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TW201609722A - 新穎三唑并吡啶化合物 - Google Patents

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TW201609722A
TW201609722A TW103140672A TW103140672A TW201609722A TW 201609722 A TW201609722 A TW 201609722A TW 103140672 A TW103140672 A TW 103140672A TW 103140672 A TW103140672 A TW 103140672A TW 201609722 A TW201609722 A TW 201609722A
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TW
Taiwan
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compound
etoac
group
phenyl
pharmaceutically acceptable
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TW103140672A
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English (en)
Inventor
恰菲 漢道區
Original Assignee
美國禮來大藥廠
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Abstract

本發明提供下式之化合物 □其中R1選自由H及CH3組成之群；R2選自由H及CH3組成之群；R3選自由以下組成之群：H、C1-C3烷基、O(CH2)3SO2CH3、O(CH2)2OCH3、O(CH2)2C(CH3)2OH、CN及OCF2；或其醫藥鹽、治療糖尿病之方法、製備本發明化合物之中間體及製程。

Description

新穎三唑并吡啶化合物
本發明係關於三唑并吡啶化合物或其醫藥上可接受之鹽，及化合物在治療中之用途。本發明三唑并吡啶化合物係GPR-40之活化劑。
GPR-40亦稱為游離脂肪酸受體1(FFA1或FFAR1)，據報導其主要在齧齒類動物胰臟β細胞、胰島素瘤細胞系及人類胰島中大量表現。胰島素分泌之葡萄糖調節係活化GPR-40之重要特徵。在II型糖尿病(T2D)患者中，實行GPR-40活化之化合物與胰島素分泌之刺激相關。期望GPR-40活化劑化合物用於治療GPR-40介導之病況。
WO2004/041266揭示GPR-40受體功能調節劑，其包含具有芳香族環及能釋放陽離子之基團之化合物。
本發明提供下式Ia化合物：
其中R1選自由H及CH3組成之群；R2選自由H及CH3組成之群； R3選自由以下組成之群：H、C1-C3烷基、O(CH2)3SO2CH3、O(CH2)2OCH3、O(CH2)2C(CH3)2OH、CN及OCF2；或其醫藥上可接受之鹽。
本發明化合物具有在上文結構中經星號(*)標識之對掌性碳。較佳化合物具有下式I中所示之構形，其常稱為S構形。
本發明提供下式Ib化合物：
其中R1選自由H及CH3組成之群；R2選自由H及CH3組成之群；R3選自由以下組成之群：H、C1-C3烷基、O(CH2)3SO2CH3、O(CH2)2OCH3、O(CH2)2C(CH3)2OH、CN及OCF2；或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供下式I化合物：
或其醫藥上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物係無水結晶型I。
在一實施例中，式I化合物係無水結晶型II。
在一實施例中，R1係H；R2係CH3；且R3選自由以下組成之群：H、C1-C3烷基及CN。在另一實施例中，R1係H；R2係H；且R3係H。在另一實施例中，R1係H；R2係H；且R3選自由以下組成之群：O(CH2)3SO2CH3、O(CH2)2OCH3、O(CH2)2C(CH3)2OH、CN及OCF2。在另一實施例中，R1係CH3；R2係CH3；且R3係C3烷基。R1係H；R2係H；且R3係O(CH2)3SO2CH3。在另一實施例中，R1係CH3；R2係CH3；且R3係H。在另一實施例中，R1係H；R2係CH3；且R3選自由以下組成之群：O(CH2)3SO2CH3、O(CH2)2OCH3及O(CH2)2C(CH3)2OH。
本發明亦提供醫藥組合物，其包含如上文所述之式I化合物或其醫藥上可接受之鹽以及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
本發明亦提供醫藥組合物，其包含如上文所述之式I化合物或其醫藥上可接受之鹽以及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，且視情況與一或多種治療劑組合。其他治療劑包括(例如)二甲雙胍及/或佳糖維(Januvia)。在本發明之一實施例中，其他治療劑係二甲雙胍。在本發明之一實施例中，其他治療劑係佳糖維。
本發明亦提供醫藥組合物，其包含如上文所述之式Ia化合物或其醫藥上可接受之鹽以及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
本發明亦提供醫藥組合物，其包含如上文所述之式Ia化合物或其醫藥上可接受之鹽以及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，且視情況與一或多種治療劑組合。其他治療劑包括(例如)二甲雙胍及/或佳糖維。在本發明之一實施例中，其他治療劑係二甲雙胍。在本發明之一實施例中，其他治療劑係佳糖維。
本發明提供治療藉由GPR-40活性調節之病況之方法。本發明亦 提供治療哺乳動物之糖尿病之方法。該方法包含向需要治療之哺乳動物投與有效量之式I化合物或其醫藥上可接受之鹽。該方法包含向需要治療之哺乳動物投與有效量之式Ia化合物或其醫藥上可接受之鹽。 更佳地，本發明提供治療需要治療之哺乳動物之II型糖尿病之方法，其包含向該哺乳動物投與有效量之式I化合物或其醫藥上可接受之鹽。
更佳地，本發明提供治療需要治療之哺乳動物之II型糖尿病之方法，其包含向該哺乳動物投與有效量之式Ia化合物或其醫藥上可接受之鹽。較佳地，哺乳動物係人類。
本發明提供如上文所述用於治療之式I化合物或其醫藥上可接受之鹽。
本發明提供如上文所述用於治療之式Ia化合物或其醫藥上可接受之鹽。
在另一形式中，本發明提供用於治療糖尿病之如上文所述之式I化合物、其醫藥上可接受之鹽或醫藥組合物。在另一形式中，本發明提供用於治療糖尿病之如上文所述之式Ia化合物、其醫藥上可接受之鹽或醫藥組合物。在另一實施例中，如上文所述之式I化合物或其醫藥上可接受之鹽係用於治療II型糖尿病。在另一實施例中，醫藥組合物係用於治療II型糖尿病。
本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受之鹽在製造用於治療糖尿病之藥劑中之用途。較佳地，該藥劑係用於治療II型糖尿病。
本發明提供式Ia化合物或其醫藥上可接受之鹽在製造用於治療糖尿病之藥劑中之用途。較佳地，該藥劑係用於治療II型糖尿病。
在另一形式中，本發明提供式IIa之中間體化合物
其中R選自由以下組成之群：C1-4烷基、C1-4鹵代烷基、C3-6環烷基、C1-4烷基-C3-6環烷基、苯基及C1-5烷基苯基；R4選自由H及CH3組成之群；R5選自由H及CH3組成之群；且R6選自由以下組成之群：H、C1-C3烷基、O(CH2)3SO2CH3、O(CH2)2OCH3、O(CH2)2C(CH3)2OH、CN及OCF2；或其醫藥上可接受之鹽。
在另一形式中，本發明提供式IIb之中間體化合物
其中R選自由以下組成之群：C1-4烷基、C1-4鹵代烷基、C3-6環烷基、C1-4烷基-C3-6環烷基、苯基及C1-5烷基苯基；R4選自由H及CH3組成之群；R5選自由H及CH3組成之群；且R6選自由以下組成之群：H、C1-C3烷基、O(CH2)3SO2CH3、 O(CH2)2OCH3、O(CH2)2C(CH3)2OH、CN及OCF2； 或其醫藥上可接受之鹽。
在另一形式中，本發明提供式II之中間體化合物
其中R選自由以下組成之群：C1-4烷基、C1-4鹵代烷基、C3-6環烷基、C1-4烷基-C3-6環烷基、苯基及C1-5烷基苯基或其醫藥上可接受之鹽。
較佳R基團選自由以下組成之群：C1-4烷基、C1-2鹵代烷基、苯基及C1-2烷基苯基。尤佳R基團選自由以下組成之群：甲基、乙基、苯基及苄基。尤佳R基團選自由以下組成之群：甲基及乙基。
在一實施例中，R係C1-4烷基；R4係H；R5係CH3；且R6選自由以下組成之群：H、C1-C3烷基及CN。在一實施例中，R選自由以下組成之群：C1-4烷基及C1-4鹵代烷基；R4係H；R5係CH3；且R6選自由以下組成之群：H、C1-C3烷基及CN。在另一實施例中，R選自由以下組成之群：C1-4烷基、C1-4鹵代烷基；R4係H；R5係H；且R6係H。在另一實施例中，R選自由以下組成之群：C1-4烷基、C1-2鹵代烷基、苯基及C1-2烷基苯基；R4係H；R5係H；且R6選自由以下組成之群：O(CH2)3SO2CH3、O(CH2)2OCH3、O(CH2)2C(CH3)2OH、CN及OCF2。在另一實施例中，R選自由以下組成之群：C1-4烷基、C1-2鹵代烷基、苯基及C1-2烷基苯基；R4係CH3；R5係CH3；且R6係C3烷基。在另一實施例中，R選自由以下組成之群：C1-4烷基；R4係CH3；R5係CH3；且 R6係H。在另一實施例中，R選自由以下組成之群：C1-4烷基、C1-2鹵代烷基、苯基及C1-2烷基苯基；R4係H；R5係CH3；且R6選自由以下組成之群：O(CH2)3SO2CH3、O(CH2)2OCH3及O(CH2)2C(CH3)2OH。
本發明亦提供製備上文所述式I之(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸之方法。該方法包含使式II之中間體化合物去保護或去酯化以製備式1化合物或其醫藥上可接受之鹽。
本發明亦提供製備上文闡述為式Ia之化合物之方法。該方法包含使式IIa之中間體化合物去保護或去酯化以製備式Ia化合物或其醫藥上可接受之鹽。
熟習此項技術者不需過度實驗即可容易地理解且能實踐去保護反應。熟習此項技術者應認識到，除了羧酸及受保護羧酸外，可使用其他可易於轉化為羧酸之官能基來代替羧酸或受保護酸。該等官能基、該等基團之製備及轉變為羧酸可參見「Comprehensive Organic Transformations：A Guide to Functional Preparations」，Larock.R.C、Wiley VCH，1999以及「March’s Advanced Organic Chemistry,Reactions,Mechanisms and Structure」Smith,M.B.及March,J.,Wiley-Interscience，第6版，2007。
圖1(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸形式II及圖2(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸形式I係(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸之代表性XRD圖案之光譜圖。XRD光譜圖係如實例1中所述來獲得。
本發明化合物可以醫藥上可接受之鹽提供。「醫藥上可接受之鹽」係指視為臨床及/或獸醫用途可接受之本發明化合物之鹽。醫藥 上可接受之鹽及其廠用製備方法為業內所熟知。例如，參見P.Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection and Use,(VCHA/Wiley-VCH,2002)；S.M.Berge等人，"Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences，第66卷第1期，1977年1月。
術語「醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑」意指該等載劑、稀釋劑及賦形劑與組合物中之其他成份在醫藥上相容。
個別異構物、鏡像異構物或非鏡像異構物可在式I或Ia或Ib化合物之合成中之任一便捷點藉由諸如對掌性層析等方法分離。另外，以下方案及製備中所述之中間體含有多個氮、羥基及酸保護基團(例如酯)。端視具體反應條件及欲實施之具體轉變，可變保護基團可在每次出現時相同或不同。保護及去保護條件為熟習此項技術者所熟知且闡述於文獻中。例如，參見Greene及Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,(T.Greene及P.Wuts編輯，第2版，1991)。
本文所用縮寫係根據Aldrichimica Acta，第17卷第1期，1984來定義。其他縮寫定義如下：「BSA」係指牛血清白蛋白；「DCM」係指二氯甲烷；「DIBAL-H」係指二異丁基氫化鋁；「DIPEA」係指二異丙基乙胺；「DMEM」係指達爾伯克改良伊戈爾培養基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)；「DMF」係指二甲基甲醯胺；「DTT」係指二硫蘇糖醇；「EC50」係指一般最大反應時之有效濃度；「EtOAc」係指乙酸乙酯；「EtOH」係指乙基醇或乙醇；「F12」係指Ham’s F12培養基；「FBS」係指胎牛血清；「HEK」係指人類胚腎；「IC50」係指藥劑產生50%之最大可能抑制反應之該藥劑之濃度；「i.p.」係指腹膜內注射；「MCPBA」係指間氯過氧苯甲酸；「PPAR」係指過氧化物酶體增殖物活化之受體；「PPRE」係指過氧化物酶體增殖物反應元件；「PPh3」係指三苯基磷酸酯；「RFU」係指相對螢光單位；「THF」係指四氫呋喃；「TK」係指胸苷激酶； 「TAK875」係指Takeda化合物(3-[4-(2-甲基-苄基氧基)-苯基]-己-4-炔酸)稱為法西利法(fasiglifam)且「XRD」係指X射線粉末繞射。
如本文所用術語烷基係直鏈烷基(例如乙基或正丙基)或具支鏈烷基(例如異丙基或第三丁基)。術語C1-4鹵代烷基係指具有1、2、3或更多個附接至烷基鏈之碳之鹵基之烷基。若存在兩個或更多個鹵素，則鹵素不需要附接至同一碳。此術語亦包括全鹵代烷基，其中烷基之所有氫原子皆經鹵素置換。
在下文之製備及方案中，除非另外指明，否則所有取代基皆如先前所定義。熟習此項技術者通常易於獲得試劑及起始材料。其他可藉由有機及雜環化學中與已知結構類似之化合物之合成相似之標準技術以及下文製備及實例中所闡述之包括任何新穎程序之程序製得。
式Ib之產物可根據如方案I中繪示之反應來製備。方案1顯示鹵素、6-取代[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基中間體之反應，其產生式Ib化合物。6-取代[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-基之羧酸酯可在標準還原條件下在-78℃溫度下在諸如DCM等極性非質子溶劑中使用諸如過量DIBAL-H等還原劑還原為羥基，以獲得方案1之步驟1之產物。熟習此項技術者將瞭解，亦可使用其他還原劑將羧酸甲基酯還原為步驟1之 羥基化合物產物(例如硼氫化鈉及氫化鋁鋰)。可使用諸如SOCl2或POCl3等氯化劑將步驟1之羥基產物轉化為鹵素(例如氯)，以獲得步驟2之產物。或者，羥基可在諸如DCM等極性非質子溶劑中在約-40℃溫度下使用諸如PBr3等溴化劑經溴置換，以獲得步驟2之產物。步驟2之產物可在一般烷基化條件下使用諸如碳酸銫或碳酸鉀等無機鹼在諸如DMF或乙腈等極性非質子溶劑中經取代酚烷基化，以獲得步驟3之產物。步驟3之鹵素產物可在步驟4之子步驟1中在Suzuki-Miyaura交叉偶合條件中與適宜酸偶合。熟習此項技術者將認識到，有多種條件可用於促進該等交叉偶合反應。因此，適宜鈀試劑包括氯化雙(三苯基膦)鈀(II)、含有三環己基膦之叁(二亞苄基丙酮)二鈀(0)、(1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵)氯化鈀(II)、四三苯基膦鈀或乙酸鈀(II)。適宜鹼包括碳酸銫、碳酸鈉、碳酸鉀或磷酸三鉀單水合物，其使用諸如1,4-二噁烷或甲苯等非極性溶劑及EtOH來獲得步驟4之化合物，該等化合物可在步驟4之子步驟2中在室溫或加熱下在鹼性條件下使用NaOH、LiOH或三甲基矽烷酸鉀(potassium trimethylsilanote)去保護，以獲得式Ib化合物。「PG」係經研發用於酸之保護基團，例如酯。該等保護基團為業內所熟知及瞭解。例如，參見Greene及Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis。步驟4子步驟1之酚類產物可在業內熟知之條件下在諸如乙腈等極性非質子溶劑中使用諸如碳酸銫等無機鹼進一步烷基化，以在去保護後獲得式Ib化合物。
方案2
或者，在方案2中，方案1之步驟2之產物可在如方案1之步驟4之子步驟1中所述之Suzuki-Miyaura交叉偶合條件下偶合，以獲得方案2之步驟1之產物。然後可如方案1之步驟3中所述使方案2之步驟1之產物與方案2之步驟2之酚試劑反應，以獲得方案2之步驟2之產物。可如方案1之步驟4之子步驟2中所述使方案2之步驟2之產物去保護，以獲得式Ib之產物。
在可選步驟中，式(I)化合物之醫藥上可接受之鹽可藉由使式(I)之適宜酸與醫藥上可接受之適宜鹼在適宜溶劑中在標準條件下反應來形成。另外，該等鹽之形成可在酯水解之同時進行。該等鹽之形成為業內所熟知及瞭解。
以下製備及實例進一步闡釋本發明且代表式(I)化合物之典型合成。除非說明相反之情形，否則本文所闡釋之化合物係使用Accelrys Draw 4.1 IUPACNAME ACDLABS來命名及編號。
製備1 6-胺基吡啶-3-甲酸甲基酯
向6-胺基吡啶3-甲酸(30g,217.1mmol)於甲醇(30mL)中之溶液中添加H2SO4(30mL，在0℃下)且將反應混合物加熱至80℃達16小時。蒸發反應混合物且用NaHCO3水溶液(50mL)中和殘留物，過濾並乾燥沈澱固體以獲得呈淺黃色固體之標題化合物(24g,72%)。LCMS m/z 153(M+H)+。
製備2 (1E)-N-(2,4,6-三甲基苯基)磺醯基氧基乙亞胺酸乙基酯
向(1E)-N-羥基乙亞胺酸乙基酯(8.4g,81.5mmol)於DMF(20mL)中之溶液中添加三乙胺(12mL,86.24mmol)且將混合物攪拌20分鐘。添加2,4,6-三甲苯-1-磺醯氯(20g,81.5mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌16小時。使用水(100mL)驟冷反應混合物並用EtOAc(3×100mL)萃取。將合併有機萃取物經硫酸鈉乾燥，過濾，並蒸發至乾燥以獲得呈白色固體之標題化合物(15g,64%)。粗材料未經進一步純化即使用。
替代製備2
向(1E)-N-羥基乙亞胺酸乙基酯(250g,2.42mol)於DMF(2.5L)中之溶液中添加三乙胺(490.6g,4.85mol)且將混合物攪拌20分鐘。將反應混合物冷卻至10℃-15℃並經30分鐘時間逐份添加2,4,6-三甲苯-1-磺 醯氯(529.5g,2.42mol)且將混合物在室溫下攪拌16小時。用水(3.5L)驟冷反應混合物並用EtOAc(2×4L)萃取。用水(4×3L)、鹽水溶液(3L)洗滌合併有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，並蒸發以獲得呈灰白色固體之標題化合物(435g,63%)。LCMS m/z 285.1(M+H)+。
製備3 2,4,6-三甲苯磺酸胺基酯
在0℃下，向(1E)-N-(2,4,6-三甲基苯基)磺醯基氧基乙亞胺酸乙基酯(14g,49.12mmol)於1,4二噁烷(25mL)中之溶液中添加HClO4(7.0mL，70%水溶液)且將反應混合物在室溫下攪拌1小時。用水稀釋反應混合物並用DCM(2×50mL)萃取。將合併有機萃取物經硫酸鈉乾燥並過濾。粗材料未經進一步純化即使用(10g，理論產率)。
製備4 1,6-二胺基吡啶-1-鎓-3-甲酸甲基酯；2,4,6-三甲苯磺酸酯
向2,4,6-三甲苯磺酸胺基酯(10g,45.71mmol)於DCM(100mL)中之經攪拌溶液中添加6-胺基吡啶-3-甲酸甲基酯(5.55g,56.56mmol)。在10分鐘後，逐滴添加三乙胺(19.11mL,137.13mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至0℃並添加二乙醚。過濾沈澱固體並在真空下乾燥以獲得呈白色固體之標題化合物(6.8g,41%)。1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ 8.95(bs,2H),8.63(s,1H),8.11 (d,J=9.6Hz,1H),7.09(d,J=9.6Hz,1H)6.89(s,2H),6.73(s,2H),3.85(s,3H),2.48(s,6H),2.16(s,1H)。
替代製備4
在10℃-15℃下，向2,4,6-三甲苯磺酸胺基酯(618g,2.87mol)於DCM(8.5L)中之經攪拌溶液中添加6-胺基吡啶-3-甲酸甲基酯(437.3g,2.87mmol)且將混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至0℃，攪拌20分鐘且過濾固體沈澱物，用二乙醚(2L)洗滌並在真空下乾燥以獲得呈灰白色固體之標題化合物(495g,47%)。LCMS m/z 168(M+H)+。
製備5 2-溴[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲基酯
在室溫下，向溴化銅(13.9g,62.4mmol)於乙腈(150mL)中之經攪拌溶液中添加亞硝酸第三丁基酯(6.4g,62.4mmol)且將反應混合物加熱至60℃。逐份添加2-胺基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲基酯(8.0g,41.6mmol)且將反應混合物在相同溫度下加熱1小時。用水驟冷反應混合物並用EtOAc萃取。用鹽水洗滌有機萃取物，經硫酸鈉乾燥並蒸發至乾燥。粗材料係藉由矽膠層析(combiflash純化器)(40g redisep管柱)純化且經己烷中之30% EtOAc溶析，以獲得呈灰白色固體之標題化合物(5.1g,48%)。LCMS m/z 363(M+H)+。
製備6 2-(4-羥基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲基酯
在0℃下，向1,6-二胺基吡啶-1-鎓-3-甲酸甲基酯；2,4,6-三甲苯磺酸酯(8g,21.68mmol)於甲醇(100mL)中之經攪拌溶液中添加4-羥基-2,6-二甲基-苯甲醛(3.25g,21.68mmol)及三乙胺(8.77mL,65.04mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌48小時。濃縮反應混合物並用EtOAc(100mL)萃取。用水(2×100mL)、飽和氯化銨溶液(50mL)、鹽水溶液(50mL)洗滌合併有機萃取物，且經無水硫酸鈉乾燥，過濾並蒸發至乾燥。粗材料係藉由矽膠層析(combiflash 40g redisep Rf管柱)純化且經己烷中之40-60% EtOAc溶析，以獲得呈淺黃色固體之標題化合物(1.2g,18%)。LCMS m/z 298[M+H]+。
製備7 2-[4-(3-甲烷磺醯基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲基酯
在室溫下，向2-(4-羥基-2,6-二甲基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲基酯(0.2g,0.673mmol)於乙腈(5mL)中之溶液中添加甲苯-4-磺酸3-甲烷磺醯基-丙基酯(0.196g,0.673mmol)及碳酸鉀(0.278g,2.019mmol)且將反應混合物在100℃下加熱16小時。用水(10mL)稀釋反應混合物並用EtOAc(2×20mL)萃取。用水(10mL)、鹽水(10mL)洗滌合併有機萃取物，經無水Na2SO4乾燥，過濾，且蒸發至乾 燥。粗材料係藉由矽膠層析(combiflash純化器，24g redisep管柱)純化且經己烷中之40-60% EtOAc溶析，以獲得呈淡黃色固體之標題化合物(198mg,70%)。LCMS：m/z 418[M+H]+。
製備8 (2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲醇
在-78℃下，向2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲基酯(3.0g,11.7mmol)於DCM中之溶液中逐滴添加DIBAL-H(3當量)且將反應混合物升溫至室溫並攪拌1小時。用飽和氯化銨溶液(20mL)驟冷反應混合物且用DCM(2×50mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併有機萃取物並蒸發。將粗材料與正戊烷一起研磨以獲得呈黃色固體之標題化合物(1.5g,57.6%)。LCMS m/z 171(M+H)+。
以下化合物基本上係藉由製備8之方法來製備。
製備10 2-溴-6-(氯甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶
將(2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲醇(1.5g,6.5mmol)與亞硫醯氯(10mL)之混合物在室溫下攪拌1小時。將反應混合物蒸發至乾燥。將殘留物與甲苯(2×20mL)一起共蒸發以獲得呈黃色固體之標題化合物(1.5g，粗製)。LCMS m/z 247(M+H)+。
替代製備10
在0℃下將SOCl2(50mL)添加至(2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-甲醇(2.9g,12.69mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌1小時。將反應混合物冷卻至0℃，用飽和碳酸氫鈉溶液(100mL)驟冷，並用DCM(3×30mL)萃取。用鹽水溶液洗滌合併有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾並蒸發以獲得呈黃色固體之標題化合物(2.8g，粗製)。LCMS m/z 246(M+H)+。
製備11 2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲基酯
向1,6-二胺基吡啶-1-鎓-3-甲酸甲基酯；2,4,6-三甲苯磺酸酯(6.0g,16.3mmol)於1,4-二噁烷(50mL)中之溶液中添加2,6-二甲基苯甲醛(1.72g,13.00mmol)且將反應混合物在90℃下加熱2小時。將反應混合物冷卻至室溫，添加1N KOH溶液(15mL)，且將混合物在室溫下攪拌過夜。用水(50mL)稀釋反應混合物並用EtOAc(2×100mL)萃取。使用水(100mL)及飽和鹽水(100mL)洗滌合併有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。粗材料係藉由矽膠層析(combiflash)純化，經己烷中之12% EtOAc溶析，以獲得呈黃色液體之標題化合物(0.35g,16%)。LCMS m/z 282(M+H)+。
替代製備11
在15℃-20℃下，向1,6-二胺基吡啶-1-鎓-3-羧酸甲基酯；2,4,6-三甲苯磺酸酯(400g,1.09mol)於甲醇(5L)中之溶液中添加2,6-二甲基苯甲醛(146g,1.09mol)及三乙胺(330.5g,3.27mol)且將混合物攪拌30分鐘。使反應混合物升溫至室溫並攪拌18小時。藉由在50℃下蒸餾移除溶劑。將粗殘留物溶解於EtOAc(3L)及水(4L)中並攪拌10分鐘。分離混合物並用EtOAc(2×3L)萃取水性層。用水(2×5L)及鹽水溶液(3L)洗滌合併有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，並濃縮以獲得褐色黏稠物質。粗材料係藉由矽膠管柱層析純化，經己烷中之30-50% EtOAc溶析，以獲得呈淺黃色固體之標題化合物(125g,40%)。LCMS m/z 282(M+H)+。
製備12 [2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲醇
在0℃下，向2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-甲酸甲基酯(0.35g,1.24mmol)於DCM(20mL)中之溶液中逐滴添加DiBAL-H(1M甲苯溶液，4.98mL,4.98mmol)。使反應混合物升溫至室溫並攪拌2小時。用NH4Cl水溶液驟冷反應物並用EtOAc(4×50mL)萃取。經硫酸鈉乾燥合併萃取物，過濾並濃縮。粗材料係藉由矽膠層析(combiflash)純化，經己烷中之50% EtOAc溶析。濃縮產物以獲得呈透明液體之標題化合物(0.18g,57%)。LCMS m/z 254(M+H)+。
製備13 6-(氯甲基)-2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶
將[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲醇(0.17g,0.67mmol)於SOCl2(2.0mL)中之溶液在室溫下攪拌2小時。將反應混合物蒸發至乾燥且與甲苯一起共蒸餾以獲得呈黃色固體之標題化合物(0.198g,100%粗製)，其不經進一步純化即使用。LCMS m/z 272(M+H)+。
製備14 6-(溴甲基)-2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶
在-40℃下，向(2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲醇(148g,0.584mol)於DCM(2.96L)中之溶液添加PBr3(237.3g,0.877mol)。使反應混合物升溫至溫度，然後在室溫下進一步攪拌2小時。使反應物冷卻至0℃，用冰冷水(1.5L)驟冷且添加飽和碳酸氫鈉溶液以將pH調節至約7.5至8。用DCM(2L)稀釋混合物，分離水性層並用DCM(3L)萃取。合併有機萃取物，用水(2×3L)及鹽水溶液(3L)洗滌，經硫酸鈉乾燥有機萃取物，過濾並蒸發至乾燥以獲得標題化合物(140g,76%)。LCMS m/z 316/318 79Br/81Br(M+H)+。
替代製備14
在-40℃下，向(2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲醇(0.2g,0.79mmol)於DCM(10mL)中之溶液添加PBr3(0.11mL,1.18mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物冷卻至0℃，用冰冷水(5mL)驟冷，添加10%碳酸氫鈉溶液(10mL)，且用DCM(3×20mL)萃取混合物。用鹽水溶液洗滌合併有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾並蒸發至乾燥以獲得標題化合物(0.17g，粗製)。LCMS m/z 79Br/81Br 316/318(M+H)+。
以下化合物基本上係藉由替代製備14之方法來製備。
製備16 (3S)-3-[4-[(2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲氧基]苯基]己-4-炔酸乙基酯
向(S)-3-(4-羥基苯基)己-4-炔酸乙基酯(1.4g,6.09mmol)於DMF中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(5.9g,18.1mmol)及2-溴-6-(氯甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(1.5g,6.09mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌2小時。用冰冷水驟冷反應混合物並用EtOAc(2×200mL)萃取。用鹽水(2×30mL)洗滌有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，並濃縮。粗材料係藉由矽膠層析(combiflash純化器，10g redisep管柱)純化，經己烷中之25% EtOAc溶析，以獲得呈黃色黏稠油之標題化合物(1.4g,54%)。LCMS m/z 442(M+H)+。
替代製備16
將2-溴-6-氯甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(2.8g,11.39mmol)、 (S)-3-(4-羥基苯基)己-4-炔酸乙基酯(2.6g,11.359mmol)及碳酸銫(11.10g,34.07mmol)於乙腈(50mL)中之混合物在室溫下攪拌過夜。用水(50mL)稀釋反應混合物並用EtOAc(2×50mL)萃取。用飽和鹽水溶液(20mL)洗滌合併有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾並蒸發至乾燥。粗材料係藉由矽膠層析(combiflash純化器，40g redisep管柱)純化且在己烷中之42% EtOAc中溶析，以獲得呈褐色液體之標題化合物(4g,80%)。LCMS m/z 442(M+H)+。
以下化合物基本上係藉由替代製備16之方法使用6-溴甲基-2-[4-(3-甲烷磺醯基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶作為起始材料及(S)-3-(4-羥基-苯基)-己-4-炔酸乙基酯來製備。
製備18 (S)-3-(4-{2-[4-(3-甲烷磺醯基-丙氧基)-2-甲基-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙基酯
向(3S)-3-[4-[(2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲氧基]苯基]己-4-炔酸乙基酯(0.5g,1.13mmol)及4-羥基-2-甲苯酸(0.206g,1.35mmL)於1,4-二噁烷(10mL)中之經攪拌溶液中添加2M碳酸鉀(1.69mL,3.39mmol)溶液。將混合物用氮吹掃20分鐘，添加Pd(PPh3)2Cl2(0.039g,0.056mmol)並在100℃下用微波輻射將混合物輻照4小時。經由矽藻土過濾反應混合物並用EtOAc(10mL)洗滌。用冷水(2×20mL)及鹽水溶液洗滌濾液，經硫酸鈉乾燥，且在減壓下蒸發。殘留物係藉由矽膠層析(combiflash)純化，經己烷中之15% EtOAc溶析，以獲得呈黃色糖漿之標題化合物(0.3g,56.6%)。LCMS m/z 470(M+H)+。
製備19 (S)-3-(4-{2-[4-(3-甲烷磺醯基-丙氧基)-2-甲基-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙基酯
在室溫下，向(S)-3-(4-{2-[4-(3-甲烷磺醯基-丙氧基)-2-甲基-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙基酯(0.3g,0.630mmol)及甲苯-4-磺酸3-甲烷磺醯基-丙基酯(0.18g,0.634 mmol)於乙腈(10mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸鉀(0.26g,1.89mmol)且將反應混合物在90℃下加熱過夜。經由矽藻土過濾反應混合物，用EtOAc(10mL)洗滌，且將濾液蒸發至乾燥。將殘留物溶解於EtOAc(10mL)中，用水(2×30mL)、鹽水溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥，且在減壓下蒸發。粗化合物係藉由矽膠(combiflash純化器)純化且經己烷中之50% EtOAc溶析，以獲得呈黃色固體之標題化合物(0.12g,32.3%)。LCMS m/z 590(M+H)+。
製備20 (S)-3-{4-[2-(4-羥基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙基酯.
向(3S)-3-[4-[(2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲氧基]苯基]己-4-炔酸乙基酯(1.0g,2.2mmol)及4-羥基苯基酸(0.37g,2.7mmol)於1,4-二噁烷(30mL)中之經攪拌溶液中添加K2CO3(0.91g,6.6mmol)。將混合物用氮吹掃10分鐘。添加Pd(PPh3)2Cl2(0.14g,0.2mmol)並將混合物在100℃下加熱12小時。將反應混合物冷卻至室溫，經由矽藻土過濾，並用EtOAc(2×10mL)洗滌。經無水硫酸鈉乾燥濾液，過濾並濃縮至乾燥。粗材料係藉由矽膠層析(combiflash，使用24g redisep管柱)純化，經15-20% EtOAc/己烷溶析，以獲得標題化合物(0.75g,73.52%)。LCMS m/z 456.2(M+H)+。
製備21 (S)-3-(4-{2-[4-(2-甲氧基-乙氧基)-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙基酯
在室溫下，向(S)-3-{4-[2-(4-羥基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙基酯(0.250g,0.585mmol)及1-溴-2-甲氧基-乙烷(0.22mL,2.34mmol)於乙腈(10mL)中之經攪拌溶液中添加碳酸銫(0.381g,1.17mmol)，且將反應混合物在室溫下攪拌過夜。經由矽藻土過濾反應混合物並用EtOAc(20mL)洗滌，且將濾液濃縮至乾燥。將殘留物溶解於EtOAc(30mL)中，用水(2×30mL)、鹽水溶液(30mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，且在減壓下蒸發。粗化合物係藉由矽膠(combiflash純化器)純化且經己烷中之17-19% EtOAc溶析，以獲得呈白色半固體之標題化合物(0.190g,64%)。LCMS m/z 514(M+H)+。
製備22 (S)-3-(4-{2-[4-(3-羥基-3-甲基-丁氧基)-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙基酯
向(S)-3-{4-[2-(4-羥基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙基酯(0.2g,0.43mmol)於乙腈(20mL)中之經攪拌溶液中添加4-溴-2-甲基-丁-2-醇(0.14g,0.87mmol)及碳酸銫(0.41g,1.2mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌2小時。過濾反應混合物並蒸發至乾燥。粗材料係藉由矽膠層析(combiflash純化器，24g redisep管 柱)純化且經己烷中之15-20% EtOAc溶析，以獲得標題化合物(0.23g,100%)。LCMS m/z 542(M+H)+。
製備23 (S)-3-{4-[2-(4-二氟甲氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙基酯
在0℃下，向(S)-3-{4-[2-(4-羥基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙基酯(0.25g,0.54mmol)於DMF(10mL)中之混合物中添加氯二氟乙酸鈉(0.142g,1.09mmol)及碳酸銫(0.354g,1.09mmol)且將反應混合物在80℃下加熱4小時。用冰冷水(50mL)稀釋反應混合物且用EtOAc(2×20mL)萃取。用飽和鹽水溶液(20mL)洗滌合併有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾並蒸發至乾燥。粗材料係藉由矽膠(combiflash純化器，40g redisep管柱)純化且經己烷中之45% EtOAc溶析，以獲得呈無色半固體之標題化合物(0.15g,55.5%)。LCMS m/z 506(M+H)+。
製備24 (S)-3-{4-[2-(4-氰基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙基酯
向(3S)-3-[4-[(2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲氧基]苯基]己 -4-炔酸乙基酯(0.25g,0.57mmol)及4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜硼烷-2-基)-苯甲腈(0.14g,0.5mmol)於二噁烷(115mL)中之經攪拌溶液中添加K2CO3(0.15g,1.134mmol)。將混合物用氬吹掃30分鐘，添加Pd(PPh3)4(0.032g,0.027mmol)並將混合物在100℃下加熱5小時。將反應混合物冷卻至室溫，經由矽藻土過濾。在減壓下蒸發濾液並濃縮至乾燥。粗材料係藉由矽膠層析(combiflash)純化，經30% EtOAc/己烷溶析，以獲得呈褐色液體之標題化合物(0.170g,68.75%)。LCMS m/z 464(M+H)。
製備25 (S)-3-{4-[2-(4-異丙基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙基酯
向(3S)-3-[4-[(2-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基)甲氧基]苯基]己-4-炔酸乙基酯(0.3g,0.67mmol)及4-異丙基-苯基酸(0.24g,1.0mmol)於甲苯(16mL)及EtOH(4mL)中之經攪拌溶液中添加2M K2CO3(0.6mL,1.34mmol)。用氬將混合物吹掃30分鐘。添加Pd(PPh3)4(0.077g,0.067mmol)且將混合物在100℃下加熱過夜。將反應混合物冷卻至室溫，經由矽藻土過濾。用水(30mL)稀釋濾液並用EtOAc(2×20mL)萃取。用飽和鹽水溶液(20mL)洗滌合併有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮至乾燥。粗材料係藉由矽膠層析(combiflash，使用24g redisep管柱)純化，經45% EtOAc/己烷溶析，以獲得呈褐色液體之標題化合物(0.22g,68.75%)。LCMS m/z 481(M+H)+。
製備26 (3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸乙基酯
向(S)-3-(4-羥基苯基)己-4-炔酸乙基酯(WO05/086661)(0.2g,0.87mmol)於DMF(20mL)中之溶液中添加Cs2CO3(0.84g,2.59mmol)及6-(氯甲基)-2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(0.187g,0.69mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物傾倒至冰冷水中並用EtOAc(3×50mL)萃取。用水(2×50mL)、鹽水(50mL)洗滌合併有機萃取物，經無水Na2SO4乾燥，過濾並蒸發至乾燥。粗材料係藉由combiflash矽膠層析純化，經己烷中之13% EtOAc溶析，以獲得呈無色液體之標題化合物(0.225g,55%)。LCMS m/z 468(M+H)+。
替代製備26
在10℃-15℃下，向(S)-乙基3-(4-羥基苯基)己-4-炔酸酯(14.69g,63.25mmol)於DMF(200mL)中之溶液中添加Cs2CO3(61.82g,189.75mmol)且將混合物攪拌15min。添加6-(溴甲基)-2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(20g,63.25mmol)且將混合物在室溫下攪拌16小時。用冷水(400mL)驟冷反應混合物並用EtOAc(2×200mL)萃取。用水(4×600mL)、鹽水溶液(500mL)洗滌合併有機層，經硫酸鈉乾燥並蒸發。粗產物係藉由矽膠層析來純化，經己烷中之30-50% EtOAc溶析，以獲得呈淺黃色固體之標題化合物(17g,57%)。LCMS m/z 467(M+H)+。
實例1 (3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸
向(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸乙基酯(0.22g,0.47mmol)於EtOH(20mL)中之溶液中添加5N NaOH(0.3mL)且將反應混合物在80℃下在微波儀器中攪拌30分鐘。將反應混合物蒸發至乾燥，用水稀釋，並用6N HCl溶液酸化至pH約3。過濾沈澱固體，用正戊烷洗滌並乾燥，以獲得呈白色固體之標題化合物(0.155g,75%)。LCMS m/z 440(M+H)+。
替代製備，實例1
在室溫下，向(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸乙基酯(16g,34.22mmol)於乙醇(160mL)中之溶液中逐滴添加5N NaOH水溶液(2.73g,68.44mmol，於16mL水中)且將反應混合物攪拌16小時。將反應混合物蒸發至乾燥，將殘留物溶解於水(300mL)中，用二乙醚(2×200mL)洗滌，且棄去有機萃取物。使水性層冷卻至10℃-15℃，用飽和檸檬酸溶液酸化至pH約5，並用DCM(2×300mL)萃取。用水(2×500mL)、鹽水溶液(500mL)洗滌合併有機萃取物，經Na2SO4乾燥，過濾並蒸發至乾燥，以獲得呈灰白色固體之標題化合物(14g,93%)。LCMS m/z 440(M+H)+。
將如實例1之替代製備製備之其他批次之產物與來自替代製備實 例1 DCM(5L)之產物混合並升溫至40℃，以獲得澄清溶液。然後蒸發溶劑以獲得灰白色固體。可能捕集DCM係一問題，因此裝填EtOAc(7.5L)且將所得混合物升溫至65℃以獲得澄清溶液(約30分鐘)。蒸發溶劑且在真空及50℃下乾燥所得固體以獲得呈灰白色固體之期望產物。LCMS m/z 440(M+H)+。
形式II晶種，實例1
經由0.22μm耐綸注射過濾器將(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸之飽和乙醇溶液過濾至潔淨器皿中。溶劑在25℃下緩慢蒸發，產生實例1之形式II晶種。
結晶型II(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸
(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸可藉由以下方式製備為無水結晶型II：將(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸(580mg,132mmol)溶於EtOH(1.2mL)中，同時將混合物在80℃下攪拌10分鐘。過濾溶液並冷卻至70℃，此時引入形式II之晶種。然後使混合物緩慢冷卻至環境溫度，同時攪拌過夜。藉由添加庚烷(600μL)輸送所得固體填料，且藉由真空過濾回收固體且在真空及60℃下乾燥，以獲得結晶標題產物(438mg,75.5%)。
X-射線粉末繞射，實例1，形式II
在於35kV及50mA下操作之配備有CuKa源(λ=1.54060Å)及Vantec檢測器之Bruker D4 Endeavor X射線粉末繞射計上獲得結晶固體之XRD圖案。以2θ公差角度在4°與40°之間掃描樣品，其中步長為0.0087°(公差為2θ)且掃描速率為0.5秒/步，且使用0.6mm發散狹縫、5.28mm固定防散射狹縫及9.5mm檢測器狹縫。將乾燥粉末填塞於石 英樣品架上並使用載玻片獲得光滑表面。晶體學領域中已眾所周知，對於任一給定晶體形式而言，繞射峰之相對強度可因諸如晶體形態及習性等因素所致之較佳定向而變化。倘若存在較佳定向之效應，則改變峰強度，但多形體之特徵峰位置不變。例如，參見美國藥典35-國家藥品集30，第<941>章Characterization of crystalline and partially crystalline solids by X-ray powder diffraction(XRPD)Official，2012年12月1日-2013年5月1日。此外，晶體學領域中亦眾所周知，對於任一給定晶體形式而言，角峰位置可略有變化。舉例而言，峰位置可因分析樣品時之溫度或濕度差異、樣品位移或存在或不存在內標而發生移動。在本發明情形中，該等潛在差異將考慮±0.2(公差為2θ)之峰位置差異性，且不妨礙所指示晶體形式之明確鑑別。可基於有區別之峰(通常為更顯著之峰，以° 2θ為單位)之任一獨特組合來確認晶體形式。基於在8.85°及26.77°(公差為2θ)之NIST 675標準峰調節在環境溫度及相對濕度下收集之晶體形式繞射圖案。
(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸形式II之製備樣品係藉由XRD圖案使用CuKa輻射表徵為具有如下表4中所述之繞射峰(2θ值)。特定而言，該圖案含有17.55處之峰與一或多個選自由以下組成之群之峰之組合：5.82、10.78、19.65、21.31及24.33，且繞射角之公差為0.2度。
(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸形式II之X射線粉末繞射峰
結晶型I，實例1
在80℃下將(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸(0.102g,0.232mmol)溶解於乙酸異丙基酯(2mL)中。移除熱源且使樣品達到室溫，從而導致晶體形成。
以1mL增量添加庚烷(3mL)，以獲得昏濁膠質化溶液。將樣品在90℃下攪拌並加熱1小時，以獲得雙折射葉片/板之亮白色固體，對其進行真空過濾且在真空下乾燥10分鐘。
替代形式I晶體，實例1
使(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸(44g,0.10mol)懸浮於乙醇(1.1L)中並在60℃下攪拌以獲得澄清溶液。使溫度上升至70℃並緩慢添加水(638mL)且將混合物在此溫度下攪拌30分鐘，然後冷卻至5℃且攪拌1小時30分鐘。將混合物加熱至55℃達約10分鐘並冷卻至15℃。將混合物在15℃下攪拌14小時。在真空下過濾白色晶體並風乾，以獲得標題化合物(24.1g,55%)，將其在真空及40℃下進一步乾燥。
X-射線粉末繞射，實例1，形式II
在於35kV及50mA下操作之配備有CuKa源(λ=1.54060Å)及Vantec檢測器之Bruker D4 Endeavor X射線粉末繞射計上獲得結晶固體之XRD圖案。以2θ公差角度在4°與40°之間掃描樣品，其中步長為0.0087°(公差為2θ)且掃描速率為0.5秒/步，且使用0.6mm發散狹縫、5.28mm固定防散射狹縫及9.5mm檢測器狹縫。將乾燥粉末填塞於石英樣品架上並使用載玻片獲得光滑表面。晶體學領域中已眾所周知，對於任一給定晶體形式而言，繞射峰之相對強度可因諸如晶體形態及習性等因素所致之較佳定向而變化。倘若存在較佳定向之效應，則改變峰強度，但多形體之特徵峰位置不變。例如，參見美國藥典35-國家藥品集30，第<941>章Characterization of crystalline and partially crystalline solids by X-ray powder diffraction(XRPD)Official，2012年12月1日-2013年5月1日。另外，晶體學領域中亦眾所周知，對於任一給定晶體形式而言，角峰位置可略有變化。舉例而言，峰位置可由於分析樣品時之溫度或濕度差異、樣品位移或存在或不存在內標而發生移動。在本發明情形中，該等潛在變化將考慮±0.2(公差為2θ)之峰位置差異性，且不妨礙所指示晶體形式之明確鑑別。可基於有區別之峰(通常為更顯著之峰，以° 2θ為單位)之任一獨特組合來確認晶體形式。基於在8.85°及26.77°(公差為2θ)之NIST 675標準峰調節在環境溫 度及相對濕度下收集之晶體形式繞射圖案。
(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸形式I之製備樣品係藉由XRD圖案使用CuKa輻射表徵為具有如下表5中所述之繞射峰(2θ值)。特定而言，該圖案含有17.70處之峰與一或多個選自由以下組成之群之峰之組合：4.92、13.33、18.44、20.27及23.36，且繞射角之公差為0.2度。
(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸形式I之X射線粉末繞射峰
以下化合物基本上係如針對替代製備實例1所述來製備。將反應物在室溫下攪拌2-4小時。可在用飽和檸檬酸酸化或用DCM萃取，過濾並濃縮至乾燥時，收集呈沈澱物之產物。
a在0℃下添加5N NaOH。
b反應係在甲醇中完成。
實例6 (3S)-3-[4-[[2-[2,6-二甲基-4-[3-(甲基磺醯基)丙氧基]苯基][1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸
在室溫下，向(S)-3-(4-{2-[4-(3-甲烷磺醯基-丙氧基)-2,6-二甲基-苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基}-苯基)-己-4-炔酸乙基酯(0.145g,0.238mmol)於EtOH(5mL)中之溶液中添加5N NaOH溶液(0.14mL,0.715mmol)且將反應混合物在50℃下加熱30分鐘。蒸發反應混合物且將殘留物溶解於水(5mL)中，用醚(2×5mL)洗滌，並在0℃下用檸檬酸水溶液酸化(pH約6)。過濾並乾燥沈澱物固體，以獲得呈灰白色固體之標題化合物(0.075g,55%)。LCMS m/z 576[M+H]+。
實例7 (S)-3-{4-[2-(4-氰基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸
向(S)-3-{4-[2-(4-氰基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙基酯(0.130g,0.2795mmol)於THF(10mL)中之溶液中添加三甲基矽烷醇酸鉀(potassium trimethylsilanoate)(0.143g,1.118mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將反應混合物蒸發至乾燥，用正戊烷洗滌殘留物，再溶解於水(5mL)中並用飽和檸檬酸溶液酸化(pH約5)。過濾沈澱固體，用水洗滌並乾燥，以獲得呈灰白色固體之標題化合物(0.113g,56.5%)。LCMS m/z 437(M+H)+。
實例8 (3S)-3-[4-[[2-(4-二氟甲氧基)苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸
向(S)-3-{4-[2-(4-二氟甲氧基-苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基甲氧基]-苯基}-己-4-炔酸乙基酯(0.15g,0.29mmol)於THF(8mL)及水(2mL)中之溶液中添加3N LiOH.H2O(0.1mL,0.89mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌48小時。將反應混合物蒸發至乾燥，用正戊烷洗滌殘留物，再溶解於水(5mL)中並用飽和檸檬酸溶液酸化(pH約5)。過濾沈澱固體，用水洗滌並乾燥，以獲得呈灰白色固體之標題化合物(0.83g,59.2%)。LCMS m/z 478(M+H)+。
GPR-40：資訊
最近由Nagasumi報導之使用在胰島素II啟動子控制下過表現人類GPR-40基因之轉基因小鼠之研究結果進一步證實，GPR-40尤其在胰島素抗性之齧齒類動物模型中之活體內GDIS及血糖含量調節中具有重要作用。Nagasumi K等人，Overexpression of GPR-40 in pancreatic β-cells augments glucose-stimulated insulin secretion and improves glucose tolerance in normal and diabetic mice,Diabetes 58：1067-1076,2009。亦參見Briscoe CP等人，The orphan G protein-coupled receptor GPR-40 is activated by medium and long chain fatty acids, Journal Biological Chemistry 278：11303-11311,2003。該等發現進一步證實，新穎GPR-40調節劑化合物之研發可尤其期望用於治療T2D中。
分析 鈣通量初步分析
該等分析用於藉由量測因配體結合並活化GPR-40所致之細胞內鈣含量增加來篩選化合物，由此顯示GPR-40激動劑之效力及效能。採用在37℃及5% CO2下維持在補充有10% FBS及800μg/ml建那黴素之達爾伯克改良伊戈爾培養基及F12培養基(3：1比率)中之過表現人類GPR-40 cDNA之HEK293細胞進行研究。使用鈣4染料分析套組(Molecular Devices)在0.1%無脂肪酸BSA存在或不存在下，在分析緩衝液(1×HBSS(漢克氏平衡鹽溶液(Hank’s Balanced Salt Solution))及20mM HEPES(4-(2-羥基乙基)-1-六氫吡嗪乙磺酸))中實施激動劑分析。使用螢光成像讀板器(FLIPR)根據細胞內鈣之增加量測受體活化。使用超出基線之螢光最大變化來測定激動劑反應。化合物之EC50值係使用Excel Fit軟體(4版；IDBS)藉由繪示濃度對相對螢光單位(RFU)之圖來計算。效能百分比係基於與天然配體亞麻油酸相比，化合物展現之最大反應來計算。在此分析中檢查時，實例1之測試化合物具有119nM(±27.4,n=7)之EC50及76%效能(±0.8,n=5)。該等結果進 一步顯示實例1作為GPR-40激動劑之期望效力及效能。(平均值±SEM；SEM=平均值之標準誤差。)
本文所例示之化合物基本上係如上文所述來測試且展現低於500nM之鈣通量初步分析之EC50值及>35%之效能。例示化合物之該等結果顯示GPR-40激動劑之期望效力及效能。
選擇性分析 過氧化物酶體增殖物活化之受體(PPAR)α、δ及γ功能分析
由於已知GPR-40可藉由配體活化為PPARγ，在PPARα、PPARδ及PPARγ報告基因分析中檢查例示化合物以測定例示化合物之選擇性。用各種受體及報告基因質粒使用Fugene來轉染源自非洲綠猴腎組織之CV1細胞。對於PPARα及PPARδ分析，將在由腺病毒之主要晚期啟動子驅動之螢火蟲螢光素酶基因上游選殖之含有酵母轉錄蛋白Gal4反應元件之5個串聯拷貝之報告基因質粒與組成型表現含有Gal4 DNA結合結構域(DBD)及PPARα或PPARδ配體結合結構域之雜合蛋白質之猿猴病毒40(SV40)驅動質粒一起轉染。對於PPARγ分析，將編碼皆由巨細胞病毒(CMV)啟動子驅動之PPARγ及RXRα二者之質粒與含有由TK啟動子驅動之螢光素酶報告基因cDNA及受體反應元件(2×PPRE)之質粒一起轉染。在T225cm2細胞培養燒瓶中在含有5%炭吸附FBS及用於個別分析之特定質粒之DMEM培養基中轉染細胞。在過夜培育後，對轉染細胞進行胰蛋白酶處理，平鋪於不透明96孔盤(15,000細胞/孔)中之含有5%炭吸附FBS之DMEM培養基中，培育4小時，且以半對數稀釋暴露於0.17ηM至10μM測試化合物或參照化合物。在與化合物一起培育24小時後，裂解細胞並藉由發光測定螢光素酶活性作為受體活化之量度。將數據擬合至四參數擬合邏輯模型以測定EC50值。相對於使用10μM適宜PPAR激動劑參照化合物獲得之最大刺激確定最大刺激百分比。效能<20%視為陰性。在上述特定PPAR共 轉染(CTF)/功能分析中在以最高10μM檢查時，檢測到使用實例1化合物對PPARα及PPARδ無功能活化。在PPARγ CTF分析中，實例1之化合物之EC50係2.6μM。由於在此分析中使用實例1之化合物之效能%係17%，該化合物視為對PPARγ活性為陰性。因此，該等分析證實，實例1化合物如所期望無PPAR激動劑活性。
對GPR-40之活體外結合親和性
運行使用快速洗滌過濾及定製放射性標記(5nM[3H](TAK-875))及自過表現人類GPR-40(hGPR-40)構築體之HEK293細胞製備之膜之放射性配體競爭結合分析來測定例示化合物之平衡解離常數(Ki)。按化合物之特異性抑制百分比對濃度繪製競爭曲線且使用具有可變斜率之四參數非線性回歸擬合來分析。Ki值係使用Cheng-Prusoff方程Ki=IC50/(1+(D/Kd))來計算，其中IC50係化合物對結合產生50%抑制之濃度，D係分析中所用放射性配體之濃度且Kd係自飽和結合分析實驗測定之受體及放射性配體之平衡解離常數([3H]TAK-875之Kd=6.2)。參見Cheng,Y.及Prusoff,W.H.(1973)「Relationship between the inhibition constant(Ki)and the concentration of inhibitor which causes 50 per cent inhibition(IC50)of an enzymatic reaction」，Biochem Pharmacol 22(23)：3099-3108。對於實例1，Ki=14.9nM±3.5,n=4。(平均值±SEM；SEM=平均值之標準誤差。)該等數據顯示，實例1化合物係人類GPR-40之配體。
競爭結合動力學-受體滯留時間之測定
未標記化合物之結合及解離速率係使用Motulsky,H.J.及L.C.Mahan(1984),「The kinetics of competitive radioligand binding predicted by the law of mass action」Mol Pharm 25(1)：1-9中所述之方法來定量。在1×Ki、3×Ki或10×Ki未標記例示化合物之不存在或存在下，在各個時間點以6-8nM[3H]之GPR-40激動劑標準品(TAK- 875)培育人類GPR-40膜。結合及游離放射性配體之分離係使用快速洗滌過濾至玻璃纖維濾器上來實施，且在液體閃爍計數器上計數。藉由將數據擬合至GraphPad Prism 6 Windows 6.03版(GraphPad Software,La Jolla California USA)之競爭結合模型之動力學來計算速率。實例1顯示GPR-40滯留時間τ為30.2min(±3.2，n=3)，此表明，此GPR-40配體在受體上之滯留時間與活體內反應相關。(平均值±SEM；SEM=平均值之標準誤差。)
使用1% FBS之人類及小鼠β-抑制蛋白激動劑分析以測定β-抑制蛋白募集：
人類胚腎(hEK293)-hFFAR1細胞購自DiscoveRxTM。表現mFFAR1之人類骨肉瘤(U2OS)細胞係由DiscoveRXTM研發。該等細胞共表現加ProlinkTM(PK)標籤之GPR-40及加Enzyme AcceptorTM(EA)標籤之β-抑制蛋白融合蛋白。若GPR-40之活化刺激β-抑制蛋白募集，則其會迫使β半乳糖苷酶(B-gal)片段互補，從而形成使用DiscoveRx PathHunterTM檢測套組生成化學發光信號之B-gal酶。將細胞以5,000細胞/孔在384孔板中在含有1% FBS(胎牛血清)之培養基中培育過夜。將DMSO中之連續稀釋化合物(2×稀釋以生成20個濃度)在含有1% FBS(胎牛血清)之培養基中階降稀釋並將其以始於100μM之最終最高濃度添加至細胞。在添加化合物後，將細胞在37℃下於5% CO2培育器中培育90min，並添加DiscoveRXTM套組檢測試劑。化學發光信號之量測係在室溫下培育1小時後用EnvisionTM讀取器確定。將數據擬合至四參數擬合邏輯以確定EC50值，活性%係相對於對內標準品1μM GPR-40激動劑之最大反應來量測。對於hGPR-40 b-抑制蛋白，實例1之EC50為44.8nM(±17.9，n=4)且最大刺激%(FA)為128(±10.9，n=4)，且mGPR-40 b-抑制蛋白為3.63nM(±0.81,n=7)且最大刺激%(FA)為153(±5.64,n=7)。(平均值±SEM；SEM=平均值之標準誤差。)該等數據指 示，實例1之化合物可經由β抑制蛋白路徑發出信號。
Zucker fa/fa大鼠中之長期經口葡萄糖耐量測試(OGTT)
在以1.0mg/kg、3.0mg/kg及10mg/kg經口投與例示化合物1天及21天後，在胰島素抗性之齧齒類動物模型Zucker fa/fa大鼠中實施OGTT。1mg/kg之標準GPR-40激動劑用作陽性對照。在化合物投與後1小時實施OGTT，且在葡萄糖投與後10、20、40、60及120分鐘取血樣以供測定葡萄糖及胰島素含量。在第1天及第21天，對於所測試所有劑量之實例1之化合物(1mg/kg、3mg/kg及10mg/kg)且對於陽性對照，葡萄糖降低之AUC在統計學上顯著(p<0.05)。在OGTT期間胰島素AUC顯示劑量依賴性升高；但該等值在統計學上不顯著。在研究期間，體重及食物消耗不因任何治療而改變。在第1天，使用實例1之化合物之葡萄糖降低之ED90係4.1mg/kg，且在第21天係5.0mg/kg。該等發現表明，在實例1之化合物之21天之經口投與後，GPR-40不失敏。
活體內效能：腹膜內葡萄糖耐量測試(IPGTT)
為檢查實例1之化合物在活體內活化GPR-40而產生抗糖尿病效能(即降低血糖含量)之能力，完成腹膜內葡萄糖耐量測試(ipGTT)研究，且將實例1之化合物之數據顯示於下表7中。
將雄性Balb/c(小白鼠(Albino mice))小鼠(8-9週齡)單獨飼養，並餵之以可隨意獲取之正常齧齒類動物飼料及水。將動物稱重；依據體重隨機化；並每日記錄其體重。在開始研究前夜，使動物禁食過夜。早晨，經口給予動物實例1之化合物或僅媒劑，60分鐘後進行葡萄糖耐量測試(葡萄糖2g/kg,i.p.)。自葡萄糖篩查後0、3、7、15、30及60min所取之尾部血液測定血糖含量。使用自t=0至t=60min之血糖波動曲線來積分每一治療之曲線下面積(AUC)。葡萄糖降低百分比係相對於媒劑組之AUC自化合物之AUC數據來計算。以0.1mg/kg、0.3 mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg或30mg/kg經口投與實例1之化合物，且陽性對照(3-[4-(2-甲基-苄基氧基)-苯基]-己-4-炔酸)係以10mg/kg投與。在GTT期間在3或7分鐘時間點，所有濃度之實例1之化合物或陽性對照皆顯著降低葡萄糖含量。葡萄糖含量在以下情況中顯著降低：30mg/kg劑量之實例1之化合物，在15分鐘時間點；1.0mg/kg、10mg/kg及30mg/kg劑量及陽性對照，在30分鐘時間點；以及3.0mg/kg、10mg/kg及30mg/kg劑量及陽性對照，在60分鐘時間點。基於葡萄糖降低之AUC，實例1之化合物之ED50係7.6mg/kg。此研究之結果顯示，實例1活化GPR-40產生活體內抗糖尿病效能。
在ipGTT期間各個治療組與媒劑相比之對血糖之效應、統計學顯著性
本發明之例示化合物可易於根據業內已知之公認實踐(例如參見Remington’s「Pharmaceutical Sciences」,Gennaro編輯，Mack Publishing Co.Easton Pa.1990)調配為醫藥組合物，例如錠劑、填充固體或凝膠之膠囊、粉末、懸浮液或溶液。組合物亦可包括一或多種 醫藥上可接受之載劑、賦形劑及稀釋劑。
較佳醫藥組合物係調配為用於經口投與之錠劑或膠囊。錠劑或膠囊可以有效治療糖尿病、尤其II型糖尿病之量包括本發明化合物。
醫藥組合物係以有效治療糖尿病、更具體而言II型糖尿病之量投與患者。有效治療患者之適當量或劑量可由醫療保健提供者確定。
圖1顯示(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸形式II之XRD光譜圖。
圖2顯示(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸形式I之XRD光譜圖。

Claims (18)

  1. 一種化合物，其具有下式 其中R1選自由H及CH3組成之群；R2選自由H及CH3組成之群；R3選自由以下組成之群：H、C1-C3烷基、O(CH2)3SO2CH3、O(CH2)2OCH3、O(CH2)2C(CH3)2OH、CN及OCF2；或其醫藥上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其中該化合物係 或其醫藥上可接受之鹽。
  3. 如請求項1或2之化合物，其中R3選自由以下組成之群：C1-C3烷基、O(CH2)3SO2CH3、O(CH2)2OCH3、O(CH2)2C(CH3)2OH、CN及OCF2。
  4. 如請求項1或2之化合物，其中R1係H。
  5. 如請求項1或2之化合物，其中R2係H。
  6. 如請求項1或2之化合物，其中R2係CH3。
  7. 如請求項1之化合物，其中該化合物係： 或其醫藥上可接受之鹽。
  8. 如請求項7之化合物，其中該化合物係(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸。
  9. 如請求項1、2、7及8中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法中。
  10. 如請求項1、2、7及8中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療II型糖尿病。
  11. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑中之至少一者。
  12. 一種如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用以治療糖尿病之藥劑。
  13. 一種中間體化合物，其具有下式 其中R選自由以下組成之群：C1-4烷基、C1-4鹵代烷基、C3-6環烷基、C1-4烷基-C3-6環烷基、苯基及C1-5烷基苯基；R4選自由H及CH3組成之群； R5選自由H及CH3組成之群；且R6選自由以下組成之群：H、C1-C3烷基、O(CH2)3SO2CH3、O(CH2)2OCH3、O(CH2)2C(CH3)2OH、CN及OCF2；或其醫藥上可接受之鹽。
  14. 如請求項13之中間體化合物，其中該化合物係 或其醫藥上可接受之鹽。
  15. 如請求項13或14之中間體化合物，其中R選自由以下組成之群：C1-4烷基、苯基及苄基。
  16. 如請求項13或14之中間體化合物，其中R選自由以下組成之群：甲基及乙基。
  17. 如請求項13之中間體化合物，其中該化合物係 其中R選自：C1-4烷基、C1-4鹵代烷基、C3-6環烷基、C1-4烷基-C3-6環烷基、苯基及C1-5烷基苯基；或其醫藥上可接受之鹽。
  18. 一種製備(3S)-3-[4-[[2-(2,6-二甲基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-6-基]甲氧基]苯基]己-4-炔酸或其醫藥上可接受之鹽之方法，其包含使下式之中間體化合物去酯化； 其中R選自由以下組成之群：C1-4烷基、C1-4鹵代烷基、C3-6環烷基、C1-4烷基-C3-6環烷基、苯基及C1-5烷基苯基；以提供下式之化合物， 或其醫藥上可接受之鹽。
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