TW200820978A - Use of LXR agonists for the treatment of osteoarthritis - Google Patents

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200820978 九、發明說明： 發明領域 本發明係關於用L X R激動劑來治療或預防骨關節炎的 5 方法。 【先前技術3 發明背景 骨關節炎，也被知道為退化性關節疾病，係特徵在於 關節軟骨的退化以及軟骨下方硬骨的增殖和重塑。通常的 10症狀是僵硬、動作的限制，以及疼痛。骨關節炎是關節炎 最常見的形式’以及盛行的速率隨著年齡而顯著地增加。 現行的骨關節炎治療方法包括運動、藥物、休息以及 關節照顧、手術疼痛的緩解技術、任擇的療法，和體重控 制。普遍地被使用於治療骨關節炎的藥物包括非類固醇抗 I5發炎藥物（NSAIDs) ’舉例而言：阿斯匹靈，依普芬 (ibuprofen)，那普洛辛鈉（naproxeil s〇dium)，可多普洛非 (ketoprofen);直接地塗於皮膚之局部的緩解疼痛的乳膏， 按摩，和喷霧(舉例而言，辣椒素(capsaicin)乳膏）；皮質類 固醇，典型地被注射至受侵襲的關節内以暫時地缓解疼 2〇痛；以及透明質酸。手術可以被執行以替骨路鋪設新表面 (smooth om)，使骨骼復位，以及取代關節。縱然各種各樣 的藥物已經被使用於治療此疾病，其等對於長期的控制和 預防不是有效的。 肝X受體(LXRS)，原、來自肝被鑑定為孤兒受體，是核 200820978 激素受體超級家族的成員以及已經被發現是巨噬細胞發炎 基因的表現之負向的調節子(見公開的美國專利申請案案 號 2004/0259948 ; J0seph SB 等人，Nat· Med· 9:213-19 (2003))。LXR是配體-活化的轉錄因子以及結合至DNA作 5為維生素A酸類(retinoid) X受體之義務的異種二聚體。雖然 LXRa被侷限於某些組織，如：肝、腎、脂肪、小腸，和旦 噬細胞，LXR/5顯現出一種普遍存在的組織分佈形態。巨噬 細胞内藉由氧化類固醇（内生的配體）之LXR的活化導致數 種涉及脂質代謝和反向膽固醇運輸之基因的表現，包括 10 ABCA1，ABCG1，和缺辅基月旨蛋白E。 【明内】 發明概要 一種態樣是關於一種用於一種罹患骨關節炎的哺乳動 物之治療的方法，其包含投藥一種LXR-反應性基因表現-15 誘導量的一種LXR激動劑至需要其之哺乳動物。 另一種態樣是關於一種誘導一種具有骨關節炎的軟骨 之哺乳動物體内的缺輔基脂蛋白D的表現的方法，其包含投 藥一有效量的一種LXR激動劑至需要其之哺乳動物。 一種另外的態樣係關於一種預防骨關節炎的方法，其 20包含：0)決定一個個體的正常的軟骨内之一基線缺辅基脂 蛋白D的表現位準；以及(b)經由以LXR激動劑的治療維持 該個體的軟骨内之基線缺辅基脂蛋白D的表現位準。 一種額外的態樣疋關於一種用於一種罹患骨關節炎的 哺乳動物之治療的方法，其包含投藥一種聚蛋白多醣酶 6 200820978 (aggrecanase)活性-抑制量的一種lxr激動 乳動物。 w t要其之哺 一種另外的態樣是關於一種抑制一種具成 軟骨之哺乳動物體内的聚蛋白多醣酶的活性之=關節炎的 含投藥一有效量的一種LXR激動劑至兩 去’其包 而赘具之哺乳氣 另一種態樣係關於一種用於一種溫虫瓜 勒物。 種惟患骨關節炎的 動物之治療的方法，其包含投藥一有效量的 、甫孔 劑至需要其之哺乳動物以抑制骨關節炎的損宝種LXR激動 細胞激素的精緻化(elaboration)。 ' 的知發炎 10 15 -種額外的態樣係關於-種读測_個個體内、 關節炎表現型的方法，其包含：（幻味a 的一種骨 决疋一個正常 之一基線缺輔基脂蛋白D的表現位進· 、人月内 干’（b)獲得來自一 μ

懷疑具有骨關節炎的個體之一種軟骨樣本·、曰一個被 樣本中之缺輔基脂蛋白D的表現位準;其中相輕及(C)谓測該 基脂蛋白D的表現，該樣本中一較低量的^土線缺辅 表現係表明骨關節炎。 、土月曰蛋白D -種另外的態樣是關於-種鐘定_ 的骨關節炎的作用之LXR配體的方法降低敕h 種包含LXR的樣本；（b)接觸該樣本與一種 /·、- 及⑷決定是否該測試化合物誘導缺 ° 現’抑制聚蛋白多_的活性，抑制前^脂蛋白％ 緻化，或是其等之-種組合。則^胞激素的米 本發明之其他的態樣和優點當參昭於下 細說明對於本技藝中具有技術的那些:將變： 20 200820978 圖式簡單說明 第1A圖是一個長條圖，其顯示於具有嚴重的骨關節炎 (OA)之軟骨内的核受體(NR)的表現之相對表現位準。第1B 圖是一個長條圖，其顯示於具有嚴重的〇A的軟骨内之維生 5 素A酸類(retinoid)受體的表現之相對表現位準。 第2A圖是一個長條圖，其顯示於正常的軟骨内，以及 具有輕微的0A和嚴重的0A的軟骨内之Ap〇D的表現。疾病 嚴重性係巨觀地藉由檢查軟骨檢體内的損害之大小與深度 予以評估。第2B圖是一個長條圖，其顯示於正常的軟骨内， 10以及具有輕微的〇A和嚴重的0A的軟骨内之tnF〇!的表現。 第3圖是一個長條圖，其顯示細胞激素誘導的自人類 0A軟骨培植體之蛋白多糖降解/釋放係藉由1^<^激動劑予 以抑制，以及此等培植體内之細胞激素誘導的總蛋白多糖 含里的降低係藉由LXR激動劑予以預防。 15 第4A圖疋一種使用BC_3抗體之西方墨點，其顯示聚蛋 白多醣酶產生的聚蛋白多醣新抗原決定位，其辨認聚蛋白 多醣酶產生的?《白多醣異化產物上之义端。來自具有末 階段的OA(在關節置換手術之後）之2個人類供者的軟骨培 植體係被使用。供者#259是-位57歲的男性病人，以及供 20者#261是-位55歲的女性病人。徑w :載劑。徑2,6 : ΤΟ901317(2μΜ)。徑 3,7 : IL_1/3+抑瘤素 M(〇nc〇statin M)(0SM)(各10 ng/ml)。捏 4, 8 : IL-1/5+ OSM + TO901317。 第4B圖疋-種使用AGEG抗體之西方墨點，其顯示聚蛋白 多醣酶產生的聚蛋白多_新抗原決定位，其辨認聚蛋白多 8 200820978 醣酶產生的聚蛋白多醣異化產物之不同的抗原決定位。徑 1，5:載劑。徑2, 6:ΤΟ901317(2 μΜ)。徑3, 7:IL-l/3 + OSM(各 10 ng/ml)。徑4, 8 ·· IL“li8 + OSM + TO901317。 第5A圖是一個長條圖，其顯示藉由LXR激動劑之來自 5細胞激素-處理的人類軟骨培植體的總前列腺素E2(PGE2) 的生產之抑制。第5B圖比較於以載劑對照或LXR激動劑 GW3965(2/iM)予以處理歷時21天的培植體之内的、以膜磷 脂PC和PE的形式存在之花生四烯酸的量。來自2個人類〇A 供者的軟骨樣本係被使用於此研究中。 10 【實施方式】 較佳實施例之詳細說明 申請人特別地併入本揭示中全部引用的參考資料之全 部内容。而且，當一個量、濃度，或是其他的值或參數被 提供為一範圍，較佳的範圍，或是較高的較佳值和較低的 15較佳值的一個表時，要瞭解到如同特別地揭示全部的範圍 係由較高的範圍界限或較佳的值以及任何較低的範圍界限 或較佳的值之任何一對予以形成的，不管是否範圍被分別 地揭示。當數值的一範圍被列舉於本文中，除非以其他方 式陳述’該範圍係意欲包括其等之端點，以及於範圍之内 20的全部的整數和分數。不希望本發明的範疇被限制至被列 舉的特定的值，當定義一個範圍時。 本發明的實施將使用，除非另外指出，細胞生物學、 細胞培養、分子生物學、基因轉殖生物學、微生物學、重 組型DNA，以及免疫學之慣用的技術，其等係落在本技藝 9 200820978 的技術之内。此等技術係於文獻中被完整地解釋。見，舉 例而言：Sambrook，Fritsch和 Maniatis 的 Molecular Cloning :

A Laboratory Manual, 2nd Ed·，ed.(Cold Spring Harbor Laboratory Press ·· 1989) ; DNA Cloning，第 I和 II冊（D. N· 5 Glover ed.5 1985) ； Oligonucleotide Synthesis(M. J. Gait ed.? 1984);美國專利案案號 4,683，195 ; Nucleic Acid Hybridization(B. D. Hames & S. J. Higgins eds. 1984)； Transcription and Translation(B. D. Hames & S. J. Higgins eds. 1984) ； Culture of Animal Cells(R. I. Freshney, Alan R. 10 Liss，Inc.，1987); Immobilized Cells and Enzymes(IRL Press， 1986) ； B. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning(1984) ; Methods in Enzymology(Academic Press， Inc.5 N.Y.) ； Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J. H. Miller 和 M. P. Calos eds·，1987，Cold Spring Harbor 15 Laboratory) ; Methods in Enzymology，第 154和 155冊(Wu等 人 eds.)5 Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology(Mayer 和 Walker，eds·，Academic Press, London, 1987) ; Handbook of Experimental Immunology，第 I-IV冊（D. M· Weir和 C. C. Blackwell，eds.，1986) ; Manipulating the 20 Mouse Embryo?(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor，N.Y·，1986)。 於此，申請人證明LXRce和LXRiS(肝X受體o:和]8)係被表 現於正常的、中度的骨關節炎，以及嚴重的骨關節炎軟骨 内。申請人亦首次展示骨關節炎内一種似乎有理的脂質缺 10 200820978 陷，因為缺輔基脂蛋白D(Apo D)的表現，其係以一種非常 高的位準於正常的軟骨内表現，係於中度和嚴重的骨關節 炎軟骨内被引人注目地向下調控。LXR配體係經由一種出 現於Apo D啟動子區域中的LXR反應要件而誘導八][)〇 〇的 5表現。依照表現資料，當相較於正常的軟骨時，於骨關節 炎之軟骨樣本内的前缺輔基脂蛋白D的蛋白位準也被降 低。因為Apo D是一種脂質（花生四烯酸和膽固醇）結合蛋 白，其於骨關節炎軟骨内之降低之可以對於骨關節炎軟骨 内觀察到的增加的脂質位準負有責任。軟骨内增加的花: 10四烯酸係被預期要導致不健全的組織内之増加位準的發炎 脂質媒介(PGE2，白三烯素’和類似物）。骨關節炎軟^ 顯不軟骨-降解酵素（聚蛋白多醣酶和金屬蛋白酶)之増加的 活性。 曰口' 申請人亦首次證明LXR配體抑制人類f|請炎關 15骨組織培植體中的聚蛋白多_的活性^XR配體也1 TNF α，以及-些其他的前發炎細胞激素的表現。因而，二 種LXR配體係被預期在骨關節炎上是治療上有效的，以— 比起現行的以及即將來臨的骨關節炎療法是更有效的，^ 係藉由正常化脂質缺陷，抑制聚蛋白多釀酶/金屬蛋二 20表現及/或活性，以及抑制骨關節炎内的損害之前發炎= 激素的精緻化。而且’ LXR配體誘導咖〜如蛋白= 以及’結果，提高API的活性’其係為軟㈣形成需知 因而，用LXR配體，首二欠，—種骨關節炎治療可以。 制軟骨降解而且也可以誘導軟骨再生。 仰 11 200820978 ι·定義 於本揭示的上下文中，一些術語應該被使用。 如於本文中所使用的，術語“大約，，或是“大概，，意指於 一個給予的值或範圍之20%之内，較佳地於之内，以及 5 更佳地於5%之内。 術語“聚蛋白多醣酶的活性”係提及為藉由一種聚蛋白 多醣酶酵素結合至聚蛋白多醣而予以中斷或起始之至少一 種細胞過程。一般而言，活性係提及為聚蛋白多醣藉由聚 蛋白多醣酶之蛋白水解的分裂。其他的聚蛋白多醣酶活性 10 包括，但是不被限制至，聚蛋白多·酶的結合至聚蛋白多 醋以及一種起因於聚蛋白多酶精由聚蛋白多釀酶之結合或 分裂的生物反應。 術语細胞激素精緻化係k及為精由軟骨的組織或軟 骨細胞之細胞激素的生產。 15 本文中所使用的術語“有效量治療有效量，，，“一種 LXR-反應性基因表現誘導量”，“聚蛋白多醣酶活性抑制 量’’，和“有效劑量”係提及為一種效應分子的量，當被投藥 至的一種需要的哺乳動物時，其對於與骨關節炎有關的病 況之至少部分地改善或是至少部分地預防是有效的。 20 如於本文中所使用的，術語“表現”包括DNA被轉錄成 為mRNA以及被轉譯成為肽、多肽，或蛋白的過程。 術語缺輔基脂蛋白D(Apo D)的表現之“誘導^!^!^)” 或“誘導(induction)”係提及為缺輔基脂蛋白D mRNA及/或 蛋白的表現之一種增加、誘導，或是在其他方面的擴大。 12 200820978 增加、誘導，或擴大能以本文中所提供的分析法的其中之 一予以測量。缺辅基脂蛋白D的表現之誘導不必然地表明缺 辅基脂蛋白D之最大的表現。Apo D的表現之增加可以是， 舉例而言：至少大約 10%，20%，30%，40%，50°/〇, 60%，70%， 5 80%，90%或更多。於一個實施例中，誘導係藉由以下方式 測量：比較來自正常的軟骨之Apo D mRNA的表現位準與來 自骨關節炎軟骨之Apo D mRNA的表現位準。 術語聚蛋白多酶或聚蛋白多醣酶活性的“抑制 (inhibit)”或“抑制作用（inhibition)”係提及為至少一種聚蛋 10白多醣酶的活性之降低、抑制作用，或在其他方面減少。 結合的降低、抑制作用，或是減少能以本文中所提供的分 析法的其中之一予以測量。聚蛋白多醣酶活性的抑制作用 不必然地表明聚蛋白多酶活性之完全的不存在。活性上 的降低可以是，舉例而言··至少大約10%，20%，30%，40%， 15 50%，60%，70%，80%，90%或更多。紙—個實施例中，抑制 作用係被測量為聚蛋白多醣的分裂產物之偵測的一種降 低。 術語前發炎細胞激素的精緻化之“抑制”或“抑制作用，， 提及為一種細胞激素的活性之降低、抑制作用，或是在其 20 他方面減少，如，舉例而言：iNOS，MCP-3, COX-2, MIP1/3, MMP-9, IP-10, IL-1]8, IL-Ια，G-CSF，TNFa，MCP-1，IL-6。細 胞激素精緻化之降低、抑制作用，或是減少能以本文中所 提供的分析法的其中之一予以測量。前發炎細胞激素精緻 化的抑制作用不必然地表明前發炎細胞激素精緻化之完全 13 200820978 的不存在。精緻化上的降低可以是，舉例而言：至少大約 10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%，90%或更多。於 一個實施例中，抑制作用係藉由比較來自正常的軟骨之 TNFo: mRNA的表現位準與來自骨關節炎軟骨之TNFa 5 mRNA的表現位準而測量。 “肝X受體”或“LXR”提及為LXRa和LXR/5二者，以及其 等之變異體、同質體，和活性片段。LXR/3是無所不在地表 現的，然而LXRa的表現係被限制至肝、腎、小腸、脾、脂 肪組織、巨噬細胞、骨骼肌，以及，如本文中所展示的， 10軟骨。LXRa序列之代表性的（^⑶此成⑧寄存編號包括以 下：人類（智人(Homo sapiens)，q13133)，小鼠（家鼷鼠(Mus musculus) ’ Q9Z0Y9)，大鼠（溝鼠（Rattus norvegicus)， Q62685)，乳牛(特羅斯牛(B〇s Taurus)，q5E9B6)，豬(野豬 (Sus scrofa)，AAY43056)，雞（紅原雞（Gallus gallus)， 15 AAM9〇897)。LXR/3之代表性的GenBank®寄存編號包括以 下：人類（智人，P55055)，小鼠（家鼷鼠，Q60644)，大鼠（溝 鼠’ Q62755)，乳牛(特羅斯牛，q5BIS6)。 術#“哺乳動物”提及為一種人類、一種非人類靈長類 動物、犬科動物、貓科動物、牛科動物、綿羊、豬、鼠科 20動物，或是其他的獸醫或實驗室哺乳動物。本技藝中具有 技術的那些人認可一種降低哺乳動物的一種之一種病變的 嚴重性之療法預測該療法對於哺乳動物的其他種之作用。 術語“調節”包含於活性或表現上的一種降低或一種增 加，端視標的分子而$。舉例而言，一種Ap〇D調節劑係被 14 200820978 認為是調節Apo D的表現，設若此Apo D調節劑的出現導致 Apo D的表現之一增加或降低。 II.LXR激動劑 於本發明中有用的LXR調節劑包括天然的氧化類固醇 5 (oxysterols)、合成的氧化類固醇、合成的非氧化類固醇， 以及天然的非氧化類固醇。例示的天然的氧化類固醇包 括：20(S)羥基膽固醇(20(S)hydroxycholesterol)，22(R)羥基 膽固醇，24(S)羥基膽固醇，25-經基膽固醇，24(S)，25環氧 膽固醇(epoxycholesterol)，以及27-羥基膽固醇。例示的合 10 成的氧化類固醇包括N，N-二甲基-3/3-羥基膽固醯胺 (N，N_dimethyl-3j8_hydroxycholenamide)(DMHCA)。例示的 合成的非氧化類固醇包括：Ν·(2,2,2-三氟乙基)-N-{4-[2,2,2-二氟-l-經基-1-(三氟甲基）乙基]苯基}苯績酿胺 (TO901317 ; Tularik 0901317)，1>(3·(2-氣-三氟甲基苯基 15 -2,2-二苯乙基胺基）丙氧基）苯乙酸](GW3965)，Ν-甲基 ·Ν-[4-(2,2,2-三氟-1-羥基-1-三氟甲基-1-乙基)·苯基]-苯磺 醯胺(ΤΟ314407)，4,5-二氫-1-(3-(3-三氟甲基-7-丙基-苯并異 噚唑-6-基氧)丙基)-2,6-嘧啶二酮，3_氣-4·(3_(7-丙基·3-三氟 甲基-6-(4,5)-異噚唑基）丙基硫)-苯乙酸(f3甲基ΑΑ)，以及乙 20 醯-羅漢松二聚物(acetyl-podocarpic dimer)。例示的天然的 非氧化類固醇包括樁兹菌素（paxilline)、德斯莫固醇 (desmosterol)，以及豆固醇（stigmasterol)。 其他有用的LXR調節劑係被揭露於，舉例而言··公開 的美國專利申請案案號2006/0030612，2005/0131014, 15 200820978 2005/0036992, 2005/0080111，2003/0181420, 2003/0086923, 2003/0207898, 2004/0110947, 2004/0087632, 2005/0009837, 2004/0048920，和 2005/0123580 ;美國專利案案號 ^ 6,316,503, 6,828,446, 6,822，120，和 6,900,244 ; W001/41704 ; 5 Menke JG等人，Endocrinology 143 : 2548-58(2002) ; Joseph SB等人，Proc. Natl· Acad· Sci· USA 99 : 7604-09(2002) ; Fu X 等人，J· Biol· Chem· 276 : 38378-87(2001) ; Schultz JR等人， Genes Dev· 14 : 2831-38(2000) ; Sparrow CP 等人，J· Biol· _

Chem· 277 : 10021-27 (2002) ; Yang C等人，J· Biol· Chem·， 10 Manuscript M603781200 (July 20, 2006) ; Bramlett KS 等人，J· Pharmacol· Exp· Ther. 307 : 291-96 (2003) ; Ondeyka JG等人， J. Antibiot (Tokyo) 58 : 559-65 (2005)。 III.治療/預防的方法 依據一種調節方法，於一種細胞内的LXR的活性係藉 15由接觸該細胞與一種LXR激動劑予以刺激。此等LXR激動 φ 劑的實例係如以上於第Η節所說明的。其他的可以被使用以 刺激LXR的活性之LXR激動劑可以使用選擇此等化合物的 篩選分析予以鑑定，如本文中（第V節）詳盡地說明的。 調節方法可以於活體外(例如，藉由以一種LXR激動劑 2〇 培養該細胞或是藉由引進一種LXR激動劑進入培養物中的 細胞内）或是，任擇地，於活體内（例如，藉由投藥一種LXR 激動劑至一個個體或是藉由引進一種LXR激動劑進入一個 個體的細胞内）予以執行。關於實施一種活體外調節方法， 細胞可以藉由標準的方法自一個個體獲得以及於活體外以 16 200820978 ^養）以調節細胞中的反 一種LXR激動劑予以培育（亦即， 的活性。 I預防疾病的方法 於一種態樣中，本發明提供一種用於預防一個 的骨關節炎的方法，其係藉由投藥一種lxr激動劑 體’其誘導於AP。D的表現及/或抑制聚蛋白多酶的= 及/或抑制骨關節炎的損害内之前發炎細胞激素的 化。一種預防疾病的LXR激動劑的投藥能在骨關節炎二織 10 15 20 狀顯示之前發生，藉此骨關節炎被預防或是，任擇地，症 其之進程中被延遲。 ’於 2·治療的方法 本發明的另一種態樣有關調節LXR的活性的方法 骨關節炎治療的目的。於是，於一個例示實施例中，〜於 本發明的調節方法涉及接觸一種細胞與一種LXR激種 其調節Ap〇 D的表現及/或聚蛋白多聽酶的活性及 於骨關節炎之損害内之前發炎細胞激素的精緻化。此等^ 即方法相於賴外⑽如，藉種LXR餘劑予以與 養該細胞）或是’任擇地，於活體内（例如，藉由投藥一種 LXR激動継-個娜)被執行。就此，本發明提供治療一 個受骨關節炎侵襲的個體的方法，其係受惠於AP〇D的表現 及/或聚蛋白多醣酶的活柯只a f生及/或骨關節炎之損害内的前發 炎細胞激素精緻化的調節。 IV· LXR激動劑的投藥 LXR激動d係以一種合適於活體内藥物的投藥之生物 17 200820978 學上相容的形式予以投藥至個體，以提#Ap0 D的表現及/ 或抑制聚蛋白多醣酶的活性及/或抑制前發炎細胞激素的 精緻化。“合適於活體内的投藥之生物學上相容的形式’’係 意指要被投藥的LXR激動劑之一種形式，其中任何有毒的 5作用比激動劑的治療效力更重要。術語“個體”係打算包括 一種免疫反應可以被引出的活的有機體，舉例而言：哺乳 動物。如於本文中所說明的LXR激動劑的投藥可以以任何 藥學形式存在，其包括單獨或是與一種藥學上可接受的載 體組合的一治療有效量的一種LXR激動劑。 10 一治療有效量的一種LXR激動劑可以依據因子而變 化’如：個體的皮膚老化狀態、年齡、性別，和重量，以 及LXR激動劑於該個體體内引出一種所欲的反應的能力。 劑量攝生法可以被調整以提供最佳的治療反應。舉例而 言，數種被分割的劑量可以每日地被投藥，或是該劑量可 15以按照治療情況的迫切需要所指出的情況而被成比例地降 低。 本發明的治療或藥學組成物可以藉由任何其他本技藝 中已知的合適的途徑予以投藥，包括，舉例而言：口的、 靜脈内的、皮下的、肌肉内的、經皮的、椎管内的，或大 20 腦内的，或是於法娜. —、 體外(ex vlv〇)的處理程序中投藥至細胞。 杈藥可以如藉由注射而快速的或如藉由緩慢的浸 或緩慢釋放的配方的投藥而持續一段時間期間。 關^"療或預防骨關節炎，本發明的治療或藥學組成物的 杈柰可以，舉例而言，藉由口的投藥或藉由關節内注射予 18 200820978 以執行。 而且，LXR激動劑可以被安定地結合至一種聚合物， 如：聚乙二醇，以獲得所欲的溶解度、安定性、半生期之 性質，以及其他的藥學上有利的性質（見，例如，Davis等人， 5 Enzyme Eng. 4 ： 169-73(1978) ； Burnham NL5 Am. J. Hosp. Pharm· 51 ·· 210-18(1994)) 〇 LXR激動劑可以是於一種組成物之内，該組成物協助 遞送至一種細胞的胞液中。舉例而言，一種LXR激動劑可 以與一種能夠遞送激動劑至一種細胞的胞液中之載體部分 10予以耦合，如：一種脂質體。此等方法是本技藝熟知的（見， 例如，Amselem S等人，Chem. Phys. Lipids 64 : 219-37 (1993))。另外，一種LXR激動劑可以藉由顯微注射術而被 直接地遞送至一個細胞内。 LXR激動劑可以以藥學製備物的形式予以使用。此等 15製備物係以藥學技藝中熟知的方式製造。一種較佳的製備 物係使用一種生理食鹽溶液的載劑，但是可以預期到其他 的藥學上可接受的載體也可以被使用，如：生理濃度之其 他的非有毒的鹽，5個百分比的水性葡萄糠溶液，無菌的水 或類似物。如於本文中所使用的，“藥學上可接受的載體” 2〇包括任何以及全部的溶劑、分散媒介、塗層、抗菌和抗真 菌劑、等張的和吸收延遲劑，以及類似物。此等媒介和製 劑的使用於藥學上活性物質是本技藝熟知的。除了在任何 ’償用的媒介或是製劑的範圍内是與LXR激動劑不相容的之 外’其等於治療的組合物中之用途是被預期的。補充性活 19 200820978 性化合物也能被併入至該專組成物中。一種合適的緩衝液 出現於該組成物内也是所欲的。此等溶液能，設若所欲的 話’被;東乾且儲存於一種無痛的安親内，其係預先準備好 藉由無菌的水之添加而復原，用於預先準備好的注射。主 5要的溶劑可以是水性的或任擇地非水性的。LXR激動劑也 能被併入至一種固體或半固體生物學上相容的基質内，其 能被移植至需要治療的組織内。 載體也能包含其他藥學上可接受的賦形劑用於修飾或 維持配方的pH、滲透壓、黏性、清澈、顏色、無菌、安定 10 性、溶解速率，或氣味。 劑量投藥可以被重複，端視劑量配方的藥物動力學參 數以及使用的投藥的途徑而定。 也提供某些包含LXR激動劑的配方要被口服地投藥。 此等配方較佳地以固體劑量形式被裝入膠囊且與合適的載 15體一起被配方。合適的載體、賦形劑，和稀釋劑之一些實 例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、殿粉、 阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、矽酸鈣、微晶纖維素 (microcrystalline cellulose)、聚乙烯吡洛烷酮 (polyvinylpyrrolidone)、纖維素、明膠、糖漿劑、甲基纖維 20素、甲基-和丙基羥基苯曱酸酯、滑石粉、鎂、硬脂酸、水、 礦油，和類似物。該等配方能額外地包括潤滑劑、潤濕劑、 乳化和懸浮劑、保存劑、增甜劑，或是調味劑。該等組成 物可以被配方以便於在藉由使用本技藝熟知的程序予以投 藥至病人之後提供活性成分之快速、持續的，或是延遲的 20 200820978 釋放。該等配方也能包含縮減蛋白水解的降解之物質及/或 促進如，舉例而言··表面活性劑的吸收之物質。 配方組成物於劑量單位形式内對於投藥的容易以及劑 篁的一致是特別有利的。本文中所使用的劑量單位形式係 5知及適合作為要被處理的哺乳動物主體之單一的劑量之實 際上分離的單位；包含一預定量的活性化合物之各單位係 聯合需要的藥學載劑打算要產生所欲的治療效力。本發明 的劑量單位形式之詳細計劃係由以下所支配以及直接地取 决於(a)LXR激動劑之獨特的特性和要被達到的特定的治療 10效力，以及(b)本技藝中化合此一活性化合物用於個體體内 的感叉性的處理之固有的限制。特定的劑量可以由本技藝 中具有通常技術的一個人，例如，依據病人大概的體重或 體表面積或是要被佔據的身體空間的體積而容易地計算 出。劑量也會視被選擇的特定的投藥途徑而計算出。必須 15用來決定處理之適當的劑量之計算的進一步地精確化是本 技藝中具有通常技術的那些人例行作的。此等計算可以由 本技藝中具有技術的一個人、按照本文中揭示的LXR激動 劑的活性、不需過度實驗而於標的細胞的分析製備物中進 行。確實的劑量係結合標準的劑量—反應研究而決定。可以 20瞭解到實際上投藥的組成物的量會由一個從事者，按照有 關的情況而決定，包括要被治療的病況(condition)或病況 (conditions)，要被投藥的組成物之選擇，個別的病人的年 齡、重量’和反應、病人的症狀之嚴重性，以及所選擇的 投藥途徑。 21 200820978 此等LXR激動劑的毒性與功效標準可以藉由標準的藥 學程序於細胞培養或實驗動物中決定，舉例而言：用於争 定LDM對50%的族群致命的劑量）和四別(於50%的族鮮户 療上有效的劑量）。介於有毒和治療效力之間的劑量比率是 5治療指數以及其可以被表現為比率LDm/EDm。顯示出大的 治療指數之LXR激動劑是較佳的。縱然顯示出有毒的副作 用之LXR激動劑可以被使用，應該小心要設計一種對準此 等調節劑至受侵襲的組織之位置的遞送系統，俾以最小化 對於未感染的細胞之潛在的損害以及，從而，降低副作用。 10 由細胞培養分析和動物研究獲得的資料可以被使用於 配方供使用於人類中的一範圍的劑量。此等LXR激動劑的 劑里較佳地處於包括ED%且很少或沒有毒性之循環濃度的 一範圍之内。劑量可以於此範圍之内變化，端視使用的劑 里的形式以及使用的投藥途徑而定。關於任何被使用於本 15發明的一種方法中之LXR激動劑，治療上有效的劑量最初 可以自細胞培養分析被估計。一劑量可以於動物模式中被 配方以達到包括ICW亦即，達到最大的一半的症狀抑制之 LXR激動劑的濃度）的一循環血漿濃度範圍，如於細胞培養 中被決定的一般。此資訊可以被利用以更準確地決定於人 20類中有用的劑量。血漿内的位準可以，舉例而言：藉由高 性能液相層析法予以測量。 監控LXR激動劑對於Apo D的表現及/或聚蛋白多醣酶 的活性及/或前發炎細胞激素的精緻化的影響不止可以被 應用至基礎的藥物篩選中，而且也可以被應用至臨床試驗 22 200820978 中。舉例而言，-種LXR激動劑的有效性可以於顯示出軟 月、、、田胞内降低的Apo D基因表現及/或增加的聚蛋白多醣酶 活ϋ及/或月關即炎的損害内之增加的前發炎細胞激素的 精緻化之個體的臨床試驗中^以監控。於此等臨床試驗 5中Apo D的表現及/或聚蛋白多醣酶的活性及/或前發炎細 胞激素的精緻化可峨使用作為_種“讀出㈣d Gut)，，或是 不同的皮膚老化表現型之標誌。 因此，要研究LXR激動劑對於骨關節炎的作用，舉例 而言：於-種臨床賴巾，細魏鮮離狀祖係被製 1〇敎分析AP〇D以及骨關節炎牽涉的其他的基因（舉例而 吕，TNFa)之表現位準。基因表現的位準（亦即，一種基因 表現模式）月b，舉例而a ·藉由北方墨點分析或rt_pcr予以 定量，其係藉由測量被產生的蛋白#，或是藉由測量Ap〇D 或其他的基因之活性的位準，全部係藉著本技藝中具有通 15常技術的那些人所熟知的方法。以此方式，基因表現模式 能作為一種標誌，表明細胞對mLXR激動劑的生理反應。 於是，此反應狀態可以在個體以LXR激動劑的處理之前被 決定，以及在個體以LXR激動劑的處理之期間的各種各樣 的時間點被決定。 2〇 本發明亦提供一種用於監控一個個體以一種LXR激動 劑的治療之有效性的方法，其包含以下步驟··（i)在lxr激 動劑的投藥之前獲得來自一個個體之一種投藥前的樣本； (ii)偵測該投藥前的樣本中之Apo D的表現位準及/或聚蛋 白多醣酶活性的位準及/或前發炎細胞激素的精緻化的位 23 200820978 準，（ni)獲得來自該個體之1或多個投藥後的樣本；（iv)偵 測該等投藥後的樣本中之Apo D的表現或活性的位準及/或 聚蛋白多醣酶活性的位準及/或前發炎細胞激素的精緻化 的位準；（v)比較該投藥前的樣本中之Apo D的表現位準及/ 5或聚蛋白多醣酶活性的位準及/或前發炎細胞激素的精緻 化的位準與該或該等投藥後的樣本中之Ap〇 D的表現及/ 或聚蛋白多醣酶活性及/或前發炎細胞激素的精緻化的位 準；以及(vi)相應地改變該LXR激動劑的投藥至該個體。舉 例而言’該LXR激動劑之增加的投藥可以是所欲的以增加 10 Apo D的表現至比偵測到的更高的位準，以及/或降低聚蛋 白多醣酶活性至比偵測到的較低的位準，以及/或降低前發 炎細胞激素的精緻化至比偵測到的較低的位準，那就是， 要增加該LXR激動劑的有效性。任擇地，該LXR激動劑之 降低的投藥可能是所欲的以降低Apo D的表現至比偵測到 15 的較低的位準，以及/或以增加聚蛋白多醣酶活性至比 >(貞測 到的更高的位準，以及/或以增加前發炎細胞激素的精緻化 至比偵測到的更高的位準，那就是，要降低該LXR激動劑 的有效性。根據此一個實施例，Apo D的表現及/或聚蛋白 多醣酶的活性及/或前發炎細胞激素的精緻化可以被使用 20 作為一種LXR激動劑的有效性之一種表明，即使在缺少一 種看得見的表現型反應的情況下。 而且，於骨關節炎的治療中，包含LXR激動劑之組成 物可以外源地被投藥，以及要於金清中、於任何所欲的組 織劃分中，及/或於受侵襲的組織中達到LXR激動劑的某種 24 200820978 払的位準彳艮可能是所欲的。因而，以下會是有利的：能夠 孤控個病人體内或包括一種自一個病人獲得的組織活體 切片的樣本之一種生物樣本中之LXR激動劑的位準，以 • 及，於一些事例中，也監控Apo D的表現及/或聚蛋白多醣 • 5酶的活性及/或前發炎細胞激素的精緻化之位準。於是，本 孓明亦提供偵測一種來自一個病人的樣本中之二乂化激動劑 的出現之方法。 φ ν·篩選分析 於一個實施例中，LXR-反應性基因的表現位準或從該 1〇處來的蛋白之活性位準可以被使用來協助經由一種LXR為 基礎的機制而治療骨關節炎的化合物的設計及/或鑑定。於 是，本發明提供用於鑑定調節劑，亦即，LXR激動劑的方 法(本文中也被提及為“筛選分析”），該等調節劑對於，舉例 而言：ApoD的表現及/或聚蛋白多醣酶的活性及/或細胞激 15素的精緻化具有一種刺激或抑制效力。由此被鑑定的化合 Φ 物能被使用作為如於本文中的別處所說明的骨關節炎的治 療中。 测試化合物可以，舉例而言：使用本技藝知道的組合 庫的方法中之$午多方法的任何一種予以獲得，包括：空間 20 可定位平行固定相（spatially addressable parallel solid phase) 或是溶液相庫，需要解迴旋(deconvolution)的合成庫的方 法；‘單一顆粒-單一化合物（one^ead 〇ne-compound)，庫的 方法；以及使用親和層析篩選之合成庫的方法。 分子庫的合成方法的實例可以於以下尋得，舉例而 25 200820978 5 言·· DeWitt SH等人，Proc. Natl. Acad· Sci· U.S.A. 90 ·· 6909-13 (1993) ; Erb E等人，Proc· Natl· Acad· Sci· USA 91 : 11422-26 (1994) ; Zuckermann RN#、，J.Med.Chem· 37 : 2678-85 (1994) ; Cho CY等人，Science 261 : 1303-05 (1993) ; Carrell等人，Angew· Chem· Int· Ed. Engl· 33 : 2059 (1994) ; Carrell等人，Angew. Chem· Int· Ed· Engl· 33 : 2061(1994) ; Gallop MA等人，J· Med. Chem· 37 : • 1233-51 (1994)。 化合物的庫能以以下方式被呈現：於溶液（例如， 10 Houghten RA等人，Biotechniques 13 : 412-21(1992))，或是 於顆粒上(Houghten RA等人，Nature 354 : 82-84(1991))，晶 片（Fodor SA等人，Nature 364 : 555-56(1993))，細菌（美國專 利案案號5,223,409)，孢子(美國專利案案號5,223,409)，質體 (Cull MG等人，Proc. Natl· Acad· Sci. USA 89 : 1865-69(1992)) 15 或是於噬菌體上（Scott JK & Smith GP，Science 249 : 386-90(1990) ; Devlin JJ等人，Science 249 : 404-06(1990); Cwirla SE等人，Proc. Natl. Acad· Sci· 87 : 6378-82(1990); Felici F等人，J. Mol. Biol. 222 : 301-10(1991);美國專利案案 號5,223,409)。 20 一種例示的篩選分析是一種細胞為基礎的分析，其中 一種表現LXR的細胞係與一種測試化合物接觸，以及測試 化合物的能力係經由一種LXR為基礎的機制來調節Apo D 的表現及/或聚蛋白多酶的活性及/或細胞激素的精緻 化。決定測試化合物調節Apo D的表現及/或聚蛋白多醣酶 26 200820978 的活，及/或細胞激素的精緻化的能力能藉由以下方式完 成η藉由&控’舉例而言:DNA、mRNA，或蛋白的位準， β 《是^由測量AP〇D、聚蛋白多醣酶，及/或卿_活性位 王。卩藉由本技藝中具有通常技術的那些人熟知的方法。 • 5、、、田胞’舉例而言··可以是哺乳動物來源的，例如，人類。 藉由以上忒明的篩選分析鑑定的新穎的調節劑能被使 用於本文中所說明的治療。 ^ 實施例 本發明係進-步於以下的實施例中予以定義。應該瞭 10解此等實施例，雖然指出本發明的較佳實施例，係僅僅經 由說明被提供。由以上的討論和此等實施例，本技藝中具 有技術的一個人能確定本發明之較佳的特徵，以及不背離 其之精神和範嘴，能做出本發明的各種各樣的變化和修錦 以使其適合各種各樣的用途和狀況。 15 實施例1 _ 為了鑑定表現於關節炎的或正常的關節軟骨之轉錄 • 品，組織樣本係自具有末階段的膝蓋置換之關節炎病人以 及非關節炎的截肢個體獲得。關節炎的出現或缺少係轉由 組織學予以確認。 20 人類基因體U95 Av2(HG-U95 Av2)基因晶片®障列 (Affymetrix，聖克拉拉，CA)係被使用於表現的剖續。 HG-U95Av2晶片包含代表衍生自人類基因體的〜12,〇〇〇根 本上全長的序列(〜16探針對/序列）之25-mer募核苷峻探 針。對於各個被設計成要完美地互補於一標的序列的探 27 200820978 針，一種同一的’除了其中心的單一鹽基錯配之外，拍槽 探針係被產生。此等探針對允許訊號定量以及非專一的雜 訊之扣除。 • RNA係自個別的關節軟骨組織予以萃取，轉化成生物 - 5 素化的cRNA，以及依據Affymetrix規則予以片段化。片段 化的cRNAs係以包含lOOgg/ml鯡魚精子DNA和500 pg/ml 乙醯化的BSA之1 xMES緩衝液予以稀釋以及在99°C下被變 φ 性歷時5 min，接著立刻在45。€下5 min。不溶的材料係藉 由短暫的離心而自雜交混合物移除，以及雜交混合物係被 10 添加至各陣列以及在45°C下予以培育歷時16 hr，伴隨60 rpm之持續的旋轉。在培育之後，雜交混合物係被移除以及 晶片被廣泛地以6xSSPET予以清洗且以SAPE溶液予以染 色，如於Affymetrix規則中所說明的。 各轉錄品的粗略螢光強度值係用一種Hewlett-Packard 15基因陣列掃瞄儀、在6 mm的解析度下予以測量。基因晶片 _ ®軟體3.2(Affymetdx)，其使用一種演算法以決定是否一基 因是“出現，，或“缺乏，，，以及陣列上的各基因之專一的雜交 強度值或“平均差（average differencesy，，係被使用以評估螢 光數據。各基因的平均差係藉由參考已知的大量之〗丨種控 2〇制轉錄品的平均差而被正常化成為頻率值，其等係依據Hill aa等人，Science 290 : 809_12(2〇〇〇)，的程序而被攙入至 各個雜交混合物。各基因的頻率係被計算以及代表一個等 於每1〇6個總轉錄品中個別的基因轉錄品的總數之數值。 第1A圖描繪於嚴重的骨關節炎軟骨内之核激素受體超 28 200820978 級家族的19個不同的成員（LXRce，LXR]S，Rev-erba， Rev-erb/?，GR，EAR2, COUP TF-I，COUP TF-II，CAR，PXR， MR，SF_1，TR-2, TR-4, NOR-1，NuTrl，Nur77, SHR FXR)的 mRNA的位準（被表現為百萬分之一(ppm))。此等基因晶片 5 研究之偵測的較低的定量界限被決定是大概5 ppm。顯示於 第1圖中的數據提供以下證據，LXR/5，Rev_erbce，和GR似 乎係由關節軟骨以基因晶片的感受性之位準予以表現。於 第1B圖中，6種維生素A酸類受體家族成員（維生素A酸受體 (RARs)和維生素A酸類X受體(RXRs))的表現位準係被顯 10 示。此等資料證明RXRa係以可容易地偵測的位準被表現於 關節軟骨組織内。RXRa是LXR的一種異種二聚體拍檔以及 LXR配體作用的生物學上活化的單元是LXR-RXR異種二聚 體。此等數據係提供一種推動力去查明關節軟骨内之LXR 的表現之功能性作用。 15 實施例2 第2A圖顯示於正常的軟骨以及獲得自中度和嚴重的骨 關節炎病人的軟骨内之Apo D mRNA的位準的比較(被表現 為百萬分之一(ppm))。此等基因晶片研究之偵測的較低的 定量界限被決定是大概5 ppm。顯示於第2A圖中的數據提供 20以下證據’於輕微的和嚴重的骨關節炎軟骨内之Apo D信 息的表現係被引人注目地降低，當相較於正常的軟骨時。 第2B圖顯示於正常的軟骨以及獲得自中度和嚴重的骨關節 炎病人的軟骨内之TNFa mRNA的位準的比較(被表現為百 萬分之一(ppm))。此等基因晶片研究之偵測的較低的定量 29 200820978 界限被決定是大概5 ppm。顯示於第2B圖中的數據提供以下 證據，於輕微的和嚴重的骨關節炎軟骨内之TNFa的表現係 被顯著地誘導，當相較於正常的軟骨時。 實施例3 5 來自一個人類QA供者(#154，來自國家疾病研究交流 (National Disease Research Interchange))的新鮮的軟骨培植 體(〜20片，總共〜200 mg/井)係於包含1% Nutridoma⑧(Roche Applied Science，印第安納波里，IN)的 1 ml的DMEM/F12内 予以培養歷時10天。在10天的期間中，培植體係被暴露至 10 具有或不具有LXR激動劑（2μΜ GW3965，一種報導過的 LXR激動劑，或是2μΜ的以下的式I，一種LXR激動劑）之 細胞激素（lng/mlILl/3加5ng/ml抑瘤素Μ)内。 co2h

(I) 15 每2天培養基係以新鮮的細胞激素和L X R激動劑予以 取代。此等培養物内的蛋白多糖之堆積的釋放係在使用 30 200820978 DMMB(二甲基亞甲基藍）分析之後予以測量。在10天的處理 最後，培植體係以蛋白酶K予以消化以及被分析總共的蛋白 多糖含量。LXR激動劑顯著地降低細胞激素誘導的蛋白多 糖之釋放至該培養基内；結果，OA軟骨培植體以LXR激動 5 劑之1〇天的處理顯著地增加培植體之内的總共的蛋白多糖 含量（第3圖）。因IL1/5和抑瘤素M2者均出現於具有OA的關 節内以及據信於OA疾病進程中扮演角色，我們的資料建議 LXR激動劑可能於〇A軟骨中具有一種修飾結構作用。 實施例4 10 來自人類〇A供者的新鮮的軟骨培植體被切成碎片 (〜10 mg/片，〜2x2x2 mm)。軟骨培植體被隨機地分至24井 平盤中（〜250 mg濕重/井）。培植體的3個井係被包括於各處 理組。培植體係於具有10% FBS的1 ml DMEM/F-12中予以 培養歷時3天，接而完全培養基係以無血清的培養基予以取 I5 代。12個小時之後’培養基係被移除以及新鮮的無血清的 培養基（1 ml)係被添加，接著藉由LXR激動劑T0901317的 處理(2 μΜ)。IL1说抑瘤素Μ(各10 ng/ml)係於8小時之後被 添加。培植體接而係於LXR激動劑T0901317和ILljS/抑瘤素 Μ存在或缺少的情況下予以培養歷時額外的2〇小時。來自 20 各處理組之180μ1的集中的培養基係在50mM EDTA的存在 下、以軟骨素酶ABC、硫酸角質素酶(keratanase)、硫酸角 質素酶II於37 °C下予以去糖基化歷時3 hrs。樣本接而被濃 ^且％ 種4-12% SDS-PAGE滅膠予以分離。西方分析係用 以下方式執行，使用小鼠BC3新抗原決定位抗體（丨：1500)， 31 200820978 或是兔抗AGEG抗體（1 : 1000)作為初級抗體，以及被耦合 以鹼性過氧化酶（1:5000)的抗小鼠或抗兔IgG抗體作為二級 抗體。第4A圖顯示使用BC3抗體的結果，以及第4B圖顯示 使用AGEG抗體的結果。於使用來自供者#259的軟骨之實驗 5 中，細胞激素處理誘導包含聚蛋白多醣片段的BC3和AGEG 二者的釋放至培養基内。以T0901317的處理封阻BC3和 AGEG藉由細胞激素之釋放的誘導。於使用來自供者#261 的軟骨之實驗中，來自未處理的軟骨培植體之含聚蛋白多 醣片段的BC3和AGEG係被釋放至培養基内。T090131處理 10 係降低此等片段於培養基内的量。來自培植體之含AGEG 片段的釋放也被細胞激素處理誘導，以及其被T0901317處 理所封阻。 實施例5 來自一個人類OA供者（由國家疾病研究交流提供）的新 15 鮮的軟骨培植體（〜20片，總共〜200mg/井）係於包含1% Nutridoma®(Roche Applied Science，印第安納波里，IN)的 1 ml的DMEM/F12内予以培養歷時21天。在21天的期間中， 培植體係被暴露至具有或不具有LXR激動劑(？μΜ GW3965 或是式I)之細胞激素（l〇ng/ml IL1/3加10ng/ml抑瘤素Μ)内。 20 每2-3天培養基係以新鮮的細胞激素和LXR激動劑予以取 代。於第7、14、21天收集的培養基樣本内的前列腺素 E2(PGE2)的總量係利用一種ΕΙΑ分析法（Cayman)予以測 量。 第5圖顯示出二種LXR激動劑在全部的3個時間點均強 32 200820978 烈地抑制細胞激素(IL1/3/抑瘤素Μ)誘導的PGE2的合成。脂 質剖繪分析(Lipomics Inc.)結果顯示最多的花生四浠酸(ΑΑ) 從其而來之2種形式的膜磷脂的量係藉由LXR的活化而降 低，暗示總PGE2的降低係至少部分地藉由OA軟骨内之降低 5 的總AA含量所中介。涉及PGE2的合成的酵素之表現也可以 被LXR活性所抑制。 PGE2是存在於具有風濕性關節炎(RA)或OA的關節内 之主要的前發炎性類前列雎素。軟骨内增加的PGE2也可 能於描繪關節炎的疾病之發炎媒介的結構性損傷扮演一角 10 色。更重要地，PGE2促成發炎的重要特徵之一種，疼痛過 敏症(pain hypersensitivity)。因而，LXR激動劑具有很大的 潛力成為OA療法，其會藉由封阻OA關節内之PGE2的生產 而緩解疼痛，以及藉由封阻軟骨基質降解而預防疾病進程。 C圖式簡單說明3 15 第1A圖是一個長條圖，其顯示於具有嚴重的骨關節炎 (OA)之軟骨内的核受體(NR)的表現之相對表現位準。第1B 圖是一個長條圖，其顯示於具有嚴重的OA的軟骨内之維生 素A酸類(retinoid)受體的表現之相對表現位準。 第2A圖是一個長條圖，其顯示於正常的軟骨内，以及 20 具有輕微的〇A和嚴重的OA的軟骨内之Ap〇 D的表現。疾病 嚴重性係巨觀地藉由檢查軟骨檢體内的損害之大小與深度 予以評估。第2B圖是一個長條圖，其顯示於正常的軟骨内， 以及具有輕微的OA和嚴重的OA的軟骨内之TNFa的表現。 第3圖是一個長條圖，其顯示細胞激素誘導的自人類 33 200820978 〇A軟骨培植體之蛋白多糖降解/釋放係藉由lxr激動劑予 以抑制，以及此等培植體内之細胞激素誘導的總蛋白多糖 含量的降低係藉由LXR激動劑予以預防。 第4A圖是一種使用BC-3抗體之西方墨點，其顯示聚蛋 5白多醣酶-產生的聚蛋白多醣新抗原決定位，其辨認聚蛋白 多醣酶產生的聚蛋白多醣異化產物上之N-端。來自具有末 階段的OA(在關節置換手術之後)之2個人類供者的軟骨培 植體係被使用。供者#259是一位57歲的男性病人，以及供 者#261是一位55歲的女性病人。徑1，5 :載劑。徑2,6 : 10 ΤΟ9013ΐ7(2μΜ)。徑 3,7 : IL_l/5+ 抑瘤素 M(oncostatin M)(OSM)(各 10 ng/ml)。徑 4, 8 ·· IL-1 尽 + OSM + TO901317。 第4B圖是一種使用AGEG抗體之西方墨點，其顯示聚蛋白 多醣酶產生的聚蛋白多醣新抗原決定位，其辨認聚蛋白多 醣酶產生的聚蛋白多醣異化產物之不同的抗原決定位。徑 15 1，5:載劑。徑2, 6:ΤΟ901317(2 μΜ)。徑3, 7:IL-l/3 + OSM(各 10 ng/rnl)。徑 4, 8 : IL-1/3+ OSM + TO901317。 第5A圖是一個長條圖，其顯示藉由LXR激動劑之來自 細胞激素-處理的人類軟骨培植體的總前列腺素E2(PGE2) 的生產之抑制。第5B圖比較於以載劑對照或LXR激動劑 20 GW3965(2gM)予以處理歷時21天的培植體之内的、以膜磷 脂PC和PE的形式存在之花生四烯酸的量。來自2個人類OA 供者的軟骨樣本係被使用於此研究中。 【主要元件符號說明】 (無） 34

Claims (1)

1. 200820978 十、申請專利範圍： 1· 一種LXR-反應性基因表現_調整量之lxr激動劑的用 途，其係用於製造一藥物以治療罹患骨關節炎的哺乳動 物。 5 2·如申請專利範圍第1項之用途，其中該LXR激動劑是一 天然的氧化類固醇，一合成的氧化類固醇，一合成的非 氧化類固醇，或是一天然的非氧化類固醇。 3.如申請專利範圍第1項或第2項之用途，其中該LXR激 動劑是20(S)羥基膽固醇(20(S)hydn)xyCh〇lester〇l)，22(R) 10 經基膽固醇，24(S)羥基膽固醇，25-羥基膽固醇，24(S),25 環氧膽固醇（epoxycholesterol)，27-經基膽固醇，N，N_ 二甲基-3β-羥基膽固醯胺（N，N-dimethyl -3p-hydroxycholenamide) (DMHCA)，Ν-(2,2,2·三就乙 基)-Ν- {4·[2,2,2-三氟-1-羥基-1-(三氟甲基）乙基]苯基} 15 苯磺醯胺，[3-(3-(2-氣-三氟甲基苯基-2,2-二苯乙基胺基） 丙氧基）苯乙酸]，N·甲基-N_[4-(2,2,2-三氟-1-羥基-1-三 氟甲基-1-乙基)-苯基]-苯磺醯胺，4,5_二氫-1-(3-(3-三氟 甲基-7-丙基-苯并異巧峻-6-基氧）丙基)-2,6_喷咬二顏I， 3_氯-4_(3_(7-丙基·3-三氟曱基-6-(4,5)-異噚唑基）丙基 20 硫）-苯乙酸，乙蕴羅漢松二聚物（acetyl-podocarpic dimer)，樁兹菌素(卩迂叉111^1€)、德斯莫固醇((1€8111(^61*〇1)， 或豆固醇（stigmasterol)。 4·如申請專利範圍第3項之用途，其中該LXR激動劑是 N-(2,2,2-三氟乙基)·Ν-[4·(2,2,2-三氟-1·羥基-1-三氟甲 35 200820978 基-1-乙基)_苯基]-苯磺醯胺。 5.如申凊專利範圍第1或2項中任一項之用途，其中以該 LXR激動劑之治療係抑制軟骨降解以及誘導軟骨再生。 6·如申請專利範圍第1或2項中任一項之用途，其中該LXR 5 激動劑抑制聚蛋白多醣酶的活性。 7·如申請專利範圍第1或2項中任一項之用途，其中該LXR 激動劑抑制骨關節炎的關節内之前發炎細胞激素及/或 發炎媒介的精緻化(elab〇rati〇n)。 8.如申請專利範圍第7項之用途，其中該發炎媒介是前列 10 腺素E2。 9·如申請專利範圍第1或2項中任一項之用途，其中以該 LXR激動劑之治療係提供骨關節炎的關節内之疼痛的 緩解。 10.如申請專利範圍第1或2項中任一項之用途，其中該 15 LXR-反應性基因是缺輔基脂蛋白D。 11· 一種有效量之Lxr激動劑的用途，其係用以製造一藥物 以誘導具有骨關節炎之軟骨之哺乳動物的缺輔基脂蛋 白D的表現。 12. —種LXR激動劑的用途，其係用以製造一藥物以維持一 20 個體之軟骨内之缺辅基脂蛋白D的基本表現位準來預防 骨關節炎，該個體之軟骨内之缺輔基脂蛋白0的基本表 現位準為該個體之正常軟骨内之缺輔基脂蛋白D的基本 表現位準。 36 200820978 " 5 13·—種聚蛋白多酶（aggrecanase)活性-抑制量的1^幻敫 動劑的用途，其係用於製造一藥物以治療罹患骨關節炎 的嗔乳動物。 14. 一種有效量之LXR激動劑的用途，其係用於製造一藥物 以抑制具有骨關節炎之軟骨之哺乳動物的聚蛋白多醣 酶的活性。 15. —種有效量之LXR激動劑的用途，其係用於製造一藥物 以抑制骨關節炎之關節内的前發炎細胞激素與脂質的 精緻化來治療罹患骨關節炎的哺乳動物。 10 16. —種有效量之LXR激動劑的用途，其係用於製造一藥物 以緩解骨關節炎之關節内的疼痛來治療罹患骨關節炎 的哺乳動物。 17. 如申請專利範圍第16項之用途，其中該LXR激動劑抑制 TNFa的表現。 15 • 18. —種偵測一個個體内的一骨關節炎表現型的方法，其包 含： (a) 決定正常的軟骨内之一基線缺輔基脂蛋白D的 表現位準； (b) 獲得來自一個被懷疑具有骨關節炎的個體之一 20 軟骨樣本；以及 (c)偵測該樣本中之缺輔基脂蛋白D的表現位準； 其中相較於基線缺辅基脂蛋白D的表現，該樣本中 較低量的缺輔基脂蛋白D的表現係表明骨關節炎。 19. 一種鑑定一能夠降低軟骨内的骨關節炎的作用之LXR 37 200820978 配體的方法，其包含： ⑻提供一包含一LXR的樣本； (b)接觸該樣本與一測試化合物；以及 、 （c)決定是否該測試化合物誘導缺輔基脂蛋白D的 ' 5 表現，抑制聚蛋白多醣酶的活性，抑制前發炎細胞激素 的精緻化，或是其等之一組合。 20.—種LXR激動劑之用途，其係用於製造骨關節炎的治療 或預防藥物。 38