TW202115077A - Ｍａｌｔ１抑制劑及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明提供用於治療自體免疫疾病、炎性疾病、或癌症之結構式(I)所示之化合物：

或其醫藥上可接受之鹽。

Description

MALT1抑制劑及其用途

相關申請案交互參考

本申請案主張2019年7月1日提出申請之國際專利申請案第PCT/CN2019/094154號之優先權之效益。前述申請案之全部內容係以引用方式全文併入本文中。

本發明有關利用新穎化合物或其醫藥上可接受之鹽治療自體免疫疾病、炎性疾病、或癌症。

對位凋亡蛋白酶(paracaspase)為半胱胺酸蛋白酶C14家族之成員，相較於存在植物、真菌、與原生生物中之間位凋亡蛋白酶(metacaspase)，彼等為與存在動物與黏液黴菌中之凋亡蛋白酶相關之蛋白酶。對位凋亡蛋白酶比間位凋亡蛋白酶更類似凋亡蛋白酶，表明對位凋亡蛋白酶係從共同間位凋亡蛋白酶祖先偏離凋亡蛋白酶。

對位凋亡蛋白酶於與MALT(胃黏膜相關淋巴組織)淋巴瘤子集相關之復發性t(11；18)(q21；q21)染色體易位中首先被鑑定。此染色體易位為MALT淋巴瘤中經鑑定最常見之突變，且易位導致由凋亡蛋白酶抑制劑蛋白c-IAP2(亦 稱為含桿狀病毒IAP重複序列蛋白3)N端與人類對位凋亡蛋白酶C端組成的融合致癌蛋白之形成，稱為MALT1。

MALT1(Mucosa Associated Lymphoid Tissue lymphoma translocation protein 1，胃黏膜相關淋巴組織淋巴瘤易位蛋白1)係人類唯一的對位凋亡蛋白酶。MALT1既具支架功能又具蛋白酶功能，也於免疫細胞(例如B與T淋巴細胞、NK淋巴細胞、以及髓樣細胞與肥大細胞)與非免疫細胞兩者中，傳遞來自細胞表面受體之訊息。於免疫細胞中，MALT1以ITAM(Immunoreceptor Tyrosine-based Activation Motif，免疫受體酪胺酸活化模體)序列，於免疫受體[例如，細胞受體(BCR)與T細胞受體(TCR)]下游起作用。於非免疫細胞中，MALT1於特定G蛋白偶聯受體(GPCR)與EGFR(Her2/neu)下游起作用。MALT1之支架功能在於幫助其他傳訊蛋白之組裝成稱為CBM之傳訊複合體(見下文)，而其半胱胺酸蛋白酶功能，至少於若干免疫細胞中，係負責切割一些靶定蛋白。MALT1蛋白分解活性似為T細胞活化以及B細胞淋巴瘤發展所必需。

舉例而言，於TCR/BCR活化後，MALT1成為所謂CBM複合體之活性次單元，該複合體由三種蛋白質之多個次單元組成：CARD11(capspace recruitment domain family member 11，凋亡蛋白酶聚集結構域家族成員11，亦已知為CARMA1)、BCL10(B細胞CLL/淋巴瘤10)與MALT1。然而，根據細胞譜系之不同，MALT1及其夥伴BCL10通常結合於含CARD(caspace recruitment domain，凋亡蛋白酶聚集結構域)之CARMA(含CARD之膜相關鳥苷酸激酶)蛋白家族之不同成員。特別是，淋巴細胞中，在抗原受體刺激(經由TCR或BCR路徑)後立即形成的CBM複合體涉及CARMA1/CARD11，而CARD9與Toll樣或C型凝集素受體下游之MALT1相互作用。同時，於非免疫細胞中，MALT1- BCL10-CARD10之CBM複合體經由GPCR與NF-κ B活化連接訊息傳遞(McAllister-Lucas et al.,PNAS 104：139-44,2007)。另一方面，CARD14與角質細胞中之MALT1及BCL10相互作用。

MALT1具有具未知功能之N端死亡結構域(DD)，隨後為BCL10結合所需的兩個類免疫球蛋白結構域(Ig)。中央類凋亡蛋白酶結構域與凋亡蛋白酶分享低序列同源性，惟採取如凋亡蛋白酶顯著類似之摺疊結構，具有H415與C464之活性部位殘基。類凋亡蛋白酶結構域之後為含K644之第三Ig結構域，其為控制蛋白酶活性之單泛蛋白化部位。MALT1亦含有兩個泛蛋白連接酶TRAF6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6，腫瘤壞死因子受體相關因子6)之結合模體。TRAF6在多個C端離胺酸殘基上多泛蛋白化MALT1，產生K63連接之泛蛋白鏈，其可繼而通過經由轉接蛋白TAB 2/3之聚集IKK活化之激酶TAK1的召集，促進NF-κB激酶(IKK)複合體抑制劑之活化。

MALT1係典型NF-κB訊息傳遞路徑之關鍵媒介者，並於直接或間接涉及炎性轉錄因子NF-kB的許多疾病中充當核心蛋白。MALT1通過兩個不同機制影響NF-κB傳訊。第一，通過其支架功能，MALT1聚集NF-κB傳訊蛋白例如TRAF6、TAB-TAK1、或NEMO-IKK α/β。第二，通過其Cys蛋白酶功能，MALT1切割且去活化NF-κB傳訊之負調控因子例如RelB、A20、或CYLD。MALT1活性之終極指標為NF-κB轉錄因子複合體之核易位與NF-κB傳訊之活化(Jaworski et al.,Cell Mol Life Science 73：459-473,2016)，導致產生介白素-2(IL-2)、以及T和B淋巴細胞之活化與增殖。

c-IAP2-MALT1融合物為NF-κB路徑之強力活化子(Rosebeck et al.,World J Biol Chem 7：128-137,2016)。c-IAP2-MALT1融合物模擬結合配體之 TNF受體，並促進扮作支架用於活化典型NF-κB傳訊的RIP1之TRAF2依賴性泛蛋白化。再者，已顯示該cIAP2-MALT1融合物可切割並產生NF-κB-誘導激酶(NIK)之穩定且持續性(constitutively)活性片段，從而活化非典型之NF-κB路徑(Rosebeck et al.,Science 331：468-472,2011)。

MALT1於先天性[例如，自然殺手或NK細胞、樹突細胞(dendritic cell，DC)、與肥大細胞]以及適應性免疫細胞(例如，T細胞與B細胞)中具有為細胞內傳訊蛋白之功能。某些刊物似乎提示MALT1與其蛋白分解功能在許多細胞類型中，於由先天性細胞受體如Dectin受體觸發的傳訊級聯反應，以及由G蛋白偶合性受體(GPCR)觸發的傳訊級聯反應中之重要作用。因此，MALT1在自體免疫與炎性病理學之機制上備受關注。此外，注意到持續性(失調之)MALT1活性與MALT淋巴瘤及活化型B細胞樣瀰漫性大B細胞淋巴瘤(activated B cell-like diffuse large B cell lymphoma，ABC-DLBCL)相關。

的確，NF-κB傳訊之持續性活化係ABC-DLBCL之品質保證。DLBCL(diffuse large B-cell lymphoma，瀰漫性大型B細胞淋巴瘤)是一種B細胞癌症，為成年人非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)之最常見形式，約佔淋巴瘤病例之25%。DLBCL是一種侵襲性腫瘤，幾乎可出現於身體之任何部位。通常，DLBCL係由正常B細胞引起，惟其亦可代表其他類型之淋巴瘤或有潛在顯著風險因素免疫缺乏之白血病之惡性轉形。於生物學上，主要有兩種不同的DLBCL分子亞型：生發中心型B細胞(GCB)與活化型B細胞(ABC)。ABC-DLBCL係於生發中心型B細胞分化成漿細胞之過程中衍生自B細胞。大約全部DLBCL之40%為ABC-DLBCL，其為DLBCL之更激進形式。通常，被診斷為ABC亞型的病患預後比GCB病患較差。ABC-DLBCL中NF-κB路徑之活化係由傳訊成分(例如 CD79A/B、CARD11、MYD88、或A20)之突變所驅動(Staudt,Cold Spring Harb Perspect Biol 2010,2；Lim et al.,Immunol Rev 246：359-378,2012)。儘管於治療上有進展，惟仍有三分之一之DLBCL病患無反應或於短時間內復發。

MALT1亦已被報導涉及數種其他疾病病理學，例如，不同類型之腫瘤疾患包括肺腺癌(Jiang et al.,Cancer Research 71：2183-2192,2011；Pan et al.,Oncogene 1：10,2015)、乳癌(Pan et al.,Mol Cancer Res 14：93-102,2016)、外膜細胞淋巴瘤(Penas et al.,Blood 115：2214-2219,2010；Rahal et al.,Nature Medicine 20：87-95,2014)、緣帶淋巴瘤(Remstein et al.,Am J Pathol 156：1183-1188,2000；Baens et al.,Cancer Res 66：5270-5277,2006；Ganapathi et al.,Oncotarget 1：10,2016；Bennett et al.,Am J of Surgical Pathology 1：7,2016)、皮膚T細胞淋巴瘤[例如塞扎萊(Sezary)症候群](Qin et al.,Blood 98：2778-2783,2001；Doebbeling et al.,J of Exp and Clin Cancer Res 29：1-5,2010)、原發性滲出液淋巴瘤(Bonsignore et al.,Leukemia 31：614-624,2017)、胰臟癌(WO2016/193339A1)、特定類型之具有CARD11突變之慢性淋巴球性白血病、以及涉及MALT1之淋巴瘤GCB-DLBCL類型之特定亞型。

除淋巴瘤之外，MALT1已顯示在先天性與適應性免疫上起關鍵作用(Jaworski et al.,Cell Mol Life Sci.2016)。

MALT1支架與蛋白酶功能為腹膜B1 B細胞、緣帶(MZ)B細胞、與自然調節性T細胞(nTreg)發育所必須。初始CD4⁺ T細胞之極化成T輔助細胞之Th17子集亦嚴重地依賴MALT1蛋白酶功能。

舉例而言，已發現MALT1在小鼠實驗性過敏性腦脊髓炎(多發性硬化症之小鼠模式)中起關鍵性作用(McGuire et al.,J.Neuroinflammation 11：124, 2014)。已顯示，MALT1蛋白酶抑制劑可減弱小鼠實驗性過敏性腦脊髓炎疾病之發作與進展(McGuire et al.,J.Neuroinflammation 11：124,2014)。表現無催化活性MALT1突變體之小鼠顯示緣帶B細胞與B1 B細胞喪失，以及特徵為T與B細胞活化與增殖減少之一般免疫缺乏。然而，彼等小鼠於9至10週齡時亦形成自發性多器官自體免疫炎症。何以MALT1蛋白酶無效之基因敲入小鼠顯示耐受性之破壞，而習知之MALT1 KO小鼠卻沒有，仍不甚了解。一種假說提示，MALT1蛋白酶無效基因敲入小鼠之不平衡免疫恆穩狀態，可能係由於T與B細胞之不完全缺乏，但免疫調節型細胞之嚴重缺乏導致(Jaworski et al.,EMBO J.2014；Gewies et al.,Cell Reports 2014；Bornancin et al.,J.Immunology 2015；Yu et al.,PLOS One 2015)。同樣地，人類之MALT1缺乏與複合型免疫缺乏症相關(McKinnon et al.,J.Allergy Clin.Immunol.133：1458-1462,2014；Jabara et al.,J.Allergy Clin.Immunol.132：151-158,2013；Punwani et al.,J.Clin.Immunol.35：135-146,2015)。有鑑於基因突變與藥理學抑制作用間之差異，MALT1蛋白酶無效之基因敲入小鼠之表現型可能與用MALT1蛋白酶抑制劑治療之病患不同。藉由抑制MALT1蛋白酶而降低免疫抑制性T細胞，可能由於潛在地增強抗腫瘤免疫力而有益於癌症病患。

無論如何，MALT1活性之失調在例如MALT1依賴型炎性及/或自體免疫疾病[例如，類風濕性關節炎(rheumatoid anthritis，RA)、多發性硬化症(multiple sclerosis，MS)、乾癬、全身性狼瘡、蕭格倫氏(Sjogren’s)症候群、與橋本氏(Hashimoto’s)甲狀腺炎]之疾病形成上起作用。靶定免疫調節蛋白可在多重器官之種種炎性病症上具有直接與間接之效益，例如在治療乾癬(Lowes et al.,Ann Review Immunology 32：227-255,2014；Afonina et al.,EMBO Reports 1-14,2016； Howes et al.,Biochem J 1-23,2016)、多發性硬化症(Jabara et al.,J Allergy Clin Immunology 132：151-158,2013；McGuire et al.,J of Neuroinflammation 11：1-12,2014)、類風濕性關節炎、蕭格倫氏症候群(Streubel et al.,Clin Cancer Research 10：476-480,2004；Sagaert et al.,Modern Pathology 19：225-232,2006)、潰瘍性結腸炎(Liu et al.,Oncotarget 1-14,2016)、不同器官之MALT淋巴瘤(Suzuki et al.,Blood 94：3270-3271,1999；Akagi et al.,Oncogene 18：5785-5794,1999)與慢性發炎產生之不同類型過敏性疾病上。

MALT1活性之抑制劑已被鑑定為係潛在之治療藥物。Rebaud et al.(Nat Immunol 9(3)：272-81,2008)敘述配備彈頭之基質類似物zVRPRfmk，而Lim et al.(J Med Chem 58(21)：8591-8502,2015)敘述小分子MALT1抑制劑MI2。Nagel et al.(Cancer Cell 22(6)：825-837,2012)敘述另一小分子抑制劑甲哌啶

(mepazine)。此等MALT1抑制劑之一特徵是，該等化合物被推薦用於依賴NF-κB路徑活性失調之自體免疫或炎性路徑、或癌症。MALT1蛋白分解活性之其他抑制劑已被敘述在臨床前淋巴瘤模式中具有活性(Vincendeau et al.,Int.J.Hematoi.Oncol.2：409,2013)。

同樣地，諾華(Novartis)(WO2015/181747)揭示一種小分子MALT1抑制劑，並以MALT1生化分析、以及由MALT淋巴瘤特有的cIAP2-MALT1融合蛋白之異位表現所驅動之NF-κB報導基因分析、以及IL2啟動子驅動之報導基因分析鑑定彼等化合物。亦參見針對相同類別化合物子集之WO2017/081641(諾華)。

藉由使用例如依魯替尼(ibrutinib)]等BTK抑制劑之臨床概念驗證研究顯示，抑制NF-κ B傳訊可有效治療ABC-DLBCL。MALT1在NF-κ B傳訊 遞路徑BTK下游起作用。因此，MALT1抑制劑可靶定無反應或者已對BTK抑制劑(例如依魯替尼)產生抗性之ABC-DLBCL病患，主要是具CARD11突變之病患。

於ABC-DLBCL之臨床前模式中已證明MALT1蛋白酶小分子抑制劑之功效(Fontan et al.,Cancer Cell 22：812-824,2012；Nagel et al.,Cancer Cell 22：825-837,2012；Fontan et al.,Clin Cancer Res 19：6662-68,2013)。再者，MALT1蛋白酶功能之共價催化位點與異位抑制劑已被敘述，表明此蛋白酶之抑制劑可為醫藥製劑用(Demeyer et al.,Trends Mol Med 22：135-150,2016)。

因此，業界對用於治療涉及MALT1活化之疾病或病症(例如癌症以及依賴MALT1-NF-kB活化之免疫性與炎性病症)之MALT1抑制性化合物有所需求。

本文中敘述抑制MALT1活性之式(I)、(II-A)、或(II-B)之化合物，與實施例之化合物(本文統稱為“本發明化合物”)，及其醫藥上可接受之鹽。

於一態樣中，本發明提供由結構式(I)所示之化合物：

或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，式中

A環為

或

；

Z為O、NR₆、或S；

A₁與A₂各自獨立地為CR₁或N；

R₁之各情況為氫；鹵素；-OH；CN；-COOC_1-6烷基；視需要經鹵素取代之C_1-6烷氧基；C_1-6烷氧基羰基；苯基；胺基；N,N-二-C_1-6烷基胺基；視需要經鹵素、苯基、或具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜環(該環視需要經C_1-6烷基取代)取代之C_1-6烷基；Rh；ORh；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經胺基、視需要經胺基或羥基或經N-單-C_1-6烷基胺基羰基或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基取代之C_1-6烷基取代；其中

Rh為具有選自N、O與S之1至4個雜原子之5至6員雜環，該環視需要經C_1-6烷基、-OH、或側氧基取代；

R₂之各情況為氫；鹵素；CN；-COOC_1-6烷基；視需要經鹵素取代之C_1-6烷氧基；C_1-6烷氧基羰基；胺基；N,N-二-C_1-6烷基胺基；視需要經鹵素、-OH、苯基、或具有選自N與O之1至2個雜原子之5至6員雜環(該環視需要經C_1-6烷基取代)取代之C_1-6烷基；Rh；ORh；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經胺基、視需要經胺基或羥基取代之C_1-6烷基、或經N-單-C_1-6烷基胺基羰基或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基取代；

R₃之各情況為H；氘；鹵素；CN；-OH；-COOH；-NR_aR_b；-SR_c；-SO₂R_c；-SO₂NR_c；-C(=O)NR_aR_b；視需要經鹵素、OH、C_1-6烷基、-NH₂、-NHC(=O)C_1-6烷基、N-二-C_1-6烷基胺基、或N-單-C_1-6烷基胺基取代之C_1-6烷氧基；視需要經鹵素、C_2-6烯基、-OH、-NH₂、-NHC(=O)C_1-6烷基、N-二-C_1-6烷基胺基、N-單-C_1-6烷基胺基、-O-Rg、Rg、苯基、或C_1-6烷氧基取代之C_1-6烷基(其中該烷氧基視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷氧基、N,N-二-C_1-6烷基胺基、Rg或苯基取代)；視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷基、N,N-二-C_1-6烷基胺基或C_1-6烷氧基-C_1-6烷基取代之 C_3-6環烷基；視需要經鹵基或C_1-6烷氧基取代之苯基；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經可視需要經胺基或-OH取代之C_1-6烷基取代；Rg；或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基；其中

Rg為具有選自N與O之1至3個雜原子之3至6員雜環，該環視需要經-OH、-NH₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷氧基-羰基取代；

R_a獨立地為H或視需要經C_1-6烷氧基取代之C_1-6烷基，Rb獨立地為H、C_1-6烷基、-COC_1-6烷基、-SO₂C_1-6烷基、C_3-6環烷基或具有選自N與O之1至3個雜原子之3至6員雜環，該環視需要經C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷氧基-羰基取代，或

R_a與R_b和與其連接的氮原子一起，形成具有選自N、O、與S之1至3個雜原子之4至6員雜環，該環視需要經-OH、-NH₂、N-二-C_1-6烷基胺基、N-單-C_1-6烷基胺基、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6鹵烷氧基、O-環丙基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷基-羰基取代；

R_c之各實例為C_1-6烷基或C_3-6環烷基；

其中由R_a、R_b、或R_c所示或由R_a、R_b、或R_c所示基團中之烷基視需要經鹵素、-OH、C_1-2烷氧基、或C_3-4環烷基取代；

R₄之各情況為H、氘、鹵素、CN、C_1-6烷基、或C_1-6鹵烷基；

R₄’之各情況為H、氘、F、或Cl；

R₅之各情況為H、氘、C_1-6烷基、或C_1-6鹵烷基；及

R₆為H；OH；視需要經鹵素、OH、或C_1-6烷氧基取代之C_1-6烷基；或視需要經鹵素、OH、或C_1-6烷氧基取代之C_3-6環烷基。

本文提供一種醫藥組成物，其包含有效量之本發明化合物或其醫 藥上可接受之鹽、與醫藥上可接受之載劑。

本文中亦提供一種組合療法，其包含治療有效量之本發明化合物、或其醫藥上可接受之鹽、以及一或多種具治療活性之共劑。

本發明進一步提供在有其需要之受試者中抑制MALT1活性之方法，該方法包括投予該受試者治療有效量之本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽。

於本發明方法之特定具體例中，該受試者具有例如自體免疫疾病、炎性疾病、或癌症之疾病或症狀，且其中該疾病或症狀被治療。

於本發明方法之特定具體例中，該疾病或症狀係類風濕性關節炎(RA)、多發性硬化症(MS)、全身性紅斑性狼瘡(SLE)、血管炎性症狀、過敏性疾病、呼吸道疾病[例如氣喘與慢性阻塞性肺部疾病(COPD)]、延遲或即時性過敏反應引起之症狀、急性過敏症、急性或慢性移植排斥、移植物抗宿主病、造血起源或實體腫瘤之癌症，包括慢性類骨髓性白血病(CML)、類骨髓性白血病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、或B細胞淋巴瘤。

特定具體例揭示用於作為藥劑，例如作為MALT1抑制劑的藥劑之本發明化合物、或其醫藥上可接受之鹽。

本揭示內容亦提供本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽或包含該化合物之醫藥組成物於本發明上述任何方法中之用途。於一具體例中，係提供用於本發明上述任何方法中之本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽或包含該化合物之醫藥組成物。於另一具體例中，係提供本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽或包含該化合物之醫藥組成物於製造本發明所述任何方法中之藥劑之用途。

圖1顯示於生物學實施例1中所述GLOSENSOR^TM分析中，本發明代表性化合物之劑量反應曲線。需要注意的是，特定化合物為部分抑制劑，對MALT1對位凋亡蛋白酶活性之最大抑制為約70至80%。

圖2顯示於生物學實施例2中所述IL-2生成分析中，本發明代表性化合物之劑量反應曲線。需要注意的是，特定化合物係部分抑制劑，對MALT1對位凋亡蛋白酶活性之最大抑制為約50至80%。

1.綜述

本文敘述抑制MALT1活性之式(I)、(II-A)、或(II-B)之化合物，與實施例之化合物(本文中統稱為“本發明化合物”)，及其醫藥上可接受之鹽。亦揭示使用其抑制MALT1活性以治療如本文所述包括自體免疫失調、炎性疾病、或癌症等疾病或症狀之方法。

2.界定

除非於本文中另行指示，或於上下文明顯予盾，否則本文所用之“a(一)”、“an(一)”、“the(該)”及本發明上下文(尤其是申請專利範圍上下文)中所用之類似術語欲被理解為涵蓋單數與複數。

本文中所用之“鹵基”一詞意指鹵素及包括氯、氟、溴與碘。

單獨使用或為較大部分(moiety)一部分之“烷基”一詞，例如“烷氧基”或“鹵烷基”等，意指飽和脂族直鏈或支鏈單價烴基。除非另行指明，否則烷 基通常具有1至4或1至6個碳原子，即(C₁-C₄)烷基或(C₁-C₆)烷基。於此，“(C₁-C₄)烷基”意指具有呈線性或分支排列之1至4個碳原子之基團；其實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、二級丁基、異丁基、三級丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基等。

“C_1-6伸烷基”一詞係指具有1至6個碳原子之二價完全飽和之分支或直鏈單價烴基團。同樣地，“C_1-4伸烷基”、“C_1-3伸烷基”與“C_1-2伸烷基”作相應之解釋。C_1-6伸烷基之代表性實例包括，惟不限於，亞甲基、伸乙基、伸正丙基、伸異丙基、伸正丁基、伸二級丁基、伸異丁基、伸三級丁基、伸正戊基、伸異戊基、伸新戊基、與伸正己基。

“視需要經羥基取代之C₁-C₆烷基”一詞係指如上文界定之C₁-C₆烷基，可經一或多個羥基取代。實例包括，惟不限於，羥甲基、羥乙基、1,2-二羥乙基、2,3-二羥基-丙基等。

本文所用之“二C_1-6烷基胺基”一詞係指式-N(R_a)-R_a之一部分，其中各R_a為如上文界定之C_1-6烷基，可相同或不同，與此類似地，“單C_1-6烷基胺基”係指式-N(H)-R_a之一部分，其中R_a為如上文界定之C_1-6烷基。

“烯基”一詞意指含有至少一個雙鍵之支鏈或直鏈單價烴基。烯基可為單不飽和或多不飽和，且可呈E或Z構型存在。除非另行指明，否則烯基通常具有2至6個碳原子，即(C₂-C₆)烯基。例如，“(C₂-C₆)烯基”意指具有呈線性或分支排列之2至6個碳原子之基團。

“炔基”一詞意指含有至少一個參鍵之分支或直鏈單價烴基。除非另行指明，否則炔基通常具有2至6個碳原子，即，(C₂-C₆)炔基。例如，“(C₂-C₆)炔基”意指具有呈線性或分支排列之2至6個碳原子之基團。

“烷氧基”一詞意指通過氧連接原子連接之烷基基團，以-O-烷基表示。例如，“C₁-C₆烷氧基”係指-O-C₁-C₆烷基，其中烷基於本文中界定，且“(C₁-C₄)烷氧基”包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、與丁氧基等。烷氧基之代表性實例包括，惟不限於，甲氧基、乙氧基、2-丙氧基、丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、己氧基、環丙氧基-、環己氧基-等。通常，烷氧基具有約1至6個碳原子、1至4個碳原子、或1至2個碳原子。

“鹵烷基”與“鹵烷氧基”等詞，視情況而定，意指經一或多個鹵素原子取代之烷基或烷氧基。鹵烷基之實例包括，惟不限於，三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基等。

因此“視需要經鹵素取代之C_1-6烷基”一詞係指可經一或多個鹵素取代之如上文界定之C₁-C₆烷基。實例包括，惟不限於，三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基、3-溴-2-氟丙基、與1-溴甲基-2-溴乙基。

如本文所用之“環烷基”一詞包括含有所示環數與碳原子數之具3至14個碳之飽和環狀、雙環、三環、或多環烴基(例如C₃-C₁₄單環、C₄-C₁₄雙環、C₅-C₁₄三環、或C₆-C₁₄多環環烷基)。於若干具體例中，“環烷基”為單環環烷基。單環環烷基之實例包括環戊基(C₅)、環己基(C₆)、環丙基(C₃)、環丁基(C₄)、環庚基(C₇)與環辛基(C₈)。於若干具體例中，“環烷基”為雙環環烷基。雙環環烷基之實例包括雙環[1.1.0]丁烷(C₄)、雙環[1.1.1]戊烷(C₅)、螺[2.2]戊烷(C₅)、雙環[2.1.0]戊烷(C₅)、雙環[2.1.1]己烷(C₆)、雙環[3.3.3]十一烷(C₁₁)、十氫萘(C₁₀)、雙環[4.3.2]十一烷(C₁₁)、螺[5.5]十一烷(C₁₁)與雙環[4.3.3]十二烷(C₁₂)。於若干具體例中，“環烷基”為三環環烷基。三環環烷基之實例包括金剛烷(C₁₂)。除非另行說明，否則“環 烷基”具有三至六個碳原子且為單環。

單獨使用或如於“芳烷基”、“芳烷氧基”、或“芳氧烷基”中為較大基團一部分之“芳基”一詞意指碳環芳族環。“芳基”一詞可與“芳基環”、“碳環芳族環”、“芳基”與“碳環芳基”互換使用。通常，芳基為具有6至20個碳原子，通常為6至14個環碳原子之單環、雙環或三環芳基。再者，本文所用之“芳基”一詞係指可為單一芳環、或稠合在一起的多個芳環之芳族取代基。實例包括苯基、萘基、蒽基、1,2-二氫萘基、1,2,3,4-四氫萘基、茀基、二氫茚基、茚基等。

“經取代基之芳基”於任一或多個可經取代之環原子上被取代，該環原子為與氫結合之環碳原子。經取代基之芳基通常被1至5個(例如一、或二、或三個)取代基取代，該取代基係獨立地選自下述群組：羥基、硫醇、氰基、硝基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄烯基、C₁-C₄炔基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄硫代烷基、C₁-C₄烯氧基、C₁-C₄炔氧基、鹵素、C₁-C₄烷基羰基、羧基、C₁-C₄烷氧羰基、胺基、C₁-C₄烷基胺基、二-C₁-C₄烷基胺基、C₁-C₄烷基胺羰基、二-C₁-C₄烷基胺羰基、C₁-C₄烷基羰胺基、C₁-C₄烷羰基、C₁-C₄烷基胺基、磺醯基、胺磺醯基、烷基胺磺醯基、與C₁-C₄烷基胺基磺醯基；其中前述各個烴基(例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基殘基)可進一步經一或多個於每次出現時獨立地選自鹵素、羥基或C₁-C₄烷氧基的殘基取代。

“雜環基”或“雜環基團”等詞意指單環、具有含較佳為1至4環雜原子之3至10員非芳族(包括部分飽和)環、或具有較佳為7至20個環員及較佳為1至4環雜原子之多環，其中該多環具有與一或多個芳族或雜芳族環稠合之一或多個單環非芳族雜環。雜環基通常具有3至7、3至24、4至16、5至10、或5或6個環原子；其中視需要有一至四個，尤其是一或兩個環原子為雜原子 (因此其餘環原子為碳)。各個雜原子獨立地選自氮、四級氮、氧化氮(例如，NO)；氧；與硫，包括亞碸和碸。雜環基團可附接於雜原子或碳原子。雜環之實例包括四氫呋喃(THF)、二氫呋喃、1,4-二

烷、嗎啉、1,4-二硫環己烷、哌

、哌啶、1,3-二氧雜環戊烷、咪唑啶、咪唑啉、吡咯啉、吡咯啶、四氫吡喃、二氫吡喃、氧硫雜環戊烷、二硫雜環戊烷、1,3-二

烷、1,3-二硫環己烷、氧硫雜環己烷、硫嗎啉等。

雜環基可包括稠環或橋環以及螺環。於一具體例中，雜環基為具有與苯基稠合的單環非芳族雜環之雙環。例示性多環雜環基包括四氫異喹啉基(例如1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基、2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基、1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基與2-甲基-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基)、異吲哚啉基(例如2-乙基異吲哚啉-5-基、2-甲基異吲哚啉-5-基)、吲哚啉基、四氫苯并[f]氧雜吖庚因基(oxazepinyl)(例如，2,3,4,5-四氫苯并[f][1,4]氧雜吖庚因-7-基)。

無論是飽和或部分不飽和之“雜環”、“雜環基”、“雜環族”等詞均係指視需要經取代之環。經取代之雜環基可為獨立地經1至4個，例如一個、或兩個、或三或四個取代基取代之雜環。

於若干具體例中，雜環基基團為具有環碳原子與1至4個環雜原子之3至14員非芳族環系統，其中各雜原子獨立地選自氮、氧、與硫(“3至14員雜環基”)。

“雜芳基”、“雜芳族”、“雜芳基環”、“雜芳基團”、“雜芳族環”與“雜芳族基團”等詞，單獨使用或為較大部分的一部分使用，例如於“雜芳烷基”或“雜芳基烷氧基”中，係指具有5至14個選自碳與至少一個(通常1至4個，更通常為1或2個)雜原子(例如，氧、氮或硫)的環原子之芳族環基團。“雜芳基”包括其 中單環雜芳族環稠合於或多個其他碳環芳族或雜芳族環之單環與多環(例如，雙環或三環)。因此，“5至14員雜芳基”包括單環、雙環或三環環系統。

5至6員單環雜芳基之實例包括呋喃基(例如，2-呋喃基、3-呋喃基)、咪唑基(例如，N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基)、異

唑基(例如，3-異

唑基、4-異

唑基、5-異

唑基)、

二唑基、(例如，2-

二唑基、5-

二唑基)、

唑基(例如，2-

唑基、4-

唑基、5-

唑基)、吡唑基(例如，3-吡唑基、4-吡唑基)、吡咯基(例如，1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基)、吡啶基(例如，2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基)、嘧啶基(例如，2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基)、嗒

基(例如，3-嗒

基)、噻唑基(例如，2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基)、三唑基(例如，2-三唑基、5-三唑基)、四唑基(例如，四唑基)、噻吩基(例如，2-噻吩基、3-噻吩基)、嘧啶基、吡啶基與嗒

基。

典型地，雜芳基為5至10員環系統(例如，5至6員單環或8至10員雙環)或5至6員環系統。典型的雜芳基包括2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、2-或3-吡咯基、2-、4-、或5-咪唑基、3-、4-、或5-吡唑基、2-、4-、或5-噻唑基、3-、4-、或5-異噻唑基、2-、4-、或5-

唑基、3-、4-、或5-異

唑基、3-或5-1,2,4-三唑基、4-或5-1,2,3-三唑基、四唑基、2-、3-、或4-吡啶基、3-或4-嗒

基、3-、4-、或5-吡

基、2-吡

基、與2-、4-、或5-嘧啶基。

多環芳族雜芳基之實例包括咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并

唑基、苯并咪唑基、異喹啉基、吲哚基、異吲哚基、吖啶基、或苯并異

唑基。

因此，“雜芳基”一詞亦係指其中雜芳族環與一或多個芳基、脂環族、或雜環基環稠合之基團，其中附接之基團或點在雜芳族環上。非限制實例 包括1-、2-、3-、5-、6-、7-、或8-吲嗪基、1-、3-、4-、5-、6-、或7-異吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-吲唑基、2-、4-、5-、6-、7-、或8-嘌呤基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、或9-喹嗪基、2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-異喹啉基、1-、4-、5-、6-、7-、或8-酞

基、2-、3-、4-、5-、或6-萘啶基、2-、3-、5-、6-、7-、或8-喹唑啉基、3-、4-、5-、6-、7-、或8-噌啉基、2-、4-、6-、或7-喋啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-4aH咔唑基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-咔唑基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-咔啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-、或10-啡啶基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-吖啶基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-苯并喹唑啉基(perimidinyl)、2-、3-、4-、5-、6--8-、9-、或10-啡咯啉基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、或9-啡

基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-、或10-啡噻

基、1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-、或10-啡

基、2-、3-、4-、5-、6-、或1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-、或10-苯并異喹啉基、2-、3-、4-、或噻吩并[2,3-b]呋喃基、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-、或11-7H-吡

并[2,3-c]咔唑基、2-、3-、5-、6-、或7-2H-呋喃并[3,2-b]-吡喃基、2-、3-、4-、5-、7-、或8-5H-吡啶并[2,3-d]-o-

基、1-、3-、或5-1H-吡唑并[4,3-d]-

唑基、2-、4-、或5-4H-咪唑并[4,5-d]-噻唑基、3-、5-、或8-吡

并[2,3-d]嗒

基、2-、3-、5-、或6-咪唑并[2,1-b]-噻唑基、1-、3-、6-、7-、8-、或9-呋喃并[3,4-c]噌啉基、1-、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、10-、或11-4H-吡啶并[2,3-c]咔唑基、2-、3-、8-、或7-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三

基、7-苯并[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-、或7-苯并

唑基、2-、4-、5-、6-、或7-苯并咪唑基、2-、4-、4-、5-、6-、或7-苯并噻唑基、1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-、或9-苯并奧沙平基(benzoxapinyl)、2-、4-、 5-、6-、7-、或8-苯并

基(benzoxazinyl)、1-、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-、或11-1H-吡咯并[1,2-b][2]苯扎氮平基(benzazapinyl)。

典型的稠合雜芳基包括，惟不限於2-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-喹啉基、1-、3-、4-、5-、6-、7-、或8-異喹啉基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-吲哚基、2-、3-、4-、5-、6-、或7-苯并[b]噻吩基、2-、4-、5-、6-、或7-苯并

唑基、2-、4-、5-、6-、或7-苯并咪唑基、與2-、4-、5-、6-、或7-苯并噻唑基。

本文所用視需要經羥基取代之吡啶或吡啶基一詞，例如2-吡啶基、3-吡啶基、或4-吡啶基係指各別之羥基吡啶或羥基-吡啶基，且可包括其互變異構型例如各自之吡啶酮或吡啶酮-yi。

本文所用之視需要經側氧基取代之吡啶或吡啶基一詞，例如2-吡啶基、3-吡啶基、或4-吡啶基係指各別之吡啶酮或吡啶酮基且可包括其互變異構型，例如各自之羥基-吡啶或羥基-吡啶基，只要該互變異構型可獲得。視需要經側氧基取代之吡啶或吡啶基可進一步參照各自之吡啶-N-氧化物或吡啶基-N-氧化物。

“經取代之雜芳基”於任何一或多個可取代之環原子被取代，該環原子為與氫鍵結之環碳或環氮原子。

“橋接之雙環基”一詞係指包括共享至少三個鄰接環原子的兩個環之環系統。

本文所用之許多部分(例如，烷基、伸烷基、環烷基、芳基、雜芳基、或雜環基)被稱為“經取代”或“視需要經取代”。當部分係經這些術語之一修飾時，除非另行說明，否則表示該部分為發明所屬技術領域中的技術人員已知可用於取代之任何部分均可被取代，包括一或多個(例如，一至三個)取代基。若存在 一個以上取代基，則每個取代基可獨立地選擇。此類取代方法為發明所屬技術領域中悉知及/或由本發明教導。視需要之取代基可為適於附接該部分之任何取代基。

於未具體列舉適當取代基情況下，例示之取代基包括，惟不限於：(C₁-C₅)烷基、(C₁-C₅)羥烷基、(C₁-C₅)鹵烷基、(C₁-C₅)烷氧基、(C₁-C₅)鹵烷氧基、鹵素、羥基、氰基、胺基、-CN、-NO₂、-OR^c1、-NR^a1R^b1、-S(O)_iR^a1、-NR^a1S(O)_iR^b1、-S(O)_iNR^a1R^b1、-C(=O)OR^a1、-OC(=O)OR^a1、-C(=S)OR^a1、-O(C=S)R^a1、-C(=O)NR^a1R^b1、-NR^a1C(=O)R^b1、-C(=S)NR^a1R^b1、-C(=O)R^a1、-C(=S)R^a1、NR^a1C(=S)R^b1、-O(C=O)NR^a1R^b1、-NR^a1(C=S)OR^b1、-O(C=S)NR^a1R^b1、-NR^a1(C=O)NR^a1R^b1、NR^a1(C=S)NR^a1R^b1、苯基、或5至6員雜芳基。各R^a1與各R^b1獨立地選自-H與(C₁-C₅)烷基，視需要經羥基或(C₁-C₃)烷氧基取代；R^c1為-H、(C₁-C₅)鹵烷基或(C₁-C₅)烷基，其中(C₁-C₅)烷基視需要經羥基或(C₁-C₃)烷氧基取代。

本文敘述之化合物可呈各種互變異構形式存在。“互變異構物”或“互變異構性”等詞係指由於氫原子之至少一個形式遷移及至少一個價數變化(例如，單鍵成為雙鍵、參鍵成為單鍵，或反之亦然)產生的兩個或兩個以上可互相轉換的化合物/置換物。例示之互變異構包括，酮至烯醇、醯胺至醯亞胺、內醯胺至內醯亞胺、烯胺至亞胺、以及烯胺至(不同烯胺)之互變異構。本教示涵蓋呈互變異構物形式之化合物，包括未於結構上描繪之形式。此類化合物之所有此類異構形式均明確地包括在內。若化合物之互變異構物為芳族，則該化合物即為芳族。

應理解的是，當本文化合物係以結構式表示或以本文化學名稱表 明時，該化合物可能存在的所有其他互變異構形式均為該結構式所涵蓋。

上述任一式之化合物可展示一或多種異構性(例如光學、幾何或互變異構性)。上述任一式之化合物亦可被同位素標記。由於上述任一式之化合物係經由參考其結構特徵而界定，此類變異隱含其中，因此隸屬本揭示內容範疇之內。

含有一或多個非對稱碳原子之上述任一式之化合物可呈兩個或兩個以上立體異構物存在。於上述任一式之化合物含有烯基或亞烯基之情況下，可能存在幾何順式/反式(或Z/E)異構物。結構異構體經由低能量障壁互相轉換之情況下，會發生互變異構之異構性(“互變異構性”)。於含有例如亞胺基、酮基、或肟基之上述任一式之化合物中，可採取質子互變異構性之形式，或於含有芳族基團的化合物中之所謂原子價互變異構性。因此，單一化合物可能表現不只一種類型之異構性。

具有一或多個掌性中心之化合物可呈多種立體異構形式存在。立體異構物為僅於其空間排列上不同之化合物。立體異構物包括所有非鏡像異構物、鏡像異構物、與差向異構物形式以及消旋物及其混合物。“幾何異構物”一詞係指具有至少一個雙鍵之化合物，其中該雙鍵可呈順式[亦稱為同(syn)或entgegen(E)]或反式[亦稱為反(anti)或一起(zusammen，Z)]形式以及其混合物存在。當所揭示之化合物係經由結構命名或描繪而未指示立體化學性時，一般了解該名稱或結構涵蓋一或多種可能之立體異構物、或幾何異構物、或所涵蓋立體異構物或幾何異構物之混合物。

當以名稱或結構描繪幾何異構物，應理解的是，經命名或描繪之異構物比另一異構物存在的程度更高，亦即，該經命名或描繪的幾何異構物之幾 何異構物純度大於50%，例如以重量計至少60%、70%、80%、90%、99%、或99.9%之純度。幾何異構物純度係利用將混合物中經命名或描繪的幾何異構物之重量除以混合物中所有幾何異構物的總重量而決定。

消旋混合物意指50%之一種鏡像異構物與50%之相對應鏡像異構物。當命名或描繪具有一個掌性中心之化合物而未指示該掌性中心之立體化學時，一般了解該名稱或結構涵蓋該化合物的兩種可能的鏡像異構物形式(例如，鏡像異構物純正、鏡像異構物富集或消旋)。當命名或描繪具有兩個或兩個以上掌性中心之化合物而未指示該掌性中心之立體化學時，一般了解該名稱或結構涵蓋該化合物所有可能的非鏡像異構物形式[例如，非鏡像異構物純正、非鏡像異構物富集及一或多種非鏡像異構物之等莫耳混合物(例如，消旋混合物)]。

鏡像異構物與非鏡像異構物混合物，可利用一般悉知之方法離析為組成鏡像異構物或立體異構物，例如掌性相氣相層析法、掌性相高效液相層析法，將該化合物結晶化為掌性鹽複合體；或於掌性溶劑中結晶化該化合物。亦可利用一般悉知之不對稱合成法，以非鏡像異構物或鏡像異構物純正之中間物、試劑、與觸媒得到鏡像異構物與非鏡像異構物。

當化合物係經由指示為單一鏡像異構物之名稱或結構定名時，除非另行指示，否則該化合物之光學純度係至少為60%、70%、80%、90%、99%或99.9%(亦稱為“鏡像異構物純正”)。光學純度係將混合物中該命名或描繪之鏡像異構物之重量除以混合物中兩種鏡像異構物之總重量。

當所揭示化合物之立體化學係由結構命名或描繪，且該經命名或描繪之結構涵蓋一種以上立體異構物(例如，如於非鏡像異構物對中)時，應理解的是，所涵蓋立體異構物之一或所涵蓋立體異構物之任何混合物也包括在內。應 進一步理解的是，該命名或描繪之立體異構物之立體異構純度，以重量計至少為60%、70%、80%、90%、99%或99.9%。於此情形下，立體異構物之純度係經由將混合物中由名稱或結構所涵蓋之立體異構物之總重量，除以混合物中所有立體異構物之總重量而決定。

以上所述任一式化合物之醫藥上可接受之鹽亦可含有具光學活性(例如d-乳酸或l-離胺酸)或消旋性(例如dl-酒石酸或dl-精胺酸)之相對離子。

順式/反式異構物可利用發明所屬技術領域中的技術人員周知之習知技術分離，例如，色層分析法與分段結晶法。

用於製備/單離個別鏡像異構物之習知技術包括，從適當之光學純正前驅物進行掌性合成，或使用例如掌性高壓液相層析法(HPLC)離析消旋物(或鹽或衍生物之消旋物)。替代地，該消旋物(或消旋前驅物)可與適當之光學活性化合物(例如，酒精)反應，或於上文所述任一式之含有酸性或鹼性基團的化合物之情形下，與鹼或酸(例如1-苯乙胺或酒石酸)反應。所產生之非鏡像異構物混合物可利用色層分析法及/或分段結晶分離，然後利用技術人員已悉知之手段，將一種或兩種非鏡像異構物轉化成對應之純鏡像異構物。上述任一式之掌性化合物(及其掌性前驅物)可使用色層分析法，呈鏡像異構物富集之形式獲得，色層分析法一般為HPLC，使用非對稱樹脂與由碳氫化合物(一般為庚烷或己烷)構成之移動相，其包含0至50體積%之異丙醇，一般為2%至20%，以及0至5體積%之烷基胺，一般為0.1%二乙胺。濃縮洗提液得到富集之混合物。可使用應用次臨界與超臨界流體之掌性色層分析法。於本揭示內容之若干具體例中，用於掌性色層分析之方法為發明所屬技術領域中已知的[參見，例如，Smith,Roger M.,Loughborough University,Loughborough,UK；Chromatographic Science Series (1998),75(Supercritical Fluid Chromatography with Packed Columns),pp.223-249以及其中所引用之參考文獻]。管柱可得自Chiral Technologies,Inc,West Chester,Pa.,USA，其為Daicel® Chemical Industries,Ltd.,Tokyo,Japan之子公司。

必須強調的是，上文所述任一式之化合物在本文中已呈單一互變異構體形成，所有可能之互變異構體均隸屬本揭示內容之範疇內。

本揭示內容亦包括上文所述任一式之所有醫藥上可接受之同位素標誌化合物，其中一或多個原子被具有相同原子序，惟原子量或質量數與自然界佔多數之原子量或質量數不同之原子替換。

適於納入本揭示內容化合物中之同位素實例包括，氫(例如²H與³H)、碳(例如¹¹C、¹³C與¹⁴C)、氯(例如³⁶Cl)、氟(例如¹⁸F)、碘(例如¹²³I與¹²⁵I)、氮(例如¹³N與¹⁵N)、氧(例如¹⁵O、¹⁷O與¹⁸O)、磷(例如³²P)及硫(例如³⁵S)之同位素。

上文所述任一式之特定同位素標誌化合物，例如併入放射性同位素者，於藥物及/或基質組織分佈之研究中有用。為此目的，鑑於其併入容易及現成之檢測方法，放射性同位素氚(即³H)與碳-14(即¹⁴C)特別有用。

以較重同位素例如氘(即²H)置換，由於更大之代謝穩定性，例如，增長活體內半衰期或降低劑量需求而提供特定治療優勢。

用正電子發射同位素(例如¹¹C、¹⁸F、¹⁵O與¹³N)置換，可有用於正電子發射斷層攝影術(PET)研究，以檢查基質受體之位置佔有率。

上文所述任一式之同位素標誌化合物，通常可利用發明所屬技術領域中的技術人員周知之習知技術，或以類似隨附實施例與製備中所述之彼等製程，使用適當之同位素標誌試劑代替先前使用之非標誌試劑予以製備。

根據本揭示內容之醫藥上可接受之溶劑合物包括其中該結晶溶劑可被同位素置換者例如，D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO。

本文給定之任何式亦意在表示化合物之未標誌形式以及同位素標誌形式，例如²H。再者，一般了解，於本文中，氘被視為係式(I)化合物之取代基，以氘(即²H或D)置換，由於更大之代謝穩定性(例如，增長活體內半衰期或降低劑量需求或改善治療指數)，可提供特定之治療優勢。此等較重同位素(具體地氘)的濃度，可由同位素富集因數界定。本文所用之“同位素富集因子”一詞意指指定同位素之同位素豐度與天然豐度間之間的比率。若本發明化合物中之取代基指明為氘，則此化合物對每個指定氘原子之同位素富集因數為至少3500(每個指定氘原子52.5%氘併入)、至少4000(60%氘併入)、至少4500(67.5%氘併入)、至少5000(75%氘併入)、至少5500(82.5%氘併入)、至少6000(90%氘併入)、至少6333.3(95%氘併入)、至少6466.7(97%氘併入)、至少6600(99%氘併入)、或至少6633.3(99.5%氘併入)。

本發明化合物可呈用於治療之游離型存在，或於適當情況下，為醫藥上可接受之鹽型。

本文中所用之“鹽”或“鹽類”等詞係指本發明化合物之酸加成鹽或鹼加成鹽。“鹽”特別包括“醫藥上可接受之鹽”。“醫藥上可接受之鹽”一詞係指保留本發明化合物之生物學效能與性質且通常不是生物學上或在其他方面不良之鹽類；許多情況下，本發明化合物能憑藉胺基及/或羧基或類似基團之存在而形成酸及/或鹼鹽之能力。

醫藥上可接受之酸加成鹽可以無機酸與有機酸形成，例如，乙酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫 酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、氯代葉綠酸鹽(chlortheophylionate)、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、2-羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、苯乙醇酸鹽、甲磺酸鹽、甲硫酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、次水楊酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽及三氟乙酸鹽。

可衍生鹽之無機酸包括，例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可衍生鹽之有機酸包括，例如，乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、順丁烯二酸、丙二酸、琥珀酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺柳酸等。醫藥上可接受之鹼加成鹽可用無機鹼與有機鹼形成。可衍生鹽之無機鹼包括，例如，銨鹽與週期表第I至第XII列之金屬；於特定具體例中，鹽係衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅與銅；特別適當之鹽包括銨、鉀、鈉、鈣與鎂鹽。

可衍生鹽之有機鹼包括，例如，一級、二級與三級胺、經取代之胺包括天然存在之經取代之胺、環胺、鹼性離子交換樹脂等。特定之有機胺包括異丙胺、苄乙二胺、膽鹼鹽、二乙醇胺、二乙胺、離胺酸、葡甲胺、哌

與三木甲胺(tromethamine)。

本發明之醫藥上可接受之鹽，可利用習知化學方法以鹼性或酸性基團合成。通常，此類鹽可經由將此等化合物之游離酸型與化學計量之適當鹼(例如Na、Ca、Mg或K之氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等)反應，或經由將此等 化合物之游離鹼型與化學計量之適當酸反應，予以製備。此類反應一般為於水或有機溶劑或兩者之混合物中進行。通常，於可行之情況下，期望使用非水性介質如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇、或乙腈。更多適當鹽之列表可於例如“Remington’s Pharmaceutical Sciences,”20th ed.,Mack Publishing Company,Easton,PA,(1985)；與“Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use”by Stahl and Wermuth(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)中找到。

“組成物”與“調配物”等詞可互換使用。

“受試者”係哺乳動物，較佳為人類，惟亦可為需要獸醫治療之動物，例如，伴生動物(例如，狗、貓等)、農場動物(例如，母牛、綿羊、豬、馬等)與實驗動物(例如，大鼠、小鼠、天竺鼠等)。

如本文所用，若受試者可從此類治療中得到生物學上、醫學上或生活品質上之好處，則該受試者“需要”治療。

“投予(administer)”、“投予(administering)”以及“投予(administration)”等詞係指於受試者體內或體表引入本發明化合物或其組成物之方法。此等方法包括，惟不限於，關節內(在關節中)、靜脈內、肌內、腫瘤內、皮內、腹膜內、皮下、經口、局部、脊髓腔內、吸入、經皮、直腸等。可與本文敘述之製劑與方法一起使用之投藥技術見述於例如Goodman and Gilman,The Pharmacological Basis of Therapeutics,current ed.；Pergamon；and Remington’s,Pharmaceutical Sciences(current edition),Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania。

本文所用之“抑制(inhibit)”、“抑制(inhibition)”以及“抑制(inhibit)”等詞係指給定症狀、徵候、或病症、或疾病之減輕或壓制，或生物活性或製程的基線活性之顯著減少。

“治療”等詞係指逆轉、減輕、或抑制本文所述疾病之進展。於若干具體例中，治療可在疾病之一或多種症狀或徵候已形成或已被觀察之後投予(即，治療性處理)。於其他具體例中，治療可在缺少疾病之症狀或徵候下投予。舉例而言，治療可對易患受試者在徵候開始以前投予(即，預防治療)(例如，根據徵候史及/或根據暴露於病原體)。治療亦可在徵候消除之後繼續，例如，使延緩或預防復發。

“症狀”、“疾病”、與“病症”等詞可互換使用。

通常，本文所教示化合物之有效量取決於各種因素，例如給定藥物或化合物、醫藥調配物、投藥途徑、疾病或病症之類型、所治療受試者或宿主之身分等，惟仍可經由熟發明所屬技術領域中的技術人員例行地決定。本教示化合物之有效量，可由發明所屬技術領域中具有通常知識者，經由發明所屬技術領域中已知之例行方法輕易地決定。

“有效量”一詞意指投予受試者時，導致有益或期望之結果，包括臨床結果，例如，相較於對照組時，抑制、壓制或減輕治療受試者症狀之徵候之量。舉例而言，有效量可呈單元劑型投予(例如每天1mg至約50g，例如每天1mg至約5g)。

本發明化合物之“治療有效量”一詞係指將引出受試者之生物學或醫學反應，例如，降低或抑制酵素或蛋白質活性、或改善徵候、減輕症狀、放慢或延緩疾病之進展、或預防疾病等之量。於一非限制性具體例中，“治療有效量”一詞係指本發明化合物之量，其於投予受試者時，有效地(1)至少部分地減緩、抑制、預防及/或改善(i)經由MALT1媒介、或(ii)與MALT1活性相關、或(iii)以MALT1活性為特徵(正常或異常)之症狀、或病症或疾病；或(2)降低或抑制 MALT1之活性；或(3)降低或抑制MALT1之表現；或(4)修改MALT1之蛋白質量。於另一非限制性實施例中，“治療有效量”一詞係指本發明化合物之量，當施用於細胞、或組織、或非細胞性生物材料、或介質時，有效地至少部分降低或抑制MALT1活性；或部分或完全降低或抑制MALT1之表現。

除非本文另行指示或顯然與上下文相抵觸，否則本文敘述之所有方法可以任何適當順序進行。本文所提供之任何及其他實施例或例示性語言(如“例如”)之使用，僅旨在較佳地闡明本發明，並不擬對本發明申請專利範圍構成限制。

上式中所使用之一般化學術語具有其通常之意義。

本文所用之“h”或“hr”係指小時，“min”係指分鐘，“MCL”係指外膜細胞淋巴瘤，“AML”係指急性類骨髓性白血病，“CML”係指慢性類骨髓性白血病，“Boc”係指N-三級丁氧羰基，“EA”係指乙酸乙酯，“DCM”係指二氯甲烷，“DMSO”係指二甲亞碸，“DMA”係指二甲基乙醯胺，“THF”係指四氫呋喃，“MtBE”係指甲基三級丁基醚，“TEA”係指三乙胺，“FBS”係指胎牛血清，“PBS”係指磷酸鹽緩衝鹽液，“BSA”係指牛血清白蛋白，“RT”係指室溫，“mpk”意指每公斤毫克數，“po”係指口服投藥(口服)，“qd”意指每天投藥一次，“HPLC”意指高壓液相層析法，“q2d”意指每兩天一次劑量，“q2dx10”意指每兩天10倍單次劑量，“VSMC”係指血管平滑肌細胞及“XRD”係指X光繞射。

本文所用之“醫藥上可接受之載劑”一詞包括熟發明所屬技術領域中的技術人員所悉知之任何及所有溶劑、分散介質、塗料、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如，抗細菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、吸收遲滯劑、鹽、防腐劑、藥物安定劑、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染料等及其 組合(參見，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences,18th Ed.Mack Printing Company,1990,pp.1289-1329)。除非任何習知載劑與活性成分不相容，否則將慮及在治療或醫藥組成物上之用途。

再者，本發明化合物，包括其鹽，亦可呈其水合物形式得到，或包含用於其結晶化之其他溶劑。本發明化合物可固有地或經由設計與醫藥上可接受之溶劑(包括水)形成溶劑合物；因此，本發明旨在包括溶劑合物與非溶劑合物兩種形式。“溶劑合物”一詞係指本發明化合物(包括其醫藥上可接受之鹽)與一或多種溶劑分子之分子複合體。此類溶劑分子係常在醫藥發明所屬技術領域上使用者，已知對接受者無害，例如，水、乙醇等。“水合物”一詞係指溶劑分子為水之複合體。

本發明化合物，包括其鹽、水合物與溶劑合物，可固有地或經由設計形成多形體。於另一態樣中，本發明提供醫藥組成物，其包含本發明化合物與醫藥上可接受之載劑。該醫藥組成物可調配用於特定之投藥途徑，例如口服投藥、注射投藥、與直腸投藥等。另外，本發明之醫藥組成物可以固態形式(包括惟不限於膠囊、錠劑、丸劑、顆粒劑、粉劑或栓劑)，或以液態形式(包括惟不限於溶液、懸浮液或乳液)組成。醫藥組成物可進行習知之醫藥操作，例如滅菌，及/或可包含習知之惰性稀釋劑、潤滑劑、或緩衝劑，以及佐劑，例如防腐劑、安定劑、潤濕劑、乳化劑與緩衝劑等。

典型地，醫藥組成物為錠劑或明膠膠囊，其包含活性成分以及a)稀釋劑，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素及/或甘胺酸；b)潤滑劑，例如，二氧化矽、滑石、硬脂酸、其鎂或鈣鹽及/或聚乙二醇；還有用於錠劑之c)黏合劑，例如，矽酸鎂鋁、澱粉糊、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、 羧甲基纖維素鈉及/或聚乙烯吡咯烷酮；需要時d)崩解劑，例如，澱粉、洋菜、褐藻酸或其鈉鹽、或發泡混合物；及/或e)吸收劑、著色劑、調味劑與甜味劑。錠劑可根據發明所屬技術領域中已知之方法被覆膜衣或腸衣。

用於口服投藥之適當組成物包括為錠劑、口含錠、水性或油性懸浮液、可分散性粉劑或顆粒劑、乳液、硬或軟膠囊劑、或糖漿或酏劑等形式之有效量之本發明化合物。根據發明所屬技術領域中已知用於製造醫藥組成物之任何方法，製備意欲口服使用之組成物，此類組成物可包含一或多種選自由甜味劑、調味劑、著色劑與保藏劑所組成組群之藥劑，俾使提供醫藥上精緻且合口味之製劑。錠劑可包含摻入適合製造錠劑之無毒醫藥上可接受賦形劑之活性成分。此等賦形劑為，舉例而言，惰性稀釋劑，例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；製粒劑與崩散劑，例如玉米澱粉、或褐藻酸；結合劑，例如澱粉、明膠或阿拉伯膠；及潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。利用已知技術使錠劑未包衣或包衣，以延緩其在胃腸道裡之崩解與吸收，從而於較長時期內提供持續作用。舉例而言，可使用延時材料，例如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。口服使用之調配物可以硬明膠膠囊呈現，其中活性成分與惰性固態稀釋劑(例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合；或以軟明膠膠囊呈現，其中活性成分與水或油介質(例如花生油、液態石蠟或橄欖油)混合。

特定之注射用組成物係水性等滲溶液或懸浮液，栓劑則係有利地從脂肪乳液或懸浮液製備。該等組成物可經滅菌及/或包含佐劑，例如保藏劑、安定劑、潤濕劑或乳化劑、溶液促進劑、用於調節滲透壓之鹽及/或緩衝劑。此外，彼等亦可含其他具治療價值之物質。該等組成物分別係根據習知之混合、製粒或包衣方法製備，並且含有約0.1至75%或含約1至50%之活性成分。供經皮 施用之適當組成物包含具有適當載劑之有效量之本發明化合物。適用於經皮遞送之載劑包括容易被吸收之藥理學上可接受之溶劑，以幫助通過宿主皮膚。舉例而言，經皮裝置係呈繃帶形式，其包含支持構件、含有視需要具載劑的化合物之藥盒(reservoir)、視需要控制速率之屏障(俾使長時間以受控制及預定之速率遞送宿主皮膚化合物)，以及將該裝置牢固於皮膚之方法。

供局部施用(例如，至皮膚與眼睛)之適當組成物，包括例如供經由氣溶膠等遞送之水溶液、懸浮液、軟膏、乳膏、凝膠或可噴霧調配物。此類局部投藥系統特別適合皮膚施用，例如，用於治療皮膚癌，例如用於防曬乳膏、洗滌劑、噴霧劑等中之預防性用途。因此，它們特別適合使用於發明所屬技術領域中已悉知之局部調配物中，包括化妝品。此類可包含助溶劑、安定劑、滲壓性增強劑、緩衝劑與防腐劑。

本文所用之局部施用亦可涉及吸入或鼻內施用。在使用或不使用適當推進劑下，彼等可呈乾粉形式(單獨，或呈混合物，例如與乳糖之乾混合物，或例如與磷脂質之混合成分顆粒)從乾粉吸入器或從加壓容器、幫浦、噴灑器、噴霧器或霧化器之氣溶膠噴霧呈現，方便地遞送。

因為水可促進特定化合物之降解，本發明進一步提供包含本發明化合物作為活性成分之無水醫藥組成物與劑型。

本發明之無水醫藥組成物與劑型可使用無水或低水分含量之成分及低水分或低濕度條件製備。無水醫藥組成物可製備並注射劑，俾使其無水性質得以維持。因此，無水組成物係使用已知防止暴露於水之物料包裝，俾使彼等可被包含於適當之處方套組中。適當包裝材料之實例包括，惟不限於，不透氣金屬薄片、塑膠製品、單位劑量容器(例如小瓶)、泡罩包裝與條狀包裝。

本發明進一步提供包含一或多種降低作為活性成分的本發明化合物之分解速率的製劑之醫藥組成物與劑型。此類製劑，於本文中稱為“安定劑，包括惟不限於，抗氧化劑(例如抗壞血酸)、pH緩衝劑、或鹽緩衝劑等。

3.化合物

本文揭示具式(I)一般結構的化合物之具體例。

於本發明第一具體例中，式(I)所示化合物或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，式中

A環為

或

；

Z為O、NR₆或S；

A₁與A₂各自獨立地為CR₁或N；

R₁之各情況為氫；鹵素；-OH；CN；-COOC_1-6烷基；視需要經鹵素取代之C_1-6烷氧基；C_1-6烷氧基羰基；苯基；胺基；N,N-二-C_1-6烷基胺基；視需要經鹵素、苯基、或具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜環(該環視需要經C_1-6烷基取代)取代之C_1-6烷基；Rh；ORh；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經胺基、經胺基或羥基取代之C_1-6烷基、或N-單-C_1-6烷基胺基羰基或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基取代；其中

Rh為具有選自N、O與S之1至4個雜原子之5至6員雜環，該環視需要經C_1-6烷基、-OH、或側氧基取代；

R₂之各情況為氫；鹵素；CN；-COOC_1-6烷基；視需要經鹵素取代之C_1-6烷氧基；C_1-6烷氧基羰基；胺基；N,N-二-C_1-6烷基胺基；視需要經鹵素、-OH、苯基、或具有選自N與O之1至2個雜原子之5至6員雜環(該環視需要經C_1-6烷基取代)取代之C_1-6烷基；Rh；ORh；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經胺基、視需要經胺基或羥基取代之C_1-6烷基、或經N-單-C_1-6烷基胺基羰基或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基取代；

R₃之各情況為H；氘；鹵素；CN；-OH；-COOH；-NR_aR_b；-SR_c；-SO₂R_c；-SO₂NR_c；-C(=O)NR_aR_b；視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷基、-NH₂、-NHC(=O)C_1-6烷基、N-二-C_1-6烷基胺基、或N-單-C_1-6烷基胺基取代之C_1-6烷氧基；視需要經鹵素、C_2-6烯基、-OH、-NH₂、-NHC(=O)C_1-6烷基、N-二-C_1-6烷基胺基、N-單-C_1-6烷基胺基、-O-Rg、Rg、苯基、或C_1-6烷氧基取代之C_1-6烷基(其中該烷氧基視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷氧基、N,N-二-C_1-6烷基胺基、Rg或苯基取代)；視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷基、N,N-二-C_1-6烷基胺基或C_1-6烷氧基-C_1-6烷基取代之C_3-6環烷基；視需要經鹵基或C_1-6烷氧基取代之苯基；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經可視需要經胺基或-OH取代之C_1-6烷基取代；Rg；或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基；其中

Rg為具有選自N與O之1至3個雜原子之3至6員雜環，該環視需要經-OH、-NH₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷氧基-羰基取代；

R_a獨立地為H或視需要經C_1-6烷氧基取代之C_1-6烷基，R_b獨立地為H、C_1-6烷基、-COC_1-6烷基、-SO₂C_1-6烷基、C_3-6環烷基或具有選自N與O之1至3個雜原子之3至6員雜環，該環視需要經C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷氧基-羰基取代、或

R_a與R_b，和與其連接的氮原子一起，形成具有選自N、O、與S之1至3個雜原子之4至6員雜環，該環視需要經-OH、-NH₂、N-二-C_1-6烷基胺基、N-單-C_1-6烷基胺基、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6鹵烷氧基、O-環丙基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷基-羰基取代；

R_c之各情況為C_1-6烷基或C_3-6環烷基；

其中由R_a、R_b、或R_c所示或由R_a、R_b、或R_c所示基團中之烷基視需要經鹵素、-OH、C_1-2烷氧基、或C_3-4環烷基取代；

R₄之各情況為H、氘、鹵素、CN、C_1-6烷基、或C_1-6鹵烷基；

R₄’之各情況為H、氘、F、或Cl；

R₅之各情況為H、氘、C_1-6烷基、或C_1-6鹵烷基；及

R₆為H；OH；視需要經鹵素、OH、或C_1-6烷氧基取代之C_1-6烷基；或視需要經鹵素、OH、或C_1-6烷氧基取代之C_3-6環烷基。

本發明第二具體例中，式(I)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中Z為O，其餘變數如第一具體例中所界定。

本發明第三具體例中，式(I)化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中A環為

，其餘變數如第一或第二具體例中所界定。

本發明第四具體例中，式(I)化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₃之各實例為H；鹵素；CN；-OH；-COOH；-NR_aR_b；-SR_c；-SO₂R_c；-SO₂NR_c；-C(=O)NR_aR_b；視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷基、-NH₂、- NHC(=O)C_1-6烷基、N-二-C_1-6烷基胺基、或N-單-C_1-6烷基胺基取代之C_1-4烷氧基；視需要經鹵素、C_1-2烷氧基、N-二-C_1-6烷基胺基、或N-單-C_1-6烷基胺基取代之C_1-4烷基；C_3-6環烷基；或Rg，其餘變數如第一、第二及/或第三具體例中所界定。

於第五具體例中，由結構式(II-A)或(II-B)所示之式(I)化合物：

或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₄之各實例為H或F，其餘變數如第一、第二、第三及/或第四具體例中所界定。

於第六具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中

R₃之各情況為H；鹵素；CN；-OH；-COOH；-NR_aR_b；-SR_c；-SO₂R_c；

-SO₂NR_c；-C(=O)NR_aR_b；視需要經鹵素、-OH、C_1-4烷基、-NH₂、N-二-C_1-4烷基胺基、或N-單-C_1-4烷基胺基取代之C_1-4烷氧基；視需要經鹵素、C_1-2烷氧基、N-二-C_1-4烷基胺基、或N-單-C_1-4烷基胺基取代之C_1-4烷基；C_3-6環烷基；嗎福林基；氧雜環丁基；或視需要經甲基取代之氮雜環丁基；

R_a獨立地為H或視需要經C_1-4烷氧基取代之C_1-4烷基；

R_b獨立地為H、C_1-4烷基、-COC_1-4烷基、-SO₂C_1-4烷基、C_3-6環烷基或具有選自N與O之1至3個雜原子之3至6員雜環，該環視需要經C_1-4烷基、C_1-4烷氧基-C_1-4烷基、或C_1-4烷氧基-羰基取代，或

R_a與R_b，和與其連接的氮原子一起，形成具有選自N、O、與S之1至3個雜原子之4至6員雜環，該環視需要經-OH、C_1-4烷基、C_1-4鹵烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4鹵烷氧基、或C_1-4烷氧基-C_1-4烷基取代，其餘變數如第一、第二、第三、第四及/或第五具體例中所界定。

於第七具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R4之各實例為H、鹵素、視需要經鹵素取代之C_1-2烷基，R₄之各實例為H，其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五及/或第六等具體例中所界定。

於第八具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₂為H、Cl、CN、或視需要經鹵基或-OH取代之C_1-6烷基，其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六及/或第七等具體例中所界定。

於第九具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₁為H；鹵素；-OH；CN；視需要經鹵素取代之C_1-6烷氧基；C_1-6烷氧羰基；苯基；N,N-二-C_1-6烷基胺基；視需要經鹵素或苯基取代之C_1-6烷基；含有1至3個N原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經視需要經胺基或羥基取代之C_1-6烷基取代或經單-N-C_1-6烷基胺基羰基或二-N-C_1-6烷基胺基羰基取代；O-Rh；或Rh；其中Rh為含有選自N、O與S之1至4個雜原子之5至6員雜環基，該環視需要經C_1-6烷基、OH、或側氧基取代，其餘 變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、及/或第八等具體例中所界定。

於第十具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₁為H；鹵素；視需要經鹵素取代之C_1-4烷基；C_1-4烷氧基；或含有1至3個N原子之5至6員雜芳基，其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、及/或第九等具體例中所界定。

於第十一具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₃之各實例為溴、甲基、乙基、丙基、異丙基、COOH、-CH(CH₃)OCH₃、-CH(CH₃)OCH₂CH₃、

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、

、

、-CH(CH₃)N(CH₃)₂、-CH₂OCH₃、環丙基、嗎福林基、-S(CH₃)、-N(CH₃)₂、-N(CH₃)(CH₂CH₃)、-N(CH₂CH₃)₂、-N(CH₃)(異丙基)、-N(CH₃)(環丙基)、-N(CH₂CH₃)(環丙基)、-N(CH₃)(SO₂CH₃)、-N(CH₂CH₂OCH₃)(環丙基)、或-N(CH₃)(CH₂CH₂OCH₃)，其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、及/或第十等具體例中所界定。

於第十二具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₃之各實例為-CH(CH₃)OCH₃、

、

、乙基、或環丙基，其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、及/或第十等具體例中所界定。

於第十三具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₄為H、F、Cl、Br、CH₃、或CF₃，其餘變 數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一及/或第十二等具體例中所界定。

於第十四具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₂為Cl或CF₃，其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二及/或第十三等具體例中所界定。

於第十五具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₁為H、1,2,3,-三唑、-OCH₃、或CF₃，其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三及/或第十四等具體例中所界定。

於第十六具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₄為H或Cl，其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、及/或第十五等具體例中所界定。

於第十七具體例中，式(I)、(II-A)、或(II-B)化合物或其或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中

為

，其餘變數如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五及/或第十六等具體例中所界定。

於一具體例中，如本文中所述，該化合物或其醫藥上可接受之鹽係選自式(I)、(II-A)、或(II-B)之化合物，或於實施例中。

1.結構式(I)所示之化合物：

或其醫藥上可接受之鹽，其中

A環為

、

、

、或

；

Z為O、N、或S；

A₁與A₂各自獨立地為CR₁或N；

R₁之各情況為鹵素；CN；-COOC_1-6烷基；視需要經鹵素取代之C_1-6烷氧基；C_1-6烷氧基羰基；胺基；N,N-二-C_1-6烷基胺基；視需要經鹵素、苯基、或具有選自N與O之1至2個雜原子之5至6員雜環取代之C_1-6烷基(該環視需要經C_1-6烷基取代)；Rh；ORh；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經胺基、視需要經胺基或羥基取代之C_1-6烷基、或經N-單-C_1-6烷基胺基羰基或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基取代；其中

Rh為具有選自由N、O與S之1至4個雜原子之5至6員雜環，該環視需要經C_1-6烷基、-OH、或側氧基取代，

R₂之各情況為鹵素；CN；-COOC_1-6烷基；視需要經鹵素取代之C_1-6烷氧基；C_1-6烷氧基羰基；胺基；N,N-二-C_1-6烷基胺基；視需要經鹵素、苯基、或具有選自N與O之1至2個雜原子之5至6員雜環(該環視需要經C_1-6烷基取代)取代之C_1-6烷基；Rh；ORh；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經胺基、視需要經胺基或羥基、或經N-單-C_1-6烷基胺基羰基或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基取代之C_1-6烷基取代；

R₃之各情況為H；氘；鹵基；-OH；NR_aR_b；-SR_c；-SO₂R_c；-SO₂NR_c；視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷基、-NH₂、N-二-C_1-6烷基胺基、或N-單-C_1-6烷基胺基取代之C_1-6烷氧基；視需要經鹵素、C_2-6烯基、-OH、-NH₂、N-二-C_1-6烷基胺基、N-單-C_1-6烷基胺基、O-Rg、Rg、苯基、或經C_1-6烷氧基(其中該烷氧基視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷氧基、N,N-二-C_1-6烷基胺基、Rg或苯基取代之)取代之C_1-6烷基；視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷基、N,N-二-C_1-6烷基胺基或C_1-6烷氧基-C_1-6烷基取代之C_3-6環烷基；視需要經鹵基或C_1-6烷氧基取代之苯基；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經可視需要經胺基或-OH取代之C_1-6烷基取代；Rg；或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基；其中

R_g為具有選自N與O之1至3個雜原子之3至6員雜環，該環視需要經-OH、-NH₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷氧基-羰基取代；

R_a獨立地為H或C_1-6烷基，及R_b獨立地為H、C_1-6烷基、-COC_1-6烷基、-SO₂C_1-6烷基、C_3-6環烷基或具有選自N與O之1至3個雜原子之3至6員雜環，該環視需要經C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷氧基-羰基取代)、或

R_a與R_b，和與其連接的氮原子一起，形成具有選自N、O、與S之1至3個雜原子之4至6員雜環，該環視需要經-OH、-NH₂、N-二-C_1-6烷基胺基、N-單-C_1-6烷基胺基、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6鹵烷氧基、O-環丙基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷基-羰基取代；

R_c之各情況為C_1-6烷基或C_3-6環烷基；

其中由R_a、R_b、或R_c所示或由R_a、R_b、或R_c所示基團中之烷基視需要經鹵素、-OH、C_1-2烷氧基、或C_3-4環烷基取代；

R₄之各情況為H、氘、鹵素、CN、C_1-6烷基、或C_1-6鹵烷基；及

R₅之各情況為H、氘、C_1-6烷基、或C_1-6鹵烷基。

2.第1段之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R₃之各實例為H；鹵基；-OH；NR_aR_b；-SR_c；-SO₂R_c；-SO₂NR_c；視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷基、-NH₂、N-二-C_1-6烷基胺基、或N-單-C_1-6烷基胺基取代之C₁-₄烷氧基；視需要經鹵基或C_1-2烷氧基取代之C_1-4烷基；C_3-6環烷基；或Rg。

3.第1或2段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中Z為O。

4.第1至3段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R₃為H；鹵基；-OH；NR_aR_b；-SR_c；-SO₂R_c；-SO₂NR_c；視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷基、-NH₂、N-二-C_1-6烷基胺基、或N-單-C_1-6烷基胺基取代之C_1-4烷氧基；甲基、乙基、異丙基、C_1-4鹵烷基；嗎啉基；氧雜環丁基；或視需要經甲基取代之氮雜環丁基。

5.第1至4段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中A環為

。

6.第1至5段中任一段之化合物，其中該化合物由結構式(II-A)或(II-B)所示：

或其醫藥上可接受之鹽。

7.第1至6段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R₄之各情況為H、鹵素、視需要以鹵基取代之C_1-2烷基。

8.第1至7段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R₂為H、Cl、CN、或視需要經鹵基或-OH取代之C_1-6烷基。

9.第1至8段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R₁為H；鹵素；-OH；CN；視需要經鹵素取代之C_1-6烷氧基；

C_1-6烷氧基羰基；苯基；N,N-二-C_1-6烷基胺基；視需要經鹵素或苯基取代之C_1-6烷基；含有1至3個N原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經視需要經胺基或羥基取代之C_1-6烷基取代、或經單-或二-N-C_1-6烷基胺基羰基取代；O-Rh；或Rh；其中Rh為含有選自N、O與S之1至4個雜原子之5至6員雜環基，該環視需要經C_1-6烷基、OH、或側氧基取代。

10.第1至9段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R₁為H；鹵素；視需要經鹵素取代之C_1-4烷基；或含有1至3個N原子之5至6員雜芳基。

11.第1至10段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R₃之各情況為H、乙基、異丙基、環丙基、嗎啉基、N(CH₃)(環丙基)或(CH₃)(CH₂CH₂OCH₃)。

12.第1至10段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R₃之各情況為H、F、或Cl，較佳為H或F。

13.第1至12段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R₄為H、F、Cl、Br、CH₃、或CF₃。

14.第1至13段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R₂為Cl或CF₃。

15.第1至14段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R₁為H、1,2,3,-三唑、或CF₃。

16.第1至15段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中R₄為H或Cl。

17.第1至16段中任一段之化合物、或其醫藥上可接受之鹽，其中

為

。

於特定具體例中，本發明化合物為MALT1之部分抑制劑，其中最大約50至85%、或最大約60至80%、或最大約70至80%、或最大約75%之MALT1活性被抑制。MALT1活性抑制可使用發明所屬技術領域中公認之任何方法評估，例如生物學實施例中，特別是實施例1(Glosensor測定法或其變體)及/或實施例2(IL-2生產)敘述者。於特定具體例中，係使用如生物學實施例1所述之Glosensor測定法評估MALT1活性。

4.可治療之疾病

於特定具體例中，本發明化合物可用於治療其中CBM複合體(例如包含CARMA1/BCL10/MALT1、或CARD9/BCL10/MALT1之一者)之活性及/或MALT1活性被向上調節或過度活躍(例如，激活CARD11突變、野生型MALT1過度表現、MALT1功能獲得激活突變、MALT1抑制因子之功能喪失等)之疾病或適應症。

因此於特定具體例中，本發明化合物可用以治療其中NF-κ B訊息傳遞路徑被活化或失調之疾病或適應症。儘管不希望受任何特定理論之束縛，惟一般相信於此類疾病或適應症(例如癌症)中，直接封鎖或抑制MALT1向下調節NF-κ B路徑，從而導致治療。

於其他特定具體例中，儘管仍不希望受任何特定理論之束縛，惟進一步認為，本發明之MALT1抑制劑可能不受例如於某些腫瘤細胞中失調的NF-κ B路徑直接抑制之支配而起作用。相反地，主題化合物對MALT1對位凋亡蛋白酶活性的抑制影響獨立於或包含NF-κ B路徑的免疫系統之許多組分，並廣泛調節受試者之特定T細胞族群，例如Th17細胞、或自然調節型T細胞(nTreg)或Tregs，惟非另一者，或兩者兼而有之。因此，本發明某些化合物充當免疫調節劑以微調特定T細胞族群之活性，並經由投予受試者MALT1抑制劑而間接擴大可治療癌症及其他自體免疫/炎性疾病或適應症之範圍，無關該等癌症/自體免疫/炎性疾病或適應症是否具有失調之NF-κ B路徑活性。

於特定具體例中，相對於Treg，本發明化合物優先或選擇性抑制Th17細胞(例如，相對於Th17，Treg的IC₅₀比率超過3、5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、或100)。於特定具體例中，本發明化合物本質上不抑制Treg。

其特徵在於NF-kB活化失調的症狀與疾患包括自體免疫、免疫性、及/或炎性疾患、過敏性疾患、呼吸系統疾患、與腫瘤疾患。

於一態樣中，本發明提供於有其需要之受試者中抑制MALT1活性之方法，該方法包括投予該受試者治療有效量之本發明化合物。

於另一相關態樣中，本發明化合物可用於製造抑制MALT1活性之藥劑。

根據本發明上述任何相關態樣，該受試者患有疾病或症狀，例如自體免疫疾病、炎性疾病、或癌症，且其中該疾病或症狀被治療。

於特定具體例中，該疾病或症狀係類風濕性關節炎(RA)、多發性硬化症(MS)、全身性紅斑性狼瘡(SLE)、血管炎性症狀、過敏性疾病、呼吸道疾病[例如氣喘與慢性阻塞性肺部疾病(COPD)]、由延遲或即時性過敏反應引起之症狀、急性過敏症、急性或慢性移植排斥、移植物抗宿主病、造血起源之癌症或實體腫瘤包括慢性類骨髓性白血病(CML)、類骨髓性白血病、非霍奇金氏淋巴瘤HL)、或B細胞淋巴瘤。

於一具體例中，該可治療之疾病或疾患為癌症(腫瘤疾患)。

可利用本發明化合物治療之腫瘤疾患尤其可包括造血起源之癌症或實體腫瘤、惡性腫瘤、肉瘤、淋巴瘤、白血病與生殖細胞腫瘤(例如腺癌)、膀胱癌、透明細胞癌、皮膚癌、腦癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、膀胱癌、腦瘤、乳癌、胃癌(gastric cancer)、生殖細胞腫瘤、神經膠母細胞瘤、肝腺瘤、霍奇金氏淋巴瘤、肝癌、腎臟癌、肺癌、卵巢癌、真皮瘤、攝護腺癌、腎細胞癌、胃癌(stomach cancer)、神經管胚細胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、瀰漫性大型B細胞淋巴瘤、外膜細胞淋巴瘤、緣帶淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、其他B細胞淋巴瘤、黑色素瘤、胃黏膜相關淋巴組識(MALT)淋巴瘤、慢性類骨髓性白血病、類骨髓性白血病、多發性骨髓瘤、漿細胞腫瘤、小痣性惡性黑色素瘤、與肢端小痣性黑色素瘤。

於特定具體例中，該癌症為白血病或淋巴瘤。

於特定具體例中，該白血病為慢性淋巴球性白血病(CLL)，例如具有CARD11突變之CLL。

於特定具體例中，該淋巴瘤為胃黏膜相關淋巴組織淋巴瘤(MALT)。

於特定具體例中，該淋巴瘤為外膜細胞淋巴瘤。於特定具體例中，該淋巴瘤為緣帶淋巴瘤。於特定具體例中，該淋巴瘤為皮膚T細胞淋巴瘤例如塞扎萊(Sezary)症候群。於特定具體例中，該淋巴瘤為原發性滲出液淋巴瘤。

於特定具體例中，該淋巴瘤為非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)。於特定具體例中，該淋巴瘤為DLBCL(瀰漫性大型B細胞淋巴瘤)。於特定具體例中，該淋巴瘤為生發中心型B細胞(GCB)DLBCL。於特定具體例中，該淋巴瘤為活化型B細胞(ABC)DLBCL(例如於CARD11中具有激活突變者)。

於特定具體例中，該癌症為肺腺癌。

於特定具體例中，該癌症為乳癌。

於特定具體例中，該癌症為胰臟癌。

可利用本發明化合物治療之自體免疫及/或炎性疾患，尤其可選自關節炎、僵直性脊椎炎(AS)、炎性腸道疾病(IBD)、潰瘍性結腸炎(UC)、胃炎、胰臟炎、克隆氏(Crohn's)症(CD)、腹瀉疾病、多發性硬化症(MS)、全身性紅斑性狼瘡(SLE)、風濕熱、痛風、器官或移植排斥、急性或慢性移植物抗宿主病、慢性同種異體移植物排斥、貝塞特氏(Behcet's)病、眼色素層炎、乾癬、皮膚炎、異位性皮膚炎、皮膚肌炎、重症肌無力症、葛瑞夫茲氏(Grave's)症、橋本氏甲狀腺炎、蕭格倫氏症候群、與水泡疾患(例如尋常性天疱瘡)、抗體媒介之血管炎症候群[包括ANCA相關血管炎、亨諾-舒恩萊二氏(Hennoch-Schonlein)紫瘢病與免疫 複合體血管炎(無論原發性或繼發性之感染或癌症)]。

於特定具體例中，該可治療之疾病或疾患為自體免疫疾病或疾患、或炎性疾病或疾患。

於特定具體例中，該疾病為類風濕性關節炎(RA)。

於特定具體例中，該疾病為乾癬。

於特定具體例中，該疾病為潰瘍性結腸炎(UC)。

於特定具體例中，該疾病為多發性硬化症(MS)。

於特定具體例中，該疾病為過敏性腦脊髓炎。

於特定具體例中，該疾病為全身性狼瘡、蕭格倫氏症候群、或橋本氏甲狀腺炎。

於特定具體例中，該疾病或疾患係由慢性發炎引起之過敏症。

可利用本發明化合物治療之過敏症，尤其包括：接觸性皮膚炎，腹瀉疾病，氣喘，對家塵螨、花粉與相關過敏原之過敏症，鈹中毒症[或慢性鈹疾病(CBD)]。

可利用本發明化合物治療之呼吸系統疾患，尤其包括：氣喘、支氣管炎、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、囊狀纖維化症、肺水腫、肺栓塞、肺炎、肺部類肉瘤病、矽肺病、肺纖維化症、呼吸衰竭、急性呼吸窘迫症候群、原發性肺循環血壓過高與肺氣腫。

於其他具體例中，本發明化合物亦可用於治療BENTA(“具有NF-κB與T細胞無反應性之B細胞擴增”)疾病、狼瘡性腎炎、與多發性肌炎。

於特定具體例中，該自體免疫疾病或疾患，或該炎性疾病或疾患係經由進一步投予免疫抑制劑，例如環孢靈(cyclosporine)、雷帕黴素(rapamycin)、 胺甲喋呤(methotrexate)等進行治療。

5.組合療法

本發明化合物可與適於治療主題化合物可治療的疾病或適應症之一或多種附加/輔助治療劑一起用於組合療法中。

因此，於特定具體例中，使用本發明化合物之本發明方法可另外包括投予有其需要的受試者進一步之治療劑。該進一步之治療劑可為：(i)封阻或抑制免疫系統檢查點之免疫調節劑，該檢查點可為或不為NF-κB路徑之成分；及/或(ii)直接刺激免疫效應物反應之製劑，例如細胞介素，或腫瘤特異性過繼轉移之T細胞族群，或對腫瘤細胞表現之蛋白質具特異性之抗體；及/或(iii)包含腫瘤抗原或其免疫原片段之組成物；及/或(iv)化學治療劑。

本發明化合物可與進一步之治療劑同時、之前或之後投予。MALT1抑制劑可經由相同或不同之投藥途徑分開投予，或於相同醫藥組成物中作為進一步之治療劑一起使用。

本文所用之“共同投予”或“聯合投予”等意欲涵蓋所選定治療劑對單一病患之投藥，且意欲包括該等製劑不必要經由相同投藥途徑或相同時間投藥之治療方案。

本文所用“醫藥組合物”一詞意指一種以上活性成分混合或組合產生之產品，且包括該活性成分之固定以及非固定組合。“固定組合物”一詞意指活性成分(例如，主題化合物與共製劑)係呈單一單位或劑量之形式同時投予病患。“非固定組合物”一詞意指活性成分(例如，主題化合物與共製劑)二者係呈分開實體，無特定時間限制，同時、並行或相繼投予病患，其中此類投藥提供該等化合物於病患體內之治療有效量。

於一具體例中，本發明提供包含本發明化合物(例如主題化合物或其任何亞群)之產品，與至少一種其他治療劑作為用於治療中同時、分開或相繼使用之組合製劑。所提供作為組合製劑之產品包括於相同醫藥組成物中一起之包含本發明化合物或其任何亞群及其他治療劑之組成物，或呈分離形式(例如，呈套組形式)之主題化合物或其任何亞群與其他治療劑。

於一具體例中，本發明提供於治療中使用之醫藥組成物，其包含主題化合物或其任何亞群與另外的免疫調節劑或包含腫瘤抗原或其免疫原片段之組成物。視需要地，該醫藥組成物可包含醫藥上可接受之賦形劑。

於一具體例中，本發明提供套組，其包含兩種或兩種以上不同之醫藥組成物，其中至少一種含有主題化合物，另一種含有本文所討論之輔助治療劑。於一具體例中，該套組包含用於分開保存所述組成物之方式，例如容器、分離之瓶子、或分離之金屬薄片小包。此類套組之實例為泡型包裝，通常用於錠劑、膠囊等之包裝材料。本發明之套組可用於投予不同劑型(例如，口服與非經腸)、用於在不同劑量間隔投予分開之組成物、或用於該分開組成物之彼此滴定。為了協助順從性，本發明之套組通常包含投藥指引。

應理解的是，本發明方法中使用的許多進一步治療劑可為需要靜脈內、腹膜內或注射劑投藥(depot administ比n)之生物製品。於進一步具體例中，本發明化合物係口服投予，而進一步之治療劑係非經腸投予(例如靜脈內、腹膜內或作為注射劑)。

於特定具體例中，第二/額外之治療劑為免疫系統檢查點。效應T細胞活化通常由MHC複合體所呈現之TCR辨識抗原性胜肽觸發。然後，經由刺激信號與抑制效應T細胞反應信號間之平衡，確定所達到之活化類型與程度。 本文所用之“免疫系統檢查點”係指改變平衡以利於抑制效應T細胞反應之任何分子交互作用。亦即，當發生分子交互作用時，其負調節效應T細胞之活化。此類交互作用可能是直接的，例如配體與細胞表面受體間之交互作用，該受體將抑制信號傳送至效應T細胞中。或者它可能是間接的，例如封阻或抑制配體與細胞表面受體間之交互作用，否則該受體將傳送活化信號至效應T細胞中，或促進抑制分子或細胞向上調控之交互作用，或效應T細胞所須代謝物被酵素消減，或其任何組合。

免疫系統檢查點之實例包括：a)吲哚胺2,3-二氧酶(ID01)與其基質間之交互作用；b)PD1與PD-L1及/或PD1與PD-L2間之交互作用；c)CTLA-4與CD86及/或CTLA-4與CD80間之交互作用；d)B7-H3及/或B7-H4與其各自配體間之交互作用；e)HVEM與BTLA間之交互作用；f)GAL9與TIM3間之交互作用；g)MHC第一類或第二類與LAG 3間之交互作用；及h)MHC第一類或第二類與KIR間之交互作用；i)OX40(CD134)與OX40L(CD252)間之交互作用；j)CD40與CD40L(CD154)間之交互作用；k)4-1 BB(CD137)與配體(包括4-1 BBL)間之交互作用；1)GITR與配體(包括GITRL)間之交互作用。

用於本發明目的之代表性檢查點為檢查點(b)，即PD1與其配體PD-L1及PD-L2中任一個間之交互作用。PD1係於效應T細胞上表現。其與任一種配體接合都會產生活化向下調節之信號。配體由某些腫瘤表現。PD-L1特別係由許多實體腫瘤(包括黑色素瘤)表現。因此，此等腫瘤可能經由活化T細胞上之抑制性PD1受體而向下調節免疫媒介之抗腫瘤效果。經由封阻PD1與其一或兩種配體間之交互作用，可移除免疫反應之檢查點，導致加強之抗腫瘤T細胞反應。因此，PD1與其配體可為本發明方法中所靶定的免疫系統檢查點成分之實 例。

用於本發明目的之另一檢查點為檢查點(c)，即T細胞受體CTLA-4與其配體B7蛋白(B7-1與B7-2)間之交互作用。初始活化後，CTLA-4通常在T細胞表面向上調節，並結合配體產生抑制進一步/持續活化之信號。CTLA-4和受體CD28競爭與B7蛋白之結合，該受體CD28亦於T細胞表面表現但向上調節活化。因此，經由封阻CTLA-4與B7蛋白之交互作用而非CD28與B7蛋白之交互作用，免疫反應正常檢查點之一可被移除，導致增強之抗腫瘤T細胞反應。因此，CTLA-4與其配體可為本發明方法中所靶定免疫系統檢查點成分之實例。

本文所用之“免疫調節劑”包括於投予受試者時，封阻或抑制免疫系統檢查點的作用，導致受試者免疫效應物反應向上調節之任何製劑，該免疫效應物反應通常為T細胞效應物反應，其可包括抗腫瘤T細胞效應物反應。

本發明方法中所用之免疫調節劑可封阻或抑制任何上述免疫系統檢查點。該製劑可為抗體或導致該封阻或抑制之任何其他適當製劑。因此，該製劑通常被稱為該檢查點之抑制劑。

本文所用之“抗體”包括完整抗體及其任何抗原結合片段(即，“抗原結合部分”)或單鏈。抗體可為多株抗體或單株抗體，且可經由任何適當方法產生。抗體之“抗原結合部分”一詞內所涵蓋之結合片段之實例包括Fab片段、F(ab’)₂片段、Fab’片段、F_d片段、Fv片段、dAb片段、與單離之互補決定區(CDR)。單鏈抗體(例如scFv)與重鏈抗體(例如VHH與駱駝抗體)亦旨在涵蓋於抗體之“抗原結合部分”一詞內。

於特定具體例中，封阻或抑制CTLA-4與B7蛋白交互作用之抗 體包括易普利姆單抗(Ipilimumab)、德美利姆單抗(tremelimumab)、或揭示於WO2014/207063中之任何抗體。其他分子包括多肽、或可溶性突變體CD86多肽。於特定具體例中，該抗體為易普利姆單抗。

於特定具體例中，封阻或抑制PD1與PD-L1交互作用之抗體包括納武單抗(Nivolumab)、派姆單抗(Pembrolizumab)、蘭布魯珠單抗(Lambrolizumab)、皮地利珠單抗(Pidilizumab)、BGB-A317與AMP-224。於特定具體例中，該抗體為納武單抗或派姆單抗。抗PD-L1抗體包括阿替珠單抗(atezolizumab)、阿維單抗(avelumab)或度伐單抗(durvalumab)、MEDI-4736與MPDL3280A。

於特定具體例中，封阻或抑制4-1 BB與其配體間交互作用之抗體包括烏托單抗(utomilumab)。

其他適當抑制劑包括小分子抑制劑(SMI)，其通常為小的有機分子。於特定具體例中，ID01之抑制劑包括艾卡哚司他(Epacadostat)(INCB24360)、吲哚莫德(Indoximod)、GDC-0919(NLG919)與F001287。ID01之其他抑制劑包括1-甲基色胺酸(1-MT)。

本文所用之“直接刺激免疫效應物反應之製劑”意指任何適當製劑，惟一般係指細胞介素或趨化素(或刺激任一種生產之製劑)、腫瘤特異性過繼轉移之T細胞族群、或對腫瘤細胞表現之蛋白質具特異性之抗體。

細胞介素可為選自IFN α、IFN β、IFN γ與IFNA之干擾素或介白素(例如IL-2)。趨化素可為發炎介質，例如選自CXCL9、10與11之發炎介質，其吸引表現CXCR3之T細胞。刺激細胞介素或趨化素生產之製劑可以是適合於人類施用之佐劑。一實例是卡介苗(Bacille Calmette-Guerin)(BCG)，其通常 膀胱內(即導尿管)投藥，用於治療膀胱癌。BCG用於膀胱癌之典型投藥方案係每週一次，計六週，但已知其長時期之安全歷史紀錄，亦可無限期地投藥作為維護。已證明BCG刺激對膀胱癌之免疫反應。BCG亦已與包含腫瘤抗原之組成物(即帶著癌症疫苗)組合用作佐劑，特別是用於結腸癌，那時通常皮內投藥。本發明中亦計劃BCG之此類用途。腫瘤特異性之過繼轉移之T細胞族群，直接增加個體中腫瘤特異性T細胞族群之大小，並且可經由任何適當手段產生。然而，通常該製程涉及從取自病患之腫瘤試樣中單離腫瘤特異性T細胞，並在將擴增之腫瘤特異性T細胞族群送回該病患之前，選擇性地培養彼等細胞。替代地，可經由T細胞受體基因座之遺傳工程，接著擴增該改變之細胞，生產腫瘤特異性T細胞族群。

特異於腫瘤細胞所表現蛋白質之抗體，通常經由與腫瘤細胞之結合以及經由抗體依賴型細胞媒介之細胞毒性作用(ADCC)之促進細胞破壞，刺激免疫活性。此類型抗體之實例包括抗CD20抗體[例如奧法木單抗(ofatumumab)或利妥昔單抗(rituximab)]及抗CD152抗體[例如阿侖滋單抗(alemtuzumab)]。

因此，於特定例示具體例中，本發明化合物可與鈣調磷酸酶抑制劑(例如環孢靈A或FK 506)、mTOR抑制劑[例如雷帕黴素、40-0-(2-羥乙基)雷帕黴素、拜爾莫司(biolimus)-7或拜爾莫司-9]、具免疫抑制性之子囊黴素(例如ABT-281、ASM981)、皮質類固醇、環磷醯胺、咪唑硫嘌呤、胺甲喋呤、艾炎寧、咪唑立賓、黴酚酸或鹽，黴酚酸酯、IL-1 β抑制劑組合使用。

於另一具體例中，本發明化合物係與為PI3激酶抑制劑之共製劑組合。

於另一具體例中，本發明化合物係與影響BTK[布魯頓氏 (Bruton's)酪胺酸激酶]之共製劑組合。

為了治療腫瘤疾病，本發明化合物可與B細胞調節劑組合使用，例如，利妥昔單抗，BTK或Syk抑制劑，PKC、PI3激酶、PDK、PIM、JAK與mTOR之抑制劑及BH3模擬物。

6.化合物篩選/測定方法

本發明化合物抑制MALT1之對位凋亡蛋白酶活性，該酵素活性可使用許多生化測定法直接測定，例如於實施例1中所述之GLOSENSOR^TM測定法。因此，任何化合物之IC₅₀值可於一系列抑制劑濃度下予以測定。

於實施例1(其全部內容併入本文，惟此處僅作簡要敘述以避免冗餘)中，可使用GLOSENSOR^TM(Promega Corp.,Madison,WI)分段型螢光素酶系統評估MALT1抑制劑之活性。此系統中，如Fontan et al.(J Clin Invest.128(10)：4397-4412,2018，併入本文以資參考)中所述，該螢火蟲螢光素酶經基因改造且分裂成由短MALT1基質胜肽(例如MALT1基質-RelB之切割部位序列)連接的兩個不同結構域。該螢光素酶於此組態下無活性；經MALT1活化後，例如使用PMA/IO(離子黴素)刺激具有功能性MALT1的細胞，MALT1基質胜肽被切割，導致構形改變，從而恢復具有功能性之螢光素酶蛋白質。於提供適當螢光素酶基質，例如Promega Corp之Bright Glo基質時，即可檢測發光信號。此系統中MALT1抑制劑的存在，以與該MALT1抑制劑濃度成比例之方式降低發光信號。因此，可於一系列抑制劑濃度下測定抑制劑之IC₅₀值。此測定法可於任何適當細胞株中進行，例如Raji淋巴瘤細胞。編碼該螢光素酶酵素之GLOSENSOR^TM建構體可穩定整合入該細胞株之基因體中。

實施例2(其全部內容併入本文，惟此處僅作簡要敘述以避免冗 餘)敘述評估主題化合物抑制MALT1蛋白酶之替代或更多測定法。此測定法係根據此類抑制劑經由導致IL-2生產(為MALT1活化之下游事件)之MALT1活化而拮抗NF-κ B傳訊之能力。簡言之，可使用T細胞TRANSACT^TM試劑(Miltenyi Biotec)(該試劑已被開發為經由CD3與CD28共刺激以活化並擴增人類T細胞之隨時可用試劑)刺激能於刺激後即產生IL-2之適當細胞株[例如Jurkat細胞(不朽之人類T淋巴細胞)]以生產IL-2。可從細胞上清液收集如此生產之IL-2，然後使用標準ELISA測定法，根據使用一系列已知濃度IL-2產生之標準曲線決定IL-2之量。於此系統中，MALT1抑制劑之存在以與該MALT1抑制劑濃度成比例之方式降低產生之IL-2量。因此，可於一系列抑制劑濃度下決定該抑制劑之IC₅₀值。

可使用一種或兩種測定法決定主題化合物之IC₅₀值。

亦可使用更多測定法評估本發明任何特定MALT1抑制劑抑制MALT1之對位凋亡蛋白酶活性之能力，或篩選擁有MALT1抑制活性之化合物。

舉例而言，於一測定法中，可使用共價依附於短MALT1基質胜肽之螢光探針來測定MALT1蛋白分解活性。探針於此狀態下無螢光，惟於基質胜肽被活化之MALT1切割後，探針被釋出而變有螢光，可使用螢光計測量。MALT1抑制劑的存在會於一系列抑制劑濃度下，降低此類螢光信號。

特別是，MALT1之C結構域(胺基酸329至824)可作為此抑制劑篩選之MALT1替代物用。讀出參數可為與酵素活性成比例的螢光生命之經時增加。該測定法使用MALT1之短肽基質，並以單一螢光團PT14標記作為對基質切割狀態敏感之螢光生命期探針[PT14：6-(9-側氧-9H-吖啶-10-基)-已酸酯，AssayMetrics,UK)。胜肽基質具有下述序列：Ac-Trp-Leu-Arg-Ser-Arg-Cys(PT14)- NH₂(產品編號BS-91 17,Biosynta,Germany)。於此，Ac代表乙醯基，Cys(PT14)為半胱胺酸殘基，其中螢光團PT14經由順丁烯二醯亞胺基與半胱胺酸之硫氫基接合；胜肽之C端被醯胺化；可切斷鍵介於Arg與末端Cys間。測定用緩衝液由pH 7.5之200mM Tris/HCI、0.8M檸檬酸鈉、100μM EGTA、100μM DTT與0.05%(w/v)CHAPS組成。酵素反應之動力學特性分析可用以測定米開勒斯氏(Michaelis)常數(K_M)與k _cat 值。可於使用黑色微量滴定圓底孔培養盤(產品編號95040020,Thermo Electron Oy,Finland)之384孔培養盤格式中進行測定。可使測試化合物溶於100%(v/v)DMSO或含有90%(v/v)DMSO與10%(v/v)水之混合物中，儲備液濃度為100mM。可使用100%(v/v)DMSO或含有90%(v/v)DMSO與10%(v/v)水之混合物進行測試化合物之連續稀釋。

為了測量化合物抑制作用，於384孔培養盤之孔中，使0.25μL測試化合物與12.5μL酵素混合，於室溫(22℃)培育混合物60分鐘。然後，添加12.5L受質，室溫(22℃)下，令酵素反應繼續進行60分鐘。總分析體積因而為25.25μL，酵素與基質之最終分析濃度分別為2.5nM與1μM。於此測定條件下，測定信號之經時增加被預期至少持續60分鐘呈線性，且與至少2.5nM之活性酵素濃度呈正比。DMSO含量介於0.9與1%(v/v)之間。於使用稀釋因數為3.16之連續稀釋中，測試化合物之最終測定濃度一般在100μM至1nM之範圍內(即半對數稀釋程序)。作為對照，將經由僅添加DMSO代替測試化合物導致未抑制之酵素反應(即0%抑制)，或經由添加不含與DMSO混合之酵素之分析緩衝液，其係等同於完全抑制之反應(即100%抑制)，於多重孔中進行反應。使用微量滴定盤讀取計，例如具有在405nm激發螢光與在450nm紀錄發射之TECAN Ultra Evolution FLT儀器，紀錄螢光生命期。使用上文述及之對照作為參考(0與 100%抑制)，可將該螢光生命期轉換成抑制百分比。使用非線性迴歸分析軟體(Origin,OriginLab Corpo比n,USA)，從抑制百分比對抑制劑濃度圖計算IC₅₀值。將數據使用四參數對數模式擬合，其特點在於下述方程式：

y=A2+(A1-A2)/(1+(x/IC₅₀)^p)其中y係於抑制劑濃度下之%抑制，A1為最小抑制值，A2為最大抑制值。指數p為希爾(Hill)係數。

於另一具體例中，亦可在反應NF-kB活化之啟動子控制下，使用報導基因(例如螢光素酶)評估MALT1抑制。舉例而言，可將編碼cIAP2-MALT1融合物(持續性之活性MALT1蛋白酶)之建構體，穩固地整合至宿主細胞(例如HEK293)基因體中，並可於啟動子中NF-kB反應元件之控制下，使用螢光素酶讀取活化之NF-kB傳訊。如由降低螢光素酶報導基因之活性所反映，MALT1抑制劑之存在將向下調節MALT1所刺激之NF-kB傳訊。

更具體而言，此cIAP2-MALT1驅動之NF-κ B報導基因測定法(RGA)係於適當細胞例如HEK293中進行。於此測定中，融合蛋白cIAP2-MALT1於MALT型B細胞淋巴瘤中驅動持續性之NF-kB活化。為了監測MALT1抑制劑在NF-kB傳訊上之活性，乃建立穩定轉染之HEK293細胞株，於該細胞株中活化之cIAP2-MALT1融合蛋白被持續性地表現，且螢火蟲螢光素酶報導基因受到NF-kB反應元件之控制。於此系統中，抑制MALT1蛋白酶活性降低NF-kB傳訊，據報導螢光素酶活性較低。可使用螢光素酶活性檢測測定法測量螢光素酶基因表現之抑制。簡言之，接種1.8×10⁴個細胞/90μL/孔於無菌、白色壁、透明底之經組織培養處理之96孔微量培養盤(Costar，商品目錄編號3903)中。於37°C培育隔夜後，使用液體處理機器人(Velocity Bravo 11,Agilent)，將最初於DMSO 中製備隨後以1：100中間稀釋於細胞培養液之10×3倍系列化合物稀釋液10μL添加至細胞中。除非另行述及，否則化合物之起始濃度可設定於10μM，且所有孔中之最終媒介物濃度可為0.1% DMSO。化合物培育24小時後，第一步驟為於添加10μL溶於磷酸鹽緩衝鹽液之135μgmL刃天青鈉鹽(SIGMA Cat-Nr R7017)3小時後，評估細胞生存能力。使用多用途微量盤讀取計(例如Infinite M200Pro,TECAN)，於540/590nm之激發/發射波長處定量減少之刃天青後，使細胞與70μL ONEGlow(Promega，商品目錄編號E6120)同質分析緩衝液於室溫一起培育20分鐘，然後進行螢光素酶表現量之定量。發光呈發光檢測模式記錄在多用途微量盤讀取計(例如Infinite M200Pro，TECAN)上。使用Excel分析範本處理原始數據。特定測試化合物濃度對NF-kB活性之影響以螢光素酶信號(相對光單位)表示，將其除以減少之刃天青信號(相對螢光單位)以標準化為細胞生存能力。將經媒介物處理之細胞得到之值設定為100%。使用四參數曲線擬合(XLfit，V4.3.2)決定絕對(相對於媒介物對照組減少50%)與相對(轉折點)IC50值(μM)。另外，測試在最高化合物濃度下之%標準化NF-κB信號與%細胞生存能力。

於另一具體例中，亦可於Jurkat細胞中，使用人類IL-2啟動子報導基因分析(RGA)評估MALT1抑制。類似於實施例2中之測定法，Jurkat細胞可經由抗CD28 mAb與PMA之刺激產生IL-2。與實施例2不同地，係於IL-2反應啟動子之控制下，使用報導基因(例如螢光素酶)間接測量所產生之IL-2。因此，產生之IL-2量與所測量之螢光素酶活性成比例。

此測定法中，可使經轉染之Jurkat選殖株於補充10%熱不活化之胎牛血清、50μM 2-巰基乙醇與1mg/ml遺傳黴素之RPMI 1640培養基中繁殖。 培養期間細胞濃度不應超過1×10⁶個/ml。細胞不應超過30次繼代培養。測定前，洗滌細胞並製備成濃度為2×10⁶個細胞/mL。將化合物稀釋液製成2×濃縮溶液，然後經由添加於細胞中稀釋1/2。於96深孔培養盤孔中，使約250μL化合物稀釋液與250μL細胞一起混合。37℃與5% CO₂下，使細胞/化合物預混物直接於深孔培養盤中培育30分鐘。於細胞與化合物預培育後，以3g/mL之抗CD28 mAb+1μg/mL之PMA刺激細胞。兩種共刺激物以10×濃縮溶液於培養基中稀釋。吸取10μL共刺激物至白色96孔培養盤中，並立即以二重複添加100μL之細胞/化合物混合液。使細胞於37℃及5% CO₂下刺激5.5小時。刺激細胞後，於各孔添加50μL BriteLifePlus試劑(Perkin Elmer)，並以Wallac EnVision讀取計(Perkin Elmer)測量生物發光。

任何上述測定法可按比例予以放大用於大規模或高通量篩選。使用上述任何測定法，可確定主題化合物之IC₅₀值。於特定具體例中，主題化合物之IC₅₀值係使用於實施例1及/或實施例2中所述方法予以確定。

7.醫藥組成物

本發明提供醫藥組成物，其包含本文所述之任何一種化合物或其醫藥上可接受之鹽，以及一或多種醫藥上可接受之載劑或賦形劑。

“醫藥上可接受之賦形劑”與“醫藥上可接受之載劑”係指有助於活性劑之調配及/或投藥及/或受試者之吸收，並可包含於本發明之組成物中而不對受試者引起顯著不良毒理學作用之物質。醫藥上可接受之載劑與賦形劑之非限制性實例包括水、NaCl、一般生理鹽水、乳酸林格氏液、一般蔗糖、一般葡萄糖、黏合劑、填充劑、崩解劑、潤滑劑、包衣、甜味劑、調味劑、鹽類溶液(例如林格氏液)、酒精、油、明膠、碳水化合物(例如乳糖、直鏈澱粉或澱粉)、脂肪酸酯、 羥甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、與色素等。此類製劑可進行滅菌且，需要時，可與不會與本文所提供之化合物有害地反應或干擾其活性之輔助劑，例如潤滑劑、防腐劑、安定劑、潤濕劑、乳化劑、影響滲透壓之鹽類、緩衝劑、著色劑、及/或芳香族物質等混合。發明所屬技術領域中具有通常知識者將認知其他醫藥上之載劑與賦形劑適合與揭示之化合物一起使用。

這些組成物視需要進一步包含一或多種附加之治療劑。替代地，本發明化合物可與一或多種其他治療方案[例如格列衛(Gleevec)或其他激酶抑制劑、干擾素、骨髓移植、法呢基轉移酶抑制劑、雙膦酸鹽類、α-酞醯亞胺戊二醯亞胺、癌症疫苗、激素療法、抗體、輻射線等]之投藥組合投予有其需要之病患。舉例而言，用於與本發明化合物聯合投藥或包含於醫藥組成物中之治療劑可為其他一或多種抗癌製劑。

如本文所述，本發明組成物包含本發明化合物以及醫藥上可接受之載劑，如本文所用，其包括適合所需特定劑型之任何與所有溶劑、稀釋劑或其他媒介物、分散或懸浮助劑、界面活性劑、等滲劑、增稠或乳化劑、防腐劑、固體黏合劑、潤滑劑等。Remington’s Pharmaceutical Sciences,Fifteenth Edition,E.W.Martin(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1975)揭示用於調配醫藥組成物之各種載劑及用於其製備之已知技術。任何習知載劑介質除非與本發明化合物不相容，例如經由產生任何不良生物學作用或與醫藥組成物之任何其他成分以有害方式交互作用，否則其用途均涵蓋於本發明範圍內。可作為醫藥上可接受的載劑之若干物料實例包括，惟不限於，糖類例如乳糖、葡萄糖與蔗糖；澱粉類例如玉米澱粉與馬鈴薯澱粉；纖維素及其衍生物類例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素與乙酸纖維素；粉末狀西黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑類例如可可脂與栓劑 蠟；油類例如花生油、棉籽油；紅花子油；芝麻油；橄欖油；玉米油與大豆油；乙二醇類此類丙二醇；酯類例如油酸乙酯與十二酸乙酯；洋菜；緩衝劑類例如氫氧化鎂與氫氧化鋁；褐藻酸；無熱原水；等滲生理鹽水；林格氏液；乙醇與磷酸鹽緩衝液，以及其他無毒之相容性潤滑劑例如十二烷基硫酸鈉與硬脂酸鎂、以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調味劑與芳香劑、防腐劑與抗氧化劑亦可存在組成物中。

8.調配物

本發明亦涵蓋一類組成物，其包含本發明之活性化合物與一或多種醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或佐劑(本文中統稱為“載劑”物料)以及，需要時之其他活性成分。

於特定具體例中，本發明提供用於治療癌症(特別是本文所述之癌症)之醫藥調配物，其包含本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽以及醫藥上可接受之載劑。

於特定具體例中，本發明提供用於治療選自由本文所述可治療疾病部分所組成組群之癌症之醫藥調配物，其包含本發明化合物或其醫藥上可接受之鹽以及醫藥上可接受之載劑。

本發明之活性化合物可經由任何適當途徑投予，較佳為呈適應此類途徑之醫藥組成物的形式以及以有效劑量用於預期之治療。本發明化合物與組成物可，例如，經口、黏膜、局部、直腸、例如經由吸入性噴霧經肺部、或非經腸包括經血管內、靜脈內、腹膜內、皮下、肌內、胸骨內與輸注技術，呈含有習知醫藥上可接受之載劑、佐劑、與媒介物之劑型單元調配物投予。

本發明之醫藥上活性化合物可依照藥劑學之習知方法處理以產 生用於投予病患(包括人類與其他哺乳動物)之醫藥製劑。

關於口服投藥，醫藥組成物可呈例如錠劑、膠囊、懸浮液或液體之形式。醫藥組成物較佳為製成含有特定量活性成分之劑型單元形式。

此類劑型單元之實例為錠劑或膠囊。舉例而言，用於人類或其他哺乳動物適當之每日劑量可依病患之症狀與其他因素而變化，惟可再次使用例行方法予以決定。

投予之化合物量與使用本發明化合物及/或組成物治療疾病症狀之投藥方案取決於種種因素，包括受試者之年齡、體重、性別與醫學症狀、疾病類型、疾病嚴重度、投藥途徑與頻率及所使用之特定化合物。因此，投藥方案可廣泛地不同，惟可使用標準方法依常規決定。如先前所述，每日劑量可一次投予或可分為2、3、4或更多次投予。

為了治療之目的，本發明之活性化合物通常與一或多種適合指定投藥途徑之佐劑、賦形劑或載劑組合。若為口服投藥，則該等化合物可摻入乳糖、蔗糖、澱粉、纖維素烷酸酯、纖維素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸與硫酸之鈉與鈣鹽、明膠、阿拉伯膠、褐藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、及/或聚乙烯醇，然後打錠或膠囊化以方便投藥。此類膠囊或錠劑可含有控制釋放調配物，可呈活性化合物於羥丙基甲基纖維素中之分散體提供。

於皮膚症狀之情形下，較佳為將本發明化合物之局部製劑施加於患處，每天二至四次。適用於局部投藥之調配劑包括適用於穿透皮膚之液體或半液體製劑(例如擦劑、洗劑、軟膏、乳劑、或糊劑)與適用於投予眼、耳或鼻之滴劑。供局部投藥時，活性成分可佔調配劑之0.001%至10% w/w，例如以重量計1%至2%，儘管其最多可佔10% w/w，惟較佳為不多於5% w/w，更加為佔調配 劑之0.1%至1%。

本發明化合物亦可經由經皮裝置投予。較佳為使用藥盒與多孔膜類型或固體基質多樣化之貼片達成經皮投藥。於任一情形下，該活性劑係連續地從藥盒或微膠囊穿過膜，被遞送到與接受者之皮膚或黏膜接觸之活性劑可滲透之膠黏劑裏。若活性劑經由皮膚被吸收，則可將經控制及預定流量之活性劑投予接受者。於微膠囊之情形下，膠囊化劑亦可作為膜之功能。本發明乳液之油相可由已知成分以已知方法組成。

儘管該相可只包含乳化劑，惟其可包含至少一種乳化劑與脂肪或油或與脂肪與油兩者之混合物。較佳為，親水性乳化劑係包括與作為安定劑之親脂性乳化劑一起使用。更佳為包含油與脂肪二者。總之，有或無安定劑之乳化劑構成所謂乳化蠟，該蠟以及油與脂肪一起構成所謂乳化軟膏基底，其形成乳劑調配物之油性分散相。適合用於本發明調配物之乳化劑與乳液安定劑包括Tween 60、Span 80、鯨蠟硬脂醇、肉荳蔻醇、甘油單硬脂酸酯、十二烷基硫酸鈉、單獨或與蠟一起之甘油二硬脂酸酯、或發明所屬技術領域中已周知之其他物料。

用於調配物的適當油或脂肪之選擇係根據達到所期望之化妝品性質。由於活性化合物在很可能用於醫藥乳液調配物之多數油中之溶解度非常低，因此，乳劑較佳為應具有適當稠度之不油膩、不沾汙且可洗滌之產品，以避免從管或其他容器中漏出。可使用直鏈或支鏈之一鹽基性烷基酯或二鹽基性烷基酯，例如二異己二酸酯、硬脂酸異十六烷酯、椰子油脂酸丙二醇二酯、肉荳蔻酸異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2-乙基己酯或支鏈酯之混合物。彼等可視所需性質單獨或組合使用。

替代地，可使用高熔點脂質，例如白色軟石蠟及/或液態石蠟或其 他礦物油。

適用於局部投藥至眼睛之調配物亦包括眼藥水，其中活性成分係溶解或懸浮於適當載劑中，特別是用於活性成分之水性溶劑。

出現在此類調配物中之活性成分濃度較佳為0.5至20%，有利地為0.5至10%，特別是約1.5% w/w。

用於注射投藥之調配物可為水性或非水性等滲無菌注射溶液或懸浮液之形式。這些溶液與懸浮液可使用用於口服投藥調配物所提及之一或多種載劑或稀釋劑，或使用其他適當之分散或潤濕劑與懸浮劑，以無菌粉末或顆粒予備。該等化合物可溶於水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苄醇、氯化鈉、黃蓍膠、及/或各種緩衝劑中。其他佐劑與投藥模式為醫藥發明所屬技術領域中所廣泛悉知。活性成分亦可為與適當載劑(包括生理鹽水、右旋糖、或水)，或與環糊精(即Captisol)、共溶劑溶解化(即丙二醇)或微胞增溶(即Tween 80)之組成物注射投予。

無菌注射用製劑亦可為於無毒注射可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌注射用溶液或懸浮液，例如於1,3-丁二醇中之溶液。在可接受之媒介物與溶劑中，可使用水、林格氏液、與等滲氯化鈉溶液。另外，無菌之不揮發油習知地被使用作為溶劑或懸浮介質。為此目的，可使用任何溫和之不揮發油，包括合成之一甘油酯或二甘油酯。此外，發現脂肪酸(例如油酸)於注射劑製備中之用途。

用於肺部投藥，醫藥組成物可呈氣溶膠形式，或以包括乾粉氣溶膠之吸入器投藥。

用於藥物直腸投藥之栓劑可利用使該藥物與適當無刺激性賦形劑例如可可脂與聚乙二醇混合予以製備，該等賦形劑於常溫下為固體，惟於直腸 溫度下則為液體，因此將在直腸中融化並釋出藥物。

醫藥組成物可進行習知之醫藥操作例如滅菌及/或可含有習知佐劑，例如防腐劑、安定劑、潤濕劑、乳化劑、緩衝劑等。此外，可製備具有腸溶性包衣之錠劑與丸劑。此類組成物亦可包含佐劑，例如潤濕劑、甜味劑、調味劑、與芳香劑。本發明之醫藥組成物包含本文所述諸式之化合物或其醫藥上可接受之鹽；選自激酶抑制劑(小分子、多肽、抗體等)、免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、抗發炎劑、抗真菌劑、抗生素、或抗血管過度增生化合物之添加劑；以及任何醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒介物。

本發明之替代組成物包含本文所述諸式之化合物或其醫藥上可接受之鹽；及醫藥上可接受之載劑、佐劑或媒介物。此類組成物可視需要包含一或多種添加之治療劑，包括，例如，激酶抑制劑(小分子、多肽、抗體等)、免疫抑制劑、抗癌劑、抗病毒劑、抗炎劑、抗真菌劑、抗生素、或抗血管過度增生化合物。

“醫藥上可接受之載劑或佐劑”一詞係指可與本發明化合物一起投予病患之載劑或佐劑，其以足夠劑量遞送化合物之治療量投予時，不會破壞藥理活性而且無毒。可用於本發明醫藥組成物之醫藥上可接受之載劑、佐劑與媒介物包括，惟不限於，離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、自乳化輸藥系統(SEDDS)(例如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、醫藥劑型中使用之界面活性劑(例如Tweens或其他類似之聚合遞送基質)、血清蛋白(例如人類血清白蛋白)、緩衝物質(例如磷酸鹽、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀)、飽和植物脂肪酸之部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質(例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、矽酸膠、三矽酸鎂)、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素類物質、聚乙二 醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯聚氧丙烯封阻聚合物、聚乙二醇與羊毛脂。環糊精(例如u-、P-、與y-環糊精)、或經化學修飾之衍生物(例如羥烷基環糊精，包括2與3-羥丙基環糊精)或其他可溶性之衍生物亦可有利地用以增強本文所述諸式化合物之遞送。

醫藥組成物可以任何口服可接受之劑型口服投予，包括，惟不限於，膠囊、錠劑、乳液與水性懸浮液、分散液與溶液。於口服使用錠劑之情形下，經常使用之載劑包括乳糖與玉米澱粉。通常也添加潤滑劑，例如硬脂酸鎂。關於膠囊形式之口服投藥，有用之稀釋劑包括乳糖與乾玉米澱粉。口服投予水性懸浮液及/或乳液時，可將活性成分懸浮或溶解於油相中，並與乳化劑及/或懸浮劑結合。

需要時，可添加特定之甜味劑、調味劑及/或著色劑。醫藥組成物可包含利用脂質體或微膠囊化技術之調配物，其各種實例為發明所屬技術領域中已知。

醫藥組成物可經由鼻用氣溶膠或吸入投藥。此類組成物係根據醫藥調配物發明所屬技術領域中悉知之技術製備，且可使用苄醇或其他適當防腐劑、增強生體可利用率之吸收促進劑、氟碳化物及/或其他助溶劑或分散劑製備為鹽溶液，其實例亦為發明所屬技術領域中已悉知。

9.治療套組

本發明之一態樣係有關用於方便且有效地實行依照本發明方法或用途之套組。通常，該醫藥包裝或套組包含一或多個裝填本發明醫藥組成物之一或多種成分之容器。這樣的套組特別適用於遞送固體口服形式例如錠劑或膠囊。此類套組較佳為包含許多單位劑量，且亦可包含具有其擬使用順序之劑量導向之卡片。需 要時，可提供記憶輔助工具，例如以數字、字母、或其他標記形式或使用日曆插入物標出治療計畫中可投予劑量之日子。視需要與此類容器相關的可為由管理醫藥品製造、使用或銷售之政府機構規定形式之告示，該告示反映人類投藥之製造、使用或銷售機構之認可。

下述代表性實施例含有更多重要之資訊、範例與導引，其可在各種具體例與其同等物中，適用於本發明之實施。此等實施例意欲有助於幫助說明本發明，而不擬也不應被解釋為限制其範圍。的確，於回顧本文件(包括隨後之實施例以及本文所引用之科學與專利文獻之參考文獻)後，除彼等本文所示及敘述之外，本發明之各種修飾及其許多進一步具體例，對熟悉此項發明所屬技術領域者將變得顯而易見。

所引用參考文獻之內容併入本文以資參考，以幫助說明此項發明所屬技術領域之狀態。

此外，為了本發明之目的，化學元素係依照元素週期表標識(Periodic Table of the Elements,CAS version,Handbook of Chemistry and Physics,75th Ed.，封面裡)。另外，有機化學之一般原理以及特定之功能性部分與反應性見述於“Organic Chemistry,”Thomas Sorrell,University Science Books,Sausalito：1999與“Organic Chemistry,”Morrison & Boyd(3d Ed)中，二者之全部內容均併入本文以資參考。

10.合成流程

式I化合物可由發明所屬技術領域中具有通常知識者遵循發明所屬技術領域認可之技術與程序製備。更具體而言，式I化合物可利用下文提出之流程、方法與實施例中所述製備。發明所屬技術領域中的技術人員將認知，可改變下述流 程中之各個步驟以提供式I化合物。試劑與起始物料係發明所屬技術領域中具有通常知識者容易獲得的。除非另行指明，否則所有取代基均如先前所界定。

[實施例]

以下為本說明書中所用之縮寫及其意義：

EtOAc/EA：乙酸乙酯

DCM：二氯甲烷

ACN：乙腈

THF：四氫呋喃

DMSO：二甲亞碸

MeOH：甲醇

EtOH：乙醇

DMF：N,N-二甲基甲醯胺

DMA：N,N-二甲基乙醯胺

DMF DMA：N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛

NCS：N-氯琥珀醯亞胺

NBS：N-溴琥珀醯亞胺

NIS：N-碘琥珀醯亞胺

Pd-C：鈀碳

LDA：二異丙胺鋰

TFA：三氟乙酸

PTSA：對甲苯磺酸

DIBAL-H：氫化二異丁基鋁

LAH：氫化鋁鋰

PE：石油醚

Py：吡啶

DPPA：二苯基磷醯基疊氮化物

CDI：1,1-羥基二咪唑

TEA：三乙胺

DIPEA：N,N-二異丙基乙胺

DMAP：4-(二甲胺基)吡啶

EDCI：N-(3-二甲胺丙基)-N-乙基碳二亞胺鹽酸鹽

HOBT：1-羥基苯并三唑

TfOH：三氟甲烷磺酸

dppf：1,1-二茂鐵二基-雙(二苯膦)

DAST：(二乙胺基)三氟化硫

Pd₂(dba)₃：參(二亞苄基丙酮)二鈀(0)

Boc：三級丁氧羰基

Ac：乙醯基

TMSI：三甲基碘矽烷

TBAI：碘化四丁銨

PPh₃：三苯基膦

dba：二亞苄基丙酮

BINAP：2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-雙萘基

MsCl：甲烷磺醯氯

TsCl：甲苯磺醯氯

DMAP：4-二甲胺吡啶

LiHMDS：雙(三甲基矽基)胺化鋰

NaHMDS：雙(三甲基矽基)胺化鈉

DMS：二甲硫醚

DAST：二乙胺三氟化硫

DME：二甲氧乙烷

DCE：二氯乙烷

NMR：核磁共振

LC-MS：液相色譜質譜法

ESI-MS：電灑游離質譜法

GCMS：氣相層析質譜法

TLC：薄層層析法

TCR：T細胞受體

BCR：B細胞受體

CARD：凋亡蛋白酶活化與召集結構域

mM：毫莫耳

μM：微莫耳

mL：微升

ng：奈克

nM：奈莫耳

nm：奈米

IC₅₀：半最大抑制濃度

OD：光學密度

A.生物學實施例

實施例1.Raji/GLOSENSOR ^TM 穩定細胞株之化合物篩選

此實施例提供能於活細胞中高通量篩選/評估MALT1抑制劑活性之鑑定法。此鑑定法可用於，例如，鑑定對MALT1具有效活體內活性之化合物、鑑定比其他MALT1抑制劑更有效之MALT1抑制劑、鑑定最多可抑制約70至80%(而非100%)MALT1蛋白分解活性的部分(相對於完全)抑制劑之MALT1抑制劑、以及研究結構相關的MALT1抑制劑間之結構功能關係等。

本文所述鑑定法之基本原理係根據Fontan et al.[J Clin Invest.128(10)：4397-4412,2018，併入本文以資參考]，其敘述用以檢測細胞內之MALT1對位凋亡蛋白酶活性以及任何潛在MALT1抑制劑對MALT1活性之作用之穩健又靈敏之方法。該方法係根據GLOSENSOR^TM(Promega Corp.,Madison,WI)之分段型螢光素酶系統，其利用由藉由嵌入cAMP結合蛋白部分而切開成2個不同結構域之基因改造形式之螢火蟲螢光素酶組成之生物發光嵌合蛋白。cAMP之結合誘發構形之改變，其重建功能性螢光素酶蛋白導致發光。代替嵌入cAMP結合蛋白部分，Fontan設計報導子，俾使此構形之改變係經由MALT1誘發之蛋白分解切割所導致，因此螢光素酶活性將替代內源性MALT1蛋白酶活性。更具體而言，Fontan在其GLOSENSOR^TM建構體中使用Re1B(天然MALT1基質)之切割部位序列，俾使所編碼之螢光素酶被MALT1明確地活化。於Raji淋巴瘤細胞中測試GLOSENSOR^TM建構體，該等細胞容易轉導且適用於此類測定法，因其於以PMA與離子黴素(IO)刺激後立即活化MALT1。

因此，於下文所述測定法中，係於無抗生素下，於T75培養瓶中使必須數量之Raji細胞(例如5×10⁵個細胞/mL)生長隔夜，使細胞於第二天達到70至90%的匯合。第二天收集最適密度之細胞，計數以驗證。於預熱之PBS(不含Ca²⁺與Mg²⁺)中洗滌收集之細胞後，將Raji細胞再懸浮於適當之再懸浮緩衝液(包括使用Neon^TM套組，Thermo fisher，# MPK1025)中，最終密度為約1×10⁷個細胞/mL。

然後，添加適當容量之GLOSENSOR^TM質體(對於Raji細胞，每孔0.5μg)至細胞懸浮液中。關於EGFP對照組，則將0.5μgEGFP質體分別添加至細胞懸浮液中。

經由變更脈衝電壓、脈衝寬度、與脈衝數，測試24種不同之電穿孔條件，並選擇下表中之條件16(脈衝電壓：1400V；脈衝寬度：20 msec.；與脈衝數：2)用於電穿孔。亦使用等量之EGFP質體電穿孔進入Raji細胞以評估轉染效率。

電穿孔兩天後，收集以EGFP建構體電穿孔之Raji細胞，並經由FACS分析測定EGFP之表現。經由閘控FITC⁺比，確定電穿孔效率。

亦於電穿孔兩天後，收集用(或未用)GLOSENSOR^TM建構體電穿孔之Raji細胞，然後以每孔約10,000個細胞之密度接種至96孔培養盤中。於37℃，以PMA(200ng/mL)/離子黴素(1μM)刺激細胞2小時以活化MALT1蛋白酶活性。然後，添加BRIGHT GLO^TM(Promega Corp.,Madison,WI)受質至各孔中，以檢測螢光素酶信號。經PMA/IO刺激MALT1活性後，於GLOSENSOR^TM建構體成功電穿孔並表現MALT1之Raji細胞，在MALT1切割GLOSENSOR^TM融合蛋白以重新構成螢光素酶活性後，展現強之螢光素酶信號。

為要建立具有將GLOSENSOR^TM建構體穩固整合至基因體中之Raji細胞，於電穿孔兩天後收集電穿孔之Raji細胞，然後將其再平板培養於具有G418培養基之24孔培養盤中，以挑選具穩固整合之GLOSENSOR^TM建構體之細胞(其表現新黴素抗性基因)。每三天更換一次細胞培養基，每次以1,500rpm離心細胞5分鐘。13至14天後，匯集(pool)所有存活之細胞(推測具有穩固整合之GLOSENSOR^TM建構體)，冷凍，然後使用Bright-Glo基質評估螢光素酶活性。

經由將匯集之穩定Raji細胞首先稀釋至密度為每100μL約1個細胞，然後吸取100μL細胞懸浮液(平均包含1個單一細胞)至96孔培養盤之各孔中，即可得到具有穩固整合的GLOSENSOR^TM建構體之Raji細胞單一細胞選殖。使細胞生長3至4週，以成長為單一細胞選殖株。

於PMA/IO刺激後，可測試各單一細胞選殖株之MALT1活性。具體而言，可將細胞以約20,000個細胞/孔之密度，平板培養於96孔培養盤之孔中，然後藉由添加200ng/mL PMA加上1μM離子黴素予以刺激。添加等容積不含PMA與IO之培養液至對照孔中，作為對照組。進一步地，使用未電穿孔之Raji細胞作為媒介物對照，其於刺激及無刺激條件下皆產生陰性信號。選擇測定視窗大於7之細胞選殖株作為陽性選殖株。

進一步使用本發明之參考化合物，經由IC₅₀測定測試此類陽性Raji穩定細胞選殖株。具體而言，將40μL約20,000個細胞平板培養於96孔培養盤各孔中。同時，將參考化合物(WO2015/181747實施例10中所揭示之RGT005-001)以200μM為起始濃度，3倍連續稀釋至10等級劑量，然後使各個劑量與平板培養之細胞接觸。於37℃培育30分鐘後，再使細胞與PMA/IO(或等容積之對照培養液)接觸60分鐘以刺激MALT1活性，然後添加Bright Glo螢 光素酶基質以測量螢光素酶活性。參考化合物存在下之MALT1活性抑制可決定抑制率。

任何其他測試化合物均可同樣進行連續稀釋，俾使具有整合GLOSENSOR^TM建構體之Raji穩定細胞株可與不同濃度的潛在MALT1抑制劑接觸，以評估各測試化合物之IC₅₀值，較佳為呈高通量形式。具有高抑制活性之MALT1可使用此測定法進行鑑定。

下文列舉用於代表性分析實驗之條件與設備。

材料與培養基

1.試劑及消耗品

2.設備

3.培養基與溶液

Raji之完全培養基

Raji：RPM1640：90%；FBS：10%；青黴素/鏈黴素：1% Raji/GLOSENSOR ^TM 之完全培養基

Raji：RPM1640：90%；FBS：10%；青黴素/鏈黴素：1%；G418：1,500μg/mL

冷凍介質

FBS：90%；DMSO：10%

穩定細胞株產生之程序

1.轉染/電穿孔

第1天：準備細胞

接種所需量之細胞(5×10⁵個細胞/mL於T75培養瓶中)，俾使第二天細胞匯合達到70至90%。培養基中不含抗生素。

第2天：使用Neon ^TM 轉染系統(Thermo fisher#MPK5000)進行電穿孔

a.收集細胞懸浮液。經由混合20μL細胞懸浮液與20μL錐蟲藍，使用Countstar機器計數細胞。以1,000rpm離心細胞5分鐘。

b.移除上清液，並將細胞沈澱物再懸浮於預熱之PBS(不含Ca²⁺與Mg²⁺)中。以1,000rpm離心細胞5分鐘。

c.將細胞沈澱物再懸浮於適當之再懸浮緩衝液(包含於Neon^TM套組中，ThermoFisher，#MPK1025)，Raji最終密度為1×10⁷個細胞/mL。

d.添加適當體積之GLOSENSOR^TM質體至上述細胞懸浮液中(對於Raji細胞，每孔0.5μg)。對於EGFP組，則分別地添加0.5μg之EGFP質體至細胞懸浮液中。

e.在質體轉染前，吸取不含抗生素之培養液至24孔培養盤中，每孔500μL。將培養盤在37℃預熱一會。

f.使用條件16(脈衝電壓：1400V；脈衝寬度：20 msec；脈衝數：2)用GLOSENSOR^TM質體電穿孔Raji。亦將等量之EGFP電穿孔至Raji細胞中，以評估轉染效率。註：總計測試24種轉染條件(見下文)，並選擇條件16作為最適條件。

第4天：轉染/電穿孔效率之評估

於EGFP電穿孔之孔中收集細胞，進行FACS。經由閘控FITC⁺比評估轉染效率。

第4天：短暫性轉染信號之評估

收集以或未以GLOSENSOR^TM轉染之細胞。將細胞接種至96孔培養盤中，每孔10,000個細胞。於37℃，以PMA(200ng/mL)/離子黴素(1μM)刺激細胞2小時，然後添加Bright Glo以檢測螢光素酶信號。

第4天至第17天：抗生素處理

a.於第4天，將在24孔培養盤中之細胞轉移至T25培養瓶中。添加1,500μg/mL G418，俾使得到Raji/GLOSENSOR^TM之穩定選殖株。

b.每三天利用以1,500rpm離心5分鐘更換細胞培養基。

c.第17天時，收集所匯集之穩定細胞。將其冷凍並使用Bright-Glo評估匯集細胞之信號。

2.單一細胞選殖株之製備

a.將所匯集之穩定轉染細胞稀釋至1個細胞/100μL。

b.吸取100μL細胞懸浮液至10個96孔培養盤中。

c.令細胞生長3至4週。標記從一個單一細胞逐漸形成之選殖株。

3.使用Bright-Glo初步鑑定Raji/GLOSENSOR ^TM 中之陽性選殖株

a.於顯微鏡下觀察各個穩定選殖株之細胞狀態。概略地評估各個選殖株之細胞密度。

b.將細胞平板培養於96孔培養盤(Corning # 3610)中，90μL/孔，約2×10⁴個細胞。

c.關於刺激組，將10μL之200ng/mL PMA加上1μM離子黴素轉移至96孔培養盤中。

關於未刺激組，係將10μL培養液轉移至96孔培養盤之各孔中。以未電穿孔之Raji細胞作為媒介物對照組，其於刺激及未刺激下應會產生陰性信號。

d.於37℃、5% CO₂培養箱中，培育培養盤2小時。

e.於培養盤添加100μL/孔之Bright-Glo。

f.於室溫，於培養盤振盪器振盪培養盤(~300rpm)5分鐘。

g.於Envision微量盤分析儀(96孔USL)中讀取發光信號。

h.處理數據。檢查刺激與未刺激組間，各選殖株之測試視窗。挑選測試視窗大於7之選殖株作為陽性選殖株。

4.利用參考化合物RGT005-001之IC ₅₀ 測定確認陽性選殖株

a.將細胞接種至96孔培養盤(Corning # 3610)中，每孔40μL、20,000個細胞。

b.化合物製備：

i)使用DMSO將RGT005-001(溶於DMSO中之10mM儲液)稀釋為200μM(添加1μL儲液至49μL DMSO中以獲得200μM)。

ii)以200μM RGT005-001作為最高劑量。然後將其3倍稀釋(10μL之最高劑量溶液與20μL DMSO混合)成10等級劑量。

iii)使用預熱培養液連續稀釋化合物(將2μL之化合物溶液與198μL培養液混合)以得到2×化合物。

iv)於96孔培養盤中以40μL化合物溶液處理細胞。

v)於300rpm搖動2分鐘，37℃、5% CO₂下，培育測定盤30分鐘。

vi)關於高量/低量對照組，係添加40μL培養液(含1% DMSO)至培養盤中。

c.30分鐘後，將20μL 5× PMA/離子黴素轉移至96孔培養盤中。

d.高量對照組係添加20μL PMA/離子黴素至培養盤中。低量對照組則係添加20μL培養液加至培養盤中。

e.37℃、5% CO₂下，於培養箱中培育培養盤1小時。

f.添加100μL/孔之Bright-Glo至測定盤中。

g.於室溫，於培養盤振盪器振盪(~300rpm)諸盤5分鐘。

h.於Envision微量盤分析儀(96孔USL)中讀取發光信號。

i.由使用方程式處理數據以得到抑制率：(高量對照孔之讀數-化合物處理孔之讀數)×100%/(高量對照孔之讀數-低量對照孔之讀數)。針對不同濃度之化合物，擬合抑制率。使用統計分析繪圖軟體(GraphPad prism)中之非線性分析產生IC₅₀。

5.黴漿菌檢測

使用MYCOALERT^TM PLUS黴漿菌檢測套組(訂購資訊：Lonza，LT07-710)進行黴漿菌檢測，並嚴格遵循供應商所提供之說明書進行測定。

於Raji/GLOSENSOR ^TM 細胞株上篩選化合物之程序

於96孔培養盤接種細胞：

將細胞接種至96孔培養盤(Corning # 3610)中，每孔總計2×10⁴個細胞(40μL)。註：每次記錄細胞數與細胞生存能力。

化合物連續稀釋

關於參考化合物RGT005-001：

a.使用DMSO將RGT005-001(溶於DMSO之10mM儲液)稀釋成200μM(添加1μL儲液至49μL DMSO中以得到200μM)。

b.然後使用DMSO將其3倍連續稀釋成10等級劑量(10μL最高劑量溶液與20μL DMSO混合)。

c.使化合物溶液(100×)與預熱之培養液混合，得到2×化合物溶液(使2μL化合物溶液與198μL培養液混合)。DMSO之最終濃度為1%(2×)。

關於測試化合物：

a.使用DMSO將測試化合物(溶於DMSO之10mM儲液)稀釋成2mM(添加3μL儲液至12μL DMSO中以得到2mM)。

b.然後使用DMSO將2mM之測試化合物，二重複地以3倍連續稀釋成10等級劑量(5μL最高劑量溶液與10μL DMSO混合)。

c.使用預熱之培養液混合化合物溶液(100×)，得到2×化合物溶液(使2μL之化合物溶液與198μL培養液混合)。DMSO之最終濃度為1%(2×)。

用化合物對Raji/GLOSENSOR ^TM 細胞進行預處理

a.以不同濃度之如下圖(platemap)所示化合物處理Raji/GLOSENSOR^TM，每孔40μL。

b.於300rpm搖動培養盤2分鐘，37℃、5% CO₂下，培育測定用培養盤30分鐘。

c.關於高量/低量對照組，係將40μL培養液(含1% DMSO)添加於培養盤中。

PMA/離子黴素刺激1小時

a.使用預熱之培養液製備1μg/mL PMA加5μM離子黴素之混合物(於7984μL培養液中添加8μL PMA與8μL離子黴素)。

b.處理化合物30分鐘後，將20μLPMA/離子黴素混合物轉移至96孔培養盤中(預期之陽性對照)。

c.關於低量對照組，係添加20μL培養液加至諸孔中。

d.37℃、5% CO₂下，使培養盤於培養箱中培育1小時。

螢光素酶信號檢測與數據分析

a.添加100μL/孔Bright-Glo至測定用培養盤中。

b.於室溫，於培養盤於培養盤振盪器振盪(~300rpm)5分鐘。

c.於Envision微量盤分析儀(96孔USL)中讀取發光信號。

d.使用方程式處理數據成抑制率：(高量對照孔之讀數-化合物處理孔之讀數)×100%/(高量對照孔之讀數-低量對照孔之讀數)。針對不同濃度之化合物，擬合抑制率。使用統計分析繪圖軟體(GraphPad prism)中之非線性分析產生IC₅₀。

本發明例示性化合物之Glosensor劑量反應圖呈現於圖1中。

實施例2. 關於Jurkat細胞中IL-2產生之化合物效力研究

此實施例證明本主題化合物影響Jurkat細胞中IL-2之產生。同時，使用ELISA可針對相同系統中，測試化合物影響IL-2產生之能力進行測試。

選擇Jurkat細胞用於此分析，乃因其為能產生介白素2(IL-2)之不朽人類T淋巴細胞。可使用T Cell TRANSACT^TM試劑(Miltenyi Biotec)刺激Jurkat細胞以產生IL-2，該試劑已被開發為可經由CD3與CD28以活化及擴增人類T細胞之隨時可用試劑。其由與擬人化之CD3與CD28促效劑接合之膠體聚合奈米基質構成之聚合奈米基質結構，可保證溫和且有效地活化T細胞，同時維持高生存能力。

可將刺激以產生IL-2之Jurkat細胞離心，收集含IL-2之上清液，然後使用抗IL-2抗體，使用標準ELISA測定法測量所產生之IL-2量。MALT1抑制劑之存在降低Jurkat細胞之IL-2產生量，又使用此分析法可定量地測量各個MALT1抑制劑之IC₅₀值。

下文為本文所提供之例示性分析實驗流程。

材料與設備：

1.試劑：

2.設備及用品：

3.程序

Jurkat細胞解凍與接種程序：

細胞生長培養基：RPMI1640(ATCC，Cat #30-2001)；10% FBS(Gibco，商品目錄編號10091148)；1% PenStrep(Gibco，商品目錄編號15140)；與Beta-ME(Gibco，商品目錄編號21985023)。

1.繼代培養

此細胞株通常每週以1：3比率稀釋兩次。

1)經由添加新鮮培養液/更換培養液或離心以維持細胞培養，接著再以3至4×10⁵個細胞/mL重新懸浮。

2)當細胞濃度/密度達到1×10⁶個細胞/mL時，使細胞進行繼代培養。細胞濃度控制於不超過3×10⁶個細胞/mL。

3)每2至3天更新培養液一次。

2.於測定日之前更換新鮮培養液

3.於96孔培養盤中接種細胞(第1天)

1)經由離心及丟棄細胞生長培養基收集細胞。計算細胞數，並計算測定所需細胞總數。

2)以適當容量之細胞培養基稀釋細胞懸浮液。

3)接著將細胞懸浮液分注至無菌拋棄式藥盒中。

4)然後將1×10⁵個細胞/孔(50μL/孔)之細胞懸浮液轉移至96孔培養盤(細胞培養盤：corning-3788)中。

5)於潮濕空氣、37℃、5% CO₂之培養箱中培育培養盤1小時。

化合物與Transact製備程序(第1天)：

1.化合物與DMSO製備與添加：

化合物連續稀釋(源培養盤)

1)使化合物溶於100% DMSO中至濃度為10mM，然後以DMSO稀釋至1mM：5μL 10mM化合物+45μL DMSO=50μL 1mM化合物添加至A列中。

2)添加約40μL DMSO至B1至H10諸孔中。然後經由轉移20μL化合物至40μL DMSO中，使用微量分注器連續稀釋化合物(8等級，3倍稀釋，B2至H9)。經由此方法，得到稀釋於DMSO中之一系列化合物濃度。

2×化合物劑量製備[中間盤：Corning-3599]：

1)以微量分注器添加95μLRPMI 1640培養液(RPMI1640+10% FBS+1% PS+0.055mM 2-ME)至96孔中間盤1中，然後將5μL諸化合物從源培養盤轉移至此中間盤1(A2至H9)中並混合；

2)以微量分注器將5μL DMSO從源培養盤轉移至此中間盤1中(A1至H1，A10至H10)並充分混合。

3)以微量分注器添加240μL RPMI 1640培養液(RPMI1640+10% FBS+1% PS+0.055mM 2-ME)至96孔中間盤2(A1至H10)中，然後以微量分注器將10μL諸化合物或DMSO從中間盤1轉移至此中間盤2(A1至H10)中，並充分混合以得到最終之2×化合物濃度。

4)添加50μL/孔工作濃度(working concent比n)DMSO與化合物溶液至細胞培養盤(Corning-3788)中。化合物最終濃度為1μM，而細胞培養中最終DMSO濃度為0.1%。然後於37℃之5% CO₂培養箱中培育培養盤0.5小時。

2.TRANSACT ^TM 試劑：貯存於4 ℃

1)TRANSACT^TM試劑工作溶液係於使用之前，每次以RPMI 1640培養液(RPMI1640+10% FBS+1% PS+0.055mM Beta-ME)從儲液中新鮮稀釋。試樣未稀釋。

2)添加100μL/孔2×Transact於各孔。

3)於37℃之5% CO₂培養箱中培育24小時。

上清液收集程序

試樣收集(第2天)

1)於37℃之5% CO₂培養箱中培育24小時後，以1,000rpm離心細胞培養盤10分鐘。收集100μL/孔上清液，然後進行IL-2 ELISA測定法。上清液可注射劑於-80℃，於第二天進行IL-2 ELISA測定。需要時，可將上清液稀釋3倍，以確保該測定不會超出IL-2標準曲線之線性範圍。

IL-2ELISA程序(第2天)：

第1天塗佈培養盤：

1)以於被覆緩衝液中稀釋之捕獲抗體塗覆於微量孔(每孔100μL)。使用批號之特定說明/測定證明書作為用於推薦抗體塗覆稀釋之指南。將培養盤密封，並於4℃培育隔夜。

第2天IL-2 ELISA：

1)抽吸諸孔，以

300μL/孔之洗滌緩衝液洗滌三次。最後一次洗滌後，將培養盤倒置並於吸水紙上吸乾以任何殘留之緩衝液。

2)以

200μL/孔之測定稀釋劑封阻培養盤，然後於室溫培育1小時。

3)重複抽吸/洗滌，如步驟2。

4)於測定稀釋劑中製備標準與試樣稀釋液。

IL-2標準儲液製備：添加1mL去離子水至小瓶(235ng/小瓶)中，以達到235ng/mL之儲液濃度。將標準儲液等分為50μL/小瓶，然後於-80℃冷凍。

STD曲線係在測定當天以儲液稀釋，用最高之500pg/ml、2倍稀釋、8種劑量(包括0pg/ml)。稀釋後，將100μL/孔之STD轉移至ELISA培養盤(第12行)中。

5)吸取100μL各標準、試樣、與對照組至適當孔中。密封培養盤，於室溫培育2小時。

6)如步驟2，重複抽吸/洗滌，惟總計洗滌五次。

7)於各孔添加100μL工作檢測物(檢測抗體+SAv-HRP試劑)。將培養盤密封，於室溫培育1小時。

8)如步驟2，重複抽吸/洗滌，惟總計洗滌七次。

註：於此最後洗滌步驟中，每次洗滌均將孔浸漬於洗滌緩衝液中30秒至1分鐘。

9)添加100μL基質溶液於各孔。於室溫、於黑暗中，培育培養盤(培養盤未密封)30分鐘。

10)於各孔添加50μL終止溶液。

11)終止反應30分鐘之內，讀取450nm處之吸光度。若可進行波長校正，則從450nm處之吸光度中減去570nm處之吸光度。

數據分析：

根據及相對於各個測定用培養盤內所含HPE與ZPE諸孔中之信號，計算各化合物濃度之抑制百分比(%)。使用HPE孔作為0%抑制，而除DMSO(最終濃度=0.1%)外，以不含任何化合物之ZPE孔作為100%抑制。繪製測試化合物之濃度與%抑制值，並用三參數對數之劑量反應方程式決定50%抑制所需之化合物濃度(IC₅₀)。於各實驗中，評估參考胜肽/化合物之結果變數值(IC₅₀)，作為品質管制之基準。若結果變數值在預期值之3倍內，則認為該實驗為可接受。

下文表1中，列舉得自例示化合物之細胞數據。對於小於或等於100nM之數值，分別為IC₅₀值以"++++"表示；小於或等於500nM之數值，"+++"；小於或等於1μM之數值，"++"；大於1μM之數值，"+"。

圖2呈現本發明例示化合物之IL-2 Jurkat細胞Transact劑量反應圖。

實施例3.針對Treg與Th17之抑制活性

CD4⁺ T細胞在調節免疫系統以抵抗包括細菌或病毒之外來病原體感染以及癌症上起關鍵性作用。CD4⁺ T細胞區室之特有功能取決於各種T細胞子集間之可調整平衡，其中Th17細胞與調節型T細胞(Tregs)在調節自體免疫性與癌症上 起重要作用。Th17細胞與Treg細胞間之精巧平衡，不僅對於維持健康與正常運轉之免疫環境至關重要，且對疾病之治療也具重要意義。換言之，有目的地抵銷Th17/Treg平衡，於治療與Th17/Treg平衡及體內恆穩狀態崩解相關之疾病可能有效。

Th17細胞為宿主防禦病原體以維持生命所必需，並涉及引發自體免疫疾病與癌症，而Tregs則是自我耐受性與防禦自體免疫性所必需，常與癌症進展相互關聯。此實施例證明，根據主題化合物對Th17或Treg功能(包括分化的Th17或Treg細胞之擴增)的抑制功能之測量分析，本發明化合物對Th17與Treg T細胞具有鑑別性之抑制效應。

A.Th17測定-7天培養以產生極化之人類Th17樣細胞

經由將CD4⁺初始T細胞再懸浮於含有抗CD28共刺激抗體(以提供“第二”活化信號)、細胞介素混合物[例如IL-6(Th17分化所必需)、IL-1 β(促進Th17分化)、TGF-β 1(Th17分化所必需)、IL-23(支撐Th17表現型所必需)]、及抗IL-4(抑制初始T細胞極化成Th2細胞)與抗IFN-γ(抑制初始T細胞極化成Th1細胞)之中和抗體之培養液中，然後將細胞平板培養於用抗CD3抗體(提供“第一”活化信號)預塗覆之組織培養孔，經7天之擬體內培養分化成人類Th17樣細胞。收集分化之Th17樣細胞，再平板培養於以抗CD3與抗CD28共刺激之細胞介素混合物中，以測量存在與不存在化合物濃度遞減下之IL-17A產量，俾使評估測試化合物抑制IL-17A產生及/或Th17功能之能力。

使用LANCE^®(Lanthanide Chelate Exeite)TR-FRET技術，以用標準曲線評估IL-17A之產生。簡言之，LANCE^® TR-FRET測定係時間差螢光(TRF)與螢光共振能量轉移(FRET)之組合，用於高通量格式之檢測與定量。其使用長 生命期螢光鑭系元素螯合物(Ulight)，允許於激發與發射間延遲測量。將Ulight螢光團與第一個抗IL-17A抗體接合(即，ULight標記之抗hIL17A抗體)，以與LANCE^® Europium W-1024-ITC螯合物標記之第二個抗IL-17A抗體(即，Eu標記之抗hIL17A抗體)一起使用。當兩種抗體同時結合於IL-17A時，Eu部分之激發導致經由TRF-FRET從Ulight螢光團發射可檢測之光。該反應中IL-17A之量與可檢測信號成比例。使用經由一系列已知濃度之IL-17A試樣所產生之標準曲線，測量測試試樣中之IL-17A濃度。

用於FACS測定法，係以PMA/離子黴素刺激Th17樣細胞以促進細胞介素之產生，並使用布雷非德菌素(brefeldin)-A中斷細胞內運送，於細胞內保留所合成之細胞介素，用於使用螢光標記之抗IL-17A Ab之FACS。

試劑：

設備及用品：

分化測定法實驗流程

1.以無菌PBS將抗CD3抗體稀釋至10μg/mL。

2.以300μL經稀釋之抗CD3抗體塗覆24孔平底組織培養培養盤。將培養盤密封並於4℃培育隔夜以進行抗體交聯。

3.第2天，以1,000μL無菌PBS洗滌塗覆之培養盤兩次。

4.將1小瓶初始(CD4⁺，CD45RA⁺)T細胞(AllCells)再懸浮於含有抗CD28抗體(1μg/mL)、IL-6(10ng/mL)、IL-1 β(10ng/mL)、TGF-β 1(5ng/mL)、IL-23(10ng/mL)、及抗IL-4(10μg/mL)與抗IFN-γ(10μg/mL)等中和抗體之X-Vivo 15培養液中，密度為1.0×10⁵個細胞/mL。

選擇供體之QC準則：

PBMC QC：新鮮；CD3 ⁺ ，40-60%；CD4 ⁺ /CD8 ⁺ ，1.5-2。

CD4 ⁺ 初始T細胞QC：新鮮；

分選方法：雙重陰性選擇

活細胞：>95%

CD3 ⁺ CD4 ⁺ CD45RA ⁺ ：>95%

5.添加1mL T細胞懸浮液至以抗CD3抗體預塗覆之24孔培養盤中。於37℃與5% CO₂之培養箱中培養細胞7天。

6.於第7天：

收集細胞以進行IL-17A FACS測定，並將細胞接種於96孔培養盤中，以用於如下述之化合物測試(總計150μL測試系統)：

1)接種再懸浮之細胞至預塗覆抗CD3抗體之96孔培養盤之X-vivo培養液中(2×10⁴個細胞/孔，100μL/孔，2×10⁵個細胞/mL)。

2)於培養箱中培育1小時。

3)在分化實驗流程中為了維持Th17表現型所使用之所有抗體與細胞介素存在下(96孔培養盤中每孔50μL)，使用於X-vivo培養液中所製備不同濃度之連續稀釋化合物(3倍連續稀釋，從10,000nM至4.57nM)處理細胞72小時(37℃，5% CO₂)。

4)關於高量對照孔，係製備具有抗體與細胞介素之於X-vivo培養液中之0.2% DMSO(96孔培養盤中每孔50μL)。

5)對於低量對照孔，係製備於不含抗體與細胞介素之於X-vivo培養液中之0.2% DMSO(96孔培養盤中每孔50μL)。

6)72小時後，從各孔收集50μL上清液供HTRF測定用，並於FACS測定法中測試細胞。

FACS測定程序

1)於不含抗體與細胞介素之X-vivo培養液中製備PMA(最終濃度：50ng/mL)與離子黴素(最終濃度：1μg/mL)及eBioscience^TM布雷非德菌素A，用於所有孔。

2)於所有孔中添加50μL/孔之PMA/離子黴素(P/I)與eBioscience^TM布雷非德菌素A溶液(1,000×)。再刺激細胞6小時。

3)收集細胞用於FACS測定。

4)以1mL PBS洗滌細胞一次，以300g離心5分鐘。

5)使細胞再懸浮於1mL PBS中。添加1μL重新構成之螢光反應性染料(先前製備)-APC Cy7至1mL細胞懸浮液中，並充分混合。在室溫避光下培育20分鐘，以300g離心5分鐘。

6)以1mL PBS洗滌細胞一次，以300g離心5分鐘。

7)使細胞再懸浮於100μL染色緩衝液中。於室溫，於黑暗中，以CD4⁺-PE抗體染色細胞30分鐘，以300g離心5分鐘。

8)於500μL染色緩衝液中洗滌細胞兩次，以300g離心5分鐘。

9)4℃，使細胞再懸浮於100μL固定緩衝液中20分鐘。

10)於1* Perm/Wash緩衝液中，洗滌細胞兩次。

11)製備於1* Perm/Wash緩衝液中之抗IL-17A，於黑暗中、於4℃，添加100μL抗IL-17A計40分鐘。

12)以1* Perm/Wash緩衝液洗滌細胞兩次並將其再懸浮於染色緩衝液中，然後進行流式細胞檢測分析。

13)一旦完成染色，獲取細胞進行數據分析。

14)記述IL-17A陽性細胞(positive cell)百分比。

IL-17A LANCE ^® 測定程序

1.製備1× Ultra HiBlock緩衝液：添加400μL 5× HiBlock緩衝液至1,600μL水中。

2.製備hIL-17A分析物之標準稀釋液：以H₂O再構成，以產生10μg/mL之溶液。製備標準之3倍連續稀釋液，最高濃度為15μL之1.00E-06g/mL之hIL-17A，最低濃度為15μL之3.00E-12g/mL之hIL-17A(在各標準稀釋間更換吸管頭)。

3.製備4× MIX Eu標記之抗hIL17A抗體(1.2nM)+ULight標記之抗hIL17A抗體(12nM)：添加1.32μL之500nM Eu標記之抗hIL-17A抗體與13.2μL之500nM Ulight標記之抗hIL-17A抗體。

4.於白色384培養盤中：

A：添加15μL各分析物標準稀釋液或15μL試樣，以1,000rpm離心1分鐘。

B：添加5μL 4× MIX Eu標記之抗hIL-17A抗體(最終0.3nM)+Ulight標記之抗hIL-17A抗體(最終3nM)，以1,000rpm離心1分鐘。

5.於RT(室溫)下培育120分鐘。

6.使用LANCE TRF Laser讀取(呈TR-FRET模式)。

B.Treg分化-6天培養以產生極化之人類Treg細胞

使用來自R&D Systems,Inc.(Minneapolis,MN)之CellXVivo人類Treg細胞分化套組(商品目錄編號CDK006)，根據廠商之建議，經6天之擬體內培養，將CD4⁺初始T細胞分化成人類Treg細胞。該套組包含最適化之蛋白質與試劑，以驅動初始CD4⁺ T細胞有效率分化成FoxP3⁺CD25⁺ Treg細胞。培養6天後，利用FACS測定法確認經分化的Tregs之CD4⁺CD25⁺與FOXP3⁺表現。

具體而言，用於FACS測定法，為了表面CD4與CD25之表現，將Tregs用藻紅素(PE)接合抗CD4抗體(CD4⁺-PE)之螢光團與異藻藍素(APC)接合抗CD25抗體(CD25⁺-APC)之螢光團染色，然後將細胞固定並通透化，以供使用抗FOXP3-FITC抗體檢測FOXP3之表現。使染色之細胞進行流式細胞檢測分析，以確定FOXP3⁺陽性細胞之百分比。

同時，收集分化之Tregs，然後再平板培養於以抗CD3與抗CD28共刺激之細胞介素混合物中，測量存在與不存在化合物濃度遞減下Tregs之IL-10產量，俾使評估測試化合物抑制IL-10產生之能力。使用來自Biolegend(San Diego,CA)之IL-10 ELISA套組(商品目錄編號430604)，根據廠商之實驗流程測量IL-10之產量。

材料與設備：

試劑：

設備及用品：

分化分析程序：

1.分別以125μL重新構成緩衝液1，重新構成人類Treg試劑1與人類Treg試劑2，以產生400×儲液。

2.以125μL重新構成緩衝液2，重新構成人類Treg試劑4，產生400×儲液。

3.分別添加125μL人類Treg試劑1、2、與4(400×儲液)與50μL人類Treg試劑3(1,000×)至49.6mL之X-VIVO 15無血清培養液中。

4.以300μL經稀釋之抗CD3抗體塗覆24孔平底組織培養培養盤。將培養盤密封並於4℃培育隔夜以進行抗體交聯。

5.第2天，以1,000μL洗滌緩衝液洗滌塗覆之培養盤兩次。

6.使1小瓶初始T細胞(CD4⁺，CD45RA⁺；AllCells)再懸浮於含步驟3中所製人類Treg試劑之X-Vivo 15培養液中，密度為1×10⁵個細胞/mL。

選擇供體之QC準則：

PBMC QC：新鮮；CD3 ⁺ ，40至60%；CD4 ⁺ /CD8 ⁺ ，1.5-2。

CD4 ⁺ 初始T細胞QC：新鮮；

分選方法：雙重陰性選擇

活細胞：>95%

CD3 ⁺ CD4 ⁺ CD45RA ⁺ ：>95%

7.添加1mL細胞至預塗覆抗CD3抗體之24孔培養盤中。

8.使培養盤於37℃與5% CO₂之培養箱中培育6天。

9.第6天，收集細胞，以FACS測定法測量Foxp3⁺CD25⁺CD4⁺ T細胞，並將細胞接種於96孔培養盤中，供化合物測試用(總計150μL之測試系統)：

1)再懸浮與接種細胞至預塗覆抗CD3抗體之96孔培養盤之X-vivo培養液中(1×10⁴個細胞/孔，100μL/孔，1×10⁵個細胞/mL)。

2)於培養箱(37℃，5% CO₂)培育1小時。

3)在分化實驗流程步驟3製備之人類Treg試劑存在下(每孔50μL至96孔培養盤中)，使用於X-vivo培養液中所製備之不同濃度之連續稀釋化合物(3倍連續稀釋，從10,000nM至4.57nM)處理細胞72小時(37℃，5% CO₂)。

4)關於高量對照孔，於含分化實驗流程之步驟3所製備之人類Treg試劑之X-vivo培養液中製備0.2% DMSO(50μL/孔至96孔培養盤中)。

5)關於低量對照孔，於不含分化實驗流程之步驟3所製備之人類Treg試劑之X-vivo培養液中製備0.2% DMSO(50μL/孔至96孔培養盤中)。

6)72小時後，收集120μL上清液，使用ELISA測定法測試Treg細胞之IL-10產量，並收集細胞供FACS測定法用，以確認於Tregs上之CD4⁺CD25⁺ FoxP3⁺表現(僅高量對照組與低量對照組)及CTG測定(化合物諸孔加上高量對照/低量對照)。

FACS測定法程序：

1.以1mL PBS洗滌細胞一次，以300g離心5分鐘。

2.使細胞再懸浮於1mL PBS中。添加1μL重新構成之螢光反應性染料(先前製備)-APC Cy7至1mL細胞懸浮液中並充分混合。於室溫避光下培育20分鐘，以300g離心5分鐘。

3.用1mL PBS洗滌細胞一次，以300g離心5分鐘。

4.將細胞再懸浮於100μL染色緩衝液中。於黑暗中之於室溫，以藻紅素(PE)接合抗CD4抗體(CD4⁺-PE)之螢光團與異藻藍素(APC)接合抗CD25抗體(CD25⁺-APC)之螢光團，將細胞染色30分鐘。

5.細胞於500μL之染色緩衝液中洗滌兩次，以300g離心5分鐘。

6.4℃，使細胞再懸浮於500μL固定/通透化緩衝液(4×，以固定/通透化之稀釋液稀釋)中30分鐘。4℃，以300g離心5分鐘。

7.添加500μL 1×通透化洗滌緩衝液(以ddH₂O從10×稀釋)以再懸浮。於4℃，以300g離心5分鐘。

8.添加100μL抗FOXP3-FITC抗體預混物(於1×通透化洗滌緩衝液中製備)至試樣中。

9.於黑暗中之4℃，培育45分鐘。

10.添加500μl 1×通透化洗滌緩衝液。離心，移除上清液並渦動。重複一次。

11.將其再懸浮於染色緩衝液中，然後進行流式細胞檢測分析。

12.一旦完成染色，取得細胞，記述FOXP3⁺陽性細胞之百分比。

CTG測定法程序：

1.於室溫，將1小瓶等分之CTG試劑解凍，使用前使其平衡至室溫。

2.於室溫，使測定用培養盤平衡大約20分鐘。

3.收集120μL上清液至另一培養盤，以進行IL-10 ELISA分析。

4.添加30μL/孔之CTG試劑到細胞測定用培養盤中。

5.於室溫，在培養盤振盪器上以300rpm培育15分鐘，避免光照射。

6.於Envision培養盤讀取計上讀取發光信號。

數據分析

根據下式計算化合物之抑制率：%抑制=100-100×(發光值-低量發光值)/(高量發光值-低量發光值)。

ELISA測定法程序：

˙試劑製備：

1.以去離子水將5×被覆緩衝液A稀釋為1×。針對一培養盤，於9.6mL去離子水中，稀釋2.4mL之5×被覆緩衝液。

2.將預力價測定之捕獲抗體，以1：200稀釋於1×被覆緩衝液A中。針對一培養盤，於11.94mL之1×被覆緩衝液A中，稀釋60μL捕獲抗體。

3.以PBS(pH 7.4)將5×測定稀釋劑A稀釋至1×。針對50mL，於40mLPBS中，稀釋10mL 5×測定稀釋劑A。

4.凍乾之小瓶在真空壓力下。以0.2mL之1×測定稀釋劑A重新構成凍乾之標準品。使重新構成之標準品於室溫靜置15分鐘，然後於輕輕混合後製作稀釋液。

5.使用之前，於1×測定稀釋劑A中，以儲液製備1,000μL濃度為250pg/mL之最高標準品(參考Lot-Specific Cettificate of Analysis/ELISA MAX^TM Deluxe Set Protocol)。

於不同試管中，以1×測定稀釋劑A進行250pg/mL最高濃度標準品之六次兩倍連續稀釋。稀釋後，人類IL-10標準品濃度分別為250pg/mL、125pg/mL、62.5pg/mL、31.3pg/mL、15.6pg/mL、7.8pg/mL、與3.9pg/mL。1×測定稀釋劑A作為零標準品(0pg/mL)。

6.將預力價測定之生物素化檢測抗體，以1：200於1×測定稀釋劑A中稀釋。對一培養盤，於11.94mL 1×測定稀釋劑A中稀釋60μL檢測抗體。

7.於1×測定稀釋劑A中，以1：1000稀釋抗生物素蛋白-HRP。對一培養盤，於11.99mL 1×測定稀釋劑A中稀釋12μL抗生物素蛋白-HRP。

8.TMB基質溶液為等容量之基質溶液A與基質溶液B之混合物。接近使用之前才將兩種成分混合。對一培養盤，於乾淨容器中，使5.5mL基質溶液A與5.5mL基質溶液B混合(溶液應透明無色)。

9.試樣：關於細胞培養上清液試樣，使用者可能需要於初步實驗中確定稀釋因數。血清或血漿試樣應首先進行無任何稀釋之測試。若需稀釋，則添加至諸孔前，應於1×測定稀釋劑A中稀釋試樣。

˙ELISA測定：

1.進行ELISA前一天，如試劑製備中所述，於1×被覆緩衝液A中稀釋捕獲抗體。添加100μL此捕獲抗體溶液至此組所提供之96孔培養盤之所有孔中。密封培養盤並在2℃與8℃間培育隔夜(16至18小時)。

2.於使用前，將所有試劑置於室溫(RT)。強烈地建議，所有標準品與試樣係以二重複或三重複進行。每個測試都需要一條標準曲線。

3.每孔至少用300μL洗滌緩衝液洗滌培養盤4次，然後經由將培養盤倒置於吸水紙上，穩固地輕拍以吸乾殘餘之緩衝液。所有隨後之洗滌應同樣地進行。

4.為了封阻非特異性結合並降低背景值，每孔添加200μL 1×測定稀釋劑A。

5.密封培養盤並在於室溫於培養盤振盪器上搖動(例如500rpm、0.3cm之圓形軌道)培育1小時。所有隨後之搖動培育應同樣地進行。

6.於封阻培養盤同時，製備適當之試樣稀釋液(若需要時)與標準品。

7.以洗滌緩衝液洗滌培養盤4次。

8.添加100μL/孔標準品或試樣至適當孔中。若需要稀釋，則於添加至諸孔之前，應於1×測定稀釋劑A中稀釋試樣。

9.密封培養盤並於室溫搖動培育2小時。

10.以洗滌緩衝液洗滌培養盤4次。

11.添加100μL經稀釋之檢測抗體溶液於各孔，密封培養盤並於室溫搖動培育1小時。

12.以洗滌緩衝液洗滌培養盤4次。

13.添加100μL經稀釋之抗生物素蛋白-HRP溶液至各孔，密封培養盤並於室溫搖動培育30分鐘。

14.以洗滌緩衝液洗滌培養盤5次。對於此最後之洗滌，每次洗滌將諸孔浸漬於洗滌緩衝液中30秒至1分鐘。此將有助於最小化背景值。

15.添加100μL新鮮混合之TMB受質溶液，並於黑暗中培育30分鐘。正向孔之顏色應變成藍色。此步驟期間不需密封培養盤。

16.經由添加100μL終止溶液至各孔終止反應。正向孔應從藍色轉變成黃色。

17.於15分鐘內讀取450nm處之吸光度。若讀取計可讀取在570nm處之吸光度，則可從450nm處之吸光度中減去570nm處之吸光度。

使用上述測定法，於下文諸表中概述本發明數個代表性化合物(以及於數個案例中之比較組化合物)對Treg細胞之抑制效應。由於於不同批次所進行之測定未必可彼此直接相互比較，因此在相同表中僅直接比較在相同批次中所分析之化合物。需要注意的是，比較組化合物為Treg抑制之部分抑制劑，因為在最高濃度下可達到之最大抑制為約55至65%。

同樣地，於下文表中摘述本發明數個代表性化合物(以及於數個案例中之比較組化合物)對Th17細胞之抑制效應。

實施例4. 小鼠之藥物動力學(PK)數據

本發明代表性化合物與比較組化合物之藥物動力學數據係得自CD1雄鼠。具體而言，以低劑量之5mg/kg之化合物口服或高劑量之30mg/kg相同化合物口服飼養各組之CD1雄鼠。得到對於本發明各種化合物與比較組之PK數據，包括AUC_last(hr*ng/mL)與生體可利用率(F%)。根據相同化合物之高劑量與低劑量之AUC，計算AUC之增加倍數。

B.合成實施例

設備說明

NMR光譜係使用Varian Mercury光譜儀，於400MHz(¹H)、376MHz(¹⁹F)或75MHz(¹³C)操作測量。用於試樣之溶劑於各個化合物之實驗程序中具體指定。化學位移係以百萬分點(ppm，δ單位)表示。偶合常數以赫茲(Hz)為單位。分裂型式描繪明顯之多重性，並定名為s(單峰)、d(雙峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、quint(五重峰)、m(多重峰)、br(寬峰)。

LCMS使用下述系統：Agilent 6120(二元梯度模組幫浦)，XBridge分析管柱C₁₈、5μm、4.6×50mm，25℃，5μL注射容積，2mL/min，以乙腈於0.1%乙酸銨水溶液中之梯度根據下述時機進行：

實驗程序：除非另行說明，否則所有反應均於乾燥氮氣氛圍下進行。TLC板以紫外線顯現。快速層析法係指使用玻璃管柱在矽膠(40至60μm)上進行管柱層析法。替代地，可使用於220或254nm處之u.v.檢測之Biotage SP1或Biotage Isolera系統及利用Biotage正相或逆相矽膠匣進行自動化層析法。進一步細節可於相關的實驗程序中找到。

流程1

式I化合物之合成

式I化合物可如流程1所述，以咪唑中間產物製備。於鹼例如氫化鈉存在下，使咪唑衍生物1例如氧化(胺氧)二苯膦於溶劑例如DMF中反應，得到胺化之咪唑衍生物2。化合物2可經由與二碳酸二(三級丁酯)反應使N-經保護，得到化合物3。化合物3可於溶劑例如DMF中以溴化劑或氯化劑，例如溴或N-溴琥珀醯亞胺溴化或氯化，得到為主要產物之化合物4。化合物4可於鹼例如三級丁氧化鉀存在下，於溶劑例如THF中，與乙酸乙酯反應，得到化合物5。於室溫，於溶劑例如DCM中，使化合物5與1,1-二甲氧-N,N-二甲基甲胺(DMF-DMA)反應，得到環化產物6。化合物6與氯化劑，例如氯氧化磷/溴化磷(phosphorus oxy chloride/bromide)反應，得到化合物7。化合物7於Suzuki偶合條件下，可與式R₁B(OH)₂之硼酸或硼酸酯反應，得到化合物8。化合物8可於質子溶劑例如甲醇或乙醇中，以水解劑例如氫氧化鋰或氫氧化鈉水解，得到酸衍 生物9。該咪唑嗒

酸9於二苯基磷醯基疊氮化物(DPPA)存在下進行Curtis重排，並以吡啶胺10處理，得到式I化合物。

流程2

式II化合物之合成

經由於一種或多種溶劑例如DMF、DMA、THF、甲苯或其混合物中，使用適當鹼例如氫化鈉、六甲基二矽烷鋰、碳酸銫、碳酸鉀，以烷基鹵化物(例如碘甲烷、碘乙烷、溴化丙基)使化合物6烷基化，得到咪唑嗒

醚類似物11，將其以LiOH處理，得到酸12。咪唑嗒

酸9於二苯基磷醯基疊氮化物(DPPA)存在下進行Curtis重排，以吡啶胺10處理，得到式II化合物。

流程3

式III化合物之合成

式III化合物可遵循流程3所述之方法製備。於適當Pd催化劑例如Pd₂dba₃、Pd(dppf)Cl₂、Pd(OAc)₂，適當配體例如BINAP、黃磷(xantphos)、三苯膦及適當鹼例如t-BuONa或t-BuOK存在下，在溶劑如四氫呋喃、二

烷、或甲苯中，以一級胺或二級胺R₅R₆NH進行溴化物7之Buchwald-Hartwig胺化反應，最後得到式III之化合物。

流程4

式IV化合物之合成

式IV化合物可遵循流程4描述之方法予以製備。於Pd/C與氫下，使化合物7氫化得到化合物15，以氫氧化鋰使其進行水解，隨後利用Curtis重排，並以胺基吡啶10或衍生物猝滅，最後得到式IV化合物。

流程5

式V化合物之合成

式V化合物可如流程5所述，以咪唑嗒

酯7製備。鹼性條件(例如K₂CO₃、LiOH、NaOH等)下，於溶劑如THF、水、甲醇或其混合物中，酯7之水解得到對應之碳環酸(carbocylic acid)17，其於DPPA與三級胺鹼存在下進行Curtis重排，並捕捉異氰酸酯衍生物，得到所需產物10。隨後溴化物18與有機錫化合物 Stille之偶合得到對應之炔烴化合物19，將其以HCl水溶液處理，得到酮20；以硼氫化鈉還原成對應之醇21後，用亞硫醯氯處理，然後以不同醇猝滅，得到醚22，令其與胺甲酸酯(carbomate)23反應，得到脲化合物V。

中間產物6c與7c

步驟1

0℃，於1H-咪唑-2-羧酸乙酯(10g，71.36mmol)之THF(200mL)溶液中，添加NaH(3.55g，92.76mmol，60%純度)，將所得溶液加溫至室溫，攪拌2小時，然後冷卻至0℃，逐滴添加O-二苯基磷醯基羥基胺(23.30g，99.90mmol)之THF (200mL)溶液至混合物中。20分鐘後，移除冰浴，於室溫攪拌所得混合物12小時。TLC顯示形成新斑點；以水猝滅反應至其成為澄清溶液，並真空濃縮至乾。攪拌30分鐘，使粗產物懸浮於乙酸乙酯(700mL)中，並予以過濾。濃縮濾液，利用快速管柱層析法(DCM：甲醇30：1)純化，得到1-胺基咪唑-2-羧酸乙酯(10.32g，66.51mmol，93.21%產率)，為無色油。LC-MS：m/z 156[M+H]⁺。

步驟2

於1-胺基咪唑-2-羧酸乙酯(10g，64.45mmol)之DMF(60mL)攪拌溶液中，添加DMAP(1.18g，9.67mmol)與二碳酸二(三級丁酯)(18.29g，83.79mmol，19.23mL)。於85℃攪拌反應混合物4小時，反應完全後，將混合物傾入水中，以EtOAc(2×600mL)萃取。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=5：1)純化，得到1-(三級丁氧羰胺基)咪唑-2-羧酸乙酯(13.2g，51.71mmol，80.23%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 256[M+H]+。

步驟3

於1-(三級丁氧羰胺基)咪唑-2-羧酸乙酯(3.5g，13.71mmol)之DMF(15mL)懸浮液中，緩緩添加於DMF(5mL)中之1-氯吡咯啶-2,5-二酮(1.83g，13.71mmol，1.11mL)。於室溫攪拌反應混合物6小時，反應完全後，添加飽和碳酸氫鈉於該反應，並以EtOAc(2×150mL)萃取。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(石油醚/乙酸乙酯=10：1)純化，得到1-(三級丁氧羰胺基)-4-氯-咪唑-2-羧酸乙酯(1.9g，6.56mmol，47.83%產率)，為無色油。LC-MS：m/z 290[M+H]⁺。

步驟4

於0℃，於1-(三級丁氧羰胺基)-4-氯-咪唑-2-羧酸乙酯(3.7g，12.77mmol)之THF(10mL)溶液中，逐滴添加2-甲基丙烷-2-油酸鉀(1M，38.31mL)5分鐘。添加無水乙酸乙酯(2.81g，31.93mmol，3.12mL)至該混合物中，於0℃攪拌15分鐘。移除冰浴，於室溫攪拌所得混合物2小時。TLC顯示形成斑點，將反應冷卻至0℃，經由逐滴添加以1.0N HCl處理直到懸浮液完全溶解，然後以EtOAc(2×40mL)萃取。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮，得到(Z)-3-[1-(三級丁氧羰胺基)-4-氯-咪唑-2-基]-3-羥基-丙-2-烯酸乙酯(4.24g，粗產物)，為黃色固體。LC-MS：m/z 332[M+H]⁺。

步驟5

於(Z)-3-[1-(三級丁氧羰胺基)-4-氯-咪唑-2-基]-3-羥基-丙-2-烯酸乙酯(4.24g，12.78mmol)之DCM(30mL)溶液中，添加1,1-二甲氧基-N,N-二甲基-甲胺(12.18g，102.25mmol，13.69mL)。於室溫攪拌反應混合物3小時，反應完全後，濃縮混合物得到粗產物，以乙酸乙酯將其再結晶，得到2-氯-8-羥基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(2.4g，9.93mmol，77.72%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 242[M+H]⁺。

步驟6

於室溫，於2-氯-8-羥基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(6g，24.83mmol)之1,4-二

烷(20mL)攪拌溶液中，添加磷醯溴(17.80g，62.08mmol，6.31mL)，於110℃攪拌反應混合物2小時，反應完全後，冷卻反應混合物至室溫，將其傾入水中，以EtOAc(2×150mL)萃取。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(石油醚/乙酸乙酯= 7：1)純化，得到8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(3.3g，10.84mmol，43.64%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 304[M+H]⁺。

實施例1. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(700.0mg，2.31mmol)之甲苯(42mL)溶液中，添加環丙基硼酸(397.4mg，4.62mmol)、三環己膦(646.8mg，2.31mmol)與磷酸鉀(1.22g，5.775mmol)。將懸浮液脫氣並與N₂交換兩次。添加乙酸鈀(II)(129.4mg，0.5775mmol)至該混合物中。加熱反應混合物至100℃ 12小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。減壓濃縮混合物，所得殘留物以快速管柱層析法Z(以於石油中1%至15%之乙酸乙酯洗提)純化，得到2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(330.0mg，50.3%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 266[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(352mg，1.328mmol)之THF(8mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(111.6mg，2.657mmol)之水(2.5mL)溶液。於30℃攪拌混合物4小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮去除溶劑；殘留物以HCl(1M)酸化至pH=3~4。以EtOAc萃取混合物，乾燥有機相，濃縮，得到2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(310mg，98.5%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 238[M+H]⁺。

步驟3

於2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(150mg，0.6329mmol)之1,4-二

烷(10mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(diphenylphosphonic azide)(209mg，0.7595mmol)與三乙胺(320.2mg，3.164mmol)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(185.1mg，0.9494mmol)，加熱混合物至100℃ 2小時。將混合物溶液傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。有機相以Na₂SO₄乾燥，濃縮，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中10%至80%之乙酸乙酯洗提)純化，得到1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(64mg)，為白色固體。LC-MS：m/z 430[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 9.78(s,1 H),8.99(s,1 H),8.72(s,1 H),8.58(d,J=2.4Hz,1 H),8.48(d,J=2.4Hz,1 H),8.34(s,1 H),8.16(s,2 H),2.17-2.14(m,1 H),1.73-1.71(m,2 H),1.16-1.14(m,2 H)。

實施例2. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(250mg，820.94μmol)、2-異丙烯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二

硼烷7c(179.3mg，1.07mmol)之甲苯(3mL)與水(0.3mL)溶液中，添加磷酸鉀(522.8mg，2.46mmol)與氯化雙(三苯膦)鈀(II)(57.6mg，82.09μmol)。N₂下，於100℃攪拌混合物24小時。LC-MS顯示殘留一些起始原料，再添加氯化雙(三苯膦)鈀(II)(57.6mg，82.09μmol)。N₂下，於100℃再攪拌混合物24小時。冷卻至室溫後，過濾反應混合物濃縮濾液，得到殘留物，利用快速管柱層析法(以PE/EA=10/1洗提)將其純化，得到為黃色固體之2-氯-8-異丙烯基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(57mg，26%產率)及回收100mg 8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯。LC-MS：m/z 266[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-異丙烯基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(68mg，255.93μmol)之甲醇(5mL)溶液中，添加PtO₂(15mg，255.93μmol)。於室溫，攪拌反應混合物，於H₂下隔夜，然後過濾，真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(以PE/EA =10/1洗提)純化，得到2-氯-8-異丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(32mg，47%產率)，為清油。LC-MS：m/z 268[M+H]⁺。

步驟3

於2-氯-8-異丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(32mg，119.53μmol)之THF(2mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(20.1mg，478.13μmol)之水(0.4mL)溶液。於室溫攪拌混合物5小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。以EtOAc萃取混合物，乾燥有機相，濃縮，得到為白色固體之2-氯-8-異丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(28.6mg，定量)，直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 240[M+H]⁺。

步驟4

於2-氯-7-異丙基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-羧酸(28.6mg，119.34μmol)之1,4-二

烷(6mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(37.1mg，143.20μmol)與三乙胺(60.4mg，596.68μmol)。所得溶液於室溫攪拌30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(28.0mg，143.20μmol)，於100℃攪拌混合物2小時。去除溶劑，殘留物利用快速管柱層析法(以DCM：MeOH=30：1洗提)與製備型HPLC純化，得到1-(2-氯-7-異丙基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(8mg，18.51μmol，15.51%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 432.0[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 9.72(s,1H),8.91(s,1H),8.71(s,1H),8.57(d,J=2.4Hz,1H),8.47(d,J=2.4Hz,1H),8.39(s,1H),8.16(s,2H),3.51-3.44(m,1H),1.48(d,J=6.8Hz,6H)。

實施例3. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-乙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(600mg，1.97mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二

硼烷(910mg，5.91mmol)與三環己膦(552mg，1.97mmol)之1,4-二

烷(20mL)溶液中，添加磷酸鉀(1.25g，5.91mmol)與乙酸鈀(II)(110mg，492.57μmol)。N₂下，於100℃攪拌該懸浮液2小時。冷卻至室溫後，過濾反應混合物，濃縮濾液，得到殘留物，利用快速管柱層析法(以PE/EA=10/1洗提)將其純化，得到2-氯-8-乙烯基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(230mg，46%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 252[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-乙烯基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8d(230mg，913.90μmol)之甲醇(5mL)溶液中，添加PtO₂(41.5mg，182.78μmol)。H₂下，於室溫攪拌反應混合物3小時，然後過濾，真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(以PE/EA=10/1洗提)純化，得到2-氯-8-乙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(170mg，73%產率)，為清油。LC-MS：m/z 254[M+H]⁺。

步驟3

於2-氯-8-乙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8e(170mg，670.12μmol)之THF(2mL)與乙醇(1mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(112.5mg，2.68mmol)之水溶液(1mL)。於室溫攪拌混合物4小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。以EtOAc萃取該混合物，乾燥有機相，濃縮，得到2-氯-8-乙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(150mg，99%產率)，為白色固體，直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 226[M+H]⁺。

步驟4

於2-氯-7-乙基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-羧酸9c(100mg，443.20μmol)之1,4-二

烷(6mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(137.8mg，531.84μmol)與三乙胺(224.2mg，2.22mmol)。所得溶液於室溫攪拌30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(130.0mg，664.80μmol)，於100℃攪拌混合物2小時。去除溶劑，殘留物利用快速管柱層析法(以DCM：MeOH=30：1洗提)與製備型HPLC純化，得到1-(2-氯-7-乙基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(68mg，37%產率)。LC-MS：m/z 418.0[M+H]^{+ 1}H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 9.78(brs,1H),8.93(brs,1H),8.90(s,1H),8.58(d,J=2.4Hz,1H),8.48(d,J=2.4Hz,1H),8.38(s,1H),8.16(s,2H),2.95(q,J=7.2Hz,2H),1.26(t,J=7.6Hz,3H)。

實施例4. 1-(8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯9d(114mg，0.3762mmol)之THF(4mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(23.7mg，0.5644mmol)之水(0.5mL)溶液。於30℃攪拌混合物4小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮所得混合物以移除溶劑，殘留物以HCl(1M)酸化至pH=3~4。以EtOAc萃取混合物，乾燥有機相，濃縮，得到8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(96mg，92.8%)，為黃色固體。LC-MS：m/z 276[M+H]⁺。

步驟2

於8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(96mg，0.3491mmol)之1,4-二

烷(6mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(115.3mg，0.4189mmol)與三乙胺(176.6mg，1.745mmol)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(102.1mg，0.5236mmol)，加熱混合物至100℃ 2小時。將混合物溶液傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。該有機物以Na₂SO₄乾燥，濃縮，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中10%至80%之乙酸乙酯洗提)純化，得到1-(8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)脲(10.2mg)，為白色固體。LC-MS：m/z 468[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 10.19(s,1 H),9.13(s,1 H),9.06(s,1 H),8.57(d,J=1.6Hz,1 H),8.54(s,1 H),8.49(d,J=2.0Hz,1 H),8.17(s,2 H)。

實施例5. 1-(2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)脲之合成

步驟1

於2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9a(50mg，0.211mmol)之1,4-二

烷(2mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(69.7mg，0.2532mmol)與三乙胺(106.8mg，1.055mmol)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，然後添加2-(三氟甲基)吡啶-4-胺10b(51.3mg，0.317mmol)，加熱混合物至100℃ 2小時。將混合物溶液傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。該有機物以Na₂SO₄乾燥，濃縮，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中10%至80%之乙酸乙酯洗提)純化，得到1-(2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)脲(5.2mg)，為白色固體。LC-MS：m/z 397[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 9.89(s,1 H),8.95(s,1 H),8.68(s,1 H),8.55(d,J=5.6Hz,1 H),8.34(s,1 H),8.07(d,J=1.6Hz,1 H),7.63-7.62(m,1 H),2.16-2.12(m,1 H),1.71-1.69(m,2 H),1.14-1.12(m,2 H)。

實施例6. 1-(2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲之合成

步驟1

於2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9a(50mg，0.211mmol)之1,4-二

烷(3mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(69.7mg，0.2532mmol)與三乙胺(106.8mg，1.055mmol)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，然後添加6-(三氟甲基)吡啶-3-胺10c(51.3mg，0.3165mmol)，加熱混合物至100℃ 2小時。將混合物溶液傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。有機相以Na₂SO₄乾燥，濃縮，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中10%至100%之乙酸乙酯洗提)純化，得到1-(2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)脲(12.7mg)，為白色固體。LC-MS：m/z 397[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 9.69(s,1 H),8.88(s,1 H),8.76(d,J=2.0Hz,1 H),8.72(s,1 H),8.33(s,1 H),8.26-8.23(m,1 H),7.84(d,J=8.8Hz,1 H),2.16-2.12(m,1 H),1.72-1.68(m,2 H),1.15-1.11(m,2 H)。

實施例7. 1-(2-溴-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)脲之合成

步驟1

於1-(三級丁氧羰胺基)咪唑-2-羧酸乙酯3(3.57g，13.99mmol)之DMF(30mL)懸浮液中，緩緩添加1-溴吡咯啶-2,5-二酮(2.49g，13.99mmol，1.19mL)之DMF(10mL)溶液。於室溫攪拌反應混合物12小時，經由TLC判斷反應完全後，添加飽和碳酸氫鈉於反應混合物並以EtOAc(2×150mL)萃取。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(石油醚/乙酸乙酯，10：1)純化，得到4-溴-1-(三級丁氧羰胺基)咪唑-2-羧酸乙酯(2.5g，7.48mmol，53.49%產率)，為無色油。LC-MS：m/z 334.1[M+H]⁺。

步驟2

0℃，於4-溴-1-(三級丁氧羰胺基)咪唑-2-羧酸乙酯4d(2.5g，7.48mmol)之THF(4mL)溶液中，逐滴添加2-甲基丙烷-2-油酸鉀(1M，22.44mL)5分鐘，添加無水乙酸乙酯(1.65g，18.70mmol，1.83mL)至該混合物中，於0℃持續攪拌15分鐘。移除冰浴，於室溫攪拌所得混合物2小時。TLC顯示形成斑點，冷卻反應至0℃，經由逐滴添加以1.0N HCl處理直到懸浮液完全溶解，以EtOAc(2×40mL)萃取。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮，得到(Z)-3-[4-溴-1-(三級丁氧羰胺基)咪唑-2-基]-3-羥基-丙-2-烯酸乙酯(2.26g，粗產物)，為黃色固體。LC-MS：m/z 376.1[M+H]⁺。

步驟3

於(Z)-3-[4-溴-1-(三級丁氧羰胺基)咪唑-2-基]-3-羥基-丙-2-烯酸乙酯5d(2.26g，6.01mmol)之DCM(10mL)溶液中，添加1,1-二甲氧基-N,N-二甲基-甲胺(2.86g，24.03mmol，3.22mL)。於室溫攪拌反應混合物3小時，反應完全後，濃縮混合物，得到2-溴-8-羥基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(1.72g，粗產物)，為黃色固體。LC-MS：m/z 286.1[M+H]⁺。

步驟4

於室溫，於2-溴-8-羥基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯6d(1.72g，6.01mmol)之1,4-二

烷(20mL)攪拌溶液中，添加磷醯溴(4.31g，15.03mmol，1.53mL)。於110℃攪拌反應混合物3小時，反應完全後，冷卻反應混合物至室溫，然後將其傾入水中，以EtOAc(2×50mL)萃取。合併之有機相以鹽水(50mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，得到粗產物，利用快速管柱層析法(石油醚/乙酸乙酯，10：1)將其純化，得到2,8-二溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(1.22g，3.50mmol，58.15%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 348.1[M+H]⁺。

步驟5

於2,8-二溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7d(200mg，573.10μmol)、環丙基硼酸(147.7mg，1.72mmol)之甲苯(5mL)溶液中，添加三環己膦(tricyclohexylphosphane)(160.7mg，573.10μmol)、磷酸三鉀(304.1mg，1.43mmol)與二乙醯氧鈀(25.7mg，114.62μmol)。於100℃攪拌懸浮液4小時。通過矽藻土墊過濾該混合物，濾液以水(5mL)稀釋並以乙酸乙酯(10mL)萃取。有機相以鹽水洗滌，乾燥，濃縮得到殘留物，利用管柱層析法以石油醚/乙酸乙酯(8/1)洗提將其純化，得到2-溴-8-環丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(118mg，380.47μmol，66.39%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 310.1[M+H]⁺。

步驟6

0℃，於2-溴-8-環丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8f(118mg，380.47μmol)之乙醇(4mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(1M，1.90mL)。於室溫攪拌混合物10小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。以H₂O(10mL)稀釋該混合物並以乙酸乙酯(10mL x 2)萃取。合併之有機層以鹽水(10mL)洗 滌，以無水硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮，得到2-溴-8-環丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(107mg，粗產物)，為白色固體。LC-MS：m/z 287[M+H]⁺。

步驟7

於室溫，於2-溴-8-環丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9e(107mg，379.31μmol)之1,4-二

烷(7mL)溶液中，添加三乙胺(191.9mg，1.90mmol，264.34uL)與[疊氮(苯氧)磷醯基]氧苯(125.3mg，455.2μmol，98.63uL)。攪拌該混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(96.4mg，493.10μmol)，於100℃攪拌反應混合物2小時。濃縮混合物得到殘留物，利用製備型TLC(二氯甲烷：甲醇=20：1)將其純化，得到1-(2-溴-8-環丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(37.1mg，78.15μmol，20.60%產率)，為黃色固體。LC-MS：(ESI)m/z 474[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 9.86(s,1H),9.04(s,1H),8.71(s,1H),8.58(s,1H),8.48(s,1H),8.38(s,1H),8.16(d,J=2.0Hz,2H),2.21-2.14(m,1H),1.76-1.72(m,2H),1.17-1.14(m,2H)。

實施例8. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於0℃，於1-((三級丁氧羰基)胺基)-1H-咪唑-2-羧酸乙酯3(1.5g，5.882mmol)之THF(4.5mL)溶液中，逐滴添加冷的(於0℃預冷)三級丁氧化鉀(1M，17.6mL)5分鐘。逐滴添加於0℃預冷之無水乙酸乙酯(1.29g，14.7mmol，1.43mL)，於0℃持續攪拌15分鐘。移除冰浴，於室溫攪拌所得混合物2小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。冷卻反應混合物至0℃，經由逐滴添加，以1.0N HCl酸化至懸浮液完全溶解。以乙酸乙酯(2×40mL)萃取。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮。所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中0%至20%之乙酸乙酯洗提)純化，得到(Z)-3-(1-((三級丁氧羰基)胺基)-1H-咪唑-2-基)-3-羥基丙烯酸乙酯(380mg，21.8%產率)，為淡黃色固體。LC-MS：m/z 298[M+H]⁺。

步驟2

於(Z)-3-(1-((三級丁氧羰基)胺基)-1H-咪唑-2-基)-3-羥基丙烯酸乙酯5a(380mg，1.279mmol)之DCM(10mL)溶液中，添加1,1-二甲氧基-N,N-二甲基-甲胺(762mg，6.397mmol)。於室溫攪拌反應混合物13小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮混合物，殘留物以快速層析法(以甲醇/二氯甲烷=10/1洗提)純化，得到8-羥基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(122mg，45.9%產率)，為黃色油-固體。LC-MS：m/z 208[M+H]⁺。

步驟3

於室溫，於8-羥基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯6a(122mg，0.5894mmol)之1,4-二

烷(8mL)溶液中，添加磷醯溴(506.9mg，1.768mmol)。於110℃攪拌反應混合物2小時。耗盡起始原料，並以LC-MS檢測到所需質量。冷卻反應混合物至室溫，傾入水中，以乙酸乙酯(2×15mL)萃取。合併之有機相以鹽水(10mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(以於石油中1%至25%之乙酸乙酯洗提)純化，得到8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(110mg，69.4%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 270[M+H]⁺。

步驟4

於8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7a(110.0mg，0.4089mmol)之甲苯(5mL)溶液中，添加環丙基硼酸(70.3mg，0.8178mmol)、三環己膦(114.5mg，0.4089mmol)與磷酸鉀(216.7mg，1.022mmol)。將懸浮液脫氣並與N₂交換兩次。添加乙酸鈀(II)(18.3mg，0.08178mmol)至該混合物中。加熱反應混合物至100℃ 12小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。減壓濃縮混合物，所得殘留物以快速管柱層析法(以於石油中1%至15%之乙酸乙酯洗提)純化，得到8-環丙 基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(34.0mg，36%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 232[M+H]⁺。

步驟5

於8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8g(67mg，0.29mmol)之THF(4mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(30.4mg，0.7251mmol)之水(0.7mL)溶液。於30℃攪拌混合物4小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮去除溶劑，殘留物以HCl(1M)酸化至pH=3~4。以乙酸乙酯萃取該混合物並乾燥有機相，濃縮，得到8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(55mg，93.4%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 204[M+H]⁺。

步驟6

於8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9f(55mg，0.2709mmol)之1,4-二

烷(4mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(89.5mg，0.3251mmol)與三乙胺(137.1mg，1.354mmol)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(79.2mg，0.4064mmol)，加熱混合物至100℃ 2小時。將混合物溶液傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。該有機物以Na₂SO₄乾燥，濃縮，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中10%至80%之乙酸乙酯洗提)純化，得到1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(9.1mg)，為白色固體。LC-MS：m/z 396[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 9.73(s,1 H),8.93(s,1 H),8.58-8.57(m,2 H),8.47(d,J=2.4Hz,1 H),8.15(s,2 H),8.13(d,J=1.2Hz,1 H),7.61(d,J=1.2Hz,1 H),2.22-2.18(m,1 H),1.89-1.86(m,2 H),1.15-1.10(m,2 H)。

實施例9. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-丙基咪唑 并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於2-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9a(60mg，0.2532mmol)之甲醇(3mL)溶液中，添加Pd/C(30mg)。H₂下，於室溫攪拌反應混合物3小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。將其過濾並減壓濃縮濾液。粗產物利用快速管柱層析法(以於石油中0%至80%之乙酸乙酯洗提)純化，得到8-丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(50mg,96.3%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 206[M+H]⁺。

步驟2

於8-丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9g(50mg，0.2439mmol)之1,4-二

烷(4mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(87.2mg，0.3171mmol)與三乙胺(123.4mg，1.219mmol)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(71.3mg，0.366mmol)，加熱混合物至100℃ 2小時。將混合物溶液傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。該有機物以Na₂SO₄乾燥，濃縮，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中10%至80%之乙酸乙酯洗提)純化，得到1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(15.7mg)，為白色固體。LC-MS：m/z 398[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 9.75(s,1 H),8.77(s,1 H),8.76(s,1 H),8.57(d,J=2.4Hz,1 H),8.48(d,J=2.4Hz,1 H),8.18(d,J=1.2Hz,1 H),8.15(s,2 H),7.67(d,J=1.6Hz,1 H),2.98-2.94(m,2 H),1.73-1.69(m,2 H),0.99-0.96(m,3 H)。

實施例10. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(50mg，0.165mmol)之乙醇(8mL)溶液中，添加Pd/C(5mg)。H₂下，於室溫攪拌反應混合物3小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。將其過濾並減壓濃縮濾液。粗產物利用快速管柱層析法(以於石油中0%至30%之乙酸乙酯洗提)純化，得到2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(25mg，67.4%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 226[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯15c(42mg，0.1867mmol)之THF(2mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(15.7mg，0.373mmol)之水(0.3mL)溶液。於30℃攪拌混合物4小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮所得混合物以移除溶劑，殘留物以HCl(1M)酸化至pH=3~4。以乙酸乙酯萃取該混合物並乾燥有機相，濃縮，得到2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(35mg，95.1%)，為黃色固體。LC-MS：m/z 198[M+H]⁺。

步驟3

於2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸16c(35mg，0.1777mmol)之1,4-二

烷(4mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(58.7mg，0.213mmol)與三乙胺(89.9mg，0.8885mmol)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(52mg，0.267mmol)，加熱混合物至100℃ 2小時。將混合物溶液傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。該有機物以Na₂SO₄乾燥，濃縮，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中10%至100%之乙酸乙酯洗提)純化，得到1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(10.2mg)，為白色固體。LC-MS：m/z 390[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 9.87(s,1 H),9.75(s,1H),8.63-8.61(m,2 H),8.46(d,J=2.4Hz,1 H),8.34(s,1 H),8.16-8.13(m,3 H)。

實施例11. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2,8-二氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於2-氯-8-羥基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯6c(200mg，0.8299mmol)之THF(4mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(69.7mg，1.66mmol)之水(1.6mL)溶液。於70℃攪拌混合物14小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。 濃縮去除溶劑，殘留物以HCl(1M)酸化至pH=3~4。以乙酸乙酯萃取該混合物並乾燥有機相，濃縮，得到2-氯-8-羥基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(160mg，90.5%)，為白色固體。LC-MS：m/z 214[M+H]⁺。

步驟2

於120℃，加熱2-氯-8-羥基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9h(187.0mg，929.1μmol)之POCl₃(6mL)溶液12小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮反應液，殘留物以水(10mL)猝滅並以DCM(25mL x 2)萃取。有機層以鹽水(20mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥並減壓濃縮，殘留物利用快速層析法(以甲醇/二氯甲烷=10/1洗提)純化，得到2,8-二氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(150mg，粗產物)之粗產物，為白色固體。LC-MS：m/z 232[M+H]⁺。

步驟3

於2,8-二氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9i(50mg，0.2164mmol)之1,4-二

烷(5mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(71.5mg，0.2597mmol)與三乙胺(109.5mg，1.082mmol)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(63.3mg，0.3246mmol)，混合物於100℃加熱2小時。將混合物溶液傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。有機物以Na₂SO₄乾燥，濃縮，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中10%至100%之乙酸乙酯洗提)純化，得到1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2,8-二氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(3.5mg)，為白色固體。LC-MS：m/z 424[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 10.11(s,1 H),9.25(s,2 H),8.57(d,J=2.4Hz,1 H),8.52(s,1 H),8.48(d,J=2.4Hz,1 H),8.16(s,2 H)。

實施例12. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-甲基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(200mg，656.76μmol)、甲基硼酸(147.4mg，2.46mmol)與三環己膦(230.2mg，820.94μmol)之1,4-二

烷(5mL)溶液中，添加磷酸鉀(522.8mg，2.46mmol)與乙酸鈀(II)(92.2mg，410.47μmol)。N₂下，於100℃攪拌懸浮液5小時。冷卻至室溫後，過濾反應混合物，濃縮濾液，得到殘留物，利用快速管柱層析法(以PE/EA=10/1洗提)將其純化，得到2-氯-8-甲基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(68mg，283.74μmol，43.20%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 240[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-甲基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8h(85mg，354.67μmol)之THF(3mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(29.8mg，709.34μmol)之水(0.7mL)溶液。於室溫攪拌混合物5小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。以EtOAc萃取該混合物，乾燥有機相，濃縮，得到2-氯-8-甲基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(74mg，99%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 212[M+H]⁺。

步驟3

於2-氯-7-甲基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-羧酸9j(74mg，349.71μmol)之1,4-二

烷(6mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(108.8mg，419.65μmol)與三乙胺(176.9mg，1.75mmol)。所得溶液於室溫攪拌30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(102.6mg，524.56μmol)，於100℃攪拌該混合物2小時。去除溶劑，殘留物利用快速管柱層析法(以DCM：MeOH=30：1洗提)與製備型HPLC純化，得到1-(2-氯-7-甲基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(33mg，23%產率)。LC-MS：m/z 403.8。¹H NMR(DMSO,400MHz)：δ 9.79-9.12(m,2H),8.89(s,1H),8.58(d,J=1.6Hz,1H),8.48(d,J=2.0Hz,1H),8.37(s,1H),8.16(s,2H),2.47(s,3H)。

式II化合物之合成

實施例13. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-甲氧基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於室溫，於2-氯-8-羥基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯6c(100mg，0.41mmol)與碳酸鉀(171mg，1.24mmol)之DMF(5mL)攪拌溶液中，添加碘甲烷(176.2mg，1.24mmol，77.29uL)。於室溫攪拌反應混合物2小時，反應完全後，真空 濃縮該混合物。粗產物利用快速管柱層析法(SiO₂,DCM/MeOH=10：1)純化，得到2-氯-8-甲氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(90mg，352.03μmol，85%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 256.1[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-甲氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯11a(90mg，352.03μmol)之EtOH(2mL)與H₂O(2mL)攪拌溶液中，添加LiOH H₂O(73.9mg，1.76mmol)。於室溫攪拌反應混合物3小時，反應完全後，以EtOAc(5mL)稀釋該混合物並以1N HCl調至pH=2。分離各層，水層以EtOAc(2×5mL)萃取。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物2-氯-8-甲氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(73mg，320.73μmol，91%產率)為黃色固體，直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 226.0[M-H]⁺。

步驟3

於2-氯-8-甲氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸12a(65mg，285.54μmol)之1,4-二

烷(4mL)攪拌溶液中，添加二苯基磷醯基疊氮化物(102.2mg，371.20μmol，80.44uL)、Et₃N(1.43mmol)。於室溫攪拌反應混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(111.7mg，571.08μmol)，於100℃攪拌混合物2小時，反應完全後，以EtOAc(4mL)稀釋該混合物，有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(SiO₂,DCM/MeOH=20：1)純化，得到1-(2-氯-8-甲氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(10.3mg，24.51μmol，8%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 408.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )：10.27(s,1H),9.15(s,1H),8.73(s,1H),8.49-8.46(m,3H),8.15(s,2H),4.25(s,3H)。

實施例14. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-乙氧基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於室溫，於2-氯-8-羥基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯6c(200mg，827.71μmol)之DMF(5mL)攪拌溶液中，添加碘乙烷(387.3mg，2.48mmol，199.63uL)。微波輻射下，於80℃攪拌反應混合物2小時，反應完全後，真空濃縮混合物。粗產物利用快速管柱層析法(SiO₂,DCM/MeOH=10：1)純化，得到2-氯-8-乙氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(103mg，381.93μmol，46%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 270.1[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-乙氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯11b(103mg，381.93μmol)之EtOH(2mL)與H₂O(2mL)攪拌溶液中，添加LiOH H₂O(73.9mg，1.76mmol)。於室溫攪拌反應混合物3小時，反應完全後，以EtOAc(5mL)稀釋該混合物並以1N HCl調至pH=2。分離各層，水層以EtOAc(2×5mL)萃取。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物2-氯-8-乙氧 基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(70mg，289.70μmol，76%產率)為黃色固體，直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 240.0[M-H]⁺。

步驟3

於2-氯-8-乙氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸12b(70mg，289.70μmol)之1,4-二

烷(4mL)攪拌溶液中，添加二苯基磷醯基疊氮化物(159.5mg，579.40μmol，125.55uL)、Et₃N(146.3mg，1.45mmol)。於室溫攪拌反應混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(113.3mg，579.40μmol)，於100℃攪拌混合物2小時，反應完全後，以EtOAc(4mL)稀釋該混合物，有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(SiO₂,DCM/MeOH=20：1)純化，得到1-(2-氯-8-乙氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(8.6mg，19.80μmol，6.84%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 434.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )：10.27-10.26(m,1H),9.14(s,1H),8.76(s,1H),8.50-8.47(m,3H),8.15(s,2H),4.79(q,J=6.8Hz,2H),1.40(t,J=6.8Hz,3H)。

實施例15. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-異丙氧基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於室溫，於2-氯-8-羥基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯6c(350mg，1.45mmol)與碳酸銫(1.42g，4.35mmol)之DMF(5mL)攪拌溶液中，添加2-溴丙烷(1.78g，14.48mmol，248.30uL)利用快速管柱層析法(SiO₂,DCM/MeOH=10：1)純化。微波輻射下，所得混合物於120℃攪拌2小時，反應完全後，真空濃縮混合物。粗產物利用快速管柱層析法(SiO₂,DCM/MeOH=10：1)純化，得到2-氯-8-異丙氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(82mg，289.03μmol，20%產率)，為黃色油。LC-MS：m/z 84.1[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-異丙氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯11c(82mg，289.03μmol)之EtOH(2mL)與H₂O(2mL)攪拌溶液中，添加LiOH H₂O(60.70mg，1.45mmol)。於室溫攪拌反應混合物3小時，反應完全後，以EtOAc(5mL)稀釋該混合物並以1N HCl調至pH=2。分離各層，水層以EtOAc(2×5mL)萃取。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物2-氯-8-異 丙氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(67mg，262.07μmol，91%產率)為黃色固體，直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 254.0[M-H]⁺。

步驟3

於2-氯-8-異丙氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸12c(21.2mg，82.77μmol)之1,4-二

烷(4mL)攪拌溶液中，添加二苯基磷醯基疊氮化物(45.6mg，165.54μmol，35.87uL)、Et₃N(41.80mg，413.85μmol)。於室溫攪拌反應混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(32.4mg，165.54μmol)，於100℃攪拌混合物2小時，反應完全後，以EtOAc(4mL)稀釋該混合物，有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(矽膠，DCM/MeOH=20：1)純化，得到1-(2-氯-8-異丙氧基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(11.3mg，25.21μmol，30%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 448.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )：10.29(s,1H),9.15(s,1H),8.78(s,1H),8.50-8.47(m,3H),8.15(s,2H),3.35-3.29(m,1H)1.68(d,J=6.4Hz,2H)。

式III化合物之合成

實施例16. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(環丙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(200mg，656.76μmol)之THF(4mL)溶液中，添加N-甲基環丙胺(141.3mg，1.31mmol，364.05uL，HCl)。懸浮液於室溫攪拌3小時。LCMS顯示大部分反應物被耗盡。去除溶劑，得到2-氯-8-[環丙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(186mg，631.07μmol，96.09%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 295.1[M+H]⁺。

步驟2

0℃，於2-氯-8-[環丙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯13a(186mg，631.07μmol)之乙醇(4mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(1M，1.89mL)。於室溫攪拌混合物10小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。過濾懸浮液，將濾餅真空乾燥，得到2-氯-8-[環丙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(168mg，629.96μmol，99.82%產率)，為白色固體。

步驟3

於室溫，於2-氯-8-[環丙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸14a(157mg，588.71μmol)之1,4-二

烷(7mL)溶液中，添加三乙胺(297.9mg，2.94mmol， 410.27uL)與[疊氮(苯氧)磷醯基]氧苯(194.42mg，706.46μmol，153.08uL)。攪拌混合物30分鐘。然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(149.70mg，765.33μmol)，於100℃攪拌反應混合物2小時。濃縮混合物得到殘留物，利用製備型TLC(二氯甲烷：甲醇=20：1)將其純化，得到1-[2-氯-8-[環丙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(42.7mg，92.97μmol，15.79%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 459[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d ₆,400MHz)δ 9.73(s,1H),8.55-8.47(m,4H),8.23(d,J=6.4Hz,1H),8.15(s,2H),3.22-3.17(m,4H),0.67-0.51(m,4H)。

實施例17. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(二甲胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(300mg，985.13μmol)之THF(10mL)溶液中，添加N-甲基甲胺(2M，2.46mL)。該懸浮液於室溫攪拌1小時。TLC顯示大部分反應物被耗盡並出現一個主要斑點。濃縮混合物得到殘留物，利用矽膠管柱層析法以石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗提將其純化，得到2-氯-8-(二甲 胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(250mg，930.41μmol，94.45%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 269.1[M+H]⁺。

步驟2

0℃。於2-氯-8-(二甲胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯13b(100mg，372.16μmol)之乙醇/水(5/5mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(1M，1.12mL)。於室溫攪拌混合物10小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。過濾懸浮液，將濾餅真空乾燥，得到2-氯-8-(二甲胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(89.6mg，粗產物)，為黃色固體，直接用於下一步驟。

步驟3

於室溫，於2-氯-8-(二甲胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸14b(82mg，340.75μmol)之1,4-二

烷(7mL)溶液中，添加三乙胺(172.4mg，1.70mmol，237.47uL)與[疊氮(苯氧)磷醯基]氧苯(112.5mg，408.90μmol，88.61uL)。然後攪拌該混合物30分鐘，接著添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(86.7mg，442.97μmol)，於100℃攪拌反應混合物3小時。濃縮混合物得到殘留物，利用製備型HPLC將其純化，得到1-[2-氯-8-(二甲胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(7.0mg，16.16μmol，4.74%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 433[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 9.75(s,1H),8.57(d,J=1.6Hz,2H),8.46(d,J=1.6Hz,1H),8.32(s,1H),8.23(s,1H),8.15(s,2H),3.24(s,6H)。

實施例18. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(N-嗎啉基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

25℃，於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(100.0mg，328.4μmol)之THF(3mL)混合物中，添加嗎啉(57.2mg，656.8μmol)。於25℃攪拌反應混合物隔夜。過濾分離固體，真空濃縮濾液。殘留物利用管柱層析法(以PE/EA=10/1洗提)純化，得到2-氯-8-(N-嗎啉基)-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(82mg，80.36%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 311[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-(N-嗎啉基)-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯13c(60mg，193.09μmol)之THF(6mL)與乙醇(1mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(81.0mg，1.93mmol)之水(1mL)溶液。於60℃攪拌混合物48小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。以EtOAc萃取該混合物，乾燥有機相，濃縮，得到2-氯-8-(N-嗎啉基)-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(54.6mg，定量)，為白色固體，直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 267[M+H]⁺。

步驟3

於2-氯-7-(N-嗎啉基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-羧酸14c(54mg，191.03μmol)之1,4-二

烷(6mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(59.4mg，229.23μmol，46.79μL)與三乙胺(96.6mg，955.13μmol，133.13μL)。所得懸浮液於室溫攪拌30分鐘。然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(56.1mg，286.54μmol)，於100℃攪拌該混合物2小時。去除溶劑，殘留物利用快速管柱層析法(以DCM：MeOH=30：1洗提)與製備型HPLC純化，得到1-(2-氯-7-(N-嗎啉基)-吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(18mg，19.83%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 475.0[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d6,400MHz)：δ 9.89(brs,1H),8.58(d,J=2.4Hz,2H),8.50(s,1H),8.48(d,J=2.4Hz,1H),8.29(s,1H),8.15(s,2H),3.78(t,J=4.0Hz,4H),3.78(t,J=4.0Hz,4H)。

實施例19. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-((2-甲氧基乙基)(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於室溫，於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(90mg，0.3mmol)之THF(1mL)溶液中，添加2-甲氧-N-甲基-乙胺(131.7mg，1.48mmol)。於室溫攪拌所得混合物2小時。TLC顯示反應完全。濃縮反應混合物，利用快速矽膠層析 法(PE中0~10% EtOAc)純化，得到2-氯-8-[2-甲氧基乙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(90mg，97%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 313.1[M+H]⁺。

步驟2

於50℃，攪拌2-氯-8-[2-甲氧基乙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯13d(100mg，319.7μmol)與氫氧化鋰(153.2mg，6.4mmol)於THF(3mL)、水(2mL)與甲醇(2mL)中之混合物12小時。LC-MS顯示反應完全。減壓去除溶劑，使殘留物溶於水(10mL)中，以EA(5mLx2)萃取。其水相以1M HCl酸化至pH~6，以DCM(10mLx5)萃取，合併之有機層以無水Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮，得到2-氯-8-[2-甲氧基乙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(70mg，77%產率)，為黃色固體，直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 285.1[M+H]⁺。

步驟3

於室溫，於2-氯-8-[2-甲氧基乙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸14d(70mg，245.9μmol)之1,4-二

烷溶液中，添加[疊氮(苯基)磷醯基]苯(77.7mg，319.6μmol)與三乙胺(124.4mg，1.23mmol)。攪拌所得混合物30分鐘。添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(72.1mg，368.8μmol)，於100℃攪拌混合物2小時。LC-MS顯示反應完全，以乙酸乙酯(20mL)稀釋，以鹽水(10mLx2)洗滌。濃縮有機層，利用製備型TLC(以DCM：MeOH=20：1洗提)純化，得到1-[2-氯-8-[2-甲氧基乙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(14.8mg，13%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 477.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)：δ 9.79(s,1 H),8.57(d,J=2.4Hz,1H),8.50(s,1 H),8.47(d,J=2.0Hz,1 H),8.42(s,1 H),8.25(s,1 H),8.15(s,2 H),3.90(t,J=5.2Hz,2 H),3.55(t,J=5.6Hz,2 H),3.19-3.18(m,6 H)。

實施例20. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(7-環丙基-2-甲基-2H-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)脲之合成

步驟1

於室溫，於4-胺基-1-甲基-1H-吡唑-3-羧酸甲酯(2.0g，12.9mmol)之DMF(120mL)溶液中，添加二碳酸二(三級丁酯)(3.38g，15.44mmol)。加熱反應混合物至60℃ 5小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。將反應混合物傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。合併之有機相以Na₂SO₄乾燥，以鹽水洗滌，過濾及濃縮。所得殘留物利用矽膠管柱層析法以於石油醚中0%至50%之乙酸乙酯洗提純化，得到4-(三級丁氧基羰胺基)-1-甲基-吡唑-3-羧酸甲酯(2.5g，75.98%產率)。LC-MS：m/z 256[M+H]⁺。

步驟2

於室溫，於4-(三級丁氧基羰胺基)-1-甲基-吡唑-3-羧酸甲酯(2.5g，9.79mmol)之四氫呋喃(24mL)溶液中，添加氫氧化鋰(586.4mg，24.48mmol)之水(5mL)溶液，於室溫攪拌反應混合物4小時。完全耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需 質量。將其濃縮，以HCl(1N)酸化至pH=3~4。然後過濾反應混合物，以水洗滌濾餅。接著將其真空乾燥，得到4-(三級丁氧基羰胺基)-1-甲基-吡唑-3-羧酸(2.3g，97.35%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 242[M+H]⁺。

步驟3

於4-(三級丁氧基羰胺基)-1-甲基-吡唑-3-羧酸(2.3g，9.53mmol)之乙腈(8mL)與四氫呋喃(8mL)溶液中，添加1,1’-羥基二咪唑(2.32g，14.30mmol)。所得反應混合物於室溫攪拌2小時並添加氯化鎂(907.6mg，9.53mmol)、三乙胺(2.89g，28.60mmol，3.99mL)。於室溫攪拌反應混合物隔夜。反應完全後，將反應混合物傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。合併之有機相以Na₂SO₄乾燥，以鹽水洗滌，過濾及濃縮。所得殘留物利用矽膠管柱層析法以於石油醚中0%至30%之乙酸乙酯洗提純化，得到3-[4-(三級丁氧基羰胺基)-1-甲基-吡唑-3-基]-3-側氧-丙酸乙酯(2.26g，76.14%產率)。LC-MS：m/z 312[M+H]⁺。

步驟4

於室溫，於3-[4-(三級丁氧基羰胺基)-1-甲基-吡唑-3-基]-3-側氧-丙酸乙酯(1.0g，3.21mmol)之二氯甲烷(15mL)溶液中，逐滴添加N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛(3.06g，25.70mmol，3.44mL)。於室溫攪拌反應混合物隔夜。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮反應混合物，殘留物利用矽膠管柱層析法，以於二氯甲烷中0%至10%之甲醇洗提純化，得到7-羥基-2-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-羧酸乙酯(603mg，84.87%產率)。LC-MS：m/z 222[M+H]⁺。

步驟5

加熱7-羥基-2-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-羧酸乙酯(300mg，1.36mmol)於氧氯化磷(20.79g，135.62mmol)中之溶液至80℃ 3小時。LC-MS顯示耗盡起始原 料並檢測到所需質量。濃縮反應混合物，殘留物利用矽膠管柱層析法以於石油醚中0%至50%之乙酸乙酯洗提純化，得到7-氯-2-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-羧酸乙酯(300mg，92.30%產率)。LC-MS：m/z 240[M+H]⁺。

步驟6

於室溫，於7-氯-2-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-羧酸乙酯(300mg，1.25mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(12mL)溶液中，添加環丙基硼酸(1.08g，12.52mmol)與碳酸鈉(398.0mg，3.76mmol)。將反應混合物脫氣並與N₂交換兩次。添加二氯雙[二-三級丁基(4-二甲胺基苯基)膦]鈀(177.3mg，250.4μmol)至該混合物中，加熱所得反應混合物至100℃隔夜。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。將反應混合物傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。合併之有機相以鹽水洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮。所得殘留物利用矽膠管柱層析法以於石油醚中0%至20%之乙酸乙酯洗提純化，得到7-環丙基-2-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-羧酸乙酯(70mg，22.80%產率)。LC-MS：m/z 246[M+H]⁺。

步驟7

於0℃，於7-環丙基-2-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-羧酸乙酯(85mg，346.6μmol)之四氫呋喃(6mL)溶液中，逐滴添加氫氧化鋰(20.75mg，866.37μmol)之水1mL)溶液。所得反應混合物於室溫攪拌4小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。反應溶液以HCl(1N)酸化至pH=3~4。然後以乙酸乙酯萃取兩次。合併之有機相以鹽水洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮，得到7-環丙基-2-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-羧酸(68mg，90.33%產率)，為黃色固體，不需進一步純化直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 218[M+H]⁺。

步驟8

於7-環丙基-2-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-羧酸(68mg，0.3134mmol)之1,4-二

烷(6mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(103.5mg，0.376mmol)與三乙胺(158.6mg，1.567mmol)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(91.6mg，0.47mmol)，加熱混合物至100℃ 2小時。將反應溶液傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。該有機物以Na₂SO₄乾燥，濃縮，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中10%至80%之乙酸乙酯洗提)純化，得到1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(7-環丙基-2-甲基-2H-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基)脲(13.1mg，10.21%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 410[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d ₆ ,400MHz)：δ 9.70(s,1 H),8.74(s,1 H),8.56(d,J=2.0Hz,1 H),8.51(s,1 H),8.47(d,J=2.0Hz,1 H),8.42(s,1 H),8.14(s,2 H),4.15(s,3 H),2.23-2.19(m,1 H),1.71-1.67(m,2 H),1.1-1.06(m,2 H)。

實施例21. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(甲基(氧雜環丁烷-3-基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(150.0mg，492.6μmol)之THF(3mL)溶液中，添加氧雜環丁烷-3-胺(72.0mg，985.1μmol)。於室溫攪拌混 合物隔夜。反應完全後，過濾分離固體及濃縮濾液。殘留物利用管柱層析法(以PE/EA=10/1洗提)純化，得到2-氯-8-(氧雜環丁烷-3-基胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(140.0mg，95.8%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 297[M+H]⁺。

步驟2

0℃，於2-氯-8-(氧雜環丁烷-3-基胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯13e(140mg，471.84μmol)之DMF(3mL)溶液中，添加NaH(90.4mg，2.4mmol，60%純度)。將所得溶液加溫至室溫並攪拌0.5小時。然後逐滴添加碘甲烷(401.8mg，2.8mmol)至該混合物中。於室溫攪拌所得混合物2小時。以水猝滅反應混合物並以乙酸乙酯(70mL)萃取。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。殘留物利用快速管柱層析法純化，得到2-氯-8-[甲基(氧雜環丁烷-3-基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(60.0mg，40.9%產率)，為無色油。LC-MS：m/z 311[M+H]⁺。

步驟3

於2-氯-8-[甲基(氧雜環丁烷-3-基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯13f(60.0mg，193.1μmol)之THF(2mL)與乙醇(1mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(81.0mg，1.9mmol)之水(1mL)溶液。於50℃攪拌混合物48小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。以EtOAc萃取該混合物，合併之有機相以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，得到2-氯-8-[甲基(氧雜環丁烷-3-基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(54.5mg，99.8%產率)，為白色固體，直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 283[M+H]⁺。

步驟4

於2-氯-7-[甲基(氧雜環丁烷-3-基)胺基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-羧酸14e(55.0 mg，194.6μmol)之1,4-二

烷(6mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(60.5mg，233.5μmol)與三乙胺(98.4mg，972.8μmol)。所得溶液於室溫攪拌30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(57.1mg，291.9μmol)，於100℃攪拌該混合物2小時。去除溶劑，殘留物利用快速管柱層析法(以DCM：MeOH=30：1洗提)與製備型HPLC純化，得到標題化合物1-[2-氯-7-[甲基(氧雜環丁烷-3-基)胺基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基]-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(6mg，6.5%產率)。LC-MS：m/z 475.0[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d ₆ ,400MHz)：δ 8.92(s,1H),8.72-8.69(m,2H),8.58(d,J=2.0Hz,1H),8.49(d,J=2.4Hz,1H),8.29(s,1H),8.16(s,2H),5.08(t,J=6.4Hz,1H),4.73(t,J=6.4Hz,2H),4.63(t,J=6.4Hz,2H),3.08(s,3H)。

實施例22. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(3-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於1-(三級丁氧基羰胺基)咪唑-2-羧酸乙酯3(1.75g，6.86mmol)之DMF(10mL)懸浮液中，緩緩添加1-氯吡咯啶-2,5-二酮(0.92g，6.86mmol)之DMF(5mL)溶液。於室溫攪拌反應混合物6小時，反應完全後，添加飽和碳酸氫鈉於反應混合物，並以EtOAc(2×100mL)萃取。合併之有機相以鹽水(50mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(石油醚/乙酸乙酯10：1)純化，得到1-((三級丁氧基羰基)胺基)-5-氯-1H-咪唑-2-羧酸乙酯(1.0g，3.46mmol，50.4%產率)，為無色油。LC-MS：m/z 290[M+H]⁺。

步驟2

0℃，於1-((三級丁氧基羰基)胺基)-5-氯-1H-咪唑-2-羧酸乙酯4(1.0g，3.45mmol)之THF(20mL)溶液中，逐滴添加2-甲基丙烷-2-油酸鉀(1M，10.35mL)5分鐘，添加無水乙酸乙酯(760.27g，8.63mmol，0.84mL)至該混合物中，於0℃將其攪拌15分鐘。移除冰浴，於室溫攪拌所得混合物2小時。TLC顯示形成斑點，冷卻反應至0℃，經由逐滴添加以1.0N HCl處理直到懸浮液完全溶解。以EtOAc(2×40mL)萃取所得溶液。合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮，得到(Z)-3-(1-((三級丁氧基羰基)胺基)-5-氯-1H-咪唑-2-基)-3-羥基丙烯酸乙酯(720mg，粗產物)，為黃色固體。LC-MS：m/z 332[M+H]⁺。

步驟3

於(Z)-3-(1-((三級丁氧基羰基)胺基)-5-氯-1H-咪唑-2-基)-3-羥基丙烯酸乙酯5e(720mg，2.17mmol)之DCM(20mL)溶液中，添加1,1-二甲氧-N,N-二甲基-甲胺(1.94g，16.28mmol，2.18mL)。於室溫攪拌反應混合物3小時，反應完全後，濃縮混合物得到粗產物，於乙酸乙酯中再結晶，得到3-氯-8-羥基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(380mg，1.57mmol，72.46%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 242[M+H]⁺。

步驟4

於室溫，於3-氯-8-羥基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯6e(380mg，1.57mmol)之1,4-二

烷(6mL)攪拌溶液中，添加磷醯溴(1.35g，4.72mmol，0.48mL)。於110℃攪拌反應混合物2小時。反應完全後，冷卻反應混合物至室溫，將反應混合物傾入水中，以EtOAc(2×10mL)萃取。合併之有機相以鹽水(10mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(石油醚/乙酸乙酯=7：1)純化，得到8-溴-3-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(220mg，722.43μmol，45.94%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 304[M+H]⁺。

步驟5

於8-溴-3-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7e(220mg，722.43μmol)、環丙基硼酸(62.1mg，722.43mmol)之甲苯(4mL)溶液中，添加三環己膦(40.5mg，144.49μmol)、磷酸三鉀(383.4mg，1.81mmol)與二乙醯氧鈀(16.2mg，72.24μmol)。於100℃攪拌懸浮液4小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=5：1)顯示大部分起始原料被消耗並存在一個主要斑點。通過矽藻土墊過濾反應混合物。濾液以水(5mL)稀釋並以乙酸乙酯(10mL)萃取。有機相以鹽水洗滌，以Na₂SO₄乾燥，濃縮得到殘留物，利用矽膠管柱層析法以石油醚/乙酸乙酯(8/1)洗提將其純化，得到3-氯-8-環丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(136mg，511.86μmol，70.85%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 266[M+H]⁺。

步驟6

於0℃，於3-氯-8-環丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8i(136mg，511.86μmol)之乙醇/水(5/5mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(1M，2.55mL)。所得反應混合物於室溫攪拌10小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。過濾懸浮液，將濾餅真空乾燥，得到3-氯-8-環丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(110.0mg，粗產物)，為黃色固體，直接用於下一步驟。

步驟7

於室溫，於3-氯-8-環丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9k(110mg，462.88μmol)之1,4-二

烷(4mL)溶液中，添加三乙胺(233.8mg，2.31mmol，321.20uL)與疊氮膦酸二苯酯(165.6mg，601.75μmol，130.40uL)，攪拌混合物30分鐘。然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(90.5mg，462.88μmol)，於100℃攪拌反應混合物3小時。濃縮混合物得到殘留物，利用製備型HPLC將其純化，得到1-(3-氯-8-環丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(35.4mg，82.28μmol，17.78%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 430[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 9.75(s,1H),9.00(s,1H),8.78(s,1H),8.58(d,J=2.4Hz,1H),8.48(d,J=2.4Hz,1H),8.15(s,2H),7.75(s,1H),2.23-2.18(m,1H),1.85-1.81(m,2H),1.19-1.14(m,2H)。

實施例23. 1-(8-(氮雜環丁-1-基)-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3- (5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)脲之合成

步驟1

於0℃，於8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(100mg，0.33mmol)之THF(5mL)溶液中，添加氮雜環丁烷鹽酸鹽(92.6mg，0.99mmol)與三乙胺(100.2mg，0.99mmol)。所得反應混合物於室溫攪拌隔夜。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮反應混合物，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中0%至30%之乙酸乙酯洗提)純化，得到8-(氮雜環丁-1-基)-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(91mg，98.5%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 281[M+H]⁺。

步驟2

於8-(氮雜環丁-1-基)-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯13g(91mg，0.33mmol)之THF(5mL)與乙醇(5mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(136.5mg，3.25mmol)之水(3.2mL)溶液。於70℃攪拌反應混合物4小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。真空去除溶劑後，殘留物以HCl(1M)酸化至pH=3~4。然後以乙酸乙酯萃取，合併之有機相以Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮，得到8- (氮雜環丁-1-基)-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(81mg，98.9%產率)，為白色固體，不需進一步純化，直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 253[M+H]⁺。

步驟3

於8-(氮雜環丁-1-基)-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸14f(81mg，0.32mmol)之1,4-二

烷(5mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(115mg，0.42mmol)與三乙胺(162.6mg，1.61mmol)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(87.7mg，0.45mmol)，加熱混合物至100℃ 2小時。將反應混合物傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。合併之有機相以Na₂SO₄乾燥，濃縮，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中10%至80%之乙酸乙酯洗提)純化，得到1-(8-(氮雜環丁-1-基)-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)脲(15.8mg)，為紫色固體。LC-MS：m/z 445[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d ₆ ,400MHz)：δ 9.68(s,1 H),8.58(s,1 H),8.45(d,J=2.4Hz,1 H),8.19(s,1 H),8.15(s,1 H),8.13(s,2 H),7.91(s,1 H),4.62(t,J=7.6Hz,4 H),2.38-2.34(m,2 H)。

實施例24. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(吡咯啶-1-基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(100.0mg，328.4μmol)之1,4-二

烷(6mL)溶液中，添加吡咯啶(23.4mg，328.4μmol)、碳酸銫(321.2mg，985.2μmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(30.1mg，32.84μmol)與4,5-雙(二苯膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃(38.0mg，65.68μmol)。N₂下，於100℃攪拌反應混合物2小時，冷卻反應混合物至室溫，真空濃縮得到殘留物，利用快速管柱層析法(以PE/EA=10/1洗提)將其純化，得到2-氯-8-吡咯啶-1-基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(85mg，87.8%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 295[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-吡咯啶-1-基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯13h(85.0mg，288.4μmol)之EtOH(4mL)與H₂O(4mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(121.1mg，2.88mmol)。於70℃攪拌反應混合物16小時。以EtOAc(5mL)稀釋反應混合物並以HCl(1N)調至pH=6。水相以EtOAc(2×5mL)萃取，合併之有機相以鹽水(100mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，得到粗產物2-氯-8-吡咯啶-1- 基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(70mg，91.0%產率)，為黃色固體，不需進一步純化直接用於下一步驟。

步驟3

於2-氯-8-吡咯啶-1-基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸14g(70mg，262.5μmol)之1,4-二

烷(4mL)溶液中，添加二苯基磷醯基疊氮化物(93.9mg，341.23μmol)、三乙胺(132.6mg，1.3mmol)。於室溫攪拌反應混合物30分鐘。然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(66.8mg，341.2μmol)，於100℃攪拌該混合物2小時。冷卻反應混合物至室溫，去除溶劑，殘留物利用快速管柱層析法(以DCM：MeOH=20：1洗提)純化，得到1-(2-氯-8-吡咯啶-1-基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(25mg，20.7%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 459.0[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d ₆ ,400MHz)：δ 8.58(s,1H),8.45(d,J=2.4Hz,1H),8.17(s,1H),8.14(s,2H),7.94(s,1H),4.01(t,J=6.0Hz,4H),1.87(t,J=6.4Hz,4H)。

實施例25. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(乙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

0℃，於8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(100mg，0.33mmol)之THF(4mL)溶液中，添加N-甲基乙胺(68.2mg，1.16mmol)。於室溫攪拌反應混合物隔夜。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮反應混合物，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中0%至30%之乙酸乙酯洗提)純化，得到2-氯-8-(乙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(90mg，96.7%產率)，為淡黃色固體。LC-MS：m/z 283[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-(乙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯13i(90mg，0.32mmol)之THF(5mL)與乙醇(5mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(67mg，1.60mmol)之水1.6mL)溶液。於70℃攪拌混合物4小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。真空去除溶劑得到殘留物，以HCl(1N)將其酸化至pH=3~4。所得混合物以乙酸乙酯萃取，合併之有機相以鹽水洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾，濃縮，得到2-氯-8-(乙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(81mg，99.9%產率)，為淡黃色固體，直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 255[M+H]⁺。

步驟3

於2-氯-8-(乙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸14h(81mg，0.3189mmol)之1,4-二

烷(5mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(114.1mg，0.4146mmol)與三乙胺(161.3mg，1.594mmol)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(87mg，0.4465mmol)，此混合物於100℃加熱2小時。將混合物溶液傾入水中，以乙酸乙酯萃取兩次。合併之有機相以Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮，殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中10%至80%之乙酸乙酯洗提)純化，得到1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(乙基 (甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(7.4mg，5.2%)，為白色固體。LC-MS：m/z 447[M+H]⁺。¹H NMR(DMSO-d ₆ ,400MHz)：δ 9.77(s,1 H),8.56(d,J=2.4Hz,2 H),8.46(d,J=2.4Hz,1 H),8.42(s,1 H),8.23(s,1 H),8.14(s,2 H),3.70(q,J=7.2,14.4Hz,2 H),3.13(s,3 H),1.16(t,J=7.2Hz,3 H)。

實施例26. 1-(2-氯-8-(環丙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(200mg，656.76μmol)之THF(4mL)溶液中，添加N-甲基環丙胺(141.3mg，1.31mmol，364.0uL，HCl)。懸浮液於室溫攪拌3小時。LCMS顯示用盡大部分起始原料。去除溶劑，得到2-氯-8-[環丙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(186mg，631.07μmol，96.09%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 295.1[M+H]⁺。

步驟2

0℃，於2-氯-8-[環丙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯13a(186mg，631.07μmol)之乙醇(4mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(1M，1.89mL)。於室溫攪拌混合物10小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。 過濾懸浮液，將濾餅真空乾燥，得到2-氯-8-[環丙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(168mg，629.96μmol，99.82%產率)，為白色固體，直接用於下一步驟。

步驟3

於室溫，於2-氯-8-[環丙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(168mg，629.96μmol)之1,4-二

烷(7mL)溶液中，添加三乙胺(318.7mg，3.15mmol，439.02uL)與疊氮膦酸二苯酯(208.0mg，755.95μmol，163.81uL)，所得反應混合物於室溫攪拌30分鐘。然後添加2-(三氟甲基)吡啶-4-胺(132.76mg，818.95μmol)，於100℃攪拌反應混合物2小時。濃縮反應混合物得到殘留物，利用製備型TLC(以二氯甲烷：甲醇=20：1洗提)將其純化，得到1-[2-氯-8-[環丙基(甲基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]-3-[2-(三氟甲基)-4-吡啶基]脲(13.4mg，31.47μmol，5.00%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 426[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 9.83(s,1H),8.53(d,J=5.6Hz,1H),8.48(s,2H),8.24(s,1H),8.04(d,J=2.0Hz,1H),7.64-7.62(m,1H),3.21(s,3H),3.18-3.14(m,1H),0.65-0.62(m,2H),0.51-0.49(m,2H)。

實施例27. 1-(2-氯-8-(異丙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)脲之合成

步驟1

於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(250.0mg，820.9μmol)之THF(5mL)溶液中，添加N-甲基丙-2-胺(600.4mg，8.21mmol)。所得反應混合物於室溫攪拌隔夜。反應完全後，過濾分離固體並真空濃縮濾液。殘留物利用管柱層析法(以PE/EA=10/1洗提)純化，得到2-氯-8-(異丙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(82mg，80.36%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 297.1[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-(異丙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯13j(210.0mg，707.7μmol)之THF(4mL)與H₂O(4mL)液中，添加氫氧化鋰一水合物(297mg，7.08mmol)。60℃攪拌反應混合物48小時。去除溶劑後，以HCl(2N)酸化殘留物至pH=3~4。以EtOAc萃取所得混合物，合併之有機相以Na₂SO₄乾燥，過濾，濃縮，得到2-氯-8-(異丙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(171.0mg，定量)，為白色固體，直接用於下一步驟。LC-MS：m/z 297.1[M+H]⁺。

步驟3

於2-氯-8-(異丙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸14i(171mg，636.4μmol)之1,4-二

烷(4mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(227.7mg，229.23μ mol，827.3uL)與三乙胺(321.4mg，3.18mmol)。所得懸浮液於室溫攪拌30分鐘。然後添加2-(三氟甲基)吡啶-4-胺(103.2mg，636.40μmol)，所得反應混合物於100℃攪拌2小時。真空去除溶劑得到殘留物，利用快速管柱層析法(以DCM：MeOH=30：1洗提)與製備型HPLC將其純化，得到1-(2-氯-8-(異丙基(甲基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)脲(46.0mg，16.9%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 428.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )：δ 9.88(brs,1H),8.53(d,J=5.6Hz,1H),8.42-8.40(m,2H),8.24-8.23(m,1H),8.06-8.05(m,1H),7.65-7.63(m,1H),4.52-4.47(m,1H),2.95(s,3H),1.22(d,J=6.4Hz,6H)。

實施例28. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(環丙基(2-甲氧乙基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用N-(2-甲氧乙基)環丙胺代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例28。LC-MS：m/z 503.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )：δ 10.06(s,1H),8.61(s,1H),8.56(d,J=2.4Hz,1H),8.48(d,J=2.0Hz,1H),8.40(s,1H),8.25(s,1H),8.15(s,2H),3.90(t,J=5.6Hz,2H),3.52(t,J=5.6Hz,2H),3.33-3.31(m,1H),3.14(s,3H),0.68-0.66(m,2H),0.51-0.49(m,2H)。

實施例29. (S)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(3-甲基-N-嗎啉基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用(3S)-3-甲基嗎啉代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例29。LC-MS：m/z 489.0[M+H]⁺ _； ¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 10.29(brs,1H),9.16(s,1H),8.73(s,1H),8.57(d,J=2.4Hz,1H),8.51(d,J=2.4Hz,1H),8.35(s,1H),8.16(s,2H),4.16-4.12(m,1H),3.90-3.79(m,3H),3.49-3.43(m,2H),3.09-3.06(m,1H),0.86-0.85(m,3H)。

實施例30. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-((2S,6R)-2,6-二甲基-N-嗎啉基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用(2S,6R)-2,6-二甲基嗎啉代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例30。LCMS m/z 503[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.85(s,1H),8.58(d,J=2.4Hz,1H),8.52(s,1H),8.50(s,1H),8.47(d,J=2.4Hz,1H),8.27(s,1H),8.78(s,1H),8.15(s,2H),3.82-3.78(m,4H),2.99-2.93(m,2H),1.11(d,J=2.4Hz,6H)。

實施例31. (S)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(3-(甲氧甲基)-N-嗎啉基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用(3S)-3-(甲氧甲基)嗎啉代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例31。LC-MS(ESI)m/z 518.9[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.09(s,1H),8.78(s,1H),8.58-8.57(m,1H),8.50-8.49(m,2H),8.31(s,1H),8.15(s,1H),8.04(s,1H),4.39(s,1H),3.91-3.84(m,2H),3.79-3.75(m,1H),3.71-3.65(m,1H),3.50-3.39(m,4H),3.08(s,3H)。

實施例32. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(1,1-二氧化-N-硫嗎啉基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用1,4-噻

烷1,1-二氧化物代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例32。LC-MS：m/z 523[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz；DMSO-d6)：δ 10.02(br,1H),8.79(s,1H),8.79(s,1H),8.59(d,J=2.4Hz,1H),8.49(d,J=2.4Hz,1H),8.36(s,1H),8.16(s,2H),3.86(d,J=5.2Hz,4H),3.42(s,4H)。

實施例33. (S)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(3-甲氧吡咯啶-1-基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用(3S)-3-甲氧吡咯啶代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例33。LC-MS：m/z 489[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.79(br,1H),8.59(s,1H),8.45(d,J=2.0Hz,2H),8.19(s,1H),8.14(s,2H),7.95(s,1H),4.16-4.01(m,5),3.17(s,3H),2.06-2.05(m,1),1.94-1.89(m,1)。

實施例34. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(甲硫基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用甲硫醇鈉代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例34。LC-MS：m/z 436.0[M+H]⁺；¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 10.28(s,1H),9.02(s,1H),8.98(s,1H),8.56(d,J=2.4Hz,1H),8.47(d,J=2.4Hz,1H),8.41(s,1H),8.16(s,2H),2.82(s,3H)。

實施例35. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(環丙基(乙基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用N-乙基環丙胺代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例35。LC-MS：m/z 473[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz；DMSO-d ₆ )：δ 9.83(s,1H),8.67(s,1H),8.55(d,J=2.4Hz,1H),8.48(d,J=2.4Hz,2H),8.26(s,1H),8.15(s,2H),3.71(q,J=7.2Hz,2H),3.26-3.22(m,1H),1.12(t,J=7.2Hz,3H),0.69-0.65(m,2H),0.51-0.48(m,2H)。

實施例36. 1-(2-氯-8-(乙基(2-甲氧乙基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)脲之合成

藉由使用N-乙基-2-甲氧-乙胺代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例36。LC-MS：m/z 458.1[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.13(s,1H),8.76(s,1H),8.55(d,J=4.8Hz,2H),8.27(s,1H),8.07(d,J=1.6Hz,1H),7.63-7.61(m,1H),3.67(t,J=5.6Hz,2H),3.55(q,J=7.2Hz,2H),3.41(t,J=5.6Hz,2H),3.12(s,3H),1.01(t,J=7.2Hz,3H)。

實施例37. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(乙基(2-甲氧乙基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用N-乙基-2-甲氧-乙胺代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例37。

LC-MS：m/z 490.9[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.13(s,1H),8.80(s,1H),8.63(s,1H),8.56(d,J=2.4Hz,1H),8.48(d,J=2.4Hz,1H),8.27(s,1H),8.15(s,2H),3.68(t,J=6.0Hz,2H),3.57(q,J=7.2Hz,2H),3.43(t,J=6.0Hz,2H),3.15(s,3H),1.03(t,J=7.2Hz,3H)。

實施例38. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(二乙胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用N-乙基乙胺代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例38。

LC-MS：m/z 461.0[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )：δ 10.51(brs,1H),8.50(s,1H),8.78(s,1H),8.57(d,J=2.4Hz,1H),8.48(d,J=2.4Hz,1H),8.26(s,1H),8.15(s,2H),3.55(q,J=7.2Hz,4H),1.05(t,J=7.2Hz,6H)。

實施例39. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-(N-嗎啉基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用嗎啉代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例39。

LC-MS：m/z 441.1；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )：δ 9.80(brs,1H),8.59(d,J=2.4Hz,1H),8.48(d,J=2.4Hz,2H),8.39(s,1H),8.15(s,2H),8.09(d,J=1.2Hz,1H),7.60(d,J=1.2Hz,1H),3.78(t,J=4.8Hz,4H),3.69(t,J=4.8Hz,4H)。

實施例40. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(3-甲氧氮雜環丁-1-基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用3-甲氧氮雜環丁烷鹽酸鹽代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例40。LC-MS：m/z 475.0[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 8.59(s,1H),8.45(d,J=2.4Hz,1H),8.19(s,1H),8.14(s,2H),7.96(s,1H),4.81-4.77(m,2H),4.41-4.39(m,2H),4.34-4.30(m,1H),3.25(s,3H)。

實施例41. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(3-甲氧-3-甲基氮雜環丁-1-基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用3-甲氧-3-甲基-氮雜環丁烷鹽酸鹽代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例41。LC-MS：m/z 489.0[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 8.59(s,1H),8.45(d,J=2.0Hz,1H),8.19(s, 1H),8.14(s,2H),7.96(s,1H),4.51(d,J=10.0Hz,2H),4.42(d,J=9.6Hz,2H),3.21(s,3H),1.46(s,3H)。

實施例42. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(哌

-1-基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用哌

-1-羧酸三級丁酯代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例42。LC-MS m/z 474[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.13(s,1H),8.76(s,1H),8.59(t,J=2.0Hz,1H),8.47(d,J=2.0Hz,1H),8.43(s,1H),8.26(s,1H),8.14(s,2H),3.54(s,4H),2.91(s,4H),1.90(d,J=1.2Hz,1H)。

實施例43. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(4-甲基哌

-1-基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用1-甲基哌

代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例43。LCMS m/z 488[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.14(s,1H),8.80(s,1H),8.59(s,1H),8.46(s,1H),8.38(s,1H),8.25(s,1H),8.14(s,2H),3.61(s,4H),2.22(s,4H),1.90(s,3H)。

實施例44. 1-(2-氯-8-(二甲胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(5-甲基吡啶-3-基)脲之合成

實施例44藉由使用N-甲基甲胺代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例44。LC-MS(ESI+)[(M+H)+]：406.0；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.58(br s,1H),8.80(s,1H),8.23(s,1H),8.20(s,1H),7.63(s,1H),3.23(s,6H)。

實施例45. 1-(2-氯-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-3-(2-氯-8-(乙基(2-甲氧乙基)胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用N-乙基-2-甲氧-乙胺與2-氯-6-(三氟甲基)吡啶-4-胺甲烷代替氧雜環丁烷-3-胺與5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺作為起始物料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例45。LC-MS：m/z 492.0[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.26(s,1H),8.65(d,J=6.4Hz,2H),8.28(s,1H),7.94(d,J=1.4Hz,1H),7.84(d,J=1.4Hz,1H),3.71(t,J=5.6Hz,2H),3.58(q,J=7.2Hz,2H),3.42(t,J=5.6Hz,2H),3.13(s,3H),1.02(t,J=7.2Hz,3H)。

實施例46. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7a(300mg，1.11mmol)之甲苯(4mL)溶液中，添加異丙烯基硼酸(95.4mg，1.11mmol)、三環己膦(62.3mg，0.222mmol)與磷酸鉀(589.5mg，2.78mmol)。將懸浮液脫氣並與N₂交換兩次。添加乙酸鈀(II)(24.9mg，0.111mmol)至該混合物中。於100℃攪拌反應混合物12小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。真空濃縮混合物，所得殘留物以快速管柱層析法(以PE/EA=10/1洗提)純化，得到8-異丙烯基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(100.5mg，39.13%產率)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 232.1[M+H]。

步驟2

於8-異丙烯基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8j(100mg，0.432mmol)之甲醇(5mL)溶液中，添加氧化鉑(IV)(15mg，0.256mmol)。於室溫，氫氣氛圍下，攪拌反應混合物隔夜。將其過濾並真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法純化(以PE/EA=10/1洗提)，得到產物8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(94mg，93.19%產率)，為白色固體。

LC-MS：m/z 234.1[M+H]⁺。

步驟3

於8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8k(92mg，0.394mmol)之THF(2mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(82.8mg，1.97mmol)之水(0.4mL)溶液。於室溫攪拌混合物5小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。以EtOAc萃取該混合物，乾燥合併之有機相，濃縮，得到8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(80mg，98.84%產率)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 206.1[M+H]⁺。

步驟4

於8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9l(80mg，0.390mmol)之1,4-二

烷(6mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(128.74mg，0.468mmol)與三乙胺(196.87mg，1.95mmol)。所得溶液於室溫攪拌30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(76.3mg，0.389mmol)，於100℃攪拌該混合物2小時。真空去除溶劑後，殘留物利用快速管柱層析法(以DCM：MeOH=30：1洗提)純化，得到1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-(8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(14.8mg，9.54%產率)，為白色固體。

LC-MS：m/z 398.1[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.67(s,1H),8.81(s,1H),8.59-8.57(m,2 H),8.47-8.46(m,1 H),8.18(d,J=1.2Hz,1H),8.15(s,2 H),7.70(d,J=1.2Hz,1H),3.52-3.47(m,1H),1.51(d,J=6.8Hz,6H)。

實施例47. 1-(8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)脲之合成

藉由使用2-(三氟甲基)吡啶-4-胺代替5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例46所述程序製備實施例47。

LC-MS：m/z 365.1[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.78(s,1H),8.77(s,1H),8.56-8.54(m,2 H),8.18(d,J=1.2Hz,1H),8.06-8.05(m,1 H),7.70(d,J=1.2Hz,1H),7.63-7.61(m,1 H),3.51-3.44(m,1H),1.50(d,J=7.2Hz,6H)。

實施例48. 1-(5-氯-6-甲氧基吡啶-3-基)-3-(8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用5-氯-6-甲氧基-吡啶-3-胺代替5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例46所述程序製備實施例48。

LC-MS：m/z 361.1[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.14(s,1H),8.62-8.59(m,2H),8.15-8.13(m,3H),7.67-7.66(m,1H),3.91(s,3H),3.53-3.46(m,1H),1.50(d,J=7.2Hz,6H)。

實施例49. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-乙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於2-氯-8-乙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8e(150mg，0.591mmol)之甲醇(5mL)溶液中，添加Pd/C(71.8mg，591.29μmol)，將反應混合物脫氣，以H₂吹洗數次，H₂氛圍下，於室溫攪拌3小時。過濾該混合物，濾餅以乙酸乙酯洗滌。濃縮合併之有機層，得到8-乙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(129mg，粗產物)，為黃色油，不需進一步純化即用於下一步驟。

LC-MS：m/z 220.1[M+H]⁺。

步驟2

於0℃，於8-乙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8e2(129mg，0.588mmol)之THF(3mL)溶液中，添加氫氧化鋰(74.1mg，1.77mmol)。於室溫攪拌該混合物12小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。過濾懸浮液，將濾餅真空乾燥，得到8-乙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(112mg，粗產物)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 192.1[M+H]⁺。

步驟3

於室溫，於8-乙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9c2(147mg，0.769mmol)之1,4-二

烷(7mL)溶液中，添加N,N-二乙基乙胺(389.0mg，3.84mmol)與[疊氮(苯氧)磷酸基]氧苯(253.9mg，0.922mmol)。於室溫攪拌該混合物30分鐘。然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(195.5mg，0.999mmol)，於100℃攪拌反應混合物2小時。TLC(二氯甲烷：甲醇=20：1，UV)顯示多數起始原料用盡。濃縮混合物得到殘留物，利用製備型TLC(二氯甲烷：甲醇=20：1)將其純化，得到1-[5-氯-6-(三唑 -2-基)-3-吡啶基]-3-(8-乙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(45.4mg，15.38%產率)，為白色固體。

LC-MS：m/z 384.0[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 9.74(s,1H),8.81(s,1H),8.78(s,1H),8.57(d,J=2.4Hz,1H),8.48(d,J=2.4Hz,1H),8.19-8.16(m,3H),7.68(d,J=2.4Hz,1H),2.99(q,J=7.2Hz,2H),1.28(t,J=7.2Hz,1H)。

實施例50. 1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-(3-氟-8-異丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲

步驟1

於8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7a(540mg，2.00mmol)之H₂O(2.5mL)與1,4-二

烷(10mL)混合溶劑之混合物中，添加磷酸鉀(1.27g，6.00mmol)、2-異丙烯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二

硼烷(403.2mg，2.40mmol)與[1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(146.3mg，199.94μmol)。所得混合物以N₂脫氣，回流攪拌8小時，冷卻至室溫，通過矽膠過濾。固體濾餅以乙酸乙酯(20mL x 3)洗滌，將濾液真空濃縮。殘留物利用矽膠快速管柱層析法(以EtOAc/石油醚，0~50%，v/v洗提)純化，得到8-異丙烯基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(250mg，54.07%產率)，為白色固體。LCMS(ESI⁺)[(M+H)⁺]：231.8。

步驟2

於室溫，H₂氛圍下，攪拌8-異丙烯基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8l(250mg，1.08mmol)與披鈀活性碳(0.1g，1.08mmol)於MeOH(5mL)中之混合物攪拌2小時，通過矽藻土墊過濾。以MeOH洗滌固體濾餅，真空濃縮濾液，得到粗產物8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(180mg，71.38%產率)。LCMS(ESI⁺)[(M+H)⁺]：233.7。

步驟3

於5℃~10℃，於8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8m(90mg，385.83μmol)之MeCN(5mL)溶液中，分數次添加Selecfluor(205.02mg，578.74μmol)。於此溫度攪拌混合物4小時，將其傾入H₂O(20mL)中，以乙酸乙酯(15mL x 2)萃取。合併之有機相以鹽水(20mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥，並予以過濾。真空濃縮濾液，殘留物利用矽膠快速管柱層析法(以於石油醚中10%至50%之乙酸乙酯洗提)純化，得到3-氟-8-異丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(23mg，23.73%產率)，為白色固體。LCMS(ESI⁺)[(M+H)⁺]：251.6。

步驟4

於3-氟-8-異丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8n(23mg，91.54μmol)之THF(0.5mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(11.52mg，274.62μmol)之H₂O(0.2mL)溶液。於室溫攪拌該混合物隔夜並真空濃縮。殘留物以HCl水溶液(2M)酸化至pH 3~4。所得混合物以乙酸乙酯萃取(15mL x 2)，以無水硫酸鈉乾燥合併之有機相並予以過濾。真空濃縮濾液，得到粗產物3-氟-8-異丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(18mg，88.10%產率)。LCMS(ESI⁺)[(M+H)⁺]：223.8。

步驟5

於3-氟-8-異丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9m(18mg，80.64μmol)之1,4-二

烷(4mL)溶液中，添加疊氮膦酸二苯酯(31.4mg，120.97μmol，24.69uL)與TEA(24.5mg，241.93μmol，33.72uL)。於室溫攪拌所得混合物30分鐘，隨後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(15.8mg，80.64μmol)。於100℃攪拌該混合物隔夜，冷卻至室溫，將其傾入水中(10mL)並以乙酸乙酯(15mL x 2)萃取。合併之有機相以無水Na₂SO₄乾燥，並予以過濾。真空濃縮濾液，殘留物利用矽膠快速管柱層析法(以於石油醚中10%至80%之乙酸乙酯洗提)與製備型HPLC純化，得到1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-(3-氟-8-異丙基-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(4.0mg，11.93%產率)，為白色固體。LCMS(ESI⁺)[(M+H)⁺]：416.¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.97(s,1H),8.69(s,1H),8.59(d,J=2.4Hz,1H),8.47(d,J=2.4Hz,1H),8.16(s,2H),7.53(d,J=7.2Hz,1H),3.50(dt,J=13.6,6.8Hz,1H),1.51(d,J=6.8Hz,6H)。

實施例51. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於氯化亞銅(195.1mg，1.97mmol)、三級丁氧化鉀7c(220.7mg，1.97mmol)之攪拌溶液中添加1,10-啡啉(355.06mg，1.97mmol)之DMF(3.0mL)溶液，脫氣並再灌滿N₂三次，於室溫攪拌該深紅色混合物30分鐘，然後緩緩添加三甲基(三氟甲基)矽烷(280.6mg，1.97mmol，313.03uL)。於室溫，進一步攪拌所得混合物1小時，迅速添加8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(300mg，985.13μmol)，脫氣並再灌滿N₂三次，於50℃加熱18小時並經LCMS判斷反應完全，然後冷卻至室溫，以MTBE稀釋並通過矽藻土墊過濾。以MTBE洗滌該矽藻土墊，合併之有機層以鹽水洗滌，以Na₂SO₄乾燥。過濾後，蒸發溶劑，粗混合物利用矽膠管柱層析法純化，使用EA/PE=0：100-1：50為洗提液，得到2-氯-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(80mg，272.45μmol，27.66%產率)，LC-MS：m/z 294[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8o(80mg，272.45μmol)之THF(2.0mL)攪拌溶液中，添加LiOH(0.82mL,1M)，所得混合物於室溫攪拌隔夜，經LCMS判斷反應完全，然後添加3M鹽酸調至pH=2至3，並以EA(20mL)萃取，有機相以鹽水(5mL)洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，得到粗產物2-氯-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(80mg，301.23μmol，110.56%產率)，粗產物直接用於下一步驟不需進一步純化。LC-MS：m/z 266[M+H]⁺。

步驟3

於2-氯-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9n(80mg，301.23μmol)之1,4-二

烷(2.0mL)攪拌溶液中，添加TEA(91.4mg，903.69μmol，125.96uL)與DPPA(124.4mg，451.85μmol，97.91uL)。於室溫攪拌反應混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(88.4mg，451.85μmol)，於100℃攪拌反應混合物隔夜，經LCMS判斷反應完全，冷卻混合物至室溫並蒸發溶劑，粗混合物利用製備型HPLC純化，得到1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[2-氯-8-(三氟甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(20mg，43.65μmol，14.49%產率)，LC-MS：m/z 459[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.12(s,1H),9.26(s,1H),9.07(s,1H),8.61(s,1H),8.56(t,J=0.5Hz,1H),8.47(t,J=1.2Hz,1H),8.17(s,2H)。

實施例52. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(甲氧基甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於2-(溴甲基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(300mg，1.36mmol)之MeOH(6mL)攪拌溶液中，添加CH₃ONa(73.4mg，1.36mmol)。於25℃攪拌反應混合物隔夜，添加冰水(1mL)，並以EtOAc(40mL)萃取，其有機相以鹽水(5mL) 洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，得到粗產物2-(甲氧甲基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(240mg，1.40mmol，102.73%產率)，為白色固體。

步驟2

於8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(339.88mg，1.12mmol)之1,4-二

烷(5.0mL)、H₂O(0.5mL)攪拌溶液中，添加2-(甲氧甲基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(240mg，1.40mmol)、K₃PO₄(888.42mg，4.19mmol)，脫氣並再灌滿N₂三次，添加Pd(dppf)Cl₂．DCM(113.93mg，139.51μmol)並脫氣並再灌滿N₂三次，於90℃加熱混合物4小時並經LCMS判斷反應完全，然後冷卻，以EA稀釋並以鹽水洗滌，以Na₂SO₄乾燥。過濾並蒸發溶劑後，粗混合物利用矽膠管柱層析法純化，使用EA/PE=0：100-1：10作為洗提液，得到2-氯-8-(甲氧甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(80mg，296.64μmol，21.26%產率)，為白色固體。

LC-MS：m/z 270[M+H]⁺。

步驟3

於0℃，於2-氯-8-(甲氧基甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8p(80mg，296.64μmol)之THF(4.0mL)攪拌溶液中，添加LiOH(0.5M，1.2ml)，於0℃攪拌2小時並經LCMS判斷反應完全，然後添加3M鹽酸調至pH=2至3並以EA(20mL)萃取，其有機相以鹽水(5mL)洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，得到粗產物2-氯-8-(甲氧基甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(60mg，248.31μmol，83.71%產率)，LC-MS：m/z 242[M+H]⁺，粗產物直接用於下一步驟不需進一步純化。

步驟4

於2-氯-8-(甲氧基甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9o(60mg，248.31μmol)之1,4-二

烷(4mL)攪拌溶液中，添加TEA(75.4mg，744.94μmol，103.83uL)與DPPA(90.6mg，372.47μmol)。於室溫攪拌反應混合物2小時。然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(58.3mg，297.98μmol)，於100℃攪拌反應混合物2小時並經LCMS判斷反應完全。冷卻混合物至室溫，蒸發溶劑，粗混合物利用製備型HPLC純化，得到1-[2-氯-8-(甲氧基甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(14.0mg，32.24μmol),LC-MS：m/z 435[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.05(s,1H),8.49(d,J=2.3Hz,1H),8.42(d,J=2.3Hz,1H),8.34(s,1H),8.09(s,2H),4.81(s,2H),3.32(s,3H)。

實施例53. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-(甲氧基甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-異丙基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7a(1.5g，5.55mmol)之THF(20mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(699.2mg，16.66mmol)之水(10mL)溶液。於室溫攪拌混合物5小時。去除溶劑後，殘留物以HCl(2M)酸化至pH=3~4。以EtOAc萃取該混合物並乾燥合併之有機相，濃縮，得到8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(1.25g，92.99%產率)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 241.1[M+H]⁺。

步驟2

於8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸17a(1.25g，5.16mmol)之甲苯(15mL)與2-甲基丙-2-醇(10mL)攪拌溶液中，添加三乙胺(2.61g，25.82mmol，、二苯基磷醯基疊氮化物(1.71g，6.20mmol，1.34mL)、三級丁氧羰酐(1.69g，7.75mmol，1.78mL)。於100℃攪拌反應混合物4小時。真空去除溶劑後，殘留物利用快速管柱層析法純化(以己烷類/乙酸乙酯=1：1洗提)，得到N-(8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)胺甲酸三級丁酯(820mg，41.43%產率)，為白色固體。

LC-MS：m/z 313.1[M+H]⁺。

步驟3

於N-(8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)胺甲酸三級丁酯18a(800mg，2.55mmol)之MeOH(10mL)攪拌溶液中，添加三乙胺(1.29g，12.77mmol)、[1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)(186.9mg，0.255mmol)。CO(3MPa)下，於100℃攪拌所得反應混合物16小時。冷卻反應混合物至室溫。真空去除溶劑後，殘留物利用快速管柱層析法(以己烷類/乙酸乙酯=1：1洗提)純化，得到7-(三級丁氧羰胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧酸甲酯(460mg，61.60%產率)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 293.1[M+H]⁺。

步驟4

於0℃，於7-(三級丁氧羰胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧酸甲酯19a(460mg，1.57mmol)之MeOH(10mL)攪拌溶液中，分數次添加硼氫化鈉(297mg，7.87mmol)，於25℃攪拌所得反應混合物16小時。以飽和NH₄Cl猝滅反應並以EtOAc(10mL)萃取該混合物，合併之有機相以鹽水(5mL)洗滌，以無水Na₂SO₄乾燥， 過濾並真空濃縮。粗產物利用快速管柱層析法(DCM/MeOH=20：1)純化，得到N-[8-(羥甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]胺甲酸三級丁酯(300mg，72.13%產率)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 265.1[M+H]⁺。

步驟5

於0℃，於N-[8-(羥甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]胺甲酸三級丁酯19b(300mg，1.14mmol)之MeOH(5.00mL)攪拌溶液中，添加亞硫醯氯(1.35g，11.35mmol)，然後於60℃攪拌所得反應混合物16小時。真空去除溶劑後，殘留物利用快速管柱層析法(以DCM/MeOH=10：1洗提)純化，得到7-胺基咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧酸甲酯(90mg，41.05%產率)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 179.1[M+H]⁺。

步驟6

於5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺10a(90mg，468.33μmol)之甲苯(10mL)攪拌溶液中，添加三乙胺(153mg，1.52mmol)、碳酸雙(三氯甲基)酯(74.9mg，0.252mmol)。於100℃攪拌反應混合物2小時，然後，於0℃，添加8-(甲氧甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-胺19b(90mg，0.505mmol)之DCM(2.00mL)溶液，於室溫攪拌反應混合物2小時。真空去除溶劑後，殘留物利用快速管柱層析法(以DCM：MeOH=30：1洗提)純化，得到1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[8-(甲氧基甲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(17.8mg，8.82%產率)，為白色固體。

LC-MS：m/z 400.1[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 10.30(s,1H),9.04(s,1H),8.77(s,1H),8.55(d,J=2.4Hz,1H),8.50(d,J=2.4Hz,1H),8.22(d,J=1.2Hz,1H),8.16(s,2H),7.69(d,J=1.2Hz,1H),4.94(s,2H),3.39(s,3H)。

實施例54. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(環丙基胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用環丙胺代替氧雜環丁烷-3-胺作為起始原料，以類似製備實施例21所述程序製備實施例54。

LC-MS：m/z 445.0[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 9.68(s,1H),8.58(d,J=2.4Hz,1H),8.44(d,J=2.4Hz,1H),8.36(s,1H),8.19(s,1H),8.14(s,2H),8.06(s,1H),7.18(s,1H),3.36-3.29(m,1H),0.76-0.69(m,4H)。

實施例55. N-(7-(3-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)脲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基)乙醯胺之合成

步驟1

於8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7a(4g，14.81mmol)之THF(50mL)與水(30mL)溶液中，添加LiOH(1.24g，29.62mmol)。於室溫攪拌所得混合物10分鐘。TLC顯示反應完成。以1M HCl酸化該混合物至pH=6，以EtOAc萃取。乾燥合併之有機層，過濾及濃縮，得到8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(3.26g，13.47mmol，91%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 241.9[M+H]⁺。

步驟2

使8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸17a(3.26g，13.47mmol)、[疊氮(苯基)磷醯基]苯(3.93g，16.16mmol)、N,N-二乙基乙胺(6.81g，67.35mmol，9.39mL)、Boc₂O(14.70g，67.35mmol)於甲苯(25mL)與2-甲基丙-2-醇(25mL)中之混合物脫氣並再灌滿N₂(三次)。於100℃加熱混合物12小時後，LCMS顯示反應完成。濃縮該混合物，以EA(100mL)稀釋殘留物，以鹽水(40mLx2)洗滌，並乾燥。濃縮有機層，粗產物利用快速矽膠層析法(石油醚/乙酸乙酯=2/1)純化，得到N-(8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)胺甲酸三級丁酯(2.3g，55%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 315.0[M+H]⁺。

步驟3

於N-(8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)胺甲酸三級丁酯18a(850mg，2.71mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(15mL)溶液中，添加Cs₂CO₃(1.77g，5.43mmol)。於80℃攪拌所得混合物2小時。TLC顯示反應完成。以EA(50mL)稀釋該混合物並予以過濾。濾液以飽和NH₄Cl(20mL)、1M LiCl(20mLx2)洗滌，並濃縮。殘留物利用矽膠管柱層析法純化(石油醚/乙酸乙酯=3/1)，得到N-(8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]胺甲酸三級丁酯(1.1g，94%產率)，為白色固體。

LC-MS：m/z 433.1[M+H]⁺。

步驟4

使N-(8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]胺甲酸三級丁酯18b(1.1g，2.54mmol)、乙醯胺(299mg，5.08mmol)、Cs₂CO₃(1.65g，5.08mmol)、Pd₂(dba)₃(465mg，507.73μmol)與黃磷(587mg，1.02mmol)於1,4-二

烷(20mL)中之混合物脫氣並以N₂回填(三次)。混合物於100℃加熱12小時後，LCMS顯示反應完成。過濾去除沉澱物並濃縮濾液。殘留物利用製備型TLC純化，得到 N-(8-乙醯胺基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]胺甲酸三級丁酯(600mg，57%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 412.2[M+H]⁺。

步驟5

於室溫，攪拌N-(8-乙醯胺基咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]胺甲酸三級丁酯19c(600mg，1.46mmol)之TFA(5mL)溶液12小時。濃縮該混合物，殘留物以DCM(30mL)稀釋，以飽和NaHCO₃(15mLx2)洗滌，然後濃縮，得到粗產物，利用矽膠層析法(DCM/MeOH=20/1)將其純化，得到N-(7-胺基咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基)乙醯胺(180mg，65%產率)，為黃色固體。LC-MS：m/z 192.1[M+H]⁺。

步驟6

於80℃，攪拌N-(7-胺基咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基)乙醯胺20b(50mg，0.261mmol)與N-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]胺甲酸苯酯(99mg，0.314mmol)之DMF溶液12小時。LCMS顯示反應完全。以EtOAc(15mL)稀釋該混合物，以1M LiCl洗滌並濃縮。殘留物利用製備型HPLC純化，得到N-[7-[[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]胺甲醯胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基]乙醯胺(23.8mg，22%產率)，為白色固體。LC-MS：m/z 413.1[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)：δ 10.90(s,1H),10.41(s,1H),8.83(s,1H),8.54(d,J=2.4Hz,1H),8.45(d,J=2.4Hz,1H),8.26(s,1H),8.15(s,3H),7.70(s,1H),2.30(s,3H)。

實施例56. 2-氯-7-(3-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)脲基)-N,N-二甲基咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧醯胺之合成

步驟1

於7-(三級丁氧基羰胺基)-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧酸甲酯19d1(200mg，612.12μmol)之THF(4.0mL)攪拌溶液中，添加LiOH(1.0M，1.8mL)，攪拌2小時並經LCMS判斷反應完全，然後添加3M HCl以調至pH=2至3並以EA(40mL)萃取，其有機相以鹽水(5mL)洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，得到7-(三級丁氧基羰胺基)-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧酸(190mg，607.59μmol，99.26%產率)，LC-MS：m/z 313[M+H]⁺，粗產物直接用於下一步驟不需進一步純化。

步驟2

於7-(三級丁氧基羰胺基)-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧酸19d2(190mg，607.59μmol)之DMF(2.0mL)攪拌溶液中，添加二甲胺鹽酸鹽(99.1mg，1.22mmol)、HATU(462mg，1.22mmol)、DIEA(471mg，3.65mmol)，攪拌4.0小時，經LCMS判斷反應完全，添加4.0mL水，以EA(40mL)萃取，有機相以鹽水(5mL)洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，粗混合物利用矽膠管柱層析法純化，使用EA/PE=0：100-1：10作為洗提液，得到N-[2-氯-8-(二甲基胺甲醯基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]胺甲酸三級丁酯(150mg，441.47μmol，72.66%產率)，LC-MS：m/z 340[M+H]⁺。

步驟3

於N-[2-氯-8-(二甲基胺甲醯基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]胺甲酸三級丁酯19d3(150mg，441.47μmol)攪拌溶液中，添加HCl/EA(1.0M，5mL)，所得混合物攪拌隔夜，以Na₂CO₃調到pH=9至10並以EA(40mL)萃取，其有機相以鹽水(5mL)洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，得到7-胺基-2-氯-N,N-二甲基-咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧醯胺(100mg，417.26μmol，94.52%產率)，LC-MS：m/z 240[M+H]⁺，粗產物直接用於下一步驟不需進一步純化。

步驟4

於7-胺基-2-氯-N,N-二甲基-咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧醯胺20c(50mg，208.63μmol)之DMF(4.0mL)攪拌溶液中，添加CDI(120mg，834.51μmol)與TEA(126.7mg，1.25mmol，174.47uL)，於80℃加熱反應混合物4小時，冷卻至40℃。於其內添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(40.8mg，208.63μmol)。此混合物於80℃加熱隔夜，冷卻至室溫並以EA(40mL)稀釋，其有機相以鹽水(5mL)洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，粗混合物利用製備型HPLC純化，得到2-氯-7-[[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]胺甲醯胺基]-N,N-二甲基-咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧醯胺(6.0mg，13.01μmol，6.23%產率)。LC-MS：m/z 462[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.16(s,1H),8.55(d,J=2.3Hz,1H),8.47(d,J=2.3Hz,1H),8.44(s,1H),8.16(s,2H),3.12(s,3H),2.89(s,3H)。

實施例57. 2-氯-7-(3-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)脲基)咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧酸之合成

步驟1

於微波瓶中添加8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(300mg，985.13μmol)、草酸二乙酯(172.8mg,1.18mmol，159.96uL)、N,N-二甲基吡啶-4-胺(144.4mg，1.18mmol)與EtOH(6.0mL)，N₂下，攪拌反應混合物10分鐘，添加氯化雙(三苯膦)鈀(II)(69.2mg，98.51μmol)，微波輻射下，於120℃加熱0.5小時。令混合物冷卻至室溫。過濾並蒸發溶劑後，粗混合物利用矽膠管柱層析法純化，使用EA/PE=0：100-100：0作為洗提液，得到2-氯-7-乙氧羥基-咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧酸(190mg，704.64μmol，71.53%產率)，LC-MS：m/z 270[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-7-乙氧羥基-咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧酸8q(100mg，370.86μmol)之THF(2.0mL)攪拌溶液中，添加LiOH(1.0M，1.0ml)，攪拌混合物5小時，經LCMS判斷反應完全，然後添加3M鹽酸調至pH=2至3並以EA(40mL)萃取，有機相以鹽水(5mL)洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，得到2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7,8-二羧酸(85mg，351.84μmol，94.87%產率)，LC-MS：m/z 242[M+H]⁺，粗產物直接用於下一步驟不需進一步純化。

步驟3

於2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7,8-二羧酸9q(85mg，351.84μmol)之1,4-二

烷(2.0mL)攪拌溶液中，添加DPPA(128.3mg，527.76μmol)與TEA(106.8mg，1.06mmol，147.12uL)。於室溫攪拌反應混合物2小時。然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(82.6mg，422.21μmol)，於100℃加熱4小時，經LCMS判斷反應完全，添加1.0mL冰水，以EA(40mL)萃取，有機相以鹽水(5mL)洗滌，以Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮，粗混合物利用製備型HPLC純化，得到2-氯-7-[[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]胺甲醯胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-8-羧酸(9.0mg，20.73μmol，5.89%產率)，為白色固體，LC-MS：m/z 435[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.11(d,J=8.6Hz,1H),8.47(d,J=2.3Hz,1H),8.42(d,J=2.3Hz,1H),8.31(d,J=10.2Hz,1H),8.09(s,2H)。

實施例58. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸酯作為起始物質，以類似製備實施例10所述程序製備實施例58。

LC-MS：m/z 356.0；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )：δ 9.79(s,1H),8.59(s,1H),8.62-8.59(m,2H),8.47-8.46(m,1H),8.17-8.16(m,4H),7.66(s,1H)。

實施例59. 1-(8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(5-氯-6-甲氧吡啶-3-基)脲之合成

藉由使用8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸酯作為起始物質，以類似製備實施例10所述程序製備實施例59。

LC-MS：m/z 430.8[M+H]⁺。

實施例60. 1-(8-胺基-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)脲之合成

藉由使用8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸酯作為起始物質，以類似製備實施例10所述程序製備實施例60。

LC-MS：m/z 405[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.20(s,1H),8.85(s,1H),8.60(d,J=2.2Hz,1H),8.45(d,J=2.2Hz,1H),8.19(s,1H),8.17(s,1H),8.14(s,2H),6.98(s,2H)。

實施例61至63. 1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲/(S)-1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲/(R)-1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲之合成

步驟1

於室溫，於N-(8-溴咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)胺甲酸三級丁酯18a(10.36g，33.08mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(50mL)溶液中，添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫烷(23.90g，66.17mmol，22.33mL)，隨後於N₂下，添加氯化雙(三苯膦)鈀(II)(2.32g，3.31mmol)。所得反應混合物於100℃攪拌3小時。反應完全後，濃縮混合物，殘留物利用快速管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯3：1)純化，得到N-[8-(1-乙氧基乙烯基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]胺甲酸三級丁酯(10.06g，99%產率)，為黃色油。

LC-MS：m/z 305[M+H]⁺。

步驟2

於N-[8-(1-乙氧基乙烯基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]胺甲酸三級丁酯19e(2g，6.57mmol)之二

烷(20mL)溶液中，添加HCl/二

烷(20mL)。於80℃攪拌混合物2小時，然後真空去除溶劑。接著添加HCl/水(20mL)，於80℃攪拌混合物2小時。然後以Na₂CO₃(aq)鹼化混合物至pH~8，過濾固體，乾燥，得到化合物1-(7-胺基咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基)乙酮(1.15g，99.33%產率)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 177[M+H]⁺。

步驟3

於0℃，於1-(7-胺基咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基)乙酮20d(4.8g，27.25mmol)之甲醇(60mL)溶液中，添加硼氫化鈉(2.06g，54.49mmol，1.93mL)。於室溫攪拌混合物4小時。反應完全後，以水(50mL)稀釋反應混合物並以EtOAc(3×250mL)萃取。合併之有機相以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並真空濃縮。粗產物利用快速層析法(DCM/MeOH 15：1)純化，得到1-(7-胺基咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基)乙醇(3.84g，79%產率)，為灰色固體。

LC-MS：m/z 179[M+H]⁺。

步驟4

於室溫，於1-(7-胺基咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基)乙醇21a(4g，22.45mmol)之甲醇(45.00mL)溶液中，添加亞硫醯氯(2.4mL)，於50℃攪拌混合物隔夜。反應完全後，濃縮反應混合物，利用快速層析法(DCM/MeOH 30：1)純化，得到8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-胺(3.6g，83%產率)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 193[M+H]⁺。

步驟5

於室溫，於8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-胺22a(10g，52.02mmol)之THF(200mL)溶液中添加N-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]胺甲酸苯酯(17.25g，54.63mmol)。此混合物於80℃攪拌3小時，LCMS顯示用盡大部分起始原料。去除溶劑，粗產物利用快速層析法(DCM/MeOH 30：1)純化，得到1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(61)(15g，69.67%產率)，為白色固體。

利用具如下條件(Daicel Chiralpak、IG 4.6mm*250mm*5um、於EtOH中之5至50%Hex、1.0mL/min)之Prep-Chiral-SFC，手性分離化合物(61)。將諸區分蒸發至乾，得到所需化合物。

峰1：(S)-1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(62)或(R)-1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(63)。

滯留時間：6.146分鐘；ee(%)：>99%，

(0.5，CH₃OH)；

峰2：(R)-1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(63)或(S)-1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(62)。

滯留時間：7.681分鐘，ee：>99%；

(0.5，CH₃OH)；LC-MS：m/z 414[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 10.60(s,1H),9.12(s,1H),8.81(s,1H),8.55(d,J=2.4Hz,1H),8.50(d,J=2.4Hz,1H),8.20(d,J=1.6Hz,1H),8.16(s,2H),7.67(d,J=1.2Hz,1H),5.33(q,J=6.8Hz,1H),3.34(s,3H),1.56(d,J=6.4Hz,3H)。

實施例64至66：1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲/(S)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲/(R)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1：

於8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(31g，102.3mmol)之THF(500mL)溶液中，添加氫氧化鋰一水合物(8.6g，204.6mmol)之水200mL)溶液。於室溫攪拌所得混合物10分鐘。反應混合物以HCl(1N)調至pH=3~4予以猝滅，將其以EtOAc萃取，乾燥合併之有機相，濃縮，得到8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(28g，99.6%)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 276[M+H]⁺。

步驟2：

於8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸17c(28g，101.8mmol)之三級丁醇(280mL)與甲苯(300mL)溶液中，添加二苯基磷醯基疊氮化物(39.2g，142.5mmol)、三乙胺(51.5g，509mmol)與二碳酸二(三級丁酯)(66.58g，305.4mmol)。於100℃攪拌反應混合物4小時。LC-MS顯示耗盡起始原料並檢測到所需質量。濃縮後，所得殘留物利用快速管柱層析法(以於石油中0%至10%之乙酸乙酯洗提)純 化，得到(8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)胺甲酸三級丁酯(19.4g，產率：55.1%)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 347[M+H]⁺。

步驟3：

於室溫，於(8-溴-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)胺甲酸三級丁酯18c(7.75g，22.4mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(100mL)溶液中，添加三丁基(1-乙氧乙烯基)錫烷(16.22g，44.8mmol)，將所得混合物脫氣並與N₂交換兩次，添加氯化雙(三苯膦)鈀(II)(3.14g，4.48mmol)。於100℃攪拌反應混合物4小時。LC-MS顯示耗盡起始原料並檢測到所需質量。濃縮後，所得殘留物利用矽膠管柱層析法，以於石油醚中之0%至10%乙酸乙酯洗提予以純化，得到(2-氯-8-(1-乙氧基乙烯基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)胺甲酸三級丁酯(5.9g，產率：77.9%)，為白色固體。

LC-MS：m/z 339[M+H]⁺。

步驟4：

於(2-氯-8-(1-乙氧基乙烯基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)胺甲酸三級丁酯19f(5.9g，17.46mmol)之1,4-二

烷(100mL)溶液中，添加HCl/1,4-二

烷(30mL)。於80℃攪拌反應混合物2小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮反應混合物，殘留物以三乙胺鹼化至pH~7至8。濃縮後，殘留物利用矽膠管柱層析法，以於石油醚中0%至30%之乙酸乙酯洗提予以純化，得到1-(7-胺基-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基)乙酮(2.0g，產率：54.5%)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 211[M+H]⁺。

步驟5：

0℃，於1-(7-胺基-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基)乙酮20e(2.0g，9.52mmol)之甲醇(50mL)溶液中，添加NaBH₄(1.08g.28.57mmol)。於室溫攪拌所得混合物4小時。反應完全後，濃縮混合物，殘留物利用快速層析法，以甲醇/二氯甲烷=10/1洗提予以純化，得到1-(7-胺基-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基)乙醇(1.94g，產率：96%)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 213[M+H]⁺。

步驟6：

0℃，於1-(7-胺基-2-氯咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基)乙醇21c(1.94g，9.151mmol)之甲醇(60mL溶液中，添加SOCl₂(12mL)。所得混合物於50℃攪拌隔夜。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮所得混合物，殘留物利用矽膠管柱層析法，以於石油醚中0%至30%之乙酸乙酯洗提予以純化，得到2-氯-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-胺(1.7g，產率：82.1%)，為黃色固體。

LC-MS：m/z 227[M+H]⁺。

步驟7：

於2-氯-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-胺22c(300mg，1.327mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(14mL)溶液中，添加(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)胺甲酸苯酯23a(752.6mg，2.389mmol)。微波輻射下，於90℃加熱所得混合物8小時。耗盡起始原料並以LC-MS檢測到所需質量。濃縮混合物，殘留物利用快速層析法(以甲醇/二氯甲烷：20/1洗提)純化，得到1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(64)(401mg，產率：67.6%)，為白色固體。

利用具如下條件(Daicel Chiralpak、IG 4.6mm*250mm*5um、於EtOH中之5至50%Hex、1.0mL/min)之Prep-Chiral-SFC，手性分離化合物(64)。將諸區分蒸發至乾，得到所需化合物。

峰1：(S)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(65)或(R)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(66)。

滯留時間：10.280分鐘，ee(%)：>99%。

峰2：(R)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(66)或(S)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(65)。

滯留時間：11.856分鐘，ee(%)：>99%。

LC-MS：m/z 448[M+H]⁺。LC-MS：m/z 448[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz；DMSO-d6)：δ 10.62(s,1 H),9.21(s,1 H),8.85(s,1 H),8.55(d,J=2.4Hz,1 H),8.49(d,J=2.0Hz,1 H),8.39(s,1 H),8.15(s,2 H),5.19-5.24(m,1 H),3.34(s,3 H),1.55(d,J=6.8Hz,3 H)。

實施例67. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(2-氯-8-(1-(二甲胺基)乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

步驟1

於8-乙醯基-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8r(50mg，0.187mmol)之甲醇(3mL)溶液中，添加N-甲基甲胺(25.3mg，0.56mmol)與氰基硼氫化鈉(23.5 mg，0.374mmol)。於室溫攪拌反應混合物隔夜。LC-MS顯示耗盡起始原料並檢測到所需質量。濃縮反應混合物，所得殘留物利用矽膠管柱層析法，以於石油醚中之0%至100%乙酸乙酯洗提予以純化，得到2-氯-8-[1-(二甲胺基)乙基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(36mg，71.72%產率)。

LC-MS：m/z 269[M+H]⁺。

步驟2

於2-氯-8-[1-(二甲胺基)乙基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9r(36mg，0.134mmol)之1,4-二

烷(3mL)溶液中，添加二苯基磷醯基疊氮化物(44.3mg，0.161mmol)與三乙胺(67.8mg，0.67mmol)。於室溫攪拌反應混合物30分鐘，然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(39.3mg，0.2mmol)。加熱反應混合物至100℃ 2小時。LC-MS顯示耗盡起始原料並檢測到所需質量。將其濃縮，利用矽膠管柱層析法，以於石油醚中之0%至100%乙酸乙酯洗提予以純化，得到1-[2-氯-8-[1-(二甲胺基)乙基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(5.7mg，9.22%產率)，為白色固體。

LC-MS：m/z 461[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )：δ 10.59(s,2H),9.24(s,1H),8.60(d,J=2.0Hz,1H),8.50(d,J=2.4Hz,1H),8.35(s,1H),8.15(s,2H),4.10-4.05(m,1H),2.30(s,6H),1.39(d,J=6.4Hz,3H)。

實施例68. N-[7-[[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]胺甲醯胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-8-基]乙醯胺之合成

藉由使用2-(三氟甲基)吡啶-4-胺作為起始物質，以類似製備實施例3所述程序製備實施例68。

LC-MS：m/z 385[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 9.99(brs,1H),8.95(brs,1H),8.86(s,1H),8.56(d,J=5.2Hz,1H),8.38(s,1H),8.07(d,J=1.6Hz,1H),7.62(dd,J=2.0,5.6Hz,1H),2.93(q,J=7.6Hz,2H),1.24(t,J=7.6Hz,3H)。

實施例69至71. 1-(5-氯-6-甲氧基-3-吡啶基)-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲/(S)-1-(5-氯-6-甲氧基-3-吡啶基)-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲/(R)-1-(5-氯-6-甲氧基-3-吡啶基)-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲之合成

實施例69至71係以類似製備實施例61至63所述程序，藉由使用5-氯-6-甲氧-吡啶-3-胺作為起始物料予以製備。

得到標題化合物1-(5-氯-6-甲氧基-3-吡啶基)-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(69)(30mg，21.04%產率)，為白色固體。

LC-MS：m/z 377[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz；DMSO-d6)：δ 9.95(s,1H),9.12(s,1H),8.59(s,1H),8.17(d,J=1.6Hz,2H),8.13(d,J=2.4Hz,1H),7.63(d,J=0.8Hz,1H),5.33-5.30(m,1H),3.92(s,3H),3.31(s,3H),1.53(d,J=6.4Hz,3H)。

利用具如下條件(管柱：Eclipse XDB-C18、管柱大小：4.6*150mm*5um、移動相：B(CAN)、A(0.1%TFA))之Prep-Chiral-SFC，手性分離化合物(69)。將諸區分蒸發至乾，得到所需化合物。

峰1：(S)-1-(5-氯-6-甲氧基-3-吡啶基)-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(70)或(R)-1-(5-氯-6-甲氧基-3-吡啶基)-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(71)。

滯留時間：9.290分鐘，ee>99%。

峰2：(R)-1-(5-氯-6-甲氧基-3-吡啶基)-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(71)或(S)-1-(5-氯-6-甲氧基-3-吡啶基)-3-[8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(70)。

滯留時間：9.305分鐘，ee>99%。

LC-MS：m/z 377[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz；DMSO-d6)：δ 9.95(s,1H),9.11(s,1H),8.59(s,1H),8.16(d,J=1.6Hz,2H),8.13(d,J=2.4Hz,1H),7.63(d,J=0.8Hz,1H),5.33-5.30(m,1H),3.92(s,3H),3.31(s,3H),1.53(d,J=6.4Hz,3H)。

實施例72. 1-(8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)脲之合成

藉由使用6-(三氟甲基)吡啶-3-胺作為起始物質，以類似製備實施例61所述程序製備實施例72。

LC-MS：m/z 381[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 10.63(s,1H),9.08(s,1H),8.77(s,1H),8.58(d,J=5.6Hz,1H),8.20(d,J=1.2Hz,1H),8.07(d,J=1.6Hz,1H),7.67(d,J=1.2Hz,1H),7.63(dd,J=2.0,5.6Hz,1H),5.31(q,J=6.8Hz,1H),3.32(s,3H),1.54(d,J=6.8Hz,3H)。

實施例73. 1-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)-3-(8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用6-(二氟甲基)吡啶-3-胺作為起始物質，以類似製備實施例61所述程序製備實施例73。

LC-MS：m/z 363[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 10.49(s,1H),9.08(s,1H),8.73(s,1H),8.50(d,J=6.0Hz,1H),8.20(d,J=1.2Hz,1H),7.89(d,J=1.6Hz,1H),7.66(d,J=1.2Hz,1H),7.54(d,J=5.2Hz,1H),5.31(q,J=6.8Hz,1H),3.32(s,3H),1.55(d,J=6.8Hz,3H)。

實施例74至76. 1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-(1-乙氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲/(S)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-(1-乙氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲/(R)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-(1-乙氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用不同起始物質，以類似製備實施例61至63所述程序製備實施例74至76。

LC-MS：m/z 428[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 10.58(s,1H),9.11(s,1H),8.76(s,1H),8.57(d,J=2.4Hz,1H),8.50(d,J=2.0Hz,1H),8.20(d,J=0.8Hz,1H),8.16(s,2H),7.66(d,J=1.2Hz,1H),5.44(q,J=6.4Hz,1H),3.53(m,2H),1.56(d,J=6.4Hz,3H),1.21(q,J=8.8Hz,3H)。

利用具如下條件(管柱：Daicel Chiralpak、IG 4.6mm*250mm*5um、於EtOH中之5至50% Hex、1.0mL/min)之Prep-Chiral-SFC，手性分離化合物(74)。將諸區分蒸發至乾，得到所需化合物。

峰1：(S)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-(1-乙氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(75)或(R)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-(1-乙氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(76)。

滯留時間：6.18分鐘；ee>99%。

峰2：(R)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-(1-乙氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(76)或(S)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-(1-乙氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲(75)。

滯留時間：7.70分鐘；ee>99%。

實施例77. (S)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

於微波管中，攪拌1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[8-[(1S)-1-甲氧基乙基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(100mg，241.65μmol，得自實施例61至63之峰1)、 碳酸銀(2.0mg，12.08μmol)、與四氟硼酸鹽氟試劑(selectfluor)(34.2mg，96.66μmol)之乙腈(10mL)混合物。將反應管密封，微波輻射下，於85℃加熱，攪拌1小時。通過矽藻土墊以CH₂Cl₂過濾反應混合物，真空濃縮合併之有機層。所得混合物利用矽膠層析法(以於CH₂Cl₂中0至20%之MeOH洗提)，得到粗產物，然後以製備型HPLC(移動相：ACN-H₂O(0.05% HCO₂H)；梯度：40)純化，得到1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[3-氟-8-[(1S)-1-甲氧基乙基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(12.5mg，28.95μmol，11.98%產率)。

LC-MS：m/z 431.8[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.64(s,1H),9.18(s,1H),8.84(s,1H),8.56(d,J=2.3Hz,1H),8.51(d,J=2.3Hz,1H),8.17(s,2H),7.50(d,J=7.1Hz,1H),5.28(q,J=6.7Hz,1H),3.33(s,3H),1.56(d,J=6.7Hz,3H)。

實施例78. (R)-1-(5-氯-6-(2H-1,2,3-三唑-2-基)吡啶-3-基)-3-(3-氟-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)脲之合成

藉由使用1-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]-3-[8-[(1R)-1-甲氧基乙基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]脲(得自實施例61至63之峰2)作為起始物質，以類似製備實施例77所述程序製備實施例78。

LC-MS：m/z 431.8[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 10.63(s,1H),9.19(s,1H),8.82(s,1H),8.56(d,J=2.3Hz,1H),8.51(d,J=2.3Hz,1H),8.17(s,2H), 7.52(d,J=7.0Hz,1H),5.28(q,J=6.7Hz,1H),3.34(s,3H),1.56(d,J=6.7Hz,3H)。

實施例79. 1-(2-氯-8-(1-甲氧基乙基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基)-3-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)脲之合成

藉由使用2-(三氟甲基)吡啶-4-胺作為起始物質，以類似製備實施例61所述程序製備實施例78。

LC-MS：m/z 415[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz；DMSO-d6)：δ 10.68(s,1H),9.17(s,1H),8.83(s,1H),8.58(d,J=5.6Hz,1H),8.40(s,1H),8.06(s,1H),7.63-7.61(m,1H),5.22-5.17(m,1H),3.32(s,3H),1.53(d,J=6.8Hz,3H)。

實施例80. 1-[2-氯-8-[甲基(甲磺醯基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲之合成

步驟1

使8-溴-2-氯-咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯7c(300mg，985.13μmol)、甲磺醯胺(140.6mg，1.48mmol)與碳酸二銫(641.9mg，1.97mmol)之1,4-二

烷(10 mL)混合物脫氣並再灌滿N₂(三次)。於90℃加熱該混合物並攪拌12小時。TLC顯示反應完全。以EA(50mL)稀釋該混合物，以飽和NH₄Cl(15mL x 2)洗滌並濃縮。殘留物利用快速矽膠層析法(以己烷/乙酸乙酯=1/1洗提)純化，得到2-氯-8-(甲磺醯胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(230mg，產率：73%)，為白色固體。

LC-MS：m/z 319.0[M+H]⁺。

步驟2

於室溫，於2-氯-8-(甲磺醯胺基)咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8s(120mg，0.376mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(5mL)溶液中，添加碳酸鉀(104mg，0.753mmol)與碘甲烷(267mg，1.88mmol)，於80℃攪拌所得混合物2小時。LC-MS顯示反應完全。以乙酸乙酯(20mL)稀釋該混合物，以1N LiCl洗滌並濃縮。殘留物利用快速矽膠管柱層析法(以己烷類/乙酸乙酯=2/1洗提)純化，得到2-氯-8-[甲基(甲磺醯基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯(120mg，產率：96%)，為白色固體。

LC-MS：m/z 333.0[M+H]⁺。

步驟3

於2-氯-8-[甲基(甲磺醯基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸乙酯8t(120mg，0.36mmol)之THF(3mL)與水(1mL)溶液中，添加氫氧化鋰(34.5mg，1.44mmol)，於室溫攪拌反應12小時。TLC顯示反應完全。減壓去除溶劑，使殘留物溶於水(10mL)中。The溶液以1N HCl酸化該溶液至pH=6.0。過濾形成之沉澱，乾燥，得到2-氯-8-[甲基(甲磺醯基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸(85mg，77%產率)，為黃色固體，直接用於下一步驟。

LC-MS：m/z 305.1[M+H]⁺。

步驟4

於室溫，於2-氯-8-[甲基(甲磺醯基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-羧酸9s(85mg，0.279mmol)之1,4-二

烷(5mL)溶液中，添加[疊氮(苯氧基)磷醯基]氧基苯(99.8mg，0.363mmol)與N,N-二乙基乙胺(141.1mg，1.39mmol)。所得混合物於此溫度攪拌30分鐘。然後添加5-氯-6-(三唑-2-基)吡啶-3-胺(81.9mg，0.418mmol)並於100℃攪拌混合物2小時。LC-MS顯示反應完全，以EA(20mL)猝滅，以飽和NH₄Cl(10mL x 2)洗滌。濃縮有機層，殘留物利用製備型TLC(DCM：MeOH=20：1)純化，得到粗產，，利用製備型HPLC將其純化，得到1-[2-氯-8-[甲基(甲磺醯基)胺基]咪唑并[1,2-b]嗒

-7-基]-3-[5-氯-6-(三唑-2-基)-3-吡啶基]脲(8.9mg，6%產率)，為白色固體。

LC-MS：m/z 497.0[M+H]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )：δ 10.50(s,1H),9.43(s,1H),9.01(s,1H),8.55(d,J=2.4Hz,1H),8.50(d,J=2.0Hz,1H),8.48(s,1H),8.17(s,2H),3.40(s,3H),3.33(s,3H)。

Claims (24)

1. 一種結構式(I)所示之化合物或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，

   

   其中

   A環為

   

   或

   

   ；

   Z為O、NR₆、或S；

   A₁與A₂各自獨立地為CR₁或N；

   R₁之各情況為氫；鹵素；-OH；CN；-COOC_1-6烷基；視需要經鹵素取代之C_1-6烷氧基；C_1-6烷氧基羰基；苯基；胺基；N,N-二-C_1-6烷基胺基；視需要經鹵素、苯基、或具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜環取代之C_1-6烷基，該雜環之環視需要經C_1-6烷基取代；Rh；ORh；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經胺基、視需要經胺基或羥基取代之C_1-6烷基、或經N-單-C_1-6烷基胺基羰基或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基取代；其中

   Rh為具有選自N、O與S之1至4個雜原子之5至6員雜環，該環視需要經C_1-6烷基、-OH、或側氧基取代，

   R₂之各情況為氫；鹵素；CN；-COOC_1-6烷基；視需要經鹵素取代之C_1-6烷氧基；C_1-6烷氧基羰基；胺基；N,N-二-C_1-6烷基胺基；視需要經鹵素、-OH、苯基、或具有選自N與O之1至2個雜原子之5至6員雜環取代之C_1-6烷基，該 雜環之環視需要經C_1-6烷基取代；Rh；ORh；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經胺基、視需要經胺基或羥基取代之C_1-6烷基、或經N-單-C_1-6烷基胺基羰基或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基取代；

   R₃之各情況為H；氘；鹵素；CN；-OH；-COOH；-NR_aR_b；-SR_c；-SO₂R_c；-SO₂NR_c；-C(=O)NR_aR_b；視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷基、-NH₂、-NHC(=O)C_1-6烷基、N-二-C_1-6烷基胺基、或N-單-C_1-6烷基胺基取代之C_1-6烷氧基；視需要經鹵素、C_2-6烯基、-OH、-NH₂、-NHC(=O)C_1-6烷基、N-二-C_1-6烷基胺基、N-單-C_1-6烷基胺基、-O-Rg、Rg、苯基、或C_1-6烷氧基取代之C_1-6烷基，其中該烷氧基視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷氧基、N,N-二-C_1-6烷基胺基、Rg或苯基取代；視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷基、N,N-二-C_1-6烷基胺基或C_1-6烷氧基-C_1-6烷基取代之C_3-6環烷基；視需要經鹵基或C_1-6烷氧基取代之苯基；具有選自N與O之1至3個雜原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經可視需要經胺基或-OH取代之C_1-6烷基取代；Rg；或N,N-二-C_1-6烷基胺基羰基；其中

   Rg為具有選自N與O之1至3個雜原子之3至6員雜環，該環視需要經-OH、-NH₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷氧基-羰基取代；

   R_a獨立地為H或視需要經C_1-6烷氧基取代之C_1-6烷基，R_b獨立地為H、C_1-6烷基、-COC_1-6烷基、-SO₂C_1-6烷基、C_3-6環烷基或具有選自N與O之1至3個雜原子之3至6員雜環，該環視需要經C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷氧基-羰基取代、或

   R_a與R_b和與其連接的氮原子一起，形成具有選自N、O、與S之1至3個雜原子之4至6員雜環，該環視需要經-OH、-NH₂、N-二-C_1-6烷基胺基、N-單- C_1-6烷基胺基、C_1-6烷基、C_1-6鹵烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6鹵烷氧基、O-環丙基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、或C_1-6烷基-羰基取代；

   R_c之各情況為C_1-6烷基或C_3-6環烷基；

   其中由R_a、R_b、或R_c所示或由R_a、R_b、或R_c所示基團中之烷基視需要經鹵素、-OH、C_1-2烷氧基、或C_3-4環烷基取代；

   R₄之各情況為H、氘、鹵素、CN、C_1-6烷基、或C_1-6鹵烷基；

   R₄’之各情況為H、氘、F、或Cl；

   R₅之各情況為H、氘、C_1-6烷基、或C_1-6鹵烷基；及

   R₆為H；OH；視需要經鹵素、OH、或C_1-6烷氧基取代之C_1-6烷基；或視需要經鹵素、OH、或C_1-6烷氧基取代之C_3-6環烷基。
2. 如請求項1所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中Z為O。
3. 如請求項1或2所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中A環為

   

   。
4. 如請求項1至3中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中R₃之各情況為H；鹵素；CN；-OH；-COOH；-NR_aR_b；-SR_c；-SO₂R_c；-SO₂NR_c；-C(=O)NR_aR_b；視需要經鹵素、-OH、C_1-6烷基、-NH₂、-NHC(=O)C_1-6烷基、N-二-C_1-6烷基胺基、或N-單-C_1-6烷基胺基取代之C_1-4烷氧基；視需要經鹵素、C_1-2烷氧基、N-二-C_1-6烷基胺基、或N-單-C_1-6烷基胺基取代之C_1-4烷基；C_3-6環烷基；或Rg。
5. 如請求項1至4中任一項所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中該化合物係由結構式(II-A)或(II-B)所示：

   

   

   或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，其中R₄’之各情況為H或F。
6. 如請求項1至5中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中

   R₃之各實例為H；鹵素；CN；-OH；-COOH；-NR_aR_b；-SR_c；-SO₂R_c；-SO₂NR_c；-C(=O)NR_aR_b；視需要經鹵素、-OH、C_1-4烷基、-NH₂、N-二-C_1-4烷基胺基、或N-單-C_1-4烷基胺基取代之C_1-4烷氧基；視需要經鹵素、C_1-2烷氧基、N-二-C_1-4烷基胺基、或N-單-C_1-4烷基胺基取代之C_1-4烷基；C_3-6環烷基；嗎啉基；氧雜環丁基；或視需要經甲基取代之氮雜環丁基；

   R_a獨立地為H或視需要經C_1-4烷氧基取代之C_1-4烷基；

   R_b獨立地為H、C_1-4烷基、-COC_1-4烷基、-SO₂C_1-4烷基、C_3-6環烷基或具有選自N與O之1至3個雜原子之3至6員雜環，該環視需要經C_1-4烷基、C_1-4烷氧基-C_1-4烷基、或C_1-4烷氧基-羰基取代、或

   R_a與R_b，和與其連接的氮原子一起，形成具有選自N、O、與S之1至3個雜原子之4至6員雜環，該環視需要經-OH、C_1-4烷基、C_1-4鹵烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4鹵烷氧基、或C_1-4烷氧基-C_1-4烷基取代。
7. 如請求項1至6中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中R₄之各情況為H、鹵素、視需要經鹵基取代之C_1-2烷基，及R₄’之各情況為H。
8. 如請求項1至7中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中R₂為H、Cl、CN、或視需要經鹵素或-OH取代之C_1-6烷基。
9. 如請求項1至8中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中R₁之各情況為H；鹵素；-OH；CN；視需要經鹵素取代之C_1-6烷氧基；C_1-6烷氧基羰基；苯基；N,N-二-C_1-6烷基胺基；視需要經鹵素或苯基取代之C_1-6烷基；含有1至3個N原子之5至6員雜芳基環，該環視需要經視需要經胺基或羥基取代之C_1-6烷基或經單-N-C_1-6烷基胺基羰基或二-N-C_1-6烷基胺基羰基取代；ORh；或Rh；其中Rh為含有選自N、O與S之1至4個雜原子之5至6員雜環基，該環視需要經C_1-6烷基、-OH、或側氧基取代。
10. 如請求項1至9中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中R₁為H；鹵素；視需要經鹵素取代之C_1-4烷基；C_1-4烷氧基；或含有1至3個N原子之5至6員雜芳基。
11. 如請求項1至10中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中R₃之各情況為溴、甲基、乙基、丙基、異丙基、COOH、-CH(CH₃)OCH₃、-CH(CH₃)OCH₂CH₃、

    

    、

    

    、

    

    、

    

    、-CH(CH₃)N(CH₃)₂、-CH₂OCH₃、環丙基、嗎啉基、-S(CH₃)、-N(CH₃)₂、-N(CH₃)(CH₂CH₃)、-N(CH₂CH₃)₂、-N(CH₃)(異丙基)、-N(CH₃)(環 丙基)、-N(CH₂CH₃)(環丙基)、-N(CH₂CH₂OCH₃)(環丙基)、-N(CH₃)(SO₂CH₃)、或-N(CH₃)(CH₂CH₂OCH₃)。
12. 如請求項1至10中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中R₃之各實例為-CH(CH₃)OCH₃、

    

    、

    

    、乙基、或環丙基。
13. 如請求項1至12中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中R₄為H、F、Cl、Br、CH₃、或CF₃。
14. 如請求項1至13中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中R₂為Cl或CF₃。
15. 如請求項1至14中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中R₁為H、1,2,3,-三唑、-OCH₃、或CF₃。
16. 如請求項1至15中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中R₄為H或Cl。
17. 如請求項1至16中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，其中

    

    為

    

    。
18. 一種醫藥組成物，其包含有效量之如請求項1至17中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，與醫藥上可接受之載劑。
19. 一種組合，其包含治療有效量之請求項1至17中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物，及一或多種具治療活性之共劑。
20. 一種於有其需要之受試者中抑制MALT1活性之方法，該方法包括投予該受試者治療有效量之如請求項1至17中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或其立體異構物；或如請求項18所述之醫藥組成物；或如請求項19所述之組合。
21. 如請求項20所述之方法，其中該受試者具有例如自體免疫疾病、炎性疾病、或癌症之疾病或症狀，且其中該疾病或症狀係針對抑制MALT1活性進行治療。
22. 如請求項21所述之方法，其中該疾病或症狀係類風濕性關節炎(RA)、多發性硬化症(MS)、全身性紅斑性狼瘡(SLE)、血管炎性症狀、過敏性疾病、呼吸道疾病[例如氣喘與慢性阻塞性肺部疾病(COPD)]、延遲或即時性過敏反應引起之症狀、急性過敏症、急性或慢性移植排斥、移植物抗宿主病、造血起源或實體腫瘤之癌症[包括慢性類骨髓性白血病(CML)、類骨髓性白血病、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、或B細胞淋巴瘤]。
23. 如請求項21或22所述之方法，其中相較於Treg，該疾病或症狀係經由選擇性或優先抑制Th17進行治療。
24. 如請求項1至17中任一項所述之化合物、或其醫藥上可接受之鹽、或立體異構物，係作為藥劑用，例如作為MALT1抑制劑之藥劑。0

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