TW200404002A - Treatment method achieved by using the lymphocytes derived from HLA matching donor-originating activated lymphocytes, formula having the lymphocytes as a main constituent thereof; method and preparation kit for manufacturing the formula - Google Patents

Description

200404002 玫、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於用於預防與治療腫瘤、傳染性疾病及自體免 疫疾病之源自HLA配對捐者的活化淋巴球、使用淋巴球的治療 方法、含有淋巴球做為其主要成分的調配物、製造該調配物口的 方法及用於製備該調配物的製備套組，本發明之目的係使 腫瘤（諸如癌症）及傳染性疾病之治療及預防更為有效。 【先前技術】 近幾年來，有很大的關注係集中在以淋巴球作為重要 的生物防禦（biophylaxic)方法以支持免疫系統。根據其 單株抗體的反應性，在達成細胞介導的免疫反應中扮演了 尤其重要角色的τ-淋巴球係如下分類。例如，對於抗—CD3 抗體（CD 表示「分化群（cluster 〇f differentiati⑽） 」）有明顯反應性的T-淋巴球被分類為CD3陽性細胞。至 今’定量及定性之重要研究工作係放在Τ—淋巴球上，特別 是關於顯現出的抗原及其功能之間的關係。 除此之外，Sekine先生（本發明的發明人之一）於之 雨在日本未審查的專利公開案第Η 03-80076號中報導淋巴 球可以藉由使用固相（s〇l id-phase )抗-CD3抗體（以淋 巴球覆盍）及白血球介素2增殖，也報導了如此增殖的自 肢淋巴球可達到明顯的抗腫瘤效果。許多其他研究者也報 導可以藉由使用抗-CD3抗體或白血球介素2來增殖源自周 邊血或其相似物的淋巴球，得到的自體淋巴球顯示有抗腫 瘤活性。 200404002 再者，當白血病發生在經骨髄移植的病患時，捐者白 ㈣料㈣稱為「DLT」）及捐者淋巴球注入（此後 簡稱為「DLI」）係兩種會採用之已完善建立的治療方法， 八係轭以相田大里之骨髓捐者的淋巴球。而且，微嵌合性 的存在已在近年來被證實，能使HLA配對的母親及小孩之 間顯現有免疫耐受性’結果，各種形式的研究展開了，利 用微嵌合性的優點以迅速引起病患症狀的減輕，使得更安 全的^官移植成為可能。廣為人知的是，當兄弟姊妹之間 有微嵌合性時，兄弟姚姑：鬥，。k】· 禾邶妹間（slblln^t〇-Sibling)腎臟 移植的成功率非常高。 然而，上述之T-淋⑽及錢合性誘導的研究仍舊處 於貫驗階段，目前尚未有針對實現該研究之實施應用的應 用«被發展出來，此外，僅僅藉由將收得的自 巴球=殖，並不能永遠確保有效的抗腫瘤效果，尤其是癌 症。貝鞑DLT治療是另一個必須提到的困難。 根據㈣白血球所屬的白血球族群，白血球被 ::不：的基因座（locl)」，如叫人類白血球抗 原）。在這些基因座中，有基關DQA Dp，還有四個基 因座A、B、C及DR’是器官移植時需要 ： 子另這些基因座各由兩個基因複本所組成，—個源自重= ，另一個源自母親（對偶基因），每-個基因座係古产， 型性的（polymorphic)。因為這個原因，^又夕 移植（諸如周邊血肝細胞移植）及DLT，至少要:血包1 者及病患# HLA基因座必彡|㈣_ 對扣 一致率是重要的因子。 個HLA分子的 200404002 因為在這些情況下，要使病患及捐者的白血球HLA達 到完全的配對幾乎是不可能的，所以實際上只要主要的 HLA有相配，就進行骨髓移植或輸血。然而，HLA配對錯誤 可能會對接受骨髓移植或DLT治療的病患造成致命的副作 用’例如致命的輸血後移植物抗宿主疾病（此後簡單稱為 「PT-GVHD」）。 除此之外’有許多即使他們有HLA配對捐者的病患， 仍無法進行骨髓移植或輸血，這是因為處置前的器官病顯 現及傳染性疾病。儘管已試圖用源自捐者之淋巴球來治療 不能做骨髓移植之癌症病患的腫瘤，但是那些方法都還未 被證明為很有效的。 如上所述，當不能做骨髓移植時，使用自體移植（源 自病患）之淋巴球或源自捐者之淋巴球的抗腫瘤效果並不 理想’且其抗病毒效果及其對自體免疫疾病的影響尚未明 瞭。還有另外的問題是，大量製備淋巴球會對淋巴球捐者 造成很大的負擔。再者，必須與造血幹細胞移植併用的 DLI ’在作為治療選擇時，有很大的限制，因為此丨不能用 在無法促進造血幹細胞移植的病患，還有因為肖DLI幹细 胞移植個需要很高的HL卜錄，㈣找到配對損者的 希望甚微。 發明内容】 因此，本發明之發明人宕成的 乃人兀成的本發明，係專注研究努力 於開發可達到高抗腫瘤效吴轱 文果^病毋效果及抗自體免疫疾病 200404002 效果之源自捐者淋巴球，以及開發製備此等淋巴球的方法。 本發明係關於源自HLA配對捐者活化的淋巴球，其具 有尚抗腫瘤效果及抗病毒效果，亦提供高度有效性的自體 免疫疾病治療，其取得係藉由收# HLA配對捐者周邊血中 或與病患有明顯微嵌合性之源自HLA配對捐者周邊血中的 細胞’然後以（例如）白血球介素2及抗—⑽抗體或其相 似物刺激及增殖細胞，製造此等活化之淋巴球的方法，藉 由施以活化的淋巴球來治療具有腫瘤、病毒感染或自體免 疫疾病之HL“己對病患的方法，含有淋巴球為其主要成分 的調配物，製造調配物的方法，以及用於製造調配 備套組。 本發明之細節將於下面描述，總體來說，本發明的特 徵在於··源自HLA配對捐者活化之淋巴球的製備，係藉由 收集HLA配對捐者或具有微傲合性之HU配對捐者周邊血 的細胞，並刺激及增殖如此收集之細胞。 收集的細胞可以（例如）用白血球介素2及抗-cD3抗 體的多株活化作用來刺激及增殖。或者，抗原專一之活化 淋巴球的獲得，可以藉由用適當的抗原或其相似物誘生出 抗原專一的τ-淋巴球或其相似物，然後用CD3抗體、⑶26 抗體及細胞活素（諸如白血球介素2 )其一，《用其組合 、。除此之外，在增殖及活化了收集之源自hla配對捐者的 林巴球之* ’具抗原專一的活化淋巴球可以經由篩選來選

取，或者，抗原專-的活化淋巴球可以用適當的抗原來製 備源自HLA配對捐者的淋巴球。 X

ZUU4U4UUZ 或者’具有抗原專一的、、壬1 勺活化淋巴球可以藉篩選上述活 化的淋巴球來選取，或去， . 一 氣傷具有抗原專一的活化淋巴 球’可用抗原刺激來增殖及 舌化淋巴球。在此情況下，抗 原專一的淋巴球可以你Γ Γϊ β l * CD8 %性細胞或CD4陽性細胞誘生 出/除了精製的（refined)抗原，來自癌症細胞或病毒的 卒取物、癌細胞本身或病毒本身、或任何對癌細胞或病毒 具交叉反應性的抗原性铷暂 恭r生物貝都可以用於此目的。 在本發明的一項特別^ 貝将別的樣恶中，源自HLA配對捐者活 化之淋巴球係用於預防咬、Λ 了只丨万：¾心療腫瘤、傳染性疾病及自體免 疫疾病。 、除此之夕卜，根據本發明，含有源自HLA配對捐者活化 之淋巴球的㈤配物係用於預防或治療腫瘤、各種傳染性疾 病及自體免疫疾病。 再者本^明提供一種治療的方法，其達成係藉由使 用源自HLA配對捐者活化之淋巴球或含有源自動配對捐 者活化之淋巴球的調配物，可用於預防或治療腫瘤、傳染 性疾病及自體免疫疾病。 本發明進一步提供一種用於製備活化淋巴球的製備套 組，或一種藉由組合源自HLA配對捐者的淋巴球與至少含 有可活化淋巴球的白血球介素2而達成的調配物。除此之 二’本發明提供—種用於製備活化淋巴球的製備套組，或 藉由組合源自HLA配對捐者的淋巴球與至少含有可活化淋 巴球的抗-CD3抗體而達成的調配物。 本發明亦提供一種製造預防及治療腫瘤、各種傳染性 10 200404002 疾病及自體免疫疾病之調配物的方法，其包括··從含有源 自HLA配對捐者淋巴球的周邊血分離出單核細胞的步驟、 曰殖及活化分離之單核細胞中的源自肌A配對捐者淋巴球 的步驟，以及萃取該經增殖及活化的淋巴球，則含有該淋 巴球為其主要成分的調配物就製備完成。 本發明之特定細節將依序解釋如後。 (收集之周邊血的種類） 根據本發明，收集的周邊血必須是源自HLA配對捐者 的周邊血及，更理想的為顯示有微嵌合性之HU配對捐者 的周邊血。雖然較佳的收集之周邊血是與HLA病患具有完 美HLA配對的，以確保無GVHD-誘發的副作用產生，但是 也可以收集具有部份HLA配對的周邊血來取代。 例如，在A、B、C及DR 4個基因座中，具有丄、2 、3或4個基因座與病患相對應之基因座配對之源自捐者 的周邊血可以被使用。或者，在8個HLA基因（顯現在四 個基因座）中至少有兩個HLA基因與病患相配的捐者周邊 血可以被使用。然而，在這個例子中，較理想的是有四個 HLA基因達成配對。 此外’使用顯示微嵌合性之源自捐者的源自Hla配對 捐活化之、淋巴球是有效的。雖然微嵌合性在生物醫學領 域是已被完善建立的概念，下面提供了其概略的解釋。「 微欲合性（micro-chimerism)」（源自另一個個體的細胞 在身體中以大約1 /1 〇 〇 0的比例存在的狀況）在懷孕時發生 ，媽媽及胎兒經由胎盤互相交換少量的細胞。 11 200404002 事實上，微巍合性可在懷孕婦女中被常態須測到。除 此之外，即使在分娩之後，非常多的母親維持了一段時間 的微嵌合性，所以，可以維持對小孩HLA (源自父親）i 免疫对受性。由於這個現象，母親及其小孩形成了免疫耐 受性三角。 因此，本發明的發明人由其研究中證實，源自hla配 對捐者（具有微嵌合性之兄弟姊妹）《活化的淋巴球，對 於預防及治療腫瘤、傳染性疾病及自體免疫疾病非常有效 。除此之外也顯示，即使HLA基因沒有配對，只要其顯露 微嵌合性，周邊血可以被使用得更加安全。 這意味著，只要有微嵌合性，源自沒有血緣關係之陌 生人的周邊血可以和源自父母親、祖母、祖父、兄弟姊妹 叔叔阿姨子女或孫子女的周邊血同樣有效的被使用 。應注意的是，小孩（基因上遺傳了父母親之hla )的每 一半HLA組成與父母親之一的HLA相符合，以及，其肚八 有25%的機會與其兄弟姊妹達到配對。與沒有血緣的陌生 人達到此HLA配對的機會是數百〜數萬分之一，基於這個原 因’源自陌生人的淋巴球在正常情況下不能使用。然而， 如果捐者具有微嵌合性，則該捐者的淋巴球可以作為調配 物的原料。 再者，較佳的係選擇一個與受捐者具有排斥傾向（ works along the rejective direction)之 Hu 組合的捐 者。例如，在具有排斥傾向的HLA組合中，捐者的A基因 座可以包含A2及A24血清，而接收活化淋巴球之病患的a 12 200404002 二：° ι3 A2及A2血清。因為病患的淋巴球能夠減 Z t具有似血清的淋巴球，所以可以避免嚴重的副 作用（諸如GVHD)。具有排斥傾向之HU組合可以是B、c 及DR基因座，A基因座也可以。 (收集淋巴球） 根據本發明之源自捐者之活化的淋巴球可以從捐者的 周邊血製備。雖隸捐者手臂靜脈收集A报容易，但只要 血液含有淋巴,求，關於收集區並沒有特定的限制。或者， 可以使用從膪帶血收集的淋巴球。只f要收集少量的周邊 血：介於0.001毫升及500毫升的範圍之間，實際應用時 ，較理想的是收集的周邊血的量在大約1〇毫升〜丨〇〇毫 的範圍之間。 毛开 (淋巴球的調整） 肝素或檸檬酸可以加到收集的周邊血中以預防凝結。 根據本發明源自捐者之活化的淋巴球可以藉由使用收集的 周邊血作為基礎原料而取得，從周邊血製備淋巴球，然後 培養以增殖及活化淋巴球。除此之外，根據本發明之淋巴 球可以從捐者骨髓經由灌洗術（pheres丨s )或其相似者製 備。應注意的是，在本發明的說明中，術語「培養」收集 的淋巴球意指人工增殖（培養）組織細胞，其達成係藉由 將細胞組織小樣本放到含有使細胞存活之必要養分的培養 溶液中’及術語「增殖」意指活體外組織細胞人工的數量 13 200404002 立曰加，其係經由上述培養來達成。除此之外，術語「活化 或活化劑到培養溶液中來刺激細胞，1明確的是，控制實 施以達成細胞内抗腫瘤、抗病毒及抗自體免疫疾病的特性。 (源自周邊血之淋巴球的增殖及活化） 源自收集的周邊血之活化的淋巴球可以經由技藝中已 知的任何淋巴球培養方法增殖。關於可以 並沒有特定的限制，該培養可以經由，m= 求h素2或抗-CD3抗體之一或組合使用他們來達成，如 Y本未審查之專利公開第Η 3-80076號所揭示。較理想的 :f林巴球養在自血球介素2及抗-GD3抗體都存在的環 士兄中，以達到較佳的增殖效果。 除了經由多株增殖/活化來增殖及活化淋巴球（藉由如 上所述之使用白血球介素2及抗一CD3抗體），具有抗原專 :之活化的淋巴球可以藉由先用前述之適當的抗原或其相 似物何生出抗原專一 T-淋巴球或其相似物來取得，然後單 獨使用CD3抗體、⑽抗體、各種分裂素及細胞活：（： 士白血球；丨素2)之一或組合使用之。 = 或者，具有抗原專一之活化的淋巴球可以藉由篩選具 體貫例中得到的活化的淋巴球來選擇，具有抗原專—之活 化的淋巴球可以利用適當的抗原得到，或具有抗原專—之 活化的淋巴球可以經抗原刺激以增殖及活化該淋巴球來製 備在乂些狀況下，抗原專一的淋巴球可以從CD8陽性細 14 200404002 胞或CD4陽性細胞衍生出。 =製的抗原，來自癌細胞或病毒、癌細、 的萃取物都可以被用之抗原性物質 用於此方法巾，只要1^2 相㈣物f均可以 此之外，用料* 化淋巴球的功能。除 口，且盆/ 4的白血球介素2是市面上可獲得的產 〇σ 解’以在培養基溶液中達到1 ~ 2000U/客 升的濃度。 MUUU/毛 白血球介素2可以被溶解及使用於廣 的任何培養基溶液中，諸如水、生理鹽溶液 構酸緩衝溶液、義_164〇、麵、刪及㈣个一曰 白增素2溶解了，該溶液可冷藏儲存 ： 降低。應注意的是，關於用於此目的之培養基溶液的J 並沒有特定的限制’只要其適合淋巴球的培養，舉例來說 ’可以使用源自有機體的培養溶液，諸如血清或添加了胺 基酸、維他命、核酸鹼基及其相似物到平衡鹽㈤时㈣ sal lne )中的合成培養基。理想的培養基溶液例子包括 RPMI-1 640、AIM-V、MEM 及 IMDM，在這之中，_卜 尤佳。 雖然使用3有正常人類血清的培養基以得到較佳的增 殖是較理想的Μ旦是也可以使用市面上可獲得的培養基產 品。、除此之外’除了人類血清：可以使用源自牛胎的血清 或者可以使用無血清培養基。該培養可以採用任何的 一般操作培養方法，例如，在Cl培養箱中。在此例子中 15 〜10%範圍内 40 C範圍内 ’更佳是在3 ’更理想是在 ’較理想岐維持⑶2濃度在 〜7%範圍内，溫度維持在3〇 35〜38QC範圍内。 關於培養的天數雖然 期必須夠長，使得來自 ，疋勺限制，但前提是培邊 細胞。所以，較= 抗體的刺激訊息 尤其理想的是，當培養 …2〜2〇天， 養效果時，可以^ 纟3〜14天的時間達到較佳只 伴^ μ 有I疋的刺激訊息交流到達細胞。為了 4 保較好㈣養效果，更㈣是，可 ^了与 顯微觀察、如所兩的、目丨曰 在坧養期進仃細胞白七 液。 斤而的測置細胞數目及如所需的補充培養淳 ^，心的疋，在培養開始之後，剛開始i〜2天並 硯察到細胞數目顯著的增加，細胞增殖是在約第Ϊ: =察：’ 一旦細胞開始真的增殖，培養鳩色: 5 '成 '色。除此之外，培養溶液必須以大約10% 〇相對於補充之前培養基溶液的量）的比例補充。丰 者^養溶液必須每i〜7天補充—次，更佳的是每 天_人，以預防任何培養溶液的降解，及維持白血球介3 2的活性程度。 進而，在有抗-CD3抗體存在下的環境中培養完成之後 可以在沒有任何抗—CD3抗體的刺激下繼續培養程序。也 就疋°兒’可以藉由抗-CD3抗體不在固相的器具（例如培養 瓶、旋轉舰、培養的氣體可通透袋）繼續培養，直到施用 >林巴球，。 16 200404002 當如上所述持續培養淋巴球，培養必須在與起始 (在抗-CD3抗體的影響下）設定相同的狀況下進行二： 第二培養沒有任何抗-⑵抗體的刺激。更佳是調整人類^ 清滚度，或如需要的使用無血清培養基，以達到較好的摔 作性、較佳的成本支出及較佳的安全性。 木 培養的開始係將含有白血球介素2與腾帶血或懸浮其 中之單核細胞的培養基溶液放人—抗_咖抗體在固相的^ 養容器中。在此狀況下，如需要的藉由添加各種細胞活‘ 或分裂素到培養溶液中，淋巴球增殖及活化的效果會進一 步的改善。應注意的是，雖然用來刺激淋巴球細胞的抗― CD3抗體可以利用精製的CD3分子在動物或細胞内製備， 市面上可獲得之具有絕佳穩定性及價格的〇κτ_ 3抗體（製 造商：Orthopharmaceutical)亦可以使用。 然而，關於用來刺激淋巴球的抗體種類並沒有限制， 只要該抗體可以增進淋巴球的增殖及活化，例如，可以用 抗-CD20抗體來取代抗-CD3抗體。除此之外，較理想的是 使用固相抗-CD3抗體，以達到較佳的淋巴球增殖效果及較 好的操作性。抗體可以固相存在於由玻璃、聚氨酯（ polyurethane)、聚烯烴（polyolefine)或聚苯乙烯所構 成之培養容器中。市售之容易取得的由塑膠或其相似物所 構成的滅菌細胞培養瓶可用於這些目的，在這情況下，瓶 子的大小可以適當的選擇。 除此之外，藉由添加抗-CD3抗體稀釋液到用於處理抗 體使到固相之目的的容器中，抗體可以被引誘到固相，然 17 200404002 後靜置容器2〜24小時，溫度設定在4〜37°C。較佳的 ，當處理抗-CD3抗體使到固相，將抗-CD3抗體以生理緩衝 溶液（諸如已滅菌的Dulbecco氏填酸緩衝溶液）稀釋到 〇· 1〜30微克/毫升的濃度。達到固相之後，抗-CD3抗體 可以儲存在冷房或冰箱（4 °C )中直到使用，在此狀況下 ’液體可以在使用時移除’抗-C D 3抗體於室溫以生理緩衝 溶液（諸如Dulbecco氏磷酸緩衝溶液）沖洗後就可以使用 了0 如此得到之源自捐者周邊血的活化淋巴球可以製作或 製備成調配物，其可用來廣範圍的應用在生物防禦上，預 防或治療腫瘤及各種傳染性疾病。除此之外，源自捐者周 邊血之活化的淋巴球（其含有CD4陽性細胞及⑽陽性細 胞）被預期可提供較佳的抗腫瘤效果。 再者，若有任何副作用（諸如GVHD)的風險，製備之 源自周邊血之活化的淋巴球可以用抗CD4抗體或其相㈣ 處理以製備細胞族群（卿ulati〇n)(其主要成分為⑶ 陽性細胞）用於治療。另—方面’當副作用（諸如瞻）

的風險低時，或當雲亚於社M 而要較佳的抗腫瘤效果時，含有CD8聞 性細胞之源自周邊血之活化淋巴球可以直接用於治療。後 者，：化的淋巴球可以細胞族群（CD8陽性細胞含量調整 到適當的量）用於治療。 (含有源自周邊血之活化淋 ^闽、真i 衣為其主要成分的調配物）

從周邊血取得之源自H 配對知者活化的淋巴球（其 18 200404002 γ =主要成分增殖的周邊血細胞）可以製備成調配物，其 係糟由懸浮於（例如）♦有人類白蛋白之生理鹽溶液中作 為主入命液，如此製備之調配物可以用於預防及治療腫瘤 及f種傳染性疾病。應注意的是，術胃「調配物」在此係 :函蓋所有具有生物防禦功能的物質，#主要成分為活化的 #巴球m周配物可以有各種形^，只要其含有從捐者 周邊血取得之源自HLA配對捐者活化之淋巴球。 例如，可以將源自周邊血之HLA配對的活化淋巴球懸 孚於適田的/合液中以得到調配物，雖然如上所述以懸浮於 含有人類白蛋白的生理鹽溶液（其係作為注入液）中的形 式來提供調配物是較佳的，但是本發明並非限於此實例。 除此之外，含有源自周邊血之活化淋巴球為其主要成分的 凋配物，可以藉由在試管内直接增殖周邊血來製備，或者 可以先將單核細胞從周邊血分離出來，然後在試管增殖 4刀離的單核細胞，來製備含有源自周邊血之活化淋巴球 為其主要成分的調配物。 再者，許多基因都可以被放入源自周邊血之活化的淋 巴球中，該淋巴球係包含在根據本發明之調配物裡，或， 可以刪除或修飾任何原本含在活化之淋巴球中的基因。源 自周邊血之活化淋巴球（去除了可人類免疫缺陷病毒感染 之辅因子）可以用於預防或治療由病毒感染而造成的人類 免疫缺陷疾病，或用於預防或治療發生在由人類免疫缺陷 病毒所造成之免疫缺陷情況下的各種感染。 含有源自HLA配對捐者活化之淋巴球（如上所述收集 19 200404002 自周邊血）為其主要成分的調配物可以用於廣泛範圍的臨 木μ _以預防及治療癌症病患、有免疫缺陷的病患、具 有自體免疫疾病的病患、需要臍帶血注入之疾病（諸如過 敏病患）的病患、，以及有各種感染的病患。根據本發明之 周-勿可以用於治療腫瘤以及預防腫瘤再發，也可以用於 治療白血病及各種實體（solid)腫瘤。 此外，如上所述使用該調配物來預防或治療腫瘤，也 可、文。病患的Q0L (生活品質）。即，如果（例如） 一，癌症藥物造成了持續的腎臟或肝失調，或病患因手術 而留有永久的疤痕，甚至在其疾病已經治癒之後，此等治 療的副作用或其相似狀況常常破壞了病患的生活品質。然 而’使用根據本發明之調配物來治療病患，其Q〇L可以大 大的改善。 S有本發明源自HLA配對捐者活化之淋巴球作為其主 要成分的調配物，對於治療各種癌症及腫瘤、免疫缺陷失 調及各種感染係有效的，如後詳述。更特定來說，其對於 治療肺癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、腎臟癌、胰臟癌、膽 囊癌、卵巢癌、子宮癌、睪丸癌、前列腺癌、白血病、肉 瘤及腦瘤有效，對於治療天生的及後天的免疫缺陷也有效。 先天免疫缺陷疾病包括了嚴重聯合免疫缺陷、Wisc〇tt

Aldrich 徵候群、腺苷酸脫胺酶（Adenosine deaminase) 缺陷、嘌呤核替碟酸化酶缺陷、高I gM徵候群及聯合的免 疫缺陷，根據本發明之調配物還可以用於治療其他免疫缺 陷。除此之外’典型的後天免疫缺陷例子包括了因使用抗 20 200404002 癌症藥物、免疫抑壓劑或類固醇所造成的續發性（ secondary)免疫缺陷，以及由人類免疫缺陷病毒感染所造 成的AIDS ’本發明也可以用於治療除了這些以外的其他免 疫缺陷。 除此之外，可以使用根據本發明調配物治療之典型自 體免疫疾病的例子包括全身性紅斑狼瘡、慢性關節風濕、 乾燥症（Sj0gren’s syndrome)、重症肌無力、惡性貧血 及Hashimoto氏疾病，本發明也可以用於治療其他自體免 疫疾病。根據本發明之調配物可以作為治療對特定病毒或 其相似物沒有免疫能力或低免疫能力的病患的預防或醫療 上方法，以及治療免疫能力差的病患。可以用根據本發明 調配物治療的過敏疾病包括支氣管氣喘、西洋杉花粉過敏 及蓴麻疹，根據本發明的調配物也可以用於治療其他過敏 症，也可以用於減輕各種過敏症的症狀。 可以使用根據本發明調配物治療的傳染性疾病包括病 毒感染、微生物感染（microbisms)、真菌感染、原生動 物感染、衣原體感染及黴漿菌感染。這當中，病毒感染包 括巨大細胞病毒（cytomegalovirus )感染及Epstein_

Barr病毒感染。然而，本發明的應用並非限於治療這些病 毒感染，本發明的調配物可以大範圍的應用於預防及治療 各種其他病毒感染諸如疱疹，包括單純疱疹病毒及帶狀疱 療病毒（Varicella-zoster Virus)、各種反轉錄病毒包 括人類白血病病毒及人類免疫缺陷病毒、腺病毒及克沙奇 病毒。 21 200404002 可以使用根據本發明的調配物而治療的微生物感毕（ micr〇blsms)包括由綠膿桿菌（pseudom〇nas aerugin〇sa )、及抗甲氧苯青黴素（methiclllin)黃色葡萄球菌屬所造 成的感染。然巾’根據本發明的調配物可以用於治療任何 在人類會顯示致病性之細菌所造成的傳染性疾病。尤其， 根據本發明的調配物可以有效的用於預防及治療由不知名 病原體、$易被鑑認的病原體所造成的傳染性疾病，或用 於預防及治療此等感染所造成的疾病。 先前所述之微嵌合性可用PCR (聚合酶連鎖反應）分 析容易咖。例如，當測定HLA-A基因座的A_24微嵌合 ㈣微嵌合性可以藉由先用hu_a基因座引 :放大該反應、使用A—24引子來進行巢式⑽、然後用適 §的偵測糸統偵測任何微嵌合性。 J用於製備含有源自周邊血之活化淋巴球為其主要成分之 调配物的製備套組） 雖然本發明之源自HLA配對捐者活化之淋巴球成分可 =單-試劑製備物’它們也可以在套組中製備，其係 二、，併3有白血球介素2培養溶液及固相抗-CD3抗體在 瓶中纟後者’本發明之該調配物可以使用套組 易的製備。 應注意的H於製料調配物的培養溶液可以事先 =里於塗覆有固相抗—CD3抗體的分離瓶中，然後這些瓶 子可以儲存在冷凌櫃中。於套組（其如上所述結合了至少 22 200404002 兩種成分作為多重試劑）製備活化的淋巴球，當對於活化 的淋巴球需求增加時，可以使用該套組以更容易的製備根 據本發明的調配物。可用於本發明上述所有方式之從周邊 血製備來的源自HLA配對捐者活化之淋巴球，或含有此等 活化淋巴球的調配物，可以儲存於冷凍櫃中備用，一旦需 要時’可用於預防或治療各種疾病。 (劑量） 雖然調配物（含有從周邊血製備來的HU配對活化淋 巴球作為其主要成分）之劑量需依照特定病患的狀態或特 定治療目的做適當的調整，正常情況下的標準投藥劑量介 於1 X 10 2到1 X 1 〇 9個淋巴球（相對於i公斤體重）。 除此之外，較佳係每公斤施用丨x 1〇3個淋巴球或更多以 進步增進效果，但是一旦劑量超過每公斤5 X 1〇8個淋 巴球，效果並沒有再增加。所以，最適劑量範圍係每公斤 1 x 1〇3〜5 X 1〇8個淋巴球。 C投藥形式及方法） 、上述調配物必須以液體形式投藥，即，以注射或以點 滴。更特定言4 ’較佳係以注射或以點滴（其含有分散在 生理鹽溶液中的細胞）％用如上所述而製備的細胞，其添 ::人類金血清白蛋白至".01〜5%的濃度。該調配物； 以靜脈内點滴來投藥，或靜脈内注射、動脈注射或局部注 射。雖然施用的溶液量必須根據投藥方法、投藥部位戈其 23 200404002 相仏（去' 士闲击女 爷调整，但正常狀況下，施用的溶液量較佳係在1〜 5〇1 *升範圍W，同時，需確定在施用的溶液内含有前述 戶^而的淋巴球細胞數。除此之外，此投藥的頻率係每天一 母月 次’且淋巴球必須施用至少多於一次。 【實施方式】 (具體實例1 ) Νο· 1 · (血液收集及淋巴球分離） 以主射裔從靜脈收集（藉由添加肝素）捐者（其與急 性淋巴白血病病患完全HLA配對）20毫升的周邊血。然後 維持無菌狀態，在乾淨的工作檯將注射針從注射器鬆脫， 亚將注射針取代為19 G X 11/2，，的注射針。將15毫升的 清洗培養基（RPMI 1 640 + 6 ) ( 500毫升，製造商：Nikken 生物醫學研究中心，GM1106)倒入兩個50毫升的離心管中 (製造商：Iwaki Glass Co· Ltd·，234卜050 )，以培養 /谷液稀釋（係數3 )收集的血液以增加溶液的量之後，將 全部混合液慢慢倒入該兩個離心管中，使恰等量的混合液 倒入該兩管中。 完全盖上離心管的蓋子之後，倒轉及搖動二或三次。 用10¾升Mi吸管將3毫升Lymph〇cepar 1 ( 1 〇〇毫升， 製 & 商· Immunobiological Bio-research Center Co· Ltd· ’ 2301 0 )放入六個15毫升的離心管中，然後，將1〇 宅升、、二養基稀釋的血液慢慢在Lymph〇cepar 1分層，避 免擾亂各離心管表面。然後在離心機以1 8〇〇 rpm離心離心 官1 5分鐘’並維持離心溫度為2〇〇c。 24 200404002 當離心完成，以吸引器將各離心管的内容物吸到淋巴 球層上方大約1公分，不要吸除淋巴球細胞，並維持無菌 狀恶。然後’使用5毫升微量吸管沒取（drawn of f )淋巴 球細胞層’但是不吸凝血層，再將如此萃取的淋巴球細胞 層收集到事先已放入25毫升清洗培養基（RPmi 1 640 + 6 ) 的50毫升離心管中。在移出離心管並輕輕混合（藉由蓋 上蓋子上下顛倒之）之後，再將離心管放入離心機中離心 10分鐘（180 0 rpm)，離心溫度設定為2〇。(：。 離心之後，去除上清液，並完全打散及攪動細胞沉澱 。測定細胞數目後，將細胞置於懸浮液中（pBS濃度〇. 5 x 106/毫升）。在15毫升容量的離心管中，當細胞與 Dynabeads CD4 (進口商/販賣者：Veritas)以細胞/珠珠 比例1 · 4 合之後’將混合物4。C培養3 0分鐘。放置 一磁鐵（進口商/販賣者：Veritas )使與離心管外壁接觸 以收集結合到Dynabeads CD4的CD4陽性細胞，無菌地用 吸力器吸除沒有與任何Dynabeads CD4結合的細胞。 接者用展盈器（vortex)將與Dynabeads CD4結合的 細胞完全鬆散開。然後在50毫升的培養基中輕輕倒轉混 合之，該培養基係藉由注入1毫升3500U/毫升的il - 2 (製造商：Cetus )及5毫升人類血液血清到44毫升纟立養 基（RPMI 1 640 + 7 製造商：Immunological Bio-research Center Co· Ltd·)中得到，這樣就製備了細胞 懸浮液。 將10微升細胞懸浮液放入一管中（進口商/販賣者： 25 200404002

Assist Co· Ltd·，72.690 )，然後將懸浮液與4〇微升 Tiirk溶液混合。取1〇微升混合液放到血球計數器（ hemocytometer)(製造商：Elmer lnc·，9731 )上，並在 顯微鏡下測定細胞數目。全細胞計數為丨· 〇 X 1 〇 7〜7 〇 乂 107 〇

No· 2 (塗覆了 0KT3之瓶子的製備） 將已用PBS (-)調整到5微克/毫升濃度的1〇毫升 0KT3 溶液（進口商 /販賣者：Jansen Ky〇wa，c。. ud.， 製造商：Orthopharmaceutical : 0KT3注射）放入底面積 225平方公分的培養瓶中，確認瓶底表面已被溶液平均的 覆蓋。 隔天，用吸引器吸除瓶中的0ΚΤ3溶液，然後將5〇毫 升PBS (-)倒入觀中。蓋上蓋子，待完全搖動瓶子之後， 打開蓋子並去除液體。接下來，維持無菌狀態，將5〇毫 升PBS㈠倒入瓶中，然後蓋子蓋上，充分搖動瓶子。然 後打開蓋子去除液體。將航内或蓋子上存有之任何濕氣用 吸引器完全吸除，如此，就製備好了塗覆有⑽以的瓶子。

No· 3 (淋巴球的活化培養） 將如上述No· 1 (血液收隼及鈇p奸、八μ、 队罘汉淋巴球分離）所製備的 50毫升細胞懸浮液倒入如上述Ν〇· 2 (塗覆了 〇κτ3之瓶子 的製備）所製備的塗覆了 0ΚΤ3的瓶中，然後於37〇c瓶二 氧化碳氣體濃度為5%的環境下，將懸浮液培養於瓶中。三 26 200404002 天後，添加50毫升培養基，並繼續在37〇c、二氧化碳氣 體/辰度為5/。的裱境下培養。然後，四天後，添加⑽毫升 。養基在37 C培養（二氧化碳氣體濃度5%的環境下） 最後人補充培養基後，繼續培養兩天（37°C，二氧化 碳氣體濃& 5%的環境下）。結果取得2·0 X 1〇8〜7·〇 χ 1 0 8個活化的淋巴球。 Ν〇· 4 (淋巴球的增殖培養） wo· 3 (淋巴球的活化培養）所述而製備 的淋巴球轉移到合古 砂巧b有750宅升LL-7培養基（Nikken生物 醫學研究中心） 之乳體可通透的培養袋中，然後將此轉移 的淋巴球培養尤_〆 在一氧化碳氣體培養箱中（CDP-300A ;

Hirasawa Co τ 、 td· ) ，37°C，二氧化碳氣體在5 %内的大 氣下。 四天德，兹山a 猎由使用無菌的結合裝置（製造商：Terum〇 )將含有細胞的氣體可通透培養a (製造商：Nipr〇c〇. 雜、ΝΐΡΓ〇培養袋A—1 000 )與另一個含有新培養基的氣 IIί 2:養袋連結，並將兩氣體可通透的培養袋中的培 二凡王“ °然後，切斷袋子間的連接，並在連接處益 囷密封之德，唿a t …、 ”、㈤I培養在37。(：、5 %二氧化碳氣體大氣 下0 '仅樂之調配物的製備） 後濟兩氣體可通透培養袋中之含有乡 27 200404002 基轉移到容量2 5 0 a a 妹从 毛升的離心管中，並經離心分離細胞。 然後，用倒出的方式山 A ^ 排出培養溶液，將生理鹽溶液加到細 胞沉澱中以再縣淫鈿的 ， 丹心汗細胞，然後經離心沖洗細胞。接下來， 用含有人類白蛋白的生理、、六 曲 里風/合液（浪度0. 1 %，以取代先前 使用的生理鹽滚、、房一， 岭液）進仃相似的沖洗操作，如此，細胞沉 殿就適應好了。 接下來’將200毫升含有人類白蛋白的生理鹽溶液（ 2%濃度）加到細胞沉澱中以懸浮細胞，在懸浮液通過1〇〇 微米不鑛鋼網過渡之後’將製備物裝進輸血袋中，並已可 用於投藥。應注意的是’轉移到輸血袋中的細胞數目為 〇· 5 〜10 X 1〇9 〇 Ν〇· 6 (冷凍櫃儲存調配物） 應注意的是，如上Νο· 5(用於投藥之調配物的製備 )所述而製備之活化的淋巴球可以如需要的儲存於冷凍櫃 中。為了解釋調配物保存於冷凍櫃中的特定具體實例，將 上述No· 5 (用於投藥之調配物的製備）所取得之活化的 淋巴球經由離心來分離，用倒出的方式排出培養基，並取 得細胞沉殿，將18毫升的細胞保存溶液（其製備係藉由 混合5毫升人類血液血清、5毫升二甲亞硼（dimethyl sulfoxide)(製造商：Nakaraitesky Co· Ltd·，在此後

可稱為「DMSO」）及40毫升培養基（RPMI 1640 + 7 )) 加到細胞儿殿中，將細胞沉殿及保存溶液混合完全，並將 3毫升混合液倒入五個5毫升細胞保存管每一管中（5 X 28 200404002 1〇7個細胞/管）。然後將這些管子置於極低溫冷凍櫃中並 保存於-8 0。C。 除此之外，冷凍的細胞必須解凍及液化以供使用，其 係藉由將冷凍細胞從冷凍櫃取出，並用37〇c熱阻礙（heat block)(製造商：Titek Inc. ; TAL-IG) 4 分鐘溫暖之。 我們無菌的轉移大約3毫升的含有如此解凍並液化之細胞 的細胞保存溶液到15毫升的離心管中，添加1〇毫升培養 溶液以懸浮細胞，然後離心（在1〇〇〇 rpm，2〇〇c，進行5 分鐘）分離細胞。然後，用倒出的方式去除上清液，用上 面1〜4所述的方法培養細胞，用於投藥的調配物則如上 5(用於投藥之調配物的製備）所述製備。我們亦製備 該已可用於投藥之調配物’其係藉由用培養的生理鹽溶液 沖洗該解康及液化的細胞，然後力，1G毫升含有人類血液 血清白蛋白的生理鹽溶液（5%濃度）以使其懸浮。

Wo. 細i用調配物） ▲如上No. 5 (用於投藥之調配物的製備）所述製㈣ 凋配物，或如No. 6 (冷凍櫃儲存調配物）所述保存於 Γ東櫃的調配物’係經靜脈注射到未經造血幹細胞移植的 思性淋巴白血病病患中。投藥給急性白血病病& (盆已蛾 明對各種化學治療藥物有抗性，且儘管有化學治療卻未： 輕症狀者）總共30次調配物。以每數天到每以（通當 每7天）的時間注射個細胞。 29 200404002

No· 8 (效果評估） §施用源自hla配對捐者活化之淋巴球之前，試過各 種化學治療都證明無效，且觀察到白血病細胞增加時，下 歹J係在施用源自HLA配對捐者活化淋巴球之後紀錄的： (1 )白血病細胞並未明顯增加。相反的，有觀察到慢 慢減少的趨勢（抗腫瘤效果）； (2 )在治療期間病患並無得到任何嚴重的感染，且觀 察到嗜中性白血球增加（投藥之後以5GG/微升或更快的速 度增加）（抗傳染性疾病效果及 (3)在治療前期，痛苦減低（Q〇L改善及抗自體免疫 疾病效果）。 所以很清楚的是，源自HLA配對捐者活化之淋巴球是 有效之預防及醫療上對抗腫瘤、傳染性疾病及自體免疫疾 病的方法，並有效的改善病患生活品質。除此之外，^用 源自HLA配對捐者活化之淋巴球幾乎沒有觀察到任何副作 用’也沒有觀察到GVHD症狀或高溫。 (具體實例2 ) 如具體貫例1製備活化的淋巴球，但是周邊血係收集 自人心丨生月性白血病病患顯示有微後合性的血親γ具= 兩個HLA基因座與病患配對）。活化的淋巴球 > —用於 =樂的調配物）係如具體實例丨製備，且此調配物係經由 靜脈注射到未經造血幹細胞移植的急性骨髓性白血 # 病病患 僅技藥该调配物一次。投藥三天後，觀察到病串門邊 30 2U0404002 的白血病細胞減少，且周邊^由 周瓊血中的白血病細胞在投藥七天

後完全消失0所以，很清接的H β走的疋，源自具有微嵌合性之捐 者的活化淋巴球具有抗腫瘤效果。 (具體實例3 ) 如具體實例1製備活化的淋巴球，但是周邊血係收集 自與腎臟癌病患顯示微嵌合性的血親（具有兩_ hla基因 座與病患相配）。活化的淋巴球（已可用於投藥的調配物 )係如具體實例1製備，且此調配物係經由靜脈注射到腎 臟癌病患内。每月投藥該調配物，總共3次。在最早投藥 ，兩週後’觀察到部分腎臟癌減少’ i腎臟癌在第三次投 藥的兩週之後完全消失。所以，很清楚的是，源自具有微 嵌合性之捐者的活化淋巴球具有抗腫瘤效果。 如同上述具體實例已證明的，取得活化的淋巴球（作 為高度有效預防及醫療上對抗腫瘤、病毒感染及自體免疫 疾病的方法）可以藉由收集及活化HLA配對捐者的淋巴球 ’然後用白血球介素2及抗-CD3抗體或其相似物刺激及增 殖這些活化的淋巴球。已清楚證明源自HLA配對捐者活化 之淋巴球可有效改善病患的q〇L以及有效對抗腫瘤、傳染 性疾病及自體免疫疾病，係高度有用於預防及醫療上對抗 腫瘤、傳染性疾病及自體免疫疾病的方法。 除此之外，源自HLA配對捐者活化之淋巴球幾乎沒有 被觀察到有任何不好的副作用，也沒有顯現GVHD症狀或高 溫° 31 200404002 再者’本發明可以被用於改善病患生活品質的特定目 的，其係藉由減少不舒服及增加病患的食懲，還有治療腫 瘤（諸如癌症）及各種傳染性疾病、預防腫瘤及傳毕性疾 病再發、及預防腫瘤及傳染性疾病的目的。根據本發明之 調配物可以用作預防及醫療上治療各種實體腫瘤以及白血 病的方法。 尤其，本發明的優點可以進一步的提升，其係藉由結 合本發明及其他醫療上的方法（諸如化學治療或放射線治 療），或結合本發明及其他免疫治療來治療病患。進而 ’本發明可以作為改善病患在造血幹細胞移植前狀況的目 的。 除此之外，淋巴球活化的穩定性及效果可以被大大的 改善，其係藉由使用至少白血球介素2或抗一CJ)3抗體來活 化源自HLA配對捐者之活化淋巴球，在以適當的抗原或其 相似物導出具有抗原專一的τ—淋巴球或其相似物之後，藉 由使用下列之一 · CD3抗體、CD26抗體或細胞活素諸如白 血球介素2，或組合使用之，以取得抗原專一之活化的淋 巴球，或用一抗原刺激增殖及活化源自CD8陽性細胞或 CD4陽性細胞之抗原專一的淋巴球，以製備具有抗原專一 之活化的淋巴球。然後，可以製備出含有活化淋巴球的調 配物’容易取得及方便進行投藥，以用做預防及醫療上對 抗腫瘤、各種傳染性疾病及自體免疫疾病的方法。在此觀 念下，本發明預期可對新生藥品領域進一步的發展有很大 的貢獻。 32 200404002 藉由製備懸浮液形式之增殖及活化的淋巴球的調配物 (/、中名淋巴球係懸浮於含有人類白蛋白的注射生理鹽溶 液中），可以減少在投藥時有效活化的淋巴球數目變低的 程度。 除此之外，GVHD的風險可被進一步的降低，其係藉由 ί ^用以技藥的源自hla配對捐者之活化淋巴球含有具有 排斥傾向（works ai〇ng the rejective directi〇n)的 HLA。 藉由使用收集自具有微嵌合性之捐者的淋巴球，可以 取知甚至更有效於預防及治療腫瘤、傳染性疾病及自體免 疫疾病之活化的淋巴球，同時，可以減少副作用諸如⑺肋 的發生。藉由使用含有CD8陽性細胞以及CD4陽性細胞之 活化的淋巴球，這些優點可以更加明顯。 藉由以製備套組銷售源自HLA配對捐者活化之淋巴球 ，該套組係用於製備由源自HLA配對捐者的淋巴球組成之 活化的淋巴球’及至少活化該淋巴球的白血球介素2，戋 用於製備含有源自HLA配對捐者活化之淋巴球的調配物， 根據本發明源自HLA配對捐者活化之淋巴球即使在很遠的 地方都可以容易的取得，且源自HLA配對捐者的淋巴球可 以增殖及活化，以用於預防及治療腫瘤、各種傳染性疾病 及自體免疾病的治療，不須任何高深知識或廣泛的經驗。 製造含有淋巴球之調配物的方法，該調配物係用於預 防及治療腫瘤、各種傳染性疾病及自體免疫疾病，包括了 將單核細胞從含有源自HLA配對捐者的淋巴球的周邊血分 33 200404002 :出來的步驟’用（例如）至少白血球介素2或抗-CD3抗 版活化及增殖分離出的單核細胞中源自HLa配對捐者的淋 巴球的步驟，及萃取已被活化及增殖的淋巴球，並製傷成 含有淋巴球為其主要成分的調配物的步驟。結果，含有源 自士 HLA配對捐者淋巴球的調配物可以有效率㈣造，且同 時’可防止任何活性程度及有效之淋巴球數目減低。 當經由培養來增殖淋巴球時，在3〜14天培養期中， 培養溶液可以1〇% ~ _ (相較於培養基溶液的量）的 比例補充，且此等纟3〜14天培養期期間每3~5天一次 的補充’可以有效預防培養溶液的任何降解，及預防白血 球介素2活性程度有任何的減少。再者，在活化及增殖淋 巴球的培養期間裡，藉由添加各種細胞活素或分裂素，活 化之淋巴球的效果可以被進一步的提昇。 / 此外’已活化及增殖的含有CD4陽性細胞及⑽陽性 細胞之源自HLA配對捐者的淋巴球，證明比單獨含有CM 陽性細胞的源自HLA配對捐者活化淋巴球更有效。 34

Claims (1)

1. 404002 拾、申請專利範圍： ^ 種用於預防及治療腫瘤、傳染性疾病及自體免 焱疾病之預防及醫療上的淋巴球，豆免 μ , . κ ，、w欲在於該淋巴球你 曰由活化源自HLA配對捐者的淋巴球而取得。 、 巴球2甘根據申請專利範圍第1項之預防的及醫療上的淋 八、特徵在於該源自HU配對捐者的淋巴球係 球介素2活化。 血 圍第1項之預防的及醫療上的淋 HLA配對捐者的淋巴球係以抗〜 3 ·根據申請專利範 巴球’其特徵在於該源自 CD3抗體活化。 4·根據申請專利範圍第丄項之預防的及醫療上的淋 —球、、’其特徵在於該源自HLA配對捐者的淋巴球係、抗原專 h舌化的淋巴球，其係藉由以適當的抗原導出抗原專— 的淋巴球，然後用其中-種；⑽抗體、CD26抗體及白血 :介素2，或請抗體、CD26抗體及白血球介素2的组 合而取得。 、 5 ·根據申請專利範圍第i項至第4項中任一項之預 勺及酉療上的淋巴球’其特徵在於該源自hLA配對捐者 的淋巴球係藉由先活化及增殖收集之源自編配對捐者的 巴求：、、':後經由選擇自抗原專一之活化淋巴球篩選或以 適田的抗原導出抗原專一之活化的淋巴球來製備及使用。 6 ·根據申請專利範圍第1項至第4項中任一項之預 防的及醫療上的淋巴球，其特徵在於該源自HLA配對捐者 的淋巴球係II由製備以抗原刺激經活化及增殖的抗原專一 35 200404002 淋巴球而取得。 7 ·根據申請專利範圍第4項之預防的及醫療上的淋 巴球，其特徵在於該抗原是精製的抗原、一種來自癌細胞 或病毋萃取物、一種癌細胞或病毒、或一種可以與癌細胞 或病毒交叉反應的抗原物質。 8 根據申凊專利範圍第1項至第4項中任一項之預 防的及醫療上的淋巴球，其特徵在於該源自HLA配對捐者 的淋巴球含有具有排斥傾向（works along the jective direction)之 HLA。 9 ·根據申請專利範圍第i項至第4項中任一項之預 防的及醫療上的淋巴球，其特徵在於該源自HLA配對捐者 的淋巴球係收集自具有微嵌合性的捐者。 1 0 ·根據申請專利範圍第1項至第4項中任一項之 預防的及醫療上的淋巴球，其特徵在於該淋巴球的正確劑 量係每公斤體重在1 X 103〜5 x 108的範圍内。 1 1 · 一種用於預防及治療腫瘤、各種傳染性疾病及 自體免疫疾病之預防的及醫療上的調配物，其特徵在於取 得源自HLA配對捐者活化之淋巴球。 1 2 ·根據申請專利範圍第1 1項之預防的及醫療上 的調配物’其特徵在於藉由懸浮活化的淋巴球及增殖於含 人類白蛋白的注入生理鹽溶液中製備。 1 3 ·根據申請專利範圍第1 1或1 2項之預防的及 醫療上的調配物，其特徵在於該淋巴球正確的劑量為每 公斤體重在1 X 1〇3〜5 X 108的範圍内。 36 200404002 4 種調配物製備套組，其特徵在於由源自hla 配對扣者的淋巴球及至少用以活化該淋巴球之白血球介素 2的組合而構成。 1 5 · —種調配物製備套組，其特徵在於由源自Η" 皆胃者的淋巴球及至少用以活化該淋巴球之抗-CD3抗體 的組合而構成。 6 種製造用於預防及治療腫瘤、各種傳染性疾 病及自體免疫疾病之預防及醫療上調配物的方法，其、 在於包括： 從含源自HLA配對捐者的淋巴球之周邊血分離單核細 胞的步驟； ' …分離出之該單核細胞中該源自脇配對損者的淋巴球 係被活化及增殖的步驟；及 被活化及增殖的該淋巴球係經萃取及製備成以該淋巴 球為其主要成分之調配物的步驟。 、17.根據申請專利範圍第16項之製造用於預防及 治療腫瘤、各種傳染性疾病乃ό 展届及自體免疫疾病之預防及醫療 上調配物的方法，其特徵在於： ’、 該淋巴球係經過3〜U妥姥硌w兰u 天持績培養期的增殖，苴 =用合併有白血^介素2或抗·抗體之―，或白血^ "素2及抗-CD3 ^几體兩者的培養芙。 18 .根據申請專利範圍第以或"項之製造用於 預防及療腫瘤、各種傳染性疾病及自體免疫疾病之預防 及醫療上調配物的方法，其特徵在於·· 37 200404002 培養溶液係以10%〜500%的比例添加，相對於該3〜 14天培養期培養基溶液的量，以預防任何該培養溶液之降 解及預防任何培養增殖該淋巴球時白血球介素2活性的減 少 〇 1 9 .根據申請專利範圍第1 8項之製造用於預防及 治療腫瘤、各種傳染性疾病及自體免疫疾病之預防及醫療 上調配物的方法，其特徵在於： 該培養溶液係在該3〜14天培養期中每3〜5天加一 次。 2 0 ·根據申請專利範圍第i 9項之製造用於預防及 /口療腫瘤各種傳染性疾病及自體免疫疾病之預防及醫療 上調配物的方法，其特徵在於·· 各種細胞活素或分裂素係在活化及增殖該淋巴球之培 養中加到培養溶液裡。 2 1 .根據申請專利範圍第i 6項之製造用於預防及 治療腫瘤、各種傳染性疾病及自體免疫疾病之預防及醫療 上調配物的方法，其特徵在於： 該活化及增殖之源自HLA配對捐者的淋巴球係含有 CD4陽性細胞及CD8陽性細胞。 ’、 拾壹、圖式： 無0 38 200404002 柒、指定代表圖： (一） 本案指定代表圖為：第（無）圖。 (二) 本代表圖之元件代表符號簡單說明： 無 捌、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式