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TW201138811A - Peptide conjugates - Google Patents

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TW201138811A
TW201138811A TW100114971A TW100114971A TW201138811A TW 201138811 A TW201138811 A TW 201138811A TW 100114971 A TW100114971 A TW 100114971A TW 100114971 A TW100114971 A TW 100114971A TW 201138811 A TW201138811 A TW 201138811A
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TW
Taiwan
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peg3
gastrin
exendin
lys
leu4
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Application number
TW100114971A
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TWI523659B (zh
Inventor
Trine Skovlund Ryge Neerup
Torben Osterlund
Jakob Lind Tolborg
Keld Fosgerau
Ulrika Martensson
Marianne Brorson
Kamilla Rolsted
Original Assignee
Zealand Pharma As
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Filing date
Publication date
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Publication of TWI523659B publication Critical patent/TWI523659B/zh

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Description

201138811 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 2Γ月尤其係、關於料肽結合物，且係關於該等結合物 ^療夕種疾病或病症的用途，包括糖尿病㈣及/或2型）及 糖尿病相關疾病或病症。 【先前技術】 糖尿病，特別是1型及2型糖尿病，以及咸信尤其為2型 :尿病發生之主要病因的肥胖症，構成曰益增長及全世界 耗圍之主要健康問題。由於未經治療之糖尿病而可能產生 之疾病或病症包括心i管及周邊動脈疾病、微血管及大血 管併發症、中風及可能的某些癌症形式。 糖尿病特徵在於血糖含量之生理學調節缺陷，且可導致 糖尿病之潛在病狀有胰腺β·細胞群及功能之降低或喪失， 伴有内源性胰島素產生及/或胰島素抗性之降低或喪失（對 騰島素之敏感度降低）’亦即實現血糖含量充分調節之内 源性胰島素之能力降低或喪失。 胃腸黏膜回應消化道中存在及吸收之營養素而分泌許多 降低血糖含量之激素。此等激素包括類升糖素肽(GLp_ 1)、葡萄糖依賴性促胰島素肽（GIP)及胰泌素。 GLP-1[參見例如 0rskov，Diabetologia 35: 701-711 (1992)]係藉由組織處理前升糖素（proglucagon)(—種180胺 基酸之狀）而生成[參見例如Drucker，47: 159-169 (1998)]。前升糖素之整個序列含有升糖素之29胺基酸序 列、GLP-1之36或37胺基酸序列以及類升糖素肽-2(GLP- 155900.doc 201138811 2 ; — 種腸營養肽（intestinotrophic peptide))之 34胺基酸序 列。人類GLP-l(7-37)具有胺基酸序列HAEGTFTSDV SSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG(SEQ ID NO: 114) ° 已確認GLP-1具有許多功能。其為在正常人體内增加受 葡萄糖刺激之胰島素分泌的激素（且因此屬於稱為腸促騰 島素激素的激素群）。此外，GLP-1降低升糖素濃度，延遲 胃排空，刺激胰島素（原）生物合成，且增加胰島素敏感度 [參見例如 Nauck，Horm. Metab. Res. 47: 1253-1258
U997)]。GLP-1亦增強葡萄糖耐受性不良之個體中胰腺β-細胞感測及回應葡萄糖的能力（藉由胰島素分泌）[參見例如 Byrne,五wr. «/· C7z’《. /«vesi. 28: 72-78 (1998)]。人體内 GLP-1之促胰島素效應增加葡萄糖消失速率且降低内源性葡萄 糖之產生’部分地是由於肤島素含量增加且部分地是由於 胰島素敏感度之提高[參見例如D'Alessio，J 28: 72-78 (1994)]。然而，在嘗試利用該激素作為 藥物時，原生GLP-1在活體内之短半衰期成為主要藥理學 難題。在人類及大鼠體内，GLP-1經二肽基肽酶-IV(DPP-IV)快速降解成GLP-UQdG)醯胺，其用作内源性GLP-1受 體拮抗劑。已提出若干防止此問題發生的對策，其中一些 使用DPP-IV之抑制劑，但其他使用GLP-l(7-36)醯胺之抗 DPP-IV類似物。 構成降低血糖含量之另一肽群組的所謂Exendin與GLP_ 1(7-36)具有一些序列相似性（53%)[參見例如Goke等人，乂 价〇/· 268: 19650-19655 (1993)]。Exendin發現於毒 155900.doc 201138811 蝴科（Helodermatidae)物種（念珠渐踢（beaded lizard))之唾 液中。Exendin-3存在於墨西哥毒姊Aorr/dwm) (墨西哥念珠蜥踢（Mexican beaded lizard))之唾液中，而 Exendin-4存在於純尾毒晰吉拉毒 晰（Gila monster))之唾液中》在位置2及3不同於Exendin-3 的 Exendin-4之胺基酸序列為 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVR LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(SEQ ID NO: 115)。
Exendin-4已報導為分離之大鼠胰島素瘤細胞上的冇效 GLP-1受體促效劑[Goke等人，在上述引文中]。WO 99/07404揭示在糖尿病db/db小鼠中以全身方式投與 Exendin-4使血糖含量降低40%，且亦已報導在糖尿病 ob/ob小鼠中每日一次腹膜内注射Exendin-4具有長期降血 糖效果[Grieg等人，42: 45-50 (1999)]。 US 5,424,286^. WO 98/0535 1# ^ Exendin-3 ' Exendiri -4 及Exendin促效劑可用於治療糖尿病、用於減少胃蠕動及 延遲胃排空及用於預防高血糖症，且WO 98/30231另外揭 示其可用於減少食物攝取。 狀激素胃泌素（Gastrin)係由胃黏膜細胞及十二指腸G細 胞分泌，且在人類該激素之主要生理學作用為刺激胃酸 (亦即HC1)分泌並幫助胃蠕動。胃泌素之其他確認作用包 括刺激細胞生長，且有表明胃泌素可在胰島新生中起作 用，亦即刺激胰島中分泌胰島素之β-細胞生長[參見例如 Korc，Μ·，《/· /«veii.，92: 1113-1114 (1993) ; R〇〇man 等人，心ία 51: 686-690 (2002)]，且藉此有助於血糖 1559⑻.doc 201138811 調節。 胃泌素與另一胃腸肽激素膽囊收縮素（CCK)共用受體。 受體CCK-A R及CCK-B R對於胃泌素及CCK變異體具有不 同親和力。CCK-A R(或CCK R1)主要用作硫酸化CCK之受 體’而CCK-B R(或CCK R2)結合CCK及胃泌素同樣好。由 於血漿中胃泌素之含量高於CCK，因此認為CCK-B R為 「胃泌素受體」[Foucaud 等人，Pe/mWes 145 : 1 7-23 (2008)] 〇 CCK-B R可在結合配位體時起始幾個細胞内路徑，其被 視為CCK之各種生理學作用之原因。CCK-B R下游之關鍵 路徑為ΜAPK(有絲分裂促進劑活化蛋白激酶）或石RK(細胞 外調節激酶）路徑’其亦由幾種生長激素活化。此為胃泌 素之細胞增殖作用之關鍵特徵。由於CCK-B R表現於胰腺 中’因此胃泌素能夠促進此組織中之細胞增殖及胰島再 生。 在人類中，胃泌素主要以三種形式存在，即胃泌素34、 胃泌素17及胃泌素14(參考所述序列中胺基酸之總數）。亦 已確認胃泌素6。較短形式係由裂解c端醯胺化之胃泌素34 產生’因此胃泌素17由胃泌素34之C端最後17個殘基組成 (對應於前胃泌素（55-71))、胃泌素14由c端最後14個殘基 組成（對應於前胃泌素（58-71))及胃泌素6僅由c端最後6殘 基組成（對應於前胃泌素（66-71)) ^胃泌素之醯胺化形式以 咼親和力與CCK-B R結合並發揮細胞增殖功能。在人類胃 泌素17中，N端胺基酸殘基為焦麩胺酸（pyr〇Giu)殘基。醯 I55900.doc 201138811 胺化之C端6胺基酸為胃泌素之關鍵受體結合殘基。 WO 2005/072045尤其揭示「GLP-1促效劑」與「胃泌素 化合物」之組合，據稱此組合具有預防及/或治療「GLpq 促效劑」或「胃泌素化合物」已證明具有治療效果的病狀 及/或疾病的有益作用。WO 2007/095737尤其揭示 . 「效劑」與「胃泌素化合物」之類似組合，據 稱此類似組合同樣具有預防及/或治療「Exendin促效劑」 或月泌素化合物」已證明具有治療效果的病狀及/或疾 病的有益作用。 WO 2005/072045中提出之數據[源自使用廣泛用作人類1 型糖尿病之動物模型的非肥胖糖尿病（N〇D)小鼠之研究]似 乎指示’相較於單獨使用所述「GLP-1促效劑」（或「胃泌 素化合物」）時所見之作用，其中描述之某些「GLP-1促效 劑」/「胃泌素化合物」組合在急性糖尿病N〇D小鼠中可 具有使血糖含量正常化的有益作用。W〇 2〇〇7/〇95737中提 出之數據[同樣源自使用非肥胖糖尿病（NOD)小鼠之研究] 〇乎心示，相較於單獨使用所述「Exen(jin促效劑」（或 「胃泌素化合物」）時所見之作用，其中描述之某些 ， 「Exendin促效劑」/「胃泌素化合物」組合在急性糖尿病 ' nod小鼠中可具有使血糖含量及胰島素含量正常化的有益 作用，且相較於單獨使用Γ GLP_ i受體促效劑」時所見之 作用，其中描述之某些「GLPd受體促效劑」/胃泌素組合 可具有誘發胰島細胞再生的有益作用。 WO 2005/072045及W〇 2007/095737亦揭示可形成分別 155900.doc 201138811 包含「GLP-1促效劑」或「Exendin促效劑」與「胃泌素化 合物」彼此視情況經由中間連接子或間隔子共價偶聯或連 接（亦即結合）之結合物。提及為合適間隔子的有單醣或雙 醣、胺基酸、硫酸酯、丁二酸酯、乙酸酯、或包含一或多 種此類部分的寡聚聚合物間隔子或連接子4描述所述類 型之結合物可藉以製備的預期方法。所述後者文獻在各別 國際申請案提出_請時均未提供製備性或其他數據來證實 所述類型之任何結合物實際上已製備及表徵，或其生物/ 生理學性質或活性已測試。 另外可注意到WO 2005/072045及w〇 2〇〇7/〇95737均未 提供任何活體内、活體外或其他數據來證實其中描述及使 用之GLP-1促效劑」/「胃泌素化合物」或「£則如促 效劑」’胃泌素化合物」組合分別在治療例如2型糖尿病 時可為有益的。 【發明内容】 目前已發現’包含兩個共價偶聯或連接之肽部分的特定 口物與所述兩種個別肽之組合的治療活性相比在治療例 如糖尿病（1型及/或2型糖尿病）或各種其他糖尿病相關疾病 或病症時可展示出乎意料之高治療活性。 在第—態樣中’本發明因此提供具有式1之肽結合物 R'-Z-L-Y-R2 (I) 其中 為H C〗·4烷基、乙醯基、甲醯基、苯曱醯基或三氟 155900.doc 201138811 R2 為 OH或 NH2 ; Z包含具有以下序列之Exendin-4(l-39)之序列 His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glii-Trp-Leu-Ly s-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(SEQ ID NO: 115) 或其類似物Za ; L為視情況存在之連接部分；且 Y包含具有以下序列之胃泌素17之序列 Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Y15-Asp-Phe(SEQ ID NO: 116) 其中Y15係選自Leu、Nle、Phe及Thr 或其類似物Ya。 另外，本發明提供一種肽結合物，其中： (i) Za關於Exendin-4之序列在多至1〇個位置上具有取代， 及/或包含1至12個胺基酸的C端截斷；及/或 (ii) Ya關於胃泌素1 7之序列在多至5個位置上具有取代， 及/或關於胃泌素17之序列包含1至13個胺基酸的N端截 斷。 在一實施例中，本發明提供一種肽結合物，其中 Za為具有式Ila之肽序列
His-Z2-Z3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Z10-Zll-Z12-Z13- Z14-Glu-Z16-Z17-Z18-Z19-Z20-Z21-Z22-Z23-Z24-Z25- Z26-Z27-Z28-Z29-Z30-Z31-Z32-Z33-Z34-Z35-Z36-Z37- 155900.doc •9· 201138811 Z38-Z39(IIa) 其中 Z2係選自 Gly、Ala、Ser、Aib、Thr、Leu及 lie ; Z3係選自Glu及Asp ; Z9係選自Asp及Glu ; Z10係選自 Leu、Va卜 lie及 Ala ;
Zll係選自Ser及Aib ; Z12係選自 Ser、Gin、Arg、Cys、Lys、Glu及 Orn ; Z13 係選自 Arg、Ser、Gin、Tyr及 Glu ; Z14係選自 Gly、Cys、Phe、Tyr、Trp、Lys、Met、 Leu、Nle及 lie ; Z1 6係選自 Asp、Gly、Aib、Glu、Lys及 Cys ; Z17係選自 Glu、Cys、Lys、Ser及 Gin ; Z18係選自Ala及Aib ; Z19係選自 vai、Leu、lie及 Ala ; Z20係選自 Arg、Lys、Cys、Orn及 Glu ; Z21係選自Leu及Glu ; Z22係選自phe及Ala ; Z23係選自ne及Leu ; Z24係選自 Glu、Cys、Lys、Ala及 Arg ; Z25係選自 Trp、Cys、Lys及 Phe ; Z26係選自Leu及lie ; Z27係選自 He、Val、Gin、Lys、Cys、Arg及 Orn ; Z28係選自 Asn、Ser、Asp、Aib、Gin、Lys、Cys、 155900.doc •10· 201138811
Arg、Tyr、bAla、Glu、Orn及 Leu，或不存在； Z29係選自Gly、Aib及bAla，或不存在； Z30係選自Gly、Cys、Lys及Arg，或不存在； Z3 1係選自Pro、Ser及Asp，或不存在； Z32係選自Ser及Lys，或不存在； Z33為Ser，或不存在； Z34係選自Gly及Lys，或不存在； Z35為Ala，或不存在； Z36為Pro，或不存在； Z37為Pro，或不存在； Z38為Pro’·或不存在； Z39為Ser，或不存在； L為具有式lib之肽序列
Ll-L2-L3-L4(IIb) 其中 L1係選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、 Peg3、Cys及Gin，或不存在； L2係選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、 Peg3、Cys及Gin，或不存在； L3係選自 Ser、Ala ' Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、 Peg3、Cys及Gin，或不存在； L4係選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、 Peg3、Cys及Gin，或不存在；
Ya為具有式lie之肽序列 -11 - 155900.doc 201138811 Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14- Y15-Asp-Y17(IIc) 其中 Y1為Gin，或不存在； Y2為Gly，或不存在； Y3為Pro，或不存在； Y4為Trp，或不存在； Y5為Leu，或不存在； Y6為Glu，或不存在； Y7為Glu，或不存在； Y8為Glu，或不存在； Y9為Glu，或不存在； Y10為Glu，或不存在； Y11為Ala，或不存在； Y12係選自Ala及Tyr，或不存在； Y13係選自Gly及Ala，或不存在； Y14係選自 Trp、Phe、INal及Met ; Y15係選自 Leu、Nle、Phe及 Thr ;且 Y17係選自Phe及3-(3-吡咬基）-丙胺酸。 在另一實施例中’本發明提供一種肽結合物，其中 Za為具有式nia之狀序列
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Z13- Z14-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Z20-Leu-Phe-Ile-Z24-Z25-Leu- Z27-Z28(IIIa) 155900.doc s -12- 201138811 其中 Z9係選自Asp及GIu ; Z12係選自 Lys、Arg及 Orn ; Z13係選自Gin及Tyr ; Z14係選自Met及Leu ; Z16係選自 Glu、Cys及 Lys ; Z20係選自 Arg、Lys及 Orn ; Z24係選自Lys及Glu ; Z25係選自 Trp、Lys、Cys及Phe ; Z2 7係選自 Lys、Arg及 Orn ; Z28係選自Asn及Asp，或不存在； L為具有式Illb之肽序列 Ll-L2-L3-L4(IIIb) 其中 L1係選自 〇rn、Peg3、Cys、Lys及 Gin， L2係選自 〇rn、Peg3、Cys、Lys及 Gin， L3 係選自 Orn、Peg3、Cys、Lys及 Gin， L4係選自 Orn、Peg3、Cys、Lys及 Gin， Ya為具有式IIIc之肽序列 Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17(IIIc) 其中 Y12係選自Tyr及Ala，或不存在； Y13係選自Gly及Ala，或不存在； Y14係選自 Trp、INal及 Phe ; -13- 或不存在 或不存在 或不存在 或不存在 155900.doc 201138811 Y15係選自 Leu、Nle、Thr及 Phe ;且 Y17係選自Phe及3-(3-吡啶基）-丙胺酸。 在另一實施例中，本發明提供一種肽結合物，其中 Za為具有式IVa之肽序列
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Zl 2-Gln-Met-Glu-Z 1 ό-ΘΙιι-ΑΙα-ν^Ι-Αα-Ι^ιι-ΡΙιε-ΙΙε-ΟΙιι-ΤΓρ-Ι^ιι-ΖΙΤ-ΖΙδυνα) 其中 Ζ9係選自Glu及Asp ; Z12係選自Lys及Orn ; Z16係選自Glu及Lys ; Z27係選自Lys及Orn ; Z28係選自Asn及Asp，或不存在； L為具有式IVb之肽序列 Ll-L2-L3-L4(IVb) 其中 L1係選自Orn、Peg3、Cys、Lys及Gin，或不存在； L2係選自〇rn、Peg3、Cys、Lys及Gin，或不存在； L3係選自〇rn、peg3、Cys、Lys及Gin，或不存在； L4係選自〇rn、peg3、Cys、Lys及Gin ’或不存在；
Ya為具有式IVc之肽序列 Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe(IVc) 其中 Y12為Tyr，或不存在；且 •14- 155900.doc 201138811 Y13為Gly，或不存在。 在另一實施例中’本發明提供一種肽結合物，其中 Za為具有式Va之肽序列
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Tyr-
Leu-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Phe-Leu- Z27-Z28(Va) 其中 Z9係選自Glu及Asp ; Z12係選自Lys及Orn ; Z16係選自Glu及Lys ; Z27係選自Lys及Orn ; Z28係選自Asn及Asp，或不存在； L為具有式Vb之狀序列
Ll-L2-L3-L4(Vb) 其中 L1係選自〇rn、peg3、Cys、Lys及Gin，或不存在； L2係選自〇rn、peg3、Cys、Lys及Gin，或不存在； L3係選自〇Γη、peg3、Cys、Lys及Gin，或不存在； L4係選自〇rn、peg3、Cys、Lys及Gin，或不存在；
Ya為具有式Vc之狀序列 Y12-Yl 3-Trp-Leu-Asp-Phe(Vc) 其中 Y12為Tyr’或不存在；且 Y13為Gly ’或不存在。 155900.doc 201138811 另外’本發明提供一種肽結合物’其中式i之肽序列包 含一或多個分子内橋》 另外’本發明提供一種肽結合物’其中該分子内橋在由 式I之線性胺基酸序列中之三個胺基酸分開的兩個胺基酸 殘基之侧鏈之間形成。 在一特定實施例中，本發明提供一種肽結合物，其中分 子内橋在殘基對X與χ+3、x+4、X+5等之側鏈之間形成。 在另一特定實施例中’本發明提供一種肽結合物，其中 分子内橋為内醯胺環。 在另一特定實施例中，本發明提供一種肽結合物，其中 分子内橋涉及一對殘基，其中： Z12 為 Lys且 Z16 為 Glu ; Z12 為 Glu且 Z16 為 Lys ; Z16為 Glu且 Z20 為 Lys ; Z16為 Lys且 Z20 為 Glu ; Z20為 Glu且 Z24 為 Lys ; Z20為 Lys且 Z24 為 Glu。 在本發明之另一態樣中提供具有式VI之肽結合物： R^X-L-Y-R2 (VI) 其中 R為Η、Ci ·4烧基、乙酿基、甲酿基、苯甲酿基或三氣 乙醯基； R2 為 OH 或 NH2 ; X包含具有以下序列之GLP-1 (7-36)之序列 His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Ly s-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-
Val-Lys-Gly-Arg(SEQ ID NO: 114) 155900.doc • 16 - 201138811 或其類似物xa; L為含有多至4個天然或非天然胺基酸或其組合的連接 子，或不存在； Y包含具有以下序列之胃泌素_17之序列 Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Y15-Asp-Phe 其中Y15係選自Leu、Nle、Phe及Thr 或其類似物Ya。 在一實施例中，本發明提供一種肽結合物，其中 (i)Xa關於GLP-1之序列在多至5個位置上具有取代，及/ 或包含1至2個胺基酸的C端截斷；及/或 (i〇Ya關於胃泌素17之序列在多至5個位置上具有取代’ 及/或關於胃泌素17之序列包含1至13個胺基酸的N端截 斷。 在另一實施例中，本發明提供一種肽結合物，其中 Xa為具有式Vila之肽序列
His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-
Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-X26-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-
Val-X34-Gly-X36(VIIa) 其中 X8係選自 Ala、Aib及 Gly ; X26係選自Arg及Lys ; X34係選自Arg及Lys ; X36係選自Arg及Lys ; 155900.doc 201138811 L為具有式Vllb之肽序列 Ll-L2-L3-L4(VIIb) 其中 L1係選自 Ser、Ala、Lys
Orn、bAla、8Aoc、DBF、
Peg3、Cys、Gin，或不存在； L2係選自 Ser、Ala、Lys、 Peg3、Cys、Gin，或不存在； L3係選自 Ser、Ala、Lys、 Peg3、Cys、Gin，或不存在； L4係選自 Ser、Ala、Lys、 Peg3、Cys、Gin，或不存在；
Orn、bAla、
Orn、bAla、
Orn、bAla、 8Aoc、DBF、 8Aoc、DBF、 8Aoc 、 DBF 、
Ya為具有式Vile之肽序列 Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14- Y15-Asp-Y17(VIIc) 其中 Y1 為 Gin， 或不存在； Y2 為 Gly， 或不存在； Y3 為 Pro， 或不存在； Y4 為 Trp， 或不存在； Y5 為 Leu， 或不存在； Y6 為 Glu， 或不存在； Y7 為 Glu， 或不存在； Y8 為 Glu， 或不存在； Y9為 Glu， 或不存在； 155900.doc 201138811 Y10為Glu，或不存在； Y11為Ala，或不存在； Y12係選自Ala、Tyr，或不存在； Y13係選自Gly、Ala，或不存在； Y14係選自 Trp、Phe、INal及 Met ; ' Y15係選自 Leu、Nle、Phe及 Thr ;且 Y17係選自Phe及3-(3-吡啶基）-丙胺酸。 在又一實施例中，本發明提供一種肽結合物，其中 Xa為具有式Villa之肽序列
His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-
Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-X26-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-
Val-X34-Gly-X36(VIIIa) 其中 X8係選自 Ala、Aib及 Gly ; X26係選自Arg及Lys ; X34係選自Arg及Lys ; X36係選自Arg及Lys ; L為具有式Vlllb之肽序列 • Ll-L2-L3-L4(VIIIb) . 其中 L1 係選自 Peg3、Orn、Cys、Lys、Gin，或不存在； L2係選自 Ser、Ala、Orn、Cys、Lys、Gin，或不存在； L3係選自 Lys、Ala、Cys、Orn、Gin，或不存在； L4係選自 Lys、Orn、Ala、Peg3、Cys、Lys、Gin，或不 155900.doc -19- 201138811 存在，
Ya為具有式VIIIc之肽序列 Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Phe(VIIIc) 其中 Y12係選自Tyr、Ala，或不存在； Y13係選自Gly、Ala，或不存在； Y14係選自Trp及Phe ;且 Y15係選自 Leu、Thr及 Phe。 在一特定實施例中，本發明提供一種肽結合物，其中 Xa為具有式IXa之肽序列
His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-
Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-X26-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-
Val-X34-Gly-X36(IXa) 其中 X8係選自 Ala、Aib及 Gly ; X26係選自Arg及Lys ; X34係選自Arg及Lys ; X36係選自Arg及Lys ; L為具有式IXb之肽序列 Ll-L2-L3-L4(IXb) 其中 L1係選自Orn、Peg3、Cys、Lys及Gin，或不存在； L2係選自Orn、Peg3、Cys、Lys及Gin，或不存在； L3係選自Orn、Peg3、Cys、Lys及Gin，或不存在； 155900.doc .20- 201138811 L4係選自Orn、Peg3、Cys、Lys及Gin，或不存在；
Ya為具有式IXc之肽序列 Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe(IXc) 其中 Y12為Tyr，或不存在；且 Y13為Gly，或不存在。 在另一特定實施例中，本發明提供一種肽結合物，其中 Lys或Cys中之至少一者另外結合至親脂性取代基。 本發明之另一態樣係關於具有下式之肽結合物：
Exendin，4(l-39)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (1)
Exendin-4(l-39)-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (2)
Exendin-4(l-39)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (3)
Exendin-4(l-39)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (4)
Exendin-4(l-39)-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (5)
Exendin-4(l-39)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (6)
Exendin-4(l-39)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (7)
Exendin-4(l-39)-DBF-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (8)
Exendin-4(l-39)-8Aoc-8Aoc-[Glnl,Leul5]胃泌素 17， (9)
Exendin-4(l-39)-[Leu4]胃泌素6， (10)
Exendin-4(l-39)-K-[Leu4]胃泌素6， (11)
Exendin-4(l-39)-AAA-[Leu4]胃泌素6， (12)
Exendin-4(l-39)-SKK-[Leu4]胃泌素6， (13)
Exendin-4(l-39)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素6， (14)
Exendin-4(l-39)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6， (15) 155900.doc •21 - 201138811
Exendin-4(l-39)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素6， (16)
Exendin-4(l-39)-DBF-SKK-[Leu4]胃泌素6， (17)
Exendin-4(l-39)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素6， (18)
Exendin-4(l-28)-[Glnl,Leul5]胃泌素 17， (19)
Exendin-4(l-28)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (20)
Exendin-4(l-28)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (21)
Exendin-4(l-28)-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (22)
Exendin-4(l-28)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (23)
Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (24)
Exendin-4(l-28)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (25)
Exendin-4(l-28)-DBF-SKK-[Glnl,Leul5]胃泌素 17， (26)
Exendin-4(l-28)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素17， (27)
Exendin-4(l-28)-[Leu4]胃泌素6， (28)
Exendin-4(l-28)-K-[Leu4]胃泌素6， (29)
Exendin-4(l-28)-AAA-[Leu4]胃泌素6， (30)
Exendin-4(l-28)-SKK-[Leu4]胃泌素6， (31)
Exendin-4(l-28)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素6， (32)
Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6， (33)
Exendin-4(l-28)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素6， (34)
Exendin-4(l-28)-DBF-SKK-[Leu4]胃泌素6， (35)
Exendin-4(l-28)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素6， (36) GLP-l(7-36)-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (37) GLP-l(7-36)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (38) GLP-l(7-36)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (39) 155900.doc -22- s 201138811 GLP-l(7-36)-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， （40) GLP-l(7-36)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (41) GLP-l(7-36)-Peg3-Peg3-[Glnl,Leul5]胃泌素 17， (42) GLP-l(7-36)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (43) GLP-l(7-36)-DBF-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (44) ' GLP-l(7-36)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (45) GLP-l(7-36)-[Leu4]胃泌素6， (46) GLP-l(7-36)-K-[Leu4]胃泌素6， (47) GLP-l(7-36)-AAA-[Leu4]胃泌素6， (48) GLP-l(7-36)-SKK-[Leu4]胃泌素6， (49) GLP-l(7-36)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素6， （50) GLP-l(7-36)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6， (51) GLP-l(7-36)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素6， (52) GLP-l(7-36)-DBF-SKK-[Leu4]胃泌素 6 (53) 或 GLP-l(7-36)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素6， (54) 其中 Exendin-4(l-39)、Exendin-4(l-28)及 GLP-l(7-36)肽 部分各自經由其C端共價附接（亦即連接或偶聯）至各別結 合物分子之其餘部分，且[Glnl,Leul5]胃泌素17及[Leu4] 胃泌素6肽部分各自經由其N端共價附接（亦即連接或偶聯） 至各別結合物分子之其餘部分； 或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 在一特定態樣中，本發明之肽結合物可藉由標準合成方 法、藉由使用重組表現系統、或藉由任何其他合適方法來 155900.doc -23 - 201138811 包括例如包含以 製造。因此，可以多種方式合成結合物， 下步驟之方法： (a)藉助於標準固相或液相方法藉由逐步 出队认a 7 4月奴組裝來合 攻肽、，，。合物，以及分離及純化最終肽結合物產物； /)於宿主細胞中表現編碼肽結合物的核酸構築體及自 估主細胞培養物中回收表現產物；或 (C)對編碼肽結合物的核酸構築體實現無細胞活 現’及回收表現產物； 或 片段 物。 藉由方法⑷、（b)或⑷之任何組合來獲#肽結合物之 ，隨後接合該等片段以獲得肽結合物，及回收肽結合 本發明之其他態樣為治療多種病H病或病症[包括 糖尿病（1型及2型）及各種糖尿病相關病狀、疾病或病症]的 方法，其包含投與本發明之肽結合物（呈游離形式或呈其 醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物之形式），以及醫藥組合 物，其包含本發明之肽結合物或其醫藥學上可接受之鹽或 溶劑合物。 在一特定態樣中，本發明之肽結合物亦可適用作治療以 下疾病之藥劑：胰島素抗性、葡萄糖不耐、糖尿病前期、 空腹葡萄糖含量升高、1型及/或2型糖尿病、高血壓及/或 血脂異常（或此等代謝性風險因素之組合）、動脈粥樣硬 化、動脈硬化、冠狀動脈心臟病、周邊動脈疾病及中風。 其亦可適用於預防體重增加、促進體重減輕、減少體重過 重及/或治療肥胖症（例如藉由控制食慾、進食、食物攝 155900.doc 24
S 201138811 取、熱量攝取、及/或能量消耗），包括病態肥胖症，以及 相關疾病、病症及健康狀況，包括（但不限於）肥胖症關聯 之炎症、肥胖症關聯之膽囊疾病及肥胖症誘發之睡眠呼吸 暫停。本發明之肽結合物對此等病狀之影響可經由對體重 之影響整體或部分地調控，或其可為獨立的。 本發明之其他態樣將由以下揭示内容變得顯而易見。 【實施方式】 如上文已指示，本發明之一態樣係關於具有下式之肽結 合物：
Exendin-4(l-39)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (1)
Exendin-4(l-39)-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (2)
Exendin-4(l-39)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (3)
Exendin-4(l-39)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (4)
Exendin-4(l-39)-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (5)
Exendin-4(l-39)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (6)
Exendin-4(l-39)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (7)
Exendin-4(l-39)-DBF-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (8)
Exendin-4(l-39)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (9)
Exendin-4(l-39)-[Leu4]胃泌素6， (10)
Exendin-4(l-39)-K-[Leu4]胃泌素6， (11)
Exendin-4(l-39)-AAA-[Leu4]胃泌素6， (12)
Exendin-4(l-39)-SKK-[Leu4]胃泌素6， (13)
Exendin-4(l-39)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素6， (14)
Exendin-4(l-39)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6， (15) 155900.doc -25- 201138811
Exendin-4(l-39)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素6， (16)
Exendin-4(l-39)-DBF-SKK-[Leu4]胃泌素6， (17)
Exendin-4(l-39)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素6， (18)
Exendin-4(l-28)-[Glnl，Leul5]胃泌素17， (19)
Exendin-4(l-28)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (20)
Exendin-4(l-28)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (21)
Exendin-4(l-28)-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (22)
Exendin-4(l-28)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (23)
Exendin-4( 1 -2 8)-Peg3 -Peg3 - [Gin 1，Leu 15 ]胃泌素 17， (24)
Exendin-4(l-28)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (25)
Exendin-4(l-28)-DBF-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (26)
Exendin-4(l-28)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (27)
Exendin-4(l-28)-[Leu4]胃泌素6， (28)
Exendin-4(l-28)-K-[Leu4]胃泌素6， (29)
Exendin-4(l-28)-AAA-[Leu4]胃泌素6， (30)
Exendin-4(l-28)-SKK-[Leu4]胃泌素6， (31)
Exendin-4(l-28)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素6， (32)
Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6， (33)
Exendin-4(l-28)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素6， (34)
Exendin-4(l-28)-DBF-SKK-[Leu4]胃泌素6， (35)
Exendin-4(l-28)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素6， (36) GLP-l(7-36)-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (37) GLP-l(7-36)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (38) GLP-l(7-36)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (39) 155900.doc -26- s 201138811 GLP-l(7-36)-SKK-[Glnl,Leul5]胃泌素 17， (40) GLP-l(7-36)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (41) GLP-l(7-36)-Peg3，Peg3-[Glnl,Leul5]胃泌素 17， (42) GLP-l(7-36)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (43) GLP-l(7-36)-DBF-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (44) GLP-l(7-36)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， (45) GLP-l(7-36)-[Leu4]胃泌素6， (46) GLP-l(7-36)-K-[Leu4]胃泌素6， (47) GLP-l(7-36)-AAA-[Leu4]胃泌素6， (48) GLP-l(7-36)-SKK-[Leu4]胃泌素6， (49) GLP-l(7-36)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素6， (50) GLP-l(7-36)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6， (51) GLP-l(7-36)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素6， (52) GLP-l(7-36)-DBF-SKK-[Leu4]胃泌素 6 (53) 或 GLP-l(7-36)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素6， (54) 其中 Exendin-4(l-3 9)、Exendin-4(l-28)及 GLP-l(7-3 6)肽 部分各自經由其C端共價附接至各別結合物分子之其餘部 分，且[Glnl，Leul5]胃泌素17及[Leu4]胃泌素6肽部分各自 經由其N端共價附接至各別結合物分子之其餘部分； 或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 在另一態樣中，本發明係關於具有下式之肽結合物： 155900.doc -27- 201138811
Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu3]胃泌素5 (55)
Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Alal，Leu4]胃泌素 6 (56)
Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Ala2，Leu4]胃泌素6 (57)
Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (58)
Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu2]胃泌素 4 (59) [Leu 14]Exendin-4( 1 -28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 (60) [Oml2]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (61) [Om27]Exendin-4( 1 -28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 (62) [Phe25]Exendin-4( 1 -28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 (63) [Asp28]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 (64) [Tyrl3]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (65) [Om20]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 (66)
Exendin-4(l-28)-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (67)
Exendin-4(l-28)-[Leu4]胃泌素 6 (68)
Exendin-4( 1 -27)-[Leu4]胃泌素 11 (69)
Exendin-4( 1 -27)-Peg3-[Leu4]胃泌素6 (70)
Exendin-4( 1 -27)-Peg3-[Leu3]胃泌素5 (71)
Exendin-4(1 -26)-Peg3-[Leu3]胃泌素5 (72)
Exendin-4(1 -27)-Peg3-[Leu2]胃泌素4 (73) (74) (75) (76) (77) [Tyrl3，Leul4]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Tyrl3，Phe25]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Leul4，Phe25]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 [Tyrl3，Leul4，Phe25]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 155900.doc •28· 201138811 側鏈-環([Lysl2，Glul6]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (78) 側鏈-環([Glul6，Lys20]Exendin-4(l-28)-Peg3-peg3-[Leu4]胃泌素 6 (79) 側鏈-環([Lys20，Glu24]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (80) [Lysl6]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (81)
Exendin-4(1 -28)-Peg3-K-Peg3-[Leu4]胃泌素6 (82)
Exendin-4(l-28)-[Thr4]胃泌素 6 (83)
Exendin-4(l-28)-[Phe4]胃泌素 6 (84) [Leul4]Exendin-4(l-28)-[lNal3，Leu4]胃泌素6 〔85) [Leul4]Exendin-4(l-28)-[Nle4]胃泌素 6 (^6) [Leul4]Exendin-4(l_28)-[Leu4，[3-(3-吼啶基)-Ala]6]胃泌素 6 (87) [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 丨'88) [Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4，Phe3]胃泌素6 (89) [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4，Phe3]胃 泌素6 ㈣ [Arg27，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (91) [Arg 12,27，Leu 14，Lys 16，Phe25，Tyr 13]Exendin-4( 1 -27)-Peg3-[Leu4]胃 泌素6 (92) [Arg 12,27，Leu 14，Lys20，Phe25，Tyr 13]Exendin，4( 1 -27)-Peg3-[Leu4]胃 泌素6 (93) [Arg 12,27，Leu 14,Lys24，Phe25，Tyr 13]Exendin-4( 1 -27)-Peg3-[Leu4]胃 泌素6 (94) [Argl2，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3，[Leu4]胃泌素 6 (%) [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-[Leu2]胃泌素 4 (y&) [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu2]胃泌素 4 ,iC) 155900.doc •29· 201138811 [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Om-Peg3-[Leu2]胃泌素 4 (卵） [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-Om-[Leu2]胃泌素4 (99) [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Om-Om-[Leu2]胃泌素 4 (100) [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-[Leu4]胃泌素6 (101) [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素6 (102) [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Om-Peg3-[Leu4]胃泌素6 (103) [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-Om-[Leu4]胃泌素 6 (104) [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Om-Om-[Leu4]胃泌素 6 (105) [Lys(十六酿基-異 Glu)34]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 (106) [Arg34，Lys(十六醯基-異Glu)26]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌 素6 _ [Arg26,34，Lys(十六醯基-異Glu)36]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃 l (108) 泌素6 [Lys(十六醯基-異 Glu)26]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 (1〇9) [Arg26,34，Gly8，Lys(十六酿基-異 Glu)36]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 · (11〇) [Aib8，Arg34，Lys(十六醯基-異 Glu)26]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4] 胃泌素6 (111) [Aib8，Arg34]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 [Arg34]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[LeU4]胃泌素 6 (113) 或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 對於所述各種肽部分[亦即Exendin-4(l-39)、Exendin-4 (1-28)及GLP-1 (7-36)]使用習知及廣泛使用之縮寫/名稱來 -30- 155900.doc
S 201138811 書寫的本發明肽結合物之上述式可以習知完整胺基酸序列 形式書寫如下（其中連接部分以粗體字突出顯示）： (SEQ ID NO: 1)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSS GAPPPS-Peg3-Peg3-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 2)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSG APPPSQGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (無連接子） (SEQ ID NO: 3)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSS GAPPPS-K-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 4)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSS GAPPPS-AAA-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 5)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSS GAPPPS-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 6)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSS GAPPPS-Peg3-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 7)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPS S GAPPPS-8A0C-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 8)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLIGSiGGPSS GAPPPS-DBF-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 9)H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSS GAPPPS-8A0C-8A0C-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 10) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN GGPSSGAPPPSYGWLDF-NH2 (無連接子） (SEQ ID NO: 11) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN GGPSSGAPPPS-K-YGWLDF-NH2 155900.doc -31 · 201138811 (SEQIDNO: 12) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN GGPSSGAPPPS-AAA-YGWLDF-NH2 (SEQIDNO: 13) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN GGPSSGAPPPS-SKK-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 14) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN GGPSSGAPPPS-Peg3-SKK-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 15) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN GGPSSGAPPPS-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 16) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN GGPSSGAPPPS-8A0C-SKK-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 17) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN GGPSSGAPPPS-DBF-SKK-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 18) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN GGPSSGAPPPS-8Aoc-8Aoc-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 19) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNQ GPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (無連接子） (SEQ ID NO: 20) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-K-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 21) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-AAA-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 22) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 23) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 155900.doc -32- s 201138811 (SEQ ID NO: 24) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 25) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-8Aoc-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 26) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-DBF-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 27) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-8A0C-8A0C-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 28) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-YGWLDF-NH2 (無連接子） (SEQ ID NO: 29) ygwldf-nh2 H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-JK (SEQ ID NO: 30) AAA-YGWLDF-NH2 H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN- (SEQ ID NO: 31) skk-ygwldf-nh2 H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN- (SEQ ID NO: 32) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-
Peg3-SKK-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 33) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN- Peg3-Peg3-YGWLDF- nh2 (SEQIDNO: 34) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN- 8A0C-SKK-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 35) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN DBF-SKK -YGWLDF-NH2 155900.doc •33· 201138811 (SEQ ID NO: 36) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-8Aoc-8Aoc-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 37) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (無連接子） (SEQ ID NO: 38) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-K-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 39) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-AAA-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 40) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 41) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-Peg3-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 42) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-Peg3-Peg3-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 43) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-8A0C-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 44) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-DBF-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 45) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-8A0C-8A0C-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 46) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVK GRYGWLDF-NH2 (無連接子） (SEQ ID NO: 47) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-K-YGWLDF-NH2 155900.doc -34- s 201138811 (SEQ ID NO: 48) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-AAA-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 49) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-SKK-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 50) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-Peg3-SKK-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 51) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 52) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKCjR-8Aoc-SKK-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 53) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-DBF-SKK-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 54) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKCjR-8A0C-8A0C-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 55) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-GWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 56) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-AGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 57) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-YAWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 58) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 59) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-WLDF-NH2 155900.doc •35- 201138811 (SEQ ID NO: 60) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 61) H-HGEGTFTSDLS-Om-QMEEEAVRLFIEWLKN Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 62) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWL-Om-N- Peg3-Peg3-YGWLDF- nh2 (SEQ ID NO: 63) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEFLKN- Peg3-Peg3-YGWLDF- nh2 (SEQ ID NO: 64) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKD- Peg3-Peg3-YGWLDF- nh2 (SEQ ID NO: 65) H-HGEGTFTSDLSKYMEEEAVRLFIEWLKN-
Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2
(SEQ ID NO: 66) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAV-Om-LFIEWLKN
Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 67) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN- Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 68) gwldf-nh2 H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNY (SEQ ID NO: 69) aygwldf-nh2 H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKEEEE (SEQ ID NO: 70) ygwldf-nh2 H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK-Peg3- (SEQ ID NO: 71) gwldf-nh2 H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK-Peg3- 155900.doc -36- 201138811 (SEQ ID NO: 72) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWL-Peg3-GWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 73) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK-Peg3-WLDF-NH2 (SEQ ID NO: 74) H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFIEWLK-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 75) H-HGEGTFTSDLSKYMEEEAVRLFIEFLK-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 76) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLK-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 77) H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 78) H-HGEGTFTSDLS-K()-QME-E〇-EAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 79) H-HGEGTFTSDLSKQME-E()-EAV-K〇-LFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 80) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAV-K()-LFI-E〇-WLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 81) H-HGEGTFTSDLSKQMEKEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 82) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-K-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 83) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNY GWTDF-NH2 155900.doc -37- 201138811
(SEQ ID NO: 84) gwfdf-nh2 H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNY (SEQ ID NO: 85) lNaI-LDF-NH2 H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEWLKNYG- (SEQ ID NO: 86) GW-NIe-DF-NH2 H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEWLKNY (SEQ ID NO: 87) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEWLKNYG WLD-[3-(3-吡啶基)-丙胺醯基】-NH2 (SEQ ID NO: 88) Peg3-YGWLDF-NH2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3- (SEQ ID NO: 89) Peg3-YGFLDF-NH2 H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3- (SEQ ID NO: 90) Peg3-YGFLDF-NH2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3- (SEQ ID NO: 91) ygwldf-nh2 H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFIEFLR-Peg3- (SEQ ID NO: 92) ygwldf-nh2 H-HGEGTFTSDLSRYLEKEAVRLFIEFLR-Peg3- (SEQ ID NO: 93) ygwldf-nh2 H-HGEGTFTSDLSRYLEEEAVKLFIEFLR-Peg3- (SEQ ID NO: 94) ygwldf-nh2 H-HGEGTFTSDLSRYLEEEAVRLFIKFLR-Peg3- (SEQ ID NO: 95) H-HGEGTFTSDLSRYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3- 155900.doc -38- s 201138811 ygwldf-nh2 (SEQ ID NO: 96) nh2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLKWLDF- (SEQ ID NO: 97) wldf-nh2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Pe：g3- (SEQ ID NO: 98) Peg3-WLDF-NH2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Orn- (SEQ ID NO: 99) Orn-WLDF-NH2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3- (SEQ ID NO: 100) Orn-WLDF-NH2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Orm- (SEQ ID NO: 101) gwldf-nh2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLKY (SEQ ID NO: 102) ygwldf-nh2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3- (SEQ ID NO: 103) Peg3-YGWLDF-NH2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Orm- (SEQ ID NO: 104) Orn-YGWLDF-NH2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg；3- (SEQ ID NO: 105) Orn-YGWLDF-NH2 H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Orn- (SEQIDNO: 106) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLV-K(十 六醯基-異 Glu)-GRG-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 107) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAA-K(十六醯基-異 155900.doc -39- 201138811
Glu)-EFIAWLVRGRG-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 108) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAWLVRG-K(十六醯基-異 Glu)-G-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 109) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAA_K(十六醯基-異 Glu)-EFIAWLVKGRG-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 110) H-HGEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAWLVRG-K(十六醯基-異 Glu)-G-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 111) 11-11-八出-£0丁？丁80¥88¥1^0(^^\-1：(十六醯基- 異 Glu)-EFIAWLVRGRG-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 112) H-H-Aib-EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVR GRG-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEQ ID NO: 113) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVR GRG-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 其中縮寫 Peg3、8Aoc、DBF、INal、bAla、Orn、 DPR、Dbu、Gaba及Aib表示以下非天然存在之胺基酸部 分：
Peg3 : -NH-CH2-CH2-0-CH2-CH2-0-CH2-C(0)-(源自 8-胺基-3,6-二氧雜辛酸）； 8Aoc : -NH-CH2-CH2-CH2_CH2-CH2-CH2-CH2-C(0)-(源 自8_胺基辛酸）1 ; DBF ：
[源自4-(2 -胺基乙基）-6·二本并11 夫喃 155900.doc •40-
S 201138811 丙酸]; INal : 1-萘基丙胺酸 bAla : β-丙胺酸 Gaba : γ-胺基丁酸 Aib : α-胺基-異丁酸 Dbu :二胺基丁酸 DPR :二胺基丙酸 Orn :鳥胺酸 因此，關於本發明肽結合物中之連接部分的取向，例如 連接部分-Peg3-Peg3-表示化學部分 -nh-ch2-ch2-o-ch2-ch2-o-ch2-c(o)-nh-ch2-ch2-o-ch2-ch2-o-ch2-c(o)-， 所述連接部分左側之部分共價附接至所述肽結 合物之Exendin-4-或GLP- 1來源部分，且所述連接部分右 側之....-C(O)-部分附接至所述肽結合物之胃泌素來源部 分。 關於其餘指定連接部分，-K-表示離胺酸胺基酸殘基， -AAA-表不-Ala-Ala-Ala-二狀_ 歹免基·且-SKK-表不-Ser-Lys· ‘ Lys-三肽殘基。 在本發明之上列一些肽結合物中，應瞭解GLP-l(7-36) 肽序列部分來源於人類GLP-l(hGLP-l)序列之複本或為其 類似物。 在本發明之上列一些其他肽結合物中，應瞭解Exendin-4(1-39)肽序列部分來源於鈍尾毒蜥Exendin-4序列之複本 155900.doc -41 - 201138811 或為其類似物β 同樣，結合物中之[Glnl，Leul5]胃泌素17及[Leu4]胃泌 素6部分係來源於人類胃泌素。 應瞭解SEQ ID NO: 1等於化合物丨，SEq ID Ν〇· 2等於 化合物2，等。 應瞭解上述肽結合物1至54中之每一者個別地，亦即化 合物1或化合物2或化合物3··.…（等’直至化合物54)，以及 下文所揭示之其他肽結合物55至113(參見實例2中之表2及 3)中之每一者個別地，亦即化合物55或化合物％……（等， 直至化合物113)，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物構 成本發明之其他個別態樣。 在本發明之上下文中，除非胺基酸係以其全名而提及 (例如丙胺酸、精胺酸等），否則其以其習知三字母及/或單 子母縮寫來表示（例如Ala或Α表示丙胺酸、Arg或R表示精 胺酸，等）。 在本發明之上下文中術語「肽結合物」係指第一肽部分 藉助於共價化學鍵直接或經由連接（亦即橋或間隔）化學部 分來附接（亦即偶聯或連接）至第二肽部分的分子。 本發明之化合物可在肽序列内帶有一或多個分子内内醯 胺橋。表2中所列化合物中之各此類橋（以字首「側鏈_環」 提及）在含有羧酸之側鏈與含有胺之另一側鏈之間形成。 兩個胺基酸殘基通常由線性序列中之三個胺基酸分開。 在本發明之肽結合物中，Exendin_4或Za可與原生
Exendin-4具有至少75%—致性，例如至少8〇%、85%、
155900.doc 42 S 201138811 90%或95%—致性。 在本發明之肽結合物中，胃泌素或、可與原生胃泌素具 有至少70。/。一致性’例如至少75%、8〇%、_、9〇%或 95%—致性。在本發明之肽結合物中，^^-丨或心可與原 生GLP-1具有至少85% —致性，例如至少9〇%或95% 一致 性。 在貫施例中’本發明之多肽可包含SEQ ID NO: 1、 2、3、4、5、6、7、8、9、1〇、u、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22、23 ' 24、25、26、27、 28 、 29 、 30 、 31 、 32 、 33 、 34 、 35 、 36 、 37 、 38 、 39 、 40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、 52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、 64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、 76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、 88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、 100 、 101 、 102 、 103 、 104 、 105 、 106 、 107 、 108 、 109 、 110、111、112及in中任一者所闡述的胺基酸序列，或與 一或多種所述序列具有至少約8〇%、85%、90%、95%、 97%、98%、99%、99.5。/〇—致性的其功能性片段/變異體， 或相較於一或多種所述序列具有多至20、15、10、9、8、 7、ό、5、4、3、2或1個胺基酸取代的其功能性片段/變異 體’有或無信號序列，有或無一或多個半胱胺酸殘基經諸 如絲胺酸之另一殘基取代’及具有至少2個胺基酸長度的 其鄰接區段。 155900.doc -43· 201138811 在一實施例中，本發明之多肽⑴與SEQ ID NO: 1、2、 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、 17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、 29 、 30 、 31 、 32 、 33 、 34 、 35 、 36 、 37 、 38 、 39 、 40 、 41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、 53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、 65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、 77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、 89、90、91、92、93、94、95 ' 96、97、98、99、100、 101 、 102 、 103 、 104 、 105 、 106 、 107 、 108 、 109 、 110 、 111、112及113，或其一部分共有至少99%之胺基酸序列一 致性；或（ii)包含 SEQ ID NO: 1、2、3、4、5、6、7、8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、 34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、 46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、 58 ' 59、60、61 ' 62、63 ' 64、65 ' 66、67、68、69、 70、71、72、73、74、75 ' 76、77、78、79 ' 80、81、 82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、 94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、 105、106、107、108、109、110、111、112及 113 中任一 者的至少 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、 41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、 53、54、55、56、57、58、59或 60個鄰接胺基酸；或（iii)
155900.doc -44- S 201138811 兩者。 在本發明之上下文中，術語「醫藥學上可接受之鹽」 (本發明之肽結合物的醫藥學上可接受之鹽）欲指對所述鹽 所投與之患者或個體無害的鹽。其宜為選自例如酸加成鹽 及鹼式鹽之鹽。酸加成鹽之實例包括氯化物鹽、檸檬酸鹽 及乙酸鹽。鹼式鹽之實例包括陽離子選自諸如鈉或鉀離子 之鹼金屬陽離子、諸如鈣或鎂離子之鹼土金屬陽離子' 以 及諸如疒型離子之經取代銨離子的鹽，其 中R、R、R及R4通常將獨立地表示氫、視情況經取代之 烷基或視情況經取代之C2·6烯基。相關Ci 6烷基之實例 包括甲基、乙基、1-丙基及2-丙基。可能相關之c2 6烯基 之貫例包括乙烯基、1-丙烯基及2_丙烯基。醫藥學上可接 受之鹽之其他實例描述於「Remingt〇nis phai<maeeut].eal Sciences」，第 17 版，Alf〇_ R Gennar〇(編），Mark
Publishing Company，Easton，PA，USA, 1985(及其更近期之 版本）；「Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology」，第 3 版 ’ James Swarbrick(編），lnforma Healthcare USA (Ine.)，NY, USA，2007 ;及《/. p/iaw·如·. 66: 2 (1977)中。 在本發明之上下文中’術語「溶劑合物」係指在溶質 (在本文情況下〇·« cww)為本發明之肽結合物或其醫藥學上 可接党之鹽）與溶劑之間形成的具有確定化學計量之複合 物。就此而言，溶劑可為例如水、乙醇或另一種醫藥學上 可接受的、通常為小分子之有機物質，諸如（但不限於）乙 醜或乳酸。當所述溶劑為水時，此類溶劑合物通常稱為水 155900.doc -45- 201138811 合物。 本發明之另一態樣係關於本發明之肽結合物或其醫藥學 上可接受之鹽，其適用作藥物。在另一態樣中，所述藥物 為適用於治療有需要之個體的一或多種以下疾病或病症及 相關病狀的藥物： 1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病前期、胰島素抗性症候 群、葡萄糖耐受性不良（IGT)、與血糖含量升高相關之疾 病病況、尚血糖症、高血壓、致動脈粥樣化之血脂異常、 動脈硬化（例如動脈粥樣硬化）、冠狀動脈心臟病、周邊動 脈疾病、中風、微血管疾病、胃疾病、代謝症候群、癌症 (例如結腸癌）、發炎性腸病（IBD)及大腸急躁症候群 (IBS)。 就此而言’可能相關之其他疾病或病症包括肥胖症、病 態肥胖症、肥胖症關聯之炎症、肥胖症關聯之膽囊疾病及 肥胖症誘發之睡眠呼吸暫停。 在另一態樣中所述藥物為適用於誘發有需要之個體胰 島新生（例如促進胰島中形成新細胞）的藥物。 在另一態樣中，所述藥物為適用於誘發有需要之個體胰 島β-細胞存活（例如預防胰島^細胞損失）的藥物。 在又-態樣中’所述藥物為適用於預防有需要之個體姨 島β-細胞細胞凋亡（例如預防胰島卜細胞損失）的藥物。 在另一態樣中，所述藥物為適用於減少有需要之個體血 液中血紅蛋白blAC(糖基化血紅蛋白；HbAlc)含量的藥 155900.doc -46- 201138811 本發明之另一態樣係關於本發明之肽結合物之用途，係 用於製造供治療有需要之個體的一或多種以下病狀、疾病 或病症的藥物： 1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病前期、胰島素抗性症候 群、葡萄糖耐受性不良（IGT)、與血糖含量升高相關之疾 病病況、高血糖症、高血壓、致動脈粥樣化之血脂異常、 動脈硬化（例如動脈粥樣硬化）、冠狀動脈心臟病、周邊動 脈疾病、中風、微血管疾病、胃疾病、代謝症候群、癌症 (例如結腸癌）、發炎性腸病（IBD)及大腸急躁症候群 (IBS)。 本發明之肽結合物可進一步用於： 製造供誘發有需要之個體胰島新生的藥物； 製造供預防有需要之個體胰島β·細胞細胞凋亡的藥物；或 製造供減少有需要之個體血液中血紅蛋白blAc(糖基化 血紅蛋白；HbAlc)含量的藥物。 在相關情況中，本發明之其他態樣為治療上文所提及之 病狀、疾病或病症的相應方法。因此，本發明之此另一態 樣係關於治療有需要之個體一或多種以下疾病或病症的方 法： 1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病前期、胰島素抗性症候 群、葡萄糖耐受性不良（IGT)、與血糖含量升高相關之疾 病病況、高血糖症、高血壓、致動脈粥樣化之血脂異常、 動脈硬化（例如動脈粥樣硬化）、冠狀動脈心臟病、周邊動 脈疾病、中風、微血管疾病、胃疾病、代謝症候群、癌症 155900.doc •47· 201138811 (例如結腸癌）、發炎性腸病（IBD)及大腸急躁症候群 (IBS)， 該方法包含向該個體投與治療有效量的本發明之肽結合 物或其醫藥學上可接受之鹽或溶劍合物。 又，在根據本發明之治療方法中，可能相關之其他病 狀、疾病或病症包括肥胖症、病態肥胖症、肥胖症關聯之 發炎、肥胖症關聯之膽囊疾病及肥胖症誘發之睡眠呼吸 停。 本發明之另一態樣係關於誘發有需要之個體胰島新生的 方法，該方法包含向該個體投與治療有效量的本發明之肽 結合物或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 本發明之另一態樣係關於促進有需要之個體胰島P細胞 存活的方法，該方法包含向該個體投與治療有效量的本發 明之肽結合物或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 本發明之另一態樣係關於預防有需要之個體胰島β_細胞 凋亡的方法，該方法包含向該個體投與治療有效量的本發 明之肽結合物或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 本發明之另一態樣係關於減少有需要之個體金液中企紅 蛋白blAc(糖基化血紅蛋白；HbAlc)含量的方法，該方法 包含向該個體投與治療有效量的本發明之肽結合物或其醫 藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 本發明之其他態樣係關於以下： 治療有需要之個體的與血糖含量升高相關之疾病病況的 方法；
155900doc -48- S 201138811 降低有需要之個體血糖含量的方法； 刺激有需要之個體胰島素釋放的方法； 調節有需要之個體胃排空的方法；及 降低有需要之個體血槳脂質含量的方法。 在本發明後者方法之每一者φ， 該方法包含向該個體投 與治療有效量的本發明之狀社人< t肽、，η合物或其醫藥學上可接受之 鹽或溶劑合物。 如本發明之上述治療方法或其他治療性介人之上下文中 所使用之術語「治療有效量」係指^以治癒、改善、減輕 或部分地遏止作為所述治療或其他治純介人之目標的特 ::病、病症或病狀之臨床表現的量。足以實現此目的之 量定義為治療有效量。投藥量及投藥方法可經設計以實現 最佳功效。對於既定目的有效之量將尤其視以下而定：作 為特定治療或其他治療性介入之目標的疾病、病症或病狀 之嚴重程度、所述個體之體重及一般狀況 '膳食、可能之 -同用藥及熟習醫學技術者所熟知之其他因素。最適於向 人類技與本發明之肽結合物或其醫藥學上可接受之鹽或溶 ^物的適當劑量大小及給藥方案的確定可由本發明所獲 得之結果來指導’且可在經恰當設計之臨床試驗中證實。 有效劑量及治療方案可藉由習知方式確定，開始在實驗動 物中使用低劑量，隨後增加劑量，同時監控效果，且亦系 統地變動給藥方案。當針對既定個體確定最佳劑量時，臨 床醫師可考慮許多因素。該等考慮因素為熟習此項技術者 所熟知。 155900.doc -49- 201138811 ，本發明之上下文中使用之術語「治療」及其文法變化 形式係指獲得有益或所要臨床結果的方法。為達成本發明 之目的，有益或所要臨床結果包括（但不限於）減輕症狀、 降低疾病程度、敎（亦即不惡化）疾病病況、延遲或減慢 疾病進展、改善或緩和疾病病況且緩解（無論部分或: 部），無論可谓測或不可偵側。「治療」亦可意謂相對於未 接受治療之誠存科岐長存科間。「治療」為欲預 防病狀、疾病或病症之發展或改變其病理學而進行之介 入。因此，「治療」係指治療性介入及預防性（pr〇phyiactie 或preventive)措施》因此需要治療之個體（例如人類）可為 已罹患所述疾病或病症之個體，或欲預防病症之個體。因 此術語「治療」包括相對於不進行治療而抑制或減少病理 性病況或症狀（例如體重增加或高血糖症）之嚴重程度增 加’且未必意謂包含相關疾病、病症或病狀的完全終止。 如本發明之上下文中使用之術語「促效劑」係指活化所 述受體類型之物質（配位體）。 如本發明之上下文中使用之術語「GLP-1受體促效劑」 (有時在別處稱為「GLP-1促效劑」）係指活化GLP-丨受體 (諸如人類GLP-1受體）之物質（配位體）。活化人類glp-1受 體之物質包括原生GLP-1肽激素GLP-l(7-37)、GLIM(7-36) 酿胺、調酸素、Exendin-3、Exendin-4、升糖素、胃抑多 肽（GIP)及其功能性肽類似物及衍生物。 如本發明之上下文中使用之術語「拮抗劑」係指阻斷、 中和或抵消用作針對所述受體類型之促效劑的另一物質
155900.doc -50- S 201138811 (配位體）之影響的物質（配位體）。 在本發明之上下文中，配合上述本發明之各種態樣所提 及的需要特定治療或其他治療性介人之個體較佳地為哺乳 動物’且更特定言之為人類。 本發明之另一態樣係關於一種醫藥組合物，其包含本發 明之肽結合物或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，以及 醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或媒劑。 肽結合物之合成 本發明之肽結合物可藉由標準合成方法、藉由使用重組 表現系統、或藉由任何其他合適方法來製造。因此，可以 夕種方式合成結合物，包括例如包含以下步驟之方法： (a) 藉助於標準固相或液相方法藉由逐步或片段組裝來合 、成肽結合物，以及分離及純化最終肽結合物產物； (b) 於宿主細胞中表現編碼肽結合物的核酸構築體及自 宿主細胞培養物中回收表現產物；或 0)對編碼肽結合物的核酸構築體實現無細胞活體外表 現，及回收表現產物； 或藉由方法（a)、（b)或（c)之任何組合來獲得肽結合物之 片4又’隨後接合s亥等片段以獲得狀結合物，及回收肽結合 物。 藉助於固相或液相肽合成來合成本發明之結合物通常可 能較佳。就此而言，可參考WO 98/11125或尤其Fields， G.B.等人，「Principles and Practice of Solid-Phase Peptide Synthesis」；於：办Gregory A. 155900.doc 201138811
Grant(編）’ 〇xford university press (第二版，2002)中，及 本文中之合成實例。 本發明之化合物中一或多個胺基酸側鏈可進一步結合至 親脂性取代基。親脂性取代基可共價鍵結至胺基酸側鏈中 之原子或者.可藉由間隔子結合至胺基酸側键上。胺基酸 可為肽Z之一部分’或肽γ之一部分。 不希望受理論束缚，據信親脂性取代基結合血流中之白 蛋白，從而保護本發明之化合物不會被酶促降解，其可增 力化σ物半衰期。間隔子存在時，係用於在化合物與親脂 性取代基之間提供間隔。 親知性.取代基可經由酯、磺醯酯、硫酯、醯胺或磺醯胺 而附接至胺基酸側鏈或間隔子上。因此，應瞭解親脂性取 代基較佳包括形成酯、磺酿酯、硫酯、醯胺或磺醯胺之一 部分的醯基、磺醯基、Ν原子、〇原子或s原子。 較佳地，親脂性取代基中之醯基與胺基酸賴或間隔子 形成酿胺或醋之一部分。 親脂性取代基可包括具有4至3_c原子之煙鍵。較佳地 其具有至少8或12個C原子，且較佳地其具㈣個或洲以 下C原子、或20個或20個以下c原子。烴鏈可為直鏈或分 支鍵且可為飽和或*飽和的。應瞭解烴鍵較佳經形成與胺 基酸側鏈或間隔子附接者之—部分的部分取代，例如酿 土確醯基N原子、〇原子或s原子〇最佳地，煙鍵經酿 基取代，且因此烴鍵可為&酿基（例如軟脂醢基、己醯 基、月桂醯基、肉豆蔻醯基或硬脂醯基）之一部分。
_〇d〇C -52- S 201138811 因此’親脂性取代基可具有以下所示之式： 〇 Α可為例如醢基、磺醯基ΝΗ、Ν-烷基、〇原子或S原 子，較佳為醯基。！!為3至29、較佳至少7或至少u、玉較 佳23或23以下，更佳19或19以下之整數。 烴鏈可另外經取代。舉例而言，其可另外經多至三個選 自Ν%、OH及C00H之取代基取代。若烴鏈另外經取代’ 則較佳地其另外僅經一個取代基取代。或者或另外烴鏈 可包括環烷或雜環烷，例如如下所示：
較佳地，環烷或雜環烷為六員環❶最佳地，其為哌啶。 或者親J5a丨生取代基可基於環戊幷菲(CyCl〇pentan〇phenanthr,3ne) 骨架，其可為部分或完全不飽和，或者飽和。骨架中之碳 原子可各自經Me或OH取代。舉例而言，親脂性取代基可 為膽醯基（cholyl)、去氧膽醯基或石膽醯基（丨hh〇ch〇iyi)。 如上所述，親脂性取代基可藉由間隔子結合至胺基酸側 鏈。當間隔子存在時，其附接至親脂性取代基及胺基酸側 鏈。間隔子可藉由酯、磺醯酯、硫酯、醯胺或磺醯胺獨立 地附接至親脂性取代基及胺基酸側鏈上，因此，其可包括 兩個獨立地選自醯基、磺醯基、N原子、〇原子或s原子之 155900.doc •53· 201138811 部分。間隔子可具有下式： 其中B及D各自獨立地選自酿基、續醯基、nh、n-燒 基、〇原子或S原子，較佳地選自醯基及NH。較佳地，n為 1_.至1〇、較佳1至5之整數。間隔子可另外經一或多個選自 烷基、cQ·6烷基胺、烷基羥基及烷基羧基之取 代基取代。 或者，間隔子可具有上式之兩個或兩個以上重複單元。 對於各重複單元，B、！)及n各自經獨立地選擇。鄰接重複 單元可經由其各別B及D部分彼此共價附接。舉例而言， 鄰接重複單元之B及D部分可一起形成酯、磺醢酯、硫 酯、醯胺或磺醯胺。間隔子之每一端之自由B&D單元附 接至如上所述之胺基酸側鏈及親脂性取代基。 較佳地’間隔子具有5個或5個以下、4個或4個以下或3 個或3個以下重複單元。最佳地，間隔子具有2個重複單 元’或為单一單元。 間隔子（或若其具有重複單元，則為一或多個間隔子重 複單元）可為例如天然或非天然胺基酸。應瞭解對於具有 官能化侧鏈之胺基酸，B及/或D可為胺基酸側鏈内之部 分。間隔子可為任何天然存在之胺基酸或非天然胺基酸。 舉例而言’間隔子（或若其具有重複單元，則為一或多個 間隔子重複單元）可為Gly、Pro、Ala、Val、Leu、lie、 155900.doc •54· s 201138811
α-Glu、γ-Glu、Asp、Ser、Thr、Gaba、Aib、bAla、5-胺 基戊醯基、6-胺基己醯基、7_胺基庚醯基、8_胺基辛醯 基、9-胺基壬醯基或10-胺基癸醯基。 舉例而5 ’間1¾子可為選自γ-Glu、Gaba、b-Ala及a-Gly 之單一胺基酸。 親脂性取代基可結合至本發明化合物中之任何胺基睃側 鏈。較佳地，胺基酸側鏈包括羧基、羥基、硫醇、醯胺或 胺基’以便與間隔子或親脂性取代基形成酯、磺醯酯、硫 醋、酿胺或磺酿胺。舉例而言，親脂性取代基可結合至
Asn、Asp、Gl\i ' Gin、His、Lys、Arg、Ser、Thr、Tyr、
Trp、Cys或Dbu、Dpr或Orn。較佳地，親脂性取代基結合 至Lys或Cys。然而，本文提供之式中展示為Lys之任何胺 基酸可經添加有親脂性取代基之Dbu、Dpr或Orn置換。 例示性親脂性取代基及間隔子展示於下式中：
本文中，來自本發明化合物（例如來自χ)之Lys經由醯胺 155900.doc -55· 201138811 °p刀共彳只附接至Y-Glu(間隔子）。軟脂醯基經由酿胺部分共 價附接至γ-Glu間隔子。 或者或另外，本發明化合物中一或多個胺基酸側鏈可結 合至聚合部分，例如以增加溶解度及/或活體内半衰期（例 如在血漿中）及/或生物可用性。亦已知此類修飾可減少治 療性蛋白及肽之清除率（例如腎臟清除率）。 聚合部分較佳為水溶性（兩親媒性或親水性）、無毒且醫 藥學上惰性。合適之聚合部分包括聚乙二醇（PEG)、peg 之均聚物或共聚物、PEG之經單甲基取代之聚合物 (mPEG)、或聚氧乙烯甘油（p〇G)。參見例如如； Hematology 68:1 (1998) ； Bioconjugate Chem. 6:150 (Ί995)，及 Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Sys. 9:249 (1992) 〇 其他合適聚合部分包括聚胺基酸，諸如聚離胺酸、聚天 冬胺酸及聚麩胺酸（參見例如G〇mb〇tz，等人，（1995),
Bioconjugate Chem.，第 6卷：332-351 ; Hudecz，等人， (1992)，Bi〇conjUgate Chem·，第 3卷，49_57; Tsukada，等 人 ’（1984)，J. Natl. Cancer Inst.，第 73 卷：721-729 ;及 Pratesi，等人 ’（1985)，Br. J. Cancer,第 52卷：841-848)。 聚合部分可為直鏈或分支鏈。其分子量可為5〇〇_4〇〇〇〇
Da ’ 例如5〇〇·ι〇,〇〇〇 Da、1000-5000 Da、10,000-20,000 Da或 20,〇〇〇_4〇,〇〇〇 Da。 化合物可包含兩個或兩個以上該等部分，在該情況下， 所有該等部分之總分子量一般將處於上文所提供之範圍 155900.doc -56·
S 201138811 聚合部分可偶聯（藉由共價鍵）至胺基酸側鏈之胺基、羧 基或硫醇基。較佳實例為Cys殘基之硫醇基及Lys殘基之ε 胺基’且亦可使用Asp及Glu殘基之叛基。
熟習之讀者將熟知可用於進行偶聯反應之適當技術。舉 例而s ’可使用可購自Nektar Therapeutics AL之試劑藉由 順丁嫦二酿亞胺鍵聯使帶有甲氧基之PEG部分偶聯至CyS 硫醇基。對於合適化學之細節亦參見W〇 2008/101017，及 上文引用之參考文獻。 治療用途 下文中，應瞭解，提及本發明之肽結合物之用途亦涵蓋 其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物之用途。 本發明之肽結合物可針對代謝疾病或病症（包括糖尿病 (尤其1型及/或2型糖尿病）及可能之肥胖症）提供有吸引力 的治療方案 糖尿病包含特徵在於由於胰島素分泌缺陷'胰島素作用 病。糖尿病之
155900.doc 缺陷或兩者所造成之高血糖症的—組代謝疾病 急性徵象包括尿產生過多’導致代償性口渴及 加 '視力模糊、無法解釋之體重減輕、嗜睡及 化。糖尿病之得丨Ν： 岛她、ri：也丄，& _ -57- 201138811 糖尿病可再分為三類 糖尿病。 即1型糖尿病、2型糖尿病及妊娠性 1型糖尿病佔所有糖尿病個案之且係由分泌胰島 素之胰腺β·細胞的自體免疫破壞所引起。 2型糖尿病佔糖尿病個牵夕Qn 〇 α 八网1U茶之90-95%且為一系列複雜代謝 障礙之結果。2型糖尿病為内 κ源性胰島素產生及/或全身胰 島素敏感度變得不足以你^將# # A e 使血漿匍萄糖含3：維持在診斷臨限 值以下的結果。 妊娠性糖尿病係指在姓娠期間確定的任何程度之葡萄糖 不耐。 亦認識到稱為糖尿病前期之病狀。其包括例如线葡萄 糖含量異常及㈣糖耐受性不良’且—般係指灰糖含量升 尚但低於為臨床診斷糖尿病所確立之含量時所出現之彼等 病況。 患有2型糖尿病及糖尿病前期之大部分個體由於其他代 謝性風險因素之高流行率而處於發病率及死亡率增加之風 險中，該等風險因素包括腹部肥胖（在腹部内臟周圍脂肪 組織過多）、致動脈粥樣化之血脂異常（血脂病症，包括三 酸甘油酯含量高、HDL膽固醇含量低及/或]11)]1膽固醇含量 高，其促進動脈壁中之斑塊累積）、血壓升高（高企壓）、促 血栓病況（例如血液中血纖維蛋白原或纖維蛋白溶酶原活 化因子抑制劑-1含量高）及促發炎病況（例如血液中c_反應 蛋白含量升高）。 另一方面，肥胖可增加產生例如糖尿病前期、2型糖尿 155900.doc 58
S 201138811 病、某些類型之癌症、阻塞性睡眠呼吸暫停及膽囊疾病的 風險。 血脂異常與心血管疾病之風險增加有關。高密度脂蛋白 (HDL)具有臨床重要性，因為在血漿hdl濃度與動脈粥樣 硬化疾病之風險之間存在反向相關性。動脈粥樣硬化斑中 儲存之大部分膽固醇來源於低密度脂蛋白（LDL)，且因此 LDL之濃度升高與動脈粥樣硬化密切相關。HDL/LDL比率 為尤其用於評估動脈粥樣硬化及冠狀動脈粥樣硬化之臨床 風險的參數。 不受任何特定理論東縛’似乎本發明之肽結合物可出乎 意料地使GLP-1受體促效劑之生理效應與上文之胃泌素肽 之生理效應組合，該組合之方式為使得觀測到之活性可顯 著大於使用個別肽組分之相應相加性（非結合）組合時所觀 測到之活性。因此咸信本發明之肽結合物可特別有益於治 療糖尿病前期、糖尿病（特別是丨型及/或2型糖尿病）及糖尿 病相關病狀、疾病或病症（諸如上文所討論者），包括促進 胰島β-細胞形成（胰島新生）’並藉此產生胰島素的治療， 其將有益於調節血糖濃度。因此，本發明之肽結合物尤其 在限制或遏止1型及/或2型糖尿病之疾病進程中具有價 值。 本發明之肽可進一步適用於促進胰島中卜細胞存活及抑 制β-細胞細胞凋亡。 因此本發明之肽結合物可適用作治療以下疾病之藥劑： 胰島素抗性、葡萄糖不耐、糖尿病前期、空腹葡萄糖含量 155900.doc •59- 201138811 升高、1型及/或2型糖尿病、高μ及/或血脂異常（或此 代謝性風險因素之組合）、動脈粥樣硬化、動脈硬化、冠 狀動脈心臟病、周邊動脈疾病及中風。其亦可適用於預防 體重增加、促進體重減輕、減少體重過重及/或治療肥胖 症(,!如藉由控制食懲、進食、食物攝取、熱量攝取、、及/ 或犯量消耗）’包括病態肥胖症，以及相關疾病、病症及 健康狀況，包括（但+限於）肥胖症關聯之炎症、肥胖症關 聯之膽囊疾病及肥胖症誘發之睡眠啤吸暫停。本發明之肽 結合物對此等病狀之影響可經由對體重之影響整體或部分 地調控，或其可為獨立的。 醫藥組合物 下文中’應瞭解，提及包括於醫藥組合物中的本發明之 或夕種肽、〇物亦涵蓋包括本發明之肽結合物的醫藥學 上可接受之鹽或溶劑合物。 本發明之肽結合物可調配為在儲存或不儲存之情況下適 合於投藥之醫藥組合物，且其通常包含治療有效量的至少 種本發明之肽結合物，以及醫藥學上可接受之載劑、賦 形劑或媒劑。 術語「醫藥學上可接受之載劑」&括任何標準醫藥學载 劑。用於治療用途之醫藥學上可接受之載劑在醫藥學技術 中已熟知且描述於例如「Remingt〇n，s pharmaceutical iences」，第 17 版，Alfonso R. Gennaro(編），Mark Publishing Company, Easton，PA，USA，1985 中。舉例而 吕，可使用微酸性或生理學pH值之無菌鹽水及磷酸鹽緩衝 155900.doc 201138811 鹽水。合適之pH值緩衝劑可為例如磷酸鹽、檸檬酸鹽、乙 酸鹽、參（羥甲基）胺基甲烷（TRIS)、冰參（羥甲基）曱基-3_ 胺基丙磺酸（TAPS)、碳酸氫銨、二乙醇胺、組胺酸、精胺 酸、離胺酸或乙酸鹽（例如乙酸鈉），或其混合物。該術語 進一步涵蓋美國藥典（US Pharmacopeia)中所列出的適用於 動物（包括人類）之任何載劑。 本發明之醫藥組合物可為單位劑型。在該形式中，組合 物分為含有適量活性組分的單位劑量。單位劑型可呈現為 包裝製劑，該包裝含有個別量之製劑，例如包裝錠劑膠 囊及小瓶或安瓿中之散劑。單位劑型亦可為例如膠囊 '扁 囊劑或錠劑本身，或其可為適當數目之任何此等包裝形 式。單位劑型亦可以單一劑量可注射形式提供，例如呈含 有液相（通常水溶液）組合物之筆形裝置（pen device)形式。 組合物可經調配用於任何合適之投藥路徑及方式。醫藥學 上"T接乂之載劑或稀釋劑包括適用於例如經口、玻璃體内 (intraviteral)、經直腸、經陰道、經鼻、局部、經腸或非 經腸（包括皮下、肌肉内、靜脈内、皮内及經皮）投藥或藉 由吸入技藥的調配物中所使用者。調配物纟以單位劑型提 供且可藉由醫藥學調配物技術中熟知之任何方法來製備。 皮下或經皮投藥模式尤其可適用於本發明之肽結合物。 本發明之另一態樣係關於用於傳遞本發明之醫藥學調配 物的裝置、劑型及包裝。因此，可根據本發明經由多種傳 遞方法將本文所述之穩定或保存之調配物或溶液中至少一 種肽結合物或特定部分或變異體投與患者，該等傳遞方法 I55900.doc • 61 - 201138811 包括SC或IM注射；經皮、經肺、經黏膜、植入、滲透 泵、藥筒、微泵或熟習此項技術者所瞭解的其他方式。 本發明之又一態樣係關於經口調配物及投藥。經口調配 物可依賴於共投與之佐劑（例如間苯二酚及非離子界面活 性劑，諸如聚氧乙烯油基醚及正十六烷基聚伸乙基醚）來 人工增加腸壁通透性，以及共投與之酶促抑制劑（例如胰 腺胰蛋白酶抑制劑、二異丙基氟磷酸酯（DFF)及特雷西洛 (trasylol))以抑制酶促降解。用於經口投與之固體型劑型 之活性組分化合物可與包括以下之至少一種添加劑混合： 蔗糖、乳糖、纖維素、甘露糖醇、海藻糖、棉子糖、麥芽 糖醇、聚葡萄糖、澱粉、瓊脂、精胺酸鹽、曱殼素、聚葡 萄胺糖、果膠、黃蓍膠、阿拉伯膠、明膠、膠原蛋白、酪 蛋白、白蛋白、合成或半合成聚合物，及甘油酯。此等劑 型亦可含有其他類型之添加劑，例如非活性稀釋劑丨諸如 硬脂酸鎂、對羥基苯甲酸酯之潤滑劑；諸如山梨酸、抗壞 血酸、ct-生育酚之防腐劑；諸如半胱胺酸之抗氧化劑；崩 解劑；黏合劑；增稠劑；緩衝劑；甜味劑；調味劑；芳香 劑等。 劑量 如本發明之上下文中使用之本發明肽結合物的典型劑量 可分一或多次劑量（諸如1至3次劑量）投與、在每天每公斤 體重約0.001至約100 mg之範圍内，諸如每天每公斤體重 約0·01至約50 mg ’例如每天每公斤體重約〇 〇5至約1〇 mg 之範圍内。如上文在一定程度上已指示，確切使用劑量將
155900.doc η -〇2 *· S 201138811 尤其視以下因素而定：待治療之疾病或病症之性質 程度；待治療之個體的性別、年齡、體重及-般狀況； 經歷或將經歷治療之可能的立仙保饮——上 正 .、』b的其他併發疾病或病症；以及孰 習此項技術之從醫者已知之其他因素。 < ··、、 組合療法 如上所述’應瞭解下文提及本發明之肽結合物亦擴展至 其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物以及包含一種以上不同 本發明肽結合物的組合物。 本發明之肽結合物可作為與治療所述疾病或病症（例如 糖尿病、肥胖症、代謝症候群、血脂異常或高血壓）之另 一活性劑的組合療法之一部分來投藥，或作為獨立調配物 來投藥，在此等情況下，兩種活性劑可一起或分別給與， 例如以同一醫藥組合物或調配物中之組分形式或以各別調 配物形式給與。 因此’本發明之肽結合物可與已知類型之抗糖尿病劑組 合使用’該抗糖尿病劑包括（但不限於）二曱雙胍 (Metformin)、磺醯脲（sulfonyiurea)、格列奈（ginide、,、 DPP-IV抑制劑、格列酮（glitazone)、或者胰島素或騰島素 ’ 類似物。在一較佳實施例中’本發明之肽結合物與胰島素 . 或其類似物、DPP-IV抑制劑、磺醯脲或二曱雙胍，尤其續 醯脲或二甲雙胍組合投藥，以達成充分血糖控制。在一更 佳實施例中，肽結合物與胰島素或胰島素類似物組合投 藥，以達成充分血糖控制。適當胰島素類似物之實例包括 (但不限於）：LantusTM、Novorapid™、HumalogTM、 155900.doc -63 - 201138811
Novomix™ ' Actraphane™ HM、LevemirTM、DegludecTM& ApidraTM。就此而言，其他相關抗糖尿病劑包括GLP-1受 體促效劑，諸如艾塞那肽（exenatide)(ByettaTM ; Exendin-4) 及利拉魯肽（liraglutide)(VictozaTM)。 本發明之肽結合物亦可與已知類型之抗肥胖劑組合使 用，該抗肥胖劑包括（但不限於）：肽YY或其類似物、神經 肽Y(NPY)或其類似物、大麻受體1拮抗劑、脂肪酶抑制 劑、人類促姨島肽（Human prolslet Peptide ; HIP)、黑色素 皮質素受體4促效劑或黑色素濃縮激素受體1拮抗劑。 本發明之肽結合物可另外與已知類型之抗高血壓劑組合 使用，該抗高血壓劑包括（但不限於）：血管收縮素轉化酶 抑制劑、血管收縮素II受體阻斷劑、利尿劑、β-阻斷劑或 鈣離子通道阻斷劑。 本發明之肽結合物可更進一步與已知類型之抗血脂異常 劑組合使用，該抗血脂異常劑包括（但不限於）：司他汀類 (statin)、纖維酸類（fibrate)、於酸及/或膽固醇吸收抑制 劑。 本發明之肽結合物亦可與已知類型之質子泵抑制劑（亦 即具有如抑制劑H+/K+-ATP酶之藥理學活性的藥劑）組合使 用，該質子泵抑制劑包括（但不限於）：苯并咪唑衍生物型 藥劑或°米°坐幷n比咬衍生物型藥劑，諸如OmeprazoleTM、 Lansoprazole™、Dexlansoprazole™、Esomeprazole™、 Pantoprazole™ 、 Rabeprazole™ 、 Zolpidem™ 、 Alpidem™、Saripidem™或NecopidemTM o 155900.doc 201138811 此外’本發明之肽結合物可與已知類型之消炎劑組合使 用’該消炎劑包括（但不限於）： 類固醇及皮質類固醇，諸如倍氯米松 (beclomethasone)、甲潑尼龍（methylprednisolone)、倍他米 松（betamethasone)、強的松（prednisone)、地塞米松 (dexamethasone)及氫化可體松（hydrocortisone); 非類固酵消炎劑（NS AID)，諸如丙酸衍生物（例如阿明洛 芬（alminoprofen)、苯噁洛芬（benoxaprofen)、布氯酸 (bucloxic acid)、卡洛芬（carprofen) ' 芬布芬（fenbufen.)、 非諾洛芬（fenoprofen)、氟洛芬（fluprofen)、氟比洛芬 (flurbiprofen) 布洛芬（ibuprofen) 、 °引 α朵洛芬 (indoprofen)、_ 洛芬（ketoprofen)、咪洛芬（miroprofen)、 萘普生（naproxen)、°惡丙°秦（oxaprozin)、°比洛芬 (pirprofen)、普拉洛芬（pranoprofen)、舒洛芬（suprofen)、 °塞洛芬酸（tiaprofenie acid)及硫 °惡洛芬（tioxaprofen));乙酸 衍生物（例如°引°朵美辛（indomethacin)、阿西美辛 (acemetacin)、阿氯芬酸（alclofenac)、環氯茚酸 (clidanac)、雙氯芬酸（diclofenac)、芬氯酸（fenclofenac)、 芬克洛酸（fenclozic acid)、芬替酸（fentiazac)、°夫羅芬酸 (furofenac)、異 丁芬酸（ibufenac)、伊索克酸（isoxepac)、 奥平酸（oxpinac)、舒林酸（sulindac)、硫平酸（tiopinac)、 托美丁（tolmetin)、齊多美辛（zidometacin)及佐美酸 (zomepirac));芬那酸（fenamic acid)衍生物（例如氟芬那酸 (flufenamic acid)、曱氯分那酸（meclofenamic acid)、甲分 155900.doc -65- 201138811 那酸（mefenamic acid)、尼 It 酸（niflumic acid)及托芬那酸 (tolfenamic acid));聯苯叛酸衍生物（例如二氟尼柳 (diflunisal)及氣苯柳（flufenisal));昔康（oxicam)(例如伊索 昔康（isoxicam)、0比羅昔康（piroxicam)、舒多昔康 (sudoxicam)及替諾昔康（tenoxicam));水楊酸酯（例如乙醯 水楊酸及柳氮績胺°比咬（sulfasalazine));及二氫》比。坐酉同 (pyrazolone)(例如阿紮丙宗（apazone)、苄派立隆 (bezpiperylon)、非普拉宗（feprazone)、莫非布宗 (mofebutazone)、經布宗（oxyphenbutazone)及苯基 丁氮嗣 (phenylbutazone))； COX II抑制劑，諸如羅非昔布（rofecoxib)及塞内昔布 (celecoxib);干擾素β之製劑（例如干擾素β-la或干擾素β_ lb); 及某些其他化合物，諸如5 -胺基水楊酸及其前藥及醫藥 學上可接受之鹽。 二甲雙胍亦展示具有消炎性[參見Haffner等人， 54: 1566-1572 (2005)]且因此亦可適用於本發明之上下文 中〇 所有引用之公開案及專利申請案均以全文引用的方式併 入本文中。 以下實例展示本發明之某些特定實施例。除另外詳細描 述之外，以下實例係使用熟習此項技術者所熟知之常規標 準技術來進行。應瞭解此等實例僅用於說明性目的，且不 意欲完全限定本發明之狀況或範疇。因此，其不應以任何
155900.doc - 66 - S 201138811 方式解釋為限制本發明之範疇。 實例 實例中使用之縮寫包括： NMP : N-曱基吡咯啶酮 DCM :二氯甲烷 DMF : N，N-二曱基甲醯胺 HATU :六氟磷酸2-(7-氮雜-1H-苯并三唑-1-基）-1，1,3,3-四曱錄 DIPEA :二異丙基乙胺 EtOH :乙醇 Et20 :乙醚
Peg3 : 8-胺基-3,6-二氧雜辛醯基 8Aoc : 8-胺基辛醯基 DBF : 4-(2-胺基乙基）-6-二苯并呋喃丙醯基 TFA :三氟乙酸
MeCN :乙腈 HPLC :高效液相層析法 MS :質譜法 IBMX: 3-異丁基-1-曱基黃嘌呤 BSA :牛血清白蛋白 cAMP :環狀單磷酸腺苷 DMEM :達爾伯克改良伊格爾培養基（Dulbecco's Modified Eagle Medium) F C S :胎牛血清 155900.doc -67- 201138811 HEPES : N-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸 p-ERK :磷酸化細胞外調節激酶 PBS :磷酸鹽缓衝鹽水 Boc :第三丁氧羰基 NEP : N-甲基吡咯啶酮 利拉魯肽：[Arg34，Lys(十六醯基-異 Glu)26]GLP-l(7-37) 實例1 :化合物之合成及肽性質 物質及方法 除非另有說明，否則下文中使用之試劑及溶劑可以標準 實驗室試劑級或分析級購得，且不經進一步純化即使用。 用於合成本發明之肽結合物的一般程序 在CEM Liberty肽合成器上使用標準Fmoc化學進行固相 肽合成。將TentaGel™ S Ram樹脂（1 g ; 0.25 mmol/g)在使 用之前在NMP(10 ml)中膨脹，且使用DCM及NMP在管與 反應容器之間轉移。適當時使用假脯胺酸，其為在肽合成 期間用於使聚集最少化之二肽，諸如Fmoc-Phe-Thr(\|/-Me，Me-Pro)-OH 及 Fmoc-Asp-Ser(v|/-Me，Me-Pro)-OH，及使 用形成Peg3、8Aoc及DBF連接部分（參見上文）之非天然胺 基酸作為經Fmoc保護之胺基酸（亦即分別為Fmoc-Peg3-OH、Fmoc-8Aoc-OH及 Fmoc-DBF-OH)且無需對一般程序 作任何改變。 · 偶聯： 在 CEM Discover微波單元中將 NMP/DMF/DCM(1:1:1 ; 0.2 Μ ; 5 ml)中之 Fmoc-胺基酸連同 HATU/NMP(0.5 Μ ; 2 155900.doc * 68 - 201138811 ml)及DIPEA/NMP(2.0 Μ; 1 ml)—起添加至樹脂中。加熱 偶聯混合物至75°C維持5分鐘，同時將氮氣鼓泡通過混合 物。隨後用NMP(4xlO ml)洗滌樹脂。 脫除保護基’· 添加哌啶/NMP(20% ; 10 ml)至樹脂中以便開始脫除保護 基，且用微波加熱混合物（40°C ; 30秒）。排出反應容器中 之物質且添加第二份哌啶/NMP(20% ; 10 ml)並再次加熱 (75°C ; 3分鐘）。隨後用NMP(6xl0ml)洗滌樹脂。 裂解： 用EtOH(3xlO ml)及Et2O(3xl0 ml)洗滌樹脂且在室溫 (r.t.)下乾燥至恆重。藉由用TFA/乙烷二硫醇（95/5，40 m卜2 h ; r.t.)處理使粗肽自樹月旨上裂解。在減壓下移除大 部分TFA，且使粗肽沈澱並用Et20洗滌三次且在室溫下乾 燥至怪重。 純化及表徵： 藉由製備型逆相HPLC使用配備有合適管柱及溶離份收 集器之PerSeptive Biosystems VISION工作站，且以緩衝液 A(0.1% TFA，水溶液）及緩衝液 Β(0·1% TFA，90% MeCN，水溶液）之梯度操作，將粗肽純化至純度大於 90%。藉由分析型HPLC及MS分析溶離份，且將相關溶離 份集中並凍乾。最終產物藉由HPLC及MS來表徵。 合成實例 使用如上所述之TentaGel S Ram樹脂（0.67 g ; 0,23 mmol/g)及Fmoc化學在CEM Liberty肽合成器上合成 155900.doc -69- 201138811
Exendin-4(l-39)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17(化合物 1)。使用Fmoc-8-胺基-3,6-二氧雜辛酸及假脯胺酸Fmoc-Phe-Thr(\]/-Me，Me-Pro)-OH 及 Fmoc-Ser(tBu)-Ser(\)/-Me，Me-Pro)-OH。 如上所述使肽自樹脂上裂解，且在Gemini-NX管柱（5x25 cm ; 10 μιη ; C 1 8)上用 35 ml/min 流速之緩衝液 Α(0.10/〇 TFA ;水溶液）與緩衝液B(0.1% TFA ; 90% MeCN ;水溶液） 之混合物進行純化。產物用線性梯度為20%至50%之緩衝 液B經47分鐘溶離，且用溶離份收集器收集溶離份（9 ml)。 藉由分析型HPLC及MS分析相關溶離份、集中且凍乾，得 到白色粉末（122 mg)，其經分析型HPLC分析純度為58%。 產物再次於Luna管柱（1x25 cm; 5 μηι; C8)上用4 ml/min流速之緩衝液A(0.1% TFA;水溶液）與緩衝液Β (0.1% TFA ; 90% MeCN ;水溶液）之混合物進行純化。產 物用線性梯度為20%至50%之緩衝液B經47分鐘溶離，且用 溶離份收集器收集溶離份（2 ml)。藉由分析型HPLC及MS 分析相關溶離份.、集中且凍乾，得到白色粉末（63 mg)， 經分析型HPLC分析其純度為82%。 使用 TentaGel S Ram樹脂（0.70 g ; 0.23 mmol/g)及另外如 上文針對合成及裂解所述之相同條件來合成另一份化合物 1 ° 在 Gemini-NX 管柱（5x25 cm ； 10 μιη ； C18)上用 35 ml/min流速之緩衝液A(0.1% TFA ;水溶液）與緩衝液Β (0.1% TFA ; 90% MeCN ;水溶液）之混合物進行純化。產
155900.doc -70- S 201138811 物用線性梯度為20%至50%之緩衝液B經47分鐘溶離，且用 溶離份收集器收集溶離份（9 ml)。藉由分析型HPLC及MS 分析相關溶離份、集中且凍乾，得到白色粉末（113 mg)， 經分析型HPLC分析其純度為57%。 產物再次於Luna管柱（1x25 cm; 5 μπι; C8)上用4 ml/min流速之緩衝液Α(0· 1% TFA ;水溶液）與緩衝液Β (0.1% TFA ; 90% MeCN ;水溶液）之混合物進行純化。產 物用線性梯度為20%至55%之缓衝液B經47分鐘溶離，且用 溶離份收集器收集溶離份（2 ml)。藉由分析型HPLC及MS 分析相關溶離份、集中且凍乾，得到白色粉末（29 mg)， 經分析型HPLC分析其純度為77%。 合併第一合成產物（63 mg ; 82%)與第二合成產物（29 mg ; 77%)且再次在 Kromasil 管柱（1x25 cm ; 10 μιη ; C8)上 用4 ml/min流速之緩衝液Α(0.1 % TFA;水溶液）與緩衝液Β (0.1% TFA ; 90% MeCN ;水溶液）之混合物進行純化。產 物用線性梯度為25%至65%之緩衝液B經47分鐘溶離，且用 溶離份收集器收集溶離份（2 ml)。藉由分析型HPLC及MS 分析相關溶離份、集中且凍乾，得到白色粉末（33 mg)， 經分析型HPLC分析其純度為94%。如由MS測定質量為 65 5 3.39 Da(計算值為 6553.06 Da) ° 使用如上所述之TentaGel S Ram樹脂（0.55 g i 0.23 mmol/g)及Fmoc化學在CEM Liberty肽合成器上合成 Exendin-4(l-28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃泌素 6(化合物 33)。 使用Fmoc-8-胺基-3,6-二氧雜辛酸及假脯胺酸Fmoc-Plie- 155900.doc -71- 201138811
Thr(\|/-Me，Me-Pro)-OH。 如上所述使肽自樹脂上裂解，且在Gemini-NX管柱（5x25 cm ; 10 μιη ; C18)上用 35 ml/min 流速之缓衝液 Α(0· 1 % TFA ;水溶液）與緩衝液Β(0·1°/〇 TFA ; 90% MeCN ;水溶液） 之混合物進行純化。產物用線性梯度為25%至55°/。之緩衝 液B經47分鐘溶離，且用溶離份收集器收集溶離份（9 ml)。 藉由分析型HPLC及MS分析相關溶離份、集中且凍乾，得 到白色粉末（70 mg)，經分析型HPLC分析其純度為90%。 如由MS測定質量為4364.08 Da(計算值為4364.11 Da)。 使用 Fmoc-Phe-Thr(\)/-Me,Me-Pro)-OH、使用如上所述之 TentaGel S Ram 樹脂（1.15 g ; 0.25 mmol/g)及 Fmoc 化學在 CEM Liberty 肽合成器上合成[Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3] Exendin-4(1-27)-[Leu4]胃泌素6(化合物 101)。在偶聯及 脫除保護基過程中使用NEP代替NMP。 如上所述使肽自樹脂上裂解，且在Gemini-NX管柱（5x25 cm ; 10 μιη ; C 1 8)上用 3 5 ml/min 流速之緩衝液 Α(0· 1 〇/〇 TFA ;水溶液）與緩衝液B(0.1% TFA ; 90% MeCN ;水溶液） 之混合物進行純化。產物用線性梯度為20%至50°/。之緩衝 液B經47分鐘溶離，且用溶離份收集器收集溶離份（9 ml)。 藉由分析型HPLC及MS分析相關溶離份、集中且凍乾，得 到白色粉末（50 mg)，經分析型HPLC分析其純度為85%。 如由MS測定質量為3952.00.08 Da(計算值為3951.97 Da)。 使用如上所述之TentaGel S Ram樹脂（1.16 g ; 0.23 mmol/g)及Fmoc化學在CEM Liberty肽合成器上合成GLP- 155900.doc -72- s 201138811 l(7-36)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17(化合物 42)。使 用？111〇(：-8-胺基-3,6-二氧雜辛酸及假脯胺酸？111〇(：-861^811)-Ser(\|； Me, Me pro)-OH。 如上所述使肽自樹脂上裂解，且在Gemini-NX管柱（f; χ25 cm ； 10 μηι ; C18)上用 35 ml/min 流速之緩衝液 Α(0· 1 % TFA ;水溶液）與缓衝液Β(0.1% TFA ; 90% MeCN ;水溶液） 之混合物進行純化。產物用線性梯度為25°/。至45%之緩衝 液B經47分鐘溶離，且用溶離份收集器收集溶離份（9 ml)。 藉由分析型HPLC及MS分析相關溶離份、集中且凍乾|得 到白色粉末（172 mg)，經分析型HPLC分析其純度為86%。 如由MS測定質量為5664.72 Da(計算值為5664.70 Da)。 使用如上所述之TentaGel S Ram樹月旨（1.30 g ； 0.25 mmol/g)及Fmoc化學在CEM Liberty肽合成器上合成 [Arg34，Lys(十六醯基-異 Glu)26]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6(化合物107)。在偶聯及脫除保護基過程中 使用NEP代替NMP。在醯化附接點處使用Fmoc-8-胺基-3,6-二氧雜辛酸及假脯胺酸 Fmoc-Phe-Thr(\(/-Me，Me-Pro)-OH 以及 Fmoc-Lys(Dde)-OH。 使用DCM中之Boc2O(330 mg)及DIPEA(54 μΐ)使固相附 接之肽的Ν端經Boc保護。隨後使用水合肼/ΝΕΡ(4% ; 2:<15 分鐘）裂解Dde保護基，且用ΝΕΡ(8χ2分鐘）、DIEA/NEP (10°/。； 5x5分鐘）及NEP(8x2分鐘）洗滌樹脂。使用Fmoc-Glu-OtBu及十六酸在如上所述之CEM Liberty肽合成器上 完成合成。在偶聯及脫除保護基過程中使用NEP代替 155900.doc -73- 201138811 NMP。 如上所述使肽自樹脂上裂解，且在Gemini-NX管柱（5x25 cm ; 10 μηι ; C18)上用 35 ml/min 流速之緩衝液 Α(0.1ο/〇 TFA ;水溶液）與緩衝液Β(0·1°/。TFA ; 90% MeCN ;水溶液） 之混合物進行純化。產物用線性梯度為3 〇°/()至之緩衝 液Β經47分鐘溶離，且用溶離份收集器收集溶離份（9 ml)。 藉由分析型HPLC及MS分析相關溶離份、集中且凍乾，得 到白色粉末（60 mg)，經分析型HPLC分析其純度為88%。 如由MS測定質量為4819.95 Da(計算值為4819.45 Da)。 實例2 : GLP-1受體及胃泌素CCK-B受體在活體外經本發 明之肽結合物活化（ECs〇) 物質及方法 人類GLP-1受體（GLP-1 R)功效檢定： 藉由使用 Perkin-Elmer之 FlashPlate™ cAMP套組、在用 GLP-l(7-3 6)、Exendin-4(l-39)或本發明之測試結合物刺激 受體之後量測誘發之c AMP來評估本發明之肽結合物之活 體外作用。簡言之，將表現人類GLP-1 R之HEK293細胞 (經由轉染GLP-1 R之CDNA及選擇穩定純系產生之穩定細 胞株）以40,000細胞/孔接種於塗有0.01。/。聚-L-離胺酸之96 孔微量滴定盤中，且在100 μΐ生長培養基[DMEM，10% FCS ’ 青黴素（Penicillin)(100 IU/ml)，鍵黴素（Streptomycin) (100 pg/ml)]中生長1天來培養。在分析當天，移除生長培 養基且用200 μΐ泰洛得（Tyrode)緩衝液[泰洛得鹽（9.6 g/Ι)， 1〇1111^11£?£5，？117.4]將細胞洗滌一次》在37°(：下在含有
155900.doc • 74· S 201138811 濃度遞增之測試化合物、100 μΜ IBMX及0.1% BSA之100 μΐ泰洛得緩衝液中培育細胞15分鐘。藉由添加25 μΐ 0.5 Μ HC1來中止反應且在冰上培育60分鐘。其他方法細節參見 WO 2008/152403。 CCK-B受趙（CCK-BR)功效檢定： 為測試CCK-B R之結合及活化，以類似於為產生hGLP-1 R而產生細胞株（參見上文）之方式來產生表現人類或小鼠 CCK受體之一的穩定細胞株。簡言之，使用HEK293細胞 用於轉染人類或小鼠CCK-A R或CCK-B R[hCCK-A R(基因 身分：L19315)、hCCK-B R(NM_176875)、mCCK-A R (NM_009827)及 mCCK-B R(NM_007627)]之 cDNA，該等 cDNA均已選殖至轉染質體;五中。細胞根據 標準方案在生長培養基中生長並使用脂染胺（Lipofectamin) (Invitrogen)經質體轉染。在生長培養基中使用G418選擇穩 定表現CCK受體之細胞（只有已吸收且合併cDNA表現質體 之細胞存活）且使其增殖。將細胞儲備液冷凍以便稍後使 用。 藉由量測分別穩定表現人類及小鼠CCK_B R(高親和力 胃泌素受體）之HEK293細胞中之p-ERK(使用AlphaScreen™ SureFire p-ERK檢定）來估計本發明之狀結合物之活體外作 用。如下進行胃泌素受體功效檢定（AlphaScreen™ SureFire p-ERK檢定）： 第1天：接種細胞 表現CCK-B R之所述細胞以20,000細胞/孔接種於塗有 155900.doc -75- 201138811 聚-D-離胺酸之96孔盤中之100 μΐ生長培養基[DMEM，10% FCS，青黴素（100 IU/ml)，鏈黴素（100 pg/ml)]中。細胞在 培育箱（37°C，5% C02)中培育兩天。 第3天：改為無血清培養基 將生長培養基改為每孔80 μΐ無血清培養基[DMEM，青 黴素（100 IU/ml)，鏈黴素（100 pg/ml)]，且細胞在培育箱 (3 7°C，5% C02)中繼續培育19小時。 第4天：肽結合物刺激及AlphaScreeri1^1· SureFire p-ERK檢定 1.19小時之後，添加20 μΐ含有5種不同濃度肽結合物之 一的無血清培養基（對於每種濃度以一式三份進行），且在 室溫下培育細胞5分鐘。 2. 藉由將培養盤快速倒置而棄去刺激培養基，且每孔添 加60 μΐ 1 X溶解緩衝液（來自SureFire檢定套組）。 3. 將培養盤在盤震盪器上震盪5分鐘，隨後置於冰上。 4.SureFire P-ERK檢定：取各上清液4 μΐ轉移至384孔淺 孔微孔盤（proxiplate)(Perkin Elmer)中。 5. 兩種對照溶解產物（未受刺激及受刺激）各取4 μΐ —式 兩份添加至淺孔微孔盤中。 6. 混合60份反應緩衝液、10份活化緩衝液、1份受體珠 粒及1份供體珠粒（反應緩衝液+活化緩衝液+珠粒）。在淺 孔微孔盤中每孔添加7 μΐ之後者反應緩衝液+活化緩衝液+ 珠粒，在添加至孔中之前小心地使混合物再懸浮。 155900.doc -76- 201138811 7. 培養盤在22°C培育箱中於暗盒中培育2小時。 8. 使用適當閱讀程式（Perkin-Elmer)在Envision™發光式 讀盤器（Perkin-Elmer)上分析培養盤。 在上述檢定中測試本發明之肽結合物（亦即人類GLP-1 R 活化功效、人類CCK-B R活化功效及小鼠CCK-B R活化功 效）。 在人類GLP-1受體（hGLP-1 R)活化功效檢定中使用人類 GLP-l(7-3 6)及Exendin-4(l-3 9)作為陽性對照，且在人類 CCK-B受體（hCCK-B R)功效檢定及小鼠CCK-B受體 (mCCK-B R)檢定中使用 h[Glnl，Leul5]胃泌素 17 及 CCK-8 (由CCK之C端8個活性胺基酸殘基組成）作為陽性對照。 在本發明之CCK受體活化研究中，使用h[Glnl,Leul5]胃 泌素17(具有序列H-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2)作為對 照化合物。麩醯胺酸（Gin)殘基可在一定程度上重排為 PyroGlu，而不喪失受體結合活性。 結果（EC50值，以mold表示）概述於下表1、la及2中。 155900.doc 77- 201138811 表1.本發明之化合物（肽結合物）活化hGLP-l R、hCCK-B R 及mCCK-B R之活體外功效（EC5〇值，mol/1)。 化合物 編號 肽結合物 hGLP-l R EC50 hCCK-B R EC50 mCCK-B R EC50 1 Exendin-4( 1 -3 9)-Peg3 -Peg3 -[Glnl，Leul5]胃泌素 17 5.68xl0.10 1.90x10—8 5.40x10-8 33 Exendin-4(1 -28)-Peg3_Peg3-[Leu4]胃 泌素6 7.74X10'10 3·08χ10_8 7.15xl〇·8 37 GLP-l(7-36)-[Glnl，Leul5]胃泌素17 1.45X10'10 2·59χ10·8 7.31xl0'8 38 GLP-l(7-36)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 17 8.42X10·11 7.73xl0_8 1.14X10·7 39 GLP-l(7-36)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌 素17 1.14xl〇·10 1·88χ10·8 5.41xl0'8 40 GLP-l(7-36)-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌 素17 1.16x10-10 1.56xl0'8 5.86xl〇·8 41 GLP-l(7-36)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul 5] 胃泌素17 9.26x1 O·11 8.76X10'9 5·11χ10_8 42 GLP-1 (7-36)-Peg3-Peg3-[Glnl ,Leul 5] 胃泌素17 7.78xlO'n 8.2〇xlO'9 5.83xlO'8 43 GLP-1 (7-36)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17 1.56xlO'10 5.19xl〇·8 8.25 xlO*8 44 GLP-l(7-36)-DBF-SKK-[Glnl,Leul5] 胃泌素17 1.37xlO'10 2.57χ10·8 8.69xl0'8 45 GLP-1 (7-3 6)-8 Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素17 1.22xlO·10 1.28x1 O'8 7.14xl〇·8 對照 GLP-1 (7-36) 1.66X10'11 對照 Exendin-4(l-39) 1.63xlO_10 對照 h[Glnl，Leul5]胃泌素 17 4.69x1 O'9 1.82xl0'8 對照 CCK-8 6.1 xlO'9 1.63 xlO·7 155900.doc ·78· s 201138811 表la.本發明之化合物（肽結合物）活化hGLP-l R、hCCK-B R及mCCK-B R之活體外功效（EC50值，mol/1)。 化合物 編號 肽結合物 hGLP-l R EC50 hCCK-B REC50 mCCK-B R EC50 1 Exendin-4( 1 -3 9)-Peg3 -Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17 2.7xl0*n 8.0xl0'9 5.4x10'8 33 Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 2·8χ10·η 1.1x10—8 7-lxlO'8 表2.本發明之其他化合物（肽結合物）活化hGLP-l R及 hCCK-B R之活體外功效（EC50值，mol/1)。 化合物 編號 肽結合物 hGLP-l RECso hCCK-B R EC50 55 Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu3]胃泌 素5 4.2X10'11 7.4x10·9 56 Exendin-4( 1 -2 8)-Peg3 -Peg3 - [Ala 1 ,Leu4] 胃泌素6 2.2xl0"n 9.1xl〇·9 57 Exendin-4( l-28)-Peg3-Peg3- [ Ala2 ,Leu4] 胃泌素6 3.3χ1〇·" 7.2x10·9 58 Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌 素6 3.3χ1〇·η 96xl0·9 59 Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu2]胃泌 素4 2.5xl〇-n 9.00x1 O'9 60 [Leu 14]Exendin-4( 1 -2 8)-Peg3 -Peg3 -[Leu4]胃泌素6 4.1χ10_π 6.3x1 O'9 61 [Oml2]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-fLeu4]胃泌素6 2.8χ1〇·η 5.8xl0'9 62 [Om27]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 3.1xl〇-n 5.6xl0'9 63 [Phe25]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 4.1xl0*n 8_5χ10_9 155900.doc -79- 201138811 64 [Asp2 8] Exendin-4( 1 -2 8)-Peg3 -Peg3 -[Leu4]胃泌素6 6.1x1ο·11 3.3Χ10'9 65 [Tyrl3]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 4.6xl0_u 1.2x10'8 66 [Om20]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3· [Leu4]胃泌素6 3.8x10'" 1.5χ10·8 67 Exendin-4(l-28)_Peg3-[Leu4]胃泌素6 5.〇χ1〇·π 1.0x10-8 68 Exendin-4(l-28)-[Leu4]胃泌素6 6.1χ1〇·" 1.4x10'8 69 Exendin-4(l-27)-[Leu4]胃泌素11 1.〇χ1〇·10 4.3 χΙΟ-9 70 Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素6 1.4χ10'π 5.3χ10'9 71 Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu3]胃泌素5 2.9x10'" 4.1 χΙΟ'9 72 Exendin-4(l-26)_Peg3-[Leu3]胃泌素5 1.4χ10_9 3.2χ10'9 73 Exendin_4(l-27)-Peg3-[Leu2]胃泌素4 4.1x10*" 8.1Χ10'9 74 [Tyr 13 ,Leu 14]Exendin-4( 1 -27)-Peg3 -Peg3-[Leu4]胃泌素6 5.〇χ1〇·η 8.4x10'9 75 [Tyrl3,Phe25]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]會泌素6 3.5x1ο·11 8.4x10'9 76 [Leul4,Phe25]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 2.6χ1〇·" 7.9x10_9 77 [Tyrl3，Leul4，Phe25]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 4.4χ1〇·" 9.1 χ ΙΟ'9 78 側鍵-環([Lys 12，Glul 6]Exendin-4( 1 -28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 2.5Χ10·11 5.9χ10'9 79 側鍵-環([Glul 6，Lys20]Exendin-4( 1 -28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 2.6x1ο·11 5.3 χΙΟ'9 80 側鏈-環([Lys20,Glu24]Exendin-4(l -28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 3·2χ10-11 4.〇χ1 (Γ9 81 [Lys 16]Exendin-4( 1 -28)-Peg3 -Peg3 -[Leu4]胃泌素6 3.2x10-11 1.5χ1〇·8 82 Exendin-4(l-28)-Peg3-K-Peg3-[Leu4]胃 泌素6 2.8χ10'η 2.14χ10·8 83 Exendin-4(l-28)-[Thr4]胃泌素6 4.4χ1〇·" 5.8x10-8 84 Exendin-4(l-28)-[Phe4]胃泌素6 4.4χ1〇·" 1.4χ10·7 85 [Leul4]Exendin-4(l-28)-[lNal3，Leu4]胃 泌素6 4.〇χ1〇·π 2.7χ10'7 155900.doc -80- s 201138811 86 [Leul4]Exendin-4(l-28)-[Nle4]胃泌素6 5.2X10·11 2.4x10':? 87 [Leu 14]Exendin-4( 1 _28)_ [Leu4, [3，(3 - 口比 啶基)-Ala]6]胃泌素6 2.8XHT11 2.〇x10_i! 88 [Glu9，Leu 14，Phe25，Tyr 13 ] Exendin-4( 1 -27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 4.6xl0'n 2.0x1 O'*1 89 [Leul 4,Phe25 ,Tyr 13]Exendin-4(l -27)-Peg3-Peg3-[Leu4，Phe3]胃泌素6 2.3χ1〇·η 1.2x10-6 90 [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4，Phe3]胃泌素6 3.2xl0'n 1.3xl0'6 91 [Arg275Leul45Phe255Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 6.8xlO'u 1.8xl0'8 92 [Argl2,27,Leul4,Lysl6,Phe25,Tyrl3]Exe ndin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素6 1.7xlO*10 2.6x10·8 93 [Argl2,27,Leul4,Lys20,Phe25,Tyrl3]Exe ndin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素6 5.8xl0'n 2.6xl0'8 94 [Argl2,27，Leul4，Lys24，Phe25，Tyrl3]Exe ndin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 1.3x1 O'10 3,6xl〇·8 95 [Argl2，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素6 7.9xl0'n 1.4x1 O'8 96 [Glu9，Leu 14，Phe25，Tyr 13 ] Exendin_4( 1 · 27)-[Leu2]胃泌素 4 1.2xl0'9 2.11x10” 97 [Glu9，Leu 14，Phe25，Tyr 13 ] Exendin-4( 1 -27)-Peg3-[Leu2]胃泌素 4 6.〇χ1〇·" 1.3xl〇·8 98 [Glu9，Leul4,Phe25，Tyrl3]Exendin_4(l-27)-Om_Peg3-[Leu2]胃泌素4 4.6xl0'n 1.0x10—8 99 [Glu9，Leu 14，Phe2 5，Tyr 13 ] Exendin-4( 1 -27)-Peg3-Om-[Leu2]胃泌素4 4.1xl0'n 5.1xl0·8 100 [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendii>4(l-27)-〇m-Om-[Leu2]胃泌备4 l.lxlO'10 8.6χ10'7 101 [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-[Leu4]胃泌素 6 l.lxlO'10 3.〇xl〇·8 102 [Glu9,Leu 14,Phe25 ,Tyr 13]Exendin-4( 1 -27)-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 9.1χ1〇·π 5.4xl0_8 103 [Glu9，Leu 14，Phe2 5，Tyr 13 ]Exendin-4( 1 _ 27)-Om-Peg3-[Leu4]胃泌素6 1.2xlO'10 l.OxlO·7 104 [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-Om-[Leu4]胃泌素6 8.7xl〇-u 8.8xl〇·9 105 [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin，4(l-27)-Om-On>[Leu4]胃泌备6 l.lxlO'10 1·6χ10·8 155900.doc •81 · 201138811 表3.本發明之GLP-1化合物（肽結合物）活化hGLP-l R、 hCCK-B R及 mCCK-B R之活體外功效（EC50，mol/1)。（僅包 括於GLP-1應用中） 化合物 編號 肽結合物 hGLP-l R EC50 hCCK-B REC50 mCCK-B REC50 37 GLP-l(7-36)-[Glnl，Leul5]胃泌素 17 3.0x10'" 2.6χ10'8 7.3x10'8 38 GLP-l(7-36)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 17 3.〇χ1〇·π 7.7χ10'8 Ι.ΙχΙΟ'7 39 GLP-l(7-36)-AAA-[Glnl，Leul5]胃 泌素17 3.4χ10'π 1.9χ10·8 5.4χ10'8 40 GLP-l(7-36)-SKK-[Glnl5Leul5]胃 泌素17 3.1x10'" 1.6χ10'8 5.9χ10'8 41 GLP-l(7-36)-Peg3-SKK-[Glnl,Leul5]胃泌素 17 2.3χ1〇·" 8.8χ1(Γ9 5.1χ10'8 42 GLP-1 (7-36)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素17 2.8x10'" 8.2χ10-9 5.8χ10'8 43 GLP-1 (7-36)-8 Aoc-SKK-[Glnl,Leul5]胃泌素17 4.9xl〇·" 5.2χ1〇·8 8.3 χΙΟ*8 44 GLP-1 (7-36)-DBF-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17 5.3χ10'π 2·6χ10—8 8.7χ10'8 45 GLP-1 (7-36)-8 Aoc-8Aoc-[Glnl,Leul5]胃泌素17 4.2χ1〇·π 1·3χ1〇-8 7.1χ10'8 對照 GLP-1 (7-36) 1.7xl0'n Ν.Τ. Ν.Τ. 對照 Exendin-4(l-39) 2.4x10'" Ν.Τ. Ν.Τ. 對照 h[Glnl，Leul5]胃泌素 17 Ν.Τ 4·7χ10·9 Ι.δχΙΟ'8 對照 CCK-8 Ν.Τ 6.3x10'9 1·6χ1 Ο·7 對照 h[Leul5]胃泌素17 Ν.Τ 2.4χ1〇·9 Ν.Τ 106 [Lys(十六醯基-異 Glu)34]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 4.9χ10'π 1.8χ10—8 107 [Arg34,Lys(十六酿基-異 Glu)26]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 1.4χ10'10 2.9χ10'8 155900.doc •82- s 201138811 108 [Arg26,34，Lys(十六醯基-異 Glu)3 6] GLP-1 (7-3 7)-Peg3-Peg3 -[Leu4]胃泌素6 LlxlO'10 7.8xl0·8 109 [Lys(十六醯基-異 Glu)26]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 9,9x10*11 2.6x10—8 110 [Arg26,34，GIy8，Lys(十六醯基-異 Glu)36]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 1.2xl〇·10 2.9xl0'8 111 [Aib8，Arg34,Lys(十六醢基-異 Glu)26]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 8.8χ1〇·η 5.9X10'8 112 [Aib8,Arg34]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 4.3X10'11 4.2xl〇·8 113 [Arg34]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 2.7x10-11 2.4x10—8 Ν.Τ :未測試 結果 上表1、la、2及3中概述之結果指示通常所有本發明之 肽結合物對於所述所有三種受體均為有效促效劑，且其展 示緊密相似之功效程度。 實例3:針對92種經選擇之肽GPCR來篩選化合物73。 針對大量選擇之GPCR類型肽受體來選擇化合物73用於 測試，以便在早期發現混雜（promiscuity)。受體屬於A及B 類GPCR家族且在Millipore使用其GPCR篩選平台進行檢 定。各GPCR係藉由其對照肽配位體（已知各別受體之活化 劑）或藉由化合物73在100 nM濃度下活化。針對受體之促 效作用作為對照肽（根據定義提供100%活化）之百分比來提 供。只有預期之GLP-1受體及CCKB(CCK2)受體經化合物 73顯著活化（分別為100及95%)，表示該肽對於此兩種受體 155900.doc -83- 201138811 具有特異性。 實例4:小鼠體内化合物1及33之藥物動力學（PK) 方法 以靜脈内或皮下快速給藥方式向小鼠給與每公斤100 nmol化合物1或33，且在給藥後直至240分鐘收集血漿樣 品。在各時間點自三個小鼠收集樣品。使用LC/MS/MS分 析血漿樣品中存在之化合物33(10-1000 nM)。 結果 表4.靜脈内及皮下投與100 nmol/kg至小鼠之後的PK參數 化合物33 化合物1 參數 單位 皮下 靜脈内 皮下 靜脈内 t>/3\ 小時 3.4 2.8 0.45 0.28 F % 100% - 97% - 兩種化合物在皮下投藥之後均具有極佳生物可用性 (F)，但化合物33由於較長半衰期而展示更佳之PK分佈（圖 ΙΑ、1B及表 4)。 實例5 :化合物33及74-80之PK 方法 將每種肽以100 nmol/kg之單一皮下劑量給與小鼠。在5 及30分鐘之後及1、2、4、6、16及24小時之後採集血液樣 品。在各時間點，自兩個小鼠採集樣品。藉由液相層析質 譜法（LC-MS/MS)在固相萃取（SPE)之後分析血漿樣品。 155900.doc -84-
S 201138811 ^5.皮下投與1QQ nmol/kg至小鼠之後的1:½ 化合物 ㈣W ..... :·-.· ·.:··.-： 33 2.0 74 3.6 76 2.3 77 3.1 75 2.5 78 2.0 79 1.5 80 1.9 該等肽展示有前景之T1/^分佈’其中就半衰期及暴蜀·量^ 而言化合物74及77優於其餘者（表5及圖2)。 實例6:本發明之肽結合物在db/db小鼠中之活體内活性 物質及方法 先前已使用db/db小鼠模型來評估潛在治療性候選藥# 的β-細胞保護作用[Rolin，B.等人，J/w. j pi .rnysi〇i
Endocrinol. Metab. 283: E745-E752 (2002)]。若干研办已 證實在胰腺胰島素含量與β-細胞群之間有相關性[Rolin，B 等人（在上述引文中）；Suarez-Pinzon，W.L.等人， 54: 2596-2601 (2005) ; Suarez-Pinzon W.L.等人， 57: 3281-3288 (2008)]。 在本發明研究中，使6週齡db/(ib(BKS.Cg-w +/+ 雕性小鼠（Taconic Europe A/S，Lille Skensved， Denmark)適應其新環境且使其隨意獲取正常食物及水。將 小鼠成對放養於光、溫度及濕度可控制之室中。藉由監控 155900.doc -85- 201138811 血糖含量來追蹤糖尿病之進程為期2週，隨後在處理之前 根據糖尿病小鼠之血糖含量將其隨機分成處理組（n=1 〇/ 組）。隨後用100 μΐ媒劑對動物進行皮下（sc)模擬注射（每天 一次）為期二天以使該等動物適應處置及注射。在隨機分 組及模擬注射之後’接著用h[Leul5]胃泌素17(1、1〇及50 nmol/kg)與 Exendin-4(1-39)(1、10 及50 nmol/kg)之組合， 或用化合物1(本發明之肽結合物）[亦即Exendin_4(1_39)_
Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17](1、10及 50 nmol/kg)， 或用媒劑（PBS緩衝液；注射體積5 ml/kg)處理（皮下，每天 兩次）動物16天。用在給藥之前即刻製備之新鮮溶液在8:〇〇 與9:00時間之間及在15:〇〇與16:〇〇時間之間進行每天之注 射。 在給藥之前（第1天）及處理之第8天及第16天自眼窩血管 叢獲得血液樣品（200 μΐ)且置於經EDTA塗佈之管中。各血 液樣品經離心，且將血漿（丨〇〇 μ1)儲存於_8〇〇c下用於稍後 分析。用於血糖測定之血液樣品取自尾靜脈。在給藥最後 一天之後’藉由C02麻醉隨後以頸椎脫臼法（cervicai dislocation)殺死所有動物（第16天）。立即自各動物分離胰 腺、稱重及儲存’用於稍後分析胰島素含量。 量測 藉由固疋化葡萄糖氧化酶法（Elite Autoanalyser, Bayer， Denmark)測定全血葡萄糖濃度（mM)。使用大鼠C-肽放射 免疫檢定套組（Linco/Millipore，套組RCP-21K)測定血漿C-狀。使用大鼠騰島素放射免疫檢定套組（Linco/Millipore， 155900.doc
S -86 · 201138811 套組Rl-13)測定胰腺胰島素含量。 結果 自圖3顯而易見，相較於Exendin-4(l-39)與h[Leul5]胃泌 素17之簡單組合處理或媒劑處理之動物，在用本發明之肽 結合物（化合物1)處理之動物中可見胰腺胰島素之含量顯著 較高。 因此’由於本發明之肽結合物中Exencjin_4部分與胃泌 素部分之共價偶聯或鍵聯（結合）而產生的對胰腺胰島素含 量之影響似乎可能出乎意料地大於使用兩種個別肽組分之 相應相加性組合時所達成之影響。 實例7 : 6週研究 方案 自 Taconic Europe A/S 獲得 125 隻 db/db(BKS.Cg-w +/+
Zepr心/J)雌性小鼠（到達時為6週）。 在第-4天，自半空腹動物收集血液用於測定基線血漿c_ 肽、血漿胰島素、血糖及HbAlc含量。隨後根據基線血漿 C-肽及HbAlc含量將動物分成n=20的5個處理組。隨後對 動物皮下注射100 μΐ媒劑，每天兩次，為期至少3天，以使 該等動物適應處置及實驗程序。 隨後根據表6對動物皮下注射肽或媒劑，每天兩次，總 共42天。用新鮮製備之溶液在〇8:〇〇〇9:〇〇 h之間及在 15:00-16:00 h之間進行每天之注射。給藥最後一天為第42 天早晨。 155900.doc -87 · 201138811 表6.組及劑量 組 物質 路徑 劑量 (奈莫耳濃度/公斤/天） 組1 媒劑(PBS) 皮下每天 兩次 - 組2 Exendin-4 + 胃泌素 17 2*25+2*25 組3 化合物33 2*25 研究在第42天終止》動物為半空腹，且其在早晨接受最 後之劑量。對血液取樣用於測定血漿C-肽、血漿騰島素、 血糖及HbAlc。對血液取樣之後，使用c〇2隨後以頸椎脫 臼法使動物安樂死《分離胰腺、稱重、分成3塊，且轉移 至含有2 ml冷酸性醇之管中並分析胰島素含量。 在db/db小鼠中，相對於媒劑，化合物33使血糖含量降 低（圖4)且使血漿胰島素濃度升高（圖5)。此外，相較於經 媒劑處理及經胃泌素17+Exendin-4處理之動物，用化合物 33處理引起HbAlc含量在統計學上顯著降低（圖6)。此等結 果表明化合物33改良糖尿病小鼠體内之血糖控制。 又’相對於媒劑’化合物33引起胰腺胰島素含量在統計 學上顯著增加（圖7)。此外，化合物33在兩種情況下均引起 血漿△(：-肽含量顯著增加，指示在所有組中胰功能均有改 良（圖8)。 本發明數據顯示肽結合物化合物33增加db/db小鼠體内 胰腺胰島素含量及改良血糖控制，如由HbAlc之減少所證 明。 實例8:休藥期研究 155900.doc
S -88- 201138811 方案 獲得150隻5-6週齡之雄性db/db小鼠》在控制條件下（20-22 C，55-85%濕度）遵循12:12小時光亮/黑暗循環（其中光 亮於05.00 AM)放養動物（5隻小鼠/籠）。用標準…“。肛七第 1324號膳食使動物隨意進食且自由獲取酸化自來水。在研 究開始時’動物為8 - 9週齡。在實驗前最少一週，每天使 所有動物適應新環境及處置。 i液取樣：開始處理之前及在第93天（終止之前），在空 腹小鼠（17小時）中獲得企液樣品（15〇 μ 1)，其用經EDTA塗 佈之微吸管獲自眼窩血管叢，置於保存在冰上的經EDTA 塗佈之管中。企液樣品經離心且所得金漿（至少5〇 μΐ)儲存 (於-80°C下）用於稱後分析C-肽及騰島素含量。又，在第 -10/12天（開始治療之前）及第93天（終止之前）分析自眼窩血 管叢獲得之血液樣品（50 μΐ)的BG(條形圖（stick))及 HbAlc。 分組 在首次給藥之前6至4天，對空腹動物（17小時）進行口服 葡萄糖耐量測試（OGTT，參見下文）。利用所得240分鐘時 段之血糖濃度曲線下面積（AUC〇-24〇 ;單位：mM*min)將動 物分成5組（A-E) ’每組26隻，以便在兩組中獲得相似葡萄 糖耐受性。給藥之初始5 0天（時段1)之後進行第二次 OGTT。基於此第二次OGTT測§式’根據AUC(如上所述）將 各組小鼠分成展示相似葡萄糖耐受性的兩個子組。 給藥：該等動物每天一次（QD)皮下（SC)給與媒劑 155900.doc -89· 201138811 (2*n=26)、Exendin-4(n=26)或化合物 33(n=26)之劑量且根 據表6給藥為期50天。給藥應在每天02.00與03.00 pM之間 進行，且注射量為5 ml/kg。給藥5 0天之後，將動物分成7 組，如表1中所說明。此給藥方案持續40天直至在第93天 殺死動物。 口服葡萄糖耐量測試（OGTT):在處理期之第-6/4、50、 65、78及91天對最後注射媒劑或化合物之後空腹隔夜（17 小時）之動物進行OGTT。自尾尖取得血液樣品且量測血 糖。為防止混淆食物攝取，在所有OGTT過程中使動物保 持空腹。在初始血液取樣（t=0，空腹血糖含量）之後立即給 與口服劑量（1 g/kg)之葡萄糖（葡萄糖單水合物，SAD 500 g/1)、溶解之MQ水（5 ml/kg，0·2 g/ml)，且將動物送回其 所住之籠中（t=0)。隨後，在t=15、30、60、120及240分鐘 時量測B G含量。 空腹血糖：為進一步監控動物之糖尿病狀況，在第0、 37、44、58、72及85天空腹8小時之後量測空腹血糖含 量。為使緊張最小化，在白天使動物空腹（自食物習慣性 消耗較低之06.00 AM開始），且在02.00 PM時測定空腹血 糖。 表6.研究組 物質 時段1 物質： 時段2 路徑 劑量 (奈莫耳濃度/公斤/ :天） 媒劑 媒劑 皮下，每天 一次 0+0 媒劑 Exendin-4 0+100 •90- 155900.doc
S 201138811 時段1:: ,；：;： [ . · · 路徑 劑量 (奈莫耳濃度/公斤/ •天): 媒劑 化合物33 0+100 媒劑 利拉魯肽 0+100 Exendin-4 Exendin-4 100+100 Exendin-4 媒劑 100+0 利拉魯肽 利拉魯肽 100+100 利拉魯肽 媒劑 100+0 化合物33 化合物33 100+100 化合物33 媒劑 100+0 媒劑：PBS :磷酸鹽緩衝鹽水Gibco(#70011，ρΗ = 7·4)。 無論治療範例為預防、治療或休藥期，根據口服葡萄糖 挑戰測試，相較於媒劑對照組，GLP-1-胃泌素雙重促效劑 化合物33均使葡萄糖曲線下面積（AUC)減少，且空腹血糖 亦減少（圖9+10)。又，相較於媒劑對照組，用化合物33處 理之小鼠體内胰島素及C-肽之血漿含量及HbAlc之血液含 量均顯著降低（圖11)。此等數據顯示化合物33改良糖尿病 db/db小鼠之血糖控制，且改良程度比Exendin-4及利拉魯 肽均更大。值得注意地是，化合物對血糖控制之影響在治 療停止之後持續若干天，在用化合物33處理之小鼠中最顯 著。 【圖式簡單說明】 圖1. A :彳匕合物33，B :化合物1以100 nmol/kg靜脈内及 皮下投與小鼠之後的平均血漿濃度與時間的關係曲線（對 數線性）。數據表示平均值±80，n=3/數據點。 155900.doc -91 - 201138811 圖 2.化合物 35、74、76、77、78及 80 以 100 nmol化合 物/kg皮下投與小鼠之後的平均血漿濃度與時間的關係曲 線（對數線性）。n=2/數據點。 圖3呈現投與⑴三種濃度（1、10及50 nmol/kg)之本發明 化合物 l[Exendin-4(l-39)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17 ;見上文]，（ii)三種相應濃度的Exendin-4(l-39)與 h[Leul5]胃泌素17肽（每種狀1、10及50 nmol/kg)之1:1相加 性組合，及（iii)媒劑之後在db/db糖尿病小鼠體内總胰腺胰 島素含量（Kg)的數據。 圖4·小鼠之△-血糖。使用克拉斯卡·瓦立斯檢定 (Kruskal-Wallis test)隨後使用杜恩氏多重比較檢定（Dunn，s multiple comparison test)來分析數據，***p<〇 〇〇1。分別 比較化合物33、Exendin-4(l-39)與h[Leul5]胃泌素17之組 合以及媒劑；每組n=l6-19。 圖5.小鼠之△-血漿胰島素。使用克拉斯卡_瓦立斯檢定 随後使用杜恩氏多重比較檢定來分析數據，"〇〇 1 C 分別比較化合物33、EXendin-4(l-39)與h[Leul5]胃泌素17 之組合以及媒劑；每組n= 16-19。 圖6.小鼠之胰腺胰島素含量。使用克拉斯卡-瓦立斯檢 定隨後使用杜恩氏多重比較檢定來分析數據，Μ。 分別比較化合物33、EXendin-4(l-39)與h[Leul5]胃泌素η 之組合以及媒劑；每組n=16-19。 斯檢定隨後 *P <0.01， 圖7.小鼠之Δ-HbAlc。使用克拉斯卡-瓦立 使用杜恩氏多重比較檢定來分析數據，* 155900.doc •92· 201138811 p<0.001。分別比較化合物 33、Exendin-4(1-3S>)與 h[Leul5]胃泌素17之組合以及媒劑；每組n=16_19。 圖8.小鼠之△-血衆C肽。使用克拉斯卡-瓦立斯檢定隨 後使用杜恩氏多重比較檢定來分析數據，*p < 〇 〇5。分別 比較化合物33、Exendin-4(l-39)與h[Leul5]胃泌素17之組 合以及媒劑；每組n=16-19。 圖9，如在db/db小鼠體内葡萄糖負荷之後由曲線下面積 (AUC)所量測的皮下投與Exendin-4 '利拉魯肽或化合物33 對葡萄糖耐受性之影響。應用三種治療方案：（A)預防， ⑻治療’或（C)休藥期（Holiday)。數據以帶有SEM之平均 值提供（n=8-13/組）。統計：藉由二因子an〇VA、隨後用 邦弗朗尼氏事後檢定（Bonferroni’s post-test)相對於媒劑來 比較數據：*ρ<〇.〇5 ; **ρ<〇.〇1 ; ***ρ<〇.〇〇ι。 圖10·皮下投與Exendin-4、利拉魯肽或化合物33對 db/db小鼠8小時空腹血糖的影響。應用三種治療方案：（A) 預防，（B)治療，或（C)休藥期。數據以帶有SEM之平均值 提供（n=8-13/組）。統計：藉由二因子AN〇VA、隨後用邦 弗朗尼氏事後檢定相對於媒劑來比較數據：; **Ρ<0.01 ; ***ρ<0·001 〇 圖11.皮下投與Exendin-4、利拉魯肽或化合物33對（Α) 血漿C肽，（Β)血漿胰島素，或（c)HbAlc(%)之末期（第％
天）值的影響。數據以帶有SEM之平均值提供（nU V 組）。統計：藉由單因子AN0VA克拉斯卡_瓦立斯檢定、隨 後用杜恩氏MC檢定相對於媒劑來比較數據： ***Ρ<0.001，**ρ<0·01，*p<〇 〇5。 155900.doc •93·

Claims (1)

  1. 201138811 七、申請專利範圍： 1. 一種肽結合物，其具有式I RLz-L-Y-R2 (I) 其中 R1為Η、Cb4烷基、乙醯基、甲醯基、苯曱醯基或三氟 乙醯基； R2 為 OH 或 NH2 ; Z包含具有以下序列之Exendin-4 (1-39)之序列 His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys- Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp- Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro- Ser 或其類似物Za ; L為視情況連接部分；及 Y包含具有以下序列之胃泌素17(Gastrin 17)之序列 Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr- Gly-Trp-Y15-Asp-Phe 其中Y15係選自Leu、Nle、Phe及Thr 或其類似物Ya。 2. 如請求項1之肽結合物，其中： (i) Za關於Exendin-4之序列在多至個位置具有取代， 及/或包含1至12個胺基酸的c端截斷；及/或 (ii) Ya關於胃泌素17之序列在多至5個位置具有取代， 及/或關於胃泌素17之序列包含1至13個胺基酸的N端截 155900.doc 201138811 斷。 3.如請求項1或2之肽結合物，其中： Za為具有式Ila之肽序列 His-Z2-Z3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Z10-Zll-Z12-Z13- Z14-Glu-Z16-Z17-Z18-Z19-Z20-Z21-Z22-Z23-Z24-Z25- Z26-Z27-Z28-Z29-Z30-Z31-Z32-Z33-Z34-Z35-Z36-Z37- Z38-Z39(IIa) 其中 Z2係選自 Gly、Ala、Ser、Aib、Thr、Leu及 lie ; Z3係選自Glu及Asp ; Z9係選自Asp及Glu ; Z10係選自 Leu、Va卜 lie及 Ala ; Zll係選自Ser及Aib ; Z12係選自 Ser、Gin、Arg、Cys、Lys、Glu及 Orn ; Z13係選自 Arg、Ser、Gin、Tyr及 Glu ; Z14係選自 Gly、Cys、Phe、Tyr、Trp、Lys、Met、 Leu、Nle及 lie ; Z16係選自 Asp、Gly、Aib、Glu、Lys及 Cys ; Z17係選自 Glu、Cys、Lys、Ser及 Gin ; Z18係選自Ala及Aib ; Z19係選自 Val、Leu、lie及 Ala ; Z20係選自 Arg、Lys、Cys、Orn及 Glu ; Z21係選自Leu及Glu ; Z22係選自Phe及Ala ; 155900.doc -2- s 201138811 Z23係選自lie及Leu ; Z24係選自 Glu、Cys、Lys、Ala及 Arg ; Z25係選自 Trp、Cys、Lys及Phe ; Z26係選自Leu及lie ; Z27係選自 lie、Val、Gin、Lys、Cys、Arg及 Orn ; Z28係選自 Asn、Ser、Asp、Aib、Gin、Lys、Cys、 Arg、Tyr、bAla、Glu、Orn及 Leu，或不存在·， Z29係選自Gly、Aib及bAla，或不存在； Z3 0係選自Gly、Cys、Lys及Arg，或不存在； Z31係選自Pro、Ser及Asp，或不存在； Z32係選自Ser及Lys，或不存在； Z33為Ser，或不存在； Z34係選自Gly及Lys，或不存在； Z35為Ala，或不存在； Z36為Pro，或不存在； Z37為Pro，或不存在； Z38為Pro，或不存在； Z39為Ser，或不存在； L為具有式lib之肽序列 Ll-L2-L3-L4(IIb) 其中 L1係選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、 Peg3、Cys及Gin，或不存在； L2係選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、 155900.doc 201138811 Peg3、Cys及Gin，或不存在； L3係選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、 Peg3、Cys及Gin，或不存在； L4係選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、8Aoc、DBF、 Peg3、Cys及Gin，或不存在； Ya為具有式lie之肽序列 Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17(IIc) 其中 Y1為Gin，或不存在； Y2為Gly，或不存在； Y3為Pro，或不存在； Y4為Trp，或不存在； Y5為Leu，或不存在； Y6為Glu，或不存在； Y7為Glu，或不存在； Y8為Glu，或不存在； Y9為Glu，或不存在； Y10為Glu，或不存在； Yl 1為Ala，或不存在； Y12係選自Ala及Tyr，或不存在； Y13係選自Gly及Ala，或不存在； Y14係選自 Trp、Phe、INal及Met ; Y15係選自 Leu、Nle、Phe及 Thr ;及 155900.doc 201138811 Y17係選自Phe及3-(3-吡啶基）-丙胺酸。 4.如請求項1至3中任一項之肽結合物 其中 乙3為具有式Ilia之肽序列 His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12- Z13-Z14-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Z20-Leu-Phe-Ile-Z24-Z：25- Leu-Z27-Z28(IIIa) 其中 Z9係選自Asp及Glu ; Z12係選自 Lys、Arg及 Orn ; Z13係選自Gin及Tyr ; Z14係選自Met及Leu ; Z16係選自 Glu、Cys及 Lys ; Z20係選自 Arg、Lys及 Orn ; Z24係選自Lys及Glu ; Z25係選自 Trp、Lys、Cys及Phe ; Z27係選自 Lys、Arg及 Orn ; Z28係選自Asn及Asp，或不存在； L為具有式Illb之肽序列 Ll-L2-L3-L4(IIIb) 其中 L1係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； L2係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； L3係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； 155900.doc 201138811 L4係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； Ya為具有式IIIc之肽序列 Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17(IIIc) 其中 Y12係選自Tyr及Ala，或不存在； Y13係選自Gly及Ala，或不存在； Y14係選自 Trp、INal及Phe ; Y15 係選自 Leu、Nle、Thr及 Phe ;及 Y17係選自Phe及3-(3-吡啶基）-丙胺酸。 5.如請求項1至4中任一項之肽結合物，其中 Za為具有式IVa之肽序列 His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12- Gln-Met-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp Leu-Z27-Z28(IVa) 其中 Z9係選自Glu及Asp ; Z12係選自Lys及Orn ; Z16係選自Glu及Lys ; Z27係選自Lys及Orn ; Z28係選自Asn及Asp，或不存在； L為具有式IVb之肽序列 Ll-L2-L3-L4(IVb) 其中 L1係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； -6 - 155900.doc s 201138811 L2係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； L3係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； L4係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； Ya為具有式IVc之肽序列 Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe(IVc) 其中 Y12為Tyr，或不存在；及 Y13為Gly ,或不存在。 6.如請求項1至5中任一項之肽結合物，其中 Z a為具有式"Va之狀序列 His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Tyr- Leu-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Phe-Leu- Z27-Z28(Va) 其中 Z9係選自Glu及Asp ; Z12係選自Lys及Orn ; Z16係選自Glu及Lys ; Z27係選自Lys及Orn ; Z28係選自Asn及Asp，或不存在； L為具有式Vb之肽序列 Ll-L2-L3-L4(Vb) 其中 L1係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn ’或不存在； L2係選自peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； 155900.doc 201138811 L3係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； L4係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； Ya為具有式Vc之肽序列 Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe(Vc) 其中 Y12為Tyr，或不存在；及 Y13為Gly，或不存在。 7. 如前述請求項中任一項之肽結合物，其中該式I之肽序列 包含一或多個分子内橋。 8. 如請求項7之肽結合物，其中該分子内橋形成於式I之線 性胺基酸序列中之三個胺基酸所分開的兩個胺基酸殘基 之側鏈之間。 9. 如請求項8之肽結合物，其中該分子内橋形成於殘基對X 與χ+3、χ+4或x+5之側鏈之間。 10·如請求項7至9中任一項之肽結合物，其中該分子内橋為 内醯胺環》 11. 如請求項7至10中任一項之肽結合物，其中該分子内橋 涉及一對殘基，其中： Z12為 Lys且 Z16為 Glu ; Z12 為 Glu且 Z16為 Lys ; Z16為 Glu且 Z20為 Lys ; Z16為 Lys且 Z20為 Glu ; Z20為 Glu且 Z24為 Lys ; Z20為 Lys且 Z24為 Glu。 12. 如請求項1至丨丨中任一項之肽結合物，其中Za與原生 exendin-4具有至少75%—致性，例如至少80%、85°/〇、 9 0 %或9 5 % —致性。 155900.doc 201138811 13. 如請求項！至u中任一項之肽結合物，其中Ya與原生胃 泌素具有至少70%—致性，例如至少75%、80%、85%、 90%或95%—致性。 14. 如前述請求項中任一項之肽結合物，其中該式1之肽具有 以下序列： Exendin-4(l-39)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-39)-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-39)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 π， Exendin-4(l-39)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-39)-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-39)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17 Exendin-4(l-39)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-39)-DBF-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-39)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素17， Exendin-4(l-39)_[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-39)-K-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-39)-AAA-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-39)-SKK-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-39)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-39)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-39)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-39)-DBF-SKK-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-39)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-28)-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， 155900.doc -9- 201138811 Exendin-4(l-28)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-28)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-28)-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-28)-Peg3-SKK-[Glnl,Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-28)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-28)-DBF-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-28)-8Aoc-8Aoc_[Glnl，Leul5]胃泌素 17， Exendin-4(l-28)-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-28)-K-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-28)-AAA-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-28)-SKK-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-28)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素6， Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6， Exendin-4(l-28)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素 6， Exendin-4(l-28)-DBF-SKK-[Leu4]胃泌素 6， Exendiii-4(l-28)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素 6， 或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 15.如請求項1至11中任一項之肽結合物，其中該式I之肽具 有以下序列： Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu3]胃泌素 5 Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Alal，Leu4]胃泌素 6 Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Ala2，Leu4]胃泌素 6 Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 155900.doc •10- 201138811 Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu2]胃泌素4 [Leul 4]Exendin-4( 1 - 28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Ornl2]Exendin-4(l-28)_Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Orn27]Exendin-4( l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Phe25]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Asp28]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Tyrl3]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Orn20]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 Exendin-4(1 - 28)-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 Exendin-4(l-28)-[Leu4]胃泌素 6 Exendin-4(l-27)-[Leu4]胃泌素 11 Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素6 Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu3]胃泌素5 Exendin-4(l-26)-Peg3-[Leu3]胃泌素5 Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu2]胃泌素4 [Tyrl3，Leul4]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌 素6 [Tyrl3，Phe25]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌 素6 [Leul4，Phe25]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌 素6 [Tyrl3,Leul4,Phe25]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 側鏈-環（[Lysl2,Glul6]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3· 155900.doc • 11 - 201138811 [Leu4]胃泌素6 側鍵-環（[Glul6，Lys20]Exendin-4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 侧鍵-環（[Lys20，Glu24]Exendin_4(l-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 [Lys 16]Exendin-4( 1 - 28)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 Exendin-4(1-28)-Peg3-K-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 Exendin-4(l-28)-[Thr4]胃泌素 6 Exendin-4(l-28)-[Phe4]胃泌素 6 [Leul4]Exendin-4(l-28)-[lNal3，Leu4]胃泌素6 [Leul4]Exendin-4(l-28)-[Nle4]胃泌素 6 [Leul4]Exendin-4(l-28)-[Leu4，[3-(3-D比咬基）-Ala]6]胃 泌素6 [Glu9,Leul4,Phe25,Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素6 [Leu 14,Phe25,Tyrl 3]Exendin-4(l -27)-Peg3-Peg3-[Leu4，Phe3]胃泌素 6 [Glu9,Leul4,Phe25,Tyr 13]Exendin-4( 1 -27)-Peg3-Peg3-[Leu4，Phe3]胃泌素 6 [Arg27,Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素6 [Argl2,27,Leul4,Lysl6,Phe25,Tyrl3]Exendin-4( 1-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Argl2,27,Leul4,Lys20,Phe25,Tyrl3]Exendin-4(l-27)- 155900.doc 12- s 201138811 Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Argl2,27，Leul4，Lys24，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Arg 12,Leul4,Phe25,Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu4]胃泌素6 [Glu9,Leul4,Phe25,Tyr 13]Exendin-4(l-27)-[Leu2] If 泌 素4 [Glu9,Leul4,Phe25,Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-[Leu2] 胃泌素4 [Glu9,Leul 4,Phe25,Tyr 13]Exendin-4( 1 -27)-Orn-Peg3-[Leu2]胃泌素4 [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Peg3-Orri-[Leu2]胃泌素4 [Glu9,Leul4,Phe25,Tyrl3]Exendin-4(l - 27)-Orn-Orn-[Leu2]胃泌素4 [Glu9，Leul4，Phe25，Tyrl3]Exendin-4(l-27)-[Leu4]胃泌 素6 [Glu9,Leul4,Phe25,Tyr 13]Exendin-4(l -27)-Peg3-[Lea4] 胃泌素6 [Glu9,Leul4,Phe25,Tyrl3]Exendin-4(l-27)-Orn-Peg3-[Leu4]胃泌素6 [Glu9,Leul 4,Phe25 ,Tyrl 3]Exendin-4(l -27)-Peg3-Orn-[Leu4]胃泌素6 [Glu9,Leu 14,Phe25,Tyr 13]Exendin-4( 1 -27)-Orn-Orn- 155900.doc -13- 201138811 [Leu4]胃泌素6 或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 16. —種肽結合物，其具有式VI : R'-X-L-Y-R2(VI) 其中 R1為Η、Ci.4烷基、乙醢基、曱醯基、苯曱醯基或三氣 乙醯基； R2 為 OH 或 NH2 ; X包含具有以下序列之GLP-1 (7-36)之序列 His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr- Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu- Val-Lys-Gly-Arg 或其類似物Xa ; L為含有多至4個天然或非天然胺基酸或其組合的連接 子，或不存在； Y包含具有以下序列之胃泌素-17之序列 Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Yl 5-Asp-Phe 其中Y15係選自Leu、Nle、Phe及Thr 或其類似物Ya » 17. 如請求項16之肽結合物，其中： (〇Xa關於GLP-1之序列在多至5個位置具有取代，及/ 或包含1至2個胺基酸的C端戴斷；及/或 (ii)Ya關於胃泌素17之序列在多至$個位置具有取代， 155900.doc 201138811 及/或關於胃泌素17之序列包含1至13個胺基酸的N端截 斷。 18.如請求項16至17中任一項之肽結合物，其中 Xa為具有式Vila之肽序列 His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr- Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-X26-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu- Val-X34-Gly-X36(VIIa) 其中 X8係選自 Ala、Aib及 Gly ; X26係選自Arg及Lys ; X34係選自Arg及Lys ; X3 6係選自Arg及Lys ; L為具有式Vllb之肽序列 Ll-L2-L3-L4(VIIb) 其中 8Aoc ' DBF ' 8Aoc、DBF、 8Aoc、DBF、 8Aoc、DBF、 LI係選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、 Peg3、Cys、Gin，或不存在； L2係選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、 Peg3、Cys、Gin，或不存在； L3係選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、 Peg3、Cys、Gin，或不存在； L4係選自 Ser、Ala、Lys、Orn、bAla、 Peg3、Cys、Gin，或不存在； Ya為具有式Vile之肽序列 155900.doc -15- 201138811 Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y1 5-Asp-Yl7(VIlc) 其中 Y1為Gin，或不存在； Y2為Gly，或不存在； Y3為Pro，或不存在； Y4為Trp，或不存在； Y5為Leu，或不存在； Y6為Glu，或不存在； Y7為Glu，或不存在； Y8為Glu，或不存在； Y9為Glu，或不存在； Y10為Glu，或不存在； Yl 1為Ala，或不存在； Y12係選自Ala、Tyr，或不存在； Y13係選自Gly、Ala，或不存在； Y14係選自 Trp、Phe、INal及 Met ; Y15係選自 Leu、Nle、Phe及 Thr ;及 Yl 7係選自Phe及3-(3-吡啶基）-丙胺酸。 19.如請求項16至1 8中任一項之狀結合物， 其中 xa為具有式Villa之肽序列 His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr- Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-X26-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-155900.doc 201138811 Val-X34-Gly-X3 6(VIIIa) 其中 X8係選自 Ala、Aib及 Gly ; X26係選自Arg及Lys ; X34係選自Arg及Lys ; X3 6係選自Arg及Lys ; L為具有式Vlllb之肽序列 Ll-L2-L3-L4(VIIIb) 其中 L 1 係選自 Peg3、Orn、Cys、Lys、Gin，或不存在； L2 係選自 Ser、Ala、Orn、Cys、Lys、Gin，或不存 在； L3係選自 Lys、Ala、Cys、Orn、Gin，或不存在； L4係選自 Lys、Orn、Ala、Peg3、Cys、Lys、Gin，或 不存在； Ya&具有式VIIIc之肽序列 Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Phe(VIIIc) 其中 Y12係選自Tyr、Ala，或不存在； Y13係選自Gly、Ala，或不存在； Y14係選自Trp及Phe ;及 Y15 係選自 Leu、Thr及 Phe。 20.如請求項16至19中任一項之肽結合物，其中 Xa為具有式IXa之肽序列 155900.doc -17- 201138811 His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr- Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-X26-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu- Val-X34-Gly-X36(IXa) 其中 X8係選自 Ala、Aib及 Gly ; X26係選自Arg及Lys ; X34係選自Arg及Lys ; X36係選自Arg及Lys ; L為具有式IXb之肽序列 Ll-L2-L3(IXb) 其中 LI係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； L2係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； L3係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； L4係選自Peg3、Gin、Cys、Lys及Orn，或不存在； Ya為具有式IXc之肽序列 Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe(IXc) 其中 Y12為Tyr，或不存在；及 Y13為Gly，或不存在。 21. 如請求項16至20中任一項之肽結合物，其中Xa與原生 exendin-4具有至少85%—致性，例如至少90%、95%、 97%、98%、99%或 99.5%— 致性。 22. 如請求項16至21中任一項之肽結合物，其中至少一個 155900.doc -18- S 201138811 Lys或Cys另外結合至親脂性取代基β 23.如請求項16至21中任一項之肽結合物，其中該式VI之肽 具有以下序列： GLP-l(7-36)-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， GLIM(7-36)-K-[Glnl，Leul5]胃泌素 17 , GLP-l(7-36)-AAA-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， GLP-l(7-36)-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， GLP-l(7-36)-Peg3-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， GLP-l(7-36)-Peg3-Peg3-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， GLP-l(7-36)-8Aoc-SKK-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， GLP-l(7-36)-DBF-SKK-[Glnl，LeU15]胃泌素 17， GLP-l(7-36)-8Aoc-8Aoc-[Glnl，Leul5]胃泌素 17， GLP-l(7-36)-[Leu4]胃泌素6， GLP-l(7-36)-K-[Leu4]胃泌素 6， GLP-l(7-36)-AAA-[Leu4]胃泌素 6， GLP-l(7-36)-SKK-[Leu4]胃泌素6， GLP-l(7-36)-Peg3-SKK-[Leu4]胃泌素 6， GLP-l(7-36)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6， GLP-l(7-36)-8Aoc-SKK-[Leu4]胃泌素 6， GLP-l(7-36)-DBF-SKK-[Leu4]胃泌素 6 GLP-l(7-36)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]胃泌素6， [Aib8，Arg34]GLP-l(7-3 7)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Arg34]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 155900.doc -19- 201138811 24. 如請求項16至22中任一項之肽結合物，其中該式VI之肽 具有以下序列： [Lys(十六醯基-異0111(13〇0111))34]01^-1(7-37)-卩6呂3-Peg3-[Leu 4]胃泌素 6 [Arg34，Lys(十六醯基-異 Glu)26]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg 3-[Leu4]胃泌素6 [Arg26,34，Lys(十六醯基-異 Glu)36]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Lys(十六醯基-異 Glu)26]GLP-l(7_37)-Peg3-Peg3-[Leu 4 ]胃泌素6 [Arg26,34，Gly8，Lys(十六酿基-異 Glu)36]GLP-l(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 [Aib8,Arg34，Lys(十六醯基-異 Glu)26]GLP-1(7-37)-Peg 3-Peg3-[Leu4]胃泌素 6 或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 25. 如請求項1至24之肽結合物或其醫藥學上可接受之鹽或 溶劑合物，其用作藥物。 26. 如請求項25之肽結合物或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑 合物，其用作用於治療有需要之個體選自由以下組成之 群之疾病或病症的藥物： 1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病前期（pre-diabetes)、 胰島素抗性症候群、葡萄糖耐受性不良（IGT)、與血糖含 量升尚相關之疾病病況、高血糖症、高血壓、致動脈粥 樣化之血知異常、動脈硬化（例如動脈粥樣硬化）、冠狀 155900.doc S •20· 201138811 動脈心臟病、周邊動脈疾病、中風、微血管疾病、胃疾 病、代謝症候群、癌症（例如結腸癌）、發炎性腸病（】加) 及大腸急躁症候群（IBS)。 27·如請求項25之肽結合物或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑 合物’其用作誘發有需要之個體姨島新生的藥物。 28. 如請求項25之肽結合物或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑 合物，其用作預防有需要之個體胰島中之0'細胞計的 藥物。 29. 如請求項25至28中任—項之肽結合物或其醫藥學上可接 叉之鹽或溶劑合物，其中該個體為人類。 30. -種用於治療有需要之個體選自由以下組成之群之疾病 或病症的方法： 1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病前期、胰島素抗性症 候群、葡萄糖财受性不良（IGT)、與血糖含量升高相關之 疾病病況、尚血糖症、高血壓、致動脈粥樣化之血脂異 吊、動脈硬化（例如動脈粥樣硬化）、冠狀動脈心臟病、 周邊動脈疾病、中風、微▲管疾病、胃疾病、代謝症候 群、癌症（例如結腸癌）、發炎性腸病（IBD)及大腸急躁症 候群（IBS)， ^ 該方法包含向該個體投與治療有效量的如請求項】至 29之肽結合物或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。 3 κ如晴求項3〇之方法，其中該個體為人類。 32·―，醫藥組合物’其包含如請求们至巧之肽結合物或 其4藥學上可接受之鹽或溶劑合物，以及醫藥學上可接 155900.doc -21· 201138811 受之載劑、賦形劑或媒劑。 33. 如請求項32之醫藥組合物，其用於預防體重增加或促進 體重減輕。 34. 如請求項！至29中任一項之化合物’其用於改良循環葡 萄糖含量、葡萄糖耐受性及/或循環膽固醇含量，降低循 環LDL含量，及/或增加HDL/LDL比率的方法。 3 5.如請求項！至29中任一項之化合物’其用於治療體重過 重所引起或為特徵之病狀的方法，例如治療及/或預防肥 胖症、病態肥胖症、肥胖症關聯之發炎、肥胖症關聯之 膽囊疾病、肥胖症誘發之睡眠呼吸暫停、代謝症候群、 糖尿病前期，該方法包含向該個體投與治療有效量的如 請求項1至29中任一項之肽結合物或其醫藥學上可接受 之犟或溶劑合物。 36. —種如請求項！至29中任一項之化合物的用途其係用 於預防有需要之個體體重增加或促進體重減輕。 37. —種如請求項1至29中任一項之化合物的用途，其係用 於有需要之個體中改良循環葡萄糖含量、葡萄糖耐受性 及/或循環膽固醇含量，降低循環LDL含量，及/或增加 HDL/LDL比率的方法。 38. 如《月求項1至37中任一項之化合物、用途或方法，其中 投與該化合物作為與治療糖尿病、肥胖症、血脂異常或 ifj血壓之藥劑的組合療法之一部分。 39. 如請求項38之化合物、用途或方法，其中該治療糖尿病 之藥劑為二甲雙胍（metformin)、續酿腺（sulfonylurea) ' 155900.doc S -22- 201138811 格列奈（glinide)、DPP-IV抑制劑、格列酮（glitazone)、胰 島素或胰島素類似物。 40. 41. 42. 43. 44. 45. 46. 47. 如請求項38之化合物、用途或方法，其中該治療肥胖症 之藥劑為類升糖素肽受體1促效劑（agonist)、肽YY或其 類似物、大麻受體1 (cannabinoid receptor 1)#抗劑、脂 肪扭抑制劑、黑色素皮質素（melanocortin)受體4促效 劑、或黑色素濃縮激素受體1拮抗劑。 如請求項3 8之化合物 '用途或方法，其中該治療高血壓 之藥劑為血管收縮素轉化酶抑制劑、血管收縮素π受體 阻斷劑、利尿劑、β_阻斷劑或鈣通道阻斷劑。 如請求項38之化合物、用途或方法，其中該治療血脂異 常之藥劑為司他汀類（statin)、纖維酸類（fibrate)、菸酸 及/或膽固醇吸收抑制劑。 種以合成方式製造如請求項1至24中任一項之肽結合 物的方法。 種以重組方式製造如請求項1至24中任一項之肽結合 物的方法。 一種如請求項1至24中任一項之化合物的用途，其係用 於有需要之個體中改良循環㈣糖含量、㈣㈣受性 及/或循環膽固醇含量，降低循環LDL含量，及/或辦加 HDULDL比率的方法，其中使用休藥期給藥方案。日 種製le如上述凊求項中任一項之化合物的方法。 一種醫藥組合物， 其醫藥學上可接受 其包含如請求項1至29之肽結合物或 之鹽或溶劑合物，與一或多種如請求 155900.doc •23- 201138811 項1至29之肽結合物或其 樂予上可接受之鹽或溶劑合 物以及醫樂予上可接受之载劑、 48. —種裝置，其包含至少一雜^ ^ ° .„ ^ 種如清求項1至29之肽結合物 I:上可接受之Β或溶劑合物，該裝置用於傳遞 該肽結合物至個體。 49. -種套組，其包含至少一種如請求項⑽之肽結合物 或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，且另外包含包裝 或使用說明書。 155900.doc 24 S
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