TW200918098A

TW200918098A - Modified growth hormone polypeptides

Info

Publication number: TW200918098A
Application number: TW097131758A
Authority: TW
Inventors: Richard Ross; Jon Sayers; Peter Artymiuk
Original assignee: Asterion Ltd
Priority date: 2007-10-10
Filing date: 2008-08-20
Publication date: 2009-05-01
Also published as: AR068038A1; RU2010103159A; KR20100067686A; US20120322735A1; JP5697983B2; CN101932600B; EP2209798A2; ES2532600T3; WO2009047474A2; CA2701369A1; DK2209798T3; EP2209798B1; EP2886553A1; WO2009047474A3; JP2011507487A; GB0719818D0; CN101932600A; BRPI0818639A2; US20100197589A1; US8273552B2

Description

200918098 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於經修飾之生長激素融合蛋白及包含該等融合蛋白之二聚體；編碼該等蛋白之核酸分子及使用該等蛋白之治療方法。【先前技術】生長激素（GH)為一種對於兒童之線性生長及成人之正常身體組成很重要之合成代謝細胞因子激素。調節活性很複雜且涉及大量相互作用之多肽及肽促效劑及肽拮抗劑。GH可直接藉由結合生長激素受體或間接藉由刺激胰島素樣生長因子-l(IGF-l)之產生而介導其作用。因此GH 之一主要作用為刺激肝臟產生IGF — 1。此外，Gh之分泌由兩種具有相反活性之肽激素控制。生長激素釋放激素 (GHRH)為一種由下視丘之弓狀核產生之44個胺基酸之肽。其發揮刺激腦垂體前葉產生GH之作用。生長抑素為種對抗GHRH作用之肽激素且由較大前肽原加工為丨斗及 28個胺基酸形式。生長抑素由下視丘室周核之神經内分泌細胞分泌於與垂體前葉連接之下視丘-垂體門脈系統中，在該垂體前葉中，生長抑素抑制GH之分泌。 GH依次與兩個膜結合生長激素受體（Ghr)經由gh上稱為位點1及位點2之兩個獨立位點結合。位點1為高親和力結合位點且位點2為低親和力位點。單個GH分子經由位點 1結合1個GHR。第二個GHR隨後經由位點2募集以形成 GHR:GH:GHR複合物。該複合物隨後經内化且活化引起基 I33627.doc 200918098 因表現變化之信號轉導級聯e GHR之胞外域以各自具有約 100個胺基酸之兩個連接域（SD_1〇〇)形式存在，c末端SD_ 100域（b)最接近細胞表面且N末端8〇_丨〇〇域（a)最遠離細胞表面。在形成三聚複合物GHR_GH_GHR中在激素結合上該等兩個域發生構形變化。 GH過量與大量疾病病狀相關；例如肢端肥大症及垂體 ]生巨人症。大多數過量病例係由腦垂體前葉之促生長激素細胞中之垂體腫瘤產生。該等腫瘤為良性的且逐漸增加GH之分泌。生長激素過量之症狀包括頜、手指及趾部之骨肥厚、對神經/肌肉壓迫及胰島素抵抗。腫瘤相關性 GH過量之初始治療為手術移除腦垂體腫瘤。近來，使用 GH拮抗劑抑制GH信號傳導由於其無創傷性而成為較佳療法GH拮抗劑可為生長抑素或生長抑素類似物（例如奥曲肽（octreotide)、蘭瑞肽（ianreotide))之重組形式或經修飾之 GH。

Kopchick (2003) European Journal of Endocrinology 148； S21 -25中提供經修飾之gh拮抗劑之評述，其描述一種稱為派格索曼（pegVisomant)之市售GH拮抗劑，該GH拮抗劑在G120處將修飾組合於人類〇11上，其中添加聚乙二醇以增加經修飾之GH之分子量。與投與生長激素相關之問題為其藉由腎過濾及/或蛋白水解達成之快速清除率。添加聚乙二醇減少該損失。然而’應瞭解聚乙二醇降低GH對於GHR之親和力，且因此為彌補該降低之親和力必須投與增加量之經修飾之GH。此舉可能產生副作用。需要提供 133627.doc 200918098 一種經修飾之gh拮抗劑，其可以減少之劑量投與，由此避免與派格索曼相關之問題。此可能減少投藥量或降低投藥頻率。在吾等同在申請中之申請案W〇 03/070765中，吾人描述經修飾之GH融合蛋白’其包括對gh之位點1及位點2之修飾。該等經修飾之GH分子融合至GHR之胞外域。吾人在本文中揭示經修飾之GH融合蛋白，其具有大大延長之血清半衰期且形成可能藉由降低腎清除率或保護經修飾之 GH免於蛋白水解而與該等融合蛋白改良之藥物代謝動力學相關之二聚體。該等生長激素融合蛋白之改良之藥物代謝動力學概況將使得治療方案無需多次投藥且減少不良副作用。【發明内容】根據本發明之一態樣，提供一種核酸分子，其包含選自以下序列之核酸序列： i) SEQ ID NO: 1中所表示之核酸序列； ϋ) SEQ ID NO:2中所表示之核酸序列； iii) SEQ ID NO:4中所表示之核酸序列； iv) SEQ ID NO: 5中所表示之核酸序列； v) SEQ ID NO: 7中所表示之核酸序列； vi) SEQ ID NO:8中所表示之核酸序列； vii) SEQ ID N〇:l〇中所表示之核酸序列； viii) SEQ ID Ν〇:Π中所表示之核酸序列； ix) SEQ ID ΝΟ:13中所表示之核酸序列； 133627.doc 200918098 X) SEQIDNO:14中所表示之核酸序列； xi) SEQIDNO:16中所表示之核酸序列； xii) SEQIDNO:17中所表示之核酸序列； xiii) SEQIDNO:19中所表示之核酸序列； xiv) SEQ ID NO:20中所表示之核酸序列； xv) SEQ ID NO:22中所表示之核酸序列； xvi) SEQIDNO:23中所表示之核酸序列； xvii) 包含在嚴格雜交條件下與SEQ ID ΝΟ:1、2、4、5、 7 8 1〇 11、 13、 14、 16、 17、 19'20、 22或23 雜父且編碼具有生長激素受體拮抗劑活性之多肽的核酸序列的核酸分子。核酸分子之雜交在兩個互補核酸分子彼此進行一定量之氫鍵結時進行。雜交之嚴格度可根據核酸周圍之環境條件、雜交方法之性質及所用核酸分子之組成及長度而變化。Sambrook等人，Molecular Cloning : A Laboratory

Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring

Harbor，NY，2001);及 Tijssen，Laboratory Techniques in

Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes 第 I部分，第2章（Elsevier，New York， 1993)中討論關於達成特定嚴格度所需之雜交條件之計算。1為核酸分子之給定鏈中50%與其互補鏈雜交之溫度。以下為例示性雜交條件組且並非加以限制：極高嚴格度（允許具有至少90%—致性之序列雜交）雜交： 5xSSC，65。(：，16小時 I33627.doc 200918098 洗務兩次： 2 x S s C ’室溫（RT) ’各1 5分鐘洗滌兩次：〇.5><SSC ’ 65°C，各20分鐘高嚴格度（允許具有至少80% 一致性之序列雜交）雜交： 5x-6xSSC，65°C-70°C，16-20小時洗務兩次： 2><SSC’ RT ’各5 - 2 0分鐘洗滌兩次： lxSSC，55°C-70°C，各30分鐘低嚴格度（允許具有至少50 %—致性之序列雜交）雜交： 6xSSC，RT 至 55°C，16-20 小時 J 洗滌至少兩次：2x-3xSSC，室溫至551，各20-30分鐘。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEQ ID ΝΟ:1中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEQ ID NO:2中所表示之核酸序列或由其組成。

在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEQ ID f ; NO:4中所表示之核酸序列或由其組成。

Li 在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEQ ID NO: 5中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEq ID NO:7中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEq ID NO:8中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEq m Ν〇· 1 〇中所表示之核酸序列或由其組成。 133627.doc 200918098 在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEQ NO: 11中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEQID NO: 13中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEQ ID NO: 14中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEQ ID NO: 16中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEQ ID NO. 17中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含seq ι〇 NO:19中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEQ 1〇 NO:20中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEQ ID NO:22中所表示之核酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該核酸分子包含SEq id NO:23中所表示之核酸序列或由其組成。根據本發明之一態樣，提供一種由本發明之核酸編碼之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種多肽，其包含選自以下之胺基酸序列： i) SEQ ID NO:3中所表示之胺基酸序列； ii) SEQ ID NO:6中所表示之胺基酸序列； 133627.doc " 200918098 iii) SEQ ID NO:9中所表示之胺基酸序列； iv) SEQ ID NO:12中所表示之胺基酸序列； v) SEQ ID ΝΟ·_15中所表示之胺基酸序列； vi) SEQ ID NO:18中所表示之胺基酸序列； vii) SEQ ID NO:21中所表示之胺基酸序列； viii) SEQ ID NO:24中所表示之胺基酸序列； ix) SEQ ID NO:25中所表示之胺基酸序列； X) SEQ ID NO:26中所表示之胺基酸序列； xi) SEQ ID NO:27中所表示之胺基酸序列； xii) SEQ ID NO:28中所表示之胺基酸序列； xiii) SEQ ID NO:29中所表示之胺基酸序列； xiv) SEQ ID NO:30中所表示之胺基酸序列； xv) SEQ ID NO:31中所表示之胺基酸序列； xvi) SEQ ID NO:32中所表示之胺基酸序列；其中該多肽具有生長激素受體拮抗劑活性。在本發明之一個較佳實施例中，該多肽包含SEq ID NO:3中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之一個較佳實施例中，該多肽包含SEq ID NO:6中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之一個較佳實施例中，該多肽包含SEq ID NO:9中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之一個較佳實施例中，該多肽包含SEQ ID NO: 12中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之一個較佳實施例中，該多肽包含SEQ m 133627.doc -12- 200918098 NO:15中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之-個較佳實施例中，該多狀包含卿ι〇 NO:18中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該多肽包含seqidno:21 中所表示之fe基酸序列或由其組成。在本發明之-較佳實施例中’該多肽包含seqidn〇:24 中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該多肽包含SEQIDNO:25 中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之-較佳實施例中，該多肽包含seqidno:26 中所表示之胺基酸序列或由其组成。在本發明之-較佳實施例中，該多狀包含SEQIDNO:27 中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之-較佳實施例中，該多狀包含SEQIDNO:28 中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之一較佳實施例中，該多肽包含SEQIDNO:29 中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之車又佳實施例中，該多肽包含SEQ ID NO:30 中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之較佳實施例中，該多肽包含SEQ ID N〇:3 i 中所表示之胺基酸序列或由其組成。在本發明之車乂佳實施例中，該多肽包含SEQ ID NO:32 中所表示之胺基酸序列或由其組成。根據本發明之另-態樣’提供一種同元二聚體，其包含 133627.doc -13- 200918098 兩個包含SEQIDNO:3或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體兩個包含SEQ ID ΝΟ:6或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體兩個包含SEQ ID ΝΟ:9或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體兩個包含SEQ IDN0:12或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體兩個包含SEQlDNO:15或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體兩個包含SEQ ID ΝΟ··18或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體兩個包含SEQ IDNO:21或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體兩個包含SEQ ID NO:24或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體兩個包含SEQ IDn〇:25或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體兩個包含SEQ ID NO:26或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體兩個包含SEQ ID n〇:27或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體兩個包含SEQ Π) NO:28或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二 133627.doc 其包含其包含其包含其包含其包含其包含其包含其包含其包含其包含其包含其包含 • 14· 200918098 兩個包含SEQ ID NO:29或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體，其包含兩個包含SEQ IDNO:30或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體，其包人兩個包含SEQ ID n〇:31或由其組成之多肽。根據本發明之另一態樣，提供一種同元二聚體，其包含兩個包含SEQ ID NO:32或由其組成之多肽。

根據本發明之另一態樣，提供一種載體’其包含本發明之核酸分子。 $ 在本發明之一較佳實施例中，該載體為適合於表現本發明之核酸分子之表現載體。包括本發明之核酸的載體無需包括啟動子或其他調節序列，尤其若載體欲用於將核酸引入細胞中而重組於基因組中以供穩定轉染時。較佳地，載體中之核酸與適當啟動子或用於在宿主細胞中轉錄之其他調節元件可操作地連接。該載體可為在多個宿主中發揮作用之雙功能表現载體。 ’’啟動子’’意謂轉錄起始位點上游且含有轉錄所需之所有調節區域的核普酸序列。合適啟動子包括組成型、組織特異陡、誘導型、發展型（develGpmentai)啟動子或在真核或原核細胞巾表現之其減動子。"可操作地連接”意謂作為同一核酸分子之—部分而連接，經適當定位及定向而用於由啟動子引發之轉錄。與啟動子可操作地連接之職係處於該啟動子之"轉錄起始調節下”。誘導型或可調節在一較佳實施例中，啟動子為組成型 133627.doc -15- 200918098 啟動子。根據本發明之另一態樣，提供一種以本發明之核酸分子或載體轉染或轉型之細胞。較佳地，該細胞為真核細胞。或者，該細胞為原核細胞。

在本發明之一較佳實施例中，該細胞係選自由以下細胞組成之群：真菌細胞（例如畢赤酵母屬spp)、酵母屬（心cc/mrowya spp；)、鏈孢黴屬昆蟲細胞（例如夜蛾屬（办spp));哺乳動物細胞（例如 COS細胞、CHO細胞）；植物細胞。根據本發明之另一態樣，提供一種醫藥組合物，其包含本發明之多肽，包括賦形劑或載劑。在本發明之一較佳實施例中，該醫藥組合物與另—治療劑組合。 ’' 在投與時，本發明之醫藥組合物以醫藥學上可接受之製劑形式投與。該等製劑通常可含有醫藥學上可接受濃度之鹽、緩衝劑”方腐劑、相容載劑及視情況其他治療劑。本發明之醫藥組合物可藉由任何習知途徑（包括注射）投與。投藥及施藥可（例如）經口、靜脈内、腹膜内、肌 L腔内、關節内、皮下、局部（眼睛）、經表皮(例如嵌i 皮膚或黏膜中之脂溶性乳膏劑）、經皮或鼻内。本發明之醫藥組合物係以有效量投與。”有效量或與其他劑量或協同藥物一物之蚤甘 I王所而反應之藥物/組合物之！。其可包括僅暫時減缓疾病之 133627.doc •16- 200918098 包括永久地停止疾病之進程。其可藉由常規方法監測或可根據診斷方法監測。

向個體投與之醫藥組合物之劑量可根據不同參數來選擇，尤其根據所用投藥模式及個體之狀況（亦即年齡、性別）。在投與時，本發明之醫藥組合物係以醫藥學上7可接受之量及醫藥學上可接受之組合物形式施用。當用於藥品中時’鹽應為醫藥學上可接受’但可將非醫藥學上可接受之鹽便利地用⑨製備其醫藥學上可接受之鹽且其並不自本發明之範疇中排除。該等藥理學及醫藥學上可接受之鹽包括(但不限於)由以下酸製備之鹽：鹽酸、氫溴酸、硫酸、 :酸、磷酸、順丁烯二酸、乙酸、水楊酸、檸檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸及其類似物。又，醫藥學上可接受之鹽可製備為驗金屬或驗土金屬鹽，諸如納、卸或好鹽。若需要，則醫藥組合物可與醫藥學上可接受之載劑組合。如本文中所使用之術語”醫藥學上可接受之載劑”意謂 l D於向人類投與之一或多種相容固體或液體填充劑、稀釋劑或膠囊化物質。術語"載劑"表示活性成份與之組合以有利於施用的天然或合成之有機或無機成份。醫藥組合物之、、且伤亦此夠與本發明之分子混合且彼此以一定方式混口以使大體上削弱所需藥物功效之相互作用不存在。睡醫藥組合物可含有合適緩衝劑，包括：鹽形式之乙酸；風形式之轉樣酸；鹽形式之硼酸；及鹽形式之磷酸。醫藥組合物亦可視情況含有合適防腐劑，諸如：氣化苯曱焓銨，氣丁醇；對羥基苯甲酸酯及硫柳汞。 133627.doc 200918098 醫藥組合物可便利地以單位劑型存在 =熟知之任何方法製備。所有方法均包括使活= 二籌成一或多種辅助成份之载劑締合之步驟。一般而言，活〖生化合物與液體載劑或細粉狀固體載 :且緊密締合’且若必要’隨後使產物成型來製備組： kσ丄杈與之組合物可以各含有預定量活性化合物之

'_、W(1_ges))提供。其他組口物包括水性液體或非水性液體之懸浮液，諸如糖聚、酿劑或乳液。，適合非經腸投與之組合物便㈣包含滅菌水性或非水性製劑其較佳與接文體之血液等張。此製劑可根據已知方法使用適合分散劑或濕潤劑及懸浮劑調配。滅菌可注射製劑亦可為於無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之滅菌可注射溶液或懸浮液，例如於以丁二醇中之溶^可採用 =可接受溶劑為水、林格氏溶液（Ringer,s⑹此⑽)及等張氯化納溶液。此外，f知採用滅菌不揮發性油作為溶劑或 :浮介質。為此㈣，可採用任何溫和不揮發性油，包括合成之單甘油酯或二甘油酯。此外，諸如油酸之脂肪酸可用於製備可注射製劑。適合經口、皮下、靜脈内、肌肉内等技與之載劑調配物可見於Remingt〇n,s pharmaceutical

Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA 中。田根據本發明之另一態樣，提供一種治療患有生長激素過量之人類個體之方法，其包含投與有效量之至少一種本發 133627.doc -18- 200918098 明之多肽肽係皮下投 }月之冑較佳方法中，該多肽係經靜脈内投與在本發明之-個替代性較佳方法中，該乡、 * a和發月之另車父佳方法中，該多肽係每曰投與或每隔又與，較佳地，該多肽係每週投與，每隔2週或2月投 ° ，本發明之-較佳方法中，該生長激素過量導致肢端肥症在本發明之—較佳方法中，該生長激素過量導致巨人 =據本發明之另_態樣，提供n療患有癌症之人類個體之方法’其包含投與有效量之至少一種本發明之多狀0 ϋ 如本文中所使用之術語”癌症"係指具有自主生長能力之細胞’亦即-種由迅速增殖之細胞生長表徵之異常病況或 :狀。該術語意謂包括各種類型之癌性生長或致癌性過魟轉=!生組織或惡變細胞、組織或器官，與組織病理學類型或侵襲階段無關。術語"癌症，，包括各種器官系統之惡，症，諸如彼等影響(例如)肺、乳房、甲狀腺、淋巴' 胃腸及生殖泌尿道者，以及包括惡性病症之腺癌，諸如大夕數結腸癌、腎細胞癌瘤、前列腺癌及/或睾丸腫瘤、非小細胞肺癌瘤、小腊，處β各腸癌及食道癌。術語”癌瘤”為此項技術所公認的且倍指μ 士 1 & a 、才皮或内刀泌組織之惡性病症，包括呼吸 133627.doc 19· 200918098 系統癌瘤月腸系統癌瘤、生殖泌尿系統癌瘤、皇瘤、礼癌癌瘤、前列腺癌瘤、内分泌系統癌瘤及黑色素瘤。例示性癌瘤包括由子宮頸、肺、前列腺、乳房、料及頸部、結腸及卵巢之組織形成之彼等癌瘤。術語"癌瘤” 亦包括癌肉瘤’例如，纟包括包含癌瘤性及肉瘤樣組織之惡性腫瘤。"腺癌’’係指自腺組織衍生或腫瘤細胞形成可識狀腺結構之癌瘤。術語"肉瘤"為此項技術所公認的且係才曰自間葉細胞衍生之惡性腫瘤。在本發明之一較佳方法中，該癌症為前列腺癌。在本說明書之正文及申請專利範圍通篇中，詞語”包含" 及"含有”意謂”包括（但不限於）"，且並非意欲（且並非）排除其他部分、添加物、組份、整數或步驟。在本說明書之正文及申請專利範圍通篇中，除非上下文另作要求，否則單數涵蓋複數。詳言之，除非上下文另作要求否則當使用不定冠詞時，本說明書應理解為涵蓋複數以及單數。聯繫本發明之特定態樣、實施例或實例一起描述之特性、整數、特徵、化合物、化學部分或基團應視為適用於本文所述之任何其他態樣、實施例或實例，除非與其不相容。 ’、【實施方式】現僅藉由實例且參考以下圖式描述本發明之一實施例：材料及方法建構1B8拮抗劑分子 133627.doc •20· 200918098 該分子經建構以使GH分子（G12OR)之位點2(低親和力位點）中之胺基酸甘胺酸-120突變為精胺酸。雖然GH分子與 GH受體經由南親和力位點1之結合未受影響，但與受體經由GH位點2之結合由精胺酸分子之大型侧基抑制。先前採用PCR策略以產生含有G120R突變之GH分子，且藉由使用合適限制性位點使得可將該分子選殖於pTrc_His 表現質體中以產生純系pTrc-His-1 A7(G120R與GHR胞外B 域連接）。隨後將300 bp Bsu36I-Not 1片段由該載體切除且接合於哺乳動物表現質體pGHsecTag-lB7中（GH與GHR胞外域A及 B連接）以產生pGHsecTag-lB8(分泌表現藉由GH分泌信號引導）。參見圖9。建構1Β9νΟ拮抗劑分子該分子經建構以使GH分子之位點1與位點2中之胺基酸均突變。GH分子與GH受體經由高親和力位點丨之結合由該等突變增強’而與受體經由GH位點2之結合由於單個甘胺酸變為精胺酸而受抑制。採用單鏈DNA位點定向突變策略產生含有位點1與位點2 突變之GH分子。使用合適限制性位點使得可將該分子選殖於pTrc-His及pET21a(+)表現質體中。使用PCR產生含有具有側接Nhe 1及Notl位點之GH信號序列（GHss)之純系。將其接合於哺乳動物表現質體pGHsecTag-lB8vO中（GH與 GHR胞外域A及B連接）以產生pGHsecTag-lB9vO(分泌表現係藉由GH分泌信號引導）。參見圖1〇。 133627.doc -21 - 200918098 建構1Β8νΟ與1B9vO之變異純系使用限制酶 Hindlll-EcoRV 將質體 pGHsecTag-lB7v3 消化’且將該片段接合於質體pGHsecTag-lB8v0及1Β9νΟ中以建構質體1B9vl(該等分子在3，端不含有任何錯誤序列）。隨後之步驟在於移除連接子區域周圍之限制性位點以產生質體pGHseTag-lB8v2及1Β9ν2。此係使用基因合成完成，且其中將該初始連接子以G4Sx5連接子替換。藉由基因合成建構具有側接限制性位點NarI& AvrII之以下片段’且將其接合至pGHsecTag-lB8vl或1Β9ν1 ;參見圖11及12 。括抗劑變異分子之活艘外生物活性使用GH特異性螢光素酶報導基因檢定測試各嵌合體之活體外生物活性。將人類來源之細胞株基本上以人類GH 觉體穩定轉染且隨後以螢光素酶信號傳導報導基因瞬時轉染。該檢定偵測GH之生理學含量，參見圖丨4。拮抗劑分子之純化

使表現1B8V2與1Β9ν2作為分泌產物之CH〇 Flp_In細胞株在無蛋白培養基中生長。收集培養基，將其濃縮且淨化隨後進行親和力純化。為進行純化，製備2〇如與11(}11之5£1 單株抗體偶合之NHS活化Sephar〇se 4 Fast Fl〇w樹脂。一般而言，將培養基樣品濃縮十倍且以結合緩衝液（25 mM THs HC1/150 mM Naa，pH 7 4)1:1 稀釋隨後進行純化。將物質以2 ml/min之流率裝載於管柱上。洗務之後，使 133627.doc 22- 200918098 用200 mM甘胺酸（PH 2.7)將結合蛋白以i溶離繼而用i M Tris HC_ 9增和。藉由__ρΑ(}Ε分析樣品（參見圖15a及岡。圖17a及17b說明與天然生長激素嵌合體相比，IB9之二聚體形成。 IB8之藥物代謝動力學研究向6隻正常健康大鼠皮下（sc，圖心）或靜脈内π，圖 16b)給予單次劑量注射之！ nM〇1(75 ug)蛋白。對照大鼠僅

❹ 給予媒劑。以經10日之時間間隔採集樣品且使用内部 house)GHElisa檢定法來檢定1B8之存在。【圖式簡單說明】表1說明1Β8ν2溶離份之Bradford檢定；圖la 1Β8ν0··由與GHR胞外（域！及域2)經由G4Sx4連接子連接之GH(含有位點丨突變）組成：該構築體在連接子區域周圍及31端含有限制酶位點；圖lb為所編碼之胺基酸序列；圖2a 1Β8ν1 :該分子衍生自iB8v0但在5,及3'末端不含有外來序列且含有G4Sx4連接子；圖2b為所編碼之胺基酸序列；圖3a 1Β8ν2 :該分子衍生自iB8vO但不含有外來序列且含有G4Sx5連接子；圖3b為所編碼之胺基酸序列；圖4a 1Β8ν3 :該分子衍生自1B8vO但不含有外來序列且不含有連接子；圖4b為所編碼之胺基酸序列；圖5a 1Β9ν0:由與GHR(域1及域2)經由G4Sx4連接子連接之GH(含有位點i及位點2突變）組成：該構築體在連接子 133627.doc •23- 200918098 區域周圍及3’端含有限制酶位點；圖讣為所編碼之胺基酸序列；圖6a 1Β9ν1 :該分子衍生自1B9v〇但在5，及3t末端不含有外來序列且含有G4Sx4連接子；圖6b為所編碼之胺基酸序列；圖7a 1Β9ν2 :該分子衍生自iB9vO但不含有外來序列且含有G4Sx5連接子；圖7b為所編碼之胺基酸序列；圖8a 1Β9ν3 :該分子衍生自iB9vO但不含有外來序列且不含有連接子；圖8b為所編碼之胺基酸序列；圖9說明將G120R分子次選殖至哺乳動物表現質體中之基本接合策略；圖10說明IB9vO之建構；圖Π說明1B8 v2片段：Narl -AvrII(524 bp)。新穎連接子區域以黑體展示’其中限制酶位點加下劃線。將該片段接合至質體pGHsecTag-lB8vl以產生質體pGHsecTag-1Β8ν2 ；圖12說明1B9 v2片段：Narl-AvrII(524 bp)。新穎連接子區域以黑體展示，其中限制酶位點加下劃線。將該片段接合至質體pGHsecTag-lB9vl以產生質體pGHsecTag-1Β9ν2 ；圖1 3展示使用GH特異性抗體偵測來自穩定CHO Flp-In 細胞株之細胞培養基的1Β8ν2(色帶1及色帶2)及1Β9ν2(色帶3)之表現的西方墨點法。樣品具有各蛋白所預期之適當尺寸（約75 kDa)且未展示降解跡象； 133627.doc -24· 200918098 圖14說明在〇·5 nM rhGR六各存在之情況（+)下，與1Β9ν2穩定細胞株之拉I 术自1B8v2 培養基樣品能夠拮抗rhGH之作用。在無0.5 nM GH之情況㈠下，兩種分子均未展示生物性。展示之標準曲線（〇_5nM); 玍物，舌圖15a展示藉由庫馬斯毕 3所木色進仃之經純化蛋白隱歸分析。圖像展⑽純M_8v2)W ^ 適當尺寸（約75 kDa)且未見到低分子量降解產物；圖⑼展示 IB9v2之 SDS-PAGE分析；

C 圖^皮下投與1B8之後，血清蛋白含量在注射後叫、時達峰值。投與後Π)日仍可_到咖；圖咐：靜脈内投與1B8之後’血清蛋白含量在注射後丨小時料值且隨後迅速降低；圖m天然PAGE樣品之西方墨點法：1: iB7v〇天然㈤融合物，2 : lB7vl 天然 GH ’ 3 : ιΒ7ν2 天然，4 : 1B7v3 天然GH，5: 1B8經修飾之GH融合物。所有樣品均展示表徵單體及二聚體形成之清晰雙條帶；圖17b :說明二聚體形成之等效庫馬斯染色凝膠。 133627.doc 25- 200918098 序列表 <11〇>英商亞斯特恩有限公司 <120>經修飾之生長激素多肽 <130> 0871P/GB0 <140> 097131758 <141> 2008-08-20 <150> 60/979,010 ； 0719818.7 <151> 2007-10-10:2007-10-11 <360> 32 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 1452 <212> DNA <213>人工 <220> <223>生長激素融合蛋白

<400> ] atggctacag gctcccggac gtccctgctc ctggcttttg gcctgctctg ccigccctgg 60 ct tcaagagg gcagtgccu cccaaccat t ccct tatcca ggctltttga caacgctaig 120 ctccgcgccc atcgtcigca ccagctggcc 1ttgacacct accaggagt t igaugaagcc 180 tatatcccaa aggaacagaa gtattcaitc ctgcagaacc cccagacclc CCtClg tItc 240 tcagagtcta t tccgacacc ctccaacagg gaggaaacac aacagaaatc caacctagag 300 ctgctccgca tctccctgct gctcatccag icgtggctgg agcccgtgca gttcctcagg 360 agtgicttcg ccaacagcct ggtgtacggc gcctctgaca gcaacgtcta tgacctccta 420 aaggacctag aggaacgcat ccaaacgctg atggggaggc tggaagatgg cagcccccgg 480 aclgggcaga tct tcaagca gacctacagc aagitcgaca caaacicaca caacgatgac 540 gcaciacEca agaactacgg gcigciciac igcucagga aggaca tgga caaggic^ag 600 acat tcctgc gcalcgtgca gigccgctct gtggagggca gctgtggct t cggcggccgc 660 ggtggcggag gtagtggtgg cggaggtagc ggtggcggag gltctggtgg cggaggucc 720 gaattcit 11 ctggaagtga ggccacagca gctatcct ta gcagagcacc ctggagtctg 780 caaagtgt ta atccaggcct aaagacaaat tct tctaagg agcctaaatt caccaagtgc 840 cgt tcacctg agcgagagac tttttcatgc cactggacag atgaggttca tcatggtaca 900 aagaacctag gacccataca gctgirclat accagaagga acacicaaga atggactcaa 960 gaatggaaag aatgccctga t tatgt ttct ectggggaaa acagctgtta ct t laat tea 1020 icgt t tacct ccatctggat acct tat tgt atcaagctaa ctagcaaigg tggtacagtg 1080 gatgaaaagi gt t tcicigt tgatgaaata gigcaaccag atccacccal igccctcaac Π40 tggactt tac tgaacglcag t ttaactggg aitcatgcag aiatccaagt gagat^g^aa 1200 gcaccacgca atgcagatat tcagaaagga tggatggltc tggagtalga act tcaatac 1260 aaagaagiaa algaaactaa atggaaaatg atggacccla tat tgacaac atcagtlcca ]320 gtgiactcat tgaaagtgga taaggaatat gaagtacgcg igagatccaa acaacgaaac 1380 tctggaaati atggcgagtt cagtgaggig ctctatgtaa cac ticctca gaigagccaa 1440 aagct Utcg aa 1452 133627-序列表.doc 60200918098

C <210> 2 <2Π> 1374 <212> DNA <213>人工 <220> <223>生長激素融合蛋白 <400> 2 ttcccaacca ttcccttatc caggctttti gacaacgcta tgctccgcgc ccatcgtctg caccagctgg cctttgacac ctaccaggag ittgaagaag cctatatccc aaaggaacag aagtattcat tcctgcagaa cccccagacc tccctctgn tctcagagtc lattccgaca ccctccaaca gggaggaaac acaacagaaa tccaacctag agctgctccg catctccctg ctgctcatcc agtcgtggct ggagcccgtg cagttcctca ggagtgtcit cgccaacagc ctggtgtacg gcgcctctga cagcaacgtc tatgacctcc taaaggacct agaggaacgc aiccaaacgc tgatggggag gctggaagat ggcagccccc ggactgggca gatcucaag cagacciaca gcaagttcga cacaaactca cacaacgaig acgcaciact caagaactac gggctgctct actgcttcag gaaggacatg gacaaggtcg agacattcct gcgcatcgtg cagtgccgct ctgtggaggg cagctgtggc ttcggcggcc gcggtggcgg aggiagiggt ggcggaggta gcggtggcgg aggttctggt ggcggaggu ccgaaitctt tictggaagi gaggccacag cagctatcct tagcagagca ccctggagtc tgcaaagtgt taatccaggc ctaaagacaa attct tciaa ggagcctaaa 1tcaccaagt gccgltcacc tgagcgagag actttttcat gccactggac agatgaggtt catcatggta caaagaacct aggacccata cagctgttct ataccagaag gaacactcaa gaatggacic aagaatggaa agaatgccct gattatgttl ctgctgggga aaacagctgt laciltaatt catcgitiac ctccaicigg ataccttatt giatcaagci aactagcaat ggtggtacag iggaigaaaa gtgittctct gttgatgaaa tagtgcaacc agatccaccc attgcccica aciggacttt aclgaacgtc agtitaac'ig ggaucaigc agaiatccaa ^igagatggM aagcaccacg caatgca^at attcagaaag gatggaiggt tctggagtat yaacttcaai acaaagaagt aaatgaaact aaatggaaaa igatg^accc taiattgaca ucatcagttc cagtgtacic airgaaagtg gataaggaat atgaagiacg cgtgagatcc aaacaacgaa actctggaaa ttatggcgag t icagtgagg tgcictatgt aacact tcct cagaigagcc aaaagcii 11 cgaa 120 ]80 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 ]260 1320 1374

<210> 3 <211> 458 <212> PRT <213>人工 <220> <223>生長激素融合蛋白 <400> 3 Phe Pro Thr lie Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Ai>n Ala Met Leu Arg 15 10 15

Ala His Arg Leu His Gin Leu Ala Phe A^p Thr Tyr Gin Glu Phe Glu 20 25 30

Glu Ala Tyr He Pro Lys Glu Gin Lys Tyr Ser Phe Leu Gin Asn Pro 133627-序列表.doc -2- 200918098 35 40 45

Gin Thr Ser Leu Cys Phe Ser Clu Ser He Pro Thr Pro Ser Asn Arg 50 55 60

Glu G】u Thr Gin Gin Lys Ser Asn Leu Clu Leu Leu Arg lie Ser Leu 65 70 75 80

Leu Leu lie Gin Ser Trp Leu Glu Pro Va! Gin Phe Leu Arg Ser Val 85 90 95

Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp 100 105 110

Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Arg lie Gin Thr Leu Met Gly Arg Leu 115 120 125

Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gin lie Phe Lys Gin Thr Tyr Ser 130 135 140

Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr 145 150 155 160

Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe 165 170 175

Leu Arg lie Val Gin Cys Arg Ser Vai Gla Gly Ser Cys Gly Phe Gfy 180 )85 190

Gly Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser G]y Gly Gly Gly 195 200 205

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Phe Phe Ser Gly Ser Glu Ala Thr Alu 210 215 220

Ala lie Leu Ser Arg Ala Pro Trp Ser Leu Gin Ser Val Asn Pro Gly 225 230 235 240

Leu Lys Thr Asn Ser Ser Lys Glu Pro Lys Phe Thr Lys Cys Arg Ser 245 250 255

Pro Glu Arg Glu Thr Phe Ser Cys His Trp Thr Asp Glu Val His His 260 265 270

Gly Thr Lys Asn Leu Gly Pro Me Gin Leu Phe Tyr Thr Arg Arg Asn 275 280 285

Thr Gin Glu Trp Thr Gin Glu Trp Lys Glu Cys Pro Asp Tyr Val Ser 290 295 300

Ala Gly Glu Asn Ser Cys Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser He Trp 305 310 315 320 lie Pro Tyr Cys 11c Lys Leu Thr Scr Asn Gly Gly Ί\\τ Val Asp Glu 325 330 335 133627·序列表.doc 200918098

Lys Cys Phe Ser Val Asp Glu lie Val Gin Pro Asp Pro Pro Me Ala 340 345 350

Leu Asn Trp Thr Leu Leu Asn Val Ser Leu Thr Gly lie His Ala Asp 355 360 365 lie Gin Val Arg Trp Glu Ala Pro Arg Asn Ala Asp Ik Gin Lys Gly 370 375 3δ0

Trp Met Val Leu Glu Tyr G!u Leu Gin 丁yr Lys Glu Val Asn Glu Thr 385 390 395 400

Lys Trp Lys Met Met Asp Pro He Leu Thr Thr Ser Val Pro Val Tyr 405 410 415

Ser Leu Lys Val Asp Lys Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gin 420 425 430

Arg Asn Ser Gly Asn Tyr Gly Glu Phe Ser Glu Val Leu Tyr Val Thr 435 440 445

C

Leu Pro Gin Met Ser Gin Lys Leu Phe Glu 450 455 <210> 4 <211> 1440 <212> DNA <213>人工 <220> <223>生長激素融合蛋白

<400> 4 atggctacag cttcaagagg ctccgcgccc tatatcccaa tcagagtcta ctgctccgca agtglcttcg aaggacctag actgggcaga gcactactca acaiicctgc ggtggcggag gaaitct 111 caaagigi ia cgitcacctg aagaacctag gaatggaaag gctcccggac gcaglgcctt atcgictgca aggaacagaa ttccgacacc tctccctgct ccaacagcct aggaacgcat tct tcaagca agaactacgg gcatcgtgca gtagtggtgg ctggaagiga atccaggcc! agegagagae gacccaiaca aatgccctga gtccctgctc cccaaccatt ccagctggcc gtat teat tc ctccaacagg gctcatccag ggtgtacggc ccaaacgctg gacctacagc gctgctctac gtgccgctct eggaggtage ggccacagca aaagacaaat 111ticatgc gctgt tetat t talgtttct ctggcttttg cccttatcca 11 tgacacct ctgcagaacc gaggaaacac legtggeigg gcdctgaca atggggaggc aagt tcgaca tgcttcagga gtggagggca ggtggcggag gciatcct ta icl tciaa^g cactggacag accagaagga gciggggaaa gcctgctctg gget 111 tga accaggagt t cccagacctc aacagaaatc agcccglgca gcaacgtcta tggaagatgg caaacicaca aggacatgga gctgtggctt gttctggtgg gcagagcacc agcctaaaiI aigaggitca acacicaaga acagctgtla cctgcccigg caacgctatg igaagaagee cctctgtuc caacctagag gttcctcagg tgacctccta cagcccccgg caacgatgac caaggtcgag cggcggccgc cggaggitcc cMggag 丨 ctg caccaagigc icatgglaca atggaclcaa ctitaaitca 60 120 ISO 240 300 360 420 4S0 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 -4- 133627-序列表.doc )080 200918098 icginacct ccaictggal accnangi atcaagciaa ctagcaatgg tggiacagig gatgaaaagt gtitctctgt tgatgaaata gtgcaaccag atccacccat tgccctcaac tggactttac tgaacgtcag tttaactggg attcatgcag alaiccaagi gagatgggaa gcaccacgca atgcagatat tcagaaagga tggatggttc iggagtaiga acttcaatac aaagaagtaa atgaaactaa atggaaaatg atggacccta taugacaac atcagttcca gtgtadcat tgaaagtgga taaggaatat gaagtgcgtg igagaiccaa acaacgaaac tciggaaatt atggcgagtt cagtgaggtg ctctatgiaa cacitcctca gatgagccaa 1140 1200 1260 1320 1380 1440

C <210> 5 <211> 1362 <2i2> DNA <2丨3>人工 <220〉 <223>生長激素融合蛋白 <400> 5 ticccaacca ttcccttatc caggcttttt caccagctgg cctugacac ctaccaggag aagtattcat tcctgcagaa cccccagacc ccctccaaca gggaggaaac acaacagaaa ctgctcatcc agtcgtggci ggagcccgtg ctggtgtacg gcgccictga cagcaacgtc atccaaacgc tgatggggag gciggaagat cagacctaca gcaagttcga cacaaactca gggctgctcl actgcttcag gaaggacatg gacaaggtcg agacattcct gcgcatcgtg cagtgccgct ctgtggaggg cagctgtggc ttcggcggcc gcggtggcgg aggtagtggt gacaacgcta tgctccgcgc ccaicgtcig tttgaagaag cctatatccc aaaggaacag iccctctgit tctcagagic tattccgaca iccaacctag agctgctccg catctccctg cagttcctca ggagtgtcit cgccaacagc tatgacctcc laaaggacct agaggaacgc ggcagccccc ggacigggca gatct tcaag cacaacgatg acgcactact caagaactac ggcggaggia gaggccacag ctaaagacaa act 111teat cagctgt tet gattatgltt alacct tat t gttgaigaaa agt t taactg at tcagaaag aaatggaaaa gataaggaal ttcagtgagg gcggtggcgg cagctatcct attet tetaa gccactggac ataccagaag ctgcigggga glatcaagct tagtgcaacc ggattcatgc gaiggatggt igatggaccc aigaagtgcg tgctciatgi aggttctggt tageagagea ggagcctaaa agatgaggit gaacactcaa aaacagctgt aactagcaat agatccaccc agatatccaa tctggagtat tatat tgaca tgtgagatcc aacact tcct ggcggaggtt ccctggagtc t tcaccaagt catcatggta gaatggactc tacit taat t ggtggtacag angccctca gtgagatggg gaact tcaat acatcagt tc aaacaacgaa cagaigagcc ccgaattctt tgcaaagtgt geegt tcacc caaagaacct aagaatggaa catcgt Mac tggalgaaaa actggaci11 aagcaccacg acaaagaagt cagtgtaclc actctggaaa aa ttctggaagt taatccaggc tgagegagag aggacccata agaatgccct ctccatctgg gtgt t tcici actgaacgtc caatgcagat aaaigaaact at tgaaagtg ilatggcgag 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 ]〇80 1140 1200 1260 1320 <210> 6 <21]> 454 <212> PRT <213>人工 133627-序列表.doc 1362 200918098 <220> <223>生長激素融合蛋白 <40ϋ> 6

Phe Pro Thr lie Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg 15 10 15

Ala His Arg Leu His Gin Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gin Glu Phe Glu 20 25 30

Glu Ala 丁yr He Pro Lys Glu Gin Lys Tyr Ser Phe Leu Gin Asn Pro 35 40 45

Gin Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser 丨 le Pro Thr Pro Ser Asn Arg 50 55 60

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Lys Trp Lys Met Met Asp Pro lie Leu Thr 丁hr Ser Val Pro Val 丁yr 405 410 4)5

Ser Leu Lvs Val Asp Lys Glu Tyr Glu Val Arg Val Arg Ser Lys Gin '420 425 430

Arg Asn Ser Gly Asn Tyr Gly Giu Phe Ser Glu Vai Leu Tyr Vai 丁hr -16· 133627-序列表.doc 200918098 435 440 445 Leu Pro Gin Met Ser Gin Lys Leu Phe Glu 450 455

C

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L

Gly Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 195 200 205

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Ala Gly Glu Asn Ser Cys Tyr Phe Asn Ser Ser Phe Thr Ser lie Trp 305 310 315 320 -22- 133627-序列表.doc 200918098 lie Pro Tyr Cys lie Lys Leu Thr Ser Asn Gly Gly Thr Val Asp Glu 325 330 335

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Leu Asn 丁rp Thr Leu Leu Asn Vaj Ser Leu Thr Gly lie His Ala Asp 355 360 365 lie Gin Val Arg Trp Glu Ala Pro Arg Asn Ala Asp He Gin Lys Gly 370 375 380

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Leu Leu lie Gin Ser Trp Leu Glu Pro Va) Gin Phe Leu Arg Ser Val 85 90 95

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Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Asn Ala Asp Met Ser Arg Val Ser Thr Phe 165 170 175

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Leu Gin Ser Val Asn Pro Gly Leu Lys Thr Asn Ser Ser Lys Glu Pro 2】0 215 220

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Leu Phe Tyr 丁hr Arg Arg Asn Thr Gin Glu Trp Thr Gin Glu Trp Lys 260 265 270 -25- 133627-序列表.doc 200918098

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Ser Ser Phe Thr Ser lie Trp lie Pro Tyr Cys lie Lys Leu Thr Ser 290 295 300

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Gin Pro Asp Pro Pro lie Ala Leu Asn Trp rFhr Leu Leu Asn Val Scr 325 330 335

Leu Thr Gly lie His Ala Asp lie Gin Val Arg Trp Glu Ala Pro Arg 340 345 350

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Tyr Lys Glu Val Asn Glu Thr Lys Trp Lys Mel Met Asp Pro lie Leu 370 375 380

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Ser Glu Val Leu Tyr Va! 丁hr Leu Pro Gin Me! Ser G)n 420 425 <210> 25 <211> 484 <212> PRT <213>人工 <220> <223>生長激素融合蛋白 <400> 25

Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu ] 5 10 15

Cys Leu Pro Trp Leu Gin Glu (Hy Ser Ala Phe Pro Thr lie Pro Leu 20 25 30

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Claims

200918098 十、申請專利範圍： 1. 一種核酸分子’其包含一個選自以下之核酸序列. i) SEQ ID NO: 1中所表示之核酸序列； ii) SEQ ID NO:2中所表示之核酸序列； iii) SEQ ID NO:4中所表示之核酸序列； iv) SEQ ID NO:5中所表示之核酸序列； v) SEQ IDNO:7中所表示之核酸序列； vi) SEQ ID NO:8中所表示之核酸序列； vii> SEQ IDNO:10中所表示之核酸序列； viii) SEQ ID ΝΟ:11中所表示之核酸序列； lx) SEQ ID NO: 13中所表示之核酸序列； X) SEQ ID NO: 14中所表示之核酸序列； xi) SEQ ID NO:16中所表示之核酸序列； xii) SEQ ID NO:17中所表示之核酸序列； xiii) SEQ ID NO:19中所表示之核酸序列； xiv) SEQ ID NO:20中所表示之核酸序列； ^ xv) SEQ ID NO:22中所表示之核酸序列； xvi) SEQIDNO:23中所表示之核酸序列； xvii) 包含在嚴格雜交條件下與SEQ ID NO: 1、2、4、 5、7、8、，10、11、13、14、16、17、19、2〇、 22或23雜父且編碼具有生長激素受體拮抗劑活性之多狀之核酸序列的核酸分子。 2. 如請求項1之核酸分子，其中該核酸分子包含SEq出 Ν Ο · 1中所表示之核酸序列或由其組成。 133627.doc 200918098 3.如請求項1之核酸分子，其中該核酸分子勵2中所表示之核酸序列或由其組成。如月求項1之核酸分子，其中該核酸分子 N〇:4中所表示之核酸序列或由其組成。 5·如請求項1之核酸分子’其中該核酸分子 N〇:5中所表示之核酸序列或由其組成。 6·如明求項1之核酸分子’其中該核酸分子 N〇:7中所表示之核酸序列或由其組成。 7·如明求項！之核酸分子，其中該核酸分子勵8中所表示之核酸序列或由其組成。月长項1之核酸分子’其中該核酸分子 N〇:1〇中所表示之核酸序列或由其組成。 9.如請求項1之核酸分子，其中該核酸分子 N0:11中所表示之核酸序列或由其組成。 1〇·如請求項1之核酸分子，其中該核酸分子 N〇:13中所表示之核酸序列或由其組成。 U.如請求項1之核酸分子，其中該核酸分子 N0:14中所表示之核酸序列或由其組成。 12_如請求項1之核酸分子，其中該核酸分子 NO·16中所表示之核酸序列或由其組成。 13. 如請求項1之核酸分子，其中該核酸分子 NO·17中所表示之核酸序列或由其組成。 14. 如請求項1之核酸分子，其中該核酸分子 N〇.19中所表示之核酸序列或由其組成。包含SEQ ID 包含SEQ ID 包含SEQ ID 包含SEQ ID 包含SEQ ID 包含SEQ ID 包含SEQ ID 包含SEQ ID 包含SEQ ID 包含SEQ ID 包含SEQ ID 包含SEQ ID 133627.doc 200918098 15. 如請求項丨之核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ NO:20中所表示之核酸序列或由其組成。 16. 如請求項上之核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ Ν0.22中所表示之核酸序列或由其組成。 17. 如請求項丄之核酸分子，其中該核酸分子包含SEQ NO:23中所表示之核酸序列或由其組成。 1 8. —種多肽’其係由如請求項1至17中任一項之核® 碼。 19. 一種多肽’其包含一個選自以下之胺基酸序列： i) SEQ IDNO:3中所表示之胺基酸序列； ii) SEQ ID NO:6中所表示之胺基酸序列； iii) SEQ ID NO:9中所表示之胺基酸序列； iv) SEQ ID NO: 12中所表示之胺基酸序列； v) SEQ ID NO: 15中所表示之胺基酸序列； vi) SEQ ID NO:18中所表示之胺基酸序列； vii) SEQ ID NO:21中所表示之胺基酸序列； viii) SEQ ID NO:24中所表示之胺基酸序列； ix) SEQ ID NO:25中所表示之胺基酸序列； X) SEQ ID NO:26中所表示之胺基酸序列； xi) SEQ ID NO:27中所表示之胺基酸序列； xii) SEQ ID NO:28中所表示之胺基酸序列； xiii) SEQ ID NO:29中所表示之胺基酸序列； xiv) SEQ ID NO:30中所表示之胺基酸序列； xv) SEQ ID NO:31中所表示之胺基酸序列； 133627.doc ID ID ID 編 200918098 xvl) SEQ ID NO:32中所表示之胺基酸序列；其中該多肽具有生長激素受體拮抗劑活性。 20. 如吻求項19之多肽，其中該多肽包含SEQ m N〇:3中所表示之胺基酸序列或由其組成。 21. 如明求項19之多肽，其中該多肽包含①j中所表不之胺基酸序列或由其組成。 22. 如明求項19之多肽，其中該多肽包含seq 中所表示之胺基酸序列或由其組成。 23_如β求項19之多肽，其中該多肽包含seq n〇:i2中所表示之胺基酸序列或由其組成。 24·如咕求項19之夕肽，其中該多肽包含seq Μ中所表示之胺基酸序列或由其組成。 25. 如明求項19之夕肽，其中該多肽包含SEq ι〇 N〇:i8中所表示之胺基酸序列或由其組成。 26. 如《月求項19之多肽，其中該多肽包含SEq 中所表示之胺基酸序列或由其組成。 27. 如明求項19之夕肽，其中該多肽包含SEq ι〇中所表示之胺基酸序列或由其組成。 28. 如。月求項19之夕肽，其中該多肽包含SEq出中所表示之胺基酸序列或由其組成。 29. 如請求項19之多肽，其中該多肽包含seq 1〇 n〇:26中所表示之胺基酸序列或由其組成。 30. 如δ月求項19之多肽，其中該多肽包含SEQ ι〇中所表示之胺基酸序列或由其組成。 133627.doc 200918098 31·如睛求項19之多肽，其中該多肽包含SEQ ID N〇:28中所表示之胺基酸序列或由其組成。 32. 如叫求項ρ之多肽，其中該多肽包含SEq ι〇 Ν〇:29中所表示之胺基酸序列或由其組成。 33. 如明求項w之多肽，其中該多肽包含SEq 中所表示之胺基酸序列或由其組成。 34. 如請求項19之多肽’其中該多肽包含seq ι〇 ν〇3ι中所表示之胺基酸序列或由其組成。 35. 士:求項19之多肽，其中該多肽包含卿①中所表示之胺基酸序列或由其組成。 36. —種同元二聚體（h〇 otiimer)，其包含兩個包含以下序列或由以下序列組成吝乂〈夕肽.SEQ ID NO:3 ;或 SEQ ID NO:6 ; SEQ ID NO.Q · cca τ。、 .’ SEQ ID N〇:i2 ; SEQ ID NO:15 ; SEQ ID N〇:i8 ； ^ SFn m , - Q ID NO:2l ;或 SEq ID N〇:24 ;戋 SEQ ID N〇：25:^seq id no：26:^seq id n〇：27; SBOm N〇：28；SEQ ID N〇：29；«BQ ID NO:30；^ N0·31 ;或 SEQ ID 耻32。 37. —種載體，其包主子。如明未項1至17中任一項之核酸分 3 8. —種細胞，发役，、，或如請求扣〜如請求項1至17中任—項之核酸分子 ^員37之載體轉染或轉型。 39. —種醫藥組合物，，、I 3如請求項1 8至3 5中任一項之多肽或如請求項3 6 Η 70二聚體，包括賦形劑或載劑。 40. 如凊求項39之纟且入、Q物’其中該組合物係與另一種治療劑 133627.doc 200918098 組合。 41 一種如請求項1 8至35中任一項之多肽或如請求項％之同元二聚體的用途，其係用於製備治療患有生長激素過量之人類個體之藥劑。 42.如請求項41之用途，其中該多肽係經靜脈内投與。 43·如請求項41之用途，其中該多肽係皮下投與。日投 44.如請求項41至43中任-項之用途，其中該多肽係每與或每隔兩日投與。

45.如請求項41至43中任一項之用途週投與。其中該多肽係每隔一其中該多肽係每隔2 其中該多肽係每隔一其中該生長激素過量其中該生長激素過量 46. 如請求項41至43中任一項之用途週投與。 47. 如請求項41至43中任一項之用途月投與。 48. 如請求項41至43中任一項之用途

導致肢端肥大症。 49. 如請求項41至43中任一項之用途導致巨人症。 50. —種如請求項18至35令任— 之人類個員之夕肽或如請求項36之同一體的用途’其係用於製備治療患有癌症體之藥劑。 51.如請求項5〇之用途其中癌症為前列腺癌。 133627.doc