TW200813115A - Polymer conjugate of combretastatin - Google Patents

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200813115 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種康布列塔司他㈣員之高分子結合體、 其製造方法及其用途，該康布列塔司他汀類之高分子結合 體，係使聚乙二醇結構部分與具有2個以上緩基的聚合物 部分之钱段共聚物中之該聚合物部分的緩基、與康布列塔 司他>丁類的羥基進行酯键結而成。 【先前技術】 | 康布列塔司他汀（COMBRETASTATIN)係於！ 98〇年代自非 洲樹木C〇mbretumcaffrum等巾分離出，已確認其具有抑制 微管蛋白聚合之活性。特別是，康布列塔司他灯引起血管 内皮細胞的形態學變化而具有血流抑制活性。因此，業者 期待將其用作固形癌或慢性風濕性關節炎等與新血管形成 有關的疾病之治療劑。再者，非專利文獻！中揭示有康布 列塔司他汀類之製造法。然而，因康布列塔司他汀類二般 _ 極難溶於水，故業者一直進行賦予其水溶性之研究、及用 以使其於患部有效發揮藥效之研究。 目萷為止’專利文獻1中揭示有康布列塔司他、汀之破酉分 酯型前驅藥之製造法。又，非專利文獻2中記載有具有胺 基之康布列塔司他汀衍生物、以及用以使其衍生物於患部 選擇性地表現藥效之胺基酸結合前驅藥。 另一方面，以對水難溶性抗癌劑附加水溶性及使其於串 部集積為目的’業者亦進行以高分子為载體之研究。= 如，專利文獻2或專利文獻3中記載有作為結合有聚乙_产 121539.doc 200813115 % . ㈣驅藥之水難溶性抗耗之高分子衍生m，對於 康布列塔司他江類之結合體卻未有記載。又，於結構上， 一分子聚乙項僅可結合卜2個分子之料水難溶性抗癌 劑之高分子衍生物。因此’為了投與有效量之藥劑必須投 與大量的聚合物。 — 專利文獻4中記載有將藥劑與形成微胞且顯示水溶性之 聚乙二醇與聚天冬胺酸的嵌段共聚物加以結合之分子。專 _ 利文獻5中纪載有將疏水性物質與聚乙二醇類和聚酸性胺 基酸之嵌段共聚物的側鏈羧基加以結合而成為高分子藥物 運送體之高分子載體。專利文獻6中記載有使聚乙二醇類 與聚麵胺酸之嵌段共聚物的側鏈羧基與喜樹鹼類 (camptothecine)的酚性羥基加以結合之喜樹鹼類高分子衍 生物。然而，專利文獻4、專利文獻5、專利文獻6中對於 康布列塔司他汀類之結合體卻未有記載。 [專利文獻1]國際公開第〇2/〇6279號案 響 [專利文獻2]國際公開第93/24476號案 [專利文獻3]曰本專利特表平1〇-5 1 3 1 87號公報 [專利文獻4]日本專利第2694923號公報 [專利文獻5]曰本專利第3268913號公報 [專利文獻6]國際公開第04/39869號案 [非專利文獻 1] J.Org.Chem.，66，第 8135-8138 頁（2001) [非專利文獻 2] Anti-Cancer Drug Design，14，第 539-548 頁（1999) 【發明内容】 121539.doc 200813115 . [發明所欲解決之問題] 非專利文獻2中記載之康布列塔司他汀之前驅藥，與康 布列塔司他汀A-4相比較對水的溶解度增加。 以印’因康 布列塔司他汀A-4的釋放依存於被投與的被試驗體於血液 . 中之内因性胺肽酶，故擔心於被釋放藥劑的效果中會產生 個體差異。 專利文獻1之康布列塔司他汀之磷酸酯型前驅藥，與康 φ 布列塔司他汀A-4相比較，對水的溶解度增加。然而，可 預計投與生物體後磷酸醋會即刻被水解，因而不明確將前 驅藥傳輸至患部後康布列塔司他汀A_4是否可有效地發揮 作用。專利文獻2或專利文獻3記載之聚乙二醇類部分與藥 劑之結合亦被生物體的水解酶切斷，利用此可控制藥劑^ 輸送及釋放。然而，生物體之水解酶’當然存在種間^異 而且即使在同一種中其個體差異亦較大。因此，對於該等 文獻所記載之藥劑結合體，因對結合體與藥劑的結合之切 • 斷依存於生物體的水解酶，故擔心在所釋放藥劑的效果上 會產生個體差異。 又，專利文獻5所記载之阿黴素（adriamycin)結合體中， 細醯賴將嵌段共聚物與阿黴素結合。然而，因酿胺鍵 係化學性貝穩定的結合形式，故由水解而導致藥劑釋放較 為遲缓’對其藥效存在著疑問。 康布列塔司等康布列塔司他江類化合物係有用 之抗癌劑但難溶於水。因此，業者正在謀求具有水溶性且 抗癌活性優異之新衍生物。 I21539.doc 200813115 [解決問題之技術手段] 本發明者們為解決上述課題而進行努力研究，钤心 現：聚乙二醇結構部分與具有2個以上敌基的聚合 之嵌段共聚物中的該聚合物部分㈣基、與康布列: 汀類的經基進行醋鍵結之康布列塔司他汀類高分二 體’並不依存於水解酶而釋放康布列塔司二 成本發明。 從而元 即’本發明係關於以下（丨）〜（15)。 (1) 一種康布列塔司他汀類之高分子結合體，其係聚乙二醇 結構部分與具有2個以上羧基的聚合物部分之嵌段共聚物 中之該聚合物部分㈣基、與康布列塔司他β類的經基進 行酯鍵結而成。 (2) 如上述（1)之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其中 具有羧基之聚合物部分係具有琥珀酸單醯胺結構部分之聚 合物。 (3) 如上述（2)之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其中 具有琥珀酸單醯胺結構部分之聚合物係聚天冬胺酸。… (4) 如上述（1)至（3)中任一項之康布列塔司他汀類之高分子 結合體，其中康布列塔司他汀類之高分子結合體係以通式 (I )所表示之化合物 121539.doc 200813115 [化i] C02R4 R1-0-(CH2CH2〇)t-R2-I(NHCOCH)d.(NHCOCH2CH)e-(NHCOCH)f-

I I CH2C02R4 CH2COR5

C02H COR5 -(NHCOCH2CH)g-(NHCOCH)h-(NHCOCH2CHHNCO€H)j]-NHR3 (I) ch2co2h coch；

[式中，R1表示氫原子或者（Cl〜C6)烷基，R2表示結合基， R3表示氫原子或者（C1〜C6)醯基，R4表示康布列塔司他$丁 類的羥基殘基，R5表示選自由（C1〜C30)烷氧基、（C7〜C30) 芳烷氧基、（Cl〜C30)烷基胺基、二（C1〜C30)烷基胺基、將 羧基保護之胺基酸以及-N(R6)CONH(R7)所組成之群之 基，R6、R7可相同亦可不同、表示（C3〜C6)環狀烧基或者 亦可被三級胺基取代之（C1〜C 5)烧基，t表示5〜11500之整 數，d、e、f、g、h、i或者j分別獨立表示〇〜200之整數， 其中d+e表示1〜2Q0之整數’且d+e+f+g+h+i+j表示3〜2〇〇之 整數，聚天冬胺酸之各結構單位之結合順序為任意]。 (5) 如上述（4)之康布列塔司他江類之高分子結合體，其中 R1為（C1〜C6)烷基，R2為（C2〜C6)伸烷基，R3為（C1〜C6)醯 基，*1為100〜3 00之整數’（1、6、£、§、]1、1或者」分別獨立 為0〜100之整數，其中d+e為1〜1〇〇之整數，其中 d+e+f+g+h+i+j 為 6〜100之整數。 (6) 如上述（4)或（5)之康布列塔司他汀類之高分子結合體， 121539.doc -10- 200813115 其中R1為（Cl〜C3)烷基，R2為（C2〜C4)伸烷基，R3為 (C1〜C3)醯基，t為100〜300之整數，（1、6、[、8、11、1或者 j分別獨立為0〜90之整數，其中d+e為1〜90之整數，其中 d+e+f+g+h+i+j 為 15 〜90 之整數 ° (7) 如上述（1)之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其中 具有羧基之聚合物部分為聚麩胺酸。 (8) 如上述（1)或（7)之康布列塔司他汀類之高分子結合體， 其中康布列塔司他汀類之高分子結合體係以通式（II)所表 示之化合物 [化2] CH2CH2C02R5 R1-0-(CH2CH20h-R2-[<NHC0(|H>k*(NHC0CH>m«{NHC0CH)n]-NHR3 CH2CH2C02R4 ch2ch2co2h (11) [式中，R1表示氫原子或者（Cl〜C6)烷基，R2表示結合基， R3表示氫原子或者（C1〜C6)醯基，R4表示康布列塔司他汀 類之羥基殘基，R5表示選自由（C1〜C30)烷氧基、（C7〜C30) 芳烷氧基、（C1〜C30)烷基胺基、二（C1〜C30)烷基胺基、將 羧基保護之胺基酸以及-N(R6)CONH(R7)所組成之群之 基，R6、R7可相同亦可不同、表示（C3〜C6)環狀烷基或者 亦可被三級胺基取代之（C1〜C5)烷基，t表示5〜11500之整 數，k表示1〜200之整數，m、η分別獨立地表示0〜200之整 數，其中，k+m+n表示3〜200之整數，聚麩胺酸之各構成 早位之結合順序為任意]ό 121539.doc 11 200813115 (9) 如上述（8)之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其中 R1為（C1〜C6)烧基，R2為（C2〜C6)伸烧基，R3為（C1〜C6)g藍 基’ t為100〜300之整數’ k為1〜90之整數，πι、η分別獨立 為0〜90之整數’其中k+m+n為6〜90之整數。 (10) 如上述（8)或（9)之康布列塔司他汀類之高分子結合體， 其中R1為（C1〜C3)烷基，R2為（C2〜C4)伸烷基，H3為 (C1〜C3)醯基，t為100〜300之整數，k為3〜60之整數，m、n 为別獨立為0〜60之整數，其中k+m+n為6〜60之整數。 (11) 如上述（1)至（10)中任一項之康布列塔司他汀類之高分 子結合體，其中康布列塔司他汀類為康布列塔司他汀 4 〇 (12) —種康布列塔司他汀類之高分子結合體，其係於有機 溶劑中’使用脫水縮合劑使聚乙二醇結構部分與具有2個 以上羧基的聚合物部分之嵌段共聚物中的該聚合物部分的 魏酸基、與康布列塔司他汀類的羥基進行酯鍵結而獲得。 (13) —種上述（1)至（11)中任一項之康布列塔司他汀類之高 分子結合體之製造方法，其特徵在於：於有機溶劑中，使 用脫水縮合劑使聚乙二醇結構部分與具有2個以上羧基的 聚合物部分之嵌段共聚物中之該聚合物部分的羧基與康布 列塔司他汀類的羥基進行酯鍵結。 (14) 種抗癌劑，其將上述（1)至（12)中任一項之康布列塔 司他>丁類之高分子結合體作為有效成分。 (15) 一種血管靶向劑，其將上述（1)至（12)中任一項之康布 列土合司他汀類之高分子結合體作為有效成分。 121539.doc -12· 200813115 [發明之效果] 本發明之康布列/塔司他汀類之高分子結合體，係聚乙一 醇結構部分與具有2個以上羧基的聚合物部分之嵌段 物中的該聚合物部分的羧基、與康布列塔司他汀類的羥= 進行酯鍵結而成。因此，本發明之康布列塔司他汀類=二 分子結合體能夠不依存於生物體的水解酶而釋放藥劑，難 以受個體差異的影響而顯示有效的治療效果。 、 【實施方式】 本發明之康布列塔司他汀類之高分子結合體，係聚乙二 醇結構部分與具有2個以上羧基的聚合物部分之嵌段共Z 物中的該聚合物部分的羧基、與康布列塔司他汀類的羥基 進行酯鍵結而成。本發明中，對於具有2個以上羧基:二 合物並無特別限制，例如可舉出··具有2個以上琥珀酸單 酉避胺結構部分之聚合物或聚麵醯胺等。

本發明中，所謂琥珀酸單醯胺結構部分，咅 指-HNC WC〇2h結構。例如可舉出：琥轴酸單酿: (-HNCO-CH2”H)、或使天冬胺的2㈣基中的i 個醯胺化之結構（棚⑶韻（舰）偶_C02H 或-hNCO-CH2_ch(_nh+c〇2H)等。㈣號拍酸單酿胺結 構部分’例如亦可如聚天冬胺酸般，構成聚合物之主鍵。 或者亦可與由葡聚糖等多元醇、聚離胺酸等聚胺、除聚 天冬胺酸以外之聚叛酸(例如，聚乳酸等)所構成之主鏈聚 合物的官能基結合。 -般認為，琥,白酸單醯胺結構部分，伴隨向環化結構 】21539.doc -13- 200813115 (琥拍醯亞胺）變化而使具有羥基之化合物游離。 作為本發明之康布列塔司他 他/丁頦之问分子結合體的聚合 物中之聚乙二醇結構部分，可舉出將兩末端或單末端加以 修飾之聚乙二醇；於將兩末端加以修飾時，其修飾基可相 同亦可不同。作為該修飾基，可舉出亦可具有取代基之 (C1〜C6)烧基。作為亦可呈右1 八有取代基之（C1〜C6)烷基的烷 基，可舉出後述之烷基，較好地舉出(C1〜C4)烷基，例如

可舉出：甲基、“、正丙基、正丁基等。至於亦可具有 取代基之（C1〜C6)院基之取代基’例如可舉出：胺基、甲 胺基、二甲胺基、乙胺基、二乙胺基等。 聚乙二醇結構部分之分子量為3〇〇〜5〇〇〇〇〇左右、較好的 是500〜100000左右、更好的是1〇〇〇〜5〇〇〇〇左右。 本發明之聚乙二醇結構部分與具有2個以上羧基的聚合 物部分之嵌段共聚物之分子量為500〜500000左右、較好的 是600〜100000左右、更好的是8〇〇〜8〇〇〇〇左右。 再者’本發明之所謂分子4，係指以GPC(凝膠渗透層 析法）法所測定之重量平均分子量。 於本發明之康布列塔司他汀類之高分子結合體中，和聚 乙二醇結構部分與具有2個以上羧基的聚合物部分之嵌段 共聚物結合之康布列塔司他汀類的結合量為總羧基數的 1〜1〇〇%、較好的是1〜90%、更好的是2〜60%。 於本發明中，康布列塔司他㈣，若為具有經基且具有 抗腫瘤活性之康布列塔司他汀骨架之化合物、即具有含氧 B能基之芪結構之化合物，則無特別限制。至於該康布列 121539.doc -14- 200813115 塔司他汀類，例如可舉出：以下述式所表示之康布列塔司 他汀A-l(III)、康布列塔司他汀A-4(IV)、AC-7700(V)等。 至於康布列塔司他汀類之羥基，如下述式所示，可舉出酚 性羥基亦可舉出醇性羥基，對其取代位置亦無限制。 [化3]

H3CO och3

och3 (1工工> [化4]

OH (IV) [化5]

H 3CO

121539.doc -15- (V) 200813115 於本發明中，作為2個以上之琥珀酸單醯胺構造部分， 較好的是聚天冬胺酸。又，作為其他具有2個以上羧基之 聚合物部分，較好的是聚麩胺酸。 作為本發明之康布列塔司他汀類之高分子結合體，較好 地舉出：含有聚天冬胺酸之以上述通式（I )[式中，R1表示 氫原子或者（C1〜C6)烷基，R2表示結合基，R3表示氫原子 或者（C1〜C6)醯基，R4表示康布列塔司他汀類之羥基殘 基，R5表示選自由（C1〜C30)烷氧基、（C7〜C30)芳烷氧基、 (C1〜C30)烷基胺基、二（C1〜C30)烷基胺基、將羧基經保護 之胺基酸以及-N(R6)CONH(R7)所組成之群之基，R6、R7 可相同亦可不同、表示（C3〜C6)環狀烷基或者亦可被三級 胺基取代之（(：1〜€5)烷基，1表示5〜115 00之整數，（1、6、 f、g、h、i或者j分別獨立地表示0〜200之整數，其中d+e表 示1〜200之整數，且d+e+f+g+h+i+j表示3〜200之整數，聚 天冬胺酸之各構成單位之結合順序為任意]所表示之化合 物；或者含有聚麵胺酸之以上述通式（II)[式中’ R1表不氮 原子或（C1〜C6)烷基，R2表示結合基，R3表示氫原子或者 (C1〜C6)醯基，R4表示康布列塔司他汀類之羥基殘基，R5 表示選自由（C1〜C30)烷氧基、（C7〜C30)芳烷氧基、 (C1〜C30)烷基胺基、二（C1〜C30)烷基胺基、將羧基保護之 胺基酸以及-N(R6)CONH(R7)所組成之群之基，R6、R7可 相同亦可不同、表示（C3〜C6)環狀烷基或者亦可被三級胺 基取代之（C1〜C5)烷基，t表示5〜1 1500之整數，k表示 1〜200之整數，m、η分別獨立表示0〜200之整數，其中 121539.doc -16- 200813115 k+m+n表示3〜200之整數，聚麩胺酸之各構成單位的結合 順序為任意]所表示之化合物。 至於上述通式（I)或（II)之R1中之（C1〜C6)烷基，可舉出 直鏈或支鏈之碳數1〜6之烷基。其中較好的是直鏈或支鍵 之（C1〜C4)烧基’尤其好的是直鏈或支鏈之（ci〜C3)烧基。 至於直鏈或支鏈之（C1〜C6)烷基，例如可舉出··甲基、乙 基、正丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、正戊基、正己

基等，特別好的是甲基、乙基、正丙基、異丙基，尤其好 的是甲基。 對於以上述通式（〗）或（11)之们所表示之結合基並無特 別限制，例如可舉出（C2〜C6)伸烷基，其中較好的是 (C2 CM)伸烷基。至於（C2〜C4)伸烷基，例如可舉出：伸乙 基、三亞甲基、伸丁基等，特別好的是三亞甲基。 對於上述通式⑴或（⑴之们中之⑹〜叫醯基並無特別 限制’例如可舉出：甲醯基、乙醯基、丙醯基、三甲基乙 醯基等，較好是乙醯基。 …工逆逋式（I )或（II)之R4之庵涂加w 免 ； 乏康布列塔司他汀類之羥基 歹欠土中’作為康布列塔司他、;丁類可爽山. ^ 頰了舉出：上述康布列塔司 ，丁類。若為具有藉由脫水縮合 _ % σ d而與聚合物部分的羧基 進订酉日鍵結的經基、且且右h 類，目… 瘤活性之康布列塔司他江 θ ,,, 乍為該康布列塔司他汀類，較好的 疋’例如可舉出上述康布列塔司他…。 作為上述通式（1)或（11)之 惫其… 表不選自由（C1〜C30)烷 虱基、（C7〜C30)芳烷氧基、 …1〜C30)烷基胺基、二 121539.doc -17- 200813115 (Cl〜C30)烧基胺基、將羧基保護之胺基酸以 及-N(R6)CONH(R7)所組成之群之基，R6、R7可相同亦可 不同，為（C3〜C6)環狀烷基或者亦可被三級胺基取代之 (C1〜C5)烷基。作為通式（I )或（II)之R5，於一分子中可相 同亦可不同，又，康布列塔司他汀類之高分子結合體所使 用之聚合物，可為單一的聚合物亦可為混合物。 至於該（C1〜C30)烷氧基，可舉出直鏈或支鏈之（C1〜C30) 烷氧基。其中，較好的是直鏈或支鏈之（C1〜C10)烷氧基， 例如可舉出··甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正 丁氧基、第三丁氧基等。至於（C7〜C30)芳烷氧基，較好的 是直鏈或支鏈之（C7〜C30)芳烷氧基、或者直鏈或支鏈之 (C7〜C12)芳烷氧基。例如可舉出4-苯基丁氧基等。 至於該（C1〜C30)烷基胺基或二（C1〜C30)烷基胺基，可舉 出：直鏈或支鏈之（C1〜C30)烷基胺基或二（C1〜C30)烷基胺 基，較好的是直鏈或支鏈之（C1〜C20)烷基胺基或二 (C1〜C20)烷基胺基，例如可舉出··曱胺基、乙胺基、正丙 基胺基、異丙基胺基、正丁，基胺基、第三丁基胺基、二甲 胺基、二乙胺基、二丁基胺基等。 至於保護該羧基之胺基酸，可舉出通常於肽合成中所使 用之保護羧基之胺基酸。例如較好的是苯丙胺酸苄酯等。 對於通式(I )或（II)之 R5 中之-N(R6)CONH(R7)[R6、R7 可相同亦可不同、為（C3〜C 6)環狀烧基或者亦可被三級胺 基取代之（C1〜C5)烷基]並無特別限制。例如可舉出：環己 基胺基獄基環己基胺基、異丙基胺基魏基異丙基胺基等。 121539.doc -18- 200813115 本發明之以上述通式（i)所表示之康布列塔司他汀類之 鬲分子結合體中之2個以上琥珀酸單醯胺結構部分即聚天 冬胺酸中，有α-胺基酸型、胺基酸型、環化者等構成單 位’但全部的聚天冬胺酸並不包含環化者。對該等構成單 ， 位之結合順序並無限制，可為嵌段型亦可為隨機型。又， 各構成單位可為L型亦可為d型。 以上述通式（I )所表示之康布列塔司他汀類之高分子結 馨 合體之總天冬胺酸數係Ud+e+f+g+h+i+j表示，為3〜個 左右、杈好的是6〜1〇〇個左右、特別好的是15〜9〇個。總天 冬胺酸數，例如可藉由製造聚乙二醇結構部分與聚天冬胺 酸之嵌段共聚物時之反應投入量而自由地變更。 康布列塔司他汀類所結合之天冬胺酸數（d+e)相對於總 天冬胺酸數（d+e+f+g+h+i+j)之比例為1〜100%、較好的是 3〜90%、更好的是4〜6〇%。又，天冬胺酸數（d+e)為卜】⑼ 個左右、較好的是個左右、特別好的是丨〜卯個左 馨右。康布列塔司他汀類之結合比例，例如可藉由嵌段共聚 物與康布列塔司他汀顏之結合反應時之反應投入量而變 更’如後述可藉由反應液的分析而求得。 a-胺基酸型（d+f+h)相對於總天冬胺酸數（d+e+f+g+h+i+j) ‘ 之比例為10〜10〇(>/❹、較好的是20〜100%。該比例，例如可 藉由選擇聚天冬胺酸的保護基的脫保護條件等而適當變 更。 本發明之以上述通式（Π)所表示之康布列塔司他汀類之 同分子結合體中之聚麩胺酸為α•胺基酸型，可為L型亦可 121539.doc -19- 200813115 為D型。 本發明之以上述通式（II)所表示之康布列塔司他汀類之 面刀子、δ體之總麵胺酸數係以k + m + n表示，為3〜2QQ個 左右、較好的是6〜90個左右、特別好的是6〜6〇個左右。總 麩胺酸數，例如可藉由製造聚乙二醇結構部分與眾麩胺酸 之嵌段共聚物時之反應投入量而自由變更。 康布列塔司他汀類所結合之麩胺酸數（k)相對於總麩胺 酸數（k+m+n)之比例為1〜100%、較好的是3〜90%、更好的 疋4 60/g。又，作為麩胺酸數（k)為1〜200個左右、較好的 是1〜90個左右、特別好的是3〜6〇個左右。康布列塔司他汀 類之結合比例，例如可藉由嵌段共聚物與康布列塔司他汀 類、^ 口反應時之反應投入量而加以變更，又，可藉由反應 液的分析而求得。 對以上述通式（II)所表示之康布列塔司他汀類之高分子 結合體中之麵胺酸結構的各構成部分之結合順序並無限 制’可為嵌段型亦可為隨機型。 作為上述通式（1)或（11)之t為5〜11500左右之整數、較好 的是8〜2300左右之整數、更好的是1〇〇〜3〇〇左右之整數。 本發明之康布列塔司他汁類之高分子結合冑，亦可於水 中形成以聚乙二醇結構部分為外殼之微胞。 〜本發明之康布列塔司他汀類之高分子結合體，係於有機 洛劑中，冑用脫水縮合劑使聚乙二醇結構部分與具有以固 以上綾基的聚合物部分之嵌段共聚物中之該聚合物的幾 基、與康布列塔司他；^類的㈣進行賴結而獲得；該製 121539.doc *20. 200813115 造方法亦包含於本發明中。 卩’例如係如下之制锆方、本· 將以專利文獻5記載的方法 瓜仏方法· . ^ 7裏備之聚乙二醇結構部分-聚 天冬胺酸之嵌段共聚物、 稱刀％ ^ Μ Φ -m 或者M日本專利特開平5-955號 山π ϋ4 . I乙一醇結構部分_聚麩胺酸 甘欠段共t物’與根據雲I脸 ^要將除反應基以外的官能基加以保 濩之康布列塔司他汀類，於 。 & 於/合解兩者之有機溶劑中，於 0 180 c車乂好的是5〜5〇t下使用脫水縮合劑進行縮合反 應。又’於進打該縮合反應時亦可使用反應助劑。對於用 於該縮合反應之有機溶劑並無特別限制，較好的是N，N•二 甲基甲醯胺（DMF)、U_二曱基_2_咪唑啉酮（dmi ; Dimethyl lmidaz〇lidinone)、N_ 甲基吡咯烷酮（NMp ; N_Methylpyrrolidone)等非質子性極性溶劑。至於脫水縮合 』，可使用.二環己基碳二醯亞胺（DCC ; diCyCl〇heXylCarbodiimide)、二異丙基碳二醯亞胺（Dipc ; Diisopropyl carbodiimide)、！·乙基 _3_(3_二甲胺基丙基）碳 二醯亞胺鹽酸鹽（WSC ; LEthy^-p-dimethyiaminoprop^) carbodiimide hydrochloride)、1-乙氧羰基-2_乙氧基-i，2-二 氫喧琳（EEDQ ; l-ethoxycarbonyHethoxy-lJ-dihydroqiiiiiolme) 等。反應助劑可使用N，N_二甲基胺基吡咬（DMAP ; dimethyl aminopyridine)等。縮合反應後，藉由通常之分 離純化等操作，而可獲得康布列塔司他汀類之高分子結合 體。根據需要亦進行脫保護。例如，於康布列塔司他汀類 為AC-7700(V)之情形時，利用第三丁氧基羰基等保護基將 胺基加以保護，供於與嵌段共聚物的縮合反應，然後以三 121539.doc -21 - 200813115 氟醋酸等進行脫保護，藉此能夠製造。 又，R5為-N(R6)CONH(R7)基、R6、R7可相同亦可不 同’為（C3〜C6)壞狀烧基或者亦可被三級胺基取代之 (C1〜C5)烷基之康布列塔司他汀類之高分子結合體，亦可 藉由將上述碳二醯亞胺類用作縮合劑之反應而獲得。 作為通式（I)或（II)之化合物中的R5為（C1〜C30)燒氧 基、（C1〜C30)芳烷氧基、（Cl〜C30)烷基胺基、二（cl〜C3〇) 烧基胺基或者羧基經保護的胺基酸之化合物之製造方法， 可舉出：使與將聚合物的羧基活化後欲結合的量所對應之 醇或所對應之胺或羧基經保護之胺基酸等，於鹼性條件下 進行縮合反應之方法；或者將所對應之醇、所對應之胺或 保護羧基之胺基酸等活化後，使其進行縮合反應而形成聚 合物之方法等。將聚合物純化後，以同樣的反應使聚合物 中未反應的羧基再活化，此處亦可使其與康布列塔司他汀 類的羥基縮合·，或者亦可使其與不同的醇、胺等重複進行 反應，而合成以各種取代基取代尺5之混成體聚合物，繼而 亦可使其與康布列塔司他汀類的羥基縮合。又，亦可於使 其與康布料司他';了_合後，料Mci〜⑽)燒氧基、 P〜C30)芳烧氧基、（C1~C寧基胺基、二（ci〜c_基 胺基或者保護幾基之胺基酸等。 ::不=明之康布列塔_類之高分子結合體之製 k法並不限疋於上述方法。 本發明亦包含以本發明之康布列塔司他汀類之高結 合體為有效成分之抗癌劑。 八 刀、口 i明亦包含以本發明之 121539.doc -22- 200813115 :布列：司他汀類之高分子結 劑，即與由於抑制血流而造成 ：二…向 療劑例如慢性關節風滿病、年二办級關之疾患之治 病性視網膜症等之治療 性頁斑㈣症、糖尿 劑、錠劑、粉劑等通二 結合體可經由注射 I吊所使用之劑创 & 時可使用通常使用之藥學 、、‘劑化之 劑、潤滑劑、崩解劑、溶劑、賦形劑、助溶劑、

:定劑、懸浮劑、防腐劑、鎮痛劑、色素二 中’較好的是作為注射劑使用，通常例如使用：水生理 鹽=、5%㈣㈣甘露醇液、水溶性有機溶劑（例如，丙 二％、乙醇、二甲基亞颯、N_甲基吡咯烷酮、聚乙二醇、 Cremophor(氫化M麻油聚氧乙烯，等或該等之混合液）或 者水與該水溶性有機溶劑之混合液等。 A本發明之康布列塔司他，丁類之高分子結合體之投與量， :然可根據患者的性別、年齡、生理狀態、病態等而加以 變更，例如，非經口投與時，通常成人每日，料活性成 分投與0.01〜500 mg/m2、較好的是投與〇1〜25〇 。採 用注射之投與，係於靜脈内、動脈内、患部（腫瘤部）等處 進行。 [實施例] 以下，利用實施例更具體地說明本發明，但本發明並不 限定於該等實施例。 貫施例1化合物1(由分子量5000之甲氧基聚乙二醇部 分與聚合數為3〇之聚天冬胺酸部分所構成之嵌段共聚物與 12I539.doc -23- 200813115 康布列塔司他汀Ad之結合體：通式（I)之Rl==Me(甲基）、 R2-二亞曱基、R3=Ac(乙醯基）、R4 =康布列塔司他汀A-4 殘基、R5 =異丙基胺基羰基異丙基胺基、d+e+f+g+h+i+j = 30、t=113)之合成 將以專利文獻5記載的方法製備之甲氧基聚乙二醇-聚天 冬胺酸嵌段共聚物（天冬胺酸部分：α型與β型之混合體， 聚合數30，2670 mg)與以非專利文獻1記載的方法合成之 康布列塔司他汀A-4(600 mg)溶解於DMF(60 ml)中，添加 DMAP(174 mg)、DIPC(2.97 ml)，於 25°C 下攪拌20小時。 向反應液中添加醋酸乙酯（180 ml)及二異丙醚（720 ml)，於 室溫下攪拌30分鐘後，濾取沈析物，以醋酸乙酯/二異丙 醚（l/4(v/v)、30 ml)加以清洗。將所得沈析物溶解於乙腈/ 水（l/l(v/v)、1〇〇 ml)後，於離子交換樹脂（陶氏化學公司 (Dow Chemical)製 Dowex 50(H+)、15 ml)中進行通塔，以 乙腈/水（1/1 (v/v)、20 ml)進行溶出。向所得溶出部分添加 水（60 ml)，於減壓下餾去乙腈，其後進行冷凍乾燥，藉此 獲得化合物1(2670 mg)。 根據使用HPLC(局效液相層析法：管柱：jnertsii 〇ds_ 3(GL Science公司製）、溶劑糸統：〇1%石粦酸水溶液_乙腈 (50%·5〇%(ν/ν)))對反應液中的未反應 c〇mbretastatin α·4量 之計量，化合物1中之康布列塔司他汀Α-4含量為 10.4%(w/w)，d+e相對於 d+e+f+g+h+i+j 之比例為 1〇·6%。 化合物1中，未檢測出游離之康布列塔司他、;丁 Α-4。 又，導入異丙基胺基羰基異丙基胺基作為R5，其存在比 12I539.doc -24- 200813115 係根據將化合物1溶解於氛氧化鈉/重水/說化乙猜之 W-NMR(氫核磁共振光譜）而求得。化合物1中異丙基胺基 羰基異丙基胺基於聚天冬胺酸中所占比例，即相對於 d+e+f+g+h+i+j之比例為16.2%。其他天冬胺酸為游離魏酸 (h+i)或者環狀構造⑴。 實施例2化合物2(由分子量！2000的甲氧基聚乙二醇部 分與聚合數為23的聚麵胺酸部分所構成的嵌段共聚物與康 布列塔司他汀A-4之結合體）之合成··通式（11)之R1=Me(甲 基）、R2 =二亞甲基、R3=Ac(乙醯基）、R4=康布列塔司他 汀A-4殘基、R5=異丙基胺基羧基異丙基胺基、 k+m+n=23、t=273)之合成 將以日本專利特開平5_955號公報記載的方法而製傷之 曱氧基聚乙一醇-聚麵胺酸巍段共聚物（581 mg)及以非專利 文獻Ϊ記載的方法而合成之康布列塔司他汀A-4(l〇〇 mg)溶 解於 DMF(4.5 ml)中，添加 DMAP(16.5 mg)、DIPC(0.283 ml)，於20°C下攪拌40小時。向反應液中添加dipc((k〇7〇 ml) ’升溫至25°C後繼續攪拌1.5小時。向反應液中添加乙 醇（60 ml)及二異丙醚（240 ml)，於室溫下攪拌3小時後濾取 沈析物，以乙醇/二異丙_(1/4(v/v)、50 ml)加以清洗。將 所得沈析物溶解於乙腈/水（1/1(v/v)、5〇 ml)後，於離子交 換树脂（陶氏化學公司（D〇w Chemical)製Dowex 50(H+)、1 5 ml)中進行通塔，以乙腈/水（l/l(v/v)、50 ml)進行溶出。向 所得溶出部分添加水（3 ml)，減壓下餾去乙腈，其後進行 冷束乾燥，藉此獲得化合物2(550 mg)。 121539.doc -25- 200813115 根據使用Η P L C對反應液中的未反應康布列塔司他汀A _ 4 量之計量，化合物2中之康布列塔司他汀A_4含量為 11.2%(w/w)。化合物2中’未檢測出游離之康布列塔司他 丁 A-4。 又，導入異丙基胺基羰基異丙基胺基作為R5，其存在比 係根據將化合物2溶解於氘氧化鈉/重水/氘化乙腈者之 NMR(氫核磁共振光譜）而求得，異丙基胺基羰基異丙基胺 基於聚天冬胺酸中所占比例，即m相對於k+m+η之比例為 32%。 貫施例3化合物3(由分子量12000的甲氧基聚乙二醇部 分與聚合數為33的聚天冬胺酸部分所構成之嵌段共聚物與 康布列塔司他汀A-4之結合體：通式（1)之尺卜Me(曱基）、 R2一二亞甲基、R3=Ac(乙醯基）、康布列塔司他汀殘 基、R5 =異丙基胺基羰基異丙基胺基以及&苄基-苯基丙胺 醯基、d+e+f+g+h+i+j = 33、t=273)之合成 • 將以專利文獻5記載的方法製備之甲氧基聚乙二醇-聚天 冬胺&L敗^又共聚物（天冬胺酸部分· α型與β型之混合體， 聚合數33，605.4 mg)與以國際公開第〇2/〇6279號案記載的 方法製備之康布列塔司他汀A_4(i〇〇 mg)溶解於dmf(8 5 ml)中’添加本丙胺酸 > 酷鹽酸鹽（83·4 mg)、三乙胺（〇·〇4 ml)、DMAP(16 mg)以及 DIPC(0.4 ml)，於 15°C 下攪拌 20小 時’其後進而於25 C下攪拌4小時。向反應液中添加醋酸 乙酯（70 ml)、庚烷（70 ml)，於室溫下攪拌3〇分鐘後濾取沈 析物，以醋酸乙酯/庚烷（1/1(v/v)、2〇 ml)加以清洗。將所 121539.doc -26- 200813115 獲沈析物溶解於乙腈/水（1/1 (v/v)、20 ml)中後，於離子交 換樹脂（陶氏化學公司（Dow Chemical)製Dowex 5〇(H+)、3 ml)中進行通塔，以乙腈/水u/uv/v)、2〇 ml)進行溶出。向 所得溶出部分添加水（35 ml)，於減壓下餾去乙腈，其後進 行冷凍乾燥，藉此獲得化合物3(710 mg)。 根據使用HPLC(高效液相層析法）對反應液中的未反應康 布列塔司他汀A-4量之計量，化合物3中之康布列塔司他汀 A-4含量為7.9%(w/w)，d+e相對於d+e+f+g+h+i+j之比例為 14%。化合物3中，未檢測出游離之康布列塔司他汀a-4。 作為R5之一而導入之〇-苄基_苯基丙胺醯基，係根據將 化合物3於乙腈-氫氧化鈉水溶液中於4〇。〇下水解6小時、 且對溶出之苄基醇進行的定量而求得，〇-苄基-苯基丙胺 酉胜基於聚天冬酸中所占比例即;f+g相對於d + e + f+g+h+i+j 之比例，對於結合Ο-苄基-苯基丙胺醯基者而言為27%。 又’亦導入異丙基胺基獄基異丙基胺基作為R5，其存在比 係根據將化合物3溶解於氘氧化鈉/重水/氘化乙腈之1H-NMR(氫核磁共振光譜）而求得。異丙基胺基羰基異丙基胺 基於5^天冬fee酸中所占比例即f+g相對於d+e+f+g+h+i+j之 比例，對於結合異丙基胺基羰基異丙基胺基者而言為 1 5%。其結果為，R5的總量於聚天冬胺酸中所占比例即 f+g相對於d+e+f+g+h+i+j之比例為42% °其他之天冬胺酸 為游離羧酸（h+i)或者環狀結構（j)。 試驗例1 非酶存在下之藥劑釋放 將化合物1、化合物2或化合物3以聚合物濃度1 mg/mU# 121539.doc •27- 200813115 解於叩叫酸緩衝生理鹽水；pH7 l)中，於抓下保溫。 將自《南分子結纟體中釋放之康布列塔司他《丁 Μ以册^ 進订刀離且利用標準曲線進行定量。定量值與根據高分子 、、’口 5體的某劑含量而求得的總藥劑量之比示於圖1。 由圖1可明瞭，本發明之高分子結合體（化合物1、化合 物2及化合物3)即使無水解酶亦有意地釋放康布列塔司他 /丁 A-4。特別是，具有琥珀酸單醯胺結構部分之化合物1及 化合物3與不具有琥珀酸單醯胺結構部分之化合物2相比， 更早地釋放康布列塔司他…。圖i之結果顯示於非酶存 在下之本發明之咼分子結合體之優異藥劑釋放性能。 試驗例2 抗腫瘤作用 將於小白鼠皮下繼帶培養之小白鼠大腸癌c〇1〇n26製成 約2 mm四方形的方塊，使用套管針將其移植於雌性cDfi 小白鼠的背側部皮下。自腫瘤移植後第7曰起以將本養明 之高分子結合體（化合物1)或者對照藥（康布列塔司他汀A_ 4)分別以進行康布列塔司他汀a_4換算之投與量向小白鼠 尾靜脈内單次投與。對照群為不投與藥物之群。化合物i 係以5%葡萄糖注射液將其溶解後使用。將康布列塔司他 ✓丁 A-4溶解於一曱基亞石風及crem〇ph〇r EL(Sigma公司製） 中，使用時以5%葡萄糖注射液稀釋後加以使用。投與 後’使用游標卡尺測量腫瘤之長徑（Lmm)及短徑（Wmm)， 藉由（LxW2)/2計异腫瘤體積，作為相對於投與開始日的腫 瘤體積之相對腫瘤體積而示於表1。 [表1] 121539.doc -28- 200813115 投與量 0 投J 2 每後曰數< 4 :日） 7 8 化合物1 200 mg/kg LOO 0.87 0.98 1.15 1.71 100 mg/kg 1.00 0.99 1.38 2.87 4.91 康布列塔司 他汀A-4 400 mg/kg LOO 1.24 2.21 5.09 6.41 200 mg/kg LOO 1.77 3.73 9.25 12.03 對照群 LOO 2.70 5.02 10.51 11.59 由表1可明瞭，本發明之高分子結合體（化合物1)，以少 於康布列塔司他汀A-4之投與量具有較康布列塔司他汀A_4 更優異之抗癌活性。 試驗例3 抗腫瘤作用 將於小白鼠皮下繼代培養之小白鼠大腸癌c〇1〇n26製成 約1 mm四方形的方塊，使用套管針移植於雌性小白 鼠8之背側部皮下。自腫瘤移植後第7日起將本發明之高分 子、、’。合體（化合物2及化合物3)或者以非專利文獻〗所記載方 法而合成之對照藥（康布列塔司他汀磷酸酯）分別以進 =列塔司他…換算之投與量向小、白鼠尾靜脈内進 ^ 技與。對照群為不投與藥物之群。化合物2、化合 八鱼/對照藥，全部係以5%葡萄糖注射液溶解後使用。 與後」使用游標卡尺測量腫瘤之長徑（£ mm)及短徑（w 藉由（Lxw )/2計算腫瘤體積，作為相對於投與開始 的腫瘤體積之相對腫瘤體積而示於表2。 [表2] 121539.doc -29- 200813115 投與量 l與後曰數 0 2 4 7 9 化合物2 50 mg/kg 1.00 0.99 1.11 3.05 5.52 化合物3 100 mg/kg 1.00 0.79 0.99 0.84 1.18 50 mg/kg LOO 1.15 1.20 1.59 _______ 3.87 康布列塔司 他汀A-4石粦 酸酉1 200 mg/kg 1.00 1.57 3.12 9.33 10.11 對照群 1.00 2.82 5.70 12.23 19.58 由表2可明瞭，本發明之高分子結合體（化合物2及3)， 以少於康布列塔司他汀A-4磷酸酯之投與量具有較康布列 塔司他汀A-4磷酸酯更優異之抗癌活牲。 【圖式簡單說明】 圖1係本發明之實施例1之化合物1及3((曱氧基聚乙二醇 衍生物-聚天冬胺酸）-康布列塔司他汀A-4結合體）及實施例 2之化合物2((曱氧基聚乙二醇衍生物-聚麩胺酸）_康布列塔 司他>丁 A-4結合體）於pbs溶液（ρΗ7· 1、37°C)中的釋放量相 對於康布列塔司他汀A-4的總結合量之比例 121539.doc -30-

Claims (1)

1. 200813115 十、申請專利範圍： 1. 一種康布列塔司他汀類之高分子結合體，其係聚乙二醇 結構部分與具有2個以上羧基的聚合物部分之嵌段共聚 物中之該聚合物部分的羧基與康布列塔司他汀類的羥基 進行酯鍵結而成。 2. 如請求項1之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其中 具有羧基之聚合物部分為具有琥珀酸單醯胺結構部分之 聚合物。 3. 如請求項2之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其中 具有琥珀酸單醯胺結構部分之聚合物為聚天冬胺酸。 4. 如請求項1至3中任一項之康布列塔司他汀類之高分子結 合體，其中康布列塔司他汀類之高分子結合體係以通式 (I )所表示之化合物： [化6] C02R4 I

   R1-0-(CH2CH20)rR2-[(NHC0CH)d-(NHC0CH2CH)e-(NHC0CH)f. CH2C02R4 CH2COR5 COR5 C02H -(NHCOCHiCHJg^NHCOCHJh.iNHCOCHaCHJHNCOCHy-NHRS CH2C02H COCH2 (X) [式中，R1表示氫原子或者（Cl〜C6)烷基，R2表示結合 基，R3表示氫原子或者（C1〜C6)醯基，R4表示康布列塔 司他汀類之羥基殘基，R5表示選自由（C1〜C30)烷氧基、 12l539.doc 200813115 (C7〜C30)芳烷氧基、（cn〜C30)烷基胺基、二（Cl〜C30)烷 基胺基、羧基經保護之胺基酸以&_N(R6)C〇NH(R7)所 組成之群之基，R6、R7可相同亦可不同、表示（C3〜C6) 環狀烧基或者亦可被三級胺基取代之（C1〜C5)烧基，t表 示5〜11500之整數，（1、6、£、§、11、1或者]分別獨立地 表示0〜200之整數，其中d+e表示1〜200之整數，且 d+e+f+g+h+i+j表示3〜200之整數，聚天冬胺酸之各構成 單位之結合順序為任意]。 5·如請求項4之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其中 R1為（C1〜C6)烷基，R2為（C2〜C6)伸烷基，R3為（C1〜C6) 醯基，t為8〜2300之整數，d、e、f、g、h、i或者j分別獨 立為0〜100之整數，其中d+e為1〜100之整數，且 d+e+f+g+h+i+j為 6〜100之整數。 6·如請求項5之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其中 R1為（C1〜C3)烷基，R2為（C2〜C4)伸烷基，R3為（C1〜C3) 酉迪基’ t為1 〇〇〜300之整數，d、e、f、g、h、i或者j分別 獨立為〇〜90之整數，其中d+e為1〜90之整數，且 d+e+f+g+h+i+j 為 15 〜90之整數。 7·如請求項1之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其中 具有羧基之聚合物部分為聚麩胺酸。 8·如請求項1或7之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其 中康布列塔司他汀類之高分子結合體係以通式（ΪΙ)所表 示之化合物： [化7] I21539.doc 200813115 CH2CH2C02R5 I R1-0-.(CH2CH2〇)rR2-I(NHCOCH)k-{NHCOCH)m-(NHCOCH)n]-NHR3 CH2CH2C02R4 ch2ch2co2h [式中，R1表示氫原子或者（Cl〜C6)烷基，R2表示結合 基，R3表示氫原子或者(C1〜C6)醯基，R4表示康布列塔 司他汀類之羥基殘基，R5表示選自由（C1〜C30)烷氧基、 (C7〜C30)芳烷氧基、（C1〜C30)烷基胺基、二（C1〜C30)烷 基胺基、羧基經保護之胺基酸以及-N(R6)CONH(R7)所 組成之群之基，R6、R7可相同亦可不同、表示（03〜€6) 環狀烷基或者亦可被三級胺基取代之（C1〜C5)烷基，t表 示5〜11 500之整數，k表示1〜200之整數，m、η分別獨立 表示0〜200之整數，其中k+m+n表示3〜200之整數，聚麩 胺酸之各構成單位之結合順序為任意]。 9. 如請求項8之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其中 R1為（C1〜C6)烷基，R2為（C2〜C6)伸烷基，R3為（C1〜C6) 醯基，t為8〜2300之整數，k為1〜90之整數，m、η分別獨 立為0〜90之整數，其中k+m+n為6〜90之整數。 10. 如請求項9之康布列塔司他汀類之高分子結合體，其中 R1為（C1〜C3)烷基，R2為（C2〜C4)伸烷基，R3為（C1〜C3) 醢基，t為100〜300之整數，k為3〜60之整數，m、η分別 獨立為0〜60之整數，其中k+m+n為6〜60之整數。 11 ·如請求項1、2、3或7之康布列塔司他汀類之高分子結合 體，其中康布列塔司他汀類為康布列塔司他汀A-4。 12. —種康布列塔司他汀類之高分子結合體，其係於有機溶 121539.doc 200813115 劑中，使用脫水縮合劑使聚乙二醇結構部分與具有2個 以上羧基的聚合物部分之嵌段共聚物中之該聚合物部分 的羧基、與康布列塔司他；丁類的羥基進行醋鍵結而獲 得0 13.種如请求項j至u中任—項之康布列塔司他灯類之高 分子結合體之製造方法，其特徵㈣：於有機溶劑中， 使用脫水縮合劑使聚 ^ ^ 一知結構部分與具有2個以上羧

   基的聚合物部分之嵌 ^ , 奴共t物中之該聚合物部分的羧 基、與康布列塔司他汀〜 u 一丁颌的羥基進行酯鍵結。 14·種抗癌劑，其係以如往 . %未項1至12中任一項之康布列 ，丁類之向分子結合體為有效成分。 15. —種血管靶向 直 ,欢成刀 布列议η 八糸以如請求項1至12中任一項之康 ♦列塔司他汀類 八 、同刀子結合體為有效成分。

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