TW200942247A - Virally-inactivated biological fluid, virally inactivating method thereof and use of the method - Google Patents

Description

200942247 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關於一種病毒去活化的生物流體，特別是一種血 漿及血漿產物。 【先前技術】 人類和動物之血漿及血漿成分(plasma fraction)在現代醫學中 扮演一個重要的角色。這些血漿及血漿成分主要在出血事件、栓 塞(thrombotic)事件、纖維蛋白溶解(fibrin〇iySis)、感染事件的處理 上使用於輸血的目的，或是在確定的臨床表現上，於外科手術前 使用於病患的預防或預處理。 在人類和動物之血漿及血漿成分的使用上，其主要缺點在於 血液傳播病毒的傳染風險，例如人類免疫不全病毒(human immunodeficiency vims ’ HIV)、B 型肝炎病毒(hepatitis B virus， HBV)、C型肝炎病毒(hepatitis C vims ’ HCV)、以及西尼羅病毒 (WestNilevirus)，或是可能的新興(emerging)病毒，例如登革熱病 毒(Dengue virus)、屈公病毒(shikungunya virus)、嚴重急性呼吸道 症候群(Severe Acute Respiratory Syndrome ’ SARS)、以及禽流感病 毒(avian flu virus)，這些病毒皆為脂套膜病毒(lipid_envel〇ped virus)。病毒的風險同樣存在於來自重組的哺乳類細胞株以及基因 轉殖動物所獲得的產物上。 因此，不同的生物去活化血漿及/或血漿成分及/或重組產物的 方法已被發展出來’例如在可見光的照射下以甲基藍(methylene 200942247 )進行處理以及以有機溶劑消毒(s〇lven施啤加，WD)法或有 9機☆劑單獨處理。美國公告第4,481，189號及第4,540,573號專利 *案中舉例°兒明使用有機溶劑消毒法(S/D method)或單獨使用有機 命劑’使包含或添加於血漿及血漿產物中的肝炎病毒或其他套膜 類病毒(envei〇pedviruses)減少了十的數次方的感染力。 、 在試劑濃度、溫度及接觸時間的適當狀態下，有機溶劑消毒 法或有機溶解觸處理馳感性血祕㈣好職及生物活 ❹性之影響微乎其微’対有效地分解赫，此赫储有與脂質 相連結的外套膜蛋白質。 有機溶劑、;肖毒法是目前在市場上大多數的血漿及生物技術產 品(何生自哺乳類細胞或哺乳動物的重組或基因轉殖產物)主要的 病毒去活化處理方法，其中包含輪血用的血漿。其製程-般包含： 鱗蛋㈣絲1至6小時’此蛋自f溶液巾具有姉蛋白質溶 液0.3至1體積百分比(VQ1 %)的有機溶劑“粦酸三丁脂㈣n-buty) © phosphate ’ ΤηΒΡμχ及-種或多種的清潔劑、—般的吐溫乳化劑 80 (Tween 80)、聚乙—醇辛基苯基醚(Trit〇n χ_ι〇〇)、吐溫乳化劑 20 (Tween 20)或去氧膽酸鈉(s〇dium deoXyCh〇iate)。血漿或血漿產 物係於-相當大體積⑽至湖公升或更大)的液槽(以㈣〇〇ι) 中處理，其需要龐大且昂貴的製藥設備。 此病毒去活化處理可保護各種凝血因子(c〇agulati〇n fact〇rs)以 及其他不穩定血漿蛋自質的功能活性，並具有出色的殺死致病性 脂套膜血液感染病毒的功效。（Bumouf及Radosevich，血液評論期 200942247 刊，西元 2000 年，第 14 期第 94七〇 頁）(B_ufandRad〇sevich,

Blood Rev 2000, 14: 94-110)。 接著，在有機溶劑法之後，將液射以有機溶劑消毒過 之輸血用血漿進行疏水性交互作用層析(hydn>phQbic ιη__η chromatography)，以去除有機溶劑消毒試劑。然而，此疏水性交 互作用層析之步驟含有昂貴的層析原料，相當大的緩衝液消耗量 以及在每-批次後必須對設備進行清理及衛生處理，藉以重複使 用設備，因此導致有機溶劑消毒試劑在移除上相當的昂貴及冗 長。再者’由於設備的錢使用，使每—批次之間存在被黏附於 設備表面的病毒及傳染性蛋白質⑽⑽)污染的風險。 並且’將_巾以有機溶_毒過之輸血用血漿與相對生物 流體_ogicalfluid)重量之！體積百分比(ν〇ι %)的魏三丁脂，以 及相對生物流體4量之！重量¥分比(wt%)之聚乙二醇辛基苯基峻 σ魅X捕，聚氧乙稀㈣）對_第三辛基苯帅咖〇柳㈣咖 ㈣）奸啤1 phend);分子式為第三-辛基-苯-(氧乙婦基)x ’ X = 9_1G ’其t χ為氧乙絲之數量） 進行培養、油脂萃取、離心、以及疏水性交互作用層析，例如 H_ltz Β.等人於西元1992年於血液期刊第％期伽至如頁 之說明，具有低功能活性的絲氨酸蛋白酶抑制劑(_ p論咖 m臟⑽，哪㈣，如α2•抗血製素⑻咖2侧 必AP或SERPINF2)，或抗凝血劑，如s蛋白(Mm s)。 如上所歧前技術之缺點，須要—種使財機溶劑消毒試劑 200942247 到方去’此方法毋輔由疏水性交互作㈣析法來達 溶嶋她移除，並且具編能活性之 、、糸孩蛋白酉母抑制劑及/或s蛋白。 【發明内容】 ❹ 魯 Λ長』及透伽研究之後，本案之發日狀研究出令人驚 、、^、/、_地結果’此結果係由—種生物越之病毒去活化方 、成’此生物賴之病毒去活化方法包含： ⑻以石种酸二丁脂(ΤηΒΡ)與聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯 紛(polyoxyethylene (4-5) p-t-octyl phenol);分子式為第 一辛基-笨-(氧乙烯基）χ羥基，χ約為5 (t-Oct-C6H4-(〇CH2CH2)x〇H ’ χ。5 ; Triton Χ-45)之混 合物對生物流體進行處理之步驟； (b) —油知卒取步驟，其中將含有罐酸三丁脂(Τηβρ)與聚 氧乙烯（4-5)-對-第三辛基苯酚 (t-Oct-C6H4-(〇CH2CH2)x〇H ’ X = 5) (Triton X-45)之生 物流體，以5至15體積百分比(v〇l·%)之大豆油(s〇ybean oil)進行處理’例如以8至12體積百分比(ν〇ι.%)，或 10體積百分比(vol.%)之大豆油進行處理，用以將磷酸 三丁脂(ΤηΒΡ)與聚氧乙烯(4-5)-對_第三辛基苯酉分 (t-Oct-C6H4_(〇CH2CH2)x〇H ’ X = 5) (Triton Χ-45)轉移 至大豆油中； (c)將油脂萃取步驟後所回收的生物流體，藉由重力法通 200942247 過一活性碳過濾裝置；以及 (d)將通過活性碳過濾裝置後所回收的生物流體，藉由重 力法通過一濾菌器(bacterial filter)。 所k供之大豆油萃取步驟係為此方法中唯—的油脂萃取步 驟。 所使用的磷酸三丁脂(ΤηΒΡ)含量為相對生物流體之體積的 0.1至2體積百分比(vol.%) ’例如〇·3至I.5體積百分比(ν〇ι %)， 0.5至1體積百分比(vol·%)，或1體積百分比(ν〇ι %)。 所使用的聚氧乙稀（4-5)-對-第三辛基苯紛 (t_Oct-C6H4-(OCH2CH2)XOH ’ X。5) (Triton Χ-45)含量，為相對生 物流體之體積的0.1至2體積百分比(v〇l.%)，例如〇 3至1.5體積 百分比(vol·%) ’ 0.5至1體積百分比(ν〇ι %)，或1體積百分比 (vol.%)。 在本發明之一實施例中，磷酸三丁脂(TnBP)及聚氧乙烯(4_5)_ 對-第三辛基苯酚(t-〇ct-C6H4-(OCH2CH2)X〇H，x = 5) (Triton Χ-45) 的含量皆為相對生物流體之體積的1體積百分比(vol.%)。 依據本發明之生物流體，包含哺乳類血液、血漿、血清、血 漿成分、來自血漿成分的沉殿物(precipitates)以及來自血漿成分的 上清液(supernatants)、血小板稀少血漿(platelet poor plasma)、血小 板濃厚血漿(platelet-rich plasma)、冷凍貧乏血聚(cryo-poor plasma) (血漿冷上清液(cryosupematant))、重組及基因轉殖產物。當生物流 體為血槳時，其包含回收血漿(recovered plasma)(來自於所有的血 200942247 液)以及4離術4装(anphereSiS plaSma)、冷;東貧乏血漿、血漿成分， ， 如用以純化下列物質之成分：凝血酶複合體（prothrombin complex)、第九凝血因子(Fact〇r ιχ)、第七凝血因子(Fact〇r vn)、c 蛋白(Protein C)、S蛋白、抗凝血酶(antithrombin)、α2-抗血漿素 (α2-ΑΡ)、αΐ-抗騰蛋白酶(aipha l-antitrypsin，al-AT)、胞漿素原活 化因子抑制劑 1 (plasmin〇gen activat〇r inhibitor-1，ΡΑΙ-1)、Cl 抑制 劑(Cl-inhibitor)、來自血漿的沉澱物，如聚乙二醇(p〇iy ethyiene ❿ §lyc〇l)、辛酸(caprylic acid)或硫酸銨(ammonium sulphate)沉澱物成 分，以及其他相對應的上清液，或任何來自血漿分離、第一、第 一及弟二上清液所組成之上清液(supernatant I+II+III)、第一、第二 及第三沉澱物所組成之沉澱物(precipitate Ι+Π+ΙΙΙ)、第二及第三上 清液所組成之上清液(SUpematant ΙΙ+ΙΠ)、第二及第三沉殿物所組成 之沉澱物(precipitate II+III)、第一及第三上清液所組成之上清液 (supernatant I+III)、第四上清液(SUpematant IV)、第五沉丨殿物 參 （precipitate V)或第二上清液(SUpematant II)之沉殿物或上清液。血 漿成分、沉殿物及上清液係從回收血裝及分離術血聚中獲得。 特別地’生物流體為分離術血漿、回收血漿、來自分離術血 漿的冷凍沉澱品(cryopercipitate)、來自回收企漿的冷滚沉殺品、以 及(分離術的及回收的)冷凍貧乏血漿。 在有機溶劑消毒處理的步驟(a)之後，以大豆油進行一次萃取 • 的效能，可使磷酸三丁脂(丁沾？)的初始含量(1〇,〇〇〇百萬分率(卯111)) . 降低為少於百分之1〇(1〇%)，意即約低於1000百萬分率，更甚至 200942247 於降低為少於初始構酸三丁脂含量(1〇,〇〇〇百萬分率)的百分之$， 意即約低於500百萬分率，以及步驟(b)可使聚氧乙稀(4_5)_對-第三 辛基苯盼(Triton X-45)的初始含量(10，_百萬分率)降低為少柯 ， 分之30，意即約低於3，_百萬分率，更甚至於降低為少於初始 鱗酸二丁脂含量的百分之25，意即約低於2,5〇〇百萬分率。 並且，非常不可預期及令人意想不到地，依據本發明之生物 流體的病毒去活化方法所獲得之病毒去活化的生物流體中，鄰苯 一曱酸二(2-乙基己基)酯(di(2_ethylhexyl) phthaUte，DEHp)的含量 顯著地低於起始的生物流體。存在於起始的生減體巾之轉^ ❹ 甲酸二(2_乙基己基)醋(DEHp)，係起因於—般生物流體(例如血 漿、冷珠貧乏血漿或冷束沉殿品)所使用之儲存袋，其材質中所含 有的鄰苯二曱酸二(2-乙基己基)醋(DEHp)的擴散作用。生物流體 (如血液及血液成分）之儲存或收集袋通常是由聚氯乙烯 (polyvinylchloride ’ PVC)所製成。鄰苯二甲酸二(2_乙基己基)酯 (DEHP)為一種非化學鍵結於聚氯乙烯聚合物之塑化劑，並且當聚 氣乙烯醫學裝置接觸到流體時會溶出。當在特殊病患族群有可能 的毒性之考量時，如新生兒、兒童、孕婦、或肝功能受損的病患’ 在須要生物流體時，特別是輸血時，生物流體所具有的鄰苯二甲 酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)含量儘可能的降至最低。不可預期且令 人意想不到地，油脂萃取法及過濾法被發現用以降低鄰苯二曱酸 二(2-乙基己基)酯(DEHP) ’使鄰苯二曱酸二(2-乙基己基)g旨(DEHP) 的含量低於起始血漿，並少於已知的輸血用血漿及藉由其他方法 10 200942247 濃縮之血小板(請參見Inoue，K.等人，臨床化學期刊，西元2005 ， 年，第 358 卷第 1-2 期：第 159 至 166 頁(Inoue，K. etal. Clin. Chem. ， Acta2005; 358 (1-2): 159-66) ; ColeRS 等人，血液之聲期刊，西元 1981 年，第 40 卷第 5 期：第 317 至 322 頁(ColeRS etaL Vox Sang 1981;40(5):317-22);L〇ffS等人，兒童外科期刊，西元2〇〇〇年， 第 35 卷第 12 期··第 1775 至 1781 f(L〇ff s et al j pediatr _ 2000; 35 (12): 1775-81) ; Buchta C 等人，輸血期刊，西元 2〇〇5 年， ❹第45卷第5期：第798至觀頁(Buchta c付^ τ刪細⑽罵； 45 (5): 798-802))。 非常重要地，油脂萃取法是必須的，用以獲得清徹的/非渾濁 勺生n〜夜’其可以過濾而不須額外添力填理程序(例如離心 )Qitb可達成過;慮作用的直接效能。非常令人意想不到且不 可=期地，清徹的/非渾濁的生物流體溶祕在於當此生物流體之 :f去活化方射’只包含單—次油脂萃取之步驟時方可獲得。 過夕的㈣卒取次數或使用其他·進行萃取，例如謎油㈣ο: )〜疋仔到軍濁喊，而無法藉由重力法通過活性破過渡裝置 進行過濾。 口此在μ施例中，在油脂萃取步驟後的過濾步驟，係通 過活性碳猶裝置進行猶，並料力法完成。 雜碳過遽之步驟(步驟⑼可進—步降低雜三丁脂的含量 q 百萬刀率或無法測得的程度，降低聚氧乙稀(4-5)-對-第 二辛基本卿⑽χ_45)的含量為少於5G百辦，或甚至於少 11 200942247 於ίο百萬分率’移除仍存在於生物流體溶液中的油滴，此油滴是 由於油月曰萃取過私中進行混合時所產生。並藉由移除細胞碎片㈣ debris)、微小凝聚物、殘留脂質來進一步淨化生物流體溶液，因此 增加後鉍濾菌器的產能，並藉由使用吸附式過濾器進行過濾作用 及/或奈米過濾作用(nanoflltration)，使濾菌器可更加快速的完成病 毒/傳染性蛋白質的移除步驟（例如移除無外套膜病毒 (non-envdoped vmises))。吸附式過濾器例如為 Cun〇 Zeta plus 病毒 過濾器，或具有孔隙尺寸之範圍為15至75奈米(nm)之過濾器， 或類似的過濾器，例如Pall公司的Dv過濾器、Mmip〇re公司的 Viresolve過濾器或Asahi公司的pianova過濾器系列。 在一貫施例中，小量混合(small pools)的生物流體，即約少於 500毫升的生物流體，但並不以此為限，其過濾時所使用的活性碳 過濾器’例如由Pall公司所商業化的paii Supracap 60過濾膜系列， 如AKS6、AKS7、AKS4以及AKS1 ’以及由Cuno公司所商業化 的 Cuno Zeta Plus Zetacarbon 系列的 BIOCAP 30 - R32SP、BIOCAP ❹ 30-R33SP、BIOCAP 30-R34SP、BIOCAP 30 R35SP，以及最新 引進的 BIOCAP 25 R32SP、BIOCAP 30 - R33SP、BIOCAP 30 -R34SP 以及 BIOCAP 25 R35SP。 在本發明之一實施例中’濾菌器含有約〇·2微米(μιη)孔隙尺 寸。當使用具有漸層的孔隙度之濾菌器，例如具有0.65微米至0.2 微米孔隙度的濾菌器，相對的在細菌過濾(bacterial filtration)之步 驟(步驟⑹)的產能上可獲得良好的結果。這種漸層式孔隙度確保物 _ 12 200942247 質在逐漸縮小孔隙度之纖維上漸進式的過據。在—實施例中，小 「量混合的生物流體的過濾作用，即少於15公升的生物流體，其所 使用的渡菌器為經由_公司所商業化的㈣此偷】 KleenpakTM Εκν (序號譲5既仰列濾菌器。 在一實施财，在步驟⑼中之_過義藉由重力法完成。 假設在處理·中發生偶發性的細S污染，由於細®的過遽 作用可確保生物流體的細g安全性。此外，在_之處理過程中 ©避免使用各種的化學藥品，例如_三丁脂(ΤηΒρ)、聚氧乙稀㈣- 對-第三辛基苯斷TritonX_45)、敍豆油，其可節省時間及成本， 並使此生物流體之病毒去活化方法可應用於滅菌設備無法立即使 用的環境中。 當生物流體為血漿、冷;東臟品、或冷;東貧乏血漿時，細菌 過濾進-步破保在血液/血浆收集時所引進之血液傳染細菌的移除 (例如起ID於供血者的手臂不正確的清潔所引進之血液傳染細 ❹菌）’以及無法以有機溶劑消毒法消滅之血液傳染細菌的移除。再 者，細菌過濾增加了企浆/冷珠沉澱品，冷殊貧乏血聚溶液對於血液 寄生蟲的安全裕度(血液寄生蟲例如為引起巴貝氏蟲症(Babesi〇sis) 之巴貝氏蟲（Babesia microti);引起瘧疾（malaria)之變形蟲 (Plasmodium);引起萊什曼原蟲病(Leishmani〇sis)之莱什曼原蟲 (Leishmania) ’引起查加斯氏病(chagas disease)之克魯斯氏錐蟲 CTrypanosomiacmzi) ’特別是在假設以非常新鮮及尚未冷凍的血漿 做為起始物質的使用’以及這些血液寄生蟲未被預期不會被有機 13 200942247 溶劑消毒法所消滅。於〇2微米薄膜上進行細菌過淚，同時可移除 血液、桃¥片’因此使起因於殘餘淋巴細胞或細胞凝聚物之免疫 輸血反應的風險降低。 又， 並且’本發騎揭不之内容，騎鍵立以輸血狀血漿或： 其他血漿成分，例如經由血液製造的冷涞沉殿品或冷陳貧乏血 漿’通過〇·2微米過遽器進行過濾是可行的。通過具有〇·2微米孔 隙尺寸之過;ϋ進行過濾所具有之優點為，其產物中沒有任何的 血液細胞(白血球、血小板、紅血球)及細胞碎片，此外不具有細菌 及寄生蟲。’完全的移除血液細胞及細胞碎片可同時促成輪血用〇 血漿或其他血漿成分’如冷;東沉殿品或冷束貧乏血襞之安全性的 改善，由於白血球相關病原菌，如巨細胞病毒(cytomegawims)、 乂伯斯坦-巴爾病毒(Epstein_Barr virus)或傳染性蛋白質的移除或 減少。與本發_反的’普通單—供血者血漿經過無_理並含 有相當程度的血液細胞；去白細胞(leucoreduced)之單一供血者血 漿包含低含量的白血球，但仍含有血小板；病毒去活化血聚單位， 如單t、血者甲基^L血漿或補骨脂素血漿咖脱⑻狀ma)分別通 過曱基藍或補骨脂素吸附過遽器，但仍含有血液細胞或血液細胞 碎片。 另外，依據本發明所獲得之血漿及冷凍貧乏血漿，使脂質的 含量減少，而降低輸血相關急性肺損傷(τ刪脑〇n池㈣扣收 lirng injury ; TRALI)的風險。 最後，當百分之20至3〇的流失發生於以甲基藍、補骨脂素 、 14 200942247 及核黃素(nboflavin)處理的血漿時，依據本發明所獲得之血漿及冷 r ;東貧乏血漿，顯示出良好的第人凝血因子_Π)及凝血纖轉^ ；： 原(clottable fibrinogen)含量的保存。 總之，本發明之生物流體之病毒去活化方法在血裝、冷康貧 乏血漿及冷束沉殿品的製備上，可達到⑻病毒去活化，（b)=凝 血因子及凝血纖維蛋自職良好保存，⑷實質上不具有脂質，⑹ 實質上不具有血液細胞及細胞碎片，以及(e)所具有之鄰苯二甲酸 ❹二(2_乙基己基)醋_HP)含量低於起始之血漿、冷珠貧乏血裝或冷 凍沉澱品。 在一實施例中，本發明之生物流體之病毒去活化方法，在步 驟(c)之前，包含一回收生物流體之步驟，其係於步驟(B)之後將生 物机體藉由重力法通過一輸血過濾、器(trans扮si〇n mter)進行回收。 此一外加的過濾步驟不會影響生物流體的濁度，但會移除可見的 凝塊(visible dots)，這些凝塊可能潛在於隨後要進行油脂萃取之生 參物流體中，並做為安全性的檢測。此一過濾步驟係以重力法完成。 本發明之生物流體之病毒去活化方法，可應用於大量混合的 有機溶劑消毒處理之生物流體的工業製程上，例如血漿及血漿成 分’如同於微量混合(minipool) (MD_SD)之製造程序。有機溶劑消 毒法於微量混合的生物流體之應用，例如血漿及血漿產物 (MP/SD) ’係將少量的血漿於密閉袋系統(ci〇se(j bag system)中進行 • 處理，其被描述於國際專利(W〇)申請號第2006/082115號中，在 i 此做為參考文獻的引用。 15 200942247 關於袋内病常去活化系統(in_bag virai inactivati〇n system)，本 發明之生物流體之病毒去活化方法特別引人注意之處在於以重力 法完成過濾作用，不需使用特殊的設備，例如螺祕㈣祕c pump)。㈣使本發明之生物流體之病毒去活化方法麵容易使用 且便宜。拋棄式過濾、器的使用，令生物流體之病毒去活化方法特 別相容於袋内病毒去活化系統，因為袋_毒去活化系統中所有 的袋子及過濾器於使用後可直接地丟棄。 如「第1圖」所示之袋内病毒去活化系統】，為袋内病毒去活 系統之其中之一種個別的形態，係用以依據本發明之生物流體之G 病毒去活化方法來處理微量混合的血漿(或冷;東貧乏血默）。此袋内 病毒去活化系統！包含：一第一病毒去活化袋2、一第二病毒去活 化袋3、-漏斗形袋體4、一回收袋5、一輸血過濾器6、一活性 碳過濾器7 ' -渡菌器8以及二收集袋9，用以回收病毒去活化及 純化的血漿或冷涞貧乏血漿。在—實施例中，袋内病毒去活化系 統1未包含輸血過濾器6。此袋内病毒去活化系統】在濾菌器8❹ 及收集袋9之間可同時包含一另外的收集袋，用以在病毒去活化 及純化的血漿分送至收集袋9前混合這些病毒去活化及純化的血 漿。 在-實施射’病毒去活化袋為侧形或_的形式，用以 促進成分的'混合並避免死點(dead p〇lnt)的存在，此死點為血聚原 料不會與有機溶劑消毒試劑相接觸的位置。 用以回收病毒去活化及純化的血漿或冷凍貧乏血漿之第一病 - 16 200942247 毒去活化袋2、第二病毒去活化袋3、漏斗形袋體4、回收袋5、 ，輸血過濾器6、活性碳過濾器7、濾菌器8及收集袋9，係以血液 :及血液產物輸血領域中所使用的元件聯接方式，彼此相互線性連 接。 經處理之血漿或冷凍貧乏血漿直接地從一個或多個收集袋或 儲存袋10傳輪至第-病毒去活化袋之第一入口 u。然後將操作助 劑(Pr_S chemicals)(聚氧乙烯㈣_對_第三辛基苯盼⑽加χ_45) 及顧三丁脂⑽Ρ))，由第—病毒去活化袋之第二人口 ΐ2添加入 第一病毒去活化袋中，例如藉由注射器(_⑽來添加。此注射器 係直接由管子連接於第_病毒去活化袋之第二入口。 病毋去活化^ 2中之第一次培養後，含有ν的血漿或 ==由第—病毒去活化袋之出口 13及第二病毒去活化 "；! Η； 3，〇 弟—人培養之步驟終止後，含有操作助 之血聚經由第二病毒去活化袋之出口15及漏斗形^冷/東貝 16’傳輪至漏斗形袋體4，以遵行油脂萃取。…-入口 經由漏斗形袋體 油，例如藉由注射哭18二口 17添加用以進行油脂萃取之大立 於漏斗形袋體之第I入口：。注射器18係直接或藉由管子連接 在油脂萃取步驟的 血浆，以及大豆油先均句的有操作助劑的血聚或冷康貧乏 在以重力法進行相II、，然後藉由重力法進行相分離。 丁相4之程序結束之後，獲得低相 17 200942247 或冷滚貧之血漿以及高相位的大豆油。織將低相位的血漿或冷 練貧乏血漿，經由漏斗形袋體之出口 19和回收袋之入口 2〇，傳輸 至回收袋5。 ’谱將回收的血漿或冷珠貧乏血漿依序地通過輸企過滤器6 (若具有輸血過濾器）、活性後過濾器7及遽菌器8。 、/帛2圖」所不之袋内病毒去活化系統la，為袋内病毒去 活系統之其中之—種個別的形態，制以依據本發明之生物流體 之病毒去活化方法來處理微量混合的冷涞沉殺品。袋内病毒去活

化系統la與「第i圖」所示之袋内病毒去活化系統之差異，在於G 2袋内病毒去活化系統la在濾菌器8與收集袋$之間進一步包含 π卜的收*衣21 ’用以混合經處理過之冷;東沉殿品並在分送前 件到均勻溶液。在另—實施例中，此袋内病毒去活化系統不包含 輸血過濾器。 士第2圖」所不，在冷涞沉殿品之病毒去活化的袋内病毒 化系、’’先la中’30至50單位(unit)(每單位約為1〇毫升)之冷凍 沉殿品直接從儲存袋輪送至第一病毒去活化袋之第-入口 η。 $續的步驟與錢或冷珠貧乏血漿之病毒去活化步驟相同。 护當大量混合的有機溶劑消毒處理之生物流體應用於工業製程 尤，、疋血漿及血漿製品，例如免疫球蛋白G (immunoglobulins 。）本發明所述之生產流程可以多種方式來改善產量及簡化製 在業規模中用以移除有機溶劑消毒試劑之昂貴的疏 ^生又互作用之步驟(通常為碳丨8 (C18)或SDR-hyper D型號之管 18 200942247 ♦的，、充材料）以單次使用的活性石炭過濾器代替。此避開了（重複 使用的)層析材料之確認、清理及衛生清細要求，以及減少/避免 峨液的消耗，使製程變得便宜及减、並歸需細批次與批 人之間被黏附於層析設備表面的病毒及傳染性蛋自質污染。再 者，所使用之聚氧乙稀叫對-第三辛基苯盼(Triton X—45)，係於 ^豆油脂萃取後域得清澈物質所必需使黯，聚氧乙離5)鲁

^辛基苯驗⑽onX_45)提供高品質的血製，此血漿具有良好含 里的〇2-抗血輯必处）、α1•抗騰蛋白酶⑻_at)、$蛋白(prog S)及其他的蛋白_抑侧或抗凝血劑。 本發明另揭露—種病毒去活化的生物流體，其係選自血聚、 冷康貧乏血!細及料峨品所組紅群組，其巾生物流體實質 j不具有脂質、血液細胞及細胞碎片。生物流體，如血漿及冷凌 =品’具有良好的第八凝血因子(簡)及凝血纖維蛋白原含量 保存之優點。 、日貝、血液細胞及細胞碎片之生物流體，可顯著的降低 α輪血反應的顺，例如起因於殘餘脂f、麵巴細胞、或細 Μ聚物的輸血糊祕肺贿(TRALI)。啊謂録自於血液 細胞或血液細胞膜病原菌的風險。 / 為了更充分鑛本㈣之本f與實縣㈣之 (未限定之實___。雖麵有的實施例包括 *時，pods)以及於密閉袋系财完成， 尤其是有 發明之生物流體之病毒去活化方法可輕易的放大規模’'疋 19 200942247 關於通過活性碳及慮菌器進行過據。使用大規模的過滤器在商業 上是可行的。 【實施方式】 所有的實關巾，其耻比柄體積百分比，除非跡具體 指定。 第一實施例 分離術血漿_咖也恤贿），以百分之1磷酸三丁酯(7着） 及百分之1聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇n χ_45)(序號 93419 ’ Fluka，Sigma Aldrich公司製造)處理，並以大豆油(序號® S7381，Sigma公司製造)進行一次的油脂萃取。 依循製造商的操作指南下，以分離術程序收集2血漿單位， 亚且以抗凝血酸檸檬酸葡萄糖(acid_dtrate_de伽此肪此。㈣抓， ACDA)(比例為每100毫升血液中含有8毫升)抗凝此2血聚單位。 血漿在進行處理程序之前並未去白細胞(leuc〇reduced)。將血聚冷 /東於乾冰酒精浴(dry ice ethanol bath)中，並於攝氏溫度負3〇度(_3〇❹ C)之冰箱中’最多儲存3個月。 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱1〇分鐘進行融解。然後混合於第—病毒去活化袋(第一 有機溶劑消毒處理袋)中。混合的血漿之體積為4⑻毫升。 將8毫升的百分之5〇/百分之5〇的磷酸三丁酯(TnBp) (Prolabo，VWR公司製造，F〇ntenay_s〇us_b〇is地區，法國)及聚氧 乙烯(4_5)~對-第三辛基苯酚(Triton X-45)(序號 93419，Fluka，Sigma * 20 200942247

Aldrich公司製造)混合物，謹慎地加入400毫升的血漿中，以達到 最終濃度為相對血漿重量百分之1的雄酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之 » 1的聚乳乙稀(4-5)-對-第三辛基苯紛(TritonΧ-45)。 將血漿/填酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚 (TritonX-45)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的充分 混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱中，於 攝氏溫度31度進行培養，並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速15〇 © 轉(15〇 分鐘進行處理。接著將血漿續酸三丁醋(Tjjgpy聚 氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇n χ_45)混合物傳輸至第二病毒 去活化袋(第二有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀態下培養i小 時30分鐘。 然後將血漿/填酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4_5)_對_第三辛基苯 酚(TritonX-45)混合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋）中。加入4〇 毫升的大涵(賴S?381，Slgma公i]驗)至血漿續酸三丁§旨 β (T避)/聚氧乙離5)鲁第三辛基苯紛⑽〇ηχ_45)混合物中。將 金漿續酸三丁醋(ΤηΒΡ)/聚氧乙稀(4_5>對_第三辛基苯盼⑽加 Χ-45)/百分之10大豆油所組成之懸浮液劇烈地振盈至少、i分鐘， 接著放置於振i培養箱，以雜溫和的搖駐少丨 此漏斗形袋體懸置45分鐘，以確保油相(上層)及血裝相(下層)的傾 析(decantation) 〇 回收清澈的血漿相。超過，毫升的血漿通過—注入液過濟 器(M_ f·)，使血漿藉由重力法(不需藉由栗浦提供壓力)通過 21 200942247

Pall公司所製造之AKS6 Pall活性碳過濾器(型號SUPRAcap 6〇 SC060XAK6)’其係續接於一 〇·2微米濾菌器(型號MiniKleenpakTM 20，序號 KM5EKVP2S)。 盤f备·結合百分之1磷酸三丁醋(ΤηΒΡ)及百分之1聚氧乙烯 (4-5)-對-第三辛基苯酚(Triton χ_45)的使用，並藉由大豆油進行一 次的萃取，可獲得超過350毫升的清澈血漿，此清澈血漿可藉由 重力法通過活性碳過濾器及濾菌器進行過濾，以排除有機溶劑消 毒試劑、殘留之大豆油、血液細胞碎片、細菌及寄生蟲。 第二實施你丨 分離術血裝(apheresisplasma)，以百分之1填酸三丁醋(ΤηΒρ) 及百刀之1 χκ氧乙稀(4-5)-對-第三辛基苯紛(Triton Χ-45)(序號 9M19，Fluka，Sigma Aldrich公司製造)處理，並以大豆油(序號 85471 ’來自大豆(Glycinemax)，抑咖公司製造)進行一次的油脂 萃取。 依循製造商的操作指南下，以分離術程序收集2血漿單位， 並且以抗凝血酸檸檬酸葡萄糖(acid-citmte-dextrose anticoagulant， ACDA)(比例為每100毫升血液中含有8毫升)抗凝此2血装單位。 金水在進行處理程序之前並未去白細胞(leuc〇reduced)。將血漿冷 束於乾冰酒精浴(dry lce ethan〇i bath)中，並於攝氏溫度負3〇度(_3〇 °c)之冰箱中，最多儲存3個月。 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱1〇分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 200942247 有機溶劑消毒處理袋）中。混合的血漿之體積為400毫升。 / 將8宅升的百分之50/百分之50的填酸三丁醋（ΤηΒΡ) - (Pr〇lab〇 ’ VWR 公司製造 ’ Fontenay-sous-bois 地區，法國)及聚氧 乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Triton X-45)(序號 93419，Fluka，Sigma

Aldrich公司製造)混合物，謹慎地加入4〇〇毫升的血漿中，以達到 最終濃度為百分之1的鱗酸三丁酯(TnBP)及百分之丨的聚氧乙烯 (4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇nχ_45)。 © 將血漿/磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚 (Triton Χ-45)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的充分 混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱中，於 攝氏溫度31度進行培養，並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速15〇 轉(150 rpm))30分鐘進行處理。接著將血漿續酸三丁醋(丁避)/聚 氧乙埽(4_5)-對-第三辛基苯酚(Triton X-45)混合物傳輪至第二病毒 去A化袋(第二有機溶觸毒處理袋），並於相同的狀態下培養丄小 •時30分鐘。 ” 然後將血漿/碟酸三丁酯(Τηβρ)/聚氧乙烯(φ5)_對-第三辛基苯 紛(TmonX，混合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋)中。加入恥 毛升的大豆油(序號85471，來自大豆(Glyeinemax)，公司製 &)至血漿/碟酸三丁醋(TnBp)/聚氧乙稀㈣_對_第三辛基苯齡 (Tm〇nX-45)混合物中。將血漿續酸三丁酯(ΤηΒρ)/聚氧 乐二辛基本紛(Triton Χ_45)/百分之1〇大豆油所組成之懸浮液劇 、、、堡至^ 1分鐘’接著放置於振盈培養箱，以確保溫和的搖 23 200942247 動至少15分鐘。然後將此漏斗形袋體懸置45分鐘，以確保油相(上 層)及血漿相(下層）的傾析(decantation)。 回收清澈的血漿相。超過370毫升的血漿通過一注入液過濾 器_si〇n fiker)，使血漿藉由重力法(不需藉由泵浦提供塵力)通過 Pali公司所製造之趣6 Pal】活性碳過濾器(型號supRAcap 6〇 SC_XAK6M_接於一 α2微米遽菌器(型號麻幻等㈣ 20 ’ 序號 KM5EKVP2S)。

脸1結合百分之1顧三丁自旨(TnBp)及百分之〗聚氧乙婦 (4-5)-對-第三辛基苯紛(Trit〇n χ_45)的使用，並藉由大豆油進行一 C 人的卞取了獲得超過35〇毫升的清澈血漿，此清澈血衆可藉由 重力法通過活性碳猶肢顧騎行過濾，輯除有機溶劑消 毒試劑、殘留之大豆油、血液細胞碎片、細菌及寄生蟲。 J三實施Μ 分離術血漿(叩11咖仏1)1狀11^)，以百分之1磷酸三丁酯(1^1)) 及百刀之1 1氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯盼(Triton χ_45)(序號❹ 93419 ’ Fluka，Sigma Aldrich公司製造)處理，並以大豆油(序號 19-42500 ’ Penta公司製造)進行一次的油脂萃取。 依循製造商的操作指南下，以分離術程序收集2血漿單位， 並且以抗旋血酸檸檬酸葡萄糖(acid_ckrate_dextr〇se antjc〇agUiant， ACDA)(比例為每loo毫升血液中含有8毫升)抗凝此2血漿單位。 血漿在進行處理程序之前並未去白細胞(leucoreduced)。將血漿冷 珠於乾冰酒精浴(dry ice ethanol bath)中，並於攝氏溫度負30度(-30 * 24 200942247 °C)之冰箱中，最多儲存3個月。 / 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 ? %度加熱10分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 有機溶劑消毒處理袋）中。混合的血漿之體積為亳升。 將8毫升的百分之50/百分之50的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ) (Prolabo，VWR公司製造，F〇ntenay_s〇us_b〇is地區，法國)及聚氧 乙婦(4-5)-對-第三辛基苯斷Trit〇n χ_45)(序號934!9，跑匕，s咖a ❹Aldrich公司製造)混合物，謹慎地加入4〇〇毫升的血漿中，以達到 最終浪度為百分之1的磷酸三丁酯(TnBp)及百分之丨的聚氧乙烯 (4-5)-對-第二辛基苯|分(丁也〇11]^-45)。 將血漿/磷酸三丁酯(TnBP)/聚氧乙烯(4_5)_對_第三辛基苯酚 (TritonX-45)混合物劇烈地振盡5分鐘，以確保不同成分間的充分 混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱中，於 攝氏溫度31度進行培養，並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速⑼ ❹轉(150 _)30分鐘進行處理。接著將血漿鱗酸三丁醋⑽p)/聚 乳乙烯(4-5)-對_第三辛基苯齡(Trit〇n χ_45)混合物傳輪至第二病毒 去活化袋(第二有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀態下培養^小 時30分鐘。 然後將血漿A粦酸三丁酯(TnBP)/聚氧乙烯(4_5)_對_第三辛基笨 酚(TntonX-45)混合物傳輪至漏斗形袋體(油脂萃取袋)中。加入恥 ，毫升的大豆油(序號19_42500，Penta公司製造)至血聚續酸三丁賴 .(猜)/聚氧乙稀(4_5)鲁第三辛基苯紛⑽。ηχ_倾合物中。將 25 200942247 血漿/鱗酸三丁醋(TnBP)/聚氧乙稀㈣普第三辛基苯盼(Trit〇n X-45)/百紅10大豆油所組成之懸浮液劇烈地振蘯至少、！分鐘， 接著放置於振盪培養箱，以確保溫和的搖動至少15分鐘。然後將 此漏斗形袋體懸置45分鐘，以確保油相(上層)及血聚相(下層）的傾 析(decantation)。 回收清澈的血_。超過370毫升的血槳通過—注入液過遽 器(mfUsmn filter) ’使血漿藉由重力法(不需藉由泵浦提供壓力）通過 Pall公司所製造之船6 Pall活性碳過濾器(型號supRA哪⑹ SC060XAK6)’其係續接於一 〇.2微米濾菌器(型號Μώίκ&ηί^τΜ 20 ’ 序號 KM5EICVP2S)。 鐘逢丄結合百分之1磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之丨聚氧乙烯 (4-5)-對-第三辛基苯酚(Triton Χ_45)的使用，並藉由大豆油進行一 次的萃取，可獲得超過350毫升的清澈血漿，此清澈血漿可藉由 重力法通過活性碳魏狀顧H進行，赠除有機溶劑消 毋试劑、殘留之大呈油、血液細胞碎片、細菌及寄生蟲ρ 第四實施例 分離術血漿(apheresisplasma)，以百分之1碟酸三丁酯(Τηβρ) 及百刀之1秀、氧乙知(4-5)-對-弟二辛基苯紛(Triton Χ-45)(序號 93419，Fluka，Sigma Aldrich公司製造)處理，並以大豆油(序號 S7381，Sigma公司製造)進行兩次的油脂萃取。 依循製造商的操作指南下，以分離術程序收集2血漿單位， 並且以抗凝血酸檸檬酸葡萄糠(acid-citrate-dextrose anticoagukm， 26 200942247 ACDA)(比例為每loo毫升血液中含有8毫升)抗凝此2血聚單位。 ' 血水在進行處理私序之前並未去白細胞fleucoreduced)。將企漿冷 : 凍方;乾冰/酉精冷(_ ice ethanol bath)中，並於攝氏溫度負3〇度(-3〇 C)之冰箱中，最多儲存3個月。 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱10分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 有機溶劑消毒處理袋)中。混合的血漿之體積為4〇〇毫升。 ❹ 冑8毫升的百分之5Q/百分之50的御&三丁酯(ΤηΒρ) (Prolabo ’ VWR公司製造，F〇ntenay_s〇us_b〇is地區，法國)及聚氧 乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇nX_45)(序號 93419，Fhika，sigma Aldrich公司製造)混合物，謹慎地加入4〇〇毫升的血漿中，以達到 最終濃度為相對血漿重量百分之1的填酸三丁酯(Τηβρ)及百分之 1的聚氧乙烯(4-5)_對·第三辛基笨酚(Trit〇nX_45)。 將血漿/磷酸三丁酯(TnBP)/聚氧乙烯(4_5)·對_第三辛基苯酚 .(Tr— X-45)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的充分 混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱中，於 攝氏溫度31度進行培養，並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速 轉(150 rpm))30分鐘進行處理。接著將血漿續酸三丁醋(TnBp)/聚 氧乙烯(4-5)-對-第二辛基苯g分(Trjt〇n χ_45)混合物傳輸至第二病毒 去活化袋(第二有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀態下培養1小 t 時30分鐘。 k 然後將血漿/磷酸三丁酯(TnBpy聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯 27 200942247 酚(TritonX-45)混合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋）中。加入4〇 笔升的大丑油(序號S7381，Sigma公司製造)至血漿/麟酸三丁酯 (ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇nX_45^^合物中。將 血濃/磷酸二丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4_5)-對-第三辛基苯酚(Triton X-45)/百分之1〇大豆油所組成之懸浮液劇烈地振盪至少丨分鐘， 接著放置於振盪培養箱，以確保溫和的搖動至少15分鐘。然後將 此漏斗形袋體懸置4 5分鐘，以確保油相(上層)及血漿相(下層）的傾 析(decantation) 〇 回收血漿相，並重複一次油脂萃取處理程序，得到約毫 升的血漿產量(兩次的大豆油脂萃取後之總量）。 回收到非常混濁的血漿相，並通過—注人液過濾器(infUsi〇n filter)。僅有約3G毫升的血漿藉由重力法(不需藉由泵浦提供壓力） 通過Pall公司所製造之AKS6 Μ1活性碳過據器(型號supRAc叩 60SC06GXAK6) ’且麵器產生阻塞而停止過滤程序。 結合百分之1嶙酸三丁酯(TnBp)及百分之〗聚氧乙稀 (4-5)-對·第三辛基祕(TntGn χ_45)的使用，並藉由大豆油進行兩 次萃取所產_血漿非常的混濁，此混_血漿為無法藉由重力 法通過活性碳過濾器及濾菌器進行過濾。 第五實施何 分離術血餘細—細蜂以百分之㈣酸王丁酿仰明 及百分之1聚氧乙烯(4_5)_對-第三辛基笨盼(Triton Χ-45)(序號 934i9，黯a，Slgma Aldrich公司製造)處理，並以大豆油(序^ . 28 200942247 S7381 ’ Sigma公司製造)進行三次的油脂萃取。 ^ 依循製造商的操作指南下，以分離術程序收集2血漿單位， : 並且以抗凝血酸檸檬酸葡萄糖(acid-citrate-dextrose anticoagulant， ACDA)(比例為每loo毫升血液中含有8毫升)抗凝此2血漿單位。 血漿在進行處理程序之前並未去白細胞(leuc〇reduce(j)。將血漿冷 來於乾冰酒精浴(dry ice ethanol bath)中，並於攝氏溫度負30度(-30 °C)之冰箱中，最多儲存3個月。 © 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱1〇分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 有機溶劑消毒處理袋)中。混合的血漿之體積為4〇〇毫升。 將8毫升的百分之50/百分之50的碟酸三丁酯(ΤηΒρ) (Prolabo ’ VWR 公司製造 ’ ;pontenay_s〇us_b〇is 地區，法國)及聚氧 乙烯(4_5)普第三辛基笨盼(Trit〇nX_45)(序號93419,跑ka，sig· Aldrich公司製造)混合物，謹慎地加入4〇〇毫升的血漿中，以達到 最終/辰度為相對i漿重量百分之1的碟酸三丁酯(TnBp)及百分之 1的聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基笨酚(Trit〇nX—45)。 將血槳續酸三丁酯(TnBpy聚氧乙烯⑷5)_對_第三辛基苯酉分 (TritonX-45)混合物劇烈地振盡5分鐘，以確保不同成分間的充分 混合。將經過此程序之第—病毒去活化袋置人振盪培養箱中，於 攝氏度31度進行培養，並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速bo 、轉(150 1Ρ1Ώ))30刀在里進行處理。接著將jk漿/石粦酸三丁醋(丁118?)/聚 ^氧乙稀(4_5)鲁第三辛基苯盼⑽加X-45)混合物傳輸至第二病毒 29 200942247 去活化袋(第二有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀態下培養！小 時30分鐘。 然後將血漿/填酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4斗對_第三辛基苯 酚(TritonX-45)混合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋）中。加入4〇 毫升的大豆油(序號S糧，Sigma公司製造)至血漿/概三丁酉旨 (ΤηΒΡ)/聚氧乙稀(4_5)脊第三辛基苯齡(Trit〇nX七)混合物中。將 血聚續酸三丁醋(ΤηΒΡ)/聚氧乙稀㈣鲁第三辛基苯哪rit〇n X-45)/百分之10大豆油所組成之懸浮液劇烈地振盪至少丨分鐘，

接著放置於振盈培養箱’以確保溫和的搖動至少分鐘。然後將 G 此漏斗形袋體懸置45分鐘，以確保油相(上層)及血聚相(下別的傾 析(decantation)。 回收血漿相’並重複兩次大豆油脂萃取處理程序，得到約观 毫升的血黎產量。 回收_微混濁的血漿相。將35〇毫升的血漿通過—注入液 過濾器(infusion filter)。僅有約8〇亳升的血_由重力法(不需藉 由泵浦提供壓力)通過Pall公司所製造之AKS6 Μ活性碳過滤^ (型號SUPRACap60SC060XAK6)進行過濾，且過遽器產生阻塞^ 停止過濾程序。 結合百分之1 _三丁自l(TnBP)及百分之】聚氣乙婦 (4-5)鲁第三辛基苯朌(Triton X_45)的使用，並藉由大豆油進行三 -人十取所產㈣血漿輕微地混濁，此輕微混濁的血漿為無法藉由 重力法通過活性碳過濾器及濾菌器進行過濾。 f 30 200942247 _第六貫施你丨_ • ”離術血水(apheresisplasma)，以百分之】磷酸三丁醋(遞p) /及百分之1聚氧乙烯(4_5>對_第三辛基苯_〗_从）（沿5， ton X 45 ’ Sigma公司製造)處理，並以大 8辆公司製造)進行-次_旨萃取。 (序说 依健造商的操作指南下，以分離術程序收集2血漿單位， 並且以抗凝血特檬酸_糖(祕d_dext_ am_guiant， β ACDA)(比例為每丨⑽毫升血液巾含有8毫升)抗凝此2血聚單位。 血水在進行處理程序之前並未去白細胞咖騰地^)。將血裝冷 凍於乾冰酒精冷(dry lce ethan〇i bath)中，並於攝氏溫度負3〇度(_3〇 °C)之冰箱中，最多儲存3個月。 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱1〇分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 有機溶劑消毒處理袋)中。混合的血漿之體積為4〇〇毫升。 參 ， . 將8毫升的百分之50/百分之50的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ) (Prolabo，VWR公司製造’ Fontenay-sous-bois地區，法國)及聚氧 乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇n χ_45) (χ45，Trit〇n⑧ χ_45， Sigma公司製造)混合物.，謹慎地加入4〇〇毫升的血漿中，以達到 最終濃度為相對血漿重量百分之1的填酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之 1的聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇n Χ-45)。 將血漿/磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚 (Triton Χ-45)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的充分 31 200942247 混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振藍培養箱中，於 攝氏溫度31度進行培養，並且穩定的溫和搖酬每分鐘轉速15〇 轉(15〇 rpm))30分鐘進行處理。接著將血製/填酸三丁醋(TnBp)/聚 氧乙稀(4-5)-對-第三辛基苯紛(Trit〇n以习混合物傳輸至第二病毒 去活化袋(第-有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀態下培養i小 時30分鐘。 然後將血漿續酸三丁醋(TnBP)/聚氧乙烯㈣_對_第三辛基苯 紛(TntonX-45)混合物傳輸至漏斗形袋體⑽脂萃取袋）中。加入4〇 毫升的大豆油(序破S738卜Sigma公司製造)至血漿/嶙g曼三丁g旨 (ΤηΒΡ)/聚氧乙缚(4_5)_對_第三辛基苯盼(Trit〇nX_45)混合物中。將 血聚續酸三丁醋(ΤηΒΡ)/聚氧乙豨(4,5)_對_第三辛基苯酉分邮〇11 Χ-45)/百分之1〇大豆油所組成之懸浮液劇烈地振盈至少工分鐘， 接著放置於減培養箱，以顧溫和的搖魅少15分鐘。然後將 此漏斗形袋麵置45分鐘，以確保油相(上層)及血對目(下層）的傾 析(decantation)。 〇 回收清澈的金漿相。超過370毫升的血漿通過一注入液過濾 器_如_時使血漿藉由重力法(不需藉由泵浦提供壓力)通過 Pall公司所製造之AKS6 Pall活性唆過滤器(型號s脈^叩⑻ SC060XAK6)，其係續接於一 0.2微米濾菌器(型號㈣版零㈣ 20，序號 KM5EKVP2S)。 脸iJ吉合百分之1填酸三丁醋(TnBP)及百分之！聚氧乙烯 (4-5)-對-第三辛基苯紛(Triton X_4S)(使用其他品牌的聚氧乙稀 32 200942247 (4 5)-對-第二辛基苯酚(Trit〇nX_45))的使用，並藉由大豆油進行一 次的萃取’可獲得超過现毫升的清澈血漿，此清澈血漿可藉由 * 重力法通過/舌性碳過濾'器及濾、菌器進行過濾，以排除有機溶劑消 毒试劑、殘留之大豆油、血液細胞碎片、細菌及寄生蟲。 _第七實放例 女離術血漿(apheresisplasma)，以百分之2填酸三丁酯(ΤηΒΡ) 處理，並以大豆油(序號S7381，Sigma公司製造)進行一次、兩次 〇 或三次的油脂萃取。 依循製造商的操作指南下，以分離術程序收集2血漿單位， 並且以抗凝血酸檸檬酸葡萄糖(acid_citrate_dextrose antic〇agUiant， ACDA)(比例為每ίο。毫升血液中含有8毫升)抗凝此2血漿單位。 血襞在進行處理程序之前並未去白細胞(leucoreduced)。將血聚冷 凍於乾冰酒精浴(dry ice ethanol bath)中，並於攝氏溫度負30度(-30 °C)之冰箱中，最多儲存3個月。 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱1〇分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 有機溶劑消毒處理袋)中。混合的血漿之體積為400毫升。 將8毫升的磷酸三丁g旨(TnBP) (Prolabo，VWR公司製造， Fontenay-sous-bois地區，法國)謹慎地加入4⑻毫升的血漿中，以 達到最終濃度為百分之2的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)。 • 將血漿續酸三丁酯(ΤηΒΡ)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保 . 不同成分間的充分混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入 33 200942247 振盪培養箱中，於攝氏溫度37度進行培養，並且穩定的溫和搖動 (每分鐘轉速150轉(150 -))30分鐘進行處理。接著將血裝續酸 三丁醋(ΤηΒΡ)混合物傳輸至第二病毒去活化袋(第二有機溶劑消毒 處理袋）’並於相同的狀態下培養1小時％分鐘。 然後將血漿鱗酸三丁醋(丁着)混合物傳輸至漏斗形袋體(油 脂萃取袋)中。加入40毫升的大豆油(序號S7381，Sigma公司製造） 至血漿/碟酸三丁酯(TnBP)混合物中。將血漿/填酸三丁酯(ΤηΒρ)/ 百分之10大豆油所組成之懸浮液劇烈地振盪至少丨分鐘，接著放 置於振i培養箱’以確保溫和的搖動至少15分鐘。然後將此漏斗G 形袋體懸置β分鐘’以確保油相(上層)及血漿相(下層）的傾析 (decantetion)。 所回收的血漿相非常的混濁，導致回收的血漿無法通過活性 奴過濾'器(Pall公司所製造之船6 PaU活性碳過滤器；型號 SUPRAcap 60 SC060XAK6)進行過濾。 再重複進行兩次的大豆油脂質萃取程序。每次萃取所產生的 ❹ 血桌非常的混濁，致使上述之過濾步驟無法進行。 ^2^二’、、。&百分之2碌酸三τ_(τηΒΡ)的使用，並藉由大旦 油進行一次、兩次或三次的萃取，經由不同次數的萃取所產生的 血水非常的混濁，而無法藉由重力法通過pdl公司所製造之八尺％

Pal1活性碳過濾器(型號SUPRAcap 60 SC060XAK6)更甚至是濾菌 器進行過渡。 施柯 34 200942247 分離術血漿(apheresisplasma)，以百分之1磷酸三丁龜(ΤηΒΡ) 及百刀之1聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯g分(Triton Χ-45)(序號 ;93419 ’Fluka ’ Sigma Aldrich 公司製造)處理，並以蓖麻油(castor oil) 進行一次、兩次或三次的油脂萃取。 依循製造商的操作指南下，以分離術程序收集2血漿單位， 並且以抗凝血酸檸檬酸葡萄糖(add-dtmte-dextrose anticoagulant， ACDA)(比例為每100毫升血液中含有8毫升)抗凝此2血漿單位。 ©血漿在進行處理程序之前並未去白細胞(leuc〇reduced)。將血裝冷 凍於乾冰酒精浴(dry ice ethanol bath)中，並於攝氏溫度負3〇度(_3〇 °C)之冰箱中’最多儲存3個月。 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱1〇分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 有機溶劑消毒處理袋）中。混合的血漿之體積為4〇〇毫升。 _ 將8毫升的百分之5〇/百分之5〇的碟酸三丁酯(丁也巧 (Prolabo ’ VWR公司製造，；p〇ntenay_s〇us_b〇is地區法國)及聚氧 乙稀(4-5)鲁第三辛基苯酚(Trit〇nX_45)(序號 93419，Fluka，sigma Aldrich公司製造)混合物，謹慎地加入4〇〇毫升的血漿中，以達到 最終濃度為相對血漿重量百分之丨的磷酸三丁酯(TnBp)及百分之 1的聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇nχ_45)。 將血漿/磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4_5)_對_第三辛基苯酚 (TritonX-45)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的充分 混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱中，於 35 200942247 攝氏溫度31度進行培養，並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速i5〇 轉(15〇 -))30分鐘進行處理。接著將血漿/鱗酸三丁醋(ΤηΒρ)/聚 氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯盼(Trit〇n X_4S)混合物傳輸至第二病毒 去活化袋(第一有機溶劑消毒處理袋）’並於相同的狀態下培養工小 時30分鐘。 然後將血漿/碟酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4_5)_對_第三辛基苯 酚(TntonX-45)混合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋）中。加入 毫升的蓖麻油(castor (= rici皿s) oi】）（序號8於12，Fkika公司製造） 至血襞/雜三丁醋(TnBP)/聚氧乙烯(4_5)♦第三辛基苯盼⑽〇n 〇 X-45)混合物中。將血漿/磷酸三丁酯(TnBp)/聚氧乙烯(4_5)_對-第三 辛基苯齡(Tnton X-45)混合物/百分之1〇 _由所組成之懸浮液劇 烈地振盪至少1分鐘，接練置於振i培，以確保溫和的搖 動至少15分鐘。然後將此漏斗形袋體懸置幻分鐘，以確保油相(上 層)及jk漿相(下層）的傾析(decantati〇n)。 所回收的血漿相非常的混濁，導致回收的血漿無法通過活性❹ 碳過濾器(Pall公司所製造之akS6 pall活性碳過濾器；型號 SUPRAeap 60 SC060XAK6)進行過濾。 再重複進行兩次的油脂質萃取程序。每次萃取後所產生的血 漿非常的混濁，致使上述之過濾步驟無法進行。 結論：結合百分之1磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之1聚氧乙缚 (4_5)-對-第三辛基苯紛(Trit〇n χ_45)的使用，並藉由篆麻油進行一 次、兩次或三次的萃取，每次萃取皆產生混濁的血漿，而無法藉 ，r 36 200942247 由重力法通過活性碳過濾器或濾菌器進行過濾。 j九實施例 ‘分離術血漿(apheresisplasina)，以百分之1磷酸三丁酯(TnBp) 及百分之1聚乙二醇辛基笨基醚(Trit〇n χ_1〇〇)處理，並以大豆油 (序號S7381，Sigma公司製造)進行一次、兩次或三次的油脂萃取。 依循製造商的操作指南下，以分離術程序收集2血漿單位， 並且以抗;旋血酸杯樣酸葡萄糖(acid_ci^ate_dextrose anticoagUiant， ® ACDA)(比例為每loo毫升血液中含有8毫升麻凝此2血槳單位。 血桌在進行處理程序之前並未去白細胞(leuc〇reduce(j)。將血聚冷 /東於乾冰酒精浴(dry ice ethanol bath)中，並於攝氏溫度負30度(-30 °C)之冰箱中，最多儲存3個月。 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱1〇分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 有機溶劑消毒處理中。混合的血漿之體積為4⑻毫升。 將8宅升的百分之50/百分之50的碟酸三丁酯（ΤηΒΡ) (Prolabo ’ VWR公司製造’ F〇ntenay-sous-bois地區，法國)及聚乙 二醇辛基苯基醚(Triton X-100) (Merck公司製造，Darmstadt地區， 德國)混合物’謹慎地加入400毫升的血浆中，以達到最終濃度為 百分之1的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之1的聚乙二醇辛基苯基醚 (Triton Χ-100)。 ·· 將血漿續酸三丁醋(ΤηΒΡ)/聚乙二醇辛基苯基醚(Triton χ_1〇(^ *. 混合物劇烈地振蓋5分鐘’以確保不同成分間的充分混合。將經 37 200942247 過此权序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱中，於攝氏溫度31 度進彳于養並且穩疋的溫和搖動(每分鐘轉速I%轉(15〇 分釦進行處理接著將血漿/碟酸三丁酯(TnBp)/聚乙二醇辛基苯基 i|(Triton X-1 〇〇)混合物傳輸至第二病毒去活化袋(第二有機溶劑消 毒處理袋），並於相同的狀態下培養1小時30分鐘。 然後將血漿續酸三丁酯(TnBP)/聚乙二醇辛基苯基醚(Trit〇n X-100)混合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋）中。加入4〇毫升的 大丑油(序號S7381，Sigma公司製造)至血漿/構酸三丁酯(TnBp)/ ^ 聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)混合物中。將血漿續酸三丁酯 (ΤηΒΡ)/聚乙二醇辛基苯基醚(Trit〇n χ_1〇〇)混合物/百分之大豆 油所組成之t;浮液細、地減至少丨分鐘，接著放置錄後培養 箱，以確保溫和的搖動至少、15分鐘。然後將此漏斗形袋體懸置幻 分鐘’以確保油相(上層)及血漿相(下層)的傾析(此_沾⑽）。 所回收的血漿相非常的混濁，導致回收的血浆無法通過活性 碳過濾器(Pall公司所製造之繼6 pau活性碳過滤器；型號❹ SUPRAcap 60 SC060XAK6)進行過濾。 再重複進行兩次的油脂質萃取程序。每次萃取後所產生的血 漿非常的混濁，致使上述之過濾步驟無法進行。 莛|丄結合百分之1磷酸三丁醋(ΤηΒΡ)及百分之i聚乙二醇 辛基苯基峨Tnton X_100)的使肖’並藉由大豆油進行一次、兩次 或三次的轉’每次萃取皆產生關的錢n域由重力法 通過活性碳過濾器或濾菌器進行過遽。 ·- 38 200942247 弟十貫施例 分離術血漿(aPheresisplasma) ’以百分之1磷酸三丁醋(ΤηΒΡ) • 及百分之1吐溫乳化劑80 (Tween 80)處理，並以大豆油（序號 S7381 ’ Sigma公司製造)進行一次、兩次或三次的油脂萃取。 依循製造商的操作指南下，以分離術程序收集2血漿單位， 並且以抗政血酸榉樣酸葡萄糖(acid_cjtrate_dex^〇se antic〇agUiant， ACDA)(比例為每1〇〇毫升血液中含有8毫升)抗凝此2血聚單位。 ❿血水在進行處理程序之前並未去白細胞(丨eucoreduced)。將血漿冷 床於乾冰酒精浴(dry ice ethan〇i bath)中’並於攝氏溫度負30度(-30 C)之冰箱中，最多儲存3個月。 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱1〇分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 有機溶劑消毒處理袋)中。混合的血漿之體積約為400毫升。 將8毫升的百分之5〇/百分之50的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ) (Prolabo ’ VWR公司製造，F〇ntenay_s〇us_b〇is地區，法國)及吐溫 乳化劑80 (Tween 80)，即聚山梨醇S旨80 (polysorbate 80)(序號 59924，Fhika公司製造)混合物，謹慎地加入400毫升的血梁中， 以達到最終濃度為百分之1的填酸三丁醋(ΤηΒΡ)及百分之1的吐 溫乳化劑(Tween 80)。 將血漿A粦酸三丁酯(TnBpy吐温乳化劑80 (Tween 80)混合物 劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的充分混合。將經過此程 " 序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱中，於攝氏溫度31度進行 39 200942247 培養，並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速150轉(150 rpm))30分鐘 進行處理。接著將血漿續酸三丁醋(ΤηΒΡ)/吐溫乳化劑80 (Tween 80)混合物傳輸至第二病毒去活化袋(第二有機溶劑消毒處理袋）， 並於相同的狀態下培養1小時30分鐘。 然後將血漿續酸三丁醋(ΤηΒΡ)/吐溫乳化劑80 (Tween 8〇)混 合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋)中。加入4〇毫升的大豆油(序 號S7381，Sigma公司製造)至血漿麟酸三丁酯(TnBp)/吐溫乳化劑 80 (Tween 80)混合物中。將血漿/麟酸三丁酯(ΤηΒρ)/吐溫乳化劑如 (Tween 80)混合物/百分之1〇大豆油所組成之懸浮液劇烈地振盪至 少1分鐘，接著放置於振盪培養箱，以確保溫和的搖動至少15分 鐘。然後將此漏斗形袋體懸置45分鐘，以確保油相(上層)及血漿 相（下層）的傾析(decantation)。 所回收的血漿相非常的混濁，導致回收的血敷無法通過活性 碳過濾、器(Pall公司所製造之AKS6 Pall ;舌性碳過遽器；型號 SUPRAcap 60 SC060XAK6)進行過濾。 再重複進行兩次的油脂質萃取程序。每次萃取後所產生的血 漿非常的混濁，致使上述之過濾步驟無法進行。 m丄結合百分之1磷酸三丁酯(TnBp)及百分之丨吐溫乳化 劑80 (Tween 80)的使用，並藉由大豆油進行一次、兩次或：4的 萃取，每次萃取皆產生混刺血聚’而無法藉由重力法通過活性 碳過遽器或濾、菌器進行過濾、。 200942247 回收血敷(recovered plasma)，以百分之！磷酸三丁醋(TnBp) ’ 及百分之1聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Triton X-45)(序號 * 9M19 ’ Fluka，Sigma Aldrich公司製造)處理，並以大豆油(序號 S7381，Sigma公司製造)進行一次的油脂萃取。 從全血(whole blood)中製備2單位的回收血漿，收集於檸檬酸 辑I右方疋葡萄糖（citrate-phosphate-dextrose)抗凝/保存液 (anticoagulant/preservative)中（比例為每刚毫升血液中含有14毫 ®升）。係將血液於4小時内以3,600克之離心力，離心分鐘進行 收本血桌在進行處理程序之兩並未去白細胞(leuC〇reduced)。將 血漿冷凍於乾冰酒精浴(dry ice ethan〇i bath)中，並於攝氏溫度負3〇 度(-30 C)之冰箱中’最多儲存3個月。 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱1〇分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 _ 有機溶劑消毒處理袋)中。混合的血漿之體積為4〇〇毫升。 將8笔升的百分之5〇/百分之50的麟酸三丁醋（TnBp) (Prolabo ’ VWR公司製造’ F〇ntenay_sous_b〇is地區，法國)及聚氧 乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇nX_45)(序號 93419，Fhka，sigma Aldrich公司製造)混合物，謹慎地加入4〇〇毫升的血漿中，以達到 最終濃度為相對血漿重量百分之i的磷酸三丁酯(TnBp)&百分之 1的♦、氧乙燦(4-5)-對-第三辛基苯酉分(Trit〇n X-45)。 將血漿/麟酸三丁酯(ΤιιΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚 (Triton X-45)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的充分 41 200942247 混合。將經過此程序之第—病毒去活化袋置入振盪培養箱中，於 攝氏溫度31度進行培養’並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速15〇 轉(150 rpm))30分鐘進行處理。接著將血漿鱗酸三丁酯(TnBp)/聚 氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Triton χ_45)混合物傳輸至第二病毒 去活化袋(第二有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀態下培養丨小 時30分鐘。 然後將血漿/碟酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯 酚(Triton X-45)混合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋）中。加入4〇 毫升的大豆油(序號S7381，Sigma公司製造)至血漿/填酸三丁酯 (ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)普第三辛基苯紛(Trit〇nX_45)混合物中。將 血J： /碟酸二丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4_5)_對_第三辛基苯酚(Trit〇n X-45)/百分之1〇大豆油所組成之懸浮液劇烈地振盪至少丨分鐘， 接著放置於振盪培養箱，以確保溫和的搖動至少15分鐘。然後將 此漏斗形㈣ 45分鐘，以確保油相(上層)及血漿相(下層)的傾 析(decantation)。 回收清澈的血漿相。超過370毫升的血漿通過一注入液過濾 器(infusion filter) ’使血漿藉由重力法(不需藉由泵浦提供壓力）通過 Pall公司所製造之ak% Pall活性碳過濾器(型號叩吣 SC060XAK6)，其係續接於- 〇.2微米濾菌器(型號脑⑴沈啊㈣ 2〇，序號 KM5EKVP2S)。 鐘塗丄結合百分之1磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之i聚氧乙烯 (4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇n χ_45)的使用，並藉由大豆油進行一 42 200942247 次的萃取，可獲得超過350毫升的清澈回收血漿，此清澈回收血 漿可藉由重力法通過活性碳過濾器及濾菌器進行過濾，以排除有 ••機溶劑消毒試劑、殘留之大豆油、血液細胞碎片、細菌及寄生蟲。 第十二實施例 回收血漿(recovered plasma)，以百分之1填酸三丁醋(τηΒρ) 及百分之1 t氣乙稀(4-5)-對-第三辛基苯盼(Tiit〇n χ_45)(序號 93419，Fluka，Sigma Aldrich公司製造)處理，並以大豆油(序號 ⑩ 19-42500 ’ Penta公司製造)進行一次的油脂萃取。 從全血(whole blood)中製備2單位的回收血漿，全血係收集於 檸檬酸磷酸右旋葡萄糖(dtrate-phosphate-dextrose)抗凝/保存液 (anticoagulant/preservative)中（比例為每1〇〇毫升血液中含有14毫 升）。係將血液於4小時内以3,600克之離心力，離心12分鐘進行 收集。血漿在進行處理程序之前並未去白細胞(leucoreduced)。將 血漿冷珠於乾冰酒精浴(dry ice ethanol bath)中，並於攝氏溫度負3〇 ® 度(-30°C)之冰箱中，最多儲存3個月。 將2扣獻來源的血襞放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱10分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 有機溶劑消毒處理袋)中。混合的血漿之體積為400毫升。 將8毫升的百分之50/百分之50的填酸三丁酯（ΤηΒΡ) (Prolabo，VWR公司製造，Fontenay-sous-bois地區，法國)及聚氧 乙稀(4-5)-對-弟二辛基笨酉分(Triton X-45)(序號 93419，Fluka，Sigma Aldrich公司製造)混合物，謹慎地加入400毫升的血襞中，以達到 43 200942247 最終濃度為相對血漿重量百分之1的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之 1的聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(TritonX-45)。 將血漿/磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚 (TritonX-45)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的充分 混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱中，於 攝氏溫度31度進行培養，並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速15〇 轉(150 rpm))30分鐘進行處理。接著將血漿續酸三丁自旨(TnBp)/聚 氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Triton X-45)混合物傳輸至第二病毒 ^ 〇 去活化袋(第二有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀態下培養J小 時30分鐘。 然後將血漿續酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4·5)_對-第三辛基苯 酚(TntonX-45)混合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋)中。加入4〇 毫升的大且油(序號19-42500 ’ penta公司製造)至血漿/碌酸三丁酯 (ΤηΒΡ)/聚氧乙稀(4_5)普第三辛基苯盼㈣〇ηχ_45)混合物中。將 血水/%酉欠二丁酉日（ΤηΒΡ)/聚氧乙稀(4_外對_第三辛基苯斷Trit〇n❹ X-45)/百分之1〇大豆油所組成之__舰振盪至少丨分鐘， 接著放置於缝培養箱，以確保溫和的鶴至少15分鐘。然後將 此漏斗形袋體懸置45分鐘，以確保油相(上層)及金漿相(下層）的傾 析(decantation)。 回收清澈的血槳相。超過370亳升的血漿通過一注入液過濾 器(涵_ m㈣，使血黎藉由重力法(不需藉由泵浦提供壓力)通過 Pan公司所製造之細Pall活性軸慮器(型號§服‘ 44 200942247 SC060XAK6)，其係續接於一 Ο.2微米濾菌器(型號MiniKleenpakTM •： 20，序號 KM5EKVP2S)。 1 |吉論：結合百分之1填酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之1聚氣乙稀 (4-5)-對-第三辛基苯酚(Triton Χ-45)的使用，並藉由大豆油進行一 次的萃取，可獲得超過350毫升的清澈回收血漿，此清澈回收血 漿可藉由重力法通過活性碳過濾器及濾菌器進行過濾，以排除有 機溶劑消毒試劑、殘留之大豆油、血液細胞碎片、細菌及寄生蟲。 參 第十二貫施例 分離術血漿(apheresispiasma)，以百分之！磷酸三丁酯(TnBp) 及百分之1聚氧乙稀(4-5)-對-第三辛基苯盼(Trit〇n χ_45) (χ45， Triton® X·45，Sigma公司製造)處理，並且未經過油脂萃取。 依循製造商的操作指南下，以分離術程序收集2血漿單位， 並且以抗凝血酸檸檬酸葡萄糖(acid-dtrate-dextrose antiC0agUlant， ❹ACDA)(比例為每100毫升血液中含有g毫升)抗凝此2血衆單位。 血漿在進行處理程序之前並未去白細胞(leuc〇reduced)。將血漿冷 束於乾冰酒精浴(dry ice ethan〇1 bath)中，並於攝氏溫度負3〇度(_3〇 C)之冰箱中，最多儲存3個月。 將2扣獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱1〇分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第一 有機溶劑消毒處理袋)中。混合的血漿之體積為撕毫升。 ' 將8冤升的百分之50/百分之50的磷酸三丁酯（ΤηΒΡ) • (P1〇lab〇 VWR公司製造’ Fontenay_s〇us_b〇is地區，法國)及聚氧 45 200942247 乙烯(4_5)-對-第三辛基苯酚(Triton X-45) (X45，Triton® Χ-45，

Sigma公司製造)混合物，謹慎地力口入400毫升的血漿中，以達到 最終濃度為相對血漿重量百分之1的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之 1的聚氧乙稀(4-5)-對-第三辛基苯盼(Triton Χ-45)。 將血漿/填酸三丁醋(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚 (TritonX-45)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的充分 混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱中，於 攝氏溫度31度進行培養，並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速15〇 轉(150 rpm))30分鐘進行處理。接著將血漿/磷酸三丁g旨(TnBp)/聚 氧乙烯(4-5)-對-第二辛基苯紛(Triton X-45)混合物傳輸至第二病毒 去活化袋(第二有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀態下培養2小 時30分鐘。 所回收的血漿相非常的混濁，導致回收的血漿無法通過活性 碳過濾器(Pall公司所製造之ak% Pall活性碳過濾器；型號 SUPRAcap 60 SC060XAK6)進行過渡。 兹盈1在百分之1磷酸三丁酯(TnBP)及百分之1聚氧乙烯(4_5)_ 對-第三辛基苯盼(Triton X_45)處理之後，必需進行油脂萃取的步驟 以獲得清澈的血漿，以及使血漿能通過活性碳過濾器。 如表所示，為第一實施例中經過處理後的血漿品質(標示為 「最終」）相對於起始的血漿品質(標示為「起始」）以5個批次進 行比較。結果顯示，使用百分之1破灌三丁醋(ΤηΒΡ)及百分之1 聚乳乙稀(4_5).第三辛基苯盼(Trit〇n χ_45)處理，並且經由大豆 200942247 油脂萃取並通過AKS6活性碳過濾m心進行過濾，並不會 改變血漿的蛋白質品f，同時不會改變離子平衡(iQnba丨繼）。在 經過一次大豆油脂萃取及活性碳過濾後，使最終血漿中的磷酸三 丁酉曰(ΤηΒΡ)及t氣乙稀(φ_5)_對-第三辛基苯紛(Trit〇n χ_45)的含量 牛低至…、法測件的程度。其中Ns .表示差異不明顯(n〇n以职丨化⑽丈 difference) ’ ΝΑ .表示無法測得(n〇t ，*:表示活性碳過 濾、後。 e

47 200942247 鐵 (mg/dl) Ο 〇 m 〇\ On yn 〇〇 GO r—( 銅 (mg/dl) 49,7 i««1 r—l cn \D 卜 22,4 G\ m P； 鎮 (mg/dl) t\ r~H in r—^ r\ r-H €\ i—i 妈 (mg/dl) r\ (Ν (N r% (N m r\ m €\ Γν| r- <N c\ ΓνΙ 00 r\ CN OD 〇\ (Ν 滲透壓 (mosm) r-H m m 322 317 i 1 _1 1 315 T—H to rn 307 320 324 Ο m 酸驗值 (pH) 7,547 7,25 On 寸 r\ 卜 7,52 卜 tn c\ 卜 7,59 〇\ <N 卜 rs 寸 β\ 卜 樣品 第1批次起始 第1批次最終 1 . ..._ι 第2批次起始 第2批次最終 第3批次起始 第3批次最終 .... .. ... 第4批次起始 第4批次最終 第5批次起始 200942247 Ο 參 49.2 士 5.8 68.2 ±30.2 m 15,2 — 1 28.86 ± 8.3 1 18.4 ±4.3 CO r\ ι-Ή 1.52 士 0.06 1.59 ±0.71 00 m 2.84 士 0.13 3.46 士 0.85 318 _1 325.2 士 7.5 317.2 ±3.0 00 寸 卜 7.548 ±0.03 7.385 ±0.06 〇 VI 第5批次最終 起始的平均標準差 最終的平均標準差 P值 τ 第Η 凝 血因子 (%) 84,9 第十凝血 因子 (%) 139,7 第九凝血 因子 (%) 118,1 第八凝血 因子 (%) 55,5 第五凝血 因子 (%) 104,7 第二凝血 因子 (%) 131,9 樣品 第1批次起始 200942247 m (N (N ss (N m ID 卜 〇〇 <N 寸 τ-Η r\ 〇\ rs rn cK' oo 卜 7—( 卜 £ OO 卜 CN 屮 r—< 卜 ?i τ—< r-H m ^H Ό 寸 寸 ί〇 寸 0\ r4 ro r-H t—H ri T—H r-H r-W t—H τ-Η 〇 T—< 〇 r—H r-H r—K σ\ r—I r-H m r\ 110,8 ΓΟ On r-H t-H 102,5 〇\ r-H T—H CN 寸 m r\ rn 〇〇 m s r—i s r—^ 〇\ to r-H r-H rn t—< r—i cn 屮 T—( in in OO^ r—( OO in CX^ 〇〇 \〇 § SO o 卜 m oo tn 卜 tn oo δ +1 oo ^S〇 又 oo^ CO 〇> r~< 00。 t—H 卜 卜 CS 〇〇 s r-H o t-H r™H (N t—H r—t 卜 r—^ r—H iN r*H 艺 r—H 艺 T-H s T—H 118.5 〇 T—1 113.4 134,4 129,4 139,6 134,4 tn rs (N Cn| t—H 122,5 r—< r-H 寸 Γ—< t—4 124,7 126.4 士 3.7 127.4 i: )則 欢 举 鲽 鲽 ♦ ίΓ ίΓ -O •ΐν 〇J uJ UJ d5 T-H Γν! (N m m 寸 寸 IT) 姝 城· 派 城： 贼 200942247 ❹ L 士3.3 CO 名 士 6.4 GO ±3.0 ±6.2 寸· 寸· Xfl % 1 士 4.2 X/1 P值 聚氧乙烯 (4-5)-對-第 三辛基苯酚 1 (Triton X-45) (ppm) NA * 〇 V ΝΑ 磷酸三丁酯 (ΤηΒΡ) (PPm) NA <10* ΝΑ 活化凝血·活 酵素時間 (sec) 30.5 「34.7 ; 32.2 1 凝血酵素原 時間 (sec) 1 13.2 13.5 S蛋白 1 (%) 22,6 45,9 20,1 C蛋白 (%) 1 98,4 CN <N r—Η 107,8 才篆品 第1批次起始 第1批次最終 第2批次起始 200942247 ο ( NA ο r—ί ΝΑ 〇 ?—< ΝΑ r—f V V V V * Ο < 关 Ο < 〇 < τ—Ή V Z r—^ V 1—( V r-H V m m 00 寸 m \〇 m oo ΓΠ Ό 〇〇 r—Ί m m ro m 〇6 (N 〇6 m CN m o m r-H (Ν 屮 rn m -Η GO <N 寸· 00 U1 00 00 r-H \〇t MO <Ν τ-Η 寸’ r—Κ rn r—( 寸· r-H Η 寸· T-H r-H 寸· 1—( 〇 r—1 r Ή -Η 00 r—H OC 卜 寸 卜 寸 rn CN in 1—1 o ο Ό ro 苳 ri 寸" m cK (N cn +1 屮 VI 〇\ ON S m CN 寸 -τ·Η r—Η m t—1 r—( r\ s oo r—( r-H •n c\ m \〇 OO 〇\ -Η s r—K Ο r—< 屮 〇〇 7u 给 驾 ii. 鲽 ίΓ -aJ -iV 莫 ΓΝ m m 寸 寸 1〇 滅· 滅： P值 200942247 第+四實施例 來自分離術血漿之微量混合(minipool)的冷凍沉殿品，以百分 J 之1磷酸三丁醋(ΤηΒΡ)及百分之1聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基笨紛 (Triton Χ-45) (Χ45，Triton® Χ-45，Sigma 公司製造)處理，並以大 丑油(序號_S7381 ’ Sigma公司製造)進行一次的油脂萃取。 血漿係以分離術程序收集，其依循製造商的操作指南，使用 百特(Baxter自動血漿_分離系統(autopheresis C)血細胞分離器 ® (Blood Cell Separator)(百特公司製造，Deerfield 地區，美國），進 行分離術程序。並且以抗凝血酸檸檬酸葡萄糖(acid_citrate_dextr〇se anticoagulant，ACDA)(比例為每1〇〇毫升血液中含有8毫升)抗凝 血浆。 冷凍沉澱品之製備，係將冷凍的血漿於攝氏溫度4度隔夜 (overnight)融解，直到冷凍之血漿變為泥滓狀。然後將盛裝此血漿 _之血漿袋，以3,850克的離心力，於攝氏溫度負4度(_4π)離心3〇 分鐘(離心機之型號為KR4i，J0uan公司製造，St Herblain地區， 法國）。完成離心作業後，將血漿袋倒置，以排出實質上所有的冷 凍雀乏血漿，而獲得「脫水(dry)」之冷凍沉澱品。 然後將冷凍沉澱品收集袋立即冷凍於攝氏溫度負2〇度或更低 的溫度下’最多冷凍2個月。 田進行病毒去活化處理時，取出冷凍沉澱品，並放置於攝氏 /JDL度35度，正負5度的溫度控制水浴槽中10分鐘，使冷凍沉殿 品在收集袋内融解。 53 200942247 將8毫升的無菌葡萄糖/鹽溶液在無菌操作下添加至每一單位 及每一收集袋，以手動混合的方式使冷凍沉澱品充分的回溶 (resuspend)。將冷凍沉殿品溶液(約為每一收集袋毫升)混合於 (pooled) 40個供應來源(donation)所組成的族群中，並置入於第— 病毒去活化袋。混合的冷凍沉殿品(cryoprecipitate p〇〇1)之體積為 400毫升。 將8毫升的百分之50/百分之50的填酸三丁酯(TnBp) (Prolabo，VWR公司製造，Fontenay-s〇US-b〇is地區，法國)及聚氧 乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Triton X-45) (X45，Triton® X-45，

Sigma公司製造)混合物，謹慎地加入400毫升的冷束沉澱品中， 以達到最終濃度為百分之1的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之1的聚 氧乙烯(4-5)-對-第三辛基笨酚(Triton Χ-45)。 將冷凍沉澱品續酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4_5)_對_第三辛基 苯酚(TritonX-45)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的 充分混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振蘯培養箱 中，於攝氏溫度31度進行;培養’並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速 150轉(150 rpm))30分鐘進行處理。接著將冷凍沉澱品續酸三丁酯 (ΤηΒΡ)/聚氧乙稀(4-5)-對-第三辛基苯盼(Triton X-45)混合物傳輸 至第一病毒去活化袋(第二有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀態 下培養1小時30分鐘。 然後將冷凍沉澱品/磷酸三丁醋(ΤηΒΡ)/聚氧乙婦(4_5)_對_第三 辛基苯酚(Triton Χ-45)混合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋）中。 54 200942247 加入40毫升的大豆油(序號S738丨，sigma公司製造)至冷凍沉殿品 /碟酸二丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4_5)_對_第三辛基苯酚(Trit〇n X-45) 混合物中。將冷凍沉澱品/碟酸三丁酯(TnBpy聚氧乙烯0_5)_對-第 二辛基苯SKTmon x_45)/百分之10大豆油所組紅祕液劇烈地 振盪至少1分鐘，接著放置於振盪培養箱，以確保溫和的搖動至 y 15为知。然後將此漏斗形袋體懸置45分鐘，以確保油相(上層） 及冷凍沉澱品相(下層）的傾析(decantati〇n)。 回收清澈的冷凍沉澱品相。超過37〇毫升的冷凍沉澱品通過 一注入液過濾器(mfUsi〇nfllter)，使冷凍沉澱品藉由重力法(不需藉 由泵浦提供壓力)通過Cuno bioCap 30 BC0030 A R32SP型過濾器 (Cuno公司製造)，然後通過由PaU公司所製造之〇 2微米濾菌器(型 號 Mmi Kleenpak™ 20，序號 KM5EKVP2S)。 差塗丄結合百分之1磷酸三丁酯(TnBP)及百分之1聚氧乙稀 (4-5)-對-第三辛基苯盼(Trit〇n χ_45)的使用，並藉由大豆油進行一 次的萃取，從分離術血漿中可獲得超過35〇毫升清澈的冷凍沉澱 此/月政的冷柬沉殿品可藉由重力法通過活性碳過濾器及淚菌 态進行過濾，以排除有機溶劑消毒試劑、殘留之大豆油、血液細 胞碎片、細菌及寄生蟲。 JL十五實施例 來自回收血漿之微量混合(minipool)的冷柬沉殿:品，以百分之 1磷酸三丁酯(TnBP)及百分之1聚氧乙烯(4_5)_對_第三辛基苯酚 (Tilton X-45) (X45 ’ Triton® X-45，Sigma 公司製造)處理，並以大 55 200942247 豆油(序號19-42500 ’ Penta公司製造)進行一次的油脂萃取。 從全血(wholeblood)中獲得回收血漿，全血係收集於檸檬酸碟 酸右旋葡萄糖（dtrate-pliosphate-dextrose)抗凝/保存液 (anticoagulant/preservative)中（比例為每1〇〇毫升血液中含有14毫 升）。係將血液於4小時内以3,600克之離心力，離心12分鐘進行 收集。血漿在進行處理程序之前並未去白細胞(leucoreduced^將 血漿冷凍於乾冰酒精浴(dry ice ethanol bath)中，並於攝氏溫度負3〇 度(-30°C)之冰箱中，最多儲存3個月。 冷凍沉澱品之製備，係將冷凍的血漿於攝氏溫度4度隔夜 © (overnight)融解，直到冷凍之血漿變為泥濘狀。然後將盛裝此血漿 之血漿袋，以3,850克的離心力，於攝氏溫度負4度(_4。〇離心如 分鐘(離心機之型號為KR4i，Jouan公司製造，St Herblain地區， 法國）。元成離心作業後，將血漿袋倒置，以排出實質上所有的冷 凍貧乏血漿，而獲得「脫水(dry)」之冷凍沉澱品。 然後將冷涞沉殿品收集袋立即冷涞於攝氏溫度負20度或更低 的溫度下，最多冷凍2個月。 ® 當進行病毒去活化處理時，取出冷;東沉殿品，並放置於攝氏 溫度35度，正負5度的溫度控制水浴槽中1〇分鐘，使冷束沉搬 品在收集袋内融解。 將8毫升的無菌葡萄糖/鹽溶液在無菌操作下添加至每一單位 及每-收集袋’以手動混合的方式使冷柬沉殿品充分的回溶 (職spend)。將冷涞沉殿品溶液(約為每—收集们〇毫升)混合於 _ 56 200942247 (pooled) 40個供應來源(donation)所組成的族群中，並置入於第一 病毒去活化袋。混合的冷凍沉殿品(cryoprecipitate pool)之體積為 ’ 400毫升。 將8毫升的百分之50/百分之50的磷酸三丁酯（ΤηΒΡ；) (Prolabo ’ VWR公司製造，Fontenay-sous-bois地區，法國)及聚氧 乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Triton X-45) (X45，Triton® X-45，

Sigma公司製造)混合物’謹慎地力π入400毫升的冷束沉殺品中， β 以達到最終濃度為百分之1的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之1的聚 氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯g分(Triton Χ-45)。 將冷凍沉澱品/鱗酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)_對-第三辛基 苯盼(Triton Χ-45)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的 充分混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱 中，於攝氏溫度31度進行培養，並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速 15〇轉(150 rpm))30分鐘進行處理。接著將冷凍沉殿品/鱗酸三丁酯 (ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇n又_45)混合物傳輸 至第二病毒去活化袋(第二有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀態 下培養1小時30分鐘。 然後將冷柬沉殿品續酸三丁醋(TnBp)/聚氧乙稀(4_5)_對_第三 辛基苯斷Tntcm X·45)混合物傳輸至漏斗形㈣(油脂萃取袋)中。 加入40 i升的大ϋ(序號19_425⑻，&血公3製造)至冷康沉殿 品嫩三丁醋(腿>)/聚氧乙稀叫對_第三辛基苯紛㈣〇ηχ⑼ 混合物中。將冷東沉殿品續酸三丁醋(ΤηΒρ)/聚氧乙稀㈣鲁第 57 200942247 三辛基苯_Triton Χ_45)Λ§分之1G大豆油所喊之_液劇烈地 振盪至少1分鐘’接著放置於振蘯培養箱，以確保溫和的搖動至 少15分鐘。然後將此漏斗形袋體懸置4S分鐘，以確保油相(上層） 及冷凍沉殿品相(下層）的傾析(decamati〇n)。 回收清澈的冷滚沉殿品相。超過37〇毫升的冷柬沉殿品通過 一注入液過濾器(mfUsi〇nflher)，使冷凍沉澱品藉由重力法(不需藉 由泵浦提供壓力)通過Cuno bioCap 30 BC0030 A R32SP型過濾器 (cun〇公司製造)，然後通過由Pall公司所製造之〇 2微米濾菌器(型 號 Mini Kleenpak™ 20，序號 km5EKVP2S)。 ❻ ϋ塗丄結合百分之1磷酸三丁酯(TnBP)及百分之丨聚氧乙烯 (4-5)-對第三辛基苯酚(Trit〇n χ_45)的使用，並藉由大豆油進行一 次的萃取，可獲得超過35〇毫升來自分離術血漿的清澈冷凍沉澱 品，此清澈的冷凍沉澱品可藉由重力法通過活性碳過濾器及濾菌 窃進行過濾，以排除有機溶劑消毒試劑、殘留之大豆油、血液細 胞碎片.、細菌及寄生蟲。 〇 第十六實施你丨 來自回收血漿之微量混合(minip〇〇l)的冷束沉殿品，以百分之 1磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之1聚氧乙烯(4-5>對第三辛基苯酚 (Triton Χ-45) (X45 ’ Triton® X-45 ’ Sigma 公司製造)處理，並以笔 麻油(序號83912，Fluka公司製造)進行一次、兩次或三次的油脂 萃取。 «全血(whole blood)中獲得回收血漿，全血係收集於檸檬酸麟 ? 58 200942247 酉夂右疑葡刼糖（citrate-phosphate-dextrose)抗凝/保存液 -(anticoagulant/ preservative)中（比例為每1〇〇毫升血液中含有14毫 ’升）。係將血液於4小時内以3,_克之離心力，離心12分鐘進行 收本血水在進行處理程序之前並未去白細胞(1郎⑺比duce(j)。將 血漿冷凍於乾冰酒精浴付171沈技11紐〇]^站11)中，並於攝氏溫度負30 度(-30 C)之冰箱中，最多儲存3個月。 冷凍沉澱品之製備，係將冷凍的血漿於攝氏溫度4度隔夜 β (overnight)融解’直到冷束之血漿變為泥渾狀。然後將盛裝此血漿 之血漿袋，以3,850克的離心力，於攝氏溫度負4度(_4。〇離心3〇 为釦(離心機之型號為KR4i，J〇uan公司製造，St Herblain地區， 法國）。完成離心作業後，將血漿袋倒置，以排出實質上所有的冷 凍貧乏血漿，而獲得「脫水(dly)」之冷凍沉澱品。 然後將冷凍沉澱品收集袋立即冷凍於攝氏溫度負2 〇度或更低 的溫度下，最多冷;東2個月。 當進行病毒去活化處理時，取出冷凍沉澱品，並放置於攝氏 溫度35度，正負5度的溫度控制水浴槽中1〇分鐘，使冷來沉殿 品在收集袋内融解。 將8毫升的無菌葡萄糖/鹽溶液在無菌操作下添加至每一單位 及每一收集袋，以手動混合的方式使冷凍沉澱品充分的回溶 (resuspend)。將冷凍沉澱品溶液(約為每一收集袋1〇毫升)混合於 (pooled) 40個供應來源(donation)所組成的族群中，並置入於第一 病毒去活化袋。混合的冷康沉殿品(CI7〇precipitate ?〇〇])之體積為 59 200942247 400毫升。 將8毫升的百分之50/百分之50的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ) (Prolabo ’ VWR公司製造，Fontenay-sous-bois地區，法國)及聚氧 乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酉分(Triton X-45) (X45，Triton® X-45，

Sigma公司製造)混合物，謹慎地加入400毫升的冷凍沉澱品中， 以達到最終濃度為百分之1的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之1的聚 氧乙稀(4-5)-對-第三辛基苯酌(TritonΧ-45)。 將冷凍沉澱品/鱗酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基 苯酚(Triton Χ-45)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的 ® 充分混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱 中’於攝氏溫度31度進行培養’並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速 150轉(150 rpm))30分鐘進行處理。接著將冷凍沉澱品/磷酸三丁酯 (ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯紛(Trit〇n χ_45)混合物傳輪 至第二病毒去活化袋(第二有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀熊 下培養1小時30分鐘。 然後將冷凍沉殿品/磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)/聚氧乙稀(4_5)-對-第二 〇 辛基苯酚(Triton X-45)混合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋)中。 加入40耄升的蓖麻油(序號83912，Fluka公司製造)至冷凍沉澱σ 續酸三丁醋(ΤηΒΡ)/聚氧乙烯(4♦對-第三辛基笨盼(Tnt〇n 混合物中。將冷凍沉澱品/磷酸三丁酯(TnBP)/聚氡乙烯^5)_對-第 三辛基苯_1_ X，百分之K)賊油所组成之懸浮液劇烈地 振盛至少i分鐘，接著放置於培養箱，以確保溫和的搖動至 60 200942247 少15分鐘。然後將此漏斗形袋體懸置45分鐘，以確保油相(上層） :及冷凍沉澱品相(下層）的傾析(decantati〇n)。 1 所回收的冷凍沉澱品相係混濁的，導致回收的冷凍沉澱品無 法通過活性碳過濾器(Cun〇 bi〇Cap 3〇 BC0030 A R32SP型過濾 器，Cimo公司製造)進行過濾。 再重複進行兩次的油脂質萃取程序。每次萃取後所產生的冷 床沉殿品為混濁的’致使上述之過濾步驟無法進行。 ❿ 藍盤丄結合百分之1磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之1聚氧乙烯 (4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇n χ_45)的使用，並藉由蓖麻油進行一 次的油脂卒取，使來自於回收血漿的冷凍沉澱品混濁，而無法藉 由重力法依續通過活性碳過濾器及濾菌器進行過濾。 _第十七實施例 來自分離術血漿之微量混合(minip00l)的冷束沉殿品，以百分 之2填酸三丁酯(TnBP)處理，並以大豆油(序號S7381，％咖公 司製造)進行一次、兩次或三次的油脂萃取。 依循製造商的操作指南下，以分離術程序收集4〇血漿單位， 並且以抗凝企酸檸檬酸葡萄糖(acid_citrate_dextr〇se anticoagUiant， ACDA)(比例為每loo毫升血液中含有8毫升)抗凝此2血聚單位。 血聚在進行處理程序之前並未去白細胞(leucoreduced)。將血漿冷 凍於乾冰酒精浴(dry ice ethanol bath)中，並於攝氏溫度負30度(-30 °C)之冰箱中，最多儲存3個月。 冷凍沉澱品之製備’係將40單位冷凍的血漿於攝氏溫度4度 61 200942247 隔夜(overnight)融解，直到冷潘夕蔣 朿之血漿變為泥濘狀。然後將盛裝此 血漿之血漿袋，以谈0克的離心力，於攝氏溫度負4度(_4。〇離 心30分鐘(離心機之型號為咖，細ι公㈣造，&脑也地 區，法國）。完成離心作業後，將血漿袋倒置，以排出實質上所有 的冷;東貧乏血漿’而獲得「脫水_」之冷束沉殿品。 然後將冷康沉激品收集袋立即冷來於攝氏溫度負2〇度或更低 的溫度下，最多冷凍2個月。 當進行病毒去活化處理時，取出冷凍沉澱品，並放置於攝氏 溫度35度，正負5度的溫度控制水浴槽中1〇分鐘，使冷凍沉澱 品在收集袋内融解。 將8毫升的無菌葡萄糖/鹽溶液在無菌操作下添加至每一單位 及每一收集袋，以手動混合的方式使冷凍沉澱品充分的回溶 (resuspend)。將冷》東沉殿品溶液(約為每一收集袋1〇毫升)混合於 (pooled) 40個供應來源(donation)所組成的族群中，並置入於第一 品(cryoprecipitate pool)之體積為◎ 病毒去活化袋。混合的冷凍沉澱 400毫升。 將8毫升的構酸三丁 S旨(TnBP) (Prolabo，VWR公司製造， Fontenay-sous-bois地區，法國)謹慎地加入400毫升的血漿中，以 達到最終濃度為百分之2的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)。 將冷凍沉澱品/填酸三丁酯(ΤηΒΡ)混合物劇烈地振盪5分鐘， 以確保不同成分間的充分混合。將經過此程序之第一病毒去活化 袋置入振盪培養箱中，於攝氏溫度31度進行培養，並且穩定的溫 62 200942247 和搖動(每分鐘轉速l5〇轉(15〇 φΐη))3〇分鐘進行處理。接著將冷 * 凍沉澱品續酸三丁酯(ΤηΒΡ)混合物傳輸至第二病毒去活化袋（第 一有機溶劑消毒處理袋）’並於相同的狀態下培養1小時30分鐘。 然後將冷凍沉澱品/填酸三丁酯(ΤηΒΡ)混合物傳輸至漏斗形袋 體(油脂萃取袋）中。加入4〇毫升的大豆油(序號S7381，Sigma公 司製造)至冷凍沉澱品/填酸三丁酯(TnBp)混合物中。將冷凍沉澱品 /石粦酸二丁醋(ΤηΒΡ)/百分之10大豆油所組成之懸浮液劇烈地振盪 ❿至少1分鐘，接著放置於振盪培養箱，以確保溫和的搖動至少15 为在里。然後將此漏斗形袋體懸置45分鐘，以確保油相(上層)及冷 柬沉殿品相(下層)的傾析(decantati〇n)。 所回收的冷康儿殿品相非常的混濁，致使回收的冷殊沉殿品 無法通過活性碳過濾器(Cuno bioCap 30 BCO030 A R32SP型過濾 器，Cuno公司製造)進行過濾。 _ 再重複進行兩次的油脂質萃取程序。每次萃取後所產生的冷 /東沉殿品非常的混濁，致使上述之過據步驟無法進行。 建論，結合百分之2磷酸三丁醋(ΤηΒΡ)的使用，並藉由大豆 油進行一次、兩次或二次的油醋萃取，每次萃取皆產生非常混濁 的冷/東沉澱品，而無法藉由重力法通過Cuno bi〇Cap 30 BC0030 A R32SP型過濾器(Cuno公司製造)更甚至是濾菌器進行過濾。 第十八實施例 來自分離術金漿之微量混合(minip00l)的冷;;東沉殿品，以百分 之1磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之丨聚乙二醇辛基苯基醚(Trit〇n 63 200942247 X_1〇〇)處理’並以大豆油(序號S7381，Sigma公司製造)進行一次、 兩次或三次的油脂萃取。 依循製造商轉作指南下，时離娜序收集40血漿單位， 並且以抗凝血 宁檬酸葡萄糖(acid_citrate_dextr〇se antic〇aguiant , ACDA)(比例為每100毫升血液中含有8毫升)抗凝此2血聚單位。 血漿在進行處理程序之前並未去白細卿譲㈣職①。將血浆冷 束於乾冰酒精浴(dry ice ethan〇1 bath)中，並於攝氏溫度負3〇度(_3〇 C)之冰箱中，最多儲存3個月。 冷/東沉澱品之製備，係將4〇單位冷珠的血聚於攝氏溫度4度 5¾夜(overmght)融解’直到冷滚之血漿變為泥濘狀。織將盛裝此 血漿之血漿袋，以3,850克的離心力，於攝氏溫度負4度(_4。〇離 心30分鐘(離心機之型號為跋屯，了〇職公司製造，別版趣n地 區’法國）。完成離心作業後，將血漿袋倒置，以排出實質上所有 的~柬^乏血漿，而獲得「脫水(㈣」之冷束沉澱品。 然後將冷;東沉殿品收集袋立即♦柬於攝氏溫度負2〇度或更低 的溫度下，最多冷涞2個月。 虽進行病毒去活化處理時，取出冷柬沉殿品，並放置於攝氏 溫度35度，正負5度的溫度控制水浴槽中1〇分鐘，使冷柬沉殿 品在收集袋内融解。 將8毫升的無菌葡萄糖/鹽溶液在無菌操作下添加至每一單位 及每-收集袋，以手動混合的方式使冷練沉澱品充分的回溶 (職spend)。將冷束沉殿品溶液(約為每一收集》1〇毫升)混合於 64 200942247 (pooled) 40個供應來源(donation)所組成的族群中，並置入於第一 ' 病毒去活化袋。混合的冷凍沉澱品(cryoprecipitate pool)之體積為 ! 400毫升。 將8毫升的百分之50/百分之50的磷酸三丁酯（ΤηΒΡ) (Prolabo，VWR公司製造，Fontenay-sous-bois地區，法國)及聚乙 二醇辛基苯基_(Triton X-100) (Merck公司製造，Darmstadt地區， 德國)混合物，謹慎地加入400毫升的冷凍沉澱品中，以達到最終 © 濃度為百分之1的磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之1的聚乙二醇辛基 苯基&|(TritonX-l〇〇)。 將冷凍沉澱品/磷酸三丁酯（ΤηΒΡ)/聚乙二醇辛基苯基_ (Triton X-1〇〇)混合物劇烈地振盪5分鐘，以確保不同成分間的充 分混合。將經過此程序之第一病毒去活化袋置入振盪培養箱中， 於攝氏溫度31度進行培養，並且穩定的溫和搖動(每分鐘轉速15〇 轉(150 rpm))30分鐘進行處理。接著將冷康沉澱品罐酸三丁醋 (ΤηΒΡ)/聚乙二醇辛基苯基醚(Trit〇n χ_1〇〇)混合物傳輸至第二病毒 去活化袋(弟二有機溶劑消毒處理袋），並於相同的狀態下培養^小 時30分鐘。 然後將冷凍沉澱品/磷酸三丁酯(ΤηΒρ)/聚乙二醇辛基苯基醚 (Tnton Χ-100)混合物傳輸至漏斗形袋體(油脂萃取袋）中。加入奶 $升的大i油(序號S7381 ’ Sigma公司製造)至冷;東沉殿品罐酸三 :TSs(TnBP)/4乙一醇辛基苯基醚(Triton X-100)混合物中。將冷凍 '沉澱品/磷酸三丁醋(TnBP)/聚乙三醇辛基苯細(Trit〇n Μ—百 65 200942247 分之10大豆油所組成之懸浮液劇烈地振盪至少1分鐘，接著放置 於振盪培養箱，以確保溫和的搖動至少15分鐘。然後將此漏斗形 袋體懸置45分鐘’以確保油相(上層)及冷凍沉澱品相(下層）的傾析 (decantation) ° 所回收的冷涞沉殿品相係混濁的，致使回收的冷來沉殿品無 法通過活性碳過濾器(Cuno bioCap 30 BC0030 A R32SP型過淚 器，Cuno公司製造)進行過濾。 再重複進行兩次的油脂質萃取程序。每次萃取後所產生的冷 凍沉;殿品非常的混濁，致使上述之過濾步驟無法進行。 © 结論.i結合百分之1磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之1聚乙二醇 辛基苯基醚(Triton Χ-100)的使用，並藉由大豆油進行—次、兩次 或三次的_旨萃取’每次萃取皆產生非常關的冷歧殿品，而 無法藉由重力法通過Cuno bioCap 30 BC0030 A R32SP型過據器 (Cuno公司製造)更甚至是濾菌器進行過濾。 第十九實施例 來自分離術血漿之微量混合(minipo〇l)的冷凍沉澱品，以百分❹ 之1磷酸三丁酯(ΤηΒΡ)及百分之丨聚氧乙烯(4_5>對_第三辛基苯酚 _οηΧ-45)(Χ45，Triton⑧145，Sigma公司製造)處理，並以大 豆油(序號S7381 ’ Sigma公司製造)進行—次的油脂萃取，同時以 Cuno BioCap 25 R32SP型活性碳過濾器(Cun〇公司製造)進行過濾。 冷凍沉澱品之處理方式與第十四實施例所述之内容相同，惟 所使用的活性碳過濾器為Cuno BmCap 25 R32SP型活性碳過濾 ； 66 Λ 200942247 y 將超過380亳升的冷凍沉澱品通過一注入液過濾器(infusi〇n "fllter) ’使冷凍沉澱品可藉由重力法(不需藉由泵浦提供壓力）通過 此Cuno BioCap 25 R32SP型活性碳過濾器，然後再通過一 〇 2微 米遽囷益（Pall公司製造’型號Mini Kleenpak™ 20，序號 KM5EKVP2S) ° 兹達丄結合百分之1磷酸三丁酯(TnBP)及百分之丨聚氧乙烯 ❹（4_5)_對-第三辛基苯盼(Τώαη χ_45)的使用，並藉由大豆油進行一 次的萃取，可獲得超過35〇毫升來自分離術血裂的清澈冷珠沉殿 品，此清澈的冷凍沉澱品可藉由重力法通過Cun〇 Bi〇c^ 25

試劑、殘留之大豆油、血液細胞碎片、細菌及寄生蟲。 如表二所示，為料四實施例巾經過處理後的料沉澱品之 品質(標示為「最終」）相對-Φ 始」）以2個批次進行比較 )相對於起始的冷凍沉澱品之品質(標示為「起 ί比較。結果顯示，使用百分之丨磷酸三丁酯 量降低至無法測得的程度。 (Τ’及百分之丨聚氧乙稀叫對-第三辛基苯斷肠n &句處 理’並且經由大豆油月旨萃取並通過c卿献叩Μ r咖型活性 碳過濾器域龜進行麟，並不會改變糾職品的蛋白質口 質。在經過—次油料取及活性碳過紐，使最終錢中的猶 ⑽ση罐輪零辑㈣基卿她χ侧含 67 200942247 第八凝血 因子 (IU) 凝血纖維 蛋白原 (g/i) 碌酸三丁 酯(ΤτιΒΡ) (ppm) 聚氧乙烯 (4-5)-對-第 三辛基苯 紛(Triton X-45) (ppm) 第1批次起始 8.5 16.9 無法測得 無法測得 第1批次最終 8.0 15.7 < 10 ppm ——--- < 15ppm 第2批次起始 7.5 16.2 無法測得 無法測得 弟1批次最終 7.3 16.8 < lOppm < 15ppm

如表三所示，為第十九實施例中經過處理後的冷凍沉殿品之 品質(標示為「最終」）相對於起始的冷凍沉澱品之品質(標示為「起 始」）以1個批次進行比較。結果顯示，使用百分之1磷酸三丁酯

(TnBP)及百分之1聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯盼(Triton X-45)處 理’並且經由大豆油脂萃取並通過Cuno BioCap 25 R32SP型活性 碳過濾器及濾菌器進行過濾，並不會改變冷凍沉澱品的蛋白質口 --—-- 表三 第八凝血因子 ~~---- 凝血纖維蛋白原 ------ (IU) (g/1) 第1批次起始 —-—-- --~ , 一 7.3 _ 13.6 68 # 200942247 第1批次最終 7.0 13 5 / 第二+實施例 / 以百分之1磷酸三丁酯(TnBP)及百分之1聚氧乙烯(4_5)_對- 第三辛基苯酚(TritonX-45)處理血漿，並以大豆油進行—次的油浐 萃取。 從Shabrawishi醫院(埃及開羅之Giza地區）的血液庫申收集血 漿，此血漿係來自簽有同意書的規律性自願捐血者。血漿係由全 β血經分離術程序或回收後獲得，並且冷凍於攝氏溫度負2〇度或更 低的溫度下，如Bumouf等人於西元2006年12月，發表於輪血期 刊第46卷第12期，第2100至2108頁之說明。 將2捐獻來源的血漿放置於溫度控制水浴槽中，以攝氏溫度 35度加熱1〇分鐘進行融解。然後混合於第一病毒去活化袋(第— 有機溶劑消毒處理袋)中。混合的血漿之體積為4〇〇毫升。 依據「第一圖」所示之袋内病毒去活化系統(但不具輸血過濾 器，並於濾菌器8及收集袋9之間包含另外的收集袋），以百分之 50/百分之50的磷酸三丁酯(TnBP) (Pr〇lab〇 , VWR公司製造， Fontenay-SOUS-b〇is地區，法國)及聚氧乙烯(4_5)_對_第三辛基苯酚 (Triton X-45)(序號 93419，Fluka，Sigma Aldrich 公司製造)混合物 對血製進行處理。將血漿/填酸三丁酯(TnBpy聚氧乙烯(冬5)_對_第 三辛基苯盼(Triton X-45)之混合物以大豆油進行油脂萃取及後續 步驟，如第一實施例中之說明。 回收一清澈的血漿相。超過370毫升的血漿藉由重力法(不需 69 200942247 藉由泵浦提供壓力）通過Pall公司所製造之AKS6 Pal丨活性碳過濾 态(型號SUPRAcap 60 SC060XAK6)，其續接於一 〇.2微米濾菌器 (型號]Mini Kleenpak™ 20，序號 KM5EKVP2S)。 將過濾後的血漿於一混合袋中混合，並分裝於兩個單獨的2〇() 毫升袋體。所有的袋體係以可折斷的閥體隔開，以確保在每一個 步驟中隔開。當使用後，將袋體從系統上切除並丟棄。 第二十一實施例 微量混合的冷凍沉殿品，以百分之〗填酸三丁酯(丁沾？)及百 为之1聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯紛(Triton X-45)處理，並以大❹ 豆油進行一次的油脂萃取 冷凍沉澱品之製備，係將冷凍的血漿於攝氏溫度4度隔夜 (ovennght)融解，直到冷凍之血漿變為泥濘狀。經由3,85〇克的離 心力(離心機之型號為KR4i，J0uan公司製造，st HerWain地區’ 法國）’於攝氏溫度負4度(-4。〇離心30分鐘後，冷凍貧乏血漿幾 乎完全的被移除’剩下少量體積的冷;東沉H立即將冷粒殿❹ 品收集袋冷凍於攝氏溫度負20度或更低的溫度，最多冷凍2個月。 32至40單位的少量冷凍沉澱品，於無菌操作台中混合於一 400毫升的袋體内，並使用百分之！石粦酸三丁酉|(TnBp)(pr〇iab〇， VWR公司製造，Fontenay-sous-bois地區，法國)及百分之j聚氧 乙缚(《)养第三辛基苯紛(Triton X，（序號9如9，黯a，帥脳 Akfeh公司製造)在攝氏溫度31度的溫度下進行有機溶劑消毒處 理’隨後並以軒五實施例之說明進行油脂萃取，所使狀病毒 f 70 $ 200942247 去活化系統係依據「第2圖」所示之袋内病毒去活化系統(但不具 、 輸血過濾器）。 •所麟的冷拉澱品於-混合料秘，並分躲兩個單獨 的4〇毫升袋體。所有的袋體係以可折斯的閥體隔開，以確保在每 -個步驟巾Μ。當使用後’將袋體從系統上娜並丢棄。 第二十二實施例 分析第二十實施例及第二十—實施例所獲得之錢及冷束沉 〇 澱品。 —1.分析(assavs、 A液細胞§十數與細胞標諸、(marker)泪|丨定 血小板、白血球及紅血球細胞計數係使用細胞計數器(Abb〇tt 公司製造，Cell Dyn型號)來測定。藉由流式細胞儀(fl〇w_cyt〇metry) (Becton-Dickmson公司製造)測定血液細胞抗原標誌：用於白血球 之CD 41、用於血小板之CD61以及用於紅血球之血型糖蛋白a ® (Glycophorin A) ° (Protein assav) 在蛋白質測定之前，將複數個具有起始的血漿及微量混合的 冷/東沉殿品，以及具有最終的混合血漿及微量混合冷凍沉澱品的1 毫升樣品’冷凍於攝氏溫度負80度。大多數蛋白質測定係使用習 知的私序來完成。以習知的方式完成溫韋伯氏因子(von willet>rand

Faet〇1 ’ VWF)瑞斯特黴素輔助因子(ristocetin cofactor，RCo) (VWF:RCo)與膠原蛋白鍵結(VWF:CB)分析、以及溫韋伯氏因子多 71 200942247 聚體(VWFmukimer)電泳分離。Berichrom 第十三因子(factorXIII， FXIII)試劑(Siemens公司製造)測定第十三因子(FXIII)的功能活 性，並且藉由Coamatic AT試劑(Chromogenix公司製造)測定抗凝 血酶的功能活性。所有的樣品係以同系列分析比較起始及經處理 後之血漿物質，以排除分析變異。 聚丙烯醯胺勝艚雷泳(SDS-PAGE) 在非還原狀態與還原狀態下，藉由聚丙烯醯胺膠體電泳 (SDS-PAGE)，對有機溶劑消毒程序前、後的血漿及冷束沉殿品的 〇 蛋白質圖譜進行研究。0.5微升(μΐ)的非還原樣品與2.5微升的 NXJPAGE LDS 4Χ (Invitrogen 公司製造，Carlsbad 地區，美國加州） 樣品缓衝液和6微升的放射免疫沉澱(ripa)緩衝液混合，於攝氏 溫度70度加熱10分鐘，並在嗎林乙基磺酸(meS) (Invitr〇gen公司 製造)緩衝液中，於百分之4至12的聚丙稀醯胺梯度膠體上分離。 還原樣品除了混合物中添加有1微米的NUPAGE還原試劑 (Invitrogen公司製造)外’以相同的條件製備。分離作用係於2〇〇 Ό 伏特的恆定電壓，每一膠體150毫安培的起始電流，分離35分鐘 後完成。使用Novex® Sharp預染蛋白質分子量標準(]sfovex®

Sharp Pre-Stained Protein Molecular Weight Standard) (Invkrogen 公 司製造)進行分子量測定：260、160、110、80、60、50、40、3〇、 20、15、10、及3.5什道爾頓(KDa)。膠體係使用考馬斯藍(coomassie blue)進行染色。 鱗酸三丁酯（ΤηΒΡ)及聚氧乙烯(4-5V對-第三辛某笨齡 ； 72 200942247 (Triton X-45)公析 * 從血漿及冷珠沉激品之樣品萃取出_三丁醋(TnBp)及聚氧 *乙稀(4-5)·對·第三辛基笨盼如ton χ_45)，並以氣相層析(gc)及高 效能液相層析法進行分析，如Bu_f等人於西元2嶋年12月， 發表於輸血期刊第46卷第12期，第21〇〇至2108頁之說明。 迦乙基己基)酯(DEHPV；^ 於起始及最終之血漿與混合的冷凍沉澱品上測定鄰苯二甲酸 © -(2-乙基己基)g旨(DEHP)。於玻璃試管中混合！毫升的血漿或冷凍 沉澱品與0.125毫升的1.5當量過氯酸(perchl〇rie add) (Riedel-de-Ha6n公司製造’ Seelze地區，德國），並於攝氏溫度37 度培養15分鐘。在培養時間區間結束後，將玻璃試管内的混合物 與冰冷的乙醇(Merck公司製造’德國):氯仿(Fisher_Scientific公司 製造，Illldrch地區，法國)混合液，以比例1:1:0 〇92亳升進行混合， 並且於攝氏溫度負20度培養2小時。將樣品於1,〇〇〇克離心力下， 離心30分鐘’同時謹慎地將上清液轉移到乾淨的玻璃試管。將4 毫升的正己烷(n-hexane) (Merck公司製造，德國）添加於上清液 中’並且劇烈的搖動，然後靜置5分鐘以分離為兩層。將上層之 正己烷在不擾動界面的情形下轉移至另一乾淨的玻璃試管。重複 兩次最後的步驟，並將正己;!：完收集於同一乾淨的玻璃試管中。使 正己院揮發至乾燥，然後溶解於1毫升的乙腈(acetonitrile)中以供 高效能液相層析(HPLC) (LabScan公司製造，英國）。以配備有分 析級液體輸送幫浦(analytical pump)(^l號SFD 9414)及紫外光/可見 73 200942247 光4貞測儀(型號S 3 210)之商效能液相層析儀(sfd，Schemback Gmbh公司製造’德國），在202奈米波長及Lichrospher RP 18-5μ (250毫米χ4.6毫米)之管柱(CS-Chromatographie公司製造，德國） 中對鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)進行測定。使用乙腈與曱 醇之比例為85比15的混合物做為移動相(1110|3^ phase)，以每分 鐘1.5亳升的流速使用8分鐘分析時間。 膽固醇含量 膽固醇含量的測定為使用酵素比色測試，係由人類診斷公司 (human Diagnostic ’ www.human.de)所製造，具有液體清除因子的 單一試劑。藉由Spinreact公司（西班牙)製造之分光光度計，於波 長546及每分升(dl) 1毫克的敏感度分析讀取。 毒性分析 有機溶劑消毒處理之血漿及有機溶劑消毒之冷滚沉殿品的毒 性分析，係於Sprague Dawley大鼠上進行測定，並且比較未經處 理之血漿及冷;東沉殿品與控制組鹽水。;36隻重量介於至1〇〇 ^ 克的大鼠，以4隻為單位分成9組，包含2隻公鼠與2隻母鼠。 使大鼠於實驗環境下適應七天並紀錄這些大鼠的重量。每一大鼠 靜脈注射企漿成分或鹽水，劑量為每公斤體重6 5毫升。然後觀察 大鼠14天，每天檢查異常行為或臨床症狀、體重以及每天水分及 食物的消耗量。 統計分析 所有系列的實施數據以平均值、標準差及最小值和最大值呈 ， 74 200942247 •現。以雙尾配對學生試驗(t卿姚dPairedStudemtes〇進行統計比 ;較。小於⑽5的p值(p value)被用來測定處理程序中不同步驟所 •製備的血小板之間’平均前列腺素F(PGF)漠度的明顯差異。小於 〇.〇1或0.001的p值表不差異不明_〇n s細迅cant，Ns，· p值 小於0.05)。趨近於0.05的明確p值，表示顯著的差異。 2·結果 血漿 如表四A和表四丑所示’分別表示依據第二十實施例於有機 =劑消毒及猶處理(有機溶劑消毒處理後以大豆油脂萃取並過抝 刖、後的回收血漿(表四A)或分離術血漿(表四b)的分析數據(每一 組皆連續進行8次）。可觀察難好的保存了血_特性。大多數 的凝血因子及蛋白酶抑糊和抗凝血因子缺始血漿及最終血裝 (_有機雄肖毒及過濾處_錢)之間沒有顯著差異，並具有 讓超4百刀之90至95白勺功能活性回收率。僅在第五凝血因子(fv) 的功能活性上觀察到明顯的降低，在回收血漿及分離術血聚中的 第五凝血因子(FV)的回收率分別為百分之88及百分之82 (p值小 ；)並且在回收企漿中的α2-抗血漿素(α2-ΑΡ)的回收率為百 刀之％ Ο同日守在回收的最終血漿(ρ值小於_及分離術的最終血 漿(Ρ值小於〇.〇5)令，在凝血酵素原時間(Pr〇tl_bintime，叩上 皆有小幅度但顯著的增加，並且在分離術的最終血漿(p值小於 〇5)中活化凝血活酵素時間(Activated _ial此―㈣咖， aPTT)小幅度但顯著的增加。總蛋白質、蛋白素(―）、免疫球 75 200942247 蛋白G _及免疫球蛋白M (Ι_的含量在經過處理後並未明顯 的改k。所有的最終血漿符合新鮮冷滚血漿(㈣fr_咖麵， FFP)的品質規範。 在所有血漿單位中的磷酸三丁酯(TnBP)及聚氧乙烯(4_5)_對_ 第三辛基苯紛(Triton X-45)的含量分別少於1 〇百萬分率及50百萬 分率，像徵著油脂萃取程序的效能。

表四A 回收血漿(連續進行8次) 起始 最終 平均 標準差 平均(回收率 % 標準差 纖維蛋白原(mg/mL) 293.4 52 277.4 (95%) 54.4 第二凝血因子(IU/mL) 0.94 0.12 0.95 (101%) 0.14 第五凝血因子(IU/mL) 1.27 0.17 1.12(88%) 0.17 第七凝血因子(IU/mL) 1.02 0.14 0.99 (97%) 0,13 第八凝血因子(IU/mL) 1.24 0.25 1.27 (102%) 0.26 第九凝血因子(IU/mL) 0.98 0.13 0.85 (87%) 0.19 第十凝血因子(IU/mL) 0.87 0.17 0.69 (79%) 0.20 第十一凝血因子 (IU/mL) 0.61 0.12 0.55 (90%) 0.12 第十三凝血因子 0.83 0.26 0.84(101%) 0.26 3 76 200942247 (IU/mL) 溫韋伯氏因子抗原 (IU/mL) 1.12 0.21 1.11 (99.1%) 0.21 溫韋伯氏因子瑞斯特 黴素輔助因子(IU/mL) 1.10 0.25 1.10(100%) 0.31 S 蛋白(IU/mL) 0.86 0.23 0.96(112%) 0.08 C 蛋白(IU/mL) 0.76 0.13 0.80 (105%) 0.11 抗凝血酶(IU/mL) 0.88 0.14 0.91 (103%) 0.11 α2-抗血漿素(IU/mL) 0.89 0.16 0.81 (91%) 0.19 C3抑制劑(mg/ml) 719 156 686 (95%) 125 免疫球蛋白G (mg/ml) 8.9 2.25 9.14(103%) 1.81 免疫球蛋白A (mg/ml) 1 .46 0.15 1.46(100%) 0.20 免疫球蛋白M (mg/ml) 1.22 0.35 1.16(95%) 0.28 蛋白素(mg/ml) 33.2 4.8 32.3 (97%) 4.3 蛋白質(mg/ml) 55.4 4.8 58.7 (106 %) 8.26 凝血酵素原時間(sec， 秒） 13.8 0.5 14.3 0.7 活化凝血活酵素時間 (sec) 29.6 2.5 30.9 1.7 膽固醇(mg/ml) 84.0 13.3 無法測得 無法測 得 77

三酸甘油脂(mg/ml) 81.8 50.1 19.9(24%) 6.6 表四B 200942247 分離術血漿(連續進行8次） 起始 最終 平均 標準差 平均(回收率 %) 標準差 纖維蛋白原(mg/mL) 276.5 51.1 260.2 (94%) 42.5 第二凝血因子(IU/mL) 0.98 0.19 0.95 (97%) 0.12 第五凝血因子(IU/mL) 1.28 0.22 1.05 (82%) 0.25 第七凝血因子(IU/mL) 1.13 0.13 1.09 (96%) 0.11 第八凝血因子(IU/mL) 1.21 0.35 1.27(105%) 0.35 第九凝血因子(IU/mL) 1.09 0.20 1.04 (95%) 0.20 第十凝血因子(IU/mL) 0.98 0.20 0.96 (98%) 0.15 第十一凝血因子 (IU/mL) 0.80 0.18 0.77 (96%) 0.15 第十三凝血因子 (IU/mL) 0.77 0.22 0.75 (97%) 0.22 溫韋伯氏因子抗原 (IU/mL) 1.19 0.32 1.22(102%) 0.33 溫韋伯氏因子瑞斯特 黴素輔助因子(IU/mL) 1.04 0.33 1.12(107%) 0.33 78 200942247

❹ s 蛋白(IU/mL) 0.75 0.20 0.94 (125%) 0.12 C 蛋白(IU/mL) 1.00 — 0.32 1.04(104%) 0.31 抗凝血酶(IU/mL) 1.09 0.08 246 (68%) 44 α2-抗血漿素(KJ/mL) 0.98 0.15 1.03 (94%) 0.12 C3抑制劑(mg/mi) —------ 779 —___ 101 827 (106%) 70 免疫球蛋白G (mg/ml) 7.23 ---- 2.09 7.07 (98%) 2.45 免疫球蛋白A (mg/ml) 1.05 0.32 1.02 (97%) 0.32 免疫球蛋白M (mg/ml) 0.97 0.26 1.05 (108%) 0.28 蛋白素(mg/ml) 30.01 2.3 29.9 (99%) 2.3· 蛋白質(mg/ml) 49.4 3.29 49.1 (99%) 3.2 凝血酵素原時間(sec， 秒） 13.31 0.93 14 .21 1.6 活化凝血活酵素時間 (sec) 26.4 2.1 29.4 3.9 膽固醇(mg/ml) -— 、 105.7 7.4 3.4 (3%) 7.95 二酸甘油脂(mg/ml) ——圓 _ .- ' 1 J 116.7 47.35 23.6 (20%) 4.9 冷凍沉澱品 如表五所示，為有機溶劑消毒及過濾處理(有機溶劑消毒處理 後以大五油脂萃取並過濾）前、後的微量混合冷涑沉澱品 (C^edPltate —牆)的分析數據，以及「第7圖」所示^ 五個不同批奴起㈣微量私冷;東藏品（魏條帶··⑸、 79 200942247

Cs2、Cs3、Cs4及Cs5)以及最終的微量混合冷凍沉殿品(經過有機 溶劑消毒處理並過濾的冷凍沉澱品）（電泳條帶：Cfi、cf2、、

Cf4及Cf5)，與基準血漿(reference plasma)(來自Siemens公司所製 造的標準血漿；電泳條帶：：^的溫韋伯氏因子多聚體圖譜示意圖。 在最終的微;1；混合冷珠沉殿品中第八凝血因子(FYJH)的平均含旦 趨近於每毫升9國際單位(9 IU/ml)，以及趨近於每毫升15毫克(15 mg/ml)的纖維蛋白原(£^1^(^11)平均含量。在最終的微量混合冷凍 沉澱品中溫韋伯氏因子抗原(antigen) (VWF:Ag)、溫韋伯氏因子瑞 斯特黴素輔助因子(VWF:RCo)、以及溫韋伯氏因子膠原蛋白鍵结 〇 (VWF:CB)的平均含1依序為每毫升1? 5、14 6及丨3.5國際單位。 在起始的微量混合冷涞沉殿品中並沒有觀察到顯著的數值差異。 有機溶劑消毒處理並不會影響瑞斯特黴素辅助因子與抗原 (RCo/Ag)的平均比例(0.84)以及膠原蛋白鍵結分析與抗原(c购 的平均比例(0.87)。最終的微量混合冷珠沉殺品與起始的微量混合 冷柬沉澱品’兩者間的多聚體分佈情形並無區別。在每一各別的 批次中，起始的微量混合冷;束沉殿品與最終的微量混合冷來沉殿〇 品之多聚體百分比，㈣為大於15解體(廳)與大於叫固單體， 以及個別與標準血漿之多聚體(NP multlmer)的比例，如表五中所 示。大於I5個單體的平均百分比約為百分之7 8 (對應相較於標準 血漿之多聚體的比例為〇.8)，以及大於1〇個單體的平均百分比約 介於百分之23.5 (當相較於標準血漿之多聚體的各別比例為㈣） (未圖示）。膠原蛋白鍵結(CB)活性以及大於15個單體含量具有良· 80 200942247 好的關聯性。起始的微量混合冷凍沉澱品及最終的微量混合冷凍 * 沉澱品，各別的A抗體與B抗體同族凝集素(iso-agglutinin)之生物 * 力價範圍分別為0至1以及0至1/8。 表五 起始 最終 第八凝血因子 平均 8.66 標準差 0.97 平均(回收率％) 9.21 (106%) 標準差 1.51 Φ (IU/mL) 纖維蛋白原 17.40 2.73 14.98 (86%) 3.66 (mg/mL) 第十三凝血因 2.26 0.26 2.46(109%) 0.29 子(IU/mL) 溫韋伯氏因子 17.52 1.66 17.08 (97.5%) 1.03 抗原 溫韋伯氏因子 13.46 2.22 14.28 (106%) 2.25 瑞斯特黴素輔 助因子 瑞斯特黴素辅 0.77 0.13 0.84 (109%) 0.14 助因子抗原 溫韋伯氏因子 14.60 3.91 14.92 (102%) 3.45 膠原蛋白鍵結 膠原蛋白鍵結 0.83 0.16 0.87(105%) 0.17 81 200942247 分析抗原 %>15單體 7.80 1.59 7.76 (99.5%) 1.34 > 15單體/ 0.80 0.16 0.80(100%) 0.14 標準血漿比例 %>10單體 23.82 2.02 23.54 (99%) 1.69 > 單體/標 0.93 0.08 0.92 (99%) 0.07 準血漿比例 聚丙嬌醯胗膠艚雷汰(SDS-PAGE) 非還原狀態(如「第3A圖」所示)及還原狀態(如「第3B圖」 所示)的電泳圖型並未顯示出起始的血漿(電泳條帶：！、3)與微量 混合冷凍沉澱品(電泳條帶：5)，以及相對應之最終的血漿(電泳條 帶’ 2、4)與微量混合冷束沉殿品(電泳條帶：6)之間有任何可測得 的差異。 邊麗三丁酯(TnBP)及聚氧乙烯(4-5V對-第三每其_ ilriton X-49 含畢 如「第4圖」和「第5圖」所示，為血漿在經過有機溶劑消 毒處理後、油脂萃取後以及過濾後，血漿中磷酸三丁酯(TnB巧及 聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯酚(Trit〇n χ_45)的平均含量。油脂萃 取降低殘餘磷酸三丁i|(TnBp)的平均含量至261正貞146 (261士 H6)百萬分率(分離術血漿)以及393正負仍5 (於赶习百萬分率 (° ’幻並且在過濾後降低為少於i百萬分率(分離術血漿及 °收血漿）各別的聚氧乙缚(4办對_第三辛基苯紛㈣〇ηχ_45)殘 82 200942247 留量，在油脂萃取後為22肋正負1189 (2248±1189)百萬分率及丨906 f 正負660(1906±660)百萬分率，以及在過濾後為18正負25(18±25) 『 百萬分率及12正負14 (12土 14)百萬分率。在冷珠沉殿品中獲得類 似的數值。 酸二(2-乙某 基)酯(DEHP) 如表/、所示，為依據第二十實施例之分離術血浆或回收血裝 中，於各個步驟所測定鄰苯二甲酸二(2_乙基己基)醋(DE剛的結 ❹果。此絲同時顯示於「第6圖」巾。在起始的分離術血聚及回 收血衆巾部笨—曱酸一(2_乙基己基)醋(〇ΕΗρ)的平均含量分別為 14.3正負16.3 (14.3±16.3)百萬分率以及9.9正負6.6 (9.9±6.6)百萬 分率。在經過有機溶劑消毒處理後分別增加至1〇77正負MO.2 (1〇7.7±6.6)百萬分率與7α6正貞45 (贿45)百萬分率。在油脂萃 取後同時降低分離術血漿及回收血漿中的鄰苯二甲酸$乙基己 基爾職)含量(分別為33 0正負25 5 (Μ細·分^與 Μ正請1 (21.6凱百萬分率），以及在雜後同時使分離術 血漿及回收血漿中的鄰苯二甲酸斗乙基己基)_咖)的含量 降低(分別為5.i正負3·4 (5 1±3Λ)百萬分率與* 7正負3 9 (彳7土3巧 百萬分率）。在冷涞沉殿品中獲得類似的數值。 樣品形式 ___________ 分離術血漿 標準差 樣品數 表六 平均(pptr〇 83 200942247 起始 14.34625 16.34411 8 有機溶劑消毒處理後 107.753 140.2421 10 油脂萃取後 33.0154 25.47154 ---------------------- 10 最終 5.116 3.49165 10 回收血漿 起始 9.90175 6.57638 8 有機溶劑消毒處理後 70.577 45.69168 10 油脂萃取後 21.6574 20.1105 10 最終 , — 4.707 3.9412 10 毒性

在施以鹽水的控制組(control)與最終的經過有機溶劑消毒處 =血漿⑽)及冷柬沉殿品㈣的大鼠群組之間，所獲得的平均重 里並無顯著的差異。所祕的重量高於未經過有機賴消毒處理 的血裝及树沉殿品之群、组。其結果顯示於表七中。其中體重變 化的標示减.於表七中，G2為起始的血漿，⑺為起始的 ^東錢品’ G4為油脂萃取後的有機溶劑消毒處理之血漿，GS ? 〇6 〜慮後的血私及G7為經活性碳過濾後的冷拉殿品。 200942247

200942247 36,05 土 5,65 1 40,91 ± 6,30 1__ 卜 r- r\ o r-H 屮 OO •1—H *N 〇> 卜 rn r-" 屮 jo cT m 35,17 土 7，19 37,65 士 7,87 30,10 士 2,12 33,54 士 2,59 36,34 土 2,86 31,18 ± 5,41 34,96 士 6,00 寸 -Η § cn ! 32,93 士 6,03 m 寸 r\ MD -H 卜 ^sO m 1- 39,20 土 7,38 40,58 士 8,37 oo 屮 oo (N Cn 气 oo" -H 1〇 VO r\ CN m

On 〇 2,00 ±0,67 r-H r—< -Η r\ 卜 oo t-H 寸 τ—4 rs τ-Η r-H m t—i 屮 CO r—H 寸 •r—^ On r\ r—( -H s r\ r-H 19,36 士 2,34 cn -H CO r\ tN Ό un r\ m -H m rs m (N 〇〇 o 0,66 土 2,44丨 _1 I 4,50 士 3,26 5,15 士 2,99 7,72 ± 3,40 11，20 士 4,77 Ο ίΝ r\ +1 <N T—H 4,20 士 3,26 oo On 屮 oo (N CN r—< 卜 o 0,20 ±0,98 4,54 ±1,72 .. . J 6,62 ± 2,58 _ _ 9,31 士 3,44 o r\ 寸 Ο r>> r-H τ—( 13,69 士 5,59 21,31 士 4,68 23，14 土 4,34 處理後天數 τ—Η (N m 寸 r- OO

❹ 98 Q 200942247

?; 寸 <N r\ <N 〇\ r\ to to rv o OO oo r\ o 卜 -Η On m r- ro -H o ro -H 00 m 屮 ?； 屮 \〇 t-H Ό (N CN m (N m S o cn 寸 〇> r\ ID r-H oo CN (N to m r~· oo o CN 寸 in c\ m On r\ m 屮 ^s〇 -H oo uo -H i—H 屮 m 屮 m -H 卜 寸 (N <N 卜 i—H m CN oo (N r-H m \D (N Cn 卜 CO o" r\ G\ OO r\ 卜 (N uo r\ OO Q\ -H 〇 T—H 屮 -H 〇 (N 屮 -H vo -H 00 S ο m tr> (N 卜 m r-H 寸 a ο (N m 寸 r-H 200942247 MM :M酸三丁醋(TnBP)及聚氧乙烯(4-5)-對-第三辛基苯齡 (TritonX-45)的平均殘留量分別少於1〇百萬分率及5〇百萬分率， 使有機溶劑消毒處理血漿衍生物及其他的生物產物的範圍獲得了 驗證。藉由油脂萃取以及過濾、器吸附殘留的化學物質，使超過百 分之90及百分之70的磷酸三丁酯(TnBp)及聚氧乙烯(4、5)_對-第三 辛基苯酿(TritonX-45)被移除。這種油脂萃取及過濾的結合方式對 於產物品質具有許多的效益。首先，降低起始血襞中鄰苯二甲酸 二(2-乙基己基)酯(DEHP)的含量，鄰苯二甲酸二(2_乙基己基)酯 (DEHP)為用於製造娜袋的可塑劑。再者，降低膽_及三酸甘 〇 ’由月曰的s里’使最終產物非常的清澈以及對於膽固醇病患的處理 具有臨床上的效益。脂質的移除有助於降低脂質相關的輸血相關 $性肺損傷(TRAU)的風險。第三，物質上預淨化的血裝，使其可 兀全的直接在0.2微米的薄膜上完成過濾。因此，使最終產物相當 WU冗’即使起始的血漿或冷珠沉殿品輕微的混濁或呈乳 白色的。0.2微米的過滤，可確保裝置在收集、混合血裝分率時， 錢理過程帽抗潛在的偶發性細騎染。㈣，鎌血液細胞〇 T片如本發明所述，如可藉由血漿傳輸的微凝聚體或任何假嗖 的血液細胞内的細菌或寄生蟲。本發明所揭示之内容，為第—個 可允許血液庫之血漿成分成功的進行02微米無菌過遽的方法 6 1、、、本毛明以月,J述之較佳實施例揭露如上，然其並非用以限 足本I.明’任何相像技藝者，在不讎本發明之精神和範圍 内’當可作些許之更動與濁飾，因此本發明之專利保護範圍須視· 88 200942247 本說明書所附之申請專利範圍所界定者為準。 f 【圖式簡單說明】 • 第1圖為依據本發明一實施例中用以有機溶劑消毒處理微量 混合的血漿(或冷凍貧乏血漿)之袋内病毒去活化系統示意圖； 第2圖為依據本發明一實施例中用以有機溶劑消毒處理微量 混合的冷床沉澱品之袋内病毒去活化系統示意圖； 第3A圖為有機溶劑消毒處理及過滤(S/D-F)前後(分別為大豆 e油脂萃取及過濾作用之後的有機溶劑消毒處理），微量混合的血漿 及冷凍沉澱品於未降低狀態下之電泳圖型示意圖； 第3B圖為有機溶劑消毒處理及過濾(S/D_F)前後(分別為大豆 油脂萃取及過遽作用之後的有機溶劑消毒處理），小量混合的血裝 及冷凍沉澱品於降低狀態下之電泳圖型示意圖； 第4圖為依據本發明第二十實施例，在大豆油脂質萃取之後 及分離術與回收血魏紅後，有機溶綱毒處理後磷酸三丁脂 ⑩（ΤηΒΡ)的平均含量示意圖； 第5圖依據本發明第二十實施例，在大豆油脂質萃取之後及 分離術與回收血漿過遽之後，有機溶劑消毒處理後聚氧乙稀(4_习_ 對-第二辛基苯紛(Trit〇n χ-句的平均含量示意圖； 弟6圖為依據本舍明弟二十實施例中分離術血漿或回收血襞 處理紅序的各種步驟，所測定之鄰苯二曱酸二(2_乙基己基）酯 (DEHP)的結果示意圖；以及 第7圖為依據本發明於有機溶劑消毒處理前/後之小量混合的 89 200942247 冷凍沉澱品之溫韋伯氏因子多聚體圖譜示意圖 【主要元件符號說明】 1 袋内病毒去活化系統 la 袋内病毒去活化系統 2 第一病毒去活化袋 3 第二病毒去活化袋 4 漏斗形袋體 5 回收袋 6 輸血過據器 7 活性碳過濾器 8 濾菌器 9 收集袋 10 儲存袋 11 第一病毒去活化袋之第一入口 12 第一病毒去活化袋之第二入口 13 第一病毒去活化袋之出口 14 第二病毒去活化袋之入口 15 第二病毒去活化袋之出口 16 漏斗形袋體之第一入口 17 漏斗形袋體之第二入口 18 注射器 19 漏斗形袋體之出口

90 200942247 20 回收袋之入口 21 另外的收集袋 ❹ ❹ 91

Claims (1)

1. 200942247 ’ 七、申請專利範圍： 1. 種生物流體之病毒去活化方法，包括有： (a) 以包含有一磷酸三丁脂(TnBP)與一聚氧乙烯(本5)_對-第 三辛基苯酚(t-〇ct-C6H4_(OCH2CH2)x〇H，x = 5 ; Trit〇n χ_45)之 一混合物對一生物流體進行處理之步驟； (b) —油脂萃取步驟，其中將含有該鱗酸三丁脂(了沾ρ)與該 聚氧乙烯(4-5)普第三辛基苯__0cK：6H4_(〇CH2CH2)x〇H，χ 二5 ; TritonX-45)之該生物流體，以一相對該生物流體體積5至 15體積百分比之大豆油對該生物流體進行處理，用以將該磷酸❹ 三丁脂（ΤηΒΡ)與該聚氧乙烯（4_5>對_第三辛基苯酚 OOct-C6H4-(〇CH2CH2)xOH miton χ_45)轉移至該大豆 油中； (c) 於該步驟(b)後將所回收之該生物流體通過一活性碳過 濾裝置；以及 (d) 於該步驟(C)後將所回收之該生物流體通過一濾菌器； 其中，以該大旦油進行油脂萃取之步驟係為該生物流體之 〇 病毒去活化方法中’唯一的油脂萃取之步驟。 2. 如請求項1所述之生物流體之病毒去活化方法，其中該磷酸三 丁脂（ΤηΒΡ)及該聚氧乙烯（4-5)-對-第三辛基苯酚 (t-Oct-C6H4-(OCH2CH2)x〇H ’ X。5 ; Trit〇n χ_45)之使用量為相 對該生物流體體積之1體積百分比。 3. 如請求項1所述之生物流體之病毒去活化方法，其中該大豆油 92 200942247 的使用量為相_生物流體體積之8至12體前分比。 ，4·如請柄1所述之生物越之鱗去活化方法，其中該大豆油 ， 的使㈣為蝴該生物《體積之10 _百分比。 5·如請求項1所敎生物越之_去活化方法，射該步驟⑻ 之5亥生物流體係藉由重力法通過該活性碳過渡裝置。 6.如請求項1所述之生物流體之鱗去活化方法，其中該步驟⑼ 之姓物桃體係藉由重力法通過該遽菌器。 _ 7.如請求項i所述之生物流體之病毒去活化方法，其中於該步驟 (_该步驟(e)之間，更包含1收該生物越之步驟。 如明求項7所述之生物流體之鱗去活化方法，其中該回收該 2物流體之步驟中，該生物流體係藉由重力法通遇—輸企過遽 益0 、 9.如π求項1所述之生物流體之病毒去活化方法，係使用一組可 ❹抛棄式袋體來進行，該組可拋棄式袋體包含—病毒去活化袋， 、Ί二於°亥步驟(&)以及一油脂萃取袋，係使用於該步驟(b)，該 油脂卒取袋具有一内隔間，該内隔間具有一漏斗狀之下半部接 觸於該油脂萃取袋之一出口裝置。 1〇.如請求項9所述之生物流體之病毒去活化方法 ，其中該組可拋 11-式袋體更包含—活性碳過濾器及—翻器。 /種％求項丨至g所述之生物流體之病毒去活化方法的使用， 12錢用於—微量混合之生物流體的赫去活化作用。 種病母去活化之生物流體，該生物流體係選自由血漿、冷康 93 200942247 貧乏血漿及冷凍沉澱品所組成之群組，其中該生物流體不具有 脂質、血液細胞及細胞碎片。