SK287919B6

SK287919B6 - Indolylmaleimide derivatives, method for the preparation thereof and pharmaceutical composition comprising same

Info

Publication number: SK287919B6
Application number: SK546-2003A
Authority: SK
Inventors: Rainer Albert; Nigel Graham Cooke; Sylvain Cottens; Claus Ehrhardt; Jean-Pierre Evenou; Richard Sedrani; Matt Peter Von; Jurgen Wagner; Gerhard Zenke
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2000-11-07
Filing date: 2001-11-05
Publication date: 2012-03-02
Also published as: HUP0301651A2; IL182428A0; PE20020544A1; ATE445613T1; KR100916613B1; CA2428133A1; KR20030042036A; AU2005202387B2; NZ525656A; NZ535616A; WO2002038561A8; SI1337527T1; PL361409A1; DK1337527T3; CZ307144B6; CN1253449C; DE60140201D1; NO327427B1; ECSP104578A; EP2070921A1

Abstract

It is described indolylmaleimide derivatives comprising either a substituted phenyl, naphthyl, tetrahydronaphthyl, quinazolinyl, quinolyl, isoquinolyl or pyrimidinyl residue have interesting pharmaceutical properties, e.g. in the treatment and/or prevention of T-cell mediated acute or chronic inflammatory diseases or disorders, autoimmune diseases, graft rejection or cancer.

Description

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka indolylmaleínimidových derivátov, spôsobu ich prípravy a farmaceutických kompozícii, ktoré ich obsahujú.

Doterajší stav techniky

Analogické indolylmaleínimidové deriváty sú opísané na liečenie zápalov a kardiovaskulárnych ochorení v EP 0 328 026.

Podstata vynálezu

Konkrétne sa predložený vynález týka zlúčenín všeobecného vzorca (I)

H

(I),

Rb ¥

R^a kde

R^a je H; C,.4alkyl; alebo C,.4alkyl substituovaný skupinou OH, NH2, NHC|.4alkyl alebo N(di-Ci_4alkyl)2; R^b je H; alebo Ci_4alkyl;

R je skupina vzorca (d) alebo (e)

(e) kde každá zo skupín R⁸ a R¹¹ je piperazinylový kruh prípadne N-substituovaný skupinou zvolenou z C|._ftalkylu; acylu; Cv<,cykloalkylu; C₃_₆cykloalkyl-Ci.₄alkylu; fenylu; fenyl-Ci.₄alkylu; a zvyšok vzorca (β) (β), kde

R² je C|.₄alkylén alebo C₂.₄alkylén prerušený O a Y'je OH, NH₂, NH(C[_₄alkyl) alebo N(C!.₄alkyl)₂; a je prípadne substitovaný jednou alebo viacerými skupinami zvolenými zo skupín Ci_₄alkyl; C₃.₄cykloalkyl prípadne ďalej substituovaného s C,.₄alkylom;

kde p je 1, 2 alebo 3; CF₃; halogén; OH; NH₂; -CH₂-NH₂; -CH₂-OH; piperidín-l-yl; a pyrolidín;

každá zo skupín R⁹, R¹⁰, R¹² a R¹³ je nezávisle H, halogén, C|.₄alkyl, CF₃, OH, SH, NH₂, C|.₄alkoxy, C|_₄alkyltio, NHC|.₄alkyl, N(di-Ci.₄alkyl)₂ alebo CN;

E je buď -N= a G je-CH= alebo E je -CH= a G je-N=; a kruh A je prípadne mono- aleb polysubstituovaný, pričom substituenty sú zvolené zo skupiny pozostávajúcej zo skupín halogén, OH, C,.₄alkoxy, C|.₄alkyl; NO₂, CF₃, NH₂, NHC_Malkyl, N(di-Ci.₄alkyl)₂ a CN, alebo jej soľ.

Akákoľvek alkylová skupina alebo alkylová skupina napríklad v alkoxyskupine môže byť priama alebo rozvetvená. Atómom halogénu môže byť atóm fluóru, atóm chlóru, atóm brómu alebo atóm jódu, výhodne atóm fluóru alebo atóm chlóru. Akoukoľvek arylovou skupinou môže byť fenylová skupina alebo naftylová skupina, výhodne fenylová skupina.

Ak je R^a substituovaná alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, substituent je výhodne prítomný na koncovom atóme uhlíka.

Ak je kruh A substituovaný, môže byť mono- alebo polysubstituovaný, výhodne monosubstituovaný, pričom substituent(y) je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí napríklad atóm halogénu, hydroxylová skupina, alkoxyskupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, napríklad metoxyskupina, alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, napríklad metylová skupina, nitroskupina, trifluórmetylová skupina, aminoskupina, NH-alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, skupina N(dialkyl)₂ obsahujúca v každej alkylovej časti 1 až 4 atómy uhlíka a kyanoskupina. Kruhom A môže byť napríklad skupina všeobecného vzorca

kde

R^d je atóm vodíka; alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka; alebo atóm halogénu; a

R^e je hydroxylová skupina; nitroskupina; aminoskupina; NH-alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka; alebo skupina N(dialkyl)₂ obsahujúca v každej alkylovej časti 1 až 4 atómy uhlíka.

Výhodne je R^d v polohe 1; výhodne je R^e v polohe 3.

Ak R^c má skupinu CH2 nahradenú skupinou CR*R^y, je to výhodne skupina CH2 nesúca skupinu Y. Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu existovať vo voľnej forme alebo vo forme soli, napríklad adičných solí napríklad s organickými alebo anorganickými kyselinami, napríklad kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou octovou, ak R⁸ alebo R¹¹ a/alebo R⁹, R¹⁰, R¹² alebo R¹³ obsahuje prípadne substituovanú aminoskupinu alebo heterocyklickú skupinu, ktorá môže tvoriť kyslú adičnú soľ.

Je zrejmé, že zlúčeniny všeobecného vzorca (I) môžu existovať ako optické izoméry, racemáty alebo diastereoizoméry. Napríklad kruhový atóm uhlíka nesúci substituent na heterocyklickej skupine ako R⁸ alebo R¹¹ je asymetrický a môže mať konfiguráciu D- alebo L-. Rozumie sa, že predložený vynález zahŕňa všetky enantioméry a ich zmesi. Podobné predpoklady platia vo vzťahu k východiskovým látkam obsahujúcim asymetrické atómy uhlíka, ako je uvedené skôr.

V zlúčeninách všeobecného vzorca (I) sú jednotlivo alebo v kombinácii výhodné nasledujúce významy:

1. R^a je atóm vodíka alebo metylová skupina;

2. R^b je atóm vodíka;

3. kruh A je nesubstituovaný alebo je substituovaný metylovou skupinou v polohe 7;

16. v skupine vzorca (d) je buď každá zo skupín R⁹ a R¹⁰ atóm vodíka alebo je jedna zo skupín R⁹ a R¹⁰atóm vodíka a druhá je atóm fluóru, atóm chlóru, metylová skupina, metoxyskupina alebo trifluórmetylová skupina; výhodne je R¹⁰ atóm vodíka a R⁹ je v polohe 5, 6, 7 alebo 8, výhodne v polohe 6;

17. v skupine vzorca (e) je každá zo skupín R¹² a R¹³ atóm vodíka;

18. v skupine vzorca (e) je jedna zo skupín R¹² a R¹³ atóm vodíka a druhá je atóm fluóru, atóm chlóru, metylová skupina, metoxyskupina alebo trifluórmetylová skupina;

ak E je skupina -N= a G je skupina -CH=, je výhodne R¹³ atóm vodíka a R¹² je v polohe 6 alebo 7; ak E je skupina -CH= a G je skupina -N=, je výhodne R¹³ atóm vodíka a R¹² je v polohe 7.

Predložený vynález sa týka tiež spôsobu prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca (I), ktorý zahŕňa:

a) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca (II)

(Π), kde R^a, R^b a kruh A sú rovnaké, ako je definované skôr, so zlúčeninou všeobecného vzorca (III)

R-CH₂-CO-NH₂ (III), kde R je rovnaké, ako je definované skôr,

b) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca (IV)

kde R\ R^b a A sú rovnaké, ako je definované skôr, so zlúčeninou všeobecného vzorca (V)

R - CO - CO - OCHj (V), kde R je rovnaké, ako je definované skôr; alebo

c) konverziu substituenta R⁸ alebo R¹¹ v zlúčenine všeobecného vzorca (I) na iný substituent R⁸ alebo R¹¹, a, ak je to potrebné, konverziu výslednej zlúčeniny všeobecného vzorca (I) získanej vo voľnej forme na soľ alebo naopak.

Kroky spôsobu a) a b) sa môžu vhodne uskutočňovať v prítomnosti silnej zásady, napríklad Zerc-butoxidu draselného. Ak sa použijú zlúčeniny všeobecného vzorca (III) alebo (V) obsahujúce hydroxylové skupiny, ktoré by sa nemali zúčastniť reakcie, sú také hydroxylové skupiny v chránenej forme. Skupina chrániaca hydroxylovú skupinu sa môže odstrániť pomocou spôsobov, ktoré sú odborníkom v tejto oblasti známe, na konci kondenzačného kroku a) alebo b). Krok spôsobu c) sa môže uskutočňovať podľa známych postupov: napríklad ak R⁸ alebo R¹¹ obsahuje koncovú hydroxylovú skupinu, môže byť táto hydroxylová skupina nahradená požadovanou skupinou -NR¹⁶R¹⁷ alebo -NR^I9R²⁰.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (II) sa môžu pripraviť reakciou zodpovedajúcej indolovej zlúčeniny s oxalylhalogenidom, napríklad chloridom, alebo s monoalkyloxalylchloridom za zásaditých podmienok, ako je napríklad opísané v príklade 28.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (III) alebo (V), použité ako východiskové látky, sa môžu pripraviť pomocou známych postupov, napríklad zavedením požadovaného substituenta R⁸ alebo R¹¹, v tomto poradí, do zlúčeniny (IIP) alebo (V')

R’-CH₂-CO-NH₂ (IIP)

R - CO - CO - OCH₃ (V'), kde každá zo skupín R' alebo R” je v tomto poradí skupina všeobecného vzorca (d) alebo (e), kedy každá z nich obsahuje odstupujúcu skupinu, napríklad atóm halogénu, namiesto R⁸ alebo R¹¹.

Alternatívne sa zlúčeniny všeobecného vzorca (III), kde R je skupina vzorca (a), (b) alebo (c), R¹, R⁴ alebo R⁷ je skupina vzorca (a), môžu pripraviť podľa známych postupov reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (Ilľ), kde R'je zodpovedajúca skupina vzorca (a), (b) alebo (c), kedy každá z nich obsahuje hydroxylovú skupinu namiesto R¹, R⁴ alebo R⁷, so zlúčeninou vzorca X^a-X-R^c-Y, kde X^a je odstupujúca skupina, napríklad atóm chlóru a X, R^c alebo Y sú rovnaké, ako je definované skôr.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I), kde R je skupina vzorca e), kde E je skupina -N=, G je skupina-CH= a R¹¹ je skupina -O-R^c-Y alebo skupina —S-R^c-Y, sa môžu tiež pripraviť vzájomnou reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (II), ako je definovaná skôr, so zlúčeninou všeobecného vzorca (IIP), kde R' je skupina vzorca (e')

(e'),

SK 287919 Β6 kde R¹² a R¹³ sú rovnaké, ako je definované skôr a X^a je odstupujúca skupina, napríklad atóm halogénu, a so zlúčeninou všeobecného vzorca (VI)

R Ή (VI), kde R¹¹' je skupina -O-R^c-Y alebo skupina -S-R^c-Y. Táto reakcia sa môže uskutočňovať pomocou známych spôsobov, napríklad tak, ako je opísané v príklade 28.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I), kde R je skupina vzorca (d) alebo (f), kde R⁸ alebo R¹⁴ je skupina -O-R^CY alebo -S-R^CY, sa môžu tiež pripraviť vzájomnou reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (II), ktorá je definovaná skôr, so zlúčeninou všeobecného vzorca (Ilľ), kde R” je skupina vzorca (ď) alebo (f)

kde R⁹, R¹⁰, R¹⁵ a R¹⁵' sú rovnaké, ako je definované skôr a X^a je odstupujúca skupina, napríklad atóm halogénu, a so zlúčeninou všeobecného vzorca (Vľ)

A-H (VI), kde A je skupina -O-R^c-Y alebo skupina -S-R^c-Y. Táto reakcia sa môže uskutočňovať pomocou známych postupov.

Ak nie je príprava východiskových látok konkrétne opísaná, sú zlúčeniny známe alebo sa môžu pripraviť analogicky známym spôsobom, alebo tak, ako je opísané neskôr.

Vynález je ďalej ilustrovaný pomocou príkladov 56, 65-75, 77-148, 149A, 149B a 171-196. Ostatné príklady sú porovnávacími príkladmi.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Tm = teplota miestnosti

THF = tetrahydrofurán

FCC = flash kolónová chromatografia

TBAF = tetrabutylamóniumfluorid

BINAP = 2,2'-bis(difenylfosfino)-l,ľ-binaftyl

Príklad 1

3-(1.//.-Indol-3-yl)-4-[3-(2-dimetylaminoetoxy)-5-hydroxyfenyl]-pyrol-2,5-dión

Roztok400 mg (0,58 mmol) 3-(l.//.-indol-3-yl)-4-[3-(2-metánsulfonyloxyetoxy)-5-trifenylmetoxyfenyl]-pyrol-2,5-diónu v 5 ml 33 % dimetylamínu v etanole sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zriedi etylacetátom. Získaná zmes sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa extrahuje tromi dielmi etylacetátu. Spojené organické extrakty sa premyjú nasýteným roztokom soľanky, sušia sa nad bezvodým síranom sodným, filtrujú sa a odparia sa pri zníženom tlaku. Zvyšok sa filtruje cez stĺpec siliky (70 : 30 etylacetát/metanol) a získa sa 3-(l.//.-indol-3-yl)-4-[3-(2-dimetylaminoetoxy)-5-trifenylmetoxyfenyl]-pyrol-2,5-dión, ktorý sa bez čistenia ihneď použije v nasledujúcom kroku.

K roztoku 370 mg (0,58 mmol) 3-(l.//.-indol-3-yl)-4-[3-(2-dimetylaminoetoxy)-5-trifenylmetoxyfenyl]5

-pyrol-2,5-diónu v 5 ml metanolu sa pridá 251 mg (1,46 mmol) />ara-toluénsulfónovej kyseliny. Po 2 hodinách miešania pri teplote miestnosti sa zmes zriedi etylacetátom a premyje sa nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Vodná vrstva sa extrahuje trikrát etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa premyjú nasýteným roztokom soľanky, sušia sa nad bezvodým síranom sodným, filtrujú sa a odparia pri zníženom tlaku. Zvyšok sa čistí kolónovou chromatografiou na silikagéli (7 : 3 etylacetát/metanol) a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme oranžovej peny.

'H NMR (DMSO-d,;, 400 MHz) δ 11,89 (s, 1H), 11,00 (s, 1H), 9,45 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,43 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,08 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,78 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,50 (m, 2H), 6,34 (s, 1H), 6,30 (s, 1H), 3,69 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,35 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,06 (s, 6H); MS (EI, negatívna ionizácia) m/z 390 [M-H]', (EI, pozitívna ionizácia) m/z 392 [M + H]⁺

3-(l .7í.-Indol-3-yl)-4-[3-(2-metánsulfonyloxyetoxy)-5-hydroxyfenyl]-pyrol-2,5-dión, použitý ako východisková látka, sa pripraví nasledujúcim spôsobom:

a) Metylester [3-(2-triizopropylsilyloxyetoxy)-5-hydroxyfenyl]-octovej kyseliny

Zmes 9,39 g (51,5 mmol) metylesteru (3,5-dihydroxyfenyl)octovej kyseliny (pripravenej podľa U. Eder, G. Sauer, G. Haffer, G. Neef, R. Wiechert, US 4 066 674), 11,38 g (61,8 mmol) l-bróm-2-triizopropylsilyloxyetánu a 14,50 g (51,5 mmol) uhličitanu cézneho sa mieša 1 hodinu pri teplote miestnosti a ďalšiu hodinu pri 60 °C. Na reakčnú zmes sa potom pôsobí nasýteným vodným roztokom uhličitanu sodného a extrahuje sa etylacetátom. Vrstvy sa oddelia a organická vrstva sa trikrát premyje nasýteným vodným roztokom uhličitanu sodného. Vodné vrstvy sa spoja a extrahujú sa trikrát etylacetátom. Spojené organické roztoky sa potom premyjú nasýteným roztokom soľanky, sušia sa, filtrujú sa a odparia pri zníženom tlaku. Zvyšok sa čistí kolónovou chromatografiou na silikagéli (85 : 15 hexán/etylacetát, potom 70 : 30 hexán/etylacetát a nakoniec čistý etylacetát) a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme žltého oleja.

MS (EI, negatívna ionizácia) m/z 381 [M-H]’, (EI, pozitívna ionizácia) m/z 405 [M + Na]⁺

b) 2-[3-(2-Triizopropylsilyloxyetoxy)-5-hydroxyfenyl]acetamid

Zmes 3,9 g (10,2 mmol) zlúčeniny z kroku a) a 40 ml koncentrovaného vodného amoniaku sa mieša 2 dni pri teplote miestnosti a rozpúšťadlo sa odstráni pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a filtruje sa cez stĺpec silikagélu. Filtrát sa odparí pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozpustí v malom množstve etylacetátu a pridá sa «-hexán, pričom začne kryštalizovať požadovaný produkt a po filtrácii a sušení sa získa zlúčenina uvedená v názve.

MS (EI, negatívna ionizácia) m/z 366 [M-H]’, (EI, pozitívna ionizácia) m/z 390 [M + Na]⁺

c) 2-[3-(2-Triizopropylsilyloxyetoxy)-5-trifenylmetoxyfenyl]acetamid

Roztok 1,6 g (4,38 mmol) zlúčeniny b), 3,7 g (13,27 mmol) trifenylchlórmetánu, 3,7 ml (26,69 mmol) trietylamínu a 535 mg (4,38 mmol) dimetylaminopyridínu v 50 ml dichlórmetánu sa 2 hodiny mieša pri teplote miestnosti. Pridá sa nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného a zmes sa extrahuje trikrát etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa dvakrát premyjú nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a raz nasýteným roztokom soľanky, sušia sa nad bezvodým síranom sodným, filtrujú sa a odparia sa pri zníženom tlaku. Zvyšok sa čistí kolónovou chromatografiou na silikagéli (1 : 2 «-hexán/etylacetát, potom 100 % etylacetát) a získa sa zlúčenina uvedená v názve c) vo forme bielej peny.

'H NMR (DMSO-dň, 400 MHz) δ 7,46 - 7,20 (m, 16H), 6,81 (s, 1H), 6,38 (s, 1H), 6,28 (s, 1H), 5,92 (s, 1H), 3,81 (dd, J = 4,5,4,7 Hz, 2H), 3,68 (dd, J = 4,5,4,7 Hz, 2H), 3,13 (s, 2H), 1,11- 0,91 (m, 21H); MS (EI, negatívna ionizácia) m/z 608 [M-H]', (El, pozitívna ionizácia) m/z 632 [M + Na]⁺

d) 3-(1.77.-Indol-3-yl)-4-[3-(2-triizopropylsilyloxyetoxy)-5-trifenylmetoxyfenyl]-pyrol-2,5-dión

K miešanému roztoku 2,5 g (4,12 mmol) zlúčeniny c) a 1,3 g (6,40 mmol) metylesteru kyseliny (1./7.-indol-3-yl)-oxooctovej v 18 ml tetrahydrofuránu sa pri teplote miestnosti pridá 20,6 ml (20,6 mmol) IM roztoku ŕerc-butoxidu draselného v tetrahydrofuráne. Reakčná zmes sa zahrieva 45 minút na 60 °C a potom sa nechá ochladiť na teplotu miestnosti. Pridá sa nasýtený roztok hydrogenuhličitanu sodného a získaná zmes sa zriedi etylacetátom. Vrstvy sa oddelia. Vodná vrstva sa extrahuje trikrát etylacetátom. Spojené organické roztoky sa dvakrát premyjú nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a raz nasýteným roztokom soľanky, sušia sa nad bezvodým síranom sodným, filtrujú a odparia sa vo vákuu. Zvyšok sa čistí kolónovou chromatografiou na silikagéli (2 : 1 «-hexán/etylacetát, potom 100 % etylacetát) a získa sa zlúčenina uvedená v názve d) vo forme oranžovej peny.

'H NMR (DMSO-dí, 400 MHz) δ 11,90 (s, 1H), 10,95 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,43 (d,7=8,0 Hz, 1H),7,37- 7,20 (m, 15H), 7,11 (dd, J = 7,4, 7,6 Hz, 1H), 6,74 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,33 (s, 1H), 6,16 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,07 (t, J = 2,1Hz, 1H), 3,65 (dd, J = 4,1, 5,1 Hz, 2H), 3,39 (m, 2H), 1,04 - 0,87 (m, 21H); MS (EI, negatívna ionizácia) m/z 761 [M-H], 518 [M-Ph₃C]', (EI, pozitívna ionizácia) m/z 785 [M + Na]⁺

e) 3-(1.77.-Indol-3-yl)-4-[3-(2-hydroxyetoxy)-5-trifenylmetoxyfenyl]pyrol-2,5-dión

K ochladenému (0 °C) miešanému roztoku 1.8 zlúčeniny d) v 15 ml tetrahydrofuránu sa pridá 7,1 ml (7,1 mmol) IM roztoku TBAF v tetrahydrofuráne. Po 45 minútach sa pridá nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a získaná zmes sa zriedi etylacetátom. Vrstvy sa oddelia. Vodná vrstva sa extrahuje trikrát etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa dvakrát premyjú nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a raz nasýteným roztokom soľanky, sušia sa nad bezvodým síranom sodným, filtrujú sa a odparia pri zníženom tlaku. Zvyšok sa čistí kolónovou chromatografiou na silikagéli (1 : 1 n-hexán/etylacetát) a získa sa zlúčenina uvedená v názve e) vo forme oranžovej peny.

^lH NMR (DMSO-d„, 400 MHz) δ 11,89 (s, 1H), 10,95 (s, 1H), 7,91 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8,0 Hz, 5 1H), 7,40 - 7,20 (m, 15H), 7,13 (dd, J = 7,4, 7,6 Hz, 1H), 6,77 (dd, J = 7,2, 7,8 Hz, 1H), 6,51 (s, 1H), 6,34 (s,

1H), 6,20 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,08 (t, J = 2,1 Hz, 1H), 4,66 (s, 1H), 3,37 (s, 4H); MS (EI, negatívna ionizácia) m/z 605 [M-H]’, 362 [M-Ph₃C]', (EI, pozitívna ionizácia) m/z 629 [M + Na]⁺, 645 [M + K]⁺

f) 3-(1 .H.-Indol-3-yl)-4-[3-(2-metánsulfonyloxyetoxy)-5-trifenylmetoxyfenyl]pyrol-2,5-dión

Zmes zlúčeniny e), 1,0 g (5,74 mmol) anhydridu metánsulfónovej kyseliny a 0,76 ml (9,42 mmol) pyridí10 nu v 20 ml tetrahydrofuránu sa mieša 1 hodinu pri teplote miestnosti. Pridá sa nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a získaná zmes sa zriedi etylacetátom. Vrstvy sa oddelia. Vodná vrstva sa extrahuje trikrát etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa dvakrát premyjú nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a raz nasýteným roztokom soľanky, sušia sa nad bezvodým síranom sodným, filtrujú a odparia sa pri zníženom tlaku. Zvyšok sa čistí kolónovou chromatografiou na silikagéli (1:2 «-hexán/etyl15 acetát, potom 100 % etylacetát) a získa sa zlúčenina uvedená v názve f) vo forme oranžového oleja.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (X¹)

kde R¹ a R² sú definované v tabuľke 1, sa môžu pripraviť podľa postupu opísaného v príklade 1, ale s použitím vhodných východiskových látok. Východiskové látky, ktoré neobsahujú hydroxylovú skupinu ako substituent, sa pripravia bez kroku chránenia tak, ako je uvedené v príklade 1.

Tabuľka 1

Príklad	R¹	R²	R³	R^a	M.S. dáta
2	OH	H	H	H	M⁺304
3	-O-(CH₂)₃-N(CH₃)₂	H	H	H	MH⁺ 390
4	-O-CH₂-4-pyridyl	H	H	H	MH⁺ 396
5	-O-CH₂-3-pyridyl	H	H	H	MH⁺ 396
6	-O-CH₂-CH₂-OH	H	H	H	M⁺348
7	-O-CH₂-CH₂-piperidin-1 -yl	H	H	H	MH⁺416
8	-O-CH₂-CH₂-(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	H	H	MH⁺ 431
9	-O-CH₂-CH₂-(morfolin-4-yl)	H	H	H	MH⁺418
10	-O-CH₂-CH₂-[4-(2-hydroxyetyl)pipe- razin-l-yl]	H	H	H	Mtf 461
11	-O-CH₂-CH₂-(imidazol-l -yl)	H	H	H	MH⁺399
12	-O-CH₂-CH₂-N(CH₃)₂	H	H	H	MH⁺ 376
13	-O-CH₂-CH₂-N(CH₃) ho-ch₂-ch₂	H	H	H	MH⁺ 406
14	-O-CH₂-CH₂-N(benzyl) HO-CH₂-CH₂	H	H	H	Mtf 482
15	-O-CH₂-CH₂-N(CH₂-CH₂- -OH)₂	H	H	H	MH⁺ 436
16	-O-CH₂-CH₂-(pyrolidin-1 -yl)	H	H	H	MH⁺ 402
17	-O-CH₂-( 1 -metylpiperidin-3-y 1)	H	H	H	MH⁺416
18	-CH₂-N(CH₃)₂	H	H	H	Mtf 346
19	-O-CH₂-CH₂-N(CH₃)₂	-O-CH₂- ch₃	H	H	M⁺419
20	-O-CH₂-CH₂-N(CH₃)₂	-o-ch₃	H	H	MH⁺ 406

Príklad		R²	R³	R^a	M.S. dáta
21	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	-O-CHj	H	(M+H/417
22	-(4-metylpiperazin-l -yl)	H	H	H	(M+H)⁺387
23	-(4-metylpiperazin-l -yl)	H	H	ch₃	(M+H)⁺401
24	-(4-metylpiperazin- 1-yl)	H	ch₃	H	(M+H/401
25	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	ch₃	ch₃	(M+H/415
26	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	Cl	H	(M+H/421
27	-(4-metylpiperazin-l -yl)	H	Cl	ch₃	(M+H)⁺435

Príklad 28

3-(l.//.-Indol-3-yl)-4-[3-(2-dimetylaminoetoxy)naftalen-l-yl]pyrol-2,5-dión

Suspenzia 2,10 g (4,41 mmol) 3-(l//-indol-3-yl)-4-[3-(2-metánsulfonyloxyetoxy)naftalen-l-yl]pyrol-2,5-diónu v 20 ml 33 % roztoku dimetylamínu v etanole sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí pri zníženom tlaku. Produkt sa kryštalizuje zo zmesi 1 : 1 acetonitril/voda, filtruje sa a premyje so zmesou 1 : 1 acetonitril/voda, dietyléterom a «-hexánom. Týmto postupom sa získa zlúčenina uvedená v názve vo forme červeno-oranžovej kryštalickej pevnej látky.

'H NMR (DMSO-d_Ŕ, 400 MHz) δ 11,84 (s, 1H), 11,13 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,84 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,62 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,39 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,16 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,12 (s, 1H), 6,92 (dd, J = 7,4, 7,6 Hz, 1H), 6,46 (dd, J = 7,4, 7,6 Hz, 1H), 6,25 (d, J = 8,2Hz, 1H), 4,16 (m, 2H), 2,63 (dd, J = 5,5, 5,7 Hz, 2H), 2,20 (s, 6H); ^l3C NMR (DMSO-d_Ä, 100 MHz) δ 173,3, 173,2, 156,3, 137,1, 136,6, 135,3, 132,2, 131,6, 128,6, 128,1, 127,7, 127,3, 126,4, 125,6, 124,7, 122,8, 121,9, 121,3, 120,7, 112,9, 109,2, 105,9, 66,8, 58,4, 46,4; IČ (KBr) 3244, 1698, 1629, 1597, 1220, 1039.

3-(/.H.-Indol-3-yl)-4-[3-(2-metánsulfonyloxyetoxy)naftalen-l-yl]pyrol-2,5-dión, použitý ako východisková látka, sa pripraví nasledujúcim spôsobom:

a) l-Bróm-3-(2-triizopropylsilyloxyetoxy)naftaIén

Miešaná zmes 4,38 g (19,6 mmol) l-brómnaftalen-3-olu (pripraveného podľa postupu opísaného v M.S. Newman, V. Sankaran, D.R. Olson, J. Am. Chem. Soc. 1976, 98, 3237-3242), 5,52 g (19,6 mmol) l-bróm-2-triizopropylsilyloxyetánu, 13,56 g (98,1 mmol) uhličitanu draselného a 1,45 g (3,9 mmol) tetrabutylamóniumjodidu v 50 ml dimetylformamidu sa zahrieva 4 hodiny na 60 °C. Potom sa pridá ďalších 0,55 g (2,0 mmol) l-bróm-2-triizopropylsilyloxyetánu a miešanie pokračuje ďalšiu hodinu pri 60 °C a potom sa podľa TLC analýzy zistí, že sa spotreboval všetok l-brómnaftalen-3-ol. Zmes sa nechá vychladnúť na teplotu miestnosti a pridá sa soľanka. Získaný roztok sa extrahuje etylacetátom. Organický roztok sa premyje dvakrát soľankou a spojené vodné vrstvy sa znova extrahujú etylacetátom. Organické vrstvy sa spoja, sušia sa, filtrujú a odparia pri zníženom tlaku. Olejovitý hnedý zvyšok sa čistí kolónovou chromatografiou na silikagéli (97,5 : 2,5 «-hexán/dietyléter) a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme hnedej, pevnej látky.

b) Metylester oxo-[3-(2-triizopropylsilyloxyetoxy)naftalen-l-yl]octovej kyseliny

K ochladenému (-78 °C) miešanému roztoku 1,59 g zlúčeniny z kroku a) v 15 ml tetrahydrofuránu sa pridá 2,6 ml (4,13 mmol) 1,6 M roztoku n-BuLi v «-hexáne. Získaná zmes sa mieša 1 hodinu a potom sa prikvapká roztok 886 mg (7,50 mmol) dimetyloxalátu v 5 ml tetrahydrofuránu. Po 30 minútach miešania pri -78 °C sa reakčná zmes zohreje na 0 °C a miešanie pokračuje pri tejto teptote 3 hodiny. Potom sa pridá ďalších 132 mg (1,12 mmol) dimetyloxalátu v 1 ml tetrahydrofuránu. Miešanie pokračuje 1 hodinu pri 0 °C a reakčná zmes sa rozloží pridaním nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho. Pridá sa etylacetát a vrstvy sa oddelia. Organická vrstva sa dvakrát premyje nasýteným roztokom soľanky. Vodné vrstvy sa spoja a extrahujú sa ešte raz etylacetátom. Spojené organické roztoky sa sušia, filtrujú a odparia sa pri zníženom tlaku. Zvyšok sa čistí kolónovou chromatografiou na silikagéli (95 : 5 «-hexán/dietyléter) a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme žltého oleja.

c) 3-(l./7.-Indol-3-yl)-4-[3-(2-triizopropylsilanyloxyetoxy)-naftalen-l-yl]pyrol-2,5-dión

K roztoku 1,070 g zlúčeniny z kroku b) a 0,436 g (2,50 mmol) 2-(l.//.-indol-3-yl)acetamidu v 10 ml tetrahydrofuránu sa pri teplote miestnosti pridá 12,5 ml (12,5 mmol) IM roztoku terc-butoxidu draselnému v tetrahydrofuráne. Po skončení pridávania sa zmes 4 hodiny zahrieva na 60 °C a potom sa nechá vychladnúť na teplotu miestnosti. Pridá sa nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a získaná zmes sa extrahuje etylacetátom. Organická vrstva sa dvakrát premyje nasýteným roztokom soľanky. Vodné vrstvy sa spoja a extrahujú sa etylacetátom. Spojené organické extrakty sa sušia, filtrujú sa a odparia pri zníženom tlaku. Zvyšok sa čistí kolónovou chromatografiou na silikagéli (60 : 40 «-hexán/etylacetát) a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme oranžovo-červenej pevnej látky.

'H NMR (DMSO-d_e, 400 MHz) δ 11,85 (s, 1H), 11,15 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,83 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,39 (dd, J = 7,4, 7,6 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,15 (m, 2H), 6,92 (dd, J = 7,4, 7,6 Hz, 1H), 6,44 (dd, J = 7,4, 7,8 Hz, 1H), 6,26 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,18 (m, 2H), 4,03 (dd, J = 4,3, 4,5 Hz, 2H), 1,16 - 0,92 (m, 21H); IČ (KBr) 3346, 1710 cm¹; MS (El, negatívna ionizácia) m/z 553 [M-H]', (El, pozitívna ionizácia) m/z 574 [2M + K + H]²⁺, 577 [M + Na]⁺

d) 3-(l.//.-Indol-3-yl)-4-[3-(2-hydroxyetoxy)naftalen-l-yl]pyrol-2,5-dión

K ochladenému (0 °C) miešanému roztoku 807 mg (1,45 mmol) zlúčeniny z kroku c) v 10 ml tetrahydrofuránu sa pridá 4,4 ml (4,40 mmol) 1 M roztoku TBAF v tetrahydrofuráne. Po 1 hodine sa pridá nasýtený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a získaná zmes sa extrahuje etylacetátom. Organická vrstva sa dvakrát premyje soľankou. Vodné vrstvy sa spoja a extrahujú sa etylacetátom. Spojené etylacetátové roztoky sa sušia, filtrujú a odparia sa pri zníženom tlaku. Zvyšok sa čistí kolónovou chromatografiou na silikagéli (etylacetát) a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme červeno-oranžovej pevnej látky.

'H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 11,85 (s, 1H), 11,15 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,84 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,4 Ηζ,ΙΗ), 7,45 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 7,2, 7,6 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,0 Ηζ,ΙΗ), 7,15 (m, 2H), 6,92 (dd, J = 7,4, 7,6 Hz, 1H), 6,47 (dd, J = 7,4, 7,8 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,92 (t, J = 5,5 Hz,

1H), 4,11 (m, 2H), 3,76 (m, 2H); IČ (KBr) 1705 cm¹; MS (El, negatívna ionizácia) m/z 397 [M-H], (El, pozitívna ionizácia) m/z 418 [2M + K + H]²⁺, 421 [M + Na]⁺

e) 3-(1.//.-Indol-3-yl)-4-[3-(2-metánsulfonyloxyetoxy)naftalen-l-yl]pyrol-2,5-dión

Zmes 1,99 g (5,00 mmol) zlúčeniny z kroku d), 2,18 g (12,50 mmol) anhydridu metánsulfónovej kyseliny a 1,6 ml (19,80 mmol) pyridínu v 25 ml tetrahydrofuránu sa 1 hodinu zahrieva na 60 °C. Reakčná zmes sa nechá ochladiť na teplotu miestnosti a filtruje sa. Filtrát sa odparí pri zníženom tlaku. Produkt sa potom kryštalizuje z dietyléteru, filtruje sa a premyje sa jedným dielom dietyléteru, dvoma dielmi vody a ďalším dielom dietyléteru. Pomocou tohto postupu sa získa zlúčenina uvedená v názve vo forme červeno-oranžových kryštálov.

'H NMR (DMSO-drt, 400 MHz) δ 11,83 (s, 1H), 11,14 (s, 1H), 7,96 (d, J = 2,5 Hz, 1H),7,84 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 7,4, 7,6Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,16 (m, 2H), 6,92 (dd, J = 7,4, 7,8 Hz, 1H), 6,46 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,28 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,57 (dd, J = 3,9, 4,1 Hz, 2H), 4,39 (m, 2H), 3,21 (s, 3H); MS (El, negatívna ionizácia) m/z 475 [M-H]‘, (El, pozitívna ionizácia) m/z 499 [M + Na]⁺

Zlúčeniny vzorca (X²)

(X²), kde R³ je definované v tabuľke 2, sa môžu s použitím vhodných východiskových látok pripraviť podľa postupu opísaného v príklade 28.

Tabuľka 2

Príklad	R³	R	M.S. dáta
29	-0-CH₂-CH₂-(pyrolidin-1 -yl)	H	MH⁺452
30	-O-CH₂-CH₂-N(CH₃) ho-ch₂-ch₂	H	MH⁺ 456
31	-O-CH₃	H	(M-H)’367
32	OH	H	(M-H)'353
33	-O-(CH₂)₃-N(CH₃)₂	H	MH⁺ 440
34	-O-(CH₂)₂-N(CH₃)-cyklopropyl	H	MH⁺ 452
35	-O-(CH₂)₂-N(CH₃)-cyklopropyl	ch₃	MH⁺ 466
36	-O-(CH₂)₂-NH-cyklopropyl	ch₃	(M+H)⁺ 452

SK 287919 Β6

Príklad	R^J	R	M.S. dáta
37	-och₂^<3 nhch₃	H	(M+H)⁺ 438,2 (M-H)'436,3
38	-°^CH2- NHCH₃	ch₃	(M+H)⁺ 452,3
39	(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	(M+H)⁺ 437 (M-H)'435
40	(4-metylpiperazin-l-yl)	ch₃	(M+H)⁺ 451
41	1 -piperazinyl	h	(M+H)⁺ 423 (M-H)'421
42	1-piperazinyl	ch₃	(M+H)⁺ 437 (M-H) 435
43	-(4-formylpiperazin-1 -yl)	ch₃	(M+H)⁺ 465 (M+Na)⁺487
44	O-(CH2)2-(piperidin-1 -yl)	H	(M+H)+ 466
45	O-(CH₂)₂-N(CH₃)(«-Bu)	H	(M+H)+ 468
46	O-(CH₂)2-NH-cyklohexyl	H	(M+H)+ 480
47	O-(CH2)2-(4-metylpiperidin-1 -yl)	H	(M+H)+ 480
48	O-(CH₂)₂-(rac-2-metylpyro 1 idin-1 -y 1)	H	(M+H)+ 466
49	O-(CH₂)2-(4-hydroxypiperidin-l—yl)	H	(M+H)+ 482
50	O-(CH2)2-(>5)-2-hydroxymetylpyrolidin-1 -yl)	H	(M+H)+ 482
51	O-(CH2)2-[4-(piperidin-1 -yljpiperidin-1 -yl]	H	(M+H)+ 549
52	O-(CH₂)2-(rac-3 -hydroxypiperidin-1 -yl)	H	(M+H)+ 482

Zlúčeniny z príkladov 48 a 52, ktoré sú racemáty, sa môžu tiež pripraviť vo forme čistých cis alebo trans enantiomérov s použitím zodpovedajúcich cis alebo trans východiskových látok. To isté platí pre cis izomér z príkladu 50; môže sa tiež pripraviť ako racemát alebo ako čistá trans forma.

Príklad 53

3-[3-(2-hydroxyetoxy)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]-4-(l.H.-indol-3-yl)-pyrol-2,5-dión

HO

3-[3-(2-íerc-Butoxyetoxy)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]-4-(l./7.-indol-3-yl)pyrol-2,5-dión reaguje s 5 ml zmesi 95/5 TFA/H₂O 15 minút pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa naleje do ľadovo studeného nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a získaná suspenzia sa extrahuje etylacetátom. Čistá zlúčenina uvedená v názve sa získa vo forme oranžového prášku po čistení chromatografiou na silikagéli elúciou zmesi cyklohexán/etylacetát (2/1). MH⁺: 403 (ES⁺).

'H NMR (400 MHz, DMSO-d„) δ 11,84 (šs, 1H), 10,96 (s, 1H), 7,95 (d, 1H, J = 1,47 Hz), 7,37 (d, 1H, J = = 8,32 Hz), 7,03 (t, 1H, J = 7,34 Hz), 6,72 (d, 1H, J = 2,44 Hz), 6,67 (t, 1H, J = 7,33 Hz), 6,62 (d, 1H, J = 2,69 Hz), 6,45 (d, 1H, J = 8,07 Hz), 4,77 (t, 1H, J = 5,38 Hz), 3,87 (m, 2H), 3,62 (kv, 2H, J = 5,38 Hz), 2,67 (m, 2H), 2,34 (m, 1H), 2,06 (m, 1H), 1,59 (m, 1H), 1,49 (m, 1H), 1,36 (m, 2H)

3-[3-(2-ŕerc-Butoxyetoxy)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]-4-(1.7ŕ.-indol-3-yl)pyrol-2,5-dión, použitý ako východisková látka, sa pripraví nasledujúcim spôsobom:

a) 8-Bróm-6-acetyltetralín

K 9,9 g (75 mmol) chloridu hlinitého sa za mechanického miešania pri teplote miestnosti prikvapká 5,25 g (30 mmol) 6-acetyltetralínu. Po 20 minútach pri 70 °C sa reakčná zmes ochladí na teplotu miestnosti a reaguje v priebehu 30 minút s malým množstvom brómu (5,76 g [= 1,86 ml], 36 mmol). Potom sa zmes ďalších 60 minút mieša pri 85 °C. Po ochladení na teplotu miestnosti a pridaní 450 ml ľadovej vody sa zlúčenina extrahuje dichlórmetánom a čistí sa chromatografiou na silikagéli elúciou zmesi cyklohexán/etylacetát 2/1 až 1/1 a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme svetložltej pevnej látky.

b) 8-Brómtetralin-6-ylacetát

7,28 g (28,75 mmol) zlúčeniny z kroku a) sa rozpustí v 60 ml dichlórmetánu. Pri teplote miestnosti sa pridajú 2 ekvivalenty m-chlórperbenzoovej kyseliny (11,7 g, Fluka 25800, 70 %) a po pridaní 5 g síranu sodného sa reakčná zmes reaguje s 250 μΐ (2,88 mmol) trifluórmetánsulfónovej kyseliny. Reakčná zmes sa mieša 16 hodín pri teplote miestnosti. Po kontrole pomocou tenkovrstvovej chromatografie sa k reakčnej zmesi pridá 2,25 g (11 mmol) zw-chlórperbenzoovej kyseliny, 2 g síranu sodného a 50 pl (0,57 mmol) trifluórmetánsulfónovej kyseliny (dvakrát v priebehu 6 hodín). Organická vrstva sa filtruje a extrahuje sa trikrát vodným roztokom tiosíranu sodného. Zlúčenina sa čisti chromatografiou na silikagéli elúciou zmesi cyklohexán/etylacetát 2/1 až 1/1 a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme bezfarebného oleja.

c) 5,6,7,8-Tetrahydro-4-bróm-2-nafitol

6,1 g (22,66 mmol) zlúčeniny z kroku b) sa pri teplote miestnosti pridá k 200 ml metanolu. Pridá sa 22,7 ml IN roztoku metoxidu sodného v metanole a zmes sa mieša 15 minút. K reakčnej zmesi sa pridáva Amberlite IR-120 (H⁺-forma), až kým nie je zmes neutrálna. Iionomenič sa odfiltruje, rozpúšťadlo sa odparí a surový produkt sa izoluje bez akéhokoľvek ďalšieho čistenia vo forme svetložltej pevnej látky.

d) 2-(2-terc-Butoxyetoxy)-4-bróm-5,6,7,8-tetrahydronaftalén

2,8 g (12,33 mmol) zlúčeniny z kroku c) sa pridá pri teplote miestnosti k 100 ml tetrahydrofuránu. Pridá sa 16,82 g (64,13 mmol) trifenylfosfínu a po 10 minútach 11,66 ml (59,2 mmol) diizopropylazodikarboxylátu a zmes sa mieša 14 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa čistí chromatografiou na silikagéli elúciou čistým cyklohexánom až cyklohexán/metylénchlorid (1/1) a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme svetložltej pevnej látky.

e) Metylester 3-(2-/erc-butoxyetoxy)-5,6,7,8-tetrahydronaťtalen-l-yl-oxooctovej kyseliny

2,61 g (7,96 mmol) zlúčeniny z kroku d) sa pri teplote miestnosti rozpustí v 70 ml suchého tetrahydrofuránu a ochladí sa na -70 °C. K reakčnej zmesi sa v inertnej atmosfére (argón) prikvapká 5,5 ml (8,76 mmol) 1,6 M butyllítia v hexáne. K reakčnej zmesi sa pridá roztok 1,9 g (15,92 mmol) dimetyloxalátu v 5 ml suchého tetrahydrofuránu a reakčná zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti. Reakčná zmes sa naleje do roztoku pufra Titrisol a extrahuje sa etylacetátom. Organická vrstva sa suší a zlúčenina sa čistí chromatografiou na silikagéli elúciou zmesi cyklohexán/metylénchlorid 1/2 a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme bielej, pevnej látky.

f) 3-[3-(2-terc-Butoxyetoxy)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]-4-(l.//.-indol-3-yl)pyrol-2,5-dión g (2,99 mmol) zlúčeniny z kroku e) a 270 mg (1,49 mmol) indol-3-acetamidu sa pridá k 10 ml tetrahydrofuránu a zahrieva sa do varu pod spätným chladičom. V atmosfére argónu sa prikvapká 6 ml (6 mmol) IM roztoku Zerc-butoxidu draselného v tetrahydrofuráne a reakčná zmes sa 1 hodinu zahrieva do varu pod spätným chladičom. Reakčná zmes sa zriedi etylacetátom a extrahuje sa nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva sa suší a zlúčenina sa izoluje vo forme oranžovej pevnej látky po odstránení rozpúšťadla bez akéhokoľvek ďalšieho čistenia.

Príklad 54

3-[3-(2-Dimetylaminoetoxy)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]-4-(l.//-indol-3-yl)pyrol-2,5-dión

380 mg (0,94 mmol) zlúčeniny z príkladu 53 sa suspenduje v 20 ml metylénchloridu obsahujúceho 225 μΐ (2,8 mmol) pyridínu. Po pridaní 393 mg (2,26 mmol) anhydridu metánsulfónovej kyseliny sa reakčná zmes 14 hodín mieša pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa extrahuje IN kyselinou chlorovodíkovou vo vode, organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozpustí v tetrahydrofuráne a potom reaguje s 2,5 ml vodného roztoku dimetylamínu. Po 96 hodinách sa rozpúšťadlo odparí a po chromatografii na silikagéli elúciou zmesi metanol/etylacetát 1/1 sa získa čistá zlúčenina uvedená v názve vo forme oranžového prášku. MH⁺: 430(ES⁺) ’H NMR (400 MHz, DMSO-d„) δ 11,87 (šs, IH), 10,99 (s, IH), 7,98 (t, IH, J = 0,40 Hz), 7,39 (d, IH, J = = 8,07 Hz), 7,05 (t, IH, J= 7,34 Hz), 6,75 (d, IH, J = 2,44 Hz), 6,68 (t, IH, J = 7,33 Hz), 6,63 (d, IH, J = 2,69 Hz), 6,44 (d, IH, J = 8,07 Hz), 3,98 (m, 2H), 2,70 (m, 2H), 2,63 (m, 2H), 2,40 (m, IH), 2,23 (s, 6H), 2,12 (m, IH), 1,63 (m, IH), 1,53 (m, IH), 1,41 (m, 2H)

Príklad 55A

3-(l.//.-Indol-3-yl)-4-[3-(4-metylpiperazin-l-yl)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]pyrol-2,5-dión

Zlúčenina uvedená v názve sa získa kondenzáciou 2-[3-(4-metylpiperazin-l-yl)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]-acetamidu s metylesterom (l.//.-indol-3-yl)oxooctovej kyseliny analogickým spôsobom, ako je opísané v príklade 53 (krok f).

Míľ: 441 (ES⁺)

Príklad 55B

3-(l-Metyl-l.//.-indol-3-yl)-4-[3-(4-metylpiperazin-l-yl)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]pyrol-2,5-dión Zlúčenina uvedená v názve sa pripraví kondenzáciou 2-[3-(4-metylpiperazin-l-yl)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]acetamidu s metylesterom kyseliny (1-metyl-1.//.-indol-3-yl)oxoocto vej analogickým spôsobom, ako je opísané v príklade 53 (krok f).

MH⁺: 455 (ES⁺)

2-[3-(4-Metylpiperazin-l-yl)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]-acetamid, použitý ako východisková látka, se pripraví nasledujúcim spôsobom:

a) 5-Bróm-7-metoxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalén g (30,8 mmol) 5,6,7,8-tetrahydro-4-bróm-2-naftolu, krok c) v príklade 29 sa rozpustí v 100 ml suchého acetónu a reaguje s 15 g (0,11 mol) K₂CO₃ a 7,25 ml (0,13 mmol) metyljodidu. Reakčná zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Po filtrácii a odstránení rozpúšťadla sa zvyšok čistí chromatografiou na silikagéli elúciou zmesi metylénchlorid/cyklohexán 1/1 a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme bielej, pevnej látky.

b) Etylester (3-metoxy-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl)octovej kyseliny

K roztoku 2,75 g (11,4 mmol) zlúčeniny z kroku a) v 110 ml dimetylformamidu a 3,4 g (14,8 mmol) bromidu zinočnatého sa pridá 5,5 g (14,8 mmol) a-(tributylstanyl)acetátu a dichlórbis(tri-o-tolylfosfín)paládium. Reakčná zmes sa mieša pod argónom cez noc pri 80 °C. Dimetylformamid sa odstráni pri zníženom tlaku a surový zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a extrahuje sa 6 % vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva sa suší, odparí a čistí sa kolónovou chromatografiou na silikagéli elúciou zmesi metylénchlorid/cyklohexán 1/1 a získa sa čistá zlúčenina uvedená v názve.

c) Etylester (3-hydroxy-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl)octovej kyseliny

1,11 g (7,5 mmol) DL-metionínu sa rozpustí v 9 ml metánsulfónovej kyseliny a mieša sa cez noc pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa naleje do ľadovo studeného nasýteného vodného roztoku chloridu sodného a trikrát sa extrahuje dichlórmetánom. Organická vrstva sa suší, odparí sa a čistí chromatografiou na silikagéli elúciou zmesi metylénchlorid/metanol 95/5 a získa sa čistá zlúčenina uvedená v názve.

d) Etylester (3-trifluórmetánsulfonyloxy-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl)octovej kyseliny

K roztoku 940 mg (4 mmol) zlúčeniny z kroku c) v 2 ml pyridínu sa pri 0 °C pridá 720 μΐ (4,4 mmol) anhydridu trifluórmetánsulfónovej kyseliny. Reakčná zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa naleje do ľadovo studenej vody a extrahuje sa trikrát dietyléterom. Organická vrstva sa suší, odparí a čistí sa chromatografiou na silikagéli elúciou metylénchloridom a získa sa zlúčenina uvedená v názve.

e) Etylester [3-(4-metylpiperazin-l-yl)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]octovej kyseliny

K roztoku 0,5 g (1,36 mmol) zlúčeniny z kroku d) v 10 ml suchého tetrahydrofuránu sa v atmosfére argónu pridá 405 mg (1,90 mmol) fosforečnanu draselného, 180 μΐ (163 mmol) N-metylpiperazínu, 60 mg (0,07 mmol) tris(dibenzylidénacetónacetón)dipaládia(O) a 21 mg (0,07 mmol) 2-(di-/erc-butylfosfmo)bifenylu. Reakčná zmes sa mieša 24 hodín v atmosfére argónu pri 80 °C. Po filtrácii sa dimetylformamid odparí pri zníženom tlaku a surový zvyšok sa čistí chromatografiou na silikagéli elúciou zmesi metylénchlorid/metanol 95/5 a získa sa čistá zlúčenina uvedená v názve.

'H NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 6,68 (d, IH, J = 2,44 Hz), 6,59 (d, IH, J = 2,20 Hz), 4,15 (kv, 2H, J = 7,34 Hz), 3,55 (s, 2H), 3,17 (t, 4H, J = 5,13 Hz), 2,75 (t, 2H, J = 5,87 Hz), 2,60 (t, 2H, J = 6,11 Hz), 2,57 (t, 4H,

J = 4,90 Hz), 2,35 (s, 3H), 1,77 (m, 4H), 1,25 (t, 3H, J = 7,10 Hz)

f) 2-[3-(4-Metylpiperazin-l-yl)-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-l-yl]acetamid

Roztok 394 mg (1,2 mmol) zlúčeniny z kroku e) v 4 molámej zmesi metanol/NH₃ sa prevedie do autoklávu a 48 hodín sa udržiava pri 120 °C. Po ochladení sa reakčná zmes zahustí a surový zvyšok sa čistí chromatografiou na silikagéli elúciou zmesi metylénchlorid/metanol 90/105 a získa sa čistá zlúčenina uvedená v názve.

Príklad 56

3-(1.7f.-Indol-3-yl)-4-[2-(4-metylpiperazin-l-yl)chinazolin-4-yl]pyrol-2,5-dión

213 mg (0,75 mmol) 2-[2-(4-metylpiperazin-l-yl)chinazolin-4-yl]acetamidu a 167 mg (1,1 ekvivalentu) metylesteru 3-indolglyoxylovej kyseliny sa rozpustí v 15 ml tetrahydrofuránu. K suspenzii sa pri 0 °C prikvapká 2,25 ml (3,0 ekvivalentu) 1,0 M roztoku Zerc-butoxidu draselného 1,0 M v tetrahydrofúráne. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Pridá sa druhý podiel 30 mg (0,2 ekvivalentu) glyoxalátu a 0,5 ml terc-butoxidu draselného a zmes sa mieša 24 hodín pri teplote miestnosti. Pridá sa etylacetát a organická fáza sa premyje 1,0 M vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a soľankou. Organická fáza sa suší nad bezvodým síranom sodným a odparí sa. Zvyšok sa čistí pomocou FCC (Et₂O/MeOH/vodný NH₄OH 90 : 10 : 1) a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme oranžovo-červeného prášku.

ESI-MS: 437 [M-H]⁺;

'H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 2,13 (s, 3H), 2,16 (m, 4H), 3,69 (m, 4H), 6,35 (d, J = 8,0 Hz, IH), 6,64 (dd,

J = 7,8, 7,4 Hz, IH), 7,02 (dd, J = 7,6, 7,4 Hz, IH), 7,10 (dd, J = 7,8, 7,2 Hz, IH), 7,38 (d, J = 8,2 Hz, IH), 7,53 (d, J =8,4 Hz, IH), 7,63-7,73 (m, 2H), 8,13 (s, IH), 11,29 (šs, IH), 12,01 (šs, IH).

Získaná zlúčenina sa rozpustí v etanole a pridá sa 1,2 ekvivalentu kyseliny octovej. Rozpúšťadlo sa odparí pri zníženom tlaku a získa sa očakávaný produkt vo forme acetátu. 2-[2-(4-Metylpiperazin-l-yl)chinazolin-4-yl]acetamid

použitý ako východisková látka, sa získa nasledujúcim spôsobom:

a) K suspenzii 10,0 g (61,7 mmol) 177,37/-chinazolin-2,4-diónu v 37,0 ml POC1₃ sa prikvapká 7,8 ml (1,0 ekvivalentu) Ν,Ν-dimetylanilínu. Zmes sa zahreje na 110 °C a udržiava sa za varu pod spätným chladičom 35 hodín. Roztok sa ochladí na teplotu miestnosti a naleje sa na zmes ľadu a vody. Zrazenina sa odfiltruje a premyje sa vodou. Pevná látka sa rozpustí v etylacetáte a premyje sa vodou a soľankou. Organická fáza sa suší nad síranom sodným a odparí sa, pričom sa získa surový 2,4-dichlórchinazolín, ktorý sa môže rekryštalizovať zo zmesi toluén/pentán.

EI-MS: 198 [M-H]⁺, 163 [M-C1]⁺;

b) 5,08 ml (2,0 ekvivalentu) etylacetoacetátu rozpusteného v 25 ml tetrahydrofuránu sa pri 0 °C prikvapká k suspenzii 1,04 g (1,3 ekvivalentu) 60 % hydridu sodného v 25 ml tetrahydrofuránu. Roztok sa mieša 30 mi13 nút pri O °C a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa rozpustí v 125 ml toluénu a pridá sa 4,0 g (20,0 mmol) 2,4-dichlórchinazolínu. Zmes sa mieša 30 minút za varu pod spätným chladičom a toluén sa odparí. Olejovitý zvyšok sa rozpustí v 80 ml 25 % vodného roztoku hydroxidu amónneho a mieša sa cez noc pri teplote miestnosti. Všetky prchavé zložky sa odparia a zvyšok sa prevedie do 80 ml etylacetátu. Suspenzia sa zahrieva 15 minút do varu pod spätným chladičom, ochladí sa na 0 °C a filtruje, pričom sa získa 2-(2-chlórchinazolin-4-yljacetamid vo forme bielej, pevnej látky.

EI-MS: 221 [M]⁺ 178; IČ (KBr) v_max 3302, 3138,1681, 1542, 1388,1287, 948, 771;

'H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 4,21 (s, 2H), 7,24 (šs, 1H), 7,75-7,84 (m, 2H), 7,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 8,4, 7,5 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 8,4 Hz, 1H)

c) 221 mg (1,0 mmol) 2-(2-chlórchinazolin-4-yl)acetamidu sa rozpustí v 2,0 ml l-metyl-2-pyrolidinónu a pridá sa 555 μΐ (5,0 ekvivalentu) N-metylpiperazínu. Zmes sa zahrieva 45 minút na 50 °C. Pridá sa etylacetát a suspenzia sa filtruje a získa sa 2-[2-(4-metylpiperazin-l-yl)chinazolin-4-yl]acetamid vo forme bielej, pevnej látky.

ESI-MS: 284 [M-H]⁺, 241;

'H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 2,24 (s, 3H), 2,40 (m, 4H), 3,86 (m, 4H), 3,98 (s, 2H), 7,12 (šs, 1H), 7,24 (dd, J = 8,2, 7,5 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,63-7,72 (m, 2H), 7,95 (d, J = 8,2 Hz, 1H);

Zlúčeniny vzorca (X³)

kde R¹, R⁵, R⁶ a R⁷ sú definované v tabuľke 3, sa môžu s použitím vhodných východiskových látok pripraviť podľa postupu opísaného v príklade 56. Zlúčeniny sa môžu tiež, ak je to vhodné, previesť na formu acetátu tak, ako je to opísané pre zlúčeninu z príkladu 56.

Tabuľka 3

Pr.	R⁵	R¹	R^Ď (poloha 7 alebo 8)	R⁷ (poloha 5 alebo 6)	M.S. dáta
57	-och₃	H	H	H	M⁺370 (EI)
58	-N(CH₃)₂	H	H	H	M⁺383 (EI)
59	-O-CH₂-CH₂-N(CH₃)₂		H	H	(M-H)‘ 426 (ES)
60	-o-ch₂-ch₂-oh	H	H	H	(M-H)’ 399 (ES)
61	-HN-CH₂-CH₂-N(CH₃)₂	H	H	H	(M-H)' 425 (ES)
62	-O-( 1 -metylpiperidin-4-yl)	H	H	H	(M-H)' 452 (ES')
63	-O-(CH₂)₃-N(CH₃)₂	H	H	H	(M+H/442 (ES⁺)
64	-N(CH₃)-CH₂-CH₂-N(CH₃)₂	H	H	H	(M-H)' 439 (ES’)
65	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	7-OCH₃	H	(M-H)’ 467 (ES)
66	-(4-metylpiperazin-l-yl)	H	8-CH₃	H	(M-H)’ 451 (ES')
67	-(4-mety lp iperazin-1 -y 1)	H	7-OCH₃	6-OCH₃	(M-H)' 497 (ES')
68	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	H	6-C1	(M-H)' 471 (ES)
69	-(4-metylpiperazin-1 -y 1)	H	7-C1	H	(M-H)' 471 (ES)

Pr.	R⁵	R¹	R^Ď (poloha 7 alebo 8)	R^z (poloha 5 alebo 6)	M.S. dáta
70	-1 -piperazinyl	H	H	H	(M-H)‘ 423 (ES)
71	morfolin-4-yl	H	H	H	(M-H)^- 424 (ES)
72	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	H	6-CH₃	(M-H)' 451 (ES’)
73	-[4-(2-hydroxyetyl)piperazin-1 -yl]	H	H	H	(M-H)’ 467 (ES)
74	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	H	6-F	M⁺456 (El)
75	(cis)3,5-dimetyl-1 -piperazinyl	H	H	H	(M-H)' 451 (ES)
76	-4-N-(pyridin-4-yl)-1 -piperazinyl	H	H	H	(M-H)’ 500 (ES’)
77	(rac .)3 -metylpiperazin-1 -yl	H	H	H	(M-H)' 437 (ES)
78	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	H	6-OCH₃	(M-H)’ 467 (ES^-)
79	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	H	6-OH	MH+ 455
80	-(4-benzy lpiperazin-1 -yl)	H	H	H	MH+515
81	trans-f 5-dimetyl-1 -piperazinyl	H	H	H	MH+ 453
82	-[4-(2-dimetylaminoetyl)piperazin-1 -yl]	H	H	H	MH+ 496
83	4-fenylpiperazin-l -yl	H	H	H	(M-H)’499
84	4-ethyl-piperazin-l -yl	H	H	H	MH⁺ 453
85	4-izopropylpiperazin-1 -yl	H	H	H	M⁺466
86	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	H	7-F	H	MH⁺ 457
87	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	CH₃	H	6-C1	MH⁺ 487
88	1-piperazinyl	CH₃	H	6-C1	MH⁺ 473
89	(cz.s)3,5 -dimety 1-piperazin-1 -y 1	H	H	6-C1	MH+ 487
90	(cz,s)3,5-dimetyl-1 -piperazinyl	ch₃	H	6-C1	MH+ 501
91	(cz,s)3,4,5 -trimetyl-1 -piperazinyl	H	H	6-C1	MH+ 501
92	(cz,s)3,4,5-trimetyl-1 -piperazinyl	ch₃	H	6-C1	MH⁺515
93	-(4-metylpiperazin-1-yl)	H	H	5-CH₃	MH⁺ 453
94	-(4-ety lpiperazin- 1-yl)	H	H	6-C1	MH⁺ 487
95	-(4-izopropyl-1 -piperazin-1 -yl)	H	H	6-C1	MH⁺ 501
96	-(4-etylpiperazin-1 -yl)	ch₃	H	6-C1	MH⁺ 501
97	-(4-izopropylpiperazin-1 -yl)	ch₃	H	6-C1	MH⁺515
98	-(4-cyklopropylpiperazin-1 -yl)	H	H	H	MH⁺ 465
99	-(4,7-diaza-spiro-[2,5]okt-7-yl)	H	H	H	MH⁺ 451, MNa⁺ 473
100	-(4,7-diaza-spiro- [2,5 ]okt-7-yl)	ch₃	H	H	MH⁺ 465, MK⁺ 503
101	-(4-cyklopropylpiperazin-1 -yl)	ch₃	H	H	MH⁺ 479
102	-(4-metyl-4,7-diaza-spiro[2,5]okt-7-yl)	H	H	H	MH⁺ 465
103	-(4-mety 1-3,3 -diéty lpiperazin-1 -yl)	H	H	H	MH⁺ 495
104	-(4-metyl-4,7-diazaspiro[2,5]okt-7-yl)	ch₃	H	H	MH⁺ 479; MNa⁺501
105	-(4-metyl-3,3 -dietylpiperazin-1 -yl)	ch₃	H	H	MH⁺ 509
106	-4-( 1 -metylcyklopropyl)-1 -piperazinyl	H	H	H	MH⁺ 479
107	-4-( 1 -metylcyklopropyl)-1 -piperazinyl	ch₃	H	H	MH⁺ 493; MNa⁺515
108	1-piperazinyl	ch₃	H	H	MH⁺ 439
109	-(4-metylpiperazin- 1-yl)	ch₃	H	H	(M+H)⁺ 453
110	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	2-hydroxy- etyl	H	6-C1	(M+H)⁺ 517
111	(4-N-metyl-1 -homopiperazinyl)	H	H	6-C1	(M+H)⁺ 487
112	-(4-í-butylpiperazin-1 -yl)	H	H	6-C1	(M+H)⁺515

Pr.	R⁵	R¹	R⁶ (poloha 7 alebo 8)	R⁷ (poloha 5 alebo 6)	M.S. dáta
113	3 -metylpíperazin- 1-yl	ch₃	H	6-C1	(M+H)⁺ 487
114	-(4-ŕ-buty lpiperazin- 1-yl)	ch₃	H	6-C1	(M+H)⁺519
115	-(4-metyl-4,7-diaza-spiro[2,5]okt-7-yl)	ch₃	H	6-C1	(M+H)⁺ 499
116	3 -Ä-mety Ip iperazin-1 -yl	ch₃	H	6-C1	(M+H)⁺ 487
117	3 -S- mety lpiperazin-1 -yl	ch₃	H	6-C1	(M+H)⁺ 487
118	3,3 -dimetyl-1 -piperazinyl	ch₃	H	6-C1	(M+H)⁺ 501
119	3,3 -dimetyl-1 -piperazinyl	H	H	6-C1	(M+H)⁺ 487
120	3,3 -dimetyl-1 -piperazinyl	ch₃	H	H	(M+H)⁺ 467
121	3,3-dimetyl-l-piperazinyl	H	H	H	(M-H)' 451
122	-(4-metylpiperazin-1 -yl)	2-(CH₃)₂N- etyl	H	6-C1	(M+H)⁺ 544

Zlúčenina z príkladu 77, ktorá je racemátom, sa môže tiež pripraviť vo forme čistého cis alebo trans enantioméru s použitím zodpovedajúcej cis alebo trans východiskovej látky. To isté platí pre cis izoméry z príkladu 75, 89 a 92 a trans izomér z príkladu 81; môžu sa tiež pripraviť ako racemát alebo čistá trans alebo cis forma s použitím zodpovedajúcich východiskových látok. Zlúčeniny z príkladov 116 a 117 sa môžu pripraviť vo forme racemátu alebo zodpovedajúcej S alebo R izomémej formy.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (X⁴)

kde R, R¹ a R² sú definované v tabuľke 4, sa môžu pripraviť podľa postupu opísaného v príklade 56 s použitím vhodne substituovaného metylesteru (l./7.-indol-3-yl)oxooctovej kyseliny.

Tabuľka 4

Pr.	R	R'	R²	M.S. dáta (ESI-MS)
123	4-F	H	H	457 [M+H]⁺
124	4-OMe	H	H	469 [M+H]⁺
125	5-F	H	H	457 [Μ+ΗΓ
126	5-OMe	H	H	469 (M+H]⁺
127	5-C1	H	H	473 [M+H]⁺
128	6-F	H	H	457 [M+H]⁺
129	7-F	H	H	457 [M+H]⁺
130	6-OCH₃	H	H	469 [M+H]⁺
131	6-C1	H	H	473,475 [M+H]⁺
132	5-Br	H	H	517,519 (M⁺)
133	4-CH₃	H	H	453 [M+H]⁺
134	4-C1	H	H	473, 475 [M+H]⁺
135	5-CH₃	H	H	453 [M+H]⁺
136	7-Br	H	H	517,519 (M⁺)
137	7-C1	H	H	473, 475 [M+H]⁺
138	6-CH₃	H	H	453 [M+H]⁺
139	7-CH₃	H	H	453 [M+H]⁺
140	7-OCH₃	H	H	469 [M+H]⁺
141	4-Br	H	H	517,519 [M+H]⁺
142	6-Br	H	H	517,519 [M+H]⁺
143	H	ch₃	ch₃	MH⁺ 467
144	H	H	ch₃	MH⁺ 453

Pr.	R	R¹	R²	M.S. dáta (ESI-MS)
145	5-OH	H	H	MH⁺ 455
146	5-NO₂	H	H	MH⁺484
147	5-NHCH₃	H	H	MH⁺468
148	5-NH₂	H	H	MH⁺ 454

Príklady 149A a 149B

Zlúčeniny sa pripravia podľa postupu opísaného v príklade 56, ale s použitím vhodne substituovaného metylesteru (l.//.-indol-3-yl)-oxooctovej kyseliny.

Príklad 149 A Príklad 149B

M⁺ 486 M⁺ 500

Metylester (7-fluór-l./Y.-indol-3-yl)-oxooctovej kyseliny, použitý ako východisková látka, sa pripraví na10 sledujúcim spôsobom:

0,147 g (1,09 mmol) 7-fluórindolu sa rozpustí v 5 ml suchého tetrahydrofuránu a roztok sa ochladí na 0 °C. Pridá sa 0,65 ml (1,31 mmol) 2M roztoku oxalylchloridu v dichlórmetáne a zmes sa mieša ďalších 10 minút pri 0 °C a potom 4 hodiny pri teplote miestnosti. Zmes sa ochladí na 0 °C a pridá sa 10 ml metanolu. Zmes sa mieša ďalších 18 hodín pri teplote miestnosti. Zmes sa odparí do sucha pri zníženom tlaku, pevný zvyšok sa premyje zmesou etylacetát: hexán (1 : 1) a suší sa vo vysokom vákuu, čím sa získa metylester (7- fluór-l.//.-indol-3-yl)-oxooctovej kyseliny. Produkt sa ďalej použije bez čistenia.

ESI-MS: 220 [M-H]⁺

Zodpovedajúci substituovaný metylester (1.7f.-indol-3-yl)-oxooctovej kyseliny, použitý ako východisková látka pri príprave zlúčenín z príkladov 123 až 148, sa pripraví analogickým spôsobom zo zodpovedajúcich indolov.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (X⁵)

kde R, R¹ a R² sú definované v tabuľke 5, sa môžu pripraviť podľa postupu opísaného v príklade 56, ale s použitím vhodne substituovaného metylesteru (l.//.-indol-3-yl)-oxooctovej kyseliny.

Tabuľka 5

Pr.	Ŕ¹⁴	R¹⁵	R'¹⁵	R¹	M.S. dáta
150	-(4-N-metyl)-l -piperazinyl	H	H	H	[M+H]⁺389
151	-(4-N-metyl)-l -piperazinyl	H	H	CH₃	[M+H]⁺ 403
152	-3,5-dimetyl-1 -piperazinyl	H	H	H	[M+H]⁺ 403
153	-3,5-dimetyl-1 -piperazinyl	H	H	CH₃	[M+H]⁺417
154	-(4-N-metyl)-l -piperazinyl	5-CH₃	H	H	[M+Hj⁺ 403
155	-(4-N-metyl)-l -piperazinyl	5-CH₃	H	ch₃	[M+H]⁺417
156	-(4-N-metyl)-l -piperazinyl	6-CH₃	H	H	[M+H]⁺ 403
157	-(4-N-metyl)-l -piperazinyl	6-CH₃	H	ch₃	[M+H]⁺417
158	-(4-N-metyl)-l -piperazinyl	6-CH3	5-CH3	CH₃	[M+H]⁺ 431

Pr.	R¹⁴	R¹⁵	R'¹⁵	R¹	M.S. dáta
159	-(4-N-metyl)-1 -piperazinyl	6-CH3	5-CH3	H	[M+H]⁺417
160	-(4-N-metyl)-1 -piperazinyl	5-C1	H	CH₃	[M+H]⁺ 437
161	-(4-N-metyl)-1-piperazinyl	5-C1	H	H	[M+H]⁺ 423

Príklad 162

3-[2-(2-Dimetylaminoetoxy)chinolin-4-yl]-4-(1.7/.-indol-3-yl)pyrol-2,5-dión

— N

110 mg (0,5 mmol) 2-(2-chlórchinolin-4-yl)acetamidu, 102 mg (0,5 mmol) metyl-3-indolglyoxylátu a 508 μΐ (10 ekvivalentov) Ν,Ν-dimetylaminoetanolu sa rozpustí pri 0 °C v 5,0 ml suchého tetrahydrofuránu. Pridá sa 2,5 ml (5 ekvivalentov) 1,0 M íerc-butoxid draselný a reakčná zmes sa mieša cez noc pri 80 °C. Zmes sa nechá vychladnúť na teplotu miestnosti, zriedi sa 20 ml etylacetátu a premyje sa 10 ml vody a 5 ml soľanky. Organická fáza sa suší nad síranom sodným a odparí sa. Zvyšok sa čistí pomocou FCC (AcO -Et/EtOH/28 % NH₄OH 90 : 9 : 1) a získa sa červený prášok, ktorý sa môže rekryštalizovať zo zmesi CH₂Cl₂/Et₂O a získa sa čistá zlúčenina uvedená v názve.

'H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 2,20 (s, 6H), 2,67 (m, 2H), 4,51 (m, 2H), 6,38 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,53 (dd,

J = 8,4, 7,5 Hz, 1H), 6,95 (m, 2H), 7,21 (dd, J = 8,4, 7,5 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,57 (dd, J = 8,4, 7,5 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 8,00 (s, 1H), 11,20 (š s, 1H), 11,92 (šs, 1H); ES-MS: 427 [M+H]⁺

2-(2-Chlórchinolin-4-yl)acetamid

použitý ako východisková látka, sa pripraví nasledujúcim spôsobom:

a) Metylester 2-(2-chlórchinolin-4-yl)octovej kyseliny sa môže pripraviť podľa postupu opísaného v EP-A1-0 364 327 a Indián J. Chem. 1994, 33B, 747-751,

b) 100 mg (0,42 mmol) metylesteru 2-(2-chlórchinolin-4-yl)octovej kyseliny sa suspenduje v 2 ml 28 % roztoku hydroxidu amónneho. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí a získa sa 2-(2-chlórchinolin-4-yl)acetamid vo forme pevnej látky.

'H NMR (DMSO, 300 MHz) δ 3,88 (s, 2H), 7,16 (šs, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,65 (dd, J = 8,4, 7,5 Hz, 1H), 7,70 (šs, 1H), 7,80 (dd, J= 8,4, 7,5 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 8,4 Hz, 1H).

Príklad 163

3-(1.7í.-Indol-3-yl)-4-[2-(4-metylpiperazin-l-yl)chinolin-4-yl]pyrol-2,5-dión

200 mg (0,70 mmol) 2-[2-(4-metylpiperazin-l-yl)chinolin-4-yl]acetamidu a 143 mg (0,70 mmol) metyl-3-indolglyoxylátu sa pri 0 °C rozpustí v 7,0 ml dimetylformamidu. Pridá sa 3,52 ml (5 ekvivalentov) 1,0 M roztoku íerc-butoxid draselný a zmes sa mieša cez noc pri 80 °C. Zmes sa ochladí na teplotu miestnosti, zriedi sa 40 ml dichlórmetánu a premyje sa dvakrát 10 ml vody a 5 ml soľanky. Organická fáza sa suší nad síranom sodným a odparí sa. Zvyšok sa čistí pomocou FCC (AcOEt/H₂O/AcOH 7 : 1 : 1) a získa sa produkt vo forme acetátu. Táto soľ sa rozpustí v 20 ml etylacetátu a premyje sa dvakrát 10 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáza sa suší nad síranom sodným a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme červeného prášku.

'H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 2,22 (s, 3H), 2,37 (m, 4H), 3,62 (m, 4H), 6,63 (dd, J = 8,4, 7,5 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,95-7,05 (m, 2H), 7,10 (s, 1H), 7,34 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,41-7,50 (m, 2H), 7,60 (d, J = = 8,4 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 10,77 (šs, 1H), 11,48 (šs, 1H);

ES-MS: 438 [M+H]⁺

2-[2-(4-Metylpiperazin-l-yl)chinolin-4-yl]acetamid

NH,

N N použitý ako východisková látka, sa môže pripraviť nasledujúcim spôsobom:

500 mg (2,27 mmol) 2-(2-chlórchinolin-4-yl)acetamidu sa rozpustí v 3,0 ml l-metyl-2-pyrolidinónu. Pridá sa 1,3 ml (5 ekv.) N-metylpiperazínu a reakčná zmes sa mieša 48 hodin pri 80 °C. Pridá sa 20 ml etylacetátu a zrazenina sa čistí pomocou FCC (AcOEt/EtOH/28 % NH₄OH 80 : 18 : 1) a získa sa 2-[2-(4-metylpiperazin-l-yl)chinolin-4-yl]acetamid vo forme pevnej látky.

'H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 2,25 (s, 3H), 2,47 (m, 4H), 3,67 (m, 4H), 3,77 (s, 2H), 7,00 (šs, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,22 (dd, J = 8,4, 7,5 Hz, 1H), 7,50 (dd, J = 8,4, 7,5 Hz, 1H), 7,56 (m, 2H), 7,85 (d, J = 8,4 Hz, 1H); ES-MS: 285 [M+H]⁺

Zlúčeniny všeobecného vzorca (X⁶)

kde R⁸ a R⁹ sú definované v tabuľke 6, sa môžu pripraviť podľa postupu opísaného v príkladoch 162 alebo 163, ale s použitím vhodných východiskových látok.

Tabuľka 6

Pr.	R⁸	Poloha-R⁹	R^a	M.S dáta
164	Cl	H	H	374 (M+H)⁺
165	-och₃	6-CH₃	H	384 (M+H)⁺
166	-O-CH₂-CH₂-N(CH₃)₂	6-CH₃	H	441 (M+H)⁺
167	-O-(CH₂)₃-N(CH₃)₂	6-CH₃	H	455 (M+H)⁺
168	-och₃	H	H	370 (M+H)⁺
169	-OCHj	7-CH₃	H	384 (M+H)⁺
170	-O-CH₂-CH₂-N(CH₃)₂	7-CH₃	H	441 (M+H)⁺
171	-(4-N-metyl)-1 -piperazinyl	7-CH₃	H	452 (M+H)⁺
172	-(4-N-metyl)-1 -piperazinyl	7-CH₃	CH₃	466 (M+H)⁺
173	-(4-N-metyl)-1 -piperazinyl	H	ch₃	438 (M+H)⁺
174	-(4-N-metyl)-1-piperazinyl	6-CH3	H	452 (M+H)⁺
175	-(4-N-metyl)-l -piperazinyl	6-CH₃	ch₃	466 (M+H)⁺
176	-(4-N-cyklopent- yl)-1 -piperazinyl	H	ch₃	506 (M+H)⁺
177	-(4-N-cyklopent- yl)-1 -piperazinyl	H	H	492 (M+H)⁺

Pr.	R^s	Poloha -R^y	R“	M.S dáta
178	-(4-N-3 -hydroxypropy 1)-1 -piperaziny 1	H	H	482 (M+H)⁺
179	-(4-N-3 -dimety laminopropyl)	H	H	509 (M+H)⁺
180	-(4-N-pyrimidin-2-yl)-1 -piperazinyl	ch₃	H	516 (M+H)⁺

Príklad 181

3-(l./7.-Indol-3-yl)-4-[3-(4-metylpiperazin-l-yl)izochinolin-l-yl]pyrol-2,5-dión

110 mg (0,30 mmol) 3-(3-chlórizochinolin-l-yl)-4-(l.//.-indol-3-yl)pyrol-2,5-diónu sa suspenduje v 2,5 ml N-metylpiperazínu a udržiava sa pri 130 °C 24 hodín. Prebytok N-metylpiperazínu sa odparí vo vysokom vákuu pri 60 °C a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a extrahuje sa vodou. Tmavooranžová vodná fáza sa pomocou IN vodného roztoku hydroxidu sodného zalkalizuje na pH 9 a extrahuje sa etylacetátom. Organická fáza sa oddelí, suší sa nad síranom sodným, odparí sa a čistí sa chromatografiou na silikagéli elúciou zmesi metylénchlorid/metanol/kyselina octová₅₀o_/o (9/1/0,25). Frakcie obsahujúce zlúčeninu uvedenú v názve sa spoja a extrahujú sa 6 % vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáza sa oddelí, suší sa nad síranom sodným a odparí sa, čím sa získa čistá zlúčenina uvedená v názve vo forme oranžového prášku.

MH⁺: 438 (ES⁺) 'H NMR (400 MHz, DMSO-D«) δ 11,88 (s, IH), 11,14 (široký, IH), 8,04 (s, IH), 7,68 (d, IH, J =8,56 Hz), 7,65 (d, IH, J = 9,05 Hz), 7,45 (t, IH, J = 8,07 Hz), 7,31 (d, IH, J = 8,07 Hz), 7,08 (s, IH, J = 8,33 Hz), 7,08 (t, IH, J = 8,31 Hz), 6,94 (t, IH, J = 8,07 Hz), 6,50 (t, IH, J = 7,34 Hz), 6,16 (d, IH, J = 8,07 Hz), 3,53 (m, 4H), 2,30 (m, 4H), 2,14 (s, 3H)

3-(3-Chlórizochinolin-l-yl)-4-(l.H.-indol-3-yl)-pyrol-2,5-dión, použitý ako východisková látka, sa môže pripraviť nasledujúcim spôsobom:

a) etylester (3-chlórizochinolin-l-yl)octovej kyseliny sa môže pripraviť podľa postupu opísaného v T. Kametani a kol. Chem. Pharm. Bull., 15(5), 704 (1967),

b) 2,5 g (10 mmol) etylesteru (3-chlórizochinolin-l-yl)-octovej kyseliny sa rozpustí v 50 ml 4N NH₃/MeOH. Roztok sa prevedie do autoklávu a udržiava sa 48 hodín pri 120 °C. Po ochladení na teplotu miestnosti sa rozpúšťadlo odparí a získaná pevná látka sa čistí chromatografiou na silikagéli elúciou metylénchloridom (100 %) —> metylénchlorid/metanol (95/5) a získa sa 2-(3-chlórizochinolin-l-yl)-acetamid vo forme svetložltej pevnej látky.

c) 440 mg (2,5 mmol) 2-(3-chlórizochinolin-l-yl)-acetamidu a 1,0 g (5 mmol) metyl-3-indolglyoxalátu sa pridá k 10 ml tetrahydrofuránu a zahrieva sa do varu pod spätným chladičom. V atmosfére argónu sa prikvapká 10 ml (10 mmol) IM roztoku terc-butoxid draselný v tetrahydrofuráne a reakčná zmes sa 1 hodinu zahrieva do varu pod spätným chladičom. Reakčná zmes sa zriedi etylacetátom a extrahuje sa nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva sa suší nad bezvodým síranom sodným a zlúčenina sa izoluje po spracovaní dietyléterom a filtráciou ako oranžová pevná látka.

MH⁺: 375 (ES⁺) 'H NMR (400 MHz, DMSO-d_Ŕ) δ 12,04 (s, IH), 11,30 (s, IH), 8,14 (s, IH), 8,11 (s, IH), 7,99 (d, IH, J = = 8,32 Hz), 7,95 (d, IH, J = 8,56 Hz), 7,75 (t, IH, J = 8,33 Hz), 7,50 (t, IH, J = 8,33 Hz), 7,32 (d, IH, J = = 8,07 Hz), 6,92 (t, IH, J = 8,07 Hz), 6,48 (t, IH, J = 7,33 Hz), 5,96 (d, IH, J = 8,07 Hz).

Príklad 182

3-(l-Metyl-l.F/.-indol-3-yl)-4-[3-(4-metylpiperazin-l-yl)izochinolin-l-yl]pyrol-2,5-dión

710 mg (2,5 mmol) 2-[3-(4-metylpiperazin-l-yl)-izochinolin-l-yl]acetamidu a 1,1 g (5 mmol) metyl-(l-metylindolyl)-3-glyoxalátu sa reaguje v tetrahydrofuráne v prítomnosti Zerc-butoxid draselný za varu podľa postupu opísaného v príklade 181c) skôr. Zlúčenina uvedená v názve sa izoluje podľa postupu opísaného v príklade 181 c).

MH⁺: 452 (ES⁺)

2-[3-(4-Metylpiperazin-l-yl)izochinolin-l-yl]acetamid, použitý ako východisková látka, sa môže pripraviť nasledujúcim spôsobom:

a) 13 g (50 mmol) etylesteru (3-chlórizochinolin-l-yl)octovej kyseliny sa v atmosfére argónu rozpustí v 150 ml dioxánu. K tomuto roztoku sa v atmosfére argónu pridá 1,3 g (2 mmol) BINAP, 1,3 g (4 mmol) paládium(II)acetátu, 11 ml (0,1 mol) N-metylpiperazínu a 5,4 g (55 mmol) ŕerc-butoxid sodný a reakčná zmes sa mieša 30 minút za varu pod spätným chladičom. Po ochladení sa reakčná zmes zriedi 300 ml dichlórmetánu a extrahuje sa 300 ml 0,5N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Po filtrácii sa vodná fáza zalkalizuje pomocou pevného hydrogénuhličitanu sodného na pH 8,5 a extrahuje sa trikrát dichlórmetánom. Spojené organické fázy sa sušia nad síranom sodným a odparia sa. Získaná surová látka sa čistí chromatografiou na silikagéli s použitím metylénchloridu (100 %) —> zmesi metylénchloridu/metanolu (90/10) ako eluenta a získa sa produkt vo forme žltej, pevnej látky.

b) K roztoku 1,7 g (5,4 mmol) etylesteru [3-(4-metylpiperazin-l-yl)-izochinolin-l-yl]octovej kyseliny v dimetylformamide sa v atmosfére argónu pridá 0,72 ml (18,1 mmol) formamidu. Po zahriatí na 100 °C sa v priebehu 45 minút v 10 dieloch (každý obsahuje 0,1 ml) pridá 1 ml 5,4 N metoxidu sodného v metanole. Po 60 minútach pri 100 °C sa reakčná zmes ochladí na teplotu miestnosti a zriedi sa 100 ml izopropanolu. Rozpúšťadlá sa odparia pri zníženom tlaku, zvyšok sa rozpustí v etylacetáte a extrahuje sa 5 % vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného. Organická fáza sa suší nad síranom sodným a odparí sa. Získaná surová látka sa čistí chromatografiou na silikagéli eiúciou zmesi metylénchlorid/metanol (90/10 —> 80/20) a získa sa zlúčenina uvedená v názve vo forme bielej, pevnej látky.

kde R^a, R^c, R⁸ a R⁹ sú definované v tabuľke 7, sa môžu s použitím vhodných východiskových látok pripraviť podľa postupu opísaného v príklade 181.

Tabuľka 7

Pr.	R⁸	Poloha -R⁹	R^a	R^c	M. S dáta
183	-(4-N-metyl)-l -piperazinyl	H	H	ch₃	452 (M+H)⁺
184	-(4-N-metyl)-1 -piperazinyl	H	H	F	456 (M+H)⁺
185	-1-piperazinyl	H	H	F	442 (M+H)⁺
186	-(4-N-metyl)-1 -homopiperazinyl	H	H	F	470 (M+H)⁺
187	-(4-N-metyl)-l-homopiperazinyl	H	H	H	452 (M+H)⁺
188	(rac.) -(3-metyl-piperazin-l-yl)	H	H	H	438 (M+H)⁺
189	1-piperazinyl	H	H	H	424 (M+H)⁺
190	(4-N-izopropyl)-1 -piperazinyl	H	H	H	466 (M+H)⁺
191	3-metyl-l -piperazinyl	H	H	H	438 (M+H)⁺
192	-(4-N-metyl)-1 -piperazinyl	H	CH₃	F	470 (M+H)⁺
193	-(4-N-metyl)-l -piperazinyl	H	CH₃	H	452 (M+H)⁺
194	-(4-N-metyl)-1 -piperazinyl	H	ch₃	ch₃	466 (M+H)⁺
195	-(4-N-metyl)-1 -piperazinyl	7-C1	H	H	473 (M+H)⁺
196	-(4-N-metyl)-1 -piperazinyl	7-C1	ch₃	H	487 (M+H)⁺

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) vo voľnej forme alebo vo forme farmaceutický prijateľnej soli majú cenné farmakologické vlastnosti, napríklad inhibujú aktivitu proteínovej kinázy C (PKC), napríklad PKC izo21 formy ako α, β, δ, ε, η alebo θ, inhibujú aktiváciu a proliferáciu T buniek, napríklad inhibíciou produkcie T buniek alebo cytokínov, napríklad IL-2, prostredníctvom inhibície proliferatívnej odpovede T buniek na cytokíny, napríklad IL-2, napríklad ako ukazujú in vitro a in vivo testy, a sú preto vhodné na liečenie.

A. In vitro testy

1. Test proteínovej kinázy C

Pri zlúčeninách všeobecného vzorca (I) sa testovala ich aktivita vzhľadom na rôzne izoformy PKC podľa známeho postupu opísaného v D. Geiges a kol., Biochem. Pharmacol. 1997; 53 : 865-875. Test sa uskutočňuje v 96-jamkovej polypropylénovej mikrotitračnej doštičke (Costar 3794), ktorá sa vopred silikonizuje pomocou Sigmacote (Sigma SL-2). 50 μΐ reakčnej zmesi obsahuje 10 μΐ príslušného izozýmu PKC spolu s 25 μΐ testovanej zlúčeniny a 15 μΐ zmesového roztoku, ktorý obsahuje 200 pg/ml protamínsulfátu, 10 mM Mg(NO₃)₂, 10 pm ATP (Boehringer 519987) a 3750 Bq ³³P-ATP (Hartmann Analytic SFC301, llOTBq/mmol) v 20 mM pufra Tris s pH 7,4 + 0,1 % BSA. Inkubácia sa uskutočňuje 15 minút pri 32 °C v trepacom inkubátore mikrotitračných doštičiek (Biolabo Scientific Instruments). Reakcia sa ukončí pridaním 10 μΐ 0,5 M Na₂EDTA, pH 7,4, 50 μΐ zmesi sa pipetuje na vopred navlhčený fosfocelulózový papier (Whatmann 3698-915) za mierneho tlaku. Nenaviazaná ATP sa vymyje 100 μΐ bi-dist H₂O. Papier sa dvakrát premyje 0,5 % H₃PO₄ počas 15 minút a potom 5 minút v etanole. Potom sa papier suší a umiestni sa na omnifilter (Packard 6005219) a prevrství sa 10 μΐ/jamka Microscint-O (Packard 6013611) a potom sa odčíta na zariadení na odčítanie rádioaktivity Topcount (Packard). Meranie IC₅₀ sa uskutočňuje rutinným spôsobom pomocou inkubácie sériových zriedení inhibítora pri koncentráciách pohybujúcich sa v rozsahu 1 až 1000 μΜ podľa opísaného postupu. Hodnota IC₅₀ sa vypočíta z grafu extrapoláciou sigmoidnej krivky.

2. Test proteínovej kinázy CO

V podmienkach opísaného testu sa použije ľudská rekombinantná PKC0. Pri tomto teste zlúčeniny všeobecného vzorca (I) inhibujú PKC0 pri hodnotách IC₅₀ < 1 μΜ. Zlúčenina z príkladu 56 inhibuje pri tomto teste PKC0 pri IC₅₀ < 10 nM.

3. Test proteínovej kinázy Ca

V podmienkach testu opísaného v odseku A.l, sa použije ľudská rekombinantná PKCa získaná od Oxford Biomedical Research. Zlúčenina z príkladu 100 inhibuje pri tomto teste PKCa pri IC₅₀ 39 ± 15 nM.

4. Test proteínovej kinázy Οβί

V podmienkach testu opísaného v odseku A.l, sa použije ľudská rekombinantná ΡΚΟβΙ, získaná od Oxford Biomedical Research. Zlúčenina z príkladu 163 inhibuje pri tomto teste PKCQ1 pri IC₅₀ 8 ± 2 nM.

5. Test proteínovej kinázy Cδ

V podmienkach testu opísaného v odseku A.l, sa použije ľudská rekombinantná PKCô získaná od Oxford Biomedical Research. Zlúčenina z príkladu 181 inhibuje pri tomto teste PKCô pri IC50 18 ± 8 nM.

6. Test proteínovej kinázy Ce

V podmienkach testu opísaného v odseku A.l, sa použije ľudská rekombinantná PKCe získaná od Oxford Biomedical Research. Zlúčenina z príkladu 139 inhibuje pri tomto teste PKCe pri IC₅₀ 20 ± 7 nM.

7. Test proteínovej kinázy

V podmienkach testu opísaného v odseku A.l, sa použije ľudská rekombinantná ΡΚΟη získaná od PanVera. Zlúčenina z príkladu 85 inhibuje pri tomto teste ΡΚΟη pri IC50 50 ± 9 nM.

8. Kostimulačný test CD28

Test sa uskutočňuje s Jurkatovými bunkami transfekovanými konštruktom promótor ľudského interleukínu-2/reportérový gén podľa postupu opísaného v Baumann G. a kol., Transplant. Proc. 1992; 24:43-8, β-galaktozidázový reportérový gén sa nahradí luciferázovým génom (de Wet J., a kol., Mol. Celí Biol. 1987, 7(2), 725-737). Bunky sa stimulujú protilátkami kondenzovanými na pevnej fáze alebo forbolmyristátacetátom (PMA) a Ca⁺⁺ ionofor ionomycínom nasledujúcim spôsobom. Pri stimulácii sprostredkovanej protilátkou sa mikrotitračné doštičky Microlite TMI (Dynatech) potiahnu 3 pg/ml kozích anti-myších IgG Fc protilátok (Jackson) v 55 μΐ fyziologického roztoku pufrovaného fosfátom (PBS) na jamku počas troch hodín pri teplote miestnosti. Doštičky sa blokujú po odstránení protilátok pomocou inkubácie s 2 % bovinným sérovým albumínom (BSA) v PBS (300 μΐ na jamku) počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Po troch premytiach 300 μΐ PBS na jamku sa pridá 10 ng/ml receptora protilátky anti T bunky (WT31, Becton & Dickinson) a 300 ng/ml protilátok anti-CD28 (15E8) v 50 μΐ 2 % BSA/PBS ako stimulačných protilátok a inkubuje sa cez noc pri 4 °C.

Nakoniec sa doštičky premyjú trikrát 300 μΐ PBS na jamku. V oddelených doštičkách sa pripraví sedem trojnásobných sériových zriedení testovaných zlúčenín dvojnásobne v testovom médiu (RPMI 1640/10 % fetálne teľacie sérum (FCS) obsahujúce 50 μΜ 2-merkaptoetanolu, 100 jednotiek/ml penicilínu a 100 pg/ml streptomycínu, zmieša sa s transfekovanými Jurkatovými bunkami (kloň K22 290-H23) a inkubuje sa 30 minút pri 37 °C v 5 % CO₂, 100 μΐ tejto zmesi obsahujúcej lxlO⁵ buniek sa potom prevedie do testovacích doštičiek potiahnutých protilátkou. Paralelne sa 100 μΐ inkubuje so 40 ng/ml PMA a 2 μΜ ionomycínu. Po 5,5-hodinách inkubácie pri 37 °C v 5 % CO₂ sa určí hladina luciferázy pomocou merania bioluminiscencie. Doštičky sa odstred’ujú 10 minút pri 500 g a supematant sa oddelí. Pridá sa 20 μΐ na jamku lýzneho pufra obsahujúceho 25 mM Tris-fosfátu, pH 7,8, 2 mM DTT, 2 mM l,2-diaminocyklohexán-N,N,N',N-tetraoctovej kyseliny, 10 % (objemovo) glycerolu a 1 % (objemovo) Triton X-100. Doštičky sa inkubujú 10 minút pri teplote miestnosti za konštantného trepania. Aktivita luciferázy sa zistí pomocou zariadenia na odčítanie bioluminiscencie (Labsystem, Helsinky, Finland) po automatickom pridaní 50 μΐ na jamku luciferázového reakčného pufra obsahujúceho 20 mM Tricinu, 1,07 mM (MgCO₃)₄Mg(OH)₂x5H₂O, 2,67 mM MgSO₄, 0,1 mM EDTA, 33,3 mM DTT, 270 μΜ koenzýmu A, 470 μΜ luciferínu (Chemie Brunschwig AG), 530 μΜ ATP, pH 7,8. Oneskorenie je 0,5 sekundy, celkový čas merania je 1 alebo 2 sekundy. Dolnými kontrolnými hodnotami sú svetelné jednotky od buniek stimulovaných receptorom anti-T buniek alebo buniek stimulovaných PMA, hornými kontrolnými hodnotami sú bunky stimulované receptorom buniek anti-T/anti-CD28- alebo PMA/ionomycínom bez testovanej vzorky. Dolné kontrolné hodnoty sú odčítané od všetkých hodnôt. Inhibícia získaná v prítomnosti testovanej zlúčeniny sa vypočíta ako percentuálna inhibícia horných kontrolných hodnôt. Koncentrácia testovaných zlúčenín vedúca k 50 % inhibícii (IC₅₀) sa určí z kriviek odpovede na dávku. Pri tomto teste zlúčeniny všeobecného vzorca (I) inhibujú Jurkatove bunky stimulované receptorom anti-T buniek/antiCD28 a PMA/ionomycínom pri IC₅₀ < 1 μΜ. Zlúčenina z príkladu 56 má pri tomto teste hodnotu IC₅o 42 ± 12 nM.

9. Reakcia alogénnych zmiešaných lymfocytov (MLR)

Dvojcestná MLR sa uskutočňuje podľa štandardného postupu (J. Immunol. Methods, 1973, 2, 279 a Meo T. a kol., Immunological Methods, New York, Academic Press, 1979, 227-39). V krátkosti sa bunky sleziny myší CBA a BALB/c (1,6 x 10⁵ buniek od každého kmeňa na jamku v tkanivových mikrotitračných doštičkách s rovným dnom, celkom 3,2 x 10⁵) inkubujú v médiu RPMI obsahujúcom 10 % FCS, 100 U/ml penicilínu, 100 pg/ml streptomycínu (Gibco BRL, Basel, Switzerland), 50 μΜ 2-merkaptoetanolu (Fluka, Buchs, Switzerland) a sériové zriedenie zlúčenín. Uskutočňuje sa sedem trojnásobných krokov riedení, dvakrát pre každú testovanú zlúčeninu. Po 4 dňoch inkubácie sa pridá 1 pCi ³H-tymidfnu. Bunky sa odoberú po ďalších 5 hodinách inkubácie a pomocou bežného postupu sa stanoví naviazaný ³H-tymidín. Hodnotami pozadia (dolnými hodnotami) MLR sú hodnoty proliferácie samotných buniek BALB/c. Dolné kontrolné hodnoty sa odčítajú od všetkých hodnôt. Horné kontrolné hodnoty bez akejkoľvek vzorky sa považujú za 100 % proliferáciu. Vypočíta sa percentuálna inhibícia vzoriek a určia sa koncentrácie potrebné pre 50 % inhibíciu (hodnota IC₅o). Zlúčenina z príkladu 56 má IC₅₀ 168 ± 20 nM.

B. In vivo testy

Transplantácia srdca krysy

Použije sa kombinácia druhov: samec Lewis (RT¹ haplotyp) a BN (RT¹ haplotyp). Zvieratá sa anestetizujú s použitím inhalačného izofluoranu. Po heparinizácii krysieho darcu prostredníctvom brušnej dolnej dutej žily za súčasnej exsangvinácie prostredníctvom aorty sa otvorí hrudník a srdce sa rýchlo ochladí. Aorta sa podviaže a oddelí sa distálne k prvej odbočke a brachiocefalický kmeň sa oddelí v prvom rozdvojení. Ľavá pľúcna tepna sa podviaže a oddelí a pravá strana sa oddelí, ale ľavá sa otvorí. Všetky ďalšie cievy sa uvoľnia, podviažu a oddelia a darcovo srdce sa vyberie na ľadový fyziologický roztok.

Príjemca sa pripraví oddelením a zasvorkovaním infrarenálnej brušnej aorty a dutej žily. Step sa implantuje pomocou end-toside anastomózy, s použitím 10/0 jednovláknovej sutury, medzi brachocefalickým kmeňom darcu a aortou príjemcu a pravou pľúcnou tepnou darcu a dutou žilou príjemcu. Svorky sa uvoľnia, štep sa upevní retroabdominálne, abdominálny obsah sa premyje teplým fyziologickým roztokom a zviera sa zavrie a nechá sa zotaviť pod zahrievacou lampou. Štep prežívajúceho príjemcu sa monitoruje každodenným prehmataním tlkotu srdca darcu cez brušnú stenu. Odmietnutie sa považuje za úplné, keď srdce prestane biť. Vzrast schopnosti prežiť sa dosiahne pri zvieratách liečených zlúčeninou všeobecného vzorca (I) podávanou denne v dávke 1 až 30 mg/kg. Zlúčenina z príkladu 100 teda významne zvyšuje prežitie štepu, ak sa podáva v dávke 30 mg/kg/deň.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sú preto vhodné pri liečení a/alebo prevencii ochorení alebo stavov sprostredkovaných T lymfocytmi a/alebo PKC, napríklad akútneho alebo chronického odmietnutia orgánu alebo tkaniva alo- alebo xenoštepov, aterosklerózy, uzatvorenia ciev spôsobeného poškodením cievy, ako je angioplastika, restenózy, vysokého krvného tlaku, zlyhania srdca, chronického obštrukčného pľúcneho ochorenia, ochorenia CNS, ako je Alzheimerova choroba alebo amyotrofná laterálna skleróza, rakoviny, infekč23 ných ochorení, ako je AIDS, septického šoku alebo syndrómu dýchacieho stresu dospelých, príhody ischémie/reperfúzie, napríklad infarktu myokardu, mŕtvice, črevnej ischémie, zlyhania obličiek alebo hemoragický šok, alebo traumatický šok. Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sú tiež vhodné pri liečení a/alebo prevencii zápalových akútnych alebo chronických ochorení alebo stavov, alebo autoimúnnych ochorení sprostredkovaných T bunkami, ako je napríklad reumatoidná artritída, osteoartritída, systémový lupus erythematosus, Hashimotova thyroiditída, skleróza multiplex, myasténia gravis, diabetes typu I alebo II a ochorenia s ním súvisiace, ochorení dýchacích ciest, ako je astma alebo zápalové ochorenie pľúc, zápalové ochorenie pečene, zápalové glomeruláme ochorenie, kožné prejavy imunologických porúch alebo ochorení, zápalových a hyperproliferatívnych ochorení kože (ako je psoriáza, atopická dermatitída, alergická kontaktná dermatitída, dráždivá kontaktná dermatitída a ďalšie ekzematické dermatitídy, seboroická dermatitída), zápalové očné ochorenia, napríklad Sjoegrenov syndróm, keratokonjunktivitída alebo uveitída, zápalové ochorenie čriev, Crohnova choroba alebo ulceratívna kolitída. Pre skôr uvedené použitia bude potrebné dávkovanie samozrejme meniť v závislosti od spôsobu podávania, konkrétneho ochorenia, ktoré sa má liečiť a od požadovaného účinku. Všeobecne sa zistilo, že uspokojivé výsledky je možné dosiahnuť pri systémovej dennej dávke pohybujúcej sa v rozsahu 0,1 až 100 mg/kg telesnej hmotnosti. Indikovaná denná dávka u väčších cicavcov, napríklad u človeka, sa pohybuje v rozsahu 0,5 mg až 2000 mg, ktorá sa podáva vhodne napríklad v rozdelených dávkach až štyrikrát denne alebo vo forme prostriedku s predĺženým uvoľňovaním.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sa môžu podávať akýmkoľvek vhodným spôsobom, najmä enterálne, napríklad perorálne, napríklad vo forme tabliet alebo kapsúl, alebo parenterálne, napríklad vo forme injikovateľných roztokov alebo suspenzií, topicky, napríklad vo forme lotiónu, gélov, mastí alebo krémov, alebo nazálne, alebo vo forme čapíkov. Farmaceutické kompozície obsahujúce zlúčeninu vo voľnej forme alebo vo forme farmaceutický prijateľnej soli spolu s najmenej jedným farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom sa môžu vyrábať pomocou bežných postupov zmiešaním s farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom. Jednotkové dávkovacie formy na perorálne podávanie obsahujú napríklad 0,1 mg až asi 500 mg aktívnej látky.

Topické podávanie znamená napríklad podávanie na pokožku. Ďalším spôsobom topického podávania je podávanie do oka.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sa môžu podávať vo voľnej forme alebo vo forme farmaceutický prijateľnej soli, ako je napríklad uvedené skôr. Tieto soli sa môžu pripraviť bežným spôsobom a majú rovnakú úroveň aktivity, ako voľné zlúčeniny.

V súlade s tým, čo je uvedené skôr, predložený vynález ďalej poskytuje nasledujúce aspekty:

1.1 Spôsob prevencie alebo liečenie porúch alebo ochorení sprostredkovaných T lymfocytmi a/alebo PK.C, ako je napríklad uvedené skôr, u subjektu, ktorý takú liečbu potrebuje, pričom spôsob zahŕňa podávanie účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli tomuto subjektu.

1.2 Spôsob prevencie alebo liečenia akútneho alebo chronického odmietnutia transplantátu alebo zápalového alebo autoimónneho ochorenia sprostredkovaného T bunkami, ako je napríklad uvedené skôr, u subjektu, ktorý takú liečbu potrebuje, pričom spôsob zahŕňa podávanie účinného množstva zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnej soli tomuto subjektu.

2. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) vo voľnej forme alebo vo forme farmaceutický prijateľnej soli na použitie ako liečivo, napríklad pri akomkoľvek spôsobe uvedenom v bode 1.1 a 1.2.

3. Farmaceutická kompozícia napríklad na použitie pri akomkoľvek spôsobe uvedenom v bode 1.1 a 1.2 obsahujúca zlúčeninu všeobecného vzorca (I) vo voľnej forme alebo vo forme farmaceutický prijateľnej soli spolu s farmaceutický prijateľným riedidlom alebo nosičom.

4. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľná soľ na použitie na prípravu farmaceutickej kompozície na použitie pri akomkoľvek spôsobe uvedenom v bode 1.1 a 1.2.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sa môžu podávať ako samostatná aktívna zložka alebo spolu s inými liečivami pri imunomodulačných režimoch alebo s inými protizápalovými činidlami, napríklad na liečenie alebo prevenciu akútneho alebo chronického odmietnutia alo- alebo xenoštepu alebo zápalových alebo autoimúnnych ochorení. Napríklad sa môžu použiť v kombinácii s cyklosporínmi alebo askomycínmi, alebo ich imunosupresívnymi analógmi alebo derivátmi, napríklad cyklosporínom A, cyklosporínom G, FK-506, ABT-281, ASM 981; inhibítorom mTOR, napríklad rapamycínom, 40-O-(2-hydroxy)etylrapamycínom a tak ďalej; kortikosteroidmi; cyklofosfamidom; azatioprénom; metotrexátom; činidlom urýchľujúcim smerovanie lymfocytov, napríklad FTY 720; leflunomidom alebo jeho analógmi; mizoribínom; mykofenolovou kyselinou; mykofenolátmofetilom; 15-deoxyspergualínom alebo jeho analógmi; imunosupresívnymi monoklonálnymi protilátkami, napríklad monoklonálnymi protilátkami receptorov leukocytu, napríklad MHC, CD2,

CD3, CD4, CDlla/CD18, CD7, CD25, CD27, B7, CD40, CD45, CD58, CD 137, ICOS, CD150 (SLÁM), 0X40, 4-1BB alebo ich ligandmi, napríklad CD 154; alebo inými imunomodulačnými zlúčeninami, napríklad rekombinantnou väzbovou molekulou obsahujúcou aspoň časť extracelulámej domény CTLA4 alebo jej mutantu, napríklad aspoň extracelulárnu časť CTLA4 alebo jej mutantu viazaného k non-CTLA4 proteínovej sekvencií, napríklad CTLA4Ig (napríklad označenej ATCC 68629) alebo jej mutantu, napríklad LEA29Y, alebo inými inhibítormi adhéznej molekuly, napríklad mAbs alebo inhibítormi s nízkou molámou hmotnosťou, vrátane antagonistov LFA-1, antagonistov Selectinu a antagonistov VLA-4. Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sa môžu tiež podávať spolu s antiproliferatívnym liečivom, napríklad chemoterapeutickým liečivom, napríklad pri liečení rakoviny, alebo s antidiabetickým liečivom, pri liečení diabetu.

V súlade s tým, čo je uvedené skôr, predložený vynález poskytuje ešte ďalší aspekt:

5. Spôsob, ako je definovaný skôr, zahŕňajúci spoločné podávanie, napríklad súčasne alebo postupne, terapeuticky účinného množstva inhibítora PKC a inhibítora aktivácie a proliferácie T buniek, napríklad zlúčeniny všeobecného vzorca (I) vo voľnej forme alebo vo forme farmaceutický prijateľnej soli, a druhej liečebnej látky, kedy touto druhou liečebnou látkou je imunosupresívum, imunomodulačné činidlo, protizápalové činidlo, antiproliferatívne alebo antidiabetické liečivo, ako je napríklad uvedené skôr.

6. Terapeutická kombinácia, napríklad kit, obsahujúca a) inhibítor PKC alebo aktivácie a proliferácie buniek T, napríklad zlúčeninu všeobecného vzorca (I) vo voľnej forme alebo vo forme farmaceutický prijateľnej soli, a b) aspoň jedno činidlo vybrané zo skupiny, ktorú tvorí imunosupresívum, imunomodulačné činidlo, protizápalové činidlo, antiproliferatívne alebo antidiabetické liečivo. Zložka a) a zložka b) sa môžu použiť súčasne alebo postupne. Kit môže obsahovať inštrukcie na podávanie.

Ak sa inhibítor PKC a inhibítor aktivácie a proliferácie T buniek, napríklad zlúčenina všeobecného vzorca (I), podávajú súčasne s imunosupresívom/imunomodulačným činidlom, protizápalovým liečivom, antiproliferatívnym liečivom alebo antidiabetickým liečivom, napríklad s cieľom prevencie alebo liečenia akútneho alebo chronického odmietnutia štepu pri transplantácii alebo zápalového alebo autoimúnneho ochorenia, ako je uvedené skôr, budú sa dávky spoločne podávaného imunosupresíva, imunomodulačnej zlúčeniny, protizápalovej zlúčeniny, antiproliferatívneho činidla alebo antidiabetickej zlúčeniny samozrejme meniť v závislosti od typu použitého spoločne podávaného liečiva, napríklad podľa toho, či ide o steroid alebo cyklosporín, na základe použitého liečiva, podľa ochorenia, ktoré sa má liečiť a tak ďalej.

Výhodnou zlúčeninou podľa predloženého vynálezu je napríklad zlúčenina z príkladu 56.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Zlúčenina všeobecného vzorca (I) kde

R^a je H; Ci.4alkyl; alebo Ci_4alkyl substituovaný skupinou OH, NH2, NHC,.4alkyl alebo N(di-C).4alkyl)2; R^b je H; alebo C].4alkyl;

R je skupina vzorca (d) alebo (e) (e), kde každá zo skupín R⁸ a R¹¹ je piperazinylový kruh prípadne N-substituovaný skupinou zvolenou z C|.₍₎alkylu; acylu; C₃.₆cykloalkylu; C₃.₆cykloalkyl-Ci_₄alkylu; fenylu; fenyl-C|.₄alkylu;

a zvyšok vzorca (β)

-R²¹-Y' (β), kde

5 R²¹ je Ci_₄alkylén alebo C₂.₄alkylén prerušený O a Y je OH, NH₂, NH(C)_₄alkyl) alebo N(Ci_₄alkyl)₂;

a je prípadne substitovaný jednou alebo viacerými skupinami zvolenými zo skupín C,.₄alkyl; C₃.₄cykloalkyl prípadne ďalej substituovaného s C,.₄alkylom;

kde p je 1, 2 alebo 3; CF₃; halogén; OH; NH₂; -CH₂-NH₂; -CH₂-OH; piperidín-1-yl a pyrolidín;

10 každá zo skupín R⁹, R¹⁰, R¹² a R¹³ je nezávisle H, halogén, Ci_₄alkyl, CF₃, OH, SH, NH₂, C,.₄alkoxy,

C|.₄alkyltio, NHC_r4alkyl, N(di-C|.₄alkyl)₂ alebo CN;

E je buď -N= a G je-CH= alebo E je -CH= a G je-N=; a kruh A je prípadne mono- alebo polysubstituovaný, pričom substituenty sú zvolené zo skupiny pozostávajúcej zo skupín halogén, OH, C|.₄alkoxy, C)_₄alkyl; NO₂, CF₃, NH₂, NHC|.₄alkyl, N(di-Ci.₄alkyl)₂ a CN,

15 alebo j ej soľ.
2. Zlúčenina podľa nároku 1, kde kruh A je nesubstiuovaný; alebo je substitutovaný metylom v polohe 7.
3. Zlúčenina podľa nárokov 1 alebo 2, kde skupinou R je zvyšok vzorca (d).
4. Zlúčenina podľa nárokov 1 alebo 2, kde skupinou R je zvyšok vzorca (e).
5. Zlúčenina podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, kde každý z R⁹ a R¹⁰ je H alebo jeden z R⁹ a

20 R¹⁰ je H a druhý je F, Cl, CH₃, OCH₃ alebo CF₃.
6. Zlúčenina podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, kde každý z R¹² a Rⁱ³ je H.

7. Zlúčenina podľa nároku 1, ktorá má vzorec (X³):

25 pričom zlúčeninou je 3-(l./7.-indol-3-yl)-4-[2-(4-metylpiperazin-l-yl)chinazolín-4-yl)pyrol-2,5-dión alebo je zlúčeninou, v ktorej R¹, R⁵, R⁶ a R⁷ sú definované nasledovne:

Pr. R⁵ R¹ R^Ď (poloha 7 alebo 8) R' (poloha 5 alebo 6) 65 -(4-metylpiperazin-1 -yl) H 7-OCH₃ H 66 -(4-metylpiperazin-1 -yl) H 8-CH₃ H 67 -(4-metylpiperazin-1 -yl) H 7-OCH₃ 6-OCH₃ 68 -(4-metylpiperazin-1 -yl) H H 6-CI 69 -(4-metylpiperazin-1 -yl) H 7-C1 H 70 -1-piperazinyl H H H 72 -(4-metylpiperazin-1 -yl) H H 6-CH₃ 73 -[4-(2-hydroxyetyl)piperazin-1 -yl] H H H 74 -(4-metylpiperazin-1 -yl) H H 6-F 75 (c is) 3,5-dimety 1-1 -piperazinyl H H H 77 (rac.)3-metylpiperazin-l -yl H H H 78 -(4-metylpiperazin-1 -yl) H H 6-OCH₃ 79 -(4-metylpiperazin- 1-yl) H H 6-OH 80 -(4-benzylpiperazin- 1-yl) H H H 81 Zrans-2,5-dimetyl-l -piperazinyl H H H 82 -[4-(2-dimetylaminoetyl)piperazin-1 -yl] H H H 83 4-fenylpiperazin-1 -yl H H H

Pr. R⁵ R¹ R⁶ (poloha 7 alebo 8) R⁷ (poloha 5 alebo 6) 84 4-ethyl-piperazin-1 -y 1 H H H 85 4-izopropy lpiperazin-1 -y 1 H H H 86 -(4-metylpiperazin-1 -yl) H 7-F H 87 -(4-metylpiperazin-1 -yl) ch₃ H 6-C1 88 1-piperazinyl ch₃ H 6-C1 89 (cis) 3,5 -dimety 1-piperazin-1 -y 1 H H 6-C1 90 (cz's)3,5-dimetyl-1 -piperazinyl ch₃ H 6-C1 91 (czx)3,4,5 -trimetyl-1 -piperazinyl H H 6-C1 92 (cw)3,4,5-trimetyl-1 -piperazinyl ch₃ H 6-C1 93 -(4-metylpiperazin-1 -yl) H H 5-CH₃ 94 -(4-etylpiperazin-1 -yl) H H 6-C1 95 -(4-izopropyl-1 -piperazín-1 -yl) H H 6-C1 96 -(4-etylpiperazin-1 -yl) ch₃ H 6-C1 97 -(4-izopropylpiperazin-l-yl) ch₃ H 6-C1 98 -(4-cyklopropylpiperazin-l -yl) H H H 99 -(4,7-diaza-spiro-[2,5]okt-7-yl) H H H 100 -(4,7-diaza-spiro-[2,5]okt-7-yl) ch₃ H H 101 -(4-cyklopropylpiperazin-1 -yl) ch₃ H H 102 -(4-metyl-4,7-diaza-spiro[2,5]okt-7-yl) H H H 103 -(4-mety 1-3,3 -dietylp iperazin-1 -yl) H H H 104 -(4-metyl-4,7-diazaspiro[2,5]okt—7-yl) ch₃ H H 105 -(4-metyl-3,3-dietylpiperazin-1 -yl) ch₃ H H 106 -4-( 1 -metylcyklopropyl)-1 -piperazinyl H H H 107 -4-( 1 -metylcyklopropyl)-l -piperazinyl ch₃ H H 108 1-piperazinyl ch₃ H H 109 -(4-metylpiperazin-1 -yl) ch₃ H H 110 -(4-metylpiperazin-1 -yl) 2-hydroxy-etyl H 6-C1 111 (4-N-metyl-l-homopiperazinyl) H H 6-C1 112 -(4-í-butylpiperazin-1 -y 1) H H 6-C1 113 3-metylpiperazin-1 -yl ch₃ H 6-C1 114 -(4-Z-butylpiperazin-1 -yl) ch₃ H 6-C1 115 -(4-metyl-4,7-diaza-spiro[2,5]okt-7-yl) ch₃ H 6-C1 116 3 -R-mety lpiperazin-1 -y 1 ch₃ H 6-C1 117 3 -S-mety lpiperazin-1 -yl ch₃ H 6-C1 118 3,3 -dimety 1-1 -piperazinyl ch₃ H 6-C1 119 3,3-dimetyl-1 -piperazinyl H H 6-C1 120 3,3-dimetyl-l -piperazinyl ch₃ H H 121 3,3 -dimetyl-1 -piperazinyl H H H 122 -(4-metylpiperazin-1 -yl) 2-(CH₃)₂N-etyl H 6-C1

alebo jej soľ.

8. Zlúčenina podľa nároku 1, ktorá má vzorec (X⁴):

kde R¹, R² a R sú definované nasledovne:

Pr. R R¹ R² 123 4-F H H 124 4-OMe H H 125 5-F H H 126 5-OMe H H 127 5-C1 H H 128 6-F H H 129 7-F H H 130 6-OCH₃ H H 131 6-C1 H H 132 5-Br H H 133 4-CH₃ H H 134 4-C1 H H 135 5-CHj H H 136 7-Br H H 137 7-C1 H H 138 6-CH₃ H H 139 7-CH₃ H H 140 7-OCH₃ H H 141 4-Br H H 142 6-Br H H 143 H ch₃ ch₃ 144 H H ch₃ 145 5-OH H H 146 5-NO₂ H H 147 5-NHCH₃ H H 148 5-NH₂ H H

alebo jej soľ.

9. Zlúčenina podľa nároku 1, zvolená z \ \ alebo jej soľ.

10. Zlúčenina podľa nároku 1, ktorá má vzorec (X⁶):

(X^Ď),

10 kde zlúčeninou je 3-[2-(2-dimetylaminoetoxy)chinolin-4-yl]-4-(l.//.-indol-3-yl)pyrol-2,5-dión alebo 3-(1.//.

-indol-3-yl)-4-[2-(4-metylpiperazin-l-yl)chinolin-4-yl]pyrol-2,5-dión alebo je zlúčeninou, v ktorej R^a, R⁸ a R⁹ sú definované nasledovne:

Pr. Ŕ⁵ Poloha -R⁹ R^a 171 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl 7-CHj H 172 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl 7-CHj ch₃ 173 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl H ch₃ 174 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl 6-CH₃ H 175 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl 6-CH₃ ch₃ 176 -(4-N-cyklopent-yl)-1 -piperazinyl H ch₃ 177 -(4-N-cyklopent-yl)-1 -piperazinyl H H 178 -(4-N-3-hydroxypropyl)-1 -piperazinyl H H 180 -(4-N-pyrimidin-2-yl)-1 -piperazinyl ch₃ H

kde zlúčeninou je 3-(l./7.-indol-3-yl)-4-[3-(4-metylpiperazin-l-yl)izochinolin-l-yl]pyrol-2,5-dión; 3-(l-metyl-l./7.-indol-3-yl)-4-[3-(4-metylpiperazin-l-yl)izochinolin-l-yl]pyrol-2,5-dión; alebo je zlúčeninou, kde R^a, R^c, R⁸ a R⁹ sú definované nasledovne:_

Pr. Ŕ⁵ Poloha -R⁹ R^a R^c 183 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl H H ch₃ 184 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl H H F 185 -1-piperazinyl H H F 186 -(4-N-metyl)- 1-homopiperazinyl H H F 187 -(4-N-metyl)-1 -homopiperazinyl H H H 188 (rac.) -(3-metyl-piperazin-l-yl) H H H 189 1-piperazinyl H H H 190 (4-N-izopropyl)-1 -piperazinyl H H H 191 3 -metyl-1 -piperazinyl H H H 192 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl H CH, F 193 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl H ch₃ H 194 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl H ch₃ ch₃ 195 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl 7-C1 H H 196 -(4-N-metyl)-1 -piperazinyl 7-C1 ch₃ H

12. Zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je 3-(l./7.-indol-3-yl)-4-[2-(4-metylpiperazin-l-yl)chinazolin-4-yl]pyrol-2,5-dión alebo jej soľ.
13. Zlúčenina podľa nároku 12, ktorou je acetátová soľ.
14. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, vyznačujúci sa 15 tým, že zahŕňa

a) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca (II) kde R^a, R^b a kruh A sú rovnaké, ako je definované v nároku 1, so zlúčeninou všeobecného vzorca (III)

R-CH₂-CO-NH₂ kde R je rovnaké, ako je definované v nároku 1,

b) reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca (IV) (III), (IV), (V), kde R^a, R^b a kruh A sú rovnaké, ako je definované v nároku 1, so zlúčeninou všeobecného vzorca (V)

R - CO - CO - OCH₃kde R je rovnaké, ako je definované v nároku 1; alebo

c) konverziu substituenta R⁸ alebo R¹¹ v zlúčenine všeobecného vzorca (I) na iný substituent R⁸ alebo R¹¹, a keď je to potrebné, konverziu výslednej zlúčeniny všeobecného vzorca (I) získanej vo voľnej forme na formu soli alebo naopak.
15. Zlúčenina podľa niektorého z nárokov 1 - 13 na použitie ako liečivo.
16. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje zlúčeninu všeobecného vzorca (I) podľa nárokov 1 - 13 vo voľnej forme alebo vo forme farmaceutický prijateľnej soli, spolu s farmaceutický prijateľným riedidlom alebo nosičom.
17. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 16, vyznačujúca sa tým, že je na topické podanie na kožu alebo do oka.
18. Použitie zlúčeniny podľa niektorého z nárokov 1 až 13 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli na prípravu liečiva na liečenie alebo prevenciu akútneho alebo chronického odmietnutia orgánu alebo tkaniva aloalebo xenoštepov, akútnych alebo chronických auto imunitných alebo zápalových ochorení sprostredkovaných T-bunkami.
19. Použitie zlúčeniny podľa niektorého z nárokov 1 až 13 alebo jej farmaceutický prijateľnej soli na prípravu liečiva na liečenie alebo prevenciu aterosklerózy, vaskulámej oklúzie, restenózy, hypertenzie, zlyhania srdca, chronického obštrukčného pľúcneho ochorenia, ochorenia CNS, rakoviny, infekčných ochorení, septického šoku, syndrómu akútnej respiračnej tiesne dospelých, ischemického/reperfúzneho poranenia, mŕtvice, črevnej ischémie, zlyhania obličiek alebo hemoragického šoku, traumatického šoku, reumatoidnej artritídy, osteoartritídy, systémového lupus erythematosus, Hashimotovej thyroiditídy, sklerózy multiplex, myasténie gravis, diabetu typu I alebo II, astmy, zápalového ochorenia pľúc, zápalového ochorenia pečene, zápalového glomerulámeho ochorenia, kožných prejavov imunologický sprostredkovaných porúch alebo ochorení, psoriázy, atopickej dermatitídy, alergickej kontaktnej dermatitídy, dráždivej kontaktnej dermatitídy a ďalších ekzematických dermatitíd, seboroickej dermatitídy, Sjoegrenovho syndrómu, keratokonjunktivitídy, uveitídy, zápalového ochorenia čriev, Crohnovej choroby alebo ulceratívnej kolitídy.
20. Použitie podľa nároku 19, kde liečivo je na topické podanie na kožu alebo do oka.
21. Zlúčenina podľa niektorého z nárokov 1 až 13 na liečenie alebo prevenciu akútneho alebo chronického odmietnutia orgánu alebo tkaniva alo- alebo xenoštepov, akútnych alebo chronických autoimunitných alebo zápalových ochorení sprostredkovaných T-bunkami.
22. Zlúčenina podľa niektorého z nárokov 1 až 13 na liečenie alebo prevenciu aterosklerózy, vaskulámej oklúzie, restenózy, hypertenzie, zlyhania srdca, chronického obštrukčného pľúcneho ochorenia, ochorenia CNS, rakoviny, infekčných ochorení, septického šoku, syndrómu akútnej respiračnej tiesne dospelých, ischemického/reperfúzneho poranenia, mŕtvice, črevnej ischémie, zlyhania obličiek alebo hemoragického šoku, traumatického šoku, reumatoidnej artritídy, osteoartritídy, systémového lupus erythematosus, Hashimotovej thyroiditídy, sklerózy multiplex, myasténie gravis, diabetu typu I alebo II, astmy, zápalového ochorenia pľúc, zápalového ochorenia pečene, zápalového glomerulámeho ochorenia, kožných prejavov imunologický sprostredkovaných porúch alebo ochorení, psoriázy, atopickej dermatitídy, alergickej kontaktnej dermatitídy, dráždivej kontaktnej dermatitídy a ďalších ekzematických dermatitíd, seboroickej dermatitídy, Sjoegrenovho syndrómu, keratokonjunktivitídy, uveitídy, zápalového ochorenia čriev, Crohnovej choroby alebo ulceratív30 nej kolitídy.
23. Kombinácia obsahujúca a) zlúčeninu podľa niektorého z nárokov 1 až 13 vo voľnej forme alebo farmaceutický prijateľnej forme a b) aspoň jedno ďalšie činidlo zvolené z imunosupresívneho, imunomodulačného, protizápalového, antiproliferatívneho alebo antidiabetického liečiva, pričom činidlá sú na súčasné alebo

5 postupné použitie.
24. Kombinácia podľa nároku 23, vyznačujúca sa tým, že druhé činidlo je zvolené z cyklosporínu alebo jeho imunosupresívneho analógu alebo derivátu, askomycínu alebo jeho imunosupresívneho analógu alebo derivátu; mTOR inhibítora; kortikosteroidu; cyklofosfamidu; azatioprénu; metotrexátu; činidla urýchľujúceho smerovanie lymfocytov; leflunomidu alebo jeho analógu; mizoribínu; mykofenolovej kyseli10 ny; mykofenolát mofetilu; 15-deoxyspergualínu alebo jeho analógu; monoklonálnej protilátky leukocytových receptorov; imunomodulačnej zlúčeniny; inhibítora adhéznej molekuly; a mAbs alebo inhibítorov s nízkou molekulárnou hmotnosťou.
25. Kombinácia podľa nárokov 23 alebo 24, vyznačujúca sa tým, že druhé činidlo je zvolené z cyklosporínu A, cyklosporínu G, FK-506, ABT-281, ASM 981, rapamycínu, 40-O-(2-hydroxy)e15 tylrapamycínu, FTY 720, CTLA4Ig alebo jej mutantu, LEA29Y, antagonistu LFA-1, antagonistu Selectinu, antagonistu VLA-4 alebo monoklonálnej protilátky proti MHC, CD2, CD3, CD4, CD1 la/CD18, CD7, CD25, CD27, B7, CD40, CD45, CD58, CD137, ICOS, CD150, 0X40, 4-1BB alebo ich ligandov.
26. Kombinácia podľa niektorého z nárokov 23 až 25 na súčasné alebo postupné použitie na liečenie alebo prevenciu akútneho alebo chronického odmietnutia orgánu alebo tkaniva alo- alebo xenoštepov, akútnych

20 alebo chronických autoimunitných alebo zápalových ochorení sprostredkovaných T-bunkami.
27. Kombinácia podľa niektorého z nárokov 23 až 26, vyznačujúca sa tým, že kombináciou je kit.