TARIFNAME YENI ANTI-INSAN TSLP RESEPTÖR ANTIKORU Teknik Alan Mevcut bulus, yeni bir anti-insan TSLP reseptör antikoru ile ilgilidir. Önceki Teknik Timik stromal lenfopoietin (TSLP), pro-inflamatuvar uyarana yanltîlolarak üretilen, epitelyum hücrelerinden elde edilen bir sitokindir. Temel olarak, TSLP, dendritik hücrelerin ve mast hücrelerinin aktivasyonu vaslßslýla bir alerjik inflamatuvar yanlElElartlElnaktadlE Dendritik hücreler, bir hematopoietik reseptör ailesinin üyeleri olan TSLP reseptörü ve IL-7 reseptörü a zincirini eksprese etmektedir ve TSLP, TSLP reseptörü ve IL-7 reseptörü a-zincirinden olusan bir heterodimere baglanmaktadlEl böylelikle dendritik hücreleri aktive etmektedir. TSLP tarafian aktive edilen dendritik hücreler, timus gibi inflamatuvar kemokinleri ve aktivasyon regülasyonlu kemokinleri (TARC (CCL17)), makrofaj-türevli kemokinleri (MDC (CCL22)) ve MDC'nin Th2 kemokinleri oldugu bir infalamasyon alan. Th2 hücrelerini çektigi edilen dendritik hücreler, naif T hücrelerinin Th2 hücrelerine farklllâsmasIEgüçlü sekilde indüklemektedir ve Th2 hücreleri, IL-4, IL-5, IL-13, ve TNFa üretmektedir ve inflamatuvar Bu tür bir TSLP reseptörü vasltîi'sslýla TSLP'den kaynaklElolarak dendritik hücrelerinin aktivasyonunun, astIi gibi alerjik inflamatuvar hastallKlar ve sistemik skleroz da dahil olmak üzere hastalllZl patolojisine dahil oldugu rapor edilmistir. AstIi bakIiIan, TSLP ekspresyonunun özellikle akcigerde art-@Etransgenik farelerde, akcigerde IgE ve Th2 sitokinlerinin artan bir miktarüile birlikte bir hava yolundaki inflamatuvar yanlß yol açI[giEle bunun astllüaatolojiye sebep oldugu rapor edilmistir (Nat. uygulandlglDTSLP reseptörünün veya bir astl modelinin bulundugu nakavt farelerde, kandaki Th2 sitokinlerinin ve IgE üretiminin baskllândlglEl/e solunum islevinin gelistirildigi hastaligll siddeti ile baglantHJDsekilde astlllîlhava yollarlEha arttigiürapor edilmistir (J. 2798). Sistemik skleroz bakIiIan, sistemik skleroz hastalarlEllB] derisinde TSLP'nin aslEIElaksprese oranEt-lil, TSLP reseptörü-nakavt fareleri kullanilârak bir bleomisin-indüklü sklerodermada Bu baglamda, insan TSLP reseptörüne spesifik olarak baglanan ve insan TSLP reseptörü vasilîislýla insan TSLP'sinin faaliyetini inhibe eden bir monoklonal antikor gelistirilebildiginde, bu tür bir antikorun, insan TSLP ve Insan TSLP reseptörünün hastallKl patolojisine dahil oldugu çesitli hastalilZIarI önlenmesi ve tedavi edilmesinde faydalElmasDbeklenmektedir. Simdiye kadar arastlElnanI yürütüldügü insan TSLP reseptörüne karslîlantikorlar olarak, bir fare monoklonal antikoru olarak 13H5 ve bunun bir insanlastlîllBilglantikoru olarak hu, fare monoklonal antikoru olarak 1D6.C9 ve bunun kimerik antikorlarü olarak Nv, tamamen insan antikorlarEl olarak NV164-1 ve NV ve bir hamsterden elde edilen insanlastlEIIEilgmonoklonal antikor olarak TSLPR-012_141 rapor edilmistir. 13H5'te, insan TSLP reseptörünü stabil sekilde eksprese eden Ba/F3 hücreleri kullanilârak bir TSLP-indüklü proliferasyon tahlilinde nötrlestirici aktivitesi dogrulanmlgtß ancak hu13H5'te nötrlestirici aktivitesi henüz dogrulanmamlgtlîl (Patent DokümanlZl 1). DahasÇI Patent DokümanlarlZlZ ila 4'ün tarifnamesine dayanarak, bu dokümanlarda açüZIanan antikorlar araleUan, TSLPR-012_141'in en yüksek nötrlestirici aktivitesine sahip oldugu tespit edilmistir (Patent DokümanlarEZ ila 4). TSLPR-012_141, çesitli nötrlestirici aktivitesi testleri vasitâslýla degerlendirilmistir. Örnegin, insan TSLP reseptörünü stabil sekilde eksprese eden Ba/F3 hücrelerinin kullanI[gll:lTSLP-indüklü proliferasyon tahlilinde, insan periferal kan-türevli dendritik hücrelerinin kullanligiüiSLP-indüklü TARC, MDC ve IL-8 üretim tahlilinde, insan periferal kan-türevli dendritik hücrelerinin ve naif T-hücresi ko-kültür sistemlerinin kullan-[giEl TSLP-indüklü Th2 sitokin üretim tahlili ve benzerinde, TSLPR-012_141'in nötrlestirme aktivitesi sergiledigi dogrulanmlgtE(Patent DokümanEli). Bununla birlikte, antikor ilacüblarak kullanIi için yüksek nötrlestirici aktivitesi sergileyen bir antikor arzu edilmektedir. Bir antikor ilacII etkili dozunu belirleyen ana faktörler, bir antijene karsüntikorun baglama aktivitesi ve nötrlestirici aktivitesinin yanüsß vücutta mevcut olan antijenin miktarIü kapsamaktadlEI Baglama aktivitesinin ve nötrlestirici aktivitenin artlgîtlozajda azalmaya yol açmaktadlüve bunun sonucunda, hastalar. finansal yükünde ve medikal harcamalarlEUa da bir azalmaya yol açmakta olup, bu fazlaca faydalEbir gelisimdir. Dolaylîlýla, çesitli hastalilZIarI önlenmesinde ve tedavi edilmesinde kullanilBiak üzere konvansiyonel anti-insan TSLP reseptör antikoruna klýlasla, aktivite bakIilEldan üstün olan bir anti-insan TSLP reseptör antikorunun elde edilmesi gerekmektedir. Önceki Teknik Patent DokümanE] Bulusun Aç[lZlamasl:l Bulus TaraflEUan Çözülecek Olan Problemler Mevcut bulusun bir amacüinsan TSLP reseptörüne spesifik olarak baglanan ve insan TSLP reseptörü vasüâslýla insan TSLP'sinin bir faaliyetini inhibe eden bir anti-insan TSLP reseptörü antikorunun saglanmasi& Problemlerin Çözülmesine Yönelik Yollar Mevcut bulus sahipleri tarafütlan anti-insan TSLP reseptörü antikorunun üretimi üzerine gerçeklestirilen yogun bir arastlElnanlEl sonucunda, SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarü ila 118'in amino asit sekansIan olusan bir aglElzincir degisken bölgesi ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3'ün amino asit numaralarül ila 108'in amino asit sekansIan olusan bir hafif zincir degisken bölgesini içeren bir anti-insan TSLP reseptör antikoru saglanmlgtlEl Anti-insan TSLP reseptör antikorunun, TSLP tarafian indüklenen MDC proteinleri üretimini ve TARC mRNA ekspresyonunu inhibe ettigi (Örnekler 5 ve 6) ve bir maymun Askaris antijeni hassaslastlîilna modelinde bir alerjik reaksiyonu basküâdigiüörnek 7), böylelikle mevcut bulusu tamamladfgüirtaya çlEhrUBilstlEI Yani, mevcut bulus asaglkileri kapsamaktadEI bunun bir antijen-baglama fragmenti: (1) SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarEll ila 118'in amino asit sekansIan olusan bir agEI zincir degisken bölgesi ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3'ün amino asit numaralarlîl ila 108'in amino asit sekans'an olusan bir hafif zincir degisken bölgesini içeren bir anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun (2) antikorun veya bunun antijen baglama fragmentinin (1) agIEI zincirine ait N terminalin glutamik asidinin, pirogiutamik aside modifiye edildigi bir anti-insan TSLP reseptörü antikoru veya bunun bir antijen-baglama fragmenti. NUMARASIzl ile gösterilen amino asit sekansIan olusan bir aglEi zinciri ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekanleUan olusan bir hafif zinciri içermektedir. NUMARASI:1'in amino asit numarasElL'e ait glutamik asidin pirogiutamik aside modifiye edildigi ve/veya SEKANS KIMLIK NUMARASI 1'in amino asit numarasEi448'e ait lisinin silindigi, SEKANS KIMLIK NUMARASI:1 ile gösterilen amino asit sekansIan olusan aglîl zinciri ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekansian olusan hafif zinciri içermektedir. NUMARASI:1'in amino asit numaralarü ila 447'nin amino asit sekansldan olusan bir agiEl zincir ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekansIdan olusan bir hafif zincir içermektedir. sekansIEiçeren bir polinükleotit ve madde 1(1)'e göre antikorun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan bir baz sekansüçeren bir polinükleotit. sekansIEiçeren bir polinükleotiti ve madde 1(1)'e göre antikorun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan bir baz sekanslîçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü. (a) madde 1(1)'e göre anti-insan TSLP reseptör antikorunun agß zincir degisken bölgesini kodlayan bir baz sekansEiçeren bir polinükleotiti ve antikorun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan bir baz sekansEliçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücre; (b) madde 1(1)'e göre anti-insan TSLP reseptör antikorunun agIEI zincir degisken bölgesini kodlayan bir baz sekansEliçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ve antikorun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan bir baz sekansüçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücre; (c) madde 1(1)'e göre anti-insan TSLP reseptör antikorunun agB zincir degisken bölgesini kodlayan bir baz sekanslZliçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücre; (d) madde 1(1)'e göre anti-insan TSLP reseptör antikorunun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan bir baz sekansEliçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücre; burada konak hücre söz konusu antikoru eksprese etmektedir. fragmentinin eksprese edilmesi için bir konak hücrenin kültürlenmesini içeren bir yöntem vaslßslîla üretilen bir anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun bir antijen-baglama fragmenti, burada konak hücre, madde 7'ye göre konak hücredir. baglama fragmentini ve/veya madde 1(2)'ye göre anti-insan TSLP reseptör antikorunu veya bunun antijen-baglama fragmentini ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir eksipiyanEiÇeren bir farmasötik bilesim. reseptör antikorunu ve/veya madde 4'e göre anti-insan TSLP reseptör antikorunu ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir eksipiyanEIlçermektedir. madde 10'a göre farmasötik bilesim. Maddeler 1 ila 4 ve 8'e göre anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen-baglama fragmenti, antikorun veya bunun antijen-baglama fragmentinin ve bir baska peptit veya proteinin bir füzyonunu ve buraya baglanan bir modifikasyon ajan. sahip bir modifikasyonu içermektedir. Bulusun Etkileri Mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru insan TSLP reseptörüne baglanmaktadlEl Insan TSLP reseptörü vasIslSLla insan TSLP'sinin bir faaliyetine karsEhötrlestirici aktiviteye sahiptir ve astIi veya sistemik skleroz gibi alerjik inflamatuvar hastalllZlarII önlenmesi veya tedavi edilmesine yönelik bir ajan olarak kullanüâbilmektedir. Sekillerin Klgia AçÜZlamasEl Sekil 1, bir maymun Askaris antijen hassaslastlîrlna modelinde Askaris antijenine özgü IgE konsantrasyonu üzerindeki tamamen insan T7-27'nin bir inhibitör faaliyetini göstermektedir. Dikey eksen, bir Vehikül grubu araleblan birinin Gün 22'de plazma Askaris antijene özgü IgE konsantrasyonu 2000 U/mL'ye ayarlandiglia, ilgili numunelerin göreli plazma Askaris antijene özgü IgE konsantrasyonunu temsil etmektedir. Vehikül grubunun ve bir antikor uygulama grubunun Gün 1'deki IgE konsantrasyonu (alüminyum hidroksit jel ile asklâla tutulan bir Askaris antijen s-I uygulanmasIan önce), Vehikül grubunun Gün 22'deki IgE konsantrasyonu ve antikor uygulama grubunun Gün 22'deki IgE konsantrasyonu gösterilmektedir. Sekil 2, bir maymun Askaris antijeni hassaslastlülna modelinde bir Askaris antijenine özgü deri reaksiyonu üzerinde tamamen insan T7-27'sinin bir inhibitör faaliyetini göstermektedir. Gün 22'de, fosfat tamponlu salin (PBS) ve 100 ug/mL Askaris antijen çözeltisinin uygulanmasi dair sonuçlar gösterilmektedir. Dikey eksen, PBS vasltîlislýla bir deri reaksiyonuna ait bir çaplEl, Askaris antijen çözeltisi vasßslýla bir deri reaksiyonuna ait bir çaptan çllZlarI [glübir degeri (delta cm) temsil etmektedir. Sekil 3, bir fare astIi modelinde, bir hava yolu aslEIEtluyarIiIJKl reaksiyonu üzerinde bir anti-TSLP reseptör antikorunun bir inhibitör faaliyetini göstermektedir. Dikey eksen, bir solunum islevinin bir indeksi olarak kullanllân PenH'nin bir degerini temsil etmektedir (**p Sekil 4, fare asti modelinde eozinofillerin infiltrasyonu üzerinde anti-TSLP reseptör antikorunun bir inhibitör faaliyetini göstermektedir. Dikey eksen, bir BALF hücre süspansiyonu içerisindeki eozinofillerin say-Eüemsil etmektedir (**p < 0.01). Sekil 5, fare asti modelinde, TARC mRNA'nI ekspresyonu üzerinde anti-TSLP reseptör antikorunun bir inhibitör faaliyetini göstermektedir. Dikey eksen, TARC mRNA'nI bir ekspresyon seviyesini temsil etmektedir. Bulusun Gerçeklestirilmesine Yönelik Yapllând lîrlnalar Buradan itibaren, mevcut bulus ayrIEtlHEJIarak açlElanacaktE Bir antikorda bes IgG, IgM, IgA, IgD, ve IgE sIlElElnevcuttur ve bir antikor molekülünün zincirlerden yapüândlîllüiaktadlü Aglîlzincirler genelde yaklaslKl olarak 440 amino asit içeren bir polipeptit zincirinden olusmaktadB her bir sIEEliçin kendine özgü bir yaplýla sahiptir ve süslüa IgG, IgM, IgA, IgD, ve IgE'ye kars[l]]Zl gelen Igy, Igp, Iga, Igö, ve 199. olarak adlandßlßîaktadß DahasüIgGl, IgG2, IgG3, ve IgG4'ün dört alt sIlfIUgG'de mevcuttur ve sÜsMa bunlara karsilik] gelen agE zincirler Igyl, Igy2, 1973, ve Igy4 olarak adlandlElllIhaktadE Hafif zincir genelde 220 amino asit içeren bir polipeptit zincirinden olusmakta olup, bunlardan ikisi, tip L ve tip K bilinmektedir ve 19%, ve IgK olarak adlandlîlllfnaktadlEl Antikor moleküllerinin temel yap_ ait bir peptit konfigürasyonunda, iki homolog aglEIzincir ve iki homolog hafif zincir, disülfür baglarlIGS-S bagtIlve kovalent olmayan baglar tarafli-:dan baglanmaktadlEve bunun moleküler aglEllglEISOOOO ila 190000'dir. Iki tür hafif zincir herhangi bir aglîl zincir ile eslestirilebilmektedir. Ilgili antikor molekülleri tipik olarak iki özdes hafif zincirden ve iki özdes aglElzincirden olusmaktadE Zincirler içi S-S baglarlJbakIiIdan, S-S baglarIdan dördü, aglEzincirde mevcuttur (besi Igu ve 195 içerisinde) ve bunlardan ikisi ise hafif zincirde mevcuttur; bir döngü 100 ila 110 amino asit kaIlEt-an olusturulmaktadlü ve bu sterik yapEUöngüler arasIa benzerdir ve bir yaplglal birim veya bir alan olarak adlandlEIBiaktadlEl Aynüwayvan türünün aynEsI- (alt S.-) ait bir numune durumunda bile amino asit sekansII sabit olmad[gll]iiem aglîlzincirin hem de hafif zincirin amino terminal (N terminal) tarafIa bulunan alan bir degisken bölge olarak adlandlElIIhaktadlEIve ilgili alanlar ise bir aglElzincir degisken bölgesi (VH) ve bir hafif zincir degisken bölgesi (VL) olarak adlandlîllÜiaktadIE Degisken bölgeden bir karboksi terminalin (C terminal) amino asit sekansülier sliflia veya alt sIEEtia neredeyse sabittir ve bir sabit bölge olarak adlandEIlBiaktadlEl(alanlardan her biri süslýla CH1, CH2, CH3 ve CL olarak adlandlülßîaktadlî). Bir antikorun bir antijenik belirleyici yeri, VH ve VL'den yapllândlElIIhaktadlEI ve baglama özgüllügü, bu yerin amino asit sekanlela baglIlÜ Diger yandan, tamamlaylîzllâra ve çesitli hücrelere baglama gibi biyolojik aktiviteler, her bir sIEfZl(Ig) araslßha sabit bölge yapEIBrIaki farkllIJElarEl yans[iîinaktadlEl Hafif zincirlerin ve aglîl zincirlerin degisken bölgelerindeki degiskenligin, her iki zincirde de mevcut olan üç küçük hiper degisken bölge ile lellEIlüildugu ve bu bölgelerin, tamamlayEIHEJ belirleme bölgeleri olarak adland-[gll:bnlasl]fnaktadlü(N terminal taraflEUan CDR: CDRl, CDR2, ve CDR3). Degisken bölgenin geriye kalan klgh'iübir çerçeve bölgesi (FR) olarak adlandlEllBiaktadlElve görece sabittir. DahasÇIbir antikorun VH ve VL'sini içeren çesitli antijen baglama fragmenti türleri bir antijen baglama aktivitesine sahiptir. Örnegin, bir tek zincirli degisken bölge fragmenti (scFv), Fab, Fab', ve F(ab')2, tipik antijen-baglama fragmentleri olarak örneklenmektedir. Bir Fab, bir VH, bir CHl, ve eklem bölgesinin bir klgnIERapsayan bir hafif zincir ve bir aglîlzincir fragmenti ile olusturulan bir monovalent antijen-baglama fragmentidir. Bir Fab', bir VH, bir CH1, ve eklem bölgesinin bir klâlnIEkapsayan bir hafif zincir ve bir aglElzincir fragmenti ile olusturulan bir monovalent antijen-baglama fragmentidir aglEl zincirler arasIZB-S bagIElolusturan sistein kallîitüârüeklem bölgesi klgtnia bulundurulmaktadlEI Bir F(ab')2, iki Fab' fragmentinin eklem bölgesinde aglEIzincirIer arasE$-S bagülasiüslýla birbirine baglandlgilîlbir dimerik yaplýla sahip bir bivalent antijen-baglama fragmentidir. Bir scFv, bir baglaylEEl peptit vasüslýla baglantllândlîllân bir VH ve VL'den olusan bir monovalent antijen-baglama fragmentidir. Mevcut bulusun bir anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen-baglama fragmenti, asagIki özelliklere sahip bir anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen-baglama fragmentidir. Anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun bir antijen-baglama fragmenti, SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarEl ila 118'in amino asit sekansIan olusan bir agEzincir degisken bölgesini ve SEKANS KIMLIK NUMARASI13'ün amino asit numaralarEl ila 108'In amino asit sekansian olusan bir hafif zincir degisken bölgesini içermektedir. Tercihen, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptörü veya bunun antijen-baglama fragmenti yukari açilZIanan özelliklere sahiptir ve ayrlîb, bir aglElzincir sabit bölgesi ve bir hafif zincir sabit bölgesi içermektedir. Sabit bölge olarak, sabit bölgenin herhangi bir alt sIifIliîlörnegin, agEzincir sabit bölgesi olarak Igyl, Igy2, Igy3, veya Igy4'ün bir sabit bölgesi ve hafif zincir sabit bölgesi olarak Igx, veya IgK'nin bir sabit bölgesi) seçilebilmektedir, ancak aglElzincir sabit bölgesi olarak insan Igyl sabit bölgesi tercih edilmektedir ve hafif zincir sabit bölgesi olarak ise insan Igic sabit bölgesi tercih edilmektedir. Bir insan Igyl sabit bölgesi, örnegin SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarEl 119 ila 448'in amino asit sekansIan olusan insan Igyl sabit bölgesini kapsamaktadlü Bir insan IgK sabit bölgesi, örnegin SEKANS KIMLIK NUMARASIz3'ün amino asit numaralarEl 109 ila 214'ün amino asit sekansIan olusan insan IgK sabit bölgesini kapsamaktadE Mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen-baglama fragmenti olarak, yukari açiiZlanan aglrîl zincir degisken bölgesini ve hafif zincir degisken bölgesini içeren ve aglEl zincir sabit bölgesinin insan Igyl sabit bölgesi oldugu ve hafif zincir sabit bölgesinin ise insan Igic sabit bölgesi oldugu anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen-baglama fragmenti daha da tercih edilmektedir. Bir yapllândiEinada, mevcut bulusun antijen-baglama fragmenti, scFv, Fab, Fab', veya F(ab')2'dir. Teknikte uzman herhangi bir kisi, bir antikor veya bunun bir antijen-baglama fragmenti ve bir baska peptit veya proteinin bir füzyonunu olusturabilmektedir ve ayrlîla, teknikte bilinen bir yöntemi kullanarak, buraya baglanan bir modifikasyon ajanIEla sahip bir modifikasyonu da olusturabilmektedir. Mevcut bulusun antikoru veya bunun antijen-baglama fragmenti, bu tür bir füzyon veya modifikasyon formunda olan antikoru ve bunun antijen-baglama fragmentini kapsamaktadß Örnegin, SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarEil ila 118'in amino asit sekansIan olusan aglE zincir degisken bölgesini ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3'ün amino asit numaralarEll ila 108'in amino asit sekansIdan olusan bir hafif zincir degisken bölgesini içeren bir anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun bir antijen- baglama fragmenti, antikor veya bunun antijen-baglama fragmenti ve bir baska peptit veya proteinin bir füzyonunu ve buraya baglanan bir modifikasyon ajanlEla sahip bir modifikasyonu kapsamaktadlü Füzyon için kullanilân diger peptit veya protein, antikorun veya bunun antijen-baglama fragmentinin baglama aktivitesini indirgemedigi sürece özellikle sIlEllandlElIEiamaktadB bunun örnekleri, insan serum albumin, çesitli etiket peptitleri, yapay sarmal motif peptiti, maltoz-baglama proteinleri, glutatyon S transferaz, çesitli toksinler, multimerizasyonu tesvik edebilen diger peptitler veya proteinleri ve benzerini kapsamaktadlEl Modifikasyon için kullanilan modifikasyon ajanÇl antikorun veya bunun antijen-baglama fragmentinin baglama aktivitesini indirgemedigi sürece özellikle SIEJIElandlEIIIhamaktadlîj bunun örnekleri, polietilen glikol, seker zincirleri, fosfolipidler, Iipozomlar, düsük moleküler bilesikler ve benzerini kapsamaktadlîl Bir yapllândlünada, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru, asaglalaki özelliklere sahip bir anti-insan TSLP reseptör antikorudur. Bir anti-insan TSLP reseptör antikoru, SEKANS KIMLIK NUMARASI:1 ile gösterilen amino asit sekansIEUan olusan agEIzinciri ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekansIan olusan hafif zinciri içermektedir. Bir antikorun hücrelerde eksprese edilmesi durumunda, antikorun translasyondan sonra modifiye edildigi bilinmektedir. Post-translasyonel modifikasyon örnekleri, karboksipeptidaz vaslüslýla bir aglEIzincirin bir C terminaline ait Iizinin kesilmesini, bir aglEzincirin veya bir hafif zincirin bir N-terminaline ait glutaminin veya glutamik asitin piroglutamilasyonundan kaynaklßlarak piroglutamik aside modifikasyonu ve benzerini kapsamaktadlEI AgEzincirin C terminaline ait lisinin silindigi veya ag& zincirin N terminaline ait glutaminin büyük bir bölümünün piroglutamik asite modifiye edildigi bilinmektedir (Journal of Pharmaceutical bir antikorun aktivitesini etkilemedigi de bilinmektedir (Analytical Biochemistry, 2006, Cilt 348, syf. 24 ila 39). Mevcut bulusun antikoru, aglîlzincirin bir tam uzunlugunu içeren bir antikorun yanßß, bir C terminalinin lisininden yoksun bir aglElzincir içeren bir antikor, aglrîlzincire ait N terminalin glutamini veya glutamik asidinin piroglutamillemeden dolayElpiroglutamik aside modifiye edildigi bir antikor ve benzeri gibi, hücrelerin içerisindeki ekspresyon slüisia translasyondan sonra modifiye edilen bir antikoru kapsamaktadlEl Dahasümevcut bulusun antijen baglama fragmenti, aglElzincire ait N terminalin glutamini veya glutamik asidinin piroglutamillemeden dolayEpiroglutamik aside modifiye edildigi bir antijen baglama fragmenti gibi, hücrelerin içerisindeki ekspresyon leisIa translasyondan sonra modifiye edilen bir antijen baglama fragmentini kapsamaktadEl Örnegin, bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru, asaglîzlla aç[lZIanan bir anti-Insan TSLP reseptör antikorunu kapsamaktadlü SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numarasEll'e ait glutamik asidin piroglutamik aside modifiye edildigi ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numarasEl448'e ait zinciri ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekansldan olusan hafif zinciri içeren bir anti-insan TSLP reseptör antikoru. Mevcut bulus, asag-ki özelliklere sahip olan bir anti-insan TSLP reseptör antikorunu veya bunun bir antijen-baglama fragmentini kapsamaktadlEl SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarEBl ila 35'In amino asit sekansIan olusan CDR1, SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarE50 ila 66'nlEl amino asit sekansIian olusan CDR2 ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarlZB9 ila 107'nin amino asit sekansIan olusan CDR3 içeren bir agß zincir degisken bölgesi ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3'ün amino asit numaralarE24 ila 34'ün amino asit sekansIan olusan CDR1, SEKANS KIMLIK NUMARASI:3'ün amino asit numaralarElBO ila 56'nI amino asit sekansIan olusan CDR2 ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3'ün amino asit numaralarEBg ila 97'nin amino asit sekansüdan olusan CDR3'ü içeren hafif zincir degisken bölgesini içeren bir anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun bir antijen-baglama fragmenti. Mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptörü veya bunun antijen-baglama fragmenti, insan TSLP reseptörüne baglanmaktadlEl Antikorun veya bunun antijen-baglama fragmentinin insan TSLP reseptörüne baglanlp] baglanmadlglü önceki teknikteki bir baglama aktivitesi ölçüm yöntemi kullanilârak dogrulanmaktadlEi Baglama aktivitesi ölçümüne yönelik yöntemin örnekleri, Enzime bagllîlbaglgllîlllg deneyinin (ELISA) bir yöntemini veya yüzey plazmon rezonans.. (SPR) bir yöntemini kapsamaktadE ELISA'nI kullanllîhasmurumunda, bir örnek yöntemde, insan TSLP reseptörünün ve insan Fc'nin (insan TSLP reseptörü-insan Fc füzyon proteini (SEKANS KIMLIK NUMARASI:5'in baz sekansEllarafIdan kodlanmaktadlEJ) bir füzyon proteini, bir ELISA plakaslîiüzerinde immobilizedir ve bir test antikoru ise reakte edilmesi için buraya eklenmektedir. Reaksiyondan sonra, Yabanturpu peroksidazüHRP) gibi bir enzimle isaretlenmis bir anti-IgG antikoru gibi bir ikincil antikor veya benzeri reaksiyona sokulmustur ve yiKianmlgtlB ve ardIan, aktiviteyi tespit eden bir tepken (örnegin, HRP isaretlemesinin kullanllîhaslîidurumunda, BM-Kemiluminesans ELISA SubstratEl(POD) (Roche Diagnostics. baglanmadlglII dogrulanmaslîilnümkün olmustur. SPR'nin kullanilh1asllurumunda, örnegin, Biacore (tescilli marka) 2000'in (GE Healthcare Japan Corporation) kullanilmasülnümkündür. Bir örnek yöntemde, test antikoru bir sensörü çipinin bir yüzeyi üzerinde immobilizedir ve insan TSLP reseptörünün ve fare Fc'sinin bir füzyon proteini (Insan TSLP reseptörü-fare Fc füzyon proteini (SEKANS KIMLIK NUMARASI:6'nI baz sekansEtarafIan kodlanmaktadlE) aklgyoluna eklenmektedir. Antikor ve insan TSLP reseptörü arasIaki baglama hlîl3abitinin (ka), ayrglîrli hEEBabitinin (kd) ve ayrlglüi sabitinin (KD) analiz edilmesi vasitâslßa test antikorunun insan TSLP reseptörüne baglanlü baglanmadig'lElI dogrulanmasljlnümkündür. DahasÇImevcut bulusun antikoru veya bunun antijen-baglama fragmenti, diger hayvanlardan elde edilen TSLP reseptörüne (örnegin maymun TSLP reseptörü) baglanan bir antikoru veya bunun bir antijen-baglama fragmentini kapsamaktadlEl ve reseptörlere göre baglama aktivitesi, aynßiöntem kullanilârak ölçülebilmektedir. Tercihen, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen-baglama fragmenti, insan TSLP reseptörüne baglanmaktadlîl ve insan TSLP reseptörüne göre nötrlestirici aktiviteye sahiptir. Insan TSLP reseptörüne göre nötrlestirici aktivite, insan TSLP reseptörüne baglanma ile insan TSLP'sinden meydana getirilen herhangi bir biyolojik aktivitenin inhibe edilmesine yönelik aktivite anlam. gelmektedir ve bir indeks olarak insan TSLP reseptörü valei'eslýla insan TSLP'sinin bir veya birden çok biyolojik aktivitesine baglEl olarak degerlendirilebilmektedir. Bu tür nötrlestirici aktivitelerin örnekleri, TSLP-indüklemeli TARC mRNA ekspresyonu üzerindeki bir inhibitör aktivitesini ve insan periferal kan mononükleer hücreleri (PBMC) kullanllârak TSLP-indüklemeli MDC protein üretimi üzerindeki inhibitör aktivitesini kapsamaktadIE ve asaglîlhki Örnekler 5 ve 6'da açllîlanan yöntemler, aktivitenin spesifik bir degerlendirme yöntemi olarak kullan Hâbilmektedir. Daha ayriEtiIJBJlarak, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen baglama fragmentinin etkilerinin degerlendirilmesi için bir in vivo test kullanllâbilmektedir. Örnegin, asag-ki Örnek 7'de açiKIandlgiEiJzere, bir maymun Askaris antijen hassaslastlîrlna modeli kullanilârak bir anti-alerjik reaksiyon testi ile in vivo anti-insan TSLP reseptör antikorunun etkilerinin degerlendirilmesi mümkündür. Bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen-baglama fragmenti, mevcut tarifnamede açllîlanan bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun agIEi zincir degisken bölgesi ve hafif zincir degisken bölgesi üzerine olan sekans bilgisine dayanarak, alandaki bilinen bir yöntemi kullanHÜiaslýla teknikte uzman bir kisi tarafIan kolaylikla üretilebilmektedir. Mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen- baglama fragmenti özellikle sIlEllandlElIBiamaktadlÜ ancak asaglâbki TSLP reseptör antikorunun üretilmesine yönelik yöntem› bölümünde açIanan bir yönteme göre imal edilebilmektedir. Mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen-baglama fragmenti ihtiyaç duyulmasülurumunda ilaveten saflastlEIlßîaktadEve konvansiyonel bir yönteme göre formüle edilmektedir. Bu, astIi ve sistemik skleroz gibi alerjik inflamatuvar hastaliElar da dahil olmak üzere, insan TSLP ve insan TSLP reseptörünün hastalik] patolojisine dahil oldugu hastalilîlarl önlenmesinde veya tedavi edilmesinde kullanilâbilmektedir. Mevcut bulusun bir polinükleotiti, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun agE zincir degisken bölgesini kodlayan bir baz sekansülçeren bir polinükleotiti ve mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan bir baz sekanslüberen bir polinükleotiti kapsamaktadlE Bir yapllândlülnada, mevcut bulusun anti-Insan TSLP reseptör antikorunun aglEl zincir degisken bölgesini kodlayan bir bazlZI sekanslZliçeren polinükleotit, SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarEil ila 118'in amino asit sekansIdan olusan aglElzincir degisken bölgesini kodlayan bir baz sekansEîlçeren bir polinükleotittir. SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarül ila 118'in amino asit sekansElle gösterilen agir-_l zincir degisken bölgesini kodlayan baz sekanslüiçeren bir polinükleotit, örnegin, SEKANS KIMLIK NUMARASI:2'nin baz numaralarEl ila 354'ten baz sekansIEilçeren bir polinükleotiti kapsamaktadIE Tercih edilen bir yapllândlîiinada, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun aglEl zincir degisken bölgesini kodlayan baz sekansIlZliçeren polinükleotit, SEKANS KIMLIK NUMARASI:1 ile gösterilen amino asit sekanleUan olusan aglElzinciri kodlayan baz sekansIEl içeren bir polinükleotittir. SEKANS KIMLIK NUMARASI:1 ile gösterilen amino asit sekansEUan olusan agIEI zinciri kodlayan baz sekansIElçeren bir polinükleotit, örnegin, SEKANS KIMLIK NUMARASI:2 ile gösterilen baz sekansIEîçeren bir polinükleotiti kapsamaktadlEl Bir yapllândlünada, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan bazE] sekansü içeren polinükleotit, SEKANS KIMLIK NUMARASI:3'ün amino asit numaralari: ila 108'in amino asit sekansIdan olusan hafif zincir degisken bölgesini kodlayan baz sekansEiÇeren bir polinükleotittir. SEKANS KIMLIK NUMARASI:3'ün amino asit numaralari] ila 108'in amino asit sekansIan olusan hafif zincir degisken bölgesini kodlayan baz sekanslüberen bir polinükleotit, örnegin, SEKANS KIMLIK NUMARASI:4'ün baz numaralarEll ila 324'ten baz sekansIlZliçeren bir polinükleotiti kapsamaktadß Tercih edilen bir yapllândlülnada, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan baz sekansIDiçeren polinükleotit, SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekansIan olusan hafif zinciri kodlayan bir baz sekanlelEiberen bir polinükleotittir. SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekanleldan olusan hafif zinciri kodlayan baz sekansIElçeren bir polinükleotit, örnegin, SEKANS KIMLIK NUMARASI:4 ile gösterilen baz sekanlelügeren bir polinükleotiti kapsamaktadE Mevcut bulusun polinükleotiti, baz sekanlela dayanarak alanda bilinen bir yöntemin kullanlßrasMa teknikte uzman bir kisi tarafIan kolaylElZla üretilebilmektedir. Örnegin, mevcut bulusun polinükleotiti, alanda bilinen bir gen sentez yöntemi kullanüârak sentezlenebilmektedir. Bir gen sentez yöntemi, örnegin, WO90/07861 numaralüjokümanda açllZlanan antikor genlerinin bir sentez yöntemi gibi, teknikte uzman bir kisi tarafian bilinen çesitli yöntemleri kapsamaktadlB bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun üretim yöntemi ve yöntem vaslßslýla üretilen anti-insan TSLP reseptör antikoru› Mevcut bulusun bir ekspresyon vektörü, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun agE zincir degisken bölgesini kodlayan baz sekansIlIliçeren polinükleotiti ve/veya mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan baz sekansIEiçeren polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörünü kapsamaktadlEl Mevcut bulusun tercih edilen ekspresyon vektörleri, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun aglEl zincirini kodlayan baz sekanslZl içeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörünü, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun hafif zincirini kodlayan baz sekansIEilçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörünü veya mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun agIElzincirini kodlayan baz sekansIülçeren bir polinükleotiti veya antikorun hafif zincirini kodlayan baz sekansIülçeren polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörünü kapsamaktadE Mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun aglElzincir degisken bölgesini kodlayan baz sekansIEliçeren bir polinükleotit ve/veya mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan baz sekansIEiçeren bir polinükleotitin, ökaryotik hücrelerin (örnegin hayvan hücreleri, böcek hücreleri, bitki hücreleri ve maya) ve/veya prokaryotik hücrelerin (örnegin Escherichia coli) çesitli konak hücrelerinde eksprese edilebildigi sürece ve bunlar taraf-an kodlanan polipeptitler üretilebildigi sürece, mevcut bulusun polinükleotitinin eksprese edilmesi için kullanilan ekspresyon vektörü sIlEllandEIBiamaktadlEI Ekspresyon vektörü örnekleri, plazmid vektörlerini, viral vektörlerini (örnegin adenovirüs veya retrovirüs) ve benzerini kapsamaktadlîl Tercihen pEE6.4 veya pEE kullanllâbilmektedir. DahaslZlantikor genleri, bir degisken bölge gen fragmentinin, AG-yl veya AG'K gibi önceden insan 19 sabit bölge genleri içeren ekspresyon vektörlerine aktarßasüasitâslîla antikor genleri eksprese edilebilmektedir (örnegin, bakIlîl W094/20632). Mevcut bulusun ekspresyon vektörü, mevcut bulusun polinükleotitine faal olarak baglantllândlülân bir promotoru kapsayabilmektedir. Hayvan hücreleri ile bulusun polinükleotitinin eksprese edilmesine yönelik promotor örnekleri, CMV, RSV, veya SV40 gibi bir virüs-türevli promotor, bir aktin promotoru, bir EF (uzama faktörü) la promotoru ve bir ED soku promotorunu kapsamaktadlE Bakteri vasitiislýla (örnegin Escherichia) ekspresyona yönelik promotor örnekleri, bir trp promotoru, bir Iac promotoru, kPL promotoru ve tac promotorunu kapsamaktadü Dahasü maya vasltîlislsîla ekspresyona yönelik promotorlarEl örnekleri, bir GAL1 promotoru, bir GAL10 promotoru, bir PH05 promotoru, bir PGK promotoru, bir GAP promotoru ve bir ADH promotorunu kapsamaktadlB Mevcut bulusun dönüstürülen konak hücresi, asag-ki (a) ila (d)'den olusan gruptan seçilen mevcut bulusun ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücreyi kapsamaktadE (a) mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun agElzincir degisken bölgesini kodlayan baz sekansIElçeren polinükleotiti ve antikorun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan baz sekanlelEl içeren polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücre; (b) mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun agEzincir degisken bölgesini kodlayan baz sekansIElçeren polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ve antikorun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan baz sekansIEliçeren polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücre; (c) mevcut bulusun anti-Insan TSLP reseptör antikorunun aglElzincir degisken bölgesini kodlayan baz sekanlelEl içeren polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücre; ve (d) mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun hafif zincir degisken bölgesini kodlayan baz sekanleIlZI içeren polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücre, ve konak hücre söz konusu antikoru eksprese etmektedir. Mevcut bulusun dönüstürülen konak hücresi, asaglki (a) ila (d)'den olusan gruptan seçilen mevcut bulusun ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücredir: (a) mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun aglEl zincirini kodlayan baz sekansIlZilçeren bir polinükleotiti ve antikorun hafif zincirini kodlayan baz sekansIülçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücre; (b) mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun aglEI zincirini kodlayan baz sekansIEIlçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vekrörü ve antikorun hafif zincirini kodlayan baz sekansIEliçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücre; (c) mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun agEl zincirini kodlayan baz sekansIlIiçeren polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücre; ve (d) mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun hafif zincirini kodlayan baz sekansIEiçeren polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak ve konak hücre söz konusu antikoru eksprese etmektedir Bir hayvan hücresinin, bir böcek hücresinin veya mayanI konak hücre olarak kullanilB1asEI durumunda, mevcut bulusun ekspresyon vektörü baslatma kodonu ve sonlandlüina kodonu içerebilmektedir. Bu durumda, mevcut bulusun ekspresyon vektörü, bir artlEIEDsekansü mevcut bulusun antikorunu kodlayan genlerin 5' tarafüfe 3' taraflEJdaki çevrilmemis bir bölge veya aglEzincir degisken bölgesi veya hafif zincir degisken bölgesi, bir salglîlsinyali sekansü uç birlestirme ek yeri, bir poliadenilasyon alanlZl/eya yinelenebilir bir birim içerebilmektedir. Konak hücre olarak Escherichia coli'nin kullanüîhasülurumunda, mevcut bulusun ekspresyon vektörü, bir baslatma kodonu, bir sonlandüina kodonu, bir sonlandlElEIliJölgesi ve yinelenebilir bir birim içerebilmektedir. Bu durumda, mevcut bulusun ekspresyon vektörü, genel olarak ihtiyaca yönelik olarak kullanilan bir seçim isaretçileri (örnegin tetrasiklin dirençli genler, ampisillin dirençli genler, kanamisin dirençli genler, neomisin dirençli genler veya dihidrofolat redüktaz genleri) içerebilmektedir. Mevcut bulusun dönüstürülen konak hücresinin tercih edilen örnekleri, mevcut bulusun anti- insan TSLP reseptör antikorunun aglElzincirini kodlayan baz sekanlelülçeren bir polinükleotiti ve antikorun hafif zincirini kodlayan baz sekansIEliçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücreyi ve mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun aglEzincirini kodlayan baz sekansIEilçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü veya antikorun hafif zincirini kodlayan baz sekansIüiçeren bir polinükleotiti içeren bir ekspresyon vektörü ile dönüstürülen bir konak hücreyi kapsamaktadlü Konak hücre, kullan[lân ekspresyon vektörü için uygun oldugu, ekspresyon vektörü ile dönüstürüldügü ve antikoru eksprese edebildigi sürece, dönüstürülen konak hücre özellikle sIlElandlElIEnamaktadlEl Dönüstürülen konak hücrenin örnekleri, genel olarak mevcut bulusun alanIia kullanüân dogal hücreler veya yapay olarak meydana getirilen hücreler gibi çesitli hücreleri kapsamaktadlîl(örnegin hayvan hücreleri (örnegin CHO-KlSV hücreleri), böcek hücreleri (örnegin Sf9), bakteriler (örnegin Escherichia), maya (örnegin Saccharomyces veya Pichia) veya benzeri). Tercihen, CHO-KlSV hücreleri, CHO-DG 44 hücreleri, 293 hücreleri veya NSO hücreleri gibi kültürlenmis hücreler kullanllâbilmektedir. Konak hücrenin dönüstürülmesine yönelik bir yöntem özellikle sIlEllandlEIlIhamaktadE ancak, bir kalsiyum fosfat yöntemi veya bir elektroporasyon yöntemi kullan Uâbilmektedir. Mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen-baglama fragmentinin üretilmesine yönelik yöntemler, anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen-baglama fragmentinin eksprese edilmesi için mevcut bulusun dönüstürülen konak hücresinin kültürlenmesini içeren, anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen-baglama fragmentinin üretilmesine yönelik bir yöntemi kapsamaktadlEl Mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen-baglama fragmenti, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen- baglama fragmentinin üretilmesine yönelik yöntem vasßslýla üretilen bir anti-insan TSLP reseptör antikorunu veya bunun antijen-baglama fragmentini kapsamaktadE Yöntem, anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen baglama fragmentinin eksprese edilmesi için mevcut bulusun dönüstürülen konak hücresinin kültürlenmesini içerdigi sürece, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen-baglama fragmentinin üretilmesine yönelik yöntem özellikle sIlEllandlEllIhamaktadB Yöntemde kullanlßn, tercih edilen konak hücre, tercih edilen bir örnek olarak asaglah aç[lZ]anan, mevcut bulusun dönüstürülen konak hücresini kapsamaktadlB Dönüstürülen konak hücre bilinen yöntemler vasltâlea kültürlenebilmektedir. Kültür kosullarüörnegin lelakIHZl kültür ortam pH'ü/e kültür süresi uygun sekilde seçilmektedir. Konak hücrenin bir hayvan hücresi olmasEUurumunda, kültür ortamII örnekleri, %5 ila ve RPMI1640 Biol. Med., 1950, Cilt 73, syf. 1 ila 8) kapsamaktadlü Kültür ortamII pH'ütercihen yaklasllZJ olarak 6 ila 8 aras-ve kültür genel olarak, gerekli olmasEtlurumunda havalandlîrlna ve karlgtlüna ile birlikte yaklaslld olarak 15 saat ila 72 saat boyunca yaklasllîl olarak 30°C ila 40°C'de gerçeklestirilmektedir. Konak hücrenin bir böcek hücresi olmasEdurumunda, kültür ortamlîblarak örnegin, fetal slgilElserumu ile takviye gören Grace kültür 0rtamE(Proc. Natl. yaklasllZl olarak 5 ila 8 arasIlÜve kültür genel olarak, gerekli olmaslîllurumunda havalandlüna ve karlgtIElna ile birlikte yaklaslKl olarak 15 saat ila 100 saat boyunca yaklas[lZJ olarak 20°C ila 40°C'de gerçeklestirilmektedir. Konak hücrenin Escherichia coli veya maya olmasü durumunda, kültür ortamEblarak örnegin, bir besin kaynagEiIe takviye gören slîlîkültür ortamDJygundur. Besleyici kültür ortamIlEI, dönüstürülen konak hücrenin büyümesi için gerekli olan bir karbon kaynagIÇlbir inorganik nitrojen kaynagIü/eya bir organik nitrojen kaynagIElkapsamasEltercih edilmektedir. Karbon kaynaglElI örnekleri, glukoz, dekstran, çözünebilir nisasta ve sukrozu kapsamaktadlElve inorganik nitrojen kaynagII veya organik nitrojen kaynagII örnekleri ise amonyum tuzlarÇl nitrat tuzlarlZl amino asitler, mlglîl maserasyon slîlggpepton, kasein, et özütü, soya küspesi ve patates özütünü kapsamaktadlrîl Diger besinler (örnegin inorganik tuzlar (örnegin kalsiyum klorür, sodyum dihidrojen fosfat ve magnezyum klorür), vitaminler) ve antibiyotikler (örnegin tetrasiklin, neomisin, ampisillin ve kanamisin) arzu edildigi üzere dahil edilebilmektedir. Kültür ortamII pH'ütercihen yaklasllZl olarak 5 ila 8 arasIlE Konak hücrenin Escherichia coli olmaslîtlurumunda, kültür ortamII tercih edilen örnekleri, LB kültür ortamIIZl/e M9 kültür ortamIEl Cold Spring Harbor Laboratory, Cilt 3, A2.2). Kültür genel olarak, gerekli olmasülurumunda havalandlElna ve karlgtlîrlna ile birlikte yaklasllîl olarak 3 saat ila 24 saat boyunca yaklasllZ] olarak 14°C ila 43°C'de gerçeklestirilmektedir. Konak hücrenin maya olmasEldurumunda, kültür ortam lîrlilarak örnegin, Burkholder minimal ortam (Proc. Natl. Acad, Sci, USA, 1980, Cilt 77, syf. 4505) kullanilâbilmektedir. Kültür genel olarak, gerekli olmasEl durumunda havalandlElna ve karlgtüna ile birlikte yaklas[lZl olarak 14 saat ila 144 saat boyunca yaklasllZl olarak 20°C ila 35°C'de gerçeklestirilmektedir. Kültürün yukari açlElandlglEl üzere gerçeklestirilmesi vasltiislîla, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen-baglama fragmentinin eksprese edilmesi mümkündür. Mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen-baglama fragmentinin üretilmesine yönelik yöntem, anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen-baglama fragmentinin eksprese edilmesi için mevcut bulusun dönüstürülen konak hücresinin kültürlenmesine ilaveten, dönüstürülen konak hücreden, anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen-baglama fragmentinin giderilmesi, tercihen izole edilmesi veya saflastlEllüiaslükapsayabilmektedir. Izolasyon ve saflastlEna yönteminin örnekleri, tuzla çöktürme veya solvent çöktürme yöntemi gibi çözülebilirligin kullanI[g]|:yöntemler, diyaliz, ultrafiltrasyon ve jel filtrasyonu gibi moleküler aglElllthaki farkI kullanIlglEyöntemler, iyon degisim kromatografisi ve hidroksilapatit kromatografisi gibi bir elektrik yükünün kullan-[gllîl yöntemler, afinite kromatografisi gibi spesifik afinitenin kullanIlglEh/öntemler, revers faz yüksek performanslBEBromatografisi gibi hidrofobisitedeki farkI kullanIlglEyöntemler ve izoelektrik odaklana forezi gibi izoelektrik noktadaki farkI kullanIigilZI yöntemleri kapsamaktadlEl Tercihen, bir kültür süpernatantIa biriken antikor, çesitli kromatografiler, örnegin Protein A kolonu veya Protein G kolonunun kullan-@Ekolon kromatografisi vasltaslýla saflastlîllâbilmektedir. Mevcut bulusun farmasötik bilesimleri, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunu veya bunun antijen-baglama fragmentini ve farmasötik olarak kabul edilebilir eksipiyanlarü içeren bir farmasötik bilesimi kapsamaktadlE Mevcut bulusun farmasötik bilesimi, genel olarak eksipiyanlar, yani genel olarak teknikte kullanllân tllz'iba yönelik eksipiyanlar veya tlBba yönelik tasElEIIâr ile birlikte kullanllân bir yöntem ile hazlEllanabilmektedir. Farmasötik bilesimlerin dozaj formlar. dair örnekler, bir enjeksiyon ilacEle bir damlalühfüzyon ilacügjibi parenteral ilaçlarEkapsamaktadlElve bunlar, intravenöz uygulama, subkütanöz uygulama ve benzeri ile uygulanabilmektedir. Ilaç preparasyonunda, dozaj formlarlEla göre eksipiyanlar, tasMEllâr ve katkEl maddeleri, farmasötik olarak kabul edilebilir arallKJ dahilinde kullanliâbilmektedir. Mevcut bulusun farmasötik bilesimleri, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorlarEl veya bunlarlEl antijen-baglama fragmentlerinin çesitli türlerini kapsayabilmektedir. Örnegin, mevcut bulus, agEzincirin C terminaline ait Iisinin silindigi bir antikoru, N terminale post- translasyonel modifikasyona sahip bir antijeni veya bunun bir antijen-baglama fragmentini, aglEl zincirin C terminaline ait Iisinin silindigi ve N terminale post-translasyon modifikasyonunun gerçeklestirildigi bir antikoru ve/veya aglrîlzincirin C terminaline ait lisine sahip olan ve N terminale post-translasyonel modifikasyona sahip olmayan bir antikoru içeren bir farmasötik bilesimi kapsamaktadiü Örnegin, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunu içeren mevcut bulusun farmasötik bilesimi, asagIki (1) ila (4) arasIan anti-insan TSLP reseptör antikorlarII iki veya daha fazla türünü içeren bir farmasötik bilesimi kapsamaktadE (1) SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarEil ila 447'nin amino asit sekansian olusan agEzinciri ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekansian olusan hafif zinciri içeren anti-insan TSLP reseptör antikoru. (2) Amino asit numarasljl'in glutamik asidinin piroglutamik asit taraflüdan modifiye edildigi, SEKANS KIMLIK NUMARASI:1 ile gösterilen amino asit sekansnan olusan agiEI zinciri ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekansIan olusan hafif zinciri içeren anti-insan TSLP reseptör antikoru. (3) Amino asit numarasEll'in glutamik asidinin piroglutamik asit tarafIan modifiye edildigi, SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarlîll ila 447'nin amino asit sekansIan olusan aglüzinciri ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekanleUan olusan hafif zinciri içeren anti-insan TSLP reseptör antikoru. (4) SEKANS KIMLIK NUMARASI:1 ile gösterilen amino asit sekansIan olusan ag iElzinciri ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekansIan olusan hafif zinciri içeren anti-insan TSLP reseptör antikoru. Ilaç preparasyonu içerisine mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunun veya bunun antijen-baglama fragmentinin ekleme miktarübir hastanI semptomlarII seviyesi, bir hastanI yasÇl kullanilâcak olan ilacI dozaj formu, antikorun baglama titresi veya benzerine baglüalarak degismektedir ve örnegin, yaklasllZl olarak 0.001 mg/kg ila 100 mg/kg degerindeki bir ekleme miktarülullanHâbilmektedir. Mevcut bulusun farmasötik bilesimi, insan TSLP ve insan TSLP reseptörünün astIi gibi bir hastalllZi patolojisine dahil oldugu hastaIIKlarI önlenmesi veya tedavi edilmesine yönelik bir farmasötik bilesim olarak kullanllâbilmektedir. Mevcut bulus, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikorunu veya bunun antijen- baglama fragmentini Içeren, astIiI önlenmesi veya tedavi edilmesine yönelik bir farmasötik bilesimi kapsamaktadlü DahasiÇi mevcut bulus, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen-baglama fragmentinin terapötik olarak etkili bir miktari. uygulanmasIEliçeren, astIiI önlenmesi veya tedavi edilmesine yönelik bir yöntemi kapsamaktadlEl Ilaveten, mevcut bulus, ast önlenmesi veya tedavi edilmesinde kullanIia yönelik, mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen-baglama fragmentini kapsamaktadlü Ilaveten, mevcut bulus, astIiI önlenmesi veya tedavi edilmesine yönelik bir farmasötik bilesimin imalatlEb yönelik olarak mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru veya bunun antijen-baglama fragmentinin kullanIiIleapsamaktadlB Mevcut bulus genel olarak açiElanmlStlElve bunun daha iyi anlasliîhaslîigin basvurulan spesifik örnekler de saglanacaktE ancak bunlar yalnlîta örnektir ve mevcut bulus bunlarla sIlEIllZI degildir. Piyasada mevcut kitlerin veya tepkenlerin kullanIi- yönelik k-ilar ile ilgili olarak, aksi belirtilmedigi sürece testler ekli protokol uyarIa gerçeklestirilmektedir. Dahasü kolayliEl baknlEUan, konsantrasyon mol/L, M olarak ifade edilmektedir. Örnegin bir 1 M sulu sodyum hidroksit çözeltisi, 1 mol/L sulu sodyum hidroksit çözeltisi anlamlEia gelmektedir. (Örnek 1: TSLP reseptörü-FC füzyon proteininin elde edilmesi) Bir antikorun baglama aktivitesinin degerlendirilmesi için, insan TSLP reseptörü ve Insan Fc'sinin bir füzyon proteini (insan TSLP reseptörü-insan Fc füzyon proteini), insan TSLP reseptörü ve fare Fc'sinin bir füzyon proteini (insan TSLP reseptörü-fare Fc füzyon proteini) ve maymun TSLP reseptörü ve insan Fc'sinin bir füzyon proteini (maymun TSLP reseptörü- insan Fc füzyon proteini) elde edilmistir. Insan TSLP reseptörü-insan Fc füzyon geni (SEKANS KIMLIK NUMARASI:5), insan TSLP reseptörü-fare Fc füzyon geni (SEKANS KIMLIK NUMARASI:6) ve maymun TSLP reseptörü-insan Fc füzyon geni (SEKANS KIMLIK NUMARASIz7), sßslîla memeli hücre ekspresyon vektörleri, GS vektörleri (Lonza, Inc.) pEE12.4. ile rekombine edilmistir. HazlHianan vektörlerin, bir gen aktarIi tepkeni 293 fektin (Life technologies, Inc) kullanllârak FreeStyle 293 hücrelerine (Life technologies, Inc) gen aktarIiEi/apllmlgtlîlve hücreler, bir hafta boyunca, FreeStyle 293 Ekspresyon ortami:[Life technologies, Inc) kullanllârak bir serumsuz kültür sistemi ile kültürlenmistir ve ardIan insan TSLP reseptörü-insan Fc füzyon proteini, insan TSLP reseptörü-fare Fc füzyon proteini ve maymun TSLP reseptörü-insan Fc füzyon proteini içeren kültür süpernatantlarlîlsßslýla elde edilmistir. Ilgili TSLP reseptörü-FC füzyon proteinleri, elde edilen kültür süpernatantlarlûdan, bir protein saflastlEna kolonu Protein G kolonu (GE Healthcare Japan Corporation) kullanlßrak saflastElBilStlEl (Örnek 2: TSLP mutant-Flag proteinlerinin elde edilmesi) Bir antikorun nötrlestirici aktivitesinin degerlendirilmesi için, Flag etiketine sahip bir insan TSLP mutant proteini (insan TSLP mutant-Flag proteini) ve Flag etiketine sahip bir maymun TSLP mutant proteini (maymun TSLP mutant-Flag proteini) elde edilmistir. Insan veya maymun TSLP mutant-Flag geni (SEKANS KIMLIK NUMARASI:8 veya 9 (fürin proteazElle kesilmesiyle aktivitenin kaybolmasII önlenmesi için, mutasyonun kesme yerine yerlestirildigi insan veya maymun yaban tipi TSLP'nin amino asit sekanslarßßislýla kodlanmlStE), süslýla GS vektörleri pEE12.4 ile rekombine edilmistir. HazlElianan vektörlerin, bir 293 fektin kullanilârak FreeSter 293 hücrelerine gen aktarIiEyapllüilgtßve hücreler, bir hafta boyunca, FreeSter 293 Ekspresyon ortam Ekullanllârak bir serumsuz kültür sistemi ile kültürlenmistir ve ardIan insan TSLP mutantEFlag proteinleri veya maymun TSLP mutantEPr'lag proteinleri içeren kültür süpernatantlarßlîasüla elde edilmistir. Ilgili TSLP mutantEIFlag proteinleri, elde edilen kültür süpernatantlarlEdan, bir anti-FLAG M2 antikoru afinite jeli (Sigma, Inc.) kullanilârak saflastlîlliiigtlü (Örnek 3: tamamen insan anti-insan TSLP reseptör antikorunun preparasyonu) Bir insan monoklonal antikor gelistirme teknolojisi "VelocImnune" (VelocImmune antikor teknolojisi: Regeneron, Inc. (US Patent No. 6596541) kapsamIa, fare, bir immün reaksiyonuna sebep olunmasEIlçin bir adjuvan, insan TSLP reseptörü-FC (R&D, Inc.) ve Ba/F3 hücrelerini eksprese eden insan TSLP reseptörü (insan TSLP reseptörü genlerini (SEKANS KIMLIK NUMARASI:10) ve insan IL-7 reseptörü or zinciri genlerini (SEKANS KIMLIK NUMARASI:11) kodlayan vektörlerin, fare Ba/F3 hücrelerine (RIKEN: RCBOSOS) aktarHBiaslîla hazlîlianmaktadlî) ile immünize edilmistir. Konvansiyonel yönteme göre, baglglKliEl kazandlîllân farenin dalagEi/eya lenf nodu çlEbrilB'ilStE lenfositler toplanmigtlîlve hücreleri fare myelom hücreleri SPZ/O (ATCC CRL-1581) ile füzyonlanmlgtlî) böylelikle hibridom haziBlanmlgtlÜ Hibridom monoklonlanmlgtlEl ardIan serumsuz bir ortam olan bir CD hibridom kültür ortamE(Life technologies, Inc.) içerisinde kültürlenmistir. Elde edilen kültür süpernatantlarian, bir antikor saflastüna kiti Protein G Saflastlîilna kiti (Proteus, Inc.) kullanilârak antikor saflastElînlStlE Antikorun baglama aktivitesinin degerlendirilmesi için, Örnek 1'de hazlEllanan insan TSLP reseptörü-insan Fc füzyon proteini ve maymun TSLP reseptörü-insan Fc füzyon proteininin kullanIigiIZlELISA sßislîla gerçeklestirilmistir. DahasiZI antikorun nötrlestirici aktivitesini degerlendirilmesi için, Örnek 2'de hazlîllanan maymun TSLP mutantElFlag proteinlerinin stimülasyonu vasltâslýla Ba/F3 hücrelerini eksprese eden insan TSLP reseptörünün bir hücre büyümesi inhibisyon tahlili ve Örnek 2'de hazIBlanan maymun TSLP mutantEFlag proteinlerinin stimülasyonu vasiliislýla maymun tam kanlîüzerinde bir MDC protein üretimi inhibisyon tahlili gerçeklestirilmistir. Yukar- açlklanan testlerden, T7-27 olarak adlandlülân antikorun (kimerik antikor), insan ve maymun TSLP reseptörlerin göre baglama aktivitesine ve nötrlestirici aktiviteye sahip oldugu ortaya çilZl'nlStlE T7-27 üreten hibridomdan antikorun aglElzincirini ve hafif zincirini kodlayan genler klonlanmlgtlEve bir sekans belirlemesi yapilBilStB Yukari açiElanan antikorda, degisken bölge insan türevlidir ve sabit bölge ise fare türevlidir. Bu sebeple, aglüzincirin ve hafif zincirin her iki genini de içeren ekspresyon vektörleri, GS vektörleri kullanilârak meydana getirilmistir ve bir tam insan antikoru hazlEHanmStlB Spesifik olarak, sinyal sekanslarIElkodlayan genler (Nigel Whittle ve ark., Protein Engineering 1987; baglanmlSIEl ve insan Igyl'in sabit bölge genleri (SEKANS KIMLIK NUMARASI:2'nin baz numaralarE355 ila 1344'in baz sekanletlan olusmaktadlî), bunun 3' taraflEb baglanmlgtlüve ardIan, agIE zincir genleri GS vektörü pEE6.4'ün içine eklenmistir. Dahasü sinyal sekanslarlü zincir degisken bölge genlerinin 5' taraf. baglanmEtlEve insan Igic'sinin sabit bölge genleri (SEKANS KIMLIK NUMARASI:4'ün baz numaralari] 325 ila 642'nin baz sekansian olusmaktadlî), bunun 3' taraflEb baglanmlStlE ve ardIan hafif zincir genleri GS vektörü pEE12.4'ün içine eklenmistir. Hazlîlbnan T7-27'nin (tamamen insan T7-27) tamamen insan antikorunun aglEl zincirini kodlayan baz sekansLZI SEKANS KIMLIK NUMARASI:2 tarafIan gösterilmektedir, bunun tarafIan kodlanan amino asit sekansEl SEKANS KIMLIK NUMARASI:1 tarafIian gösterilmektedir ve antikorun hafif zincirini kodlayan baz sekansEl SEKANS KIMLIK NUMARASI:4 taraflîidan gösterilmektedir ve bunun tarafIdan kodlanan amino asit sekanslîl ise SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 tarafli-ndan gösterilmektedir. Tamamen insan T7-27'nin aglEl zincir degisken bölgesi, SEKANS KIMLIK NUMARASI:1'in amino asit numaralarEil ila 118'in amino asit sekansIan olusmaktadlEI ve aglEI zincirin CDR1, CDRZ, ve CDR 3'ü sÜsMa, amino asit sekansIan olusmaktadlEl Tamamen insan T7-27'nin hafif zincir degisken bölgesi, SEKANS KIMLIK NUMARASI:3'ün amino asit numaralarEIl ila 108'in amino asit sekansIan olusmaktadE ve hafif zincirin CDR1, CDRZ, ve CDR 3'ü slîâilea, SEKANS KIMLIK sekansIdan olusmaktadlEi Antikor, antikorun agIEI zincir ve hafif zincir genlerinin eklendigi yukar- açllZlanan GS vektörleri ile geçici ekspresyon ve yapiEllkspresyonun iki tür yöntemi kullanilarak eksprese edilmistir. Geçici ekspresyon ile ilgili olarak, hem ag lEizincirin hem de hafif zincirin ekspresyon içerisinde kültürlenen FreeSter 293 hücrelerine göre 293 fektin kullanilârak transfekte edilmistir ve ardIan 7 gün boyunca kültürlenmistir. Alternatif olarak, yukar- açllZJanan aglEI zincir ve hafif zincirin ekspresyon vektörleri, yaklasllZJ olarak 10,000,000 CHO-KlSV hücreye (Lonza, Inc.) göre bir elektroporasyon yöntemi kullanilârak transfekte edilmistir ve 7 gün boyunca bir CD-CHO 0rtaml:(Life technologies, Inc.) içerisinde kültürlenmistir. Kültür süpernatantlarü bir Protein A kolonu veya Protein G kolonu (GE Healthcare Japan Corporation) kullanüârak saflastIEllE'ilgtlEIve tamamen insan olan antikorun bir saflastlEllüig antikoru elde edilmistir. YaplEÜekspresyon ile ilgili olarak, antikorun aglüzincir ve hafif zincir genlerinin süsüla eklendigi GS vektörleri, NotI ve Pvul vaslfâslýla bir restriksiyon enzimi ile kesilmistir ve Iigasyon, ligasyona yönelik bir Ligasyon-Uygunluk Kiti (NIPPONGENE, Inc.) veya Ligasyonu-yüksek bir Iigasyon tepkeni (TOYOBO, Inc.) kullanilârak gerçeklestirilmistir ve ardEUan agE zincir ve hafif zincirin her iki geninin eklendigi GS vektörleri meydana getirilmistir. Ekspresyon vektörleri aglElzincirin ve hafif zincirin tam uzunlugunu kodlamlgtlîlve antikor, CHO-KlSV hücreleri içerisinde transfeksiyon vasiüsüla eksprese edilmistir. Kültür süpernatantlarü bir Protein A kolonu veya Protein G kolonu (GE Healthcare Japan Corporation) kullanilârak saflastlEllfhlgtBve tamamen insan olan antikorun bir saflastlîllBtE antikoru elde edilmistir. SaflastlEllBilgl tamamen insan T7-27'sinin amino asit modifikasyonunun analizi sonucunda, aglEl zincir C terminaline ait lisinin delesyonu, saflastlEllBiEantikorun büyük bir bölümünde meydana gelmistir. (Örnek 4: SPR analizi vasißslýla baglama aktivitesi üzerine degerlendirme) Tamamen insan T7-27'sinin baglama aktivitesinin ayrlEtHJIblarak ölçülmesi için SPR analizi gerçeklestirilmistir. Mevcut örnekte, bir anti-insan TSLP reseptör antikoru TSLPR-, bir karsllâstlîn'nalßntikor olarak kullanHBilStE SPR analizinde, örnegin, Biacore (tescilli marka) 2000'in (GE Healthcare Japan Corporation) kullanllîhaslýla analiz gerçeklestirilmistir. Ilgili anti-insan TSLP reseptör antikorlarübir Insan Antikor Yakalama Kiti ve bir Amin Baglama Kiti (GE Healthcare Japan Corporation) kullantlârak bir sensör çipi CM5'in yüzeyinde immobilize edilmistir. Örnek 1'de elde edilen insan TSLP reseptörü-fare Fc füzyon proteini, bir HBS-EP çözeltisi (GE Healthcare Japan Corporation) ile seri olarak seyreltilmistir ve çözeltinin 100 pL'si, 50 uL/dk degerindeki bir aklgl h-a aklgl yoluna eklenmistir. Bu ölçüm sistemi vaslßslýla, insan TSLP reseptörü-fare Fc füzyon proteini ve anti-insan TSLP reseptörü antikorunun baglama hmabiti (ka), ayrlSh'ia hlîlîbabiti (kd) ve ayrlgtna sabiti (KD), veri analiz yazIIJEiEKBIA Evaluation) kullanilârak hesaplanmlstBUablo 1). Tablo 1: SPR analizi vasBsEla insan TSLP reseptörüne göre baglama aktivitesi KD (M) Kd (l/sn) baglama aktivitesine sahip oldugu aç[gb çlEtnlStlB (Örnek 5: Insan PBMC'si kullanllârak TSLP-indüklü TARC mRNA ekspresyon inhibisyonunun degerlendirilmesi) Tamamen insan T7-27'sinin nötrlestirici aktivitesinin degerlendirilmesi Için, insan periferal kan mononükleer hücrelerindeki (PBMC) TSLP-indüklü TARC mRNA ekspresyon inhibisyonu degerlendirilmistir. Insan PBMC'si, TSLP reseptörünü eksprese eden dendritik hücreleri içerdigi için, insan PBMC'si, anti-insan TSLP reseptör antikorunun degerlendirilmesi için kullanilâbilmektedir. Bir karsllâstünallîantikor olarak TSLPR-012_141 kullanüiilgtlîl Asaglöh açlKIanan Test Örnegi 1'in sonuçlar. bakarak, anti-TSLP reseptör antikoru kullanilârak kan TARC mRNA ekspresyonu ve bir asti modelinin patoloji gelisimi arasIa bir korelasyon bulundugu için, mevcut degerlendirme sistemi, patoloji üzerindeki etkililigi gösteren bir degerlendirme sistemidir. 96 kuyucuklu plakalardaki (Gleiner, Inc.) kuyucuk baslßh insan PBMC'sinin (AIICeIIs, Inc.) 160 iuL'sinde tohumlanmlstlü Örnek 2'de hazlîltanan insan TSLP mutant-Flag proteinlerinin bir seyrelti serisi (0.1 ng/mL ila 100 ng/mL arallglia nihai konsantrasyonun 7 adIiLD RPMI164 kültür ortamEl içerisinde hazlEIlanmStE ve bunun 20 uL'SI kültür çözeltisine eklenmistir, ardlEtlan lehklIgiEl 37°C'ye ayarlanan bir COZ inkübatörü içerisinde 24 saat boyunca inkübasyon gerçeklestirilmistir. ArdIan, ilgili anti-insan TSLP reseptör antikorlarüRPMI1640 ortamIa hazlîlbnmlgtlü böylelikle nihai konsantrasyon 0.3 pg/m olmustur ve 20 pL miktar-a kültür çözeltisine eklenmistir ve ardIan 72 saat boyunca inkübe edilmistir. Bir kontrol numunesi olarak, insan TSLP murant-Flag proteinlerinden ziyade RPM11640 kültür ortamII eklendigi bir kuyucuk ve antikordan ziyade RPM11640 kültür ortamII eklendigi bir kuyucuk slßslýla hazlIlianmlgtE Kültür süpernatantlarlElI 200 uL'SI giderilmistir ve ardlEUan toplam RNA, RNA saflastlîiinaslîliçin bir RNeasy 96 kiti (Qiagen, Inc.) kullanilarak 30 uL su ile ekstrakte edilmistir. ArdIan, 10 iiL RNA, revers transkripsiyona yönelik bir kit, Yüksek Kapasiteli cDNA Revers Transkripsiyon Kiti (Life technologies, Inc.) kullanilârak bir revers transkripsiyon reaksiyonuna maruz blEhkUBilStlEl Sonrasonda, TARC mRNA'nI ekspresyon seviyesi, bir TARC için tekrarlanmEtEve ölçüm sonucu, bir karsilâstlülna CT yöntemi kullanüârak analiz edilmistir ve ardIdan TARC mRNA'nI ekspresyon seviyesi hesaplanmlgtlü ArdIan, her bir TSLP konsantrasyonundaki antikorun Inhibisyon oranElhesaplanmlStlEl Insan TSLP mutant-Flag proteinlerinden ziyade RPMIl640 kültür ortamII eklendigi bir kuyucugun inhibisyon oranEl sßslýla eklendigi bir kuyucugun ortalama degeri, %O'lilîl inhibisyon oranEl olarak ayarlanmlgtlîl Hesaplanan inhibisyon oranEbnaliz edilmistir ve 0.3 pg/mL'Iik bir antikorun inhibisyon oranII %50'sine sahip TSLP konsantrasyonu, Üç parametrelik bir lojistik egrinin ayarlanmaslýla hesaplanmlgtlîl (Tablo 2). Bu TSLP konsantrasyonu yükseldikçe, test antikorunun TSLP'sine göre nötrlestirici aktivite daha güçlü hale gelmektedir. Tablo 2: Insan PBMC kullanilarak TSLP-indüklü TARC mRNA ekspresyon inhibisyon aktivitesi TSLP konsantrasyonu (ng/mL) Tamamen insan T7-27 1.25 Sonuç olarak, tamamen insan T7-27'sinin, TSLPR-012_141'e klýlasla, insan TSLP-indüklü TARC mRNA ekspresyonuna karslîlyaklasllâ olarak 12 kat daha yüksek bir inhibisyon aktivitesine sahip oldugu açlgb çilZlnStlE (Örnek 6: Insan PBMC kullanllârak TSLP-indüklü MDC proteinleri üretim inhibisyonunun degerlendirilmesi) Insan PBMC'sinde TSLP-indüklü MDC proteinleri üretim inhibisyonu, tamamen insan T7- 27'sinin nötrlestirici aktivitesinin degerlendirilmesi için degerlendirilmistîr. Bir karsllâstlîilnallîl antikor olarak TSLPR-012_141 kullanllîhlgtlü Insan kanßynlîilniktardaki PBS içerisinde seyreltilmistir ve aynlIilniktardaki FicolI-Paque PLUS (GE Healthcare Japan Corporation) üzerinde laminatlanmlgtlü ve ardIdan, 30 dakika boyunca, 400 X g'de, oda slîakHgiEkosullarEbltlEUa santrifüj islemine maruz bßkllîhlglü böylelikle insan PBMC hazlEllanmlStlE 96 kuyucuklu plakalardaki (Gleiner, Inc.) kuyucuk RPM11640 kültür ortamElçerisinde hazlîlbnmlgtlü böylelikle bunun nihai konsantrasyonu 5 ng/mL olmustur ve bunun 10 uL'si miktarIa kültür çözeltisine eklenmistir, ardIan lelaklIgIEI 37°C'ye ayarlanan bir CO; inkübatörü içerisinde 24 saat boyunca inkübasyon gerçeklestirilmistir. SonrasIa, ilgili anti-insan TSLP reseptör antikorunun seyrelti serisi (0.1 ng/mL ila 10 ug/mL araligllda nihai konsantrasyonun 5 adIiD] RPMI164 kültür ortamlZl içerisinde hazlHbnmlStlE ve bunun 10 pL'SI kültür çözeltisine eklenmistir, arlehan 5 gün boyunca Inkübasyon gerçeklestirilmistir. Bir kontrol numunesi olarak, Insan TSLP mutant-Flag proteinlerinden ziyade RPM11640 kültür ortamII eklendigi bir kuyucuk ve antikorlardan ziyade RPM11640 kültür ortamII eklendigi bir kuyucuk sßsüla hazEllanmEtEl ArdIdan, kültür süpernatantlarlîltoplanmlgtlîl ve MDC'nin üretim miktari: bir Insan CCLZZ/MDC Quantikine ELISA Kiti (R&D, Inc.) kullanüârak degerlendirilmis olup, süpernatantlar, PBS ile kat seyreltilmistir (Life technologies, Inc.). Test ilgili antikorlar için tekrarlanmlîstlElve her bir antikor konsantrasyonundaki inhibisyon oranEhesapIanmlStlEI Insan TSLP mutant-Flag proteinlerinden ziyade RPM11640 kültür ortamII eklendigi bir kuyucugun inhibisyon oranü kuyucugun inhibisyon oranElise %O'a ayarlanmlgtlB Inhibisyon oranII %50'sine sahip antikor konsantrasyonu, üç parametreli bir lojistik egrinin ayarlanmaslsîla IC 50 olarak hesaplanmlStEUablo 3). Tablo 3: Insan PBMC kullanilârak TSLP-indüklü MDC proteinleri üretim inhibisyonunun degerlendirilmesi Tamamen insan T7-27 0.12 Sonuç olarak, tamamen insan T7-27'sinin, TSLPR-012_141'e klEasla, TSLP-indüklü MDC proteinleri üretimine karsüiaklasilg olarak 9 kat daha yüksek bir inhibisyon aktivitesine sahip oldugu açiga çiEl'nlgtlEI (Örnek 7: Maymun Askaris antijen hassaslastiüna modelinde tamamen insan T7-27'sinin degerlendirilmesi) Askaris antijenine özgü IgE, bir maymunun Askaris antijeni ile hassasiastiüllBwas. izin verilmesi vasiüslýla indüklenmektedir ve bir alerjik reaksiyon olarak bir deri reaksiyonuna sebep olunmaktadE Alüminyum peroksit jel (buradan itibaren Alüm olarak adlandlEiliiaktadlB (50 mg/mL Alüm konsantrasyonunda PBS içerisinde ask. tutulan 0.5 mg/mL DNP-Askaris, buradan itibaren Askaris antijen-Alüm slýlslîblarak adlandlElilEîaktadlE) ile ask. tutulan bir Askaris antijen SMEEI (DNP-Ascaris (LSL, Inc.)), 3.6 mL/kg miktarlEUa intraperitoneal olarak ve hassasiastlElna için 0.4 mL/kg miktarIa intramüsküler olarak bir erkek sinomolgus maymununa Gün 1, Gün 8 ve Gün 15'te uygulanmlSIlB Dahasüislem gören gruplar olarak, bir Normal grup (islem görmemis grup n=2), bir Vehikül grubu (bir solventin (20 mM sodyum sitrat tampon çözeltisi/, hassaslastlünadan bir gün önce intravenöz sekilde uyguland[giübir grup n=3) ve bir antikor uygulama grubu (hassaslastlElnadan bir gün önce 10 mg/kg tamamen insan T7-27'sinin intravenöz sekilde uygulandigiEbir grup, n=3) sßsüla ayarlanmlgtE Ilaveten, Alüm, asaglBlaki yöntem ile hazlEllanmlSIlE Alüminyum sülfat (14 ila 18 hidrat) (Wako, Inc.), 1M çözeltinin hazlîiianmasüçin ultra saf bir suyun içerisinde çözündürülmüstür ve çözelti 0.22 um'lik bir filtreden geçirilmistir ve ardIan 1M sodyum hidroksit (Nacalai Tesque), beyaz çökelti meydana gelmeyene kadar buraya eklenmistir. Süpernatantlar giderilmistir, 5 kez ultra saf su ile yiElanmIStlEIve ardIEUan ayriEla üç kez PBS (WAKO, Inc.) ile yilöanmßtlîl YiKbnle beyaz çökelti, buzun altIa bir homojenizör (CH- ile ince ince ezilmistir, ardIan bir santrifüj (himac CR21, Hitachi, Ltd.) kullanilârak 5 dakika boyunca 4°C'lik bir süklüîta 2000 rmp'de santrifüjleme gerçeklestirilmistir. ArdlEtlan süpernatantlar giderilmistir ve PBS ile iki kez ylKlanmlgtlEl Elde edilen çökelti, Alümün elde eidlmesi için PBS içerisinde asklah tutulmustur. Plazma Askaris antijenine özgü IgE'nin Ölçümü Kan, yukari açilZianan sinomolgus maymunundan, Gün 1 (bir Askaris antijeni-Alüm s-I uygulanmasldan önce), Gün 8, Gün 15 ve Gün 22'de kesintisiz olarak toplanmlgtlîl ve plazma, santrifüjlemeden sonra toplanmlgtEüBOO x 9, 4°C, 10 dakika). Plazmadaki Askaris antijenine özgü IgE'nin konsantrasyonu asag-ki yöntem kullanilârak ölçülmüstür. DNP-Askaris PBS ile hazlHianmiStlü böylelikle bunun konsantrasyonu 100 ng/mL olmustur ve eklenmistir, ve ardIan oda lelakligIIa gece boyunca immobilize edilmistir. Bir engelleyici ajan (Blocking One: Nacalai Tesque), 200 pL miktariEtla buraya ilave edilmistir ve 30 dakika boyunca oda siîakligiIa tutulmustur ve çözelti giderilmistir. Ard Ian, geri kazanliân plazma ve bir kalibrasyon egrisine yönelik bir numune, 100 uL miktarIa leislýla ilave edilmistir. Bir kalibrasyon egrisinin numunesi olarak, Gün 22'de Vehikül grubundan birinin plazma Askaris antijenine özgü IgE'sinin konsantrasyonu 2000 U/mL'ye ayarlanmlgtlîl ve bir seyrelti serisi ve kullanilBiiStB Inkübasyon 1 saat boyunca oda lelakligiIa gerçeklestirilmistir, ardIdan T- PBS içerisinde bes kez yiiZiama gerçeklestirilmistir (% ve sonrasia, bir seyrelti çözeltisi içerisinde 10000 kat seyreltilen bir HRP etiketli insan IgE tespit antikoru (A80-108P: Bethyl, Inc.) 100 pL miktar-a buraya ilave edilmistir. Ayrlîa, inkübasyon 1 saat boyunca oda lethigiIa gerçeklestirilmistir, ardlEUan T-PBS içerisinde 5 kez yikama gerçeklestirilmstir. Son olarak, ölçüm, bir peroksidaz renk gelistirme kiti (ML- kullanilârak gerçeklestirilmistir. Absorbans, SpectraMax (Molecular Devices, Inc.) kullanilârak ölçülmüstür. Gün 1 ve Gün 22'nin sonuçlarlZlSekil 1'de gösterilmektedir. Deri testi Gün 22'de, PBS, 1, 10 ve 100 pg/mL Askaris antijen çözeltisi (PBS taraf-an DNP-Askarisin asküh tutuldugu bir çözelti), Vehikül grubunun ve antikor uygulama grubunun aynEIbireyinin tBislEIkarI bölgesi üzerinde süsüla iki yere 100 uL miktarIa intradermal sekilde uygulanmlgtElmer hayvanda toplam 8 yer). Normal gruba göre, PBS ve 100 pg/mL Askaris antijeni çözeltisi, aynEibireyin tßsllîlkarl bölgesi üzerinde süsüla 4 yere 100 "L miktarIa intradermal sekilde uygulanmlgtlE (her hayvanda toplam 8 yer). Derinin hassaslastIElIÜiasIan 20 dakika sonra, bir Vernier kaliperi kullanilârak çapI ölçülmesiyle deri reaksiyonu gözlemlenmistir. Her bireyde, PBS uygulamasül'asitâslýla deri reaksiyonunun bir çaplEllEl, Askaris antijeni çözeltisi vasli'âslîla deri reaksiyonunun bir çagIan çilZbrIIgiljbir deger, delta cm'ye ayarlanmlgtlE 100 pg/mL Askaris antijeni çözeltisindeki sonuçlar Sekil 2'de gösterilmektedir. Dahasü 1 ve 10 pg/mL Asakris antijeni çözeltisinin uygulanmasü durumunda, test antikorunun degerlendirilmesi için yeterli olan bir deri reaksiyonu meydana gelmemistir. Her bir grubun ortalama degeri ve standart hatasEbIde edilmistir ve bir inhibisyon oranÇl plazma Askaris antijenine özgü IgE'nin ölçümünde, Gün 1'deki degerin (Askaris antijeni-Alüm s-I uygulanmasIan önceki deger) %100'e ayarlanmasüve Gün 22'deki Vehikül grubunun %O'a ayarlanmasüiaslmslîla elde edilmistir. Sekil 1'de gösterildigi üzere, Vehikül grubuna klýlasla, tamamen insan T7-27'si, maymun Askaris antijeni hassaslastIEîna modelinde Askaris antijenine özgü IgE konsantrasyonunu azaltmlgtlEl(°/o97 inhibisyon). Sekil 2'de gösterildigi üzere, Vehikül grubuna klýlasla, tamamen insan T7-27'si, maymun Askaris antijeni hassaslastüina modelinde 100 pg/mL Askaris antijeni çözeltisinde Askaris antijenine özgü deri reaksiyonunu azaltmlglîl Yukarlîzlh açlKlanan sonuçlardan, tamamen insan T7-27'sinin, maymun Askaris antijeni hassasiastlEina modelinde Askaris antijenine özgü IgE'nin sebep oldugu alerjik reaksiyonu baskllâdlgiüiçigla çEElnlgtlEl (Test Örnegi 1: fare akar antijeni hassaslastlElna astIi modelinde anti-TSLP reseptör antikorunun degerlendirilmesi) Fare akar antijen hassaslastlûna modeli bir astIi modeli olarak bilinmektedir ve patolojik durumlar, hava yolu reaktivitesindeki artlgîe bronkoalveoler Iavaja eozinofil infiltrasyonunu ka psamaktadE Hassaslastlîilna, Gün O'da (baslanglÇlhassaslastlEnasBsEisIa) ve Gün 5'te 100 ug Dp/ intraperitoneal olarak akar antijeninin (Dp) (LSL, Inc.) uygulanmasMa gerçeklestirilmistir. degerindeki bir dozaj ile akar antijeninin nazal uygulamasßebep olmustur. PBS (WAKO, Inc.) içerisinde çözündürülen bir anti fare TSLP reseptör antikoru (WAKO, Inc.), günde bir kez, dozaj (0.1,1,1O mg/kg) ile sunkütanöz sekilde antikor uygulama grubuna uygulanmLgtlEl Bir deksametazon uygulama grubu (Deks grubu) bir pozitif kontrol grubu olarak saglanmlgtlîl PBS içerisinde çözündürülen deksametazon, günde bir kez Gün 12 ila Gün 19'da 3 mg/kg'lllZl bir dozaj ile intraperitoneal olarak Deks grubuna uygulanmlStlE Ayarlanan, islem görmüs gruplar asaglühki gibidir. Normal grup (n = 10): Islem görmemis Salin grubu (n = 6): Akar antijeni, Gün 0 ve Gün 5'te intraperitoneal olarak uygulanmlSIlB fizyolojik salin Gün 12 ve Gün 19'da nazal sekilde uygulanmlstlB ve PBS, antikor uygulama gününde subkütanöz olarak uygulanmlStlB PBS grubu (n = 10): Akar antijeni, Gün 0 ve Gün 5'te intraperitoneal olarak uygulanmlStEl akar antijeni Gün 12 ve Gün 19'da nazal sekilde uygulanmlgtliîlve PBS, antikor uygulama gününde subkütanöz olarak uygulanmlstlü Antikor uygulama grubu (0.1,1, 10 mg/kg) (n = 10, her bir dozaj için): Akar antijeni, Gün 0 ve Gün S'te intraperitoneal olarak uygulanmlgtlîi akar antijeni Gün 12 ve Gün 19'da nazal sekilde uygulanmlgtlîl ve antikor, antikor uygulama gününde subkütanöz olarak uygulanmlIsIE Deks grubu (n = 10): Akar antijeni, Gün 0 ve Gün S'te intraperitoneal olarak uygulanmIStiEi akar antijeni Gün 12 ve Gün 19'da nazal sekilde uygulanmlgtlüve deksametazon, antikor Gün 12 ila Gün 19'da subkütanöz olarak uygulanmlîslE Bir fare, Gün 20'de farelere özel denetimsiz bir odaya koyulmustur. Pnömotakografl kullanIlg'lEbir dönüstürücü, odaya tutturulmustur ve bir solunum islevi analizörü BioSystem XA'ya (Buxco, Inc.) baglanmigtlElve atmosferik baslüta göre odanlIil içerisindeki balelcI bir degisimi, dönüstürücü kullanilarak tespit edilmistir. Fizyolojik salinin içerisinde çözündürülen AsetiI-ß-metil kolin klorür konsantrasyonu (Sigma, Inc.) (0.25, 0.5, 1, 2, 4 mg/mL) sßslsîla artiEIlBilgtlEl ve ardIan, hava yolu reaktivitesinin incelenmesi için bir ultrasonik nebülizör kullanüârak inhalasyon maruziyetine tabi kHJErnlglEl OdanI içerisindeki baleçtaki degisimden mekanik olarak hesaplanan PenH, solunum islevinin bir indeksi olarak kullanilîhlgtlü Ölçüm sonuçlarESekil 3'te gösterilmektedir. SonrasIa, fare kan Ukarn ana toplardamarIan toplandithan sonra, fareye kansiîlbßkma islemi vasiâslsîla ötenazi uygulanmlSIlB Bir kanül soluk borusuna sokulmustur ve bronkoalveolar Iavaj, PBS çözeltisi içeren %01 fetal s[g]l:lserumu (BioWest, Inc.) ile yiEEnmlStEl ve ardüijan, bronkoalveolar Iavaj SEIEEI (BALF) toplanmlgtlB BALF santrifüjlenmistir, süpernatant giderilmistir, tortu 500 uL fizyolojik salin içerisinde asklElb tutulmustur ve bir BALF hücresi süspansiyonu hazlîlianmStlîl BALF hücre süspansiyonu içerisindeki eozinofil saylîlgçok parçalmir otomatik kan hücresi analizörü XT -2000i (SYSMEX, Elde edilen kan, RPM11640 kültür ortamE(Life technologies, Inc.) ile 10 kat seyreltilmistir. Seyreltilen kan, bir plaka içerisinde (IWAKI Co. Ltd.) 1 mL'de tohumlanmlgtliîl Fare TSLP'si (R&D, Inc.) PBS vasltiislîla seyreltilmistir, böylelikle bunun nihai konsantrasyonu, 0 veya 10 ng/mL olmustur ve bunun 100 uL'SI ilave edilmistir. Inkübasyon, %5 COz altIa 24 saat boyunca 37°C'de gerçeklestirilmistir ve toplam RNA, bir RNeasy 96 Kiti (Qiagen, Inc.) kullanilârak 30 pL su ile ekstrakte edilmistir. Sonrasia, 10 pL RNA, bir Yüksek Kapasiteli cDNA Revers Transkripsiyon Kiti (Life technologies, Inc.) kullanilârak bir revers transkripsiyon reaksiyonuna maruz blûakllmlgtlîl Sonraletla, TARC mRNA'nI ekspresyon seviyesi, bir TARC technologies, Inc.) ve 2 uL cDNA kullanllârak bir TaqMan PCR yöntemi ile ölçülmüstür. Ekspresyon seviyesi, bir karsilâstlîiinalElCT yöntemi kullanilârak ölçüm sonucunun analiz edilmesiyle hesaplanmlSIEl 10 ng/mL TSLP'deki sonuçlar Sekil 5'te gösterilmektedir. Ilgili gruplar. ortalama degerleri ve standart hatalarüelde edilmistir. Student-t testi, sßslýla PBS grubu ve Normal grup, Salin grubu ve Deks grubu araleUa bir anlamIEl'arklililgtesti için kullanllînlgtlîl PBS grubu ve antikor uygulama grubu arasiaki anlamlEfarklHJKI testi için, Dunnett'in çoklu karsliâstlünaslîkullanilßilgtlü Her iki durumda da, anlamIEiiarklülElar p < 0.05 durumunda mevcuttu. Sekil 3'te gösterildigi üzere, antikor uygulama grubunda, 1 mg/ml asetin-ß-metil kolin klorür tarafIan indüklenen hava yolu asEIliuyarIilIgEüzerindeki bir anhibitör faaliyeti, PBS grubuna klýbsla fare astIi modelinde bulunmustur. Anti-TSLP reseptör antikorunun, astIi modelindeki solunum islevini gelistirdigi açllg hale gelmistir. Sekil 4'te gösterildigi üzere, PBS grubuna klýbsla, antikor uygulama grubunda, bronkoalveolar IavajI içerisine eozinofillerin infiltrasyonu üzerindeki inhibitör faaliyeti bulunmustur. Sekil 5'te gösterildigi üzere, PBS grubuna klýbsla, antikor uygulama grubunda, bronkoalveolar IavajI içerisine eozinofillerin infiltrasyonu TARC mRNA'nI ekspresyonu üzerindeki inhibitör faaliyeti bulunmustur. Sekiller 3 ve 4'ün sonuçlarIan, anti-TSLP reseptör antikorunun, astIi modelinin patolojik durumunu gelistirdigi dogrulanmlgIIE DahaslÇI anti-TSLP reseptör antikorundan kaynaklü olarak, patolojik durumun gelisimi ve TARC mRNA ekspresyonunun inhibisyonu arasIaki bir korelasyon Sekiller 3 ila 5'in sonuçlarIan bulunmustur ve patolojik durum üzerindeki gelistirme etkilerinin, bir indeks olarak TARC mRNA'nI ekspresyonu üzerindeki inhibitör etkileri kullan llârak degerlendiriIebilmektedir. Endüstriyel Uygulanabilirlik Mevcut bulusun anti-insan TSLP reseptör antikoru, insan TSLP ve insan TSLP reseptörünün hastalilîl patolojisine katIigIEesitli hastaliElarI önlenmesi ve tedavi edilmesi için faydalIlEl DahasÇI mevcut bulusun polinükleotidi, ekspresyon vektörleri ve konak hücresinin üretim yöntemleri, anti-insan TSLP reseptör antikorunun üretimi için faydaIIlB Sekans listesinin <223 numara basliglüja, "Yapay Sekans" taniEyapHmaktadlE Spesifik olarak, sekans listesinin SEKANS KIMLIK NUMARASI:2 ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:4 ile gösterilen baz sekanslarÇbEslýla, tamamen insan T7-27'sinin ag iElzinciri ve hafif zincirine ait baz sekansIlEl ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:1 ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:3 ile gösterilen amino asit sekanslarüsßslýla, SEKANS KIMLIK NUMARASI:2 ve SEKANS KIMLIK NUMARASI:4 tarafIan kodlanan aglîlzincir ve hafif zincire ait amino asit sekansIE Sekans listesinin SEKANS KIMLIK NUMARALARI:5, 6, 7, 8 ve 9 ile gösterilen baz sekanslarÇlinsan TSLP reseptörü-insan Fc füzyon proteini, insan TSLP reseptörü-fare FC füzyon proteini, maymun TSLP reseptörü-insan Fc füzyon proteini, insan TSLP mutantElFlag proteini ve maymun TSLP mutantEiFlag proteinini kodlayan baz sekansIlEl TR