TW201902894A

TW201902894A - 用於治療寄生疾病之5,6-稠合-雙環化合物及組合物

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Publication number: TW201902894A
Application number: TW107118305A
Authority: TW
Inventors: 詹吉利克; 伊莎貝里 K 雷拉里歐; 梁芳; 劉小東; 凡倫堤那摩堤尼; 艾德維特蘇瑞許奈葛雷; 黃淑懿; 麥克森拉特尼寇夫; 傑弗瑞 M 史密斯; 揚平紀
Original assignee: 瑞士商諾華公司
Priority date: 2017-05-31
Filing date: 2018-05-29
Publication date: 2019-01-16
Also published as: MX389106B; CO2019013254A2; AU2018276190B2; ECSP19084722A; BR112019024804A2; CN110678468A; US20200109142A1; US11384078B2; EP3630771B1; CU24543B1; IL270927A; CN110678468B; PE20201148A1; CL2019003467A1; PH12019502652A1; JP7187490B2; AU2018276190A1; WO2018220531A1; KR20200010275A; JP2020521775A

Abstract

本發明提供一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽；

Description

用於治療寄生疾病之5,6-稠合-雙環化合物及組合物

本發明係關於具有針對動質體原蟲之抗寄生物活性的化合物。

利什曼體病係由屬於利什曼原蟲屬(Leishmania )之原蟲寄生蟲所引起的疾病且藉由某種白蛉(sand fly)之叮咬傳播。利什曼體病有四種主要形式。皮膚利什曼體病為利什曼體病之最常見形式。內臟利什曼體病為最嚴重形式，其中寄生蟲遷移至生命器官，係由寄生蟲杜氏利什曼原蟲(Leishmania donovani )引起，且若未經治療則可能致命。其影響全世界多達1200萬人，每年有150-200萬個新案例。利什曼體病之內臟形式每年具有估計的500,000個新案例之發生率及60,000例死亡。

兩種主要的內臟利什曼體病之療法為銻衍生物葡萄糖酸銻鈉(Pentostam®)及葡甲胺銻酸鹽(Glucantim®)。葡萄糖酸銻鈉已使用約70年且對此藥物之抗性係一個日益嚴峻的問題。另外，治療相對較長且痛苦，且可導致不想要的副作用。雙性黴素(Amphotericin)(AmBisome®)係目前所選之治療劑。米替福新(Miltefosine)(Impavido®)及巴龍黴素(paromomycin)係其他治療替代方案。

雙性黴素(AmBisome)價格昂貴且必須靜脈內給予。巴龍黴素需要肌內注射3週；遵從性係主要問題。米替福新為口服藥物且已顯示與其他藥物相比更有效且耐受更好。然而，存在與使用米替福新相關之問題，其產生於該藥物之致畸性及藥物動力學。經顯示，米替福新自身體排除慢得多且在治療結束之後五個月仍可偵測到。治療後超過五個月在血液中存在亞治療性米替福新濃度可能會有助於抗性寄生蟲之選擇，而且，必須重新考慮用於預防米替福新之致畸風險的措施。目前，無常規使用之疫苗。

卻格司氏病(Chagas disease)，亦稱為美國錐蟲病(American trypanosomiasis)，係由鞭毛蟲原蟲克氏錐蟲(Trypanosoma cruzi )引起之熱帶寄生蟲疾病。克氏錐蟲(T . cruzi )通常係藉由子族錐蝽(Triatominae)(獵蝽(Reduviidae)科)之吸血「接吻蟲」傳播至人類及其他哺乳動物。每年，估計有1000至1500萬橫跨世界的人感染卻格司氏病，其中的大部分不知道其被感染。每年，14,000人死於該疾病。在中美洲及南美洲，與任何其他寄生蟲媒介疾病(包括瘧疾)相比，卻格司氏殺死更多的人。CDC估計，在美國居民中有超過300,000人感染有克氏錐蟲的。

卻格司氏病之症狀隨感染之過程變化。在早期、急性階段中，症狀為輕度的且通常僅在感染部位產生局部腫脹。初始急性期對抗寄生蟲治療具反應性，治癒率為60-90%。在4-8週之後，具有活性感染之個人進入卻格司氏病之慢性期，其對於60-80%長期感染之個體為終生無症狀的。然而，估計其餘20-40%受感染的人將在其生命過程中產生衰弱且有時危及生命之醫學問題。

對於卻格司氏病之治療聚焦於殺滅寄生蟲及管理跡象及症狀。在卻格司氏病之急性期期間，目前可用於治療之藥物為苄硝唑(benznidazole)及硝呋莫司(nifurtimox)。一旦卻格司氏病到達慢性期，藥物對治癒該疾病無效。相反地，治療係視特定跡象及症狀而定。然而，此等目前療法之問題包括其多樣的副作用、治療之持續時間及在治療期間對醫務監督之要求。已出現對兩種一線藥物之抗性。已提出將抗真菌劑雙性黴素b作為二線藥物，但昂貴且相對有毒性。無針對卻格司氏病之疫苗。

人類非洲錐蟲病(Human African trypanosomiasis，HAT)，亦稱為非洲昏睡病，係由原蟲布氏錐蟲(Trypanosoma brucei )引起的病媒感染寄生蟲疾病。存在兩種感染人類之子種，布氏岡比亞錐蟲(T . b . gambiense )、布氏羅得西亞錐蟲(T . b . rhodesiense )，其中前者占經報導案例之超過95%且後者占經報導案例之其餘部分。寄生蟲係藉由已自攜帶有人類病原性寄生蟲之人類或動物得到其感染的采采蠅(舌蠅(Glossina )屬)的叮咬傳播至人類。2008年，約48,000人死於昏睡病。預防及根除采采蠅群體之公共衛生工作已成功控制疾病之擴散；根據WHO數字，2009年報導了低於10,000個新案例，其體現自1998年所估計的300,000個新案例之大幅下降。

非洲錐蟲病症狀分兩個階段出現。在稱為血淋巴期之第一階段中，錐蟲在皮下組織、血液及淋巴中倍增。血淋巴期係之特徵為發熱、頭痛、關節疼痛及瘙癢之發作。在第二階段神經期中，寄生蟲穿過血腦障壁感染中樞神經系統。該疾病之更明顯的跡象及症狀在此階段中出現(例如行為變化、意識模糊、感官紊亂及協調不良)。給予該疾病其名稱之睡眠週期紊亂為該疾病之第二階段之重要特徵。在不治療的情況下，該疾病一定係致命的，其伴以導致昏迷、全身性器官衰竭及死亡之進展性精神惡化。

四種藥物經註冊用於治療昏睡病。方案視疾病之階段而定。針對第一階段疾病之目前標準治療為靜脈內或肌肉內噴他脒(pentamidine)(針對布氏岡比亞錐蟲)，或靜脈內蘇拉明(suramin)(針對布氏羅得西亞錐蟲)。針對第二階段疾病之目前標準治療為靜脈內美拉胂醇(melarsoprol)或靜脈內美拉胂醇與口服硝呋莫司組合、靜脈內僅依氟鳥胺酸(eflornithine)或依氟鳥胺酸與硝呋莫司組合。所有藥物均有不想要的或潛在地嚴重的副作用。舉例而言，3-10%注射有美拉胂醇(Arsobal®)之患者出現反應性腦病(抽搐、進展性昏迷或精神病性反應)，且10-70%此類情況導致死亡。

因此，一直存在對利什曼體病、卻格司氏病及HAT之新穎且更好的治療及療法的需求。

在某些態樣中，本發明提供式(I)或其子式之化合物：(I) 或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體；其中環A為苯基或吡啶基； R¹ 選自： (a) C₁ _- ₆ 烷基，其未經取代或經1至3個獨立地選自鹵素及C₃ _- ₆ 環烷基之取代基取代；且該C₃ _- ₆ 環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代； (b) C₁ _- ₄ 烷氧基，其未經取代或經C₁ _- ₄ 鹵烷基取代； (c) -NR^5a R^5b ，其中R^5a 及R^5b 獨立地為氫、C₁ _- ₄ 烷基或C₁ _- ₄ 鹵烷基；或R^5a 與R^5b 連同二者所連接之氮原子一起形成4至7員雜環烷基，其包含1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子；其中該4至7員雜環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、C₁ _- ₄ 烷基及C₁ _- ₄ 烷氧基；或4至7員雜環烷基之相同或不同環原子上之兩個取代基連同其所連接之原子一起形成連接於該4至7員雜環烷基之螺環、橋環或稠環B；其中環B為C₃ _- ₆ 環烷基或包含1至3個獨立地選自N、O或S之雜原子作為環原子的3至7員雜環烷基； (d) 單環C₃ _- ₆ 環烷基、C₃ _- ₆ 環烯基或螺戊基；各自未經取代或經1至3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基及C₁ _- ₄ 鹵烷基及C₁ _- ₄ 烷氧基； (e) 苯基，或包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子的5-6員雜芳基；其各自未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、二C₁ _- ₄ 烷基胺基-C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 羥基烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基及C₃ _- ₆ 環烷基； R² 及R⁷ 獨立地為氫或C₁ _- ₄ 烷基； R³ 為氫或鹵素，且n為0或1；及 R⁴ 選自 (a) 氫； (b) 鹵素； (c) C₁ _- ₆ 鹵烷基或C₁ _- ₆ 烷基，其未經取代或經C₃ _- ₆ 環烷基取代；且該C₃ _- ₆ 環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代； (d) -NR^6a R^6b ，其中R^6a 為氫或C₁ _- ₄ 烷基；R^6b 為氫、C₁ _- ₄ 烷氧基羰基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₃ _- ₆ 環烷基或C₁ _- ₄ 烷基，其未經取代或經C₁ _- ₄ 烷氧基取代；或 R^6a 與R^6b 連同二者所連接之氮原子一起形成4至7員雜環烷基，其包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子；其中4至7員雜環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基、側氧基、1,1-二側氧基、-C(O)-OR⁷ ，或4-6員雜環烷基，其包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子；或4至7員雜環烷基之相同或不同環原子上之兩個取代基連同其所連接之原子一起形成連接於該4至7員雜環烷基之螺環、橋環或稠環C；其中環C選自C₃ _- ₆ 環烷基及包含1至3個獨立地選自N、O或S之雜原子作為環原子的3至7員雜環烷基；且獨立地未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及側氧基之取代基取代； (e) C₃ _- ₆ 環烷基； (f) 4至6員雜環烷基，其包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子；且未經取代或經-C(O)OR⁸ 、-C(O)R⁸ 取代，其中R⁸ 為C₁ _- ₄ 烷基及芳基C₁ _- ₄ 烷基，其未經取代或經1至2個鹵基取代基取代；及 (g) 5至6員雜芳基，其包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子；其未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 羥基烷基及C_3-6 環烷基。

在另一態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含治療有效量之式(I)或其子式之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體；及一或多種醫藥學上可接受之載劑。

在另一態樣中，本發明提供一種組合，尤其一種醫藥組合，其包含治療有效量之式(I)或其子式之化合物，或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體；及一或多種治療活性劑。

呈游離形式或呈醫藥學上可接受之鹽之形式的式(I)或其子式之化合物可適用作可以獲益於抑制動質體寄生蟲之生長及增殖之疾病或病況的療法。在一個態樣中，本發明提供一種式(I)或其子式之化合物、其醫藥學上可接受之鹽或其立體異構體，其用於治療、預防抑制、改善或根除由動質體寄生蟲由所引起之疾病之病變及/或症候。在另一態樣中，本發明提供一種選自式(I)或其子式之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體之用途，其用於製造治療個體之由動質體寄生蟲所引起之疾病之藥劑。動質體寄生蟲包括但不限於利什曼原蟲屬之寄生蟲，例如，杜氏利什曼原蟲、嬰兒利什曼原蟲(Leishmania infantum )、巴西利什曼原蟲(Leishmania braziliensis )、巴拿馬利什曼原蟲(Leishmania panamensis )、圭亞那利什曼原蟲(Leishmania guayanensis )、亞馬遜利什曼原蟲(Leishmania amazonensis )、墨西哥利什曼原蟲(Leishmania mexicana )、熱帶利什曼原蟲(Leishmania tropica )、碩大利什曼原蟲(Leishmania major )；或錐蟲屬之寄生蟲，例如，克氏錐蟲及布氏錐蟲。相應地，本發明之化合物可適用於治療選自以下之指征：利什曼體病、卻格司氏病(亦稱為美國錐蟲病)，更尤其，由原蟲克氏錐蟲所引起之卻格司氏病；及人類非洲錐蟲病，更尤其，由原蟲布氏錐蟲所引起之人類非洲錐蟲病。

除非另外規定，否則術語「本發明之化合物」係指式I及其子式之化合物；該化合物之鹽；該等化合物、該等鹽之水合物或溶劑合物；以及所有立體異構體(包括非對映異構體及對映異構體)、互變異構體及經同位素標記之化合物(包括氘取代)。本發明之化合物另外包含式(I)(或其子式)之化合物及其鹽之多晶型物。

相關申請案之交叉參考 本申請案主張於2017年5月31日申請的美國臨時申請案序列號62/513,211及於2017年11月6日申請的美國臨時序列號62/581,919的權益；其中各者均以全文引用之方式併入本文中。

定義如本文所用，除非本文中另外指示或與上下文明顯矛盾，否則本發明之上下文中(尤其在申請專利範圍之上下文中)所用的術語「一(a/an)」、「該」及類似術語應解釋為涵蓋單數及複數兩者。

如本文所用，術語「C₁ _- ₆ 烷基」係指單獨由碳及氫原子組成、不含有不飽和、具有一個至六個碳原子且藉由單鍵附著至分子之其餘部分的直鏈或分支鏈烴鏈基團。術語「C₁ _- ₄ 烷基」應相應地理解。如本文所用，術語「正烷基」係指如本文所定義之直鏈(非分支)烷基。C₁ _- ₆ 烷基之實例包括但不限於：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基(--CH₂ CH(CH₃ )₂ )、第二丁基(-CH(CH₃ )CH₂ CH₃ )、第三丁基(-C(CH₃ )₃ )、正戊基、異戊基(-(CH₂ )₂ CH(CH₃ )₂ )、新戊基(-CH₂ C(CH₃ )₃ )、第三戊基(-C(CH₃ )₂ CH₂ CH₃ )、2-戊基(-CH(CH₃ )(CH₂ )₂ CH₃ )、正己基及類似者。

如本文所用，術語「C₁ _- ₄ 烷基胺基」係指式-NH-R_a 之基團，其中R_a 為如上文所定義之C₁ _- ₄ 烷基。

如本文所用，術語「二(C₁ _- ₄ 烷基)胺基」係指式-N(R_a )-R_a 之基團，其中各R_a 為如上文所定義之C₁ _- ₄ 烷基，其可相同或不同。

如本文所用，術語「C₁ _- ₆ 烷氧基」係指式-OR_a 之基團，其中R_a 為如上文一般定義之C₁ _- ₆ 烷基。C₁ _- ₆ 烷氧基之實例包括但不限於：甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、戊氧基及己氧基。

如本文所用，術語「C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基」係指式-R^a -O-R^a 之基團，其中各R^a 獨立地為如上文所定義之C₁ _- ₆ 烷基。氧原子可鍵結於任一烷基中之任何碳原子。C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基之實例包括但不限於：甲氧基-甲基、甲氧基-乙基、乙氧基-乙基、1-乙氧基-丙基及2-甲氧基-丁基。

如本文所用，術語「C₁ _- ₆ 烷氧基羰基」係指式-C(=O)-O-R^a 之基團，其中R_a 為如上文一般定義之C₁ _- ₆ 烷基。

如本文所用，「芳基」係指6-14員單環或多環芳環總成，其中所有環原子為碳原子。通常，芳基為6員單環、10-12員雙環或14員稠合三環芳環系統。如本文所用之C_X 芳基及C_X _- _Y 芳基描述其中X及Y指示環系統中之碳原子數目的芳基。C₆ _- ₁₄ 芳基包括但不限於：苯基、聯苯基、萘基、薁基及蒽基。

如本文所用之「橋環(Bridging ring/bridged rings)」係指其中其中兩個環所共用之兩個環原子彼此不直接結合的多環環系統。環系統之一或多個環可包括C₃ _- ₆ 環烷基或包含選自N、O及S之雜原子作為環原子的4至6員雜環。橋環之非排他性實例包括：金剛烷基、氮雜雙環[3.2.1]辛-3-烯-3-基、及類似者。

如本文所用，術語「氰基」意指基團。

術語「環烷基」係指作為完全氫化環的非芳族碳環，其包括單、二或多環、稠環、橋環或螺環系統。環烷基之實例包括但不限於：環丙基、環丁基、環戊基、雙環[1,1,1]戊基、環己基、降冰片烷基及立方烷基。

如本文所用，「稠環」係指多環總成，其中構成環總成之環以一定方式連接以使得兩個環所共用之環原子彼此直接結合。稠環總成可為飽和、部分飽和、芳族、碳環族、雜環族及類似者。共用稠環之非排他性實例包括十氫萘、萘、蒽、菲、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、喹啉及其類似者。

「鹵素」或「鹵基」係指溴、氯、氟或碘；較佳氟、氯或溴。

如本文所用，「C₁ _- ₆ 鹵烷基」係指如上文所定義之經一或多個如上文所定義之鹵基取代的C₁ _- ₆ 烷基。C₁ _- ₆ 鹵烷基之實例包括但不限於：三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1,3-二溴丙-2-基、3-溴-2-氟丙基及1,4,4-三氟丁-2-基。

術語「雜芳基」係指在5至10員芳環系統中含有至少一個雜原子(例如氧、硫、氮氣或其組合)的芳族部分。雜芳基之實例包括但不限於：吡咯基、吡唑基、吲哚基、吲唑基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、噁唑基、異噁唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、三嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、喹啉基、異喹啉基、喹喏啉基、苯并哌喃基、苯幷噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁唑基及1H-苯并[d][1,2,3]三唑基。雜芳族部分可由單環系統或稠環系統組成。典型單雜芳基環為含有一至四個獨立地選自N、O及S之雜原子的5至6員環，且典型稠合雜芳基環系統為含有一至四個獨立地選自N、O及S之雜原子的9至10員環系統。稠合雜芳基環系統可由稠合在一起之兩個雜芳基環或與芳基(例如，苯基)稠合之雜芳基組成。

如本文所用，術語「雜原子」係指氮(N)、氧(O)或硫(S)原子。除非另外規定，否則假設具有不飽和化合價的任何雜原子均具有足以滿足化合價之氫原子，且當雜原子是硫時，其可未經氧化(S)或氧化成S(O)或S(O)₂ 。

如本文所用，術語「羥基(hydroxyl/hydroxy)」係指基團-OH。

如在本申請案中所定義，「雜環烷基」意指環烷基，其限制條件為所指定之一或多個環碳經替換為選自以下之部分：-O-、-N=、-NH-、-S-、-S(O)-及-S(O)₂ -。3至8員雜環烷基之實例包括但不限於：環氧乙基、氮丙啶基、吖丁啶基、咪唑啶基、吡唑啶基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫噻吩基1,1-二氧化物、噁唑啶基、噻唑啶基、吡咯啶基、吡咯啶基-2-酮、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡唑啶基、六氫嘧啶基、1,4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.5]癸-8-基、硫代嗎啉基、硫基嗎啉基、磺醯基嗎啉基及八氫吡咯并[3,2-b]吡咯基。

如本文所用之術語「側氧基」係指二價基團=O。

如本文所用之術語「螺」包括C₃ _- ₆ 環烷基或具有選自N、O及S之一或兩個雜原子作為環成員的4至6員雜環，其中螺環稠合在非芳環之單個碳原子上，使二個環所共享之碳原子成為螺環中心。螺環可視情況如所定義地經例如鹵基、羥基或C₁ _- ₄ 烷基取代。螺基團之說明性實例為：

，其中各結構中之虛線的鍵表示螺環基團與其共享一個原子之非芳環之鍵。

如本文所提及，術語「取代」意謂至少一個氫原子經非氫基團替換，其限制條件為保持正常價數且取代產生穩定化合物。當取代基為側氧基(亦即=O)時，則替換原子上之2個氫。在本發明之化合物上存在氮原子(例如胺)的情況下，此等可藉由用氧化劑(例如mCPBA及/或過氧化氫)處理而轉化成N-氧化物以得到本發明其他化合物。

如一般技術者將能夠理解，例如，分子中之酮(-CH-C(=O)-)基可互變異構化成其烯醇形式(-C=C(OH)-)。因此，本發明意欲涵蓋全部可能的互變異構體，甚至在結構僅描繪其中之一者時。

當任何變數在化合物之任何組分或式中出現一次以上時，其在每次出現時之定義獨立於其在其他每次出現時之定義。因此，例如，若基團展示為經0-3個R基團取代，則該基團可未經取代或經至多三個R基團取代，且在每次出現時R獨立地選自R之定義。

如本文所用，「」表示X與分子之其他部分之連接點。

如本文所用，術語「IC₅₀ 」係指產生50%抑制作用之抑制劑的莫耳濃度。

如本文所用，術語「EC₅₀ 」係指產生50%功效之抑制劑或調節劑之莫耳濃度。

如本文所用，術語「醫藥組合物」係指本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及至少一種醫藥學上可接受之載劑，其呈適用於局部或非經腸投與之形式。

如本文所用，術語「醫藥學上可接受之載劑」係指適用於製備或使用醫藥組合物之物質且如熟習此項技術者應已知，包含例如適合稀釋劑、溶劑、分散介質、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑、等張劑、緩衝劑、乳化劑、吸收延遲劑、鹽、藥物穩定劑、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、濕潤劑、甜味劑、調味劑、染料及其組合(參見例如Remington The Science and Practice of Pharmacy，第22版，Pharmaceutical Press, 2013, 第1049-1070頁)。

如本文所用，術語「抑制(inhibit/inhibition/inhibiting)」係指減少或遏制既定病況、症狀或病症或疾病，或顯著降低生物活動或過程之基線活性。

如本文所用，術語「預防(prevent/preventing/prevention)」任何疾病或病症係指對該疾病或病症之預防性治療；或延遲該疾病或病症之發作或進展。

如本文所用，術語「個體」係指靈長類(例如人類男性或女性)、狗、兔、天竺鼠、豬、大鼠及小鼠。在某些實施例中，個體為靈長類。在其他實施例中，個體為人類。

術語本發明之化合物之「治療有效量」係指將引發個體之生物學或醫學反應的本發明之化合物的量，該等反應例如降低或抑制酶或蛋白質活性或減輕症狀、緩解病況、減緩或延遲疾病進展或預防疾病等。在一個非限制性實施例中，術語「治療有效量」係指當向個體投與時能有效地(1)至少部分地緩解、抑制、預防及/或減輕由動質體寄生蟲之增殖所引起之病況或病症或疾病的本發明之化合物之量；或(2)減少或抑制動質體寄生蟲之增殖。

如本文所用，術語「治療(treat/treating/treatment)」任何疾病或病症係指緩解或減輕該疾病或病症(亦即，減緩或阻止該疾病或其至少一種臨床症狀之發展)；或緩解或減輕與該疾病或病症相關之至少一種生理參數或生物標記，包括病患可能無法辨別的彼等生理參數或生物標記。

本發明之實施例 本發明係關於具有針對動質體原蟲之抗寄生物活性的化合物。尤其係關於經由抑制寄生蟲蛋白酶體來抑制動質體寄生蟲細胞之生長的化合物，且因此適用作利什曼體病、卻格司氏病及非洲昏睡病之療法。

在本文中描述本發明之各種(所列舉的)實施例。各實施例中之特定特徵可與其他特定特徵組合，得到本發明之其他實施例。

實施例 1 . 一種式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，如發明內容中所描述。

實施例 2. 如實施例1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中環A為苯基。

實施例 3. 如實施例1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中環A為吡啶基。

實施例 4. 如實施例1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 選自：-(CH₂ )_1-3 CF₃ 、-(CH₂ )-CH(CH₃ )-CF₃ 、-(CH₂ )-C(CH₃ )₃ 、-O(CH₂ )₂ CF₃ 、-(CH₂ )_0-2 -環丙基、-(CH₂ )_0-2 -環丁基、 -NHCH₃ 、-N(CH₃ )₂ 、-N(CD₃ )₂ 、-N(CH₃ )(CH₂ CH₃ )、-N(CH₃ )(CH₂ CF₃ )、。

實施例 5. 如實施例1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為吖丁啶基，其未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代；或吖丁啶基之相同環原子上之兩個取代基連同二者所連接之環原子一起形成連接於該吖丁啶基環的螺環丙基或螺四氫呋喃基。

實施例 6. 如實施例1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 選自：。

實施例 7. 如實施例1至6中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R³ 為鹵基且n為1。

實施例 8. 如實施例7之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R³ 為氟。

實施例 9. 如實施例1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 選自：氫、氯、溴、甲基、異丙基、 -(CH₂ )_1-2 CH(CH₃ )₂ 、-(CH₂ )_0-1 C(CH₃ )₃ 、-C(CH₃ )₂ CH₂ CH₃ 、-CH(CH₃ ) (CH₂ )_1-2 CH₃ 、-CH₂ -環丁基、-(CH₂ )_0-1 CF₃ 、-NH-(CH₂ )_0-1 CH₃ 、 -N-(CD₃ )₂ 、-N(CH₃ )₂ 、-NH-CH-(CH₃ )₂ 、-NH-(CH₂ )-CH-(CH₃ )₂ 、 -NHC(O)OCH(CH₃ )₂ 、-NH(CH₂ )₂ OCH₃ 、。

實施例 10. 如實施例1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 為-NR^6a R^6b ； R^6a 為氫或C₁ _- ₄ 烷基； R^6b 為氫、C₁ _- ₄ 烷氧基羰基或C₁ _- ₄ 烷基，其未經取代或經C₁ _- ₄ 烷氧基取代；或R^6a 與R^6b 連同二者所連接之氮原子一起形成4至6員雜環烷基，其視情況包含1至2個獨立地選自N、O及S之額外雜原子作為環原子；其中4至6員雜環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基及側氧基；或4至6員雜環烷基之相同或不同環原子上之兩個取代基連同其所連接之原子一起形成連接於該4至6員雜環烷基之螺環、橋環或稠環C；其中環C選自C₃ _- ₆ 環烷基及包含1至3個獨立地選自N、O或S之雜原子作為環原子的3至5員雜環烷基；且環C獨立地為未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及側氧基之取代基取代。

實施例 11. 如實施例1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 選自：。

實施例 12. 如實施例1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；其中R¹ 為吖丁啶基，其未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代；或吖丁啶基之相同環原子上之兩個取代基連同二者所連接之環原子一起形成連接於該吖丁啶基環之螺環丙基或螺四氫呋喃基； R² 為氫或C₁ _- ₄ 烷基； R³ 選自鹵基，且n為1；且 R⁴ 為-NR^6a R^6b ，其中R^6a 為氫或C₁ _- ₄ 烷基；R^6b 為氫、C₁ _- ₄ 烷氧基羰基或C₁ _- ₄ 烷基，其未經取代或經C₁ _- ₄ 烷氧基取代；或R^6a 與R^6b 連同二者所連接之氮原子一起形成4至6員雜環烷基，其視情況包含1至2個獨立地選自N、O及S之額外雜原子作為環原子；其中4至6員雜環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基及側氧基；或4至6員雜環烷基之相同或不同環原子上之兩個取代基連同其所連接之原子一起形成連接於該4至6員雜環烷基之螺環、橋環或稠環C；其中環C選自C₃ _- ₆ 環烷基；包含1至3個獨立地選自N、O或S之雜原子作為環原子的3至5員雜環烷基；且環C獨立地為未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及側氧基之取代基取代。

實施例 13. 如實施例1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 選自：。

實施例 14. 如實施例1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 選自：。

實施例 15. 一種式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽： I 或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體；其中 W¹ 及W² 各自獨立地為CH或N；環A為苯基或吡啶基； X為-C(O)-或-S(O)₂ -； R¹ 選自 (a) C₁ _- ₄ 烷基，其未經取代或經1至3個獨立地選自鹵素及C₃ _- ₆ 環烷基之取代基取代，其中C₃ _- ₆ 環烷基取代基未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代； (b) C₁ _- ₄ 烷氧基，其未經取代或經C₁ _- ₄ 鹵烷基取代； (c) -NR^5a R^5b ，其中 (1) R^5a 與R^5b 各自獨立地為氫或C₁ _- ₄ 烷基；或 (2) R^5a 與R^5b 連同二者所連接之氮原子一起形成4至6員雜環烷基，其視情況包含1至3個獨立地選自N、O及S之額外雜原子作為環原子，其中 4至6員雜環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基及側氧基；或 4至6員雜環烷基之相同或不同環原子上之兩個取代基連同其所連接之原子一起形成連接於該4至6員雜環烷基之螺環、橋環或稠環B；其中環B選自 (i) C_3-6 環烷基； (ii) 3至5員雜環烷基，其包含1至3個獨立地選自N、O或S之雜原子作為環原子；及 (iii) 5至6員雜芳基，其包含1至3個獨立地選自N或O之雜原子作為環原子；其中屬於(i)至(iii)之環B各自為未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基及側氧基； (d) 單環C₃ _- ₆ 環烷基及多環C₅ _- ₉ 環烷基，其各自為未經取代或經1至3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基及C₁ _- ₄ 烷氧基羰基； (e) 4至6員雜環烷基，其包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子，其未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基、側氧基及C₁ _- ₄ 烷基羰基； (f) 苯基，其未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷基胺基-C₁ _- ₄ 烷基、二C₁ _- ₄ 烷基胺基-C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基及C₃ _- ₆ 環烷基； (g) 單環5至6員雜芳基及多環7至10員雜芳基，其各自包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子，且其各自未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷基胺基-C₁ _- ₄ 烷基、二C₁ _- ₄ 烷基胺基-C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基C₁ _- ₄ 烷氧基及C₃ _- ₆ 環烷基； R² 為氫或C₁ _- ₄ 烷基； R³ 為鹵素或C₁ _- ₄ 烷基，且n為0、1或2； R⁴ 選自 (a) 鹵素； (b) C₁ _- ₆ 烷基，其未經取代或經1至3個獨立地選自鹵素及C₃ _- ₆ 環烷基之取代基取代，其中C₃ _- ₆ 環烷基取代基未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代； (c) -NR^6a R^6b ，其中 (1) R^6a 為氫或C₁ _- ₄ 烷基； (2) R^6b 為氫或C₁ _- ₄ 烷基，其未經取代或經C₁ _- ₄ 烷氧基或C₁ _- ₄ 烷氧基羰基取代； (3) 或R^6a 與R^6b 連同二者所連接之氮原子一起形成4至6員雜環烷基，其視情況包含1至2個獨立地選自N、O及S之額外雜原子作為環原子，其中 4至6員雜環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基及側氧基；或 4至6員雜環烷基之相同或不同環原子上之兩個取代基連同其所連接之原子一起形成連接於該4至6員雜環烷基之螺環、橋環或稠環C；其中環C選自 (i) C₃ _- ₆ 環烷基， (ii) 3至5員雜環烷基，其包含1至3個獨立地選自N、O或S之雜原子作為環原子；及 (iii) 5至6員雜芳基，其包含1至3個獨立地選自N或O之雜原子作為環原子；其中屬於(i)至(iii)之環C各自為未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基及側氧基； (d) C₃ _- ₆ 環烷基，其未經取代或經1至2個選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基及C₁ _- ₄ 鹵烷基； (e) 4至6員雜環烷基，其包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子，其未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基及側氧基； (f) 苯基，其未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷基胺基-C₁ _- ₄ 烷基、二C₁ _- ₄ 烷基胺基-C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基及C₃ _- ₆ 環烷基； (g) 5至6員雜芳基，其包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子，其未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷基胺基-C₁ _- ₄ 烷基、二C₁ _- ₄ 烷基胺基-C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基C₁ _- ₄ 烷氧基及C₃ _- ₆ 環烷基。

實施例 16. 如實施例15之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物具有式(I-B)：(I-B)。

實施例 17. 如實施例15或16之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中環A為苯基。

實施例 18. 如實施例15或16之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中環A為吡啶基。

實施例 19. 如實施例15至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中X為-C(O)-。

實施例 20. 如實施例15至19中任一項之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為吖丁啶基，其未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代；或吖丁啶基之相同環原子上之兩個取代基連同二者所連接之環原子一起形成連接於該吖丁啶基環之螺環丙基或螺四氫呋喃基。

實施例 21. 如實施例20之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為。

實施例 22. 如實施例20之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為。

實施例 23. 如實施例20之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為。

實施例 24. 如實施例15至23中任一項之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R³ 選自鹵基或C₁ _- ₄ 烷基且n為1。

實施例 25. 如實施例24之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R³ 為鹵基。

實施例 26. 如實施例25之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R³ 為氟。

實施例 27. 如實施例15至26中任一項之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 為-NR^6a R^6b ；其中R^6a 為氫或C₁ _- ₄ 烷基；且R^6b 為氫或C₁ _- ₄ 烷基，其未經取代或經C₁ _- ₄ 烷氧基或C₁ _- ₄ 烷氧基羰基取代；或其中R^6a 與R^6b 連同二者所連接之氮原子一起形成4至6員雜環烷基，其視情況包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為額外環原子；其中4至6員雜環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基及側氧基；或4至6員雜環烷基之相同或不同環原子上之兩個取代基連同其所連接之原子一起形成連接於該4至6員雜環烷基之螺環、橋環或稠環C；其中環C選自C₃ _- ₆ 環烷基；包含1至3個獨立地選自N、O或S之雜原子作為環原子的3至5員雜環烷基；及包含1至3個獨立地選自N或O之雜原子作為環原子的5員雜芳基；且環C未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基及側氧基。

實施例 28. 如實施例15至27中任一項之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 選自。

實施例 29. 如實施例15之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中化合物具有式(I)D： ID 其中 R₁ 選自 (a) -NR^5a R^5b ，其中R^5a 與R^5b 連同二者所連接之氮原子一起形成4至5員雜環烷基，其未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代；及 (b) 單環5員雜芳基，其包含1至2個獨立地選自N及O之雜原子作為環原子，且其各自為未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代； R³ 為鹵素或C₁ _- ₄ 烷基，且n為0或1； R⁴ 選自 (a) -NR^6a R^6b ，其中R^6a 與R^6b 連同二者所連接之氮原子一起形成4或5員雜環烷基，其未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、羥基及C₁ _- ₄ 烷基；或 4或5員雜環烷基之相同或不同環原子上之2個取代基連同其所連接之原子一起形成連接於該4至5員雜環烷基之螺環C，其中環C為C₃ _- ₆ 環烷基；及 (b) 6員雜芳基，其包含1至2個氮原子作為環原子，其未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代。

實施例 30. 如實施例29之化合物，其中R¹ 選自。

實施例 31. 如實施例29或30之式(I)D之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R³ 為氟或氯且n為1。

實施例 32. 如實施例29至31中任一項之式(I)D之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 選自。

實施例 33. 如實施例29至31中任一項之式(I)D之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 選自。

實施例 34. 一種式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其選自表1。表1

實施例 35. 如實施例34之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物選自表1之化合物1至76、78至79、81至87、89至115、117至118及121至353。

實施例 36. 一種醫藥組合物，其包含如實施例1至35中任一項之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種賦形劑。

實施例 37. 一種組合，其包含如實施例1至35中任一項之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如實施例36之其醫藥組合物及一或多種治療活性劑。

實施例 38. 如實施例1至35中任一項之化合物，或如實施例36之醫藥組合物，其用於療法中。

實施例 39. 如實施例1至35中任一項之化合物，或如實施例36之醫藥組合物，其用於治療選自以下之疾病：利什曼體病、卻格司氏病及人類非洲錐蟲病。

實施例 40. 一種如實施例1至35中任一項之化合物或如實施例36之醫藥組合物之用途，其用於製造治療選自以下之疾病之藥劑：利什曼體病、卻格司氏病及人類非洲錐蟲病。

實施例 41. 一種抑制個體之動質體寄生蟲之生長及增殖方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的如實施例1至35中任一項之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。

實施例 42. 一種治療由動質體寄生蟲所引起之病症或疾病之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的如實施例1至35中任一項之式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽且視情況與第二藥劑組合；其中疾病選自利什曼體病、卻格司氏病及人類非洲錐蟲病。

實施例 43. 如實施例42之方法，其中該疾病為選自內臟利什曼體病及皮膚利什曼體病之利什曼體病。

實施例 44. 如實施例43之方法，其中該第二藥劑選自葡萄糖酸銻(stibogluconate)、葡甲胺銻酸鹽、雙性黴素、米替福新及巴龍黴素。

實施例 45. 如實施例42之方法，其中該疾病為卻格司氏病；且該第二藥劑選自苄硝唑、硝呋莫司及雙性黴素。

實施例 46. 如實施例42之方法，其中該疾病為人類非洲錐蟲病；且該第二藥劑為噴他脒、蘇拉明、美拉胂醇、依氟鳥胺酸及硝呋莫司。

視起始材料及步驟之選擇而定，化合物可以可能的立體異構體中之一者的形式或作為其混合物存在，例如，視不對稱碳原子之數目而定，作為純光學異構體，或作為立體異構體混合物，諸如外消旋體混合物及非對映異構體混合物。本發明意在包括所有此類可能的立體異構體，包括外消旋混合物、非對映異構混合物及光學純形式。光學活性(R )及(S )立體異構體可使用對掌性合成組元或對掌性試劑製備，或使用習知技術解析。若化合物含有雙鍵，則取代基可為E或Z組態。若化合物含有經二取代之環烷基，則環烷基取代基可具有順式或反式組態。亦意欲包括所有互變異構形式。

如本文所用，術語「鹽」係指本發明之化合物之酸加成鹽或鹼加成鹽。「鹽」尤其包括「醫藥學上可接受之鹽」。術語「醫藥學上可接受之鹽」係指保持本發明之化合物之生物學有效性及特性且通常在生物學上或其他方面合乎需要的鹽。在許多情況下，本發明之化合物能夠藉助於胺基及/或羧基或其類似基團之存在而形成酸鹽及/或鹼鹽。

醫藥學上可接受之酸加成鹽可用無機酸及有機酸形成。可自其衍生鹽之無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及類似者。可自其衍生鹽之有機酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、順丁烯二酸、丙二酸、丁二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸及類似者。

醫藥學上可接受之鹼加成鹽可用無機鹼及有機鹼形成。可自其衍生鹽之無機鹼包括例如銨鹽及元素週期表之第I行至第XII行之金屬。在某些實施例中，鹽衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅及銅；特別適合之鹽包括銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽及鎂鹽。可自其衍生鹽之有機鹼包括例如一級胺、二級胺及三級胺；經取代之胺，包括天然存在的經取代之胺；環胺；鹼離子交換樹脂及類似者。某些有機胺包括異丙胺、苄星(benzathine)、膽茶鹼(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、離胺酸、葡甲胺、哌嗪及緩血酸胺。

在另一個態樣中，本發明提供呈以下之形式之式(I)或其子式之化合物：乙酸鹽、抗壞血酸鹽、己二酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、癸酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、氯茶鹼鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、麩胺酸鹽、戊二酸鹽、羥乙酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、半乳糖二酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、乙二酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、癸二酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、磺基水楊酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽、三氟甲磺酸鹽、三氟乙酸鹽或羥萘甲酸鹽。

在另一態樣中，本發明提供呈以下形式之式(I)或其子式之化合物：鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅、銅、異丙胺、苄星、膽茶鹼、二乙醇胺、二乙胺、離胺酸、葡甲胺、哌嗪或緩血酸胺鹽。

本文中給出之任何式表示化合物之未標記形式以及經同位素標記之形式。經同位素標記之化合物具有如本文給出之式所描繪的結構，不同之處在於一或多個原子經替換為具有選定原子質量或質量數的原子。可併入至本發明之化合物中之同位素包括例如氫之同位素。

另外，併入特定同位素，尤其氘(亦即² H或D)可得到由較大代謝穩定性產生之某些治療優勢，例如活體內半衰期增加或劑量需求降低或改善治療指數或耐受性。應理解，在此情形下，將氘視為式(I)化合物之取代基。氘之濃度可由同位素增濃因素定義。如本文所用之術語「同位素增濃因素」意指特定同位素之同位素豐度與天然豐度之間的比率。若本發明之化合物中的取代基標示為氘，則該化合物所具有的各指定氘原子之同位素增濃因素分別為至少3500 (在各指定氘原子處52.5%氘併入)、至少4000 (60%氘併入)、至少4500 (67.5%氘併入)、至少5000 (75%氘併入)、至少5500 (82.5%氘併入)、至少6000 (90%氘併入)、至少6333.3 (95%氘併入)、至少6466.7 (97%氘併入)、至少6600 (99%氘併入)或至少6633.3 (99.5%氘併入)。應理解術語「同位素增濃因素」可以如針對氘所描述之相同之方式應用於任何同位素。

可併入本發明之化合物中之同位素之其他實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，分別諸如³ H、¹¹ C、¹³ C、¹⁴ C、¹⁵ N、¹⁸ F、³¹ P、³² P、³⁵ S、³⁶ Cl、¹²³ I、¹²⁴ I、¹²⁵ I。因此應理解，本發明包括併入任何前述同位素之一或多者的化合物，該等同位素包括例如放射性同位素(諸如³ H及¹⁴ C)，或其中存在非放射性同位素(諸如² H及¹³ C)的化合物。此類經同位素標記之化合物適用於代謝研究(使用¹⁴ C)；反應動力學研究(使用例如² H或³ H)；偵測或成像技術，諸如正電子發射斷層攝影術(positron emission tomography，PET)或單光子發射電腦斷層攝影術(single-photon emission computed tomography，SPECT)，包括藥物或受質組織分佈分析；或適用於患者之放射性治療。特定言之，¹⁸ F或經標記之化合物可能尤其合乎PET或SPECT研究之需要。經同位素標記之式(I)之化合物通常可藉由熟習此項技術者所已知之習知技術，或藉由與隨附實例及製備中所描述之彼等方法類似之方法，使用適當經同位素標記之試劑替代先前採用之未經標記試劑來製備。

本發明之化合物之任何不對稱原子(例如碳或類似者)可以外消旋或對映異構性增濃形式存在，例如(R )、(S )或(R , S )組態。在某些實施例中，各不對稱原子在(R )組態或(S )組態中具有至少50%對映異構體過量、至少60%對映異構體過量、至少70%對映異構體過量、至少80對映異構體過量、至少90%對映異構體過量、至少95%對映異構體過量或至少99%對映異構體過量。在具有不飽和雙鍵之原子處的取代基若可能則以順式(Z )或反式(E )形式存在。

相應地，如本文所用，本發明之化合物可呈可能的立體異構體、旋轉異構體、滯轉異構體、互變異構體或其混合物中之一者之形式，例如呈實質上純幾何(順式或反式)立體異構體、非對映異構體、光學異構體(對映體)、外消旋體或其混合物之形式。

任何所得立體異構體之混合物可基於組分之物理化學差異分離成純的或實質上純的幾何或光學異構體、非對映異構體、外消旋體，例如藉由層析及/或分步結晶。

任何所得最終產物或中間體之外消旋體可藉由已知方法解析成光學對映體，例如藉由分離其由光學活性酸或鹼獲得之非對映異構鹽且釋出光學活性酸性或鹼性化合物。特定言之，鹼性部分可因此用於將本發明之化合物解析為其光學對映體，例如藉由將由與光學活性酸(例如酒石酸、二苯甲醯基酒石酸、二乙醯基酒石酸、二-O , O ' -對甲苯甲醯基酒石酸、杏仁酸、蘋果酸或樟腦-10-磺酸)形成之鹽分步結晶。外消旋產物亦可藉由對掌性層析來解析，例如使用對掌性吸附劑之高壓液相層析(high pressure liquid chromatography，HPLC)。

藥理學及效用 在一個態樣中，本發明係關於式(I)之小分子化合物，其靶向動質體寄生蟲之蛋白酶體且適合用作療法；尤其，用於預防及治療由感染動質體寄生蟲所引起之疾病和病況。根據本發明之化合物之活性可藉由描述於下文之生物分析部分中之活體外及活體內方法評估。應理解，該等分析說明本發明而不以任何方式限制本發明之範疇。

因此，作為另一態樣，本發明提供式(I)或其子式之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其立體異構體之用途，其作為可獲益於抑制動質體寄生蟲之生長及增殖之疾病或病況的療法；及用於製造諸如治療由動質體寄生蟲之生長及增殖所引起之疾病的藥物。在一個實施例中，所治療之疾病選自利什曼體病、卻格司氏病及人類非洲錐蟲病。在另一實施例中，所治療之疾病為由包括但不限於以下之寄生蟲所引起之利什曼體病：杜氏利什曼原蟲、嬰兒利什曼原蟲、巴西利什曼原蟲、巴拿馬利什曼原蟲、圭亞那利什曼原蟲、亞馬遜利什曼原蟲、墨西哥利什曼原蟲、熱帶利什曼原蟲、碩大利什曼原蟲。在一個實施例中，所治療之疾病為內臟利什曼體病。在另一實施例中，所治療之疾病為皮膚利什曼體病。在另一實施例中，所治療之疾病為由克氏錐蟲所引起之卻格司氏病。在又一實施例中，所治療之疾病為由布氏錐蟲、布氏岡比亞錐蟲或布氏羅得西亞錐蟲所引起之人類非洲錐蟲病。

根據前文，本發明另外提供一種用於預防或治療需要此類治療之個體之利什曼體病、卻格司氏病或人類非洲錐蟲病之方法，其包含向該個體投與治療有效量之選自式(I)或其子式之化合物、其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體。所需劑量將視投藥模式、待治療之特定病況及所需效果而變化。

醫藥組合物、劑量及投藥在另一態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。在另一實施例中，組合物包含至少兩種醫藥學上可接受之載劑，諸如本文中所描述之彼等。醫藥組合物可經調配用於特定投藥途徑，諸如經口投藥、非經腸投藥(例如藉由注射投藥、輸注投藥、經皮投藥或局部投藥)及經直腸投藥。局部投藥亦可涉及吸入或鼻內施加。另外，本發明之醫藥組合物可以固體形式(包括但不限於：膠囊、錠劑、丸劑、粒劑、散劑或栓劑)或以液體形式(包括但不限於溶液、懸浮液或乳液)製作。錠劑可根據此項技術中已知之方法經包覆薄膜或經包覆腸溶包衣。通常，醫藥組合物為包含活性成分以及以下中之一或多者的錠劑或明膠膠囊： a) 稀釋劑，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素及/或甘胺酸； b) 潤滑劑，例如二氧化矽、滑石、硬脂酸、硬脂酸之鎂鹽或鈣鹽及/或聚乙二醇；對於錠劑亦為如此 c) 黏合劑，例如矽酸鎂鋁、澱粉糊、明膠、黃蓍、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉及/或聚乙烯吡咯啶酮；若需要 d) 崩解劑，例如澱粉、瓊脂、褐藻酸或其鈉鹽或發泡混合物；及 e) 吸附劑、著色劑、調味劑及甜味劑。

對於約50-70 kg之個體，本發明之醫藥組合物或組合可呈具有約1-1000 mg、或約1-500 mg、或約1-250 mg、或約1-150 mg、或約0.5-100 mg、或約1-50 mg活性成分之單位劑量。化合物、醫藥組合物或其組合之治療有效劑量視個體之物種、體重、年齡及個別病況、所治療之病症或疾病或其嚴重度而定。一般熟練之醫師、臨床醫生或獸醫可容易地確定預防、治療或抑制病症或疾病之進展所必需之各活性成分之有效量。

以上列舉之劑量特性可有利地使用哺乳動物(例如小鼠、大鼠、犬、猴)或分離之器官、組織及其標本活體外及活體內測試證明。本發明之化合物可以溶液形式(例如水溶液)活體外施加，及經腸、非經腸、有利地靜脈內(例如以懸浮液或以水溶液形式)活體內施用。活體外劑量可在約10^- ³ 莫耳濃度與10^- ⁹ 莫耳濃度之間的範圍內。活體內治療有效量可視投藥途徑而定，在約0.1-500 mg/kg之間或在約1-100 mg/kg之間的範圍內。

本發明之化合物可以治療有效量與一或多種治療劑組合(醫藥組合)投與。本發明之化合物可與一或多種其他治療劑同時、或之前、或之後投與。本發明之化合物可藉由與其他劑相同或不同投藥途徑各別投與，或在同一醫藥組合物中一起投與。治療劑為例如化合物、肽、抗體、抗體片段或核酸，其為治療活性的或與本發明之化合物組合投與患者時增強治療活性。

作為組合製劑提供之產物包括組合物，其包含式(I)或其子式之化合物、其醫藥學上可接受之鹽或其立體異構體及其他治療劑一起在同一醫藥組合物中；或式(I)之化合物與其他治療劑呈分開形式，例如呈套組形式。在一個實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含式(I)或其子式之化合物、其醫藥學上可接受之鹽或其立體異構體及其他治療劑。如上文所述，醫藥組合物視情況可包含醫藥學上可接受之載劑。在另一實施例中，本發明提供一種產物，其包含式(I)之化合物及至少一種其他治療劑作為組合製劑同時、分別或依序使用於療法中。

在一個實施例中，本發明提供一種套組，其包含兩種或更多種各別醫藥組合物，其中至少一者含有式(I)或其子式之化合物、其醫藥學上可接受之鹽或其立體異構體。在一個實施例中，該套組包含用於分別保存該等組合物之構件，諸如容器、分隔瓶或分隔式箔封包。該套組之一個實例為泡殼包裝，如通常用於封裝錠劑、膠囊及類似者。本發明之套組可用於投與不同劑型(例如經口及非經腸)，用於在不同給藥時間間隔投與各別組合物，或用於各別組合物彼此滴定。為協助順從性，本發明之套組通常包含投藥之指導。

在本發明之組合療法中，本發明之化合物及其他治療劑可由相同或不同製造商製造及/或調配。此外，本發明之化合物與其他治療劑可在以下情況中結合為組合療法：(i)在將組合產品交給醫師之前(例如在試劑盒包含本發明之化合物及其他治療劑的情況下)；(ii)由醫師本人(或在醫師指導下)在投藥之前不久；(iii)由患者本人，例如在依序投與本發明之化合物及其他治療劑期間。

相應地，本發明提供式(I)之化合物用於治療由動質體寄生蟲之生長及增殖所引起之疾病或病況的用途，其中藥物製備為用於與另一治療劑一起投與。本發明亦提供另一治療劑用於治療由動質體寄生蟲之生長及增殖所引起之疾病或病況的用途，其中藥物與式(I)之化合物一起投與。

相應地，本發明亦提供式(I)之化合物用於治療由動質體寄生蟲之生長及增殖所引起之疾病或病況的用途，其中患者先前(例如24小時內)已經另一治療劑治療。本發明亦提供另一治療劑用於治療由動質體寄生蟲之生長及增殖所引起之疾病或病況的用途，其中患者先前(例如在24小時內)已經式(I)之化合物治療。

在一個實施例中，用於治療利什曼體病，其他治療劑選自葡萄糖酸銻、葡甲胺銻酸鹽、雙性黴素、米替福新及巴龍黴素。在一個實施例中，用於治療卻格司氏病，其他治療劑選自苄硝唑、硝呋莫司及/或雙性黴素。在另一實施例中，用於治療人類非洲錐蟲病，其他治療劑選自噴他脒、蘇拉明、美拉胂醇、依氟鳥胺酸及/或硝呋莫司。在本發明之化合物與其他治療劑一起投與之情況下，共同投與之化合物之劑量將理所當然地視所使用之輔助藥物之類型、所使用之特定藥物、所治療之病況等而定。

化合物之製備 本發明之化合物可根據本文所提供之方法、反應流程及實例以熟習有機合成技術者所已知之多種方式製備。出於說明性目的，下文描繪之反應流程提供合成本發明之化合物以及關鍵中間體之可能途徑。關於個別反應步驟之更詳細描述，參見下文實例部分。熟習此項技術者將瞭解，亦可使用其他合成途徑合成本發明之化合物。儘管在流程中描繪且在下文中論述了特定起始材料及試劑，但可用其他起始材料及試劑替代以提供各種衍生物及/或反應條件。另外，藉由下文所述之方法製備之諸多化合物可根據本發明使用熟習此項技術者熟知之習知化學方法進一步改質。除非另外規定或以其他方式與上下文明顯抵觸，否則本文所述之所有方法均可以任何適合順序進行。

式(I)之化合物可如以下流程1至3中所大體說明地製備，其中R¹ 、R² 、R³ 、R⁴ 及n如發明內容中所定義。

式(I)之化合物可如以下流程1至3中所大體說明地製備，其中X為氯、溴或三氟甲基；且R¹ 、R² 、R³ 、R⁴ 及n如發明內容中所定義。流程 1

替代地，式(I)可根據流程2中之程序由中間體(1d )製備。流程 2

替代地，式(I)可根據流程3中之程序由中間體(1e )製備。流程 3

本發明進一步包括本發明之方法的任何變型，其中可在其任何階段獲得之中間產物用作起始材料且進行其餘步驟，或其中在反應條件下原位形成起始材料，或其中反應組分以其鹽或光學純材料之形式使用。本發明化合物及中間體亦可根據熟習此項技術者通常已知之方法而彼此轉化。

實例本文中實例僅闡明本發明且不限制另外主張之本發明之範疇。

溫度以攝氏度為單位給出。若未另外提及，則所有蒸發均在減壓下，通常在約15 mm Hg及100 mm Hg之間(= 20-133 mbar)進行。最終產物、中間體及起始材料之結構藉由標準分析方法(例如微量分析)及光譜表徵(例如MS、IR、NMR)來確認。

用於合成本本發明之化合物之所有起始材料、建構嵌段、試劑、酸、鹼、脫水劑、溶劑及催化劑均可商購或可藉由一般熟習此項技術者已知之有機合成方法(Houben-Weyl第4版 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, 第21卷)來產生。另外，本發明之化合物可藉由如以下實例中所示的一般熟習此項技術者已知之有機合成方法來產生。必要時，根據標準實踐使用習知保護基團來保護反應性官能基，例如，參見T.W. Greene及P.G.M. Wuts於「Protecting Groups in Organic Synthesis」，John Wiley and Sons, 1991中。

除非另外規定，否則起始材料通常可獲自非排他性市售來源，諸如，Aldrich Chemicals (Milwaukee, Wis.)、TCI Fine Chemicals (日本(Japan))、Shanghai Chemhere有限公司(上海(Shanghai)，中國(China))、Aurora Fine Chemicals LLC (San Diego, CA)、FCH Group (烏克蘭(Ukraine))、Lancaster Synthesis有限公司(Windham, N.H.)、Acros Organics (Fairlawn, N.J.), Maybridge Chemical Company有限公司(Cornwall，英格蘭(England))、Tyger Scientific (Princeton, N.J.)、AstraZeneca Pharmaceuticals (London，英格蘭)、Chembridge Corporation (USA), Matrix Scientific (USA)、Conier Chem & Pharm有限公司(中國)、Enamine Ltd (烏克蘭)、Combi-Blocks有限公司(San Diego，USA)、Oakwood Products有限公司(USA)、Apollo Scientific有限公司(UK)、Allichem有限責任公司(USA)、Rieke Metals (USA)、Silicycle有限公司(加拿大(Canada))及Ukrorgsyntez有限公司(拉脫維亞(Latvia))；或容易地使用熟習此項技術者所熟知之方法製備(例如藉由大體描述於Louis F. Fieser及Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, 第1-19卷, Wiley, New York (1967-1999版)；Larock, R.C. ,Comprehensive Organic Transformations , 第2版, Wiley-VCH Weinheim, Germany (1999)；或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl.版 Springer-Verlag, Berlin，包括增刊(亦可經由Beilstein在線資料庫獲得)中之方法製備)。

縮寫如本文所用之縮寫定義如下：「1×」為一次，「2×」為兩次，「3×」為三次，「℃」為攝氏溫度，「aq」為水溶液，「Col」為管柱，「eq」為當量，「g」為克，「mg」為毫克，「L」為公升，「mL」或「ml」為毫升，「μL」或「μl」為微升，「N」為正態，「M」為莫耳濃度，「μM」為微莫耳，「nM」為奈莫耳，「mol」為莫耳，「mmol」為毫莫耳，「min」為分鐘，「h」或「hrs」為小時，「RT」為室溫，「ON」為隔夜，「atm」為大氣壓，「psi」為磅每平方吋，「conc.」為濃縮的，「aq」為水溶液，「sat」或「sat'd」為飽和，「MW」為分子量，「mw」或「μwave」為微波，「mp」為熔點，「Wt」為重量，「MS」或「Mass Spec」為質譜分析，「ESI」為電噴射離子化質譜分析，「HR」為高解析度，「HRMS」為高解析度質譜分析，「LCMS」為液相層析質譜分析，「HPLC」為高壓液相層析，「RP HPLC」為逆相HPLC，「TLC」或「tlc」為薄層層析，「NMR」為核磁共振光譜法，「nOe」為，「1H」為質子，「δ」為差量，「s」為單重峰，「d」為雙重峰，「t」為三重峰，「q」為四重峰，「m」為多重峰，「br」為寬峰的，「Hz」為赫茲，「ee」為對映異構過量，「α」、「β」、「R」、「r」、「S」、「s」、「E」及「Z」為熟習此項技術者所熟悉之立體化學標示。

下文中使用之以下縮寫具有以下對應含義： AIBN 偶氮二異丁腈 Bn 苯甲基 Boc 第三丁氧基羰基 Boc₂ O 二碳酸二第三丁基酯 Bu 丁基 Cs₂ CO₃ 無水碳酸銫 CHCl₃ 氯仿 DAST 二乙基胺基三氟化硫 DBA 二苯亞甲基丙酮 DBU 2,3,4,6,7,8,9,10-八氫嘧啶并[1,2-a]吖庚因 DCM 二氯甲烷 DIEA N,N-二異丙基乙基胺 DMAP 4-二甲基胺基吡啶 DMF 二甲基甲醯胺 DMSO 二甲亞碸 DPP 二苯基膦 DPPA 二苯基磷醯基疊氮化物 Dppf 1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵 EA 乙酸乙酯 Equiv. 當量 Et 乙基 Et₂ O 二乙醚 EtOH 乙醇 EtOAc 乙酸乙酯 FA 甲酸 HATU 2-(7-氮雜-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯 HCl 鹽酸i- Bu 異丁基i- Pr 異丙基 KOAc 乙酸鉀 LiAlH₄ 氫化鋰鋁 Me 甲基 mCPBA 3-氯過氧苯甲酸 MeCN 乙腈 MnO₂ 二氧化錳 N₂ 氮氣 NaBH₄ 硼氫化鈉 NaHCO₃ 碳酸氫鈉 Na₂ SO₄ 硫酸鈉 NBSN -溴丁二醯亞胺Ph 苯基 PPh₃ 三苯基膦 Ph₃ P=O 三苯基氧膦 R_f 保留因子 RT 室溫(℃) SFC 超臨界流體層析t- Bu或Bu^t 第三丁基 T3P^® 丙烷膦酸酸酐 TEA 三乙胺 TFA 三氟乙酸 THF 四氫呋喃 Troc 2,2,2-三氯乙基

LCMS 方法 1 ： Waters Acquity UPLC系統： -具有脫氣器之Acquity二元梯度管理器 - Acquity管柱隔室設定在50℃ - Acquity二極體陣列偵測器 Leap Technologies HTS Pal自動取樣器 Antek化學發光氮偵測器(Chemiluminescent Nitrogen Detector，CLND) Waters 3100質譜儀 HPLC管柱：Thermo Syncronis C18 30×2.1mm 移動相：(A) 95% H2O/5% MeOH/IPA (75/25，v/v) + 0.05%甲酸，(B) MeOH/IPA (75/25，v/v) + 0.035%甲酸梯度：0.4 mL/分鐘，初始2% B持續1.0分鐘，經2.5分鐘勻變至95% B，直至4.0分鐘，在4.25分鐘時返回至2%B，直至5.0分鐘時運行結束。 MS掃描：1秒內150至1000 amu 二極體陣列偵測器：190 nm-400 nm方法 2 ： Waters Acquity UPLC系統： -具有脫氣器之Acquity二元梯度管理器 - Acquity管柱隔室設定在50℃ - Acquity二極體陣列偵測器 -Acquity ELSD Leap Technologies HTS Pal自動取樣器 Waters Qda質量偵測器 HPLC管柱：Waters Acquity C18 1.7 µm 2.1×30 mm 移動相：(A) H2O + 0.05% TFA及(B)乙腈 + 0.05% TFA 梯度：1 mL/分鐘，初始5% B持續0.1分鐘，經1.5分鐘勻變至95%B，保持直至1.6分鐘，隨後在1.7分鐘時達至100% B，且在1.9分鐘時返回至5% B，直至在2.25分鐘時運行結束。 MS掃描：0.4秒內160至1000 amu 二極體陣列偵測器：214 nm-400 nm

NMR. 除非另外說明，否則質子譜圖在具有5 mm QNP低溫探針之Bruker AVANCE II 400 MHz或具有5 mm QNP探針之Bruker AVANCE III 500 MHz上。相對於二甲亞碸(δ 2.50)、氯仿(δ 7.26)、甲醇(δ 3.34)或二氯甲烷(δ 5.32)以ppm為單位報告化學位移。將少量乾燥樣品(2-5 mg)溶解於適當氘化溶劑(1 mL)中。

中間體 1 ： 3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯胺(I - 1 )

步驟 A ：將於DMF (250 mL)中之NaN₃ (8 g，122.5 mmol，1eq )、5-溴-2-氟-吡啶-3-甲醛(25 g，122.5 mmol，1 eq)之反應混合物在70℃下攪拌1小時。將反應混合物用乙酸乙酯(500 mL)稀釋且倒入冰水(500 mL)。分離水層且用乙酸乙酯(500 mL×6)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌(300 mL×3)，經硫酸鈉乾燥且濃縮。用Et₂ O (100 mL)研磨殘餘物，呈黃色固體之得到化合物I - 1a 。¹ H NMR: (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 10.26 - 10.46 (m, 1 H), 10.12 (d,J =1.51 Hz, 1 H), 8.64 (d,J =1.51 Hz, 1 H)。為安全處理低分子量疊氮化物，進行幾個批次之此反應且經合併用於步驟B。

步驟 B ：將於EtOH (500 mL)中之1 - 1a (30 g，132.1 mmol，1eq )及2-氟-5-硝基-苯胺(20.6 g，132.1 mmol，1 eq)之反應混合物在85℃下在N₂ 氛圍下攪拌4小時。真空濃縮反應混合物。向粗材料中添加甲苯(700 mL)且將反應混合物回流16小時。濃縮反應混合物，且材料藉由矽膠層析用0-50% EtOAc/DCM溶離來純化。將所得材料用EtOAc (100 mL)研磨，得到呈黃色固體之1 - 1b 。¹ H NMR: (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.04 (d, J=2.26 Hz, 1 H), 8.85 (dd, J=6.53, 3.01 Hz, 1 H), 8.79 (d, J=2.26 Hz, 1 H), 8.60 - 8.71 (m, 1 H), 8.47 (dt, J=9.03, 3.39 Hz, 1 H), 7.92 (dd, J=10.54, 9.29 Hz, 1 H)。

步驟 C ：將於THF (500 mL)中之化合物1 - 1b (25 g，74.2 mmol，1 eq)、二碘化鋅(9.5 g，29.7 mmol，0.4eq )及雷尼鎳(Raney-Ni)(50 g，583.6 mmol，7.9eq )之反應混合物在20℃下在15 psi之H₂ 下攪拌12小時。將反應混合物用MeOH (450 mL)稀釋，過濾且將濾餅用MeOH洗滌(200 mL×3)。濃縮濾液且用水(500 mL)研磨且真空乾燥，得到呈黃色固體之I - 1 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.81 (br d, J=1.51 Hz, 1 H), 8.71 (br d, J=1.76 Hz, 1 H), 8.58 (br d, J=1.76 Hz, 1 H), 7.10 - 7.41 (m, 2 H), 6.56 - 6.85 (m, 1 H), 5.45 (br s, 2 H)。

中間體 2 ： (3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)胺基甲酸2,2,2-三氯乙基酯(I-2 )向於EtOAc (150 mL)中之溶液I - 1 (5 g，16.3 mmol，1 eq)添加飽和NaHCO₃ 水溶液(150 mL)。將反應混合物冷卻至0℃，接著逐滴添加氯甲酸2,2,2-三氯乙基酯(6.9 g，32.6 mmol，2 eq)。將混合物攪拌在0℃持續2小時並隨後在25℃下攪拌20小時。藉由過濾收集固體且用水(150 mL)及乙酸乙酯(20 mL)洗滌，得到呈黃色固體之化合物I - 2 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ ppm, 10.57 (br s, 1 H), 8.92 (d,J =2.51 Hz, 1 H), 8.76 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.63 (d,J =2.51 Hz, 1 H), 8.27 (br d,J =4.52 Hz, 1 H), 7.62 - 7.67 (m, 1 H), 7.55 - 7.61 (m, 1 H), 4.99 (s, 2 H)。

中間體 3 ： N-(3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-3,3-二氟吖丁啶-1-甲醯胺(I - 3 )(亦化合物125 )向於DMSO (15 mL)中之I - 2 (2 g，4.14 mmol，1 eq)及3,3-二氟吖丁啶HCl (1.1 g，8.3 mmol，2eq )之溶液中添加DMAP (25.3 mg，207 µmol，0.05eq )及DIEA (1.1 g，8.3 mmol，1.45 mL，2eq )。將混合物在60℃下攪拌15小時。藉由添加60 mL水及10 mL乙酸乙酯沈澱出產物且藉由過濾收集。用40 mL水及10 mL乙酸乙酯洗滌濾餅且將所得固體在減壓下乾燥，得到呈白色固體之I - 3 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ ppm, 9.25 (s, 1 H), 8.91 (br s, 1 H), 8.76 (br s, 1 H), 8.63 (br s, 1 H), 8.25 (br s, 1 H), 7.69 (br s, 1 H), 7.51 (br t,J =10.16 Hz, 1 H), 4.41 (br t,J =12.67 Hz, 4 H)。

中間體 4 ： N-(3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-3-氟吖丁啶-1-甲醯胺(I - 4 )(亦化合物126 )向於DMSO (15 mL)中之I - 2 (2 g，4.14 mmol，1 eq)及3-氟吖丁啶HCl (924 mg，8.28 mmol，2eq )之溶液中添加DMAP (25.3 mg，207 µmol，0.05eq )及DIEA (1.07 g，8.28 mmol，1.45 mL，2eq )。將混合物在60℃下攪拌15小時。藉由添加60 mL水及10 mL乙酸乙酯沈澱出產物且藉由過濾收集。用40 mL水及10 mL乙酸乙酯洗滌濾餅且將所得固體在減壓下乾燥，得到呈固體之I - 4 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ ppm, 8.98 (s, 1 H), 8.90 (d,J =2.51 Hz, 1 H), 8.76 (d,J =2.51 Hz, 1 H), 8.63 (d,J =2.51 Hz, 1 H), 8.24 (dd,J =7.03, 2.76 Hz, 1 H), 7.67 - 7.74 (m, 1 H), 7.49 (dd,J =11.17, 9.16 Hz, 1 H), 5.29 - 5.51 (m, 1 H), 4.25 - 4.39 (m, 2 H), 3.96 - 4.10 (m, 2 H)。

中間體 5 ： (R )-N -(3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-3-氟吡咯啶-1-甲醯胺(I - 5 )(亦化合物127 )中間體I - 5 以與中間體I - 3 相似之方式製備，使用(R )-3-氟吡咯啶HCl作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ ppm, 8.90 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.76 (d,J =2.51 Hz, 1 H), 8.66 (s, 1 H), 8.63 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.27 (dd,J =7.03, 2.76 Hz, 1 H), 7.71 - 7.77 (m, 1 H), 7.48 (dd,J =11.17, 9.16 Hz, 1 H), 5.28 - 5.48 (m, 1 H), 3.40 - 3.78 (m, 4 H), 2.01 - 2.27 (m, 2 H)。

中間體 6 ： N -(3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)吖丁啶-1-甲醯胺I - 6 (亦化合物129 )向於DMSO (15 mL)中之I - 2 (1.6 g，3.32 mmol，1 eq)及吖丁啶(379 mg，6.63 mmol，2eq )之溶液中添加DMAP (20.3 mg，166 µmol，0.05eq )及DIEA (857 mg，6.63 mmol，2eq )。將混合物在60℃下攪拌15小時。藉由添加60 mL水及10 mL乙酸乙酯沈澱出產物且藉由過濾收集。用40 mL水及10 mL乙酸乙酯洗滌濾餅且將所得固體在減壓下乾燥。將所得固體用10 mL乙酸乙酯研磨，得到呈黃色固體之I - 6 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ ppm, 8.89 (d, J=2.01 Hz, 1 H), 8.70 - 8.80 (m, 2 H), 8.62 (d, J=2.26 Hz, 1 H), 8.25 (dd, J=6.90, 2.38 Hz, 1 H), 7.72 (br d, J=9.03 Hz, 1 H), 7.46 (br t, J=10.16 Hz, 1 H), 3.98 (br t, J=7.53 Hz, 4 H), 2.20 (quin, J=7.59 Hz, 2 H)。

中間體 7 ： N-(3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2,4-二甲基噁唑-5-甲醯胺(I - 7 )(亦化合物128 )向於DMF (15 mL)中之I - 1 (1 g，3.3 mmol，1eq )及2,4-二甲基噁唑-5-羧酸(552.1 mg，3.9 mmol，1.2eq )之溶液中添加HATU (1.5 g，3.9 mmol，1.2eq )及DIEA (632 mg，4.9 mmol，854 μL，1.50eq )。將混合物在25℃下攪拌13小時。向反應混合物中添加飽和NaHCO₃ 水溶液(40 mL)且藉由過濾收集固體。用水(30 mL)及乙酸乙酯(10 mL)洗滌濾餅。將所得固體在水(20 mL中)研磨，得到呈棕色固體之I - 7 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ ppm, 10.53 (s, 1 H), 8.94 (d,J =2.51 Hz, 1 H), 8.77 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.64 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.58 (dd,J =7.15, 2.64 Hz, 1 H), 7.89 - 7.97 (m, 1 H), 7.59 (dd,J =11.17, 9.16 Hz, 1 H), 2.52 - 2.53 (s, 3 H), 2.40 (s, 3 H)。

中間體 8 ： N-(3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)呋喃-2-甲醯胺(I - 8 )(亦化合物130 )中間體I - 8 以與中間體I - 7 相似之方式製備，使用呋喃-2-羧酸作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ ppm, 10.58 (br s, 1 H), 8.94 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.77 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.64 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.53 (dd,J =7.03, 2.51 Hz, 1 H), 7.92 - 8.02 (m, 2 H), 7.60 (dd,J =11.04, 9.29 Hz, 1 H), 7.40 (d,J =3.26 Hz, 1 H), 6.74 (dd,J =3.26, 1.51 Hz, 1 H)。

中間體 9 ： 4-氟-3-(5-異丙基-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺(I - 9 )

步驟 A ：向於THF (60 mL)及H₂ O (9 mL)中之中間體I - 1 (4 g，13.0 mmol，1 eq)之溶液中添加Cs₂ CO₃ (12.7 g，39.1 mmol，3 eq)、Pd(dppf)Cl₂ .CH₂ Cl₂ (531.8 mg，651.2 µmol，0.05 eq)及三氟(丙-1-烯-2-基)硼酸鉀(2.2 g，14.7 mmol，1.1 eq)。將混合物在80℃下攪拌16小時。將反應混合物用EtOAc (100 mL×2)萃取。將合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且減壓濃縮獲得殘餘物。將殘餘物藉由矽膠層析用石油醚:EtOAc=1:2溶離來純化，得到呈白色固體之化合物I - 9a 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 9.00 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.78 (d,J =2.38 Hz, 1 H), 8.23 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 7.09 - 7.29 (m, 2 H), 6.68 (dt,J =8.88, 3.34 Hz, 1 H), 5.64 (s, 1 H), 5.44 (s, 2 H), 5.22 (s, 1 H), 2.18 (s, 3 H), M+H = 269.1。

步驟 B ：向於EtOH (216 mL)中之中間體I - 9a (3.4 g，12.7 mmol，1 eq)之溶液中添加20% Pd(OH)₂ /C (5.3 g，7.60 mmol，0.6 eq)且將混合物在25℃下在15 psi H₂ 氛圍下攪拌4小時。將反應混合物經由矽藻土過濾且用乙醇(30 mL)洗滌濾餅。濃縮濾液，將所得殘餘物溶解於EtOAc (10 mL)中且添加4M HCl/EtOAc (2 mL)。藉由過濾收集固體且在真空下乾燥，得到呈黃色固體之I - 9 之HCl鹽。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 9.10 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.90 (d,J =2.01 Hz, 1 H), 8.47 (br d,J =1.63 Hz, 1 H), 8.07 (br dd,J =6.46, 2.45 Hz, 1 H), 7.72 (br dd,J =10.85, 9.10 Hz, 1 H), 7.58 (dt,J =8.50, 3.28 Hz, 1 H), 3.07 - 3.25 (m, 1 H), 1.32 (d,J =6.78 Hz, 6 H), M+H =271.1。

中間體 10 ： (2-(2-氟-5-(3-氟吖丁啶-1-甲醯胺基)苯基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)硼酸( I - 10 ) 向於二噁烷(18 mL)中之中間體I - 4 (300 mg，734.9 µmol，1 eq)之溶液中添加4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧雜硼戊環)(223.9 mg，881.9 µmol，1.2 eq)、Pd(dppf)Cl₂ (53.8 mg，73.5 µmol，0.1 eq)及KOAc (144.3 mg，1.5 mmol，2 eq)。將混合物在100℃下攪拌16小時。濃縮反應混合物且用EtOAc (5 mL)、水(5 mL)洗滌殘餘物，且在減壓下乾燥，得到呈黑色固體之化合物I - 10 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 9.00 (br s, 2 H), 8.70 (br s, 1 H), 8.45 (br s, 1 H), 8.24 (br s, 1 H), 7.69 (br s, 1 H), 7.56 (br s, 1 H), 7.50 (br s, 1 H), 6.59 (br s, 1 H), 5.25 - 5.56 (m, 1 H), 4.33 (br s, 2 H), 3.90 - 4.13 (m, 2 H), M+H =374.2。

中間體 11 ： 4-氟-3-(5-(吡啶-2-基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺I - 11 在燒瓶中合併I - 1 (947 mg，3.1 mmol)及 Pd(Ph3P)₄ (178 mg，0.15 mmol)且置於氮氣氛圍下。添加吡啶-2-基溴化鋅(II)(於THF中0.5 M)(24.7 mL，12.3 mmol)，且將反應加熱至65℃持續4小時。用水淬滅反應且濃縮。粗材料藉由C18急驟層析用10-80%乙腈於水中溶離純化，得到呈淡黃色固體之I - 11 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.45 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.93 (dd, J = 3.4, 2.4 Hz, 2H), 8.73 (ddd, J = 4.8, 1.8, 0.9 Hz, 1H), 8.12 (dt, J = 8.0, 1.0 Hz, 1H), 7.95 (td, J = 7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 6.69 (ddd, J = 8.9, 3.9, 2.9 Hz, 1H), 5.46 (s, 2H)。

中間體 12 ： 2-(5-胺基-2-氟苯基)-N,N-二甲基-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-胺(I - 12 )將於DMSO (5 mL)中之N -甲基甲胺(4.4 g，98.7 mmol，5 mL，50.5eq )、I - 1 (0.6 g，1.9 mmol，1eq )、L -脯胺酸(22.5 mg，195.4 µmol，0.1eq )、CuI (37.2 mg，195.4 µmol，0.1eq )及K₂ CO₃ (540 mg，3.9 mmol，2eq )之反應混合物在90℃下攪拌12小時。用10% NH₄ OH水溶液(20 mL)淬滅反應，且用乙酸乙酯(25 mL×4)萃取。將合併之乙酸乙酯層用鹽水洗滌(15 mL×3)，經硫酸鈉乾燥且濃縮。殘餘物藉由矽膠層析用於石油醚中之20%乙酸乙酯及20% DCM溶離來純化，得到呈黃色固體之I - 12 。¹ H NMR:(400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 8.68 (br s, 1 H), 8.48 (br s, 1 H), 7.16 (br s, 3 H), 6.63 (br s, 1 H), 5.38 (br s, 2 H), 2.95 (br s, 6 H)。M+H = 391.1。

中間體 13 ： (3-(5-(二甲胺基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)胺基甲酸2,2,2-三氯乙基酯( I - 13 ) I - 13 之合成描述於實例9中。

中間體 14 ： (R)-N-(3-(5-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-3-氟吡咯啶-1-甲醯胺( I - 14 ) I - 14 之合成描述於實例18中。

中間體 15 ： N-(3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-5-氮雜螺[2.3]己烷-5-甲醯胺I - 15 (亦化合物254 )中間體I - 15 (化合物254 )以與中間體I - 3 相似之方式製備，使用5-氮雜螺[2.3]己烷半草酸酯作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ), δ ppm, 8.90 (d, J=2.45 Hz, 1 H), 8.85 (s, 1 H), 8.74 - 8.78 (m, 1 H), 8.61 - 8.65 (m, 1 H), 8.26 (dd, J=7.09, 2.69 Hz, 1 H), 7.69 - 7.76 (m, 1 H), 7.47 (dd, J=11.25, 9.29 Hz, 1 H), 4.05 (s, 4 H), 0.66 (s, 4 H)。方法1：RT = 2.95 min; M+H = 416.0, 418.0。

中間體 16 ：3-(5-氯-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯胺(I - 16 ) 中間體I - 16 以與中間體I - 1 相似之方式製備，使用5-氯-2-氟菸鹼醛作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 8.82 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.67 (d,J =2.51 Hz, 1 H), 8.44 (d,J =2.51 Hz, 1 H), 7.12 - 7.28 (m, 2 H), 6.61 - 6.75 (m, 1 H), 5.44 (br s, 2 H)。

中間體 17 ：2-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)吡啶-4-胺(I - 17 ) 中間體I - 17 以與中間體I - 1 相似之方式製備，在步驟B中使用4-硝基吡啶-2-胺作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 9.19 (br s, 1 H), 8.73 (br s, 1 H), 8.59 (br s, 1 H), 8.01 (br d,J = 5.27 Hz, 1 H), 7.42 (br s, 1 H), 6.54 - 6.74 (m, 3 H)。

中間體 18 ：3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氯苯胺(I-18) 中間體I - 18 以與中間體I - 1 相似之方式製備，在步驟B中使用2-氯-5-硝基-苯胺作為起始材料。M+H=325.0。

中間體 19 ：3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺(I-19) 中間體I - 19 以與中間體I - 1 相似之方式製備，在步驟B中使用3-硝基苯胺作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 8.99 (s, 1 H), 8.69 (d,J =2.44 Hz, 1 H), 8.56 (d,J =2.45 Hz, 1 H), 7.31 (t,J =2.08 Hz, 1 H), 7.12 - 7.26 (m, 2 H), 6.61 - 6.72 (m, 1 H), 5.56 (br s, 2 H)。

中間體 20 ：(2-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)吡啶-4-基)胺基甲酸2,2,2-三氯乙基酯(I-20) I - 20 之合成描述於實例21中。

中間體 21 ：3-(2-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)吡啶-4-基)-1,1-二甲基脲(I-21) I - 21 之合成描述於實例21中。

中間體 22 ： N-(2-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)吡啶-4-基)-3,3-二氟吖丁啶-1-甲醯胺( I - 22 ) I - 22 之合成描述於實例22中。

中間體 23 ：4-氟-3-(5-(三氟甲基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺(I-23) 中間體I - 23 以與中間體I - 1 相似之方式製備，使用2-氟-5-(三氟甲基)菸鹼醛作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO), δ ppm, 9.06 (d,J = 2.01 Hz, 1 H), 8.98 (d,J = 2.26 Hz, 1 H), 8.85 (s, 1 H), 7.16 - 7.30 (m, 2 H), 6.72 (dt,J = 8.91, 3.33 Hz, 1 H), 5.48 (s, 2 H)。

中間體 24 ： N-(3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)環丙烷甲醯胺( I - 24 ) 中間體I - 24 以與中間體I - 7 相似之方式製備，使用環丙烷甲酸作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.90 (d,J = 2.38 Hz, 1 H), 8.75 (d,J = 2.38 Hz, 1 H), 8.62 (d,J = 2.38 Hz, 1 H), 8.38 (dd,J = 7.03, 2.51 Hz, 1 H), 8.25 - 8.30 (m, 1H), 7.66 - 7.75 (m, 1 H), 7.53 (dd,J = 11.17, 9.16 Hz, 1 H), 1.72 - 1.83 (m, 1 H), 0.83 (d,J = 6.15 Hz, 4 H)。

中間體 25 ： 3-(5-(1H-吡唑-1-基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯胺(I-25)

步驟 A ：將於THF (100 mL)中之I - 1 (10 g，32.6 mmol，1eq )及Boc₂ O (21.3 g，97.7 mmol，22.4 mL，3eq )之反應混合物在76℃下攪拌12小時。濃縮反應混合物且將殘餘物用石油醚(100 mL)研磨，得到呈棕色固體之I - 25a 。M+H = 408.9。

步驟 B ：將於DMSO (5 mL)中之I - 25a (0.5 g，1.2 mmol，1 eq)、1H-吡唑(126 mg，1.8 mmol，1.5eq )、CuI (35 mg，184.5 µmol，0.15eq )、喹啉-8-醇(27 mg，184.5 µmol，31.9 μL，0.15eq )及K₂ CO₃ (221 mg，1.6 mmol，1.3eq )之反應混合物在120℃下攪拌12小時。向反應混合物中倒入水20 mL，用DCM (20 mL×3)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌(10 mL)，經Na₂ SO₄ 乾燥且濃縮，得到呈黑色固體之I - 25b 。M+H =395.3。

步驟 C ：將於HCl/二噁烷(10 mL)中之I - 25b (0.4 g，1.0 mmol，1 eq)之反應混合物在25℃下攪拌12小時。濃縮反應混合物，且藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 150×25 mm×10 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-乙腈]；B%：18%-48%，12 min)來純化，得到呈黃色固體之I - 25 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 9.28 (d,J = 2.69 Hz, 1 H), 8.90 (d,J = 2.45 Hz, 1 H), 8.61 (dd,J = 10.64, 2.57 Hz, 2 H), 7.84 (d,J = 1.47 Hz, 1 H), 7.14 - 7.31 (m, 2 H), 6.66 - 6.75 (m, 1 H), 6.57 - 6.65 (m, 1 H), 5.45 (s, 2 H)。

中間體 26 ： 4-氟-3-(5-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺(I-26) 中間體I - 26 以與中間體I - 25 相似之方式製備，在步驟B中使用4-甲基-1H-咪唑作為起始材料。¹ H NMR: (400 MHz, DMSO) δ ppm 9.00 (d,J = 2.69 Hz, 1 H), 8.89 (d,J = 2.20 Hz, 1 H), 8.37 - 8.49 (m, 1 H), 8.20 (s, 1 H), 7.53 (s, 1 H), 7.13 - 7.30 (m, 3 H), 6.61 - 6.80 (m, 1 H), 5.45 (s, 2 H), 2.21 (s, 3 H)。

中間體 27 N-(3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)吡咯啶-1-甲醯胺(I-27 )中間體I - 27 以與中間體I - 3 相似之方式製備，使用吡咯啶作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 8.89 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.75 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.62 (d,J =2.51 Hz, 1 H), 8.51 (s, 1 H), 8.28 (dd,J =7.03, 2.51 Hz, 1 H), 7.74 (dt,J =9.10, 3.48 Hz, 1 H), 7.46 (dd,J =11.29, 9.29 Hz, 1 H), 3.39 (br s, 4 H), 1.87 (br t,J =6.40 Hz, 4 H)。

中間體 28 ： 4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺I-28 中間體I - 28 以與中間體I - 11 相似之方式製備，使用(3-甲基吡啶-2-基)溴化鋅(II)作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) 8.89 (dd,J = 8.2, 2.4 Hz, 2H), 8.56 (dd,J = 4.6, 1.7 Hz, 1H), 8.47 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.80 (ddd,J = 7.7, 1.7, 0.8 Hz, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 1H), 7.24 - 7.14 (m, 2H), 6.69 (ddd,J = 9.0, 3.9, 2.8 Hz, 1H), 5.46 (s, 2H), 2.44 (s, 3H)。

中間體 29 ： 4-氟-3-(5-(3-(三氟甲基)吖丁啶-1-基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺I-29

步驟 A ：將I - 25a (100 mg，245.6 µmol，1eq )、3-(三氟甲基)吖丁啶(48 mg 294.7 µmol，1.2eq ，HCl)、NaOBu-t (2 M，368.3 μL，3eq )、XantPhos (28 mg，49.11 µmol，0.2eq )及Pd₂ (dba)₃ (22 mg，24.6 µmol，0.1eq )於二噁烷(2 mL)中之混合物脫氣且隨後在80℃下在N₂ 下攪拌1小時。將混合物淬滅且用1 M HOAc調節至pH=7。混合物藉由矽膠層析(石油醚/乙酸乙酯=1/1)來純化，得到呈黃色固體之I - 29a 。M+H = 452.3。

步驟 B ：此步驟以與I - 25 步驟C相似之方式進行，得到I - 29 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 8.49 (d,J = 2.45 Hz, 1 H), 8.29 (d,J = 2.81 Hz, 1 H), 7.09 - 7.22 (m, 2 H), 7.02 (d,J = 2.69 Hz, 1 H), 6.63 (dt,J = 8.74, 3.33 Hz, 1 H), 5.38 (s, 2 H), 4.07 - 4.23 (m, 2 H), 3.98 (dd,J = 7.95, 5.38 Hz, 2 H), 3.66 - 3.83 (m, 1 H)。

中間體 30 ： 2-(2-(2-氟-5-(3-氟吖丁啶-1-甲醯胺基)苯基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吖丁啶-1-甲酸第三丁基酯( I - 30 ) I - 30 之合成描述於實例24中。

中間體 31 ：反式N-(3-(5-溴-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)-4-氟苯基)-2-氟環丙烷-1-甲醯胺(I-31) 向於DMF (20 mL)中之I - 1 ( 2.5 g，8.1 mmol，1eq )及反式2-氟環丙烷甲酸(1.0 g，9.8 mmol，1.2eq )之溶液中添加HATU (3.7 g，9.8 mmol，1.2eq )及DIEA (1.6 g，12.2 mmol，2.1 mL，1.5eq )。將混合物在25℃下攪拌16小時。將反應物用乙酸乙酯(150 mL)稀釋，且用飽和NaHCO₃ (50 mL)及鹽水100 mL (50 mL×2)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。將殘餘物在第三丁基甲基醚(20 mL)中研磨且藉由過濾收集，得到呈黃色固體之I - 31 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 10.74 (s, 1 H), 8.91 (d,J =2.51 Hz, 1 H), 8.75 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.62 (d,J =2.26 Hz, 1 H), 8.36 (dd,J =7.03, 2.51 Hz, 1 H), 7.60 - 7.74 (m, 1 H), 7.55 (dd,J =11.17, 9.16 Hz, 1 H), 4.70 - 5.12 (m, 1 H), 2.89 (s, 1 H), 2.23 - 2.41 (m, 1 H), 1.46 - 1.66 (m, 1 H)。

中間體 32 ： 4-(甲氧基甲基)-2-甲基噁唑-5-甲酸(I-32)

步驟 A ：將乙醯胺(1.7 g，28.6 mmol，4eq )及2-羥基--N,N,N-三甲基乙-1-氯化銨(1 g，7.2 mmol，1eq )合併且加熱至60℃持續30 min。向反應中添加NBS (2.5 g，14.3 mmol，2eq )及4-甲氧基-3-側氧基-丁酸甲基酯(2.1 g，14.3 mmol，2eq )且加熱至60℃持續1小時。反應混合物藉由製備型TLC用50%乙酸乙酯於石油醚中溶離純化，得到呈淡黃色油狀之I - 32a 。¹ HNMR: (400 MHz, CDCl₃ ) δ ppm 4.66 (s, 2 H), 3.94 (s, 3 H), 3.47 (s, 3 H), 2.55 (s, 3 H)。

步驟 B ：將I - 32a (60 mg，324.01 µmol，1eq )及LiOH.H₂ O (27.2 mg，648.0 µmol，2eq )於THF (1 mL))、MeOH (1 mL)及H₂ O (0.5 mL)中之混合物在25℃下在N₂ 氛圍下攪拌16小時。在真空下濃縮反應混合物，得到60 mg呈黃色固體之I - 32 之鋰鹽。

中間體 33 ： N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)-4-(甲氧基甲基)-2-甲基噁唑-5-甲醯胺(I-33) I - 33 之合成描述於實例28中。

中間體 34 ： 4-甲基-2-(甲基-d3)噁唑-5-甲酸(I-34)

步驟 A ：向於甲苯(15 mL)中之3-側氧基丁酸甲基酯(900 mg，7.7 mmol，833 μL，1eq )之溶液中添加2,2,2-三氘乙醯胺(962 mg，15.5 mmol，2eq )及TsOH (13.3 mg，77.5 µmol，0.01eq )。將混合物在120℃下攪拌12小時。在真空下濃縮混合物以得到殘餘物，將殘餘物藉由矽膠層析用呈30:1-10:1梯度之石油醚:乙酸乙酯溶離來純化，得到呈白色固體之I - 34a 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.88 (br s, 1 H), 5.02 (s, 1 H), 3.63 (s, 3 H), 2.29 (s, 3 H)。

步驟 B ：向於DCE(8 mL)中之I - 34a (250 mg，1.6 mmol，1eq )之溶液中添加(二(乙醯氧)碘基)苯(654 mg，2.0 mmol，1.3eq )及BF₃ .Et₂ O (443 mg，3.1 mmol，385 μL，2eq )。將混合物在90℃下攪拌2小時。在真空下濃縮混合物以得到殘餘物，將殘餘物藉由矽膠層析用呈30:1-10:1梯度之石油醚:乙酸乙酯溶離來純化，得到呈白色固體之I - 34b 。¹ H NMR: (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.81 (s, 3 H), 2.33 (s, 3 H)。

步驟 C ：向中於THF (1 mL)及H₂ O (1 mL) 中之I - 34b (100 mg，632 µmol，1eq )之溶液中添加15% NaOH (1 mL) 水溶液。將混合物在70℃下攪拌2小時。藉由添加HCl水溶液(1 M)調節pH至5，且形成白色固體。過濾懸浮液且用H₂ O (5 mL)洗滌濾餅。將濾餅在減壓下乾燥，得到呈白色固體之I - 34 。¹ H NMR: (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.30 (br s, 1 H), 2.32 (s, 3 H)。

中間體 35 ： 2-(第三丁氧基甲基)-N-(4-氟-3-(5-(3-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)苯基)-4-甲基噁唑-5-甲醯胺(I-35) I - 35 之合成描述於實例29中。

中間體 36 ： 4-氟-3-(5-苯基-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶-2-基)苯胺(I-36)

步驟 A ：將含有於DME:H₂ O (8:2) (15 mL)中之I - 1b (500 mg，1.483 mmol)及苯基硼酸(181 mg，1.483 mmol)之 100 ml密封試管用氬氣沖洗15 min。添加NaHCO₃ (249 mg，2.966 mmol)及Pd(dppf)Cl₂ .DCM (61 mg，0.074 mmol)，且在80℃下攪拌反應持續1小時。將反應混合物用水稀釋，用EtOAc (100 mL×2)萃取。將合併之有機層用水(150 mL)洗滌一次，用鹽水(100 mL)洗滌一次，且隨後經硫酸鈉乾燥且真空濃縮。粗化合物藉由矽膠層析用25% EtOAc/正己烷溶離來純化，得到I - 36a 。¹ H NMR (300 MHz, CDCl₃ ): δ 9.32-9.29 (m, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.34-8.29 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.65 (d, J=6.9 Hz, 2H), 7.55-7.41 (m, 4H).;M+H= 335.2

步驟B：向含有於EtOH:H₂ O (8:2) (20 mL) 中之I - 36a (150 mg，0.449 mmol)之燒瓶中添加鐵粉(370 mg，6.730 mmol)及CaCl₂ (995 mg，8.973 mmol)，且在65℃下攪拌反應持續2小時。將反應混合物用水稀釋且用EtOAc (100 mL×2)萃取。將合併之有機層用水(100 mL)洗滌一次，用鹽水(100 mL)洗滌一次，且隨後經硫酸鈉乾燥且真空濃縮。粗化合物藉由正戊烷洗滌來純化，得到I - 36 。1H NMR (300 MHz, CDCl₃ ): δ 9.04 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.70-7.40 (m, 6H), 7.20-7.00 (m, 1H), 6.75-6.60 (m, 1H);M+H= 305.30。

實例 1 ： N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 3 - 甲基吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 )- 2 , 4 - 二甲基噁唑 - 5 - 甲醯胺 ( 化合物 1 ) 向I - 7 (30 mg，0.070 mmol)及Siliacat DPP-Pd 0.25 mmol/g (0.014 g，3.52 µmol，0.05 eq)之混合物中添加0.5 mL無水THF。將反應混合物置於氮氣氛圍下且添加(3-甲基吡啶-2-基)溴化鋅(II)(於THF中0.5M，0.56 mL，0.28 mmol，4 eq)且在65℃下攪拌反應隔夜。用0.2 mL水淬滅反應且藉由製備型HPLC (Waters Atlantis T3 C18 19×50mm×10 μm管柱)用20-80%乙腈(0.035%TFA)/水(0.05% TFA)溶離來純化，得到化合物1 。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d ₄ ) δ 8.90 (dd,J = 13.2, 2.3 Hz, 2H), 8.59 - 8.43 (m, 3H), 7.97 - 7.81 (m, 2H), 7.55 - 7.35 (m, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.48 - 2.45 (m, 6H)。方法1：RT = 2.69 min.; M+H = 443.1。

化合物16 、17 、101 、102 、103 、104 、105 、106 、107 及108 根據方上文所描述之案使用對應的鋅(II)溴化物合成。

實例 2 ： N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 3 - 甲基吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 呋喃 - 2 - 甲醯胺 ( 化合物 2 ) 化合物2 以與化合物1 相似之方式製備，使用I - 8 作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.92 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.88 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.55 - 8.45 (m, 3H), 7.96 (m, 1H), 7.87 (m, 1H), 7.78 (m, 1H), 7.52 - 7.39 (m, 2H), 7.32 (m, 1H), 6.68 (m, 1H), 2.46 (s, 3H)。方法2：RT = 0.89 min.; M+H = 414.3。

化合物54 、55 、56 、57 、59 、60 、61 、62 、63 及64 係根據上文所描述之方案使用對應的鋅(II)溴化物合成。

實例 3 ： N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 3 - 甲基吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 3 ) 化合物3 以與化合物1 相似之方式製備，使用I - 6 作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.89 - 8.84 (m, 2H), 8.52 (m, 1H), 8.48 (m, 1H), 8.18 (m, 1H), 7.86 (m, 1H), 7.67 (m, 1H), 7.44 - 7.32 (m, 2H), 4.18 - 4.06 (m, 4H), 2.46 (s, 3H), 2.41 - 2.26 (m, 2H)。方法1：RT = 2.41 min.; M+H = 403.3。

化合物99 係根據上文所描述之方案使用對應的鋅(II)溴化物合成。

實施例 4 ： ( R )- 3 - 氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 3 - 甲基吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吡咯啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 4 ) 化合物4 以與化合物1 相似之方式製備，使用I - 5 作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.87 (dd, J = 4.7, 2.3 Hz, 2H), 8.52 (m, 1H), 8.49 (m, 1H), 8.19 (m, 1H), 7.86 (m, 1H), 7.67 (m, 1H), 7.45 - 7.34 (m, 2H), 5.42 - 5.25 (m, 1H), 3.85 - 3.55 (m, 4H), 2.46 (s, 3H), 2.39 - 2.19 (m, 2H)。方法1：RT = 2.41 min.; M+H = 435.3。

化合物41 、42 、43 、44 、45 、46 、47 、48 、49 、50 、51 、52 及53 係根據上文所描述之方案使用對應的鋅(II)溴化物合成。

實例 5 ： 3 , 3 - 二氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 3 - 甲基吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 5 ) 化合物5 以與化合物1 相似之方式製備，使用I - 3 作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.88 (dd, J = 5.4, 2.3 Hz, 2H), 8.52 (m, 1H), 8.48 (m, 1H), 8.22 (m, 1H), 7.86 (m, 1H), 7.69 (m, 1H), 7.45 - 7.36 (m, 2H), 4.44 (m, 4H), 2.46 (s, 3H)。方法2：RT = 0.76 min.; M+H = 439.1。

實例 6 ： 3 - 氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 3 - 甲基吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 6 ) 化合物6 以與化合物1 相似之方式製備，使用I - 4 作為起始材料。¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.98 (s, 1H), 8.94 (dd, J = 16.9, 2.3 Hz, 2H), 8.57 (ddd, J = 4.8, 1.7, 0.7 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.28 (dd, J = 7.0, 2.7 Hz, 1H), 7.80 (ddd, J = 7.7, 1.7, 0.8 Hz, 1H), 7.72 (ddd, J = 9.1, 4.1, 2.7 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 11.2, 9.1 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 7.7, 4.7 Hz, 1H), 5.41 (dtt, J = 57.5, 6.1, 3.1 Hz, 1H), 4.34 (dddd, J = 21.7, 10.4, 6.0, 1.4 Hz, 2H), 4.04 (dddd, J = 24.9, 10.4, 3.1, 1.4 Hz, 2H), 2.44 (s, 3H)。方法1：RT = 2.39 min.; M+H = 421.1。

化合物14 、15 、18 、19 、20 、21 、23 、24 、25 、26 、27 及28 係根據上文所描述之方案使用對應的鋅(II)溴化物合成。

化合物318 係根據上文所描述之方案使用二甲基鋅合成。

實例 7 ： N -( 4 - 氟基 - 3 -( 5 - 異丁基 - 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 7 ) 化合物7 以與化合物1 相似之方式製備，使用I - 6 及異丁基溴化鋅(II)作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.66 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.12 (m, 1H), 8.07 (m, 1H), 7.64 (m, 1H), 7.34 (m, 1H), 4.19 - 4.01 (m, 4H), 2.67 (m, 2H), 2.41 - 2.24 (m, 2H), 1.97 (m, 1H), 0.99 (m, 6H)。方法1：RT = 3.11 min.; M+H = 368.3。

化合物91 、93 、94 、95 、96 、97 及98 係根據上文所描述之方案使用對應的鋅(II)溴化物合成。

實例 8 ： 3 , 3 - 二氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 - 異丁基 - 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 8 ) 化合物8 以與化合物1 相似之方式製備，使用I - 3 及異丁基溴化鋅(II)作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.59 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.06 (m, 1H), 7.97 (m, 1H), 7.56 (m, 1H), 7.30 - 7.24 (m, 1H), 4.33 (m, 4H), 2.57 (m, 2H), 1.92 - 1.81 (m, 1H), 0.89 (m, 6H)。方法2：RT = 1.09 min。M+H = 404.1。

化合物29 、30 、31 、32 、33 、34 、35 、36 、37 及38 係根據上文所描述之方案使用對應的鋅(II)溴化物合成。

實例 9 ： N -( 3 -( 5 -( 二甲胺基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 )- 4 - 氟苯基 )- 3 , 3 - 二氟吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 9 )

步驟 A ：在0℃下向於乙酸乙酯(5 mL)及飽和NaHCO₃ 水溶液(5 mL)中之I - 12 (0.5 g，1.8 mmol，1eq )之溶液中添加氯甲酸2,2,2-三氯乙基酯(585.7 mg，2.8 mmol，370.7 μL， 1.5eq )，且在0℃下攪拌反應持續1小時。將反應混合物用EtOAc (30 mL×3)萃取，且合併之有機物經硫酸鈉乾燥且濃縮。所得殘餘物藉由矽膠層析用於石油醚中之20% EtOAc及20% DCM溶離來純化，得到呈黃色固體之I - 13 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 10.52 (br s, 1 H), 8.71 (d,J =2.93 Hz, 1 H), 8.57 (d,J =2.69 Hz, 1 H), 8.25 (br d,J =5.14 Hz, 1 H), 7.44 - 7.64 (m, 2 H), 7.16 (d,J =2.69 Hz, 1 H), 4.99 (s, 2 H), 2.96 (s, 6 H)。

步驟 B ：將於DMSO (1 mL)中之I - 13 (60 mg，134.3 µmol，1eq )、3,3-二氟吖丁啶HCl (25 mg，268.6 µmol，2eq )、DIEA (34.6 mg，268.6 µmol，46.7 µL，2eq )、DMAP (1.6 mg，13.4 µmol，0.1eq )之反應混合物在60℃下攪拌12小時且在70℃下攪拌另外12小時。反應混合物藉由製備型HPLC管柱：Phenomenex Gemini C18 250×50mm×10 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-乙腈]；B%：25%-55%，12 min來純化，得到呈黃色固體之9 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.18 (s, 1 H), 8.70 (d, J=3.01 Hz, 1 H), 8.55 (d, J=2.76 Hz, 1 H), 8.20 (dd, J=6.90, 2.64 Hz, 1 H), 7.56 - 7.78 (m, 1 H), 7.45 (dd, J=11.42, 9.16 Hz, 1 H), 7.15 (d, J=3.01 Hz, 1 H), 4.41 (t, J=12.67 Hz, 4 H), 2.95 (s, 6 H)。方法1：RT = 2.84 min.; M+H = 391.1。

化合物100 、124 、133 、142 、143 、156 、167 、170 、195 、219 、220 、221 、222 、223 、224 、225 、226 、227 、228 、229 、260 、276 、319 、320 、321 、322 、323 、324 及328 ，根據上文所描述之方案使用中間體I - 9 、I - 12 、I - 16 、I - 23 、I - 25 或I - 26 及對應的胺合成。

實例 10 ： N -( 3 -( 5 -( 吖丁啶 - 1 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 )- 4 - 氟苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 10 ) 將I - 6 (80 mg，205 µmol，1 eq)、吖丁啶(17.6 mg，307.5 µmol，20.7 µL，1.5eq )、NaOt-Bu (於THF中2 M，307.5 µL，3eq )、XantPhos (23.7 mg，41 µmol，0.20eq )及Pd₂ (dba)₃ (18.8 mg，20.5 µmol，0.10eq )於二噁烷(3 mL)中之混合物用氬氣脫氣且加熱至90℃持續4小時。用1 M HOAc淬滅反應且藉由製備型HPLC來純化(管柱：Phenomenex Gemini C18 250×50mm×10 µm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-乙腈]；B%：28%-58%，12 min)，得到呈黃色固體之10 。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4), δ ppm, 8.42 (d, J = 2.51 Hz, 1 H), 8.22 (d, J = 2.76 Hz, 1 H), 8.05 (dd, J=6.78, 2.76 Hz, 1 H), 7.58 - 7.62 (m, 1 H), 7.30 (dd, J = 11.04, 9.16 Hz, 1 H), 7.01 (d, J = 2.64 Hz, 1 H), 4.10 (t, J = 7.65 Hz, 4 H), 3.99 (t, J = 7.22 Hz, 4 H), 2.41 - 2.49 (m, 2 H), 2.27 - 2.35 (m, 2 H)。方法1：RT = 2.80 min.; M+H = 367.1。

化合物40 、58 、92 、122 、131 、132 、134 、135 、137 、141 、144 、145 、147 、149 、151 、155 、157 、158 、161 、163 、171 、172 、177 、178 、179 、180 、181 、183 、184 、185 、186 、190 、191 、192 、193 、194 、197 、198 、199 、200 、201 、202 、203 、204 、205 、230 、231 、232 、234 、235 、236 、237 、238 、239 、240 、241 、243 、244 、245 、248 、249 、250 、251 、252 、253 、255 、263 、266 、272 、290 、291 、292 、298 、299 、300 、302 、303 、306 、307 、308 、314 、326 、327 、338 及339 係根據上文所描述之方案使用對應的中間體I - 3 、I - 4 、I - 5 、I - 6 、I - 7 、I - 8 、I - 24 、I - 27 或I - 31 及對應的胺合成。

除了化合物241 之外亦使用以上反應條件分離化合物242 。相似地，除了化合物202 之外亦使用以上反應條件分離化合物246 。

化合物270 使用上文所描述之方案合成：使用Boc-哌啶，之後使用0.36:1比率之TFA/DCM移除Boc基團，接著用Et₃ N中和至pH=7且隨後用製備型HPLC純化(管柱：Phenomenex Synergi C18 150×25×10 μm；移動相：[水(0.225% FA)-乙腈]；B%：3%-30%，10 min))，得到化合物270 。

實例 11 ： 4 , 4 , 4 - 三氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 - 異丙基 - 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 丁醯胺 ( 化合物 173 ) 向於DMF (1.5 ml)及DIEA (0.040 ml，0.23 mmol)中之I - 9 (25 mg，0.092 mmol)之溶液中添加4,4,4-三氟丁醯氯(14.9 mg，0.092 mmol)且在室溫下攪拌反應持續12小時。將粗反應混合物直接在15 g C18急驟層析管柱上用20-90%乙腈於水中溶離純化，得到呈白色固體之化合物173 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.45 (s, 1H), 8.81 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.69 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.36 (dd, J = 7.0, 2.7 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 2.3, 0.8 Hz, 1H), 7.68 (ddd, J = 9.1, 4.2, 2.7 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 11.2, 9.0 Hz, 1H), 3.08 (pd, J = 6.9, 0.8 Hz, 1H), 2.72 - 2.55 (m, 4H), 1.30 (d, J = 6.9 Hz, 6H)。方法1：RT = 3.19 min.; M+H = 395.2。

化合物174 係根據上文所描述之方案使用對應的氯甲酸酯代替酸氯化物來合成。

實例 12 ： N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 - 異丙基 - 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吡嗪 - 2 - 甲醯胺 ( 化合物 87 ) 向燒瓶中添加吡嗪-2-甲酸(16.5 mg，0.13 mmol)，接著添加溶解於0.25 mL DMF中之I - 9 (30 mg，0.11 mmol)。向反應中添加於0.25 mL DMF中之DIEA (0.058 ml，0.33 mmol)及HATU (50.6 mg，0.13 mmol)之溶液，且將所得混合物攪拌隔夜。經由0.2微米針筒過濾器過濾反應物，且材料藉由製備型HPLC (Waters Atlantis T3 C18 19×50mm×10 μm管柱)用20-80%乙腈(0.035% TFA)/水(0.05% TFA)溶離來純化，得到化合物87 。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 9.36 (m, 1H), 8.84 (m, 1H), 8.76 (m, 1H), 8.72 (m, 1H), 8.66 (m, 1H), 8.57 (m, 1H), 8.13 (m, 1H), 7.99 (m, 1H), 7.46 (m, 1H), 3.13 (m, 1H), 1.38 (2s, 6H)。方法1：RT = 3.05 min.; M+H = 377.3。

化合物65 、67 、68 、69 、70 、71 、72 、73 、74 、75 、76 、77 、78 、79 、80 、81 、82 、83 、84 、85 、86 、87 、88 、89 、90 、109 、110 、111 、112 、113 、114 、115 、116 、117 、118 、119 、120 、196 、207 、208 、209 、210 、211 、212 、213 、214 、215 、216 、217 、261 、262 及351 係根據上文所描述之方案使用對應的羧酸合成。

化合物139 、140 、153 、154 、279 、330 及352 係根據上文所描述之方案使用I - 12 、I - 29 或I - 36 及對應的羧酸合成。

化合物278 係根據上文所描述之方案合成，使用I - 28 及I - 34 作為起始材料。

實例 13 ： 3 - 氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 2 , 2 , 2 - 三氟乙基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 152 ) 在N₂ 氛圍下向於二噁烷(1 mL)中之I - 10 (106 mg，285.6 µmol，1 eq)之溶液中添加1,1,1-三氟-2-碘-乙烷(119.9 mg，571.10 µmol，56.03 μL，2eq )、Pd₂ (dba)₃ (13.1 mg，14.3 µmol，0.05eq )、XantPhos (28.1 mg，48.5 µmol，0.2eq )及Cs₂ CO₃ (372.15 mg，1.1 mmol，4eq )。1 min之後，添加水(92.6 mg，5.1 mmol，92.6 μL，18eq )且將混合物在80℃下攪拌16小時。減壓濃縮反應混合物。將殘餘物用DCM (30 mL)稀釋，且將有機層用水洗滌(10 mL×2)，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮以得到殘餘物。殘餘物藉由製備型TLC (SiO₂ ，DCM:甲醇=10:1)純化且藉由製備型HPLC進一步純化(管柱：Phenomenex Gemini C18 250×50mm×10 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-乙腈]；B%：28%-58%，12 min)，得到呈黃色固體之化合物152 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ ppm, 8.98 (s, 1 H), 8.95 (d, J=2.51 Hz, 1 H), 8.69 (d, J=2.01 Hz, 1 H), 8.33 (d, J=1.76 Hz, 1 H), 8.24 (dd, J=6.90, 2.63 Hz, 1 H), 7.67 - 7.74 (m, 1 H), 7.48 (dd, J=11.29, 9.29 Hz, 1 H), 5.30 - 5.52 (m, 1 H), 4.26 - 4.39 (m, 2 H), 3.97 - 4.09 (m, 2 H), 3.87 (q, J=11.71 Hz, 2 H)。方法1：RT = 2.76 min.; M+H = 412.2。

化合物162 、164 、166 、175 及176 係根據上文所描述之方案使用對應的硼酸合成，對應的硼酸由以與I - 10 相同之方式製備之中間體I - 3 、I - 5 、I - 6 、I - 7 或I - 8 製備。

實例 14 ： ( 2 -( 2 - 氟 - 5 -( 3 - 氟吖丁啶 - 1 - 甲醯胺基 ) 苯基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 5 - 基 ) 胺基甲酸異丙基酯 ( 化合物 168 ) 在氬氣氛圍下向I - 4 (120 mg，294 µmol，1 eq)、胺基甲酸異丙基酯(45.5 mg，441 µmol，1.5eq )及Cs₂ CO₃ (287.3 mg，881.9 µmol，3eq )於二噁烷(3 mL)中之混合物中添加XantPhos (34.0 mg，58.8 µmol，0.20eq )及Pd₂ (dba)₃ (26.9 mg，29.4 µmol，0.10eq )。將混合物加熱至90℃且攪拌4小時。藉由添加1 M HOAc來淬滅混合物，且藉由製備型HPLC來純化(管柱：Boston pH-lex 150×25 10 μm；移動相：[水(0.225%甲酸)-乙腈]；B%：33%-63%，10 min，接著在管柱： Phenomenex Gemini C18 250×50mm×10 μm上；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-乙腈]；B%：28%-58%，12 min進一步純化)。獲得呈黃色固體之化合物168 。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4), δ ppm, 8.64 (br d, J = 2.26 Hz, 1 H), 8.61 (br d, J = 2.64 Hz, 1 H), 8.44 (br s, 1 H), 8.10 (dd, J = 6.71, 2.70 Hz, 1 H), 7.60 - 7.67 (m, 1 H), 7.33 (dd, J = 10.92, 9.16 Hz, 1 H), 5.25 - 5.47 (m, 1 H), 5.01 (dt, J = 12.52, 6.23 Hz, 1 H), 4.32 - 4.43 (m, 2 H), 4.07 - 4.19 (m, 2 H), 1.33 (d, J = 6.27 Hz, 6 H)。方法1：RT = 2.88 min.; M+H = 431.1。

化合物123 、136 、138 、146 及159 係根據上文所描述之方案使用對應的中間體I - 3 、I - 5 、I - 6 、I - 7 或I - 8 合成。

實例 15 ： 3 - 氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 3 - 氟吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 187 ) 向於DMF (3 mL)中之中間體I - 10 (95 mg，254.6 µmol，1eq )之溶液中添加Pd(dppf)Cl₂ (18.6 mg，25.5 µmol，0.1eq )、Na₂ CO₃ (81 mg，763.8 µmol，3eq )及2-溴-3-氟吡啶(89.5 mg，509.2 µmol，2eq )。將混合物在90℃下攪拌16小時。減壓濃縮反應混合物，且藉由製備型HPLC來純化(管柱：Boston Green ODS 150×30 5μ；移動相：[水(0.225% FA)-乙腈]；B%：35%-65%，10 min)，得到呈黃色固體之化合物187 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.27 (s, 1 H), 9.00 - 9.09 (m, 2 H), 8.82 (s, 1 H), 8.63 (br d, J=4.39 Hz, 1 H), 8.29 (dd, J=6.90, 2.51 Hz, 1 H), 7.93 (dd, J=10.73, 8.47 Hz, 1 H), 7.72 (dt, J=8.60, 3.48 Hz, 1 H), 7.52 - 7.58 (m, 1 H), 7.46 - 7.51 (m, 1 H), 5.28 - 5.55 (m, 1 H), 4.25 - 4.44 (m, 2 H), 3.93 - 4.14 (m, 2 H)。方法1：RT = 2.74 min.; M+H = 425.1。

化合物188 、294 、295 、297 、301 、304 、312 、325 、329 、330 及335 係根據上文所描述之方案使用對應的溴化物合成。

實例 16 ： 5 - 氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 呋喃 - 2 - 甲醯胺 ( 化合物 11 ) 將I - 11 (40 mg，0.131 mmol)溶解在2 mL DMF中。向反應中添加5-氟呋喃-2-甲酸(25.6 mg，0.20 mmol)、DIEA (0.058 mL，0.33 mmol)及HATU (50.6 mg，0.13 mmol)，且將所得混合物攪拌隔夜。將反應物用EtOAc稀釋，且用飽和Na₂ CO₃ 水溶液洗滌一次，用水洗滌一次。有機物經Na₂ SO₄ 乾燥且濃縮。粗材料經矽膠層析用0-100% 3:1 EtOAc:EtOH/庚烷溶離來純化，得到化合物11 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 10.53 (s, 1H), 9.49 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 9.06 (d,J = 2.6 Hz, 1H), 8.96 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 8.74 (ddd,J = 4.8, 1.9, 0.9 Hz, 1H), 8.53 (dd,J = 7.0, 2.7 Hz, 1H), 8.14 (dt,J = 8.0, 1.1 Hz, 1H), 8.01 - 7.91 (m, 2H), 7.62 (dd,J = 11.2, 9.1 Hz, 1H), 7.50 - 7.38 (m, 2H), 6.14 (dd,J = 7.0, 3.7 Hz, 1H)。方法2：RT = 0.91 min.; M+H =418.1。

化合物12 、13 、206 、218 、345 、346 、347 、348 及349 係根據上文所描述之方案使用對應的羧酸合成。

化合物350 係根據上文所描述之方案使用對應的羧酸及I - 28 合成。

實例 17 ： 3 - 氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 吡啶 - 4 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 182 ) 在N₂ 氛圍下向於DME (3 mL)中之I - 4 (80 mg，196 µmol，1eq )及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)吡啶(60.3 mg，294 µmol，1.5eq )之溶液中添加Pd(dppf)Cl₂ (14.34 mg，19.6 µmol，0.1eq )及Na₂ CO₃ (2 M，294 μL，3eq )。將混合物在90℃下攪拌20小時。濃縮反應混合物且將殘餘物用EtOAc (30 mL)稀釋。將有機層用水洗滌(10 mL×2)，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物藉由製備型HPLC純化(管柱：Phenomenex Gemini C18 250×50mm×10 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-乙腈]；B%：18%-48%，12 min)，得到呈白色固體之化合物182 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ ppm, 9.17 (d, J=2.26 Hz, 1 H), 9.03 (d, J=2.51 Hz, 1 H), 9.00 (s, 1 H), 8.75 (d, J=2.51 Hz, 1 H), 8.67 - 8.73 (m, 2 H), 8.28 (dd, J=6.90, 2.64 Hz, 1 H), 7.84 - 7.90 (m, 2 H), 7.68 - 7.75 (m, 1 H), 7.50 (dd, J=11.29, 9.03 Hz, 1 H), 5.30 - 5.52 (m, 1 H), 4.27 - 4.40 (m, 2 H), 3.97 - 4.10 (m, 2 H)。方法2：RT = 0.58 min.; M+H = 407.1。

化合物189 係根據上文所描述之方案使用對應的硼酸酯合成。

實例 18 ： ( R )- 3 - 氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 四氫 - 2H - 哌喃 - 4 - 基 ) - 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吡咯啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 150 )

步驟 A ：在氬氣氛圍下向2-(3,6-二氫-2H-哌喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環(65.7 mg，312.6 µmol，1.1eq )、I - 5 (120 mg，284.2 µmol，1 eq)及Na₂ CO₃ (2 M，426.3 μL，3eq )於DME (3 mL)及水(0.5 mL)中之混合物中添加Pd(dppf)Cl₂ (20.8 mg，28.4 µmol，0.1eq )。將混合物加熱至90℃持續4小時。混合物藉由製備型TLC用90%EtOAc於石油醚中溶離純化，得到呈白色固體之I - 14 。M+H = 426.2。

步驟 B ：向I - 14 (85 mg，199.8 µmol，1 eq)於甲醇(10 mL)中之混合物中添加Pd/C (30 mg，10%純度)。將懸浮液真空脫氣且用H₂ 沖洗若干次。將混合物在10℃在H₂ (15 psi)下攪拌1小時。將混合物過濾且濃縮濾液得到殘餘物。殘餘物藉由製備型HPLC純化(管柱：Boston Green ODS 150×30 5μ；移動相：[水(0.225% FA)-乙腈]；B%：27%-51%，10 min) )，得到呈黃色固體之化合物150 。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d ₄ ), δ ppm, 9.15 ( (d,J = 2.01 Hz, 1 H)), 8.98 (s, 1 H), 8.85 (d,J = 1.88 Hz, 1 H), 8.33 (dd,J = 6.78, 9.16 Hz, 1 H), 7.61 - 7.65 (m, 1 H), 7.42 (dd,J = 11.04, 9.16 Hz, 1 H), 5.28 - 5.41 (m, 1 H), 4.11 - 4.14 (m, 2 H), 3.57 - 3.85 (m, 6 H), 3.14 - 3.20 (m, 1 H), 2.11 - 2.32 (m, 2 H), 1.91 - 1.97 (m, 4 H)。方法1：RT = 2.60 min.; M+H = 428.2。

化合物148 、160 、165 、169 、296 及305 係根據上文所描述之方案使用中間體I - 3 、I - 4 、I - 6 或I - 7 及對應的硼酸或硼酸酯合成。

化合物293 係使用上文所描述之方案合成：使用I - 4 及4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁基酯，之後使用1:5比率之TFA於DCM中移除Boc基團，接著濃縮，且隨後經製備型HPLC純化(管柱：Phenomenex Synergi C18 150×25×10 μm；移動相：[水(0.225% FA)-乙腈]；B%：2%-22%，10 min)，得到化合物293 。

實例 19 ： N -( 3 -( 5 -( 5 - 氮雜螺 [ 2 . 3 ] 己 - 5 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 )- 4 - 氟苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 257 ) 將I - 6 (400 mg，1.0 mmol，1eq )、5-氮雜螺[2.3]己烷半草酸酯(128 mg，1.0 mmol，1eq )、NaOBu-t (於THF中2 M，1.5mL，3eq )及Xphos Pd G3 (87 mg，102.5 µmol，0.1eq )於二噁烷(10 mL)中之混合物脫氣，置於氬氣氛圍下且加熱至90℃持續1小時。藉由添加飽和NH₄ Cl (40 mL)淬滅反應。所得混合物由二氯甲烷(30 mL×6)萃取，且有機相經Na₂ SO₄ 乾燥且過濾。濃縮濾液，且殘餘物藉由矽膠層析用50% MeOH於DCM中溶離純化，接著製備型HPLC純化(管柱：Phenomenex Synergi C18 150× 25×10 μm；移動相：[水(0.225% FA)-乙腈]；B%：30%-60%，10 min)，得到呈黃色固體之化合物257 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 8.69 (s, 1 H), 8.52 (d,J = 2.63 Hz, 1 H), 8.28 (d,J = 2.76 Hz, 1 H), 8.20 (dd,J = 7.03, 2.63 Hz, 1 H), 7.62 - 7.69 (m, 1 H), 7.40 (dd,J = 11.29, 9.16 Hz, 1 H), 6.91 (d,J = 2.76 Hz, 1 H), 4.01 (s, 4 H), 3.97 (t,J = 7.53 Hz, 4 H), 2.19 (quin,J = 7.56 Hz, 2 H), 0.68 (s, 4 H)。方法1：RT = 2.90 min.; M+H = 393.2。

化合物233 、258 、259 及337 係根據上文所描述之方案使用對應的中間體I - 3 、I - 4 、I - 5 或I - 27 合成。

實例 20 ： 3 - 氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 3 -( 三氟甲基 ) 吖丁啶 - 1 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 265 ) 將I - 4 (3.5 g，8.6 mmol，1eq )、3-(三氟甲基)吖丁啶HCl鹽(1.7 g，10.3 mmol，1.2eq )、Pd₂ (dba)₃ (785 mg，857.4 µmol，0.1eq )、XantPhos (992 mg，1.7 mmol，0.2eq )及Cs₂ CO₃ (8.4 g，25.7 mmol，3eq )於二噁烷(60 mL)中之混合物脫氣，且隨後在N₂ 氛圍下加熱至85℃持續1.2小時。將反應混合物用飽和NH₄ Cl溶液(400 mL)淬滅，且用EtOAc (300 mL×2)萃取。將合併之有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且濃縮。殘餘物藉由矽膠層析用MeOH/乙酸乙酯/DCM=0:1:1至1:5:1溶離來純化，得到黃色固體，其藉由製備型HPLC進一步純化；管柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250×80mm×10 μm；移動相：[水(0.225% FA)-乙腈]；B%：30%-60%，35 min。藉由20% NH₃ /H₂ O調節溶液之pH至pH=7，在30℃下真空移除乙腈。藉由過濾收集所得黃色固體，用水洗滌(100 mL×4)，且凍乾，得到呈黃色固體之化合物265 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 8.93 (s, 1 H), 8.58 (d,J = 2.76 Hz, 1 H), 8.32 (d,J = 2.76 Hz, 1 H), 8.20 (dd,J = 7.03, 2.64 Hz, 1 H), 7.65 (dd,J = 7.34, 4.58 Hz, 1 H), 7.44 (dd,J = 11.17, 9.16 Hz, 1 H), 7.03 (d,J = 2.89 Hz, 1 H), 5.29 - 5.51 (m, 1 H), 4.24 - 4.38 (m, 2 H), 4.18 (t,J = 8.34 Hz, 2 H), 3.95 - 4.10 (m, 4 H), 3.65 - 3.85 (m, 1 H)。方法1：RT = 2.86 min.; M+H =453.1。

化合物274 及275 係根據上文所描述之方案使用對應的中間體I - 5 或1 - 6 合成。

實例 21 ： N -( 2 -( 5 -( 3 , 3 - 二氟吖丁啶 - 1 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 吡啶 - 4 - 基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 280 )

步驟 A ：向於吡啶(30 mL)中之I - 17 (2.5 g，8.6 mmol，1 eq)之溶液中添加氯甲酸2,2,2-三氯乙基酯(3.6 g，17.2 mmol，2.3 mL，2eq )。將混合物在30℃下攪拌22小時。藉由添加100 mL水來沈澱反應混合物，且隨後過濾。用50 mL水洗滌濾餅且在減壓下乾燥。將沈澱在第三丁基甲基醚(20 mL)中研磨且藉由過濾收集，得到呈棕色固體之I - 20 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 11.08 (s, 1 H), 9.32 (s, 1 H), 8.77 (d,J = 1.71 Hz, 1 H), 8.62 (d,J = 1.96 Hz, 1 H), 8.52 (d,J = 1.71 Hz, 1 H), 8.49 (d,J = 3.91 Hz, 1 H), 7.75 (dd,J = 5.38, 1.71 Hz, 1 H), 5.05 (s, 2 H)。

步驟 B ：向於DMSO (12 mL)中之I - 20 (1.2 g，2.6 mmol，1 eq)及吖丁啶鹽酸鹽(482 mg，5.2 mmol，2eq )之溶液中添加DMAP (31 mg，257.8 µmol，0.10eq )及DIEA (666 mg，5.2 mmol，898.0 μL，2eq )。將混合物在60℃下攪拌144小時。藉由添加100 mL水來沈澱反應混合物，且隨後過濾。用50 mL水洗滌濾餅，在減壓下乾燥，得到呈棕色固體之I - 21 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 9.24 (s, 2 H), 8.75 (d,J = 2 .45 Hz, 1 H), 8.60 (d,J = 2.20 Hz, 1 H), 8.49 (d,J = 1.71 Hz, 1 H), 8.35 (d,J = 5.62 Hz, 1 H), 7.73 (dd,J = 5.75, 1.83 Hz, 1 H), 4.04 (br t,J = 7.58 Hz, 4 H), 2.23 (quin,J = 7.64 Hz, 2 H)。

步驟 C ：將I - 21 (180 mg，482.3 µmol，1 eq)、3,3-二氟吖丁啶(125 mg，964.6 µmol，2eq ，HCl)、XantPhos (56 mg，96.5 µmol，0.20eq )、Pd₂ (dba)₃ (44 mg，48.2 µmol，0.10eq )及NaOBu-t (2 M，964.6 μL，4eq )於二噁烷(3 mL)中之混合物在90℃下在N₂ 氛圍下攪拌16小時。減壓濃縮反應混合物以移除溶劑。殘餘物藉由矽膠層析用10-100%石油醚於乙酸乙酯中溶離純化，得到65 mg殘餘物。將殘餘物在MeOH (3 mL)中研磨，藉由過濾收集固體，得到呈黃色固體之化合物280 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.18 (s, 1 H), 8.99 (s, 1 H), 8.44 (d, J=1.76 Hz, 1 H), 8.36 (d, J=2.76 Hz, 1 H), 8.31 (d, J=5.77 Hz, 1 H), 7.67 (dd, J=5.52, 2.01 Hz, 1 H), 7.14 (d, J=2.76 Hz, 1 H), 4.42 (t, J=12.17 Hz, 4 H), 4.04 (t, J=7.53 Hz, 4 H), 2.16 - 2.29 (m, 2 H)。方法1：RT = 2.76 min.; M+H = 386.0。

化合物282 、284 、286 、287 及343 係根據上文所描述之方案使用中間體I - 17 、I - 18 或I - 19 及對應的胺合成。

化合物340 根據步驟A及步驟B中所描述之方案使用(R)-3-氟吡咯啶合成。

實例 22： 3,3-二氟 -N-(2-(5-(吡啶 - 2 - 基 )- 2H-吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 吡啶 - 4 - 基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 (化合物281)

步驟 A ：向於DMSO (10 mL)中之I - 20 (800 mg，1.7 mmol，1eq )及3,3-二氟吖丁啶HCl鹽(445 mg，3.4 mmol，2eq )之溶液中添加DMAP (21 mg，171.8 µmol，0.1eq )及DIEA (444 mg，3.4 mmol，598.7 μL，2eq )。將混合物在60℃下攪拌320小時。藉由添加水(100 mL)來沈澱反應混合物，且隨後過濾。用50 mL水洗滌濾餅，在減壓下乾燥，得到呈棕色固體之I - 22 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 9.69 (s, 1 H), 9.23 - 9.27 (m, 1 H), 8.75 (d,J = 2.45 Hz, 1 H), 8.61 (d,J = 2.44 Hz, 1 H), 8.47 (d,J = 1.96 Hz, 1 H), 8.41 (d,J = 5.62 Hz, 1 H), 7.71 (dd,J = 5.62, 1.96 Hz, 1 H), 4.48 (t,J = 12.72 Hz, 4 H)。

步驟 B ：向於DMF (10 mL)中之I - 22 (460 mg，1.12 mmol，1eq )及三丁基(2-吡啶基)錫烷(497 mg，1.3 mmol，1.2eq )之溶液中添加Pd(PPh₃ )₄ (130 mg，112.4 µmol，0.1eq )及CuI (21 mg，112.4 µmol，0.1eq )。將混合物在85℃下在N₂ 氛圍下攪拌16小時。減壓濃縮反應混合物以移除溶劑。殘餘物藉由矽用10-100%石油醚於乙酸乙酯中溶離純化，得到固體，將其在DCM (3 mL)中研磨。藉由過濾收集所得固體，得到呈灰白色固體之化合物281 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.70 (s, 1 H), 9.47 (d, J=2.20 Hz, 1 H), 9.38 (s, 1 H), 8.95 (d, J=2.20 Hz, 1 H), 8.71 - 8.77 (m, 1 H), 8.49 (d, J=1.71 Hz, 1 H), 8.42 (d, J=5.62 Hz, 1 H), 8.12 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.96 (td, J=7.76, 1.83 Hz, 1 H), 7.72 (dd, J=5.62, 1.96 Hz, 1 H), 7.39 - 7.47 (m, 1 H), 4.49 (t, J=12.72 Hz, 4 H)。方法1：RT = 2.81 min.; M+H = 408.0。

化合物283 、285 、309 、310 、313 、315 、317 、341 、342 及344 係根據上文所描述之方案使用中間體I - 1 、I - 17 、I - 18 或I - 19 及對應的胺及對應的有機錫來合成。

化合物256 、 332 、 333 及336 根據步驟B中之方案使用I - 24 、I - 27 或I - 31 及對應的有機錫來合成。

實例 23 ： 3 - 氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 311 ) 在N₂ 氛圍下向於EtOH (2 mL)中之I - 4 (100 mg，245 µmol，1eq )之溶液中添加TEA (25 mg，245 µmol，34.1 μL，1eq )及Pd(OH)₂ /C (34 mg，24.5 µmol，10%純度，0.1eq )。將懸浮液脫氣且用H₂ 沖洗3次。將混合物在25℃下在H₂ (15 Psi)下攪拌3小時。將反應混合物過濾且減壓濃縮以得到殘餘物。殘餘物藉由製備型HPLC純化(管柱： Luna C18 150×25×5μm；移動相：[水(0.225% FA)-乙腈]；B%：17%-44%，10 min)且凍乾，得到呈白色固體之化合物311 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ), ppm, 8.98 (s, 1 H), 8.90 (d, J=2.26 Hz, 1 H), 8.72 (d, J=3.01 Hz, 1 H), 8.31 (d, J=8.28 Hz, 1 H), 8.25 (dd, J=7.03, 2.51 Hz, 1 H), 7.66 - 7.73 (m, 1 H), 7.43 - 7.51 (m, 1 H), 7.20 (dd, J=8.41, 4.14 Hz, 1 H), 5.29 - 5.51 (m, 1 H), 4.24 - 4.39 (m, 2 H), 3.96 - 4.10 (m, 2 H)。方法1：RT = 2.41 min.; M+H = 330.1。

實例 24 ： N -( 3 -( 5 -( 1 - 乙醯基吖丁啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 )- 4 - 氟苯基 )- 3 - 氟吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 267 )

步驟 A ：將1-(第三丁氧基羰基)吖丁啶-2-甲酸(394 mg，2 mmol)、I - 4 (400 mg，1 mmol)、1,1,3,3-四甲基胍(226 mg，1.96 mmol)、NiCl₂ (dme)(22 mg，0.1 mmol)、4,4'-二第三丁基-2,2'-聯吡啶(26 mg，0.1 mol)及2,4,5,6-四(9H-咔唑-9-基)間苯二甲腈(23 mg，0.03 mmol)在加熱且音波處理下溶解在DMSO (9.8 mL)中。將溶液經由光(化學)反應器泵抽(0.10 mL/min)(反應器體積-0.9 mL；PFA管0.04” ID、0.0625” ID；照射面積 20 cm² ；距LED板距離1 cm；400-750 nm LED；8800 lm亮度)，且收集在小瓶中。將反應物藉由C18急驟層析用15-85%乙腈於水中溶離純化，且濃縮。材料藉由矽膠層析用40-100% EtOAc/庚烷溶離來進一步純化，得到I - 30 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.98 (s, 1H), 8.94 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.71 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.22 (dd, J = 7.0, 2.7 Hz, 1H), 7.70 (ddd, J = 9.1, 4.1, 2.8 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 11.1, 9.1 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.55 (dd, J = 9.0, 6.4 Hz, 1H), 5.48 - 5.30 (m, 1H), 4.32 (dddd, J = 21.7, 10.4, 6.0, 1.4 Hz, 2H), 4.11 - 3.94 (m, 6H), 1.27 (s, 9H)。

步驟 B ：將I - 30 (83 mg，0.171 mmol)溶解於DCM (1 mL)中且添加TFA (0.5 mL)。攪拌反應3小時且濃縮，將其溶解在MeOH中且藉由C18急驟層析用5-40%乙腈於水中溶離純化。凍乾，產生呈白色固體之化合物264 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.38 (s, 1H), 9.07 - 8.96 (m, 2H), 8.84 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.30 (dd, J = 7.0, 2.7 Hz, 1H), 7.72 - 7.62 (m, 1H), 7.52 (dd, J = 11.2, 9.1 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 4.4, 1.2 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.41 (dtt, J = 57.4, 6.1, 3.1 Hz, 1H), 4.40 - 4.25 (m, 2H), 4.27 - 4.16 (m, 1H), 4.10 - 3.94 (m, 2H), 3.90 - 3.77 (m, 1H), 3.06 - 2.94 (m, 1H), 2.86 (dtd, J = 11.7, 8.7, 4.4 Hz, 1H)。方法1：RT = 1.69 min.; M+H = 385.2。

步驟 C ：將化合物264 (20 mg，0.052 mmol)溶解在DCM (體積：1 mL)中，且添加DIEA (0.027 mL，0.16 mmol)及乙醯氯(5.55 µl，0.078 mmol)且攪拌60小時。反應物藉由SFC在Princeton PPU 250×21.2mm管柱上用20-60% MeOH/液體CO₂ 溶離來純化，得到化合物267 。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 8.86 (dd, J = 3.4, 2.2 Hz, 1H), 8.74 (d, J = 4.4 Hz, 0.5H), 8.67 (d, J = 4.5 Hz, 0.5H), 8.17 (dd, J = 6.8, 2.7 Hz, 0.5H), 8.13 (dd, J = 6.8, 2.7 Hz, 0.5H), 7.66 (dddd, J = 8.8, 4.3, 2.7, 1.7 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 10.9, 9.1, 3.7 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 4.4, 0.8 Hz, 0.5H), 7.18 (dd, J = 4.5, 0.9 Hz, 0.5H), 5.93 (dd, J = 9.2, 5.6 Hz, 0.5H), 5.73 (dd, J = 9.3, 6.1 Hz, 0.5H), 5.37 (dtt, J = 57.1, 6.1, 3.2 Hz, 1H), 4.48 - 4.32 (m, 3H), 4.24 - 4.15 (m, 2H), 4.11 (ddd, J = 10.3, 3.2, 1.4 Hz, 1H), 3.05 - 2.91 (m, 1H), 2.34 - 2.21 (m, 1H), 2.03 (s, 1.5H), 1.71 (s, 1.5H)。方法2：RT = 0.66 min.; M+H = 427.2。

化合物247 根據上文步驟A中之方案合成，使用1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-甲酸作為起始材料。

實例 25 ： N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 四氫 - 2H - 哌喃 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 288 ) 將I - 6 (30 mg，0.077 mmol)、氯化鎳(II)乙二醇二甲醚錯合物(1.7 mg，7.8 µmol)、1,1,3,3-四甲基胍(53 mg，0.46 mmol)、4,4'-二第三丁基-3,3'-聯吡啶(2.1 mg，7.7 µmol)、四氫-2H-哌喃-2-甲酸(60 mg，0.46 mmol)及[4,4'-雙(第三丁基)-2,2'-聯吡啶]雙[3,5-二氟-2-[5-甲基-2-吡啶基]苯基]銥(III)六氟磷酸酯(3.90 mg，3.84 µmol)在加熱且音波處理下溶解在DMSO (769 µL)中。將溶液添加至96孔聚四氟乙烯(Teflon)盤之0.3 mL孔中，照射3小時(照射面積20 cm² ；距LED板距離10 cm；400-750 nm LED；7600 lm亮度)。所得溶液藉由製備型HPLC (Waters Atlantis T3 C18 19×50mm×10 μm管柱)用乙腈(0.035% TFA)/水(0.05%TFA)溶離來純化，得到化合物288 。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 9.03 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.73 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.19 (dd, J = 6.8, 2.7 Hz, 1H), 7.63 (ddd, J = 9.1, 4.2, 2.7 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 10.9, 9.1 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 5.0, 0.9 Hz, 1H), 4.92 (ddt, J = 2.7, 1.4, 0.7 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.17 - 4.07 (m, 2H), 3.74 (td, J = 11.6, 2.5 Hz, 1H), 3.37 - 3.32 (m, 2H), 2.33 (p, J = 7.6 Hz, 2H), 2.15 - 1.98 (m, 2H), 1.92 - 1.57 (m, 4H)。方法2：RT = 0.89 min.; M+H = 396.0。

化合物289 根據上文方案合成使用1,4-二噁烷-2-甲酸作為起始材料。

實例 26A 及實例 26B ： ( 1S , 2R )- 2 - 氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 環丙烷 - 1 - 甲醯胺 或 ( 1R , 2S )- 2 - 氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 環丙烷 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 269 及 273 ) 藉由SFC分離化合物256 (170 mg)(管柱：CHIRALCEL®OJ-H (250mm×25 mm，10 μm)；移動相：[CO₂ -MeOH (0.1% NH₃ H₂ O]；B%：50%)，得到呈黃色固體之化合物269 (峰1，RT=5.42 min)及呈灰白色固體之化合物273 (峰2，RT=6.75 min)。

269 ( 峰 1) ： SFC RT：5.42 min。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.75 (s, 1 H), 9.48 (d, J=2.26 Hz, 1 H), 9.03 (d, J=2.38 Hz, 1 H), 8.95 (d, J=2.26 Hz, 1 H), 8.74 (d, J=4.14 Hz, 1 H), 8.39 (dd, J=6.96, 2.57 Hz, 1 H), 8.13 (d, J=8.03 Hz, 1 H), 7.96 (td, J=7.75, 1.69 Hz, 1 H), 7.65 - 7.74 (m, 1 H), 7.57 (dd, J=11.11, 9.10 Hz, 1 H), 7.42 (dd, J=7.22, 5.21 Hz, 1 H), 4.78 - 5.06 (m, 1 H), 2.26 - 2.35 (m, 1 H), 1.49 - 1.66 (m, 1 H), 1.24 - 1.33 (m, 1 H)。方法1：RT = 2.80 min.; M+H = 392.2。

273 ( 峰 2) ： SFC RT：6.75 min。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.75 (s, 1 H), 9.48 (d, J=2.08 Hz, 1 H), 9.03 (d, J=2.32 Hz, 1 H), 8.95 (d, J=2.20 Hz, 1 H), 8.74 (d, J=4.52 Hz, 1 H), 8.40 (dd, J=7.03, 2.51 Hz, 1 H), 8.13 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.96 (td, J=7.79, 1.77 Hz, 1 H), 7.69 (dt, J=8.47, 3.53 Hz, 1 H), 7.57 (dd, J=11.00, 9.17 Hz, 1 H), 7.42 (dd, J=7.09, 5.14 Hz, 1 H), 4.80 - 5.05 (m, 1 H), 2.25 - 2.34 (m, 1 H), 1.48 - 1.67 (m, 1 H), 1.28 (dq, J=13.13, 6.67 Hz, 1 H)。方法1：RT = 2.82 min.; M+H = 392.2。

實例 27A 及實例 27B ： ( 1S , 2R )- N -( 3 -( 5 -( 3 , 3 - 二氟吖丁啶 - 1 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 )- 4 - 氟苯基 )- 2 - 氟環丙烷 - 1 - 甲醯胺 或 ( 1R , 2S )- N -( 3 -( 5 -( 3 , 3 - 二氟吖丁啶 - 1 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 )- 4 - 氟苯基 )- 2 - 氟環丙烷 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 268 及 271 ) 藉由SFC分離化合物339 (130 mg)(管柱：CHIRALCEL® OD-H 250mm×25 mm，10 μm)；移動相：[CO₂ -MeOH (0.1% NH₃ H₂ O]；B%：50%)，得到呈黃色固體之化合物271 (峰1，RT=4.58 min)及呈黃色固體之化合物268 (峰2，RT=8.01 min)。

268 ( 峰 2) ： SFC RT：8.01 min。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.69 (s, 1 H), 8.64 (d, J=2.69 Hz, 1 H), 8.37 (d, J=2.81 Hz, 1 H), 8.32 (dd, J=7.03, 2.51 Hz, 1 H), 7.61 - 7.67 (m, 1 H), 7.52 (dd, J=11.19, 9.11 Hz, 1 H), 7.15 (d, J=2.81 Hz, 1 H), 4.80 - 5.03 (m, 1 H), 4.41 (t, J=12.29 Hz, 4 H), 2.24 - 2.33 (m, 1 H), 1.46 - 1.67 (m, 1 H), 1.27 (dd, J=13.27, 6.54 Hz, 1 H)。方法1：RT = 2.89 min.; M+H = 406.0。

271 ( 峰 1) ： SFC RT：4.58 min。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.75 (s, 1 H), 8.70 (d, J=2.69 Hz, 1 H), 8.43 (d, J=2.81 Hz, 1 H), 8.38 (dd, J=6.97, 2.57 Hz, 1 H), 7.66 - 7.77 (m, 1 H), 7.52 - 7.63 (m, 1 H), 7.20 (d, J=2.81 Hz, 1 H), 4.85 - 5.08 (m, 1 H), 4.47 (t, J=12.23 Hz, 4 H), 2.27 - 2.39 (m, 1 H), 1.52 - 1.72 (m, 1 H), 1.33 (dq, J=13.11, 6.43 Hz, 1 H)。方法1：RT = 2.89 min.; M+H = 406.0。

實例 28 ： N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 3 - 甲基吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 )- 4 -( 羥基甲基 )- 2 - 甲基噁唑 - 5 - 甲醯胺 ( 化合物 277 )

步驟 A ：中間體I - 33 以與實例 12 相似之方式製備，使用I - 28 及I - 32 作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 10.70 (s, 1 H), 9.04 (d,J =2.45 Hz, 1 H), 8.95 (d,J =2.20 Hz, 1 H), 8.60 - 8.66 (m, 2 H), 8.55 (d,J =2.20 Hz, 1 H), 7.89 - 7.96 (m, 2 H), 7.62 (dd,J =11.00, 9.29 Hz, 1 H), 7.44 - 7.52 (m, 1 H), 4.64 (s, 2 H), 3.31 (s, 3 H), 2.57 (s, 3 H), 2.46 (s, 3 H)。M+H = 473.0。

步驟 B ：在-78℃下向於DCM (1 mL)中之I - 33 (15 mg，28.9 µmol，1eq ，FA)之溶液中逐滴添加於DCM (0.5 mL)中之BBr₃ (14.5 mg，57.9 µmol，5.6 μL，2eq )。將混合物在20℃下在N₂ 氛圍下攪拌18小時。添加飽和NaHCO₃ (3 mL)且將混合物用DCM (10 mL)萃取。有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且減壓濃縮以得到殘餘物。殘餘物藉由製備型HPLC純化(管柱：Phenomenex Gemini 150×25 mm×10 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-乙腈]；B%：30%-60%，12 min)，且凍乾，得到呈白色固體之化合物277 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.00 (d, J=2.20 Hz, 1 H), 8.94 (d, J=1.96 Hz, 1 H), 8.53 - 8.63 (m, 2 H), 8.51 (d, J=2.20 Hz, 1 H), 7.85 - 7.95 (m, 1 H), 7.81 (br d, J=7.34 Hz, 1 H), 7.55 - 7.67 (m, 1 H), 7.37 (dd, J=7.46, 4.77 Hz, 1 H), 4.69 (s, 2 H), 2.55 (s, 3 H), 2.45 (s, 3 H)。方法1：RT = 2.50 min.; M+H = 459.0。

實例 29 ： N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 3 - 甲基吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 )- 2 -( 羥基甲基 )- 4 - 甲基噁唑 - 5 - 甲醯胺 ( 化合物 334 )

步驟 A ：中間體I - 35 以與實例 12 相似之方式製備，使用I - 28 及2-(第三丁氧基甲基)-4-甲基噁唑-5-甲酸作為起始材料。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ ppm 10.55 - 10.67 (m, 1 H) 9.00 (d,J =2.45 Hz, 1 H) 8.91 - 8.97 (m, 1 H) 8.54 - 8.65 (m, 2 H) 8.47 - 8.53 (m, 1 H) 7.96 (s, 1 H) 7.80 (dd,J =7.70, 0.86 Hz, 1 H) 7.55 - 7.65 (m, 1 H) 7.37 (dd,J =7.70, 4.77 Hz, 1 H) 4.54 (s, 2 H) 2.69 (s, 3 H) 2.44 (s, 3 H) 1.24 (s, 9 H)。

步驟 B ：向於DCM (2 mL)中之I - 35 (70 mg，136.04 µmol，1eq )之溶液中添加TFA (0.5 mL，6.75 mmol，49.6eq )。將混合物在25℃下攪拌3小時。減壓濃縮反應混合物以移除溶劑。用TEA調節pH至7。殘餘物藉由製備型HPLC純化(管柱：Phenomenex Gemini 150×25 mm×10 μm；移動相：[水(0.05%氫氧化氨v/v)-乙腈]；B%：20%-50%，12 min)，且凍乾，得到呈白色固體之化合物334 。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm, 10.63 (s, 1 H), 9.00 (d, J=2.20 Hz, 1 H), 8.94 (d, J=2.20 Hz, 1 H), 8.62 (dd, J=7.09, 2.45 Hz, 1 H), 8.57 (d, J=3.67 Hz, 1 H), 8.51 (d, J=2.20 Hz, 1 H), 7.91 - 8.01 (m, 1 H), 7.81 (d, J=7.34 Hz, 1 H), 7.60 (dd, J=11.00, 9.05 Hz, 1 H), 7.37 (dd, J=7.70, 4.77 Hz, 1 H), 5.83 (t, J=5.99 Hz, 1 H), 4.60 (d, J=6.11 Hz, 2 H), 2.45 (s, 6 H)。方法1：RT = 2.57 min.; M+H = 459.0。

實例 30 ： 3 , 3 - 二氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 -( 吡啶 - 2 - 基 )- 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 39 ) 在N₂ 氛圍下向於DMF (40 mL)中之I - 3 (3.00 g，7.04 mmol，1eq )及三丁基(2-吡啶基)錫烷(3.4 g，9.1 mmol，1.3eq )之溶液中添加Pd(PPh₃ )₄ (813 mg，703.9 µmol，0.1eq )及CuI (134 mg，703.9 µmol，0.1eq )。將混合物在85℃下攪拌2小時。減壓濃縮反應混合物以移除溶劑。殘餘物藉由矽膠層析用石油醚/乙酸乙酯(=2:1至0:1)溶離來純化，得到呈白色固體之化合物39 。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ 9.36 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 9.00 - 8.93 (m, 2H), 8.79 - 8.75 (m, 1H), 8.26 (dd, J = 6.8, 2.7 Hz, 1H), 8.19 - 8.14 (m, 2H), 7.70 - 7.64 (m, 1H), 7.64 - 7.56 (m, 1H), 7.46 - 7.35 (m, 1H), 4.44 (td, J = 12.3, 3.0 Hz, 4H)。方法2：RT = 0.99 min.; M+H = 425.0。

實例 31 ： 3 , 3 - 二氟 - N -( 4 - 氟 - 3 -( 5 - 苯基 - 2H - 吡唑并 [ 3 , 4 - b ] 吡啶 - 2 - 基 ) 苯基 ) 吖丁啶 - 1 - 甲醯胺 ( 化合物 353 ) 在-5℃至0℃下向經攪拌的於無水THF (1 mL)中之三光氣(23 mg，0.079 mmol)溶液中添加於無水THF (2 mL)中之I-36 (40 mg，0.131 mmol)，且在室溫下攪拌10 min。在0℃下逐滴添加於無水THF (2 mL)中之3,3-二氟吖丁啶鹽酸鹽(34 mg，0.263 mmol)及DIEA (51 mg，0.394 mmol)，且在RT下攪拌反應持續1小時。用飽和NH₄ Cl溶液淬滅反應混合物，且用EtOAc (50 mL×2)萃取。合併之有機層用水(20 mL)、鹽水(10 mL)洗滌，且經硫酸鈉乾燥且真空濃縮。粗化合物藉由矽膠層析用50% EtOAc/正己烷溶離來純化，得到呈灰白色固體之化合物353。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 9.25 (s, 1H), 9.06-9.05 (d, J=2.8, 1H), 8.96-8.95 (d, J=2.0, 1H), 8.52-8.51 (d, J=2.4, 1H), 8.27-8.25 (m, 1H), 7.80-7.78 (d, J=7.2, 2H), 7.72-7.67 (m, 1H), 7.56-7.48 (m, 3H), 7.44-7.41 (m, 1H), 4.44-4.38 (t, J=16.4, 4H)。

表2列出根據以上實例製備之化合物。表2

生物分析 本文中所描述之分析說明且不限制本發明之範疇。

縮寫下文中所使用之縮寫具有以下對應含義：

對杜氏利什曼原蟲無菌無鞭毛體之生長抑制的活體外分析 在由RPMI 1640、4 mM L-麩醯胺酸、20%熱滅活FBS、100單位/毫升青黴素(penicillin)及100 µg/ml鏈黴素(streptomycin)、23 µM葉酸、100 µM腺苷、22 mM D-葡萄糖、25 mM MES製成之培養基中在37℃、5% CO₂ 下生長杜氏利什曼原蟲無菌無鞭毛體寄生蟲。在37℃下使用HCl調節培養基之pH至5.5。首先將20 µL培養基分配至384孔盤中且向盤孔添加100 nL於DMSO中之本發明之化合物。同時向盤中添加對照化合物及DMSO以分別充當陽性及陰性對照。隨後向盤孔中添加40 µL寄生蟲培養物(9600個寄生蟲)。隨後將盤置於培育箱中。培育兩天之後，向盤孔中添加20 µL Cell TiterGlo® (Promega)。使用Envision讀取器(Perkin Elmer)量測各孔之發光信號。

對小鼠巨噬細胞中之杜氏利什曼原蟲之寄生蟲血症之抑制的分析 該分析使用DNA嵌入染料SYBR Green I^® 染料(INVITROGEN)染色利什曼原蟲細胞核來量測分析盤孔中之寄生蟲數目之增加。藉由經尾部靜脈注射10⁷ 個利什曼原蟲寄生蟲來感染BALB/c小鼠來傳播杜氏利什曼原蟲HU3 株。使經感染小鼠在感染後9-11週期間發展感染。在此時間期間，寄生蟲在經感染小鼠脾中累積至較大數目，且經感染小鼠充當用於活體外量測化合物功效之寄生蟲來源。為分析化合物之抗利什曼原蟲活性，將自未經感染BALB/c小鼠分離之腹膜巨噬細胞以每孔2×10⁴ 個巨噬細胞之密度接種在384孔盤中之25 mL培養基(RPMI1640、10%胚胎血清白蛋白、10 mM HEPES、1 mM丙酮酸鈉、1%青黴素/鏈黴素)中。隨後，將經接種的盤置於培育箱中，該培育箱設定為保持37℃溫度及具有5% CO₂ 之氛圍。

次日，自感染9至11週之小鼠之脾中分離利什曼原蟲寄生蟲，且將於10 mL以上培養基中之4×10⁵ 個經分離的寄生蟲添加至各盤孔中。隨後將盤返回至培育箱中且使感染進行24小時。在巨噬細胞之感染完成之後，將亦含有5% DMSO之以上培養基中之5 mL本發明之化合物添加至含有經感染的巨噬細胞的盤孔中。同時，向盤中添加對照化合物(米替福新及雙性黴素B)及DMSO以分別充當陽性及陰性對照。在添加化合物之後，將盤返回至培育箱中且將感染有寄生蟲之細胞培養5天。在培養結束時，向盤孔中添加40 mL 8%多聚甲醛且在室溫下培育15 min。在培育之後，自盤孔中抽吸來多聚甲醛，且向孔中添加含有0.2% Triton X-100之40 mL PBS。在培育15 min之後，再次自孔中抽吸溶液，且置換為於PBS (1:125,000稀釋)中之Sybr® Green染料溶液。用Evotec Opera高含量顯微鏡成像感染細胞，且藉由計數藉由染色有Sybr® Green染料而可視化之寄生蟲核來測定孔中之寄生蟲之數目。

對 動質體寄生蟲克氏錐蟲之生長抑制的分析 可針對對在3T3纖維母細胞中培養之克氏錐蟲無鞭毛體之抑制活性來分析本發明之化合物。該分析使用在宿主細胞之細胞內空間中複製之哺乳動物階段(無鞭毛體)之克氏錐蟲進行。宿主細胞起初感染有培養物衍生之錐鞭毛體，其快速侵入且隨後作為無鞭毛體分裂。方案使用克氏錐蟲之Tulahuen株，其已經工程化以表現大腸桿菌(E . coli ) β-半乳糖苷酶基因(Lac-Z) (Antimicr. Agents Chemoth. 40:2592, 1996)。此允許藉由使用基質CPRG及吸光度讀盤器進行比色讀取。

將3T3纖維母細胞再懸浮於補充有10% FBS (熱滅活)、100 μg/ml青黴素及100 μg/ml鏈黴素之不含酚紅培養基的RPMI-1640培養基中。將四十微升懸浮液(1,000個細胞)分配至384孔盤中，且在37℃溫度下於含有5% CO₂ 之氛圍中培育隔夜。第二天，向含有3T3細胞之盤孔中添加100 nL於DMSO中之本發明之化合物。同時，向盤中添加對照化合物(苄硝唑及硝呋莫司)及DMSO以分別充當陽性及陰性對照。此後，向各盤孔中添加10 µL含有10,000個克氏錐蟲錐鞭毛體之培養基，且將盤置放回培育箱中。在培育6天之後，向盤中添加10 µL試劑溶液(於PBS中之0.6 mM CPRG、0.6% NP-40)且在室溫下培育2小時。隨後在SpectraMax Gemini螢光計上量測吸光度以測定存在於各盤孔中之克氏錐蟲細胞之相對數目。

對布氏布氏錐蟲之生長抑制的分析 藉由添加Cell TiterGlo®(Promega®)來定量增殖，其係基於定量細胞ATP量(代謝活性細胞之指標)來量測培養物中之活細胞之數目的發光細胞成活力分析。

在補充有10% v/v 胎牛血清(FBS)及10% v/v血清加之Hirumi 9 (HMI-9)培養基中生長布氏布氏錐蟲 (Lister 427)株。為量測細胞增殖抑制，將測試化合物一式兩份三倍連續稀釋至384孔白色盤中，對各化合物產生10份稀釋液。向各孔中添加40 μL體積之布氏布氏錐蟲培養物(10,000個寄生蟲/毫升)，且將分析盤在CO₂ 培育箱中於37℃下培育2天。藉由量測用作生長之替代標記物之ATP含量監測生長抑制。在添加40 μl Cell TiterGlo® 30 min之後使用TECAN®M1000來量測相對發光單位。藉由使用HELIOS軟體分析資料來確定IC₅₀ 值。IC₅₀ 定義為相比於未經處理對照組，化合物抑制布氏布氏錐蟲野生型株之50%生長的最低濃度。

表3顯示活體外化合物對杜氏利什曼原蟲無菌無鞭毛體(第2欄)；於小鼠腹膜巨噬細胞中之杜氏利什曼原蟲(第3欄)；克氏錐蟲(第4欄)；及布氏布氏錐蟲(第5欄)之抑制功效(EC₅₀ )。本發明之化合物之EC₅₀ 在＞10 µM至＜0.01 µM範圍內。在特定實施例中，本發明之化合物之EC₅₀ ＜1 µM，＜500 nM，＜100 nM或＜50 nM。表3

表4比較式(I)之化合物與具有不同核之化合物之活性。除非另外規定，否則EC₅₀ 值由上文所描述之分析獲得。表4

應瞭解，本文所述之實例及實施例僅用於說明之目的，且根據其之各種修改或變化將由熟習此項技術者提出且包括在本申請案之精神及範圍內及所附申請專利範圍之範疇內。本文所引用之所有公開案、專利及專利申請案均以引用之方式併入本文中用於所有目的。

Claims

一種式(I)之化合物：(I) 或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體；其中環A為苯基或吡啶基； R¹ 選自： (a) C₁ _- ₆ 烷基，其未經取代或經1至3個獨立地選自鹵素及C₃ _- ₆ 環烷基之取代基取代；且該C₃ _- ₆ 環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代； (b) C₁ _- ₄ 烷氧基，其未經取代或經C₁ _- ₄ 鹵烷基取代； (c) -NR^5a R^5b ，其中R^5a 及R^5b 獨立地為氫、C₁ _- ₄ 烷基或C₁ _- ₄ 鹵烷基；或R^5a 與R^5b 連同二者所連接之氮原子一起形成4至7員雜環烷基，其包含1至3個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子；其中該4至7員雜環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、C₁ _- ₄ 烷基及C₁ _- ₄ 烷氧基；或該4至7員雜環烷基之相同或不同環原子上之兩個取代基連同其所連接之原子一起形成連接於該4至7員雜環烷基之螺環、橋環或稠環B；其中環B為C₃ _- ₆ 環烷基，或包含1至3個獨立地選自N、O或S之雜原子作為環原子的3至7員雜環烷基； (d) 單環C₃ _- ₆ 環烷基、C₃ _- ₆ 環烯基或螺戊基；各自未經取代或經1至3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基及C₁ _- ₄ 鹵烷基及C₁ _- ₄ 烷氧基； (e) 苯基，或包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子的5-6員雜芳基；各自未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、二C₁ _- ₄ 烷基胺基-C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 羥基烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基及C₃ _- ₆ 環烷基； R² 及R⁷ 獨立地為氫或C₁ _- ₄ 烷基； R³ 為氫或鹵素，且n為0或1；及 R⁴ 選自 (a) 氫； (b) 鹵素； (c) C₁ _- ₆ 鹵烷基或C₁ _- ₆ 烷基，其未經取代或經C₃ _- ₆ 環烷基取代；且該C₃ _- ₆ 環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代； (d) -NR^6a R^6b ，其中R^6a 為氫或C₁ _- ₄ 烷基；R^6b 為氫、C₁ _- ₄ 烷氧基羰基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₃ _- ₆ 環烷基或C₁ _- ₄ 烷基，其未經取代或經C₁ _- ₄ 烷氧基取代；或 R^6a 與R^6b 連同二者所連接之氮原子一起形成4至7員雜環烷基，其包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子；其中該4至7員雜環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基、側氧基(oxo)、1,1-二側氧基、-C(O)-OR⁷ ，或4-6員雜環烷基，其包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子；或該4至7員雜環烷基之相同或不同環原子上之兩個取代基連同其所連接之原子一起形成連接於該4至7員雜環烷基之螺環、橋環或稠環C；其中環C選自C₃ _- ₆ 環烷基，及包含1至3個獨立地選自N、O或S之雜原子作為環原子的3至7員雜環烷基；且獨立地未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及側氧基之取代基取代； (e) C_3-6 環烷基； (f) 4至6員雜環烷基，其包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子；且未經取代或經-C(O)OR⁸ 、-C(O)R⁸ 取代，其中R⁸ 為C₁ _- ₄ 烷基及芳基C₁ _- ₄ 烷基，其未經取代或經1至2個鹵基取代基取代；及 (g) 5至6員雜芳基，其包含1至2個獨立地選自N、O及S之雜原子作為環原子；其未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 羥基烷基及C₃ _- ₆ 環烷基。
如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中環A為苯基。
如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中環A為吡啶基。
如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 選自： -(CH₂ )_1-3 CF₃ 、-(CH₂ )-CH(CH₃ )-CF₃ 、-(CH₂ )-C(CH₃ )₃ 、 -O(CH₂ )₂ CF₃ 、-(CH₂ )_0-2 -環丙基、-(CH₂ )_0-2 -環丁基、-NHCH₃ 、-N(CH₃ )₂ 、-N(CD₃ )₂ 、-N(CH₃ )(CH₂ CH₃ )、-N(CH₃ )(CH₂ CF₃ )、。
如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為吖丁啶基，其未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及C₁ _- ₄ 烷基之取代基取代；或該吖丁啶基之相同環原子上之兩個取代基連同二者所連接之環原子一起形成連接於該吖丁啶基環的螺環丙基或螺四氫呋喃基。
如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 選自：。
如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R³ 為鹵基且n為1。
如請求項7之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R³ 為氟。
如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 選自：氫、氯、溴、甲基、異丙基、-(CH₂ )_1-2 CH(CH₃ )₂ 、-(CH₂ )_0-1 C (CH₃ )₃ 、-C(CH₃ )₂ CH₂ CH₃ 、-CH(CH₃ )(CH₂ )_1-2 CH₃ 、-CH₂ -環丁基、-(CH₂ )_0-1 CF₃ 、-NH-(CH₂ )_0-1 CH₃ 、-N-(CD₃ )₂ 、-N(CH₃ )₂ 、-NH-CH-(CH₃ )₂ 、-NH-(CH₂ )-CH-(CH₃ )₂ 、-NHC(O)OCH(CH₃ )₂ 、-NH(CH₂ )₂ OCH₃ 、。
如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 為-NR^6a R^6b ； R^6a 為氫或C₁ _- ₄ 烷基； R^6b 為氫、C₁ _- ₄ 烷氧基羰基或C₁ _- ₄ 烷基，其未經取代或經C₁ _- ₄ 烷氧基取代；或R^6a 與R^6b 連同二者所連接之氮原子一起形成4至6員雜環烷基，其視情況包含1至2個獨立地選自N、O及S之額外雜原子作為環原子；其中該4至6員雜環烷基未經取代或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代：鹵素、氰基、羥基、C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 鹵烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基C₁ _- ₄ 烷基、C₁ _- ₄ 烷氧基及側氧基；或該4至6員雜環烷基之相同或不同環原子上之兩個取代基連同其所連接之原子一起形成連接於該4至6員雜環烷基之螺環、橋環或稠環C；其中環C選自C₃ _- ₆ 環烷基，及包含1至3個獨立地選自N、O或S之雜原子作為環原子的3至5員雜環烷基；且環C獨立地未經取代或經1至2個獨立地選自鹵素及側氧基之取代基取代。
如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 選自：。
如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R⁴ 選自：及。
一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其選自表1中所揭示之化合物1至353。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至13中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種賦形劑。
一種組合，其包含如請求項1至13中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種治療活性劑。
一種如請求項1至13中任一項之化合物之用途，其用於製造治療選自以下之病症或疾病之藥劑：利什曼體病、卻格司氏病(Chagas diseases)及人類非洲錐蟲病。
如請求項16之用途，其中該疾病為選自內臟利什曼體病及皮膚利什曼體病之利什曼體病。
如請求項17之用途，其中該第二藥劑選自：葡萄糖酸銻(stibogluconate)、葡甲胺銻酸鹽、雙性黴素(amphotericin)、米替福新(miltefosine)及巴龍黴素(paromomycin)。
如請求項16之用途，其中該疾病為卻格司氏病；且該第二藥劑選自苄硝唑(benznidazole)、硝呋莫司(nifurtimox)及雙性黴素。
如請求項16之用途，其中該疾病為人類非洲錐蟲病；且該第二藥劑為噴他脒(pentamidine)、蘇拉明(suramin)、美拉胂醇(melarsoprol)、依氟鳥胺酸(eflornithine)及硝呋莫司。