TW200815346A - Inhibitors of soluble adenylate cyclase - Google Patents

Description

200815346 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於可溶性腺㈣環化酶之抑制劑，其製備以 及其用於製備供避孕用之醫藥劑之用途。 【先前技術】 當前存在大量女性可用之現代避孕方法；然而，僅極少 種男性節育之方法可用(避孕套及絕育手術)。絕對有必要 開發用於男性節育之新穎可靠的藥劑。就此而論，因"男 "，陡避孕藥，，所產生之不育應完全可逆且恰與女性可用之現 存方法一樣有效。不育應開始相對較快且持續盡可能長時 間。該等避孕方法不應具有任何副作用；就此而論，除激 素製劑外，亦可存在非激素製劑。可能之出發點為調控卵 母細胞文精中發揮重要作用之酶，可溶性腺苷酸環化酶 (sAC)之活性。該酶主要表現於睪丸幹細胞中且存在於成 熟精子中。

在 1999年，作者Levin及Buck(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96 (1):79-84)能夠自大鼠睪丸純化且選殖sAC之同功異型 物0 大鼠之重組酶可受碳酸氫鹽刺激。藉助於抗體，有可能 證明酶之催化功能部位位於睪丸、精子、腎及脈絡叢中。 該等揭示内容為（其在美國授權（US6544768))之申請案 WO01/85753之標的物。 在WO01/21829(Conti等人）中，主張編碼人類SAC之同功 異型物之經分離聚核苷酸序列、經分離sAC多肽及測試系 119677.doc 200815346 統，在該系統幫助下，可鑑別抑制sAC之活性的物質。揭 不使用$等物質以可逆方式降低活動精子細胞數目之可能 性以及該等物質用作男性節育之藥劑之用途。

John Herr小組展示自精子分離及表徵sAC之人類同功異 型物。、在WO G2/2G745中，除核酸外，亦主張亦編碼sAC 之測4系統，在该系統之幫助下，可鑑別調控人類$之 表現或活丨生的物質。該等化合物可選擇性抑制（例如>Ac 之活性；此導致精子細胞喪失使卵母細胞受精之能力。因 此，該等sAC抑制劑可用作非激素避孕醫藥劑。 然而’業已已知之sAC抑制劑顯示特定問題：兒茶酚雌 激素（T· Braun，Proc s〇c Exp Biol Med 1990, 194(1):58轉頁） 棉子盼（Κ· L· 〇lgiati，Arch Biochem Biophys 1984， 231(2): 411轉頁）天生具有毒性，而腺苷類似物僅以極微弱 之作用抑制（M. A· Brown 及 E· R_ Casillas，J Androl 1984, 5:361轉頁）。由Zippin 等人（J H zippin等人，】CeU 扪〇1 2004’ 164(4):527轉頁）描述之重組人類sAC之抑制劑（IC5〇 $10 μιηοΐ)在某種程度上更有效。 為月b夠製造男性節育可用之藥劑，對可逆、快速且成功 導致不育之物質存在日益增加之需要。 【發明内容】 該目標係藉由提供通式〗化合物達成：

119677.doc 200815346 其中

Rl意謂氫、鹵素、CF3、視情況為多元飽和的且視情 況經多取代之CrC6環烷基；或基團Ci-C6烷基、c广 C6芳基、CVC6醯基、鹵基-Ci-C6烷基、C1_G烷基-cvc6烧基、（VC6院基-CrQ醯基、Ci_c6醯基 C6醯基、CVC6烧基-Cl_c6芳基、Ci-C6芳基·Ci_c^ 基或cf3，其中Cl-C6烷基、Cl-C6芳基、Ci_c6醯 基、i基-CVC6烧基、Ci_c6院基_Ci-C6烧基、ClA 烷基-CVC6醯基、Ci_c6醯基_Ci_c6醯基、^^烷 基-C^C6芳基或Cl-C6芳基_c广Q烷基視情況可在一 或多處以相同或不同方式穿插氧、硫或氮；或基團 磺醯基-CrC6烷基、磺醯胺或氰基； R Ό月鹵素、cf3、視情況為多元飽和的且視情況經 多取代之C3_C6環燒基；或基團CVC6燒基、Cl_c6芳 基、Cl_C6酿基、_基<广C6烧基、Cl-C6烧基-Ci_C6 烷基、CVC6垸基·Ci_c6酿基、基^-^酿 基、CVC6烷基-Ci_c6芳基、Ci_c6芳基心_。6烷基或 3 ”中ci c6燒基、Ci-C6芳基、Ci_C6醯基、鹵 1 6烧基、CVC6烧基-d-Cd基、Ci-Ce烧基-

Cl^6酿基、C”C6醯基A-C6醯基、CnC6烧基-Ci_ 6芳土或Ci C6芳基_Ci_C6烷基視情況可在一或多處 以相同或不同方彳 j方式牙插氧、硫或氮；或基團磺醯 3 土-C「C6烷基、磺醯胺或氰基； R…月CVC12芳基，其視情況可在一或多處以相同或 119677.doc 200815346 不同方式經_素、視情況可在一或多處經取代之 Ci_C0烷基或(^-(^6醯基取代，或可經Ci-C6烷氧基、 經基、氰基、COHCVG烷基）、Ν-((ν(：6烷基）2、 CO-NR4R5或 CF3取代；

Cs-Ci2雜芳基，其視情況可在一或多處以相同或不 同方式經鹵素、CVC6烷基、CVC6醯基、CVC6烷氧 基、羥基、氰基、（：02-(〇ν(：6烷基）、N-(C!-C6烷 基）2、c〇-nr4r5或CF3取代；或 C3_C6環烷基，其視情況可在一或多處以相同或不 同方式經鹵素、CF3、羥基、氰基、cCVCCrG烷 基）、CVC6 烷基、CrCe 醯基、烷基）2、 烷氧基取代； r4意謂氫；C3_C6環烷基，其視情況在一或多處以相 同或不同方式經CVC6烷基、CVC6醯基、CVC6烷氧 基或CF3取代； C^C!2芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方 式經_素、CVC6烷基、Cl_c6醯基、Ci_c6烧氧基、 N-CVC6烷基-(VC6烷基、cf3或氰基取代；或 C5_Ci2雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同 方式經鹵素、CVC,烷基、Cl_c6醯基、Ci_C6烷氧 基、N-Cl-C6烷基-Cl-C6烷基、Cf3或氰基取代；或 CrC：6烷基，其可依任何想要之方式經取代； R5意謂氫；Q-C6烷基-C3_C6環烷基，其視情況在一或 多處以相同或不同方式經Ci_C6烷基、CrG醯基: 119677.doc 200815346

Ci-C6烧氧基或CF3取代；

CyC6環烷基，其視情況在一或 方式經CVC6烷基、醯基、 取代； CVC12芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方 式、，工鹵素、cvc6烧基、Cl_c6醯基、烧氧基、 N-CVC6烷基-CVC6烷基、CR或氰基取代；或

5 C12雜芳基’其視情況在一或多處以相同或不同 方式經齒素、Cl-C6燒基、Ci_c6酿基、Ci心㈣ 基、N-CVC6烷基-Cl_c：6烷基、或氰基取代；或 CrC6烷基，其可依任何想要之方式經取代； R4及R5一起形成5至8員環，其可含有其他雜原子；且 X 意謂基團磺醯基、（CH2)n4羰基； Y 意謂 _(CH2)n_或·CH=CH·; η 思謂1 _ 4 ;

多處以相同或不同 C1_C6烷氧基或CF2 以及其克服已知之缺點且展示改良性質，亦即良好之效 用、良好之溶解性及穩定性之其異構體、非對映異構體、 對映異構體及鹽； 根據本發明之化合物抑制可溶性腺苷酸環化酶且因此阻 止精子獲能作用且因此用於男性節育。 烷基在各情況下係定義為直鏈或支鏈烷基，諸如甲基、 乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁 基、戊基、異戊基及己基。 烷氧基在各情況下係定義為直鏈或支鏈烷氧基，諸如甲 119677.doc •10- 200815346 氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、第二丁 氧基、異丁氧基、第三丁氧基、戊氧基、異戊氧基及己氧 基。 醯基在各情況下係定義為直鏈或支鏈基團，諸如甲醯 基乙醯基、丙醯基、丁醯基、異丙醯基、戊醯基及苯甲 醯基。 環燒基係定義為單環烷基環，諸如環丙基、環丁基、環 戊基及環己基。 袠烷基可含有一或多個諸如氧、硫及/或氮之雜原子來 替代反原子。較佳為彼等具有3至6個環原子之雜環烷基。 中％中可含有視情況一或多個可能的雙鍵之環系統係定 義為（例如）環烯基，諸如環丙烯基、環丁烯基、環戊烯 土 袠戊一烯基、環己烯基或環庚烯基，由此可進行與雙 鍵及與單鍵之鍵聯。 鹵素在各情況下係定義為氟、氣、溴或碘。 在各情況下，芳基包含6_12個碳原子且可為（例如）苯并 縮合的。舉例而言，可提及以下各基團：苯基、托品基、 環辛二烯基、茚基、萘基、聯苯基、苐基、蒽基等。 雜芳基在各情況下包含5-16個環原子且環中可含有一或 諸如氧、硫或氮之相同或不同的雜原子來替代碳原 子且可為單環、雙環或三環，且另外在各情況下可為苯 弁縮合的。 舉例而言，可提及： 嗟为基、咬喃基、11比洛基、噁唑基、咪唑基、吡唑基、 119677.doc 200815346 異嗯絲、異°塞嗤基、嗯二嗤基、三唾基、嘆二唾基等及 其苯，衍生物，諸如苯并吱喃基、苯并喧吩基、苯并㈣ 土苯并糸坐基、叫卜坐基、0弓卜朵基、異十 基、嘧啶基、吡嗪基、三味A箄及、， 飞雙桑 一矛、土等及其本开竹生物，諸如喧 1基、異0基等，·或。丫辛因基、啊基、㈣基等及其 本开何生物；或啥琳基、異啥琳基、吟琳基"太嗓基、喹 唑琳基、啥嗜琳基、嗓咬基、嗓咬基、味唾基"丫咬基、 钟嗓基、啡料基、啡料基”山基、氧年基等。 雜芳基在各情況下可為苯并縮合的。舉例而言，嗟吩、 呋喃、噁唑、噻唑、咪唑、、， 上及其本开衍生物可提及為 5-¾雜芳族化合物，且吡啶、-^ ^ ^ ^ —嗪、喹啉、異喹啉 及本开何生物可提及為6_環雜芳族化合物。 雜原子係定義為氧、氮或硫原子。

C

J ^包括酸性基團’則作為鹽適合的為例如易溶性驗金屬 双土金屬鹽之有機及無機驗之生理學上相容的鹽，以及 Ν甲基-匍萄胺、二甲基-葡萄胺、乙基_葡萄胺、離胺酸、 夕-己二胺、乙醇胺、葡糖胺、肌胺酸、絲胺醇、參-經 2,3,4_丁三醇。 ^^“讀及卜胺基- 若包括驗性基團，則經動脈内合適的為諸如鹽酸、硫 西夂、磷酸、檸檬酸、酒石酸之有機及無機酸之生 容的鹽。 t 仰 尤其較佳為彼等通式（I)化合物，其中

R1意謂氫、i素、CF3、C3_c6環燒基；或基團LG 119677.doc -12- 200815346 烧基、Ci-CG芳基、CpCfi酼复 . y醞基、_ *-Cl-C6烷基、 CVC6烷基-CVC6烷基、Ci_r A # 烷基_Ci_c6醯基、Ci_ C6 酿基- C1-C6酿基、Ci-Ck、]^ 甘 6坑基-CVC6芳基、Cl_cd 基- C1-C6烧基或CF3，JL中p ” T(Vc6烧基、Cl-C6芳基、

Ci-C6 醯基、_ 基-Ci-Cfi 焓 A ^ 6坑基、CA烧基-Cl_cw 基、（VC6烷基_(VC6醯基、r 1-C6&&基- Ci-Cg^ 基、

Ci-c6烧基-Ci-C^芳基或c^c \ 1 %方基-CVC6烷基視情況 R2 可在一或多處以相同或不同方式穿插氧、硫或氮； 或基困績醢基-C1_w基、料胺或氮基； 意謂鹵素、CF3或C3-C6環;^ Λ + A ^ 6衣沉基，或基團（^_(:6烷 基（VC6芳基、CVC6醯基、鹵基_Ci_c6烷基、 C6烧基·Cl-C0烧基、Cl_C6垸基_Ci_C6酿基、c…酿 基-Cl_C6醯基、Cl_C6燒基AC6芳基、Cl_c6芳基-CVC6烷基或cf3，其中Ci_C6烷基、Ci-C6芳基、Ci_ c6醯基、鹵基-(VG燒基、Ci_C6烧基_Ci_c6燒基、 CVC6燒基-Cl-C6醯基、Ci_c6醯基_Ci_c6酿基、 C6烷基-C^C6芳基或Cl-C0芳基·Cl_c6烷基視情況可 在一或多處以相同或不同方式穿插氧、硫或氮；或 基團磺醯基-C^C：6烷基、磺醯胺或氰基； R3 思谓CcC〗2芳基，其視情況可在一或多處以相同或 不同方式經鹵素、Ci_C6烷基、CVC3醯基、CVC3烷 氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、COHCrCs烷基）、 CO-NR4R5或 CF3取代； C5-Cu雜芳基，其視情況可在一或多處以相同或不 119677.doc -13- 200815346 同方式經氯及/或氟、Cl-C6烷基、CVC3醯基、CK c3烧氧基、氰基、羥基、n_(ch3)2、c〇2-((VC3烷 基）、CO-NR4R5或 CF3取代；

Cs-C6環燒基，其視情況可在一或多處以相同或不 同方式經氯及/或氟、CF3、氰基、CVC3烷基、Cr c3 酸基、經基、n-(ch3)2、C02-(CVC3 烧基）、CO-NR4R5或c「c3烷氧基取代； R4意謂氫；C3_c0環烷基，其視情況在一或多處以相 同或不同方式經(^-(：3烷基、CVC3醯基、Cl-C3烷氧 基或CF3取代； 芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方 式經鹵素、（VC3烷基、Cl_C3醯基、（^(^烷氧基、 N-Ci-C3烷基-(VC3烷基、CF3或氰基取代；或 CyCu雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同 方式經鹵素、CVC3烷基、Cl_c3醯基、Ci-C3烷氧 基、N-Ci-C3烷基-CVG：3烷基、CF3或氰基取代；或 CrC6烷基，其可依任何想要之方式經取代； R5意謂氫；Ci-C6烷基-CrC6環烷基，其視情況在一或 多處以相同或不同方式經Ci_c6烷基、Ci_c6醯基、 Ci-C6烧氧基或cf3取代； C3_C0環烷基，其視情況在一或多處以相同或不同 方式經CVC3烷基、CrC3醯基、Cl_c3烷氧基或cf3 取代； 芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方 119677.doc -14- 200815346 R4 x λ Y n =『幽素'CVC3烧基、Ci_C3酿基、Ci_c3^氧暴、 !· 3烷基-Ci-C3烷基、CF3或氰基取代，·或 kb雜芳基，其視情況在一或多處以相同5或不同 2式經i素、Ci_C3炫基、Ci_C3酿基、Cl*炫氧 土、N-CA貌基院基、W或氛基取代；或 ci C6烷基，其可依任何想要之方式經取代； 及R 一起形成5至8員環，其可含有其他雜原子，·且 意謂基團磺醯基、（CH2)n或羰基； 意謂-(CH2)n-或-CH=CH-; 意謂1-2 ; 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 亦較佳為彼等通式I化合物，其中 Rl意謂氫； R2意謂C3-C6環烷基、G-C6烷基、CF3、氰基、溴或 基團-OCF3或-S02-CH3 ; R3意謂C6-Ci2芳基，其視情況可在一或多處以相同或 不同方式經鹵素、cvq烷基、醯基、κ3烷 氧基、氰基、羥基、n-(ch3)2、烷基）、 CO-NR4R5 或 cf3 取代；

Cs-Cu雜芳基，其視情況可在一或多處以相同或不 同方式經氣及/或氟、CVC6烷基、cvc3醯基、Ci_ c3烷氧基、氰基、羥基、N_(CH3)2、C02-(CVC3燒 基）、CO-NR4R5或 CF3取代； C3 - C6 烧基’其視情況可在^一或多處以相同或不 119677.doc •15- 200815346 同方式經 C3醯基、 NW或c R4 氯及/或氟、CF3、氰基、CVC3烷基、Cr 羥基、N_(CH3)2、COHCkCs 烷基）、co-1-C3烷氧基取代； R5 意謂氫; 意謂氫；Γ n ia. 4* Li-C6烷基_c3_c6環烷基，其視情況在一或 夕處以相同或不同方式經C1-C6烷基、Cl_c6醯基、 Cl_C6烷氧基或cf3取代；

C3 C6%燒基’其視情況在一或多處以相同或不同 方式故κ3燒基、Cl_c3醯基、Ci-c;烷氧基或cf3 取代；

C6 cu芳基’其視情況在一或多處以相同或不同方 式Μ齒素、Cl_C3烷基、Ci_C3醯基、Ci_C3烷氧基、 N_Ci-C3燒基-c^C3燒基、CF3或氰基取代；或 C5-Cu雜芳基’其視情況在一或多處以相同或不同 方式經画素、（VC3烷基、Cl-C3醯基、Cl-c3烷氧 基、N-CVC3院基_Cl-c3烧基、cf3或氰基取代；或 Ci-C：6烷基，其可依任何想要之方式經取代； x 意謂基團磺醯基； γ 意謂-(CH2)n-或-CH=CH-; n 意謂1-2 ; 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 亦較佳為彼等通式I化合物，其中 R1意謂氫； r2意謂c3-c6環烷基' 烷基、cf3、氰基、漠或 119677.doc -16 - 200815346 基團-OCF3或-S〇2-CH3且處於對位； R3意謂C6_ci2芳基，其視情況可在一或兩處以相同或 不同方式經鹵素、CrC3烷基、乙醯基、曱氧基、 乙氧基、氰基、羥基、N_(CH3)2、cOHCi-Cs烷 基）、CO-NHR5或 CF3取代；

Cs-Cu雜芳基，其視情況可在一或兩處以相同或不 同方式經氣及/或氟、Cl_C3烷基、乙醯基、甲氧 基、乙氧基 '氰基、羥基、n_(CH3)2、C〇2qCl-c3 烷基）、CO-NHR5或CF3取代；或烷基； R4 意謂氫； R5意謂氫；或Ci-C6烷基-CrC6環烷基，其視情況在一 或多處以相同或不同方式經Ci_C6烷基、〇1{6醯 基、Ci_C6烧氧基或CF3取代； c3-c6%烷基’其視情況在一或多處以相同或不同 方式經Cl_C3燒基、醯基、cvcj氧基或CF3 取代； ”仇丨月況在一或多處以相同或 式經i素、（:心燒基、Ci_C3酿基、Ci_c々氧基、 N_Cl·基燒基、cf3或氰基取代；或 C5-Cl2雜芳基，其視情況在—或多處以相同或不同 方式經鹵素、CVc,栌a 〇 3坑基、Ci-c3醯基、Cl_c3烷氧 基N Cl C3燒基-Cl'C3烧基、CF3或氰基取代；或

X C1领基’其可依任何想要之方式經取代； 意謂基團續醯基； 119677.doc -17- 200815346 Y 意謂-(CH2)n-或-CH=CH-; n 意謂1-2 ; 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 亦較佳為彼等通式I化合物，其中 R1意謂氮； R2 意謂第三丁基、異丙基、異丁基、第二丁基、氰 基、溴或基團-〇-cf3或-so2-ch3且處於對位； R3 意謂基團

R4 意謂氫； R5 意謂氫或基團-(CH2)n-N-(CH3)2、-(CH2)2_CH3、 119677.doc -18 - 200815346

-(ch2)2-nh-coch3、-(ch2)-chch3-oh、-(ch2)2-o-ch3、-(ch2)2-oh或-chch3-ch2-oh、

X 意謂基團磺醯基； Y 意謂-(CH2)n-或-CH=CH-; n 意謂1_2 ; 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 亦較佳為彼等通式I化合物，其中 R1意謂氫； R2 意謂第三丁基、異丙基、異丁基、第二丁基、氰 基、溴或基團-〇-cf3或-so2-ch3且處於對位； R3 意謂基團 119677.doc -19- 200815346

R 意謂氫； r5 意謂氫或基團-(ch2)-chch3-〇h、 V^H2)2^〇.Ch 或-chch3-ch2-oh、 3

Ν x 意謂基團磺醯基； Y 意謂 _(CH2)n-或-CH=CH-;且 n 意謂1-2 ; 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及_ 下列根據本發明之化合物十分尤其較佳： 1· (E)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）·3·苯基 吲哚-2-基](四氫-吡喃-4-基）-丙烯酸醯胺 2· (E)_3-[5-(4-第三丁基·苯基磺醯基胺基）_3·苯基-1H_ 吲哚-2-基]-N-(2-嗎啉-4-基-乙基丙烯酸醯胺 3· (±ΗΕ)-3·[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）_3·苯基_ 1Η-吲哚基]_Ν_(2_羥基-4·甲基_乙基）_丙烯酸醯胺 4· (±)·(Ε)-3_Ι>(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）_3_苯基_ 119677.doc • 20 - 200815346 1 Η-σ弓卜朵-2-基]-N-(2-經基-丙基）-丙烯酸醯胺 5. 3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-苯基 哚-2-基]-N-(2-嗎啉-4-基·乙基）-丙酸醯胺 6. (E)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-(3-氟苯 基）-1Η-吲哚-2-基]-N·(四氫·吡喃-4-基）-丙烯酸醯胺 7. (E)-3-[5-(4_第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-(3-氟笨 基）-1Η-吲哚-2-基]-N-(2-嗎啉-4-基-乙基）·丙烯酸 醯胺 8. (E)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-(3-甲氧 基-苯基）-1Η-吲哚-2-基]-N-(四氫-η比喃·4_基）·丙稀 酸醯胺 9. (Ε)-3-[5-(4-第三丁基·苯基磺醯基胺基）-3-(3-甲氧 基-苯基）-1Η-吲哚-2-基]-N-(2-嗎啉-4-基-乙基）·内 烯酸醯胺 10· (E)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-(3_氣苯 基）-1Η_吲哚-2-基]-Ν-(吡啶基）-丙烯酸醯胺 η· (Ε)-3_[5_(4·第三丁基-苯基磺醯基胺基甲氧 基-苯基）-1Η-吲哚-2-基]-Ν-(吡啶-4-基）_丙烯酸醯胺 另外，本發明係關於一種製備根據本發明之通式！化人 物之方法，其特徵在於根據熟習此項技術者所已知之方 法’使式II化合物

119677.doc -21 - 200815346 其中R1、R2、R3、x及γ具有以上所指出之含義且r6可為 氫或cvc6烧基’且較佳為氫、甲基或乙基，與通式出胺 η/5 、R4 (m) 其中R4及R5具有以上所指出之含義，及/或隨後視情況裂 解所需之保護基團，及/或視情況氫化所存在之雙鍵。 對於R6為氫之情況而言，反應首先可藉由使酸功能活化 來進行；在該種狀況下，例如首先首先在諸如三乙胺之三 級胺存在下用氣甲酸異丁 s旨使通式⑽酸轉化為混合: 酐在_3〇 C與+60 c之間的溫度下、較佳在〇〇c至3〇。匸 下，在諸如四氫吱喃、二甲氧基乙烧、二甲基甲酿胺、六 甲基磷酸三醯胺之惰性溶劑或溶劑混合物中進行混合酸酐 與相應胺之鹼金屬鹽之反應。 另可此性在於由諸如HOBt或HATU之試劑使通式 酸活化。在-50°C與+60X：之間的溫度下、較佳在〇。〇至3〇 亡下，在諸如DMF之惰性溶劑中，在通式m之相應胺及諸 如乙基一異丙基胺之二級胺存在下進行酸與（例如）hAtu 之反應。 對於R為CrC6烷基之情況而言，例如視情況亦可藉助 於三烷基鋁試劑、較佳三甲基鋁執行酯與相應胺之直接醯 胺解。 用作起始物質之通式II化合物可（例如）以此項技術已知 之方法製備，其中在Pd觸媒存在下，在氫蒙氣或諸如甲酸 119677.doc -22- 200815346 銨之氫源下，使已知之吲哚酯ιν之硝基 o2n

(IV) 其中R7為CrC6烷基，較佳甲基或乙基，首先還原為胺官 能基’且隨後在諸如吡啶、二異丙基乙胺、三乙胺或碳酸 鉀之鹼存在下，使該胺與通式V鹵化物反應

R2 (V).， 較 其中R、R2及X具有以上所指出之含義且Hal代表鹵素 佳氯或溴，以形成通式VI化合物

R2 隨後，例如藉助於碘、NBI、NBS或CuBr2使通式VI醋在 3位處經鹵化，且隨後在與通式VII_酸衍生物之Pd催化反 應中轉化 ^B(〇H)2 R3 (VII) 其中R3具有以上所指出之含義，且隨後用（例如）二異丁基 氫化鋁還原為通式VIII醇 119677.doc -23- 200815346 (vm) 其中R、R、R、R及X具有以上所指出之含義。 醇VIII轉化為通式II化合物係藉由如下步驟進行：

a)藉由（例如）與PB1·3、亞硫醯氯、甲苯磺醯氯或甲磺 醯氣或CBrVPPh3反應且隨後與氰化物反應使醇轉 化為離去基。由此獲得之氰化物可經皂化以形成相 應叛酸且隨後視情況根據熟習此項技術者所已知之 方法用R6-OH酯化，或者相應羧酸亦可藉由用（例如） 二異丁基氫化鋁還原，接著用（例如）Jonew<劑氧化 水解而獲得，或 b)使醇由二氧化錳氧化，接著為醛之霍爾納-維蒂希 反應（Horner·Wittig reaction)，該等駿係由以下試 劑產生，諸如

[或] 其中R6具有以上所指出之含義但不為氫，且R8等同 思明甲基、乙基或三氟乙基，視情況接著在氫蒙氣 下在Pd觸媒存在下氫化且隨後視情況將所獲得之酯 根據熟習此項技術者所已知之方法皂化，或 c) 用（例如）二異丁基氫化鋁使在a)項下獲得之氰化物 還原且水解，接著進行醛之霍爾納-維蒂希（H〇rner_ 119677.doc •24- 200815346

Wittig)反應，該等醛係由以下試劑產生，諸如

其中R6及R8具有以上所指出之含義，但R6不為氫， 接著在氫蒙氣下在Pd觸媒存在下氫化，且隨後視情 況將所獲得之酯根據熟習此項技術者所已知之方法 皂化。 根據本發明之化合物抑制可溶性腺苷酸環化酶，在例如 男性節育之情況下即以此作用為基礎。 腺苷酸環化酶為最常用之信號轉導方法之一的效應分 子；其由三磷酸腺苷（ATP)經焦磷酸（PP)裂解而合成環狀 單填酸腺苷（cAMP)之第二信使分子。cAMP介導許多神經 遞質及激素之眾多細胞反應。可溶性精子特異性腺普酸環 化酶〇八(：，人類1111^八序列（基因庫）>^一〇18417，人類基 因ADCY X)為人類基因組之1 〇種所述腺苷酸環化酶之一 種。在該種狀況下，sAC展示數種不同於其他腺苷酸環化 酶之特異性質。與所有其他腺苷酸環化酶相比，sAC受其 • 周圍之介質中碳酸氫鹽之濃度刺激且不受G蛋白刺激。 sAC在其胺基酸序列中並不具有任何跨膜區；其不能由毛 喉素（forskolin)抑制，受錳刺激之程度比受鎂刺激強烈得 多，且僅展示與其他腺苷酸環化酶之低序列同源性（在胺 基酸層級上，sAC之催化功能部位I及π與其他腺苷酸環化 酶具有$26%之一致性）。 119677.doc -25- 200815346 sAC之特異性錳依賴活性首先由T. Braun等人（1975, PNAS 73:1097轉頁）在大鼠睪丸及精子中描述。N. Okamura 等人（1985，J. Biol· Chem 260(17):9699 轉頁）展示 刺激豬精液中sAC之活性之物質為碳酸氫鹽。亦可展示僅 在大鼠睪丸及精子中而未在其他組織中偵測到sAC活性可 受碳酸氫鹽刺激。由Buck及Levin小組自大鼠睪丸純化sAC 且首次定序（J. Buck等人，1999 PNAS 96:79轉頁，WO 01/85753)。所預期之性質（例如，刺激碳酸氫鹽及鎂之能 力）在重組表現蛋白中得以證實（Y. Chen等人，2000 Science 289:625轉頁）。 關於sAC mRNA之分佈及可由碳酸氫鹽刺激之sAC活性 之資料可表明酶之睪丸及精子特異性表現（M· L· Sinclair 等人，2000 Mol Reprod Develop 56:6轉頁；N. Okamura等 人，1985, J. Biol. Chem 260(17):9699轉頁；J. Buck等人， 1999 PNAS96··79轉頁）。在該種狀況下，在睪丸中，sAC mRNA僅表現於配子發展為精子之後期，但不表現於體細 胞中（M. L. Sinclair等人，2000 Mol Reprod Develop 56:6 轉頁）。 存在大量關於sAC在哺乳動物之精子中之功能的藥理學 研究。在精子穿過卵透明帶以致隨後與卵黃膜融合之前， 其必須對該功能有所準備。精子獲能過程已十分深入地經 研究。獲能精子因變更之活動模式及由合適刺激物進行頂 體反應過程之能力而不同（估計可能用於精子穿過透明帶 之細胞溶解酶之釋放）。基於介質中之高碳酸氫鹽濃度， 119677.doc •26- 200815346 在活體内及活體外經動脈内進行精子獲能作用（Ρ· Ε·

VlSC〇ntl及G· S. KoPf (1998) Biol Reprod 59:1轉頁；Ε· de Lamirande等人，1997 M〇1 Hum Repr〇d 3(扑175轉頁）。精 子獲此作用亦可藉由添加例如db-cAMP之合適穿膜cAMp 類似物及抑制其降解（例如，ΙΒΜχ)之抑制劑來刺激。所預 期之精子功能對s A C之依賴僅在最近才由所謂的基因剔除 J鼠之基因缺失模型證實。（G· Esp〇sit〇等人，2〇〇4 1〇 1(9):2993轉頁）。缺少sAC基因之雄性小鼠展示正常之精 子形成，但不能育。精子具有活動性缺點且不能使卵受 精。該等動物不展示其他對應於sAC之其他假定功能之缺 點或異常發現（j· Η· zippin等人，2〇〇3 FASEB n:82轉 頁）。 sAC具有獨特之序列且與其他體腺苷酸環化酶僅具有微 小同源性。其為哺乳動物精子中唯一之腺苷酸環化酶，且 其活性對於精子活動性及獲能作用不可或缺。因此，sAc 之特異性抑制劑代表調控男性生育力之重要可能性。 因此’含有至少一種如請求項1 _7之化合物之醫藥劑為 本發明之主題。 如請求項1-7之化合物之用途亦為本發明之主題。 為將使用根據本發明之化合物用作醫藥劑，使後者成為 除經腸或非經腸投與之活性成份外，亦含有合適之醫藥有 機或無機惰性載劑物質之醫藥製劑形式，該等載劑物質諸 如水、明膠、阿拉伯樹膠（gum arabic)、乳糖、澱粉、硬 脂酸鎂、滑石、植物油、聚伸烷二醇等。醫藥製劑可以如 H9677.doc -27- 200815346 下形式存在·固體形式，例如錠劑、包衣錠劑、栓劑或膠 囊，或液體形式，例如溶液、懸浮液或乳液。此外，其視 情況含有佐劑，諸如防腐劑、穩定劑、濕潤劑或乳化劑、 改變滲透壓之鹽或緩衝液。該等醫藥製劑亦為本發明之主 題。 對於非經腸投藥而言，合適的為尤其注射溶液或懸浮 液，尤其活性化合物於聚羥基乙氧基化蓖麻油之水溶液。

作為載劑系統，亦可使用諸如膽酸之鹽或動物或植物磷 脂之界面活性佐劑，亦其混合物以及脂質體或其組份。 對於經口投藥而言，合適的為尤其具有滑石及/或諸如 乳糖、玉米或馬鈐薯澱粉之烴媒劑或黏合劑之錠劑、包衣 錠劑或膠囊。投藥亦可以諸如視情況添加有甜味劑之汁液 之液體形式進行。 對於陰道施藥而言，合適且普遍的為（例如）栓劑。 經腸、非經腸及經口投藥亦為本發明之主題 患者之年齡及體重、待 因素而變化。曰劑量為 此，劑量可以投與一次 之曰劑量來給與。 活性成份之劑量可視投藥方法、 治療疾病之類型及嚴重性及類似 0.5-1000 mg，較佳 50-200 mg，由 之單次劑量或分成兩次或兩次以上 根據本發明之通式I化合物為經動脈内之可溶性腺普酸 環化酶之極佳抑制劑。可溶性腺苷酸淨 敗衣化鉍之抑制劑使 CAMP信號減弱。CAMP含量對監測對細胞 肥日殖、細胞分化 及細胞调亡起重要作用之過程具有決定性。諸如CAMP含 量之降低具有決定性之癌症的疾病可由可溶性 119677.doc -28- 200815346 酶抑制劑調節。該調節可對患有該疾病之患者具有預防及 治療效應。如伴隨細胞增瘦升高之癌症之疾病當前由（例 如）放射療法及化學療法治療。該等方法為非特里性的且 具有高副作用潛能。因此，直接攻擊特定乾位點之新顆物 質之製備為有利的。藉由抑制可溶性腺苦酸環化酶來調節 翁之產生之物質為本發明之主題。因此，例如显常細 胞增殖可藉由調控或抑制cAMP之產生來降低或抑制。芦 f \ 由使用根據本發明之物質，可抑制可溶性腺普酸環化酶.曰 此產生細胞增殖降低之結果。本發明之主題為用於治療疾 病之含有至少一種通式1化合物之醫藥劑，以及且有人適 調配物質及媒劑之醫藥劑。因此，疾病之特徵在於μ第 二信使cAMP之代謝失調引起。 藉由抑制可溶性腺普酸環化酶使cAMp濃度 用藥劑用於㈣精子獲能作用。本發明之主題為根 明之物f藉由降低或抑制可溶性腺㈣環化酶活性及因I 所得之精子獲能作用從而降低及/或抑㈣ 的用途。 T王月力 印子之受精可藉由投與有效量之 制的物質來阻止。通式！化合物用 =生受抑 之醫藥劑之用途亦為本發明之主題。備供非激素避孕用 若未描述起始物質之製備，則起 似於已知化合物或本文所描述之方法製備為;;知的或可類 行反應器中或藉助於組合操作 ’、有可犯在平 反應。 f序實知本文所描述之所有 119677.doc -29· 200815346 很據諸如結晶法、層析法或成鹽法之 構體混合物分離為對映異構體或E/z異構體。可將異 況藉由使式1化合物之溶液與等量或過量視情 况為命液形式之鹼或酸混合，且 理溶液來進行鹽之製備。 以方“離沉殿或處 【實施方式】 根據本發明之化合物之製備

下列實例說明根據本發明之通式⑴化合物之製備，而非 將所主張之化合物之範疇限於該等實例。 根據本發明之通式⑴化合物可如下所述製備。 實！ （E)-3-[5 _(心第二丁基-苯基磺醯基胺基）-3-苯基_ 朵1基]·叫四氫♦南_心基）_丙烯酸醯胺

將43.7 mg N-[(二甲基胺基w好·Μ，％三唑并[4,5_办]吡 啶-1-基亞甲基]-TV-甲基甲烷六氟磷酸銨_N_氧化物（HATU) 及1〇·7 mg 4-胺基四氫吡喃添加至5〇 mg實例ih)所製備之 酸於0.84 ml二甲基甲醯胺中之溶液中。隨後，在下逐 滴添加19·5 μΐ乙基二異丙基胺且在室溫下攪拌2〇小時。隨 後’添加15 ml水，攪拌30分鐘且抽吸。將所獲得之殘餘 物藉由矽膠層析，用已烷/〇_7〇%乙酸乙酯純化。以此方 式，獲得44 mg標題化合物。 119677.doc •30- 200815346 NMR (300 MHz，DMSO-d6): δ=1·20 (s，9H)，1 42 (2H)， 1.68 (2H)? 3.32 (2H)5 3.79 (3H), 6.48 (1H), 6.99 (1H) 7 l〇 (1H)，7.20 (2H)，7.28 (1H)，7·36 (1H)，7.37 (1H)，7 42-7 53 (4H)，7.57 (2H)，8.13 (1H)，9·79 (1H)，11.63 (1H)。 用於以上所提及之標題化合物之起始物質製備如下： 1 a) 5 -胺基-1Η -ϋ弓丨°朵-2 -甲酸乙g旨

將5 g 5_石肖基-1Η-°弓卜朵-2-甲酸乙g旨引入170 ml甲醇及0,5 ml水中，與6.73 g曱酸銨及50 mg把/碳（10%)混合且在9〇。〇 下回流1小時。隨後，將其在矽藻土上抽吸且用溫甲醇再 洗滌。移除溶劑後，將殘餘物與1 〇〇 ml水混合，擾拌1 〇分 鐘，且將沉澱固體在G4玻璃料上抽吸。真空乾燥所獲得之 固體。以此方式’獲得4.12 g標題化合物。 NMR (300 MHz，DMSO-d6): δ=1·28 (3H)，4.25 (2H)， 4·63 (2Η)，6.62-6.68 (2Η)，6·79 (1Η)，7·12 (1Η)，11·35 (1Η)。 lb)5-(4-第三丁基·苯基磺醯基胺基）_ιη-吲哚_2-甲酸乙 酯

0— 在〇°C下，將5.18 ml乙基二異丙基胺及4_69 g 4-第三 119677.doc -31 - 200815346 ml ^基料職添加和2g_a)所製狀胺於〜 之洛液中’且在室溫下將其授拌2小時。減壓下移 除/谷液’且將殘餘物藉由石夕膠； /層析，用已烷/0-80%乙酸乙 酉旨純化。以此方式，难媒7以 乃八擭侍7.56 g標題化合物。 NMR (300 MHz，DMSO-d6)· δ=1 、 Ό^· 0-^1.20 (9Η)5 1.27 (3Η) 4.27 (2Η)，6.97-7.03 (2Η)，7 25 (ΊΗ、， ’ )，·25 (1Η)，7.31 (1Η)，7·48 (2Η)， 7.59 (2Η)，9·93 (1Η)，11·80 (1Η)。 1 c)3H(4·第三丁基-苯基磺醯基胺基iΗ_吲哚_2•甲 酸乙酯

將3·36 g Ν-溴丁二醯亞胺添加至7·56 g實例ib)所製備之 磺醯胺於217 ml四氫呋喃中之溶液中，且將其在室溫下攪 拌40分鐘。將其用300 ml乙酸乙酯稀釋，用5〇㈤丨水洗務一 次’用各50 ml飽和氯化鈉溶液洗務兩次，且經硫酸鈉乾 燥有機相。過濾且經真空蒸發濃縮後，將所獲得之殘餘物 自己烷/乙酸乙酯再結晶。以此方式，獲得8 · 11 g標題化合 物。 NMR (300 MHz，DMSO-d6): δ=1·20 (9H)，1·30 (3Η)， 4·31 (2Η)，7.08-7.15 (2Η)，7_33 (1Η)，7·50 (2Η)，7.60 (2Η)， 1〇·〇8 (1Η)，12.16 (1Η)。 ld)5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-苯基-1Η-吲哚-2- 119677.doc -32- 200815346 甲酸乙酯

將4.86 g苯基目朋酸及70 ml i M碳酸鈉水溶液以及3 29 g 氯化鋰添加至13·3 g以上所製備之溴化物於由531⑹乙醇 及531 ml甲苯組成之混合物中的溶液中。添加2.58 g肆（三 苯基膦）-鈀之後，將反應混合物回流2〇小時。冷卻至室溫 後，將其在矽藻土上抽吸且用乙酸乙酯再洗滌。將所獲得 之有機相用500 ml飽和重碳酸鈉及飽和氣化鈉溶液洗滌且 經硫酸鈉乾燥。經真空蒸發濃縮後，將所獲得之殘餘物藉 由矽膠層#，用己烷/0-70%乙酸乙I純化。以此方式，‘ 得1〇·8 g標題化合物。 又 NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ=1.12 (3Η), 1.21 (9Η) 4.15 (2Η), 7.03 (1Η), 7.08 (1Η), 7.21-7.41 (6Η), 7.49 (2Η)! 7.52 (2Η)，9·79 (1Η)，11·84 (1Η)。 le)5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）_3_苯基-ιη_吲哚

將65 ml丨.2莫耳二異了基氫化㈣甲苯中之溶液緩 滴添加至H).3 g實例ld)所製備之醋於93 mi曱 二 T <冷卻 119677.doc -33· 200815346 至-7〇 C的溶液中。添加後，將其加熱至〇乞且在此溫度下 攪拌2小時。隨後，小心添加4 3如異丙醇，且1〇分鐘後， 逐滴添加29 ml水且在室溫下授拌2小時。將白色沉殿渡 出，且用40 ml乙酸乙酯洗滌，且經真空蒸發濃縮所獲得 之有機相。將殘餘物藉由矽膠層析，帛己烷/〇_7〇%乙酸乙 醋純化。以此方式’獲得4.2 g標題化合物。 NMR (则 MHz，DMS〇_d6): S=1 25 (9H)，4 ⑼（2h)， 5.34 (1H), 6.91 (1H), 7.18 (1H), 7.23-7.34 (4H), 7.39-7.49 (2H)，7.54 (2H)，7.59 (2H)，9.72 (1H)，U.31 (1H)。 lf)5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）_3_苯基_ih-吲哚_2_ 甲醛

在室溫下攪拌時，將800 mg二氧化錳分批添加至5〇〇 實例le)所製備之醇於7.5 ml二氯甲烷中之溶液中，且將其 在此溫度下再授拌18小時。隨後，將其在矽藻土上抽吸且 用乙酸乙S旨充分再洗務。經真空蒸發濃縮有機相後，獲得 330 mg標題化合物，其無需進一步純化即可併入下一階 段。 (9H)，7_15 (1H)， 9·93 (1H)，12.05 NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5=1.20 7.26 (1H)，7.33-7.60 (10H)，9.71 (1H)， (1H) 〇 119677.doc -34- 200815346 lg)(E)-3-[5-(4_第三丁基-苯基磺醯基胺基）·3_苯基-1H_ 吲哚-2-基]-丙烯酸乙酯

在〇°C下，在氮下，將511 mg三乙基膦醯乙酸酯於15 mi 二甲氧基乙烧中之溶液逐滴添加至1〇6 mg NaH於1.5 ml二 甲氧基乙烧中之懸浮液中，且在室溫下繼續攪拌1小時以 上。隨後’逐滴添加實例If)所製備之醛於15…二甲氧基 乙烷中之溶液且首先在室溫下攪拌丨小時，隨後在5(rc下 攪拌1小時。冷卻之後，添加1〇…飽和氯化銨溶液，且在 相为離之後，將水相用各3〇…二乙醚萃取三次。將組合 之有機相用20 ml水洗滌一次且用2〇 ml飽和氣化鈉溶液洗 ^夂。經硫酸鈉乾燥且過濾之後，將其經真空蒸發濃 縮將所獲得之殘餘物藉由石夕膠層析，用己烧乙酸 乙酯純化。以此方式，獲得280 mg標題化合物。

吲哚-2-基]-丙烯酸 119677.doc -35- 200815346

將383 mg氫化納添加至260 mg實例lg)所製備之酯於6 ^ ml乙醇及3.1 ml乙醇之混合物中，且在室溫下將其授拌17 小時。隨後’將其用30 ml水稀釋且用5°/〇硫酸酸化。將所 沈積之沉澱濾出且乾燥。以此方式，獲得225 mg標題化合 物，其無需另外純化即可進一步反應。 NMR (300 MHz, DMSO_d6): δ=1·20 (9H)，6.48 (1H)， 7.03 (1Η)，7.11 (1Η)，7.18-7.31 (3Η)，7·34-7·61 (8Η)，9.82 (1H)，11.72 (1H)，12.20 (1H) 〇 實例2 : (E)-3-[5-(4-第三丁基·苯基績醯基胺基）-3 -苯基-1Η-σ弓卜朵-2-基]-N-(2-嗎琳-4-基-乙基）-丙浠酸醢胺

類似於實例1，由50 mg實例lh)之酸及13.8 μΐ 2-(嗎啉-4-基）·乙胺獲得43.0mg標題化合物。 NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ=1.20 (9Η)? 2.30-2.38 (6Η)? 3.24 (2Η)，3.52 (4Η)，6·51 (1Η)，7·00 (1Η)，7.10 (1Η)，7·20 (2Η)，7·27 (1Η)，7·33 (1Η)，7.36 (1Η)，7.43-7.53 (4Η)，7.56 (2Η)，8·03 (1Η)，9·79 (1Η)，11.85 (1Η)。 實例3 : (土 )-(Ε)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-苯 基-1Η-吲哚-2-基]-Ν-(2-羥基-1-甲基-乙基）-丙烯酸醯胺 119677.doc -36- 200815346

基-1-丙醇獲得44 mg標題化合物。

NMR (300 MHz, DMSO-d6)： δ=ΐ.〇2 (3Η), 1.21 (9Η), 3.19-3.39 (2Η)，3.83 (1Η)，4.67 (ΐΗ)，6·50 (1Η)，7.00 (1Η)， 7·10(1Η)，7·20(2Η)，7·28(1Η)，7.34(1Η)，7·35(1Η)，7·43-7·53 (4Η)，7.56 (2Η)，7.92 (1Η)，9.79 (1Η)，11.62 (1Η)。 實例4 : (士)-(Ε)·3-[5·(4-第三丁基_苯基磺醯基胺基）_3_苯 基·1Η_吲哚-2-基]-Ν-(2-羥基-丙基）_丙烯酸醢胺

類似於實例1，由50 mg實例lh)之酸及8·24 μΐ 1-胺基 丙醇獲得47 mg標題化合物。

U NMR (300 MHz，DMSO-d6): δ=0·99 (3H)，1·21 (9H)， 3·〇6 (2Η)，3·66 (1Η)，4·68 (1Η)，6.54 (1Η)，7.00 (1Η), 7·10 ⑽)，7·20 (2H)，7.28 (1H)，7.34 (1H)，7·36 (1H)，7.43-7.53 (4H)，7·56 (2H)，8·11 (1H)，9·79 (1H)，11.63 (1H) ° 實例5 : 3-[5-(4_第三丁基-苯基橫贐基胺基）-3 -苯基 哚-2-基]-N-(2-嗎啉-4-基-乙基）-丙酸醯胺 H9677.doc -37- 200815346

將2.5 mg鈀/碳（10%)添加至25 mg實例2)所製備之標題化 合物於1.0 ml乙酸乙酯中之溶液中，且在氫蒙氣下，將其 在室溫下攪拌21小時。隨後，將其在矽藻土上抽吸，用乙 酸乙酯充分再洗滌，且經真空蒸發濃縮有機相。將由此獲 得之殘餘物藉由矽膠板製備型薄層層析，用1:1比率之乙 酸乙酯/丙i同純化。以此方式，獲得6.7 mg標題化合物。 NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5=1.21 (9H)? 2.18-2.38 (6H)5 2.92 (2H)? 3.11 (2H)5 3.25-3.35 (2H)? 3.47 (4H)? 6.83 (1H)5 7.05 (1H)，7.17-7.27 (4H)，7·39 (2H)，7.50 (2H)，7.56 (2H)， 7.73 (1H)，9·66 (1H)，11.05 (1H)。 生物學實例： 實例1 : sAC-檢定 在合適之緩衝系統中，可溶性精子特異性腺苷酸環化酶 催化三磷酸腺苷（ATP)轉化為環狀單磷酸腺苷（cAMP)及焦 磷酸之反應。隨後，將以此方式產生之游離cAMP用於競 爭性伯測過程中，其中可阻止標記銪穴狀化合物（europium kryptate，Eu[K])之抗 cAMP抗體（抗 cAMP-Eu[K]-AK)與標 記cAMP分子之經修飾別藻藍蛋白- l(allophycocyanine-1)分 子（CAMP-XL665)之結合。在無外源cAMP之情況下，在 335 nm下激發後，在抗cAMP-Eu[K]-AK(FRET供體）與 119677.doc -38- 200815346 CAMP-XL665分子（FRET受體）之間產生螢光共振能量轉移 (FRET)。依據FRET受體XL665之發射光（665 nm及620 nm)，在不同時間點（隨時間解析）定量該過程。信號下降 (量定波比率；計算公式：[(E665 nm/E620 nm)xl0000])可 歸因於cAMP之存在且因此歸因於sAC之活性。 首先，將1·5 μΐ測試物質（於30% DMSO中），在溶劑對照 中僅30% DMSO，引入384孔測試板（聚苯乙烯；384，NV) 中之每個凹孔。隨後，回收10 μΐ稀sAC酶溶液（含於300 mmol NaCl、10%甘油中之酶儲備溶液；pH 7.6 ;中間及最 終酶稀釋液為a)l: 10及b) 1:2000，其分別於以下溶液中稀 釋··於 H20 中之 1.0 mmol MnCl2; 0.2% BSA; 50 mmol tris，pH 7·5)。酶反應藉由添加5 μΐ ATP受質溶液（於H20 中之200 μηιοί ATP)起始，且在培養（於室溫下25分鐘）後， 藉由添加5 μΐ終止溶液（於PBS中之200 μιηοΐ EDTA)結束反 應。最終，添加70 μΐ PBS調整整個反應至總體積91.5 μΐ。 隨後，將8 μΐ偵測溶液1引入384孔量測板之一凹處（量測 板：聚苯乙烯；384，SV-黑色；偵測溶液1 : 50 μΐ cAMP-XL665 ; 950 μΐ 復原緩衝液；2200 μΐ PBS ; cAMP-XL665 :如Cis Bio套組#62AMPPEC指令所說明，藉由將5 ml H20添加至冷凍乾燥產物中製備；儲存··在-80°C下等 分試樣）。隨後，將來自91.5 μΐ之3 μΐ添加至測試板之相應 凹處。最後，進行添加8 μΐ偵測溶液2(偵測溶液2 : 50 μΐ抗 cAMP-Eu[K]-AK ; 950 μΐ復原緩衝液；2200 μΐ PBS ;抗 cAMP-Eu[K]-AK:如 Cis Bio 套組 #62AMPPEC指令所說明 119677.doc -39- 200815346 製備；儲存：在-80°C下等分試樣）。 在室溫下再培養90分鐘後，在Packard Discovery上或用

RubiStar HTRF量測裝置（延遲：50 ;積分時間·· 400 μ8) 量測HTRF結果。 實例2 :自精液中分離人類精子及獲能作用 2 · 1 ·精子之分離 藉由基於矽膠粒子（商品名：？6^〇11或18〇1以幻之兩層梯 度系統自精液中純化人類精子。 將每份精液各2·5 ml預熱下層（"90% isolate下層，，， Irvine Company)引入1 5 ml離心試管（圓錐形，塑膠）中且用 2.5 ml預熱上層（50% isolate上層 ’’，Irvine Company)小心 覆蓋且在37°C下在水浴中制動小於1小時。用有最多3…正 常（相對於精子數目、活動性及液化作用而言）精液小心覆 蓋梯度。在室溫下，在l〇〇〇Xg下進行精子沉降25分鐘。藉 助於玻璃毛細管，將兩層抽吸至恰位於精子小球上方之 點。洗出isolate梯度，將以各約20〇 μ1再懸浮之精子小球 移至具有 12 ml mHTF介質（4 mmol NaHC03 ; 0.01% BSA ; 37°〇之15 ml塑膠試管中，且在1〇〇〇Xg下將精子沉降汕分 鐘。將介質抽吸至恰位於小球上方之點且用mHTF介質（4 mmol NaHC〇3 ; 0·01% BSA ; 3rc)調整至 ι〇〇〇 μΐ。在

Neubauer計數室中測定精子之數目，且視情況用瓜11打介 質（4 mm〇1 NaHC〇3; 0.01% BSA; 37〇c)調整至 4χΐ〇6 個精 子/150 μΐ以用於隨後之獲能作用。 2·2·獲能作用 119677.doc -40· 200815346 =試:則試物質對頂體反應之效應’則必須將精子與測 ㈣培養。在獲能作用開始，亦即達成精子，尤 :未穿過㈣之物質中之結合位點的預飽和之前，該預培 養（於37C下在培養箱中15分鐘）對使測試物質可能渗透於 精子中為必要的。另外’因為由BSA之高脂質結合所致之 獲能作用中BSA濃度之增加可導致製财有效測試物質滚 度之降低，所以預培養為必要的。

將測試物質溶解於DMSO中且用mHTF介質（4 mm〇i NaHC〇3; 0.01%BSA; 37。〇稀釋，以致在4〇〇仰終獲能 作用製劑巾，DMS0濃度為〇·5%。在各情況下，將各15〇 μΐ上述調和測試物質溶液移入15〇 μ1精子懸浮液中且在 37C下預培養15分鐘。藉由添加1〇〇 μ1 mHTF介質（88 mmol NaHC〇3 ; 4% BSA; 37。〇起始精子之獲能作用。在 最終400 μ1獲能作用製劑中，精子濃度為1〇xl〇Vm卜碳酸 虱鹽/辰度為4 mmol且BSA濃度為1%。於37°C下在培養箱中 使獲能作用進行3小時。 為完成獲能作用，將製劑（各400 μΐ)各完全轉移至具有 1·5 ml mHTF(4 mmol NaHC03 ; 37°C)之 15 ml樣品試管 中’在1000xg下離心5分鐘，且移除上清液。藉助於此步 驟’移除大量蛋白質與測試物質均。 實例3 :頂體反應之流式細胞測定 3.1·由離子載體處理及同時Cd46_FITC染色引入頂體反應 精子之頂體反應（AR)藉由使精子與透明帶（ZP)之結合來 觸發。在該種狀況下，酶自頂體釋放使得精子有可能經由 119677.doc • 41 · 200815346 ZP穿入卵母細胞。在AR之情況下，在精子中，此導致質 膜與外部頂體膜（OAM)部分融合。精子細胞之頭部僅末端 受内部頂體膜（IAM)限制。CD46抗原僅可在IAM上偵測 到。 雖然頂體反應可在活體外用獲能之精子上，但非未獲能 之精子或獲能作用受測試物質抑制之精子上，合適濃度之 鈣·離子載體A23187誘導。藉助於相對IAM之FITC標記抗 CD46抗體（Pharmingen Company)，可在流式細胞儀中區分 有頂體反應之精子與頂體完整精子，在頂體完整精子中 IAM未暴露。藉由用僅染色DNA膜缺損致死之細胞之DNA 染料乙錄:均二聚物（ethidium homodimer，EhD)同時染色， 可區分死精子與活精子。 因為離子載體稀釋液在觸發AR中似乎極不穩定且必須 與CD46-FITC溶液混合以同時染色，該等溶液不可在測試 開始之前製備而必須在處理獲能作用製劑期間製備。 將精子小球再懸浮於殘留上清液中且在水浴（37°C )中用 450 μΐ mHTF(4 mmol NaHC03 ; 0.01% BSA ; 37〇C)稀釋。 將100 μΐ精子懸浮液之等分試樣移入所製備之FACS流動試 管樣品中（在水浴中）。將150 μΐ具有離子載體及FITC標記 抗CD46抗體之溶液移入精子中。最終濃度為800 nmol離子 載體及抗 CD46 抗體於 mHTF(4 mmol NaHC03 ； 0.01% BSA ; 37°C)中之1:125稀釋液。在37°C下，在水浴中，將 精子在其中培養、避免光照射，歷時30分鐘。 藉由添加3.5 ml PBS[0.1% BSA]/製劑，接著在70〇xg(室 119677.doc -42- 200815346 溫）下離心5分鐘且隨後抽吸出上清液來停止培養。離心之 後，將樣品在熱板上保持溫暖直至完成量測° 3.2. EhD染色（用於區別死/活的有頂體反應之精子） 抽吸後，將精子小球與各500 μΐ新鮮製備之EhD溶液（於 PBS[無BSA]中之150 nmol EhD ; 37°C)浪合。隨後’可將 樣品在流式細胞儀（BD Facs Calibur)中量測。在488 nm2 雷射激發波長下，進行量測；每次量測偵測到10,000個精 子。可用CD46-FITC在FL-1過濾器中在530 nm下用CD46-( FITC量測有頂體反應之精子。在FL-2過濾中在634 nm下藉 助於EhD-DNA-染色量測死精子。首先，使量測通道相互 適當補償。 3.3. 評估 以FSC-H(前向散射）相對SSC-H(側向散射）之點潰墨法選 擇呈極均勻細胞群之精子。因為使用兩種顏色螢光染色， 所以用自FSC對SSC點潰墨法選擇之精子群以FL-l(EhD， X軸）對FL-2(FITC-CD46，Y軸）點潰墨法藉助於象限分析 / 、 V / 進行評估。 FL-1對FL-2點潰 墨法之象限分析 染色 分析 Q1=UL 左上限 僅EhD 死的、無頂體反應之精子 Q2=UR 右上限 EhD及 FITC-CD46 死的、有頂體反應之精子 Q3=LL 左下限 1 未染色 活的、無頂體反應之精子 Q4=LR 右下限 僅 FITC-CD46 活的、有頂體反應之精子 為計算經誘導、有頂體反應之精子的。/〇卜” IAR[%]")，僅 119677.doc -43- 200815346 使用來自Q3及Q4之活精子，且其總數目經設定等於 100%。隨後，IAR計算如下： iar[%]=

LRxlOO LL + LR

一部分精子在未添加離子載體之情況下業已自發進行頂 體反應（=nSAR[%n。因此，亦總進行在未添加離子載體 之情況下經同等處理之精子之對照量測。SAR係類似於 IAR計算。將實際由離子載體觸發之頂體反應（=”ARIC [%Γ)計算為差值：ARIC = IAR - SAR。 就下列吾人之抑制劑對sAC介導之獲能作用之效應（量測 為精子經歷離子載體誘導之頂體反應之能力）的分析而 言，有頂體反應之精子在陽性獲能作用對照（=用具有25 mmol NaHC03、1% BSA，無測試物質之mHTF介質培養） 中之百分率設定為100%。與測試物質混合之精子經歷頂 體反應之能力指示與最大頂體反應有關。 所使用之物質 mHTF=經改良之人類小管液（Irvine Scientific Company)，杜貝科爾磷酸鹽緩衝生理食鹽水（Dulbecco’s phosphate-buffered saline)(Gibco Company)(具有 Ca2+、 Mg2+、1 g/1 D-葡萄糖、36 mg/1丙酮酸納，無盼紅，無 NaHC03);牛血清白蛋白，組份V(Fluka Company);二甲 亞石風（DMSO)，無水（Merck Company); 7·5% 重石炭酸納溶液（893 mmol)(Irvine Scientific Company);分離梯度（Irvine Scientific Company);離子載 119677.doc •44- 200815346 體 A23 1 87 游離酸（Calbiochem Company);乙錠:均二聚物 (EhD)(Molecular Probe Company)，小鼠抗人類 CD46:FITC(Pharmingen Company) 〇 參考文獻： J. W. Carver-Ward，Human Reproduction 第 11 卷，第 9 期，第1923頁（轉頁），1996

High Fertilization Prediction by Flow-Cytometric Analysis of the CD46 Antigen on the Inner Acrosomal Membrane of Spermatozoa 0· J. D’Cruz，G. G. Haas，Fertility and Sterility第 65卷， 第4期，第843頁（轉頁），1996

Fluorescence-Labeled Fucolectins are Superior Markers for Flow-Cytometric Quantitation of the Sperm Acrosome Reaction E. Nieschlag，Η. M. Behre，Andrologie [Andrology]， Springer Verlag 1996 實例：

119677.doc -45- 200815346 [T7 4 -CHrCHCHr0H -CH=CH- 4.4 ON 4ΌΗ-雌二醇 ；0 13 ；Χ)ί 2ΌΗ-雌二酉 /對掌性 ；〇 I 11 由表可知，關於由ICm值表達之可溶性腺苷酸環化酶之 抑制，根據本發明之化合物有時具有比已知之兒茶酚雌激 素（OH-雌二醇）高之活性。兒茶酚雌激素具有毒性，因此 根據本發明之化合物比已知之化合物更優良。根據本發明 之化合物亦比由Zippin提供之化合物效力高。 H9677.doc 46-

Claims (1)

1. 200815346 、申請專利範圍： 種通式（I)化合物， 其中 R1

   η R2 多取代之cvc：6環烷基；或基團c”C6燒基、c C6方基、C1-C6酿基、1¾基- Ci_C6烧基、Ci-C产灵 Ci-CW 基、CVC6 烧基-Ci-CG 醯基、CVc6 酿基 C6醯基、（VC6烧基-CVC6芳基' (VC6芳基_Ci_c6燒 基或cf3，其中Cl_c6烷基、Ci_c6芳基、。_^醯 基、鹵基-(VC6烧基、Ci_C6烧基_Ci_C6燒基、q_C6 烷基-CVC6醯基、Cl_c6醯基_Ci_c6醯基、Ci_C6烷 基-CVC6芳基或c^c：6芳基-Cl_c0烷基視情況可在一 或多處以相同或不同方式穿插氧、硫或氮；或基團 磺醯基-CrC6烷基、磺醯胺或氰基； 基 烷 基 意謂齒素、CF3、視情況為多元飽和的且視情況經 多取代之CrC6環烷基；或基團c广C6烷基、C1_C6芳 *、Cl-C6酿基、齒基A-C6烧基、Cl-C6烧基_Ci-c6 基、Cl_C6烧基_C”C6醯基、CVC6醯基-Cl-c6醯 、CkC6烷基·Cl_c·、Ci_C6芳基_Ci夂烷基或 cf3，其中CVC6烧基、Ci_C6芳基、Ci_C6醯基、_ 119677.doc 200815346 基_Cl_C6燒基、Cl_C6烧基-C「C6燒基、Cl_c6烷基編 CVC6醯基、cKc6醯基_Ci-C6醯基、Ci-C6烧基&-C6芳基或CrC6芳基-CrC6烧基視情況可在一或多處 以相同或不同方式穿插氧、硫或氮；或基團磺醯基_ C1_C6烧基、磺醯胺或氰基； R心"月C6 C!2芳基，其視情況可在一或多處以相同或 不同方式經_素、視情況可在一或多處經取代之C1_ C6烷基或C〗-C6醯基取代，或可經（：1_(：6烷氧基、羥 基、氰基、C02_(CVC6 烧基）、N-CCi-Ce 烧基）2、CO-NR4R5或cf3取代； Cs-Cu雜芳基，其視情況可在一或多處以相同或不 同方式經鹵素、（^-(^烷·基、醯基、Ci-Cs烷氧 基、羥基、氰基、COHCVCg烷基）、N-(C「C6烷 基）2、CO-NR4R5或cf3取代；或 C3_C6環烷基，其視情況可在一或多處以相同或不同 方式經鹵素、CF3、羥基、氰基、c〇2_(Ci-C6烷 基）、CVC6烧基、（VC6醯基、n_(Ci_c6烧基）2、CO-烷氧基取代； R4意謂氫；C^C：6環烷基，其視情況在一或多處以相同 或不同方式經CrC6烷基、Ci-C6醯基、Ci_C6烷氧基 或CF3取代； C^-Cu芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方 式經鹵素、CVC6烷基、cvc6醯基、CVC6烷氧基、 N-CVC6烷基-CVC6烷基、CF3或氰基取代；或 119677.doc -2 - 200815346 Cs c 12雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同 方式經鹵素、CpC6烷基、（VC6醯基、CVC6烷氧 基、N-CVC6烷基-Cl_C6烷基、cf3或氰基取代；或 ci C0炫基’其可依任何想要之方式經取代，· R5意謂氫’· Ci-C6烷基_Cs_C6環烷基，其視情況在一或 多處以相同或不同方式經Ci-C6烷基、Ci-C6醯基、 Ci-C6烧氧基或cf3取代； CyC：6環烷基，其視情況在一或多處以相同或不同方 式經CVC6烷基、CVC6醯基、Ci_c6烷氧基或以；取 代； 芳基，其視情況在一或多處以相同或不同方 式經鹵素、cvc6烷基、Cl_c6醯基、（^匕烷氧基、 N-Ci-G烷基-CVC6烷基、CF3或氰基取代；或 C^C!2雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同 方式經鹵素、CVC6烷基、Cl_C：6醯基、Cl_c6烷氧 基、烷基-Cl-C6烷基、CFs或氰基取代；或 Ci-C6烧基，其可依任何想要之方式經取代； R及R5 —起形成5至8員環，其可含有其他雜原子；且 X 意謂基團磺醯基、（CH2)n或羰基； Y 意謂-(CH】)!!·或-CH=CH-; η 意謂1-4 ; 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 2 ·如請求項1之化合物，其中 R1意謂氫、鹵素、CF3、CVC6環烷基；或基團。-仏烷 119677.doc 200815346 基、Ci-Cs芳基、c卜r祕# ^ ^ c6醯基、鹵基-Ci_C6烷基、Cl- C6统基-Ci_C6燒基、 Ll_C6烷基-CVC6醯基、CVC6醯 基醯基、c 烷基或CF3， 广匕燒基-ci-c6芳基、CVC6芳基_ 其中^(：6烷基、（^-(：6芳基、CV

   R2 C6醯基、齒基-Cl_c_、Ci_C6烷基A。烷基、 CVC^ 基-CVC6酿基、Ci_c6醯基_Ci_c6酿基、Ci_ C6院基·μ6芳基或Ci_C6芳基々C6烧基視情況可 在-或多處以相同或不同方式穿插氧、硫或氮；或 基團續酿基-C^C：6烷基、磺醯胺或氰基；

   R3 意謂齒素、CF3或CVM烧基；或基圏Ci_C6烧基、 C,-C6芳基、Cl-c6醯基、ώ基·Ci_C6烧基、Ci_c々 基-CrQ炫基、Cl_c6燒基·Ci_C6醯基、c心酿基_ CVC6 醯基、Cl-C6 烧基 _Ci_c6 芳基、Ci_C6 芳基-Ci_ C6烷基或cf3，其中Ci_C6烷基、Ci_c6芳基、 醯基、鹵基-CVC6烧基、Cl-C6烧基_Ci_c6烧基、Ci_ c6烷基-Cl-C6醯基、Cl_c6醯基_Ci_c6醯基、Ci-Q烷 基-CVC6芳基或Cl-C6芳基_Ci_c0烷基視情況可在一 或多處以相同或不同方式穿插氧、硫或氮；或基團 磺醯基-C^C6烷基、磺醯胺或氰基； 意謂c^c〗2芳基，其視情況可在一或多處以相同或 不同方式經鹵素、CVC6烷基、Cl-C：3醯基、（^-。烷 氧基、氰基、羥基、n-(ch3)2、ccMCi-q烷基）、 CO-NR4R5或 CF3取代； 雜芳基，其視情況可在一或多處以相同或不 119677.doc -4- 200815346 同方式經氣及/或氟、CVC6烷基、（VC3醯基、cKc3 烷氧基、氰基、羥基、N_(CH士、c〇2<Cl_C3烷 基）、c〇-NR4R5或CF3取代； C3 C1環烷基，其視情況可在一或多處以相同或不同 方式經氯及/或氟、CF3、氰基、Cl-C3烷基、Cl-C3 酿基、經基、N-(CH3)2、cOHCi-Cs 烷基）、CO-nr4R5或CVC3烷氧基取代； R思渭氫；C3_C6環烷基，其視情況在一或多處以相同 或不同方式經CrC3烷基、Ci-C3醯基、Cl_c3烷氧基 或CF3取代； C6 cu芳基’其視情況在一或多處以相同或不同方 式經_素、Ci-Cs院基、Cl_c3醢基、Ci_c3烧氧基、 N_C1_C3燒基-CVC3烷基、cf3或氰基取代；或 CVCu雜芳基’其視情況在一或多處以相同或不同 方式經i素、Ci_C3烷基、Ci_c3醯基、Cl-C3烷氧 基、N-C^C：3烧基-CrCs燒基、CF3或氰基取代；或 Ci C1燒基’其可依任何想要之方式經取代； R意明氫；CVC1烷基-C3_c6環烷基，其視情況在一或 多處以相同或不同方式經Ci_c3烷基、Cl-C6醯基、 Cl-C6燒氧基或CF3取代； C3 C1環燒基’其視情況在一或多處以相同或不同方 式經Ci-c3烷基、Ci_c3醯基、Ci_c3烷氧基或cf3取 代； 119677.doc 1 12方基，其視情況在一或多處以相同或不同方 200815346 式經鹵素、CVC3烷基、CVC3醯基、CVC3烷氧基、 烧基-Crq烧基、CF3或氰基取代；或 雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同 方式經鹵素、CrCs烷基、（VC3醯基、CrC3烷氧 基、Ν-Ci-C3烷基-c「C3烧基、CF3或氰基取代；或 Ci-C6烧基，其可依任何想要之方式經取代； R及R5 —起形成5至8員環，其可含有其他雜原子；且 X 意謂基團石黃醯基、（CH2)n或羰基； γ 意謂 ~(CH2)n-或-CH=CH-; η 意謂1_2 ; 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 3 _如请求項1或2之化合物，其中 R1意謂氫； r2意謂c^C6環烷基、CrQ烷基、cf3、氰基、溴或基 團-〇cf3或-so2-ch3 ; R 忍明CcCu芳基，其視情況可在一或多處以相同或 不同方式經鹵素、Cl-c6烷基、Ci_c3醯基、Ci-C3烷 氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、CCVA-Cs烷基）、 CO-NR4R5 或 CF3取代； Cs-Cu雜芳基，其視情況可在一或多處以相同或不 同方式經氯及/或氟、Ci_C6烷基、CKc3醯基、CVC3 烷氧基、氰基、羥基、N_(CH3)2、C(V(Ci_C3烷 基）、C〇-NR4R5或 cf3取代； CrCy衣烷基，其視情況可在一或多處以相同或不同 119677.doc 200815346 方式經氯及/或氟、CF3、氰基、CVC3烷基、CrC3 醯基、羥基、N-(CH3)2、（：02-(〇ν(：3 烷基）、c〇一 NR4R54C1-C3烷氧基取代； R 意謂氮； R 意謂氫；Ci-C6烧基-(^-(^環烧基，其視情況在〆或 多處以相同或不同方式經Ci-Cs烷基、Ci-C^醯基、 Ci-Q烷氧基或cf3取代； CyC6 %烧基’其視情況在一或多處以相同或不同方 式經CVC3烷基、CVC3醯基、CVC3烷氧基或cf3取 代； CpCu芳基’其視情況在一或多處以相同或不同方 式經鹵素、CVC3烷基、CVC3醯基、cKc3烷氧基、 烷基-CVC3烷基、CF3或氰基取代；或 Cs-C〗2雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同 方式經鹵素、CVC3烷基、C!-C3醯基、Ci-Cs烷氧 基、N-CrCs烷基-CrCs烷基、CF3或氰基取代； 或匸厂匕烷基，其可依任何想要之方式經取代； X 意謂基團磺醯基； Y 意謂-(CH2)n-或-CH=CH-; η 意謂1-2 ; 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 4.如請求項1或2之化合物，其中 R1意謂氫； R意謂C3_C6環烷基、C「c6烷基、cf3、第二丁基、氰 119677.doc ^ 200815346 基、溴或基團-OCF3或-SCVCH3且處於對位； R 思谓C6 - C〗2芳基，其視情況可在一或兩處以相同威 不同方式經鹵素、Ci-C3烧基、乙醯基、曱氧基、乙 氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、COHCi-Cs烷基）、 CO-NHR5 或 CF3取代； C5 - C!2雜芳基’其視情況可在一或兩處以相同或不 同方式經氣及/或氟、CrC3烧基、乙醯基、甲氧 基、乙氧基、氰基、羥基、N-(CH3)2、 烧基）、CO-NHR5或CF3取代；或c3_c6環烧基； R4意謂氫； R 意謂氫；或Ci-C6烷基-Cs-C：6環烷基，其視情況在〆 或多處以相同或不同方式經烧基、Ci-Cs醯 基、烧氧基或cf3取代； C3·。6環烧基，其視情況在一或多處以相同或不同方 式經C!-C3烷基、CVC3醯基、CVC3烷氧基或cf3取 代； C6_C i 2 ^•基’其視情況在一或多處以相同或不同方 式經鹵素、cvc3烷基、CVC3醯基、CVC3烷氧基、 N-Ci-C3烷基-Ci-C3烷基、CF3或氰基取代；或 Cs-Cu雜芳基，其視情況在一或多處以相同或不同 方式經鹵素、CVC3烷基、CVC3醯基、CVC3烷氧 基、N-Ci-C3烧基-CVC3烧基、CF3或氰基取代；或 Ci-C6烷基，其可依任何想要之方式經取代； x 意謂基團磺醯基； 119677.doc 200815346 Y 意謂-(CH2)n-或-CH=CH-; n 意謂1-2 ; 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 5.如請求項1或2之化合物，其中 R1意謂氫； R2 意謂第三丁基、異丙基、異丁基、第二丁基、氰 基、溴或基團-〇-cf3或-so2_ch3且處於對位； R3 意謂基團

   R4意謂氫； R5 意謂氫或基團 _(CH2)n-N-(CH3)2、-(CH2)2-CH3、 119677.doc -9- 200815346 -(CH2)2-NH-COCH3、-(CH2)-CHCH3-OH、-(CH2)2- o-ch3、-(ch2)2-oh、-chch3-ch2-oh、

   X 意謂磺醯基； Y 意謂-(CH2)n-或-CH=CH-; η 意謂1-2 ; 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。

   6 _如請求項1或2之化合物，其中 R 意謂氫， R2 意謂第三丁基、異丙基、異丁基、第二丁基、氰 基、溴或基團-〇-cf3或-so2-ch3且處於對位； R3 意謂基團 119677.doc •10- 200815346 R4 R5

   意謂氫； 意謂氫或基團-(ch2)-chch3-oh、-(ch2)2-o-ch3 或-chch3-ch2-oh、

   X 意謂磺醯基； Y 意謂-(CH2)n-或-CH=CH-;且 π 意謂1 - 2， 以及其異構體、非對映異構體、對映異構體及鹽。 7.如請求項1或2之化合物，其係選自含有以下各化合物之 群： (E)-3-[5-(4-弟二丁基-苯基石黃酿基胺基）-3 -苯基-1Η -σ引11 朵_ 2 -基]-Ν -(四氮-°比喃-4 _基）丙細酸酿胺 (Ε)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-苯基-1Η-吲哚- 2·基]-N-(2-嗎啉-4-基-乙基）-丙烯酸醯胺 (士 )-(E)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-苯基-1H- ϋ弓丨13朵-2 ·基]_ N - ( 2 -經基· 1 ·甲基·乙基）-丙沐酸酿胺 (士)-(Ε)-3-[5-(4 -第二丁基-苯基績酿基胺基）_3-苯基-1Η· 119677.doc -11 - 200815346 吲哚-2-基]-N-(2-羥基-丙基）-丙烯酸醯胺 3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-苯基-1H-吲哚-2- 基]-N-(2-嗎啉-4-基-乙基）-丙酸醯胺 (E)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-(3-氟苯基）-1H-吲哚-2-基]-N-(四氫-吡喃-4·基）-丙烯酸醯胺 (E)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-(3-氟苯基）· 1H-吲哚-2-基]-N-(2-嗎啉_4_基-乙基）_丙烯酸醯胺 (E)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-(3-曱氧基·苯 基）-1Η-吲哚_2_基]-N-(四氫-吡喃_4_基）-丙烯酸醯胺 (E)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-(3-曱氧基-苯 基）-1Η_σ弓卜朵_2·基]-N-(2_嗎淋-4-基-乙基）_丙烤酸酿胺 (E)-3-[5-(4-第三丁基-苯基磺醯基胺基）-3-(3-氟苯基）· 1H-吲哚_2_基]-N_〇b咬-4_基）·丙稀酸醯胺 (E)-3-[5-(4-第三丁基·苯基磺醯基胺基）-3-(3-甲氧基·苯 基）_ 1H-叫卜朵-2-基]比淀-4-基）-丙稀酸醯胺。 8· —種醫藥劑，其含有至少一種如請求項1 _7中任一項之化 合物。 9·如請求項8之醫藥劑，其中該通式⑴化合物之含量為有 效劑量。 10·如請求項1或2之通式（I)化合物，其係用於製備醫藥劑。 11·如請求項9之醫藥劑，其用於治療疾病。 12·如明求項11之醫藥劑，其中該疾病係由cAMP代謝失調 所引起。 月求項9之醫藥劑，其係用於避孕。 119677.doc -12- 200815346 14. 如請求項9之醫藥劑’其係用於抑制可溶性腺芽酸戸 酶。 ·衣化 15. 如請求項8、咖至“中任一項之醫藥劑，其具有合適 之調配物質及媒劑。 16. —種以如請求項丨_7中任一項之通式⑴化合物於經腸、 非經腸、經陰道及經口投藥型式之醫藥製劑中的用途。 17· —種製備如請求項工之通式⑴化合物之方法，其中該方 法包括使通式（II)化合物反應以形成該通式⑴化合物，

   其中R1、R2、R3、X及γ具有如請求項1所定義之含義且 R0可為氫或(^-(：6烷基。 18· —種通式（II)、（VI)及（vm)之中間產物：

   (Π) 其中R1、R2、R3、X及γ具有如請求項1所定義之含義且 R0可為氫或(^-(：6烷基；

   119677.doc 200815346 其中R1、R2及X具有如請求..項1所定義之含義且尺7為C!- 餹 c6烷基；

   R2 其中R1、R2、R3及X具有如請求項1所定義之含義。

   119677.doc -14- 200815346 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

   119677.doc