TW201813668A

TW201813668A - 於淋巴行性藥劑投予法中有效之藥劑

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Publication number: TW201813668A
Application number: TW106129854A
Authority: TW
Inventors: 小玉哲也; 森士朗; 野原剛
Original assignee: 國立大學法人東北大學; 日商養樂多本社股份有限公司
Priority date: 2016-10-05
Filing date: 2017-08-31
Publication date: 2018-04-16
Also published as: US11559526B2; EP3524269A4; US20230119275A1; JPWO2018066278A1; AU2017340350B2; BR112019006949A2; RU2759640C2; KR20190064570A; CA3039442A1; JP6960637B2; US20200038400A1; EP3524269B1; CN110022899A; RU2019109965A3; EP3524269A1; KR102431011B1; RU2019109965A; AU2017340350B9; WO2018066278A1; TWI754666B

Abstract

本發明提供一種於將抗癌劑進行淋巴結內投予之淋巴行性藥劑投予中適宜之醫藥組合物。本發明之供淋巴結內投予之癌症治療或預防性治療用醫藥組合物，係將選自代謝拮抗劑及植物鹼系抗癌劑中之1種以上之抗癌劑設為有效成分。

Description

於淋巴行性藥劑投予法中有效之藥劑

本發明係關於一種適於淋巴行性藥劑投予法之醫藥組合物。

癌症係日本人之每二人中有一人會罹患之疾病，癌症患者之死因有9成起因於轉移。以乳癌或頭頸部癌為首之癌症多數係經由淋巴管轉移至所屬淋巴結。最初招致轉移之淋巴結被稱為前哨淋巴結(sentinel lymph node)。於轉移淋巴結之治療中，除淋巴結清除術或放射線治療外，一般為向靜脈注射抗癌劑之全身化學療法，但如抗癌劑之低分子容易於位於腫瘤周圍之間質之毛細血管中被再吸收，因此全身化學療法未必能獲得充分之治療成果。近年來，本發明者等人成功確立了具有與人類淋巴結同等之大小之特殊小鼠。而且發現，於將癌細胞移入至該小鼠之淋巴結(髂骨下淋巴結(SiLN))而使之轉移至固有腋窩淋巴結(PALN)之淋巴結轉移模型中，自髂骨下淋巴結(SiLN)投予阿黴素之情形時，於發生癌症之固有腋窩淋巴結(PALN)中，發揮出抗癌作用(非專利文獻1)。 [先前技術文獻] [非專利文獻] [非專利文獻1]Shigeki Kato, Shiro Mori, Tetsuya Kodama、Journal of Cancer 2015, 6(12): 1282-1294.

[發明所欲解決之問題] 本發明之目的在於提供一種將抗癌劑進行淋巴結內投予之情形之更適合之醫藥組合物。 [解決問題之技術手段] 本發明者等人鑒於該實際情況進行研究後，發現代謝拮抗劑或植物鹼系抗癌劑於進行淋巴結內投予之情形時以少量即可發揮優異之抗腫瘤活性，作為用於淋巴結內投予之藥劑更有用，從而完成了本發明。即，本發明係關於以下之(1)～(9)。 (1)一種供淋巴結內投予之癌症之治療或預防性治療用醫藥組合物，其將選自代謝拮抗劑及植物鹼系抗癌劑中之1種以上之抗癌劑設為有效成分。 (2)如(1)所記載之醫藥組合物，其中代謝拮抗劑為5-氟尿嘧啶或其鹽。 (3)如(1)或(2)所記載之醫藥組合物，其中植物鹼系抗癌劑為選自伊立替康、SN-38、歐洲紫杉醇及該等之鹽中之1種以上。 (4)如(1)至(3)中任一項所記載之醫藥組合物，其中投予對象之淋巴結為位於以治療或預防性治療為目的之淋巴結或該淋巴結所屬之淋巴管網絡上游之淋巴結。 (5)如(1)至(4)中任一項所記載之醫藥組合物，其中單次投予量以代謝拮抗劑計為1 ng～100 mg及/或以植物鹼系抗癌劑計為1 ng～20 mg。 (6)如(1)至(5)中任一項所記載之醫藥組合物，其黏度為40 mPa・s以下。 (7)如(1)至(5)中任一項所記載之醫藥組合物，其黏度為1～10 mPa・s。 (8)一種選自代謝拮抗劑及植物鹼系抗癌劑中之1種以上之抗癌劑之用途，其係用以製造供淋巴結內投予之癌症之治療或預防性治療用醫藥組合物。 (9)一種醫藥組合物，其包含選自代謝拮抗劑及植物鹼系抗癌劑中之1種以上之抗癌劑，且用以藉由淋巴結內投予而進行癌症之治療或預防性治療。 [發明之效果] 本發明之用於淋巴結內投予之醫藥組合物以低用量即可發揮優異之抗腫瘤效果。又，藉由投予至位於淋巴管網絡之上游之淋巴結內，可使位於下游之淋巴結亦成為治療對象。藉此，可將處於轉移初期階段之淋巴結或轉移之危險性較高之淋巴結設為治療或預防性治療之對象。

本發明之醫藥組合物含有選自代謝拮抗劑及植物鹼系抗癌劑中之1種以上之抗癌劑，且被局部投予至淋巴結內。作為代謝拮抗劑，例如除5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-FU之前藥(例如喃氟啶或其鹽)、卡培他濱或其鹽、TS-1(亦稱為S-1，對喃氟啶併用調節劑而成之複合劑)、卡莫氟、去氧氟尿苷等氟化嘧啶系抗癌劑外，可列舉：吉西他濱、阿糖胞苷、依諾他濱、巰基嘌呤、氟達拉濱、克拉屈濱、甲胺喋呤、愛甯達、羥基脲、奈拉濱、噴司他丁或該等之前藥等，更佳為使5-氟尿嘧啶存在於生物內之氟化嘧啶系抗癌劑，尤佳為5-氟尿嘧啶或其鹽。此處，作為鹽，可列舉藥學上容許之與無機酸(例如鹽酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、磷酸)或有機酸(例如甲酸、乙酸、丙酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、乳酸、蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、甲磺酸)之鹽。作為植物鹼系抗癌劑，例如可列舉：長春新鹼、長春花鹼、長春地辛、長春瑞濱、依託泊苷、伊立替康或其活性代謝物或其等之鹽、拓樸替康、索布佐生、歐洲紫杉醇、紫杉醇、紫杉醇注射劑、埃立布林等，較佳為伊立替康或其代謝物或其等之鹽。作為伊立替康之活性代謝物，可列舉7-乙基-10-羥基喜樹鹼(SN-38)。作為伊立替康之鹽，可列舉上述藥學上容許之與無機酸或有機酸之鹽，較佳為鹽酸鹽。本發明之醫藥組合物之單位投予劑型中之抗癌劑之含量根據其種類而有所不同，為1 ng～1000 mg，較佳為10 ng～100 mg，更佳為100 ng～10 mg，更佳為1 μg～1 mg。本發明之醫藥組合物係投予至淋巴結內，故而較佳為可注射至淋巴結內之劑型。作為可注射之劑型，可列舉可注射之溶液、可注射之懸浮液、可注射之乳化液、可注射之凝膠、可注射之固體形態。所謂可注射之固體形態，可列舉與注射用水、注射用生理食鹽水、注射用葡萄糖液等溶劑混合而可於使用時以淋巴結內注射之形式使用之冷凍乾燥製劑或粉末填充製劑。本發明之醫藥組合物除上述抗癌劑外，可包含藥學上容許之載體、稀釋劑或賦形劑。於此情形時，藥學上容許之載體、稀釋劑或賦形劑可自水溶性溶劑或油性溶劑、分散劑、等張劑、防腐劑、溶解劑、穩定劑等中適當選擇。此處，作為水溶性溶劑，例如可列舉蒸餾水、生理食鹽水、林葛爾氏液或磷酸鹽緩衝液(PBS)等。作為油溶性溶劑，例如可列舉橄欖油、蓖麻油、芝麻油、棉籽油、玉米油等植物油。作為分散劑，例如可列舉tween20或tween80、聚乙二醇、羧甲基纖維素、海藻酸鈉等。作為等張劑，例如可列舉氯化鈉、甘油、山梨醇、葡萄糖等。作為溶解劑，例如可列舉水楊酸鈉、泊洛沙姆(Poloxamer)、乙酸鈉等。作為防腐劑，例如可列舉對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、苄醇、氯丁醇、苯甲酸鈉、苯酚等。作為穩定劑，例如可列舉人血清白蛋白、牛血清白蛋白等白蛋白。該醫藥組合物可使用公知之製藥技術製備本發明之抗癌劑。例如，可藉由使本發明之抗癌劑與上述分散劑、等張劑、防腐劑、溶解劑、穩定劑等一併溶解、懸浮或乳化於水溶性溶劑或油溶性溶劑而製備。又，就腫瘤縮小效果之方面而言，本發明之醫藥組合物之黏度較佳為40 mPa・s以下，更佳為30 mPa・s以下，更佳為20 mPa・s以下，更佳為10 mPa・s以下。又，較佳為0.5 mPa・s以上，更佳為1 mPa・s以上。例如，較佳為0.5～40 mPa・s，更佳為0.5～30 mPa・s，更佳為0.5～20 mPa・s，更佳為0.5～10 mPa・s，進而較佳為1～10 mPa・s。黏度可如下述實施例所示，於20℃下使用振動黏度計(例如，音叉振動式黏度計＜SV-1A、A&D股份有限公司製造＞)進行測定。黏度之調整一般可於注射製劑中使用作為增黏劑使用之各種親水性聚合物而進行。具體而言，例如可列舉：纖維素、直鏈澱粉、果膠、明膠、糊精、海藻酸鹽等直鏈狀之多糖類；纖維素衍生物(甲基纖維素(MC)、羥丙基纖維素(HPC)及羥丙基甲基纖維素(HPMC)等羥烷基纖維素、羧烷基纖維素、以及包含羧甲基纖維素(CMC)之該等之鹽等)；葡糖胺聚醣(透明質酸及其鹽等非硫酸化葡糖胺聚醣、脫硫酸化肝素、脫硫酸化軟骨素硫酸、及脫硫酸化皮膚素硫酸等)；半乳甘露聚糖(瓜爾膠、葫蘆巴膠、塔拉膠、刺槐豆膠、及角豆膠等)；卡波姆；聚丙烯酸；聚卡波非；聚乙烯吡咯啶酮；聚丙烯醯胺；聚乙烯醇；聚乙酸乙烯酯之衍生物及混合物，此外，可使用亦可作為穩定劑、界面活性劑、懸浮劑、乳化劑、分散劑、溶劑、溶解劑、溶解助劑等使用之聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯類，就腫瘤縮小效果之方面而言，較佳為使用聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯類。作為聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯，較佳為聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯(Polysorbate20、Tween20)、聚氧乙烯山梨醇酐單硬脂酸酯(Polysorbate60、Tween60)、聚氧乙烯山梨醇酐三硬脂酸酯(Polysorbate65、Tween65)、聚氧乙烯山梨醇酐油酸酯(Polysorbate80、Tween80)，更佳為聚氧乙烯山梨醇酐油酸酯。如此製備之本發明之醫藥組合物係局部投予至患者之淋巴結內。此處，成為投予對象之淋巴結可為以治療或預防性治療為目的之淋巴結(目標淋巴結)本身，或位於該淋巴結所屬之淋巴管網絡上游之淋巴結。具體而言，例如可列舉腫瘤細胞自原發病灶移動而最初發生轉移之前哨淋巴結、或位於前哨淋巴結之下游之淋巴結(二次淋巴結)、位於原發病灶周圍之附屬淋巴結之上游之淋巴結、位於附屬淋巴結所屬之淋巴管網絡之上游之淋巴結等。此處，目標淋巴結有無癌症均可。例如，於進行淋巴結清除之前，向清除域內之淋巴結(上游側淋巴結)投予本發明之醫藥組合物，經由淋巴管網絡使抗癌劑送達至清除域外之淋巴結(下游側淋巴結)而實施清除，藉此可實現下游側淋巴結之預防性治療。關於本發明之醫藥組合物向淋巴結之投予，只要本發明之醫藥組合物可注入至淋巴結內，則其方法並無限定，可切開患者之皮膚而注入投予至露出之淋巴結，亦可自患者之皮膚上注射投予至推測為淋巴結之位置之部位。如下述實施例所示，5-氟尿嘧啶、伊立替康及歐洲紫杉醇藉由進行淋巴結內投予，以少量之投予即可發揮比阿黴素優異之抗腫瘤效果。關於對癌細胞株之細胞增殖抑制活性(GI₅₀ 值)，已知阿黴素遠遠強於5-氟尿嘧啶及伊立替康，與歐洲紫杉醇為相同程度(參照比較例)，故而藉由5-氟尿嘧啶、伊立替康或歐洲紫杉醇之淋巴結內投予所獲得之抗腫瘤效果完全無法由先前之見解所預測。又，該抗腫瘤效果係藉由位於較預防或治療目的之淋巴結更上游之淋巴結內投予而發揮。由此，本發明之醫藥組合物可將處於轉移初期階段之淋巴結或轉移之危險性較高之淋巴結設為治療或預防性治療之對象，對於防止復發等尤為有用。再者，於本說明書中，所謂「治療」係指具有癌症之對象之治療(即時治療)，意指使其狀態、或因其狀態而產生之1種或複數種症狀改善、減輕或消失。所謂「預防性治療」意指雖有成為癌症之風險但目前不具有其狀態或症狀之對象之治療。作為可藉由投予本發明之醫藥組合物而治療之惡性腫瘤之種類，只要為對本發明之抗癌劑顯示敏感性者，則並無特別限制，例如可列舉：頭頸部癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、肝癌、膽囊-膽管癌、胰腺癌、肺癌、乳癌、膀胱癌、前列腺癌、子宮癌、咽癌、食道癌、腎癌、卵巢癌等。尤其對結腸癌、直腸癌、乳癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肺癌、胰腺癌、及膽囊-膽管癌可期待較高之效果。本發明之醫藥組合物對人體之投予頻度及投予量可適當調整或變更，作為投予間隔，例如可列舉1～42日1次，較佳為1～28日1次，更佳為1～21日1次。關於單次投予量，以代謝拮抗劑計為1 ng～100 mg，較佳為10 ng～10 mg，更佳為100 ng～1 mg，為先前之全身投予所使用之量之1/10⁹ ～1/3左右。又，以植物鹼系抗癌劑計為1 ng～20 mg，較佳為10 ng～10 mg，更佳為100 ng～1 mg，為先前之全身投予所使用之量之1/10⁷ ～2/3左右。以下，藉由實施例更詳細地說明本發明，但本發明並不限定於該等實施例。 [實施例] 實施例1 5-FU之淋巴結內投予之抗腫瘤活性 1.材料 (a)使用動物依據已經報告(J Immunol Methods 2013; 389 (1-2): 69-78 doi 10.1016/j. jim. 2013. 01. 004.)之方法，製作淋巴結腫脹模型小鼠MXH10/Mo/lpr/lpr(MXH10/Mo/lpr)。於以下實施例中，使用雄雌合計5隻之15～18週齡之該模型小鼠。 (b)腫瘤細胞依據已經報告(PLoS One 2013; 8(2): e55797 doi 10.1371/ journal. pone. 0055797)之方法，製作來自小鼠纖維芽細胞之KM-Luc/GFP細胞。KM-Luc/GFP細胞係將pEGFPLuc質體轉染至作為來自MRL/MpTn-gld/gld小鼠之纖維芽細胞之腫瘤細胞之MRL/N1細胞而成者，恆常地表現螢光素酶基因及綠色螢光基因。於以下實施例中，使用FBS(胎牛血清)10%、L-Glutamine-P.S.溶液1%(Thermo Fisher Scientific製造)、包含0.5%之G418之Dulbecco's modified Eagle's medium(Sigma-Aldrich製造)培養該細胞並使用。 (c)被試驗藥 5-FU係使用5-FU注射液250 mg(Kyowa Hakko Kirin製造)。以相對於小鼠之體重達到0 μg/g、0.1 μg/g、1 μg/g、10 μg/g之方式使用生理食鹽水而進行濃度調整。 2.方法 (a)固有腋窩淋巴結轉移模型小鼠之製作使於-80℃保存之腫瘤細胞融解之後，使用PBS(磷酸緩衝生理食鹽水)將經總計2次繼代之KM-Luc/GFP細胞濃度調整至1.0×10⁶ cells/mL。其後，與基質膠(基底膜基質，Becton Dickinson and Co.製造)混合而稀釋成3.3×10⁵ cells/mL之後，於小鼠之髂骨下淋巴結接種60 μL(圖1)。將接種腫瘤細胞之日設為day0。 (b)活體內之腫瘤細胞增殖評價使用活體發光成像系統(IVIS，Caliper Life Science製造)對髂骨下淋巴結及固有腋窩淋巴結之腫瘤細胞之增殖率進行測定。測定日係於腫瘤細胞接種後第0、6、9日(day0、day6、day9)進行。將調整至15 mg/mL之螢光素(Promega製造)200 μL注射至小鼠之腹腔，於10分鐘後使用IVIS測定螢光素酶活性。 (c)自副腋窩淋巴結之藥劑投予對腫瘤細胞接種後day6之小鼠中固有腋窩淋巴結中之螢光素酶活性為1.0×10⁶ photos/sec以上之小鼠，使用注射泵(KDS100，Muromachi製造)以10 μL/min之速度將120 μL之5-FU投予至副腋窩淋巴結(圖1)。 (d)抗腫瘤活性之評價藉由下述(式1)將day6及day9之螢光素酶活性標準化(normalized)。其後，藉由下述(式2)算出標準化之day9與day6之螢光素酶活性比。對於所獲得之活性比，藉由下述(式3)計算將0 μg/g投予下之標準化之day9與day6之螢光素酶活性比設為100時的5-FU之各濃度投予下之標準化之day9與day6之螢光素酶活性比。 (式1) 標準化之day6或day9之螢光素酶活性＝((day6或day9之螢光素酶活性)/(day0之螢光素酶活性)) (式2) 標準化之day9與day6之螢光素酶活性比＝((標準化之day9之螢光素酶活性)/(標準化之day6之螢光素酶活性)) (式3) 將0 μg/g投予下之標準化之day9與day6之螢光素酶活性比設為100時的5-FU之各濃度投予下之標準化之day9與day6之螢光素酶活性比＝((5-FU之各濃度投予下之標準化之day9與day6之螢光素酶活性比)/(0 μg/g投予下之標準化之day9與day6之螢光素酶活性比)×100) 3.結果將結果示於表1。 [表1] 藉由5-FU之投予，螢光素酶活性比大幅降低，且可確認腫瘤縮小及極少量之投予(0.1 μg/g)亦具有90%以上之腫瘤縮小效果。5-FU係自位於淋巴結之上游之副腋窩淋巴結投予，抗腫瘤活性於下游之固有腋窩淋巴結得到確認。根據該情況，暗示將少量之5-FU投予至淋巴結、尤其是上游之淋巴結對於癌症之治療、防止復發、防止轉移等有用，尤其對下游之淋巴結之治療、防止復發等效果較高。又，由於極少量亦具有抗腫瘤活性，故而暗示本方法之副作用較少，安全性較高。實施例2 伊立替康鹽酸鹽(CPT-11)之淋巴結內投予之抗腫瘤活性 1.材料使用動物、使用細胞係使用與實施例1相同者。作為被試驗藥，CPT-11係使用伊立替康鹽酸鹽(Yakult總公司製造)。以相對於小鼠之體重達到0 μg/g、0.5 μg/g、5 μg/g之方式使伊立替康鹽酸鹽溶解於生理食鹽水並調整濃度。 2.方法除將投予至副腋窩淋巴結之被試驗藥變更為CPT-11以外，均以與實施例1相同之方法進行。 3.結果將結果示於表2。 [表2] 藉由CPT-11之投予，螢光素酶活性比大幅降低，且可確認腫瘤縮小及極少量之投予(0.5 μg/g)亦具有90%以上之腫瘤縮小效果。CPT-11係自位於淋巴結之上游之副腋窩淋巴結投予，抗腫瘤活性於下游之固有腋窩淋巴結得到確認。根據該情況，暗示將少量之CPT-11投予至淋巴結尤其是上游之淋巴結對癌症之治療、防止復發等有用，尤其對下游之淋巴結之治療、防止復發等效果較高。又，由於極少量亦具有抗腫瘤活性，故而暗示本方法之副作用較少，安全性較高。實施例3 歐洲紫杉醇之淋巴結內投予之抗腫瘤活性 1.材料 (a)使用動物使用動物係使用與實施例1相同者。 (b)腫瘤細胞依據已經報告(J Immunol Methods 2013 Mar 29; 389 (1-2): 69-78. doi: 10.1016/ j. jim. 2013. 01. 004.)之方法，製作來自小鼠乳癌細胞之FM3A-Luc。FM3A-Luc細胞係使用電穿孔法將pGL4.51基因導入至FM3A細胞所獲得之細胞，恆常地表現螢光素酶基因。於以下實施例中，使用FBS(胎牛血清)10%、L-Glutamine-P.S.溶液1%(Thermo Fisher Scientific製造)、包含0.5%之G418之RPMI-1640(Sigma-Aldrich公司製造)培養該細胞並使用。 (c)被試驗藥歐洲紫杉醇係使用Taxotere點滴靜脈注射用80 mg(Sanofi製造)。將2 mL之Taxotere點滴靜脈注射用80 mg溶解於13%乙醇 6mL而製備10 mg/mL之Stock溶液，其後，以相對於小鼠之體重達到0 μg/g、1 μg/g、10 μg/g之方式使Stock溶液溶解於殺菌水並調整濃度。 2.方法 (a)固有腋窩淋巴結轉移模型小鼠之製作使於-80℃保存之腫瘤細胞融解之後，使用PBS(磷酸緩衝生理食鹽水)將經總計2次繼代之FM3A-Luc細胞濃度調整至1.0×10⁶ cells/mL。其後，與基質膠(基底膜基質，Becton Dickinson and Co.製造)混合而稀釋成3.3×10⁵ cells/mL之後，將60 μL接種至小鼠之髂骨下淋巴結(圖1)。將接種腫瘤細胞之日設為day0。 (b)活體內之腫瘤細胞增殖評價使用活體發光成像系統(IVIS，Caliper Life Science製造)對髂骨下淋巴結及固有腋窩淋巴結之腫瘤細胞之增殖率進行測定。測定日係於腫瘤細胞接種後第0、7、14、17、20、23、26、29日進行。將調整至15 mg/mL之螢光素(Promega製造)200 μL注射至小鼠之腹腔，於10分鐘後使用IVIS測定螢光素酶活性。 (c)自副腋窩淋巴結之藥劑投予對確認固有腋窩淋巴結處之螢光素酶活性為1.0×10⁶ photos/sec以上之小鼠，於確認之翌日，使用注射泵(KDS100，Muromachi製造)以10 μL/min之速度將歐洲紫杉醇120 μL投予至副腋窩淋巴結(圖1)。 (d)抗腫瘤活性之評價將歐洲紫杉醇投予日定義為day0^T ，且藉由下述(式4)將day3^T (歐洲紫杉醇投予後第3日)及day6^T (歐洲紫杉醇投予後第6日)之螢光素酶活性標準化(normalized)。其後，藉由下述(式5)算出標準化之day3^T 或day6^T 與day-1^T (確認固有腋窩淋巴結處之螢光素酶活性為1.0×10⁶ photos/sec以上之日，歐洲紫杉醇投予之前日)之螢光素酶活性比。對於所獲得之活性比，藉由下述(式6)計算將0 μg/g投予下之標準化之day3^T 或day6^T 與day-1^T 之螢光素酶活性比設為100時的歐洲紫杉醇之各濃度投予下之標準化之day3^T 或day6^T 與day-1^T 之螢光素酶活性比。 (式4) 標準化之day3^T 、day6^T 或day-1^T 之螢光素酶活性＝((day3^T 、day6^T 或day-1^T 之螢光素酶活性)/(day0之螢光素酶活性)) (式5) 標準化之day3^T 或day6^T 與day-1之螢光素酶活性比＝((標準化之day3^T 或day6^T 之螢光素酶活性)/(標準化之day-1^T 之螢光素酶活性)) (式6) 將0 μg/g投予下之標準化之day3^T 或day6^T 與day-1^T 之螢光素酶活性比設為100時的歐洲紫杉醇之各濃度投予下之標準化之day3^T 或day6^T 與day-1^T 之螢光素酶活性比＝((歐洲紫杉醇之各濃度投予下之標準化之day3^T 或day6^T 與day-1^T 之螢光素酶活性比)/(0 μg/g投予下之標準化之day3^T 或day6^T 與day-1^T 之螢光素酶活性比)×100) 3.結果將結果示於表3。 [表3] N.D. : 無資料藉由歐洲紫杉醇之投予，螢光素酶活性比大幅降低，且可確認腫瘤縮小及極少量之投予(1 μg/g)亦於治療後第6日具有90%以上之腫瘤縮小效果。歐洲紫杉醇係自位於淋巴結之上游之副腋窩淋巴結投予，抗腫瘤活性於下游之固有腋窩淋巴結得到確認。根據該情況，暗示將少量之歐洲紫杉醇投予至淋巴結尤其是上游之淋巴結對癌症之治療、防止復發、防止轉移等有用，尤其對下游之淋巴結之治療、防止復發等效果較高。又，由於極少量亦具有抗腫瘤活性，故而暗示本方法之副作用較少，安全性較高。實施例4 使歐洲紫杉醇之黏度變化時之淋巴結內投予之抗腫瘤活性 1.材料使用動物係使用與實施例1相同者。使用細胞係使用與實施例4相同者。歐洲紫杉醇係使用Taxotere點滴靜脈注射用80 mg(Sanofi製造)。將2 mL之Taxotere點滴靜脈注射用80 mg溶解於13%乙醇 6 mL而製備10 mg/mL之Stock溶液。其後，以歐洲紫杉醇之濃度相對於小鼠之體重達到1 μg/g之方式以表4之調配比製備溶液A、溶液B及溶液C。 [表4] ※ Polysorbate80(polysorbate80，日油股份有限公司) 2.方法 (a)固有腋窩淋巴結轉移模型小鼠之製作、(b)活體內之腫瘤細胞增殖評價、(c)自副腋窩淋巴結之藥劑投予係利用與實施例4相同之方法進行。 (d)抗腫瘤活性之評價對於溶液A、B或C，將投予日定義為day0^T 並藉由下述(式7)計算相對於day-1^T (確認固有腋窩淋巴結處之螢光素酶活性為1.0×10⁶ photos/sec以上之日、歐洲紫杉醇投予之前日)之day9^T 之螢光素酶活性。 (式7) 相對於day-1^T 之day9^T 之螢光素酶活性＝((day9^T 之螢光素酶活性)/(day-1^T 之螢光素酶活性)) (e)黏度之測定使用音叉振動式黏度計(SV-1A：黏度測定範圍：0.3～10,000 mPa・s、SV-1H：黏度測定範圍：0.3～1,000 mPa・s、A&D股份有限公司製造)，依據日本藥典黏度測定法對溶液A、溶液B及溶液C之黏度進行測定。 (f)病理圖照片之拍攝於溶液B或溶液C投予後之day9T時，使用倒立顯微鏡BX51(Olympus公司製造)利用明視野觀察法拍攝固有腋窩淋巴結及副腋窩淋巴結之病理圖照片。拍攝倍率係於2倍及10倍進行。 3.結果 (a)黏度與螢光素酶活性之關係將結果示於表5。 [表5] 藉由式7計算出之螢光素酶活性為相對於day-1^T 之day9^T 之螢光素酶活性，因此顯示出數值越小則day9^T 時之腫瘤越縮小之情況。顯示溶液A及溶液B之螢光素酶活性較低，腫瘤縮小效果較高。另一方面，溶液C幾乎未確認到腫瘤縮小效果。根據該情況，認為為了於歐洲紫杉醇之淋巴結投予中顯示腫瘤縮小效果，黏度較佳為40 mPa・s以下、尤其是1～10 mPa・s。 (b)day9^T 時之溶液B及溶液C之病理圖照片將投予溶液B或溶液C後day9^T 時之固有腋窩淋巴結之病理圖照片示於圖2及圖3。於溶液B中，於淋巴結皮質表層發現腫瘤細胞之殘留，但於相當於淋巴結邊緣竇之部位未發現腫瘤細胞。另一方面，於溶液C中，於淋巴結實質及邊緣竇發現腫瘤之浸潤、增殖。藉此，黏度相關之腫瘤縮小效果亦可由固有腋窩淋巴結之病理圖照片進行確認。再者，利用相同之方法拍攝溶液C之投予部位即副腋窩淋巴結之病理圖照片後，以淋巴結髓質為中心發現廣泛之壞死及纖維化，變異甚至波及包含淋巴結皮質及輸出淋巴管基部在內之淋巴結被膜外，暗示輸出淋巴管之通過障礙(圖4)。認為其原因在於溶液C為高黏度，因此於投予至位於上游之副腋窩淋巴結時，不流動至下游之淋巴結而滯留於副腋窩淋巴結。因此，認為不僅歐洲紫杉醇，對於作為相同植物鹼系抗癌劑之CPT-11或SN-38、作為代謝拮抗劑之5-FU，於進行淋巴結投予之情形時，均需要將藥劑之黏度設為40 mPa・s以下。比較例阿黴素之淋巴結內之投予之抗腫瘤活性 1.材料使用動物、使用細胞係使用與實施例1相同者。作為被試驗藥，阿黴素係使用阿黴素鹽酸鹽(Wako製造)。以相對於小鼠之體重達到0 μg/g、0.1 μg/g、1 μg/g、10 μg/g之方式使用生理食鹽水而進行濃度調整。 2.方法除將投予至副腋窩淋巴結之被試驗藥變更為阿黴素以外，均利用與實施例1相同之方法進行。 3.結果將結果示於表6。為了將阿黴素之抗腫瘤活性與5-FU、CPT-11及歐洲紫杉醇之抗腫瘤活性進行比較，將實施例1～3之結果一併示於表6。 [表6] ^＊ 5-FU、CPT-11及阿黴素之螢光素酶活性比係藉由式3計算。歐洲紫杉醇之螢光素酶活性比係藉由式6計算。藉由阿黴素之投予，螢光素酶活性比降低，但腫瘤之縮小率較5-FU、CPT-11及歐洲紫杉醇更小。尤其於阿黴素中，於10 μg/g下腫瘤之縮小率為25%左右，於結果最佳之1 μg/g下，腫瘤之縮小率亦未達60%，但於5-FU及CPT-11中，即便於未達1 μg/g之投予量下腫瘤之縮小率亦顯示90%以上，於歐洲紫杉醇中，於10 μg/g之投予下顯示80%以上之腫瘤縮小率。藉此，暗示5-FU、CPT-11及歐洲紫杉醇之效果較阿黴素更高。對癌細胞株之細胞增殖抑制活性(GI₅₀ 值)如表7所示，已知阿黴素與5-FU及CPT-11相比強約10～1000倍左右(對NIH DTP database(https://dtp.cancer.gov/dtpstandard/cancerscreeningdata/index.jsp)所記載之對各細胞株之GI₅₀ 值取平均值而算出)。又，關於歐洲紫杉醇，已知與阿黴素大致為相同程度。 [表7] 如表7所示，先前，認為阿黴素之效果較5-FU及CPT-11更高，與歐洲紫杉醇為相同程度，但於淋巴結投予之情形時，如表6所示，顯示5-FU、CPT-11及歐洲紫杉醇之抗腫瘤活性較阿黴素之投予更高，故而明白該等藥劑尤其適於淋巴結投予。 [產業上之可利用性] 根據本發明之醫藥組合物，可於清除前將抗癌劑投予至淋巴結而使抗癌劑亦流入至較所投予之淋巴結更下游之淋巴結，不僅可於目標淋巴結發揮抗癌作用，亦可使抗癌劑流入至具有微小之癌症轉移之可能性之其他淋巴結，可藉由殺死微小之癌症而防止復發。又，於利用手術無法清除之區域之淋巴結中存在癌症之情形時，無法利用外科手術治癒，但藉由使用本發明之醫藥組合物，可自上游之淋巴結使抗癌劑流動而進行無法清除之區域之淋巴結之治療。進而，關於本發明之醫藥組合物，所使用之抗癌劑之量較先前之全身投予所使用之量更少，因此副作用亦較少，安全性較高。

圖1係固有腋窩淋巴結轉移模型小鼠及使用該小鼠之藥劑投予之圖。藉由將腫瘤細胞移植至髂骨下淋巴結(SiLN)，經由淋巴管將腫瘤細胞之轉移誘導至固有腋窩淋巴結(PALN)。其次，藉由將藥劑投予至副腋窩淋巴結(AALN)，經由淋巴管將藥劑送達至固有腋窩淋巴結，對已轉移之腫瘤細胞進行治療。圖2係溶液B投予後day9^T 時之固有腋窩淋巴結之病理圖照片(a：2倍、b：10倍)。b係將a之□部分放大而成者，且cor表示淋巴結之皮質，T表示腫瘤。於淋巴結皮質表層發現腫瘤細胞之殘留，但於相當於淋巴結邊緣竇(marginal sinus)之部位未發現腫瘤細胞。圖3係溶液C投予後day9^T 時之固有腋窩淋巴結之病理圖照片(a：2倍、b：10倍)。b係將a之□部分放大而成者，且T表示腫瘤。於淋巴結實質及邊緣竇發現腫瘤之浸潤、增殖。圖4係溶液C投予後day9^T 時之副腋窩淋巴結之病理圖照片(a：2倍、b：10倍)。b係將a之□部分放大而成者，且F表示纖維化。以淋巴結髓質為中心發現廣泛之壞死及纖維化，變異甚至波及包含淋巴結皮質及輸出淋巴管基部在內之淋巴結被膜外，暗示輸出淋巴管之通過障礙。

Claims

一種供淋巴結內投予之癌症之治療或預防性治療用醫藥組合物，其係將選自代謝拮抗劑及植物鹼系抗癌劑中之1種以上之抗癌劑設為有效成分。
如請求項1之醫藥組合物，其中代謝拮抗劑為5-氟尿嘧啶或其鹽。
如請求項1或2之醫藥組合物，其中植物鹼系抗癌劑為選自伊立替康、SN-38、歐洲紫杉醇及其等之鹽中之1種以上。
如請求項1至3中任一項之醫藥組合物，其中投予對象之淋巴結為以治療或預防性治療為目的之淋巴結或位於該淋巴結所屬之淋巴管網絡上游之淋巴結。
如請求項1至4中任一項之醫藥組合物，其單次投予量以代謝拮抗劑計為1 ng～100 mg及/或以植物鹼系抗癌劑計為1 ng～20 mg。
如請求項1至5中任一項之醫藥組合物，其黏度為40 mPa・s以下。
如請求項1至5中任一項之醫藥組合物，其黏度為1～10 mPa・s。
一種選自代謝拮抗劑及植物鹼系抗癌劑中之1種以上之抗癌劑之用途，其係用以製造供淋巴結內投予之癌症之治療或預防性治療用醫藥組合物。
一種醫藥組合物，其包含選自代謝拮抗劑及植物鹼系抗癌劑中之1種以上之抗癌劑，且用以藉由淋巴結內投予而進行癌症之治療或預防性治療。