TW200812955A - Anti cancer use of caffeic acid and derivatives - Google Patents

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200812955 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係相關於咖啡酸、或其衍生物、或其鹽類在治 療對 Gleevec (Glivec，lmatinib，或 ST1571)之治療有抗 性的t艾性骨髓性白血病（chronic myeloid leukemia，CML) 上’或是在減少對Gleevec有抗性之細胞的增殖上的使用。 本發明亦相關於包括分子式（1)所示之咖p非酸、或其衍生 w、或其鹽類之藥物成分在治療對Gleevec的治療有抗性之 fe性骨髓性白血病（chronic myeloid leukemia，CML)上， 或是在減少對Gleevec有抗性之細胞的增殖上的使用。本發 明更進一步相關於一種治療對Gleevec之治療有抗性的慢 性骨髓性白血病（chronic myeloid leukemia，CML )的方法。 【先前技術】 ^又性月骨边性白金病（chronic myeloid leukemia，CML ) 的特徵是，惡性脊髓前驅細胞的無性增殖導致脊髓細胞在 所有形成階段都過量，其中，CML的發展是相關於一特殊 的染色體異位，已知為費城染色體（Philadelphia (ph) chromosome)，在費城染色體中的體細胞突變是源自於第9 對以及第22對染色體的長臂之間的相互異位 translocation )，而此異位的分子變異則是會造成產生融合蛋 白質（fusionpr〇tein)BCr-Abl，其係為在此疾病的整個:二 中都债測得到的一持續活化的酪氨酸激酶（执㈣此 kinase)，該Ph染色體會產生在異常細胞生長以及分裂中扮 演-中心角色的-酵素，其中，該酵素（會加強路氨酸二 200812955 腺活性的一融合蛋白質（Bcr-Abl))會改變細胞的正常基因 指令’此異常酵素會在細胞中透過多重的路徑發送出訊 號’導致身體中之白血球細胞的過度產生，而這樣的結果 是，當健康血液每立方公釐是包含4,〇〇〇至ι〇,000個白血球 時’ CML病患之血液中的白血球會是這個量的至25倍， 所以，CML的特徵就是這樣的白血球數量大量增加。除了 CML之外’亞型（subset)急性淋巴白血病（acutelymph〇id leukemia ’ ALL )以及急性骨髓性白血病（acute myel〇id leukemia，AML)也都是Ph陽性白血病。

Gleevec (Glivec，Imatinib，或ST1571)，一Abl激酶抑 制劑，乃是現在CML病人的第一線治療，而Gleeve則是顯 不必須對具有費城染色體陽性CML之病患在慢性期 (chronic phase)、加速期（acceieratedphase)、或是急性轉 化期（blast crisis)的治療。在某些例子中，的使用 會疋在干擾素-α治療失敗以後，另外，在某些例子中，則是 干擾素w的治療會在Gleevec失敗之後才進行。 CML中之效力的基礎在於整體血液以及細胞的反應速率， Gleevec是一種新的療法，其為遭受先前已經在療法選擇上 X到限制之CML的病患提供另一種新的選擇，此外，其亦 為研究者提供了對於癌症之生理機制的新的洞悉。八 大部分利用Gleevec進行治療的病患在某些時候都會經 歷不利的情形。大部分的情形是輕微到中等等級，但在 的階段II臨床追蹤中，2%的慢性期病患、3%加速期的病患、 以及5〇/。急性轉化期的病患中會因不良的情形而停止用藥， 200812955 其中’敢常見的副作用包括，Π惡心，水液積留（打 retention)，嘔吐，腹瀉，出血，肌肉痙攣，皮膚起疹子， 疲勞，頭痛，消化不良，以及呼吸困難，同時還有嗜中性 白血球減少症（neutropenia )以及血小板減少症 (thrombocytopenia )，嚴重劇烈的副作用，例如，肝毒 (hepatotoxicity) (1%至4%)，水液積留症（fluidretenti〇n syndrome) ( 3%至12〇/〇)，嗜中性白血球減少症（加咖penia) (8%至48%)，以及血小板減少症（thrombocytopej^a) (1% 至33%)，亦已被報導出現在一些病患身上。到目前為止， 沒有相關於於Gleevec療法的長期安全性資料。雖然大部分 接收Gleevec治療的CML病患都表現出顯著的血液以及細 胞上的反應，但對於Gleevec治療有抗性仍然是處於此疾病 之病患在加速期、或是急性轉化期的主要問題。 伤鲞表於Nature之有關白血病（Leukemia)的文章 (2004, 1-11)中提到，對於Gleevec療法發展出抗性的可能 理由。病患對於Gleevec療法產生抗性已經被發現相關於從 非特性之乡抗·分佈她r_Abl之内在基因改變的機制的 -異種陣列，其中，最常被定義之伽_抗性機制是，的 Bcr-Abl激酶點突變（d〇main p〇im _此_ )，盆合藉由 干擾一服觀结合位置而損害伽·結合、或是藉^定 結構來降低GWc之親和力進而損害a隊結 合0 l^S20060〇57157 A1亦揭示對Gleevec療法發展出抗性 、可此理由。根據該份參考文獻，又發細胞社（啊触） 200812955 疋主要的機制’藉此，化療藥品可以發揮它們的功用，因 此’產生細胞凋亡的失敗，就可能是腫瘤中產生藥物抗性 的機制。

Human T3m是最常見之Bcr_Abl變種形式，而其對 Gleevec就具有抗性。T3151是由於Bcr-Abl蛋白之激酶域 (kinase domain)中，位於315位置處之蘇氨酸（threonine residue)成為白氨酸（is〇ieucine)之點突變所造成的。

Blood，2003, 101，690 - 698 中敘述了K-562-R抗性細胞 株。K-562是人類白血病細胞株的其中之一，其包含了一野 生型Bcr_Abl蛋白，而K-562-R則為藉由連續暴露至Gleevec (2 pg/mL)數段時間而對Gleevec產生抗性的κ-562細胞株。

Hematology，2005, 183-187揭示了二種研究用的小分子 ABL激酶抑制劑，Dasatinib (BMS-354825)以及AMN107， 它們在對於利用(Gleevec)進行治療-抗性CML 的階段I臨床追蹤中顯現出了效果，並且正在進行更進一步 地臨床評估。這些新抑制劑的長期效果仍然有待商榷。

Cancer Res·，2006, 66(2)，1007-1014以及Proceedings of the National Academy of Sciences (PNAS)，2005，102(6)， 1992-1997揭示了二種化合物νχ_680以及ON-12380，其對 Gleevec抗性CML (T3151)具有對抗活性。

Cancer Res” 2005, 65(11)，4500-4505敘述了 Bcr_Abl抑 制劑’ AMN107以及BMS-354825，在臨床上對抗imatinib抗 性Abl激酶域突變的相關體外活性。文章中敘述了各種的 imatinib 抗性細胞株，Ba/F3 BCT_Abl/T3151 ，Ba/F；3 11 200812955

Bcr-Abl/E255K ，Ba/F3 Bcr-Abl/H396P ，Ba/F3 Bcr-Abl/M351T ，Ba/F3 Bcr-Abl/F359V ，Ba/F3 Bcr-Abl/E255V ，Ba/F3 Bcr-Abl/F317L ’ Ba/F3 Bcr-Abl/H396R ，Ba/F3 Bcr-Abl/M244V 5 Ba/F3 Bcr-Abl/Q252H， Ba/F3 Bcr-Abl/Y253F，以 及 Ba/F3 Bcr-Abl/Y253H 〇 植物化學咖啡酸（3,4-dihydroxy cinnamic acid (3 4-一 翻基肉桂酸））是咖啡、水果蔬菜、榖類、以及蜜蜂蜂赠的 組成物，咖啡酸已知具有各種的藥學上的活性，例如，抗 氧化性以及抗病毒效果，咖啡酸以及或是其衍生物，例如， 酯，已經被報導具有抗癌活性，接下來的報導即指出了咖 啡酸及其衍生物的特殊抗癌特性。

Breast Cancer Res·，2004, 6, R63_R74敘述 了咖啡酸對於 T47人類乳癌細胞的抗增殖以及產生細胞凋亡的效果。

Bull· Korean Chem” 2001，22(10)，113M135敘述個♦ 啡酸甲基酯（caffeic acid methyl ester)對於Fos-Jun-DNA複 合物形成之抑制效果以及對癌症細胞生長的抑制。該篇文 章敘述了對抗人類癌症細胞株（A549以及K-562)的細胞毒 素效果。

Biol” Pharm· Bull·，2005, 28(12)，2338-2341 敘述 了藉由 辛基咖啡酸（octylcaffeate)，而經由細胞凋亡機制抑制人類 淋巴瘤U937細胞的成長。

Cancer Letters，1996, 108, 211-214敘述了咖啡酸苯乙酯 (caffeic acid phenethyl ester)對於人類白血病HL-60細胞的 12 200812955 抑制效果。 J· Nutritional Biochemistry，2006, 17(5)，356_362敘述了 咖啡酸苯乙酯對於癌細胞轉移的抑制效果，其乃是藉由向 下-周節人顯HT1080肌纖維惡性腫瘤（沿細胞的 基質金屬蛋白酶表達（matrix metall〇pr〇teinase expressi〇n ) 而達成。 接下來的專利申請則是揭示了包含咖啡酸、或其衍生 的組成物。 WO9105543敘述了包含作為活性成分之咖啡酸、或其 酯或其胺類其中之一的藥物、或化妝品組成物。 JP60013712敘述了包含咖啡甲基酯作為活性成分的藥 物’以用於抑制5_脂氧合酶（5]ip〇Xygenase)活性。 基於Bcr-Abl的突變，因此，需要一種能治療對於 Gleevec之治療具有抗性之慢性骨髓性白血病（chr〇nic myeloid leukemia，CML)的藥劑。 【發明内容】 本叙明係相關於咖啡酸、或其衍生物、或其鹽類在治 療對Gleevec之治療有抗性的慢性骨髓性白血病（ myeloid leukemia ’ CML)上的使用，本發明亦相關於一種 治療對Gleevec之治療有抗性之慢性骨髓性白血病（chr〇nic myeloid leukemia，CML)的方法，另夕卜，本發明的化合物 可以被使用在抑制包括K-562-R以及32DclBar-AblT3151， Bcr-Abl/T3151 ，Ba/F3 Bcr-Abl/E255K，Ba/F3 Bcr-Abl/H396P，Ba/F3 Bcr-Abl/M351T， 13 200812955

Bcr-Abl/F359V ， Ba/F3 Bcr-Abl/E255V ， Ba/F3 Bcr-Abl/F317L ， Ba/F3 Bcr_Abl/H396R ， Ba/F3 Bcr-Abl/M244V ， Ba/F3 Bcr-Abl/Q252H ， Ba/F3

Bcr_Abl/Y253F，以及Ba/F3 Bcr-Abl/Y253H之對Gleevec之治 療具抗性之細胞株的生長抑制。 本發明亦相關於一種治療對Gleevec之治療具抗性之慢 性骨騎性白血病（chronic myeloid leukemia，CML )的方法， 該方法包括提供具治療效果之量的咖啡酸、或其如分子式 (1)之衍生物、或其鹽類。 本發明亦相關於一種降低對Gleevec之治療具抗性之細 胞的增殖的方法，該方法包括將該等細胞接觸咖啡酸、或 其如分子式（1)之衍生物、或其鹽類。 再者’本發明提供一種治療對Gleevec的治療有抗性之 f叉性骨髓性白血病（chronic myeloid leukemia，CML )的藥 物組成物，該藥物組成物包括具治療效果之量的咖啡酸、 或其如分子式（1)之衍生物、或其鹽類。 更進一步地，本發明提供咖啡酸、或其衍生物、或其 鹽類在治療對Gleevec之洽療具抗性之慢性骨髓性白血病 (chronicmyeloidleukemia，CML)的藥劑上的使用。 【實施方式】 本發明提供咖啡酸、或其如下列分子式（1)所示的衍 生物， 14 200812955

分子式（1) 其中， X表示氧（ο)、或雜環基（heter〇cyclyl);以及 R可以存在、或疋不存在，若存在的話，代表氫（H)， 烧基（alkyl)，芳基（aiyl)，或雜環基（亦即，R為氮，烷 基，方基，雜環基，或不存在）； 可以是其所有立體異構物以及互變異構物形式，以及 其所有比例的混合物，其於藥理上可接受之鹽類，其於藥 理上可接文之溶劑，其於藥理上可接受之同質異像體 (polymorph)，或是其前驅藥（pr〇dmg)。 定義 如下所列為在整份說明書以及所附申請專利範圍所使 用之詞句的定義。 正如於此所使用，該詞“烷基（alkyl)，，表示脂肪基 (aliphatic group)，包括直鏈、或是支鏈脂肪基，再者，除 非特別敘述，該詞“烷基，，是包括未被取代的脂肪基，以 及被一或多個取代基所取代的脂肪基。 在一實施例之中，一直鏈、或是支鏈烷基會在其骨架 之中具有20個、或更少的碳原子（例如，對直鏈而言，Q-C20 ’以及對支鍵而言，c2〇)，舉例而言，15個、或更 少的碳原子。包括1至20個碳原子之烷基的實例包括，曱 15 200812955 基，乙基，丙基，丁基’戊基，己基，庚基，辛基，壬基， 癸基’十'^纟元基’十一纟元基’十四烧基，十六烧基，十八 烧基’以及二十炫基’這些炫基的正同分異構物，異丙基 (isopropyl )、異 丁基（isobutyl ) 、1_ 甲基 丁基 (1 -methylbutyl )、異戊基（isopentyl )、新戊基（狀叩邱切）、 2，2-二曱基丁基（2,2-dimethylbutyl ) 、2-曱基戊基 (2-methylpentyl)、3-曱基戊基（3_methylpentyl)、異己 基（isohexyl)、2, 3, ‘三曱基己基（2,3344rimethylhexyl)、 異癸基（isodecyl)、二級丁基（sec-butyl)、或三級丁基 (tert-butyl)，適合的烷基包括1至6個碳原子，舉例而言， 1至4個碳原子，例如，曱基，乙基，丙基，異丙基，正丙 基，三級丁基，正丁基，二級丁基，或異丁基。 該等烷基可以具取代基、或是不具取代基。除非特別 聲明，烧基可以為不具取代基、或是具有一、或多個（舉 例而言，1、2、3、4、或5個）相同、或不同之取代基。 出現在烷基中的取代基可以為任何種類以及任何位置，只 要不造成不穩定的分子結構即可。一具取代基的烷基表 示，其中的一、或多個（舉例而言，1、2、3、4、或5個） 的氫原子被取代基所取代，舉例而言，烷基、鹵素、氫氧 基、#厌基（carbonyl )、烧氧基（alkoxyl )、環烧基（cycloalkyl)、 酉曰、_、氰基、胺基、單或雙烧氨基（mono- or di-alkylamino)、醯胺基（amido)、亞胺基（imino)、硝基 (mtro)、芳烷基（aralkyl)醯氧基（acyi〇Xy)、雜環基 (heterocyclyl)、芳基（aiyl)、或是雜芳基（heteroaryl)。 16 200812955 η ， 正如在此所使用，_ “芳基（aryl) ”表示具有最多 14個碳原子環的-單環、或是多環碳氫基，舉例而言，最 多1〇個碳原子環，其中’至少—碳環會具有一共·電子 糸統’（c6 - c14)芳基包括，苯基（phenyl)、蔡基（卿_ )、 ^^^(biphenyl)^ f ^(fluorenyl )^&(anthracenyl}, 特暇苯基以及萘基，除非特別聲明，任何的芳基，舉例 Γ 而言’苯基、萘基、或U基，都可以具有、或不且有一、 或多個取代基，舉例而言，最多5個選自包含南素，烧基， 亂烷基（flu_lkyl)，氫氧基，烷氧基（呲邮），芳氧基 (a^l〇xy)，胺基（amin〇)，氰基（cyan〇)，硝基 & 硫醇（thiol)，亞胺（imine)，醯胺（amide)，羰基，芳基， 以及雜環基之群組的相同、或不同取代基。 土 該詞“雜環基（heter〇cyclyl)”表示一包括最多Μ個原 子環之飽和、部分未飽和、或是芳香族的單環、或多環系 C 統’其中小2歧3個環具有選自下列群組之相同的Ϊ 或是不同的雜原子··氮、氧、或硫。_環基可以在環中， 舉例而言’具有1或2個氧原子，及/或1或2個硫原子， 及/或1至4個氮原子，再者，於環中的雜原子可以是任何 的數量，以及相對於彼此的任何位置，只要所得出的雜環 彡統在f知技術中為已知，且作為—_之子群為穩定及 適合即可。轉基的適當例子包括，料基（咖u㈣）、 哌啶基（piperidinyl)、咪唑基（imidaz〇lyl)、吡略产美 (pyrrdidinyi )、嗎琳基（m〇rph〇Unyl )、甲苯喝:^ (benz〇xaz〇iyl )、喹啉基（quin〇lyl )、異述啉二 17 200812955 (isoquinolyl)、味唾基（carbaz〇iyi)、,π朵基（in(j〇iyi)、 兴 口引 σ朵基（isoindolyl )、苯 σ惡哇基（phenoxazinyl )、 (benzothiazolyl)、曱苯π塞嗤基（benzimidazolyl)、曱苯口惡 一嗤雜環（benzoxadiazolyl )、或曱苯吱咕基 (benzofurazanyl)。 該等雜環基可以具有、或不具有取代基。除非特別聲 明’並且不管結合至分子式（丨）所定義之組成物中之雜環 基的任何取代基，該雜環機可以在碳原子環上具有、或不 具有一、或多個舉帶機，最多5個相同、或不同的取代基。 適合碳原子環以及氮原子環的取代基包括，烷基、芳烷基 (aralkyl)、烷氧基（alkoxyl)鹵素、氫氧基、羥烷基 (hydroxyalkyl)、❹完基（f|uoroaikyi)、aryi〇Xyi 胺基、 氰基、硝基（nitro)、硫醇（thiol)、亞胺（imine)、醯胺 (amide)、石反基（carb〇nyi)、烧幾基（aikyicarb〇nyi)、芳 羰基（arylcarbonyl )、芳基（aryl )、或是雜環基 (heterocydyl)。該等取代基可以出現在一、或多個位置^ 只要能得出穩定的分子即可。 正如在此所使用，該詞“芳烷基（aralkyl)，，表示一具 有芳基、或是雜芳基（heter〇aryl)作為取代基的烷基，其 中’該等詞烧基、芳基、以及雜芳基已經於先前進行定義。 芳烧基的例子包括，_(CH2)P•縣（phenyl)、或__(αί2) 咖定基（pyridyl) ’其中，Ρ代表自1至3的紐，該芳I 基係可以更進—步地具找基、氩氧基、鹵素、氰基、石肖 酸基、胺基、芳基、雜絲、或是_者作為取代基。 18 200812955 該詞“齒素（halogen)，，表示氟、氯、溴、或碘。 正如於此所使用，遠等詞句‘‘治療（treatment)，,‘‘對待 ”以及“治療（therapy) ”以及類似者是表示對於既 存疾病（例如，對Gleevec之治療具有抗性之慢性骨髓性白 ，病（chnmic myeloid leukemia ’ CML))的發展減緩、減 慢，預防，減弱、或治癒，再者，“避免（__)，，，正 如在此所制，表示延遲、減慢、抑制、降低、或是改善 對Gleevec之治療具有抗性之慢性骨髓性白血病（&比 myeloid leukemia，CML )的攻擊。 正如於此所使用，該等詞句“藥理上可接受 (pharmaceutics acceptable)，，表示，載體、稀釋液、職形 劑、及/或鹽類可以相容於該配方中的其他組合成分，並且 對其接收者而言為無毒。 正如於此所使用，該等詞句‘‘有效治療量 (therapeutically effective am〇unt) ”表示，於人二容刺 範圍内，在進行調節、或治療的情形下，足地誘發 -正向減輕、但足夠低到能聽任何副作用，若有的話（在 一合理的利益/風險比（bene齡isk rati〇 )之下），之化合物、 或組合物（例如，，加啡酸、或其如分子式⑴的衍:物） 的量。該化合物、或組合物的有效治療量將會隨著特殊的 治，情形、仙者之年齡及生雜況.、欲轉/避免之條件 的嚴重性、治療的持續期間、共同治療的性質、所使用的 特殊組合物或化合物、所使用的特殊藥理上可接受載體、 以及類似的因子而有所改變。 _ 19 200812955 咖啡酸化合物以及刺用該化合物之方決 咖啡酸或其如分子式（1)的衍生物在文獻中為已知， 且可藉由下述的規劃而進行合成，並也可以具選擇性地被 轉變成為其於藥理上可接受的鹽類。 如 Tetrahedron 2003, 59, 4383-4387 所敘述的方法，在 乾式二曱基甲酿胺（N，N-dimethylformamide )中之碳酸铯 r\ ( cesium carbonate )的存在下，3，4二羥基苯曱醛 \ ： (3,4-Dihydroxybenzaldehyde ) ( A )可以藉由添加二漠曱 烷（dibromomethane )而被轉換成為胡椒搭（piperonal)( B )， 因此，藉由於 Eur· J· Med· Chem. 2002, 37, 979 - 984 之中所 敘述的方法，所獲得的胡椒醛（B)可以與丙二酸（maionic acid )進行 Knoevenagel 縮合反應（Knoevenagel condensation )，以產生3，4-(亞曱二氧）肉桂酸 (3,4-(methylenedioxy)cinnamic acid) (C)，然後，藉由與 Q 亞硫酸氣（thionyl chloride)以及曱醇反應，該酸（c)可 以被轉變成為其本身的曱基@旨（methyl ester) (D)，再者， 藉由在 J. Org· Chem. 1974, 39, 1427 - 1429 中所敘述的程 序’就可以貫行利用三漠化硼（borontribromide)而脫去保 護曱基酉旨的亞曱二氧基（methyllenedioxy group)，接著，反 應合物的激化造成@旨類水解，進而產生咖啡酸（£)，而 藉由在適當之0 T酒精存在下添加亞硫酸氣、或是乙二醯 氣（oxalyl chloride)，並緊接著如反應所需要的讓混合物恢 復至室溫、或是在水浴中加熱，咖啡酸（E)就可以被轉變 成為醋（F) (X=氧，以及烷基、芳基、或雜環基）， 20 200812955 此外，利用在 Bioorg· Med· Chem· Lett· 2004, 14, 4677 - 4681 中所敘述的程序，咖啡酸（E)可以利用在室溫二氯曱烷 (Methylene chloride)中之1-(3-二曱氨基丙基)-3_乙基碳二 亞胺鹽酸鹽（l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethyl carbodiimide hydrochloride(EDC))，經基苯三嗤（1-hydroxy benzotriazole (HOBT))，

X = Ο, NH or heterocycly! R = H, alkyl, aryl, heterocyclyl or absent ί； 以及三乙胺（triethylamine)而與一適當的胺類發生耦 接，進而轉變成為氨基化合物（F)。在另外一個方法中， 加非酸可以藉由添加亞硫酸氯、或是乙二酸氯而轉變成為 其氯酸’然後再接著藉由添加所選擇的胺類而轉變 基化合物⑻（ΧϋΜϋ基、芳基、t 環基）。 、咖啡酸、或其如分子式（1)的衍生物也可以從自然次 源中獲得，例如，植物萃取物。 〜貝 本發明之咖啡酸、或其如分子式（1)的衍生物對於户 21 200812955 療對Gleevec之治療具有抗性之慢性骨髓性白血病（ myeloid leukemia，CML )而言是有用的。 分子式（1)之化合物的抗增殖活性可以藉由Gleevec 抗性變異細胞株而進行評估，例如，K-562-R以及32Dcl ，而其他數種造血細胞株亦可以被用來研究該等 化合物的抗增瘦活性， 該等細胞株包括， Ba/F3 Bcr-Abl/T3151 ， Ba/F3 Bcr-Abl/E255K ， Ba/F3 Bcr-Abl/H396P ， Ba/F3 Bcr-Abl/M351T ， Ba/F3 Bcr - Abl/F359V ， Ba/F3 Bcr-Abl/E255V ， Ba/F3 Bcr-Abl/F317L ， Ba/F3 Bcr-Abl/H396R ， Ba/F3 Bcr-Abl/M244V ， Ba/F3 Bcr-Abl/Q252H ， Ba/F3 Γ

Bcr-Abl/Y253F，或是Ba/F3Bcr_Abl/Y253H。

本發明的一個觀點是，一種治療一患有對Gleevec之治 療具有抗性之丨艾性骨聽性白血病（myel〇id leukemia ’ CML)的哺乳動物（例如，人類）的方法，其是 藉由提供如該分子式（1)之化合物之一有效治療量、或是 該化合物的一藥理上可接受鹽類給該哺乳動物而達成治 療。 本發明的另一個觀點是，一種避免、降低、或最小化 對Gleevec之治療具有抗性之慢性骨髓性白血病（chr〇nic myeloid leukemia，CML)所造成之傷害的方法，其是藉由 提供一受感染之哺乳動物（例如，一女性、或男性人類） 如該分子式（1)之化合物之一有效治療量、或是該化合物 的一藥理上可接受鹽類而達成治療。 22 200812955 本發明亦提供-種降低對Gleevee之治療具抗性之細 胞㈣殖的方法，該方法包括，將該等細胞接觸♦啡酸、 其何生物、或是其鹽類。本發明的一個觀點是，咖啡酸、 其衍生物、或其鹽類是如分子式（丨）的一化合物，並且， 該等化合物可以被提供一有效治療量，以降低該等 抗性細胞的增殖。 根據本發明，在對Gleevec之治療具有抗性之慢性骨髓 性白血病（chronic myeloid leukemia，CML )的治療上有用 的代表性化合物包括： 3-(3，4-一說基苯基）-丙烯酸（3-(3，4-Dihydroxy _ phenyl)-acrylicacid)(咖啡酸），3-(3,4-二羥基苯基）_ 丙烯 酸甲基酯（3-(3，4-Dihydroxy-phenyl)-acrylic acid methyl ester)，3_(3，4_二羥基苯基）-丙烯酸乙酯（3_(3, 4-Dihydroxy-phenyl)-acrylic acid ethyl ester)，（E)_3-(3, 4-二 羥基苯基）_丙烯酸-2-硝基-乙酯（（E)_ 3-(3, 4-dihydroxy-phenyl)-acrylic acid 2-nitro-ethyl ester)，3-(3, 4-二經基苯基）-丙烯酸正丙酯（3-(3，4-Dihydroxy-phenyl) -acrylic acid n-propyl ester )，3-(3, 4-二經基苯基）-丙稀酸異 丙酯(3-(3， 4-Dihydroxy- phenyl)-acrylic acid i-propyl ester ) ’ 3-(3，4-二經基苯基）-丙細酸丁醋（3-(3，4-Dihydroxy _phenyl)-acrylic acid butyl ester )，（E)- 3_(3, 4,二經 基苯基）-1-哌啶小基·丙烯酮（（Ε)-3_(3, 4-dihydroxy-phenyl)-l-piperidin_l_yl-propenone) ’ 3_(3，4-二 羥基苯基）· 1 -(4-乙基^底嗓小基）-丙烯酮（3_(3, 23 200812955 4-Dihydroxy-phenyl)-l -(4-ethyl- piperazin-l-yl) -propenone)，1 - (4_曱苯基』底嗪-1-基）-3_(3, 4-二經基苯基） -丙婦明(1-(4-Benzyl- piperazin-l-yl)- 3-(3, 4-Dihydroxy-phenyl)-propenone)，（E)_3-{4_[3-(3, 4-二經基苯 基）-丙炸酿基]-派σ秦-1-基}丙猜（（E)-3-{4-[3-(3， 4-Dihydroxy- phenyl) -acryloyl] - piperazin- 1-yl} propionitrile)，（E)· 3-(3, 4-二經基苯基)-l-[4-(l-甲基-旅咬-4-基）派嗓-1-基]-丙稀酮（(E)-3-(3，4- dihydroxyphenyi)-[4-(l-methyl- piperidin-4-yl) piperazin-1-yl] -propenone)5 (E)- 3- (3，4-二經基苯基)-1-(4-苯基旅ϋ秦-1-基）-丙炸S同（(E)-3-(3， 4_ dihydroxyphenyl) -1-(4- phenylpiperazin-l-yl)-propenone)，（E)-l-(4-乙酸，口底嗓_1-基)-3-(3, 4-二經基 苯基）-丙烯酮（（E)-l-(4-acetyl-piperazin-l-yl)-3_(3, 4- dihydroxy-phenyl) -propenone)，（E)_ 3-(3, 4-二羥基苯基） -1-(4-苯乙基-旅嗓-1-基）-丙烯酮（出)-3_(3，4-(1111}^〇\}^ phenyl)-l-(4-phenethyl- piperazin-1-y 1)- propenone)5 (E)- 3-(3, 4-二羥基苯基）-1-嗎啉_4—基-丙烯酮（（E)-3_(3, 4-dihydroxy-phenyl)- l-morpholin-4-yl- propenone) 5 3-(3? 4- 二故基苯基)-N-(3-二曱基氨基-丙基)-丙稀酿胺（3-(3, 4-dihydroxy- phenyl)- N- (3 -dimethy lamino-propyl)- acrylamide)，（E)- 3_(3, 4-二羥基苯基）-N_異丙基-丙烯醯胺 ((E)-3-(3，4-dihydroxypheny 1)- N-isopropyl- acrylamide )，或 1 — (4_甲苯基-α辰ϋ定小基）_3_(3，4 二經基苯基）-丙稀酮 (l-(4-Benzyl- piperidin-l-yl)- 3- (3? 4-dihydroxy-phenyl)- 24 200812955 propenone) 〇 根據本發明，適合用於治療對Gleevec之治療具有抗性 之慢性骨髓性白血病（chronic myeloid leukemia，CML)的 化合物包括： 3-(3，4-二經基苯基）-丙稀酸曱基醋（3-(3， 4-Dihydroxy-phenyl)-acrylic acid methyl ester)，3-(3, 4-二經 基苯基)-丙烯酸乙酯（3-(3, 4_Dihydroxy-phenyl)-acrylic acid ethyl ester)，3-(3, 4-二羥基苯基)-丙烯酸正丙酯（3弋3, 4-Dihydroxy-phenyl)-acrylic acid n-propyl ester )，3-(3, 4-二羥 基苯基)-丙烯酸異丙醋（3-(3, 4-Dihydroxy-phenyl)-acrylic acid i-propyl ester )，1 -(4_ 曱苯基-哌嗪小基）-3-(3, 4_二羥基 本基）-丙烯酮（l-(4-Benzyl_piperazin 小 yl)_ 3-(3, 4-Dihydroxy_phenyl)-propenone )，（Ε)_ 3·(3，4-二羥基苯 基)異丙基-丙烯酸胺（(e)-3-(3，4-dihydroxyphenyl)· Ν- isopropyl- acryiamide)，或 1 一(4甲苯基』辰啶小基）_3-(3, 4- 一輕基本基）_ 丙稀 g同（l-(4-Benzyl_piperidin_l_yl)-3-(3, 4_dihydroxy_phenyl)-propenone)。 再者，本發明相關於包含該分子式（1)之至少一化合 物、或是（除了習知之藥理可接受載體之外）其生理容許 鹽類之有效治療量的藥物成分，以及亦相關於產生一藥物 的生產私序，其包括利用一藥理上適合及生理容許之賦形 劑，以及適當的話，更進一步之適當的活性化合物、添加 物、或辅助物，而將該分子式⑴之至少一化合物變為— 適當之服用形式。 25 200812955 本發明的該等化合物對於治療對Gleevec之治療具有抗 性之，1¾性骨骨过性白血病（chr〇nic呵如记ieukemia，cml ) 是有用的，據此，本發明相關於利用如分子式（1)所示之 化合物製造來一用於避免、或治療癌症，例如，對⑶㊁⑺沈 治療沒有反應之慢性骨髓性白血病（chr〇nic myd〇id leukemia，CML)，的藥劑。 Γ 在一實施例之中，本發明相關於一種製造一用於治 ‘ 療、或避免對Gleevec之治療具抗性之慢性骨髓性白血病 (chronic myeloid leukemia，CML)的藥劑的方法，其特徵 在於，如分子式（1)的至少一化合物會被使用作為藥理活 性物質。 本發明更進一步相關於一種製造一包括如分子式（1) 之至少一化合物、以用於降低對Gieevec之治療具抗性之細 胞之增殖的藥劑的方法。 (J 本發明的化合物亦相關於使用如分子式（1)的一化合 物、或该化合物的一藥理上可接收鹽類與其他藥理有效的 化合物相結合，舉例而言，一包括如分子式（1)之一化合 物、或一樂理可接受鹽類的藥理有效成分，其可以以彼此 /¾合、或為樂品調劑的形式，而與能夠對抗具Gieevec抗性 細胞、或腫瘤的任何其他化合物、或已知在治療上述病症 其中之一為有效的任何其他藥理活性化合物一起提供給哺 乳動物’特別是人類。 本發明的該等化合物可以被使用在一種降低體外之

Gleevec 敏感（κ_562、或 Ba/F3Bcr-Abl/WT)以及 Gleevec 26 200812955 抗性（K-562-R 以及 32DclBar_AblT3151，Ba/F3 Bcr_Abl/T3151，

Ba/F3 Bcr-Abl/E255K，Ba/F3 Bcr-Abl/H396P，Ba/F3 Bcr-Abl/M351T ， Ba/F3 Bcr-Abl/F359V ， Ba/F3

Bcr-Abl/E255V ，Ba/F3 Bcr-Abl/F317L ，Ba/F3

Bcr-Abl/H396R ， Ba/F3 Bcr-Abl/M244V ， Ba/F3

Bcr-Abl/Q252H，Ba/F3 Bcr-Abl/Y253F，或 Ba/F3 Bcr_Abl/Y253H )慢性骨騎性白血病（chr〇nic myeloid leukemia，CML)細胞之族群的方法之中。 本發明之该專化合物在Gleevec敏感以及Gleevec抗性 腫瘤模型中的體内效果可以藉由使用細胞株，例如，Ba/F3 轉染（transfectants)表現全長野生型Bcr_Abl (Ba/F3 Bcr-Abl/WT)^t^^sCID (Severely Combined Immune-Deficient ’嚴重聯合免疫缺陷）鼠之異種皮移植 (xen〇graft )模型中的變種 Bcr-Abl ( Ba/F3 Bcr-Abl/T3151)，而進行評估。

據此，本發明會相關於使用如分子式⑴的一化合物 來製造用於避免、或絲癌症，制是對脱·治療沒有 反應的k丨生月知性白血病（chr〇nic m㈣id ^， CML)，的一藥劑。 根據本發明-方面的構想，該等治療方法以及該等用 崎低在此所敘述之細胞增_方法，其於上述所使用的 樂性=分可以藉由下列的實施路#、模式等而加以提供。 里牲成全丛至31^ 藥物可以提供為口服，例如，藥丸、藥片、膜衣錠、 27 200812955 膠囊、粒狀、或藥酊（elixirs)的形式，然而，也可以實施 為直腸用，舉例而言，栓劑的形式、或是非腸胃吸收，舉 例而言，靜脈、肌肉、或皮下地，可注射之無菌溶液、^ 懸浮液的形式、或局部用，舉例而言，溶液、或皮膚藥貼 形式、或是其他的方式，舉例而言，煙霧、或鼻喷霧的形 式。 根據本餐明的樂物§周製是利用已知的方式進行準備， 且對具此通常知識之人皆為熟悉。除了如分子式（丨）所六 的該化合物、及/或其生理容許鹽類以外，藥理上可接受之 惰性無機、及/或有機載體、及/或添加物也可以被使用。而 為了生產藥丸、藥片、膜衣旋、以及硬式卿膠囊，就有 可能使用’舉例而言’乳糖，玉米殿粉、或其衍生物，阿 拉伯膠（gumarabica) ’氧化鎂’或葡萄糖等。用於軟式明 膠膠囊以及栓劑的載體則為，舉例而言，脂肪、壤、天然 ，硬化油（hardened oils)等。生產溶液，舉例而言，注射 溶液’或是乳化物、或糖漿的適當載體為，舉例而言，水、 生理食鹽水、或醇類，舉例而言，乙醇，丙醇或甘油，糖 溶液’例如，葡萄糖溶液、<甘露醇溶液，或是所提及之 各種溶劑的混合。 丄通常’樂物調製會包含，重量百分比1%至"％，舉例 而吕’大約5%至7%、或是大約1GJL大約30%，之如分子式 ⑴所示之化合物、或其生縣許龍，通f，該分子式 2 )之活f生、、且成或其生理容許鹽類在該藥物調劑中的量 會大約為5至5〇0 mg，而本發明所提供之化合物的劑量可以 28 200812955 =很廣的關，每日提供的劑量可以選擇為適合所需的 H -適合的劑量大約姐〇〇1至1〇〇 mg/kg/柳之如分子 式⑴所示的化合物、或其生理容許鹽類之間，舉例而言， =〇.〇1至5Gmg/kg/day之如分子式⑴所補化合物、或 :、理容許贿，但若有需要的話，也可以提供較高、或 ==日缝。她嫌雜成分的實 可以有所變化，以獲得對一特別病患能達成所 =療反應之效果之·成分的量、組合物、以及在對病 Μ沒有毒性之情形下的供應模式。 該所選擇的劑量標準將是取決於各種因子，包括本發 贿使用之特殊化合物、或其酯類、鹽類、翁類之活性: 的路從’提供之時間，所使用之特殊化合物的排泄速 …^療的持續期間’與所使狀特殊化合物—域用的 其他藥，、化合物、及/或原料，待治療之病患的年齡、性 別、重里、狀況、健康及先前病史，以及在醫療領域中已 知之類似的因子。 ，除了如刀子式（1)所示的化合物、或其生理可接受鹽 類及載體物質之外，該等藥物調劑亦可以包含添加物，例 如’舉例而言’填充物，抗氧化劑，分散劑，乳化劑，消 泡劑、，香料1方·，增溶劑，或是著色劑，並且，它們 亦可以I § _、或多種如分子式⑴所示的化合物、或盆 生理容許鹽類，再者，除了至少一如分子式⑴所示· 合物、或其生理容許鹽類之外，該等藥物調劑亦可以包含 一、多種其他具療效、或具生理活性的成分。 29 200812955 應為要瞭解的是’未實質影響本發明之各種實施例之 活性的修飾都包含在本發明於此所揭示的範圍之中，據 此，接下來的實例僅是用以舉例說明，而非限制本發明。 實例 實例1 3 (3’ 4- 一輕基苯基）_丙烯酸（3-(3, 4_Dihydroxy_phenyi)-acryiic acid)(咖啡酸）（化合物i ) 貝例lc的化合物（6.0 g，〇 029 mol)被溶解在氯仿（20 mL)之中，然後，添加溶於氣仿（90mL)中之25%w/v三 >臭化硼，並於25 °C攪拌16小時，之後，藉由滴加1〇%碳酸 氫鈉水溶液（於25 QC，並攪拌）而冷卻反應混合物，最後 達到PH7。然後，分離有機層，並利用水（100 mL)，鹽鹵 (brine) (1〇〇 mL)洗務，並於無水硫酸納中乾燥，並於減 壓條件下進行濃縮，進而得到標題所示之化合物。 產量：2.0 g ( 38.3% )，NMR CCDC13 + DMSO-d6) : δ 6·83 (d，1Η，J =15.6 Hz)，6·41 (d，1Η)，6·25 (dd，1Η)，6.18 (d， 1H)，6.52(d，1H，J=15.6Hz)。 實例la 曱苯[1, 3]二氧雜環戊烯-5-羰醛 (Benzo[l，3]dioxole_5-carbaldehyde)(胡椒搭（piperonal)) 3,4-Dihydroxy benzaldehyde (25g，0.181 mol)，碳酸铯 (cesium carbonate) (88.29 g，0.271 mol)，以及二溴甲烧 (dibromomethane) ( 19·0mL，0.271 mol)溶解在二曱基曱 醯胺（N，N-dimethylformamide) (400mL)之中’然後’此 30 200812955 反應混合物加熱至110 °C持續ι·5個小時，並在減壓條件下 蒸發二甲基甲醯胺，接著，利用乙酸乙酯（ethyl acetate)( 500 mL)稀釋反應混合物，並利用水（2 x 250 mL)以及鹽鹵 (brine) (2 X 100 mL)洗滌，之後，於無水硫酸鈉中乾燥 有機層，並於減壓條件下進行濃縮，進而得到標題所示之 化合物。 產量：23.0 g(84.6%)，hNMR (CDC13): δ 9.8 (s，1H)， 7.42 (d，1Η)，7·34 (d，1Η)，6.94 (d，1Η)，6·09 (s，2Η)。 實例lb 曱本[1，3] 一氧雜壞戊-5-基-丙稀酸 (Benzo[l，3]dioxol_5_yl_acrylic acid) 將貝例la之化合物（23 g，〇· 153 mol)與丙二酸（malonic acid) (31.77 g，0.305 mol)的混合物溶解於吡啶（办灿丨批） (69 mL)之中’攪拌，再添加u底咬（piperjdine)，之後， 反應混合物加熱至85。(：持續1個小時，再接著將溫度上升至 105°C ’並維持3小時。然後，冷卻反應混合物，利用水（5〇〇 mL )稀釋，並利用ι〇〇/。氫氧化納水溶液使其驗化（至阳9 )。 利用乙酸乙酯（2x250 mL)萃取該混合物。利用50%鹽酸 水溶易酸化水層（至pH2)，過濾得到的固體，以水洗滌， 乾無’即可得到標題所示之化合物。 產量：20.0 g( 68% ); 4 NMR (DMSO-d6): δ 7.42 (d，1H， J =15.9 Hz)，7.31 (s，1H)，7·10 (d，1Η)，6.92 (d，1H)，6·37 (d5 1H，J = 15·9 Hz)，6.04 (s，2H) ; MS(ES-) : 191 (Μ·1)。 實例lc 31 200812955 甲笨[1，3]二氧雜環戊i基-丙烯酸曱基酯 (Benzo[l53]dioxol-5-yl-acrylic acid methyl ester) 將實例lb之化合物（25 g，〇· 13 m〇l)溶解曱醇（2〇〇 mL ) 之中，冷卻至0 - 5 °C，接著滴加亞硫醯氯（Thi〇nyl chl〇ride) (14·2 mL，0.195 mol) ’混合物於〇 qc攪拌3〇分鐘，之後， 反應混合物恢復至室溫（25。〇，再攪拌16小時。反應的最 後，混合物在減壓條件下進行濃縮。剩餘物利用丨〇%重碳酸 鈉（sodium bicarbonate )稀釋至pH 7，再利用乙酸乙酯（2 x 250 mL )進行萃取。有機層利用水（丨qq mL )以及鹽_ ( brine ) (100 mL)洗蘇，之後，於無水硫酸納中乾燥有機層，並 於減壓條件下進行濃縮，進而得到為白色固體之標題所示 的化合物。 產里· 20,0 g ( 74.6% )，4 NMR (DMSO_d6): δ 7.55 (d， 1H，J =15·9 Hz)，7·38 (d，1H)，7·17 (dd，1H)，6·93 (d，1Η)， 6.48 (d，1H，J = 15.9 Hz)，6.05 (s，2H)，3.68 (s，3H)。 實例2 3-(3，4-二經基苯基）_丙烯酸曱基酯（3_(3, 4-Dihydroxy-phenyi)_acryiic acid methyl ester )(化合物2 ) 化合物1 (8.0 g，0.044 mol)溶解於甲醇（7〇 mL)之 中’冷部至〇°c，接著，滴加亞硫醯氯（4.84 mL ,0.066 mol)， 在〇 C維持3〇分鐘，之後，反應混合物回溫至室溫（25。〇)， 並攪拌16小時，接著，該反應混合物在減壓條件下進行濃 細幻餘物利用重碳酸鈉（s〇diumbicarb〇nate)稀釋至 PH7,再利用乙酸乙酯（2x100 mL)進行萃取。有機層利 32 200812955 用水（50mL)以及鹽鹵（brine)(50mL)洗滌，於無水硫 酸鈉中乾燥，並於減壓條件下進行濃縮，進而 :: 固體之標題所示化合物。 〜色 產量：7·5 g (87·8%) ; hNMRfDMSac^) : δ7·45 (d m，J :15.9 Hz)，7.02 (s，m)，6.98 (d，m)，6·73 (d，lH)，’ 6.24 (d，1H，J = i5.9 Hz)，3.7 (s，3H) ; MS(ES-) : 193 (Μ·1)。 實例3 3 (3’ 4- 一每基本基）-丙稀酸乙酯（ 4-Dihydroxy-phenyl)-acrylic acid ethyl ester )(化合物 3 ) 化合物1(0.2 g，Lll mol)溶解於乙醇（15 mL)之中， 冷部至’接著，滴加亞硫龜氯（0.1 mL，1·41 mmol)， 在〇 C維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至室溫（25 〇c)， 再加熱至50 ，並維持在該溫度攪拌過夜（16小時），接著， 該反應混合物在減壓條件下進行濃縮，剩餘物利用1〇%重碳 酸納（sodium bicarbonate )稀釋至pH 7，再利用乙酸乙酯（2 x lOmL)進行萃取。有機層利用水（5mL)以及鹽鹵（brine) (5 mL)洗滌，於無水硫酸鈉中乾燥，並於減壓條件下進 行、/辰纟倍’该剩餘物利用快速色層分析（flash chromatography ) (silica gel，5 % ethyl acetate in pet ether)進行純化，進而 得到標題所示化合物。 產量：〇· 11 g ( 47·5% );巾 NMR ( DMSOd6): δ 9.31 (bs， 2H)，7.44 (d，1H，J =15.9 Hz)，7.00 (s，1Η)，6.97 (d，1H)， 6.73 (d，1H)，6.24 (d，1H，J 二 15.9 Hz)，4.12 (q，2H)，1.24 (t， 3H) ; MS(ES-) : 207 (M-l)。 33 200812955 實例4 (E)-3-(3, 4-二經基苯基)-丙烯酸-2-石肖基-乙酉旨（(e)_ 3-(3, 4-dihydroxy-phenyl)-acrylic acid 2_nitro_ethyl ester)(化合物 4) 化合物1 (〇·400 g，2·22 mol)溶解於四氫吱喃 (tetrahydrofuran) (30 mL)之中，冷卻至〇〇c，接著，滴 加亞硫醯氯（0.49mL，6.88mmol)，在0°C維持30分鐘，之 後，反應混合物回溫至室溫（25 °C)，攪拌2小時，接著， 该反應混合物在減壓條件下進行濃縮，剩餘物溶解於四氫 呋喃（5 mL)之中，並冷卻至〇〇c，滴加2_硝基乙醇 (2-Nitmethanol) (1.59 mL，22·20 麵〇1)，反應混合物恢 復至室溫（25。〇 ’翻1過夜（16小時）。反應的最後，該 /心a物於減壓條件下進行濃縮，剩餘物利用重碳酸納 (sodmm bicarbonate )稀釋至pH 7，再利用乙酸乙醋（2 X i5 此）進行萃取。有機層利用水（10 mL)以及鹽鹵（brine) ^0=0洗務，於無水硫酸納中乾燥，並於減壓條件下進 行/辰、:'佰糊餘物利用石夕膠（i % ) =夬速色層分析㈤shehiOmato抑ρ_)進行純化，進而得 到標題所示化合物。 產里· 〇.170g (3〇35%); iHNMR(CDCy ·· § 7 55 (d， ’ J 15.9 Hz) ’ 7.03 (d，1H)，6.94 (dd，1H)，6.76 (d，1Η)， 4 (d’ 1H，J — 15·9 Hz)，4·79 (m，2H)，4.66 (m，2H)。 實例5 34 200812955 IDihydroxy-phenylhcrylic acid n_pr〇pyl ester )(化合物 5 ) 化 & 物1 (0.25 g ’ 1.38 mol)溶解於丙醇（pr〇pan小〇i) (20 mL)之中，冷卻至〇。(：，揍著，滴加亞硫醯氯（〇.i2 mL， 1.65mmol)，在〇QC維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至 室溫（25 QC)，再加熱至50 〇C，並維持在該溫度過夜（16 小時）’接著，該反應混合物在減壓條件下進行濃縮，剩餘 物利用10%重石反酸納（sodiumbicarbonate)稀釋至pH7，再 利用乙酸乙酯（2 X 10 mL)進行萃取。有機層利用水（5mL) 以及鹽鹵（brme) (5 mL)洗滌，再於無水硫酸鈉中乾燥， 並於減壓條件下進行濃縮，該剩餘物利用快速色層分析 (flash chromatography) (silica gel ^ 5 % ethyl acetate in pet ether)進行純化，進而得到標題所示化合物。 產量：0.2g (65.2%) ; hNMWDMSOO : 3 9.5(bs， 2H)，7·40 (d，1H，卜15_9 Hz)，7·02 (s，1H)，6.98 (d，1H)， 6.73 (d，1H)，6·21 (d，1H，卜 15.9 Hz)，4.04 (t，2H)，1.61 (m， 2H)，0.89 (t，3H) ; MS(ES-) : 221 (M-l)。 實例6 3-(3，‘二輕基苯基）-丙烯酸異丙酯（3_(3, 4_Dihydroxy_phenyl)-aCTylic acid 故沉）（^ 化合物 1 (0·3 g，1·66 mol)溶解於2_丙醇（pr0pan_2_0l) (20mL)之中，冷卻至〇。〇接著，滴加亞硫醯氯（〇18mL， 2·5 mmol) ’在〇。〇維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至 室溫（25。〇，再加熱至70 〇C，並維持在該溫度過夜（16 小時）’接著，該反應混合物在減壓條件下進行濃縮，剩餘 35 200812955 物利用 10〇/〇重碳酸納（sodiumbicarbonate) 利用乙酸“（2xlGmL)進行棘。有機;再) 以及鹽齒（brine) (5 mL)洗;條，再於無水硫酸納中乾燥， 並於減壓條件下進行濃縮，關餘物利用快速色層分析 (flash chromatography) (silica gel > 3 〇/〇 pr〇pan-2-ol in chloroform)進行純化’進而得到標題所示化合物。 產量：0.2 g ( 54.2〇/〇); h NMR (DMs〇_d6) : δ 9·33 扣， 2Η) ’ 7.42 (d，1Η，J =15.9 Hz)，7,〇〇 (s，1Η)，6 97 (d，1Η)， 6.73 (d，1H) ’ 6.20 (d，1H, J = 15.9 Hz)，4 % (m, m)，丨 21 (d， 2H) ; MS(ES-) ·· 221 (M_l)。 ’ 實例7 3-(3，4- 一羥基苯基）_丙烯酸丁酯（3_(3, 4-Dihydr〇Xy-Phenyl)-acrylic acid butyl ester )(化合物 7 ) 化合物 1 (0·1 g，5.5m〇l)溶解於正_丁醇（n_butan〇1) (10 mL)之中，冷卻至〇〇C，接著，滴加亞硫醯氯（〇 〇4恤， 8.3 mmol)，在(TC維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至 室溫（25。〇，並攪拌16小時，接著，該反應混合物在減壓 條件下進行濃縮’剩餘物利用1〇%重碳酸鈉（s〇dium bicarbonate)稀釋至pH 7，再利用乙酸乙酯（2X25 mL)進 行卒取。有機層利用水（1〇 mL)以及鹽_ (brine) (1〇 mL) 洗滌，於無水硫酸鈉中乾燥，並於減壓條件下進行濃縮， 然後，所獲得的未加工產品利用快速色層分析（ chromatography )( silica gel，5 % ethyl acetate in pet ether ) 進行純化，進而得到標題所示化合物。 36 200812955 產量：50 mg ( 38.4% ) ; 4 NMR (CDC13): δ 7·56 (d，1H， J 二 15.9 Hz)，7·08 (s，1H)，7·01 (d，1H)，6.87 (d，1H)，6·25 (d， 1H，15.9 Hz)，5.86 (bs，1H)，5·80 (bs，1H)，4.19 (t，2H)， 1.70 (m，2H)，1·44 (m，2Η)，〇·95 (t，3H):MS (ES-)235 (M-l)。 實例8 (E)- 3_(3, 二羥基苯基)-1•哌啶小基-丙烯酮（(e)各(3, 4-dihydroxy-phenyl)- 1-piperidin- l-yl-propenone)(化合物8) 化合物1 ( 0.500 g，2.77 mol)溶解於四氫吱喃 (tetrahydrofUran) (30 mL)之中，冷卻至〇°c，接著，滴 加亞硫醢氯（1 mL，13.85 mmol)，在〇°C維持30分鐘，之 後，反應混合物回溫至室溫（25 °C)，攪拌2小時，接著， 該反應混合物在減壓條件下進行濃縮至乾，剩餘物溶解於 四氫呋喃（10 mL)之中，並冷卻至〇。〇滴加哌咬(piperidine) (1.1 mL ’ 11.08 mmol)，反應混合物恢復至室溫（25 〇c)， 攪拌過夜（16小時）。反應的最後，該混合物於減壓條件下 進行濃縮，剩餘物利用10%重碳酸鈉（s〇diumbicarbonate) 稀釋至pH 7 ’再利用乙酸乙酯（2 X 25 mL)進行萃取。有 機層利用水（10mL)以及鹽鹵（brine)(i〇mL)洗蘇，於 無水硫酸鈉中乾燥，並於減壓條件下進行濃縮。該剩餘物 利用矽膠（2 % methanol in chloroform)之快速色層分析 (flash chromatography)進行純化，.進而得到標題所示化人 物。 產量：0.350 g ( 51.02% ) ; NMR (DMSO-d6) : δ 7 27 (d，1Η，J =15.3 Hz)，7.04 (d，1Η)，6.95 (dd, 1Η)，6.89 (d，1Η 37 200812955 J = 15.3 Hz)，6.71 (d，1H)，3.53 (m，4H)，j 57 (m，6H); MS (ES-) ·· 246.11。 ’ 實例9 3-(3, 4-二經基苯基—(4_乙基令秦]-基卜丙稀綱 ( 3-(3, 4-Dihydroxy- phenyl)-l-(4- ethyl-piperazin-l-yiypropenone)(化合物 9) 化合物1 (〇·3 g，U6 mol)溶解於四氫呋喃 (她ahydmfumn) (5mL)之中，冷卻至〇〇c，接著，滴加 亞硫雜（0.36 mL，5.1 mmol)，在〇。(：維持3〇分鐘，之後， 反應混合_溫至室溫（25 ，並赫2小時，接著，該 反應混合物在_條件下進行濃齡乾，職物溶解於四 氫吱喃（5 mL)之中，並冷卻至〇〇c，滴加i乙基_略嗪 y 视yi-Piperazine) (u mL，8·62 mm〇1)，反應混合物恢 彳” 過夜（16小時）。該反應混合物於 減壓條件下進行濃縮，剩餘物利用1〇%重碳酸鈉 bicarbonate)稀釋至pH7，再利用乙酸乙酯（2x25mL)進 行萃取。有機層利用水（10mL)以及鹽鹵（brine)(1〇mL) 洗；V、，於無水硫酸鈉中乾燥，並於減壓條件下進行濃縮。 亥剩餘物利用快速色層分析（丘ash Chromat0graphy) (smca gel ’ 5°/〇m她an〇linchl〇r〇f〇rm)進行純化，進而得到標題 所示化合物。 產量：180 mg( 39.2% );NMR (DMSO-d6) ·· δ 9·43 (s， 2Η) ’ 8·97 (s，1Η)，7·45 (d，1Η，J =15.9 Hz)，7·05 (d，1Η)， 6·96 (dd，1Η)，6·89 (d，1Η，J : 15·9 Hz)，6.71 (d5 1Η)，3·56 (m， 38 200812955 4H)，2.32 (m，6H)，0·99 (t，3H) ; MS(ES+) : 277 (Μ+l)。 製備鹽酸鹽（hydrochloride salt): 4-[3-(3, 4_二經基苯基)-丙烯隨基]-l_乙基—π底嗓_i_氯 (4-[3-(3?4-Dihydroxy-phenyl)-acryloyl]-l-ethyl-piperazi n-l-ium chloride) 化合物9 (2.0 g，7.29 mol)溶解於10 mL曱醇之中，溶 液冷卻至0-5。0 ’接者’添加5%鹽酸鍵溶液（ hydrochloric acid solution) (25 mL)，攪拌 10分鐘，之後， 反應混合物回溫至室溫（25 QC)，並攪拌1小時，接著，該 反應混合物在減壓條件下進行濃縮，所得之固體完全乾燥 後即可得所需之產品。 產量：2.1 g (93.3%) ; hNMf^DMSO-A) : δ 10.88 (s， 1Η)，7·35 (d，1Η，J 二 15.3 Ηζ)，7·10 (d，1Η，J=1.5 Ηζ)，6·99 (d， 1H，J =1.5 Hz)，6.97 (d，1H，J =15.3 Hz)，6·74 (d，1H，J =8.4 Hz)，4.48 (m，2H)，3.46 (m，2H)，3.11 (m，4H)，2.91 (m，2H)， 1.23 (t，3H) 〇 實例10 1 —(4•甲苯基-哌喚小基）_3_(3, ζμ二羥基苯基）_丙烯酮 ( 1 -(4-Benzyl-piperazin-1 -yl)- 3_ (3 4_〇&}^〇父}^3]1611}4)切(^11〇1^)(化合物10) 化合物1 ( 0·3 g，L66 mol )溶解於四氳吱喃 (tetrahydrofUran) (5mL)之中，冷卻至〇〇c，接著，滴加 亞硫酸氯（0.6 mL，8.5 mmol)，在0°C維持30分鐘，之後， 反應混合物回溫至室溫（25。〇，並攪拌2小時，接著，該 39 200812955 反應混合物在減壓條件下進行濃縮至乾，剩餘物溶解於四 氫吱喃（5 mL)之中，並冷卻至〇〇c，滴加μ苯曱基^底嗪 (1-Benzyl_piperazine) (〇·9 mL，5 2 mm〇1)，反應混合物 恢復至室溫（25。〇，攪拌過夜（16小時）。該反應混合物 於減壓條件下進行濃縮，剩餘物利用10%重碳酸鈉（sodium bicarbonate)稀釋至pH 7，再利用乙酸乙醋（2x25 mL)進 行卒取。有機層利用水（1〇 mL)以及鹽鹵（brine) ( mL) 洗滌，於無水硫酸鈉中乾燥，並於減壓倏件下進行濃縮。 。亥剩餘物利用快速色層分析（£[ash chromat〇graphy ) ( silica ge卜5 % methanol in chloroform)進行純化，進而得到標題 所示化合物。 產量：160mg (28.4%) ; iNMRCCDgOD) : 3 7.44(d， 1Η，J 二 15·3 Hz)，7·32 (m，5Η)，7·03 (d，1Η)，6.96 (dd，1Η)， 6.85 (d，1H，卜 15·3 Hz)，6.75 (d，1H)，3·71 (bs，4H)，3.56 (s， 2H)，2.49 (bs，4H) ; MS(ES+) : 277 (M+l)。 製備鹽酸鹽（hydrochloride salt): 4-[3-(3, 4-二經基苯基)-丙烯酿基]底嗓_1_氯 (4 [3 (3,4-Dihydroxy-phenyl)-acryloyl]-l-benzyl-pipera zin-l-ium chloride) 化合物10 (0.5 g，1.49 mol)溶解於15 mL曱醇之中， 溶液冷卻至0-5。(：，接著，添加5%鹽酸醚溶液（ethereal hydrochloric acid solution) (25 mL)，攪拌 1〇分鐘，之後， 反應混合物回溫至室溫（25 °C)，並攪拌1小時，接著，該 反應混合物在減壓條件下進行濃縮，所得之固體完全乾燥 200812955 後即可得所需之產品。 產量：0.52 g( 94.54% ); 4 NMR (DMSO-d6): δ 9·56 (s， 1Η)，7·56 (m，2Η)，7·32 (d，1Η，J =15.3 Hz)，9.06 (d，1Η)， 6.95 (m，1H)，6.89 (d，1H，J 二 15·3 Hz)，6.72 (d，1H)，4.43 (m， 2H)，4·27 (m，2H)，3.26 (m，3H)，2·89 (m，3H)。 實例11 (EKH4-[3-(3, 4-二羥基苯基)_丙烯醯基]_哌嗪_1-基} 丙腈 （ （E)-3-{4_[3-(3， 4-Dihydroxy-

phenyl)-acryl〇yl]-piperazin-l-yl}propionitrile)(化合物 11) 化合物1 ( 0.400 g，2.22 mol)溶解於四氫呋喃 (tetrahydrofhran) (30 mL)之中，冷卻至 〇°C，接著，滴 加乙二酿氣（oxalyl chloride)(0.57 mL，6.66 mmol)，在 〇°C 維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至室溫（25 °c)，擾 拌2小時，接著，該反應混合物在減壓條件下進行濃縮至 乾，剩餘物溶解於四氫呋喃（15 mL)之中，並在氮氣中冷 卻至0°C，並於0°C滴加3-旅嗪小基_丙猜 (3_piperazin_l_yl-propionitrile) (0.37 g，2.66 mmol)以及 三乙胺（triethylamine) (0.67mL，48·8 mmol)溶於四氫口夫 喃中的一溶液，反應混合物恢復至室溫（25 °C)，擾拌過夜 (16小時）。反應的最後，該混合物於減壓條件下進行濃 縮，並利用石夕膠（1 % methanol in chloroform)之快速色層 分析（flashchromatography)進行純化，進而得到標題所示 化合物。 產量：0.130 g ( 19.43%) ; 4NMR (CD3〇D): δ 7.45 (d， 41 200812955 1H，J =15 Hz)，7.04 (d，1H)，6·97 (dd，1H)，6.86 (d，1H，J = 15.3 Hz)，6.76 (d，1H)，3.75 (m，4H)，2.71 (m，4H)，2.66 (m， 4H) ; MS (ES+) : 302.14。 實例12 ⑹-3_(3，二羧基苯基)小[4_(l-曱基H4_基）旅π秦 -1-基]-丙烯酮（（Ε)-3-(3， 4- dihydroxyphenyl)-144-(1 -methyl-piperidin-4-yl)piperazin--1 -yl ]-propenone)(化合物 12) 化合物1 ( 0.500 g，2.77 mol)溶解於四氫吱喃 (tetrahydrofuran) (30 mL)之中，冷卻至 〇°c，接著，滴 加乙二酸氯（oxalyl chloride)(0.52 mL，6.09 mmol)，在 〇0c 維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至室溫（25 °C)，擾 拌3小時，接著，該反應混合物在減壓條件下進行濃縮至 乾，剩餘物溶解於四氫呋喃（10mL)之中，並在氮氣中冷 卻至0°C，並於0°C滴加1- (1-曱基派唆-4-基）旅嗅 (Hi-methylpiperidin-4-yl) piperazine)(0.37 g，2·66 mmol) 以及三乙胺（triethylamine) (0.84 mL，6.09 mmol)溶於四 氫呋喃中的一溶液，反應混合物恢復至室溫（25 °C)，攪;拌 過夜（16小時）。反應的最後，該混合物於減壓條件下進行 濃縮，並利用矽膠（1 %methanolin chloroform)之快速色 層分析（flash chromatography)進行純化，進而得到標題所 示化合物。 產量：0.170 g( 17.74%) ; iHNMRCCDPD) ·· δ 7.47 (d， 1H，J =15.3 Hz)，7.06 (d，1H)，6·98 (dd，1H)，6·87 (d，1H，J = 42 200812955 15.3 Hz)，6.79 (d，1H)，3.76 (bs，4H)，3.18 (m，2H)，2.63 (bs， 4H)，2.51 (s，3H)，2.45 (m，3H)，1.96 (m，2H)，1.69 (m，2H); MS (ES+) ·· 346.21。 實例13 (E)_ 3-(3，4-二羧基苯基)-1-(4-苯基u底嗓-1-基）-丙稀酮 ( (E)-3-(3， 4-dihydroxyphenyl)- l-(4_phenylpiperazin-l-yl)-propenone)(化合物 13) 化合物1 ( 0.500 g，2.77 mol)溶解於四氤呋喃 (tetrahydrofuran) (30 mL)之中，冷卻至 0°C，接著，滴 加乙二醯氯（oxalyl chloride)(0.71 mL，8.31 mmol)，在 〇°C 維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至室溫（25。〇，攪 拌3小時，接著，該反應混合物在減壓條件下進行濃縮至 乾，剩餘物溶解於四氫呋喃（10 mL)之中，並在氮氣中冷 卻至0 C ’並於〇°C滴加N-苯基』底σ秦(N_phenyl_piperazine) (〇.54mL，3·60 mmol)以及三乙胺（triethylamine) (0.84 mL ’ 6.09 mmol)溶於四氫呋喃中的一溶液，反應混合物恢 设至至/JIEL (25 C) ’攪拌過夜（小時）。反應的最後，該 混合物於減壓條件下進行濃縮，並利用矽膠（1 %methan〇1 inchloroform)之快速色層分析（flash chromatography)進 行純化，進而得到標題所示化合物。 產量：O.lOOmg (ιι·11%) ; ihnmr(CD3〇d) : δ7·47 (d5 1H? J -15.3 Hz) ^ 7.23 (t5 2H) ^ 7.05 (d? 1H) ^ 6.98 (d? 2H) ^ 6·91 (1H，J = 15.3 Hz) ’ 6.84 (m，1H)，6.77 (d，1H)，3.85 (bs， 4H)，3.19 (bs，4H) ; MS (ES-) : 323.12。 43 200812955 實例14 (E)-l-(4_乙隨-派嗓-1-基)-3_(3，4_一海基苯基）-丙烯酉同 ( (E)-1 - (4-acetyl-piperazin-1 -yl)-3 -(3， 4-dihydroxy-phenyl)-propenone)(化合物 14) 化合物1 ( 0.500 g，2.77 mol)溶解於四氫π夫喃 (tetrahydrofuran) (30 mL)之中，冷卻至 〇°C，接著，滴 加乙二驢氯（oxalyl chloride)(0.52 mL，6.09 mmol)，在 〇°c 維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至室溫（25 QC)，擾 拌3小時，接著，該反應混合物在減壓條件下進行濃縮至 乾，剩餘物溶解於四氫吱喃（10mL)之中，並在氮氣中冷 卻至0QC，並於0QC滴加N-乙醯基_旅嗓 (N-acetyl-piperazine) (0.35 mL，2.77 mmol)以及三乙胺 (triethylamine) (0.84 mL，6.09 mmol)溶於四氫呋喃中的 一溶液，反應混合物恢復至室溫（25 QC)，擾拌過夜（16 小時）。反應的最後，該混合物於減壓條件下進行濃縮，並 利用矽膠（1 % methanol in chloroform)之快速色層分析 (flash chromatography)進行純化，進而得到標題所示化合 物0 產量：0·3 g ( 37.26%) ; 4 NMR (DMS〇-d6): δ 8.93 (bs， 1H) ’ 7.34 (d，1H，J =15.3 Hz)，6.99 (dd，1H)，7.09 (d，1H，J = 15 Hz)，6.75 (d，1H)，3.85 (m，8H)，2.03 (s，3H) ; MS (ES+): 291.15 (M+l)。 實例15 (E)- 3-(3, 4-二羥基苯基）小(4-苯乙基-派嗓小基）_丙烯 44 200812955 酮 （ （E)-3-(3, 4-dihydroxy- phenyl). l-(4-phenethyl-piperazin-l_yl)-propenone) (4匕合物 15) 化合物1 ( 0.500 g，2·77 mol)溶解於四氫咬喃 (tetrahydrofuran) (30 mL)之中，冷卻至 〇°c，接著，滴 加乙二醢氣（oxalyl chloride)(0.35 mL，4· 15 mmol)，在 維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至室溫（25 ，授 摔3小時’接著’該反應混合物在減壓條件下進行濃縮至 乾，剩餘物溶解於四氫呋喃（10mL)之中，並在氮氣中冷 卻至0QC，並於0°C滴加苯乙基-派口秦 (1-phenylethy 1-piperazine) (0.52 g ^ 2.77 mmol)以及三乙 胺（triethylamine) (0.84 mL，6.09 mmol)溶於四氫吱σ南中 的一溶液，反應混合物恢復至室溫（25 QC)，攪拌過夜（16 小時）。反應的最後，該混合物於減壓條件下進行濃縮，並 利用石夕膠（1 % methanol in chloroform)之快速色層分析 (flashchromatography)進行純化，進而得到標題所示化合 物。 產量·· 0.150 g (15.33%) ; MS (ES+) : 353.24。 實例16 (E)- 3_(3, 4-二羥基苯基）小嗎啉-4-基-丙烯酮（(ε)_3·(3, 4-dihydroxy-phenyl)- l-morpholin-4-yl-propenone)(化合物 16)

化合物1 ( 〇·4 g ’ 2·22 mol )溶解於四氫吱喃 (tetrahydroforan) (30 mL)之中，冷卻至 〇〇c，接著，滴 加亞硫醯氯（thionyl chloride)(0.51 mL，7.10 mm〇l)，在 〇°C 45 200812955 維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至室溫（25 QC)，擾 拌2小時，接著，該反應混合物在減壓條件下進行濃縮至 乾。剩餘物溶解於四氫吱喃（10mL)之中，並冷卻至〇°c， 滴加嗎琳（Morpholine) (0.77mL，8·88 mmol)，尽應混合 物恢復至室溫（25 QC )，攪拌過夜（16小時）。反應的最後， 該混合物於減壓條件下進行濃縮，並利用矽膠（1 〇/〇 methanol in chloroform )之快速色層分析（flash chromatography)進行純化，進而得到標題所示化合物。 產量·· 0.200g (28.94%) ; iHNMRpMSOO : δ7.31 (d，1Η，J =15 Hz)，7·06 (bs，1Η)，6·96 (d，1Η)，6.89 (d，1Η，J 二 15.3 Hz)，6.71 (d，1H)，3.60 (m，8H)。 實例17 3-(3, 4-二羥基苯基)_N_(3_二曱基氨基_丙基)_丙烯醯 胺 （ 3_(3， 4-dihydroxy-phenyl)- N- (3-dimethylamino_propyl)-acrylamide)(化合物 17) 化合物 1 (〇.2g，1.11 mol)，N，N-二甲基丙烷-1，3-二胺 (N，N-dimethyl-pr〇pane-l，3-diamine)(0.13 mL，1.11 mmol) 以及HOBT (〇.2g，l.32mol)的一混合物溶解於二曱基曱 酿胺（N，N-dimethylformamide) (5mL)之中，並於0oC下 添加三乙胺（triethylamine) (0·4 mL，3.3 mmol)，10分鐘 之後，於0 下添加EDC (0·25 g，u mm〇1)，之後，反應 混合物於室溫（25。〇下攪拌24小時，接著，該反應混合 物在減壓條件下進行濃縮，剩餘物利用乙酸乙酯（25mL) 進行稀釋。有機層利用水（10 mL)以及鹽鹵（brine)(10 mL) 46 200812955 洗滌，並於減壓條件下進行濃縮。所獲得的未加工產品利 用快速色層分析（flash chromatography )( silica gel，〇 3 % methanol in chloroform)進行純化’進而得到標題所示化合 物。 產量：190mg (64.7%) ; MS(ES-) : 263 (M-1)。 實例18 (E)- 3-(3, 4-一經基本基)-N_異丙基-丙烯醯胺（⑻各(3, 4_dihydroxyphenyl)-N-isopropyl-acrylamide)(化合物 is) 化合物1 ( 0.500 g，2·77 mol)溶解於四氫呋喃 (tetrahydrofuran) (30 mL)之中，冷卻至 〇〇c，接著，滴 加乙二醯氣（oxalyl chloride)( 0·71 mL，8·31 mmol)，在 〇〇c 維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至室溫（25 QC)，授 拌3小時，接著，該反應混合物在減壓條件下進行濃縮至 庠乙，剩餘物溶解於四氫吱喃（l〇mL)之中，並在氮氣中冷 部至0 C ’並於〇°C下滴加異丙胺（iS〇pr〇pyl amine ) ( 〇·3〇 mL ’ 3·60 mmol)以及三乙胺（triethylamine) (0.84 mL， 6·09 mmol)溶於四氫吱喃中的一溶液，反應混合物恢復至 至/孤（25 QC) ’攪;拌過夜（16小時）。反應的最後，該混合 物於減壓條件下進行濃縮，並利用破膠（1 % methanol in chloroform)之快速色層分析（f[ash chromatography)進行 純化’進而得到標題所示化合物。 產量：〇· 150 g ( 24.42% )。4 NMR (CD3OD): δ 7·36 (d， 1H，J =15.6 Hz)，6.98 (d，1Η)，6.88 (dd，1H)，6·74 (d，1H)， 6.32 (d，1H，J = 15.6 Hz)，4·06 (m，1H)，U7 (d，6H)。 47 200812955 實例19 1 一(4-曱苯基-哌啶-1-基）-3-(3, 4-二羥基苯基）-丙烯酮 ( 1 -(4-Benzyl-piperidin-l -y 1)-3-(3 ? 4-dihydroxy-phenyl)-propenone)(化合物 19)

化合物1 ( 5 g，27.7 mol )溶解於四氫呋喃 (tetrahydrofuran) (60 mL)之中，冷卻至 〇°C，接著，滴 加乙二酸氣（oxalyl chloride )( 5·26 mL，61 ·0 mmol )，在 〇°C 維持30分鐘，之後，反應混合物回溫至室溫（25。〇，攪 拌3小時，接著，該反應混合物在減壓條件下進行濃縮至 乾，剩餘物溶解於四氫呋喃（20 mL)之中，並在氮氣中冷 部至0 C ’並於〇°C下滴加苯曱基α辰u定（benzylpiperidine) (5·35 g ’ 30·5 mmol)以及三乙胺（triethylamine)( 5·52 mL， 41·6 mmol)溶於四氫呋喃中的一溶液，反應混合物恢復至 室溫（25。〇,攪拌過夜（16小時）。反應的最後，該混合 物於減壓條件下進行濃縮，並利用快速色層分析（flash chromatography) (silica gel ^ 1 % methanol in chloroform) 進行純化，進而得到標題所示化合物。 產置·2·2 g(23·5〇 %)。4 NMR (CD3OD): δ 7.41 (d，1H， J -15·3 Hz) ’ 7·25 (m，2H)，7.15 (m· 3H)，7·02 (d，1H)，6·95 (dd，1H)，6·85 (d，1H，J。15·3 Hz)，6·76 (d，m)，4·57 (m， 1H)，4.2G (m，1H)，3 ⑽㈣，m)，2 67 ㈣ m) ’ 2.56 (d，2H)， L85 (m，1H)，i·73 (m，2H)，1.18 (m，2H) ; MS (ES-) : 336.1 (M-1) 〇 本七明之化合物對抑制Gleevec敏感細胞株Κ·562， 48 200812955

Ba/F3 Bcr_Abl/WT 以及 Gleevec 抗性細胞株 K_562_R 以及 32Dcl

Bar-Abl

Bcr-Abl/E255K Bcr-Abl/M351T Bcr-Abl/E255V Bcr-Abl/H396R Bcr-Abl/Q252H ，Ba/F3 Bcr-Abl/T3151 ，Ba/F3 ，Ba/F3 Bcr-Abl/H396P ， Ba/F3 ，Ba/F3 Bcr-Abl/F359V ， Ba/F3 ，Ba/F3 Bcr-Abl/F317L ， Ba/F3 ，Ba/F3 Bcr-Abl/M244V ， Ba/F3 ，Ba/F3 Bcr-Abl/Y253F，以及 Ba/F3

Bcr-Abl/Y253H的效果，可以藉由下列的藥性試驗的數字而 加以決定。下列所舉例的藥性試驗已經藉由imatinib mesylate，以及本發明的化合物、或其鹽類而加以實行（此 後’稱之為測試化合物）。 下列為所使用的縮寫：

ATCC : American Type Culture Collection OGSU · Oregon Health And Science University^ Oregon，USA NPRC : Nicholas Piramal Research Centre，Mumbai， India FBS : Fetal Bovine Serum IMDM : Iscove’S Modified Dulbecco’S Medium RPMI Rosewell Park Memorial Institute SDS-PAGE · Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electrophoresis PBS Phosphate Buffered Saline EDTA ： Ethylene Diamine Tetra Acetate 200812955 NP-40 : Nonidet P-40 HEPES : (N_[2-Hudroxy ethyl] piperazine_N’-[2_ethance sulphonic acid]) DTT ： Dithiothreitol EGTA : Ethylene glycol bis(2-aminoethyl ether)-N，N，N’N’-tetraacetic acid IL3 · Interleukin 3 實例20 細胞增殖試驗 氚-胸嘧啶吸收試驗（¾ -Thymidine uptake assay ):氚-胸嘴唆結合就直接正比於在培養皿中分裂的細胞數。 貫驗設計（Protocol) 將來自不同來源（表1)的細胞株進行預先培養，並使 其維持在供應者所建議的最適生長條件之下，以指數成長 的培養會接受如下所示之不同濃度的測試化合物以及標

細胞株敘述 來源 Ph狀 增殖培養基 態 (FBS%) 人類Bcr-Abl白 ATCC +ve IMDM (10%) 血病細胞株 對Gleevec具抗 性之人類 Bcr-Abl白灰病 --------- NPRC +ve RPMI-1640 (10%) 50 200812955 細胞株 3. 32DC13 Bcr-Abl 具T3151變異 Bcr-Abl之老鼠 纖維組織母細胞 +ve IMDM (10%) 方法： 在透明的96凹槽組織培養盤（NCNU，USA)中，細胞 會以母個凹槽以3x 103至5x 1〇3的密度（在〇18QmL之中） 進行接種，然後，在5%二氧化碳培養箱中，以培養2 — 6小時。測試化合物利用培養基（具有1〇% 幻 稀釋為各種的_，0.02 mL的lGx儲存液以三倍的量加入 每個凹槽之中，培養盤在5%二氧化碳培養箱中，以 培養72小時。 在72小日寸的培養之後，培養盤在一盤式離心機中以 1000 rpm進行離心1G分鐘，㈣浮物小_吸走，在所有的 凹槽（·11〇中添加在(U祉完全培養基中之濃度為〇5 ga/well0^_^H_Thymidine)，將培養盤再於辦二 乳化碳培養箱中，以37 〇C培養6 —η小時。 ::末』在細胞收集裔（harvester ) ( packarcj， USA)的％助下，可以在％個凹槽的玻璃過遽盤（〇&士 # 6005177, Unifilter-96, GF/B? Packard, USA) | 96 口凹才曰的、、順株’然後’該過缝進行完全地乾燥，於⑼。c (25 〇c) ^ 彳的底部利用封條堵住，加入0.05 mL/well的閃光 51 200812955 液體（Microscint-O, Packard)，然後，該盤再由上方封住， 由閃光計數器（scintillation counter )( TopCount，Parkard ) 進行讀取，最後計算出相較於控制數值的抑制率以及IC50。 表2 :化合物2對於各種細胞株的抗增殖活性 編號 化合物 IC50 μΜ Κ-562 K-562-R 32DclBar"Abl T3151 1 Imatinib mesylate 0.21 ±0.05 1.0 >3.0 2 化合物2 13.6 士 2.3 23.0 36.0 結論：本發明的化合物2會抑制具Gleevec抗性細胞株 K-562，K-562-R，以及32DclBar-AblT3151 的增殖。 實例21 利用體外抗增殖活性決定測試化合物對imatinib抗性細 胞株的特異性 預先培養數個imatinib抗性細胞株，來自Dr. Brain Dmker’s laboratory，Howard Hughes Medical Institute，

Oregon Health and Science University (OHSU)? Cancer Listitute，Portland，Oregon，USA，其詳細資料如表3所提供。 這些細胞株被維持在供應者所建議的較佳生長條件之下。 表3 :各種imatinib敏感及imatinib抗性細胞株的敘述 編號 細胞株 來源 Ph狀態 增殖培養基（FBS%) 1 Ba/F3 Bcr-Abl/WT OHSU + ve野生株 RPMI- 1640(10%) 2 Ba/F3 Bcr-Abl/T3151 OHSU + ve變異株 RPMI- 1640(10%) 3 Ba/F3 Bcr-Abl/E255K OHSU + ve變異株 RPMI~1640(10%) 52 200812955 4 Ba/F3 Bcr-Abl/H396P OHSU "—---- + ve變異株 RPMI—1640(10%) 5 Ba/F3 Bcr-Abl/M351T OHSU '" - + ve變異株 RPMI-1640 (10%) 6 Ba/F3 Bcr-Abl/F359V OHSU + ve變異株 RPMI-1640 (10%) 7 Ba/F3 Bcr-Abl/E255V OHSU —----- + ve野生株 RPMI-1640 (10%) 8 Ba/F3 Bcr-Abl/F317L OHSU 一 ---— + ve野生株 RPMI-1640 (10%) 9 Ba/F3 Bcr-Abl/H396R OHSU ------- + ve變異株 RPMI-1640 (10%) 10 Ba/F3 Bcr-Abl/M244V OHSU + ve變異株 RPMI-1640(10%) 11 Ba/F3 Bcr-Abl/Q252H OHSU + ve變異株 RPMI - 1640 (10%) 12 Ba/F3 Bcr-Abl/Y253F OHSU + ve變異株 RPMI-1640 (10%) 13 Ba/F3 Bcr-Abl/Y253H OHSU + ve變異株 RPMI - 1640 (10%) 14 Ba/F3* OHSU -ve野生株 IMDM(10%) + IL3** * Ba/F3細胞包含的載體僅(Ba/F3 - pSRa) **IL3作為生長因子 在表3中所敘述的細胞株會被用於測試欲測試之化合 物的抗增殖活性，而利用CCK-8試驗，該等測試化合物作 為一抗增殖劑的活性則是可以與Imatinib mesylate在 imatinib抗性細胞中的活性相比較。 細胞增殖以及細胞毒素（cytotoxicity) CCK-8試驗 細胞計數試劑-8 (CCK-8)藉由利用Dojindo的高度水 溶性四唑鹽類（tetrazolium salt)而使得試驗變得相當地簡 便。CCK-8，無放射性，利用敏感的色度測定來決定在細 胞增殖以及細胞毒素試驗中之可活細胞的數量，藉由在細 53 200812955 胞中之脫氫酶（dehydrogenases)所產生之formazan染劑 (formazan dye)的量會直接正比於存活細胞的數量，因 此’該CCK-8試驗亦可以取代氖-胸嘧啶結合試驗。 化合物準備

Imatmib mesylate是購自 Natco Pharma, India，為 了測試 化合物以及標準lmatinib mesyiate，1〇 mM儲存液準備於 DMSO之中。 、

方法 細胞以每個凹槽至多5xl〇3(〇.〇9mL)的密度接種於 透明的96凹槽組織培養盤（NUCU，USA)之中，並於5%二 氧化碳培養箱中，以37 〇C培養2 —6小時，不同濃度的測試 化合物以及一標準imatinib被添加三倍至每一個凹槽之中， 之後，培養盤再次地於5%二氧化碳培養箱中，以37〇c培養 72小時。10 pL的CCK-8溶液添加至每一個凹槽之中，並將 培養盤於培養箱中再培養1 — 4小時，利用一微量盤偵測器 測量450 nm的吸光值。 Α·計算相較於控制組的抑制比例以及1C %，結果顯示 於下列表4以及表5之中。 B.遠專測试化合物對於丨腿血出敏感（BW3 Bcr-Abl/WT)以及抗性（Ba/F3 Bcr_Abl/T3151)(如臨床所 見）的抗增殖活性（表示為μΜ的IC%數值）係以圖例方式 顯示於第1圖之中。 化合物對於五個低突變率imatinib抗性細胞株（

Bcr-Abl/E255K

Ba/F3 Bcr-Abl/H396P ， Ba/F3 -54 200812955

Bcr_Abl/E255V，Ba/F3 Bcr_Abl/M244v，以及 Ba/F3 Bcr-Abl/Q252H)(如臨床所見）的抗增殖活性（表示為_ 的IC5〇數值）係以圖例方式顯示於第2圖之中。 化合物對於七個高突變率丨腿如出抗性細胞株（Ba/F3

Bcr-Abl/T3151 ，Ba/F3 Bcr-Abl/M351T ，Ba/F3

Bcr-Abl/F359V ，Ba/F3 Bcr-Abl/F317L Ba/F3

Bcr-Abl/H396R，Ba/F3 Bcr-Abl/Y253F，以及 Ba/F3

Bcr-Abl/Y253H)(如臨床所見）的抗增殖活性（表示為411从 的IC50數值）係以圖例方式顯示於第2圖之中。 表4 :本發明之化合物對imatinib敏感及imatinib抗性細 胞株的抑制濃度（inhibitory concentrations，IC50) 編號 化合物 - I〇5〇 uM K-562 Ba/F3 Bcr-Abl/WT Ba/F3 Bcr-Abl/T3151 1 化合物1 > 100 > 100 >3.0 2 化合物2 13.3 土 2.1 7.9 ±2.1 36.0 3 化合物3 11.8 ±8·8 3.3 ±0.9 2.3 士 1·9 · 4 化合物4 13.5 土 2.1 2.4 士 0·8 0.7 士 0·1 5 化合物5 16.5 土 2.1 2.3 ± 1.1 1.7 士 1.1 6 化合物6 59.5 40.6 士 16.4 43.1 ±27.9 7 化合物7 18.0 2.8 ±0.4 2.5 ± 1.5 8 化合物8 >30 >30 >30 9 化合物9 33.5 27.0 士 8.5 26.6 士 6.5 10 化合物10 32.1 19.4 土 8.8 9.5 ±4.1 55 200812955 11 化合物11 5.7 4.2 士 1.3 2.7 ±0.5 12 化合物12 0.5 ±0.2 0.3 ±0.1 20.8 ±6.1 表5:本發明之化合物對imatinib抗性細胞株的細胞毒素抑制活 性 細胞毒素抑制活性（IC5G) μΜ 編 號 細胞株 I II III IV V VI VII VIII 1 Ba/F3 Bcr-Abl/ E255K > 100 15.0 6.7 2.9 5.1 2.4 1.5 8.7 2 Ba/F3 Bcr-Abl/ E255V > 100 18.9 10.2 3.4 9.9 2.1 0.8 8.4 3 Ba/F3 Bcr-Abl/ F317L > 100 23.5 12.3 1.6 11.3 1.2 1.1 2.0 4 Ba/F3 Bcr-Abl/ F359V > 100 18.4 13.4 2.5 14.6 2.6 2.4 2.1 5 Ba/F3 Bcr-Abl/ H396R > 100 26.2 16.6 5.6 10.8 3.7 2.8 4.3 6 Ba/F3 Bcr-Abl/ H396P > 100 18.8 8.6 1.1 7.0 1.0 1.4 2.1 7 Ba/F3 Bcr-Abl/ M244V > 100 30.1 15.2 3.0 9.8 1.3 1.0 1.8 8 Ba/F3 Bcr-Abl/ M351T > 100 16.1 8.7 2.2 5.1 2.2 2.1 2.1 9 Ba/F3 Bcr-Abl/ Q252H > 100 15.4 8.4 1.7 5.9 1.5 1.1 2.0 10 Ba/F3 Bcr-Abl/Y253F > 100 17.0 6.4 1.7 5.2 1.1 1.0 3.9 11 Ba/F3 Bcr-Abl/Y253H > 100 14.5 13.2 3.3 13.3 2.5 1.0 9.2 12 Ba/F3 Bcr-Abl/T3151 > 100 6.3 1.1 0.6 2.0 3.1 2.1 27.0 I -化合物1，II-化合物2，III-化合物3，IV-化合物5， V-化合物6，VI-化合物 10，VII-化合物 19，VIII-Imatinib 56 200812955 mesylate 〇 結論·其結果證明了本發明的化合物存在有對Bcr-Abl 變異之imatinib抗性細胞株的顯著抑制活性。 實例22

Bcr-Abl激酶（kinase)試驗 目的 為 了研九Bcr-Abl的自鱗酸化（aut〇ph〇sphorylation)抑 制性，而其實行則是利用從尺_562的細胞溶解產物中免疫沈 澱（immim〇precipitation)出p21〇bcr-abl酪胺酸激酶（讲⑽狀 kinase)，以進行激酶酵素試驗。然後，反應混合物會跑 SDS-PAGE，並進行自動放射顯影照相。 介紹 免疫沈殿（Immunoprecipitation)是利用特殊之抗體而 自粗細胞溶解產物中純化出特殊蛋白質的技術，在此，主要 的抗版不疋已經結合至瓊膠（agar〇se)的形式，就是可以在 程序期間結合至蛋白-A-瓊脂糖凝膠粒（protein-A-sepharose beads)的形式’因而從剩下的樣品中物理地分離出抗體-抗 原複合體。 方法： 分％為了檢查本發明之化合物對於自磷酸化p21〇 bcr_abl酪胺 ^酶的抑制性，係使絲現為野生型^BCT_abl的K_562細 二=Χ 10 6的【562細胞被施以濃度為1C 50以及3倍1C 50 料Α 口物（以貫例2〇中所描述之關概_562的抗增歹直活性資 據）並在濕潤的5% C〇2培養箱中培養24小時。細胞 57 200812955 係用PBS溶液洗滌’並利用分解緩衝液（CelLytic μ cell

Lysis reagent，Sigma Aldrich，USA)在冷環境下分解2 -3小 時，再者，為了能夠從所有的樣品中得到相同的免疫沈澱 里 A 白貝了以藉由Bradford方法（Bradford reagent，Sigma Aldrich，USA)進行評估。一p2i〇 bcr_abi蛋白是利用多株抗 -c-abl抗體（Santa Cruz Biotechnologies，USA)而進行免疫沈 澱，接著，在蛋白A-Sepharose存在下於4°C培養整夜，分離 出免疫複合物’並以NET-N緩衝液（20 mM Tri-HCI pH 7,5， 100 mM Nad ’ ImM EDTA，以及0.5% NP40)沖洗三次，

接著’將其重新懸浮於激酶緩衝溶液（5〇 mM HEPES pH

7·5 ’ 1 mM DTT，2·5 EGTA，10 mM p_glycerophosphate，1 mM

NaF，以及i〇mMMgCl2)之中。 激酶反應的執行是利用〇·5 μα (γ32Ρ)-三磷酸腺苷 (adenosine triphosphate )(每個反應），接著，在室溫（25 0C ) 培養30分鐘。藉由添加SDS樣品緩衝液而停止激酶反應，而 在95 QC加熱5分鐘之後，自麟酸化反應產物就會重新溶解於 SDS-PAGE之中，而可為自動放射顯影照相所偵測。 結果：經由SDS-PAGE以及自動放射顯影照相的顯示， Bcr-abl自動磷酸化的免疫沈澱會逐漸減少，正如不斷減少的 帶密度所示，化合物2被判定是一具有影響力的Bcr-abl酪胺 酸激酶抑制劑。 實例23 藉由流式細胞技術（Flow cytometry)評估本發明化合 物對Bcr-abl變異imatinib抗性細胞株之細胞循環以及細胞凋 58 200812955 亡的影響 用於流式細胞技術的細胞以10 X 104 cells.mL的密度進 行接種，並與測試化合物/imatinib (5 μΜ) —起於5% C〇2 培養箱中，以37 °C培養24小時。培養完後，1000 rpm離心 10分鐘，以獲得細胞，利用PBS (phosphate buffered saline， 磷酸緩衝液）洗滌二次，洗滌後之細胞粒逐漸重新懸浮於冰 的70%乙醇之中，以有利於染劑的滲透，在利用PI( pr〇pidium iodide ’碘化丙錠）染色之前，細胞懸浮液最少要先存放4 小時。已固定的細胞在RNaseA (50pg/mL)存在下，利用 Π (80 pg/mL)進行染色，然後，利用BD FACS caliber (流 式細胞儀）讀取數值，以進行細胞循環分析。此研究的結果 顯示於第4圖之中。 結論·藉由本發明的化合物抗性細胞株中所 誘發的細胞凋亡是很顯著的。 實例24 本發明之化合物在體内對imatinib抗性以及imatinib敏 感腫瘤模型的影響測試是藉由細胞株，例如，轉染 (transfectants )表現全長（fuu_iength )野生型Bcr_Abl ( Ba/F3 Bcr-Abl/WT)、或是變種Bcr-Abl (Ba/F3 Bcr_Abl/T3151)， 而進行研究。 目的 測式咖啡酸衍生物在體内對imatinib抗性以及imatinib 敏感腫瘤模型的影響 細胞株 59 200812955 在此研究中使用細胞株Ba/F3轉染（transfectants)表現 全長（full-length)野生型Bcr-Abl (Ba/F3Bcr-Abl/WT)、或 是變種Bcr-Abl (Ba/F3 Bcr-Abl/T3151)這些重組細胞株乃 是授權自 Dr. Brain Druker’s laboratory，Howard Hughes Medical Institute, Oregon Health and Science University (OHSU)，Cancer Institute，Portland，Oregon，USA (Cancer Research，2003, 62, 7149_7153 )。 化合物儲存 所有的化合物，包括標準品，皆置於一琥珀色瓶中，並 儲存於4-8°C。在溶液中的化合物也是於冰箱中維持在4 — 8 °C。動物注射樣品則是每日新鮮製作，剩餘的量會依照化學 棄置的標準操作程序（SOP)而進行收集及丟棄。 劑量準備 所需的化合物進行秤重，並與0.5 % (w/v) CMC (carboxymethylcellulose，羰甲基纖維）相混合，然後，在 逐漸加水的情形下，利用Tween_20 (從磨成 粉末，以形成最終的濃度。 在SCID老鼠中的效果

使用一群110隻具嚴重聯合免疫缺陷（Severely Combined Immune-Deficient ) ( SCID strain-CBySmn.Cb 11-Prkdcscid/J} The Jackson Laboratory, 、6 —9週，重約20g的老鼠。

Ba/F3 Bcr-Abl/WT細胞株以及Ba/F3 Bcr-Abl/T3151 細 胞株生長於包含10% (fetal calf serum)之RPMI1640培養 200812955 基’並於5/〇 C〇2培養相中’以37 °C進行培養。；[〇〇〇 rpm離 心10分知取得細胞粒，重新懸浮於鹽水之中，以形成每^^ 具有8〇 -1〇〇 X ίο個細胞，然後，利用皮下（subcutaneous， s.c·)注射的方式，將〇.2mL的此細胞懸浮液注射入gen)老 鼠之中。隔天觀察老鼠的可觸摸腫瘤塊，一旦腫瘤直徑尺寸 到達5 - 7 mm，動物就隨機地分為個別的治療群組。控制 組、或疋測试化合物的樂劑會每天提供，每2_5天記錄腫瘤 的尺寸，腫瘤的重量則是根據細長橢球的方程式（長度(mm ) x [I度（mm) ]2χ0·5)而進行評估，其中，假設比重為1， 以及π為3。接受化合物治療之動物體内的腫瘤生長則是被計 算為 T/C(Treated/Control)x 1〇〇%，以及生長抑制率（Gp/〇) 為[100 —T/C%] 〇分別的治療君羊組顯示於表6之中。 結果則是以圖例的方式顯示於第5 A圖以及第5B圖之 中0 表6 :異種皮移植（xenograft)模型（SETI以及SETII)中的治 療族群 (SE&)選定：Ba/F3Bcr_Abl/T3151 群組 才篆品 劑量 路徑 治療數量 n = I 控制組 溶劑 p.o. qldx 12 8 (未受 試） II 化合物2 200 mg/kg p.O. qldx 12 8 III 化合物3 200 mg/kg p.o. qldx 12 8 61 200812955 IV 化合物5 200 mg/kg p.o. V 化合物6 200 mg/kg p.o. VI 化合物10 200 mg/kg p.o. VII Imatinib Mesylate 200 mg/kg p.o. qldx 12 ΐϊχΐ2" Ϊ5^Γΐ2"ΐάΤϊΤ 7 7 ρ·ο·=經口服（per oral) ; 動物數量 qldxl2=單獨實行12天

(SETII)選定：Ba/F3 Bcr-Abl/WT 群組 —-—_ 樣品 劑量 路徑 治療數量 '~~----—__ n = I p.o. ~ ------ 控制組 溶劑 qldx 14 1 ~~~~ (未受 試） II 200 mg/kg p.o. — ——^___ 化合物2 qld x 14 8 III ΤΛ7 - 化合物3 200 mg/kg p.o. qld x 14 8 IV 化合物5 200 mg/kg p.o. qld X 14 8 ^ ~ V 化合物6 200 mg/kg p.o. — --〜— qld x 14 8 ~~ VI 化合物10 200 mg/kg p.o. qldx 14 8 " VII 〜 Imatinib Mesylate 200 mg/kg —B—--- p.o. -_ qldx 14 ~7 ~— — Ρ·0·=經口服（peroral) ; 動物數量 qldxl4=單獨實行14天 結論··在第5A圖以及弟5B圖中所呈現的資料證實， 比起imatinib mesylate，當以與表現異種皮移植（xen〇graft) 之野生型Bcr-AW，亦即，Ba/F3 Bcr-Abl/WT，相同之劑量 62 200812955 進行測试時’在抑制最具支配性之變種形式Bcr-Abl，亦即， Ba/F3 Bcr_Abl/T3151，方面，本發明的化合物展現了顯著較 佳的體内效果。 應该要注意的是，正如在此說明書以及所附申請專利 範圍中所使用的，單一形式“一個（a，an)，，以及“該個 (the)包括複數個所指的對象，除非有特別聲明，因此， 舉例而s，一包含“一化合物，，的組成是包括了二、或多個 化合物的混合。亦應該要注意地是，該詞“或，，一般被使用 於句子中日守，除非有特別地聲明，其是用於包括“及/或，，。 在此說明書中的所有出版品以及專利申請案被視為相 關於本發明的習知技術。 雖;」本务明已以各式特殊及較佳實施例及技術做為表 考而進行敘述，但應該要瞭解地是，在不脫離本發明之精 神及範4的情形下，仍可有❹龍似及修飾。1 63 200812955 【圖式簡單說明】 第1圖：其係顯示本發明之組成物在imatinib敏感（Ba/F3 Bcr-Abl/WT)以及imatinib抗性（Ba/F3Bcr-Abl/T3151)細 胞株中的抗增殖活性； 第2圖：其係顯示本發明之組成物在具imatinib抗性且低 突變率之細胞株（Ba/F3 Bcr-Abl/E255K，Ba/F3 Bcr-Abl/H396P ， Ba/F3 Bcr-Abl/E255V ， Ba/F3

Bcr-Abl/M244V，以及Ba/F3Bcr-Abl/Q252H)中（正如於臨 床中所見者）的抗增殖活性，其係表示為以μΜ為單位的平 均1C 50數值； 第3圖：其係顯示本發明之組成物在具丨1!1也11比抗性且高 突變率之細胞株（Ba/F3 Bcr-Abl/T3151，Ba/F3 Bcr-Abl/M351T ，Ba/F3 Bcr-Abl/F359V，Ba/F3

Bcr-Abl/F317L ， Ba/F3 Bcr-Abl/H396R ，Ba/F3

Bcr-Abl/Y253F，以及Ba/F3Bcr_Abl/Y253H)中（正如於臨 床中所見者）的抗增殖活性，其係表示為以μΜ為單位的平 均IC 5G數值； 第4圖：其係顯示在藉由本發明之化合物（5 μΜ)在 imatinib敏感以及imatinib抗性細胞株中誘發細胞调亡 (apoptosis) 48小時之後的情形； 弟5A圖·其係顯示本發明之化合物在匕也^^抗性 (Ba/F3Bcr-Abl/T3151)異種皮移植（xen〇graft)模型中之 SCID老鼠體内的功效表現；以及 第5B圖：其係顯示本發明之化合物在imatinib敏感 64 200812955 (Ba/F3 Bcr-Abl/WT )異種皮移植（xenograft )模型中之 SCID老鼠體内的功效表現。 【主要元件符號說明】 65

Claims (1)

1. 200812955 十、申睛專利範圍： L —種用於治療對基力克（Gleevec)之治療具抗性之慢性 骨髓性白血病的方法，包括對一有需要之哺乳動物提

   分子式（1) 供一有效治療量之一咖啡酸、或其如分子式（丨）之一 衍生物， 其中， X表示氧（〇)、NH、或雜環基；以及 R為氫（H) ’ ：):完基，芳基，雜環基，或不存在； 可以是其所有立體異構物以及互變異構物的形式，以 及其所有比例的混合物，其藥理上可接受之鹽類，其 樂理上可接受之溶劑，其藥理上可接受之同質異像體 (polymorph)，或是其前驅藥。 2· 一種用於降低對基力克（Gleevec)之治療具抗性之細 胞的增殖的方法，包括對一有需要之哺乳動物提供一 有效治療量之一咖啡酸、或其如分子式（1)之一衍生

   0H H0 分子式（1) 其中， X表示氧（〇)、NH、或雜環基；以及 66 200812955 R為氫（η)，烧基，芳基，雜環基，或不存在； 可以疋其所有立體異構物以及互變異構物的形式，以 及其所有比例的混合物，其藥理上可接受之鹽類，其 藥理上可接受之溶劑，其藥理上可接受之同質異像體 (polymorph)，或是其前驅藥。 3·如申請專利範圍第1或第2項所述之方法，其中，該 咖啡酸、或其衍生物是： 3-(3, 4-二經基苯基）-丙烯酸（咖η非酸），3_(3_本二羥 基苯基）-丙烯酸甲基酯，3-(3,4-二羥基苯基丙烯酸 乙酯，（E)-3-(3,4-二羥基苯基）_丙烯酸_2_硝基_乙酯， 3- (3,4_二羥基苯基）_丙婦酸正丙酯，3_(3,4_二羥基苯 基）-丙稀酸異丙酯（3-(3, 4_Dihydroxy- phenyl)-acrylic acid i-propyl ester)，3-(3, 4-二羥基苯基）-丙烯酸丁 酉曰’ (E)- 3-(3, 4-二每基苯基）-1 - 口底π定小基一丙稀酉同，3_(3, 4- 一經基本基）-1 -(4-乙基-娘嗅小基）-丙稀g同，1 — (4_甲苯基-哌嗪小基）各(3, 4_二羥基苯基）-丙烯酮， (E)-3_{4_[3-(3，4-二羥基苯基)-丙婦酸基]_派嗪_1_基} 丙腈，（E)_ 3_(3, 4_二羥基苯基)_1-[4_(1_曱基_π底啶_4_基） 哌嗪小基]_丙烯酮，（Ε)- 3-(3, 4_二羥基苯基)小(4_苯基 。辰嗓_1_基）-丙烯酮，出)-1-(4-乙酿_娘嗓-1-基)_ 3-(3, 4-一經基本基）-丙婦S同，（Ε)- 3-(3，4-二經基苯基）-ΐ_(4_ 苯乙基_°底嗓-1_基）-丙稀酮，（Ε)- 3_(3，4_二經基苯基） 小嗎啉4-基-丙烯酮，3-(3,4-二羥基苯基)-Ν-(3_二甲基 氨基-丙基)-丙稀醯胺，（Ε)- 3-(3, 4-二羥基苯基）異 67 200812955 丙基-丙烯醯胺，或1 - (4-曱苯基底π定_ι_基）；(3, 4 _ 二羥基苯基）-丙烯酮。 4. 如申請專利範圍第1或第2項所述之方法，其中，咖 啡酸的衍生物是： 3-(3, 4-二經基苯基)-丙烯酸曱基酯，3_(3, 4-二經基苯 基)-丙稀酸乙酯，3-(3，4-二經基苯基)_丙烯酸正丙 醋’ 3-(3,4-二經基苯基)-丙烯酸異丙酯，1一(‘曱苯基 -旅务1_基）-3_(3, 4-二經基苯基）-丙稀_，(e)_ 3_(3, 4_ 二羥基苯基)-N-異丙基-丙晞醯胺，或1 一(4-曱苯基_旅 咬-1_基）_3_(3, 4_二經基苯基）-丙烯酮。 5. 如申請專利範圍第1或第2項所述之方法，其中，該 咖啡酸、或其如分子式（1)的衍生物是合成、或源自 一自然資源。 6. 如申請專利範圍第1或第2項所述之方法，其中，該 對基力克（Gleevec)之抗性是由Bcr-Abl變異所造成。 7. 如申請專利範圍第2項所述之方法，其中，該細胞包 括：K-562-R，32DdBcr_AblT3151，Ba/F3 Bcr-Abl/T3151， Ba/F3 Bcr-Abl/E255K，Ba/F3 Bcr-Abl/H396P，Ba/F3 Bcr-Abl/M351T，Ba/F3 Bcr-Abl/F359V，Ba/F3 Bcr-Abl/E255V，Ba/F3 Bcr-Abl/F317L，Ba/F3 Bcr-Abl/H396R，Ba/F3 Bcr-Abl/M244Y，Ba/F3 Bcr-Abl/Q252H，Ba/F3 Bcr-Abl/Y253F，或 Ba/F3 Bcr-Abl/Y253H 細胞株。 68 200812955 8. 種包δ有效治療量之咖啡酸 之衍生物的藥物組成， 、或其如分子式（1) OH 分子式(1) 其中， —表，氧（〇)、ΝΉ、或雜環基（heter〇cyc別）；以及 R為氫（H)，絲，芳基，雜環基，或不存在，· 可以是其所有立體異構物以及互變異構物的形式，以 及其=有比例的混合物，其於藥理上可接受之鹽類， 其於藥理上可接受之溶劑，其於藥理上可接受之同質 異像體（polymorph) ’或是其前驅藥；以及 、 以單獨、或與至少-藥理可接受賦形劑一起作為治療 對基力克（Gleevec)之治療具抗性之慢性骨髓性白血 病的一活性成分。 9' 一種治療對基力克的治療具抗性之慢性骨 騎性白血病的方法，包括對一有需要之哺乳動物提供 申睛專利範圍第8項之該藥物組成的一有效治療量。 1〇. —種咖啡酸、或其如分子式（1)之衍生物的用途£，

   0H 69 分子式（1) 其中， X表示氧（Ο)、NH、或雜環基（heter〇Cyciyi);以及 R為氫（Η)，烷基，芳基，雜環基，或不存在； 可以是其所有立體異構物以及互變異構物的形式，以 及其所有比例的混合物，其藥理上可接受之鹽類，其 藥理上可接受之溶劑，其於藥理上可接受之同質異像 體（polymorph)，或是其前驅藥；以及 用於製造一種治療對基力克（G1 eevec)之治療具抗性 之t艾性骨髓性白血病的藥品。 如申凊專利範圍第8項所述之藥物組成，更包括另一 抗癌劑。 如申清專利範圍第10項所述之用途，其中，該咖啡酸、 或其衍生物是： 3一(3, 4_二羥基苯基）-丙烯酸（咖啡酸），3-(3, 4-二羥 基苯基）-丙烯酸曱基酯，3-(3,4-二羥基苯基）_丙烯酸 乙酯，（E)-3-(3,4-二經基苯基）_丙烯酸_2_硝基_乙酯， 3- (3, 4-一說基苯基）_丙烯酸正丙g旨，3-(3, 4-二經基苯 基）-丙烯酸異丙酯，3-(3, 4-二羥基苯基）_丙烯酸丁 醋，(E)- 3-(3, 4-二羥基苯基）小哌啶小基_丙烯酮，3-(3, 4- 一輕基本基）-1 -(4-乙基-派嗓-1_基）-丙稀g同，1 一 (4_曱苯基-哌唤-1-基）-3_(3, 4_二羥基苯基）-丙烯酮， (E)-3-{4-[3_(3，4_二經基苯基)-丙烯酸基]-派嗪_1_基} 丙腈，（E)· 3_(3, 4_二羥基苯基)小曱基_哌啶斗基） 哌嗪_1_基]_丙烯酮，（E)- 3_(3, 4_二羥基苯基>ι_(4_苯基 200812955 s 哌嗅小基卜丙烯酮（EH作乙酿』底嘻小基)4(3, 4_ 二羥基苯基）_丙烯酮，（E)_ 3_(3, 4_二羥基苯基）q_(4_ 苯乙基-旅嗪小基）-丙烯_，⑹_ Μ，1二羥基笨基) +嗎琳-4—基-丙烯酮，3_(3, 4_二羥基苯基)_N_(3_二甲 基氨基-丙基)-丙烯醯胺，（e)_3_(3,4_二羥基笨基）— 異丙基丙烯醯胺，或1 — (4_甲苯基_哌啶基）_3_(3, 4 _ 二羥基苯基）-丙烯酮。 13. 如申請專利範圍第10項所述之用途，其中，咖啡酸的 衍生物是： ’ 3-(3, 4-二备基苯基)_丙烯酸甲基酯，3_(3, 4_二羥基笨 基)-丙烯酸乙酯，3-(3, 4-二羥基苯基丙烯酸正丙 @曰’ 3-(3, 4-一备基苯基)-丙烯酸異丙g旨，1-(4-甲苯基 -哌嗪小基）各(3, 4_二羥基苯基）_丙稀酮，（E)— 3_(3, ‘ 二羥基苯基)-N-異丙基-丙烯醯胺，或1 一(4-甲笨基_派 °定小基）_3_(3, 4_二經基苯基）_丙烯酮。 14. 15. 16. 如申請專利範圍第10項所述之用途，其中，該咖啡酸、 或其如分子式（1)的衍生物是合成、或源自一自然資 源。 如申請專利範圍第10項所述之用途，其中，該對基力 克（Gleevec)之抗性是由Bcr_Abl變異所造成。 如申請專利範圍第10項所述之用途，其中，該抗性的 產生是源自於發生變異的·· K-562-R，32DclBc^AblT3151， Ba/F3 Bcr_Abl/T3151，Ba/F3 Bcr-Abl/E255K，Ba/F3 Bcr_Abl/H396P ，Ba/F3 Bcr-Abl/M351T ，Ba/F3 71 200812955 Bcr-Abl/F359V，Ba/F3 Bcr-Abl/E255V，Ba/F3 Bcr-Abl/F317L，Ba/F3 Bcr-Abl/H396R，Ba/F3 Bcr-Abl/M244V，Ba/F3 Bcr-Abl/Q252H，Ba/F3 Bcr_Abl/Y253F，或 Ba/F3 Bcr-Abl/Y253H 細胞株。 17·如申請專利範圍第1項所述之方法，其中，該抗性的 產生是源自於發生變異的：〖-562-以，320(：严1^113151， Ba/F3 Bcr-Abl/T3151 ^ Ba/F3 Bcr-Abl/E255K ^ Ba/F3 Bcr-Abl/H396P，Ba/F3 Bcr-Abl/M351T，Ba/F3 Bcr-Abl/F359V，Ba/F3 Bcr-Abl/E255V，Ba/F3 Bcr-Abl/F317L，Ba/F3 Bcr-Abl/H396R，Ba/F3 Bcr-Abl/M244V，Ba/F3 Bcr-Abl/Q252H，Ba/F3 Bcr_Abl/Y253F，或 Ba/F3 Bcr-Abl/Y253H 細胞株。 18· —種用於降低對基力克（Gleevec)之治療具抗性之細 胞的增殖的方法，包括將該細胞接觸一有效治療量之 一咖啡酸、或其如分子式（1)之一衍生物，

   分子式（1) 其中， X表示氧（Ο)、NH、或雜環基；以及 為氫（H) ’烧基，芳基，雜環基，或不存在； 。乂疋其所有立體異構物以及互變異構物的形式，以 及其所有比例的混合物，其藥理上可接受之鹽類，其 72 200812955 藥理上可接受之溶劑，其藥理上可接受之同質異像體 (polymorph)，或是其前驅藥。 19·如申請專利範圍第18項所述之方法，其中，該咖啡酸、 或其衍生物是： 3-(3, 4-二羥基苯基）-丙烯酸（咖啡酸），3-(3, 4-二羥 基苯基）-丙烯酸曱基酯，3-(3,4-二羥基苯基）-丙烯酸 乙酯，（Ε>θ-(3,4-二羥基苯基）-丙烯酸-2-硝基·乙酯， 3- (3, 4-二羥基苯基丙烯酸正丙酯，3-(3,4-二羥基苯 基）-丙細酸異丙醋，3-(3，4-二經基苯基）-丙稀酸丁 酉曰’ (E)- 3-(3, 4-二輕基苯基）-1一派口定小基_丙稀酮，3_(3, 4- 二每基苯基）· 1 一(4_乙基-π底嗪小基）-丙烯酮，1 — ⑷曱苯基派嗓小基）各(3, 4_二羥基苯基）-丙晞酮， (Ε)-3-{4_[3_(3，4-二經基苯基)_丙稀醢基]_派嗪+基} 丙腈，（Ε)- 3_(3, ‘二羥基苯基^小卜屮曱基_旅啶斗基） 派嗪小基]_丙烯酮，⑹_ 3_(3, 4_二羥基苯基Η_(4_苯基 派嗪_1_基）-丙烯酮，（Ε)小(4_乙醯底嗪基)_ 3_(3, 4_ 二羥基苯基）-丙烯酮，（Ε)_ 3-(3, 4-二羥基苯基）小(4_ 苯乙基』底嗪-1_基）_丙烯酮，⑹_ 3_(3, ‘二羥基苯基) -1-嗎啉-4—基-丙烯酮，3-(3, ‘二羥基苯基)-N_(3_二曱 基氨基-丙基)-丙烯醯胺，（E)_3_(3,4_二羥基苯基）_N_ 異丙基-丙烯醯胺，或丨—(‘甲苯基-哌啶―^基）_3_(3, 4 _ 一經基苯基）-丙烯酉同。 20·如申請專利範圍第18項所述之方法，其中，咖啡酸的 衍生物是： 73 200812955 3-(3, 4-二羥基苯基)-丙烯酸甲基酯，孓(3, ζμ二羥基苯 基)-丙烯酸乙酯，3-(3, 4-二羥基苯基)_丙烯酸正丙 酯’ 3-(3,4-二經基苯基)-丙烯酸異丙酯，1 一(4-曱苯基 辰嗓小基）_3-(3, 4-二輕基苯基）_丙浠酮，（E)_ 3-(3, 4-二羥基苯基)-N-異丙基-丙烯醯胺，或1 一(4-甲苯基-哌 口疋小基）各(3,4_二經基苯基）_丙稀酮。 21·如申請專利範圍第18項所述之方法，其中，該★啡酸、 或其如分子式（1)的衍生物是合成、或源自一自然資 源。 22·如申請專利範圍第18項所述之方法，其中，該對基力 克（Gleevec)之抗性是由Bcr-Abl變異所造成。 23.如申請專利範圍第18項所述之方法，其中，該抗性的 產生是源自於發生變異的：反-562-11，32〇0严1^113151， Ba/F3 Bcr_Abl/T3151，Ba/F3 Bcr_Abl/E255K，Ba/F3 Bcr-Abl/H396P ，Ba/F3 Bcr-Abl/M351T ，Ba/F3 Bcr-Abl/F359V ，Ba/F3 Bcr-Abl/E255V ，Ba/F3 Bcr-Abl/F317L ，Ba/F3 Bcr-Abl/H396R，Ba/F3 Bcr-Abl/M244V，Ba/F3 Bcr-Abl/Q252H，Ba/F3 Bcr-Abl/Y253F，或 Ba/F3 Bcr-Abl/Y253H 細胞株。 74