TW201831506A - 放射線傷害之治療或預防劑與治療或預防方法 - Google Patents

Abstract

作為用以有效地治療或預防伴隨放射線曝射之放射線傷害之技術，本發明提供一種含有嗜酸性球去除劑作為有效成分的伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防劑等。根據本發明之包含嗜酸性球去除劑之治療或預防劑等，藉由抑制嗜酸性球向靶組織之移動、浸潤、及/或於該組織中之增殖，及/或阻礙該嗜酸性球之活性或功能，可抑制組織之炎症反應及纖維化等病況，而有效地治療或預防放射線傷害。又，可抑制放射線傷害而進行有效之放射線治療。

Description

放射線傷害之治療或預防劑與治療或預防方法

本發明係關於一種放射線傷害之治療或預防劑與治療或預防方法。更詳細而言，本發明係關於一種含有嗜酸性球去除劑作為有效成分的伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防劑等。

放射線療法係與手術療法及化學療法並列之癌症治療法之一，係廣泛地應用於盆腔內癌及前列腺癌等癌症治療中之治療法。其目的在於藉由使劑量集中於腫瘤，儘量減少向周圍之正常組織之劑量，而對癌症進行根治或緩和症狀。 另一方面，作為放射線療法之課題，可列舉對於正常組織之放射線傷害。放射線傷害大致分為於放射線治療中或治療後幾個月之期間發病之早發性放射線傷害、及於治療後幾個月至幾十年之期間發病之遲發性放射線傷害(非專利文獻1)。 放射線性腸炎係於向腹部或盆腔內之癌照射放射線時引發之對於腸內之正常細胞的放射線傷害。作為放射線性腸炎之早發性放射線傷害，例如可列舉：嘔吐、飲食障礙、黏膜炎症、出血、下痢、便秘、及便血等。又，作為放射線性腸炎之遲發性放射線性傷害，可列舉：腸管纖維化症、消化道之潰瘍、狹窄、阻塞、廔管形成、出血、穿孔、潰瘍形成、排糞失禁、及慢性下痢等。作為針對早發性傷害之治療法，係以排便控制為主，以使用類固醇劑、抗氧化劑、抗炎症藥、自由基清除劑製劑、及抗生素等藥劑之內服治療為中心實施對症療法。又，作為針對遲發性放射線傷害之治療法，業界例如進行有高壓氧療法、氬電漿凝固法、及外科切除等。 放射線性腸炎中之早發性放射線傷害係以黏膜傷害及黏膜之炎症為主之病況，使放射線治療中之患者之生活質量(QOL，quality of life)明顯降低。進而，於重度之早發性放射線傷害發病之情形時，不得已地進行治療之中斷或治療日程之變更等。作為早發性放射線傷害之治療藥，業界使用有類固醇劑、抗氧化劑、抗炎症藥、自由基清除劑製劑、及抗生素等，但治療效果受到限定，不存在可期待充分之治療效果之治療藥(非專利文獻1、2)。 另一方面，放射線性腸炎中之遲發性放射線傷害係以組織之纖維化、黏膜之萎縮、及血管硬化等為主之呈現慢性症狀之進行性之病況，使患者之QOL終生顯著降低。不存在針對遲發性放射線傷害之有效之治療藥，於嚴重之情形時實施外科治療，但尚未確立有效之治療方法(非專利文獻1)。 作為引發放射線性腸炎之機制，根據使用對野生型小鼠之腹部照射放射線之放射線性腸炎模型之分析，提示有嗜酸性球之參與(非專利文獻3)。例如，於該放射線性腸炎模型中，自放射線照射幾個月後起，引發作為主要之遲發性傷害之小腸纖維化之進行，確認到作為纖維化發病部位之小腸黏膜下層中之嗜酸性球之浸潤及活化。 又，於使用嗜酸性球遺傳性地缺失之ΔdblGATA小鼠之放射線性腸炎模型之研究中，明確小腸黏膜下層之纖維化得以抑制。另一方面，ΔdblGATA小鼠通常被廣泛地用作嗜酸性球缺損小鼠，但除嗜酸性球缺損以外，亦報告有產生嗜鹼性球之減少或輕度之貧血等之影響(非專利文獻4)。 又，有報告稱，ΔdblGATA小鼠與同樣地被廣泛用作嗜酸性球缺損小鼠之PHIL小鼠亦於哮喘模型等中表現型不同(非專利文獻5、6)。因此，關於在ΔdblGATA小鼠體內抑制放射線性腸炎之發病之機制是否僅由不存在嗜酸性球所引起，尚未必明確。 作為去除小腸中之嗜酸性球之方法，例如業界考慮使作為嗜酸性球活化因子之介白素-5(IL-5)匱乏之方法。然而，於使用IL-5缺損小鼠之分析中明確，血中嗜酸性球顯著地減少，另一方面小腸嗜酸性球未減少(非專利文獻7)。又，於使用使IL-5受體缺損之IL-5Ra缺損小鼠之分析中，血中嗜酸性球僅減少50%左右(非專利文獻8)。 作為與IL-5配體或IL-5受體特異性地結合之抗體，已知有抗IL-5人源化抗體美泊利單抗(Mepolizumab)(IgG(Immunoglobulin G，免疫球蛋白G)1)、瑞利珠單抗(Reslizumab)(IgG4/κ)、以及抗IL-5Rα抗體本雷利珠單抗(Benralizumab)(MEDI-563)[Fasenra(註冊商標)](專利文獻1、2及非專利文獻9、10)。 [先前技術文獻] [專利文獻] 專利文獻1：國際公開第1997/10354號說明書 專利文獻2：國際公開第2005/35583號說明書 [非專利文獻] 非專利文獻1：Nat. Rev. Gastroenterol. Hepatol., 2014, 11 (8): 470-479 非專利文獻2：Nat. Rev. Cancer, 2011, 11 (4): 239-253 非專利文獻3：Proceedings of the Japanese Society for Immunology, 2014, 43: 3-H-W50-4 非專利文獻4：Proc. Natl. Acad. Sci., 2013, 110 (46): 18620-18625 非專利文獻5：Science, 2004, 305: 1773-1776 非專利文獻6：Science, 2004, 305: 1776-1779 非專利文獻7：Proc. Natl. Acad. Sci., 2000, 97 (12): 6681-6686 非專利文獻8：Immunity, 1996, 4 (5): 483-494 非專利文獻9：World Allergy Organization J., 2014, 7: 1-14 非專利文獻10：Clinical Et. Experimental Allergy, 2010 42, 712-737

[發明所欲解決之問題] 本發明之主要目的在於提供一種用以有效地治療或預防伴隨放射線曝射之放射線傷害之技術，及提供一種抑制伴隨放射線曝射之放射線傷害之放射線治療方法、或癌症之治療方法。 [解決問題之技術手段] 為了解決上述課題，本發明者等人進行努力研究，結果首次明確，藉由具有配體/受體之中和活性之嗜酸性球去除抗體及賦予有高效應活性之嗜酸性球去除抗體等嗜酸性球去除劑而顯著地減少腸管嗜酸性球。而且發現，嗜酸性球去除劑之投予可減少組織中之嗜酸性球，抑制放射線傷害下之病況之發病及進行，且抑制伴隨放射線曝射之放射線傷害，藉此增加放射線治療中之耐受劑量。 基於該等見解，本發明提供以下之[1]至[70]。 [1]一種伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防劑，其含有嗜酸性球去除劑作為有效成分。 [2]如[1]之治療或預防劑，其中放射線為X射線或γ射線。 [3]如[1]或[2]之治療或預防劑，其中放射線曝射為伴隨放射線治療之放射線曝射。 [4]如[3]之治療或預防劑，其中放射線治療係針對選自由小腸癌、大腸癌、胃腸道間質腫瘤(GIST)、消化道類癌、胃癌、食道癌、肝癌、膽囊-膽道癌、胰臟癌、胰臟-消化道神經內分泌腫瘤、蘭格漢氏細胞組織細胞增生症(Langerhans cell histiocytosis)、腎細胞癌、腎盂-輸尿管癌、腎上腺腫瘤、骨肉瘤、軟組織肉瘤、惡性淋巴瘤、膀胱癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸瘤、陰莖癌、子宮體癌、宮頸癌、子宮腫瘤、卵巢腫瘤、女性生殖器癌、肺癌、胸腺腫瘤、間皮瘤、乳癌、造血器官腫瘤、白血病、骨髓增殖性疾病及多發性骨髓瘤所組成之群中的任一種癌症之放射線治療。 [5]如[1]至[4]中任一項之治療或預防劑，其中放射線傷害為早發性放射線傷害或遲發性放射線傷害。 [6]如[1]至[5]中任一項之治療或預防劑，其中放射線傷害係對於選自由小腸、大腸、胃、膀胱、肝臟及腎臟所組成之群中的任一種以上之器官之傷害。 [7]如[1]至[6]中任一項之治療或預防劑，其中嗜酸性球去除劑係與表現於嗜酸性球細胞表面上之抗原結合之抗體或其片段、或與和該抗原結合之配體結合之抗體或其片段。 [8]如[7]之治療或預防劑，其中抗體或其片段係與選自由IL-5受體α鏈及/或β鏈、CRTH2(Chemoattractant Receptor-homologous molecule expressed on T Helper cells type 2，表現於2型輔助性T細胞上之趨化因子受體-同源分子)、Siglec8(Sialic Acid-Binding Ig-Like Lectin 8，唾液酸凝集素8)、CCR3(CC chemokine receptor 3，CC趨化激素受體3)、IL-5、PGD2(prostaglandin D2，前列腺素D2)、Siglec8配體、CCL(Chemokine ligand，趨化激素配體)5、CCL7、CCL11、CCL13、CCL15、CCL24、CCL26、及CCL28所組成之群中的任一種抗原結合之抗體或其片段，較佳為與IL-5受體α鏈或IL-5配體結合之抗體或其片段。 [9]如[7]或[8]之治療或預防劑，其中抗體或其片段係具有抗體依賴性細胞毒殺活性(ADCC活性)及/或中和活性之抗體或其片段。 [10]如[7]至[9]中任一項之治療或預防劑，其中抗體或其片段為單株抗體或基因重組抗體或該等之片段。 [11]如[7]至[10]中任一項之治療或預防劑，其中抗體或其片段係包含人類Fc區或人類恆定區之抗體或其片段。 [12]如[7]至[11]中任一項之治療或預防劑，其中抗體或其片段係選自由嵌合抗體、人源化抗體及人類抗體所組成之群中的任一種抗體或其片段。 [13]一種伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防劑，其含有嗜酸性球去除劑作為有效成分，且其特徵在於：於放射線治療中，增加治療對象患者之放射線之耐受劑量，延長放射線治療之期間，及/或抑制伴隨放射線治療之放射線傷害。 [14]一種增加治療對象患者之放射線之耐受劑量、延長放射線治療之期間、及/或抑制伴隨放射線曝射之放射線傷害之方法，其特徵在於：於放射線治療中，使用嗜酸性球去除劑。 [15]如[14]之方法，其中放射線為X射線或γ射線。 [16]如[14]或[15]之方法，其中放射線曝射為伴隨放射線治療之放射線曝射。 [17]如[14]至[16]中任一項之方法，其中放射線治療係針對選自由小腸癌、大腸癌、胃腸道間質腫瘤(GIST)、消化道類癌、胃癌、食道癌、肝癌、膽囊-膽道癌、胰臟癌、胰臟-消化道神經內分泌腫瘤、蘭格漢氏細胞組織細胞增生症、腎細胞癌、腎盂-輸尿管癌、腎上腺腫瘤、骨肉瘤、軟組織肉瘤、惡性淋巴瘤、膀胱癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸瘤、陰莖癌、子宮體癌、宮頸癌、子宮腫瘤、卵巢腫瘤、女性生殖器癌、肺癌、胸腺腫瘤、間皮瘤、乳癌、造血器官腫瘤、白血病、骨髓增殖性疾病及多發性骨髓瘤所組成之群中的任一種癌症之放射線治療。 [18]如[14]至[17]中任一項之方法，其中放射線傷害為早發性放射線傷害或遲發性放射線傷害。 [19]如[14]至[18]中任一項之方法，其中放射線傷害係對於選自由小腸、大腸、胃、膀胱、肝臟及腎臟所組成之群中的任一種以上之器官之傷害。 [20]如[14]至[19]中任一項之方法，其中嗜酸性球去除劑係與表現於嗜酸性球細胞表面上之抗原結合之抗體或其片段、或與和該抗原結合之配體結合之抗體或其片段。 [21]如[20]之方法，其中抗體或其片段係與選自由IL-5受體α鏈及/或β鏈、CRTH2、Siglec8、CCR3、IL-5、PGD2、Siglec8配體、CCL5、CCL7、CCL11、CCL13、CCL15、CCL24、CCL26、及CCL28所組成之群中的任一種抗原結合之抗體或其片段，較佳為與IL-5受體α鏈或IL-5配體結合之抗體或其片段。 [22]如[20]或[21]之方法，其中抗體或其片段係具有抗體依賴性細胞毒殺活性(ADCC活性)及/或中和活性之抗體或其片段。 [23]如[20]至[22]中任一項之方法，其中抗體或其片段為單株抗體或基因重組抗體或該等之片段。 [24]如[20]至[23]中任一項之方法，其中抗體或其片段係包含人類Fc區或人類恆定區之抗體或其片段。 [25]如[20]至[24]中任一項之方法，其中抗體或其片段係選自由嵌合抗體、人源化抗體及人類抗體所組成之群中的任一種抗體或其片段。 [26]一種伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防方法，其包括投予含有嗜酸性球去除劑作為有效成分之治療劑或預防劑之步驟。 [27]如[26]之治療或預防方法，其中放射線為X射線或γ射線。 [28]如[26]或[27]之治療或預防方法，其中放射線曝射為伴隨放射線治療之放射線曝射。 [29]如[28]之治療或預防方法，其中放射線治療係針對選自由小腸癌、大腸癌、胃腸道間質腫瘤(GIST)、消化道類癌、胃癌、食道癌、肝癌、膽囊-膽道癌、胰臟癌、胰臟-消化道神經內分泌腫瘤、蘭格漢氏細胞組織細胞增生症、腎細胞癌-腎盂、輸尿管癌、腎上腺腫瘤、骨肉瘤、軟組織肉瘤、惡性淋巴瘤、膀胱癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸瘤、陰莖癌、子宮體癌、宮頸癌、子宮腫瘤、卵巢腫瘤、女性生殖器癌、肺癌、胸腺腫瘤、間皮瘤、乳癌、造血器官腫瘤、白血病、骨髓增殖性疾病及多發性骨髓瘤所組成之群中的任一種癌症之放射線治療。 [30]如[26]至[29]中任一項之治療或預防方法，其中放射線傷害為早發性放射線傷害或遲發性放射線傷害。 [31]如[26]至[30]中任一項之治療或預防方法，其中放射線傷害係對於選自由小腸、大腸、胃、膀胱、肝臟及腎臟所組成之群中的任一種以上之器官之傷害。 [32]如[26]至[31]中任一項之治療或預防方法，其中嗜酸性球去除劑係與表現於嗜酸性球細胞表面上之抗原結合之抗體或其片段、或與和該抗原結合之配體結合之抗體或其片段。 [33]如[32]之治療或預防方法，其中抗體或其片段係與選自由IL-5受體α鏈及/或β鏈、CRTH2、Siglec8、CCR3、IL-5、PGD2、Siglec8配體、CCL5、CCL7、CCL11、CCL13、CCL15、CCL24、CCL26、及CCL28所組成之群中的任一種抗原結合之抗體或其片段，較佳為與IL-5受體α鏈或IL-5配體結合之抗體或其片段。 [34]如[32]或[33]之治療或預防方法，其中抗體或其片段係具有抗體依賴性細胞毒殺活性(ADCC活性)及/或中和活性之抗體或其片段。 [35]如[32]至[34]中任一項之治療或預防方法，其中抗體或其片段為單株抗體或基因重組抗體或該等之片段。 [36]如[32]至[35]中任一項之治療或預防方法，其中抗體或其片段係包含人類Fc區或人類恆定區之抗體或其片段。 [37]如[32]至[36]中任一項之治療或預防方法，其中抗體或其片段係選自由嵌合抗體、人源化抗體及人類抗體所組成之群中的任一種抗體或其片段。 [38]一種放射線治療方法，其特徵在於使用嗜酸性球去除劑。 [39]如[38]之放射線治療方法，其降低由放射線曝射所引起之放射線傷害。 [40]如[38]或[39]之放射線治療方法，其中放射線為X射線或γ射線。 [41]如[39]或[40]之放射線治療方法，其中放射線曝射為伴隨放射線治療之放射線曝射。 [42]如[38]至[41]中任一項之放射線治療方法，其包括與未投予嗜酸性球去除劑時相比高5%以上之1次劑量及/或合計劑量之放射線之照射。 [43]如[38]至[42]中任一項之放射線治療方法，其包括較耐受劑量高5%以上之劑量之放射線之照射。 [44]如[38]至[43]中任一項之放射線治療方法，其包括次數較未投予嗜酸性球去除劑時多之放射線照射。 [45]如[38]至[44]中任一項之放射線治療方法，其中放射線治療係針對選自由小腸癌、大腸癌、胃腸道間質腫瘤(GIST)、消化道類癌、胃癌、食道癌、肝癌、膽囊-膽道癌、胰臟癌、胰臟-消化道神經內分泌腫瘤、蘭格漢氏細胞組織細胞增生症、腎細胞癌、腎盂-輸尿管癌、腎上腺腫瘤、骨肉瘤、軟組織肉瘤、惡性淋巴瘤、膀胱癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸瘤、陰莖癌、子宮體癌、宮頸癌、子宮腫瘤、卵巢腫瘤、女性生殖器癌、肺癌、胸腺腫瘤、間皮瘤、乳癌、造血器官腫瘤、白血病、骨髓增殖性疾病及多發性骨髓瘤所組成之群中的任一種癌症之放射線治療。 [46]如[39]至[45]中任一項之放射線治療方法，其中放射線傷害為早發性放射線傷害或遲發性放射線傷害。 [47]如[39]至[46]中任一項之放射線治療方法，其中放射線傷害係對於選自由小腸、大腸、胃、膀胱、肝臟及腎臟所組成之群中的任一種以上之器官之傷害。 [48]如[38]至[47]中任一項之放射線治療方法，其中嗜酸性球去除劑係與表現於嗜酸性球細胞表面上之抗原結合之抗體或其片段、或與和該抗原結合之配體結合之抗體或其片段。 [49]如[48]之放射線治療方法，其中抗體或其片段係與選自由IL-5受體α鏈及/或β鏈、CRTH2、Siglec8、CCR3、IL-5、PGD2、Siglec8配體、CCL5、CCL7、CCL11、CCL13、CCL15、CCL24、CCL26、及CCL28所組成之群中的任一種抗原結合之抗體或其片段，較佳為與IL-5受體α鏈或IL-5配體結合之抗體或其片段。 [50]如[48]或[49]之放射線治療方法，其中抗體或其片段係具有抗體依賴性細胞毒殺活性(ADCC活性)及/或中和活性之抗體或其片段。 [51]如[48]至[50]中任一項之放射線治療方法，其中抗體或其片段為單株抗體或基因重組抗體或該等之片段。 [52]如[48]至[51]中任一項之放射線治療方法，其中抗體或其片段係包含人類Fc區或人類恆定區之抗體或其片段。 [53]如[48]至[52]中任一項之放射線治療方法，其中抗體或其片段係選自由嵌合抗體、人源化抗體及人類抗體所組成之群中的任一種抗體或其片段。 [54]一種癌症之治療方法，其包括併用嗜酸性球去除劑之投予及放射線之照射。 [55]如[54]之癌症之治療方法，其中放射線為X射線或γ射線。 [56]如[54]或[55]之癌症之治療方法，其中放射線之照射係以與未投予嗜酸性球去除劑時相比高5%以上之1次劑量及/或合計劑量進行。 [57]如[54]至[56]中任一項之癌症之治療方法，其中放射線之照射係以較耐受劑量高5%以上之劑量進行。 [58]如[54]至[57]中任一項之癌症之治療方法，其中放射線之照射係以較未投予嗜酸性球去除劑時多之次數進行。 [59]如[54]至[58]中任一項之癌症之治療方法，其中癌症係選自由小腸癌、大腸癌、胃腸道間質腫瘤(GIST)、消化道類癌、胃癌、食道癌、肝癌、膽囊-膽道癌、胰臟癌、胰臟-消化道神經內分泌腫瘤、蘭格漢氏細胞組織細胞增生症、腎細胞癌、腎盂-輸尿管癌、腎上腺腫瘤、骨肉瘤、軟組織肉瘤、惡性淋巴瘤、膀胱癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸瘤、陰莖癌、子宮體癌、宮頸癌、子宮腫瘤、卵巢腫瘤、女性生殖器癌、肺癌、胸腺腫瘤、間皮瘤、乳癌、造血器官腫瘤、白血病、骨髓增殖性疾病及多發性骨髓瘤所組成之群中的任一種癌症。 [60]如[54]至[59]中任一項之癌症之治療方法，其中嗜酸性球去除劑係與表現於嗜酸性球細胞表面上之抗原結合之抗體或其片段、或與和該抗原結合之配體結合之抗體或其片段。 [61]如[60]之癌症之治療方法，其中抗體或其片段係與選自由IL-5受體α鏈、IL-5受體β鏈、CRTH2、Siglec8、CCR3、IL-5、PGD2、Siglec8配體、CCL5、CCL7、CCL11、CCL13、CCL15、CCL24、CCL26、及CCL28所組成之群中的任一種抗原結合之抗體或其片段。 [62]如[60]或[61]之癌症之治療方法，其中抗體或其片段係具有抗體依賴性細胞毒殺活性及/或中和活性之抗體或其片段。 [63]如[60]至[62]中任一項之癌症之治療方法，其中抗體或其片段為單株抗體或基因重組抗體或該等之片段。 [64]如[60]至[63]中任一項之癌症之治療方法，其中抗體或其片段係包含人類Fc區或人類恆定區之抗體或其片段。 [65]如[60]至[64]中任一項之癌症之治療方法，其中抗體或其片段係選自由嵌合抗體、人源化抗體及人類抗體所組成之群中的任一種抗體或其片段。 [66]一種伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防劑，其含有嗜酸性球去除劑作為有效成分，且其特徵在於：於放射線治療中，使治療對象患者之放射線之耐受劑量增加5%以上。 [67]如[1]至[13]之治療或預防劑、[14]至[25]之方法、[26]至[37]或[66]之治療或預防方法、[38]至[53]之放射線治療方法、或[54]至[65]之癌症之治療方法，其中嗜酸性球去除劑係選自由如下抗體所組成之群中的1種以上之抗體或其片段。 (1)與存在於人IL-5Rα之細胞外區之第1號～第313號胺基酸序列中之抗原決定基結合之抗體(此處，所謂細胞外區係指人IL-5Rα之中，除跨膜區至C末端以外之N末端側區)、 (2)與存在於人IL-5Rα之細胞外區之第41號～第61號胺基酸序列中之抗原決定基結合之抗體、 (3)與存在於人IL-5Rα之細胞外區之第52號～第61號胺基酸序列中之抗原決定基結合之抗體、 (4)與包含人IL-5Rα之細胞外區之第61號胺基酸殘基之抗原決定基結合之抗體、 (5)與抗人IL-5Rα抗體本雷利珠單抗所結合之抗原決定基結合之抗體、 (6)與和抗人IL-5Rα抗體本雷利珠單抗相同之抗原決定基結合之抗體、 (7)包含抗人IL-5Rα抗體本雷利珠單抗之CDR(complementarity determining region，互補決定區)之抗體、 (8)包含抗人IL-5Rα抗體本雷利珠單抗之重鏈可變區(以下簡稱為VH)及輕鏈可變區(以下簡稱為VL)之抗體、 (9)抗人IL-5Rα抗體本雷利珠單抗、 (10)包含分別含有序列編號1～3所表示之胺基酸序列之H鏈CDR1～3及分別含有序列編號4～6所表示之胺基酸序列之L鏈CDR1～3的抗IL-5R抗體、 (11)包含含有序列編號7所表示之胺基酸序列之VH及含有序列編號8所表示之胺基酸序列之VL的抗IL-5R抗體、 (12)包含含有序列編號9所表示之胺基酸序列之H鏈及含有序列編號10所表示之胺基酸序列之L鏈的抗IL-5R抗體、 (13)包含序列編號14所表示之胺基酸序列中所含之H鏈CDR1～3及序列編號17所表示之胺基酸序列中所含之L鏈CDR1～3的抗IL-5R抗體、 (14)包含含有序列編號14所表示之胺基酸序列之VH及含有序列編號17所表示之胺基酸序列之VL的抗IL-5R抗體、 (15)與抗人IL-5人源化抗體美泊利單抗(IgG1)所結合之抗原決定基結合之抗體、 (16)與和抗人IL-5人源化抗體美泊利單抗(IgG1)相同之抗原決定基結合之抗體、 (17)包含抗人IL-5人源化抗體美泊利單抗(IgG1)之CDR之抗體、 (18)包含抗人IL-5人源化抗體美泊利單抗(IgG1)之VH及VL之抗體、 (19)抗人IL-5人源化抗體美泊利單抗(IgG1) (20)與抗人IL-5抗體瑞利珠單抗(IgG4/κ)所結合之抗原決定基結合之抗體、 (21)與和抗人IL-5抗體瑞利珠單抗(IgG4/κ)相同之抗原決定基結合之抗體、 (22)包含抗人IL-5抗體瑞利珠單抗(IgG4/κ)之CDR之抗體、 (23)包含抗人IL-5抗體瑞利珠單抗(IgG4/κ)之VH及VL之抗體、及 (24)抗人IL-5抗體瑞利珠單抗(IgG4/κ)。 [68]如[1]至[13]之治療或預防劑、[14]至[25]之方法、[26]至[37]或[66]之治療或預防方法、[38]至[53]之放射線治療方法、或[54]至[65]之癌症之治療方法，其中抗體或其片段中，與Fc區之第297號結合之核心岩藻糖(core fucose)減少或缺損。 [69]一種抗IL-5R抗體，其包含序列編號14所表示之胺基酸序列中所含之H鏈CDR1～3及序列編號17所表示之胺基酸序列中所含之L鏈CDR1～3，或 包含含有序列編號14所表示之胺基酸序列之VH及含有序列編號17所表示之胺基酸序列之VL。 [70]如[69]之抗體或其片段，其係選自由基因重組型之大鼠抗體、大鼠-小鼠嵌合抗體、大鼠-人嵌合抗體、人源化抗體、及人類抗體所組成之群中之任一種。 [71]如[69]或[70]之抗體或其片段，其包含人類Fc區。 [72]一種DNA(Deoxyribonucleic Acid，去氧核糖核酸)，其編碼如[69]至[71]中任一項之抗體或其片段。 [73]一種抗體生產細胞，其導入有如[72]之DNA。 [74]一種製造方法，其係製造如[69]至[71]中任一項之抗體或其片段之方法，且其特徵在於：培養如[73]之抗體生產細胞，取得該培養上清液並進行純化。 [發明之效果] 藉由本發明，提供一種用以有效地治療或預防伴隨放射線曝射之放射線傷害之技術。根據本發明之包含嗜酸性球去除劑之治療或預防劑、及使用其之治療或預防方法，藉由抑制嗜酸性球向靶組織之移動、浸潤、及/或於該組織中之增殖，及/或阻礙該嗜酸性球之活性或功能，可抑制組織之炎症反應及纖維化等病況，從而有效地治療或預防放射線傷害。

以下，對用以實施本發明之適宜之形態進行說明。再者，以下說明之實施形態係表示本發明之代表性實施形態之一例，並非據此狹義地解釋本發明之範圍。 本發明係關於一種含有嗜酸性球去除劑的針對伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防劑、以及使用該治療或預防劑之伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防方法。 又，本發明亦包括使用嗜酸性球去除劑而抑制伴隨放射線曝射之放射線傷害之方法、藉由使用嗜酸性球去除劑而增加放射線治療中之治療對象患者之放射線耐受劑量之方法、及藉由使用嗜酸性球去除劑而延長放射線治療中之治療對象患者之放射線治療期間之方法。 於本發明中，所謂「放射線」係指所有電磁波及粒子束。具體而言，可列舉：由放射性物質釋出之α射線、β射線、γ射線，或人工製作之X射線、質子束、碳離子束、中子束、電子束等。 於本發明中，所謂「放射線曝射」係指全身或者身體之一部分暴露於放射線下，包含藉由將放射性物質導入至體內而自身體之內部暴露於放射線下之內部曝射、及自身體之外部暴露於放射線下之外部曝射。具體而言，可列舉：伴隨放射線治療或使用放射線之圖像診斷之醫療曝射、伴隨操作放射性物質或放射線產生裝置之職業曝射、源自存在於自然界之放射性物質或宇宙射線之自然曝射、伴隨核能發電廠等之事故之曝射等，包含由任一種放射線曝射所引起者。 於本發明中，所謂「放射線傷害」係指因全身或者身體之一部分受到放射線曝射而產生之傷害。通常，放射線傷害係於正常之細胞或正常組織受到放射線曝射時作為不期望之反應而產生之現象、即有害現象或副作用。 於包含由癌症治療等醫療目的之放射線照射所引起之局部性之放射線傷害的放射線傷害中，包含早發性(急性)放射線傷害與遲發性(慢性)放射線傷害。 於本發明中，作為放射線傷害，只要為由放射線曝射引起之放射線性之病況即可，並無特別限定。 具體而言，可列舉：放射線性上皮炎、放射線性食道炎、放射線性腎炎、放射線性神經炎、放射線性胃炎、放射線性壞死、放射線性潰瘍、放射線性燒傷、放射線性肝炎、放射線性口炎、放射線性脊髓症、放射線性纖維化症、放射線性腸炎、放射線性黏膜炎、放射線性肺炎、放射線性皮膚炎、放射線性膀胱炎、放射線性白內障、放射線性白血球減少症、放射線性宿醉、放射線性貧血、及放射線性不孕症等。 於本發明中，所謂「早發性放射線傷害」，係指於剛進行放射線曝射後至幾個月之期間內發病之放射線傷害。例如，作為放射線性腸炎中之早發性放射線傷害之例，並無限定，可列舉：皮膚傷害、口腔黏膜傷害、消化道黏膜傷害、脫毛、嘔吐、飲食障礙、黏膜炎症、出血、下痢、便秘、及便血等。 於本發明中，所謂「遲發性放射線傷害」係指於放射線曝射後幾個月至幾十年之間發病之放射線傷害。例如，作為放射線性腸炎中之遲發性放射線傷害之例，並無限定，可列舉：腸管纖維化症、消化道之潰瘍、狹窄、阻塞、廔管形成、出血、穿孔、潰瘍形成、排糞失禁、及慢性下痢等。 於本發明中，作為產生放射線傷害之器官，只要為皮膚、腦、口腔、咽喉、食道、胃、十二指腸、小腸(空腸及回腸等)、大腸(盲腸、結腸及直腸等)、肛門、肝臟、膽管、膽嚢、胰臟、腎臟、膀胱、腹膜、耳下腺、頜下線、耳下腺、淋巴管、淋巴結、神經系統、脊髓、肺、呼吸道、支氣管、心臟、血管等受到放射線性傷害之組織，則包含任一組織。 於本發明中，所謂「放射線治療」或「放射線療法」，係指使放射線之治療劑量集中於腫瘤而進行照射，降低對腫瘤周圍之正常組織之治療劑量之照射，並且抑制癌細胞之增殖而對癌症進行根治、或緩和症狀。 於本發明中，作為成為「放射線治療」或者「放射線療法」或「癌症之治療」之對象之癌症種類之例，並無限定，可列舉：小腸癌、大腸癌、胃腸道間質腫瘤(GIST)、消化道類癌、胃癌及食道癌等消化道癌；肝癌、膽囊-膽道癌、胰臟癌、胰臟-消化道神經內分泌腫瘤及蘭格漢氏細胞組織細胞增生症、腎細胞癌、腎盂-輸尿管癌、腎上腺腫瘤等產生於腸管附近之癌症；膀胱癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸瘤、陰莖癌、子宮體癌、宮頸癌、子宮腫瘤、卵巢腫瘤、女性生殖器癌等盆腔內癌；肺癌、胸腺腫瘤、間皮瘤、乳癌等產生於胸部之癌；造血器官腫瘤、白血病、骨髓增殖性疾病及多發性骨髓瘤等骨髓系癌；以及產生於腸管附近之骨肉瘤、軟組織肉瘤及惡性淋巴瘤等。 於本發明中，放射線治療或放射線療法可列舉自體外照射放射線之外部照射法與自體內照射放射線之內部照射法。作為外部照射法中所使用之放射線，可列舉：短波長之電磁線(X射線、γ射線)、質子束及重粒子束。作為內部照射法中所使用之放射線，可列舉：X射線、γ射線、質子束、重粒子束、α射線及β射線等。於本發明中，放射線治療或放射線療法中所使用之放射線較佳為作為短波長之電磁線之γ射線及X射線。 於本發明中，所謂「耐受劑量」，係指於對正常之組織進行放射線照射之情形時，組織可耐受之放射線量，臨床上係使用最小耐受劑量(耐受劑量(tolerant dose)；TD5/5)及最大耐受劑量(TD50/5)。所謂最小耐受劑量，係指放射線照射後於5年間組織之功能障礙以5%之概率發病之總放射線量。又，所謂最大耐受劑量，係指放射線照射後於5年間組織之功能障礙以50%之概率發病之總放射線量。再者，耐受劑量係根據每1次之放射線量或照射放射線之各組織而有所不同，各組織之最小耐受劑量及最大耐受劑量例如係藉由參照公知之準則「放射線治療計劃準則2012(日本放射線腫瘤學會)」而定義(表1)。 [表1] 於本發明中，所謂「嗜酸性球去除劑」，只要係可抑制嗜酸性球之細胞增殖、移動、浸潤及/或去顆粒等活化，或進行嗜酸性球之凋亡及/或細胞毒殺誘導者，則可為任意者，亦可為作用於表現於嗜酸性球之細胞表面上之受體及黏著分子等抗原者、及作用於針對該抗原之配體者中之任一種。 作為表現於嗜酸性球之細胞表面上之抗原，可列舉：IL-5受體(以下亦記載為「IL-5R」)、CRTH2(PTGDR2(prostaglandin D2 receptor 2，前列腺素D2受體2)，GPR44(G protein-coupled receptor 44，G蛋白偶合受體44))、Siglec8(SAF-2(serum amyloid A activating factor-2，血清澱粉樣蛋白A活化因子-2)及CCR3(趨化激素(chemokine)，CC-motif受體3(CC-motif receptor 3)，伊紅趨素受體(eotaxin receptor)、CD193)等。又，作為與該抗原結合之配體，可列舉：IL-5配體(亦僅記載為「IL-5」)、PGD2(前列腺素D2(prostaglandin D2))、Siglec8配體(唾液酸、6'-磺基唾液酸化路易斯寡糖X(6'-sulfo-sialyl Lewis X)或包含該糖鏈之配體)以及CCL11(趨化激素配體11(chemokine CC-motif ligand 11)，伊紅趨素)、CCL5、CCL7、CCL13、CCL15、CCL24、CCL26、及CCL28等。 於本發明中，作為嗜酸性球去除劑，較佳為可列舉：與IL-5R、CRTH2、Siglec8及CCR3、以及該等之配體中之至少任一者結合，降低嗜酸性球之活性者。作為嗜酸性球去除劑，更佳為可列舉：與IL-5R、CRTH2、Siglec8及CCR3、以及該等之配體中之至少任一者結合，且具有嗜酸性球之細胞增殖、移動、浸潤及/或去顆粒等活化之抑制活性(亦稱為中和活性、或拮抗劑活性)，及/或具有嗜酸性球之凋亡誘導活性及/或細胞毒殺誘導活性(亦稱為細胞毒殺活性)者。 於本發明中，作為嗜酸性球去除劑，最佳為可列舉：與IL-5R、CRTH2、Siglec8及CCR3中之至少任一種結合，且具有抑制嗜酸性球之細胞增殖、移動、浸潤及/或去顆粒等活化之活性(亦稱為中和活性、或拮抗劑活性)，或/及具有嗜酸性球之凋亡誘導活性及/或細胞毒殺誘導活性(亦稱為細胞毒殺活性)者。 作為本發明中所使用之嗜酸性球去除劑，只要係具有上述特徵者，則低分子、高分子均可。較佳為可列舉抗體及該抗體片段。 「IL-5R」包含兩種多肽鏈、α鏈(以下亦記載為「IL-5Rα鏈」)與β鏈(以下亦記載為「IL-5Rα鏈」)。與IL-5之結合係由IL-5Rα鏈所承擔，IL-5Rβ鏈單獨情況下不顯示出對於IL-5之結合能力。因此，作為本發明中所使用之抗IL-5R抗體，更佳為與IL-5Rα鏈結合之抗體。 作為阻礙IL-5R與IL-5之結合之抗體，可列舉：與IL-5R結合且阻礙IL-5與IL-5R之結合之抗體(抗IL-5R抗體)、及與IL-5結合且阻礙IL-5R與IL-5之結合之抗體(抗IL-5抗體)等，更佳為可列舉：阻礙IL-5R與IL-5之結合，結果阻礙IL-5R之訊號之抗體。作為抗IL-5R抗體，例如可列舉抗人IL-5Rα抗體本雷利珠單抗。又，作為抗人IL-5抗體，例如可列舉抗人IL-5人源化抗體美泊利單抗(IgG1)及抗人IL-5抗體瑞利珠單抗(IgG4/κ)等。 直接作用於IL-5R表現細胞而阻礙IL-5R依賴性之訊號之抗IL-5R抗體可藉由抗體依賴性細胞毒殺活性(ADCC活性)等效應活性而去除IL-5R表現細胞，除此以外，可引起IL-5R表現細胞之細胞增殖阻礙、移動阻礙及/或凋亡誘導，故而作為抗IL-5R抗體而更佳。 本發明中所使用之抗IL-5R抗體較佳為參與IL-5R與IL-5之結合的IL-5R之「細胞外區」作為抗原決定基的抗體。作為此種抗原決定基，可列舉：存在於人IL-5Rα之細胞外區(人IL-5Rα之中，除跨膜區至C末端以外之N末端側區)之第1號～第313號胺基酸序列中之抗原決定基、存在於人IL-5Rα之細胞外區之第41號～第61號胺基酸序列中之抗原決定基、存在於人IL-5Rα之細胞外區之第52號～第61號胺基酸序列中之抗原決定基、包含人IL-5Rα之細胞外區之第61號胺基酸殘基之抗原決定基、及抗人IL-5Rα抗體本雷利珠單抗所結合之抗原決定基(Kolbeck et al, J. Allergy Clin. Immunol., 2010, 125: 1344-1353)。 本發明中之IL-5R抗體並無限定，可列舉：本雷利珠單抗、與和本雷利珠單抗相同之抗原決定基結合之抗體、包含本雷利珠單抗之CDR之抗體、包含本雷利珠單抗之重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)之抗體等。 作為本發明中所使用之抗IL-5R抗體或抗IL-5抗體，更具體而言，可列舉：包含分別含有序列編號1～3所表示之胺基酸序列之重鏈(H鏈)CDR1～3及分別含有序列編號4～6所表示之胺基酸序列之輕鏈(L鏈)CDR1～3的抗IL-5R抗體、包含含有序列編號7所表示之胺基酸序列之VH及含有序列編號8所表示之胺基酸序列之VL的抗IL-5R抗體、包含含有序列編號9所表示之胺基酸序列之H鏈及含有序列編號10所表示之胺基酸序列之L鏈的 抗IL-5R抗體、包含本雷利珠單抗之CDR之抗體、包含本雷利珠單抗之VH及VL之抗體、包含美泊利單抗(IgG1)之CDR之抗體、包含瑞利珠單抗(IgG4/κ)之CDR之抗體、包含美泊利單抗(IgG1)之VH及VL之抗體、包含瑞利珠單抗(IgG4/κ)之VH及VL之抗體、本雷利珠單抗、美泊利單抗(IgG1)及瑞利珠單抗(IgG4/κ)等。 又，作為本發明中所使用之抗IL-5R抗體，更具體而言，亦可列舉：包含序列編號14所表示之胺基酸序列中所含之重鏈(H鏈)CDR1～3及序列編號17所表示之胺基酸序列中所含之輕鏈(L鏈)CDR1～3的抗IL-5R抗體、包含含有序列編號14所表示之胺基酸序列之VH及含有序列編號17所表示之胺基酸序列之VL的抗IL-5Rα抗體。 又，較佳為與上述抗體之Fc區之第297號結合之核心岩藻糖減少或缺損之抗體，具體而言，可列舉抗IL-5R人源化抗體本雷利珠單抗。 又，於本發明中包含：包含序列編號14所表示之胺基酸序列中所含之重鏈(H鏈)CDR1～3及序列編號17所表示之胺基酸序列中所含之輕鏈(L鏈)CDR1～3之抗IL-5R抗體、包含含有序列編號14所表示之胺基酸序列之VH及含有序列編號17所表示之胺基酸序列之VL之抗IL-5R抗體。作為本發明之抗體，亦包含單株抗體、基因重組型之大鼠抗體、大鼠-小鼠嵌合抗體、大鼠-人嵌合抗體、人源化抗體、及人類抗體中之任一抗體。 「CRTH2」係參與白血球之移動的前列腺素D2(以下亦記載為「PGD2」)之7次跨膜型G蛋白偶合型受體，強烈地表現於嗜酸性球。CRTH2藉由與PGD2之結合而傳遞CRTH2依賴性之細胞內訊號，誘導表現CRTH2之細胞之移動、或源自該細胞之細胞激素產生亢進、以及伴有細胞直徑及細胞表面積等之變化之細胞形態變化。 作為本發明中所使用之抗CRTH2抗體，較佳為將CRTH2之細胞外區作為抗原決定基而結合之抗體。作為人CRTH2之細胞外區，可列舉：自人CRTH2之N末端起包含第1～33號胺基酸殘基之N末端側區、包含第95～111號胺基酸殘基之環1區、包含第169～206號胺基酸殘基之環2區、及包含第264～285號胺基酸殘基之環3區(J Immunol, 1999. 162 (3): 1278-86.)。抗CRTH2抗體可直接作用於CRTH2表現細胞，藉由抗體依賴性細胞毒殺活性(ADCC活性)等效應活性而去除CRTH2表現細胞，除此以外，可阻礙CRTH2依賴性之訊號，結果引起CRTH2表現細胞之細胞增殖阻礙、移動阻礙及/或凋亡誘導。例如，作為針對人CRTH2之抗體，可列舉：301108(R＆D公司)、BM16(國際公開第97/46677號)、Clone 19A2、8B1、31A5(國際公開第2014/144865號)、Clone Lym2(國際公開第2017/010567)。 「Siglec8」為I型跨膜型蛋白質，強烈地表現於嗜酸性球。Siglec8傳遞Siglec8依賴性之細胞內訊號，誘導表現Siglec8之細胞之凋亡。 作為本發明中所使用之抗人Siglec8抗體，較佳為直接作用於Siglec8表現細胞而傳遞Siglec8依賴性之細胞內訊號，結果可引起Siglec8表現細胞之細胞增殖阻礙或凋亡誘導，並且藉由抗體依賴性細胞毒殺活性(ADCC活性)等效應活性而去除Siglec8表現細胞之抗體。例如，作為與人Siglec8結合之抗體，可列舉：837535(R＆D公司)、7C9(J Immunol. 2014 Jun 15; 192 (12): 5481-9)等。 「CCR3」為7次跨膜型G蛋白偶合型受體，強烈地表現於嗜酸性球。藉由CCL5、CCL7、CCL11、CCL13、CCL15、CCL24、CCL26、及CCL28等趨化激素向CCR3之結合而誘導嗜酸性球之移動。 作為本發明中所使用之與CCR3結合之嗜酸性球去除劑，例如可列舉抗CCR3抗體及具有CCR3阻礙活性之低分子。作為抗CCR3抗體，較佳為直接作用於CCR3表現細胞而阻礙趨化激素之結合及由此誘導之嗜酸性球之移動的抗CCR3抗體。例如，作為與CCR3結合之抗體，可列舉83103抗體(R＆D公司)及61828抗體(R＆D公司)等，又，作為具有CCR3阻礙活性之低分子，例如可列舉AXP-1275及MT-0814等。 作為本發明中所使用之與CCR3之配體結合之嗜酸性球去除劑，例如可列舉與CCR3之配體選擇性地結合之抗體。作為與CCR3之配體選擇性地結合之抗體，較佳為與CCR3之配體結合而阻礙向CCR3之結合及由此誘導之嗜酸性球之移動的抗體。例如可列舉：抗伊紅趨素-1抗體CAT-212及CAT213(J. Pharmacol. Exp. Ther. 2006, 319 (3), 1395-1404)、或抗CCL24抗體(US20160368979A1)等。 本發明中所使用之抗體可為單株抗體及多株抗體中之任一種，較佳為與單一之抗原決定基結合之單株抗體。單株抗體可為由融合瘤生產之單株抗體，亦可為利用基因重組技術而製作之基因重組抗體。 本發明中所使用之抗體為了於人體內降低免疫原性，較佳為使用包含人類Fc區之抗體、包含人類恆定區之抗體、人型嵌合抗體(以下亦簡稱為「嵌合抗體」)、人源化抗體(亦稱為「人型互補決定區(CDR，complementarity determining region)移植抗體」)及人類抗體等基因重組抗體。 嵌合抗體係包含人以外之動物之抗體之重鏈可變區(以下簡稱為「VH」)及輕鏈可變區(以下簡稱為「VL」)、與人類抗體之重鏈恆定區(以下簡稱為「CH」)及輕鏈恆定區(以下簡稱為「CL」)的抗體。關於與可變區有關之動物之種類，若為小鼠或大鼠、倉鼠、兔等可製作融合瘤之動物，則並無特別限定。 人型嵌合抗體可藉由如下方法而製作：取得編碼與目標抗原特異性地結合的人以外之動物之抗體之VH及VL的cDNA(Complementary Deoxyribonucleic Acid，互補去氧核糖核酸)，分別插入至具有編碼人類抗體之CH及CL之基因的表現載體中而構築人型嵌合抗體表現載體，向動物細胞中導入並進行表現。 人型嵌合抗體之CH只要為人免疫球蛋白(以下簡稱為hIg)，則並無特別限定，較佳為hIgG(human Immunoglobulin G，人免疫球蛋白G)類者。人型嵌合抗體之CL只要屬於hIgG，則並無特別限定。 人源化抗體係將人以外之動物之抗體的VH及VL之CDR移植至人類抗體之VH及VL的適當位置而成之抗體。人源化抗體可藉由如下方法而製作：構築編碼將與目標抗原特異性地結合的人以外之動物之抗體的VH及VL之CDR移植至任意之人類抗體之VH及VL之骨架(以下亦簡稱為「FR」)的可變區(以下亦簡稱為「V區」)之cDNA，分別插入至具有編碼人類抗體之CH及CL之DNA的表現載體中而構築人源化抗體表現載體，並向動物細胞中導入進行表現。人類抗體之VH及VL之FR之胺基酸序列只要為源自人類抗體之胺基酸序列，則並無特別限定。人源化抗體之CH只要為hIg，則並無特別限定，較佳為hIgG類者。人源化抗體之CL只要屬於hIg，則並無特別限定。 本發明中所使用之所謂抗體片段係指上述各抗體之片段，作為抗體片段之種類，並無限定，例如可列舉：Fab、Fab'、F(ab')₂ 、scFv(Single Chain Fragment Variable，單鏈可變區片段)、雙功能抗體(diabody)、dsFv(disulfide-stabilized Fragment Variable fragment，二硫鍵穩定性Fv抗體)、VHH(variable domain of the heavy-chain of heavy-chain antibody，重鏈抗體之重鏈可變區片段)、包含CDR之肽及包含Fc之抗體片段等。 「Fab」係利用木瓜酶(蛋白質分解酶)對IgG進行處理而獲得之片段中，分子量約5萬之具有抗原結合活性之抗體片段。本發明中之抗體之Fab可藉由如下方法而製作：利用木瓜酶對本發明之抗體進行處理，或將編碼上述抗體之Fab之DNA插入至表現載體中，並將該載體導入至原核生物或真核生物中進行表現。 「F(ab')₂ 」係利用胃蛋白酶(蛋白質分解酶)對IgG進行處理而獲得之片段中，分子量約10萬之具有抗原結合活性之抗體片段。本發明中之抗體之F(ab')₂ 可藉由如下方法而製作：利用胃蛋白酶對本發明之抗體進行處理，或利用硫醚鍵或二硫醚鍵使Fab'結合。 「Fab'」係將F(ab')₂ 之鉸鏈區之二硫醚鍵切斷而得的分子量約5萬之具有抗原結合活性之抗體片段。本發明中之抗體之Fab'可藉由如下方法而製作：利用二硫蘇糖醇對本發明之抗體之F(ab')₂ 進行處理，或將編碼上述抗體之Fab'之DNA插入至表現載體中，並將該載體導入至原核生物或真核生物中進行表現。 「scFv」係使用適當之肽連接子將1條VH與1條VL連結而得的具有抗原結合活性之抗體片段。本發明中之抗體之scFv可藉由如下方法而製作：取得編碼本發明之抗體之VH及VL的cDNA，構築編碼scFv之DNA，將該DNA插入至表現載體中，並將該表現載體導入至原核生物或真核生物中進行表現。 「Diabody」係scFv進行二聚物化而成之抗體片段，係具有二價抗原結合活性之抗體片段。本發明中之抗體之diabody可藉由如下方法而製作：取得編碼本發明之抗體之VH及VL的cDNA，構築編碼diabody之DNA，將該DNA插入至表現載體中，並將該表現載體導入至原核生物或真核生物中進行表現。 「dsFv」係經由半胱胺酸殘基間之二硫醚鍵，使將VH及VL中之各1個胺基酸殘基取代為半胱胺酸殘基所得的多肽進行結合而成之抗體片段。本發明中之抗體之dsFv可藉由如下方法而製作：取得編碼本發明之抗體之VH及VL的cDNA，構築編碼dsFv之DNA，將該DNA插入至表現載體中，並將該表現載體導入至原核生物或真核生物中進行表現。 「包含CDR之肽」係包含VH或VL之CDR之至少1區以上之肽。本發明中之包含抗體之CDR之肽可藉由如下方法而製作：構築編碼本發明之抗體之VH及VL之CDR的DNA，將該DNA插入至表現載體中，並將該表現載體導入至原核生物或真核生物中進行表現。又，本發明中之包含抗體之CDR之肽亦可藉由Fmoc法(茀基甲氧基羰基法)、(第三丁氧基羰基法)等化學合成法而製作。較佳為可列舉包含本發明之源自抗體之6個CDR之肽。 作為「包含Fc之抗體片段」，可列舉使Fc融合於上述抗體片段或該部分片段之適當部分而成者。例如可列舉scFv-Fc、(scFv)₂ -Fc等。 本發明之治療或預防劑中所使用之抗體較佳為具有效應活性。所謂「效應活性」，係經由抗體之Fc區而引起之活性，且已知有抗體依賴性細胞毒殺活性(ADCC活性)、補體依賴性細胞毒殺活性(CDC活性)、或由巨噬細胞或樹狀細胞等吞噬細胞所引起之抗體依賴性吞噬作用(ADP，Antibody-dependent phagocytosis)活性等。 作為控制效應活性之方法，已知有如下方法等：控制與和N結合複合型糖鏈之還原末端結合的N-乙醯葡糖胺(GlcNAc)進行α1-6結合之岩藻糖(亦稱為核心岩藻糖)之量(國際公開第2005/035586號、國際公開第2002/31140號、國際公開第00/61739號)，該N結合複合型糖鏈係與抗體之Fc區之EU索引(Kabat et al, Sequence of Proteins of immunological interests, 5th edition, 1991)第297號之天冬醯胺(Asn)結合；或藉由修飾抗體之Fc區之胺基酸殘基而加以控制。 藉由控制與抗體之Fc結合的N結合複合型糖鏈之核心岩藻糖之含量，可增加或降低抗體之效應活性。作為降低與和抗體之Fc結合的N結合複合型糖鏈結合之岩藻糖之含量的方法，可列舉：使用α1,6-岩藻糖轉移酶基因(fucosyltransferase-8，FUT8)缺損之CHO細胞表現抗體，由此取得未結合岩藻糖之抗體之方法。未結合岩藻糖之抗體具有較高之ADCC活性。 另一方面，作為增加與和抗體之Fc結合的N結合複合型糖鏈結合之岩藻糖之含量的方法，藉由使用導入有α1,6-岩藻糖轉移酶基因之宿主細胞表現抗體，可取得結合有岩藻糖之抗體。結合有岩藻糖之抗體具有低於未結合岩藻糖之抗體的ADCC活性。 又，藉由修飾抗體之Fc區之胺基酸殘基，可增加或降低ADCC活性或CDC活性。藉由進行Fc區之胺基酸殘基修飾，可增加或降低向FcγR之結合活性，由此可控制ADCC活性，或者藉由進行Fc區之胺基酸殘基修飾，可增加或降低補體之結合活性，藉此控制CDC活性。 例如，藉由使用美國專利申請公開第2007/0148165號說明書中所記載之Fc區之胺基酸序列，可增加抗體之CDC活性。又，藉由進行美國專利第6,737,056號說明書、美國專利第7,297,775號說明書、美國專利第7,317,091號說明書及國際公開第2005/070963號中所記載之胺基酸殘基修飾，可增加或降低ADCC活性或CDC活性。 本發明中所使用之抗體較佳為藉由上述修飾而具有較高之ADCC活性或CDC活性，尤其具有較高之ADCC活性。 又，關於本發明中所使用之抗體，較佳為與上述抗體之Fc區結合的N-糖苷複合型糖鏈上未結合岩藻糖之比率為80%以上、90%以上、較佳為91%、92%、93%、94%、95%以上之抗體，更佳為該糖鏈上未結合岩藻糖之抗體。藉此，可期待較高之ADCC活性。 本發明中所使用之抗IL-5R抗體及該抗體片段可參考WO1997/10354及WO2005/35583而製造。 本發明之治療或預防劑可併用嗜酸性球去除劑與其他治療藥或治療方法。例如可與使用類固醇劑、抗氧化劑、抗炎症藥、自由基清除劑製劑、抗生素等藥劑之藥劑療法、高壓氧療法、氬電漿凝固法、外科切除等併用，使用嗜酸性球去除劑。於該情形時，嗜酸性球去除劑與其他治療藥或治療方法可同時進行投予或治療，亦可連續地進行投予或治療。 本發明之治療或預防劑只要為包含上述嗜酸性球去除抗體作為有效成分之醫藥組合物，則可為任意者，通常較理想為作為與藥學上所容許之一種或一種以上之載體一同混合，並藉由製劑學之技術領域中眾所周知之任意方法製造之醫藥製劑而提供。 較佳為使用溶解於水、或食鹽、甘胺酸、葡萄糖、人白蛋白等之水溶液等水性載體中而成之無菌溶液。又，亦可添加用以使製劑溶液接近生理條件之緩衝劑或等張劑般之藥學上容許之添加劑，例如乙酸鈉、氯化鈉、乳酸鈉、氯化鉀、檸檬酸鈉等。又，亦可進行冷凍乾燥而加以儲藏，並於使用時溶解於適當之溶劑中而使用。 本發明之治療或預防劑之投予途徑較佳為使用於治療時最有效者，可列舉：經口投予，或口腔內、呼吸道內、直腸內、皮下、肌內、脊椎內及靜脈內等非經口投予，較佳為脊椎內投予或靜脈內投予。 作為適於經口投予之製劑，例如可列舉：乳劑、漿液劑、膠囊劑、錠劑、散劑、顆粒劑等。例如，乳劑及漿液劑般之液體製備物可使用以下物質作為添加劑而製造：水、蔗糖、山梨糖醇、果糖等糖類，聚乙二醇、丙二醇等二醇類，芝麻油、橄欖油、大豆油等油類，對羥基苯甲酸酯類等防腐劑，草莓香料、胡椒薄荷等香料類等。 膠囊劑、錠劑、散劑或顆粒劑等可使用以下物質作為添加劑而製造：乳糖、葡萄糖、蔗糖或甘露醇等賦形劑，澱粉或海藻酸鈉等崩解劑，硬脂酸鎂、滑石等潤滑劑，聚乙烯醇、羥丙基纖維素或明膠等結合劑，脂肪酸酯等界面活性劑，或甘油等塑化劑等。 作為適於非經口投予之製劑，例如可列舉：注射劑、栓劑、噴霧劑等。例如，注射劑係使用包含鹽溶液、葡萄糖溶液、或兩者之混合物之載體等而製備。栓劑係使用可可脂、氫化脂肪或羧酸等載體而製備。又，噴霧劑係使用該抗體本身、或不刺激接受者之口腔及呼吸道黏膜且將該抗體製成微細之粒子並使之分散而容易吸收之載體等製備。 作為載體，具體而言，可例示乳糖、甘油等。根據該抗體及所使用之載體之性質，可為氣溶膠、乾粉等製劑。又，亦可於該等非經口劑中添加於經口劑中作為添加劑而例示之成分。 本發明之治療或預防劑之投予量或投予次數根據目標治療效果、投予方法、治療期間、年齡、體重等而有所不同，通常成人每1天為1 μg/kg～10 mg/kg。 於增加本發明之耐受劑量之方法中，使用嗜酸性球去除劑而抑制嗜酸性球之細胞增殖、移動、浸潤及/或去顆粒等活化、或進行嗜酸性球之凋亡及/或細胞毒殺誘導，藉此可於抑制放射線傷害之狀態下進行放射線治療，故而可增加最小耐受劑量或最大耐受劑量。 同樣地，所謂本發明之使用高於耐受劑量之放射線量之放射線治療，係指使用高於未使用嗜酸性球去除劑之情形時之最小耐受劑量或最大耐受劑量的放射線量之放射線治療。 藉由使用本發明之預防方法或預防劑，即便於使用高於通常之最小耐受劑量之放射線量，較佳為高1%以上、2%以上、3%以上、4%以上、5%以上、6%以上、7%以上、8%以上、9%以上、10%以上、15%以上、20%以上、25%以上、30%以上、40%以上、50%以上、60%以上或70%以上之劑量的放射線治療中，亦可於放射線照射後，將5年間之組織之功能障礙抑制為5%之概率之發病。又，藉由使用本發明之預防方法或預防劑，即便於使用高於通常之最大耐受劑量之放射線量的放射線治療中，亦可於放射線照射後，將5年間之組織之功能障礙抑制為50%之概率之發病。 又，藉由於放射線治療中增加耐受劑量，可儘量降低對正常組織之影響，另一方面，繼續且有效率地進行對病變部位之治療之治療效果。 本發明亦包含於放射線治療中延長放射線治療期間之方法或增加放射線照射次數之方法。於本發明中，使用嗜酸性球去除劑，抑制嗜酸性球之細胞增殖、移動、浸潤及/或去顆粒等活化、或進行嗜酸性球之凋亡及/或細胞毒殺誘導，由此使伴隨放射線治療有可能產生之放射線傷害延遲，藉此可避免由放射線傷害所引起之放射線治療之停止、放射線治療之延期。藉此，可於抑制、降低伴隨放射線曝射之放射線傷害之狀態下持續進行患者之放射線治療。 本發明亦包含使用嗜酸性球去除劑的伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防方法。本發明之治療或預防方法之特徵在於投予嗜酸性球去除劑，藉由嗜酸性球去除劑而抑制嗜酸性球之細胞增殖、移動、浸潤及/或去顆粒等活化、或進行嗜酸性球之凋亡及/或細胞毒殺誘導，由此抑制產生放射線傷害之器官、組織之炎症反應、纖維化反應，藉此可治療或預防伴隨放射線曝射之放射線傷害。 本發明亦包含如下癌症之治療方法，其包括併用嗜酸性球去除劑之投予及放射線之照射。於本發明中，使用嗜酸性球去除劑，抑制嗜酸性球之細胞增殖、移動、浸潤及/或去顆粒等活化，或進行嗜酸性球之凋亡及/或細胞毒殺誘導，由此抑制放射線傷害，又，可進行較高劑量之放射線照射。藉此，可進行安全且效果較高之癌症治療。 作為伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防方法中所使用之嗜酸性球去除劑，可使用上述所記載之嗜酸性球去除劑，可參照用法及劑量中之任一者。 於本發明之治療或預防劑、及治療或預防方法中，可為同時進行嗜酸性球去除劑之使用與放射線治療之情形，可為前後地進行兩者之治療之情形，亦可為交替地持續進行之情形。 以下，藉由實施例更詳細地說明本發明，但本發明並不限定於該等實施例。 [實施例] [實施例1：抗小鼠IL-5受體表現細胞之製作] (1)小鼠IL-5Rα基因表現pEF6載體之構築 對小鼠IL-5Rα之cDNA(序列編號11)進行全合成。將小鼠IL-5Rα之cDNA插入至載體pEF6/myc-His C(Invitrogen公司)中，而構築小鼠IL-5Rα基因表現pEF6載體。 (2)小鼠IL-5Rα短暫性表現Expi293F細胞之製作 依據隨附之說明書，將小鼠IL-5Rα表現pEF6載體轉染至Expi293F細胞。其後，使用Expi293F培養基培養3天。 (3)小鼠IL-5Rα穩定表現Ba/F3細胞之製作 對於Ba/F3細胞，使用細胞系核轉染套組V(Cell Line Nucleofector Kit V)(Lonza公司)，依據隨附之說明書，轉染小鼠IL-5Rα表現pEF6載體。 於添加有10%FBS(Fetal Bovine Serum，胎牛血清)及青黴素(100 U/mL)-鏈黴素(100 μg/mL)混合液(Nacalai Tesque公司)、0.5 ng/mL之小鼠IL-5(Sigma-Adrich公司)之RPMI1640培養基(以下，亦記載為「IL-5Rα/BaF3培養基」)中，以30 μg/mL之殺稻瘟菌素(Blasticidin) (Invivogen公司)重複繼代3週，而進行藥劑選擇。細胞膜上之小鼠IL-5Rα之表現係使用APC anti-IL5RΑ抗體(Milteny公司，REA343)，利用流式細胞儀加以確認。 [實施例2：針對抗小鼠IL-5Rα之單株抗體之製作] (1)對大鼠之免疫 對9週齡之雌性WKY/NCrlCrlj大鼠(WKY大鼠)(Charles River公司)進行免疫。使25 μg之小鼠IL-5Rα-Fc懸浮於100 μL之生理鹽水(大塚製藥工廠)中，與Sigma Adjuvant System(註冊商標)(Sigma Aldrich公司)100 μL合併而製備200 μL之懸浮液。於初次免疫中，於WKY大鼠之脊部於左右2處每1處肌內投予懸浮液100 μL。又，於初次投予2週後，使25 μg之小鼠IL-5Rα-Fc懸浮於200 μL之生理鹽水中，並藉由同樣之方法進行投予。 (2)融合瘤之製作 於(1)中進行了第2次免疫之3天後，以外科方式自WKY大鼠摘取髂骨淋巴結，並供於細胞融合。首先，於載玻片上將所摘取之髂骨淋巴結搗碎，使組織鬆散。使該髂骨淋巴結組織懸浮於最低必需培養基(MEM，Minimum Essential Media)(invitrogen公司)中，使之通過細胞過濾器(cell strainer)，藉此去除多餘之組織。藉由以1500 rpm離心分離5分鐘而去除上清液後，再次懸浮於MEM中，而製成髂骨淋巴結細胞。 供於細胞融合之小鼠骨髓瘤細胞P3-U1(ATCC公司)係使用於S-clone選殖培養基(S-clone cloning medium)CM-B(Eidia公司)中進行適應培養而得者(以下，亦記載為「無血清適應P3-U1」)。相對於所獲得之髂骨淋巴結細胞數，混合1/2細胞數之無血清適應P3-U1。藉由離心分離去除上清液後，使用GenomONE-CF(石原產業公司)，依據隨附之說明書進行細胞融合。其後，使細胞於HAT培養基(500 mL之S-clone cloning medium CM-B(Eidia公司))中，懸浮於10 mL之HAT(添加有次黃嘌呤(H)、胺基喋呤(A)、胸苷(T))溶液(Thermo SCIENTIFIC公司)與0.5 mL之10 mg/mL建它黴素溶液(Nacalai Tesque公司)者)中，並接種於96孔板而進行培養。 (3)融合瘤篩選 將於(2)中所接種之融合瘤培養7天後，採集各孔之培養上清液，分析對於小鼠IL-5Rα之反應性。陽性對照細胞及陰性對照細胞係分別設為小鼠IL-5Rα表現Expi293F細胞及Expi293F細胞。首先，以每1孔分別成為1×10⁵ cells/50 μL之方式將陽性對照細胞及陰性對照細胞接種於96孔板，添加50 μL之培養上清液，並於4℃下進行30分鐘之反應。 於利用PBS(-)洗淨細胞後，以50 μL/well添加利用添加有0.05%NaN₃ 及1 mmol/L EDTA(Ethylenediamine Tetraacetic Acid，四乙酸乙二胺)(Nacalai Tesque公司)之1%(w/v)BSA(Bull Serum Albumin，牛血清蛋白)-PBS(-)(pH值7.0，無KCl)(Nacalai Tesque公司)(以下，亦記載為「FACS(Fluorescence-Activated Cell Sorting，螢光活化細胞分選)緩衝液1」)稀釋至300倍的DyLight 650抗大鼠IgG(DyLight 650 anti-Rat IgG)(Fc)(abcam公司)，並於4℃下進行30分鐘之反應。於利用FACS緩衝液1洗淨細胞後，利用CyAn ADP-HyperCyt(Beckman Coulter公司)對螢光強度進行分析。 針對在小鼠IL-5Rα短暫性表現Expi293F細胞中可見特異之反應之孔之融合瘤，使用選殖培養基(於S-clone cloning medium CM-B(Eidia公司)中，添加有0.5 mL之10 mg/mL建它黴素溶液(Nacalai Tesque公司)、5 mL之HT(hypoxanthine(次黃嘌呤) Thymidine(胸苷))添加劑(Thermo SCIENTIFIC公司)者)，利用極限稀釋法進行1次單細胞選殖。最終，建立對於小鼠IL-5Rα穩定表現細胞Ba/F3顯示出較強之流式細胞儀反應性之融合瘤(以下，亦記載為「1B12」)。 (4)融合瘤1B12之培養上清液中所含的抗體之亞綱之鑑定 將融合瘤1B12培養數天，利用D-PBS(Dulbecco's Phosphate Buffered Saline，杜氏磷酸鹽緩衝液)將所得之培養上清液稀釋至10倍，使用其稀釋液150 μL，使用大鼠單選殖抗體分型試驗套組(Rat Monoclonal Antibody Isotyping Test Kit)(AbD Serotec公司)，依據隨附之說明書進行亞綱之分析。 其結果表明，1B12之培養上清液中所含之大鼠抗小鼠IL-5Rα單株抗體(以下亦記載為「1B12抗體」)為大鼠IgG1抗體。 (5)1B12抗體之重鏈及輕鏈可變區基因之選殖 使用微量RNA提取套組(RNeasy Micro Kit)(Qiagen公司)，依據隨附文件，由1B12製備總RNA(Ribonucleic Acid，核糖核酸)(Total RNA)。使用SMARTer RΑCE 5/3套組(SMARTer RΑCE 5/3 Kit)(Clontech公司)，依據隨附之說明書，由經純化之mRNA(Messenger Ribonucleic Acid，信使核糖核酸)製備cDNA。 以所獲得之cDNA為模板，分別藉由PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈反應)法對大鼠重鏈基因及大鼠輕鏈(κ鏈)基因進行擴增，並分別分析鹼基序列。將編碼H鏈及L鏈之可變區之DNA序列記載為序列編號12、15，將包含訊號序列VH、VL之胺基酸序列記載為序列編號13、16，及將不含訊號序列之VH、VL之胺基酸序列記載為序列編號14、17。 [實施例3：大鼠/小鼠嵌合型1B12抗體之製作] (1)大鼠/小鼠嵌合型1B12抗體表現載體之構築 藉由以下之方法建立抗小鼠IL-5Rα大鼠/小鼠嵌合型1B12抗體表現載體。製作將實施例2-(5)中進行分析而得之1B12抗體重鏈可變區及輕鏈可變區之基因序列分別連結於小鼠IgG2a重鏈及κ鏈之恆定區基因序列而成的人工合成基因，並基因導入至基於pCI之載體(pCI based vector)(Promega公司)中。轉形為大腸桿菌DH5α勝任細胞(TAKARA BIO公司)，進行次選殖，實施序列確認，藉此製作大鼠/小鼠嵌合型1B12抗體(以下，亦記載為「cm1B12抗體」)表現載體。 (2)cm1B12抗體之短暫性表現細胞株之製作 為了製作cm1B12抗體之短暫性表現株，而使用FreeStyle(商標)MAX CHO表現系統(MAX CHO Expression System)(Lifetechnologies公司)，依據隨附之說明書，將(1)中所製作之表現載體導入至宿主細胞中。宿主細胞係使用使FUT8剔除CHO細胞(國際公開第2005/035586號、國際公開第02/31140號)於FreeStyle(商標)CHO表現培養基(CHO Expression Medium)(Lifetechnologis公司)中適應而成之株。利用FUT8剔除CHO細胞生產之抗體係不具有α1,6-岩藻糖之糖鏈與Fc區結合而成之抗體，具有高於在糖鏈中具有岩藻糖之抗體之ADCC活性。 使1 mg之cm1B12抗體表現載體溶解於16 mL之Opti-Pro SFM(serum-free medium，無血清培養基)(invitrogen公司)中，且使1000 μL之Freestyle MAX試劑(invitrogen公司)溶解於15 mL之Opti-Pro SFM中，於室溫下放置5分鐘。混合上述二液，於室溫下放置15分鐘。將該混合溶液全部添加至800 mL之宿主細胞培養液(1×10⁶ cells/mL)中，而獲得cm1B12抗體之短暫性表現細胞株。 (3)cm1B12抗體之純化 使(2)中所獲得之cm1B12抗體之短暫性表現細胞株懸浮於添加有8 mM之L-麩醯胺酸(L-glutamine)(invitrogen公司)之Free style CHO expression medium(invitrogen公司)中，於錐形瓶中培養7天後，回收培養上清液。對所回收之培養上清液進行離心分離，使用0.22 μm過濾器進行過濾，藉此製備包含cm1B12抗體之培養上清液。 使用Ab-Capcher ExTRα(ProteNova公司)，自所製備之培養上清液純化cm1B12抗體。首先，將培養上清液裝載於管柱，利用D-PBS洗淨管柱後，利用pH值3.0之溶出緩衝液(0.1 M檸檬酸一水合物-NaOH/pH值3.0)依序溶出。所溶出之溶出分迅速利用中和緩衝液(2 M Tris-HCl/pH值8.5)進行中和。 測定各溶出分之280 nm之吸光度(A280)，回收測定值較高之連續溶出分作為抗體部分。使用NAP-25管柱葡聚糖凝膠(NAP-25 columns Sephadex)(GE Healthcare)，依據隨附文件，將溶劑置換為D-PBS。將通過0.22 μm之過濾器者作為純化蛋白質。將280 nm之吸光係數設為1.61，算出濃度。 [實施例4：cm1B12抗體之抗原結合活性] (1)對於小鼠IL-5Rα-Fc之結合 cm1B12抗體對於小鼠IL-5Rα-Fc之結合活性係使用BiacoreT200進行分析。於CM5感測晶片(GE Healthcare)上使用人類抗體捕捉套組(Human Antibody Capture Kit)(GE Healthcare)，依據隨附之說明書，以9000 RU為標準將抗人IgG(Anti-Human IgG)(Fc)固相化。於以流速30 μL/min捕捉作為配體之以成為1 μg/mL之方式溶解於HBS-EP(+)中之小鼠IL-5Rα-Fc(R＆D公司)20秒後，藉由多循環法添加分階段稀釋至1000.00、333.33、111.11、37.04、12.35、及4.12 ng/mL之濃度的cm1B12抗體作為分析物。 於流速為30 μL/min，且接觸時間(contact time)及解離時間(dissociation time)分別為120秒、600秒之條件下進行分析。分析係使用Biacore T200評估軟體(Biacore T200 Evaluation software)，藉由表面結合(Surface bound)之二價分析物(Bivalent Analyte)模式實施。 其結果為，如表2所示，cm1B12抗體對於小鼠IL-5Rα-Fc顯示出較強之結合活性。 [表2] (2)對於IL-5Rα表現Ba/F3細胞之結合 以細胞密度成為1×10⁶ cells/mL之方式使Ba/F3細胞及IL-5Rα表現Ba/F3細胞懸浮於FACS緩衝液1中。以成為5×10⁵ cells/well之方式將100 μL之細胞懸浮液接種於96孔U型板(96-well U-form plate)中。利用FACS緩衝液1將cm1B12抗體稀釋至最終濃度為0.0003、0.001、0.003、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、及10 μg/mL，並各添加100 μL/well，於冰上進行1小時反應。利用FACS緩衝液1洗淨後，各以100 μL/well添加經FACS緩衝液1稀釋至5 μg/mL之Alexa Fluor(註冊商標)647山羊抗小鼠IgG(Goat anti-mouse IgG)(H＋L)(Life Technologies)，於冰上進行1小時反應。利用FACS緩衝液1洗淨後，利用流式細胞儀CantoII(BD公司)測定螢光強度(幾何平均值(Geometric mean))。 將結果示於圖1。cm1B12抗體係濃度依賴性地與IL-5Rα表現Ba/F3細胞特異性地結合。 [實施例5：cm1B12抗體對於IL-5Rα表現細胞之細胞毒殺活性] 將效應細胞設為人冷凍末梢血單核細胞(PBMC，peripheral blood mononuclear cell)(ALLCELLS)，將靶細胞設為Ba/F3細胞或者mIL-5Rα表現Ba/F3細胞，並藉由下述中所記載之方法評價cm1B12抗體之細胞毒殺活性。 使用添加有5%透析FBS(Dialyzed FBS)之RPMI 1640培養基(無酚紅)(RPMI 1640 Medium, no phenol red)(Nacalai Tesque公司)洗淨效應細胞及靶細胞，以細胞密度分別成為2×10⁷ cells/mL及5×10⁵ cells/mL之方式進行調整。將以最終濃度成為0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、100及1000 ng/mL之方式進行調整而得之cm1B12抗體、靶細胞、及效應細胞依序分別添加50 μL至96孔U形底板(96-well U-bottom plate)中，並於37℃下進行4小時反應。 將50 μL之上清液回收至96孔平底板(96-well Flat-bottom plate)(Sumitomo Bakelite)中，使用CytoTox 96非放射性細胞毒性試驗套組(CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay)(Promega)，依據隨附之說明書，檢測上清液中之乳酸去氫酶(LDH，Lactate dehydrogenase)活性。吸光度係利用讀板儀SPECTRΑ MAX 340 PC384(Molecular Devices)測定490 nm之吸光度。細胞毒殺活性係使用進行了背景校正之測定值藉由以下之式算出。 細胞毒性(%)＝[[樣品之吸光度]－[靶細胞之自然游離吸光度]－[效應細胞之自然游離吸光度]]/[[靶細胞總游離吸光度]－[靶細胞自然游離吸光度] 將結果示於圖2。cm1B12抗體對於IL-5Rα表現細胞濃度依賴性地顯示出細胞毒殺活性。 [實施例6：cm1B12抗體對於IL-5-IL-5R訊號之拮抗劑活性] (1)IL-5依賴性之IL-5Rα表現Ba/F3之細胞增殖評價 利用添加有10%FBS及青黴素(100 U/mL)-鏈黴素(100 μg/mL)混合液(Nacalai Tesque公司)之RPMI1640培養基將Ba/F3細胞及IL-5Rα表現Ba/F3細胞洗淨後，以細胞密度成為1×10⁵ cells/mL之方式進行調整。於96孔平底板上分別接種50 μL/well之Ba/F3細胞及IL-5Rα表現Ba/F3細胞，以50 μL/well添加以最終濃度成為0.001、0.01、0.1、1及10 ng/mL之方式利用上述培養基進行調整而得之小鼠IL-5(Sigma-Adrich公司)，並於37℃下進行72小時反應。 其後，使用細胞計數套組-8(Cell Counting Kit-8)(Dojindo)，依據隨附之說明書，測定活細胞數。吸光度係利用讀板儀SPECTRΑ MAX 340 PC384(Molecular Devices)測定450 nm之吸光度。 將結果示於圖3(A)。IL-5Rα表現Ba/F3細胞係IL-5濃度依賴性地進行增殖。 (2)cm1B12抗體對於IL-5-IL-5R訊號之拮抗劑活性 於與(1)相同之培養條件下，於最終濃度0.1 ng/mL小鼠IL-5(Sigma-Adrich公司)存在下，以最終濃度成為0.003、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3及10 μg/mL之方式添加cm1B12抗體，並測定IL-5Rα表現Ba/F3細胞之活細胞數。使用純化小鼠IgG2a(mouse IgG2a purified)(BD Pharmingen)作為陰性對照。 細胞增殖阻礙活性係使用進行了背景校正之測定值藉由以下之式算出。阻礙活性(%)＝100×[1－[[樣品之吸光度]－[IL-5未添加群之吸光度平均值]]/[[抗體未添加群之吸光度平均值]－[IL-5未添加群之吸光度平均值]]] 將結果示於圖3(B)。cm1B12抗體係抗體濃度依賴性地阻礙細胞增殖。明確cm1B12抗體係阻礙IL-5依賴性細胞增殖之IL-5R拮抗劑抗體。 [實施例7：cm1B12抗體之嗜酸性球去除活性] 為了驗證活體內(in vivo)之cm1B12抗體之嗜酸性球之去除效果，以成為25 mg/kg之方式向8-10週齡之BALB/c小鼠(雌)腹腔內投予經D-PBS稀釋至2 mg/mL之cm1B12抗體、或抗IL-5配體大鼠單株抗體TRFK-5(R&D systems公司)，於投予1週後、2週後、及4週後採集血液，於投予4週後採集小腸，並進行分析。對照群係投予D-PBS。 (1)血中嗜酸性球之去除活性 (i)細胞之製備 自小鼠採集約1 mL之血液，與EDTA-2 Na粉末溶混後，使用BD PharmLyse(BD公司)，藉由以下之方法進行溶血處理。將小鼠血液全部添加至5 mL之1xLysis緩衝液中，倒置溶混後，於常溫下反應3分鐘。於4℃下以2000 rpm離心5分鐘而去除上清液，使細胞再次懸浮於1 mL之1×Lysis緩衝液中，於常溫下反應3分鐘。 於4℃下以5000 rpm離心3分鐘，去除上清液後，使細胞懸浮於添加有1 mL之10%FBS(GIBCO公司)、10 mM之EDTA(Nacalai Tesque公司)、20 mM之HEPES(hydroxyethyl piperazine ethanesulfonic acid，羥乙基哌乙磺酸)(MP Biomedical公司)、1 mM之丙酮酸鈉(Sodium Pyruvate)(GIBCO公司)、10 μg/mL之硫酸多黏菌素B(Sigma-Adrich公司)、及青黴素(100 U/mL)-鏈黴素(100 μg/mL)混合液(Nacalai Tesque公司)之D-PBS(以下，亦記載為「FACS緩衝液2」)中，並進行洗淨。 (ii)測定 以細胞密度成為1×10⁷ cells/mL之方式使(i)中所製備之血球細胞於FACS緩衝液2中懸浮，並向1.5 mL微型管中添加100 μL/tube。添加Fc阻斷劑(Fc blocker)(BD bioscience，2.4G2)1 μL/tube，於冰上進行15分鐘反應。其後，分別添加FITC抗CD11b(FITC anti-CD11b)(BD bioscience，M1/70)、PE抗Siglec F(PE anti-Siglec F)(BD bioscience，E50-2440)、PE-Cy7抗CD11c(PE-Cy7 anti-CD11c)(BD bioscience，HL3)、及APC抗GR1(APC anti-GR1)(BD bioscience，RB6-8C5)各1 μL/tube，於冰上進行20分鐘反應。利用FACS緩衝液2洗淨後，利用FACS Calibur(BD公司)進行測定。 分析係如圖4(A)所示，以FSC(forward scatter，前向角散射)、SSC(side scatter，側向角散射)展開，將單核球與粒細胞部分作為總細胞數，將粒細胞部分中之CD11c^- /CD11b⁺ /Gr1^int /Siglec F⁺ 部分作為嗜酸性球部分，算出嗜酸性球部分之比率(%)。圖4(A)中表示投予各抗體4週後之小鼠血液之分析結果。 結果如圖4(B)所示，於cm1B12抗體及抗IL-5抗體TRFK-5投予群中，與對照群相比確認到末梢血液中之顯著之嗜酸性球部分之減少。又，cm1B12抗體較TRFK-5抗體更強力地使嗜酸性球減少。因此，明確cm1B12抗體及TRFK-5抗體係使末梢血嗜酸性球減少之抗體。 (2)對於小腸嗜酸性球之去除活性 (i)小腸黏膜固有層細胞之製備 使小鼠安樂死後進行剖腹，於幽門與回結瓣處切割小腸並回收。去除附著於腸壁之脂肪組織與派亞氏淋巴叢(Peyer's patch)後，縱向切開腸並於D-PBS中清洗而洗淨去除內容物。一面將切碎之小腸片於FACS緩衝液2中攪拌，一面於37℃下培養20分鐘。利用D-PBS洗淨小腸片後，進而細細地切碎，一面於添加有10%FBS(GIBCO公司)0.425 mg/mL LibeRαse T-flex(Roche)、100 μg/mL DNaseI(deoxyribonuclease I，脫氧核糖核酸酶I)(Roche)之RPMI1640培養基中攪拌，一面於37℃下培養60分鐘。利用100 μm孔過濾器(BD bioscience)去除組織殘渣後，對所分離之細胞於4℃下以1500 rpm進行離心分離5分鐘並加以回收。進而藉由使用40%及75%Percol溶液之密度梯度離心法分離細胞(20℃、20分鐘、2000 rpm)。使所分離之細胞懸浮於FACS緩衝液2中，進行洗淨。 (ii)測定 以與上述(1)(ii)相同之方式對(i)中所製備之小腸黏膜固有層細胞進行FACS分析。 分析係如圖5(A)所示，以FSC、SSC展開，將單核球與粒細胞部分作為總細胞數，將粒細胞部分中之CD11c^int /CD11b⁺ /Gr1^int /Siglec F⁺ 部分作為嗜酸性球部分，算出嗜酸性球部分之比率(%)。 結果如圖5(B)所示，於投予抗體後4週後，cm1B12抗體或抗IL-5抗體TRFK-5投予群中，與對照群相比而使存在於小腸黏膜固有層內之嗜酸性球部分顯著地減少。又，cm1B12抗體較TRFK-5抗體更強力地使嗜酸性球減少。因此，明確cm1B12抗體及TRFK-5抗體不僅減少末梢血液中之嗜酸性球，亦減少特異性地存在於小腸黏膜固有層等組織之嗜酸性球。 [實施例8：cm1B12抗體之放射線性腸炎(遲發性傷害)之抑制效果] (1)放射線性腸炎(遲發性傷害)之誘導 利用Somnopentyl對小鼠施加全身麻醉後，於以鉛塊遮蔽腹部以外之狀態下照射12 Gy之伽馬射線(Gammacell 40 Exactor MDS Nordion)。於進行照射後，使之自由地攝取餌食及飲用水而進行飼養。 (2)cm1B12抗體之病況抑制效果 自照射放射線之4週前至放射線照射之13週後，每4週計5次以成為25 mg/kg之方式腹腔內投予經D-PBS稀釋至2 mg/mL之cm1B12抗體或TRFK-5抗體。於放射線照射13週後，採集血液及組織，並進行分析。 (i)血中嗜酸性球之減少 以與實施例7(1)中所記載之方法相同之方式分析嗜酸性球部分之比率。將結果示於圖6(A)。與未照射放射線之小鼠相比，於進行了照射放射線之小鼠體內，末梢血液中之嗜酸性球數未觀察到較大之變化，但於向放射線照射小鼠投予了cm1B12抗體或TRFK-5抗體之群中，與向放射線照射小鼠投予了D-PBS之對照群相比，確認到末梢血液中之嗜酸性球之顯著減少。又，關於其嗜酸性球減少效果，cm1B12抗體高於TRFK-5抗體。因此，明確cm1B12抗體及TRFK-5抗體於放射線照射個體中亦使末梢血中之嗜酸性球減少。 (ii)小腸嗜酸性球之減少 以與實施例7(2)中所記載之方法相同之方式分析嗜酸性球部分之比率。將結果示於圖6(B)。與未照射放射線之小鼠相比，於進行了照射放射線之小鼠體內，存在於小腸黏膜固有層之嗜酸性球數未觀察到變化，但與末梢血液中之嗜酸性球同樣地，於在放射線照射小鼠體內投予了cm1B12抗體及TRFK-5抗體之群中，與對照群相比確認到存在於小腸黏膜固有層內之嗜酸性球之顯著減少。因此，明確於放射線照射小鼠體內，cm1B12抗體及TRFK-5抗體亦與末梢血中之嗜酸性球同樣地使存在於小腸黏膜固有層之嗜酸性球顯著地減少。 (iii)小腸中之嗜酸性球之浸潤 將小腸中之較指屈氏(Treitz)靭帶遠2 cm之部分回收1.5 cm，浸漬於包含10%福馬林之PBS中1天而加以固定。製作經固定之小腸片之石蠟塊，將厚度5 μm之薄切片貼附於載玻片並進行乾燥。 利用包含0.1%(w/v)胃蛋白酶(pepsin)(MP Biomedicals)之0.01 N HCl於室溫下將石蠟切片處理20分鐘後，使用抗小鼠MBP(Major Basic Protein，主要鹼性蛋白)大鼠單株抗體(由美國梅歐醫學中心(Mayo Clinic)之James J. Lee博士及Nancy A. Lee博士分讓)，於4℃下使之反應一晩。 洗淨切片後，利用生物素標識抗大鼠IgG山羊抗體(Kirkegaard ＆ Perry Laboratories)於37℃下反應1小時。再次洗淨後，利用HRP(Horse Radish Peroxidase，辣根過氧化酶)標識抗生蛋白鏈菌素(Thermo Fisher Scientific)於室溫下反應30分鐘。所標識之細胞係以二胺基聯苯胺作為受質而顯色。將MBP陽性之細胞視為嗜酸性球，並使用BZ-II影像分析應用(BZ-II Image Analysis Application)(Keyence)測定小腸黏膜下層中每一定面積中浸潤之嗜酸性球數。 如圖7(A)及(B)所示，與未照射放射線之小鼠相比，於進行了放射線照射之小鼠體內，MBP陽性之嗜酸性球大量浸潤至小腸黏膜下層。於放射線性腸炎中，確認到嗜酸性球特異性地浸潤至小腸黏膜下層。 另一方面，於放射線照射小鼠體內，cm1B12抗體及TRFK-5抗體與對照相比，阻礙小腸黏膜下層之MBP陽性之嗜酸性球之浸潤。又，關於向小腸黏膜下層之嗜酸性球之阻礙效果，cm1B12α抗體強於TRFK-5抗體，與對照相比幾乎完全阻礙嗜酸性球之移動、浸潤。 因此，明確cm1B12抗體及TRFK-5抗體藉由IL-5-IL-5R之中和作用或以IL-5R作為靶之ADCC活性而阻礙嗜酸性球，結果不僅減少侷限於小腸黏膜固有層之嗜酸性球，亦阻礙向小腸黏膜下層之移動及浸潤。尤其明確抗IL-5Rα抗體與抗IL-5抗體相比，可強力地阻礙小腸黏膜固有層及黏膜下層中任一者中之嗜酸性球。 (iv)小腸黏膜下層之纖維化 為了利用光學顯微鏡對膠原蛋白纖維進行觀察，而對藉由(iii)中所記載之方法製作之石蠟切片進行偶氮卡紅染色(Azan stain)。沈積於黏膜下層之膠原蛋白層之厚度係使用BZ-II影像分析應用(Keyence)而加以測定。 如圖8(A)及(B)所示，與未照射放射線之小鼠相比，於進行了放射線照射之小鼠體內，確認到小腸黏膜下層之肥厚，但於在放射線照射小鼠體內投予了cm1B12α抗體及TRFK-5抗體之群中，確認到小腸黏膜下層之肥厚減少，且小腸黏膜下層之膠原蛋白之集聚顯著減少，抑制黏膜下層之纖維化。 因此，明確cm1B12抗體及TRFK-5抗體藉由IL-5-IL-5R之中和作用或以IL-5R作為靶之ADCC活性而阻礙嗜酸性球，結果可阻礙放射線性腸炎中之嗜酸性球依賴性之小腸黏膜下層之纖維化。 以上，根據本實施例之結果明確，抗IL-5R抗體及抗IL-5抗體藉由IL-5-IL-5R之中和作用或以IL-5R作為靶之ADCC活性，而阻礙嗜酸性球向腸管黏膜固有層及黏膜下層之移動及浸潤以及嗜酸性球細胞增殖，藉此可抑制腸管炎症及腸管纖維化，故而對放射線性傷害之治療較有用。 [實施例9：抗CCR3中和抗體對放射線性腸炎(遲發性傷害)之抑制效果] 對於藉由實施例8(1)中所記載之方法進行了放射線照射之小鼠，自照射放射線之2週前至放射線照射後12週，每2週計8次以成為5 mg/kg之方式腹腔內投予大鼠抗小鼠CCR3中和抗體83103(R＆D公司)。於放射線照射13週後採集血液及組織，藉由實施例7(2)、實施例8(2)(iii)及(iv)中分別記載之方法，對小腸黏膜固有層之嗜酸性球部分之比率、浸潤至小腸黏膜下層之嗜酸性球數及小腸黏膜下層之纖維化進行評價。 如圖9(A)～(C)所示，與投予抗IL-5抗體或抗IL-5R抗體時同樣地，確認到小腸黏膜固有層之嗜酸性球之減少、嗜酸性球向小腸黏膜下層之移動及浸潤之阻礙、以及小腸黏膜下層之纖維化之抑制。 確認到CCR3參與嗜酸性球向腸管黏膜固有層及黏膜下層之移動(未顯示資料)。根據本實施例之結果明確，藉由抗CCR3中和抗體對嗜酸性球之移動阻礙，亦可阻礙放射線性腸炎中之嗜酸性球依賴性之小腸黏膜下層之纖維化。以上之結果顯示，藉由使用具有ADCC活性之嗜酸性球去除劑、具有中和活性之嗜酸性球去除劑、及具有兩種活性之嗜酸性球去除劑中的任一種作為嗜酸性球去除劑之嗜酸性球去除，均可進行放射線性傷害治療。 [實施例10：cm1b12抗體對伴隨X射線分割照射療法之放射線性腸炎之抑制效果] (1)放射線性腸炎(遲發性傷害)之誘導 藉由3種混合麻醉對小鼠施加全身麻醉後，於以鉛板遮蔽腹部以外之狀態下，使用X射線照射裝置MBR-1520R-4(Hitachi Power Solutions)，每週1次、計1～5次反覆照射8 Gy(80-90c Gy/min)之X射線。於進行照射後，使之自由地攝取餌食及飲用水而進行飼養。 (2)cm1B12抗體之病況抑制效果 自照射放射線之4週前至初次放射線照射之20週後，每2週以5 mL/kg腹腔內投予D-PBS、或經D-PBS稀釋至1 mg/mL之cm1B12抗體。於放射線照射20週後，採集血液及組織，並進行分析。 (i)血中嗜酸性球之減少 藉由與實施例7(1)中所記載之方法相同之方法，分析嗜酸性球部分之比率。將結果示於圖10。向放射線照射小鼠投予了cm1B12抗體之群中，末梢血中之嗜酸性球被完全去除。因此，明確cm1B12抗體於放射線照射個體中亦使末梢血中之嗜酸性球減少。 (ii)腸管中之嗜酸性球之浸潤 將腸管中之較Treitz靭帶遠2 cm之部分回收2 cm，浸漬於包含10%福馬林之PBS中1天而加以固定。製作經固定之小腸片之石蠟塊，將厚度5 μm之薄切片貼附於載玻片並進行乾燥。對石蠟切片進行蘇木精-曙紅(HE，hematoxylin-eosin)染色。 如圖11所示，與未照射放射線之小鼠(A)相比，於進行了放射線照射之小鼠(B及D)體內，嗜酸性球大量浸潤至黏膜下層。另一方面，於進行了放射線照射之小鼠體內，cm1B12抗體與對照相比，完全阻礙了腸管之黏膜下層中之嗜酸性球之浸潤(C及E)。 因此，明確cm1B12抗體藉由IL-5-IL-5R之中和作用或以IL-5R作為靶之ADCC活性而阻礙嗜酸性球，結果不僅減少侷限於腸管黏膜固有層之嗜酸性球，亦阻礙向黏膜下層之移動及浸潤。 (iii)腸管之纖維化 為了利用光學顯微鏡對膠原蛋白纖維進行觀察，而對石蠟切片進行Azan染色。黏膜下層之厚度、及所沈積之膠原蛋白層之厚度係使用ImageScope Ver.12(Leica)而加以測定。 如圖12及圖13所示，於PBS群中，與所照射之合計劑量相關地確認到腸管黏膜下層之肥厚(B及D)。另一方面，於cm1B12抗體投予群中，與照射了相同程度之放射線之PBS群相比，確認到黏膜下層之肥厚、及膠原蛋白之集聚減少，抑制黏膜下層之纖維化(C及E)。又，與照射了合計劑量24 Gy之PBS群之黏膜下層之肥厚程度相比，於照射了合計劑量32 Gy或40 Gy之cm1B12抗體投予群中，確認到黏膜下層之肥厚經抑制為相同程度以下。即，提示藉由投予cm1B12抗體，容許至少高30%～70%之合計劑量之放射線治療及照射次數至少多1～2次之放射線治療。 因此，明確cm1B12抗體藉由IL-5-IL-5R之中和作用或以IL-5R作為靶之ADCC活性而阻礙嗜酸性球，結果可阻礙放射線性腸炎中之嗜酸性球依賴性之腸管之炎症、及纖維化，及增加腸管對於放射線之耐受劑量。即，藉由併用嗜酸性球去除劑，可抑制放射線傷害，並且以較高之劑量實施放射線治療。 (iv)腸管傷害 為了評價包含伴隨腹部放射線傷害之對腸管之炎症、纖維化等的綜合性影響，而測定自胃幽門部至盲腸上部之長度。 如圖14所示，於PBS群中，與所照射之合計劑量相關地確認到腸管之長度縮短。另一方面，於cm1B12抗體投予群中，與照射了相同程度之放射線之PBS群相比，確認到腸管之縮短得到抑制。又，與照射了合計劑量24 Gy之PBS群之腸管縮短程度相比，於照射了合計劑量32 Gy或40 Gy之cm1B12抗體投予群中，確認到腸管縮短經抑制為相同程度以下。即，提示藉由投予cm1B12抗體，容許至少高30%～70%之合計劑量之放射線治療及至少照射次數至少多1～2次之放射線治療。 因此，明確cm1B12抗體藉由IL-5-IL-5R之中和作用或以IL-5R作為靶之ADCC活性而阻礙嗜酸性球，結果可減少放射線性腸炎中之腸管傷害，及增加腸管對於放射線之耐受劑量。 (v)伴隨病況發病之體重減少 為了評價伴隨腹部放射線傷害之以飲食、營養吸收障礙為中心的全身性之影響，經時地評價體重變動。 如圖15所示，於發病時，體重依賴於照射次數而減少，但發病一結束，所有個體迅速地恢復至與放射線照射前同等之體重，與未照射放射線群同樣地體重持續增加一定期間。另一方面，若長期地持續飼養，則於照射了合計劑量16 Gy以上之群中，與未照射群相比，體重增加明顯受阻，於照射了合計劑量24 Gy以上之群中，隨著時間經過確認到體重減少。於照射了合計劑量24 Gy、及32 Gy之PBS群、以及照射了合計劑量32 Gy、及40 Gy之cm1B12抗體投予群之4群之間，未能確認到明顯之差。另一方面，於照射了40 Gy之PBS群中，與其他群相比顯示出顯著之體重減少。 因此，明確cm1B12抗體藉由IL-5-IL-5R之中和作用或以IL-5R作為靶之ADCC活性而阻礙嗜酸性球，結果可降低伴隨放射線傷害之以飲食、營養吸收障礙為中心之傷害，及增加對於放射線之耐受劑量。 (vi)生存曲線 為了評價伴隨腹部放射線傷害之全身性之影響，而評價生存率。生存曲線係藉由經時地測定伴隨病況惡化之自然死個體、及安樂死個體之數量而算出。又，安樂死係除了發病時以外，就動物愛護之觀點而言，對暴露於生命維持危機下之個體、具體而言自初始體重減少15%以上之個體實施。 如圖16所示，於照射了合計劑量40 Gy之PBS投予群中，隨著時間經過而生存率顯著地降低，但於照射了合計劑量40 Gy之cm1B12抗體投予群中，生存率顯著改善。 因此，明確cm1B12抗體藉由IL-5-IL-5R之中和作用或以IL-5R作為靶之ADCC活性而阻礙嗜酸性球，結果可降低伴隨腹部放射線傷害之與生命預後相關的嚴重之放射線傷害。 以上，根據本實施例之結果明確，抗IL-5R抗體及抗IL-5抗體藉由IL-5-IL-5R之中和作用或以IL-5R作為靶之ADCC活性，而阻礙嗜酸性球向腸管黏膜固有層及黏膜下層之移動及浸潤、及嗜酸性球細胞增殖，藉此可改善長期生存率，及減輕伴有進行性體重減少之病況，以及抑制腸管縮短、腸管炎症及腸管纖維化等腸管傷害，故而對放射線性傷害之治療較有用。 [序列表自由內容] 序列編號1：本雷利珠單抗之HCDR1之胺基酸序列 序列編號2：本雷利珠單抗之HCDR2之胺基酸序列 序列編號3：本雷利珠單抗之HCDR3之胺基酸序列 序列編號4：本雷利珠單抗之LCDR1之胺基酸序列 序列編號5：本雷利珠單抗之LCDR2之胺基酸序列 序列編號6：本雷利珠單抗之LCDR3之胺基酸序列 序列編號7：本雷利珠單抗之VH之胺基酸序列 序列編號8：本雷利珠單抗之VL之胺基酸序列 序列編號9：本雷利珠單抗之H鏈之胺基酸序列 序列編號10：本雷利珠單抗之L鏈之胺基酸序列 序列編號11：小鼠IL-5Rα cDNA之鹼基序列 序列編號12：1B12抗體H鏈可變區之鹼基序列 序列編號13：1B12抗體H鏈可變區之胺基酸序列(包含訊號序列) 序列編號14：1B12抗體H鏈可變區之胺基酸序列(訊號序列除外) 序列編號15：1B12抗體L鏈可變區之鹼基序列 序列編號16：1B12抗體L鏈可變區之胺基酸序列(包含訊號序列) 序列編號17：1B12抗體L鏈可變區之胺基酸序列(訊號序列除外)

圖1表示利用流式細胞儀對cm1B12抗體對於IL5Ra表現Ba/F3細胞之特異性結合進行分析而得之結果。白圈表示針對於IL5Ra表現Ba/F3細胞之結合量，黑圈表示針對於Ba/F3細胞之結合量。縱軸表示抗體結合量(螢光強度)，橫軸表示抗體濃度。 圖2表示針對cm1B12抗體對於IL5Ra表現Ba/F3細胞之細胞毒殺活性進行分析而得之結果。黑圈表示針對於IL5Ra表現Ba/F3細胞之細胞毒殺活性，白圈表示該抗體對於Ba/F3細胞之細胞毒殺活性。縱軸表示將最大細胞毒殺活性設為100%時之細胞毒殺活性率(%)，橫軸表示抗體濃度。 圖3(A)表示針對經小鼠IL-5刺激之Ba/F3細胞及IL5Ra表現Ba/F3細胞之細胞增殖進行分析而得之結果。縱軸表示細胞增殖(吸光度OD450)，橫軸表示小鼠IL-5濃度(ng/mL)。圖3(B)表示cm1B12抗體對於經由小鼠IL-5與IL-5R之結合之細胞增殖的中和活性。縱軸表示細胞增殖阻礙活性(%)，橫軸表示抗體濃度(μg/mL)。 圖4A表示利用流式細胞儀進行之血中嗜酸性球部分之閘控。 圖4B表示針對由投予cm1B12抗體或TRFK-5抗體所引起之血中嗜酸性球之比率的變化進行分析而得之結果。縱軸表示圖4(A)中定義為總細胞數之部分中之血中嗜酸性球部分之比率(%)。 圖5A表示利用流式細胞儀進行之小腸嗜酸性球部分之閘控。 圖5B表示針對由投予cm1B12抗體或TRFK-5抗體所引起之小腸嗜酸性球之比率的變化進行分析而得之結果。縱軸表示圖5(A)中定義為總細胞數之部分中之小腸嗜酸性球部分之比率(%)。 圖6(A)表示針對cm1B12抗體或TRFK-5抗體之投予對於放射線照射13週後之血中嗜酸性球之比率的影響進行分析而得之結果。縱軸表示圖4(A)中定義為總細胞數之部分中之血中嗜酸性球部分之比率(%)。圖6(B)表示針對cm1B12抗體或TRFK-5抗體之投予對於放射線照射13週後之小腸嗜酸性球之比率的影響進行分析而得之結果。縱軸表示圖5(A)中定義為總細胞數之部分中之小腸嗜酸性球部分之比率(%)。 圖7A表示針對cm1B12抗體或TRFK-5抗體之投予對於放射線照射13週後之小腸黏膜下層之嗜酸性球之浸潤數的影響進行分析而得之結果。箭頭表示嗜酸性球。 圖7B表示針對cm1B12抗體或TRFK-5抗體之投予對於放射線照射13週後之小腸黏膜下層之每單位面積之嗜酸性球數的影響進行分析而得之結果。 圖8A表示cm1B12抗體或TRFK-5抗體之投予對於放射線照射13週後之小腸黏膜下層之纖維化的抑制效果。 圖8B表示cm1B12抗體或TRFK-5抗體之投予對於放射線照射13週後之小腸黏膜下層之肥厚化的抑制效果。縱軸表示黏膜下層之厚度(μm)。 圖9A表示針對83103抗體之投予對於放射線照射13週後之小腸嗜酸性球之比率的影響進行分析而得之結果。縱軸表示將單核球與粒細胞部分定義為總細胞數之小腸嗜酸性球部分之比率(%)。 圖9B表示83103抗體之投予對於放射線照射13週後之小腸黏膜下層之每單位面積之嗜酸性球數的影響進行分析而得之結果。 圖9C表示83103抗體之投予對於放射線照射13週後之小腸黏膜下層之肥厚化的抑制效果。縱軸表示黏膜下層之厚度(μm)。 圖10表示放射線照射20週後之血中之嗜酸性球數之變化、及由投予cm1B12抗體所引起之血中嗜酸性球之比率之變化。縱軸表示嗜酸性球之比率(%)。橫軸表示合計劑量、及投予藥劑。 圖11A～E表示針對cm1B12抗體投予對於放射線照射20週後之腸管黏膜下層中之嗜酸性球之浸潤的影響進行分析而得之結果。箭頭表示嗜酸性球。 圖12A～E表示針對cm1B12抗體投予對於放射線照射20週後之腸管黏膜下層之肥厚化的影響進行分析而得之結果。箭頭表示纖維層。 圖13表示針對放射線照射20週後之腸管黏膜下層之肥厚化與合計劑量之關聯、及cm1B12抗體投予之影響進行分析而得之結果。縱軸表示黏膜下層之厚度(μm)。橫軸表示合計劑量、及投予藥劑。生存個體之資料係以平均值表示。安樂死個體之資料係以黑圈所表示。 圖14表示針對放射線照射20週後之腸管之縮短與合計劑量之關聯、及cm1B12抗體投予之影響進行分析而得之結果。縱軸(左)表示將0 Gy群設為基準時之腸管縮短之長度(cm)。縱軸(右)表示將0 Gy群設為基準時之腸管縮短之比率(%)。橫軸表示合計劑量、及投予藥劑。生存個體之資料係以平均值表示。安樂死個體之資料係以黑圈所表示。 圖15表示針對放射線照射對體重變動之影響、及cm1B12抗體投予之影響進行分析而得之結果。縱軸表示體重(g)。橫軸表示自初次放射線照射日起之天數(天)。各線表示照射了0、8、16、24、32或40 Gy之合計劑量之放射線的PBS(Phosphate Buffer Solution，磷酸鹽緩衝液)投予群或照射了32或40 Gy之合計劑量之放射線的cm1B12抗體投予群的平均值。再者，照射了40 Gy之PBS投予群或cm1B12抗體投予群表示除致死個體以外之平均值。 圖16表示針對照射了40 Gy之合計劑量之放射線之群的生存曲線、及cm1B12抗體投予之影響進行分析而得之結果。各線表示PBS投予群或cm1B12抗體投予群之生存曲線。縱軸表示生存個體數。橫軸表示自初次放射線照射日起之天數(天)。

Claims (32)

1. 一種伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防劑，其含有嗜酸性球去除劑作為有效成分。
2. 如請求項1之治療或預防劑，其中放射線為X射線或γ射線。
3. 如請求項1或2之治療或預防劑，其中放射線曝射為伴隨放射線治療之放射線曝射。
4. 如請求項1至3中任一項之治療或預防劑，其中放射線治療係針對選自由小腸癌、大腸癌、胃腸道間質腫瘤(GIST)、消化道類癌、胃癌、食道癌、肝癌、膽囊-膽道癌、胰臟癌、胰臟-消化道神經內分泌腫瘤、蘭格漢氏細胞組織細胞增生症、腎細胞癌、腎盂-輸尿管癌、腎上腺腫瘤、骨肉瘤、軟組織肉瘤、惡性淋巴瘤、膀胱癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸瘤、陰莖癌、子宮體癌、宮頸癌、子宮腫瘤、卵巢腫瘤、女性生殖器癌、肺癌、胸腺腫瘤、間皮瘤、乳癌、造血器官腫瘤、白血病、骨髓增殖性疾病及多發性骨髓瘤所組成之群中的任一種癌症之放射線治療。
5. 如請求項1至4中任一項之治療或預防劑，其中放射線傷害為早發性放射線傷害或遲發性放射線傷害。
6. 如請求項1至5中任一項之治療或預防劑，其中放射線傷害係對於選自由小腸、大腸、胃、膀胱、肝臟及腎臟所組成之群中的任一種以上之器官之傷害。
7. 如請求項1至6中任一項之治療或預防劑，其中嗜酸性球去除劑係與表現於嗜酸性球細胞表面上之抗原結合之抗體或其片段、或與和該抗原結合之配體結合之抗體或其片段。
8. 如請求項7之治療或預防劑，其中抗體或其片段係與選自由IL-5受體α鏈、IL-5受體β鏈、CRTH2、Siglec8、CCR3、IL-5、PGD2、Siglec8配體、CCL5、CCL7、CCL11、CCL13、CCL15、CCL24、CCL26、及CCL28所組成之群中的任一種抗原結合之抗體或其片段。
9. 如請求項7或8之治療或預防劑，其中抗體或其片段係具有抗體依賴性細胞毒殺活性及/或中和活性之抗體或其片段。
10. 如請求項7至9中任一項之治療或預防劑，其中抗體或其片段為單株抗體或基因重組抗體或該等之片段。
11. 如請求項7至10中任一項之治療或預防劑，其中抗體或其片段係包含人類Fc區或人類恆定區之抗體或其片段。
12. 如請求項7至11中任一項之治療或預防劑，其中抗體或其片段係選自由嵌合抗體、人源化抗體及人類抗體所組成之群中的任一種抗體或其片段。
13. 如請求項7至12中任一項之治療或預防劑，其中抗體或其片段係包含分別含有序列編號1～3所表示之胺基酸序列之重鏈(以下，記載為H鏈)互補決定區(以下，記載為CDR)1～3及分別含有序列編號4～6所表示之胺基酸序列之輕鏈(以下，記載為L鏈)CDR1～3的抗IL-5R抗體或其片段。
14. 一種伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防劑，其含有嗜酸性球去除劑作為有效成分，且其特徵在於：於放射線治療中，增加治療對象患者之放射線之耐受劑量，延長放射線治療之期間，及/或抑制伴隨放射線治療之放射線傷害。
15. 一種伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防劑，其含有嗜酸性球去除劑作為有效成分，且其特徵在於：於放射線治療中，使治療對象患者之放射線之耐受劑量增加5%以上。
16. 如請求項14或15之治療或預防劑，其中嗜酸性球去除劑係包含分別含有序列編號1～3所表示之胺基酸序列之H鏈CDR1～3及分別含有序列編號4～6所表示之胺基酸序列之L鏈CDR1～3的抗IL-5R抗體或其片段。
17. 一種伴隨放射線曝射之放射線傷害之治療或預防方法，其包括投予含有嗜酸性球去除劑作為有效成分之治療劑或預防劑之程序。
18. 如請求項17之治療或預防方法，其中嗜酸性球去除劑係包含分別含有序列編號1～3所表示之胺基酸序列之H鏈CDR1～3及分別含有序列編號4～6所表示之胺基酸序列之L鏈CDR1～3的抗IL-5R抗體或其片段。
19. 一種放射線治療方法，其特徵在於使用嗜酸性球去除劑。
20. 如請求項19之放射線治療方法，其降低由放射線曝射所引起之放射線傷害。
21. 如請求項20之放射線治療方法，其中放射線曝射係伴隨放射線治療之放射線曝射。
22. 如請求項19至21中任一項之放射線治療方法，其包括與未投予嗜酸性球去除劑時相比高5%以上之1次劑量及/或合計劑量之放射線之照射。
23. 如請求項19至22中任一項之放射線治療方法，其包括次數較未投予嗜酸性球去除劑時多之放射線之照射。
24. 如請求項19至23中任一項之放射線治療方法，其包括較耐受劑量高5%以上之劑量之放射線之照射。
25. 如請求項19至24中任一項之放射線治療方法，其中放射線治療係針對選自由小腸癌、大腸癌、胃腸道間質腫瘤(GIST)、消化道類癌、胃癌、食道癌、肝癌、膽囊-膽道癌、胰臟癌、胰臟-消化道神經內分泌腫瘤、蘭格漢氏細胞組織細胞增生症、腎細胞癌、腎盂-輸尿管癌、腎上腺腫瘤、骨肉瘤、軟組織肉瘤、惡性淋巴瘤、膀胱癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸瘤、陰莖癌、子宮體癌、宮頸癌、子宮腫瘤、卵巢腫瘤、女性生殖器癌、肺癌、胸腺腫瘤、間皮瘤、乳癌、造血器官腫瘤、白血病、骨髓增殖性疾病及多發性骨髓瘤所組成之群中的任一種癌症之放射線治療。
26. 如請求項19至25中任一項之放射線治療方法，其中嗜酸性球去除劑係包含分別含有序列編號1～3所表示之胺基酸序列之H鏈CDR1～3及分別含有序列編號4～6所表示之胺基酸序列之L鏈CDR1～3的抗IL-5R抗體或其片段。
27. 一種癌症之治療方法，其包括併用嗜酸性球去除劑之投予及放射線之照射。
28. 如請求項27之癌症之治療方法，其中放射線之照射係以與未投予嗜酸性球去除劑時相比高5%以上之1次劑量及/或合計劑量進行。
29. 如請求項27或28之癌症之治療方法，其中放射線之照射係以較耐受劑量高5%以上之劑量進行。
30. 如請求項27至29中任一項之癌症之治療方法，其中放射線之照射係以較未投予嗜酸性球去除劑時多之次數進行。
31. 如請求項27至30中任一項之癌症之治療方法，其中癌症係選自由小腸癌、大腸癌、胃腸道間質腫瘤(GIST)、消化道類癌、胃癌、食道癌、肝癌、膽囊-膽道癌、胰臟癌、胰臟-消化道神經內分泌腫瘤、蘭格漢氏細胞組織細胞增生症、腎細胞癌、腎盂-輸尿管癌、腎上腺腫瘤、骨肉瘤、軟組織肉瘤、惡性淋巴瘤、膀胱癌、尿道癌、前列腺癌、睾丸瘤、陰莖癌、子宮體癌、宮頸癌、子宮腫瘤、卵巢腫瘤、女性生殖器癌、肺癌、胸腺腫瘤、間皮瘤、乳癌、造血器官腫瘤、白血病、骨髓增殖性疾病及多發性骨髓瘤所組成之群中的任一種癌症。
32. 如請求項27至31中任一項之癌症之治療方法，其中嗜酸性球去除劑係包含分別含有序列編號1～3所表示之胺基酸序列之H鏈CDR1～3及分別含有序列編號4～6所表示之胺基酸序列之L鏈CDR1～3的抗IL-5R抗體或其片段。