TW200410712A - Anti-chicken coccidiosis composition - Google Patents

Description

200410712 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 、，本發明係關於對雞球蟲病之預防及治療有效之組合物。 進-步具體言之，其係關於對雞等鳥類之㈣蟲病具優越 的預防效果及治療效果，對防禦雞球蟲病之感染及難球蟲 病伴有之體重下降之臨床症狀的改善，或雞球蟲病之治療 極為有效之組合物。 【先前技術】 雞球蟲病（coccidiosis in chickens)係由艾美球蟲（Eimeria) 屬之原蟲感染引起者。寄生於難之艾美球蟲屬，因種類不 同’其症狀、寄生部位、病變各異。特㈣，作為病原體 被重視者，有柔嫩艾美球蟲、毒害艾美球蟲、巨型艾美球 蟲、布氏艾美球蟲、堆型艾美球蟲5種，另外和緩艾美球蟲、 早熟艾美球蟲、哈氏艾美球蟲、變位艾美球蟲等亦為所知。 已知於鹤鶉域||艾美球蟲、E.ts刪dai等；於火雞為火雞 和緩艾美球蟲、E· adenoides、E· gall〇povonis等；於珠難 為由E. gremen、E· numidae等之感染所引起。此為雞的疾 病中，危害最大者之一。藉由卵囊之口服攝取可引起感染。 呈現各種腹瀉、食欲不振、絕嗣、體重下降等症狀，亦發 現有死亡。此與雞之日齡、性別、品種無關而發生。易發 生於地面放養之雞舍，但近年於多階梯式槽之採卵雞之發 生亦有報告。又，藉由肉毒杆菌（Clostridium perfringens)之 混合感染’症狀嚴重化。以防止卵囊引起之雞舍汗染及球 蟲預防劑之使用來對應。於預防上，可將各種合成抗雞球 86120 200410712 蟲劑及4才/ 7才予只抗生素作為球蟲預防劑使用。於治 療上，可使用磺胺藥物或磺胺藥物與嘧啶系藥物之合劑。 疫苗亦被實用化。 球蟲預防劑僅能於雞卵孵化後1 〇週内使用，另外具於離 難出貨前7曰之停藥期間之義務。此係因於用藥之情形，一 定期間内卵、肉之出貨被禁止。此球蟲預防劑不能使用之 期間内，雞球蟲病易發生。再者，因耐藥性雞球蟲增加， 有必要選擇對各農場有效之預防劑。雖然難球蟲病之球蟲 預防劑一時間開發出極多，但其後，因殘留、對包括人之 其他生物之惡性影響、耐藥性難球蟲之出現等，變為不能 使用。於歐洲，2007年以後，球蟲預防劑之使用被禁止。 於我國自對飼料添加物之法規實施以來，其使用亦被嚴重 限制。 活疫苗’為口服投與者，以病原性弱之種類進行計劃免 疫’從而防止強毒種之感染之嘴試正在進行。又，將數種 卵囊之混合物用於離’使其感染至不死亡之程度，從而使 其獲得免疫之難球蟲活疫苗，實際上因養雞場被汗染，不 如說負面點多。於非活化疫苗，阻止感染之抗體之產生少， 且效果亦低。又，即使用疫苗免疫離，因到防禦感染之抗 體產生為止需要數週，故於離雞之利用價值低。 另外’一旦患難球蟲病’腸内菌群紊，引起腹湾等症 狀，特別地，腹瀉涉及長期。又，由此體力消耗，免疫力 下降而導致易患壞死性腸炎。 使用特許第2548 11 5號、特許第2698778號、特許第2698779 86120 200410712 號（鳥抗體之哺乳動物之被動免疫化，於投與為被動免疫 之異種抗體（來自難卵）之際（特別地，注射等非口服投與）， 為防止引起過敏性休克及血清病等，於投與為預防/治療 之抗體之前，預先給哺乳動物含有抗體之食物，使其置於 口服免疫耐义（免疫寬容）之狀態，與本發明之口服被動免疫 防禦效果之想法芫全相異。又，本發明者等，對關於食用 鳥之食物中毒菌抑制材料（特許第2615673號）提出申請。其 係以豬大腸杆菌症之原因之腸毒素原性大腸杆菌987ρ、κ88 及Κ99彡/l原，及牛大細杆菌症之原因之腸毒素原性大腸杆菌 Κ99抗原中任1種以上之抗原免疫雞，由此免疫雞產的卵至 少含有卵黃之部分回收抗體而獲得，含有對前述抗原之特 異性多克隆抗體，含有豬或牛之哺乳期之大腸杆菌症之口 服預防劑及治療劑（特許第2034005號），及預先接種食物中 毒菌之雞於免疫獲得後產生的卵之全卵、卵黃或含有抗體 之組分’其含有對該食物中毒菌之特異抗體。此等具雞卵 抗體之有用性，對細菌雖具雞卵抗體之口服被動免疫防禦 效果，但對原蟲並不顯示防禦效果。即使於今，雖有對細 ®或病毒等具口服被動免疫能力之想法，但並無對原蟲之 口服被動免疫能力之想法。 另’雖有多數對使用難球蟲病之各種抗原之疫苗的報告， 但使用被動免疫之報告為少。針對雞球蟲病之巨型艾美球 蟲的生殖母體製作小鼠單克隆抗體，雖有確認於雞球蟲病 之被動免疫的論文（Infection and Immunity，56: 972-976, 1988, Infection and Immunity, 58 ： 557-562，1990)，但其以 86120 200410712 將小鼠單仏抗體非口服而以靜脈注射之投與方法進行每 驗，完全無實用意義。 只 【發明内容】 本發明者等必要解決前述問題點，而銳意研究之結果， 1現藉由以具有參與雞球蟲病之堆型艾美球蟲、柔嫩 球蟲及巨型艾吴球蟲之孢子體與裂殖子之共同免疫原性之 外膜蛋白質抗原或其免疫原性片段作為抗原，免疫雞、鹌 鶴或其他鳥類獲得之㈣所含之抗雞球蟲病抗體投與雞等 鳥類’抗體附著於艾美球蟲屬之孢子體或裂殖子，藉由阻 止孢子m或裂殖子附著及侵入上皮細胞，可使其病原性消 失。再者，於投與本抗雞球蟲病抗體之際，藉由合併供給 乳酸菌，發現與腸内菌群之改善及免疫增強之同時，本= 體更有效地發揮作用’對難球蟲病之預防及治療可發揮^ 越的效果。又，於投與本抗雞球蟲病抗體之際，藉由合併 供給由以肉毒杆菌免疫過之難蛋得到之抗體，纟現藉由抑 制混合感染肉毒杆菌所致之症狀嚴重化，使本抗體更有效 地發揮作用’對雞球蟲病之預防及治療發揮優越的效果而 完成本發明。 本發明包含以下發明。 (1) 一種口服用抗雞球蟲病組合物，其包含一抗體，該 抗體係得自以具有參與難球蟲病之堆型艾美球蟲、柔嫩艾 美球蟲及巨型艾美球蟲之孢子體與裂殖子之共同免疫原性 之外膜蛋白質抗原或其免疫原性片段免疫之難蛋。 (2) 如前述（1)記載之組合物，其另含有乳酸菌。 86120 200410712 由以肉毒杆菌 (3) 如前述⑴或（2)記載之組合物，其另含有 免疫過之雞蛋獲得之抗體。 用於雞球蟲 (4) 如前述⑴-(3)之任—項記載之組合物，其 病之預防或治療。 項記載之 (5) —種鳥類用飼料，其含有前述（iH4)之任一 組合物。 士（6卜種難球蟲病之預防或治療方法，其特徵在於將前述⑴ 圮載《抗體’或該抗體與由乳酸菌及/或肉毒杆菌免疫過之 難蛋獲得之抗體口服投與給鳥類。 以下，茲詳細說明本發明。 本發明，作為抗原係使用參與難球蟲病之堆型艾美球蟲、 柔嫩艾美球蟲及巨型艾美球蟲之孢子體與裂殖子之共同免 疫原性之外膜蛋白質抗原或其免疫原性片段。 前述抗原，因係堆型艾美球蟲、柔嫩艾美球蟲及巨型艾 美球蟲之孢子體與裂殖子之纟同抗原、’於病原體為堆型艾 美球蟲、柔嫩艾美球蟲及巨型艾美球蟲任一種之情形均有 效發揮作用。 作為前述抗原，可使用例如Avian叫⑶％% 44:379_389 2000記載之18-27千道爾頓之可溶性蛋白（1?3)或3β1 E蛋白 質’ J· Parasitol·，84 ·· 654-656, 1998記載之千道爾頓之裂殖 1991記載之 子蛋白，Infection and Immunity, 59:1271-1277 防禦片段蛋白（FV)。 作為「免疫原性片段」，含有一個或其以上之免疫決定簇， 只要可作為免疫原使用者，無特別限定。 86120 -10- 200410712 抗體因有可識別3個氨基酸形成之氨基酸序列的報告（F. Hudecz et al.5 J. Immunol. Methods, 147: 201-210 (1992)) 作為前述免疫原性片段之最小單位，認為氨基酸殘基數為3 以上的肢鏈，可列舉為氨基酸殘基數5以上為佳，氨基酸殘 基數1 0以上之肚鍵或多肢更佳。 又，前述外膜蛋白質抗原或其免疫原性片段，亦可藉由 液相法及固相法等之肽鏈合成方法合成，進一步亦可使用 肚鏈自動合成裝置，可依據以下記載之方法合成··日本生 化學會編「生化學實驗講座i夕>八夕質（7)化學以」，東京 化學同人，1975年，泉屋等人「弋7。千卜、合成①基礎七實 驗」，丸善，1985年，曰本生化學會編「續生化學實驗講座 2夕化學下」，東京化學同人，198?年等。 再者，前述外膜蛋白質抗原或其免疫原性片段者，由含 有對應足鹼基序列之！)凡八或RNA使用基因工程學技術（例 如’參照日本生化學會編「續生化學實驗講座丨遣傳子研究 法I」，東京化學同人，1986年，曰本生化學會編「續生化 學實驗講座1遺傳子研究法n」，東京化學同人，1986年，曰 本生化學會編「續生化學實驗講座丨遺傳子研究法」，東 京化學同人，1987年）製作亦可。 W述免疫原性片段為低分子物質之情形，通常，使用讓 載體結合於該片段者。作為前述載體，可使用裂螺科之血 藍蛋白（KLH)、牛血清白蛋白（BSA)、人血清白蛋白（hsa)、 難血清白蛋白、多七離氨酸、多丙氨酸離氨酸、雙棕櫚酸 離氨酸、破傷風類毒素或多糖類等。前述免疫原性片段與 86120 200410712 載體之結合，可使用戊二醛法、1_乙烯基-3-(3-雙甲基氨两 基）碳二亞胺法、亞gS胺苯臨-N-輕基琥珀驢亞胺酯法、- 丨丨-¾ 重氮化聯苯胺、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代）丙酸 法等眾所週知之方法。又，亦可將前述免疫原性片段吸附 於硝化綿顆粒、聚乙烯吨洛酮、脂質體等之載體者作為免 疫原。 免疫方法，可使用免疫原（前述外膜蛋白質抗原或其免疫 原性片段）之皮下注射及筋肉内注射、口服投與等。作為蛋 白質或肽鏈，接種免疫原量為0.01_10mg為佳。藉由初次免 疫2-10週後進行加強免疫，可得到較高抗體效價。加強免 疫第2週以後，對雞球蟲抗原起特異性反應之抗體，不僅於 ’隹6血中，且於卵中亦有生成。如此免疫之抗體，通常 高抗體效價可維持4個月。即使於抗體效價下降之情形，只 要以同樣手法進行加強免疫，高抗體效價即可持續。此卵 之抗體活性，可藉由螢光抗體法或酵素抗體法測定。 前述免疫原’與佐劑;昆合免疫注射者為佳。作為佐劑， 可使用福氏完全佐劑、福氏不完全佐劑、氧化銘佐劑、百 日咳遠佐骑彳等眾所週知者。 所述得到切的抗體，可將全彡卩或彡卩黃製成溶液， 5猎由噴霧乾燥機等乾燥製成粉末使用，另外亦可由全卵 或^脫^ *用印水溶性蛋白質，進—步精製或粗精製 抗體使用。 本發明之組合物，；奋m、人& & 麵、 k用於鳥^，特別適用於難。前述抗 月亘足投與量，一般地， — 十$母天對母隻雞抗體效價為卜106 86120 -12 - 200410712 品種等適宜增減為佳。 么’但根據鳥類的週齡、性別 又’於投與前述抗體之際，—旦合併使用乳酸菌，雞球 ^病伴有之體重下降等症狀可進—步被改善。乳酸菌，通 一常可對於前述抗體1§以乳酸菌10_1〇9個之比例使用。乳酸 菌，可與前述抗體同時投與，間隔投與亦可。 f) 田:為於此被使用之乳酸菌，只要為屬於乳酸桿菌、雙叉 杯囷、鏈球菌、腸球菌、乳球菌等之屬之乳酸菌，不問其 2，早獨或混合多種株均可。作為屬於乳酸桿菌屬之乳酸 菌例如嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌、乾酪乳桿菌、乙· ntum、鼠李糖乳桿菌、L· paracasei、乳酸乳桿菌、胚 芽乳桿菌、囉伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、唾液乳酸桿菌； 作為屬於雙又桿菌屬之乳酸菌，例如青春雙叉桿菌、分歧 雙叉扣菌、短雙叉桿菌、嬰兒雙歧桿菌、長雙叉桿菌、Β·

二eUd〇1〇ngUm、嗜熱雙叉桿菌；作為屬於鏈球菌屬之乳酸 菌，例如操乳鏈球菌、唾液鏈球菌、嗜熱性鏈球菌；作為 屬、；和求菌屬之乳酸菌，例如糞腸球菌、腸球菌；作為屬 於乳球菌屬之乳酸菌，例如乳酸乳球菌可被列舉。 又，於投與前述抗體之際，一旦合併使用由肉毒杆菌免 疫過（難蛋得到之抗體（以下稱為「抗肉毒杆菌抗體」），難 球蟲病伴有之體重減少等症狀可進一步改善。抗肉毒杆菌 杬把，通常對於抗雞球蟲病抗體lg可以0.01-100g之比例使 用。抗肉母杆菌抗體，可與前述抗難球蟲病抗體同時投與， 間隔投與亦可。 抗肉毒杆菌抗體，除作為免疫原使用肉毒杆菌以外，可 86120 -13 - 200410712 藉由與前述抗雞球蟲病抗體同樣的方法製作。又，藉由作 為免疫原將肉毒杆菌與前述外膜蛋白質抗原或其免疫原性 片段同時使用，亦可同時製作抗肉毒杆菌抗體及抗雞球蟲 病抗體。 作為肉毒杆菌’例如可將j· Anim· Sci·，75:19-25，1997記 載之蛋白、Avian Diseases，21: 241-255，1977 記載之類毒 素、Vet· Rec·，120: 435-439, 1987記載之蛋白、Vaccine，n: 1253-1258，1993 記載之蛋白、FEMS Immunol· Med.

Microbiol·，7: 321-336，1993記載之蛋白作為抗原使用。 本發明之抗難球蟲病組合物，作為各有效成分濃度為 0·001%-10%之溶液，甚至以粉末、顆粒、錠劑或膠狀對於 飼料以各有效成分濃度為〇·〇〇!%_!〇%之範圍被供給。又， 於供給抗雞球蟲病抗體之際，為防止於胃之消化分解，亦 可製成腸溶性劑形。 本發明說明，包括本申請優先權之基礎之特願2〇〇2_ 189 137號發明說明中記載之内容。 【實施方式】 〔實施例1〕 將難球蟲之堆型艾美球蟲ΝΑ株（ΡΕ0101)、柔嫩艾美球蟲 ΝΜ株（ΡΕ0102)、巨型艾美球蟲ΝΤ株（ΡΕ〇1〇3)之卵囊分別讓 4週齡的難以2χ106個口服感染，感染後第4日進行剖檢，得 到腸管及腸管内容物。各孢子體及裂殖子之精製，依據 Diseases，39:53 8-547，1995進行。藉由將堆型艾美球蟲na 株之裂殖子之可溶性外膜蛋白質於SDS-PAGE進行電泳，得 86120 -14- 200410712 到 18-27kD之外膜蛋白質（Avian Diseases，44 ·· 379-389, 2000)。將含此外膜蛋白質〇.5nig/mi之溶液與福氏不完全佐 劑乳化’給12週齡之雌難左右胸肌各注射1 mi進行第一次 免疫。同樣，6週後，同樣進行第二次免疫。第二次免疫2 週後’此雞之血液中之抗難球蟲病抗體於酵素免疫法分析 (ELISA)(Avian Diseases，44:379-389，2000)之抗體效價為 3 0,000-120,〇〇〇倍。此雞產的卵之抗體效價為3〇,〇〇〇-12〇,〇〇〇 倍。此抗體效價持續4個月。收集此卵，藉由喷霧乾燥製成 全印粉末之雞卵抗體。此粉末之抗體效價為6〇,〇〇〇倍。又， 將對於本抗體之孢子體及裂殖子之相交性以間接免疫熒光 染色（Avian Diseases，44:379-389，2000)研究之結果，本抗 體將艾美球蟲屬堆型艾美球蟲、柔嫩艾美球蟲、巨型艾美 球蟲之孢子體及裂殖子表面特異性熒光染色，確認其係共 通抗體。 〔實施例2〕 將於貝施例1仔到之抗難球蟲病抗體添加至離雞飼料中， 研九其對雞球蟲病實驗感染難（柔嫩艾美球蟲 Disease，3 1: 112-119, 1987)之效果，供試驗動物採用離雞專 用種強難（chunky)，抗體以〇·1。/。，1%及1〇%添加至雛雞育肥 前期用標準飼料（SDB Νο·1:Β團法人畜產生物安全研究所） 後投與。柔嫩艾美球蟲ΕΤ株之卵囊感染為1〇〇〇個/隻 Protozool，9: 154_161，1962)，每組按比例各設定1〇隻。又， 感染後之觀察期間為2週。檢查項目，以體重增加量及飼料 要求率為主要檢查項目，其他實施〇·Ρ (}•(平均每克糞便之 86120 -15- 200410712 卵囊數）及盲腸病變觀察（角田清監修「雞口夕シ^々A症」、 千夕寸 > 出版社、1983年）。其結果，藉由體重增加量，於 0.1 %投與組其效果亦被確認，藉由飼料要求率於1.0%投與 組其效果被確認。 综上，針對難球蟲病之攻擊，藉由將抗難球蟲病抗體以 0.1%以上投與於飼料中，發現有包含體重增加量及飼料要 求率之改善。综合判定，以得到之各觀察項目之數值為基 礎判定被檢物之效果，得到極為有效之效果。 表1 非感染組 柔嫩艾美球蟲感染組 非添加組 於飼料Θ 17添加之; :元體之比例 0% 0% 0.1% 1% 10% 平均體重增加量(g) 731 578 622 620 666 相對體重增加率(％)a) 100 79 85 85 91 平均飼料攝取量(g) 879 885 910 862 915 飼料要求率b) 1.20 1.53 1.46 1.39 1.37 生存率(％) 100 100 100 100 100 OPG(xl04)第 7 曰 0.0 9.7 5.1 4.2 0.4 卵囊值e) 0 40 20 10 5 盲腸病變值d) 0 20 10 5 5 Acmc) 200 119 155 170 181 稍有效 中度有效 極有效 a):相對體重增加率（％) =感染組體重增加率+非感染組體重 增加率X 1 〇 0 86120 -16- 200410712 b)·飼料要求率=平均飼料攝取量+平肖體重增加量 C)藉由相對於對照組之o.p.g·之比例=用藥組之〇.P G々感 染無用藥組之aRG· χ⑽’以基準為基礎，求出各試驗二 《卵囊值。〇 : 〇]%，+5 : 1.1-25%，+1〇 : 26_5〇%，+2〇 : 51-75〇/〇，+4〇 : 76]〇〇%。 )目腸病4值，依據〇 :未發現病變；+1 :盲腸壁上散在 有：少數點狀出血斑，但内容物正常；+2:内容物中混有 y :血液’可見多數出血病竈；+3 :可明顯見到盲腸内含 有夕里血液，或盲腸核（凝血或灰白色奶酪狀，香蕉型塊狀）， 目腸壁肥厚’及盲腸之變形、萎縮。+4 :盲腸嚴重萎縮， 病變到達直腸部。壁極度肥厚，盲腸内含有凝血或盲腸核； <判足基準求出1隻之平均值，換算成10隻的值示於表！。 幻：ACI值（Anticoccidial Index:抗雞球蟲指數）气相對體重 增加率+生存率）-(卵囊值+病變值） ACI值：18〇以上…極有效，16〇_179…中度有效， 稍有效’不足12 0…無效。 〔實施例3〕 使用將實施例1中得到之抗雞球蟲病抗體與乳酸菌之嗜酸 乳杆菌混合之飼料，研究對雞球蟲實驗感染雞（柔嫩艾美球 蟲）之效果。乳酸菌之嗜酸乳杆菌ATCC4356株於MRS培基 培養後，藉由凍乾製成lxl〇1H@/g的粉末。供試驗動物採用 離雞專用種強雞chunky，向離雞育肥前期用標準飼料（sdb No. 1)添加前述抗體〇· 1 %與乳酸菌1 〇6個/g投與。柔嫩艾美球 蟲ET株之卵囊感染為1000個/隻，每組按比例各設定1〇隻。 86120 -17- 200410712 又，感染後之觀察期間為2週，檢查項目，以體重增加量及 飼料要求率為主要檢查項目，其他實施O.P.G.及盲腸病變觀 察。其結果，藉由體重增加量，於抗體與乳酸菌之投與組 其效果被確認，藉由飼料要求率其效果亦被確認。 综上，針對難球蟲病之攻擊，藉由將抗雞球蟲病抗體與 乳酸菌之嗜酸乳桿菌投與於飼料中，發現有包含體重增加 量及飼料要求率之改善。综合判定，以得到之各觀察項目 之數值為基礎判定被檢物之效果，發現極為有效之效果。 表2 非感染組 柔嫩艾美球蟲感染組 非添加組 添加於飼料 對照組 對照組 抗體0.1% 抗體+乳酸菌 平均體重增加量(g) 731 578 622 666 相對體重增加率(％) 100 79 85 91 平均飼料攝取量(g) 879 885 910 845 飼料要求率 1.20 1.53 1.46 1.27 生存率(％) 100 100 100 100 OPG(xl04)第7 曰 0.0 9.7 5.1 2.2 卵囊值 0 40 20 5 盲腸病變值 0 20 10 5 ACI值 200 119 155 181 稍有效 極有效 〔實施例4〕 使用將實施例1中得到之抗難球蟲病抗體與由肉毒杆菌免 86120 -18- 200410712 疫過之雞蛋得到之抗肉毒杆菌抗體混合之飼料，研究其對 雞球蟲病（柔嫩艾美球蟲）與肉毒杆菌之混合感染實驗雞 (Avian Disease，24 : 324-333，1980)之效果。 抗肉毒杆菌抗體，係將肉毒杆菌ATCC3624株於巯基乙醇 酸鋼培基培養，將含此1 x 101G個/ml之菌液與福氏不完全佐 劑乳化，給12週齡之雌難左右胸肌各注射1 ml，進行第一 次免疫。同樣，6週後，同樣進行第二次免疫。第二次免疫 2週後，此雞之血液中之抗肉毒杆菌抗體藉由菌體凝集法測 定之抗體效價為300-1200倍。此難產的卵之抗體效價為300-1200倍。此抗體效價持續4個月。收集此卵，藉由噴霧乾燥 製成全卵粉末之雞卵抗體。此粉末之抗體效價為600倍。 供試驗動物採用離難專用種強雞（chunky)，向離雞育肥前 期用標準飼料（SDB No. 1)添加抗雞球蟲病抗體0.1 %與抗肉 毒杆菌抗體0.1 %，投與。柔嫩艾美球蟲ET株之卵囊感染為 1000個/隻，肉毒杆菌ATCC3624株為107個/隻，每組按比例 各設定10隻。又，感染後之觀察期間為2週，檢查項目，以 體重增加量及飼料要求率為主要檢查項目，其他實施O.P.G. 及盲腸病變觀察。其結果，藉由體重增加量，於抗雞球蟲 抗體與抗肉毒杆菌抗體之混合投與組其效果被確認，藉由 飼料要求率其效果亦被確認。 综上，針對難球蟲病與肉毒杆菌之混合攻擊，藉由將抗 雞球蟲病抗體0.1 %與抗肉毒杆菌抗體0.1 %與飼料合併使用 投與，發現有包含體重增加量及飼料要求率之改善。综合 判定，以得到之各觀察項目之數值為基礎判定被檢物之效 86120 -19- 200410712 果，發現極為有效之效果。 表3 非感染組 柔嫩艾美球蟲+肉毒杆菌感染組 非添加組 添加於飼料 對照組 對照組 難球蟲 病抗體 0.1% 雞球蟲病抗體 0.1%+肉毒杆菌 抗體0.1% 平均體重增加量(g) 731 563 620 629 相對體重增加率(％) 100 77 85 86 平均飼料攝取量(g) 879 880 905 865 飼料要求率 1,20 1.56 1.46 1.38 生存率(％) 100 100 100 100 OPG(xl04)第 7 曰 0.0 12.0 6.3 0.1 卵囊值 0 40 20 0 盲腸病變值 0 24 12 3 ACM 200 113 153 183 稍有效 極有效 〔實施例5〕 將於實施例1得到之抗雞球蟲病抗體添加至飼料中，研究 其對雞球蟲病實驗感染難（堆型艾美球蟲）(Avian Disease，3 1: 112-119，1987)之效果。供試驗動物採用離難專用種強雞 (chunky)，抗體以0.1%、1%及10%添加至離難育肥前期用 標準飼料（SDB No. 1)後投與。堆型艾美球蟲EA株之卵囊感 染為1000個/隻，每組按比例各設定10隻。又，感染後之觀 86120 -20- 200410712 察期間為2週，檢查項目，以體重增加量及飼料要求率為主 要檢查項目，其他實施O.P.G.及小腸病變觀察。其結果，於 〇.1 %投與組其效果亦被確認。 综上，針對雞球蟲病之攻擊，藉由將抗難球蟲病抗體以 0.1%以上投與於飼料中，發現體重增加量之改善。 表4 非感染組 堆型艾美球蟲感染組 非添加組 於飼料c 卜添加之抗體之比例 0% 0% 0.1% 1% 10% 平均體重增加量(g) 731 580 630 650 680 相對體重增加率(％) 100 79 86 89 93 平均飼料攝取量(g) 879 826 869 845 820 飼料要求率 1.20 1.4 1.38 1.30 1.22 生存率(％) 100 100 100 100 100 OPG(xl04)第 7 曰 0.0 5.0 4.5 4.0 0.3 卵囊值 0 40 40 40 5 小腸病變值a) 0 20 5 5 0 ACM 200 119 141 144 188 稍有效 稍有效 極有效 a):小腸病變值，依據0 :未發現病變；+1 :十二指腸可見 散在有含有卵囊之白色壞死病竈；+2:白色壞死病竈數增 加，且病竈延長至小腸上部；+3 :病竈增加，融合。小腸 壁肥厚，内容物為水樣；+4 :因多數病竈互相融合，十二 指腸及小腸上部呈現灰色。壁高度肥厚，内部含有奶油狀 86120 -21 - 200410712 黏液；之判定標準，求出1隻之平均值，換算成1〇隻的值示 於表4。 只訑例2 3及5，將抗雞球蟲病抗體、或該抗體與乳酸 菌此口於飼料，對雞連續供給時，發現其使實驗感染雞球 蟲病者發病減輕，出現體重增加之效果。又，對感染雞球 蟲病之雞，將柷雞球蟲病抗體與乳酸菌混合於飼料，供給 <時’其症狀明顯改善，發現包括體重增加量及飼料要求 率 < 改善。又，合併使用抗肉毒杆菌抗體，預防難球蟲病 之發病，發現包括體重增加量及飼料要求率之改善。 本發明說明中引用之全部刊物，特許及特許申請，均保 持原樣作為參考放入本發明說明中。 屋業上利用之可能性 本發明中包含抗雞球蟲病抗體與乳酸菌或抗肉毒杆菌抗 眼之抗雞球蟲病組合物，因對雞球蟲病特異性起作用，替 代抗雞球蟲劑或疫苗，對難球蟲病發揮出極為有效之預防 效果之同時，對雞球蟲病之症狀減輕及體重增加極為有效 地起作用。 86120 22-

Claims (1)

1. 200410712 拾、申請專利範園： 1 · 一種口服用抗雞球蟲病組合物，其包含一抗體，該抗體係 得自以具參與雞球蟲病之堆型艾美球蟲、柔嫩艾美球蟲及 巨型艾美球蟲之孢子體與裂殖子之共同免疫原性之外膜蛋 白質抗原或其免疫原性片段免疫之雞蛋。 2·如申請專利範圍第丨項之口服用抗雞球蟲病組合物，其另 含有乳酸菌。 3·如申請專利範圍第1項之口服用抗雞球蟲病組合物，其另 含有以肉毒杆菌免疫過之雞蛋得到之抗體。 4·如申請專利範圍第丨項之口服用抗雞球蟲病組合物，其用 於雞球蟲病之預防或治療者。 〃 5. —種鳥類用飼料，其係、包含如申請專利範圍第p 物者。 β 口 86120 200410712 柒、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：第（無）圖。 (二) 本代表圖之元件代表符號簡單說明： (無元件代表符號） 捌、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： 86120