TW201620526A - 用於抑制α－１抗胰蛋白酶基因表現之組合物及方法 - Google Patents
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Abstract
本發明關於一種經由RNA干擾機制來抑制AAT基因表現之RNA干擾觸發物。本發明亦關於一種醫藥組合物，其包含該AAT RNAi觸發物以及能夠改良該RNAi觸發物向體內肝細胞遞送之賦形劑。該AATRNAi觸發物向體內肝細胞之遞送使得AAT基因表現得到抑制且使α1-抗胰蛋白酶缺乏及相關疾病得到治療。
Description
α-1抗胰蛋白酶缺乏為一種遺傳性體染色體共顯性基因病症，其導致α1-抗胰蛋白酶(A1AT)產生不足，從而引起肺病及肝病且發病頻率為每1,500至3,500位個體中約有1例。α-1抗胰蛋白酶缺乏最通常會影響全世界具有歐洲血統之人。
α-1抗胰蛋白酶(α1-抗胰蛋白酶、α-1蛋白酶抑制劑、A1AT或AAT)為屬於serpin超家族之蛋白酶抑制劑。正常的AAT蛋白主要在肝中由肝細胞合成且分泌至血液中。其生理學功能為抑制嗜中性球蛋白酶以保護宿主組織以免在發炎階段受到非特異性損傷。A1AT缺乏症(AATD)之臨床上最重要的形式係由Z突變引起。Z突變型對偶基因(PiZ)經由單一點突變使得突變型PiZ蛋白傾向於在肝細胞內質網中異常摺疊，從而導致細胞內滯留。循環性蛋白酶活性之不存在使得肺易受嗜中性球彈性蛋白酶所致之損傷，從而導致肺氣腫之發展。每週使用純化之人類AAT來對AATD使用AAT增強療法會得到正常的AAT血漿含量且預防受影響個體之肺損傷。
儘管投與純化之AAT會改善由不存在內源分泌之AAT所引起的肺損傷，但AATD患者仍易患由過量異常摺疊之AAT蛋白之沈積所引起的內質網肝貯積病。12%至15%之AATD患者亦產生可能嚴重或致命的、甚至嬰兒期的肝病。在AATD患者中，AAT蛋白在肝細胞中之細胞內累積會誘導肝細胞損傷及死亡，以及慢性肝損傷。臨床表現包括慢性肝
炎、肝硬化、肝細胞癌、轉胺酶升高(transaminitis)、膽汁鬱積、纖維化及甚至暴發性肝衰竭。
目前不存在用於預防由AATD所致之肝病之發作或減緩其進展的特定治療。因為由AATD引起之肝損傷經由功能獲得機制出現，所以抑制或AAT基因表現將適用於防止AAT蛋白在肝中之累積，藉此提供對AATD之治療性治療。已經顯示雙股RNA分子(dsRNA)及其他RNAi觸發物會以高度保守之調控機制阻斷基因表現，其稱為RNA干擾(RNAi)。本發明提供用於抑制AAT基因體內表現之AAT RNA干擾(RNAi)觸發物及其組合物。本發明亦提供使用AAT RNAi觸發物以治療AATD及由AATD引起之病狀及疾病(諸如慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌及暴發性肝衰竭)的方法。
本發明提供能夠選擇性地且有效地減少AAT表現之α-1抗胰蛋白酶(AAT)基因特異性RNA干擾(RNAi)觸發分子。使用AAT RNAi觸發物提供一種用於治療性治療與α-1抗胰蛋白酶缺乏相關之疾病的方法。此等方法包括向人類或動物投與靶向AAT之RNAi觸發物。
在一個實施例中，本發明提供用於抑制人類AAT基因表現之RNAi觸發分子。該RNAi觸發物包含至少兩個相互部分、實質上或完全互補之序列。在一個實施例中，兩個RNAi觸發物序列含有包含第一序列之有義股及包含第二序列之反義股。在另一實施例中，兩個RNAi觸發物序列包含兩條在一起包含第一序列之有義股，及包含第二序列之反義股，其中有義股與反義股一起形成部分雙鏈體(meroduplex)(表2及表4)。AAT RNAi觸發物有義股包含與AAT mRNA之至少一部分具有至少90%一致性之序列。表1至表5中展示例示性AAT RNAi觸發物有義股、反義股、序列對及部分雙鏈體。
在一個實施例中，反義股包含與由該AAT基因編碼之mRNA之一
部分互補的核苷酸序列，且互補區域之長度最佳小於30個核苷酸。此外，較佳的是，本文所述之本發明RNAi觸發物之長度(雙鏈體長度)在約16至30個核苷酸之範圍內，特定言之在18至28個核苷酸之範圍內。尤其適用於本發明之上下文的是約17、18、19、20、21、22、23或24個核苷酸之雙鏈體長度。有義股與反義股可具有相同長度或其可具有不同長度。舉例而言，有義股與反義股之長度均可為19、20、21、22、23或24個核苷酸。舉例而言，有義股之長度可為21個核苷酸，而反義股之長度為23個核苷酸。19、21、22或23個核苷酸之雙鏈體段為最佳。RNAi觸發物在遞送至表現AAT基因之細胞時會抑制該AAT基因之體外或體內表現。
視需要局部或全身治療以及待治療之區域而定，可用許多方式投與本文所述之RNAi觸發分子或醫藥組合物。投與可為表面的(例如藉由經皮貼片)、經肺，例如藉由吸入或吹入散劑或氣霧劑，包括藉由噴霧器：氣管內、鼻內、經表皮及經皮、經口或非經腸。非經腸投藥包括靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內、肌肉內注射或輸注；皮下，例如經由植入式裝置；或顱內，例如腦實質內、鞘內或腦室內投藥。
可使用此項技術中已知之任何已知寡核苷酸遞送技術將本文所述之RNAi觸發分子遞送至目標細胞或組織。核酸遞送方法包括(但不限於)封裝於脂質體中、藉由離子電滲或藉由併入其他媒劑，諸如水凝膠、環糊精、可生物降解之奈米膠囊，及生物黏性微球粒、蛋白性載體或DPC(WO 2000/053722、WO 2008/0022309、WO 2011/104169及WO 2012/083185，其各自以引用的方式併入本文中)。在一個實施例中，AAT RNAi觸發物具備體內遞送化合物。較佳的體內遞送化合物包含MLP遞送聚合物。
在另一較佳實施例中，本發明之特徵在於將AAT RNAi觸發物體內遞送至肝細胞之組合物，其包含：本文所述之AAT RNAi觸發物，偶聯
於含有至少20個碳原子之疏水基諸如膽固醇(RNA觸發物-偶聯物)。
圖1. 表1. 靶向AAT mRNA之RNAi觸發物的核心序列。
圖2 表2. 含有5'及3'延伸之RNAi觸發序列。大寫字母表示核糖核苷酸，小寫字母「c」「g」「a」及「u」表示2' O-甲基修飾之核苷酸，後接有「f」之大寫字母A、C、G、U表示2'-氟核苷酸，「s」表示硫代磷酸酯，「dT」表示去氧胸苷，(invdT)表示反向去氧胸苷(3'-3'-連接)。
圖3. 表3. 規範的AAT siRNA RNAi觸發物。大寫字母表示RNA核苷酸，小寫字母「c」「g」「a」及「u」表示2' O-甲基修飾之核苷酸，後接有「f」之大寫字母A、C、G、U表示2'-氟核苷酸，「s」表示硫代磷酸酯，「dT」表示去氧胸苷，且(invdT)表示反向去氧胸苷(3'-3'-連接)。Tm為RNAi觸發物之熔化溫度。
圖4. 表4. AAT部分雙鏈體RNAi觸發物。大寫字母表示RNA核苷酸，小寫字母「c」「g」「a」及「u」表示2' O-甲基修飾之核苷酸，後接有「f」之大寫字母A、C、G、U表示2'-氟核苷酸，「s」表示硫代磷酸酯，「dT」表示去氧胸苷，且(invdT)表示反向去氧胸苷(3'-3'-連接)。Tm為RNAi觸發物之熔化溫度。
圖5. 表5. AAT UNA RNAi觸發物。大寫字母表示RNA核苷酸，小寫字母「c」「g」「a」及「u」表示2' O-甲基修飾之核苷酸，後接有「f」之大寫字母A、C、G、U表示2'-氟核苷酸，後接有「UNA」之大寫字母A、C、G、U表示2',3'-斷(解鎖)RNA核苷酸模擬物，「s」表示硫代磷酸酯，「dT」表示去氧胸苷，且(invdT)表示反向去氧胸苷(3'-3'-連接)。Tm為RNAi觸發物之熔化溫度。
圖6A-E. 列出適用於體內遞送本文所述之AAT RNAi觸發物之MLP聚合物的表。
圖7. 描繪使用不同濃度之所示RNAi觸發物在體外Hep3B細胞中
之相對AAT表現的圖。
圖8. 描繪用鹽水或SEQ ID 52/63 AAT RNAi觸發物(AD00370)及MLP遞送聚合物(MLP)治療之PiZ小鼠之相對血清AAT含量的圖。
圖9. 將肝中之Z-AAT累積可視化之PAS-D染色。肝切片來自(A)在研究第1天處死之PiZ小鼠；(B)接受四次每兩週一次的鹽水媒劑靜脈內劑量之PiZ小鼠；(C)接受四次每兩週一次的8mg/kg Luc-RNAi觸發物對照物+8mg/kg MLP遞送聚合物之靜脈內劑量的PiZ小鼠；(D)接受四次每兩週一次的8mg/kg SEQ ID 52/63與8mg/kg MLP遞送聚合物之靜脈內(IV)劑量的PiZ小鼠。
圖10. 來自PiZ小鼠之肝的可溶性及不溶性部分的西方墨點(Western blot)分析。五週齡小鼠接受每兩週一次的鹽水、Luc-UNA(8mg/kg SEQ ID 59/78與8mg/kg MLP遞送聚合物)或AAT-UNA(8mg/kg SEQ ID 52/63與8mg/kg MLP遞送聚合物)之靜脈內劑量，持續8週。
圖11. 來自PiZ小鼠之肝的可溶性及不溶性部分的西方墨點分析。五週齡小鼠接受四次每兩週一次的鹽水、Luc-UNA(8mg/kg SEQ ID 59/78與8mg/kg MLP遞送聚合物)或AAT-UNA(8mg/kg SEQ ID 52/63與8mg/kg MLP遞送聚合物)之靜脈內劑量，持續8週。
圖12. 展示六月齡雌性PiZ小鼠之小球(globule)尺寸的條線圖，該等小鼠已接受單次的鹽水、Luc-UNA RNAi觸發物(8mg/kg SEQ ID 59/78與8mg/kg MLP遞送聚合物)或AAT-UNA RNAI觸發物(8mg/kg SEQ ID 52/63與8mg/kg MLP遞送聚合物)之靜脈內劑量。將肝切成切片、在福馬林中處理以便組織學觀測，且用PAS-D染色以便對小球尺寸及由小球覆蓋之肝區域進行數位定量。
圖13. 展示在靈長類動物中重複投與AAT-RNAi觸發物及MLP遞送聚合物之後AAT剔除之圖。向兩隻猴子各自給予2.0mg/kg MLP遞送聚合物(MLP遞送肽)+4.0 AAT-RNAi觸發物SEQ ID 52/63(AAT-UNA)
或3mg/kg MLP遞送聚合物(MLP遞送肽)+6mg/kg RNAi觸發物SEQ ID 52/63(AAT-UNA)。第一劑係在第1天。劑量均相隔六週。
附表1至5係關於用於形成根據本發明之AAT RNAi觸發分子的較佳分子及序列。本文所述之AAT RNAi觸發分子包含一或兩條有義股及反義股，該等股各自含有約18個核苷鹼基之核心序列。反義股核心序列係與AAT mRNA中存在之核苷酸序列(目標序列)互補。有義股核心序列可與反義核心序列具有相同長度或其可具有不同長度。RNAi觸發物之有義與反義核心序列退火形成互補性雙鏈體區域或雙螺旋結構。在互補性雙鏈體區域內，有義股核心序列與反義核心序列至少90%互補或100%互補。對於部分雙鏈體RNAi觸發物，有義股核心序列內部帶切口，且提供兩個一起與反義股核心序列雜交之有義股序列。另外，有義股及反義股可獨立地在其核心序列之5'端、其核心序列之3'端或其核心序列之5'端與3'端含有1至6個核苷鹼基之延伸。反義股延伸若有的話則可能與AAT mRNA之相應核苷酸或與有義股之任何相應核苷酸互補或不互補。類似地，有義股延伸若有的話則可能與AAT mRNA之相應核苷酸或與反義股之任何相應核苷酸一致或不一致。當遞送至細胞時，本文所述之AAT RNAi觸發物「剔除」或抑制正常或Z突變型對偶基因AAT基因之表現。
所述之AAT RNAi觸發物及方法可用以治療患有將受益於AAT表現減小或抑制之疾病或病症之受試者。向受試者投與治療有效量之任何一或多種所述AAT RNAi觸發物。治療將受益於AAT基因表現減小及/或抑制之受試者包括治療性及/或預防性治療。受試者可為人類、患者或人類患者。所述AAT RNAi觸發分子可用以提供治療性治療與突變型AAT表現相關之疾病的方法。此等方法包括向人類或動物投與靶向AAT之RNAi觸發物。
表1中展示AAT RNAi觸發物有義股及反義股核心序列。表2提供本文所述之具有5'或3'延伸之RNAi觸發物有義及反義股的說明性實例。本文提供具有經修飾的核苷酸之RNAi觸發物有義及反義股，且特定言之將其揭示於附表3至5中，該等表提供了本發明之經修飾的RNAi觸發物有義及反義股之說明性實例。表2至5中所示之經修飾的RNAi觸發物股與表1中所示之未經修飾的核心序列之關係由核心SEQ ID號表示。本發明的RNAi觸發物之此等成分之修飾在本文中係作為修飾及/或修飾模式之實例來提供。
RNAi觸發物(亦稱為dsRNAi觸發物)經由RNA干擾(RNAi)之生物過程來抑制基因表現。RNAi觸發物包含雙股RNA或RNA樣結構，該結構通常含有15-50個鹼基對及較佳地18-26個鹼基對，且具有與細胞內經表現之目標基因中之編碼序列至少90%互補的核苷鹼基序列。RNAi觸發物包括(但不限於)：短干擾性RNA(siRNA)、雙股RNA(dsRNA)、微RNA(miRNA)、短髮夾RNA(shRNA)及切丁酶(dicer)受質(美國專利第8,084,599號、第8,349,809號及第8,513,207號)。
本文所述之RNAi觸發物係藉由使反義股與有義股(對於規範的siRNA RNAi觸發物及UNA RNAi觸發物)或兩條有義股(對於部分雙鏈體RNAi觸發物)退火來形成。在一個較佳實施例中，AAT RNAi觸發物反義股包含SEQ ID No：1、2、3、4及5中所描繪之核酸序列。相應AAT RNAi觸發物有義股包含SEQ ID No：8、9、10、11及12中所描繪之核酸序列。因此，本發明的AAT RNAi觸發分子尤其可包含選自由以下SEQ ID對組成之群的序列對：1/8、2/9、3/10、4/11及5/12。表1至5中提供互補對或部分雙鏈體(meroplex)(RNAi觸發物)，如由SEQ ID對或SEQ ID部分雙鏈體所示。
如下文詳述，本文所述之RNAi觸發分子有義股及反義股各自包含核心序列及視情況5'延伸、3'延伸，或5'延伸與3'延伸。如本文所用，
延伸在有義股核心序列或反義股核心序列之5'端或3'端包含1至5個核苷酸。有義股上之延伸核苷酸可能或可能不與核苷酸(相應反義股中之延伸核苷酸之任一核心序列核苷酸)互補(鹼基配對)。相反地，反義股上之延伸核苷酸可能或可能不與核苷酸(相應有義股中之延伸核苷酸之任一核心序列核苷酸)互補(鹼基配對)。
在一個實施例中，本文所述之AAT RNAi觸發分子包含具有1至5個核苷酸長、較佳地1至2個核苷酸長之3'延伸的反義股。在一個實施例中，反義股延伸核苷酸中之一或多者包含尿嘧啶或胸苷核苷酸或與相應AAT mRNA序列互補之核苷酸。在另一實施例中，反義股延伸由dTdT或dTsdT組成，其中dT表示去氧胸苷核苷酸且sdT表示具有5'硫代磷酸酯之去氧胸苷核苷酸。
在另一較佳實施例中，本文所述之AAT RNAi觸發分子包含具有1至5個核苷酸長、較佳地1至2個核苷酸長之3'延伸的有義股。在一個實施例中，反義股延伸核苷酸中之一或多者包含腺苷、尿嘧啶或胸苷核苷酸、AT二核苷酸，或對應於AAT mRNA序列中之核苷酸的核苷酸。在一個較佳實施例中，3'有義股延伸由Af(invdT)組成，其中Af表示2'-氟腺苷核苷酸且invdT表示反向(3'-3'-連接)去氧胸苷核苷酸。
在一個實施例中，本文所述之AAT RNAi觸發分子包含具有1至5個核苷酸長、較佳地1至2個核苷酸長之5'延伸的反義股。在一個實施例中，反義股延伸核苷酸中之一或多者包含尿嘧啶或胸苷核苷酸或與相應AAT mRNA序列互補之核苷酸。在一個較佳實施例中，反義股延伸由dT組成。
在另一較佳實施例中，本文所述之AAT RNAi觸發分子包含具有1至4個核苷酸長、較佳地1至3個核苷酸長之5'延伸的有義股。在一個實施例中，有義股延伸核苷酸中之一或多者包含尿嘧啶或腺苷核苷酸或對應於AAT mRNA序列中之核苷酸的核苷酸。在一個較佳實施例中，
有義股延伸由5' UAU或5' uAu組成，其中u表示2' O-甲基-修飾之尿苷核苷酸。
本文所述之RNAi觸發分子可在有義股及反義股中之每一者上獨立地含有3'及/或5'延伸。在一個實施例中，有義股與反義股均含有3'及5'延伸，各自如上所述。在一個實施例中，一股之3'延伸核苷酸中之一或多者與另一股之一或多個5'延伸核苷酸鹼基配對。在另一實施例中，一股之3'延伸核苷酸中之一或多者與另一股之一或多個5'延伸核苷酸並不鹼基配對。RNAi觸發物之有義及反義股可能或可能不含有相同數目的核苷酸鹼基。反義及有義股可形成雙鏈體，其中5'端僅具有鈍端，3'端僅具有鈍端、5'與3'端均為鈍端，或5'與3'端均不為鈍端。在另一實施例中，延伸中之核苷酸中之一或多者含有硫代磷酸酯、硫代磷酸酯、反向去氧核苷酸(3'至3'連接)核苷酸或經核糖核苷酸或去氧核苷酸修飾。
在一些實施例中，本文所述之RNAi觸發物之有義及反義股含有不同數目之核苷酸鹼基。在一些實施例中，本文所述之RNAi觸發物之有義股5'端與反義股3'端形成鈍端。在一些實施例中，本文所述之RNAi觸發物之有義股3'端與反義股5'端形成鈍端。在一些實施例中，本文所述之RNAi觸發物之兩端均形成鈍端。在一些實施例中，本文所述之RNAi觸發物之兩端均非鈍端。如本文所用，鈍端係指雙股觸發分子之末端，其中兩條經退火之股之末端核苷酸具有互補性(形成互補鹼基對)。在一些實施例中，本文所述之RNAi觸發物之有義股5'端與反義股3'端形成翻口端。在一些實施例中，本文所述之RNAi觸發物之有義股3'端與反義股5'端形成翻口端。在一些實施例中，本文所述之RNAi觸發物之兩端形成翻口端。在一些實施例中，本文所述之RNAi觸發物之兩端均非翻口端。如本文所用，翻口端係指雙股觸發分子之末端，其中兩條經退火之股之末端核苷酸無互補性(即形成非互補鹼基對)。如
本文所用，懸垂部分為一或多個在雙股RNAi觸發分子之一股之末段的不成對核苷酸之段。不成對核苷酸可在有義股或反義股上，從而產生3'或5'懸垂部分。在一些實施例中，RNAi觸發分子含有：鈍端及翻口端、鈍端及5'懸垂端、鈍端及3'懸垂端、翻口端及5'懸垂端、翻口端及3'懸垂端、兩個5'懸垂端、兩個3'懸垂端，或5'懸垂端及3'懸垂端。
在一個較佳實施例中，本發明之AAT RNAi觸發分子包含選自由以下組成之群的序列對：SEQ ID NO：15/23、15/24、16/28、17/30、18/31、19/36及19/38。在另一較佳實施例中，本發明之AAT部分雙鏈體RNAi觸發分子包含選自由以下組成之群的部分雙鏈體：SEQ ID NO：15/25/41、15/26/42、15/27/43、16/29/44、18/32/45、18/33/46、18/34/47、18/35/48及19/37/49。
RNAi觸發物(亦稱為dsRNAi觸發物)經由RNA干擾(RNAi)之生物過程來抑制基因表現。RNAi觸發物包含雙股RNA或RNA樣結構，該結構通常含有15-50個鹼基對及較佳地18-25個鹼基對，且具有與細胞內經表現之目標基因中之編碼序列一致(完全互補)或幾乎一致(實質上互補)的核苷鹼基序列。RNAi觸發物包括(但不限於)：短干擾性RNA(siRNA)、雙股RNA(dsRNA)、微RNA(miRNA)、短髮夾RNA(shRNA)、部分雙鏈體、含解鎖核酸之dsRNA及切丁酶受質(美國專利第8,084,599號、第8,349,809號及第8,513,207號)。
本文所述之AAT RNAi觸發分子可包含天然存在之核苷酸或可包含至少一種經修飾之核苷酸或核苷酸模擬物。本文所述之RNAi觸發物有義及反義股可藉由此項技術中公認之方法來合成及/或修飾。
核苷酸鹼基(或核苷鹼基)為雜環嘧啶或嘌呤化合物，其為所有核酸之成分且包括腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)及尿嘧啶(U)。核苷為某些嘧啶或嘌呤鹼基之核糖基或去氧核糖基衍生物。其因此為藉由缺乏磷酸化而與核苷酸相關之醣苷胺或N-醣苷。亦變得
慣例的是，在核苷中包括葡糖基基團連接於碳而非氮之類似物質(『C-核苷』)。核苷酸為藉由用磷酸酯化核苷之3'或5'羥基在形式上獲得之化合物。其為核酸單體。
如本文所用，「G」、「C」、「A」、「U」及「T」或「dT」分別地各自一般而言表示核苷鹼基、核苷、核苷酸或核苷酸模擬物，其分別含有鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、尿嘧啶及去氧胸苷作為鹼基。又，如本文所用，術語「核糖核苷酸」或「核苷酸」亦可指經修飾之核苷酸或核苷酸模擬物，如下文進一步詳述，或替代性置換部分。包含此等置換部分之序列為本文所述之實施例。
對於本文所述之RNAi觸發分子，核苷或核苷酸鹼基可由含磷酸酯(天然)或不含磷酸酯(非天然)之共價核苷間鍵連接，即RNAi觸發分子可具有天然或非天然之寡核苷酸主鏈。在另一實施例中，RNAi觸發物在兩個核苷酸鹼基之間含有非標準(非磷酸酯)鍵。
在一個較佳實施例中，RNAi觸發分子之一或多個核苷酸為經修飾之核苷酸。在另一實施例中，至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或100%之核苷酸係經修飾。經修飾之核苷酸包括(但不限於)：2'修飾、2'-O-甲基核苷酸(在本文中以核苷酸序列中之小寫字母『n』表示)、2'-去氧-2'-氟核苷酸(在本文中以Nf表示，在本文中亦以2'氟核苷酸表示)、2'-去氧核苷酸(在本文中以dN表示)、2'-胺基核苷酸、2'-烷基核苷酸、末端3'至3'鍵、反向去氧胸苷(在本文中以invdT表示)、包含5'-硫代磷酸酯基之核苷酸(在本文中以在核苷酸之前的小寫字母『s』表示，如在sN中)、硫代磷酸酯鍵、二硫代磷酸酯基、包含非天然鹼基之核苷酸、鎖核苷酸、橋連核苷酸、肽核酸、2',3'-斷核苷酸模擬物(解鎖核苷酸，在本文中以NUNA表示)、嗎啉基核苷酸及無鹼基核苷酸。不必要使既定化合物中之所有位置均得到均勻修飾。相反地，可將一個以上修飾併入單一RNAi觸發物化合物中或甚至其單一
核苷酸中。可將核糖2'修飾與經修飾之核苷鍵組合。
較佳經修飾之核苷間鍵或主鏈包括(例如)硫代磷酸酯、對掌性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、胺基烷基磷酸三酯、甲基及其他烷基膦酸酯(包括膦酸3'-伸烷酯及對掌性膦酸酯)、次膦酸酯、磷醯胺(包括3'-胺基磷醯胺及胺基烷基磷醯胺)、硫羰基磷醯胺、膦酸硫羰基烷酯、硫羰基烷基磷酸三酯，及具有法線3'-5'鍵之硼烷基磷酸酯、其2'-5'連接之類似物及具有反極性之彼等，其中相鄰核苷單元對為3'-5'連接至5'-3'或2'-5'連接至5'-2'。亦包括多種鹽、混合鹽及無酸形式。
較佳的不包括磷原子(即寡核苷)之經修飾之核苷間鍵或主鏈具有藉由短鏈烷基或環烷基糖間鍵、混合雜原子及烷基或環烷基糖間鍵或一或多個短鏈雜原子或雜環糖間鍵形成的主鏈。其包括具有嗎啉基鍵之彼等(部分地由核苷之糖部分形成)；矽氧烷主鏈；硫化物、亞碸及碸主鏈；亞甲基氧基及硫基亞甲基氧基主鏈；亞甲基亞甲基氧基及硫基亞甲基氧基主鏈；含有烯烴之主鏈；胺基磺酸酯主鏈；亞甲基亞胺基及亞甲基肼基主鏈；磺酸酯及磺醯胺主鏈；醯胺主鏈；及具有混合N、O、S及CH2組分部分之其他物質。
在另一實施例中，本文所述之AAT RNAi觸發分子為具有經修飾之核苷酸的規範siRNA。表3中展示適於形成具有經修飾之核苷酸之AAT規範siRNA RNAi觸發物的例示性序列。例示性AAT規範siRNA RNAi觸發物為以下SEQ ID對：50/62、50/63、53/67、54/69、55/70、56/75及56/77。
在另一實施例中，本文所述之AAT RNAi觸發分子為具有經修飾之核苷酸的部分雙鏈體。表4中展示適於形成具有經修飾之核苷酸之AAT部分雙鏈體RNAi觸發物的例示性序列。例示性AAT部分雙鏈體RNAi觸發物為以下SEQ ID部分雙鏈體：50/64/81、50/65/82、50/66/83、53/68/84、55/71/85、55/72/86、55/73/87、55/74/88及56/76/89。
AAT RNAi觸發物反義股較佳地含有至少一個「解鎖核苷酸」(UNA)、AAT UNA RNAi觸發物。UNA為無環-RNA模擬物，亦稱2',3'-斷-RNA，其中不存在C2'-C3'核糖鍵。因為不存在核糖2'、3'鍵，所以UNA為可撓的，從而可調節親和力及特異性。UNA顯示對互補股之結合親和力減小，導致雙鏈體之熱穩定性降低。UNA可位於沿著RNAi觸發物之鹼基股的任一處。本文所述之RNAi觸發物較佳含有位於位置6或7(編號包括5'dT核苷酸延伸)之UNA。表5中展示適於形成AAT UNA RNAi觸發物之例示性序列。例示性AAT UNA RNAi觸發物為以下SEQ ID對：51/63、52/63、57/77及58/77。
經修飾之核苷鹼基包括其他合成及天然的核苷鹼基，諸如5-取代嘧啶、6-氮雜嘧啶及N-2、N-6及O-6取代之嘌呤(包括2-胺丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶及5-丙炔基胞嘧啶)、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、腺嘌呤及鳥嘌呤之6-甲基及其他烷基衍生物、腺嘌呤及鳥嘌呤之2-丙基及其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶及2-硫胞嘧啶、5-鹵基尿嘧啶及胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶及胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶及胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-鹵基、8-胺基、8-巰基、8-硫代烷基、8-羥基及其他8-取代腺嘌呤及鳥嘌呤、5-鹵基，尤其5-溴基、5-三氟甲基及其他5-取代脲嘧啶類及胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤及7-甲基腺嘌呤、8-鳥嘌呤唑及8-氮雜腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤及7-去氮腺嘌呤及3-去氮鳥嘌呤及3-去氮腺嘌呤。
在一個實施例中，本文所述之AAT RNAi觸發物包含偶聯於RNAi觸發物之靶向部分。吾人已發現RNAi觸發物偶聯於靶向部分(其中靶向部分包含疏水基)或半乳糖簇有助於RNAi觸發物體內靶向肝。RNAi觸發物-靶向部分偶聯物係藉由將RNAi觸發物共價連接於靶向部分來形成。可將靶向部分連接於RNAi觸發物有義股或反義股之3'或5'端。
較佳將靶向部分連接於RNAi觸發物有義股5'端。
在一個實施例中，靶向部分由疏水基組成。更特定言之，RNAi觸發物靶向部分由具有至少20個碳原子之疏水基組成。用作靶向部分之疏水基在本文中稱為疏水性靶向部分。疏水性靶向部分較佳為僅含有碳及氫原子之烴。然而，可允許維持疏水性之取代或雜原子，例如氟。適用作靶向部分之疏水基可選自由以下組成之群：烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基及芳炔基，其各自可為線性、分支鏈或環狀的膽固醇、膽固醇衍生物、固醇、類固醇及類固醇衍生物。例示性的適合之疏水基可選自包含以下之群：膽固醇、膽固醇衍生物、二膽固醇、生育酚、二生育酚、二癸基、二(十二烷基)、二(十八烷基)、二(十二烷基)、二(十八烷基)、類異戊二烯及膽醯胺。
在另一實施例中，靶向部分包含半乳糖靶向部分或半乳糖簇靶向部分。如本文中使用，半乳糖簇包含具有二至四種通常三種末端半乳糖衍生物之分子。如本文所用，術語半乳糖衍生物包括半乳糖與對脫唾液酸糖蛋白受體之親和力等於或大於半乳糖之衍生物。適用於將寡核苷酸及其他分子體內靶向肝之半乳糖或半乳糖簇為此項技術中熟知。
此項技術中常見之其他術語包括三觸角半乳糖、三化合價半乳糖及半乳糖三聚體。較佳半乳糖衍生物為N-乙醯基-半乳糖胺(GalNAc)。其他對脫唾液酸糖蛋白受體具有親和力之醣類可選自包含以下之清單：半乳糖、半乳糖胺、N-甲醯基半乳糖胺、N-乙醯半乳糖胺、N-丙醯基-半乳糖胺、N-正丁醯基半乳糖胺及N-異丁醯基半乳糖胺。
在一個實施例中，靶向部分偶聯於AAT RNAi觸發物有義股之5'端。在另一較佳實施例中，靶向部分偶聯於具有UAU延伸之AAT RNAi觸發物有義股之5'端。較佳靶向部分為膽固醇基衍生物。較佳UAU延伸為uAu延伸。在又一實施例中，膽固醇基衍生物經由接頭連接於AAT
RNAi觸發物有義股之5'端。例示性接頭包括烷基及PEG基。較佳PEG接頭為三甘醇鍵。
具有膽固醇基靶向部分之例示性AAT RNAi觸發物包括：以下SEQ ID對或部分雙鏈體：50/63、56/77、50/64/81、50/65/82、50/66/83、53/68/84、55/71/85、55/72/86、55/73/87、55/74/88、56/76/89、51/63、52/63、57/77及58/77。
本文所述之RNAi觸發分子可合成為在5'端具有反應性基團，諸如胺基。反應性基團隨後可用於使用此項技術中典型之方法來連接靶向部分。
如本文所用，術語「序列」係指由使用標準核苷酸命名法提及之序列描述的核苷酸鏈。然而，如本文詳述，此「構成序列之股」亦可包含修飾，如經修飾之核苷酸及核苷酸模擬物。
如本文所用，且除非另有規定，否則術語「互補性」當用於相對於第二核苷酸序列(例如RNAi觸發物反義股)來描述第一核苷酸序列(例如RNAi觸發物有義股或AAT mRNA)時係指包含第一核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸在一定條件下與包含第二核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸雜交且形成雙鏈體或雙螺旋結構之能力。互補序列包括沃森-克裏克鹼基對或非沃森-克裏克鹼基對，且包括天然或經修飾之核苷酸或核苷酸模擬物，只要滿足上述關於其雜交能力之要求。完美或完全互補意謂第一聚核苷酸之鄰接序列中所有鹼基均將與第二聚核苷
酸之鄰接序列中相同數目之鹼基雜交。鄰接序列可包含第一或第二核苷酸序列之全部或一部分。部分互補意謂在雜交之核苷鹼基序列對中存在一或多個不匹配鹼基對。如本文所用之實質互補當提及本文所述之RNAi觸發物時意謂在雜交之核苷鹼基序列對中存在1至3個不匹配鹼基對。關於在RNAi觸發物之有義股與反義股之間或在RNAi觸發物之反義股與AAT mRNA之序列之間的鹼基匹配，在本文中可使用術語「互補」、「完全互補」及「實質上互補」。
吾人描述用於抑制細胞、細胞群、組織或受試者中之AAT表現的組合物及方法，該方法包括：向受試者投與治療有效量之本文所述之AAT RNAi觸發物，藉此抑制受試者之AAT表現。沈默、減小、抑制、下調或降低基因表現(只要其係指AAT基因)意謂當用本文所述之AAT RNAi觸發物處理AAT基因轉錄之細胞、細胞群、組織或受試者時，與未或尚未如此治療之第二細胞、細胞群、組織或受試者相比，該細胞、細胞群、組織或受試者中該基因之表現減小，如藉由自該基因轉錄之RNA含量或自mRNA轉譯之多肽、蛋白質或蛋白質亞單位之含量所量測。
此外，本發明係關於一種抑制細胞、組織或生物體中之AAT基因表現方法，其包括以下步驟：將如本文定義之RNAi觸發物引入細胞、組織或生物體中；及將該細胞、組織或生物體維持足以達成AAT之mRNA轉錄物降解的時間，藉此抑制既定細胞中之AAT表現。
在一些實施例中，吾人描述醫藥組合物，其包含至少一種所述之AAT RNAi觸發物。此等醫藥組合物尤其適用於抑制細胞、組織或生物體中之AAT基因表現。所述之醫藥組合物可用以治療患有將受益於AAT表現減小或抑制之疾病或病症之受試者。所述之醫藥組合物可用以治療處於產生將受益於AAT表現減小或抑制之疾病或病症之風險中的受試者。將受益於AAT表現減小或抑制之疾病及/或病症可選自包含
以下之清單：AATD、慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌及暴發性肝衰竭。較佳地，受試者為哺乳動物，最佳為人類患者。在一個實施例中，該方法包括向待治療哺乳動物投與包含本文所述之AAT RNAi觸發分子之組合物。上述醫藥組合物亦可包含一或多種醫藥學上可接受之賦形劑(包括媒劑、載劑、稀釋劑及/或遞送聚合物)。
在另一實施例中，本發明提供治療、預防或管理與AATD(包括AATD)相關之臨床表現之方法。該等方法包括向需要此治療、預防或管理之受試者投與治療或預防有效量之一或多種本文所述之AAT RNAi觸發物。較佳地，該受試者為哺乳動物，最佳為人類患者。在一個實施例中，該方法包括向待治療哺乳動物投與包含本文所述之AAT RNAi觸發分子之組合物。
術語「治療(treat)」、「治療(treatment)」及其類似術語在本發明之上下文中意謂減輕或緩解與AATD相關之病症。
所述之AAT RNAi觸發物及方法可用以治療或預防患有將受益於AAT表現減小或抑制之疾病或病症之受試者的至少一種症狀。向該受試者投與治療有效量之任何一或多種所述RNAi觸發物，藉此治療該症狀。向該受試者投與預防有效量之任何一或多種所述RNAi觸發物，藉此預防該至少一種症狀。
在一些實施例中，相對於未接受該AAT RNAi觸發物之受試者，經投與所述AAT RNAi觸發物之受試者之AAT的基因表現程度及/或mRNA含量減小至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或98%。受試者之基因表現程度及/或mRNA含量可在受試者之細胞、細胞群及/或組織中減小。在一些實施例中，相對於未接受AAT RNAi觸發物之受試者，經投與所述AAT RNAi觸發物之受試者之AAT蛋白含量減小至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、
50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或98%。受試者之蛋白含量可在受試者之細胞、細胞群、組織、血液及/或其他體液中減小。基因表現、mRNA或蛋白含量之減小可藉由任何在此項技術中已知之方法來評估。AAT mRNA含量及/或蛋白含量之減小或降低在本文中總稱AAT減少或降低或AAT表現抑制或減小。
當提及RNAi觸發物時，「引入細胞中」意謂將RNAi觸發物功能上遞送至細胞中。功能性遞送意謂將RNAi觸發物遞送至細胞中且具有預期生物活性，即基因表現之序列特異性抑制。投與至哺乳動物血管之許多分子(包括RNAi觸發分子)通常會由肝自身體清除。不將其中RNAi觸發物降解或以其他方式處理以便自身體移除以及其中RNAi觸發物不會導致基因表現之序列特異性抑制的肝對RNAi觸發物之清除視為功能性遞送。
投藥途徑為使RNAi觸發物接觸身體之路徑。一般而言，投與藥物及核酸以治療哺乳動物之方法為此項技術中所熟知，且可應用於本文所述之組合物的投與。本發明之化合物可經由任何適合途徑、以針對具體途徑適當定製之製劑來投與。因此，本發明之化合物可藉由注射投與，例如靜脈內、肌肉內、皮內、皮下或腹膜內投與。因此，本發明亦提供包含醫藥學上可接受之載劑或賦形劑之醫藥組合物。
可使用此項技術中已知之寡核苷酸遞送技術將本文所述之AAT RNAi觸發分子或組合物遞送至細胞、細胞群、組織或受試者。一般而言，在此項技術中公認之任何適用於遞送核酸分子(體外或體內)之方法均可適用於本發明之RNAi觸發物。舉例而言，遞送可藉由局部投與(例如直接注射、植入或表面投與)、全身性投與，或皮下、靜脈內、經口、腹膜內，或非經腸途徑，包括顱內(例如腦室內、腦實質內及鞘內)、肌肉內、經皮、氣管(氣霧劑)、經鼻、經直腸或表面(包括經頰及舌下)投與來實現。在某些實施例中，藉由皮下或靜脈內輸注或注射來
投與組合物。
RNAi觸發物可與脂質、奈米粒子、聚合物、脂質體、微胞、DPC或此項技術中可用之其他遞送系統組合。RNAi觸發物亦可化學偶聯於靶向部分、脂質(包括(但不限於)膽固醇及膽固醇基衍生物)、奈米粒子、聚合物、脂質體、微胞、DPC(WO 2000/053722、WO 2008/0022309、WO 2011/104169及WO 2012/083185，其各自以引用的方式併入本文中)，或此項技術中可用之其他遞送系統。
如本文所用，「醫藥組合物」包含藥理學有效量之至少一種RNAi觸發物及醫藥學上可接受之載劑及視情況賦形劑。一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。醫藥學上可接受之賦形劑(賦形劑)為除活性醫藥成分(API，治療產品，例如AAT RNAi觸發物)以外之已適當評價安全性且有意地包括在藥物遞送系統中之物質。在預期劑量下賦形劑不會發揮或不會意欲發揮治療作用。賦形劑可用於a)幫助在製造期間藥物遞送系統之加工，b)保護、支援或增強API之穩定性、生物可用性或患者可接受性，c)有助於產品鑒定，及/或d)在儲存或使用期間增強API之總體安全性、效用、遞送之任何其他屬性。
賦形劑包括(但不限於)：吸收促進劑、防黏劑、消泡劑、抗氧化劑、黏合劑、黏合劑、緩衝劑、載劑、包衣劑、著色劑、遞送增強劑、聚葡萄糖、右旋糖、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、增量劑、填料、香料、助流劑、保濕劑、潤滑劑、油類、聚合物、防腐劑、鹽水、鹽、溶劑、糖、懸浮劑、緩釋基質、甜味劑、增稠劑、張力劑、媒劑、憎水劑及潤濕劑。醫藥學上可接受之賦形劑可或可不為惰性物質。
醫藥組合物可含有其他在醫藥組合物中常見之附加組分。醫藥學上活性物質可包括(但不限於)：抗瘙癢劑、收斂劑、局部麻醉劑或消炎劑(例如抗組織胺、苯海拉明(diphenhydramine)等)。亦設想表現或包含本文定義之RNAi觸發物的細胞、組織或離體器官可用作「醫藥組合
物」。如本文所用，「藥理學有效量」、「治療有效量」或簡單地「有效量」係指產生預定藥理、治療或預防結果之RNAi觸發物之量。
在一個實施例中，將AAT RNAi觸發物-靶向部分偶聯物與MLP遞送聚合物(賦形劑)共投與。共投與意謂將AAT RNAi觸發物及遞送聚合物投與哺乳動物以使其同時存在於哺乳動物體內。AAT RNAi觸發物-靶向部分偶聯物與遞送聚合物可同時投與或其可依次遞送。對於同時投與，其可在投與之前混合。對於依次投與，可首先投與AAT RNAi觸發物-靶向部分偶聯物或遞送聚合物。
在一個較佳實施例中，本發明之特徵在於將AAT RNAi觸發物遞送至體內肝細胞之醫藥組合物，其包含：a)AAT RNAi觸發物與含有至少20個碳原子之疏水基諸如膽固醇的偶聯物(RNA觸發物-偶聯物)，及b)MLP遞送聚合物。MLP遞送聚合物及RNA觸發物-偶聯物係分別合成，且可在獨立容器或單一容器中提供。在一個較佳實施例中，AAT RNAi觸發物不偶聯於遞送聚合物。
如本文所用之蜂毒素樣肽MLP為小型兩親媒性膜活性肽，其包含約23至約32個來源於天然存在之蜂毒肽即蜂毒素之胺基酸，如WO 2012/083185中所述。天然存在之蜂毒素含有26個胺基酸，且在胺基末端主要具有疏水性且在羧基末端主要具有親水性(陽離子性)。本文所述之MLP可自生物來源分離得到或其可為合成的。合成聚合物係藉由化學方法「人工」調配或製造且並非藉由天然存在之生物過程產生。如本文所用，MLP涵蓋可見於例如以下物種之毒液中的蜂毒素家族之天然存在之蜂毒肽：小蜜蜂(Apis florea)、義大利蜂(Apis mellifera)、中華蜜蜂(Apis cerana)、排蜂(Apis dorsata)、額斑黃胡蜂(Vespula maculifrons)、大胡蜂(Vespa magnifica)、黃腳虎頭蜂(Vespa velutina)、長腳蜂屬某種(Polistes sp.)HQL-2001及亞非馬蜂(Polistes hebraeus)。
如本文所用，MLP亦涵蓋具有與天然存在之蜂毒素肽一致或類似的胺基酸序列之合成肽。例示性MLP胺基酸序列包括圖6中所示之彼等。除保留蜂毒素固有之高膜活性的胺基酸以外，亦可將1至8個胺基酸添加至肽之胺基或羧基末端。特定言之，可將半胱胺酸殘基加至胺基或羧基末端。圖1中之清單不意謂為詳盡的，如可容易地設想其他保守性胺基酸取代。合成MLP可含有天然存在之L形式胺基酸或鏡像異構D形式胺基酸(翻轉構型)。然而，MLP應含有基本上所有L形式或所有D形式胺基酸，但可具有附於胺基或羧基末端之相反立體中心之胺基酸。MLP胺基酸序列亦可逆轉(反向)。反向MLP可具有L形式胺基酸或D形式胺基酸(反式翻轉構型)。MLP可具有除遮蔽劑以外之增強組織靶向或有助於體內循環的連接於肽之胺基末端或羧基末端之修飾基團。然而，如本文所用，MLP不包括含有兩種以上相互共價連接或與另一聚合物或支架共價連接之MLP肽的鏈或聚合物。
在一個實施例中，MLP包含小蜜蜂(小的或矮的蜜蜂)蜂毒素、義大利蜂(西方或歐洲或大的蜜蜂)、排蜂(巨大蜜蜂)、中華蜜蜂(東方蜜蜂)或其衍生物。較佳MLP包含以下序列：Xaa1-Xaa2-Xaa3-Ala-Xaa5-Leu-Xaa7-Val-Leu-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Leu-Pro-Xaa15-Leu-Xaa17-Xaa18-Trp-Xaa20-Xaa21-Xaa22-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26，其中：Xaa1為白胺酸、D-白胺酸、異白胺酸、正白胺酸、酪胺酸、色胺酸、纈胺酸、丙胺酸、二甲基甘胺酸、甘胺酸、組胺酸、苯丙胺酸或半胱胺酸，Xaa2為異白胺酸、白胺酸、正白胺酸或纈胺酸，Xaa3為甘胺酸、白胺酸或纈胺酸，Xaa5為異白胺酸、白胺酸、正白胺酸或纈胺酸，Xaa7為離胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、丙胺酸、精胺酸或組胺酸，
Xaa10為丙胺酸、蘇胺酸或白胺酸，Xaa11為蘇胺酸或半胱胺酸，Xaa12為甘胺酸、白胺酸或色胺酸，Xaa15為蘇胺酸或丙胺酸，Xaa17為異白胺酸、白胺酸、正白胺酸或纈胺酸，Xaa18為絲胺酸或半胱胺酸，Xaa20為異白胺酸、白胺酸、正白胺酸或纈胺酸，Xaa21為離胺酸或丙胺酸，Xaa22為天冬醯胺或精胺酸，Xaa23為離胺酸或丙胺酸，Xaa24為精胺酸或離胺酸，Xaa25為離胺酸、丙胺酸或麩醯胺酸，Xaa26為視情況選用的且若有的話則為麩醯胺酸、半胱胺酸、麩醯胺酸-NH2或半胱胺酸-NH2；且且Xaa21、Xaa23及Xaa25中之至少兩者為離胺酸。
在另一實施例中，MLP包含以下序列：Xaa1-Xaa2-Xaa3-Ala-Xaa5-Leu-Xaa7-Val-Leu-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Leu-Pro-Xaa15-Leu-Xaa17-Ser-Trp-Xaa20-Lys-Xaa22-Lys-Arg-Lys-Xaa26，其中：Xaa1為白胺酸、D-白胺酸、正白胺酸或酪胺酸，Xaa2為異白胺酸、白胺酸、正白胺酸或纈胺酸，Xaa3為甘胺酸、白胺酸或纈胺酸，Xaa5為異白胺酸、纈胺酸、白胺酸或正白胺酸，Xaa7為離胺酸、絲胺酸、天冬醯胺、丙胺酸、精胺酸或組胺酸，Xaa10為丙胺酸、蘇胺酸或白胺酸，Xaa11為蘇胺酸或半胱胺酸，Xaa12為甘胺酸、白胺酸或色胺酸，
Xaa15為蘇胺酸或丙胺酸，Xaa17為異白胺酸、白胺酸或正白胺酸，Xaa20為異白胺酸、白胺酸或正白胺酸，Xaa22為天冬醯胺或精胺酸，且Xaa26為麩醯胺酸或半胱胺酸。
在另一實施例中，MLP包含以下序列：Xaa1-Xaa2-Gly-Ala-Xaa5-Leu-Lys-Val-Leu-Ala-Xaa11-Gly-Leu-Pro-Thr-Leu-Xaa17-Ser-Trp-Xaa20-Lys-Xaa22-Lys-Arg-Lys-Xaa26，其中：Xaa1、Xaa2、Xaa5、Xaa17及Xaa20獨立地為異白胺酸、白胺酸或正白胺酸，Xaa11為蘇胺酸或半胱胺酸，Xaa22為天冬醯胺或精胺酸，且Xaa26為麩醯胺酸或半胱胺酸。
在另一實施例中，MLP包含：Leu-Ile-Gly-Ala-Ile-Leu-Lys-Val-Leu-Ale-Thr-Gly-Leu-Pro-Thr-Leu-Ile-Ser-Trp-Ile-Lys-Asn-Lys-Arg-Lys-Gln。
本文所述之MLP具有膜活性，因此能夠破壞質膜或溶酶體/胞吞膜。如本文所用，膜活性肽為表面活性的能夠在生物膜上誘導以下作用中之一或多者的兩親媒性肽：允許非膜可滲透性分子進入細胞或穿過膜之膜改變或破壞、在膜中形成孔、膜分裂、或膜破壞或溶解。如本文所用，膜或細胞膜包含脂質雙層。膜改變或破壞在功能上可由肽在至少一種以下分析中之活性來定義：紅血球溶解(溶血)、脂質體滲漏、脂質體融合、細胞融合、細胞溶解及胞內釋放。將優先地引起質膜上之胞內體或溶酶體受到破壞之肽視為具有胞內溶解性。膜活性肽對細胞膜之影響可為短暫的。膜活性肽對膜具有親和力且會導致雙層結構發生變性或變形。RNAi觸發物遞送至細胞係由以下介導：MLP破
壞或去穩定化質膜或內囊膜(諸如胞內體或溶酶體)，包括在膜中形成孔，或破壞胞內體或溶酶體囊泡，藉此允許囊泡之內容物釋放至細胞質中。
MLP之膜活性係經可逆地遮蔽以得到MLP遞送聚合物。經由遮蔽劑可逆地連接MLP之一級胺來實現遮蔽。
遮蔽劑之必要的特徵在於，呈聚集體形式時，其會抑制MLP之膜活性且提供體內肝細胞靶向。如本文所用，若經修飾之MLP(MLP遞送聚合物)不顯示膜活性且顯示細胞特異性(即肝細胞)體內靶向，則MLP經遮蔽。若將遮蔽劑連接於肽之鍵斷裂引起MLP上之胺恢復，藉此恢復膜活性，則MLP經可逆地遮蔽。遮蔽劑之必要特徵在於，遮蔽劑經由生理學上不穩定之可逆鍵共價結合於MLP。藉由使用生理學上不穩定之可逆鍵聯或鍵，遮蔽劑可自MLP體內裂解，藉此使MLP失去遮蔽且使失去遮蔽之MLP恢復活性。將足夠數目之遮蔽劑連接於MLP以實現所需之不活化程度。藉由連接遮蔽劑來修飾MLP之所需程度係使用適當之肽活性分析來容易地測定。舉例而言，若MLP在既定分析中具有膜活性，則足夠程度之遮蔽劑經連接於MLP以在該分析中實現所需程度之膜活性抑制。較佳修飾MLP肽群體上80%或90%之一級胺基團，如藉由在無任何遮蔽劑存在下，肽上一級胺之量來測定。亦為遮蔽劑之較佳特徵的是，遮蔽劑連接於肽會減少聚合物之正電荷，因此形成更中性之遞送聚合物。需要遮蔽肽保留水溶性。
MLP遞送聚合物包含藉由肽上之一級胺與含脫唾液酸糖蛋白受體(ASGPr)配體之遮蔽劑的反應經可逆修飾之MLP，其中該可逆修飾在生理學上不穩定，如2012/083185中所述。
如本文所用，遮蔽劑包含較佳地中性(不帶電)之具有ASGPr配體及胺反應性基團之化合物，其中胺反應性基團與肽上之胺的反應使得ASGPr配體經由可逆的生理學上不穩定之共價鍵而鍵聯於肽。若修飾
基團之裂解恢復了該胺，則胺經可逆地修飾。較佳的含ASGPr配體之遮蔽劑具有中性電荷且包含ASGPr配體，諸如半乳糖胺或半乳糖胺衍生物，其具有雙取代之順丁烯二酸酐胺反應性基團。膜活性多胺可在過量遮蔽劑存在下偶聯於遮蔽劑。可在投與遞送聚合物之前自偶聯之遞送聚合物移除過量遮蔽劑。
半乳糖及半乳糖衍生物已經由其對在肝細胞表面上表現之脫唾液酸糖蛋白受體(ASGPr)之結合而用於將分子體內靶向肝細胞。如本文所用，一ASGPr配體(或ASGPr配體)包含半乳糖及對ASGPr之親和力等於或大於半乳糖之半乳糖衍生物。半乳糖靶向部分對ASGPr之結合有助於遞送聚合物對肝細胞之細胞特異性靶向及遞送聚合物向肝細胞中之胞吞。ASGPr配體可選自包含以下之群：乳糖、半乳糖、N-乙醯半乳糖胺(GalNAc)、半乳糖胺、N-甲醯基半乳糖胺、N-乙醯基-半乳糖胺、N-丙醯基半乳糖胺、N-正丁醯基半乳糖胺及N-異丁醯基-半乳糖胺(Iobst,S.T.及Drickamer,K.J.B.C.1996,271,6686)。ASGPr配體可為單體的(例如具有單個半乳糖胺)或多聚的(例如具有多個半乳糖胺)。
較佳遮蔽劑包含中性親水性雙取代之烷基順丁烯二酸酐：
其中R1包含不帶電之脫唾液酸糖蛋白受體配體。較佳烷基為甲基或乙基。經取代之烷基順丁烯二酸酐之實例由2-丙酸-3-烷基順丁烯二酸酐衍生物組成。中性親水性2-丙酸-3-烷基順丁烯二酸酐衍生物係藉由中性親水基經由2-丙酸-3-烷基順丁烯二酸酐γ-羧基連接於2-丙酸-3-烷基順丁烯二酸酐來形成。
其中R1包含中性ASGPr配體且n=0或1。在一個實施例中，ASGPr配體經由短PEG接頭連接於酐。
ASGPr配體經由對ASGPr之親和力來提供靶向功能。較佳ASGPr配體含有對ASGPr具有親和力之醣類，包括(但不限於)：半乳糖、N-乙醯基-半乳糖胺及半乳糖衍生物。此項技術中熟知對ASGPr具有親和力之半乳糖衍生物。
本發明包括組成如下之偶聯物遞送系統：N-T及MLP-(L-M) x ，其中N為AAT RNAi觸發物，T包含具有20或20個以上碳原子之疏水基，MLP為如本文所述之蜂毒素樣肽，且M含有經由生理學上不穩定之可逆馬來醯胺鍵L與MLP共價連接的如本文所述之ASGPr配體。L裂解恢復MLP上未經修飾之胺。x為大於1之整數。更特定言之，x值大於80%及多達100%之MLP群體上一級胺之數目。如本文所用，MLP-(L-M) x 為MLP遞送聚合物。
足夠百分比之MLP一級胺經修飾以抑制肽之膜活性且提供肝細胞靶向。較佳地，x值大於80%且更佳大於90% MLP群體上一級胺之數目，如藉由在無任何遮蔽劑存在下MLP群體上之胺量來測定。應注意，單個MLP通常含有3至5個一級胺(胺基(若未經修飾)且通常含有2至4個離胺酸殘基。呈未經修飾之狀態時，MLP具有膜活性。然而，MLP遞送聚合物MLP-(L-M) x 不具有膜活性。藉由連接M對MLP一級胺之可逆修飾可逆地抑制MLP膜活性或使MLP膜活性失活。在可逆鍵L裂解時，未經修飾之胺恢復，藉此使MLP還原至其未經修飾之膜活性
狀態。MLP-(L-M) x (即一種ASGPr靶向可逆地遮蔽之膜活性聚合物)及T-N(即一種RNAi觸發物-偶聯物)為分別合成或製造。T與N均不直接或間接地共價連接於MLP、L或M。對於RNAi-觸發物之體內肝遞送，不需要RNAi觸發物或RNAi-觸發物-偶聯物與遮蔽或失去遮蔽之聚合物的靜電性或疏水性締合。遮蔽聚合物及RNAi-觸發物偶聯物可在同一容器中或在獨立容器中提供。其可在投與之前便經組合、共投與或依次投與。
在一個態樣中，吾人描述了用於抑制AAT基因表現之醫藥組合物，其包含本文所述之AAT RNAi觸發物。
在一個實施例中，RNAi觸發物係在未經緩衝之溶液中投與。在一個實施例中，未經緩衝之溶液為鹽水或水。在一個實施例中，RNAi觸發物與緩衝溶液一起投與。在一個實施例中，緩衝溶液包含乙酸鹽、檸檬酸鹽、醇溶穀蛋白、碳酸鹽或磷酸鹽或其任何組合。在另一實施例中，緩衝溶液為磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。
根據本文所述之方法及用途投與所述AAT RNAi觸發物可使患有將受益於AAT表現抑制或減小之病症(諸如AATD)的受試者之此等疾病或病症之嚴重度、病徵、症狀及/或標記物減少。可例如藉由量測疾病進展、疾病緩解、症狀嚴重度、疼痛減輕、生活品質、維持治療效果所需之藥物劑量、疾病標記物含量或適於正在進行治療或針對性預防之既定疾病的任何其他可量測參數來評估疾病之治療或預防功效。
如本文使用之「治療有效量」意欲包括AAT RNAi觸發物或共同治療當投與患有AATD之受試者時足以實現疾病治療(例如藉由減小、改善或維持現有疾病或一或多種病徵來達成)之量。「治療有效量」可視AAT RNAi觸發物、共同治療、如何投與該觸發物、疾病及其嚴重度及病史、年齡、體重、家族史、基因組成、先前或伴隨治療(若有的話)之類型及待治療受試者之其他個別特徵而變化。
如本文使用之「預防有效量」意欲包括AAT RNAi觸發劑或共同治療當投與患有AATD但尚末(或目前)經歷或呈現疾病症狀之受試者及/或處於產生AATD的風險中之受試者時足以預防或改善疾病或疾病之一或多種症狀的量。改善疾病包括減緩疾病過程或減小以後產生的疾病之嚴重度。
在一個實施例中，劑量可為：0.0005、0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.125、0.15、0.175、0.2、0.225、0.25、0.275、0.3、0.325、0.35、0.375、0.4、0.425、0.45、0.475、0.5、0.525、0.55、0.575、0.6、0.625、0.65、0.675、0.7、0.725、0.75、0.775、0.8、0.825、0.85、0.875、0.9、0.925、0.95、0.975、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、31、32、33、34、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50mg/kg。所述值之中間的值亦意欲為本發明之部分。
在另一實施例中，劑量可為：0.1至50、0.25至50、0.5至50、0.75至50、1至50、1.5至50、2至50、2.5至50、3至50、3.5至50、4至50、4.5至50、5至50、7.5至50、10至50、15至50、20至50、20至50、25至50、25至50、30至50、35至50、40至50或45至50mg/kg。
在另一實施例中，劑量可為：0.1至45、0.25至45、0.5至45、0.75至45、1至45、1.5至45、2至45、2.5至45、3至45、3.5至45、4至45、4.5至45、5至45、7.5至45、10至45、15至45、20至45、20至45、25至45、25至45、30至45、35至45或40至45mg/kg。
在另一實施例中，劑量可為：0.1至40、0.25至40、0.5至40、0.75至40、1至40、1.5至40、2至40、2.5至40、3至40、3.5至40、4至40、4.5至40、5至40、7.5至40、10至40、15至40、20至40、20至40、25至40、25至40、30至40或35至40mg/kg。
在另一實施例中，劑量可為：0.1至30、0.25至30、0.5至30、0.75至30、1至30、1.5至30、2至30、2.5至30、3至30、3.5至30、4至30、4.5至30、5至30、7.5至30、10至30、15至30、20至30、20至30、25至30mg/kg。
在另一實施例中，劑量可為：0.1至20、0.25至20、0.5至20、0.75至20、1至20、1.5至20、2至20、2.5至20、3至20、3.5至20、4至20、4.5至20、5至20、7.5至20、10至20或15至20mg/kg。
在另一實施例中，劑量可為：0.01至10、0.05至10、0.1至10、0.2至10、0.3至10、0.4至10、0.5至10、1至10、1.5至10、2至10、2.5至10、3至10、3.5至10、4至10、4.5至10、5至10、5.5至10、6至10、6.5至10、7至10、7.5至10、8至10、8.5至10、9至10或9.5至10mg/kg。
在另一實施例中，劑量可為：0.01至5、0.05至5、0.1至5、0.2至5、0.3至5、0.4至5、0.5至5、1至5、1.5至5、2至5、2.5至5、3至5、3.5至5、4至5或4.5至5mg/kg。
在另一實施例中，劑量可為：0.01至2.5、0.05至2.5、0.1至2.5、0.2至2.5、0.3至2.5、0.4至2.5、0.5至5、1至2.5、1.5至2.5或2至2.5mg/kg。
在一個實施例中，一次性投與AAT RNAi觸發物。在另一實施例中，重複投與AAT RNAi觸發物(即重複劑量方案或多劑量方案)。對於
重複投與，可每天一次、每隔一天、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每週兩次、每週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每四(4)週至十四(14)週一次、每月兩次、每月一次、每兩月一次、每三個月以下一次或每四個月或更長時間一次對受試者投與AAT RNAi觸發物。所述值之中間的值亦意欲為本發明的部分。在另一實施例中，必要時可投與AAT觸發物。在另一實施例中，初始治療方案可包括以初始時間間隔重複投與及以較小頻率進行後續投與。舉例而言，在每週或每兩週一次投與一至六個月之後，此後可每月一次或更少地進行投與。初始時間間隔可為設定之投藥次數、設定之時間跨度，或直至量測到確定之AAT降低為止。對於任何給藥方案，無論單次或重複，可使用任一上述量。對於重複給藥，相同劑量或不同劑量可用於各次投藥。
本發明亦提供包含至少一種本文所述之RNAi觸發物之細胞。細胞較佳為哺乳動物細胞，諸如人類細胞。此外，包含本文定義之RNAi觸發分子之組織及/或非人類生物體為本發明之實施例，藉此該非人類生物體尤其適用於研究目的或適用作研究工具，例如在藥物測試中。
上文提供的本發明之實施例及條目現說明於以下非限制性實例中。
實例1. 鑑別RNAi觸發物序列。用於鑑別之選擇方法使UNA靶向AAT，其以電子(in silico)方法開始以在全部AAT基因變異體中鑑別保守序列。起初針對在11種已知之人類AAT變異體中具有精確互補序列之17-核苷酸序列篩選AAT cDNA序列。淘汰已知具有製造挑戰之序列，諸如具有五(5)個或五個以上連串的鳥嘌呤或胞嘧啶者，及基於已知siRNA參數預測為具有較差RNAi活性之彼等。亦淘汰包括單核苷酸多形態(SNP)，其中在19-mer序列之位置2至18的主要對偶基因頻率大
於0.2之序列。接著對序列進行交叉物種反應性分析以選擇將與獼猴AAT交叉反應之候選物。電子分析得到840種作為19-mer之序列及939種作為17-mer之序列。接著評價此等序列之特異性以避免針對人類及獼猴基因組之脫靶作用。淘汰在含脫靶基因之任一siRNA股之位置2-7含有保守miRNA種區之序列。接著選擇47種候選序列以用於產生RNAi觸發分子。
實例2. RNAi觸發物合成。
A)合成。在用於寡核苷酸合成之固相上根據亞磷醯胺技術來合成RNAi觸發分子。根據規模，使用MerMade96E(Bioautomation)或MerMade12(Bioautomation)。在由控制孔玻璃(CPG，對於dT為500Å且對於反向dT為600Å，獲自Prime Synthesis,Aston,PA,USA)製成之固體支撐物上進行合成。所有2'-修飾之RNA亞磷醯胺以及輔助試劑均購自Thermo Fisher Scientific(Milwaukee,WI,USA)。特定言之，使用以下2'-O-甲基亞磷醯胺：(5'-O-二甲氧基三苯甲基-N6-(苯甲醯基)-2'-O-甲基-腺苷-3'-O-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基胺基)亞磷醯胺、5'-O-二甲氧基-三苯甲基-N4-(乙醯基)-2'-O-甲基-胞嘧啶核苷-3'-O-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基胺基)亞磷醯胺、(5'-O-二甲氧基三苯甲基-N2-(異丁醯基)-2'-O-甲基-鳥嘌呤核苷-3'-O-(2-氰基-乙基-N,N-二異丙基胺基)亞磷醯胺及5'-O-二甲氧基-三苯甲基-2'-O-甲基-尿苷-3'-O-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基胺基)亞磷醯胺。2'-去氧-2'-氟-磷光體-醯胺攜帶與2'-O-甲基RNA醯胺(amidite)相同之保護基。5'-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-2',3'-斷-尿苷、2'-苯甲醯基-3'-[(2-氰基乙基)-(N,N-二異丙基)]-亞磷醯胺購自Link Technologies有限公司，Scotland。將所有醯胺均溶解於無水乙腈(50mM)中且添加分子篩(3Å)。為了在寡聚物之5'端引入TEG-Cholesterol，採用來自Glen Research(Sterling,VA,USA)之1-二甲氧基三苯甲基氧基-3-O-(N-膽固醇基-3-胺丙基)-三甘醇-甘油酯
-2-O-(2-氰基乙基)-(N,N,-二異丙基)-亞磷醯胺。在未對合成循環進行任何修改之情況下引入5'-修飾。將5-苯甲硫基-1H-四唑(BTT，250mM於乙腈中)用作活化物溶液。偶合時間為10分鐘(RNA)、180秒(膽固醇)、90秒(2'OMe及UNA)及60秒(2'F及DNA)。為了引入硫代磷酸酯鍵，採用100mM 3-苯基1,2,4-二噻唑啉-5-酮(POS，獲自PolyOrg公司，Leominster,MA,USA)於無水乙腈中之溶液。參見表1-5(圖1-5)。關於
(Chol-TEG)-RNA n=1-10，較佳地n=2
B.支撐結合寡聚物之裂解及脫除保護。在固相合成結束之後，在室溫下用1：1體積的40重量%甲胺於水中之溶液及28%氫氧化銨溶液(Aldrich)處理經乾燥之固體支撐物2小時。蒸發溶液且使固體殘留物在水中復原(參見下文)。
C.純化。藉由使用Waters XBridge BEH300 C4 5u製備型管柱及Shimadzu LC-8系統之逆相HPLC純化含有寡聚物之粗膽固醇。緩衝劑A為100mM TEAA(pH 7.5)且含有5%乙腈，且緩衝劑B為100mM TEAA且含有95%乙腈。採用45% B至55% B之梯度，歷時25分鐘。記錄在260nm下之UV跡線。接著在使用填充有Sephadex G-25介質與運行之100mM碳酸氫銨(pH 6.7)及20%乙腈緩衝劑的GE Healthcare XK 16/40之尺寸排阻HPLC上運作適當餾份。藉由使用TKSgel SuperQ-5PW 13u管柱及Shimadzu LC-8系統之陰離子交換HPLC純化其他粗寡聚物。緩衝劑A為20mM Tris、5mM EDTA(pH 9.0)且含有20%乙腈，且緩衝劑B與緩衝劑A相同並添加有1.5M氯化鈉。採用32.5% B至42.5% B之梯度，歷
時25分鐘。記錄在260nm下之UV跡線。彙集適當餾份，接著在如對含有寡聚物之膽固醇所述之尺寸排阻HPLC上運作。
D.退火。藉由在0.2×PBS(磷酸鹽緩衝鹽水，1×，Corning，Cellgro)中合併等莫耳RNA溶液(有義及反義)來混合互補股以形成RNAi觸發物。將此溶液放入70℃熱混合器中、加熱至95℃、保持在95℃下5分鐘，且緩慢冷卻至室溫。一些RNAi觸發物經凍乾且儲存在-15℃至-25℃下。藉由在UV-Vis光譜計上在0.2×PBS中量測溶液吸光度來測定雙鏈體濃度。接著將在260nm下之溶液吸光度乘以轉換因數及稀釋因數以測定雙鏈體濃度。除非另有說明，否則所有轉換因數均為0.037mg/(mL．cm)。對於一些實驗，使用0.0502mg/(mL．cm)之轉換因數。
實例3. 蜂毒素樣肽(MLP)遞送聚合物。
A)蜂毒素樣肽(MLP)合成。所有MLP均係使用此項技術中標準之肽合成技術製備。適合之MLP可為所有L-形式胺基酸、所有D形式胺基酸(翻轉構型)。與L或D形式無關地，MLP序列可為逆轉的(翻轉構型)。
B)CDM-NAG(N-乙醯半乳糖胺)合成。向CDM(300mg，0.16mmol)於50mL二氯甲烷中之溶液中添加乙二醯氯(2g，10重量當量)及二甲基甲醯胺(5μl)。使反應進行隔夜，此後藉由旋轉蒸發來移除過量乙二醯氯及二氯甲烷以得到CDM醯氯。將醯氯溶解於1mL二氯甲烷中。向此溶液中添加含1.1莫耳當量(胺基乙氧基)乙氧基-2-(乙醯胺基)-2-去氧-β-D-吡喃半乳糖苷(即胺基雙羥乙基-乙基NAG)及吡啶(200μl，1.5當量)之10mL二氯甲烷。接著攪拌該溶液1.5小時。接著移除溶劑且將所得固體溶解於5mL水中，且使用逆相HPLC使用0.1% TFA水/乙腈梯度進行純化。
n為1至10之整數。如上所示，PEG間隔基可位於酐基與ASGPr配體之間。較佳之PEG間隔基含有1-10個乙烯單元。替代性地，可在酐與N-乙醯半乳糖胺之間使用烷基間隔基。
n為0至6之整數。
可在酐與N-乙醯半乳糖胺之間使用其他間隔基或接頭。然而，親
水性、中性(較佳地不帶電的)間隔基接頭為較佳。
C)形成MLP遞送聚合物(即遮蔽)。使MLP與CDM-NAG遮蔽劑反應以得到MLP遞送聚合物。首先將MLP組分在HEPES水溶液(鈉鹽，GMP級，約430mg/mL)中溶解至最終濃度8.5mg/mL。接著將MLP溶液冷卻至4℃，且檢查外觀(無可見微粒之透明至淺黃色溶液)且藉由UV分光光度測定法來檢查濃度。在4℃下將CDM-NAG溶解於水中，至約75mg/mL之最終濃度。檢查溶液外觀(無可見微粒之透明至淺黃色溶液)且藉由UV分光光度測定法來檢查濃度。將溶液中之MLP與溶液中之CDM-NAG以CDM-NAG與MLP呈5：1(w/w)之比率混合。CDM-NAG溶液之添加速率為每分鐘約0.3L，同時攪拌。在所有CDM-NAG溶液均已添加至MLP溶液中之後，攪拌混合物30分鐘。為了穩定化MLP遞送聚合物，藉由添加1M氫氧化鈉水溶液將pH值增大至9.0±0.2。雙取代之順丁烯二酸酐遮蔽劑與肽之反應得到具有由以下表示之結構的化合物：
其中R為MLP且R1包含ASGPr配體(例如NAG)。
使用其餘游離胺之比色三硝基苯磺酸(TNBS)分析以確定MLP經CDM-NAG充分遮蔽，不到總數10%之MLP胺保持未經修飾。
藉由針對10mM、pH 9.2碳酸鹽緩衝液進行滲濾以移除過量CDM-NAG來純化MLP遞送聚合物。滲濾方法交換約10倍體積之碳酸鹽緩衝液/體積遮蔽MLP反應溶液且保持在2-8℃下。
將MLP遞送聚合物用聚葡萄糖進一步調配至10% w/v且儲存在2℃至8℃下。對於一些實驗，在使用之前凍乾此溶液。
D)注射液。藉由混合RNAi觸發物與MLP遞送聚合物來形成注射液。將凍乾之MLP遞送聚合物溶解於水中且與RNAi觸發物混合。接著用生理鹽水稀釋該溶液至正確注射濃度。
實例4. siRNA之體外篩選。將藉由電子分析(實例1)鑑別之候選序列篩選為經化學修飾之體外規範siRNA。電子鑑別之可能AAT RNAi觸發物中之四十六種係經合成為規範siRNA且針對體外功效進行篩選。將人類肝細胞癌細胞株Hep3B細胞以約10,000個細胞/孔塗鋪於96孔格式中。使用Lipofectamine RNAiMax(Life Technologies，0.3μL/孔)將46種siRNA中之每一者均以兩種濃度即1nM及10nM進行一式三份地轉染。轉染後二十四小時，溶解細胞且產生cDNA(TaqMan Cells-to-CT Gene Expression套組，Life Technologies)。藉由qRT-PCR與TaqMan化學基分析(Life Technologies)對人類AAT(分析ID：Hs01097800_m1)來評估AAT基因剔除，針對內源對照物人類親環素A(PPIA，4326316E)進行正規化。在46種體外測試之siRNA中，五種顯示AAT剔除至少80%。對其進行選擇以便進一步分析。使用相同之細胞及轉染條件來產生十點EC50曲線，siRNA濃度在0.001-1nM之範圍內。另外，五種最有效的規範siRNA中之每一者經重新設計且合成為相應部分雙鏈體RNAi觸發物、UNA RNAi觸發物及鎖核酸(LNA)RNAi觸發物。藉由體外剔除分析、藉由兩點濃度(在1nM及0.1nM下)分析與十點ED50測定來再次考查所得RNAi觸發物。對其中最有效的進行選擇以便進一步體內研究。
其中最強力的，SEQ ID 50/62靶向AAT mRNA中之位置1142-1160且具有0.01nM之EC50。
血清因數VII(F7)活性量測。藉由將血液收集至微離心管中來製備動物血清樣本。用顯色方法使用BIOPHEN VII套組(Hyphen BioMed/Aniara,Mason,OH)按照製造商建議來量測血漿中之F7活性。使用Tecan Safire2酶標儀在405nm下量測比色顯影之吸光度。
實例5. 小鼠AATD模型中RNAi觸發物功效之體內分析。為了評價候選RNAi觸發物體內功效，使用基因轉殖PiZ小鼠模型(PiZ小鼠)。PiZ小鼠具有人類PiZ AAT突變型對偶基因及模型人類AATD(Carlson等人，Journal of Clinical Investigation 1989)。如上所指出，針對與人類及獼猴AAT而非與大鼠或小鼠AAT之相互作用來電子選擇AAT RNAi觸發物。
使用MLP遞送聚合物將靶向之膽固醇RNAi觸發物遞送至PiZ小鼠。各小鼠接受向尾部靜脈之200-250μL溶液之靜脈內(IV)注射，該溶液含有8或2mg/kg RNAi觸發物+8mg/kg MLP遞送聚合物(分別為1：1或0.25：1 w/w RNAi觸發物：遞送聚合物)之劑量。藉由使用hAAT ELISA(Abcam)分析小鼠血清直至hAAT表現水準返回至基線為止來監測血清中之人類AAT蛋白(hAAT)含量。對於正規化，將在某一時點之各動物的AAT含量除以該動物之治療前表現水準(在這種情況下係在第1天)以測定「針對第1天正規化」之表現比率。接著針對鹽水對照組藉由將個別動物「針對第1天正規化」之比率除以鹽水對照組中所有小鼠之平均的「針對第1天正規化」之比率來正規化特定時點之表現。此得到針對對照組中表現正規化之各時點的表現。實驗誤差以標準偏差形式給出。
mRNA定量。如下自PiZ小鼠肝分離RNA。在安樂死之時，使用液氮將一至三片肝切片在1.5mL微離心管中速凍。將各小鼠之一片肝切
片轉移至15mL錐形管中之2mL TRI Reagent RT(Molecular Research Center公司，Cincinnati,OH)中。按照製造商建議之方案分離總RNA。簡言之，用組織均質機處理TRI Reagent RT中之肝切片，持續約30秒。將1mL勻漿添加至50μL 4-溴苯甲醚中，混合且藉由離心分離各相。移除0.25-0.5mL水相，用異丙醇沈澱，且離心。用75%乙醇洗滌所得沈澱且將其懸浮於0.3-0.7mL無核酸酶之水中。
使用高容量cDNA反轉錄套組(Life Technologies,Grand Island,NY)逆轉錄總RNA(約500ng)。接著1：5稀釋cDNA且使用5'核酸外切酶化學與用於人類α-1抗胰蛋白酶之市售FAM標記之分析(Assay ID Hs01097800_m1,Life Technologies)、用於小鼠β-肌動蛋白之VIC標記之內源對照分析(Life Technologies)及VeriQuest Master Mix(Affymetrix,Santa Clara,CA)進行多重RT-qPCR。使用相對定量之比較性CT方法(Livak及Schmittgen,2001)來分析基因表現資料。
實例6. 篩選AAT siRNA RNAi觸發物及AAT剔除時程。向如上所述之PiZ小鼠投與膽固醇偶聯之規範siRNA RNAi觸發物。各小鼠接受2mg/kg RNAi觸發物與8mg/kg MLP遞送聚合物之單次靜脈內(IV)劑
量。監測血清中之人類AAT蛋白含量多達29天。表8中展示剔除程度及反應持續時間。在投與SEQ ID 50/63及SEQ ID 56/77之後hAAT血清蛋白含量降低95%以上。
實例7. 篩選AAT部分雙鏈體RNAi觸發物及AAT剔除時程。向如上所述之PiZ小鼠投與膽固醇偶聯之部分雙鏈體RNAi觸發物。各小鼠接受8或2mg/kg RNAi觸發物與8mg/kg MLP遞送聚合物之單次靜脈內(IV)劑量。監測血清中之人類AAT蛋白含量多達39天。表10中展示剔除程度及反應持續時間。
實例8. 體內篩選AAT UNA RNAi觸發物及AAT剔除時程。向如上所述之PiZ小鼠投與膽固醇偶聯之UNA RNAi觸發物。各小鼠接受8或2mg/kg RNAi觸發物與8mg/kg MLP遞送聚合物之單次靜脈內(IV)劑量。監測血清中之人類AAT蛋白含量達40天。
在投與規範siRNA SEQ ID 50/63及UNA SEQ ID 52/63之後hAAT血清蛋白含量降低95%以上。注射後7天(第8天)觀測到最大剔除。用UNA SEQ ID 52/63之情況下，剔除減小80%以上持續21天以上(第22天)。UNA RNAi觸發物之剔除持續時間長於具有相同序列SEQ ID 50/63之規範chol-siRNA。
實例9. 肝mRNA分析。向如上所述之PiZ小鼠投與AAT RNAi觸發物。各小鼠接受6mg/kg RNAi觸發物與6mg/kg MLP遞送聚合物之單次靜脈內(IV)劑量。在第3天及第10天量測肝hAAT mRNA產生。mRNA含量降低與血清hAAT蛋白含量降低相關，除了mRNA降低比蛋白質降低早幾天以外。在PiZ小鼠中，在SEQ ID 52/63與MLP遞送聚合物之單次劑量之後第3天及第10天量測肝hAAT mRNA產生程度。觀測到肝hAAT mRNA含量持續降低，其與觀測到之血清hAAT蛋白含量降低相關。
表12. 在投與6mg/kg SEQ ID 52/63 RNAi觸發物或siLuc siRNA對照物與6mg/kg MLP遞送聚合物之後PiZ小鼠體內之血清hAAT蛋白含量。針對第1天及鹽水對照物正規化之血清hAAT含量。
實例10. SEQ ID 52/63 RNAi觸發物之體內劑量反應。向如上所述之PiZ小鼠投與不同量之UNA SEQ ID 52/63。各小鼠接受SEQ ID 52/63與4或8mg/kg MLP遞送聚合物之單次靜脈內(IV)劑量。監測血清中之人類AAT蛋白含量達35天。關於SEQ ID 52/63劑量與MLP遞送聚合物之劑量，hAAT剔除程度在很大程度上具有劑量依賴性(圖8)。
實例11. SEQ ID 52/63 RNAi觸發物之體內劑量反應。向如上所述之PiZ小鼠投與不同量之UNA SEQ ID 52/63。各小鼠接受SEQ ID 52/63與2、4或8mg/kg MLP遞送聚合物之單次靜脈內(IV)劑量。監測血清中之人類AAT蛋白含量達36天。增大之UNA劑量一般會引起所用各含量MLP遞送聚合物賦形劑之剔除的程度及持續時間增大。
實例12. 用SEQ ID 52/63 RNAi觸發物治療之PiZ基因轉殖小鼠之肝組織學。為了進一步評價肝中hAAT剔除之功效，評估在投與SEQ ID 52/63 RNAi觸發物與MLP遞送聚合物之後的雄性PiZ小鼠之肝樣本之組織學變化。向如上所述之PiZ小鼠投與UNA SEQ ID 52/63。各小鼠接受每兩週一次之8mg/kg SEQ ID 52/63與8mg/kg MLP遞送聚合物之靜脈內(IV)劑量之投與，持續8週。每週對小鼠放血以監測血清中之hAAT含量，且在投與SEQ ID 52/63與MLP遞送聚合物之後第57天將小鼠處死。收集肝樣本且將其固定於10%中性緩衝之福馬林中且嵌入石蠟中。藉由H&E染色評估炎性浸潤。每兩週一次用8mg/kg SEQ ID 52/63與8mg/kg MLP遞送聚合物注射8週之PiZ小鼠具有正常形態、無可偵測炎性浸潤性及極罕見之小Z-hAAT小球。每兩週一次用鹽水注射之PiZ小鼠在受損或死亡肝細胞週圍具有顯著小球累積以及炎性浸潤。Z-hAAT聚集係藉由對肝切片進行澱粉酶抗性過碘酸希夫(PAS-D)染色來可視化。在進行PAS染色之前肝醣經澱粉酶消化使Z-AAT蛋白累積或「小球」得到陽性染色。接受四次每兩週一次的8mg/kg SEQ ID 52/63與8mg/kg MLP遞送聚合物之靜脈內(IV)劑量歷經8週之過程的PiZ小鼠顯示，與接受鹽水或Luc UNA RNAi觸發物59/78對照注射劑(螢光素酶RNAi觸發物：dTCfgAfaGfUUNAAfcUfcAfgCfgUfaAfgdTsdT，SEQ ID
59；(Chol-TEG)uAuCfuUfaCfgCfuGfaGfuAfcUfuCfgAf(invdT)，SEQ ID 78)之PiZ小鼠相比，細胞內AAT小球減少。根據用PAS-D染色之肝樣品來數位定量小球數目、小球尺寸及由小球覆蓋之肝的面積。較之注射鹽水之對照物，以AAT-UNA治療之小鼠的小球要少85%、小球要小85%，且由小球覆蓋之肝的面積要小96%(圖10)。
實例13. 分析PiZ小鼠肝組織中之可溶性及不溶性Z-hAAT蛋白。進一步分析來自用SEQ ID 52/63 RNAi效應物治療之PiZ小鼠之均質化肝組織，以確定預期多為單體蛋白質之可溶性Z-hAAT，與不溶性Z-hAAT聚合物是否均有效減少。使用經修飾之西方墨點方案以在如先前所述之非變性條件下分離可溶性與不溶性Z-hAAT部分(Mueller等人，Molecular Therapy 2012)。經給予四次每兩週一次之8mg/kg SEQ ID 52/63與8mg/kg MLP遞送聚合物之靜脈內(IV)劑量持續8週的PiZ小鼠顯示，與經給予四次每兩週一次之鹽水靜脈內(IV)劑量之PiZ小鼠相比，可溶性Z-hAAT減少99%且不溶性Z-hAAT減少79%(圖11)。
實例14. 在PiZ小鼠中單次注射SEQ ID 52/63 RNAi觸發物所致之反應的體內持續時間。向如上所述之6月齡雌性PiZ小鼠投與鹽水、8mg/kg Luc-UNA+8mg/kg MLP遞送聚合物或8mg/kg AAT RNAi觸發
物SEQ ID 52/63+8mg/kg MLP遞送聚合物之單次靜脈內劑量。監測血清中之人類AAT蛋白含量達29天。在指定時間，收集血樣且藉由ELISA分析其hAAT。在投與觸發物之前收集第1天樣本。在mRNA分析中，在第3、8、15、22及29天中之每一天使3至4只小鼠安樂死。對於安樂死小鼠，進行心臟穿刺以便AAT ELISA血清分離(200μl血清)。收集一半左側肝葉且在液氮中速凍以便分離RNA。將左葉之其餘部分嵌埋至石蠟塊中以便用蘇木色素進行PAS-D染色以作為對比染色。經給予AAT RNAi觸發物SEQ ID 52/63之小鼠體內血清hAAT含量在第8天減少95%且至第29天仍保持減少，此時減少79%。在第3、8、15、22或29天使經給予AAT RNAi觸發物SEQ ID 52/63之小鼠安樂死。在第29天使經給予鹽水或Luc-RNAi觸發物(SEQ ID 59/78)之小鼠安樂死。藉由RT-qPCR量測肝中hAAT mRNA之含量。經給予UNA SEQ ID 52/63之小鼠體內hAAT mRNA在第3天減少97%且至第29天仍保持減少，此時含量降低56%。根據用PAS-D染色之肝樣品來數位定量小球尺寸及由小球覆蓋之肝的面積。以AAT-UNA治療之小鼠在第15天小球要小70%且在第29天小球要小62%。由小球覆蓋之肝的面積在第15天減少83%且在第29天減少72%(圖12)。
實例15. 在藉由MLP遞送聚合物遞送AAT RNA觸發分子之後靈長類動物中之α-1抗胰蛋白酶(AAT)剔除。製備MLP遞送聚合物及RNAi觸發物，且將其合併於如上所述之醫藥學上可接受之緩衝劑中。在第1天，對食蟹獼猴(cynomolgus macaque)(食蟹猴(Macaca fascicularis))靈長類動物(雄性及雌性，3至9kg)以不同劑量組合共注射MLP遞送聚合物與AAT UNA RNAi觸發物SEQ ID 52/63。所注射之劑量組合為：2.0
mg/kg MLP遞送聚合物+4.0 RNAi觸發物(n=3)、3mg/kg MLP遞送聚合物+1.5mg/kg RNAi觸發物(n=2)、3.0mg/kg MLP遞送聚合物+3.0mg/kg RNAi觸發物(n=3)、3.0mg/kg MLP遞送聚合物+6.0mg/kg RNAi觸發物(n=2)、6.0mg/kg MLP遞送聚合物+12mg/kg RNAi觸發物(n=3)(0.050s轉換因數用於確定RNAi觸發物濃度)及12mg/kg MLP遞送聚合物+6.0mg/kg RNAi觸發物(n=12)。對於各次注射，使用22至25號靜脈導管將MLP遞送聚合物+RNAi觸發物(2ml/kg)注射於隱靜脈中。在指定時點，抽取血樣且分析其AAT及毒性標記物。自股靜脈採血，且使靈長類動物在所有採血之前禁食隔夜。在Meriter實驗室或BASi在自動化學分析器上進行關於血液尿素氮(BUN)、丙胺酸轉胺酶(ALT)、天門冬胺酸轉胺(AST)及肌酸酐之血液測試。在Cobas Integra 400(Roche Diagnostics)上根據製造商建議測定AAT含量。在所有劑量組合下均觀測到AAT顯著剔除。在2mg/kg、3mg/kg或6mg/kg MLP之劑量下未觀測到毒性，但在12mg/kg MLP下，在注射後肝酶(ALT及AST)以及BUN及肌酸酐有所升高。
實例16. 重複投與。以六週間隔給予食蟹獼猴靈長類動物以五劑RNAi觸發物+MLP遞送聚合物。各劑以MLP與RNAi觸發物呈1：2之重
量與重量比含有MLP遞送聚合物及AAT-RNAi觸發物SEQ ID 52/63。第一次注射在第1天。所注射之劑量組合為：2.0mg/kg MLP遞送聚合物+4.0 RNAi觸發物(n=2)及3mg/kg MLP遞送聚合物+6mg/kg RNAi觸發物(n=2)。貫穿研究以一定間隔採血，且如所述量測血清中之AAT含量。以六週間隔重複給藥使血清AAT含量在對靈長類動物用3mg/kg MLP遞送聚合物+6mg/kg RNAi觸發物進行第一次治療之後二至三十週減小約80-90%。在用2.0mg/kg MLP遞送聚合物+4.0 RNAi觸發物對靈長類動物進行第一次治療之後血清AAT減小80%，且在第四次治療之後減小85%。在用2.0mg/kg MLP遞送聚合物+4.0 RNAi觸發物進行之各次治療之後六週量測的血清AAT含量反彈小於各次其他治療(圖13)。
<110> 美商愛羅海德研究公司 克莉絲丁 I 伍戴爾 大衛 L 路易士 戴倫 H 瓦克菲德 史蒂芬 B 坎納 羅倫 亞梅達
<120> 用於抑制α-1抗胰蛋白酶基因表現之組合物及方法
<130> 30624 US1
<150> 62013288
<151> 2014-06-17
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<212> PRT
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<222> 2,5,17,20
<223> Xaa為Nle
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<222> (5)..(5)
<223> Xaa為Nle
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<223> 蜂毒素樣肽
<400> 152
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<212> PRT
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<220>
<223> 蜂毒素樣肽
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa為Nle
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<223> 蜂毒素樣肽
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<223> 蜂毒素樣肽
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<223> 反向及蜂毒素樣序列
<400> 184
Claims (23)
- 一種RNA干擾(RNAi)觸發分子，其能夠抑制α-1抗胰蛋白酶基因之表現，其中該RNAi觸發分子包含有義序列及反義序列，其中該反義序列依次包含SEQ ID No.1、2、3、4或5之核苷酸1-18。
- 如請求項1之RNAi觸發分子，其中該有義股或該反義股進一步包含長度為1至5個核苷酸之3'延伸。
- 如請求項2之RNAi觸發分子，其中該反義股之該3'延伸包含dTdT或dTsdT。
- 如請求項2或3之RNAi觸發分子，其中該有義股之該3'延伸包含Af(invdT)。
- 如請求項1或2之RNAi觸發分子，其中該有義股或該反義股進一步包含長度為1至5個核苷酸之5'延伸。
- 如請求項5之RNAi觸發分子，其中該反義股之該5'延伸包含dT。
- 如請求項5之RNAi觸發分子，其中該有義股之該5'延伸包含UAU或uAu。
- 如請求項1至3中任一項之RNAi觸發分子，其中靶向部分偶聯於該有義股之該5'端。
- 如請求項8之RNAi觸發分子，其中該靶向部分包含膽固醇基。
- 如請求項9之RNAi觸發分子，其中該靶向部分包含膽固醇-三甘醇基。
- 如請求項1之RNAi觸發分子，其中該有義序列與反義序列形成選自由以下組成之群的序列對：SEQ ID NO：1/8、2/9、3/10、4/11或5/12。
- 如請求項1或2之RNAi觸發分子，其中該有義序列與反義序列形成 選自由以下組成之群的序列對或部分雙鏈體(meroduplex)：SEQ ID NO：15/23、15/24、15/25/41、15/26/42、15/27/43、16/28、16/29/44、17/30、18/31、18/32/45、18/33/46、18/34/47、18/35/48、16/36、19/37/49或19/38。
- 如請求項1至3中任一項之RNAi觸發分子，其中該有義股或反義股含有一或多種經修飾之核苷酸或核苷酸模擬物。
- 如請求項13之RNAi觸發分子，其中該有義序列與反義序列形成選自由以下組成之群的序列對：SEQ ID NO：50/62、50/63、53/67、54/69、55/70、56/75或56/77。
- 如請求項13之RNAi觸發分子，其中該有義序列與反義序列形成選自由以下組成之群的序列部分雙鏈體：SEQ ID NO：50/64/81、50/65/82、50/66/83、53/68/84、55/71/85、55/72/86、55/73/87、55/74/88或56/76/89。
- 如請求項13之RNAi觸發分子，其中該反義序列含有至少一種2',3'-斷RNA核苷酸模擬物。
- 如請求項16之RNAi觸發分子，其中該有義序列與反義序列形成選自由以下組成之群的序列對：SEQ ID NO：51/63、52/63、57/77或58/77。
- 如請求項13之RNAi觸發分子，其中經修飾之核苷酸選自由以下組成之群：2'-O-甲基修飾之核苷酸、包含5'-硫代磷酸酯基之核苷酸、2'-去氧-2'-氟修飾之核苷酸、2'-去氧修飾之核苷酸、鎖核苷酸、無鹼基核苷酸、去氧胸苷、反向去氧胸苷、2'-胺基修飾之核苷酸、2'-烷基修飾之核苷酸、嗎啉基核苷酸、連接硫代磷酸酯之核苷酸及包含非天然鹼基之核苷酸。
- 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至18中任一項之RNAi觸發物酸分子，及MLP遞送聚合物。
- 如請求項19之醫藥組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑、穩定劑及/或稀釋劑。
- 一種如請求項1至18中任一項之RNAi觸發物酸分子之用途，其係用於製備抑制細胞、組織或生物體中之AAT基因表現的藥物。
- 如請求項21之用途，其中抑制生物體中之AAT基因表現會治療、預防或管理由α-1抗胰蛋白酶缺乏引起之病理學病狀或疾病。
- 如請求項22之用途，其中該由α-1抗胰蛋白酶缺乏引起之病理學病狀或疾病選自由以下組成之群：慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌及暴發性肝衰竭。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3687808A (en) | 1969-08-14 | 1972-08-29 | Univ Leland Stanford Junior | Synthetic polynucleotides |
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| US5359044A (en) | 1991-12-13 | 1994-10-25 | Isis Pharmaceuticals | Cyclobutyl oligonucleotide surrogates |
| EP0577558A2 (de) | 1992-07-01 | 1994-01-05 | Ciba-Geigy Ag | Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte |
| NL9201440A (nl) | 1992-08-11 | 1994-03-01 | Univ Leiden | Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing. |
| US5519134A (en) | 1994-01-11 | 1996-05-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrrolidine-containing monomers and oligomers |
| US5596091A (en) | 1994-03-18 | 1997-01-21 | The Regents Of The University Of California | Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides |
| US5597909A (en) | 1994-08-25 | 1997-01-28 | Chiron Corporation | Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use |
| AU3206697A (en) | 1996-05-17 | 1997-12-09 | Thomas Jefferson University | Ribozyme-mediated gene replacement |
| US6172209B1 (en) | 1997-02-14 | 2001-01-09 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Aminooxy-modified oligonucleotides and methods for making same |
| JP3756313B2 (ja) | 1997-03-07 | 2006-03-15 | 武 今西 | 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体 |
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| FR2774379B1 (fr) | 1998-01-30 | 2002-03-29 | Groupe Limagrain Holding | Procede de production, par des cellules vegetales, d'alpha 1-antitrypsine et de ses variantes, et produits contenant l'alpha-antitrypsine ainsi obtenue |
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| CN102869774B (zh) | 2010-02-24 | 2018-02-09 | 箭头研究公司 | 用于靶向递送siRNA的组合物 |
| EP2614149B1 (en) | 2010-09-07 | 2015-04-08 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Modifications for antisense compounds |
| US8501930B2 (en) | 2010-12-17 | 2013-08-06 | Arrowhead Madison Inc. | Peptide-based in vivo siRNA delivery system |
| CA2976966C (en) | 2010-12-29 | 2021-11-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Small molecule conjugates for intracellular delivery of nucleic acids |
| WO2012178033A2 (en) | 2011-06-23 | 2012-12-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpina1 sirnas: compositions of matter and methods of treatment |
| BR112014004585A2 (pt) | 2011-08-26 | 2017-06-13 | Arrowhead Res Corp | polímeros de poli(éster vinílico) para liberação de ácido nucleico in vivo |
| TWI484183B (zh) * | 2011-09-01 | 2015-05-11 | 國立成功大學 | 癌症轉移之評估方法及生物標記、及抑制癌症轉移之ｓｉＲＮＡ化合物 |
| US9340784B2 (en) | 2012-03-19 | 2016-05-17 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for modulating alpha-1-antitrypsin expression |
| AU2012377385A1 (en) | 2012-04-18 | 2014-01-23 | Arrowhead Research Corporation | Poly(acrylate) polymers for in vivo nucleic acid delivery |
| PL2999785T3 (pl) | 2013-05-22 | 2018-09-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Kompozycje iRNA Serpina1 i sposoby ich zastosowania |
| WO2014197524A2 (en) | 2013-06-06 | 2014-12-11 | Serpin Pharma, Llc | Peptide therapy for treatment of alpha-1 antitrypsin deficiency and associated pathologies |
| WO2015003113A2 (en) | 2013-07-03 | 2015-01-08 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of alpha-1 antitrypsin by double-stranded rna |
| WO2015188197A2 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-10 | Solstice Biologics, Ltd. | Polynucleotide constructs having bioreversible and non-bioreversible groups |
| TW201620526A (zh) * | 2014-06-17 | 2016-06-16 | 愛羅海德研究公司 | 用於抑制α－１抗胰蛋白酶基因表現之組合物及方法 |
| AU2016306275A1 (en) | 2015-08-07 | 2018-02-08 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | RNAi therapy for Hepatitis B virus infection |
| WO2017139616A1 (en) | 2016-02-10 | 2017-08-17 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treatment for alpha-1 antitrypsin deficiency |
| CA3011946A1 (en) | 2016-03-07 | 2017-09-14 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Targeting ligands for therapeutic compounds |
| WO2017214518A1 (en) | 2016-06-10 | 2017-12-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COMPLETMENT COMPONENT C5 iRNA COMPOSTIONS AND METHODS OF USE THEREOF FOR TREATING PAROXYSMAL NOCTURNAL HEMOGLOBINURIA (PNH) |
| KR102403408B1 (ko) | 2016-09-02 | 2022-05-30 | 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 | 표적화 리간드 |
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| KR102675026B1 (ko) | 2017-01-10 | 2024-06-17 | 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 | 알파-1 항트립신 (AAT) RNAi 작용제, AAT RNAi 작용제를 포함하는 조성물, 및 사용 방법 |
| SE1750774A1 (en) | 2017-06-19 | 2018-12-11 | Hepgene Medical Ab | Novel nucleic acid molecules and their use in therapy |
| WO2020247774A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the treatment of alpha-1 antitrypsin deficiency (aatd) |
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