TW200815021A - Nanoliposome using esterified lecithin and method for preparing the same, and composition for preventing or treating skin diseases comprising the same - Google Patents

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200815021 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於奈米微脂體，該奈米微脂體包括含有酯 化卵磷脂之微脂體膜、及包含於該微脂體膜之内部空間的 一種或多種生理活性成分；該奈米微脂體的製造方法；以 .及包括該奈米微脂體以用於預防或治療皮膚疾病之組成 $ 【先前技術】 微脂體為具有密閉雙層脂質膜的微内質網，該雙層脂 夤膜中存在親水性空間。因此，微脂體之特徵為在該親水 性内部空間中含有水溶性物質以及在外部雙層脂質膜中捕 獲脂溶性物質。形成此類微脂體膜的物質稱為類脂質 (lipoid)。關於類脂質’習知係使用填酸甘油g旨或神經脂質 (sphingolipid)。卵磷脂或神經醯胺（cerainide)最常用於化妝 i— 品或食品領域中，因其具有絕佳的濕潤性質（m〇isturizing _ protery)且對人體無毒性。 然而，這些卵鱗脂及神經酿胺為疏水性，因而難以分 散於醇溶液及水溶液中。因此，若欲用作為類脂質，此等 類脂質卵磷脂及神經醯胺必須藉由加熱至高溫7〇〇c或更 高之溫度而予以分散，之後必須再將功能性物質加入其 内。於是，將功能性化合物進行微脂體化的最大的問題即 在於該功能性化合物如輔酶Qi〇及EGF在高溫會氧化或 為熱不安定性。此外，藉此形成的微脂體具有下述缺點： 非常低的安定性及不一致的尺寸。尤其，要將兩種具有彼 94070 6 200815021 此不相同之極性的功能性化合物（如疏水性輔酶Q丨〇及親 水性EGF)微脂體化在一起是相當困難的。 近來，係廣泛使用陰離子性界面活性劑類型之磷脂基 類脂質（phospholipidyl lipoid)，該磷脂基類脂質是藉由將. 印鱗脂與磷酸或其他極性化合物反應而獲得類脂質，因而 —具有良好的水溶液分散性。然而，若類脂質太過於親水性， •則可提南可濕性，但由於在皮膚表面上之成分的極性差異 鲁而使付進入皮膚的穿透效果大大的減少。此外，若類脂質 為陰離子鹽型態，則會降低化妝品的黏性，因而需要進一 步添加增稍劑。 起初’已知輔酶Q1 〇在人體中為增進細胞能量產生的 輔酶’對活性氧具有強效的抗氧化能力。因此，使皮膚吸 收輔酶Q10或將輔酶q1〇施用於皮膚可預防細胞氧化，藉 此有效地維持皮膚彈性並防止老化。尤其，在人體中，係 X足夠里產生此類輔_ q 1 〇直到2〇歲，但由於各種因素 ⑩例如：飲食不均衡、壓力等，在20歲以前或20歲以後輔 酶Q10的量就會從高峰開始減少。40歲以前或40以歲 後’該減少會加速，因而需要補充。 表皮生長因子（EGF)為存在母乳初乳中的蛋白質，且 在複製細胞及促進傷口癒合方面具有絕佳的效果，因此係 使用EGF作為治療糖尿病之足部潰瘍的生物藥劑。此外， EGF已知為具有自然癒合傷口而不留下疤痕之作用的成 分，且已知具有使皮膚再生的效果。因此，EGF係廣泛用 作為功能性化妝品的原料、以及癒合糖尿病足部潰瘍傷 94070 7 200815021 口、燙傷、刀傷等的藥劑。 韓國專利早期公開第10-2005-0058635號揭露一種來 自山茶花（Camellia japonica；^萃取物，具有抗發炎及抗氧 化活性。韓國專利早期公開第10-2006-0025423號揭露一 種來自槲寄生（Viscum album l· var· c〇i〇ratum)的萃取 物，具有抗發炎及抗氧化活性。 -【發明内容】 •於本發明之一目的係提供奈米微脂體，包括含有酯化卵 石η月曰之微脂體膜、及包含於該微脂體膜之内部空間的一種 或多種生理活性成分。根據本發明，若雙層脂質膜係藉由 使用良好分散於水或醇中之醋化印填脂所形成且同時具有 親水性及疏水性，則含有功能性物質如輔酶Q10或表皮生 長因子的奈米微脂體之溶液可在低溫下製備，且經此 的奈米微脂體具有長期安定性及均勻性，因此可用作為對 皮膚具有絕佳的濕潤及穿透性質之組成物如：化妝品:用 讎於治療皮膚疾病的藥劑等的原料。 本！，明之^ -目的係提供製備安定奈米微脂體的方 =該方法是㈣脂與生黯性成分的混合物 洛液为散成奈米尺寸而製備該安定奈米微脂體。 體且⑽現若將表皮生長因子製備成奈米微脂 性並促進=穿;?皮之广:萃取物調配’則可增強安定 麵合效杲的：成物皮膚’因而可獲得對皮膚疾病具有絕 因此， 本發明之另一 目的係提供用於預防或治 療皮膚 94070 8 200815021 疾病的組成物，該組成物包括内含有表皮生長因子、及一 種或多種具有抗發炎活性的天然萃取物之奈米微脂體。 【實施方式】 _本發明之一恝樣係提供奈米微脂體，該奈米微脂體包 括含有酯化卵磷脂之微脂體膜、及包含於該微脂體膜之内 部空間的一種或多種生理活性成分。 本發明之另一態樣係提供製備奈米微脂體的方法，該 φ方法包括··將卵磷脂與有機酸反應而製備酯化卵磷脂之第 一步驟，將酯化印碟脂與一種或多種生理活性成分溶解於 /谷劑中之弟一步驟，以及將所得溶液分散以獲得奈米尺寸 的微脂體之第三步驟。 本發明另一態樣係提供用於預防或治療皮膚疾病的組 成物’該組成物包括·奈米微脂體，其包括含有醋化印鱗 脂之微脂，體膜、及包含於該微脂體膜之内部空間的表皮生 長因子；以及一種或多種具有抗發炎活性的天然萃取物。 ⑩ 下文詳細解釋本發明。 此處所用之術語“内含（inclusion)(包含（included 〇r including))”意指在微脂體中心的親水性空間中含有 (contain; contained or containing)水溶性物質（例如表皮生 長因子、抗壞血酸等），或意指在微脂體的雙層脂質膜中捕 集脂溶性物質（如輔酶Q10、視網醇〜棕櫚酸視網酯以紂比" palmitate)、抗壞jk酸棕櫚酸酯等）。 此處所用之術語“奈米微脂體，，意指直徑為約1〇〇至 200奈米（nm)的微脂體，習知係藉由將微米尺寸之微脂體 94070 9 200815021 在約1000 psi或更高的壓力條件下分散而製備。 在本發明中，微脂體之膜包括酯化卵磷脂。視需要， 微脂體之膜可包括習知用於微脂體製備的微脂體膜成分 (即類月曰貝）。類脂質包括碟酸甘油酿（phosphoglyceride)或 神經脂質（sphingolipid)，例如：磷脂醯膽鹼 • (Phosphatidylcholine)(即卵磷脂）、氫化卵磷脂、磷脂醯乙 •醇胺（phosphatidylethanolamine)、磷酸脂肌醇 ⑩（phosphatidylinositol)、神經醯胺、腦苷脂（cerebr〇side)(即 半礼糖苷基神經醯胺（galactosyl ceramide))、神經鞘磷脂 (sphingomyelin)、神經節糖苷（gangli〇side)等。關於酯化卵 磷脂，類脂質亦可提供濕潤作用。在上述列舉之類脂質中， 較佳可使用氳化卵磷脂及/或神經醯胺。氫化卵磷脂意指由 飽和烴所構成的印磷脂，該氫化卵磷脂係藉由將卵磷脂中 的所有不飽和烴還原而獲得。

^包含於微脂體之膜中的酯化卵磷脂係良好分散於水或 醇中且同％·具有親水性及疏水性。因此，自旨化印罐脂且有 足夠雜性以分散於水性溶射，但仍不足以完全溶解於 水性各劑中。因此，當使㈣化_脂來形成微脂體膜時， 甚至可在低溫如2G°C至6G°C製備安定的微脂體溶液。 -曰化卵η月曰可藉由將卵碟脂或氫化卵麟脂與有機酸反 f而製備化過程為縮合反應，其中，㈣脂的醇基係 兵有機酸反應，且從反應去除所得的水分子。經此製借的 ，化㈣脂會與水溶液中的水反應且再次分離（dissociate) P破脂（醇基）及有機酸的形式。因此，在此反應中，醋 94070 10 200815021 化卵磷脂、卵磷脂（或氫化卵磷脂）與有機酸係共同存在， 根據酸度在醋化作用與分離作用之間維持適當的平衡狀 態’如下所不· RCOOR’（醋化_填脂）肖RC〇〇H(有機酸）+R，〇h(印碌脂或 氫化卵磷脂) 、 用於製備醋化印碟脂的有機酸包括習知用於化妝品及 .食品的有機酸，例如：乙酸、蘋果酸、乳酸、乙醇酸、檸 _檬酸或草酸，較佳為無水有機酸，且更佳為無水蘋果酸或 無水乙酸。若使用無水乙酸，則酯化卵磷脂展現比使用無 水蘋果酸時更高度的親水性。因此，可依所加入之親水性 或疏水性功能性物質的相對量或功能性物質 適當地選擇有機酸。若施用於皮膚，這些有機酸亦;= 私除角質物質或柔軟皮膚（s〇ftening skin)的功效。 了使用足以心成摄脂體的酯化卵磷脂量而沒有特別限 制，較佳地，基於丨重量份的生理活性成分，酯化卵磷脂 馨的使用量為1至5重量份。 、包含於本發明微脂體膜之内部空間的生理活性成分可 為但不限於·水溶性藥物、脂溶性藥物、熱不安定的功 月匕性物貝等。該生理活性成分較佳為選自下列所組成之群 組的一者或多者：辅酶Q1G及表皮生長因子。 本發明之奈米微脂體可進一步包括選自下列所組成之 群、、且的一者或多者：三酸甘油酯類㈣一他type)有機 t物較铨為辛酸/癸酸三酸甘油酯；陰離子性界面活性 劑，較佳為二乙胺時_ ^ 尽既蛳酸酉曰、抗壞血酸磷酸鈉、磷脂膽 94070 200815021 驗（phosphotidy 1 choline)或三乙胺挪油基（cocony 1)麵酸胺 酸鈉；氫化飽和烴卵磷脂；柔軟劑（softening agent)，較佳 為丁基化經基曱苯；甜菜驗類（betaine type)兩性界面活性 劑，較佳為例如月桂基胺丙基甜菜鹼、月桂基甜菜鹼、月 桂基胺甜菜驗或椰油醯胺基（cocaniido)丙基甜菜驗；及聲 合劑，較佳為乙二胺四乙酸之鈉鹽。 本發明亦關於製備奈米微脂體之方法，該方法包括： ⑩將卵破脂與有機酸反應而製備酯化卵鱗脂之第一步驟；將 醋化卵磷脂與一種或多種生理活性成分溶解於溶劑中之第 二步驟；以及將所得溶液分散以獲得奈米尺寸的微脂體之 第三步驟。 在第一步驟中，酯化卵磷脂是由卵磷脂與有機酸的縮 合反應而製備。該有機酸較佳係選自下列所組成之群組： 乙酸、蘋果酸、乳酸、乙醇酸、檸檬酸及草酸、及其無水 物0 在第二步驟中，生理活性成分較佳為，但不限於，水 溶性藥物、脂溶性藥物或熱不安定性功能性物質。更佳地， 生理活性成分為選自下列所組成之群組的一者或多者：輔 酶Q10及表皮生長因子。此外，關於生理活性成分，若需 要’可進一步使用抗氧化劑，如：輔酶Q1〇、視網醇 (retinol)、視網醛（retinal)、棕搁酸視網醋扣仳y palmitate)、視網酸（retin〇icacid)、抗壞也酸、抗壞血酸碟 酸醋（ascorbyl phosphate)或其鹽、或抗壞血酸掠櫊酸酯。 虽同時使用疏水性成分如_ Q1G以及親水性成分 94070 12 200815021 石^ 二步驟較佳係包括T列步驟：藉由將酯化印 mr性成分如辅_QlG溶解於有機溶劑中以 二r目Γ液;藉由將親水性活性成分如咖溶解於水性 洛封以備水相溶液；以及混合該油相溶液與水相溶液。 ΐ Μ： ί 衣傷'由相洛液的步驟中’醋化㈣脂及疏水性 活性成/刀如輔_ Q10係溶於有機溶劑例如乙醇中。較佳 :也：可進一步將下列各者添加至有機溶劑中·氫化飽和烴 ^脂，·三酸甘油醋類親水性有機化合物，如辛酸/癸酸三 ^油醋；陰離子性界面活性劑，如二乙胺料磷酸醋、 杬壞血酸鱗酸醋納、鱗脂膽驗（ph〇sph〇ti州咖此e)威三乙 胺椰油基麩醯胺酸鈉;或柔軟劑，如丁基化羥基甲苯。 在上述製備水相溶液的步驟中，係藉由將親水性活性 成分如EGF溶於純水巾以製備水相溶液。較佳地，可進一 步將下列各者添加至水相溶液中：陰離子性界面活性劑， 如：二乙胺錄蟻碟酸醋、抗壞血酸磷酸醋鈉、鱗脂膽驗或 二乙胺椰油基麵醯胺酸納；或螯合劑，如乙二胺四乙酸鈉 /醋化㈣脂與生理活性成分溶解於溶劑中的步驟較佳 係在20 C至60 C之溫度實施。若溫度低於2〇。。，可實施溶 解’但溶解時間長，且溶解後可能有安定性的問題。此處， #溫度’則輔酶⑽及/或咖等生理活性成分 可能不安定。 將上述製備的油相溶液與水相溶液混合後，使用均質 混合機（homomixer)攪拌器將混合物均質化。此時，經均質 94070 13 200815021 化之微脂體溶液中的微脂體係呈現微米級的顆粒尺寸。 於第二步驟中，將第二步驟之均同質混合溶液在1000 pS1或更高的壓力下通過微射流均質機（micr0fiuidize]r，M/F) 或夕人且$散成奈米尺寸的微脂體而得到奈米微脂 體溶液。若壓力低於1〇〇〇 psi，則可能難以形成奈米尺寸 的微脂體。較佳為將均質混合溶液通過微射流均質機（M/F) 二次或更多次。 b g於上述所製備之奈米微脂體溶液中的微脂體在水 溶液中形成水相/油相的雙微脂體（加uble lip〇s〇me)，因此 亦可穩定存在於最内部的水相功能性物質如egf及視需 =的水溶性抗氧化劑，且可進—步同時穩定親水性活性: 分如EGF及疏水性活性成分如輔酶q1〇。 ，含有輔酶Q10 A EGF且使用酷化_脂的本發明奈 未微脂體可藉由習知方法用來製備用於皮膚的組成物， 如·化妝品、治療皮膚疾病的藥劑等。 . 且添加物的量可依據功能性物質的量作適當 製備條件。 用於製備組成物的原料之較佳用量係於實施例中詳 述。此外，上述列舉之添加物可使用其他可相容者取代， 調整以最佳化

及包含於該微脂體膜 種或多種具有抗發炎 根據一具體實 膚疾病的組成物， 體包括含有酯化卵磷脂之微脂體膜、 之内部空間的表皮生長因子；以及一 活性的天然萃取物。 94070 14 200815021 - 本發明組成物係以内含於奈米微脂體中之形式使用表 •皮生長因子，藉此可增進藥物的醫藥安定性及穿透入皮膚 的月b力此外，用於製備微腊體的酯化卵鱗脂可提供有利 於治療皮膚疾病的額外濕潤效果。習知，皮膚疾病係由燙 f、刀傷等傷Π所導致或由對癌症患者施行放射線治療所 導致。因此，對受傷區域提供濕潤效果的酯化卵磷脂可呈 現治療皮膚疾病的較佳效果。再者，酯化卵磷脂提供柔軟 ⑩皮膚及促進皮膚穿透（skin_penetration)的效果，藉以增進表 皮生長因子及天然萃取物穿透入皮膚的能力。 /再者，由於本發明組成物包括奈米微脂體（該奈米微脂 體係藉由在微脂體膜内含有酯化卵磷脂而製備”因此可解 決習知在高溫（70。〇或更高）加熱及分散活性成分、低安定 性、低一致性等問題。 在本發明組成物中，可使用足量的表皮生長因子以治 療皮膚疾病，且治療有效量可依患者的病症、年齡、性別、 _敏感度等而異。基於奈米微脂體的總重量，本發明組成物 中之表皮生長因子的含量可為丨至50重量％。 在本發明組成物中，包含EGF的奈米微脂體可進一步 包括抗氧化劑。該抗氧化劑可包括，但不限於：輔酶、 視網醇、視網醛、棕櫚酸視網酯、視網酸、抗壞血酸、抗 壞血酸磷酸酯或其鹽、或抗壞血酸棕櫚酸酯。輔酶Q1〇 在人體中扮演促進細胞能量產生的輔酶角色，且對活性氧 具有強效的抗氧化能力，因此，使皮膚吸收輔酶Qi〇或二 輔酶Q1G施用於皮膚已知可有效預防細胞氧化，從而有效 94070 15 200815021 地維持皮膚彈性及防止老化。基於奈米微脂體的總重量， 在本發明組成物中的抗氧化劑的量可為〇·1至10重量％。 具有抗發炎活性的天然萃取物包括來自已知含有抗發 炎成分的天然產物之萃取物，但沒有限定。用於本發明組 成物中之具有抗發炎活性的天然萃取物可包括來自下列一 種或多種天然產物的萃取物，如：山茶花（Camellia japonica)、槲寄生（Viscum album L. var· coloratum)、楡白 皮（Ulmi cortex)、百合（Lillium brownii F.E·)、三片葉 φ (Pimellia ternata Thunb Breit)、百芨（Bletilla striata Reichb· fil·)、苟藥（Paeonia lactiflora Pall)、乳香樹（Boswellia carterii Birdw)、知母（Anemarrhena rhizome)、槐木屬樹皮 (Aralia cortex)、熟地（Rehmaniae radix)、山藥（Dioscoreae Radix)、山茱萸（Corni Fructus)、茯荟（11〇61611)、牡丹皮 (Moutan Cortex Radicis)、五味子（Schizandfae Fructus)、天 門冬（Asparagi Tuber)、麥門冬（Liriopsis Tuber)、貝母 • (Fritillariae Bulbus)、杏仁（Armeniacae Semen)、半夏 (Pinelliae Tuber)、桔梗（Platicodi Radix)、黃答(Scutellariae Radix)、黃連（Coptidis Rhizoma)等。天然萃取物可單獨使 用或組合二種或更多種萃取物使用。較佳地，天然萃取物 係來自山茶花及/或槲寄生，且更佳地，天然萃取物係如韓 國早期公開第10-2005-0058655號所揭露來自山茶花或如 .韓國早期公開第10-2006-0025423號所揭露來自槲寄生。 可依據所使用的天然產物、萃取方法等使用各種量之 天然萃取物。基於組成物的總重量，習知在本發明組成物 16 94070 200815021 中之天然萃取物的含量可為〇·〇1至10重量°/〇。 用於預防或治療皮膚疾病的本發明組成物可藉由調配 奈米微脂體與具有抗發炎活性的天然萃取物而製備'該奈 米微脂體係如上述製備以包括含有酯化卵碟脂的微脂體 膜、及包含於該微脂體膜之内部空間的表皮生長因子。該 調配可藉由將具有抗發炎活性的天然萃取物分散及/或溶 解於上述所得之奈米微脂體溶液中而進行。分散及/或溶解 較佳係於室溫進行。 如需要，本發明組成物可進一步包括安定劑，如：胺 基酸、亞硫酸氫鈉、偏二亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、乙二胺四 乙酸二鈉、硫氫化納、次硫酸曱酸鈉（sodium formaldehyde sulfoxylate)、硫脲、丙酮亞硫酸氳納等；濕潤劑，如神經 醯胺、甘油、丙二醇、海藻酸銨、環曱石夕脂 (cyclomethicone)、石夕靈（dimethicone)、聚葡萄糖、玻尿酸 納（sodium hyaluronate)、乳酸納、山梨醇、甘油三乙酸醋、 • 三乙醇胺、木糖醇等；乳化劑，如：聚氧伸乙基烷基醚、 聚氧伸乙基篦麻油衍生物、聚氧伸乙基去水山梨醇脂肪酸 酉旨、聚氧伸乙硬脂酸S旨等；或醫藥上可接受之添加劑，如： 苯曱酸鈉、對羥基苯曱酸曱酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥 基苯曱酸（異）丙酯、對羥基苯曱酸（異）丁酯、山梨酸、山梨 酸If、山梨酸納、去水乙酸（dehydroacetic acid)、去水乙酸 鈉（sodium dehydroacetate)、氯化苄烧銨（benzalkonium chloride)、氯化苯錢松寧（benzentonium chloride)、驗、曱 酚、氯甲酚、苯曱醇等。本發明組成物可調配成外用的藥 17 94070 200815021 物，如·軟貧、乳膏、塗劑（lotion)等。 此外，本發明組成物可製備成各種形式的化妝品，如： 皮膚塗劑、滋養塗劑、滋養乳貧、按摩乳膏、滋養精油、 面膜（pack)、隔離霜（mak㈣p base)、粉底、身體潤澤油、 髮油、洗髮精、潤絲精等。 本發明將藉由下列實施例更具體地說明。然而，應理 解下列實施例係意欲用於說明本發明而不能以任何方式限 鲁制本發明範疇。 $ 、 實施例 化卵磷脂的合# 。 <實施例1> 將200g四氫呋喃溶劑加熱至7〇它之溫度，加入Mg 氫化飽和烴卵磷脂並溶解。卵磷脂完全溶解後，將3g無水 頻果酸加入混合物中並溶解。無水蘋果酸完全溶解後，加 =0.5g三乙胺作為催化劑並在回流下維持反應超過3小 ·，。反應完成後，將所得混合物在45ΐ下真空乾燥以獲得 呈白色粉末狀的酯化卵磷脂。 〈實施例2> 以相同於實施例彳之方法合成酉旨化㈣脂，惟使用 .2.5g無水乙酸取代無水蘋果酸。 貧備奈米微脂體溶液 〈貫施例3 > 11製備油相溶液 將15g酯化卵磷脂、15g氫化飽和烴印磷脂、2〇〇g辛 94070 18 200815021 酸/癸酸三酸甘油酯（MCT)、10g二乙胺鯨蠟磷酸酯及〇.5g 丁基化經基甲苯(BHT)加入110g的乙醇中，且將混合物加 熱至約40°C，攪拌且溶解。.再將溶解的混合物冷卻至室溫 而得到油相溶液。 2) 製備水相溶液 在室溫攪拌下，將〇.5gNa-EDTA、lg抗壞血酸磷酸酯 納(NAP)及2gEGF溶解在650g水中而得到水相溶液。 3) 混合油相溶液及水相溶液 ® 將上述所得之水相溶液添加至所製備的油相溶液中， 且使用均質混合機（homomixer)充分攪拌該混合物超過5 分鐘以得到均質混合物。 · 4) 製備奈米微脂體 使所得之均質混合物在超過1000 psi的壓力下通過微 射流均質機一次或多次以將微脂體分散成奈米尺寸而製備 奈米微脂體溶液。通過步驟的溫度條件係藉由使用冷水而 _ 冷卻到低於室溫。 〈實施例3’> 以相同於實施例3的方法製備奈米微脂體溶液，惟使 用 2.4gEGF〇 . <實施例4> 以相同於實施例3的方法製備奈米微脂體溶液，惟使 用30g酯化即磷脂。 <實施例5> 以相同於實施例3的方法製備奈米微脂體溶液，惟使 19 94070 200815021 φ 用1 〇g月桂基甜菜鹼（甜菜鹼類兩性界面活性劑）取代二乙 胺鯨蠟磷酸酯（陰離子性界面活性劑）。 <實施例6> 以相同於實施例3的方法製備奈米微脂體溶液，惟使 用50g酯化卵磷脂，而不使用氫化飽和烴卵磷脂及二乙胺 鯨蠟磷酸酯。 <實施例7> 1)製備油相溶液 將1 5g g旨化彡卩填脂、15g氫化飽和烴_填脂' 2〇〇g辛 酸/癸酸三酸甘油酯（MCT)、l〇g二乙胺鯨蠟磷酸g旨、〇.5g 丁基化羥基甲苯（BHT)及10g輔酶qi〇加入ii〇g乙醇申， 且將該混合物加熱至約4(TC，攪拌並溶解。將該溶解的混 合物冷卻至室溫而得到油相溶液。 ill備奈米撒脂體 根據相同於實施例3的方法製備水相溶液，之後將所 _製備的水相溶液與上述所製備的油相溶液混合，並該混合 物分散成奈米尺寸以製備奈米微脂體溶液。 〈實施例8> 以相同於掌施例7的方法製備奈米微脂體溶液，惟使 用30g酯化卵磷脂，而不使用氫化飽和烴卵磷脂外。 <實施例9> 以相同於實施例7的方法製備奈米微脂體溶液，惟使 用1 〇g月桂基甜菜鹼（甜菜鹼類兩性界面活性劑）取代二乙 胺鯨躐碌酸酯。 20 94070 200815021 <實施例ιο> 以相同於實施例7的方法製備奈米微脂體溶液，惟使 用50g酯化卵磷脂，而不使用氫化飽和烴卵磷脂及二乙胺 鯨蠟磷酸酯。 〈實施例11> 1) 將15g酯化卵磷脂、15g氫化飽和烴卵磷脂、2〇〇g辛酸/ 癸酸三酸甘油酯（MCT)、0.5g 丁基化羥基甲苯（BHT)及l〇g _輔酶Q10加至110g乙醇中，且加熱該混合物至約50。〇， 攪拌並溶解。之後將該溶解的混合物冷卻至室溫。 2) 將2.4g EGF溶解於10g蒸餾水。之後將所得之溶液添加 至上述步驟1)所製備‘的溶液中。 3) 使用均質混合機充分攪拌上述步驟2)所製備的混合物溶 液超過10分鐘。 4) 在超過1〇〇〇 psi的壓力下將上述步驟3)所製備之溶液通 過微射流均質機。 _ 5)在以均質混合機攪拌下將上述步驟4)所製備之溶液添加 至含有0.5g Na-EDTA及lg抗壞血酸磷酸酯鈉的650g水 中。 6) 添加之後，充分攪拌該混合物超過1〇分鐘。 7) 將上述步驟6)所製備之溶液通過微射流均質機一次或多 次以獲得雙層奈米微脂體溶液。 <實施例12> 以相同於實施例11的方法製備奈米微脂體溶液，惟 使用35g醋化卵磷脂，而不使用氫化飽和烴卵磷脂。 21 94070 200815021 <實施例13> 以相同於實施例11的方法製備奈米微脂體溶液，惟 使用50g酷化卵填脂，而不使用氫化飽和烴卵填脂外。 〈實施例14> 1) 將1 g —乙胺知增構酸知、2 0 0 g辛酸/癸酸三酸甘油酉旨 (MCT)、 10g醋化印鱗脂、0.5g 丁基化經基甲苯及i〇g輔 酶Q10加至11 〇g乙醇中，且在室溫下劇烈攪拌該混合物 並溶解以獲得油相溶液。 2) 將2.3g EGF溶解於10g蒸餘水中。之後將所得之溶液 添加至上述步驟1)所製備之溶液。 3) 使用均質混合機充分攪拌上述步驟2)所製備之混合物溶 液超過10分鐘。 句在超過则_的壓力下將上述㈣3)所製備之溶液通 過微射流均質機。 5) 在以均質混合機攪拌下將上述步驟4)所製備之溶液添加 3有〇.5g Na-EDTA及lg抗壞血酸磷酸酯鈉之65〇g水 中。 6) 添加之後，充分㈣該混合物超過1()分鐘。 所製備之溶液通過微射流均質機-次或多 一人以付到雙層奈米微脂體溶液。 〈貫施例15> 以相同於實施例14的方、 # ^ 乃忐製備奈米微脂體溶液，惟 使用lg抗壞血酸磷酸酯鈉取 <實施例16> 代一乙胺鯨蠟磷酸酯。 94070 200815021 以相同於實施例14的方法製備奈米微脂體溶液，惟 使用lg三乙胺椰油基麩醯胺酸鈉（MIAMI CT130，陰離子 性界面活性劑）取代二乙胺錄蠟磷酸酯。 〈實施例17> 以相同於實施例14的方法製備奈米微脂體溶液，惟使 用1 g月桂基胺丙基甜菜鹼（甜菜鹼類兩性界面活性劑）取 代二乙胺鯨蠟磷酸酯。 赢 <比較例〉 馨 以相同於實施例7的方法製備奈米微脂體溶液，惟使 用3 0 g鼠化飽和fe自p麟脂’而不使用醋化印鱗脂外。 棗備外用調配物 <實施例18> 將5ml實施例3所製備的奈米微脂體溶液添加至含有 山茶花萃取物的95g滋養塗劑基底，該山茶花萃取物係根 據韓國早期公開第10-2005-0058635號的實施例2所製 _備。之後，在室溫下攪拌混合物20分鐘以獲得用於預防或 治療皮膚疾病的組成物。 <實施例19> 將5ml實施例3所製備的奈米微脂體溶液添加至含有 槲寄生卒取物的95g滋養塗劑基底，該槲寄生萃取物係根 據韓國早期公開第10-2006-0025423號的調配實施例1所 製備。之後’在室溫下攪拌混合物20分鐘以獲得用於預防 或治療皮膚疾病的組成物。 試驗例1 23 94070 200815021 <安定性測試> 比較上述實施例8(只使用酯化卵磷脂）、實施例7(使 用酯化卵磷脂及氫化飽和烴卵磷脂）及比較例（只使用氫化 飽和烴卵磷脂)所製備的奈米微脂體溶液在室溫下於長期 儲存後的平均顆粒尺寸及凝膠化狀態。結果如下表1所 示。此外，進行觀察以確認奥茲瓦德熟化（Ostwald ripening) 的發生，奥茲瓦德熟化為顆粒成長的機制，其係因為溶液 中各顆粒間之顆粒尺寸不同而在較大顆粒上沈積物質 [Ostwald，Z Phys. Chem.(34)，1900, 495-5031]。 右長期儲存微脂體溶液’常會發生因凝結（coagulation) 導致的凝膠化。因此，凝膠化時間的判定即是儘管再擾拌， 凝膠化的溶液也不會再分散及再溶解的時間點。 表1 ·安定性試驗結果 溶液樣品 微脂體平均 顆粒尺寸 凝膠化 時間 說明 j施例8 470 nm 25天 凝膠化缓一 一 _ 實施例7 750 nm 20天 膠化，部分免德熟 化。 比較例 1300 nm 15天 "生凝膠化，且 微脂體自溶劍分離。 *試驗溫度：室溫（平均2〇t) <查^脂體溶液在UV/可見光範圍的吸央磨|透光率〉 測定根據本發明在上述實施例8中只使用酯化即鱗脂 所製備的具有EGF(水相）/辅酶Qi〇(油相）之雙層膜的奈米 从月曰體溶液在UV/可見光範圍的吸光度及透光率。结果顯 94070 24 200815021 翥 示於第1圖及第2圖。 如第1圖及第2圖所示，在400 nm至700 nm範圍内 的可見光貫質上未被散射及吸收，這表示所製備的奈米微 脂體溶液非常澄清且微脂體尺寸一致。 〈ϋί量顆粒^^也分佈> 测1在上述實施例8中所製備的具有雙層膜之奈米 微脂體溶液的顆粒尺寸分佈。結果顯示於第3圖。 φ 如第3圖所示，奈米微脂體顆粒係分散在狹小範圍 内’這表示所製備的奈米微脂體溶液非常澄清且微脂體尺 寸一致。 試驗例2 當EGF被奈米微脂體化且奈米微脂體分散在化妝品 中時，比較飞GF的安定性。在40°C及濕度75 % RH的嚴 苛條件下，將pH值7·4之lOmMEGF磷酸鹽緩衝液、實 施例3的EGF奈米微脂體溶液及實施例18之：EGF奈米微 _脂體分散之組成物儲存三個月，，且比較相對安定性。殘餘 量係使用ELISA方法分析。結果顯示於下表2。如表2所 示，包含於奈米微脂體中之EGF的安定性與緩衝溶液相 比係顯著地增加，且在所調配的組成物中之EGF的安定性 係更進一步地增加。 94070 25 200815021 表2·女疋性試驗結果-比較在pH值7·4之1 〇 mM EGF鱗 酸鹽緩衝液、EGF奈米微脂體、及Egf奈米微脂體分散之 組成物中之EGF的安定性（n=3) 時間 EGF 含量(％) — ~~— pH值7.4之磷酸鹽 緩衝液 EGF奈米微脂 體溶液 含有EGF奈米微脂體之 組成物 2週 72.23 士 2.3 95.42 土 3.0 96.51 ± 1.0 4週 55.82 士 5.5 88,57 ±2.8 89·95 土 7.2 8週 31·67 土 4·7 67.04 ±4.1 75.36 士 2.2 12週 23·39 土 L2 51.08 士 4.2 64.18 士 1·6 試驗例3 對接又33次放射線治療（59.4Gy)且因此在放射線治療 後有嚴重皮膚發炎症狀（第4圖左欄）的口腔癌患者施用實 施例18所製備的組成物以完全覆蓋在患部，每天2次持續 約L5個月（2006. 2· 28至2〇〇6· 4· I?)。在組成物投予期 間’每天觀察患部。投予5天後，患部的發炎症狀明顯減 缓。10天後，患部的皮膚顏色改變，且約1個月後，患部 恢復成近似正常皮膚（第4圖）。 對2位有嚴重皮膚發炎症狀的喉癌患者施加實施例18 所製備的組成物以完全覆蓋在患部，每天2次持續約1個 月（2006· 3· 29 至 2006· 4· 17)以及持續約 1 週（2006· 4. 11 至2006·4· 18)。在投予期間，每天觀察患部。分別約1個 月、々1週後’患部恢後成近似正常皮膚（第4圖）^ 產業利用性 根據本發明的奈米微脂體係形成含有酯化卵磷脂的微 26 94070 200815021 =膜’因此可在低溫下安全地將熱不安定功能性物質予 以㈣體化並同時捕集親水性物質及疏水性物質。此外， 因為使用可用於移除角質物f的無水有機酸作為官能基， ^其有餅展現各種功能性效果，如：移㈣質 柔軟皮膚。

此外’用於預防或治療皮膚疾病的本發明組成物包括 有包含於奈米微脂體内的表皮生長因子，因而展現了促進 皮膚穿透及良好醫藥安定性之絕佳效果。再者’用於製備 微脂體的醋化㈣脂可提供有利於治療皮膚疾病之額外的 濕潤效果，’皮膚疾病係由變傷、刀傷等的傷口所導 致或由對癌症患者所進行的放射線治療所導致。因此，對 受傷部位提供濕潤效果的s旨化㈣脂可展現治療皮膚疾病 的較佳效果。此外’ g旨化㈣脂提供柔軟皮膚及促進皮膚 穿透的效果’因此增進了表皮生長因子及天料取物穿透 入皮膚的能力。而且，因本發明組成物包括藉由在微脂體 膜含有酯化印磷脂所製備的奈米微脂體，故可解決習知在 高溫（7G°C或更高）加熱及分散活性成分、低安定性及低一 致性等問題。 【圖式簡單說明】 第1圖表示根據本發明使用醋化㈣脂所製備的具有 EGF/輔酶Q1G之雙層膜的奈純㈣料的紫外光 可見光吸光度（％)曲線圖。 ” 第2圖表示根據本發明使用酯化印磷脂所製備的且有 EGF/_Q1〇之雙層膜的奈米微脂體溶液的UV/可見光透 94070 27 200815021 龜 光率（％)曲線圖。 第3圖表隸據本發日歧用§旨切仙所製備的具有 EGF/輔酶Q10之雙層膜的奈米微脂體的顆粒大小分佈曲 線圖。 第4圖顯示當投予包括奈米微脂體的本發明組成物至 因放射線治療導致皮膚炎的口腔癌患者及喉癌患者時，該 組成物之治療效果。

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Claims (1)

1. 200815021 φ 十、申請專利範圍： 1· 一種奈米微脂體，包括··含有酯化卵磷脂之微脂體膜； 以及包含於該微脂體膜之内部空間的一種或多種生理 活性成分。 2·如申請專利範圍第1項之奈米微脂體，其中，該生理活 性成分為選自下列所組成之群組的一者或多者··輔酶 Q10及表皮生長因子。 3·如申請專利範圍第i項之奈米微脂體，其中，該酯化卵 磷脂為卵磷脂與有機酸的反應產物。 4·如申請專利範圍第3項之奈米微脂體，其中，該有機酸 係廷自下列所組成之群組：無水乙酸、無水蘋果酸、無 水礼酸、無水乙醇酸、無水檸檬酸及無水草酸。 5·如申4專利範圍第丨項之奈米微脂體，復包括選自下列 所、、且成之群組的一者或多者：氫化飽和烴卵填脂、陰離 子性界面活性劑、三酸甘油酯類有機化合物、柔軟劑、 • 螯合劑及甜菜鹼類兩性界面活性劑。 6· 一種製備奈米微脂體的方法，包括： 將卵磷脂與有機酸反應而製備酯化卵磷脂之第一 步驟； 將酯化卵磷脂與一種或多種生理活性成分溶解於 溶劑中之第二步驟；以及 、 一分散該所得溶液以獲得呈奈米尺寸的微脂體之第 三步驟。 申η月專利fe lj第6項之方法，其中，該生理活性成分 29 94070 200815021 2自下列所組成之群組的一者 表皮生長因子。. 補麵Ql〇及 &如申請專利範圍第7項之方法，其中， 下列步驟： X弟一步驟包括 藉由將酯化卵磷脂與辅# 以製備油相溶液； … /奋於有機溶劑中 藉由將表皮生長因子溶解於水性 • 相溶液；以及 4 T从製備水 混合該油相溶液與該水相溶液。 9·如申請專利範圍第6項 机至啊之溫度實施。，、中該弟—步驟係於 1〇二種用於預防或治療皮膚疾病的組成物，該組成物包 ,/奈未微脂體’該奈米微脂體包括含有S旨化㈣脂之 U知體膜、及包含於該微脂體膜之内部空間的表皮生長 因子；以及一種或多種具有抗發炎活性的天然萃取物二 » 11·如=請專利_第1G項之組成物，其中，該奈米微脂 體復包3種或多種選自下列所組成之群組的抗氧化 劑·輔酶Q10、視網醇、視網醛、棕櫚酸視網酯、視網 酸、抗壞血酸、抗壞血酸磷酸酯或其鹽、及抗壞血酸棕 櫚酸S旨。 12·如申請專利範圍第1〇項之組成物，其中，該天然萃取 物為來自一種或多種選自下列所組成群組之天然產物 的萃取物·山茶花、槲寄生、楡白皮、百合、三片葉、 百及、与藥、乳香樹、知母、檍木屬樹皮、熟地、山藥、 30 94070 200815021 山茱萸、茯苓、牡丹皮、五味子、天門冬、麥門冬、貝 母、杏仁、半夏、桔梗、黃芩、及黃連。 13·如申請專利範圍第1〇項之組成物，其中，該天然萃取 物為來自山茶花或槲寄生的萃取物。 14·如申请專利範圍第1〇項之組成物，其中，該微脂韙膜 除了酯化卵磷脂外，復包括氫化卵 填脂、神經醯胺、或 其混合物。 ⑩15·如申明專利範圍第1〇至14項中任一項之組成物，其 中’’該醋化卵磷脂為卵磷脂與有機酸的反應產物。 16·=申请範圍第15項之組成物，其中，該有機酸為乙酸、 蘋果酸、乳酸、乙醇酸、檸檬酸、草酸、或其無水物。 17·如申请範圍第1〇至14項中任一項之組成物，其中，該 奈米微脂體復包括選自下列所組成之群組的一者或多 者陰離子性界面活性劑、三酸甘油酯類有機化合物、 木軟劑、螯合劑、及兩性界面活性劑。 94070 31