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TW201416363A - Ｃ型肝炎病毒抑制劑 - Google Patents

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TW201416363A
TW201416363A TW101142101A TW101142101A TW201416363A TW 201416363 A TW201416363 A TW 201416363A TW 101142101 A TW101142101 A TW 101142101A TW 101142101 A TW101142101 A TW 101142101A TW 201416363 A TW201416363 A TW 201416363A
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TW101142101A
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傑佛瑞 李 洛明
楊忠
王敢
范恩Ｎ 恩古顏
約翰Ａ 班德
丹尼斯Ｒ 聖羅倫
馬柯南 貝雷瑪
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必治妥美雅史谷比公司
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Abstract

本發明係關於用於治療C型肝炎病毒(HCV)感染之化合物、組合物及方法。亦揭示含有該等化合物之醫藥組合物及使用此等化合物治療HCV感染之方法。

Description

C型肝炎病毒抑制劑
本發明大體上係關於抗病毒化合物，且更特定言之係關於可抑制由C型肝炎病毒(HCV)編碼之NS5A蛋白質之功能的化合物、包含該等化合物之組合物及抑制NS5A蛋白質之功能的方法。
HCV為一種主要的人類病原體，其在世界範圍內感染著估計1.7億人-大致為受1型人類免疫缺乏病毒感染之數目的五倍。相當大部分之該等HCV感染個體發展出嚴重的進行性肝病，包括肝硬化及肝細胞癌。
目前採用聚乙二醇化干擾素與病毒唑(ribavirin)之組合的HCV護理標準在獲得持續病毒反應方面成功率並非最佳且產生諸多副作用。因此，顯而易見且盼望已久，需要開發可有效解決該尚未得到滿足之醫學需求的療法。
HCV為一種正股RNA病毒。基於所推定之胺基酸序列之比較及5'非轉譯區之廣泛類似性，已將HCV分類為黃病毒(Flaviviridae)科中之一獨立屬。所有黃病毒科成員均具有包膜病毒粒子，該等病毒粒子含有經由轉譯單一、不間斷之開放閱讀框架編碼所有已知病毒特異性蛋白質的正股RNA基因組。
由於缺乏校正(proof-reading)能力的所編碼之RNA依賴性RNA聚合酶之錯誤率較高，因此在整個HCV基因組中於核苷酸及所編碼之胺基酸序列內發現顯著的異質性。已表 徵至少六種主要基因型，且已描述50種以上亞型，其分佈在世界範圍內。HCV遺傳異質性之臨床意義已表明，在單一療法治療期間，易發生突變，因此，希望有其他治療選項供使用。基因型對發病機制及療法之可能的調節作用仍難以捉摸。
單股HCV RNA基因組之長度為約9500個核苷酸且具有編碼具有約3000個胺基酸之單一大聚合蛋白質的單一開放閱讀框架(ORF)。在受感染細胞中，該聚合蛋白質在多個位點處被細胞及病毒蛋白酶裂解而產生結構蛋白質及非結構(NS)蛋白質。在HCV之情況下，成熟非結構蛋白質(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A及NS5B)之產生係由兩種病毒蛋白酶來實現。咸信第一者為金屬蛋白酶，且其在NS2-NS3接面處裂解；第二者為含於NS3之N末端區域內的絲胺酸蛋白酶(在本文中亦稱為NS3蛋白酶)且其介導NS3下游之所有後續順式(在NS3-NS4A裂解位點處)與反式(對於剩餘NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位點而言)裂解。NS4A蛋白質似乎藉由充當NS3蛋白酶之輔因子及輔助NS3及其他病毒複製酶組分之膜定位而發揮多種功能。NS3-NS4A複合物之形成為可提高裂解事件之蛋白質水解效率的恰當蛋白酶活性所必需。NS3蛋白質亦展現核苷三磷酸酶及RNA解旋酶活性。NS5B(在本文中亦稱為HCV聚合酶)為複製酶複合物中之RNA依賴性RNA聚合酶，其涉及HCV及其他HCV蛋白質(包括NS5A)之複製。
需要可選擇性抑制HCV病毒複製且適用於治療HCV感染 患者之化合物。詳言之，需要可有效抑制NS5A蛋白質之功能的化合物。HCV NS5A蛋白質例如描述於以下參考文獻中：S.L.Tan等人，Virology,284：1-12(2001)；K.-J.Park等人，J.Biol.Chem.,30711-30718(2003)；T.L.Tellinghuisen等人，Nature,435,374(2005)；R.A.Love等人，J.Virol,83,4395(2009)；N.Appel等人，J.Biol.Chem.,281,9833(2006)；L.Huang,J.Biol.Chem.,280,36417(2005)；C.Rice等人，WO 2006093867。
在第一態樣中，本發明提供一種式(I)化合物 或其醫藥學上可接受之鹽，其中 L係選自一鍵、、及； A及A'獨立地選自 其限制條件為A及A'中之至少一者不為； 其中「」表示連接至X及X'之連接點且「」表示連接至L之連接點；且其中：Z為視情況含有一個、兩個或三個氮原子之6員芳環；R2係選自氫、烷基及鹵基；且R3係選自氫、烷氧基、烷基、氰基、鹵基及鹵烷氧基；X及X'獨立地選自 其中各基團被繪示為碳原子連接於A或A'且氮原子連接於羰基，且其中：n為0、1或2；s為0、1、2、3或4；Y係選自Si(R4)2、NR4、O、S、S(O)、SO2、CH2、CHR4及C(R4)2；其限制條件為當n為0時，Y係選自CH2、CHR4及C(R4)2；且各R4獨立地選自烷氧基、烷基、芳基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、羥基、-NRaRb及硫代烷基，其中烷基可視情況與環上之另一碳原子形成稠合三員至六員環或橋聯四員或五員環；或可視情況與其所連接之碳形成螺環三員至六員環，其中所形成之各個環系視情況含有一或兩個氧原子，且其中所形成之各個環系視情況經一或兩個獨立地選自烷基及鹵基之基團取代；其限制條件 為當Y為NR4時，R4不為鹵基、羥基或-NRaRb；R為(NRcRd)烷基，其中(NRcRd)烷基之烷基部分經雙環烷基、稠合雙環雜環基、經環烷基取代之雜環基、乙烯基環烷基、雜環基乙烯基、側氧基環烷基或螺環雜環基取代，其中雙環烷基、雙環雜環基、側氧基環烷基及螺環雜環基視情況經一或兩個獨立地選自烷基、鹵基及鹵烷基之基團取代；R'為(NRcRd)烷基，其中(NRcRd)烷基之烷基部分視情況經雙環烷基、稠合雙環雜環基、經環烷基取代之雜環基、乙烯基環烷基、雜環基乙烯基、側氧基環烷基或螺環雜環基取代，其中雙環烷基、雙環雜環基、側氧基環烷基及螺環雜環基視情況經一或兩個獨立地選自烷基、鹵基及鹵烷基之基團取代；Ra及Rb獨立地選自氫及烷基；Rc及Rd獨立地選自氫、烯氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺醯基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基、芳基磺醯基、環烷基、環烷氧基羰基、環烷基磺醯基、甲醯基、鹵烷氧基羰基、雜環基、雜環基烷氧基羰基、雜環基烷基、雜環基烷基羰基、雜環基羰基、雜環氧基羰基、羥烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺醯基、-C(NCN)OR"及-C(NCN)NRxRy，其中R"係選自烷基及未經取代之苯基，且其中芳基烷基、芳基烷基羰基、雜環基烷基及雜環基烷基羰基之烷基部分 進一步視情況經一個-NReRf基團取代；且其中芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基及芳基磺醯基之芳基部分、雜環基及雜環基烷氧基羰基、雜環基烷基、雜環基烷基羰基、雜環基羰基及雜環氧基羰基之雜環基部分進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自烷氧基、烷基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基及硝基之取代基取代；Re及Rf獨立地選自氫、烷基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷基、未經取代之環烷基、未經取代之(環烷基)烷基、未經取代之雜環基、未經取代之雜環基烷基、(NRxRy)烷基及(NRxRy)羰基；及Rx及Ry獨立地選自氫、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷氧基羰基、未經取代之芳基烷基、未經取代之環烷基、未經取代之雜環基及(NRx'Ry')羰基，其中Rx'及Ry'獨立地選自氫及烷基。
在第一態樣之第一實施例中，本發明提供一種式(I)化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為。
在第一態樣之第二實施例中，本發明提供一種式(I)化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中L係選自及
在第一態樣之第三實施例中，本發明提供一種式(I)化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為一個鍵結。
在第一態樣之第四實施例中，本發明提供一種式(I)化合 物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為一個鍵結且A及A' 各為；其中Z為視情況含有一個氮原子之6員 芳環。
在第一態樣之第五實施例中，本發明提供一種式(I)化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為一個鍵結；A及A' 各為；其中Z為視情況含有一個氮原子之6員 芳環；且X及X'各為；其中n、s及Y係如關於式(I) 所描述。
在第一態樣之第六實施例中，本發明提供一種式(I)化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為一個鍵結；A及A' 各為；其中Z為視情況含有一個氮原子之6員 芳環；且X及X'各為；其中n為1或2；s為1、2或3； 且Y係選自O、CH2、CHR4及C(R4)2。
在第一態樣之第七實施例中，本發明提供一種式(I)化合物，或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為一個鍵結；A及A' 各為；其中Z為視情況含有一個氮原子之6員 芳環；且X及X'各為；其中n為1；s為1、2或3；且 Y係選自CH2、CHR4及C(R4)2。在第一態樣之第八實施例中，R及R'各為(NRcRd)烷基，其中各(NRcRd)烷基之烷基部分經雙環烷基、稠合雙環雜環基、經環烷基取代之雜環基或螺環雜環基取代，其中雙環烷基及雙環雜環基視情況經一或兩個鹵基取代。在第一態樣之第九實施例中，各(NRcRd)烷基之烷基部分經螺環雜環基取代，其中螺環雜環基為經由一個單一碳原子鄰接至3員飽和碳環之含有一個氧原子的6員飽和環。
在第二態樣中，本發明提供一種式(II)化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽，其中 L係選自一個鍵結、、及； A及A'獨立地選自 其中各基團被繪示為咪唑環連接於X，且六員環連接於L，且其中：Z為視情況含有一個、兩個或三個氮原子之6員芳環；R2係選自氫、烷基及鹵基；且R3係選自氫、烷氧基、烷基、氰基、鹵基及鹵烷氧基；X及X'獨立地選自 其中各基團被繪示為碳原子連接於A或A'且氮原子連接於羰基，且其中：n為0、1或2；s為0、1、2、3或4；Y係選自NH、NR4、O、S、S(O)、SO2、CH2、CHR4及C(R4)2；其限制條件為當n為0時，Y係選自CH2、CHR4及C(R4)2；且各R4獨立地選自烷氧基、烷基、芳基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、羥基及-NRaRb，其中烷基可視情況與環上之另一碳原子形成稠合三員至六員環或橋聯四員或五員環；或可視情況與其所連接之碳形成螺環三員至六員環，其中所形成之環系視情況經一或兩個獨立地選自烷基及鹵 基之基團取代；其限制條件為當Y為NR4時，R4不為鹵基、羥基或-NRaRb；R為(NRcRd)烷基，其中(NRcRd)烷基之烷基部分經雙環烷基、稠合雙環雜環基、側氧基環烷基或螺環雜環基取代，其中雙環烷基、雙環雜環基、側氧基環烷基及螺環雜環基視情況經一或兩個獨立地選自烷基、鹵基及鹵烷基之基團取代；R'為(NRcRd)烷基，其中(NRcRd)烷基之烷基部分視情況經雙環烷基、稠合雙環雜環基、側氧基環烷基或螺環雜環基取代，其中雙環烷基、雙環雜環基、側氧基環烷基及螺環雜環基視情況經一或兩個獨立地選自烷基、鹵基及鹵烷基之基團取代；Ra及Rb獨立地選自氫及烷基；Rc及Rd獨立地選自氫、烯氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺醯基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基、芳基磺醯基、環烷基、環烷氧基羰基、環烷基磺醯基、甲醯基、鹵烷氧基羰基、雜環基、雜環基烷氧基羰基、雜環基烷基、雜環基烷基羰基、雜環基羰基、雜環氧基羰基、羥烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺醯基、-C(NCN)OR"及-C(NCN)NRxRy，其中R"係選自烷基及未經取代之苯基，且其中芳基烷基、芳基烷基羰基、雜環基烷基及雜環基烷基羰基之烷基部分進一步視情況經一個-NReRf基團取代；且其中芳基、芳基 烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基及芳基磺醯基之芳基部分、雜環基及雜環基烷氧基羰基、雜環基烷基、雜環基烷基羰基、雜環基羰基及雜環氧基羰基之雜環基部分進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自烷氧基、烷基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基及硝基之取代基取代；Re及Rf獨立地選自氫、烷基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷基、未經取代之環烷基、未經取代之(環烷基)烷基、未經取代之雜環基、未經取代之雜環基烷基、(NRxRy)烷基及(NRxRy)羰基；及Rx及Ry獨立地選自氫、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷氧基羰基、未經取代之芳基烷基、未經取代之環烷基、未經取代之雜環基及(NRx'Ry')羰基，其中Rx'及Ry'獨立地選自氫及烷基。
在第三態樣中，本發明提供一種包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的組合物。在第三態樣之第一實施例中，該組合物進一步包含至少一種具有抗HCV活性之其他化合物。在第三態樣之第二實施例中，其他化合物中之至少一者為干擾素或病毒唑。在第三態樣之第三實施例中，干擾素係選自干擾素α2B、聚乙二醇化干擾素α、聚乙二醇化干擾素λ、複合干擾素、干擾素α2A及淋巴母細胞樣干擾素τ。
在第三態樣之第四實施例中，本發明提供一種包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之載劑 及至少一種具有抗HCV活性之其他化合物的組合物，其中該至少一種其他化合物係選自介白素2、介白素6、介白素12、增強1型輔助性T細胞反應之發展的化合物、干擾RNA、反義RNA、咪奎莫特(Imiquimod)、病毒唑(ribavirin)、肌苷5'-單磷酸脫氫酶抑制劑、金剛烷胺(amantadine)及金剛乙胺(rimantadine)。
在第三態樣之第五實施例中，本發明提供一種包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之載劑及至少一種具有抗HCV活性之其他化合物的組合物，其中該至少一種其他化合物可有效抑制選自以下各者之標靶的功能以治療HCV感染：HCV金屬蛋白酶、HCV絲胺酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白質、HCV進入(HCV entry)、HCV組裝、HCV釋放(HCV egress)、HCV NS5A蛋白質及IMPDH。
在第四態樣中，本發明提供一種治療患者之HCV感染的方法，其包括向該患者投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在第四態樣之第一實施例中，該方法進一步包括在式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前、之後或同時投與至少一種具有抗HCV活性之其他化合物。在第四態樣之第二實施例中，該至少一種其他化合物為干擾素或病毒唑。在第四態樣之第三實施例中，干擾素係選自干擾素α2B、聚乙二醇化干擾素α、複合干擾素、干擾素α2A及淋巴母細胞樣干擾素τ。
在第四態樣之第四實施例中，本發明提供一種治療患者 之HCV感染的方法，其包括向該患者投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，且在式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前、之後或同時投與至少一種具有抗HCV活性之其他化合物，其中該至少一種其他化合物係選自介白素2、介白素6、介白素12、增強1型輔助性T細胞反應之發展的化合物、干擾RNA、反義RNA、咪奎莫特、病毒唑、肌苷5'-單磷酸脫氫酶抑制劑、金剛烷胺及金剛乙胺。
在第四態樣之第五實施例中，本發明提供一種治療患者之HCV感染的方法，其包含向該患者投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，且在式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前、之後或同時投與至少一種具有抗HCV活性之其他化合物，其中該至少一種其他化合物可有效抑制選自以下各者之標靶的功能以治療HCV感染：HCV金屬蛋白酶、HCV絲胺酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白質、HCV進入、HCV組裝、HCV釋放、HCV NS5A蛋白質及IMPDH。
本發明之其他態樣可包括本文中所揭示之實施例之合適組合。
其他態樣及實施例可見於本文中所提供之說明中。
本文中對本發明之說明應理解為符合化學鍵結之規則及原理。在一些情況下，可能必需移除氫原子以在任何既定位置容納取代基。
應瞭解，本發明所涵蓋之化合物為彼等對於用作藥劑而言具有適當穩定性之化合物。
預期在某一分子中特定位置處之任何取代基或變數的定義與其在彼分子中其他位置處之定義無關。舉例而言，當s為2時，兩個R4基團可相同或不同。
本說明書中所引用之所有專利、專利申請案及參考文獻書目係以引用的方式全部併入本文中。在不一致之情況下，以本發明(包括定義)為準。
如本說明書中所用，以下術語具有如下指定之含義。
除非上下文明確另作規定，否則如本文中所用之單數形式「一」及「該」包括複數含義。
除非另作說明，否則本發明之所有芳基、環烷基及雜環基均可如其各自定義中之每一者中所述經取代。舉例而言，芳基烷基之芳基部分可如術語「芳基」之定義中所述經取代。
如本文中所用之術語「烯基」係指具有二至六個碳原子、含有至少一個碳-碳雙鍵之直鏈或支鏈基團。
如本文中所用之術語「烯氧基」係指經由氧原子與母分子部分連接之烯基。
如本文中所用之術語「烯氧基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之烯氧基。
如本文中所用之術語「烷氧基」係指經由氧原子與母分子部分連接之烷基。
如本文中所用之術語「烷氧基烷基」係指經一個、兩個 或三個烷氧基取代之烷基。
如本文中所用之術語「烷氧基烷基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之烷氧基烷基。
如本文中所用之術語「烷氧基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之烷氧基。
如本文中所用之術語「烷基」係指源自含有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈飽和烴的基團。在本發明之化合物中，當R4為烷基時，該烷基可視情況與相鄰碳原子一起形成稠合三員至六員環以提供如下所示之結構： 其中m係選自1、2、3及4，其中z為0、1或2，且其中各Rs係獨立地選自烷基、鹵基及鹵烷基；或其中烷基可視情況與環上之另一碳原子一起形成橋聯四員或五員環以提供如下所示之結構： 其中m係選自0或1，其中z為0、1或2，且其中各Rs係獨立地選自烷基、鹵基及鹵烷基； 或其中烷基可視情況與其所連接之碳原子一起形成螺環三員至六員環以提供如下所示之結構： 其中m係選自1、2、3及4，其中z為0、1或2，且其中各Rs係獨立地選自烷基、鹵基及鹵烷基。
如本文中所用之術語「烷基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之烷基。
如本文中所用之術語「烷基羰基氧基」係指經由氧原子與母分子部分連接之烷基羰基。
如本文中所用之術語「烷硫基」係指經由硫原子與母分子部分連接之烷基。
如本文中所用之術語「烷基磺醯基」係指經由磺醯基與母分子部分連接之烷基。
如本文中所用之術語「芳基」係指苯基或雙環稠環系(其中該等環中之一者或兩者為苯基)。雙環稠環系由與四至六員芳族或非芳族碳環稠合之苯基組成。本發明之芳基可經由基團中之任何可取代碳原子與母分子部分連接。芳基之代表性實例包括(但不限於)二氫茚基、茚基、萘基、苯基及四氫萘基。本發明之芳基視情況經一個、兩個、三個、四個或五個獨立地選自以下之取代基取代：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、第二 芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基、雜環基、雜環基烷基、雜環基羰基、羥基、羥基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基、側氧基及-P(O)OR2，其中各R係獨立地選自氫及烷基；且其中該芳基烷基及該雜環基烷基之烷基部分未經取代，且其中該第二芳基、該芳基烷基之芳基部分、該芳基羰基之芳基部分、該雜環基以及該雜環基烷基與該雜環基羰基之雜環基部分進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自以下之取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基及硝基。
如本文中所用之術語「芳基烷氧基」係指經由烷氧基與母分子部分連接之芳基。
如本文中所用之術語「芳基烷氧基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之芳基烷氧基。
如本文中所用之術語「芳基烷基」係指經一個、兩個或三個芳基取代之烷基。該芳基烷基之烷基部分進一步視情況經一或兩個獨立地選自以下之其他基團取代：烷氧基、烷基羰基氧基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基、雜環基、羥基及-NRcRd，其中該雜環基進一步視情況經一或兩個獨立地選自以下之取代基取代：烷氧基、烷基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷氧基、未經取代之芳基烷氧基羰基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基、羥基、-NRxRy及側氧基。
如本文中所用之術語「芳基烷基羰基」係指經由羰基與 母分子部分連接之芳基烷基。
如本文中所用之術語「芳基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之芳基。
如本文中所用之術語「芳基氧基」係指經由氧原子與母分子部分連接之芳基。
如本文中所用之術語「芳基氧基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之芳基氧基。
如本文中所用之術語「芳基磺醯基」係指經由磺醯基與母分子部分連接之芳基。
如本文中所用之術語「雙環烷基」係指具有五至十二個碳原子且無雜原子之飽和、稠合、橋聯或螺環雙環烴環系。本發明之雙環烷基視情況經一或兩個獨立地選自烷基、鹵基及鹵烷基之基團取代。
如本文中所使用之術語「羰基」係指-C(O)-。
如本文中所使用之術語「羧基」係指-CO2H。
如本文中所使用之術語「氰基」係指-CN。
如本文中所用之術語「環烷基」係指具有三至七個碳原子及零個雜原子之飽和單環烴環系。環烷基之代表性實例包括(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基及環己基。本發明之環烷基視情況經一個、兩個、三個、四個或五個獨立地選自以下之取代基取代：烷氧基、烷基、芳基、氰基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基、雜環基、羥基、羥基烷基、硝基及-NRxRy，其中該芳基及該雜環基進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自以下之取代基取代：烷氧 基、烷基、氰基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基、羥基及硝基。
如本文中所用之術語「(環烷基)烷基」係指經一個、兩個或三個環烷基取代之烷基。
如本文中所用之術語「環烷基氧基」係指經由氧原子與母分子部分連接之環烷基。
如本文中所用之術語「環烷基氧基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之環烷基氧基。
如本文中所用之術語「環烷基磺醯基」係指經由磺醯基與母分子部分連接之環烷基。
如本文中所用之術語「經環烷基取代之雜環基」係指經一或兩個環烷基取代之飽和單環雜環基。
如本文中所用之術語「乙烯基環烷基」係指： 其中m為1、2或3。
如本文中所用之術語「甲醯基」係指-CHO。
如本文中所用之術語「稠合雙環雜環基」係指與三員至五員飽和碳環稠合之含有一個、兩個或三個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的四員、五員、六員或七員飽和或不飽和環。本發明之雜環基可經由基團中之任一碳原子或氮原子連接至母分子部分。本發明之雙環雜環基視情況經一 或兩個獨立地選自烷基、螺環基、鹵基及鹵烷基之基團取代。
如本文中所使用之術語「鹵基」係指Cl、Br、F或I。
如本文中所用之術語「鹵基烷氧基」係指經由氧原子與母分子部分連接之鹵基烷基。
如本文中所用之術語「鹵基烷氧基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之鹵基烷氧基。
如本文中所用之術語「鹵基烷基」係指經一個、兩個、三個或四個鹵素原子取代之烷基。
如本文中所用之術語「雜環基」係指含有一個、兩個、三個或四個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的四員、五員、六員或七員環。四員環具有零個雙鍵，五員環具有零至兩個雙鍵，且六員及七員環具有零個至三個雙鍵。術語「雜環基」亦包括如下雙環基團，其中雜環基環與另一單環雜環基或四至六員芳族或非芳族碳環稠合；以及橋接雙環基團，諸如7-氮雜雙環[2.2.1]庚-7-基、2-氮雜雙環[2.2.2]辛-2-基、2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基及2-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基。本發明之雜環基可經由基團中之任何碳原子或氮原子與母分子部分連接。雜環基之實例包括(但不限於)苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、吲哚啉基、吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、嗎啉基、噁唑基、氧雜環丁基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯啶基、吡咯并吡啶基、吡咯基、喹啉基、四氫呋喃基、四氫哌喃基、噻唑基、噻吩基及硫代嗎啉基。本發明之雜環基 視情況經一個、兩個、三個、四個或五個獨立地選自以下之取代基取代：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基、第二雜環基、雜環基烷基、雜環基羰基、羥基、羥基烷基、硝基、-NRxRy、(NRxRy)烷基及側氧基，其中該芳基烷基及該雜環基烷基之烷基部分未經取代，且其中該芳基、該芳基烷基之芳基部分、該芳基羰基之芳基部分、該第二雜環基及該雜環基烷基與該雜環基羰基之雜環基部分進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自以下之取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基及硝基。
如本文中所用之術語「雜環基烷氧基」係指經由烷氧基與母分子部分連接之雜環基。
如本文中所用之術語「雜環基烷氧基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之雜環基烷氧基。
如本文中所用之術語「雜環基烷基」係指經一個、兩個或三個雜環基取代之烷基。該雜環基烷基之烷基部分進一步視情況經一或兩個獨立地選自以下之其他基團取代：烷氧基、烷基羰基氧基、芳基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基、羥基及-NRcRd，其中該芳基進一步視情況經一或兩個獨立地選自以下之取代基取代：烷氧基、烷基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷氧基、未經取代之芳基烷氧基羰基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基、羥基及-NRxRy。
如本文中所用之術語「雜環基烷基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之雜環基烷基。
如本文中所用之術語「雜環基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之雜環基。
如本文中所用之術語「雜環基乙烯基」係指： 其中A為不含有其他雙鍵之五員至七員單環雜環，且其中「」及「」表示連接至-NRcRd基團及母分子部分之連接點。
如本文中所用之術語「雜環基氧基」係指經由氧原子與母分子部分連接之雜環基。
如本文中所用之術語「雜環基氧基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之雜環基氧基。
如本文中所用之術語「羥基」係指-OH。
如本文中所用之術語「羥基烷基」係指經一個、兩個或三個羥基取代之烷基。
如本文中所用之術語「羥基烷基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之羥基烷基。
如本文中所用之術語「硝基」係指-NO2。
如本文中所用之術語「-NRcRd」係指經由氮原子與母分子部分連接之兩個基團Rc及Rd。Rc及Rd係獨立地選自氫、 烯氧基羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、烷基磺醯基、芳基、芳基烷氧基羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳基氧基羰基、芳基磺醯基、環烷基、環烷基氧基、環烷基氧基羰基、環烷基磺醯基、甲醯基、鹵基烷氧基羰基、雜環基、雜環基烷氧基羰基、雜環基烷基、雜環基烷基羰基、雜環基羰基、雜環基氧基羰基、羥基烷基羰基、(NReRf)烷基、(NReRf)烷基羰基、(NReRf)羰基、(NReRf)磺醯基、-C(NCN)OR'及-C(NCN)NRxRy，其中R'係選自烷基及未經取代之苯基，且其中該芳基烷基、該芳基烷基羰基、該雜環基烷基及該雜環基烷基羰基之烷基部分進一步視情況經一個-NReRf基團取代；且其中該芳基及該芳基烷氧基羰基、該芳基烷基、該芳基烷基羰基、該芳基羰基、該芳基氧基羰基及該芳基磺醯基之芳基部分、該雜環基以及該雜環基烷氧基羰基、該雜環基烷基、該雜環基烷基羰基、該雜環基羰基及該雜環基氧基羰基之雜環基部分進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自以下之取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基及硝基。
如本文中所用之術語「(NRcRd)烯基」係指 其中Rc及Rd係如本文中所定義，且各Rq獨立地為氫或C1-3 烷基。
如本文中所用之術語「(NRcRd)烷基」係指經一個、兩個或三個-NRcRd基團取代之烷基。該(NRcRd)烷基之烷基部分進一步視情況經一或兩個選自以下之其他基團取代：烷氧基、烷氧基烷基羰基、烷氧基羰基、烷硫基、芳基烷氧基羰基、羧基、環烷基、雜環基、雜環基羰基、羥基及(NReRf)羰基；其中該雜環基進一步視情況經一個、兩個、三個、四個或五個獨立地選自以下之取代基取代：烷氧基、烷基、氰基、鹵基、鹵基烷氧基、鹵基烷基及硝基。
如本文中所用之術語「-NReRf」係指經由氮原子與母分子部分連接之兩個基團Re及Rf。Re及Rf係獨立地選自氫、烷基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷基、未經取代之環烷基、未經取代之(環烷基)烷基、未經取代之雜環基、未經取代之雜環基烷基、(NRxRy)烷基及(NRxRy)羰基。
如本文中所用之術語「(NReRf)烷基」係指經一個、兩個或三個-NReRf基團取代之烷基。
如本文中所用之術語「(NReRf)烷基羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之(NReRf)烷基。
如本文中所用之術語「(NReRf)羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之-NReRf基團。
如本文中所用之術語「(NReRf)磺醯基」係指經由磺醯基與母分子部分連接之-NReRf基團。
如本文中所用之術語「-NRxRy」係指經由氮原子與母分子部分連接之兩個基團Rx及Ry。Rx及Ry係獨立地選自氫、烷氧基羰基、烷基、烷基羰基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷氧基羰基、未經取代之芳基烷基、未經取代之環烷基、未經取代之雜環基及(NRx'Ry')羰基，其中Rx'及Ry'係獨立地選自氫及烷基。
如本文中所用之術語「(NRxRy)烷基」係指經一個、兩個或三個-NRxRy基團取代之烷基。
如本文中所用之術語「(NRxRy)羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之-NRxRy基團。
如本文中所用之術語「(NRx'Ry')羰基」係指經由羰基與母分子部分連接之-NRx'Ry'基團。
如本文中所用之術語「側氧基」係指=O。
如本文中所用之術語「側氧基環烷基」係指經側氧基取代之環烷基。
如本文中所用之術語「螺環雜環基」係指分別經由一或兩個單一碳原子鄰接至一或兩個視情況含有一個氧原子之三員至五員飽和環的含有一個、兩個或三個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的四員、五員、六員或七員飽和或不飽和環。本發明之雜環基可經由基團中之任一碳原子或氮原子連接至母分子部分。本發明之螺環雜環基視情況經一或兩個獨立地選自烷基、鹵基及鹵烷基之基團取代。
如本文中所用之術語「螺環基」係指經由單個碳原子鄰接至母分子部分之三員、四員或五員飽和環。
如本文中所用之術語「磺醯基」係指-SO2-。
如本文中所用之術語「硫烷基」表示經由硫原子連接至母分子部分之烷基。
在本發明之化合物中存在不對稱中心。視對掌性碳原子周圍之取代基的構型而定，該等中心係以符號「R」或「S」表示。應瞭解，本發明涵蓋具有抑制NS5A之能力的所有立體化學異構形式或其混合物。化合物之個別立體異構物可由含有對掌性中心之市售原料以合成方式製備，或藉由製備對映異構產物之混合物繼而分離(諸如轉化為非對映異構物之混合物繼而分離或再結晶、層析技術或直接在對掌性層析管柱上分離對映異構物)來製備。特定立體化學之起始化合物可為市售的或可藉由此項技術中已知之技術來製備且解析。
本發明之某些化合物亦可以可分離之不同穩定構形形式存在。由於圍繞不對稱單鍵之限制性旋轉(例如由於位阻或環應力)所產生之扭轉不對稱性，可能允許分離不同構象異構物。本發明包括該等化合物之各構形異構物及其混合物。
本發明之化合物亦以互變異構物形式存在；因此，本發明亦涵蓋所有互變異構形式。
術語「本發明之化合物」及等效表述意欲涵蓋式(I)化合物及其醫藥學上可接受之對映異構物、非對映異構物及鹽。類似地，若上下文許可，則所提及之中間物意欲涵蓋其鹽。
本發明意欲包括存在於本發明化合物中之原子之所有同位素。同位素包括具有相同原子序數但具有不同質量數之原子。氫之同位素一般例如包括(但不限於)氘及氚。碳之同位素包括13C及14C。本發明之同位素標記之化合物可一般藉由熟習此項技術者已知之習用方法或藉由與本文描述類似之方法，使用適當的同位素標記之試劑代替原本採用之未標記之試劑來製備。該等化合物具有多種潛在用途，例如在生物活性測定中作為標準物及試劑。在穩定的同位素之情況下，該等化合物可具有有利地改變生物學、藥理學或藥物動力學性質之潛能。
本發明之化合物可以醫藥學上可接受之鹽存在。如本文中所用之術語「醫藥學上可接受之鹽」表示本發明之化合物的水溶性或油溶性或可分散之鹽或兩性離子形式，其在正確之醫學判斷的範疇內適於與患者組織接觸使用而無過度毒性、刺激性、過敏性反應或其他問題或併發症，與合理之效益/風險比相符，且對於其所欲用途而言為有效的。該等鹽可在化合物之最終分離及純化期間加以製備或獨立地藉由使適合之氮原子與適合之酸反應來製備。代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽；二葡糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、均三甲苯磺酸鹽、甲烷磺酸鹽、伸萘 基磺酸鹽、菸鹼酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過氧硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、三氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、磷酸鹽、麩胺酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽。可用於形成醫藥學上可接受之加成鹽之酸之實例包括諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸及磷酸之無機酸及諸如草酸、順丁烯二酸、丁二酸及檸檬酸之有機酸。
鹼加成鹽可在化合物之最終分離及純化期間，藉由使羧基與適合之鹼(諸如金屬陽離子之氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)或與氨或有機一級、二級或三級胺反應來製備。醫藥學上可接受之鹽的陽離子包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂及鋁以及無毒胺陽離子，諸如銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二環己基胺、普魯卡因(procaine)、二苯甲基胺、N,N-二苯甲基苯乙基胺及N,N'-二苯甲基伸乙基二胺。適用於形成鹼加成鹽之其他代表性有機胺包括伸乙基二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶及哌嗪。
若有可能在用於療法時，可將治療有效量之式(I)化合物以及其醫藥學上可接受之鹽以化學原料之形式投與，亦可能以醫藥組合物形式提供活性成份。因此，本發明另外提供醫藥組合物，其包括治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。如本文中所用之術語「治療有效量」係指足 以展示有意義之患者益處(例如病毒負荷持續減少)之各活性組份的總量。當應用於單獨投與之個別活性成份時，該術語係指單獨該成份。當應用於組合時，該術語係指無論組合、連續抑或同時投與均產生治療效應之活性成份的組合量。式(I)化合物及其醫藥學上可接受之鹽係如上所述。載劑、稀釋劑或賦形劑必須在與調配物之其他成份相容之意義上為可接受的且對其接受者無害。根據本發明之另一態樣，亦提供一種用於製備醫藥調配物之方法，其包括將式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑混合。如本文中所用之術語「醫藥學上可接受」係指彼等化合物、物質、組合物及/或劑型在正確之醫學判斷的範疇內適於與患者組織接觸使用而無過度毒性、刺激性、過敏性反應或其他問題或併發症，並具有合理之效益/風險比，且可有效用於其計畫用途。
醫藥調配物可以每單位劑量含有預定量之活性成份的單位劑型來提供。本發明之化合物用於預防及治療HCV介導性疾病之單一療法中的典型劑量為每日每公斤體重約0.01毫克至約250毫克(「mg/kg」)發明之間、較佳為每日每公斤體重約0.05 mg至約100 mg發明之間。通常，本發明之醫藥組合物將每日投與約1次至約5次或者以連續輸注形式投與。該投藥可用作慢性或急性治療。可與載劑物質組合以產生單一劑型的活性成份之量將視以下因素而變化：所治療之病狀、病狀之嚴重性、投藥時間、投藥途徑、所用 化合物之排泄速率、治療持續時間及患者之年齡、性別、重量及身體狀況。較佳單位劑量調配物為彼等含有如此處以上所述之日劑量或亞劑量或其適當一部分之活性成份的調配物。一般，治療先以大體上小於化合物之最佳劑量的小劑量開始。此後，以小幅增量增加劑量直至在該情況下達至最佳效應。一般而言，化合物最適宜以通常不會造成任何有害或不利副作用之情況下提供抗病毒有效結果的濃度來投與。
當本發明之組合物包含本發明之化合物與一或多種其他治療劑或預防劑之組合時，該化合物與該其他藥劑通常均以單一治療方案中通常所投與之劑量的約10%至150%之間且更佳為約10%與80%之間的劑量來提供。
醫藥調配物可適合於藉由任何適合之途徑來投與，例如藉由經口(包括口腔或舌下)、經直腸、經鼻、局部(包括口腔、舌下或經皮)、經陰道或非經腸(包括皮下、皮內、肌肉內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、病灶內、靜脈內或皮內注射或輸注)途徑來投與。該等調配物可藉由藥學技術中已知之任何方法(例如藉由使活性成份與載劑或賦形劑結合)來製備。經口投藥或藉由注射來投藥為較佳的。
適合於經口投與之醫藥調配物可以離散單位形式來提供，該等離散單位諸如膠囊或錠劑；粉末或顆粒；於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液；可食用發泡劑或起泡劑；或水包油型液體乳液或油包水型乳液。
舉例而言，為以錠劑或膠囊之形式經口投與，可將活性藥物組份與口服、無毒、醫藥學上可接受之惰性載劑(諸如乙醇、甘油、水及其類似物)組合。粉末係藉由將化合物粉碎至適合之精細尺寸且與類似經粉碎之醫藥載劑(諸如可食性碳水化合物，例如澱粉或甘露糖醇)混合來製備。調味劑、防腐劑、分散劑及著色劑亦可存在。
膠囊係藉由如上所述製備粉末混合物且填充成型明膠外殼來製備。在填充操作之前可將諸如膠態二氧化矽、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇之助流劑及潤滑劑添加至粉末混合物中。當吞咽膠囊時亦可添加諸如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉之崩解劑或增溶劑以改良藥物之可用性。
此外，在需要或必需時亦可將適合之黏合劑、潤滑劑、崩解劑及著色劑併入混合物中。適合之黏合劑包括澱粉、明膠、諸如葡萄糖或β-乳糖之天然糖、玉米甜味劑、諸如阿拉伯膠、黃蓍膠或海藻酸鈉之天然膠及合成膠、羧甲基纖維素、聚乙二醇及其類似物。該等劑型中所用之潤滑劑包括油酸鈉、氯化鈉及其類似物。崩解劑包括(但不限於)澱粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、三仙膠及其類似物。錠劑係例如藉由製備粉末混合物、進行粒化或乾壓、添加潤滑劑及崩解劑且壓製成錠劑來調配。粉末混合物係藉由將經適當粉碎之化合物與上述稀釋劑或鹼且視情況與黏合劑(諸如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠或聚乙烯基吡咯啶酮)、溶解遲延劑(諸如石蠟)、再吸收促進劑(諸如第四 鹽)及/或吸收劑(諸如膨潤土、高嶺土或磷酸氫鈣)混合來製備。粉末混合物可藉由以黏合劑(諸如糖漿、澱粉糊、阿卡迪亞黏漿(acadia mucilage)或纖維素或聚合材料之溶液)濕潤且迫使其通過篩網來粒化。作為粒化之替代，可使粉末混合物通過壓錠機且結果為分裂成顆粒之不完全成型的小塊。可藉助於添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石粉或礦物油來潤滑顆粒以防止黏著於錠劑成型模具。隨後將經潤滑之混合物壓製成錠劑。本發明之化合物亦可與自由流動性惰性載劑組合且直接被壓製成錠劑而無需經受粒化或乾壓步驟。可提供由蟲膠之密封塗層、糖或聚合材料之塗層及蠟之拋光塗層組成之透明或不透明塗層。可將染料添加至該等塗層中以區別不同單位劑量。
可以劑量單位形式製備諸如溶液、糖漿及酏劑之口服流體以便使給定數量含有預定量之化合物。糖漿可藉由將化合物溶解於經適當調味之水溶液中來製備，而酏劑係經由使用無毒媒劑來製備。亦可添加增溶劑及乳化劑(諸如乙氧基化異硬脂醇及聚氧化乙烯山梨糖醇醚)、防腐劑、調味添加劑(諸如薄荷油或天然甜味劑，或糖精或其他人工甜味劑)及其類似物。
若適當時，可將用於經口投與之劑量單位調配物微膠囊化。亦可例如藉由以聚合物、蠟或其類似物塗佈或包埋微粒物質來製備調配物以延長或維持釋放。
式(I)化合物及其醫藥學上可接受之鹽亦可以脂質體傳遞系統(諸如單層小微脂粒、單層大微脂粒及多層微脂粒)之 形式投與。脂質體可由各種磷脂(諸如膽固醇、硬脂胺或磷脂醯膽鹼)形成。
式(I)化合物及其醫藥學上可接受之鹽亦可藉由使用單株抗體作為個別載體來傳遞，其中該等化合物分子與該等單株抗體偶合。化合物亦可與作為可靶向藥物載體之可溶性聚合物偶合。該等聚合物可包括聚乙烯基吡咯啶酮、哌喃共聚物、聚羥基丙基甲基丙烯醯胺苯酚、聚羥基乙基天冬醯胺苯酚或經軟脂醯基殘基取代之聚氧化乙烯聚離胺酸。此外，可使化合物與一類適用於達成藥物之受控釋放的可生物降解聚合物(例如聚乳酸、聚ε己內酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫哌喃、聚氰基丙烯酸酯及水凝膠之交聯或兩性嵌段共聚物)偶合。
適合於經皮投與之醫藥調配物可以意欲與接受者表皮保持長時段之緊密接觸的離散貼片形式來提供。舉例而言，可大體上如Pharmaceutical Research 1986,3(6),318所述，藉由離子導入療法由貼片傳遞活性成份。
適合於局部投與之醫藥調配物可調配為軟膏、乳膏、懸浮液、洗劑、粉末、溶液、糊劑、凝膠、噴霧劑、氣溶膠或油劑。
對於眼睛或其他外部組織(例如口及皮膚)之治療，調配物較佳以局部軟膏或乳膏形式使用。當調配於軟膏中時，活性成分可與石蠟或水可混溶性軟膏基質一起使用。或者，活性成分可與水包油乳膏基質或油包水基質一起調配於乳膏中。
適於局部投與眼睛之醫藥調配物包括滴眼劑，在滴眼劑中，活性成分溶解或懸浮於適合的載劑、尤其水性溶劑中。
適於局部投與口中之醫藥調配物包括含片、錠劑及漱口劑。
適合於經直腸投與之醫藥調配物可以栓劑或灌腸劑之形式來提供。
適合於經鼻投與之醫藥調配物(其中載劑為固體)包括粒子尺寸例如在20微米至500微米範圍內之粗粉，其係以吸氣之方式，亦即經由鼻孔自緊挨鼻固持之粉末的容器快速吸入來投與。適合以鼻噴霧劑或滴鼻劑形式投與之調配物(其中載劑為液體)包括活性成份之水溶液或油溶液。
適合於藉由吸藥法投與之醫藥調配物包括細粒粉狀物或霧狀物，其可藉助於各種類型之定劑量加壓噴霧器、霧化器或吹藥器來產生。
適合於經陰道投與之醫藥調配物可呈子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、發泡劑或噴霧調配物之形式來提供。
適合於非經腸投與之醫藥調配物包括可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使調配物與預期接受者之血液呈等滲性之溶質的水性及非水性無菌注射溶液；及可包括懸浮劑及增稠劑之水性及非水性無菌懸浮液。調配物可含於單位劑量或多次劑量容器(例如密封安瓿及小瓶)中提供，且可儲存於冷凍乾燥(凍乾)條件下，其僅需在臨用前添加無菌液體載劑(例如注射用水)。可自無菌粉末、顆粒及錠劑製備 現場使用之注射溶液及懸浮液。
應瞭解，除上述特別述及之成份以外，考慮到所討論之調配物類型，調配物可包括此項技術中習知之其他藥劑，例如彼等適合於經口投與之調配物可包括調味劑。
術語「患者」包括人類及其他哺乳動物。
術語「治療」係指：(i)在可能易患某種疾病、病症及/或病狀但尚未被診斷為患有該疾病、病症及/或病狀之患者中防止該疾病、病症或病狀出現；(ii)抑制該疾病、病症或病狀，亦即使其進展停滯；及(iii)緩解該疾病、病症或病狀，亦即使該疾病、病症及/或病狀消退。
本發明之化合物亦可與環孢素(cyclosporin)(例如環孢素A)一起投與。已在臨床試驗中顯示環孢素A具有抗HCV活性(Hepatology 2003,38,1282；Biochem.Biophys.Res.Commun. 2004,313,42；J.Gastroenterol. 2003,38,567)。
以下表1列出可與本發明之化合物一起投與之化合物的一些說明性實例。本發明之化合物可與其他抗HCV活性化合物一起用在組合療法中，其可聯合或分別投與，或將化合物組合為組合物來投與。
本發明之化合物亦可用作實驗室試劑。化合物可能有助於為設計病毒複製檢定、驗證動物檢定系統及結構生物學研究提供研究工具以進一步增強對HCV疾病機制之認識。此外，本發明之化合物適用於例如藉由競爭性抑制來確定或測定其他抗病毒化合物之結合位點。
本發明之化合物亦可用於處理或預防物質之病毒污染，且因此降低與該等物質(例如血液、組織、外科儀器與衣服、實驗室儀器與衣服及血液收集或灌輸裝置與物質)接觸之實驗室或醫務人員或患者的病毒感染風險。
本發明意欲涵蓋具有式(I)之化合物，其係藉由合成過程或藉由代謝過程來製備，該等代謝過程包括彼等出現於人類或動物體內(活體內)之代謝過程或出現於活體外之過 程。
本申請案中所用之縮寫，特別包括下文說明性實例中之縮寫，為熟習此項技術者所熟知。一些所用縮寫如下：ca.表示約；ACN或MECN表示乙腈；TFA表示三氟乙酸；min或mins表示分鐘；EtOAc或EtOAc或EA表示乙酸乙酯；DCM表示二氯甲烷；Hex表示己烷；THF表示四氫呋喃；DMSO表示二甲亞碸；Et3N或TEA表示三乙胺；TBS-Cl表示第三丁基二甲基矽烷基氯；Et2O表示乙醚；MeOH表示甲醇；EtOH表示乙醇；rt或RT表示室溫或滯留時間(視情況而定)；Rt表示滯留時間；Ts表示對甲苯磺醯；Ph表示苯基；LiHMDS表示雙(三甲基矽烷)胺基鋰；Me表示甲基；iPr2EtN、DIEA或DiPEA表示二異丙基乙胺；h或hr或hrs表示小時；ON表示隔夜；TBS表示第三丁基二甲基矽烷基；DMF表示N,N-二甲基甲醯胺；pTsOH表示對甲苯基磺酸；AcOH表示乙酸；HATU表示六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲；BOC表示第三丁氧羰基；DME表示1,2-二甲氧基乙烷；DMAP表示N,N-二甲基胺基吡啶；HOBT表示1-羥基苯并三唑；且EDC表示1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺。
現在，本發明將結合某些實施例來描述，該等實施例不欲限制本發明之範疇。相反，本發明覆蓋申請專利範圍範疇內可包括之所有替代物、修改形式及等效物。因此，包括特定實施例之以下實例將說明本發明之一種實施，應瞭解，該等實例係出於說明某些實施例之目的，且呈現於此 以提供咸信對本發明之程序及概念態樣之最適用且最容易理解之描述。
起始材料可自商業來源獲得，或用熟習此項技術者已知之已被認可之文獻方法製備。
條件1
起始% B=0
最終% B=100
梯度時間=2 min
停止時間=3 min
流動速率=1 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=10% ACN/90% H2O/0.1% TFA
溶劑B=90% ACN/10% H2O/0.1% TFA
管柱=Phenomenex-Luna C18,30×2,3 u
條件2
起始% B=0
最終% B=100
梯度時間=2 min
停止時間=3 min
流動速率=4 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=含0.1% TFA之10%甲醇/90%水
溶劑B=含0.1% TFA之90%甲醇/10%水
管柱=Phenomenex-Luna 3.0×50 mm S10
條件3
起始% B=0
最終% B=100
梯度時間=4 min
停止時間=5 min
流動速率=0.8 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=10% ACN/90% H2O/0.1% TFA
溶劑B=90% ACN/10% H2O/0.1% TFA
管柱=Phenomenex-Luna C18,50×2,3 u
條件4
起始% B=2
最終% B=98
梯度時間=1 min
停止時間=1.5 min
流動速率=0.8 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=100% H2O/0.05% TFA
溶劑B=100% ACN/0.05% TFA
管柱=Waters Acquity SDS
條件5
起始% B=0
最終% B=100
梯度時間=2 min
停止時間=3 min
流動速率=1 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=含0.1% TFA之10%甲醇/90%水
溶劑B=含0.1% TFA之90%甲醇/10%水
管柱=Phenomenex-Luna 2.0×30 mm 3 um
條件6
起始% B=10
最終% B=100
梯度時間=30 min
停止時間=33 min
流動速率=1 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=10 mM碳酸氫銨(pH=9.5)/95%水/5%甲醇
溶劑B=10 mM碳酸氫銨(pH=9.5)/5%水/95%甲醇
管柱=Xbridge Phenyl 3.5 um,3.0×150 mm
條件7
起始% B=10
最終% B=100
梯度時間=15 min
停止時間=18 min
流動速率=1 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=0.1%TFA/95%水/5%乙腈
溶劑B=0.1%TFA/5%水/95%乙腈
管柱=Xbridge C18 3.5 um,3.0×150 mm
條件8
起始% B=0
最終% B=100
梯度時間=4 min
停止時間=5 min
流動速率=0.8 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA
溶劑B=90% MeOH/10% H2O/0.1% TFA
管柱=Phenomenex-Luna C18,50×2,3 u
爐溫=40℃
條件9
起始% B=10
最終% B=50
梯度時間=20 min
停止時間=25 min
流動速率=1 mL/min
波長1=220 nm
波長2=254 nm
溶劑A=5% ACN/95% H2O/0.1% TFA
溶劑B=95% ACN/5% H2O/0.1% TFA
管柱=Waters Sunfire C18,150×4.6,3.5 u(低pH值)
條件10
UPLC
起始% B=2
最終% B=98
梯度時間=1.5 min
停止時間=2 min
流動速率=0.8 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=100% H2O/0.05% TFA
溶劑B=100% ACN/0.05% TFA
管柱=Waters Acquity UPLC BEH C18 2.1×50 mm,1.7 μm
Cap-1
Cap-1步驟a
藉由注射泵經5小時將重氮乙酸第三丁酯(1.832 mL，13.22 mmol)於50 mL CH2Cl2中之溶液逐滴添加至2,5-二氫呋喃(9.76 mL，132 mmol)、乙酸銠(II)二聚體(0.058 g，0.132 mmol)於40 mL CH2Cl2中之混合物中。接著在室溫下 攪拌所得混合物隔夜。真空移除溶劑。藉由層析(矽膠，0%-15% EtOAc/Hex)純化殘餘物，得到呈澄清油狀之Cap-1步驟a(反式異構體)(720 mg)及Cap-1步驟a(順式異構體)(360 mg)。Cap-1步驟a(反式異構體)：1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 3.88(2H,d,J=8.55 Hz),3.70(2H,d,J=8.55 Hz),2.03-2.07(2H,m),1.47(1H,t,J=3.20 Hz),1.41(9H,s)；Cap-1步驟a(順式異構體)：1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ ppm 4.06(2H,d,J=8.53 Hz),3.73(2H,d,J=8.03 Hz),1.81-1.86(2H,m),1.65-1.71(1H,m),1.43-1.47(9H,m)。
Cap-1步驟b
在-10℃下，經1小時向(Cap-1步驟a(反式異構體))(700 mg，3.80 mmol)於15 mL乙醚中之溶液中逐滴添加LiAlH4(7.60 mL，7.60 mmol)(1 M於THF中)。在-10℃下攪拌所得混合物1小時，接著在室溫下攪拌1小時。接著冷卻混合物至-5℃。逐滴添加10 mL羅謝爾鹽(Rochelle's salt，酒石酸鉀鈉)水溶液以淬滅反應。在室溫下攪拌混合物30分鐘，接著用EtOAc(3×)萃取。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮，得到呈淡黃色油狀之Cap-1步驟b(380 mg)。產物未經純化即用於下一步驟中。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ ppm 3.85(2H,d,J=8.28 Hz),3.68(2H,d,J=8.53 Hz),3.45-3.55(2H,m),1.50-1.56(2H,m),1.02-1.11(1H,m)。
Cap-1步驟c
在-78℃下，向DMSO(4.82 mL，67.9 mmol)於CH2Cl2(70 mL)中之溶液中緩慢逐滴添加乙二醯氯(3.14 mL，35.8 mmol)。在-78℃下攪拌所得混合物15分鐘。添加Cap-1步驟b(3.10 g，27.2 mmol)於35 mL CH2Cl2中之溶液且在-78℃下攪拌混合物1小時。接著逐滴添加Et3N(18.93 mL，136 mmol)。30分鐘之後，移除冷卻浴且用冷的20% K2HPO4水溶液(10 mL)及水淬滅反應。在室溫下攪拌混合物15分鐘，接著用Et2O稀釋。分離各層。用Et2O(2×)萃取水層。用鹽水洗滌所合併之有機層，用MgSO4乾燥且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，100% CH2Cl2)純化殘餘物，得到呈淡黃色油狀之Cap-1步驟c(2.71 g)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 9.41(1H,d,J=4.27 Hz),3.96(2H,d,J=8.85 Hz),3.80(2H,d,J=8.55 Hz),2.27-2.33(2H,m),1.93(1H,m)。
Cap-1步驟d
在0℃下，向Cap-1步驟c(2.7 g，24.08 mmol)於50 mL水 中之混合物中添加亞硫酸氫鈉(2.506 g，24.08 mmol)及KCN(1.631 g，25.04 mmol)，隨後添加(R)-2-胺基-2-苯乙醇(3.30 g，24.08 mmol)於18 mL MeOH中之溶液。在室溫下攪拌所得混合物2小時且隨後加熱至回流隔夜。將混合物冷卻至室溫。添加100 mL EtOAc。在混合15分鐘後，分離各層。用EtOAc(2×)萃取水層。用鹽水洗滌所合併之有機層，用MgSO4乾燥且濃縮。藉由逆相HPLC(管柱：Water Sunfire 30×150 mm，乙腈/水/NH4OAc)純化粗非對映異構體混合物，得到Cap-1步驟d之兩種非對映異構體。未測定各異構體之絕對立體化學構型。非對映異構體1(後面的溶離份)(570 mg)：LC(條件1)：RT=0.97 min；LC/MS：[M+H]+ C15H19N2O2之分析計算值259.14；實驗值259.2。
Cap-1步驟e
在0℃下，向Cap-1步驟d(非對映異構體1)(570 mg，2.207 mmol)於20 mL CH2Cl2及20 mL MeOH中之溶液中添加四乙酸鉛(1174 mg，2.65 mmol)。在0℃下攪拌所得橙色混合物10分鐘。接著添加水(20 mL)至混合物中且經由矽藻土(Celite®)過濾混合物。濃縮濾液且用25 mL 6 N HCl水溶液稀釋。使所得混合物回流4小時。濾出混合物且用CH2Cl2洗滌。濃縮水層，得到Cap-1步驟e(HCl鹽)。粗產物不經進一步純化即可用於下一步驟。1H NMR(500 MHz, MeOD)δ ppm 3.87-3.91(2H,m),3.73(2H,dd,J=8.70,2.90 Hz),3.55(1H,d,J=10.07 Hz),2.02-2.07(1H,m),1.94-1.99(1H,m),1.03-1.10(1H,m)。
Cap-1
向上述粗Cap-1步驟e於1 N NaOH水溶液(10 mL)中之混合物中添加碳酸氫鈉(371 mg，4.42 mmol)。接著逐滴添加氯甲酸甲酯(0.342 mL，4.42 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物3小時。用1 N HCl水溶液中和混合物，接著用EtOAc(3×)萃取。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮，得到呈淡黃色油狀之Cap-1(100 mg，經兩個步驟21.1%)。LC(條件1)：RT=0.54 min；LC/MS：[M+H]+ C9H14NO5之分析計算值216.09；實驗值216.1；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 5.29(1H,br.s.),3.53-4.02(8H,m),1.66-1.92(2H,m),1.08(1H,br.s.)。
cap-2
外消旋混合物
Cap-2步驟a
在室溫下攪拌環戊-3-烯醇(5 g，59.4 mmol)及Et3N(9.94 mL，71.3 mmol)於50 mL CH2Cl2中之溶液15分鐘。接著逐滴添加苯甲醯氯(8.28 mL，71.3 mmol)且在室溫下攪拌混合物隔夜。接著用水洗滌混合物。用MgSO4乾燥有機層且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，EtOAc/Hex 0-10%)純化殘餘物，得到呈澄清油狀之Cap-2步驟a(9.25 g)。LC(條件1)：RT=1.77 min；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ ppm 8.01-8.07(2H,m),7.55(1H,t,J=7.40 Hz),7.43(2H,t,J=7.65 Hz),5.79(2H,s),5.64(1H,tt,J=6.93,2.60 Hz),2.87(2H,dd,J=16.56,6.78 Hz),2.52-2.63(2H,m)。
Cap-2步驟b
向具有磁力攪拌棒之圓底燒瓶中添加純氟化鈉(5.02 mg，0.120 mmol)及Cap-2步驟a(2.25 g，11.95 mmol)。加熱燒瓶至100℃且藉由注射泵經5小時緩慢添加純2,2-二氟-2-(氟磺醯基)乙酸三甲基矽烷酯(5.89 mL，29.9 mmol)。在100℃下攪拌混合物隔夜。接著用CH2Cl2稀釋混合物，用水、飽和NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，用MgSO4乾燥且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0-5% EtOAc/Hex)純化粗產物， 得到呈澄清油狀之Cap-2步驟b(異構體1)(750 mg)及Cap-2步驟b(異構體2)(480 mg)。藉由NOE研究進行相對立體化學分配(Relative stereochemical assignment)。Cap-2步驟b(異構體1)：LC(條件1)：RT=1.83 min；LC/MS：[M+H]+ C13H13F2O2之分析計算值239.09；實驗值239.2；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 7.99-8.04(2H,m),7.56(1H,t,J=7.32 Hz),7.43(2H,t,J=7.63 Hz),5.25-5.33(1H,m),2.50(2H,dd,J=14.04,6.71 Hz),2.14-2.22(2H,m),2.08-2.14(2H,m)；Cap-2步驟b(異構體2)：LC(條件1)：RT=1.79 min；LC/MS：[M+H]+ C13H13F2O2之分析計算值239.09；實驗值239.2；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ ppm 7.98-8.08(2H,m),7.53-7.59(1H,m),7.41-7.48(2H,m),5.53-5.62(1H,m),2.59-2.70(2H,m),2.01-2.11(4H,m)。
Cap-2步驟c
向Cap-2步驟b(異構體2)(480 mg，2.015 mmol)於4 mL MeOH中之溶液中添加KOH(4 mL，2.015 mmol)(10%水溶液)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。接著用CH2Cl2(3×)萃取混合物。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮，得到呈淡黃色固體狀之Cap-2步驟c(220 mg)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 4.41-4.54(1H,m),2.38-2.50(2H,m),1.89-1.99(2H,m),1.81(2H,dd,J=14.50,5.04 Hz)。
Cap-2步驟d
將甲苯磺醯氯(625 mg，3.28 mmol)添加至Cap-2步驟c(220 mg，1.640 mmol)及吡啶(0.531 mL，6.56 mmol)於7 mL CH2Cl2中之溶液中。在室溫下攪拌混合物隔夜且隨後用CH2Cl2稀釋，用水及1 N HCl水溶液洗滌。乾燥(MgSO4)有機層且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0-15% EtOAc/己烷)純化殘餘物，得到呈澄清油狀之Cap-2步驟d(325 mg)。LC(條件1)：RT=1.72 min；LC/MS：[M+Na]+ C13H14F2NaO3S之分析計算值311.05；實驗值311.2；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 7.76(2H,d,J=8.24 Hz),7.34(2H,d,J=8.24 Hz),4.99-5.08(1H,m),2.45(3H,s),2.31-2.41(2H,m),1.84-1.94(4H,m)。
Cap-2步驟e
外消旋混合物
向微波管中添加含N-(二苯亞甲基)甘胺酸乙酯(241 mg，0.902 mmol)及Cap-2步驟d(260 mg，0.902 mmol)之2 mL甲苯。密封該管且在N2下逐滴添加LiHMDS(1.082 mL，1.082 mmol)(1 N於THF中)。在100℃下微波加熱所得深棕色溶液 5小時。接著用水淬滅混合物且用EtOAc(3×)萃取。用水洗滌所合併之有機層，用MgSO4乾燥且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0-5% EtOAc/Hex)純化粗產物，得到呈淡黃色油狀之Cap-2步驟e之外消旋混合物(240 mg)。混合物未經分離即可提交至下一步驟。LC(條件2)：RT=1.91 min；LC/MS：[M+Na]+ C23H24F2NO2之分析計算值384.18，實驗值384.35。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 7.63-7.70(2H,m),7.43-7.51(3H,m),7.38-7.43(1H,m),7.31-7.38(2H,m),7.13-7.22(2H,m),4.13-4.22(2H,m),3.95(1H,d,J=6.41 Hz),2.67-2.79(1H,m),2.07-2.16(1H,m),1.97-2.07(2H,m),1.90(2H,m),1.65-1.76(1H,m),1.25(3H,t,J=7.17 Hz)。
Cap-2步驟f
外消旋混合物
向Cap-2步驟e(240 mg，0.626 mmol)於4 mL THF中之溶液中添加HCl(1 mL，2.0 mmol)(2 N水溶液)。在室溫下攪拌所得混合物2小時。接著用EtOAc洗滌混合物，用飽和NaHCO3水溶液中和，接著用EtOAc(3×)萃取。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮，得到呈澄清油狀之Cap-2步驟f(120 mg)。LC(條件2)：RT=0.85 min；LC/MS：[M+H]+ C10H16F2NO2之分析計算值220.11；實驗值220.26；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 4.14-4.25(2H,m),3.26(1H,d,J=6.71 Hz),2.22-2.35(1H,m),1.90-2.11(5H,m),1.79-1.90(1H,m),1.22-1.34(3H,m)。
Cap-2步驟g
外消旋混合物
向Cap-2步驟f(120 mg，0.547 mmol)於2 mL CH2Cl2中之溶液中添加氯甲酸甲酯(0.085 mL，1.095 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物1小時。用CH2Cl2稀釋混合物且用水洗滌。用Na2SO4乾燥有機層且濃縮，得到呈白色固體狀之Cap-2步驟g(150 mg)。LC(條件1)：RT=1.45 min；LC/MS：[M+H]+ C12H18F2NO4之分析計算值278.12；實驗值278.2；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 5.23(1H,d,J=8.24 Hz),4.29(1H,t,J=7.48 Hz),4.15-4.23(2H,m),3.68(3H,s),2.37(1H,br.s.),2.02-2.10(1H,m),1.85-2.00(4H,m),1.75-1.84(1H,m),1.27(3H,t,J=7.02 Hz)。
Cap-2
外消旋混合物
向Cap-2步驟g(150 mg，0.541 mmol)於2 mL THF及1 mL水中之混合物中添加LiOH(0.811 mL，1.623 mmol)(2 N水溶液)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。用1 N HCl水溶液中和混合物，且用EtOAc(3×)萃取。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮，得到呈白色固體狀之Cap-2(133 mg)。LC(條件2)：RT=1.07 min；LC/MS：[M+H]+ C10H14F2NO4之分析計算值250.09；實驗值250.13；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 5.18-5.36(1H,m),4.28-4.44(1H,m),3.70(3H,s),2.37-2.56(1H,m),1.74-2.31(6H,m)。
Cap-3
外消旋混合物
根據關於Cap-2所描述之程序，由Cap-2步驟b(異構體1)合成Cap-3。LC(條件2)：RT=1.08 min；LC/MS：[M+H]+ C10H14F2NO4之分析計算值250.09，實驗值249.86。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 5.15(1H,d,J=8.24 Hz),4.32(1H,t,J=7.48 Hz),3.69(3H,s),2.83-2.99(1H,m),1.96-2.26(4H,m),1.70(1H,t,J=11.75 Hz),1.59(1H,t,J=12.05 Hz)。
Cap-4
外消旋混合物 Cap-4步驟a
外消旋混合物
在室溫下攪拌2-胺基-2-((1R,3r,5S)-雙環[3.1.0]己-3-基)乙酸乙酯(藉由採用關於製備Cap-2所描述之相同程序由市售(1R,3r,5S)-雙環[3.1.0]己-3-醇製備；350 mg，1.910 mmol)、DiPEA(0.667 mL，3.82 mmol)、氯甲酸甲酯(0.296 mL，3.82 mmol)於5 mL CH2Cl2中之混合物1小時。接著用CH2Cl2稀釋混合物且用水洗滌。用MgSO4乾燥有機層且濃縮，得到呈黃色油狀之Cap-4步驟a(461 mg)。LC(條件1)：RT=1.43 min；LC/MS：[M+H]+ C12H20NO4之分析計算值242.14；實驗值242.2；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 5.04(1H,d,J=7.63 Hz),4.09-4.20(2H,m),4.05(1H,t,J=8.39 Hz),3.63(3H,s),2.55-2.70(1H,m),1.96-2.09(2H,m),1.37-1.60(4H,m),1.24(3H,t,J=7.17 Hz),0.66-0.76 (1H,m),-0.03-0.06(1H,m)。
Cap-4
外消旋混合物
向乙酯Cap-4步驟a(461 mg，1.911 mmol)於5 mL THF及2 mL水中之混合物中添加LiOH(2.87 mL，5.73 mmol)(2 N水溶液)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。接著用1 N HCl水溶液中和混合物，且用EtOAc(3×)萃取。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮，得到呈澄清油狀之Cap-4(350 mg)。LC(條件1)：RT=1.04 min；LC/MS：[2M+Na]+ C20H30N2NaO8之分析計算值449.19；實驗值449.3；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ ppm 5.07(1H,d,J=8.85 Hz),4.13(1H,t,J=8.24 Hz),3.68(3H,s),2.64-2.79(1H,m),2.04-2.21(2H,m),1.23-1.49(4H,m),0.71-0.81(1H,m),0.03-0.12(1H,m)。
Cap 5.1及Cap 5.2
Cap 5步驟a
在80℃下加熱3,3-二甲氧基丙酸甲酯(10 g，68 mmol)及LiOH(8.08 g，337 mmol)於MeOH(40 mL)、THF(40 mL)及水(40 mL)中之混合物2小時。接著將混合物冷卻至室溫且用1 N HCl水溶液(pH>3)酸化。接著用CH2Cl2(3×)萃取混合物。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮，得到呈澄清油狀之Cap 5步驟a(6.3 g)。產物未經進一步純化即可用於下一個反應。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.82(t,J=5.8 Hz,1H),3.36(s,6H),2.69(d,J=5.8 Hz,2H)；13C NMR(125 MHz,CDCl3)δ 175.22,101.09,53.68,38.76。
Cap 5步驟b
向Cap 5步驟a(4.55 g，33.9 mmol)於THF(40 mL)中之溶液中逐滴添加N,N'-羰基二咪唑(6.60 g，40.7 mmol)於THF(40 mL)中之懸浮液。溶液變黃且觀察到氣體逸出。在室溫下攪拌混合物2小時。同時，在室溫下攪拌含丙二酸單甲酯單鉀(7.95 g，50.9 mmol)及氯化鎂(3.55 g，37.3 mmol)之THF(80 mL)溶液的另一燒瓶2小時。接著藉由注射器將咪唑化物(imidazolide)溶液轉移至Mg(OOCCH2COOMe)2溶液中且在室溫下攪拌所得混合物16小時。接著用2 M NaHSO4(60 mL)酸化混合物且用EtOAc(3×)萃取。用飽和NaHCO3水溶液、鹽水洗滌所合併 之有機層，用MgSO4乾燥且濃縮，得到呈淺紫色油狀之Cap 5步驟b(4.9 g)。該油無需進一步純化即可用於下一步驟。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.75(t,J=5.5 Hz,1H),3.72(s,3H),3.50(s,2H),3.35(s,6H),2.84(d,J=5.5 Hz,2H)。
Cap 5步驟c
向Cap 5步驟b(4.9 g，26 mmol)於MeOH(70 mL)中之溶液中緩慢添加硼氫化鈉(1.07 g，28.3 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物3小時且隨後用1 N HCl(15 mL)淬滅。用EtOAc萃取(3×)混合物。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮，得到呈淡黃色油狀之Cap 5步驟c(4.4 g)。該產物無需進一步純化即可用於下一步驟中。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 4.60(t,J=5.5 Hz,1H),4.25-4.16(m,1H),3.70(s,3H),3.38(s,3H),3.37(s,3H),2.52-2.48(m,2H),1.83-1.77(m,2H)；13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ 172.21,102.73,64.61,53.22,52.95,51.30,41.00,38.65。
Cap 5步驟d
向Cap 5步驟c(4.4 g，22.89 mmol)於DMF(50 mL)中之溶液中添加咪唑(3.12 g，45.8 mmol)及TBS-Cl(5.52 g，36.6 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物3天。接著用CH2Cl2稀釋 反應物且用水洗滌。用鹽水洗滌有機相，用MgSO4乾燥且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0-15% EtOAc/Hex)純化粗產物，得到呈澄清油狀之Cap 5步驟d(5.0 g)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 4.55-4.50(m,1H),4.30-4.21(m,1H),3.67(s,3H),3.32(s,3H),3.31(s,3H),2.51(d,J=6.3 Hz,2H),1.89-1.77(m,2H),0.88(s,9H),0.08(s,3H),0.06(s,3H)；13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ 171.41,101.24,65.85,52.35,52.09,51.04,42.40,39.92,25.37,25.27,17.55,-3.95,-5.15。
Cap 5步驟e
向冰/水浴中Cap 5步驟d(5.0 g，16 mmol)於乙醚(50 mL)中之溶液中添加鈦酸四異丙酯(0.971 mL，3.26 mmol)於乙醚(10 mL)中之溶液。接著藉由注射泵經1小時逐滴添加溴化乙基鎂(48.9 mL，48.9 mmol)(1 M於THF中)。接著在冰/水浴中攪拌混合物2小時。用乙醚稀釋混合物且用飽和NH4Cl水溶液緩慢淬滅。濾出所得白色沈澱。用Et2O(3×)萃取濾液。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮。接著藉由急驟層析(矽膠，0-20% EtOAc/Hex)純化粗產物，得到呈澄清油狀之Cap 5步驟e(4.02 g)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.47(t,J=5.6 Hz,1H),4.21-4.14(m,1H),3.71(s,1H),3.32(s,3H),3.31(s,3H),2.05-1.88(m,3H),1.66-1.58(m,1H),0.90(s,9H),0.83-0,76(m,1H),0.71-0.65(m,1H),0.47(m,1H),0.40-0.34(m,1H),0.14(s,3H),0.11 (s,3H)；13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ 102.09,69.97,54.44,52,97,52.84,43.27,40,00,25.92,17.96,14.04,12.06,-4.32,-4.61。
Cap 5步驟f
在室溫下攪拌Cap 5步驟e(4.02 g，13.2 mmol)及對甲苯磺酸單水合物(3.01 g，15.8 mmol)於MeOH(120 mL)中之溶液隔夜。向混合物中添加飽和NaHCO3水溶液(100 mL)且用CH2Cl2(3×)萃取混合物。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮。粗產物係藉由使其經過矽膠床以70% EtOAc/Hex來純化，得到呈非對映異構體之混合物狀之Cap 5步驟f(1.7 g；澄清油)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.79(t,J=3.7 Hz,1H),4.59(dd,J=5.3,2.9 Hz,1H),4.30-4.22(m,1H),4.03(br.s.,1H),3.37(s,3H),3.31(s,3H),2.09-2.03(m,1H),2.00(dtd,J=13.1,4.0,1.5 Hz,1H),1.86(dd,J=13.1,3.7 Hz,1H),1.81-1.61(m,7H),0.94-0.87(m,1H),0.83-0.77(m,1H),0.74-0.69(m,1H),0.65-0.56(m,2H),0.48-0.40(m,2H),0.37-0.30(m,1H)；13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ 100.86,100.27,65.75,64.35,56.24,55.92,53.80,52.35,40.86,39.92,39.28,38.05,12.10,12.06,9.91,9.37。
Cap 5步驟g
向Cap 5步驟f(1.7 g，11 mmol)於CH2Cl2(20 mL)中之溶液中添加雙(三甲基矽烷基)三氟乙醯胺(2.14 mL，8.06 mmol)。在室溫下攪拌混合物2小時。接著冷卻混合物至-10℃且逐滴添加三乙基矽烷(6.87 mL，43.0 mmol)，且隨後逐滴添加三氟化硼乙醚複合物(3.40 mL，26.9 mmol)。接著使混合物緩慢升溫至0℃且在0℃下攪拌30分鐘。接著用水淬滅反應物且用EtOAc(3×)萃取。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮。粗產物係藉由使其經過矽膠床以70% EtOAc/Hex純化，得到呈澄清油狀之Cap 5步驟g(1.5 g)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 6.43(br.s.,1H),3.96(tt,J=9.5,4.7 Hz,1H),3.86(dt,J=11.5,4.0 Hz,1H),3.51(td,J=11.1,2.7 Hz,1H),1.98-1.84(m,2H),1.66-1.50(m,2H),0.86-0.79(m,1H),0.66-0.59(m,1H),0.53-0.46(m,1H),0.34(m,1H)；13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ 67.41,64.37,57.99,41.28,35.22,11.74,11.32。
Cap 5步驟h
在-78℃下，向乙二醯氯(1.090 mL，12.45 mmol)於CH2Cl2(30 mL)中之溶液中逐滴添加DMSO(1.767 mL， 24.90 mmol)於CH2Cl2(20 mL)中之溶液。攪拌混合物20分鐘，且逐滴添加含Cap 5步驟g(1.33 g，10.4 mmol)之CH2Cl2(20 mL)。在-78℃下攪拌混合物20分鐘。接著添加Et3N(7.52 mL，54.0 mmol)且經30分鐘使混合物緩慢升溫至室溫。接著用水淬滅混合物且用CH2Cl2(3×)萃取。合併有機層且用MgSO4乾燥並濃縮，得到呈澄清油狀之Cap 5步驟h(1.3 g)。粗產物不經純化即用於下一步驟中。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 3.95(t,J=6.0 Hz,2H),2.55-2.50(m,2H),2.46(s,2H),0.84(m,2H),0.50(m,2H)。
Cap 5步驟i
在-20℃下，向2-(((苄氧基)羰基)胺基)-2-(二甲氧基磷醯基)乙酸甲酯(3.41 g，10.3 mmol)於THF(20 mL)中之溶液中添加1,1,3,3-四甲基胍(2.85 mL，22.7 mmol)。在-20℃下攪拌所得混合物1小時。接著添加含Cap 5步驟h(1.3 g，10.30 mmol)之THF(10 mL)。在室溫下攪拌所得棕色混合物6天。接著濃縮反應物且藉由急驟層析(矽膠，0-25% EtOAc/Hex)純化粗產物，得到呈白色固體狀之Cap 5步驟i(異構體之混合物)(850 mg)。LC(條件2)：RT=1.88 min；LC/MS：[M+H]+ C18H22NO5之分析計算值332.15；實驗值332.14；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 7.45-7.29(m,5H), 6.09-5.81(m,1H),5.18-5.08(m,2H),3.88-3.49(m,5H),3.06-2.82(m,2H),2.52-2.36(m,2H),0.82-0.64(m,2H),0.58-0.32(m,2H)。
Cap 5.1及Cap 5.2步驟j
用N2鼓泡500 mL氫化壓力瓶中Cap 5步驟i(異構體之混合物)(730 mg，2.20 mmol)於MeOH(5 mL)中之溶液30分鐘。向混合物中添加(-)-1,2-雙((2S,5S)-2,5-二甲基磷)乙烷(環辛二烯)四氟硼酸銠(I)(24.5 mg，0.044 mmol)，且接著將該瓶安置於帕爾(Parr)振盪器上且在60 psi下氫化3天。濃縮混合物且藉由對掌性HPLC(Chiralpak AD管柱，21×250 mm，10 μm，用85% 0.1%二乙胺/庚烷-15% EtOH以15 mL/min溶離)分離粗產物，得到呈澄清油狀之Cap 5.1步驟j(220 mg)(第一溶離份)及Cap 5.2步驟j(290 mg)(第二溶離份)。未測定異構體之絕對立體化學構型。
Cap 5.1步驟j：LC(條件2)：RT=1.89 min；LC/MS：[M+Na]+ C18H23NNaO5之分析計算值356.15；實驗值356.16；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 7.41-7.28(m,5H),5.34(d,J=8.9 Hz,1H),5.10(s,2H),4.37(dd,J=9.0,5.0 Hz,1H),3.89-3.82(m,1H),3.75(s,3H),3.48(td,J=11.1,3.1 Hz,1H),2.29-2.17(m,1H),1.96(t,J=12.7 Hz,1H),
1.57-1.43(m,2H),1.07-0.98.(m,1H),0.87-0.78(m,1H),0.66-0.56(m,1H),0.56-0.47(m,1H),0.37-0.27(m,1H)；Cap 5.2步驟j：LC(條件2)：RT=1.90 min；LC/MS：[M+Na]+ C18H23NNaO5之分析計算值356.15；實驗值356.17；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 7.40-7.28(m,5H),5.33(d,J=8.5 Hz,1H),5.10(s,2H),4.36(dd,J=8.9,5.8 Hz,1H),3.86(dd,J=11.0,3.1 Hz,1H),3.74(s,3H),3.53-3.43(m,1H),2.25-2.14(m,1H),1.94(t,J=12.5 Hz,1H),1.67-1.44(m,2H),0.97-0.90(m,1H),0.86-0.79(m,1H),0.66-0.57(m,1H),0.53-0.44(m,1H),0.33-0.24(m,1H)。[注意：絕對立體化學分配參見下文]
Cap 5.1步驟k
向氫化燒瓶中Cap 5.1步驟j(210 mg，0.630 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液中添加二碳酸二甲基酯(0.135 mL，1.26 mmol)及10% Pd/C(33.5 mg，0.031 mmol)。將燒瓶安置於帕爾振盪器上且在50 psi下氫化混合物4小時。接著經由矽藻土(Celite®)過濾混合物且濃縮濾液，得到呈澄清油狀之Cap 5.1步驟k(165 mg)。LC(條件2)：RT=1.56 min；LC/MS：[M+H]+ C12H20NO5之分析計算值258.13；實驗值258.16；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 5.39(d,J=8.5 Hz,1H),4.30(dd,J=8.9,5.2 Hz,1H),3.84-3.78(m,1H),3.70 (s,3H),3.63(s,3H),3.47-3.39(m,1H),2.23-2.12(m,1H),1.91(t,J=12.5 Hz,1H),1.49-1.39(m,2H),0.97(dd,J=13.1,2.4 Hz,1H),0.81-0.74(m,1H),0.61-0.52(m,1H),0.46(dt,J=10.1,6.0 Hz,1H),0.32-0.24(m,1H)。
Cap 5.1
向Cap 5.1步驟k(165 mg，0.641 mmol)於THF(2 mL)及水(1 mL)中之混合物中添加2 M LiOH(1 mL，2.0 mmol)(水溶液)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。接著用乙醚(1 mL)洗滌混合物。用1 N HCl水溶液酸化水相且用乙醚(6×)萃取。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮，得到呈白色固體狀之Cap 5.1(150 mg)。LC(條件2)：RT=1.10 min；LC/MS：[M+H]+ C11H18NO5之分析計算值244.12；實驗值244.09；1H NMR(500 MHz,CDCl3-d)δ 5.27(d,J=8.9 Hz,1H),4.39(dd,J=8.5,4.9 Hz,1H),3.94-3.86(m,1H),3.70(s,3H),3.56-3.46(m,1H),2.36-2.24(m,1H),2.01(t,J=12.7 Hz,1H),1.63-1.48(m,2H),1.14-1.05(m,1H),0.92-0.80(m,1H),0.69-0.60(m,1H),0.58-0.49(m,1H),0.40-0.31(m,1H)。
注意：Cap 5.1經由HATU偶合與(S)-1-(萘-2-基)乙胺偶合且使所得醯胺結晶。此類似物之X射線結晶分析確定Cap 5.1之相對及絕對立體化學如圖所示。
Cap 5.2
Cap 5.2係根據關於Cap 5.1所描述之程序由Cap 5.2步驟j製備。LC(條件2)：RT=1.12 min；LC/MS：[M+H]+ C11H18NO5之分析計算值244.12；實驗值244.09；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 5.27(d,J=8.9 Hz,1H),4.38(dd,J=8.2,4.9 Hz,1H),3.91(dd,J=11.1,3.2 Hz,1H),3.69(s,3H),3.52(t,J=11.0 Hz,1H),2.34-2.23(m,1H),2.07-1.97(m,1H),1.72-1.61(m,1H),1.54(qd,J=12.6,4.7 Hz,1H),1.04-0.96(m,1H),0.90-0.82(m,1H),0.68-0.61(m,1H),0.56-0.49(m,1H),0.39-0.30(m,1H)。
Cap-6
Cap-6步驟a
將1,4-二氧螺[4.5]癸-8-酮(15 g，96 mmol)於EtOAc(150 mL)中之溶液添加至2-(苯甲氧羰基胺基)-2-(二甲氧基磷醯基)乙酸甲酯(21.21 g，64.0 mmol)於1,1,3,3-四甲基胍 (10.45 mL，83 mmol)及EtOAc(150 mL)中之溶液中。在環境溫度下攪拌所得溶液72小時且隨後將其用EtOAc(25 mL)稀釋。用1 N HCl(75 mL)、H2O(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮。經由Biotage(5%至25% EtOAc/己烷；300 g管柱)純化殘餘物。接著真空濃縮所合併之含有產物的溶離份，且由己烷/EtOAc再結晶殘餘物，得到對應於2-(苯甲氧羰基胺基)-2-(1,4-二氧螺[4.5]癸-8-亞基)乙酸甲酯之白色晶體(6.2 g)。1H NMR(400 MHz,CDCl3-d)δ ppm 7.30-7.44(5H,m),6.02(1H,br.s.),5.15(2H,s),3.97(4H,s),3.76(3H,br.s.),2.84-2.92(2H,m),2.47(2H,t,J=6.40 Hz),1.74-1.83(4H,m)。LC(條件OL1)：Rt=2.89 min。LC/MS：[M+Na]+ C19H23NNaO6之分析計算值：745.21；實驗值：745.47。
Cap-6步驟b
酯Cap-176步驟b係根據Burk,M.J.；Gross,M.F.及Martinez J.P.(J.Am.Chem.Soc., 1995,117,9375-9376及其中之參考文獻)之方法由烯烴Cap-176步驟a製備：在N2層下，用含烯烴Cap-176步驟a(3.5 g，9.68 mmol)之經脫氣MeOH(200 mL)填充500 mL高壓瓶。接著用(-)-1,2-雙((2S,5S)-2,5-二甲基磷)乙烷(環辛二烯)四氟硼酸銠(I)(0.108 g，0.194 mmol)填充該溶液，用N2(3×)沖洗所得 混合物並用H2(3×)填充。在環境溫度下，在70 psi H2下用力振盪溶液72小時。減壓移除溶劑且將剩餘殘餘物溶解於EtOAc中。接著經由矽膠塞過濾褐色溶液且用EtOAc溶離。真空濃縮溶劑，得到對應於酯Cap-176步驟b之澄清油狀物(3.4 g)。1H NMR(500 MHz,CDCl3-d)δ ppm 7.28-7.43(5H,m),5.32(1H,d,J=9.16 Hz),5.06-5.16(2H,m),4.37(1H,dd,J=9.00,5.04 Hz),3.92(4H,t,J=3.05 Hz),3.75(3H,s),1.64-1.92(4H,m),1.37-1.60(5H,m)。LC(條件OL1)：Rt=1.95 min。LC/MS：[M+H]+ C19H26NO6之分析計算值：364.18；實驗值：364.27。
Cap-6步驟c
將Cap-6步驟b(6.68 g，18.38 mmol)溶解於MeOH(150 mL)中且用Pd/C(0.039 g，0.368 mmol)填充，並將懸浮液置放於1 atm H2下。在室溫下攪拌反應混合物6小時且經由矽藻土(Celite®)塞過濾並減壓移除揮發物。回收對應於Cap-6步驟c(3.8 g，16.57 mmol，90%產率)之琥珀油且無需進一步純化即可使用。1H NMR(400 MHz,CDCl3-d)δ 3.92(br.s.,4H),3.71(s,3H),3.31(d,J=4.0 Hz,1H),1.87-1.44(m,9H)。13C NMR(101 MHz,CDCl3-d)δ 176.1,108.7,64.5(2C),59.1,52.0,41.1,34.7,34.6,27.2,25.4。
Cap-6步驟d
將氯甲酸甲酯(2.57 mL，33.1 mmol)添加至Cap 6步驟c(3.8 g，16.57 mmol)及DIEA(23.16 mL，133 mmol)於CH2Cl2(200 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌所得溶液3小時且減壓移除揮發物。經由Biotage(30% EtOAc/Hex；160 g管柱)純化殘餘物。回收對應於Cap-6步驟d之琥珀油(3 g，10.44 mmol，63.0%產率)。1H NMR(500 MHz,CDCl3-d)δ 5.24(d,J=8.5 Hz,1H),4.34(dd,J=8.9,4.9 Hz,1H),3.92(s,4H),3.74(s,3H),3.67(s,3H),1.89-1.73(m,3H),1.67(d,J=12.5 Hz,1H),1.62-1.33(m,5H)。13C NMR(126 MHz,CDCl3-d)172.4,156.7,108.1,64.2,64.2,57.7,52.3,52.2,39.6,34.2(2C),26.5,25.0。
Cap-6步驟e
將Cap-6步驟d(1.15 g，4.00 mmol)溶解於THF(50 mL)中，隨後相繼添加水(30 mL)、冰AcOH(8.02 mL，140 mmol)及二氯乙酸(1.985 mL，24.02 mmol)。在室溫下攪拌混合物隔夜且藉由在劇烈攪拌下緩慢添加固體碳酸鈉直至不再觀察到氣體釋放為止來淬滅反應物。將粗產物萃取至10%乙酸乙酯-二氯甲烷中且合併有機層，乾燥(MgSO4)， 過濾且濃縮。經由Biotage(0至30% EtOAc/Hex；40 g管柱)純化殘餘物，且回收對應於Cap-6步驟e之澄清油狀物(0.72 g，2.96 mmol，73.9%產率)。1H NMR(500 MHz,CDCl3-d)δ 5.36(d,J=8.2 Hz,1H),4.46(dd,J=8.4,5.0 Hz,1H),3.77(s,3H),3.68(s,3H),2.46-2.39(m,2H),2.38-2.29(m,2H),2.09-2.03(m,1H),1.96-1.88(m,1H),1.64-1.51(m,2H)。13C NMR(126 MHz,CDCl3-d)δ 210.1,171.9,156.7,57.2,52.5(2C),40.2,40.2,39.4,28.7,27.6。
Cap-6
將Cap-6步驟e(0.68 g，2.80 mmol)於THF(7.5 mL)及MeOH(7.50 mL)中之溶液冷卻至0℃。逐滴添加2 N NaOH水溶液(1.9 mL，3.80 mmol)且在室溫下攪拌所得溶液2小時。添加己烷：Et2O之1：1混合物(20 mL)且棄去有機層。接著用10% KHSO4水溶液酸化水層至pH值約為1且用EtOAc(2×)萃取混合物。乾燥(MgSO4)所合併之有機層，過濾且濃縮。回收對應於Cap-6之白色泡沫(0.55 g)且無需進一步純化即可使用。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 12.70(br.s.,1H),7.49(d,J=8.5 Hz,1H),4.01(dd,J=8.2,6.7 Hz,1H),3.54(s,3H),2.45-2.30(m,2H),2.23-2.13(m,3H),1.94-1.79(m,3H),1.57(qd,J=12.7,4.1 Hz,1H),1.47(qd,J=12.7,4.4 Hz,1H)。13C NMR(126 MHz,DMSO-d6) □210.2,173.0,156.8,57.6,51.5,39.7(2C),36.9,28.6,27.5。
Cap-7
在0℃下，向(S)-2-胺基-2-(3-(三氟甲基)雙環[1.1.1]戊-1-基)乙酸(自商業來源獲得；0.5151 g，2.463 mmol)及碳酸鈉(0.131 g，1.231 mmol)於1 M氫氧化鈉水溶液(2.4 ml，2.400 mmol)中之混合物中逐滴添加氯甲酸甲酯(0.2 ml，2.59 mmol)。接著在室溫下攪拌反應物4小時。接著使其在冰/水浴中冷卻，且添加乙醚(25 mL)且攪拌並分離各層。用乙醚(2×25 mL)洗滌水層。用冰-水浴冷卻水層且用12 N HCl酸化至1-2之pH值範圍。將其用CH2Cl2(3×50 mL)萃取，經MgSO4乾燥且真空濃縮，得到呈灰白色固體狀之Cap-7(480.7 mg)且無需進一步純化即可使用。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 12.86(br s,1H),7.61(br d,J=8.0 Hz,1H),4.16(d,J=8.0 Hz,1H),3.57(s,3H),2.00(d,J=8.3 Hz,3H),1.93(d,J=9.3,3H)。
Cap 8.1及Cap 8.2(兩種立體異構體)
Cap 8步驟a
在回流溫度下攪拌4-側氧基戊酸甲酯(6 g，46.1 mmol)、二硒二苯(14.39 g，46.1 mmol)及過氧硫酸銨(15.92 mL，138 mmol)於MeOH(200 mL)中之混合物3小時。接著將混合物傾入水中且用CH2Cl2(3×75 mL)萃取。用鹽水洗滌所合併之有機層，用MgSO4乾燥且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0-15% EtOAc/Hex)純化粗產物，得到呈黃色油狀之Cap 8步驟a(7.1 g)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.53(s,1H),3.67(s,3H),3.42(s,6H),2.89(t,J=6.6 Hz,2H),2.60(t,J=6.6 Hz,2H)。
Cap 8步驟b
向Cap 8步驟a(7.1 g，37.3 mmol)於MeOH(100 mL)中之溶液中緩慢添加硼氫化鈉(1.554 g，41.1 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物2小時。向混合物中添加1 N HCl水溶液直至呈酸性為止且隨後用CH2Cl2(3×50 mL)萃取。用鹽水洗滌所合併之有機層，用MgSO4乾燥且濃縮，得到呈橙色油狀之Cap 8步驟b(7.1 g)，其以1：1.7之比率受相應環化副產物5-(二甲氧基甲基)二氫呋喃-2(3H)-酮污染。混合物無需進一步純化即可使用。
Cap 8步驟c
向Cap 8步驟b(7.1 g，36.9 mmol)於DMF(50 mL)中之溶液中添加咪唑(5.03 g，73.9 mmol)及TBS-Cl(8.91 g，59.1 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物16小時。接著用CH2Cl2稀釋反應物，用水及鹽水洗滌，用MgSO4乾燥且濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0-5%隨後10% EtOAc/Hex)純化粗產物，得到呈澄清油狀之Cap 8步驟c。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.07(d,J=5.5 Hz,1H),3.72-3.67(m,1H),3.66(s,3H),3.40(s,3H),3.39(s,3H),2.48-2.35(m,2H),1.92(dddd,J=13.8,9.3,6.9,4.1 Hz,1H),1.82-1.71(m,1H),0.88(s,9H),0.07(s,3H),0.05(s,3H)。
Cap 8步驟d
向水浴中Cap 8步驟c(4.4 g，14.36 mmol)於Et2O(50 mL)中之溶液中添加含鈦酸四異丙酯(0.855 mL，2.87 mmol)之乙醚(10 mL)且溶液變黃。隨後經1小時藉由注射泵逐滴添加溴化乙基鎂(14.36 mL，43.1 mmol，1 M於THF中)。溶液變成深棕色且有一些沈澱。接著在水浴中攪拌混合物2小時。用乙醚稀釋混合物且藉由緩慢添加飽和NH4Cl水溶液來淬滅。過濾混合物以移除所形成的白色沈澱。分離兩 層且用Et2O(3×50 mL)萃取水層。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮。接著藉由急驟層析(矽膠，0-20% EtOAc/Hex)純化粗產物，得到呈澄清油狀之Cap 8步驟d(2.9 g)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.26(d,J=6.1 Hz,1H),3.81-3.72(m,1H),3.46(s,3H),3.43(s,3H),1.90-1.75(m,3H),1.52-1.43(m,1H),0.90(s,9H),0.82-0.74(m,1H),0.73-0.67(m,1H),0.47-0.40(m,2H),0.11-0.10(m,6H)。
Cap 8步驟e
在室溫下攪拌Cap 8步驟d(2.9 g，9.52 mmol)及p-TsOH.H2O(2.174 g，11.43 mmol)於MeOH(40 mL)中之溶液16小時。向混合物中添加200 mL飽和NaHCO3溶液且用CH2Cl2(3×50 mL)萃取混合物。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮。經由矽膠塞(用70% EtOAc/Hex溶離)過濾粗產物，得到呈澄清油狀之Cap 8步驟e(1 g)，其由非對映異構體之混合物組成且並未分離。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.16(d,J=7.3 Hz,1H),3.55-3.46(m,1H),3.44-3.38(m,2H),2.50-2.22(m,1H),2.13-2.00(m,1H),1.71-1.59(m,1H),1.22-1.14(m,1H),0.99-0.77(m,1H),0.70-0.59(m,1H),0.57-0.46(m,1H),0.45-0.30(m,1H)。
Cap 8步驟f
向Cap 8步驟e(1 g，6.32 mmol)於CH2Cl2(15 mL)中之溶液中添加雙(三甲基矽烷基)三氟乙醯胺(1.26 mL，4.74 mmol)。在室溫下攪拌混合物2小時，在這段時間內混合物變成橙色。接著將混合物冷卻至-10℃且逐滴添加三乙基矽烷(4.04 mL，25.3 mmol)，隨後逐滴添加三氟化硼乙醚複合物(2.00 mL，15.80 mmol)。在添加三氟化硼乙醚複合物後，混合物立刻變成淺紫色。接著使混合物緩慢升溫至0℃且在0℃下攪拌30分鐘。接著用水淬滅反應物且用EtOAc(3×20 mL)萃取。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮。經由矽膠塞(用70% EtOAc/Hex溶離)過濾粗產物且濃縮濾液，得到呈澄清油狀之Cap 8步驟f(0.8 g)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 4.19(d,J=6.8 Hz,1H),3.77(dd,J=11.3,2.5 Hz,1H),3.55(d,J=6.0 Hz,1H),2.14-2.06(m,2H),1.75-1.62(m,1H),1.44(dd,J=12.4,7.2 Hz,1H),0.97-0.88(m,2H),0.65(dddd,J=10.8,6.2,4.8,1.5 Hz,1H),0.59-0.51(m,1H),0.48-0.40(m,2H)。
Cap 8步驟g
在-78℃下，向乙二醯氯(0.664 mL，7.58 mmol)於CH2Cl2(10 mL)中之溶液中逐滴添加含DMSO(1.076 mL， 15.17 mmol)之CH2Cl2(7 mL)。攪拌混合物20分鐘，且逐滴添加含Cap 8步驟f(810 mg，6.32 mmol)之CH2Cl2(7 mL)。在-78℃下攪拌混合物20分鐘。接著添加Et3N(4.58 mL，32.9 mmol)且經30分鐘使混合物緩慢升溫至室溫。接著用水淬滅混合物且用CH2Cl2(3×10 mL)萃取。合併有機層且用MgSO4乾燥並濃縮，得到呈澄清油狀之Cap 8步驟g(0.8 g)。產物無需進一步純化即可使用。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.56(s,1H),4.00(s,1H),2.53-2.46(m,1H),2.40-2.32(m,1H),2.08(t,J=6.9 Hz,1H),1.82(dt,J=13.5,5.8 Hz,1H),1.09-0.99(m,1H),0.89-0.82(m,1H),0.70(ddd,J=10.2,6.9,5.8 Hz,1H),0.54(ddd,J=10.2,6.7,5.6 Hz,1H)。
Cap 8步驟h
在-20℃下，向2-(((苄氧基)羰基)胺基)-2-(二甲氧基磷醯基)乙酸甲酯(3.19 g，9.63 mmol)於THF(10 mL)中之溶液中添加1,1,3,3-四甲基胍(2.42 mL，19.26 mmol)。在-20℃下攪拌所得混合物1小時且混合物變成乳白色。添加Cap 8步驟g(810 mg，6.42 mmol)於THF(5 mL)中之溶液且接著在室溫下攪拌所得棕色混合物2天。接著濃縮反應物且藉由急驟層析(矽膠，0-5% EtOAc/CH2Cl2)純化粗產物，得到呈 澄清油狀之Cap 8步驟h(順式-反式異構體之混合物)(400 mg)。LC(條件3)：RT=1.74 min；LC/MS：[M+Na]+ C18H21NNaO5之分析計算值354.13；實驗值354.04。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 7.42-7.31(m,10H),5.19-5.10(m,4H),4.66(br.s.,1H),4.23(s,1H),3.84-3.70(m,5H),3.39(s,3H),2.68-2.53(m,2H),1.81-1.74(m,2H),1.30-1.21(m,2H),0.96-0.80(m,4H),0.76(dt,J=11.1,5.7 Hz,1H),0.56-0.39(m,4H)。
Cap 8步驟i
用N2鼓泡500 mL氫化壓力管中Cap 8步驟h(異構體之混合物)(400 mg，1.207 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液30分鐘。向混合物中添加(-)-1,2-雙((2S,5S)-2,5-二甲基磷)乙烷(環辛二烯)四氟硼酸銠(I)(13.43 mg，0.024 mmol)，且接著將混合物安置於帕爾振盪器上且在60 psi下氫化3天。接著濃縮混合物。接著藉由對掌性HPLC(Chiralpak OJ管柱，21×250 mm，10 μm)用90% 0.1%二乙胺/庚烷-10% EtOH以15 mL/min溶離來分離粗產物，得到呈澄清油狀之Cap 8步驟i.1(55 mg；第一溶離份)及Cap 8步驟i.2(65 mg；第二溶離份)。未測定異構體之絕對立體化學構型。
Cap 8步驟i.1：LC(條件3)：RT=1.93 min；LC/MS： [M+Na]+ C18H23NNaO5之分析計算值356.15；實驗值356.04；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 7.45-7.30(m,5H),5.38-5.30(m,1H),5.18-5.06(m,2H),4.41(dd,J=8.9,5.8 Hz,1H),3.83(d,J=11.0 Hz,1H),3.77(s,3H),3.35(t,J=10.8 Hz,1H),2.21-2.09(m,1H),2.07-1.98(m,1H),1.70(d,J=11.0 Hz,2H),1.54(qd,J=12.1,4.1 Hz,1H),1.19(dt,J=13.6,3.4 Hz,1H),0.83(dt,J=11.1,5.7 Hz,1H),0.63(dt,J=10.5,5.1 Hz,1H),0.49(dt,J=10.1,6.0 Hz,1H),0.36-0.29(m,1H)。
Cap 8步驟i.2：LC(條件5)：RT=1.55 min；LC/MS：[M+Na]+ C18H23NNaO5之分析計算值356.15；實驗值356.06；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 7.40-7.32(m,5H),5.31(d,J=8.5 Hz,1H),5.12(s,2H),4.39-4.33(m,1H),3.77(s,3H),3.74(d,J=2.1 Hz,1H),3.39(t,J=10.5 Hz,1H),2.07(d,J=4.0 Hz,1H),2.04-1.95(m,1H),1.82(d,J=10.7 Hz,1H),1.34-1.21(m,2H),0.82(dt,J=11.0,5.8 Hz,1H),0.68-0.61(m,1H),0.49(dt,J=9.9,5.9 Hz,1H),0.34(ddd,J=10.1,6.4,4.9 Hz,1H)。
Cap 8步驟j.1
向氫化燒瓶中Cap 8步驟i.1(55 mg，0.165 mmol)於10 mL MeOH中之溶液中添加二碳酸二甲基酯(0.035 mL，0.33 mmol)及Pd/C(8.78 mg，08.25 μmol)。將燒瓶安置於帕爾振盪器上且在50 psi下氫化混合物4小時。接著經由矽藻土(Celite®)過濾混合物且濃縮濾液，得到呈澄清油狀之Cap 8步驟j.1(50 mg)。LC(條件1)：RT=1.09 min；LC/MS：[M+H]+ C12H20NO5之分析計算值258.13；實驗值258.05；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.39(dd,J=8.7,6.0 Hz,1H),3.85-3.80(m,1H),3.79-3.76(m,3H),3.71(s,3H),3.36(t,J=10.8 Hz,1H),2.14(d,J=4.9 Hz,1H),2.03(t,J=13.0 Hz,1H),1.71(ddd,J=12.7,3.7,2.0 Hz,1H),1.55(td,J=12.1,4.1 Hz,1H),1.20(d,J=13.4 Hz,1H),0.83(dt,J=11.0,5.8 Hz,1H),0.67-0.60(m,1H),0.49(dt,J=9.9,6.0 Hz,1H),0.37-0.29(m,1H)。胺基甲酸苄基酯Cap 8步驟i.2係類似於其胺基甲酸甲酯Cap 8步驟j.2精製。
Cap 8.1及Cap 8.2
向Cap 8步驟j.1(50 mg，0.194 mmol)於THF(1 mL)及水(0.5 mL)中之混合物中添加LiOH(0.292 mL，0.583 mmol)(2 M水溶液)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。用Et2O(5 mL)萃取混合物。用1 N HCl水溶液酸化水相且用Et2O(6×)萃取。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮，得到呈白色固體狀之Cap 8.1(35 mg)。LC(條件1)：RT=0.95 min；LC/MS：[M+H]+ C11H18NO5之分析計算值244.12；實驗值244.02；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 5.24(d,J=7.5 Hz,1H),4.43(br.s.,1H),3.89(d,J=12.0 Hz,1H),3.73(s,3H),3.41(t,J=10.8 Hz,1H),2.22(d,J=4.3 Hz,1H),2.11-2.00(m,1H),1.78(dt,J=12.6,1.9 Hz,1H),1.65-1.54(m,1H),1.30-1.18(m,2H),0.85(dt,J=11.1,5.9 Hz,1H),0.70-0.61(m,1H),0.50(dt,J=10.0,5.9 Hz,1H),0.40-0.31(m,1H)。
根據關於Cap-8.1所描述之程序，由Cap 8步驟j.2合成Cap 8.2。LC(條件1)：RT=0.96 min；LC/MS：[M+H]+ C11H18NO5之分析計算值244.12；實驗值244.02；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 5.44(d,J=8.5 Hz,1H),4.35(t,J=7.6 Hz,1H),3.81(d,J=8.9 Hz,1H),3.71(s,3H),3.49-3.41(m,1H),2.14(br.s.,1H),2.04-1.86(m,2H),1.69-1.55(m,1H),1.34-1.25(m,2H),0.83(dt,J=11.0,5.8 Hz,1H),0.67(dt,J=10.5,5.1 Hz,1H),0.54-0.45(m,1H),0.40-0.34(m,1H)。
Cap 9.1至Cap 9.4(四種立體異構體)
Cap 9步驟a
將甲烷磺酸(3.89 mL，59.9 mmol)添加至丁-3-烯-1-醇 (2.06 g，28.5 mmol)及環丁酮(2.00 g，28.5 mmol)於DCM(20 mL)中之經攪拌溶液中，且攪拌反應混合物隔夜。用飽和NaHCO3(水溶液)緩慢淬滅反應物(直至呈鹼性為止),分離各層且用DCM(20 mL)萃取水層。乾燥(MgSO4)所合併之有機物且濃縮為粗物質黃色油狀物。用Biotage Horizon(90 g SiO2，0-40% EtOAc/己烷)純化粗物質油，產生呈橙色油狀之Cap 9步驟a(5.3 g)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 4.93-4.81(m,1H),3.84(dt,J=12.1,4.1 Hz,1H),3.50(ddd,J=12.1,10.9,2.6 Hz,1H),3.05(s,3H),2.28(ddd,J=12.7,4.4,1.8 Hz,1H),2.22-2.12(m,1H),2.09-1.96(m,4H),1.90-1.64(m,4H)。
Cap 9步驟b
在35 mL壓力容器中，將2-((二苯亞甲基)胺基)乙酸苄酯(972 mg，2.95 mmol)及Cap 9步驟a(500 mg，2.270 mmol)溶解於甲苯(10 mL)及THF(2 mL)中，且在氮氣下攪拌該澄清無色溶液5分鐘。接著添加1 M LiHMDS/THF(2.95 mL，2.95 mmol)且密封容器並接著在100℃下加熱9小時。使反應物冷卻且傾入1/2飽和NH4Cl(水溶液)(約40 mL)中且隨後用EtOAc(約40 mL)萃取。用鹽水(約40 mL)洗滌有機相，乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮。用Biotage Horizon(0-30% EtOAc/hex，40 g SiO2)純化粗物質橙色油狀物，得到呈橙黃色油狀之Cap 9步驟b(四種立體異構體之混合物)(350 mg)。LC-MS滯留時間1.920 min；m/z 454.32(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2 min之梯度時間、1 min之保持時間及3 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。
Cap 9步驟c
用1.5 M HCl(3.04 mL，4.56 mmol)(水溶液)處理含Cap 9步驟b(345 mg，0.761 mmol)之THF(8 mL)且攪拌1.5小時。接著在高真空下濃縮反應混合物。將殘餘物溶解於DCM(4 mL)中，用DIPEA(0.531 mL，3.04 mmol)及氯甲酸甲酯(0.088 mL，1.14 mmol)處理且在室溫下攪拌隔夜。用水(約10 mL)及DCM(10 mL)稀釋反應物，分離且用DCM(10 mL)萃取水層。乾燥(MgSO4)所合併之有機層，過濾且濃縮。藉由製備型HPLC(水/ACN及TFA緩衝劑)純化殘餘物， 得到呈橙色玻璃狀之Cap 9步驟c(四種立體異構體之混合物；108 mg)。LC-MS滯留時間2.833 min；m/z 348.3(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4 min之梯度時間、1 min之保持時間及5 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。
藉由對掌性製備型SFC純化分離立體異構體之混合物：Chiralpak AD-H製備型管柱，30×250 mm，5 μm
移動相：在150巴下CO2中之15% 2：1庚烷：EtOH
溫度：35℃
流動速率：70.0 mL/min維持14 min
在220 nm下監測之UV
注射：0.35 mL約27 mg/mL於EtOH中(經由疊層注射總計約108 mg)
得到：Cap 9步驟c.1：第一溶離峰：22.3 mg；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.47-7.32(m,5H),5.37-5.21(m,2H),5.10(d,J=12.0 Hz,1H),4.42(dd,J=9.0,4.8 Hz,1H),3.79-3.65(m,4H),3.38(td,J=11.5,3.3 Hz,1H),2.15-2.01(m,2H),1.98-1.65(m,4H),1.56-1.14(m,5H)。
Cap 9步驟c.2：第二溶離峰：20.6 mg；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.45-7.32(m,5H),5.26(d,J=9.0 Hz,1H),5.20(s,2H),4.37(dd,J=9.0,5.0 Hz,1H),3.77-3.67(m,4H),3.41-3.29(m,1H),2.16-1.99(m,2H),1.96-1.68(m,4H),1.58-1.19(m,5H)。
Cap 9步驟c.3：第三溶離峰：25.0 mg；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.44-7.31(m,5H),5.27(d,J=8.8 Hz,1H),5.20(s,2H),4.37(dd,J=9.0,5.0 Hz,1H),3.77-3.66(m,4H),3.40-3.28(m,1H),2.14-2.00(m,2H),1.97-1.69(m,4H),1.62-1.23(m,5H)。
Cap 9步驟c.4：第四溶離峰：22.4 mg；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.45-7.32(m,5H),5.37-5.21(m,2H),5.10(d,J=12.0 Hz,1H),4.42(dd,J=9.0,4.8 Hz,1H),3.78-3.66(m,4H),3.38(td,J=11.5,3.3 Hz,1H),2.06(q,J=10.1 Hz,2H),1.96-1.67(m,4H),1.56-1.14(m,5H)。
根據1H NMR分析，Cap 9步驟c.1及Cap 9步驟c.4為對映異構體，Cap 9步驟c.2及Cap 9步驟c.3亦如此。各單一立體異構體係獨立地加以精製。
Cap 9.1至Cap 9.4
將Cap 9步驟c.1(22.3 mg，0.064 mmol)溶解於MeOH(3 mL)中且添加至10% Pd/C(5.46 mg，5.14 μmol)中。用氮氣(4×)且隨後用氫氣(4×)真空沖洗反應物，且使反應物在氫氣球下攪拌隔夜。用矽藻土(Celite®)處理反應物且隨後經由矽藻土(Celite®)過濾並濃縮，得到呈無色玻璃狀之Cap 9.1(16.8 mg)。LC-MS滯留時間1.008 min；m/z 258.2(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2 min之梯度時間、1 min之保持時間及3 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。其他相關立體異構體Cap 9步驟c.2至c.4皆使用上述程序獨立地加以去苄基(debenylated)。
Cap 9.2：LC-MS滯留時間1.011 min；m/z 258.15(MH+)。
Cap 9.3：LC-MS滯留時間1.054 min；m/z 258.2(MH+)。
Cap 9.4：LC-MS滯留時間1.045 min；m/z 258.2(MH+)。
Cap 10.1至10.4(四種立體異構體)
Cap 10步驟a
將甲烷磺酸(3.89 mL，59.9 mmol)添加至丁-3-烯-1-醇 (2.058 g，28.5 mmol)及環戊酮(2.40 g，28.5 mmol)於DCM(20 mL)中之經攪拌溶液中，且攪拌反應混合物隔夜。用飽和NaHCO3(水溶液)緩慢淬滅反應物(直至呈鹼性為止)，分離各層且用DCM(20 mL)萃取水層。乾燥(MgSO4)所合併之有機物且濃縮為粗物質橙色油狀物。用Biotage Horizon(90 g SiO2，0-40% EtOAc/己烷)純化該粗物質油狀物，得到呈橙色油狀之Cap 10步驟a(4.68 g)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 5.02-4.82(m,1H),3.85(dt,J=12.4,4.2 Hz,1H),3.60(ddd,J=12.4,10.7,3.0 Hz,1H),3.04(s,3H),2.11-1.97(m,2H),1.95-1.54(m,9H),1.52-1.40(m,1H)。
Cap 10步驟b
在48 mL壓力容器中，將2-((二苯亞甲基)胺基)乙酸苄酯(1.46，4.44 mmol)及Cap 10步驟a(800 mg，3.41 mmol)溶解於甲苯(15 mL)及THF(3 mL)中，且在氮氣下攪拌該澄清無色溶液5分鐘。接著添加含1 M LiHMDS(4.44 mL，4.44 mmol)之THF且密封容器，且隨後在100℃下加熱9小時。使反應物冷卻且接著傾入1/2飽和NH4Cl(水溶液)(約60 mL)中並用EtOAc(約60 mL)萃取。用鹽水(約40 mL)洗滌有機相，乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮。用Biotage Horizon(0- 40% EtOAc/hex，90 g SiO2)純化粗物質橙色油狀物，得到呈黏性橙色油狀之Cap 10步驟b(四種立體異構體之混合物)(480 mg)。LC-MS滯留時間1.991 min；m/z 468.4(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2 min之梯度時間、1 min之保持時間及3 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。
Cap 10步驟c
將Cap 10步驟b(475 mg，1.02 mmol)溶解於THF(12 mL)中且隨後用1.5 M HCl(4.06 mL，6.09 mmol)(水溶液)處理並攪拌1.5小時。在高真空下濃縮反應物。接著將殘餘物溶解於DCM(6 mL)中且用DIPEA(0.710 mL，4.06 mmol)及氯甲酸甲酯(0.118 mL，1.52 mmol)處理並在室溫下攪拌1.5天。用水(約10 mL)及DCM(10 mL)稀釋反應物，分離且用DCM(10 mL)進一步萃取水層。乾燥(MgSO4)所合併之有機物，過濾且濃縮。用Biotage Horizon(12 g SiO2，0-25% EtOAc/hex)純化殘餘物，得到284 mg橙色油狀物。藉由製備型HPLC(水/ACN及TFA緩衝劑)進一步純化此物質，得到呈澄清幾乎無色玻璃狀之Cap 10步驟c(四種立體異構體之混合物)(200 mg)。LC-MS滯留時間3.025 min；m/z 362.3(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4 min之梯度時間、1 min之保持時間及5 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。
藉由對掌性半製備型純化分離立體異構體之混合物：Chiralpak AD-H製備型管柱，30×250 mm，5 μm
移動相：8% EtOH/庚烷及0.1% Et2NH
在220 nm下監測之UV
注射：0.5 mL約30 mg/mL於EtOH中(總計約200 mg)
得到：Cap 10步驟c.1：第一溶離峰：30.5 mg；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.45-7.31(m,5H),5.34-5.19(m,2H),5.10(d,J=12.0 Hz,1H),4.39(dd,J=9.0,4.8 Hz,1H),3.78-3.66(m,4H),3.51(td,J=12.0,2.6 Hz,1H),2.20-2.06(m,1H),1.92-1.79(m,1H),1.76-1.11(m,11H)。
Cap 10步驟c.2：第二溶離峰：29.6 mg；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.43-7.31(m,5H),5.28-5.15(m,3H),4.34(dd,J=9.0,5.3 Hz,1H),3.78-3.66(m,4H),3.53-3.40(m,1H),2.10(td,J=10.6,5.4 Hz,1H),1.94-1.82(m,1H),1.76-1.62(m,3H),1.59-1.24(m,8H)。
Cap 10步驟c.3：第三溶離峰：27.8 mg；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.46-7.31(m,5H),5.30-5.14(m,3H),4.34(dd,J=8.9,5.1 Hz,1H),3.79-3.63(m,4H),3.53-3.40(m,1H),2.10(td,J=10.4,5.5 Hz,1H),1.95-1.82(m,1H),1.76-1.63(m,3H),1.60-1.22(m,8H)。
Cap 10步驟c.4：第四溶離峰：21.7 mg；1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.45-7.32(m,5H),5.36-5.18(m,2H),5.10(d,J=12.0 Hz,1H),4.39(dd,J=9.0,4.8 Hz,1H),3.79-3.67(m,4H),3.51(td,J=12.0,2.6 Hz,1H),2.19-2.06(m,1H),1.92-1.79(m,1H),1.77-1.10(m,11H)。
根據1H NMR，Cap 10步驟c.1及Cap 10步驟c.4為對映異構體對，Cap 10步驟c.2及Cap 10步驟c.3亦如此。各單一立體異構體獨立地進入後續操作。
Cap 10.1-10.4
將Cap 10步驟c.1(24.4 mg，0.068 mmol)溶解於MeOH(3 mL)中且添加至10% Pd/C(5.8 mg，5.40 μmol)中。用氮氣(4×)且隨後用氫氣(4×)真空沖洗反應物，且使反應物在氫氣球下攪拌隔夜。用矽藻土(Celite®)處理反應物且隨後經由矽藻土(Celite®)過濾並濃縮，得到呈無色玻璃狀之Cap 10.1(16.3 mg)。LC-MS滯留時間1.139 min；m/z 272.2 (MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2 min之梯度時間、1 min之保持時間及3 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。1H NMR(400 MHz,MeOH-d4)δ 4.11-4.03(m,1H),3.77-3.70(m,1H),3.66(s,3H),3.65-3.56(m,1H),3.37-3.34(m,1H),2.22-2.08(m,1H),2.02-1.93(m,1H),1.77-1.28(m,11H)。
其他三種立體異構體Cap 10步驟c.2至c.4皆使用上述程序獨立地加以去苄基：Cap 10.2(無色玻璃)：LC-MS滯留時間1.018 min；m/z 272.2(MH+)。1H NMR(400 MHz,MeOH-d4)δ 4.10-4.03(m,1H),3.78-3.71(m,1H),3.66(s,3H),3.59(td,J=12.1,2.4 Hz,1H),3.38-3.34(m,1H),2.22-2.09(m,1H),2.06-1.96(m,1H),1.79-1.27(m,11H)。
Cap 10.3(無色玻璃)：1H NMR(400 MHz,MeOH-d4)δ 4.10-4.03(m,1H),3.78-3.70(m,1H),3.66(s,3H),3.59(td,J=12.1,2.4 Hz,1H),3.38-3.35(m,1H),2.23-2.09(m,1H),2.05-1.94(m,1H),1.79-1.26(m,11H)。
Cap 10.4(無色玻璃)：1H NMR(400 MHz,MeOH-d4)δ 4.06(d,J=6.0 Hz,1H),3.77-3.70(m,1H),3.69-3.57(m,4H),3.36(s,1H),2.22-2.06(m,1H),2.02-1.92(m,1H),1.79-1.26(m,11H)。
Cap-11(外消旋混合物)
Cap-11步驟a
在0℃下，在氮氣下，向3-(苄氧基)環丁酮(5 g，28.4 mmol)於CH2Cl2(200 ml)中之溶液中添加2-(二甲氧基磷醯基)-2-(甲氧羰基胺基)乙酸甲酯(14.48 g，56.7 mmol)，接著添加1,1,3,3-四甲基胍(7.33 ml，62.4 mmol)。自冷卻浴中移出反應物且使其在約25℃下在氮氣下攪拌24.5小時。用飽和NH4Cl(水溶液，100 mL)處理反應物。分離各層且用CH2Cl2(2×100 mL)萃取水層。用鹽水(50 mL)洗滌所合併之有機層，經MgSO4乾燥，過濾且真空濃縮。用氯仿(5 mL)稀釋黏性油狀物且裝載於湯姆遜矽膠柱(Thomson's silica gel cartridge)上，用25%乙酸乙酯/己烷溶離，得到呈淡黃色黏性油狀之Cap-11步驟a(6.84 g)。LC/MS： [M+Na]+ C16H19NNaO5之分析計算值328.12；實驗值328.00。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 8.49(br.s.,1H),7.41-7.26(m,5H),4.43(s,2H),4.20-4.10(m,1H),3.65(s,3H),3.56(s,3H),3.35-3.24(m,1H),3.01(ddt,J=17.4,6.8,3.5 Hz,1H),2.96-2.84(m,1H),2.72-2.62(m,1H)。
Cap-11步驟b
在氮氣下，向Cap-11步驟a(6.84 g，22.40 mmol)於MeOH(100 mL)中之溶液中添加鈀/碳10%(2.384 g，2.240 mmol)於MeOH(20 mL)中之懸浮液。接著，藉助於氣球使混合物暴露於氫氣26小時。經矽藻土(Celite®)過濾反應物且真空濃縮，得到呈淡黃色黏性油狀之Cap-11步驟b(4.84 g)。LC/MS：[M+Na]+ C9H15NNaO5之分析計算值240.08；實驗值240.01。1H NMR(400 MHz,MeOH-d4)δ 7.40-7.25(m,1H),4.91(s,2H),4.19-3.99(m,2H),3.72(s,3H),3.67(s,3H),2.42-2.25(m,2H),2.24-2.02(m,1H),1.91-1.61(m,1H)。
Cap-11步驟c
在-78℃下，在氮氣下，向DMSO(4.0 ml，56.4 mmol)於CH2Cl2(70 ml)中之溶液中逐滴添加2 M乙二醯氯於CH2Cl2中之溶液(15.3 ml，30.6 mmol)。攪拌反應物1小時。在-78℃下，在氮氣下，將Cap-11步驟b(4.814 g，22.16 mmol)於CH2Cl2(35.0 ml)中之溶液添加至反應物中，維持攪拌。攪拌反應混合物1.5小時。在-78℃下，在氮氣下，將三乙胺(15.5 ml，111 mmol)逐滴添加至反應物中，同時維持攪拌反應物。攪拌反應物16小時。用冷的20% K2HPO4(水溶液)(50 mL)及水(50 mL)淬滅反應物。在約25℃下攪拌混合物15分鐘。用乙酸乙酯(50 mL)稀釋反應物且分離各層。用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取水層。用鹽水洗滌所合併之有機層，經MgSO4乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物裝載於湯姆遜矽膠柱上，用40%乙酸乙酯/己烷溶離，得到呈淡黃色黏性油狀之Cap-11步驟c(3.71 g)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 7.86(d,J=8.0 Hz,1H),4.27(t,J=8.4 Hz,1H),3.65(s,3H),3.57(s,3H),3.16,2.86(m,4H),2.82-2.61(m,1H)。
Cap-11步驟d
在氮氣下，在40℃下加熱甲基三苯基溴化鏻(3 g，8.40 mmol)及第三丁醇鉀(1 g，8.91 mmol)於1,4-二噁烷(35 mL)中之混合物3小時。將反應物自熱源移開且在冷卻浴中冷 卻至10℃。逐滴添加Cap-11步驟c(1.48 g，6.88 mmol)於1,4-二噁烷(7 mL)中之溶液，且在10℃下在氮氣下繼續攪拌反應物45小時。真空移除所有溶劑。將殘餘物溶解於乙酸乙酯(50 mL)及飽和NH4Cl(水溶液，50 mL)中。分離各層且進一步用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取水層。用飽和NaCl(水溶液，50 mL)洗滌所合併之有機層，經MgSO4乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物溶解於CHCl3(1 mL)中且裝載於湯姆遜矽膠柱上，用超過約4 L之5%至15%乙酸乙酯/己烷溶離，得到呈無色黏性油狀之Cap-11步驟d(533 mg)，其在靜置後凝固成白色固體。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 5.21(d,J=7.8 Hz,1H),4.83-4.74(m,2H),4.41(t,J=7.7 Hz,1H),3.74(s,3H),3.70(s,3H),2.82-2.52(m,5H)。
Cap-11步驟e
在0℃下，在氮氣下，經10分鐘向CH2Cl2(2.5 ml)中逐滴添加1 M含二乙基鋅之己烷(6.69 ml，6.69 mmol)，接著添加三氟乙酸(於1 mL CH2Cl2中)(0.516 ml，6.69 mmol)。在1小時後，經10分鐘逐滴添加二碘甲烷(於1 mL CH2Cl2中)(0.540 ml，6.69 mmol)。隨後逐滴添加Cap-11步驟d(於1 mL CH2Cl2中)(0.2378 g，1.115 mmol)。在添加後，自冷 卻浴中移出反應物且使其在約25℃下在氮氣下攪拌12.5小時。用0.1 N HCl(水溶液，50 mL)淬滅反應物。用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取產物。經MgSO4乾燥所合併之有機層，過濾且真空濃縮。將殘餘物裝載於湯姆遜矽膠柱上，用15%乙酸乙酯/己烷溶離，得到呈白色固體狀之Cap-11步驟e(206.1 mg，81%產率)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 7.65(d,J=7.8 Hz,1H),4.08(dd,J=9.5,8.0 Hz,1H),3.62(s,3H),3.56(s,3H),2.76-2.57(m,1H),2.11-2.00(m,3H),2.00-1.90(m,1H),0.48-0.28(m,4H)。
Cap-11(外消旋混合物)
在約25℃下，向Cap-11步驟e(0.2804 g，1.234 mmol)於MeOH(4 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰(0.035 g，1.481 mmol)於水(2 mL)中之溶液。攪拌反應物4小時，真空移除所有揮發性組分。用水(25 mL)稀釋殘餘物且用6 N鹽酸酸化至約1-2之pH值。用乙酸乙酯(3×25 mL)萃取產物，經MgSO4乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈白色固體狀之Cap-11(258.1 mg)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 12.52(s,1H),7.48(d,J=8.3 Hz,1H),3.99(dd,J=9.3,8.3 Hz,1H),3.55(s,3H),2.74-2.57(m,1H),2.17-1.89(m,4H),0.49-0.25(m,4H)。
Cap-12(外消旋混合物)
向Cap-11步驟d(0.200 g，0.938 mmol)於MeOH(3 mL)中之溶液中逐滴添加氫氧化鋰(0.027 g，1.126 mmol)於水(1.5 mL)中之溶液。在約25℃下攪拌反應物6小時。真空移除所有揮發性組分。用水(10 mL)稀釋殘餘物且用6 N HCl酸化至約1-2之pH值。用乙酸乙酯(3×25 mL)萃取產物。經MgSO4乾燥所合併之有機層，過濾且真空濃縮，得到呈白色固體狀之Cap-12(178 mg)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ 12.59(s,1H),7.54(d,J=8.0 Hz,1H),4.75(br.s.,2H),3.95(t,J=8.2 Hz,1H),3.55(s,3H),2.76-2.51(m,4H),2.51-2.42(m,1H)。
Cap 13.1及13.2
Cap 13步驟a
在氮氣下，將(二乙基氫羥基)三氟硼酸酯(3.64 mL，29.0 mmol)(經10分鐘)逐滴添加至已冷卻至-78℃之環丙甲醛(4.25 mL，56.9 mmol)及(E)-((4-甲氧基丁-1,3-二烯-2- 基)氧基)三甲基矽烷(4.90 g，28.4 mmol)於Et2O(100 mL)中之溶液中。在-78℃下攪拌反應物2.5小時且隨後添加飽和NaHCO3(水溶液)(50 mL)，且使反應物緩慢升至室溫並攪拌隔夜。分離各層，用Et2O(100 mL)萃取水層且用鹽水(約50 mL)洗滌所合併之有機層，乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮成粗物質橙色油狀物。用Biotage Horizon(80 g SiO2，0-30% EtOAc/己烷)純化該粗物質油狀物，得到呈黃色油狀之Cap 13步驟a(2.826 g)。該物質無需進一步純化即可使用。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 7.37(d,J=6.0 Hz,1H),5.40(dd,J=6.0,1.0 Hz,1H),3.70(ddd,J=13.1,8.8,3.8 Hz,1H),2.74-2.63(m,1H),2.60-2.52(m,1H),1.24-1.14(m,1H),0.75-0.61(m,2H),0.54-0.46(m,1H),0.35-0.28(m,1H)。
Cap 13步驟b
將Cap 13步驟a(800 mg，5.79 mmol)溶解於甲醇(50 mL)中且隨後用10% Pd/C(185 mg，0.174 mmol)處理。攪拌反應混合物且用氮氣(4×)、隨後用氫氣(4×)真空沖洗。接著使反應物在氫氣球下攪拌2小時。將矽藻土(Celite®)添加至反應混合物中且攪拌，且隨後經由矽藻土(Celite®)過濾反應物並濃縮成粗物質油狀物。用Biotage Horizon(25 g SiO2，0-50% EtOAc/己烷)純化該粗物質油狀物，得到呈無 色無黏性油狀之Cap 13步驟b(650 mg，受25% w/w EtOAc污染)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 3.92(ddd,J=11.5,5.1,1.8 Hz,1H),3.56-3.45(m,1H),3.23(s,3H),3.16(s,3H),2.70(ddd,J=11.2,8.7,2.1 Hz,1H),2.10(dt,J=13.4,2.6 Hz,1H),1.93-1.84(m,1H),1.68-1.57(m,1H),1.46(dd,J=13.3,11.5 Hz,1H),0.96-0.85(m,1H),0.63-0.45(m,2H),0.37(dq,J=9.4,4.8 Hz,1H),0.19(dq,J=9.5,4.8 Hz,1H)。
Cap 13步驟c
將Cap 13步驟b(650 mg，2.65 mmol，受25% w/w EtOAc污染)溶解於THF(7 mL)中，且隨後用1.5 M HCl(水溶液)(7.07 mL，10.61 mmol)處理並攪拌30分鐘。用鹽水(約30 mL)稀釋反應物，用DCM(3×25 mL)萃取且乾燥(MgSO4)所合併之有機物，過濾且濃縮，得到呈澄清無色油狀之Cap 13步驟c(543 mg，受12% w/w THF及其他較少雜質污染)。該物質未經進一步純化即可使用。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 4.31(ddd,J=11.5,7.4,1.6 Hz,1H),3.67-3.57(m,1H),2.98-2.88(m,1H),2.68-2.42(m,3H),2.37-2.28(m,1H),1.03(qt,J=8.1,4.8 Hz,1H),0.69-0.52(m,2H),0.49-0.40(m,1H),0.30-0.21(m,1H)。
Cap 13步驟d.1及d.2
用Et2O(15 mL)稀釋2-異氰基乙酸乙酯(390 mg，3.45 mmol)且隨後用氧化亞銅(76 mg，0.530 mmol)處理。攪拌漿液10分鐘且隨後添加含Cap 13步驟c(371 mg，2.65 mmol)之Et2O(10 mL)，且在室溫下攪拌反應物3小時。接著冷卻反應物至0℃，用1 M含第三丁醇鉀(3.45 mL，3.45 mmol)之THF逐滴處理且在0℃下攪拌1小時。添加含乙酸(0.197 mL，3.45 mmol)之DCM(2 mL)且使反應物升溫至室溫並攪拌隔夜。用水(約20 mL)稀釋粗物質反應混合物且用EtOAc(3×25 mL)萃取。乾燥(MgSO4)所合併之有機物，過濾且濃縮成暗紅色油狀物。用Biotage Horizon(25 g SiO2，50-75% EtOAc，己烷)純化該油狀物，得到各呈灰白色固體狀之外消旋Cap 13步驟d.1((Z)-異構體；250 mg)及Cap 13步驟d.2((E)-異構體；243 mg)。E/Z分配係基於nOe研究。Cap 13步驟d.1：LC-MS滯留時間1.007 min；m/z 254.2(MH+)。1H NMR(400 MHz,MeOH-d4)δ 8.10(s,1H),4.20(q,J=7.0 Hz,2H),4.08(ddd,J=11.2,5.6,1.8 Hz,1H),3.45-3.36(m,1H),3.35-3.29(m,1H),2.75-2.67(m,2H),2.30(ddd,J=13.9,12.4,5.5 Hz,1H),2.07(dd,J=14.1,11.0 Hz,1H),1.34-1.22(m,3H),0.95(qt,J=8.1,4.8 Hz,1H),0.57-0.47(m,2H),0.40-0.23(m,2H)。Cap 13步驟 d.2：LC-MS滯留時間1.067 min；m/z 254.2(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2 min之梯度時間、1 min之保持時間及3 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。1H NMR(400 MHz,METHANOL-d4)δ 8.08(s,1H),4.21(q,J=7.0 Hz,2H),4.08(ddd,J=11.1,5.6,1.9 Hz,1H),3.51(dt,J=14.0,2.0 Hz,1H),3.42(td,J=11.5,2.5 Hz,1H),2.70(ddd,J=10.6,8.2,2.3 Hz,1H),2.49(dq,J=14.1,2.2 Hz,1H),2.26-2.12(m,2H),1.34-1.24(m,3H),0.96(qt,J=8.1,4.9 Hz,1H),0.58-0.49(m,2H),0.37(dddd,J=7.8,6.3,3.0,1.3 Hz,1H),0.26(dddd,J=5.2,4.0,2.9,1.4 Hz,1H)。
Cap 13步驟e.1及e.2
將外消旋Cap 13步驟d.1(625 mg)溶解於16 mL EtOH中且藉由製備型對掌性HPLC(ChiralPak AS管柱，10% EtOH/庚烷0.1%二乙胺)分多次注射分離，得到各呈灰白色固體狀 之Cap 13步驟e.1(450 mg，第一溶離峰)及Cap 13步驟e.2(360 mg，第二溶離峰)。澈底分離對映異構體，且雖然各樣品藉由LC/MS及對掌性分析型HPLC提純，但根據1H NMR仍存在未確認的污染。各物質無需進一步純化即可使用。1H NMR(400 MHz,MeOH-d4)δ 8.08(s,1H),4.21(q,J=7.0 Hz,2H),4.08(ddd,J=11.1,5.6,1.9 Hz,1H),3.51(dt,J=13.9,2.1 Hz,1H),3.46-3.38(m,1H),2.70(ddd,J=10.7,8.2,2.3 Hz,1H),2.49(dq,J=14.1,2.2 Hz,1H),2.26-2.12(m,2H),1.34-1.22(m,3H),0.96(qt,J=8.2,5.0 Hz,1H),0.58-0.48(m,2H),0.37(dddd,J=7.7,6.3,2.9,1.4 Hz,1H),0.28-0.22(m,1H)。
Cap 13步驟f.1及f.2
在帕爾振盪器500 mL反應容器中，將Cap 13步驟e.1(310 mg，受未知雜質污染)溶解於MeOH(20 mL)中且隨後添加(-)-1,2-雙((2S,5S)-2,5-二甲基磷)乙烷(環辛二烯)四氟硼酸銠(I)(17.0 mg，0.031 mmol)。使氮氣鼓泡通過反應混合物10分鐘，且隨後用氮氣(4×)且隨後用氫氣(4×)真空沖洗反應物。接著在60 psi氫氣下振盪反應物2.5天。將反應物濃縮成棕黃色油狀物，且隨後用Biotage Horizon(12 g SiO2，60-80% EtOAc/hex)純化，得到呈澄清無色油狀之 Cap 13步驟f.1(201 mg)。LC-MS滯留時間1.681 min；m/z 256.25(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C182.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4 min之梯度時間、1 min之保持時間及5 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。根據1H NMR，該物質以醯胺旋轉異構體之12：1混合物形式存在。關於主要旋轉異構體：1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.26(s,1H),6.09(d,J=7.8 Hz,1H),4.88(t,J=8.7 Hz,1H),4.25(q,J=7.0 Hz,2H),3.89-3.72(m,2H),2.89(ddd,J=9.5,6.2,3.9 Hz,1H),2.32-2.20(m,1H),1.80-1.70(m,1H),1.69-1.58(m,2H),1.50(dt,J=6.8,3.4 Hz,1H),1.33(t,J=7.2 Hz,3H),1.13-1.03(m,1H),0.63-0.49(m,2H),0.44-0.35(m,1H),0.18-0.10(m,1H)。
根據上述程序由Cap 13步驟e.2製備Cap 13步驟f.2(無色油狀物)。LC-MS滯留時間1.753 min；m/z 256.25(MH+)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.28(s,1H),6.16(d,J=8.8 Hz,1H),4.72(dd,J=8.9,4.6 Hz,1H),4.25(q,J=7.1 Hz,2H),4.09-4.02(m,1H),3.41-3.29(m,1H),2.54(ddd,J=10.9,8.5,2.0 Hz,1H),2.15-2.04(m,1H),1.80(dd,J=13.2,1.9 Hz,1H),1.49-1.42(m,2H),1.32(t,J=7.2 Hz, 3H),0.94-0.82(m,1H),0.60-0.45(m,2H),0.39-0.31(m,1H),0.21-0.13(m,1H)。根據關於所選THP質子之1H NMR偶合量值進行反式立體異構體(Cap 13步驟f.1)及順式立體異構體(Cap 13步驟f.2)之推測分配。
Cap 13步驟g
將Cap 13步驟f.1(213 mg，0.834 mmol)溶解於MeOH(5 mL)中且隨後添加1.5 M HCl(1.11 mL，1.67 mmol)，並用隔膜密封反應物，接著用針刺穿隔膜並留下開口。接著在50℃下加熱反應物隔夜。將反應物濃縮，溶解於DCM(5 mL)中且隨後用DIPEA(0.583 mL，3.34 mmol)及氯甲酸甲酯(0.13 mL，1.7 mmol)處理並在室溫下攪拌3小時。用水(約5 mL)淬滅反應物，攪拌，分離且用DCM(3x5 mL)進一步萃取水層。乾燥(MgSO4)所合併之有機物，過濾且濃縮。用Biotage Horizon(12 g SiO2，25-25% EtOAc/己烷)純化粗物質淺棕色油狀物，得到Cap 13步驟g.1(131 mg)。LC-MS滯留時間2.020 min；m/z 286.2(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C182.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑 B之梯度、4 min之梯度時間、1 min之保持時間及5 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 5.17(d,J=9.3 Hz,1H),4.49(t,J=8.7 Hz,1H),4.30-4.18(m,2H),3.89-3.80(m,1H),3.79-3.67(m,1H),3.69(s,3H),2.94-2.83(m,1H),2.26-2.16(m,1H),1.78-1.47(m,4H),1.33(t,J=7.2 Hz,3H),1.08(dt,J=8.6,4.4 Hz,1H),0.63-0.47(m,2H),0.44-0.36(m,1H),0.18-0.09(m,1H)。
根據上述程序由Cap 13步驟f.2製備Cap 13步驟g.2。LC-MS滯留時間2.053 min；m/z 286.25(MH+)。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 5.27(d,J=8.8 Hz,1H),4.34(dd,J=9.0,4.8 Hz,1H),4.23(q,J=7.3 Hz,2H),4.05(dt,J=11.2,3.2 Hz,1H),3.71(s,3H),3.41-3.30(m,1H),2.55(ddd,J=10.7,8.5,1.9 Hz,1H),2.09-1.96(m,1H),1.77(d,J=12.8 Hz,1H),1.48-1.38(m,2H),1.35-1.22(m,1H),1.31(t,J=7.3 Hz,3H),0.89(qt,J=8.2,4.9 Hz,1H),0.61-0.44(m,2H),0.39-0.30(m,1H),0.17(dq,J=9.4,4.7 Hz,1H)。
Cap 13.1及13.2
將Cap 13步驟g.1(131 mg，0.459 mmol)溶解於THF(5.5 mL)中且隨後用0.5 M LiOH水溶液(3.67 mL，1.836 mmol)處理並攪拌5小時。用1 N HCl(1.9 mL)淬滅反應物且隨後 在氮氣流下濃縮。用水(約4 mL)稀釋該物質且隨後用DCM：MeOH(約5：1，3X3 mL)萃取。濃縮所合併之有機物，得到呈無色玻璃狀之Cap 13.1(117 mg)。該物質無需進一步純化即可使用。LC-MS滯留時間2.441 min；m/z 258.2(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4 min之梯度時間、1 min之保持時間及5 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。
使用上述程序由Cap 13步驟g.2製備Cap 13.2。LC-MS滯留時間2.553 min；m/z 258.2(MH+)。
Cap 14
Cap 14步驟a
用N2鼓泡500 mL氫化壓力管中2-(苯甲氧羰基胺基)-2- (二甲氧基磷醯基)乙酸甲酯(300 mg，0.906 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液30分鐘。向混合物中添加二碳酸二甲酯(0.146 mL，1.358 mmol)及Pd/C(48.2 mg，0.045 mmol)(10%)，且隨後置放於帕爾振盪器上並在60 psi下氫化5小時。經由矽藻土(Celite®)墊過濾混合物且濃縮濾液，得到呈淡黃色油狀之Cap 14步驟a(230 mg)，其無需進一步純化即可使用。LC(條件1)：RT=1.60 min；LC/MS：[M+H]+ C7H15NO7P之分析計算值256.06；實驗值256.20。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 5.54(d,J=8.0 Hz,1H),5.00-4.86(m,1H),3.87-3.82(m,9H),3.73(s,3H)。
Cap 14步驟b
在-20℃下，向Cap 14步驟a(230 mg，0.901 mmol)於THF(1 mL)中之溶液中添加1,1,3,3-四甲基胍(0.125 mL，0.992 mmol)。在-20℃下攪拌所得淡黃色混合物1小時。接著添加含二氫-2H-哌喃-4(3H)-酮(99 mg，0.992 mmol)之THF(0.5 mL)且在室溫下攪拌所得混合物16小時。用EtOAc(5 mL)稀釋反應混合物且用0.1 N HCl溶液洗滌。用EtOAc(2×10 mL)萃取水層，且用MgSO4乾燥所合併之有機層並濃縮。藉由急驟層析(矽膠，50% EtOAc/Hex)純化粗產物，得到呈白色固體狀之Cap 14步驟b。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 5.93(br.s.,1H),3.81-3.75(m,7H),3.73(s, 3H),2.95(t,J=5.5 Hz,2H),2.44(t,J=5.2 Hz,2H)。
Cap 14
向Cap 14步驟b(150 mg，0.654 mmol)於THF(2 mL)及水(1 mL)中之混合物中添加LiOH(0.982 mL，1.963 mmol)(2 M水溶液)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。用Et2O(5 mL)萃取混合物。用1 N HCl水溶液酸化水相且用EtOAc(6×)萃取。用MgSO4乾燥所合併之有機層且濃縮，得到呈白色固體狀之Cap 14(100 mg)。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 8.34(br.s.,1H),3.73-3.67(m,4H),3.65(s,3H),3.29(dt,J=3.3,1.7 Hz,2H),2.38(t,J=5.3 Hz,2H)。
Cap 15.1、15.2、15.3及15.4
Cap 15步驟a
在氮氣下，將甲基鋰(27.1 mL，43.4 mmol)於乙醚中之1.6 M溶液添加至經攪拌且已冷卻至0℃之碘化亞銅(I)(5.51 g，29.0 mmol)於乙醚(30 mL)中之漿液中，且在0℃下攪拌反應物30分鐘。接著，經20分鐘添加Cap 13步驟a(2.00 g，14.5 mmol)於乙醚(10 mL)中之溶液。使反應混合物升 溫至室溫且攪拌2小時。接著，將反應混合物冷卻至0℃，用冷NH4Cl水溶液(>10 g)緩慢淬滅且攪拌隔夜。用鹽水稀釋反應混合物，分離各層且用乙醚(2×100 mL)進一步萃取水層。乾燥(Na2SO4)所合併之有機物，過濾且濃縮。藉由急驟二氧化矽層析(160 g二氧化矽，負載溶劑：DCM，0-20% Et2O/己烷)純化殘餘物，得到呈澄清黃色油狀之外消旋Cap 15步驟a(1.24 g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.45-4.36(m,1H),3.36(dt,J=8.8,5.5 Hz,1H),2.63(ddd,J=14.1,5.3,1.5 Hz,1H),2.56(ddd,J=14.1,4.5,1.5 Hz,1H),2.45(ddd,J=14.1,5.8,1.5 Hz,1H),2.25(ddd,J=14.1,7.3,1.4 Hz,1H),1.28(d,J=6.5 Hz,3H),1.05-0.95(m,1H),0.65-0.55(m,2H),0.46-0.36(m,1H),0.27-0.17(m,1H)。
Cap 15Z及Cap15E，步驟b
將2-異氰基乙酸乙酯(0.868 mL，7.78 mmol)添加至經攪拌的氧化亞銅(0.056 g，0.389 mmol)於Et2O(30 mL)中之懸浮液中且在室溫下攪拌反應混合物10分鐘。接著添加含Cap15步驟a(1.2 g，7.8 mmol)之Et2O(10 mL)且在室溫下攪拌反應混合物2.5小時。將反應物冷卻至0℃，用1 M KOtBu(7.78 mL，7.78 mmol)之THF溶液處理且攪拌1小時。接著添加乙酸(0.535 mL，9.34 mmol)於20 mL DCM中 之溶液，且使反應物升溫至室溫並攪拌隔夜。粗反應混合物用EtOAc(60 mL)及DCM(40 mL)稀釋，用飽和鹽水(100 mL)分配，用EtOAc(50 mL)進一步萃取水層。乾燥(Na2SO4)所合併之有機物，過濾且濃縮。藉由急驟二氧化矽層析(80 g二氧化矽，負載溶劑：DCM，0-50% EtOAc/己烷)純化殘餘物，得到各呈白色固體狀之外消旋Cap 15Z步驟b(710 mg，第一溶離產物)及外消旋Cap 15E步驟b(970 mg，第二溶離產物)。藉由對各烯烴異構體進行NOE分析來測定雙鍵幾何形狀。
Cap 15Z步驟b(Z-異構體)：1H NMR呈現為醯胺旋轉異構體之7：3混合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.25(d,J=1.3 Hz,0.7H),7.99(d,J=11.5 Hz,0.3H),6.84(br.s.,0.7H),6.73(d,J=11.0 Hz,0.3H),4.29-4.15(m,3H),3.20(dd,J=14.3,3.8 Hz,0.3H),3.11-3.02(m,1H),2.99(dd,J=14.2,4.1 Hz,0.7H),2.82(dd,J=14.1,6.3 Hz,0.7H),2.70-2.61(m,0.6H),2.57-2.48(m,1H),2.32(dd,J=13.9,7.4 Hz,0.7H),1.35-1.28(m,3H),1.26-1.20(m,3H),1.04-0.94(m,1H),0.61-0.46(m,2H),0.37(tt,J=9.3,4.5 Hz,1H),0.20-0.12(m,1H)。LC-MS滯留時間1.90 min；m/z=290[M+Na]+。管柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3 u。溶劑A=90%水/10%乙腈/0.1% TFA；溶劑B=10%水/90%乙腈/0.1% TFA。起始% B=10，最終% B=40。梯度時間=4 min。流動速率=.8 ml/min。波長=220。
Cap 15E步驟b(E-異構體)：1H NMR呈現為醯胺旋轉異構 體之7：3混合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.24(d,J=1.3 Hz,0.7H),7.97(d,J=11.3 Hz,0.3H),6.85(br.s.,0.7H),6.75(d,J=11.3 Hz,0.3H),4.31-4.22(m,2H),4.21-4.08(m,1H),3.24-3.15(m,1H),3.14-3.03(m,1.6H),2.91(ddd,J=13.8,4.5,0.8 Hz,0.7H),2.66(dd,J=14.1,3.8 Hz,0.3H),2.47(dd,J=14.1,3.3 Hz,0.7H),2.21(dd,J=14.1,7.5 Hz,0.3H),2.07(dd,J=14.1,8.3 Hz,0.7H),1.35-1.29(m,3H),1.23-1.19(m,3H),1.17-1.08(m,0.7H),1.06-0.96(m,0.3H),0.61-0.51(m,2H),0.43-0.34(m,1H),0.26-0.15(m,1H)。LC-MS滯留時間1.98 min；m/z=290[M+Na]+。管柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3 μ。溶劑A=90%水/10%乙腈/0.1% TFA；溶劑B=10%水/90%乙腈/0.1% TFA。起始% B=10，最終% B=40。梯度時間=4 min。流動速率=.8 ml/min。波長=220。
Cap 15.1及Cap15.2，步驟c
在帕爾振盪器容器中，將(-)-1,2-雙((2S,5S)-2,5-二甲基磷)乙烷(環辛二烯)四氟硼酸銠(I)(120 mg，0.216 mmol)添加至Cap 15Z步驟b(0.68 g，2.5 mmol)於MeOH(20 mL)中之溶液中。將反應容器密封，用氮氣(4×)且隨後用氫氣(4×)真空沖洗，且在室溫下在55 psi氫氣下振盪反應物2 天。將粗反應混合物濃縮至乾燥，且藉由急驟二氧化矽層析(25 g二氧化矽，負載溶劑：DCM，0-50% EtOAc/己烷)純化殘餘物，得到呈澄清無色凝膠狀之Cap 15.1及Cap 15.2步驟c之非對映異構體混合物(607 mg)。該物質無需分離非對映異構體即可用於下一步驟。LC-MS滯留時間2.11 min；m/z=270[M+H]+。管柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3 μ。溶劑A=90%水/10%乙腈/0.1% TFA；溶劑B=10%水/90%乙腈/0.1% TFA。起始% B=10，最終% B=50。梯度時間=4 min。流動速率=.8 ml/min。波長=220 nm。
Cap 15.3及Cap15.4，步驟c
在帕爾振盪器容器中，將(-)-1,2-雙((2S,5S)-2,5-二甲基磷)乙烷(環辛二烯)四氟硼酸銠(I)(120 mg，0.216 mmol)添加至Cap 15E步驟b(0.94 g，3.5 mmol)於MeOH(20 mL)中之溶液中。將反應容器密封，用氮氣(4×)且隨後用氫氣(4×)真空沖洗，且在室溫下在55 psi氫氣下振盪2天。將粗反應混合物濃縮至乾燥，且藉由急驟二氧化矽層析(25 g二氧化矽，負載溶劑：DCM，0-50% EtOAc/己烷)純化殘餘物，得到呈無色凝膠狀之Cap 15.3及Cap 15.4步驟c之非對映異構體混合物(889 mg)。藉由製備型HPLC(H2O-MeCN，加上0.1% TFA緩衝劑)純化一份(390 mg)該混合物，得到Cap 15.3步驟c(0.19 g，作為第一溶離產物)及Cap 15.4步
驟c(0.19 g作為第二溶離產物)。對由後續步驟產生之產物使用NOE及2D NMR分析來確定各產物之相對立體化學。
Cap 15.3步驟c：LC-MS滯留時間1.14 min；m/z=270[M+H]+。管柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3 u。溶劑A=90%水/10%乙腈/0.1% TFA；溶劑B=10%水/90%乙腈/0.1% TFA。起始% B=20，最終% B=40。梯度時間=4 min。流動速率=.8 ml/min。波長=220。
Cap15.4步驟c：LC-MS滯留時間1.61 min；m/z=270[M+H]+。管柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3 u。溶劑A=90%水/10%乙腈/0.1% TFA；溶劑B=10%水/90%乙腈/0.1% TFA。起始% B=20，最終% B=40。梯度時間=4 min。流動速率=.8 ml/min。波長=220。
Cap 15.1及Cap15.2，步驟d
將1.5 N HCl水溶液(5.5 mL，8.25 mmol)添加至Cap 15.1及Cap 15.2步驟c之非對映異構體混合物(590 mg，2.19 mmol)於EtOH(6 mL)中之溶液中，且在52℃下攪拌反應物16小時。接著將反應物濃縮至乾燥，得到粗白色固體，將粗白色固體溶解於DCM(10 mL)中，冷卻至0℃且用氯甲酸甲酯(0.26 mL，3.3 mmol)隨後用DIPEA(1.15 mL，6.57 mmol)處理。在室溫下攪拌反應混合物16小時，濃縮且藉由急驟二氧化矽層析(25 g二氧化矽，負載溶劑：DCM，0- 25% EtOAc/己烷)純化並部分分離殘餘物。藉由急驟二氧化矽層析(25 g二氧化矽，負載溶劑：DCM，0-40% EtOAc/己烷)進一步分離含所需產物之非對映異構體混合物的溶離份。合併每次層析之相應單立體異構體溶離份且加以濃縮，得到各呈澄清無色凝膠狀之Cap 15.1步驟d(230 mg，第一溶離立體異構體)及Cap15.2步驟d(240 mg，第二溶離立體異構體)。使用NOE分析及2D NMR確定各產物之相對立體化學。
Cap 15.1步驟d：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 5.26(d,J=9.0 Hz,1H),4.33(dd,J=9.0,4.8 Hz,1H),4.29-4.18(m,2H),3.92-3.81(m,1H),3.69(s,3H),3.00(dd,J=9.8,5.5 Hz,1H),2.38(ddt,J=12.4,8.4,4.0 Hz,1H),1.74-1.64(m,1H),1.63-1.52(m,1H),1.47(d,J=12.3 Hz,1H),1.35-1.24(m,4H),1.16(d,J=6.0 Hz,3H),1.11-0.99(m,1H),0.60-0.50(m,2H),0.44-0.37(m,1H),0.15-0.07(m,1H)。LC-MS滯留時間3.58 min；m/z=322[M+Na]+。管柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3 u。溶劑A=90%水/10%甲醇/0.1% TFA；溶劑B=10%水/90%甲醇/0.1% TFA。起始% B=0，最終% B=100。梯度時間=4 min。流動速率=.8 ml/min。波長=220。
Cap15.2步驟d：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 5.25(d,J=8.8 Hz,1H),4.37-4.15(m,4H),3.70(s,3H),2.78(ddd,J=11.1,8.7,2.0 Hz,1H),2.24(td,J=12.4,3.8 Hz,1H),1.74(d,J=12.8 Hz,1H),1.67-1.65(m,1H),1.59(td, J=12.9,5.8 Hz,1H),1.30(t,J=7.2 Hz,3H),1.28-1.21(m,1H),1.19(d,J=7.0 Hz,3H),0.90-0.79(m,1H),0.58-0.43(m,2H),0.27(dq,J=9.3,4.8 Hz,1H),0.14(dq,J=9.4,4.8 Hz,1H)。LC-MS滯留時間3.56 min；m/z=322[M+Na]+。管柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3 μ。溶劑A=90%水/10%甲醇/0.1% TFA；溶劑B=10%水/90%甲醇/0.1% TFA。起始% B=0，最終% B=100。梯度時間=4 min。流動速率=.8 ml/min。波長=220。
Cap 15.3步驟d
將1.5 N HCl水溶液(0.99 mL，1.5 mmol)添加至Cap15.3步驟c(160 mg，0.594 mmol)於EtOH(2 mL)中之溶液中且在52℃下攪拌反應混合物16小時。將反應物濃縮且隨後與乙醇一起共沸，得到呈白色固體狀之粗物質。將此粗物質溶解於DCM(3 mL)中，用冰/H2O浴冷卻且隨後用氯甲酸甲酯(0.069 mL，0.89 mmol)及DIPEA(0.31 mL，1.8 mmol)處理。在室溫下攪拌反應混合物16小時，用EtOAc(20 mL)稀釋，添加鹽水(10 mL)且用EtOAc(10 mL)進一步萃取水層。將所合併之有機層濃縮至乾燥且藉由急驟二氧化矽層析(12 g二氧化矽，負載溶劑：DCM，0-40% Et2O/己烷)純化，得到呈澄清無色黏性油狀之Cap15.3步驟d(129 mg)。 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 5.25(d,J=9.0 Hz,1H),4.35-4.17(m,4H),3.70(s,3H),2.77(ddd,J=11.0,8.5,2.1 Hz,1H),2.28-2.16(m,1H),1.69-1.56(m,3H),1.42(d,J=13.1 Hz,1H),1.31(t,J=7.2 Hz,3H),1.21(d,J=6.8 Hz,3H),0.89-0.79(m,1H),0.58-0.43(m,2H),0.31-0.24(m,1H),0.14(dq,J=9.5,4.7 Hz,1H)。LC-MS滯留時間3.60 min；m/z=322[M+Na]+。管柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3 u。溶劑A=90%水/10%甲醇/0.1% TFA；溶劑B=10%水/90%甲醇/0.1% TFA。起始% B=0，最終% B=100。梯度時間=4 min。流動速率=.8 ml/min。波長=220。
Cap 15.4步驟d
使用Cap15.4步驟c作為起始物質，如上所述進行反應，得到呈澄清無色黏性油狀之Cap15.4步驟d(141 mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 5.25(d,J=8.8 Hz,1H),4.39-4.14(m,3H),3.95-3.83(m,1H),3.70(s,3H),3.06-2.98(m,1H),2.46-2.34(m,1H),1.67-1.48(m,3H),1.33-1.23(m,1H),1.30(t,J=7.2 Hz,3H),1.17(d,J=6.0 Hz,3H),1.14-1.02(m,1H),0.62-0.48(m,2H),0.46-0.37(m,1H),0.10(td,J=8.5,4.4 Hz,1H)。LC-MS滯留時間3.58 min；m/z=322[M+Na]+。管柱：Phenomenex LUNA C18,50×2, 3 u。溶劑A=90%水/10%甲醇/0.1% TFA；溶劑B=10%水/90%甲醇/0.1% TFA。起始% B=0，最終% B=100。梯度時間=4 min。流動速率=.8 ml/min。波長=220。
Cap 15.1
將1 M LiOH水溶液(1.27 mL，1.27 mmol)添加至Cap 15.1步驟d(0.19 g，0.64 mmol)於THF(3 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌反應混合物16小時。將反應物用1 M HCl水溶液(1.3 mL)中和且用EtOAc(2×10 mL)萃取。乾燥(Na2SO4)所合併之有機層，過濾且濃縮，得到呈白色固體狀之Cap 15.1(0.19 g)，其無需進一步純化即可使用。LC-MS滯留時間3.38 min；m/z=294[M+Na]+。管柱：Phenomenex LUNA C18,50×2,3 μ。溶劑A=90%水/10%甲醇/0.1% TFA；溶劑B=10%水/90%甲醇/0.1% TFA。起始% B=0，最終% B=100。梯度時間=4 min。流動速率=.8 ml/min。波長=220 nm。
Cap 15.2，15.3及15.4
如關於Cap 15.1所述進行反應及產物分析。
Cap 16
Cap 16步驟a
在0℃下在氮氣下，向2-氧雜螺[3.3]庚-6-酮(0.54 g，4.82 mmol)(關於製備，參見WO 2011 130146)於CH2Cl2(30 mL)中之溶液中添加2-(二甲氧基磷醯基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙酸甲酯(2.458 g，9.63 mmol)，接著添加1,1,3,3-四甲基胍(1.244 mL，10.60 mmol)。自冷浴中移出反應物且使反應物在約25℃下攪拌16小時。真空移除所有溶劑。將殘餘物裝載於湯姆遜矽膠柱(90 g)上，用45%乙酸乙酯/己烷溶離，得到兩個溶離份，384 mg(黏性無色油狀物，其在靜置後凝固為灰白色固體)及627 mg(黏性淡黃色油狀物，其在靜置後凝固為灰白色固體)。兩種溶離份之1H NMR與產物一致且因此將其合併，得到一批呈淡黃色固體狀之Cap 16步驟a(1.014 g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.40(br.s.,1H),4.62(d,J=6.5 Hz,2H),4.58(d,J=6.3 Hz,2H),3.65(s,3H),3.56(s,3H),3.24(s,2H),2.97(s,2H)。
Cap 16步驟b
將500 mL帕爾反應容器中之Cap 16步驟a(1 g，4.15 mmol)及(-)-1,2-雙((2S,5S)-2,5-二甲基磷)乙烷(環辛二烯)四氟硼酸銠(I)(0.100 g，0.180 mmol)於MeOH(50 mL)中之溶液用氮氣澈底沖洗，暴露於真空且用氮氣再沖洗若干次，隨後用氫氣填充至60 psi。在約25℃下劇烈振盪反應物72小時。自帕爾氫化設備中移出反應物。真空移除所有溶劑。將殘餘物裝載於湯姆遜矽膠柱(90 g)上，用50%乙酸乙酯/己烷溶離，得到呈淡黃色黏性油狀之Cap 16步驟b(846 mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.58(d,J=7.8 Hz,1H),4.57(d,J=1.0 Hz,1H),4.55(d,J=1.0 Hz,1H),4.44(d,J=1.0 Hz,1H),4.42(d,J=1.0 Hz,1H),3.93(t,J=8.4 Hz,1H),3.62(s,3H),3.56(s,3H),2.43-2.29(m,1H),2.29-2.16(m,2H),2.08-1.94(m,2H)。
Cap 16
向Cap 16步驟b(0.300 g，1.233 mmol)於MeOH(4 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰(0.032 g，1.36 mmol)於水(2 mL)中之溶液。在約25℃下攪拌反應物17.5小時。真空移除所有揮發性組分。將殘餘物用水(4 mL)稀釋且用6 N HCl酸化至pH值約為2。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取產物。用鹽水 (20 mL)洗滌所合併之有機層，經MgSO4乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈澄清無色黏性油狀之Cap 16，其在靜置後凝固為白色固體(215.8 mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.49(br.s.,1H),7.40(d,J=8.3 Hz,1H),4.62-4.49(m,2H),4.49-4.37(m,2H),3.84(t,J=8.3 Hz,1H),3.55(s,3H),2.46-2.29(m,1H),2.29-2.14(m,2H),2.11-1.94(m,2H)。
Cap 17.1及Cap 17.2
Cap17步驟a
將2 M氯化異丙基鎂(97 mL，195 mmol)於THF中之溶液經20分鐘之過程逐滴添加至經氮氣淨化的Cap 16步驟a(16.0 g，64.9 mmol)及N,O-二甲基羥胺HCl(9.82 g，101 mmol)於無水THF(150 mL)中之冷溶液中，同時維持反應溫度在-20℃(冷凍浴)以下。在相同溫度下攪拌反應混合物2小時，隨後將其用飽和NH4Cl溶液(100 mL)淬滅且用乙醚(100 mL)稀釋。用乙醚(100 mL)洗滌水層且用鹽水洗滌所合併之乙醚萃取物並乾燥(MgSO4)。濃縮有機物質得到無 色油狀物(21.43 g)，將無色油狀物裝載(己烷)於湯姆遜300 g矽膠柱且用超過3 L的5-100% EtOAc/己烷梯度溶離。分離呈無色油狀之Cap 17步驟a(17.65 g)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.41-4.35(m,1H),3.71(s,3H),3.19(s,3H),2.80-2.76(m,1H),2.37(dd,J=14.7,5.7 Hz,1H),1.24(d,J=6.1 Hz,3H),0.89(s,9H),0.09(s,3H),0.06(s,3H)。
Cap 17步驟b
在-78℃下，在氮氣下，將第三丁基鋰(32.4 mL，55.1 mmol)逐滴添加至1-溴環戊-1-烯(4.05 g，27.5 mmol)於THF(200 mL)中之溶液中。在攪拌30分鐘後，在-78℃下，將所得乙烯基鋰經由插管轉移至Cap 17步驟a(6.0 g，23 mmol)於THF(50 mL)中之溶液中。將反應物攪拌2小時，升溫至0℃維持1小時且用飽和NH4Cl溶液(40 mL)淬滅。添加鹽水(40 mL)且用Et2O(2×)萃取水相。乾燥(MgSO4)所合併之有機層且真空蒸發，並對所得粗產物(8 g；含有殘餘溶劑)進行以下處理。出於表徵目的，將一小份(約500 mg)裝載(DCM)於40 g湯姆遜矽膠柱且用超過1 L的5-35% EtOAc/己烷進行梯度溶離。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 6.79-6.78(m,1H),4.36-4.32(m,1H),2.97(dd,J=14.5,7.3 Hz,1H),2.60-2.53(m,5H),1.94(m,2H),1.2(d,J=6.1 Hz, 3H),0.86(s,9H),0.06(s,3H),0.001(s,3H)。
Cap 17步驟c
將Amberlyst 15(2.4 g乾燥形式，Fluka 06423)添加至經氮氣淨化的Cap 17步驟b(3 g，11.17 mmol)於乙腈(60 mL)中之溶液中，且在50℃下加熱反應混合物1小時。藉由過濾移除樹脂且藉由旋轉蒸發移除溶劑。將粗產物裝載(DCM)於240 g湯姆遜矽膠柱，且用超過2 L的5-50% EtOAc/己烷進行梯度溶離，得到Cap 17步驟c(1.9 g)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 4.24(t,J=4.3 Hz,1H),3.82-3.76(m,1H),2.46(dt,J=9.5,4.1 Hz,1H),2.37(dd,J=15.6,4.6 Hz,1H),2.30(ddd,J=13.7,2.9,1.0 Hz,1H),2.00-1.86(m,5H),1.72-1.67(m,1H),1.31(d,(dd,J=6.1 Hz,3H)。
Cap 17步驟d
在氮氣下，用乙醚(30 mL)稀釋2-異氰基乙酸乙酯(1.51 g，13.20 mmol)且用氧化亞銅(I)(257 mg，1.80 mmol)處理。攪拌漿液5分鐘且添加Cap 17步驟c(1.85 g，12.0 mmol)於乙醚(15 mL)中之產物，且在室溫下攪拌反應混合物2小時。將反應物冷卻至0℃且添加12 mL 1 M第三丁醇 鹽之THF溶液(注意：反應物在添加10 mL後凝固)，並使反應混合物靜置18小時。添加含乙酸(0.76 mL，13.20 mmol)之20 mL DCM(使用刮刀打碎固體塊)且攪拌溶液30分鐘，隨後過濾。用DCM稀釋濾液且用水洗滌。用DCM萃取水層且用鹽水洗滌所合併之有機層，並乾燥(MgSO4)。將粗產物裝載(DCM)於110 g湯姆遜矽膠柱且用超過1.5 L的15-100% EtOAc/DCM進行梯度溶離，得到呈順式-反式異構體之混合物形式的Cap 17步驟d(3.0 g；注意：1H NMR顯示約20%殘餘EtOAc)，按原樣對其進行以下處理。注意：對樣品(約40 mg)進行對掌性製備型HPLC[chiralpak AS 21×250 mm 10 μm；操作20分鐘(溶解於總共3 mL EtOH中之12%等濃度溶劑，加上0.5 mL注射液)；A=0.1%二乙胺/庚烷，B=EtOH]。收集在8分鐘及13分鐘時溶離之峰。在8分鐘時溶離之峰：UPLC(條件10)：0.946 min；[M+H]+ C14H22NO4之分析計算值268.15；實驗值268.10。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.23(s,0.7H)/7.95(d,J=11.4 Hz,0.3H),6.67-6.61(m,1H),4.28-4.23(m,2H),3.98-3.94(m,1H),3.60-3.43(m,2H),2.63/2.32(d,J=15.1 Hz,1H),2.10-2.04(m,1H),2.01-1.93(m,2H),1.91-1.78(m,2H),1.82-1.69(m,2H),1.35-1.24(m,6H)。在13分鐘時溶離之峰：UPLC(條件10)：0.966 min；[M+H]+ C14H22NO4之分析計算值268.15；實驗值268.10。1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ 8.26(s,0.55H)/7.99(d,J=11.3 Hz,0.45H),6.67-6.62(m,1H),4.28-4.22(m,2H),4.00-3.93(m,1H), 3.57-3.40(m,2H),2.79-2.58(m,1H),2.16-1.91(m,2H),1.90-1.67(m,5H),1.35-1.26(m,6H)。
Cap 17步驟e
將(-)-1,2-雙((2S,5S)-2,5-二甲基磷)乙烷(環辛二烯)四氟硼酸銠(I)(0.312 g，0.561 mmol)添加至經氮氣淨化的異構體混合物Cap 17步驟e(3.0 g，具有約20%殘餘EtOAc)於MeOH(37 mL)中之溶液中，且用氫氣沖洗溶液3次且在60 PSI下振盪3天。藉由旋轉蒸發移除溶劑，且將粗產物裝載(DCM)於110 g湯姆遜矽膠柱並用超過2 L的5-100% EtOAc/DCM進行梯度溶離，得到還原產物(2.4 g)。
Cap 17步驟f
將2.5 mL HCl(1.5N)添加至Cap 17步驟e中所獲得之立體異構體(1.75 g，6.50 mmol)於乙醇(20 mL)中之混合物中，且在50℃下加熱反應物6小時(以裝備有針頭的隔片對油鼓泡器封蓋)。在旋轉蒸發器上移除揮發性組分且將殘餘物暴露於室內真空18小時，得到胺中間物(約1.6 g)。將產物溶解於DCM(30 mL)中，在-25℃下，在氮氣下添加許尼希 鹼(Hunig's Base)(3.46 mL，19.89 mmol)，隨後逐滴添加氯甲酸甲酯(0.820 mL，10.61 mmol)。在相同溫度下攪拌反應物3小時，隨後將其用水(10 mL)淬滅且用DCM(50 mL)稀釋。分離有機層，乾燥(MgSO4)且真空蒸發。將所得粗產物裝載(DCM)於110 g湯姆遜矽膠柱，且用超過2 L的15-100% EtOAc/DCM進行梯度溶離，得到胺基甲酸甲酯(1.56 g)。用逆相HPLC(Axia-Luna管柱，30×100 mm C18；MeOH/水/TFA)隨後用製備型SFC(Chiralpak AD-H管柱，30×250 mm，5 μm；移動相：含10% EtOH之CO2；流動速率：50.0 mL/min，維持15分鐘；在220 nm下UV監測)再純化產物，得到兩種主要產物。非對映異構體-1(359 mg)：LCMS：條件10，Rt=1.02 min，[M+H]+ C15H26NO5之分析計算值300.37；實驗值300.1。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 5.16(d,J=8.9 Hz,1H),4.57(t,J=8.2 Hz,1H),4.26-4.19(m,2H),3.96-3.94(m,1H),3.75-3.71(m,1H),3.70(s,3H),2.04(br s,1H),1.85-1.62(連續的m,6H),1.52-1.44(m,2H),1.41-1.35(m,1H),1.29(t,J=7.2 Hz,3H),1.15(d,J=6.3 Hz,3H)。非對映異構體-2(89 mg)：LC/MS：條件10，Rt=1.04 min；[M+H]+ C15H26NO5之分析計算值300.37；實驗值30.15。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 5.08(d,J=8.7 Hz,1H),4.26-4.19(m,3H),3.84(s,1H),3.76-3.75(m,1H),3.70(s,3H),3.41-3.47(m,1H),2.27(br s,1H),1.90-1.85(m,2H),1.76-1.72(m,3H),1.66-1.55(m,3H),1.31(t,J=7.2 Hz,3H),1.19(d,J=6.3 Hz,3H)。
Cap 17.1
向Cap 18步驟f(非對映異構體-1；56 mg，0.187 mmol)於THF(5.6 mL)/水(1.5 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰單水合物(24 mg，0.561 mmol)。攪拌反應混合物18小時，隨後濃縮，用水(10 mL)稀釋且用Et2O洗滌。用1 mL 1 N HCl酸化水層，用EtOAc萃取，且用鹽水洗滌有機層並乾燥(MgSO4)，得到Cap 17.1(49 mg)，其未經進一步純化即用於下一步驟。
Cap 17.2
向實例Cap 17步驟f(非對映異構體-2；75 mg，0.25 mmol)於THF(7 mL)/水(3 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰單水合物(31 mg，0.75 mmol)。攪拌反應混合物18小時，隨後濃縮，用水(10 mL)稀釋且用Et2O洗滌。用1 mL 1 N HCl酸化水層，用EtOAc萃取，且用鹽水洗滌有機層，乾燥(MgSO4)並真空蒸發，得到Cap 17.2(55 mg)，其未經純化即用於下一步驟。
Cap 18
非對映異構體混合物 Cap 18步驟a
在-78℃下，在氮氣下，向二異丙胺(18.36 ml，129 mmol)於THF(20 ml)中之溶液中逐滴添加2.5M正丁基鋰之己烷溶液(51.5 ml，129 mmol)。在-78℃下攪拌反應物15分鐘，接著使其達到0℃後維持30分鐘。
在-78℃下，在氮氣下，向3-亞甲基環丁腈(10 g，107 mmol)於THF(300 ml)中之溶液中逐滴添加上述LDA溶液。攪拌反應物45分鐘，隨後逐滴添加碘甲烷(8.02 ml，129 mmol)。使反應物維持在-78℃下30分鐘，接著自冷浴中移出且使其在約25℃下攪拌19小時。將反應物用飽和NH4Cl溶液(水溶液，100 mL)淬滅，接著用乙醚(3×100 mL)萃取。用水、鹽水洗滌所合併之有機層，經MgSO4乾燥，過濾且真空濃縮，得到深色油狀物。該產物無需進一步純化即可用於下一步驟中。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 4.97-4.90(m,2H),3.32-3.27(m,1H),3.27-3.22(m,1H),2.75-2.69(m,1H),2.67(dt,J=4.1,2.2 Hz,1H),1.55(s,3H)。
Cap 18步驟b
在約25℃下，攪拌水(108 ml，5992 mmol)及1,4-二噁烷(339 ml，3959 mmol)、Cap 18步驟a(11.47 g，107 mmol) 及4重量%四氧化鋨水溶液(2.72 g，0.428 mmol)之混合物5分鐘。經30分鐘時間分數份添加過碘酸鈉(48.1 g，225 mmol)。在約25℃下攪拌反應物19.5小時。用CH2Cl2(150 mL)及水(150 mL)稀釋反應物。過濾混合物且用CH2Cl2(100 mL)洗滌固體。分離濾液且用CH2Cl2(2×100 mL)萃取水層。用水(50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌所合併之有機層，經MgSO4乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物裝載於湯姆遜矽膠柱上，用25%乙酸乙酯/己烷溶離，得到呈淡黃色油狀之Cap 18步驟b(9.13 g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 3.79-3.74(m,1H),3.74-3.67(m,1H),3.21-3.16(m,1H),3.16-3.10(m,1H),1.74(s,3H)。
Cap 18步驟c
在0℃下，在氮氣下，向冷浴中之Cap 18步驟b(2 g，18.33 mmol)於CH2Cl2(100 mL)中之溶液中添加2-(二甲氧基磷醯基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙酸甲酯(7.01 g，27.5 mmol)，接著添加1,1,3,3-四甲基胍(3.23 mL，27.5 mmol)。自冷浴中移出反應物且使其在約25℃下，在氮氣下攪拌23小時。用飽和NH4Cl(水溶液，25 mL)處理反應物。分離各層且用CH2Cl2(2×50 mL)萃取水層。用鹽水(25 mL)洗滌所合併之有機層，經MgSO4乾燥，過濾且真空濃 縮。將殘餘物裝載於湯姆遜矽膠柱上，用25%乙酸乙酯/己烷溶離，得到呈無色黏性油狀之Cap 18步驟c(2.77 g)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.61(br.s.,1H),3.67(s,3H),3.58(s,3H),3.50(dt,J=17.8,1.6 Hz,1H),3.27(dd,J=17.7,3.4 Hz,1H),3.15(dt,J=17.9,1.7 Hz,1H),2.88(dt,J=17.8,1.7 Hz,1H),1.52(s,3H)。
Cap 18
向Cap 18步驟c(0.4083 g，1.714 mmol)於MeOH(6 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰(0.049 g，2.057 mmol)於水(3.00 mL)中之溶液。在約25℃下攪拌反應物6.5小時。真空移除所有揮發性組分。將殘餘物用水(15 mL)稀釋且用乙酸乙酯(25 mL)洗滌。分離各層且用6 N HCl酸化水相至約1-2之pH值。用乙酸乙酯(3×25 mL)萃取產物。用鹽水(25 mL)洗滌所合併之有機層，經MgSO4乾燥，過濾且真空濃縮，得到呈白色泡沫狀之Cap 18(345 mg)。產物無需進一步純化即可使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.66(br.s.,1H),8.43(br.s.,1H),3.57(s,3H),3.49(dd,J=17.8,3.0 Hz,1H),3.24(dd,J=17.6,3.3 Hz,1H),3.19-3.07(m,1H),2.92-2.78(m,1H),1.51(s,3H)。
實例QC-1.1、QC-1.2及QC-1.3
向4,4'-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)聯苯，4 HCl(50 mg，0.084 mmol)及Cap-2(外消旋混合物)(41.9 mg，0.168 mmol)於2 mL DMF中之溶液中添加DIEA(0.088 ml，0.505 mmol)。向所得混合物中添加HATU(64.0 mg，0.168 mmol)且在約25℃下攪拌混合物2小時。接著移除溶劑，得到3種非對映異構體之粗混合物，當在LC(條件3)下分析時，該3種非對映異構體之比率為約1：2：1。接著藉由逆相HPLC(管柱：Water Sunfire 30×150 mm；乙腈/水/NH4OAc)純化混合物，得到呈白色固體狀之三種非對映異構體之游離鹼(實例QC-1.1、QC-1.2及QC-1.3)。實例QC-1.1(9.1 mg)：LC(條件1)：Rt=1.15 min；>95%；LC/MS：[M+H]+ C48H51F4N8O6之分析計算值911.39；實驗值456.5(M/2+1)；HRMS：[M+H]+ C48H51F4N8O6之分析計算值911.3862；實驗值911.3869；1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ ppm 7.61-7.88(8H,m),7.36(2H,br.s.),5.09-5.21(2H,m),4.66-4.77(2H,m),3.69(6H,s),2.36-2.62(6H,m),1.86-2.14(16H,m),1.03-1.17(2H,m),0.70-0.84(2H,m)。實例QC-1.2(24.5 mg,)：LC(條件1)：Rt=1.19 min；>97%純度。LC/MS：[M+H]+ C48H51F4N8O6之分析計算值911.39；實驗值456.5(M/2+1)；HRMS：[M+H]+ C48H51F4N8O6之分析計算值911.3862；實驗值911.3865；1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ ppm 7.59-7.89(8H,m),7.36(2H,d,J=4.88 Hz),5.08-5.24(2H,m),4.60-4.76(2H,m),3.69(6H,s),2.36-2.71 (6H,m),1.82-2.20(16H,m),1.16-1.25(1H,m),1.03-1.14(1H,m),0.66-0.83(2H,m)。實例QC-1.3(14.7 mg)：LC(條件1)：Rt=1.22 min；>99%純度。LC/MS：[M+H]+ C48H51F4N8O6之分析計算值911.39；實驗值456.5(M/2+1)；HRMS：[M+H]+ C48H51F4N8O6之分析計算值911.3862；實驗值911.3864。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ ppm 7.61-7.88(8H,m),7.36(2H,br.s.),5.09-5.21(2H,m),4.66-4.77(2H,m),3.69(6H,s),2.36-2.62(6H,m),1.86-2.14(16H,m),1.03-1.17(2H,m),0.70-0.84(2H,m)。
實例QC-2.1至QC-4.3
根據關於實例QC-1所描述之程序使用合適cap製備實例QC-2.1至QC-3.3。除採用MeOH/水/TFA溶劑系統(管柱：WATERS Atlantis OBD 30×100 mm 5 u)進行逆相HPLC純化之外，亦類似地製備實例QC-4.1至QC-4.3。儘管當使用Cap-1時僅一種化合物為所期望的，但獲得3種不同非對映異構體，表明外消旋可能在Cap-1合成期間存在。
實例QC-5.1、QC-5.2及QC-5.3 (關於未指定立體對稱中心之三種非對映異構體)
實例QC-5步驟a
2-((1R,3s,5S)-雙環[3.1.0]己-3-基)-2-(第三丁氧基羰基胺基)乙酸(實例QC-5步驟a)係由市售(順式)-雙環[3.1.0]己-3-醇來製備，後者首先使用標準光延方案(Mitsubobu's protocol)來轉化為其(反式)-雙環[3.1.0]己-3-醇異構體，且 隨後根據自Cap-2步驟d至Cap-2步驟f所述之反應順序精製成2-胺基-2-((1R,3s,5S)-雙環[3.1.0]己-3-基)乙酸乙酯。接著，將胺以其BOC衍生物形式保護，隨後在標準方案下水解乙酯，得到酸實例QC-5步驟a。
實例QC-5步驟b
向4,4'-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)聯苯，4 HCl(50 mg，0.084 mmol)及酸實例QC-5步驟a(43.0 mg，0.168 mmol)於2 mL DMF中之溶液中添加DIEA(0.088 ml，0.505 mmol)及HATU(64.0 mg，0.168 mmol)。在約25℃下攪拌混合物2小時。接著真空移除溶劑且藉由逆相HPLC(管柱：WATERS Atlantis OBD 30×100 mm 5 u，MeOH/水THF)純化粗產物，得到呈白色固體狀之實例QC-5步驟b之TFA鹽(97 mg)。LC(條件1)：Rt=1.47 min；LC/MS：[M+H]+ C54H67N8O6之分析計算值923.52；實驗值462.8(M/2+1)；1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ ppm 7.82-7.91(10H,m),5.08-5.18(2H,m),4.57(1H,d,J=7.63 Hz),4.48(1H,d,J=8.24 Hz),4.06-4.12(1H,m),3.79-3.86(1H,m),3.02(3H,s),2.88(3H,s),2.66-2.75(2H,m),2.43-2.54(2H,m),2.01-2.16(4H,m),1.88-1.97(2H,m),1.68-1.82(4H,m),1.57-1.68(2H,m),1.47(9H,s),1.41 (9H,s),1.25-1.36(6H,m),1.16-1.24(1H,m),1.04-1.11(1H,m),0.81-0.93(2H,m),0.29-0.39(2H,m),0.19-0.27(2H,m)。
實例QC-5步驟c
向實例QC-5步驟b(97 mg，0.084 mmol)於1 mL CH2Cl2中之混合物中添加HCl(2 mL，4.00 mmol)(2 N於乙醚中)。在室溫下攪拌所得混合物2小時。接著移除溶劑，得到呈黃色固體狀之實例QC-5步驟c之HCl鹽(73 mg)。LC(條件1)：Rt=0.84 min；LC/MS：[M+H]+ C44H51N8O2之分析計算值723.41；實驗值723.6。
實例QC-5.1、QC-5.2及QC-5.3
向實例QC-5步驟b之HCl鹽(73 mg，0.084 mmol)於2 mL CH2Cl2中之混合物中添加DIEA(0.117 mL，0.672 mmol)及氯甲酸甲酯(0.026 mL，0.336 mmol)。在室溫下攪拌所得混合物1小時。添加氨(2 mL，4.00 mmol)(2 N於甲醇中)，且攪拌所得混合物2小時。接著真空移除溶劑且藉由逆相HPLC(管柱：Water Sunfire 30×150 mm，乙腈/水/NH4OAc)純化粗物質，得到呈白色至淡黃色固體狀之三種非對映異構體之游離鹼(實例QC-5.1、QC-5.2及QC-5.3)。 實例QC-5.1(8.5 mg)：LC(條件3)：Rt=2.05 min，>95%純度；LC/MS：[M+H]+ C48H55N8O6之分析計算值839.42；實驗值839.7。HRMS：[M+H]+ C48H55N8O6之分析計算值839.4239；實驗值839.4243。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ ppm 7.64-7.87(8H,m),7.37(2H,br.s.),5.10-5.22(2H,m),4.57-4.72(2H,m),3.68(6H,s),2.38-2.58(4H,m),1.90-2.31(6H,m),1.55-1.87(6H,m),1.20-1.38(6H,m),1.04-1.19(2H,m),0.72-0.85(2H,m),0.28-0.37(2H,m),0.22-0.28(2H,m)。實例QC-5.2(18 mg)：LC(條件3)：Rt=2.14 min；>99%純度；LC/MS：[M+H]+ C48H55N8O6之分析計算值839.42；實驗值839.7；HRMS：[M+H]+ C48H55N8O6之分析計算值839.4239；實驗值839.4243；1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ ppm 7.63-7.86(8H,m),7.37(2H,d),5.11-5.22(2H,m),4.51-4.70(2H,m),3.68(6H,d),2.38-2.59(4H,m),1.90-2.15(6H,m),1.57-1.84(6H,m),1.18-1.38(6H,m),1.03-1.16(2H,m),0.72-0.83(2H,m),0.28-0.39(2H,m),0.22-0.28(2H,m)。實例QC-5.3(9.1 mg)：LC(條件3)：Rt=2.23 min；>95%純屬。LC/MS：[M+H]+ C48H55N8O6之分析計算值839.42；實驗值839.7；HRMS：[M+H]+ C48H55N8O6之分析計算值839.4239；實驗值839.4242。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ ppm 7.63-7.93(8H,m),7.36(2H,s),5.17-5.29(2H,m),4.55(2H,d,J=8.5 Hz),3.69(6H,s),2.39-2.64(4H,m),1.92-2.20(6H,m),1.58-1.86(6H,m),1.27-1.45(6H,m),1.17-1.27(2H,m), 0.70-0.84(2H,m),0.31-0.45(2H,m),0.20-0.30(2H,m)。
實例QC-6至QC-7
向實例QC-2.1(50 mg，0.044 mmol)於1 mL DMF中之混合物中添加NCS(7.03 mg，0.053 mmol)。在50℃下攪拌所得混合物隔夜。接著移除溶劑且藉由逆相HPLC(管柱：WATERS Sunfire C18 OBD 30×100 mm 5 u，MeOH/水/TFA)純化粗產物，得到分別呈白色固體及淡黃色固體狀之實例QC-6之TFA鹽及實例CQ-7之TFA鹽。實例QC-6(20 mg)：LC(條件2)：Rt=1.72 min，>99%純度；LC/MS：[M+H]+ C48H50ClF4N8O6之分析計算值945.35；實驗值473.16(M/2+1)；HRMS：[M+H]+ C48H50ClF4N8O6之分析計算值945.3472；實驗值945.3440；1H NMR(500 MHz,CD4OD)δ ppm 7.77-7.92(9H,m),5.06-5.13(1H,m),4.97-5.04(1H,m),4.61-4.70(2H,m),3.78-3.85(1H,m),3.71-3.75(1H,m),3.69(6H,d),2.63-2.74(1H,m),2.39-2.55(5H,m),1.83-2.14(14H,m),1.00-1.12(2H,m),0.81-0.89(1H,m),0.72-0.79(1H,m)。實例QC-7(19 mg)：LC(條件2)：Rt=2.03 min，>96%純度；LC/MS：[M+H]+ C48H49Cl2F4N8O6之分析計算值979.31；實驗值490.17(M/2+1)；HRMS：[M+H]+ C48H49Cl2F4N8O6之分析計算值 979.3083；實驗值979.3043；1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ ppm 7.74-7.88(8H,m),4.97-5.05(2H,m),4.63-4.71(2H,m),3.71-3.78(2H,m),3.69(6H,s),2.39-2.55(6H,m),1.87-2.11(14H,m),1.01-1.11(2H,m),0.73-0.81(2H,m)。
實例QC-8.1
向4,4'-雙(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-1,1'-聯苯，4 HCl(25 mg，0.042 mmol)及Cap 5.1(20.32 mg，0.084 mmol)於2 mL DMF中之溶液中添加DIEA(0.044 mL，0.251 mmol)。向所得混合物中添加HATU(31.8 mg，0.084 mmol)且在室溫下攪拌混合物2小時。真空移除溶劑。藉由逆相HPLC(管柱：WATERS Sunfire C18 OBD 30×100 mm 5 u，甲醇/水/TFA)純化粗產物，得到呈白色固體狀之實例QC-8.1之TFA鹽(32 mg，64.3%)。LC(條件1)：Rt=1.04 min；LC/MS：[M+H]+ C50H63N8O8之分析計算值903.48；實驗值903.7；HRMS：[M+H]+ C50H63N8O8之分析計算值903.4763；實驗值903.4753；1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ 8.03-7.78(m,10H),5.16(dd,J=10.5,7.2 Hz,2H),4.84-4.73(m,2H),4.33-4.18(m,2H),3.92-3.78(m,2H),3.74-3.63(m,6H),3.61-3.43(m,2H),2.69-2.47(m,2H),2.43-2.07(m,6H),2.06-1.95(m,2H),1.95-1.74(m, 4H),1.56(d,J=6.4 Hz,6H),1.42(m,2H),0.83-0.70(m,2H),0.67-0.49(m,4H),0.45-0.33(m,2H),0.21-0.10(m,2H)。
實例QC-8.2
使用與實例QC-8.1所述相同的程序，由Cap 5.2替代Cap 5.1來製備實例QC-8.2之TFA鹽。LC(條件1)：Rt=1.01 min；LC/MS：[M+H]+ C50H63N8O8之分析計算值903.48；實驗值：903.7；HRMS：[M+H]+ C50H63N8O8之分析計算值903.4763；實驗值：903.4761；1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ 8.05-7.78(m,10H),5.16(dd,J=10.4,7.0 Hz,2H),4.83-4.75(m,2H),4.36-4.18(m,2H),3.92-3.75(m,2H),3.74-3.61(m,6H),3.57-3.37(m,2H),2.72-2.47(m,2H),2.44-2.24(m,4H),2.24-2.07(m,2H),1.99(m,2H),1.95-1.77(m,2H),1.58(d,J=6.4 Hz,6H),1.52-1.40(m,2H),1.39-1.19(m,4H),0.76(m,2H),0.67-0.44(m,4H),0.38(m,2H)。
使用關於實例QC-1.1所述之相同程序，使相應核心(參見表內之參考文獻)與Cap 5.1或Cap 5.2組合來製備實例QC-9至QC16及實例OL1至OL10，且在逆相HPLC條件下純化產物且以TFA鹽形式獲得。藉由使用標準EDC/CH2Cl2偶 合條件由合適核心及Cap 6製備實例OL10，且在逆相HPLC條件下純化產物且以游離鹼形式獲得。藉由使用標準HATU/DIEA/DMF偶合條件由合適核心及Cap 7製備實例OL11至OL12，且在逆相HPLC條件下純化產物且以TFA鹽形式獲得。
*實例QC14之次末前驅體係根據WO 2008/021927中所述之三步驟方案(醯胺偶合、酮醯胺環化成咪唑及Boc去保護)，由1,1'-(1,4-伸苯基)雙(2-胺基乙酮)二鹽酸鹽(參見TL,1986，第5759頁之製備型程序)及Boc-L-脯胺酸起始製備。
實例QC-17.1
實例QC-17.1步驟a
在室溫下，向4-溴-2-甲基苯甲酸(10 g，46.5 mmol)於DMF(150 mL)中之溶液中添加N,O-二甲基羥胺鹽酸鹽(5.44 g，55.8 mmol)，隨後添加HOBT(8.55 g，55.8 mmol)。接著添加EDC(10.7 g，55.8 mmol)，隨後添加DIEA(24.4 mL，140 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物12小時。接 著用EtOAc(150 mL)稀釋反應混合物，用水(3×250 mL)及鹽水(150 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且真空濃縮，得到粗物質QC-17.1步驟a(9.5 g)，其原樣送至下一步驟。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)：δ 7.37(d,J=1.6 Hz,1H),7.34(dd,J=8.0,1.6 Hz,1H),7.14(d,J=8.0 Hz,1H),3.47(s,3H),3.30(s,3H),2.31(s,3H)。LC/MS：[M+H]+ C10H13 81BrNO2之分析計算值：260.01；實驗值260.0。
實例QC-17.1步驟b
將QC-17.1步驟a(9.5 g，36.8 mmol)溶解於乙醚(150 mL)中且冷卻至0℃。接著經10分鐘逐滴添加甲基碘化鎂(3.0 M於乙醚中，24.54 mL，73.6 mmol)。在40℃下攪拌反應物6小時且隨後恢復至室溫且攪拌12小時。將反應混合物冷卻至0℃，用冰且隨後用1.5 N HCl(50 mL)淬滅。分離有機層且用甲基第三丁基醚(2×100 mL)萃取水層，經Na2SO4乾燥且減壓濃縮。藉由急驟層析(矽膠，60-120，EtOAc：石油醚，2：98)純化粗物質，得到呈淺黃色液體狀之QC-17.1步驟b(6.25 g)。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)：δ 7.55(d,J=8.0 Hz,1H),7.41(s,1H),7.40(d,J=8.0 Hz,1H),2.55(s,3H),2.50(s,3H)。
實例QC-17.1步驟c
將4-乙醯基苯基酸(5.39 g，32.9 mmol)添加至含有QC-17.1步驟b(7.0 g，32.9 mmol)之MeOH溶液(75.0 mL)的密封管中且用氮氣淨化反應混合物10分鐘。接著添加K2CO3(9.08 g，65.7 mmol)，隨後添加Pd(Ph3P)4(1.139 g，0.986 mmol)，且再用氮氣淨化反應混合物10分鐘。加熱反應混合物至75℃後維持12小時。接著減壓濃縮反應混合物且用EtOAc(100 mL)稀釋殘餘物，並用水(2×100 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由combiflash(Silicycle，SiO2，10-15% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之QC-17.1步驟c(6.5 g)。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)：δ 8.06-8.04(m,2H),7.81(d,J=8.0 Hz,1H),7.72-7.70(m,2H),7.54-7.49(m,2H),2.65(s,3H),2.63(s,6H)。
實例QC-17.1步驟d
在10℃下，將溴(1.12 mL，21.8 mmol)(稀釋於10 mL二噁烷中)緩慢(經10分鐘)添加至QC-17.1步驟c(2.75 g，10.90 mmol)於二噁烷(50 mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌混合物2小時。用10% NaHCO3(25 mL)淬滅反應物且用DCM(50 mL)萃取。經Na2SO4乾燥有機相且減壓濃縮，得到粗物質QC-17.1步驟d(5.0 g)，其未經純化原樣用於下一步驟。LC/MS：[M+H]+ C17H15 79/81Br2O2之分析計算值：410.94；實驗值411.0。
實例QC-17.1步驟e
在0℃下，向粗物質QC-17.1步驟d(5.1 g，12 mmol)於乙腈(75 mL)中之溶液中添加QC-17.1步驟a(5.70 g，24.9 mmol)，隨後添加DIEA(8.69 mL，49.7 mmol)。10分鐘後，使溫度升至室溫且攪拌2小時。接著用EtOAc(100 mL)稀釋反應混合物且用10% NaHCO3(50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由combiflash(Silicycle，SiO2，25-30% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到呈淺黃色油狀之QC-17.1步驟e(5.8 g)。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)：δ 8.00(app bd,2H),7.71(app d,3H),7.53-7.51(m,2H),5.61-5.34(m,2H),5.29-5.04(m,2H),4.51-4.36(m,2H),4.09-3.91(m,2H),2.59(s,3H),2.35-2.21(m,4H),2.15-2.04(m,2H),1.80-1.63(m,2H),1.47/1.44(s,18H),1.35-1.27(m,6H)。LC/MS：[M-H]- C39H49N2O10之分析計算值：705.35；實驗值705.30。
實例QC-17.1步驟f
向QC-17.1步驟e(5.6 g，7.92 mmol)於二甲苯(75 mL)中之溶液中添加NH4OAc(12.21 g，158 mmol)，且用氮氣淨 化反應混合物10分鐘。在130℃下加熱18小時後，將反應混合物冷卻至室溫且減壓移除揮發性組分。接著用EtOAc(100 mL)稀釋反應混合物且用10% NaHCO3(50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由combiflash(Redi Sep,C-18管柱，30-40%乙腈：10 mM碳酸氫銨)純化殘餘物，得到呈淺黃色固體狀之QC-17.1步驟f(2.3 g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.50 ppm,400 MHz)：δ 12.27/12.0/11.77/11.71(s,2H),7.92-7.63(m,5H),7.58-7.47(m,3H),7.24(br s,1H),4.90-4.75(m,2H),3.92-3.84(m,2H),2.54(s,3H),2.20-2.01(m,6H),1.73-1.65(m,2H),1.48-1.12(m,24H)。LC/MS：[M-H]- C39H49N6O4之分析計算值：665.39；實驗值665.4。
實例QC-17.1步驟g
向QC-17.1步驟f(1.55 g，2.32 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液中添加HCl/MeOH(4 N，58.1 mL)且在室溫下攪拌2小時。真空移除揮發性組分，且使殘餘物與無水DCM(3×25 mL)一起共蒸發。使所得固體暴露於高真空，得到呈淺黃色固體狀之QC-17.1步驟e之HCl鹽(1.3 g)。1H NMR(MeOD,δ=3.34 ppm,400 MHz)：δ 8.06(br s,1H),7.98(d,J=8.4 Hz,2H),7.90(d,J=8.4 Hz,2H),7.86(br s,1H),7.78(br s,1H),7.74(d,J=8.4 Hz,1H),7.71(d,J=8.4 Hz,1H),5.27-5.20(m,2H),4.04-4.00(m,2H),2.80-2.67(m,4H),2.59(s,3H),2.55-2.46(m,2H),2.15-2.06(m,2H),1.60(d,J=6.4,6H)。LC/MS：[[M+H]+ C29H35N6之分析計算值：467.28；實驗值467.2。
實例QC-17.1
將HATU(37.2 mg，0.098 mmol)添加至Cap 5.2(26.2 mg，0.108 mmol)及實例QC-17.1步驟g(30 mg，0.049 mmol)於DMF(2 mL)及DIEA(0.051 ml，0.294 mmol)中之經攪拌溶液中。在室溫下攪拌反應混合物2小時且真空濃縮。用MeOH稀釋殘餘物，過濾且藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18 OBD 30×100 mm 5 u；MeOH/水/TFA緩衝劑)純化，得到呈灰白色固體狀之實例QC-17.1之TFA鹽(34 mg)。LC/MS(條件1)：Rt=1.743 min；LC/MS：[M+H]+ C51H65N8O8之分析計算值917.12；實驗值917.9；HPLC(條件6)：Rt=26.27；97%均質性。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ 8.05-7.92(m,1H),7.90-7.83(m,4H),7.75(s,1H),7.72-7.65(m,1H),7.63(s,1H),7.56(d,J=8.2 Hz,1H),5.25-5.10(m,2H),4.84-4.78(m,2H),4.27-4.15(m,2H),3.79(d,J=7.9 Hz,2H),3.65(s,4H),3.49-3.38(m,2H),2.59-2.51(m,2H),2.47(s,3H),2.42-2.33(m,2H),2.33-2.23(m,2H),2.16(d,J=17.7 Hz,2H),2.04-1.95(m,2H),1.82(t,J=12.2 Hz,2H),1.67-1.52(m,6H),1.51-1.38(m,2H),1.36-1.21(m,5H),0.83-0.72(m,2H),0.63-0.45(m,4H), 0.43-0.30(m,2H)。
實例QC-17.2
藉由用Cap 5.1替代Cap 5.2且使用與關於實例QC-17.1所述相同的程序製備實例QC-17.2之TFA鹽。LC/MS(條件1)：Rt=1.710 min；LC/MS：[M+H]+ C51H65N8O8之分析計算值917.12；實驗值917.6；HPLC(條件6)：Rt=26.05；98%均質性。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ 8.01-7.95(m,1H),7.90(s,1H),7.88-7.80(m,5H),7.75(s,1H),7.72-7.66(m,2H),7.63(s,1H),7.54(d,J=7.9 Hz,1H),5.16(dd,J=10.1,7.3 Hz,2H),4.82-4.74(m,2H),4.22(d,J=8.9 Hz,2H),3.89-3.81(m,2H),3.67(s,6H),3.53-3.45(m,2H),2.58-2.50(m,3H),2.47(s,3H),2.42-2.33(m,3H),2.27(br.s.,2H),2.15(dd,J=19.5,10.1 Hz,2H),1.98(dd,J=11.7,5.3 Hz,2H),1.89(t,J=12.4 Hz,2H),1.79(d,J=12.2 Hz,2H),1.55(t,J=6.7 Hz,6H),1.46-1.38(m,2H),1.35-1.27(m,3H),0.76(dt,J=11.1,5.3 Hz,2H),0.69-0.50(m,5H),0.38(d,J=5.5 Hz,2H),0.25-0.12(m,2H)。
實例QC-18.1
實例QC-18.1步驟a
向在冰-水浴中處於0℃下之1-(4-溴-2-氟苯基)乙酮(5.0 g，23 mmol)於二噁烷(150 mL)及乙醚(150 mL)中之溶液中逐滴添加溴(1.18 mL，23.0 mmol)。攪拌反應物1小時，使其升溫至室溫且攪拌16小時。使混合物分配於EtOAc(50 mL)與飽和NaHCO3(50 mL)之間，且用水洗滌有機層並經Na2SO4乾燥。真空蒸發揮發性組分且真空乾燥固體隔夜，得到呈白色固體狀之實例18.1步驟a(6.94 g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5 ppm,400 MHz)：7.87-7.79(m,2H),7.62-7.60(m,1H),4.84(s,2H)。
實例QC-18.1步驟b
向實例18.1步驟a(2.58 g，8.72 mmol)及(2S,5S)-1-(第三丁氧羰基1)-5-甲基吡咯啶-2-甲酸(2.00 g，8.72 mmol)於乙腈(50 mL)中之溶液中添加DIEA(2.285 mL，13.08 mmol)，且在室溫下攪拌混合物64小時。真空移除溶劑且使殘餘物 分配於EtOAc(40 mL)與水(30 mL)之間。用飽和NaHCO3及鹽水洗滌有機層，用Na2SO4乾燥且真空蒸發，得到呈黃色固體狀之實例18.1步驟b(3.8 g)。1H NMR(CDCl3,400 MHz)：7.87(m,1H),7.44(m,2H),5.42-5.09(m,2H),4.53-4.40(m,1H),4.10-3.95(m,1H),2.31(m,2H),2.09(m,1H),1.75(m,1H),1.49-1.46(兩個單峰，9H),1.33(m,3H)。LC/MS：[M+Na]+ C19H24 BrNNaO5之分析計算值：466.06；實驗值：466.03。
實例QC-18.1步驟c
向含有實例18.1步驟b(3.8 g，8.6 mmol)於二甲苯(40 mL)中之溶液的壓力管中添加乙酸銨(6.59 g，86 mmol)，且蓋上反應容器且在140℃下加熱6小時。真空蒸發揮發性組分且使殘餘物分配於DCM(80 mL)與水(50 mL)之間。分離有機層且用飽和NaHCO3洗滌，並用Na2SO4乾燥。真空移除溶劑產生紅色油狀物，其藉由急驟層析(0-40% EtOAc/己烷)純化，得到呈棕色固體狀之實例18.1步驟c(2.3 g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5 ppm,400 MHz)：7.98(app.t,J=8.4 Hz,1H),7.65(dd,J=11,1.9 Hz,1H),7.45(dd,J=8.3,2,1H),7.36(m,1H),4.85(m,1H),3.90(m,1H),2.15-2.07(m,3H),1.73(m,1H),1.40-1.17(m,12H)。LC/MS：[M+Na]+ C19H23 79BrFN3NaO2之分析計算值： 446.09；實驗值：446.00。
實例QC-18.1步驟d
向2-溴-1-(4-溴苯基)乙酮(2.425 g，8.72 mmol)及(2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-甲酸(2 g，8.72 mmol)於乙腈(50 mL)中之溶液中添加DIEA(1.524 mL，8.72 mmol)，且在室溫下攪拌混合物16小時。真空移除溶劑且使殘餘物分配於EtOAc(40 mL)與水(30 mL)之間。用飽和NaHCO3及鹽水洗滌有機相且用Na2SO4乾燥。真空移除揮發性組分，得到呈淡黃色固體狀之實例18.1步驟d(1.74 g)，其無需進一步純化即可使用。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5 ppm,400 MHz)：7.95-7.90(m,2H),7.81(m,1H),7.79(m,1H),5.63-5.44(m,2H),4.36(m,1H),3.99(m,1H),2.27(m,1H),2.09(m,2H),1.63(m,1H),1.41-1.37(兩個單峰，9H),1.19(m,3H)。LC/MS：[M+Na]+ C19H24BrNNaO5之分析計算值：448.07；實驗值：448.06。
實例QC-18.1步驟e
向含有實例18.1步驟d(3.4 g，8.0 mmol)於二甲苯(40 mL)中之溶液的壓力管中添加乙酸銨(6.15 g，80 mmol)， 且在140℃下加熱混合物6小時。真空移除揮發性組分，小心地使殘餘物分配於DCM(60 mL)與飽和NaHCO3(30 mL)之間，且分離有機層並用Na2SO4乾燥。真空移除溶劑得到紅色固體，其藉由急驟層析(5-50% EtOAc/己烷)純化，得到呈淺棕色固體狀之實例18.1步驟e(2.65 g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5 ppm,400 MHz)：7.73-7.71(m,2H),7.59-7.50(m,3H),4.80(m,1H),3.89(m,1H),2.10(m,3H),1.71(m,1H),1.40-1.17(m,12H)。LC/MS：[M+Na]+ C19H24BrN3NaO2之分析計算值：428.09；實驗值：428.07。
實例QC-18.1步驟f
向實例18.1步驟e(2.64 g，6.50 mmol)及4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧硼)(3.30 g，13.0 mmol)於二噁烷(40 mL)中之溶液中添加乙酸鉀(1.594 g，16.24 mmol)。藉由鼓泡氮氣10分鐘使混合物脫氣，添加Pd(Ph3P)4(0.375 g，0.325 mmol)且再繼續脫氣15分鐘。接著密封反應容器且在80℃下加熱16小時。真空蒸發揮發性組分且使殘餘物分配於DCM(100 mL)與半飽和NaHCO3(50 mL)之間。分離有機層，用Na2SO4乾燥且真空蒸發，得到粗物質紅色油狀物，其藉由急驟層析(10-90% EtOAc/己烷)純化。獲得呈黃色泡沫狀之實例18.1步驟f(2.7 g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5 ppm,400 MHz)：7.77(d,J=8.3 Hz,2H),7.64-7.53(m,3H),4.80(m,1H),3.88(m,1H),2.09(m,3H),1.73(m,1H),1.43-1.08(m,24H)。LC/MS：[M+H]+ C25H37BrBN3O4之分析計算值：454.29；實驗值：454.23。
實例QC-18.1步驟g
向含有實例18.1步驟f(2.70 g，5.96 mmol)及實例4步驟c(2.30 g，5.42 mmol)於DME(70 mL)中之溶液的壓力管中添加水(17.50 mL)及碳酸氫鈉(2.27 g，27.1 mmol)。藉由鼓泡氮氣15分鐘使混合物脫氣，添加Pd(Ph3P)4(0.313 g，0.271 mmol)且再繼續脫氣15分鐘。密封反應容器且在80℃下加熱15小時。真空蒸發溶劑且使殘餘物分配於DCM(100 mL)與水(50 mL)之間。分離有機層，用Na2SO4乾燥且真空移除揮發性組分，並藉由急驟層析(30-100% EtOAc/己烷)純化所得紅色粗物質固體。獲得呈黃色固體狀之實例18.1步驟g(1.95 g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5 ppm,400 MHz)：8.10(m,1H),7.87-7.71(m,4H),7.61-7.55(m,3H),7.37(m,1H),4.85(m,2H),3.91(m,2H),2.11(m,6H),1.76(m,2H),1.42-1.08(m,24H)。LC/MS：[M+H]+ C35H48FN6O4之分析計算值：671.37；實驗值：671.35。
實例QC-18.1步驟h
向實例18.1步驟g(1.95 g，2.91 mmol)於二噁烷(10 mL)中之懸浮液中添加含4 N HCl之二噁烷(9.72 mL，320 mmol)，且在室溫下攪拌混合物6小時。添加甲醇(1 mL)且繼續攪拌1小時。真空移除揮發性組分且真空乾燥殘餘物隔夜。回收呈黃色固體狀之實例18.1步驟h之HCl鹽(1.7 g)。1H NMR(DMSO-d6),δ=2.5 ppm,400 MHz)：10.34/10.29/9.43/9.08(四個寬峰，~4H),8.16(t,J=8.3 Hz,1H),8.10(br s,1H),8.00(d,J=8.3 Hz,2H),7.92(d,J=8.3 Hz,2H),7.78-7.72(m,3H),4.99-4.89(m,2H),3.80(m,2H),2.53-2.42(m,4H),2.25(m,2H),1.87(m,2H),1.44(d,J=6.5,3H),1.43(d,J=6.5,3H)。LC/MS：[M+H]+ C28H32FN6之分析計算值：471.27；實驗值：471.17。
實例QC-18.1
將HATU(37.0 mg，0.097 mmol)添加至Cap 5.2(26.0 mg，0.107 mmol)及實例QC-18.1步驟f(30 mg，0.049 mmol)於DMF(2 mL)及DIEA(0.051 ml，0.294 mmol)中之經攪拌溶液中。在室溫下攪拌反應混合物2小時且真空濃縮。用MeOH稀釋殘餘物，過濾且藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18 OBD 30×100 mm 5 u；MeOH/水/TFA緩衝劑)純化，得到呈灰白色固體狀之實例QC-17.1之TFA鹽(34 mg)。LC/MS(條件1)：Rt=1.77 min；LC/MS：[M+H]+ C50H62FN8O8之分析計算值921.47；實驗值：921.11；HPLC(條件6)：Rt=26.39；99%均質性。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ 8.13-7.98(m,1H),7.95-7.84(m,5H),7.82(s,1H),7.75-7.67(m,2H),5.24-5.12(m,2H),4.82-4.76(m,2H),4.28-4.17(m,2H),3.87-3.75(m,2H),3.72-3.61(m,6H),3.42(t,J=11.6 Hz,2H),2.52(d,J=3.4 Hz,2H),2.44-2.23(m,4H),2.18-2.08(m,2H),2.03-1.94(m,2H),1.82(t,J=12.2 Hz,2H),1.58(d,J=6.7 Hz,6H),1.47(td,J=12.1,8.2 Hz,2H),1.33-1.18(m,5H),0.84-0.74(m,2H),0.57(br.s.,2H),0.50(br.s.,2H),0.37(d,J=4.0 Hz,2H)。
實例QC-18.2
使用關於實例QC-18.1所述之相同程序，藉由用Cap 5.1替代Cap 5.2來製備實例QC-18.2之TFA鹽。LC/MS(條件1)：Rt=1.75 min；LC/MS：[M+H]+ C50H62FN8O8之分析計算值921.47；實驗值921.25；HPLC(條件6)：Rt=26.02 min；98%均質性。1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ 7.96(d,J=9.3 Hz,1H),7.92-7.80(m,6H),7.79-7.64(m,4H),5.26-5.12(m,2H),4.22(d,J=6.5 Hz,3H),3.84(d,J=7.8 Hz,3H),3.73-3.64(m,7H),3.48(t,J=11.8 Hz,3H),2.56-2.48(m,2H),2.45-2.23(m,5H),2.18-2.09(m,2H),2.04-1.94 (m,3H),1.94-1.74(m,5H),1.55(d,J=6.3 Hz,6H),1.47-1.35(m,3H),1.29(br.s.,4H),1.03-0.84(m,3H),0.81-0.70(m,3H),0.63(t,J=13.6 Hz,3H),0.54(d,J=4.8 Hz,2H),0.38(d,J=5.3 Hz,2H),0.24-0.08(m,2H)。
實例QC-19
實例QC-19步驟a
根據Tetrahedon Letters, 2003 ,3203-3205中所述之程序，由(S)-5-側氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯製備呈非對映異構體混合物形式之上述酯。
實例QC-19步驟b
經10分鐘向實例QC-19步驟a之冷卻(-50℃)甲苯(45 mL)溶液中逐滴添加超氫化物(superhydride)(19.20 mL 1 M/THF，19.20 mmol)。添加許尼希鹼(Hunig's base，13.6 mL，78 mmol)且攪拌10分鐘；添加呈固體狀之DMAP(0.122 g，0.997 mmol)，攪拌15分鐘；且經15分鐘 逐滴添加三氟乙酸酐(2.98 mL，21.1 mmol)，移除冷卻浴，且繼續攪拌4小時，同時使其升溫至室溫。用水(50 mL)、飽和NaCl(30 mL)洗滌反應混合物，且真空濃縮有機相。以急驟層析(8-60% EtOAc/己烷)純化所得粗物質，得到呈黃色油狀之實例QC-19步驟b(2.85 g)。1H NMR(CDCl3,400 MHz)：6.36(s,0.5H),6.25(s,0.5H),4.70-4.57(m,1H),3.78(s,3H),2.96(m,1H),2.54(m,1H),1.70(s,3H),1.50(s,4.5H),1.44(s,4.5H)。
實例QC-19步驟c
實例QC-19步驟c.1 實例QC-19步驟c.2
經20分鐘將二乙基鋅(1.1 M於甲苯中，59.1 mL，65.0 mmol)逐滴添加至實例QC-19步驟b(5.23 g，21.7 mmol)之冷卻(-23℃)甲苯(60 mL)溶液中，且攪拌10分鐘。經10分鐘逐滴添加氯碘甲烷(9.44 mL，130 mmol)，且在-21℃下攪拌反應混合物16小時。將飽和NaHCO3(60 mL)添加至反應混合物中，移除冷卻浴，且攪拌混合物10分鐘。接著將其過濾，且用甲苯(50 mL)洗滌濾餅。分配濾液，且用Na2SO4乾燥有機層並真空濃縮。以急驟層析(2-10% EtOAc/己烷)純化所得粗物質，得到實例QC-19步驟c.1(第一溶離物；無色油狀物；2.88 g)及實例QC-19步驟c.2(第二溶離物；無色油狀物；1.01 g)。根據NOE研究獲得相對 立體化學分配。實例QC-19步驟c.1：1H NMR(CDCl3,400 MHz)：4.65-4.52(m,1H),3.72(s,3H),3.28-3.17(m,1H),2.44-2.32(m,1H),2.16-2.10(m,1H),1.51-1.42(兩個s,9H),1.24(s,3H),1.07(m,1H),0.69-0.60(m,1H)。實例QC-19步驟c.2：1H NMR(CDCl3,400 MHz)：4.0(m,1H),3.76(s,3H),3.32-3.16(m,1H),2.43(m,1H),2.01(m,1H),1.44(s,9H),1.35(s,3H),0.76-0.66(m,2H)。
實例QC-19步驟d
實例QC-19步驟d.1 實例QC-19步驟d.2
向實例QC-19步驟c.1(2.88 g，11.3 mmol)於乙醇(20 mL)中之溶液中添加LiOH(0.324 g，13.5 mmol)於水(10.00 mL)中之溶液，且在室溫下攪拌反應混合物6小時。真空移除大部分揮發性組分，且使殘餘物分配於水(20 mL)與乙醚(20 mL)之間。在冰-水浴中冷卻水層，用1 N HCl酸化至2之pH範圍且用EtOAc(30 mL，4X)萃取。用Na2SO4乾燥所合併之有機相且真空蒸發，得到呈黏稠固體狀之實例QC-19步驟d.1(2.55 g)。1H NMR(CDCl3,400 MHz)：4.64(m,1H),3.25(appt s,1H),2.70-2.40(m,1H),2.14(m,1H),1.54-1.44(m,9H),1.27(s,3H),1.10-0.80(m,1H),0.67(m,1H)。由實例QC-19步驟c.2以類似方式製備實例QC-19步驟d.2。1H NMR(CDCl3,400 MHz)：4.13(app br s,1H), 3.06(app br s,1H),2.55/2.41(重疊app br s,2H),1.51(s,9H),1.27(s,3H),0.76(app t,J=5.6 Hz,1H),0.60(app br s,1H)。
實例QC-19步驟e
向實例QC-19步驟d.2(1.09 g，4.52 mmol)及1,1'-(聯苯-4,4'-二基)雙(2-溴乙酮)(0.869 g，2.19 mmol)於乙腈(40 mL)中之懸浮液中添加DIEA(0.789 mL，4.52 mmol)，且在室溫下攪拌混合物4小時。真空移除揮發性組分且使殘餘物分配於EtOAc(70 mL)與水(50 mL)之間。用飽和NaHCO3(50 mL)洗滌有機層，用Na2SO4乾燥，真空蒸發且真空乾燥，得到呈白色泡沫狀之實例QC-19步驟e(1.54 g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5 ppm,400 MHz)：8.13(d,J=8.3 Hz,4H),7.99(d,J=8.5 Hz,4H),5.70-5.54(m,4H),4.17(m,2H),3.13-3.11(m,2H),2.58-2.46(m,2H),2.19(m,2H),1.42-1.37(兩個s,18H),1.24(s,6H),0.76-0.70(m,4H)。LC/MS：[M+Na]+ C40H48N2NaO10之分析計算值：739.32；實驗值：739.52。
實例QC-19步驟f
向含有實例QC-19步驟e(1.54 g，2.15 mmol)於二甲苯(40 mL)中之溶液的壓力管中添加乙酸銨(1.656 g，21.48 mmol)，且蓋上容器並在140℃下加熱5小時。真空移除揮發性組分且小心地使殘餘物分配於DCM(50 mL)與水(50 mL)之間，同時添加充足的飽和NaHCO3溶液，以便在分配結束時，水相為中性或鹼性。用Na2SO4乾燥有機層，真空蒸發且藉由急驟層析(10-100% EtOAc/己烷)純化所得粗物質，得到呈棕色固體狀之實例QC-19步驟f(0.65 g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5 ppm,400 MHz)：7.84-7.65(m,8H),7.55-7.54(m,1.7H),7.32-7.30(m,0.3H),4.60(m,2H),3.20(m,2H),2.48-2.43(m,2H),2.12(m,2H),1.45-1.07(m,24H),0.77(m,2H),0.69(m,2H)。LC/MS：[M+H]+ C40H49N6O4之分析計算值：677.38；實驗值：677.45。
實例QC-19步驟g
向實例QC-19步驟f(0.65 g，0.960 mmol)於二噁烷(5 mL)中之溶液中添加含4 N HCl之二噁烷(5.84 mL，192 mmol)，且在室溫下攪拌混合物6小時。真空移除揮發性組分且真空乾燥隔夜，得到呈棕色固體狀之實例QC-19步驟g之HCl鹽(0.6 g)。1H NMR(DMSO-d6,δ=2.5 ppm,400 MHz)：10.5-10(br s,~3.2H),7.99(br s,2H),7.95(d,J=8.5,4H),7.85(d,J=8.5 Hz,4H),4.76(m,2H),3.18(m,2H),2.61-2.46(m,4H；與溶劑信號重疊)，1.35(s,6H),1.30(m,2H),0.82(app br t,J=7.1,2H)。LC/MS：[M+H]+ C30H33N6之分析計算值：477.28；實驗值：477.22。
實例QC-19
將HATU(37.0 mg，0.097 mmol)添加至Cap 5.2(23.5 mg，0.096 mmol)及實例QC-19步驟g(30 mg，0.048 mmol)於DMF(2 mL)及IDEA(0.051 ml，0.294 mmol)中之經攪拌溶液中。在室溫下攪拌反應混合物2小時且真空濃縮。用MeOH稀釋殘餘物，過濾且藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18 OBD 30×100 mm 5 u；MeOH/水/TFA緩衝劑)純化，得到呈灰白色固體狀之實例QC-191之TFA鹽(31 mg)。LC/MS(條件1)：Rt=1.72 min；LC/MS：[M+H]+ C52H63N8O8之分析計算值927.48；實驗值927.05；HPLC(條件6)：Rt=26.32；100%均質性。1H NMR(500 MHz,CD3OD)δ 7.96-7.74(m,10H),5.02(t,J=8.5 Hz,2H),4.56(d,J=7.9 Hz,2H),3.82(d,J=10.7 Hz,2H),3.66(s,5H),3.60(d,J=3.4 Hz,2H),3.54-3.44(m,2H),2.77(dd,J=13.3,9.3 Hz,2H),2.32-2.15(m,4H),1.88(t,J=12.5 Hz, 2H),1.53(br.s.,4H),1.41(s,6H),1.11(d,J=11.9 Hz,2H),1.00(d,J=5.5 Hz,2H),0.95(d,J=5.5 Hz,2H),0.76(dt,J=10.8,5.5 Hz,2H),0.64-0.58(m,2H),0.52-0.45(m,2H),0.42-0.32(m,2H)。
實例1.1及1.2
根據關於實例QC-8.1所述之程序，由Cap 8.2製備實例1.1之TFA鹽。LC(條件1)：Rt=1.15 min；LC/MS：[M+H]+ C50H63N8O8之分析計算值903.48；實驗值：903.50；HRMS：[M+H]+ C50H63N8O8之分析計算值903.4763；實驗值：903.4755；1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 7.89(br.s.,8H),7.73(d,J=7.9 Hz,2H),5.02(t,J=8.5 Hz,2H),4.71-4.61(m,2H),4.11(t,J=8.7 Hz,2H),3.78-3.67(m,3H),3.55(s,6H),3.24(t,J=10.5 Hz,2H),2.36(br.s.,2H),2.30-2.06(m,4H),1.98(d,J=9.8 Hz,2H),1.89-1.72(m,3H),1.49(d,J=6.4 Hz,6H),1.23(d,J=5.8 Hz,1H),1.09(d,J=13.4 Hz,2H),0.68(dt,J=10.6,5.2 Hz,2H),0.56-0.40(m,4H),0.36-0.27(m,2H)。
根據關於實例QC-8.1所述之程序，藉由使用Cap 8.1製備實例1.2之TFA鹽。LC(條件1)：Rt=1.19 min；LC/MS：[M+H]+ C50H63N8O8之分析計算值903.48；實驗值： 903.50；1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 8.02-7.87(m,8H),7.71(d,J=8.5 Hz,2H),5.09-4.97(m,2H),4.62(t,J=6.7 Hz,2H),4.30(t,J=9.0 Hz,2H),3.56(s,6H),3.38(d,J=8.9 Hz,2H),3.17(dd,J=10.8,8.1 Hz,2H),2.36(br.s.,2H),2.29-2.08(m,4H),1.99(d,J=3.4 Hz,2H),1.86-1.75(m,3H),1.54(d,J=9.2 Hz,2H),1.47(d,J=6.7 Hz,6H),1.42(br.s.,2H),1.26(d,J=6.1 Hz,1H),0.68-0.59(m,2H),0.57-0.48(m,2H),0.45-0.31(m,4H)。
實例2.1至2.4
將HATU(24.38 mg，0.064 mmol)添加至4,4'-雙(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-聯苯，4 HCl(18.3 mg，0.031 mmol)及Cap 9.1(16.5 mg，0.064 mmol)於DMF(0.8 mL)及DIEA(0.037 mL，0.21 mmol)中之經攪拌溶液中。用氮氣沖洗反應物，密封且隨後在室溫下攪拌2小時。在氮氣流下部分濃縮反應物，且隨後藉由製備型HPLC(ACN/水及TFA緩衝劑)純化，得到呈灰白色固體狀之實例2.1之TFA鹽(23.1 mg)。LC-MS滯留時間2.205 min；½ m/z 466.55(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4 min之梯度時間、1 min之保持時間及5 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。
除非另作說明，否則以與關於實例2.1所述之程序類似的方式製備及表徵實例2.2至2.4之TFA鹽。
實例3.1至3.4
將HATU(22.8 mg，0.060 mmol)添加至4,4'-雙(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-聯苯，4 HCl(17.1 mg，0.029 mmol)及Cap 10.1(16.3 mg，0.060 mmol)於DMF(0.8 mL)及DIEA(0.035 mL，0.200 mmol)中之經攪拌澄清溶液中。用氮氣沖洗反應物，密封且隨後在室 溫下攪拌2小時。在氮氣流下部分濃縮反應物，且隨後藉由製備型HPLC(ACN/水及TFA緩衝劑)純化，得到呈白色固體狀之實例3.1之TFA鹽(23.4 mg)。LC-MS滯留時間2.425 min；½ m/z 480.55(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4 min之梯度時間、1 min之保持時間及5 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。1H NMR(400 MHz,MeOH-d4)δ 7.96-7.83(m,10H),5.32(t,J=8.4 Hz,2H),4.56(t,J=6.4 Hz,2H),4.34(d,J=8.3 Hz,2H),3.81-3.53(m,10H),2.70-2.59(m,2H),2.42-2.21(m,4H),2.12-1.91(m,6H),1.81-1.42(m,28H)。
除非另作說明，否則以與關於實例10.1所述之程序類似的方式製備及表徵實例3.2至3.4之TFA鹽。
實例4.1及4.2(兩種對稱非對映異構體)
向4,4'-雙(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-聯苯四鹽酸(0.134 g，0.224 mmol)、Cap-12(0.1034 g，0.519 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(0.313 mL，1.791 mmol)於DMF(1.5 mL)中之溶液中添加HATU(0.179 g，0.470 mmol)。在約25℃下攪拌反應物3.5小時。用MeOH(3.5 mL)稀釋反應物且藉由製備型HPLC(注射體積：2000 μL；梯度時間：15 min；起始% B：30，最終% B：100；流動速率：30 mL/min；停止時間：15 min；溶劑A：10% MeOH-90% H2O-0.1% TFA，溶劑B：90% MeOH-10% H2O-0.1% TFA；管柱：XTERRA 30×100 mm S5；由UV收集：220 nm)純化產物，得到非對映異構體之混合物。藉由製備型HPLC(注射體積：2000 μL；梯度時間：30 min；起始% B：10，最終% B：50；流動速率：30 mL/min；停止時間：30 min；溶劑A：10%乙腈-90% H2O-0.1% TFA，溶劑B：90%乙腈-10% H2O-0.1% TFA；管柱：Waters-SunFire 30×100 mm S5；由UV收集：220 nm)進一步分離非對映異構體之混合物以分離兩種對稱非對映異構體：呈灰白色泡沫狀之實例4.1(第一溶離物)(35.5 mg)。LC(條件1)：Rt=13.696 min。LC/MS：[M+H]+ C46H55N8O6之分析計算值815.42；實驗值815.49；呈灰白 色泡沫狀之實例4.2(最後的溶離物)(38.3 mg)。LC(條件1)：Rt=14.492 min。LC/MS：[M+H]+ C46H55N8O6之分析計算值815.42；實驗值815.49。
實例5.1及5.2(兩種對稱非對映異構體)
根據關於實例4.1反4.2所述之程序，由4,4'-雙(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-聯苯四鹽酸及Cap-11製備實例5.1及5.2。呈淡黃色泡沫狀之實例5.1(第一溶離物)(56.4 mg)：LC(條件1)：Rt=15.124 min。LC/MS：[M+H]+ C48H59N8O6之分析計算值843.46；實驗值843.40；及呈白色泡沫狀之實例5.2(最後的溶離物)(50.7 mg)。LC(條件1)：Rt=16.559 min。LC/MS：[M+H]+ C48H59N8O6之分析計算值843.46；實驗值843.40。
實例6
將HATU(173 mg，0.455 mmol)添加至4,4'-雙(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-聯苯，4 HCl(109 mg，0.182 mmol)及Cap 13.1(117 mg，0.455 mmol)於DMF(2.0 mL)及DIEA(0.222 mL，1.27 mmol)中之經攪拌澄清溶液中。用氮氣沖洗反應物，密封且隨後在室溫下攪拌隔夜。在氮氣流下部分濃縮反應物，且隨後藉由製備型HPLC(ACN/水及TFA緩衝劑)純化，得到呈灰白色固體狀之實例6之TFA鹽(135 mg)。LC-MS滯留時間2.196 min；m/z 931.7(MH+)。使用SPD-10AV UV-Vis偵測器在220 nM之偵測器波長下於配備有Phenomenex-Luna 3 u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC資料。溶離條件採用0.8 mL/min之流動速率、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4 min之梯度時間、1 min之保持時間及5 min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用LC之Micromass平台以電噴模式測定MS資料。1H NMR(400 MHz,MeOH-d4)δ 7.96(s,2H),7.88(s,8H),5.20(dd,J=10.7,7.2 Hz,2H),4.79(t,J=6.8 Hz,2H),4.31-4.24(m,2H),3.85-3.76(m,2H),3.74-3.69(m,2H),3.67(s,6H),2.91-2.83(m,2H),2.55(dt,J=12.8,6.7 Hz,2H),2.47-2.23(m,6H),2.00(dd,J=12.3,5.8 Hz,2H),1.79(d,J=12.3 Hz,2H),1.69-1.27(m,12H),1.15(dd,J=8.3,4.3 Hz,2H),0.47(td,J=8.5,3.9 Hz,2H),0.34-0.21(m,4H),-0.01-0.09(m,2H)。
實例7
以與關於實例6所述之程序類似的方式由Cap 13.2製備實例7之TFA鹽且加以表徵。LC-MS滯留時間2.208 min；m/z 931.7(MH+)。
實例8
實例8步驟a
向在冰-水浴中處於0℃下之(R)-5-(羥甲基)吡咯啶-2-酮(5 g，43.4 mmol)及三苯基膦(17.09 g，65.1 mmol)於乙腈(300 mL)中之懸浮液中逐滴添加四溴化碳(21.60 g，65.1 mmol)於乙腈(80 mL)中之溶液。懸浮液在1小時內逐漸變成澄清溶液且移除水浴，並在室溫下攪拌23小時。真空移除溶劑且將所得粗物質送至急驟層析(30-100% EtOAc/己烷，10-20% MeOH/EtOAc)，得到呈棕色油狀之實例8步驟a(6.3 g)。LC(條件II)：Rt=1.29 min；LC/MS：[M+H]+ C5H9BrNO之分析計算值：179.99；實驗值：178.11。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)δ 6.09(br.s.,1H),4.07-3.92(m,1H),3.46(dd,J=10.3,4.8 Hz,1H),3.36(dd,J=10.3,7.5 Hz,1H),2.55-2.30(m,3H),1.99-1.81(m,1H)。
實例8步驟b
當反應燒瓶用鋁箔蓋住時，藉由注射器向實例8步驟a(6.33 g，35.6 mmol)及氟化銀(I)(14.21 g，112 mmol)之混合物固體中緩慢添加乙腈(500 mL)。在室溫下攪拌反應混合物40小時。使其經由矽藻土(Celite®)過濾且真空移除溶劑。將所得粗物質送至急驟層析(50-100% EtOAc/Hex，EtOAc，10-20% MeOH/EtOAc)，得到呈無色油狀之實例8步驟b(1.96 g)。LC(條件II)：Rt=0.78 min；LC/MS：[M+H]+ C5H9FNO之分析計算值：118.07；實驗值：118.0。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)δ 6.07(br.s.,1H),4.51(dd,J=9.5,3.5 Hz,0.5H),4.43-4.31(m,1H),4.23(dd,J=9.5,7.3 Hz,0.5H),4.06-3.91(m,1H),2.48-2.34(m,2H),2.32-2.18(m,1H),1.84(m,1H)。
實例8步驟c
在冰-水浴中，在0℃下，在10分鐘內將二碳酸二第三丁酯(5.11 g，23.40 mmol)分三份添加至實例8步驟b(2.61 g， 22.28 mmol)及DMAP(0.109 g，0.891 mmol)於DCM(110 mL)中之溶液中。移除水浴且在室溫下將其攪拌20小時。添加50%飽和NaHCO3(30 mL)且攪拌10分鐘。分離有機層且用Na2SO4乾燥。真空蒸發溶劑，得到呈黃色油狀之粗產物。將所得粗物質送至急驟層析(0-80% EtOAc/己烷)，得到呈無色油狀之實例8步驟c(3.87 g)。LC(條件II)：Rt=2.64 min；LC/MS：[M+Na]+ C10H16FNNaO3之分析計算值：240.10；實驗值：240.14。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,500 MHz)δ 4.68(ddd,J=48.2,9.8,3.5 Hz,1H),4.50(ddd,J=45.7,9.8,2.5 Hz,1H),4.31(ddm,J=27.7,8.8 Hz,1H),2.69(dtd,J=17.7,9.8,1.9 Hz,1H),2.44(ddq,J=17.7,9.8,1.1 Hz,1H),2.20(m,1H),2.06(m,1H),1.51(s,9H)。
實例8步驟d
向在乾冰-丙酮浴中處於-78℃下之實例8步驟c(2.67 g，12.29 mmol)於THF(50 mL)中之溶液中逐滴添加超氫化物(14.75 mL，14.75 mmol)。在-78℃下攪拌反應混合物40分鐘。添加飽和NaHCO3水溶液(15 mL)且移除乾冰-丙酮浴，使溫度升至室溫。逐滴添加20滴50% H2O2且將其攪拌20分鐘。分離有機層且用乙醚(2×40 mL)萃取水層，用Na2SO4乾燥所合併之有機層，真空蒸發溶劑，得到呈澄清油狀之粗物質中間物(2.34 g)。將該粗物質中間物溶解於甲醇(30 mL)中且添加對甲苯磺酸單水合物(0.223 g，1.174 mmol)，將其在室溫下攪拌16小時。添加飽和NaHCO3水溶液(5 mL)，用乙醚(3×35 mL)萃取，用Na2SO4乾燥，真空蒸發，得到呈澄清油狀之粗產物。將所得粗物質送至急驟層析(0-40% EtOAc/己烷)，得到呈無色油狀之實例8步驟d(1.97 g)。LC(條件II)：Rt=3.43 min；LC/MS：[M+Na]+ C11H20FNNaO3之分析計算值：256.13；實驗值：256.19。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)δ 5.27-5.16(m,1H),4.59-4.26(m,2H),4.03(br.s.,1H),3.29(br.s.,3H),2.17-1.96(m,2H),1.96-1.85(m,1H),1.85-1.70(m,1H),1.55-1.39(m,9H)。
實例8步驟e
向在-78℃乾冰-丙酮浴中冷卻的實例8步驟d(1.97 g，8.44 mmol)於DCM(50 mL)中之溶液中添加氰化三甲基矽烷(1.698 mL，12.67 mmol)，隨後添加三氟化硼乙醚複合物(1.605 mL，12.67 mmol)。將其攪拌1小時。添加飽和NaHCO3(20 mL)且移除該浴，並在室溫下將其攪拌2小時。分離有機層且用DCM(40 mL×2)萃取，用Na2SO4乾燥，真空蒸發。將所得粗物質送至急驟層析(0-40%，40-55% EtOAc/己烷)，得到呈白色固體狀之第一溶離物實例8步驟e.1(反式；1.12 g)及第二溶離物實例8步驟e.2(順式；0.63 g)。LC(條件II)：Rt=3.04 min；LC/MS：[M+Na]+ C11H17FN2NaO2之分析計算值：251.12；實驗值：251.16。 1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)：d 4.67-4.44(m,3H),4.12-4.06(m,1H),2.32(br s,2H),2.18(br s,2H),1.52(s,9H)。
實例8步驟f
向8e-順式(0.51 g，2.234 mmol)於二噁烷(3 mL)中之溶液中添加HCl(12 M，3 mL，99 mmol)。將其加熱至80℃後維持8小時。真空蒸發溶劑且真空乾燥16小時，得到呈黃色固體狀之粗物質中間物(0.55 g)。將該粗物質中間物(0.55 g)溶解於THF(4 mL)中，添加NaOH(2 M，3.44 mL，6.89 mmol)及二碳酸二第三丁酯(0.719 g，3.30 mmol)且在室溫下將其攪拌17小時。真空蒸發溶劑且添加水(5 mL)及乙醚(5 mL)。分離水層且在冰-水浴中用10% HCl酸化至pH 3，用EtOAc(15 mL，3×)萃取且用Na2SO4乾燥，真空蒸發溶劑，得到呈黃色固體狀之實例8步驟f(0.50 g)。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)：δ 4.69-4.14(m,4H),2.29-2.07(m,4H),1.50-1.48(兩個s,9H)。
實例8
根據關於合成實例QC17.1所述之程序，藉由使用指定前 驅體及其他合適前驅體，將實例8步驟f精製為實例8。LC/MS：[M+H]+ C50H61F2N8O8之分析計算值：939.46；實驗值：939.77。在以下LC條件下：起始% B=10；最終% B=98；梯度時間=35 min；停止時間=35 min；流動速率=0.35 mL/min；波長=306 nm；溶劑A=水及0.05% TFA；溶劑B=乙腈及0.05% TFA；管柱=Waters Acquity BEH C18；1.7 um；150×2.1 mm ID；(在35℃下)Rt=15.99 min。
實例9.1
將HATU(44.8 mg，0.118 mmol)添加至4,4'-雙(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-聯苯鹽酸鹽(32 mg，0.054 mmol)及Cap 15.1(32 mg，0.12 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIEA(0.075 mL，0.43 mmol)中之溶液中，且在室溫下攪拌混合物2小時。經由製備型LC/MS在以下條件下純化粗反應混合物，得到實例9.1(24.1 mg)：管柱：Waters XBridge C18,19×200 mm,5-μm粒子；保護管柱：Waters XBridge C18,19×10 mm,5-μm粒子；移動相A：含20-mM乙酸銨之水；移動相B：含20-mM乙酸銨之95：5乙腈：水；梯度：經20 min 40-80% B，接著在100% B下保持5分鐘；流動速率：20 mL/min。合併含所需產物之 溶離份且經由離心蒸發乾燥。LC/MS滯留時間2.99 min；m/z=960[M+H]+。管柱：Waters BEH C18,2.0×50 mm,1.7-μm粒子；移動相A：含10 mM乙酸銨之5：95乙腈：水；移動相B：含10 mM乙酸銨之95：5乙腈：水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5 min，經4 min 0-100%，接著在100% B下保持0.5 min；流動速率：1 mL/min。
實例9.2
使用Cap 15.2(38 mg，0.14 mmol)作為起始物質，如上所述進行反應，得到實例9.2(20.8 mg)。LC/MS滯留時間2.99 min；m/z=960[M+H]+。管柱：Waters BEH C18,2.0×50 mm,1.7-μm粒子；移動相A：含10 mM乙酸銨之5：95乙腈：水；移動相B：含10 mM乙酸銨之95：5乙腈：水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5 min，經4 min 0-100% B，接著在100% B下保持0.5-min；流動速率：1 mL/min。
實例9.3
使用Cap 15.3(34 mg，0.13 mmol)作為起始物質，如上所述進行反應，得到實例9.3(39.7 mg)。LC/MS滯留時間3.01 min；m/z=960[M+H]+。管柱：Waters BEH C18,2.0×50 mm,1.7-μm粒子；移動相A：含10 mM乙酸銨之5：95乙腈：水；移動相B：含10 mM乙酸銨之95：5乙腈：水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5 min，經4 min 0-100% B，接著在100% B下保持0.5-min；流動速率：1 mL/min。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.89-7.40(m,12H),5.38-4.92(m,2H),4.69-4.60(m,2H),4.25-3.91(m,6H),3.55(s,6H),2.84-2.65(m,2H),2.30-2.20(m,2H),2.19-1.96(m,4H),1.95-1.87(m,2H),1.84-1.52(m,4H),1.60-1.24(m,8H),1.22-1.03(m,4H),0.99-0.81(m,6H),0.79-0.65(m,2H),0.45-0.28(m,4H),0.20-0.04(m,4H)。
實例9.4
使用Cap 15.4(34 mg，0.13 mmol)作為起始物質，如上所述進行反應，得到實例9.4(25.5 mg)。LC/MS滯留時間3.03 min；m/z=960[M+H]+。管柱：Waters BEH C18,2.0×50 mm,1.7-μm粒子；移動相A：含10 mM乙酸銨之5：95乙腈：水；移動相B：含10 mM乙酸銨之95：5乙腈：水； 溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5 min，經4 min 0-100% B，接著在100% B下保持0.5-min；流動速率：1 mL/min。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.10-7.64(m,12H),5.10-4.98(m,2H),4.69-4.54(m,2H),4.08-3.95(m,2H),3.79-3.69(m,2H),3.56(s,6H),2.97-2.72(m,4H),2.43-2.05(m,8H),1.90-1.79(m,2H),1.75-1.64(m,2H),1.49(d,J=5.8 Hz,6H),1.33-1.14(m,6H),1.09-0.81(m,8H),0.54-0.36(m,4H),0.24-0.66(m,2H),0.66-0.02(m,2H)。
實例10
實例10步驟a.1-a.2
根據以下兩個參考文獻中所述之程序製備該兩種酯：Madar,D.J.等人，J.Med.Chem., 2006,49,6416；Biellmann,J.等人，J.Org.Chem., 1992,57,2060)。
實例10步驟b
向實例10步驟a.1(3.05 g，19.9 mmol)及DMAP(0.122 g，0.996 mmol)於DCM(150 mL)中之懸浮液中添加二碳酸二第三丁酯(5.21 g，23.89 mmol)，且在室溫下攪拌反應混合物17小時。真空蒸發溶劑且對所得粗物質進行急驟層析(0-60% EtOAc/Hex)，得到呈無色油狀之實例10步驟b(3.26 g)。LC/MS：[M+Na]+ C13H19NNaO4之分析計算值：276.12；實驗值：276.02。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)δ 4.66-4.53(兩個br.s.,1H),4.34-4.22(m,1H),3.04(s,3H),2.35-2.12(m,5H),1.51-1.45(兩個br.S.,9H)。
實例10步驟c
向實例10步驟b(2.05 g，8.09 mmol)於乙醇(20 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰(0.233 g，9.71 mmol)於水(10 mL)中之溶液，在室溫下將其攪拌5小時。蒸發溶劑且添加乙醚(10 mL)及水(10 mL)，並添加1 N HCl至水層以將其pH值調節至2。用EtOAc(3×20 mL)萃取水相，用Na2SO4乾燥，真空蒸發，得到呈淡黃色油狀之實例10步驟c(1.65 g)。LC/MS：[M+Na]+ C12H17NNaO4之分析計算值：262.11；實驗值：262.02。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)δ 4.67-4.36(m,2H),2.54-2.13(m,5H),1.53(br.S,9H)。
實例10
根據關於合成實例QC17.1所述之程序，藉由使用指定及其他適當前驅體來精製實例10之實例10步驟c。LC(條件8)：Rt=2.98 min；LC/MS：[M+H]+ C52H63N8O8之分析計算值：927.48；實驗值：927.47。
實例10.1
根據關於實例10所述之程序，由實例10步驟a.2製備實例10.1。LC(條件8)：Rt=2.95 min；LC/MS：[M+H]+ C52H63N8O8之分析計算值：927.48；實驗值：927.47。
實例11
實例11步驟a
向順式-1-苯甲基吡咯啶-2,5-二甲酸二乙酯鹽酸鹽(根據J.Med.Chem., 2006,49,3068中所述之程序製備)(17.35 g，50.8 mmol)於乙醇(300 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(14.03 g，102 mmol)及氫氧化鈀/碳(20%)，將其用氮氣沖洗且隨後裝上氫氣球，並在室溫下攪拌6小時。在氫氣球下，添加二碳酸二第三丁酯(27.7 g，127 mmol)且在室溫下攪拌72小時。經由矽藻土過濾反應混合物且藉由甲醇洗滌。蒸發溶劑且使其分配於EtOAc(80 mL)與水(50 mL)之間，用EtOAc(20 mL，2×)萃取水層且用Na2SO4乾燥所合併之有機層。真空蒸發溶劑且對所得粗物質進行急驟層析(0-30% EtOAc/Hex)，得到呈無色油狀之實例11步驟a(13.3 g)。LC(條件8)：Rt=3.44 min；LC/MS：[M+Na]+ C15H25NNaO6之分析計算值：338.16；實驗值：338.11。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)δ 4.41(m,1H),4.30(m,1H),4.23(m,4H),2.24-2.12(m,4H),1.45(s,9H),1.30(m,6H)。
實例11步驟b
在0℃下經20分鐘向冰-水浴中之實例11步驟a(16.8 g，53.3 mmol)於乙醇(150 mL)中之溶液中逐滴添加氫氧化鉀 (2.99 g，53.3 mmol)於乙醇(100 mL)中之溶液。移除冰-水浴且在室溫下攪拌混合物23小時。蒸發溶劑，添加水(40 mL)，隨後添加1 N HCl以將pH值調節至8-9。用己烷(35 mL，2×)洗滌水層，藉由添加1 N HCl將其pH值調節至4-5範圍，且用EtOAc(70 mL×3)萃取。用Na2SO4乾燥所合併之有機層，且真空移除揮發性組分，得到呈無色油狀之實例11步驟b(8.45 g)。LC(條件8)：Rt=3.10 min；LC/MS：[M+Na]+ C13H21NNaO6之分析計算值：310.13；實驗值：310.10。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)δ 4.63-4.50,4.44-4.20(一組m,4H),2.49-2.27(m,2H),2.11-2.05(m,2H),1.48(兩個s,9H),1.38-1.30(m,3H)。
實例11步驟c
在0℃下經15分鐘向冰-水浴中之實例11步驟b(1.6 g，5.57 mmol)於THF(35 mL)中之溶液中逐滴添加硼烷-甲硫醚錯合物(2.78 mL，5.57 mmol)。在10分鐘攪拌後，移除冰-水浴且在室溫下將其攪拌5小時。添加甲醇(10 mL)且使其在室溫下再攪拌1小時。蒸發溶劑且使殘餘物分配於EtOAc(80 mL)與水(50 mL)之間。分離有機層，用Na2SO4乾燥，真空蒸發揮發性組分。將所得粗物質送至急驟層析(0-35% EtOAc/Hex)，得到呈無色油狀之實例11步驟c(0.91 g)。藉由對掌性SFC(管柱IC-2×15 cm；15% i-PrOH/0.1% 二乙胺/CO2)分離兩種對映異構體：峰值1(402 mg)及峰值2(414 mg)。LC(條件8)：Rt=3.01 min；LC/MS：[M+Na]+ C13H23NNaO5之分析計算值：296.15；實驗值：296.10。
實例11步驟d
向實例11步驟c(峰值1，402 mg，1.471 mmol)於乙醇(4 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰(42.3 mg，1.765 mmol)於水(2 mL)中之溶液，且在室溫下攪拌混合物5小時。濃縮混合物，用水(10 mL)稀釋且用EtOAc(10 mL)洗滌。用冰-水浴冷卻水層，添加1 N HCl以將其pH值調節至約為2，且將其用EtOAc(3×30 mL)萃取。用Na2SO4乾燥所合併之有機層，且真空蒸發揮發性組分，得到呈黃色固體狀之實例11步驟d(0.29 g)。LC/MS：[M+Na]+ C11H19NNaO5之分析計算值：268.12；實驗值：268.126。1H NMR(CDCl3,δ=7.26 ppm,400 MHz)δ 4.45-4.40,4.17-4.03,3.68-3.58(一組m,4H),2.27-1.95(m,4H),1.47(br.s,9H)。
實例11
根據關於合成實例QC17.1所述之程序，藉由使用指定中間物及其他適當前驅體來精製實例11之實例11步驟d。在以下LC條件下：起始%B=10；最終%B=98；梯度時間=35 min；停止時間=35 min；流動速率=0.35 mL/min；波長=306 nm；溶劑A=含0.05% TFA之水；溶劑B=含0.05% TFA之乙腈；管柱=Waters Acquity BEH C18；1.7 μm；150×2.1 mm ID；(在35℃下)Rt=15.99 min。LC/MS：[M+H]+ C50H61F2N8O8之分析計算值：939.46；實驗值：939.77。
實例11.1
根據關於實例11所述之程序，由實例11步驟c(峰值2)製備實例11.1。在以下LC條件下：起始%B=10；最終%B=98；梯度時間=35 min；停止時間=35 min；流動速率=0.35 mL/min；波長=306 nm；溶劑A=含0.05% TFA之水；溶劑B=含0.05% TFA之乙腈；管柱=Waters Acquity BEH C18；1.7 μm；150×2.1 mm ID；(在35℃下)Rt=12.51 min。LC/MS：[M+H]+ C50H67N8O10之分析計算值：940.11；實驗值：939.88。
實例12.1及12.2 (關於未指定立體對稱中心之兩種對稱的非對映異構體)
向4,4'-雙(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-聯苯(4HCl；0.100 g，0.167 mmol)、Cap 18(0.094 g，0.418 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(0.233 mL，1.337 mmol)於DMF(2 mL)中之溶液中添加HATU(0.140 g，0.368 mmol)。在室溫下攪拌反應物4小時。用MeOH(6 mL)稀釋反應物且藉由逆相製備型HPLC(XTERRA 30×100 mm S5；MeOH/水/TFA)純化產物，得到作為三種非對映異構體之混合物的淡黃色固體(110 mg)。藉由製備型對掌性SFC[管柱：ChiralCel OJ-H,30×250 mm,5 μm；移動相：20% EtOH(w/0.2% DEA)/80% CO2；壓力：120巴；溫度：35℃；流動速率70 mL/min；UV：320 nm]進一步純化樣品，得到三種非對映異構體。為移除少量污染物，藉由製備型HPLC(Waters-Sunfire 30×100 mm S5；乙腈/水/TFA)進一步單獨純化出兩種對稱的非對映異構體。實例12.1(黃色固體；11.0 mg)：LC(條件8)：Rt=3.05 min；LC/MS：[M+H]+ C48H53N10O6之分析計算值：865.41；實驗值：865.60。實例12.2(黃色固體；7.6 mg)：LC(條件8)：Rt=3.01 min；LC/MS：[M+H]+ C48H53N10O6之分析計算值865.41；實驗值865.73。
實例13
向4,4'-雙(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-聯苯(4HCl；0.05 g，0.084 mmol)、Cap 16(0.042 g，0.184 mmol)及N,N-二異丙基乙基胺(0.117 mL，0.668 mmol)於DMF(2 mL)中之溶液中添加HATU(0.067 g，0.175 mmol)。在約25℃下攪拌反應物4小時。用MeOH(6 mL)稀釋反應物且藉由製備型HPLC(Xbridge C18,30×100 mm 5 μm；乙腈/水/乙酸銨)隨後第二逆相HPLC(Waters XBridge C18,19×200 mm,5 μm；乙腈/水/乙酸銨)純化產物，得到呈白色固體狀之實例13(11.4 mg)：LC(條件8)：Rt=2.78 min；LC/MS：[M+H]+ C48H59N8O8之分析計算值875.45；實驗值875.72。
實例JLR-1.0
實例JLR-1.0步驟a
在-78℃下，經10分鐘時間向經氮氣淨化的(S)-5-側氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯(15 g，61.7 mmol)於THF(225 mL)中之溶液中添加雙(三甲基矽烷基)胺基鋰(61.7 mL，61.7 mmol)於THF中之1 M溶液。攪拌反應物1小時，隨後在相同溫度下添加3-溴丙-1-烯(5.22 mL，61.7 mmol)，且攪拌反應物1.5小時，隨後移除冷浴並在室溫下攪拌18小時。用稀乙酸(12 mL於50 mL水中)淬滅反應物且濃縮以移除THF。將殘餘物溶解於EtOAc中且用水、鹽水洗滌並乾燥(Na2SO4)。
將粗產物溶解於最小體積之10% EtOAc/Hex中且裝載於300 g湯姆遜矽膠柱。用超過3 L的10-80% EtOAc/己烷進行梯度溶離。注意：將純溶離份擱置在一旁，且合併混合溶離份並再次經受層析。第一溶離帶為(S)-4,4-二烯丙基-5-側氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯(4.63 g)，隨後為單烷基化反式產物(3.56 g)且接著為單烷基化順式產物(2.0 g)。反式產物：1H NMR(500MHz,MeOD)δ 5.79(ddt,J=17.1,10.0,7.1 Hz,1H),5.20-5.05(m,2H),4.66(dd,J=9.8,1.9 Hz,1H),3.81(s,3H),2.76(dtd,J=11.3,8.8,4.4 Hz,1H),2.57(dddt,J=14.3,6.7,4.4,1.3 Hz,1H),2.29-2.17(m,2H),2.16-2.06(m,1H),1.49(s,9H)。雙烷基化產物：1H NMR(CDCl3；500 MHz)：δ 5.81-5.70(m,2H),5.19- 5.07(連續的m,4H),4.56(dd,J=9.9,5.6 Hz,1H),3.79(s,3H),2.40-2.34(m,3H),2.30-2.25(m,2H),1.94(dd,J=13.7,5.6 Hz,1H),1.49(s,9H)。
實例JLR-1.0步驟b
將Grubbs I催化劑(0.117 g，0.417 mmol)添加至經氮氣淨化的(S)-4,4-二烯丙基-5-側氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯(2.7 g，8.35 mmol)於二氯甲烷(130 mL)中之溶液中且在24℃下攪拌18小時。將反應混合物部分濃縮(約1/5體積)且裝載於160 g湯姆遜矽膠柱。用超過2 L的5-75% EtOAc/己烷進行梯度溶離，得到(S)-1-側氧基-2-氮雜螺[4.4]壬-7-烯-2,3-二甲酸2-第三丁酯3-甲酯(1.98 g)。1H NMR(CDCl3,500 MHz)：δ 5.67-5.65(m,1H),5.61-5.59(m,1H),4.68(dd,J=9.3,4.0 Hz,1H),3.81(s,3H),2.88(dt,J=16.8,2.3 Hz 1H),2.77(dt,J=16.6,2.3 Hz 1H),2.44-2.29(連續的m,3H),2.12(dd,J=13.2,4.0 Hz 1H),1.50(s,9H)。
實例JLR-1.0步驟c
在-78℃下，將超氫化物(7.7 mL，7.72 mmol)於THF中之1 M溶液逐滴添加至經氮氣淨化的(S)-1-側氧基-2-氮雜 [4.4]壬-7-烯-2,3-二甲酸2-第三丁酯3-甲酯(1.9 g，6.43 mmol)於THF(40 mL)中之溶液中且攪拌1小時。反應混合物經1小時升溫至0℃，再冷卻至-78℃且在-78℃下，在攪拌下再添加6 mL超氫化物持續1小時，隨後置放於冷凍機中在-5℃下靜置18小時。在冷的時用飽和NaHCO3溶液(16 mL)淬滅反應混合物，且保持在0℃，並添加30%過氧化氫溶液(1.8 mL)。在相同溫度下攪拌反應物20分鐘，隨後藉由旋轉蒸發移除溶劑。用DCM(3×60 mL)萃取殘餘物，且用水洗滌所合併之有機層並乾燥(Na2SO4)。縮減溶劑達至35 mL體積，添加三乙基矽烷(1.1 mL，6.76 mmol)，且冷卻反應物至-78℃。在氮氣下添加醚合三氟化硼(0.98 mL，7.72 mmol)，且30分鐘後，再添加三乙基矽烷(1.1 mL，6.76 mmol)且再添加醚合三氟化硼(0.98 mL，7.72 mmol)。攪拌反應混合物2小時，用飽和NaHCO3溶液(10 mL)淬滅，用DCM(3×60 mL)萃取，且乾燥(Na2SO4)有機層。將粗產物裝載(DCM)於160 g湯姆遜矽膠柱且用超過2 L的5-50% EtOAc/己烷進行梯度溶離，得到(S)-2-氮雜螺[4.4]壬-7-烯-2,3-二甲酸2-第三丁酯3-甲酯(1.44 g)。1H NMR(MeOD,500 MHz)：δ 5.70-5.67(m,2H),4.30(t,J=7.9 Hz,1H),3.76(s,3H),3.47-3.44(m,1H),3.38-3.31(m,1H),2.48-2.29(連續的m,5H),1.98-1.93(m,1H),1.47/1.42(s,9H)。
實例JLR-1.0步驟d
將鈀/碳(10%，182 mg)添加至經氮氣淨化的(S)-2-氮雜螺[4.4]壬-7-烯-2,3-二甲酸2-第三丁酯3-甲酯(480 mg，1.71 mmol)於EtOAc(50 mL)中之溶液中，且用氫氣(氣球)沖洗反應混合物並攪拌18小時。藉由經矽藻土過濾移除催化劑，且藉由旋轉蒸發濃縮來移除溶劑。將殘餘物溶解於苯中且藉由旋轉蒸發(2×)濃縮以確保移除EtOAc。獲得(S)-2-氮雜螺[4.4]壬-2,3-二甲酸2-第三丁酯3-甲酯(472 mg)，其無需進一步純化即可使用。出於表徵之目的，將樣品(25 mg)裝載於12 g湯姆遜矽膠柱且用超過1.5 L的15-100% EtAOc/己烷進行梯度溶離。1H NMR(MeOD,500 MHz)：δ 4.29-4.25(m,1H),3.75(s,3H),3.37-3.35(m,1H),3.29-3.24(m,1H),2.24-2.20(m,1H),1.91-1.84(m,1H),1.72-1.66(m,5H),1.57-1.54(m,3H),1.47/1.42(s,9H)。
實例JLR-1.0步驟e
向(S)-2-氮雜螺[4.4]壬-2,3-二甲酸2-第三丁酯3-甲酯(445 mg，1.57 mmol)於MeOH(3.5 mL)/水(1 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰單水合物(99 mg，2.356 mmol)。攪拌反應混合物18小時，隨後濃縮，用水(20 mL)稀釋且用Et2O洗滌。 用2.5 mL 1 N HCl酸化水層，用EtOAc萃取，且用鹽水洗滌有機層並乾燥(MgSO4)，得到該化合物(338 mg)，其無需進一步純化即可使用。1H NMR(MeOD,500 MHz)：δ 4.26-4.19(m,1H),3.37-3.35(m,1H),3.29-3.25(m,1H),2.25-2.21(m,1H),1.93-1.89(m,1H),1.72-1.67(m,5H),1.59-1.55(m,3H),1.48/1.44(s,9H)。LC/MS：[M-H]- C39H49N2O10之分析計算值：705.35；實驗值705.30。
實例JLR-1.0步驟f
將許尼希鹼(0.21 mL，1.23 mmol)添加至(S)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜螺[4.4]壬-3-甲酸(330 mg，1.23 mmol)及1,1'-([1,1'-聯苯]-4,4'-二基)雙(2-溴乙酮)(243 mg，0.613 mmol)於乙腈(6 mL)中之溶液中且在24℃下攪拌18小時。藉由旋轉蒸發移除溶劑且將殘餘物溶解於EtOAc中，用飽和NaHCO3溶液、鹽水洗滌並乾燥(Na2SO4)。將粗產物裝載(DCM)於25 g湯姆遜矽膠柱且用超過1 L的15-100% EtOAc/己烷進行梯度溶離，得到二酯中間物(387 mg)，將二酯中間物溶解於二甲苯(7 mL)中且置放於有螺旋蓋的玻璃壓力容器中。添加NH4OAc(579 mg，0.5 mmol)，且在140℃下加熱密封容器3小時。將反應混合物冷卻至室溫， 用EtOAc(40 mL)稀釋，用飽和NaHCO3、鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)。將粗產物裝載(DCM)於25 g湯姆遜矽膠柱，且用超過1 L的15-100% EtOAc/DCM進行梯度溶離，得到雙咪唑產物(170 mg)。1H NMR(MeOD,500 MHz)：δ 7.78(d,J=8.1 Hz,4H),7.69(d,J=8.1 Hz,4H),7.39(s,2H),4.12(q,J=7.2 Hz,2H),3.51(br s,4H),2.28-2.24(m,2H),2.13-2.08(m,2H),1.77-1.48(連續的m,16H),1.24(s,18H)。HPLC：條件10，Rt=1.0 min；[M+H]+ C44H57N6O4之分析計算值：733.47；實驗值733.40。
實例JLR-1.0步驟g
向JLR-1.0步驟f(150 mg，0.20 mmol)於MeOH(5 mL)中之溶液中添加4 N HCl之二噁烷溶液(10 mL)，且在室溫下攪拌反應混合物5小時。真空移除揮發性組分，且將殘餘物暴露於室內真空18小時。(LC/MS：條件2，Rt=1.78 min；[M+H]+ C34H41N6之分析計算值：533.34；實驗值533.36。
實例JLR-1.0
將HATU(74.9 mg，0.197 mmol)添加至JLR-1.0步驟g(四鹽酸鹽；50 mg，0.094 mmol)、(S)-2-((2R,6R)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙酸(48.3 mg， 0.197 mmol)及許尼希鹼(0.154 mL，0.939 mmol)於DMF(5 mL)中之溶液中且攪拌5小時。在phenonmenex-Luna管柱(30×100 mm S10；MeOH/水/TFA)上對反應混合物進行製備型HPLC，得到呈黃色固體狀之實例JLR-1.0(46 mg)之TFA鹽。UPLC(條件10)：Rt=0.9 min；[M+H]+ C56H75N8O8之分析計算值987.57；實驗值987.65。1H NMR(500 MHz,MeOD)δ 7.97(s,2H),7.88(s,8H),5.21(dd,,J=10.8,7.3 Hz 2H),4.22-4.18(m,4H),4.13(d,J=8.8 Hz,2H),3.67(s,6H),3.37-3.29(m,4H),2.46-2.42(m,2H),2.29(t,J=11.4 Hz,2H),2.20-2.16(m,2H),1.85-1.72(m,14H),1.61-1.41(m,6H),1.22(d,J=6.9 Hz,6H),1.22-1.9(m,2H),1.02(d,J=6.1 Hz,6H),0.96(q,J=11.4 Hz,2H)。
實例JLR-2.0
實例JLR-2.0步驟a
將1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(4.9 g，33.5 mmol)緩慢添 加至經特殊塗佈之玻璃器皿中10 N氫氧化鈉(14 mL，100 mmol)於乙醚(30 mL)及水(20 mL)中之溶液中且在0℃下攪拌15分鐘。在0℃下，將所得溶液傾析至經特殊塗佈之分液漏斗中且將乙醚層逐滴添加至實例JLR-1.0步驟a之單烷基化反式產物(790 mg，2.79 mmol)及Pd(OAc)2(43.8 mg，0.195 mmol)於THF(25 mL)中之溶液中。攪拌反應物45分鐘，隨後升溫至室溫，繼續攪拌2小時。藉由經矽藻土過濾來移除催化劑且濃縮濾液。將粗產物裝載(DCM)於110 g湯姆遜矽膠柱上且用超過2 L的5-60% EtOAc/己烷進行梯度溶離，得到環丙基加合物(486 mg)。
實例JLR-2.0步驟b
在-78℃下，將超氫化物(3 mL，2.89 mmol)於THF中之1 M溶液逐滴添加至經氮氣淨化的(2S,4R)-4-(環丙基甲基)-5-側氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯(383 mg，1.3 mmol)於THF(15 mL)中之溶液中且攪拌45分鐘。在冷的時用飽和NaHCO3溶液(18 mL)淬滅反應混合物，升溫至0℃，且添加30%過氧化氫溶液(0.8 mL)，並在相同溫度下攪拌反應物20分鐘，隨後藉由旋轉蒸發移除溶劑。用DCM(3×20 mL)萃取殘餘物，且用水洗滌所合併之有機層並乾燥(Na2SO4)。縮減溶劑達至15 mL體積，添加三乙基矽烷(315 mg，2.71 mmol)，且冷卻反應物至-78℃。在氮 氣下添加醚合三氟化硼(402 mg，2.83 mmol)，且30分鐘後，如上所述再添加三乙基矽烷且再添加醚合三氟化硼。攪拌反應混合物2小時，用飽和NaHCO3溶液(8 mL)淬滅，用DCM(3×20 mL)萃取，且乾燥(Na2SO4)有機層。將粗產物裝載(DCM)於90 g湯姆遜矽膠柱且用超過2 L的5-60% EtOAc/己烷進行梯度溶離，得到(2S,4R)-4-(環丙基甲基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯(242 mg)。1H NMR(MeOD,500 MHz)：δ 4.33-4.29(m,1H),3.75(s,3H),3.72-3.68(m,1H),3.07-3.02(m,1H),2.42-2.38(m,1H),2.16-2.11(m,1H),2.01-1.92(m,3H),1.48/1.42(s,9H),1.32-1.28(m,2H),0.71-0.67(m,1H),0.48-0.45(m,2H)。
實例JLR-2.0步驟c
向(2S,4R)-4-(環丙基甲基)吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯2-甲酯(242 mg，0.85 mmol)於MeOH(2 mL)/水(0.5 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰單水合物(53 mg，1.28 mmol)。攪拌反應混合物18小時，隨後濃縮，用水(10 mL)稀釋且用Et2O洗滌。用2 mL 1 N HCl酸化水層，用EtOAc萃取，且用鹽水洗滌有機層並乾燥(MgSO4)，得到該酸(212 mg)，其無需進一步純化即可使用。
實例JLR-2.0步驟d
將許尼希鹼(0.14 mL，0.79 mmol)添加至(2S,4R)-1-(第三丁氧羰基)-4-(環丙基甲基)吡咯啶-2-甲酸(212 mg，0.79 mmol)及1,1'-([1,1'-聯苯]-4,4'-二基)雙(2-溴乙酮)(156 mg，0.395 mmol)於乙腈(4 mL)中之溶液中且在24℃下攪拌18小時。藉由旋轉蒸發移除溶劑且將殘餘物溶解於EtOAc中，用飽和NaHCO3溶液、鹽水洗滌並乾燥(Na2SO4)。將粗產物裝載(DCM)於25 g湯姆遜矽膠柱上且用超過1 L的15-100% EtOAc/己烷進行梯度溶離，得到雙酮酯中間物(225 mg)，將雙酮酯中間物溶解於二甲苯(7 mL)中且置放於有螺旋蓋的玻璃壓力容器中。添加NH4OAc(224 mg，2.91 mmol)，且密封容器並在140℃下加熱反應混合物。在攪拌3小時，將反應混合物冷卻至室溫，用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3、鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)。將粗產物裝載(DCM)於25 g湯姆遜矽膠柱，且用超過1 L的5-100% EtOAc/己烷進行梯度溶離，得到雙咪唑產物(144 mg)。1H NMR(MeOD,500 MHz)：δ 7.78(br s,4H),7.69(d,J=7.9 Hz,4H),7.35(m,2H),7.39(s,2H),5.07-5.01(m,2H),3.94-3.87(m,2H),3.17-3.13(m,2H),2.54(br s,2H),2.27-2.07(m,4H),1.5/1.3(s,18H),1.38-1.36(m,4H),0.74-0.73(m,2H),0.49-0.47(m,4H),0.09(br s,4H)。UPLC：條件10，Rt=1.0 min；[M+H]+ C44H57N6O4之分析計算值：733.47； 實驗值733.45。
實例JLR-2.0步驟e
向JLR-2.0步驟d(138 mg，0.188 mmol)於MeOH(3 mL)中之溶液中添加4N HCl之二噁烷溶液(7 mL)，且在室溫下攪拌反應混合物6小時。真空移除揮發性組分，且將殘餘物暴露於室內真空18小時。1H LC/MS：條件10，Rt=0.8 min；[M+H]+ C34H41N6之分析計算值：533.34；實驗值533.30。
實例JLR-2.0
將HATU(86 mg，0.225 mmol)添加至JLR-2.0步驟e(四鹽酸鹽；60 mg，0.113 mmol)、(S)-2-((2R,6R)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙酸(55.2 mg，0.225 mmol)及許尼希鹼(0.2 mL，1.1 mmol)於DMF(3 mL)中之溶液中且攪拌3小時。在phenonmenex-Luna管柱(30×100 mm S10；MeOH/水/TFA)上對反應混合物進行逆相製備型HPLC，得到呈白色固體狀之實例JLR-2.0之TFA鹽(52 mg)。UPLC(條件10)：Rt=0.92 min；[M+H]+ C56H75N8O8之分析計算值987.57；實驗值987.60。1H NMR(500 MHz,MeOD)δ 7.94(s,2H),7.91-7.88(m,8H),5.37(dd,,J=8.6,5.2 Hz 2H),4.26-4.21(m,4H),4.13-4.09(m,2H),3.76- 3.72(m,4H),3.69(s,6H),3.37-3.29(m,4H),2.46-2.42(m,2H),2.79-2.74(m,2H),2.40-2.26(m,2H),1.61-1.58(m,2H),1.51-1.35(連續的m,4H),1.24(d,J=6.8 Hz,6H),1.08(d,J=6.3 Hz,6H),1.04(q,J=11.6 Hz,2H),0.83-0.78(m,2H),0.55-0.50(m,4H),0.16-0.13(m,4H)。
實例JLR-3.0
將HATU(72 mg，0.188 mmol)添加至Cap 17.1(49 mg，0.184 mmol)、4,4'-雙(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-聯苯(四鹽酸鹽；55 mg，0.092 mmol)及許尼希鹼(0.16 mL，0.92 mmol)於DMF(5.5 mL)中之溶液中且攪拌4小時。在phenonmenex-Luna管柱(30×100 mm S10；MeOH/水/TFA)上對反應混合物進行逆相製備型HPLC，得到呈白色固體狀之實例JLR-3.0之TFA鹽(36 mg)。UPLC(條件10)：Rt=0.90 min；[M+H]+ C54H71N8O8之分析計算值959.64；實驗值959.50。1H NMR(500 MHz,MeOD)δ 7.90(s,2H),7.89-7.78(m,8H),5.20(dd,,J=10.7,7.2 Hz,2H),4.73-4.67(m,4H),4.04-4.00(m,2H),3.70(s,6H),3.64-3.60(m,4H),2.58-2.52(m,2H),2.46-2.23(m,6H),2.02-1.99(m,2H),1.81-1.67(m,6H),1.57(d,J=6.6 Hz,6H),1.53-1.38(m,8H),1.25-1.21(m,2H),1.09(d,J=6.1 Hz,6H)。
實例JLR-3.1
實例JLR-3.1
將HATU(78 mg，0.21 mmol)添加至Cap 17.2(54 mg，0.20 mmol)、4,4'-雙(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-1,1'-聯苯(四鹽酸鹽；60 mg，0.092 mmol)及許尼希鹼(0.17 mL，1.0 mmol)於DMF(6 mL)中之溶液中且攪拌4小時。對反應混合物進行逆相製備型HPLC(phenonmenex-Luna管柱(30×100 mm S10)，MeOH/水/TFA)，得到呈白色固體狀之實例JLR-3.1之TFA鹽(48 mg)。UPLC(條件10)：Rt=0.88 min；[M+H]+ C54H71N8O8之分析計算值959.64；實驗值959.50。1H NMR(500 MHz,MeOD)δ 7.94(s,2H),7.88(s,8H),5.18(dd,J=10.9,7.2 Hz,2H),4.98-4.92(m,2H),4.28-4.21(m,2H),3.83-3.82(m,2H),3.68(s,6H),3.27-3.23(m,2H),2.58-2.52(m,2H),2.46-2.37(m,2H),2.23-2.27(m,4H),2.03-1.97(m,4H),1.87-1.76(m,6H),1.72-1.61(m,8H),1.58(d,J=6.7 Hz,6H),1.30-1.11(m,4H),1.09(d,J=6.1 Hz,6H)。
生物活性
在本發明中利用HCV複製子檢測，且該檢測係如共同擁有之PCT/US2006/022197及O'Boyle等人。Antimicrob Agents Chemother. 2005年4月；49(4)：1346-53中所述加以準備、進行及驗證。亦如所述(Apath.com)已使用併入螢光素酶報導體之檢測方法。
使用HCV-neo複製子細胞及在NS5A區域內含有抗性取代之複製子細胞來測試目前所述家族之化合物。相比於針對野生型細胞之相應抑制性效能，該等化合物經測定對於含有突變之細胞的抑制活性具有不同程度之減小。因此，本發明之化合物可有效抑制HCV NS5A蛋白質之功能且被理解為如先前申請案PCT/US2006/022197及共同擁有的WO/04014852中所述呈組合時有效。應瞭解，本發明之化合物可抑制HCV之多個基因型。表2展示本發明之代表性化合物針對HCV 1b基因型之EC50(50%有效抑制濃度)值。
本發明化合物抑制HCV之機制可為除了NS5A抑制以外附加之機制或為NS5A抑制以外之不同機制。在一個實施例中，本發明之化合物抑制HCV複製子，且在另一實施例中，本發明之化合物抑制NS5A。本發明之化合物可抑制HCV之多個基因型。針對HCV 1b之EC50範圍如下：A(900.01 pM-0.7 μM)；B(100.01 pM-900 pM)；C(5.01 pM-100 pM)；D(0.5 pM-5 pM)。
熟習此項技術者將顯而易知，本發明並不限於上述說明性實例，且其可在不背離其基本屬性之情況下以其他特定形式來實施。因此，適宜地，該等實例自各個方面而言皆應視為說明性而非限制性的，參考係針對隨附申請專利範圍而非上述實例而進行，且因此本發明意欲涵蓋在申請專利範圍之等效性意義及範圍內之所有變化。

Claims (16)

  1. 一種化合物，其係選自：((R,S,R,1S,1'S)-((2S,2'S,5S,5'S)-5,5'-(5,5'-([1,1'-聯苯]-4,4'-二基)雙(1H-咪唑-5,2-二基))雙(2-甲基吡咯啶-5,1-二基))雙(1-((2R,4R,6S)-2-環丙基-6-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-側氧基乙-2,1-二基))二胺基甲酸二甲酯；((S,R,R,1S,1'S)-((2S,2'S,5S,5'S)-5,5'-(5,5'-([1,1'-聯苯]-4,4'-二基)雙(1H-咪唑-5,2-二基))雙(2-甲基吡咯啶-5,1-二基))雙(1-((2S,4R,6R)-2-環丙基-6-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-側氧基乙-2,1-二基))二胺基甲酸二甲酯；((S,R,S,1S,1'S)-((2S,2'S,5S,5'S)-5,5'-(5,5'-([1,1'-聯苯]-4,4'-二基)雙(1H-咪唑-5,2-二基))雙(2-甲基吡咯啶-5,1-二基))雙(1-((2R,4S,6S)-2-環丙基-6-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-側氧基乙-2,1-二基))二胺基甲酸二甲酯；(4,4'-聯苯二基雙(1H-咪唑-4,2-二基((2S,5S)-5-甲基-2,1-吡咯啶二基)(1-(3-氰基-3-甲基亞環丁基)-2-側氧基-2,1-乙二基)))二胺基甲酸二甲酯；及(4,4'-聯苯二基雙(1H-咪唑-4,2-二基((2S,5S)-5-甲基-2,1-吡咯啶二基)(1-(3-氰基-3-甲基亞環丁基)-2-側氧基-2,1-乙二基)))二胺基甲酸二甲酯；或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 一種化合物，其係選自：(4,4'-聯苯二基雙(1H-咪唑-5,2-二基((2S,5R)-5-乙炔基-2,1-吡咯啶二基)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-二甲基四氫-2H-哌 喃-4-基)-2-側氧基-2,1-乙二基)))二胺基甲酸二甲酯；(4,4'-聯苯二基雙(1H-咪唑-4,2-二基((2S,5S)-5-乙炔基-2,1-吡咯啶二基)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-側氧基-2,1-乙二基)))二胺基甲酸二甲酯；(4,4'-聯苯二基雙(1H-咪唑-4,2-二基((2S,5R)-5-(羥甲基)-2,1-吡咯啶二基)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-側氧基-2,1-乙二基)))二胺基甲酸二甲酯；(4,4'-聯苯二基雙(1H-咪唑-4,2-二基((2S,5R)-5-(羥甲基)-2,1-吡咯啶二基)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-側氧基-2,1-乙二基)))二胺基甲酸二甲酯；(4,4'-聯苯二基雙(1H-咪唑-4,2-二基(3S)-2-氮雜螺[4.4]壬-3,2-二基((1S)-1-((2R,6R)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-側氧基-2,1-乙二基)))二胺基甲酸二甲酯；及(4,4'-聯苯二基雙(1H-咪唑-4,2-二基((2S,4R)-4-(環丙基甲基)-2,1-吡咯啶二基)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-側氧基-2,1-乙二基)))二胺基甲酸二甲酯；或其醫藥學上可接受之鹽。
  3. 一種化合物，其係選自：(4,4'-聯苯二基雙(1H-咪唑-5,2-二基((2S,5S)-5-甲基-2,1-吡咯啶二基)((1S)-1-(2-氧雜螺[3.3]庚-6-基)-2-側氧基-2,1-乙二基)))二胺基甲酸二甲酯； (4,4'-聯苯二基雙(1H-咪唑-4,2-二基((2S,5S)-5-甲基-2,1-吡咯啶二基)((1S)-1-((2R,4R,4aS,7aS)-2-甲基八氫環戊并[b]哌喃-4-基)-2-側氧基-2,1-乙二基)))二胺基甲酸二甲酯；及(4,4'-聯苯二基雙(1H-咪唑-4,2-二基((2S,5S)-5-甲基-2,1-吡咯啶二基)((1S)-1-((2R,4S,4aS,7aS)-2-甲基八氫環戊并[b]哌喃-4-基)-2-側氧基-2,1-乙二基)))二胺基甲酸二甲酯；或其醫藥學上可接受之鹽。
  4. 一種化合物，其為((R,S,S,1S,1'S)-((2S,2'S,5S,5'S)-5,5'-(5,5'-([1,1'-聯苯]-4,4'-二基)雙(1H-咪唑-5,2-二基))雙(2-甲基吡咯啶-5,1-二基))雙(1-((2S,4S,6R)-2-環丙基-6-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-側氧基乙-2,1-二基))二胺基甲酸二甲酯；或其醫藥學上可接受之鹽。
  5. 一種組合物，其包含如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。
  6. 如請求項5之組合物，其進一步包含至少一種具有抗HCV活性之其他化合物。
  7. 一種組合物，其包含如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。
  8. 如請求項7之組合物，其進一步包含至少一種具有抗HCV活性之其他化合物。
  9. 一種組合物，其包含如請求項3之化合物或其醫藥學上 可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。
  10. 如請求項9之組合物，其進一步包含至少一種具有抗HCV活性之其他化合物。
  11. 一種組合物，其包含如請求項4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。
  12. 如請求項11之組合物，其進一步包含至少一種具有抗HCV活性之其他化合物。
  13. 一種如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其係用於製造用以治療HCV感染之藥物。
  14. 一種如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其係用於製造用以治療HCV感染之藥物。
  15. 一種如請求項3之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其係用於製造用以治療HCV感染之藥物。
  16. 一種如請求項4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其係用於製造用以治療HCV感染之藥物。
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