TW201200511A - Crystalline salts of a potent HCV inhibitor - Google Patents

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201200511 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於如本文所述之化合物（1)的新穎結晶鹽、 其製備方法、其醫藥組合物、及其用於治療c型肝炎病毒 (HCV)感染的用途。 【先前技術】 已知以下化合物（1):

為HCV NS3絲胺酸蛋白酶之選擇性及有效抑制劑。化合物 ⑴屬於美國專利6,323,180、7,514,557及7,585,845中揭示 之HCV抑制劑的非環狀肽系列之範疇。化合物⑴在美國專 利7,5 85,845中明確揭示為1055號化合物及在美國專利 7,514,557中明確揭示為1〇〇8號化合物。化合物（！）可根據 上文引用之參考文獻（以引用的方式併入本文中）中所見之 一般程序來製備。 化合物（1)亦可藉由以下對相當於上述結構的其化學結 154201.doc 201200511 構之替代性描述而已知：

备根據上文引用之參考文獻中闡述之一般程序合成時， 化合物⑴製備為非晶形固體，其為一般不大適用於完全醫 藥加工中的形式。因此’需要製備呈結晶形式的化合物（1) 以使調配物能夠滿足嚴格醫藥需求及規格。此外’需要藉 以製備化合物⑴之方法為適於錢模生產之方&。另外， 需要產物應呈易於過濾且容易乾燥之形式。最後，在經濟 上$要產物穩疋較長時間而無需特別儲存條件。 2009年9月15曰申請之美國專利申請案第12/559,927號揭 不相較於非晶形化合物具有更有利醫藥性質的化合物⑴之 A型結晶形式及化合物⑴之結晶納鹽形式。然而，結晶納 鹽為可變水合物，其可造成生產上之難題，例如一致調配 物表徵、製造（例如難以乾燥）及處理方面之難題。相較於 化s物（I)之A型結晶形式及結晶鈉鹽具有優良性質之鹽（例 如非溶劑合結晶形式）對於大規模生產及醫藥調配物將較 154201.doc 201200511 佳0 【發明内容】 現已驚訝且意外地首次發現，化合物（1)可以結晶參（經 甲基）胺基曱烧（緩血酸胺（tromethamine))形式以及其纟士曰 膽驗鹽及其結晶N-甲基-D-還原葡糖胺鹽之形式製備。因 此，本發明提供呈新型結晶鹽形式之化合物〇)，在—實施 例中其為新型結晶緩血酸胺鹽且在其他實施例中其包括結 晶膽鹼鹽及結晶N·甲基-D-還原葡糖胺鹽。此等新賴結晶 形式克服了使用非晶形式所固有之醫藥加工困難，且特定 言之’在如下文詳細描述之醫藥調配加工中，相較於結晶 A型及鈉鹽形式，緩血酸胺鹽及膽鹼鹽亦具有使其特別有 利之其他性質。 可使用各種技術，包括X射線粉末繞射測定法（XRpD)及 固態NMR(ssNMR)來表徵化合物（1)之此等新穎結晶形式且 將其彼此區分。 在一實施例中’本發明係關於結晶緩血酸胺鹽形式之化 合物（1) ’在本文中稱為「TH」。 另一實施例係關於化合物（1)之結晶膽鹼鹽，在本文中 稱為「HEA」。 另一實施例係關於化合物（1)之結晶N_曱基_D_還原葡糖 胺鹽，在本文中稱為「MU」。 其他實施例包括如由XRPD或SSNMR表徵或由XRPD與 ssNMR兩者表徵之ΤΗ、HEA及MU鹽之每一者。 又一實施例係關於一種醫藥組合物，其包含ΤΗ、HEA或 154201.doc 201200511 MU或其混合物，及至少一種醫藥學上可接受之載劑或稀 釋劑。 又一實施例係關於一種治療哺乳動物之HCV感染的方 法，其包含向該哺乳動物投與治療有效量之ΤΗ、HEA或 MU或其混合物。 【實施方式】 定義 在本文中未明確定義之術語應給予熟習此項技術者根據 本發明及上下文會給予其之含義。然而，如本申請案中所 使用’除非相反說明’否則以下術語具有所指示之含義： 術語「TH」意謂化合物（1)之結晶緩血酸胺鹽。 術語「HEA」意謂化合物（1)之結晶膽鹼鹽。 術語「MU」意謂化合物（1)之結晶N_甲基·£)_還原葡糖胺 鹽。 術3吾「約」意謂在指定值或範圍之5%以内，且更佳在 1%以内。舉例而言，「約3_7%J意謂3 5至3 9%，較佳3 66 至3.74。/。。當術語「約」與值之範圍有關時，例如，「約 X%至Y%」，則術語「約」意欲既改變所述範圍之下限值 (X)亦改變上限值（γρ舉例而言，「約2〇%至」相當於 「約20%至約4〇。/0」。 如本文針對一種物質所用之術語「醫藥學上可接受」意 謂物質在正確醫學判斷料内適用於與人類及低等動物之 組織接觸’而無不當毒性、刺激性、過敏反應及其類似反 應’與合理效益/風險比相稱，且當該物質用於醫藥組合 154201.doc 201200511 物中時對於預定用途有效。 關於治療患者之疾病病況之術語「治療」包括： (i) 抑制或改善患者之疾病病況’例如’阻止或減緩其 發展；或 (ii) 緩解患者之疾病病況’亦即，使疾病病況好轉或 治癒。在HCV之情況下’治療包括減少患者體内 HCV病毒負荷之含量。

結晶TH 已將化合物（1)分離為在本文中稱為「TH」之結晶緩血 酸胺鹽多晶型物，且已使用X射線粉末繞射測定法 (XRPD)、差示掃描熱量測定法（DSC)及固態NMR(SSNMR) 進行表徵。 一般而言，TH顯示之特徵性X射線粉末繞射（「xrpd」） 圖案以度 2Θ(土0.2 度 2Θ)表示在 5.9、9.8、10.0、16.4、 16.7、20.3、20.9及22.6處具有較高強度峰。 圖1中展示ΤΗ之XRPD圖案。圖j中XRpD圖案之特徵性 峰位置及相對強度展示於下表丨中（包括較高強度及較低強 度峰兩者）。 表1 _角度，2Θ，。 _相對強度％ —3.9 14.1 5.9 100.0 8.8 10.6 9.8 33.5 10.0 38.1 154201.doc -8 · 201200511 11.7 24.0 12.0 16.3 15.1 14.4 16.1 17.0 16.4 33.0 16.7 35.3 17.6 23.2 20.3 36.2 20.9 49.4 21.6 17.5 22.6 30.8 23.0 22.9 24.8 13.0 27.4 12.5 對於ΤΗ晶體，差示掃描熱量測定法（Dsc)展示在2〇1〇c 之起始溫度下發生吸熱熔融/分解。熱解重量分析（tga)展 示在高達165°C下有0·15%之重量損失。此等資料指示TH為 非溶劑化結晶固體形式。經由在85% RH於25°C下根據動 態氣相吸附（DVS) ’ TH晶體顯示約<4%之水分增加，其指 示在分析中所用之條件下具有不吸濕性或輕微吸濕性。 在一通用實施例中，本發明係關於化合物（1)的結晶緩 血酸胺鹽，在本文中稱為「TH」。 另一更特定實施例係關於具有至少以下特徵之結晶 TH :當使用CuKa輻射量測時，χ射線粉末繞射圖案包含 5.9度 2Θ(±0.2度 2Θ)之峰。 另一實施例係關於結晶ΤΗ，當使用CuKa輻射量測時其 XRPD圖案包含上述5.9度2θ(±〇 2度2Θ)之峰，且進—步包 含 10.0 及 20.9 度 2Θ(土 0.2 度 2Θ)之峰。 154201.doc •9· 201200511 另一實施例係關於結晶ΤΗ，當使用CuKa輻射量測時其 XRPD圖案包含上述5.9度2Θ(土 0_2度2Θ)之峰，且進一步包 含 10.0、16.7、2〇.3及2〇.9度20(±〇.2度20)之峰。 另一實施例係關於結晶TH，當使用CuKa輻射量測時其 XRPD圖案包含上述5.9度2Θ(±0.2度2Θ)之峰，且進一步包 含 9.8、10.0、16.4、16.7、20.3、20.9 及 22.6 度 2Θ(±0·2 度 2Θ)之峰。 另一實施例係關於結晶ΤΗ，其顯示實質上與圖1中所示 相同之XRPD圖案。 TH顯示具有如下表2中報導之13C化學位移（包括較高強 度及較低強度峰）的固態NMR(ssNMR)圖案。 表2 化學位移(ppm) 化學位移(ppm) 178.3 78.4 176.0 75.5 173.9 62.1 173.1 59.6 160.2 59.0 158.9 54.2 158.0 53.6 156.4 42.4 155.4 37.5 150.2 36.7 147.9 34.6 138.1 33.9 122.6 33.1 116.8 27.1 115.9 24.2 . 154201.doc •10· 201200511 113.5 22.8 112.9 21.7 110.0 18.6 98.6 除非另有指示，否則本文報導及主張之所有化學位移精 確到±0.2 ppm以内。 圖2中展示TH之代表性13C ssNMR光譜。 一通用實施例係關於化合物（1)之結晶緩血酸胺鹽，其 13C固態NMR光譜包含化學位移為178.3、i38>1及27」 ppm(±0.2 ppm)之峰。咸信此等化學位移峰值足以表徵化 合物（1)之TH鹽且將其與其他結晶形式區分開來。 另一實施例係關於化合物（1)之結晶緩血酸胺鹽，其13 C 固態NMR光譜包含化學位移為178.3、173.9、173.1、 150.2、147.9、138.1 及 27.1(均 ±0.2 ppm)之峰。 另一貫施例係關於化合物（1)之結晶緩企酸胺鹽，其i3C 固態NMR光譜包含化學位移為178.3、ι76 〇、ι73.9、 173.1、150.2、147.9、138.1、36.7、27.1、22.8 及 18.6 ppm(均 ±0.2 ppm)之峰 〇 另一實施例係關於化合物（1)之結晶緩血酸胺鹽，其顯 示實質上與圖2中所示相同之13c SSNMR光譜。 另一實施例係關於化合物（1)之結晶緩血酸胺鹽，其具 有根據上述XRPD及C ssNMR實施例之任何組合的xrpd 圖案及C ssNMR光譜兩者。舉例而言，當使用CuKa輻射 量測時結晶緩血酸胺鹽之X射線粉末繞射圖案包含5 9度 2Θ(±0.2度2Θ)之峰，且其光譜包含化學位移為 15420J.doc 201200511 178.3、138.1 及 27.1 ppm(士0.2 ppm)之峰·。 本發明提供一種製備TH之方法’其包含在如下所述之 條件下使TH結晶。形成TH之精確條件可憑經驗確定，且 只可能提供已發現適合實施之方法。 已發現可藉由包含以下步驟之方法來製備TH，該方法 亦為本發明之一實施例： (i)將化合物（1)與1當量之參（羥曱基）胺基曱烷組合於 適合溶劑中； (Π)加熱混合物至約5(TC且攪拌約3_5小時； (iii) 冷卻漿料至約2〇。〇; (iv) 過濾漿料且用適合溶劑沖洗所得固體； (v) 在約70°C於真空下乾燥固體。 適〇 ♦劑包括丙酮及乙腈。較佳溶劑為丙酮。可藉由此 項技術中已知之任何習知方法來回收所得τ Η晶體。 在最終步驟㈣及（V)中，可使用習知收集及高溫乾燥技 術（例如過濾、及真空烘箱）來收集步驟（iH)巾獲得之所得固 體並在高溫下乾燥。 在較佳貫施例中’在步驟⑴中，將化合物（1)與1當量 之參（經甲基）胺基曱&以每公克化合物⑴H)灿丙_之比 率組合於丙嗣中’在步驟⑼中加熱至約50。(：且攪拌4小 時，且在步驟（iv)令以丙酮沖洗。 在另貫施例中’在步驟（iii)中在冷卻的同時攪拌漿料 約4-1 2小時。 在另一實施例中’在步驟（Π)期間添加自先前製備獲得 154201.doc •12· 201200511 之ΤΗ晶種。 在另一實施例中，在步驟（V)中將固體乾燥約4至12小 時。 當然可藉由習知攪動技術（例如攪拌）及其他如清楚瞭解 可促進處理之習知技術來促進處理步驟。 結晶ΗΕΑ 已將化合物（1)分離為結晶膽鹼鹽多晶型物，在本文中 稱為「ΗΕΑ」。一般而言’ ΗΕΑ顯示之特徵性X射線粉末繞 射（「XRPD」）圖案以度2Θ(士0.2度2Θ)表示在7.5、14.2、 14.9、17.5、21.8、22·1、22.7及 24_3處具有較高強度峰。 圖3中展示ΗΕΑ之XRPD圖案。圖3中XRPD圖案之特徵性 峰位置及相對強度展示於下表3中（包括較高強度及較低強 度峰兩者）。 表3 角度，2Θ，° 相對強度％ 3.7 23.2 7.5 100.0 11.1 17.1 13.4 24.4 14.2 30.9 14.9 49.0 17.5 41.7 18.7 28.5 21.2 23.2 21.8 31.6 22.1 41.7 22.7 32.7 23.3 25.8 154201,(J〇c •13- 201200511 24.3 34.5 26.0 19.2 對於HEA晶體，差示掃描熱量測定法（DSC)展示在264°C 之起始溫度下發生吸熱炫融/分解。熱解重量分析（TG A)展 示在高達230°C下有0.045%之重量損失。此等資料指示 HEA為非溶劑化結晶固體形式。經由在85% RH於25°C下根 據動態氣相吸附（〇乂8)，11£八晶體顯示約<2.5%之水分增 加，其指示在分析中所用之條件下具有不吸濕性。 在一通用實施例中，本發明係關於化合物（1)的結晶膽 鹼鹽，在本文中稱為HEA。 另一更特定實施例係關於具有至少以下特徵之結晶 HEA :當使用CuKa輻射量測時，X射線粉末繞射圖案包含 7.5度 2Θ(±0.2度 2Θ)之峰。 另一實施例係關於結晶ΗΕΑ，當使用CuKa輻射量測時 其XRPD圖案包含上述7.5度2Θ(±0.2度2Θ)之峰，且進一步 包含14.9及17.5度20(±〇.2度20)之峰。 另一實施例係關於結晶ΗΕΑ，當使用CuKa輻射量測時 其XRPD圖案包含上述7.5度2Θ(±0·2度2Θ)之峰，且進一步 包含 14.9、17.5、22.1 及 24.3 度 2Θ(土 0.2 度 2Θ)之峰。 另一實施例係關於結晶ΗΕΑ，當使用CuKa輻射量測時 其XRPD圖案包含上述7.5度2Θ(土 0.2度2Θ)之峰，且進一步 包含 14.2、14.9、17.5、21.8、22.1、22.7及24.3度20(±〇.2 度2Θ)之峰。 另一實施例係關於結晶HEA，其顯示實質上與圖3中所 154201.doc -14- 201200511 示相同之XRPD圖案。 HEA顯*具有如下表4中所報導之％化學位移（包括較言 強度及較低強度峰兩者）的固_Mr(ssNmr)圖案。n 表4

除非另有指示，否則本文報導及主張之所有化學位移精 確到±0.2 ppm以内。 圖4中展示結晶HEA之代表性nC ssNMR光譜。 通用貫施例係關於化合物（1)之結晶膽驗鹽，其13C固 154201.doc -15- 201200511 態NMR光譜包含化學位移為i75」、137 6及27 2 ppm(±〇 2 PPm)之峰。咸信此等化學位移峰足以表徵化合物⑴之 HEA鹽且將其與其他結晶形式區分開來。 另一實施例係關於化合物（1)之結晶膽鹼鹽，其固態 NMR光譜包含化學位移為175 1、172 6、172 2、147 8、 147.1、137.6及 27.2(均 ±〇,2 ppm)之峰。 另一實施例係關於化合物（1)之結晶膽鹼鹽，其Uc固態 NMR光譜包含化學位移為175 1、ι72 6、172 2、17〇2、 154.9、149.5、147.8、1471、137 6、27 2及 15 7 啊(均 ±0.2 ppm)之峰。 另一實施例係關於化合物（1)之結晶膽鹼鹽，其顯示實 質上與圖4中所示相同之丨3^ SSNMR光譜。 另一實施例係關於化合物（1)之結晶膽鹼鹽，其具有根 據上述實施例之任何組合的又尺!》!)圖案及uc ssNmr光譜兩 者舉例而01，▲使用CuKa輪射量測時結晶膽驗鹽之X射 線粉末繞射圖案包含7.5度2Θ(±0·2度2Θ)之峰，且其13c固熊 NMR光譜包含化學位移為175」、137 6及27 2卯叫土〇 2 ppm)之峰。 本發明提供一種製備HEA之方法，其包含在如下所述之 條件下使HEA結晶。形成HEA之精確條件可憑經驗確定， 且只可能提供已發現適合實施之方法。 已發現可藉由包含以下步驟之方法來製備HEa ’該方法 亦為本發明之—實施例： (i)將化合物（1)與適合溶劑組合且加熱至約6〇〇c ; 15420I.doc -J6- 201200511 (11)添加約1.1當量氫氧化膽鹼於適合溶劑中的儲備溶 液； ’ (lii)冷卻至約5°c ; (1V)過渡所得漿料且用適合溶劑沖洗固體； (v)在約7〇。〇於真空下乾燥固體。 較佳溶劑包括乙腈及丙酮。最佳溶劑為乙腈。適合氫氧 化膽驗儲備溶液包括甲醇溶液或水溶液，視情況經乙腈稀 釋。較佳儲備溶液為用乙腈稀釋之45 wt0/〇曱醇溶液。可藉 由此項技術中已知之任何習知方法來回收所得he a晶體。 在最終步驟（iv)及（v)中，可使用習知收集及高溫乾燥技 術（例如過;慮及真空供箱）來收集步驟（iv)中獲得之所得固 體並在面溫下乾燥。 在一較佳實施例中，在步驟⑴中，將化合物（1)與乙腈 以每公克化合物（1)10 mL:腈之比率組合，且步驟（ii)中所 用之氫氧化膽鹼之儲備溶液藉由用乙腈將45 wt%氫氧化膽 驗之甲醇溶液稀釋至原始體積之5倍來製備。 在另一實施例中’在添加氫氧化膽鹼之後，在步驟（ii) 期間添加自先前製備獲得之HE A晶種。 在另一實施例中，在步驟（iii)中，在攪拌同時進行冷卻 約4小時。 在另一實施例中，在步驟（v)中將固體乾燥約4至12小 時。 當然可藉由習知攪動技術（例如攪拌）及其他如清楚瞭解 可促進處理之習知技術來促進處理步驟。 154201.doc 17· 201200511

結晶MU 已將化合物（1)分離為結晶甲基_D-還原葡糖胺鹽多晶 型物，在本文中稱為「MU」。一般而言，MU顯示之特徵 性X射線粉末繞射（「XRPD」）圖案以度20(士〇 2度2Θ)表示 在 2.5、4.4、5.1、11.7、15.5、15.9及 20.9處具有較高強度 峰。 圖5中展示MU之XRPD圖案。圖5中XRPD圖案之特徵性 峰位置及相對強度展示於下表5中（包括較高強度及較低強 度峰）》 表5 角度，2Θ，。 —__ 相對強度％ 2.5 79.3 4.4 100.0 5.1 62.8 8.8 10.4 9.2 13.3 11.7 18.3 15.5 15.9 15.9 28.6 20.9 15.6 22.1 14.2 23.1 15.5 對於MU晶體’差示掃描熱量測定法（DSC)展示兩個寬的 吸熱事件’一個為20°C至69。(：且另一個為155。(：至187。(：。 熱解重量分析（TGA)展示3.丨3%之重量損失與第一吸熱事件 (20C至69C)有關’其指示MU為半五水合物（hemipentahydrate) 形式。 154201.doc -18- 201200511 在一通用實施例中，本發明係關於化合物（1)的結晶N-甲基-D-還原葡糖胺鹽，在本文中稱為「MU」。 另一更特定實施例係關於具有至少以下特徵之結晶 MU :當使用CuKa輻射量測時，X射線粉末繞射圖案包含 4.4度20(±〇.2度20)之峰。 另一實施例係關於結晶MU，當使用CuKa輻射量測時其 XRPD圖案包含上述4.4度2Θ(±0·2度2Θ)之峰，且進一步包 含2.5及5.1度20(±〇.2度20)之峰。 另一實施例係關於結晶MU，當使用CuKa輻射量測時其 XRPD圖案包含上述4.4度2Θ(±0.2度2Θ)之峰，且進一步包 含 2.5、5.1、11.7及15.9度20(±〇.2度20)之峰。 另一實施例係關於結晶MU，當使用CuKa輻射量測時其 XRPD圖案包含上述4.4度2Θ(±0·2度2Θ)之峰，且進一步包 含 2.5、5·1、11.7、15.5、15.9 及 20.9 度 2Θ(土0.2 度 2Θ)之 峰。 另一實施例係關於結晶MU，其顯示實質上與圖5中所示 相同之XRPD圖案。 MU顯示具有如下表6中所報導之13C化學位移（包括較高 強度及較低強度峰）的固態NMR(ssNMR)圖案。 表6 化學位移(ppm) 化學位移(ppm) 178.4 70.4 175.6 67.7 173.9 67.2 173.5 59.7 154201.doc -19- 201200511 173.4 59.2 172.7 58.6 172.3 58.2 159.8 53.5 158.0 51.7 156.7 42.1 156.4 41.7 156.0 41.6 154.2 38.6 151.2 37.5 147.2 35.1 138.0 34.7 122.4 34.4 118.8 34.2 116.4 33.8 114.0 27.0 111.6 24.7 95.7 23.9 79.4 20.8 78.9 19.2 74.7 18.9 70.6 除非另有指示，否則本文報導及主張之所有化學位移精 確到±0.2 ppm以内。 圖6中展示MU之代表性13C ssNMR光譜。 一通用實施例係關於化合物（1)之結晶N-曱基還原葡 糖胺鹽，其13C固態NMR光譜包含化學位移為Π84、 13 8.0 及27.0 ppm(±0·2 ppm)之峰。咸信此等化學位移峰足以表 徵化合物（1)之MU鹽且將其與其他結晶形式區分開來。 另一實施例係關於化合物（1)之結 胺鹽，其nC固態NMR光譜包含化學 晶N-甲基_D·還原葡糠 位移為 178.4、175 6 154201.doc -20· 201200511 159.8、154.2、151.2、138.0 及 27.0 ppm(均土0.2 ppm)之 il^· 〇 另一實施例係關於化合物（1)之結晶N-甲基-D-還原葡糖 胺鹽，其13C固態NMR光譜包含化學位移為178.4、175.6、 173.4、172.3、159.8、154.2、151.2、138.0、27.0、24.7 及20.8 ppm(均士0.2 ppm)之峰。 另一實施例係關於化合物（1)之結晶N_甲基_D•還原葡糖 胺鹽’其顯示實質上與圖6中所示相同之ssNMR光谱。 另一貫施例係關於化合物（1)之結晶N_曱基還原葡糖 fe鹽，其具有根據上述貫施例之任何組合的XRPD圖案及 13C ssNMR光譜兩者。舉例而言，當使用CuKa輻射量測時 結晶N-甲基-D-還原葡糖胺鹽之χ射線粉末繞射圖案包含 4.4度2Θ(土 0.2度2Θ)之峰，且其uc固態Nmr光譜包含化學 位移為 178.4、138.0及 27.0 ppm(±0.2 ppm)之峰。 本發明提供-種製備MU之方法，其包含在如下所述之 條件下使MU纟形成則之精確條件可憑經驗確定，且 只可能提供已發現適合實施之方法。 已發現可藉由包含以下步驟之方法來製備則，該方法 亦為本發明之一實施例： ⑴將化合物⑴m當量之N_甲基還原葡糖胺於適合 溶劑中組合； (ii) 加熱該混合物至約5〇。〇; (iii) 經4小時加入適合溶劑以降低mu之溶解度； (iv) 經3小時冷卻襞料至約2〇。〇; 154201.doc -21 - 201200511 (V) 過濾漿料且用適合溶劑或溶劑混合物沖洗所得固 體； (VI) 在約S30°c下於真空下乾燥固體。 適合溶劑包括乙酸曱酯（Me〇Ac)/H2〇或異丙醇（ιρΑ)/ h2o。較佳溶劑為Me0Ae/H2◦混合物。可藉由此項技術中 已知之任何習知方法來回收所得Μϋ晶體。 在一較佳實施例中，在步驟（i)中將化合物（1)與i當量之 N-曱基-D-還原葡糖胺以每公克化合物（1)4 68 g 出〇之比率組合於Me〇Ac/H2〇(9 2 wt%)中加熱至約 50°C，且在步驟（iii)中經4小時添加每公克化合物（1)7 13吕 MeOAc，且在步驟（v)中以Me〇Ac/H2〇混合物（每公克化合 物（1)1.75 g MeOAc+0.035 g H20)沖洗。 在另一實施例中，在步驟（iii)期間添加自先前製備獲得 之MU晶種。 當然可藉由習知攪動技術（例如攪拌）及其他如清楚瞭解 可促進處理之習知技術來促進處理步驟。 鹽特徵 已意外發現緩血酸胺鹽形式TH及膽驗鹽he A耳有使其尤 其有利於醫藥調配加工的獨特性質《詳言之，TH及HEa具 有之某些性質將使其更容易在製造期間進行表徵、加工及 處理。 首先’意外發現TH以非溶劑化及不吸濕或輕微吸濕（在 環境溫度下高達8 5 % RH下）之結晶形式存在。亦發現he a 以非溶劑化及不吸濕之結晶形式（在環境溫度下高達85〇/〇 154201.doc • 11· 201200511 RH下）存在。此等性質為不可預測之性質。舉例而言，發 現鈉鹽(ΝΑ)以可變水合物形式存在，其可造成一致；配物 表徵、製造（例如難以乾燥）及處理方面之難題。 表7 此外，如表7中所示，意外發現在ρΗ 68下，τη相較於 鈉鹽或ΗΕΑ具有高10倍以上之溶解速率。ηεα與鈉鹽相 當。增強之溶解可有利於吸收及生物可用性。 化合物 溶解速率 (UR/min/mL'i TH ---------~~—--上- 64.4 HEA 1.1 NA 1.3 產生此等結果所用之方法在下文之表徵方法部分中描 述。 化合物（1)之各種結晶鹽所獲得之以上結果為非可預期 的，因為一般不能預測一種化合物、尤其化合物（1)之不同 鹽形式之間吸濕性、溶劑合物形式或溶解度之差異，即使 在該等形式已成功製備之後。 醫藥組合物及方法 鑒於所證實化合物（1)針對Hcv NS3絲胺酸蛋白酶之抑 制活性，化合物（1)之上述形式，包括TH、HEA&MU鹽形 式，適用作抗-HCV劑。因此此等形式適用於治療哺乳動 物之HCV感染，且可用於製備用於治療患者之hcv感染或 減輕其一或多種症狀的醫藥組合物。用於特定患者之適當 劑i及方案可藉由此項技術中已知之方法及參考美國專利 154201.doc •23· 201200511 6,323，180及7,585,845中之揭示確定。一般而言，投與治療 有效量來治療哺乳動物之HCV感染《在一個實施例中，每 天以單次或多次劑量投與每個成人約50 mg至1〇〇〇 mg、更 佳約120 mg至約480 mg。 對於任何特疋患者之特定最佳劑量及治療方案當然將視 多種因素而定，包括年齡、體重、—般健康狀況、性別、 飲食、投藥時間、排出速率、藥物組合、感染之嚴重程度 及過程、患者之感染傾向及治療醫師之判斷。一般而言， 該化合物最佳以-般將提供抗病毒有效結果而不會導隸 何有害或不利副作用之濃度含量投與。 通常經由醫藥組合物以所選擇之劑量濃度向患者投與化 勿（）之ΤΗ HEA及MU結晶鹽形式。參見例如美國專利 6,323，18G及7,585,845中對於可用於本發明之各種類型組合 物的描述。醫藥組合物可經口、非經腸或經由植入式儲積 器投與。本文所用之術語非經腸包括皮下、皮内、靜脈 I肌肉内'M㈣、滑膜内、胸骨内1内及病灶内注 射或輸液技術H與或注射投與較佳。 本發明之3藥組合物可含有任何習知醫藥學上可接受之 無毒載劑、稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒劑。在一些情況 下：可用醫藥學上可接受之酸、鹼或緩衝劑調節調配物之 〜強^調配之化合物或其傳遞形式的穩定性。 醫藥組合物可呈滅菌可注射製劑形式，例如滅菌可注射 水性或油性懸浮液。此懸浮液可根據此項技術中已知之技 術使用適合分散劑或濕潤劑(諸如TWeen 80)及懸浮劑調 I5420I.doc _24· 201200511 配。 醬藥、且。物亦可呈經口醫藥組合物形式，其包含化合物 ⑴之th、hea^Mu鹽或其混合物及至少_種醫藥學上可 接受之載劑或稀釋劑。經口醫藥組合物可以任何經口可接 受之劑型經口投與’包括(但不限於)錠劑、膠囊(例如硬或 軟明膠膠囊）’包括填充液體之膠囊，及水性懸浮液及溶 、'在•使用之鍵劑情況下，常用載劑包括乳糖及玉米 澱粉。通常亦添加潤滑劑’諸如硬脂酸鎂。對於經口投與 之膠囊形式’適用稀釋劑包括乳糖及乾玉米澱粉。可使用 之軟明膠膠囊之實例包括EP 6侧m及美國專利 5,985’321中所揭示者。當經口投與水性懸浮液時，將活性 成分與乳化劑及懸浮劑組合。必要時，可添加某些甜味劑 及/或調味劑及/或著色劑。 用於上述調配物及組合物之其他適合媒劑或載劑可見於 標準醫藥學教科書中’例如「Remingt〇n,s pha_eeutical Sciences」，第 19版，Mack PubHshing。叫卿，East〇n， Penn.，1995。 當然’當結晶ΤΗ、HE A或MU鹽調配於液體媒劑中時， 例如，調配為供經口投與或注射之液體溶液或懸浮液，包 括例如調配於填充液體之膠囊中時，該鹽喪失其結晶性 質。然而，最終液體基醫藥組合物含有新穎的化合物（丨）之 ΤΗ、HEA或MU鹽，且其因此視為本發明所包涵之獨立實 施例。 表徵方法 154201.doc •25· 201200511 ι· χ射線粉末繞射 使用 CuKa輻射在自 Bruker AXS，Inc (Madis〇n，—獲得 之Bruker AXS X射線粉末繞射儀M〇dei 〇8 Disc〇ver上進行 x射線粉末繞射分析》步進掃描為自2。29進行至35。20，每 步0·〇5°’每步4秒。使用參考石英標準物來檢查儀器對 準。藉由排列零背景矽固持器來製備樣品用於分析。 2. DSC分析 使用TA儀器Ql000來進行Dsc分析。將約5 mg樣品稱量 至密封紹盤中’打開。使用標準句變模式以阶纷鐘加熱 速率自20 C加熱至300。(^操作時用5〇 mL/min氮氣吹掃 DSC單元。 3. TGA分析 使用TA儀器Q500來進行TGA分析。將約1〇爪§毫克樣品 置於配衡之鉑TGA盤上。以i〇°c/分鐘加熱速率自25。〇至 300 C掃描樣品。用60 mL/min氮氣吹掃TGA爐，同時用4〇 mL/min氮氣吹掃天平。 4. 動態氣相吸附 動態吸水分析使用表面量測系統Dvs或DVS-HT，或VTI SGA-100儀器來進行。樣品量在4 mg至13 mg範圍内。在 25°C下操作三個吸水/解吸之循環’相對濕度以5_1〇%之增 量自5%變至95%。該步驟之準則為重量變化小於或等於 0.002%或最長時間為3小時。

5. 固態NMR 在 Bruker AVance m NMR光譜儀（Bruker Biospin，Inc·， 154201.doc -26- 201200511

Billerica, ΜΑ)上在 9.4T 下（4=400.46 MHz，13C=100.70 MHz)獲得固態NMR(ssNMR)資料。將樣品封裝於具有Kel_ F®驅動尖端之4 mm外徑氧化锆轉子中。使用Bruker 4BL CP BB WVT型探針獲取資料且樣品繞魔術角（54 74。）旋 轉。獲取樣品光譜所使用之旋轉速率為12 kHz。在環境溫 度及壓力下，在質子通道上標準橫向極化脈衝序列與勻變 Hartman-Hahn匹配脈衝一起使用。脈衝序列使用5毫秒接 觸脈衝及2秒再循環延遲。在脈衝序列中亦使用雙脈衝相 位調變（tppm)去耦。在自由感應衰變之傅里葉變換（F〇urier transformation)之前不使用指數譜線加寬。使用金剛烷之 次級標準物作為化學位移參考，其中高磁場共振設置為 29.5 ppm。在5 kHz之旋轉速率下使用來自KBr粉末之79Br 信號來設置魔術角。 6.溶解研究 在37°C下以100 rpm旋轉速率使用Vail Kel VK7000溶解 測試器及400 ml溶解槽來評估固有溶解速率。使用約5〇 mg API於6 mm直徑Wood模具中藉由Carver壓力機以3 kN 壓力及I5秒停留時間來製備樣品。在4〇〇 mL pH 6 8(2〇 mM磷酸鈉）中進行該測試。在2、5、1〇、15、2〇、25及3〇 分鐘時收集樣品，且所收集之樣品未經過濾的或使用〇 2 μιη PDVF過濾器進行過濾。使用利用螢光偵測之等度方法 藉由HPLC來測定藥物之濃度。 為更充分理解本發明，闡述以下實例。此等實例係出於 說明本發明之實施例之目的，且不應解釋為以任何方式限 154201.doc •27· 201200511 制本發明之範疇。該等實例中所用之起始物質化合物（1)可 藉由美國專利6,323，180、7,514,557及7,585,845中揭示之 方法製備。 實例 實例1 :製備化合物（1)之緩血酸胺鹽 將化合物（1)(5 g)與參（羥甲基）胺基曱烷（〇 696 g)組合於 50 mL丙酮中。攪拌混合物且加熱至5(rc並在該溫度下攪 拌4小時。在攪拌下使所得漿料緩慢冷卻至2〇。〇 ^將冷卻 之混合物攪拌總共12小時。真空過濾所得混合物且用丙酮 (2x10 mL)沖洗所得固體。在真空下於7〇〇c下乾燥固體12 小時’得到化合物（1)之緩血酸胺鹽（TH)。 τη之xrpd圖案展示於圖& ΤΗ之i3C ssNMR^譜展示 於圖2中。 實例2:製備化合物（1)之膽驗鹽 將化合物（1)(5 g)與50 mL乙腈組合且攪拌，並加熱至 60 C ^在60°C攪拌下經6小時的時期緩慢添加4.52 mL·的先 則藉由用乙腈稀釋5 mL氫氧化膽驗於MeOH中之45 wt%溶 液至總體積25 mL而製備的氫氧化膽鹼儲備溶液。攪拌混 合物且經4小時的時期緩慢冷卻至5〇c。隨後過濾漿料且用 乙腈（2X 10 mL)洗條所得固體。隨後在真空下於7〇。〇下乾 燥固體12小時，得到化合物（丨）之膽鹼鹽（HEA)。 HEA之XRPD圖案展示於圖3中且hEa之nc ssNMR光譜 展示於圖4中。 實例3:製備化合物（1)之〜甲基·D_還原葡糖胺鹽 154201.doc •28· 201200511 將化合物（1)(20 g)&N_甲基_D_還原葡糖胺（4 49 g)與 8.63 g HjO及85 g乙酸甲酯（Me〇Ac)組合。攪拌混合物且加 熱至50 C。經>4小時將142.5 g MeOAc加入混合物中（在 MeOAc添加之前加晶種較佳但並非必需）。在攪拌下經y 小時使所得漿料冷卻至2〇。(：。過濾所得混合物且用

Me0Ac/H20 混合物（35.15 g MeOAc+O.717 g H20)沖洗所得 固體。在真空下於S30°C下乾燥固體212小時，得到化合物 (1)之N-甲基-D-還原葡糖胺鹽（MU)。 MU之XRPD圖案展示於圖5中且MU之13C ssNMR光譜展 示於圖6中。 【圖式簡單說明】 圖1為結晶TH之特徵性X射線粉末繞射圖案； 圖2為結晶TH之特徵性13C固態NMR光譜； 圖3為結晶HEA之特徵性X射線粉末繞射圖案； 圖4為結晶HEA之特徵性13C固態NMR光譜； 圖5為結晶MU之特徵性X射線粉末繞射圖案；及 圖6為結晶MU之特徵性13C固態NMR光譜。 154201.doc •29·

Claims (1)

1. 201200511 七、申請專利範圍： 1. 一種下式（1)化合物之結晶緩血酸胺（tromethamine)鹽：

   ⑴ 2. 如請求項1之結晶鹽，當使用CuKa輻射測量時，其X射 線粉末繞射圖案包含5.9度2Θ(±0.2度2Θ)之峰。 3. 如請求項1之結晶鹽，其13C固態NMR光譜包含化學位移 178.3 ' 138.1 及 27.1 ppm(±0.2 ppm)之峰。 4. 如請求項1之結晶鹽，當使用CuKa輻射測量時，其X射 線粉末繞射圖案包含5.9度2Θ(土 0.2度2Θ)之峰，及其13C固 態NMR光譜包含化學位移178.3、138.1及27.1 ppm(±0.2 ppm)之峰〇 5. —種下式（1)化合物之結晶膽鹼鹽： 154201.doc 201200511

   6. 如請求項5之結晶鹽，當使用CuKa輻射測量時，其χ射 線粉末繞射圖案包含7.5度2Θ(±0.2度2Θ)之峰。 7. 如請求項5之結晶鹽，其i3c固態NMR光譜包含化學位移 175.1、137.6及 27.2 ppm(±0.2 ppm)之峰》 8_如請求項5之結晶鹽，當使用CuKa輻射測量時，其χ射 線粉末繞射圖案包含7.5度2Θ(±0.2度2Θ)之峰，及其13C固 態NMR光譜包含化學位移175」、137 6及27 2 ppm(土〇 2 ppm)之峰。 9. 一種下式（1)化合物之結晶N-曱基-D-還原葡糖胺鹽： 154201.doc 201200511

   (1) 〇 ίο. 11. 12. 13. 如清求項9之結晶鹽，當使用CuKa輻射測量時，其χ射 線粉末繞射圖案包含4.4度2Θ(±0·2度2Θ)之峰。 如凊求項9之結晶鹽，其nc固態NMR光譜包含化學位移 W8.4 138.0及 27.0ppm(±0.2ppm)之峰。 如請求項9之結晶鹽，當使用CiiKa輻射測量時，其χ射 線粉末繞射圖案包含4,4度“(土〇 2度20)之峰，及其固 態NMR光譜包含化學位移178 4、138〇及27〇 _±〇2 ppm)之峰。 一種醫藥組合物’其包含如請求項！至12中任-項之鹽 及至少-種醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。 154201.doc