TW201805002A - 磷醯二胺嗎啉代寡聚物醫藥組合物 - Google Patents

Abstract

本文所提供係包含依替利森(Eteplirsen)之醫藥組合物。本文另外提供治療有需要之個體之肌肉疾病之方法，該方法包含向該個體投與本揭示內容之醫藥組合物。

Description

磷醯二胺嗎啉代寡聚物醫藥組合物

反義技術提供調節一或多種特定基因產物(包括選擇性剪接產物)之表現之手段，且在多種治療、診斷及研究應用中係唯一可用的。反義技術背後之原理在於與靶標核酸雜交之反義化合物(例如，寡核苷酸)藉助多種反義機制之任一者調節基因表現活性(例如轉錄、剪接或轉譯)。反義化合物之序列特異性使得其作為用於靶標驗證及基因功能化之工具以及選擇性調節疾病中所涉及基因之表現之治療劑而具吸引力。 杜興氏肌肉營養不良症(杜興氏肌肉營養不良症，DMD)係由蛋白質肌肉萎縮蛋白之表現缺陷而引起。編碼該蛋白質之基因含有79個外顯子，展開覆蓋DNA之超過2百萬個核苷酸。改變外顯子之閱讀框，或引入終止密碼子，或特徵在於移除全部框外外顯子或一或多個外顯子之重複之任何外顯子突變均有可能破壞功能性肌肉萎縮蛋白之產生，從而導致DMD。 測試用於治療DMD之剪接轉換寡核苷酸(SSO)之安全性及效能之近期臨床試驗係基於SSO技術以藉由剪接體之空間阻斷來誘導前mRNA之選擇式剪接(Cirak等人，2011；Goemans等人，2011；Kinali等人，2009；van Deutekom等人，2007)。然而，儘管已取得該等成功，但可用於治療DMD之藥物選擇有限。 依替利森(Eteplirsen)係磷醯二胺嗎啉代寡聚物(PMO)，其經設計以跳讀患有DMD之患者中人類肌肉萎縮蛋白基因之外顯子51，該等患者對外顯子51跳讀可修正以恢復閱讀框並產生肌肉萎縮蛋白之功能性較短形式。Sarepta, Therapeutics, Inc.向美國食品及藥品管理局(United States Food and Drug Administration，FDA)提交新藥申請(New Drug Application，NDA)，尋求對於治療對外顯子51跳讀可修正之患者之DMD之批准。Sarepta之NDA目前正在由FDA審查。 儘管在反義技術領域已獲得顯著進展，但業內仍需要包含寡核苷酸之醫藥調配物。

本文所提供係包含依替利森(Eteplirsen)之醫藥組合物，其中依替利森之濃度係每毫升醫藥組合物含有約50 mg。本文另外提供者係治療有需要之個體之肌肉疾病之方法，其包含向該個體投與本揭示內容之醫藥組合物。 因此，在一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 依替利森； b) 氯化鈉； c) 氯化鉀； d) 磷酸二氫鉀； e) 磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中依替利森之濃度係每毫升醫藥組合物含有約50 mg。 亦構想熟習此項技術者所通常已知之其他調配物質。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 40-60 mg依替利森； b) 6.4-9.6 mg氯化鈉； c) 0.16-0.24 mg氯化鉀； d) 0.16-0.24 mg磷酸二氫鉀； e) 0.91-1.37 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 80-120 mg依替利森； b) 12.8-19.2 mg氯化鈉； c) 0.32-0.48 mg氯化鉀； d) 0.32-0.48 mg磷酸二氫鉀； e) 1.02-1.54 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 400-600 mg依替利森； b) 64-96 mg氯化鈉； c) 1.6-2.4 mg氯化鉀； d) 1.6-2.4 mg磷酸二氫鉀； e) 9.0-14.0 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 本揭示內容之醫藥組合物包含濃度為約50 mg/mL醫藥組合物之依替利森。 在另一態樣中，本文所提供係治療有需要之個體之肌肉疾病之方法，其包含向該個體投與本文中所提供之醫藥組合物。

相關申請案 本申請案主張於2016年5月24日提出申請之美國臨時專利申請案第62/340,947號及於2016年12月2日提出申請之美國臨時專利申請案第62/429,160號之權益，該等申請案之每一者之全部內容皆係以引用的方式併入本文中。 本文所提供係包含依替利森之醫藥組合物。本文另外提供治療有需要之個體之肌肉疾病之方法，其包含向該個體投與本揭示內容之醫藥組合物。本文中所闡述之嗎啉代寡核苷酸(依替利森)相對於天然或未經修飾之寡核苷酸展示更強之對DNA及RNA之親和力，而不損害序列選擇性。在一些實施例中，本揭示內容之寡核苷酸會最小化或防止因RNase H所致之裂解。在一些實施例中，本揭示內容之反義寡核苷酸不活化RNase H。定義 下文列示用於闡述本揭示內容之各術語之定義。除非在特定情況下另有限制，否則當在整篇本說明書及申請專利範圍中個別地或作為較大基團之一部分使用該等術語時，該等定義適用於該等術語。 術語「載體結合」係指化學實體共價鏈接至載體介質。 術語「載體介質」係指包括(例如)寡聚物可在其上附接或在其上合成或可經修飾用於附接或合成寡聚物之任何粒子、珠粒或表面之任何材料。代表性基材包括(但不限於)無機載體及有機載體，例如玻璃及經修飾或功能化玻璃、塑膠(包括丙烯酸系樹脂、聚苯乙烯及苯乙烯與其他材料之共聚物、聚丙烯、聚乙烯、聚丁烯、聚胺基甲酸酯、特氟龍(TEFLON)等)、多醣、耐綸或硝化纖維素、陶瓷、樹脂、二氧化矽或基於二氧化矽之材料(包括矽及改質矽)、碳、金屬、無機玻璃、塑膠、光纖束及各種其他聚合物。對於一些實施例尤其可用之固體載體及固體表面係位於流動池裝置內。在本文中所闡述方法之一些實施例中，載體介質包含具有1%交聯二乙烯基苯之聚苯乙烯。 在一些實施例中，代表性載體介質包含至少一個用於附接或合成寡聚物之反應性位點。舉例而言，在一些實施例中，本揭示內容之載體介質包含一或多個能夠與用於附接或合成寡聚物之後續核苷或其他活化基團形成化學鍵之末端胺基或羥基。 適用於本文中所闡述方法之一些代表性載體介質包括(但不限於)以下：可控孔徑玻璃(CPG)；草醯基可控孔徑玻璃(例如，參見Alul等人，Nucleic Acids Research 1991, 19, 1527)；含二氧化矽之粒子，例如多孔玻璃珠粒及矽膠(例如由三氯-[3-(4-氯甲基)苯基]丙基矽烷與多孔玻璃珠粒之反應所形成者) (參見Parr及Grohmann，Angew. Chem. Internal. Ed. 1972, 11, 314；由Waters Associates, Framingham, Mass., USA以商標「PORASIL E」來銷售)；1,4-二羥基甲苯與二氧化矽之單酯(參見Bayer及Jung，Tetrahedron Lett. 1970, 51, 4503；由Waters Associates以商標「BIOPAK」來銷售)；TENTAGEL (例如，參見Wright等人，Tetrahedron Lett. 1993, 34, 3373)；交聯苯乙烯/二乙烯基苯共聚物珠粒狀基質，或POROS，即聚苯乙烯/二乙烯基苯之共聚物(可自PerSeptive Biosystems獲得)；可溶載體介質，例如聚乙二醇PEG (參見Bonora等人，Organic Process Research & Development 2000, 4, 225-231)；PEPS載體，其為具有側鏈長鏈聚苯乙烯(PS)接枝之聚乙烯(PE)膜(參見Berg等人，J. Am. Chem. Soc. 1989, 111, 8024及國際專利申請案WO 1990/02749)；二甲基丙烯醯胺與N,N’-雙丙烯醯基乙二胺(包括已知量之N-第三丁氧基羰基-β-丙胺醯基-N’-丙烯醯基六亞甲基二胺)交聯之共聚物(參見Atherton等人，J. Am. Chem. Soc. 1975, 97, 6584；Atherton等人，Bioorg. Chem. 1979, 8, 351；及Atherton等人，J. Chem. Soc. Perkin I 1981, 538)；經疏水性交聯苯乙烯聚合物塗覆之玻璃粒子(參見Scott等人，J. Chrom. Sci. 1971, 9, 577)；其上已接枝聚苯乙烯之氟化乙烯聚合物(參見Kent及Merrifield，Israel J. Chem. 1978, 17, 243及van Rietschoten，Peptides 1974, Y. Wolman編輯, Wiley and Sons, New York, 1975, 第113-116頁)；經丙烯酸羥基丙基酯塗覆之聚丙烯膜(Daniels等人，Tetrahedron Lett. 1989, 30, 4345)；丙烯酸接枝之聚乙烯棒(Geysen等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1984, 81, 3998)；含有傳統使用之聚合物珠粒之「茶包」(Houghten，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1985, 82, 5131)；及其組合。 術語「流動池裝置」係指包含表面(例如，固體表面)之室，一或多種流體試劑(例如，液體或氣體)可跨越該表面流動。 如本文中所使用之術語「治療(treating或treatment)」包含減輕、減少或緩解個體之至少一種症狀或實現疾病進展延遲之治療。舉例而言，治療係降低病症之一或若干種症狀或完全根除病症(例如肌肉營養不良症(例如，杜興氏肌肉營養不良症(Duchenne muscular dystrophy)))。在本揭示內容之含義內，術語「治療」亦表示阻止、延緩發作(即，疾病臨床表現之前之時期)或降低疾病發展或惡化之風險。術語「保護」在本文中用於適當地意指預防、延緩或治療(或以上全部)個體(例如，哺乳動物或人類)之疾病之發展、持續或加劇。如本文中所使用之術語「預防(prevent、preventing或prevention)」包含預防至少一種與所預防之狀態、疾病或病症相關聯或由其引起之症狀。 如本文中所使用之術語「個體」或「患者」意欲包括動物，其可患有肌肉疾病或任何直接或間接涉及肌肉疾病之病症或受其困擾。個體之實例包括哺乳動物，例如人類、猿、猴、狗、牛、馬、豬、綿羊、山羊、貓、小鼠、兔、大鼠及轉基因之非人類動物。在實施例中，個體係人類，例如患有肌肉疾病、處於患有肌肉疾病之風險下或潛在地可患有肌肉疾病之人類。 如本文中關於個體或患者所使用之「對外顯子51跳讀可修正」意欲包括在肌肉萎縮蛋白基因中具有適於外顯子51跳讀之各種突變之個體及患者。肌肉萎縮蛋白基因之以下外顯子中突變之非限制性實例適於外顯子51跳讀，該等外顯子包括(例如)：45-50、47-50、48-50、49-50、50、52、52-63 (荷蘭萊頓大學醫學中心(Leiden University Medical Center, The Netherlands)萊頓杜興氏肌肉營養不良症突變資料庫)。確定患者是否具有適於外顯子跳讀之肌肉萎縮蛋白基因中之突變係為熟習此項技術者所熟知(例如，參見Aartsma-Rus等人，Hum Mut 2009, 30, 293-299)。 除非另有說明，否則術語「包含」及「包括」在本文中係以其開放及非限制性之意義使用。 除非本文中另有指示或上下文明顯矛盾，否則在闡述本發明之上下文(尤其在下文申請專利範圍之上下文)中之術語「一(a及an)」及「該(the)」及類似指示物均應解釋為涵蓋單數及複數二者。當化合物、鹽及諸如此類以複數形式使用時，此亦指單一化合物、鹽或諸如此類。 術語「約」或「大約」通常為相關主題領域之熟習者所理解，但在某些情況下可意指在既定值或範圍之±10%內或±5%內。 「USP」係指美國藥典(United States Pharmacopeia)，其係以全文引用的方式併入本文中，且指示所鑑別之材料符合USP規範。 「NF」係指國家藥品集(National Formulary)，其係以全文引用的方式併入本文中，且指示所鑑別之材料符合NF規範。寡聚物 基於嗎啉代之寡聚物(包括反義寡聚物)詳細闡述於(例如)美國專利第5,698,685號、第5,217,866號、第5,142,047號、第5,034,506號、第5,166,315號、第5,185,444號、第5,521,063號、第5,506,337號、第8,299,206號及第8,076,476號，國際專利申請公開案第WO/2009/064471號及第WO/2012/043730號；及Summerton等人，Antisense Nucleic Acid Drug Dev .1997, 7, 187-195中，該等參考文獻中之每一者均係以全文引用的方式併入本文中。 依替利森(參見例如，國際專利申請公開案第WO 2006/000057號，該案係以全文引用的方式併入本文中)一直係臨床研究之主題以測試其安全性及效能，且臨床開發正在進行中。依替利森係磷醯二胺嗎啉代(PMO)反義寡核苷酸。肌肉萎縮蛋白治療劑「依替利森」(亦稱為「AVI-4658」)係具有鹼基序列5’-CTCCAACATCAAGGAAGATGGCATTTCTAG-3’ (SEQ ID NO：1)之PMO。依替利森係以CAS登記號1173755-55-9登記。化學名稱包括：RNA， [P -去氧-P -(二甲基胺基)](2’,3’-二去氧-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環)(2’a→5’)(C-m5U-C-C-A-A-C-A-m5U-C-A-A-G-G-A-A-G-A-m5U-G-G-C-A-m5U-m5U-m5U-C-m5U-A-G) (SEQ ID NO：2)，5’-[P -[4-[[2-[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]乙氧基]羰基]-1-六氫吡嗪基]-N,N -二甲基膦醯胺]及P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-5’-O-{P-[4-(10-羥基-2,5,8-三氧雜癸醯基)六氫吡嗪-1-基]-N,N-二甲基膦醯胺基}-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胞苷醯基-(2’a→5’)-P,3’-二去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胸苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胞苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胞苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環腺苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環腺苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胞苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環腺苷醯基-(2’a→5’)-P,3’-二去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胸苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胞苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環腺苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環腺苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環鳥苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環鳥苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環腺苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環腺苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環鳥苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環腺苷醯基-(2’a→5’)-P,3’-二去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胸苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環鳥苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環鳥苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胞苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環腺苷醯基-(2’a→5’)-P,3’-二去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胸苷醯基-(2’a→5’)-P,3’-二去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胸苷醯基-(2’a→5’)-P,3’-二去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胸苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胞苷醯基-(2’a→5’)-P,3’-二去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環胸苷醯基-(2’a→5’)-P,2’,3’-三去氧-P-(二甲基胺基)-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環腺苷醯基-(2’a→5’)-2’,3’-二去氧-2’,3’-亞胺基-2’,3’-開環鳥苷。 依替利森具有以下結構：

依替利森亦可如下文所示來繪示：

為清晰起見，依替利森之結構式係自5’至3’之連續結構式，且為方便在上述結構式中以緊湊形式繪示全式，申請人已包括標記為「斷點A」、「斷點B」、「斷點C」及「斷點D」之各種圖解說明斷點。如熟習此項技術者將理解，例如，「斷點A」之每一指示顯示在該等點結構式之圖解說明繼續。熟習此項技術者理解，對於上文依替利森結構式中之「斷點B」、「斷點C」及「斷點D」之每一情況亦係如此。然而，無圖解說明之斷點意欲指示、且熟習此項技術者不會將其理解為意指上文依替利森結構式之實際中止。 本揭示內容之寡聚化合物可具有不對稱中心、手性軸及手性平面(如(例如) E. L. Eliel及S. H. Wilen，Stereochemistry of Carbon Compounds , John Wiley & Sons, New York, 1994, 第1119-1190頁，及March, J.，Advanced Organic Chemistry , 第3版, 第 4章, John Wiley & Sons, New York (1985)中所闡述)，且可作為外消旋物、外消旋混合物及作為個別非鏡像異構物發生，以及其所有可能之異構物及混合物，包括光學異構物。本文中具體提及之本揭示內容之寡聚化合物(不對其立體化學作出任何指示)意欲表示其所有可能之異構物及混合物。 具體而言，不希望受限於任何特定理論，如本文中所論述，本揭示內容之寡聚化合物係自經活化之嗎啉代亞單元來製備，該等亞單元包括化合物C、化合物D、化合物E及化合物F：

化合物(C)

化合物(D)

化合物(E)

化合物(F) 化合物C、化合物D、化合物E及化合物F中之每一者可自(例如)如下文所繪示之相應β-D-呋喃核糖基來製備：

參見Summerton等人，Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 1997, 7, 187-195。不受限於任何特定理論，兩個手性碳之立體化學在合成條件下保留。不受限於任何特定理論，每一嗎啉代亞單元之多種可能之其他立體異構物可以其他方式基於選擇(例如) α-L-呋喃核糖基、α-D-呋喃核糖基、β-L-呋喃核糖基或β-D-呋喃核糖基起始材料產生。不受限於任何特定理論，將10至40種獨立地選自由化合物C、化合物D、化合物E及化合物F組成之群之化合物及每一嗎啉代亞單元之其他立體異構物併入(例如)寡聚化合物中可產生多種可能之立體異構物。不希望受限於任何特定理論，本揭示內容之寡聚化合物包含一或多個含磷亞單元間鏈接，其在每一磷處產生手性中心，其每一者指定為如業內所理解之「Sp」或「Rp」構型。不希望受限於任何特定理論，此手性產生立體異構物，該等立體異構物具有相同之化學組成，但其原子之三維排列卻不同。不希望受限於任何特定理論，每一磷亞單元間鏈接之構型在(例如)本揭示內容之寡聚化合物之合成期間隨機發生。不希望受限於任何特定理論，合成製程產生指數級大量之本揭示內容之寡聚化合物之立體異構物，此乃因本揭示內容之寡聚化合物包含多個含磷亞單元間鏈接，其中每一含磷亞單元間鏈接具有隨機手性構型。具體而言，不希望受限於任何特定理論，額外嗎啉代亞單元之每一亞單元間鏈接使得產物立體異構物之數量加倍，因此本揭示內容之寡聚化合物之習用製備實際上係2^N 種立體異構物之高度異質混合物，其中N表示含磷亞單元間鏈接之數量。醫藥組合物 本文係提供醫藥組合物，其包含依替利森或其醫藥上可接受之鹽，其中依替利森之濃度係每毫升醫藥組合物含有約50 mg。在某些實施例中，組合物適用於治療肌肉疾病。 因此，在一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 依替利森； b) 氯化鈉； c) 氯化鉀； d) 磷酸二氫鉀； e) 磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中依替利森之濃度係每毫升醫藥組合物含有約50 mg。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 40-60 mg依替利森； b) 6.4-9.6 mg氯化鈉； c) 0.16-0.24 mg氯化鉀； d) 0.16-0.24 mg磷酸二氫鉀； e) 0.91-1.37 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之一個實施例中，醫藥組合物包含約50 mg之依替利森。在此態樣之另一實施例中，醫藥組合物之總體積係約1 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 約50 mg依替利森； b) 約8 mg氯化鈉； c) 約0.2 mg氯化鉀； d) 約0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 約1.14 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之實施例中，醫藥組合物之總體積係約1 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 50 mg依替利森； b) 8 mg氯化鈉； c) 0.2 mg氯化鉀； d) 0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 1.14 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之實施例中，醫藥組合物之總體積係1 mL。 在另一態樣中，本文中提供醫藥組合物，其包含： a) 80-120 mg依替利森； b) 12.8-19.2 mg氯化鈉； c) 0.32-0.48 mg氯化鉀； d) 0.32-0.48 mg磷酸二氫鉀； e) 1.02-1.54 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之實施例中，醫藥組合物包含約100 mg之依替利森。在此態樣之另一實施例中，醫藥組合物之總體積係約2 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 約100 mg依替利森； b) 約16 mg氯化鈉； c) 約0.4 mg氯化鉀； d) 約0.4 mg磷酸二氫鉀； e) 約2.28 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之實施例中，醫藥組合物之總體積係約2 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 100 mg依替利森； b) 16 mg氯化鈉； c) 0.4 mg氯化鉀； d) 0.4 mg磷酸二氫鉀； e) 2.28 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之實施例中，醫藥組合物之總體積係2 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 400-600 mg依替利森； b) 64-96 mg氯化鈉； c) 1.6-2.4 mg氯化鉀； d) 1.6-2.4 mg磷酸二氫鉀； e) 9.0-14.0 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之實施例中，醫藥組合物包含約500 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物之總體積係約10 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 約500 mg依替利森； b) 約80 mg氯化鈉； c) 約2 mg氯化鉀； d) 約2 mg磷酸二氫鉀； e) 約11.4 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之實施例中，醫藥組合物之總體積係約10 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 500 mg依替利森； b) 80 mg氯化鈉； c) 2 mg氯化鉀； d) 2 mg磷酸二氫鉀； e) 11.4 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之實施例中，醫藥組合物之總體積係10 mL。 在實施例(包括(例如)上文所論述之醫藥組合物之一些實施例)中，依替利森之濃度係每毫升醫藥組合物含有約50 mg。在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在約45 mg/mL至約55 mg/mL範圍內。在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在45 mg/mL至55 mg/mL範圍內。在某些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在約47.5 mg/mL至約52.5 mg/mL範圍內。在某些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在47.5 mg/mL至52.5 mg/mL範圍內。在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係約50 mg/mL ± 10%。在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係50 mg/mL ± 10%。在某些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在50 mg/mL之± 10%內。在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係約50 mg/mL ± 5%。在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係50 mg/mL ± 5%。 在某些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在50 mg/mL之+ 5%內。在一些實施例中，以醫藥組合物計，依替利森之濃度係在以下範圍內：約45.5 mg/mL至55 mg/mL、約46 mg/mL至約54.5 mg/mL、約46.5 mg/mL至約54 mg/mL、約47 mg/mL至約53.5 mg/mL、約47.5 mg/mL至約53 mg/mL、約45.5 mg/mL至約52.5 mg/mL、約45.5 mg/mL至約52 mg/mL、約48 mg/mL至約51.5 mg/mL、約48.5 mg/mL至約51 mg/mL、約49 mg/mL至約50.5 mg/mL或約49.5 mg/mL至約50 mg/mL。 在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度以醫藥組合物計係約45 mg/mL、45.5 mg/mL、46 mg/mL、46.5 mg/mL、47 mg/mL、47.5 mg/mL、48 mg/mL、48.5 mg/mL、49 mg/mL、49.5 mg/mL、50 mg/mL、50.5 mg/mL、51 mg/mL、51.5 mg/mL、52 mg/mL、52.5 mg/mL、53 mg/mL、53.5 mg/mL、54 mg/mL、54.5 mg/mL或55 mg/mL。在某些實施例中，依替利森之濃度以醫藥組合物計係45 mg/mL、45.5 mg/mL、46 mg/mL、46.5 mg/mL、47 mg/mL、47.5 mg/mL、48 mg/mL、48.5 mg/mL、49 mg/mL、49.5 mg/mL、50 mg/mL、50.5 mg/mL、51 mg/mL、51.5 mg/mL、52 mg/mL、52.5 mg/mL、53 mg/mL、53.5 mg/mL、54 mg/mL、54.5 mg/mL或55 mg/mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 約5 w/v %依替利森； b) 約0.8 w/v %氯化鈉； c) 約0.02 w/v %氯化鉀； d) 約0.02 w/v %磷酸二氫鉀； e) 約0.114 w/v %磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之指定某些w/v百分比之實施例中，組合物之總體積係1-10 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約1 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約2 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係2 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約10 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係10 mL。 在此態樣之指定某些w/v百分比之另一實施例中，醫藥組合物包含約50 mg之依替利森。在一些實施例中，醫藥組合物包含50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含約100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含約500 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含500 mg之依替利森。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 5 w/v %依替利森； b) 0.8 w/v %氯化鈉； c) 0.02 w/v %氯化鉀； d) 0.02 w/v %磷酸二氫鉀； e) 0.114 w/v %磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之指定某些w/v百分比之實施例中，組合物之總體積係1-10 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係1 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係2 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係10 mL。在此態樣之指定某些w/v百分比之另一實施例中，醫藥組合物包含50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含500 mg之依替利森。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其每毫升包含： a) 約50 mg依替利森； b) 約8 mg氯化鈉； c) 約0.2 mg氯化鉀； d) 約0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 約1.14 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之指定某些mg/mL比率之實施例中，組合物之總體積係1-10 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約1 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約2 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係2 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約10 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係10 mL。 在另一實施例中，醫藥組合物包含約50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含約100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含約500 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含500 mg之依替利森。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其每毫升包含： a) 50 mg依替利森； b) 8 mg氯化鈉； c) 0.2 mg氯化鉀； d) 0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 1.14 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之指定某些mg/mL比率之實施例中，組合物之總體積係1-10 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係1 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係2 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係10 mL。在另一實施例中，醫藥組合物包含50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含500 mg之依替利森。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 約50 mg依替利森； b) 約8 mg氯化鈉； c) 約0.2 mg氯化鉀； d) 約0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 約1.14 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中該醫藥組合物之總體積係約1 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 50 mg依替利森； b) 8 mg氯化鈉； c) 0.2 mg氯化鉀； d) 0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 1.14 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中該醫藥組合物之總體積係1 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 約100 mg依替利森； b) 約16 mg氯化鈉； c) 約0.4 mg氯化鉀； d) 約0.4 mg磷酸二氫鉀； e) 約2.28 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中該醫藥組合物之總體積係約2 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 100 mg依替利森； b) 16 mg氯化鈉； c) 0.4 mg氯化鉀； d) 0.4 mg磷酸二氫鉀； e) 2.28 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中該醫藥組合物之總體積係2 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 約500 mg依替利森； b) 約80 mg氯化鈉； c) 約2 mg氯化鉀； d) 約2 mg磷酸二氫鉀； e) 約11.4 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中該醫藥組合物之總體積係約10 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 500 mg依替利森； b) 80 mg氯化鈉； c) 2 mg氯化鉀； d) 2 mg磷酸二氫鉀； e) 11.4 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中該醫藥組合物之總體積係10 mL。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 50 mg依替利森； b) 8 mg氯化鈉，USP； c) 0.2 mg氯化鉀，USP； d) 0.2 mg磷酸二氫鉀，NF； e) 1.14 mg無水磷酸氫二鈉，USP；及 f) 注射用水，USP， 其中該醫藥組合物之總體積係1 mL，該醫藥組合物之pH係約7.5，且該醫藥組合物之滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 100 mg依替利森； b) 16 mg氯化鈉，USP； c) 0.4 mg氯化鉀，USP； d) 0.4 mg磷酸二氫鉀，NF； e) 2.28 mg無水磷酸氫二鈉，USP；及 f) 注射用水，USP， 其中該醫藥組合物之總體積係2 mL，該醫藥組合物之pH係約7.5，且該醫藥組合物之滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 500 mg依替利森； b) 80 mg氯化鈉，USP； c) 2 mg氯化鉀，USP； d) 2 mg磷酸二氫鉀，NF； e) 11.4 mg無水磷酸氫二鈉，USP；及 f) 注射用水，USP， 其中該醫藥組合物之總體積係10 mL，該醫藥組合物之pH係約7.5，且該醫藥組合物之滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 50 mg依替利森； b) 8 mg氯化鈉； c) 0.2 mg氯化鉀； d) 0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 1.14 mg無水磷酸氫二鈉；及 f) 注射用水， 其中該醫藥組合物之總體積係1 mL，該醫藥組合物之pH係約7.5，且該醫藥組合物之滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 100 mg依替利森； b) 16 mg氯化鈉； c) 0.4 mg氯化鉀； d) 0.4 mg磷酸二氫鉀； e) 2.28 mg無水磷酸氫二鈉；及 f) 注射用水， 其中該醫藥組合物之總體積係2 mL，該醫藥組合物之pH係約7.5，且該醫藥組合物之滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。 在另一態樣中，本文係提供醫藥組合物，其包含： a) 500 mg依替利森； b) 80 mg氯化鈉； c) 2 mg氯化鉀； d) 2 mg磷酸二氫鉀； e) 11.4 mg無水磷酸氫二鈉；及 f) 注射用水， 其中該醫藥組合物之總體積係10 mL，該醫藥組合物之pH係約7.5，且該醫藥組合物之滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。 在一些實施例(包括(例如)上文所論述之一些實施例)中，醫藥組合物之pH係約7.5或係7.5。在一些實施例中，利用符合國家藥品集規範之NaOH、符合國家藥品集規範之HCl或其組合將醫藥組合物之pH調整至約pH 7.5。 在某些實施例(包括(例如)上文所論述之一些實施例)中，醫藥組合物之滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。在一些實施例中，醫藥組合物之pH係約7.5且醫藥組合物的滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。 在另一實施例中，本揭示內容之醫藥組合物可額外地包含碳水化合物，如Han等人，Nat. Comms. 2016, 7, 10981中所提供，其全部內容係以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，本揭示內容之醫藥組合物可包含5%之己糖碳水化合物。舉例而言，本揭示內容之醫藥組合物可包含5%葡萄糖、5%果糖或5%甘露糖。在某些實施例中，本揭示內容之醫藥組合物可包含2.5%葡萄糖及2.5%果糖。在一些實施例中，本揭示內容之醫藥組合物可包含選自以下之碳水化合物：以5體積%之量存在之阿拉伯糖、以5體積%之量存在之葡萄糖、以5體積%之量存在之山梨醇、以5體積%之量存在之半乳糖、以5體積%之量存在之果糖、以5體積%之量存在之木糖醇、以5體積%之量存在之甘露糖、各自以2.5體積%之量存在之葡萄糖及果糖之組合以及以5.7體積%之量存在之葡萄糖、以2.86體積%之量存在之果糖及以1.4體積%之量存在之木糖醇之組合。方法 本文係提供治療有需要之個體之肌肉疾病之方法，其包含向該個體投與本揭示內容之醫藥組合物。 因此，在一態樣中，本文係提供治療有需要之個體之肌肉疾病之方法，其包含向該個體投與本文中所揭示之醫藥組合物。在一個實施例中，肌肉疾病係杜興氏肌肉營養不良症。 在另一態樣中，本文係提供預防有需要之個體之肌肉疾病之方法，其包含向該個體投與本文中所揭示之醫藥組合物。在一個實施例中，肌肉疾病係杜興氏肌肉營養不良症。 在另一態樣中，本文係提供治療有需要之個體之杜興氏肌肉營養不良症之方法，其中該個體具有適於外顯子51跳讀之肌肉萎縮蛋白基因之突變，其包含向該個體投與本揭示內容之醫藥組合物。 本文中所考慮之個體通常係人類。然而，個體可為期望治療之任何哺乳動物。因此，本文中所闡述之方法可應用於人類及獸醫學應用二者。 將瞭解，本文中所提供之醫藥組合物可藉由業內已知之任何方式來投與。本文中所提供之醫藥組合物更佳地藉由靜脈內、動脈內、腹膜內、肌內或皮下投與途徑來遞送。 因此，在一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含： a) 40-60 mg依替利森； b) 6.4-9.6 mg氯化鈉； c) 0.16-0.24 mg氯化鉀； d) 0.16-0.24 mg磷酸二氫鉀； e) 0.91-1.37 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此方法之一個實施例中，醫藥組合物包含約50 mg之依替利森。在此方法之另一實施例中，醫藥組合物之總體積係約1 mL。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含： a) 約50 mg依替利森； b) 約8 mg氯化鈉； c) 約0.2 mg氯化鉀； d) 約0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 約1.14 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此方法之實施例中，醫藥組合物之總體積係約1 mL。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含： a) 80-120 mg依替利森； b) 12.8-19.2 mg氯化鈉； c) 0.32-0.48 mg氯化鉀； d) 0.32-0.48 mg磷酸二氫鉀； e) 1.02-1.54 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此方法之實施例中，醫藥組合物包含約100 mg之依替利森。在此方法之另一實施例中，醫藥組合物之總體積係約2 mL。在此方法之另一實施例中，醫藥組合物之總體積係2 mL。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含： a) 約100 mg依替利森； b) 約16 mg氯化鈉； c) 約0.4 mg氯化鉀； d) 約0.4 mg磷酸二氫鉀； e) 約2.28 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此方法之實施例中，醫藥組合物之總體積係約2 mL。在此方法之實施例中，醫藥組合物之總體積係2 mL。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含： a) 400-600 mg依替利森； b) 64-96 mg氯化鈉； c) 1.6-2.4 mg氯化鉀； d) 1.6-2.4 mg磷酸二氫鉀； e) 9.0-14.0 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此方法之實施例中，醫藥組合物包含約500 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物之總體積係約10 mL。在此方法之實施例中，醫藥組合物包含500 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物之總體積係10 mL。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含： a) 約500 mg依替利森； b) 約80 mg氯化鈉； c) 約2 mg氯化鉀； d) 約2 mg磷酸二氫鉀； e) 約11.4 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此方法之實施例中，醫藥組合物之總體積係約10 mL。在此方法之實施例中，醫藥組合物之總體積係10 mL。 在實施例(包括(例如)上文所論述之醫藥組合物之一些實施例)中，依替利森之濃度係每毫升醫藥組合物含有約50 mg。在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在約45 mg/mL至約55 mg/mL範圍內。在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在45 mg/mL至55 mg/mL範圍內。在某些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在約47.5 mg/mL至約52.5 mg/mL範圍內。在某些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在47.5 mg/mL至52.5 mg/mL範圍內。 在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係約50 mg/mL ± 10%。在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係50 mg/mL ± 10%。在某些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在50 mg/mL之± 10%內。在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係約50 mg/mL ± 5%。在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係50 mg/mL ± 5%。 在某些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度係在50 mg/mL之± 5%內。在一些實施例中，依替利森之濃度以醫藥組合物計係在以下範圍內：約45.5 mg/mL至55 mg/mL、約46 mg/mL至約54.5 mg/mL、約46.5 mg/mL至約54 mg/mL、約47 mg/mL至約53.5 mg/mL、約47.5 mg/mL至約53 mg/mL、約45.5 mg/mL至約52.5 mg/mL、約45.5 mg/mL至約52 mg/mL、約48 mg/mL至約51.5 mg/mL、約48.5 mg/mL至約51 mg/mL、約49 mg/mL至約50.5 mg/mL或約49.5 mg/mL至約50 mg/mL。 在一些實施例中，醫藥組合物中依替利森之濃度以醫藥組合物計係約45.5 mg/mL、46 mg/mL、46.5 mg/mL、47 mg/mL、47.5 mg/mL、48 mg/mL、48.5 mg/mL、49 mg/mL、49.5 mg/mL、50 mg/mL、50.5 mg/mL、51 mg/mL、51.5 mg/mL、52 mg/mL、52.5 mg/mL、53 mg/mL、53.5 mg/mL、54 mg/mL、54.5 mg/mL或55 mg/mL。在某些實施例中，依替利森之濃度以醫藥組合物計係45 mg/mL、45.5 mg/mL、46 mg/mL、46.5 mg/mL、47 mg/mL、47.5 mg/mL、48 mg/mL、48.5 mg/mL、49 mg/mL、49.5 mg/mL、50 mg/mL、50.5 mg/mL、51 mg/mL、51.5 mg/mL、52 mg/mL、52.5 mg/mL、53 mg/mL、53.5 mg/mL、54 mg/mL、54.5 mg/mL或55 mg/mL。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含： a) 約5 w/v %依替利森； b) 約0.8 w/v %氯化鈉； c) 約0.02 w/v %氯化鉀； d) 約0.02 w/v %磷酸二氫鉀； e) 約0.114 w/v %磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此方法之指定某些w/v百分比之實施例中，組合物之總體積係1-10 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約1 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約2 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係2 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約10 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係10 mL。 在此方法之指定某些w/v百分比之另一實施例中，醫藥組合物包含約50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含約100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含約500 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含500 mg之依替利森。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含： a) 5 w/v %依替利森； b) 0.8 w/v %氯化鈉； c) 0.02 w/v %氯化鉀； d) 0.02 w/v %磷酸二氫鉀； e) 0.114 w/v %磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之指定某些w/v百分比之實施例中，組合物之總體積係1-10 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係1 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係2 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係10 mL。在此態樣之指定某些w/v百分比之另一實施例中，醫藥組合物包含50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含500 mg之依替利森。 在此方法之指定某些w/v百分比之另一實施例中，醫藥組合物包含約50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含約100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含約500 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含500 mg之依替利森。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該每毫升醫藥組合物包含： a) 約50 mg依替利森； b) 約8 mg氯化鈉； c) 約0.2 mg氯化鉀； d) 約0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 約1.14 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之指定某些mg/mL比率之實施例中，組合物之總體積係1-10 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約1 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約2 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係約10 mL。在另一實施例中，醫藥組合物包含約50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含約100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含約500 mg之依替利森。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該每毫升醫藥組合物包含： a) 50 mg依替利森； b) 8 mg氯化鈉； c) 0.2 mg氯化鉀； d) 0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 1.14 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。 在此態樣之指定某些mg/mL比率之實施例中，組合物之總體積係1-10 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係1 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係2 mL。在另一實施例中，組合物之總體積係10 mL。在另一實施例中，醫藥組合物包含50 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含100 mg之依替利森。在另一實施例中，醫藥組合物包含500 mg之依替利森。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含： a) 50 mg依替利森； b) 8 mg氯化鈉； c) 0.2 mg氯化鉀； d) 0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 1.14 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中該醫藥組合物之總體積係1 mL。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含： a) 100 mg依替利森； b) 16 mg氯化鈉； c) 0.4 mg氯化鉀； d) 0.4 mg磷酸二氫鉀； e) 2.28 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中該醫藥組合物之總體積係2 mL。 在另一態樣中，本揭示內容之方法包含向個體投與醫藥組合物，該醫藥組合物包含： a) 500 mg依替利森； b) 80 mg氯化鈉； c) 2 mg氯化鉀； d) 2 mg磷酸二氫鉀； e) 11.4 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中該醫藥組合物之總體積係10 mL。 在一些實施例(包括(例如)上文所論述之一些實施例)中，醫藥組合物之pH係約7.5或係7.5。在一些實施例中，利用符合國家藥品集規範的NaOH、符合國家藥品集規範的HCl或其組合將醫藥組合物之pH調整至約pH 7.5。 在某些實施例(包括(例如)上文所論述之一些實施例)中，醫藥組合物之滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。在一些實施例中，醫藥組合物之pH係約7.5且醫藥組合物的滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。 在另一實施例中，本揭示內容之醫藥組合物在本揭示內容之方法中可與碳水化合物一起在相同調配物中共投與或為分開調配物，如Han等人，Nat. Comms. 2016, 7, 10981中所提供，其全部內容係以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，本揭示內容之醫藥組合物可與5%之己糖碳水化合物一起共投與。舉例而言，本揭示內容之醫藥組合物可與5%葡萄糖、5%果糖或5%甘露糖一起共投與。在某些實施例中，本揭示內容之醫藥組合物可與2.5%葡萄糖及2.5%果糖一起共投與。在一些實施例中，本揭示內容之醫藥組合物可與選自以下之碳水化合物一起共投與：以5體積%之量存在之阿拉伯糖、以5體積%之量存在之葡萄糖、以5體積%之量存在之山梨醇、以5體積%之量存在之半乳糖、以5體積%之量存在之果糖、以5體積%之量存在之木糖醇、以5體積%之量存在之甘露糖、各自以2.5體積%之量存在之葡萄糖及果糖之組合以及以5.7體積%之量存在之葡萄糖、以2.86體積%之量存在之果糖及以1.4體積%之量存在之木糖醇之組合。套組 在其他實施例中，提供套組。根據本揭示內容之套組包括一或多個封裝，其包含依替利森或本揭示內容之醫藥組合物。在一些實施例中，套組包含依替利森或其醫藥上可接受之鹽。 片語「封裝」意指含有本文中所呈現之寡核苷酸或組合物之任何容器。在一些實施例中，封裝可為盒子或包裝。用於封裝醫藥產品之封裝材料為熟習此項技術者所熟知。醫藥封裝材料之實例包括(但不限於)瓶、管、吸入器、幫浦、袋、小瓶、容器、注射器及適用於所選調配物及預期投與及治療模式之任何封裝材料。 套組亦可含有並不含於封裝內但附接至封裝外側之物品(例如移液管)。 套組可進一步含有用於將本揭示內容之依替利森或醫藥組合物投與患者之說明書。套組亦可包含由管理機構(例如美國食品與藥物管理局(United States Food and Drug Administration))批准之依替利森之使用說明書。套組亦可含有針對依替利森之標記或產品插頁。封裝或任何產品插頁或兩者本身可由管理機構批准。套組可在封裝中包括呈固相或呈液相(例如所提供之緩衝液)之依替利森。套組亦可包括用於製備實施該等方法之溶液之緩衝液及用於將液體自一個容器轉移至另一容器之移液管。實例 出於說明及闡述本揭示內容之某些具體實施例之目的，於下文闡述各實例。然而，申請專利範圍之範圍決不以任何方式受限於本文中所述之實例。熟習此項技術者將明瞭所揭示實施例之各種改變及修改，且可在不背離本揭示內容之精神及隨附申請專利範圍之範圍的情況下作出此等改變及修改，其包括(但不限於)與本揭示內容之化學結構、取代基、衍生物、調配物或方法相關之彼等。本文方案中之結構中之變量的定義與本文中所呈現之各式中之相應位置之彼等相稱。實例 1 ：依替利森粗製原料藥之 50 L 固相合成 1. 材料表 1 ： 起始材料 術語「EG3」係指偶聯至寡聚物(例如，在其3’或5’末端)之三乙二醇部分：

。 起始材料之化學結構： A. 經活化之EG3尾

化合物(B) B. 經活化之C亞單元(對於製備，參見US 8,067,571)

化合物(C) C. 經活化之A亞單元(對於製備，參見US 8,067,571)

化合物(D) D. 經活化之DPG亞單元(對於製備，參見WO 2009/064471)

化合物(E) E. 經活化之T亞單元(對於製備，參見WO 2013/082551)

化合物(F) F.載錨樹脂

式(I) 其中R¹ 係載體介質。表 2 ： 用於依替利森粗製原料藥之固相寡聚物合成之溶液之描述 2. 依替利森粗製原料藥之合成 A. 樹脂溶脹 將750 g載錨樹脂及10.5 L NMP裝填至50 L矽烷化反應器並攪拌3小時。排乾NMP，並用每次5.5 L之DCM將樹脂洗滌兩次及用每次5.5 L之30% TFE/DCM洗滌兩次。 B. 循環0: EG3尾偶合 用每次5.5 L之30% TFE/DCM將樹脂洗滌三次且排乾。用5.5 L CYTFA溶液洗滌15分鐘，排乾，且用5.5 L CYTFA溶液重複洗滌15分鐘而不排乾，向其裝填122 mL 1:1 NEM/DCM，並將懸浮液攪拌2分鐘且排乾。用5.5 L中和溶液將樹脂洗滌5分鐘兩次並排乾，然後用每次5.5 L之DCM洗滌兩次並排乾。將706.2 g經活化之EG3尾(MW 765.85)及234 mL NEM於3 L DMI中之溶液裝填至樹脂並在RT下攪拌3小時且排乾。用每次5.5 L之中和溶液將樹脂洗滌兩次(每次洗滌5分鐘)並用5.5 L之DCM洗滌一次且排乾。裝填374.8 g苯甲酸酐及195 mL NEM於2680 mL NMP中之溶液，並攪拌15分鐘且排乾。將樹脂與5.5 L中和溶液一起攪拌5分鐘，然後用5.5 L DCM洗滌一次且用每次5.5 L之30% TFE/DCM洗滌兩次。將樹脂懸浮於5.5 L 30% TFE/DCM中並保持14小時。 C. 亞單元偶合循環1-30 i. 偶合前處理 如表 3 中所描述在每一偶合循環之前，將樹脂：1) 用30% TFE/DCM洗滌；2) a) 用CYTFA溶液處理15分鐘且排乾，及b) 用CYTFA溶液處理15分鐘，向此添加1:1 NEM/DCM，攪拌，且排乾；3) 與中和溶液一起攪拌三次；及4) 用DCM洗滌兩次。參見表 3 。 ii.偶合後處理 如表 3 中所描述在每一亞單元溶液排乾之後，將樹脂：1) 用DCM洗滌；及2) 用30% TFE/DCM洗滌兩次。若樹脂在下一偶合循環之前保持一段時期，則不將第二TFE/DCM洗滌液排乾，並將樹脂保留在該TFE/DCM洗滌溶液中。參見表 3 。 iii.經活化之亞單元偶合循環 如表 3 中所描述進行偶合循環。 iv.最終IPA洗滌 用每次19.5 L之IPA將樹脂洗滌8次，並在真空下在室溫下乾燥約63.5小時至乾重為5,579.8 g。 D. 裂解 將上文樹脂結合之依替利森粗製原料藥分成兩份，每一份處理如下。將2,789.9 g份的樹脂：1) 與10 L NMP一起攪拌2小時，然後將NMP排乾；2) 用每次10 L之30% TFE/DCM洗滌三次；3) 用10 L CYTFA溶液處理15分鐘；及4) 用10 L CYTFA溶液處理15分鐘，然後向此添加130 mL 1:1 NEM/DCM並攪拌2分鐘且排乾。用每次10 L之中和溶液將樹脂處理三次，用10 L DCM洗滌六次並用每次10 L之NMP洗滌八次。用1530.4 g DTT及2980 DBU於6.96 L NMP中之裂解溶液將樹脂處理2小時以將依替利森粗製原料藥自樹脂分離。將裂解溶液排乾並保留在單獨容器中。用4.97 L NMP洗滌反應器及樹脂，將其與裂解溶液合併。 E. 去保護 將合併之裂解溶液及NMP洗滌液轉移至壓力容器，向該壓力容器添加39.8 L已在冷凍器中冷凍至-10℃至-25℃之NH₄ OH。將壓力容器密封並加熱至45℃持續16小時，然後使其冷卻至25℃。將含有依替利森粗製原料藥之去保護溶液用純化水稀釋(3:1)並用2 M磷酸將pH調整至3.0，然後用NH₄ OH調整至pH 8.03。HPLC (C18) 73-74% (圖 1 )。表 3 ： 表 3( 續 ) 表 3( 續 ) 表 3( 續 ) 表 3( 續 ) 表 3( 續 ) 表 3( 續 ) 表 3( 續 ) 實例 2 ：依替利森粗製原料藥之純化 將來自實例1之含有依替利森粗製原料藥之去保護溶液裝載至ToyoPearl Super-Q 650S陰離子交換樹脂(Tosoh Bioscience)之管柱上並用0-35% B之梯度溶析超過17個管柱體積(緩衝液A：10 mM氫氧化鈉；緩衝液B：於10 mM氫氧化鈉中之1 M氯化鈉)，並將可接受純度之級分(C18及SCX HPLC)合併至純化藥物產物溶液。HPLC：97.74% (C18) 94.58% (SCX；圖 2 )。 將純化原料藥溶液脫鹽並凍乾至1959 g純化依替利森原料藥。產率61.4%；HPLC：97.7% (C18) 94.6% (SCX；圖 3 )。表 4. 首字母縮略詞實例 3 ：例示性依替利森醫藥組合物 表 5. 對於例示性組合物1-6 (表5)中之每一者而言，所存在水之量足以使每毫升醫藥組合物達成含有約50 mg之依替利森的濃度。此外，例示性組合物之pH係約7.5，且例示性組合物之滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。參考文獻之引用 本申請案中通篇所引用之所有參考(包括參考文獻、授權專利、公開專利申請案及及共同待決之專利申請案)之全部內容均係以引用的方式明確地併入本文中。除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術及科學術語均符合業內熟習此項技術者所通常已知之含義。等效形式 熟習此項技術者僅使用常規實驗即可識別或能夠確定本文中所闡述本揭示內容之具體實施例之多種等效形式。此等等效形式意欲涵蓋在以下申請專利範圍內。

圖 1 顯示合成及去保護依替利森(AVI-4658)粗製原料藥之代表性分析型高效液相層析(HPLC)層析圖(參見實例1)。圖 2 顯示經純化依替利森原料藥溶液之代表性分析型HPLC層析圖(參見實例2)。圖 3 顯示經脫鹽及凍乾依替利森原料藥之代表性分析型HPLC層析圖(參見實例2)。

Claims (11)

1. 一種醫藥組合物，其包含： a) 依替利森(Eteplirsen)； b) 氯化鈉； c) 氯化鉀； d) 磷酸二氫鉀； e) 磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中依替利森之濃度係每毫升醫藥組合物含有約50 mg。
2. 如請求項1之醫藥組合物，其包含： a) 80-120 mg依替利森； b) 12.8-19.2 mg氯化鈉； c) 0.32-0.48 mg氯化鉀； d) 0.32-0.48 mg磷酸二氫鉀； e) 1.02-1.54 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中依替利森之濃度係每毫升醫藥組合物含有約50 mg。
3. 如請求項2之醫藥組合物，其包含約100 mg之依替利森。
4. 如請求項2之醫藥組合物，其包含： a) 約100 mg依替利森； b) 約16 mg氯化鈉； c) 約0.4 mg氯化鉀； d) 約0.4 mg磷酸二氫鉀； e) 約2.28 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中依替利森之濃度係每毫升醫藥組合物含有約50 mg。
5. 如請求項1之醫藥組合物，其包含： a) 400-600 mg依替利森； b) 64-96 mg氯化鈉； c) 1.6-2.4 mg氯化鉀； d) 1.6-2.4 mg磷酸二氫鉀； e) 9.0-14.0 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中依替利森之濃度係每毫升醫藥組合物含有約50 mg。
6. 如請求項5之醫藥組合物，其包含約500 mg之依替利森。
7. 如請求項5之醫藥組合物，其包含： a) 約500 mg依替利森； b) 約80 mg氯化鈉； c) 約2 mg氯化鉀； d) 約2 mg磷酸二氫鉀； e) 約11.4 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水， 其中依替利森之濃度係每毫升醫藥組合物含有約50 mg。
8. 如請求項1之醫藥組合物，其包含： a) 約5 w/v %依替利森； b) 約0.8 w/v %氯化鈉； c) 約0.02 w/v %氯化鉀； d) 約0.02 w/v %磷酸二氫鉀； e) 約0.114 w/v %磷酸氫二鈉；及 f) 水。
9. 如請求項1之醫藥組合物，其每毫升包含： a) 約50 mg依替利森； b) 約8 mg氯化鈉； c) 約0.2 mg氯化鉀； d) 約0.2 mg磷酸二氫鉀； e) 約1.14 mg磷酸氫二鈉；及 f) 水。
10. 如請求項1之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之pH係約7.5，且該醫藥組合物之滲透壓係在約260 mOsm至約320 mOsm範圍內。
11. 一種如請求項1之醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療有需要之個體之杜興氏肌肉營養不良症(Duchenne muscular dystrophy，DMD)之藥劑，其中該個體具有適於外顯子51跳讀之肌肉萎縮蛋白基因之突變。 [1] ml指示1:1 NEM/DCM之量 [2] 樹脂在此步驟保持½天 [3] 樹脂在此步驟保持½天 [4] 樹脂在此階段保持0.4天 [5] 樹脂在此階段保持2.5天 [6] 樹脂在此階段保持½天 [7] 樹脂在此階段保持0.4天 [8] 樹脂在此階段保持0.4天 [9] 樹脂在此階段保持0.4天 [10] 樹脂在此階段保持1.5天 [11] 樹脂在此階段保持0.3天 [12] 樹脂在此階段保持0.4天 [13] 樹脂在此階段保持0.4天 [14] 樹脂在此階段保持0.4天 [15] 樹脂在此階段保持0.3天