TW202031275A - 促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本發明關於一種促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物及其用途。提取魚類受精卵中複合性成分，藉由其所具有消除自由基之抗氧化力、抑制細胞酪胺酸酶活性及促進皮膚纖維母細胞分泌大量膠原蛋白之功能促進皮膚美白、抗老化及傷口修復癒合。藉此，達成皮膚全方位修護，作為化妝品原料及傷口敷料之用途。
Description
本發明係有關於一種可用於皮膚傷口癒合的組成物，尤指利用魚類受精卵萃取物所具有抗氧化力、抑制黑色素生成、促膠原蛋白增生及促進細胞增生等功能來促進傷口癒合，減少傷口可能受到環境病菌感染的時間與機會。
依據生理學上定義，組織傷口癒合(wound healing)進程概分成三階段：發炎期(inflammation)、增生期(proliferation)與成熟期(maturation)，其中如果發炎期間變長將會增加傷口受到感染機會及延遲傷口癒合。再者，傷口的復原又分為表皮層及真皮層的增生修復，通常外表觀察表皮層癒合較快，而內部真皮層卻需較長時間來完成組織重塑，回復原狀。
亞洲養殖漁業相當進步，其中又以養殖馴化野生魚種做為種魚進行繁養的技術獨步全球。而種魚繁殖期生產的受精卵數量係配合市場養殖需求進行孵化放養，因此在淡季或放養品種風向改變時，就會造成該品種受精卵過剩現象，只能廢棄，殊為可惜。因受精卵具有發育成為完整個體的能力，因此也代表著受精卵中富含所有可能與細胞增生與分化息息相關的各種因子，例如生長因子、細胞激素…等。如能將此受精卵進一步提取利用，預期將可應用在創傷護理保養上，不僅物盡其用，更能增進養殖漁業之附加價值。
爰此，本發明人為促使皮膚創傷癒合，且增進養殖漁業之附加價值，而提出一種促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，其包括有魚類受精卵萃取物，該魚類受精卵萃取物係低溫水萃取魚類受精卵而得。
進一步，該魚類係指鱸形目魚類。
進一步，該魚類包括鮨科石斑魚亞科裡的各屬魚類。
進一步，該魚類係選自：鞍帶石斑(Epinephelus lanceolatus
)、棕點石斑(Epinephelus fuscoguttatus
)、龍虎斑(Epinephelus fuscoguttatus
♀xEpinephelus lanceolatus
♂)、點帶石斑(Epinephelus coioides
)、瑪拉巴石斑(Epinephelus malabaricus
)、駝背鱸(Cromileptes altivelis
)、豹紋豹鱠(Plectropomus leopardus
)、赤點石斑(Epinephelus akaara
)、褐帶石斑(Epinephelus bruneus
)、七帶石斑(Epinephelus septemfasciatus
)所構成群組之一或其組合。
進一步，該皮膚創傷係選自：切割傷、擦傷、燒燙傷、曬傷所構成群組之一或其組合。
進一步，該魚類受精卵萃取物之重量百分濃度(wt%)大體介於0.01~1%。
進一步，更包括有一或多個醫藥上可接受之載體。
進一步，該魚類受精卵萃取物係呈水液狀、粉體狀、顆粒狀、凝膠狀或乳霜狀。
進一步，該醫藥組成物係包括口服或外用劑型。
本發明又提出一種魚類受精卵萃取物在製備促進皮膚創傷癒合藥物的用途。
本發明復提出一種皮膚膠原蛋白增生促進劑，係包含使用前述魚類受精卵萃取物。
本發明再提出一種藥用化妝品，係使用包含前述促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，具有加速修復肌膚損傷、抑制酪胺酸酶活性及促進肌膚膠原蛋白增生之功效。
本發明又再提出一種魚類受精卵萃取物在製備用於抑制酪胺酸酶活性及促進肌膚膠原蛋白增生之化妝品原料的用途。
本發明復提出一種促進皮膚創傷癒合之傷口敷料，係使用包含前述促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，用以敷蓋於傷口上。
本發明復又提出一種魚類受精卵萃取物在製備促進皮膚創傷癒合之傷口敷料的用途。
本發明復再提出一種抗氧化劑，係包含使用前述魚類受精卵萃取物，其中，該魚類受精卵萃取物濃度0.21wt%即具有清除50%自由基的能力。
根據上述技術特徵可達成以下功效：
1.藉由提取魚類受精卵萃取物使用在皮膚創傷患處，以促進傷口癒合，大幅縮短發炎期。如傷口破壞至真皮層，亦能使真皮層乳頭結構重塑，使傷口表皮層及真皮層癒後良好。
2.藉由試驗證實魚類受精卵萃取物具有消除自由基之抗氧化力、抑制細胞酪胺酸酶活性及促進皮膚纖維母細胞分泌大量膠原蛋白功用，因此可進一步應用於化妝保養品與醫療器材之傷口敷料等領域，不僅達到美白、抗老化功效，還能使皮膚創傷(例如醫美微創術後、燒燙傷、切割傷、擦傷或曬傷)加速癒合，令其應用層面相當廣泛。
綜合上述技術特徵，本發明促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物的主要功效將可於下述實施例清楚呈現。
首先，本發明提出一種促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，其中，該醫藥組成物包括有魚類受精卵萃取物。而前述魚類受精卵萃取物係透過習知低溫水萃方法獲得，包含在低溫下(10至18℃)使用超音波或高速均質機對受精卵進行均質化處理，令受精卵中蛋白或胜肽分子釋放入水液中，再經過多階段雜質過濾(1mm至0.1um孔徑濾網/膜)及除味過程(1g活性碳/1L萃取液)而得。
本發明所屬技術領域中具通常知識者皆可理解的是，前述魚類受精卵萃取物是一種蛋白質總和的概念，意即將受精卵中所有可能存在與細胞增生分化有關的蛋白質、胜肽分子都保留下來，因為其中可能包含了許許多多未知的生長因子(Growth factor)或細胞激素(Cytokines)。而在目前全球基因體庫尚未完成鮨科石斑魚亞科魚種基因體序列定序前，仍無法針對前述未知的生長因子或細胞激素進行單離及定義(尚無標準品可得)，故僅能先以蛋白質總和的概念來定義前述魚類受精卵萃取物，亦藉此盡可能地保留對細胞增生及分化最有利的蛋白質及胜肽分子，以期應用於抗老化美妝產品及醫藥產品領域。
較佳的是，前述魚類係指鱸形目魚類。較佳的是，前述魚類包括鮨科石斑魚亞科裡的各屬魚類。較佳的是，前述魚類係選自：鞍帶石斑、棕點石斑、龍虎斑、點帶石斑、瑪拉巴石斑、駝背鱸、豹紋豹鱠、赤點石斑、褐帶石斑、七帶石斑所構成群組之一或其組合。此外，前述魚類受精卵亦可以是上述任兩種品系所雜交產生之新品系受精卵，可兼具親代優良遺傳。前述魚類係指被捕撈馴養後可供大量人工繁養殖的魚種，因已能大量繁養，故所能取得之受精卵數量才得以量化生產出萃取物以供應市場需求，深具產業利用價值。
本發明實施例中，係以前述鞍帶石斑、棕點石斑、龍虎斑、點帶石斑、瑪拉巴石斑等幾種魚類之受精卵等比例混合進行萃取所得之萃取物為範例進行說明，但不以此限定魚類受精卵來自多品系混合，亦可以是單一品系受精卵進行萃取。本發明所屬技術領域中具通常知識者皆能理解同品種之魚類所產之受精卵，其萃取物所具之功效應屬可推測範圍內，可視為相同或相近。
本發明實施例中，前述魚類受精卵萃取物之重量百分比濃度大體介於0.01~1wt%。濃度範圍之界定，理論上，濃度越高，應該所呈現出的效果越好，惟仍須考量皮膚使用安全性，故經皮膚貼布安全性評估後，以濃度1wt%為上限。較佳的是，前述魚類受精卵萃取物係呈水液狀、凝膠狀；或經冷凍乾燥為粉體狀、顆粒狀；或經乳化作用成為乳霜狀，藉以因應不同劑型需求。當然，本發明之促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物更可進一步包括有一或多個醫藥上可接受之載體，使劑型更多元化。較佳的是，該醫藥組成物係包括口服或外用劑型，因傳統可供食用魚類之受精卵亦被認定為可供食用之食材，因此亦可做成口服劑型使用，如使用在口腔內膜。而本發明實施例中係以水液狀(習知精華液劑型)之外用劑型作為進行各種試驗的範例說明。
本發明又提出一種魚類受精卵萃取物在製備促進皮膚創傷癒合藥物的用途。
本發明再提出一種藥用化妝品，係使用包含前述促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，具有加速修復肌膚損傷、抑制酪胺酸酶活性及促進肌膚膠原蛋白增生之功效。
本發明復提出一種魚類受精卵萃取物在製備用於抑制酪胺酸酶活性及促進肌膚膠原蛋白增生之化妝品原料的用途。
本發明又再提出一種促進皮膚創傷癒合之傷口敷料，係包含使用前述促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，用以敷蓋於傷口上。
本發明復再提出一種魚類受精卵萃取物在製備促進皮膚創傷癒合之傷口敷料的用途。
本發明復再提出一種抗氧化劑，係包含使用前述魚類受精卵萃取物，該魚類受精卵萃取物濃度於0.21wt%時具有清除50%自由基的能力。
本發明實施例說明如下：
一、細胞毒性試驗
請先參閱第一圖，係本發明實施例以魚類受精卵萃取物對細胞毒性測試之存活率結果圖。利用本發明所屬技術領域中具通常知識者皆能理解之細胞存活率分析法(MTT assay)來分析魚類受精卵萃取物對人類皮膚纖維母細胞(Hs68)的生長影響，在給予不同濃度之前述魚類受精卵萃取物 (0.01 wt%、0.05 wt%、0.1 wt%及0.5 wt%)培養24小時後進行觀察。其中，前述濃度0.01 wt%、0.05 wt%、0.1 wt%及0.5 wt%經測280nm吸光值換算所含總蛋白質濃度依序約為0.03 mg/ml、0.15 mg/ml、0.3 mg/ml及1.5 mg/ml。上述各組細胞型態經顯微鏡照相結果發現當到達0.5 %高濃度時，細胞外觀無顯著變化，也無明顯傷害，顯示對其生長並無不良影響，且各組經計算該Hs68 細胞仍有90%以上存活率，表示前述魚類受精卵萃取物對Hs68 細胞無毒性影響。
二、自由基清除能力試驗
本發明實施例以常被用於檢測抗氧化力的DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼；1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)試劑來進行檢測，三重複試驗結果發現本發明中前述魚類受精卵萃取物的自由基抑制率50%濃度(IC50
)為2.11±0.31 mg/ml，換算重量百分濃度為0.21%左右即具有清除50%自由基的能力。藉此證實，前述魚類受精卵萃取物具有消除自由基之抗氧化能力，進而能協助皮膚抵抗環境自由基的侵襲，延緩肌膚老化情形。
三、酪胺酸酶活性抑制試驗
本發明實施例以老鼠黑色素細胞瘤細胞株(B16-F10; BCRC 60031)進行試驗，分為對照組(未處理)與實驗組，實驗組以0.0125wt%之前述魚類受精卵萃取物與細胞進行72小時處理培養，將細胞收下。以20 mM Tris-0.1%Triton X-100將細胞溶解後離心，取部份上清液先進行蛋白質定量分析。再取其上清液加入L-DOPA(L-3,4-Dihydroxyphenylanine)溶液中，置於37℃、反應10分鐘後，測475nm吸光值。經換算獲得結果如下：對照組的酪胺酸酶活性當作100%，實驗組中的酪胺酸酶活性只剩下76.93%，換句話說，0.0125wt%之前述魚類受精卵萃取物具有23.07%的酪胺酸酶活性抑制率。藉由上述試驗證實，前述魚類受精卵萃取物確實具有抑制酪胺酸酶活性之功效，進而抑制皮膚黑色素生成，達到美白肌膚的效果。
四、促進膠原蛋白增生試驗
請參閱第二圖所示，係本發明實施例中以魚類受精卵萃取物對人類纖維母細胞株(Hs68)處理後，促進膠原蛋白增生之效果圖。本發明實施例以習知總膠原蛋白分析套組(Total Collagen Assay kit, BioVision)進行檢測分析。試驗中以人類纖維母細胞為受試對象添加前述魚類受精卵萃取物進行培養，所取濃度點分別為：對照組(0%)、0.01%、0.05%、0.1%及0.5%，各試驗進行三重複。經培養24小時後收取細胞，以20 mM Tris-0.1%Triton X-100將細胞溶解後離心，收集蛋白質溶液進行檢測分析。測得個別560nm吸光值，經換算結果發現，與對照組相比，前述魚類受精卵萃取物0.01%、0.05%、0.1%、0.5%依序分別有約24%、48.2%、88.2%及126.4%的膠原蛋白增生率，且P ＜ 0.05(參圖中*處)，顯示與對照組有顯著性差異。雖本實施例以前述0.01%、0.05%、0.1%、0.5%等四個濃度點進行試驗，且依據數據結果之線性規則合理推測，隨著濃度往0.5%以上提升拉高，可預期能獲得更佳之膠原蛋白增生率，故具通常知識者應可理解不以此濃度範圍作為本發明可達成促進膠原蛋白增生功效之限制。習知背景知識認知膠原蛋白是皮膚細胞外基質的主要組成成分，它使皮膚保持彈性，而膠原蛋白的流失與老化，則使皮膚失去彈性而出現皺紋。因此藉由上述試驗結果可知，促進皮膚內膠原蛋白之增生，可進一步達到皮膚緊實、回復彈性及撫平細紋的效果，實現皮膚抗老化作用。
五、促進燒燙傷口癒合試驗
實驗分為三組：對照組(以注射用生理食鹽水處理)、試驗A組(前述魚類受精卵萃取物0.05wt%)及試驗B組(點帶石斑受精卵萃取物0.05wt%)，各6隻大鼠，每隻大鼠魚於麻醉後在背上以92℃銅棒接觸皮膚12秒，以開創一個直徑2公分左右的圓形深二度燒燙傷口，建立燒燙傷之模式。於開創後第0、1、2、3、5、7、9、12、15、18、21、24天重新清創傷口、投藥及包紮。傷口於0、1、2、3、5、7、9、12、15、18、21、24、28天，以Isoflurane將動物進行麻醉，利用照相機拍攝存檔(傷口旁附校正用之scale 貼紙)，以投影片描繪傷口後再掃描成圖檔，再以Image J軟體分析計算傷口癒合百分比(wound healing rate, %)。傷口癒合百分比%=[(第0天傷口面積－第N天傷口面積)/第0天傷口面積]×100%。
請參閱第三圖所示，係本發明實施例中以魚類受精卵萃取物對大鼠皮膚燒燙傷口處理後，癒合情況影像圖。從圖中可明顯看出試驗A組與試驗B組在開創後第2天已出現傷口癒合縮小情形，相較對照組在第5天才有傷口癒合縮小情形，確實能提早2至3天啟動傷口癒合修復機制。藉此證實，前述魚類受精卵萃取物對於燒燙傷口具有提早並促進癒合的功效。
請再參閱第四圖所示，係本發明實施例中以魚類受精卵萃取物對大鼠皮膚燒燙傷口處理後，促進傷口癒合之效果圖。圖中可明顯發現，相較於對照組，前述試驗A組與試驗B組確實能提早並且加速傷口的癒合。其中值得注意的是，在統計學上，試驗A組在第3、5、9、12、15、19及21天(參圖中標示a處)與對照組相比具有顯著性差異(P ＜ 0.05)。由這結果，我們推測，前述魚類受精卵來自多品系混合所得萃取物其功效可能較來自單一品系所得萃取物為佳。
請再又參閱第五圖所示，係本發明實施例中以魚類受精卵萃取物對大鼠皮膚燒燙傷口處理後之皮膚組織切片及染色圖。本試驗於開創後第14天(傷口增生期)每組隨機犧牲大鼠將其背部燙傷之部位皮膚取下，並於第28天(傷口成熟期)將其餘大鼠全部犧牲，同樣將其背部燙傷之皮膚部位取下，直接浸泡於10% (v/v) 福馬林溶液中至少24小時後進行組織切片及染色(H&E stain)。圖中為顯微照相下觀察(40x、200x)，第14天時各組別傷口處包含形成結痂(參圖中標示*處)、新生上皮(參圖中標示&處)、多核白血球浸潤、纖維母細胞浸潤、新生血管及膠原蛋白表現上均無顯著差異。另在第28天時，與對照組相較，前述試驗A組與試驗B組的纖維母細胞增殖程度更顯著(p＜0.05)，表示可分泌大量膠原蛋白，促使表皮層及真皮層皮膚進行新生修復(參圖中標示&處)。而值得注意的是，前述試驗A組相較於其他二組可看到其新生表皮組織向下延展至真皮層，重建出原始真皮乳頭（dermal papilla）結構(參圖中箭頭所指)，使表皮與真皮的連接面擴大，有利於兩者牢固連接，並便於表皮從真皮的血管獲得營養，使得新生皮膚組織結構恢復的較為完整。
藉由上述動物燒燙傷癒合試驗結果得知，對於此種深二度燒燙傷，傷及表皮層及真皮層，可以說是相當嚴重的一種皮膚創傷，而本發明證實對於促進此種嚴重皮膚創傷癒合修復有著明顯的功效。因此，我們相信在本發明所屬技術領域中具通常知識者都應能理解，前述魚類受精卵萃取物對一般只傷及表皮層之輕度皮膚創傷(如醫美雷射微創術後、輕度燒燙傷、切割傷、擦傷或曬傷)理應有著相同促進傷口癒合修復之功效。
結合上述各種試驗結果證實，前述魚類受精卵萃取物確實具有抗氧化能力、抑制黑色素生成、增進皮膚膠原蛋白增生以及促進皮膚創傷癒合等顯著功效，使其具有應用於醫藥產品、藥用化妝品及醫療器材之敷料開發上潛力，創造漁業及消費者雙贏的新局面。
綜合上述實施例之說明，當可充分瞭解本發明之操作、使用及本發明產生之功效，惟以上所述實施例僅係為本發明之較佳實施例，當不能以此限定本發明實施之範圍，即依本發明申請專利範圍及發明說明內容所作簡單的等效變化與修飾，皆屬本發明涵蓋之範圍內。
無
[第一圖]係本發明實施例中魚類受精卵萃取物對細胞毒性測試之存活率結果圖。
[第二圖]係本發明實施例中以魚類受精卵萃取物對人類纖維母細胞處理後，促進膠原蛋白增生之效果圖。
[第三圖]係本發明實施例中以魚類受精卵萃取物對大鼠皮膚燒燙傷口處理後，癒合情況影像圖。
[第四圖]係本發明實施例中以魚類受精卵萃取物對大鼠皮膚燒燙傷口處理後，促進傷口癒合之效果比較圖。
[第五圖]係本發明實施例中以魚類受精卵萃取物對大鼠皮膚燒燙傷口處理後之皮膚組織切片及染色圖。
Claims (16)
- 一種促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，其包括有魚類受精卵萃取物，該魚類受精卵萃取物係低溫水萃取魚類受精卵而得。
- 如申請專利範圍第1項所述之促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，其中，該魚類係指鱸形目魚類。
- 如申請專利範圍第1項所述之促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，其中，該魚類包括鮨科石斑魚亞科裡的各屬魚類。
- 如申請專利範圍第1項所述之促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，其中，該魚類係選自：鞍帶石斑、棕點石斑、龍虎斑、點帶石斑、瑪拉巴石斑、駝背鱸、豹紋豹鱠、赤點石斑、褐帶石斑、七帶石斑所構成群組之一或其組合。
- 如申請專利範圍第1項所述之促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，其中，該皮膚創傷係選自：切割傷、擦傷、燒燙傷、曬傷所構成群組之一或其組合。
- 如申請專利範圍第1項所述之促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，其中，該魚類受精卵萃取物之濃度大體介於0.01~1wt%。
- 如申請專利範圍第1項所述之促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，其中，更包括有一或多個醫藥上可接受之載體。
- 如申請專利範圍第1項所述之促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，其中，該魚類受精卵萃取物係呈水液狀、粉體狀、顆粒狀、凝膠狀或乳霜狀。
- 如申請專利範圍第1項所述之促進皮膚創傷癒合之醫藥組成物，其中，該醫藥組成物係包括口服或外用劑型。
- 一種魚類受精卵萃取物在製備促進皮膚創傷癒合藥物的用途。
- 一種皮膚膠原蛋白增生促進劑，係包含使用如申請專利範圍第1項所述之魚類受精卵萃取物。
- 一種藥用化妝品，係包含使用如申請專利範圍第1項所述之魚類受精卵萃取物，具有加速修復肌膚損傷、抑制酪胺酸酶活性及促進肌膚膠原蛋白增生之功效。
- 一種魚類受精卵萃取物在製備用於抑制酪胺酸酶活性及促進肌膚膠原蛋白增生之化妝品原料的用途。
- 一種促進皮膚創傷癒合之傷口敷料，係包含使用如申請專利範圍第1項所述之魚類受精卵萃取物，用以敷蓋於傷口上。
- 一種魚類受精卵萃取物在製備促進皮膚創傷癒合之傷口敷料的用途。
- 一種抗氧化劑，係包含使用如申請專利範圍第1項所述之魚類受精卵萃取物，該魚類受精卵萃取物濃度0.21wt%具有清除50%自由基的能力。
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