TW201114765A

TW201114765A - Use of aminodihydrothiazines for the treatment or prevention of diabetes

Info

Publication number: TW201114765A
Application number: TW099130754A
Authority: TW
Inventors: Jeremy Beauchamp; Agnes Benardeau; Hans Hilpert; Cristiano Migliorini; William Riboulet; Hai-Yan Wang
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 2009-09-11
Filing date: 2010-09-10
Publication date: 2011-05-01
Also published as: JP2013503838A; CN102482268A; CN102482268B; CA2771374A1; IN2012DN01233A; US20130096107A1; US20140221360A1; WO2011029803A1; SG179034A1; EP2475658A1; US20110065695A1; AR078163A1

Description

201114765 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於胺基二氫噻畊衍生物之用途’其用於治療或預防代謝疾病，例如較佳糖尿病，尤指2塑糖尿病° 具體而言’本發明係關於以下通式化合物、或其醫藥上可接受之鹽之用途

其中 R1係（^_7-烷基或c3.7-環烷基； R2選自由以下組成之群：氫、Ci 7_烷基、鹵素、氰基及 C 1 -7-烧氧基； R3係芳基或雜芳基，該芳基或雜芳基未經取代或由i個、 2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：Ci7_烷基、鹵素、鹵素-Cm-烷基、C丨_7_烷氧基、鹵素_c]广烧氧基、氰基、羥基烷基、側氧基及苯基；其用於製備用以治療或預防糖尿病，尤指2型糖尿病之藥劑。【先前技術】式I化合物係BACE2之選擇性抑制劑。 2型糖尿病（T2D)係由來自胰腺p細胞之胰島素抵抗及胰 149787.doc 201114765 島素分泌不足從而導致血糖控制較差及高血糖症而引發（Μ Prentki及 CJ Nolan，「Islet β-cell failure in type 2 diabetes.」J. Clin. Investig. 2006，116(7), 1802-1812)。T2D患者具有增加微血管及大血管疾病及多種相關併發症（包括糖尿病性神經病變、視網膜病變及心血管疾病）之風險。2000年，估計有一億七千一百萬人患有該病況，且預計該數字到2030年將增加一倍（S Wild、G Roglic、A Green、R. Sicree及H King，「Global prevalence of diabetes」，Diabetes Care 2004，27(5)， 1047-1053)，從而使得該疾病成為主要的康護問題。T2D患病率之上升與世界人口日益增加的久坐生活方式及高能量食物攝入相關（P Zimmet、KGMM Alberti 及 J Shaw，「Global and societal implications of the diabetes epidemic」 Nature 2001， 414, 782-787)。 β細胞失效及隨之發生的胰島素分泌之急劇下降及高血糖症標誌著 T2D 之發作（M Prentki及 CJ Nolan, 「Islet β-cell failure in type 2 diabetes.」J. Clin. Investig. 2006, 116(7), 1802-1812)。多數現行治療並不阻止為明顯T2D之特徵的β細胞質量之損失。然而，GLP-1類似物、胃泌激素及其他藥劑的最近進展顯示可達成β細胞之維持及增殖，從而可改良葡萄糖耐受並延緩向明顯T2D之進展（LL Baggio及DJ Drucker，「Therapeutic approaches to preserve islet mass in type 2 diabetes」，Annu· Rev· Med. 2006, 57, 265-281)。已將Tmem27鐾定為促進β細胞增殖（P Akpinar, S Kuwajima, J Kriitzfeldt, M Stoffel, 「Tmem27: A cleaved and 149787.doc 201114765 shed plasma membrane protein that stimulates pancreatic β cell proliferation」，Cell Metab. 2005，2，385-397)及膜島素分泌(K Fukui、Q Yang、Y Cao、N Takahashi等人，「The HNF-1 target Collectrin controls insulin exocytosis by SNARE complex formation」，Cell Metab. 2005，2，373-384)之蛋白質。Tmem27 係β細胞表面因全長細胞mem27降解而組成性脫落之42 kDa膜糖蛋白。在糖尿病之DIO模型中，Tmem27在轉基因小鼠中之過表現增加β細胞質量並改良葡萄糖耐受（K Fukui、Q Yang、Y Cao、N Takahashi等人，「The HNF-1 target Collectrin controls insulin exocytosis by SNARE complex formation」，Cell Metab. 2005, 2, 373-384 ； P Akpinar, S Kuwajima, J Kriitzfeldt, M Stoffel, 「Tmem27: A cleaved and shed plasma membrane protein that stimulates pancreatic β cell proliferation」，Cell Metab. 2005，2，385-397)。此外，在齧齒類β細胞增殖分析（例如使用INS 1 e細胞）中對Tmem27實施 siRNA敲除可降低增殖率，表明Tmem27在控制β細胞質量中之作用。在活體外，BACE2基於Tmem27序列來裂解肽。密切相關之蛋白酶B ACE 1不會裂解該肽且僅選擇性抑制B ACE 1不會增強β細胞增殖。BACE1(BACE，β-位點APP-裂解酶，亦稱為β分泌酶）與阿茲海默氏病（Alzheimer disease)之致病機理及外周神經細胞中髓鞘之形成相關。

緊密同系物BACE2係膜接合天冬胺醯蛋白酶且與 Tmem27共存於齧齒類腺腺β細胞中（G Finzi、F Franzi、C 149787.doc 201114765

Placidi、F Acquati等人，「BACE2 is stored in secretory granules of mouse and rat pancreatic β cells j，Ultrastruct Pathol. 2008, 32(6)，246-251)。亦已知其能夠降解 APP(I Hussain、D PoweU、 D Howlett、G Chapman等人，「ASP1 (BACE2) cleaves the amyloid precursor protein at the β-secretase site」 Mol Cell Neurosci. 2000，16，609-619)、IL-1R2(P Kuhn、E Marjaux、A Imhof、B De Strooper 等人，「Regulated intramembrane proteolysis of the interleukin-1 receptor II by alpha-, beta-, and gamma-secretase」J. Biol. Chem. 2007, 282(16)，11982-11995)。 .【發明内容】因此，提出將抑制BACE2作為2型糖尿病之一種治療，該治療具有在前期糖尿病及糖尿病患者中維持及恢復β細胞質量並刺激胰島素分泌的潛力。因此，本發明之一目標係提供選擇性BACE2抑制劑。此等化合物可用作治療活性物質尤其用於治療及/或預防與BACE2抑制相關之疾病。本發明化合物超過業内已知之化合物，此乃因其係 BACE2之強選擇性抑制劑。與業内已知化合物相比，預計本發明化合物具有增強之治療潛力，且可用於治療及預防糖尿病（較佳2型糖尿病）、代謝症候群及多種代謝病症。除非另有說明，否則陳述下列定義來闡釋並定義用於闡述本發明之各術語的含義及範圍。術語「鹵素」係指氟、氯、溴及碘，其中氟、氯及溴較佳，且氟及氣更佳。術語「低碳烷基」或「（^_7-烷基」（單獨或呈組合形式） 149787.doc 201114765 表示具有1個至7個碳原子之直鏈或具支鏈烷基，較佳具有 1個至6個碳原子之直鏈或具支鏈烷基，且尤佳具有丨個至4 個碳原子之直鏈或具支鏈烷基，直鏈及具支鏈Ci7烷基之貫例係曱基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基第三丁基、異構戊基、異構己基及異構庚基，較佳為甲基及乙基，且最佳為甲基。術語「低碳烷氧基」或「〇1^烷氧基」係指基團R，_〇_ ，其中R·係低碳烷基且術語「低碳烷基」具有先前所給出之意義。低碳烷氧基之實例係甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基及第三丁氧基，較佳為甲氧基及乙氧基。術語「低碳鹵代烷基」或「鹵素_Ci_7_烷基」係指如上文所定義之低碳烷基，其中低碳烷基之至少—個氫原子由鹵素原子、較佳m最佳㈣代4中較佳低碳齒代烷基係三氟甲基、二氟曱基、三氟乙基、2,2_二氟乙基、氟甲基及氣甲基，其中三氟甲基或二氟甲基尤佳。術語「低碳_代烷氧基」或「鹵素-(：1_7_烷氧基」係指如上文所定義之低碳烷氧基，其中低碳烷氧基之至少一個氫原子由函素原子、較佳氟或氯、最佳氟替代。其中較佳鹵化低碳烷氧基係三氟曱氧基、二氟甲氧基、氟甲氧基及氯甲氧基，其中三氟甲氧基尤佳。術語「低碳羥基烷基」或「羥基_Ci_7_烷基」係指如上文所定義之低碳烧基，其中低碳烧基之至少一個翁 ILJ乳席子由經基替代。其中較佳低碳羥基烷基係羥基甲基或羥基乙基。 149787.doc 201114765 術語「芳基」係指具有6個至14個碳原子、較佳6個至個碳原子之芳香族單環狀或多環狀環系統。較基及萘基，其中笨基最佳。 “本術°°雜芳基」係指芳香族或部分不飽和之5員戈6員裒/、03至少一個選自氮、氧及/或硫之雜原子/且可另外包含1個或3個選自氮、氧及/或硫之原子，例如_ 基、。"基、嘧啶基、嗒畊基、6_側氧基_丨，6_二氫嗒：基、5-側氧基_4’5_二氫吡畊基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、。惡唾基、異嚼唾基…惡二嗤基…塞二唾基、四唾基、比坐基米。坐基、二。圭基及嚷唾基。術語「雜芳基」另外係指包含兩個5員或6員環的二環狀芳香族或部分不飽和基團’其中一個或兩個環可含有！個、2個或3個選自氮、& 或硫之原子’例如喹啉基、異喹啉基、咔啉基、吡唑并 [l，5-ap比咬基、味唾并⑴^^比咬^。塞吩并[2,3_十比咳基、喹噁啉基、苯并[b]噻吩基、苯并噻唑基、苯并三唑基、吲哚基、吲唑基及3,4_二氫“沁異喹啉基。較佳雜芳基係噻吩基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、吡啶基 '嘧啶基、吡畊基、異喹啉基、噻吩并[2,3<]。比啶基及苯并㈨噻为基八中噻吩基、噁唑基、。比唑基、吡啶基、嘧啶基及。比11井基更佳且。比啶基最佳。式I化合物可形成醫藥上可接受之鹽。術語「醫藥上可接文之鹽j係指彼等保持游離鹼或游離酸之生物有效性及性夤的鹽，其在生物上或在其他方面係期望的。較佳地，式I化合物之醫藥上可接受之鹽係與以下酸之酸加成鹽·· 149787.doc 201114765 生理上相容之無機酸’例如鹽酸、硫酸、亞硫酸或填酸；或有機酸，例如甲石黃酸、乙續酸、對甲苯橫酸、甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、乳酸、三氟乙酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸、丙二酸、酒石酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、琥珀酸或水楊酸。尤佳的式j化合物之醫藥上可接受之鹽係諸如鹽酸鹽、甲酸鹽或三氟乙酸鹽等酸加成鹽。式I化合物亦可經溶劑化，例如經水化。溶劑化可在製造過程中達成或可因（例如）起初無水之式丨化合物之吸水性質（水化）而發生。術語「醫藥上可接受之鹽」亦包括生理上可接受之溶劑合物。「異構體」係具有相同分子式但其原子之結合性質或序列不同或其原子在空間排布上不同的化合物。Μ 間排布上不同之異構體稱為「立工體…構體」。彼此不為鏡像之立體異構體稱為「非對映異構體」，且^ 之立體異構體稱為「對映異構體」，或兄像體。結合至4個不相同取代基 / 冉.，，' 光學異構基之崚原子稱為「對掌性中心。詳細而言’本發明係關於下式化合物、」受之鹽之用途上可接

149787.doc -10. 201114765 其中 R1係匚!·7-烷基或c3.7-環烷基； R2選自由以下組成之群：氫、Ck7_烷基、函素、氰基及 Ci-7-院氧基； R係芳基或雜芳基，該芳基或雜芳基未經取代或由丨個、 2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：Ci-7_烷基、鹵素、鹵素-Cm-烷基、Cw烷氧基、鹵素_Ci 7_ 烷氧基、氰基、羥基-C】.7-烷基、側氧基及苯基；其用於製備用以治療或預防代謝病症、較佳糖尿病之藥較佳地，本發明係指式〗化合物之如上文所定義之用途’其中R1係曱基或乙基。式I化合物（其中R2選自由以下組成之群·· Ci-7·烷基、鹵素、氰基及(^·7-烷氧基）之用途亦較佳。更佳者係式丨化合物之如上文所定義之用途，其中R2係鹵素。其他較佳者係式I化合物之如上文所定義之用途，其中 R係雜芳基，6玄雜芳基未經取代或由1個、2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：Cl_7_烷基、鹵素、鹵素CM· 烷基C〗·7-烷氧基、鹵素-Cw-烷氧基、氰基 '羥基_Ci.7_ 烧基及苯基。更佳地，以、選自由以下組成之群之雜芳基：噻吩基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡畊基、異喹啉基、噻吩并[2,3_c]吡啶基及苯并⑻噻 2個或3個選自由以下 _素、鹵素-Cw-烷基吩基’該雜芳基未經取代或由1個組成之群之基團取代·· Ci 7_烷基、 149787.doc -11 201114765 及苯基。尤佳者係式I化合物（該化合物係5-氯-吡啶-2-甲酸[3- ((S)-2 -胺基-4-甲基-5,6 -二氫 _4H-[ 1，3]°塞 p井 _4_ 基）_4_ 氣-苯基]-醯胺（化合物J))或其醫藥上可接受之鹽用於製備用以治療或預防代謝病症、較佳糖尿病之藥劑的用途。亦較佳者係式I化合物之如上文所定義之用途，其中R6 係苯基’該苯基未經取代或由1個、2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：C] 7_烷基、鹵素、鹵素_Cl7-烷基、C,·7-烷氧基、鹵素_Ci 7_烷氧基、氰基、羥基_Ci 7_烷基及苯基。如上文所定義式I化合物用於製備用以治療或預防2型糖尿病之藥劑的用途尤佳。本發明亦係指下式化合物

其中 R係^·7-烧基或C3·7·環燒基； R2選自由以下組成之群：箭 C…基； c…、…氛基及 R3係芳基或雜芳基，該芳基 ^ ^ ^ 土飞雜方基未經取代或由1個、 2個或3個選自由以下組其七本上主〈群之基團取代：C丨j-烷基、函素、鹵素-Ck7-烷基、c ^ 烷氧基、齒素-(：丨_7· 149787.doc 201114765 院氧基、氰基、經基-Cl.7-院基、側乳基及苯基；或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療或預防代謝疾病，較佳用子乂住用於治療或預防糖尿病，尤指2型糖尿病。此外，本發明係關於如上文所定蠤田吓疋我用於治療或預防代謝疾病之式I化合物’其中R1係曱基或乙基。本發明進-步係關於如上文所定義用於治療或預防代謝疾病之式I化合物，其中R2選自由以下組成之群·· Cl·?·烷基、鹵素、氰基及(^_7-烷氧基，更具體而言，其中R2係齒 t。、具體而言’本發明係指如上文所定義用於治療或預防代謝疾病之式I化合物，其中R6係雜芳基，該雜芳基未經取代或由1個、2個或3個選自由以下組成之群之基團取代： Cm-烷基、鹵素、鹵素-Cl_7_烷基、Ci_7_烷氧基、鹵素_Cy 燒氧基、氰基、羥基-C!—7·烷基及苯基。更具體而言，本發明係關於如上文所定義用於治療或預防代謝疾病之式1 化合物，其中R係選自由以下組成之群之雜芳基：噻吩基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡畊基、異喹啉基、噻吩并[2,3-c]吡啶基及苯并[b]噻吩基，該雜芳基未經取代或由1個、2個或3個選自由以下組成之群之基團取代.c丨·7·烷基、鹵素、鹵素-C丨_7·烧基及苯基。本發明進一步係關於如上文所定義用於治療或預防代謝疾病之式I化合物，該化合物係5-氯比咬_2_曱酸[3_((s)-2_ 胺基_4_甲基二氫·4Η-[1，3]噻畊-4-基）-4_氟_苯基]_醯 149787.doc • 13 201114765 本發明亦係關於如上文所定義用於治療或預防代謝疾病之式I化合物，其中R6係苯基，該苯基未經取代或由1個、 2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：Ci-7-烷基、南素、鹵素-Cy烷基、C,_7-烷氧基、鹵素-Cu-烷氧基、筑基、羥基-Chr烷基及苯基。尤佳者係具有下式之式I化合物

其用於治療或預防代謝疾病，較佳用於治療或預防糖尿病’尤指2型糖尿病》此外，本發明係關於式j之新穎化合物，其具有下式

其中 R1係乙基； R選自由以下組成之群烧氧基； R3係芳基或雜芳基，該 .C|·7-烷基、鹵素、氰基及Ci 2個或3個選自由該芳基或雜芳基未經取代或由丨個、以下組成之群之基團取代： • Ci-7-院 149787.doc 201114765 基2 _素、鹵素-Cy烷基、Cl 7_烷氧基、_素、c"、烷氧基、氰基、羥基-Cm-烷基、側氧基及苯基；或其醫藥上可接受之鹽。車佳者係如上文所定義之式Ia化合物，其中尺2係鹵素，且彼等R2為氟之式la化合物最佳。亦較佳者係本發明之式la化合物，其中r3#雜芳基，$ 雜芳基未經取代或由丨個、2個或3個選自由以下組成之^ 之基團取代：Cl.7-烷基、幽素、画素_Ci7_烷基、烷氧基、鹵素_Cl-7_烧氧基 '氰基、經基{Μ·烧基及笨基。更佳地，R3係選自由以下組成之群之雜芳基：噻吩基:喔唾基…S絲、n基、㈣基、㈣基、則基、異= 啉基、嗟吩并[2,3-cP比啶基及苯并[b]a塞吩基，該雜芳基未經取代或由1個、2個或3個選自由以下纟且成之群之基團取代：CN7_烷基、鹵素、鹵素_Ci 7·烷基及苯基。其他較佳式la化合物係彼等R6為苯基者，該苯基未經取代或由1個、2個或3個選自由以下組成之群之基團取代： Cw-烷基、鹵素、鹵素-c丨γ烷基、c丨·7_烷氧基、鹵素<丨 7_烷氧基、氰基、羥基-C^-烷基及笨基。本發明之尤佳式la化合物如下： 5-氯-吼口定-2-甲酸[3-((S)-2-胺基_4_乙基_5,6_二氮_4H_ [1,3]°塞11 井-4-基）-4-氣-苯基]-醯胺、吼啶-2-甲酸[3-((S)-2-胺基_4_乙基_5,6_二氯嗟畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 N-[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6_ 二氫·4Η_π，3],ρ井 _4_ 基 149787.doc -15· 201114765 氟-苯基]-4-氣-苯曱醯胺、 5_氣_ °比喷_2-曱酸[3-((S)-2 -胺基-4-乙基-5,6 -二鼠-4H- [1.3] 噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 5- 氣-嘧啶-2-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 3-二敦甲基-°比。定-2-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5，6-二氮_ 4H-[1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 3- 苯基-吡啶-2-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 4- 鼠-°比0定-2-甲酸[3-((S)-2 -胺基-4-乙基-5，6-二氮-4Η_ [1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 6 -甲基-°比。定-2 -曱酸[3-((S)-2 -胺基-4 -乙基-5，6 -二氣-4 Η - [1.3] 噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 3，6-二氮-。比。定-2 -曱酸[3-((S)-2 -胺基-4-乙基- 5,6-二氮_ 4H-[1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 6- 氯-3-三氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、異喹啉 _3_ 曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氩-4H-[1，3] 噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、噻吩并[2,3-c]吡啶-7-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1,3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、苯弁[b]π塞吩-2-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-· — SL -4H-[1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 5- 曱基-°塞吩-2-甲酸[3-((S)-2 -胺基-4-乙基- 5,6 -二氮-4H- 149787.doc -16- 201114765 [1，3]售畊-4-基）_4_氟_苯基]-醯胺、甲基-1H-吡唑·3-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫_ 4Η_Π，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 2-甲基-噁唑_4_甲酸[3_((δ)·2-胺基-4-乙基-5,6-二氫·4Η-[1，3]°塞畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、及 2-曱基-噻唑_4_甲酸[3_((S)_2-胺基_4·乙基_5,6_二氫_4H_ [1’3]。塞畊-4-基）_4_氟_苯基]•醯胺、或其醫藥上可接受之鹽。式la化合物之醫藥上可接受之鹽亦個別地構成本發明之較佳化合物。尤佳者係式la化合物與HC1、曱酸及三氟乙酸 (CFsCOOH)之鹽，即氯化物鹽、曱酸鹽及三氟乙酸鹽。最佳者係式la化合物與甲酸之鹽，即曱酸鹽。在該類中，以下鹽尤佳： 5·氯 _0比0定甲酸[3-((S)-2 -胺基-4-乙基- 5,6 -二氫 _4η· [1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽、 0比。定-2-曱酸[3_((S)-2 -胺基-4-乙基- 5,6 -二氫-4H-[l，3]。塞畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺與曱酸形成之鹽、 N-[3-((S)-2-胺基 _4-乙基-5,6-二氫-4H-[1,3]噻畊-4-基）_4_ 氟-苯基]_4-氯-苯甲醯胺與甲酸形成之鹽、 5 -氣-。比崎-之-曱酸[3-((S)-2 -胺基-4-乙基- 5,6-二氫 [1,3]噻畊-4-基）-4_氟-苯基]-醯胺與曱酸形成之鹽、 5_氣-嘧啶-2-甲酸[3-((S)-2_胺基乙基_5,6-二氫_4H_ Π，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽、 149787.doc -17· 201114765 3- 二氟甲基-η比啶_2_甲酸[3_((S)_2_胺基_4_乙基_5,6_二氫_ 4H-[1，3]°塞啡-4·基）_4_氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽、 3_苯基比咬-2-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]°塞啡-4-基）_4_氟_苯基卜醯胺與甲酸形成之鹽、 4- 氯-。比咬-2-曱酸[3_((S)-2_胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]。塞11 井-4-基）_4·氟·苯基]•醯胺與甲酸形成之鹽、 6_曱基比啶-2-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氮-4H-[1，3]。塞》井-4-基）_4•氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽、 3,6-二氯-1«比啶_2-曱酸[3_(〇2_胺基_4_乙基_5,6_二氫-4Η·[1，3]°塞畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺與曱酸形成之鹽、 6-氯-3-三氟甲基_吡啶甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻畊_4_基）_4_氟-苯基]•醯胺與曱酸形成之鹽、異喹啉-3-甲酸[3_((s)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3] °塞畊-4-基）-4-氟-苯基]•醯胺與曱酸形成之鹽、 °塞吩并[2,3-c]。比啶_7-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻u井_4_基）_4_氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽、苯并[b]噻吩·2_曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻η井-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽、 5 -曱基-u塞吩_2_甲酸[3-((S)-2 -胺基-4-乙基-5,6 - 一虱-4H-[1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基l·醯胺與曱酸形成之鹽、 1_曱基-111-吡唑-3-甲酸[3-((8)-2-胺基-4-6基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻畊_4_基）-4-氟-苯基]-醯胺與曱酸形成之鹽、 2_甲基-噁唑-4-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基_5,6-二氫-4H- 149787.doc -18· 201114765 [1，3]噻啤_4-基）_4-氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽、及 2-甲基-噻唑_4_曱酸[3_(〇2_胺基-4-乙基-5,6-二氫-411-[1，3]°塞11井-4-基）-4-氟-苯基]-醢胺與甲酸形成之鹽。熟習此項技術者將瞭解，式I化合物可以互變異構體形式存在’例如以下述互變異構體形式存在：

lb 本發明中涵蓋所有互變異構體形式^ 式I化合物具有一個不對稱碳原子且可以光學純對映異構體及對映異構體之混合物(例如外消旋異構體)之形式存在人光學活性形式可藉由（例如）外消旋異構體拆分、不對 =。成或不對稱層析（用對掌性吸附劑或洗脫劑層析）來獲付。本發明涵蓋所有該等形式。本發明亦係關於劍4 l L & 表以如上文所定義之式la化合物之方法，該方法包含 a)使式II之胺

方案1中所定義 (其中R2係如技術與式ΠΙ之羧酸且Prot係胺基保護基團 ) 149787.doc 201114765

III

RV (其中R3係如技術方案丨丨中所定義）在偶合試劑存在鹼性條件下反應以獲得式IV化合物

及藉助酸脫除式IV化合物之保護基，獲得式^化合物

(其中R至R係如技術方案11中所定義），及若需要 b)將所獲得化合物轉化為醫藥上可接受之鹽。術語「胺基保護基團」係指諸如以下等保護基團： Bz(笨甲醯基）、Ac(乙醯基）、Trt(三苯甲基）、b〇c(第三丁氧基羰基）、CBz(苄氧基羰基或Z)、Fm〇c(9_苐基曱氧基羰基）、MBz(4-曱氧基CBz)、P〇c(2-苯基丙基（2)-氧基羰基）及Bpoc 聯苯]-4-基-1-甲基乙氧基）羰基]。具體而言’胺基保護基團係Boc(第三丁氧基羰基）。適宜偶合劑係碳化二亞胺或脲鏽鹽，例如N，N，_幾基二咪哇（CDI)、N，Nf-二環己基碳化二亞胺（DCC)、n-(3-二节基胺基丙基）-N'-乙基-碳化二亞胺-鹽酸鹽（EDCI)、四氟硼 149787.doc •20· 201114765 酸0-(苯并三唑-1-基）-N，N，N，，N，-四曱基脲鏽鹽（TBTU)及1-[雙（二甲基胺基）亞甲基]-111-1，2,3-三唑并[4,5-15]吡啶鑌-3-氧化物六氟鱗酸鹽（HATU)。術語「在鹼性條件下」意指存在鹼，較佳為烷基胺（例如二異丙基乙基胺（DIEA)或三乙基胺（TEA))或三級胺（例如N-甲基嗎淋或4-(二甲基胺基）-吡啶）。在適宜溶劑（例如N，N-二甲基甲醯胺（DMF)或二甲基乙醯胺（DMAc))中在介於〇。(：與環境溫度之間之溫度下實施反應。用於脫除保護基之較佳酸係硫酸或鹽酸，更佳為存於溶劑（例如醚、較佳乙醚或1，4_二噁烷）中之鹽酸、或純三氟乙酸或甲酸’最佳為存於乙腈與水之混合物中之甲酸。用於製備本發明之式I化合物之方法及程序的更詳細說明可參見各實例。如上文所述，本發明之式I或Ia化合物可用作治療與 BACE2抑制相關之疾病的藥劑。如下文所述，本發明之式I或Ia化合物可用於在糖尿病患者及非糖尿病患者（其患有葡萄糖耐受不良或處於前期糖尿病狀況中）中維持及恢復β細胞功能並刺激胰島素分泌。其可用於預防1型糖尿病發作或治療該病或延遲或阻止2型糖尿病患者對胰島素療法之需要。式〗化合物可進一步用來改善而肤島素血症（其通常發生於糖尿病或前期糖尿病患者中）並降低與代謝症候群相關之風險。因此’與BACE2活性抑制相關之疾病」之表述意指諸 149787.doc -21 - 201114765 如代謝及心血管疾病等疾病，具體而言為糖尿病，更具體而5為2型糖尿病、妊娠性糖尿病、空腹葡萄糖異常、葡萄糖耐文不良、胰島素抵抗、前期糖尿病、代謝症候群、 1型糖尿病、糖尿病併發症（包括糖尿病性神經病變、糖尿病改視網膜病變及糖尿病性神經病變广慢性腎病、血脂異:、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、高血壓及其他代謝及心血S病症。在較佳態樣中，「與BACE2活性抑制相關之疾病」之^述係關於糖尿病（尤其Π型糖尿病）' 葡萄糖耐受不良、前期糖尿病、代謝症候群。更佳地，「與BACE2活丨抑制相關之疾病」之表述係關於糖尿病，最佳為^ _ 尿病。本發月亦係關於包含如上文所定義式⑽合物及醫藥上可接受之載劑及/或佐劑之醫藥組合物。更特定而言，本發明係關於用於治瘃盥Ώ 化縻與B ACE2活性抑制相關之疾病的醫藥組合物。 ’ 此外’本發明係關於用作藥劑，尤其用作治療或預防與 [生抑制相關之疾病的藥劑的如上文所定義之式la 化合物。尤佳者係用於艫用於糖尿病，尤指2型糖尿病中之式“匕合物。〇物及其醫藥上可接受之鹽可用作(例如)呈用於經腸、非經腸或局部投與之醫藥製劑形式的藥劑。其可依下列方式投與：例如，u m 以（例如）錠劑、包衣錠劑、糖衣藥丸、硬及軟明膠膠量、^ 最/谷液、乳液或懸浮液形式經口投與，以（例如）栓劑形式、左直腸奴與’以（例如）注射溶液或 149787.doc -22· 201114765 輪注溶液形式非經腸投與，或以（例如）軟膏、乳相〆/萬丨开> 式局部投與。經口投與較佳。 :等醫藥製劑之製備可藉由任一熟習此項技術者熟習之有=述式1化合物及其醫藥上可接受之鹽（視情況與二“療價值之物質組合)連同適宜的無毒惰性治療相谷性固體或液體載劑材料及（若需要）常用醫侖製劑投與形式。 ’成盍適宜載劑材料不僅可為無機載劑材料，亦可為有機載劑材料。因此，例如，乳糖、玉米殿粉或其衍生物、滑石私更月曰酉夂或其鹽均可用作鍵劑、包衣錠劑、糖衣藥丸及硬明膠膠囊之載劑材料。用於軟明膠膠囊之適宜載劑材料係（例如）植物油、壞、脂肪及半固體及液體多元醇（端視活性成伤之性質而定，然而，在軟明膠膠囊之情形中可能無需載劑）。用於製備溶液及糖漿之適宜載劑材料係（例如）水夕元醇、蔗糖、轉化糖及諸如此類。用於注射溶液之匕且载劑材料係（例如）水、醇、多元醇、甘油及植物油°用於检劑之適宜載劑材料係（例如）天然或硬化油、增1、脂肪及半固體或液體多元醇。用於局部製劑之適宜載劑材料係甘油酯、半合成及合成甘油酯、氫化油、液體蠟、液體石蠟、液體脂肪醇、類固醇、聚乙二醇及纖維素衍生物。亦可考慮使用常用的穩定劑、防腐劑、潤濕劑及乳化劑、一致性改良劑、矯味劑、用於改變滲透壓之鹽、緩衝劑物質、增溶劑、著色劑及掩蔽劑及抗氧化劑作為醫藥佐 149787.doc • 23- 201114765 式i化合物之劑量可在寬範圍内變化，此劑量端視擬受控疾病、患者年齡及個體病症及投與方式而定，且當然應滿足每一特定情況下之個體需要。對於成年患者，可考慮使用約1 mg至1000 mg ’尤指約1 ^^至3〇〇 mg之日劑量。端視疾病之嚴重程度及精確藥物代謝動力學分佈而定，該化合物可以一或若干日劑量單位（例如以丨至3個劑量單位）投與。 mg至 500 mg ' 較佳 1 mg 該等醫藥製劑可方便地含有約！ „^至5〇〇11^ '較佳至100 mg式I化合物。

其中 R 係C1-7-院基或c R2選自由以下如θ 3·7·環烷基； R2選自由以下組成之群：氫 C 1 -7-炫·氧基； R3係芳基或雜芳基， .氣' C|_7-烧基、鹵素、氰基及該芳基或雜芳基未經取代或由1個 149787.doc -24- 201114765 2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：c^_烷基、鹵素、_素-Cm-烷基、Ci 7_烷氧基、齒素_Ci 7_ 烷氧基、氰基、羥基-C,·7·烷基、側氧基及苯基；或其醫藥上可接受之鹽。在對6週齡Zucker糖尿病肥胖（ZDF)大鼠實施4週治療之長期研九中3平估式I化合物對諸如血糖、血装騰島素、姨島素抵抗及胰島素敏感性等代謝參數之效應。使用長效 GLP-1類似物利拉魯肽（Liraglutide)(NN2211，CAS登記號 204656-20-2)作為陽性對照。利拉魯肽已在美國及德國以商品名Victoza上市用於治療2型糖尿病^ 3週治療後，對禁食過夜的大鼠實施口服葡萄糖耐受測試（〇GTT)。在3至4週治療之後且在麻醉後，對ZDF大鼠（每天2/3隻）實施胰腺手術並用低/高葡萄糖介質進行原位灌注。該研究之結果論述於實例2 1中。總之，在經口治療1 7天後，式I化合物（實例1)降低了 ZDF大鼠之刺激後葡萄糖濃度且因此改良長期治療後之胰腺功能，如藉由葡萄糖耐受之改良所量測。在經口治療17天後及最後一次投藥後18 h(長期效應），式I化合物進一步使ZDF大鼠之胰島素濃度（葡萄糖刺激後達峰值並持續長達60分鐘）增加。用式I化合物進行長期治療不會影響肝（HOMA)或外周（MATSUDA)胰島素抵抗指數。相反’用式I化合物治療可改良ΗΟΜΑ β細胞指數。用式I化合物治療可降低基礎胰腺胰島素分泌並因此使胰腺胰島金分泌曲線正常化至6週齡非糖尿病ZDF大鼠之狀況。因 M9787.doc •25· 201114765 此，式i化合物可用【實施方式】於保護騰腺功能並預防高姨島素血广以下實例用於更為詳盡地闡釋本發明。然而，該等實例並非意欲以任何方式限制本發明之範圍。歹縮寫： DIEA = :異丙基乙基胺，DMF=N，N_二甲基甲醯胺， HATU=1-[雙（二甲基胺基）亞甲基]_1Η·12,3三唑并 °比啶鑌-3-氧化物六氟磷酸鹽，HPLC=高效液相層析， LDA =二異丙基醢胺經’ MS=質譜且THF=四氫呋喃。實例1

149787.doc -26 - 201114765 中間體5-氣-吡啶-2-甲酸（3-乙酿基_4_氟·苯基）_醯胺（A)之合成向 5-氯比咬-2-羰基氯（30.5 g，如 h.G. Brunner, EP 353 187，1990中所述來製備）存於THF (75〇 mi)中之溶液中 . 相繼添加丨_(5胺基-2-氟-苯基）_乙酮（25.3 g，如M.Q.

Zhang等人，J· Heterocyclic Chem· 28，673, 1991 中所述來製備）及NEt3 (18.4 g)，且使溫度保持在2〇〇c與3〇〇c之間。將懸浮液在22°C下攪拌2 h並實施蒸發。使殘餘物在乙酸己S旨與飽和NaHC〇3水溶液之間分配，將有機層用水洗滌，進行乾燥並蒸發。將殘餘物與戊烷一起研磨，過濾並使殘餘物乾燥，得到淺褐色固體狀標題化合物（48 〇 g， 99%) » MS (ESI): m/z=293.0 [M+l]+。中間體5-氣·吡啶-2-甲酸[4-氟-3-(1-羥基-1_甲基-烯丙基苯基]-酿胺（B)之合成在-78°C下向5-氯比啶-2-甲酸（3-乙醯基-4-氟-苯基）_醯胺（47.7 g)存於THF (850 ml)及乙醚（850 ml)中之懸浮液中添加乙烯基氯化鎂（1.7 Μ，存於THF中，240 ml)，且使溫度保持在-6 0 °C以下。在-6 0 °C下將混合物攪拌1匕且 • 在_2〇°C下攪拌3 h並且用飽和NH4C1水溶液（150〇加）驟 • 冷。用乙酸乙酯（250 ml)稀釋混合物’分離各層並再用乙酸乙S旨萃取水層。將合併的有機層用飽和NaHC〇3水溶液 (600 ml)及鹽水（600 ml)洗滌，乾燥並蒸發。將殘餘物溶解於彿騰乙酸乙醋（80 ml)中’並再次進行蒸發直至獲p 濃稠懸浮液。將懸浮液用戊烷/乙醚（3:1, 20 ml)之混合物 149787.doc •27- 201114765 及純戊烷（50 ml)稀釋，進行過濾並使殘餘物乾燥，得到淺黃色固體狀標題化合物（40.0 g，77%)。MS (ESI): m/z=3 19· 1 [Μ-1 ]- 0 中間體5-氯-吡啶-2-甲酸[3-((Ε)-3-甲脒基硫烷基甲基_ 丙烯基）-4-氟-苯基】·醯胺與HC丨形成之鹽（C)之合成在22°C下將硫腺（11 ·11 g)及5-氣比。定-2-甲酸[4-1 -3-(1-經基-1-甲基-坤丙基）-苯基]-酿胺（46.8 g)存於HC1存於乙酸 (1M，260 ml)中之溶液中的溶液攪拌30 min且在4(TC下攪拌3 h。對混合物實施蒸發，將殘餘物與曱苯一起共蒸顧並與乙鍵（600 ml) —起研磨。將懸浮液過濾並使殘餘物乾燥，得到淺褐色固體狀標題化合物（54.2 g，90。/<〇。MS (ESI): m/z=379.2 [M+l]+。 5-氣-吡啶-2-甲酸丨3-((S)-2-胺基-4-甲基-5,6-二氫-4H-【1，3] 嗟喷-4-基）-4-|L-苯基】-酿胺（化合物J)之合成

在〇°C下向5-氯-吡啶_2·曱酸[3_((E)_3_曱脒基硫烷基小甲基-丙烯基）-4-氟-笨基]-醯胺與HC1形成之鹽（54.8 g)存於三氟乙酸（275 ml)中之褐色溶液中添加三氟甲磺酸（3 15 ml)並在22 C下持續檀拌3 h。對混合物實施蒸發並使殘餘物在飽和NajCCh水溶液與乙酸乙酯之間分配。用乙酸乙酯 149787.doc •28- 201114765 將水層萃取兩次並用鹽水洗條合併的有機層。由於在洗務程序期間產物已沉澱出來，因此將懸浮液過濾，得到灰白色固體狀外消旋標題產物（4 g，1〇%p將濾液之 - 各層分離’將有機層乾燥且蒸發至大約400 ml之體積並過濾、。將殘餘物用乙酸乙酯及乙醚洗滌並乾燥，得到第二部分灰白色固體狀外消旋標題化合物（22.6 g, 45%)。 MS (ESI): m/z=379.2 [M+I]+。在對掌性HPLC 管柱（Chiralpak AD，20 μΜ，250x 110 mm)上使用乙腈/異丙醇（8 5 :1 5 )分8批次對外消旋異構體實施拆分’得到較快洗脫產物5-氣-〇比π定甲酸[3 -((R)· 2-胺基-4-甲基-5,6-二氫-4Η-[1，3]噻畊_4-基卜4氟_苯基]_ 醯胺（12.8 g)及較慢洗脫產物5-氣-吡啶_2_甲酸[3_((s)_2_ 胺基-4-甲基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻畊_4_基），4_氟_苯基]_醯胺（12.0 g)。 149787.doc •29- 201114765 實例2-19

中間體M2-氟-5-硝基苯基）丙q酮（D)之合成在- 20C下將1-(2·氟苯基）丙-；[_酮（54 g，355 mmol)逐滴添加至硫酸（1 80 mL)中，隨後以使溫度決不超過-1 51之此 •30- 149787.doc 201114765 一速率將發煙硝酸（27 mL)添加至該混合物中。將該混合物攪拌10分鐘，然後倒入冰中，用乙酸乙酯萃取，用H2〇、 NaHC〇3水溶液及鹽水洗滌，乾燥（Na2s〇4)並蒸發。經由二氧化矽（戊烷/乙酸乙酯，10 : 1)對粗製材料實施層析，得到標題產物（40 g, 58%)。MS (ESI): m/z=198.0 [M+l]+。中間體（R)-2-甲基·丙烷-2-亞磺酸[1-(2-氟-5-硝基苯基）_ 丙-(E)-亞基]-醯胺（E)之合成將 1-(2-氟-5-硝基苯基）丙-1-酮（41.5 g，211 mmol)及（R)-(+)-第三丁基亞磺醯胺（51.0 g，421 mmol)溶解於THF (250 mL)中’隨後在室溫下添加乙醇鈦（iv) (154 g，675 mmol) ’在70°C下將該混合物授拌3小時並冷卻至室溫。用鹽水（400 ml)處理混合物，將懸浮液攪拌1〇 min並經由代卡利特（dicalite)過濾。將各層分離，用乙酸乙酯萃取水層’將合併的有機層用水洗蘇，乾燥並蒸發。在二氧化石夕上使用戊烷/乙酸乙酯（5:1)對殘餘物實施層析，得到標題產物（50 g，78%)。MS (ESI): m/z=301.0 [M+l]+。中間體3-((R)-l，l-二甲基乙基亞磺酿胺基）-3-(2-氟-5-硝基苯基）戊酸（S)-第三丁基酯（F)之合成在-78°C 下將 tBuOAc (40.0 g，351 mmol)存於 THF (200 mL)中之溶液添加至LDA溶液（2 Μ 200 mL)中，在相同溫度下將該混合物攪拌30分鐘，隨後將存於THF (200 mL)中之三異丙氧基氣化鈦（IV) (92.0 g，3 53 mmol)添加至該混合物中。半小時後，將（R)-2-甲基-丙烷-2-亞磺酸[1-(2-氟-5-石肖基-苯基）-丙-(E)-亞基]-醯胺（30.0 g，100 mmol)添加至混 I49787.doc •31 · 201114765 合物中，在-78°C下將該混合物攪拌1小時且隨後倒入 NH4C1水溶液中’同時進行冰水浴冷卻。將混合物用乙酸乙酯稀釋，過濾，將有機層用鹽水洗滌，經NhSOi乾燥，並藉由層析（戊烷/乙酸乙酯，3 : 1}來純化，得到標題化合物（20.9 g，61%)。MS (ESI): m/z=417.0 [M+l]+。中間體（S)-3-胺基-3-(2-氟-5-確基苯基）戊酸（G)之合成將3-((R)-l，l-二甲基乙基亞磺醯胺基）_3_(2_氟_5_硝基苯基）戊酸（S)-弟二丁基醋（20.9 g，50.0 mmol)溶解於 HC1(300 mL，4 Μ，存於1，4-二噁烷中）中，隨後在9〇。〇下將混合物授拌1 5小時。將混合物冷卻至室溫且在減壓下進行濃縮。將褐色油狀物與醚一起研磨，得到標題產物（1〇〇 g， 66.0%)。MS (ESI): m/z=257.0 [M+l]+。中間體（S)-3-胺基-3-(2-氟-5-蝴*基苯基）戊-i_醇（η)之合成將（S)-3-胺基-3-(2-氟-5-硝基苯基）戊酸（10〇 g，39〇 mmol)懸浮於THF (100 mL)中並用硼烷（200 mL，1 M，存於THF中）進行逐滴處理。在室溫下將混合物攪拌3〇小時且隨後倒入冰水中。將混合物用4 N氫氧化鈉水溶液鹼化至 pH=9 ’用乙酸乙酯萃取’將有機層用鹽水洗滌，經 NaaSO4乾燥並濃縮，得到標題產物（5 〇 g，6〇%)。ms (ESI): m/z=243.0 [M+l]+。中間體（S)-3-(2-氟-5-硝基-苯基）_3_異硫氰基-戊醇（][)之合成將（S)-3-胺基-3-(2-氟-5·硝基苯基）戊-^醇^力g，21.0 mmol)懸浮於甲苯（30 mL)與水（30 mL)之混合物中。在冰 149787.doc •32- 201114765 水'谷冷卻下向懸浮液中添加碳酸if (8.0 g, 58 mmol)，隨後添加二氯硫化碳（2_85 g, 25 mmol)。將混合物攪拌半小時，用乙酸乙酯（100 ml)及水（50 mL)稀釋，並將混合物過渡。將有機層用鹽水洗滌，經Na2S04乾燥並在減壓下濃縮’得到深色油狀粗製標題化合物（5 ·0 g)，其直接用於下一步驟中。中間體2-((S)-3-氣-1-乙基-1-異硫氰基-丙基）-1-氟-4-硝基-苯（K)之合成向（S)-3-(2 -氟-5-确基-苯基）-3 -異硫氰基-戍-1-醇（5.0 g，粗製）存於甲苯（50 mL)中之溶液中添加亞硫醯氯（5.0 mL， 70 mmol)及DMF (0_5 mL)且在80°C下將混合物加熱3小時。將混合物冷卻至2 2 °C ’倒入冰水中並用乙酸乙g旨萃取。將有機層用鹽水洗滌’經NasSO4乾燥且藉由層析（戊院/ 乙酸乙酯，20:1)來純化，得到標題化合物（4.0 g, 64%)。中間體（S)-4-乙基-4-(2-氟-5-硝基笨基）_5,6-二氫-4H-[1，31 噻畊-2-基胺（L)之合成在冰水浴冷卻下向2-((S)-3-氯-1-乙基-i_異硫氰基_丙基）-1-氟-4-硝基-苯（4.0 g，13 mmol)存於 THF (40 ml)中之溶液中添加存於水中之氨（26 mL，25-28%)且在室溫下將混合物攪拌6小時。用水及乙酸乙酯稀釋混合物，將有機層用鹽水洗滌，經NaaSCU乾燥且在減壓下濃縮，得到粗製禪題產物（3.0 g, 80%)。中間體[(S)-4-乙基-4-(2-氟：硝基-苯基）_5,6·二氫_4Η· [1，3】噻畊-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯（Μ)之合成 149787.doc -33- 201114765 向（S)-4-乙基-4-(2-氟_5_硝基苯基）_5 6_二氫々H u y噻畊-2-基胺（3.0 g，10.6 mmol)存於二氣甲烷（5〇 mL)中之溶液中添加 Et3N (3.2 g，31.8 mmol)及 b〇c20 (2.78 g，12·7 mmol)且在22 C下持續攪拌10 h。對混合物實施蒸發使殘餘物在乙酸乙酯與水之間分配，經Na2S〇4乾燥有機層，進行蒸發並藉由層析來純化，得到標題產物（3 5 g，88%)。 MS (ESI): m/z=384.0 [M+l]+。中間體[(S)-4-(5-胺基_2_氟-苯基）_4_乙基_5,6二氫_4h_ [1，3]噻畊-2-基】-胺基曱酸第三丁基酯（N)之合成向[(S)-4-乙基-4-(2-氟-5-硝基-苯基）_5,6•二氫嘆喷基]-胺基曱酸第三丁基醋（Μ g，8·9匪〇1)存於甲醇（50 mL)中之溶液中添加Pd/C (5 〇 g，1〇%)且在3〇叫下將混合物氫化2 h。藉由過濾去除觸媒，將濾液蒸發並藉由管柱層析（戊烷/乙酸乙酯，3:1)來純化殘餘物，得到純標題產物（2.3 g，74。/。）。MS (ESI): m/z=354.〇 [M+l]+。 [(S)-4-(5-胺基-2-氟_苯基）_4_乙基_5,6_二氫·4H丨I”噻啩_ 2-基】-胺基甲酸第三丁基酯與碳酸之偶合一般程序向[(S)-4-(5-胺基-2-氟-苯基）_4_ 乙基 _5,6-二氫 _4H-[1，3] 噻畊-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯（〇丨丨毫莫耳）存於8 ml)中之溶液中相繼添加HATU(〇14毫莫耳）、碳酸（〇13毫莫耳）及DIEA(0.44宅莫耳）且在22°C下持續授拌2 h。用曱酸將混合物酸化並在製備型RP-丨8 HPLC上使用乙赌及水 (含有0.1%甲酸）之梯度來對其實施純化。將含有經第三丁 1497B7.doc -34- 201114765 氧基羰基保護中間體之部分蒸發，將殘餘物溶解於 H20/CH3CN/HC00H (1:1:0」，2.0 ml)之混合物中並在 5(rc 攪拌2 h。對混合物實施蒸發，得到曱酸鹽狀純醯胺。實例2 5-氣-吡啶-2-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3J 噻畊-4_基）-4-氟·苯基】-醯胺與甲酸形成之鹽

0 使[(S)-4-(5 -胺基-2 -氟-苯基）-4-乙基-5,6 -二氫-4H-[1 3] 噻畊-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯與5-氣-吡啶-2-甲酸偶合，隨後使中間體脫除保護基，產生無色固體狀標題化合物（24 mg)。MS (ESI): m/z=393.2 [M+H]+。實例3 口比咬-2-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基- 5,6-二氫- 4Η·[1，3]售 _ _ 4-基）-4-氟-苯基】-醯胺與甲酸形成之鹽

0 使[(S)-4-(5-胺基-2 -氟-笨基）-4-乙基- 5,6-二氫-4H-[1，3] 149787.doc -35- 201114765 噻畊-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯與吡啶-2-甲酸偶合，隨後使中間體脫除保護基，產生淺黃色固體狀標題化合物（3 i mg)。MS (ESI): m/z=359.3 [M+H]+。實例4 N-[3-((S)-2 -胺基 _4-乙基-5,6 -二氮-4H-[1，3]嗟》»井 _4_基）_4_ 氟·苯基]-4-氣-苯甲醢胺與甲酸形成之鹽

Ο 使[(S)-4-(5-胺基-2 -氟-苯基）-4-乙基-5,6-二氫-411-[1，3] 噻畊-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯與4-氣-苯曱酸偶合，隨後使中間體脫除保護基，產生無色固體狀標題化合物（27 mg)。MS (ESI): m/z=392.2 [M+H]+。實例5 5-氣-吡畊-2-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3] 噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽

149787.doc • 36- 201114765 噻畊-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯與5-氯·吡畊-2_甲酸偶合，隨後使中間體脫除保護基，產生無色固體狀標題化合物（13 mg)。MS (ESI): m/z=394.1 [M+H]+。實例6 5-氣-嘴咬-2-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6·二氫_4Η·【1，3】售〃井-4-基）-4 -敗-苯基卜醯胺與甲酸形成之鹽

使[(S)-4-(5 -胺基-2 -氣-苯基）-4-乙基-5,6 -二氫 _4H-[1,3] 噻畊-2-基]-胺基曱酸第三丁基酯與5-氯-嘧啶_2_甲酸偶合，隨後使中間體脫除保護基’產生淺黃色固體狀標題化合物（25 mg)。MS (ESI): m/z=394.1 [M+H]+。實例7 3-三氟甲基-吡啶-2-甲酸P-((S)-2-胺基-4-乙基_5,6·二氫_ 4Η-[1，3】嗟呼-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽

149787.doc -37- 201114765 使[(S)-4-(5 -胺基-2-氟-本基）-4-乙基- 5,6 -二氫 _4H-[ 1 3] 噻畊-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯與3-三氟曱基-吡咬-2_甲酸偶合，隨後使中間體脫除保護基，產生無色固體狀標題化合物（36 mg)。MS (ESI): m/z=427.2 [M+H]+ » 實例8 3 -苯基-〇比咬-2-甲酸[3-((S)-2 -胺基-4-乙基-5,6 -二氫-4H_ [1,3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基】-醯胺與甲酸形成之鹽

使[(8)-4-(5-胺基-2-氣-苯基）-4-乙基-5,6-二氫-411-[1，3] 噻畊-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯與3-苯基-吡啶-2-甲酸偶合，隨後使中間體脫除保護基，產生無色固體狀標題化合物（38 mg)。MS (ESI): m/z=435.3 [M+H]+。實例9 4-氣-吡啶-2-甲酸p-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-丨1，3】噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽

149787.doc -38- 201114765 使[(S)-4-(5-胺基-2-氟-苯基）-4-乙基-5,6-二氫-4H-[l，3] 嗟畊-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯與4-氯-°比咬-2-曱酸偶合，隨後使中間體脫除保護基，產生無色油狀標題化合物 (31 mg)。MS (ESI): m/z=393.2 [M+H]+。實例10 6-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((S)-2_胺基-4-乙基_5,6-二氫_4H [1，3】噻畊-4-基）-4-氟-苯基】-醯胺與甲酸形成之鹽 HCOOH H,N.

使[(S)-4-(5 -胺基-2-1-苯基）-4-乙基-5,6 -二氫- 3] 噻畊-2-基]-胺基曱酸第三丁基酯與6-甲基·吡啶_2-甲酸偶合’隨後使中間體脫除保護基，產生無色油狀標題化合物 (28 mg)。MS (ESI): m/z=373.1 [M+H]+。實例11 3,6-二氣-吡啶-2·甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫 [1，3】噻畊-4-基）·4-氟-苯基]·醢胺與曱酸形成之鹽

149787.doc •39- 201114765 使[(S)-4-(5 -胺基-2 -氟-苯基）-4-乙基- 5,6 -二氫-4H-[1，3] 噻〃井-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯與3,6-二氯-吡啶-2-曱酸偶合’隨後使中間體脫除保護基，產生無色固體狀標題化合物（32 mg)。MS (ESI): m/z=427.1 [M+H]+。實例12 6-氣-3-三氟甲基-哺啶-2-甲酸P-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基卜醯胺與甲酸形成之里

使[(S)-4-(5 -胺基-2 -氣-苯基）-4-乙基-5,6 -二氮-4H-[1，3] 噻_ -2-基]-胺基甲酸第三丁基酯與6-氣·吡啶-2-曱酸偶合，隨後使中間體脫除保護基，產生無色固體狀標題化合物（35 mg) » MS (ESI): m/z=461.2 [M+H]+。實例13 異喹啉-3-甲酸【3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H_[1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺與曱酸形成之鹽

149787.doc -40· 201114765 使[(8)-4-(5-胺基-2-氟-苯基）-4-乙基-5,6-二氫-祀-[13] °塞p井-2-基]-胺基曱酸第三丁基醋與異啥琳_3_甲酸偶合，隨後使中間體脫除保護基，產生無色固體狀標題化合物（4〇 mg)。MS (ESI): m/z=409.3 [M+H]+。實例14 噻吩并[2,3-c】吡啶-7-甲酸丨3-((S)-2-胺基_4·乙基_5,6_二氫_ 4Η-[ 1,3】嗟畊-4-基）-4·氟-苯基】-酿胺與甲酸形成之鹽

使[(S)-4-(5-胺基-2-氟-苯基）-4_ 乙基 _5,6_ 二氫噻畊-2-基]-胺基曱酸第三丁基酯與噻吩并[2,3_c]ntb啶_7_甲酸偶合（如 Frohn，M.等人，Bi〇〇rg. & Med Chem μ、 2008，18, 5023中所述來製備），隨後使中間體脫除保護基，產生無色固體狀標題化合物（41 mg)。MS (Esi): m/z=415.2 [M+H]+ 〇實例15 苯并丨b】嗟吩-2-甲酸[3-((8)·2_胺基_4乙基_5,6二氫_4h_ [1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基卜酿胺與甲酸形成之鹽 149787.doc •41 - 201114765

hcooh H,N、/S

使[(S)-4-(5-胺基-2-氟-苯基）-4-乙基·5,6·二氫 _4Η·Π，3] 噻畊-2-基]-胺基曱酸第三丁基酯與苯并[b]噻吩_2_甲酸偶合，隨後使中間體脫除保護基’產生無色固體狀標題化合物（48 mg)。MS (ESI): m/z=414.2 [M+H]+。實例16 5-甲基-噻吩-2-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基·5,6_二氫_4H_ 【1，3】噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽

使[(8)-4-(5 -胺基-2-1-苯基）-4-乙基-5,6 -二氫-4H-[1，3] 噻畊-2-基]-胺基曱酸第三丁基酯與4-曱基-噻吩_2-曱酸偶合’隨後使中間體脫除保護基，產生無色固體狀標題化合物（22 mg)。MS (ESI): m/z=378.3 [M+H]+。 1-甲基-1H-吡唑-3-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻畊_4-基）-4-氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽 149787.doc -42- 201114765

—氣·4Η-[1，3] 噻畊-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯與1-甲基-1幵_吡唾_3_甲酸偶合，隨後使中間體脫除保護基，產生淺黃色固體狀標題化合物（27 mg)。MS (ESI): m/z=362.3 [Μ+Η]+。實例18 2-甲基-噁唑-2-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基·5,6-二氫_4Η [1，3]嘆〃井-4 -基）-4 -氟-苯基】-酿胺與甲酸形成之鹽

使[(S)-4-(5-胺基-2-氟-苯基）-4-乙基- 5,6 -二氫 _4H-[1 3] 噻啩-2-基]-胺基甲酸第三丁基酯與2-曱基·噁唑_4_甲酸偶合’隨後使中間體脫除保護基’產生淺黃色固體狀標題化合物（21 mg)。MS (ESI): m/z=363.3 [M+H]+。實例19 2-甲基-噻唑-4-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基·5,6-二氫-411- [1，3】嗟ρ井-4-基）-4 -氟-苯基]-醯胺與甲酸形成之鹽 149787.doc -43· 201114765

使[(S)-4-(5 -胺基-2-氟-苯基）-4-乙基- 5,6 -二氮-4H-[1，3] 噻啡-2-基]-胺基曱酸第三丁基酯與2-曱基-噻唑-4-曱酸偶合，隨後使中間體脫除保護基，產生無色固體狀標題化合物（29 mg)。MS (ESI): m/z=379.3 [M+H]+。實例20 實施以下測試以測定式I化合物之活性：用於BACE2抑制之免疫螢光共振能量轉移（FRET)分析依照 Ostermann 等人，「Crystal Structure of Human BACE2 in Complex with a Hydroxyethylamine Transition-state Inhibitor」，Journal of Molecular Biology 2006，35 5, 249-201中所述來製備BACE2酶胞夕卜結構域（自質粒「pET17b-T7-hu proBACE2」獲得）。在 4〇C 下以 70 pg/ml 之濃度儲存前酶。基本上依照 Griininger-Leitch等人，Journal of Biological Chemistry (2002) 277(7) 4687-93 (「Substrate and inhibitor profile of BACE (β-secretase) and comparison with other mammalian aspartic proteases」）中所述來實施FRET分析。總之，設計藉由蛋白酶裂解之肽。用dabcyl標記該肽之N 端且用螢光黃（Lucifer Yellow)標記其C端，以使得就完整肽而言，螢光黃螢光係由dabcyl來淬滅。當該肽係藉由 149787.doc • 44- 201114765 BACE2來切割時，去除淬滅並產生螢光信號。依照Grueninger等人2002中所述使用5 μΜ之受質濃度在 pH 4.5下來實施分析。設計基於ΤΜΕΜ27序列之FRET肽 dabcyl-QTLEFLKIPS-LucY。BACE2 對該序列具有高活性，此與已知APP基受質無關。相反，BACE1對該肽具有輕微活性。分析讀出值係螢光強度之初始變化率，以給出BACE2活性之相對量測。小值與高抑制對應且較大值與低抑制對應。為了測定化合物對於BACE2之IC5G值（即將酶活性抑制 50%之濃度），通常對於根據經驗所選擇的多個濃度進行12 次分析，以得到對蛋白酶之低、高及中間抑制。使用針對多個抑制劑濃度所產生該等分析值及曲線擬合軟體XLfit (IDBS)且使用西格摩德劑量反應模型（Sigmoidal Dose-Response Model)來測定 IC5〇值。在上述分析中，較佳式I化合物具有較佳5 nM至50 μΜ、更佳5 ηΜ至1 μΜ之抑制活性（IC50)。舉例而言，以下化合物在上述分析中顯示以下IC5〇值：表1 實例 IC5〇(BACE2) [nMl 實例 ICs〇(BACE2) fnMl 1 9 11 23045 2 8 12 33490 3 1031 13 9096 4 2697 14 3080 5 1001 15 916 6 440 16 667 7 5459 17 2143 8 4927 18 475 9 41035 19 33577 10 50924 149787.doc -45- 201114765 實例21 藉由量測分離人類胰腺胰島中之TMEM27裂解來檢測 BACE2抑制來自兩名不同供給者（男性，51歲，BMI: 27.5 kg/m2 ; 女性，62歲，BMI: 22.2 kg/m2 ;大約3000個胰島/供給者）之新鮮分離之人類胰島係自Dr. D. Bosco(細胞分離及移植中心（Cell Isolation and Transplantation Center)，Department of Surgery，Geneva，Switzerland)獲得且在實驗前在補充有10% FCS、100 U/ml青黴素、100 pg/ml鏈黴素及 100 pg/ml慶大徽素（Sigma)之 CMRL-1066 (Invitrogen)中於 5.6 mmol/1 葡萄糖下維持2天。本研究已獲機構倫理委員會（institutional ethics committee)批准。在存在或不存在200 nM實例1化合物時將精選胰島培養72 h。藉由離心收集胰島且依照廠商方案使用CELYA溶胞緩衝液CLB1 (Cat*9000, Zeptosens)來提取總蛋白質。藉由 NuPAGE 4-12% Bis-Tris 凝膠（Cat*NP0321Box， Invitrogen)對總胰島蛋白質（i〇 μβ)實施分級分離並使用 iBlot系統（Cat*IB3 010-01, Invitrogen)將其轉移至硝基纖維素。使用以下抗體來實施免疫墨點分析：一級抗體：小鼠抗 TMEM27 單株抗體（R0Che Clone-3/3，1 gg/ml);小鼠抗 BACE2 單株抗體（Roche Clone-1/9，1 pg/ml);兔抗 GAPDH 單株抗體（Cat*2118, Cell Signaling, 1:4,000 稀釋）’之後為與HRP偶聯之抗小鼠或抗兔二級抗體（Pierce)，且使用增強之化學發光來進行檢測（PierCe)。 149787.doc -46- 201114765 西方墨點（Western blot)(圖8)顯示實例1化合物使全長 TMEM27穩定，如藉由識別C端之小鼠抗hTMEM27單株抗體（Roche clone 3/3)所檢測。hTMEM27 與 TMEM27之人類序列對應。BACE2抑制導致自成熟BACE2(下部帶）至未成熟B ACE2 (pro-BACE2)(上部帶）之移位，如藉由小鼠抗 hBACE2 (1/9)單株抗體所識別。與其他天冬胺酸蛋白酶相似，BACE2係以無活性酶原形式表現，在成熟過程期間其需要對其前序列進行裂解。未成熟BACE2需要進行自催化前結構域處理以供酶促活化。實例1化合物對BACE催化活性之抑制導致成熟BACE2減少且未成熟BACE2增加。抑制 BACE2活性亦係使人類胰島中全長TMEM27增加及穩定之機制的基礎。實例22 實例1化合物（5-氣-吡啶-2-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-曱基-5,6-二氫-411-[1，3]°塞11井-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺）在211〇1<^1'糖尿病肥胖（ZDF)大鼠中之代謝效應用雄性ZDF大鼠[ZDF/gmiCrl fa/fa]及瘦型大鼠 [ZDF/gmiCrl fa/+] (Charles River Laboratories, Sulzfeld, Germany)來實施該研究。ZDF大鼠係以胰島素抵抗、β細胞缺陷及高血糖症為特徵之人類2型糖尿病的常用模型。當進給致糖尿病膳食時，雄性大鼠發作糖尿病的時間係在 8至10週齡。在實驗開始時對所有6週齡大鼠（ZDF及痩型大鼠）進給專門的膳食（「PURINA ΡΜΙ 5008」，ZDF_膳食 = Ssniff R/M-H)且每籠圈養1隻（3型）。環境溫度為大約 149787.doc -47- 201114765 =且=度為55%至65%。在各室中維持i2小時光_暗 \在•段期間實施所心m。可隨意及自來水。週-DF大鼠經隨機化以接收藉由經口管飼（只是用利拉魯肽治療必須藉由皮下注射來投與）所投與5種治療中之一者： 1組接收作為媒劑之明膠（n=1丨）。 2組每日以〇.2 mg/kg接收實例工化合物（η=ιι)。該劑量經計算以在24小時後誘發約50% BACE2抑制。 3，’且母日以5 mg/kg接收實例1化合物（n=1丨）。基於BACEap 制活性，此係最大效應之計算劑量。 4組每日以30 mg/kg接收實例1化合物（n=1丨）。在該劑量下，應完全阻斷BACE2活性。 5組每曰經皮下以〇·4 mg/kg接收利拉魯肽（n=u)。對照組痩型大鼠（η= 11)接收媒劑。表2 :治療組治療劑量 (mg/kg) 存於明膠中之微懸浮液之劑量 (mg/mn ZDF大鼠之數量 ROA 施用時間 1 &劑：明膠 - 2 ml/kg 11 經口 4 p.m. 2 實例1 0.2 mg/kg 2 ml/kg 11 經口 4 p.m. 3 實例1 5 mg/kg 2 ml/kg 11 經口 4 p.m. 4 實-例1 30 mg/kg 2 ml/kg 11 經口 4 p.m. 5 利拉魯肽 0.4 mg/kg 1 ml/kg 11 經皮下 4 p.m. 6 瘦型ZDF大鼠 - - 11 - - 每日監測體重及食物攝入。所有大鼠每週量測1次血糖。治療3週後，對每組6隻禁食過夜的大鼠實施〇GTT。 149787.doc -48- 201114765 在大約第4週時且在麻醉後，每天對每組2至3隻ZDF大鼠實施胰腺手術並用低/高葡萄糖條件實施原位胰腺灌注。每隻大鼠收集120份洗脫部分用於葡萄糖及胰島素定量。口服葡萄糖耐受測試（〇GTT) 在第18天實施oGTT。在經過治療後大約16 h禁食過夜後’藉由管飼給予大鼠2 g/kg葡萄糖負載》在即將進行葡萄糖刺激前（0 min)及在葡萄糖刺激後+ 1〇 min、+30 min、 +60 min及+120 min收集血樣且測定血糖及其他血衆參數。- 用血糖監測系統（Accu-Chek Aviva，Roche Diagnostics

GmbH, Rotkreuz, Switzerland)來量測血糖。藉由使用

Mercodia 大鼠胰島素 ELISA (Merc〇dia AB，Uppsala, Sweden)實施ELISA來量測胰島素。結果展示於圖l中。使用針對wind〇ws之軟體 SAS/JMP(6.〇.〇版，SAS Institute公司，Cary，Nc)來分析數據。數據以平均值：tSEM(平均值之標準誤差）表示。大鼠數 1係6隻/組。使用方差分析（AN〇VA)及事後鄧奈特檢驗相對於媒劑進行比較。媒劑組之特徵在於，在〇時刻，空腹血糖濃度適度上升 (大約6 mM) ’隨後在經口葡萄糖刺激後記錄到葡萄糖漂移上升且持續進行’表明該年齡之ZDF大鼠出現嚴重的葡萄糖耐受不良。用貝例1化合物治療以劑量依賴方式減小葡萄糖曲線下面積（AUC 0-12〇分鐘）。與媒劑相比，在葡萄糖刺激後 149787.doc •49· 201114765 分鐘、60分鐘及120分鐘，實m化合物（30 mg/kg)對葡萄糖耐受之改良達到顯著性。用實化合物治療誘發減小總刺激後葡萄糖AUC之長期功效。使用用於2型糖尿病治療之利拉魯肽(一種市售藥物)作為陽性對照。實例i化合物 (30 mg/kg)之功錢近於用㈣魯、狀（〇 4 mg/kg)長期^療所誘發之功效。對8.5週齡ZDF大鼠（已用媒劑、實例i化合物或利拉魯狀治療17天）實施。GTT期間之葡萄糖漂移之定量進_步繪示於圖2中。AUC代表曲線下面積（〇至12〇分鐘卜單位係 AUC係藉由梯形積分法則來計算。該計算代表葡萄糖刺激後0至120 min。用實例1化合物長期治療誘發葡萄糖AUC之劑量依賴性減小，且在30 mg/kg下達到顯著值（***ρ<〇〇〇1，相對於媒劑進行ANOVA ’之後進行事後鄭奈特檢驗）。數據以平均值土SEM表示。用實例1化合物長期治療對8 5週齡ZDF大鼠之空腹血糖 (FBG)之效應展示於圖3中。用實例i化合物⑶ mg/kg)長期治療顯示減少禁食過夜條件後之空腹血糖 (FBG)之傾向’且未達到顯著性。類似地，利拉魯肽顯示向FBG減少之統計上不顯著之傾向性。如所預計，瘦型大鼠之特徵在於低於年齡匹配之ZDF媒劑治療大鼠之fbg。數據以平均值土SEM表示。依序使用an〇va及事後鄧奈特檢驗相對於媒劑進行比較。已接受媒劑、實m化合物或利拉魯狀治療17天之85週 149787.doc •50· 201114765 齡ZDF大鼠在進行。阳期間之姨島素濃度示於圖*中。在〇時間點用葡萄糖（2 g/kg)刺激ZDF大鼠：經媒劑治療之靡大鼠之特徵在於’在葡萄糖刺激後胰島素快速且顯著增加。用實例1化合物長期治療時，在。GTT期間所誘發分泌之姨島素濃度會隨劑量增加。主要在姨島素分泌峰值時觀察到增加。與媒劑相比，用實例丨化合物治療不改變空腹胰島素濃度。用利拉魯肽長期治療降低空腹與刺激後胰島素濃度二者。數據以平均值±咖表示。依序使用an〇va 及事後鄧奈特檢驗在實例丨化合物治療組與媒劑治療組之間進行比較。已接嗳媒劑、實例1化合物或利拉魯肽治療17天之8 5週齡咖大鼠在進行。GTT期間之騰島素AUC(〇至12〇分鐘）進一步示於圖5中。AUC代表曲線下面積。γ單位係 ng/ml*min。AUC係藉由梯形法則來計算。該計算係針對葡萄糖刺激後0至120 min進行。用實例丨化合物長期治療所誘發之胰島素濃度會隨劑量增加，但未達到顯著性。數據以平均值土SEM表示。另外，根據接受媒劑、實例丨化合物或利拉魯肽治療17 天後之8.5週齡ZDF大鼠所量測數據來計算H〇MA_IR、ISI Matsuda及ΗΟΜΑ β細胞指數。數據繪示於圖6中，且以平均值土 SEM(N=6隻/組）來表示。依序使用AN〇VA&事後鄧奈特檢驗，在實例1化合物治療組與媒劑治療組之間進行比較。用實例1化合物長期治療不會影響肝（H〇MA)或全身騰島素抵抗（MATSUDA)指數。相反，實例1化合物會隨劑 149787.doc •51· 201114765 量隻化改善Η〇ΜΑ·β胰島素抵抗指數。此表明，實例^化合物可改善姨島及β細胞功能。藉由原位胰腺灌注來評估Ρ細胞功能將大鼠麻醉（依序使用丁丙諾啡（Temgesic) ((M ml/1〇〇 g)，然後麻醉劑混合液：氯胺酮（77 mg/kg)、赛拉嗅（Xylazine) (11 mg/kg) ’腹腔注射，體積2 ml/kg)。以手術方式將騰腺與其他連接器官及神經及傳入及傳出之靜脈與動脈分離，且保持與均插入導管之腹主動脈及門靜脈相連。在手術完成後’將大鼠置於溫控箱（37。〇中且經由腹主動脈將肤腺連接至輸注幫浦。由含有低/高葡萄糖濃度之KrebS-Ringer緩衝液灌注胰腺，獲得葡萄糖刺激之胰島素分泌（GSIS)，如圖7中所設。十之方案所述。基本上，首先用含有低葡萄糖濃度（2 8祕) 之新鮮製備的KrebS-Ringer溶液（5 ml/min)灌注胰腺約3〇分鐘，以使基礎胰島素分泌穩定。隨後，用高葡萄糖濃度溶液（16.7 mM)進行第一次刺激，使胰腺敏化，以產生適度的階段1及階段2胰島素分泌。最後，在約75分鐘時，用高葡萄糖濃度（16.7 mM)對胰腺進行第二次刺激，產生全胰島素分泌’如由快速且上升之階段1及之後持續且長效之 P白#又2及「驟增反應（〇ff_reSp〇nse)」所示（參見圖7中之媒劑曲線）。與媒劑相比’用實例1化合物（3〇 mg/kg)治療降低基礎胰島素分泌及AUC驟增反應。實例i化合物使騰島素分泌曲線（階段1/階段2)正常化且因此預防高胰島素血症0 149787.doc •52· 201114765 以規則時間間隔在96孔板中收集（經由引入門靜脈中之導管）胰腺洗脫部分且將其立即冷卻至4°C並且隨後在-20°C 下儲存直至分析。每隻大鼠收集至少120份洗脫部分用於量測葡萄糖及胰島素濃度。

實例A 可以習用方式製造含有下列成份之膜衣錠·· 成份每鍵劑核：式I化合物 10.0 mg 200.0 mg 微晶纖維素 23.5 mg 43.5 mg 含水乳糖 60.0 mg 70.0 mg 聚維酮K30 (Povidone K30) 12.5 mg 15.0 mg 羥乙酸澱粉鈉 12.5 mg 17.0 mg 硬脂酸鎂 1.5 mg 4.5 mg (核重量） 120.0 mg 350.0 mg 膜包衣：羥基丙基甲基纖維素 3.5 mg 7.0 mg 聚乙二醇6000 0.8 mg 1.6 mg 滑石粉 1.3 mg 2.6 mg 氧化鐵(黃色） 0.8 mg 1.6 mg 二氧化鈦 0.8 mg 1.6 mg 對活性成份實施篩分並與微晶纖維素混合，且用聚乙烯吡咯啶酮之水溶液對該混合物進行製粒。將粒狀物與羥基乙酸澱粉鈉及硬脂酸鎂混合且壓製以分別得到1 20 mg或 3 50 mg之核。用上述膜包衣之水溶液/懸浮液塗佈該等核。 149787.doc -53· 201114765

實例B 可以習用方式製造含有下列成份之膠囊：成份每膠囊式I化合物 25.0 mg 乳糖 150.0 mg 玉米澱粉 20.0 mg 滑石粉 5.0 mg 對該等組份實施篩分並混合且將其填充至2號膠囊中。

實例C 注射溶液可具有下列組成：式I化合物 3.0 mg 聚乙二醇400 150.0 mg 乙酸適量，添加至pH 5,0 注射溶液用水添加至1.0 ml 將活性成份溶解於聚乙二醇400與注射用水（部分）之混合物中。用乙酸將pH調節至5.0。藉由添加餘量水將體積調節至1.0毫升。將溶液過濾，並適當過量地裝入瓶中並滅菌。

實例D 可以習用方式製造含有下列成份之軟明膠膠囊：膠囊内含物式I化合物 5.0 mg 黃蝶 8.0 mg 氫化大豆油 8.0 mg 部分氫化植物油 34.0 mg 大豆油 110.0 mg 膠囊内含物之重量 165.0 mg 明膠膠囊明膠 75.0 mg 甘油85% 32.0 mg 山梨糖醇83 (Karion83) 8.0 mg (乾物質）二氧化鈦 0.4 mg 氧化鐵黃 1.1 mg 149787.doc •54- 201114765 將活f生成份溶解於其他成份之溫熔融物中並將該混合物填充至適宜大小之軟明膠膠囊中。根據常用程序處理已填充之軟明膠膠囊。 '

實例E 可以習用方式製造含有下列成份之藥囊：式I化合4^~--—- 50.0 ms — 乳糖，細粉末 "—----- 微晶纖維素- ~竣甲基纖~~~—―1-- ^ Τ. '!& Ol-l· η1^ Τ，λα —----- •w lllg ί〇15.0 mg - 14〇〇〇^~ 14Omg~~ ' | Μ_»‘令 u疋 gjfoj ]^」（）硬脂酸鎂 ' - 10.0 mg 嬌味添加齊j ； I 10.0 mg [0 mg -— ------ 將活性成份與乳糖、微晶纖維素及幾甲基纖維素納混合並用聚乙稀。比·：各咬輞存於水中之混合物進行製粒。將顆粒物與硬脂酸鎂及矯味添加劑混合並填充於藥囊中。【圖式簡單說明】以下對附圖進行簡要說明·· 圖1係展示對8.5週齡z D F大鼠實施口服葡萄糖耐受測試 (oGTT)之結果的圖’該等大鼠已用媒劑、利拉魯量之實例1化合物治療丨7天。在第18天實施。町丁。’ 圖2係展示在對8.5週齡ZDF大鼠實施。阳期間的葡萄糖漂移的圖’該等大氣已用媒劑、實例i化合物或利拉魯肽治療1 7天。圖3係繪示用實例1化合物長期治療對葡萄糖刺激前所量測FBG(禁食過夜條件後之空腹血糖）之效應的圖。圖4係展示在對8.5週齡ZDF大鼠實施〇GTT期間的騰島素 149787.doc •55- 201114765 濃度的圖，該等大鼠已用媒劑、實例1化合物或利拉魯肽治療17天》圖5係展示在對8.5週齡ZDF大鼠實施〇GTT期間血漿胰島素AUC之量（0至120分鐘）的圖，該等大鼠已用媒劑、實例1 化合物或利拉魯肽治療17天。AUC代表曲線下面積。Y之單位係 ng/ml*min。圖6展示繪示用媒劑、實例1化合物或利拉魯肽治療對胰島素抵抗及胰島素敏感性（如藉由肝（HOMA)或全身胰島素抵抗（MATSUDA)指數測定）以及β細胞敏感性（藉由HOMA-β指數測定）之效應的圖。進行以下計算： HOMA_IR指數=空腹胰島素（mU/ml)xFBG (mM)/22.5 ISI MATSUDA=1000/ V(GoxIoxGpriemxIpriem), Priem= 在OGTT期間葡萄糖或胰島素之平均值。 ΗΟΜΑ-β細胞=(20xFI)/(FBG-3.5)。數據以平均值土SEM表示；（N=6隻/組）， **在ISI MATSUDA中意指相對於媒劑ρ<〇.〇1，進行 ANOVA ’隨後進行鄭奈特事後檢驗(Dunnett's Post Hoc test)。圖7係展示在用媒劑、實例1化合物或利拉魯肽治療後9 至1 0週齡ZDF大鼠之原位騰腺姨島素曲線（ng/ml)的圖。最後一次投藥係在胰腺灌注前18小時（長期效應）投與。圖8展示對來自兩名人類供給者（其未用實例1化合物治療㈠或用其治療72 h (+))之分離人類胰島之溶胞產物實施免疫墨點分析（immunoblotting)的結果。用實例1化合物治療之人類胰腺胰島表現全長TMEM27之維持並抑制BACE2之自催化活化。 149787.doc -56·

Claims

201114765 七、申請專利範圍： 1. 一種下式化合物或其醫

藥上可接受之鹽之用途其中 C1-?-院基、鹵素、氰基 Rl係Cl·7-烷基或環烷基； R2選自由以下組成之群：氫及<^.7-烷氧基； R3 係芳基或雜芳基，該芳基或雜芳基未經取代或由i 個、2個或3個選自心下組成之群之基團取代：k-烷基、鹵素、画素烷基、Ciw_烷氧基、南素7_ G-7-烷氧基、氰基、羥基_C]_7_烷基、側氧基及苯基；其用於製備用以治療或預防糖尿病之藥劑。 2.如凊求項1之式j化合物之用途，其中Ri係曱基或乙基。 3 ·如請求項1或2之式I化合物之用途’其中R2選自由以下組成之群：C^-烷基、鹵素、氰基及匚丨-7-烷氧基。 4.如請求項1或2之式j化合物之用途，其中R2係鹵素。 5 ·如請求項1或2之式I化合物之用途’其中r6係雜芳基，該雜芳基未經取代或由1個、2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：Ci 7_炫基、鹵素、鹵素-cK7_烷基、ci 7_ 烷氧基、鹵素-Cu-烷氧基、氰基、羥基_Ci-7·烷基及苯 149787.doc 201114765 基》 6.如請求項5之式I化合物之用途，其中R6係選自由以下組成之群之雜芳基：噻吩基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡畊基、異喹啉基、噻吩并[2,3_q吡啶基及苯并[b]噻吩基，該雜芳基未經取代或由丨個、2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：Ci7_烷基、鹵素、鹵素-C】_7-烷基及苯基。 7_如請求項1或2之式I化合物之用途，該化合物係5_氯_咣啶-2-曱酸[3_((S)_2_ 胺基·4_ 曱基·5,6_ 二氫 _4Η_π，3]噻畊 _ 4_基）-4 -氣-苯基]-酿胺。 8. 如請求項之式j化合物之用途，其中r6係苯基，該苯基未經取代或由1個、2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：c^-烷基、鹵素、鹵素_c】 7_烷基、Ci.7_烷氧基、鹵素-Cy烷氧基、氰基、羥基_Ci 7_烷基及苯基。 9. 如請求項丨或2之用途，其用於治療或預防2型糖尿病。 10. —種下式化合物

其中 R1 R2 係C 1.7 -烧基或C 3 · 7 _環烧基；選自由以下組成之群：氫、c •7_院基、鹵素、氰基 149787.doc 201114765 及C!—·;-院氧基； R3係芳基或雜芳基，噹关其加 °亥方基或雜芳基未經取代或由！個、2個或3個選自由以Τέ 下、、且成之群之基團取代：Cl_7- 烷基、齒素、函素_Cn7_烷基、 P 片 Cl-7·烷乳基、鹵素- 匕1-7_烧軋基、氰基、羥某 c,·7-烷基、側氧基及苯或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療或預防糖尿病。 11. 如請求項10之式I化合物，其具有下式

Ύ R1係乙基； R2選自由以下組成之群：c ^ 烷基、自素、氰基及Cm- 烷氧基； 7 R3係芳基或雜芳基，該芳基咬万雜方基未經取代或由】個、2個或3個選自由乂下έ 士、 L自由以下組成之群之基團取代：Ci7_ 院基、鹵素、鹵去r U 因素-c"-烷基、Ci.7·烷氧基 Cm-烷氧基、氰美、鉍萁p 乱基漆C-_烷基、側氧基及苯基，或其醫藥上可接受之鹽。 149787.doc 201114765 12. 13. 14. 15. 16. 17. 如請求項11之化合物，其中R2係齒素。如清求項11或12之化合物，其中r2係氣。如凊求項11或12之化合物，其中R3係雜芳基，該雜芳基未、”至取代或由1個、2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：C!·7-烷基、鹵素、鹵素_Ci 7_烷基、Ci 7_烷氧基、鹵素-c〗·7·烷氧基、氰基、羥基_Ci 7_烷基及苯基。如請求項14之化合物，其中R3係選自由以下組成之群之雜芳基：噻吩基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吼畊基、異喹啉基、噻吩并[2,3_c]吼啶基及苯并[b]塞吩基，该雜芳基未經取代或由1個、2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：Cl_7_烷基、_素、函素· 烷基及苯基。如請求項11或12之化合物，其中R3係苯基，該苯基未經取代或由1個、2個或3個選自由以下組成之群之基團取代：cK7-烷基、鹵素、鹵素_Ci 7_烷基、Ci 7_烷氧基、_ 素_ci·?-烷氧基、氰基、羥基-C】·7·烷基及苯基。如請求項11之化合物，其選自由下列組成之群： 5-氯-吡啶-2-甲酸[3-((S)-2_胺基-4·乙基_5,6_二氫_4H_ Π，3]噻喷-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、。比咬-2-曱酸[3_((S)_2_ 胺基 _4_ 乙基 _5,6_ 二氫·4Η_Π，3] 塞ρ井-4 -基）-4 -說-苯基]-醒胺、 1^-[3-((8)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4^1-[1，3]〇塞畊-4-基）- 4_氟-苯基]-4-氣-苯甲醯胺、 5-氯-吡啩·2_甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基_5,6_二氫_4Η· 1497S7.doc 201114765 [1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 5- 氯-嘧啶-2-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H- [1.3] 噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 3-三氟甲基-吡啶-2-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻啡-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 3- 苯基-吡啶-2-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]°塞11井-4-基）-4 -氣-苯基]-酿胺、 4- 氣-°比 °定-2-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基- 5,6 -二鼠- 4H_ [1.3] 噻呼-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 6- 曱基-吡啶-2-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻0井-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 3,6-二氣-°比°定-2-曱酸[3-((8)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氮-4H-[1,3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 6-氯-3-三氟曱基-吡啶-2-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1，3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、異喹啉_3_曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[l，3]^p井-4 -基）-4 -鼠-苯基]-酸胺、噻吩并[2,3-c]吡啶-7-甲酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[ 1,3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、苯弁[b]n塞吩-2-曱酸[3-((S)-2 -胺基-4-乙基- 5,6-二氣_ 4H-[1,3]噻畊-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 5- 甲基-噻吩-2-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫-4H-[1,3]噻啩-4-基）-4-氟-苯基]-醯胺、 1-曱基-1H-吡唑-3 -曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二 149787.doc 201114765 氫-4H-[1，3]噻畊-4-基）_4-氟-苯基]-醯胺、 2-曱基·•噁唑-4-曱酸[3-((S)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫 4H-[1，3]噻畊-4-基）、4·氟-苯基]-醯胺、及 2-曱基·噻唑-4-曱酸[3_((s)-2-胺基-4-乙基-5,6-二氫 4H-[1，3]噻畊-4-基）_4_氟_苯基]_醯胺、或其醫藥上可接受之鹽。 1 8 · —種用於製造如請求項丨〗之化合物之方法，該方法包含 a) 使式II之胺 ProtHN

其中R2係如請求項i中所定義且Pr〇t係胺基保護基團；與式III之羧酸 RY 其中R3係如請求項i丨中所定義；在偶合試劑存在下，於驗性條件下反應’獲得式IV化合物 ProtHN c

及藉助酸脫除泫式IV化合物之保護基，獲得式Ia化合物 149787.doc 201114765

Ia 19. 20. 其中R至R係如請求項11中所定義，及若需要 b)將該所獲得化合物轉化為醫藥上可接受之踏。物’其包含如請求項n至〗7 合物及醫藥上可接受之載劑及/或佐劑。如6月求項19之醫藥組合物’其用於治療或預防與BACE2 活性抑制相關之疾病。 149787.doc