TW201002737A - Cancerous disease modifying antibodies - Google Patents

Description

201002737 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於癌症疾病調節抗體（CDMAB)之分離及產生 且係關於此等CDMAB視情況與一或多種化學治療劑組合 用於治療及診斷過程中的用途。本發明另外係關於利用本 發明之CDMAB之結合檢定。 關於合作研究協議之聲明 如本文中之申請專利範圍界定之本發明係由Arius

Research Inc與 Takeda Pharmaceutical Company Limited之 間的聯合研究協議（「協議」）之參與者創制，其作為在彼 協議之範疇内進行之活動的結果。該協議在本發明之日期 之前生效。 【先前技術】 作為癌症療法之單株抗體：每一患有癌症之個體為獨特 的且具有如彼人之身份般與其他癌症不同的癌症。儘管如 此，目前療法仍以相同方式治療患有相同類型之癌症、處 於相同階段之所有患者。至少3〇%之此等患者未通過第— 線療法，因此導致進行進一輪之治療且引起治療失敗、轉 移及最终死亡之機率增加。優良之治療方法將為針對特定 個體定製療法。目前適用於定製之唯一療法係外科手術, 化學療法及放射治療不能針對患者來定製，且丁 況下單獨外科手術不足以治癒。 夕數狀 隨著單株抗體之出現’開發用於定製 .-^ 乃白勺"nJ~ A匕 蔓得更為現實，此係因為每一抗體可針 — b ]早—抗原決定 139530.doc 201002737 定義特定個體腫瘤之抗 基。此外，有可能產生針對可唯一 原決定基之組的抗體之組合。 已認識到癌細胞與正常細胞之間的顯著差異在於癌細胞 含有對轉型細胞具特異性之抗原，長期以來科學界_直認 為單株抗體可經設相藉由特異性結合於此等癌症抗原而 特異性乾向轉型細胞；因此得出單株抗體可用作消除癌細 胞之「靈丹妙藥」（Magic Bullets)的看法。然而，目前廣 泛認識到沒有任何單—單株抗體可用於癌症之所有情況， 且可使用-種類別之單株抗體作絲向癌症治療。已顯示 根據本發明之教示分^ 双不刀離的早株抗體可以有益於患者之方式 (例如藉由降低腫瘤負荷)來調節癌症疾病過程，且該等單 株抗體將在本女φ姑丁门 ' 中被不冋地稱為癌症疾病調節抗體 (CDMAB)或「抗癌」抗體。 /前’癌症患者通常具有很少的治療選擇。癌症療法之 系統化方法已於整體存活率及發病率方面產生改良。然 而’對於特定個體而言，此等改良之統計㈣未必與其個 人情況之改良相關聯。 醫者能夠獨立於同一群組中之其他患 法’則此將允許為僅彼一人定製療法 因此，若提出使行 者來治療各腫瘤的方 之獨特方法。此類療法過程將理想地增加治癒率且產生更 佳結果’因此滿足了盼望已久之需求。 3J^ * 止 仕人類癌症之治療中使用多株抗體，取得了 勺成力雖然已用人類企漿治療淋巴瘤及白企病，但 存在很v的長期緩解或反應。此外，與化學療法相比，缺 139530.doc 201002737 乏再現性且無額外益處。亦已用人類血液、黑:ί星Μ血清、 ^類血漿及馬血清治療諸如乳癌、黑色素瘤及腎細胞癌之 貝體腫瘤’相應地，結果不可預知且無成效。 • 已存在針對實體腫瘤之單株抗體的許多臨床試驗。在20 世紀80年代，存在至少四種針對人類乳癌之臨床試驗，其 使用針對特異性抗原或基於组織選擇性之抗體，自至少47 名患者中僅產生1名反應者。直至觸年才存在-例成功 的臨床試驗，其使用與順鈾⑽PLATIN)組合之人類化抗 Her2/neu抗體（Herceptin⑧）。在此試驗中針對反應評估 37名患者，其中約四分之-具有部分反應率且另外四分之 一具有微小或穩定的疾病進展。在反應者之中中位進展時 間為8.4個月，其中中位反應持續時間為5·3個月。 1998年批准Herceptin®與Taxol®組合用於第一線使用。 床研九結果顯示與單獨接受Tax〇l⑧之群（3 〇個月）相比， 接受抗體療法加Taxol®之彼等患者（6·9個月）的中位疾病進 Ο 展時間增加。中位存活期亦略微增加；對於Herceptin®加

Taxol®治療組與單獨Taxop治療組而言為22個月與^個 月。此外，與單獨Taxol®相比，在抗體加Tax〇1⑯之組合群 中，完全反應者（8%與2%)及部分反應者（34%與15%)之數 目均有增加。然而，用Herceptin®及Taxol®治療與單獨 Taxol®治療相比引起心臟中毒之較高發病率（分別為13%與 1%)。此外，Herceptin®療法僅可有效用於過度表現（如經 由免疫組織化學（IHC)分析確定）人類表皮生長因子受體 2(Her2/neU)(—種受體，其目前不具有已知之功能或生物 139530.doc 201002737 學上重要之配位體）的患者；占患有轉移性乳癌之患者之 約2 5 %。因此，對於患有乳癌之患者而言，仍存在大量未 滿足之需求。甚至可受益於Herceptin®治療之彼等患者仍 將需要化學療法且因此仍將必須至少在某種程度上處理此 種治療之副作用。 研究結腸直腸癌之臨床試驗涉及針對醣蛋白與糖脂標乾 之抗體。諸如對腺癌具有一定特異性之17-1A的抗體已在 超過60名之患者中經歷2期臨床試驗，其中僅1名患者具有 部分反應。在其他試驗中，在使用額外環磷醯胺 (cyclophosphamide)之方案中，在52名患者間使用^八僅 產生1例完全反應及2例微小反應。迄今為止，作為111期結 腸癌之輔助療法，17-1A之III期臨床試驗未曾展示改良之 功效。使用最初獲准用於成像之人類化鼠類單株抗體亦未 引起腫瘤消退。 僅近來’已藉由使用單株抗體而存在有來自結腸直腸癌 6™床研九之任何正面結果。在2〇〇4年批准用 於患有表現EGFR之轉移性結腸直腸癌且難以用基於伊立 替康（mnotecan)之化學療法醫治之患者的第二線治療。來 自又’（two-arm)II期臨床研究與單臂（8丨叩16 arm)研究之結 果顯不與伊立替康組合之ΕΚΒΙτυχ€)分別具有及15%之 反應率’其中中位疾病進展時間分別為4.丨個月及& 5個 月。來自同一雙臂Π期臨床研究及另一單臂研究之結果顯 示單獨ERBITUX⑧治療分別產生H%及9%之反應率，其中 中位疾病進展時間分別為i 5個月及4·2個月。 139530.doc 201002737 因此’在瑞士與美國與伊立替康組合之ERBITUX®治療 及在美國單獨ERBITUX®治療已被批准作為第一線伊立替 康療法無效之結腸癌患者的第二線治療。因此，如 Herceptin®，在瑞士之治療僅作為單株抗體與化學療法組 合之形式獲得批准。此外，在瑞士與美國之治療僅獲准作 為第二線療法用於患者。在2004年，亦批准AVASTIN®與 靜脈内基於5 -氟尿。密°定（5-fluorouracil)之化學療法組合用 作轉移性結腸直腸癌之第一線治療。III期臨床研究結果展 示與單獨用5-氟尿嘧啶治療之患者相比，用AVASTIN®加 5-氟尿嘧啶治療之患者的中位存活期延長（分別為20個月與 16個月）。然而，再如Herceptin®及ERBITUX®之治療僅作 為單株抗體與化學療法組合之形式獲得批准。 對於肺癌、腦癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌及胃癌， 亦持續存在不良結果。近來關於非小細胞肺癌之最有希望 的結果來自一項II期臨床試驗，其中治療涉及與化學治療 劑TAXOTERE®組合之接合至殺死細胞藥物多柔比星 (doxorubicin)的單株抗體（SGN-1 5 ; dox-BR96，抗唾液癒 基-LeX)。TAXOTERE®為FDA批准用於肺癌之第二線治療 的唯一化學療法。初始資料指示與單獨TAXOTERE®相 比，總存活率有了改良。在經募集用於研究之62名患者 中，三分之二患者接受與TAXOTERE®組合之SGN-15，而 剩餘三分之一患者單獨接受TAXOTERE®。與單獨接受 TAXOTERE®之患者的5.9個月相比，接受與TAXOTERE® 組合之SGN-1 5之患者的中位總存活期為7.3個月。與對於 139530.doc 201002737 單獨接文TAXOTERE®之患者而言分別為24%及8%相比， 接受SNG-15加TAXOTERE®之患者在！年及18個月時之總 存活率分別為29%及18%。計劃其他臨床試驗。 臨床前，在單株抗體針對黑色素瘤之使用方面已存在一 些有限的成功。此等抗體中極少數抗體已通過臨床試驗， 且迄今為止，無一者經批准或展示在⑴期臨床試驗中具有 有利結果。 缺乏對30,000種會促成疾病發病機制之已知基因之產物 中相關標靶的鑑別阻礙了可用於治療疾病之新藥的發現。 在腫瘤學研究中，常常僅僅由於潛在藥物縣在腫瘤細胞 中過度表現之事實而選擇該等標靶。接著針對與大量化合 物之相互作用，篩檢由此鑑別之標靶。在潛在抗體療法之 狀況下，此等候選化合物通常來源於根據Kohler及 MUStein規定之基本原則產生單株抗體之傳統方法…”, 迦咖，256, 495_497, K〇milstein)。自經抗原⑽ 如，全細胞、細胞碎片、純化抗原)免疫之小鼠收集脾細 =且使其與永生化融合瘤搭配物融合。針對可最有力地結 合於標靶之抗體的分泌來篩檢所得融合瘤且進行選擇。已 使用此等方法產生針對癌細胞之許多治療及診斷抗體，包 括Hercepti，及料昔單抗（RITUXIMAB)，且基於其親和 力進仃選擇。此策略之缺點為雙重的。首先，對適於治療 心斷抗體結合之標㈣選擇受到圍繞組織特異性致癌過 、識之缺乏及可用力鑑別此等標乾之所得過於簡單化 之方法（諸如，藉由過度表現來選擇）的限制。其次，以最 139530.doc 201002737 大親和力結合受體之藥物分子通常具有引發或抑制信號之 最高機率的假定可能並不總為此狀況。 儘管對乳癌及結腸癌之治療已有一些進展，但作為單一 藥劑或共同治療之有效抗體療法的鑑別及發展對所有類型 之癌症而言係不足夠的。 先前專利： 美國專利第5,750,102號揭示一種將來自患者腫瘤之細胞 以可自來自患者之細胞或組織選殖之MHC基因轉染的方 法。接著使用此等經轉染之細胞給患者接種。 美國專利第4,861，58 1號揭示一種包含以下步驟之方法： 獲得對哺乳動物之贅生性細胞及正常細胞之内部細胞組分 具特異性但對外部組分無特異性的單株抗體；標記該單株 抗體；使經標記之抗體與已接受可殺死贅生性細胞之療法 之哺乳動物的組織接觸；及藉由量測經標記之抗體與變性 贅生性細胞之内部細胞組分的結合來測定療法之有效性。 在製備針對人類細胞内抗原之抗體時，專利權所有人認識 到惡性細胞為該等抗原之便利來源。 美國專利第5,171,665號提供一種新穎抗體及其產生方 法。特定S之，該專利教示形成—種具有強烈結合於與人 類^廇（例如，結腸及肺之腫瘤）有關之蛋白質抗原同時在 小知·夕之轾度上結合於正常細胞之性質的單株抗體。 美國專利第5,484,596號提供一種包含以下步驟之癌症療 法之方法：藉由外科手術自人類癌症患者取得腫瘤組織； 處理該腫瘤組織以獲得腫瘤細胞；照射可存活但未產生腫 139530.doc 201002737 瘤之腫瘤細胞；及使用此等細胞來製備用於患者之疫苗， 該疫苗能夠抑制原發腫瘤復發同時抑制轉移。哼專利教厂、 可與腫瘤細胞之表面抗原起反應之單株抗體的開發。如= 4行第45列及以下等等所述，專利權所有人在開發在人類 腫瘤形成中表示活性特異性免疫療法之單株抗體時利用固 有腫瘤細胞。 美國專利第5,693,763號教示-種人類癌瘤所特有且與來 源之上皮組織無關之醣蛋白抗原。 吴國專利第5,783，186號描述誘發表現如2之細胞之細胞 〉周亡的抗Her2抗體、產生該等抗體之融合瘤細胞株、使用 該等抗體治療癌症之方法及包括該等抗體之醫藥組合物。 美國專利第5,849,876號描述用於產生針對自腫瘤I#腫 瘤組織來源純化之黏液素抗原之單株抗體的新型融合瘤細 胞株。 美國專利第5,869,268號描述一種用於形成產生對所需抗 原具特異性之抗體之人類淋巴細胞的方法、一種用於產生 單株抗體之方法以及藉由該方法產生之單株抗體。該專利 尤其描述可用於癌症診斷及治療之抗肋人類單株抗體的 產生。 美國專利第5,869，()45號係關於可與人類癌瘤細胞起反應 之抗體、抗體片段、抗體接合物及單鍵免疫毒素。此等抗 體起作用之機制為雙重的，因為該等分子可與人類癌瘤表 面上存在之細胞膜抗原起反應，且此外因為在結合之後該 等抗體具有在癌瘤細胞内内在化的能力，此使得其特別適 139530.doc 10 201002737 用於形成抗體-藥物及抗體-毒素接合物。就未經修飾之形 式而言，抗體在特定濃度下亦顯示細胞毒性性質。 美國專利第5,780,033號揭示自體抗體用於腫瘤治療及預 防之用途。然而’此抗體為來自老年哺乳動物之抗核自體 抗體。在此狀況下，自體抗體據㈣在免疫系統中發現之 -類天然抗體。因為自體抗體來自「老年哺乳動物」，所 以不要求自體抗體實際上來自所治療之患者。此外，該專

利揭^來自老年哺乳動物之天然及單株抗核自體抗體以及 產生單株抗核自體抗體之融合瘤細胞株。 【發明内容】 本申明案利用關於分離編碼癌症疾病調節單株抗體之融 合瘤細胞株的美國6，18G，357專利中教示 異性抗癌抗體的方法。此等抗體可特定地針對 製成且因此使癌症療法之定製成為可能。在本申請案之上 下文中’具有殺死細胞（細胞毒性）或抑制細胞生長（細胞生 長抑制性）性質之抗癌抗體在下文中將稱為具細胞毒性。 此等抗體可用於幫助癌症之分期及診斷，且可用於治療腫 瘤轉移。此等抗體亦可用於經由預防性治療來預防癌症。 不同於根據傳統藥物發現模式產生之抗體，以此方式產生 之抗體可靶向先前未顯示為惡性組織生長及/或存活所必 需之分子及路徑。此外，此等抗體之結合親和力適合於對 引發可能不易於發生較強親和力相互㈣之細胞毒性事件 的要求。使標準化學治療形式（例如，放射性核素）與本發 明之CD論接合亦在本發明之範圍内，因此密切關注該 139530.doc 201002737 等化學治療劑之用途。CDMAB亦可接合於毒素、細胞毒 性部分、酶（例如，生物素接合酶）或造血細胞，因此形成 抗體接合物。 個體化杬癌治療之前景將引起控制患者之方式變化。很 可能之臨床情況係在呈現時獲得腫瘤樣品且加以儲存。來 自此樣品之腫瘤可由—組預先存在之癌症疾病調節抗體來 驗明。雖然將以習知方式對患者分期，但可用抗體可用於 對患者進—步分期。可直接用現有抗體來治療患者，且可 使用本文中概述之方法或經由使用噬菌體呈現文庫結合本 文中揭示之t帛檢法來產生對腫瘤具特異性之—組抗體。將 所產生之所有抗體添加至抗癌抗體之文庫♦，此係因為存 在有其他腫瘤可能具有—些與所治療之腫瘤相同之抗原決 定，的可能性。根據此方法產生之抗體可用於治療具有與 此等抗體結合之癌瘤之許多患者的癌症疾病。 μ除抗癌抗體外’患者可選擇接受目前推薦之療法作為多 模式治療方案之部分。經由本發明之方法分離之抗體對非 癌細胞而言相對無毒的事實允許以高劑量單獨地或與習知 ，法相結合制抗體組合。高治療指數亦將允許在短時間 祀圍内作再-人治療’此應降低治療抗性細胞出現之可能 效治療且轉移 若患者難以用初始療程醫治或顯現出轉移，則可將產生 針對腫瘤之特異性抗體的過程重複以供再次治療。此外， 抗癌抗體可與自彼患者獲得之紅血球接合且加以再輸注以 治療轉移。已存在針對轉移性癌症之少數有 I39530.doc •12· 201002737 通常預示導致死亡之不良結果。然而，轉移性癌症通常充 分血管化且紅血球對抗癌抗體之傳遞可具有使抗體集中於 腫瘤位點處之效應。甚至在轉移之前，就存活而言，大部 分癌細胞視宿主之供血而定’且與紅血球接合之抗癌抗體 亦可有效對抗原位腫瘤。或者，抗體可與其他造血細胞 (例如，淋巴細胞、巨噬細胞、單核細胞、自然殺傷細胞 寺）接合。 存在5類抗體且各自與由其重鏈賦予之功能有關。一般 認為藉由裸抗體殺死癌細胞係經由抗體依賴性細胞毒性或 補體依賴性細胞毒性來介導。舉例而言，鼠類IgM& IgG2a ί几體可错由結合補體系統之C -1組分來活化人類補體，從 而活化可引起腫瘤溶解之補體活化之典型路徑。對於人類 抗體而言，最有效之補體活化抗體一般為IgM及IgG1。 IgG2a及IgG3同型之鼠類抗體可有效募集具有以受體之細 胞毒性細胞，此將藉由單核細胞、巨噬細胞、粒細胞及某 些淋巴細胞引起細胞殺死。I g 〇· 1與I g G 3同型之人類抗體介 導ADCC。 抗體介導之癌細胞殺死之另一可能機制可為經由使用用 以催化細胞膜及其相關醣蛋白或糖脂中各種化學鍵之水解 的抗體’亦即所謂催化性抗體。 存在抗體介導之癌細胞殺死的三種其他機制。第一種係 使用抗體作為疫苗來誘發主體產生針對存在於癌細胞上之 假定抗原的免疫反應。第二種係使用抗體靶向生長受體且 干擾其功能或下調彼受體，使得其功能有效喪失。第三種 139530.doc -13- 201002737 係該等抗體對可引起直接細胞死亡之細胞表面部分之直接 連接（諸如，死亡受體（諸如，TRAIL ru1trail r2)或整 合素分子（諸如，ανβ3及其類似物）之連接）的作用。 癌症蕖物之臨床效用係基於該藥物在可接受之風險概況 下對患者之益處。在癌症療法中’—般以存活性為最想要 之盈處，然而，除延長生命外，亦存在眾多其他公認的益 處。在治療不會不利地影響存活的情況下，此等其他益處 包括症狀減緩、保護防止不良反應、延長復發或無病存活 時間及延長進展時間。此等標準係經普遍認可，且由諸如 美國食品與藥物管理局（lLS. Food and Drug Administrati〇n， F.D.A.)之管理機構批准彼等可產生此等益處之藥物 (Hirschfeld等人，Critical Reviews in 〇nc〇1〇gy/Hemat〇lgy 42:137-143 2002)。除此等標準外，公認亦存在可預示此 等類型之ϋ處的其他終點。在某種程度上，由美國F D A. 准許之加速批准過程承認已存在可能預估患者益處之替代 品。到2003年年底為止，已存在16種根據此過程批准之藥 物，且在此等藥物中，四種已進行至完全批准，亦即在追 蹤研究中已證實由替代終點所預估之直接患者益處。用於 測定藥物對實體腫瘤藥效之一種重要終點係藉由量測對治 療之反應來s平估腫瘤負荷（丁herasse等人，journai 〇f the

National Cancer Institute 92(3):205-216 2000)。用於該評 估之臨床標準（RECIST標準）已由實體腫瘤反應評估標準工 作組（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors Working

Group)(在癌症領域之一個國際專家組）公布。與合適對照 139530.doc •14· 201002737 ’、且相比，如根據RECIST標準之客觀反應所示，已證實對 腫瘤負荷具有效應的藥物最終傾向於產生直接患者益處。 在l床别背景下，腫瘤負荷對評估及證明而言一般更為簡 單明瞭。因為臨床前研究可轉化為臨床背景，所以在臨床 前模式令可延長存活之藥物具有最大之預期臨床效用。類 似=對臨床治療產生陽性反應，在臨床前f景中降低腫瘤 負荷之藥物亦可對疾病具有顯著直接影響。雖然延長存活 性為癌症藥物治療之最想要的臨床結果，但仍存在其他具 有臨床效用之益處，且顯然，可能與疾病進展延遲、延長 存活或兩者相關聯之腫瘤負荷降低亦可產生直接益處且具 有臨床影響（Eckhardt 等人，Devei〇pmentaI Therapemics:

Successes and Failures of Clinical Trial Designs of

Targeted Compounds; ASCO EdUCational Book，第 39屆年 度會議’ 2003，第209-219頁）。 本發明描述根據在細胞毒性檢定及人類癌症之動物模型 中的作用而鑑別之AR150A3_U之開發及用途。本發明描 述特異性結合於標靶分子上存在之抗原決定基且亦如裸抗 體般具有針對惡性腫瘤細胞而非正常細胞之活體外細胞毒 性且亦如裸抗體般直接介導腫瘤生長之抑制的試劑。另一 進步係使用抗癌抗體，諸如靶向表現同源抗原標記物之腫 瘤以達成腫瘤生長抑制及癌症治療之其他陽性終點的抗 體。 總之，本發明教示AR150A3.il抗原作為治療劑之標靶 的用途，該治療劑在投與時可降低哺乳動物中表現該抗原 139530.doc -15 - 201002737 之癌症之腫瘤負荷。本發明亦教示CDMAB(AR150A3.11) 及其衍生物及其抗原結合片段及其細胞毒性誘發配位體靶 向其抗原以降低哺乳動物中表現該抗原之癌症之腫瘤負荷 的用途。此外’本發明亦教示偵測癌細胞中之ARl 5 〇A3丨丨 抗原之用途，其可用於具有表現此抗原之腫瘤之哺乳動物 的診斷、療法預測及預後。 因此，本發明之一目標係利用一種產生針對來源於特定 個體或一或多種特定癌細胞株之癌細胞之癌症疾病調節抗 體（CDMAB)的方法，該等CDMAB相對於癌細胞具有細胞 毒性，而同時對非癌細胞相對無毒，以便分離融合瘤細胞 株及該等融合瘤細胞株所編碼之相應經分離單株抗體及其 抗原結合片段。 ^ 本發明之另一目標係教示癌症疾病調節抗體、其配位體 及抗原結合片段。 本發明之另—目標係產生細胞毒性係經由抗體依賴性細 胞毒性介導之癌症疾病調節抗體。 本發明之另-目標係|生細胞毒性係經由補體依賴性細 胞毒性介導之癌症疾病調節抗體。 本發明之另一目標係產生細胞毒性隨催化細胞化學鍵水 解之能力而變之癌症疾病調節抗體。 本發明之另一目標係產生可在結合檢定中用於癌症之診 斷、預後及監測的癌症疾病調節抗體。 根據以下描述’本發明之其他目標及優點將變得嗤而易 見，其中藉助於例圖及實例來闡述本發明之某些實施例。 139530.doc 16- 201002737 【實施方式] 般而s ，以下字詞或短語當用於發明内 施方 式、實例及申請專利範圍令時，其具有所指示之定義 術語「抗體」係以最廣泛之意義來使用且料言之涵蓋 (例如）單-單株抗體（包括促效劑、拮抗劑及中和抗體、去 免疫化抗體、鼠類抗體、嵌合抗體或人類化抗體卜具有 多抗原決定基特異性之抗體組合物、單鏈抗體、免疫接合 物及抗體片段（見下文）。 如本文所用之術語「單株抗體」係指自—群大體上均質 ，抗體獲得之抗體’亦即’構成該群之個別抗體除可以微 量存在之可能天然存在之突變以外為相同的。單株抗體針 料-^原位點具高度特n此外，與包括針對不同決 定子（抗原決定基）之不同抗體的多株抗體製劑對比，各單 株抗體係針對抗原上之單—決定子。除其特異性外，單株 抗體之優勢在於其可在未受其他抗體污染之情況下合成得 之仏飾單株」指示抗體係自一群大體上均質之抗體 ϋ得的特彳攻且並不應解釋為需要藉由任何特定方法來產 生抗體。舉例而言，根據本發明有待使用之單株抗體可藉 由最初由Kohler等人’勤Mre，256:495 (1975)所述之融合 瘤（鼠類或人類）方法來製成，或可藉由重組DNA方法（參見 例如美國專利第4,816,567號）來製成。亦可使用例如 ClaCkS〇n等人，352:624-628 (1991)及 Marks等人， 乂 Mo/· 5z〇/·，222:581-5 97 (1991)中描述之技術自噬菌體抗 體文庫分離「單株抗體。 139530.doc -17· 201002737 「抗體片段」包含完整抗體之一部分，較佳包含其抗原 結合區或可變區。抗體片段之實例包括小於全長之抗體、 Fab、Fab’、F(ab')2及Fv片段；雙功能抗體；線性抗體；單 鏈抗體分子；單鏈抗體、單域抗體分子、融合蛋白、重組 蛋白及由抗體片段形成之多特異性抗體。 元整」抗體為包含抗原結合可變區以及輕鏈恆定域 (CL)及重鏈恆定域Ch1、Ch2及CH3的抗體。恆定域可為天 然序列恆定域（例如，人類天然序列恆定域）或其胺基酸序 列變異體。完整抗體較佳具有一或多種效應功能。 視完整抗體重鏈之恆定域之胺基酸序列而定，完整抗體 可歸為不同「類別」。存在5種主要類別之完整抗體： IgA、IgD、IgE、igG及IgM，且此等類別中之數種可進一 步为成「亞類」（同型），例如IgG 1、igG2、IgG3、IgG4、 IgA 1及IgA2。對應於抗體之不同類別的重鏈恆定域分別稱 作a、δ、ε、γ及μ。熟知免疫球蛋白之不同類別之次單元 結構及三維構型。 抗體「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區（天然序列 Fc區或胺基酸序列變異卜區）之彼等生物活性。抗體效應 功能之實例包括：Clq結合；補體依賴性細胞毒性；Fc受 體結合，抗體依賴性細胞介導之細胞毒性（ADCC) ·，吞噬 作用；細胞表面受體（例如，B細胞受體；BCR)之下調 等。 「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」及「ADCC」係指 細胞介導之反應，其中表現Fc受體（FcR)之非特異性細胞 139530.doc 18 201002737 毒性細胞（例如，自然殺傷（NK)細胞、嗜中性白血球及巨 σ藍細胞）識別標纪細胞上之結合抗體且隨後引起標把細胞 溶解。用於介導ADCC之初級細胞ΝΚ細胞僅表現FcyRIII， 而單核細胞表現FcyRI、FcyRII及FcyRIII。FcR在造jk細胞 上之表現概述於 Ravetch 及 Kinet, Tmwwno/ 9:457-92 (1991)之第464頁上的表3中。為評估所關注分子 之ADCC活性，可執行活體外ADCC檢定，諸如美國專利 第5,500,362號或第5,821,337號中所述之檢定。用於該等檢 定之適用效應細胞包括周圍血液單核細胞（PBMC)及自然 殺傷（NK)細胞。或者或另外，可對所關注分子之ADCC活 性進行活體内評估，例如在諸如揭示於Clynes等人，PiVJS (USA) 95:652-656 (1998)中之動物模型中進行。 「效應細胞」係表現一或多個FcR且執行效應功能之白 血球。該等細胞較佳至少表現FcyRIII且執行ADCC效應功 能。介導ADCC之人類白血球之實例包括周圍血液單核細 q 胞（PBMC)、自然殺傷（NK)細胞、單核細胞、細胞毒性T細 胞及嗜中性白血球；其中PBMC及NK細胞較佳。效應細胞 可自其天然來源分離，例如自如本文所述之血液或PBMC 分離。 ' 術語「Fc受體」或「FcR」用以描述結合至抗體之Fc區 的受體。較佳FcR為天然序列人類FcR。此外，較佳FcR為 結合IgG抗體（γ受體）且包括FcyRI、FcyRII及FqRIII亞類之 受體（包括此等受體之對偶基因變異體及替代剪接形式）的 FcR。FcyRII受體包括FcyRIIA(「活化受體」）及 139530.doc -19- 201002737

FcyRIIB(「抑制受體」），該兩者具有主要在細胞質域中不 同之類似胺基酸序列。活化受體FcyRIIA在其細胞質域中 含有免疫受體酪胺酸基活化基元（ITAm)。抑制受體 FcyRIIB在其細胞質域中含有免疫受體酪胺酸基抑制基元 (ITIM)。（參見論述]^ in Dagr〇n,如亂^ ^麵嶋厂 15:203-234 (1997))。FcR 論述於 Ravetch 及 Kinet, Annu.

Rev. Immunol 9:457_92 (1991) ; Capel等人，/麵瞻騰 4:25-34 (1994);及 de Haas 等人，C"«. Med. 126:330-41 (1995)中。本文中術語「FcR」涵蓋其他FcR， 包括將來待鑑別之FcR。該術語亦包括新生受體FcRn，其 負責將母體IgG轉移至胎兒（Guyer等人，乂 117:587 (1976)及 Kim 等人 ’ Eur· 乂 卿⑽,24:2429 (1994))。 「補體依賴性細胞毒性」或r CDC」係指分子在補體存 在下洛解標靶之能力。補體活化路徑係藉由補體系統之第 一組分（C 1 q)結合與同源抗原複合之分子（例如，抗體）開 始。為評估補體活化，可執行（例如）如Gazzan〇_Sant〇r〇等 人，·/. /衍则⑽施仏〇心202:163 (1996)中所述之CDC檢 定。 術語「可變」係指抗體間可變域之某些部分的序列廣泛 不同且該等部分用於各特定抗體對其特定抗原之結合及特 異性的事實。然而，可變性在整個抗體可變域中並非均勻 刀布。其集中於輕鏈與重鏈可變域中之三個稱作高變區之 區丰又中。可變域之更尚度保守部分稱作構架區（FR) ^天然 139530.doc •20· 201002737 重鏈及輕鏈之可變域各包含4個FR，大部分採用β折迭構 型’經形成環連接且在一些狀況下形成β折迭結構之一部 分的二個馬變區連接。各鏈中之高變區藉由FR緊密固持在 一起’且與來自另一鏈之高變區一起促進抗體之抗原結合 位點的开> 成（參見Kabat等人，Segwe/ices 〇/ 化/則 /mmw⑽/wca/ 仏如咖，篇 5 版，PubHc Health Service，

National Institutes of Health, Bethesda，Md·第 15-17 頁；48_ 53 (1991))。雖然恆定域並不直接涉及抗體與抗原之結 合，但其展現各種效應功能，諸如抗體參與抗體依賴性細 胞毒性（ADCC)。 當在本文中使用時術語「高變區」係指抗體之負責抗原 結合之胺基酸殘基。高變區一般包含來自「互補判定區」 或「CDR」之胺基酸殘基（例如輕鏈可變域中之殘基2‘ 34(L1)、50-56(L2)及 89-97(L3)及重鏈可變域中之 31_ 35(H1)、50-65(H2)及 95-102(H3) ; Kabat 等人， of Proteins 〇/ /mmwno/ogzcai ，著 5 版，public

Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. 第1 5-17頁；48-5 3 (1991))及/或來自「高變環」之彼等殘 基（例如輕鏈可變域之殘基26-32(Ll)、50-52(L2)及91-96(L3)及重鍵可變域之 26-32(Η1)、53-55(H2)及 96_ 101(H3) ; Chothia 及 Lesk 乂 Mo/· 196:901-917 (1987))。「構架區」或「FR」殘基為除如本文所定義之 高變區殘基外的彼等可變域殘基。木瓜蛋白酶消化抗體產 生以下片段：兩個稱為「Fab」片段之相同抗原結合片 139530.doc •21 - 201002737 段，各具有單一抗原結合位點；及一剩餘「Fc」片段，其 名稱反映其易於結晶之能力。胃蛋白酶處理產生F(abJ2片 段，其具有兩個抗原結合位點且仍能夠交聯抗原。 「F v」為含有完整抗原識別及抗原結合位點之最小抗體 片段。此區由一個重鏈可變域與一個輕鏈可變域緊密、非 共價締合之二聚體組成。在此構型中，各可變域之三個高 變區相互作用以界定VH-VL二聚體表面上之抗原結合位 點。總體而言，六個高變區賦予抗體抗原結合特異性。然 而’甚至單一可變域（或Fv之一半，僅包含三個對抗原具 特異性之高變區）亦具有識別及結合抗原之能力，不過親 寿力比I個結合位點低。pab片段亦含有輕鍵之怪定域及 重鏈之第一恆定域（CH I)。Fab，片段與Fab片段不同之處在 ;在重鍵CH1域之緩基末端處添加包括一或多個來自抗體 鉸鏈區之半胱胺酸的數個殘基。Fab，-SH為本文中對恆定 域之半胱胺酸殘基具有至少一個游離硫醇基之FA，的命 名F(ab )2杭體片段最初係以彼此間具有鉸鏈半胱胺酸之 F二片段對形式產生”亦已知抗體片段之其他化學偶合。 t自任何脊椎動物物種之抗體之「輕鏈」基於其恒定域 土敲序列可歸類為兩種明顯不同類型（稱作κ及人）之 其抗體 包人〜 於早—纽鏈巾。㈣地肽進-步 成供抗；，耿運接子，其使得scFv能夠形 原，、、。5之所需結構。關於“~之 139530.doc -22- 201002737

Pliickthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies 5 第 113 卷 ’ Rosenburg及 Moore eds·，Springer-Verlag, New York ，第 269-315頁（1994)。 術語「雙功能抗體」係指具有兩個抗原結合位點之小抗 體片段，該等片段包含與同一多肽鏈（VH-VL)中之輕鏈可 變域（VL)連接的重鏈可變域（Vh)。藉由使用過短而無法使 同一鏈上兩個域之間配對的連接子，該等域被迫與另一鏈 之互補域配對且產生兩個抗原結合位點。雙功能抗體更充 分地描述於（例如）EP 404,097 ; WO 93/11161 ;及 Hollinger 專尺 ’ Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993) 中ο 經分球」抗體為已經鑑別且與天然環境之組分分離及 /或自天然環境之組分中回收之抗體。其天然環境之污染 組分為將干擾抗體之診斷或治療用途之物質，且可包括 酶、激素及其他蛋白或非蛋白溶質。由於抗體之天然環境 之至少一種組分將不存在，所以經分離抗體包括原位處於 重組細胞内之抗體。然而，經分離抗體通常將藉由至少一 個純化步驟製備。 「結合」所關注之抗原的抗體為能夠以足夠親和力結合 彼抗原以使得抗體可用作靶向表現該抗原之細胞的治療或 診斷劑之抗體。在抗體為結合抗原部分之抗體的情況下， 與其他叉體相反，其通常將優先結合彼抗原部分，且不包 括偶然結合（諸如，非特異性Fc接觸）或其他抗原所共有之 與轉譯後修飾物（post_translati〇nal m〇dificati〇n)之結合， 139530.doc -23· 201002737 如本文所用之表述 :可為不與其他蛋白質顯著交又反應的抗冑。用於偵側結 合所關注抗原之抗體的方法在此項技術中熟知且可包^ (但不限於）諸如FACS、細胞ELISA及西方墨點法之檢定。 細胞株」及「細胞培養

J 細胞 物」、可^奐地使用且所有料名f爯包括+代。亦瞭解 子代可能由於蓄意或偶然性突變而在DNA含量上不精確一 致。包括如針對最初轉型細胞中所筛檢之具有相同功能或 生物活性之突變子代。此將自預期不同名稱之上下文中顯 而易見。 ' 治療」係指治療性治療或預防性或預防措施，直中目 標為預防或減緩（減輕）㈣病理病狀或病症。需要^療者 包括已患有該病症者以及傾向於患該病症者或有待預防該 ;^者此，本文中有待治療之哺乳動物可經診斷為患 有該病症或可易感染或易患該病症。 ‘心 術語「癌症」及「癌」係指或描述哺乳動物體内通常以 不又調控之細胞生長或社為特徵之生理減。癌症之實 例包括(但不限於)癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白企 病或淋巴惡性病。該等癌症之更特定實例包括鱗狀細胞声 (例如，上皮鱗狀細胞癌）；肺癌，包括小細胞肺癌、非;、 細胞肺癌；肺腺癌及肺鱗狀癌；腹膜癌；肝細胞癌；胃 X包括胃腸癌。；胰腺癌；神經膠母細胞瘤；子宮頸癌； =癌；肝癌；膀胱癌·，肝癌；乳癌；結腸癌；直腸癌； 、、、σ %直腸癌，子京内膜處女、 于呂内膜癌或子宮癌；唾液腺癌；腎癌；前 ’外陰癌；甲狀腺癌；肝癌瘤·，肛門癌瘤；陰莖癌 139530.doc -24. 201002737 瘤以及頭及頸部癌。

「化學治療劑」為可用於治療癌症之化合物。化學治療 劑之實例包括：烧基化劑，諸如塞替派（thiotepa)及環填醯 胺（CYTOXAN™);烧基石黃酸鹽，諸如白消安（busulfan)、 英丙舒凡（improsulfan)及哌泊舒凡（pip0SUlfan);吖丙啶 (aziridine)，諸如苯唑多巴（benzodopa)、卡巴醌（carboquone) 、米特多巴（meturedopa)及尤利多巴（uredopa);乙烯亞胺 (ethylenimine)及甲基三聚氰胺（methylamelamine)，包括六 曱密胺（altretamine)、曲他胺（triethylenemelamine)、三伸 乙基磷醯胺（triethylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷 醯胺（triethylenethiophosphoramide)及三 甲密胺 (trimethylolomelamine);氮芬（nitrogen mustard)，諸如苯 丁 酸氮芬（chlorambucil)、萘氮芥（chl〇rnaphazine)、膽麟醯 胺（cholophosphamide)、雌莫司汀（estramustine)、異環鱗 醯胺（ifosfamide)、氮芥（mechlorethamine)、鹽酸氮芥氧化 物、美法侖（melphalan)、新氮芥（novembichin)、膽固醇對 苯乙酸氮芥（phenesterine)、潑尼莫司汀（prednimustine)、 曲洛填胺（trofosfamide)、烏拉莫司汀（uracil mustard);硝 基脲（nitrosurea)，諸如卡莫司汀（carmustine)、氣脲黴素 (chlorozotocin)、福莫司汀（fotemustine)、洛莫司汀（lomustine) 、尼莫司汀（nimustine)、雷諾莫司汀（ranimustine);抗生 素，諸如克拉斯米辛（aclacinomysin)、放線菌素（actinomycin) 、奥斯拉米辛（authramycin)、偶氮絲胺酸（azaserine)、博 來黴素（bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、刺孢黴素 139530.doc -25- 201002737 (calicheamicin)、卡拉比辛（carabicin)、卡諾黴素（carn〇mycin) 、嗜癌菌素（carzinophilin)、色黴素（chrom〇mycin)、放線 菌素 D(dactinomycin)、道諾黴素（daunorubicin)、地托比星 (detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、多柔比星 (doxorubicin)、表柔比星（epirubicin)、依索比星（esorubicin) 、黃膽素（idarubicin)、麻西羅黴素（marcellomycin)、絲裂 黴素（mitomycin)、黴酚酸（mycophenolic acid)、諾拉黴素 (nogalamycin)、橄揽黴素（olivomycin)、培洛黴素 (peplomycin)、潑非黴素（potfiromycin)、嘌呤黴素 (puromycin)、奎那黴素（quelamycin)、羅多比星 (rodorubicin)、鏈黑黴素（streptonigrin)、鏈脲黴素 (streptozocin)、殺結核菌素（tubercidin)、烏笨美司（ubenimex) 、淨司他丁（zinostatin)、左柔比星（zorubicin);抗代謝 物，諸如曱胺°禁吟（methotrexate)及5 - 尿0密咬（5-FU);葉 酸類似物，諸如迪諾特寧（denopterin)、甲胺嗓呤、蝶羅吟 (pteropterin)、三曱曲沙（trimetrexate) ; °票呤類似物，諸如 氟達拉濱（fludarabine)、6-疏基 °票呤（6-mercaptopurine)、 α塞口米°票α令（thiamiprine)、硫鳥0票呤（thioguanine) ; °密σ定類似 物，諸如安西他濱（ancitabine)、阿紮胞苦（azacitidine)、6-氮尿苦（6-azauridine)、卡莫氟（carmofur)、阿糖胞芽 (cytarabine)、雙脫氧尿苦（dideoxyuridine)、脫氧氟1 尿苦 (doxifluridine)、依諾他濱（enocitabine)、氮尿 ^(floxuridine) 、5-FU ;雄激素，諸如二甲睾酮（calusterone)、丙酸屈他 雄酉同（dromostanolone propionate)、環硫雄醇（epitiostanol)、 139530.doc -26- 201002737 美雄烧（mepitiostane)、睾内醋（testolactone);抗腎上腺 類，諸如胺魯米特（aminoglutethimide)、米托坦（mitotane)、 曲洛司坦（trilostane);葉酸補充劑，諸如夫羅林酸（frolinic acid); 醋葡酸·内醋（aceglatone); 越石粦醯胺糖_ (aldophosphamide glycoside);胺基乙醯丙酸（aminolevulinic acid);安 °丫唆（amsacrine);倍思塔布（bestrabucil);比生 群（bisantrene);艾達曲克（edatraxate);得弗伐胺（defofamine)

;秋水仙胺（demecolcine);地11 丫酿（diaziquone);艾福米辛 (elformithine);依利醋銨（elliptinium acetate);依託格魯 (etoglucid);石肖酸鎵；經基脲（hydroxyurea);香益多糖 (lentinan);氣尼達明（lonidamine);米托胍腙（mitoguazone) ;米托蒽酉昆（mitoxantrone);莫派達醇（mopidamol);尼曲 阿曰（nitracrine);噴司他丁（pentostatin);凡那明（phenamet) ;0比柔比星（pirarubicin);足葉草酸（podophyllinic acid); 2-乙醯肼；丙卡巴肼（procarbazine) ; PSK® ;雷佐生 (razoxane);西佐喃（sizofiran);鍺螺胺（spirogermanium); 細交鏈孢菌酮酸（tenuazonic acid);三亞胺S昆（triaziquone) ;2,2',2M-三氯三乙胺；尿烧（urethan);長春地辛 (vindesine); 達卡巴口秦（dacarbazine); 甘露莫司汀 (mannomustine);二漠甘露醇（mitobronitol);二漠衛矛醇 (mitolactol);派泊漠烧（pipobroman);曱托辛（gacytosine) :阿拉伯糖普（arabinoside)(「Ara-C」）；環填醯胺；售替 派；紫杉烧（taxane)，例如太平洋紫杉醇（paclitaxel) (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, 139530.doc -27- 201002737 N.J.)及多稀紫杉醇（d〇cetaxel)(TAXOTERE®，Aventis， Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France);笨丁酸 I 芥；吉西 他賓（gemcitabine) ; 6-硫代鳥 °票呤（6-thioguanine);疏基 °票 呤；曱胺喋呤；鉑類似物，諸如順鉑（cisplatin)及卡鉑 (carboplatin);長春花鹼（Vinblastine);鉑；依託泊苷 (etoposide)(VP-16);異環磷醯胺；絲裂黴素C ;米托蒽 醌；長春新鹼（vincristine);長春瑞賓（vinorelbine);溫諾 平（navelbine);諾凡特龍（novantrone);替尼泊武 (teniposide)，道諾徽素；胺基。業吟（arninopterin);希羅達 (xeloda);伊班膦酸鹽（ibandronate) ; CPT-11 ;拓撲異構酶 抑制劑RFS 2000 ;二氟曱基鳥胺酸（Dmf〇);視黃酸；艾 斯帕米辛（esperamicin);卡西他賓（capecitabine);及以上 任何物質之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物。此定義中 亦包括用以調控或抑制激素對腫瘤之作用的抗激素劑，諸 如以下各物：抗雌激素，包括（例如）他莫昔芬 (tamoxifen)、雷洛昔芬（rai〇xifene)、芳香酶抑制性4(5)_味 °坐、4-經基他莫昔芬、曲沃昔芬（tri〇xifene)、雷洛昔芬鹽 酸鹽（keoxifene)、LY117018、奥那司酮（onapristone)及托 瑞米芬（t〇remifene)(法樂通（Farest〇n));及抗雄激素，諸如 氟他胺（flutamide)、尼魯胺（nilutamide)、比卡魯胺 (bicalutamide) ^亮丙立德（leuprolide)及戈舍瑞林 (goserelin);及以上任何物質之醫藥學上可接受之鹽、酸 或衍生物。 出於治療之目的之「哺乳動物」係指分類為哺乳動物之 139530.doc •28· 201002737 任何動物’包括人類、小鼠、SCID或裸小氣或小鼠變種' 家畜及農t及動物園、運動或玩f動物，諸如料、狗、 馬、貓、牛等。本文中哺乳動物較佳為人類。 「募核苷酸」為長度短之單鏈或雙鏈聚去氧核苷酸，其 係藉由已知之方法（諸如，磷酸三酯、亞磷酸酯或胺基磷 酸酯化學）使用固相技術（諸如1988年5月4日公開之辟 266,032中所述）或經由如‘心等人，1油細, 14:5399-5407, 1986所述之去氧核皆士膦酸酿巾間物化學 合成。接著將其在聚丙烯醯胺凝膠上純化。 根據本發明，非人類（例如，鼠類）免疫球蛋白之「人類 」及或t δ」形式係指含有特異性敌合免疫球蛋 白、免疫球蛋白鏈或其片段（諸如，Fv、Fab、Fab，、 F(ab’)d抗體之其他抗原結合子序列)(與原始抗體相比， 此降低人類抗小鼠抗體（HAMA)、人類抗嵌合抗體（haca) 或人類抗人類抗體（HAHA)之反應）且含有來源於該非人類 免疫球蛋白之為再現所需效應所必需的需要部分（例如， CDR'抗原結合區、可變域等）’而同時保持可與該非人 類免疫球蛋白相當之結合特徵的抗體。在很大程度上’人 類化抗體為人類免疫球蛋白（受體抗體），其中來自受體抗 體之互補判定區（CDR)之殘基被來自具有所需特異性、親 和力及此力之非人類物種（諸如，小鼠、大鼠或兔κ供體抗 體）之CDR之殘基置換。在某些情況下人類免疫球蛋白 之Fv構架區（FR)殘基經相應非人類fr殘基置換。此外，人 類化抗體可包含既不見於受體抗體中亦不見於輸入cdr或 139530.doc -29- 201002737 FR序列中之殘基。進行此等修飾以進一步改進及最佳化抗 體效能。-般而言，人類化抗體實質上包含至少—個且通 常兩個所有可變域’其中所有或實質上所有⑽區對應於 非人類免疫球蛋白之彼等c職且所有或實f上所有戰 基為人類免疫球蛋白共同序列之彼#FR殘基。人類化抗體 最佳亦將包含免疫球蛋白恒定區㈣之至少—部分，通常 為人類免疫球蛋白之至少一部分。 「去免疫化」抗體為對給定物種無免疫原性或具有較低 免疫原性的免疫球蛋白。去免疫化可經由對抗體結構作出 變化來實現。可採用熟習此項技術者已知之任何去免疫化 技術。用於使抗體去免疫化之一種合適技術描述於（例 如）2000年6月1 5日公開之w〇 00/343 17中。 誘發「細胞凋亡」之抗體為藉由任何方式（例如（但不限 於）膜聯蛋白（annexing之結合、卡斯蛋白酶（easpase)活 性、DNA斷裂、細胞皺縮、内質網擴張、細胞破碎及/或 形成膜囊（稱為細胞凋亡小體））誘發漸進式細胞死亡之抗 體。 應瞭解如本文所用之「抗體誘發性細胞毒性」意謂自由 以寄存編號200208-03寄存在IDAC的融合瘤產生之融合瘤 上液或抗體獲仔之細胞毒性效應’該效應不一定盘纟士人 程度相關。 在整個本說明書中，融合瘤細胞株以及由其產生之經分 離單株抗體替代性地以其内部名稱ARl 5〇A3 _ 11或寄存名 稱 IDAC 200208-03 提及。 139530.doc -30- 201002737 如本文所用之「抗體-配位體」包括展示對標靶抗原之 至少一個抗原決定基之結合特異性且可為完整抗體分子、 抗體片段及具有至少一抗原結合區或其部分（亦即，抗體 分子之可變區）之任何分子的部分，例如Fv分子、Fab分 子、Fab1分子、F(ab，）2分子、雙特異性抗體、融合蛋白或 特異性識別及結合藉由稱為〗DAC 200208-03之融合瘤細胞 株產生之經分離單株抗體所結合的抗原（IDAC 200208-03 抗原）之至少一個抗原決定基的任何遺傳工程化分子。 如本文所用之「癌症疾病調節抗體」（CDMAB)係指以有 益於患者之方式’例如藉由降低腫瘤負荷或延長具有腫瘤 之個體之存活來調節癌症疾病過程的單株抗體及其抗體_ 配位體。 如本文所用之「抗原結合區」意謂識別標靶抗原之分子 的一部分。 如本文所用之「競爭性抑制」意謂使用習知相互抗體競 爭檢定能夠識別及結合由稱為IDAC 200208-03之融合瘤細 胞株產生之單株抗體（ID AC 200208-03抗體）所針對的決定 子位點。（Belanger L·, Sylvestre C 及 Dufour D. (1973)， Enzyme linked immunoassay for alpha fetoprotein by competitive and sandwich procedures. Clinica Chimica Acta 48, 15)。 如本文所用之「標靶抗原」為IDAC 200208-03抗原或其 部分。 如本文所用之「免疫接合物」意謂諸如化學或生物連接 139530.doc -31 - 201002737 至細胞毒素、放射性劑、酶、毒素、抗腫瘤藥物或治療劑 之抗體的任何分子或CDMAB。抗體或CDMAB可在沿該分 子之任何位置處連接至細胞毒素、放射性劑、抗腫瘤藥物 或治療劑，只要其能夠結合其標靶即可。免疫接合物之實 例包括抗體毒素化學接合物及抗體-毒素融合蛋白。 如本文所用之「融合蛋白」意謂抗原結合區連接至生物 活性分子（例如，毒素、酶或蛋白質藥物）的任何欲合蛋 白。 為了可更充分地理解本文所述之發明，闡述以下說明。 本發明提供特異性識別及結合IDAC 200208-03抗原之 CDMAB(亦即，IDAC 200208-03 CDMAB)。 由以寄存編號200208-03寄存在ID AC之融合瘤產生的經 分離單株抗體之CDMAB可呈任何形式，只要其具有競爭 性抑制由融合瘤IDAC 200208-03產生之經分離單株抗體與 其標靶抗原的免疫特異性結合之抗原結合區即可。因此， 具有與IDAC 200208-03抗體相同之結合特異性之任何重組 蛋白質（例如，抗體與第二蛋白質（諸如，淋巴因子或腫瘤 抑制生長因子）組合的融合蛋白）在本發明之範疇内。 在本發明之一實施例中，CDMAB為IDAC 200208-03抗 體。 在其他實施例中，CDMAB為抗原結合片段，其可為Fv 分子（諸如，單鏈Fv分子）、Fab分子、Fab'分子、F(ab')2分 子、融合蛋白、雙特異性抗體、異種抗體或具有IDAC 200208-03抗體之抗原結合區之任何重組分子。本發明之 139530.doc • 32- 201002737 CDMAB係針對IDAC 200208-03單株抗體所針對之抗原決 定基。 本發明之CDMAB可經修飾，亦即分子内之胺基酸修 飾，以產生衍生分子。化學改質亦可為可能的。 衍生分子將保留多肽之功能性質，亦即，具有該等取代 之分子仍將允許多肽與IDAC 200208-03抗原或其部分之結 合。 此等胺基酸取代包括（但不一定限於）此項技術中稱為 「保守」之胺基酸取代。 舉例而言，通常可在不改變蛋白質構形或功能的情況下 在蛋白質中進行稱為「保守胺基酸取代」之某些胺基酸取 代係蛋白質化學之公認原則。 該等改變包括以下取代：用異白胺酸（I)、纈胺酸（V)及 白胺酸（L)中之任一者取代此等疏水性胺基酸中之任何其 他胺基酸；用天冬胺酸（D)取代麩胺酸（E)且反之亦然；用 麩醯胺酸（Q)取代天冬醯胺（N)且反之亦然；及用絲胺酸（S) 取代蘇胺酸（T)且反之亦然。視特定胺基酸之環境及其在 蛋白質之三維結構中的作用而定，亦可認為其他取代為保 守的。舉例而言，甘胺酸（G)及丙胺酸（A)通常可互換，丙 胺酸與纈胺酸（V)亦可如此。相對疏水性之甲硫胺酸（M)通 常與白胺酸及異白胺酸可互換，且有時與纈胺酸互換。離 胺酸（K)及精胺酸（R)在胺基酸殘基之重要特徵係其電何且 此兩種胺基酸殘基之不同pK並不顯著的位置處通常可互 換。在特定環境中，其他改變仍可被認為係「保守」的。 139530.doc -33- 201002737 實例1 融合瘤之產生-融合瘤細胞株AR1 5 0 A3.11 根據布達佩斯條約（Budapest Treaty)，融合瘤細胞株 AR15 0A3.11在2008年2月20日以寄存編號2002 08-03寄存在 International Depository Authority of Canada(IDAC), Bureau of Microbiology, Health Canada, 1015 Arlington Street, Winnipeg, Manitoba, Canada, R3E 3R2。根據 37 CFR 1.808，寄存者確保對寄存物質之公眾可用性所施加的所 有限制最後將在頒予專利後移除。若寄存處不可分配可存 活樣品，則置換寄存物。 為製備產生抗癌抗體AR150A3.il之融合瘤，在PBS中製 備冷珠人類騰腺導管癌瘤組織（Genomics Collaborative, Cambridge, ΜΑ)之單細胞懸浮液。Ribi’sTM(Sigma，Oakville, ON, Canada)佐劑係藉由輕微混合來備用。藉由皮下注射 200微升抗原佐劑中之兩百萬個細胞，使5至7週大的 BALB/c小鼠免疫。在用200微升中之兩百萬個細胞初始免 疫2及5週後，使用新製備之抗原-佐劑經腹膜内加強免疫 小鼠。在上次免疫後3天，使用脾進行融合。藉由使經分 離脾細胞與NSO-1骨髓瘤搭配物融合來製備融合瘤。自融 合瘤之次純系測試來自融合之上清液。 為確定由融合瘤細胞分泌之抗體為IgG同型抑或IgM同 型，採用ELISA檢定。在4°C下，將1〇〇微升/孔的在塗佈緩 衝液（0.1 Μ碳酸鹽/碳酸氫鹽緩衝液，pH 9.2-9.6)中濃度為 2.4微克/毫升之山羊抗小鼠IgG+IgM(H+L)添加至ELISA培 139530.doc -34- 201002737 養盤中隔仪。將培養盤在洗務缓衝液（PBS + 0.05% Tween) 中先烏—人。在至溫下將1 00微升/孔阻斷緩衝液（洗滌緩衝 液中之5〇/〇牛奶）添加至培養盤中，歷時1小時，且接著在洗 滌緩衝液令洗滌3次。添加1〇〇微升/孔之融合瘤上清液且 將培養盤在室溫下培育丨小時。將培養盤用洗滌緩衝液洗 滌人，且添加100微升/孔之山羊抗小鼠IgG或IgM辣根過 氧化物酶接合物的1/1〇〇,〇〇〇稀釋液（在含有5%牛奶之PBS 中稀釋）。在室溫下培育培養盤丨小時後，將培養盤用洗滌 缓衝液洗滌3次。將1〇〇微升/孔之TMB溶液在室溫下培育卜 3分鐘。藉由添加50微升/孔之2M HJQ4使顏色反應終止， 且使用Perkin-EImer HTS7〇〇〇盤讀數器在45〇 nm下對培養 盤肩數。如圖1中所指示，AR1 5 0 A3 · 11融合瘤主要分泌 IgG同型之抗體。 為確定由融合瘤細胞分泌之抗體之亞類，使用小鼠單株 抗體同型套組（HyCult Biotechnology，Frontstraat，Netherlands) 執行同型實驗。將500微升緩衝溶液添加至含有大鼠抗小 鼠亞類特異性抗體之測試條上。將5〇〇微升融合瘤上清液 添加至測試管中，且藉由溫和攪動使之浸沒。直接藉由偶 合至膠體微粒之第二大鼠單株抗體偵測捕獲之小鼠免疫球 蛋白。此兩種蛋白質之組合產生用以分析同型之可見信 號。抗癌抗體AR150A3.1 1為IgG2b κ同型。 在一輪限制稀釋後’在細胞ELISA檢定中針對結合於標 乾細胞之抗體來測試融合瘤上清液。分別測試三種人類胰 腺癌細胞株及一種人類非癌症胰腺細胞株：AsPc_i、 139530.doc -35· 201002737

BxPC-3、PL4 5及VIT-1。除VIT-1夕卜，所有細胞株均係自

American Type Tissue Collection(ATCC，Manassas, VA)獲 得；VIT-1細胞株係自 Vitro Diagnostics Inc.(Aurora，CO) 獲得。在使用之前將所塗細胞固定。在室溫下將培養盤用 含有MgCh及CaCh之PBS洗滌三次。在室溫下將ι〇〇微升 在PBS中稀釋之2%三聚曱醛添加至各孔中，歷時1〇分鐘， 且接著棄去。再次在室溫下將培養盤用含有MgCl2及CaCl2 之PB S洗滌二次。在室溫下使用1 〇〇微升/孔之於洗務緩衝 液（PBS+0.05% Tween)中之5%牛奶進行阻斷，歷時丄小 時。將培養盤用洗務緩衝液洗務3次，且在室溫下以7 5微 升/孔添加融合瘤上清液，歷時1小時。將培養盤用洗滌緩 衝液洗滌3次，且添加1 〇〇微升/孔之與辣根過氧化酶接合 之山羊抗小鼠IgG或IgM抗體的1/25,000稀釋液（在含有5% 牛奶之PBS中稀釋）。在室溫下培育1小時後，將培養盤用 洗務緩衝液洗滌3次，且將1 〇〇微升/孔之TMB受質在室溫 下培育1-3分鐘。使用50微升/孔之2M H2S04使反應終止， 且使用Perkin-Elmer HTS7000盤讀數器在450 nm下對培養 盤讀數。如圖1中製成表格之結果係表示為與先前已顯示 未與所測試之細胞株結合的内部（in_h〇use)IgG同型對照物 相比超過背景之倍數。來自融合瘤AR1 50A3.11之抗體顯 不可偵測之與BxPC-3、PL45及VIT-1細胞株的結合。 結合針對抗體結合之測試，在以下細胞株中測試融合瘤 上清液之細胞毒性效應（抗體誘發性細胞毒性）：AsPC-1、 BxPC-3、PL4 5 及 VIT-1。Calcein AM 係自 Molecular 139530.doc -36- 201002737

Probes(Eugene，OR)獲得且如下所概述執行檢定。在檢定 之前’以預定合適之密度塗細胞^ 2天後，將75微升來自 融合瘤微量滴定盤之上清液轉移至細胞培養盤中且在5 〇/〇 C〇2恒溫相中培育5天。將用作陽性對照之孔吸出直至為 空’且添加1〇〇微升溶於培養基中之疊氮化鈉（NaN3, 〇.1%,

Sigma, Oakville, ON)或放線菌 〇 5 微莫耳，Sigma, Oakville, ON)。處理5天後，接著藉由倒 置及吸乾使培養盤為空。將含有MgCl2及CaCl2之室溫 DPBS(杜爾貝科氏磷酸鹽緩衝生理食鹽水（Dulbecc〇,s phosphate buffered saline))自多通道壓擠瓶分配至各孔 中，輕拍3次’藉由倒置且接著吸乾來排空。將5〇微升在 含有MgCh及CaCh之DPBS中稀釋的螢光鈣黃綠素染料添 加至各孔中且在37°C下在5% C〇2恆溫箱中培育30分鐘。在 Perkin-Elmer HTS7000螢光盤讀數器中對培養盤讀數且以 Microsoft Excel分析資料。在圖i中將結果製成表格。來自 AR 150A3.il融合瘤之上清液產生對AsPC-1細胞之17.2%之 特異性細胞毒性。此為在陽性對照放線菌酮下獲得之細胞 毒性的18%。來自AR150A3.il融合瘤之上清液亦產生對 PL45細胞之13.1%之特異性細胞毒性，其為在陽性對照物 下獲得之細胞毒性的14%。已知之非特異性細胞毒性劑放 線菌酮一般產生如所期望之細胞毒性。 來自圖1之結果證明AR 1 5 0A3.11對不同細胞株之細胞毒 性效應並非與結合程度相關聯。雖然最高結合程度為與 PL45細胞株之結合，但最高細胞毒性係針對Aspc — 丨細胞 139530.doc -37- 201002737 株。雖然ARl 5 0A3 · 11結合VIT-1非癌細胞株，但其在VIT-1非癌細胞株中未產生細胞毒性。因此，抗體展現不一定 與結合程度相關之功能特異性。 實例2 活體外結合 藉由在CL-1000 燒瓶（BD Biosciences, Oakville, ON)中培 養融合瘤，每週進行收集及再接種兩次，來產生 AR150A3.il 單株抗體。接著使用 Protein G Sepharose 4 Fast Flow(Amersham Biosciences, Baie d’Urf0, QC)進行標 準抗體純化程序。利用經人類化、去免疫化、嵌合或鼠類 之單株抗體在本發明之範疇内。 藉由流式細胞儀（FACS)評估AR15 0A3.il與乳癌細胞株 (MDA-MB-23 1)、肺癌細胞株（A549)、印巢癌細胞株（SK-OV-3)、胰腺癌細胞株（BxPC-3)及前列腺癌細胞株（PC-3) 及來自皮膚之非癌細胞株（CCD-27sk)的結合。所有細胞株 均係自 American Type Tissue Collection(ATCC, Manassas, VA)獲得。 藉由最初用DPBS(不含Ca+ +及Mg+ + )洗滌細胞單層，來製 備用於FACS之細胞。接著在37°C下使用細胞解離缓衝液 (Invitrogen, Burlington, ON)自細胞培養盤移出細胞。離心 及收集後，在4°C下將細胞再懸浮於含有MgCl2、CaCl2& 2%胎牛血清之DPBS(染色介質）中，且加以計數，針對合 適細胞密度進行等分，旋轉減慢以使細胞粒化且在測試抗 體（AR150A3.il)或對照抗體（同型對照，抗EGFR(c225, 139530.doc -38- 201002737

IgGl，κ，Cedarlane, Hornby ON))存在下於4°C 下再懸浮於 染色介質中。在20微克/毫升下評估同型對照物及測試抗 體，而在5微克/毫升下評估抗EGFR，在冰上進行歷時30 分鐘。在添加Alexa Fluor 546接合之二次抗體之前，將細 胞用染色介質洗滌1次。接著在4°C下添加染色介質中之 Alexa Fluor 546接合之抗體，歷時30分鐘。接著洗滌細 胞，歷時最終時間，且再懸浮於固定介質（含有1.5%三聚 甲醛之染色介質）中。藉由使用FACSarray™系統軟體（BD Biosciences, Oakville, ON)在 FACSarray™上運行樣品，來 評估細胞之流式細胞儀獲得物。細胞之前向散射（FSC)及 側向散射（SSC)係藉由調整FSC及SSC偵測器上之電壓及振 幅增益來設定。藉由運行未染色細胞來調整螢光（Alexa-546)通道之债測器，以使得細胞具有中位螢光強度為約1-5 個單位之均一峰。對於每一樣品而言，獲得約1 0,000個門 控事件（染色固定之細胞）以供分析且結果呈現於圖2中。 圖2呈現超過同型對照組之平均螢光強度倍數增加。對 圖3而言，編制AR150A3.1 1抗體之代表性直方圖。 AR15 0A3.il展示與除肺癌細胞株A549及胰腺癌細胞株 BxPC_3夕卜之測試的細胞才朱結合。存在與乳癌細胞才朱MDA-1^6-231(3.7倍）、卵巢癌細胞株8反-0乂-3(6.4倍）及前列腺癌 細胞株PC-3(1.6倍）及非癌皮膚細胞株CCD-27sk(2.9倍）的 結合。此等資料證明AR150A3.il以不同抗原表現程度與 數種不同細胞株結合。 實例3 139530.doc -39- 201002737 使用MDA-MB-：23 1細胞進行活體内腫瘤實驗 實例1證明AR15 0A3.il具有對抗人類胰腺癌之抗癌性 夤。為§登明在乳癌模型中之功效，在MDA-MB-23 1乳癌異 種移植模型中測試AR150A3.11。參考圖4及5，向6至8週 大之雌性SCID小鼠植入皮下注射於右側腹之1〇〇微升ρΒδ 溶液中之五百萬個人類乳癌細胞（MDA-MB-23 1)。將小鼠 隨機分成2個處理組，每組1〇隻。在植入後當天，在用含

有 2.7 mM KCM、1 mM KH2P04、137 mM NaCl及 20 mM

NasHPO4之稀釋劑自儲備濃度稀釋後，以3〇〇微升之體積 向各群組腹膜内投與2〇 mg/kg AR150A3.11測試抗體或緩 衝液對照物。接著每週投與抗體及對照樣品一次，歷時研 究之持續時間。約每7天用測徑規量測腫瘤生長。在8次抗 體給藥後，完成研究。每週記錄動物體重一次，歷時研究 之持續時間。在研究結束時，根據CCAC準則處死所有動 物。 在人類乳癌之MDA-MB-231活體内預防模型中 AR1 50A3 · 1 1降低腫瘤生長。與缓衝液處理之組相比，如 在最後一次抗體給藥後7天第57天測定，用Arius抗體 AR15 0A3.11處理可使MDA_MB_231腫瘤之生長降低looo% (p = 〇._OG3, t 檢驗）（圖 。 在整個研究中不存在毒性之臨床徵象。每隔一週量測之 體重為健康及發育停滯之替代指標（圖5)。在處理時期結束 時該等組之間的平均體重不存在顯著差異。自研究開始至 結束，各組内平均體重亦無降低。 139530.doc -40- 201002737 一。之在此人#乳癌異種移植模型中AR1 5〇a〗·丨i耐 叉性良好且可顯著降低腫瘤負荷。 實例4 青兄^性結合子之分離 假疋抗體 般技術者可產生競爭性抑制CDMAB， 例如競f抗體，其為識別相同抗原決定基之抗體㈣ L 等人 ’ ClinicaChimica Acta48:i5i8 (1973))。—種方法 f: f要用表現由抗體識別之抗原的免疫原免疫。樣品可包括 (但不限於)組織、分離蛋白或細胞株。所得融合瘤可使用 競爭檢定來篩檢，該競爭檢定為鑑別可抑制測試抗體之結 合之抗體的檢定’諸如ELISA、FACW西方墨點法。另一 方法可利用嗟菌體呈現抗體文庫及淘選識別該抗原之至少 一個抗原決定基的抗體（Rubinstein JL等人，Anal Bi〇chem 3^4:294-300 (2003)).在任—狀況下，基於抗體置換初始 標記抗體與其標靶抗原之至少一個抗原決定基之結合的能 〇 力來選擇抗體。因此，該等抗體將具有如初始抗體識別抗 原之至少一個抗原決定基的特徵。 實例5 AR150A3.il單株抗體之可變區之選殖 可測定來自由AR150A3.11融合瘤細胞株產生之單株抗 體之重鏈（VH)及輕鏈（Vl)的可變區之序列。可使用標準方 法，包含以異硫氰酸胍進行細胞溶解（Chirgwin等人， Biochem. 18:5294_5299 (1979))，自標的融合瘤提取編碼 免疫球蛋白之重鏈及輕鏈之RNA。藉由此項技術中已知之 139530.doc •41 · 201002737 PCR 方法（Sambrook 等人編，Molecular Cloning，第 14 章， Cold Spring Harbor laboratories Press, Ν·Υ. (1989))，可使 用mRNA來製備用於隨後分離vH與VL基因的CDNA。重鏈 及輕鏈之N末端胺基酸序列可藉由自動埃德曼定序（Edrnan sequencing)獨立測定。CDR及側接FR之其他段亦可藉由γΗ 及VL片段之胺基酸定序來測定。接著可設計合成引子以自 AR150A3.11單株抗體分離vH及VL基因且可將分離基因接 合至合適載體中以供定序。為產生嵌合及人類化1§(}，可 將可變輕鏈結構域及可變重鏈結構域次選殖至合適載體中 以供表現。 ⑴單株抗體 編碼單株抗體（如實例1中所概述）之Dn A易於使用習知 程序（例如’藉由使用能夠特異性結合編碼該等單株抗體 之重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針）來分離且定序。融 合瘤細胞用作該DN A之較佳來源。一旦經分離，則可將 DNA置於表現載體中，接著將該表現載體轉染至不另外產 生免疫球蛋白蛋白質之宿主細胞（諸如大腸桿菌（E. c〇u)細 胞、猿COS細胞、中國倉鼠卵巢（CH〇)細胞或骨髓瘤細胞） 中以獲得重組宿主細胞内之單株抗體的合成。dna亦可 (例如）藉由用人類重鏈及輕鏈恆定域之編碼序列取代同源 鼠類序列來修飾。亦可使用合成蛋白質化學中包括涉及交 聯劑之彼等方法的已知方法活體外製備嵌合或雜交抗體。 2例而言，可使用二硫鍵交換反應或藉由形成㈣鍵來構 杀免疫毒素。用於達成此目的之合適試劑之實例包括亞胺 139530.doc -42- 201002737 基硫醇酯（iminothiolate)及曱基-4-巯基丁醯亞胺酯（methyl_ 4-mercaptobutyrimidate)。 (ii) 人類化抗體 人類化抗體具有一或多個自非人類來源引入之胺基酸殘 基。此等非人類胺基酸殘基通常稱為「輸入」殘基，其通 ' 常係取自「輸入」可變域。可藉由各種技術，例如（但不

限於）Winter及其合作者之方法藉由以齧齒動物CDR* CDR 序列取代人類抗體之相應序列來執行人類化（Jones等人， Nature 321:522-525 (1986) ; Riechmann 等人，Nature 332:323-327 (1988) ; Verhoeyen等人’以化⑽⑽：⑸扣 1536 (1988)，Clark, Immunol. Today 21:397-402 (2000)中 論述）。 人類化抗體可藉由一種使用親本序列及人類化序列之三 維模型來分析親本序列及各種概念性人類化產物的方法而 製備。二維免疫球蛋白模型為普遍可利用的且為熟習此項 〇 &術者所熟悉。可利用說明且展現所選候選免疫球蛋白序 列之可能三維構形結構的電腦程式。此等展現之檢驗允許 >析殘基在候選免疫球蛋白序列起仙時之可能作用，亦 即’分析影響候選免疫球蛋白與其抗原結合之能力的殘 基。以此方式，可自一致及輸入序列選擇FR殘基且加以組 合，以便獲得所需抗體特徵，諸如對標把抗原之親和力辦 加。-般而言，CDR殘基直接且在很大程度上涉及影響二 原結合。 (iii) 抗體片段 139530.doc -43- 201002737 已開發出各種技術用於產生抗體片段。此等片段可由重 組宿主細胞產生（Hudson，Curr. 〇pin. immunol. 11:548-557 (1999); Little等人，Immunol. Today 21:364-370 (2000)中 論述）。舉例而言，Fab'-SH片段可直接自大腸桿菌回收且 經化學偶合以形成F(ab’）2片段（Carter等人，Bi〇techn〇i〇gy 10:163-167 (1992))。在另一實施例中，使用白胺酸拉鏈 GCN4來促進F(ab’）2分子之組裝來形成F(ab，）2。根據另一方 法，Fv、Fab或F(ab，)2片段可直接自重組宿主細胞培養物 分離。 實例6 包含本發明抗體之組合物 本發明之抗體可用作用於預防/治療癌症之組合物。 含本發明抗體之用於預防/治療癌症之組合物為低毒性 且可以液體製劑之形式或以合適製劑之醫藥組合物的妒 向人類或哺乳動物(例如’大氣、兔、綿羊、豬牛/ ΐ等y 口或非經腸(例如，血管内、腹膜内、 下等Η又與。本發明之抗體可 、“人 本來形式投與，或可以 二式投與。用於投與之組合物可含有藥理學上 接又之載劑以及本發明之抗體或其踏 此類組合物係以適於經口或非二 ^或賦形劑 供。 _，丄腸杈樂之醫藥製劑形式 :非經腸投藥之組合物的 莖Λ例為可注射製劍、 專。可注㈣财包括諸如靜脈内 注射液、SJt、名 — 皮下皮内及肌 滴、關卽内注射液等劑型。此等可注射製 139530.doc -44- 201002737 i.

J 藉由公開已知之方法來製備。舉例而t，可注射製劑可夢 由使本發明之抗體或其鹽溶解、懸浮或乳化於習知用於： 射之無菌水性介質或油性介質中來製備。存在（例如）生理 鹽水、含有葡⑽及其他助劑之特溶㈣作為注射用水 性介質’其可與諸如醇（例如，乙醇）、多元醇（例如，丙二 醇、聚乙二醇）、非離子界面活性劑（例如，聚山梨醇醋 80、HCO-5〇(氫化！|麻油之聚氧乙烯（5〇莫耳）加合物））等人 適增溶劑組合使用。採用（例如）芝麻油、大豆油等作為： 性介質，其可與諸如苯甲酸…节醇等增溶劑址合使 用。由此製備之注射液通常填充於合適安瓿卜用於直腸 投藥之栓劑可藉由將本發明之抗體或其鹽與習知用於栓劑 基貝杉口來製備。經口投與之組合物包括固體或液體製 劑，特定言之’旋劑（包括糖衣藥丸及膜衣键劑）、丸劑、、 顆粒、粉狀製劑、膠囊（包括軟膠囊）、糖t、乳液、縣浮 液等。此類組合物係藉由公開已知之方法來製造且 習知用於醫藥製劑領域之媒劑、稀釋劑或賦形劑。用於旋 =之媒劑或賦形劑之實例為乳糖、澱粉、蔗糖、硬脂酸鎮 等。 述經口或非經腸使用之纪合物製成具有適 "旦-劑活性成份一致之單位劑量的醫藥製劑。該等單位 :量製劑包括(例如)錠劑、丸劑、膠囊、注射织安瓿卜 缸劑等：所含上述化合物之量一般為每劑量單位形心至 0 mg ’較佳含有約5至約1〇〇 之特定言之呈注射液形 工之上述抗體’且對於其他形式而言，含10至250 mg。 139530.doc _45_ 201002737 包含本發明抗體之上 、目^ m ^ 預防/治療劑或調控劑的劑量可 視待投與之受檢者、目萨广+ a 里可 ,與^ ^ 疾病、病狀、投藥途徑等而變 化。舉例而言，當用於遠么 又 a . . 声違成、〜療/預防（例如）成人之乳癌之 目的％·，有利地是靜脈内 鬥奴與本發明之抗體每公斤 0.01至約20 mg之劑量，較 4體重約 軚乜母公斤體重約0.1至約丨0mg2 劑量’且更佳每公斤體重 w 董約Ο.1至約5 mg之劑量，約}至 次/天’較佳約丨至3次/ — 在其他非經腸及經口投藥中， 藥劑可以對應於上文仏曰 Z、 、σ出之4置的劑量投與。當病狀特別 嚴重％，可根據病狀增加劑量。 本發明之抗體可按昭會朽主 w^際情況或以合適組合物形式投 與、。、用於投蚊組合物可含有藥理學上可接受之載劑以及 上述抗體或其鹽、稀釋劑或賦形劑。此類組合物係以適於 藥製 經口或非經腸投藥(例如，血管注射、皮下注射)之…、 劑形式提供。上述各組合物可進—步含有其他活性成份 匕卜本I明之杬體可與其他藥物組合使用，該等其他藥 物例如烷基化劑（例如，環磷醯胺、異環磷醯胺等）、代謝 抗”4丨（例如，甲胺喋呤、5_氟尿嘧啶等）、抗腫瘤抗生素 (例如、、糸表黴素、阿黴素（adriamycin)等）、植物源性抗腫 瘤知丨（例如，長春新驗、長春地辛、紫杉酚等）、順鉑、卡 鉑、依託泊苷、伊立替康等。本發明之抗體及上述藥物可 同時或以交錯時間向患者投與。 5登據優勢顯示AR1 50 A3 _ 1 1經由癌細胞株上存在之抗原 决定基之連接來介導抗癌效應。此外，可顯示利用例如 (但不限於）FACS、細胞ELISA或IHC之技術，AR150A3.il 139530.doc -46- 201002737 抗體可用於_表現與抗體特異性結合之抗原決定基的細 胞。 ’ 、月曰中提及之所有專利及公開案表現出熟習本發明 所屬之技術者的水平。> 同特定及個別地指示各個別公開 案係以引用的方式併人般，所有專利及公開案係在相同程 度上以引用的方式併入本文中。 應瞭解雖然已說明本發明之某—形式，但本發明不受限 於本文中所4及所示之部分的特定形式或安排。熟習此項 技術者應明瞭在不偏離本發明之料的情況下可作出各種 改變’且不應認為本發明受限於本說明書中所示及所述之 内容。 熟習此項技術者應易於瞭解本發明極適合於實現所提及 之目標且獲得所提及之結果及優點，以及其中固有之結果 及優點。本文所述之任何寡核苦酸、R、多肤、生物相關 化合物、方法、程序及技術目前代表了較佳實施例，音欲 為例示性的欲對料進行_。其中之改變及盆他 用途可由熟習此項技術者想到，其涵蓋於本㈣之精神範 圍内且係由隨附中請專利範圍之範B壽界定。雖然已#合_ 定較佳實施例描述了本發明，但應瞭解所主張之本發明不 應受該等特定實施例過度限制。實際上，對關於㈣本發 明所述且為熟習此項技術者所顯易 勿兄乏杈式的各種修改 意欲屬於以下申請專利範圍之範蜂。 【圖式簡單說明】 圖1比較融合瘤上清液針對細胞株入仆^、Bee]、 139530.doc -47- 201002737 PL45及VIT-1之細胞毒性％及結合程度； 圖2呈現AR15 0A3.11與癌細胞株及正常細胞株之結合。 將資料製成表格以將平均螢光強度呈現為超過同型對照組 之倍數增加； 圖3包括針對數種癌細胞株及非癌細胞株之AR1 50 A3.1 1 及抗EGFR抗體的代表性FACS直方圖； 圖4展示在預防性MDA-MB-231乳癌模型中AR150A3.11 對腫瘤生長之影響。垂直虛線指示投與抗體所歷經之時 段。資料點表示平均值+/-SEM ;及 圖5展示在預防性MDA-MB-231乳癌模型中AR150A3.1 1 對體重之影響。資料點表示平均值+/-SEM。 139530.doc -48-

Claims (1)

1. 201002737 七、申請專利範圍： 1. 一種經分離單株抗體，其係由以寄存編號200208-03寄存 在IDAC之融合瘤產生。 2. 一種經分離單株抗體之人類化抗體或由該人類化抗體產 生之抗原結合片段，該經分離早株抗體係由以寄存編號 200208-03寄存在IDAC之融合瘤產生。 3. 一種經分離單株抗體之嵌合抗體或由該嵌合抗體產生之 抗原結合片段，該經分離單株抗體係由以寄存編號 200208-03寄存在IDAC之融合瘤產生。 4. 一種經分離融合瘤細胞株，其係以寄存編號200208-03寄 存在IDAC。 5. 一種用於在選自人類腫瘤之組織樣品中引發癌細胞之抗 體誘發性細胞毒性的方法，其包括： 提供來自該人類腫瘤之組織樣品； 提供由以寄存編號200208-03寄存在IDAC之融合瘤產 厂 生之經分離單株抗體、由以寄存編號190607-04寄存在 k./ IDAC之融合瘤產生之經分離單株抗體的人類化抗體、由 以寄存編號200208-03寄存在IDAC之融合瘤產生之經分 ^ 離單株抗體的嵌合抗體或其CDMAB，該CDMAB之特徵 '為競爭性抑制該經分離單株抗體與其標I巴抗原之結合的 能力；及 使該經分離單株抗體、該人類化抗體、該嵌合抗體或 其CDMAB與該組織樣品接觸； 其中該經分離單株抗體、該人類化抗體、該嵌合抗體 139530.doc 201002737 或其CDMAB與該組織樣品之結合誘發細胞毒性。 6. 一種如請求項1之經分離單株抗體之CDMAB。 7. 一種如請求項2之人類化抗體之CDMAB。 8. 一種如請求項3之嵌合抗體之CDMAB。 9. 如請求項1、2、3、6、7或8中任一項之經分離抗體或其 CDMAB，其與選自由細胞毒性部分、酶、放射性化合 物及造血細胞組成之群之成員接合。 10. —種由以寄存編號200208-03寄存在IDAC之融合瘤產生 之經分離單株抗體或其CDMAB的用途，其係用於製造 用以治療哺乳動物中對抗體誘發性細胞毒性敏感之人類 腫瘤的藥劑，其中該人類腫瘤表現與該單株抗體或其該 CDMAB特異性結合之抗原的至少一個抗原決定基，該 CDMAB之特徵為競爭性抑制該經分離單株抗體與其標 革巴抗原之結合的能力。 11. 如請求項10之用途，其中該經分離單株抗體接合至細胞 毒性部分。 12. 如請求項1 1之用途，其中該細胞毒性部分為放射性同位 素。 13. 如請求項10之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB可活化補體。 14. 如請求項10之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB可介導抗體依賴性細胞毒性。 15. 如請求項10之用途，其中該經分離單株抗體為人類化抗 體。 139530.doc 201002737 16. 如請求項10之用途，其中該經分離單株抗體為嵌合抗 體。 17. —種單株抗體，其能夠特異性結合與寄存編號200208-03 寄存在IDAC之融合瘤所產生經分離單株抗體相同的抗原 決定基。 18. —種由以寄存編號200208-03寄存在IDAC之融合瘤產生 之經分離單株抗體或其CDMAB的用途，其係用於製造 用以治療哺乳動物中之人類腫瘤的藥劑，其中該人類腫 瘤表現與該單株抗體或其CDMAB特異性結合之抗原的 至少一個抗原決定基，該CDMAB之特徵為競爭性抑制 該經分離單株抗體與其標靶抗原之結合的能力。 19. 如請求項18之用途，其中該經分離單株抗體接合至細胞 毒性部分。 20. 如請求項19之用途，其中該細胞毒性部分為放射性同位 素。 21. 如請求項1 8之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB可活化補體。 22. 如請求項18之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB可介導抗體依賴性細胞毒性。 23. 如請求項18之用途，其中該經分離單株抗體為人類化抗 體。 24. 如請求項1 8之用途，其中該經分離單株抗體為嵌合抗 體。 25. —種由以寄存編號200208-03寄存在IDAC之融合瘤產生 139530.doc 201002737 之經分離單株抗體或其CDMAB與至少一種化學治療劑 相結合的用途，其係用於製造用以治療哺乳動物中之人 類腫瘤的藥劑，其中該人類腫瘤表現與該單株抗體或其 CDMAB特異性結合之抗原的至少一個抗原決定基，該 CDMAB之特徵為競爭性抑制該經分離單株抗體與其標 革巴抗原之結合的能力。 26. 如請求項25之用途，其中該經分離單株抗體接合至細胞 毒性部分。 27. 如請求項26之用途，其中該細胞毒性部分為放射性同位 素。 28. 如請求項25之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB可活化補體。 29. 如請求項25之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB可介導抗體依賴性細胞毒性。 3 0.如請求項25之用途，其中該經分離單株抗體為人類化抗 體。 3 1.如請求項25之用途，其中該經分離單株抗體為嵌合抗 體。 3 2. —種測定選自人類腫瘤之組織樣品中癌細胞之存在的結 合檢定，該組織樣品與由以IDAC寄存編號200208-03之 融合瘤細胞株AR15 0A3.1 1產生的經分離單株抗體、由以 寄存編號200208-03寄存在IDAC之融合瘤產生之經分離 單株抗體的人類化抗體或由以寄存編號200208-03寄存在 IDAC之融合瘤產生之經分離單株抗體的嵌合抗體特異性 139530.doc 201002737 結合，該結合檢定包括： 提供來自該人類腫瘤之組織樣品； 提供該經分離單株抗體、該人類化抗體、該嵌合抗體 或其CDMAB中之至少一者，其可識別之抗原決定基與 IDAC寄存編號200208-03之融合瘤細胞株AR150A3.11所 產生經分離單株抗體所識別的抗原決定基相同； 使該提供之抗體或其CDMAB中之至少一者與該組織樣 品接觸；及 測定該至少一種提供之抗體或其CDMAB與該組織樣品 之結合； 猎此指不該組織樣品中該癌細胞之存在。 3 3. —種由以寄存編號200208-03寄存在IDAC之融合瘤產生 之經分離單株抗體或其CDMAB的用途，其係用於製造 用以降低人類腫瘤負荷之藥劑，其中該人類腫瘤表現與 該單株抗體或其CDMAB特異性結合之抗原的至少一個 、 抗原決定基，該CDMAB之特徵為競爭性抑制該經分離 單株抗體與其標靶抗原之結合的能力。 34.如請求項33之用途，其中該經分離單株抗體接合至細胞 毒性部分。 3 5.如請求項34之用途，其中該細胞毒性部分為放射性同位 素。 36.如請求項33之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB可活化補體。 3 7.如請求項33之用途，其中該經分離單株抗體或其 139530.doc 201002737 CDMAB可介導抗體依賴性細胞毒性。 3 8.如請求項33之用途，其中該經分離單株抗體為人類化抗 體。 3 9.如請求項33之用途，其中該經分離單株抗體為嵌合抗 體。 40. —種由以寄存編號200208-03寄存在IDAC之融合瘤產生 之經分離單株抗體或其CDMAB與至少一種化學治療劑 相結合的用途，其係用於製造用以降低人類腫瘤負荷之 藥劑，其中該人類腫瘤表現與該單株抗體或其CDMAB 特異性結合之抗原的至少一個抗原決定基，該CDMAB 之特徵為競爭性抑制該經分離單株抗體與其標靶抗原之 結合的能力。 41. 如請求項40之用途，其中該經分離單株抗體接合至細胞 毒性部分。 42. 如請求項41之用途，其中該細胞毒性部分為放射性同位 素。 43. 如請求項40之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB可活化補體。 44_如請求項40之用途，其中該經分離單株抗體或其 CDMAB可介導抗體依賴性細胞毒性。 45. 如請求項40之用途，其中該經分離單株抗體為人類化抗 體。 46. 如請求項40之用途，其中該經分離單株抗體為嵌合抗 體。 139530.doc 201002737 含以下各 之抗體或 性部分、 員的接合 47. —種可有效治療人類癌症腫瘤之組合物，其包 物之組合： 如請求項1、2、3、6、7、8或17中任一項 CDMAB； 該抗體或其抗原結合片段與選自由細胞毒 酶、放射性化合物及造血細胞組成之群之成 物；及 藥理學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。 ί 139530.doc