TR201815961T4 - Yeni sitostatik 7-deazapürin nükleozidleri. - Google Patents

Abstract

Buluş, R1 ve R2'nin tarifnamede tanımlanan değerlerden herhangi birine sahip olduğu formülün (I) bileşiklerini ve tuzlarını ve bu tür bileşikleri içeren bileşimleri ve bu tür bileşikleri kullanan terapötik yöntemleri sağlar.

Description

Tarifname ayni zamanda, formülün (I) bir bilesigini veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir eksipiyani içeren farmasötik bir bilesimi saglar.

Tarifname ayni zamanda, tümör/kanser hücrelerinde tümör büyümesinin veya hücre proliferasyonunun in vitro veya in vi'vo inhibe edilmesine iliskin olarak bu tür bir tedaviye ihtiyaci olan bir öznenin, formülün (I) bir bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu ile temas ettirilmesini içeren bir yöntemi saglar.

Tarifname ayni zamanda bir hayvanda kanserin tedavi edilmesine iliskin olarak söz konusu hayvana formülün (1) bir bilesiginin veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun uygulanmasini içeren bir yöntemi saglar.

Tarifname ayni zamanda bir hayvanda neoplastik bir hastaligin inhibe edilmesine iliskin olarak söz konusu hayvana formülün (1) bir bilesiginin veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun uygulanmasini içeren bir yöntemi saglar.

Tarifname ayni zamanda formülün (1) bir bilesiginin veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun, tümör/kanser hücrelerindeki tümör/kanser hücresi büyümesi veya hücre proliferasyonunun inhibe edilmesi, tümör/kanser hücrelerindeki hücre 02 136-P-0001 döngüsü ilerlemesinin yavaslatilmasi ve bir hayvanda kanserin tedavi edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanmasi amaciyla kullanilmasini saglar.

Tarifnaine ayni zamanda formülün (1) bir bilesiginin veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun, bir hayvanda neoplastik bir hastaligin inhibe edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanmasi amaciyla kullanilmasini saglar.

Tarifname ayni zamanda, formülün (I) bilesiklerinin veya tuzlarinin hazirlanmasinda faydali olan burada açiklanan sentetik prosesleri ve sentetik ara ürünleri açiklar.

Detayli Açiklama Bu tarifnamenin yorumlanmasi amaçlarina yönelik olarak asagidaki tanimlar geçerli olacaktir ve uygun oldugunda tekil olarak kullanilan terimler ayni zamanda çogullari veya tersi durumu içerecektir.

Burada kullanildigi üzere "alkil" terimi, dallanmis veya dallanmamis hidrokarbon kismina refere eder. Tercihen alkil, 1 ila 20 karbon atomu, daha çok tercih edildigi üzere 1 ila 16 karbon atomu, 1 ila 10 karbon atomu, 1 ila 7 karbon atomu veya 1 ila 4 karbon atomu içerir. Temsili alkil örnekleri, bunlarla sinirli olmamak üzere metil, etil, n-propil, izo-propil, n-bütil, sec-bütil, i'zo-bütil, tert-bütil, n-pentil, izopentil, neopentil, n-hekzil, 3-metilhekzil, 2,2- dimetilpentil, 2,3- dimetilpentil, n-heptil, n-oktil, n-nonil, n-desil ve benzerlerini içerir. Bir alkil grubu bir veya daha fazla doymamis bag içerdiginde bu, bir alkenil (çift bag) veya alkinil (üçlü bag) grubu olarak refere edilebilir. Ayrica bir alkil grubu bir aril grubuna baglandiginda (asagida tanimlanmistir) bu "arilalkil" grubu olarak refere edilebilir.

Burada kullanildigi üzere "alkoksi" terimi, alkil-O-“ya refere eder, burada alkil, yukarida tanimlanir. Temsili alkoksi örnekleri bunlarla sinirli olmamak üzere, 02 136-P-0001 metoksi, etoksi, propoksi, 2-propoksi, bütoksi, tert-bütoksi, pentiloksi, hekziloksi, siklopropiloksi-, siklohekziloksi- ve benzerlerini içerir. Burada kullanildigi üzere gruplarina refere eder. aromatik hidrokarbon gruplarina refere eder. Tercihen aril, (Cö-Cio) arildir.

Sinirlayici olmayan örnekler, her birinin, istege bagli olarak Sübstitüe edilmis alkil, triflorometil, sikloalkil, halo, hidroksi, alkoksi, asil, alkil-C(O)-O--, aril-O--, heteroaril-O--, istege bagli olarak Sübstitüe edilmis amino, tiyol, alkiltiyo, ariltiyo, nitro, siyano, karboksi, alkil-O-C(O)-, karbamoil, alkiltiyono, sülfonil, sülfonamido, heterosikloalkil ve benzeri gibi 1-4 sübstitüent ile istege bagli olarak Sübstitüe edildigi fenil, bifenil, naftil veya tetrahidronaftili içerir.

Ayrica burada kullanildigi üzere "aril" terimi ayni zamanda, tek bir aromatik halka veya birlikte kaynastirilan, kovalent olarak baglanan veya metilen veya etilen kismi gibi ortak bir gruba baglanan birçok aromatik halka olabilen aromatik bir sübstitüente refere eder. Ortak baglanma grubu ayni zamanda benzofenondaki gibi bir karbonil veya difenileterdeki gibi oksijen veya difenilamindeki gibi nitrojen olabilir.

Burada kullanildigi üzere "heteroaril" terimi, N, 0, S veya deen seçilen 1 ila 8 heteroatoma sahip 5-l4 üyeli monosiklik veya bisiklik veya kaynasik polisiklik halka sistemine refere eder. Tercihen heteroaril, 5-10 üyeli bir halka sistemidir.

Tipik heteroaril gruplari, 2- veya 3-tiyenil, 2- veya 3-furil, 2- veya 3-pirolil, 2-, 4- triazolil, 4- veya 5-l,2, 3-triazolil, tetrazolil, 2-, 3- veya 4-pyridil, 3- veya 4- piridazinil, 3-, 4- veya 5-pirazinil, 2-pirazinil, 2-, 4- veya 5-pirimidinili içerir. 02 136-P-0001 aril, sikloalifatik veya heterosikloalkil halkalarina kaynastirildigi bir gruba refere eder, burada radikal veya baglanti noktasi heteroaromatik halka üzerindedir.

Sinirlayici olmayan örnekler, bunlarla sinirli olmamak üzere l-, 2-, 3-, 5-, 6-, 7- b][2]benzazapinili içerir. Tipik kaynastirilmis heteroaril gruplari, bunlarla sinirli benzimidazolil, 2-, 4-, 5-, 6- veya 7-benzotiyazolili içerir. 02 136-P-0001 Bir heteroaril grubu, m0no-, bi-, tri- veya polisiklik, tercihen m0n0-, bi- veya trisiklik, daha çok tercih edildigi üzere mono- veya bisiklik olabilir.

Burada kullanildigi üzere “halo” veya “halojen” terimi, floro, kloro, bromo ve iyodoya refere eder.

Burada kullanildigi üzere “izomerler” terimi, ayni molekül formülüne sahip farkli bilesiklere refere eder. Burada kullanildigi üzere “optik izomer” terimi, mevcut bulusun belirli bir bilesigi için bulunabilen çesitli stereo izomerik konfigürasyonlardan herhangi birine refere eder ve geometrik izomerleri içerir.

Bir sübstitüentin, bir karbon atomunun kiral merkezine baglanabildigi anlasilir.

Bu nedenle bulus, bilesigin enantiyomerleri, diastereomerleri veya rasematlarini içerir. “Enantiyomerler”, birbirinin üst üste çakismayan ayna görüntüleri olan bir çift stereoizomerdir. Bir çift enantiyomerin 121 karisimi “rasemik” karisimdir. Bu terim, uygun oldugunda rasemik bir karisimi göstermek amaciyla kullanilir. görüntüleri olmayan stereoizomerlerdir. Mutlak stereokimya, Cahn-lngold-Prelog R-S sistemine göre belirtilir. Bir bilesik saf enantiyomer oldugunda her kiral karbondaki stereokimya, RveyaS olarak belirtilebilir. Mutlak konfigürasyonu bilinmeyen ayristirilmis bilesikler, sodyum D çizgisinin dalga boyunca düzlem polarize isigi döndürdükleri yöne (dekstro- veya levorotator) bagli olarak (+) veya (-) seklinde gösterilebilir. Burada açiklanan bilesiklerden bazilari, bir veya daha fazla asimetrik merkez içerir ve bu nedenle mutlak stereokimya bakimindan (R)- Veya (S) olarak tanimlanabilen enantiyomerlere, diastereomerlere ve diger stereoizomerik formlara neden olabilir. Mevcut bulus, rasemik karisimlar, optik olarak saf formlar ve ara ürün karisimlari da dahil olasi tüm izomerleri içerir.

Optik olarak aktif (R)- ve (S)- izomerler, kiral sentonlar veya kiral reaktifler kullanilarak hazirlanabilir veya klasik teknikler kullanilarak ayristirilabilir.

Bilesigin çift bag içermesi halinde sübstitüent, E veya Z konfigürasyonu olabilir.

Bilesigin disübstitüe sikloalkil içermesi halinde sikloalkil sübstitüenti, cis- veya 02 136-P-0001 trans-konfigürasyona sahip olabilir. Tüm totomerik formlarin da dahil edilmesi amaçlanir.

Burada kullanildigi üzere “farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlar” terimi, bu bulus bilesiklerinin biyolojik etkinligini ve özelliklerini muhafaza eden ve biyolojik olarak veya baska bir sekilde istenmeyen olmayan tuzlara refere eder.

Birçok durumda mevcut bulusun bilesikleri, amino ve/veya karboksil gruplarinin veya bunlara benzer gruplarin (örnegin fenol veya hidroksiamik asit) varligi sayesinde asit ve/veya baz tuzlarini olusturabilir. Farmasötik olarak kabul edilebilir ilave asit tuzlari, inorganik asitler ve organik asitler ile olusturulabilir.

Tuzlarin elde edilebildigi inorganik asitler örnegin hidroklorik asit, hidrobromik asit, sülfürik asit, nitrik asit, fosforik asit ve benzerlerini içerir. Tuzlarin elde edilebildigi organik asitler örnegin, asetik asit, propiyonik asit, glikolik asit, pirüvik asit, oksalik asit, maleik asit, malonik asit, süksinik asit, fumarik asit, tartarik asit, sitrik asit, benzoik asit, sinnamik asit, mandelik asit, metansülfonik asit, etansülfonik asit, p-toluensülfonik asit, salisilik asit ve benzerlerini içerir.

Farmasötik olarak kabul edilebilir ilave baz tuzlari, inorganik ve organik bazlar ile olusturulabilir. Tuzlarin elde edilebildigi inorganik bazlar örnegin sodyum, potasyum, lityum, amonyuin, kalsiyum, magnezyum, demir, çinko, bakir, manganez, alüminyum ve benzerlerini içerir; özellikle tercih edilenler amonyum, potasyum, sodyum, kalsiyum ve magnezyum tuzlaridir. Tuzlarin elde edilebildigi organik bazlar örnegin, primer, sekonder ve tersiyer aminler, dogal olarak göürlen sübstitüe aminler de dahil sübstitüe aminler, siklik aminler, bazik iyon degistirme reçineleri ve benzerlerini, spesifik olarak örnegin izopropilamin, trimetilamin, dietilamin, trietilamin, tripropilamin ve etanolamini içerir. Mevcut bulusun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari, klasik kimyasal yöntemler ile parent bilesik, bazik veya asidik bir kisimdan sentezlenebilir. Genel olarak bu tür tuzlar, bu bilesiklerin serbest asit formlarinin, stokiyometrik miktarda uygun baz (Na, Ca, Mg veya K hidroksit, karbonat, bikarbonat veya benzeri gibi) ile reakte edilmesi veya bu bilesiklerin serbest baz formlarinin stokiyometrik miktarda uygun asit ile reakte edilmesi yoluyla hazirlanabilir. Bu tür reaksiyonlar tipik 02 136-P-0001 olarak su veya organik bir solvent içinde veya ikisinin karisimi içinde gerçeklestirilir. Genel olarak uygulanabilir oldugu durumda ter, etil asetat, etanol, izopropanol veya asetonitril gibi aköz olmayan ortamlar tercih edilir. Uygun olan ek tuzlarin listeleri örnegin Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa.`da (1985) bulunabilir. Burada kullanildigi üzere kisi tarafindan bilinecegi üzere herhangi bir veya tüm solventler, dispersiyon ortamlari, kaplamalar, sürfaktanlar, antioksidanlar, koruyucular (örnegin antibakteriyel ajanlar, antifungal ajanlar), izotonik ajanlar, absorpsiyon geciktirme ajanlari, tuzlar, koruyucular, ilaçlar, ilaç stabilizatörleri, baglayicilar, eksipiyanlar, dagitma ajanlari, yaglayicilar, tatlandirma ajanlari, aroma verme ajanlari, boyalar, buna benzer materyaller ve kombinasyonlarini içerir (bakiniz örnegin, Remington's Pharrnaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329). Klasik herhangi bir tasiyicinin aktif bilesen ile uyumsuz olmasi haricinde terapötik veya farmasötik bilesimlerdeki kullaniini öngörülür.

Mevcut bulusun bir bilesiginin “terapötik olarak etkili miktari” terimi, mevcut bulus bilesiginin, bir öznenin biyolojik veya tibbi yanitini ortaya çikartacak veya semptomlari iyilestirecek, hastalik ilerlemesini yavaslatacak veya geciktirecek veya hastaligi önleyecek ve benzerini yapacak miktarina refere eder. Tercih edilen bir düzenlemede “etkili miktar”, memeli gibi bir öznede kanser hücrelerinin proliferasyonunu inhibe eden veya azaltan veya tümör/kanser büyümesini in vitro veya in vivo inhibe eden veya azaltan veya neoplastik bir hastaligi inhibe eden veya azaltan miktara refere eder. Tercih edilen bir baska düzenlemede ayni zamanda primer tümör/kanser boyutunu azaltan, periferal organlara kanser hücreli intiltrasyonunu inhibe eden, tümör metastazini yavaslatan veya durduran veya en azindan bir dereceye kadar tüinör veya kanser ile iliskili bir veya daha fazla semptomu hafifleten ve benzerini yapan miktara refere eder.

Burada kullanildigi üzere “özne” terimi, bir hayvana refere eder. Tercihen hayvan bir memelidir. Özne ayni zamanda örnegin primat (örnegin insanlar), inek, koyun, 02 136-P-0001 keçi, at, köpek, kedi, tavsan, siçan, fare, balik, kus ve benzerlerine refere eder.

Tercih edilen bir düzenlemede özne insandir.

Burada kullanildigi üzere “bozukluk” veya “hastalik” terimi, fonksiyonda dengesizlige veya anormallige; morbid fiziksel veya zihinsel bir duruma refere eder. Bakiniz Dorland's lllustrated Medical Dictionary, (W.B. Saunders C0. 27th Burada kullanildigi üzere “inhibisyon” veya “inhibe etme” terimi, belirli bir durum, semptom veya hastalikta azalmaya veya baskilanmaya veya biyolojik bir aktivite veya prosesin baslangiç aktivitesindeki önemli bir düsüse refere eder. Bir düzenlemede tümör veya kanser büyümesinde azalmaya veya tümör veya kanser boyutunda azalmaya neden olma kapasitesine refere eder.

Burada kullanildigi üzere herhangi bir hastalik veya bozuklugun “tedavi edilmesi” veya “tedavisi” terimi bir düzenlemede, bu hastaligin veya bozuklugun iyilestirilmesine (yani, hastalik gelisiminin veya klinik semptomlarindan en az birinin durdurulmasi veya azaltilmasi) refere eder. Bir baska düzenlemede “tedavi etme” veya “tedavi”, hasta tarafindan fark edilemeyen en az bir fiziksel parametrenin iyilestirilmesine refere eder. Baska bir düzenlemede “tedavi etme” veya “tedavi”, hastalik veya bozuklugun fiziksel olarak (örnegin fark edilebilir bir semptomun stabilizasyonu), fizyolojik olarak (örnegin fiziksel bir parametrenin stabilizasyonu) veya her iki yolla modüle edilmesine refere eder. Diger bir düzenlemede “tedavi etme” veya “tedavi”, hastalik veya bozuklugun baslangicinin veya gelisiminin veya ilerlemesinin önlenmesine veya geciktirilmesine refere Burada kullanildigi üzere mevcut bulus baglaminda (özellikle istemler baglaminda) kullanilan “bir”, “tek”, “bu” terimi ve benzer terimler, burada aksi belirtilmedikçe veya baglain tarafindan aksi net bir sekilde ifade edilmedikçe tekil ve çogul formlari kapsayacak sekilde yorumlanacaktir. Burada degerlerin 02 136-P-0001 araliklarina iliskin açiklamalar sadece, bu aralik içinde yer alan her ayri degere ayri olarak refere edilmesine iliskin kisa bir yöntem olarak görev yapar. Burada aksi belirtilmedikçe her ayri deger tarifnameye burada ayri olarak belirtilmis gibi dahil edilir. Burada açiklanan tüm yöntemler, burada aksi belirtilmedikçe veya baglam tarafindan aksi net sekilde ifade edilmedikçe uygun olan herhangi bir sirada gerçeklestirilebilir. Burada saglanan herhangi bir ve tüm örneklerin veya örnek niteligindeki dilin (örnegin “gibi”) kullanimi sadece, bulusu daha iyi gösterme amaci tasir ve istemlerde bahsedilen bulus kapsami üzerinde bir sinirlamaya sahip degildir. Tarifnamedeki hiçbir dil, bulusun uygulanmasi için önemli olan istemlerde bahsedilinemis herhangi bir elemani belirtecek sekilde yorumlanmamalidir.

Bir açida mevcut tarifname, formülün (1) bir bilesigini veya bir tuzunu saglar: 1|-CIV'›" IJI R1, (Cl-C6)alkil, hidroksi(C1-C6)alkil, aril, aril(C1-C6)alkil, heteroaril, heteroari1(C 1-C6)alki1 veya halodur, burada her aril veya heteroaril istege bagli olarak, (Ci-Cé)alkil, (Ci-C6)alk0ksi, (Cl-C6)a1ki1tiy0, halo, amino, nitro, siyano, triflorometil veya hidroksiden seçilen bir veya daha fazla grup ile sübstitüe edilir; ve R2, hidrojen, heteroaril, halo veya istege bagli olarak (CI-C6)alkil, (C1- C6)a1koksi, (Cl-C6)alki1tiyo, halo, amino, nitro, siyano, triflorometil veya hidroksiden seçilen bir veya daha fazla grup ile sübstitüe edilen arildir; veya bunlarin bir tuzudur. 02 136-P-0001 Bir baska düzenlemede mevcut tarifname, Rfin 5-üyeli heteroaril veya hidroksil- (Cl-C4)alkil oldugu, Rjnin hidrojen veya halo oldugu fomiülün (l) bilesiklerini veya bir tuzunu saglar.

Baska bir düzenlemede mevcut tarifname, Ri'in furanil, tiyenil, pirolil, tiyazoil, imidazolil, piridil, selenofenil veya pirazolil oldugu, R2”nin hidrojen veya halo oldugu fonnülün (I) bilesiklerini veya bir tuzunu saglar.

Mevcut tarifname, formülün (I) bilesiklerini, farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlarini veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyicisini/eksipiyanini içeren bu tür bilesikleri kullanan farmasötik bilesimleri ve bu tür bilesikleri kullanim yöntemlerini saglar.

Mevcut bulusun bilesikleri üzerindeki herhangi bir asimetrik karbon, (R)-, (S)- veya (R,S)-k0nfigürasyonda, tercihen (R)- veya (SU-konfigürasyonda bulunabilir.

Izomerlerin ortaya çikan her türlü karisimi, örnegin kromatografi ve/veya fraksiyonel kristalizasyon ile bilesenlerin fizikokimyasal farkliliklanna göre saf geometrik veya optik izomlerlere, diastereomerlere, rasematlara ayrilabilir.

Nihai ürünlerin veya ara ürünlerin ortaya çikan her türlü rasemati, bilinen yöntemler ile örnegin optik olarak aktif asit veya baz ile elde edilen diastereomerik tuzlarinin ayrilmasi ve optik olarak aktif asidik veya bazik bilesigin serbest birakilmasi ile optik antipodlara ayristirilabilir. Özellikle hidroksamid veya sülfonamid kismi bu sekilde, örnegin L- veya D-histidin olmak üzere optik olarak aktif bir es-ligand ile olusturulan bir metal (örnegin, Zn2+) kompleksinin fraksiyonel kristalizasyonu ile mevcut bulus bilesiklerini optik antipodlarina ayristirilmasi amaciyla kullanilabilir. Rasemik ürünler ayni zamanda kiral kromatografi, örnegin kiral bir adsorban kullanilarak yüksek basinçli sivi kromatografisi (HPLC) ile ayristirilabilir. 02 136-P-0001 Teknikte uzman kisiler tarafindan kiral merkeze sahip bulus bilesiklerinin, optik olarak aktif ve rasemik formlarda bulunabilecegi ve izole edilebilecegi anlasilacaktir. Bazi bilesikler polimorfizm sergileyebilir. Mevcut bulusun, burada açiklanan faydali özelliklere sahip olan bir bulus bilesiginin herhangi bir rasemik, optik olarak aktif, polimorfik veya stereoizomerik formunu veya karisimlarini kapsadigi anlasilacaktir, teknikte optik olarak aktif formlarin ne sekilde hazirlanacagi iyi bilinmektedir (örnegin rekristalizasyon teknikleri ile rasemik formun ayristirilmasi, optik olarak aktif baslangiç materyallerinden sentez, kiral sentez veya kiral durgun faz kullanilarak kromatografik ayrim ile).

Radikaller, sübstitüentler ve araliklar için asagida listelenen spesifik degerler sadece açiklama amaçlidir; bunlar, tanimli diger degerleri veya radikaller ve Sübstitüentlere yönelik tanimlanan araliklar içindeki diger degerleri kapsam disi birakmaz.

Spesifik olarak (Cl-C6)alkil, metil, etil, propil, izopropil, bütil, izo-bütil, sec-bûtil, pentil, 3-pentil veya hekzil olabilir; (Cl-C6)alk0ksi, metoksi, etoksi, propoksi, izopropoksi, bütoksi, izo-bütoksi, sec-bütoksi, pentoksi, 3-pentoksi veya hekziloksi olabilir; hidroksi(C1-C6)alkil, hidroksimetil, l-hidroksietil, 2- hidroksietil, l-hidroksipropil, 2-hidroksipropil, 3-hidroksipropi1, l-hidroksibütil, 4-hidroksibütil, l-hidroksipentil, S-hidroksipentil, l-hidroksihekzil veya 6- hidroksihekzil olabilir; (Cl-C6)alki1tiy0, metiltiyo, etiltiyo, propiltiyo, izopropiltiyo, bütiltiyo, izobütiltiyo, pentiltiyo veya hekziltiyo olabilir; aril, fenil, indenil veya naftil olabilir ve heteroaril, fîiril, imidazolil, triazolil, triazinil, oksazoil, izoksazoil, tiyazolil, izotiyazoil, pirazolil, pirolil, pirazinil, tetrazolil, piridil, (veya N-oksidi), tiyenil, pirimidinil (veya N-oksidi), indolil, izokinolil (veya N-oksidi) veya kinolil (veya N-oksidi) olabilir.

R1 için spesifik bir deger (Cl-C6)alkildir.

R1 için spesifik bir deger, etildir. 02 136-P-0001 R1 için spesifik bir deger, istege bagli olarak bir veya daha fazla (Cl-C6)alk0ksi ile sübstitüe edilmis arildir.

R1 için spesifik bir deger, fenil, 4-flor0fenil veya 4-met0ksifenildir.

R1 için spesifik bir deger, aril(C1-C6)alkildir.

R1 için spesifik bir deger, benzildir.

R1 için spesifik bir deger, heteroarildir.

R1 için spesifik bir deger, furanil, tiyenil, pirolil, fiyazoil, imidazolil, piridil, R1 için spesifik bir deger, hidroksi(C1-C6)alkildir.

R1 için spesifik bir deger, 2-hidr0ksimetildir.

R2 için spesifik bir deger, halodur.

R2 için spesifik bir deger klorodur.

R2 için spesifik bir deger florodur.

R2 için spesifik bir deger, heteroarildir. R2 için spesifik bir deger, furanil veya tiyenildir.

R2 için spesifik bir deger, istege bagli olarak (Ci-C6)alk0ksi ve (C1- C6)alkiltiy0dan seçilen bir veya daha fazla grup ile sübsfitüe edilmis fenildir.

R2 için spesifik bir deger, 4-met0ksifenil veya 4-metiltiy0fenildir. 02 136-P-0001 Formülün (I) bilesiklerinin spesifik bir grubu, Ri°in heteroaril oldugu ve anin kloro veya floro oldugu bilesiklerdir.

Formülün (l) bilesiklerinin spesifik bir grubu, Ri°in furanil, tiyenil, pirolil, tiyazoil, imidazolil, piridil, selenofenil veya pirazolil oldugu ve Rzsnin kloro veya floro oldugu bilesiklerdir.

Tarifnamenin bir düzenleinesinde formülün (I) bilesigi, R1 ,in sübstitüe edilmemis fenil oldugu ve R2`nin hidrojen oldugu bilesikleri kapsam disi birakir.

Mevcut bulusun bilesikleri, tümör/kanser hücresi büyümesinin veya tümör/kanser hücrelerindeki hücre proliferasyonunun inhibe edilmesinde, tümör/kanser hücrelerinde hücre döngüsü ilerlemesinin yavaslatilmasinda faydalidir. Ayrica mevcut bulusun bilesiklerinin apoptozu indükledigi gösterilir. Apoptoz indüksiyonu, kanser/tümör tedavisinde önemli bir kemoterapi yaklasimi olarak kullanilmistir. Buna bagli olarak mevcut bulusun bilesikleri, degerli farmasötik özelliklere sahiptir, bunlar, anti-proliferasyon ve antitümör/anti-kanser ajanlar olarak faydali olabilir.

Bu nedenle bir açida mevcut bulusun bilesikleri, hücre proliferasyonunun in vitro ve in vivo olarak inhibe edilmesi amaciyla kullanilabilir. Bir düzenlemede mevcut bulusun bilesikleri, tümör/kanser hücresinin söz konusu bilesiklerin etkili miktari ile temas ettirilmesi yoluyla tümör/kanser hücresindeki hücre proliferasyonunu inhibe etmek amaciyla kullanilabilir. Bir düzenlemede mevcut bulusun bilesikleri, hücresel proliferasyon hastaliklarini veya durumlarini tedavi etmek amaciyla kullanilabilir. Söz konusu hastaliklar, bunlarla sinirli olmamak üzere kanser, otoimmün hastalik, fungal bozukluklar, artrit, greft reddi, inflamatuar bagirsak hastaligi, bunlarla sinirli olinamak üzere ameliyat, anjiyoplasti ve benzeri de dahil tibbi prosedürlerden sonra indüklenen hücresel proliferasyonu içerebilir. 02 136-P-0001 Bir baska açida mevcut bulusun bilesikleri, tümör/kanser büyümesinin in vitro ve in vivo olarak inhibe edilmesi amaciyla kullanilabilir. Bir düzenlemede bilesikler, tümör/kanser hücresinin söz konusu bilesiklerin etkili bir miktari ile temas ettirilmesi yoluyla tümör/kanser büyüinesinin inhibe edilmesi ainaciyla kullanilabilir. Bir düzenlemede bulus, mevcut bulus bilesiklerinin tümör veya kanser büyümesinin inhibe edilmesine yönelik kullanim yöntemini saglar.

Yöntemlere göre tedavi edilebilen tümörler veya kanserler örnegin, bir memelinin gögüs, akciger, tiroid, lenf dügümü, genitoüriner sistem, böbrek, üreter, mesane, yumurtalik, testis, prostat, muskoloskeletal sistem, kemik, iskelet kasi, kemik iligi, gastrointestinal sistem, mide, özofagus, ince bagirsak, kolon, rektum, pankreas, karaciger, düz kas, merkezi ve periferik sinir sistemi, beyin, omurilik, sinirler, bas, boyun, kulak, göz, nazofarenks, orofarinks, tükürük bezi, kardiyovasküler sistem, agiz boslugu, dil, larenks, hipofarinks, yumusak dokular, deri, serviks, anüs, retina ve/veya kalbinde bulunan tümörleri veya kanserleri içerir.

Bir düzenlemede bulus, neoplastik bir hastalik veya tümör/kanserin tedavi edilmesi yönteminde kullanilmaya yönelik mevcut bulus bilesiklerini saglar.

Burada kullanildigi üzere “neoplastik hastalik” terimi, iyi huylu (kanser olmayan) veya kötü huylu (kanser) hücrelerin veya dokularin herhangi bir anormal büyümesine refere eder. Bulusun yöntemlerine göre tedavi edilebilen neoplastik hastaliklar örnegin, akut miyelojen lösemi, kronik lenfositik lösemi, kronik miyelojen lösemi, kütanöz T-hücreli lenfoma, saçakli hücreli lösemi ve Hodgkin disi lenfomadan seçilen neoplazmlari içerir.

Ayrica mevcut bulus: o bir ilaç olarak kullanima yönelik mevcut bulus bilesigini; o mevcut bulus bilesiginin, tümör/kanser hücrelerindeki hücre proliferasyonunun inhibe edilmesine veya tümör/kanser hücrelerinde hücre döngüsü ilerleinesinin yavaslatilmasina yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanilmasini; 02 136-P-0001 o mevcut bulus bilesiginin, hücresel proliferasyon hastaliklarinin veya durumlarinin tedavi edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanilmasini; o mevcut bulus bilesiginin, tümör/kanser büyümesinin in vitro ve in vi'vo inhibe edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanilmasini; o mevcut bulus bilesiginin, neoplastik bir hastaligin tedavi edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanilmasini; o mevcut bulus bilesiginin, tümör veya kanserin tedavi edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanilmasini saglar.

Formülün (I) bilesiklerinin hazirlanmasina yönelik prosesler, bulusun diger düzenlemeleri olarak saglanir ve jenerik radikallerin anlamlarinin aksi belirtilmedikçe yukarida verilen gibi oldugu asagida yer alan prosedürler ile gösterilir.

Formülün (1) bir bilesigi asagidaki sekilde hazirlanabilir.

Korunmus 6-klor0-7-deazapürin ribozidin (1) (Sema 1, Tablo 1) karsilik gelen boronik asitler, çinko, kalay ve alüminyum reaktifler ile paladyum katalizli çapraz baglanma reaksiyonlari, akabinde nihai serbest ribozidler (3a-3l) saglanarak %90 aköz trifloroasetik asit ile isleme yoluyla korumasiz birakilan 6-sübstitüe7- deazapürinleri (Za-l) saglar. Bu asidik kosullar altinda N-koruyucu Boc (giris 8) ve tritil (giris 10) gruplarinin da uzaklastirildigi bilinmelidir. 6-hidroksimetil türevi (giris 12) durumunda benzoil grubu, nihai asidik korumasiz birakma öncesinde metanol içindeki sodyum metoksit ile nicel olarak korumasiz birakilir. 02 136-P-0001 Tablo 1. Çapraz baglanma ve korumasiz birakma islemleri Korumasiz . ' Çapraz baglanma Giris R1 Ri-M (veya M) ' birakma ürünü ürünü (verim) 4 [iZZIçKG-l-EOMG B(OH)2 2d (100%) 3d (62%) 6 %2 SnBu3 Zf (93%) 3f (63%) 7 Jlv-_QÖ SnBu3 Zg (95%) 3g (88%) 8 2h (76%) 3h (83%) 02 136-P-0001 Korumasiz . Çapraz baglanma Giris R1 Ri-M (veya M) _ birakma ürünü ürünü (verim) _ ”f d BrZn/ / /W'OH lZn› 082 a6-benzoiloksimetil türevine (21) ek olarak kromatografî ayni zamanda, %23 verim ile 6-hidr0ksimetil(21') türevini saglamistir (dolayisiyla hidroksimetil eklenmesinin toplam verimi %77,dir). Bu ürün, aköz islem esnasinda benzoil grubunun kismi olarak korumasiz birakilmasindan gelir.

Diger 6-hetaril-7-deazapürin ribozidler (3m-3s) (Sema 2, Tablo 2) çogunlukla Shaughnessy kosullari (girisler 1-6) altinda gerçeklestirilen aköz Suzuki çapraz baglama reaksiyonu ile veya Stille reaksiyonu (giris 7) ile korunmamis 6-kloro-7- deazapürin ribozidden (4) direkt olarak hazirlanir. 3-pirolil türevi durumunda N- koruyucu triizopropilsilil kismi, aköz baglanmanin oldukça bazik kosullari altinda korumasiz birakilir (Giris 3). Ayni zamanda NH içeren boronik asitler (girisler 3,5,6) durumunda klorid (4) ile sübstitüsyon reaksiyonu ile bu nitrojen atomunun arilasyonuna ait ürünün olusumunun gözlendigi bilinmelidir. 4-pirazolil türevi 02 136-P-0001 (giris 6) durumunda beraberindeki N-arilasyon ve Suzuki reaksiyonu, %18 verimde çapraz bagli dimere (5) yol açar. 4 3m-35 Tablo 2. Serbest nükleozidin (4) çapraz baglanmalari Giris R1 Ri-M (veya M) Çapraz baglanma ürünü (verim) 1 Eva-:`50 B(OH)2 3m (67%) 2 :::KS B(OH)2 3n (69%) 3 LNH lvl-:::NFSIijiPrIIi 30 (55%) f” (HOlgBl 4 nis" B(OH)2 3p (64%) HFN B(OH)2 3q (64%) 6 B(OH)2 3r (12%)3 02 136-P-0001 Giris R1 Ri-M (veya M) Çapraz baglanma ürünü (verim) 7 VE.] SnBu3 38 (51%) Analog 6-hetaril(ari1)-7-floro-7-deazapürin ribozidlerin hazirlanisina yönelik olarak per-O-benzoile 6-k10r0-7-fl0ro-7-deazapürin ribozidin (6) (Sema 3, Tablo 3) çapraz baglanma reaksiyonlari, akabinde serbest 7-floro ribozidler (Sa-h) saglanarak Zemplén,e göre korumasiz birakilan ürünler (7a-h) saglanarak gerçeklestirilir. 820 pa . BZO ' HO o lul. i-O MEOH 0\ s 7a-h Sa-h Tablo 3. Çapraz baglanma ve korumasiz birakma islemleri G' . R Ri-M (veya Çapraz baglanma Korumasiz birakma 02 136-P-0001 G` . R Ri-M (veya Çapraz baglanma Korumasiz birakma S I M) ürünü (verim) ürünü (verim) 4 "X ”'15 7d (42%) 8d (89%) l, 12;/ 7 "1" SnBu3 7g (86%) Sg (68%) (9) aköz Suzuki reaksiyonu ile hazirlanir (Sema 4). 02 136-P-0001 fm:) >-\$|i/-< Pd(OAc)z Gerekli serbest ribozidin (9) sentezi, %43 verimde korunmus nükleozid (12) saglanarak 4-klor0-5-Iloropirolo[2,3-d]pirimidinin (10) (Sema 5) potasyum tuzunun halojenoz (11) ile glikozilasyonu ile baslar. Bu nükleozidin (12) aköz TFA ile islenmesi kolay bir sekilde %85 verimde serbest nükleozidi (9) saglar. ci N H TBSO KOH, 'FDA-1 i toluen 7-k10r0-7-deazapürin serisindeki bilesiklerin sentezi, akabinde serbest nükleozidler (15a-e) elde edilerek düzgün bir sekilde korumasrz birakilan asile 6- (Sema 6, Tablo 4) paladyum katalizli çapraz baglanma reaksiyonlarindan olusur. 02 136-P-0001 820 820 i ' :40. i 13 *Ma-e 15a-e Tablo 4. Çapraz baglanma ve korumasiz birakma islemleri Rl-M (veya Çapraz baglanma Korumasiz birakma Tuzlar ve Hidratlar Bu bulusun bilesimleri istege bagli olarak, buradaki bilesiklerin tuzlarini, özellikle Örnegin Na+, Li+, KI Ca+2 ve Mg+2 içeren farmasötik olarak kabul edilebilir, toksik olmayan tuzlari içerir. Bu tür tuzlar, alkali ve toprak alkali metal iyonlari 02 136-P-0001 veya amonyum ve kuaterner amino iyonlari gibi uygun katyonlarin asit anyon kismi, tipik olarak karboksilik asit ile kombinasyonu yoluyla elde edilebilir. Tek degerlikli tuzlar, suda çözünebilir bir tuz istenmesi halinde tercih edilir. Bazi tuzlar, formülün (l) bilesiklerinin satlastirilmasina veya diger tuzlarin hazirlanmasina yönelik ara ürünler olarak faydali olabilir.

Metal tuzlari tipik olarak, metal hidroksitin bu bulusun bir bilesigi ile reakte edilmesi yoluyla hazirlanir. Bu sekilde hazirlanan metal tuzlarinin örnekleri, Li+, Na+ ve K+ içeren tuzlardir. Daha az çözünen bir metal tuzu, uygun metal bilesigin eklenmesi yoluyla daha fazla çözünen bir tuzun solüsyonundan çöktürülebilir.

Ayrica tuzlar, bazi organik ve inorganik asitler, örnegin HCl, HBr, HZSO4, H3PO4 veya organik sülfonik asitlerin bazik merkezlere, tipik olarak aminlere veya asidik gruplara asit ilavesinden olusturulabilir. Son olarak buradaki bilesimlerin, iyonize olmamis ve zwitteriyonik formlarindaki bulus bilesiklerini ve hidratlarda oldugu gibi stokiyometrik miktarlardaki su ile kombinasyonlari Bu bulusun kapsamina ayni zamanda parental bilesiklerin bir veya daha fazla amino asit ile olan tuzlar] dahil edilir. Yukarida açiklanan ainino asitlerden herhangi biri, protein bilesenleri olarak bulunan uygun, özellikle dogal olarak görülen amino asitler olmakla birlikte amino asit tipik olarak, örnegin lizin, arjinin veya glutamik asit olmak üzere bazik veya asidik grup veya glisin, serin, treonin, alanin, izolösin veya lösin gibi nötral bir grup içeren yan zinciri tasiyan amino Bulusun bir baska açisi, kanseri tedavi etme yöntemlerinde kullanilmaya yönelik bulus bilesikleri ile ilgilidir.

Bulus bilesimleri, kanseri tedavi edebilir, bu tür tedaviye yönelik ara ürünler olarak görev yapabilir veya asagida açiklanan diger kullanimlara sahip olabilir. 02 136-P-0001 Anti-kanser bilesikler, anti-kanser bilesik için Özel olan bir geometriye sahip bir kanser hücresinin yüzeyi üzerindeki veya boslugundaki lokasyonlara baglanacaktir. Anti-kanser bilesige baglanan bilesimler, çesitli tersinirlik dereceleri ile baglanabilir. Büyük ölçüde tersinmez olarak baglanan bilesikler, bulusun bu yönteminde kullanilmaya yönelik ideal adaylardir. Etiketlendiginde büyük ölçüde tersinmez olarak baglanan bilesimler, kanserin saptanmasina yönelik problar olarak faydalidir. Buna bagli olarak bulus, kanser içerdiginden süphe edilen bir numunede kanserin saptanmasina iliskin olarak kanser içerdiginden süphe edilen numunenin, bir etikete bagli bulus bilesigini içeren bir bilesim ile islenmesi ve nuinunenin etiket aktivitesi üzerindeki etkisinin gözlenmesi adimlarini içeren yöntemler ile ilgilidir. Uygun etiketler tani alaninda iyi bilinir ve stabil serbest radikaller, floroforlar, radyoizotoplar, enzimler, kemilüminesan gruplar ve kromojenleri içerir. Buradaki bilesikler, hidroksil veya amino gibi fonksiyonel gruplar kullanilarak klasik sekilde etiketlenir.

Bulus baglaminda kanser içerdiginden süphe edilen numuneler, canli organizmalar gibi dogal veya insan yapimi materyaller; doku veya hücre kültürleri; biyolojik materyal numuneleri (kan, serum, idrar, serebrospinal sivi, gözyasi, salya, tükürük, doku nuinuneleri ve benzeri) gibi biyolojik numuneler; laboratuvar numuneleri, gida, su veya hava numuneleri; hücrelerin, özellikle istenen glikoproteini sentezleyen rekombinant hücrelerin ekstraktlari gibi biyo- ürün numuneleri ve benzerlerini içerir. Tipik olarak numunenin kanser içerdiginden süphe edilecektir. Numuneler, su ve organik solvent/su karisimlari da dahil herhangi bir ortamda bulunabilir. Numuneler, insanlar gibi canli organizmalari ve hücre kültürleri gibi insan yapimi materyalleri içerir.

Bulusun tedavi etme adimi, bulus bilesiminin numuneye eklenmesini içerir veya bilesim prekürsörünün numuneye eklenmesini içerir. Ekleme adimi, yukarida açiklanan herhangi bir uygulama yöntemini içerir. 02 136-P-0001 Istenmesi halinde bilesimin uygulanmasindan sonra kanser aktivitesi, kanser aktivitesini direkt ve dolayli saptama yönteinleri de dahil herhangi bir yöntem ile gözlenebilir. Kanser aktivitesinin belirlenmesine iliskin nicel, nitel ve yari nicel yöntemlerin tümü öngörülür. Tipik olarak yukarida açiklanan tarama yöntemlerinden biri uygulanir, ancak canli bir organizmanin fizyolojik özelliklerinin gözlenmesi gibi diger herhangi bir yöntein de uygulanabilir.

Kanser içeren organizmalar, insanlar gibi memelileri içerir. Bu bulusun bilesikleri, hayvanlarda veya insanlarda kanserin tedavisinde veya profilaksisinde faydalidir.

Ancak kanseri tedavi edebilen bilesiklerin taranmasinda enzim analizlerinin sonuçlarinin, hücre kültürü analizleri ile korele olmayabilecegi akilda tutulmalidir.

Dolayisiyla hücre temelli bir analiz, primer tarama araci olmalidir.

Anti-Kanser Bilesiklere yönelik Taramalar Bulus bilesimleri, enzim aktivitesinin degerlendirilmesine yönelik klasik tekniklerden herhangi biri ile kansere karsi aktivite yönünden taranir. Bulus baglaminda tipik olarak bilesimler ilk olarak kansere karsi aktivite yönünden in vitro olarak taranir ve aktivite gösteren bilesimler akabinde aktivite yönünden in vi'vo olarak taranir. Faydali in vitro taramalar detayli olarak açiklanmistir ve burada açiklanmayacaktir. Ancak örnekler, uygun in vitro analizleri açiklar.

Farmasötik Formülasvonlar Bu bulusun bilesikleri, normal uygulamaya göre seçilecek olan klasik tasiyicilar ve eksipiyanlar ile formüle edilir. Tabletler, eksipiyanlar, glidanlar, dolgu maddeleri, baglayicilar ve benzerlerini içerecektir. Aköz formülasyonlar, steril formda hazirlanir ve oral uygulamanin disinda uygulamaya yönelik olarak hedeflendiginde genellikle izotonik olacaktir. Bütün formülasyonlar, Farmasötik Eksipiyanlar El Kitabfnda (1986) belirtilenler gibi eksipiyanlari içerecektir. 02 136-P-0001 Eksipiyanlar, askorbik asit ve diger antioksidanlar, EDTA gibi selatlama ajanlari, karbohidratlar, örnegin dekstrin, hidroksialkilselüloz, hidroksialkilmetilselüloz, stearik asit ve benzerlerini içerir. Formülasyonlarin pH”si, yaklasik 3 ila yaklasik 11 arasinda degisiklik gösterir, ancak normalde yaklasik 7 ila 10,dur.

Aktif içerik maddelerinin tek basina uygulanmasi mümkünken bunlarin farmasötik formülasyonlar olarak sunulmasi tercih edilebilir. Bulusun veterinerlige yönelik ve insanda kullanima yönelik formülasyonlari, bir veya daha fazla kabul edilebilir tasiyici ve istege bagli olarak terapötik içerik maddeleri ile birlikte yukarida tanimlandigi üzere en az bir aktif içerik maddesini içerir.

Tasiyici(lar), formülasyonun diger içerik maddeleri ile uyumlu olma bakimindan Formülasyonlar, yukaridaki uygulama yollarina yönelik uygun olanlari içerir.

Foimülasyonlar uygun bir sekilde birim dozaj formunda sunulabilir ve eczacilik tekniginde iyi bilinen yöntemlerden herhangi biri ile hazirlanabilir. Teknikler ve formülasyonlar genel olarak Remington's Phannaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA) içinde bulunur. Bu tür yöntemler, aktif içerik maddesinin bir veya daha fazla yardimci içerik maddesini olusturan tasiyici ile bir araya getirilmesi adimini içerir. Genel olarak formülasyonlar aktif içerik maddesinin sivi tasiyicilar veya ince olarak bölünmüs kati tasiyicilar veya her ikisi ile esit sekilde ve yakin halde bir araya getirilmesi ve akabinde gerekli olmasi halinde ürünün sekillendirilmesi yoluyla hazirlanir.

Oral uygulamaya yönelik uygun mevcut bulusun formülasyonlari, her biri aktif içerik maddesinin önceden belirlenmis bir miktarini içerinek üzere kapsüller, kaseler veya tabletler gibi ayri birimler olarak; bir toz veya granül olarak; bir aköz veya aköz olmayan sivi içindeki bir solüsyon veya bir süspansiyon olarak; veya su içinde yag sivi einülsiyonu veya yag içinde su sivi emülsiyonu olarak sunulabilir.

Aktif içerik maddesi ayrica bir bolus, elektuar veya macun olarak uygulanabilir. 02 136-P-0001 Bir tablet, istege bagli olarak bir veya daha fazla yardimci içerik maddesi ile sikistirma veya kaliplama yoluyla yapilir. Sikistirilmis tabletler, uygun bir makinede aktif içerik maddesinin bir toz veya granüller gibi serbest akan bir formda sikistirilmasi yoluyla hazirlanabilir, istege bagli olarak bir baglayici, yaglayici, atil seyreltici, koruyucu, yüzey aktif veya dagitici ajan ile karistirilabilir. Kaliplanan tabletler, uygun bir makinede, bir atil sivi seyreltici ile nemlendirilmis toz haline getirilmis aktif içerik maddesinin bir karisiminin kaliplanmasi araciligiyla yapilabilir. Tabletler istege bagli olarak kaplanabilir veya çentiklenebilir ve istege bagli olarak, bundan aktif içerik maddesinin yavas veya kontrollü salimini saglamak amaciyla formüle edilir.

Göz veya diger dis dokulara, örnegin agiz ve deriye uygulamaya yönelik olarak gibi %0.l,lik W/W artislarda %01 ve %20 arasindaki bir aralikta aktif içerik maddelerini içerir), tercihen %02 ila 15 w/w ve en çok tercih edildigi üzere %05 ila 10 W/W miktarinda aktif içerik maddelerini içeren bir topikal merhem veya krem olarak uygulanir. Bir merhemde formüle edildiginde aktif içerik maddeleri bir parafinik veya su ile karisabilen bir merhem bazi ile kullanilabilir. Alternatif olarak aktif içerik maddeleri su içinde yag krem bazi ile bir krem içinde formüle edilebilir.

Istenmesi halinde krem bazinin aköz fazi örnegin en az %30 W/W bir polihidrik alkol, diger bir deyisle propilen glikol, bütan 1,3-di01, mannitol, sorbitol, gliserol ve polietilen glikol (PEG 400 dahil) ve karisimlari gibi iki veya daha fazla hidroksil grubuna sahip bir alkolü içerebilir. Topikal forinülasyonlar istenebilen sekilde, deri veya etkilenen diger alanlar boyunca aktif içerik maddesinin absorpsiyonu veya penetrasyonunu arttiran bir bilesigi içerebilir. Bu tür termal penetrasyon arttiricilarin örnekleri dimetil sülfoksit ve ilgili analoglari içerir.

Bu bulusun emülsiyonlarinin yagli fazi, bilinen içerik maddelerinden bilinen bir sekilde olusturulabilir. Faz sadece bir emülsiyonlastiriciyi (bir emulgan olarak 02 136-P-0001 diger bir sekilde bilinen) içerirken bunun bir kati yag veya sivi yag ile veya kati yag veya bir sivi yag ile en az bir emülsiyonlastiricinin bir karisimini içerir.

Tercihen bir hidrofilik emülsiyonlastirici bir stabilizör olarak hareket eden bir lipofilik emülsiyonlastirici ile birlikte yer alir. Ayrica bir sivi yag ve bir kati yagin dahil edilmesi tercih edilir. Bununla birlikte, stabilizörler ile veya bunlar olmaksizin emülsiyonlastiricilar, emülsiyonlastirici mumlari olusturur ve sivi yag ve kati yag ile birlikte mum, krem formülasyonlarinin yagli bir sekilde dagitilan fazini olusturan emülsiyonlastirici merhem bazini olusturur.

Bulusun formülasyonunda kullanilmaya yönelik uygun emülganlar ve emülsiyon stabilize ediciler, Tween® 60, Span® 80, ketostearil alkol, benzil alkol, miristil alkol, gliseril mono-stearat ve sodyum lauril sülfati içerir.

Formülasyona yönelik uygun sivi yaglar veya kati yaglarin seçimi istenen kozmetik özelliklerin elde edilmesine dayalidir. Krem tercihen tüpler veya diger kaplardan sizintiyi önlemek üzere uygun tutarliliga sahip yagli olmayan, lekelemeyen ve yikanabilir bir ürün olmalidir. Di-izodipat, izosetil stearat, hindistan cevizi yagi asitlerinin propilen glikolü, izopropil miristat, desil oleat, izopropil palmitat, bütil stearat, 2-etilhekzil palmitat gibi düz veya dallanmis Zincirli, mono veya dibazik alkil esterler veya Crodamol CAP gibi bilinen dallanmis Zincirli esterlerin bir harmani kullanilabilir, son üçü tercih edilen esterlerdir. Bunlar tek basina veya gerekli özelliklere bagli olarak kombinasyon halinde kullanilabilir. Alternatif olarak beyaz yumusak parafin ve/Veya sivi paratin veya diger mineral yaglar gibi yüksek erime noktali lipidler kullanilir.

Mevcut bulusa göre farmasötik formülasyonlar, farmasötik olarak kabul edilebilir bir veya daha fazla tasiyici veya eksipiyan ve istege bagli olarak diger terapötik ajanlar ile birlikte bulusun bir veya daha fazla bilesigini içerir. Aktif içerik maddesini içeren farrnasötik formülasyonlar, hedeflenen uygulama yöntemine yönelik uygun herhangi bir formda olabilir. Oral kullanima yönelik olarak kullanildiginda, örnegin tabletler, yuvarlak yassi haplar, pastiller, aköz veya yagli 02 136-P-0001 süspansiyonlar, dagitilabilir tozlar veya granüller, emülsiyonlar, sert veya yumusak kapsüller, suruplar ve eliksirler hazirlanabilir. Oral kullanima yönelik olarak hedeflenen bilesimler, farmasötik bilesimlerin üretimine yönelik teknikte bilinen herhangi bir yönteme göre hazirlanabilir ve bu tür bilesimler, yenilebilir bir preparat saglamak amaciyla tatlandirma ajanlari, lezzetlendirrne ajanlari, renklendirme ajanlari ve koruyucu ajanlari içeren bir veya daha fazla ajani içerebilir. Tabletlerin üretimine yönelik olarak uygun olan farmasötik olarak kabul edilebilir toksik olmayan eksipiyan ile karisim halinde aktif içerik maddesini içeren tabletler kabul edilebilir. Bu eksipiyanlar örnegin, kalsiyum veya sodyum karbonat, laktoz, laktoz monohidrat, kroskarmelloz sodyum, povidon, kalsiyum veya sodyum fosfat gibi atil seyrelticiler; misir nisastasi veya aljinik asit gibi granüle edici ve dagitici ajanlar; selüloz, mikrokristalin selüloz, nisasta, jelatin veya akasya gibi baglayici ajanlar; ve magnezyum stearat, stearik asit veya talk gibi yaglayici ajanlar olabilir. Tabletler kaplanmarnis olabilir veya gastrointestinal kanalda parçalanma ve adsorpsiyonu geciktirmek ve böylece daha uzun bir periyotta yavas etki saglamak üzere mikroenkapsülasyonu içeren bilinen teknikler ile kaplanabilir. Örnegin gliseril monostearat veya gliseril distearat gibi bir zaman geciktirme materyali, tek basina veya bir vaks ile kullanilabilir.

Oral kullanima yönelik formülasyonlar ayrica, aktif içerik maddesinin bir atil sodyum seyreltici, örnegin kalsiyum fosfat veya kaolin ile karistirildigi sert jelatin kapsüller olarak veya aktif içerik maddesinin su veya yer fistigi yagi, sivi paratin veya zeytinyagi gibi bir yag ortami ile karistirildigi yumusak jelatin kapsüller olarak sunulabilir.

Bulusun aköz Süspansiyonlari, aköz süspansiyonlarin üretimine yönelik uygun eksipiyanlar ile karisim halinde aktif materyalleri içerir. Bu tür eksipiyanlar, sodyum karboksimetilselüloz, metilselüloz, hidroksipropil metilselüloz, sodyum aljinat, polivinilpirolidon, kitre ve akasya zamki gibi süspanse edici bir ajan, dogal olarak görülen bir fosfatid gibi dagitici veya islatici ajanlar (örnegin lesitin), bir yag asidi ile bir alkilen oksidin yogunlasma ürünü (örnegin polioksietilen stearat), 02 136-P-0001 bir uzun Zincirli alifatik alkol ile etilen oksidin yogunlasma ürünü (örnegin heptadekaetilenoksisetanol), bir yag asidi ve bir hekzitol anhidritten elde edilen bir kismi ester ile etilen oksidin yogunlasma ürünü (örnegin, polioksietilen sorbitan monooleat) içerir. Aköz süspansiyon ayrica, etil veya n-propil p-hidroksi- benzoat gibi bir veya daha fazla koruyucu, bir veya daha fazla renklendirme ajani, bir veya daha fazla lezzetlendirme ajani ve bir veya daha fazla tatlandirma ajani, örnegin sakaroz veya sakkarin içerebilir.

Yag süspansiyonlari aktif içerik maddesinin, fistik yagi, zeytin yagi, susam yagi veya hindistan cevizi yagi gibi bir bitkisel yag veya sivi parafin gibi bir mineral yagi içinde süspanse edilmesi yoluyla formüle edilebilir. Oral süspansiyonlar bal mumu, sert parafin veya setil alkol gibi bir koyulastirma ajanini içerebilir.

Yukarida açiklananlar gibi tatlandiirna ajanlari ve lezzetlendirrne ajanlari yenilebilir bir oral preparat saglamak üzere eklenebilir. Bu bilesimler askorbik asit gibi bir antioksidanin eklenmesi araciligiyla korunabilir.

Suyun eklenmesi yoluyla bir aköz süspansiyonun hazirlanmasina yönelik uygun bulusun dagitilabilir tozlari ve granülleri, bir dagitici veya islatici ajan, bir süspanse edici ajan ve bir veya daha fazla koruyucu ile karisim halinde aktif içerik maddesini saglar. Uygun dagitici veya islatici ajanlar ve süspanse edici ajanlar yukarida açiklananlar ile örneklendirilir. Ilave ekspiyanlar örnegin tatlandirici, lezzetlendirici ve renklendirici ajanlar, ayrica mevcut olabilir.

Bulusun fannasötik bilesimleri ayrica su içinde yag emülsiyonlari formunda olabilir. Yagli faz, zeytinyagi veya fistik yagi gibi bir bitkisel yag, sivi parafin gibi bir mineral yagi veya bunlarin bir karisimi olabilir. Uygun emülsiyonlastirici ajanlar, akasya zainki ve kitre gibi dogal olarak görülen zamklar, soya fasulyesi lesitini gibi dogal olarak görülen fosfatidler, sorbitan monooleat gibi yag asitleri ve hekzitol anhidritlerden elde edilen esterler veya kismi esterler ve polioksietilen sorbitan monooleat gibi etilen oksit ile bu kismi esterlerin yogunlasma ürünleri olabilir. Emülsiyon ayrica tatlandirma ve lezzetlendirme ajanlarini içerebilir. 02 136-P-0001 Sumplar ve eliksirler, gliserol, sorbitol veya sakaroz gibi tatlandirma ajanlari ile formüle edilebilir. Bu tür formülasyonlar ayrica bir demulsent, bir koruyucu, bir lezzetlendirici veya bir renklendirici ajani içerebilir.

Bulusun farmasötik bilesimleri, steril enjekte edilebilir aköz veya oleajinöz süspansiyon gibi steril enjekte edilebilir bir preparat formunda olabilir. Bu süspansiyon yukarida bahsedilmis olan bu uygun dagitici veya islatici ajanlar ve süspanse edici ajanlar kullanilarak bilinen teknige göre formüle edilebilir. Steril enjekte edilebilir preparat ayrica 1,3-bütan-diol içindeki bir solüsyon gibi toksik olmayan parenteral olarak kabul edilebilir seyreltici veya solvent içindeki steril enjekte edilebilir bir solüsyon veya süspansiyon olabilir veya liyofilize bir toz olarak hazirlanabilir. Kullanilabilen kabul edilebilen araçlar ve solventler arasinda su, Ringer solüsyonu ve izotonik sodyum klorid solüsyonu vardir. Ek olarak steril sabitlenmis yaglar klasik olarak, bir solvent veya süspanse edici ortam olarak kullanilabilir. Bu amaca yönelik olarak, sentetik mono- veya digliseridler dahil herhangi bir sabit orta siddette yag kullanilabilir. Ek olarak oleik asit gibi yag asitleri ayni sekilde, enjekte edilebilir maddelerin hazirlanmasinda kullanilabilir.

Tekli bir dozaj formunu üretmek üzere tasiyici materyal ile kombine edilebilen aktif içerik maddesinin miktari, tedavi edilen konakçi ve belli uygulama moduna bagli olarak degisiklik gösterecektir. Örnegin insanlara oral uygulamaya yönelik olarak hedeflenen yavas salimli bir formülasyon, toplam bilesimlerin (agirlik:agirlik) yaklasik %5 ila yaklasik 95°i arasinda degisiklik gösterebilen tasiyici materyalin uygun ve elverisli bir miktari ile bilesik haline getirilen yaklasik olarak 1 ila 1000 mg aktif materyali içerebilir. Farmasötik bilesim, uygulamaya yönelik kolayca ölçülebilen miktarlar saglamak üzere hazirlanabilir. Örnegin intravenöz infüzyona yönelik olarak hedeflenen bir aköz solüsyon, yaklasik 30 mL/saatlik bir hizda uygun bir hacmin infüzyonunun meydana gelebilmesi amaciyla solüsyonunun mililitresi basina yaklasik 3 ila 500 pg aktif içerik maddesi içerebilir. 02 136-P-0001 Göze uygulamaya yönelik uygun fonnülasyonlar, aktif içerik maddesinin uygun bir tasiyici, özellikle aktif içerik maddesine yönelik bir aköz solvent içinde çözüldügü veya süspanse edildigi göz damlalarini içerir. Aktif içerik maddesi bir konsantrasyonda bu tür formülasyonlarda bulunur.

Agizda topikal uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, lezzetlendirilinis bir bazda aktif içerik maddesi, genellikle sakaroz ve akasya veya kitreyi içeren pastiller; jelatin ve gliserin veya sakaroz ve akasya gibi bir atil bazda aktif içerik maddesini içeren pastiller; ve uygun bir sivi tasiyici içinde aktif içerik maddesini içeren agiz çalkalama sularini içerir.

Rektal uygulamaya yönelik formülasyonlar, örnegin kakao yagi veya bir salisilati içeren uygun bir baza sahip bir supozituar olarak sunulabilir.

Intrapulmoner veya nazal uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, nazal geçis araciligiyla hizli inhalasyon ile veya alveolar keseciklere ulasmak üzere agizdan mikron, vb. gibi mikron artislarinda 0.1 ve 500 mikron arasindaki bir aralikta partikül boyutlarini içerir) araliginda bir partikül boyutuna sahiptir. Uygun formülasyonlar, aktif içerik maddesinin aköz veya yagli solüsyonlarini içerir.

Aerosol veya kuru toz uygulamasina yönelik uygun formülasyonlar, klasik yöntemlere göre hazirlanabilir ve asagida açiklandigi üzere kanser enfeksiyonlarimn tedavisi veya profilaksisinde bu zamana kadar kullanilan bilesikler gibi diger terapötik ajanlar ile uygulanabilir.

Vajinal uygulamaya yönelik uygun fonnülasyonlar, aktif içerik maddesine ek olarak teknikte uygun oldugu bilinen bu tür tasiyicilari içeren pesariler, tamponlar, kremler, jeller, macunlar, köpükler veya sprey formülasyonlari olarak sunulabilir.

Parenteral uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, formülasyonu hedeflenen 02 136-P-0001 alicinin kani ile izotonik hale getiren anti-oksidanlar, tamponlar, bakteriyostatlar ve çözünmüs maddeler; ve süspanse edici ajanlar ve koyulastirici ajanlari içerebilen aköz ve aköz olmayan steril süspansiyonlari içerir.

Formülasyonlar, birim doz veya çoklu dozlu kaplarda, örnegin yalitilarak kapatilmis ampuller ve siselerde sunulabilir ve kullanilmadan hemen önce sadece steril sivi tasiyicinin, örnegin enjeksiyona yönelik suyun eklenmesini gerektiren dondurularak kurutulmus (liyofilize) bir durumda saklanabilir. Ekstamporane enjeksiyon solüsyonlari ve süspansiyonlari daha önceden açiklanan türdeki steril tozlar, granüller ve tabletlerden hazirlanir. Tercih edilen birim dozaj formülasyonlari, burada yukarida belirtildigi üzere aktif içerik maddesinin bir günlük doz veya birim günlük alt dozu veya uygun bir fraksiyonunu içerenlerdir. Özellikle yukarida bahsedilen bilesenlere ek olarak bu bulusun formülasyonlarinin, söz konusu formülasyon tipine göre teknikte klasik diger ajanlari içerebildigi, örnegin oral uygulamaya yönelik uygun olanlarin lezzetlendirme ajanlarini içerebilecegi anlasilacaktir.

Bulus ayrica, buna yönelik veterinerlige iliskin bir tasiyici ile birlikte yukarida tanimlanan en az bir aktif bileseni içeren veterinerlige iliskin bilesimleri saglar.

Veterinerlige iliskin tasiyicilar, bilesimin uygulanmasi amaci için faydali materyallerdir ve veterinerlik tekniginde atil veya kabul edilebilir olan ve aktif` bilesen ile uyumlu olan kati, sivi veya gaz materyaller olabilir. Veterinerlige iliskin bu bilesimler, oral olarak, parenteral olarak veya istenen herhangi bir yolla uygulanabilir.

Bulusun bilesikleri ayrica, daha az sik dozlainaya olanak tanimak veya aktif içerik maddesinin farmakokinetik veya toksisite profilini gelistirmek üzere aktif içerik maddesinin kontrollü salimini saglamak üzere formüle edilebilir. Dolayisiyla 02 136-P-0001 bulus ayrica yavas veya kontrolü saliina yönelik olarak formüle edilen bulusun bir veya daha fazla bilesigini içeren bilesimleri saglamistir.

Aktif bilesenin etkili dozu en azindan tedavi edilen durumun yapisina, toksisiteye, bilesigin profilaktik (düsük dozlar) veya aktif kanser enfeksiyonuna karsi kullanilip kullanilmadigina, dagitim yöntemine ve farmasötik formülasyona baglidir ve klasik doz arttirma çalismalari kullanilarak klinisyen tarafindan belirlenecektir. Günde yaklasik 0.0001 ila yaklasik 100 mg/kg vücut agirligi olmasi beklenebilir. Tipik olarak günde yaklasik 0.01 ila yaklasik 10 mg/kg vücut agirligidir. Daha tipik olarak günde yaklasik .Ol ila yaklasik 5 mg/kg vücut agirligidir. Daha tipik olarak günde yaklasik .05 ila yaklasik 0.5 mg/kg vücut agirligidir. Örnegin yaklasik 70 kg agirligindaki yetiskin bir insana yönelik günlük aday doz, 1 mg ila 1000 mg araliginda, tercihen 5 mg ile 500 mg arasinda olacaktir ve tekli veya çoklu dozlar formunda olabilir.

Uygulama Yollari Bulusun bir veya daha fazla bilesigi (burada aktif içerik maddesiler olarak refere edilir) tedavi edilecek olan duruma uygun herhangi bir yol ile uygulanir. Uygun yollar oral, rektal, nazal, topikal (bukal ve sublingual dahil), vajinal ve parenteral (subkütanöz, intramüsküler, intravenöz, intradermal, intratekal ve epidural dahil) ve benzerlerini içerir. Tercih edilen yolun örnegin alicinin durumu ile degisiklik gösterebilecegi kabul edilecektir. Bu bulusun bilesiklerinin bir avantaji, bunlarin oral olarak biyoyararlanimli olmasi ve oral olarak dozlanabilir olmasidir.

Kombinasyon Terapisi Bulusun aktif bilesenleri ayni zamanda diger aktif bilesenler ile kombinasyon halinde kullanilir. Bu tür kombinasyonlar, tedavi edilecek durum, bilesenlerin çapraz reaktiviteleri ve kombinasyonun farmako-özelliklerine göre seçilir. Örnegin kanser tedavi edilirken bulusun bilesimleri, diger kemoterapötik ajanlar 02 136-P-0001 ile kombine edilebilir. Ikinci kemoterapötik ajan, kanserin bir veya daha fazla formuna karsi biyolojik aktiviteye sahip uygun herhangi bir bilesik olabilir.

Bulusun herhangi bir bilesiginin, kanser hastasina es zamanli veya sirali uygulaina için tek dozaj formunda bir veya daha fazla diger aktif bilesenler ile kombine edilmesi mümkündür. Kombinasyon terapisi, es zamanli veya sirali bir rejim olarak uygulanabilir. Sirali olarak uygulandiginda kombinasyon iki veya daha fazla uygulama halinde uygulanabilir. Kombinasyondaki ikinci ve üçüncü aktif bilesenler, kemoterapötik aktiviteye sahip olabilir ve burada açiklanan ek kemoterapötik ajanlardan herhangi birini içerebilir. Bulusun bilesikleri ile kombinasyon halinde uygulanacak örnek niteligindeki aktif bilesenler asagida açiklanmaktadir.

Uygun ek kemoterapötik ajanlar örnegin antrasiklinler (örnegin doksorubisin, daunorubisin, epirubisin, idarubisin ve mitoksantron); (b) diger DNA interkalatörleri (örnegin aktinomisinler C, D, B ve benzeri; podofillotoksinler ve epipodofillatoksinler (etoposid, teniposid, stoposid)); (c) alkilleme ajanlari (örnegin mekloretamin, melfalan, siklofosfamid, klorambusil, ifosfamid, karmustin, lomustin, busulfan, dakarbazin, sisplatin, karboplatin, oksaliplatin, iproplatin ve tetraplatin); (d) hormonal ajanlar (örnegin antiöstrojenler / östrojen antagonistleri (tamoksifen ve diger SERM,ler); LHRH agonistleri ve antagonistleri (löprolid asetat, goserelin, abareliks); aromataz inhibitörleri ve antiandrojenler; (e) kanser gelisimini önleyici ajanlar (örnegin NSAlDsler ve cis- retinoidler); ve (f) hücre döngüsünde kanser gelisimini önleyici ajanlari içerir.

Alternatif olarak ek kemoterapötik ajan örnegin antineoplastlari içerir. Temsili antineoplastlar örnegin yardimci maddeler (örnegin levamizol, galyum nitrat, granisetron, sargramostim stronsiyum-89 klorid, filgrastim, pilokarpin, deksrazoksan ve ondansetron); androjen inhibitörleri (örnegin Ilutamid ve löprolid asetat); antibiyotik türevleri (örnegin doksorubisin, bleoinisin sülfat, daunorubisin, daktinomisin ve idarubisin); antiöstrojenler (örnegin tamoksifen sitrat, analoglari 02 136-P-0001 ve steroid olmayan antiöstrojenler örnegin toremifen, droloksifen ve roloksifen); antimetabolitler (örnegin Iludarabin fosfat, interferon alfa-Zb rekombinant, metotreksat sodyum, plikamisin, merkaptopürin ve tiyoguanin); sitotoksik ajanlar (örnegin doksorubisin, karmustin [BCNU], lomustin [CCNU], sitarabin USP, siklofosfamid, östramusin fosfat sodyum, altretamin, hidroksiüre, ifosfamid, prokarbazin, mitomisin, busulfan, siklofosfamid, mitoksantron, karboplatin, sisplatin, sisplatin, interferon alfa-2a rekombinant, paklitaksel, teniposid ve streptozosi); hormonlar (örnegin medroksiprogesteron asetat, östradiol, megestrol asetat, oktreotid asetat, dietilstilbestrol difosfat, testolakton ve goserelin asetat); immün modülatörler (örnegin aldeslökin); nitrojen hardali türevleri (örnegin melfalan, klorambusil, mekloretamin ve tiyotepa) ve steroidleri (betametazon sodyum fosfat ve betametazon asetat) içerir.

Uygun ek kemoterapötik ajanlar örnegin alkilleme ajanlari, antimitotik ajanlar, bitki alkaloidleri, biyolojik maddeler, topoizomeraz I inhibitörleri, topoizomeraz Temsili alkilleme ajanlari örnegin asaley, AZQ, BCNU, busulfan, bisulfan, karboksiftalatoplatin, CBDCA, CCNU, CHIP, klorambusil, klorozotosin, sisplatin, klomezon, siyanomorfolinodoksorubisin, siklodizon, siklofosfamid, dianhidrogalaktitol, florodopan, hepsulfam, hikanton, ifosfamid, melfalan, metil CCNU, mitomisin C, mitozolamid, nitrojen hardali, PCNU, piperazin, piperazindion, pipobroman, pofîromisin, spirohidantoin hardali, stretozosin, teroksiron, tetraplatin, tiyotepa, trietilenmelamin, urasi] nitrojen hardali ve Yoshi- 864,ü içerir.

Temsili antimitotik ajanlar örnegin allokolsisin, Halikondrin B, kolsisin, kolsisin türevleri, dolastatin 10, maytansin, rizoksin, paklitaksel türevleri, paklitaksel, tiyokolsisin, tritil sistein, vinblastin sülfat ve vinkristin sülfati içerir. 02 136-P-0001 Temsili bitki alkaloidleri, örnegin aktinomisin D, bleomisin, L-asparajinaz, idarubisin, vinblastin sülfat, vinkristin sülfat, mitramisin, mitomisin, daunorubisin, VP-16-213, VM-26, navelbin ve taksoteri içerir.

Temsili biyolojik maddeler örnegin alfa interferon, BCG, G-CSF, GM-CSF ve interlökin-Z'yi içerir.

Temsili topoizomeraz I inhibitörleri, örnegin kamptotesin, kamptotesin türevleri ve morfolinodoksorubisini içerir.

Temsili topoizomeraz II inhibitörleri örnegin, mitoksantron, amonafid, m-AMSA, antrapirazol türevleri, pirazoloakridin, bisantren HCL, daunorubisin, deoksidoksorubisin, menogaril, N, N-dibenzil daunomisin, oksantrazol, rubidazon, VM-26 ve VP-16,yi içerir.

Temsili sentetikler örnegin hidroksiüre, prokarbazin, 0,p'-DDD, dakarbazin, CCNU, BCNU, cis-diamindikloroplatimun, mitoksantron, CBDCA, levamizol, hekzametilmelamin, all-trans retinoik asit, gliadel ve porfimer sodyumu içerir.

Alternatif olarak ek kemoterapötik ajan, tubulin baglayici ilaçlari ve tubulin dinamiklerini ve fonksiyonunu etkileyen ilaçlari içerebilir. Bu, vinka alkaloidleri ve taksanlar (örnegin CP- ile kimyasal olarak ilgili olmayan çesitli ilaçlari içerir. Bu ilaçlar, G2M fazindaki hücreler üzerinde özgün etkilere sahiptir ve Gl ve/veya S fazindaki hücreler üzerinde fonksiyonel olarak bagimsiz etkilere sahip olabilir.

Alternatif olarak ek kemoterapötik ajan, sulindak, aptosin, CP-46l, CP-248 ve siklik GMP fosfodiesterazin (CGMP PDE) izozimlerindenzl, 2, 5 bir veya daha fazlasini inhibe eden ilgili sulindak türevli bilesikleri içeren selektif apoptotik anti-kanser ilaçlari (SAAND,ler) içerebilir. 02 136-P-0001 Alternatif olarak ek kemoterapötik ajan, proteozomlari (bortezomib veya Velcade) inhibe eden ilaçlari içerebilir. Proteozomlar, aktif yikim için önemli olan birçok ubikuitinli proteini parçalar. Ubikuitinli proteinler, birçok kritik hücre döngüsü regülatör molekülleri ve hücre döngüsünün spesifik asamalarinda apoptozu düzenleyen molekülleri içerir. Proteozomlar hücre döngüsünde proteinleri parçalayabilirken proteozoinlar tarafindan parçalanan proteinler, çogu kritik hücre döngüsü regülatör proteinlerin bazilarini içerir. “Hücre döngüsü aktif temeli”, kanser, imIlamatuar/otoiminün hastaliklar ve düzensiz hücrew döngüsü ve/veya apoptozu içeren nörolojik hastaliklar da dahil çesitli kategorilerdeki hastaliklarin tedavisine uygulanabilir.

Alternatif olarak ek kemoterapötik ajan, ubikuitin aracili proteozom yolagindaki inhibe eden ilaçlari içerebilir. Birkaç ilaç antitüinör etkilerini, HSP90'nin intrinsik ATPaz aktivitesini inhibe ederek sergiler, bu da HSP9O sonuçlanir. Örnekler, geldanamisin, 17-allilamino geldanainisin, 17- demetoksigeldanamisin ve radikikolü içerir.

Uygun hücre döngüsüne bagimli biyolojik ajanlar veya programa bagimli biyolojik ajanlar, hücre döngüsünün Gl fazmda, Gl/S ara yüzünde, S fazinda, GZ/M ara yüzünde veya M fazinda hücre döngüsü ilerlemesini bloke eden, engelleyen veya baska sekilde bozan ilaçlari, proteinleri veya diger molekülleri içerir. Bu ilaçlar, hücre döngüsüne bagimli veya programa bagimlidir.

Spesifik olarak uygun hücre döngüsüne bagimli biyolojik ajanlar veya programa bagimli biyolojik ajanlar asagidakileri içerir: (1) Üridin nükleozidlerinin analoglari, timidin nükleozidlerinin analoglari ve üridin ve timidin nükleozidlerinin analoglari. Bu bilesikler, tümör hücrelerinde ve muhtemelen neovasküler endotelyal hücrelerde S 02 136-P-0001 fazinda görev yapar. Bu bilesikler örnegin, 5-Il0r0de0ksiüridin (Iloksüridin, FUDR); 5-tlur0urasil (5-FU); 5-FU ön ilaçlari (örnegin kapesitabin, 5'-de0ksi-5-Ilor0üridin, ftorafur, Ilusitozin); bromodeoksiüridin ve iyododeksoiüridini içerir. (2) Floropirimidinlerin modülatörleri. Bu bilesikler, tümör hücrelerinde ve muhtemelen neovasküler endotelyal hücrelerde S fazinda görev yapar.

Bu bilesikler örnegin lörovorin, metotreksat ve diger folatlar; levamizol; asivisin; fosfonasetil-L-aspartik asit (PALA); brekinar; 5- etinilurasil ve urasili içerir. (3) Sitidin analoglari ve Sitidin nükleozid analoglari. Bu bilesikler, tümör hücrelerinde ve muhtemelen neovasküler endotelyal hücrelerde S fazinda görev yapar. Bu bilesikler örnegin sitarabin (Ara-C, sitozin arabinozid); gemsitabin (2',2'-diflorodeoksisitidin) ve 5-azasitidini (4) Pürin analoglari ve pürin nükleozid analoglan. Bu bilesikler, tümör hücrelerinde ve muhtemelen neovasküler endotelyal hücrelerde S fazinda görev yapar. Bu bilesikler örnegin, 6-tiy0guanin; 6- merkaptopürin; azatiyoprin; adenozin arabinozid (Ara-A); 2',2'- diflorodeoksiguanozin; deoksikoformisin (pentostatin); kladribin (2- klorodeoksiadenozin) ve adenozin deaminaz inhibitörlerini içerir. (5) Antifolatlar. Bu bilesikler, tümör hücrelerinde ve muhtemelen neovasküler endotelyal hücrelerde S fazinda görev yapar. Bu bilesikler örnegin, metotreksat; aminopterin; trimetreksat; edatreksat; N10- asit (IAHQ); 5,lO-dideazatetrahidrofolik asit (DDATHF); 5-deazaf01ik asit (FPGS için etkili substrat); PT523 (N alfa-(4-amin0-4- deoksipteroil)-N delta-hemiftaloil-L-ornitin); lO-etil- 10- deazaaminopterin (DDATHF, lomatreksol); piritreksim; 10-EDAM; hedefli folat (yani LY231514, pemetreksed); timidilat sentazin (TS) folat esasli herhangi bir inhibitörü; dihidrofolat redüktazin (DHFR) 02 136-P-0001 folat esasli herhangi bir inhibitörü; glisinamid ribonükleotid transformilazin (GARTF) folat bazli herhangi bir inhibitörü; folilpoliglutamat sentetazin (FPGS) herhangi bir inhibitörü ve GAR formil transferazin (AICAR transformilaz) folat bazli herhangi bir inhibitörünü içerir. (6) Diger antimetabolitler. Bu bilesikler, tümör hücrelerinde ve muhtemelen neovasküler endotelyal hücrelerde S fazinda görev yapar.

Bu bilesikler Örnegin, hidroksiüre ve poliaminleri içerir. (7) S fazina spesifik radyotoksinler (deoksitimidin analoglari). Bu bilesikler, DNA sentezine maruz kalan tüm hücrelerde S fazinda görev yapar. Bilesikler, S fazi esnasinda kromozomal DNA”ya katilir. Bu iyododeoksiüridin ve [211At]-astatin-deoksiüridini içerir. (8) Deoksinükleozid/deoksinükleotid metabolizmasinda yer alan enzimlerin inhibitörleri. Bu bilesikler, tümör hücrelerinde ve muhtemelen neovasküler endotelyal hücrelerde S fazinda görev yapar.

Bu bilesikler örnegin, timidilat sentaz (TS) inhibitörleri; dihidrofolat redüktaz (DHFR) inhibitörleri; glisinamid ribonükleotid transformilaz (GARTF) inhibitörleri; folilpoliglutainat sentetaz (FPGS) inhibitörleri; GAR formil transferaz (AICAR transformilaz) inhibitörleri; DNa polimerazlarin (DNA Pol; örnegin afidokolin) inhibitörleri; ribonükleotid redüktaz (RNR) inhibitörleri; timidin kinaz (TK) inhibitörleri ve topoizomeraz l enzimlerinin inhibitörlerini (ömegin kamptotesinler, irinotekan [CPT-ll, kamptosar], topotekan, NX-211 (9) DNA zincir sonlandirici nükleozid analoglari. Bu bilesikler spesifik olarak S fazindaki hücrelerde görev yapar ve S fazi esnasinda kromozomal DNA,ya katilir; DNA ipliginin büyümesini sonlandirir.

Bu bilesikler örnegin asiklovir; abakavir; valasiklovir; zidovudin (AZT); didanozin (ddl, dideoksisitidin); zalsitabin (ddC); stavudin 02 136-P-0001 (D4T); lamivudin (3TC); herhangi bir 2' 3'-dide0ksi nükleozid analogu ve DNA sentezini sonlandiran herhangi bir 2' 3'-dide0ksi nükleozid analogunu içerir. Bu bilesikler örnegin, hücre döngüsünün Gl fazinda, Gl/S ara yüzünde veya S fazindaki ilerlemeyi regüle eden büyüme faktörü reseptör tirozin kinazlarin (örnegin EGF reseptörleri, HER-2 neu/c-erbB2 reseptörü, PDGF reseptörleri ve benzeri; [örnegin trastuzumab, iressa, erbitux, tarceva]) inhibitörleri; reseptör disi tirozin kinazlarin (örnegin tirozin kinazlarin c-src ailesi; [örnegin Gleevec]) inhibitörleri; hücre döngüsünün G1 fazi, Gl/S ara yüzü veya S fazindaki ilerlemeyi regüle eden serin-treonin kinazlarin (örnegin Gl siklin bagimli kinazlar, Gl/S siklin bagimli kinazlar ve S siklin bagimli kinazlar [örnegin, CDK2, CDK4, CDKS, CDK6]; mitojen ile aktive edilen kinazlar; MAP kinaz sinyallesme yolagi) inhibitörleri; Gl fazi; Gl/S ara yüzü veya S fazi siklinlerinin ([örnegin siklinler Dl, D2, D3, E ve A]) inhibitörleri; hücre döngüsünün Gl fazinda, Gl/S ara yüzünde veya S fazinda hücre döngüsü ilerlemesini pozitif olarak regüle eden cGMP fosfodiesterazlar ve G-proteinlerinin inhibitörleri; çok erken yanitli transkripsiyon faktörlerinin (örnegin N-terminal c-jun kinaz, c-myc) indüksiyonunu inhibe eden ilaçlar ve “negatif” hücre döngüsü regülatör moleküllerini (örnegin p53, p27/Kipl; [örnegin bortezomib]) parçalayan proteozomlari inhibe eden ilaçlari içerir. (10) Sitokinler, büyüme faktörleri, anti-anjiyogenik faktörler ve hücre döngüsünün Gl fazinda veya Gl/S ara yüzünde hücre döngüsü ilerlemesini inhibe eden diger proteinler. Bu bilesikler, tümör hücrelerinde ve bazi durumlarda neovasküler endotelyal hücrelerde Gl, Gl/S veya S fazinda görev yapar. Bu bilesikler örnegin interferonlar; interlökinler; somatostatin ve soinatostatin analoglari (oktreotid, sandostatin LAR) ve hücre döngüsünün Gl veya Gl/S fazlarinda endotelyal hücrelerin hücre proliferasyonunu inhibe eden birçok anti-anjiyogenik faktörü içerir. 02 136-P-0001 (ll) Hücre döngüsünün G2/M ara yüzünde veya M fazinda hücre döngüsü ilerlemesini inhibe eden ilaçlar ve bilesikler. Bu bilesikler, tümör hücrelerinde ve bazi durumlarda neovasküler endotelyal hücrelerde hücre döngüsünün G2/M ara yüzünde veya M fazinda görev yapar. Bu bilesikler örnegin (a) mikrotübül hedefleyici ilaçlar - taksanlar (örnegin taksol, taksoter, epotilonlar ve diger taksanlar ve türevleri); (b) mikrotübül hedefleyici ilaçlar I vinka alkaloidleri (örnegin vinblastin, vinkristin, vindezin, Vinflunin, vinorelbin, vinzolidin, nokadazol ve kolsisinler); (c) mikrotübül hedefleyici ilaçlar - digerleri (örnegin östramustin CP-248 ve CP-461); (d) hücre döngüsünün G2/M ara yüzündeki veya M fazindaki ilerlemeyi regüle eden serin-treonin kinazlarin inhibitörlerini (örnegin, G2/M siklin bagili kinazlarin (örnegin CDC2) inhibitörleri; M fazi siklinlerinin (örnegin siklin B) inhibitörleri ve hücre döngüsünün G2/M ara yüzündeki veya M fazindaki hücre döngüsü ilerlemesini bloke eden, engelleyen veya baska sekilde bizan herhangi bir ilaç) içerir. (12) Radyasyon terapisi ve/veya tanida daydali olan radyofarrnasötikler.

Radyoizotoplarin uygun bir sinifi, “Auger Prosesi” veya “Auger Kaskadi” olarak bilinen bir nükleer parçalanma prosesi ile bozulur.

Auger yayan izotoplar, dupleks DNA,yi etkili bir sekilde klevaj eden kisa etkili elektronlar üretir. Uygun Auger yayan radyonüklidler halojenli pirimidin ve pürin nükleozidler, 5-125Iy0d0-2'-de0ksiüridin, 80mBr0m0-2'-guanidini içerir.

Büyüme Faktörleri Birçok büyüme faktörü ve sitokin, hücre döngüsündeki spesifik noktalari geçmek üzere habis hücreleri uyarma kapasitesine sahiptir. Örnegin G-CSF veya GM- CSF, Gl/S fazini geçmek amaciyla akut miyeloid lösemideki lösemik blastlari 02 136-P-0001 uyarabilir. Bu durum hücrelerin, sitarabin gibi hücre döngüsüne spesifik ilaçlara karsi duyarliligini arttirir. Kati tümörlere yönelik sitotoksik ilaçlar ve EGF kullanilarak benzer stratejiler test edilmistir. büyüme faktörüne yanit vermek amaciyla hücrelerin hücre döngüsünün spesifik bir asamasinda, örnegin Gl/S fazinda olmasi gerekir. Bir büyüme faktörünün sürekli olarak bulunmasi, belirli herhangi bir zamanda blastlarin sadece bir alt grubunun Gl/S”de olmasi nedeniyle faydali olabilir. Dolayisiyla büyüme faktörleri hücre döngüsüne spesifik bir sekilde görev yapar. Benzer mantik, nötropeni, anemi ve trombositopeni tedavisi için kullanilan hematopoetik büyüme faktörlerinin kullanimi için de geçerli olabilir.

Buna bagli olarak peptit/protein büyüme faktörleri mevcut bulusta, habis olmayan normal hücre kökenlerinin hayatta kalmasini desteklemek amaciyla kullanilabilir.

Bu tür maddelerin kullanilmasindaki bir fayda, kemik iligi, deri, oral ve gastrointestinal mukoza ve saç foliküllerinde çogalan hücreleri koruma kapasitesidir.

Bu kategori içinde yer alan maddelerin örnekleri örnegin, hematopoetik büyüme faktörleri: G-CSF, GM-CSF, eritropoetin, trombopoetin ve bu peptitlerin biyolojik olarak aktif türevleri; mukozite yönelik keratinosit büyüme faktörü (KGF); B- lenfosit uyarici peptit (BLys); platelet kökenli büyüme faktörü (PDGF); epitelyal büyüme faktörü (EGP), TGF alfa ve ilgili büyüme faktörleri; interlökinler (örnegin lL-2, lL-6); korunmasi gereken habis olmayan hücrelerin proliferasyonunu uyaran diger sitokinler, büyüme faktörleri ve peptitleri içerir.

Terapötik Büyüme Faktörleri/Sitokinler Bazi terapötik büyüme faktörleri/sitokinler, hücre döngüsünün spesifik asamalarinda kanser hücrelerinin ve/veya neovasküler hücrelerin hücre proliferasyonunu inhibe edebilir. Örnegin interferonlar, somatostatin, oktreotid ve analoglari trombospondin ve troponin-I, hücrelerin S fazina girme hizini azaltarak 02 136-P-0001 neovasküler endotelyal hücre proliferasyonunu inhibe eder. Buna bagli olarak bu maddelerden herhangi biri veya daha fazlasi mevcut bulusta kullanilabilir.

Kombinasyon terapisi, “Sinerji” ve “Sinerjik etki” saglayabilir, yani aktif bilesenlerin bir arada kullanilmasi durumunda elde edilen etki, bilesiklerin ayri olarak kullanilmasindan kaynaklanan etkilerin toplamindan daha fazladir. Sinerjik bir etki, aktif bilesenler (l) kombine bir forrnülasyonda birlikte formüle edildiginde ve es zamanli olarak uygulandiginda veya dagitildiginda; (2) ayri formülasyonlar olarak dönüsümlü sekilde veya paralel olarak dagitildiginda veya (3) baska bir rejim ile uygulandiginda elde edilebilir. Dönüsümlü terapide dagitildiginda Sinerjik bir etki bilesiklerin, örnegin ayri tabletler, haplar veya kapsüller içinde sirali olarak veya ayri siringalarda farkli enjeksiyonlar ile uygulanmasi veya dagitilmasi durumunda elde edilebilir. Genel olarak dönüsümlü terapi esnasinda her aktif bilesenin etkili dozaji sirali olarak yani seri olarak uygulanirken kombinasyon terapisinde iki veya daha fazla aktif bilesenin etkili dozajlari birlikte uygulanir.

Bulus Bilesiklerinin Metabolitleri Bu bulusun kapsaminda ayni zamanda burada açiklanan bilesiklerin in vi'vo metabolik ürünleri yer alir. Bu tür ürünler örnegin, çogunlukla enzimatik prosesler nedeniyle uygulanan bilesigin oksidasyonu, redüksiyonu, hidrolizi, amidasyonu, esterifikasyonu ve benzeri durumlarindan kaynaklanabilir. Buna bagli olarak bulus, bu bulusun bir bilesiginin bir memeli ile metabolik bir ürününü vermeye yetecek süre boyunca temas ettirilmesini içeren bir proses ile üretilen bilesikleri içerir. Bu tür ürünler tipik olarak, bulusun radyoaktif etiketli (Örnegin Cl4 veya H3) bilesiginin hazirlanmasi, bunun, metabolizmasinin meydana gelmesine yetecek bir süre (tipik olarak yaklasik 30 saniye ila 30 saat) saglanarak siçan, fare, kobay, maymun gibi bir hayvana veya insana saptanabilir bir dozda (örnegin yaklasik 0.5 mg/kgsden daha fazla) parenteral olarak uygulanmasi ve dönüsüm ürünlerinin, idrar, kan veya diger biyolojik numunelerden izole edilmesi yoluyla 02 136-P-0001 tanimlanir. Bu ürünler, etiketli olmalari nedeniyle kolay bir sekilde izole edilir (digerleri, metabolitte hayatta kalan epitoplari baglayabilen antikorlar kullanilarak izole edilir). Metabolit yapilari klasik sekilde, örnegin MS veya NMR analizi ile belirlenir. Genel olarak metabolitlerin analizi, teknikte uzman kisilerce iyi bilinen klasik ilaç metabolizmasi çalismalari ile ayni sekilde yapilir. Dönüsüm ürünleri, in vivo olarak baska sekilde bulunmadiklari sürece, kendi baslarina anti-kanser aktivitesine sahip olmamalari durumunda dahi bulus bilesiklerinin terapötik dozlamasina yönelik diagnostik analizlerde faydalidir.

Alternatif gastrointestinal sekresyonlarda bilesiklerin stabilitesinin belirlenmesine yönelik tarifler ve yöntemler bilinmektedir. Bilesikler burada, korunan gruplarin yaklasik yüzde 50 molünden daha azinin, 37°C'de 1 saat inkübasyon üzerine alternatif intestinal veya mide sivisinda korumasiz birakildigi gastrointestinal sistemde stabil olarak tanimlanir. Basit olarak bilesiklerin gastrointestinal sistemde stabil olmasi bunlarin in vivo olarak hidroliz edilemeyecegi anlamina Bulusun bir düzenlemesinde bilesik izole ve saflastirilmis formdadir. Genel olarak doku, hücreler ve benzeri) büyük ölçüde içermedigi anlamina gelir. Bulusun spesifik bir düzenlemesinde bu terim bulusun bilesiginin veya konjugatinin, biyolojik materyallerden agirlikça yaklasik en az %50 yoksun oldugu anlamina gelir; spesifik bir diger düzenlemede bu terim bulugun bilesiginin veya konjugatinin, biyolojik materyallerden agirlikça yaklasik en az %75 yoksun oldugu anlamina gelir; spesifik baska bir düzenlemede bu terim bulusun bilesiginin veya konjugatinin biyolojik materyallerden agirlikça yaklasik en az bulusun bilesiginin veya konjugatinin biyolojik materyallerden agirlikça yaklasik en az %98 yoksun oldugu anlamina gelir ve baska bir düzenlemede bu terim bulusun bilesiginin veya konjugatinin biyolojik materyallerden agirlikça yaklasik en az %99 yoksun oldugu anlamina gelir. Spesifik bir baska düzenlemede bulus, 02 136-P-0001 sentetik sekilde hazirlanmis (Örnegin eX vivo) bir bulus bilesigini veya konjugatini Bir bilesigin anti-kanser aktivitesi, teknikte iyi bilinen farmakolojik modeller kullanilarak veya asagida açiklanan Test A kullanilarak belirlenebilir.

Test A: Sitostatik Hücre Kültürü Analizi (GIE) Bu analiz, hücre ile iliskili proteinlerin kolorimetrik tayini ile hücre sayilarinin ölçülmesine dayalidir. Analiz, sülforodamin B”nin (SRB), trikloroasetik asit (TCA) ile doku kültür plakalarina fikse edilmis hücrelerin protein bilesenlerine baglanabilme kapasitesine dayalidir. SRB, hafif asidik kosullar altinda bazik amino asit kalintilarina baglanan ve bazik kosullar altinda ayrisan iki sülfonik grubu olan parlak pembe aminoksanten boyasidir. SRB baglanmasi stokiyometrik oldugundan boyanan hücrelerden ekstrakte edilen boya miktari hücre kütlesi ile dogru orantilidir.

Hücre hatlari: Tüm hücre hatlari, ATCCSden (Manassas, VA) elde edilir.

Glutamax ve tripsin içeren kültür ortamlari, lnvitrogen3den (Carlsbad, CA) satin alinir. Doksorubisin, Klofarabin, TCA ve SRB, Sigma-Aldrichîen (St. Louis, M0) alinir. Gemsitabin, Moravek Biochemicals”tan (Brea, CA) elde edilir.

Analiz protokolü: 1. Hücre hatlari Tablo l”de listelenen ortamlarda tutulur. Konflüent alti hücreler tripsinize edilir, sayilir ve hücre konsantrasyonlari Tablo lide listelenen hücre sayilarina göre ayarlanir. 2. Hücreler, 150 iiL ortamda 96 gözlü plakalara dagitilir. Plakalar, 37°C”de nemlendirilmis CO; inkübatöründe bir gece inkübe edilir. 3. Her hücre hattindan bir plaka TCA ile fikse edilir. Plakalardan kültür ortamlari, bunlara hafifçe vurulmasi yoluyla atilir ve her göze 100 uL 02 136-P-0001 soguk %10 (hacim/hacim) TCA eklenir. Plakalar 4 derecelik buzdolabinda 1 saat inkübe edilir. Plakalardan TCA, bunlara hafifçe vurulmasi yoluyla atilir. Plakalar, musluk suyu içeren bir yikama küvetinde dört kez durulanir. Plakalar oda sicakliginda saklanir. Bu plakalar, sifirinci gündeki hücre sayilarini temsil eder. 96 gözlü plakada 5 katlik seri dilüzyonlar yapilarak test edilen bilesiklerin çesitli konsantrasyonlarini içeren bir dizi ortam solüsyonu hazirlanir. Her göz için 50 uL seyreltilmis bilesik eklenir. islenmemis hücreleri ve doksorubisin, klofarabin ve gemsitabin ile islenmis hücreleri içeren kontroller dahil edilir.

Plakalar 37 °C,de 5 gün inkübe edilir.

Plakalar TCA ile fikse edilir. Plakalardan kültür ortamlari, bunlara hafifçe vurulmasi yoluyla atilir ve her göze eklenir. Plakalar 4 derecelik buzdolabinda 1 saat inkübe edilir. Plakalardaii TCA, bunlara hafifçe vurulmasi yoluyla atilir. Plakalar, musluk suyu içeren bir yikama küvetinde dört kez durulanir.

Bir kagit havlu üzerine ters çevrilen plakalara hafifçe vurularak suyun fazlasi uzaklastirilir. Plakalarin oda sicakliginda hava ile kurumasina olanak saglanir.

Sifirinci ve besinci günde TCA ile fikse edilmis plakalarin her gözüne %1 (hacim/hacim) asetik asit içindeki 100 uL %0.057 SRB solüsyonu eklenir.

Oda sicakliginda 30 dakika bekletilir.

SRByyi atmak amaciyla plakalara hafifçe vurulur. Plakalar, %1 (hacim/hacim) Asetik Asit ile dört kez durulanir.

Daha hizli kurumayi kolaylastirmak amaciyla plakalar 37°C,lik inkübatörde saklanir.

Plakalar tamamen kurudugunda her göze 200 uL lOmM Tris bazi solüsyonu (Ph 10.5) eklenir. SRB,nin çözünmesi için oda sicakliginda 30 dakika bekletilir.

Bir mikroplaka okuyucuda 500 nm”deki OD ölçülür. 02 136-P-0001 l3.Asagidaki formül kullanilarak hücre büyümesi inhibisyonu yüzdesi hesaplanir: Kontrol hücre büyümesi %,si : lOOx(ODnumune-0rtalama ODgL-mO)/(0Dneg kontrol - ortalama ODgünO) Glso tayini için bilesik konsantrasyonu ile büyüme inhibisyonu yüzdesi arasinda doz-yanit egrileri çizilir. GIso degerleri, sigmoidal doz yanit denklemi kullanilarak doz-yanit egrilerinin uydurulmasi yoluyla elde edilebilir.

HÜCRE Ortam Tohumlaina Ayristirrna Ajani HATTI Yogunlugu HCT 116 - RPMI, %10 FBS, IX 800 hücre/göz Tripsin Kolon Pen/Strep HCT 15 - RPMI, 10% FBS, 1X 1600 hücre/göz Tripsin Kolon Pen/Strep BT549 RPMI, 10% FBS, [X 4000 hücre/göz Tryple Express Pen/Strep (lnvitrogen) HS 578 - RPMI, 10% FBS, lX 4000 hücre/göz Tryple Express Gögüs Pen/Strep (lnvitrogen) PC3 - Prostat FIZK, 10% FBS, lX 2500 hücre/göz Tripsin Pen/Strep DUl45 - MEM, 10% FBS, lX 800 hücre/göz Tripsin Prostat Pen/Strep H23 - RPMl, 10% FBS, lX 6000 hücre/göz Tripsin Akciger Pen/Strep A549- RPMI, 10% FBS, lX 1500 hücre/göz Tripsin Akciger Pen/Strep 02 136-P-0001 Bulusun temsili bilesikleri tipik olarak, yaklasik 20 um,den az bir Glso degerine sahip yukaridaki hücre hatlarindan birine veya daha fazlasina karsi aktiviteye sahiptir. Bulusun bazi temsili bilesikleri, yaklasik 1 pm7den az bir Glso degerine sahip yukaridaki hücre hatlarindan birine veya daha fazlasina karsi aktiviteye sahiptir. Bulusun diger temsili bilesikleri, yaklasik 0.1 GIso degerine sahip yukaridaki hücre hatlarindan birine veya daha fazlasina karsi aktiviteye sahiptir.

Test A3dan elde dilen bulusun temsili bilesiklerine yönelik veriler asagidaki tabloda gösterilmektedir.

Akciger pm3den az bir G150(üM) Prostat 1.242 .708 1.306 0.729 >20 >20 >20 2.560 0.484 3.690 2.436 0.208 0.224 4.684 2.522 0.101 1.275 0.294 1.942 02 136-P-0001 Akciger 0.252 0.627 0.365 0.230 3.251 6.233 4.858 12.854 0.109 0.195 0.379 0.902 0.126 2.468 .190 0.375 1.052 G150 (pM) Prostat N CIH23 Du145 PC3 0.387 0.581 HCT116 HCTIS Hs578 0.447 0.216 0.500 0.342 7.314 .685 0.453 0.145 1.265 0.255 1.417 0.275 1.961 0.163 1.061 0.674 0.111 0.179 0.361 3.591 0.290 8.146 0.632 0.264 0.711 0.442 0.290 3.937 3.056 19.150 0.175 0.132 0.315 0.177 0.813 0.566 2.113 0.356 13.175 1.643 1.582 02 136-P-0001 G150 (uM) Akciger Prostat Kolon Gögüs Bulusun temsili bilesiklerinin ayni zamanda, Mycobacterium“dan alinan adenozin kinazi inhibe ettigi bulunmustur. Buna bagli olarak bir düzenlemede bulus ayni zamanda, bir adenozin kinazin (örnegin Mycobacterium,dan alinan bir adenozin kinaz) inhibe edilmesine yönelik olarak adenozin kinazin, formülün (1) bir bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu ile temas ettirilmesini içeren bir yöntemi saglar.

Bir baska düzenlemede tarifname ayni zamanda bir bilesigin, bir hayvanda adenozin kinaz aktivitesi ile iliskili bir hastaligin tedavi edilmesine yönelik olarak bu tür bir terapiye ihtiyaci olan hayvana (örnegin insan gibi bir memeli) etkili adenozin kinaz inhibe edici miktarda formülün (l) bir bilesiginin veya farmasötik olarak kabul edilebilir tuzunun uygulanmasini içeren bir yöntemde kullanilmaya yönelik bir ilacin hazirlanisinda kullanilmasini saglar. Adenozin kinaz aktivitesi ile iliskili hastaliklar, inflamasyon, sepsis, artrit, romatoid artrit, osteoartrit, otoimmün hastaliklar, yaniklar, yetiskin respiratuar distres sendromu, intlamatuar bagirsak sendromu, nekrotizan enterokolit, kronik obstrüktif akciger hastaligi, sedef, konjunktivit, iridosiklit, iskemi, reperfüzyon hasari, periferik vasküler hastalik, pankreatit, ateroskleroz, menenjit, vaskülit, dermatit, iniyozit, renal inflamasyon, sepsis, septisemi (örnegin endotoksemi) ve septik soku (örnegin endotoksik sok) içerebilir.

Bir baska düzenlemede tarifname ayni zamanda bir bilesigin, bir hayvanda (örnegin insan gibi bir memeli) tüberkülozun tedavi edilmesine yönelik olarak hayvana forinülün (1) bir bilesiginin veya fannasötik olarak kabul edilebilir bir 02 136-P-0001 tuzunun uygulanmasini içeren bir yöntemde kullanilmaya yönelik bir ilacin hazirlanisinda kullanilmasini saglar.

Bir baska düzenlemede tarifname ayni zamanda formülün (1) bir bilesiginin veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun, bir hayvanda (örnegin insan gibi bir memeli) adenozin kinazin inhibe edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanmasi amaciyla kullanilmasini saglar.

Baska bir düzenlemede tarifname ayni zamanda formülün (1) bir bilesiginin veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun, bir hayvanda (örnegin insan gibi bir memeli) adenozin kinaz ile iliskili bir hastaligin tedavi edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanmasi amaciyla kullanilmasini saglar.

Baska bir düzenlemede tarifname ayni zamanda formülün (I) bir bilesiginin veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun, bir hayvanda (örnegin insan gibi bir memeli) tüberkülozun tedavi edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanmasi amaciyla kullanilmasini saglar.

Kisaltmalar AcOEt etilasetat Boc tert-bütoksikarbonil bd genis ikili bs genis tekli Bu bütil B2 benzoil calcd hesaplanan cat. katalizör dd ikililerin ikilisi 02 136-P-0001 dimetilformamid dimetilsülfoksit üçlülerin ikilisi etilendiaminetetraasetik asit hizli atom bombardimani geminal yüksek ayristirma kizilötesi spektroskopisi metanol sodyum metoksit kütle spektrometrisi dalga sayisi nükleer manyetik rezonans trifenilfosfin dörtlü oda sicakligi doymus solüsyon 02 136-P-0001 tert-bütildimetilsilil ikililerin üçlüsü tris [2-(2-met0ksiet0ksi)etil]amin tetrahidrofuran trifloroasetik asit sodyum trifenilfosfin trisülfonat tritil, trifenilmetil Visinal Bulus, asagidaki sinirlayici olmayan Örnekler ile açiklanacaktir. Örnekler Bilesik (Za) ( ile islenmistir. Uçucular, vakum ile uzaklastirilmistir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilmistir. Silika üzerinde kromatografi (CHC13 içinde %3.5-› NMR (; 2.99 (q, 2H, Jvic = 02 136-P-0001 Ara ün'in bilesigi (Za) asagidaki sekilde hazirlanir. a. 4-Etil-7-{2,3-0-izopropiliden-S-0-(tert-bütildimetilsilil)-ß-D- korunmus klorodeazapürin ribozid 1 (200 mg, , trietilalüminyum (THF içinde lM sol., 4”ün (26 mg, argon ile arindirilmis bir karisiini, 70°C°de 20 saat karistirilir. Karisim, hekzan (30 ml) ile seyreltilir ve aköz NH4C1 (doymus, mL) ile yikanir, aköz faz tekrar hekzan (2 X 10 mL) ile özütlenir.

Toplanan organik ekstraktlar, MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular, vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, renksiz yag (162 mg, %82) olarak ürün (Za) saglanarak silika (hekzan-AcOEt, 10:1 -› 6:1) üzerinde kromatografi 2H,Jvic= ; H-6); : - 5.50 ve _; 25.90 3'); ; 114.11 02 136-P-0001 Bilesik (2b) ( ile islenir. Uçucular, vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kromatografi (CHC13 içinde %3 MeOH), renksiz camsi kati olarak nükleozidi (3b) (107 mg, %85) saglar. lH NMR (; 3.93 (q, 6); ; , ; MS FAB, m/z (rel. %): : hesaplanan Ara ürün bilesigi (2b) asagidaki sekilde hazirlanir. a. 4-Benzil-7-{2,3-O-izopropiliden-S-O-(tert-bütildimetilsilil)-ß-D- 02 136-P-0001 korunmus klorodeazapürin ribozidl (191 mg, , benzilçinko bromid (THF içinde 0.5M sol., 4”ün (25mg, argon ile arindirilmis karisimi 70°C'de 24 saat karistirilir. Karisim, hekzan (25 mL) ile seyreltilir ve aköz NH4C1 (doymus, 10 m1) ile yikanir, aköz faz tekrar hekzan (2 X 10 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar, MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, renksiz yag (201 mg, %93) olarak ürün (2b) saglanarak silika üzerinde (hekzan-AcOEt, 6:1) kromatografi islemine tabi tutulmustur. iH NMR (: 0.02 6); : - 5.50 ve -; 27.34 (3d). 02 136-P-0001 Bilesik (2d) ( ile islenir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kromatografi (CHC13 içinde %5-› %6 MeOH), renksiz camsi kati olarak istenen ürünü (200 mg, %62) saglayan revers faz kromatografi ile tekrar saflastirilan ham nükleozidi (3d) (405 mg, %125) saglar.

C6H40Me); ; 150.59 (CH- Ara ürün bilesigi (2d) asagidaki sekilde hazirlanir. 2. 7-{2,3-0-Izopropiliden-5-0-(tert-bütildimetilsilil)-ß-D- ribofuranozil}-4-(4-met0ksifenil)-7H-pir0|0[2,3-d]pirimidin argon ile arindirilmis 02 136-P-0001 (3e). karisimi 100°C”de 5 saat karistirilir. Karisim, kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz NH4Cl (doymus, 20 mL) ile yikanir, aköz faz tekrar kloroform (2 X 5 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar, MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular, vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, sarimsi yag (482 mg, %100) olarak ürün (2d) saglanarak silika (hekzan-AcOEt, 7:1) üzerinde kromatografi islemine tabi tutulmustur. 2). ”C NMR (; ; ; C6H4OMe); ; 02 136-P-0001 /37/ '5.' /xi 113 3"' "`-›.-,- Bilesik (Ze) ( ile islenir. Uçucular, vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kromatografi (CHC13 içinde %5-› %6 MeOH), beyaz kati olarak nükleozidi (3e) (214 mg, %94) saglar. Bilesik, MeOH/kloroformdan kristalize edilir. H NMR (: 3.57 (ddd, Ara ürün bilesigi (2e) asagidaki sekilde hazirlanir. 02 136-P-0001 bütildimetilsilil)-ß-D-ribofuranozi1}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin (Ze). Toluen (5 mL) içindeki klorodeazapürin ribozid l (409 mg, mg, argon ile arindirilmis karisimi, 100°C”de 5 saat karistirilir. Karisim, kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz NH4C1 (doymus, 20 mL) ile yikanir, aköz faz tekrar kloroform (2 X 5 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar, MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, renksiz yag (356 mg, %77) olarak ürün (Ze) saglanarak silika üzerinde (hekzan-AcOEt, 1021 -› 7:1) kromatografi islemine tabi tutulur. iH NMR (I (; 25.45 ), ; ; 134.17 (30)[M+H]. HR MS (FAB): hesaplanan C26H35FN304SI [M+H] 02 136-P-0001 Bilesik (21) ( ile islenir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Bilesik, bej toz (117 mg, %63) olarak ürün (31') saglanarak MeOH/AcOEtlden kristalize edilir. iH NMR (: 3.57 ve 3.66 2). ”C NMR (; 74.24 (CH- 2'); ; 112.89 (CH-4- Ara ürün bilesigi (21') asagidaki sekilde hazirlanir. f. 4-(Furan-Z-il)-7-{2,3-0-izopr0piliden-5-0-(tert-bütildimetilsilil)-ß-D- klorodeazapürin ribozid 1 (294 mg, furan (252 02 136-P-0001 iiL, argon ile arindirilmis karisimi 100°C”de 2 saat karistirilir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, toluen ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kolon kromatografisi (hekzan-AcOEt, 20:1 H 1021), renksiz köpük (293 mg, %93) olarak ürünü (2f) saglar. lH NMR (600 MHz, 1'); ; 11355 (C- 4a); ; 73 (: hesaplanan (3g)- 02 136-P-0001 Bilesik (Zg) ( ile islenir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Kalinti, sari toz (85 mg, %62) olarak ürün (3g) saglanarak MeOH/AcOEVden kristalize edilir. Ana çözeltilerin revers faz kromatografisi, 36 mg (%26) daha ürün saglamistir. Ürünün (3g) toplam verimi bu sekilde %88,dir.

DMSO-dö): ; ; Ara ürün bilesigi (lg) asagidaki sekilde hazirlanir. a. 7-{2,3-0-Izopr0piliden-5-0-(tert-bütildimetilsilil)-ß-D- mL) içindeki klorodeazapürin ribozid1(208 mg, , 2- (tribütilstannil)tiy0fen (165 iiL, 2,nin (17 mg, argon ile arindirilmis karisimi 100°C”de 2 saat karistirilir.

Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, toluen ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kolon kromatografisi (hekzan-AcOEt, 50:1 02 136-P-0001 2'); ; ; 4882032. (3 [1). .1 '0.` Bilesik (Zh) ( ile islenir. Uçucular, vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Kalinti, sari kristaller (67 mg, %31) olarak ürün (3h) saglanarak az miktarda MeOl-I eklenmesinden sonra kristalize edilmistir. Ana çözeltilerin revers faz kromatografisi, ek ürün (3h) (112 mg, %52) saglar. Toplam verim %83°tür. iH NMR (: 3.57 (ddd, iH,./g,m= 11.8, 02 136-P-0001 3.8,.]1NH = 2.5, .; 8.68 (3, 1H, H-2); : 61.82 (GHZ-53; FAB, m/z (rel. %): : hesaplanan Ara ürün bilesigi (2h) asagidaki sekilde hazirlanir. 0-(tert-bütildimetilsilil)-ß-D-ribofuranozil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin (2h).Dimetoksietan (4 mL)/H içindeki klorodeazapürin argon ile arindirilmis karisimi 100°C”de 4 saat karistirilir. Karisim kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz NH4C1 (doymus, 20 mL) ile yikanir, aköz faz tekrar kloroform (2 X 5 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar, MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, kirmizimsi köpük (397 mg, %76) olarak ürün (2h) saglanarak silika (hekzan-AcOEt, 1821 -› 17:1) üzerinde kromatografi 02 136-P-0001 1H, H-2). 13C NMR (, ; 27.41 pirol); ; ; 150.93 (C- 7a), , 471 4,; "7 4..,// 1;.,N 40/ 44”/ Bilesik (Zi) ( ile islenir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kromatografi (CHC13 içinde %4 MeOH), sari kati olarak nükleozidi (3i) (268 mg, %85) saglar. Bilesik, MeOH”den kristalize edilir. 02 136-P-0001 FAB,m/z(rel. %); : hesaplanan Ara ürün bilesigi (21) asagidaki sekilde hazirlanir. a. 7-{2,3-0-Izopr0piliden-5-0-(tert-bütildimetilsilil)-ß-D- ribofuranozil}-4-(tiyazol-2-il)-7H-pirolo[2,3-d]pirîmidin (Zi). DMF (3 mL) içindeki klorodeazapürin ribozid 1 (455 mg, , 2- (tribütilstannil)tiyazol (611 mg, 2,nin (36 mg, argon ile arindirilmis karisimi IOOOC'de 16 saat karistirilir.

Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, toluen ile birlikte birkaç kez buharIastirilir. Silika üzerinde kolon kromatografisi (hekzan-AcOEt, 30:1 -› 20:l), renksiz yag (454 mg, %90) olarak ürünü (Zi) saglar. lH NMR 02 136-P-0001 tiyazolil); I -5.49 ve -; 27.36 . MS FAB, m/z (rel. d]pirimidin (3j). 1 r' i N D / 1" N Bilesik (2j) ( ile islenir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kolon kromatografisi (%1.7-› 2% aköz NH3 [%25], CHCl3 içinde %9-> %12 MeOH), zor çözünen beyaz kati olarak nükleozidi (3j) (185 mg, %93) saglamistir. Bilesik, sudan kristalize edilir. lH 02 136-P-0001 imidazol); . IR FAB, m/z (rel. %): : hesaplanan 21.78.

Ara ürün bilesigi (2j) asagidaki sekilde hazirlanir. a. 7-{2,3-0-Iz0pr0piliden-5-0-(tert-bütildimetilsilil)-ß-D- ribofuranozil}-4-(l-tritil-lH-imidazol-4-il)-7H-pir010[2,3-d1pirimidin (2j). Etilmagnezyum bromid (THF içinde lM sol., , kuru THF (6 mL) içindeki argon ile arindirilmis 4-iy0d0-1-tritil-lH-imidazol (872 mg, 2 mM) solüsyonuna eklenir ve ortaya çikan solüsyon ambiyant sicakliginda 10 dakika karistirilir, akabinde ZnClz (THF içinde IM sol., 4 mL, 4mM) solüsyonu eklenir. Karisim oda sicakliginda 2 saat karistirilir ve ortaya çikan kivamli beyaz sulu karisim, klorodeazapürin 1 (440 mg, l mM) ve Pd(PPh3)4 (58 mg, içeren argon ile arindirilmis bir balona transfer edilir ve 95°C”de 12 saat karistirilir. Karisim, kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz EDTA (doymus, 20 mL) ile yikanir. Aköz katman tekrar kloroform (2 X 5 mL) ile Özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar, MgSO4 üzerinde kurutulur, buharlastirilir ve kirmizimsi köpük olarak ürün (2j) (474 mg, %66) saglanarak silika (hekzan-AcOEt, 2.5:1) üzerinde kromatografî islemine tabi tutulur. H NMR (: 02 136-P-0001 CDClg): -5.48 ve _; 714.3447. (3 k).

Bilesik (2k) ( ile islenir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kromatografi (CHCl3 içinde %5-› %6 MeOH), renksiz camsi kati olarak nükleozidi (3k) (270 mg, %110) saglamistir.

MeOH/AcOEt/hekzandan kristalizasyon, higroskopik beyaz tozu (146 mg, %60) saglamistir. Ana çözeltiler, liyofilizasyon sonrasinda beyaz toz olarak ek bilesik 02 136-P-0001 (3k) (57 mg, %23) parçasi saglanarak revers faz kromatografi ile saflastirilir. Ürünün (3k) toplam verimi %83,tür. 1H NMR (: 3.58 (ddd, Ara ürün bilesigi (2k) asagidaki sekilde hazirlanir. a. 7-{2,3-0-Izopr0piliden-5-0-(tert-bütildimetilsilil)-ß-D- ribofuranozil}-4-(piridin-3-il)-7H-pir0l0[2,3-d]pirimidin (2k).

Dimetoksietan (3 mL)/H20(l mL) içindeki klorodeazapürin ribozid I (306 mg, argon ile arindirilmis karisimi 100°Cide 3 saat karistirilir. Karisim, kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz NH4C1 (doymus, 20 mL) ile yikanir, aköz faz tekrar kloroform (3 X 5 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar, MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, sarimsi yag (318 mg, %95) olarak ürün (2k) saglanarak silika (hekzan-AcOEt, 2:l) üzerinde kromatografi islemine tabi tutulur. iH NMR (: 02 136-P-0001 (31).

Bilesik (21) ( ile islenir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kromatografi (CHC13 içinde %7a %10 MeOH), sarimsi camsi kati olarak nükleozidi (31) (194 mg, %92) saglar. Revers faz kromatografi sonrasinda bilesik, MeOH3den kristalize edilir. iH NMR (600 MHZ, 02 136-P-0001 1H, .; 5.35 (d, 1H, .101,2 = H-2). 13C NMR (, ; 116.50 (C- 4a); : V: Ara ürün bilesigi (21) asagidaki sekilde hazirlanir. bütildimetilsily-ß-D-ribofuranozil]-7H-pir010[2,3-d]pirimidin (21) ve 4- hidroksimetil-7-[2,3-0-izopropiliden-S-O-tert-bütildimetilsily-ß-D- mg, 1 mM) ve Pd(PPh3)4"ün (58 mg, argon ile arindirilmis karisimina THF (3.33 m1, 3 mM) içindeki 0.9 M benzoiloksimetilçinko iyodid solüsyonu eklenir. Karisim ainbiyant sicakliginda 15 saat karistirilir ve akabinde NH4C1 (20 mL) eklenir, akabinde kloroform (25 mL, 2 X 5 mL) ile özütlenir. Organik ekstraktlar, EDTA solüsyonu ile yikanir, MgSO4 üzerinde kurutulur ve buharlastirilir. Kalintinin silika (hekzan- AcOEt, 8:] -› 2:1) üzerindeki kolon kromatografisi, 296 mg bilesigi (21) lM NaOMe/MeOH (%10 mol) ile isleme yoluyla bilesige (21') nicel olarak dönüstürülebilir, akabinde asiri Dowex 50 (piridinyum formu) ile 02 136-P-0001 nötralizasyon ve buharlastirma yapilir. Bilesik (21): Renksiz yag. 1H NMR FAB, m/z (rel. %): : hesaplanan yag. lH NMR (; 02 136-P-0001 (3 m) . 1.0 / N `j/ ilk; Argon ile arindirilmis serbest ribozid 4 (226 mg, , Üiran-3-bor0nik asit (111 mg, karisimina su/CH3CN (211, 3 mL) içindeki önceden hazirlanmis Pd(OAc)2 (9 mg, ve TPPTS (56 mg, solüsyonu eklenir. Reaksiyon karisimi 100°C3de 3 saat karistirilir.

Sogutulduktan sonra karisim, aköZ HCl (3M sol.) eklenerek nötralize edilir, silika ile birlikte buharlastirilir ve sarimsi kati olarak ürün (3m) (172 mg, %69) saglanarak silika kolonu (CHC13 içinde %45 MeOH) üzerinde kromatografiye tabi tutulur. Bilesik beyaz toz olarak MeOH/CHClg/hekzandan kristalize edilir. lH lH, H-2).13C NMR (; 73 (: hesaplanan 02 136-P-0001 (3 [1).

H C ::I 'JC/O "l Argon ile arindirilinis serbest ribozid 4 (226 mg, , tiyofen-3-b0r0nik asit (168 mg, karisimina su/CH3CN (221, 3 mL) içindeki önceden hazirlanmis Pd(OAc)2 (9 mg, ve TPPTS (56 mg, solüsyonu eklenir. Reaksiyon karisimi 100°C°de 3 saat karistirilir.

Sogutulduktan sonra karisim, aköz HCl (3M sol.) eklenerek nötralize edilir, silika ile birlikte buharlastirilir ve beyaz köpük olarak ürün (3n) (176 mg, %67) saglanarak silika kolon (CHC13 içinde %45 MeOH) üzerinde kromatografiye tabi tutulur. Bilesik beyaz ince igneler olarak sudan kristalize edilir. lH NMR (; tiyeni1); ; 140.06 (C- 3-tiyenil); : V: 1633, 1572, 02 136-P-0001 (30).

Argon ile arindirilmis serbest ribozid 4 (100 mg, - lH-pirol-3-b0r0nik asit (112 mg, karisimina SU/CH3CN (2:`l, 3 mL) içindeki önceden hazirlanmis Pd(OAc)2 (4 mg, solüsyonu eklenir. Reaksiyon karisimi 100°C°de 5 saat karistirilir. Sogutulduktan sonra karisim, aköz HCl (3M sol.) eklenerek nötralize edilir ve beyaz kati olarak ürün (30) (61 mg, %55) saglanarak revers faz kromatografi ile saflastirilir. Bilesik, beyaz ince igneler saglanarak sudan kristalize edilir. iH NMR (: 3.56 (ddd, 2H,Jgem= 48, OH-3'); ; 6.90 02 136-P-0001 MS FAB,m/z(rel. %): 73 (: 16.21. (3p). i 9: "f m N 1:/ Argon ile arindirilmis serbest ribozid 4 (219 mg, , selenofen-2-b0ronik asit (168 mg, karisimina SU/CH3CN (2:l, 3 mL) içindeki önceden hazirlanmis Pd(OAc)2 (9 mg, ve TPPTS (54 mg, solüsyonu eklenir. Reaksiyon karisimi 100°C,de 3 saat karistirilir.

Sogutulduktan sonra karisim, aköz HCl (3M sol.) eklenerek nötralize edilir, silika ile birlikte buharlastirilir ve sari kati olarak ürün (3p) (188 mg, %64) saglanarak silika kolonu (CHC13 içinde %45 MeOH) üzerinde kromatografiye tabi tutulur.

Bilesik, bej kristaller saglanarak MeOH,den kristalize edilir. lH NMR (600 MHZ, 02 136-P-0001 2). ”C NMR (; 74.30 (CH- 2'); ; selenofenil); ; 152.31 (C- cm`l. MS FAB,m/z (rel. %): : hesaplanan dlpirimidin (3q).

Argon ile arindirilmis serbest ribozid (4) (100 mg, , lH-pirazol-S- boronik asit (47 mg, karisimina, su/CH3CN (2: l, 3 mL) içindeki önceden hazirlanmis Pd(OAc)2 (4 mg, ve TPPTS (25 mg, solüsyonu eklenir. Reaksiyon karisimi 100°C°de 5 saat karistirilir. Sogutulduktan sonra karisim, aköz HCl (3M s01.) eklenerek nötralize edilir ve amorf camsi kati olarak ürün (3q) (71 mg, %64) saglanarak revers faz kromatografi ile saflastirilir. Bilesik liyofilize edilir. lH NMR (; 02 136-P-0001 1H,NH). 13C NMR (; ; il}-1H-pirazol (31"). 02 136-P-0001 9./ `IN 110 5_ ”Cl” içindeki önceden hazirlanmis Pd(OAC)2 (9 mg, ve TPPTS (55 mg, solüsyonu eklenir. Reaksiyon karisimi mikrodalga firinda 150°C,de dakika karistirilir. Sogutulduktan sonra karisim, aköz HCl (3M sol.) eklenerek nötralize edilir ve renksiz camsi kati olarak istenen 4-pirazoli1 ürünü (3r) (30 mg, kromatografi ile saflastirilir. 3r: iH NMR (: 3.56 (ddd, 02 136-P-0001 pirazol). 13C NMR (; 70.81 (CH- 3'); 74.29 ve , 567.1958. Örnek 18. 4-(Piridin-Z-il)-7-(ß-D-rib ofuranozil)-7H-pirolo [2,3-d] pirimidin (3s). 02 136-P-0001 iA//ý _isin 2-~-. 43"( `a` N HC; `Ag'- ili/"OH mg, karisimi 100°C”de 24 saat karistirilir. Uçucular vakuin ile uzaklastirilir ve kalinti, MeOH ve toluen ile birlikte birkaç kez buharlastirilir.

MeOH/CH2C12 içindeki kalintinin süspansiyonu silika ve püskürtmeli olarak kurutulmus KF ile birlikte buharlastirilir ve akabinde silika kolonu (CHC13 içinde 3'); ; FAB, m/z (rel. %): : hesaplanan 02 136-P-0001 Örnek 19. S-Flor0-4-fenil-7-(ß-D-ribofuranozil)-7H-pirolo [2,3-d] pirimidin (83).

HO 5' J ,II/,OH Bilesik (721) (296 mg, içindeki lM NaOMe/MeOH ( ile islenir. Karisiin, silika ile birlikte buharlastirilir ve kristalin kati (122 mg, %79) olarak ürün (8a) saglanarak silika kolonu (CHCl3 içinde %3 MeOH) üzerinde kromatografiye tabi tutulur. Bilesik, bal benzeri yapraklar olarak MeOH/CHClg/hekzandan kristalize edilir. II-l NMR 7.97 (ni, 2H, H-o-Ph); . 13C NMR (; 85.51 (CH- 4'); ; ; (d, Ja: 4, C-4);. ”F NMR (:- MS FAB,m/z(re1. %): : 02 136-P-0001 Ara ürün bilesigi (7a) asagidaki sekilde hazirlanir. a. 5-Flor0-4-fenil-7-(2,3,5-tri-0-benzoil-ß-D-ribofuranozil)-7H- pir010[2,3-d]pirimidin (7a). Toluen (4 mL) içindeki argon ile arindirilmis korunmus protected 6-klor0-7-Ilor0deazapürin ribozid 6 (329 mg, ve Pd(PPh3)4 (31 mg, karisimi, 100°C1de 4 saat karistirilir.

Karisim kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz NH4C1 (doymus, 20 mL) ile yikanir, aköz faz tekrar kloroform (2 X 5 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, renksiz köpük (325 mg, %93) olarak ürün (7a) saglanarak silika (hekzan-AcOEt, 6: 1) üzerinde kromatografi islemine tabi m, 2 X 2H, H-0-Bz); I . 1“"F NMR ([M+H]. HR MS 02 136-P-0001 d]pirimidin (8b).

Bilesik (7b) (395 mg, içindeki buharlastirilir ve beyaz kati olarak ürün (8b) (160 mg, %78) saglanarak silika kolonu (CHC13 içinde %3 MeOH) üzerinde kromatografiye tabi tutulur.

MeOHiden kristalizasyon bej tozu saglamistir. lH NMR (: DMSO-dö): ; ; 113.15 (CH-3- MS FAB, m/z (rel. %): : hesaplanan 02 136-P-0001 Ara ürün bilesigi (7b) asagidaki sekilde hazirlanir. a. 5-Flor0-4-(furan-2-il)-7-(2,3,5-tri-O-benzoil-ß-D-ribofuranozil)-7H- pir içindeki argon ile arindirilmis (tribütilstannil)furan (2 (21 mg, karisimi 100°C,de 12 saat karistirilir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, toluen ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kolon kromatografisi (hekzan-AcOEt, 2021 -› 1021), sarimsi lH, Ji'g' = ; 7.36 ve 7.42 02 136-P-0001 d]pirimidin (SC). r 6/\.

Bilesik (7c) (145 mg, içindeki lM NaOMe/MeOH (40 uL, ile islenir. Karisim silika ile birlikte buharlastirilir ve limon benzeri kati olarak ürün (8c) (57 mg, %74) saglanarak silika kolonu (CHC13 içinde %25 MeOH) üzerinde kromatografi islemine tabi tutulur. MeOH/AcOEt/hekzandan kristalizasyon sarimsi tozu saglamistir. iH H-2). 13C NMR (; ; 110.70 tiyenil); ; 02 136-P-0001 352.0754.

Ara ürün bilesigi (7c) asagidaki sekilde hazirlanir. 7H-pir içindeki argon ile ve kalinti, toluen ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde mg, %74) olarak ürünü (7c) saglar. lH NMR (: 4.69 (dd, 2H, H-o-Bz); : ; 02 136-P-0001 MS FAB,m/z (rel. %): : hesaplanan d]pirimidin (8d).

Bilesik (7d) (166 mg, içindeki 1M NaOMe/MeOH (77 ML, ile islenir. Karisim, silika ile birlikte buharlastirilir ve bej kati olarak ürün (8d) (76 mg, %89) saglanarak silika kolonu (CHC13 içinde %4 MeOH in) üzerinde kromatografiye tabi tutulur. Bilesik, MeOHaden kristalize edilir. IHNMR (: 3.56 (ddd, lH, Jgem = 2.5,J; . '91: NMR 02 136-P-0001 Ara ürün bilesigi (7d) asagidaki sekilde hazirlanir. içindeki NaH (mineral yag içinde %55, 153 mg, solüsyonuna damlatilarak eklenir ve karisim oda sicakliginda 30 dakika karistirilir, akabinde ZnClz solüsyonu (THF içinde lM sol., eklenir.

Ortaya çikan kivamli sulu karisim 2 saat daha karistirilir ve akabinde 6- kloro-7-florodeazapürin ribozid 6 (431 mg, 4 (40 mg, içeren argon ile arindirilmis balona kanül araciligiyla transfer edilir ve reaksiyon karisimi 90°C”de 12 saat karistirilir. Karisim kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz EDTA (doymus, 20 mL) ile yikanir. Aköz katman tekrar kloroform (2 X 5 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar MgSO4 üzerinde kurutulur, buharlastirilir ve sarimsi köpük olarak ürün (7d) (188 mg, %42) saglanarak silika (hekzan-AcOEt, Szl) üzerinde kromatografi islemine tabi tutulur. lH NMR (: 02 136-P-0001 -pir01); ; . 19F NMR (470.3 MHz, d]pirimidin (Se). 1' :/ \0 4:' \\7-"'/ Bilesik (713) (132 mg, içindeki lM NaOMe/MeOH (40 uL, ile islenir. Karisim silika ile birlikte buharlastirilir ve renksiz kati olarak ürün (8e) (53 mg, %78) saglanarak silika kolonu (CHCl3 içinde %3 MeOH) üzerinde kromatografiye tabi tutulur.

MeOH/AcOEt/hekzandan kristalizasyon beyaz tozu saglar. iH NMR (600 MHz, 02 136-P-0001 cm`l. MS FAB,m/z(rel. %): : Ara ürün bilesigi (7e) asagidaki sekilde hazirlanir. pir010[2,3-d]pirimidin (7e). Toluen (2 mL) içindeki korunmus 6-kloro-7- florodeazapürin ribozid6 (216 mg, , furan-3-boronik asit (49 mg, 4,ün (20 mg, argon ile arindirilmis karisimi 100°C,de 10 saat karistirilir. Karisim kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz NH4C1 (doymus, 20 mL) ile yikanir, aköz faz tekrar kloroform (2 X 5 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, renksiz köpük (151 mg, %66) olarak ürün (76) saglanarak silika (hekzan-AcOEt, 6: 1) üzerinde kromatografi islemine tabi 02 136-P-0001 MS FAB,m/z (rel. %): : hesaplanan dlpirimidin (81). /1 `- ` 'w/I \. 11/05" `x` /N Bilesik (71) (136 mg, içindeki lM NaOMe/MeOH (40 uL, 0.04 inM) ile islenir. Karisim silika ile birlikte buharlastirilir ve renksiz kati olarak ürün (81') (58 mg, %81) saglanarak silika kolonu (CHC13 içinde %3 MeOH) üzerinde kromatografiye tabi tutulur.

MeOH/AcOEt/hekzandan kristalizasyon beyaz tozu saglamistir. lH NMR (; 02 136-P-0001 tiyenil); ; 7.98 (d, 3'); ; 352.0770.

Ara ürün bilesigi (7f) asagidaki sekilde hazirlanir. 7H-pir0]0[2,3-d]pirimidin (7f). Toluen (2 mL) içindeki korunmus 6- kloro-7-flor0deazapürin ribozid6 (216 mg, , tiyofen-3-b0ronik asit (56 mg, 4”ün (20 mg, argon ile arindirilmis karisimi 100°Cade 16 saat karistirilir.

Karisim, kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz NH4C1 (doymus, 20 mL) ile yikanir, aköz faz tekrar kloroform (2 X 5 mL) ile özütlenir.

Toplanan organik ekstraktlar MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, sarimsi köpük (155 mg, %67) olarak ürün (71') saglanarak silika (hekzan-AcOEt, 6:1) üzerinde kromatografîye tabi 02 136-P-0001 1H, H-2). 13C NMR (; CH-4-tiyenil); ; dlpirimidin (Sg). 1 >_,/ HQ] :"Jf :'9th Bilesik (7g) (317 mg, içindeki lM NaOMe/MeOH ( ile islenir. Karisim silika ile birlikte buharlastirilir ve sari kati (115 mg, %68) olarak ürün (Sg) saglanarak silika kolonu (CHC13 içinde %3 MeOH) üzerinde kromatografiye tabi tutulur. Bilesik, sari kristaller olarak MeOH,den kristalize edilir. lH NMR (: 02 136-P-0001 2-tiyazoli1). 19F NMR (: -157.84.

Ara ürün bilesigi (7g) asagidaki sekilde hazirlanir. pir içindeki argon ile arindirilmis (tribütilstannil)tiyazol (361 mg, 2 (22 mg, karisimi [00°C,de 2 saat karistirilir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, toluen ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kolon kromatografîsi (hekzan-AcOEt, 15:1 -› 6:1), sari köpük (347 mg, 02 136-P-0001 tiyazolil). '91: NMR (; d]pirimidin (8h).

.F 6” 8 411)* /M-N H .5: #OH Piridin (2 mL) içindeki bilesik (7h) (230 mg, , oda sicakliginda 1 saat lM NaOMe/MeOH ( ile islenir. Ortaya çikan solüsyon, Dowex 50 (piridinyum formu) ile tuzdan arindirilir ve uçucular vakum ile buharlastirilir ve kalinti, MeOH/toluen ile birlikte birkaç kez buharlastirilir ve akabinde oda sicakliginda 18 saat %90 aköz TFA (1 mL) ile islenir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Revers faz kromatografi, zor çözünen beyaz kati olarak nükleozidi (8h) (61 mg, %70) saglar. lH NMR (: 3.54 (dd, lH, Jgem = 12.0, JS'bA '= 3.9, H- 02 136-P-0001 imidazol), ; 141.26 (d, JC,F = 247, Ara ürün bilesigi (7h) asagidaki sekilde hazirlanir. imidazol-4-il)-7H-pir0l0[2,3-dlpirimidin (7h). Etilmagnezyum broinid argon ile arindirilmis 4-iyodo-l-tritil-lH-imidazol (696 mg, solüsyonuna eklenir ve ortaya çikan solüsyon, ambiyant sicakliginda 10 dakika karistirilir, akabinde ZnCl2 (THF içinde lM sol., solüsyonuna eklenir. Karisim oda sicakliginda 2 saat karistirilir ve ortaya çikan kivainli beyaz sulu karisim, 6-kloro-7-florodeazapürin ribozid (6) (493 mg, içeren argon ile arindirilmis bir balona transfer edilir ve 95°C'de 12 saat karistirilir. Karisim, kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz EDTA (doymus, 20 mL) ile yikanir. Aköz katman tekrar klorofoim (2 X 5 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar MgSO4 üzerinde kurutulur, buharlastirilir ve turuncu köpük olarak ürün (7h) (386 mg, %54) saglanarak silika (hekzan-AcOEt, 2:l) üzerinde kromatografiye tabi 02 136-P-0001 d]pirimîdin (Si).

Korunmamis ribozid (9) (177 mg, -lH-pir01-3- boronik asit (195 mg, argon ile arindirilmis karisimina su/CH3CN (2:1, 3 mL) içindeki önceden hazirlanmis Pd(OAc)2 ( solüsyonu eklenir.

Reaksiyon karisimi 100°C7de 3 saat karistirilir. Sogutulduktan sonra karisim, aköz HCI (3M sol.) eklenerek nötralize edilir, silika ile birlikte buharlastirilir ve beyaz kati olarak ürün (81) (141 mg, %73) saglanarak silika kolonu (CHC13 içinde 02 136-P-0001 saglanarak MeOH”den kristalize edilir. 1H NMR (: 3.55 2); ; ; 147.45 (d,JC,F= 3, C-7a); . lgF NMR 335.1156.

Ara ürün bilesigi (9) asagidaki sekilde hazirlanir. ribofuranozil]-7H-pir010[2,3-d]pirimidin (12). Tris(dimetilamin0)-fosfin ( içindeki karistirilmis 2,3-O-izopropiliden-S-O-tert-bütildimetiIsilil-ß-D-ribofaranoz (914 mg, 3 mM) ve karbon tetraklorid ( solüsyonuna damlatilarak eklenir. Reaksiyon sicakligi 1 saatte O°C2ye yükseltilir.

Karisim, buz soguklugunda tuzlu su (5 mL) ile yikanir, MgSO4 üzerinde d]pirimidin (10) ( ve TDA-l 02 136-P-0001 ( karisimina eklenir. Karisim 24 saat karistirilir ve akabinde doymus NH4C1 (20 mL) eklenir ve karisim, kloroform (30 mL, akabinde 2><5 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar MgSO4 üzerinde kurutulur, buharlastirilir ve renksiz yag olarak ürün (12) (390 mg, 2'); ; 107.62 ile 2 saat islenir. Uçucular vakum ile buharlastirilir ve kalinti, MeOH ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kromatografi (CHC13 içinde %4 MeOH), beyaz köpük olarak serbest nükleozidi (9) (198 mg, 02 136-P-0001 H-2).13C NMR (; DMSO-dç,, ref (Cs-F6) = -163 ppm): -169.72. (1 Sa).

C 7:/ iki::.. x ,11., HO 4:10" Bilesik (14a) (409 mg, içindeki 1M NaOMe/MeOH ( ile islenir. Karisim silika ile birlikte buharlastirilir ve renksiz kati olarak ürün (152) (200 mg, %91) saglanarak silika kolonu (CHC13 içinde %3 MeOH) üzerinde kromatografiye tabi tutulur.

MeOH/AcOEt/hekzandan kristalizasyon beyaz tozu saglamistir. iH NMR (; 02 136-P-0001 Ara ürün bilesigi (14a) asagidaki sekilde hazirlanir. a. 5-Klor0-4-fenil-7-(2,3,S-tri-O-benzoil-ß-D-ribofuranozil)-7H- dikloro-7-deazapürin ribozid (13) (394 mg, , fenilboronik asit (91 mg, 4,ün (36 mg, argon ile arindirilmis karisimi 100°C'de 4 saat karistirilir.

Karisim kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz NH4C1 (doymus, 20 mL) ile yikanir, aköz faz tekrar kloroform (2 X 5 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar, MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, sarimsi köpük olarak ürün (1421) (398 mg, %95) saglanarak silika (hekzan-AcOEt, 721) üzerinde kromatografiye tabi 128.50 ve ; ; ; . MS 02 136-P-0001 FAB,m/z(rel. %): : hesaplanan djpirimidin (1 Sb).

Bilesik (Mb) (197 mg, içindeki 1M NaOMe/MeOH (60 11L, ile islenir. Karisim, piridinyurn formundaki Dowex 50 ile tuzdan arindirilir ve kalintinin MeOH/CHC13'ten kristalizasyonu sarimsi tozu saglar ve ana çözeltilerin revers faz kromatografisi, istenen ürünün ilave parçasini saglar. Ürünün (15b) toplam verimi, 91 mgldir (%86). iH NMR DMSO-dö): ; ; cm'l. MS FAB, m/z(re1. %): : 02 136-P-0001 Ara ürün bilesigi (14b) asagidaki sekilde hazirlanir. pir içindeki korunmus 6,7- (tribütilstannil)furan (2°nin (12 mg, argon ile arindirilmis karisimi 100°C5de 2 saat karistirilir. Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, toluen ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kolon kromatografisi (hekzan-AcOEt, 10:1 -› 6:l) sari köpük olarak ürünü (Mb) (215 mg, %99) saglar. lH NMR (; 4.80 (dt, 2). 13C NMR (; ; 664.1495. d]pirimidin (15c). 02 136-P-0001 r /1 ..5 /4/ V 1" Ps Bilesik (14c) (183 mg, içindeki lM NaOMe/MeOH (60 uL, ile islenir. Karisim, piridinyum formundaki Dowex 50 ile tuzdan arindirilir ve kalintinin MeOH/CHCIften kristalizasyonu beyaz tozu saglar ve ana çözeltilerin revers faz kromatografisi, istenen ürünün ek tiyenil); ; 3.76; N, 11.13.

Ara ürün bilesigi (14c) asagidaki sekilde hazirlanir. 7H-pir içindeki korunmus 6,7- 02 136-P-0001 (tribütilstannil)tiy0fen (2”nin (12 mg, argon ile arindirilmis karisimi 100°C1de 2 saat karistirilir.

Uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, toluen ile birlikte birkaç kez buharlastirilir. Silika üzerinde kolon kromatografisi (hekzan-AcOEt, 20:] 133.72 ve ; . MS FAB, m/z (rel. d]pirimidin (15d). 02 136-P-0001 1' 3.--/ 073/ ni( Â` J Bilesik (14d) (366 mg, içindeki lM NaOMe/MeOH ( ile islenir. Karisim silika ile birlikte buharlastirilir ve beyaz kati olarak ürün (15d) (155 mg, %80) saglanarak silika kolonu (CHC13 içindeki %4 MeOH) üzerinde kromatografiye tabi tutulur.

MeOH/CHClglten kristalizasyon beyaz kristalleri verir. iH NMR (600 MHz, FAB, m/z (rel. %): : hesaplanan Ara ürün bilesigi (14d) asagidaki sekilde hazirlanir. 02 136-P-0001 diklor0-7-deazapürin ribozid13(506 mg, , furan-3-boronik asit (117 mg, 4,ün (46 mg, argon ile arindirilmis karisimi 100°C,de 10 saat karistirilir.

Karisim kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz NH4C1 (doymus, 20 mL) ile yikanir, aköz faz tekrar kloroform (2 X 5 mL) ile özütlenir. Toplanan organik ekstraktlar, MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, sarimsi köpük olarak ürün (14d) (457 mg, %86) saglanarak silika (hekzan-AcOEt, 7:l) üzerinde kromatografiye tabi tutulur. iH NMR (: 4.70 (dd, 1H, Jgem = 12.2, JsvbAr = 3.7, 1'); ; 664.1467. dlpirimidin (1 Se). 02 136-P-0001 F' 1//\.8 Bilesik (14e) (480 mg, içindeki 1M NaOMe/MeOH ( ile islenir. Karisim silika ile birlikte buharlastirilir ve renksiz kati olarak ürün (15e) (225 mg, %87) saglanarak silika kolonu (CHC13 içinde %4 MeOH) üzerinde kromatografiye tabi tutulur.

MeOH,den kristalizasyon, sert bej prizmalari saglar. lH NMR (600 MHZ, DMSO- tiyenil), : (80), : hesaplanan C15H15C1N3O4S [M+H] Ara ürün bilesigi (14e) asagidaki sekilde hazirlanir. 02 136-P-0001 a. 5-Klor0-4-(tiyofen-3-i1)-7-(2,3,5-tri-O-benzoil-ß-D-ribofuranozil)- (133 mg, 4°ün (46 mg, argon ile arindirilmis karisimi 100°C,de 10 saat karistirilir.

Karisim, kloroform (20 mL) ile seyreltilir ve aköz NH4C1 (doymus, 20 mL) ile yikanir, aköz faz tekrar kloroform (2 X 5 mL) ile özütlenir.

Toplanan organik ekstraktlar, MgSO4 üzerinde kurutulur, uçucular vakum ile uzaklastirilir ve kalinti, sarimsi köpük olarak ürün (14e) (500 mg, %92) saglanarak silika (hekzan-ACOEt, 6:1) üzerinde kromatografiye tabi tutulur. 'H NMR (: 4.70 (dd, lH, Jgem = 12.2, JS..., = 3.7, 3 X 2H, H-0-Bz); I , (: hesaplanan C36H27C1N307S [M+H] 02 136-P-0001 Örnek 33 Bilesiklerin insan T-lenfoid hücrelerde hücre döngüsü dagilimi üzerine etkileri Insan T-lenfoid hücre hatti CCRF-CEM, test edilen bilesikler ile her bilesigin CC50 degerine karsilik gelen konsantrasyonda 72 saat islenir. Inkübasyon sonunda hücreler santrifüj ile hasat edilir, yikanir ve etanol içinde fikse edilir. F ikse edilen hücreler, RNazA içeren bir tampon içinde propidyum iyodid ile boyanir ve hücre döngüsü dagilimi analizi, BD FACSAria aleti kullanilarak akis sitometrisi ile gerçeklestirilir. Veriler, BD FACSDiva yazilimi v4.1 kullanilarak islenir ve Faz Gl, S ve G2/M°de analiz edilen hücre popülasyonunun yüzdesi olarak verilir.

Hücre döngüsü dagilimi, islenmemis ve islenmis hücreler için paralel sekilde belirlenir ve her hücre döngüsü fazina yönelik nispi degisim hesaplanir.

Temsili bilesiklerden elde edilen sonuçlar Tablo 2,de özetlenir. Veriler, islenmemis kontrole göre islenmis hücrelerdeki her hücre döngüsü fazinin sikligindaki degisiklikleri temsil eder (islenmemis kontrolde analiz edilen her hücre döngüsü fazinin nispi fraksiyonu 1 degerine sahiptir).

Birinci veriler Tablo 3”te gösterilir, degerler, toplam hücre popülasyonundaki her hücre döngüsü fazinin dagilim yüzdesini temsil eder.

Bilesik Yapi Islenmemis kontrole göre hücre döngüsü fazindaki nispi degisim* 02 136-P-0001 Bilesik Yapi Islenmemis kontrole göre hücre döngüsü fazindaki nispi degisim* Örnek D] F 0.61 1.06 2.00 _ '::îj I " Örnek 5 GI % s % G2/M % 02 136-P-0001 Örnek 5 Gl % S % G2/M % Örnek 6 ci % s % GZ/M % Örnek 21 G] % s % GZ/M % Örnek 20 G] % s % G2/M % Test edilen bilesiklerden her biri ile yapilan isleme, insan T-lenfoid hücrelerinde hücre döngüsünün dagilimini etkiler. Temsili bilesikler, Gl fazindaki hücrelerin fraksiyonunu azaltir ve buna karsilik olarak S ve G2/M fazlarindaki hücrelerin 02 136-P-0001 fraksiyonunu arttirir, bu da bilesiklerin, hücre proliferasyonunun ilerlemesini bloke edebildigini ve/veya tümör hücresi büyümesini hücre döngüsünün birçok fazi ile inhibe edebildigini gösterir. Örnek 34 Mevcut bulusun bilesikleri ile apoptozun indüksiyonu Insan T-lenfoid hücre hatti CCRF-CEM, test edilen bilesikler ile her bilesigin CC50 degerine göre birkaç konsantrasyonda 72 saat islenir. Inkübasyon sonunda hücreler santrifüj ile hasat edilir, yikanir ve anneksin V-FITC konjugati ve propidyum iyodid (PI) eklenen kalsiyum içeren tampon içinde yeniden süspanse edilir. Inkübasyonun bitisinden sonra hücreler tekrar yikanir ve hemen BD FACSAria aleti kullanilarak akis sitometrisi ile analiz edilir. Veriler, Flowlo yazilimi v7.2.5 kullanilarak islenir ve saglikli (çift negatif), erken apoptotik (anneksin V pozitif`, PI negatiI), geç apoptotik/nekrotik (çift pozitif) veya sadece nekrotik (PI pozitif, anneksin V negatif) olarak kabul edilen analiz edilmis hücre popülasyonunun yüzdesi olarak verilir. Islenmemis hücreler, hücre kültüründe dogal olarak devam eden apoptoza refere eden negatif kontrol olarak görev yapar.

Temsili bilesiklerden elde edilen sonuçlar, Tablo 47te özetlenir, degerler, yukarida bahsedildigi üzere farkli olarak boyanan alt popülasyonlarin dagilim yüzdesini temsil eder.

Hücre Dagilimi (%) Konsantrasyon Erken _ _ ( M) Saglikli A `k Apoptotik / Nekrotik ll p p Nekrotik islenmemis 89 4 4 3 Kontrol 02 136-P-0001 Hücre Dagilimi (%) Konsantrasyon Erken Saglikli _ (uM) Apoptotik 0.2 40 14 0.2 60 8 0.4 3 3 1 1 Apoptotik / Nekrotik Nekrotik Test edilen bilesiklerden her biri ile yapilan isleme, insan T-lenfoid hücrelerinde apoptoz indüksiyonu ile sonuçlanir. Bu etki, konsantrasyona bagimlidir. Örnek 35. Asagidakiler, insanlarda terapötik veya profilaktik kullanima yönelik forrnülün (1) bir bilesigini ('Bilesik X') içeren temsili farmasötik dozaj formlarini gösterir. (i) Tablet 1 Bilesik X= Laktoz Povidon Kroskarmelloz sodyum Mikrokristalin selüloz Magnezyum stearat (ii) Tablet 2 Bilesik X: mg/tablet 100.0 300.0 mg/tablet 02 136-P-0001 (i) Tablet 1 Mikrokristalin selüloz Nisasta Sodyum nisasta glikolat Magnezyum stearat (iii) Kapsül Bilesik X: Kolloidal silikon dioksit Laktoz Önceden jelatinlestirilmis nisasta Magnezyum stearat (iv) enjeksiyon 1 (l mg/ml) Bilesik X= (serbest asit formu) Dibazik sodyum fosfat Monobazik sodyum fosfat Sodyum klorid 1.0 N Sodyum hidroksit solüsyonu (7.0-7.5”e pH ayarlamasi) Enjeksiyonluk su (v) Enjeksiyon 2 (10 mg/ml) Bilesik X= (serbest asit formu) mg/tablet 410.0 500.0 mg/capsule 465.5 120.0600.0 q.s. ad 1 mL 02 136-P-0001 Monobazik sodyum fosfat 0.3 Dibazik sodyum fosfat 1.1 Polietilen glikol 400 200.0 01 N Sodyum hidroksit solüsyonu (7.0-7.5”e pH ayarlamasi) q.s.

Enjeksiyonluk su q.s. ad l mL (vi) Aerosol mg/can Bilesik X= 20.0 Oleik asit 10.0 Trikloromonoflorometan 5,0000 Diklorodiflorometan 10,000.0 Diklorotetrafloroetan 5,0000 Yukaridaki formülasyonlar, farmasötik tekniginde iyi bilinen klasik prosedürler ile elde edilebilir.

Bulus, çesitli spesifik ve tercih edilen düzenlemeler ve tekniklere referans olarak açiklanmistir. Ancak bulus kapsami korunurken birçok varyasyon ve modifikasyonun yapilabilecegi anlasilmalidir. Tarifname açilarinin kapsamli olmayan bir listesi asagidaki numarali maddelerde saglanir. 1. Formülün (I) bir bilesigi veya bir tuzudur: 02 136-P-0001 R1, (Cl-C6)alkil, hidroksi(C1-C6)alkil, aril, aril(C 1-C6)alkil, heteroaril, heteroaril(C1-C6)alkil veya halodur, burada her aril veya heteroaril istege bagli olarak (Cl-C6)alkil, (Cl-C6)alkoksi, (Ci- C6)alkiltiyo, halo, amino, nitro, siyano, trifloro, triflorometil veya hidroksiden seçilen bir veya daha fazla grup ile sübstitüe edilir; ve R2, hidrojen, heteroaril, halo veya istege bagli olarak (C 1-C6)alkil, (C 1-C6)alkoksi, (Cl-C6)alkiltiy0, halo, amino, nitro, siyano, trifloro, triflorometil veya hidroksiden seçilen bir veya daha fazla grup ile sübstitüe edilen arildir; bunun kosulu R1, sübstitüe edilmemis fenil oldugunda anin hidrojen olmamasidir. 2. Madde 23nin bilesigidir, burada R1, heteroarildir. 3. Madde 1”in bilesigidir, burada R1, furanil, tiyenil, pirolil, tiyazolil, imidazolil, piridil, selenofenil veya pirazolildir. 4. Madde llin bilesigi veya bir tuzudur, burada R1, 5-üyeli heteroaril veya hidroksil-(C1-C4)alkildir, R2, hidrojen veya halodur.

. Madde 1”in bilesigi veya bir tuzudur, burada R1, furanil, tiyenil, pirolil, tiyazolil, imidazolil, piridil, selenofenil veya pirazolildir, R2, hidrojen veya halodur. 02 136-P-0001 Madde 5”in bilesigidir, burada R2, hidrojendir.

Madde Sain bilesigidir, burada R2, halodur.

Bir bilesigin, bir öznede tümör/kanser büyümesinin inhibe edilmesine iliskin olarak özneye madde l°e göre bilesigin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasini içeren bir yöntemde kullanilmaya yönelik bir ilacin hazirlanisinda kullanimidir.

Bir bilesigin, bir öznedeki tümör/kanser hücrelerindeki hücre proliferasyonunun inhibe edilmesine iliskin olarak özneye madde 1°e göre bilesigin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasini içeren bir yöntemde kullanilmaya yönelik bir ilacin hazirlanisinda kullanimidir.

Bir bilesigin, bir öznede hücresel proliferasyon hastaliginin tedavi edilmesine iliskin olarak özneye madde l”e göre bilesigin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasini içeren bir yöntemde kullanilmaya yönelik bir ilacin hazirlanisinda kullanimidir.

Bir bilesigin, bir öznede neoplastik bir hastaligin tedavi edilmesine iliskin olarak özneye madde Ve göre bilesigin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasini içeren bir yöntemde kullanilmaya yönelik bir ilacin hazirlanisinda kullanimidir.

Bir bilesigin, bir öznede tümör veya kanserin tedavi edilmesine iliskin olarak özneye madde l'e göre bilesigin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasini içeren bir yöntemde kullanilmaya yönelik bir ilacin hazirlanisinda kullanimidir.

Terapötik olarak etkili bir miktarda madde l”e göre bilesigi ve bir veya daha fazla farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici içeren farmasötik bir bilesimdir. 02 136-P-0001 Madde 1 veya 2 veya 4 veya 5 veya 6 veya 77ye göre bir bilesigin, bir öznede tümör/kanser büyümesinin inhibe edilmesine yönelik bir ilacin Madde 1 veya 2 veya 4 veya 5 veya 6 veya 7”ye göre bir bilesigin, bir öznede tümör/kanser hücrelerindeki hücre proliferasyonunun inhibe edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanimidir.

Madde 1 veya 2 veya 4 veya 5 veya 6 veya 7,ye göre bir bilesigin, bir öznede hücresel proliferasyon hastaliginin tedavi edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanimidir.

Madde 1 veya 2 veya 4 veya 5 veya 6 veya 7 ”ye göre bir bilesigin, bir öznede neoplastik bir hastaligin tedavi edilmesine yönelik bir ilacin Madde 1 veya 2 veya 4 veya 5 veya 6 veya 7›ye göre bir bilesigin, bir öznede tümör veya kanserin tedavi edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanimidir.

Claims (1)

ISTEMLER

1. Asagidakilerden seçilen bir bilesik: 02 136-P-0001 02136-P'0001 02 136-P-0001 02 136-P-0001 ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzudur. . Istem l'e göre bir bilesigin, bir öznede tümör/kanser büyümesinin inhibe edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanimidir. . Istem 1,e göre bir bilesigin, bir öznede tümör/kanser hücrelerindeki hücre proliferasyonunun inhibe edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanimidir. . Istem 1”e göre bir bilesigin, bir öznede hücresel proliferasyon hastaliginin tedavi edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanimidir. . Istem 1”e göre bir bilesigin, bir öznede neoplastik bir hastaligin tedavi edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanimidir. . Istem 1,e göre bir bilesigin, bir öznede tümör veya kanserin tedavi edilmesine yönelik bir ilacin hazirlanisi için kullanimidir. . Bir öznede tümör/kanser büyümesini inhibe etme yönteminde kullanima yönelik istein l°e göre bir bilesiktir. . Bir öznede tümör/kanser hücrelerindeki hücre proliferasyonunu inhibe etme yönteminde kullanima yönelik istem l”e göre bir bilesiktir. . Bir öznede hücresel proliferasyon hastaligini tedavi etme yönteminde kullanima yönelik istem lie göre bir bilesiktir. 10.Bir öznede neoplastik bir hastaligi tedavi etme yönteminde kullanima yönelik istem lae göre bir bilesiktir. l 1.Bir öznede tümör veya kanseri tedavi etme yönteminde kullanima yönelik