TW200815348A

TW200815348A - Inhibitors of soluble adenylate cyclase

Info

Publication number: TW200815348A
Application number: TW096110187A
Authority: TW
Inventors: Bernd Buchmann; Dirk Kosemund; Bernd Menzenbach; Martin Fritsch
Original assignee: Bayer Schering Pharma Ag
Priority date: 2006-03-23
Filing date: 2007-03-23
Publication date: 2008-04-01
Also published as: DOP2007000060A; CN101448787A; CA2646594A1; PE20080173A1; US20070259872A1; JP2009530339A; WO2007107384A2; DE102006014319B4; EP2001843A2; DE102006014319A1; AR060074A1; UY30237A1; KR20090008261A; WO2007107384A3

Description

200815348 九、發明說明：【赉明所屬之技術領域】本發明係關於可溶性腺苷酸環化酶之抑制劑，其製備以及其用於製備供避孕用之醫藥劑之用途。 . 【先前技術】當前存在大量女性可用之現代避孕方法；然而，僅極少種男性節育之方法可用（避孕套及絕育手術）。絕對有必要 n 開务用於男性節育之新穎可靠的藥劑。就此而冑，因男性避手藥所產生之不育應完全可逆且恰與女性可用之現存方缶樣有效。不月應開始相對較快且持續盡可能長時間。該等避孕方法不應具有任何副作用；就此而論，除激素製劑外，亦可存在非激素製劑。可能之出發點為調㈣卩母細胞受精中發揮重要作用之酶，可溶性腺苷酸環化酶（sAc)之活性。该酶主要表現於睾丸幹細胞中且存在於成熟精子中。在 1999年，作者 Levin及 Buck(Pr〇c Natl Acad^ usa ) 96⑴·79·84)能夠自大鼠睾丸純化且選殖sAC之同功異型物。大鼠之重組酶可受碳酸氫鹽刺激。藉助於抗體，有可能證明酶之催化域位於睾丸、精子、腎及脈絡叢中。該等揭示内容為在美國授權（US6544768)之申請案|〇〇1/85753之標的物。在WO 01/21829(C〇nti等人）中，主張編碼人類sAC之同功異型物之經分離聚核苷酸序列、經分離sAC多肽及測試系統，在該系統幫助下，可鑑別抑制sAC之活性的物質。揭示使用該等物質以可逆方式降低活動精子細胞數目之可能性以及該等物質用作男性節育之藥劑之用途。 119675.doc 200815348

John Herr小組展示自精子分離及表徵sAC之人類同功異型物。在WO 02/20745中，除核酸外，亦主張亦編碼sAC 之測試系統，在該系統之幫助下，可鑑別調控人類sAC之表現或活性的物質。該等化合物可選擇性抑制（例如）sAC 之活性；此導致精子細胞喪失使卵母細胞受精之能力。因此，該等sAC抑制劑可用作非激素避孕醫藥劑。然而，業已已知之sAC抑制劑顯示特定問題：兒茶酚雌激素（T. Braun，Proc Soc Exp Biol Med 1990，194(1):58 轉頁）及棉子紛（K. L. Olgiati，Arch Biochem Biophys 1984, 23 1(2):411轉頁）天生具有毒性，而腺苷類似物僅以極微弱之作用抑制（M· A· Brown 及 E. R. Casillas，J Androl 1984, 5··361轉頁）。由Zippin等人（J. Η· Zippin等人，J Cell Biol 2004，164(4):527轉頁）描述之重組人類sAC之抑制劑 (IC5〇Sl〇 μη!〇1)在某種程度上更有效。為能夠製造男性節育可用之藥劑，對可逆、快速且成功導致不育之物質存在日益增加之需要。【發明内容】該目標係藉由提供通式I化合物達成：

其中

Rl意謂氫、鹵素、cf3、視情況為多元飽和的且視情況經多取代之c3-cyf烷基；或基團CrC6烷基、Κ6芳 119675.doc 200815348 基ci-c6隨基、自基_Ci'烧基、Ci_c6烧基_Ci_C6烧土 1 6 燒基-Cl-C6 醯基、Ci_c6 醢基 _Cl_C6 醯基、Ci· C6烧基-C”P 笔 1 η ΓΛ 6方基、C1_C6芳基-C「C6烷基或CF3，其中 C 1 _ C 6 燒基、ρ μ 方基、Cl-c6醯基、i基-cKc6烷土 1 C6 燒基 _C1-C6 烧基、Ci_c6 烧基-Cl_c6 醯基、Ci-/酿基、C”C6酿基、Ci-C6烷基-CrC6芳基或（VC6芳基-C6烧基視情況可在一或多處以相同或不同方式穿插氧k或氮；或基團磺醯基-C1_C6烷基、磺醯胺或氰基； R2意謂鹵素、、日比 1 LF3、視情況為多元飽和的且視情況經多取代之C3_C6環烷基；或基團CVC6烷基、Ci-C6芳基、Cl_ C6醯基、i基_Cl_c6烧基、Ci-C6炫基_Ci_c6烧基、 6、元基Ci-C6酿基、醯基-C1-C6醯基、Ci_C6烧基 -C1_C6芳基、Cl_c6芳基-Ci_c6烷基或Cf3，其中C1_C6 燒基、芳基、CVC6醯基、自基-CVC6燒基、Ci- c6烧基-Ci-G烷基、CrG烷基-CVC6醯基、CVC6醯基 -Ci-C6醯基、Ci_c6烷基·Ci_c6芳基或Ci_c6芳基_C1心燒基視情況可在一或多處以相同或不同方式穿插氧、瓜戈氮’或基團石黃醢基- Ci-C6燒基、石黃醯胺或氰基· r3意謂芳基，其視情況可在一或多處以相同或不同方式^鹵素、視情況可在一或多處經取代之◦广匕燒基或CrC；6醯基取代，或可經(：1-〇：6烷氧基、經基、氮基、C〇2-(Cl-C6 烷基）、N-(Cl_c6 烷基）2 ' c〇_nr4r、 CF3取代； C^Ci2雜芳基，其視情況可在_或多處以相同或不同 119675.doc 200815348 方式經函素、CrC6烷基、CVC6醯基、CVC6烷氧基、歹里基、氰基、COHCVCg烧基）、NKCi-Cs烧基）2、CO-NR4R5或cf3取代；或 C3_c0環烧基，其視情況可在一或多處以相同或不同方式經鹵素、CF3、羥基、氰基、cOHCi-Ce烷基）、Cl-C6烷基、Ci-C6醯基、n_(Ci_c6烷基）2、⑶-服…或^ C6烷氧基取代； η

U R意謂氫；C3-C6環烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經CrC6烷基、Cl-C6醯基、〇1_〇6烷氧基或CF3 取代； C6-Cu芳基’其視情況在一或多處以相同或不同方式經鹵素' CVC6燒基、Cl-C6醯基、Ci_c6烧氧基、N_c广C6 烷基-Cl_C6烷基、CF3或氰基取代；或 C5 c i2雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經鹵素、Ci-C6烷基、Cl_C6醯基、Ci_c6烷氧基、N_ 烷基烷基、CF3或氰基取代；或 CkC6烷基，其可依任何想要之方式經取代； R5意謂氫·’ CVC6燒基_C3_C6環烧基，視情況在一或多處以相同或不同方式經Cl_c6烷基、Ci铺基、㈣烷氧基或cf3取代； even芳基’其視情況在一或多經鹵素、CVC6燒基、C/C6醯基、 CVC6環烷基’其視情況在一或多處以相同或不同方式經Cl-C6烧基、Cl-C6醯基、Ci_Q氧基或CF3取代；處以相同或不同方式 ^-匕烷氧基、N_CVC6 119675.doc -9 · 200815348 烧基-CVC6烷基、CF3或氰基取代；或 C5-C12雜芳基，視情況在—或多處以相同或不同方式經南素、Cl-C6烧基、Cl-C6醯基、（^6燒氧基、N_C1_C6 燒基-C^C：6烷基、CF3或氰基取代；或 CrC6烷基，其可依任何想要之方式經取代·且 R4及R5—起形成5至8員環，其可含有其他雜原子；以及其克服已知缺點且展示改良性質，亦即良好之效用、 Λ (好之溶解性及敎性之異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。根據本發明之化合物抑制可溶性腺苷酸環化酶且因此阻止精子獲能作用且因此用於男性節育。烷基在各情況下係定義為直鏈或支鏈烷基，諸如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、異戊基及己基。烷氧基在各情況下係定義為直鏈或支鏈烷氧基，諸如甲氧 ) 基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、第二丁氧基、異丁氧基、第三丁氧基、戊氧基、異戊氧基及己氧基。醯基在各情況下係定義為直鏈或支鏈基團，諸如甲醯基、乙醯基、丙醯基、丁醯基、異丙醯基、戊醯基及苯甲醯基。環烧基係定義為單環烷基環，諸如環丙基、環丁基、環戊基及環己基。環烧基可含有一或多個諸如氧、硫及/或氮之雜原子來替代碳原子。較佳為彼等具有3至6個環原子之雜環烷基。環中可含有視情況一或多個可能的雙鍵之環系統係定義為 119675.doc 10 200815348 (例如）環烯基戊一歸基、環單鍵之鍵聯。，諸如環丙烯基、環丁烯基己烯基或環庚烯基環戊烯基、環由此可進行與雙鍵及與鹵素在各情況下係定義為氟、氯、溴或碘。 a在各情況下，芳基包含6_12個碳原子且可為(例如)苯并，合的。舉例而言’可提及以下各基團：苯基、托品基、裱辛二烯基、節基、萘基、聯苯基、第基、蒽基等。

夕雜芳基在各情況下包含5_16個環原子且環中可含有一或夕個諸如氧、硫或氮之相同或不同的雜原子來替代碳原 :’且可為單環、雙環或三環’且另外在各情況下可為苯并縮合的。舉例而言，可提及：噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、咪唑基、吡唑基、異噁唑基、異噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等及其苯并衍生物，諸如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、吲唑基、吲哚基、異吲哚基等；或噠嗪基、嘧啶基、啦嗪基、三嗪基等及其苯并衍生物，諸如喹啉基、異喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等及其苯并衍生物；或喹啉基、異喹啉基、啐啉基、呔嗪基、喹唑啉基、喹喏啉基、喑啶基、喋啶基、咔唑基、吖啶基、啡嗪基、啡噻嗪基、啡噁嗪基、咄基、氧呼基等。雜芳基在各情況下可為苯并縮合的。舉例而言，嗟吩、呋喃、噁唑、噻唑、咪唑、吡唑及其苯并衍生物可提及為 119675.doc -11 - 200815348 5_%雜芳族化合物，且及策养种斗仏选足、二嗪、喹啉、異喹啉 ’物可提及為6-環雜芳族化合物。雜原子係定義為氧、氮或硫原子。及：= 生基團，則作為鹽適合的為例如易溶性鹼金屬 |之有機及無機鹼之生理學上相容的鹽，以及 N-甲基-葡萄胺、二甲其^i —〜土葡萄^、乙基-葡萄胺、離胺酸、 ’—胺、乙醇胺、葡糖胺、肌胺酸、絲胺醇、參-羥 ^甲基-胺基-甲烷、胺基丙二醇、S〇Vak鹼及b胺基 -2,3,4-丁三醇。若包括驗性基團酸、磷酸、檸檬酸容的鹽。，則經動脈内合適的為諸如鹽酸、硫酒石酸之有機及無機酸之生理學上相尤其較佳為彼等通式（I)化合物，其中 R思明氫、鹵素' CF3、環烷基；或基團（^匕烷基、G-C6芳基、Cl_C6醯基、_基·Ci_C6烧基、烷基_Κ6烷基、Ci_C6烷基-Ci_C6醯基、醯基 -CVC6 醯基、Cl46 燒基 _Ci_C6 芳基、Ci_C6 芳基 _CiA 烷基或cf3，其中Cl_c6烷基、Ci-C6芳基、Ci_c6醯基、齒基^心烷基、Cl_c6烷基·Ci_c6烷基、Ci_c6烷基 -CVC6醯基、C”C6醯基-CrC^醯基、CVC6烷基-CVC6 芳基或CrC：6芳基-Cl_C6烷基視情況可在一或多處以相同或不同方式穿插氧、硫或氮；或基團磺醯基-Ci_C6 燒基、續醯胺或氰基； R意謂_素、CF3或03-(：6環烷基；或基團Ci_C6烷基、C^ 119675.doc -12- 200815348 C6方基、Cl-C6酸基、卣基心-匕燒基、Ci-C6烧基_Cl- c6烷基cvC6燒基彳广匕醯基、c”C6醯基-Ci_c6醯基Cl C6烷基-CVC6芳基、Ci-C6芳基-Cl-c6烷基或八中Ci C6烧基、cvc6芳基、κ6醯基、鹵基 1 C1-C6 烧基-CVC6 院基、Ci_c6 炫基 A-C6 酿基Cl C6醯基-Cl_C6醯基、CVC6燒基_Cl-C6芳基或

Ci C6芳基-C广c0烷基視情況可在一或多處以相同或不 Ο R3

同方式牙插氧、硫或氮；或基團磺醯基_Ci_c6烷基、磺醯胺或氰基；意謂C6-C12若其 #、a β , 方暴，其視情況可在一或多處以相同或不同方式Ik鹵素、Ci_C6烷基、。广。3醯基、。1_。3烷氧基氛基私基、N_(CH3)2、c〇2_(c「C3 院基）、c〇 •NR R5或CF3取代； 2雜芳基其視情況可在一或多處以相同或不同方式經氯及/或氟、c基、Cl.c3醯基、Cl-C3燒氧基氰基 ^ 基、N-(CH3)2、c〇r(Cl_C3 烧基）、c〇· NR4R5或CF3取代； q-C6環烷基，其視情況可在一或多處以相同或不同方式、、、二氯及/或氟、CF3、氰基、Cl-C3烷基、Ci_C3醯基、減、N-(CH3)2、C02-(CVC3 燒基）、C〇_NR4r5 或 Ci-C3 烧氧基取代； R意謂氫；c3-c6環烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經CVC：3烧基、Cl_C3醯基、Ci_C3貌氧基或CF3 取代； 119675.doc 13· 200815348 C6_C12芳基，其視愔 > 々上妳 ^况在一或多處以相同或不同方式 _素Cl C3垸基、Cl_C3醯基、（VC3燒氧基、N-CVC3 燒基、CF3或氛基取代；或 C5"C12雜芳基，复葙棒、w 々、一 /、現N況在一或多處以相同或不同方 _ /工鹵素、C”C3烷基、Ci-C3S!基、CVC3烷氧基、N- • Cl_C3燒基-eve：3燒基、CFs或氰基取代；或 $立1 C6烷基，其可依任何想要之方式經取代； η κ思明虱；Cl_C6烷基環烷基，其視情況在一或多处X相同或不同方式經Ci-C6烷基、Ci-Cs醯基、CVC6 燒氣基或CF3取代； C3 C6%烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經CpC3烷基、Cl-c3醯基、Ci-C3烷氧基或Ch取代； C6C12芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經鹵素、（VC3院基、Cl_c3醯基、Ci_c3^氧基、n-C「c3 烧基-CVC3烷基、CF3或氰基取代；或 u C5-Cl2雜芳基，視情況在一或多處以相同或不同方式經_素、CVC3烧基、Ci-Cs酸基、CVC3烧氧基、N-Ci-C3燒基-CVC3烷基、CF3或氰基取代；或 - Cl_C6烷基，其可依任何想要之方式經取代；以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。亦較佳為彼等通式I化合物，其中 r1意謂氫； R 意謂c3_c6環烧基、cvc^烧基、cf3、氰基、漠或基團 -〇cf3或-S〇2-CH3 ; 119675.doc -14- 200815348 R3意謂C6_C12芳基，其視情況可在一或多處以相同或不同方式經鹵素、Ci-C6烷基、Ci_c3醯基、Ci-C3烷氧基、氛基、經基、N-(Ch3)2、C〇2_(Cl_c3 烷基）、CO -NR4R5或 cf3取代；

Cs-C!2雜芳基，其視情況可在一或多處以相同或不同方式經氯及/或氟、Cl_C6烷基、Ci_C3醯基、Ci_C3烷氧基、氛基、經基、n-(ch3)2、c〇2-(Cl_c3烷基）、CO -NR4R5 或 cf3取代； C3_C0%烷基，其視情況可在一或多處以相同或不同方式經氣及/或氟、CF3、氰基、Cl-C3烷基、Cl_c3醯基、羥基、N-(CH3)2、C02-(CVC3 烧基）' CO-NR^R^CVC^ 烷氧基取代； R4意謂氫； R5意謂氫；CKC6烷基-Cs-C：6環烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經Cl_C6烷基、Ci_c6醢基、烷氧基或CF3取代； 6 C3_C6環院基，其視情況在一或多處以相同或不同方弋經匕-。烷基、Cl-C3醯基、Cl_c3烷氧基或CF3取代；x G-Cu芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經齒素、（VC3燒基、Cl-C3醯基、Cl_c3^氧基、烷基-Ci-C：3烷基、CF3或氰基取代；或

Cs-Cu雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經鹵素、（VC3烷基、CVC3醯基、（VC3烷氧美、N Ci-C3烧基-CVC3烷基、cf3或氰基取代；或 119675.doc -15- 200815348

Ci-C6烷基，其可依任何想要之方式經取代；以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。亦較佳為彼等通式I化合物，其中 R1意謂氫； R2意謂0：3-(：6環烷基、c「C6烧基、CF3、氰基、溴或基團 -OCF3或_S〇2-CH3且處於對位；

R3意謂芳基，其視情況可在一或兩處以相同或不同方式經鹵素、Ci-C3烷基、乙醯基、甲氧基、乙氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、CCVCCVCs烷基）、CO-NHR5或CF3取代；

Cs-Cu雜芳基，其視情況可在一或兩處以相同或不同方式經氣及/或氟、烷基、乙醯基、甲氧基、乙氧基、氰基、羥基、n-(ch3)2、co2-(cvc3烧基）、CO-NHR5或CF3取代；或（^(^環烷基； R4意謂氫； R思明氫，或Ci-C6烷基-C3_C0環烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經Cl-C6烷基、Ci_C6醯基、烷氧基或CF3取代； C3 C6環烧基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經（^(：3烷基、CVC3醯基、^-匕烷氧基或CF3取代；。6-。12芳&，其視情況在一或多處以相同或不同方式經_素、（VC3烧基、Cl_C3醯基、Ci<：3燒氧基、N_c ^ 烷基-Ci-C3烷基、CF3或氰基取代；或 C5 c12雜芳基，其4見情況在一或多處以相$或不同方 119675.doc •16- 200815348 式經鹵素、Cl-c3烷基、Ci ㈣一 3烧基、CF3或氛:取代^ Q-C6烷基，其可依任何想要之方式經取代；以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。亦較佳為彼等通式I化合物，其中 R 意謂氫； R2意謂第三丁基、異丙基、異丁基、第二丁基、氰基、溴或基團-0-CF3或-SCVCH3且處於對位；

R3意謂基團

ϋ

119675.doc -17- 200815348 R4意謂氫； R5 意謂氫或基團- (CH2)n-N-(CH3)2、-(CH2)2-CH3、 -(ch2)2-nh-coch3、-(CH2)_CHCH3-OH、-(CH2)2-〇一 CH3、-(CH2)2_OH 或-CHCH3-CH2-OH，其中n=l-3，

以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。亦較佳為彼等通式I化合物，其中 R1意謂氫； R2意謂第三丁基、異丙基、異丁基、第二丁基、氰基、溴或基團-〇-cf3或-so2-ch3且處於對位； R3意謂基團

119675.doc -18- 200815348 R 意謂氫； R 意謂氫或基團-(CH2)_CHCH3-OH、-(ch2)2-〇-ch3或 -CHCH3-CH2-OH、

、及/、異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。下列對應於本發明之化合物十分尤其較佳： h 5-(4-第三丁基-苯基胺磺醯基）_3_笨基_1H•，嗓·2•甲酸（四氫-吡喃_4_基）_醯胺 2· 5-(4·第三丁基-苯基胺磺醯基）_3_苯基_1H_,嗓·2_甲酸（2-嗎啉-4-基_乙基）_醯胺 3. ㈩-5.(4-第三丁基-苯基胺續酿基）_3_苯基m2_ 曱酸-(2-羥基甲基_乙基）_醯胺 4. (土）|(4-第三丁基-苯基胺續醯基）_3_苯基甲酸-(2-羥基-丙基）_醯胺 5_(4·第三丁基·苯基胺續醯基）_3_(3•氟苯基口木甲酸（四氫-吡喃·4_基）-醯胺 5*第$ 丁基-苯基胺續酿基)，3备苯基)_則口木-2-甲酸（2_嗎啉-4-基_乙基）·醯胺 7. 5-(4_第5丁基-苯基胺續酿基）_3_(3_甲氧基-苯基吲哚-2-曱酸（四氫_吡喃·4-基）_醯胺 119675.doc -19- 200815348 8· 5-(4-第三丁基，苯基胺磺醯基）_3_(3-甲氧基-苯基）_1H_ 叫丨味-2-甲酸（2-嗎啉_4_基-乙基分醯胺 9· 5 (4-弟二丁基·苯基胺石黃酿基）_3_苯基朵-2-甲酸（吼唆-4 -基）-醯胺 • 另外’本發明係關於一種製備根據本發明之通式I化合物之方法，其特徵在於根據熟習此項技術者所已知之方法，使式II化合物；免5Ά Η (II)，其中R1、R2及R3具有以上所指出之含義且R6可為氫4Cl_c6 烧基’且較佳為氫、曱基或乙基，與通式m胺反應严

HN 、R4(III)， {) 其中R及R5具有以上所指出之含義，且隨後視情況裂解所需之保護基團。對於R為氫之情況而言’反應首先可藉由使酸功能活化 - 來進行；在該種狀況下，例如首先在諸如三乙胺之三級胺存在下用氣甲酸異丁酯使通式II羧酸轉化為混合酸酐。在 -30C與+60C之間的溫度下、較佳在〇。〇至30°C下，在諸如四氫呋喃、二甲氧基乙烷、二甲基甲醯胺或六曱基磷酸三醯胺之惰性溶劑或溶劑混合物中進行混合酸酐與相應胺之驗金屬鹽之反應。 119675.doc .20- 200815348 另一可能性在於由諸如HOBt或HATU之試劑使通式酸活化。在-50°C與+60°C之間的溫度下、較佳在〇°C至3〇〇c 下，在諸如DMF之惰性溶劑中，在通式in之相應胺及諸如乙基二異丙基胺之三級胺存在下進行酸與（例如）ΗΑτυ之反應。對於烧基之情況而言，例如視情況亦可藉助於二烧基鋁試劑、較佳三甲基鋁執行酯與相應胺之直接醯胺解。

用作起始物質之通式π化合物可（例如）以此項技術已知之方法製備，其中使已知之溴-吲哚酯IV

其中R6為C「C6烧基，較佳甲基或乙基，首先與氯硫酸反應以形成通式V化合物

且隨後使後者與通式（VI)胺反應

其中R1及R2具有以上所指出之含義，以形成通式VII化合物 119675.doc -21. 200815348 (VII) 〇隨後’在與通式VIII國酸衍生物之Pd催化反應 (VIII)，

中 R3 其中R3具有以上所指出之含義，視情況在使所需之保護基團裂解，視情況接著用（例如）氫氧化鈉溶液皂化後，使通式VII酯轉化為通式II化合物

其中R1、R2、R3及R6具有以上所指出之含義。 υ 根據本發明之化合物抑制可溶性腺苷酸環化酶，例如在男性節育之情況下，其作用係基於此。腺苷酸環化酶為最常用之信號轉導方法之一的效應分子；其由三磷酸腺苷（ATP)經焦磷酸（PP)裂解而合成環狀單磷酸腺苷（cAMP)之第二信使分子。cAMp介導大量神經傳遞素及激素之眾多細胞反應。可溶性精子特異性腺替酸環化酶（sAC，人類mRNA序列（基因庫）NM—〇18417，人類基因ADCY X)為人類基因組之10種所述腺苷酸環化酶之— 種。在該種狀況下’ sAC展示若干種不同於其他腺*酸琴化酶之特異性質。與所有其他腺芽酸環化酶相比， 119675.doc 200815348 其周圍之介質中碳酸氫鹽之濃度刺激且不受G蛋白刺激。 sAC在其胺基酸序列中並不具有任何跨膜區；其不能由弗斯可林（forskolin)抑制，受錳刺激可比受鎂刺激強烈得多，且僅展示與其他腺苷酸環化酶之低序列同源性（在胺基酸水平上，sAC之催化域I及II與其他腺苷酸環化酶具有 <26%之一致性）。 sAC之特異性錳依賴活性首先由τ· Braun等人「1975, PNAS 73:1097轉頁）在大鼠睾丸及精子中描述。Ν· Okamura等人（1985，J· Biol· Chem 260(17):9699轉頁）展示刺激豬精液中sAC之活性之物質為碳酸氫鹽。亦可展示僅在大鼠睾丸及精子中而未在其他組織中偵測到AC活性可受碳酸氫鹽刺激。由Buck及Levin小組自大鼠睾丸純化sAC 且首次定序（J· Buck等人，1999 PNAS 96:79轉頁，WO 01/85753)。所預期之性質（例如，刺激碳酸氫鹽及鎂之能力）在重組表現蛋白中得以證實（Y· chen等人，2000 Science 289:625轉頁）。由sAC mRNA之分佈及碳酸氫鹽刺激之sAC活性之資料可表明酶之睾丸及精子特異性表現（M· L. Sinclair等人， 2000 Mol Reprod Develop 56:6轉頁；N. Okamura等人， 1985, J. Biol· Chem 260(17):9699轉頁；J. Buck等人，1999 PNAS 96:79轉頁）。在該種狀況下，在睾丸中，sAC mRNA 僅表現於配子發展為精子之後期，但不表現於體細胞中 (M. L. Sinclair等人，2000 Mol Reprod Develop 56:6轉頁）。 119675.doc -23- 200815348 有許多藥理學研究討論sAC在哺乳動物之精子中之功能。在精子穿過印透明帶以致隨後與印黃膜融合之前，其 2須對該功能有所準備。精子獲能過程已十分深入地經研究。獲能精子之特徵在於活動模式改變及有能力接受合適 . 刺激物（細胞溶解酶之釋放，據推想可能精子用於穿過透 . 日月帶）進行頂體反應過程。依據介質中提高之碳酸氳鹽濃度’在活體内及活體外進行精子獲能作用（p. E. () S' K〇Pf (1998) Bio1 ReProd 59:1# I ； E. de Lamirande 等人，1997 Mol Hum Reprod 3(3):175轉頁）。精子獲能作用亦可藉由添加例如db_cAMp之合適穿膜cAMp類似物及抑制其降解（例如，ΙΒΜχ)之抑制劑來刺激。精子功能與 AC之可能相關性僅在最近才由所謂的基因剔除小鼠之基因缺失楔型證實。（G. Esposito等人，2004 PNAS 101(9): 2993轉頁）。缺少sAC基因之雄性小鼠展示正常之精子形成，但不能生育。精子具有活動性缺點且不能使卵受精。〇該等動物沒有出現其他對應於SAC之其他假定功能之缺點或異常發現（J_ H. Zippin等人，2003 FASEB 17:82轉頁）。 SAC具有獨特之序列且與其他體腺苷酸環化酶僅具有微】、同源性。其為哺乳動物精子中唯一之腺苷酸環化酶，且 • 其活性對於精子活動性及獲能作用不可或缺。因此，sAe 之特異性抑制劑代表調控男性生育力之重要可能性。因此，含有至少一種如請求項丨_7之化合物之醫藥劑為本發明之主題。 ' 如凊求項1-7之化合物之用途亦為本發明之主題。 H9675.doc -24- 200815348 為將根據本發明之化合物用作醫藥劑，使後者成為除細腸或非經腸投與之活性成份外，亦含有合適之醫藥有機^ 無機惰性_物質之醫藥製卿式，該等制彳物質諸如水明膠、阿拉伯樹膠（gum arabic)、乳糖、殿粉、硬脂 . 酸镇、滑石、植物油、聚伸烧二醇等。醫藥製劑可以如下 • 形式存在：固體形式，例如錠劑、包衣錠劑、栓劑或膠囊；或液體形式，例如溶液、懸浮液或乳液。此外，其視 (、冑況含有佐劑’諸如防腐劑、穩定劑、濕潤劑或乳化劑、改夂滲透壓之鹽或緩衝液。該等醫藥製劑亦為本發明之主題。對於非經腸投藥而言，合適的為尤其注射溶液或懸浮液，尤其活性化合物於聚經基乙氧基化萬麻油之水溶液。 &作為載劑系統，亦可使用諸如膽酸之鹽或動物或植物碟脂之界面活性佐劑，亦其混合物以及脂質體或其組份。 λ對於經口投藥而言，合適的為尤其具有滑石及/或諸如 U 礼糖、玉米或馬鈐薯澱粉之烴媒劑或黏合劑之錠劑、包衣錠Μ或膠囊。投藥亦可以諸如視情況添加有甜味劑之汁液之液體形式進行。 . 對於陰道施藥而言’合適且普遍的為(例如)栓劑。 • 經腸、非經腸及經口投藥亦為本發明之主題。活性成份之劑量可視投藥方法、患者之年齡及體重、待治療疾病之類型及嚴重性及類似因素而變化。日劑量為〇-5]_ mg，較佳5〇_2()() mg，由此，劑量可以投與—次之單次劑量或分成兩次或兩次以上之日劑量來給與。 H9675.doc -25 · 200815348 根據本發明之通式!化合物為經動脈内環化酶之極佳抑制劑。可溶性腺普酸環化’合苦酸 cAMP信號減弱。eAMp含量對 ·=制劑使及細胞計起重要作用之過程具有決定：曰。殖、：胞分化量之降低具有決定性之癌症的疾病可由可溶性腺;=t :抑制劑調節。該調節可對患有該疾病之患者具有二及冶療效應。如伴隨細胞增殖升高 ,、l 之癌症之疾病當前由（例 η ϋ ^= 法及化學療法治療。該等方法為非特異性的且 ::之二。因此，直接攻擊特定乾位點之新穎物貝為有利的。藉由抑制可溶性腺芽酸環化酶來調節 CAMP之產生之物質為本發明之主題。因此，例如显常细胞增殖可藉由調控或抑制CAMP之產生來降低或抑制。料由使用根據本發明之物質，可抑财溶性料酸環化酶；此產生細胞增殖降低之結果。本發明之主題為用於治療疾病之含有至少一種通式％合物之醫藥劑，以及具有合適調配物質及媒劑之醫藥劑。因此，疾病之特徵在於其由第二信使cAMP之代謝失調引起。藉由抑制可溶性腺*酸環化酶使卿濃度降低可使可用藥劑用於調節精子獲能作用。本發明之主題為根據本發明之物質藉由降低或抑制可溶性腺苦酸環化酶活性及因此所得之精子獲能作用從而降低及/或抑制男性配子生育力的用途。印子之又精可藉由投與有效量之使得之產生受抑制的物貝來阻止。通式j化合物用於製備供非激素避孕用 119675.doc -26 - 200815348 之醫藥劑之用途亦為本發，，〜土 μ。若未描述起始物質之製備，則起似於已知化合物或本文所描述之方法製備：：的或可類行反應器中或藉助於組合操作程序實二有可能在平反應。所描述之所有 I诹箝如結晶次、！啊沄或成鹽法之常用方、、構體混合物分離為對映異構體或Ε/Ζ異構體。+，可將異

Ο 以常見方式藉由使式合物之溶液與況為溶液形式之鹼或酸混合， 3過里視情理溶液來進行鹽之製備。^見方式分離心或處【實施方式】根據本發明之化合物之製備下列實例說明根據本發明之通式⑴化合物之製備，而非將所主張之化合物之範疇限於該等實例。与根據本發明之通式⑴化合物可如下所述製備。實例1 : 5*第三丁基·苯基胺磺醯基)_3_苯基_ih•，朵_2· 甲·酸（四氫-吡喃_4_基）-醯胺

將64.7 mg N_[(二甲胺基三唑并[4,5々吡咬_ 1·基亞甲基]曱基甲烷六氟磷酸銨·Ν_氧化物（hatu)及 15.8 mg 4-胺基四氫吡喃添加至7〇 mg實例ld)所製備之酸 119675.doc -27· 200815348 於1·2 ml二甲基甲醯胺中之溶液中。隨後，在〇〇c下逐滴添加29.6 μΐ乙基二異丙基胺且在25°C下攪拌20小時。隨後，添加20 ml水且用乙酸乙酯將其萃取3次。將組合之有機相用飽和氣化納溶液洗務1次，經硫酸納乾燥且真空過渡後經蒸發濃縮。將所獲得之殘餘物藉由矽膠層析，用已烷/〇_ 8 0%乙酸乙酯純化。以此方式，獲得67.1 mg標題化合物。 NMR (300 MHz，DMSO_d6): δ=1·13 (s，9H)，1.26 (2H)， 1.65 (2Η)，3.32 (2Η)，3·68 (2Η)，3.90 (1Η)，6·93 (2Η)，7·18 (2Η)，7.32-7.50 (5Η)，7.53 (1Η)，7.58 (1Η)，7.86 (1Η)，7·91 (1Η)，9·91 (Η)，12.21 (1Η)。用於以上所提及之標題化合物之起始物質製備如下： la) 3-溴-5-氣磺醯基-1Η-吲哚-甲酸乙酯

◎ 在-10C下，將2.0 g 3 -漠甲酸乙@旨添加至 2.48 ml氯磺酸中且隨後在25°C下攪拌3小時。隨後，將其用200 ml乙酸乙酯稀釋且用各30 ml飽和重碳酸鈉溶液及飽，和氯化鈉溶液洗滌1次。經硫酸鈉乾燥且過濾之後，將其 . 經真空蒸發濃縮。以此方式，獲得1.93 g標題化合物，其無需進一步純化即可進一步反應。 NMR (300 MHz，DMSO-d6): δ=1·33 (3H)，4.34 (2H)， 7·38 (1Η)，7·57 (1Η)，7·76 (1Η)，12.25 (1Η)。 lb) 3 -漠- 5- (4-第三丁基-苯基胺績酿基）-1 Η-σ弓卜朵-2 -曱酸乙酉旨 119675.doc -28 - 200815348

在25°C下，將1.38 ml乙基異丙基胺及㈣⑹ 基-苯基胺添加到丨.93 g實例la)所製備之氯磺酸於Η—如 DMF中之溶液中，且在此溫度下，將其攪㈣小時。= Γ、 -些甲苯之後，將其經真空蒸發濃縮，且將殘餘物藉切口膠層析，用已烷/0-50%乙酸乙酿純化。卩此方式獲π 1.7 g標題化合物。 NMR (300 MHz，DMSO-d6): δ=1 13 (9H), i ( 4.35 (2H), 6.96 (2H), 7.18 (2H), 7.57 (1H), 7.67 (1H) 79i (1H)，10.09 (1H)。 ’ · lc”-(4-第三丁基-苯基胺續醯基)_3_苯基令朵I甲酸乙酯

mg氣化鋰添加至1.7. g實例lb)所製備之溴化物於由π w乙醇及67 ml甲苯組成之混合物中的溶液中。添加328 肆

U (三苯基膦）-把’將反應混合物回流2〇 ,丨技爪ζυ小時。冷卻至室溫後，將其用250 ml乙酸乙酯稀釋，缍评 A石夕溱土抽吸，且用乙 119675.doc -29- 200815348 酸乙醋再洗滌。將所獲得之有機相用各3〇 mi飽和重碳酸鈉溶液及飽和氣化鈉溶液洗滌且經硫酸鈉乾燥。過濾之後’將其經真空蒸發濃縮。將所獲得之殘餘物藉由矽膠層析’用已烷/0-60%乙酸乙酯純化。藉由自己烷/乙酸乙酯再結晶而進行再次純化。以此方式，獲得1〇3 §標題化合物。 NMR (300 MHz? DMS〇.d6)： δ=ι.13 (3Η)5 1.14 (9Η), 4.19 (2Η)? 6.93 (2Η), 7.18 (2Η)? 7.31-7.48 (5Η), 7.58 (1Η)! 7·65 (1Η)，7·81 (1Η)，9·93 (1Η)，12.36 (1Η)。

Id) 5-(4-第二丁基-苯基胺磺醯基>弘苯基_1Η_吲哚甲酸

將1·51 g氫氧化鈉添加至976 mg實例lc)所製備之酯於24 ml乙醇與12 ml水中之混合物中，且在25。〇下將其擾拌1 8 小時。隨後，將其用30 ml水稀釋且用5%硫酸酸化。將所沈積之 >儿澱渡出且乾燥。以此方式，獲得9 1 〇 111§標題化合物，其無需另外純化即可進一步反應。 NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5=1.14 (12H)5 6.93 (2H) 7·18 (2H)，7.31-7.46 (5H)，7·55 (1H)，7·62 (1H)，7.79 (1H)， 9·92 (1Η)，12·27 (1Η)，13.14 (1Η)。實例2 : 5·(4-第三丁基-苯基胺磺醯基）_3_苯基_1H_,嗓_2_ 甲酸（2 -嗎琳-4-基-乙基）-酿胺 119675.doc -30 - 200815348

類似於實例1，由70 mg來自實例Id)之酸及20·5 μΐ 2-(嗎啉-4-基）-乙基胺獲得61.9mg標題化合物。 NMR (300 MHz，DMSO_d6): δ=1·14 (9H)，2.18 (4H)， 2·25 (2Η)，3·26 (2Η)，3·37 (4Η)，6·92 (2Η)，7.10 (1Η)，7·18 (2Η)，7·35 (2Η)，7.42 (1Η)，7.47-7.55 (3Η)，7.58 (1Η)，7·76 (1Η)，9·90 (1Η)，12·21 (1Η)。實例3 : (士）-5-(4-第三丁基-苯基胺磺醯基）-3-苯基-1Η-吲哚-2-甲酸-(2-羥基-1-甲基-乙基）-醯胺

類似於實例1，由70 mg來自實例Id)之酸及12·4 μΐ 2-胺基-1-丙醇獲得29.2 mg標題化合物。 NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8=0.94 (3H)5 1.14 (9H)5 3.17 (1H)，3.34 (1H)，3.90 (1H)，4·62 (1H)，6·93 (2H)，7·15 (1H)，7·17 (2H)，7.33-7.50 (5H)，7.53 (1H)，7.58 (1H)，7.83 (1H)，9·90 (1H)，12.19 (1H)。實例4 : (±)-5-(4-第三丁基-苯基胺磺醯基）-3-苯基_1Η·吲哚-2-曱酸-(2-羥基-丙基）-醯胺 119675.doc -31 - 200815348

類似於實例1，由70 mg來自實例Id)之酸及12.1 μΐ 1-胺 - 基-2-丙醇獲得56.7 mg標題化合物。 NMR (300 MHz，DMSO-d6): δ=0.91 (3H)，1·14 (9H)， 3.09 (2Η)5 3.58 (1Η), 4.59 (1Η)? 6.93 (2Η), 7.18 (2Η)5 7.29 ^ (1Η)，7.32-7.51 (5Η)，7.53 (1Η)，7·58 (1Η)，7.79 (1Η)，9·90 (1Η)，12.18 (1Η)。生物學實例：實例1 : sAC-檢定在合適之緩衝系統中，可溶性精子特異性腺苷酸環化酶催化三磷酸腺苷（ATP)轉化為環狀單磷酸腺苷（cAMP)及焦磷酸之反應。隨後，將以此方式產生之游離c AMP用於競爭性摘測過程中，其中經鎖穴狀化合物（europium 〇 kryptate，Eu[K])標記之抗 cAMP抗體（抗 cAMP-Eu[K]_AK) 與經cAMP分子標記之經修飾別藻藍蛋白-Ι^ίορίιγοοο^^ηίηβ-ΐ) 分子（CAMP-XL665)之結合受到阻止。在無外源 cAMP 之情況下，在335 nm下激發後，在抗cAMP-Eu[K]-AK(FRET . 供體）與CAMP-XL665分子（FRET受體）之間產生螢光共振能量轉移（FRET)。基於FRET受體XL665之發射（665 nm及620 nm)在不同時間（時間分辨）定量該過程。信號降落（量測為波比率；計算式：[(E665 nm/E620 nm)xl0000])可歸因於 cAMP之存在且因此歸因於sAC之活性。 119675.doc -32- 200815348 首先，將1·5 μΐ測試物質（於30°/〇 DMSO中），在溶劑對照中僅30% DMSO，引入384孔測試板（聚苯乙烯；384，NV) 中之每個凹處。隨後，回收10 μΐ稀sAC酶溶液（酶儲備溶液於300 mmol NaCl、1 0%甘油中；pH 7.6 ;中間及最終酶稀釋液a)l:10及b)l:2000在各情況下於以下溶液中··於H20 中之 1.0 mmol MnCh ; 0.2% BSA ; 50 mmol tris，pH 7.5)。酶反應藉由添加5 μΐ ATP受質溶液（於H20中之200 μπιοί ATP)起始，且在培養（於室溫下25分鐘）後，藉由添加 5 μΐ終止溶液（於PBS中之200 μπιοί EDTA)結束。最終，將整個反應藉由添加70 μΐ PBS調整為總體積91_5 μΐ。隨後，將8 μΐ偵測溶液1引入384孔量測板之一凹處（量測板：聚苯乙烯；384，SV-黑色；偵測溶液1 : 50 μΐ cAMP-XL665 ; 950 μΐ 復原緩衝液；2200 μΐ PBS ; cAMP-XL665 ··如Cis Bio套組#62AMPPEC指令所說明，藉由將5 ml H20添加至冷涞乾燥產物中製備；儲存：在- 8〇C下等分試樣）。隨後，將來自91·5 μΐ中之3 μΐ添加至測試板之相應凹處。最後，進行添加8 μ 1彳貞測溶液2 (偵測溶液2 : 5 0 μ 1 抗 cAMP-Eu[K]-AK ; 950 μΐ 復原緩衝液；2200 μΐ PBS ;抗 cAMP-Eu[K]-AK:如 Cis Bio套組 #62AMPPEC指令所說明製備；儲存：在-80°C下等分試樣）。在室溫下再培養90分鐘後，在Packard Discovery上或用 RubiStar HTRF量測裝置（延遲：50 ps ;積分時間：400 ps) 量測HTRF結果。實例2:自精液中分離人類精子及獲能作用 119675.doc -33 - 200815348 2·1·精子之分離藉由基於矽膠粒子（商品名·· Perc〇1l或IS〇late)2兩層梯度系統自精液中純化人類精子。將每份精液各2.5 ml已預熱之下層（，，9〇% isolate下層”， Irvine Company)引入15 ml離心試管（圓錐形，塑膠）中且用 2.5 ml 已預熱之上層（”50% isolate上層”，irvine Company) 小心覆蓋且在37°C下在水浴中制動小於1小時。用最多3 mi 正常（相對於精子數目、活動性及液化作用而言）精液小心覆蓋梯度。在室溫下，在1000xg下進行精子沉降25分鐘。藉助於玻璃毛細管’將兩層抽吸至恰位於精子小球上方之點。洗出ISolate梯度，將再懸浮於各約2〇〇 y之精子小球移至具有 12 ml mHTF介質（4 mmol NaHC03 ; 0.01% BSA ; 37C)之15 ml塑膠試管中，且在1〇〇〇Xg下將精子沉降2〇分鐘。將介質抽吸至恰位於小球上方之點且用mHTF介質（4 mmol NaHC03 ; 0·01% BSA ; 37。〇調整至 1〇〇〇 μΐ。在

Neubauer什數至中測定精子之數目，且視情況用介質（4 mmol NaHC03 ; 〇.〇1% BSA ; 37。〇調整至 4χΐ〇6個精子/1 50 μΐ以用於隨後之獲能作用。 2·2·獲能作用若測試測試物質對頂體反應之效應’則必須將精子與測試物質-起預培養。在獲能作用開始，亦即達成精子，尤其未穿過膜壁之物質中之結合位點的預飽和之前，該預培養（於37°C下在培養箱中15分鐘）對使測試物f可能渗透於精子中為必要的。另外，因為由BSA之高脂f結合所致之 119675.doc -34- 200815348 獲旎作用中BSA濃度之增加可導致製劑中有效測試物質濃度之降低，所以預培養為必要的。將測試物質溶解於DMSO中且用mHTF介質（4 mm〇1 NaHC03 ; 0·01% bSA ; 37°C)稀釋，以致在400…最終獲能作用製劑中，DMSO濃度為0·5〇/〇。在各情況下，將各15〇上述調和測試物質溶液移入1 50 μΐ精子懸浮液中且在 37C下預培養15分鐘。藉由添加丨〇〇 μι mHTF介質（88 mmol NaHC〇3 ; 4% BSA ; 37。〇起始精子之獲能作用。在最終400 μ1獲能作用製劑中，精子濃度為1〇xl〇6/m卜碳酸氫鹽濃度為4 mmol且BSA濃度為1%。於37°C下在培養箱中使獲能作用進行3小時。為完成獲能作用，將製劑（各400 μΐ)各完全轉移至具有 1·5 ml mHTF(4 mmol NaHC03 ; 37°C)之 15 ml樣品試管中’在lOOOxg下離心5分鐘，且移除上清液。藉助於此步驟，移除大量蛋白質與測試物質。實例3 :頂體反應之流式細胞計測定法 3·1·由離子載體處理及同時CD46-FITC染色引入頂艘反應精子之頂體反應（AR)藉由使精子與透明帶（ΖΡ)之結合來觸發。在該種狀況下，酶自頂體釋放使得精子有可能經由 ΖΡ穿入卵母細胞。在AR之情況下，在精子中，此導致聚膜與外部頂體膜（ΟΑΜ)部分融合。精子細胞之頭部僅受末端内部頂體膜（ΙΑΜ)限制。CD46抗原僅可在ΙΑΜ上债測到。頂體反應可在活體外，使用合適濃度之妈-離子載體 119675.doc -35- 200815348 A231 87 ’在獲能之精子上誘發，但無法在未獲能之精子上或獲能作用受測試物質抑制之精子上誘發。藉助於對抗 IAM 之標記 FITC 之抗 CD46 抗體（Pharmingen Company)，可在流式細胞計中區分有頂體反應之精子與未暴露iam之頂體完整精子。採用僅染色DNA膜缺損致死之細胞之DNA染料乙錠均二聚物（ethidium homodimer，EhD)同時染色，可區分死精子與活精子。因為離子載體稀釋液在觸發AR中似乎極不穩定且必須與CD46-FITC溶液混合以同時染色，該等溶液不可在測試開始之前製備而必須在處理獲能作用製劑期間製備。將精子小球再懸浮於殘留上清液中且在水浴（37°C )中用 450 μΐ mHTF(4 mmol NaHC03 ; 0.01% BSA ; 37〇C)稀釋。將100 μΐ精子懸浮液之等分試樣移入所製備之FACS流動試管樣品中（在水浴中）。將150 μΐ含有離子載體及標記FITC 之抗CD46抗體之溶液移入精子中。最終濃度為800 nmol離子載體及抗CD46抗體於 mHTF(4 mmol NaHC03 ; 0.01% BSA ; 37°C)中之1:125稀釋液。在37°C水浴中，精子在避免光照射下培養30分鐘。藉由添加3·5 ml PBS[0.1% BSA]/製劑停止培養，接著在 70〇xg(室溫）下離心5分鐘且隨後抽吸出上清液。離心之後，將樣品在熱板上保持溫暖直至完成量測。 3·2· EhD染色（用於區別死/活的有頂體反應之精子）抽吸後，將精子小球與各500 μΐ新鮮製備之EhD溶液（於 PBS [無BSA]中之150 nmol EhD ; 37°C)混合。隨後，可將 119675.doc -36- 200815348 樣品在流式細胞儀（BD Facs Calibur)中量測。在488 nm之雷射激發波長下，進行量測；每次量測偵測到1 〇,〇〇〇個精子。可在FL-1過濾器中在530 nm下用CD46-FITC量測有頂體反應之精子。在FL-2過濾中在634 nm下藉助於EhD-. DNA-染色量測死精子。首先，使量測通道相互適當補償。 3.3.評估以FSC-Η(前向散射）相對SSC-H(側向散射）之點潰墨法選 Γ . 擇呈極均勻細胞群之精子。因為使用兩種顏色螢光染色，所以用自FSC對SSC點潰墨法選擇之精子群以FL-l(EhD， X軸）對FL-2(FITC-CD46，Y軸）點潰墨法藉助於象限分析進行評估。 FL-1對FL-2點潰墨法之象限分析染色分析 Q1=UL 左上限僅EhD 死的、無頂體反應之精子 Q2=UR 右上限 EhD 及 FITC-CD46 死的、有頂體反應之精子 Q3=LL 左下限未染色活的、無頂體反應之精子 Q4=LR 右下限僅 FITC-CD46 活的、有頂體反應之精子為計算經誘導、有頂體反應之精子的％(=”IAr[%]，’），僅使用來自Q3及Q4之活精子，且其總數目經設定等於 100%。隨後，IAR計算如下： IAR[°/〇]=

LRxlOO LL + LR 一部分精子在未添加離子載體之情況下業已自發進行頂體反應（=’’SAR[%]n)。因此，亦總進行在未添加離子載體 119675.doc -37- 200815348 之情況下經同等處理之精子之對照量測。SAR係類似於 IAR計算。將實際由離子載體觸發之頂體反應（=”ARIC[%]n) 計算為差值·· ARIC=IAR-SAR。就下列吾人之抑制劑對sAC介導之獲能作用之效應（量測，為精子經歷離子載體誘導之頂體反應之能力）的分析而言，有頂體反應之精子在陽性獲能作用對照（=用具有25 mmol NaHC03、1% BSA，無測試物質之mHTF介質培養）中之百分率設定為100%。與測試物質混合之精子經歷頂 ' 體反應之能力指示與最大頂體反應有關。所使用之物質 mHTF =經改良之人類小管液（Irvine Scientific Company)，杜貝科爾攝酸鹽緩衝生理食鹽水（Dulbecco’s phosphate-buffered saline)(Gibco Company)(具有 Ca2+、Mg2+、1 gH D-葡萄糖、36 11^八丙酮酸鈉，無酚紅，無NaHC03);牛血清白蛋白，組份V(Fluka Company);二甲亞石風（DMSO)， U 無水（Merck Company); 7.5%重碳酸納溶液（893 mmol)(Irvine

Scientific Company);分離梯度（Irvine Scientific Company); 離子載體A23 187游離酸（Calbiochem Company);乙鍵均二聚物（EhD)(Molecular Probe Company)，小鼠抗人類 CD46:FITC(Pharmingen Company) 〇參考文獻： J. W. Carver-Ward，Human Reproduction 第 11卷，第 9 期，第 1923 頁（轉頁），1996 High Fertilization Prediction by Flow-Cytometric Analysis of the CD46 Antigen on the 119675.doc -38- 200815348

Inner Acrosomal Membrane of Spermatozoa 0· J. D'Cruz，G. G· Haas，Fertility and Sterility第 65卷，第 4 期，第 843 頁（轉頁），1996 Fluorescence-Labeled Fucolectins are Superior Markers for Flow-Cytometric Quantitation of the Sperm Acrosome Reaction E. Nieschlag，Η. M. Behre，Andrologie [Andrology]， Springer Verlag 1996 實例：

ϋ # R4 Ι〇50(μΜ) 0 3 Η H 4 -CHrCHCHrOH 1.6 OH 4-OH-雌二 g 广對掌性：c> % 13 2-OH-雖二 2 〇H對掌性淳 11 119675.doc -39- 200815348 由表ΊΓ知，關於由jCm值表達之可抑制，扭播丄改腺皆酸環化酶之㈣根據本發明之化合物有時具有比業已已知之兒茶盼雌=素（OH-雌二醇）高大約1G倍之活性。兒茶㈣激素具有骨性’因此根據本發明之化合物比已知之化合物更優良。根據本發明之化合物亦比由Zippin提供之化合物效力高約10倍。 η 119675.doc 40-

Claims

200815348 十、申請專利範圍： 1· 一種通式（I)化合物，

R 意謂氫、鹵辛、γρ

U 月玉L U系 LF3、視情況為多元飽和的且視情況經多取代之環烷基；或基團cvc6烷基、Cl-C6 芳基、CVC,醯基、卣基_Ci_C6烷基、Ci·。烷基_Ci_C6 烧基、C「C6燒基_C”C6醯基、CVC6醯基-CVC6醢基、Cl_C6烧基·C”C6芳基、CVC6芳基-(VC6烧基或 CF3，其中cvc6垸基、Ci-C6芳基、Ci_c6醯基、函基-Cl-C6烧基、Cl_C6烷基-CVC6烷基、CpC6烷基 -CVC6醯基、CVC6醯基_Ci-c6醢基、Ci_c6烧基_Ci_C6芳或1 6芳基C ! - C 6垸基視情況可在一或多處以相同或不同方式穿插氧、硫或氮；或基團續醯基々C6 烷基、磺醯胺或氰基；意謂_素、CF3、視情況為多元飽和的且視情況經多取代之CVC6環烷基；或基團CVC6烷基、c丨_C6芳基、CVC6醯基、i基-c”C6院基、Ci_C6燒基烷基、（^-(：6烷基-Κ6醯基、Ci_c6醯基_Ci_C6醯基、C i - C 6烧基-C1 - C 6芳基、C丨_ C 6关其 6方基-Cl_c6烷基或 CF3 ’其中CrC6烧基、芳基、CpC酼|上匕6醯基、鹵 119675.doc 200815348 基-Κ6烷其土、C1_C6烷基-CrCs烷基、烷基 -CrCs醯基、Γ # # ^C6醯基-CrC6醯基、（VC6烧基-Cl-C6 方基或关I η 、土 _Ci-C6烧基視情況可在一或多處以相同或不同方―、& 一 '牙插氧、硫或氮；或基團磺醯基-CrC6 • 烷基、磺醯胺或氰基； r3意謂c6-c12芳其 ^ ‘ _ 暴’其視情況可在一或多處以相同或不 @方式、、、！ i素、視情況可在—或多處經取代之c「C6 f) 烷基或CrC6醯基取代，或可經匕-匕烷氧基、羥基、氣基、C02-(Ci_c6 烧基）、n_(Ci_c6 烧基）2、c〇_ NR4R5或cf3取代； K12雜芳基’其視情況可在一或多處以相同或不同方式經_素、CVC6烷基、CVC6醯基、（^-<：6烷氧基、經基、氰基、COHCrCs烷基）、NKCVQ烷基）2、CO_NR4R5或CF3取代；或 CrC^i衣烧基’其視情況可在一或多處以相同或不同 (J 方式經鹵素、CF3、羥基、氰基、cOHCi-Q烷基）、 C1_C6烷基、CVC6醯基、NKCVCs烷基）2、CO-NR4R5 或<^-(:6烷氧基取代； r4意謂氫；C3-C6環烷基，視情況在一或多處以相同或 . 不同方式經CVC6烷基、cvc6醯基、CVC6烷氧基或 CF3取代； Cpc12芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經鹵素、Ci_C6烧基、Ci-C6酿基、Ci_C6炫氧基、N、 Ci-C6烧基-Ci_C6烧基、CF3或氰基取代；或 119675.doc -2- 200815348 雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經鹵素、烷基、Ci_c6醯基、。-^烷氧基、 N-CVC6烷基-Cl_c0烷基、CF3或氰基取代；或 5 CrC6烷基，其可依任何想要之方式經取代； R5意謂氫；CVC6烷基-c^C6環烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經Ci_C6烷基、Ci_C6醯基、 Ci-C6烧氧基或CF3取代； Ο

C3_(：6%烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經CVC6烷基、Cl_C6醯基、Ci_c6烷氧基或^3取代； C6_Cu芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經鹵素、（VC6烷基、Cl_C6醯基、Ci_c6烷氧基、队 CrC6烷基烷基、CFs或氰基取代；或 Cs-Ci2雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經li素、c^c：6烷基、Cl_C6醯基、〇1弋6烷氧基、 N-CVC6烷基-Cl-c6烷基、CF3或氰基取代；或 CrC：6烷基，其可依任何想要之方式經取代；且 R4及R5—起形成5至8員環，其可含有其他雜原子；以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 2·如清求項1之化合物，其中 R1意謂氫n、cf3、C3_C4烷基；或基團Ci_w 基、CVC6芳基、Ci-C6酿基、鹵基_Ci_c6燒基、Cl; 、元基q c6烧基、Cl_c6院基_Ci_c6醢基、Ci_C6醯基 -cvc6醢基、Cl_c6烧基_Ci_C6芳基、Ci_C6芳基夂 119675.doc 200815348 烷基或cf3，其中K A ^ η n 凡土 Ci-C6 芳基、醯基、_ *_CVC6烷基、 ^ A p ^ ^ . 「C6烧基_C”C6院基、Ci-C6 院基- Ci-Cs贐基、c r to c p ” 6醯基_CVc6醯基、c丨-c6烷基 -Ci-C6方基或〇^(：6笑装p 。 ^ , 土- 烷基視情況可在一或多處以相同或不同方式 g A n 插乳、硫或氮；或基團磺醯基-C^C6烷基、磺醯胺或氰基·， R2意謂齒素、CF3或c”c 6衣烷基，或基團C〗-C6烷基、

Ci-C6：^基、醢美、 6醱基、i基-Cl_c6烷基、^厂匕烷基Cl C6烧基、CleC6院基-Ci-c6s篮基、Ci_c6醯基 1 6醯基CpC,燒基·Ci-C6芳基、q_C6芳基_Ci- C6烷基或cf3，其中Ci_C6烷基、Ci_c6芳基、㈣醯基、齒基-cvc^基、Ci-C6烧基_Ci_c6烧基、Ci_c6 烧基-(VC6醯基、Cl_c6醯基_Ci_c6醯基、Ci_c々基 -CVC6芳基或Cl_C6芳基_Ci_C6烷基視情況可在一或多處以相同或不同方式穿插氧、石危或氮；或基團確酿基-C1-C6烷基、磺醯胺或氰基； R w明C6 Cu芳基，其視情況可在一或多處以相同或不同方式經鹵素、CrCs烷基、CVC3醯基、Cl_c3烷氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、COHCrCg 烷基）、CO-nr4r5或cf3取代； Cs_c 12雜芳基，其視情況可在一或多處以相同或不同方式經氯及/或氟、Cl_C6烷基、CVC3醯基、（:厂^烷氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、COHC^C;烷基）、 CO-NR4R5或 cf3取代； 119675.doc -4· 200815348 CrC6環烧基’其視情況可在一或多處以相同或不同方式經氯及/或氟、cf3、氰基、Cl_c3烷基、〇1<3醯基、羥基、N-(CH3)2、COHCi-q烷基）、C〇-NR4R5 或匸广^烷氧基取代； R4意謂氫；CrC6環烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經CVC3烷基、CVC3醯基、Cl_c3烷氧基或CF3取代；

芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經南素、CVC3烧基、Cl_c3醯基、Ci_C3院氧基、N_ Ci-C：3烷基-CVC3烷基、CF3或氰基取代；或

R5 C5 Cu雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經鹵素、Ci-C3烷基、CVC3醯基、Cl-C3烷氧基、 Ν-Ci-C3烷基-Cl_C3烷基、CF3或氰基取代；或 Ci-C0烷基，其可依任何想要之方式經取代； :明氫，CVC6烷基-CVC6環烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經Ci_C6烷基、Ci_c6醯基、 Cl_C6烷氧基或CF3取代；、6衣烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式、^c^c3烷基、Ci_c3醯基、烷氧基或取 12芳基’其視情況在一或多處以相同或不同方式經自素、CVC3烧基、Ci_C3醯基、Ci_C3院氧基、I Ci-C3烷基-CVC3燒基、CFs或氰基取代；或 12雜芳基，其視情況在—或多處以相㈤或不同方 119675.doc 200815348 式經鹵素、CVC3烷基、Cl_C3醯基、Ci_c3烷氧基、 N-CVC3烷基-CVC3烷基、CFs或氰基取代；或 CrC6烷基，其可依任何想要之方式經取代；以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 3.如請求項1或2之化合物，其中 R1意謂氫； R2意謂C3-C6環烷基、Ci-G烷基、CF3、氰基、溴或基團-OCF3 或-S〇2-CH3 ; R3意謂C6-cu芳基，其視情況可在一或多處以相同或不同方式經齒素、CVC6烷基、CVC3醯基、Ci-Cs烷氧基、氰基、經基、N-(CH3)2、CCVCCVC;烷基）、CO-nr4r5或cf3取代； Cs-Cu雜芳基，其視情況可在一或多處以相同或不同方式經氯及/或氟、Cl_C6烷基、Ci_C3醯基、CrQ烷氧基、氰基、羥基、N_(CH3)2、COHC^C;烷基）、 co-nr4r5 或 cf3 取代； CyC：6環燒基，其視情況可在一或多處以相同或不同方式經氯及/或氟、CF3、氰基、Cl_c3烷基、（VC3醯基、羥基、n-(ch3)2、c〇2_(Ci_C3烷基）、CO-nr4r5 4C「C3烷氧基取代； R4意謂氫；意謂氫；烷基·環烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經Ci_c6烷基、Cl-c6醯基、 Ci-C6烧氧基或(^3取代； 119675.doc 200815348 Cs C6環烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經CVC3烷基、CrCs醯基、CVC3烷氧基或CF3取代； CpCi2芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式 - 經_素、CkC3烷基、Cl_c3醯基、Ci-C3烷氧基、I • Cl_C3燒基-Ci-C3烷基、CF3或氰基取代；或雜芳基’其視情況在一或多處以相同或不同方 p 式經_素、Ci-C3烷基' CVC3醯基、CVC3烷氧基、 N-CVC3烷基-cvc3烷基、cf3或氰基取代；或^广匕烧基，其可依任何想要之方式經取代；以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 4·如請求項1或2之化合物，其中 R1意謂氫； R意謂C3_C6環烷基、C1-C6烷基、CF3、氰基、溴或基團-〇CF34_S〇2_CH3且處於對位； 3 Q R意謂CpCi2芳基，其視情況可在一或兩處以相同或不同方式經鹵素、CrC3烷基、乙醯基、曱氧基、乙氧基、氰基、羥基、N_(CH3)2、cOHCVCs 烷基）、CO- • nhr5或cf3取代； 2雜芳基，其視情況可在一或兩處以相同或不同方式經氯及/或氟、CKC3烷基、乙醯基、甲氧基、乙氧基、氰基、羥基、N_(CH3)2、COHCVG烷基）、 CO-NHR5或CF3取代·’或C3-C6環烧基； R4意謂氫； 119675.doc 200815348 R 思謂氫；或C^-Cs炫基-匸3-(1：6環烧基，其視情況在一或多處以相同或不同方式經Ci-C6烷基、CrQ醯基、匕-匕烷氧基或CF3取代； CrC^i展烧基，其視情況在一或多處以相同或不同方 - 式經CrC;烷基、CrC3醯基、CVC3烷氧基或CF3取代； CrCu芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式 (、經1^素、Ci_C3烷基、（VC3醯基、CrC3烷氧基、队 C1-C3烷基_CVC3烷基、CF3或氰基取代；或 C5 C i2雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方式、、、二鹵素、Ci-C3燒基、c〗-C3醯基、Ci-C^燒氣基、烷基烷基、CF3或氰基取代；或 Ci-C6烷基，其可依任何想要之方式經取代；以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 5·如請求項1或2之化合物，其中 () Rl意謂氫； R意謂第三丁基、異丙基、異丁基、第二丁基、氰基、溴或基團-〇_CF3或-S〇2_CH3且處於對位；氰， r3意謂基團 119675.doc 200815348 Γ

R4意謂氫；

R5 意謂氫或基團- (CH2)n-N-(CH3)2、-(CH2)2-CH3、 -(CH2)2-NH-COCH3、-(CH2)-CHCH3-OH、-(CH2)2-0-CH3、-(CH2)2-OH或-CHCH3-CH2-OH，其中 n=l-3， 119675.doc 200815348

以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 6.如請求項1或2之化合物，其中 R1意謂氫； R2意謂第三丁基、異丙基、異丁基、第二丁基、氰基、溴或基團-〇-CF3或-S02-CH3且處於對位； R3意謂基團

R4意謂氫； R5 意謂氫或基團-(CH2)-CHCH3-OH、-(ch2)2-o-ch3 或 -CHCH3-CH2-OH、 119675.doc -10 - 200815348

• 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 . 7.如請求項1或2之化合物，其係選自含有以下化合物之群：瘦'、 5-(4 -弟二丁基-苯基胺石黃酿基）-3 -苯基-1Η -ϋ弓丨蜂-2 -甲酸 \ (四鼠-σ比喃-4 _基）·酿胺， 5_(4-第二丁基-苯基胺石黃酿基）-3-苯基-1Η_σ引朵-2-甲酸 (2 -嗎琳-4 -基-乙基）-S篮胺， (土 )-5-(4-第二丁基-苯基胺績酿基）-3 -苯基-1Η -σ引ϋ朵-2 _ 曱酸-(2 -經基-1 -甲基-乙基）-酿胺， (士)-5-(4-第三丁基-苯基胺磺醯基）-3-苯基-1Η-吲哚-2-曱酸-(2-羥基-丙基）-醯胺； 5-(4 -第二丁基-苯基胺石黃酿基）-3-(3 -氣-苯基）-1Η-ϋ引11 朵_ 2 -曱酸（四鼠-σ比喃-4 -基）-酿胺， 5-(4-弟二丁基-笨基胺續酿基）-3-(3 -亂-苯基）-1Η-ϋ引。朵_ • 2 -甲酸（2 -嗎琳-4 -基-乙基）·酿胺， . 5-(4-弟二丁基-苯基胺石黃酿基）-3-(3-甲乳基-苯基）-1Η· 吲哚-2-甲酸（四氫-吡喃-4-基）-醯胺； 5-(4-第三丁基-苯基胺磺醯基）-3-(3-甲氧基·苯基）-1Η-叫丨。朵-2 -甲酸（2 -嗎琳-4-基-乙基）-酿胺；及 119675.doc -11 - 200815348 5-(4-第三丁基-苯基胺磺醯基）苯義 (吡啶_4-基）-醯胺。 8. —種醫藥劑，其含有至少一種如請求項J _苯基_1H-吲哚-2-甲酸合物。 9·如請求項8之醫藥劑，其中該通 -7中任一項之化其中遠通式（1)化合物之含量為有效劑量。 10·如請求項1或2之通式（I)化合物，其用於製備醫藥劑。

调所引起。 ( 13·如請求項9之醫藥劑，其用於避孕。 14·如請求項9之醫藥劑，其用於抑制可溶性腺苷酸環化 15·如請求項8、9及11至14中任一項之醫藥劑，其具有合適之調配物質及媒劑。 16· —種以如請求項丨-7中任一項之通式⑴化合物於經腸、非經腸、經陰道及經口投藥型式之醫藥製劑中的用途。 17· 種製備如清求項1之通式（I)化合物之方法，其中該方法包括使通式（II)化合物反應

其中R1、R2及R3係如請求項i所定義，且R6可為氫或C1 119675.doc -12- 200815348 c6烷基，以形成該通式（i)化合物。 18. —種通式（II)、（V)及（VII)之中間產物，其中該式（II)係如請求項17所定義且式（V)及（VII)為

其中R1及R2係如請求項1所定義且R6係如請求項17所定義0 Ο 119675.doc -13 - 200815348 七、指定代表圖·· (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明：八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式··

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