TW202012411A

TW202012411A - Iap抑制劑與免疫檢查點分子調節劑的組合用於治療癌症的方法

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Publication number: TW202012411A
Application number: TW108126997A
Authority: TW
Inventors: 大俊楊; 一帆翟; 東方; 王光鳳; 唐秋瓊; 潘文濤; 戢嬌
Original assignee: 大陸商蘇州亞盛藥業有限公司
Priority date: 2018-07-31
Filing date: 2019-07-30
Publication date: 2020-04-01
Also published as: KR20210073489A; EP3829639A1; CA3101835A1; JP2021533124A; BR112021001796A2; WO2020024932A1; EP3829639A4; MX2020013730A; CN110898226B; US20210330642A1; CN110898226A; AU2019314728A1; US12186304B2

Abstract

本發明屬於生物醫藥領域，並具體關於一種治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的方法，所述方法包括向所述個體給藥治療有效量的IAP抑制劑、治療有效量的免疫檢查點分子調節劑，並且任選地給藥治療有效量的微管蛋白抑制劑。本發明還關於一種包含IAP抑制劑、免疫檢查點分子調節劑以及任選存在的微管蛋白抑制劑的藥物組合物或藥盒。

Description

IAP抑制劑與免疫檢查點分子調節劑的組合用於治療癌症的方法

本發明屬生物醫藥領域，並具體關於一種治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的方法，所述方法包括向所述個體給藥治療有效量的IAP抑制劑、治療有效量的免疫檢查點分子調節劑，並且任選地給藥治療有效量的微管蛋白抑制劑。本發明還關於一種包含IAP抑制劑、免疫檢查點分子調節劑以及任選存在的微管蛋白抑制劑的藥物組合物或藥盒。

抗凋亡蛋白(IAP)是一類能負性調節半胱胺酸蛋白酶(caspase)和細胞凋亡的蛋白質。在許多癌症中IAP蛋白表現增多，並且被認為是導致許多抗癌藥物抗藥性的常見原因。在多種人類癌症(包括肺癌、胰腺癌和肝癌)中發現細胞IAP-1 (cIAP-1)和IAP-2 (cIAP-2)基因(分別為BIRC2和BIRC3)的DNA擴增。在各種癌細胞系和腫瘤樣品中，經常在蛋白質表現量上也能觀察到IAP蛋白的失調。IAP促進腫瘤細胞存活，與藥物抗藥性、疾病發展和預後不良密切相關。此外，IAP在免疫調節中也發揮很重要的作用。例如：IAP藉由泛素(Ub)依賴性途徑對核轉錄因子κB (NF-κB)進行活化來調節先天免疫訊號。由於IAP蛋白在細胞凋亡和免疫反應中具有顯著的生物學功能，IAP已成為多種惡性腫瘤的藥物標靶。

目前已經開發了數種IAP抑制劑(如LCL161、Birinapant)。其中，APG-1387是一種新型的IAP抑制劑，可同時標靶XIAP、cIAP1和cIAP2。在多種癌細胞和異種移植腫瘤中，APG-1387誘導cIAP-1和XIAP蛋白的降解，以及casepase-3活化和PARP剪切，導致細胞凋亡。

在一個方面中，本發明提供一種治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的方法，所述方法包括向所述個體給藥治療有效量的IAP抑制劑以及治療有效量的免疫檢查點分子調節劑。

在另一方面中，本發明提供一種IAP抑制劑在製備用於與免疫檢查點分子調節劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一方面中，本發明提供一種IAP抑制劑，其用於與免疫檢查點分子調節劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在另一方面中，本發明提供一種藥物組合物，其包含IAP抑制劑和免疫檢查點分子調節劑以及藥學上可接受的載體。

在另一方面中，本發明提供一種藥盒，其包含： (a) 位於第一容器中的第一組份，所述第一組份包含IAP抑制劑和任選存在的藥學上可接受的載體； (b) 位於第二容器中的第二組份，所述第二組份包含免疫檢查點分子調節劑和任選存在的藥學上可接受的載體；以及 (c) 任選存在的說明書。

在一個方面中，本發明提供一種治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的方法，所述方法包括向所述個體給藥治療有效量的IAP抑制劑、治療有效量的免疫檢查點分子調節劑以及治療有效量的微管蛋白抑制劑。

在另一方面中，本發明提供一種IAP抑制劑在製備用於與免疫檢查點分子調節劑以及微管蛋白抑制劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一方面中，本發明提供一種IAP抑制劑，其用於與免疫檢查點分子調節劑以及微管蛋白抑制劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在另一方面中，本發明提供一種藥物組合物，其包含IAP抑制劑、免疫檢查點分子調節劑和微管蛋白抑制劑，以及藥學上可接受的載體。

在另一方面中，本發明提供一種藥盒，其包含： (a) 位於第一容器中的第一組份，所述第一組份包含IAP抑制劑和任選存在的藥學上可接受的載體； (b) 位於第二容器中的第二組份，所述第二組份包含免疫檢查點分子調節劑和任選存在的藥學上可接受的載體； (c) 位於第三容器中的第三組份，所述第三組份包含微管蛋白抑制劑和任選存在的藥學上可接受的載體；以及 (d) 任選存在的說明書。

在本發明的某些實施方式中，所述IAP抑制劑為式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中： X選自

和-SO₂ -； Y選自-NH-、-O-、-S-和不存在； R選自

，-C_3-6 亞環烷基，

和

； R₁ 選自

； Z是O、S或NH； n是0、1或2；環A是C_4-8 脂族環；且 B環是苯基、萘基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基或嘧啶基，且B環是任選取代的。

在某些實施方式中，R是：

。

在某些實施方式中，R₁ 是：

。

在某些實施方式中，X是SO₂ ，且Y不存在。

在某些實施方式中，所述式(I)的化合物是：

。

在本發明的某些實施方式中，所述免疫檢查點分子調節劑是抗體、抗體Fab片段、二價抗體、抗體藥物綴合物、scFv、融合蛋白、或四價抗體，較佳地，所述免疫檢查點分子調節劑為單株抗體或其抗原結合片段。

在某些實施方式中，所述免疫檢查點分子是PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIM-3、LAG3、CD160、2B4、TGFβ、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、NKG2C、SLAMF7、NKp80、B7-H3、LFA-1、1COS、4-1BB、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT或CD83配體，較佳地，所述免疫檢查點分子是PD-1、PD-L1或CTLA-4。

在某些實施方式中，所述免疫檢查點分子調節劑用於恢復抗腫瘤T細胞活性和/或阻斷T細胞抑制細胞活性。

在某些實施方式中，所述免疫檢查點分子調節劑是共刺激檢查點分子活化劑，所述共刺激檢查點分子活化劑改變完整T細胞活化所需的共刺激訊號。

在某些實施方式中，所述免疫檢查點分子調節劑是PD-1抗體、CLTA-4抗體、或PD-L1抗體。

在某些實施方式中，所述免疫檢查點分子調節劑是帕博利珠單株抗體 (pembrolizumab)、伊匹木單株抗體、nivolumab、atezolizumab，avelumab、durvalumab、AGEN-1884、BMS-986016、CS1001（WO2017020858A1其中全部內容藉由援引加入本案中）、CS1002、LAG525、MBG453、MEDI-570、OREG-103/BY40、lirilumab、tremelimumab、JS001、SHR-1210、BGB-A317、IBI-308、REGN2810、JS003、SHR-1316、KN035或BMS-936559，較佳地，所述免疫檢查點分子調節劑是帕博利珠單株抗體。

在本發明的某些實施方式中，所述微管蛋白抑制劑選自紫杉醇(泰素)、埃博黴素、多西他賽、海綿內酯(discodermolide)、秋水仙鹼、考布他汀、2-甲氧基雌二醇、甲氧基苯磺醯胺(E7010)、長春鹼、長春新鹼、長春瑞濱、長春氟寧(vinfluine)、朵拉司他汀(dolastatin)、軟海綿素(halichondrin)、哈米特林(hemiasterlin)和cryptophysin 52。

在某些實施方式中所述微管蛋白抑制劑是多西他賽或紫杉醇。

在上述方面的某些實施方式中，所述IAP抑制劑是APG-1387，所述免疫檢查點分子調節劑是PD-1抗體，所述微管蛋白抑制劑是多西他賽或紫杉醇。

在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑、免疫檢查點分子調節劑和微管蛋白抑制劑一起、同時、順序或交替給藥。

在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑、免疫檢查點分子調節劑或者微管蛋白抑制劑以相同或不同的給藥途徑施用，所述給藥途徑包括口服、靜脈注射或皮下注射。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑增強所述免疫檢查點分子調節劑和/或所述微管蛋白抑制劑在治療癌症中的療效和/或降低了所述免疫檢查點分子調節劑和/或所述微管蛋白抑制劑在治療癌症中的副作用。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑增強所述免疫檢查點分子調節劑對抗原特異性免疫反應的活化或提高作用。

在另一個方面中，本發明還提供一種治療癌症的方法，包括對有需要的患者施用治療有效量的IAP抑制劑，其中該方法包括至少一個21天的治療週期，其中在所述治療週期中的連續3週中的第1、8和15天施用所述IAP抑制劑。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑是APG-1387。

在某些實施方式中，APG-1387藉由靜脈注射施用。

在某些實施方式中，所述治療有效量的IAP抑制劑是從約15 mg到約100 mg，或從20 mg到45 mg，或從20 mg到60 mg。在某些實施方式中，治療有效量是20 mg、30 mg、45 mg、60 mg、80 mg。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑與一種或多種系統性抗癌藥劑聯合施用。

在某些實施方式中，所述系統性抗癌藥劑選自抗PD-1抗體（例如帕博利珠單株抗體）、微管蛋白抑制劑（例如紫杉醇、多西他賽）或卡鉑。在某些實施方式中，帕博利珠單株抗體、紫杉醇和卡鉑獨立地靜脈施用。

在本案上述的每個實施方式中，所述癌症為早期癌症、中期癌症或者晚期癌症，較佳地，所述癌症選自腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、骨轉移癌、成人腦/中樞神經系統腫瘤、兒童腦/中樞神經系統腫瘤、乳腺癌、男性乳腺癌、兒童癌症、原發癌未知癌症、Castleman病、Merkel細胞癌、宮頸癌、結腸癌、結直腸癌、子宮內膜癌、食道癌、尤文氏肉瘤家族腫瘤、眼癌、膽囊癌、消化道癌症(如胃癌)、胃腸道間質瘤腫瘤(GIST)、滋養細胞癌、頭頸癌、卡波西肉瘤、腎癌、腎細胞癌、喉癌和下嚥癌、白血病(例如急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性骨髓細胞白血病(急性骨髓性白血病，AML)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性骨髓細胞白血病(CML)、慢性骨髓單核細胞白血病(CMML)或兒童白血病)、肝癌（如肝細胞癌）、肺癌(如非小細胞肺癌或小細胞肺癌)、淋巴瘤、皮膚淋巴瘤、惡性間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合症、鼻腔和鼻竇癌、鼻咽癌、神經母細胞瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、兒童非霍奇金淋巴瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、陰莖癌、惡性垂體瘤、前列腺癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤(如成人軟組織癌或子宮肉瘤)、皮膚癌(如基底和鱗狀細胞癌或黑色素瘤)、小腸癌、睾丸癌症、胸腺癌、甲狀腺癌、陰道癌、外陰癌、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、威爾姆斯腫瘤、尿路上皮癌、微衛星不穩定的實體瘤(高或錯配修復缺陷)和絨毛膜癌，較佳地，所述癌症為頭頸癌、微衛星不穩定的實體瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、黑色素瘤、鱗狀細胞癌、Merkel細胞瘤、尿路上皮癌、或結直腸癌。

在本案上述的每個實施方式中，所述癌症是晚期實體腫瘤或血液惡性腫瘤，較佳地，所述癌症是轉移性胰腺癌、結直腸癌、卵巢癌、淋巴瘤或肝癌（如肝細胞癌）。

在本案上述的每個實施方式中，所述個體患有晚期癌症。在某些實施方式中，所述個體患有難治性癌症、復發性癌症或抗藥性性癌症，特別是患有對於包含所述免疫檢查點分子調節劑和/或所述微管蛋白抑制劑的癌症療法抗藥性的癌症。

在另一方面中，本發明還提供一種在個體體內活化或提高抗原特異性免疫反應的方法，包括向所需個體給藥治療有效量的IAP抑制劑以活化或提高個體的抗原特異性免疫反應。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑為APG-1387。

在某些實施方式中，所述抗原為腫瘤抗原。

在某些實施方式中，所述抗原特異性免疫反應包括增加作用記憶型細胞的比例。

在某些實施方式中，所述作用記憶型細胞包括作用記憶型CD4⁺ T細胞，和/或作用記憶型 CD8⁺ T細胞。

在某些實施方式中，所述抗原特異性免疫反應包括增加的抗原刺激的NK細胞的比例。

在某些實施方式中，所述抗原特異性免疫反應包括增加抗原呈現細胞中的MHC-II 表現。

在某些實施方式中，所述對抗原特異性免疫反應的活化或提高是依賴於IL-12的。

除非在下文中另有定義，本文中所用的所有技術術語和科學術語的含義意圖與所屬領域中具有通常知識者通常所理解的相同。提及本文中使用的技術意圖指在本領域中通常所理解的技術，包括那些對所屬領域中具有通常知識者顯而易見的技術的變化或等效技術的替換。雖然相信以下術語對於所屬領域中具有通常知識者很好理解，但仍然闡述以下定義以更好地解釋本發明。

如本文中所使用，術語「包括」、「包含」、「具有」、「含有」」或「關於」及其在本文中的其它變體形式為包含性的(inclusive)或開放式的，且不排除其它未列舉的元素或方法步驟。

如本文中所使用，術語「抗凋亡蛋白(IAP)」是一類高度保守的內源性抗細胞凋亡因子家族，主要藉由抑制Caspase活性和參與調解核因子NF-κB的作用而抑制細胞凋亡。

如本文使用的術語「C_4-8 脂族環」是指未取代或被1至3個基團(例如：C_1-4 烷基、鹵素、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基、烷氧基、硝基、氰基、烷基氨基或氨基)取代的環丁基、環戊基、環己基、環庚基和環辛基。

如本文使用的術語「烷基」是指直鏈和支鏈飽和的C_1-10 烴基，其非限制性實例包括甲基、乙基和直鏈和支鏈的丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。

術語「C_3-6 亞環烷基」是指具有3至6個碳原子的二取代的環烷烴，例如：

。「C_3-6 亞環烷基」可以是未取代的，或被1至3個基團取代的，所述基團例如：C_1-4 烷基、鹵素、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基、烷氧基、硝基、氰基、烷基氨基或氨基。

如本文使用的術語「鹵素」被定義為氟、氯、溴、和碘。

如本文使用的術語「羥基」被定義為-OH。

如本文使用的術語「烷氧基」被定義為-OR，其中R是烷基。

如本文使用的術語「氨基」被定義為-NH₂ ，並且術語「烷基氨基」被定義為-NR₂ ，其中至少一個R是烷基並且第二個R是烷基或氫。

如本文使用的術語「硝基」被定義為-NO₂ 。

如本文使用的術語「氰基」被定義為-CN。

如本文使用的術語「三氟甲基」被定義為-CF₃ 。

如本文使用的術語「三氟甲氧基」被定義為-OCF₃ 。

如本文使用的術語「任選取代的」是指任選地被一個或多個並且特別是一個至四個獨立選自以下的基團取代：例如：鹵素、烷基、烯基、-OCF₃ 、-NO₂ 、-CN、-NC、-OH、烷氧基、氨基、烷基氨基、-CO₂ H、-CO₂ 烷基、炔基、環烷基、硝基、巰基、亞氨基、醯胺基、膦酸酯、亞膦酸酯、甲矽烷基、烷硫基、磺醯基、磺醯胺、醛、雜環烷基、三氟甲基、芳基和雜芳基。

如本文使用的術語「芳基」是指單環或多環的芳香基團，較佳是單環或二環的芳香基團，例如苯基或萘基。

如本文使用的術語「雜芳基」是指含有一個或兩個芳香環並且在一個芳香環中含有至少一個且至多四個氮原子的單環或二環的環系統。

如本文中所使用，術語「藥學上可接受的鹽」包括化合物的酸加成鹽及鹼加成鹽。

適合的酸加成鹽由形成無毒鹽的酸來形成。實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、硼酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環己氨磺酸鹽、乙二磺酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、六氟磷酸鹽、海苯酸鹽、鹽酸鹽/氯化物、氫溴酸鹽/溴化物、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘甲酸鹽(naphthylate)、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、乳清酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、焦谷氨酸鹽、糖二酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽、三氟乙酸鹽及昔萘酸鹽(xinofoate)。

適合的鹼加成鹽由形成無毒鹽的鹼來形成。實例包括鋁鹽、精氨酸鹽、苄星青黴素鹽、鈣鹽、膽鹼鹽、二乙胺鹽、二乙醇胺鹽、甘氨酸鹽、賴氨酸鹽、鎂鹽、葡甲胺鹽、乙醇胺鹽、鉀鹽、鈉鹽、氨丁三醇鹽及鋅鹽。

適合的鹽的綜述參見Stahl及Wermuth的「Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use」 (Wiley-VCH, 2002)。用於製備本發明的化合物的藥學上可接受的鹽的方法為所屬領域中具有通常知識者已知的。

如本文中所使用，術語「免疫檢查點」是指免疫系統中存在的一些抑制性訊息傳遞，藉由調節外周組織中免疫反應的持續性和強度避免組織損傷，並參與維持對於自身抗原的耐受。

在本發明中，術語「抗體藥物綴合物」是指藥物與抗體連接得到的物質。在本發明的部分實施方式中，藥物與抗體藉由連接基相連。所述連接基在特定環境(例如胞內低pH值環境)中或特定作用(例如溶酶體蛋白酶的作用)下能夠斷裂，從而使藥物與抗體分離。在本發明的部分實施方式中，所述連接基包含可切割或不可切割的單元，例如肽或二硫鍵。在本發明的部分實施方式中，藥物與抗體直接藉由共價鍵相連，所述共價鍵在特定環境或作用下能夠斷裂，從而使藥物與抗體分離。

在本發明中，術語「抗體」取其最廣義的解釋，包括完整的單株抗體、多克隆抗體以及由至少兩個完整抗體形成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，只要它們具有所需的生物學活性。在本文中，「抗體」和「免疫球蛋白」可以互換使用。

在本發明中，術語「單株抗體」指抗體來自一群基本均一的抗體，即構成該集群的各抗體完全相同，除了可能存在的少量天然突變。單株抗體具有針對抗原的一個決定簇(表位)的高特異性，而與其相對的多克隆抗體則包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體。除了特異性之外，單株抗體的優點還在於合成時可以不受其他抗體的污染。此處修飾語「單株」表示該抗體的特徵在於來自一個基本均一的抗體群，而不應理解成需由特殊方法製得。

在本發明的部分實施方式中，單株抗體還特別包括嵌合抗體，即重鏈和/或輕鏈的一部分與某種、某類或某亞類抗體相同或同源，其餘部分則與另一種、另一類或另一亞類抗體相同或同源，只要它們具有所需的生物學活性(參見例如US 4,816,567；和Morrison等人，1984，PNAS，81: 6851-6855)。可用於本發明的嵌合抗體包括靈長類化(primatized)抗體，其包含來自非人靈長類(例如古猴或猩猩等)的可變區抗原結合序列和人恆定區序列。

術語「抗體片段」是指抗體的一部分，較佳是抗原結合區或可變區。抗體片段的實例包括Fab、Fab’、F(ab’)₂ 、Fd、Fv、dAb和互補決定區片段；二價抗體(diabody)；線性抗體；和單鏈抗體分子。

術語「雙特異性抗體」與「雙功能抗體偶聯物」可互換使用，是指由第一抗體(片段)和第二抗體(片段)藉由偶聯臂所形成的偶聯物，該偶聯物保留了各自抗體的活性，故具有雙功能和雙特異性。

術語「多特異性抗體」包括例如三特異性抗體和四特異性抗體，前者是具有三種不同抗原結合特異性的抗體，而後者是具有四種不同抗原結合特異性的抗體。

術語「完整抗體」指包含抗原結合可變區和輕鏈恆定區(CL)、重鏈恆定區(CH1、CH2和CH3)的抗體。恆定區可以是天然序列(例如人天然恆定區序列)或其胺基酸序列變體。完整抗體較佳是具有一種或多種效應功能的完整抗體。

術語「前抗(Probody)」是一種修飾的抗體，包括一種抗體或一種抗體片段，能專門與其靶點結合，能夠與掩蔽基團耦合，其中掩蔽基團指對抗體或抗體片段與其靶點的結合能力的裂解常數比沒有耦合掩蔽基團的抗體或抗體片段與其靶點的結合能力的裂解常數至少大100倍、1000倍或者10000倍。

在本發明中，非人(例如鼠)抗體的「人源化」形式指包含最少量非人免疫球蛋白序列的嵌合抗體。大多數人源化抗體是人接受者免疫球蛋白的超變區殘基被置換成具有所需特異性、親和力和功能的非人(例如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類)超變區殘基(供者抗體)。在一些實施方式中，人免疫球蛋白的框架區(FR)殘基也被置換成非人殘基。而且，人源化抗體還可以包含受者抗體或供者抗體中沒有的殘基。這些修飾是為了進一步優化抗體的性能。人源化抗體一般包含至少一個，通常是兩個可變區，其中所有或幾乎所有超變環(hypervanable loops)與非人免疫球蛋白的相對應，而FR則完全或幾乎完全是人免疫球蛋白的序列。人源化抗體還可以包含免疫球蛋白恆定區(Fc，通常是人免疫球蛋白Fc)的至少一部分。有關細節參見例如Jones等人，1986，Nature，321: 522-525；Riechmann等人，1988，Nature，332: 323-329；和Presta，1992，Curr Op Struct Bwl 2: 593-596。

完整抗體可根據重鏈恆定區的胺基酸序列分為不同的「類」。主要的五類是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中幾類還可以分為不同的「亞類」(同種型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。抗體不同類的重鏈恆定區分別稱為α、δ、ε、γ和μ。免疫球蛋白不同類的亞基結構和三維構型是本領域中習知的。

在本發明中，儘管大多數情況下抗體中的胺基酸取代是被L-胺基酸取代，但也不限於此。在一些實施方式中，抗體肽鏈中可以包括一個或多個D-胺基酸。包含D-胺基酸的肽在口腔、腸道或血漿中比僅包含L-胺基酸的肽更加穩定而不易降解。

本發明所用的單株抗體可以由許多方法生產。例如：用於本發明的單株抗體可以藉由融合瘤方法，使用許多物種(包括小鼠、倉鼠、大鼠和人的細胞)獲得(參見例如Kohler等人，1975，Nature，256: 495)，或者藉由重組DNA技術製得(參見例如US 4,816,567)，或者從噬菌體抗體庫中分離得到(參見例如Clackson等人，1991，Nature，352: 624-628；和Marks等人，1991，Journal of Molecular Biology，222: 581-597)。

本發明中「藥學上可接受的載體」是指與治療劑一同給藥的稀釋劑、輔劑、賦形劑或媒介物，並且其在合理的醫學判斷的範圍內適於接觸人類和/或其它動物的組織而沒有過度的毒性、刺激、過敏反應或與合理的益處/風險比相應的其它問題或併發症。

在本發明的藥物組合物或藥盒中可使用的藥學上可接受的載體包括但不限於無菌液體，例如水和油，包括那些石油、動物、植物或合成來源的油，例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。當所述藥物組合物藉由靜脈內給藥時，水是例示性載體。還可以使用生理鹽水和葡萄糖及甘油水溶液作為液體載體，特別是用於注射液。適合的藥物賦形劑包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽糖、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。所述藥物組合物還可以視需要包含少量的濕潤劑、乳化劑或pH緩衝劑。口服製劑可以包含標準載體，如藥物級的甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。適合的藥學上可接受的載體的實例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences (1990)中所述。

本發明的藥物組合物及藥盒中的各組份可以系統地作用和/或局部地作用。為此目的，它們可以適合的途徑給藥，例如藉由注射(如靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內、肌內注射，包括滴注)或經皮給藥；或藉由口服、含服、經鼻、透黏膜、局部、以眼用製劑的形式或藉由吸入給藥。

對於這些給藥途徑，可以適合的劑型給藥本發明的藥物組合物及藥盒中的各組份。

所述劑型包括但不限於片劑、膠囊劑、錠劑、硬糖劑、散劑、噴霧劑、乳膏劑、軟膏劑、栓劑、凝膠劑、糊劑、洗劑、軟膏劑、水性混懸劑、可注射溶液劑、酏劑、糖漿劑。

本文所用的術語「容器」為用於容納藥物組份的容器。此容器可用於製備、儲存、運輸和/或獨立/批量銷售，其意圖涵蓋瓶、罐、小瓶、燒瓶、注射器、管(例如用於乳膏製品)，或者用於製備、容納、儲存或分配藥物產品的任何其它容器。

本文所用的術語「說明書」為插頁、標簽、標示等，其列舉了與位於所述容器內的藥物組份相關的訊息。所列出的資訊通常由管轄待銷售所述製品的區域的管理機構(例如美國食品與藥品管理局)決定。較佳所述包裝說明書具體列出了所述藥物組份獲准用於的適應症。所述包裝說明書可由任何材料製成，可從所述材料上讀取包含於其中或其上的資訊。較佳所述包裝說明書為可印刷材料(例如紙、塑膠、卡紙板、箔、膠黏紙或塑膠等)，其上可形成(例如印刷或施塗)所需資訊。

如本文中所使用的術語「有效量」指被給藥後會在一定程度上緩解所治療病症的一或多種症狀的活性成分的量。

如本文所使用的「個體」包括人或非人動物。例示性人個體包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人個體(稱為患者)或正常個體。本發明中「非人動物」包括所有脊椎動物，例如非哺乳動物(例如鳥類、兩棲動物、爬行動物)和哺乳動物，例如非人靈長類、家畜和/或馴化動物(例如綿羊、犬、貓、奶牛、豬等)。

如本文中所使用，「癌症轉移」是指從其初始部位擴散(轉移)到身體另一區域的癌症。幾乎所有的癌症都具有擴散的潛能。是否會發生轉移取決於多個腫瘤細胞因素(包括癌症的類型、腫瘤細胞的成熟(分化)程度、所在位置和癌症已存在多長時間，以及其它未完全瞭解的因素)之間複雜的相互作用。轉移擴散有三種方式-從腫瘤到周圍組織的局部擴展、藉由血流到達遠處的部位或藉由淋巴系統到達鄰近或遠處的淋巴結。每種癌症都可具有代表性的擴散途徑。腫瘤是根據原發部位命名的(例如：已擴散到腦的乳腺癌被稱為轉移至腦的轉移性乳腺癌)。

如本文中所使用，「抗藥性」是指對化學療法獲得抗藥性的癌細胞。癌細胞可藉由一系列機制獲得對化學療法的抗藥性，包括藥物標靶的突變或過表現、藥物的失活或藥物從細胞消除。

IAP抑制劑與免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑的組合

治療方法和用途

在一個實施方式中，本發明提供一種治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的方法，所述方法包括向所述個體給藥治療有效量的IAP抑制劑以及治療有效量的免疫檢查點分子調節劑。

在另一實施方式中，本發明提供一種IAP抑制劑在製備用於與免疫檢查點分子調節劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一實施方式中，本發明提供一種免疫檢查點分子調節劑在製備用於與IAP抑制劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一實施方式中，本發明提供一種IAP抑制劑在製備用於治療、遏制正在用包含免疫檢查點分子調節劑的癌症療法進行治療的個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一實施方式中，本發明提供一種免疫檢查點分子調節劑在製備用於治療、遏制正在用包含IAP抑制劑的癌症療法進行治療的個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一實施方式中，本發明提供一種IAP抑制劑，其用於與免疫檢查點分子調節劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在另一實施方式中，本發明提供一種免疫檢查點分子調節劑，其用於與IAP抑制劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在另一實施方式中，本發明提供一種IAP抑制劑，其用於治療、遏制正在用包含免疫檢查點分子調節劑的癌症療法進行治療的個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在另一實施方式中，本發明提供一種免疫檢查點分子調節劑，其用於治療、遏制正在用包含IAP抑制劑的癌症療法進行治療的個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在一個實施方式中，本發明提供一種治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的方法，所述方法包括向所述個體給藥治療有效量的IAP抑制劑、治療有效量的免疫檢查點分子調節劑以及治療有效量的微管蛋白抑制劑。

在另一實施方式中，本發明提供一種IAP抑制劑在製備用於與免疫檢查點分子調節劑和微管蛋白抑制劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一實施方式中，本發明提供一種免疫檢查點分子調節劑在製備用於與IAP抑制劑和微管蛋白抑制劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一實施方式中，本發明提供一種微管蛋白抑制劑在製備用於與IAP抑制劑和免疫檢查點分子調節劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一實施方式中，本發明提供一種IAP抑制劑在製備用於治療、遏制正在用包含免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑的癌症療法進行治療的個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一實施方式中，本發明提供一種免疫檢查點分子調節劑在製備用於治療、遏制正在用包含IAP抑制劑和/或微管蛋白抑制劑的癌症療法進行治療的個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一實施方式中，本發明提供一種微管蛋白抑制劑在製備用於治療、遏制正在用包含IAP抑制劑和/或免疫檢查點分子調節劑的癌症療法進行治療的個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的藥物中的用途。

在另一實施方式中，本發明提供一種IAP抑制劑，其用於與免疫檢查點分子調節劑和微管蛋白抑制劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在另一實施方式中，本發明提供一種免疫檢查點分子調節劑，其用於與IAP抑制劑和微管蛋白抑制劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在另一實施方式中，本發明提供一種微管蛋白抑制劑，其用於與IAP抑制劑和免疫檢查點分子調節劑組合來治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在另一實施方式中，本發明提供一種IAP抑制劑，其用於治療、遏制正在用包含免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑的癌症療法進行治療的個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在另一實施方式中，本發明提供一種免疫檢查點分子調節劑，其用於治療、遏制正在用包含IAP抑制劑和/或微管蛋白抑制劑的癌症療法進行治療的個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在另一實施方式中，本發明提供一種微管蛋白抑制劑，其用於治療、遏制正在用包含IAP抑制劑和/或免疫檢查點分子調節劑的癌症療法進行治療的個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑為如WO2014/031487 (將其藉由援引加入本文)中所記載的IAP抑制劑，並可藉由其中記載的方法製備得到。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑為式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽：

其中： X選自

和-SO₂ -； Y選自-NH-、-O-、-S-和不存在； R選自

，-C_3-6 亞環烷基，

和

； R₁ 選自

在某些實施方式中，R是：

。

在某些實施方式中，R₁ 是：

。

在某些實施方式中，X是SO₂ ，且Y不存在。

在某些實施方式中，所述式(I)的化合物是：

。

在某些實施方式中，所述化合物是APG-1387，即，1,3‐苯二[7‐(3S,5S,9aR)‐5‐((S)‐2‐甲胺基‐丙醯胺基)‐3‐二苯甲胺醯‐4‐氧代‐3a,7‐二氮雜‐十氫環戊烷並環辛烯]]‐磺醯胺，其具有以下結構：

。

在某些實施方式中，所述免疫檢查點分子調節劑是抗體、抗體Fab片段、二價抗體、抗體藥物綴合物、scFv、融合蛋白、或四價抗體，較佳地，所述免疫檢查點分子調節劑為單株抗體或其抗原結合片段。

在某些實施方式中，所述微管蛋白抑制劑選自紫杉醇(泰素)、埃博黴素、多西他賽、海綿內酯(discodermolide)、秋水仙鹼、考布他汀、2-甲氧基雌二醇、甲氧基苯磺醯胺(E7010)、長春鹼、長春新鹼、長春瑞濱、長春氟寧(vinfluine)、朵拉司他汀(dolastatin)、軟海綿素(halichondrin)、哈米特林(hemiasterlin)和cryptophysin 52。

在某些實施方式中，所述微管蛋白抑制劑是多西他賽或紫杉醇。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑是APG-1387，所述免疫檢查點分子調節劑是PD-1抗體，所述微管蛋白抑制劑是多西他賽或紫杉醇。

在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑以約0.005 mg/日至約5000 mg/日的量，例如約0.005、0.05、0.5、5、9、10、20、30、40、50、60、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500或5000 mg/日的量給藥。在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑以約10 mg/週至約200 mg/週、或約20 mg/週至約100 mg/週、或約20 mg/週至約80 mg/週的量，例如約10、15、20、25、30、35、40、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、或200 mg/週的量給藥。

在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑以每單位劑量約1 ng/kg至約200 mg/kg、約1 μg/kg至約100 mg/kg或者約1 mg/kg至約50 mg/kg的量給藥，例如以每單位劑量約1 μg/kg、約10 μg/kg、約25 μg/kg、約50 μg/kg、約75 μg/kg、約100 μg/kg、約125 μg/kg、約150 μg/kg、約175 μg/kg、約200 μg kg、約225 μg/kg、約250 μg kg、約275 μg kg、約300 μg/kg、約325 μg kg、約350 μg/kg、約375 μg/kg、約400 μg/kg、約425 μg/kg、約450 μg/kg、約475 μg/kg、約500 μg/kg、約525 μg kg、約550 μg/kg、約575 μg kg、約600 μg/kg、約625 μg/kg、約650 μg/kg、約675 μg/kg、約700 μg/kg、約725 μg/kg、約750 μg/kg、約775 μg/kg、約800 μg/kg、約825 μg/kg、約850 μg/kg、約875 μg/kg、約900 μg/kg、約925 μg/kg、約950 μg/kg、約975 μg/kg、約1 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2.5mg/kg、約3 mg/kg、約3.5 mg/kg、約4 mg/kg、約4.5 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約60 mg/kg、約70 mg/kg、約80 mg/kg、約90 mg/kg、約100 mg/kg、約125 mg/kg、約150 mg/kg、約175 mg/kg、約200 mg/kg的量給藥，並且每天、每兩天、每三天、每四天、每五天、每六天、或每週給藥一個或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個)單位劑量。

在某些實施方式中，將所述免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑以每週或每兩週或每三週或每四週約0.005 mg至約5000 mg的量，例如每週或每兩週或每三週或每四週約0.005、0.05、0.5、5、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500或5000 mg的量給藥。

在某些實施方式中，將所述免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑以每單位劑量約1 ng/kg至約200 mg/kg、約1 μg/kg至約100 mg/kg或者約1 mg/kg至約50 mg/kg的量給藥，例如以每單位劑量約1 μg/kg、約10 μg/kg、約25 μg/kg、約50 μg/kg、約75 μg/kg、約100 μg/kg、約125 μg/kg、約150 μg/kg、約175 μg/kg、約200 μg kg、約225 μg/kg、約250 μg kg、約275 μg kg、約300 μg/kg、約325 μg kg、約350 μg/kg、約375 μg/kg、約400 μg/kg、約425 μg/kg、約450 μg/kg、約475 μg/kg、約500 μg/kg、約525 μg kg、約550 μg/kg、約575 μg kg、約600 μg/kg、約625 μg/kg、約650 μg/kg、約675 μg/kg、約700 μg/kg、約725 μg/kg、約750 μg/kg、約775 μg/kg、約800 μg/kg、約825 μg/kg、約850 μg/kg、約875 μg/kg、約900 μg/kg、約925 μg/kg、約950 μg/kg、約975 μg/kg、約1 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2.5mg/kg、約3 mg/kg、約3.5 mg/kg、約4 mg/kg、約4.5 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約60 mg/kg、約70 mg/kg、約80 mg/kg、約90 mg/kg、約100 mg/kg、約125 mg/kg、約150 mg/kg、約175 mg/kg、約200 mg/kg的量給藥，並且每週、每兩週、每三週、或者每四週給藥一個或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20個)單位劑量。

在某些實施方式中，將所述免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑以每單位劑量約1 mg/m² 至約200 mg/m² 、約1 μg/m² 至約100 mg/m² 或者約1 mg/m² 至約50 mg/m² 的量給藥，例如以每單位劑量約1 μg/m² 、約10 μg/m² 、約25 μg/m² 、約50 μg/m² 、約75 μg/m² 、約100 μg/m² 、約125 μg/m² 、約150 μg/m² 、約175 μg/m² 、約200 μg/m² 、約225 μg/m² 、約250 μg/m² 、約275 μg/m² 、約300 μg/m² 、約325 μg/m² 、約350 μg/m² 、約375 μg/m² 、約400 μg/m² 、約425 μg/m² 、約450 μg/m² 、約475 μg/m² 、約500 μg/m² 、約525 μg/m² 、約550 μg/m² 、約575 μg/m² 、約600 μg/m² 、約625 μg/m² 、約650 μg/m² 、約675 μg/m² 、約700 μg/m² 、約725 μg/m² 、約750 μg/m² 、約775 μg/m² 、約800 μg/m² 、約825 μg/m² 、約850 μg/m² 、約875 μg/m² 、約900 μg/m² 、約925 μg/m² 、約950 μg/m² 、約975 μg/m² 、約1 mg/m² 、約1 mg/m² 、約1.5 mg/m² 、約2.5mg/m² 、約3 mg/m² 、約3.5 mg/m² 、約4 mg/m² 、約4.5 mg/m² 、約5 mg/m² 、約10 mg/m² 、約15 mg/m² 、約20 mg/m² 、約25 mg/m² 、約30 mg/m² 、約35 mg/m² 、約40 mg/m² 、約45 mg/m² 、約50 mg/m² 、約60 mg/m² 、約70 mg/m² 、約80 mg/m² 、約90 mg/m² 、約100 mg/m² 、約125 mg/m² 、約150 mg/m² 、約175 mg/m² 、約200 mg/m² 的量給藥，並且每週、每兩週、每三週、或者每四週給藥一個或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20個)單位劑量。

在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑和免疫檢查點分子調節劑或微管蛋白抑制劑一起、同時、順序或交替給藥。在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑和免疫檢查點分子調節劑和微管蛋白抑制劑一起、同時、順序或交替給藥。

在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑每週給藥一次、兩次、三次、四次、五次、六次、或七次。在某些實施方式中，所述IAP抑制劑連續給藥至少一週、至少二週、至少三週、至少四週、至少五週、至少六週、至少七週、或至少八週。

在某些實施方式中，將所述免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑每週給藥一次、兩次、三次、四次、五次、六次、或七次；每兩週給藥一次、兩次、三次、四次、五次、六次、或七次；或者每三週給藥一次、兩次、三次、四次、五次、六次、或七次。在某些實施方式中，所述免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑連續給藥至少一週、至少二週、至少三週、至少四週、至少五週、至少六週、至少七週、或至少八週。

在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑或免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑連續給藥至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天、至少18天、至少19天、至少20天、至少21天、至少22天、至少23天、至少24天、至少25天、至少30天、至少35天、至少40天、至少45天或至少50天、至少2週、至少3週、至少4週、至少5週、至少6週、至少7週、至少8週、至少9週、至少10週、至少11週、或至少12週。

在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑或免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑給藥一個或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個)療程，其中每個療程持續至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天、至少18天、至少19天、至少20天、至少21天、至少22天、至少23天、至少24天、至少25天、至少30天、至少35天、至少40天、至少45天或至少50天、至少2週、至少3週、至少4週、至少5週、至少6週、至少7週、至少8週、至少9週、至少10週、至少11週、或至少12週；其中每個療程給藥1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次；並且每兩個療程之間間隔0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10天、兩週、三週、四週、一個月或兩個月。

在較佳實施方式中，當給藥多個療程時，各療程所給藥的所述IAP抑制劑、免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑的量相同或不同。在更某些實施方式中，在前一療程中所給藥的所述IAP抑制劑、免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑的量是後一療程所給藥量的1-10倍，較佳1-5倍，例如1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5或5倍。

在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑、免疫檢查點分子調節劑和/或微管蛋白抑制劑以相同或不同的給藥途徑施用，所述給藥途徑包括口服、靜脈注射或皮下注射。

在某些實施方式中，將所述免疫檢查點分子調節劑以比當將所述免疫檢查點分子調節劑單獨給藥或在未給藥所述IAP抑制劑時所給藥的量更低的量給藥。

在某些實施方式中，將所述微管蛋白抑制劑以比當將所述微管蛋白抑制劑單獨給藥或在未給藥所述IAP抑制劑和/或所述免疫檢查點分子調節劑時所給藥的量更低的量給藥。

在某些實施方式中，所述免疫檢查點分子調節劑增強所述IAP抑制劑和/或所述微管蛋白抑制劑在治療癌症中的療效和/或降低了所述IAP抑制劑和/或所述微管蛋白抑制劑在治療癌症中的副作用。

在某些實施方式中，所述微管蛋白抑制劑增強所述IAP抑制劑和/或所述免疫檢查點分子調節劑在治療癌症中的療效和/或降低了所述IAP抑制劑和/或所述免疫檢查點分子調節劑在治療癌症中的副作用。

在某些實施方式中，所述癌症為早期癌症、中期癌症或者晚期癌症，較佳地，所述癌症選自腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、骨轉移癌、成人腦/中樞神經系統腫瘤、兒童腦/中樞神經系統腫瘤、乳腺癌、男性乳腺癌、兒童癌症、原發癌未知癌症、Castleman病、Merkel細胞癌、宮頸癌、結腸癌、結直腸癌、子宮內膜癌、食道癌、尤文氏肉瘤家族腫瘤、眼癌、膽囊癌、消化道癌症(如胃癌)、胃腸道間質瘤腫瘤(GIST)、滋養細胞癌、頭頸癌、卡波西肉瘤、腎癌、腎細胞癌、喉癌和下嚥癌、白血病(例如急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性骨髓細胞白血病(急性骨髓性白血病，AML)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性骨髓細胞白血病(CML)、慢性骨髓單核細胞白血病(CMML)或兒童白血病)、肝癌（如肝細胞癌）、肺癌(如非小細胞肺癌或小細胞肺癌)、淋巴瘤、皮膚淋巴瘤、惡性間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合症、鼻腔和鼻竇癌、鼻咽癌、神經母細胞瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、兒童非霍奇金淋巴瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、陰莖癌、惡性垂體瘤、前列腺癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤(如成人軟組織癌或子宮肉瘤)、皮膚癌(如基底和鱗狀細胞癌或黑色素瘤)、小腸癌、睾丸癌症、胸腺癌、甲狀腺癌、陰道癌、外陰癌、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、威爾姆斯腫瘤、尿路上皮癌、微衛星不穩定的實體瘤(高或錯配修復缺陷)和絨毛膜癌，較佳地，所述癌症為頭頸癌、微衛星不穩定的實體瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、黑色素瘤、鱗狀細胞癌、Merkel細胞瘤、尿路上皮癌或結直腸癌。

在某些實施方式中，所述癌症是晚期實體腫瘤或血液惡性腫瘤，較佳地，所述癌症是轉移性胰腺癌、結直腸癌、卵巢癌、淋巴瘤或肝癌（如肝細胞癌）。

在某些實施方式中，所述個體患有晚期癌症。

在某些實施方式中，所述個體患有難治性癌症、復發性癌症或抗藥性癌症，特別是患有對於包含所述免疫檢查點分子調節劑的癌症療法抗藥性的癌症。

在某些實施方式中，所述個體患有難治性癌症、復發性癌症或抗藥性癌症，特別是患有對於包含所述免疫檢查點分子調節劑和/或所述微管蛋白抑制劑的癌症療法抗藥性的癌症。

在某些實施方式中，所述個體患有難治性癌症、復發性癌症或抗藥性癌症，特別是患有對於包含所述IAP抑制劑和/或所述免疫檢查點分子調節劑的癌症療法抗藥性的癌症。

在某些實施方式中，所述個體患有難治性癌症、復發性癌症或抗藥抗藥性性癌症，特別是患有對於包含所述IAP抑制劑和/或所述微管蛋白抑制劑的癌症療法抗藥性的癌症。

在某些實施方式中，本發明提供一種IAP抑制劑在製備用於與免疫檢查點分子調節劑組合來治療患有抗藥性癌症，特別是患有對於包含所述免疫檢查點分子調節劑的癌症療法抗藥性的癌症的個體的藥物中的用途。

在某些實施方式中，本發明提供一種IAP抑制劑在製備用於與免疫檢查點分子調節劑和微管蛋白抑制劑組合來治療患有抗藥性癌症，特別是患有對於包含所述免疫檢查點分子調節劑和/或所述微管蛋白抑制劑的癌症療法抗藥性的癌症的個體的藥物中的用途。

在某些實施方式中，本發明提供一種免疫檢查點分子調節劑在製備用於與IAP抑制劑組合來治療患有抗藥性癌症，特別是患有對於包含所述IAP抑制劑的癌症療法抗藥性的癌症的個體的藥物中的用途。

在某些實施方式中，本發明提供一種免疫檢查點分子調節劑在製備用於與IAP抑制劑和微管蛋白抑制劑組合來治療患有抗藥性癌症，特別是患有對於包含所述IAP抑制劑和/或所述微管蛋白抑制劑的癌症療法抗藥性的癌症的個體的藥物中的用途。

在某些實施方式中，本發明提供一種微管蛋白抑制劑在製備用於與IAP抑制劑和免疫檢查點分子調節劑組合來治療患有抗藥性癌症，特別是患有對於包含所述IAP抑制劑和/或所述免疫檢查點分子調節劑的癌症療法抗藥性的癌症的個體的藥物中的用途。

藥物組合物和藥盒

在另一實施方式中，本發明提供一種藥物組合物，其包含IAP抑制劑和免疫檢查點分子調節劑以及藥學上可接受的載體。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑和所述免疫檢查點分子調節劑分別如上文所定義。

在另一實施方式中，本發明提供一種藥盒，其包含： (a) 位於第一容器中的第一組份，所述第一組份包含IAP抑制劑(較佳如上文所定義)和任選存在的藥學上可接受的載體； (b) 位於第二容器中的第二組份，所述第二組份包含免疫檢查點分子調節劑(較佳如上文所定義)和任選存在的藥學上可接受的載體；以及 (c) 任選存在的說明書。

在另一實施方式中，本發明提供一種藥物組合物，其包含IAP抑制劑、免疫檢查點分子調節劑和微管蛋白抑制劑以及藥學上可接受的載體。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑、所述免疫檢查點分子調節劑以及所述微管蛋白抑制劑分別如上文所定義。

在另一實施方式中，本發明提供一種藥盒，其包含： (a) 位於第一容器中的第一組份，所述第一組份包含IAP抑制劑(較佳如上文所定義)和任選存在的藥學上可接受的載體； (b) 位於第二容器中的第二組份，所述第二組份包含免疫檢查點分子調節劑(較佳如上文所定義)和任選存在的藥學上可接受的載體； (c) 位於第三容器中的第三組份，所述第三組份包含微管蛋白抑制劑(較佳如上文所定義)和任選存在的藥學上可接受的載體；以及 (d) 任選存在的說明書。

治療方法：單用或聯用

本案還提供了一種藉由向患者施用有效量的IAP抑制劑（例如：APG-1387）在有需要的患者中治療癌症的方法，所述IAP抑制劑作為單一藥劑或作為與其他治療劑聯合治療的聯合藥劑。在另一實施方式中，本案提供了藥物組合物，其包含治療有效量的本文揭露的IAP抑制劑，例如APG-1387或其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的載體或稀釋劑，用於治療本案所述的癌症。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑為本案中所定義的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，所述IAP抑制劑是APG-1387。

在一個實施方式中，本發明提供一種治療、遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的方法，所述方法包括向所述個體給藥治療有效量的IAP抑制劑，其中所述IAP抑制劑作為單一藥劑或作為與治療有效量的免疫檢查點分子調節劑聯合治療的聯合藥劑。

在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑（如APG-1387）以約0.005 mg/日，至約5000 mg/日的量，例如約0.005、0.05、0.5、5、10、20、30、40、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500或5000 mg/日的量給藥。在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑以約10 mg/週至約200 mg/週、或約20 mg/週至約100 mg/週的量，例如約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、或200 mg/週的量給藥。

在某些實施方式中，將所述IAP抑制劑（如APG-1387）以每單位劑量約1 ng/kg至約200 mg/kg、約1 μg/kg至約100 mg/kg或者約1 mg/kg至約50 mg/kg的量給藥，例如以每單位劑量約1 μg/kg、約10 μg/kg、約25 μg/kg、約50 μg/kg、約75 μg/kg、約100 μg/kg、約125 μg/kg、約150 μg/kg、約175 μg/kg、約200 μg kg、約225 μg/kg、約250 μg kg、約275 μg kg、約300 μg/kg、約325 μg kg、約350 μg/kg、約375 μg/kg、約400 μg/kg、約425 μg/kg、約450 μg/kg、約475 μg/kg、約500 μg/kg、約525 μg kg、約550 μg/kg、約575 μg kg、約600 μg/kg、約625 μg/kg、約650 μg/kg、約675 μg/kg、約700 μg/kg、約725 μg/kg、約750 μg/kg、約775 μg/kg、約800 μg/kg、約825 μg/kg、約850 μg/kg、約875 μg/kg、約900 μg/kg、約925 μg/kg、約950 μg/kg、約975 μg/kg、約1 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2.5mg/kg、約3 mg/kg、約 3.5 mg/kg、約4 mg/kg、約4.5 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約60 mg/kg、約70 mg/kg、約80 mg/kg、約90 mg/kg、約100 mg/kg、約125 mg/kg、約150 mg/kg、約175 mg/kg、約200 mg/kg的量給藥，並且每天或每週給藥一個或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個)單位劑量。

在某些實施方式中，所述治療癌症的方法包括向有需要的患者施用治療有效量的IAP抑制劑，如APG-1387，其中所述方法包括至少一個21天的療程，其中在所述療程的所述連續3週的第1、8和15天藉由靜脈注射施用IAP抑制劑。該方案給藥兩週停藥一週，為期21天（三週）。所述療程可根據需要重複多次。所述治療有效量為約15 mg至約100 mg IAP抑制劑。

在某些實施方式中，所述癌症為晚期實體腫瘤或血液惡性腫瘤。在某些實施方式中，所述患者患有對現有療法不反應的晚期或轉移性實體腫瘤。在某些實施方式中，所述癌症是轉移性胰腺癌、結直腸癌、卵巢癌、淋巴瘤或肝癌（如肝細胞癌）。

在某些實施方式中，IAP抑制劑的治療有效量為約20 mg。

在某些實施方式中，IAP抑制劑的治療有效量為約30 mg。

在某些實施方式中，IAP抑制劑的治療有效量為約45 mg。

在某些實施方式中，IAP抑制劑的治療有效量為約60 mg。

在某些實施方式中，IAP抑制劑的治療有效量為約80 mg。

在某些實施方式中，IAP抑制劑的治療有效量為從約20 mg到45 mg，從約20 mg到60 mg，或從約20 mg到80 mg。

治療方法：晚期實體腫瘤或血液惡性腫瘤

在某些實施方式中，IAP抑制劑（例如APG-1387）與一種或多種系統性抗癌藥劑作為聯合療法聯合施用於患有晚期實體腫瘤或血液惡性腫瘤的患者。

在某些實施方式中，所述系統性抗癌藥劑是免疫檢查點分子調節劑或微管蛋白抑制劑。

在某些實施方式中，所述系統性抗癌藥劑選自帕博利珠單株抗體、紫杉醇或卡鉑。

在某些實施方式中，IAP抑制劑可以與帕博利珠單株抗體，或與紫杉醇和卡鉑聯合用藥在有需要的患者中治療癌症。

在某些實施方式中，IAP抑制劑可以與帕博利珠單株抗體聯合用藥用於治療晚期實體瘤患者。

在某些實施方式中，IAP抑制劑可以與紫杉醇和卡鉑聯合用藥用於治療晚期實體瘤患者。

在某些實施方式中，IAP抑制劑可以與紫杉醇和卡鉑聯合用藥用於治療晚期卵巢癌、胰腺癌或結腸癌患者。

在上述實施方式中，所述IAP抑制劑為如WO2014/031487 (將其藉由援引加入本文)中所記載的IAP抑制劑，並可藉由其中記載的方法製備得到。在某些實施方式中，所述IAP抑制劑為本案中所定義的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽。在上述實施方式中，所述IAP抑制劑是APG-1387。

在某些實施方式中，在聯合療法中採用商業銷售的帕博利珠單株抗體製劑和護理標準。

在某些實施方式中，帕博利珠單株抗體藉由靜脈注射施用，每3週靜脈注射30分鐘。在某些實施方式中，帕博利珠單株抗體按照每個成年患者200 mg施用，或者根據重量以2 mg/kg施用，最高為200 mg。

在某些實施方式中，在聯合療法中採用商業銷售的紫杉醇製劑和護理標準。在某些實施方式中，紫杉醇每3週靜脈內經3小時施用，劑量為135 mg/m² 或175 mg/m² 。在另一個實施方式中，患者將在預先給藥後的每21天治療週期的第1天靜脈內（IV）接受紫杉醇，所述預先給藥是為了防止嚴重的過敏反應。

此類預先給藥可以包含，在施用紫杉醇之前約12小時和6小時口服地塞米松20 mg，在施用紫杉醇之前60分鐘靜脈注射苯海拉明（或其等效物）50 mg，以及在施用紫杉醇之前30-60分鐘靜脈注射西咪替丁（300 mg）或雷尼替丁（50 mg）。

在某些實施方式中，在聯合療法中採用商業銷售的卡鉑製劑和護理標準。在某些實施方式中，藉由持續15分鐘或更長時間的注射靜脈內施用卡鉑。在某些實施方式中，患者將在每個週期的第1天接受30 mg/m2的卡鉑。可以調整或修改劑量。

活化或提高抗原特異性免疫反應的方法

本案還提供了一種在個體體內活化或提高抗原特異性免疫反應的方法，包括向所需個體給藥治療有效量的IAP抑制劑以活化或提高個體的抗原特異性免疫反應。

在某些實施方式中，所述IAP抑制劑為如WO2014/031487 (將其藉由援引加入本文)中所記載的IAP抑制劑，並可藉由其中記載的方法製備得到。在某些實施方式中，所述IAP抑制劑為本案中所定義的式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽。在某些實施方式中，所述IAP抑制劑為APG-1387。

在某些實施方式中，所述抗原為疾病抗原例如腫瘤抗原。

在某些實施方式中，所述抗原特異性免疫反應包括增加的作用記憶型細胞的比例。在某些實施方式中，作用記憶型細胞是作用記憶型T細胞。在某些實施方式中，作用記憶型T細胞表現CD44和CD3但是不表現CD62L（即CD44⁺ CD62L^- CD3⁺ ）。

在某些實施方式中，所述作用記憶型細胞包括作用記憶型CD4⁺ T細胞，和/或作用記憶型CD8⁺ T細胞。

在某些實施方式中，所述抗原特異性免疫反應包括增加的抗原刺激的NK細胞的比例。在某些實施方式中，抗原刺激的NK細胞包括腫瘤組織內的或腫瘤浸潤的NK細胞。

在某些實施方式中，所述抗原特異性免疫反應包括增加抗原呈現細胞中的主要組織相容性複合物（MHC）II類分子（MHC-II）的表現。抗原呈現細胞的例子包括，但不限於巨噬細胞、B細胞、樹突細胞等。

在某些實施方式中，所述對抗原特異性免疫反應的活化或提高是依賴於IL-12的。IL-12是一種抗原呈現細胞衍生的細胞因子，可刺激T細胞和NK細胞分泌IFN-γ並增強這些細胞的增殖和細胞溶解活性（Gately 等, Annu Rev Immunol, 1998, 第16期, 第495–521頁）。

實施例

為了使本發明的目的和技術手段更加清楚，以下結合具體實施例進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。並且，下列實施例中未提及的具體實驗方法，均按照常規實驗方法進行。

以下實施例中所使用的抗PD-1抗體購自BioXcell, 貨號BE0146，克隆號為：RMP1-14。

實施例1、體內藥效實驗評估方法

細胞接種法建立人腫瘤免疫正常鼠皮下同源移植瘤模型：收集對數生長期的腫瘤細胞，計數後重懸於1×PBS，調整細胞懸液濃度至2.5-5×10^7/ mL。用1 mL注射器(4號針頭)在免疫正常小鼠右側背部皮下接種腫瘤細胞，5-10×10⁶ /0.2 mL/鼠。所有動物實驗操作嚴格遵守吉瑪基因股份有限公司和蘇州亞盛藥業有限公司實驗動物使用和管理規範。相關參數的計算參考中國NMPA《細胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術指導原則》。

實驗期間每週測定兩次動物體重和腫瘤大小。每天觀察動物的狀態以及有無死亡等情況發生。常規監測包括腫瘤生長及治療對動物正常行為的影響，具體內容有實驗動物的活動性、攝食和飲水情況、體重增加或降低情況、眼睛、被毛及其它異常情況。實驗過程中觀察到的死亡和臨床症狀均記錄在原始數據中。整個給藥、小鼠體重及腫瘤體積的測量操作均在超淨工作臺中進行。根據實驗方案要求，末次給藥結束後，收集血漿和腫瘤組織，稱重並拍照記錄。血漿和腫瘤樣本-80℃凍存備用。

腫瘤體積(Tumor volume，TV)的計算公式為：TV=a×b² /2。其中a、b分別代表腫瘤測量長和寬。

相對腫瘤體積(relative tumor volume，RTV)計算公式為：RTV=V_t /V₁ 。其中V₁ 為分組給藥時的腫瘤體積，V_t 為給藥後第t天測量時的腫瘤體積。

抗腫瘤活性的評價指標為相對腫瘤增殖率T/C (%)，計算公式為：相對腫瘤增殖率T/C (%)=(T_RTV /C_RTV )×100%，T_RTV 為治療組RTV，C_RTV 為溶劑對照組RTV。

腫瘤緩解率(%)為治療後荷瘤小鼠出現SD (stable disease, 疾病穩定)、PR (partial regression，腫瘤部分消退)及CR (complete regression, 腫瘤完全消退)的數目除以本組小鼠總數×100%。CR指腫瘤完全消退，即治療後腫瘤不可觸及。PR指腫瘤部分消退，即腫瘤體積與治療前相比變小。SD指腫瘤進展穩定，即腫瘤體積與治療前相同。

動物體重變化(Change of body weight，%)=(測量體重-分組時體重)/分組時體重×100%。

療效評價標準：根據中國NMPA《細胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術指導原則》(2006年11月)，T/C (%)值≦40%並經統計學分析p >0.05為有效。若小鼠的體重下降超過20%或藥物相關的死亡數超過20%，則認為該藥物劑量具有嚴重毒性。

根據Clarke R., Issues in experimental design and endpoint analysis in the study of experimental cytotoxic agents in vivo in breast cancer and other models [J]. Breast Cancer Research & Treatment, 1997, 46(2-3):255-278中的記載，協同性分析採用以下公式進行評價：協同因子 = ((A/C) × (B/C))/(AB/C)；A= A藥單藥組的RTV值；B=B藥單藥組的RTV值；C=溶劑對照組的RTV值，AB= A與B聯合用藥組的RTV值。協同因子>1表明實現了協同作用；協同因子=1表明實現了相加作用；協同因子>1表明實現了拮抗作用。

APG-1387與抗PD-1抗體(αPD-1)和多西他賽在同源小鼠腫瘤模型中的協同抗腫瘤作用

建立了CT26結直腸癌小鼠腫瘤模型，並在該模型上評估了APG-1387與抗PD-1抗體和多西他賽的聯合抗腫瘤作用。給藥方案如下： APG-1387單藥組：0.2 mg/kg，靜脈注射，每天一次，共給藥17天；多西他賽單藥組：8 mg/kg，腹腔注射，每週一次，共給藥17天；抗PD-1抗體單藥組：200 µg/小鼠，腹腔注射，每週兩次，共給藥2.5週(即17天)； APG-1387 + 多西他賽聯合組：(0.2 mg/kg，靜脈注射，每天一次，共給藥17天)+ (8 mg/kg，腹腔注射，每週一次，共給藥17天)； APG-1387 + 抗PD-1抗體聯合組：(0.2 mg/kg，靜脈注射，每天一次，共給藥2.5週) + (200 µg/小鼠，腹腔注射，每週兩次，共給藥2.5週)； APG-1387 + 抗PD-1抗體 +多西他賽聯合組：(0.2 mg/kg，靜脈注射，每天一次，共給藥2.5週) + (200 µg/小鼠，腹腔注射，每週兩次，共給藥2.5週) + (8 mg/kg，腹腔注射，每週一次，共給藥2.5週)。

如圖1所示，在給藥後第18天，由於腫瘤負荷較大，其中4組動物(包括溶劑對照組、APG-1387單藥組(T/C = 105%)、多西他賽單藥組(T/C = 66%)，以及APG-1387和多西他賽兩藥聯合組(T/C = 74%))被處以安樂死。在給藥後第18天，APG-1387+抗PD-1抗體兩藥聯合用藥組的T/C值為35%，APG-1387+抗PD-1抗體+多西他賽的三藥聯合用藥組的T/C值為28%。

各組單隻動物的腫瘤體積如圖2A和圖2B所示。在給藥後第18天(圖2A)，在溶劑和APG-1387單一藥劑組中，沒有動物表現出穩定的疾病(SD)、部分消退(PR)或完全消退(CR)。用多西他賽治療的動物中有四分之一(1/4; 腫瘤緩解率為25%)獲得SD。用抗PD-1抗體治療的動物中有1/5 (腫瘤緩解率為20%)的動物獲得PR療效。有趣的是，在APG-1387和抗PD-1抗體的聯合用藥治療下，2/5 (腫瘤緩解率為40%)的動物表現出PR或CR療效。此外，三藥聯合治療可使5隻動物中的1隻動物獲得PR療效並且使2隻動物獲得CR療效(腫瘤緩解率為60%)。在給藥後第25天(圖2B)，在未經治療的延長觀察期後，抗PD-1治療組中的五隻動物中的一隻保持PR (20%)。用APG-1387和抗PD-1的兩藥聯合治療組中的兩隻動物保持SD或CR。然而，三藥聯合治療組中的三隻動物逐漸獲得了CR療效(腫瘤緩解率60%)。本實驗數據清楚地表明，與APG-1387或抗PD-1抗體單一藥劑相比，APG-1387與抗PD-1抗體和多西他賽的組合能夠以更高的緩解率有效地抑制腫瘤，且獲得了更有效和更持久的抗腫瘤反應。這些結果表明APG-1387與抗PD-1抗體和多西他賽的組合取得了協同作用。

表 1 、 APG-1387 與抗 PD-1 抗體和多西他賽聯合用藥在 CT26 小鼠結直腸癌模型中的協同抗腫瘤作用

依照與實施例1中所述類似的操作，建立MC38同源小鼠結腸癌模型，並依照以下給藥方案測試APG-1387與抗PD-1抗體組合的作用，結果如圖3中所示。溶劑對照組：給予APG-1387和抗PD-1抗體的溶劑，共給藥2次； APG-1387單藥組：0.2 mg/kg，靜脈注射，每週兩次，共給藥2次；抗PD-1抗體單藥組：5 mg/kg，腹腔注射，每週兩次，共給藥2次； APG-1387 + 抗PD-1抗體聯合組：(0.2 mg/kg，靜脈注射，每週兩次，共給藥2次) + (5 mg/kg，腹腔注射，每週兩次，共給藥2次)。

表 2 、 APG-1387 與抗 PD-1 抗體聯合用藥在 MC38 同源小鼠結腸癌模型中的協同抗腫瘤作用

依照與實施例1中所述類似的操作，建立MC38同源小鼠結腸癌模型，並依照以下給藥方案測試APG-1387與抗PD-1抗體組合提高小鼠生存率的作用。結果如圖4中所示。溶劑對照組：給予APG-1387和抗PD-1抗體的溶劑，共給藥2次； APG-1387單藥組：0.2 mg/kg，靜脈注射，每週兩次，共給藥3次；抗PD-1抗體單藥組：100 µg/小鼠，腹腔注射，每週兩次，共給藥2次； APG-1387 + 抗PD-1抗體聯合組：(0.2 mg/kg，靜脈注射，每週兩次，共給藥3次) + (100 µg/小鼠，腹腔注射，每週兩次，共給藥2次)。

實施例 2 、 APG-1387 在體外細胞實驗中促進 CD4⁺ T 細胞和 CD8⁺ T 細胞的增殖

將(A) CD4⁺ T細胞或(B) CD8⁺ T細胞使用磁珠從小鼠脾臟中陽性分選，並用不同濃度的抗CD3抗體(0.1、1、5、10 μg/ml)包被培養盤，另加入2 μg/ml抗CD28共刺激。在APG-1387 250 nM或DMSO處理細胞72小時後，使用CellTiter-Glo發光細胞活力測定法(Promega)測定相對細胞數，並用DMSO處理的未刺激培養物將其標準化。具體而言，96孔盤和CellTiter-Glo試劑置於室溫平衡30分鐘，每孔加入100 μL CellTiter-Glo試劑。在搖床上混勻2分鐘，室溫放置10分鐘後用Biotek synergy HIMF酶標儀讀取螢光值。使用3個複孔計算平均螢光值，藉由下列公式計算細胞增殖率百分比：細胞增殖率(%)=(測試孔螢光值-陰性對照孔)⁄(溶劑對照組螢光值-陰性對照組)×100%。結果代表至少兩個獨立實驗。

結果如圖5所示。體外實驗結果表明，APG-1387可促進抗CD3和抗CD28刺激的CD4⁺ T細胞和CD8⁺ T細胞的增殖。

實施例 3 、 APG-1387 用於治療晚期實體瘤或血液惡性腫瘤患者

患者在21天的療程內接受治療。治療在第一個療程以20 mg APG-1387開始，並在第1、8和15天藉由靜脈注射施用APG-1387。進行標準的「3+3」劑量遞增，藉由評估作為單一藥劑的APG-1387的DLT，以確定APG-1387的MTD。在第1部分中，患者在21天的療程內接受治療。治療以20 mg APG-1387開始，並在第1、8和15天給藥。如果在前3名患者中在第1療程結束時未觀察到劑量限制性毒性（DLT），則APG-1387的劑量將隨後相應地增加到30、45、60和80 mg。如果≧2/6的患者在任何劑量下產生DLT，則劑量遞增停止，劑量立即擴大至6名患者。如果≤1/6患者在達到最高劑量時產生DLT，將該劑量被宣佈為最大耐受劑量（MTD）。如果未報告DLT，則將確認80 mg APG-1387 轉到如下第2部分： 1、APG-1387與帕博利珠單株抗體聯合用藥治療晚期實體瘤。 2、APG-1387與紫杉醇和卡鉑聯合用藥治療晚期卵巢癌。 3、APG-1387與紫杉醇和卡鉑聯合用藥治療除卵巢癌外的晚期實體瘤。

在確定了APG-1387與帕博利珠單株抗體，或與紫杉醇和卡鉑聯合用藥組的MTD/RP2D後，將在該劑量下採用該聯合用藥組治療最多20名患者，直至達到疾病進展，不可接受毒性或其他中斷標準。一旦基於研究者和贊助者之間的討論將DLT確定為≦1級，那麼經歷DLT的穩定或響應的患者可以繼續治療。允許患者內劑量遞增。

在單一藥劑治療方法中，注射用APG-1387以無菌凍乾粉的形式進行供應，每瓶10 mg。APG-1387在重溶後藉由靜脈注射給藥，重溶方法如下：將2 mL注射用水加入小瓶中以溶解粉末，然後用注射用5%葡萄糖溶液進一步稀釋。

在聯合用藥治療方法中，使用市售製劑。患者每三週接受一次200 mg帕博利珠單株抗體的靜脈內給藥，用時30分鐘。患者將接受靜脈內給藥紫杉醇的標準靜脈內（IV）治療，每21天療程的第1天給藥一次，在此之前預先服藥以預防嚴重的過敏反應。

患者將接受卡鉑標準治療，靜脈內注射（IV），每21天療程的第1天給藥一次。

實施例 4 、 APG-1387 作為單一藥劑和與帕博利珠單株抗體聯合使用的安全性和耐受性

APG-1387是一種新型的二價小分子IAP（凋亡蛋白抑制劑）抑制劑。 APG-1387是SMAC模擬物，其可以拮抗cIAP1/2或XIAP的功能，其觸發半胱胺酸蛋白酶活化並導致細胞凋亡。APG-1387在多種人類異種移植癌症模型中顯示出強大的抗腫瘤活性。APG-1387還可作為宿主免疫調節劑，支持APG-1387與抗PD1抗體聯合用於癌症治療的概念。

進行了I期研究（（NCT03386526）以評估APG-1387作為單一藥劑（第1部分）或與帕博利珠單株抗體（第2部分）聯用的安全性和耐受性。

該研究的主要目的是評估APG-1387作為單一藥劑或與帕博利珠單株抗體聯合使用的安全性和耐受性。第二個目的是確定APG-1387作為單一藥劑或與帕博利珠單株抗體聯用的藥物動力學（PK）、藥效學（PD）和抗腫瘤作用。

I期劑量遞增研究包括兩部分。第1部分是APG-1387的「3 + 3」劑量遞增，包括mPC（轉移性胰腺癌）隊列擴增。第2部分是APG-1387與帕博利珠單株抗體組合的「3 + 3」劑量遞增和隊列擴增。

在21天的週期中，每週一次30分鐘靜脈內施用APG-1387。帕博利珠單株抗體在21天週期的第1天靜脈內施用200 mg，直至出現疾病進展或不耐受毒性。使用APG-1387-d10作為內標（IS），使用LC-MS/MS方法測定K2EDTA人血漿中的APG-1387。使用甲醇藉由人血漿中的蛋白質沉澱提取APG-1387和IS。使用Agilent Polaris 5，C18-A柱（50 x 2.0 mm，5微米）實現反相HPLC分離。MS/MS檢測設定為，在TIS陽性模式下，APG-1387的質量躍遷（mass transition）為m/z：579.4→167.2和APG-1387-d10（IS）為m/z：584.4→172.1。

I期研究的納入標準是：年齡≧18歲；ECOG活動狀態（ECOG PS）：0-1；足夠的血液、腎臟和肝臟功能；晚期或轉移性實體瘤患者必須對已知為其病症提供臨床益處的現有療法療效不佳或不耐受。

排除標準為：在進入研究前21天內接受過化療、激素和生物製品（>2倍半衰期）、小分子靶向治療或其他抗癌治療；由於受中樞神經系統（CNS）的腫瘤影響，基於臨床評估的神經系統不穩定性；或具有不受控制的併發疾病。

入選的患者顯示出的基準線特徵如表3(a)和3(b)所示。

表 3 、患者人口統計學和基準線特徵

表3(a)

表3(b)

患者施用藥物後的耐受性結果如表3(c)和3(d)所示。

表3(c)

與治療有關的不良事件（所有等級）

表3(d)

三級（G3）以上的治療相關不良事件（TRAE）：一例G3血膽紅素升高，一例脂肪酶升高，均發生於60 mg單藥療法。

到2019年4月19日，24名患者接受了APG-1387治療，5名患者接受了APG-1387加帕博利珠單株抗體治療。APG-1387耐受性良好，並且具有可控的不良事件。最常見的TRAE（>10％）是疲勞。在60mg時觀察到兩種劑量限制毒性（DLTs），包括脂肪酶增加和面部神經障礙，APG-1387單藥療法的MTD測定為45 mg。

在研究期間觀察到的初步抗腫瘤活性在表4和表5中表徵。

表 4 、對所有腫瘤類型的抗腫瘤活性

表 5 、對胰腺癌的抗腫瘤活性

APG-1387單藥療法中10例mPC（轉移性胰腺癌）患者中有4例（一例60 mg，三例45 mg）達到病情穩定（SD），其中一例45 mg已經治療>9個週期（超過6個月）並確認達到SD（+ 6%），請參見圖6。另見圖7，其中顯示了胰腺癌靶病變中相對於基準線的最佳百分比變化。

APG-1387的初步PK數據（參見圖8的(A)和(B)部分）顯示AUC和Cmax的增加在20 mg至45 mg的範圍內基本上與劑量成比例，並且使用每週給藥方案沒有觀察到顯著的積累效應。

APG-1387治療顯著誘導在PBMC中的XIAP抑制（參見圖9的(A)和(B)部分）和血清中的細胞因子釋放（參見圖10），表明潛在的機制性PD關聯和免疫調節。

實施例 5 、 APG-1387 與抗 PD-1 抗體聯合用藥在體內實驗中的抗腫瘤作用。

測試藥品 (1) APG-1387：由江蘇亞盛醫藥開發有限公司提供，批號為R12JA076140-A2和PAPG-1387-DP-201305A。4℃避光密閉保存。APG-1387經靜脈注射（i.v.）或腹腔注射（i.p.）給藥，給藥體積為10 mL/kg。APG-1387溶於5% 蓖麻油/ 10% PEG400 / 85% 生理鹽水。 (2) 抗PD-1抗體：購自BioXcell公司，貨號為BE0146和BE0273。4℃密閉保存。抗PD-1抗體經腹腔注射給藥，給藥濃度為100 μg/小鼠或200 μg/小鼠。 (3) 同型對照（anti-IgG）：購自BioXcell公司，貨號為BE0089。4℃密閉保存。同型對照經腹腔注射給藥，給藥濃度為100 μg/小鼠或200 μg/小鼠。 (4) 多西他賽：購自南京艾康化工有限公司，批號為20141024。4℃密閉保存。多西他賽經靜脈注射給藥，給藥體積為10 mL/kg。 (5) 抗IL-12抗體：購自BioXcell公司，貨號為BE0051。4℃密閉保存。抗IL-12抗體經腹腔注射給藥，給藥濃度為500 μg /小鼠。

細胞系

鼠源MC38結腸癌細胞、鼠源A20淋巴瘤細胞、和人源PLC/PRF/5肝癌細胞購自ATCC。鼠源ID8-Luc卵巢癌細胞由中山大學謝丹教授實驗室惠贈。

實驗設計

小鼠皮下注射0.5-10×10⁶ 個細胞或者是卵巢原位注射6×10⁶ 以建立移植腫瘤模型。荷瘤小鼠隨機分組到不同的給藥組。在無菌條件下，藉由給免疫正常小鼠右側背部皮下或者卵巢原位（ID8-Luc）注射腫瘤細胞建立移植瘤模型。對於原位模型，在接種10天后，用活體螢光成像檢測腫瘤生長狀況，根據螢光強度，按隨機區組法進行隨機分組並開始治療。對於皮下移植瘤模型，當腫瘤達到合適的大小（50-150 mm³ ），根據動物腫瘤體積按隨機區組法進行隨機分組，各組腫瘤體積差異應小於平均值的10%，每組5-10隻，並於分組當日開始給藥（即D1）。對於A20皮下模型，在接種後第一天按照體重分組並開始給藥（即D1）。實驗期間每週測定兩次動物體重和腫瘤大小。每日觀察記錄臨床症狀。

腫瘤相關參數的計算同實施例1。在活體螢光成像技術中，螢光訊號的強弱可代表體內腫瘤的生長和轉移情況。在生存率觀察中，當荷瘤動物的瘤體積>2,000 mm³ 時即處以安樂死並認為是與自然死亡一樣是由腫瘤生長引起的動物死亡。

在腫瘤浸潤淋巴細胞分析的實驗中，在末次給藥後24小時，採集動物脾臟、引流淋巴結、腹水、或腫瘤等組織樣品。獲得脾臟和引流淋巴結的單個細胞懸液，離心後裂解紅細胞，過濾細胞後進行相應的流式抗體染色和流式細胞檢測。腫瘤組織剪碎後離心，組織消化液處理後過濾細胞，進行Ficoll分離和收集單個核細胞，進行對應的抗體進行流式染色和流式細胞檢測。腹水樣品收集後離心洗滌，過濾細胞後進行相應的流式抗體染色和流式細胞檢測。

統計分析

以時間點為X軸，腫瘤體積、動物體重為Y軸繪製腫瘤生長曲線和動物體重曲線。實驗數據以平均值±SEM表示，其中，SEM = SD/SQRT（n），n = 實驗組動物數。兩組比較的組間差異採用Mann-Whitney U法進行統計學分析。多組比較的組間差異採用單因素方差分析進行統計學檢驗，並用Games-Howell進行兩兩比較。生存曲線的比較採用log-rank法進行統計學分析並進行多重檢驗。所有數據均使用SPSS 18.0進行分析（*P ˂ 0.05，**P ˂ 0.01，***P ˂ 0.001，****P ˂ 0.0001）。

APG-1387 與抗 PD-1 抗體聯合用藥在鼠源 MC38 結腸癌小鼠皮下移植瘤模型中的抗腫瘤作用

在細胞實驗中，APG-1387體外給藥可刺激MC38細胞分泌IFN-γ、IL-5、IL-12p70、TNF-α等對T細胞增殖和功能至關重要的炎性細胞因子。因此，本實驗首先選用MC38細胞，以0.5-10×10⁶ 細胞/鼠皮下接種於雌性C57BL/6小鼠右後背，建立免疫正常小鼠皮下移植瘤模型，以評估APG-1387與抗PD-1抗體聯合的抗腫瘤作用。具體給藥方案見表6。

表 6 、實驗設計

結果如圖11的A和B部分所示，在給藥後第22天，APG-1387單藥組和抗PD-1抗體單藥組都有一定的抗腫瘤作用，T/C值分別為69.6%和48.6%，並且與同型對照組相比都具有統計學顯著性差異（P > 0.05）。APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥後，抗腫瘤作用顯著增強，T/C值達到了30.6%。統計分析結果顯示，聯合給藥組與同型對照組相比具有統計學顯著性差異（P > 0.0001），與APG-1387單藥組和抗PD-1抗體單藥組也有統計學顯著性差異（P > 0.05），並且協同性分析結果顯示兩藥聯合具有協同抗腫瘤作用，協同係數為1.10。如圖11的C和D部分所示，同型對照處理組動物的中位生存期為28.0天。APG-1387單藥組和抗PD-1抗體單藥組可一定程度延長動物的中位生存時間，中位生存期分別為33.0天和34.5天。APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥可進一步延長小鼠的生存時間，中位生存期達到47.5天（P> 0.05，與同型對照組比較）。各處理組動物未見顯著的體重下降。

上述結果表明APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥顯示了優於各自單藥的顯著抗腫瘤作用。

APG-1387 與抗 PD-1 抗體聯合用藥在鼠源 ID8-Luc 卵巢癌小鼠原位移植瘤模型中的抗腫瘤作用

卵巢癌是世界上最致命的婦科惡性腫瘤和第二常見的婦科癌症。目前的化學治療藥物僅短暫有效，該病的轉移和復發率仍然很高。當前最有潛力的免疫治療雖然在多種腫瘤治療中獲得巨大臨床成功，但免疫治療在卵巢癌中的應用仍是一大難題。本研究組前期研究發現，APG-1387能夠增加卵巢癌細胞的凋亡和自噬（Li等, Novel smac mimetic APG-1387 elicits ovarian cancer cell killing through TNF-alpha, Ripoptosome and autophagy mediated cell death pathway. J Exp Clin Cancer Res. 2018, 第37期, 第53頁）。所以本實驗選用ID8-Luc細胞，以6×10⁶ 細胞/鼠接種於雌性C57BL/6小鼠卵巢原位，建立小鼠原位移植瘤模型來評估APG-1387與抗PD-1抗體聯合的抗腫瘤作用。具體給藥方案見表7

如圖12的A和B部分所示，在給藥後第7天，APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥組動物的螢光強度要顯著地弱於同型對照組和兩個單藥組，顯示兩藥聯合具有協同抗腫瘤作用。如圖12的C和D部分所示，APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥可顯著的延長小鼠的生存時間。並且各處理組未見顯著的體重下降。

綜上所述，APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥顯示了明顯的協同抗腫瘤作用，並取得延長小鼠生存的療效。

表 7 、實驗設計

APG-1387 與抗 PD-1 抗體聯合用藥在鼠源 A20 淋巴瘤小鼠皮下移植瘤模型中的抗腫瘤作用

為了進一步驗證APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥的效果，本實驗選用A20細胞，以5×10⁶ 細胞/小鼠，皮下接種於雌性BALB/c小鼠右後背，建立小鼠皮下移植瘤模型對兩藥聯合的優勢做進一步的評估。接種後第2天按照體重分組並開始給藥。在該模型中，還評估了APG-1387與抗PD-1抗體、多西他賽三藥聯用的抗腫瘤作用。具體給藥方案見表8。

如圖13的A和B部分所示，在給藥後第24天， APG-1387和多西他賽兩個單藥，或兩藥聯合在該模型中的抗腫瘤作用不顯著。抗PD-1抗體單藥顯示一定的抗腫瘤作用，在給藥後第24天的T/C值為25%，並在給藥後第28天有一隻動物顯示CR療效，腫瘤緩解率為20%。APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥後，抗腫瘤作用顯著增強，T/C值為8%，且兩藥聯合具有協同作用，協同係數為3.49，並在給藥後第28天有2隻動物獲得CR療效，腫瘤緩解率為40%，進一步證明兩藥聯合的優勢。APG-1387與抗PD-1抗體、多西他賽三藥聯合抗腫瘤作用進一步增強。三藥聯合用藥組的T/C值為3%，在給藥後第28天有2隻動物獲得CR療效，2隻動物獲得PR療效，腫瘤緩解率為80%。如圖13的C部分所示，各組動物對上述治療耐受性良好，未出現體重明顯下降。

上述結果表明APG-1387有效增強了抗PD-1抗體在該模型中的抗腫瘤活性。APG-1387與抗PD-1抗體、多西他賽三藥聯用具有更優越的抗腫瘤作用。

表 8 、實驗設計

APG-1387 單藥或與抗 PD-1 抗體聯合用藥對腫瘤浸潤淋巴細胞和健康小鼠脾臟細胞活化影響的分析

如前所述，APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥在小鼠MC38結腸癌模型和ID8-Luc卵巢癌模型等模型中具有顯著的抑制腫瘤生長作用。但是在體外實驗中，APG-1387對MC38細胞、ID8-Luc細胞等多種小鼠腫瘤細胞系沒有明顯的生長抑制作用（結果未顯示）。因此，我們推測APG-1387在體內可能是藉由作用於其他細胞，如免疫細胞而發揮抗腫瘤作用的。為了驗證此假設，我們採用MC38、ID8-Luc細胞和PLC/PRF/5細胞系建立小鼠移植瘤模型，在末次給藥後24h，採集MC38荷瘤小鼠的脾臟、引流淋巴結和腫瘤組織，荷ID8-Luc瘤小鼠的腹水，荷PLC/PRF/5瘤小鼠的腫瘤組織進行腫瘤浸潤淋巴細胞分析。分別分析了APG-1387給藥組和對照組動物上述組織中的重要淋巴細胞的比例，以探索APG-1387與抗PD-1抗體聯合抗腫瘤作用的潛在機制。具體給藥方案見表9-表11。

表 9 、實驗設計： MC38 小鼠移植瘤模型

腫瘤細胞：MC38；0.5×10⁶ 細胞/小鼠，皮下接種於雌性C57BL/6小鼠右後背。

表 10 、實驗設計： ID8-Luc 小鼠移植瘤模型

表 11 、實驗設計： PLC/PRF/5 小鼠移植瘤模型

腫瘤細胞：PLC/PRF/5；10×10⁶ 細胞/小鼠，皮下接種於雌性裸鼠右後背。

在MC38模型中分別分析了APG-1387單一用藥對小鼠脾臟、引流淋巴結、和腫瘤浸潤淋巴細胞的影響。結果如圖14的A部分所示，APG-1387顯著上調脾臟組織中作用記憶型型CD8⁺ T細胞（CD44⁺ CD62L^- CD3⁺ CD8⁺ T）和CD4⁺ T 細胞（CD44⁺ CD62L^- CD3⁺ CD4⁺ T）比例。

對NK細胞比例的分析中發現，APG-1387單一用藥對脾臟和淋巴結中NK細胞的比例沒有顯著影響，但是APG-1387可以顯著上調腫瘤組織中NK細胞的比例，與同型對照組比較具有統計學顯著性差異（圖14的B部分）。

作用記憶型T細胞具有記憶特異性抗原和釋放淋巴因子的功能。如果相同抗原再次侵入，則作用記憶型T細胞會迅速增殖，消滅抗原，增強機體對抗原的免疫能力。APG-1387可增加脾臟中作用T細胞（CD8⁺ 和CD4⁺ T細胞）的比例，證明APG-1387可增強機體的適應性免疫系統的功能。NK細胞是先天免疫系統和適應性免疫系統中至關重要的細胞毒性淋巴細胞。它們具有直接殺死惡變靶細胞並與抗原呈現細胞和T細胞相互作用的能力(Vivier等, Innate or adaptive immunity? The example of natural killer cells. Science, 2011, 第331期, 第44-49頁)。APG-1387上調腫瘤組織內的NK細胞比例，證明它具有活化先天免疫系統和適應性免疫系統的作用。

在ID8-Luc小鼠卵巢癌模型中，分別檢測了APG-1387，抗PD-1抗體各自單藥以及APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥對荷ID8-Luc瘤小鼠腹水中淋巴細胞比例的影響。結果如圖15所示，APG-1387單獨給藥在此模型中可上調腹水中NK細胞的比例（圖15的A部分）。在另一獨立重複實驗中，發現APG-1387和抗PD-1抗體各自單獨給藥可一定程度上增加作用記憶型CD8+ T細胞的比例，但是APG-1387與抗PD-1聯合用藥可顯著增加的作用記憶型CD8⁺ T細胞的比例，與對照組比較，具有統計學顯著性差異（P > 0.01，圖15的B部分）。

上述結果表明，APG-1387具有增強先天免疫系統的功能，與抗PD-1抗體聯合用藥可進一步增強適應性免疫系統的功能。

在PLC/PRF/5小鼠肝癌組織的浸潤淋巴細胞分析中發現，APG-1387（5 mg/kg）給藥可顯著增加腫瘤浸潤的CD45⁺ T細胞和NK細胞的比例（圖16）。此結果再次證實APG-1387可增加腫瘤浸潤NK細胞數量，增強機體的先天抗腫瘤免疫功能。

APG-1387 單藥在體內對 C57BL/6 小鼠脾臟細胞活化的影響

接著，我們對健康C57BL/6小鼠每天腹腔給予不同劑量APG-1387，每組3隻，連續給藥7天后，取脾臟，獲得脾臟單細胞懸液，流式分析NK、巨噬細胞、樹突細胞、T細胞等免疫細胞亞群的比例，以評估APG-1387對各免疫細胞亞群的影響。

表 12 、實驗設計

結果如圖17所示，APG-1387 三個劑量組（0.05 mg/kg、 0.2 mg/kg、和0.8 mg/kg）均對脾臟裡的9類免疫細胞的比例無影響（圖17的A部分）。但是，隨著APG-1387藥物劑量的提高，脾臟細胞MHC-II 的平均螢光強度也逐漸增強。APG-1387在0.2和0.8 mg/kg劑量下可顯著增加MHC-II表現量（圖17的B部分）。

脾臟細胞中，表現MHC-II的細胞主要包括抗原呈現細胞，如巨噬細胞、B細胞、樹突細胞等。主要組織相容性複合物（MHC）II類分子的主要功能是將加工的抗原（主要是外源性抗原）呈遞給CD4⁺ T淋巴細胞。因此，MHC II類分子對於啟動抗原特異性免疫反應至關重要。APG-1387可增加脾臟細胞MHC-II分子的表現，提示APG-1387具有活化抗原特異性免疫反應的作用。

APG-1387 與抗 PD-1 抗體及抗 IL-12 抗體聯合用藥在鼠源 MC38 結腸癌小鼠皮下移植瘤模型中的抗腫瘤作用

如前所述，APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥在MC38、ID8-Luc等移植瘤小鼠模型中有顯著的協同抗腫瘤作用。對小鼠脾臟、淋巴結和腫瘤（腹水）浸潤淋巴細胞的分析中發現，APG-1387單一用藥可增加腫瘤組織和腹水中NK細胞的數量。體外細胞實驗中，APG-1387可刺激腫瘤細胞分泌IL-12。IL-12是一種抗原呈現細胞衍生的（APC衍生的）細胞因子，可刺激T細胞和NK細胞分泌IFN-γ並增強這些細胞的增殖和細胞溶解活性（Gately 等；THE INTERLEUKIN-12/ INTERLEUKIN-12-RECEPTOR SYSTEM: Role in Normal and Pathologic Immune Responses. Annu Rev Immunol, 1998；第16期；第495–521頁）。為了進一步確定APG-1387與抗PD-1抗體協同抗腫瘤作用是否與IL-12相關，我們在前述的MC38模型中使用抗IL-12抗體開展阻斷IL-12功能的實驗。具體給藥方案見表13。

表 13 、實驗設計： MC38 小鼠移植瘤模型

如圖18所示，在給藥後第22天， APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥有明顯的抗腫瘤作用，但是聯合抗IL-12抗體阻斷IL-12的功能之後，APG-1387與抗PD-1抗體聯合抗腫瘤作用顯著減弱（P > 0.05）。

上述結果說明APG-1387與抗PD-1抗體的聯合抗腫瘤作用依賴於IL-12的功能。本實驗結果也再次驗證了APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥在MC38模型中的協同抗腫瘤作用。

總結

本研究在MC38結腸癌皮下移植瘤、ID8-Luc卵巢癌原位移植瘤和A20淋巴瘤皮下移植瘤三種鼠源小鼠同種移植瘤模型中評價了APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥的抗腫瘤作用。在上述三種移植瘤模型的實驗結果均證實APG-1387與免疫檢查點抑制劑抗PD-1抗體聯合用藥具有協同抗腫瘤作用，並可轉化為更好的生存獲益。在A20模型中，抗PD-1抗體單獨用藥的腫瘤緩解率為20%（1隻動物腫瘤完全消退，即CR療效）；APG-1387與抗PD-1抗體兩藥聯合可獲得40%的腫瘤緩解率（2隻動物CR），進一步證明兩藥聯用的優勢；APG-1387與抗PD-1抗體、多西他賽三藥聯用可進一步將腫瘤緩解率提高到80% （2隻動物CR，2隻動物腫瘤部分消退，即PR療效），提示三藥聯用的潛力。

為了探索APG-1387與抗PD-1抗體協同抗腫瘤作用的機制，我們在MC38、ID8-Luc、和PLC/PRF/5模型中開展了一系列腫瘤浸潤淋巴細胞分析實驗。結果發現，APG-1387單一用藥可增加MC38模型中脾臟組織中作用記憶型T細胞數量。在ID8-Luc模型中，APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥可顯著增加腹水樣品中作用記憶型T細胞的數量。最重要的是，APG-1387單一用藥在上述三種模型中可增加腫瘤組織中浸潤的NK細胞比例。這些結果提示APG-1387可能是藉由增加腫瘤組織浸潤的NK細胞的比例，並以此與抗PD-1抗體產生協同抗腫瘤作用的。IL-12是NK細胞活化和發揮細胞殺傷功能所需要的重要細胞因子。採用抗IL-12抗體阻斷IL-12功能後，APG-1387與抗PD-1抗體的聯合抗腫瘤作用顯著減弱，說明APG-1387與抗PD-1抗體的聯合抗腫瘤作用依賴於IL-12的功能。此外，在健康小鼠的脾臟分析中還發現APG-1387給藥可增加脾臟細胞MHC-II的表現。上述結果表明APG-1387可藉由參與抗腫瘤免疫中的多個環節（包括增加作用記憶型T細胞、NK細胞比例、並增加免疫細胞MHC-II分子表現），與抗PD-1抗體產生協同抗腫瘤作用。

目前，APG-1387正在晚期實體瘤患者和惡性血液瘤患者中進行1/2期臨床試驗（NCT03386526）。以上實驗結果表明， APG-1387單藥在本研究所用劑量和給藥方案下均可良好耐受，與抗PD-1抗體聯合時，沒有觀察到實驗動物顯著的體重下降，也沒有觀察到其他顯著的藥物相關毒性。

APG-1387可以聯合免疫檢查點抑制抗PD-1抗體進行針對不同腫瘤的臨床試驗開發。

除本文中描述的那些外，根據前述描述，本發明的各種修改對所屬領域中具有通常知識者而言會是顯而易見的。這樣的修改也意圖落入所附申請專利範圍內。本案中所引用的各參考文獻(包括所有專利、專利申請、期刊文章、書籍及任何其它公開)均以其整體援引加入本文。

無

圖1係APG-1387與抗PD-1抗體和多西他賽聯合用藥在CT26小鼠結直腸癌模型中的協同抗腫瘤作用。

圖2A及圖2B分別為給藥後第18天和給藥後第25天各組各隻小鼠的腫瘤生長曲線和每組的腫瘤反應率。

圖3係APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥在MC38同源小鼠結腸癌模型中的協同抗腫瘤作用。

圖4係APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥在MC38同源小鼠結腸癌模型中提高小鼠生存率的作用。

圖5係APG-1387促進CD4⁺ 和CD8⁺ T細胞的增殖。

圖6係胰腺癌的治療持續時間和反應。

圖7係胰腺癌靶病變中相對於基準線的最佳百分比變化。

圖8係APG-1387在血漿中的藥物動力學。

圖9係APG-1387治療後的XIAP抑制。

圖10係APG-1387治療後血清細胞因子表現量變化。在基準線時和在APG-1387治療的第一個治療週期的第16天（APG-1387治療後24小時），在從患者收集的血清中的細胞因子表現量的熱力圖，所示為針對每個患者根據基準線進行標準化後的數據。

圖11係APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥顯著抑制鼠源MC38皮下移植瘤小鼠的腫瘤生長（圖11的A和B部分）並顯著延長小鼠的生存時間（圖11的C和D部分）。

圖12係APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥顯著抑制鼠源ID8-Luc原位移植瘤小鼠的腫瘤生長（圖12的A和B部分）並顯著延長小鼠的生存時間（圖12的C和D部分）。

圖13係APG-1387與抗PD-1抗體及多西他賽聯合用藥顯著抑制鼠源A20皮下移植瘤小鼠的腫瘤生長（圖13的A和B部分），並且具有良好的耐受性（圖13的C部分）。

圖14係APG-1387單一用藥顯著抑制在MC38模型中顯著上調脾臟中作用記憶型CD4⁺ T細胞和CD8⁺ T細胞比例（圖14的A部分），顯著上調腫瘤組織中NK細胞比例（圖14的B部分）。

圖15係APG-1387顯著上調腹水樣品中NK細胞比例（圖15的A部分），與抗PD-1抗體聯合用藥顯著上調腹水樣品中作用記憶型CD8⁺ T細胞的比例（圖15的B部分）。

圖16係APG-1387在PLC/PRF/5小鼠模型中顯著增加腫瘤浸潤CD45⁺ 細胞和NK細胞比例。

圖17係APG-1387對脾臟裡的免疫細胞的比例無影響（圖17的A部分），APG-1387在體內顯著增加C57小鼠脾臟細胞MHC-II的表現（圖17的B部分）。

圖18係APG-1387與抗PD-1抗體聯合用藥對鼠源MC38皮下移植瘤小鼠的抗腫瘤作用依賴於IL-12。

Claims

遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的方法，該方法包括向該個體給藥治療有效量的IAP抑制劑、治療有效量的免疫檢查點分子調節劑和/或治療有效量的微管蛋白抑制劑。
如申請專利範圍第1項所述的方法，其中該IAP抑制劑為式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽：
其中： X選自
和-SO₂ -； Y選自-NH-、-O-、-S-和不存在； R選自
，-C_3-6 亞環烷基，
和
； R₁ 選自

； Z是O、S或NH； n是0、1或2；環A是C_4-8 脂族環；且 B環是苯基、萘基、吡啶基、噠嗪基、吡嗪基或嘧啶基，且B環是任選取代的。
如申請專利範圍第1或2項所述的方法，其中R是：
。
如申請專利範圍第1至3項中任一項所述的的方法，其中R₁ 是：
。
如申請專利範圍第1至4項中任一項所述的方法，其中X是SO₂ ，且Y不存在。
如申請專利範圍第1至5項中任一項所述的方法，其中該式(I)的化合物是：
。
如申請專利範圍第1至6項中任一項所述的方法，其中該免疫檢查點分子調節劑是抗體、抗體Fab片段、二價抗體、抗體藥物綴合物、scFv、融合蛋白、或四價抗體，較佳地，該免疫檢查點分子調節劑為單株抗體或其抗原結合片段。
如申請專利範圍第1至7項中任一項所述的方法，其中該免疫檢查點分子是PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIM-3、LAG3、CD160、2B4、TGFβ、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、NKG2C、SLAMF7、NKp80、B7-H3、LFA-1、1COS、4-1BB、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT或CD83配體，較佳地，該免疫檢查點分子是PD-1、PD-L1或CTLA-4。
如申請專利範圍第1至8項中任一項所述的方法，其中該免疫檢查點分子調節劑用於恢復抗腫瘤T細胞活性和/或阻斷T細胞抑制細胞活性。
如申請專利範圍第1至9項中任一項所述的方法，其中該免疫檢查點分子調節劑是共刺激檢查點分子活化劑，該共刺激檢查點分子活化劑改變完整T細胞活化所需的共刺激訊號。
如申請專利範圍第1至10項中任一項所述的方法，其中該免疫檢查點分子調節劑是PD-1抗體、CLTA-4抗體、或PD-L1抗體。
如申請專利範圍第1至11項中任一項所述的方法，其中該免疫檢查點分子調節劑是帕博利珠單株抗體、伊匹木單株抗體、nivolumab、atezolizumab、avelumab、durvalumab、AGEN-1884、BMS-986016、CS1001、CS1002、LAG525、MBG453、MEDI-570、OREG-103/BY40、lirilumab、tremelimumab、JS001、SHR-1210、BGB-A317、IBI-308、REGN2810、JS003、SHR-1316、KN035或BMS-936559，較佳地，該免疫檢查點分子調節劑是帕博利珠單株抗體。
如申請專利範圍第1至12項中任一項所述的方法，其中該微管蛋白抑制劑選自紫杉醇(泰素)、埃博黴素、多西他賽、海綿內酯、秋水仙鹼、考布他汀、2-甲氧基雌二醇、甲氧基苯磺醯胺(E7010)、長春鹼、長春新鹼、長春瑞濱、長春氟甯、朵拉司他汀、軟海綿素、哈米特林和cryptophysin 52。
如申請專利範圍第1至13項中任一項所述的方法，其中該微管蛋白抑制劑是多西他賽或紫杉醇。
如申請專利範圍第1至14項中任一項所述的方法，其中該IAP抑制劑是APG-1387，該免疫檢查點分子調節劑是PD-1抗體，該微管蛋白抑制劑是多西他賽或紫杉醇。
如申請專利範圍第1至15項中任一項所述的方法，其中該癌症為早期癌症、中期癌症或者晚期癌症，較佳地，該癌症選自腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、骨轉移癌、成人腦/中樞神經系統腫瘤、兒童腦/中樞神經系統腫瘤、乳腺癌、男性乳腺癌、兒童癌症、原發癌未知癌症、Castleman病、Merkel細胞癌、宮頸癌、結腸癌、結直腸癌、子宮內膜癌、食道癌、尤文氏肉瘤家族腫瘤、眼癌、膽囊癌、消化道癌症(如胃癌)、胃腸道間質瘤腫瘤(GIST)、滋養細胞癌、頭頸癌、卡波西肉瘤、腎癌、腎細胞癌、喉癌和下嚥癌、白血病(例如急性淋巴細胞白血病(ALL)、急性骨髓細胞白血病(急性骨髓性白血病，AML)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、慢性骨髓細胞白血病(CML)、慢性骨髓單核細胞白血病(CMML)或兒童白血病)、肝癌（如肝細胞癌）、肺癌(如非小細胞肺癌或小細胞肺癌)、淋巴瘤、皮膚淋巴瘤、惡性間皮瘤、多發性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合症、鼻腔和鼻竇癌、鼻咽癌、神經母細胞瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、兒童非霍奇金淋巴瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、陰莖癌、惡性垂體瘤、前列腺癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤(如成人軟組織癌或子宮肉瘤)、皮膚癌(如基底和鱗狀細胞癌或黑色素瘤)、小腸癌、睾丸癌症、胸腺癌、甲狀腺癌、陰道癌、外陰癌、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、威爾姆斯腫瘤、尿路上皮癌、微衛星不穩定的實體瘤(高或錯配修復缺陷)和絨毛膜癌，較佳地，該癌症為頭頸癌、微衛星不穩定的實體瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、黑色素瘤、鱗狀細胞癌、Merkel細胞瘤、尿路上皮癌、或結直腸癌。
如申請專利範圍第1至16項中任一項所述的方法，其中將該IAP抑制劑以約0.005 mg/日至約5000 mg/日的量，例如約0.005、0.05、0.5、5、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500或5000 mg/日的量給藥。
如申請專利範圍第1至17項中任一項所述的方法，其中將該IAP抑制劑以每單位劑量約1 ng/kg至約200 mg/kg、約1 μg/kg至約100 mg/kg或者約1 mg/kg至約50 mg/kg的量給藥，例如以每單位劑量約1 μg/kg、約10 μg/kg、約25 μg/kg、約50 μg/kg、約75 μg/kg、約100 μg/kg、約125 μg/kg、約150 μg/kg、約175 μg/kg、約200 μg kg、約225 μg/kg、約250 μg kg、約275 μg kg、約300 μg/kg、約325 μg kg、約350 μg/kg、約375 μg/kg、約400 μg/kg、約425 μg/kg、約450 μg/kg、約475 μg/kg、約500 μg/kg、約525 μg kg、約550 μg/kg、約575 μg kg、約600 μg/kg、約625 μg/kg、約650 μg/kg、約675 μg/kg、約700 μg/kg、約725 μg/kg、約750 μg/kg、約775 μg/kg、約800 μg/kg、約825 μg/kg、約850 μg/kg、約875 μg/kg、約900 μg/kg、約925 μg/kg、約950 μg/kg、約975 μg/kg、約1 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3mg/kg、約3.5mg/kg、約4 mg/kg、約4.5mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約60 mg/kg、約70 mg/kg、約80 mg/kg、約90 mg/kg、約100 mg/kg、約125 mg/kg、約150 mg/kg、約175 mg/kg、約200 mg/kg的量給藥，並且每天給藥一個或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個)單位劑量。
如申請專利範圍第1至18項中任一項所述的方法，其中將該免疫檢查點分子調節劑或者該微管蛋白抑制劑以約0.005 mg/週至約5000 mg/週的量，例如約0.005、0.05、0.5、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500或5000 mg/週的量給藥。
如申請專利範圍第1至19項中任一項所述的方法，其中將該免疫檢查點分子調節劑或者該微管蛋白抑制劑以每單位劑量約1 ng/kg至約200 mg/kg、約1 μg/kg至約100 mg/kg或者約1 mg/kg至約50 mg/kg的量給藥，例如以每單位劑量約1 μg/kg、約10 μg/kg、約25 μg/kg、約50 μg/kg、約75 μg/kg、約100 μg/kg、約125 μg/kg、約150 μg/kg、約175 μg/kg、約200 μg kg、約225 μg/kg、約250 μg kg、約275 μg kg、約300 μg/kg、約325 μg kg、約350 μg/kg、約375 μg/kg、約400 μg/kg、約425 μg/kg、約450 μg/kg、約475 μg/kg、約500 μg/kg、約525 μg kg、約550 μg/kg、約575 μg kg、約600 μg/kg、約625 μg/kg、約650 μg/kg、約675 μg/kg、約700 μg/kg、約725 μg/kg、約750 μg/kg、約775 μg/kg、約800 μg/kg、約825 μg/kg、約850 μg/kg、約875 μg/kg、約900 μg/kg、約925 μg/kg、約950 μg/kg、約975 μg/kg、約1 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3mg/kg、約3.5mg/kg、約4 mg/kg、約4.5mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約60 mg/kg、約70 mg/kg、約80 mg/kg、約90 mg/kg、約100 mg/kg、約125 mg/kg、約150 mg/kg、約175 mg/kg、約200 mg/kg的量給藥，並且每週給藥一個或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或20個)單位劑量。
如申請專利範圍第1至20項中任一項所述的方法，其中將該IAP抑制劑、該免疫檢查點分子調節劑和該微管蛋白抑制劑一起、同時、順序或交替給藥。
如申請專利範圍第1至21項中任一項所述的方法，其中將該IAP抑制劑、該免疫檢查點分子調節劑或者該微管蛋白抑制劑連續給藥至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天、至少18天、至少19天、至少20天、至少21天、至少22天、至少23天、至少24天、至少25天、至少30天、至少35天、至少40天、至少45天或至少50天。
如申請專利範圍第1至22項中任一項所述的方法，其中將該IAP抑制劑、該免疫檢查點分子調節劑或者該微管蛋白抑制劑給藥一個或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個)療程，其中每個療程持續至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天、至少18天、至少19天、至少20天、至少21天、至少22天、至少23天、至少24天、至少25天、至少30天、至少35天、至少40天、至少45天或至少50天；其中每個療程給藥1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次；並且每兩個療程之間間隔0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10天、兩週、三週、四週、一個月或兩個月。
如申請專利範圍第1至23項中任一項所述的方法，其中將該IAP抑制劑、該免疫檢查點分子調節劑或者該微管蛋白抑制劑以相同或不同的給藥途徑施用，該給藥途徑包括口服、靜脈注射或皮下注射。
如申請專利範圍第1至24項中任一項所述的方法，其中該IAP抑制劑增強該免疫檢查點分子調節劑和/或該微管蛋白抑制劑在治療癌症中的療效和/或降低了該免疫檢查點分子調節劑和/或該微管蛋白抑制劑在治療癌症中的副作用。
如申請專利範圍第1至25項中任一項所述的方法，其中該個體患有晚期癌症。
如申請專利範圍第1至26項中任一項所述的方法，其中該個體患有難治性癌症、復發性癌症或抗藥性性癌症，特別是患有對於包含該免疫檢查點分子調節劑和/或該微管蛋白抑制劑的癌症療法具抗藥性的癌症。
一種藥物組合物，其包含IAP抑制劑、免疫檢查點分子調節劑和微管蛋白抑制劑以及藥學上可接受的載體；其中：該IAP抑制劑較佳如申請專利範圍第2至6項中任一項所定義；該免疫檢查點分子調節劑較佳如申請專利範圍第7至12項中任一項所定義；並且該微管蛋白抑制劑較佳如申請專利範圍第13或14項中所定義。
一種藥盒，其包含： (a) 位於第一容器中的第一組份，該第一組份包含IAP抑制劑(較佳如申請專利範圍第2至6項所定義)和任選存在的藥學上可接受的載體； (b) 位於第二容器中的第二組份，該第二組份包含免疫檢查點分子調節劑(較佳如申請專利範圍第7至12項中任一項所定義)和任選存在的藥學上可接受的載體； (c) 位於第三容器中的第三組份，該第三組份包含微管蛋白抑制劑(較佳如申請專利範圍第13或14項所定義)和任選存在的藥學上可接受的載體；以及 (d) 任選存在的說明書。
遏制個體的癌症、降低其嚴重性、降低其風險或抑制其轉移的方法，該方法包括向該個體給藥治療有效量的IAP抑制劑(較佳如申請專利範圍第2至6項中任一項所定義)以及治療有效量的免疫檢查點分子調節劑(較佳如申請專利範圍第7至12項中任一項所定義)。
如申請專利範圍第30項所述的方法，其中該癌症是晚期實體腫瘤或血液惡性腫瘤，較佳地，該癌症是轉移性胰腺癌、結直腸癌、卵巢癌、淋巴瘤或肝癌（肝細胞癌）。
一種藥物組合物，其包含IAP抑制劑和免疫檢查點分子調節劑以及藥學上可接受的載體；其中：該IAP抑制劑較佳如申請專利範圍第2至6項中任一項所定義；並且該免疫檢查點分子調節劑較佳如申請專利範圍第7至12項中任一項所定義。
一種藥盒，其包含： (a) 位於第一容器中的第一組份，該第一組份包含IAP抑制劑(較佳如申請專利範圍第2至6項中任一項所定義)和任選存在的藥學上可接受的載體； (b) 位於第二容器中的第二組份，該第二組份包含免疫檢查點分子調節劑(較佳如申請專利範圍第7至12項中任一項所定義)和任選存在的藥學上可接受的載體；以及 (c) 任選存在的說明書。
一種治療癌症的方法，包括對有需要的患者施用治療有效量的IAP抑制劑，其中該方法包括至少一個21天的治療週期，其中在該治療週期中的連續3週中的第1、8和15天施用該IAP抑制劑。
如申請專利範圍第34項所述的方法，其中該IAP抑制劑是APG-1387。
如申請專利範圍第35項所述的方法，其中APG-1387藉由靜脈注射施用。
如申請專利範圍第34至36項中任一項所述的方法，其中治療有效量的IAP抑制劑是從約15 mg到約100 mg，或從20 mg到45 mg，或從20 mg到60 mg。
如申請專利範圍第34至36項中任一項所述的方法，其中治療有效量是20 mg。
如申請專利範圍第34至36項中任一項所述的方法，其中治療有效量是30 mg。
如申請專利範圍第34至36項中任一項所述的方法，其中治療有效量是45 mg。
如申請專利範圍第34至36項中任一項所述的方法，其中治療有效量是60 mg。
如申請專利範圍第34至36項中任一項所述的方法，其中治療有效量是80 mg。
如申請專利範圍第34至42項中任一項所述的方法，其中該癌症是晚期實體腫瘤或血液惡性腫瘤，較佳地，該癌症是轉移性胰腺癌、結直腸癌、卵巢癌、淋巴瘤或肝癌（如肝細胞癌）。
如申請專利範圍第34至43項中任一項所述的方法，其中該IAP抑制劑與一種或多種系統性抗癌藥劑聯合施用。
如申請專利範圍第44項所述的方法，其中該系統性抗癌藥劑選自抗PD-1抗體（例如帕博利珠單株抗體）、微管蛋白抑制劑（例如紫杉醇、多西他賽）或卡鉑。
如申請專利範圍第45項所述的方法，其中帕博利珠單株抗體、紫杉醇和卡鉑獨立地靜脈施用。
如申請專利範圍第44項所述的方法，其中APG-1387與帕博利珠單株抗體聯合用藥用於治療晚期實體瘤患者或血液惡性腫瘤。
如申請專利範圍第44項所述的方法，其中APG-1387與帕博利珠單株抗體和多西他賽聯合用藥用於治療晚期實體瘤患者或血液惡性腫瘤。
如申請專利範圍第47或48項所述的方法，其中該晚期實體瘤是晚期卵巢癌、胰腺癌、結腸癌或肝癌（如肝細胞癌），該血液惡性腫瘤是淋巴瘤。
如申請專利範圍第44項所述的方法，其中APG-1387與紫杉醇和卡鉑聯合用藥用於治療晚期實體瘤患者。
如申請專利範圍第44項所述的方法，其中APG-1387與紫杉醇和卡鉑聯合用藥用於治療晚期卵巢癌、胰腺癌、結腸癌、肝癌（如肝細胞癌）。
一種在個體體內活化或提高抗原特異性免疫反應的方法，包括向所需個體給藥治療有效量的IAP抑制劑以活化或提高個體的抗原特異性免疫反應。
如申請專利範圍第52項所述的方法，其中該IAP抑制劑為APG-1387。
如申請專利範圍第52或53項所述的方法，其中該抗原為腫瘤抗原。
如申請專利範圍第52至54項中任一項所述的方法，其中該抗原特異性免疫反應包括增加作用記憶型細胞的比例。
如申請專利範圍第55項所述的方法，其中該作用記憶型細胞包括作用記憶型CD4⁺ T細胞，和/或作用記憶型 CD8⁺ T細胞。
如申請專利範圍第52至54項中任一項所述的方法，其中該抗原特異性免疫反應包括增加的抗原刺激的NK細胞的比例。
如申請專利範圍第52至54項中任一項所述的方法，其中該抗原特異性免疫反應包括增加抗原呈現細胞中的MHC-II 表現。
如申請專利範圍第52至58項中任一項所述的方法，其中該對抗原特異性免疫反應的活化或提高是依賴於IL-12的。