TW200819127A

TW200819127A - Novel receptor antagonists and their methods of use

Info

Publication number: TW200819127A
Application number: TW096124227A
Authority: TW
Inventors: Laura J Chambers; Robert Gleave; Stefan Senger; Daryl Simon Walter
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 2006-07-06
Filing date: 2007-07-04
Publication date: 2008-05-01
Also published as: BRPI0714062A2; SI2049478T1; US20080009541A1; WO2008003697A1; EA016076B1; UA100227C2; PT2049478E; PL2049478T3; US8048907B2; MA30607B1; PE20080997A1; EP2049478B1; AR061815A1; JP2009542595A; HK1127604A1; IL196181A0; KR101398264B1; MX2009000117A; DK2049478T3; AU2007271182B2

Description

200819127 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明是關於雜環醯胺衍生物，其具有調節P2X7受器的功能以及具有在P2X7受器拮抗ATP作用的能力 (P2X7受器拮抗劑）；彼等的製備過程；彼等之醫藥組成物；與使用這些化合物在治療之用途。【先前技術】 P2X7受器是一種配體-門控(ligand-gated)離子通道，其表現在造血系列的細胞中，例如巨喧細胞、微神經膠細胞(microglia)、胞大細胞(mast cells)與淋巴細胞(τ細胞與 B 細胞）（參考例如，Collo，等人 Neuropharmacology， Vol.36, pp 1277-1283 (1997))，而且可以被細胞外核苷酸活化，特別是腺甘三磷酸(ATP)。Ρ2Χ7受器的活化已知涉及頜骨鉅細胞(giant cell)中形成、去顆粒作用、細胞溶解細胞死亡、CD62L脫落、細胞增殖的調控、與前發炎組織細胞激素例如介白素-1β(ΙΙ^1β)(例如。Ferrari，等人，j. Immunol·，Vol.176, pp3877-3883 (2006))與 α 腫瘤壞死因子 (TNFa)(例如。Hide,lAJournalofNeurochemistry，

Vol.75, Pp965-972(2000))。P2X7受器也位於抗原呈獻細胞(antigen presenting cells)、角質細胞、肥腺腺細胞、紅企球、紅血球腫瘤細胞、單核球、纖維組織母細胞、骨魏細胞、神經元與腎系膜細胞。再者，P2X7受器在中樞與周邊神經系統藉由前突觸區表現，而且已知可以在神經膠 200819127 細胞中媒介麩胺酸的釋放。（Anderson，C·等人Drug. Dev. Res” V〇L50, page 92 (2000))。在免疫系統的關鍵細胞中P2X7受器的定著，與加上從這些細胞釋放重要的發炎調控器之能力，說明了 P2X7 5 受器在使用在大範圍的疾病的潛在角色，包括了疼痛與神經退變性疾病。最近體内臨床前試驗已知直接說明P2X7 受器與發炎及神經病理痛有關（Dell’Antonio # 乂 • Neurosci· Lett·, Vol.327, pp87-90 (2002)，· Chessell，IP·，等人，Pain，Vol.114, pp386-396 (2005)，Honore 等人·，/· ίο Pharmacol· Exp· Ther” ν〇1·319, pl376-1385 (2006))，同時體外實驗證據證明P2X7受器媒介微小膠細胞引起皮層神經元的死亡。（Skaper，S.D·，等人，Glia，Vol.54, p234-242 (2006))。除此之外，Ρ2Χ7受器的向上調控已經在阿茲海默症的基因轉殖老鼠中被觀察到位於β-類澱粉斑 15 (β-amyloid plaques)周圍。（Parvathenani，L·等人乂 Biol· • Chem·，ν〇1·278(15)，ppl3309- 13317 (2003))。【發明内容】本發明提供了可以調控Ρ2Χ7受器功能的化合物以 2〇及具有影響腺苷三磷酸於Ρ2Χ7受器上拮抗的能力 (Ρ2Χ7受器拮抗劑）。首先，式⑴化合物，或其醫藥上可接受的鹽類，提供如下： 6 25 200819127

(I) 5

10 15 其中： R代表Ci-6烧基、C2-6稀基、C2-6炔基、c3_6環炫基、 C^6環烧基甲基-或II比咬基甲基_，其任一選擇性地具有1、2或3個鹵素原子的取代基；或未取代的苯基或T基； R及R3分別代表氫原子、鹵素、c1-6烷基、芳甲基… C2·6烯基、C2_6块基或c3_6環烧基甲基-;以及任何上述之C!·6烷基、芳曱基·、c2-6烯基、c2 6炔基或 C%6環烧基曱基-係選擇性地被丨、2或3個鹵素原子取代；

Rj、R5以及R6分別代表氫、氟或甲基；以及 R R、R、R及R1各自代表氳、鹵素、氰基、cv6烧基' Cw烯基、c^6炔基、c3_6環烷基或苯基，以及任何上述之Cw烷基、c2-6烯基、C26炔基或C3 6 環烷基或苯基係選擇性地被丨、2或3個函素原子取代；或R1G與r1〗及其連接的碳原子形成一個苯環，其選擇性地被1、2或3個鹵素原子取代；倘若當R7及R11兩者選擇性地為氫或氟時，至少R8、 R9及R10其中之一是鹵素原子，或r8、r9及Rio係選自包含氫及CF；j所構成的群組，以及r8、R9及Rio其中 20 200819127 之一，但不超過一，是CF3。在一個實施例中，式（I)化合物，或其醫藥上可接受的鹽類，提供如下：

10

其中： R1代表Q_6烷基、C2_6烯基、C2_6炔基、C3_6環烷基或C3_6環烷基甲基，任何選擇性地被1、2或3個鹵素原子的取代；或未取代之苯基或苄基； 15

20 25 R2及R3分別代表氫原子、鹵素、Cw烷基、芳曱基、 C2-6婦基、〇2-6快基或C3-6環烧基甲基；以及任何上述之C〗-6烷基、芳曱基、c2_6烯基、c2_6炔基或 C3-6環烷基曱基得選擇性地被1、2或3個i素原子取代； R4、R5以及R6分別代表氫或氟；以及R7、R8、R9、R10 及Rn各自代表氫、lS素、氰基、Cu烷基、C2_6烯基、快基、C3-6環烧基或苯基；以及任何上述之 Cu烷基、C2_6烯基、C2_6炔基或C3_6環烷基或苯基上得選擇性地被1、2或3個鹵素原子的取代基者；倘若當R7及R11分別代表氫或氟時，R8、R9及R1G至 200819127 少其中之一是鹵素原子。在-個實施例中，式（1)化合物，或其醫藥的鹽類，提供如下：

10 R代表Cl-6烷基、烯基、Cw炔基、c3_6環烷基、 C3-6環烷基甲基_或。比啶基曱基_，其中任何選擇性地被1、2或3個鹵素原子取代；或未取代的苯基或苄基； R及R3分別代表氫、鹵素、Ci·6烷棊、芳甲基_、c^烯 15 基、C2·6炔基或^3-6環烷綦曱基以及任何上述之

Ci-6烷基、芳曱基_、c2 6烯基、c2 6炔基或環 _ 烷基曱基·係選擇性地被1、2或3個鹵素原子取代； R、R以及R6分別代表氩、氟或曱基；以及 2〇 ^、^、^、^。及…各自代表氫^素〜氰基〜〜烷基、Cw烯基、c：2·6炔基、C3_6環烷基或苯基，以及任何上述之Cm烷基、C2_6烯基、c2-6炔基或 C3·6環烷基或苯基係選擇性地被1、2或3個鹵素原子取代；或R1G與R11及其連接的碳原子形成一個苯環，其選擇性地被1、2或3個鹵素原子取代； 9 25 200819127 倘若當R7及R11兩者選擇性地為氫或氟時，至少r8、 R9及R1G其中之一是鹵素原子，或R8、R9及r10當中未多於一個是CF 3基團。

10 15

在此處「烷基」的字意（當作為一個基團或基團的一部分）代表直鏈或具分支之碳氫鏈且包含特定數量的碳原子數目。例如，Ck烧基代表直鏈或具有分支的破氫鏈，其包含至少一個及最多六個碳數。烷基之例包含但並未限制的有；曱基（Me)、乙基（Et)、正丙基、異丙基、正己基、異己基。在此處「烯基」的字意代表直鏈或分支之碳氫鏈包含有特定數量的碳原子數目，而當中至少有一個碳一碳鍵是雙鍵。烯基之例包含但並未限制的有乙烯基、丙烯基、正丁烯基、異丁浠基、正戊烯基及異戊烯基。 itti 〜丁必八衣且埏欢分叉之碳氫鏈包义有特定數量的碳原子數目’而當中至少有一個碳—碳鍵^ 簽鍵。炔基之例包含但並未限制的有乙炔基、丙炔基、] 快基、^絲、正賴基、異己炔基及正己炔基。「環烷基」除非另外說明，否則意為3至6環之閉性香環，例如環丙基、環丁基、環戊基或環己義「芳香烷基」這個字在此代表C6_1G單 x : 氣環，其上至少有-鱗是具㈣样。這些說有苯基及懿。 ’除非另外纟兄明，一個選自氣鹵素」在此描述為氣、溴或填的基團。 20 200819127 於本發明之特定實施射，r1代表〔Μ燒基、〇26 土 C2·6炔基、C3·6環烧基_或吡啶基甲基_，苴中任一選擇性地被1、9十2 A主β 八 5

10 15

2或3個鹵素原子取代；或未取代的 =基或下基。在一實施例中’R1代表無取代基之Cl_6烷土 2-6烯基C2-6块基、C3_6環燒基、0比0定基甲其_、 3群基。衫-個纽射，Rl代表絲代基之\·4 4、C3.5魏基"比咬基甲基_、苯基或节基。但在另一貫施例中，R1代表甲基或乙基。於本發明之特定實施例中n R3分別代表氫原 ^、鹵素、Ci-6烧基、节基、c26烯基、c26炔基或/、裱烷基曱基-;以及任何上述之C1_6烷基、苄基、3』基、C2·6炔基或c：3-6環烷基曱基_得選擇性地被丨、2 3個_素原子取代。 3 、在-實施例中，r^r3分別代表氯或齒素；無取代基之CV6烧基、节基、c2_6烯基、c2 6炔基烷基曱基-。 6衣卜巧貝汉民分別代表氫、氟或甲基。在更進一步的實施例中，R2及R3皆代表气。土在本發明-實施例中，,R4及R5分別代表氯原甲基，在另-實施例中，R6代表氫原子或曱基；在更進一步的實施例中，R4、R5及R6都代表為氫。於本發明之另一實施例中，"、^、^、^。*^^ 各自代表氫、鹵素、氰基、三氟曱基或無取代之C 基；或Rh R11㈣與相連接之石炭原子形成一個= 20 200819127 代基之苯環。在進一步的實施例中，R7、R8、R9、R1G及 R11各自代表氫、鹵素、氰基、曱基或或三氟甲基；或R1Q 及R11同時與相連接之碳原子而形成一個無取代基之苯環。但在其他實施例中，R7、R8、R9、R1G及R11各自代 5 表氫、氯、氟、溴、曱基或三氟甲基。在本發明一實施例中，提供式（I)化合物，或其醫藥上可接受的鹽類，其中： ^ R1 代表未取代之Cm烷基、C2-4烯基、C3_5環烷基、σ比咬基曱基-、苯基或节基； 10 R2及R3兩者皆代表氳； R4、R5及R6分另4代表氫原子或甲基； R7、R8、R9、R10及R11分別代表氳、氯、氟、溴、甲基或三氟曱基；倘若當R7及R11兩者係選自氳或氟時，至少R8、R9及 15 RiQ其中之一為鹵素原子，或R8、R9及R10選自包含氫以及三氟甲基所構成的群組以及R8、R9及R10其中之 B —，但不超過一個是CF3。根據發明中一些特殊的化合物，包含在後述的實例1-136 當中的化合物，或其醫藥上可接受的鹽類。 2〇 P2X7的拮抗劑也許對於預防、治療或改善特種疼痛狀態（例如神經性疼痛、慢性發炎疼痛以及内臟疼痛）、發炎以及神經退化，特別是阿茲海默症是有用的。P2X7 拮抗劑也對類風濕性關節炎以及腸發炎疾病的治療上是有效的治療藥劑。 12 200819127 在本發明中可調節P2X7受器功能以及具有影響 ATP於P2X7受器上拮抗效果的化合物（pm受器拮抗劑）可是競爭性括抗劑，反轉性促效劑，受器功能的負異位調節器或間接調節器。特定式（I)化合物在某些情況下會加入酸使其形成自身的鹽類。咸知式（1)化合物在醫療上的使用得以鹽類形式’該鹽類是藥理上可接受的。藥理上可接受性鹽類於

Berge，Bighley 及 Monkhouse，J· Pharm· Sci·，1977, 66, 1-19當中即有所描述。式（j)的鹼性化合物會與藥理上可接受的酸形成鹽類，這些酸包含無機酸及有機酸。前揭酸包含醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙烷磺酸、反丁烯二酸、葡萄糖酸、麵氨酸、氳溴酸、氫氯酸、窥基乙磺酸、乳酸、順丁烯二酸、蘋果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、黏酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸以及其他。醫藥上可接受的鹽類之例包含可從順丁烯二酸、反丁烯二酸、苯甲酸、抗壞血酸、雙羥萘酸、琥珀酸、氫氯酸、石;11酉文、雙甲缔基水揚酸、甲烧石黃酸、乙烧雙石黃酸、丙酸、酒石酸、水揚酸、檸檬酸、葡萄糖酸、天門冬氨酸、硬脂酸、棕櫚酸、衣康酸、甘醇酸、對胺基苯甲酸、麩氨酸、苯基續酸、環己基磺胺酸碟酸及硝酸等形成之鹽類。式（I)化合物也可以製傷成結晶或非結晶的型態，以及，如果可以結晶，可以選擇性地成為溶劑化合物，例如成為水合鹽。本發明在其範圍中包含有化學計量的溶劑化 13 200819127 合物（例如水合）以及包含可變量的溶劑的化合物（比如水）。式（I)化合物也可以存在有立體異構物的塑態（亦即非鏡像異構物及鏡像異構物）以及本發明擴及每個這些立體異構物以及其自身的混合物，包含内消旋化合物。利用

10 15

20 一些常見的方法可以將不同的立體異構物從另一個異構物中分離開，或利用立體專一性或不對稱合成而得到異構物。一些實例當中最終產物的立體異構物組成可以經由掌性高效能液相層析法HPLC(具體的方法（A)、（B)、（C)或 (D)描述在各個實例當中）來決定，而相對應之最終產物的立體專一性命名及結構亦加以標註，所描述之產物其鏡 1豕吳越值也都馒於川/0以上。絕對立體化學的標註則是依據已知的掌性起始物為起始。在實例中，最終產物的組成並未經㈣性HPIX來定性，最終錄的立體化學也未被指明。然而’產物混合物巾最主要的組成之掌併則將反映出起始物的樣貌’同時鏡像超越值也將依方法的使㈣及近似㈣她彳量衍生物實例的 ^ 實例存在）。因此只有-個掌性職的化田二用適當峡始物來製備另—個掌性型態化合物利擇是，如果使肋舰化合物作為起始物種廷消旋產物，且透過-㈣方法可以分離得=產生内物。本發㈣樣可以擴及任何其二像異構合物。又異構體或其混 (I)以本發明也包含有同位素標記化合物，其與在式 14 200819127 降引述者相同，除了一或多個原子被另一原子置換，後I 所具有的原子量或質量數與從自然界中常發現的原子量或質量數不相同。同位素的樣品可與發明的化合物相互結合，包含氫、碳、氮、氧、磷、氟、碘以及氯的同位素， 5 如 3H、11C、14C、18F、1231 及 1251。本發明的化合物及其醫藥上可接受的鹽類的化合物’包含上述的同位素及/或其他原子的同位素都涵蓋在鲁本發明之範圍内。本發明的同位素標記化合物，例如3H、 14C之併入，在藥物上及/或受質組織分布檢測是有用 10 的。氚化，亦即3H及碳-14，亦即i4C，同位素特別適合，因為它們容易製備及偵測。同位素llc及8F特別適合使用在PET (正子斷層掃瞄）中，同位素125/特別適合使用在SPECT (單光子放射電腦斷層攝影）中二 PET及SPECT使用在腦部造影中。此外，以較重的同 15 位素替代，如氘，亦即2H，對於醫藥治療上也具有能^ _ 代謝過程中保有較佳穩定性的優點’舉例來說能增加在生物體内的半生期或降低所需要的劑量，以及，因此，也特別適合於某些狀況中。式（I)的同位素標記化合物以及Z 發明所述也能藉由透露於圖中及/或下述實例中的程序而 2〇 *遍地被製備，只魏用即得同位素標示試劑來取代非同位素標記試劑即可。此外’式⑴化合物也可以被製造成「前驅越 (prodmgs)」。依照此處所用，式（1)化合物的「前驅: 種具有功能性化合物的衍生物，其在給病患服用^ 15 200819127 敢終式（i)化合物會在生物體内被釋出。投與式（I)化合物作為前驅藥得之熟習技藝的工匠般可以做出以下一或多種··（a)修飾生物體内化合物的啟動；（b)修飾化合物在生物體内作用之持續期；（c)修飾化合物在生物體内 5 時的轉移或分布；W)修飾化合物在生物體内時的溶解度；（e)克服或克服一個副作用或其他此化合物所遇的困難。前驅藥在製備時常見的功能性衍生物包含在生物體内 Φ %，被化學性或酵素性切除的化合物的修飾。這些修飾反 1〇應已被在其所屬領域之熟習技術者所熟知。也金韵的掣備

式（I)化合物，其中可變異處已如上定義及其溶船b合射藉纟町敘叙枝來加以進一步這項發明的面向。 ’其中可變異處已如上定義，其鹽 i由以下敘述之方法來加以製備，構成

式根撐I &… ⑷式 (見圖υ的偶合反應， R6、R7、R8、R9、Rl〇ARn 及（3)選擇性的被保護，· 16 200819127 0>)式（4)雙羰基化合物、式（5)異腈化合物以及式（6) 的胺類化合物置於適當的溶劑，如甲醇以及在適當的溫度，如100°C (見圖2)的反應，其中R1、R2、 R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10 及 R11 已在上述加以定義。R6 = Η或曱基。化合物（4)、(5)及（6)選擇性地被保護。這類型的製程已在先前的文獻中有描述 (例如 Η· Tye，and Μ· Whittaker, 6?叹·所omo/· CTiem·， 2004，2，813-815 ; G. C· Β· Harriman WO 9900362 Al)； (c) 被保護的式（I)化合物之去保護。保護基及其去保護的方法之實例可見T· w. Greene及R G. M· Wuts 所著作之「Protective Groups in Organic Synthesis」（J· Wiley and Sons，3rd Ed· 1999);或 (d) 式（I)化合物互換至其他式化合物。傳統互換程序的實例包含差向立體異構化、氧化、還原、烷基化、芳香環取代、親核性取代、醯胺偶合及酯類水解。流程1.

17 200819127 式（2)的酸與式（3)的胺進行偶合反應通常包括活化劑的使用，如—甲基胺丙基)-N’-乙基幾二亞胺氫氯酸鹽或以聚合物為載體的羰基亞胺、1-羥基苯并三唑 (HOBt)或1·羥基-7-偶氮苯並三氮唑（HOAt)，以及選 5 擇適當的驗，如第 > 炫基胺（例如一異丙基乙基胺、乙基嗎啉、三乙胺）或17比啶等，在適合的溶劑例如DMF 及/或二氯甲烷以及適合的溫度如介在0。〇到室溫之間。 p 另一種將（2)與（3)偶合在一起的方法還可利用0-(7- 偶氮苯并三氣11 坐-1-基)-N，N，N，N -四曱基脈六亂碟酸g旨與 10 其一同進行反應而達成，以及利用適當的第三烷基胺如，二異丙基乙基胺於適當的溶劑，如二曱基曱醯胺中於適當的溫度，如室溫下反應來完成。另一種選擇，式（2)化合物可以將其變為活化衍生物（例如氯化醯，混合酸酐，活性酯（例如Ο-醯化異尿素）），且在該狀態下程序（a) 15 通常包括所述之活化衍生物與胺一起反應（Ogliaruso. Μ. A. ； Wolfe5 J. F. in The Chemistry of Functional Groups {Ed. Pataiy S) Suppl. B: The Chemistry of Acid Derivatives, Pt. 1 (John Wiley and Sons，1979)，pp442-8 ; Beckwith，A· L· J· in The Chemistry of Functional Groups {Ed. Patai} S) Suppl. B: The Chemistry of Amides (Ed. Zabricky, J.)(John Wiley and Sons，1970)，pp 73 ff)。 18 20 200819127 流程2.

10

典型代表性的式（2)化合物的製備方法如 3-9所示：以下流程流程3.

15

20 其中“、^、^^、“及以已在上述加以定義。^^ Η或F，以及Ρ1及Ρ2代表適當的保護基如Ci 6烷基或 P1及P2為Η 〇在流程3所示轉形（transformation)的類似下述之方法已在先前的化學文獻中被描述（如G. Verardo，P. Geatti， E. Pol, and A. G Giumanini, Can. J. Chem.y 80: 779-788(2002) ; T· Godet，等人，（2004)， 6(19)，3281-3284)。 19 25 200819127 步驟w通常包切⑺舰，如氫氧化鈉在適當的溶劑，如甲醇於適當的溫度，如Gt:下的起始處理，之後則是逛雜統’其典型地包含依序與賴或酮類進行反應，以及酸’如醋酸’以及加人還原·，如氫蝴化納

在適當的溫度，如介在（TC到室溫之間進行反應。步驟⑼會自發性地發生’其中（9)直接如所描述從反應⑺直接分離，不過通常化合物⑻會加熱在適當的溫度’如在11(rc，於適當的溶劑，如甲苯中加熱來產生化合物（9)。、去保護步驟（出）通常包括標準程序來將幾酸醋轉換為酸基’如使㈣當的氫氧化鹽（如氫氧化納）於適當的 /合如曱醇在適當的溫度，如介在代至室溫間反應。

其中R、R、R3、R4及R5已在上述加以定義。r6 = H或F ’ L為適當的鹵素（如氯或漠）或蝴酸或蝴酸酯，且P3代表適當的保護基如CK6烷基。在流程4所示轉形的類似下述之方法已在先前的化學文獻中被描述（如T· Itoh，等人，似μ〜办⑽·，59 (2003), 3527-3536 ； Τ. Simandan and Μ. Β· Smith, Synthetic 200819127

Communications, 26(9), 1827-1838 (1996)) 〇 5 10 步驟（0通常包括將（10)與鹼，如氫氧化鈉及烷化試劑，如鹵烷化合物於適當的溶劑，如四氫呋喃於適當的溫度，如介在0¾到室溫之間進行反應，或選擇另=二方法包括（10)與鹵化芳香羥基或芳香羥基或烯基棚酸 (或醋）於騎的溶劑，如甲苯於存在有適#的催化劑，如二^二苄叉丙 _)二鈀(〇)與 XantphosTM( 9,9_二甲基-4,5- 基膦）氧雜S〇之混合物且於適當的驗，如礙酸銘於適*的溫度，如12(rc下進行反應。步驟（11)通常包含一個標準的程序來將羧酸 A支11，例如使用適當的氫氧化鹽（如氫氧化鈉）於 L田=/备片丨j，如甲醇在適當的溫度，如介在到室温之，進仃反應’或使用適當的酸（如三氟醋酸）於適當的溶 ^如t曱燒於適當的溫度，如介在0°c到室溫之間進 15

20

25 已在上述加以定義。R6 21 200819127 在、流程5所示轉形的類似下述之方法已在先前的化學文獻中被描述（如s Aoki，等人，Γ价60 (2004) 7053-7059)。步驟（丨）一般包含加熱（12)於壓力爸中或於密封試官内承裝適當的溶劑，如水，以及於適當的溫度，如 100- 140°C配合加裝或不加裝微波放射器中反應。

10 15

20 25 流程6.

其中R、R及R5已在上述加以定義。r2代表的群組已於上方定義為氫或鹵素以外者，R6 =氫或氟，丄1為適當的離去基，如i素（例如氯或溴），以及P4及p5代表適當的保護基，如分別是Cw烷基及Cl_6烷氧羰基。在流私6所示轉形的類似下述之方法已在先前的化學文獻中被描述（如A.Bassoli，等人, c/2謂， 2005, 2518-2525)。 ’ 步驟（i) 一瓜包含將（13)的保護反應，利用標準流 22 200819127 程如與烷氧羰基酸酐，如第三丁氧基曱酸酐，以及鹼，如三乙胺，以及催化劑，如4-曱基胺基吡啶於適當的溶劑，如二氯甲烷於適當的溫度，如室溫下反應。 5

10 15

20 步驟（ii) 一般包括將（14)與鹼進行反應，如雙(三曱基石夕烧）胺鐘鹽，以及一個烧化試劑，如_烧化合物於適當的溶劑，如四氫呋喃於適當的溫度，如_78它至室溫下反應。步驟（iii) 一般包括將（15)的以標準流程進行去保護步驟，倘P5為第三丁氧基羰基基團，則以氯化氫於適當的溶劑，如二噚烷，並於適當的溫度，如室溫下反應。步驟（iv) —般包含已描述於上面流程4中的方法。

具中反、112、113、]14及]^已在上述加以定義。1^ Η或F〇P5、p6及p7代表為適當的保護基，例如，p 乂為個Ci_6燒氧数基，且p6及p7可兔 (P6 芬 ^ Cl-6 ^ 及P不需相同）。[為一個適當的離去素（如氯或溴）。 ^ 步驟（i) 一般包含將（17)與適當的鹼，如六甲基二 23 25 200819127 矽烷醯胺鉀鹽，以及烷化試劑，如鹵烷於適當的溶劑，如四氫呋喃於適當的溫度，如介在_78。〇與室溫之間下進行反應。步驟（ii) 一般包括一個將酯類轉變為酸的標準流程，例如使用適當的酸（如三氟醋酸）於適當的溶劑，如一氯甲烧於適當的溫度，如室溫下進行反應。

15 20 步驟(iii)

ΟΡδ 為。 (23) 步驟ίν) (24} 見流程4

其中R1、R2、R3、R4及R5已在上述加以定義。R6 H或bP8、P9及pl〇代表為適當的保護基如在一及 P的貫例裡為CV6烧基（P8及P9不需要一樣），以及pi〇裡為-個由適當的非環狀或環__触絲的基團。在流程8的步驟(i)_(iii)所示轉形的類似下述之方法已在先前的化學文獻中被描述（如了 Wehbe，等人 25 200819127

Tetrahedronjaw/weir;;·, 14(2003)，1123-1126)。步驟（i) 一般包含將（19)與適當的嗣類，如 (7兄2足57?)-2•輕基-蔽烧-3-酮’以及路易士酸，如三敦化硼乙醚溶液於適當的溶劑下，如甲苯在適當的溫度下，如 5 ll〇°C下進行反應。步驟（ii) 一般包含將（20)與格里納試劑，如甲基溴鎂’以及鹼，如1，8-二氮雜雙環[5·4·0]11碳-7-烯中進行反 φ 應’之後接著在與未飽和酯類（21)，如丁烯酸乙酯於適當的溶劑，如四氫呋喃在適當的溫度，如-3〇。〇下進行反 10 應。步驟（iii) 一般包含將一個將亞胺轉換成醯胺的標準步驟’例如與適當的酸（如15%檸檬酸水溶液）於適當的溶劑下’如四氫呋喃於適當的溫度，如室溫下進行反應。步驟（IV) —般包含加熱（23)於適當的溶劑中，如 15 甲苯’於適當的溫度，如介在室溫及120°C之間反應。 φ 步驟（v) 一般包含已描述於前述流程4中的程序。流程9.

25 200819127 其中R1、！^、：^5及R6已在上述加個別代表的群組已於上方定義為函素以外者我。li二為適當的離去基，如鹵素（例如氯或漠）、及PU ^ 適當的保護基。代表為化般包含將（25)與驗，如氫氧化鈉以及燒化相，如自烧於適當的溶劑，如二甲基甲_二溫度，如介在〇。〇至室溫之間進行反應。田勺步驟（ii) 一般包含將（26)鹼，如二里 10 15 及烷化試劑，如鹵烷於適當的溶劑’如四氫呋4在U鹽溫度，如-78〇C至室溫下進行反應。田的步驟⑽-般包含將（27)鹼，如二異丙鹽及烷化試劑，如!i烷於適當的溶劑，如四氣的溫度，如-78°C至室溫下進行反應。工在適當步驟（iv) —般包含一個去保護而得到醇類的椁驟。舉例而言，若P11為三苯基曱基，則將（28) ^適二的酸，如Amberlyst 15®於適當的溶劑，如甲醇二的溫度，如室溫下進行反應。 ^ ^ 步驟（v) —般包含一個將醇類氧化為相對應的之標準步驟。如將醇（29)與氧化劑，如混合有亞鈉，TEMPO (2,2,6,6-四曱基-1-氧化六輕吡啶自由展及次氯酸鈉溶液，於適當的溶劑，如混合有磷酸單細X d ) 緩衝水溶液與乙腈之混合液，於適當的溫度，如40¾下進_ 反應。當所製備的化合物其分別R2 = Η或R3 == JJ時，彳固另】 26 20 200819127 地’步驟（u)或步驟（m)可以省略。通用式^、^、^，、⑺乂⑽、^)、^、 (17)、（^)、（21)及（25)化合物，其典型的來源包含由商業購得或可由已描述於-般化學文獻中（或使用類似的方法）的方法，透過熟習技藝者操作加以製備得到。而/、/、相關的藥理上可接受性鹽類則可利用適當的酸或酸的衍生物與之反應後而製備得到。臨床指示相^如同本發明的化合物調節Ρ2χ7受器的功能且在 P2X7文态上能夠拮抗ATP的效能，彼等化合物對於疼痛的治療很有用，包含了劇烈的疼痛、慢性的疼痛、慢性關節的疼痛、骨骼肌肉系統的疼痛、神經病變性疼痛、發炎疼痛、内臟疼痛、癌症伴隨的疼痛、偏頭痛、壓力性頭痛與叢集性頭痛、功能性腸病伴隨的疼痛、下背痛與脖子痛、扭傷與拉傷伴隨的疼痛、交感維持性疼痛、肌炎、流行性感W或其他病毒感染例如普通感冒引起的疼痛、風濕熱引起的疼痛、心肌衰弱局部缺血引起的疼痛、手術後疼痛、癌症化學治療、頭痛、牙齒痛、月經困難。恢性關節疼痛情況包含了風濕性關節炎、骨關節炎、風濕性脊椎炎、痛風、少年關節炎。功能性腸病伴隨的疼痛包含了非潰瘍性的上腹痛、彝心源性胸痛、激躁性結腸症。神經病變性疼痛包含了糖尿病腎病變、坐骨神經痛、 27 200819127 慢性非特異性背痛、三叉神經痛、多發性硬化症疼痛、纖維肌痛、愛滋病病毒相關的神經病變性疼痛、帶狀皰疹後遺神經痛、三叉神經痛、來自於物理性的外傷、截肢、截肢後幻肢痛、脊鰱手術、癌症、毒素或慢性發炎狀況。此 5 外神經病變性疼痛包含正常的非疼痛知覺伴隨的疼痛，例如手腳發麻(感覺異常與不悅異常感）、對觸碰很敏感（感覺過敏）、無害的刺激引起的疼痛感覺(動力的、靜電的、熱 _ 的或冷的異常疼痛）、有害的刺激引起的感覺（熱的、冷的、機械性的痛覺過敏）、移除刺激後持續的疼痛感覺(痛覺過 10 敏）或是在選擇性感覺途徑的缺失或不足(痛覺低下現象）其他的情況可以潛在地使用目前的發明來治療，包括發燒、發炎、免疫性疾病、血小板功能異常疾病（例如：血管狹窄疾病），陽痿或勃起功能障礙；骨頭疾病特別是骨代謝異常或腐蝕；非類固醇止痛消炎藥(NSAID’s)與環 15 氧化酶2抑制劑(COX-2)造成的血液動力學副作用、心血 _ ί的疾病’神經退化性疾病與神經退化、創傷之後的神經退化、耳鳴、依據導引依賴試劑，例如鵪片類（例如硫酸嗎啡）、中樞神經系統鎮靜劑(例如乙醇）、神經系統成癮性藥物(例如古柯鹼)與菸鹼；第一型糖尿病併發症、腎衰竭、肝衰竭（例如肝炎、肝硬化）、胃腸功能障礙(例如腹瀉）、大腸癌、膀胱過度活動症與急迫性失禁。憂鬱症與酒精中毒可以潛在地使用本發明來治療。發炎與伴隨著發炎的情況，包括皮膚的狀況(例如曬傷皮膚、燙傷、濕疹、皮膚炎、過敏性皮膚炎、牛皮癖）、 28 200819127 目艮疾例如青光眼、視網膜炎、視網膜病變

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眼組織損傷(例如結膜炎)、肺部發炎(例如氣候群、二龙、肺祕、過敏性鼻炎、新生料吸箸迫症呼嗯、、/養解症、農民肺、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、、過度敏感反應）；胃腸功能紊亂(例如口瘡、克隆氏症、異位性胃炎、varialoforme胃炎、潰瘍性的結腸炎、區=性迴腸炎、激躁性結腸症、發炎性腸道疾病、腸=道逆、疾病）’益官移植與其他伴隨發炎成分的情況，例如血管疾病、偏頭痛、結節性動脈周圍炎、再生不良性貧血、何傑金病、硬皮症、重肌無力症、多發性硬化症、腎病綜 &徵貝六氏症候群、會銀炎、心肌哀弱造成的局部缺血、發熱、系統性紅斑狼瘡、多發性肌炎、腱炎、滑液囊炎、修格蘭氏症。免疫疾病包括自體免疫疾病、免疫缺陷疾病或器管移植。时夕骨頭疾病的特點是異常的骨代謝或再吸收，包括了骨質疏鬆(特別是停經後骨質疏鬆）、高血舞症、副甲狀腺亢進、變形性骨炎、骨溶解、惡性腫瘤的高血鈣症伴隨或未伴隨著骨頭轉移、類風濕性關節炎、牙周炎、骨性關節炎、骨痛、骨量減少、癌症惡病質、結石症、結石（特別是尿路結石）、貫狀癌、痛風、僅直性脊椎炎、肌鍵炎、滑囊炎。 ~ 心血管疾病包含有高血壓、心肌衰弱造成的局部缺血；動脈粥狀硬化；功能性或器管性下肢靜脈功能不全； 29 20 200819127 靜脈病瘤療法；癌恭·访士降(例如敗也性休克）。〜克況伴隨著動脈血壓顯著下年癡^ 病包含有特殊退化的療呆（包括老蹈二、二森氏1 癡呆、广滋，默症、匹克病、杭丁頓舞 (ALS)、運動神細正^庫賈氏病、肌萎縮财硬化症死性癡呆V知^ ’血管型失智症（包括多發性梗感染與相關的位性病變；創傷； 10 15 :年毒二二=生的輕度錄知能力受損，特別是與年齡相關生的ί J對於神經保護作用與外傷後之神經再切介椎或類似的傷害是有效用的。谓胞白$3==^性細胞成長或轉移、與肌胚細變、^紅型^尿病的複雜性包含了糖尿病的微血管病 Ϊ光眼、二=病變、糖尿病視網臈病變、黃斑點退化、病與類肉瘤线矣群、再生不良性貧血、葡萄膜炎、川崎系膜炎、腎絲球腎炎、特別_ ’、'生陡月小球腎炎與腎炎症候群。广广it了解治療之參考’包含已建立症狀的治療盘預防疾病的治療這兩者，除非有明確的相反說明。、預防 30 20 200819127 根據本發明的更進一步方面，我們因此提供式⑴化合物或其醫藥上可接受的鹽類給人類使用或獸醫用藥。根據本發明物的另一方面，我們提供式⑴化合物或其醫樂上可接受的鹽類給藉由P2X7受器媒介的狀況治療使 5 用。根據本發明的更進一步方面，我們提供一個人類或動物實驗對象患有因為P2X7受器媒介的情況的治療方法， , 此方法包含投與所述的受試者式⑴化合物的有效用量或其醫藥上可接受的鹽類。 0 根據本發明的更進一步方面，我們提供一個人類或動物貫驗對象患有疼痛、發炎、神經退化性疾病的治療方法，此方法包含投與所述的受試者式⑴化合物的有致用量或其醫藥上可接受的鹽類。复根據本發明的更進一步方面，我們提供一個人麵或動 5 物實驗對象患有發炎疼痛、神經病變性疼痛或内臟疼痛的 . 治療方法，此方法包含投與所述的受試者式⑴化合物的有效用量或其醫藥上可接受的鹽類。根據本發明的更進一步方面，我們提供一個處理實驗對象的方法，例如人類實驗對象，其患有阿滋海默症，'這 0 方法包含投與所述的受試者式⑴化合物的有效用量或= 醫藥上可接受的鹽類。 ~ 根據本發明的另一個方面，我們提供式⑴化合物或其醫藥上可接受的鹽類的用途，其係為供製造藥劑用於治ς 由Ρ2Χ7受器媒介之病症上。 °、 200819127 根據本發明的另一方面，我們提供式⑴化合物或其醫藥上可接受的鹽類的用途，其係為供製造藥劑用於治療或避免疼痛、發炎或神經退化性疾病。根據本發明的另一個方面，我們提供式⑴化合物或其 5

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醫藥上可接受的鹽類的用途，其係為供製造藥劑用於治療或避免發炎疼痛、神經病難疼痛或内臟疼痛。在本發明的其中一個方面，我們提供式⑴化合物或其醫藥上可接受的__途，其係為供製造藥_於治療或避免阿滋海默症。 #為了人類與其他哺乳動物來使用式(1)的化合物或其 ^藥上可接文的鹽類’其通常依照標準實施而配製成醫藥 =物。因此本發_另—個方面，有提供醫藥組成物， ::式？化合物或其醫藥上可接受的鹽類可以給人類與，^ w⑽為治療使用，其 ς施而配製成醫藥組成物。本發明也提供了—個 = 式(1)化合物或其醫藥上可接受的鹽類任愚的备樂上可接受的载體。、一本發㈣醫藥㈣物可適合地在職溫度 :下籍由添加混合物的方式來製備，通常是適 D服液調劑、藥粉、團粒了以疋梁片、膠囊、或加麵袋或懸浮液或二：/二縮藥粉、血管注射劑通常比較被缺。紅_料。"服式投與的成分 20 200819127 口服投與的藥片與膠囊以單位劑量的形式，而且可包含慣用的賦形劑，例如接合劑、注入器、壓片濶滑刊、崩解劑與可接受的潤賴。藥片可依據已知的正常製&常規的方法來包衣。 ^ 5 口服液體的製備可以液體或含油的懸浮液、、容、夜、乳狀液、糖漿或萬用藥的形式或以可在使用前重新用水復原的乾燥產物或其他適合的媒介的形式。這些液體的製備或 • ^含有慣用的添加劑’例如懸浮劑、乳化劑、非液體媒介 (得包含食用油），防腐劑與慣用的調味料或著色劑。 1〇、$ I非經腸胃的投與，流體單位劑量形式依照發明物或其醫藥上可接受的鹽類與滅菌的媒介的化合物的使用製備。化合物，依照媒介與濃度來使用，可以懸浮或是溶解在媒介中。在製備溶液時，化合物可以溶解做為注射之肖i而且在填充人適合的小_瓶或錢前過濾消毒，並 15 且密封。益處是，佐劑例如局部麻醉劑、防腐劑、緩衝, 馨會溶解在媒介中。為了增加穩定性，化合物可以在填充1 適合的小玻璃瓶之後冰凍與使用真空除去水分。非經腸田的懸浮液的備製大體上是相同的，除了化合物懸浮^媒二中而不是溶解，而且不能使用過濾來消劑。化合物可以^ 2〇 1浮在媒介之前使用環氧乙烧消毒。益處是，界面活性劑或潤溼劑包含在化合物中以促進其均一的分布。組成物得包含從〇.1%至99%以重量計之活性物質，較合適的是10%至60%以重量計，視投與之方法而定、。用來/σ療以上所提到的疾病的化合物劑量將會依照 33 200819127 疾病的嚴重性、患病者的體重與其他相似的因子而變動。然而一般指示適合的劑量或許是0.05至1000毫克，更合適的是0·05至200毫克，例如20至40毫克；而且該單位劑量每日投與會更好，雖然可能需要每天超過一次；且 5 該治療可能延展到數週或數月。本說明書引用之所有的出版物，包含有但不侷限在專利與專利的應用是以參考資料形式於此結合，就如同每個 _ 個別的出版物被特別且個別地指示其係藉由於此參考資料之合併如完整之引用。 ίο 下列的說明與實例說明所發明之化合物的製備，但非用來限制。【實施方式】實例： 15 一般的方法（a)-(d)，以及列在上述流程1-9中的合成方法，為製備發明中的化合物，將用以下實例進行進一 _ 步的舉例說明。實例1 N-[(2-氯-4氟苯基）甲基]-5-侧氧-1-(苯基曱基)- 20 脯氨醯胺（E1)

25 將5-侧氧-1-(苯基曱基)-脯氨酸（0.176克，0.80毫 34 200819127 5

10 莫耳’製備方法描述於下方）溶解於二氯甲炫（3 冲，並於無水氬氣下將其加入^羥基苯并三唑=) 克’0.88毫莫耳）’三乙胺（〇113毫升，〇 8ι毫莫耳19 [(2_氯冰氟苯基）甲基]胺（0.134克，0.84毫莫耳)、力， N(3 一丙基)_N’_乙基幾二亞胺氫氯酸鹽（ ii〇 88 *莫耳）。將混合物於室訂獅至隔夜。將、、曰鋪釋後依序以2M鹽酸水溶液及飽和二納水溶液清洗。將麵層灭之後㈣濃縮可得粗絲。將粗產物以質量導引自動#化進⑽化後可得白色隨之二基]-5-側氧-i•(苯基甲基)_脯氨醯胺⑷〗，]+ = 361.2，滞留時間=2.55分鐘。 5侧氧1 (苯基甲基)-脯氨酸可以利用下列方法製備： (·)將甲基L-麵胺酸氫氯酸鹽（〇·5〇〇克，2·37毫莫於0 C下洛於甲醇。。毫升）中。將混合物與虱氧化鈉⑽99 Α，2·49毫莫耳）進行處理，接著力口入醋酸古（(U36亳升，2·37毫莫耳）以及苯甲酸 0.361笔升，3.55毫莫耳）。之後於〇〇c下攪拌1〇分鐘，將氫爛化鈉（〇·_克，2·37毫莫耳)加入，使其回溫至室溫下攙拌至隔夜。將混合物再次冷卻至〇C後再加入另一份量的氫硼化鈉（〇〇44克，ι ΐ8毫莫耳）。接著將混合物再次回到室溫後攪拌隔夜。將 200819127 甲醇抽乾後所得到的剩餘物以乙酸乙酯溶解後過濾。將濾液以飽和碳酸氫鈉水溶液清洗，之後在旋轉狀態下以兩相分離器過濾，濃縮後可得無色澄清油狀物（0.56克）。將油狀物溶解於甲醇中，並利用密封 5 試管於微波反應器下加熱至120°C反應10分鐘，接著於140°C下反應15分鐘（利用LC/MS分析可知用此方式來加熱並不會讓混合物的組成發生改變）。 ❿ 接著將溶劑濃縮之後所得之剩餘物以快速矽膠管柱層析法進行純化，以15-20〇/〇之乙酸乙酯/正己烷溶 1〇液沖提可得純曱基5-側氧_1-(苯基甲基）_脯氨酯 (0·212克）之澄清油狀產物。 LC/MS[M+H]+ = 234,滯留時間=21S 分鐘。 ⑻曱基5,氧小(苯基甲基)-脯氨酯（0.212克，〇·9ΐ毫 15 莫耳）溶解於水〇毫升）以及曱醇（5毫升）中， _ ^後以2M飽和氫氧化鈉水溶液（〇 682毫升，136 毫莫耳）進行處理。將混合物於室溫下攪拌一整晚，之後以二氯甲燒清洗。將水層抽乾後，剩餘物以過量 ^1Μ鹽酸乙醚（〜5毫升）溶液處理。將混合物 20 人抽乾’並將剩餘物在二氯甲訂磨碎。將固體物並合併所有的二氯甲料取層，之後將其抽乾 =可侍5-側氧笨基甲基)_脯氨酸（〇182克）之汽色油狀產物’此產物將不純化而直接使用於一牛驟。，乂 36 200819127 LC/MS [M+Hf = 220，滯留時間==1·72 分鐘。實例2 #-[(2_氯_4_氟苯基）曱基]_1_(卜甲基乙基)-5-侧氧 -脯氨醯胺（E2)

10 將H1·甲基乙基)-5-侧氧-脯氨酸（0.060克，0.35毫莫耳，製備方法描述於下方）溶解於二氯甲烷（3毫升）及二曱基甲醯胺（1毫升）中，之後於無水氬氣下將其加入1-羥基苯并三唑（0.052克，〇·39毫莫耳），[(2_氯-4-氟苯基）甲基]胺（0.061克，〇·39毫莫耳）以及N-(3-二 15 甲基胺丙基)_N，-乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（〇·〇74克，0.39 毫莫耳）。於室溫下將反應攪拌至隔夜。將混合物以二氯 • 甲烷稀釋後依序以2M鹽酸水溶液及飽和碳酸氫鈉水溶液清洗。將有機層利用兩相分離裝置過濾後減壓濃縮可得粗產物。將粗產物以質量導引自動化HPLC裝置純化可 2〇得白色固體之氯-4-氟苯基）曱基]-1-(1-甲基乙基側氧-脯氨醯胺（ 0.032克）。LC/MS [M+H]+ = 313·1，滯留時間=2·26分鐘。上述中所使用到的1-(1-甲基乙基>5-侧氧-脯氨酸依照下述方法進行製備而得到·· 25 ⑴將二甲基L·麩胺酸氫氯酸鹽（0.500克，2.37毫莫 200819127 耳）溶於甲醇(4毫升)及四氫咬喃（8毫升）中，之後將混合物以磨碎之氯氧化莫耳）反應ίο分鐘。於兄丄#毛 .9,7 於坆個階段加入醋酸（0.130毫升，2.37以耳）及丙_ (() 26

耳）-起混合細= 3·55 U 分鐘後，將反應混合物；4二升）中加入。擾拌10 化鈉（漏克，2ΓΛ= c下後加入片狀氯蝴溫下並攪拌至隔夜。室 10 15 20 中並過渡之。將渡液以飽和碳酸：兩相分離器零下進行分離，減後可仔無色油狀產物（G.2H克）。將此油狀 =以快速赠管㈣料純化射得純的二甲基 -(1-曱基乙基)麵胺酸酿（〇2〇〇克）。 (11)將一甲基Ν:(1_甲基乙基)楚胺酸醋（。·綱克）溶解於甲醇中，並封I於壓力試管中以微波反應器加熱至 140C下反應2G分鐘。彻薄膜層析法追縱反應後顯示起始物依㈣在，因此· 雜將溶液移除後置換成曱苯。將混合物加熱至迴流狀態反應〜3小，後再次減壓濃縮可得f基〗_(1•甲基乙基)：氧, 風酸醋（0·152克）之淡黃色油狀物，此產物無需純化而直接用於下—步驟中。㈣將曱基1_(1_曱基乙基)-5_側氧脯氨酸酯⑼·ΐ52克， 38 2 曙 19127 0.82耄莫耳）溶升）之混合溶液中，=(3毫升）及甲醇（0.5毫 (0.682毫升，丨％ ^後加入2M氫氧化鈉水溶液室溫下攪拌約4】日=莫耳）進行反應。將混合物於層以減壓濃縮法移=二氯甲烷溶液清洗。將水醚溶液（〜5毫升）、：剩餘物以過量1Μ鹽酸乙氣曱燒下择边毛π處理。將混合物再次抽乾後於二抽乾可得1(1:甲义二丟棄’合併二氯甲烷濾液後 10 之黃色油狀產物4置酸⑽60克） 15 實例胺[((Ε3: 4氣本基)甲基]小乙基_5，側氧-脯氨酿

α 望且將I基1_乙基侧氧·贿氨酸酿（0.135克，079毫莫耳，製備方法描述於下方) 克)7 : 2M氮氧:納水溶液(。.592毫升，ι ΐ8㈣應。將=合物於室溫下授拌〜4小時後減壓濃縮所得到的之剩餘物以過量1M氯化氫之乙_溶液（〜5毫升）反應1〇分鐘。將混合物再次抽乾後，剩餘物以二氯甲烧（4 毫升）及二甲基f_(2亳升）溶解之過二( 去固體部分。將所產生之溶液轉移到反應試管中’加;^ 經基本开二唾（0·117 1’〇.87亳莫耳），[(2_氯_4_氣苯 39 20 200819127

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基）甲基]胺（0.138克，0.87毫莫耳）以及n_(3-二曱基胺丙基)-N’-乙基綠二亞胺氣氣酸鹽（〇·167克，0.87毫莫耳）。將混合物以無水氬氣充填後於室溫下攪拌一個週末。接著將混合物以二氯曱烧稀釋後，依序以2Μ氯化虱水溶液及飽和碳酸氫納水溶液清洗。將有機層利用兩相分離器分開，並使用減壓濃縮進行濃縮而得到粗產物。接著利用質量導引自動化HPLC進行純化可得純的#_[(2_ 氯-4-氟苯基）甲基]-1-乙基-5·側氧-脯氨醯胺之白色固體 (〇.〇86克）。1^/皿8[1^+11]+ = 299.1，滯留時間=213分〇鏡像超越值=100。/❶，利用掌性管柱層析方法B所決定，並指ίϋ Λ4(2-氯-4-氟苯基）甲基]乙基·5_侧氧丄_膽氨醯胺的滯留時間為8.05分鐘。上述中所使用到的1-乙基-5·側氧.脯氨酸醋其製備方法如下： ⑴將二甲基L-麩胺酸氫氯酸鹽（〇5〇〇克，2 37毫莫耳）溶於曱醇（4毫升）及四氣咬喃（8毫升）中。之後將混合物以磨碎之氫氧化納（〇〇99克，2 49毫莫耳）反應1〇分鐘。於這個階段加入醋酸（(U36毫升’2.37毫莫耳）及乙駿（〇261毫升，3 55毫莫 W 一起混合於四^喃（1亳升）中加入。攪拌1〇 =後’將反Π物冷部到叱下後加化鈉（ 0.088克，2.37奎曾甘、溫下並擾拌至隔夜。當回溫混合物回溫至室 /皿至至溫後以乙酸乙酯（30 40 20 200819127 毫升）稀釋，並以飽和礙駿麟水溶液清洗，並以兩 =分離H錢拌下職’之制贿油狀剩餘 4物;，油狀物以f苯溶解後加熱至迴流狀態下反應狀能：、。t 了確保反應進行的完全’因此持續在加熱 t下私至隔夜。將溶劑以減壓濃縮法濃縮，所生 ===速靖柱層析法純化’利用濃度梯製:澄_。的 10 15 (_克）產物，I需進二5，^氨_ 驟中。 4進步純化即可帛在下一步實例4-8 其他於上述實例3中所製備出來的 -列在下表（表υ中，透過將適當地已=將朝 (或酮類）來取代上述中的乙經進行反應ς右的_ _類均可以絲製備下纟1中的化合物，表i ^類^ 的產物均玎以用商業販售的來源或利用在化：中】; 被報導過的方法來製備。文獻中e 20

200819127

實例編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (分鐘）尽[(2-氯-4-氟苯基）甲基]-5-側氧_1_ 丙基-脯氨醯胺 E5 ο C1 化[(2_氯-4-鼠苯基）甲基]-1-(2-甲基丙基)-5-側氧-脯氨醯胺 327.1 2.46 E6 ό。，' 尽[(2-氯-4-氟苯基）甲基]小環戊基 -5-側氧-脯氨醯胺 339.1 2.47 E7 ό 6' α Λ4(2-氯-4-氟苯基）甲基]-1-環丁基 -5-側氧脯氨醯胺 325 2.37 E8 #-[(2-氯-4-氟苯基）曱基]-1-(1-甲基丙基)-5-側氧脯氨醯胺 327 2.43 42 200819127 實例9 N-[(2-氯-4-氟苯基）曱基]-5-侧氧-1-苯基·脯氨醯胺（E9)

5 將5-侧氧-1-苯基脯氨酸（0.047克，0·23毫莫耳，製備方法描述於下方）溶解在二氯曱烷（〜2毫升）及二 φ 曱基曱醯胺（1毫升）混合溶液中，之後加入1-羥基苯并三唑（0.034克，0.25毫莫耳），[(2-氯-4-氟苯基）曱基] ίο 胺（0.040克，0.25毫莫耳），1^乙基嗎啉（0.032毫升， 0.25毫莫耳）以及Ν-(3·二曱基胺丙基)-Ν，-乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（0.048克，0.25毫莫耳）。將此混合物於室溫下攪拌4.5小時。之後以多量的二氯曱烷稀釋，並依序以2Μ鹽酸水溶液及飽和碳酸氫鈉水溶液清洗。將有機 15 層分離，並減壓濃縮後可得到粗產物。將此粗產物以質量導引自動化HPLC進行純化可得到純的Ν-[(2-氯-4-氟苯基）曱基]-5-侧氧-1-苯基-脯氨醯胺（0.032克）之白色固體。LC/MS[M+H]+ = 347.1，滯留時間=2.51 分鐘。上述中所用到的5-侧氧-1-苯基-脯氨酸可依照下列 20 步驟製備： ⑴將曱基5-側氧-L-脯氨酸酯（0.204毫升，1.75毫莫耳）溶解於甲苯（5毫升）中，之後加入三（二亞苄基丙酮）雙鈀(0) (0.024克，0.03毫莫耳），溴化苯 (0.184毫升，1·75毫莫耳）、碳酸铯（ 0.795克， 43 200819127 2·45 毫莫耳）以及 Xantphos™ ( 〇·〇4〇克，〇·〇7 毫莫耳）。將所生成之混合物加熱至120¾下反應〜ΐ8 小時’之後冷卻至室溫。將混合物以乙酸乙酯稀釋，並依序以2M鹽酸水溶液及飽和碳酸氫鈉水溶液及 5 飽和食鹽水清洗。利用兩相分離器過濾後進行減壓濃縮後可得黃/褐色的油狀物（〜0.200克）。粗產物利用質量誘導自動型HPLC進行純化後可得純的曱基 • 5-侧氧-1-苯基腩氨酸酯（0.054克）之油狀產物，靜置之後便會生成結晶。LC/MS [M+H]+ = 22〇，滯留時 10 間=2.03分鐘。 (ii)甲基5-側氧-1-笨基脯氨酸酯（0 054克，〇·25毫莫耳）以2M氫氧化鈉水溶液（〇16毫升，〇·32亳莫耳）合併之後溶於曱醇（1毫升）中，並在室溫下授 15 拌一整晚。接著將溶劑以減壓濃縮法抽除後的剩餘物以乙酸乙酯溶解，並以2Μ氯化氳水溶液清洗接著 ® 將有機層分離得到。將水層分離開之後，再以乙酸乙酯萃取兩次水層，之後合併所有的乙酸乙酯層，利用兩相分離器以及減壓濃縮進行乾燥動作便可得到純 2〇的侧氧-I-苯基-脯氨酸（0.047克）之澄清油狀物貫例1Q Τν*·[(2,4-一氣本基）曱基]-1-甲基-5-側氧-膽氨隨胺（Ε10) 44 200819127

•將1β甲基-5_侧氧-脯氨酸（0 057克，〇·4亳莫耳， 5 ^備方法描述於下方）溶解於無水二氯甲烧（6冑升）中’，之後加入羥基苯并三唑（〇·〇60克，0·4毫莫耳），[(24 二氯-苯基）曱基]胺（0.055毫升，0.4毫莫耳），二異内’義 Φ 胺（〇·14〇 *升，0·8亳莫耳）以及〇-(7-偶氮笨并三氮口圭-1-基)_Ν，Ν，Ν’，Ν’-四曱基脲六氟磷酸酯（0152克，〇= 1〇毫莫耳）。將混合物於室溫（20°C )及無水氬氣下下攪拌3 小時之後在攪拌隔夜。將混合物以二氯甲烧（25毫升）稀釋，並依序以2M氯化氫水溶液（25毫升）及飽和石炭酸氫鈉水溶液（20毫升），1〇%碳酸鈉水溶液（2〇毫升）以及飽和食鹽水（20毫升）清洗。將有機層分離開來， 15 並將其通過疏水性玻璃料並減壓濃縮後可得粗產物。將粗產物以二甲基亞砜（0·9毫升）與乙腈（〇·9毫升）的混 • 合液溶解，之後以質量導引自動化HPLC進行純化可得純的#-[(2,4-一氣苯基）甲基]-1-曱基-5-侧氧-脯氨驢胺 (0.085克）之白色固體。LC/MS [Μ+Η]+ = 301，滞留時 2〇間=2.16分鐘。上述中所用到的1-甲基-5-侧氧-脯氨酸可依照下列步驟製備： (i)將^甲基-L·麩胺酸（0.500克，3·1毫莫耳）溶解於水（1毫升）後置於密閉試管於微波反應器中加熱 45 200819127 至140C下反應30分鐘。接著將水以減壓濃縮法抽乾後，將剩餘物以乙醚壓碎，乾燥後可得p曱基巧_ 侧氧-脯氨酸（0.298克）之白色固體。上述中所用到的Λ4(2,4-二氯苯基）甲基]-1-曱基-5-5 側乳-捕氣酿胺可依照下列步驟製備：將1-曱基-5-側氧-脯氨酸（36·79克，〇·257莫耳，製備方法描述於上方）懸浮於DCM(二氯曱烷）（5〇〇毫 _ 升）中。將EEDQC2-乙氧基-I乙氧基羰基二氫喹啉， 66.7克，0.27莫耳，ι·05當量）一次加入。當所有的物 ίο 質溶解後會形成一不透明混合物，接著溫度會由21°C下降到l〇°C。此時將反應於無水氬氣下攪拌2〇分鐘，接著將溶解於DCM ( 1〇〇毫升）之2,4-二氯苄胺（36毫升，0.27莫耳’ 1.05當量）混合溶液於4〇分鐘之内逐滴加入。在加料期間，白色的沈澱物會在滴加漏斗内出 15 現。混合物會溫和的冒泡，此時需用冰水浴將反應溫度維持在15〜20°C之間。當胺類加料完畢，將滴加漏斗以額 B 外的DCM (50毫升）潤洗，以便將所有的結晶物體沖洗到反應中。接著將反應物於室溫下攪拌反應約18小時。之後加入飽和碳酸氫鈉水溶液（200毫升）並且攪拌 2〇 5分鐘。將有機層分離後以2N鹽酸（3 X 250亳升）清洗。在以酸液清洗時，在有機層中會不斷的出現結晶體，因此必須要以額外的DCM(200毫升）進行稀釋。接著將有機層乾燥後令其通過疏水性介質，再經過真空濃縮後可得65克粉紅色固體。將此粗產物固體以研蛛及杵搗 46 200819127 碎。接著以乙醚（400毫升）壓碎，將固體過濾掉，並以額外的Et2〇(2 X 200毫升）清洗。乾燥後可得52 96克灰粉紅色固體。接著以同樣的步驟再進行兩次（共14〗42 克），然後加入乙醇（430毫升）及水（715毫升')，固體 5 便會懸浮於其中，然後將溫度逐步升高到65。〇(溶液的溫度）。會得到幾乎澄清但為（深粉紅）的混合溶液，除了有很細微的結晶固體懸浮。經過加熱至652〇春後，將燒瓶遠離熱源，使其於室溫下隔夜。經過這段後，溶液中會產生針狀沉澱物。將混合物於冰浴下冷部 1〇分鐘以確保所有的固體均生成。將這個白色固體由粉紅色溶液中過濾出來，並以事先於冰浴下冷卻過的3:5比例的EtOH/HA (2 x400毫升）清洗之。接著將固體於真* 系統下加熱（40°C)共5天，便可得到N-[(2,4-二氯笨展）曱基]-1-曱基-5-侧氧-脯氨醯胺（ 125.37克）之無色結曰 15 固體。 " 瞻 LC/MS [M+H]+ = 301，滞留時間=2·34 分鐘。 'Η NMR (CDC13)5 500MHz δ 2.01(m? 1H)? 2.34(m> χΗ) 2·37(πι，1H)，2.46(m，1H)，2.80(s，3H)，3.99(dd，1H，9 / 4·2 Hz)，4.49(dd，1H，/ = 14·9, 5·9 Hz)，4.55(dd，1H，j 二 2〇 14·8, 6·1 Hz)，6.56(廣 t，1H，/= 5·7 Hz)，7.24(dd，llj， 8·2, 2·1 Hz)，7.33(d，1H，/= 8.2 Hz)，7.4〇(d，1H，2 1 Hz) ; 13C NMR δ 175.9, 171·3, 134·5, 134·3, 133.7, i3l 5 129.6, 127.5, 63·8, 41.2, 29.4, 29·2, 23.4。 ’ 鏡像超越值=99.5%，利用掌性管柱層析方法a所定出 47 200819127 為^{[2-氯-3_(三氟曱基)苯基]曱基卜曱基氨酿胺 -5-側氧-L-脯 5 滯留時間=9·89分鐘 [a]D、2.10(c=1，Me〇H) 熔點 > 144.(M44.8°C。度-29.3 C ’ 波長=589 nm

10 ALU #_[(2'氯_4·氟苯基）曱基^曱基巧肩氧-脯氨驢胺（E11)

15

20 制將1-甲基-5_侧氧_脯氨酸（〇〇5〇克，〇·35毫莫耳， ^備方法描述於下方）溶解於無水二氯曱烧（〜7毫升），後加入羥基苯并三唑（〇·〇47克，0·42毫莫耳）， [(2_氯+氟苯基）曱基]胺（〇·〇56毫升，〇·42毫莫耳）， Ν·=基嗎啉（〇·166毫升，1·〇4毫莫耳）以及Ν·('3_二曱基胺丙基)-Ν’-乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（〇〇67克，〇·42毫莫耳）。將此混合物於室溫下攪拌至隔夜。將額外可以整除的[(2-氯-4-氟苯基）曱基]胺（〇1〇〇毫升，〇·8毫莫耳）加入混合物中，並持續攪拌，直到HpLC顯示產物完全生成為止。將混合物依序以2M鹽酸（5毫升）以及飽氫鈉水溶液（5毫升）清洗。將有機層收集後減壓濃縮可得到粗產物。將此粗產物以質量導引自動化Ηριχ 進行純化可得到純的>^_[(2_氯_4_氟苯基）甲基甲基_5_ 48 200819127 側氧-脯氨醯胺（0.015克）之白色固體。LC/MS [M+H]+ = 285，滯留時間=2·04分鐘。上述中所用到的1-曱基_5_側氧-脯氨酸可依照下列步驟製備： 5 ⑴將（幻_焦麩胺酸曱基酯（1克，6.99毫莫耳）溶解/ 混合於四氫呋喃（1〇亳升）中，並以冰浴冷卻到〇 °C。將氫化鈉（〇·2〇1克之60%油狀固體，8 38毫 • 莫耳）加入此混合物中。待反應冒泡完後，將碘化甲烷（0.522毫升，8·38毫莫耳）加入此混合物中，並 1〇使其回溫至室溫下攪拌1小時。將溶液抽乾後加入水（1毫升）。將水層以二氯曱烷萃取。抽乾二氯曱烷後可得甲基1-甲基_5_側氧-脯氨酸酯（〇·3〇8克）之粗產物。並將此粗產物直接用於下一步驟中而無需進一步純化。 15 • ⑻將甲基^曱基_5_侧氧_脯氨酸醋（0.308克，L96毫莫耳）溶解於甲醇（〜10亳升）中，之後加入氫氧化鋼（0.157克，3·92毫莫耳）之水溶液（〜10亳升）。將此混合物加熱至迴流狀態下反應3小時後冷 20 々部，並以減壓濃縮至殘餘最少量的水。利用2Μ鹽酸水溶液進行酸化至ρΗ值為丨。將水層以二氯甲烷清洗，之後分離並且濃縮可得〗-曱基側氧-脯氨酸之白色固體（0.300克）。 49 200819127 胺（Ε12)

1-乙基-5-侧氧-Λ「-[(2,3,4-三氟苯基）曱基]•脯氨醯將1-乙基-5-侧氧-脯氨酸（〇·〇5〇克，〇·32毫莫耳）溶解於無水二氯甲烷（〜7毫升）與二曱基甲醯胺'(1龙 _ 升）之混合溶液中，接著加入1_羥基苯并三唾（〇〇52/ 〇·38毫莫耳），队从王氟苯基）曱基]胺（〇 1〇3克，〇料 10 毫莫耳），Ν-乙基嗎啉（0.151毫升，〇·95毫莫耳），以及 Ν-(3-二曱基胺基丙基)_Ν、乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（⑽乃克’ 0.38毫莫耳）。將此混合物於室溫下搖晃經過—個週末的時間。將另一整數量的[(2,3,4-三氟笨基）甲基]胺 (0.051克，〇·32毫莫耳）加入反應混合物中，並持讀搜 15 拌至HPLC顯示已不再有進一步的產物生成為止。接著瞻將此混合物以2Μ鹽酸水溶液（5毫升）酸化。並以兩相分離裝置將其過濾。將有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液清洗，接著在進行兩相分離。經有機層以減壓濃縮方式濃、縮可得粗產物。此粗產物以質量導引自動化HPLC進行純 2〇化後可得純的1 -乙基-5-氧-Λ「-[(2,3，4-三氟苯基)甲基脯氨醯胺（0·032克）。 LC/MS [Μ+Η]+ = 301，滯留時間=2·03 分鐘。上述中所用到的1-乙基-5-侧氧-脯氨酸可依照下列步驟製備（方法Α): 50 200819127 ίο 將二甲基L-麩胺酸酯氫氯酸鹽（5〇克，23 7毫莫耳）溶解於甲醇⑽毫升）中，將混合物在無水氬氣及室溫下與氫氧化鈉齡（1.〇克，24 9亳莫耳）進行反應。5分鐘之後’將乙趁（1.99毫升，35.5毫莫耳）力入並稅拌10分鐘。將此混合物冷卻到，之後加入氳硼化鈉顆粒（0.701克，18 95毫莫耳>於0 =下持㈣拌1小時後將？醇_抽乾。剩餘物溶 ^於乙酸乙s旨後將其㈣。將餘以飽和食鹽水清洗’之後&層飽和食鹽水再利用乙酸乙料取。合併所有的乙酸乙自旨層，並令料驗 15 (i) 步驟而無需進一步純化，可=清油狀物（3.2克）。將油狀物以4二 j)洛解之，並加熱至迴流狀態下反應至隔夜。將甲本抽乾後可得淡橘色剩餘物，湘快速㈣管柱層析法進行純化’以濃度梯度為2〇〜6G%的乙酸乙i 己烷/合液進行沖提可得純的甲基卜乙基側氧_ 脯氨酸醋U.9克）之澄清油狀物。此產物下一兵趣工—— (11)將曱基乙基、側氧-脯氨酸醋（191克，亳莫耳）洛解於甲醇中（25毫升），之後以爾氫氧化納水/合液（7·3亳升，14·52毫莫耳）進行反應。將此混合物於室溫下攪拌4小時，之後以二氯曱垸清洗將水層進行濃縮，剩餘物再以過量的iM竭酸 ( ^ ^ 又〜5毫升）溶液進行處理。將混合物再次 51 200819127 抽乾後’剩餘物以二氯甲烷壓碎。將固體物質丟棄後合併二氯甲燒層，並再次濃縮，靜置下會有結晶固體生成。接著於正己烷及乙醚溶劑下研磨固體，乾燥後可知純的乙基-5-侧氧-脯氨酸酯（0.271克）之白色固體。另一個製備1-乙基侧氧_脯氨酸酯的方法如下（方 SB): (1)將1，1_二甲基乙基_5-侧氧-脯氨酸酯（2·7克，12毫莫耳，製備方法描述於Synth· Comm·，2005, 35(8)， 1129)加入懸浮有氫化鈉（〇·428克（6〇%懸浮於油中），10·7耄莫耳）之四氫呋喃（6毫升）中，將此混合物於^溫下攪拌5分鐘。將碘化乙烷（1.67 克，10·7耄莫耳）加入此混合物中，並加熱到4〇七下攪拌2小時。接著將另一份量的氮化納（㈣克）加入並於室溫下持續攪拌至隔夜。將另一份量的碘化乙烷（0.86宅升）加入此混合物中，於此階段時靜置在室溫下-個週末。將水（〜1〇毫升）加入混合物中’並攪拌15分鐘。將四氫咬喃抽乾後，剩餘的水層以二氯甲烧（2x50毫升）及3:1之氯仿與異丙醇（50毫升）之混合溶液進行萃取。後並令其通過疏水性玻璃料並減壓濃職可得黃^ 油狀物。加入甲苯後再將此黃色油狀物抽乾一次。將此物質以快速石夕膠管柱層析法進行純化（Bi〇tage SP4)’利用15〜100%梯度之乙酸乙醋/正己烧進行 52 200819127 沖提後可得純的二曱基乙基1-乙基_5_側氧_脯氨酸醋。 (ii)將1，1-一曱基I-乙基-5-側氧-膽氨酸酉旨（0.965克）溶解於二氯曱烷（〜5毫升）中，接著加入三氟醋酸 (1宅升）進行反應。將此混合物於室溫下授拌1 5 小時候減壓濃縮。所生成的物質大多數均為起始物，因此進一步的在加入三氟醋酸（1毫升）及二氯甲烷 (〜5毫升）混合溶液，之後將此混合物於室溫下攪拌36小時。將混合物抽乾之後加入甲苯至此剩餘物中，接著再度抽乾。重複此步驟一次，粗製暗黃色之 1-乙基_5_侧氧-脯氨酸油狀產物便可得到，此產物不經純化直接使用。另一種製備1-乙基-5-側氧-脯氨酸的方法描述如下 (方法C): ⑴1-(1，1-二甲基乙基）5-甲基心麩胺酸酯氳氯酸鹽（μ 克，19.71毫莫耳）溶解於甲醇（30毫升）及四氫呋喃（60毫升）中。之後將此混合物於無水氬氣及室溫下與已壓碎之氫氧化鈉（0.828克，20·69毫莫耳）進行反應。經過十分鐘後，加入乙醛（毫升，19.71 毫莫耳）及醋酸（1.13毫升，19·71毫莫耳），並持續攪拌10〜15分鐘。將混合物以冰浴冷卻至〇。〇，再加入氫硼化鈉片（0·746克，19.71毫莫耳）反應。於氬氣系統及〇ΐ下持續攪拌1小時。將混合物回 53 200819127 溫至室溫下可得一薄薄的懸浮層。將此白色固體過慮出來，並將曱醇抽乾，剩餘物以二氯曱烷（〜5〇毫升）溶解之，再以飽和碳酸氫鈉水溶液（〜25毫升） 5 清洗。將有機層分離出來後，水層再以二氯曱燒（2 χ 20毫升）卒取。合併所有的有機層後抽乾可得無色油狀物C〜4見）。此油狀物（3克，依奸有1 * $毫莫耳）以曱苯（30毫升）溶解’接著加熱至迴流狀

10 態下反應〜16小時隔夜，之後可得到有機溶液。將曱苯抽乾後可得福色油狀物（2.6克）。利用同樣的方法可以得到另一抵次的油狀物（〇.85〇克），將^合併之後以自動快速矽膠管柱層析系統純化（BkJage SP4)’利用2〇〜80%之乙酸乙酿/正己燒沖提液進行沖提可得純的二甲基乙基i•乙基_5_氧_脯氨酸酯（2.14克）。 15

(ii)將1，1-二甲基乙基！-乙基_5_氧_脯氨酸酯（〇933 溶解於二^烧（〜5毫升）中，之後與三氣醋酸（1 寬升）進灯處理。將混合物於室溫下縣抽乾。加入甲苯於剩餘物中並再度抽站一：且基·5，氧姆^ (0.914克），且不需要進一步純化。實例13-36 上面有關實例12之衍生物的製備方法將製表於下 54 20 200819127 方（表2)，藉由適當的胺類（或其鹽類）進行取代反應後以取代[(2,3,4-三氟苯基）曱基]胺並用於上述的製程中。所有在表2中出現用來製造化合物的胺類可由商業販售之來源或利用已被報導過的化學文獻或其他製備衍 5 生物的方法加以製造。在反應中所使用的1-乙基-5-氧- 脯氨酸也可製備，在每個實例之中由指定的方法製造。再經由掌性高效能液相層析法（HPLC)來決定，異構物的 _ 鏡像超越值（e.e.)與其立體專一性命名也同時列在表中，掌性分離方法的使用則在括弧中，同時相對應的滯留時間 10 (r.t·)也在方法中。表2

樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (mins ) 用來製備 1-乙基-5- 側氧-脯氨酸的方法 e.e. E13 ，[(2-溴苯基）曱基]-1·乙基-5-側氧-脯氨醯胺 327 2.04 A E14 A4(2·氯-6-氟苯基)曱基]-1-乙基-5-側氧-脯氨醯胺 299 2.03 A 55 200819127

樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (mins ) 用來製備 1-乙基-5- 側氧-脯氨酸的方法 e.e. E15 J 〇 #-[(3-氯苯基）曱基]小乙基-5-側氧-脯氨醯胺 281 2.13 A El 6 J 〇 Λ4(4-氣苯基）曱基]-1-乙基-5-側氧-脯氨醯胺 281 2.07 A E17 Aq(2,4-二氯苯基）曱基]-1-乙基-5-側氧-膽氨酿胺 315 2.39 A 96% (C) A4(2,4-二氣苯基)曱基]-1-乙基 -5-側氧脯氨酿胺 r.t.=8.78 分鐘 E18 。 1-乙基-5-側氧-iV-{[2-(三氟曱基)苯基]甲基}-脯氨醯胺 315 2.29 B 56 200819127

樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (mins) 用來製備 1-乙基側氧-脯氨酸的方法 e.e. E19 ΛΓ-[(4-氯-2-甲基苯基）曱基]-1 -乙基-5 -側氧·膽氣酿胺 295 2.37 B E20 Λ4(2-氯-3,6-二氟苯基)甲基]-1 -乙基-5-側氧-膽氨酿胺 317 2.15 B E21 。务Ά #-[(2-氯苯基）曱基]-1-乙基-5-側氧-脯氨醯胺 281 2.10 B E22 y 〇界[(3,4·二氯苯基)曱基]-1-乙基-5-側氧-脯氨醯胺 315 2.36 B 82.8% (C) M[(3,4-二氯苯基）甲基]-1-乙基-5-側氧-L-膽氨醯胺 r.t.=5.37 分^^ 57 200819127

樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (mins) 用來製備 1-乙基-5- 側氧-膽氨酸的方法 e.e. E23 J 〇人 1-乙基-#-{[4-氟-2-(三氟曱基）苯基]甲基}-5·侧氧- 脯氨醯胺 333 2.33 B E24 7V-[(2,4-二甲基苯基)甲基]-1-乙基-5-侧氧·膽氣酸胺 275 2.24 B E25 9:. ΛΓ-[(2-氯-6-曱基苯基)曱基]-1-乙基-5-側氧-膽氨酸胺 295 2.28 B 79.0% (C) #-[(2-氯-6-甲基苯基)甲基]-1-乙基-5-側氧-L-脯氨酸胺 r.t.=6.91 分 E26 。务〇φ #4(2-氯-6-氟-3-曱基苯基)曱基]-1 -乙基-5-側氧-膽氨酸胺 313 2.31 B 58 200819127

樣品編號化學名稱 [Μ+Η]+ 滯留時間 (mins ) 用來製備 1-乙基-5_ 側氧-脯氨酸的方法 e.e. E27 。抑冷. #-[(6-氯-2-氟-3-甲基苯基）曱基]-1-乙基-5-側氧- 脯氨醯胺 313 2.20 B E28 o a Λ4(2,4-二甲基苯基)甲基]-1- 乙基_5-側氧-脯氨醯胺 315 2.29 C E29 。分嘴: Λ4(3-氯-2-曱基苯基)曱基]-1-乙基-5-側氧-脯氨醯胺 295 2.30 C E30 -°5v^ Λ4(2,6-二氯苯基)曱基]小乙基-5-側氧脯氨醯胺 315 2.19 C 59 200819127

樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (mins ) 用來製備 1-乙基-5- 側氧-脯氨酸的方法 e.e. E31 1-乙基-#-{[4-氟·3·(三氟甲基)苯基]甲基}-5-側氧-脯氨醯胺 333 2.35 C E32 。货XX: ΛΜ[4-氯-3-(三氟甲基）苯基]甲基}-1-乙基-5-側氧_ 脯氨醯胺 349 2.49 C 99.1 (A) #•{[4-氯-3-(三氟甲基）苯基]曱基}-1-乙基-5-側乳-L-脯氨醯胺 r.t.=5.44 分鐘 E33 。务谭& iV-[(4-漠-2-氟苯基)曱基]-1-乙基_5-側氧脯氨醯胺 345 2.24 C E34 1 -乙基-iV~[(2-曱基苯基）甲基]-5-側氧-脯氨醯胺 261 2.00 C 60 200819127

樣品編號化學名稱 [Μ+Η]+ 滯留時間 (mins ) 用來製備 1-乙基-5- 側氧-脯氨酸的方法 e.e. E35 y o ci yV-{[2-氯-3-(三氟甲基）苯基]甲基}-1-乙基-5-侧氧脯氨醯胺 349 2.45 C 100.0 (A) 尽{[2·氯-3-(三氟甲基）苯基]曱基}-1-乙基-5-側氧-L-脯氨醯胺 r.t.=5.51 分鐘 E36 P" ο α iV-[(2-氯-3,4-二氟苯基）甲基]-1-乙基-5-側氧脯氨醯胺 317 2.22 C

參合成Ν·[(2-氣-3，4-二氣苯基）曱基]-1-乙基-5-侧氧膽氨醯胺（實例36)時需要[(2-氯-3,4-二氟苯基）曱基]胺，其製備方法如下： 5 ⑴將N，N，N’，N’·四甲基乙烯二胺溶液（39.6毫升，264 毫莫耳）溶解於四氫呋喃（170毫升）中，並於氬氣系統下冷卻至-70°C，接著加入第二丁基鋰（205毫升，288毫莫耳）。將溶有3,4-二氟苯甲酸（19克， 120毫莫耳）之四氫呋喃（80毫升）溶液於40分 61 200819127 鐘之内加入，並注意不要讓反應溫度上升超過-60 。(：。接著讓反應於-68°C至-70°C下攪拌2小時。將混合物回溫至-l〇t後加入水（500毫升）以終止反應。將混合物以乙鱗（250宅升）稀釋後分開有機 5 層與水層。將水層以濃鹽酸進行酸化至pH 1後，以乙醚（ 500毫升）進行萃取兩次。合併有機層後使其通過疏水性玻璃料進行乾燥，之後減壓濃縮可得黃色鲁固體。利用乙酸乙δ旨進行再結晶可得兩份產物（8.3 5 克及4.47克）之純的2·氯-3,4-二氟苯甲酸。 10 (ii)取2-氯-3,4-二氟苯甲酸（2克，1〇·4毫莫耳）與亞硫醯氯（3.04毫升）進行反應，並於80°C下加熱反應90分鐘。將混合物冷卻後減壓濃縮。剩餘物溶解 1 於無水1，4_二碍烧（10毫升）中。之後以冰浴將混 15 合物冷卻。將〇·88氨水（液態，25毫升）逐滴加 • 入反應中，並於2小時内慢慢逐步的讓溫度上升至 22<>C。重複這個步驟並使用1〇·8克的2-氯-3,4-二氟笨甲酸，8·2毫升的亞硫醯氯，以及45毫升的0.88 2〇氨水，之後將兩次實驗成果合併在一起，並加入乙酸乙_ ( 150毫升）及水（100毫升）使其分層。將水層分離後以乙酸乙酯進行萃取（2x150毫升）。合併有機層後以飽和碳酸氫鈉水溶液（1〇〇毫升）清洗，以疏水性玻璃料乾燥後減壓濃縮可得2-氯-3,4-二氟笨甲醯胺（11.86克）之白色固體。LC/MS[M+H]+ = 62 200819127 192/194,滯留時間=1·69分鐘。 (iii)將2-氯-3,4-一氟苯曱酿胺（11.85克，62毫莫耳）溶解於四氫呋喃（200毫升）中，之後與1M硼烷之四 5 氮吱°南（247晕升，247毫莫耳）進行反應。將混合物加熱至70C下攪拌18小時。將混合物以冰浴冷卻後逐滴加入濃鹽酸水溶液（15〇毫升）。之後於攪拌 • 下加熱至7〇C並維持2小時。接著將混合物冷卻，並以減壓濃縮法移除溶劑。剩餘物加入乙酸乙酯（200

1〇毫，）及2N鹽酸水溶液（200毫升）。將水層以5N 氫氧化鈉水溶液逐滴鹼化至pH值為8〜9。接著將所生成之霧狀懸浮物以乙酸乙酯（2〇〇毫升）萃取四 -人後合併有機層。並以疏水性介質乾燥後濃縮至〜 200毫升。將混合物以1M鹽酸乙醚溶液（1〇〇毫升） 15 進行酸化後會產生沈澱物。將溶劑減壓濃縮移除後可籲知白色固體。將固體以甲基化酒精（㈣卿iate(j Spirit) 進行二次再結晶後合併總產量可得純的[(2-氯-3,4- 二氟笨基）曱基]胺氫氯酸鹽（合併總量=4.46克）之白色固體。 20 Λ4(2·氯-4·氟笨基)甲基乙基-5_侧氧(苯基甲基)-脯氨醯胺（Ε37) 63 200819127

5

10 15

將粗製之1-乙基-5-側氧-4-(苯基甲基)-脯氨酸（0.052 克，0.09毫莫耳，製備方法描述於下）懸浮於二氯甲烷（0.5 毫升）及二甲基甲醯胺（0.5毫升）之混合溶液中，之後加入N-乙基嗎啉（0·034毫升，0·27毫莫耳）便會讓大多數的物質溶解。接著依序加入1-羥基苯并三唑（0.016 克，0.12毫莫耳）及Ν-(3-二甲基胺丙基)-Ν’-乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（0.022克，0.12毫莫耳），並攪拌10分鐘。之後加入[(2_氯·4_氟苯基）曱基]胺（0.019克，0.12毫莫耳）。將反應置於室溫下攪拌至隔夜。加入飽和碳酸氫鈉水溶液（〜2毫升）於反應混合中，接著攪拌10分鐘。將有機層過濾分離出來後以2Μ鹽酸水溶液清洗。將有機層再次分離一次後濃縮可得黃色油狀物，將其以質量導引自動化HPLC進行純化可得純的ΑΚ(2-氯-4-氟苯基) 甲基]-1-乙基-5-侧氧-4-(苯基曱基)-膽氨隨胺（0.004克）之無色油狀物。LC/MS [M+H]+ = 389,滯留時間=2.90分鐘。上述中所用到的1-乙基-5-侧氧-4-(苯基曱基)-脯氨酸可依照下列步驟製備（方法A): (i) 將(S)_(+)-2-吡咯烷酮-5-羧酸曱酯（0.85克，5.94毫莫耳）溶解於二氯曱烷（5毫升）中，接著加入三乙 64 20 200819127 胺（0.869毫升，6·24毫莫耳）以及4_二甲基胺基吡啶（ο·οιο克）。接著加入第三丁氧基甲酸酐（136克， 6.24毫莫耳）後會產生橘色溶液，將其攪拌至隔夜。混合物會轉變為藍/灰色，之後減壓濃縮移除溶劑後 5 付到一淺灰色油狀物（1 ·4克）。將其以快速石夕膠管柱層析法純化（BiotageSP4)，以〇〜60%之乙酸乙醋 /正己烧之溶液進行沖提可得1-(1，1-二甲基乙基)_2_ • 甲基_5·侧氧-1，2·11比咯烷雙碳酸酯（1.37克）之無色油狀產物，靜置下會產生結晶物。 10 (ii)將一曱基乙基)冬甲基_5_側氧·洛烧雙石反酸酯（0.324克，1·33毫莫耳）溶解於四氫呋喃（3 I升）中，並將此混合物於無水氬氣系統下以丙酮/ 乾冰浴冷卻至_78。〇將1Μ之雙(三甲基矽烷)鋰醯 15 胺之四氫呋喃溶液0.4毫升，1.4Θ毫莫耳）逐滴加 _ 入，並於無水氬氣下攪拌1小時。接著加入苄基溴 (0.174毫升，1.46毫莫耳）後將混合物於_78°c下領外攪拌2·5小時。將混合物回溫至室溫後加入飽和氯化銨水溶液（〜5毫升）終止反應，並於室溫下 2〇攪拌至隔夜。將有機層與水層分離後，將水層加入更夕i的水（5毫升）稀釋，並以乙酸乙酯（3 X 10毫升）萃取。合併有機層後以無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮可得黃色油狀物（0.700克）。利用自動化快速石夕膠管柱層析法（BiotageSP4)純化，以0〜35% 65 200819127 之乙酸乙酯/正己烷溶液沖提，在經由滅壓濃縮後可得純的1·(1，1-二甲基乙基）2·曱基I氧冰(苯基甲基)-1，2-吡咯烷雙碳酸酯（〇·418克）之白色固體。 (iii) 將1-(1，1·二甲基乙基）2_甲基·5-側氧-4-(苯基甲基)-1，2_吡咯烷雙碳酸酯（〇·415克，124毫莫耳）溶解於4Μ鹽酸之1，4-二π号烷毫升）中，並於室 • 溫下攪拌2小時。將溶劑移除後可得無色油狀物，靜置下可得曱基-5-侧氧-4_(苯基曱基)-脯氨酸酯之膏 10 狀/白色固體（〇·205克）。直接使用之而無需進一步純化。 (iv) 將曱基_5•侧氧冰(苯基曱基)_脯氨酸醋（0.205克，0.88 毫莫耳）溶解於四氫吱喃（2·5毫升）中，接著與姨 15 化乙烧（0·077亳升，〇·97毫莫耳）進行反應。將混 Φ 合物冷卻至〇°c後加入氫化鈉（0·〇37克之60%包覆於油中，0.92毫莫耳）。於〇〇c下攪拌1〇至15分鐘之後，將混合物回溫到室溫下擾拌3·5小時。將混合物以飽和氯化銨水溶液（〜2毫升）處理，之後 20 依序用二氯甲烧（5毫升）稀釋。將有機層分離後以疏水性介質處理（接著再以額外的二氯甲烷（2 X 5 毫升）沖洗）。接著合併有機層後濃縮會得°到棕色油狀物（〜0.100克)。透過自動快速石夕膠管柱層析法純化’以濃度梯度為0〜100〇/〇的乙酸乙酯/正己烷溶液 66 200819127 進行沖提可得部分純（純度〜90%)的1-乙基_5-側氧 (苯基曱基)_脯氨酸甲酯（0.024克）之黃色油狀物，接著直接使用之而無需進一步純化。 5 (V)將^乙基侧氧冰(苯基甲基)-脯氨酸甲酯（〇〇24 克’ 0·09耄莫耳）以曱醇（〇5毫升）溶解並將其以冰浴於Ot：下冷卻。接著加入2Μ氫氧化鈉水溶液 ❿ （晕升，0.27笔莫耳）於反應混合物中，並於〇 C下持績攪拌3小時。利用減壓濃縮將溶劑移除 1〇後，剩餘物以2Μ鹽酸水溶液（〜0.2毫升）酸化後會得到一混濁狀溶液。將其濃縮後可得粗製之丨_乙基-5-侧氧-4-(苯基曱基)_脯氨酸（〇〇52克）之混合有白色固體與黃色油狀之剩餘物。直接使用之而無需纯化。 ' 15 另一個選擇性製備^乙基-5-侧氧-4-(苯基甲基)_脯氨酸的方法描述如下（方法B ): 馨（1)將⑻_(+)丄1三苯甲氧基甲基_2_吡咯烷酮（188 克’ 20亳莫耳）溶解於二甲基甲醯胺（9毫升）中，並於〇°C下加入氫化鈉（6〇〇/0懸浮於油中，〇 22〇 2〇克’ 5·5亳莫耳）。將混合物於0°C下攪拌30分鐘之後加入碘化乙烷（0.444亳升，5·5毫莫耳）。將混合物回溫至室溫並於此條件下攪拌至隔夜。將混合物加入飽和氯化銨水溶液以及乙酸乙酯後便會分層，以乙酸乙酯萃取三次。合併有機萃取層，並依序以水、5〇% 67 200819127 食鹽水（x2)以及飽和食鹽水清洗過，並以無水硫酸鈉乾燥。濃縮後可得到米色固體，將其以自動快速矽膠管柱層析（BiotageSP4)進行純化，以濃度梯度為〇_100%的乙酸乙酯/正己烷溶液進行沖提後可得純的1-乙基-5-侧氧-{[(三苯基甲基）氧]甲基}_2』比洛烧酮（1.78 克）。 (11)將2M二異丙基鋰醯胺之四氫呋喃溶液（1〇5〇毫升’ 2.1¾莫耳）於-78°C下加入溶有1-乙基-5-侧氧 -{[(二苯基曱基）氧]曱基卜2_吼嘻烧酮（mi克，2 晕莫耳）之四氫呋喃（10毫升）溶液中。所生成之作匕百物於-78 C下授拌1小時後使其回溫至室溫下攪拌隔夜。之後混合物以飽和氯化銨水溶液終止反應後以乙酸乙酯萃取三次。合併有機萃取層後以水清洗，之後再以飽和食鹽水清洗兩次，並以無水硫酸鎂乾燥以及濃縮成粗製油狀物（127克）。接著利用自動快速矽膠管柱層析法（Bi〇tageSP4)將此粗製油狀物進行純化，以0〜100%梯度之乙酸乙酯/正己烷溶液沖提可得所需要的產物（亦即卜乙基_3_(笨基甲基爪二苯基甲基）氧]曱基比咯烷酮（〇 561 士）），並將其使用於下一反應步驟中，同時也會分離到未反應的起始物以及雙烷化產物，^乙基_3，弘雙 (笨基曱基)-5][(二笨基甲基）氧]曱基卜比略 (0.053 克）。 68 200819127 (iii) 1-乙基-3_(苯基曱基)^{[(三苯基甲基）氧]甲基}_2_吼洛烧_ (〇·561克，1·1毫莫耳）以混合有乙腈（21 宅升）與甲酸（3毫升）之混合溶液溶解，於室溫下授摔24小時。若反應在此階段未反應完全，則將溶 5 劑移除後以曱酸（10毫升）取代，並再反應3小時。反應若依舊不完全，則將混合物在真空下濃縮（與曱醇一起共沸以移除甲酸）後在溶解於曱醇（20毫升） φ 中。加入酸性樹脂Amberlyst I5⑧後將此混合物於室溫下攪拌至隔夜。將樹脂過濾除去後以更多量的曱 1〇醇清洗，之後過濾並濃縮可得膠狀產物（0.625克）。將此膠狀產物以自動快速矽膠管柱層析法（Biotage SP4)純化，以0-100%梯度之乙酸乙酯/正己烷溶液沖提可得1-乙基_5·(羥基甲基)-3_(苯基曱基)-2-吼咯烷酮（0.170克）而直接使用於下一步驟中。 15 (iv) 將1-乙基-5-(羥基曱基）-3-(苯基甲基）-2-吼咯烷酮

* (〇·748克，3·21毫莫耳）溶解於乙腈（5毫升）與1M 磷酸鈉之單鹼緩衝溶液（3.69毫升，3.69毫莫耳）中，加入催化量的TEMPO (2,2,6,6-四曱基-1-哌啶基氧 20 基自由基）以及亞氯酸鈉（0.580克，6.41毫莫耳）後於40\：下攪拌。將大約一滴的漂白水（次氯酸鈉溶液，其中氯濃度>12%)加入反應混合物中並於40 °C下攪拌3小時。將混合物倒入含有l%w/w硫化鈉之冰水中，接著再以5N之鹽酸水溶液將此混合 69 200819127

有機萃取層後以飽和食鹽水清洗並以無水硫酸鎮乾燥後濃縮可得純的1-乙基_5·側氧_4_(苯基曱基)鋪氨酸（0.807克）之固體產物，此產物可以直接使用而無需進一步純化。基)·5-侧氧脯氨酸胺（Ε38)

邱2-氣-4-氟笨基）曱基]小(2_甲基冬丙婦小 0.075克’〜0.41宅莫耳，製備方法描述於下方）溶解於二氯曱烷（5¾升）中，之後加入；μ羥基苯并三唑（〇〇61 15 克，〇·45宅莫耳），[(2_氯1氟苯基）甲基]胺（〇·〇68克， _ 0.43宅莫耳），以及Ν-(3-二甲基胺丙基)-Ν，_乙基羰二亞

胺氫氯酸鹽（0·087克，〇·45毫莫耳）。將混合物於室溫下攪拌24小時。將混合物以二氯曱烷稀釋之後依序以2Μ 鹽酸水溶液及飽和碳酸氫鈉水溶液清洗。將有機層分離出 20 來後濃縮可得褐色剩餘物，將其以質量導引自動化HPLC 進行純化後可得純的Λ4(2•氯-4-氟苯基)甲基]-1_(2_甲基 •2-丙烯-1-基)-5-側氧-腩氨酿胺（〇〇18克）之白色固體。 LC/MS [M+Hf = 325·1，滯留時間=2.40 分鐘。上述中使用的1-(2_甲基-2-丙烯_1_基)-5_侧氧脯氨酸 200819127 製備方法如下： (i)將曱醇（55毫升）冷卻到-l〇°C下（使用乾冰/四氯化碳溶液），之後於攪拌下於45分鐘内逐滴加入亞硫醯氯。將（D)-麩氨酸（10克，67.96毫莫耳）於〜 5 5分鐘内分三個部分加入’之後將反應混合物梭掉3 小時，並於其間升溫至21 C。接者丨谷劑以減麼濃縮法移除後可得澄清油狀物（15克），將其溶解於水（15〇 • 亳升）與Μ-二畤烷（150毫升）之混合溶液中。於攪拌下將碳酸鈉（46克，340毫莫耳）緩慢的加入其 1〇中。將氯甲酸T酯（9.64毫升，68毫莫耳）加入並持續擾摔至隔仪。將混合物小心地以2N鹽酸水溶液（250毫升）進行處理，之後以乙酸乙酯（2 χ25〇晕升）萃取。合併有機層後以飽和食鹽水清洗後乾燥並濃縮後可得澄清油狀物（18.7克）。將其溶解於二氯甲烷（400笔升）中，並以1毫升之濃硫酸溶液 _ 進行處理。大量的異丁烯會凝結至混合物中，之後於 21°C下攪拌隔夜。小心的將飽和碳酸氫鈉水溶液（〜 400毫升）加入混合物中，之後將有機層分離出來， 2〇以飽和食鹽水清洗後乾燥，減壓濃縮可得澄清油狀物 (21.9克）。利用矽膠管柱層析法純化，以3:1的環己烷及乙酸乙酯之混合溶液沖提可得純的二甲基乙基)5-N-{[(苯基甲基)氧]縣}麵氨酸，Ο一克）。 71 200819127 ⑴）將溶有六曱基二矽烧基卸醯胺（10亳升之0.61V[之甲苯溶液，6毫莫耳）的四氫呋喃（25毫升）於-70 C下冷卻，之後逐滴加入溶有-二曱基乙 5

10 基)5-N-{[(苯基甲基)氧]羰基}麩氨酸酯（21.05克，3 晕莫耳）之四氫呋喃（10亳升）溶液，過糕需超過5 分鐘。之後將此混合物於-7〇°c下授拌1小時並加入甲代浠丙基蛾（2·18克，12毫莫耳）之四氫呋喃 (10毫升）溶液。接著於_78。〇下攪拌2小時後回溫至21°c。之後再攪拌1小時後倒入1Ν鹽酸水溶液中，並以乙酸乙酯萃取（2 X 50毫升）。合併有機層並以飽和食鹽水清洗後乾燥，減壓濃縮後可得黃色油狀物（1·03克）。之後以矽膠管柱層析法純化，利用4:1之環己烷及乙酸乙酯混合溶液沖提可得純 15

t j，1，-二甲基乙基1β(2-甲基-2-丙烯-1-基)-5-側氧脯氨酸之油狀產物（0.322克）。 (iii)將1 1 _ 一田甘筠齡二—甲基乙基叩-甲基_2_丙烯-卜基氧脯二古Ο"克，0·41毫莫耳）溶解於混合有二氯甲 20 並於室^升）ί及二氟醋酸（2毫升）之混合溶液中，沸可^ Μ了攪拌至隔夜。將溶劑減壓抽除（與甲苯共其"私除二氟醋酸）後可得粗製1-(2_甲基-2-丙烯-1- 土 5側氧骑氨酸之褐色油狀物，直接使用而無需進一步純化。 ” 72 200819127 宜-例39 環丙基善[(2,4_二氯苯基）甲基]-5-側氧脯氨醯胺（E39)

將（2,4-一氣本基）甲基異氮化合物（〇·〇47克，0.25 宅莫耳）與4-氧丁酸（15%之水溶液，〇·26毫升，0.4 宅莫耳）溶解於甲醇（1.75毫升）中，之後加入環丙胺（0 042 毫升，0·6毫莫耳）。將混合物以微波反應器加熱至1〇〇 °C下反應30分鐘。將溶劑以減壓濃縮法移除後剩餘物以質量導引自動化HPLC進行純化可得1-環丙基_#-[(2,4-二氯苯基）甲基]-5-側氧脯氨醯胺（0.072克）之白色固體。 LC/MS [M+Hf = 326/328，滯留時間=2.29 分鐘。魅40 #_{!>氯·3〜(三氟曱基）苯基]甲基}_1-環丙基-5-側氧脯氨醯胺（Ε40)

將[2·氯-3_(三氣曱基）苯基]甲基異氰化合物（〇〇88 克，0.4毫莫耳）與璩珀酸半酸（15%之水溶液，〇·26毫升，〇·4毫莫耳）溶於曱醇（丄75毫升）中後加入環丙胺 (0.042毫升，0·6亳莫耳）。將混合物以微波反應器加熱至100°C下反應30分鐘。將溶劑以減壓濃縮法移除後剩 73 200819127 餘物以質量導引自動化HPLC進行純化可得尽{[2-氯三氟甲基）苯基]甲基}-1-環丙基-5-側氧脯氨醯胺 (0.076 克）之白色固體。lc/MS [M+Hf = 361/363，滞留時間=2.39分鐘。 5

10

上述中的[2-氯各(三氟曱基）苯基]曱基異氰化合物可依下列方法製備： ⑴將{[1氯冬(三氟甲基)苯基]曱基}胺（1〇5克，5毫莫耳）溶於無水四氫呋喃（10毫升）中，之後逐滴加入队甲醛苯并三唑（0·772克，5.25亳莫耳）之無水四虱σ夫喃（10毫升）溶液。將反應於22。0下攪拌18 小時後減壓濃縮，剩餘物會在二氯甲烷（75毫升）與 2Ν氫氧化鈉水溶液（40亳升）中分層。將有機層分離之後以2Ν氫氧化鈉水溶液（4〇亳升）萃取。將有機層以疏水性玻璃料乾燥後減壓濃縮可得白色固體。將此粗產物以自動快速矽膠層析法(B e ) =二Γί梯度之乙酸乙醒二氣甲烷混合溶液三氣甲基)笨基]甲旬甲醯胺之 (11)將 2.82 冰浴於無水氬氣系統下進行冷卻=升）中，利用胺（1.78毫升，12.7毫莫耳），接著谈加人二異丙基毫升，4 23毫箪:^ 者加入氣氯化磷（0.393 毛升 u耳）。將反應於崎下勝2小 74 20 200819127 日，。將混合誠壓濃職所㈣的難物以飽和碳酸氫鈉水溶液（20宅升）處理，之後以二氯甲烷（2〇宅升）萃取。將有機層以疏水性麵料乾燥後減塵濃縮可得黃色固體。進-步於高真空系統下乾燥可得 [2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基異氰化合物之橘色膠狀產物（0.66克），無需純化直接使用。 _ N-[(2-氯-4-氟苯基）甲基卜^環丙基_5_侧氧脯氨醯胺（E41) 10

將[2-氯-4-氟-苯基]曱基異氰化合物（〇 068克，〇 4 笔莫耳）與琥珀酸半醛（15%之水溶液，〇·26毫升，〇.4 15 毫莫耳）溶於曱醇（1.75毫升）中後加入環丙胺（0.042 • 耄升，0.6毫莫耳）。將混合物以微波反應器加熱至loo C下反應30分鐘。將溶劑以減壓濃縮法移除後剩餘物以貝I導引自動化HPLC進行純化可得一無色膠狀產物，接著將其在乙醚下禱碎便可得体[(2-氯氟苯基）甲 2〇基P1·環丙基侧氧脯氨醯胺之灰白色膏狀固體（ϋ.058 克）。1^：/]\^[]^+11]、31〇，滯留時間=2.16分鐘。起始物[2-氯-4-氟-苯基]曱基異氰化合物的製備方法 ^同在實例40中製備[2_氯_3_(三氟曱基）苯基]曱基異氰化合物時所描述的一樣，只要將2_氯_3_(三氟甲基）苯 75 200819127 5 基甲基胺置換成2秦4·氟苯基曱基胺即可。錢42尽[(2,4-二氯苯基）曱基]_1-乙基-4,4-二甲基-5-側氧_脯氨醯胺（E42)

^ 將（2,4-二氯苯基）曱基異氰化合物（0.075克，0.4毫，耳）與粗製之2,2-二甲基-4-侧氧丁酸（〇·ΐΐ5克，0.6 毫莫耳）混合溶解於甲醇（2毫升）中。將乙胺溶液（2Μ 之水洛液’ 0·3亳升，〇 6毫莫耳）加入，之後將混合物填充在高壓試管中以微波反應器加熱至100°C下反應30 分鐘。將混合物靜置一個週末後，溶劑以減壓濃縮法移除後會產生橘色油狀物，將其以質量導引自動化HPLC進行純化可得一澄清油膠狀產物，將其在乙醚中禱碎可得柯(2,本二氯笨基）甲基]_1_乙基-4,4-二甲基_5_氧-脯氨醯胺之白色固體（0·〇24克）。lC/MS [M+H]+ = 343，滯留時間 =2.57分鐘。上述中的2,2-二甲基-4-側氧丁酸起始物可依下列方法製備： (Ο 將2,2-二甲基+戊酸溶解於二氯甲烷（25毫升）中，之後以乾冰/丙酮浴將其冷卻到-78°C下，並進行氧氣冒泡吹氣至此混合物中達5分鐘。將臭氧產生器開啟後便會產生臭氧，並持續對混合物吹氣15分 76 200819127 鐘:之後將臭氧氣麟錢再吨氣吹氣5分鐘，之後改換以無水氬氣吹氣2分鐘々EC檢視反應並全，因此再度開啟臭氧吹氣15分鐘，直到反應混合物出現淺藍灰色並有懸浮物產生為止。將臭氧氣 =關閉後以氧氣吹氣5分鐘，之後再以無水氬氣吹氣10分鐘（吹氣直到所有的氣體在通過鐵與:殿粉試 ν、氏¥均不再產生顏色為止）。將二甲基硫轉（1.72毫 • 升，23·41毫莫耳）加入於混合物中，並使其回溫^ 室溫下。於室溫下攪拌2小時之後進行濃縮可得一 1〇無色油狀產物（1·5克）。將此物質取1·4克進行快速矽膠管柱層析法純化，以0-50%梯度之乙酸乙酯 /二氯曱烷溶液進行沖提後可得2,2_二甲基_4^則^ 丁酸之無色油狀產物（〇·649克）。平 15 氯-3-(三氟曱基）苯基]曱基Μ_(1_甲基乙 _ 基)-5-侧氧脯氨醯胺（Ε43)

將1-(1·曱基乙基)-5-侧氧脯氨酸（0.100克，〇 58毫莫耳）溶解於二氣甲烷（20毫升）中，之後將基胺丙基)_N，-乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（(uu克，〇·58毫莫耳），1-羥基苯并三唑（0.078克，0.58毫莫耳）及$ 乙基嗎琳（0.223毫升，1 ·75毫莫耳）加入其中。最後將{ 77 200819127 5 10 15

氯-3-(三氟甲基）苯基]甲基}胺加入到此混合物中並持續攪拌〜48小時。將此混合物以飽和碳酸氫鈉水溶液（扣毫升）進行處理，並劇烈攪拌。將水層分離開來，之後利用氬氣吹氣裝置將溶劑從有機層中除去。所生成之剩餘物以水與乙酸乙酯（25毫升，1:1)之混合溶液進行處理，之後將水層丟棄。有機層分離開來之後進行濃縮可得到— 油狀產物。將其在乙醚中禱碎可得固體，並利用質量導弓丨自動化HPLC進行純化後可得翠{[2-氯-3·(三氟甲基）笨基]甲基曱基乙基)-5-侧氧脯氨醯胺（0.097克）之白色固體。LC/MS [M+H]+ = 363，滯留時間=2·48分鐘。上述中所使用到的1-(1-曱基乙基)-5-侧氧脯氨酸可依#日、?、先別（見實例3 )製備1 -乙基-5-侧乳膽氣酸的方法來製備，只要使用丙酮置換掉乙醛並且進行酯類的去保護步驟（使用標準條件，亦即使用氫氧化鈉之甲醇溶液）進行反應即可（與實例3中合併去保護與醯胺偶合步驟相反）。實例44-49 上面有關實例43之衍生物的製備方法將製表於下方（表3)，藉由適當的胺類（或其鹽類）進行取代反應後以取代{[2·氯_3-(三氟甲基）苯基]曱基}胺並用於上述的製程中。所有在表3中出現用來製造化合物的胺類可由商業販售之來源或利用已被報導過的化學文獻或其他製備衍生物的方法加以製造。 78 20 200819127 表

樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間（mins ) E44 1-(1-曱基乙基)-#-{[2-曱基 -3-(三氟甲基）苯基]甲基}-5-側氧脯氨醯胺 343 2.48 E45 人& α Λ4(2,3-二氯苯基）曱基]-1-(1-甲基乙基)-5-側氧脯氨醯胺 329 2.35 E46 〇 a Λ4(2-氯·3,4-二氟苯基)曱基]-1-(1-甲基乙基)-5-側氧脯氨醯胺 331 2.26 E47 iH(2,4-二氯苯基）曱基H-(l-曱基乙基)-5-氧脯氨醯胺 329 2.4 79 200819127 樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間（mins) E48 0 CI Λ4(2,3-二氯-4-氟苯基）甲基]-1 - (1-甲基乙基)-5-側氧-L_ 脯氨醯胺 346.9 2.41 E49 Α4(3-氯-2-甲基苯基)曱基]-1-(1-甲基乙基)-5_側氧脯氨醯胺 309 2.34

在實例48中，合成，[(2,3-二氯-4-氟苯基）甲基]-1_(1-曱基乙基)-5-侧氧脯氨醯胺時需要用到[(2,3-0 二氯-4-氟苯基）曱基]胺氫氯酸鹽，其製備方法如下： 5 (i)將硝酸鈉（0.172克，2.5毫莫耳）於-5°C下加入攪摔中的2-氯_6_氣-3 -曱基-丙基胺（0.400克’ 2.5宅莫耳）之水（20毫升）與37%鹽酸溶液（5毫升）中。接著於-5°C下攪拌5分鐘，之後一次加入氯化銅 (I) (0.742克，7.5毫莫耳）之37%鹽酸水溶液（5 1〇毫升），並維持溫度在-5°C至〇°C之間。將混合物加熱至38X並攪拌1小時。之後將混合物冷卻並加入乙醚（20毫升）。將有機層分離後以1N鹽酸水溶液 200819127 清洗，接著用水清洗。將有機層以無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮。粗製剩餘物以快速矽膠管柱層析法純化，以石油醚沖提後可得2,3-二氯-1-氟-4-甲基苯（〇〇9〇克，〇·5毫莫耳）之白色固體。 5 (ii) 將2,3-二氯-1-氟-4·曱基苯（〇·〇9〇克，〇·5毫莫耳）加入混合有重鉻酸鉀（0.284克，i亳莫耳）之醋酸（工毫升）溶液中。將97%硫酸（0.5毫升）緩慢加入馨此混合物中，接著加熱至l〇〇°C下2小時。冷卻至 10 室溫後，將冰與水加入，此時會得到綠色固體，將其過爐'後以冰水清洗可得二氯-4-氟苯甲酸（0.056 克，0·27毫莫耳）之白色固體。 (iii) 將2,3-二氯-4-氟苯甲酸（〇·200克，ο %亳莫耳）溶 15 解於二氯甲烷（4毫升）中，之後在無水氬氣系統及室溫下加入1-羥基苯并三唑（〇·162克，12毫莫 ❿ 耳），Ν-(3-二曱基胺丙基)_Ν、乙基羰二亞胺氫氯酸鹽 (0·230克，1.2毫莫耳），以及三乙胺（〇·56毫升， 4.0毫莫耳）。接著將混合物於室溫下攪拌40分鐘， 2〇之後加入32%之氫氧化銨水溶液（〇·〇⑽毫升）並於室溫下攪拌隔夜。將混合物以二氯甲烷稀釋，依序以水以及飽和破酸氮鈉水溶液清洗。將有機層分離之後以無水硫酸鈉乾燥，之後濃縮可得2,3-二氯-4-氟苯醯胺（〇.丨56克）之白色固體，直接使用於下一步 81 200819127 驟中而無需進一步純化。

20 (iv)將2,3-二氯-4-氟苯醯胺（0·750克，3.62毫莫耳）溶於無水四氫呋喃（2毫升）溶液中，於無水氮氣系統下加熱至90°C。將10Μ硼烷一二曱基硫醚之四氫呋喃（L05毫升，5.43毫莫耳）溶液加入這熱溶液中，並持續攪拌4小時。接著將混合物以6N鹽酸水溶液處理，並持續加熱30分鐘。將溶劑減壓濃縮移除，粗產物以SCX匣以及快速矽膠管柱層析法純化，以5%曱醇/二氯甲烷溶液沖提。所得到之醯胺化合物再以氯化氫乙醚溶液處理後可得[(2,3-二氯 •4-氟苯基）曱基]胺氫氯酸鹽（0.360克）之白色固體。實例50 N-[(2,3-二曱基苯基）曱基]-1-乙基-5-側氧脯氨醯胺（E50)

將1-乙基-5-侧氧脯氨酸（0.080克，0.51毫莫耳，衍生物的製備方法描述於實例12,方法A中。）溶解於二氯曱烷（5毫升）中，之後加入N-(3-二曱基胺丙基)-N’-乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（〇·117克，0·61毫莫耳），N-乙基嗎啉（0.195毫升，1·53毫莫耳），以及2,3-二曱基苄基胺（ 0.082克，0.61毫莫耳）。接著將混合物攪拌〜17小 82 200819127 時，並靜置一個週末。將混合物飽和碳酸氫鈉水溶液（〜 3毫升）處理，並劇烈攪拌約1〇分鐘。將有機層分離出來後通過疏水性玻璃料乾燥之，將水層以二氯甲烷（〜2 毫升）萃取。合併有機層後減壓濃縮可得黃色油狀產物（〜 0.2克）。利用質量導引自動化HPLC進行純化可得純的叫(2,3-二曱基苯基）甲基]乙基_5_侧氧脯氨醯胺（〇.奶克）之白色固體。LC/MS [M+H]+ = 275，滯留時間=2 12 分鐘。 10 實例51 ^{[2:氯_3·(三氣甲基)苯基]甲基}-1-曱基-5-侧氧脯氨酸胺（E51)

cf3 Cl 15

20 將夏-甲其製備方法描述土私;^膽氨酸（2.27克，15.88毫莫耳，之後加入N-(3、、、田方盆）溶解於二氯甲烧（150毫升）中， (3·35克，17〜甲基胺丙基^乙基羰二亞胺氫氯酸鹽券，17 47爲宅莫耳），以及羥基苯并三唑（2.36 胺（2.21毫^、，^。將混合物祕〜1G分鐘後加入三乙苯基]甲基}胺（3 莫耳）以及{[2_氯-3-(减甲基) 攪拌至隔夜f , 6笔升，17.47氅莫耳），之後於室溫下將混合物與飽;;在此躺會產生白色沈殿物。並授拌1G分趫魏水溶液（〜_毫升）進行處理。將有機層分離後使其通過疏水性玻璃料 83 200819127 乾燥，之後加入2N鹽酸水溶液，混合並再分無將有機層濃縮後可得白色固體（〜2.5克）。將固乙酯（〜200毫升）溶解後以清水（4x50毫升）鹽水（50毫升）清洗。將有機層分離後乾燥，縮可得純氣-3-(二鼠曱基）本基]甲基甲義

-側氧-L-脯氨醯胺之白色固體（2.48克）。 4 LC/MS [M+H]+ = 335，滯留時間=2·24 分鐘。

4 NMR (CDC13, 500ΜΗζ) δ 2·02(πι，1Η)，2.35(m 4·2 Ηζ)，4.60(dd，1Η，15.1，6·2 Ηζ)，4.65(dd，1Η j 二 15·1，6.2 Ηζ)，6·56(寬 t，1Η，/= 5·8 Ηζ)，7.38(t，1Η 7 7

Hz)，7.60(dd，1H，/= 7.6, 1·0 Hz)，7.68(dd，1H，7 9 i 2 Hz) ; 13C NMR δ 176.0, 171·5, 137.5, 133.9, 131·7, 3 127.4, 127.0, 122.8, 63·8, 41.8, 29·4, 29.2, 23·4。 ’ 上述中所用的到μ甲基-5-側氧脯氨酸起始物製備方法如下： ⑴將尽曱基-L-麩氨酸（9.81克，60.87亳莫耳）分成兩等分，並分別令其懸浮於水（15亳升）中，之後裝於南壓禮封试管中以微波反應器加熱至下30 分鐘，之後便可得到一澄清溶液。將此兩份化合物合併在一起，之後以減壓濃縮法將水抽除，並置於高真工下乾燥後可得白色固體。將此固體於乙醚下檮碎，接著過濾並以更多量的乙醚清洗，乾燥之後可得1-甲基側氧-脯氨酸（7·47克）之白色固體。 84 200819127 職二：氣法基)苯基]甲基Η·甲基·5-侧氧另夺 1 _甲甘方料n 土·5·侧氧脯氨酸（49.G克’G·342莫耳，製備 -产=7方）懸浮於二氯曱烧（_毫升）中（内部 10 15

13·7ΐ)°接著將 EEDQ(2·乙氧基-1-1叛土 I2·—氫喹嘴，75.26克，0.359莫耳，1·〇5當量）立人加入於反應中並讓反應混合物於室溫下攪拌15分知。之後將溶有l[2h(三氟曱基)苯基]甲烧胺⑽·77 克’ 〇·359晕莫耳，1.05當量）之二氯曱烷（250毫升）溶液於20分鐘内逐滴加入（輕微放熱至19。〇,接著將剩餘的固體以額外的二氯曱烷（15〇毫升）洗入反應中。將混合物於室溫下攪拌至隔夜。將飽和碳酸氫鈉水溶液（3〇〇毫升）加入，並在室溫下攪拌此混合物5分鐘。將有機層分離，並依序以水（300 毫升），2N鹽酸水溶液（3 x 300毫升），水（300毫升）以及飽和食鹽水（300毫升）清洗。將有機溶液以無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所生成之固體於乙醚（〜500 亳升）中檮碎，同時將固體收集起來，並以乙醚清洗並乾燥（30°C下乾燥一個週末）便可得到無色固體（91.1克， 80%)。將此物質製備另一批次，合併一起之後（總共178 克）以乙酸乙酯（2.75公升）溶解，並加熱（微微的迴流，頂端攪拌）。所生成之熱澄清溶液微微的攪拌，並冷卻至室溫隔夜。將固體收集，以冷的乙酸乙酯（500毫升）清洗並乾燥（50°C於真空烘箱，〜3天）後可得ΛΓ-{[2-氯 85 20 200819127 -3-(三氟曱基）苯基]甲基}-l-甲基-5-側氧脯氨醯胺之無色針狀結晶（148.4克）。 LC/MS [M+H]+ = 335/337，滯留時間二 2·26 分鐘。

4 NMR (CDC13, 500ΜΗζ) δ 1.86(m，1Η)，2.21(m，1Η)， 2.24(m，1H), 2.28(m，1H)，2.64(s，3H)，4.12(dd，1H，《/= 8·3, 3.5 Hz)? 4.47(d5 2H, J = 5.8 Hz)? 7.58(t9 1H? J = 7.8 Hz)9 7.65(dd，1H，7·8, 1.0 Hz)，7.80(dd，1H，7·8，1·2 Hz)， 8·81(寬 t，1H，5·7 Hz) ; 13C NMR δ 174·4, 171.4, 138·8, 133·1，129·8, 127·5, 127·1，126.6, 122·9, 61·6, 40·2, 29·1， 28.0, 22.5 〇鏡像超越值=99.1%，依照掌性管柱層析方法Α決定，並定出其為ΛΜ[2-氯-3-(三氟曱基）苯基]曱基卜1-曱基-5-側氧-L-脯氨醯胺滯留時間=6.99分鐘 [0^0 = -0.80(0=1,^^011)，溫度=29.3°C，波長= 58911111 熔點=173°C。實例52 N-[(2,3-二氯-4-氟苯基）甲基]小甲基-5-側氧脯氨醯胺（E52)

將1-曱基-5·侧氧脯氨酸（0.060克，0.42毫莫耳，製備方法於實例51中已有描述）溶解於二氯曱烷（5毫 86 200819127 升）中，之後加入N-(3_二甲基胺丙基)_N，-乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（0.096克，0.5毫莫耳），羥基苯并三唑克’ 0.5宅莫耳）’以及Ν-乙基嗎琳（〇·ι6〇毫升，I %毫莫耳）。將混合物攪拌〜10分鐘後加入[(2,3-二氯-4_氟 5 苯基）曱基]胺氫氯酸鹽（〇·〇81克，〇·42毫莫耳，製備方法已描述於實例48中）並使混合物攪拌至隔夜（〜17小時），之後經過一個週末。將混合物以飽和碳酸氫鈉水溶 .液（〜3毫升）進行處理，並劇烈攪拌1〇分鐘。將有機層分離後以疏水性玻璃料乾燥，以額外的二氯曱烷（〜2 0 毫升）清洗。合併有機層後濃縮可得膏狀帶色固體。將固體加入乙酸乙酯（〜20毫升）與水（〜1〇毫升）後便會分層，將有機層分離後濃縮可得純的Ν-[(2,3-二氯-4-氣苯基）曱基]-1-曱基-5_侧氧脯氨醯胺之白色固體。 LC/MS [Μ+Η]+ = 319 ’ 滯留時間=2_2 分鐘。 15 實例53-64 上面有關實例52之衍生物的製備方法將製表於下方（表4)，藉由適當的胺類（或其鹽類）進行取代反應後以取代[(2,3-二氯-4-氟苯基）曱基]胺氫氯酸鹽並用於 20 上述的製程中。所有在表4中出現用來製造化合物的胺類可由商業販售之來源或利用已被報導過的化學文獻或其他製備衍生物的方法加以製造。 87 200819127 表4

樣品編號化學名稱 [Μ+Η]+ 滯留時間（mins) E53 yJ〇CF f ο α iV-[(2-氯-3,4-二氟苯基）曱基]· 1 -甲基-5 -側氧膽氨酿胺 303 2.04 E54 | ο . τ ^ . * Α4(4-氣-2-曱基苯基）甲基]-1-甲基-5-側氧脯氨醯胺 281 2.29 E55 | O F F iV-{[4-氟-2-(三氟甲基）苯基]甲基}-1·曱基-5-側氧捕氨酿胺 319 2.29 E56 1 〇 * Λ4(2,3·二氯苯基）曱基]-1-甲基-5-側氧脯氨醯胺 301 2.28 88 200819127

樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間（mins) E57 。街# 1 〇 #-[(2,6-二氯苯基）甲基]-1-甲基-5-側氧脯氨醯胺 301 2.15 E58 #•[(3-氯-2·甲基苯基）曱基]-1-曱基-5-側氧脯氨醯胺 281 2.27 E59 iV-{[2-氟-3-(三氟甲基）苯基]曱基}-1-甲基-5-側氧膽氨酿胺 319 2.32 E60 。令斗， ΛΗ(3-氯-2-氟苯基）曱基]-1-曱基-5-側氧脑氨酿胺 285 2.14 E61 Aq(2,4-二氯-6-甲基苯基）曱基]-1-甲基-5-側氧脯氨醯胺 315 2.3 89 200819127

樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間（mins) E62 〇 1-甲基#{[2_曱基〇·(三氟甲基)苯基]甲基卜5-側氧脯氨醯胺 315.5 2.26 E63 〇 #-[(2-溴-4-氟苯基）曱基]-1-曱 — 基-5-側氧脯氨醯胺 330.9 2.0 E64 ^ ο1身. 〇/ 乂， ' ' , #•{[3-氟-2-(三氟甲基）苯基]曱 _参卜1_甲基-5-側氧脯氨醯胺 319 2.1 用來合成實例62-64的胺化合物可以依照下面所述、方法來製備： 1} 曱基_3-(三氟曱基)苯基]甲基}胺氫氯酸鹽（使用於實例62中的胺化合物）將硼烷（1Μ，39·4毫升，39.4毫莫耳）加入溶有2-甲基-3-三氟甲基苯甲醯胺（2克，9·85毫莫耳）之四氫吱喃（75毫升）溶液中，並加熱至7〇〇c下反應5小時。 200819127 5

10 15

LCMS (液相質譜儀）顯示反應並未完成，因此持續將反應於無水氬氣系統下加熱於70°C下反應至隔夜，之後在額外反應5小時。接著將反應混合物以2N鹽酸水溶液進行處理，並於l〇〇°C下攪拌4小時後冷卻經過一個週末。將混合物放置在真空系統下乾燥，之後加入二氯曱烷與2N氫氧化鈉水溶液後便會分層。將有機層分離後通過疏水性玻璃料，並減壓濃縮可得剩餘物，將其以快速矽膠管柱層析法純化（以〇-5%2N氨水/甲醇溶於二氯曱烧之溶液沖提）。將溶劑減壓濃縮後剩餘物加入乙醚，並以 1M鹽酸乙溶液處理。將固體沈殺物以過遽法收集並於二氯甲烷中壓碎，經過過濾後可得2_甲基-3_(三氟甲基) 苯基]曱基}胺氫氯酸鹽（1·4克）之白色固體。 LC/MS [Μ+Η]+= Π3 ’ 滯留時間：=[3〇分鐘。 2) [(2-溴-4-氟苯基）曱基]胺氫氯酸鹽（使用於實例63 中的胺化合物） (1)將2-溴-4_氟苄基溴（5克，18·8毫莫耳）以及亞醜胺鉀（4克，21.6毫莫耳）混合於二甲基甲醯胺⑽毫升）中，並於崎下騎18小 %隔仗。將混合物於減壓下濃縮後，剩餘物加入乙_與水後便會分層。將固體物過滤除去，水層以乙趟（2x50毫升）清洗。將乙鱗層收集合併後以無水硫酸鈉乾燥，過遽後減壓濃縮可得白色固體（3.36克）。將固體物質於甲醇中摩碎並過 91 20 200819127 濾、可付2-[(2- >臭冰氟苯基）曱基]]丑-異,口朵 -1，3(27ί)-二酮固體（2·06克），將此產物直接使用於下一步驟而無需進一步純化。 LC/MS [Μ+Η]+ 334，滯留時間=3·3〇分鐘。 5 (ii)將水合聯胺（0.655毫升，21毫莫耳）加入懸浮有2-[(2->臭-4-氟笨基）曱基]巧好異吲哚'沿奶· _ 二酮（2克，6亳莫耳）之乙醇（60毫升）溶液中，並於室溫下攪拌至隔夜。若反應並未完全， 1〇則可於這個階段時加熱至l〇〇°C下反應2小時 (此時反應混合物會變成白色霧狀）。將混合物過濾移除固體並冷卻後再過濾一次。將固體物質以冷乙醇溶液清洗，合併乙醇萃取層後減壓濃縮乾燥。將剩餘物加入2N鹽酸水溶液與二氯曱烷 15 後會分層。將有機層分離後通過疏水性玻璃料。 _ 將水層以二氣甲烷萃取後再度分離。將水層減壓濃縮後會剩下灰黃色固體（〇·876克）。將固體部分加入飽和碳酸氫鈉水溶液後以二氯曱烧再萃取一次。以疏水性介質再分離一次後減壓濃縮， 20 剩餘物溶解於乙醚中，並以鹽酸之乙喊溶液處理。灰黃色沈澱物固體會從混合物中產生。減壓濃縮且乾燥後可得到[(2-溴-4-氟苯基）甲基]胺氫氯酸鹽（0.789克）。 LC/MS [M+Hf = 203，滯留時間=ι·〇8 分鐘。 92 200819127 3) {[3H(三氟甲基）苯基]甲基}胺氫氯酸鹽（使用於實例64中的胺化合物）於無水氬氣系統及室溫下將硼炫之四氫呋喃（1M， 19.2毫升’ 19·2毫莫耳）溶液逐滴加入溶有3_氟-2_(三氟 5 曱基)苯曱醯胺（1克，4.8毫莫耳）之四氫呋喃（40毫升）溶液中。將混合物加熱至70。〇下之後再加入等量的硼烷之四氫呋喃（10毫升，1〇毫莫耳）溶液後加熱至7〇°c下馨經過一個週末。將混合物冷卻至室溫下並以2M鹽酸水溶液（15毫升）處理，之後於室溫下攪拌15分鐘。加 ίο 入氫氧化鈉水溶液直到混合物pH值為8-9，之後將混

合物以乙酸乙酯萃取（3 x 30毫升）。合併有機層後以疏水性介質過濾，之後減壓濃縮。將剩餘物再次以二氯曱燒溶解，以疏水性玻璃料分離，減壓濃縮後可的灰黃色油狀物。將油狀物溶解於2M鹽酸水溶液中。白色固體便會 15 沈殿’以抽氣過據收集後裝載至等量的4x 10克之SCX 管柱中。管柱以曱醇及水沖提，並以氨水來沖洗出產物。 ® 最後的濾液以減壓濃縮法濃縮可得黃色油狀物（〇·4克）。將此油狀物溶解於乙醚中，並以1Μ鹽酸之乙醚溶液處理可得到更多的沈澱物。將混合物減壓濃縮可得{[3-氟 20 -2-(二氟甲基)苯基]甲基}胺氫氯酸鹽之白色固體。 LC/MS[M+H]+=193,滯留時間=1·15 分鐘。奢例65-69 上面有關實例12之衍生物的製備方法將製表於下 93 200819127 方（表5)，藉由適當的胺類（或其鹽類）進行取代反應後以取代[(2,3,4-三氟苯基）甲基]胺並用於上述的製程中。所有在表5中出現用來製造化合物的胺類可由商業販售之來源或利用已被報導過的化學文獻或其他製備衍 5 生物的方法加以製造。在反應中所使用的1-乙基-5-側氧- 脯氨酸也可用實例12中所描述的方法C製備，在每個實例之中由指定的方法製造，除了在實例65中使用的是 _ 方法A。 ίο 表5

樣品編號化學名稱 [Μ+Η]+ 滯留時間 (mins ) E65 ，[(2,3-二氯-氟苯基)甲基]-1-乙基 -5-側氧脯氨醯胺 333 2.31 E66 入0 1-乙基-5·側氧-Α4(2,4,6-三甲基苯基）甲基]脯氨醯胺 288 2.41 94 200819127 樣品編號化學名稱 [Μ+Η]+ 滯留時間 (mins ) Ε67 ^ Ο F ΛΗ(2,3-二氟苯基）甲基]-1-乙基-5- 側氧脯氨醯胺 283 1.96 Ε68 Λ 翏[(3,5-二氯苯基）甲基]-1-乙基-5- • 側氧脯氨醯胺 315 2.39 Ε69 J ° #-[(3·氯-2-氟苯基）曱基]-1-乙基-5- 側氧脯氨醯胺 299 2.22 實例70 Aq(2-氯-4-氟苯基）甲基]-1-乙基-5-侧氧-脯氨醯胺（Ε70)

將1-乙基-5-侧氧脯氨酸（0.100克，0.64毫莫耳）以二氯甲烷（3毫升）與二曱基甲醯胺（0·5毫升）之混合 95 200819127 溶液溶解之，加入N-(3_二曱基胺丙基)_N，_乙基羰二亞胺氫氣酸鹽（0.147克，0.77毫莫耳），1_羥基苯并三唾（0.104 克’〇·77宅莫耳），N-乙基嗎淋（0.244毫升，1.92毫莫耳）。將混合物擾拌1〇分鐘之後加入2-氯-4-氟苄基胺，之後持績擾摔至隔仪。將混合物以飽和碳酸清納水溶液（〜2 毫升）處理並劇烈攪拌〜1〇分鐘。將水層分離後以二氯甲烷萃取（2x1毫升）。合併有機層後濃縮可得到黃色油狀產物，利用質量導引自動化HPLC進行純化後可得 #-[(2_氯-4_氟苯基）甲基]小乙基_5_侧氧_D-脯氨醯胺之白色固體（0.065 克 >LC/MS [M+H]+ = 299,滯留時間=2.16 分鐘。鏡像超越值=80.9%，利用掌性管柱層析方法b定出產物為7V-[(2-氣-4-氣本基）甲基]_1_乙基-5-側氧膽氨酿胺滯留時間=5.91分鐘。上述中的1-乙基-5-側氧脯氨酸可依下列方法製備： ⑴將D-焦麩胺酸乙基酯（4·17克，26·53毫莫耳）溶解於四氫呋喃（30毫升）中，加入碘化乙烷（2.23毫升，27·86毫莫耳）後會得到灰黃色溶液。將其冷卻至0°C下之後，分次加入氫化鈉（60%油狀固體， 1.11克，27·86毫莫耳）。將所有的氫化鈉加入之後讓反應混合物於〇°C下攪拌20分鐘直到不在冒泡為止。將混合物於氬氣系統下回溫至室溫下攪拌至隔 96 200819127 5 夜。加入飽和氯化銨水溶液（〜5毫升）至反應混合物中。將有機層分離之後，水層以二氯甲烷（3χ2〇毫升）萃取。合併有機層後以相分離裝置乾燥，濃縮之後可得_/棕色献絲（3.2克）。利用自動快速石夕膠管柱層析法（Biotage SP4)純化，以〇〈〇〇%梯

10 度乙酸乙酯/正己烧歸進行沖提可得卜乙基士侧氧脯氨酸S旨（1·33克）之黃色油狀產物用在下一步驟中而無需進一步純化。./、直接 ⑼將1-乙基I氡脯氨酸醋（1·33克，718毫解於乙醇（10毫升）+，使用冰浴令其冷卻至〇。〇真直D ·5Μ之氫氧化鈉水溶液（丨·72亳升，21·53 二、入，並_反應混合物於0°C下授摔〜4小 15

二/ι!!減壓濃縮將乙醇移除，液體剩餘物再以2N 二液進行酸化直到pH值為利用減壓濃縮乂 -¾濃縮至〜3毫升左右，之後利用分液漏斗以犯有3:1之氯仿及異丙醇之混合溶液進行萃取。t併*機層之後濃驗可制灰黃色油狀產物，在” 進竹再結晶可得1-乙基-5-側氧-膽氨酸白色固體（1·12克）。奢例71-82 上面有關+實例70之衍生物的製備方法將製表於下方（表6) ’藉由適當的胺類（或其鹽類）進行取代反應 97 20 200819127 後以取代2-氯-4-氟苄基胺並用於上述的製程中。所有在表6中出現用來製造化合物的胺類可由商業販售之來源或利用已被報導過的化學文獻或其他製備衍生物的方法加以製造。經由掌性高效能液相層析法（HPLC)來決定 5 異構物的鏡像超越值（e.e.)，其異構物同時列於表中並標示其立體專一命名，掌性分離方法則在括弧中，同時相對應的滯留時間（r.t·)也在其中。表6 樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (mins ) e.e. E7I Λ4(2,4-二氣苯基)曱基]-1-乙基-5-側氧脯氨龜胺 315 2.36 75.6% (C) iV-[(2,4-二氯苯基）甲基]-1-乙基-5-側氧-D-脯氨醯胺 r.t.=6.18 分鐘 E72 -1 ο a iV-{[2-氯-3-(三氟曱基）苯基]曱基卜1-乙基-5-侧氧脯氨醯胺 349 2.44 76.4% (A) #-{[2-氯-3-(三氟甲基）苯基] 甲基}-1-乙基 -5-側氧-D-脯氨酸胺 γΛ·=4·44 分鐘 98 200819127

樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (mins) e.e. E73 J ° f #-{[4-氯-3-(三氟甲基）苯基]曱基}-1-乙基-5·側氧脯氨醯胺 349 2.5 77.3% (A) #-{[4-氯-3-(三氟甲基）苯基] 曱基}-1-乙基 -5-側氧-D-膽氨醯胺 r.t.=4.45 分鐘 E74 1 ；〇 a 翠[(2-氯-6-甲基苯基)甲基]-1- 乙基-5-側氧脯氨醯胺 295 2.23 77.6% (C) i\K(2-氯-6-曱基苯基）曱基]-1-乙基-5-側氧-D-脯氨醯胺 r.t.=5.08 分鐘 E75 界[(3,4-二氯苯基)曱基]小乙基-5-側氧脯氨醯胺 315 2.38 76.3% (C) ΛΓ-[(3,4-二氯苯基）曱基]-1-乙基-5-側氧-D- 脯氨醯胺 r.t.=4.38 分鐘 E76 J / ο α , W[(2-氯苯基）曱基]-1-乙基-5-側氧脯氨醯胺 281 2.06 99 200819127

樣品編號化學名稱 [Μ+Η]+ 滯留時間 (mins ) e.e. E77 爪[(2,6-二氯苯基)甲基]·1-乙基-5-側氧捕氨酿胺 315 2.11 E78 〆 0 iV-[(2-氯-3,4-二氟苯基)甲基]-1-乙基-5-側氧脯氨醯胺 317 2.13 E79 Λ4(4-氯-2-曱基苯基)甲基]-1- 乙基-5-側氧脯氨醯胺 295 2.24 E80 Λ4(2,3-二氯苯基）曱基]-1-乙基-5-氧脯氨醯胺 315 2.23 E81 F 1-乙基-ΛΜ[4-敦-2-(三氟甲基）苯基]曱基}·5-側氧脯氨醯胺 333 2.25 100 200819127 樣品編號化學名稱 [Μ+Η]+ --- 滯留時間 (mins、 e.e. E82 ，〉〇，έ Λ4(3·氯冬氟苯基)甲基]+乙基-5-侧氧捕氨醜胺 299 2.1 二-{[4|2-(三氟甲基）苯基]甲基}_卜甲基_5_侧氧脯氨酸胺（E83)

#-{[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]甲基甲基_5_側氧捕氨酸胺的製備方法如同上述㈣7G +合成#_[(2_氣_4-氣 J = W二基，脯氨醯胺一樣，不過用的是！甲基-他脯⑽（製傷方法描述於下）*非卜乙基·% 魏^酸’以巧岐{[4_氟_2_(三氟甲基)苯基]甲基} 胺而非2-氯-4-氟节基胺。 LC/mS[M+H]、319,滯留時間=214 分鐘。 =中所提到的b甲基_5_侧氧膽氨酸製備方法描述於T万· ⑴=(TC下將D铺胺酸乙基輯（4〇克，25 5毫 f，〇.66 笔莫耳）=於氬氣系統下持續攪拌10分 15 200819127 鐘。將氫化鈉（60%油狀固體，L6克，26·7毫莫耳）分次加入反應混合物中（讓每一份氫化鈉都能完全反應）。待所有氳化鈉添加完畢之後，將混合物於氬氣糸統下回溫至室溫並攪拌隔夜。將混合物加入飽和氯化銨水溶液（〜15毫升）並攪拌4小時。將有機層分離之後，水層以二氯曱烷萃取。合併所有的有機層後以無水硫酸鎂乾燥後濃縮可得暗色油狀產物。將此以快速矽膠管柱層析法純化，以〇-75%梯度之乙酸乙酯/正己燒溶液進行沖提可得乙基1-曱基-5-侧氧膽氨酸醋（〇·27克）之無色油狀產物，可以直接使用於下一步而無需再進一步純化。 U)將乙基曱基I侧氧脯氨酸酯（〇·27克，1.58毫莫耳）溶解於乙醇（5毫升）中，並以冰浴冷卻至0°C。之後加入2M氫氧化鈉水溶液（3毫升）後於0°C 下讀:拌〜4小時。利用減壓濃縮將乙醇移除，液體剩餘物再以2N鹽酸水溶液進行酸化直到pH 1。利用 $壓濃縮將液相體積濃縮至〜3毫升左右，之後利用刀液漏斗以混合有3:1之氯仿及異丙醇之混合溶液進仃萃取。合併有機層之後濃縮便可得到1-甲基_5_ 側氧-脯氨酸而無需進一步純化。 20 此外’上面有關實例7〇之衍生物的製備方法將製表 102 200819127 於下方（表7)，藉由適當的胺類（或其鹽類）進行取代反應後以取代2-氯-4-氟苄基胺並用於實例70中。所有在表7中出現用來製造化合物的胺類可由商業販售之來源或利用已被報導過的化學文獻或其他製備衍生物的方 5 法加以製造。而在實例70冲所使用的1-乙基-5-侧氧脯氨酸也更換成1-曱基-5-側氧脯氨酸（製備方法在上述的實例81中）。經由掌性高效能液相層析法（HPLC)來決 ^ 定異構物的鏡像超越值（e.e.)，其異構物同時列於表中並標示其立體專一命名，掌性分離方法則在括弧中，同時相 10 對應的滯留時間（r.t·)也在其中。表7 樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (mins) e.e. E84 。外尊， ο α Λ4(2,3-二氯苯基)甲基]-1-曱基·5_側氧脯氨醯胺 301 2.11 E85 〇 a F f . 氯-3-(三氟甲基）苯基]甲基}-1-甲基-5-側氧脯氨醯胺 335 2.27 94.1% (A) ，{[2-氯-3-(三氟曱基)苯基] 曱基}-1-甲基 -5-側氧-D-脯氨酿胺 r.t.=5.17 分鐘 103 200819127 樣品編號化學名稱 [Μ+Η]+ 滯留時間 (mins ) e.e. E86 〇 C! Λ4(2,6-二氯苯基)甲基]-1-曱基-5-側氧膽氨酿胺 301 1.98 E87 Λ4(3-氯-2-甲基苯基)曱基]-1-曱基-5-側氧脯氨醯胺 281 2.11 E88 令^%< f O F F ΛΓ-{[2·氟-3-(三氟甲基）苯基]曱基}·1-曱基-5-側氧脯氨醯胺 319 2.16 E89 Λ4(5-氯-2-甲基苯基)甲基]-1-甲基-5-側氧脯氨醯胺 281 2.1 E90 1 Ο F 尽[(3-氯-2-氟苯基)曱基]小曱基-5-側氧脯氨醯胺 285 1.98 104 200819127 舅ϋ ^⑹-氯"4·氟笨基）甲基]-5-側氧]•苯基-脯氨醯胺（Ε91)

5

將側氧苯基-脯氨酸（0.072克，0·35毫莫耳，製備方法描述於下方）溶解於二氯甲烷（〜2毫升）與二甲基甲醯胺（0·5毫升）之混合溶液中，並加入Ν-(3-二曱基胺丙基)-Ν’-乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（0.081克，0.42毫莫耳）’ 1-羥基苯并三唑（〇〇57克，0.42毫莫耳）以及 Ν-乙基嗎啉（〇·134毫升，1〇5毫莫耳）。將此混合物於室溫下攪拌30分鐘，之後將[(2-氯-4-氟苯基）甲基]胺 (〇·〇67毫升，0·42毫莫耳）加入。於室溫下持續攪拌至隔仪’之後以二氯甲烧稀釋後加入飽和碳酸氫納水溶液。將水層分離之後以二氯甲烷（3等分量）萃取。合併有機層之後以飽和食鹽水清洗後再以無水硫酸鎂乾燥。減壓濃縮移除溶劑之後可得到黃色油狀物，將其以質量導引自動化HPLC進行純化。之後將此物質於1:1之二氯曱院及乙醚混合液中禱碎，經過過濾與乾燥之後可得純的ΛΓ_ [(2 _ 氯-4-氟苯基）甲基]_5_側氧_1-苯基-脯氨醯胺（0.031克）之白色固體。LC/MS [M+Hf = 347，滯留時間=2·46分鐘。上述中所使用的5-侧氧笨基_脯氨酸製備方法如 105 200819127 下： (i) 將D_焦麩胺酸乙基酯（〇·200克，1·27毫莫耳）溶解於二吟炫（5毫升）中’加入三（二亞苄基丙酮）二把 (0) (0.058 克，0.06 毫莫耳）、溴苯（〇·351 毫升，ι·53 5 毫莫耳）、碳酸铯（0·621克，1·91毫莫耳）以及4,5_ 雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽（XantphosTM) (0.110 克，0·19毫莫耳）。所生成的混合物加熱至迴流狀態春下反應至隔夜，之後使其冷卻回室溫。將混合物以甲醇稀釋之後過濾。將濾、液減壓濃縮後加入二氯曱院與 10 飽和碳酸氫鈉水溶液便會分層。水層以二氯甲烧萃取三次，合併有機層後以飽和食鹽水清洗，無水硫酸錢乾燥。減壓濃縮移除溶劑之後會得到量黃色剩餘物，利用快速矽膠管柱層析法純化，以0_50%梯度乙酸乙酉旨/正己烧沖提可得甲基5-側氧-1-苯基膽氨酸醋 15 ^ (0·078克）之黃色油狀產物。無需進一步純化而直 0 些使用於下一步驟中。 (ii) 將曱基5-側氧-1_笨基脯氨酸酯（0.078克，〇·36毫莫耳）洛於乙醇（2毫升）中，於〇。〇下加入2Ν氫氧 20 化鋼水溶液（2耄升）。接著將反應物於溫度介於-10 C與0°C間下反應5小時。將溶液以減壓濃縮法移除後，剩餘物加入2M鹽酸水溶液進行酸化直到 PH為1為止。加入二氯甲烷後將分層分離。水層以額外的二氣甲烷萃取，之後合併二氯甲烷層，減壓 106 200819127 濃縮之後可得5-侧氧-1-苯基-脯氨酸（0·072克）之黃色膠狀產物，直接使用而無需進一步純化。 5

實例92_ AMP-氯-3-(三氟曱基）苯基]甲基}-5-側氧-1-(苯基甲基)-脯氨醯胺（E92)

將5-侧氧-1_(苯基甲基)-脯氨酸（0.100克，〇·46毫莫耳，製備方法描述於下方）溶解於二氯曱烷（2·5毫升）與二曱基甲胺（〇·5毫升）之混合溶液中’並加入Ν-(3_ 二曱基胺丙基)-Ν’-乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（0.105克，0·55 毫莫耳），1·羥基苯并三唑（〇·〇74克，0.55毫莫耳）以及 Ν-乙基嗎啉（0.143毫升，1·37毫莫耳）。將此混合物攪拌 10分鐘，之後將{[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]曱基}胺（0.115 克，0.55毫莫耳）加入後攪拌1小時。將飽和碳酸氫納水溶液（10毫升）加入反應混合物之後劇烈授拌15分鐘。將有機層分離之後，水層以等量二氯曱烷清洗（3 χ 1〇毫升）。將有機層合併之後以無水硫酸鎂乾燥。減壓濃缩後所得到剩餘物以質量導引自動化HPLC進行純化後= 得純的氯-3-(三氟曱基)苯基]甲基}-5-側氧j(笨夷甲基)-D-膽氨酿胺。 LC/MS[M+H]+ = 411，滯留時間=2.77 分鐘。鏡像超越值=100.0%，利用掌性管柱層析方法D定出 107 200819127 氣甲基)苯基]甲基-倒氧-η笨滯留時間=1〇·58分鐘。方法如使用刺^側氧小(苯基甲基)_脯氨酸製備 (1)，D-麵氨酸（1 47克，1〇毫莫 10 15 ⑽納水溶液⑴毫升，2〇毫莫耳）中，並 /刀鐘。將混合物以笨甲酸（u毫升，1〇毫莫乙醇（3毫升）溶液進行處理，並於室溫鐘。將混合物冷卻至〇m λ > 扑之德心入礼 M化納（0._ Γ至室溫下授拌超過4小時，接者乂乙醚>月洗二遍，再以濃鹽酸進行酸化 2。將所生成的咖物顧、除去，並以㈣ P 之後以乙醇進行共沸蒸餾至少三心先之漿狀。最後的物質以乙醇（5〇亳^|^成為泥毛幵）溶解後加埶$ 迴流狀態下16小時。接著冷卻至室溫，並減壓濃縮，乾餘後便可得到、純的5-側氧七(苯基甲基)捕氨酸。實例’[(2K氟苯基）曱基側氧]-(苯基甲基)脯氨醯胺（E93)

108 20 200819127 尽[(2-氯-4-氟苯基）曱基]-5-側氧-1-(苯基甲基)脯氨醯胺的製備方法如同上述實例92中合成，{[2-氯_3_(三氟曱基)苯基]曱基}-5-側氧-1-(苯基曱基)脯氨醯胺一樣，同時使用[(2-氯-4·氟苯基）甲基]胺取代{[2_氯_3-(三氟甲基) 苯基]甲基}胺。 LC/MS [M+H]+= Ml，滯留時間=2.54 分鐘。

10 f Μ 94，[(2_氯氟苯基）甲基]_1-環戍基-5-侧氧脯氨醯胺（Ε94)

15

將1-環戊基-5-侧氧脯氨酸（〇1〇〇克，〇 51毫莫耳，製備方法描述於下方）溶解於二氯甲烷（25亳升）、及二曱基曱醯胺（G·5毫升）之混合溶液中。加入Ν·(3-二甲基胺丙基)-Ν’-乙基幾二亞胺氫氯酸鹽（〇117克，〇·6ΐ毫莫耳），1·㈣苯并三哇⑽82克，G61毫莫耳）以及 N-乙基嗎琳（0·2毫升，⑸毫莫耳）。將混合物攪拌1〇分鐘後加入K2/氯-4-氟苯基)甲基]胺（〇〇97克，〇 61毫莫耳）之後攪拌至隔夜。將飽和碳酸氫鈉水溶液…毫升）加入二，中’並劇烈搜拌15分鐘。將有機層分離之後水層以等篁的二氯甲烧萃取（3 χ 1G毫升）。將有機層合併之後以無水硫_乾燥。接著姻減壓濃轉除溶劑所可得到的剩餘物以質量導引自動t HPLC進行純化後可 109 20 200819127 得純的iV-[(2-氯斗氟苯基）甲基]]_環戊基_5_側氧膽氨酿 LC/MS [M+H]+ = 339 ’ 滞留時間=μ 分鐘。上述中使用到的1 ·環戊基_5·側氧脯氨里酸製備方法如 5 下： (〇於無水氬氣系統下將二甲基D_麵氨酸醋鹽酸鹽⑴ 克，10.GG毫莫耳）溶解於甲醇（75毫升）及四氣咬 • °南（15毫升）之混合溶液中，接著加入壓碎的氫氧化鈉（0.4〇2克，1〇·〇5毫莫耳）後反應2〇分鐘。此時 1〇將醋酸（〇.仍毫升，1〇·05毫莫耳）及環戊_ (0.889 么升10.05¾莫耳）加入此混合物中。經過授拌1〇七分鐘之後，混合物以冰浴冷卻至οΐ下，加入片狀氣聽納（0.380克，10.05毫莫耳）。將混合物於無水氬氣系統下持續攪拌，並讓溫度回升至室溫。待反應 15 混合物回溫至室溫之後，利用減壓濃縮將曱醇移除， • 所剩下之剩餘物以二氯甲燒U0毫升）稀釋之，並以飽和碳酸氫納水溶液（〜25毫升）清洗。料機層分離之後，水層再次以二氯甲烷進行萃取（2 X 2〇毫升）。合併有機層之後減壓濃縮可得到一油狀產物。 20 將此=狀產物溶解於甲苯（10毫升）中，並加熱至迴流狀態下反應-個晚上。接著將溶劑以減壓濃縮法移除，剩餘物以快速矽膠管柱層析法純化，以0_10%梯度之^酸乙s旨/正己歸液沖提後可得、_丨_環戊基 -5-側氧脯氨酸酯而無需進一步純化即可使用。 110 200819127 (ii)將1-環戊基-5-侧氧脯氨酸酯（0.560克，2.65毫莫耳）溶解於乙醇（10毫升）中，並以冰浴冷卻至0°C下。之後加入2M氫氧化鈉水溶液（5毫升）並令其在冰 5 浴下反應4小時。將乙醇以減壓濃縮法移除之後，水層以2N鹽酸水溶液進行酸化至pH 1。將所生成之液體混合物體積於減壓濃縮條件下濃縮至〜3毫升，接著以3:1之氯仿與異丙醇之混合溶液進行萃取後以分液漏斗分離。水層以額外的二氯曱烷進行萃 1〇取，之後合併有機層後減壓濃縮可得粗製之1-環戊基-5-側氧脯氨酸，此產物可直接使用而無需進一步純化。實例95-99 15 此外，上面有關實例94之衍生物的製備方法將製表於下方（表8)，藉由適當的胺類（或其鹽類）進行取代反 ® 應後以取代[(2-氯-4-氟苯基）曱基]胺並用於上述製程，及 /或以適當取代之醛或酮來取代上述程序中所用到的環戊酮。所有在表8中出現用來製造化合物的胺類可由商業 20 販售之來源或利用已被報導過的化學文獻或其他製備衍生物的方法加以製造。 111 25 200819127 表8

樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (mins ) E95 (A ° a iV-{[2-氯-3-(三氟曱基）苯基]曱巷} -1 -環戍基-5-側氧膽氨酿胺 389 2.66 E96 ςτ ΛΗ ( 2 -氯-4 ·氟苯基)甲基]-1-環戊基-5-側氧脯氨醯胺 325 2.35 E97 1[(2-氯-4-氟苯基）曱基]-1-(1-甲基乙基）-5-側氧捕氨酿胺 313 2.19 E98 iH(2-氯-4-氟苯基）甲基]-1-(1-甲基丙基)-5-側氧脯氨醯胺 327 2.35 E99 - .. .. ΛΜ[2·氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基}-1-(1-甲基丙基)-5-側氧脯氨醯胺 377 2.6 112 200819127 實例 10& 盏 q / 一 UH(三氟甲基)苯基]曱基}小(2,2-二曱基丙基側氧脯氨醯胺（E100)

y 〇

10 15 戽苴5 K(2,2^f基兩基侧氧脯氨酸（〇·100克，0·5 =，、之$製備方法描述於下方）溶於二氯甲烧（5毫升）後加入队(3_二甲基胺丙基〕界乙基羰二亞胺氫氯古見1笔莫耳），1-羥基苯并三唑（0.135克，將混合物於室溫下攪拌3〇分鐘後加入{[2_ 氯3 (―氟曱基)苯基]甲基}胺（0.209克，1毫莫耳），並於室，下檀拌至隔夜。之後將混合物依序以水、3Ν檸檬酸水/谷液以及多次的水清洗，之後以填充有吸水物質的匣 ('an 5克）乾燦。接者利用減壓濃縮將溶劑移除，並以質1導引自動化HPLC進行純化後可得純的#_{[2- 氣_3_(二氟甲基）苯基]甲基}-1-(2,2-二曱基丙基)_5_侧氧脯氨醯胺。 LC/MS [M+Hf = 391/393，滯留時間=2.78 分鐘。上述中所用到的1-(2,2-二曱基丙基)-5-側氧脯氨酸製備方法如下： ⑴將L-麩氨酸（1.47克，10毫莫耳）溶解於2N氫氧化鈉水溶液（1.09毫升，10毫莫耳）中，之後以溶有三甲基乙酸（1·09宅升，10毫莫耳）之乙醇（5毫 113 20 200819127 人夜進仃反應，並於室溫下攪拌3(>分鐘。將混二部至〇t：下加入氫硼化鈉（〇·13()克）。將混合其"二至至溫後持續攪拌4小時，之後進行酸化使為中性。減壓濃縮後可得泥漿狀剩餘物，加篆〜!Ϊ行共沸蒸餾三次以上。最後剩餘的物質冷卻可〜二'將鹽類過濾、除去，溶劑以減壓濃縮法移除後純二1膠狀物質。於乙喊中進行禱碎之後再乾燥可得、（H一曱基丙基）-5-侧氧脯氨酸固體（1.1 貝例1〇1以[2-氯冬(三氟甲基）苯基]甲基}冬側氧小(苯基甲基)-脯氨醯胺成1〇1)

AM[2-氯1(三氟曱基）苯基]甲基}·5_側氧心_(苯基甲基；)-D-脯氨醯胺的製備方法如同上述實例1〇〇中合成 ΛΜ[2·氯-3-(三氟曱基）苯基]甲基}小(2,2_二曱基丙基)_5_ 側氧脯氨醯胺一樣，同時使用5_氧4_(苯基曱基)脯氨酸取代1-(2,2-二曱基丙基)-5-氧脯氨酸。 LC/MS [M+H] =411/413，滞留時間=2.77 分鐘。鏡像超越值=100.0%，利用掌性管柱層析方法D定出產物為7V-{[2-氯-3-(三氟甲基）苯基]曱基卜孓侧氧(苯 114 200819127 基甲基)-D-脯氨醯胺滯留時間=8.09分鐘。製備5-側氧-i_(苯基甲基)脯氨酸的方法如同上述合成二甲基丙基侧氧脯氨酸（實例100) —樣，只不過使用笨曱醛取代三甲基乙醛。

10 實例102沁[(2,4·二氯苯基）曱基]-1-甲基-5-侧氧脯氨醯胺 (E102)

15

尽[(2,4-二氯苯基）甲基]甲基側氧脯氨醯胺的掣備方法如同上述實例83中合成⑷氣三i甲⑺ 苯基]甲基卜1-甲基-5-侧氧脯氨醯胺一樣，不過使用[(2^_ 二氯苯基）甲基]胺取代{[4-氟_2-(三氟甲基)苯基]甲基胺。 LC/MS [M+Hf = 3〇〇·9，滯留時間=2 η 分鐘。鏡像超越值=97.8%’利用掌性管柱層析方1 务SA°定出物為叫2,4_二氣苯基）曱基]七甲基〜則氧-D-脯氨酿胺滯留時間=6.25分鐘。實例·1031_乙基善{[2-氟-3-(三氟甲基）苯基]甲基卜5_侧氧脯氨醯胺（Ε103) 115 20 200819127

1-乙基-7V-{[2-氟-3·(三氟曱基）苯基]甲基}-5-側氧脯 5 氨醯胺的製備方法如同上述實例70中合成，[(2-氯-4- 氣苯基）甲基]-1-乙基-5-侧乳-D-捕氨酿胺一樣’不過使用 2-氟二氟甲基节基胺取代2_氯-4-氟节基胺。 LC/MS [M+H]+ = 333，滯留時間=2·24 分鐘。 ίο 實例 104-109 列於下表（表9)中的化合物可以依照實例12中所描述的方法加以製備，藉由適當的胺類（或其鹽類）進行取代反應後以取代[(2,3,4-三氟苯基）曱基]胺並依照實例 12中描述的流程來使用。所有在表9中出現用來製造化 15 合物的胺類可由商業販售之來源或利用已被報導過的化學文獻或其他製備衍生物的方法加以製造。而1-乙基-5-側氧脯氨酸可由實例12中的方法C來製備。表9 樣品編號化學名稱 [Μ+Η]+ 滯留時間 (mins ) Ε104 人0> ll· N #-[(2-氰苯基）甲基]-1-乙基-5-側氧脯氨醯胺 272 1.63 116 200819127

E105 ^ 0 iV-{[2-氰-3-(三氟曱基）苯基]曱基}-1-乙基-5-側氧膽氨酿胺 340 2.11 E106 #_(1-萘基曱基)-5-側氧脯氨醯胺 297 2.17 E107 1-乙基-5-氧-iV-{[4-(三氟甲基）苯基]曱基}側脯氨醯胺 315 2.30 E108 1-乙基-#·{[2-氟-3-(三氟甲基）苯基]甲基}·5-側氧脯氨醯胺 333 2.39 E109 」G y 1-乙基-5-氧-ΛΜ[3-(三氟甲基）苯基]甲基}側脯氨醯胺 315 2.34 實例105中所使用到的2-(胺基甲基)-6-(三氟甲基) 苯丙腈製備方法如下： 117 200819127 (i)將if2·氟-H三氟曱基）苯基]甲基}胺（1·93克，l〇毫莫耳）》谷解於二氣甲烧（40毫升）中，之後加入溶有雙（1，1_二甲基乙基)雙羰基酯（2.18克，10毫莫耳）之二氯甲燒（10毫升）溶液。於室温下經過擾拌2小 5 時後，利用減壓濃縮法移除溶劑後可得淡黃色固體，利用矽膠管柱層析法純化，以1:10〜1:5梯度之試藥級乙酸乙酯/正己烷溶液沖提可得純的丨，^二甲基乙鲁基{[2-氟-3-(三氟甲基)苯基]曱基}胺基甲酸酯（2克）。 ίο (ϋ)將卜二曱基乙基（[2_氟_3_(三氟甲基）苯基]甲基} 胺基甲S文酉曰（1 · 17克，4毫莫耳）溶解於二甲基亞石風 (5毫升）中，並加入氰化鉀（0.260克，4毫莫耳）。將混合物於無水氬氣系統下加熱至8Q t反應1 5 小時，之後於120°c下反應至隔夜（16小時）。將額 1S 外的氰化鉀（〇·26ϋ克，4毫莫耳）加入，並於12〇。(:下反應另-個24 *時。將混合物冷卻至室溫後以攀水終止反應，之後乙酸乙酯稀釋。有機萃取層分離之後以水清洗三次，並再以飽和食鹽水清洗。^壓濃縮後可得褐色膠狀產物，以矽膠管柱層析法純化，利甩 20 1:10〜1:5梯度之乙酸乙酯/正己烷溶液沖提可得邱分純的1，1-二甲基乙基{[2_氰基_3_(三氟甲基）苯基] 甲基}胺基碳酸酯之暗色固體/半固體之產物，直接使用於下一步而無需進一步純化。 LC/MS[M-BOC+H]+ = 2〇卜滯留時間=119 分鐘。 118 200819127 (111)^ U·二甲基乙基{[2-氰基-3-(三氟甲基)苯基]甲基} 胺基碳酸酯（0·190克，0.63毫莫耳）溶解於二氯曱烷（4耄升）中，並加入三氟醋酸（4毫升）。將混合物於至溫下攪拌1小時，之後減壓濃縮。剩餘物以一氯曱燒溶解、抽乾兩次後可得粗製2_(胺基甲

10 基)-6-(二氟甲基)苯丙腈之三氟醋酸鹽，直接使用而無需進一步純化。實例 ^甲基春(1-萘基曱基）-5_侧氧脯氨 (E110)

15

將1-甲基-5·側氧脯氨酸（0·050克，〇·35毫莫耳，類似的製備方法描述於實例51)，Ν-(3-二甲基胺丙基)_Ν，_ 乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（0·081克，0.42毫莫耳），丨_羥義苯并三嗤（0.057克，〇·42毫莫耳）以及Ν-乙基嗎啉（宅升’ 1.05宅莫耳）以及（1-秦基甲基)胺混合溶解於二氯甲炫（〜8毫升）中。之後將此混合物於室溫下授拌〜^ 小時。將此混合物以2M鹽酸水溶液進行處理，0 有機層分離，並以飽和碳酸氫鈉水溶液後將減壓濃縮。將剩餘物以質量導引自動化^ ^ /分離後後可得純的甲基仰·萘基甲基)_5•側氧脯氨 20 200819127 色固體（〇·〇62克）。 LC/MS [M+H]+ = 283，滯留時間=2.1 分鐘。實例111 ，{[2-氯_4·氟_3-(三氟甲基）苯基]甲基}-l-曱基-5-側氧脯氨醯胺（E111)

將1-曱基-5-侧氧脯氨酸（0.057克，0.4毫莫耳，類 ίο 似的製備方法描述於實例51)溶解於二氯曱烷（4毫升）中，之後加入2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉 (0.104克，0.42毫莫耳）。之後將{[2_氯-4_氟-3-(三氟曱基)苯基]曱基}胺氫氯酸鹽（0.105克，0.4毫莫耳，製備方法描述於下方）加入，並將此混合物於室溫下攪拌4小 15 時。之後加入飽和碳酸氫鈉水溶液（10毫升）並攪拌5分 0 鐘。將有機層以疏水性玻璃料分離後以2N鹽酸水溶液 (2 X 10毫升）清洗。減壓濃縮有機層後便可得到純的 #-{[2-氯-4-氟-3-(三氟甲基）苯基]曱基卜1-曱基-5-側氧脯氨醯胺（0.106克）。 2〇 LC/MS [M+Hf = 353，滯留時間=2·49 分鐘。上述中使用到的{[2-氯-4-氟-3-(三氟曱基)苯基]甲基} 胺氫氯酸鹽製備方法如下： ⑴將1-氯-3-氟-2-(三氟曱基)苯（10克，50毫莫耳）溶解於四氫呋喃（100毫升）中，於無水氬氣系統下冷 120 200819127 卻至-70°C後加入1·4Μ第二丁基鋰之環己烷溶液 (37.5毫升，52.5毫莫耳）。攪拌2小時之後加入氯化三曱基矽烷（6.7毫升，52.5毫莫耳），並於-70°C 下持續攪拌1小時。將混合物回溫至室溫後，減壓 5 濃縮移除四氫呋喃。剩餘物加入乙醚與水之後便會分層，有機層分離之後以2N鹽酸水溶液清洗。有機層分離之後濃縮可得粗製產物，利用快速矽膠管柱層析法進行純化，以正己烷沖提可得純的[4-氯-2-氟 * -3-(三氟甲基）苯基](三甲基）矽烷之無色油狀產物 ίο (10.35 克）。 (ii)於無水氬氣系統與-75°(：下，將2,2,6,6-四甲基六氫吡啶（3·3毫升，19.44毫莫耳）緩慢加入溶有正丁基鋰（2·5Μ甲苯溶液，7.7毫升，19.44毫莫耳）之四 15 氫呋喃（75毫升）溶液中，並攪拌15分鐘。將溶有[4-氯-2-氟-3·(三氟甲基）苯基](三甲基）矽烷（5 ⑩ 克，18.5毫莫耳）之四氫呋喃（10毫升）逐滴加入此混合物中，並確保反應溫度一直維持在-65°C下，同時持續攪拌2小時。過量的固態二氧化碳於 20 -65°C下以四氫呋喃清洗，然後結塊加入，並且讓混合物回升至室溫，此過程至少要超過2小時。接著將混合物減壓濃縮可得淡黃色固體。此物質加入水與乙醚(200毫升）之後便會分層，接著進行酸化至pH 1。將有機層分離後以無水硫酸鈉乾燥。減壓濃縮後 121 200819127 可得純的2-氯-4-氟_3-(三氟甲基)-5-(三甲基矽烷基）苯甲酸（3.85克，於三批次中得到）之白色針狀固體。 LC/MS [M+H]+ = 312，滯留時間=3·29 分鐘。 (出）將氟化鉀（0.367克，9·55毫莫耳）溶解於水（15毫升）中，之後加入溶有2_氯-4-氟-3-(三氟甲基)_5_(三甲基矽烷基)苯甲酸（1克，3·18毫莫耳）之四氫呋喃 (50亳升）中，並加熱至i〇〇〇c下攪拌反應至隔夜。加入額外等量的水（15毫升）以及氟化鉀（0 370克， 9·62宅莫耳）後持續於l〇〇°C下加熱反應4小時。接著以減壓濃縮法移除四氫呋喃後加入足夠量的二甲基甲酿胺溶劑來溶解所有的固體。將混合物加熱至 l〇〇C下反應至隔夜，不過起始物依舊存在，因此再加入更多的氟化鉀（〇·367克，9.55毫莫耳），並持續、下加熱反應7天。於這個階段下，大多數 =起始物均會進行反應而消失，因此利用減壓濃縮將心劑移除至乾燥的狀態，接著加入2N鹽酸水溶液 r y ^古夕毫升）以及乙醚（50毫升）。將水層分離後以更夕的乙_ (2x50毫升）進行萃取，之後合併有機層 4更以無水硫酸鈉乾燥，之後減壓濃縮可得粗產物之白 ^固體。利用甲苯溶液進行再結晶純化可得純的2_ 氣_4_氟^(三氟曱基)苯甲酸（0.566克）之白色固體。 (iv)將 9 ^ 、心H氟各(三氟曱基)苯曱酸（〇·56〇克，2·31毫 122 200819127 莫耳），1/M，2,3-苯并三唑七酯銨鹽（〇·534克，孓47 毫莫耳，製備方法於下方插述），Ν_(3_二曱基胺丙基)-Ν’-乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（〇·643克，3·47毫莫耳），以及Ν-乙基嗎啉（〇·594毫升，4·62毫莫耳） 5 一起於二氯曱烷（30毫升）中混合攪拌3小時。之後將飽和碳酸氩鈉水溶液（30毫升）加入此混合物中並攪拌15刀鐘。將有機層以疏水性玻璃料分離之 _ 後，以2Ν鹽酸水溶液（2Χ5〇毫升）清洗。再次以疏水性介i为離有機層之後進行減壓濃縮，便可得到 1〇純的2-氯-心氟三氟甲基）苯甲醯胺（〇·493克）之灰白色固體，直接使用於下一步驟而無需進一步純化。上述中所使用到的1仏1，2,3-苯并三唑-1-酯銨鹽製備方法描述於下方： 15 於〇°C下將氫氧化銨（4·15毫升，75毫莫耳）緩慢的加入溶有1-經基苯并三唾（克，74毫莫耳）之四氫 ❿ 呋喃（100毫升）溶液中並攪拌2小時。過濾之後以四氫呋喃溶劑清洗便可得苯并三唑,1-酯銨鹽 (10.57克）之白色固體。 2〇 (v)將2_氯-4_氟_3-(三氟甲基）苯曱醯胺（〇·49〇克，2·〇3 耄莫耳）以1Μ溶於四氫吱喃之硼烧（2〇·33耄升’ 20·33毫莫耳）溶液進行反應，並於60°C下攪拌至隔仪。之後將混合物加入2N鹽酸水溶浪進行反應直到不再冒出氣體為止，之後於1〇〇。〇下樓拌2小 123 200819127 時。接著利用滅墨濃縮將混少量的水之H氯m (餘物加入最氫氧化納水溶液進行升)5=。並以抓後以二氯甲烧UX2/毫升）之肩整到η為止’之 5 層以疏水性_料分離之後合併有::氯甲炫濃縮後可得淡黃以狀產物=的有機層，減壓

10 溶液(3毫升’ 3毫莫耳)，將所:=之乙：便可得到純{[2»氯.4龜3 (一二成的口體進行過滤 5氣酸趟（〇21〇ΐ、既甲基)苯基]曱基}胺祕酸」10克），直接使用而無需進-步純化。實例112 則[2:氯:3·(三氟曱基)苯基]甲基Μ_ 側氣脯氨酸胺（Ell2) 環丁基

15

將1_環丁基-5-侧氧脯氨酸（〇·238克，〇.82 懸浮於二氯曱烷（3毫升）中，之後加入Ν_(3_二甲基)-N，·乙基幾二亞胺氫氯酸鹽（0·188克，〇·98毫‘二丙 1-羥基苯并三唑（0.132克，0.98毫莫耳）以及Ν_乙美啉（0.313毫升，2·46毫莫耳）。將混合物於室溫下攪掉^刈分鐘。之後再加入{[2-氯·Η三氟曱基）笨基]^基 (0.205克，〇·98毫莫耳），並於室溫下攪拌〜2〇。將此混合物以更多二氯甲烷稀釋後加入飽和碳酸气^水 124 20 200819127 洛液進行處理。將二氯甲烷層分離之後，水層以等量體積之二氯甲烷萃取三次。合併有機萃取層之後以水及飽和食鹽水清洗，之後以無水硫酸鎂乾燥，減壓濃縮後可得粗產 5 ，。接著進一步以質量導弓I自動化HPLC進行純化後可 5 ，純的JU2-氯-3_(三氟甲基）苯基]甲基}-1-環丁基-5-側氧脯氨醯胺之白色固體（〇.1〇5克 LC/MS [M+H]+ = 375，滯留時間=2.53 分鐘。 • 上述中所使用的1-環丁基-5-側氧脯氨酸其製備方法如同先前在實例3中合成甲基^乙基-5-氧脯氨酸酯一 10 樣，只不過在這邊是以環丁酮取代乙醛以及增加酯類去保護步驟(使用標準條件，例如使用氫氧化鈉曱醇溶液)進二反應即可（與實例3中合併去保護與醯胺偶合步驟^ 反）。 9 15 實例 113-117 上面有關實例112之衍生物的製備方法將製表於下響方（表10)，藉由適當的胺類（或其鹽類）進行取代反應後以取代{[2-氯各(三氟甲基）苯基]甲基》胺並用於上迷製程。所有在表1〇中出現用來製造化合物的胺頬可由商 20 業販售之來源或利用已被報導過的化學文獻或其他製備衍生物的方法加以製造。 125 200819127 表ίο

樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (mins) E113 存 α ό b #-[(3-氯-2-曱基苯基）甲基]-1-環丁基-5- 側氧脯氨醯胺 321 2.39 E114 d.°. 〇，' 1 -環丁基-Λ4(2,4-二氯苯基）甲基]-5-側氧脯氨醯胺 341 2.46 E115 ό 0 a Λ4(2-氯-3,4-二氟苯基）曱基]-1-環丁基 -5-側氧脯氨醯胺 343 2.32 E116 〇 ° · α - ' 1-環丁基-尽[(2,3-二氯苯基）曱基]-5-側氧脯氨醯胺 341 2.38 126 200819127 樣品編號化學名稱 [M+H]+ 滯留時間 (mins ) Ε117 ό 〇 1 355 2.51 1_環丁基甲基-3-(三氟甲基）苯基]甲基}-5-側氧脯氨醯胺 ⑩ 在實例115中，合成Ν·[(2-氯二氟苯基)曱基]-1-環丁基-5-側氧脯氨醯胺時需要用到[(2-氯-3，4-二氟苯基）甲基]胺氫氯酸鹽，其製備方法已在實例36中有所 5 描述。實例118 ΛΜ『2-氯-3·(三氟曱基)苯基]曱基卜1-(2,2-二曱基丙基)-5-側氧脯氨醯胺（Ε118)

#-{[2-氯-3-(三氟曱基）苯基]曱基二曱基丙基)-5-側氧脯氨醯胺製備的方法已在實例100中有所描 15 述，只不過使用的是1-(2,2-二曱基丙基)-5-氧脯氨酸，其製備方法將描述於下方。 LC/MS [M+H]+ = 391/393，滯留時間=2·76 分鐘。 127 200819127 備方法二:的1似二’基丙基>5,氧脯氨酸製將麵胺酸（2·21克，15 a曾甘、化納水溶液（15毫升，3〇毫莫;溶解於讯氫氧夕尨；X w 毛吴耳）中，亚冷卻至〇。〇，溶、夜L 三甲基乙盤（1.63毫升’ 15亳莫耳）之乙醇上升)後於室溫下攪拌45分鐘。將混合物再次 ^曰！L後逐批加入氫鈉⑷89克，5毫莫耳）。 =a物回升至室溫_超過4小時，接著以乙喊清 10 15 ^並Μ濃鹽酸溶液調整至pH 4。所生成之沈殿物以過 ^法收集’乙崎洗，並於真空系統下乾燥一整夜。將固 -加入乙醇（5G *升）後會懸浮於其中，接著將此混合物加熱至迴流狀態下24小時。濃縮並於正己燒溶劑中壓碎便可知到1-(2,2-二曱基丙基)_5_侧氧脯氨酸（151克）之口體產物，無需進一步純化而直接用於下一步驟中。動Lm #-{[2|3-(三氟甲基)苯基]甲基侧氧吡啶基甲基)脯氨醯胺（E119)

(V 將5-側氧-1-(2-吡啶基曱基)脯氨酸（〇 22〇克，丨毫莫 =’製備方法描述於下方），叫3-二甲基胺丙基)_N，·乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（0.384克，2毫莫耳），丨_羥基苯并三 128 20 200819127 唑（0·308克’ 2耄莫耳）於室溫下一起攪拌混合於二氯曱烷（10毫升）中30分鐘。將此混合物加入{[2-氯-3-(三象曱基)苯基]甲基^(〇.3U克，U毫莫耳）進行反應後，將混合物於室溫下攪拌至隔夜。將混合物濃縮後加入飽和 5 碳酸氫鈉水溶液與乙酸乙酯之後便會分層。將水層分離之後以乙酸乙酯萃取，合併乙酸乙醋萃取層之後以三份水清洗，並以飽和食鹽水清洗。之後以無水硫酸納乾燥，濃縮 • 後可知固悲剩餘物，將其以質量導引自動化HPLC進行純化後可得#-{[2-氯-3-(三氟甲基）苯基]曱基卜5_側氧 1〇吡啶基甲基)脯氨醯胺之淺黃色固體（0.263克）。 LC/MS [M+H卜彻414，滞留時間=2 15分鐘。上述中所使用到的5·側氧]比咬基甲基)膽氨酸製備方法如下：於（TC下將D-麵胺酸（2.21克，Μ毫莫耳）溶解於2N 15 A氧化納水溶液（15毫升，3〇毫莫耳）巾，之後加入吼 ❿ 心2·叛酸乙酸（I43毫升，15毫莫耳），並於室溫下擾拌 45分鐘。將混合物再次冷卻到叱後逐批加人氫爛化納 (〇，189克’5毫莫耳）。將混合物回升至室溫後攪拌超過4 小時，接著以乙醚清洗兩次，並進行酸化調整至pH5_6。 20 冑水層濃縮後加入甲苯進行共彿蒸餾三次，再以W比狀乙醇1苯之混合物進行共沸蒸餾，最制是乙醇。將剩餘物溶解於乙醇（50毫升）中並加熱至迴流狀態下反貞S小時。濃職所得到的_物於真空下乾燥便可得到5_側氧-1-(2-吼咬基子基)脯氨酸（2.6〇克）之起泡狀產 129 200819127 物，無需進一步純化而使用在下一步驟中 ^{[2-氯-3·(三氟甲基)苯基]甲基}_5_側氧小(3 吡啶基甲基)脯氨醯胺（Ε120)

10 15 將5-側氧-HP比咬基曱基)脯氨酸（〇.21〇克，、毫莫耳’製備方法描述於下方），Ν·(3_: f基胺丙基)_N,_乙基幾二亞胺氫氯酸鹽（0.383克，2毫莫耳），丨_經基苯并三唑(〇·306克，2毫莫耳)於室溫下一起攪拌“ 烷〇0耄升）中3〇分鐘。將此混合物加入{[2-氯_3_(三氟甲基)苯基]甲基}胺（0.314克’1.5亳莫耳）進行反應後，將混，物於室溫下攪拌至隔夜。將混合物濃縮後加入飽和碳酸氫鈉水溶液與乙酸乙酯之後便會分層。將水層分離之後以乙酸乙酯萃取，合併乙酸乙酯萃取層之後依序以三份水以及飽和食鹽水清洗。之後以無水硫酸鎂乾燥，濃縮後可得固態剩餘物，將其以質量導引自動化HPLC進行純化後可得#_{!>氯-3-(三氟甲基）苯基]甲基卜5_側氧-丨七-吡啶基曱基)脯氨醯胺之淺黃色固體（〇·031克）。 LC/MS [Μ+Η]+ = 412/414，滯留時間=1.83 分鐘。上述中所使用到的5-侧氧-1-(3-吡啶基曱基）脯氨酸製備方法如下： 130 20 200819127 有17比哈1、％毛莫耳）中，之後加入溶 5 10 亳升）、：;二乙盤〇.41毫升’ 15毫莫耳）之乙醇（3 :=)洛液。，並於室溫爾3〇分鐘。之後將混合物(再人令卻到0 C後逐批加入氫硼化納（〇189克，5毫莫耳）。將混合物回升至室溫後攪拌超過4小時，接著以乙醚清洗，並使用濃鹽酸進行酸化調整至pH 5-6。將所生成之沈凝物以過遽法收集’並以乙_清洗，之後於真空下乾燥。將此物質溶解於乙醇（5〇毫升）中並加熱至迴流狀態下反應至隔夜。最後的固體再以過濾法移除，接著濃縮後可得到5-側氧小(3_咖定基曱基)脯氨酸（2.04克）之白色固體產物，無需進/步純化而使用在下一步驟中。 ij[^] 121 二氯苯基）曱基]_5-側氧小(3-咕咬基甲基)脯氨醯胺（E121)

iV-|X2,4-二氯苯基）曱基]-5·侧氧-比咬基甲基)脯氨酸胺的製備方法如同上述實例102中合成’{[2-氯三氟甲基)苯基]甲基》_5-氧— Η3』比咬基曱基)脯氨酿胺 —樣，不過是使用一氣苯基）曱基]胺取代{[2-氣三氟甲基)苯基]甲基>胺。 131 200819127 LC/MS [M+H]+ = 378/380/382，滯留時間=1·70 分鐘。實例122 1-環丙基-#»[(2,4·二氯苯基）甲基]-2-甲基-5- 側氧脯氨醯胺（Ε122)

將溶有（2,4-二氯苯基）甲基異腈（0.047克，〇·25毫莫耳）及乙醯丙酸（〇·〇41毫升，〇·4毫莫耳）於曱醇（2毫升）溶液中，之後加入環丙基胺（〇·〇42毫升，0.6毫莫耳）。之後將混合物置於微波反應器中加熱至1〇〇。〇下反應30 分鐘。利用減壓濃縮移除溶劑，剩餘物以質量導引自動化 HPLC進行純化後可得ι_環丙基二氯苯基）曱基]_2_曱基-5-侧氧脯氨醯胺（〇〇54克）之白色固體。 LC/MS [Μ+Η]+ = 341/343，滯留時間：=2.57 分鐘。實例 123-126 上面有關實例122之衍生物的製備方法將製表於下方（表11)，藉由適當的胺類進行取代反應後以取代之環丙基胺並用於上述製程。所有在表丨丨中出現用來製造化合物的胺類可由商業販售之來源或利用已被報導過的化學文獻或其他製備衍生物的方法加以製造。 132 200819127 表11

才篆品編號化學名稱 [Μ+Η]+ 滯留時間 (mins ) E123 °5HrNHj? iV-[(2,4·二氯苯基）曱基]-1-乙基-2-曱基-5-側氧脯氨醯胺 329 2.49 E124 .〇 ° / α 1 -環丁基·ΛΚ(2,4-二氯苯基）甲基]-2- 曱基-5-側氧膽氨酿胺 355/357 2.78 E125 JV-[(2,4-二氯苯基）曱基]-2-曱基-1-(1-曱基乙基)-5-側氧脯氨醯胺 343/345 2.64 E126 1 Ο Οϊ ΛΚ(2,4-二氯苯基）曱基]-1，2-二曱基 -5-側氧脯氨醯胺 315 2.39 133 200819127 _ 胺二=甲基]切-三甲基-側氧

將：有2,4-二氯笨基)甲基異腈（〇〇94克，〇 $亳莫耳二LYr甲基|側氧丁酸（〇·065毫克，〇.5亳莫 =於下方)之甲醇(2毫升)溶液加入甲土 . /升’ 33〇/〇之乙醇溶液）。將此混合物置於微波反應Μ加熱至1G(TC下反應％分鐘。利農縮移除溶劑’剩餘物以質量^丨自動化Ηριχ = 後可得無色膠狀之W[(2,4-二氯笨基) 一丁、田屯化 •5-側氧脯氨ϋ胺（0.043克）之濕勒狀白“體’。—甲基 LC/MS [Μ+Η]+= 329/33卜滯留時間=2 42 分鐘。 15 上述中所使用之3,3-二甲基|側氧丁酸製傭方法如下· 將3,3-二曱基-4-戊烯酸（1.3克，ι〇 ι4毫解於二氯伐⑺毫升）中，之.乾冰 -78 C。接著利用氧氣吹氣至混合物中在通以臭氧25分鐘（會得到藍色溶液）。接著再里二後進行冒㈣氣五分鐘’之後便改Μ水氬氣吹氣鐘。將二甲基硫醚（2.23毫升，30.4毫莫耳）力〇入於混二物中，之後將混合物自冷卻浴中移除後攪拌2·5小此時便會生成無色溶液，將其減壓濃縮後可得3,3_二^美 134 20 200819127 -4-側氧丁酸之無色油狀物，直接使用而無需進一步純化。實例128 ，{[2_氯-3-(三氟曱基）苯基]曱基}-1，3,3-三甲基-5-侧氧脯氨醯胺（E128)

#-{[2-氯-3-(三氟曱基）苯基]甲基}-1，3,3_三曱基-5_氧脯氨醯胺的製備方法如同上述實例127中合成Λ4(2,4-二氯苯基）曱基]-1，3,3-三曱基-5-側氧脯氨醯胺一樣，但係使用[2-氯-3_(三氟曱基）苯基]曱基異腈（製備方法描述於實例40中）取代(2,4-二氯苯基）曱基異腈。 LC/MS [Μ+Η]+ = 363/365，滯留時間=2·49 分鐘。 15 實例129 ，{[2-氯-3-(三氟曱基）苯基]曱基}·1，3-二曱基-5_侧氧脯氨醯胺（Ε129)

3 F 將1，3-二曱基-5_侧氧脯氨酸（0.620克，3.6毫莫耳，製備方法描述於下方）、N-(3-二曱基胺丙基)-N’-乙基羰二亞胺氫氯酸鹽（0.822克，4·3毫莫耳）、1-羥基苯并三唑 (0.581克，4.3毫莫耳），Ν-乙基嗎啉（1.4毫升，10.8 毫莫耳），以及{[2-氯-3-(三氟甲基）苯基]甲基}胺（0.828 135 20 200819127 克:3.96耄莫耳）合併混合溶解於二氯甲烷（ι〇毫升）及二曱基曱醯胺（5毫升）之混合溶液中，並於無水氮氣系統下攪拌至隔夜。之後將混合物依序以水（5〇毫升）、 0.5N鹽酸水溶液（5〇毫升）、水（5〇毫升）、飽和碳酸氫，水洛液（5〇毫升）以及水（5〇毫升）進行清洗。將二 ^甲烷層以疏水性梯度分離，之後以減壓濃縮法濃縮後可得粗產物。進一步以質量導引自動化HPLc進行純化後可得純的#-{[2-氯-3_(三氟曱基）苯基]甲基h，3-二甲基 -5-氧脯氨醯胺（〇·613克）。 LC/MS [Μ+Η]+ = 349，滯留時間=2·31，2.38 分鐘（兩個異構物）。上述中所使用到的1，3_二甲基-5-侧氧脯氨酸製備方法如下： W於無水氬氣系統下將（足足及)-2_羥基蒎烯-3-酮（1〇·9 克，64.8毫莫耳）及甘氨酸-第三丁基酯（13克，91.2 毫莫耳）溶解於無水甲苯（2〇〇毫升）中，之後以三氟化硼之乙醚溶液（0.460克，3.24毫莫耳）進行反應，之後加熱至迴流下反應6小時。接著將混合物冷卻至室溫後攪拌一晚。透過過濾器過濾後減壓濃縮可得黃色膠狀物質，並以自動快速矽膠管柱層析法 (使用BiotageSP4)進行純化，以25%之乙酸乙酿 /正己烷溶液進行沖提可得一些純的1，1-二甲基乙基 -尽[(7足2足从)-2-羥基-2,6,6-三甲基雙環[3·1·1]庚_3_ 基烯]甘氨酸酯（3.68克）以及部分混合到的混合液。 136 200819127 將不純的部分再次進行純化，同樣使用自動快速矽膠管柱層析法（使用Biotage SP4)進行純化，不過沖提系統改以0-25%梯度之乙酸乙酯/正己烷（0-15% 收集10管體積，15-25%收集5管體積）混合溶 5 液沖提，便可得到純的1，1-二曱基乙基 [⑺羥基-2,6,6-三甲基雙環[3·1·1]庚-3·基烯]甘氨酸酯（1.73克）。將兩批次之純的1，1-二甲基 • 乙基-1[(仪2足5及)-2-羥基-2,6,6-三甲基雙環[3丄1] 庚基烯]甘氨酸酯合併（514克），並將此物質用於 10 下一步驟中。 (備註：上述中所使用的甘胺酸第三丁基酯可以用甘胺酸第三丁基酯氫氯酸鹽取代，同時使用更多當量的碳酸鉀。） 15 ⑻將溶有U-二曱基乙基足2足57?)-2-羥基-2,6,6- _ 三甲基雙環[3· 1.1]庚！基烯]甘氨酸酷（11.05克，39·3 毫莫耳）之無水四氫呋喃（100毫升）溶液冷卻至 -30°C下，之後加入3Μ甲基溴鎂之乙醚溶液（17.1 毫升，51·1毫莫耳）。之後將丨，心二氮雜雙環[5·4·0]11 20 碳冬烯（7·78克，51·1亳莫耳）加入此混合物中，之後於-30 C下額外攪拌20分鐘。將混合物加入丁烯酸乙酯進行反應，之後持續攪拌1小時。將混合物加入飽和氯化銨水溶液（35毫升）進行終止反應，之後以乙酸乙s曰進行萃取（3 X 1〇〇毫升）。合併有機 137 200819127 萃取層後以無水硫_乾燥，财後減堡濃縮色油狀產物。將此物^自純速 _ :黃化（使用Bi〇tageSP4)，先以0_20%梯度2=純酯/正己烷進行沖提(收集5管體積，乙 ^0-35%梯度沖提（收集14#體積以上„ ι-(ι，ι-二甲基乙基）5_乙基#佩2尺从了 ^-2,6,6_三？基雙環[311]庚_3_基稀]_3_甲基 = 酯（4·2克），並將其直接使用於下一步驟中。义 (in)將10%之檸檬酸水溶液（11毫升，5·6毫莫 15 20 入溶有HU-二甲基乙基）5_乙基沁_2足，經基-2’6,6·三甲基雙環[3丄1]庚-3-基烯]_3_曱烏、酸酯（2克）之四氣咬鳴（1〇毫升）溶液中，=胺混合物於室溫下攪拌4天。將混 ^讓其剩餘物加入水(5〇毫升)便會產生懸浮辰 ==)清洗。將水層以碳酸氫鈉水溶C Ρ 為止，之後以乙醚（3 X 1〇〇毫升） 2 二層合併’以無水硫_乾燥，過= =(匕克)之黃色油狀產物，直接往下反2 無需進一步純化。 (iv) 甲基乙基)5_乙基3-甲基麵胺酸醋“ 克笔莫耳）靜置’並接上高真空系統抽乾-晚 138 200819127 以及一個週末。此階段由於起始物依舊明顯存在，因此將甲苯（30毫升）加入，並將所生成之混合物於 U0C下加熱至隔夜。減壓濃縮後可得-二甲基乙基甲基_5_側氧脯氨醯胺（〇·79克），直接使用於下一步驟而無需進一步純化。 (ν)將二甲基乙基3-曱基-5-側氧脯氨醯胺（〇·79 克’ 3·96毫莫耳）溶解於四氫呋喃（8毫升）中，之後加^峨化曱烧（〇·27毫升，4.36毫莫耳）。將混合 10 物冷卻至〇c下，之後逐次加入氫化鈉（60%在油中，0.170克，4.36毫莫耳）。待混合物於下冒泡結束約30分鐘後，將反應回溫至室溫下攪拌至隔伙。將混合物加入飽和氯化銨溶液（1〇毫升）終止反應，將有機層分離後先擱置在侧。將水層以二氯曱 15 烷（3Χ20毫升）萃取，之後合併所有的有機萃取層並以疏水性玻璃料乾燥後減壓濃縮便可得到粗製甲基乙基込3·一曱基側氧脯氨酸酯（〇·770 克）之黃色油狀產物，直接使用無需純化。㈧7^1甲基乙基二甲基側氧膽氨酸酉旨 (0.77〇克，3.62毫莫耳）懸浮於二氯甲燒（5毫升）中，之後加入三氟醋酸（〇·4亳升，5.4毫莫耳）。將混合物_ 5小時候減壓濃縮。以接著將所之剩餘物加人ψ苯騎料_ ’便可_尚未反應之 139 20 200819127 起始物（0·600克）。脸中，之後再度加入三解於二氯甲燒（2毫升）小時後，將混合物^厂(毫升）。待擾拌反應2 毫升）進行共彿蒸餘物再以甲苯（1〇氧脯氨酸（0.760克）甚于1衣H一甲基_5_侧 J產物，無需純化直接使用。 5 #丨气睹—基）甲基]小乙基_4,4·二甲基 _側乳脯氦醯胺（E130)

將1-乙基-4,4-二甲其ς 爲苴且制供女、υ 土…侧氧脯氨酸（0.130克，0.702 ΐ == 下方），1姻苯并三唾（0.161 15 20 ^ . 3笔莫耳），Ν_(3_二甲基胺丙基沖，_乙基幾二亞 ί氣氯f鹽（議*，咖毫料）制溶解於二氯甲並於室溫下攪拌15分鐘。將[(2-氯-4-氣本基）甲基]胺（0.134克，〇.842毫莫耳）以及二異丙基胺（0.184毫升，L053毫莫耳）加入此混合物中，並於室溫下攪拌至隔夜。將混合於減壓下濃縮，剩餘物加入乙酸乙酯與水之後便會分層，將水層以乙酸乙酯進行萃取。合併有機層後依序以3N擰檬酸水溶液、水、飽和碳酸^ 鈉水溶液、水（x3)以及飽和食鹽水清洗，之後以無水硫酸鈉乾燥。濃縮後可得一粗製固體，將其以質量導引自動化HPLC進行純化後可得#-[(2K氟苯基）曱基]小 140 200819127 乙基-4,4-二曱基-5-侧氧脯氨醯胺（〇·ΐ46克）之固體。 LC/MS [Μ+Η]+= 327/329，滯留 Β夺間=2·35 分鐘。上述中所使用到的1-乙基-4,4-二甲基-5-側氧脯氨酸製備方法如下·· 5 ⑴將（SH+)-L_5-三苯曱氧基曱基-2-吡咯烷酮（7·51 克，20毫莫耳）溶解於二曱基曱醯胺（25毫升）中，於〇°C下分批加入氫化納（60%在油中懸浮，0·880 0 克，22毫莫耳）。將混合物於〇°C下反應1小時，之後加入碘化甲烷（1.78毫升，22亳莫耳）。將混合 1〇回升至室溫下攪拌至隔夜。將混合物倒入冰水中並以乙酸乙S旨％取三次。合併有機萃取層後依序以水、 50%食鹽水（3x)、以及飽和食鹽水清洗，之後以無水硫酸納乾燥。濃縮後可得一粗製固體，將其以自動快速矽膠管柱層析法純化（Biotage SP4)，以〇_1〇〇0/〇 15 梯度之乙酸乙酯/正己烧混合溶液進行梯度沖提可得純的1-乙基-5-{[(三苯基曱基）氧]甲基卜2·^比咯烷酮 ⑩ （7·09 克）。 (ii)將2Μ溶於四氫呋喃之二異丙基醯胺鋰之溶液 (1.912耄升，3.82毫莫耳）於_78°C下逐滴加入溶有1·乙基-5-{[(三苯基甲基）氡]甲基卜2^比咯烷_ (1.34克，3·48毫莫耳）之四氫嗅喃（1()毫升）溶液中，將所生成之混合物於。將碘化甲烷（〇·239 = 升，3.82耄莫耳）加入後於下額外攪拌1小 141 200819127 時，之後將混合物回溫至室溫下攪拌3小時以上。將混合物再次冷卻至_78ΐτ，逐滴的再加入等量的 2Μ二異丙基醯胺鋰之四氫咴喃溶液（1912毫升， 3.82亳莫耳）。之後於_78。〇下額外攪拌丨小時，並 =加入碘化曱烷（0.239毫升，3.82毫莫耳），之後將 =合物回溫至室溫下攪拌至隔夜。將混合物加入飽和虱化銨水溶液終止反應，並以乙酸乙酯進行萃取 (χ2)。合併有機層之後以水清洗三次，並以飽和食鹽水清洗，以無水硫酸鈉乾燥，之後濃縮可得粗製似固體產物（1.7克）。將此粗製產物以自動快速矽膠&枝層析法純化（Bi〇tageSp4)，以〇_1〇〇%梯度之乙S文乙酯/正己烧之混合溶液進行梯度沖提後可得，的產物（亦即1-乙基-3,3_二曱基_5气[(三苯基甲基) 氧]甲基}·2-吼咯烷酮（0·468克）），以及純的單烷基化產物（亦即1-乙基-3_甲基-5-{[(三苯基甲基）氧]甲基卜2^比嘻烷酮（〇·524克））以及兩者相互混合的產物（0.240克）。接著將所需要的產物放在一邊，然後將1-乙基-3- f基_5_{[(三苯基甲基）氧]甲基卜比咯，酮以及混合的產物合併在一起後以四氫呋喃（2〇毛升）溶液溶解。將此溶液於_78。〇下逐滴加入2M 一異丙基醯胺鋰之四氫呋喃（1912毫升，3·82毫莫耳）溶液中，並於相同溫度下攪拌丨小時。之後將硬化甲烧（0.239毫升，3.82毫莫耳）加入此混合物中，並讓此混合物回升至室溫下攪拌超過4小時以 142 200819127 上。利用上述方法終止反應後可得到另一批次的1β 乙基-3,3-二曱基_5-{[(三苯基甲基)氧]甲基比咯烧酮（0.846克）之油狀產物，將此產物與先前放置一旁的產物合併在一起（總質量=1.08克），並直接使用而無需進一步純化。 (iii) 將Ambedystl5⑧（5.56克，26.1毫莫耳）以甲醇清洗三次，之後將溶有1-乙基_3,3_二甲基_5-{[(三苯基甲基)氧]曱基}-2-吡咯烷_ (1〇8克，2·61毫莫耳）之甲醇（50毫升）溶液加入。將此混合物於室溫下放置4天，之後將树脂以過濾法移除（並以甲醇清先）合併曱醇層後，辰縮可得粗製油狀產物（1 Μ 克），將其以自動快速矽膠管柱層析法純化（Bi〇tage SP4)，以（moo%梯度之乙酸乙酯/正己烷混合溶液進行沖提可得純的1-乙基_5_(羥基甲基)-3,3-二甲基〜比洛烧酮（G·376克）之油狀產物，靜置下會產生固化現象。 (iv) 將1 -乙基-5-(羥基甲基）·3,3_二甲基么吡咯烷酮 (〇·366克，2.1 *莫耳），亞氯酸納⑶·撕克，43 毫莫耳）以及1Μ磷酸單鉤緩衝水溶液（2·46毫升， 2.46氅莫耳）合併於乙腈溶液（3毫升）中，並加熱至4(TC下。將少量結晶狀τεμρ〇(2,2,6,6,ι* ]♦定基氧化自由基）以及一滴漂白水（次氯酸納溶 143 200819127 液，其中氯濃度>12%)加入反應混合物中並於40 °C下攪拌4小時。之後將混合物倒入含有1% w/w 硫化鈉之冰水中，將所生成之混合物以乙酸乙酯萃取三次。合併有機層之後以飽和食鹽水清洗並以無水硫 5 酸鎂乾燥，濃縮後可得^乙基-4,4_二曱基-5-侧氧脯氨酸（0.392克）之白色固體，直接使用而無需額外的純化。 LC/MS [M+H]+= 186。 ίο 實例131 ^([2_氯-3_(三氟甲基）苯基]甲基}-l-乙基-4,4- 二甲基-5-側氧脯氨醯胺

氯-3-(三氟甲基）苯基]曱基乙基_4,私二曱基馨 -5-侧乳膽氣^胺的製備方法如同上述實例（E130)中合成W[(2·氣冰氟本基）曱基]_1·乙基二曱基_5_侧氧脯氨醯胺一樣，但係使用{[2-氯-3_(三氟甲基)苯基]甲基}胺 2〇取代[(2·氯-4-氟苯基）甲基]胺。 LC/MS [Μ+Η]+ = 377/379，滯留時間二 2·63 分鐘。 132- 氯-3,4_二氟苯基）甲基]-1-乙基-4,4-二曱基_5·側氧脯氨醯胺（£132) 144 200819127

TV-[(2-氯-3，4-二氣苯基）曱基]-1-乙基_4,4_二曱基-5- 5 侧氧脯氨醯胺的製備方法如同上述實例（E130)中合成 Λ/"[(2-氯-4-鼠苯基）曱基]-1-乙基-4,4-二甲基-5-侧乳膽氨醯胺一樣，但係使用[(2-氯-3,4-二氟苯基）曱基]胺氫氣酸鹽 _ (製備方法描述於實例36中）取代[(2-氯-4-氟苯基）曱基]胺。 10 LC/MS [M+H]+ = 345/347，滯留時間=2.43 分鐘。實例133 氯·3,4-二氟苯基）甲基]-1-乙基-5-侧氧 -4,4-雙（苯基甲基)脯氨醯胺（Ε133)

，[(2-氯_3,4_二氟苯基）曱基]-1-乙基-5-侧氧-4,4-雙 (苯基甲基)脯氨醯胺的製備方法如同上述實例（Ε130)中 20 合成，[(2-氯-4-氟苯基）曱基]-1-乙基_4,4_二曱基-5-側氧脯氨醯胺一樣，但係使用1-乙基-5-氧-4,4-雙（苯基曱基) 捕氨酸取代1-乙基-4,4-二曱基-5-側氧捕氨酸。而1-乙基 -5-氧-4,4-雙（苯基曱基）脯氨酸製備方法如同上述實例 130中製備1-乙基-4,4-二曱基-5-側氧脯氨酸一樣，但使 145 200819127 用的是1-乙基-3,3-雙（苯基甲基)三苯基甲基）氧]曱基}-2-各烷酮（實例37 ，方法b中所分離出來的副產物）取代掉1-乙基_3,弘二甲基-5-{[(三苯基曱基）氧]甲基}-2-吡咯烷酮。 5

LC/MS [M+H]+ = 479/481，滯留時間=3.32 分鐘。紐…13生^{1>氯-3-(三氟甲基）苯基]甲基}-1-乙基-5-側氧-4-(苯基曱基)脯氨醯胺（E134)

尽{[2-氣-3-(三氟曱基）苯基；|甲基乙基-5-側氧 _4_(苯基甲基）脯氨醯胺的製備方法如同上述實例（E37) 中合成Λ4(2-氯-4_氟苯基)曱基]-1-乙基_5_侧氧_4_(苯基曱基)_脯氨醯胺一樣，但係使用{[2-氯-3-(三氟曱基)苯基] 曱基}胺取代[(2-氯-4-氟苯基）甲基]胺。描述於實例37 中的方法B，可以用來製備1-乙基_5_侧氧冰(苯基曱基> 脯氨酸。 LC/MS [M+H]+ = 439/441，滯留時間=2·99 分鐘。例135 #_{[2·氰各(三氟曱基）苯基]甲基}-1-曱基-5· 側氧脯氨醯胺（E135) 146 20 200819127 #-{[2-氰-3-(三氟曱基）笨基]曱基卜^曱基_5_侧氧脯氨醯胺的製備方法如同上述實例（E1〇5)中合成沁{[2- 氰-3-(三氟曱基)苯基]甲基}小乙基各側氧捕氨酿胺一樣5但係使用1-甲基-5·氧脯氨酸取代卜乙基_5-氧脯氨酸。 LC/MS [M+H]+ = 326，滯留時間=2 〇2 分鐘。 ^ 136尽(2_雙苯基曱基）-1-乙基-5-侧氧脯氨醯胺 (E136)

ΛΚ2-雙苯基甲基乙基_5-側氧脯氨醯胺的製備方法如同上述實例（E5〇)中合成^[(2,3_二曱基苯基）曱基]-1-乙基-5-側氧脯氨醯胺一樣，但係使用（2_雙苯基甲基)胺取代2,3-二甲基节基胺。 LC/MS[M+H]+ = 323,滯留時間=2.38 分鐘。 &渡反應器上述實例中所指定的微波反應器是使用Biotage 147 200819127

InitiatorTM。除非有相反指定，否則反應以一般能量輸出強度進行。質量-導引自動化高效能液相層析儀 5 上述實例中所指定的純化過程中所用的質量導引自動化HPLC其裝置與操作條件描述如下：龜硬體

Waters 2525兩相梯度模組 ίο Waters 515補充泵浦

Waters泵浦控制模組 Waters 2767注射收集器 Waters管柱流向管理系統 Waters 2996光學偶極陣列偵測儀 15 Waters ZQ 質譜儀

Gilson 202分液收集器 ⑩ GilsonAspec廢液收集器軟體 20 Waters MassLynx 版本 4 SP2 管柱使用的是Waters Atlantis，尺寸是19毫米xlOO毫米 (小尺寸）以及30毫米xlOO毫米（大尺寸）。固定相顆 148 200819127 粒大小為5微米。溶劑 A :水溶液=水+ 0.1%甲酸 5 B :有機溶液=乙腈+ 0.1%曱酸補充溶液=曱醇··水 80:20 少量潤濕溶液=曱醇方法 10 依據不同分析滯留時間而有五種方法可以使用。它們有一個13.5分鐘的執行時間，包含一個10分鐘的梯度後有一個3.5分鐘的管柱沖洗及再平衡步驟。大/小尺寸 1·〇_1·5 = 5·30%Β 大/小尺寸 1.5-2,2 =15-55% Β 15 大/小尺寸 2·2·2·9 = 30_85% Β 大/小尺寸 2.9-3.6 = 50-99% Β ⑩ 大/小尺寸3.6-5.0 = 80-99% B (在6分鐘後有7.5分鐘沖洗與再平衡）流速 20 上述方法中所有的流速均為20毫升/分鐘（小量）或40毫升/分鐘（大量）。掌性高效能液相層析用來決定產物選擇性之鏡相異構物純度時所使用的 149 200819127 裝置與條件如下：方法(A) 儀器：Agilent 1100連續液體管柱層析 5 管柱：ChiralpakAD (250毫米χ4·6毫米；10微米顆粒體積）移動相：庚烷：絕對酒精（70:30) ν/ν泵浦混合流速：1毫升/分鐘 0 溫度：環境溫度紫外光波長：215奈米 10 方法(Β) 儀器：Agilent 1100連續液體管柱層析管柱：ChiralpakAD (250毫米χ4·6毫米；10微米顆粒體積) 移動相：庚烷：絕對酒精（ 50:50) ν/ν泵浦混合 15 流速：1毫升/分鐘溫度：環境溫度 ® 紫外光波長：215奈米方法（α 20 儀器：Agilent 1100連續液體管柱層析管柱：ChiralpakAD (250毫米χ4·6毫米；10微米顆粒體積）移動相：庚烷：絕對酒精（ 80:20) ν/ν泵浦混合流速：1毫升/分鐘溫度：環境溫度 150 200819127 紫外光波長：215奈米方法ω) 儀器：Agilent 1100連續液體管柱層析 5 管柱：ChimlpakAS (250毫米χ4·6毫米；10微米顆粒體積）移動相：庚烷：絕對酒精（50:50) ν/ν泵浦混合流速：1毫升/分鐘 m 溫度：環境溫度紫外光波長：215奈米 10 液相層析儀/質譜儀分析上述樣品中所提到的液相層析/質譜儀（LC/MS) 是以下面的裝置與條件進行操作： 15 硬體

Agilent 1100梯度泵浦 ® Agilent 1100自動樣品收集器

Agilent 1100 DAD 摘測器 Agilent 1100除氣裝置 20 Agilent 1100 烘箱

Agilent 1100 控制器 Waters ZQ質譜儀 Sedere Sedex 85 151 200819127 軟體

Waters MassLynx 版本 4.0 SP2 管柱 5 管柱使用Waters Atlantis，尺寸為4.6毫米x50毫米。固定相之顆粒大小為3微米。贏溶劑 A :水溶液=水+ 0.05%甲酸 ίο B ··有機溶液=乙腈+ 0.05%曱酸方法一般方法使用5分鐘執行時間。時間/分鐘 %B 0 3 0.1 3 4 97 4.8 97 4.9 3 5.0 3

上述方法使用流速為3毫升/分鐘。注入體積一般均為5微升。 152 15 200819127 管柱溫度為30度。备、外光波長範圍是220至330 nm。藥理學的資料 %器'進行體外生物活性測本發明的化合物可在P2X7 試，依照以下的研究進行： φ 乙錠(Ethidium)累積分析研究會使用含有以下成分軌化鈉分析緩衝液進行 10 (使用痛):140碰氯化納、HEPESi〇u基-D-葡糖胺 5、KC1 5.6、D-葡萄糖 10、CaCl2〇.5 (pH 7 4)。HEK293 細胞’其表狀類重組P2X7受n HL_職基酸先處理過的96孔盤培養18_24小時。（人類p2X7受器基因選殖在US 6，133,434中有描述）。細胞在加入5〇微升測試化 15 合物之前先使用350微升分析緩衝液清洗兩次。細胞在加入ATP與乙叙(隶後分析濃度為100# M)之前先在室溫(攝氏19-21°C)培養30分鐘。ATP的濃度依據受器型選擇接近ECgo並且就人類P2X7受器之研究上係1 。接著繼續培養8或16分鐘，之後加入25微升含有5mM P2X7 2〇受裔抬抗劑反應黑5 (Aldrich)的25微升的1 ·3ιηΜ的蔬糖來停止反應。細胞内的乙錠累積藉由來自盤子下面含有 Canberra Packard Fluorocount (Pangbourne, UK)或 Flexstation· II(Molecular Devices)來測量螢光(激發光波長為530nm和放射光波長為620nm)。用來阻撓ATP反應的 153 200819127 拮抗劑pIC5〇的值由反覆曲線擬合技術來決定。螢光影像平盤讀取(FLIPR)Ca分析人類P2X7之研究會使用含有以下成分的NaCl分析緩衝液進行（以 mM): 137NaCl、20HEPES; 5.37KC1; 4.17 NaHCO3;lCaCl2;0.5NgSO4;及 1 克/升的 D-葡萄糖（pH 7.4)。 HEK293細胞，其能表現人類重組P2X7受器，在聚 •L-離氨基酸先處理過的384孔盤培養42-48小時（人類 P2X7受器基因選殖在US6，133,434中有描述）。細胞使用 80微升分析缓衝液清洗兩次，加入2//M Fluo4(Teflabs) 於37°C下反應1小時，之後再清洗三次，在加入4倍濃縮測試化合物10微升之前留下30微升含有細胞的緩衝液。細胞在加入(線上，藉由FLIPR384或FLIPR3儀器（分子儀器）)最後分析濃度60# Μ苯曱醯苯曱-ATP(BzATP)之前在室溫下先培養30分鐘。ΒζΑΤΡ的濃度選擇依據受器的類型接近EQo。培養與讀取接續90秒，而且細胞内的轉增加藉由來自盤子下面的FLIPRCCD攝影機來測量榮光(激發光波長為488nm和放射光波長為516nm)。用來阻撓ΒζΑΤΡ的拮抗劑piC5〇的值由反覆曲線擬合技術來決定。實例1-136的化合物使用FLIPRCa分析及/或以人類 P2X7受器拮抗劑活性的乙錠累積分析，並且發現在 154 200819127 FLIPR Ca分析中有ρΙ(：5〇的值>4 7或在乙錠累積分析中 PIC50 值>5.5 〇活體内的資料神經病變性疼痛的老鼠模型藉由鬆散的放置構築結紮於一般坐骨神經周圍，可以產生出周邊單一神經病變，因此就可提供神經病變性疼痛的老鼠模型，Bennet 等人，Pain，Vol.33，pp87-107 (19沾）°來自於英國查理士河的成年Random Hooded公鼠 (180-200克)使用異氟烧(3%)施行麻醉。左腳的坐骨神經被露出於中央大腿的程度而且4個鬆的紮結於神經周圍鉻 4· 0 腸結，Bennet 等人，Pain，v〇133，卯87_1〇7 (1988)。傷口會關合而且使用鎖環牢固的固定。模擬的老鼠使用相同的方法處理，但是不使用鬆結紮。機械性(觸覺的）痛覺超敏使用手動應用的細絲法來評估。單絲使用向上的順序在後腳掌上(範圍為1·4克-26克）。每一個毛使用約3_5秒，直到腳掌收回反應產生。經過確認低層的與南層部分的毛之後，最低的毛髮產生的腳掌收回反應則紀錄為閥值反應（克）。當穩定的痛覺超敏已建立，之後老鼠則给予劑量口服26-33天，然後再藉由手術給予化合物一天二次，連續給8天，接著在給藥期間再測量痛覺超敏至少三次。與媒介性反應比較起來，沁[(2,4_二氣苯基）甲基甲基-5-侧氧-脯氨醯胺（E10)與氯-3-(三氟甲基）苯基]曱基}-卜甲基-5-側氧脯氨醯胺（E51)明顯的逆轉 155 200819127 了 CCI誘導的機械性痛覺超敏。關節疼痛的老鼠模型藉由測量膝關節内注射FCA之後的過敏反應，在逆轉FCA誘導過敏中，藉由有潛力止痛的有效反應來評估慢性發炎疼痛的關節疼痛模型。來自於英國查理士河的成年的Random Hooded公鼠（180-200克）簡單的使用異氟烷(3%)施行麻醉。之後老鼠注射150微升的佛氏完全佐劑 (FCA)於左膝關節（關節腔内，i.art)。可以支持重量的每一個臀部（重量支持，克），要在之後的手術前先使用雙通道重量平均測量儀(Linton Instruments)先測。當穩定的重量支持差異在注射的與對側的腳掌已建立之後，老鼠就使用口服(正常為在手術之後13-17天)給予化合物藥劑，一天二次，連續5天，並且每天進行重量支持測量。與媒介性反應比較起來，Λ4(2,4-二氯苯基）甲基]_；μ曱基_5_侧氧_脯氨酿胺（Ε10)與7Η[2·氯_3-(三氟甲基)苯基；]曱基甲基 -5-側氧脯氨醯胺（Ε51)明顯的逆轉了 FCA誘導的重量支持差異性並且產生ED50，s小於20亳克/仟克，其來自於曲線下面積(AUC)的計算。劇烈的發炎疼痛的老鼠模型劇烈的發炎疼痛的有用的動物模型是佛氏完全佐劑 (FCA)誘導的發炎模型。相似的模型是使用鹿角菜膠而不是佛氏完全佐劑（FCA)是來自於Clayt〇n等人in Br· j. 156 200819127

Pharmacol· 1997 ; 120, 219P。來自於英國查理士河的成年的Random Hooded公鼠（180-200克）由腳掌内皮下注射 (i.pl·) 100微升的佛氏完全佐劑(FCA)於左後掌腳底表面。可以支持重量的每一個臀部（重量支持，克），要在注射 FCA，24小時之前與之後先使用雙通道重量平均測量儀 (倫玫儀器）先測量。在FCA後讀取，老鼠在重量支持測量記錄之後，就使用口服給予化合物藥劑。Λ4(2,4-二氯苯基）甲基]-1-甲基-5-側氧-脯氨醯胺洱1〇)與#-{[2-氯_3_(三氟甲基）苯基]曱基}-1-曱基-5-侧氧脯氨醯胺（Ε51)明顯的逆轉了 FCA誘導的重量支持差異性而且產生ED50，S小於 2〇毫克/仟克，其來自於劑量反應曲線(AUC)的計算。 157

Claims

200819127 十、申請專利範圍： 1· 一種式（I)化合物，或其醫藥上可接受之鹽類：

其中： R 代表Ci-6烧基、C2-6婦基、C2-6快基、C3-6壞烷基、C3_6環烷基曱基-或。比啶基甲基_、其中任一係選擇性地具有1、2或3個鹵素原子的取代基；或未取代的苯基或苄基； R2及R3分別代表氫原子、鹵素、Ci6烷基、芳曱基-、C2·6細基、C2_6炔基或C3_6環烧基甲基以及任何上述之C!·6烷基、芳甲基-、c2_6烯基、C2-6炔基或c3_6環烷基甲基-係選擇性地被 Ϊ、2或3個鹵素原子取代； R4、R5以及R6獨立地代表氫、氟或甲基；以及 R7、R8、R9H Rii各自代表氫、函素、氰基、 Ck燒基、C2-6烯基、C2-6块基、c3_6環烧基或苯基，以及任何上述之C〗·6烷基、c2_6烯基、 C2—6炔基或C3_6環烧基或苯基係上述選擇性地被1、2或3個鹵素原子取代；或Rio與Rll 158 200819127 5

10 與相連結之碳原子形成一個苯環，其選擇性地經 1、2或3個鹵素原子取代；偽若當R7及R11兩者係選自氫或氟原子時，至少 R8、R9及R10其中之一是鹵素原子，或R8、R9 及R1G係選自包含氫以&CF3所構成的群組時， R8、R9及R10其中之一但不超過一個是CF3。一種式（I)化合物，或其醫藥上可接受的鹽類：

其中·· ~ 15

R代表Cu烧基、C2-6烯基、c2-6炔基、C3_6環燒基、C3-6環烧基甲基-或吼σ定基甲基_，其中任一係選擇性地經1、2或3個鹵素原子取代；或未取代的苯基或节基； R及R3獨立地代表氫、鹵素、c〗_6烷基、芳甲基、 20 C2-6烯基、C2_6炔基或c3-6環烷基曱基；以及任何上述之Cl_6烷基、芳甲基、c2-6烯基、c26 炔基或C3_6環烷基甲基係選擇性地經丨、2或3 個齒素原子取代； R mr6獨立地代表i原子、氟原子或曱基； 159 200819127 R、R、R及R11獨立地代表氫、鹵素、說基、 Ci-6烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、C3-6環烷基或苯基，以及任何上述之Ci，6烷基、c2-6烯基、块基或c；3-6壞烧基或苯基上係選擇性地經 1、2或3個鹵素原子取代；或Rio及R11與修 10 15 20 相連結之碳原子形成一個苯環，其係選擇性地經 1、2或3個鹵素原子取代；询若1 R7及Rn兩者係選自氫或氟時，至少r8、 R及R10其中之一是鹵素原子，或沒有多於一個的R8、R9及RW是CF3基團。一種式（I)化合物，或其醫藥上可接受的鹽類··

其中 =表CK6烷基、C2 6烯基、c2 6炔基、環、元基或、Cw環烷基甲基，其中任一選擇性地經或3個鹵素原子取代；或未取代之苯基或下基； R2 Μ 玟獨立地代表氫、鹵素、Ci·6烷基、芳曱基、 h烯基、C2·6炔基或c：3·6環烷基甲基；以及壬何上述之Cw烷基、芳甲基、c2_6烯基、Cw 160 2〇〇8l9l27 . 10 4· 15 6· 20 8· 炔基或CM環烧基曱基得選擇性地經I、】或3 個鹵素原子取代； R、R以及R分別代表氫原子或氟原子；以及仏“/^及…獨立地代表氫^素〜氛基、 cv6烷基、c2_6烯基、c2_6炔基、c3 6環烷基或苯基，以及任何上述之Cl_6烷基、c26烯基、 C2-6炔基或Cw環烷基或苯基上得選擇性地經 1、2或3個鹵素原子取代；倘若當R7及R”獨立地代表氫或氟時，至、 R9及R10其中之一是鹵素原子。申請專利範圍第i項所定義之式(1)化合物，其中代。表=戈之Cl-6燒基、C…、c2 6块 1 C3_6裱烷基、吡啶基甲基·、苯基或如申請專利範圍第丨或4項所定 * t R2 ^ ^ L T疋義之式⑴化合物，及R獨立地代表氫、氣或？基。如申請專利範圍第卜4或5 (I)化合物，其中r4、r5以力^壬項所疋義之式基。及R獨立地代表氫或甲如申凊專利範圍第丨、4 式（I)化合物，其…、^^任厂項所定義之代表氫、鹵素、該一\、R、R及以獨立地基；或f及之基、未取代之〜燒代基之苯環。。之碳原子形成一個無取如申請專利範圍第i項所定義之式（I)化合物，其係 161 200819127 實例1-136之化合物，或其醫藥上可接受之鹽類。 9. 如申請專利範圍第1項所定義之式（I)化合物，其係 Ν-{[2-氯-3-(三氟甲基）苯基]曱基}-1-曱基-5-側氧-脯氨酸胺。 10. —種包含任一上開申請專利範圍所定義之式（I)化合物以及其醫藥上可接受的鹽類或賦形劑之醫藥組成物。

10 11. 一種為治療之用途而如申請專利範圍第1至9項中任一項所定義的化合物或其醫藥上可接受之鹽類。 12. —種治療遭受疼痛、發炎或神經退變性疾病之人類或動物對象之方法，其中包含投與如申請專利範圍第1 至9項中任一項所定義之式（I)化合物之有效量。 13. —種如申請專利範圍第1至9項中任一項所定義，為製造醫藥品供治療疼痛、發炎或神經退變性疾病之化合物之用途。 15

162 200819127 七、指定代表圖： (一）本案指定代表圖為：第（無）圖。 (二）本代表圖之元件符號簡單說明：無

八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式: 15

(I)

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