TW205548B - - Google Patents

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205548 Λ 6 Β6 經濟部中央標準局员工消費合作杜印製 五、發明説明（1 ) 太發明：> 節畸 本發明傜關於1一芳基一3—吡啶基一2—丙烯一1 -酮，這些化合物在作為白血球及血小板中鈣攝入抑制剤 方面之用途，及含彼些作為有效成分之化合物之藥學組成 物，以及彼之製法。g_1. 多形核白血球（白血球）乃提供主要之防禦媒介以對 抗微生物之感染。此侵襲微生物之反應將使細胞氧化過程 (産生羥基画）及非氣化過程（消化性酵素；脊®過氣化 酶，彈力酶等）活化而能有效地殺死微生物。然而，白血 球對外來挑戰之反應亦能使宿主組織破壊，且在許多非感 染性疾病之發病上佔有重要之位置。 白血球具有多種不同之機轉使彼能由細胞表面接受體 起始以因應外來之挑戰。接受體活化作用或一般之細胞活 化作用將改變細胞之生理機能，因而使細胞本身”活化〃 ，細胞内之發起活化作用訊號之分子通常稱為第二信使， 第一信使則為細胞外之活化配位基本身。 許多細胞中之一種主要第二信使為鈣離子（Ca<2) 蠢 。有兩種一般之路徑可使細胞表面之接受體得知要産生細 胞内之鈣訊號。一種像使磷脂酶C活化。此酵素可産生肌 醇三磷酸酯，彼可繼而釋出細胞内所貯存之鈣，此外，細 胞接受體可開啓或關閉限制出入之離子管道，因而使鈣由 細胞外側進入。漿膜内之C a +2管道乃更進一步區分成兩 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝< 訂_ 線< 本紙張尺度逍用中國8家標準(CNS)甲4規格(210x297公釐) -3 - £05548 Μ 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（2 ) 種形式：（1)電壓敏感性鈣管道，當離子之小量且短暫 之流動使横跨漿膜之電壓略撤改變時將予以活化，或（2 )接受髏操作性管道，彼乃藉由接受體配位基而直接開啓 ,第一種型式之管道主要僳於電壓敏感性細胞諸如神經元 及肌細胞中蓮作。而許多细胞（如白血球）主要並非電壓 敏感性細胞，但具有細胞表面接受體而能有效地結合至漿 膜内之接受體敏感性Ca+2管道上。某些配位基之結合作 用可使這些接受體活化，因而使管道開啓並令Ca〃通過 細胞溶質内，$乃有效以作為第二信使。 當細胞活化時（相當於C a 〃之流入），則細胞内可 與C a 〃結合之結構將依彼等之相對親合力及對0之專一 性而回應此變化。有一些C a 〃依賴性蛋白質像為已知。 第一種被發現且予持性化之此蛋白質為於電活性骨骼肌細 胞内所發現之向寧蛋白C,稍後所發現之鈣結合性蛋白質 為在電壓及接受體敏感性细胞内均遍布之0諝節素。在漸 增數之細胞蛋白質中，已知被鈣調節素以Ca〃依賴性方 法所調節者為某些形式之環狀核苷酸磷酸二脂酶及腺苷酸 環酶，以及膜結合式0依賴性腺嘌昤核苷三磷酸酶，磷酸 化激酶，肌凝蛋白輕鍵激酶，以及彼等與核分裂裝置之軸 Φ 及與肌動蛋白纖維束之聯合。雖然彼些鈣依賴性或被 Ca+2依賴性酶所影蜜之蛋白質總數並未知，然而鈣明顯 地是使這些過程活化之必要媒介。 當白血球活化時，有許多重要事情可發生而導致細胞 内之鈣促成性疾病。例如，白血球（尤其是噻中性白血球 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)甲4規格(210父297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -4 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 一 Λ 6 _____ Β6 五、發明説明（3 ) )乃被視為在宿主之下列疾病之症狀及组織損傷上扮演不 可缺之角色：痛風，類風濕性開節炎，免疫脈管炎，血管 球性腎炎，炎性腸病，成人呼叫痛苦症候群，氣腫，氣喘 ,與溶血有蘭之熱損傷，及慢性炎症位置上之惡性腫瘤（ Mai ech及Gall in ; 1 987)。因此吾人期望抑制白血球 内之Ca〃攝入以減軽或缓解這些與鈣之攝入有闢之免疫 及炎性疾病之進行。 白血球内之C a 〃攝入以及免疫及炎症疾病之改善亦 可擴展到彼些與皮虜及真皮组織有闘之疾病。彼些局部相 關之炎性疾病包括與皮虜及真皮有關者，例如嗜中性皮虜 病，慢性皮慮病，牛皮癖，接觸性皮虜炎，異位性及脂漏 性皮慮炎，及痤瘡。 鈣亦為血小板内之重要介體，吾人已詳知Ca〃為血 液凝固之内部路徑中之必要介髏。例如，在凝血過程及血 栓形成中必需使用C a 〃傜已詳知，如果將螯合劑諸如 EDTA,檸樺酸鹽或草酸鹽加入以與0结合，則這些過 程可於試管試驗中被抑制，及於活體試驗中受到某種程度 之抑制。吾人已知Ca〃在溶解纖維蛋白之階式過程中扮 演不可缺之角色，且其僳為活性機轉g得溶解纗維蛋白之 反應可被治療性地調節。 血小板之一主要功能傜在血管受傷之部位發生，彼乃 於受傷處形成血凝塊以使傷口閉合，此反應亦具有許多不 利之副作用，例如在缺血性再灌流期間，血栓之形成可引 起動脈之閉合到達導致心肌梗塞之程度。因此在許多事例 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) 本紙張尺度遑用中a國家楳半(CNS)甲4規格(210x297公度） -5 — 205548 Λ 6 Β6 經濟部中央標準局员工消费合作社印製 五、發明説明（4 ) 中均期望抑制血小板内C a 〃之攝入以控制溶解血栓之反 應。 Ca+2進入细胞溶質内之作用（藉由各種不同形式之 接受體促成性活化作用或藉由细胞内儲存品之釋出而完成 )乃嚴格地連結在某些白血球活化作用及血小板集結作用 之細胞事例中。改善Ca〃流動路徑將可提供諝節白血球 及血小板反應之機轉。因此，抑制Ca〃流動之化合物可 予期望能降低與白血球活化作用有開之C a 〃依賴性疾病 過程，抑制免疫及炎性疾病，以及解決某些血栓溶解狀況 中涉及血小板集結作用之問題。 本發明^略要說明 本發明僳闋於新穎之1一芳基一3—芳基一2—丙烯 一 1 一酮衍生物，其乃有用以作為與急性及慢性發炎及免 疫疾病（包括皮虜及真皮组織之相闊疾病）有鼷之白血球 内之鈣攝入抑制劑。最後，本發明亦闋於使用1一芳基一 3—吡啶一2—丙烯一1一酮衍生物以治療心臓血管条統 之鈣依賴過程包括血栓溶解条統疾病上之用途。 本發明僳關於式（1 )化合物：

本紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲4規格(210X297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) 裝< 線- -6 - 205548 Λ 6 Β6 五、發明説明（5 ) 其中 A r為下式之基園：

或

R2 » Rs及R3乃各自為重；窗素；Ci 一 c β院 基；Ci 一 C<y院氣基；Ci 一 Ce烧基硫；或一 Ν (YJ (Y2)，其中Y:及Y2乃各自為氫或C, 一 C<f 烷基；或X 名一 （Ar) — （CH，）„一 0 — ，其中Ar為苯基或某基，η=0或1,X=Ci — C «烷氧基或一 N (YJ (Yd ,其中Υι及丫2乃如 前所述，且Z=0,1， 2;或 其製藥上可接受性鹽。 本發明亦提供抑制需此治療之病患之鈣攝入之方法， 其包括施用有效治療抑制量之式（1)化合物。 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) 裝- 訂- 線. 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 太發明：> 註细銳昍 本文所諝★ Ci 一 Ce烷基"僳^具一至六個碩原子 之飽和直或支鍵烴基固。在此範圍内之實例包括甲基，乙 基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，另丁基，特丁基 ，正戊基，正己基等。所諝〜c, _c〃烷氧基〃僳指甲 氣基，乙氣基，丙氧基等。所諝> C, 一 C6烷基硫〃像 本紙張尺度逍用中國家標準(CNS)甲4規格(210X297公釐) -7 - 205548 Λ6 B6

五、發明説明（6 ) 指甲基硫，乙基硫等。當然，所諝Xz — （Ar) — （ C Η 2) n— 0 —尤其亦包括笮氣基，（4 一甲氣基）笮氣 基，（4 一二甲胺基）笮氯基等。所諝a鹵素〃僳指氟， 氮，溴或碘原子。 式（1)化合物可藉使用熟知技薛者已詳知之步驟及 技術而製得。供製備式（1)化合物之一般合成程序乃示 於圖表A中，除非另有說明，否則所有取代基均如前所述 Ο 圖表A

Ar ΟII -c-ch3 CHO Ri

Ar

〇II :-CH =

(請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) 裝- 線· 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 通常，結構_2_之1 _芳基一 3 —吡啶基一 2 —丙烯_ 1 一酮化合物可藉將結構丄_之適當鹼與結構之_之適當吡啶 羧醛縮合而製得。例如，結構之1 一芳基一 3 —吡啶基 一 2 —丙烯一 1 一酮化合物可藉將結構丄_之適當酮與結構 之適當吡啶一羧醛於乙酸鈷（I) k2, 2 z -聯吡啶 之存在下，於適當極性，質子惰性溶劑諸如二甲替甲醛胺 中進行縮合而製得。此外，偶合作用可於乙酸哌啶之存在 下，於適當極性溶劑諸如乙醇中進行。 供圖表A所示之一般合成步驟所用之初始物質可由熟 本紙張尺度逍用中a國家楳毕（CNS)甲4規格（210X297公龙) -8 - 05548 A6 B6 經濟部中央標準局8工消費合作社印*'1衣 五、發明説明（8 ) 令無水乙酸鈷（H) (700mg,4mmol)溶於二甲 替甲醛胺中。再將2, 2"* —聯吡啶（620rag, 4 mmo1)加入並予攪拌30分鐘。繼而加入3— （三氟 甲基）乙醯苯（9. 4g, 50mmo 1)及4 —吡啶羧 醛（5. 3g, 50mmol)再於80它下加熱18小 時。而後將溶劑蒸發，再將徐留物藉硅膠色層分離法（1 :1甲苯/乙酸乙酯）予以純化。而予以再結晶（乙酸乙 酯/己烷），即得標題化合物；m p 8 9 — 9 0 °C。 Cl5H1()F3NO 之理論分析值：C.64.98; H，3.64; N,5.05 實測值：C, 64.90; Η, 3.64; N, 4.92 窨例3 1一 （4 一二甲胺基荣基）一 3 — (4 —吡啶某）一2 — 丙丈希一 1 —嗣 將無水乙酸鈷（I ) ( 3 . 5 mg , 2 0 m m ο 1 )置於乾 燒瓶中。再令之溶於二甲替甲醛胺（500m文）中，並 加入2，—聯吡啶（3g, 20mmol),再予攪 拌30分鐘。繼而加入4 一 （二甲胺基）一乙醯苯（50 g，306mmo 1)，及4 —趾淀矮薛（25g, 23〇mmol),再於851C下加熱20小時。而後將 溶劑蒸發，再將徐留物藉硅膠色層分離法（2 : 1甲苯/ 乙酸乙酯），予以純化。而予以再結晶（乙醚/二氮甲烷） ，即得1. 8g標題化合物；mp 15〇_151t：。 C26HmN2〇 之理論分析值：C,76.16; H.6.39; Ν,ΙΙ.ΙΟ 實測值：C,76.45; Η，6.45; Ν,ΙΙ.08 -l〇 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS>甲4规格（210 X 297公货） (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) A6 B6 205548 五、發明説明（9 ) 審例4 1一（2—眹喃基）一3—（4 —吡啶基）一2 -丙烯-獅 令無水乙酸轱（H) (700mg, 4mmo 1)丨容於二甲 替甲醯胺（150m)n中。再將2, 2/ —聯D比旋（ 600mg, 4mmo 1)加入並予攪拌30分鐘。繼而加 入4_Dlt淀矮酸（5g, 50mmo 1)及2—乙醒基呋 喃（5. 5g, 5〇mmol)。再於 S〇°C 下加熱 is 小時。而後將溶劑蒸發，再將徐留物藉硅膠色層分離法（ 1 : 1甲苯/乙酸乙酯）予以.純化，即得3 0呢標題化合 物；mp 122— 124 °C。 (：:2只91^〇2之理論分析值：（：，72.35;[1,4.55;^7.03 實測值：C.72.20; H,4.46; N，6.67 啻例5 1—(晡盼一 2 —基）一3_ (4—吡啶甚)一 2 -丙烯一1 - 令無水乙酸銘（I) (700mg, 4mmo 1)溶於二甲 替甲醯胺（lOOmiM中。再將2, 2/ —聯吡啶（ 600mg, 4mmo 1)加入並予攪拌30分鐘。而後加 入2—乙廳基P塞盼（6. 3g, 50mmo 1)及4 —卩比 症矮醛（5g, 50mmo 1),再於80°C下加熱18 小時。而後將溶劑蒸發，再將徐留物藉硅膠色層分離法（ 1 : 1甲苯/乙酸乙酯）予以純化。繼而予以再結晶（乙 _ /己烷），即得1 2 0mg標題化合物；mp 150.5-152t：。 C ;2H 3N 0 S 之理論分析值：C.66.95; H,4.21; N.6.51 實測值：C, 67.04; H ,4.32 ; N ,6.41 本紙張尺度通用中國囷家標苹（CNS)甲4规格（210 X 297公逄> {請先閲面之注意事項再蜞寫本頁) 丨裝_ 訂 經滴部中央標準局员工消費合作社印製 -11 - 205〇48 Λ 6 Β6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（ίο) 窨例 1一 （3. 4· - 5 —三申氩甚荃某）一3 — （3 —吡啶某 )一2—丙燔一1一酮 將3, 4，5 —三甲氧基乙醒苯（5. 25g, 25 mmol) ，3 —紕症矮薛（2. 35mi2, 25 mmol),呢症（4. 93m5, 50mmol) » 乙 酸（2. 86mi2, 50mmol)及乙酵（25m)n 結合。再於迴流下加熱6小時，並令蒸餾液通過3A分子 篩之柱（25g)中。繼而以乙酸乙酯（600m)n稀 釋，再以1N氫氣化鈉（200m5)水，飽和氛化鈉先 後清洗。而後乾燥（Ms S〇4 )並將溶劑蒸發。再藉硅 膠色層分離法（9 0%乙酸乙酯/己烷）予以純化。雄而 予以再結晶（二氣甲烷/乙酸/己烷），即得1. 75s 標題化合物；mp 137—8它。 C^HuN〇4之理論分析值： C, 68. 2 1 ； Η , 5. 7 3 ； Ν , 4 . 68; 實測值：C, 68. 12;H, 5. 75;Ν, 44. 6 Ο 窨例7 * 1一 （3. 4·. 5 —三甲氬基茱某）一3 — （2 —吡啶某 )一2 —丙烯一1 一酮 將3，4, 5_三甲氣基乙醯苯（5. 25g, 25 mmol) , 2-吡啶羧醛（2. 35m5, 25 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)曱4規格(210X297公货) 12 - 附件 ：一205^4- 炫第 80107366 本-ΐ.月a補充 82. 3. 17 號專利申請案中文說明書修正頁 民國83年3月呈 五、發明説明（7 ) 知技藝者輕易製得。 下列實例偽代表圖表A所述之一般合成法。這些實例 當然僅供說明之目的，而非限定本發明之範圍。本文中， 下列之稱諝乃具有指定之定義：> g 〃意指公克； m m ο 1 〃意指毫其耳；、' m L 〃意指毫升；、' b p々意 指沸點；Ό 〃意指攝氏度數·，* mm H g 〃意指毫米汞柱 ;* m p 〃意指熔點；* mg 〃意指毫克；* w Μ 〃意指微 莫耳；* w g 〃意指微克，Α意指埃。 奮例1 1一（4—甲巯基荣某）一 3— U -吡啶基）一2 -丙士希-1 -酮 將無水乙酸鈷（I) (0.8g,4mmol)置於乾燒 瓶中。再將二甲指甲醯胺（150τηβ)及2, 2> —聯 D比旋（60〇mg, 4mmo 1)加入，並予摄伴30分鐘 。繼而加入4 一 （甲魏基）一乙醯苯（4g, 24 mmol)及4-吡啶羧醛（2. 6g, 24mmol) 。再於8 Ο υ下加熱2 ◦小時，而後將溶劑蒸發，再將徐 留物藉硅色層分離法（1 : 1甲苯/乙酸乙酯）予以純 化。繼而予以再結晶（乙酸乙酯/己烷），即得0 . 8 g 經濟部中央標準局具工消費合作社印製 標題化合物；m p 1 3 3 — 1 3 4 t：。

CwH"N05之理論分析值：c,70.55; Η，5.13; Ν，5·49 實測值：C,70.44; Η，5.03; Ν，5.25 曹例2 1..二.（3—三氩闲甚荣某）一2一 （4 —吡啶甚）一2 — 丙丈希一1 —西固 一 9 一 (請先閲讀背面之注意事項再項寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公發〉 ^〇δ&48 Λ 6 Β6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（11) mmol)，呢症（4. 93m5，5〇mmol),乙 酸（2. 86mi, 50mmol)及乙醇（25mi) 結合。再於迴流下加熱6小時，並令蒸餾液通過3A分子 篩之柱（25s)中。钃而以乙酸乙酯（600miM稀 釋，再以飽和碩酸氫納，水，飽和氡化鈉先後清洗。而後 乾燥（MgS〇4 ),並將溶劑於真空中蒸發。再藉硅謬 色層分離法（7 0%乙酸乙酯/己烷）予以純化。饞而予 以再结晶（二氯甲烷/乙醚/己烷），即得標題化合物； m p 9 4 — 5 t： 〇 Ci/HpNC^之理論分析值： C, 68. 21 ；H, 5. 73；N, 4. 68； 實测值：C , 6 8 . 2 5 ; Η , 5 . 7 2 ; N , 4 . 5 2 Ο 奮例8 1—苯某一 3—（4—Dtfc旋基）一2 —丙嫌~~1—銅 將4 一吡啶羧醛（9. 53mi?, 0. lmol),乙酸 (3. 0m5, 〇· 〇5mol),呢症（5. Omi, Ο. 05mo 1),及乙醇（20mjn結合。再於迴流 下加熱，並令蒸餾液通過3A分子篩之柱中。繼而將乙醛 苯（5. 82mi?， 0. 〇5mol)之乙醇（20mJ? )液於8小時期間分8等份加入，並予迺流過夜。饉而將 溶劑於真空中蒸發，令徐留物溶於二氣甲烷（700πιβ )中，以IN氫氧化鈉（2Χ)清洗，並予乾燥（ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂· 線， ο 本紙張尺度逍用中a B家樣準(CNS)甲4規格(210X297公*) 13 - 2055^® 修止 衣年月Η , 82. 2. 1 2 Α6 Β6 空中蒸發，再將徐留物藉 酯/己烷）予以純化。令 )中，以含亞硫酸氫鈉（ ，水（1 0 0 m 及飽 S〇4),將溶劑於真空 )。繼而於50t：及真空 .7 g標題化合物； .3 0 ； N , 6 . 6 9; 5 . 3 0 ; N , 6 . 6 6 (請先閱$面之注i項再場寫冬頁) i裝- 五、發明説明（12) Μπ S Ο 4 )。而後將溶劑於真 硅膠色靥分離法（8 0 %乙酸乙 産物溶於二氣甲烷（600m芡 2. 5g)之水（lOOmiH 和氣化鈉清洗。再予乾燥（Ms 中蒸發，並予結晶（2X,乙醚 (lmmHg)下乾燥後，即得3 m p 77 — 8*0。 Ci7H27N0之理論分析值： C , 8 0 . 3 8 ； Η , 5 η 實測值：C , 8 Ο . 2 4 ; Η， 訂 經濟部中央樣準局R工消费合作社印製 下列化合物可藉類同於上述實例丄之步驟而製得 1一 （瞎盼一 2 —基）一 3 —（3—吡啶基）一2 —丙烯 一 1 -酮； 1 一 （睡盼一 2_基）一 3 — （2 — Bit陡基）一 2 —丙稀 -1 -酬； i_ (2—呋喃基）一3— （3—吡啶基）_2—丙烯一 1 -酮； 1— (2—呋喃基）一3— (2-吡啶基）一2—丙烯一 1 - _ ; 1一 （4 一二甲胺基苯基）一 3 — (3 —吡啶基）一 2 — 本紙張尺度通用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公發） -14 - ^05548 Λ 6 Β6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（13) 丙稀一1一銅； 1 一 （4 一二甲胺基苯基）一3— （2_吡啶基）一2 — 丙烯一1一酮； 1 一〔（4 一甲镟基）苯基〕一 3 —（3 —耻啶基）一 2 一丙烯一 1 一酮； 1 一〔（4 一甲镟基）苯基〕一 3 —（2 —吡啶基）一 2 一丙烯一 1 一酮； 1 一 （3 —三氩甲基苯基）一 3— （3—吡啶基）一2 — 丙嫌一1 一酮； 1 一（3 —三氟甲基苯基）一 3 —（2 —吡啶基）一2 — 丙播一1一酮； 本發明之一體現傜提供抑制白血球内0攝入之方法。 本文所讚> 抑制"僳指任何可使鈣攝入至白血球内之速度 減缓，或被妨礙，遏止或中斷之方法，但不必使鈣攝入至 受影響细胞或組織中之量完全斷除。 本文中可互換使用之鈣及鈣離子俱指曾經稹極地參與 白血球細胞組成過程之鈣元素及其離子狀況。此外，當然 ，藉式（1)化合物以抑制鈣攝入白血球中之作用可影礬 一或多種鈣之元素狀態，而不應限定k鈣之任何離子形式 及/或其與任何持定抗衡離子之聯合；例如，氛化鈣，磺 酸鈣，氣化鈣等均為已知，且被考慮在本文所用之鈣定義 用。 鈣攝入白血球中之作用為白血球活化作用之一種訊號 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂- 線- 本紙張尺度逍用中8國家樣準(CNS)甲4規格(210X297公龙) -15 - 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 £05548 Λ 6 __Β_6 五、發明説明（14) ，且對細胞而言像作為第二信使。鈣之攝入通常係依某第 一信使而定，例如，依配位基结合至其细胞表面接受體上 之作用而定。配位基結合至其接受體之作用可用以開啓 Ca〃管道，令Ca 〃進入细胞溶質，彼乃於此處作為第 二信使。當細胞活化時（相當於C a 〃之流入），有許多 事情發生以導致或成為免疫或炎性疾病之原因。 白血球包括免疫条统之細胞類，彼等乃在组織學及生 化上與免疫条統之其它细胞區分。本文所諝白血球乃包括 五種主要之细胞類：唾中性白血球，唾驗性白血球，嚙伊 性白血球，巨噬细胞及淋巴球。這些細胞可更進一步進行 細胞型式之分類；例如，噻中性白血球當然可更進一步包 括多形核白血球。所有之主要白血球類均相闋，彼等均由 祖始之脊發莖細胞中所衍出。雖然唾中性白血球乃在本文 中廣泛地使用，然因所有细胞均由骨a莖细胞所衍生，故 噻中性白血球乃用以作為白血球活化之實例，而非意指對 使用或施用式（1)化合物（可能因任何特定形式白血球 或免疫条統細胞之活化所致或顯徽候）有任何限制。此外 ,白血球之活化（其中，活化過程用以限制或中斷鈣之攝 入以影響疾病之治療）乃不被因多重細胞或组織型式所致 之疾病所限制，且包括细胞及組織交k反應之錯合型交互 反應。本發明之一體現傜抑制白血球内之鈣攝入，其中， 抑制之效應將導致白血球巨噬細胞功能獲得良好之調節。 因此，白血球细胞當然可藉由所抑制之功能度而更進一步 地分類；例如，吾人可使用巨噬細胞或具巨噬細胞功能之 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度通用中B國家«準(CNS)甲4規格(210X297公*) -16 - 2055^8 Λ 6 Β 6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（15) 細胞作為本文已知之白血球細胞中之一細胞群或亞群。 白血球乃大幅度地對各種不同之炎性及免疫狀況有所 反應。這些事例中，接受體活化作用或一般之细胞活化作 用將改變細胞之生理狀況，因而使白血球活化。所諝> 活 化作用"通常僳指白血球變得活化之過程或狀況，其待徴 為细胞對0之攝入有反應，且同時變得活化, 或保持於活化 狀態。 因白血球活化作用所引起之細胞氣化及非氣化機轉之 活化作用在許多免疫疾病過程之發展上扮演重要之角色。 部分之細胞防禦条統，包括宿主之不利症狀及组織損傷方 面，參與之白血球之活化作用有部分為鈣依賴性。其中之 白血球（主要為噻中性白血球）被視為在宿主之症狀及组 織損傷中扮演重要角色之非感染性疾病包括：痛風，類風 濕性開節炎，免疫脈管炎，血管球性腎炎，噻中性皮病， 炎性腸病，心肌梗塞，成人呼吸痛苦症候群，氣腫，氣喘 ,與溶血有關之熱損傷，及慢性炎症位置上之惡性腫瘤（ Maiech 及 Gallin; 1 9 8 7 )。 許多之自體免疫疾病，諸如痛風，自髏免疫關節，自 體免疫脈管炎及某些形式之血管球性腎炎中，噻中性白血 球乃被發現累積在闋節及軟组織處且k為開節及軟组織遭 破壊之原因。雖然有許多疾病過程與這些疾病之病理一生 理狀況有関，然而噻中性白血球補充至彼處之作用已被充 分證實，且傜負責這些疾病之大部分可觀察到之組織病理 狀況。本文中，有許多模型糸統之研究明顯地證實，由嗜 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) 裝< 訂· 線- 本紙張尺度逍用中國國家樣準(CNS)甲4規格(210X297公龙) 17 - Λ 6 Β6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（16) 中性白血球活化作用所引起之非氣化過程（尤其是唾中性 白血球彈力酶及其它溶解蛋白質及溶解糖之酶之釋出）可 直接破壊畚主组織。 有許多不同之皮虜病症像與噻中性白血球滲入皮虜之 外皮及真皮组織中之作用有鼷。其中有唾中性白血球參與 疾病進展之皮廣病包括（但不限定於）牛皮癣形皮病，於 史侓特氏（Sweet’s)症候群及貝奇特氏（Behcet’s)病 中所發現之以血管為主之噻中性皮病，以及壊疽性膜皮病 ，這些疾病過程中，嗜中性白血球係增加及保持炎性症狀 ,加強組織損傷，因而咀礙復原。 有許多其它之疾病（諸如炎性腸病及心肌梗塞）係與 待定器官内之嗜中性白血球功能失諝有開，經由動物之研 究指出，腸内噬中性白血球循環之異常將導致這些细胞之 異常活化。同理，噻中性白血球業顯示已補充至心肌組織 之梗塞處，且在心肌梗塞發生後之组織損傷度增強上扮演 重要之角色。 有許多呼吸病症包括成人呼叫痛苦症候群（ARDS ),氣腫，及氣喘等之病因傜處噻中性白血球之滲入及疾 病之惡化有關，肺組織中之噻中性白血球促成性氧化破壊 作用可能為這些病症之重要成因。此^卜，嗦中性白血球之 累積，以及彈力酶之釋出可能在氣腫所發生之组織破壊上 扮演重要之角色且可能在過敏性氣喘之炎性反應晚期扮演 重要之角色。過敏反應（此時噻中性白血球乃釋出其構份 )則可在母细胞组織胺釋出後發生。 (請先閱讀背面之注意事項再填窝本頁) 裝- 本紙張尺度逍用中國S家標準(CNS)甲4規格(210x297公*) -18 - Λ 6 Β6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（17) 嗜中性白血球活化作用在一般疾病致因中像與補蜃活 化作用有關。吾人已詳知補體可使噻中性白血球活化，同 時産生羥基團，噻中性白血球活化後所産生之羥基團可能 與補體活化作用共同地成為红血球脆弱及血管内溶血之原 因。 本文所諝a炎症"乃指涉及免疫条统白血球之绝大多 數過程，且像為涉及> 炎性狀況〃之過程。臨床上，炎症 主要可包括一或多種下列之症狀：红，腫，熱，痛，功能 喪失及發燒。然而，炎症所伴隨之一些细胞狀況包括（但 不限定於）白血球活化作用，白血球著邊作用及遊出作用 ，及白血球滲出作用。"炎症〃亦可指任何狀況，亦即可 以初期或潛伏期炎性狀況存在，白血球可參與其基本致因 或使疾病狀況永存或擴展。本文中涉及炎性狀況之過程乃 視為與免疫条統之白血球有關，且彼可在$免疫条统〃目 錄内及在可以式（1)化合物治療之被白血球影礬之狀況 中所看到。可影辑鈣攝入至白血球中之本發明化合物亦被 視為可能有利以改善與炎症及/或免疫疾病有闋之狀況。 類似於本發明方法之發展以消除噻中性白血球之反應 或使噻中性白血球氧化代謝物及顆粒内容物鈍化之作用將 有用以限制這些非感染性炎性疾中之i織破壊度。 血小板為存在血液中且由骨鰱巨核細胞中所衍出之無 核細胞。血小板亦為凝血所需，且有助於血管壁裂口之復 原。血小板形成血凝塊及使受損血管组織復原之反應亦具 有許多有害之副作用；例如，在缺血性再灌注期間，血栓 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· -線， 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)甲4規格(210X297公*) -19 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ㈣ 48 Λ6 _ Β6_ 五、發明説明（18) 之形成及相關之血小板集結作用最终可導致動脈之閉合， 動脈及靜脈之闢閉或閉合亦已詳知可導致心肌梗塞之發生 。吾人亦詳知鈣及凝血過程及血栓形成中所需者；例如； 藉由結合至鈣上之E D Τ Α及其它螯合劑所調節之凝血反 應乃於本範醻中更加確定。因此，吾人考廉抑制鈣攝入血 小板中，使其本身作為活存之媒介以治療性地諝節血小板 之活化作用，此包括血管活性介體之釋出及血小板集結塊 之形成，此用法乃施至需此治療之病患體内。 本文所諝$病患"像指溫血動物諸如受待定免疫疾病 狀況所苦之哺乳動物。此稱諝定義範圍内之實例為狗，貓 ，鼸鼠，馬，牛，羊及人類。 吾人相信式（1 )化合物對於白血球及血小板内之0 攝入具有抑制之效應，因此可缓解與免疫調節作用有關之 鈣依賴性機轉，包括炎性及免疫疾病。然而，本發明當然 不被任何特定之理論或建議之機轉所限制以解釋其於終用 途應用上之效應。式（1)化合物之使用當然亦包括所有 其基團，如衍生物（la), (lb), (lc)及（ 1 d ) 〇 如同熟知技藝者所詳知，某些炎性及免疫疾病中之各 種不同疾病狀況像以使鈣攝入白血球¥之事例為待徽。本 文中，使鈣攝入白血球中之事例可指導致初始狀況之初始 事例或指保持炎性或免疫狀況之事例。此外，熟知技藝者 亦詳知，某些心臓血管疾病傜以使鈣攝入血小板中之事例 為特徽，此些事例可指導致彼狀況之初始事例或指保持心 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂 本紙張尺度逍用中國Β家#準（CNS)甲4規格(210x297公《·) -20 -

Λ 6 Β6 經濟部中央標準局貝工消t合作社印製 五、發明説明（19) 臓血管疾病狀況之事例。 本發明尤其提供治療受白血球内鈣依賴性疾病狀況所 苦之病患之方法，其中，此疾病狀況可為（但不限定於） 炎性或免疫疾病，其方法包括施用有效抑制鈣攝入量之式 (1 )化合物。 式（1)化合物之有療效抑制鈣攝入置係指有效以控 制與免疫疾病狀況有關之白血球活化作用之量。所諝> 控 制活化作用〃傜指可使免疫疾病之進展減缓，妨礙，遏止 或中斷之所有方法，而不必指所有疾病症狀之消除。 此外，熟知技藝者亦詳知，某些心釅血管疾病僳以導 致鈣攝入血小板中之事例為待徽，此事例可指導致彼狀況 之初始事例或指保持心臓血管狀況之事例。 本發明亦提供治療受血小板内鈣依賴性疾病所苦之病 患之方法，其中，此疾病狀況可為（但不限定於）心臓血 管疾病，其方法包括施用有效抑制鈣攝入量之式（1)化 合物。 式（1)化合物之有療效抑制鈣攝入量僳指有效以控 制與心臓血管疾病狀況有関之血小板功能之量。所諝、、控 制與心臟血管疾病有闋之血小板功能〃傜指使心臟血管疾 病之進展減缓，妨礙，遏止或中斷，^不必指所有疾病症 狀之消除。 免疫或心臓血管狀況或疾病中之具療效之抑制量可經 由隨從診斷醫師（如同熟知技藝者）藉使用慣用技術或藉 觀察類同環境下所得之結果而輕易決定。欲決定具療效之 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 本紙張尺度通用中國困家«準（CNS)甲4規格（210x297公*) -21 - 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 Λ6 B6 五、發明説明（20) 劑量，伴隨之診斷醫師乃考慮許多因素，包括（但不限定 於）：哺乳類之種類；其大小，年齡及一般健康狀況；所 涉及之特定疾病；疾病之程度，牽連或联重性；傾別病患 之反應；所施用之待定化合物；施用型式；所施用製劑之 生物利用性；所擇定之劑量服法；伴隨藥物之使用；及其 它有蘭之琛境。 吾人期望式（1)化合物之有效量乃在每天每公斤體 重約Ο. 1毫克（ing/kg /天）至約100mg/kg /天間 變化。理想之量約為0. 5至1 Omg/kg/天。 欲達成治療受上述病況所苦之病患之目的，式（1) 化合物可以任何形式以有效量施用而使化合物具生物利用 性，包括口部及非經腸部之路徑。例如，式（1)化合物 可經由口部，皮下，肌内，靜脈内，經皮，赛内，直腸部 或局部施用，通常以口部施用較為理想。熟知组成物製備 技藝者可依所擇化合物之特性，待治療之疾病狀況，疾病 之發展階段，及其它有關之環境而輕易地決定適當之施用 形式。 化合物可單獨施用或與製藥上可接受性載體或賦形剤 結合成藥學組成物之形式施用，彼之比例及特性乃藉由所 擇化合物之溶解度及化學性質，所擇^之施用路徑，及標 準裂藥操作而輕易決定。本發明化合物（本身即有效）可 以其製藥上可接受性酸加成鹽之形式予以組成及施用以達 具安定性，方便結晶，及增加溶解度等目的。 本發明之另一體現像提供含有有效置式（1)化合物 本紙張尺度逍用中8國家楳準(CNS)甲4規格(210X297公發) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁}

-22 _ Λ 6 Β6 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 五、發明説明（21) 並混合或聯合一或多種製藥上可接受性載體或賦形劑之藥 學组成物。式（1)化合物之所_"有效抑制鈣攝入量〃 傺指適於抑制白血球内鈣攝入之有效抑制量，而此抑制作 用可供治療受免疫或炎性疾病所苦之病患。此外，式（1 )化合物之所諝w有效抑制鈣攝入量〃亦指適於抑制血小 板内鈣攝入之有效抑制量，此抑制作用可供治療心臓血管 条統疾病所苦之病患。 藥學组成物像依製藥技蓊中已詳知之方法製得。載體 或賦形劑可為固態，半固態，或液態物質，彼可作為供有 效成分所用之載色劑或介質。適當之載饅或賦形劑已於技 藝中詳知。藥學组成物可適於供口部，非經腸部，或局部 使用，且可以藥片，膠囊，坐藥，溶液，懸浮液等形式施 至病患體内。 本發明化合物可（例如）使用惰性稀釋劑或可食用載 體經由口部施用。彼等可裝在凝膠膠囊中或壓縮成藥片。 供口部治療施用之目的方面，化合物可與賦形劑混合，且 可以藥H,錠劑，膠囊，酏劑，懸浮液，糖漿，威化餅及 口香糖等形式使用，這些製劑至少必需含有4%本發明化 合物（有效成分），但可依待定形式而加以變化，且最好 、介於4%至約7 0重量％單位間。化^•物存在於组成物中 之量為可獲得適當之剤量者。本發明所製備之理想組成物 及製劑偽為可使口服劑量單位形式含有5. 0—300毫 克之本發明化合物者。 藥片，丸劑，膠囊，錠劑等亦可含有一或多種下列之 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂· 本紙張尺度逍用中國B家標準(CNS)甲4規格(210X297公爱:) -23 - 經濟部中央標準局员工消费合作社印製 Γ05548 —V Λ 6 __Β6_ 五、發明説明（22) 輔劑··结合劑諸如微晶纖維素，黃蓍膠或凝膠等；賦形劑 諸如澱粉或乳糖等，崩解劑諸如藻朊酸，Priomgel,或玉 米澱粉等；潤滑剤諸如硬脂酸鎂或Sterotex等；滑動劑諸 如膠態二氧化硅等；及甜化劑諸如蔗糖或糖精素可予加入 ，或增香劑諸如薄荷，水揚酸甲酯或橘增香劑等。當劑量 單位形式為膠囊時，其除了含有上述形式之物質外，亦可 含有液態載體諸如聚乙二醇或脂油等。其它單位劑童形式 則可含有可改良劑量單位物理形式之其它各種不同物質例 如塗料。因此，藥片或九剤可塗附上糖，蟲膠或其它腸溶 塗料。糖漿除含有本化合物外，亦可含有作為甜化劑之蔗 糖且可含有防腐劑，染料，著色劑及增香劑。製備這些不 同組成物所用之物料必箱在製藥上為純質且在所用之量上 為無毒性。 欲達非經腸部治療施用之目的，本發明化合物可併入 溶液或憨浮液中。這些製劑必需含有至少0.1%本發明 化合物，但可在0.1至約50重量％間加以變化。本發 明化合物於此組成物中之量為可獲得適當之劑量者，本發 明所製備之理想组成物及製劑偽為可使非經腸部劑量單位 含有5. 0至100毫克本發明化合物者。 本發明式（1)化合物亦可局部k用，當局部施用時 ，則適當之載體可包括溶液，軟蕾或膠基質。此基質可（ * 例如）包括下列之一或多者：礦脂，羊毛脂，聚乙二醇.， 蜂蠟，礦油，稀釋劑諸如水及醇等，及乳化劑及安定劑。 局部用組成物所含有之式1或其製藥鹽濃度約為0.1至 本紙張尺度逍用中國8家榣準(CNS)甲4規格(210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂 線. -24 - ^05548 Λ6 B6 經濟部中央標準局貝工消t合作社印製 五、發明説明（23) 約10% w/v (每單位饅積之重量百分比）。 溶液或懸浮液亦可包括一或多種下列輔薄I :無菌稀釋 劑諸如注射用火，鹽水溶液，固定油，聚乙二醇，甘油， 丙二醇或其它合成溶劑等；抗菌劑諸如笮醇或對位羥基苯 甲酸甲酯等；抗氣化劑諸如抗壊血酸或亞硫酸氫鈉等；螯 合劑諸如乙二胺四乙酸等；缓衝劑諸如乙酸鹽，檸樣酸邇 ，或磷酸鹽等，及諝節張力之製劑諸如氛化鈉或右旋糖等 。此非經腸部之製劑可装在安瓿，可丢棄式注射管或由玻 璃或塑膠所製之多重劑量瓶中。 下列稱謂及（簡稱）乃彼此同義：多形核白血球（ PMNL) , 〔 4 一 （ 2 —羥乙基）一 1 一哌暸一乙烷磺 酸（HEP ES),用以在離心期間表示離心力所用之重 力倍數因子（xg),毫升（mL),攝氏度數（υ), 鈣離子（Ca〃），十億分之米（nm),二甲亞砠（ \ DMSO),乙撑雙（氧化乙烯睛基）一四乙酸（ EGTA)，克（s),毫克（mg),十億分之克（ng )，莫耳（Μ),毫莫耳（mM),微莫耳，（WM), 調理化酵母聚糖（OZ)，大戟二萜醇肉豆蔻酸酯乙酸酯 (PMA),甲醯基_蛋胺醯基一白胺醯基一苯基丙胺酸 (fMLP),白三烯 B4 ( L T B I ) 〇 化合物通常係以三字母之簡寫〜MDL —空格而 後五或六個數字之延伸號碼代表。下列為代表性實例：1 —苯基一 3 —〔（4_笮氣基）苯基〕一 2—丙炔一 1一 酮（MDL 1 0 0, 2 2 5) ; 1 一苯基一3 — （4- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂- 線· 本紙張凡度逍用中B S家標準(CNS)甲4規格(210x297公龙) -25 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

205548 λ6 ___ Β6 五、發明説明（24) 吡啶基）一 2 —丙炔一 1一酮（MDL 101,098 );1 一（4 一二甲胺基苯基）_ 3 —（4 一吡啶基）一 3 —丙炔一 1一_ (MDL 102, 175) ; 1-苯 基一 3 —〔（4 一爷氣基）苯基〕一 2 —丙炔_1 一酮（ M D L 101,097) ; 1 — （4 一二甲胺基苯基） 一 3_ (4 —吡啶基）一 2 —丙烯一 1 一酮（MDL 101,240) ; 1—苯基一 3 —（4 一吡啶基）一 2 一丙烯一 1 一酮（MDL 29,355) ； 1 - ( 4 - 二乙胺基苯基）一3 —（4 一喹啉基）一 2 —丙炔一 1 一 酮（MDL 102,387)。 白血球對活化作用訊號（刺激劑）之反應可藉於試管 試驗内測定细胞内之鈣，或藉測定相鼯因素諸如過氣化物 陰離子，及骨链過氣化酶而得知。此外，白血球於活體内 對剌檄作用之反應可於水腫之動物模型，諸如角叉菜膠誘 導性鼠腳水腫模型，路易斯鼠之輔劑誘導性開節炎模型及 鼠皮I*之局部過敏壊死反應中估測。本發明者證實，使用 本申請專利範圍化合物之方法及彼等於先前分析法中之使 用法。_iL Sprague-Dawley 鼠（1 50 — 250 克）像由 Harlan Sprgue-Dawley 鼠（Indianapolis，IN)獲得。漢克氏（ Hank's)均衡化鹽（Η B S S ; Gibco，Grand Island， NY)乃補充上20mM HEPES,並調整至pH (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) 本紙張尺度逍用中國B家樣準(CNS)甲4規格(210x297公*) -26 - 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 205548 Λ6 _ Β6 ，五、發明説明（25) 7 ♦ 4，酷肢酸納偽由 I C N B i 〇 c h e m i c a 1 ( C 1 e ν e 1 a n d， OH)獲得。Fura-2/AM 則由 Molecular Probe .(Eugene， OR )獲得。愛爾諾徽素（Iononyc i n)像由Ca 1 B i oche·.( San Diego, CA)獲得。過氣化物歧化酶换由DD I Pharmaceuticals (Mountain View， CA) 獲得。 所有其它試劑 則由SUia化學公司（St. Louis，MO)獲得，所有購得之 試劑均認定為標準者。 多形校白血球之分離作用（PMNL) 鼠之PMNI：僳於腹膜内注射6mi 8%酪朊酸鈉 後由滲出液中取得。注射之十八小時後，藉二氣化硪吸入 法將鼠隻宰殺，再將腹腔以漢克氏均衡化之鹽溶液（ HBSS)灌洗。藉離心法將PMNL濃缩液，藉低張溶 解法移去污染之红血球。而後將PMNL藉離心作用（ 4 0 0 xg 1 0分鐘）淸洗兩次，並令之再懸浮於 HBSS中。細胞活存力乃藉錐蟲藍排斥作用而得知大於 9 0%，且藉^18}^4 41^&染色法得知有9 0%以上之 細胞為Ρ Μ N L。 細朐肉^鈣^測昼 · 細胞内之鈣值僳使用Fura— 2作為螢光指示剤（〇1^-nkiewicz et al·，1985)而得知。使用Korchak等人之方 法（1 9 8 8 )將Fura- 2以乙醛氣基甲酯之形式（Fur-a— 2/AM)裝入PMNL中。特別地，將1X108 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝' 訂_ 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公龙) -27 - ί,05δ48 Λ 6 Β6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（26) PMNL/me 與 1 O/iM Fura - 2 / A Μ 共同於 HBSS中，於37¾下保溫10分鐘，而後將细胞懸浮 液以HBSS稀釋10倍，繼而保溫另20分鐘。再將细 胞離心（於25它下以400xg之速離心8分鐘），並 令PMNL (1X107値细胞/mi)再度懸浮於含1 %牛血淸白蛋白之HBSS中。进而將细胞於室溫下貯藏 ，並於3小時内使用。 細胞内錚值之測定像使用雙重波長分光光度計（Photon Technology International， New Brunswick. NJ) 而得。將2mC PMNL懸浮液（1X107値细胞/ mj?)於371C下磁性攪拌。並於活化前，將細胞與化合 物於37*C下預保溫1 5分鐘。當化合物溶於DMS0中 並直接加入時，DMS0於最终细胞懸浮液中之濃度從未 超過0. 3%。加入化合物或載色劑及剌激劑後之總體積 變化從未超過3%，細胞内之鈣濃度係藉將7 WM愛爾諾 徽素加至PMNL (於含1% BSA之HBSS中）中 以設定細胞中之最大鈣值而予以校正。繼而以2 OmM E G T A處理1小時以得最小之舒值。Grynk i ew i ez等人 之方法（1 9 8 5)乃用以定量细胞内之0值（假定Fur- 參 a_2之Kd值為24〇11111)。每一實驗乃於三値分別 之場合重覆進行，鈣變化之型式為這些實驗之代表。 骨铺渦氬化醅（MPQ)之釋出 ΜΡ0之釋出僳使用鄰聯二茴香胺之MP0催化劑氣 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) 裝· 訂_ 線< 本紙張尺度逍用中國困家標準(CNS)甲4規格(210x297公釐) -28 - 經濟部中央標準局貝工消t合作社印製 L05548 八6 _B6_ 五、發明説明（27) 化作用而測知。此實驗傜於9 6孔式撤滴定盤（Webster 及Henson, 1 978)中進行。毎一孔中，將50毫升（ 整份之PMNL懸浮液（2X107値细胞/mi? ，於HBSS中）與含載色剤（0. 3%DMS0)或抑 制劑之50/zi? HBSS共同於37t：下保溫30分鐘 。最终之DMS0濃度從未超過0. 3%且於毎一實驗之 整値過程中保持恒定。欲活化PMNL,則將50^)2之 下列之一者於37C下加入達30分鐘：N—甲醛基一 Met— Leu — Phe (fMLP；0. 1/iM) i 大 戟二帖醇肉豆蔻酸酯乙酸酯（PMA, 200ng/mi );或鼠血清之諝理化酵母聚糖（ΟΖίΖ.βϋβ/ιηί ，藉Ward等人之方法製得，1 983)。如適當的話，將 剌激劑加至亦含化合物或載色劑之50^)2 HBSS中 以避免抑制劑之濃度改變。細胞活化作用乃藉將微滴定盤 於22t：下以600xg之速離心5分鐘而終止。组而將 整份（100« J?)上層液由每一孔中移出，再轉移至 96孔式平底微滴定盤中以供ΜΡ0之分析。將新製得之 含5 0 u H 0· 2M磷酸鈉缓衝液（pH6. 2), 2 5 u又 3 . 9 mΜ鄰聯二茴香胺及2 5 w艾 0. 0 1 5Μ過氣化氫之溶液加至毎一整份之上層液中。 空白组份使用不含過氣化氫之相同溶液獲得，再將撤滴定 盤混合，而後於室溫下於暗室中保溫約15分鐘。繼而於 4 5 0 nm下測量樣品之吸光度。 (請先閲讀背面之注意事項再填窝本頁) 裝· 訂_ 線· 本紙張尺度通用中SB家標準(CNS)甲4規格(210X297公«) -29 - 經濟部中央標準局A工消費合作社印製 Λ 6 __B6_ 五、發明説明（28) 過氣化物陰雞孑（SO Α)之産生 過氣化物陰離子之産生傜使用可與Leslie法（ 1 987)相比之方法採用微滴定盤而測定，且於催化酶 (Arthur等人，1987)之存在下進行。將整份（50 wi)鼠PMNL懸浮液（2X107値细胞/mi?，於 HBSS中）依上述之方法與含載色劑（0. 3% DMSO)或化合物之50/ii? HBSS共同於37t： 下保溫3 0分鐘。再將含5 . 9 8 mg / m β細胞色素C ( SUma第I型）及〇. lmg/mi?催化酶（如適當的話加 上化合物）之100毫升缓衝液加至每一樣品中。供分光 光度測量所用之空白组（於细胞色素C,催化酶及SOD 存在下含有未受剌撖之細胞）亦予製備。欲活化PMNL ，乃將7 5 u β ΡΜΑ或0Ζ加入以獲得細胞活化劑（ 加上上述供ΜΡ0釋出之載色劑或抑制劑）之最終濃度， 再將細胞更進一步於3 7t：下保溫6 0分鐘。活化作用則 藉於41C下以60 Ox g之速離心5分鐘而終止。繼而將 整份（200/i ¢)上層液轉移至第二個平孔微滴定盤中 ，再於550nm下予以分光光度地測量。 * 奮例9 各種不同刺激劑對PMN L細朐内之鈣之效應 使用f M L P將預先裝有Fura — 2之鼠PMNL予以 刺激，繼而測量細胞内之鈣值（圖1 )，趨化性肽 fMLP産生雙相反應，第一個尖峰乃於提供肽剌激劑之 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝< 訂_ 線. 本紙張尺度逍用中國國家楳準(CNS)甲4規格(210x297公龙) -30 - Λ 6 Β6 五、發明説明（29) 3 ◦秒後逹到最大值，而於約1 ◦ 0秒及達到第二値最高 峰。 雙相反應僳與Korchak等人（1 986)對人類唾中 性白血球所做之结果相符，其中，反應之尖峰乃相當於細 胞内之鈣之早期釋出，彼是使用LTB<之反應所得。反 應之第二相（相當於在剌激後之100秒時所呈現之第二 尖峰）則與細胞外之0之流入有關，通常由刀豆球朊A誘 導性反應所産生，熟知技藝者所解釋之雙相反應中，第一 相僳指細胞内0之釋出，第二相則相當於細胞外0之流入 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公着) -31 -

c,〇5b4B Λ 6 B6 五、發明説明（30) [Ca-], Ο Ο 〇 α cr-

ο CD X ! cr· o 通涵(孬)一 經濟部中央標準局员工消費合作社印製

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(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂- 線- 本紙張尺度逍用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公釐） -32 - 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 205548 Λ 6 __Β6_ 五、發明説明（31) 如圖1所示，將PMNL與指定濃度之MDL 101, 240或MDL 29,355預保溫後，將使 第二値彼之细胞内之鈣變化受到選擇性濃度依賴性壓制作 用。吾人可見第二尖峰被式（1)化合物（以MDL 101, 240及MDL 29，355之活性代表）抑 制之作用可有效地抑制經處理之PMNL之鈣攝入。吾人 亦可見MDL 101, 240之抑制作用乃強於MDL 29， 355者，但因彼等均可壓制第二相之反應，故均 具有明顯之抑制效應。然而，在高濃度（>100/um) 下，化合物確實開始影響第一相（資料未示）。對照組之 反應（其中並無式（1)化合物涵蓋在fMLP剌撖劑中 )則顯示可觀察到之雙相反應。 謇例1 Ο 化合物對氬P M N L酵袤釋出及渦氫化物陰離孑库牛：> 妫 I 鼠PMNL像於含Ca〃之HBSS中分離出。如同 下圔中所簡示，鼠PMNL於細胞鬆弛素B存在下進行之 f ML P剌擻作用或使用調理化酵母聚糖或使用愛爾諾徽 奢 素進行之作用將導致骨發過氣化酶之釋出（fMLP/ MPO, OZ/MPO，及 ION/MPO;分別為第 2 列，第4列及第6列）。加入指定濃度之MDL 29， 355或MDL 101, 240後可使骨饉過氧 化酶之釋出受到劑量依賴性之抑制。同樣地，PMA及 衣紙張尺度逍用中a囲家標準（CNS)甲4規格（210x297公*) " ' ' -33 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂< 線· ς〇5548 Λ 6 Β6 五、發明説明（32) 0Ζ可産生過氧化物陰離子，彼乃藉由加入MDL 29, 355或MDL 101, 240而受到劑量依賴 性之抑制。如果鼠PMNL細胞外之鈣喪失，則這些資料 亦符合吾人所期望之效應（資料未示）。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂 線- 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 本紙張尺度逍用中國國家楳準(CNS)甲4規格(210X297公釐) -34 - 8 ,a> ro ύ o 66 ΛΒ 五、發明説明（33) 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 CO ac 异广s H S s ro 么 as f—» cS 〇 1—* CJ* o 1—» σ> CJi CJI CO CO g CT) 1 ΓΌ 52 ζ 、ro § : s ♦—· »—* 1—» ro PO -J cn S 03 Λ CO CO σ) CO ro -J 1 CJ? σ> '•J σ> σ> CO CJI s I—» I 01 I 办 CJ1 »—* -J £ 00 ro 00 CO »—· CO ς〇 σ> ♦—1 a σ> CO 09 σ> CJI : ·: -j S'0 t ro (O 1 岩 ro 1 s 1 »—* ro CO fO 1—* S 03 s 适05 > 1—* ro in I—* ro CO 1—* ro CJI ΟΪ <0 — g <〇 1 s —J <D PO CJi CJi cry cn s CP * s 、►«· 8 ° s σ> 〇〇 (O σ> bo ro 1—* cn cn η- s ^ 缍 ig. PHH ΗΡΠwsnAVi- BIU^— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 本紙張尺度逍用中國困家標準（CNS)甲4規格(210X297公潑：) -35 - 五、發明説明 (34) Λ 6 Β 6 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 CO 3： ^ ^ ^ S $ 8 ro S as . 'w^ C3 s CO »—* —J CO I—* ΓΟ C7> CO ♦—* fO cn \ ru 1 cn σ> cn CO CT> CO CO w S CO ΓΟ on CO ΓΟ p 1—* 0〇 ro cn 二 1—» CJT1 i ♦—* <=> ♦—* bo CJl cn ro CO Irt w ^ s OI ώ ο CJ1 o ώ <=> fo CO Cn 05 1—4 σ 雪m cn ο CO O) »—* CO cn CO ►—* ΧΛ S ^ 1 PO cn to CO 办 cn 2 cn i °° CO o ♦—* CO CO CO CJi ·—* w g 〇= 1 bo ΓΟ CJl IV> ♦—* CO σ> cjy CO S o < g 〇 00 •办 C3 »—* σι CO CO ro CO ·—* s ^ 8 i ^ ^ i- —lu^— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 私紙張尺度逍用中國國家標準（CNS)甲4規格(210x297公釐） 36 - 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 五、發明説明（35) 實例1 1 角叉莖暖誘瀵忡竄御水睡 本試驗係使用重90至1 〇〇克之卻爾斯河雄Sprag-ue-Dawley鼠。左後脚之發炎像藉將1%角叉菜膠溶液（ 0. 0 5CC)注射至脚之踱表面上而誘生。對倒腳則注射 等董之鹽水。藥物乃於脚注射之一小時前由口部或腹膜内 施入（1 CC / 1 0 0克）。注射角叉菜膠之三小時後，測 量對照及發炎脚之體積差異。令每一隻腳浸於水銀井中， 再記錄水銀被取代之量。脚像均勻地浸至水銀中最高達髮 線之起端。而後使用連接至示波記錄器上之靜旅壓電功率 轉送器以測量被取代之小量之水銀量。每一測量群平均由 四隻鼠组成，而群乃進行三次各別之測量。角叉菜膠誘導 性鼠脚水腫試驗之結果乃示於下表中。 隹艾莖_諉琪件窗.咖太睡 化会物 路撺 抑制作用辦 MDL 29,355 腹膜内 51.4土 8.5 #- 奮例1 2 路易舫鼠^輔割諸溪件關節炎模型 將0. lm文酪結核桿菌（Difco)之礦油液（5呢 .mi?)或單獨地將礦油由皮内加至重1 50 — 200克 之近親交配之雌路易斯鼠（Charles River)之尾中。再 Λ 6 Β6 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 装- 訂 線_ 本紙張尺度逍用中國B家標準(CNS)甲4規格(210x297公《) -37 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ^〇5〇4B Λ 6 ___B6_ 五、發明説明（36) 由接種之當天開始，使用水銀取代法測定右及左後肢之腳 水腫狀況達32天。再由第1天開始，將某一些鼠隻以 3〇mg/kg (口服）MDL 29，355每日處理一次 。在笫2 0天，當對照组之脚水腫達到最大程度時，經 MDL 29, 355處理之動物可使脚腫脹程度顯著地 降低，36. 4%±16. 6%。在第32天，經處理之 動物之脚腫脹程度則與未經處理之對照组無顯著差異（抑 制度為30. 9%土 22. 4%),但3隻經處理動物中 有一者從未顯現輔劑關節炎，然而所有對照组均顯現。 窨例1 3 鼠皮盧之局部渦敏鹿死皮應 令重200-250克已麻痺之雄Sprague-Daw ley鼠 (Charles Rive r)由靜脈内接受lOOng/kg無菌牛血 清白蛋白（BSA)溶液〇注射液立即地 再將1 00 W g兔抗一 BSA之鹽水溶液由皮内注入。此 將産生免疫複體促成性炎症（過敏壞死反應），其中之免 疫複體可固定可吸引噻中性白血球之補體釋出因子。噻中 性白血球乃繼而被活化而導致以出血性斑點顯現之局部組 織破壞。反應之程度則藉影像分析技術測定斑點之大小而 反映出。當於過敏壤死反應起始前之30分鐘，以100 mg/kg之剤量將M D L 2 9 , 3 5 5由腹膜内施人時， 則出血性斑點之大小乃降低55. 0%±16. 8%。當 將MDL 29, 355以100/ig之劑量與抗髏共同 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 装· 訂- 本紙張尺度逍用中國家採毕(CNS)甲4規格(210X297公*) 一 38 - Λ 6 Β 6 五、發明説明（37)由皮内施入時，則出血性斑點之大小乃降低41. 7%土

¾ 5 2 T—I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂_ 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 本紙張尺度逍用中國B家標準(CNS)甲4規格(210x297公釐) -39 -

Claims (1)

1. A7 B7 C7 D7 六、申請專利範園 附件： 第80107366號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 .下式化合物 〇 民國82年4月修正 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 其中 Ar -C-CH = CH

   ⑴ ΑΓ為下式之基圃：

   Ri R2 經濟部中央標準局员工消費合作社印製 或 其中 Ri ,只2及1^乃各自為氫；C: 一 Cs烷氣基； Ci — Cs院基硫或—Ν (Υι) (Y2)，其中Yi 及丫2乃各自為氫或Ci—Cs烷基； 或其製藥上可接受性鹽。 2 .根據申請專利範圍第1項之化合物，其中，化合 物像1一 （卩塞吩—2 —基）_3 - （4—D比旋基）一2 — 丙稀一 1 —酮。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210 X 297公釐） T A7 B7 05546 c? _____D7_ 六、申請專利範圍 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 3 ♦根據申請專利範圍第1項之化合物，其中，化合 物僳1 一〔 （3, 4, 5 —三甲氧基）苯基〕一3 — （2 一妣陡基）一2 —丙嫌一 1 一酮。 4.根據申請專利範圍第1項之化合物，其中，化合 物係1—〔 （3, 4，5 —三甲氧基）苯基〕一 3 — （3 —D比症基）一 2 —丙嫌一 1 一酬。 5 .根據申請專利範圍第1項之化合物，其中，化合 物像1 一 （呋喃—2—基）一 3 - （4 一肶啶基）_2 — 丙稀一1一酮。 6.根據申請專利範圍第1項之化合物，其中，化合 物像1— (4一二甲胺基苯基）一3_ (4 —吡啶基）一 2—丙燦一1 一嗣。 7 .根據申請專利範圍第1項之化合物，其中，化合 物係1一苯基一3- （4—吡啶基）—2—丙烯一1_酮 Ο 8 .根據申請專利範圍第1項之化合物，其中，化合 物偽1—〔 （4 一甲巯基）苯基〕一 3 — （4 —吡啶基） —2 —丙稀一 1 一酮。 绶濟部中央標準局R工消费合作社印製 9 .根據申請專利範圍第1項之化合物，其中，化合 物偽1 一 （3 —三氟甲基苯基）—3_ (4 —吡啶基）一 2_丙稀一 1 —酮。 10.—種用於抑制病患體内白血球内鈣攝入之藥學 組成物，其包括抑制鈣攝入有效量之申請專利範圍第1項 化合物，並結合至少一種製藥上可接受性載體。 本紙張又度適用中國國家標準（CNS)甲4规格（210 X 297公釐) 一 .L _ ~ 經濟部中央標準局8工消费合作社印製 205548 A7 B7 C7 ___D7__ 六、申請專利範園 1 1 .裉據申請專利範圍第1 0項之藥學組成物，其 中，病患偽患有免疫疾病。 12.根據申請專利範圍第10或11項之藥學組成 物，其中，病患僳患有類風濕性關節炎。 1 3.根據申請專利範圍第1 〇或1 1項之藥學組成 物，其中，病患像患有免疫脈管炎。 1 4 .根據申請專利範圍第1 〇項之藥學組成物，其 中，病患係患有發炎疾病。 15.根據申請專利範圍第1◦項之藥學組成物，其 中，病患傜患有嗜中性皮病。 1 6 . —種供抑制病患體内血小板内鈣攝入之藥學組 成物，其包括抑制鈣攝入有效查之申請專利範圍第1項化 合物，其結合至少一種製藥上可接受性載體。 1 7 .根據申請專利範圍第1 6項之藥學組成物，其 中，病患傜患有心臓血管病症。 1 8 .根據申請專利範圍第1 6項之藥學組成物，其 中，病患係患有心肌梗塞。 1 9 .根據申請專利範圍第1 6項之藥學組成物，其 中，病患係患有缺血性再灌注之損傷。 (請先間讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂· 本紙張尺度適用中國國家標準（CN’S)甲4規格（210 X 297公釐）