TW201408302A - 大豆皂醇組成物 - Google Patents

Abstract

本發明之大豆皂醇組成物係包含大豆皂醇B(成分(A))與3-O-D-葡糖醛酸吡喃基(3-O-D-Glucurono pyranosyl)大豆皂醇B(成分(B))。3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B相對於大豆皂醇B的重量比(成分B/成分A)的範圍是0.001~10。上述組成物可以酸部分分解大豆皂素B群組醣苷之醣鏈殘基製得。

Description

大豆皂醇組成物

本發明係關於大豆皂醇組成物、其製造方法及其用途，具體而言，係關於改善大豆皂醇B之體內吸收性的組成物。

皂素係大量存在於大豆、小豆、橄欖等之無定形醣苷。皂素含有疏水性部分及親水性部分，由於與水混合並振動時，會發生持續性的泡沫，因此賦予該名稱。

皂素依據配醣體之種類，大致分成甾類皂素及三萜式皂苷。大豆(Glycine max)，尤其是大豆胚軸，含有大量的大豆皂素，其為三萜式皂苷之一種。大豆皂素，主要係由配醣體具有大豆皂醇A之大豆皂素Aa、Ab、Ac、Ad、Ae、Af、Ag及Ah(以下，稱為大豆皂素A群組醣苷)、及由配醣體具有大豆皂醇B之大豆皂素I、II、III、IV及V(以下，稱為大豆皂素B群組醣苷)所構成(非專利文獻1)。

大豆皂素之效能為大家所熟知，包括：抗肥胖(非專利文獻2)、血中中性脂肪降低、膽固醇值改善(非專利文獻3)、肝保護作用(非專利文獻4)、抗病毒活性(非專利文獻5)等。

高B群組含量之大豆皂素，相較於高A群組含量之大豆皂素，容易達到抑制血中中性脂質的增加(非專利文獻6)。在抑制血糖值上昇方面，大豆皂素A群組不具效果，大豆皂素B群組則可看到效果(非專利文獻7)。大豆皂素B群組之活性較高的原因應該是B群組之體內吸收性高於A群組(非專利文獻6)。

由大豆皂素除去醣鏈殘基之配醣體，已知具有促進皮膚細胞之玻尿酸產生效果、抑制黑色素產生效果(專利文獻1)、及促進膠原產生效果(專利文獻2及3)。而且，在於配醣體殘留有葡萄醣醛酸之3-O-D-葡糖 醛酸吡喃基(3-O-D-Glucurono pyranosyl)大豆皂醇B，已知具有抗氧化機能(專利文獻4)。

若可將大豆皂素B群組之體內吸收性進一步改善，則可以期待生理活性的進一步提升。其原因應為大豆皂素B群組之醣苷轉換為配醣體，亦即，大豆皂醇B。大豆皂醇B之製造方法，已知有高溫、高壓水合方法(專利文獻5)、酵素分解之方法(專利文獻6)、及化學合成法(專利文獻7)等。

然而，針對大豆異黃酮之醣苷及配醣體，有配醣體吸收性較佳的報告(非專利文獻8)，也有吸收性無差異的(非專利文獻9)報告。大豆皂素則沒有進行其醣苷及配醣體在體內吸收性差異的調查。

【專利文獻】

【專利文獻1】WO2010-150612號公報

【專利文獻2】日本特開2009-132739號公報

【專利文獻3】日本特開2006-213649號公報

【專利文獻4】日本特開2003-189831號公報

【專利文獻5】WO2008/155890號公報

【專利文獻6】US2006/0275862號公報

【專利文獻7】日本特開2005-137201號公報

【非專利文獻】

【非專利文獻1】Yoshiki et al、Biosci.Biotechnol.Biochem、62、2291-2299、1998

【非專利文獻2】Kawano-Takahashi et al、Int.J.Obes、10、293-302、1986

【非專利文獻3】基礎及臨床、16、135-142、1982

【非專利文獻4】醫學及生物學、127、409-414、1993

【非專利文獻5】Nakashima et al、AIDS、3、655-658、1989

【非專利文獻6】食品及開發、45、54-56、2010

【非專利文獻7】日本臨床榮養學會雜誌、27、358-366、2006

【非專利文獻8】Izumi et al、J.Nutr、130、1695-1699、2000

【非專利文獻9】Zubik and Meydani、Am.J.Clin.Nutr、77、1459-1465、2003

如上所述，針對大豆皂素之體內吸收性的提高方面，並未進行太多的檢討。所以，本發明之目的係在提供高體內吸收性之大豆皂素組成物。

本發明者們針對提高大豆皂素B群組之體內吸收性進行審慎的研究，確認到，大豆皂素B群組之配醣體的大豆皂醇B之吸收性高於大豆皂素B群組醣苷，大豆皂醇B之體內吸收性高於大豆皂素A群組醣苷之配醣體的大豆皂醇A。而且，本發明者等，意外地發現含有大豆皂醇B及3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B之組成物，比大豆皂素之醣苷及配醣體的單獨投藥時，更能提高體內吸收性，而實現本發明。

本發明，係提供含有(A)式： 所示之大豆皂醇B，及(B)式：

所示含有3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B。前述(B)成份相對於(A)成份之重量比(B/A)為0.001~10之大豆皂醇組成物。

於專利文獻5之調製例1，記載著：藉由大豆皂素醣苷之酸性分解來製造大豆皂醇B。然而，無法從所得到之大豆皂醇粉末檢驗出3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B。亦即，傳統技術尚不知道同時含有大豆皂醇B及3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B之大豆皂醇組成物。即使對豆腐、豆乳、黃豆粉、味噌、醬油等傳統大豆食品、及大豆蛋白擠壓處理後再以乙醇、甲醇、丁醇等有機溶劑進行析出所得到的大豆素材中，也未存在如本發明之組成物。

本發明之組成物，以大豆皂醇換算時，前述(A)成份及(B)成份以含有組成物之0.05~100重量%為佳。

本發明，尚提供上述大豆皂醇組成物之製造方法，係包含以酸部分分解大豆皂素B群組醣苷之醣鏈殘基的前述製造方法。因為傳統技術並不知道同時含有(A)成份及(B)成份之大豆皂醇組成物，故上述製造方法也是創新發明。

前述部分分解，以使用含有5重量%以上之前述大豆皂素B群組醣苷的原料為佳。

本發明尚提供含有上述大豆皂醇組成物，其具有針對抑制血糖值上昇、抑制血壓上昇、改善脂質代謝、降低膽固醇作用、改善代謝症候群之作用、飲食障礙、預防肥胖、抗過敏作用、增進免疫作用、佐劑活性、抗炎症作用、抗腫瘤活性、抗潰瘍活性、肝保護作用、抑制上皮細胞增殖、細胞透性亢進、細胞賦活作用、抗病毒活性、抗HIV活性、抗突變原活性、抑制血小板凝集作用、抗補體活性、皮膚細胞之玻尿酸產生促進、抑制黑色素產生、促進膠原產生、抗氧化作用、預防腎臟結石及抑制痴呆症進行作用所構成之群組中之至少一種效能的醫藥。

本發明尚提供含有上述大豆皂醇組成物之食品或健康食品。

本發明尚提供含有上述大豆皂醇組成物之化妝材料。

本發明的組成物含有大豆皂醇B及3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B，其係高體內吸收性，亦即，高生物利用效率之皂素組成物。

本發明之組成物，只要較少投藥量即可發揮以生體內之大豆皂醇B為基礎的生理活性。因為本發明之組成物是緣自大豆之天然植物的成份，而且只要低於傳統的用量，故可長期連續服用。是以，本發明之大豆皂素素材組成物對產業極為有利。

依據本發明之組成物的製造方法，其包含以酸部分分解大豆皂素B群組醣苷之醣鏈殘基，而可簡易地製造上述組成物。而且，此方法對於容易調整大豆皂醇B及3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B之比率方面上也十分有利。

以下，針對本發明之實施方式進行更詳細的說明。本發明之組成物，必須含有(A)式：【化3】

所示之大豆皂醇B(以下，稱為(A)成份)。

本發明之組成物，必須進一步含有(B)式：

所示之3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B(以下，稱為(B)成份)。(B)成份，係(A)成份之化學構造結合含葡萄醣醛酸之醣苷。

前述(B)成份相對於(A)成份之重量比(B/A)，為0.001~10，0.01~5為佳，0.01~3較佳，0.1~2.5更佳，0.25~2.5最佳。B/A之值為0.001以下的話，則無法期待大豆皂醇B之體內吸收性的改善。相反的，B/A即使高於10，大豆皂醇B之體內吸收性的改善達到飽和或降低。

本發明之組成物中之前述(A)成份及(B)成份含量，在大豆皂醇換算下，通常為0.05~100重量%，0.5~100重量%更佳，2.5~100重量%最好。

本發明，尚提供上述組成物之製造方法。

此方法係藉由將式(5)所示之大豆皂素B群組醣苷、DDMP醣苷、及大豆皂素E群組醣苷之醣鏈殘基實施部分之酸性分解，可以特定重量比同時製造完全除去醣鏈殘基之(A)成份、及殘留有醣鏈殘基之葡萄醣醛酸的(B)成份。大豆皂素B群組醣苷在原料安定性上極為優良。

大豆皂素B群組醣苷或含有其之大豆皂素醣苷，可以由大豆之胚芽、子葉、及全粒，以WO2003/075939等公知之方法析出。用於酸性分解法之原料，含有之大豆皂素B群組醣苷，通常為5重量%以上，較佳為15~100重量%，最好為30~100重量%。大豆皂素醣苷，可以使用市販品，並無特別限制。例如，製品名稱皂素AZ-B(J-OIL MILLS,INC.製)，由於大豆皂素B群組醣苷為高於傳統之50~100重量%，而為良好原料。

將大豆皂素醣苷溶解於乙醇、甲醇、丁醇等之有機溶媒後，添加硫 酸、鹽酸、硝酸等之酸。其他方法，則係對以水、乙醇、甲醇、丁醇、醋酸乙酯等稀釋之酸的反應溶媒，添加大豆皂素醣苷使其溶解。以提高組成物產率、回收率之觀點、及以短時間回收組成物之觀點而言，使大豆皂素醣苷溶解於有機溶媒後，添加酸。

酸之濃度相對於反應溶液通常為1~55重量%，最好為3~25重量%。酸之濃度低於1重量%的話，幾乎無法得到B成份，有時組成物為重量非常低之物。相反的，高於60重量%的話，A成份及B成份之產率降低，有時配醣體換算濃度非常低。

藉由將添加酸之溶液的加溫，開始酸性分解。酸性分解溫度，係依據酸之種類及濃度、部分分解之程度(亦即，B/A)等來適度選擇。酸性分解溫度，通常為室溫~150℃，最好為50~80℃。酸性分解時間係依據酸性分解溫度，通常為0.5~23小時，最好為1~6小時。

以適當檢驗手段(例如，取樣及色譜法)來檢驗部分分解之進行，在成為特定之B/A的重量比時，利用氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀等之鹽基，來中和溶液。

於中和物之固相含有(A)成份及(B)成份，另一方面，於水相中，含有結合於醣苷之糖。以中和物之離心分離、過濾、自然沉澱、壓濾等，回收含有(A)成份及(B)成份之固相。適度對回收之固相進行乾燥，得到乾燥體。

於回收物，除了(A)及(B)成份以外，有時還含有原料之醣苷、大豆皂醇A、蛋白質、寡醣、單醣、胺基酸、游離脂肪酸、三酸肝油酯等之雜質。其時，亦可以適當的精製手段(例如，管柱層析、溶媒分離、蒸餾、膜分離、析出等)從回收物精製(A)及(B)成份。或者，直接以回收物作為本發明之組成物。

本發明之組成物，也可以特定重量比混合個別調製之(A)成份及(B)成份進行製造。

(A)成份之大豆皂醇B，從大豆皂素B群組醣苷除去醣鏈利用一般 方法即可取得。具體而言，利用葡萄糖苷酶使大豆皂素醣苷產生酵素反應(US2006/0275862)、高溫高壓處理(WO2008/155890號)、發酵處理等。大豆皂醇B也可以化學合成(特開2005-137201號)的方式獲得。上述文獻参照之本說明書挿入。

(B)成份之製造方法，例如，利用本發明之製造方法得到含有(A)成份及(B)成份之組成物後，分離(B)成份，依據專利文獻5記載之化學合成方法使大豆皂醇B及葡萄醣醛酸衍生物產生反應，使生成之反應生成物的保護基脫離等。

本發明之組成物，因為體內吸收性優良，以低於傳統之用量即可發揮大豆皂醇B之效能。傳統之公知效能上，例如，抑制血糖值上昇、抑制血壓上昇、改善脂質代謝、降低膽固醇作用、改善代謝症候群之作用、飲食障礙、肥胖預防、抗過敏作用、免疫增進作用、佐劑活性、抗炎症作用、抗腫瘤活性、抗潰瘍活性、肝保護作用、抑制上皮細胞增殖、細胞透性亢進、細胞賦活作用、抗病毒活性、抗HIV活性、抗突變原活性、抑制血小板凝集作用、抗補體活性、促進皮膚細胞之玻尿酸產生、抑制黑色素產生、促進膠原產生、抗氧化作用、預防腎臟結石、抑制痴呆症進行等作用。本發明之組成物，因為係來自大豆之天然植物的成份，而且，只要低於傳統之用量即可，故可長期連續服用。

本發明之組成物，可以適度地以醫藥品、機能性食品、健康食品、一般加工食品、化妝材料等製品形態使用。對上述製品之本發明的組成物之添加量，係依據製品形態及製品攝取量而改變，然而，通常以0.001~100重量%為佳，最好為0.003~100重量%。

添加於本發明之組成物作為第三成份且利用度高之物，係(A)及(B)成份以外之大豆皂素類、稀釋劑、濃度調整劑、及溶解劑。(A)及(B)成份以外之大豆皂素類的具體例，如大豆皂素B群組醣苷、大豆皂素A群組之醣苷及其配醣體、以及大豆異黃酮類。稀釋劑及濃度調整劑，使用澱粉、糊精、纖維素等的話，只是單純使本發明之組成物分散而 較佳。以環糊精包攝(A)及(B)成份的話，提高前述成份之疏水性成份的吸收性。而且，藉由溶解於乳化劑及油脂，提高本發明之組成物的體內吸收性。

使用本發明之組成物作為醫藥時，除了(A)成份及(B)成份以外，為可添加泛用之物作為醫藥的佐劑。例如，可對應劑型及投藥方法，在無損本發明之效果的質及量的範圍，添加泛用之賦形劑、散解劑、結合劑、潤滑劑、維生素、黃嘌呤衍生物、胺基酸、pH調整劑、清涼化劑、懸浮化劑、增稠劑、溶解輔助劑、抗氧化劑、塗層劑、塑化劑、界面活性劑、水、酒精類、水溶性高分子、甘味料、矯味料、酸味料、香料、著色劑等。

本發明之組成物的醫藥形態，係被加工成如粉劑、顆粒劑、囊劑、丸劑、錠劑、口嚼錠、滴劑(drop)之固形製劑、或如飲料、溶液劑、懸浮液、乳劑、糖漿、乾糖漿之液劑等口服劑、或液劑、溶液劑、乳劑、乳液之皮膚吸收藥劑之形態。因為大豆皂醇為粉體，形態以固形製劑為佳。

作為醫藥使用時之攝取方法，並無特別限制。例如，有口服、皮膚吸收、輸液、注射(肌肉、腹腔、皮下或靜脈)等。以患者之負擔較少之觀點而言，以錠劑、膠囊等之經口攝取為佳。

使用於醫藥時之攝取量，只要對應症狀來適度設定即可。一般而言，一日的大豆皂醇B攝取量，以1~200mg為佳，5~100mg更佳。

將本發明組成物使用於健康食品、補給品、或一般加工食品使用時，除了(A)成份及(B)成份以外，也可添加泛用物作為健康食品等之添加劑。例如，對應口服劑之形態，可以在未損及發明效果之質及量的範圍內，添加泛用之賦形劑、散解劑、結合劑、潤滑劑、維生素、黃嘌呤衍生物、胺基酸、pH調整劑、清涼化劑、懸浮化劑、增稠劑、溶解輔助劑、抗氧化劑、塗層劑、塑化劑、界面活性劑、水、酒精類、水溶性高分子、甘味料、矯味料、酸味料、香料、著色劑等。

為了將本發明之組成物當作健康食品、機能性食品來使用，例如， 加工成如粉劑、顆粒劑、囊劑、丸劑、錠劑、口嚼錠、滴劑之固形製劑、或如飲料、溶液劑、懸浮液、乳劑、糖漿、乾糖漿之液劑等口服劑。因為大豆皂醇為粉體，形態以錠劑為佳。

本發明之組成物，在麵包、米飯、湯、蔬菜、餅乾、糖果等之一般加工食品加工時，也可直接當作原料來添加。

作為健康食品及補給品使用時之攝取量，只要對應用途來適度設定即可。一般而言，一日之大豆皂醇B攝取量，以1~200mg為佳，5~100mg更佳。

將本發明之組成物當作化妝材料時，除了(A)成份及(B)成份以外，也可添加泛用物作為化妝品之佐劑。例如，乙二醇、聚乙二醇、丙二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、雙丙二醇、甘油、雙甘油、甘油聚合物、戊二醇、異戊二醇、葡萄糖、麥芽糖、果糖、木糖醇、山梨醇、麥芽三糖、赤藻糖醇等之多價醇；甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇等之低級醇；油酸、異硬脂酸、月桂酸、肉豆蔻酸、軟脂酸、硬脂酸、蘿酸、十一烯酸等之高級脂肪酸類；橄欖油、玉米油、山茶油、夏威夷核果油、酪梨油、菜籽油、麻油、篦蔴油、紅花子油、棉子油、荷荷芭油、椰子油、棕櫚油等之油脂；巴西棕櫚蠟、堪地里拉蠟、蜂蠟、羊毛脂等蠟類；山梨醇、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖等之糖類；紅藻膠、三仙膠、明膠、果膠、洋菜糖、藻酸鹽、糊精、甲纖維素、乙纖維素、羥丙基纖維素，羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、羧乙烯聚合物、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、阿拉伯膠、焮毛梧桐膠(Sterculia Urens gum)、紫雲英樹膠、大瑪琳膠等之增稠劑；苯氧基乙醇、對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸乙酯、對羥苯酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、對氧苯甲酸酯(paraoxybenzoic acid esters)、安息香酸、水楊酸及其鹽類、山梨酸及其鹽類、脫氫醋酸及其鹽類、氯化甲酚、六氯酚等之防腐劑；月桂硫酸鈉、單油酸聚氧乙烯山梨糖醇酐等之非離子界面活性劑、烷基硫酸鹽、正十二苯磺酸鈉等之陰離子界面活性劑、聚氧乙烯十二甲胺鹽等之陽離子界面活性劑；甾類系及非甾類系抗炎症劑；維生素A、維生素D、維生素E、維生素F、維生素K等之維生素類或 Dicaprylic acid pyridoxine、二軟脂酸維他命B6、二軟脂酸抗壞血酸、一軟脂酸抗壞血酸、一硬脂酸抗壞血酸等之維生素衍生物；類黃酮、類胡蘿蔔素等之抗氧化劑；鯊烷、鯊烯、液體石蠟等之高級脂肪族碳化氫類；腦醯胺、腦苷脂、神經鞘磷脂等之神經脂質；膽固醇、植物固醇等之硬脂醇類；聚甲基矽氧烷、聚甲基苯基矽醚、MethylCycloPolySiloxanes、Octamethylcyclooctanetetrasiloxane、Octamethylcyclopentasiloxane、Decamethylcyclopentasiloxane、Methyl Hydrogen Polysiloxane等之矽氧烷(silicone)類；對氨安息香酸、對氨安息香酸一甘油酯、鄰氨基苯甲酸甲酯、Homomenthyl-N-氨基苯甲酸甲酯、對-甲氧基桂皮酸辛基、乙基-4-異桂皮酸丙酯等之紫外線吸收劑；皂土、綠土、鋁膨潤石、矽鐵石、鎂膨潤石、鋰膨潤石、鋅皂石、滑鎂皂石等之礦物；氧化鐵、氧化鐵黃、氧化鐵黑、氧化鈷、群青、紺青、氧化鈦、氧化鋅等之無機顏料；紅色202號、黃色4號、藍色404號等之著色料；香料；香油等。

為了將本發明之組成物當作化妝品來使用，加工成如液劑、溶液劑、乳劑、乳液、粉體之皮膚吸收藥劑、如粉劑、顆粒劑、囊劑、丸劑、錠劑、口嚼錠、滴劑之固形製劑、及如飲料、溶液劑、懸浮液、乳劑、糖漿、乾糖漿之液劑等之口服劑形態。

作為化妝品使用時之攝取方法，係經口攝取或皮膚吸收攝取。從作為化妝品之即效性的觀點而言，以溶液劑、乳劑，乳液，乳狀物之皮膚吸收投藥為佳。

使用於化妝材料時之攝取量，只要對應症狀進行適度設定即可。一般而言，1日之大豆皂醇B的攝取量，應為0.05~50mg，最好為0.15~10mg。

【實施例】

以下，係記載本發明之實施例，然而，本發明並未受限於此。

[皂素分析法]

以高速液體液相層析串聯質譜四重極型質量分析計(Nihon Waters K.K.製)分析皂素。大豆皂醇A、3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B、及大豆皂醇B之層析分別如第1A~1C圖所示。分析條件，如以下所示。

1.分析條件

管柱：2.1mm φ x150mm(製品名稱Waters Acquity UPLC RP 18、Nihon Waters K.K.製)

管柱溫度：40℃

移動相：甲醇/水=90/10(v/v)

流速：0.200mL/min

注入量：5μL

2.溶出時間及質量片段光譜法

大豆皂醇A：3.6分m/z=441[M+H-H2O]+

3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B：3.0分m/z=635[M+H]+

大豆皂醇B：4.1分m/z=458[M+H-H2O]+

[實施例1~2]

1.大豆皂醇組成物之調製

將50g之含有23.2重量%之皂素A群組醣苷、及53.0重量%之皂素B群組醣苷的大豆皂素醣苷(製品名稱皂素AZ-B，J-OIL MILLS,INC.製)置入5000ml容量的玻璃容器，以80%乙醇1600ml進行溶解。以硫酸濃度成為2N之方式對該溶液添加濃硫酸。藉由使所得之反應溶液保持於70℃之溫度，開始皂素醣苷之酸性分解反應。

反應開始後，每1小時至8小時為止採取150mL之反應溶液，利用1N之NaOH進行中和。對各中和物經過離心分離所得到之團塊進行水洗淨後，以Yamato真空乾燥箱DP-301(Yamato Scientific Co.,Ltd.)乾 燥得到粉末。實施例1之組成物，係將2小時反應之粉末1.07g及3小時反應之粉末1.43g進行混合來調製。而且，實施例2之組成物，係將5小時反應之粉末1.6g及6小時反應之粉末0.6g進行混合來調製。而且，比較例1係準備大豆皂醇B純品(純度98%，常盤植物化學研究所製，B/A=0)。以HPLC-MS法測定實施例1及2以及比較例1之組成物的組成。其分析值如表1所示。

2.大豆皂醇組成物之體內吸收性的評估

將5週齡之雄性SD大鼠(SPRAGUE DAWLEY)(CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN,INC.)區分成以3~4隻為1群組。使實施例1及2之組成物、以及比較例1之大豆皂醇B純品懸浮於0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC)水溶液後，以(A)+(B)成份之配醣體換算成為等量(100μmol/kg體重)之方式，以餵食針對老鼠進行單次投藥。投藥2小時後進行採血，從其血液取得血漿。

於所得到之血漿，添加同量之0.2M醋酸鈉緩衝液(pH5.5)。其次，添加3000單位之β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase，製品名稱H-2、Sigma-Aldrich Japan)，在37℃之溫度下進行12小時之酵素反應。反應結束後，對酵素處理液，添加甲醇：乙腈=1：1之混合液3ml、及內部標準之刺芒柄花素(Sigma-Aldrich Japan製)並進行離心分離後，回收上 清。並再對殘渣添加3ml之甲醇：乙腈=1：1之混合液並進行離心分離操作重複執行二次，視情形來回收上清。將所得到的上清一起以旋轉蒸發器進行減壓乾燥。

將乾燥物再溶解於甲醇，以HPLC-MS法調查血中皂素濃度(N=3或4)。各群組之血中皂素濃度如第2圖所示。利用Tukey之多重比較檢定以顯著性檢定實施統計解析。將其危險率為<0.05、及<0.01之顯著性時，分別以^＊及^＊＊標示於圖中。

如第2圖所示，實施例1及2之大豆皂醇B的血中濃度，明顯比未使用3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B之比較例1高。

組成物中之3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B之濃度，實施例1雖然高於實施例2，大豆皂醇B之血中濃度，則係實施例2高於實施例1。由此可知，大豆皂醇B之血中濃度，與3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B之濃度無相關性。

[實施例3~4]

1.大豆皂醇組成物之調製

除了將實施例1之大豆皂素醣苷變更成皂素A群組之醣苷為31.9重量%、及皂素B群組之醣苷為60.0重量%之皂素AZ-B(J-OIL MILLS,INC.製)以外，以與實施例1相同之步驟，執行皂素醣苷之酸部分分解。

反應開始後，在3小時後(實施例3)及6小時後(實施例4)，採取300ml之反應溶液，利用1N之NaOH水溶液進行中和。以Yamato真空乾燥箱DP-301(Yamato Scientific Co.,Ltd.)實施藉由各中和物之離心分離所得到之團塊的乾燥而得到粉末。實施例3及4之組成物之分析值如表2所示。

【表2】

2.大豆皂醇組成物之體內吸收性之評估

將8週齡之雄性SD大鼠(CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN,INC.)區分成以4隻為1群組，並使實施例3及4、以及比較例1之組成物懸浮於0.5%CMC水溶液後，以皂素配醣體換算成為等量(100μmol/kg體重)之方式，以餵食針對老鼠進行單次投藥。投藥之1、3、8、及12小時後進行採血，再從該等取得血漿。所得到之血漿的前處理及HPLC-MS分析，係以與實施例1相同之步驟來執行，調查大豆皂醇B之血中濃度。表3中，圖示著投藥1~12小時後之血中大豆皂醇B濃度、及0~12小時之AUC(area under curve，血中濃度之曲線下面積)。

如表3所示，吸收性之指標的AUC，含有大豆皂醇B及3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B之實施例3及4，高於大豆皂醇B單獨之比較例1。

[實施例5~10]

1.大豆皂醇組成物之調製

將150g實施例3所使用之大豆皂素醣苷置入3000ml容量之玻璃容器，使其溶解於1500ml之80%乙醇。對該溶液，以濃硫酸之硫酸濃度成為2N之方式添加濃硫酸。在80℃之溫度下使溶液保持72小時，一邊緩慢攪拌一邊使皂素醣苷進行酸部分分解。

於反應開始前及表3所示之反應時間後，分別採取100mml之反應溶液，使用1N之NaOH水溶液進行中和。以蒸發器進行各中和物的乾燥，而得到粉末。所得到之組成物的分析值如表3所示。

2.大豆皂醇組成物之體內吸收性的評估

將5週齡之雄性SD大鼠(CHARLES RIVER LABORATORIES JAPAN,INC.)區分成以3匹為1群組。使表3所示之組成物懸浮於0.5%CMC水溶液後，(以A)及(B)成份之配醣體換算成為等量(150μmol/kg體重)之方式，以餵食針對老鼠進行單次投藥。投藥2小時後及4小時後進行採血，從其血液取得肝素鈉血漿。

以與實施例1相同之步驟實施所得到之血漿中之皂素濃度的分析。由2小時後、4小時後之血中皂素濃度，求取AUC(0-4小時)。此外，以包含反應時間0之組成物(只有醣苷)之投藥時的AUC作為100，求取表4所示之各實施例及比較例的相對值，並以其作為吸收性指數。其結果如表4所示。

【表4】

如表4所示，含有大豆皂醇B及3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B之組成物(實施例5~10)，相較於只含有大豆皂醇B之比較例2，具有較高之血中濃度及高吸收性。此外，由表4之吸收性指數可知B/A之範圍，應為0.01~5，0.01~3較佳，0.1~2.5更佳，最好為0.25~2.5。

[實施例11~13]大豆皂醇組成物之調製

將100mg之含有61.0重量%之皂素A群組之醣苷及30.0重量%之皂素B群組之醣苷的大豆皂素醣苷(製品名稱J-皂素，J-OIL MILLS,INC.製)置入50ml容量之茄形燒瓶，其次，添加10ml之6N之硫酸水來溶解醣苷。藉由使溶液保持於80℃之溫度下，開始皂素醣苷之酸性分解反應。

反應開始後，全量採取2、4、及8小時之反應液。使用1N之NaOH水溶液進行中和。以Yamato真空乾燥箱DP-301(Yamato Scientific Co.,Ltd.)來對各中和物之離心分離而得到之團塊實施乾燥而得到粉 末。所得到之組成物的分析值如表5所示。

[實施例14~17]大豆皂醇組成物之調製

將100mg含有12.9重量%之皂素A群組之醣苷及61.6重量%之皂素B群組之醣苷的大豆皂素醣苷(製品名稱皂素AZ-B，J-OIL MILLS,INC.製)置入50ml容量之茄形燒瓶，其次，添加10ml之1N之鹽酸水來溶解醣苷。藉由使溶液保持於80℃之溫度下，開始皂素醣苷之酸性分解反應。

反應開始後，全量採取1、8、16、及24小時之反應液。使用1N之NaOH水溶液進行中和。以Yamato真空乾燥箱DP-301(Yamato Scientific Co.,Ltd.)來對各中和物之離心分離所得到的團塊實施乾燥而得到粉末。所得到之組成物的分析值如表6所示。

【表6】

以上所述之實施例僅是為說明本發明之技術思想及特點，其目的在使熟習此項技藝之人士能夠瞭解本發明之內容並據以實施，當不能以之限定本發明之專利範圍，即大凡依本發明所揭示之精神所作之均等變化或修飾，仍應涵蓋在本發明之專利範圍內。

第1A圖係大豆皂醇A(圖中標記為A)之層析圖。

第1B圖係3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B(圖中，標記成GB)之層析圖。

第1C圖係大豆皂醇B(圖中，標記成B)之層析圖。

第2圖係將本發明之組成物及比較例之大豆皂醇B純品投藥於SD大鼠2小時後之血中大豆皂醇B濃度。使用含有(B)成份之組成物的實施例1及2之大豆皂醇B的血中濃度，顯然高於只使用(A)成份之比較例1。

Claims (7)

1. 一種大豆皂醇組成物，係含有：(A)式： 所示之大豆皂醇B、及(B)式： 所示之3-O-D-葡糖醛酸吡喃基大豆皂醇B，其中前述(B)成份相對於(A)成份之重量比(B/A)為0.001~10。
2. 如申請專利範圍第1項所記載之大豆皂醇組成物，其中含有以大豆皂醇換算為0.05~100重量%之前述(A)成份及(B)成份。
3. 一種如申請專利範圍第1項所記載之大豆皂醇組成物之製造方法，其含有以酸部分分解大豆皂素B群組醣苷之醣鏈殘基的步驟。
4. 如申請專利範圍第3項所記載之製造方法，其中 使用含有5重量%以上之前述大豆皂素B群組醣苷的原料。
5. 一種醫藥品組合物，其含有申請專利範圍第1項所記載之大豆皂醇組成物，具有由抑制血糖值上昇、抑制血壓上昇、改善脂質代謝、降低膽固醇、改善代謝症候群、飲食障礙、預防肥胖、抗過敏作用、免疫增進作用、佐劑活性、抗炎症作用、抗腫瘤活性、抗潰瘍活性、肝保護作用、抑制上皮細胞增殖、細胞透性亢進、細胞賦活作用、抗病毒活性、抗HIV活性、抗突變原活性、抑制血小板凝集作用、抗補體活性、促進皮膚細胞之玻尿酸產生、抑制黑色素產生、促進膠原產生、抗氧化作用、預防腎臟結石、及痴呆症進行抑制作用所構成之群組的至少一種效能。
6. 一種食品或健康食品，含有：申請專利範圍第1項所記載之大豆皂醇組成物。
7. 一種化妝材料，含有：申請專利範圍第1項所記載之大豆皂醇組成物。