TW201609081A

TW201609081A - 治療肝臟病症之方法

Info

Publication number: TW201609081A
Application number: TW104100541A
Authority: TW
Inventors: 松田和子
Original assignee: 梅迪西諾瓦股份有限公司
Priority date: 2014-01-10
Filing date: 2015-01-08
Publication date: 2016-03-16
Also published as: BR112016015712A2; CA2935933C; EP3091972A1; CN105934243A; US20150209314A1; JP2017502056A; US20140155484A1; JP2019218379A; EP3091972B1; US8962687B2; BR112016015712A8; KR20160099716A; KR102352729B1; WO2015105874A1; ES2917982T3; EP3091972A4; CA2935933A1

Abstract

一種式(I)之化合物： □ 或其代謝物，或式(I)化合物之酯類或其代謝物，或每一者其之藥學上可接受鹽類，其中m、n、X1與X2係如於此所界定，該化合物對抑制肝臟脂肪變性(liver steatosis)、肝小葉發炎(lobular inflammation)、肝臟腫脹(hepatic ballooning)及肝結疤(hepatic scarring)為有用的。

Description

治療肝臟病症之方法

相關申請案之交互參照

本申請案主張2014年1月10日提申之美國專利申請案第14/152,924號之優先權，該申請案轉而為2012年12月5日提申之美國申請案第13/706,161號部分之延續，該等之內容係以其整體併入於此以作為參考。

發明領域

本發明有關治療非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)、及/或非酒精性脂性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)、導致或從它們一或多者中引起的病症、及/或其等每一者之負面作用的方法，藉由投藥苯氧基烷基羧酸，諸如MN-001與MN-002。

發明背景

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)意指在肝臟中與飲酒不相關的脂肪蓄積。脂肪蓄積可能為肥胖症、糖尿病或其它病症的結果。在少數人中，NAFLD進展成肝臟發炎、結疤，且最終肝臟衰竭。該疾病之此種嚴重形式有時被稱為非酒精性脂性肝炎(NASH)。NAFLD與NASH，及導致或從它們一或多者中引起的病症，係為全球一日益嚴重的問題，影響每一年齡的人。NAFLD與NASH為目前肝臟移植增長最快的指標。

發明概要

在一層面中，本發明提供治療患有非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或非酒精性脂性肝炎(NASH)患者的方法，其包含投藥有效數量的式(I)化合物至需要其之患者：或其代謝物，或式(I)化合物之酯類或其代謝物，或每一者其之一藥學上可接受鹽類，其中m為2至5的整數，而n為3至8之整數，X¹與X²每一者獨立地代表一硫原子、氧原子、亞磺醯基(-S(O)-)或磺醯基(-S(O)₂-)，其限制條件為X¹與X²不同時為氧原子。

在另一層面，本發明提供在患有NAFLD或NASH的患者中降低肝臟發炎的方法，其包含投藥有效數量的式(I)化合物至需要其之患者，或其之酯類，或每一者其之一藥學上可接受鹽類，其中式(I)化合物係如上文界定的。

在另一層面，本發明提供在患有脂肪變性、肝小葉發炎、肝臟腫脹及肝結疤的患者中抑制其等中一或多者的方法，包含投藥有效數量的式(I)化合物至需要其之患者，或其之酯類，或每一者其之一藥學上可接受鹽類，其中式(I)化合物係如上文界定的。如於此所使用，“脂肪變性”(亦稱為脂肪改變(fatty change)，脂肪退化(fatty degeneration)或脂肪性退化(adipose degeneration))係為描述脂質在一細胞中，較佳地肝細胞，異常保留之一過程。在另一層面，本發明提供在需要其之一患者的肝臟中降低及/或抑制羥脯胺酸形成的方法，其包含投藥有效數量的式(I)化合物至需要其之患者，或其之酯類，或每一者其之一藥學上可接受鹽類，其中式(I)化合物係如上文界定的。在某些較佳實施例中，脂肪變性、肝小葉發炎、肝臟腫脹、肝結疤或肝臟羥脯胺酸蓄積係不關聯於過量酒精攝取；換言之，它們本質上大體為非酒精性的。

在一較佳實施例中，式(I)化合物係為式(IA)之化合物(或MN-001)：

在另一較佳實施例中，式(I)與式(IA)化合物之代謝物係為式(IB)之化合物(或MN-002)：

在一實施例中，患者患有NAFLD。在另一實施例中，患者患有NASH。

圖1以圖表例示在經處理與未經處理小鼠中的脂肪變性分數。

圖2以圖表例示在經處理與未經處理小鼠中的肝小葉發炎分數。

圖3以圖表例示在經處理與未經處理小鼠中的肝臟腫脹分數。

圖4以圖表例示在經處理與未經處理小鼠中的纖維化面積百分比。

圖5以圖表例示在經處理與未經處理小鼠中的發炎面積。

圖6以圖表例示在經處理與未經處理小鼠中的肝臟羥脯胺酸含量。

定義

如於此所使用，且在該等所附請求項中，單數形式“一”、“一個”及“該”包括複數引用，除非上下文另有明確指出。

藥物“投藥”或“之投藥”至一患者(及這句話的文法同義詞)包括直接投藥與間接投藥兩者，前者包括自我投藥，後者包括處方一藥物的行為。舉例而言，如於此所使用，指導患者自己投藥一藥物及/或提供患者一藥物處方的醫生係投藥該藥物至該患者。

“C_X”當置於一基團前意指在該基團中碳原子數目為X。

“烷基”意指具有1-12個碳原子的一價無環烴基。烷基之非限制性例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基及之類。

“芳基”意指具有高達10個碳原子的一價芳族烴基。芳基之非限制性例子包括苯基與萘基。

“雜芳基”意指由1至10個碳原子與1至4個選自由氧、氮、硫所組成之該群組的雜原子在該芳環內的一芳族基團，其中該雜芳基之氮及/或硫原子(等)任選地係經氧化(例如，N-氧化物、-S(O)-或-S(O)₂-)。此種雜芳基可以具有單環(例如，吡啶基或呋喃基)或多個稠合環(例如，吲嗪基(indolizinyl)或苯並噻吩基)，其中該稠合環可能是或可能不是芳族及/或含有一雜原子，其限制條件為該連接點係透過該芳族雜芳基之一原子。雜芳基之非限制性例子包括吡啶基、吡咯基、吲哚基、苯硫基與呋喃基。

“環烷基”意指具有3-12個碳原子的一價非芳族環狀烴基。環烷基之非限制性例子包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基及之類。

“雜環基”意指1至10個碳原子與1至4個選自由氧、氮、硫所組成之該群組的雜原子在該環內的一價非芳族環狀基團，其中該雜芳基之氮及/或硫原子(等)任選地係經氧化(例如，N-氧化物、-S(O)-或-S(O)₂-)。此種雜芳基可以具有單環(例如，哌啶基或四氫呋喃基)或多個稠合環，其中該稠合環可能是或可能不是芳族及/或含有一雜原子，其限制條件為該連接點係透過該非芳族雜環基之一原子。雜環基之非限制性例子包括吡咯啶基、哌啶基、哌嗪基及之類。

“胺基”意指-NH₂。

“烷基胺基”意指-NHR_B，其中R_B為C₁-C₆烷基，任選地經1-3個芳基、雜芳基、環烷基或雜環基取代。

“二烷基胺基”意指-N(R_B)₂，其中R_B係如上文所界定。

“包含”應意謂該方法與組成物包括所述元素，但不排除它者。“基本上由…組成”當使用於界定方法與組成物時，應意謂排除對該組合具任何必要重要性之其它元素，為了達成陳述的目的。因此，基本上由於此所界定之元素所組成之一組成物將不排除來自分離與純化方法的微量污染物及藥學上可接受的載體，諸如磷酸鹽緩衝食鹽水、防腐劑及之類。“由......組成”應意謂排除超過微量元素的其它成分及用於投藥本發明該組成物的本質方法步驟，或產生一組成物或實現一意欲結果的製程步驟。由這些轉變的術語及片語每一者所界定之實施例係在本發明之發明範圍內。

於此利用化合物之“有效數量”係為當投藥至具NAFLD或NASH之患者時，將具有所意欲醫療效果，例如，減輕、改善、緩解或消除在該患者中一種或多種醫學症狀的表現形式，的一數量。最大的醫療效果並不一定由一劑量(或用量)之投藥而發生，且可能僅在一系列劑量之投藥後發生。因此，一有效數量可能在一或多個投藥中投藥的。

“非酒精性脂性肝炎”或NASH係為一常見的肝病，它類似於酒精性肝病，但發生在很少喝或不喝酒的人們上。NASH之主要特徵為肝臟中的脂肪，伴隨發炎及損壞。NASH可以導致肝硬化，在該者中，肝臟係永久損壞並結疤，且不再能正恰當地作用。NASH影響2至5%的美國人口。目前，針對NASH的特異性療法並不存在。額外10至20百分比的美國人在其肝臟中具有脂肪，但沒有大量的發炎或肝損壞，一個被稱為“非酒精性脂肪肝病”(NAFLD)的病症。雖然在肝臟中具有脂肪是不正常的，其本身大概造成很小的危害或永久損壞。假若脂肪係基於血液試驗結果或肝臟掃描而懷疑，此問題係意指為NAFLD。假若在這種事例下肝穿刺係執行，其將顯示一些人具有NASH而另一些人具有NAFLD。

NASH通常在肝臟試驗中發現升高的人們中係首先懷疑的，該等試驗係含括在常規血液試驗盤中，諸如丙胺酸轉胺脢(ALT)與天冬胺酸轉胺酶(AST)。當進一步評估顯示針對肝病沒有明顯理由時(諸如用藥、病毒性肝炎或過度使用酒精)，且當肝臟之X光或成像研究顯示脂肪時，NASH係懷疑的。NASH係藉由肝穿刺診斷並與NAFLD分開。對於肝穿刺，針係經由皮膚插入以移除一小片的肝臟。NASH係診斷的，當以一顯微鏡組織檢查顯示脂肪以及肝細胞發炎與損壞時。假若該組織顯示脂肪而無發炎與損壞的話，NAFLD係診斷。從穿刺學到的一個重要資訊是在該肝臟中一結疤組織是否已發展。

NASH可以慢慢惡化，造成結疤或纖維化在肝臟中出現並蓄積。當纖維化惡化時，肝硬化發展；肝臟變得嚴重結疤、硬化，且無法正常作用。一旦嚴重的結疤或肝硬化出現，很少治療可以停止該進展。具肝硬化的人經歷體液保留、肌肉消瘦、腸道出血及肝衰竭。對於肝臟衰竭的晚期肝硬化，肝臟移植為唯一治療，且在具NASH人們中，移植係執行越來越多地。舉例而言，NASH在美國被列為肝硬化的主要原因之一，僅次於C型肝炎與酒精性肝病。

“藥學上可接受的”意指無毒且適於投藥至患者，包括人類患者。

“藥學上可接受鹽類”意指無毒且適於投藥至患者的鹽類。非限制性例子包括鹼金屬、鹼土金屬、及各種初級、次級與三級銨鹽。當式(I)化合物之酯類包括一陽離子部分時，舉例而言，當該酯類包括一胺基酸酯類時，其等之鹽類可以包括各種羧酸、磺酸以及礦物酸鹽。鹽類之某些非限制性例子包括鈉、鉀及鈣鹽。

“保護基團”意指廣為知悉的官能基團其等當結合至一官能基時，使得該所得到的受保護官能基對在一化合物之其它部分上進行的反應與相應的反應條件為惰性的，且其在去保護條件下可以反應以再生原始官能性。該保護基係選擇以與該分子的其餘部分相容。“羧酸保護基”在苯氧基烷基羧酸合成期間保護其之羧酸官能性。羧酸保護基團之非限制性例子包括芐基、對-甲氧基苄基、對-硝基芐基、烯丙基、二苯甲基及三苯甲基。羧酸保護基團之額外例子係於標準參考書中找到，諸如Greene及Wuts於John Wiley & Sons 1991年第2版之”Protective Groups in Organic Synthesis”，及Plenum Press 1975年之”McOmie Protective Groups in Organic Chemistry”。於此揭露的羧酸保護與去保護方法可以在該技藝中找到，特別是在同上Greene於Wuts中，及其中所列出的參考文獻。

“治療”一醫學病症或患者意指採取步驟以獲得有益或所欲的結果，包括臨床結果。為了達成本發明各種層面與實施例之目的，有益或所欲的臨床結果包括，但不限於，降低、減輕或改善NAFLD及/或NASH之一或多種表現形式或負面作用，在一或多個臨床成果中之改善，疾病程度之縮小，疾病進展之延遲或減緩，疾病狀態之改善、緩解或穩定化，及於此描述的其它有益結果。

較佳實施例之詳細說明

在一層面中，本發明提供治療患有非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或非酒精性脂性肝炎(NASH)患者的方法，其包含投藥有效數量的式(I)化合物至需要其之患者：或其代謝物，或式(I)化合物之酯類或其代謝物，或每一者其之一藥學上可接受鹽類，其中m為2至5的整數，而n為3至8之整數，X¹與X²每一者獨立地代表一硫原子、氧原子、亞磺醯基或磺醯基，其限制條件為X¹與X²不同時為氧原子。

在另一層面，本發明提供在患有NAFLD或NASH的患者中降低肝發炎的方法，其包含投藥有效數量的式(I)化合物至需要其之患者，或其代謝物，或式(I)化合物之酯類或其代謝物，或每一者其之一藥學上可接受鹽類，其中式(I)化合物係如上文界定的。

如於此所使用，“其之代謝物”意指本質上顯示類似式(I)化合物之醫療活性的一個代謝物。此種代謝物的非限制性例子包括化合物其中式(I)化合物該附加到含有-O-(CH₂)_nCO₂H部分之苯基上的-COCH₃基團係代謝成1-羥乙基(-CH(OH)Me)基團。

含有此種1-羥乙基的代謝物在該1-羥乙基的位置1含有一不對稱中心。相應的鏡像異構物及其之混合物，包括外消旋混合物，係包括在如於此所利用之式(I)化合物的代謝物內。

如於此所使用，“其酯”意指在式(I)化合物中所顯示之該酚羥基之酯及/或該羧酸之酯，及式(I)化合物之代謝物的1-羥乙基(一脂族羥基)之酯。該酚性及/或脂族羥基之一酯類可以包括，但不限於：以該對應酸而言，羧酸R_A-CO₂H，其中R_A為C₁-C₆烷基、芳基、雜芳基、C₃-C₁₂環烷基、或C₂-C₈雜環基，其中該烷基、芳基、雜芳基、環烷基或雜環基任選地經1-4個C₁-C₃烷基、芳基、CO₂H、胺基、烷基胺基、或二烷基胺基取代。其它酸諸如單-、二-、或三磷酸亦可以設想。羧酸酯可以包括，但不限於，以對應醇而言，式R_A-OH之一化合物，其中R_A係如上文所界定。在一實施例中，式(I)中僅有該羧酸被酯化。在另一實施例中，式(I)中僅有該酚羥基被酯化。在另一實施例中，R_A為C₁-C₄之烷基。對熟習該項技藝者將為顯而易見的是，此種酯類作為在體內水解以釋放式(I)化合物或其鹽類的前藥。

在一實施例中，患者患有NAFLD。在另一實施例中，患者患有NASH。在另一實施例中，該化合物係口服投藥。在另一實施例中，該化合物以一片劑或膠囊劑投藥。在另一實施例中，式(IA)之化合物係以本質上無其它多晶型形式的多晶型形式A存在。在另一實施例中，該化合物係以一液體劑型投藥。在另一實施例中，該化合物係在100至4000mg/天之一數量中投藥，分成一、二或三份。

不受理論所束縛，於此利用的化合物在治療NAFLD及/或NASH中為有效，部分歸因於其抗發炎活性。係為相信的是，各種受器位點可以由於此利用的化合物所阻斷。發炎性疾病的已知抑制劑很少，如果有的話，在一單一分子中體現下列所有的活性位點：抑制1)白三烯的合成、2)白三烯D-4受器、3)白三烯E-4受器、4)cAMP PDE III、5)cAMP PDE IV、6)血栓素(thromboxane)A-2的合成、7)嗜酸性白血球的遷移、及8)20淋巴球的遷移。上述機制在該所謂的“發炎串級(inflammatory cascade)”廣泛的多種細胞交互作用之間於不同程度且具不同特異性地涉及並合作，以產生放射樣的結果。藉由阻斷廣泛多種作用位點，於此利用之該等化合物係設想為對治療NAFLD及/或NASH為有效。

於此利用之一化合物的有效性可以藉由熟習該項技藝者所廣為知悉的方法測試，例如，在如於此下文所描述的STAM小鼠模型中，或改編Keiko Iwaisako等人於”PNAS 2012,109(21)E1369-E1376”之“Protection from liver fibrosis by a peroxisome proliferator-activated receptor δ agonist”中所描述之程序。

合成

式(I)化合物之合成與某些生物活性係於美國專利第4,985,585號中描述，該者係以其整體併入於此以作為參考。舉例而言，式(IA)化合物之製備係藉由將式(II)之苯酚與式(Ⅲ)之化合物反應：其中，R為一羧酸保護基，以提供式(IC)之一化合物：

酸保護基團，或R基團，的非限制性例子包括C₁-C₆烷基、芐基、二苯甲基與三苯甲基，其中芐基、二苯甲基或三苯甲基任選地係經1-6個C₁-C₆烷基、鹵素及/或C₁-C₆烷氧基取代。對熟習該項技藝者將為顯而易見的是，式(Ⅲ)非溴基的離去基可能使用的。此種其它離去基的非限制性例子包括氯或甲苯磺酸酯(tosylate)。

式(IC)該受保護羧酸的去保護作用提供式(IA)之化合物。基於本揭露內容，其係顯而易見的是，按照本發明，式(IC)之化合物在一些實施例中係有用的。去保護方法之非限制性例子包括，鹼性水解及在H₂與諸如Pd/C或Pt/C之一催化劑下的氫解。

該反應係於一惰性有機溶劑中實行，舉例而言且不限於，丙酮、甲乙酮、二乙酮、或二甲基甲醯胺。該親核置換反應可能在低於室溫下至高至該溶劑的回流溫度的溫度下進行，在無機鹼存在下，諸如碳酸鉀或碳酸鈉，且任選地在碘化鉀存在下。該反應係實行達足以提供大量產物的一段時間，該者係藉由廣為知悉的方法測定，諸如薄層色層分析法與¹H-NMR。於此利用的其它化合物係藉由遵循於此描述之該等程序並依據起始物質的適當取代，及/或遵循熟習該項技藝者所廣為知悉的方法而製成。亦參閱美國專利第5,290,812號(以其整體併入於此以作為參考)。

式(IA)之化合物係於控制條件下再結晶，以提供一基本上純的正交多晶型，稱為A形晶體(例如，90%或更多，較佳地至少95%形式A)。多晶型形式A與用於製造其之製程係於美國專利第7,060,854號及第7,064,146號中描述；該二者係以其整體併入於此以作為參考。式(I)化合物的所有多晶型形式為活性的，但多晶型形式A為較佳的。在某些條件下，此多晶型的溶解度與生物可用度係優於其它多晶型，且因此A型可能供給改善的固體調配物。

A型結晶可以獲得的，舉例而言，藉由於25-40℃，在乙醇的5至10重量份中溶解式(IA)之化合物，以得到一黃色至橙色溶液。該乙醇溶液係充填1-10份的水並於 20-25℃下攪拌達約15-60分鐘，且然後在5-10℃下達額外1-4小時時間段，較佳地2.0-3.0小時，引致一黃白色懸浮液。加入5-15份的水至該懸浮液中，且該混合物係於5-10℃下攪拌額外1-4小時，較佳地1.5-2.0小時。一固體，白色至黃白色產物，係藉由真空過濾分離，且該濾餅係以水洗滌並在25-40℃下於真空中乾燥達12-24小時。

對於於此利用、存在鏡像異構物形式的化合物，諸如式(I)化合物的某些代謝物(舉例而言，式IB之化合物)，該兩種鏡像異構物可以光學解析的。此一解析係執行的，舉例而言，但不限於，藉由形成諸如(S)-(-)-1-(1-萘基)乙胺之鹼與相應羧酸化合物的非鏡像異構物鹽類，或藉由使用掌性管柱色層分析分離該等鏡像異構物。此種化合物之中間體，其之中間體亦於鏡像異構物形式中存在，可以類似地解析。

投藥與調配物

於此利用之該等化合物可以口服投藥，或藉由靜脈內、肌肉內與皮下注射，或經皮方法。有效用量水平可以變化很大，例如，從每天約100至4000mg。在一實施例中，每日用量範圍係為250至2000mg，在一、二或三份中給予。在一實施例中，每日用量範圍係為100至500mg，諸如100、200、300、400或500mg，在一、二或三份中給予。在一實施例中，每日用量範圍係為250至2000mg，諸如250、500、750、1000、1250、1500、1750或2000mg，在一、二或三份中給予。在一實施例中，每日用量範圍係為1000至 4000mg，諸如1000、2000、3000或4000mg，在一、二或三份中給予。在另一實施例中，該用量為1000mg，一天兩次。在其它實施例中，適合用量包括1000mg qd、1000mg bid及750mg tid。

實際量將取決於被治療患者的情況。如熟習該項技藝者所體認的，修飾該活性物質作用的許多因素將被該治療醫師所考慮，諸如年齡、體重、性別、患者的飲食與狀況、投藥的時間，投藥的速率與途徑。對一組給定條件，最佳用量可以由熟習該項技藝者使用常規的用量測定試驗而被確定。

於此利用之該等化合物可以在任何藥學上可接受的形式中調配，包括液體、粉末、霜劑、乳劑、丸劑、錠劑(troches)、栓劑(suppositorie)、懸浮劑、溶液、及之類。含有於此利用該等化合物的醫療性組成物慣常地將根據已知且慣例的一或多種藥學上可接受成分調配。一般地，片劑係利用一載體形成，諸如改性澱粉，單獨或與10%重量份的羧甲基纖維素(Avicel)組合。該調配物係於片劑成型製程中於從1000至3000磅壓力下壓縮。該等片劑較佳地展現約1.5至8.0kp/cm²之平均硬度，較佳地5.0至7.5kp/cm²。崩解時間變化，從約30秒至約15或20分鐘。

用於口服使用的調配物可以以硬明膠膠囊劑提供的，其中於此利用的該醫療活性化合物係與諸如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土之惰性固體稀釋劑混合，或以軟明膠膠囊劑提供的，其中該等化合物係與一油質介質混合，例如，液體石蠟或橄欖油。適合的載體包括碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、糖、乳糖、果膠、糊精、澱粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點蠟、可可脂及之類。

於此利用之該等化合物可以調配為在與藥學上可接受賦形劑之摻合物中的一水性懸浮液，該等賦形劑諸如懸浮劑，例如，羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠及阿拉伯樹膠；分散或潤濕劑，諸如天然發生的磷脂，例如，卵磷脂、或一鹼性氧化物與脂肪酸的縮合產物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產物，例如，十七氧乙烯鯨臘醇(heptadecaethylene-oxycetanol)，或環氧乙烷與衍自脂肪酸與一己糖醇之偏酯的縮合產物，例如，聚氧乙烯山梨醇單油酸酯，或環氧乙烷與衍自脂肪酸與己糖醇酐之偏酯的縮合產物，例如，聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯。此種水性懸浮液亦可以含有一或多種防腐劑(例如對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸丙酯)、一或多種著色劑、一或多種調味劑、及一或多種甜味劑(諸如甘油、山梨醇、蔗糖、糖精或環乙烷胺基磺酸鈉(sodium cyclamate)或環乙烷胺基磺酸鈣)。

適合的調配物亦包括緩釋劑型，諸如於美國專利第4,788,055號；4,816,264號；4,828,836號；4,834,965號；4,834,985號；4,996,047號；5,071,646號；及5,133,974號中所描述的哪些者，該等之內容係以其整體併入於此以作為參考。

其它適合用於口服投藥的形式包括液體形式製劑，其包括乳劑、糖漿、酏劑、水溶液，或意欲在使用前轉換成液體形式製劑的固體形式製劑。乳劑可以在溶液中製備，舉例而言，在丙二醇水溶液，或可能含有乳化劑，舉例而言，諸如卵磷脂、山梨醇酐單油酸酯或阿拉伯膠。水溶液可以藉由在水中溶解該活性組份並加入適合的著色劑、調味劑、安定劑與增稠劑而製備。固體形式製劑可能含有，除了該活性組份外，著色劑、調味劑、安定劑、緩衝液、人工與天然甜味劑、分散劑、增稠劑、增溶劑及之類。

於此利用之該等化合物可能調配用於腸胃外投藥(例如，藉由注射，舉例而言推注(bolus injection)或連續灌注(continuous infusion))，且可能以單位劑量形式在安瓿、預填充注射器、小體積灌注，或在具添加防腐劑之多劑量容器中呈現。該等組成物可能以在油性或水性載具中之懸浮液、溶液或乳劑中採取此種形式，舉例而言如在水性聚乙二醇中之溶液。油性或非水性載體、稀釋劑、溶劑或載具的例子包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如，橄欖油)、及可注射的有機酯(例如油酸乙酯)，且可能含有調配劑諸如防腐劑、潤濕劑、乳化劑或懸浮劑、安定劑及/或分散劑。或者，該活性成分可能在粉末形式，其係藉由無菌固體的無菌分離或藉由從溶液冷凍乾燥獲得的，用於在使用前與一適合載具制定，例如，無菌、無熱原(pyrogen-free)的水。

於此利用之該等化合物可能調配用於局部投藥到表皮，以軟膏、霜劑或洗劑，或以一經皮貼劑。軟膏與霜劑可能，舉例而言，伴隨加入適合的增稠劑及/或膠凝劑與一水性或油性基質調配的。洗劑可能與一水性或油性基質調配，且一般亦將含有一或多種乳化劑、安定劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑或著色劑。適合用於在口中局部投藥的調配物包括含片(lozenges)，該者在調味基質，通常為蔗糖與阿拉伯膠或黃蓍膠，中包含一活性劑；軟錠劑(pastilles)，該者在惰性基質中，諸如明膠與甘油或蔗糖與阿拉伯膠，包含該活性成分；及漱口劑，該者在一適合液體載體中包含該活性成分。

於此利用之該等化合物可能調配為栓劑投藥。在在此一調配物中，一低熔點蠟，諸如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物係首先熔化的，且該活性組份係均勻地分散，舉例而言，藉由攪拌。該熔化的均勻混合物然後係倒入適宜大小的模具中，使其冷卻，並固化。

於此利用之該等化合物可能調配用於陰道投藥。陰道栓劑(Pessaries)、棉塞、霜劑、凝膠、糊劑、泡沫劑或噴霧劑含有除活性成分外該技藝所知悉為適當的載體。

於此利用之該等化合物可能調配用於經鼻投藥。該等溶液或懸浮液係藉由常規手段直接施用至鼻腔，舉例而言，以滴管、吸管或噴霧。該等調配物可能在單劑量或多劑量形式中提供。患者可以經由一滴管或吸管投藥一適當、預決定體積的溶液或懸浮液。噴霧可能投藥，舉例而言，藉助於一計量霧化噴霧泵。

於此利用之該等化合物可能調配用於氣霧劑投藥，特別是對呼吸道且包括鼻內投藥。該化合物一般將具有一小的粒徑，舉例而言，5微米或更小的量級。此一粒徑可能藉由該技藝中已知的手段獲得，舉例而言微粒化。該活性成分係於具適合推進劑的加壓包裝中提供，該等推進劑諸如氯氟烴(CFC)(舉例而言，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷)、二氧化碳或其它適合的氣體。該氣霧劑亦可能合宜地含有諸如卵磷脂之一界面活性劑。藥物劑量可能藉由一計量閥控制。或者，活性成分可能在乾燥粉末形式中提供，舉例而言，在適合粉末基質中之化合物的粉末混合物，該等基質諸如乳糖、澱粉、諸如羥丙基甲基纖維素之澱粉衍生物與聚乙烯吡咯烷酮。該粉末載體將在鼻腔中形成凝膠。該粉末組成物可能以單位劑量形式呈現，舉例而言在膠囊劑中，或，舉例而言明膠或泡罩包裝的藥筒(cartridges)中，從該藥筒中，粉末可能藉助於一吸入器投藥。

當需要時，調配物可以以適於活性成分的持續或受控釋放投藥的腸溶塗覆而製備。可能用於本發明之目的的受控釋放調配物之一種常見類型包括惰性核心(諸如一糖球)、一第一層、塗覆以一內含藥物的第二層、及控制藥物從該內層釋放的一外膜或第三層。

該核心較佳地為水溶性或可膨脹材料，且可能為常規用作核心的任意此種材料，或製成珠粒或丸粒的任何其它藥學上可接受的水溶性或水膨脹性材料。該核心可能為諸如蔗糖/澱粉材料的球形體(糖球NF)、蔗糖晶體、或典型地由諸如微晶纖維素與乳糖之賦形劑構成的擠出及乾燥球形體。

在該第一層中之本質上不溶於水之材料通常為一“GI不溶”或“GI部分不溶”的薄膜形成聚合物(分散或溶解在一溶劑中)。作為例子可能提及乙基纖維素、醋酸纖維素、醋酸丁酸纖維素、聚甲基丙烯酸酯諸如丙烯酸乙酯/甲基丙烯酸甲酯共聚物(Eudragit NE-30-D)與甲基丙烯酸銨酯(ammonio methacrylate)共聚物A型及B型(Eudragit RL30D與RS30D)、及有機矽彈性體。通常，一塑化劑係與該聚合物一起使用。示例性之塑化劑包括：癸二酸二丁酯、丙二醇、檸檬酸三乙酯、檸檬酸三丁酯、蓖麻油、乙醯化單甘油酯、乙醯檸檬酸三乙酯、乙醯檸檬酸丁酯(acetyl butylcitrate)、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯、甘油三乙酸酯(triacetin)、分餾的椰子油(中等鏈三甘油酯)。

含活性成分之該第二層可能包含活性成分(藥物)伴隨或不伴隨作為黏合劑的聚合物。該黏合劑，在使用時，通常係親水性的，但可能為水溶性或水不溶性的。在含有該活性藥物之第二層中使用的示例性聚合物為親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮、聚亞烷基二醇諸如聚乙二醇、明膠、聚乙烯醇、澱粉及其衍生物、纖維素衍生物諸如羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羧乙基纖維素、羧甲基羥乙基纖維素、丙烯酸聚合物、聚甲基丙烯酸酯、或任何其它藥學上可接受的聚合物。在該第二層中藥物與親水性聚合物的比例通常在從1：100至100：1(w/w)該範圍中。

在該第三層或膜中使用、用於控制藥物釋放的適合聚合物可能選自水不溶性聚合物或具pH依賴性溶解度的聚合物，諸如，舉例而言，乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸醋酸纖維素(cellulose acetate phthalate)、偏苯三甲酸醋酸纖維素(cellulose acetate trimellitate)、聚甲基丙烯酸酯、或其等之混合物，任選與塑化劑組合，諸如上述那些者。

任選地，該控制釋放層包含，除了上文之聚合物外，具不同溶解度特性的另一種物質(等)，以調節該控制釋放層之滲透性，且從而釋放速率。可能連同，舉例而言，乙基纖維素使用作為改性劑之示例性聚合物包括：HPMC、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇、具pH依賴性溶解度的聚合物，諸如鄰苯二甲酸醋酸纖維素或甲基丙烯酸銨酯共聚物與甲基丙烯酸酯共聚物，或其等之混合物。添加劑諸如蔗糖、乳糖及藥物級界面活性劑亦可能含括在該控制釋放層中，假若需要的話。

於此亦提供的是該等調配物之單位劑型。在此種形式中，該等調配物係細分為含有適當數量活性組份(例如，但不限於，式(I)之化合物或其酯類，或每一者其之鹽類)的單位劑量。該單位劑型可以為一包裝的製劑，該包裝含有離散量的製劑，諸如經包裝片劑、膠囊劑及在小瓶或安瓿中的粉劑。還有，該單位劑量形式本身可以為一膠囊劑、片劑、扁囊劑(cachet)或含片，或其可以為在這些包裝形式中任一者的適當數目。

其它適合的藥物載體與其等之調配物係描述於由E.W.Martin所編輯、賓州伊斯頓Mack出版公司1995年第19版之”Remington：The Science and Practice of Pharmacy”。

例子例子1：非酒精性脂性肝炎(NASH)之治療

250位具非酒精性脂性肝炎的成人係隨機分配以接受MN-001或MN-002，每一者每日劑量為500mg，或安慰劑，長達6個月。主要成果為在非酒精性脂性肝炎之組織學特徵中的改善，該等係藉由使用針對脂肪變性、肝小葉發炎、肝細胞腫脹、及/或纖維化的複合標準化分數評定。該等結果係遵循熟習該項技藝者所廣為知悉的方法分析。

例子2：非酒精性脂肪肝病(NAFLD)治療

一隨機、雙盲、安慰劑對照研究係於具NAFLD的50位患者上執行，該等患者係藉由超音波(US)診斷且由肝穿刺(40患者)所證實。該等患者係隨機接受MN-001或MN-002(每一者每日劑量為500mg長達6個月)、或安慰劑。所有患者參與一同樣的行為減重計劃。所有患者藉由腹部US進行月度評估。肝臟酵素水平、脂肪量變曲線、胰島素水平、及人體測量參數亦監測，且所有患者接受營養追蹤評估。患者於研究結束時亦進行第二次肝穿刺檢查。血清丙胺酸轉胺酶水平與藉由US之脂肪變性係作為非限制性端點測量。該等結果係遵循熟習該項技藝者所廣為知悉的方法分析。

例子3：MN-001在非酒精性脂性肝炎STAM模型中的醫療有益效果

STAM^TM係為一種模型，用於非酒精性脂性肝炎(NASH)、其之症狀與相關的肝臟疾病，該模型係藉由在C57BL/6小鼠中化學與飲食干預之組合而創建。替米沙坦(Telmisartan)在STAM小鼠中已經顯示具有抗NASH、抗纖維化及抗發炎效果，且從而在本研究中用作為陽性對照。根據此研究，且如下文所述，相較於載具組，以替米沙坦處理一致於已報導數據，顯著地減少肝重量、NAS、纖維化面積與發炎面積，從而提供於此所採用該STAM小鼠模型對證明本發明中所利用之一化合物有用性的有用證據。

相較於載具，處理以MN-001在劑量依賴性方式中顯著地降低纖維化面積，證明MN-001在本研究中的抗纖維化效果。高劑量MN-001傾向於降低肝臟羥脯胺酸含量，支持其抗纖維化屬性。處理以高劑量MN-001顯著地減少NAFLS活性分數(NAS)。在NAS中之改善係歸功於，例如，在肝小葉發炎與肝細胞腫脹中的降低。值得注意的是，高劑量的MN-001顯著地降低腫脹分數。由於肝細胞腫脹係衍自於氧化壓力誘導的肝細胞損壞且與NASH疾病進展相關聯(Fujii H等人於”J.Atheroscler.Thromb.2009；16：893”， RangwalaF等人於”J.Pathol.2011；224：401”)，不受理論所束縛，其係設想的是，MN-001可以藉由抑制肝細胞損壞與腫脹而改善NASH病理。

相較於載具，處理以低劑量MN-001顯著地降低發炎面積，證明MN-001的抗發炎效果。

總之，MN-001，在不同劑量下投藥，在本研究中顯示抗NASH、抗纖維化及抗發炎效果中之一或多者。這些與其它結果係於下文討論。

材料及方法試驗物質

MN-001係由MediciNove公司提供。為了製備給藥溶液，MN-001係秤重並溶解在0.2%甲基纖維素(載具)。替米沙坦(Micardis®)係購自Boehringer Ingelheim GmbH(德國)，並溶解在純水中。

NASH誘導

NASH係在50隻雄性小鼠中誘導，藉由在出生2天後單次皮下注射200μg的鏈佐黴素(STZ，美國Sigma-Aldrich)溶液，並在4週齡後餵養高脂肪飼料(HFD，57kcal%脂肪，目錄#：HFD32，日本CLEA Japan)。10隻雄性同窩出生，餵養正常飼料且未經STZ處理者，係用於正常組。

藥物投藥途徑

載具、MN-001與替米沙坦分別在10mL/kg之一體積中藉由口服途徑投藥。

治療劑量

MN-001係於10、30與100mg/kg劑量下每天投藥一次。替米沙坦係於10mg/kg劑量下每天投藥一次。

動物

C57BL/6小鼠(懷孕15天的雌性)係從日本Charles River Laboratories(日本神奈川縣)獲得的。在研究中使用的所有動物係根據日本藥理學會動物使用準則圈養並照顧。

環境

該等動物係於受控溫度(23±2℃)、濕度(45±10%)、照明(12小時人工光暗週期；光從8：00到20：00)及空氣交換條件下在SPF設施中維持。實驗室中係維持高壓(20±4Pa)，以防止設施污染。

動物飼養

該等動物係圈養在聚碳酸酯籠子KN-600(日本Natsume Seisakusho)中，每一籠子最多4隻小鼠。滅菌的PULMASμ(日本材料研究中心)係用於墊料且每週更換一次。

食物與飲水

經滅菌固體HFD係隨意提供，放置在該籠子頂部的金屬蓋中。純水係從配有一橡膠塞與一吸管的水瓶隨意提供。水瓶一周更換一次，清洗並於高壓釜中滅菌而再利用。

動物與籠子識別

小鼠係藉由在耳標上刻的數字而識別。每一籠子係標誌以一特異性的識別碼。

全血與血漿生化測量

非空腹血糖係使用LIFE CHECK(日本EIDIA)在全血中測量。對於血漿生物化學，血液係收集於具抗凝劑(Novo-Heparin，日本持田製藥)之聚丙烯管中，並於4℃下在1,000xg離心達15分鐘。上清液係收集並儲存於-80℃，直至使用。血漿ALT與AST水平係藉由FUJI DRI-CHEM7000(日本富士軟片)測量。

肝臟生化測定肝臟羥脯胺酸含量

為了量化肝臟羥脯胺酸含量，冷凍的肝臟樣品(32-40mg)係藉由如下的鹼性酸水解方法處理。肝臟樣品係以100%丙酮脫脂，在空氣中乾燥，於65℃下溶解在2N NaOH中，並在121℃下高壓滅菌達20分鐘。溶解的樣品(400μL)係以400μL的6N HCl在121℃下酸水解計20分鐘，並用含有10mg/mL活性碳的400μL的4N NaOH中和。AC緩衝液(2.2M醋酸/0.48M檸檬酸，400μL)係加入到樣品中，繼之離心以收集上清液。羥脯胺酸的標準曲線係用起始於16μg/mL的反-4-羥基-L-脯胺酸(Sigma-Aldrich)系列稀釋液製成。該等製備的樣品與標準品(每一者400μL)係與400μL氯胺T溶液(和光純藥工業)混合，並在室溫下培育達25分鐘。該等樣品然後係與Ehrlich's溶液(400μL)混合，並在65℃下加熱達20分鐘，以展開該顏色。在樣品於冰上冷卻並離心以移除沈澱物後，每一上清液的光密度係於560nm處測量。羥脯胺酸濃度係從羥脯胺酸標準曲線計算。肝臟樣品的蛋白濃度係使用BCA蛋白檢測試劑盒(美國賽默飛世爾科技)測定，並使用於標準化該所計算的羥脯胺酸值。肝臟羥脯胺酸水平係表示為μg每mg蛋白質。

病理組織學分析

對於HE染色，切片係從預固定在Bouin’s溶液中的左側肝臟組織之石蠟塊切割，並以莉莉-梅耶Lillie-Mayer’s蘇木素(日本武藤化學)與伊紅溶液(和光純藥工業)染色。NAS係根據克萊納(Kleiner)準則(Kleiner DE.等人於”Hepatology,2005；41：1313”)計算。為了可視化膠原沈積，Bouin’s固定的左側肝切片係使用苦味酸-天狼星紅(picro-sirius red)溶液(德國Waldec)染色。

對於免疫組織化學，切片係從包埋在Tissue-Tek O.C.T.化合物中的冷凍左側肝臟組織切割，並在丙酮中固定。內源性過氧化酶活性係使用0.03% H2O2達5分鐘，繼之與Block Ace(日本大日本住友製藥)培育達10分鐘而阻斷。該等切片係與稀釋200倍的抗α-SMA(美國Epitomics)或抗F4/80抗體(瑞士BMA Biomedicals)在室溫下培育達1小時。在與次級抗體(HRP-山羊抗大鼠抗體，美國Invitrogen)培育後，酵素-受質反應係使用3,3'-二胺基聯苯胺/H2O2溶液(日本Nichirei)執行。

對於纖維化面積、發炎面積之定量分析，及對α-SMA、天狼星紅染色明視野影像之半定量，F4/80與α-SMA-免疫染色切片係使用一數位相機(德國萊卡DFC280) 在200倍倍率下於中央靜脈周圍捕捉的，且在5視野/切片中的陽性面積係使用ImageJ軟體(美國國立衛生研究院)測量。

定量RT-PCR

總RNA係使用RNAiso(日本Takara Bio)根據製造商說明從肝臟樣品萃取。1μg核糖核酸係使用一反應混合物在20μL終體積中反轉錄，該混合物含有4.4mM MgCl₂(瑞士羅氏)、40U RNase抑制劑(日本Toyobo)、0.5mM dNTP(美國Promega)、6.28μM的隨機六聚體(Promega)、5x的第一鏈緩衝液(Promega)、10mM的二硫蘇糖醇(Invitrogen)及200U MMLV-RT(Invitrogen)。該反係於37℃實行達1小時，繼之於99℃ 5分鐘。即時PCR係使用即時PCR DICE與SYBR premix Taq(Takara Bio)執行。為了計算該相對mRNA表現水平，每一基因的表現係對參照基因36B4(基因代號：Rplp0)標準化。PCR引子組與孔盤配製資訊係於表1中說明。

統計檢定

統計分析係使用Bonferroni多重比較檢定於GraphPad Prism 4(美國GraphPad Software)上執行。P值<0.05係視為統計上顯著地。當一單尾t-檢定產生P值<0.10時，傾向或趨勢係假定的。結果係表示為平均值±SD。

實驗設計與處理研究組第1組：正常

十隻正常小鼠係以正常飼料隨意餵食而無任何處理，直至9週齡。

第2組：載具

十隻NASH小鼠係於6至9週齡每天一次口服投藥體積10mL/kg之載具。

第3組：MN-001-低劑量

十隻NASH小鼠係於6-9週齡每天一次口服投藥補給以MN-001劑量10mg/kg的載具。

第4組：MN-001-中間劑量

十隻NASH小鼠係於6-9週齡每天一次口服投藥補給以MN-001劑量30mg/kg的載具。

第5組：MN-001高劑量

十隻NASH小鼠係於6-9週齡每天一次口服投藥補給以MN-001劑量100mg/kg的載具。

第6組：替米沙坦

六隻NASH小鼠係於6-9週齡每天一次口服投藥補給以替米沙坦劑量10mg/kg的純水。下方表中總結該處理日程。

動物監測與犧牲

活力、臨床徵狀與行為係每日監測的。體重係於處理前記錄。小鼠係於每一次投藥大約60分鐘後針對毒性、瀕死與死亡的顯著臨床徵狀觀察。動物係於乙醚麻醉(和光純藥工業)下透過直接心臟穿刺放血犧牲。

結果組織學分析 HE染色與NAFLD活性分數

來自載具組的肝臟切片展現嚴重的微囊泡性及大囊泡性(macrovesicular)脂肪沈積、肝細胞腫脹及發炎細胞浸潤。符合這些觀察，相較於正常組，NAS在載具組中顯著地提高。替米沙坦組在肝細胞腫脹與發炎細胞浸潤中顯示明顯的改善，相較於載具組在NAS中具有顯著降低。MN-001高劑量組顯示在肝細胞腫脹明顯的改善及發炎細胞浸潤中度的改善。相較於載具組，在MN-001高組中NAS顯著地下降。MN-001-低及-中間組相較於載具組在肝細胞腫脹中顯示中度下降。在載具組與任意其它組間在NAS中係無顯著差異(正常：0.0±00，載具：5.3±0.5，MN-001-低：4.7±0.5，MN-001-中間：4.7±0.5，MN-001-高：3.3±0.8，替米沙坦：2.6±0.7)。參閱圖1-3與下方表。

天狼星紅(Sirius red)染色

來自載具組的肝臟切片相較於正常組在肝小葉的中心周圍區域顯示提高的膠原沈積。在載具組中，纖維化面積(天狼星紅陽性面積)百分比相較於正常組顯著地提高。在替米沙坦組與MN-001處理組兩者中該纖維化面積相較於載具組都顯著地下降(正常：0.29±0.08%，載具：0.97±0.19%，MN-001-低：0.76±0.19%，MN-001-中間：0.76±0.16%，MN-001-高：0.69±0.18%，替米沙坦： 0.62±0.09%)。參閱圖4。

F4/80免疫染色

來自載具組的肝臟切片相較於正常組顯示在肝小葉中一提高數量與大小的F4/80陽性細胞。在載具組中，發炎面積(F4/80陽性面積)百分比相較於正常組顯著地提高。在替米沙坦組與MN-001-低組兩者中該發炎面積相較於載具組都顯著地下降。在載具組與任意其它組間，發炎面積係無顯著差異(正常：3.26±0.66%，載具：6.56±1.19%，MN-001-低：5.18±0.85%，MN-001-中間：6.33±0.84%，MN-001-高：6.31±0.76%，替米沙坦：4.46±0.88%)。參閱圖5。

α-SMA免疫染色

來自載具組的肝臟切片相較於正常組顯示在肝小葉中一提高的α-SMA陽性細胞。在載具組中，α-SMA陽性面積百分比相較於正常組顯著地提高。在MN-001-低-及高組中，α-SMA陽性面積相較於載具組傾向於下降。在載具組與任意其它組間，α-SMA陽性面積係無顯著差異(正常：0.07±0.03%，載具：0.15±0.08%，MN-001-低：0.10±0.05%，MN-001-中間：0.11±0.04%，MN-001-高：0.11±0.04%，替米沙坦：0.12±0.05%)。

體重變化及一般狀況

在治療期間，除了替米沙坦組外，所有的體重逐漸提高。載具組之平均體重貫穿處理期間低於正常組。替米沙坦組之平均體重從第11天至第22天係顯著低於載具組者。於處理期間，在載具組與任意其它組間，平均體重係無顯著差異。在本研究中，在一般狀況下，沒有動物顯示出惡化。

犧牲日之體重

在載具組中，於犧牲時之平均體重相較於正常組係顯著較低的。該替米沙坦組相較於載具組在平均體重中顯示一顯著下降。在載具組與任意其它組間，平均體重係無顯著差異(正常：25.0±0.4g，載具：20.5±1.9g，MN-001-低：21.1±1.3g，MN-001-中間：20.3±1.0g，MN-001-高：20.6±1.5g，替米沙坦：18.0±1.9g)。

肝臟重量及肝臟對體重比

在該載具組中，平均肝臟重量相較於正常組顯著提高。該替米沙坦組相較於載具組，在平均肝臟重量中顯示一顯著下降。在MN-001-中間組中，該肝臟重量相較於載具組傾向於下降。在載具組與任意其它組間，平均肝臟重量係無顯著差異(正常：1083±83mg，載具：1555±112mg，MN-001-低：1567±165mg，MN-001-中間：1439±118mg，MN-001-高：1480±145mg，替米沙坦：1172±90mg)。

在載具組中，該肝臟對體重比相較於正常組顯著提高。該替米沙坦組相較於載具組，在平均肝臟對體重比中顯示一顯著下降。在MN-001-中間及-高組中，該肝臟對體重比相較於載具組傾向於下降。在載具組與MN-001低組間，該平均肝臟對體重比係無顯著差異(正常：4.3±0.3%，載具：7.6±0.6%，MN-001-低：7.4±0.8%，MN-001-中間： 7.1±0.5%，MN-001-高：7.2±0.6%，替米沙坦：6.5±0.4%)。

全血及生物化學

在該載具組中全血葡萄糖(圖3.1與表3)血糖水平相較於正常組顯著提高。該替米沙坦組相較於該載具組在血糖水平中顯示一顯著提高。在該載具組與任意其它組間血糖水平係無顯著差異(正常：192±40mg/dL，載具：632±95mg/dL，MN-001-低：614±98mg/dL，MN-001-中間：609±78mg/dL，MN-001-高：671±124mg/dL，替米沙坦：876±29mg/dL)。

血漿ALT

在該載具組中血漿ALT水平相較於正常組傾向於提高的。在該替米沙坦組中，血漿ALT水平相較於該載具組傾向於下降的。在該載具組與任意其它組間血漿ALT水平係無顯著差異(正常：31±10U/L，載具：51±22U/L，MN-001-低：71±60U/L，MN-001-中間：48±23U/L，MN-001-高：54±11U/L，替米沙坦：37±6U/L)。

血漿AST

在該載具組中血漿AST水平相較於正常組傾向於下降。在該MN-001-中間及-高組中，血漿AST水平相較於載具組傾向於提高的。在該載具組與MN-001低組中血漿AST水平係無顯著差異(正常：300±77U/L，載具：193±95U/L，MN-001-低：214±210U/L，MN-001-中間：270±114U/L，MN-001-高：385±183U/L，替米沙坦：190±28U/L)。

肝臟羥脯胺酸含量

在正常組與載具組間肝臟羥脯胺酸含量係無顯著差異。肝臟羥脯胺酸含量在替米沙坦組中相較於載具組傾向於提高的。肝臟羥脯胺酸含量在MN-001-高組中相較於載具組傾向於下降的。在該載具組與任意其它組之間肝臟羥脯胺酸含量係無顯著差異(正常：0.61±0.12μg/mg蛋白質，載具：0.67±0.16μg/mg蛋白質，MN-001-低：0.78±0.34μg/mg蛋白質，MN-001-中間：0.63±0.12μg/mg蛋白質，MN-001-高：0.55±0.14μg/mg蛋白質，替米沙坦：0.87±0.23μg/mg蛋白質)。參閱圖6。

基因表现分析 α-SMA

α-SMA mRNA在該載具組中之表現水平相較於該正常組傾向於上調地。α-SMA mRNA在該替米沙坦組中之表現水平相較於該載具組傾向於上調地。在該載具組與任意其它組之間α-SMA mRNA表現水平係無顯著差異(正常：1.00±0.44，載具：4.08±2.56，MN-001-低：36.8±111，MN-001-中間：3.13±2.52，MN-001-高：5.78±3.45，替米沙坦：5.21±1.43)。

TNF-α

TNF-α mRNA在該載具組中之表現水平相較於該正常組傾向於上調地。在該載具組與任意其它組之間TNF-α mRNA表現水平係無顯著差異(正常：1.00±0.48，載具：9.88±19.3，MN-001低：3.42±2.53，MN-001-中間：7.97±9.30，MN-001高：9.74±3.34，替米沙坦：8.35±2.84)。

CCR2

CCR2 mRNA在該載具組中之表現水平相較於該正常組係顯著上調地。CCR2 mRNA在該MN-001-低組與中間組之表現水平相較於該載具組係顯著下調地。在該載具組與任意其它組之間CCR2 mRNA表現水平係無顯著差異(正常：1.00±0.27，載具：6.83±9.89，MN-001-低：0.13±0.09，MN-001-中間：0.22±0.35，MN-001-高：3.86±1.43，替米沙坦：3.21±0.85)。

MCP-1

MCP-1 mRNA在該載具組中之表現水平相較於該正常組係顯著上調地。MCP-1 mRNA在該MN-001-低組中之表現水平相較於該載具組係顯著下調地。MCP-1 mRNA在該MN-001-高組及替米沙坦組中之表現水平相較於該載具組傾向於下調的。

在該載具組與任意其它組之間MCP-1 mRNA表現水平係無顯著差異(正常組：1.00±0.35，載具組：2.17±42.2，MN-001-低：1.97±2.06，MN-001-中間：4.00±7.78，MN-001-高：3.64±1.52，替米沙坦：2.69±0.95)。

膠原蛋白第1型

膠原蛋白第1型mRNA在該載具組中之表現水平相較於正常組傾向於上調的。膠原蛋白第1型之mRNA表現水平係顯著地。

TIMP-1

TIMP-1 mRNA在該載具組中之表現水平相較於該正常組係顯著上調地。TIMP-1 mRNA在該MN-001-低及-中間組中之表現水平相較於該載具組係顯著下調地。在該載具組與任意其它組之間TIMP-1 mRNA表現水平係無顯著差異(正常組：1.00±0.37，載具組：9.78±7.28，MN-001-低：2.20±1.52，MN-001-中間：3.64±1.66，MN-001高：10.6±5.83，替米沙坦：7.82±2.62)。

總之，MN-001，在不同劑量下投藥，在本研究中顯示抗NASH、抗纖維化及抗發炎效果中之一或多者。

Claims

一種在患有脂肪變性的患者中抑制該病的方法，其包含投藥有效量的式(I)化合物至需要其之患者：或其代謝物，或該式(I)化合物之酯類或其代謝物，或其每一者之一藥學上可接受鹽類，其中m為自2至5的整數，而n為自3至8之整數，X¹與X²每一者獨立地代表一硫原子、氧原子、亞磺醯基或磺醯基，其限制條件為X¹與X²不同時為氧原子。
如請求項1之方法，其中該式(I)之化合物為式(IA)
如請求項1之方法，其中該式(I)化合物之代謝物為式(IB)之化合物：
如請求項1之方法，其中該化合物係口服投藥。
如請求項4之方法，其中該化合物以一片劑或膠囊劑投藥。
如請求項2之方法，其中該化合物係以本質上無其它多晶型(orthorhombic polymorphic)形式的正交多晶型形式A存在。
如請求項1之方法，其中該化合物係以一液體劑型投藥。
如請求項1之方法，其中該化合物係以100至4000mg/天之量投藥，分成一、二或三份。
一種在患有肝小葉發炎(lobular inflammation)的患者中抑制該病的方法，其包含投藥有效量的式(I)化合物至需要其之患者：或其代謝物，或該式(I)化合物之酯類或其代謝物，或其每一者之一藥學上可接受鹽類，其中m為自2至5的整數，而n為自3至8之整數，X¹與X²每一者獨立地代表一硫原子、氧原子、亞磺醯基或磺醯基，其限制條件為X¹與X²不同時為氧原子。
如請求項9之方法，其中該式(I)之化合物為式(IA) (IA)。
如請求項9之方法，其中該式(I)化合物之代謝物為式(IB)之化合物：
如請求項9之方法，其中該化合物係口服投藥。
如請求項12之方法，其中該化合物以一片劑或膠囊劑投藥。
如請求項10之方法，其中該化合物係以本質上無其它多晶型形式的正交多晶型形式A存在。
如請求項9之方法，其中該化合物係以一液體劑型投藥。
如請求項9之方法，其中該化合物係以100至4000mg/天之量投藥，分成一、二或三份。
一種在患有肝臟腫脹(hepatic ballooning)的患者中抑制該病的方法，其包含投藥有效量的式(I)化合物至需要其之患者：或其代謝物，或該式(I)化合物之酯類或其代謝物，或其每一者之一藥學上可接受鹽類，其中m為自2至5的整數，而n為自3至8之整數，X¹與X²每一者獨立地代表一硫原子、氧原子、亞磺醯基或磺醯基，其限制條件為X¹與X²不同時為氧原子。
如請求項17之方法，其中該式(I)之化合物為式(IA)
如請求項17之方法，其中該式(I)化合物之代謝物為式(IB)之化合物：
如請求項17之方法，其中該化合物係口服投藥。
如請求項20之方法，其中該化合物以一片劑或膠囊劑投藥。
如請求項18之方法，其中該化合物係以本質上無其它多晶型形式的正交多晶型形式A存在。
如請求項17之方法，其中該化合物係以一液體劑型投藥。
如請求項17之方法，其中該化合物係以100至4000mg/天之量投藥，分成一、二或三份。
一種在患有肝結疤(hepatic scarring)的患者中抑制該病的方法，其包含投藥有效量的式(I)化合物至需要其之患者：或其代謝物，或該式(I)化合物之酯類或其代謝物，或其每一者之一藥學上可接受鹽類，其中m為自2至5的整數，而n為自3至8之整數，X¹與X²每一者獨立地代表一硫原子、氧原子、亞磺醯基或磺醯基，其限制條件為X¹與X²不同時為氧原子。
如請求項25之方法，其中該式(I)之化合物為式(IA)
如請求項25之方法，其中該式(I)化合物之代謝物為式(IB)之化合物：
如請求項25之方法，其中該化合物係口服投藥。
如請求項28之方法，其中該化合物以一片劑或膠囊劑投藥。
如請求項26之方法，其中該化合物係以本質上無其它多晶型形式的正交多晶型形式A存在。
如請求項25之方法，其中該化合物係以一液體劑型投藥。
如請求項25之方法，其中該化合物係以100至4000mg/天之量投藥，分成一、二或三份。
一種在患有升高的肝羥脯胺酸水平的患者中降低及/或抑制該肝羥脯胺酸水平的方法，其包含投藥有效量的式(I)化合物至需要其之患者：或其代謝物，或該式(I)化合物之酯類或其代謝物，或其每一者之一藥學上可接受鹽類，其中m為自2至5的整數，而n為自3至8之整數，X¹與X²每一者獨立地代表一硫原子、氧原子、亞磺醯基或磺醯基，其限制條件為X¹與X²不同時為氧原子。
如請求項33之方法，其中該式(I)之化合物為式(IA)
如請求項33之方法，其中該式(I)化合物之代謝物為式(IB)之化合物：
如請求項33之方法，其中該化合物係口服投藥。
如請求項36之方法，其中該化合物以一片劑或膠囊劑投藥。
如請求項34之方法，其中該化合物係以本質上無其它多晶型形式的正交多晶型形式A存在。
如請求項33之方法，其中該化合物係以一液體劑型投藥。
如請求項33之方法，其中該化合物係以100至4000mg/天之量投藥，分成一、二或三份。