TW201120034A - Substituted tetrazol-1-yl-phenoxymethyl-thiazol-2-yl-piperidinyl-pyrimidine salts - Google Patents

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201120034 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明提供5-乙基-2-{4-[4-(4-四唑•基·苯氧甲基）_噻 • 唑-2-基]•六氫吡啶_1_基卜嘧啶之結晶鹽類、其組合物、其 製備方法及其使用方法。 【先前技術】 WO 2008/083238揭示 5-乙基-2-{4-[4-(4-四峻-1-基-苯氧 甲基）K2-基]-六氫吼咬小基卜嘴咬及其用於治療糖尿 病及代謝病症之用途。PCT/US 2〇〇9/〇38847揭示包括5乙 基-2-{4-[4-(4-四唑_丨_基_苯氧甲基噻唑_2_基]-六氫吼啶_ 1-基}-嘧啶之氧亞甲基化合物與二肽基肽酶丨乂（Dpp 抑 制劑用於組合療法$田，全 ^ ^ 饮次之用途。業内需要用於治療與糖尿病及 代謝病症有關之疾病之改良療法。 【發明内容】 在個實施例中’本發明提供5-乙基-2-{4-[4-(4-四唑-1- +甲基）塞°坐~2_基]-六氫°比咬-1-基}-°密咬之結晶鹽， 其選自由以下4且出^ 战之群：苯磺酸鹽、樟腦磺酸鹽、乙磺酸 鹽、HBr、HC1 ' 田《· T %酸鹽、硫酸鹽及曱苯磺酸鹽。 _ 貫施例中’提供5-乙基-2-{4-[4-(4-四唑-1-基-笨 氧曱基）-嗔。坐 •I >六氫吡啶-l-基}-嘧啶鹽酸鹽之多晶型 (形式1及形式2)。 在其他實施你丨φ 中’提供製備本文所述結晶鹽或多晶型之 方法。 在其他實;彳丨+ 】中’提供包含本文所述結晶鹽或多晶型及 J51059.doc 201120034 ^藥上可接受之載劑之組合物。 '在其他實施例中，提供㈣本文所述結晶鹽或多晶型來 治療選自由以下組成之群之疾病的方法：㈣糖尿病、_ 糖尿病及代謝症候群，及該等方法在製備此等藥劑中之用 途。 在其他實施财，提供使用本文所述結晶鹽或多晶型用 於以下目的中之-或多者之方法··刺激姨島素產生，刺激 葡萄糖依賴性姨g素分泌，&低血糖，《降低血液甘油三 酸酯含量，及該等方法在製備此等藥劑中之用途。 在其他實施例中，提供本文所述結晶鹽或多晶型與治療 有效量之DPP IV抑制劑用於組合療法之方法。 本發明之該等及其他態樣進一步闡述於下文中。 【實施方式】 在本說明書及隨附申請專利範圍中，將提及除非另有說 明否則經定義具有以下含義之大量術語： 縮略語 XRPD(X射線粉末繞射）；DSC(差示掃描量熱法）； TGA(熱圖分析）；苯磺酸鹽（besy丨也，suif_te salt)，樟腦確酸鹽（camsylate，camph〇rsuifonate salt);乙 石黃酸（esylate’ ethanesulfcmate salt);甲磺酸鹽（咖^价， methanesulfcmate salt);曱苯磺酸鹽（對·甲笨磺酸鹽）；丙 酮（(CH3)2CO) ; RH(相對濕度）。 除非上下文另有明確說明，否則說明書及申請專利範圍 中使用的單數形式「一（a，an)」及「該（the)」包括複數意 151059.doc 201120034 義。 本=術語「包含」意指組合物及方法包括所 京仁並不排除其他要素。 变 值本!：用：語「約」當與量測-同使用，或者用來修你 早位、常數或值之範圍時’係指+/_ 3%之變化。 、本文利術語「結晶鹽」㉟蓋無水及非溶劑合物晶體、 以及可與不同程度之水合物或溶劑合物結合之晶體。 本文所用術語「實質上」係指+/'約1%二5 10%、約15%或約20%之變化度。 、'、 本文所用術語「實質上純」就化合物之特定多晶型物而 吕，意指含有約小於30重量％、或約小於2〇重量％、或約 小於15重量％、或約小於1G重量％、或約小於$重量％、或 約小於1重量〇/0雜質之多晶型物’此等雜質可包括相同化 合物或痕量溶劑之其他多晶型物。 本發明所用術語「醫藥上可接受之載劑」包括如熟習此 項技術者已知之任一及所有溶劑、分散介質、包衣、表面 活I·生劑、抗氧化劑、防腐劑（例如，抗細菌劑、抗真菌 劑）、等滲劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物 '藥物穩 定劑、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、矯味 劑、染料、此等類似物質及其組合（例如，參見Remingt〇心

Pharmaceutical Sciences，第 18 版 Mack Priming 公司， 1990,第1289至1329頁，其以引用方式併入本文中）。除 任何與活性成份不相容之習用載劑之外，本發明涵蓋其於 治療或醫藥組合物中之用途。 151059.doc 201120034 本文所用術語「個體」係指 類、家畜(例如，犬或猫)、農場動：:且包括但不限於人 室動物H、鼠、以、倉鼠、動:或猜)及實驗 術語「治療有效量」係指當文二兔、犬或猴)。 ^ , 與有需要之哺乳動物時足 以貫現如下文所定義治療之活性成份之量。 端視所治療個體及病况、個體 &里 Λ . 里里及年齡、疾况之嚴重 度、投與方式及諸如此類而變 進行確定。 1化’處方醫師可容易地對其 =意指哺乳動物之疾病 ^广;^療’包括：⑴預防該疾病，亦即，使該疾病之臨 床症狀不出現；⑼抑制該疾病，亦即，阻礙臨以^ 發展，及/或㈣緩解該疾病，亦即，使臨床症狀消退。 術語「糖尿病（diabetes mellitu_diabete)」意指通常特 徵在於產生及利用葡萄糖之代謝缺陷導致無法使體内維持 適當的血糖含量之疾病或病况。該等缺陷之結果係血糖升 高，其被稱為「高血糖症」。兩種主要的糖尿病形式係㈤ 糖尿病及II型糖尿病。如上文所述，χ型糖尿病通常係絕對 缺乏騰島素(調節葡萄糖利用之激素)之結果。_糖尿病 經常出現在正常'或甚至高含量騰島素之情况下且可因組 織缺乏適當地響應胰島素之能力而導致。大多數11型糖尿 病個體有胰島素抵抗且相對缺乏胰島素，原因在於胰島素 分泌不能補償外周組織響應胰島素之抵抗。另外，許多工工 型糖尿病患者係肥胖的。其他類型之葡萄糖體内穩態病症 包括葡萄糖耐受不良’其係介於正常葡萄糖體内穩態與糖 15W59.doc 201120034 尿病之間的中間代謝階段；及姓娠性糖尿病，其係先前無 I型或II型糖尿病史之女性㈣時的㈣糖耐受不良。 術語「代謝症候群」係指代謝異常之群集，包括腹型肥 胖症、姨島素抵抗、葡萄糖财受不良、糖尿病、高血壓、 高脂血症及血脂異常。已知該等異常與血管事件之風險增 加相關。 術語「腹型肥胖症」定義為男性腰圍y〇2 cm且女性腰 圍MO cm之分界點，如由國家膽固醇教育方案專家組 n— ch〇lesterol educati〇n pr〇gram 叫州㈧㈣）關於成 人高血液膽固醇之檢測、評估及治療的第三次報告所推薦 (NCEP/ATP 第 ΙΠ 組）。 術語「胰島素抵抗」通常可被定義為葡萄糖代謝障礙。 更具體而言’胰島素抵抗可定義為胰島素在寬範圍之濃度 -内發揮其生物學作用之能力降低從而產生小於預期之生物 學效應（例如，參見 Reaven GM，j. Basic & Clin &

Pharm. (1998) 9:387-406^ Flie J, Ann Rev. Med. (1983) 34:145-60)。胰島素抵抗者恰當代謝葡萄糖之能力降低且 即便有對胰島素療法之響應亦很差。 胰島素抵抗之表現包括肌肉内葡萄糖攝取、氧化及儲存 之胰島素活化不夠及脂肪組織中脂解及肝中葡萄糖產生及 分泌之胰島素抑制不充分。胰島素抵抗可導致或促成多囊 印巢症候群、葡萄糖耐受不良（IGT)、妊娠性糖尿病、代 謝症候群、高血壓、肥胖症、動脈粥樣硬化及多種其他病 症。表後’騰島素抵抗個體可發展至達到糖尿病狀態之時 151059.doc 201120034 刻0 術語「動脈粥樣硬化」涵蓋在醫學相關領域中實踐之醫 師認可及瞭解之血管疾病及病狀。動脈粥樣硬化性心血管 疾病、冠心病（亦稱為冠狀動脈疾病或缺血性心臟病）；腦 血管疾病及外周血管疾病係動脈粥樣硬化之所有臨床表現 且因此由術語「動脈粥樣硬化」及「動脈粥樣硬化性疾 病」涵蓋。 本文所用術語糖尿病之「症狀」包括但不限於多尿、多 飲及多食，本文納入其一般用法。舉例而言，「多尿」意 指在給定時期内排出大量尿；「多飲」意指長期過度口 渴，且「多食」意指過度進食。糖尿病之其他症狀包括 (例如）對某些感染（尤其真菌及葡萄球菌感染）之易感性增 加、噁心及酮酸中毒（血液甲酮體之產生增强）。 術語糖尿病之「併發症」包括但不限於微企管併發症及 大企管併發症。微血管併發症係彼等通常導致小血管損害 之併發症。該等併發症包括（例如）視網膜病變（因眼中血管 損害所致之視覺損傷或喪失）；神經病變（因對神經系統之 血管損害所致之神經損害及足部問題）；及腎病（因腎臟中 血管損害所致之腎臟疾病）。大血管併發症係彼等通常導 致大血管損害之併發症。該等併發症包括（例如）心血管疾 病及外周血管疾病。心血管疾病係指心臟血管之疾病。例 如，參見Kaplan RM等人，「Cardiovascular diseases」 Health and Human Behavior，第 206 至 242 頁（McGraw-Hill

New York 1993)。心血管疾病通常係若干形式之一， 151059.doc 201120034 形式包括（例如）高血壓（亦稱作高血壓（high blood pressure))、冠心病、中風及風濕性心臟病。外周血管疾病 係指任一心臟外部血管之疾病。其通常係將血液攜帶至腿 部及臂部肌肉之血管之狹窄。 術語「血脂異常」係指血漿中脂蛋白含量之異常，包括 脂蛋白含量之降低及/或升高二者（例如，LDL及/4VLDL 含量之升高、及HDL含量之降低）。 術語「高脂血症」包括但不限於以下： (1) 家族性高乳糜微粒血症，一種罕見遺傳病症，其原因係 分解知肪分子之酵素（LP脂肪酶）缺乏。Lp脂肪酶缺乏可造 成血液中累積大量脂肪或脂蛋白； (2) 家族性高膽固醇血症，一種相對常見的遺傳病症，其原 因在於潛在缺陷係一系列LDL受體基因突變，該等突變導 致LDL受體功能失常及/或LDL受體缺失。此使得ldl受體 不能有效清除LDL，從而導致血漿中LDL&總膽固醇含量 升高； (3) 家族性混合性高脂血症（亦稱為多脂蛋白型高脂血症）係 遺傳病症’其巾個體及其受影響之_級親屬可在不同時間 表現高膽固醇及高甘油三酸醋。祖膽固醇之含量通常中 度降低； ⑷家族性缺陷型載脂蛋白匕1〇〇係㈣常見之常染色體顯 I·生遺傳異申。造成該缺陷之原因係產生麩醯胺酸取代精胺 酸之單核«突變，此可造成咖粒子對LDL受體之親和 力降低g]此，此可造成高血漿[〇[及總膽固醇含量； 151059.doc 201120034 ()家族11異常β脂蛋白血症(亦稱為πι型高脂蛋白血症)係 f見遺傳性病症，其導致血清TG及膽固醇含量之中等至 嚴重升阿以及異常載脂蛋白E功能。HDL含量通常係正常 的；及 (6)家族性尚甘油三酸酯血症係血漿之濃度升高之常 見遺傳病症°此可造成輕度至中度升高之TG含#(且通常 並非膽固醇含量)且通常可與低血漿隱含量相關。 尚脂血症之風險因素包括但不限於以下：〇)疾病風險 因素，例如以下病史：丨型糖尿病、〗〖型糖尿病、庫欣氏症 候群（Cushing’s Syndrome)、甲狀腺功能减退及某些類型之 腎衰竭；（2)藥物風險因素，其包括節育藥丸；激素，例如 雌激素及皮質類固醇；某些利尿劑；及各種P封劑；（3)飲 食風險因素包括大於40%之飲食脂肪攝入/總卡路里；大於 10%之飽和脂肪攝入/總卡路里；大於3〇〇 mg/天之膽固醇 攝入；習慣性及過量飲用酒精；及肥胖症。 術語「肥胖」及「肥胖症」係指根據世界衛生組織男性 大於27.8 kg/m2且女性大於27.3 kg/m2之體重指數 (BMI)(BMI等於重量（kg)/身高（m2))。肥胖症與多種包含糖 尿病及高脂血症在内之醫學病况有關。肥胖症亦係形成π 型糖尿病之已知風險因素（例如，參見Barrett-Conner Ε，

Epidemol. Rev. (1989) 11:172-181 ;及 Knowler 等人，Am. J_ Clin. Nutr. (1991) 53:1543-1551)。 游離驗5 -乙基-2-{4-[4-(4 -四e坐·ι·基-苯氧曱基）_售。坐_2_ 基]-六氫吡啶-l-基}-嘧啶（ΜΒΧ-2982)具有以下結構： 151059.doc •10- 201120034

吾人發現本文所提供5-乙基-2-{4-[4-(4-四唑-1-基-苯氧 曱基）-噻唑-2-基]-六氫吡啶-l-基}-嘧啶之苯磺酸鹽、樟腦 磺酸鹽、乙磺酸鹽、HBr、HC1、甲磺酸鹽、硫酸鹽及曱 苯磺酸鹽係結晶固體，如藉由其XRPD 明。相反’發現由乙酸、己二酸、L-抗壞血酸、L-天冬胺 酸、檸檬酸、曱酸 '龍膽酸（2,5-二羥基苯曱酸）、L-麩胺 酸' 戊二酸、乳酸、馬來酸、L-蘋果酸、磷酸及L-酒石酸 所形成之鹽會呈油狀物或凝膠，該等油狀物或凝膠難以處 理及分離，不適用於大量製備。因此，結晶苯磺酸鹽、樟 腦確酸鹽、乙磺酸鹽、HBr、HC1、甲磺酸鹽、硫酸鹽及 甲苯磺酸鹽極適用於製備5_乙基_2_{4_[4_(4_四唑_丨_基-苯 氧甲基）-噻唑-2-基]-六氫吡啶_丨_基卜嘧啶之醫藥用鹽。 該等鹽藉由諸如DSC及TGA等多種固態技術來判別特 徵。應瞭解’溶點溫度及溫度記錄圖可能視所用儀器及程 序（包括所採用加熱速率）而變化。因此，應瞭解本文 揭示溫度數據及圖係配合此等變化。 該等鹽之特徵亦藉由XRPD(x_射線粉末繞射）來 對强度及峰值可隨冬綠田丰 相 W之試樣製備、安裝及儀器及分析程序及設定。本， 、，〔峰值意欲涵蓋加或减〇.5度（20)之變化。 所 151059.doc • 11 . 201120034 在一個實施例中，提供在約153。(：處具有DSC吸熱之結 晶苯項酸鹽。在一個態樣中，苯磺酸鹽具有實質上如圖8 中所展示之DSC或TGA溫度記錄圖。在其他態樣中，苯磺 酸鹽具有實質上如圖15中展示之xrpd圖譜。 在一個實施例中，提供在約184。〇下具有DSC吸熱之結 晶樟腦磺酸鹽。在一個態樣中，樟腦磺酸鹽具有實質上如 圖9中所展示之DSC或TGA溫度記錄圖。在其他態樣中， 樟腦磺酸鹽具有實質上如圖16中展示之XRPD圖譜。 在一個實施例中，提供在約99°C處具有DSC吸熱之結晶 乙石夤酸鹽。在一個態樣中，乙磺酸鹽具有實質上如圖丨〇中 所展示之DSC或TGA溫度記錄圖。在其他態樣中，乙磺酸 鹽具有實質上如圖17中展示之xrpd圖譜。 在一個實施例中，提供在約i 42°C處具有DSC吸熱之結 晶乙HBr鹽。在一個態樣中，HBr鹽具有實質上如圖11中 所展示之DSC或TGA溫度記錄圖。在其他態樣中，HBr鹽 具有實質上如圖18中展示之xrpd圖譜。 在一個實施例中’提供在約86°C處具有DSC吸熱之結晶 曱磺酸鹽。在一個態樣中，曱磺酸鹽具有實質上如圖丨2中 所展示之DSC或TGA溫度記錄圖。在其他態樣中，甲磺酸 鹽具有實質上如圖19中展示之XRPD圖譜。 在一個實施例中’提供在約97°C處具有DSC吸熱之結晶 硫酸鹽。在一個態樣中，硫酸鹽具有實質上如圖丨3中所展 示之DSC或TGA溫度記錄圖。在其他態樣中，硫酸鹽具有 實質上如圖20中展示之xrpd圖譜。 I51059.doc 12 201120034 在一個實施例中，提供在約94°C處具有DSC吸熱之結晶 甲苯磺酸鹽。在一個態樣中，甲苯磺酸鹽具有實質上如圖 14中所展示之Dsc或tGa溫度記錄圖。在其他態樣中，甲 苯石黃酸鹽具有實質上如圖21中展示之ΧΪΙΡΕ)圖譜。 在一個實施例中，提供結晶HC1鹽。結晶^^丨鹽包括下 文所述晶體「圖譜〇」及彼等於各實例中所闡述者（表6) ^ HC1鹽亦可含有諸如下文所述形式z或形式π或其混合物等 夕曰β型。結晶HC1亦可含有諸如丙酮、乙醇、甲醇及乙酸 乙酯等痕量溶劑。在一些態樣中，本文所提供形式工多晶 型係實質上純的且可含有殘餘丙酮。在一些態樣中，本文 所提供形式II多晶型係實質上純的且可能含有殘餘甲醇及/ 或乙酸乙酯。 在一個實施例中，提供含有痕量乙醇之結晶HC1鹽（圖譜 〇)’在-個態樣中，Et0H與HC1鹽之比率係大約16。在 -個態樣中，HC1鹽係實質上如圖22中所展示之_圖 譜。 在一個實施例中，提供峨吸熱起始點為約丨价之多 晶型(形式聊1鹽。在一個態樣中，形式!多晶型且有實質 上如圖2中所展示之DSC溫度記錄圖。在其他態樣中形 式I多晶型具有實質上如圖3中所展示之TGA溫度記錄圖。 在其他態樣中，形式I多晶型且有眚 有貫質上如圖4中所展示之 拉曼（Raman)光譜。在盆他能禅士 仕八他態樣中，形式I多晶型在約 8.8。 、 10_8〇 、 16.1。 、 17.4〇 、 2〇 4〇 •4 20.9〇 、 21.5。 、 21_7。、 26.6°及28.1。之2Θ繞射角處包含χ AKPD峰。在其他態樣中， 151059.doc 201120034 形式i多晶型具有實質上如圖丨中所展示之XRPD圖譜。表】 列示觀測形式I之XRPD峰且表2列示代表性峰，其中此二 表中給出相對强度。表3列示形式I之觀測拉曼峰。 在個貫施例辛’提供DSC吸熱起始點為約1 5〇°C之多 曰曰型（形式II)HC1鹽。在一個態樣中，形式π多晶型具有實 質上如圖6中所展示之DSC溫度記錄圖。在其他態樣中， 形式π多晶型具有實質上如圖7中所展示之TGA溫度記錄 圖在其他態樣中’形式II多晶型在約7.8。、10.1。、 12·5°、18.4〇、19·0〇、20.8。、23 〇。及 23 5。之 20繞射角處 包含XRPD峰。在其他態樣中，形式Π多晶型具有實質上 如圖5中所展示之XRPD圖譜。表4列示所觀測形式^之 XRPD峰且表5列示代表性峰，其中此二表中給出相對强 度。 在下表中’使用？3他〇1]^1〇111^3.〇.1軟體自動確定各峰 之位置且基於上述標準將其以四捨五入方式修成小數點後 一個或兩個有效數字。基於美國藥典（the United States

Pharmacopeia)(USP 32，NF 27，第 1卷，第 392頁，2009)論 述X射線粉末繞射差異性中所述之建議，給出峰位置之差 異性在±0 _ 1 0。2Θ内。尚未綠定與本文所報告任一特定量測 相關之準確度及精確度。此外，在不同儀器上對獨立製備 之試樣之第三方量測可導致大於±〇·1〇〇 2Θ(例如±〇5〇0 2Θ 或更大）之差異性。 151059.doc 14 201120034 表1. HC1多晶型物I之觀測XRPD峰。 °2Θ d間距(Α) 强度(％) 8.76 ±0.10 10.092 ±0.116 24 10.78 ±0.10 8.204 ± 0.077 40 10.98 ±0.10 8.054 ±0.074 5 11.34±0.10 7.806 ± 0.069 3 12.66 ±0.10 6.994 ±0.055 8 13_14±0_10 6.738 ±0.051 7 14.06 ±0.10 6.299 ±0.045 2 14.38 ±0.10 6.161 土 0.043 3 15.48 ±0.10 5.724 ±0.037 2 15.88 ±0.10 5.581 ±0.035 8 16_10±0.10 5.506 ±0.034 31 16.65 ±0.10 5.325 ±0.032 7 17.08 ±0_10 5.190 ±0.030 5 17.45 ±0.10 5.082 ± 0.029 26 18.15±0.10 4_887± 0.027 2 18·30±0·10 4.847 ± 0.026 3 18.45 ±0.10 4.808 ±0.026 6 18.81 ±0.10 4.719 ±0.025 1 19.39±0.10 4_578 ± 0.024 2 20.39 ±0.10 4.355 ± 0.021 23 20.88 ±0.10 4.255 ± 0.020 100 21.46±0.10 4.140 ±0.019 34 21.76 土 0_10 4.084 ±0.019 20 22.06 ±0_10 4.029 ±0.018 5 22.67 ±0.10 3.923 ±0.017 6 23.49 士 0.10 3.788 ±0.016 2 23.69 ±0.10 3.757 ± 0.016 2 24.37 ±0_10 3.652 ±0.015 1 24_74±0.10 3.599 ±0.014 3 24.99 ±0.10 3.563 ±0.014 2 25_16±0_10 3.540 ±0.014 4 25.44 ±0.10 3.501 ±0.014 5 -15- 151059.doc 201120034 25.67 ±0.10 3.470 ±0.013 4 25.86 ±0.10 3.446 ± 0.013 2 26.61 ±0.10 3_350±0_012 53 28.06 ±0.10 3.180±0.011 22 28.35 ±0.10 3.148 ±0.011 3 28.80 ±0.10 3.100±0.011 7 29.02 ±0.10 3.077 ±0.010 6 29.37 ±0.10 3.041 ±0.010 6 表2. HC1多 晶型物I之代表性XRPD峄 〇 °2Θ d間距(Α) 强度 8.76±0.10 10.092 ±0.116 24 10.78 ±0.10 8.204 ± 0.077 40 16·10±0·10 5.506 ±0.034 31 17.45 ±0_10 5.082 ± 0.029 26 20.39 ±0.10 4.355 ± 0.021 23 20.88 ±0.10 4.255 ± 0.020 100 21.46 ±0.10 4.140 ± 0.019 34 21.76±0.10 4.084 ± 0.019 20 26.61 ±0.10 3_350士 0.012 53 28.06 ±0.10 3_180±0.011 22 表3. HC1多 晶型物 I之觀測拉曼峰（cm_ 丨） 154 193 214 243 324 346 384 420 460 467 495 539 573 596 628 648 680 687 718 751 766 787 800 845 856 946 967 992 1009 1051 1068 1094 1110 1172 1203 1225 1253 1282 1300 1311 1334 1375 1394 1404 1432 1458 1474 1480 151059.doc -16- 201120034 1517 1533 1591 1609 1637 2734 2869 2903 2928 2937 2967 2999 3015 3030 3063 3075 表4. HC1多晶型物II之觀測XRPD峰。 °2Θ d間距(Α) 强度 7.63 ±0.10 11.593 ±0.154 23 7.79 ±0.10 11.345 ±0.147 43 8.14±0.10 10.857 ±0.135 6 9.18±0.10 9_634± 0.106 5 10.07 ±0.10 8.788 ±0.088 41 10.35 ±0.10 8.547 ± 0.083 15 12.54 ±0.10 7.059 ± 0.057 50 12.87 ±0_10 6_877± 0.054 5 13_24±0.10 6.687 ±0.051 18 14.78 ±0.10 5.994 ±0.041 7 14.98 ±0.10 5.915 ±0.040 7 15.20士0.10 5.831 ±0.038 18 15.61 ±0.10 5.675 ±0.036 3 15.91 ±0.10 5.569 ±0.035 6 16.12 士 0.10 5.500 ±0.034 17 17.69 ±0.10 5.015 ±0.028 28 17.97 士 0.10 4.936 土 0.027 28 18.39 ±0.10 4.825 ± 0.026 100 18.82 ±0.10 4.715 ±0.025 21 19.01 ±0.10 4.669 ± 0.024 85 19.27 ±0.10 4.605 ± 0.024 14 19.67 ±0.10 4.512 ±0.023 11 20_14士0_10 4.409 ± 0.022 9 20.81 ±0.10 4.268 ± 0.020 58 21.41 ±0.10 4.150 士 0.019 18 21.83 ±0.10 4.071 ±0.019 35 22.20 ±0.10 4.005 ±0.018 6 22.65 ±0.10 3.926 ±0.017 25 -17- 15I059.doc 201120034 23.03 ±0.10 23.27 ±0.10 23.54 ±0.10 23.84 ±0.10 24.45 ±0.10 24.67 ±0.10 24.94 ±0.10 25.46 ±0.10 25.87 ±0.10 26.08 ±0.10 26.53 ±0.10 26.89 ±0.10 27.23 ±0.10 27.66 ±0.10 28.40 ±0.10 29.17 ±0.10 29.87 ±0.10 3.861 土 0.017 83 3.823 ±0_016 35 3.780 ±0.016 47 3.733 ± 0.016 11 3.640 ±0.015 12 3.609 ±0.014 22 3.570 ±0.014 12 3.499 ±0.014 36 3.443 ± 0.013 15 3.417 ±0.013 17 3.360 ±0.012 9 3.315 ±0.012 8 3.275 ±0.012 8 3.225 ±0.011 19 3.143 ±0.011 10 3.062 ±0.010 13 2.991 ±0.010 11 表5. HC1多晶型物II之代表性XRPD峰。 °2Θ 强度(％) 7.78 ±0.10 11.369 ±0.148 Ao 10.07 ±0.10 8.788 ±0.088 41 12.54 ±0.10 18.37 ±0.10 19.01 ±0.10 20.81 ±0.10 23.03 ±0.10 23.54 ±0.10 7.059 ± 0.057 4.829 ± 0.026 4.669 ± 0.024 4.268 ± 0.020 3.861 ±0.017 3.780 ±0.016 50 100 86 59 84 48 本文所揭示結晶鹽可藉由自有撼+ 入士 棺W曰胥機或混合有機溶劑 得且亦可自有機/水性溶劑製得 適且有機溶劑包括石 酮、乙腈、二氣曱烷、乙謎、 鲛乙酯、乙醇、庚烷、己 烷、六氟異丙醇、異丙醇、異丙 ^ 曱基乙基酮、曱醇、 151059.doc •18- 201120034 甲基-第三丁基醚、2,2,2-三氟乙醇及四氫呋喃。 HC1鹽（形式〗）通常可藉由以下步驟來製備：在升高溫度 下於諸如丙酮、乙腈、乙醇/乙酸乙酯、曱醇/乙酸乙酯及 THF等溶劑中將HC1添加至游離鹼中，視情况之後在丙酮 中進行進一步結晶。：^^^鹽（形式„)通常可藉由在曱醇中進 行結晶來製備。甲醇溶液可視情况含有諸如乙酸乙酯或丙 酮等其他溶劑。 下文實例部分中給出此等製備之例示性非限制性實例。 擁有本發明之熟習此項技術者將能夠修改該等實例以符合 交替結晶方法且將能够確定此等方法是否能够產生期望結 晶鹽。 根據本發明之一個實施例，提供包含一或多種本文所述 結晶鹽之醫藥組合物。在其他實施例中，提供該等結晶鹽 在製備藥劑中之用途及其在治療選自由以下組成之群之疾 病中之用途：I型糖尿病、糖尿病及代謝症候群。該等 鹽亦可與DPP IV抑制劑用於組合療法。 在一個實施例中，提供用於以下目的中之一或多者之方 法：刺激胰島素產生’刺激葡萄糖依賴性胰島素分泌，降 低血糖或降低血液甘油三酸酯含量，該方法包含向有需要 之個體投與有效量之本文所述結晶鹽。 用於本發明中之DPP IV抑制劑係西他列汀（Sitagnptin) (Merck)、維達列汀（vildagliptin) (Novartis)、BMS-477118 (沙格列>丁〇狀^1丨叫11)) (Brist〇1_Myers Squibb)、R1438(胺 基曱基0比啶）（Roche)、NVP DPP728 (Novartis)、PSN9301 151059.doc 19 201120034 (Prosidion)、P32/98(異白胺酸0塞。坐0定）（Probiodrug)、 GSK823093C(地格列汀（Denagliptin)) (Glaxo Smithkline)、 SYR-322(阿格列汀（Alogliptin)) (Takeda)、NN-7201 (NovoNordisk)、ALS2-0426 (Alantos)。(Green BD，Flatt PR, Bailey CJ, Dipeptidyl peptidase IB (DPP IV) inhibitors: a newly emerging drug class for the treatment of Type II diabetes，Diabetes Vase Dis Res 2006，3:159-165)。較佳 DPP IV抑制劑係西他列汀、維達列汀、地格列汀、沙格列 汀及阿格列汀。甚至更佳DPP IV抑制劑係西他列汀及維達 列汀。西他列汀係以JanuviaTM出售之獲批醫藥，且維達列 汀係以GalvusTM出售之獲批醫藥。 結晶鹽及DPP IV抑制劑係以單一劑量或以分開劑量投 與。單一劑量係每天投與一次或每天投與多次。當以分開 劑量形式投與時，該等劑量可每天投與一次或每天投與多 次。 在一個實施例中，當以單一劑量投與鹽及DPP IV抑制劑 時，將鹽及DPP IV抑制劑作為藥劑調配成單一藥丸、單一 錠劑或單一膠囊。當以分開劑量投與鹽及DPP IV抑制劑 時，將鹽作為藥劑調配成藥丸、錠劑或膠囊且將DPP IV抑 制劑調配成單獨藥丸或膠囊。 當以分開劑量投與鹽及DPP IV抑制劑時，首先可投與鹽 且在投與鹽後，接下來可投與DPP IV抑制劑。或者，首先 可投與DPP IV抑制劑且在投與DPP IV抑制劑後，接下來可 投與鹽。熟習此項技術者可改變依序進行的第一次投與與 151059.doc •20- 201120034 第二次投與間之時間。在一個實施例中，在第—次投與 (鹽或DPP IV抑制劑）之後立即進行第二次投與（鹽或Dpp IV抑制劑）。在另一實施例中，第二次投與係在第一次投 與後2分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘或6〇分鐘、 1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8 小時、9小時、1〇小時、11小時或12小時内進行。又一實 施例提供在早上向個體投與鹽及/或DPP IV抑制劑，之後 在晚上向先前所治療個體投與鹽及/或DPP iv抑制劑。在 另一實施例中’鹽及DPP IV抑制劑較佳係每天投與一次。 本發明另一態樣提供藉由投與鹽及DPP iv抑制劑來降低 個體之葡萄糖血液含量之方法。該方法包含向哺乳動物投 與有效量之鹽及DPP IV抑制劑。該方法進一步包含在投與 鹽及DPP IV抑制劑之前及之後量測血糖含量之步驟。可藉 由S測來自金樣或尿樣之血糖之衆多市售葡萄糖監測裝置 或如本文所教示來容易地量測血糖含量。亦可藉由無需血 樣或尿樣之市售也糖測計儀來量測血糖。 本發明另一態樣提供藉由投與鹽及DPP IV抑制劑來降低 個體之騰島素錢含量之方法。該方法包含向哺乳動物投 與有效量之鹽及DPP IV抑制劑。該方法進一步包含在投與 鹽及DPP〜抑制劑之前及之後量測血液冑島素含量之步 驟可藉由量測來自血樣或尿樣之騰島素之習知騰島素監 測分析或如本文所教示來容易地量測血液胰島素含量。、规 在另怨樣中，本發明提供藉由投與鹽及Dpp Iv抑制叫 來增加個體之料崎素血液含量之方法1降血糖素: 151059.doc •21 · 201120034 GUM及GH>。該方法包含㈣乳動物投與有效量之鹽及 DPP IV抑制劑。該方法進一步包含在投與鹽及咖π抑制 劑之前及之後量私液料血糖素含量之步驟。可藉由習 知腸降血糖素監測分析或如本文所教示來容易地量測血 腸降血糖素含量。 本發明又-態樣提供藉由投與鹽及㈣Iv抑制劑來降低 個體之血液甘油三酸s|含量之方法。該方法包含向哺乳動 物投與有效量之鹽及DPP IV抑制劑。該方法進—步包含在 投與鹽及DPP IV抑制劑之前及之後量測血液甘油三酸酯含 量之步驟。可藉由量測來自血樣之血液甘油三酸酯含量之 衆多市售裝置來容易地量測血液甘油三酸酯含量。 本發明再一態樣提供藉由投與鹽及DPP IV抑制劑來减少 個體之胃排空之方法。該方法包含向哺乳動物投與有效量 之鹽及DPP IV抑制劑。該方法進一步包含在投與鹽及Dpp IV抑制劑之刚及之後量測血液腸降血糖素含量之步驟。可 措由S知腸降血糖素監測分析或如本文所教示來容易地量 測血液腸降血糖素含量。 本發明另一態樣提供藉由投與鹽及DPP IV抑制劑來增加 個體之騰島細胞之胰島素產生的方法。該方法包含向哺乳 動物投與有效量之鹽及DPP IV抑制劑。該方法進一步包含 在投與鹽及DPP IV抑制劑之前及之後量測胰腺之胰島細胞 或β細胞之胰島素產生的步驟。可藉由習知分析或如本文 所教示來容易地量測胰島及β細胞之胰島素產生。 在又-態樣中，本發明提供藉由投與鹽及DPP IV抑制劑 151059.doc -22- 201120034 來保持個體n力能之方法。該方法包含向哺乳動物投 與有放量之鹽及DPP IV抑制劑。該方法進—步包含在投與 鹽及DPP IV抑㈣之前或之後量測騰島或β細胞產生姨島 素之能力之功能的步驟。可藉由習知分析或如本文所教示 來谷易地量測胰島及β細胞之胰島素產生。 '、 可使用治療有效量之鹽及DPP 1¥抑制劑來製備一或多種 用於治療π型糖尿病及/或降低血漿葡萄糖含4之醫藥电人 物。另外，可使用治療有效量之鹽及DPPIV抑制劑來製： -或多種醫藥組合物，料組合物用於治療包括糖尿病作 為一部分之其他適應症（例如代謝症候群）、以及可因胰島 素產生增加而改善之適應症（例如I型糖尿病之早期階段）。 本發明組合物可包括鹽及視情况DPP IV抑制劑、其醫藥 上可接受之鹽或其可水解前體。通常，使鹽以治療有效量 與適宜載劑或賦形劑混合。「治療有效劑量」、「治療有2 ϊ J或者可互換地’ r藥理上可接受之劑量」或「藥理上 可接又之里」意指將存在充足量之本發明化合物及醫藥上 可接受之載劑以達成期望結果，例如，緩解II型糖尿病 症狀或并發症。 本發明方法中所使用之MBX_2982鹽可納入多種調配物 =X Λ3療投與。更特定而言，鹽可藉由與適當的醫藥上 可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑組合而調配成醫藥組合 物’且可調配成呈固體或半固體形式之製劑，例如旋劑、 :囊帛丸、粉末、顆粒、糖衣藥丸、凝膠、軟膏、栓 吸入^ °可以各種方式達成投與，包括經口、頻内、 151059.doc •23- 201120034 直腸、皮内及經皮投與。此外，可以儲積或持續釋放調配 物形式以局部而非全身性方式投與鹽。另夕卜，可以脂質體 形式投與鹽。 用於本發明中之適宜調酉己物可參見Remingt〇n，s

Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing η (1985),

Philadelphia，PA，第17版）令，其以引用方式併入本文 中。可以彼等熟習此項技術者習知之方式來製造本文所述 醫藥組合物’即借助習用混合' 顆粒化、製糖衣藥丸、研 磨成粉狀、乳化、囊封或包埋來製造。以下方法及賦形劑 僅為例示性且不以任一方式對本發明加以限制。 就經口投與而言，鹽可藉由與業内所習知之醫藥上可接 受之載劑組合來容易地調配。經口使用之醫藥製劑可藉由 以下方式獲得：將化合物與固體賦形劑混合，視情况研磨 所得混合物，及在若需要添加適宜輔料後處理顆粒混合物 以獲得錠劑或糖衣藥丸核心。特定而言，適宜賦形劑為填 充劑，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維 素製劑，例如玉米澱粉、小麥殿粉、水稻澱粉 '馬鈴薯澱 粉、明膠、黃箸膠、曱基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧 甲基纖維素鈉及/或聚乙烯基吡咯啶酮。若需要，可添加 崩解劑’例如’交聯聚乙烯基吡咯啶酮、瓊脂、或海蕩酸 或其鹽（例如海藻酸鈉）。 糖衣藥丸核心具有適宜之包衣。出於此目的，可使用經 濃縮之糖溶液’其視情况可含有阿拉伯樹膠、滑石粉、聚 乙烯基。比咯啶酮、卡波普（carb〇p〇1)凝膠、聚乙二醇及/或 151059.doc -24· 201120034 二氧化鈦、漆溶液及適宜的有機溶劑或溶劑混合物。亦可 將染料或顏料添加至錠劑或糖衣藥丸包衣中用以辨識或表 徵活性化合物劑量之不同組合。 可經口使用之醫藥製劑包含由明膠製成的配合推入膠 囊、以及由明膠及增塑劑（例如甘油或山梨醇）製成的軟密 封膠囊。該等配合推入膠囊可包含活性成份與填充劑（例 如乳糖）、黏合劑（例如澱粉）及/或潤潸劑（例如滑石粉或硬 脂酸鎂）及視情况穩定劑之混合物。在軟膠囊中，活性化 合物可溶解或懸浮於諸如脂肪油'液體石蠟或液體聚乙二 醇等適宜液體中。另外，可添加穩定劑。所有經口投與之 S周配物均應呈適合此投與之劑量。 對於頰内投與而言，組合物可採用以習用方式所調配之 錠劑或菱形錠劑之形式。 就藉由吸入投與而言，本發明鹽可借助使用適宜推進劑 (例如’二氯二氟甲燒、三氣氟甲烧、二氣四氟乙院、二 氧化碳或其他適宜氣體）以氣溶膠喷霧劑形式由壓力襄置 或噴霧器或者由無推進劑之乾粉劑吸人器方便地遞送。、在 加壓氣溶膠情况下，可藉由提供閥Η遞送經計量之旦來確 定劑量單位。吸入器或吹入器中所使用之(例如)二囊 及藥筒可調配成含有化合物盥 " 澉粉)之粉末混合物。如末基貝(例如乳糖或 人士 &物’例如栓劑或保留灌腸劑，！ 含有(例如)習用检劑基質，例如可可油、碳 二 或其他甘油酯，其全部均在體溫下融化，而在 151059.doc -25- 201120034 化。 除上述肢物以外，鹽亦可調配成儲積製劑。此等長效 調配物可藉由植入(例如，經皮下或肌内)或藉由肌内注射 投與。因此’舉例而言，鹽可用適宜聚合或疏水性材料 (例如’作為存於可接受油中之乳液）或離子交換樹脂加以 調配’或調配成微溶衍生物（例如，調配成微溶鹽）。 或者，可採用用於疏水性醫藥化合物之其他遞送系統。 用於疏水性藥物之遞送媒劑或載劑之習知實例係脂質體及 礼液。在-目前較佳實施例中，可使用較長循環即隱形脂 質體。此等脂質體概述於w〇〇dle等人之美國專利第 5,〇13,556唬中^本發明化合物亦可藉由控制釋放手段及/ 或遞送裝置（例如彼等闡述於美國專利第3 845,77〇號、第 3’916,899 號、帛 3’53m〇9 號、第 3 598 123 號及第 4,008,719號中者）投與。 適用於本發明之醫藥組合物包括其中包含治療有效量活 性成份之組合物。當然，所投與組合物之量將取决於所治 療個體、個體體重、患病嚴重度、投與方式及處方醫師之 判斷。有效量之確定為彼帛熟f此項技術者所熟知，尤其 可根據本文所提供之詳細揭示内容確定。 可與載劑材料組合以產生單一劑型之鹽的量將端視所治 療疾病、哺乳動物種類及特定投與模式而變化。然而，一 般原則上，鹽之適宜單位劑量較佳可含有（例如）介於〇1 mg至約1000 mg之間之活性化合物。較佳單位劑量介於1 mg至約500 mg之間。更佳單位劑量介於i mg至約3〇〇 151059.doc -26- 201120034 之間。另一較佳單位劑量介於i 至約丨〇〇 之間。其他 較佳單位劑量包括25 mg、5〇 j 〇〇叫、^ 5〇呵、2〇〇 mg 250 mg、300 mg、350 mg、400 mg、450 mg及 500 mg。單位劑量亦可每天投與丨次、2次、3次、4次、$次或6 次，較佳每天投與丨次或2次’或更佳每天一次，因此針對 (例如）70 kg成人而言，每次投與總劑量在〇 〇〇1 mg/kg個體 體重至約1 5 mg/kg個體體重之範圍内。較佳劑量係每次投 與約0.5 mg/kg個體體重至約1〇 〇^/4個體體重、每次投與 、”勺0.5 mg/kg個體體重至約7 5 mg/kg個體體重每次投與 約〇·5 mg/kg個體體重至約5 〇^/1^個體體重、每次投與約 〇·5 mg/kg個體體重至約4爪以^^個體體重、每次投與約〇 5 mg/kg個體體重至約3 mg/kg個體體重、每次投與約〇 5 mg/kg個體體重至約2 „1§/]^個體體重或每次投與約ο」 mg/kg個體體重至約i mg/kg個體體重，且此療法可延續數 周或數月，且在一些情形中為數年。然而，應瞭解，用於 任何特定患者之具體劑量程度將端視多種因素而定，包括 所用具體化合物之活性；所治療個體之年齡、體重、整體 健康狀况、性別及飲食；投與時間及途徑；排泄速率；先 月1J所投與之其他藥物；及進行治療之特定疾病的嚴重度， 此應為彼專热習此領域者所熟知。 典型劑量可係一天服用一次之！ mg至約5〇〇 mg、或25 mg、50 mg、75 mg、1〇〇 mg、125 mg、15〇 mg、175 mg、200 mg ' 250 mg、300 mg、35〇 mg、4〇〇 mg、45〇 mg或500 mg鍵劑或呈一天服用一次且按比例含有較高含量 151059.doc •27· 201120034 活性成份之定時釋放膠囊或錠劑形式。定時釋放效應可藉 由在不同pH值下溶解之膠囊材料、藉由滲透壓緩慢釋放之 膠囊或藉由任一其他習知之控制釋放方式獲得。 另外，本發明提供具有單位劑量（經口或可注射劑量）之 鹽及/或DPP IV抑制劑之套組。含有單位劑量之容器中另 外將係描述藥物在治療以下病症中之用途及伴隨益處的資 訊性包裝插頁：糖尿病、肥胖症、高脂血症、動脈粥樣硬 化及代謝症候群、及/或其各相關症狀、併發症及病症。 提供下列實例以進一步闡釋本發明之某些態樣並幫助彼 等熟習此項技術者實踐本發明。該等實例並非意欲限制本 發明範圍。 實例 在各實例及申請案通篇中使用下列縮寫： ACN 乙腈 DCM 二氯曱烷 DEE 乙醚 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH 乙醇 HFIP 六氟異丙醇 IPA 異丙醇 IPE 異丙醚 MEK 甲基乙基酮 MeOH 甲醇 MTBE 曱基-第三丁基醚 TFE 2,2,2-三氟乙醇 THF 四氫呋喃 CCS 溶液之急驟冷卻 FC 快速冷卻 151059.doc -28 · 201120034 FE 快速蒸發 RE 旋轉蒸發 S/AS 溶劑/反溶劑沉殿 SC 缓慢冷卻 SE 缓慢蒸發 VD 蒸氣擴散 VO 真空爐 DSC 差示掃描量熱法 NMR 核磁共振光譜 TG/TGA 熱重分析 XRPD X射線粉末繞射 B/E 雙折射/消光 NS 無固體 Ppt 沉澱 RH 相對濕度 RT 室溫 儀器技術 XRPD:使用 Inel XRG-3000繞射儀或PANalytical X’Pert Pro繞射儀來採集XRPD圖譜。

Inel :裝配有彎曲位置敏感檢測器（2Θ範圍為120°)之Inel XRG-3000繞射儀。在0.03。2Θ之解析度下使用Cu Κα輻射 (40 kV, 30 mA)之入射光束實時採集數據。在分析前，對 矽標準（NIST SRM 640c)進行分析以驗證Si 111峰位置。藉 由將試樣填充至薄壁玻璃毛細管中來準備分析用試樣。在 數據獲取期間將各毛細管安裝至測角計頭上且使其旋轉。 PANalytical :使用Optix長細聚焦源來產生Cu Κα幸畐射之 入射光束。使用橢圓漸變多層反射鏡將該源之Cu Κα X射 線聚焦並穿過樣品且到達檢測器上。採集數據且使用 X’Pert Pro數據採集器軟體（ν. 2.2b)來分析。在分析前，對 151059.doc -29· 201120034 石夕樣品（NIST SRM 640c)進行分析以驗證^⑴峰位置。將 該樣品夾置於3㈣厚膜之間，在進行透㈣何分析，且旋 向統f狹縫用於人射光束及繞射光 束來使軸向發散最小化。使用位於離樣品24〇麵處之掃描 位置敏感性檢測器（XiCelemc)r)來採集繞射圖譜。 DSC :使用TA !她uments如_差式掃描熱量計來實施 ㈣。使請ST可追義金屬來實施溫度校準。將試樣置 於D㈣盤中’且準確記錄重量。用穿有雷射針孔之蓋覆 蓋該盤並將該蓋氣密密封，或者用未穿孔之蓋覆蓋該盤且 將其壓接。在-机或坑下使試樣池平衡并在氮氣吹掃下 以1(TC/分鐘之速率將其加熱直至2耽之最終溫度。所報 告溫度係轉變最大值。 TGA :使用TA Instruments Q5〇〇〇 IR熱重分析儀來實施 TG分析。使㈣及—μ來實施溫度校準。將各試樣置 於！呂盤中。正好在插人TG爐中之前制㈣打孔機構開 孔之蓋將該盤氣密密封。在氮氣下以1(rc/分鐘之速率將該 爐加熱至350°C之最終溫度。 NMI使用Varian刪丁yin〇va_4〇〇光譜儀來獲取溶 液NMR光譜。試樣係藉由將其溶解於(：1：)(：13或1)河8〇6中來 製備。 FT-拉义光。普·在與裝配有銦鎵珅（inGaAs)檢測器之 Nexus 670 FT-IR分光光度計（Therm〇 Nic〇let)介接的〜讓 670 FT-拉曼輔助模組上獲取拉曼光譜。使用硫及環己烷來 貫施波長驗wa·。藉由將試樣置於玻璃管中且將該管定位於 151059.doc •30- 201120034 塗覆有金之管架中來準備分析用各試樣。 結晶方法 吸丨又在室溫下在各種 游離驗及酸之溶液。若固想持續存在==所關注 :解在獲付心月（無固體）溶液後，使溶液緩慢冷却至室 溫0 積减少（VR):在室溫下在各種溶劑中製備含有所關主 游離驗及酸之溶液。溶液中未發現固體。將試樣加 環境溫度下放置數小時至數天時間。若無㈣產生，則將 試樣去蓋且减少試樣體積。將試樣加蓋且在環境溫度條件 下靜置。纟固體自溶液沉澱出後，經由真空過 且將其乾燥。 沉殿㈣）：在室溫下在各種溶劑中製備含有所關注游離 驗及酸之溶液。若固體持續存在，則加熱試樣以促進溶解 或使其保持在環境溫度下且進行攪拌。若產生澄清溶液， 則將試樣加蓋且保持在環境溫度下。將升高溫度下之試樣 冷却至環境溫度。經由真空過濾收集所得固體且將其乾 實例1 :製備游離鹼5-乙基-2-{4-[4-(4-四唑美 4 nr\i y 基）·噻唑_2-基]-六氫吡啶-l-基}-嘧啶。 4-(4-((4-(1Η-四♦-卜基）苯氧基）曱基）。塞。圭_2_基）六氫吧。定_ 1-曱酸第三丁基酯之合成 在回流下將4-(4-氣曱基-噻唑-2-基）_六氫吡啶。-甲酸第 二丁酯（549 mg)、4-四唑-1-基-苯酚（270 mg)、存於乙腈中 151059.doc -31 - 201120034 之Cs2C〇3 (890 mg)之混合物加熱過夜。冷却後，藉助石夕藻 土墊將反應混合物過濾，在真空中濃縮。藉由層析（4〇_ 100% EtOAc/己烷）進行純化，獲得白色固體狀期望產物。 *H NMR (CDC13)： δ 8.01 (1Η, s), 7.61 (2H, d, J=8.8 Hz), 7.25 (1H, s), 7.15 (2H, d, J=8.8 Hz), 5.22 (2H, s), 4.2 (2H, br), 3.17 (1H} m), 2.87 (2H, m), 2.11 (2H, m), 1.73 (2H, m), 1.46 (9H, s)。 4-[4-(4-四嗤-1 -基-笨氧曱基）_σ塞嗤_2_基]_六氫n比咬鹽酸鹽 之合成 在〇°C下向4-(4-((4-(1Η-四唑-1-基）苯氧基）甲基）噻唑_2· 基）六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯（0·6〇 g)存於甲醇/二氣曱烷 (1.0 mL/1.5 mL)中之溶液中添加存於二噁烷7 mL)中之4 N HC1，且隨後在室溫下攪拌7小時。在真空中去除溶劑 後’獲得灰白色固體狀粗製期望化合物HC1鹽。 在9(TC下將4-[4-(4-四唑-1-基·苯氧曱基）·噻唑_2_基卜六 氫吡啶鹽酸鹽（403 mg)、2-氣-5-乙基嘧啶（0.15 mL)及存於 異丙醇中之二異丙基乙基胺（丨mL)之混合物加熱過夜，使 其在EtOAc與水之間分配。將有機層用水/鹽水洗蘇，且經 無水NaaSO4乾燥並且在真空中濃縮。藉由在矽膠（40_100〇/〇 EtO Ac/己烷）進行層析來純化，獲得白色固體狀期望化合 物。NMR (DMSO-d6): δ 9.98 (1H，s)，8.24 (2H，s)，7.80 (2Η, d, J=8.8 Hz), 7.66 (1H, s), 7.28 (2H, d, J=8.8 Hz), 5.20 (2H, s), 4.67 (2H, m), 3.32 (1H, m), 3.01 (2H, m), 2.43 (2H, q, J=7.2 Hz), 2.07 (2H, m), 1.59 (2H, m), 1.11 (3H, t5 151059.doc •32· 201120034 J=7.2 Hz) ppm。 實例2 :苯磺酸鹽 自丙嗣溶液體積减少實驗 屋生本崎酸鹽。該材料以堆叠

板狀物形式結晶。XR

杂、h Ά… 刀析顯示苯磺酸鹽係晶體。在RH 脅迫過伏後，該材料仍為 、』 為自由、机動粉末。受脅迫試樣之埶 分析顯示至125°C之_微曹景i〇也， ’、 二重s知失（0.9 wt·%)及以153。(：為中 心之劇烈吸熱。大約l47〇c處 L處之斜肩與吸熱相關。在超過 大約15 5 C時觀測到快速重|指生, 疋置里知失。H NMR光譜結果顯示 存在1:1鹽。 JH NMR (CDC13)： δ 8 95 ΠΜ 、。 • (1H，s)，8,54 (2H，br s)，7.95 (2H， ni)，7.63 (2H，dt，J=3 9 2 HV、n a r\ ^ Hz), 7.40 (3H? m)? 7.29 (1H5 s)? 7.18 (2H，dt，J-3, 9.2)，5.24 (2H，s), 4.76 (2H，m), 3.42 (3H，m)，2.61 (2H，q，J = 7_6 Hz)，2 33 (2H，机 j=3, i3 8

Hz), 1.97 (2H，m), 1.26 (3H, t，J=7 6 Hz)。 實例3 :樟腦磺酸鹽 藉由 >儿澱反應及在丙酮中緩慢冷却來產生樟腦磺酸鹽。 該材料以未知形態結晶。XRPD分析顯示樟腦磺酸鹽係晶 體。在RH脅迫過夜後，該材料仍為自由流動粉末。未受 脅迫材料之熱分析顯示至125°C之輕微重量損失（0.3 wt %) 及以184°C為中心之劇烈吸熱。在超過大約18〇°c時觀測到 通常指示分解之快速重量損失。1H NMR光譜結果顯示已 形成1:1鹽。 'H NMR (CDC13): δ 8·70 (1H, s), 8.61 (2H, br s), 7.74 (2H, d, J=9.2 Hz), 7.28 (1H, s), 7.18 (2H, d, J=9.2 Hz), 5.24 I51059.doc •33- 201120034 (2H，s)，4.78 (2H，d，J = 13.6 Hz)，3.42 (4H，m)，2.92 (1H d J=15.2 Hz)，2.73 (1H，m)，2.62 (2H，q，j=7.6 Hz), 2 34 (3h m)，1.99 (4H，m), 1.89 (1H，d, J=18.4 Hz), 1.79 (1H m) 1.39 (1H, m)，1·27 (3H，t，J=7.6 Hz), 1.12 (3H，s)，〇 % (3H，s) ° 實例4 :乙磺酸鹽 藉助在丙酮中之沉澱反應來產生乙磺酸鹽。乙續酸鹽材 料以堆叠板狀物及錠劑形式存在。XRPD分析顯示乙續酸 鹽係晶體。在脅迫過夜後，該材料仍為自由流動粉末。受 脅迫粉末之熱分析顯不至125C之4.8%重量損失及以％ $。〇 為中心之劇烈吸熱。吸熱事件通常指示熔融事件。重量損 失可指示鹽之溶劑合物或水合物。在超過大約！25〇C時觀 測到通常指示分解之快速重量損失。iH NMR光譜結果顯 示已形成1:1鹽。 'H NMR (CDC13)： δ 8.95 (1Η, s), 8.56 (2H, br s), 7.63 (2H d，J=9.2 Hz), 7.29 (1H, s), 7.18 (2H, d, J=9.2 Hz), 5.24 (2H, s), 4.79 (2H, m), 3.43 (3H, m), 2.97 (2H, q, j=7.6 Hz) 2-6l (2H, q, J=7.6 Hz), 2.36 (2H, m), 1.98 (2H, m), i.39 (3H, t，J=7.6 Hz), 1.27 (3H, t，J=7.6 Hz)。 實例5 : HBr鹽 藉助在丙酮中之沉澱反應來產生HBr鹽。該材料以未知 形態結晶。XRPD結果顯示HBr鹽係晶體。在脅迫過夜後， s亥材料仍為自由流動粉末。未受脅迫材料之熱分析顯示在 試樣經歷分解之前存在寬的弱吸熱。在分解之前檢測到 151059.doc -34- 201120034 I. 5% wt.損失。咕NMR光譜顯示在環境條件下未形成分解 產物。在CDCI3存在下鹽發生沉澱且在dms〇中實施 NMR分析。 丨H NMR (DMSO-d6): δ 10.00 (1H, s)，8.30 (2H，s)，7.82 (2Η, d, J=9.2 Hz), 7.68 (1H, s), 7.30 (2H, d, J=9.2 Hz), 5.22 (2H, s), 4.66 (2H, d, J=13.2 Hz), 3.36 (1H, tt, J=3.8, II. 6 Hz), 3.08 (2H, dt, J=2.6, 12.8 Hz), 2.50 (2H, q, J=7.4

Hz), 2.12 (2H，m)，1.64 (2H，m)，1.14 (3H, t，J=7.4 Hz)。 實例6 :甲磺酸鹽 使用緩慢冷却/體積减少技術產生呈多種形態之曱績酸 鹽。XRPD結果顯示單鹽係晶體。在升高rh脅迫後，該材 料仍為自由流動粉末。脅迫後試樣之熱分析顯示以86t為 中心之吸熱及直至1251之4.5%重量損失。一種可能的解 釋係快速發生溶劑（可能為水）損失且在熔融事件後試樣經 歷分解。1H NMR光譜結果證實形成1:1鹽。 *H NMR (CDCI3): δ 8.95 (1Η, s), 8.55 (2H, br s), 7.63 (2H, d, J=8.8 Hz), 7.29 (1H, s), 7.18 (2H, d, J = 9.2 Hz), 5.24 (2H, s), 4.76 (2H, m), 3.42 (3H, m)5 2.88 (1H, s), 2.61 (2H, q, J = 7.6 Hz)，2.36 (2H，m)，1.99 (2H, m)，1.27 (3H，t，J=7.6

Hz)。 XRPD(Intel XRG-3〇0〇繞射儀））選擇晶格間平面間隔：d ([人])(士0.1 A) : 10.23、6.28、4.83、4.75、4·57、4·43、 4.32、3.49、3.43、3·32。 實例7 :硫酸鹽 151059.doc •35- 201120034 自沉澱實驗產生硫酸鹽❶XRPD結果顯示單鹽產生结晶 材料。在升高RH脅迫後，該材料變得黏稠。未受脅迫試 樣之熱分析顯示大重量損失（至125°C之9%)與以97。(：為中 心之吸熱相關。在該初始重量損失後，在進一步加熱後， 材料發生快速降解，此可能歸因於水分損失，但該假設未 得到驗證。1H NMR光譜結果顯示未形成分解產物。在 CDCh存在下鹽發生沉澱且在DMS〇中實施lH nmr分析。 ]H NMR (DMSO-d6): δ 10.00 (1H, s), 8.32 (2H, s), 7.82 (2H, d, J=9.2 Hz), 7.68 (1H, s), 7.30 (2H, d5 J=9.2 Hz), 5.22 (2H, s), 4.65 (2H, d, J=13.6 Hz), 3.36 (1H, tt, J=3.6, 11.2 Hz), 3.09 (2H, m), 2.48 (2H, q, J=7.6 Hz), 2.12 (2H, m)，1·65 (2H，m)，1.14 (3H, t, J=7.6 Hz)。 實例8 :曱苯磺酸鹽 藉由緩慢冷却及丙酮之體積减少來產生曱笨確酸鹽。該 材料以未知形態結晶。XRPD結果顯示存在結晶材料。在 暴露於升高RH條件後’該材料仍為自由流動粉末。今材 料之熱分析顯示與以94°C為中心之極弱吸熱相關的'至 125°C之微小（0.9%)重量損失。該寬的弱吸熱可指示溶劑損 失。以152°C為中心之吸熱在大重量損失之前。' , 王里谓穴心刖。H NMR光 譜結果證實已形成1:1鹽。 ]Η NMR (CDC13)： δ 8.95 (1Η, s), 8.54 (2H, br s)5 7.83 (2Hj d，J=8.0 Hz), 7.63 (2H，d，J=9.2 Hz)，7.30 (1H s) 7 19 (4H，m)，5.25 (2H，s)，4.76 (2H，m)，3.43 (3H，m)，26; (2H， q，J=7.6 Hz)，2.36 (3H，s)，2.33 (2H，m)，1.96 (2H m) i 26 I51059.doc • 36 - 201120034 (3H，t，J=7.6 Hz)。 XRPDdntel XRG-3000繞射儀）選擇晶格間平面間隔：d ([人])(±0.1 人）：10.61、8.41、5.78、5.17、5.02、4.84、 4.37、4.22、3.95、3.44。 實例9 : HC1鹽 根據以下程序來篩選製備HC丨鹽之各種溶劑系統，且結 果展示於下表6中。 ° 蒸發實驗：將HC1鹽溶解於給定溶劑中。藉助Q2㈣財 綸過濾器來過濾溶液 將溶液 就環境下之蒸發實驗而言 放置於敞開小瓶中（快速蒸發）或用含有針狀紹落覆蓋（緩 慢蒸發）。就真空下之蒸發實驗（旋轉蒸發）而言，在環^或 升高溫度下將試樣置於旋轉蒸發器上且將溶劑蒸發至乾 燥。 使HC1鹽與給定溶劑接觸且在熱 升高溫度。使用〇_2 μηι耐綸過濾 緩慢及快速冷却實驗： 板上使試樣在油浴_達到 器將所選試樣過滤。然後關掉熱源且將熱板及小觀在油浴 中緩慢冷却至環境溫度以供緩慢冷却或置於實驗臺上以供 决速冷却。將在環境溫度下不產生固體之所選試樣置於冰 箱或冷凍器中。藉由真空過濾來回收固體。 心驟冷却月驗·於升高溫度下在各種溶劑中製備飽和溶 液。在置於熱板上之油浴中實施實驗。藉助〇 2叫溫熱過 慮器將所付洛液或漿液在仍溫熱的同時快速過濾至敞開小 瓶中將4小瓶置於藉由乾冰冷却之丙網浴中。藉由真空 過濾來收集固體。 I5I059.doc -37- 201120034 蒸氣擴散：將少量MBX 2982 HC1溶解於最低蜃 -里之i 適當 溶劑中。藉助0.2 μιη耐綸過濾器將試樣過濾至1打蘭 小瓶中。將乙醚添加至2〇 mL閃爍小瓶中。將1扣玆， ） B日。$ aw _ 丁鬧小瓶打蠟祺。 開且置於20 mL小瓶中。將20 mL小瓶加蓋且加上石 表6. 溶劑 條件 丙闕： MeOH (約 3:1) 氣仿

DCM

DCM

DCM/DEE

EtOH :水 (2：1)

IPA

MeOH

MeOH

MeOH

MeOH/ACN

MeOH/DEE

MeOH.EtOAc ([·】）

MeOH:THF (1:1)

MeOH.EtOAca：]) 151059.doc 自約53°C至RT進行FC(渾濁）， 經超音波處理，靜置，約3天 自約53°C至RT進行SC(澄清）, 經超音波處理，靜置，約3妥

FE 攪動W/搜拌，RT，的

VD 漿化W/视拌，RT，约】天 漿化，約60°c，約3天 漿化w/攪拌，rt，約3天 自約5 8°C進行CCS(丙酮/乾冰) S/AS嘗試(澄清”保存於冷來 器t

VD

自約57°C至RT進行SC 漿化，RT，約5天 漿化，約40°C，約2天

針樣，結塊，小粒子上有一些B/E

NS

些B/E 未知形態至顆粒樣’一些B/E 結塊，在較小粒子上有 未知形態，結塊，B/E 来知形態，結塊，無B/E 孅維或針樣’結塊，一些B/E 未知形態’結塊，在極小粒子上有

些B/E

未知形態，結塊，在小粒子上有一些 B/E

形式I 未知形態，結塊，無B/E

NS 纖維+針樣，+不澄清，結塊，一.

B/E 未知形態，結塊’在較少小叙子上有

B/E

玫瑰花狀至針樣’結塊’ B/E

未知形態，結塊，在較少粒子上有一 些 B/E ______

形式I • 38 - 201120034

硝基甲烷 漿化，約60°C，約3天 未知形態’結塊，在較小粒子上有3 些B/E 形式I 自約69°C至RT進行SC(澄清）， 未知至針樣粒子，结塊，在較小粒子 上有一些B/E ~~~~^一 硝基甲烷 經超音波處理’保存於冰箱 中，4天 圖譜J TFE RE，RT至約 40°C (膜） 未知形態，通常不澄清，在極小粒子 上有一些B/E__一 未知形態至顆粒樣，結塊，在較小粒 子上有一 4bB/E ------- 圖譜Η TFE:ACN (19:1) 漿化，約40°C，約2天 ------ 形式I TFE/DEE VD 未知形態，結塊，在較小粒子上有_ 些B/E — - 形式I TFE/EtOAc S/AS嘗試(澄清）。保存於冷凍 器中 未知形態至玫塊花狀，結塊，在較小 粒子上有一肚B/E 圖譜G THFiTFE (1:1) 自約53°C至RT進行SC(澄清）， 經超音波處理，保存於冷凍器 中，約4天 未知形態，結塊，在較小粒子上有一 些B/E 圖譜Κ 水 漿化，約38°C，約1天 未知形態，結塊，在小粒子上有一些 B/E 圖譜D

實例10 : HC1鹽形式I 使游離鹼（46.0 g)與500 mL EtOH接觸並升溫/攪拌。將 9.5 mL》辰HC1添加至該懸浮液中。將試樣放置大約3 〇分鐘 且隨後冷却至RT。將過濾材料真空乾燥（3天）且標識為含 有痕量乙醇之「圖譜0」。

lH NMR (CDC13): δ 8.95 (1Η, s), 8.42 (2H, br s), 7.63 (2H d, J=9.2 Hz), 7.28 (1H, s), 7.18 (2H, d, J=9.2 Hz)，5.24 (2H，s), 4.97 (2H, m)，3.46 (3H，m), 2.61 (2H，q, J=7.6 Hz) 2.37 (2H，m), 1.99 (2H, m), 1·27 (3H，t，J=7.6 Hz)。 將固體與原始母液再合並且快速攪拌試樣並且添加額外 0.5 mL濃HC1。將試樣加熱且攪拌大約30分鐘並且隨後使 •39· 151059.doc 201120034 其緩慢冷却至RT。將過濾材料在丙酮（26.8 g/125 mL)中漿 化且升溫大約一（1)小時。將試樣冷却至環境溫度且漿化6 天以得到HC1形式I。 HC1形式I之熱（DSC，TGA)表徵結果顯示該材料可能未經 溶劑化。TGA曲線顯示在介於約23c與約73(>c之間有約 0.2 /。重量損失，其可能與殘餘丙酮蒸發相關（自發 現存在殘餘丙酮）。在介於約113t與約21〇〇c之間觀測到大 約13.1%之重量損失，之後為可能歸因於分解的在約 3〇2°C(起始點）處之劇烈損失。該材料可首先損失HQ，其 伴隨在較高溫度下之進一步降解。DSC溫度記錄圖展示在 約191起始點）處有劇烈吸熱事件，隨後為立即熱波動， 此可能歸因於分解。 水分吸附結果顯示在約5% RH下平衡後有約〇 3 損 失。小重量損失與TGA損失相當，且可能與殘餘丙嗣損失 相關。在介於約5〇/❶與約95% RH下觀測到約〇.9 wt%穩定增 益在使相對濕度降至約5%(介於約95%與約5¾ RH之間 之約0.9 wt%損失）後出現完全解吸。 H NMR顯不在8 42 ppm處有峰之顯著位移及增寬，此 可知因於嘧啶環之質子及痕量殘餘丙酮(約0.06莫耳丙酮/ 莫耳游離鹼）。 lR NMR (CDC13)： δ 8.96 (1Η, s), 8.42 (2H, br s), 7.63 (2H, d, J=8.8 Hz), 7.28 (1H, s), 7.18 (2H, d, J=8.8 Hz), 5.24 (2H, s), 4.98 (2H, m), 3.45 (3H, m), 2.61 (2H, qs J=7.6 Hz), .38 (2H, m), 1.99 m), 1.27 (3H, t, J=7.6 Hz) ° 151059.doc 201120034 元素分析數據與材料為單鹽酸鹽一致：（c22h25cin8os) C : 54.16% ; Η : 5.29% ; N : 22.89% ; Cl : 7.40%。 FT-拉曼光譜：（cnT1) : 154、193、214、243、324、 346 、 384 ' 420 ' 460 、 467 、 495 、 539 、 573 、 596 、 628 、 648 、 680 、 687 、 718 、 751 、 766 、 787 、 800 、 845 、 856 、 946 、 967 、 992 、 1009 、 1051 、 1068 、 1094 、 1110 、 1172、1203、1225、1253、1282、1300、1311、1334、 1375、1394、1404、1432、1458、1474、1480、1517、 1533、1591 ' 1609、1637、2734、2869、2903、2928、 2937 、 2967 、 2999 、 3015 、 3030 、 3063 、 3075 。

實例11 :來自丙酮之HC1鹽形式I 在55°C下向MBX-2982 (0.9 g)存於丙酮（4 mL)中之懸浮 液中添加1當量HC1(濃的水溶液）。在5 5。〇下將該懸浮液攪 拌兩小時且隨後冷却至室溫。藉由真空過濾收集固體狀 HC1鹽形式I。自取自Intel XRG_3〇〇〇繞射儀之χ射線粉末 圖譜選擇晶格間平面間隔：d ([人])(土〇」幻：1〇 〇9、 8.20、5.51、5.08、4.36、4.26、4.14、4.08、3.35、3.18。 實例12 :來自乙酸乙酯之HC1鹽形式j 在55°C下向MBX-2982 (2 g)存於乙酸乙醋（9紅）中之懸 Μ存於乙酸乙酯中之溶液）。在

浮液中添加1.05當量HC1(1 Μ；ή 5 5°C下將該懸浮液攪拌兩小時 空過遽收集固體狀HC1鹽形式I 151059.doc • 41 · 201120034 3.35、3.18。 實例13 : HC1鹽形式II : 使21.5 g圖譜Ο材料（如實例1〇中所述製備）與125 mL MeOH及HC1形式II晶種接觸》在尺丁下將該試樣漿化6天以 獲得形式II材料。 HC1形式II之XRPD分析顯示該材料為晶體。 HC1形式II之1H NMR分析顯示在約8 42 ppm處有峰之顯 著位移及增寬，此歸因於嘧啶環中之質子，且表明HC1可 能位於嘧啶氮原子附近。另外，光譜亦顯示痕量甲醇（〇 3 莫耳甲醇/莫耳鹼）及殘餘乙酸乙醋。 'H NMR (CDC13): δ 8.98 (1Η, s), 8.42 (2H, br s), 7.63 (2H, d, J=8.8 Hz), 7.29 (1H, s), 7.18 (2H, d, J=9.2 Hz), 5.24 (2H, s), 4.98 (2HS m), 3.47 (3H, m), 2.61 (2H, q, J=7.6 Hz), 2.37 (2H，m)，1.99 (2H, m)，1.27 (3H，t, J=7.6 Hz)。 形式II之熱（DSC，TGA)表徵結果顯示該材料可能未經溶 劑化。TG曲線顯示在介於約2Γ(：與約U3〇c之間有約〇 6% 重量損失，此可能與殘餘甲醇及乙酸乙酯蒸發相關。在介 於約113 C與約2201之間觀測到大約14<%之重量損失， 之後為可能歸因於分解的在約312°C (起始點）處之劇烈損 失。該材料可首先損失HC1，其伴隨在較高溫度下之進一 乂降解DSC溫度記錄圖展示開始於約1 5〇。〇（起始點）之吸 熱事件’隨後為衆多熱波動’此可能歸因於分解。 生物學實例1 在不艮雄性斯普拉道來氏（Sprague Dawley) (SD)大鼠中 15l059.doc • 42- 201120034 單一經口管飼（PO) 200 mg/kg劑量之後進行兩項研究以比 較微晶MBX-2982及MBX-2982之鹽形式之全身性暴露及藥 物動力學（PK)。在該等研究中研究了 MBX-2982之四種鹽 形式。測試鹽係HC1形式I、HC1鹽形式π、甲磺酸鹽及甲 苯績酸鹽。 材料及設備 標準物：MBX-2982 内標物：MBX-2982，其中將6個苯環碳原子標記為l3C 空白：彙集之大鼠血躁（Bioreclamation) 化學品：試劑級 溶劑：HPLC級 96孔深板及墊：1 mL (Corning) HPLC管柱：Lunar C18 (2), 5 μ, 5〇χ2·1 mm I.D. (Phenomenex) 管柱前過濾器：0.2 μπι (Thermo- Fisher Scientific) LC系統：LC-20 AD幫浦及SCL-10A VP LC控制器以及 CTC Analytics AG Pal 自動進樣器（Shimadzu Scientific Instruments公司） . 質譜儀：具有 Analyst 1.4.2 軟體（Applied Biosystem 公司）之 4000 Q-TRAP® 分析天平：型號accu-124 (Fisher Scientific) 移液管：（Rainin Instrument, LLC) 試樣製備 藉由在1 mL/孔之96孔板中使血漿蛋白溶劑沉澱來製備 151059.doc • 43· 201120034 式樣藉由將10 pL空白企漿摻加1〇此標準溶液（含有〇 〇1 Mg/niL、0.02 _mL、〇 〇5 盹臟、〇 "_、〇 2

Pg/mL、0_5 pg/mL、1 叫就、2 gg/mL、$ 叫就、ι〇 Mg/mL 20 pg/mL、5〇 gg/mL及⑽…社 ΜΒχ·2982之乙 腈）及3〇0 μί存於含有〇_2 gg/mL内標物之乙腈中之〇 i%甲 I來製備^準物。藉由在存於乙腈中之〇1%曱酸中添加ι〇 μ桌《式樣10叫乙腈及300 μί 0.2 pg/mL内標物來製備 血漿試樣。在添加有機溶劑後，對所有試樣實施短暫渦流 且以3600 rpm離心10分鐘。將一些該等試樣用空白血漿稀 釋1.3至2倍。將一等份上清液（2S卟）轉移至丨…孔之％ 孔板中且與200 pL水/ACN (50/50, v/v)混合並注射至HpLC 中〇 將所有原液及摻加溶液保存於聚丙烯管中且在大約_8〇 °c下儲存。 在存於水中之1%羧甲基纖維素及2〇/〇吐溫80 (tween 8〇) (w/w/v)中製備微晶MBX-2982(游離鹼）及ΜΒχ_2982之鹽形 式之懸浮液。 分別以200 mg/kg經口給予5組動物MBX-2982之微晶及 鹽形式懸浮液劑里。在給藥前一晚停止食物供給且在給藥 後9小時恢復食物供給》在給藥後0.25 h、0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h、9 h、24 h、30 h及48 h採集血樣。藉由非核 准高效液相層析聯合質譜（LC-MS/MS)方法來分析該等試 樣之MBX-2982血漿濃度。 使用 WinNonlin軟體（Professional，5.0.1 版；Pharsight公 151059.doc •44· 201120034 司）來分析個別動物之血漿濃度-時間數據。使用非房室模 型（模型 200)。使用 Analyst 1.4.2 版（Applied Biosystem 公 司）中之二次回歸程式進行1/x加權將MBX-2982與内標物之 峰面積比率及濃度擬合至二次方程式（校準曲線）^隨後使 用s玄荨方程式來内插根據峰面積與内標物比率獲得之 MBX-2982在試樣中之濃度。 計算以下藥物動力學參數： 1) Cmax •最大（peak)血楽_濃度 2 ) T m a x .出現c m a x之時間 3) t1/2 :末期半衰期 4) AUC〇-t:自〇時至最後可量測濃度時之濃度-時間曲線 下面積 5) AUC〇_inf:自〇時外推至無窮大時之濃度_時間曲線下 面積 在雄性SD大鼠中經口給予單一 2〇〇 mg/kg劑量後2ΜΒχ_ 2982的平均藥物動力學參數呈現於表7中。平均企漿濃度_ 時間數據及特徵曲線呈現於表8及圖23中。 結果顯示’當給予等量時，MBX-2982之測試鹽形式之 藥物暴露量高於微MBX-2982(游離鹼）。就HC1鹽形式工、 HC1形式II、甲磺酸鹽及曱苯磺酸鹽而言，Auc〇.t之全身性 藥物暴露量分別增加2.4倍、2·9倍、1.4倍及1.7倍。 151059.doc -45- 201120034 表7 在禁食雄性SD大鼠中經口給予單一 200 mg/kg劑量後之 MBX-2982的平均藥物動力學參數（平均值土SD) 參數 MBX-2982 HC1鹽形式I HC1鹽形式II 甲磺酸鹽 曱笨磺酸鹽 tl/2 (h) 3.53 土 0.70 4.01 土 1.68 2.09 土 4.11 土 1.29 3.20 土 0.88 Tmax (h) 5.88 土 1.55 7.25 土 9.25 11.5 土 12.4 4.50 士 1.00 4.00 士 1.63 Cmax (Mg/mL) 17.4 ± 4.19 31.2 士 7.41 31.8 土 5.05 26.7 士 4.46 26.1 士 7.98 AUC〇_24 (pg*h/mL) 233 士 64.8 454 士 98.4 482 士 69.4 314 士 65.7 342 士 117 AUC〇_t (pg*h/mL) 236 土 64.6 571 土 249 679 土 208 322 士 63.6 392 士 98.2 AUC0—inf (pg*h/mL) 1.89 土 60.7 536 士 29.9 469 士 323 土 62.0 393 士 98.1 表8 在禁食雄性SD大鼠中經口給予單一 200 mg/kg劑量後之 MBX-2982在指定時間點下之平均濃度（pg/mL ;平均值士 SD) 時間(h) MBX-2982_HC1鹽形式1_HC1鹽形式Π_曱磺酸鹽_甲苯績酸鹽 0.5 3.89 土 0.95 9.79 士 3.73 8.06 士 1.61 8.52 土 0.975 10.1 土 2.45 1 6.70 士 1.27 15.5 士 3.15 16.3 土 2.77 122 土 0.839 13.0 土 3.33 2 11.6 土 1.61 24.2 土 3.35 23.7 土 4.22 18.8 土 0.904 19.7 士 2.55 4 15.8 土 3.74 31.4 土 7.10 29.2 土 3.71 26.7 土 4.39 23.6 士 6.90 6 15.9 土 4.94 28.1 士 8.46 29.1 土 8.13 21.8 土 6.48 20.3 土 11.2 9 15.0 士 5.90 23.8 土 6.99 23.2 土 5.70 18.0 ± 5.18 18.6 土 10.55 24 0.26 土 0.28 7.43 士 9.63 12.02 土 9.33 0.476 土 0.344 4.2 土 5.51 30 0.08 士 0.06 7.52 土 12.63 14.9 土 13.2 0.574 土 0.641 3.18 士 5.88 48 0.16 土 0.30 1.08 士 2.31 0.0325 土 0.082 土 0.082 0.02 士 0.01 在治療糖尿病時，隨時間在血液中維持藥物之有效濃度 從而允許每天給藥一次有利。如表8及圖23中所展示，在 給藥後24小時，微粉化游離鹼MBX-2982之血漿含量係 -46- 151059.doc 201120034 0 · 2 6 pg/m 1。相反，在24小時時，鹽形式之血衆含量係7.3 gg/ml(HCl 形式 I)、12.02 pg/ml(HCl 形式 II)、0.476 pg/ml(甲磺酸鹽）及4.2 pg/ml(曱苯磺酸鹽）。在給藥後30小 時，微粉化游離鹼MBX-2982之血漿含量係0.08 pg/m卜且 鹽形式係7.52 pg/l(HCl 形式 I)、14.9 pg/ml(HCl 形式II)、 0.574 pg/ml(甲磺酸鹽）及3.18 pg/ml(甲苯磺酸鹽）。因此在 給藥後30小時，當與MBX-2982之微粉化游離鹼形式進行 比較時，MBX-2982鹽之血漿濃度之倍數差係高於94倍血 漿濃度（HC1形式I)、186倍也漿濃度（HC1形式II)、7倍血漿 濃度（曱磺酸鹽）及40倍血漿濃度（曱苯磺酸鹽）。 給出本發明之熟習此項技術者將易於明瞭對本發明之修 改。此等修改及上述實施例及實例之所得等效内容意欲包 括在下文申請專利範圍之範圍内。 【圖式簡單說明】 圖1展示HC1鹽形式I之X射線粉末圖譜； 圖2展示HC1鹽形式I之DSC溫度記錄圖； 圖3展示HC1鹽形式I之TGA溫度記錄圖； 圖4展示HC1鹽形式I之拉曼光譜； 圖5展示HC1鹽形式II之X射線粉末圖譜； 圖6展示HC1鹽形式II之DSC溫度記錄圖； 圖7展示HC1鹽形式II之TGA溫度記錄圖； 圖8展示苯磺酸鹽之DSC及TGA溫度記錄圖之重疊； 圖9展示樟腦磺酸鹽之DSC及TGA溫度記錄圖之重疊； 圖10展示乙磺酸鹽之DSC及TGA溫度記錄圖之重疊； 151059.doc -47- 201120034 圖11展示HBr鹽之DSC及TGA溫度記錄圖之重疊； 圖12展示曱磺酸鹽之DSC及TGA溫度記錄圖之重疊； 圖13展示硫酸鹽之DSC及TGA溫度記錄圖之重疊； 圖14展示甲苯磺酸鹽之DSC及TGA溫度記錄圖之重疊； 圖15展示苯磺酸鹽之X射線粉末圖譜； 圖16展示樟腦磺酸鹽之X射線粉末圖譜； 圖17展示乙磺酸鹽之X射線粉末圖譜； 圖18展示HBr鹽之X射線粉末圖譜； 圖19展示甲磺酸鹽之X射線粉末圖譜； 圖20展示硫酸鹽之X射線粉末圖譜； 圖2 1展示甲苯磺酸鹽之X射線粉末圖譜； 圖22展示HC1鹽（圖譜0)之X射線粉末圖譜；及 圖23展示微粉化MBX-2982游離鹼、HC1形式I及II、及 曱磺酸鹽及甲苯磺酸鹽之平均血漿濃度相對於在雄性SD大 鼠中單一經口給予200 mg/kg劑量後之時間。 151059.doc 48-

Claims (1)

1. 201120034 七、申請專利範圍： 1 · -- S y u -乙基-2-{4-[4-(4-四唑-1-基-苯氧甲基兴噻唑_2_基]_ 八氫％啶·丨_基卜嘧啶之結晶鹽，其選自由以下組成之 群·笨磺酸鹽、樟腦磺酸鹽、乙磺酸鹽、HBr、HC1、甲 崎酸鹽、硫酸鹽及甲苯磺酸鹽。 2·如凊求項1之鹽，其具有與圖15至21之任一者中所展示 者貫質上相同之X射線粉末繞射（XRPD)圖譜； 3. 如請求項1之結晶鹽，其係結晶鹽酸鹽。 4. 如請求項3之結晶鹽，其具有與圖22中所展示者實質上 相同之XRPD圖譜； 如叫求項3之結晶鹽，其係多晶型（形式I )，其具有在約 8·8。 、 10.8。 、 16.1。 、 17.4。 、 20.4。 、 20.9。 、 21.50 、 21-7°、26.6°及28.1。之20繞射角處包含峰之}^1>1)圖譜； 6. 如响求項5之結晶鹽，其中該多晶型具有與圖丨中所展示 者實質上相同之XRPD圖譜； 7. 如請求項5之結晶鹽，其中該多晶型具有包含在約^…它 處之吸熱起始點之DSC溫度記錄圖； 8·如請求項5之結晶鹽，其中該多晶型具有實質上如圖2中 所展示之DSC溫度記錄圖； 9·如請求項5之結晶鹽，其中該多晶型具有實質上如圖4中 所展示之拉曼（Raman)光譜； 10.如請求項3之結晶鹽，其係多晶型（形式„)，其具有在約 7.8。、10.1〇、12_5〇、18.4。、19.0〇、20.8〇、23 〇〇及 23 5〇 之2Θ繞射角處包含峰之xrpd圖譜； 151059.doc 201120034 11. 如請求項1 〇之結晶鹽’其中該多晶型具有與圖5中所展 示者實質上相同之XRPD圖譜； 12, 如請求項1 〇之結晶鹽’其中該多晶型具有包含在約15〇。〇 處之吸熱起始點之DSC溫度記錄圖； 13·如請求項10之結晶鹽，其中該多晶型具有實質上如圖6 中所展示之DSC溫度記錄圖； 14.種醫藥組合物，其包含如請求項1至1 3中任一項之結 晶鹽。 15. —種製備如請求項5之結晶鹽之方法，其包括使5乙基-2-{4-[4-(4-四唑q•基-苯氧曱基）_噻唑_2基]•六氫吡啶^ 基}-嘯唆鹽酸鹽自丙酮溶液中結晶。 種製備如5月求項1G之結晶鹽之方法，其包括使5_乙基_ 2]心[4-(4-四。坐-卜基—苯氧曱基）〇塞〇坐_2·基]_六氫。比啶小 基卜密咬鹽酸鹽自視情况含有諸如乙酸乙酯或丙酮等其 他溶劑之甲醇溶液中結晶。 创：印求項1至13中任-項之結晶鹽之用途，其用於 二樂劑’供治療選自由以下組成之群之疾病：I型糖尿 丙11型糖尿病及代謝症候群。 2 U求項17之料，其巾該疾病仙型糖尿病。 • 種如請求項1至13中杯 τ5 製造藥蒯 3中任-項之結晶鹽之用途，其用於 ::樂，供用於以下目的中之一或多者:刺激騰島素 低血/萄糖依賴性騰島素分泌，降低血糖，或降 低血液甘油三酸酯含量。 兄降 20.如請求項17至19中 項之用途，其進一步包括使用 I5I059.doc 201120034 DPP IV抑制劑。 2 1.如請求項20之用途，其中該DPP IV抑制劑選自由以下組 成之群：西他列汀（skagliptin)、維達列汀（viidagUptin)、 地格列汀（denagliptin)、沙格列汀（saxagHptin)及阿格列 丁（alogliptin)。 22.如請求項21之用途，其中該DPP Iv抑制劑係西他列汀或 維達列汀。 151059.doc