SU1677634A1 - Способ определени агглютинации лимфоцитов - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к иммунологическому анализу клеток. Цель изобретени  - повышение чувствительности способа и сокращение времени анализа. В исследуемую суспензию лимфоцитов перед внесением конканавалина А добавл ют НАДН в концентрации 70-300 мкг/мл или каталззу в концентрации 20-75 мкг/мл, или лерок- сидазу в концентрации 20-75 мкг/мл. Агглютинацию лимфоцитов определ ют по интенсивности светопропускзни  суспензии . По сравнению с прототипом чувствительность увеличиваетс  в 5 раз, а врем  проведени  анализа сокращаетс  в б раз.

Description

Изобретение относитс  к области имму- нохимического анализа клеток и может быть использовано дл  контрол  биотехнологических процессов и в научных исследовани х .

Целью изобретени   вл етс  повышение чувствительности способа и сокращение времени анализа.

Способ осуществл ют следующим образом .

В исследуемую суспензию клеток перед внесением конканавалина А (кон А) добавл ют НАДН в концентрации 70-300 мкг/мл или каталазу в концентрации 20- 75 мкг/мл, или пероксидазу в концентрации 20-100 мкг/мл и определ ют скорость агглютинации по изменению интенсивности светопропускани .

П р и м е р 1. Суспензию лимфоцитов готов т в фосфатно-солевом буфере Дуль- бекко, рН 7,3 с рабочей концентрацией клеток 5- 106 кл/мл и числом жизнеспособных клеток, определ емым по тесту с трипановым синим, не менее 95%. К исследуемым пробам при 37°С добавл ют НАДН в концентраци х 0, 65, 70, 100, 150 200, 250, 300, 305 мкг/мл соответственно и конканавалина А (кон А) фирмы Sigma (США) в концентрации 25 мкг/мл. Интенсивность светопропускани измер ют на лазерном нефелометре.

Добавление НАДН в исследуемую пробу увеличивает скорость агглютинации при минимальном содержании агглютинирующего агента кон А. Регистрацию светопропускани  мож.-ic проводить уже спуст  5 мин после добавлени  НАДН и кон А.

Пример 2, К суспензии лимфоцитов, приготовленной по примеру 1, добавл ют пероксидазу в концентраци х 0, 15, 20, Зи, 50, 70, 100 и 105 мкг/мл соответственно и кон А в концентрации 25 мкг/мл, затем измер ют интенсивность светопропусканил

П р и м е р 3, К суспензии лимфоцитов, приготовленной по примеру 1, добавл ют каталазу в концентраци х 0, 15. 20, ЗС 50,

С

к

XI

XJ

О

СА

-1-х

.,А

50, 60,75, 80 мкг/мл соответственно и кон А в концентрации 25 мкг/мл, затем измер ют интенсивность светопропускани .

Таким образом, предлагаемый способ обладает по сравнению с прототипом следующими преимуществами.

Снижением времени агглютинации: при минимальной концентрации агглютинирующего агента кон А добавление НАДН, ката- лазы или пероксидазы увеличивает скорость агглютинации более чем в 6 раз (агглютинаци  в предлагаемом способе регистрируетс  спуст  5 мин после добавлени  кон А, а по прототипу через 30 мин).

Большей чувствительностью: равное врем  достижени  агглютинации лимфоцитов достигаетс  в прототипе при

25 мкг/мл кон А, а в предлагаемом способе при 5 мкг/мл.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ определени  агглютинации

   лимфоцитов, включающий добавление к суспензии лимфоцитов конканавалина А с последующими инкубацией и оценкой агглютинации , отличающийс  тем, что,

   с целью повышени  чувствительности способа и сокращени  времени анализа, в суспензию лимфоцитов дополнительно перед добавлением конканавалина А внос т нико- тинамиддинуклеотид в концентрации 70300 мкг/мл или каталазу в концентрации 20-75 мкг/мл, или пероксидазу в концентрации 20-100 мкг/мл, а агглютинацию определ ют по интенсивности светопропускани  суспензии.