Claims (42)
1. DEPCT6331/05/2562 1.ไกลโคซามิโนไกลแคนที่ประกอบรวมด้วยปริมาณของหมู่Nซัลเฟเตต(NS)ไดแซค คาไรด์,ซึ่งปริมาณนั้นมีประสิทธิภาพในการผลิตเฮปารินที่สังเคราะห์ทางชีวภาพ 2.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่1ที่ประกอบรวมด้วย7899%ของหมู่ Nซัลเฟเตต(NS)ไดแซคคาไรด์ 3.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่1ที่ประกอบรวมด้วย8197%ของหมู่ Nซัลเฟเตต(NS)ไดแซคคาไรด์ 4.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่1ที่ประกอบรวมด้วย8395%ของหมู่ Nซัลเฟเตต(NS)ไดแซคคาไรด์ 5.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่1ที่ประกอบรวมด้วย8593%ของหมู่ Nซัลเฟเตต(NS)ไดแซคคาไรด์ 6.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่15,ที่มีน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ย ตามน้ำหนักที่เหมาะสมในการสร้างผลิตภัณฑ์เฮปารินสุดท้ายที่มี15,00019,000Da, เปอร์เซ็นต์ของห่วงโซ่เฮปารินที่มีน้ำหนักโมเลกุลมากกว่า24,000Daมีค่าไม่มากกว่า20% ของทั้งหมด,และอัตราส่วนของโซ่ระหว่างน้ำหนักโมเลกุลของ8,000ถึง16,000Da ต่อเปอร์เซ็นต์โซ่ที่มีน้ำหนักโมเลกุลของ16,000ถึง24,000Daที่มีค่าไม่น้อยกว่า1.0 7.ไกลโคซามิโนไกลแคนที่ประกอบรวมด้วยปริมาณของหมู่Nซัลเฟเตต,2ซัลเฟเตต (NS2S)ไดแซคคาไรด์,ซึ่งปริมาณนั้นมีประสิทธิภาพในการผลิตเฮปารินที่สังเคราะห์ ทางชีวภาพ 8.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่7ที่ประกอบรวมด้วย4480%ของหมู่NS2S 9.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่7ที่ประกอบรวมด้วย5078%ของหมู่NS2S 10.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่7ที่ประกอบรวมด้วย5577%ของหมู่NS2S 11.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่7ที่ประกอบรวมด้วย6076%ของหมู่NS2S 12.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่711,ที่ประกอบรวมอีกด้วย หมู่NSไดแซคคาไรด์ 13.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่12ที่ประกอบรวมด้วย1339%ของหมู่NS 14.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่12ที่ประกอบรวมด้วย1435%ของหมู่NS 15.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่12ที่ประกอบรวมด้วย1530%ของหมู่NS 16.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่12ที่ประกอบรวมด้วย1626%ของหมู่NS 17.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่716,ที่มีน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ย ตามน้ำหนักที่เหมาะสมในการสร้างผลิตภัณฑ์เฮปารินสุดท้ายที่มี15,00019,000Da, เปอร์เซ็นต์ของห่วงโซ่เฮปารินที่มีน้ำหนักโมเลกุลมากกว่า24,000Daมีค่าไม่มากกว่า20% ของทั้งหมด,และอัตราส่วนของโซ่ระหว่างน้ำหนักโมเลกุลของ8,000ถึง16,000Da ต่อเปอร์เซ็นต์โซ่ที่มีน้ำหนักโมเลกุลของ16,000ถึง24,000Daที่มีค่าไม่น้อยกว่า1.0 18.ไกลโคซามิโนไกลแคนที่ประกอบรวมด้วยปริมาณของหมู่Nซัลเฟเตต,2ซัลเฟเตต, 6ซัลเฟเตต(NS2S6S)ไดแซคคาไรด์และหมู่Nซัลเฟเตต,6ซัลเฟเตต(NS6S)ไดแซค คาไรด์,ที่ซึ่งปริมาณนั้นมีประสิทธิภาพในการผลิตเฮปารินที่สังเคราะห์ทางชีวภาพ 19.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่18ที่ประกอบรวมด้วย3173%ของหมู่NS2S6S ไดแซคคาไรด์และ640%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์ 20.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่18ที่ประกอบรวมด้วย3670%ของหมู่NS2S6S ไดแซคคาไรด์และ632%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์ 21.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่18ที่ประกอบรวมด้วย4067%ของหมู่NS2S6S ไดแซคคาไรด์และ626%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์ 22.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่18ที่ประกอบรวมด้วย4364%ของหมู่NS2S6S ไดแซคคาไรด์และ622%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์ 23.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่1822,ที่ประกอบรวมอีกด้วย หมู่Nซัลเฟเตต,2ซัลเฟเตต(NS2S)ไดแซคคาไรด์และหมู่Nซัลเฟเตต(NS) ไดแซคคาไรด์ 24.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่23,ที่ประกอบรวมด้วย027%ของหมู่NS2S และ122%ของหมู่NS 25.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่23ที่ประกอบรวมด้วย1227%ของหมู่NS2S และ117%ของหมู่NS 26.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่1825,ที่มีสมบัติน้ำหนักโมเลกุล เฉลี่ยตามน้ำหนักที่เหมาะสมในการสร้างผลิตภัณฑ์เฮปารินสุดท้ายที่มี15,00019,000Da, เปอร์เซ็นต์ของห่วงโซ่เฮปารินที่มีน้ำหนักโมเลกุลมากกว่า24,000Daมีค่าไม่มากกว่า20% ของทั้งหมด,และอัตราส่วนของโซ่ระหว่างน้ำหนักโมเลกุลของ8,000ถึง16,000Daต่อ เปอร์เซ็นต์โซ่ที่มีน้ำหนักโมเลกุลของ16,000ถึง24,000Daที่มีค่าไม่น้อยกว่า1.0 27.ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่1725,ซึ่งมิได้ประกอบด้วย หมู่3Sไดแซคคาไรด์ 28.วิธีการสำหรับการผลิตเฮปารินที่สังเคราะห์ทางชีวภาพ,ที่ประกอบรวมด้วย a.การได้มาซึ่งไกลโคซามิโนไกลแคนที่ประกอบรวมด้วย3173%ของหมู่NS2S6S ไดแซคคาไรด์,640%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์,027%ของหมู่NS2Sและ 122%ของหมู่NS b.การบำบัดไกลโคซามิโนไกลแคนด้วยเอนไซม์,ซึ่งเป็น3Oซัลโฟทรานสเฟอเรส ไอโซฟอร์ม1(3OST1),โดยมีตัวให้ซัลเฟต เพื่อผลิตเฮปารินที่สังเคราะห์ทางชีวภาพแบบแบช 29.วิธีการของข้อถือสิทธิที่28,ที่ซึ่งในขั้นตอน(b)กลูโคซามีนเรซิดิวที่เพียงพอถูกแปลงรูป ให้เป็น3Oซัลโฟกลูโคซามีนเรซิดิวเพื่อที่แบชที่ผลิตขึ้นจะมีแอนติXaและแอนติIIa แอคทิวิตี้ที่ไม่น้อยกว่า180หน่วย/มก.และอัตราส่วนของแอนติXa/แอนติIIaเป็น 0.851.15 30.วิธีการของข้อถือสิทธิที่28,ที่ซึ่งอัตราส่วนของแอนติXa/แอนติIIaคือ0.91.1 31.วิธีการผลิตสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่สองที่ประกอบรวมด้วย4480% ของหมู่NS2Sและ1339%ของหมู่NSวิธีการนั้นที่ประกอบรวมด้วย: a.การแปลงผันปริมาณของNอะเซทิลกลูโคซามีนเรซิดิวในเฮปาโรซานเพื่อผลิต ไกลโคซามิโนไกลแคนที่หนึ่งที่ประกอบรวมด้วย7899%ของหมู่Nซัลเฟเตต (NS)ไดแซคคาไรด์,ที่ซึ่งปริมาณของNอะเซทิลกลูโคซามีนเรซิดิวซึ่งถูก แปลงผันสอดคล้องกับปริมาณของหมู่NSในสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโน ไกลแคนที่หนึ่งและ b.การบำบัดสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่หนึ่งด้วยเอนซ์ซึ่งเป็นC5 อิพิเมอเรส(C5epi)และ2Oซัลโฟทรานสเฟอเรส(2OST),โดยมีตัวให้ซัลเฟต เพื่อผลิตสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่สอง 32.วิธีการของข้อถือสิทธิที่31,ที่ซึ่งการแปลงผันดังกล่าวประกอบรวมด้วยการทำปฏิกิริยา เฮปาโรซานกับเบสและสารให้หมู่ซัลโฟเนต 33.วิธีการของข้อถือสิทธิที่31,ที่ซึ่งการแปลงผันดังกล่าวประกอบรวมด้วยการทำปฏิกิริยา เฮปาโรซานกับNดีอะเซทิเลส,Nซัลโฟทรานสเฟอเรส(NDST) 34.วิธีการสร้างสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่สามที่ประกอบรวมด้วย3173%ของ หมู่NS2S6Sไดแซคคาไรด์,640%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์,027%ของหมู่NS2S และ122%ของหมู่NS: วิธีการนั้นที่ประกอบรวมด้วย การบำบัดสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่สองที่ประกอบรวมด้วย4480%ของหมู่NS2S และ1339%ของหมู่NSด้วยเอนไซม์,ซึ่งเป็น6Oซัลโฟทรานสเฟอเรสไอโซฟอร์ม1และ/หรือ 3(6OST1/3),โดยมีตัวให้ซัลเฟตเพื่อแปลงผันสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่สองให้เป็น สารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่สาม 35.วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2834,ที่ซึ่งตัวให้ซัลเฟตประกอบรวมด้วยPAPS 36.วิธีการของข้อถือสิทธิที่36,ที่ซึ่งPAPSอยู่ในสารละลาย 37.วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2834,ที่ซึ่งตัวให้ซัลเฟตประกอบรวมด้วย PAPและPNPS 38.วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2834,ที่ซึ่งการบำบัดดังกล่าวถูกกระทำโดยมี ระบบรีไซเคิลที่ประกอบรวมด้วยPAPS,PNPSและตัวเร่งปฏิกิริยา 39.วิธีการของข้อถือสิทธิที่38,ที่ซึ่งตัวเร่งปฏิกิริยาคือแอริลซัลโฟทรานสเฟอเรสIV (ASTIV) 40.วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2839,ที่ซึ่งเอนไซม์นั้นอยู่ในสารละลาย 41.วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2839,ที่ซึ่งเอนไซม์นั้นถูกตรึงไว้ 42.วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2834,ที่ซึ่งการบำบัดดังกล่าวถูกกระทำภายใน สายพันธุ์จุลชีพที่ถูกทำวิศวกรรมที่ประกอบด้วยยีนที่เข้ารหัสสำหรับNDST,C5Epi,2OST, 3OST1,หนึ่งหรือสองอย่างใน6OST1หรือ6OST3,และแหล่งของPAPS หน้า1ของจำนวน4หน้า ข้อถือสิทธิ 1.ไกลโคซามิโนไกลแคนที่ประกอบรวมด้วยปริมาณของหมู่Nซัลเฟเตต(NS)ไดแซค คาไรด์,ซึ่งปริมาณนั้นมีประสิทธิภาพในการผลิตเฮปารินที่สังเคราะห์ทางชีวภาพ 1.DEPCT6331/05/2019 1. Glycosaminoglycan comprising an amount of N-sulfate(NS) disaccharide groups, the amount of which is effective in producing biosynthetic heparin. 2. Glycosaminoglycan of claim 1 comprising 7899% of N-sulfate(NS) disaccharide groups. 3. Glycosaminoglycan of claim 1 comprising 8197% of N-sulfate(NS) disaccharide groups. 4. Glycosaminoglycan of claim 1 comprising 8395% of N-sulfate(NS) disaccharide groups. 5. Glycosaminoglycan of claim 1 comprising 8593% of N-sulfate(NS) disaccharide groups. 6. A glycosaminoglycan of any one of claim 15, having an average molecular weight, on a weight basis, appropriate for the production of a final heparin product of 15,000-19,000Da, the percentage of heparin chains having a molecular weight greater than 24,000Da is not more than 20% of the total, and the ratio of chains between the molecular weights of 8,000 and 16,000Da to the percentage of chains having a molecular weight of 16,000 and 24,000Da is not less than 1.0. 7. A glycosaminoglycan comprising an amount of N-sulfate, 2-sulfate (NS2S) disaccharide groups, the amount of which is effective in the production of biosynthetic heparin. 8. A glycosaminoglycan of claim 7 comprising 4480% of NS2S groups. 9. A glycosaminoglycan of claim 7 comprising 5078% of NS2S groups. 10. The glycosaminoglycan of claim 7 comprising 5577% of the NS2S group. 11. The glycosaminoglycan of claim 7 comprising 6076% of the NS2S group. 12. The glycosaminoglycan of any one of claim 711, further comprising the NS disaccharide group. 13. The glycosaminoglycan of claim 12 comprising 1339% of the NS group. 14. The glycosaminoglycan of claim 12 comprising 1435% of the NS group. 15. The glycosaminoglycan of claim 12 comprising 1530% of the NS group. 16. The glycosaminoglycan of claim 12 comprising 1626% of the NS group. 17. A glycosaminoglycan of any one of claim 716, having an average molecular weight, on a weight basis, appropriate for the production of a final heparin product of 15,000-19,000Da, the percentage of heparin chains having a molecular weight greater than 24,000Da is not more than 20% of the total, and the ratio of chains between the molecular weights of 8,000 and 16,000Da to the percentage of chains having a molecular weight of 16,000 and 24,000Da is not less than 1.0. 18. A glycosaminoglycan comprising an amount of N-sulfate, 2-sulfate, 6-sulfate (NS2S6S) disaccharide groups and N-sulfate, 6-sulfate (NS6S) disaccharide groups, wherein the amount is effective in the production of biosynthetic heparin. 19. A glycosaminoglycan of claim 18 comprising 3173% of the NS2S6S groups. disaccharide and 640% of the NS6S disaccharide group. 20. The glycosaminoglycan of claim 18, comprising 3670% of the NS2S6S disaccharide group and 632% of the NS6S disaccharide group. 21. The glycosaminoglycan of claim 18, comprising 4067% of the NS2S6S disaccharide group and 626% of the NS6S disaccharide group. 22. The glycosaminoglycan of claim 18, comprising 4364% of the NS2S6S disaccharide group and 622% of the NS6S disaccharide group. 23. The glycosaminoglycan of any one of claims 1822, further comprising: 24. The glycosaminoglycan of claim 23, comprising 0.27% NS2S groups and 122% NS groups. 25. The glycosaminoglycan of claim 23, comprising 1227% NS2S groups and 117% NS groups. 26. The glycosaminoglycan of any one of claims 1825, having a weight-average molecular weight suitable for forming a final heparin product of 15,000 to 19,000Da, the percentage of heparin chains having a molecular weight greater than 24,000Da not being more than 20% of the total, and the ratio of chains with a molecular weight of 8,000 to 16,000Da to The percentage of chains having a molecular weight of 16,000 to 24,000 Da is not less than 1.0. 27. The glycosaminoglycan of any one of claim 1725, not comprising a 3S disaccharide group. 28. A method for producing biosynthetic heparin, comprising a. obtaining a glycosaminoglycan comprising 3173% of NS2S6S disaccharide groups, 640% of NS6S disaccharide groups, 027% of NS2S groups and 122% of NS groups. b. treating the glycosaminoglycan with an enzyme, namely 3O sulfotransferase isoform 1 (3OST1), in the presence of a sulfate donor, to produce the biosynthetic heparin in batches. 29. The method of claim 28, wherein in step (b) sufficient glucosamine residues are converted. 30. The method of claim 28, wherein the antiXa/antiIIa ratio is 0.91.1. 31. A method for producing a second glycosaminoglycan intermediate comprising 4480% of NS2S groups and 1339% of NS groups, the method comprising: a. converting the amount of N-acetylglucosamine residues in heparosan to produce a first glycosaminoglycan comprising 7899% of N-sulfated (NS) disaccharide groups, wherein the amount of N-acetylglucosamine residues which are The conversion is consistent with the amount of NS groups in the first glycosaminoglycan intermediate, and b. the treatment of the first glycosaminoglycan intermediate with an enzyme, which is a C5 epimerase (C5epi) and a 2O sulfotransferase (2OST), in the presence of a sulfate donor, to produce a second glycosaminoglycan intermediate. 32. The method of claim 31, wherein said conversion comprises reacting heparosan with a base and a sulfonate donor. 33. The method of claim 31, wherein said conversion comprises reacting heparosan with a N deacetylase, N sulfotransferase (NDST). 34. A method for producing a third glycosaminoglycan intermediate comprising 3173% of NS2S6S disaccharide groups, 640% of NS6S disaccharide groups, 0.27% of NS2S groups and 122% of NS groups: the method comprising treating a second glycosaminoglycan intermediate comprising 4480% of NS2S groups and 1339% of NS groups with an enzyme, being 6Osulfotransferase isoforms 1 and/or 3 (6OST1/3), with a sulfate donor to convert the second glycosaminoglycan intermediate into a third glycosaminoglycan intermediate. 35. The method of any one of claim 2834, wherein the sulfate donor comprises PAPS. 36. The method of claim 36, wherein the PAPS is in solution. 37. The method of any one of claim 2834, wherein the sulfate donor comprises PAP and PNPS. 38. The method of any one of claim 2834, wherein said treatment is carried out with a recycling system comprising PAPS, PNPS and a catalyst. 39. The method of claim 38, wherein the catalyst is aryl sulfotransferase IV (ASTIV). 40. The method of any one of claim 2839, wherein the enzyme is in solution 41. The method of any one of claim 2839, wherein the enzyme is immobilized. 42. The method of any one of claim 2834, wherein said treatment is carried out within an engineered microbial strain containing genes coding for NDST, C5Epi, 2OST, 3OST1, one or two of 6OST1 or 6OST3, and a source of PAPS. Page 1 of 4 Claim 1. A glycosaminoglycan comprising an amount of N-sulfate (NS) disaccharide groups, the amount of which is effective in producing biosynthetic heparin.
2. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่1ที่ประกอบรวมด้วย7899%ของหมู่Nซัลเฟเตต (NS)ไดแซคคาไรด์2. The glycosaminoglycan of claim 1 comprising 7899% of N-sulfate (NS) disaccharide groups.
3. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่1ที่ประกอบรวมด้วย8197%ของหมู่Nซัลเฟเตต (NS)ไดแซคคาไรด์3. The glycosaminoglycan of claim 1 comprising 8197% of N-sulfate (NS) disaccharide groups.
4. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่1ที่ประกอบรวมด้วย8395%ของหมู่Nซัลเฟเตต (NS)ไดแซคคาไรด์4. The glycosaminoglycan of claim 1 comprising 8395% of N-sulfate (NS) disaccharide groups.
5. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่1ที่ประกอบรวมด้วย8593%ของหมู่Nซัลเฟเตต (NS)ไดแซคคาไรด์5. The glycosaminoglycan of claim 1 comprising 8593% of N-sulfate (NS) disaccharide groups.
6. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่15,ที่มีน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ยตาม น้ำหนักที่เหมาะสมในการสร้างผลิตภัณฑ์เฮปทารินสุดท้ายที่มี15,00019,000Da, เปอร์เซ็นต์ของห่วงโซ่เฮปารินที่มีน้ำหนักโมเลกุลมากกว่า24,000Daมีค่าไม่มากกว่า20% ของทั้งหมด,และอัตราส่วนของโซ่ระหว่างน้ำหนักโมเลกุลของ8,000ถึง16,000Daต่อ เปอร์เซ็นต์โซ่ที่มีน้ำหนักโมเลกุลของ16,000ถึง24,000Daที่มีค่าไม่น้อยกว่า1.06. A glycosaminoglycan of any one of claim 15, having a weight-average molecular weight appropriate for forming a final heparin product of 15,000-19,000Da, the percentage of heparin chains having a molecular weight greater than 24,000Da is not more than 20% of the total, and the ratio of chains with a molecular weight of 8,000 to 16,000Da to the percentage of chains with a molecular weight of 16,000 to 24,000Da is not less than 1.0.
7. ไกลโคซามิโนไกลแคนที่ประกอบรวมด้วยปริมาณของหมู่Nซัลเฟเตต,2ซัลเฟเตต(NS2S) ไดแซคคาไรด์,ซึ่งปริมาณนั้นมีประสิทธิภาพในการผลิตเฮปารินที่สังเคราะห์ทางชีวภาพ7. Glycosaminoglycans composed of a quantity of N-sulfate, 2-sulfate (NS2S) disaccharide groups, the quantity of which is efficient in producing biosynthetic heparin.
8. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่7ที่ประกอบรวมด้วย4480%ของหมู่NS2S8. The glycosaminoglycan of claim 7 comprising 4480% of the NS2S groups.
9. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่7ที่ประกอบรวมด้วย5078%ของหมู่NS2S9. The glycosaminoglycan of claim 7 comprising 5078% of the NS2S groups.
10. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่7ที่ประกอบรวมด้วย5577%ของหมู่NS2S10. The glycosaminoglycan of claim 7 comprising 5577% of the NS2S group.
11. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่7ที่ประกอบรวมด้วย6076%ของหมู่NS2S11. The glycosaminoglycan of claim 7 comprising 6076% of the NS2S groups.
12. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่711,ที่ประกอบรวมอีกด้วย หมู่NSไดแซคคาไรด์12. The glycosaminoglycan of any one of claim 711, further comprising an NS-disaccharide group.
13. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่12ที่ประกอบรวมด้วย1339%ของหมู่NS13. The glycosaminoglycan of claim 12 comprising 1339% of the NS group.
14. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่12ที่ประกอบรวมด้วย1435%ของหมู่NS14. The glycosaminoglycan of claim 12 comprising 1435% of the NS groups.
15. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่12ที่ประกอบรวมด้วย1530%ของหมู่NS15. The glycosaminoglycan of claim 12 comprising 1530% of the NS group.
16. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่12ที่ประกอบรวมด้วย1626%ของหมู่NS16. The glycosaminoglycan of claim 12 comprising 1626% of the NS group.
17. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่716,ที่มีน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ยตาม น้ำหนักที่เหมาะสมในการสร้างผลิตภัณฑ์เฮปทารินสุดท้ายที่มี15,00019,000Da, เปอร์เซ็นต์ของห่วงโซ่เฮปารินที่มีน้ำหนักโมเลกุลมากกว่า24,000Daมีค่าไม่มากกว่า20% หน้า2ของจำนวน4หน้า ของทั้งหมด,และอัตราส่วนของโซ่ระหว่างน้ำหนักโมเลกุลของ8,000ถึง16,000Da ต่อเปอร์เซ็นต์โซ่ที่มีน้ำหนักโมเลกุลของ16,000ถึง24,000Daที่มีค่าไม่น้อยกว่า1.017. A glycosaminoglycan of any one of claim 716, having an average molecular weight of 15,000 to 19,000Da, the percentage of heparin chains having a molecular weight greater than 24,000Da is not more than 20%, page 2 of 4, of the total, and the ratio of chains having a molecular weight of 8,000 to 16,000Da to the percentage of chains having a molecular weight of 16,000 to 24,000Da is not less than 1.0.
18. ไกลโคซามิโนไกลแคนที่ประกอบรวมด้วยปริมาณของหมู่Nซัลเฟเตต,2ซัลเฟเตต, 6ซัลเฟเตต(NS2S6S)ไดแซคคาไรด์และหมู่Nซัลเฟเตต,6ซัลเฟเตต(NS6S) ไดแซคคาไรด์,ที่ซึ่งปริมาณนั้นมีประสิทธิภาพในการผลิตเฮปารินที่สังเคราะห์ทางชีวภาพ18. Glycosaminoglycans composed of quantities of N-sulfate,2-sulfate,6-sulfate(NS2S6S) disaccharide and N-sulfate,6-sulfate(NS6S) disaccharide, in quantities that are efficient for the production of biosynthetic heparin.
19. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่18ที่ประกอบรวมด้วย3173%ของหมู่NS2S6S ไดแซคคาไรด์และ640%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์19. The glycosaminoglycan of claim 18 comprising 3173% of NS2S6S disaccharide groups and 640% of NS6S disaccharide groups.
20. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่18ที่ประกอบรวมด้วย3670%ของหมู่NS2S6S ไดแซคคาไรด์และ632%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์20. The glycosaminoglycan of claim 18 comprising 3670% of NS2S6S disaccharide groups and 632% of NS6S disaccharide groups.
21. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่18ที่ประกอบรวมด้วย4067%ของหมู่NS2S6S ไดแซคคาไรด์และ626%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์21. The glycosaminoglycan of claim 18 comprising 4067% of NS2S6S disaccharide groups and 626% of NS6S disaccharide groups.
22. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่18ที่ประกอบรวมด้วย4364%ของหมู่NS2S6S ไดแซคคาไรด์และ622%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์22. The glycosaminoglycan of claim 18 comprising 4364% of NS2S6S disaccharide groups and 622% of NS6S disaccharide groups.
23. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่1822,ที่ประกอบรวมอีกด้วยหมู่ Nซัลเฟเตต,2ซัลเฟเตต(NS2S)ไดแซคคาไรด์และหมู่Nซัลเฟเตต(NS)ไดแซคคาไรด์23. The glycosaminoglycan of any one of claim 1822, further comprising an N-sulfate group, a NS2Sulfate (NS2S) disaccharide and an N-sulfate (NS) disaccharide group.
24. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่23,ที่ประกอบรวมด้วย027%ของหมู่NS2Sและ 122%ของหมู่NS24. The glycosaminoglycan of claim 23, comprising 027% of NS2S groups and 122% of NS groups.
25. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อถือสิทธิที่23ที่ประกอบรวมด้วย1227%ของหมู่NS2Sและ 117%ของหมู่NS25. The glycosaminoglycan of claim 23 comprising 1227% of NS2S groups and 117% of NS groups.
26. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่1825,ที่มีสมบัติน้ำหนักโมเลกุล เฉลี่ยตามน้ำหนักที่เหมาะสมในการสร้างผลิตภัณฑ์เฮปทารินสุดท้ายที่มี15,00019,000Da, เปอร์เซ็นต์ของห่วงโซ่เฮปารินที่มีน้ำหนักโมเลกุลมากกว่า24,000Daมีค่าไม่มากกว่า20% ของทั้งหมด,และอัตราส่วนของโซ่ระหว่างน้ำหนักโมเลกุลของ8,000ถึง16,000Daต่อ เปอร์เซ็นต์โซ่ที่มีน้ำหนักโมเลกุลของ16,000ถึง24,000Daที่มีค่าไม่น้อยกว่า1.026. A glycosaminoglycan of any one of claim 1825, having a weight-average molecular weight suitable for forming a final heparin product of 15,000-19,000Da, the percentage of heparin chains having a molecular weight greater than 24,000Da is not more than 20% of the total, and the ratio of chains having a molecular weight of 8,000 to 16,000Da to the percentage of chains having a molecular weight of 16,000 to 24,000Da is not less than 1.0.
27. ไกลโคซามิโนไกลแคนของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่1725,ซึ่งมิได้ประกอบด้วยหมู่3S ไดแซคคาไรด์27. The glycosaminoglycan of any one of claim 1725, which does not contain a 3S disaccharide group.
28. วิธีการสำหรับการผลิตเฮปารินที่สังเคราะห์ทางชีวภาพ,ที่ประกอบรวมด้วย a.การได้มาซึ่งไกลโคซามิโนไกลแคนที่ประกอบรวมด้วย3173%ของหมู่NS2S6S ไดแซคคาไรด์,640%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์,027%ของหมู่NS2Sและ 122%ของหมู่NS b.การบำบัดไกลโคซามิโนไกลแคนด้วยเอนไซม์,ซึ่งเป็น3Oซัลโฟทรานสเฟอเรส ไอโซฟอร์ม1(3OST1),โดยมีตัวให้ซัลเฟต หน้า3ของจำนวน4หน้า เพื่อผลิตเฮปารินที่สังเคราะห์ทางชีวภาพแบบแบช28. A method for producing biosynthetic heparin, comprising a. obtaining a glycosaminoglycan comprising 3173% of NS2S6S disaccharide groups, 640% of NS6S disaccharide groups, 0.27% of NS2S groups and 122% of NS groups; b. treating the glycosaminoglycan with an enzyme, namely 3Osulfotransferase isoform 1 (3OST1), in the presence of a sulfate donor, to produce batch-based biosynthetic heparin.
29. วิธีการของข้อถือสิทธิที่28,ที่ซึ่งในขั้นตอน(b)กลูโคซามีนเรซิดิวที่เพียงพอถูกแปลงรูปให้ เป็น3Oซัลโฟกลูโคซามีนเรซิดิวเพื่อที่แบชที่ผลิตขึ้นจะมีแอนติXaและแอนติIIa แอคทิวิตี้ที่ไม่น้อยกว่า180หน่วย/มก.และอัตราส่วนของแอนติXa/แอนติIIaเป็น 0.851.1529. The method of claim 28, wherein in step (b) sufficient glucosamine residue is converted to 3O-sulfoglucosamine residue so that the produced batch will have anti-Xa and anti-IIa activity of not less than 180 units/mg and the anti-Xa/anti-IIa ratio is 0.851.15.
30. วิธีการของข้อถือสิทธิที่28,ที่ซึ่งอัตราส่วนของแอนติXa/แอนติIIaคือ0.91.130. The method of claim 28, wherein the ratio of antiXa/antiIIa is 0.91.1.
31. วิธีการผลิตสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่สองที่ประกอบรวมด้วย4480%ของ หมู่NS2Sและ1339%ของหมู่NSวิธีการนั้นที่ประกอบรวมด้วย: a.การแปลงผันปริมาณของNอะเซทิลกลูโคซามีนเรซิดิวในเฮปาโรซานเพื่อผลิต ไกลโคซามิโนไกลแคนที่หนึ่งที่ประกอบรวมด้วย7899%ของหมู่Nซัลเฟเตต (NS)ไดแซคคาไรด์,ที่ซึ่งปริมาณของNอะเซทิลกลูโคซามีนเรซิดิวซึ่งถูกแปลง ผันสอดคล้องกับปริมาณของหมู่NSในสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่หนึ่ง และ b.การบำบัดสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่หนึ่งด้วยเอนซ์ซึ่งเป็นC5 อิพีเมอเรส(C5epi)และ2Oซัลโฟทรานสเฟอเรส(20ST),โดยมีตัวให้ซัลเฟต เพื่อผลิตสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่สอง31. A method for producing a second glycosaminoglycan intermediate comprising 4480% of NS2S groups and 1339% of NS groups, comprising: a. converting the amount of N-acetylglucosamine residues in heparosan to produce a first glycosaminoglycan comprising 7899% of N-sulfated (NS) disaccharide groups, wherein the amount of N-acetylglucosamine residues converted corresponds to the amount of NS groups in the first glycosaminoglycan intermediate, and b. treating the first glycosaminoglycan intermediate with an enzyme, namely C5 epimerase (C5epi) and 2O sulfotransferase (20ST), in the presence of a sulfate donor, to produce a second glycosaminoglycan intermediate.
32. วิธีการของข้อถือสิทธิที่31,ที่ซึ่งการแปลงผันดังกล่าวประกอบรวมด้วยการทำปฏิกิริยา เฮปทาโรแซนกับเบสและสารให้หมู่ซัลโฟเนต32. The method of claim 31, wherein said transformation comprises reacting the heptazoan with a base and a sulfonate donor.
33. วิธีการของข้อถือสิทธิที่31,ที่ซึ่งการแปลงผันดังกล่าวประกอบรวมด้วยการทำปฏิกิริยา เฮปทาโรแซนกับNดีอะเซทิเลส,Nซัลโฟทรานสเฟอเรส(NDST)33. The method of claim 31, wherein said conversion comprises reacting the heptarosane with N-deacetylase, N-sulfotransferase (NDST).
34. วิธีการสร้างสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่สามที่ประกอบรวมด้วย3173%ของ หมู่NS2S6Sไดแซคคาไรด์,640%ของหมู่NS6Sไดแซคคาไรด์,027%ของหมู่NS2S และ122%ของหมู่NS: วิธีการนั้นที่ประกอบรวมด้วย การบำบัดสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่สองที่ประกอบรวมด้วย4480%ของหมู่NS2Sและ 1339%ของหมู่NSด้วยเอนไซม์,ซึ่งเป็น6Oซัลโฟทรานสเฟอเรสไอโซฟอร์ม1และ/หรือ3 (6OST1/3),โดยมีตัวให้ซัลเฟตเพื่อเปรียบรูปสารมัธยันตร์ไกลโคซามิโนไกลแคนที่สองให้เป็น สารมัธยันตร์ไกลโคชามิโนไกลแคนที่สาม34. A method for producing a third glycosaminoglycan intermediate comprising 3173% of NS2S6S disaccharide groups, 640% of NS6S disaccharide groups, 0.27% of NS2S groups and 122% of NS groups: the method comprising treating the second glycosaminoglycan intermediate comprising 4480% of NS2S groups and 1339% of NS groups with an enzyme, which is a 6O sulfotransferase isoform 1 and/or 3 (6OST1/3), in the presence of a sulfate donor to convert the second glycosaminoglycan intermediate into a third glycosaminoglycan intermediate.
35. วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2834,ที่ซึ่งตัวให้ซัลเฟตประกอบรวมด้วยPAPS35. The method of any one of claim 2834, wherein the sulfate agent comprises PAPS.
36. วิธีการของข้อถือสิทธิที่36,ที่ซึ่งPAPSอยู่ในสารละลาย36. The method of claim 36, wherein the PAPS is in solution.
37. วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2834,ที่ซึ่งตัวให้ซัลเฟตประกอบรวมด้วยPAP และPNPS หน้า4ของจำนวน4หน้า37. The method of any one of claim 2834, wherein the sulfate agent comprises PAP and PNPS. Page 4 of 4.
38. วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2834,ที่ซึ่งการบำบัดดังกล่าวถูกกระทำโดยมีระบบ รีไซเคิลที่ประกอบรวมด้วยPAPS,PNPSและตัวเร่งปฏิกิริยา38. The method of any one of claim 2834, wherein said treatment is carried out with a recycling system comprising PAPS, PNPS and a catalyst.
39. วิธีการของข้อถือสิทธิที่38,ที่ซึ่งตัวเร่งปฏิกิริยาคือแอริลซัลโฟทรานสเฟอเรสIV(ASTIV)39. The method of claim 38, wherein the catalyst is arylsulfotransferase IV (ASTIV).
40. วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2839,ที่ซึ่งเอนไซม์นั้นอยู่ในสารละลาย40. The method of any one of claim 2839, wherein the enzyme is in solution.
41. วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2839,ที่ซึ่งเอนไซม์นั้นถูกตรึงไว้41. The method of any one of claim 2839, wherein the enzyme is immobilized.
42. วิธีการของข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่2834,ที่ซึ่งการบำบัดดังกล่าวถูกกระทำภายในสายพันธุ์ จุลชีพที่ถูกทำวิศวกรรมที่ประกอบด้วยยีนที่เข้ารหัสสำหรับNDST,C5Epi,2OST,3OST1, หนึ่งหรือสองอย่างใน6OST1หรือ6OST3,และแหล่งของPAPS42. The method of any one of claim 2834, wherein said treatment is performed within an engineered microbial strain comprising a gene coding for NDST, C5Epi, 2OST, 3OST1, one or two of 6OST1 or 6OST3, and a source of PAPS.