TW201400612A - 分離、培養、萃取及冷凍儲存脂肪細胞之服務平台 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種分離、培養、萃取及冷凍儲存脂肪細胞之服務平台，其包括一收集程序、一處理程序以及一應用程序。該收集程序係收集脂肪組織並容置於一無菌容器內；該處理程序係處理收集程序所得之脂肪組織，並包含：一脂肪組織分離流程、一培養流程、一萃取流程以及一冷凍及儲存流程；該應用程序係將由前述處理程序所獲得之脂肪組織、脂肪幹細胞、有核細胞、生長因子及細胞激素加以應用。藉由本發明之服務平台，可充分利用脂肪組織，並可藉由脂肪組織及脂肪幹細胞之冷凍保存，用於各式醫療用途。
Description
本發明係有關於一種處理脂肪組織及脂肪幹細胞之服務平台，尤指一種藉由分離、培養、萃取及冷凍儲存以充分利用脂肪組織及脂肪幹細胞之服務平台。
現有技術之自體脂肪移植手術，係從堆積較多脂肪之部位將脂肪抽出後，將脂肪移植至脂肪較少之部位，但脂肪移植至新部位後，部分脂肪會排出體外並逐漸萎縮，導致必須進行多次手術，而多次手術後不但容易造成局部組織纖維化，對患者來說亦是相當痛苦的過程。再者，脂肪移植至新部位後，可能因缺乏氧氣及養分，導致脂肪鈣化而形成硬塊。
Yoshimura等人發現脂肪組織之血管基質部分(stromal vascular fraction,SVF)含有血小板衍生生長因子(Platelet-derived Growth Factor,PDGF)、表皮生長因子(epidermal growth factor,EGF)、纖維母細胞生長因子(fibroblast growth factor,FGF)、血管內皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、類胰島素生長因子(insulin-like growth factors,IGF)等生長因子，而具有促進血管新生的能力，故Yoshimura等人於脂肪移植手術中，將脂肪組織與血管基質部分(stromal vascular fraction,SVF)共同移植，可提升脂肪移植後的存活率，故又稱為細胞協助脂肪移植(cell assisted lipotransfer,CAL)。
然而，現有自體脂肪移植手術所抽取出的脂肪體積遠多
於自體脂肪移植所需量，而剩餘的脂肪往往以醫療廢棄物丟棄，其中血管基質部分所富含之脂肪幹細胞，不但亦具有上述促進血管新生之功能外，亦可抗細胞凋亡、調節免疫反應以及分化成各組織之潛能，故本領域缺乏一完善利用脂肪細胞之方法，尤其缺乏一種「萃取、冷凍保存脂肪幹細胞及脂肪組織之方法」。
鑒於現有技術缺乏具效率並可再利用脂肪細胞之系統，故本發明之目的在於提供一種可充分利用脂肪組織及脂肪幹細胞之服務平台，不但可避免多次抽脂，亦可將醫療廢棄物重新再利用。
為達上述目的，本發明提供一種分離、培養、萃取及冷凍儲存脂肪細胞之服務平台，其包括一收集程序、一處理程序以及一應用程序。
該收集程序係收集脂肪組織並容置於一無菌容器內。
該處理程序係處理收集程序所得之脂肪組織，並包含以下流程：一脂肪組織分離流程、一培養流程、一萃取流程以及一冷凍及儲存流程。其中該脂肪組織分離流程係於處理程序後，可由脂肪組織中分離出脂肪幹細胞及有核細胞；其中該培養流程係將脂肪組織分離流程所得之脂肪幹細胞及有核細胞進行培養；其中該萃取流程係由培養流程之脂肪幹細胞進行萃取，以獲得生長因子及細胞激素；其中該冷凍及儲存流程係將前述程序所獲得之脂肪組織、脂肪幹細胞、有核細胞、生長因子及細胞激素進行冷凍及儲存。
該應用程序係將由前述處理程序所獲得之脂肪組織、脂肪幹細胞、有核細胞、生長因子及細胞激素應用於自體脂肪移植、傷口修復、皮膚修復、細胞治療以及再生醫學領域。
依據本發明，「服務平台」於此所指涉者亦即包含收集程序、處理程序以及應用程序之方法。
較佳的，所述之脂肪組織分離流程包含有一脂肪組織分離步驟以及一有核細胞分離步驟。更佳的，所述之脂肪組織分離步驟包含：去除脂肪組織之組織液，並藉由可分離脂肪幹細胞之酵素以分離脂肪組織，以獲得一脂肪幹細胞。更佳的，所述之有核細胞分離步驟包含：以蛋白分解酵素處理脂肪組織，以分離出有核細胞。
依據本發明，蛋白分解酵素包括，但不限於膠原蛋白分解酶(collagenase)、胰蛋白酶(trypsin)、中性蛋白酶(neutral protease)、彈性蛋白酶(elastase)、木瓜酶(papain)及分散酶(dispase)。
較佳的，所述之培養流程包含有一脂肪幹細胞及有核細胞培養步驟。更佳的，所述之脂肪幹細胞培養及有核細胞步驟包含：將脂肪幹細胞及有核細胞於適當環境培養。
依據本發明，用語「適當環境培養脂肪幹細胞」係任何可培養脂肪幹細胞之環境，包括任何可培養脂肪幹細胞之培養基包括，但不限於杜氏改良英格爾培養基(Dulbecco’s modified eagle medium,DMEM)、杜氏改良英格爾-12培養基(Dulbecco’s modified eagle medium-12,DMEM-12)、Iscove’s modified Dulbecco’s medium(IMDM)
及RPMI 1640培養液；以及將脂肪幹細胞培養於37℃並含有5%二氧化碳之培養箱。
較佳的，所述之萃取流程所獲得之生長因子及細胞激素係培養過程中細胞分泌之物質。
更佳的，所述生長因子及細胞激素包括，但不限於EGF、VEGF等。
較佳的，所述之冷凍及儲存流程包含：將脂肪組織、脂肪幹細胞、有核細胞分別加入抗凍保護劑，並於低溫儲存。含有生長因子以及細胞激素之細胞培養液則以低溫乾燥方式進行處理後低溫保存。
依據本發明，冷凍保護劑如所知者係用於低溫環境下保護細胞，可避免細胞受冰晶破壞，該冷凍保護劑之種類包括，但不限於甘油(glycerol)、二甲亞碸(dimethyl sulfoxide,DMSO)、乙二醇(ethanediol)、丙二醇(propanediol)、乙醯胺(acetarmide)及甲醇(methanol)。
依據本發明，低溫儲存係指於液態氮槽中儲存。
較佳的，所述之應用程序係將由前述收集程序及處理程序所獲得之脂肪組織、脂肪幹細胞、有核細胞、生長因子及細胞激素依據應用之目的相互搭配使用，以自體脂肪移植為例，係將脂肪組織與有核細胞共同植入受體特定部位諸如胸部或臉部；以傷口修復或皮膚修復為例，係將生長因子及細胞激素共同置於受體表面；以細胞治療及再生醫學領域為例，係利用脂肪幹細胞之分化能力達到細胞、組織或器官之再生。
本發明之服務平台包含一收集程序、一處理程序以及
一應用程序，其中該處理程序係處理收集程序所得之脂肪組織，並包含有三個流程，其中第一流程係將脂肪組織分離，並包含有脂肪組織分離步驟及有核細胞分離步驟；第二流程包含有脂肪幹細胞及有核細胞培養步驟；第三流程包含有萃取步驟；第四流程包含有冷凍及儲存步驟。
綜合上述之特點，使患者於自體脂肪移植手術後，可同時獲得脂肪組織、脂肪幹細胞、有核細胞、生長因子及細胞激素，並同時移植脂肪組織及有核細胞可提高脂肪移植存活率，亦可冷凍保存脂肪組織、脂肪幹細胞、有核細胞、生長因子及細胞激素以方便下次自體脂肪移植手術利用，不但可避免患者經歷多次抽脂手術之痛苦，亦可將所得之脂肪幹細胞、生長因子及細胞激素用於各式醫療用途，而達到充分利用脂肪組織之目的。
請參考圖1所示，本發明之分離、培養、萃取及冷凍儲存脂肪細胞之服務平台包含一收集程序10、一處理程序20以及一應用程序30。
該收集程序10係收集脂肪組織並容置於一無菌容器內。
該處理程序20係處理收集程序所得之脂肪組織，並包含一脂肪組織分離流程21、一培養流程22、一萃取流程23以及一冷凍及儲存流程24。
該脂肪組織分離流程21係於處理程序20後，可由脂肪組織中分離出脂肪幹細胞及有核細胞，請參考圖2所示，並包含有一脂肪組織分離步驟211以及一有核細胞分離步
驟212。其中脂肪組織分離步驟211包含：以含有青黴素/鏈黴素(penicillin/streptomycin)的磷酸鹽溶液(phosphate buffer salt solution)清洗脂肪組織，以去除脂肪組織之組織液。
其中有核細胞分離步驟212包含以蛋白分解酵素處理脂肪組織，以分離出有核細胞。
該培養流程22係將脂肪組織分離流程21所得之脂肪幹細胞及有核細胞進行培養，請參考圖3所示，並包含有一脂肪幹細胞及有核細胞培養步驟221，其包含以含有青黴素/鏈黴素的磷酸鹽溶液清洗脂肪組織後，加入膠原蛋白分解酶以分離脂肪組織之幹細胞S1，再以胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)中和膠原蛋白分解酶活性後，離心處理使其分成脂肪細胞(adipocyte)及血管基質部分(stromal vascular fraction,SVF)，將脂肪細胞取出後，再加入低張溶液(hypotonic solution)以溶解(lyse)紅血球(red blood cell,RBC)；再經磷酸鹽溶液清洗後，置於適當環境培養脂肪幹細胞S2。
該萃取流程23係由培養流程22所得之脂肪幹細胞進行萃取，請參考圖4所示，並包含以離心步驟231，以收集並獲得生長因子及細胞激素。
該冷凍及儲存流程24其係將收集程序10所得之脂肪組織以及處理程序20所得之脂肪幹細胞、有核細胞、生長因子及細胞激素進行冷凍及儲存，請參考圖5所示，並包含：將脂肪組織脂肪幹細胞、有核細胞、生長因子及細胞激素分別加入抗凍保護劑S1，並於液態氮槽中低溫儲存S2。
10‧‧‧收集程序
20‧‧‧處理程序
21‧‧‧脂肪組織分離流程
211‧‧‧脂肪組織分離步驟
212‧‧‧有核細胞分離步驟
22‧‧‧培養流程
221‧‧‧脂肪幹細胞及有核細胞培養步驟
S1‧‧‧藉由蛋白分解酵素分離脂肪組織之幹細胞
S2‧‧‧於適當環境培養脂肪幹細胞
23‧‧‧萃取流程
231‧‧‧離心步驟
24‧‧‧冷凍及儲存流程
S1‧‧‧加入抗凍保護劑
S2‧‧‧低溫儲存
30‧‧‧應用程序
圖1係本發明之服務平台的示意圖。
圖2係本發明之服務平台之脂肪組織分離流程的示意圖。
圖3係本發明之服務平台之培養流程的示意圖。
圖4係本發明之服務平台之萃取流程的示意圖。
圖5係本發明之服務平台之冷凍及儲存流程系統的示意圖。
10‧‧‧收集程序
20‧‧‧處理程序
21‧‧‧脂肪組織分離及冷凍流程
22‧‧‧培養流程
23‧‧‧萃取流程
24‧‧‧冷凍及儲存流程
30‧‧‧應用程序
Claims (7)
- 一種分離、培養、萃取及冷凍脂肪細胞之服務平台包括：一收集程序，係收集脂肪組織並容置於一無菌容器內；一處理程序，係處理收集程序所得之脂肪組織，並包含以下流程：一脂肪組織分離流程，其係於處理程序後，可由脂肪組織中分離出脂肪幹細胞及有核細胞；一培養流程，其係將脂肪組織分離流程所得之脂肪幹細胞及有核細胞進行培養；一萃取流程，其係將培養流程之脂肪幹細胞進行萃取，以獲得生長因子及細胞激素；以及，一冷凍及儲存流程，其係將培養流程所得之脂肪幹細胞及有核細胞以及處理程序所得之脂肪組織進行冷凍及儲存；一應用程序係將由處理程序所獲得之脂肪組織、脂肪幹細胞、有核細胞、生長因子及細胞激素應用於自體脂肪移植、傷口修復、皮膚修復、細胞治療以及再生醫學領域。
- 如請求項1所述之服務平台，其中該脂肪組織分離流程包含有一脂肪組織分離步驟以及一有核細胞分離步驟；其中該脂肪組織分離步驟包含：去除脂肪組織之組織液，並藉由可分離脂肪幹細胞之酵素以分離脂肪組織，以獲得一脂肪幹細胞；其中該有核細胞分離步驟包含：以蛋白分解酵素處理脂肪組織，以分離出有核細胞。
- 如請求項2所述之服務平台，其中蛋白分解酵素係膠 原蛋白分解酶(collagenase)、胰蛋白酶(trypsin)、中性蛋白酶(neutral protease)、彈性蛋白酶(elastase)、木瓜酶(papain)及分散酶(dispase)。
- 如請求項1所述之服務平台，其中該培養流程包含有一脂肪幹細胞及有核細胞培養步驟，其包含：將脂肪組織分離步驟所得之脂肪幹細胞及有核細胞分離步驟所得之有核細胞於適當環境培養。
- 如請求項1所述之服務平台，其中該生長因子及細胞激素係培養過程中細胞分泌之物質。
- 如請求項1所述之服務平台，其中該冷凍及儲存流程包含：將脂肪組織、脂肪幹細胞、有核細胞、生長因子以及細胞激素分別加入抗凍保護劑，並於低溫儲存。
- 如請求項6所述之服務平台，其中該抗凍保護劑係甘油(glycerol)、二甲亞碸(dimethyl sulfoxide,DMSO)、乙二醇(ethanediol)、丙二醇(propanediol)、乙醯胺(acetarmide)及甲醇(methanol)。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW101121710A TW201400612A (zh) | 2012-06-18 | 2012-06-18 | 分離、培養、萃取及冷凍儲存脂肪細胞之服務平台 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW101121710A TW201400612A (zh) | 2012-06-18 | 2012-06-18 | 分離、培養、萃取及冷凍儲存脂肪細胞之服務平台 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW201400612A true TW201400612A (zh) | 2014-01-01 |
Family
ID=50344933
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW101121710A TW201400612A (zh) | 2012-06-18 | 2012-06-18 | 分離、培養、萃取及冷凍儲存脂肪細胞之服務平台 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| TW (1) | TW201400612A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI696701B (zh) * | 2015-10-08 | 2020-06-21 | 高雄醫學大學 | 一種快速分離脂肪間質細胞之組合物 |
-
2012
- 2012-06-18 TW TW101121710A patent/TW201400612A/zh unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI696701B (zh) * | 2015-10-08 | 2020-06-21 | 高雄醫學大學 | 一種快速分離脂肪間質細胞之組合物 |
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