TW200916578A - Rose comprising flavone and process for the preparation thereof - Google Patents

Description

200916578 九、發明說明： I：發明所Λ之技術領域：！ 技術領域 本發明係有關於一種人為使之含有黃酮（flavone)之玫 5 瑰(a rose)。本發明亦有關於一種藉由因藉基因操作含黃酮 而產生的共色效果(co-pigmentation effect)來改變玫瑰花色 的方法’特別是有關於一種使花色往藍色方向變化的方法。 背景技術 10 花是植物的生殖器官，且是生產成為下一世代之種子 所必需的。為了形成種子，花粉必需附著於雌蕊並受精。 一般花粉的搬運是藉由蜜蜂或蝴蝶等昆蟲、蜂鳥、或是蝙 蝠來進行。花瓣的作用是吸引搬運花粉的該等生物，植物 為此在花的顏色、外形、模樣等上費盡了功夫。 15 彳b的顏色在鑑賞時亦是花卉最重要的性狀，故自古以 來藉由交配而育種出各種顏色的花。然而，一種植物種的 化具有各種顏色的情形很少見，例如，藉由交配製作出的 玫瑰（rose(Rosa hybrida))、康乃馨（carnation(Dianthus caryophyllus))、菊花（chrysanthemum(chrysanthemum 2〇 morifolium)) '百合(niy(Lilium spp·))等並沒有紫色到藍色 的品種’花菖蒲（Japanese garden iris(Iris ensata thumb.))或 龍膽（gentian(Gentiana triflora))並沒有鮮紅色的品種。 花色當中，淡黃色到紅色、藍色多半源自類黃酮 (flavonoid)及花青苷（anth〇cyanin)(屬於類黃明的有色配糖 5 200916578 體）。類黃酮是植物的代表性次級代謝物，如以下所示，具 有C6C3C6之基本骨架，且是由苯丙胺酸與丙二醯輔酶A所 合成。根據C環的氧化狀態，被分類為黃酮、黃酮醇(似賴〇1) 等0

COS*CoA

3x丙二醯輔酶A H〇n^v/〇H

黃酮醇

香豆酿輔酶A

L w -— CHS 2、4，，W四經查辦 AS |CHI *

oh 〇 FNS 柚配質

〇« FLS\ |F3H OH \ 丨j H〇>

、0H F3'H 了丫、oh F31 nH n二氫槲皮素 0H n二氫番鬱金 |DFR 各 DFR |ans |ans OH 〇 黃酮 花青素

OH矢車菊素

二氫楊梅皮黃素 OH飛燕草素

3，GT 5GT AT 3RAT MT 200916578

OH 〇

番鬱金黃素 0Η

懈皮素

葉黃酮

0H

OH OH 楊梅皮黃素

五經黃酮 黃酮 黃酮醇 類黃酮會吸收紫外線、除去自由基，故被認為原本就 具有從各種應力保護植物體的機能。又，作為有益健康的 15 成分’近年來亦受到關注（參照Harborne and Williams 2000

Phytochemistry 55, 481-504) ° 有色的花青苷目前已知有數百分子物種，但如下述所 示’其發色團之花青素(anthocyanidin)中，（1)多半存在於橙 色到紅色的花的天竺葵素(pelargonidin) ; (2)多半存在於紅 2〇 色到鮮紅色的花的矢車菊素（cyanidin)及芍藥素 (peonidin);以及(3)多半存在於紫色到藍色的花的飛燕草 素、矮牵牛素(petunidin)及錦葵色素(maividin)這6種係一般 常見的。 200916578

矢車菊素 芍藥素

飛燕草素 矮牽牛素 錦葵色素 1〇 花青苷的結構會對其顏色產生很大的影響。一旦花青 苷之B環的氫氧基數增加，則藍色度會增加。因此，飛燕草 素型花青苷比天竺葵素型花青苷、矢車菊素型花青苷要 藍。含花青苷之類黃酮的生物合成跨越了植物種且可良好 保存。類黃酮在細胞質進行生物合成，並附加糖或醯基後， 15 會往液泡輸送並蓄積（參照Tanaka et al. 2005 Plant Cell, Tissue and Organ Culture 80, 1-24、及Tanaka and Brugliera 2006 Ainsworth 篇、Flowering and its manipulation ' pp.201-239, Blackwell Publishing Ltd·)。 關於生物合成的酶的結構基因均已選殖。只要能製作 2〇 出基因重組植物，即可藉由人為調整該等基因的表現來改 變蓄積在花中的類黃酮的結構及量，進而改變花色（參照 Tanaka et al. 2005 Plant Cell, Tissue and Organ Culture 80, 1-24、及Tanaka and Brugliera 2006 Ainsworth篇、Flowering and its manipulation、pp.201-239, Blackwell Publishing 200916578

Ltd.)。例如’於無法在花瓣中生產飛燕草素之康乃馨或玫 瑰中，使合成飛燕草素所必需之類黃酮3，,5，_氫氧化酶（以下 簡稱為「F3’5’H」）基因表現，藉此生產飛燕草素而製作出 自然界所沒有的藍色A朵（參照Tanaka 2006 Phytochemistry 5 Reviews 5, 283-291) 〇 如前述’人為改變植物之代謝的方法有時被稱為代謝 工程。為了改變代謝，並使目標物質蓄積，只要使生產目 標物質的酶基因在基因重組植物中表現即可，但也經常會 因與植物本身具有的内在酶之競爭，使得目標物質的蓄積 10完全或幾乎不會產生，而無法具有在產業上有用的性狀。 例如，倭牽牛(Petuina hybrida)因其二氫黃酮醇還原酶 (以下簡稱為「DFR」）的專一性而無法蓄積天竺葵素，因此， 撥色花色的品種不存在於自然界。 雖已有藉由導入玫瑰等的DFR基因使天竺葵素蓄積的 15橙色矮牽牛被報導出來，但是為了使天竺葵素蓄積，必需 使用欠缺與DFR競爭的類黃酮3 氫氧化酶（以下簡稱為 「F3’H」）、F3’5’H、黃酮醇合成酶（以下簡稱為「fls」） 的基因的矮牵牛品種，即使將玫瑰的DFR基因導入未欠缺 該等基因的矮牽牛’亦無法確認表現型的變化（參照Tanaka 20 and Brugliera 2006 Ainsworth 篇 ' Flowering and its manipulation、pp_201-239，Blackwell Publishing Ltd·)。因 此，無法預測光只是導入目標基因是否可蓄積目標化合物 並展現出表現型。 此外，在代謝工程中也常會出現預測外的結果。例如， 200916578 在夏菫（Torenia hybrida)中抑制黃酮合成酶基因表現的情況 下，黃S同量會減少，並可看出黃烧酮(flavanone)的蓄積。黃 烷酮蓄積的話，花青苷量應會增加才對，但實際上連花青 苦量亦減少（Ueyama et al· Plant Science, 163，253-263, 5 2002)。如前述，要預測代謝物的增減是困難的，為了得到 目標表現型，必需得積極下工夫。 又，一旦鍵結之芳香族醯基的數量增加，則花青皆會 因分子内共色作用而變藍。具有2個以上芳香族醯基的花青 苷被稱為聚醯化花青苷，會呈現穩定的藍色（參照Harb〇rne 10 and Williams 2000 phytochemistry 55, 481-504)。 化色除了藉由必需色素之花青苦色素本身的結構以 外’亦會藉由共存之類黃酮（亦稱為輔色素）或金屬離子、液 泡的pH等而改變。例如，黃酮或黃酮醇為代表性輔色素， 藉由與花青苷堆積成夾層狀，而具有使花青苷看起來呈深 15 藍色的效果（參照Goto (1987) Prog. Chem. 0rg Natl Pr〇d 52)。以該點來看，黃酮可說是無色的輔助色素成分。例如， 黃酮之一種的異蔓荊素(isovitexin)在花菖蒲中會對於花青 苷發揮共色效果，使顏色變藍。又，亦顯示有異蔓荊素會 因花青苷穩定化而使花菖蒲的花色穩定化（參照Yabuya以 2〇 al. Euphytica 2000 115, 1-5)。 又’黃酮常會顯示出比黃酮醇強的共色效果。例如， 基因重組康乃馨的解析中，顯示出黃_的共色效果比黃嗣 醇強（參照Fukui et al. Phytochemistry，63, 15-23 2003)。因 此，為了使花色變藍，黃酮的蓄積是重要的。然而，並非 200916578 所有的植物都能生產黃酮，玫瑰或矮牽牛等不會蓄積黃酮 一事已為人所知。又，黃酮除了花色以外，亦參與紫外線 之吸收、各種應力、與其他微生物之相互作用等，且可藉 由使黃酮合成而得到具有新穎性狀的植物一事亦已為人所 5 知。（關於編碼黃酮合成酶之基因的專利文獻，可參照特開 2000-279182)。然而，使黃酮在玫瑰中表現的例子尚未為人 所知。 黃酮係藉由催化黃酮合成酶的反應而由黃烧酮所合 成。亦即，洋元荽黃素(apigenin)係由柚配質（naringenin)、 10 葉黃酮(luteolin)係由聖草酚(eriodictyol)、五羥黃酮(tricetin) 係由五經黃烧酮所合成。黃_合成酶有黃嗣合成酶I及黃ig 合成酶112種。兩者雖會催化相同反應，但係不同種類的酶。 黃剩合成酶I係2-側氧戊二酸依賴性二氧酶（參照Britsch et al. (1981) Z.Naturforsch 36c pp. 742-750、及Britsch (1990) 15 Arch. Biochem. Biophys.282pp. 152-160)的 1種，而黃_合成 酶II係細胞色素P450型的單氧酶。黃酮合成酶11的結構基因 可從夏莖、金魚草、紫蘇（Perilla frutescens)、非洲菊 (gerbera(Gerbera hybrida))、龍膽等取得（參照 Tanaka and Brugliera 2006 Ainsworth 篇、Flowering and its 20 manipulation、pp.201-239, Blackwell Publishing Ltd.)。 預測一旦使黃酮合成酶基因在不生產黃酮的基因重組 植物中表現，則可合成黃酮。然而，亦有使夏蓳的黃酮合 成酶基因在矮牽牛中表現的情況下，深藍紫色的花色變淡 的報告（Tsuda et al. Plant Biotechnology, 21，377-386, ll 200916578 4)又，亦有使源自龍膽之黃酮合成酶在煙草表現的情 況下’雖合成黃酮’但花色仍舊變淡的報告(Nakatsuka et al · 2006. Molecular Breeding 17 : 9199)。如前述即使合成黃 嗣，花色也未必會變藍。換言之，未顯示出共色效果的原 5因可舉，花青苦與黃酮的量或比例不適當、或花青普與黃 酮的經糖或醯基之修飾不適當等。從該等結果暗示，光只 是使黃酮合成酶基因表現且蓄積黃酮，並無法將花色變得 更藍。 玫瑰是最具人氣的花卉植物，有紀錄指出從紀元前就 10已開始栽培。又，歷經數百年進行人為的品種改良。其結 果，得到含天竺葵素、矢車菊素、黃酮醇等類黃酮的玫瑰。 又，近年來亦使用基因重組方法來作出可生產天然玫瑰所 沒有的飛燕草素的玫瑰。然而，可蓄積黃酮的玫瑰，不管 是藉由交配還是藉由基因重組，都尚未能取得。 15 【發明内容】 發明揭示 於植物的品種改良使用基因重組方法的最大優點係， 與經父配之品種改良不同，可利用無法進行交配的植物或 其他生物的基因來改良植物。亦即，一旦使用基因重組方 2〇 法，則可將他種生物的任意基因導入例如玫瑰等任意植 物，賦予該植物新的能力。然而，玫瑰與擬南芬(Arabidopsis thaliana)或煙草（tobacco(Nicotiana tabacum L.))等模式植物 不同，導入之基因是否會發揮機能相當依賴於該基因的來 源或使用之啟動子一事已為人所知。 12 200916578 根據W02005则47,將類黃㈣，，5，_m (F3,5，H)導人玫瑰時，在基因重組玫瑰_，雖未表_ _ 牽牛或龍膽之相同基目，且絲檢測錢燕草素，但令人 深感興趣的是表現出源自三色蓳之相同基因， 瑰生產飛料素賴能力。麟果赫丨，料輕易㈣ 該將源自何種植物種之基因導人玫魂才可發揮機^ a又’即使可在《中導人某種基因，但要^該基因 疋否忐在菊花中發揮機能是困難的，又，導 <基因會因 10 15 20 基因重組菊花的成長而不發揮機能一事已為人所知。在基 因重組植物中常被使驗異種基因之轉錄的花椰菜嵌紋病 毒说啟動子，在龍膽巾;^會發揮魏―事亦已被報導出來 (參照Mishibaet al. Plant Journal 2〇〇5, 44 : 541_556)。 為了使在玫瑰中合成，只要使黃酮合成酶基因表 現即3 —事雖可輕易推斷，但對於是使二氧酶型及細胞色 素P450型中任一種的黃酮合成酶表現較好，還是使何種植 物來源的黃酮合成酶基因表現較好等，並無法輕易推斷， 故需嘗試錯誤。又，共色效果係將花料與黃喊黃_醇 以—定濃度共存於液泡中即會產生的現象，但相對於發色 源之花青㈣配糖化等修飾狀態，成為輔色素的黃剩或黃 酮醇必需接受更適合的配糖化等修飾—事亦已很明確（參 照Nature· 2005 Aug U ; 436(7052) : 791、及灿_，吻， 515-518(1992))。 ’ 亦即，為了表現必要色調，花青芽與黃酮、黃酮醇必 需採結構上最適當的組合’ x，針對該如何使經修飾之花 13 200916578 青苷與黃酮、黃酮醇共存較好這一點，亦需要嘗試錯誤。 此外，即使黃酮合成酶在玫瑰中發揮機能，天然玫魂中， 柚配質等黃烷酮會因黃烷酮3-氫氧化酶（以下簡稱為「F3Hj) 而迅速氫氧化’故不一定要從黃烷酮合成黃酮。 5 因此’本發明係提供一種用以在玫瑰表現目標色調而 含適當色素的玫瑰者。 為解決4述課題’本發明人進行各種討論，結果發現 藉由使玫瑰人為含有黃酮可表現目標色調，而完成本發明。 具體而言，本發明係下述所示者： 10 1·一種玫瑰，係藉由基因重組方法含黃酮者。 2. 如前述第1項之玫瑰，其中前述黃酮係藉由表現所導 入之黃酮合成酶基因而生成者。 3. 如前述第2項之玫瑰，其中前述黃酮合成酶基因係源 自玄參科之黃酮合成酶基因。 15 4.如前述第3項之玫瑰，其中前述源自玄參科之黃酮合 成酶基因係源自玄參科金魚草（Scrophulariaceae, Antirrhinum majus)之黃酮合成酶基因。 5. 如前述第3項之玫瑰，其中前述源自玄參科之黃酮合 成酶基因係源自玄參科夏堇（Scrophulariaceae，Torenia 20 hybrida)之黃酮合成酶基因。 6. 如前述第4項之玫瑰，其中前述源自玄參科金魚草之 黃酮合成酶基因係編碼： (1) 具有記載於序列編號2之胺基酸序列的黃酮合成酶； (2) 具有在記载於序列編號2之胺基酸序列中，藉由1個〜 14 200916578 數個胺基酸的附加、欠缺及/或以其他胺基酸取代所修都之 胺基酸序列的黃酮合成酶； (3)具有相對於記載於序列編號2之胺基酸序列，具 以上之序列相同性之胺基酸序列的黃酮合成酶；及 5 (4)藉由與具有序列編號1所示之鹼基序列的核酸在言 嚴苛條件下雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶， 中任一者的基因。 7. 如前述第5項之玫瑰，其中前述源自玄參科夏堇之$ 酮合成酶基因係編碼： 、 10 (1)具有記载於序列編號4之胺基酸序列的黃酿I合成酶. (2) 具有在記載於序列編號4之胺基酸序列中，藉由^固 數個胺基酸的附加、欠缺及/或以其他胺基酸取代所修飾之 胺基酸序列的黃酮合成酶； (3) 具有相對於記載於序列編號4之胺基酸序列，具9〇〇/ 15以上之序列相同性之胺基酸序列的黃酮合成酶；及 (4) 藉由與具有序列編號3所示之鹼基序列的核酸在高 嚴苛條件下雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶， 中任一者的基因。 8. 如刖述第2〜7項中任一項之玫瑰，其中相較於導入次 2〇 _合成因f的宿主，其花色有產生變化。 汽 9. 如刚述第8項之玫瑰，其中前述花色的變化係朝向駐 色的變化。 10. 如刖述第8項之玫瑰，其中前述花色的變化係乙％ 表色系色度圖中的色相角度⑻接近藍色方向轴之270 15 200916578 變化。 11.如别述第8項之玫魂，其中前述花色的變化係花瓣的 反射光譜極小值往長波長側移動的變化。 ^丨2.種玫魂的部分、子孫、組織、營養增殖體或細胞， 係/、有與刖述第i〜u項中任—項之玫瑰相同性質者。 13. 種方法，係藉由共色效果改變玫瑰花色，且該共 色效果係因藉基因重組方法含黃酮而產生。 14. 如則述第13項之方法，其中前述共色效果係使花色 往藍色方向變化的效果。 10 【實施方式】 實施發明之最佳態樣 用語定義· 所謂用語「玫瑰」，在本說明書中使用時，係指玫瑰目 玫瑰科玫瑰屬（Order，R0sales，Family，肋繼狀， 15 Rosa)的落葉灌木之鑑賞用植物的總稱，不意圖受限於特定 品種，又，意指植物全體或一般含有花的部分。 所兩用5吾「玫瑰」的「部分、子孫、組織、營養增殖 體或細胞」，在本說明書中使用時，係指在保持有關於本發 明之「玫瑰」的期望遺傳性狀的範圍内，所有源自該「玫 2〇 瑰」之物，不意圖受限於特定者。 所謂用語「高嚴苛條件」’在本說明書中使用時，係指 例如’在含有6xSSC(lxSSC的組成：〇·15Μ Naa、〇 〇15M才宜 檬酉夂納、卩117.0)、0.5%808、5)<丹哈特溶液、1〇〇"吕/爪1改 質斷片化鮭魚精子DNA、50%甲醯胺的溶液中，將反義鏈 16 200916578 與對象之核酸以55t保溫—晚後，在Q l><ssc等條件及域 60t以上等條件下進行清洗的條件’特別係指使非專一 性背景信號大致不存在的條件。 所謂用語「L*a*b表色系色度圖中的色相角度⑷」，在 5本說明書中使㈣，係指1976年、_際照明委員會(_規 格化，且在日本亦作為順729而採用之色相角度⑻，〇。 為紅色方向；9G。為黃色方向；刚。為綠色方向；謂。 為藍色方向。另外’花色可併用此種色相角度及刪(英國 皇家園藝協會）的色圖資料來表示。 10 導入黃酮合成基因 15 20 以習知方法將源自紫蘇之黃嗣合成前之基因連同源 自三色莖之F3’5，H基因等-起導人玫現。其結果在導入 有源自紫蘇之黃酮合成酶U之基因的玫塊中未檢測出黃 酮，表示該基因在玫瑰中不會發揮機能。另一方面，在導 入有源自夏莖或金魚草之黃酮合成咖之基因的玫塊中檢 測出黃酮，故可知該基因在玫魂中會發揮機能。 如此-來，可作出以往不存在之蓄積黃晴玫瑰。總 咖中的黃酮含_可為1%以上，且以5%以上為佳， 而以1〇%以上為更佳，並以3〇%以上為最佳。蓄積花青賴 黃酮兩者麟瑰’找僅含花料的_魏，相對地呈 藍色，故可知黃蓄積對料藍色化之新穎性狀有貢獻。 又’透過雜交實驗可知，該性狀亦會傳遞給子孫。 典型地’與本發明相關之酶類係具有序列表所記載之 特定胺基酸序列的細。然而，在酶中 不僅限於例如天生 17 200916578 的特定胺基酸序列，即使在參與酶

兴輙活性之領域以外的領域 望之酶活性一事已為人所熟 不之特定胺 的附加、欠缺及/或以 ，並具有維持原本的 ‘所示之特定胺基酸序 基酸序列，具有藉由！個〜數個胺基、 其他胺基酸取代所修叙胺基酸相，並呈

本的酶活性的蛋白質亦包含於本發明的酶中。' 件下二=_碼某種酶的基因的話，在高嚴苛條 件下對祕^的核酸，會編碼具有與賴相同活性的 酶的絲率很高。因此，藉由與具有蚊㈣編號所干之 驗基序列的賴在高嚴苛條件下雜交的倾所編碼，且具 有目標酶活性的酶亦包含於本發明的酶中。 /、 因此，參與本發明的酶基因可舉下述者。 (A)源自金魚草之黃酮合成酶基因 係編碼： (1) 具有記載於序列編號2之胺基酸序列的黃_合成酶； (2) 具有在記载於序列編號2之胺基酸序列中，藉由1個〜 數個胺基酸的附加、欠缺及/或以其他胺基酸取代所修飾之 20胺基酸序列的黃ig合成酶； (3) 具有相對於記載於序列編號2之胺基酸序列，具9〇% 以上之序列相同性之胺基酸序列的黃酮合成酶；及 (4) 藉由與具有序列編號丨所示之鹼基序列的核酸在高 嚴苛條件下雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶， 18 200916578 中任一者的基因。 (B)源自夏11之黃_合成酶基因 係編碼： (1) 具有s己栽於序列編號4之胺基酸序列的黃_合成酶· (2) 具有在記戴於序列編號4之胺基酸序列中，藉由1個’ 數個胺基酸的附加、欠缺及/或以其他胺紐取代所修飾 胺基酸序列的黃綱合成酶； (3) 具有相對於記載於序列編號4之胺基酸序列，具9〇〇/ 以上之序列相同性之胺基酸序列的黃酮合成酶；及 〇 (4) 藉由與具有序列編號3所示之鹼基序列的核峻在言 嚴苛條件下雜乂的核酸所編碼的黃酮合成酶， 中任一者的基因。 (C)源自紫蘇之黃酮合成酶基因 係編碼· 15 (1) 具有記裁於序列編號6之胺基酸序列的黃_合成陶 (2) 具有在記載於序列編號6之胺基酸序列中，轉由1個 數個胺基酸的附加、欠缺及/或以其他胺基酸取代所佟飾 胺基酸序列的黃酮合成酶； 20 (3) 具有相對於記載於序列編號6之胺基酸序列，具％。 以上之序列相同性之胺基酸序列的黃酮合成酶；及 (4) 藉由與具有序列編號5所示之鹼基序列的核峻在言 嚴苛條件下雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶， 中任一者的基因。 (D)源自三色蓳之3，,5，-氫氧化酶基因 19 200916578 係編碼： (1) 具有記裁於序列編號8之胺基酸序列的3，，5，_氫氧化 酶； (2) 具有在記载於序列編號8之胺基酸序列中，藉由1個〜 5數個胺基酸的附加、欠缺及/或以其他胺基酸取代所修飾之 胺基酸序列的3，，5'氫氧化酶； (3) 具有相對於記載於序列編號8之胺基酸序列，具90% 以上之序列相同性之胺基酸序列的3，,5，—氩氧化酶；及 (4) 藉由與具有序列編號7所示之鹼基序列的核酸在高 10嚴苛條件下雜交的核酸所編碼的3，，5，-氫氧化酶， 中任一者的基因。 (E)源自夏堇之甲基轉移酶基因 係編碼： (1) 具有記載於序列編號1〇之胺基酸序列的甲基轉移 15 酶； (2) 具有在記載於序列編號10之胺基酸序列中，藉由1 個〜數個胺基酸的附加、欠缺及/或以其他胺基酸取代所修 飾之胺基酸序列的曱基轉移酶； (3) 具有相對於記載於序列編號10之胺基酸序列，具 20 90%以上之序列相同性之胺基酸序列的甲基轉移酶；及 (4) 藉由與具有序列編號9所示之鹼基序列的核酸在高 嚴苛條件下雜交的核酸所編碼的曱基轉移酶， 中任一者的基因。 20 200916578 實施例 藉由以下實施例更具體的說明本發明。本實施例僅用 以舉例說明本發明，不意圖解釋成限定本發明之範圍者。 貫把例1 .模擬針對花青苷之黃酮的共色效果 5 為進行模擬針對花青苷之黃酮的共色效果，首先調製 出乾青苷類。矢車菊苷（Cyanin)是從玫塊品種“羅德玫 瑰（rosecv. “RoteR〇se”）的花瓣抽出並精製而成的。飛 燕草苷(Delphin)是將從馬鞭草品種“美女櫻，，（vberbenacv Tapien Violet 〇r verbena variety Sumaref TP-V(Tapien 1〇 Vl〇let))( Tapien是一種日本的註冊商標）的花瓣抽出的 色素鹼水解後精製而成的。錦葵苷(Malvin)、及葉黃酮7_〇_ 葡萄糖苷是從FUNAKOSHI株式會社買進的。 在PH5.0的緩衝液中，對依前述調製之各種花青苷以 "1 2 4 ¥量的莫耳濃度比添加黃酮（葉黃酮7_〇_葡萄糖 15苷）’並測定吸收光譜。花青苷使用的是矢車菊苷（矢車菊素 3,5_雙葡萄糖苷）、飛燕草苷（飛燕草素3,5_雙葡萄糖苷/ 錦葵苷(錦葵色素3,5_雙葡萄糖苷）。花青苷的濃度係令矢 車菊苦、飛燕草苷、及錦葵苷為ImM。 如下述表1及表2所示，花青苷水溶液的吸光度會因普 2〇酮的添加而增多，其變化比例（吸光度比）以錦葵苷為最大。 又，吸收極大值（λ max)亦隨著黃酮的添加而往長波長側移 動。其變化比例以錦葵苷為最大，其次為飛燕草苷。此外， 在根據L*a*b表色系進行色彩值評估的情況下，會因黃_的 添加’而觀察到色彩呈藍色化’且彩度亦上升。該效果以 21 200916578 錦葵苷最為明顯。亦即，可知受到最多葉黃酮7-0-葡萄糖苷 的共色效果的是錦葵苷。 表1 添加黃酮時的花青苦水溶液的吸收極大值 5 ( λ max;單位nm) ~嗣添加量 花青苷 ^S—-S_____ 0 1當量 2當量 4當量 矢車菊苷 (矢車菊素3,5-雙葡萄糖苷） 522.5 540.5 546.0 545.0 飛燕草苷 (飛燕草素3,5-雙葡萄糖苷） 526.0 564.0 569.0 569.5 錦葵苷 (錦葵色素3,5-雙葡萄糖苷） 528.5 568.5 570.5 572.5 表2 λ max之相對於無添加黃酮時的吸光度比 —---_____^酮添加量 花青苷 S''·--- 0 1當量 2當量 4當量 矢車菊苷 (矢車菊素3,5-雙葡萄糖苷） 1.000 2.044 2.425 2.363 飛燕草苷 (飛燕草素3,5-雙葡萄糖苷） 1.000 2.917 4.248 4.798 錦葵苷 (錦葵色素3,5-雙葡萄糖苷） 1.000 5.194 7.775 9.219 10 實施例2(參考例）：將源自三色堇之F3’5’H#40基因與源自紫 蘇之黃麵I合成酶基因導入玫瑰品種“Lavande” 以Xbal消化特開2000-279182記載之含源自紫蘇之黃 酮合成酶基因的質體PYFS3後，使其末端平滑化，接著以 BamHI消化，即得到約1.8kb的紫蘇之黃酮合成酶基因斷 15 片。另一方面，以Xhol消化W02005/017147記載之pSPB906 後，使其末端平滑化，接著以BamHI消化。將前述紫蘇之 22 200916578 黃酮合成酶基因斷片插入該平滑末端與BamHI切斷部位之 間，即得到906-pYFS3。906-pYFS3係於E1235S啟動子與D8 終止子（均記載於W02005/017147)之間具有源自紫蘇之黃 酮合成酶基因者。 5 將於Ueyama等的報告(Ueyama et al. Plant Science, 163, 253-263, 2002)記載之pSPB176的BamHI與Sail部位，插入有 以BamHI與Xhol的部分消化而從W02005/017147記載之 PCGP1961切除的三色蓳F3’5’H#40基因斷片的質體作為 PSPB575。於該AscI部位插入以AscI消化前述906-pYFS3所 10 得到之約3.4kb的紫蘇之黃酮合成酶基因表現組合體。將所 得到之質體當中，使F3,5，H#40基因的表現組合體與紫蘇之 黃酮合成酶的表現組合體往相同方向連結的載體作為 PSPB1310。本質體於植物中結構性表現三色莖f3,5，H#40 基因與紫蘇之黃酮合成酶基因。 15 對藤色系玫瑰品種“ Lavande”（mauve rose variety “Lavande”）導入依前述製作之pSPB1310,即得到55個體 之轉形體。可確認進行色素分析之50個體當中的49個體有 飛燕草素蓄積’飛燕草素含有率最高達70%(平均26%)。然 而，完全未檢測出黃酮，故推測源自紫蘇之黃酮合成酶基 2〇 因未在玫瑰細胞中發揮機能。 代表性轉形體的分析值顯示於下述表3。 23 200916578 表3 植物 No. Del (%) 花青素 (mg/g) 黃_醇 (nig/g) 黃酮 (mg/g ) Del Cya Pel M 0 K Tri Lut Api Total 對照 0.0 0.000 0.078 0.000 0.000 0.451 0.078 0.000 0.000 0.000 0.000 1 70.3 6.105 0.045^ 0.000 0.253 0.152 0.017 0.000 0.000 0.000 0.000 2 67.1 0.098 0.048^ 0.000 0.379 0.291 0.026 0.000 0.000 0.000 0.000 3 50.7 0.060 0.058 0.000 0.326 0.289 0.013 0.000 0.000 0.000 0.000 4 60.6 6.050 0.033” 0.000 0.216 0.188 0.007 〇.〇〇〇 0.000 0.000 0.000 5 66.1 0.073 0.037 0.000 0.608 0.380 0.045 0.000 0.000 0.000 0.000 6 67.7 0.055 0.026 0.000 0.536 0.319 0.039 0.000 0.000 0.000 0.000 7 56.9 0.062 0.047 0.000 0.253 0.201 0.009 0.000 0.000 0.000 0.000 8 52.5 0.109 0.099 0.000 0.307 0.438 0.034 0.000 0.000 0.000 0.000 9 50.4 0.073 0.072 0.000 0.281 0.362 0.013 0.000 0.000 0.000 0.00Ό 10 61.9 0.085 0.052 0.000 0.228 0.192 0.008 0.000 0.000 0.000 0.000 對照：Lavande對照

Del :飛燕草素、Cya:矢車菊素、Pel :天竺葵素、Μ :楊梅皮黃素、 Q :槲皮素、Κ :番鬱金黃素、Tri :五羥黃酮、Lut :葉黃酮、Api : 5 洋元荽黃素

Del(%):總花青素中之飛燕草素比例 實施例3 :將源自三色蓳之F3’5’H#40基因與源自夏堇之黃 酮合成酶基因導入玫瑰品種“Lavande” 將於質體pBluescript II SK(-)的EcoRI與Xhol部位插入 10 有Akashi等的報告(Plant Cell Physiol 40, 1182-1186, 1999) 記載之源自夏堇之黃酮合成酶基因的質體作為pSPB426。以 ΚρηΙ消化後，使其末端平滑化，接著以BamHI消化，即得 到約1.7kb的源自夏蓳之黃酮合成酶基因斷片。另一方面， 以Xhol消化W02005/017147記載之pSPB906後，使其末端平 15滑化，接著以BamHI消化。將前述夏菫之黃酮合成酶基因 斷片插入該平滑末端與BamHI切斷部位之間，即得到 906-426。 將於Ueyama專的報告（ueyama et al. Plant Science, 163, 24 200916578 253-263, 2002)記載之pSPB176的BamHI與Sail部位，插入有 以BamHI與Xhol的部分消化而從W02005/017147記載之 PCGP1961切除的三色堇F3’5’H#40基因斷片的質體作為 pSPB575。於該AscI部位插入以AscI消化前述906-426所得 5到之約3_3kb的夏堇之黃酮合成酶基因表現組合體。將所得 到之質體當中’使F3,5，H#40基因的表現組合體與夏堇之黃 酮合成a«的表現組合體往相同方向連結的載體作為 pSPB1309。本質體於植物中結構性表現三色蓳ρ3,5，Η#4〇 基因與夏菫之黃酮合成酶基因。 10 15 酮 對藤色系玫瑰品種“Lavande”導入依前述製作之 P麵309，即得到50個體之轉形體。可確認進行色素分析 之38個體當巾的％個财舰Μ㈣，I料素含有率 最高達45%(平均12%)。另—方面，亦可確認，因源自夏堇 之黃基因起作用’而使35個體另行有黃嗣（葉黃 、洋元荽黃素）蓄積。黃酮她I 、 、 人… ）積Κ最高為新鮮花瓣重量ig中 含1.68mg的高含有量。 里ΐ 代表性轉形體的分析值顯示於 ‘下述表4

_酮醇 tt!g/g) — 黃網 (mg/ g ) K 、Tri Lut Api Total 、0.451 0.078 〇.〇〇〇 0.000 0.000 0.000 、〇·489 0.010 〇.〇〇〇 0.086 0.000 0.086 i).446 0.048 〇.〇〇〇 0.089 0.000 0.089 、〇.651 0.264 上000 0.020 0.000 0.020 i).359 0.027 ^000 1.684 0.000 1.684 i).203 0.009 υ.οοο 1.171 0.009 1.180 .0-121 0.012 〇.〇〇〇 0.997 0.007 1.003 i).ooo 0.029 J^ooo 1.153 0.008 1.161 i).205 0.000 〇.〇〇〇 1.642 0.010 1.652 J.223 0.006 〇.〇〇〇 0.785 0.000 0.785 ^.171 0.027 〇.〇〇〇 0.917 0.007 0.924 25 200916578 對照：Lavande對照

Del :飛燕草素、Cya :矢車菊素、Pel :天竺葵素、μ :楊梅皮黃素、 Q:槲皮素、Κ:番鬱金黃素、Tri:五羥黃酮、Lut:葉黃酮、Api : 洋元荽黃素 5 Del(°/〇):總花青素中之飛燕草素比例 實施例4 :將源自三色堇iF3,5，H#40基因與源自夏蓳之黃 酮合成酶基因導入玫瑰品種“WKS124” 對撥紅色系玫瑰品種“ WKS124”（salmon-pink rose 10 variety “WKS124”）導入實施例3記載之pSPB1309，即得 到40個體之轉形體。可確認進行色素分析之27個體當中的 26個體有飛燕草素蓄積，飛燕草素含有率最高達96%(平均 81%)。另—方面，亦可確認，因源自夏菫之黃酮合成酶基 因起作用，而使26個體另行有黃酮（五羥黃酮、葉黃酮、洋 15几荽黃素）蓄積。黃酮總量最高為新鮮花瓣重量lg中含 4.4lmg的高含有量。 代表性轉形體的分析值顯示於下述表5。

26 200916578 對照：WKS124對照

Del :飛燕草素、Cya :矢車菊素、pei :天竺葵素、μ :楊梅皮黃素、 Q :槲皮素、Κ :番鬱金黃素、Tri :五羥黃酮、Lut :葉黃酮、Api : 洋元荽黃素 5 Del(%):總花青素中之飛燕草素比例 實施例5:在玫塊品種“Lavande”中表現源自三色堇之 F3’5’H#40基因與源自金魚草之黃酮合成酶基因以及抑制 玫瑰内在性黃酮醇合成酶基因 將Tanaka專的報告（Encyclopedia of rose science vol. 1, pp.341-350, ISBN 0-12-227621-3)記載之可編碼玫瑰黃酮醇 合成酶基因的cDNA經質體載體pBluescript II SK-所選殖者 作為pRFLS。使用源自載體之多重選殖位置上游序列之反 置引子（AACAGCTATGACCATG)(序列編號11)、與附加玫 15 瑰之黃酮醇合成酶的cDNA序列中5’末端至約0.8kb下游的 序列及附加Hindlll辨識序列的RFLS-Hindlll引子 (GATCTTGTTAAGCTTGTTGTAGACATAC)(序列編號 12)，以pRFLS作為模板並依定法進行PCR。 藉由以Hindlll部分消化所得到之斷片，接著以SacI消 2〇 化，即得到源自玫瑰黃酮醇合成酶基因cDNA上游約0.85kb 之斷片。另一方面，以載體之多重選殖位置上的BamHI與 存在於黃酮醇合成酶cDNA内的Hindlll切斷pRFLS，即得到 源自玫瑰黃酮醇合成酶基因cDNA上游約0.6kb之斷片。將 源自玫瑰黃酮醇合成酶基因cDNA之該等約0.6kb之斷片及 27 200916578 約0.85kb之斷片插入以BamHI及SacI消化W02005/059141 記載之pSPB184所得到之BanHI/SacI部位，即得到 pSPB1402。 接著，以BamHI及Xhol從載體pBluescript II切除特開 5 2000-279182記載之源自金魚草之黃酮合成酶基因 ANFNS2，並使其連結至以BamHI及Xhol消化 W02005/017147記載之pSPB906所得到之啟動子與終止子 後，將其作為PSPB577。將於實施例2記載之pSPB575的AscI 部位插入有以AscI切斷pSPB577所得到之金魚草的黃酮合 10 成酶表現組合體斷片者作為pSPB908。 以AscI部分消化依前述所得到之pSPB908後，插入以 AscI消化pSPB 1402所得到之約3.5kb的源自玫瑰黃酮醇合 成酶cDNA之雙鏈RNA表現組合體於該處。所得到之質體 PSPB1403係使三色堇F3’5’H#40、金魚草FNS基因、玫瑰FLS 15 基因的雙鏈RNA表現組合體往相同方向連結的二位元載 體。本質體被設計成，於植物中結構性表現三色蓳 F3’5’H#40基因與金魚草黃酮合成酶基因，且藉由RNAi法 抑制内在性黃酮醇合成酶基因的表現。 對藤色系玫瑰品種“Lavande”導入pSPB1403,即得到 20 82個體之轉形體。可確認進行色素分析之82個體當中的64 個體有飛燕草素蓄積，飛燕草素含有率最高達72%(平均 19%)。另一方面，亦可確認，因源自金魚草之黃酮合成酶 基因起作用，而使70個體另行有黃酮（五羥黃酮、葉黃酮、 洋元荽黃素）蓄積。黃酮總量最高為新鮮花瓣重量lg中含 28 200916578 2.50mg的高含有量。 代表性轉形體的分析值顯示於下述表6。 表6 植物 No. Del (%) 花青素 (mg/g) 黃酮醇 (mg/g) 黃酮 (mg/g ) Del Cya Pel Μ 0 K Tri Lut Api Total 對照 0.0 0.000 0.078 0.000 0.000 0.451 0.078 0.000 0.000 0.000 0.000 1 63.4 0.028 0.016 0.000 0.000 0.000 0.000 1.533 0.410 0.013 1.956 2 71.7 0.040 0.016 0.000 0.000 0.000 0.000 1.121 0.318 0.009 1.447 3 62.3 0.060 0.031 0.005 0.722 0.128 0.032 1.350 0.333 0.119 1.802 4 35.1 0.007 0.013 0.000 0.000 0.000 0.052 0.093 1.018 0.021 1.132 5 18.7 0.006 0.027 0.000 0.000 0.000 0.011 0.170 0.680 0.021 0.872 6 18.0 0.005 0.021 0.000 0.000 0.258 0,004 0,232 0.774 0.018 1.023 7 41.3 0.023 0.033 0.000 0.000 0.178 0.004 0.847 0.343 0.010 1.201 8 26.1 0.011 0.030 0.000 0.000 0.115 0.012 0.279 0.563 0.019 0.861 9 23.3 0.003 0.011 0.000 0.094 0.065 0.003 0.912 0.106 0.005 1.024 10 43.6 0.022 0.029 0.000 0.000 0.055 0.003 2.200 0.292 0.012 2.504 對照：Lavande對照 5 Del :飛燕草素、Cya :矢車菊素、Pel :天竺葵素、Μ :楊梅皮黃素、 Q:槲皮素、Κ:番營金黃素、Tri:五經黃酮、Lut :葉黃酮、Api : 洋元荽黃素

Del(%):總花青素中之飛燕草素比例 10 實施例6 :在玫瑰品種“WKS124”中表現源自三色菫之 F3’5’H#40基因與源自金魚草之黃酮合成酶基因以及抑制 玫瑰内在性黃酮醇合成酶基因 對橙紅色系玫瑰品種“WKS124”導入實施例5記載之 PSPB1403，即得到20個體之轉形體。可確認進行色素分析 15 之20個體均有飛燕草素蓄積，飛燕草素含有率最高達 89%(平均55%)。另一方面，亦可確認，因源自金魚草之黃 酮合成酶基因起作用，而使20個體均另行有黃酮（葉黃酮、 洋元荽黃素）蓄積。黃酮總量最高為新鮮花瓣重量lg中含 29 200916578 1.26mg的高含有量。 代表性轉形體的分析值顯示於下述表7。 表7 植物 No. Del (%) 花青素 (mg/g) 黃_醇 (mg/g) 黃酮 _ (mg/g ) Del Cya Pel Μ Q Κ Tri Lut Api Total 對照 0.0 0.000 0.006 0.073 0.000 0.076 3.312 0.000 0.000 0.000 0.000 1 73.9 0.507 0.098 0.081 0.140 0.161 1.535 0.000 0.064 0.019 0.082 2 81.6 0.835 0.144 0.044 0.000 0.040 0.928 0.148 0.061 0.350 0.560 3 76.4 0.200 0.034 0.027 0.036 0.039 1.011 0.000 0.000 0.266 0.266 4 81.4 0.535 0.082 0.040 0.149 0.034 1.672 0.000 0.018 0.078 0.096 5 82.5 0.623 0.087 0.045 0.120 0.040 1.476 0.000 0.000 0.016 0.0Γ6 6 88.9 0.787 0.093 0.005 0.380 0.104 0.223 0.191 0.132 0.138 0.461 7 86.4 0.853 0.129 0.005 0.452 0.084 0.314 0.057 0.030 0.046 0.13^ 8 85.6 0.785 0.129 0.003 0.236 0.093 0.188 1.058 0.107 0.098 1.2 9 82.3 0.553 0.114 0.005 0.258 0.077 0.214 0.606 0.043 0.049 0.698 10 85.0 0.828 0.140 0.006 0.538 0.106 0.350 0.061 0.054 0.083 0.198 對照：WKS124對照 5 Del :飛燕草素、Cya:矢車菊素、Pel :天竺葵素、Μ :楊梅皮黃素、 Q:樹皮素、Κ:番鬱金黃素、Tri:五經黃酮、Lut :葉黃酮、Api : 洋元荽黃素

Del(%):總花青素中之飛燕草素比例 10 實施例7 :將源自三色堇之F3’5’H#40基因與源自夏堇之黃 酮合成酶基因以及源自夏堇之花青苷曱基轉移酶基因導入 玫瑰品種“WKS124” 藉由對實施例3記載之pSPB1309進行PacI處理，並切斷 存在於源自夏堇之黃酮合成酶表現組合體與源自三色堇之 15 F3’5’H#40基因表現組合體的連結部位附近（更嚴格來講， 係存在於黃酮合成酶表現組合體的D8終止子3’末端附近) 的PacI部位與載體之多重選殖位置内的PacI部位，來切除三 色菫F3’5’H#40基因表現組合體。 30 200916578 另一方面，以PacI切斷具有W02003-062428記載之夏堇 之甲基轉移酶基因表現組合體的二位元載體PSPB1530後’ 與甲基轉移酶基因表現組合體呈相同方向地插入前述三色 堇F3’5’H#40基因表現組合體於該處。將本質體作為 5 TMT-BP40。 另一方面，以AscI切斷pSPB1309後，切除夏蓳之黃酮 合成酶表現組合體。與該等表現組合體呈相同方向地插入 前述物於TMT-BP40的AscI部位後，將所得到之質體作為 PSFL535。本質體於植物中結構性表現三色堇F3’5，H#40基 10 因與夏菫之甲基轉移酶基因，以及夏菫之黃酮醇合成酶基 因。 對橙紅色系玫瑰品種“WKS124”導入依前迷所得到 之PSFL535，即得到173個體之轉形體。可確認進行花青素 分析之98個體之轉形體當中的88個體有錦葵色素（飛旌草 15素的3’位與5’位經甲基化的花青素）蓄積，且可藉由生成物 顯示出源自三色菫之F3,5，H#40基因與源自夏堇之花青普 甲基轉移酶基因有在玫瑰花瓣中發揮機能。另外，錦葵色 素含有率最高達84%(平均50%)。 另-方面，亦可確認，因源自夏蓳之黃嗣合成酶基因 20起作用，而使77個體另行有黃酮(五羥黃葉黃鲖、洋元 荽黃素）蓄積。黃酮總量最高為新鮮花瓣重量lg中含4 “mg 的高含有量。又，亦檢測出51個體經甲基化的五羥黃酮。 代表性轉形體的分析值顯示於下述表8。 31 25 200916578 表8 植物 No. Del* (%) Mai (%) 花青素 (mg/g) 黃酮醇 (mg/R) 黃酮 (mg/g) Del Cya Pet Pel Peo Mai M Q K Tri Lut Api 合計 對照 0.0 0.0 0.000 0.006 0.000 0.073 0.000 0.000 0.000 0.076 3.312 0.000 0.000 0.000 0.00 1 97.8 65.0 0.121 0.005 0.079 0.000 0.009 0.397 0.331 0.000 0.000 2.273 0.623 0.207 3.103 2 96.9 81.3 0.048 0.005 0.048 0.000 0.014 0.500 0.231 0.000 0.000 3.699 0.762 0.116 4.577 3 96.4 83.8 0.014 0.003 0.024 0.000 0.008 0.258 0.209 0.009 0.510 1.334 0.343 0.538 2.215 4 87.4 77.9 0.008 0.026 0.017 0.000 0.007 0.208 0.020 0.000 0.000 3.651 0.451 0Ό87 4.188 5 93.2 79.9 0.011 0.010 0.019 0.000 0.005 0.182 0.062 0.000 0.000 3.011 0.278 0.000 3.289 6 93.2 61.2 0.160 0.014 0.113 0.002 0.042 0.521 0.279 0.000 0.405 1.329 0.448 0.616 2.393 7 90.9 63.5 0.071 0.010 0.048 0.002 0.028 0.275 0.102 0.000 0.145 0.765 0.299 0.403 1.468 8 95.1 64.7 0.165 0.012 0.121 0.002 0.033 0.610 0.280 0.000 0.116 1.700 0.503 0.465 2.667 9 86.7 67.5 0.031 0.006 0.033 0.008 0.030 0.225 0.071 0.000 0.579 1.217 0.186 0.980 2.383 10 93.1 72.7 0.070 0.008 0.067 0.002 0.036 0.486 0.126 0.000 0.176 1.858 0.459 0.545 2.861 11 85.2 60.9 0.112 0.064 0.065 0.003 0.041 0.443 0.188 0.000 0.221 1.478 0_397 0.530 2.405 12 93.2 67.1 0.099 0.009 0.075 0.001 0.036 0.447 0.053 0.000 0.023 1.472 0.297 0.058 1.826 13 89.2 64.3 0.072 0.015 0.070 0.002 0.045 0.367 0.108 0.000 0.064 1.473 0.310 0.108 1.891 14 90.2 63.3 0.082 0.016 0.080 0.003 0.040 0.383 0.070 0.344 0.094 1.348 0.308 0.148 1.803 15 87.8 64.4 0.035 0.011 0.036 0.001 0.025 0.196 0.150 0.000 0.099 1.863 0.358 0.075 2.296 16 92.0 70.7 0.061 0.009 0.055 0.002 0.033 0.383 0.113 0.000 0.067 2.389 0.421 0.237 3.046 17 91.1 65.2 0.140 0.019 0.117 0.003 0.066 0.648 0.313 0.000 0.191 2.727 0.565 0.133 3.425 18 90.0 63.8 0.056 0.010 0.044 0.001 0.028 0.245 0.161 0.000 0.139 0.963 0.212 0.056 1.231 19 89.3 68.3 0.065 0.013 0.067 0.004 0.051 0.430 0.076 0.000 0.042 2.438 0.353 0.134 2.924 20 89.1 63.8 0.060 0.015 0.049 0.002 0.030 0.277 0.224 0.041 0.208 1.484 0.324 0.215 2.022 對照：WKS124對照

Del :飛燕草素、Cya :矢車菊素、Pet :矮牽牛素、Pel :天竺葵素、 Peo :芍藥素、Mai :錦葵色素、Μ :楊梅皮黃素、Q :槲皮素、K : 5 番鬱金黃素、Tri :五經黃酮、Lut :葉黃酮、Api :洋元荽黃素

Del(%):總花青素中之飛燕草素系色素（飛燕草素、矮牽牛素、錦葵 色素）比例

Mal(%):總花青素中之錦葵色素比例 10 實施例8 :將源自三色堇之F3’5’H#40基因與源自夏堇之黃 酮合成酶基因以及源自夏菫之花青苷甲基轉移酶基因導入 玫瑰品種“Lavande” 對藤色系玫瑰品種“Lavande”導入實施例7記載之 PSFL535，即得到130個體之轉形體。可確認進行花青素分 32 200916578 析之118個體之轉形體當中的37個體有錦葵色素（飛燕草素 的3’位與5’位經曱基化的花青素）蓄積，且可藉由生成物顯 示出源自二色堇之F3 5 H#40基因與源自夏堇之花青苷曱 基轉移酶基因有在玫瑰花瓣中發揮機能。另外，錦葵色素 5 含有率最高達55.6%(平均20.5%)。 另一方面，亦可確認，因源自夏菫之黃酮合成酶基因 起作用，而使78個體另行有黃酮（五羥黃酮、葉黃酮、洋元 荽黃素）蓄積。黃酮總量最高為新鮮花瓣重量lg中含5 Umg 的高含有量。又，生產黃酮的轉形體當中檢測出2〇個體經 1〇 甲基化的五羥黃酮或葉黃酮。 植物 Del Mai 花青^ Hmg/ 黃酮醇(mg/g) 黃酮(mg/g) No. (%) (%) Del Cya Pet Pel Peo Mai M Q K Tri Lut Api 合計 對照 (Lavande) 0% 〇% 0.000 0.109 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 1.020 0.195 0.000 0.000 0.000 0.000 1 20.7% 3.3% 0.012 0.065 0.002 0.001 0.002 0.003 0.097 0.272 0.015 0.289 0.035 0.000 0.324 2 1 45.9°/J 31.8% 0.003 0.006 0.001 0.000 0.007 0.007 0.024 0.076 0.000 1.062 0.212 0.009 1.283 3 74.8% 46.5% 0.063 0.023 0.010 0.000 0.041 0.119 0.458 0.285 0.049 0.204 0.022 0.000 0.226 4 71.4% 51.6% 0.018 0.010 0.005 0.000 0.022 0.058 0.292 0.153 0.011 0.139 0.015 0.000 0.153 5 70.5% 32.1% 0.025 0.012 0.007 0.000 0.012 0.027 0.510 0.192 0.033 0.000 0.026 0.000 0.026 6 28.9°/〇j 4.4% 0.031 0.096 0.005 0.000 0.005 0.006 0.268 0.619 0.037 0.262 0.038 0.009 0.310 7 84.4% 53.4% 0.036 0.008 0.014 0.000 0.017 0.086 0.811 0.168 0.000 1.054 0.086 0.000 1.139 8 79.8% 53.2% 0.032 0.011 0.012 0.000 0.022 0.087 0,316 0.107 0.004 0.863 0.037 0.000 0.900 9 83.3% 55.6% [).038 0.012 0.012 0.006 0.012 0.100 0.593 0.013 0.000 4.885 0.223 0.000 5.108 10 63.0% 33.6% 0.003 0.002 0.000 0.001 0.001 0.003 0.032 0.000 0.000 3.992 0.219 0.003 4.214 11 88.1% 45.8% D.027 0.004 0.006 0.000 0.005 0.036 0.285 0.060 0.009 2.779 0.077 0.000 2.855 12 86.2% 43.4% 0.041 0.009 0.011 0.000 0.008 0.053 0.412 0.103 0.020 4.243 0.119 0.000 4.363 13 73.6% 38.0% 0.019 0.009 0.004 0.000 0.009 0.025 0.227 0.049 0.000 3.794 0.000 0.000 3.794 14 89.3% 49.7% 0.035 0.005 0.007 0.000 0.006 0.052 0.217 0.030 0.000 4.936 0.139 0.000 5.075 15 65.1% 31.1% 0.010 0.007 0.005 0.000 0.007 0.013 0.155 0.050 0.000 3.184 0.128 0.000 3.312 代表性轉形體的分析值顯示於下述表9 ^ __表9 對照：Lavande對照

Del :飛燕草素、Cya :矢車菊素、Pet :矮牽牛素、Pel :天竺葵素、 15 Peo :芍藥素、Mai :錦葵色素、Μ :楊梅皮黃素、Q :槲皮素、K : 番鬱金黃素、Tri :五經黃_、Lut :葉黃酮、Api :洋元荽黃素 33 200916578

Del(%):總花青素中之飛燕草素系色素（飛燕草素、矮牽牛素、錦葵 色素）比例

Mal(%):總花青素中之錦葵色素比例 5 實施例9 :將源自三色蓳之F3’5’H#40基因與源自夏蓳之黃 酮合成酶基因以及源自夏堇之花青苷甲基轉移酶基因導入 玫瑰品種“WKS82” 對藤色系玫瑰品種“ WKS82”（mauve rose variety “WKS82”）導入實施例7記載之pSFL535，即得到250個體 10 之轉形體。可確認進行花青素分析之23 2個體之轉形體當中 的110個體有錦葵色素（飛燕草素的3’位與5’位經曱基化的 花青素）蓄積，且可藉由生成物顯示出源自三色菫之 F3’5’H#40基因與源自夏蓳之花青苷甲基轉移酶基因有在 玫魂花瓣中發揮機能。另外，錦葵色素含有率最高達 15 65.2%(平均 19.7%)。 另一方面，亦可確認，因源自夏蓳之黃酮合成酶基因 起作用，而使125個體另行有黃酮（五羥黃酮、葉黃酮、洋 元荽黃素）蓄積。黃明總量最高為新鮮花瓣重量1 g中含 4.71mg的高含有量。又，生產黃酮的轉形體當中檢測出80 20 個體經甲基化的五羥黃酮或葉黃酮。 代表性轉形體的分析值顯示於下述表10。 34 25 200916578 表ίο 植物 No. Del (%) Mai (%) 花青素(mg/g) 黃酮醇(mg/g) 黃酮(mg/g) Del Cya Pet Pel Peo Mai M Q K Tri Lut Api 合計 對照 (WKS82) 〇% 096 0.000 0.124 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 1.598 0.081 0.000 0.000 0.000 0.000 1 57.5% 46.1% 0,003 0.006 0.003 0.000 0.018 0.026 0.494 0.750 0.064 0.764 0.000 0.000 0.764 2 70.5% 51.0% 0.007 0,005 0.004 0.000 0.011 0.028 0.564 0.384 0.055 2.977 0.199 0.000 3.176 3 82.1% 65.2% 0.006 0.004 0.005 0.000 0.008 0.042 0.800 0.536 0.115 0.534 0.000 0.000 0.534 4 75.3% 57.5% 0.004 0.003 0.003 0.000 0.008 0.024 0.387 0.288 0.074 1.808 0.160 0.000 1.968 5 55.2% 37.6% 0.005 0.009 0.004 0.000 0.015 0.020 1.054 0.806 0.038 0.114 0.000 0.000 0.114 6 48.8% 37.8% 0.004 0.006 0.002 0.000 0.021 0.020 0.700 1.319 0.148 0.034 0.000 0.000 0.034 7 78.4% 62.8% 0.007 0.003 0.004 0.000 0.011 0.042 0.577 0.266 0.015 0.302 0.022 0.000 0.324 8 54.6% 39.1% 0.006 0.009 0.003 0.000 0.018 0.023 0.571 0.774 0.045 0.172 0.028 0.000 0.200 9 73.5% 57.3% 0.009 0.004 0.004 0.000 0.016 0.044 0.866 0.511 0.031 0.104 0.000 0,000 0.104 10 75.9% 57.5% 0.005 0.002 0.002 0.000 0.007 0.022 0.882 0.498 0.151 0.038 0.000 0.000 0.038 11 69.3% 52.9% 0.007 0.006 0.005 0.000 0.016 0.038 0.825 0.411 0.029 0.095 0.000 0.000 0.095 12 71.4% 50.2% 0.013 0.007 0.006 0.000 0.020 0.046 0.721 0.459 0.022 0.075 0.004 0.000 0.080 13 59.8% 42.2% 0.016 0.014 0.009 0.000 0.044 0.062 1.540 1.415 0.202 0.193 0,000 0.000 0.095 14 67.9% 50.9% 0.006 0.006 0.006 0.000 0.017 0.036 0.829 0.704 0.125 0.000 0.000 0.000 0.200 15 34.4% 13.0% 0.006 0.014 0.003 0.000 0.013 0.006 0.230 1.109 0.000 4.155 0.551 0.006 4.711 對照：WKS82對照

Del :飛燕草素、Cya :矢車韌素、Pet:矮牵牛素、Pel :天竺葵素、 Peo :芍藥素、Mai :錦葵色素、M:楊梅皮黃素、Q:槲皮素、K: 5 番鬱金黃素、Tri :五羥黃酮、Lut :葉黃酮、Api :洋元荽黃素

Del(%):總花青素中之飛燕草素系色素（飛燕草素、矮牽牛素、錦葵 色素）比例

Mal(%):總花青素中之錦葵色素比例 10 實施例10:將源自三色菫之F3’5，H#40基因與源自夏堇之黃 酮合成酶基因以及源自夏蓳之花青苷甲基轉移酶基因導入 玫瑰品種“WKS140” 對藤色系玫瑰品種 “WKS140”（mauve rose variety “WKS140”）導入實施例7記載之pSFL535,即得到74個體 15 之轉形體。可確認進行花青素分析之74個體之轉形體當中 的20個體有錦葵色素（飛燕草素的3’位與5,位經曱基化的花 35 200916578 青素）蓄積，且可藉由生成物顯示出源自三色堇之 F3’5’H#40基因與源自夏菫之花青苷甲基轉移酶基因有在 玫瑰花瓣中發揮機能。另外，錦葵色素含有率最高達 51.3%(平均33.5%)。 另一方面，亦可確認’因源自夏堇之黃酮合成酶基因 起作用，而使29個體另行有黃酮（五經黃酮、葉黃酮、洋元 妥κ素）畜積。育酮總量最南為新鮮花瓣重量lg中含3. 〇4mg 的兩含有量。又’生產黃酮的轉形體當中檢測出20個體經 甲基化的五羥黃酮或葉黃酮。 代表性轉形體的分析值顯示於下述表U。 植物 Del (%) Mai 花青J Kmg/g) 黃_醇(〇12/2) 黃酮(mg/g) No. (%) Del Cya Pet Pel Peo Mai M 0 K Tri Lut Api 合計 對照 (WKS140) 0% 〇% 0.000 0.075 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 2.412 0.271 0.000 0.000 0.000 0.000 1 62.0% 31.7% 0.025 0.020 0.015 0.000 0.030 0.042 0.655 1.085 0.202 2.314 0.305 2.650 2 67.3% 38.3% 0.013 0.009 0.009 0.000 0.015 0.029 0.491 0.627 0.104 1.790 0.227 0 031 2.048 3 79.6% 34.1% 0.025 0.008 0.011 0.000 0.008 0.027 0.572 0.555 0.129 2.388 0.237 0.015 2.639 4 69.8% 38.9% 0.021 0.012 0.011 0.000 0.019 0.040 0.589 0.766 0.165 1.941 0.282 0014 2.237 5 80.4% 51.3% 0.013 0.005 0.009 0.000 0.010 0.038 0.513 0.307 0.074 1.392 0.166 0.018 1.577 6 70.1% 35.8% 0.014 0.008 0.006 0.000 0.010 0.021 0.607 0.538 0.108 1.297 0.177 0.019 1.493 7 67.2% 34.7% 0.020 0.013 0.009 0.000 0.017 0.031 1.005 0.717 0.127 1.805 0.264 0.028 2.097 8 70.0% 36.2% 0.019 0.010 0.009 0.000 0.015 0.029 0.831 0.802 0.143 1.909 0.241 0.07.7 7176 9 70.9% 37.9% 0.015 0.008 0.008 0.000 0.012 0.027 0.497 0.690 0.106 1.841 0.265 0.032 2.138 10 69.9% 36.0% 0.018 0.010 0.009 0.000 0.015 0.030 0.544 0.663 0.143 2.102 0.236 0.017 2.355 11 57.4% 31.0% 0.011 0.011 0.008 0.000 0.019 0.022 0.386 0.892 0.129 2.088 0.271 0.012 2.372 12 62.9% 32.4% 0.016 0.014 0.010 0.000 0.018 0.028 0.351 0.846 0.114 2.274 0.281 0.009 2.565 13 62.1% 34.1% 0.021 0.018 0.014 0.000 0.030 0.042 0.887 0.789 0.177 1.855 0.389 0.018 2.262 14 73.7% 37.5% 0.016 0.006 0.004 0.000 0.008 0.021 0.597 0.489 0.081 1.664 0.158 0.000 1,821 15 58.6% 28.3% 0.013 0.012 0.007 0.000 0.016 0.019 0.513 1.121 0.166 2.650 0.373 0.015 3.038 對照：WKS140對照

Del :飛燕草素、Cya :矢車菊素、Pet :矮牵牛素、Pel :天竺葵素、 Peo :芍藥素、Mai :錦葵色素、Μ :楊梅皮黃素、Q :槲皮素、K : 15 番鬱金黃素、Tri :五羥黃酮、Lut :葉黃酮、Api :洋元荽黃素

Del(°/。）：總花青素中之飛燕草素系色素（飛燕草素、矮牵牛素、錦葵 36 200916578 色素）比例

Mal(%):總花青素中之錦葵色素比例 實施例11 :黃鲖及錦葵色素合成能力對後代之傳播-導入有 5源自三色蓳之F3,5，H#40基因、源自夏莖之黃酮合成酶基 因、源自夏菫之花青苷甲基轉移酶基因的基因重組玫瑰與 栽培玫瑰之雜交 為調查賦予至玫瑰的黃酮合成能力對後代之基因樣 式’使用實施例7作出的可生產錦葵色素及黃酮的玫瑰(表8 中的植物Ng·6)作為花純來進行交配。種子親使用的是中 輪系栽 玫瑰 Medeo”（floribunda rose Varietv “Medeo”）。 y •付之轉形體F1雜種後代當巾的卿體進 析的情況下，確認7㈣有錦葵色素蓄積，且可 、分 15顯示出源自三色堇之F3,5，H輪基因與源自夏^，成物 曱基轉移酶基因有在玫瑰花瓣中發揮機能。另外=青芽 素含有率最高達68.2%(平均46 6%)。 錦葵色 另-方面，亦可確認，因源自夏堇之 起作用，而使8個體之轉形體後代有龙 战鉍基因 2。==積。黃酮總量最黃 含7.35mg的極li3含有量。又， 吁垔量lg中 I汽S同的幸表开;^辦μ 檢測出6個體經甲基化的五羥黃_。 / 4後代當中 代表性轉频後代的分析下述表12 37 200916578 表12 植物 No. Del (%) Mai (%) 花青素(mg/g: 黃酮醇(mg/g) 黃酮(mg/g) Del Cya Pet Pel Peo Mai M Q K Tri Lut Api 合計 花粉親 (実施•例7 Plant No.6) 93,2% 61.2% 0.160 0.014 0.113 0.002 0.042 0,521 0.279 0.000 0.405 1.329 0.448 0,616 2.393 種子親 (品種Medeo ) 0% 0% 0.000 0.004 0.000 0.004 0.000 0.000 0.000 0.028 2.323 0.000 0.000 0.000 0.000 1 0.0% 0.0% 0.000 0.015 0.000 0.122 0.000 0.000 0.000 0.000 4.318 0.000 0.000 0.000 0.000 2 82.6% 49.1% 0.165 0.034 0.085 0.005 0.090 0.367 0.311 0.039 0.118 1.596 0.064 0.006 1.666 3 0.0% 0.0% 0.000 0.001 0.000 0.004 0.000 0.000 0.000 0.000 2.391 0.000 0.000 0.000 0.000 4 80.1% 50.5% 0.073 0.028 0.064 0.00 0.054 0.233 0.210 0.048 0.429 0.000 0.000 0.032 0.032 5 94.4% 52.8% 0.003 0.001 0.003 0.000 0.000 0.009 0.408 0.069 0.668 2.024 0.152 0.222 2.398 6 81.8% 34.4% 0.056 0.015 0.034 0.002 0.017 0.065 0,076 0.033 0.202 3.860 0.123 0.039 4.023 7 48.2°/J 0.0% 0.011 0.002 0.011 0.001 0.021 0.000 0.089 0.038 0.808 1.603 0.117 0.217 1.937 8 90.6% 35.5% 0.107 0.016 0.071 0.002 0.013 0.114 0.080 0.010 0.100 6.497 0.351 0.504 7.351 9 70.4% 35.8% 0.008 0,003 0.001 0.002 0.003 0.009 0.118 0.038 0.523 2.902 0.137 0.048 3.088 10 91.2% 68.2% 0.011 0.002 0.012 0.001 0.007 0.068 1.131 0.324 1.077 1.031 0.091 0.033 1.154

Del :飛燕草素、Cya :矢車菊素、Pet :矮牽牛素、pei :天竺葵素、

Peo :芍藥素、Mai :錦葵色素、M:楊梅皮黃素、Q:槲皮素、κ: 5 番鬱金黃素、Tri :五羥黃酮、Lut :葉黃酮、Api :洋元荽黃素 Del(%):總花青素中之飛燕草素系色素（飛燕草素、矮牵牛素、錦蔡 色素）比例

Mal(%):總花青素中之錦葵色素比例 10 實施例12 :黃酮合成能力對後代之傳播 導入有源自三色莖之F3,5，H#40基因及源自夏堇之花青普 甲基轉移酶基因的玫瑰品種“WKS124”與導入有源自三 色堇之F3’5’H#40基因及源自夏蓳之黃鲖合成酶基因的玫 瑰品種“ Lavande”之交配 I5 為調查賦予至玫瑰的育嗣合成能力對後代之基因樣 式，使用實施例3作出的黃酮生產菌株（表4中的植物N〇 4) 作為化粉親來進彳于父配。種子親使用的是將ρ^ΡΒ 1532導入 38 200916578 玫瑰品種WKS124後，因源自三色菫之F3,5，H#40基因及源 自夏莖之花青苷甲基轉移酶基因起作用而在花瓣高度蓄積 錦葵色素的轉形體WKS124A532-12-1(記載於 W02003/062428)。 5 對取得之轉形體後代當中的149個體進行色素分析的 情況下，確認88個體有黃酮（五羥黃酮、葉黃酮、洋元荽黃 素）蓄積。黃酮總量最向為新鮮花瓣重量1 g中含4.〇9mg的高 含有量。又，檢測出42個體經甲基化的五羥黃酮，且檢測 出11個體經甲基化的葉黃酮（金聖草素(3，Met-Lut))。另外， 10 可確認進行色素分析之149個體當中的129個體有錦葵色素 蓄積。錦葵色素含有率最高達79%(平均36%)。 植物 Del Mai 花青素 (mg/g: 1 黃鲖醇(mg/g) 黃酮(mg/g) No. (%) (%) Del Cya Pet Pel Peo Mai M Q K Tri Lut Api 合計 花粉親 44.9 0.0 0.031 0.038 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.359 0.027 0.000 1.684 0.000 1.684 種子親 93.2 73.0 0.127 0.011 0.112 0.003 0.066 0.863 0.365 0.093 0.348 0.000 0.000 0.000 0.000 1 92.1 69.1 0.032 0.005 0.030 0.000 0.016 0.186 0.197 0.105 0.090 1.950 0.078 0 05Q 2.088 2 75.3 56.7 0.076 0.048 0.055 0.005 0.121 0.400 0.345 0.081 0.097 2.879 0,156 0.086 3.121 3 80.6 60.6 0.041 0.015 0.039 0.004 0.059 0.244 0.000 0.000 0.113 2.986 0.193 o.non 3.179 4 82.4 65.8 0.005 0.002 0.006 0.000 0.009 0.043 0.000 0.131 0.084 2.036 0.066 0.000 2.103 5 68.8 56.7 0.010 0.006 0.012 0.013 0.036 0.101 0.000 0.093 0.179 1.740 0.224 0.000 1.965 6 79.3 60.4 0.018 0.009 0.017 0.000 0.029 0.111 0.089 0.053 0.084 1.956 0.093 0.029 2.078 7 86.1 52.1 0.158 0.044 0.125 0.003 0.069 0.432 0.000 0.118 0.300 3.059 0.363 0.397 3.819 8 81.3 59.8 0.026 0.010 0.027 0.011 0.025 0.149 0.000 0.247 0.226 1.489 0.232 0.179 1.900 9 79.2 59.2 0.015 0.008 0.014 0.000 0.0?.?. 0.086 0.422 0.398 0.224 2.510 0.726 0.094 3.330 10 82.5 66.8 0.019 0.008 0,022 0.000 0.038 0.175 0.445 0.559 0.322 2.122 0.446 0.111 2.678 11 73.3 59.3 0.036 0.025 0.037 0.000 0.112 0.306 0.121 0.130 0.000 0.596 0.565 0.066 1.227 12 94.0 76.2 0.018 0.002 0.018 0.000 0.010 0.154 0.840 0.426 0.445 3.655 0.306 0.124 4.086 13 82.8 62.8 0.009 0.004 0.010 0.000 0.012 0.059 0.394 0.400 0.278 1.068 「0.250 0.096 1.414 14 82.7 58.8 0.119 0.048 0.122 0.011 0.115 0.592 0.327 0.089 0.074 1.940 0.131 0.085 2.156 15 78.4 61.6 0.009 0.006 0.009 0.000 0.018 0.066 0.313 0.582 0.370 1.634 0.423 0.143 2.200 Del :飛燕草素、Cya :矢車菊素、Pet :矮牽牛素、Pel :天竺葵素、 代表性轉形體後代的分析值顯示於下述表13。 __表 13 15 Peo :芍藥素、Mai :錦葵色素、Μ :楊梅皮黃素、Q :槲皮素、K : 番鬱金黃素、Tri :五羥黃酮、Lut :葉黃酮、Api :洋元荽黃素 39 200916578

Del(%):總花青素中之飛燕草素系色素（飛燕草素、矮牵牛素、錦葵 色素）比例

Mal(%):總花青素中之錦葵色素比例 5 實施例13 :含黃酮之玫瑰花色的評估 針對在實施例4及7中所作出的轉形體（將玫瑰品種 “WKS124”作為宿主），分類為（1)蓄積飛燕草素作為主要 色素，且不含黃酮者；（2)蓄積飛燕草素作為主要色素，且 含黃酮者；及（3)宿主（蓄積天竺葵素作為主要色素）等群 10 組，並使用分光測色計針對各自的花瓣色彩進行評估 (n=10)。 在主要色素為飛燕草素品系的玫瑰或主要色素為錦葵 色素品系的玫瑰中，黃酮共存時，花瓣的色相角度會往藍 色方向移動。又，在主要色素為錦葵色素品系的玫瑰中， 15 該傾向更為明顯*且反射光譜極小值（λ Min)亦往長波長側 大幅移動。從上述結果確認，花瓣色彩會因黃酮之共存而 變藍。結果顯示於下述表14。 表14 基因與類黃酮組成^ '~~~' -—__ 色相角度(hue) 反色光譜極小值 (λ Min) 宿 主 無導入基因（WKS124 control) 蓄積天竺葵素作為主要色素，且完全不含 黃酮 31.14。 (-391.14° ) 平均520nm 最大520nm 實 施 例 9 ①三色菫F3’，5’H 高度蓄積飛燕草素作為主要色素，且完全 不含黃酮 平均 349.03° 最藍値344.68° 平均540nm 最大540nm ②三色堇F3’，5’H +夏堇FNS 高度蓄積飛燕草素作為主要色素，且含黃 酮 平均 343.64° 最藍値337.18° 平均540nm 最大540nm 色相角度(hue):係在L*a*b表色系中，以a*(紅色方向）的軸為0°，且 40 200916578 依相對於逆時鐘方向之色相從該處移動的角度來辨識顏色位置者。 90°的話為黃色方向；180°的話為綠色方向；270°的話為藍色方向； 0°(=360°)的話為紅色方向。亦即，數值越接近270°，色相就越藍。 產業上利用之可能性 5 藉由本發明，在作為鑑賞用植物頗具人氣的花卉植物 之玫瑰中，因藉基因重組方法含黃酮，而可藉由共色效果 使玫瑰花色往藍色方向變化。藍色花色的玫瑰可望具有作 為觀賞用植物的商品需求。 在此，將本說明書中引用的所有專利文獻、非專利技 10 術文獻，個別或完全援用於本說明書中。 至此，已說明完本發明，但需理解本發明在不脫離其 本質下可進行修正或變更，當然，本發明之範圍並非基於 實施例之記載，而是根據附加的申請專利範圍所規劃。 t圖式簡單說明3 15 無 【主要元件符號說明】 益 〇»、 41 200916578 序列表 <11〇國際花齐開發有限公司 <120>含黃酮之玫瑰及其生產方法 <130> IFD(Sn)-V633-PCT,TW <140> PCT/JP2008/ <141〉 2008-06-19 <150> JP2007-162845 <151〉2007120 <160> 12 <210> 1 <211> 1706 <212> DNA <213>金魚草 <220> <221> CDS <222〉 （41)...(1557) <223>核苷酸序列編碼黃酮合成酶 <400> 1 gctttacaca cacacacaca cacacacaca caaacaaaa atg tct aca ctt gtc tac Met Ser Thr Leu Val Tyr 1 5 age aca etc ttc ate etc tea acc etc etc etc acc etc eta acc ege Ser Thr Leu Phe lie Leu Ser Thr Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Arg 10 15 20 acc ege ege aag acc ege ccg ccc ggc cca tta gee etc ccc tta ata Thr Arg Arg Lys Ihr Arg Pro Pro Gly Pro Leu Ala Leu Pro Leu lie 25 30 35 ggc cac tta cac etc etc ggc cca aag etc cac cac acc ttc cac caa Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Lys Leu His His Thr Phe His Gin 40 45 50 ttc tee caa ege tac ggc ccg etc ate cag etc tac etc ggc tee gtc Phe Ser Gin Arg Tyr Gly Pro Leu lie Gin Leu Tyr Leu Gly Ser Val 55 60 65 70 cca tgc gtc gtc get tee aeg ccc gaa etc gee ege gaa ttc etc aag Pro Cys Val Val Ala Ser Thr Pro Glu Leu Ala Arg Glu Phe Leu Lys 75 80 85 57 105 153 201 249 297 200916578 acg cac gaa etc gac ttc teg tcc cgc aag cac tcc acc gcc ate gac 345

Ihr His Glu Leu Asp Phe Ser Ser Arg Lys His Ser Thr Ala lie Asp 90 95 100 ate gtc acg tac gac tcc teg ttc gee ttc geg ccg tac ggg Ccg tac 393 lie Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala Phe Ala Pro Tyr Gly Pro Tyr 105 110 115 tgg aaa ttc ate aag aaa tta tgt act tac gag eta ctg ggt gee egg 441

Trp Lys Phe lie Lys Lys Leu Cys Thr Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg 120 125 130 aac ttg age cat ttc cag ccc att aga get ttg gag gtc aac agt ttc 489

Asn Leu Ser His Phe Gin Pro lie Arg Ala Leu Glu Val Asn Ser Phe 135 140 145 150 ttg aga att ttg tac gag aaa aca gag cag aaa cag agt gtt aat gtg 537

Leu Arg lie Leu Tyr Glu Lys Thr Glu Gin Lys Gin Ser Val Asn Val 155 160 165 act gag gag ett gtg aag ctg acg agt aat gtg ate agt aac atg atg 585

Thr Glu Glu Leu Val Lys Leu Thr Ser Asn Val lie Ser Asn Met Met 170 175 180 ttg ggg ate 鄕 tgt teg 卿 acg gaa 跋g gag geg gag gtg geg agg 633

Leu Gly He Aig Cys Ser Gly Tnr Glu Giy Giu Aia Glu Val Ala Arg 185 190 195 acg gtg ata agg gag gtg acg cag ata ttt ggg gag ttt gat gtg teg 681

Ihr Val lie Arg Glu Val TTir Gin lie Phe Gly Glu Phe Asp Val Ser 200 205 210 gag att gtt tgg ttt tgt aag aat ttg gat ctg cag ggg att a踩 aag 729

Glu lie Val Trp Phe Cys Lys Asn Leu Asp Leu Gin Gly lie Arg Lys 215 220 225 230 agg teg gag gat att agg agg agg tat gat get ttg ttg gag aag att 777

Arg Ser Glu Asp lie Arg Arg Arg Tyr Asp Ala Leu Leu Glu Lys lie 235 240 245 att agt gat agg gag agg ttg agg ttg agg ggg ggt ggt ggt gga ggg 825 lie Ser Asp Arg Glu Arg Leu Arg Leu Arg Gly Gly Gly Gly Gly Gly 250 255 260 gag gtg aag gat ttt ttg gat atg ttg ttg gat gtg atg gag 873

Gly Gly Glu Val Lys Asp Phe Leu Asp Met Leu Leu Asp Val Met Glu 265 270 275 2 200916578 agt gag aaa teg gag gtg gag ttt aeg agg gag cat etc aaa get ttg 921

Ser Glu Lys Ser Glu Val Glu Phe Ihr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu 280 285 290 att ctg gat ttc ttc act gee ggt aca gac aca aca gca ate aca aca 969 lie Leu Asp Phe Phe Thr Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala lie Thr Thr 295 300 305 310 gaa tgg gca ata gca gaa etc att age aat cca aat gta etc aaa aaa 1017

Glu Trp Ala lie Ala Glu Leu lie Ser Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys 315 320 325 get caa gaa gag atg gac aaa gtc ata tea caa agg ttg ttg caa 1065

Ala Gin Glu Glu Met Asp Lys Val lie Gly Ser Gin Arg Leu Leu Gin 330 335 340 gaa tee gac gee cct aac ttg cct tac etc aac geg ate ata aaa gaa 1113

Glu Ser Asp Ala Pro Asn Leu Pro Tyr Leu Asn Ala lie lie Lys Glu 345 350 355 aeg ttc cgt etc cac cct cca ate ccc atg etc act aga aaa tea att 1161

Thr Phe Arg Leu His Pro Pro lie Pro Met Leu Thr Arg Lys Ser lie 360 365 370 tet gac gtt gtg gtc aac ggg tac aeg ate cct gee aaa aeg eta ttg 1209

Ser Asp Val Val Val Asn Gly Tyr Thr lie Pro Ala Lys Ihr Leu Leu 375 380 385 390 ttt gtc aac ett tgg tee atg 级a 顿 aat cct aac tac t座 gaa aat 1257

Phe Val Asn Leu Trp Ser Met Gly Arg Asn Pro Asn Tyr Trp Glu Asn 395 400 405 ccg atg gag ttc ega ccc gag ttt etc gag aaa acc ^ teg 1305

Pro Met Glu Phe Arg Pro Glu Arg Phe Leu Glu Lys Gly Thr Gly Ser 410 415 420 ata gac gtt aaa ggg cag cat ttc gag ttg ctg ccg ttt ggc aeg ggc 1353 lie Asp Val Lys Gly Gin His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Ihr Gly 425 430 435 agg egg ggc tgc ccg ggg atg ttg tta ggc atg cag gag ttg ttt agt 1401

Arg Arg Gly Cys Pro Gly Met Leu Leu Gly Met Gin Glu Leu Phe Ser 440 445 450 att ate get atg gtg cag tgc ttc gat tgg aaa ctg ccc gat ggt 1449 lie lie Gly Ala Met Val Gin Cys Phe Asp Trp Lys Leu Pro Asp Gly 455 460 465 470 3 1497 200916578 gtg aag teg gtc gac atg acc gag egg ccc ggg ttg aeg get cca cgt

Val Lys Ser Val Asp Met Thr Glu Arg Pro Gly Leu Thr Ala Pro Arg 475 480 485 gee aat gat ttg gtg tgc caa ttg gtg cca egg att gac ccg gtc gtt

Ala Asn Asp Leu Val Cys Gin Leu Val Pro Arg lie Asp Pro Val Val 490 495 500 gtc tee gga ccg tgaaccttaa ggtagtateg ataatctgtt taattaaatt Val Ser Gly Pro 505 gttatttgtt gtgaggattt gatttttgtt atgtatgatt atgcgtggat taagataage ctgcaaggac aaattccctt tctttgattg atgtcaatga gtttgtgtc <210> 2 <211> 506 <212> PRT <213>金魚草 <220> <221> <222> <223>黃酮合成酶之胺基酸序列 <400> 2

Met Ser Thr Leu Val Tyr Ser Thr Leu Phe lie Leu Ser Ihr Leu Leu 15 10 15

Leu Thr Leu Leu Thr Arg Thr Arg Arg Lys Thr Arg Pro Pro Gly Pro 20 25 30

Leu Ala Leu Pro Leu lie Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Lys Leu 35 40 45

His His Ihr Phe His Gin Phe Ser Gin Arg Tyr Gly Pro Leu lie Gin 50 55 60

Leu Tyr Leu Gly Ser Val Pro Cys Val Val Ala Ser Thr Pro Glu Leu 65 70 75 80

Ala Arg Giu Phe Leu Lys Thr His Glu Leu Asp Phe Ser Ser Arg Lys 85 90 95

His Ser Hir Ala lie Asp lie Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala Phe 100 105 110

Ala Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Phe lie Lys Lys Leu Cys Thr Tyr 115 120 125 1545 1597 1657 1706 4 200916578

Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Ser His Phe Gin Pro lie Arg Ala 130 135 140

Leu Glu Val Asn Ser Phe Leu Arg lie Leu Tyr Glu Lys Thr Glu Gin 145 150 155 160

Lys Gin Ser Val Asn Val Thr Glu Glu Leu Val Lys Leu Thr Ser Asn 165 170 175

Val lie Ser Asn Met Met Leu Gly lie Arg Cys Ser Gly Ihr Glu Gly 180 185 190

Glu Ala Glu Val Ala Arg Thr Val lie Arg Glu Val Thr Gin lie Phe 195 200 205

Gly Glu Phe Asp Val Ser Glu lie Val Trp Phe Cys Lys Asn Leu Asp 210 215 220

Leu Gin Gly lie Arg Lys Arg Ser Glu Asp lie Arg Arg Arg Tyr Asp 225 230 235 240

Ala Leu Leu Glu Lys lie lie Ser Asp Arg Glu Arg Leu Arg Leu Arg 245 250 255

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Val Lys Asp Phe Leu Asp Met 260 265 270

Leu Leu Asp Val Met Glu Ser Glu Lys Ser Glu Val Glu Phe Thr Arg 275 280 285

Glu His Leu Lys Ala Leu lie Leu Asp Phe Phe Thr Ala Gly Thr Asp 290 295 300

Thr Thr Ala lie Thr Thr Glu Trp Ala lie Ala Glu Leu lie Ser Asn 305 310 315 320

Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gin Glu Glu Met Asp Lys Val lie Gly 325 330 335

Ser Gin Arg Leu Leu Gin Glu Ser Asp Ala Pro Asn Leu Pro Tyr Leu 340 345 350

Asn Ala lie lie Lys Glu Thr Phe Arg Leu His Pro Pro lie Pro Met 355 360 365

Leu Thr Arg Lys Ser lie Ser Asp Val Val Val Asn Gly Tyr Thr lie 370 375 380

Pro Ala Lys Thr Leu Leu Phe Val Asn Leu Trp Ser Met Gly Arg Asn 385 390 395 400

Pro Asn Tyr Trp Glu Asn Pro Met Glu Phe Arg Pro Glu Arg Phe Leu 405 410 415 5 200916578

Glu Lys Gly Thr Gly Ser lie Asp Val Lys Gly Gin His Phe Glu Leu 420 425 430

Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly Met Leu Leu Gly 435 440 445

Met Gin Glu Leu Phe Ser lie lie Gly Ala Met Val Gin Cys Phe Asp 450 455 460

Trp Lys Leu Pro Asp Gly Val Lys Ser Val Asp Met Thr Glu Arg Pro 465 470 475 480

Gly Leu Thr Ala Pro Arg Ala Asn Asp Leu Val Cys Gin Leu Val Pro 485 490 495

Arg lie Asp Pro Val Val Val Ser Gly Pro 500 505 <210〉 3 <211> 1685 <212> DNA <213>夏堇 <220>

<221> CDS <222> (57)...(1592) <223>核皆酸序列編碼黃职合成酶 <400> 3 atcgaaaccg ctatatcatt acatttacaa cagcgctaaa aaaatatata taaagc atg

Met 1 gac aca gtc tta ate aca etc tac acc gcc ctg ttc gtc ate acc acc

Asp Thr Val Leu lie Thr Leu Tyr Thr Ala Leu Phe Val lie Ihr Thr 5 10 15 acc ttc etc etc etc etc ege ega agg gga cca ccg tet ccg ecc ggt

Thr Phe Leu Leu Leu Leu Arg Arg Arg Gly Pro Pro Ser Pro Pro Gly 20 25 30 cct etc tcc eta ccc ata att ggc cac etc cac etc etc ggc cca aga

Pro Leu Ser Leu Pro lie lie Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Arg 35 40 45 etc cac cac aeg ttc cat gaa ttc tea etc aaa tac ggc cca ttg ate

Leu His His Thr Phe His Glu Phe Ser Leu Lys Tyr Gly Pro Leu lie 5〇 55 60 65 59 107 155 203 6 251 200916578 cag etc aag etc teg ate ccg tgc gtc gtg gee teg aeg ccc gag 299

Gin Leu Lys Leu Gly Ser lie Pro Cys Val Val Ala Ser Thr Pro Glu 70 75 80 etc geg aga gag ttt ett aag aeg aac gag etc geg ttc tee tet ege 347

Leu Ala Arg Glu Phe Leu Lys Thr Asn Glu Leu Ala Phe Ser Ser Arg 85 90 95 aag cac tet aeg gee ata gac ate gtc acc tac gac teg tee ttt get 395

Lys His Ser Thr Ala lie Asp lie Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala 100 105 110 ttc tet ccg tac ccc tac aag tac ate aag aaa ctg tgt acc 443

Phe Ser Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Tyr lie Lys Lys Leu Cys Thr 115 120 125 tac gag ctg etc geg aac etc gga cac ttt cag ccc att agg 491

Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Gly His Phe Gin Pro lie Arg 130 135 140 145 aat etc gag gtc tee ttt ctg cag ett ctg atg cac aag age ttt 539

Asn Leu Glu Val Arg Ser Phe Leu Gin Leu Leu Met His Lys Ser Phe 150 155 160 aag ggc gag agt gtg aat gtg aca gac gag ctg gtg agg ctg aeg age 587

Lys Gly Glu Ser Val Asn Val Thr Asp Glu Leu Val Arg Leu Ihr Ser 165 170 175 aat gtg ata tee cac atg atg ctg age ata tgc teg gaa gat gaa 635

Asn Val lie Ser His Met Met Leu Ser lie Arg Cys Ser Glu Asp Glu 180 185 190 ggc gat get gag geg geg aga aca gtg ata ege gag gtg aeg cag ata 683

Gly Asp Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val lie Arg Glu Val Thr Gin lie 195 200 205 · ttt gaa ttc gat gtt aeg gac ata ata tgg ttt tgc aag aaa ttc 731

Phe Gly Glu Phe Asp Val Thr Asp lie lie Trp Phe Cys Lys Lys Phe 210 215 220 225 gat ctg cag ggg ata aag aag tea gag gat att cag tat 779

Asp Leu Gin Gly lie Lys Lys Arg Ser Glu Asp lie Gin Arg Arg Tyr 230 235 240 gat get ttg etc gag aag att att agt gat aga gag aga teg agg agg 827

Asp Ala Leu Leu Glu Lys lie lie Ser Asp Arg Glu Arg Ser Arg Arg 245 250 255 7 200916578 caa aat cgt gat aag cat ggt ggc aac aat gag gag gcc aag gat 875

Gin Asn Arg Asp Lys His Gly Gly Gly Asn Asn Glu Glu Ala Lys Asp 260 265 270 ttt ctt gat atg ttg ctt gat gtg atg gag agt ggg gac acg gag gtc 923

Phe Leu Asp Met Leu Leu Asp Val Met Glu Ser Gly Asp Thr Glu Val 275 280 285 aaa ttc act aga gag cat etc aag get ttg att ctg gat ttc ttc acg 971

Lys Phe Thr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu lie Leu Asp Phe Phe Thr 290 295 300 305 gcc ggt acg gac aca aca gcc ata gcc acc gag tgg gcc ate gcc gag 1019

Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala lie Ala Thr Glu Trp Ala lie Ala Glu 31〇 315 320 etc ate aac aac ccg aac gtc ttg aag aag gcc caa gaa gaa ata tcc i〇67

Leu lie Asn Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gin Glu Glu lie Ser 325 330 335 egg ate ate gga acc aag egg ate gta caa gaa tcc gac gcc cca gac 1115

Arg He lie Gly Thr Lys Arg lie Val Gin Glu Ser Asp Ala Pro Asp 340 345 350 eta ccc tac etc cag gcc ate ate aag gag acg ttc egg etc cac cca 1153

Leu Pro Tyr Leu Gin Ala He lie Lys Glu Thr Phe Arg Leu His Pro 355 360 365 ccg ate ccg atg etc teg cgt aag tcc acc tcc gat tgc acg gtc aac 1211

Pro lie Pro Met Leu Ser Arg Lys Ser Thr Ser Asp Cys Thr Val Asn 370 375 380 385 ggc tac aaa ate caa gcc aag age etc ttg ttc gtg aac ata tcc 1259

Gly Tyr Lys lie Gin Ala Lys Ser Leu Leu Phe Val Asn lie Trp Ser 390 395 400 ate ggt ega aac cct aat tac tgg gaa age cct atg gag ttc ccc 1307 lie Gly Arg Asn Pro Asn Tyr Trp Glu Ser Pro Met Glu Rie Arg Pro 405 410 415 gag egg ttc ttg gag aag gga ege gag tcc ate gac gtc aag ggc cag 1355

Glu Arg Phe Leu Glu Lys Gly Arg Glu Ser lie Asp Val Lys Gly Gin 420 425 430 cac ttt gag etc ttg cct ttt 鹏 acg 踩c ege 鄕 ggc tgt ccc 跋t 1403

His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly 435 440 445 8 1451 200916578 atg ttg ctg get ata caa gag gtg gtc age ate att ggg acc atg gtt

Met Leu Leu Ala lie Gin Glu Val Val Ser lie lie Gly Thr Met Val 450 455 460 465 cag tgc ttc gac tgg aaa ttg gca gat ggt teg ggc aat aat gtg gac

Gin Cys Phe Asp Trp Lys Leu Ala Asp Gly Ser Gly Asn Asn Val Asp 470 475 480 atg acc gaa egg tet gga ttg acc get ccg aga geg ttc gat ctg gtt

Met Thr Glu Arg Ser Gly Leu Thr Ala Pro Arg Ala Phe Asp Leu Val 485 490 495 tgc egg ttg tat cca egg gtt gac ccg gee aca ata teg ggt get

Cys Arg Leu Tyr Pro Arg Val Asp Pro Ala Thr lie Ser Gly Ala 500 505 510 tgatgtagta gggtgaggcg cgtgttggtg ttttatcttt cggttttgtt ctgttagtat tattatggtc tgtgttgaag cctcaaggat ttt <210〉4 <211〉 512 <212> PRT <213>夏莖 <220> <221〉 <222〉 <223>黃酮合成酶之胺基酸序列 <400> 4

Met Asp Thr Val Leu lie Thr Leu Tyr Thr Ala Leu Phe Val lie Thr 15 10 15

Thr Thr Phe Leu Leu Leu Leu Arg Arg Arg Gly Pro Pro Ser Pro Pro 20 25 30

Gly Pro Leu Ser Leu Pro lie lie Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro 35 40 45

Arg Leu His His Thr Phe His Glu Phe Ser Leu Lys Tyr Gly Pro Leu 50 55 60 lie Gin Leu Lys Leu Gly Ser lie Pro Cys Val Val Ala Ser Ihr Pro 65 70 75 80

Glu Leu Ala Arg Glu Phe Leu Lys Thr Asn Glu Leu Ala Phe Ser Ser 85 90 95

Arg Lys His Ser Thr Ala lie Asp lie Val Thr Tyr Asp Ser Ser Phe 1499 1547 1592 1652 1685 9 200916578 100 105 110

Ala Phe Ser Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Tyr lie Lys Lys Leu Cys 115 120 125

Thr Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Gly His Phe Gin Pro lie 130 135 140

Arg Asn Leu Glu Val Arg Ser Phe Leu Gin Leu Leu Met His Lys Ser 145 150 155 160

Phe Lys Gly Glu Ser Val Asn Val Thr Asp Glu Leu Val Arg Leu Thr 165 170 175

Ser Asn Val He Ser His Met Met Leu Ser lie Arg Cys Ser Glu Asp 180 185 190

Glu Gly Asp Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val lie Arg Glu Val Thr Gin 195 200 205 lie Phe Gly Glu Phe Asp Val Thr Asp lie lie Trp Phe Cys Lys Lys 210 215 220

Phe Asp Leu Gin Gly lie Lys Lys Arg Ser Glu Asp lie Gin Arg Arg 225 230 235 240

Tyr Asp Ala Leu Leu Glu Lys lie lie Ser Asp Arg Glu Arg Ser Arg 245 250 255

Arg Gin Asn Arg Asp Lys Ilis Gly Gly Gly Asn Asn Glu Glu Ala Lys 260 265 270

Asp Phe Leu Asp Met Leu Leu Asp Val Met Glu Ser Gly Asp Thr Glu 275 280 285

Val Lys Phe Thr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu lie Leu Asp Phe Phe 290 295 300

Thr Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala lie Ala Thr Glu Trp Ala lie Ala 305 310 315 320

Glu Leu lie Asn Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gin Glu Glu lie 325 330 335

Ser Arg lie lie Gly Thr Lys Arg lie Val Gin Glu Ser Asp Ala Pro 340 345 350

Asp Leu Pro Tyr Leu Gin Ala lie lie Lys Glu Thr Phe Arg Leu His 355 360 365

Pro Pro lie Pro Met Leu Ser Arg Lys Ser Thr Ser Asp Cys Thr Val 370 375 380

Asn Gly Tyr Lys lie Gin Ala Lys Ser Leu Leu Phe Val Asn lie Trp 10 200916578 385 390 395 400

Ser lie Gly Arg Asn Pro Asn Tyr Trp Glu Ser Pro Met Glu Phe Arg 405 410 415

Pro Glu Arg Phe Leu Glu Lys Gly Arg Glu Ser lie Asp Val Lys Gly 420 425 430

Gin His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro 435 440 445

Gly Met Leu Leu Ala lie Gin Glu Val Val Ser lie lie Gly Thr Met 450 455 460

Val Gin Cys Phe Asp Trp Lys Leu Ala Asp Gly Ser Gly Asn Asn Val 465 470 475 480

Asp Met Thr Glu Arg Ser Gly Leu Thr Ala Pro Arg Ala Phe Asp Leu 485 490 495

Val Cys Arg Leu Tyr Pro Arg Val Asp Pro Ala Thr lie Ser Gly Ala 500 505 510 <210> 5 <211> 1770 <212> DNA <213>紫蘇 <220〉

<221〉 CDS <222> (21)...(1538) <223>核苷酸序列編碼黃酮合成酶 <400〉 5 tgtcgacgga gcaagtggaa atg gca ctg tac gcc gcc etc ttc etc ctg Met Ala Leu Tyr Ala Ala Leu Phe Leu Leu 1 5 10 tcc gcc gcc gtg gtc ege tcc gtt ctg gat ega aaa ege ggg egg ccg

Ser Ala Ala Val Val Arg Ser Val Leu Asp Arg Lys Arg Gly Arg Pro 15 20 25 ccc tac cct ccc ggg ccg ttc cct ett ccc ate ate ggc cac tta cac

Pro Tyr Pro Pro Gly Pro Phe Pro Leu Pro lie lie Gly His Leu His 30 35 40 etc etc ggg ccg aga etc cac caa acc ttc cac gat ctg tcc caa egg

Leu Leu Gly Pro Arg Leu His Gin Thr Phe His Asp Leu Ser Gin Arg 45 50 55 50 98 146 11 194 242200916578 tac ggg ccc tta atg cag etc ege etc ggg tee ate ege tgc gtc att Tyr Gly Pro Leu Met Gin Leu Arg Leu Gly Ser lie Arg Cys Val lie 60 65 7〇 get gee teg ccg gag etc gee gaa tgc etc aag aca cac gag etc Ala Ala Ser Pro Glu Leu Ala Lys Glu Cys Leu Lys Thr His Glu Leu 75 80 85 go gtc ttc tee tee ege aaa cac tee acc gee att gat ate gtc acc tac Val Phe Ser Ser Arg Lys His Ser Ihr Ala lie Asp lie Val Thr Tyr 95 100 105 gat tea tee ttc get ttc tet ccc tac ggg cct tac tgg aaa ttc ate Asp Ser Ser Phe Ala Phe Ser Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Phe lie HO Π5 120 aag aaa tta tgc acc tac gag ctg etc ggg gee ega aat etc gee cac Lys Lys Leu Cys Thr Tyr Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Ala His 125 130 135 ttt cag ccc ate agg act etc gaa gtc aag tet ttc etc caa att ett Phe Gin Pro lie Arg Thr Leu Glu Val Lys Ser Phe Leu Gin lie Leu 140 145 150 atg ege aag ggt gaa teg gag age ttc aac gtg act gag gag etc Met Arg Lys Gly Glu Ser Gly Glu Ser Phe Atsn Val Thr Glu Giu Leu 155 160 165 170 gtg aag ctg aeg age aac gtc ata teg cat atg atg ctg age ata egg Val Lys Leu Thr Ser Asn Val lie Ser His Met Met Leu Ser lie Arg 175 180 185 tgt tea gag aeg gag teg gag geg gag geg geg agg aeg gtg att c踩 Cys Ser Glu Thr Glu Ser Glu Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val lie Arg 190 195 200 gag gtc aeg cag ata ttt gag ttc gac gtc tee gac ate ata tgg Glu Val Thr Gin lie Phe Gly Glu Phe Asp Val Ser Asp lie lie Trp 205 210 215 ett tgt aag aac ttc gat ttc caa ata agg aag egg tee gag gat Leu Cys Lys Asn Phe Asp Phe Gin Gly lie Arg Lys Arg Ser Glu Asp 220 225 230 ate cag aga tat gat get ctg ctg gag aag ate ate acc gac aga lie Gin Arg Arg Tyr Asp Ala Leu Leu Glu Lys lie lie Thr Asp Arg 235 240 245 250 290 338 386 434 482 530 578 626 674 722 12 770 200916578 gag aag cag agg egg acc cac ggc ggc ggt ggc ggc ggc ggg gaa gee 818

Glu Lys Gin Arg Arg Thr His Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Ala 255 260 265 aag gat ttt ett gac atg ttc etc gac ata atg gag age ggg aaa gee 866

Lys Asp Phe Leu Asp Met Phe Leu Asp lie Met Glu Ser Gly Lys Ala 270 275 280 gaa gtt aaa ttc aeg agg gag cat etc aaa get ttg att ctg gat ttc 914

Glu Val Lys Phe Thr Arg Glu His Leu Lys Ala Leu lie Leu Asp Phe 285 290 295 ttc acc gee 既c acc gac aeg aeg geg ate gtg tgt gaa t雜 geg ata 962

Phe Thr Ala Gly Thr Asp Thr Thr Ala lie Val Cys Glu Trp Ala lie 300 305 310 gca gaa gtg ate aac aat cca aat gtg ttg aag aaa get caa gaa gag l〇i〇

Ala Glu Val lie Asn Asn Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gin Glu Glu 315 320 325 330 att gee aac ate gtc gga ttc gac aga att ctg caa gaa tee gac gee 1058 lie Ala Asn lie Val Gly Phe Asp Arg lie Leu Gin Glu Ser Asp Ala 335 340 345 cca aat ctg ccc tac ett caa gee etc ate aaa gaa aca ttc c踩 etc 1106

Pro Asn Leu Pro Tyr Leu Gin Ala Leu lie Lys Glu Thr Phe Arg Leu 350 355 360 cac cct cca ate cca atg ctg geg agg aaa teg ate tee gac tgc gtc 1154

His Pro Pro He Pro Met Leu Ala Arg Lys Ser lie Ser Asp Cys Val 365 370 375 ate gac 踩c tac atg att ccg gee aac aeg ctg etc ttc gtc aac etc 1202 lie Asp Gly Tyr Met lie Pro Ala Asn Thr Leu Leu Phe Val Asn Leu 380 385 390 t踩 tee atg ^ egg aac cct aaa ate tgg gac tac ccg aeg geg ttc 1250

Trp Ser Met Gly Arg Asn Pro Lys lie Trp Asp Tyr Pro Thr Ala Phe 395 400 405 410 cag ccg gag ttt ctg gag aag gaa aag gee gee ate gat gtt aaa 1298

Gin Pro Glu Arg Phe Leu Glu Lys Glu Lys Ala Ala lie Asp Val Lys 415 420 425 cag cat ttt gag ctg eta ccg ttc gga aeg ggc agg aga tgc 1346

Gly Gin His Phe Glu Leu Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys 430 435 440 13 1394 200916578 cca atg ctt tta gcc att cag gag gtg gtc ate ata att ^ aeg

Pro Gly Met Leu Leu Ala lie Gin Glu Val Val lie lie lie Gly Thr 445 450 455 atg att caa tgc ttc gat aag ctg ccc gac ggc tcc cat gtt

Met lie Gin Cys Phe Asp Trp Lys Leu Pro Asp Gly Ser Gly His Val 460 465 470 gat atg gca gaa egg cca etc aeg gca ccg ega gag acc gat ttg

Asp Met Ala Glu Arg Pro Gly Leu Thr Ala Pro Arg Glu Thr Asp Leu 475 480 485 490 ttt tgc cgt gtg gtg ccg ega gtt gat ccg ttg gtt gtt tcc acc cag

Phe Cys Arg Val Val Pro Arg Val Asp Pro Leu Val Val Ser Thr Gin 495 500 505 tgatcacccc ctttaaattt attaatgata tatttttatt ttgagaaaaa ataaaaatgc taattgtttt gtttcatgat gtaattgtta attagtttct attgtgcgct gtcgcgtgtc gcgtggctta agataagatt gtatcattgg tacctaggat gtattttcat tttcaataaa ttattttgtg ctgtgtatat taaaaaaaaa aaagaaaaaa aaaaaaaaaa aa <210〉 6 <211> 506 <212> PRT <213>紫蘇 <220> <221> <222> <223>黃酮合成酶之胺基酸序列 <400> 6

Met Ala Leu Tyr Ala Ala Leu Phe Leu Leu Ser Ala Ala Val Val Arg ! 5 10 15

Ser Val Leu Asp Arg Lys Arg Gly Arg Pro Pro Tyr Pro Pro Gly Pro 20 25 30

Phe Pro Leu Pro He lie Gly His Leu His Leu Leu Gly Pro Arg Leu 35 4〇 45

His Gin Thr Phe His Asp Leu Ser Gin Arg Tyr Gly Pro Leu Met Gin 5〇 55 60

Leu Arg Leu Gly Ser lie Arg Cys Val He Ala Ala Ser Pro Glu Leu 65 70 75 80

Ala Lys Glu Cys Leu Lys Thr His Glu Leu Val Phe Ser Ser Arg Lys 1442 1490 1538 1598 1658 1718 1770 14 200916578 85 90 95

His Ser Thr Ala lie Asp lie Val Ihr Tyr Asp Ser Ser Phe Ala Phe 100 105 110

Ser Pro Tyr Gly Pro Tyr Trp Lys Phe lie Lys Lys Leu Cys Ihr Tyr 115 120 125

Glu Leu Leu Gly Ala Arg Asn Leu Ala His Phe Gin Pro lie Arg Thr 130 135 140

Leu Glu Val Lys Ser Phe Leu Gin lie Leu Met Arg Lys Gly Glu Ser 145 150 155 160

Gly Glu Ser Phe Asn Val Thr Glu Glu Leu Val Lys Leu Thr Ser Asn 165 170 175

Val lie Ser His Met Met Leu Ser lie Arg Cys Ser Glu Thr Glu Ser 180 185 190

Glu Ala Glu Ala Ala Arg Thr Val lie Arg Glu Val Thr Gin lie Phe 195 200 205

Gly Glu Phe Asp Val Ser Asp lie lie Trp Leu Cys Lys Asn Phe Asp 210 215 220

Phe Gin Gly lie Arg Lys Arg Ser Glu Asp lie Gin Arg Arg Tyr Asp 225 230 235 240

Ala Leu Leu Glu Lys lie lie Thr Asp Arg Glu Lys Gin Arg Arg Thr 245 250 255

His Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Ala Lys Asp Phe Leu Asp Met 260 265 270

Phe Leu Asp lie Met Glu Ser Gly Lys Ala Glu Val Lys Phe Thr Arg 275 280 285

Glu His Leu Lys Ala Leu lie Leu Asp Phe Phe Thr Ala Gly Thr Asp 290 295 300

Thr Thr Ala lie Val Cys Glu Trp Ala lie Ala Glu Val lie Asn Asn 305 310 315 320

Pro Asn Val Leu Lys Lys Ala Gin Glu Glu lie Ala Asn lie Val Gly 325 330 335

Phe Asp Arg lie Leu Gin Glu Ser Asp Ala Pro Asn Leu Pro Tyr Leu 340 345 350

Gin Ala Leu lie Lys Glu Thr Phe Arg Leu His Pro Pro lie Pro Met 355 360 365

Leu Ala Arg Lys Ser lie Ser Asp Cys Val lie Asp Gly Tyr Met lie 15 200916578 370 375 380

Pro Ala Asn Thr Leu Leu Phe Val Asn Leu Trp Ser Met Gly Arg Asn 385 390 395 400

Pro Lys lie Trp Asp Tyr Pro Thr Ala Phe Gin Pro Glu Arg Phe Leu 405 410 415

Glu Lys Glu Lys Ala Ala lie Asp Val Lys Gly Gin His Phe Glu Leu 420 425 430

Leu Pro Phe Gly Thr Gly Arg Arg Gly Cys Pro Gly Met Leu Leu Ala 435 440 445 lie Gin Glu Val Val lie lie lie Gly Thr Met lie Gin Cys Phe Asp 450 455 460

Trp Lys Leu Pro Asp Gly Ser Gly His Val Asp Met Ala Glu Arg Pro 465 470 475 480

Gly Leu Thr Ala Pro Arg Glu Thr Asp Leu Phe Cys Arg Val Val Pro 485 490 495

Arg Val Asp Pro Leu Val Val Ser Thr Gin 500 505 <210> 7 <211> 1781 <212> DNA <213>三色蓳 <220〉 <221〉 CDS <222> (7)...(1524) <223>核苷酸序列編碼類黃酮_3' 5’ _氫氧化酶 <400> 7 gacaac atg gca att eta gtc acc gac ttc gtt gtc geg get ata att Met Ala lie Leu Val Thr Asp Phe Val Val Ala Ala lie lie 1 5 10 ttc ttg ate act egg ttc tta gtt cgt tet ett ttc aag aaa cca acc

Phe Leu lie Thr Arg Phe Leu Val Arg Ser Leu Phe Lys Lys Pro Thr 15 20 25 30 ega ccg etc ccc ccg ggt cct etc ggt tgg ccc ttg gtg ggc gcc etc

Arg Pro Leu Pro Pro Gly Pro Leu Gly Trp Pro Leu Val Gly Ala Leu 35 40 45 cct etc eta ggc gcc atg cct cac gtc gca eta gcc aaa etc get aag 48 96 144 16 192 200916578

Pro Leu Leu Gly Ala Met Pro His Val Ala Leu Ala Lys Leu Ala Lys 50 55 60 aag tat 座七 ccg ate atg cac eta aaa atg acg tgc gac atg gtg 240

Lys Tyr Gly Pro lie Met His Leu Lys Met Gly Thr Cys Asp Met Val 65 70 75 gtc geg tcc acc ccc gag teg get ega gee ttc etc aaa aeg eta gac 288

Val Ala Ser Thr Pro Glu Ser Ala Arg Ala Phe Leu Lys Thr Leu Asp 80 85 90 etc aac ttc tec aac ege cca ccc aac geg 辟c gca tec cac eta geg 336

Leu Asn Phe Ser Asn Arg Pro Pro Asn Ala Gly Ala Ser His Leu Ala 95 100 105 110 tac 雜c geg cag gac tta gtc ttc gee aag tac ggt ccg 鄕 t怨 aag 384

Tyr Gly Ala Gin Asp Leu Val Phe Ala Lys Tyr Gly Pro Arg Trp Lys 115 120 125 act tta aga aaa ttg age aac etc cac atg eta ggc ggg aag geg ttg 432

Thr Leu Arg Lys Leu Ser Asn Leu His Met Leu Gly Gly Lys Ala Leu 130 135 140 gat gat tgg gca aat gtg agg gtc acc gag eta ggc cac atg ett aaa 480

Asp Asp Trp Ala Asn Val Arg Val Thr Glu Leu Gly His Met Leu Lys 145 150 155 gee atg tgc gag geg age egg tgc gag ccc gtg gtg ctg gee gag 528

Ala Met Cys Glu Ala Ser Arg Cys Gly Glu Pro Val Val Leu Ala Glu 160 165 170 atg etc aeg tac gee atg geg aac atg ate caa gtg ata etc age 576

Met Leu Thr Tyr Ala Met Ala Asn Met lie Gly Gin Val lie Leu Ser 175 180 185 190 egg ege gtg ttc gtg acc aaa acc gag tet aac gag ttc aaa gac 624

Arg Arg Val Phe Val Thr Lys Gly Thr Glu Ser Asn Glu Phe Lys Asp 195 200 205 atg gtg gtc gag ttg atg aeg tec gee ggg tac ttc aac ate ggt gac 672

Met Val Val Glu Leu Met Thr Ser Ala Gly Tyr Phe Asn lie Gly Asp 21〇 215 220 ttc ata ccc teg ate get tgg atg gat ttg caa ggg ate gag ega ggg 720

Phe lie Pro Ser lie Ala Trp Met Asp Leu Gin Gly lie Glu Arg Gly 225 230 235 atg aag aag ctg cac aeg aag ttt gat gtg tta ttg aeg aag atg gtg 768 17 200916578

Met Lys Lys Leu His Thr Lys Phe Asp Val Leu Leu Thr Lys Met Val 240 245 250 aag gag cat aga gcg acg agt cat gag cgc aaa ggg aag gca gat ttc 816

Lys Glu His Arg Ala Ihr Ser His Glu Arg Lys Gly Lys Ala Asp Phe 255 260 265 270 etc gac gtt etc ttg gaa gaa tgc gac aat aca aat ggg gag aag ett 864

Leu Asp Val Leu Leu Glu Glu Cys Asp Asn Ihr Asn Gly Glu Lys Leu 275 280 285 agt att acc aat ate aaa get gtc ett ttg aat eta ttc acg gcg 媒c 912

Ser lie Thr Asn lie Lys Ala Val Leu Leu Asn Leu Phe Thr Ala Gly 290 295 300 acg gac aca tet teg age ata ate gaa tgg gcg tta acg gag atg ate 960

Thr Asp Thr Ser Ser Ser lie lie Glu Trp Ala Leu Thr Glu Met lie 305 310 315 aag aat ccg acg ate tta aaa aag gcg caa gag gag atg gat ega gtc 1008

Lys Asn Pro Thr lie Leu Lys Lys Ala Gin Glu Glu Met Asp Arg Val 320 325 330 ate ggt cgt gat egg agg ctg etc gaa teg gac ata teg age etc ccg 1056 lie Gly Arg Asp Arg Arg Leu Leu Glu Ser Asp He Ser Ser Leu Pro 335 340 345 350 tac eta caa gee att get aaa gaa acg tat cgc aaa cac ccg teg acg 1104

Tyr Leu Gin Ala lie Ala Lys Glu Thr Tyr Arg Lys His Pro Ser Thr 355 360 365 cct etc aac ttg ccg agg att gcg ate caa gca tgt gaa gtt gat ggc 1152

Pro Leu Asn Leu Pro Arg lie Ala lie Gin Ala Cys Glu Val Asp Gly 370 375 380 tac tac ate cct aag gac gcg agg ett age gtg aac att t路 gcg ate 1200

Tyr Tyr lie Pro Lys Asp Ala Arg Leu Ser Val Asn lie Trp Ala He 385 390 395 ggt egg gac ccg aat gtt gag aat ccg ttg gag ttc ttg ccg gaa 1248

Giy Aig Asp Pro Asn Vai Trp Glu Asn Pro Leu Glu Phe Leu Pro Glu 400 405 410 aga ttc ttg tet gaa gag aat ggg aag ate aat ccc ggt ggg aat gat 1296

Arg Phe Leu Ser Glu Glu Asn Gly Lys lie Asn Pro Gly Gly Asn Asp 415 420 425 430 ttt gag ctg att ccg ttt gga gee ggg agg aga att tgt gcg ggg aca 1344 18 1392 200916578

Phe Glu Leu lie Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg lie Cys Ala Gly Thr 435 440 445 agg atg gga atg gtc ctt gta agt tat att ttg ggc act ttg gtc cat

Arg Met Gly Met Val Leu Val Ser Tyr lie Leu Gly Thr Leu Val His 450 455 460 tct ttt gat tgg aaa tta cca aat ggt gtc get gag ctt aat atg gat

Ser Phe Asp Trp Lys Leu Pro Asn Gly Val Ala Glu Leu Asn Met Asp 465 470 475 gaa agt ttt ggg ctt gca ttg caa aag gcc gtg ccg etc teg gcc ttg

Glu Ser Phe Gly Leu Ala Leu Gin Lys Ala Val Pro Leu Ser Ala Leu 480 485 490 gtc age cca egg ttg gcc tea aac geg tac gca acc tgagctaatg Val Ser Pro Arg Leu Ala Ser Asn Ala Tyr Ala Thr 495 500 505 ggctgggcct agttttgtgg geettaattt agagactttt gtgttttaag gtgtgtactt tattaattgg gtgcttaaat gtgtgtttta atttgtattt atggttaatt atgaetttat tgtataatta tttatttttc ccttctgggt attttatcca tttaattttt cttcagaatt atgatcatag ttatcagaat aaaattgaaa ataatgaatc ggaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa <210〉 8 <211> 506 <212> PRT <213>三色莖 <220〉 <221〉 <222〉 <223>類黃酮-3’，5’ -氫氧化酶之胺基酸序列 <400> 8

Met Ala lie Leu Val Thr Asp Phe Val Val Ala Ala He lie Phe Leu 15 10 15 lie Ihr Arg Phe Leu Val Arg Ser Leu Phe Lys Lys Pro Thr Arg Pro 20 25 30

Leu Pro Pro Gly Pro Leu Gly Trp Pro Leu Val Gly Ala Leu Pro Leu 35 40 45

Leu Gly Ala Met Pro His Val Ala Leu Ala Lys Leu Ala Lys Lys Tyr 50 55 60 1440 1488 1534 1594 1654 1714 1774 1781 19 200916578

Gly Pro lie Met His Leu Lys Met Gly Thr Cys Asp Met Val Val Ala 65 70 75 80

Ser Thr Pro Glu Ser Ala Arg Ala Phe Leu Lys Thr Leu Asp Leu Asn 85 90 95

Phe Ser Asn Arg Pro Pro Asn Ala Gly Ala Ser His Leu Ala Tyr Gly 100 105 110

Ala Gin Asp Leu Val Phe Ala Lys Tyr Gly Pro Arg Trp Lys Thr Leu 115 120 125

Arg Lys Leu Ser Asn Leu His Met Leu Gly Gly Lys Ala Leu Asp Asp 130 135 140

Trp Ala Asn Val Arg Val Thr Glu Leu Gly His Met Leu Lys Ala Met 145 150 155 160

Cys Glu Ala Ser Arg Cys Gly Glu Pro Val Val Leu Ala Glu Met Leu 165 170 175

Thr Tyr Ala Met Ala Asn Met lie Gly Gin Val lie Leu Ser Arg Arg 180 185 190

Val Phe Val Thr Lys Gly Thr Glu Ser Asn Glu Phe Lys Asp Met Val 195 200 205

Val Glu Leu Met Thr Ser Ala Gly Tyr Phe Asn lie Gly Asp Phe lie 210 215 220

Pro Ser lie Ala Trp Met Asp Leu Gin Gly lie Glu Arg Gly Met Lys 225 230 235 240

Lys Leu His Thr Lys Phe Asp Val Leu Leu Thr Lys Met Val Lys Glu 245 250 255

His Arg Ala Thr Ser His Glu Arg Lys Gly Lys Ala Asp Phe Leu Asp 260 265 270

Val Leu Leu Glu Glu Cys Asp Asn Thr Asn Gly Glu Lys Leu Ser lie 275 280 285

Thr Asn lie Lys Ala Val Leu Leu Asn Leu Phe Thr Ala Gly Thr Asp 290 295 300

Thr Ser Ser Ser He lie Glu Trp Ala Leu Thr Giu Met lie Lys Asn 305 310 315 320

Pro Thr lie Leu Lys Lys Ala Gin Glu Glu Met Asp Arg Val lie Gly 325 330 335

Arg Asp Arg Arg Leu Leu Glu Ser Asp lie Ser Ser Leu Pro T>t Leu 340 345 350 20 200916578

Gin Ala lie Ala Lys Glu Thr Tyr Arg Lys His Pro Ser Ihr Pro Leu 355 360 365

Asn Leu Pro Arg lie Ala lie Gin Ala Cys Glu Val Asp Gly Tyr Tyr 370 375 380 lie Pro Lys Asp Ala Arg Leu Ser Val Asn lie Trp Ala lie Gly Arg 385 390 395 400

Asp Pro Asn Val Trp Glu Asn Pro Leu Glu Phe Leu Pro Glu Arg Phe 405 410 415

Leu Ser Glu Glu Asn Gly Lys lie Asn Pro Gly Gly Asn Asp Phe Glu 420 425 430

Leu lie Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg lie Cys Ala Gly Thr Arg Met 435 440 445

Gly Met Val Leu Val Ser Tyr lie Leu Gly Thr Leu Val His Ser Phe 450 455 460

Asp Trp Lys Leu Pro Asn Gly Val Ala Glu Leu Asn Met Asp Glu Ser 465 470 475 480

Phe Gly Leu Ala Leu Gin Lys Ala Val Pro Leu Ser Ala Leu Val Ser 485 490 495

Pro Arg Leu Ala Ser Asn Ala Tyr Ala Thr 500 505 <210> 9 <211〉 1014 <212> DNA <213>夏堇 <220〉 <221〉 CDS <222> (69)…（785) <223>核苷酸序列編碼曱基轉移酶 <400> 9 60 107 cggcacgagt tcaattccgc cattttctcc aataataaca ttcataaata caatcagcag cagcaaaa atg aaa gat aag ttc tat ggc acc att ttg cag age gaa Met Lys Asp Lys Phe Tyr Gly Thr lie Leu Gin Ser Glu 1 5 10 gcc etc gca aag tat ctg tta gag aca agt gcc tat cca ega gaa cat Ala Leu Ala Lys Tyr Leu Leu Glu Thr Ser Ala Tyr Pro Arg Glu His 15 20 25 21 155 200916578 ccg cag etc aaa gaa eta agg age gca act gtg gac aag tat caa tat 203

Pro Gin Leu Lys Glu Leu Arg Ser Ala Thr Val Asp Lys Tyr Gin Tyr 30 35 40 45 tgg age ttg atg aat gtt cca get gat gag ggg cag ttc att tea atg 251

Trp Ser Leu Met Asn Val Pro Ala Asp Glu Gly Gin Phe lie Ser Met 50 55 60 tta ctg aaa att atg aac gca aaa aag aca att gaa gtt gga gtt ttc 299

Leu Leu Lys lie Met Asn Ala Lys Lys Thr lie Glu Val Gly Val Phe 65 70 75 aca ggc tac tea etc eta tea act get ctg get eta cct gat gat ggc 347

Thr Gly Tyr Ser Leu Leu Ser Thr Ala Leu Ala Leu Pro Asp Asp Gly 80 85 90 aaa ate gtt gee att gat cct gat aga gaa get tat gag act ggt ttg 395

Lys lie Val Ala lie Asp Pro Asp Arg Glu Ala Tyr Glu Thr Gly Leu 95 100 105 cca ttt ate aag aaa gca aac gtg get cat aaa ate caa tac ata caa 443

Pro Phe lie Lys Lys Ala Asn Val Ala His Lys lie Gin Tyr lie Gin 110 115 120 125 tet gat gee atg aaa gtc atg aat gac etc att get gee aag gga gaa 491

Ser Asp Ala Met Lys Val Met Asn Asp Leu He Ala Ala Lys Giy Giu 130 135 140 gaa gaa gag ggg age ttt gac ttt ggg ttc gtg gat gca gac aaa gaa 539

Glu Glu Glu Gly Ser Phe Asp Phe Gly Phe Val Asp Ala Asp Lys Glu 145 150 155 aac tac ata aac tac cac gag aaa ctg ttg aag ctg gtt aag gtt gga 587

Asn Tyr lie Asn Tyr His Glu Lys Leu Leu Lys Leu Val Lys Val Gly 160 165 170 ggg ate ata gga tac gac aac act ctg tgg tet gga aca gtt get gca 635

Gly lie lie Gly Tyr Asp Asn Thr Leu Trp Ser Gly Thr Val Ala Ala 175 180 185 tet gaa gac gat gag aat aat atg caa gac tac tta aga ggt tgc aga 683

Se,r Glu Asp Asp Glu Asn Asn Met Gin Asp Tyr Leu Arg Gly Cys Arg 190 195 200 205 ggg cat ate etc aaa eta aac tee ttt etc gca aac gat gat egg att 731

Gly His lie Leu Lys Leu Asn Ser Phe Leu Ala Asn Asp Asp Arg lie 210 215 220 22 779 200916578 gaa ttg get cac etc tet att gat gga etc acc ttg tgc aaa cgt Glu Leu Ala His Leu Ser lie Gly Asp Gly Leu Thr Leu Cys Lys Arg 225 230 235 835 895 955 1014 etc aaa taataatttt caactttatt attattgttt cataaaaagc atttactgct Leu Lys ggcct^cct ^cctgtttc ageatettat atttctattg ttctaaatat tttagttatc ttgtttatca acttgtctgt cttatatgtt taaaagaaag atgtcatgta attgtaactc gate卿etc ttgtaatatt ataatgaatt ttattgattt caaaaaaaaa aaaaaaaaa <210> 10 <211> 239 <212> PRT <213>夏堇 <220> <221> <222> <223>甲基轉移酶之胺基酸序列 <400 10

Met Lys Asp Lys Phe Tyr Gly Thr lie Leu Gin Ser Glu Ala Leu Ala 15 10 15

Lys Tyr Leu Leu Glu Thr Ser Ala Tyr Pro Arg Glu His Pro Gin Leu 20 25 30

Lys Glu Leu Arg Ser Ala Thr Val Asp Lys Tyr Gin Tyr Trp Ser Leu 35 40 45

Met Asn Val Pro Ala Asp Glu Gly Gin Phe lie Ser Met Leu Leu Lys 50 55 60 lie Met Asn Ala Lys Lys Thr lie Glu Val Gly Val Phe Thr Gly Tyr 65 70 75 80

Ser Leu Leu Ser Thr Ala Leu Ala Leu Pro Asp Asp Gly Lys lie Val 85 90 95

Ala lie Asp Pro Asp Arg Glu Ala Tyr Glu Ihr Gly Leu Pro Phe lie 100 105 110

Lys Lys Ala Asn Val Ala His Lys lie Gin Tyr lie Gin Ser Asp Ala 115 120 125

Met Lys Val Met Asn Asp Leu lie Ala Ala Lys Gly Glu Glu Glu Glu 130 135 140

Gly Ser Phe Asp Phe Gly Phe Val Asp Ala Asp Lys Glu Asn Tyr lie 23 200916578 145 150 155 160

Asn Tyr His Glu Lys Leu Leu Lys Leu Val Lys Val Gly Gly lie lie 165 170 175

Gly Tyr Asp Asn Thr Leu Trp Ser Gly Thr Val Ala Ala Ser Glu Asp 180 185 190

Asp Glu Asn Asn Met Gin Asp Tyr Leu Arg Gly Cys Arg Gly His lie 195 200 205

Leu Lys Leu Asn Ser Phe Leu Ala Asn Asp Asp Arg lie Glu Leu Ala 210 215 220

His Leu Ser lie Gly Asp Gly Leu Thr Leu Cys Lys Arg Leu Lys 225 230 235 <210〉 11 <211〉 16 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 <221〉 <222〉 <223>引子 <m> ii aacagct atg accatg 16 <210> 12 <211> 28 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 <221〉 <222〉 <223>引子 <400> 12 gatcttgtta agcttgttgt agacatac 28 24

Claims (1)

1. 200916578 十、申請專利範圍： 1. 一種玫瑰(a rose) ’係藉由基因重組方法含黃酮者。 2·如申請專利範圍第丨項之玫瑰，其中前述黃綱係藉由表 現所導入之黃酮合成酶基因而生成者。 5 3·如申請專利範圍第2項之玫瑰，其中前述黃酮合成酶基 因係源自玄參科之黃_合成酶基因。 4.如申請專利範圍第3項之玫瑰，其中前述源自玄參科之 黃酮合成酶基因係源自玄參科金魚草（Scrophulariaceae， Antirrhinum majus)之黃酮合成酶基因。 10 5.如申請專利範圍第3項之玫瑰，其甲前述源自玄參科之 黃酮合成酶基因係源自玄參科夏莖（Scrophulariaceae, Toreniahybrida)之黃_合成酶基因。 6.如申請專利範圍第4項之玫瑰，其中前述源自玄參科金 魚草之黃酮合成酶基因係編碼： 15 (1)具有記載於序列編號2之胺基酸序列的黃酮合成 酶； (2)具有在記載於序列編號2之胺基酸序列中，藉由i 個〜數個胺基酸的附加、欠缺及/或以其他胺基酸取代所 修飾之胺基酸序列的黃酮合成酶； 0 (3)具有相對於記載於序列編號2之胺基酸序列，具 90%以上之序列相同性之胺基酸序列的黃酮合成酶；及 (4)藉由與具有序列編號1所示之鹼基序列的核酸在 高嚴苛條件下雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶， 中任一者的基因。 200916578 7. 如申請專利範圍第5項之玫瑰，其中前述源自玄參科夏 蓳之黃酮合成酶基因係編碼： (1)具有記載於序列編號4之胺基酸序列的黃酮合成 酶； 5 (2)具有在記載於序列編號4之胺基酸序列中，藉由1 個〜數個胺基酸的附加、欠缺及/或以其他胺基酸取代所 修飾之胺基酸序列的黃酮合成酶； (3)具有相對於記載於序列編號4之胺基酸序列，具 90%以上之序列相同性之胺基酸序列的黃酮合成酶；及 10 (4)藉由與具有序列編號3所示之鹼基序列的核酸在 高嚴苛條件下雜交的核酸所編碼的黃酮合成酶， 中任一者的基因。 8. 如申請專利範圍第2〜7項中任一項之玫瑰，其中相較於 導入黃酮合成酶基因前的宿主，其花色有產生變化。 15 9.如申請專利範圍第8項之玫瑰，其中前述花色的變化係 朝向藍色的變化。 10.如申請專利範圍第8項之玫瑰，其中前述花色的變化係 L*a*b表色系色度圖中的色相角度（Θ)接近藍色方向軸 之270°的變化。 20 11.如申請專利範圍第8項之玫瑰，其中前述花色的變化係 花瓣的反射光譜極小值往長波長側移動的變化。 12. —種玫瑰的部分、子孫、組織、營養增殖體或細胞，係 具有與申請專利範圍第1〜11項中任一項之玫瑰相同性 質者。 2 200916578 B. —種方法，係藉由共色效果改變玫瑰花色，且該共色效 果係因藉基因重組方法含黃酮而產生。 14.如申請專利範圍第13項之方法，其中前述共色效果係使 花色往藍色方向變化的效果。 200916578 七、指定代表圖： (一） 本案指定代表圖為：第（無）圖。 (二） 本代表圖之元件符號簡單說明： 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：