替換="Y"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (2)..(2)

<223> /替換="N"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(5)

<400> 447

<210> 448

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /替換="S"

<220>

<221> 變體

<222> (3)..(3)

<223> /替換="T"

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /替換="T"

<220>

<221> 變體

<222> (7)..(7)

<223> /替換="G"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (8)..(8)

<223> /替換="S"或"L"或"Y"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(17)

<400> 448

<210> 449

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /替換="G"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (2)..(2)

<223> /替換="R"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(5)

<400> 449

<210> 450

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (4)..(4)

<223> /替換="S"

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /替換="S"或"T"

<220>

<221> 變體

<222> (9)..(9)

<223> /替換="K"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(16)

<400> 450

<210> 451

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 451

<210> 452

<211> 326

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 452

<210> 453

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 453

<210> 454

<211> 326

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 454

<210> 455

<211> 330

<212> PRT

<213> 智人

<400> 455

<210> 456

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 456

<210> 457

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 457

<210> 458

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 458

<210> 459

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 459

<210> 460

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 460

<210> 461

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 461

<210> 462

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 462

<210> 463

<211> 107

<212> PRT

<213> 智人

<400> 463

<210> 464

<211> 574

<212> PRT

<213> 智人

<400> 464

<210> 465

<211> 574

<212> PRT

<213> 智人

<400> 465

<210> 466

<211> 524

<212> PRT

<213> 智人

<400> 466

<210> 467

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人

<400> 467

<210> 468

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人

<400> 468

<210> 469

<211> 20

<212> PRT

<213> 智人

<400> 469

<210> 470

<211> 18

<212> PRT

<213> 智人

<400> 470

<210> 471

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (448)..(448)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(448)

<400> 471

<210> 472

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (448)..(448)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(448)

<400> 472

<210> 473

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (451)..(451)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(451)

<400> 473

<210> 474

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (448)..(448)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(448)

<400> 474

<210> 475

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (451)..(451)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(451)

<400> 475

<210> 476

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (451)..(451)

<223> /替換=" "

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(451)

<400> 476

<210> 477

<211> 13

<212> PRT

<213> 智人

<400> 477

<210> 478

<211> 330

<212> PRT

<213> 智人

<400> 478

<210> 479

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 479

<210> 480

<211> 20

<212> PRT

<213> 智人

<400> 480

<210> 481

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /替換="S"或"R"或"K"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

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<220>

<221> 變體

<222> (7)..(7)

<223> /替換="N"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(7)

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<210> 482

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (1)..(1)

<223> /替換="T"

<220>

<221> 變體

<222> (3)..(3)

<223> /替換="T"

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /替換="G"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /替換="S"或"L"或"Y"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(6)

<400> 482

<210> 483

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /替換="S"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /替換="G"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (7)..(7)

<223> /替換="R"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(7)

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<210> 484

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (2)..(2)

<223> /替換="S"

<220>

<221> 變體

<222> (3)..(3)

<223> /替換="S"或"T"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(5)

<400> 484

<210> 485

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /替換="S"或"R"或"K"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /替換="Y"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (7)..(7)

<223> /替換="N"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(10)

<400> 485

<210> 486

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /替換="S"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /替換="G"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (7)..(7)

<223> /替換="R"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(10)

<400> 486

<210> 487

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /替換="S"或"R"或"K"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /替換="Y"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (7)..(7)

<223> /替換="N"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(8)

<400> 487

<210> 488

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (2)..(2)

<223> /替換="T"

<220>

<221> 變體

<222> (4)..(4)

<223> /替換="T"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /替換="G"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (7)..(7)

<223> /替換="S"或"L"或"Y"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(8)

<400> 488

<210> 489

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /替換="S"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /替換="G"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (7)..(7)

<223> /替換="R"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(8)

<400> 489

<210> 490

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (3)..(3)

<223> /替換="S"

<220>

<221> 變體

<222> (4)..(4)

<223> /替換="S"或"T"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(7)

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<210> 491

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<212> PRT

<213> 智人

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<210> 492

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 492

<210> 493

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 493

<210> 494

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 494

<210> 495

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 495

<210> 496

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 496

<210> 497

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 497

<210> 498

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 498

<210> 499

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 499

<210> 500

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 500

<210> 501

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 501

<210> 502

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 502

<210> 503

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 503

<210> 504

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 504

<210> 505

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 505

<210> 506

<211> 8

<2工2> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 506

<210> 507

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 507

<210> 508

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 508

<210> 509

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 509

<210> 510

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 510

<210> 511

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 511

<210> 512

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 512

<210> 513

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 513

<210> 514

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 514

<210> 515

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 515

<210> 516

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 516

<210> 517

<211> 372

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 517

<210> 518

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 518

<210> 519

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 519

<210> 520

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 520

<210> 521

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 521

<210> 522

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 522

<210> 523

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 523

<210> 524

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 524

<210> 525

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 525

<210> 526

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 526

<210> 527

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 527

<210> 528

<211> 527

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 528

<210> 529

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (4)..(4)

<223> /替換="S"或"R"或"K"

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /替換="Y"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /替換="N"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(9)

<400> 529

<210> 530

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 530

<210> 531

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 531

<210> 532

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 532

<210> 533

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 533

<210> 534

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 534

<210> 535

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 535

<210> 536

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<220>

<221> 變體

<222> (4)..(4)

<223> /替換="S"

<220>

<221> 變體

<222> (5)..(5)

<223> /替換="G"或"S"

<220>

<221> 變體

<222> (6)..(6)

<223> /替換="R"

<220>

<221> 位點

<222> (1)..(9)

<400> 536

<210> 537

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 537

<210> 538

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 538

<210> 539

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 539

<210> 540

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 540

<210> 541

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 541

<210> 542

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 542

<210> 543

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 543

<210> 544

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 544

<210> 545

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 545

<210> 546

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 546

<210> 547

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 547

<210> 548

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 548

<210> 549

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 549

<210> 550

<211> 225

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 550

<210> 551

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 551

<210> 552

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 552

<210> 553

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 553

<210> 554

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 554

<210> 555

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 555

<210> 556

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 556

<210> 557

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 557

<210> 558

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 558

<210> 559

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 559

<210> 560

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 560

<210> 561

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 561

<210> 562

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 562

<210> 563

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 563

<210> 564

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 564

<210> 565

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 565

<210> 566

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 566

<210> 567

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 567

<210> 568

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 568

<210> 569

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 569

<210> 570

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 570

<210> 571

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 571

<210> 572

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 572

<210> 573

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 573

<210> 574

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 574

<210> 575

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 575

<210> 576

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 576

<210> 577

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 577

<210> 578

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 578

<210> 579

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 579

<210> 580

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 580

<210> 581

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 581

<210> 582

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 582

<210> 583

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 583

<210> 584

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 584

<210> 585

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 585

<210> 586

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 586

<210> 587

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 587

<210> 588

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 588

<210> 589

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 589

<210> 590

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 590

<210> 591

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 591

<210> 592

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 592

<210> 593

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 593

<210> 594

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 594

<210> 595

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 595

<210> 596

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 596

<210> 597

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 597

<210> 598

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 598

<210> 599

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 599

<210> 600

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 600

<210> 601

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 601

<210> 602

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 602

<210> 603

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 603

<210> 604

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 604

<210> 605

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 605

<210> 606

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 606

<210> 607

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 607

<210> 608

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 608

<210> 609

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 609

<210> 610

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 610

<210> 611

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 611

<210> 612

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 612

<210> 613

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 613

<210> 614

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 614

<210> 615

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 615

<210> 616

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 616

<210> 617

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 617

<210> 618

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 618

<210> 619

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 619

<210> 620

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 620

<210> 621

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 621

<210> 622

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 622

<210> 623

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 623

<210> 624

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 624

<210> 625

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成

肽的描述”

<400> 625

<210> 626

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 626

<210> 627

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 627

<210> 628

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 628

<210> 629

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 629

<210> 630

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 630

<210> 631

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 631

<210> 632

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 632

<210> 633

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 633

<210> 634

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 634

<210> 635

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 635

<210> 636

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 636

<210> 637

<211> 553

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 637

<210> 638

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 638

<210> 639

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成 6xHis tag”

<400> 639

<210> 640

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 640

<210> 641

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 641

<210> 642

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 642

<210> 643

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 643

<210> 644

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 644

<210> 645

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 645

<210> 646

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 646

<210> 647

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 647

<210> 648

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 648

<210> 649

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 649

<210> 650

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 650

<210> 651

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 651

<210> 652

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 652

<210> 653

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 653

<210> 654

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成肽的描述”

<400> 654

<210> 655

<211> 1338

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 655

<210> 656

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 656

<210> 657

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 657

<210> 658

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 658

<210> 659

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 659

<210> 660

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 660

<210> 661

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 661

<210> 662

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 662

<210> 663

<211> 1338

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 663

<210> 664

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 664

<210> 665

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 665

<210> 666

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 666

<210> 667

<211> 642

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多核苷酸的描述”

<400> 667

<210> 668

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 668

<210> 669

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 669

<210> 670

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 670

<210> 671

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 671

<210> 672

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 672

<210> 673

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 673

<210> 674

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 674

<210> 675

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 675

<210> 676

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 676

<210> 677

<211> 9

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 677

<210> 678

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成寡核苷酸的描述”

<400> 678

<210> 679

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 679

<210> 680

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 680

<210> 681

<211> 450

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 681

<210> 682

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 682

<210> 683

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 683

<210> 684

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 684

<210> 685

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 685

<210> 686

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 686

<210> 687

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 687

<210> 688

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 688

<210> 689

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 689

<210> 690

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 690

<210> 691

<211> 478

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 691

<210> 692

<211> 478

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 來源

<223> /注釋=“人工序列：合成多肽的描述”

<400> 692

Claims

一種組合，該組合包含

a)抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含表1中提供的任何抗體或抗原結合片段的重鏈互補決定區1(HCDR1)、重鏈互補決定區2(HCDR2)、重鏈互補決定區3(HCDR3)、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、輕鏈互補決定區2(LCDR2)和輕鏈互補決定區3(LCDR3)，和

b)抗人CD73抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含表2中提供的任何抗體或抗原結合片段的重鏈互補決定區1(HCDR1)、重鏈互補決定區2(HCDR2)、重鏈互補決定區3(HCDR3)、輕鏈互補決定區1(LCDR1)、輕鏈互補決定區2(LCDR2)和輕鏈互補決定區3(LCDR3)。
如請求項1所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或抗原結合片段的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3選自表1中提供的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列。
如請求項1或請求項2所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含表1中提供的重鏈可變區。
如請求項1-3中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含表1中提供的輕鏈可變區。
如請求項1或請求項2所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段選自以下中的任一項：

1)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：2的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：14的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；

2)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：5的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；

3)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：8的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：9的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；

4)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：38的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：50的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

5)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：41的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：53的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；

6)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：44的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：45的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：56的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列：

7)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：38的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：61的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

8)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：41的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：39的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：62的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；

9)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：44的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：45的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：63的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

10)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：38的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：68的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：50的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

11)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：41的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：68的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：53的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；

12)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：44的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：69的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：56的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

13)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：82的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：83的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：84的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：95的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：96的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：97的LCDR3序列；

14)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：85的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：86的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：84的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：98的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：100的LCDR3序列；

15)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：88的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：89的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：90的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：101的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：97的LCDR3序列；

16)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：106的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：107的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：108的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：119的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：120的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：121的LCDR3序列；

17)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：109的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：110的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：108的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：122的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：123的LCDR3序列；

18)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：112的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：113的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：114的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：124的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：121的LCDR3序列；

19)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：106的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：129的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：108的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：119的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：120的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：121的LCDR3序列；

20)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：109的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：130的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：108的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：122的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：123的LCDR3序列；

21)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：112的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：131的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：114的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：124的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：99的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：121的LCDR3序列；

22)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：136的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：137的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：138的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：149的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：150的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：151的LCDR3序列；

23)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：139的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：140的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：138的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：152的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：153的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：154的LCDR3序列；

24)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：142的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：143的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：144的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：155的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：153的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：151的LCDR3序列；

25)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：160的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：161的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：162的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：173的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：150的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：174的LCDR3序列；

26)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：163的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：164的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：162的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：175的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：153的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：176的LCDR3序列；

27)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：166的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：167的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：168的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：177的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：153的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：174的LCDR3序列；

28)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：220的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：221的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：61的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

29)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：222的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：221的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：62的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；

30)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：223的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：224的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：63的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

31)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：37的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：220的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：68的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：61的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：51的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

32)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：40的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：222的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：68的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：62的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：55的LCDR3序列；

33)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：43的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：223的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：69的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：63的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：54的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：52的LCDR3序列；

34)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：245的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：246的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：255的LCDR3序列；

35)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：247的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：246的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：256的LCDR3序列；

36)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：248的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：249的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：255的LCDR3序列；

37)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：261的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：262的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；

38)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：247的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：262的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；

39)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：248的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：263的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；

40)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：272的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：273的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：274的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：254的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：285的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列；

41)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：275的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：276的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：274的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：286的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列；

或

42)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：278的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：279的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：280的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：286的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列。
如請求項1-5中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段選自以下中的任一項：

i)包含如下重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)的抗體或其抗原結合片段，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：10或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：21或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

ii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：25或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：29或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

iii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：33或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：29或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

iv)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：46或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：57或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

v)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：46或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：64或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

vi)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：70或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：74或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

vii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：25或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：78或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

viii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：91或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：102或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

ix)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：115或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：125或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

x)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：132或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：125或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xi)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：145或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：156或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：169或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：178或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xiii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：225或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：229或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xiv)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：233或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：237或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xv)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：241或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：229或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xvi)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：250或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：257或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xvii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：264或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：268或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或

xviii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：281或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：287或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
如請求項1-6中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段選自以下中的任一項：

1)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：12或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：23或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

2)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：27或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：31或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

3)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：35或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：31或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

4)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：48或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：59或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

5)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：48或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：66或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

6)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：72或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：76或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

7)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：27或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：80或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

8)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：93或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：104或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

9)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：117或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：127或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

10)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：134或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：127或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

11)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：147或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：158或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

12)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：171或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：180或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

13)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：227或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：231或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

14)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：235或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：239或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

15)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：243或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：231或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

16)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：252或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：259或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

17)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：266或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：270或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或

18)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：283或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：289或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
如請求項1-7中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：2的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：14的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列。
如請求項1-7中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：4的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：5的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：17的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：19的LCDR3序列。
如請求項1-7中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：7的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：8的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：9的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：20的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：18的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列。
如請求項1-7中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：10或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：21或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
如請求項1-7中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含：SEQ ID NO：12或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；以及包含SEQ ID NO：23或與其具有至少約95%或更高同一性的序列的輕鏈。
如請求項1-12中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段結合人ENTPD2中的表位，其中該表位包含以下殘基中的至少一種：His50、Asp76、Pro78、Gly79、Gly80、Tyr85、Asp87、Asn88、Gly91、Gln94、Ser95、Gly98、Glu101、Gln102、Gln105、Asp106、Arg2‘45、Thr272、Gln273、Leu275、Asp278、Arg298、Ala347、Ala350、Thr351、Arg392、Ala393、Arg394、或Tyr398。
如請求項1-12中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段結合人ENTPD2中的表位，其中該表位包含以下殘基中的至少一種：Gly79、Gln250、Leu253、Trp266、Arg268、Gly269、Phe270、Ser271、Thr272、Gln273、Val274、Leu275、Asp278、Arg298、Ser300、Ser302、Gly303、Thr380、Trp381、Ala382、Gly390、Gln391、Arg392、Ala393、Arg394、或Asp397。
如請求項1-14中任一項所述之組合，其中該抗人CD73抗體或抗原結合片段的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3選自表2中提供的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列。
如請求項1-15中任一項所述之組合，其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含表2中提供的重鏈可變區。
如請求項1至16中任一項所述之組合，其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含表2中提供的輕鏈可變區。
如請求項1-15中任一項所述之組合，其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段選自以下中的任一項：

i)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：363的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：361的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：362的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：375的LCDR3序列；

ii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：363的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：385的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：362的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：375的LCDR3序列；

iii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：395的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

iv)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：420的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：419的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：362的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：375的LCDR3序列；

v)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：431的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：430的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

vi)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：430的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

vii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：494的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：493的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

viii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：494的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：503的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

ix)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：494的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：511的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列；

x)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：520的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：519的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：362的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：375的LCDR3序列；

xi)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：541的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：545的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：546的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：547的LCDR3序列；

xii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：554的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：545的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：546的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：547的LCDR3序列；

xiii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：561的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：559的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：560的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：569的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：570的LCDR3序列；

xiv)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：578的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：576的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：577的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：585的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：586的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：587的LCDR3序列；

xv)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：596的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：594的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：595的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：604的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：605的LCDR3序列；

xvi)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：420的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：611的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：612的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：620的LCDR3序列；

xvii)包含以下的抗體或其抗原結合片段：

包含SEQ ID NO：626的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：624的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：625的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：373的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：374的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：634的LCDR3序列。
如請求項1-18中任一項所述之組合，其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：395的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列。
如請求項1-19中任一項所述之組合，其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段選自以下中的任一項：

i)包含如下重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)的抗體或其抗原結合片段，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：369或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：380或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

ii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：390或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：380或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

iii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：403或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

iv)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：425或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：380或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

v)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：436或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

vi)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：443或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

vii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：499或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

viii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：508或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

ix)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：516或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

x)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：525或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：380或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xi)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：544或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：553或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：557或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：553或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xiii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：568或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：574或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xiv)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：584或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：592或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xv)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：603或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：609或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

xvi)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：619或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：622或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或

xvii)包含如下VH和VL的抗體或其抗原結合片段，該VH包含SEQ ID NO：633或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：636或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
如請求項1-20中任一項所述之組合，其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，該VH包含SEQ ID NO：403或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
如請求項1-19中任一項所述之組合，其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段選自以下中的任一項：

i)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：371或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：382或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

ii)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：392或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：382或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

iii)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：405或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

iv)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：427或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：382或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；

v)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：438或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416或與其具有至少約95%或更高同一性的序列；或

vi)包含如下重鏈和輕鏈的抗體，該重鏈包含SEQ ID NO：445或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
如請求項1-22中任一項所述之組合，其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：405或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
如請求項1-23中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：1的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：2的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：3的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：14的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：15的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：16的LCDR3序列

並且其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含：

包含SEQ ID NO：397的HCDR1序列、

包含SEQ ID NO：395的HCDR2序列、

包含SEQ ID NO：396的HCDR3序列、

包含SEQ ID NO：407的LCDR1序列、

包含SEQ ID NO：408的LCDR2序列、和

包含SEQ ID NO：409的LCDR3序列。
如請求項1-24中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：10或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：21或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含VH和VL，該VH包含SEQ ID NO：403或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該VL包含SEQ ID NO：414或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
如請求項1-25中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含：SEQ ID NO：12或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，以及包含SEQ ID NO：23或與其具有至少約95%或更高同一性的序列的輕鏈，並且其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含如下重鏈和輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：405或與其具有至少約95%或更高同一性的序列，並且該輕鏈包含SEQ ID NO：416或與其具有至少約95%或更高同一性的序列。
如請求項1-26中任一項所述之組合，其中該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段包含抗ENTPD2 mAb1，並且其中該抗人CD73抗體或其抗原結合片段包含抗CD73 mAb 373。
一種藥物組成物，該藥物組成物包含如前述請求項中任一項所述之組合，以及藥學上可接受的載體。
如請求項1-27中任一項所述之組合、或如請求項28所述之藥物組成物，用於作為藥物使用。
如請求項1-27中任一項所述之組合、或如請求項28所述之藥物組成物，用於在癌症的治療中使用。
如請求項1-27中任一項所述之組合或如請求項28所述之藥物組成物在製造用於治療癌症的藥物中之用途。
用於如請求項30所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項31所述之用途，其中該癌症係ENTPD2+癌症。
用於如請求項30或32所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項31或32所述之用途，其中該癌症係實性瘤，例如晚期實性瘤。
用於如請求項30或32-33所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項31-33中任一項所述之用途，其中該癌症係MSS大腸直腸癌(CRC)、膽管癌(肝內或肝外)、胰臟癌、食道癌、食道胃結合部(EGJ)癌或胃癌。
用於如請求項29-30或32-34中任一項所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項31-34中任一項所述之用途，其中將該組合或藥物組成物藉由靜脈內、腫瘤內或皮下途徑向該受試者投與。
用於如請求項29-30或32-35中任一項所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項31-35中任一項所述之用途，其中將該組合或藥物組成物與至少一種另外的治療劑或程序組合投與。
用於如請求項36所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項36所述之用途，其中該至少一種另外的治療劑係PD-1抑制劑，例如抗PD-1抗體。
用於如請求項37所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項37所述之用途；其中該PD-1抑制劑選自斯巴達珠單抗、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、或AMP-224。
用於如請求項38所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項38所述之用途，其中該PD-1抑制劑係斯巴達珠單抗。
用於如請求項35-39中任一項所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項35-39中任一項所述之用途，其中該至少一種另外的治療劑係A2aR拮抗劑，其選自由以下各項組成之群組：NIR178、CPI444/V81444、AZD4635/HTL-1071、維帕迪南、GBV-2034、AB928、茶鹼、伊曲茶鹼、托紮迪南/SYN-115、KW-6356、ST-4206和普瑞迪南/SCH 420814。
用於如請求項40中任一項所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項40中任一項所述之用途，其中該至少一種另外的治療劑係A2aR拮抗劑，該拮抗劑為NIR178。
用於如請求項35-41所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項35-41中任一項所述之用途，其中該另外的治療劑係PD-L1抑制劑，例如抗PD-L1抗體。
用於如請求項35-42所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項35-42中任一項所述之用途，其中該至少一種另外的治療劑係TGFβ抑制劑，例如抗TGFβ抗體。
一種在有需要的受試者中治療癌症之方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量的如請求項1-27中任一項所述之組合或如請求項28所述之藥物組成物。
如請求項44所述之方法，其中該癌症係ENTPD2+癌症。
如請求項44或45所述之方法，其中該癌症係實性瘤，例如晚期實性瘤。
如請求項44-46中任一項所述之方法，其中該癌症係MSS大腸直腸癌(CRC)、膽管癌(肝內或肝外)、胰臟癌、食道癌、食道胃結合部(EGJ)癌或胃癌。
如請求項44-47中任一項所述之方法，其中將該組合或藥物組成物藉由靜脈內、腫瘤內或皮下途徑向該受試者投與。
一種刺激受試者中的免疫應答之方法，該方法包括向該受試者投與有效刺激該免疫應答的量的如請求項1-27中任一項所述之組合或如請求項28所述之藥物組成物。
如請求項44-49中任一項所述之方法，該方法進一步包括向該受試者投與至少一種另外的治療劑或治療術。
如請求項50所述之方法，其中該至少一種另外的治療劑係PD-1抑制劑，例如PD-1抗體。
如請求項51所述之方法，其中該PD-1抑制劑選自斯巴達珠單抗、納武單抗、派姆單抗、匹地利珠單抗、MED10680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、或AMP-224。
如請求項52所述之方法，其中該PD-1抑制劑係斯巴達珠單抗。
如請求項50至52中任一項所述之方法，其中該至少一種另外的治療劑係A2AR拮抗劑，其中該A2AR拮抗劑選自由以下各項組成之群組：NIR178、CPI444/V81444、AZD4635/HTL-1071、維帕迪南、GBV-2034、AB928、茶鹼、伊曲茶鹼、托紮迪南/SYN-115、KW-6356、ST-4206和普瑞迪南/SCH 420814。
如請求項54所述之方法，其中該至少一種另外的治療劑係A2AR拮抗劑，該拮抗劑為NIR178。
如請求項50-55中任一項所述之方法，其中該另外的治療劑係PD-L1抑制劑，例如抗PD-L1抗體。
如請求項50-56中任一項所述之方法，其中該至少一種另外的治療劑係TGFβ抑制劑，例如抗TGFβ抗體。
用於如請求項29-30或32-43中任一項所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項31-43中任一項所述之用途，或如請求項44-57中任一項所述之方法，其中將該抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段和/或該抗人CD73抗體或其抗原結合片段以1小時(如果臨床有指示則長達2小時)輸注的方式靜脈內投與至受試者。
如請求項29-30或32-43或58中任一項所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項31-43或58中任一項所述之用途，或如請求項44-58中任一項所述之方法，將抗人ENTPD2抗體或其抗原結合片段和/或抗人CD73抗體或其抗原結合片段每二或四週一次以10mg、30mg、100mg、150mg、300mg、400mg、600mg、800mg、1200mg或2400mg投與至該受試者。
用於如請求項29-30或32-43或58-59中任一項所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項31-43或58-59中任一項所述之用途，或如請求項44-59 中任一項所述之方法，其中投與至少一種另外的治療劑，該治療劑為斯巴達珠單抗，並且其中將斯巴達珠單抗每四週一次以400mg投與至該受試者。
用於如請求項29-30或32-43或58-60中任一項所述使用的組合或藥物組成物，或如請求項31-43或58-60中任一項所述之用途，或如請求項44-60中任一項所述之方法，其中投與至少一種另外的治療劑，該治療劑為NIR178，並且其中將NIR178每天兩次(BID)以80mg或160mg連續地投與至該受試者。