SK20122000A3

SK20122000A3 - Zlúčeniny odvodené od alfa-d-xylózy, spôsob ich prípravy, farmaceutický prostriedok a terapeutické použitie

Info

Publication number: SK20122000A3
Application number: SK2012-2000A
Authority: SK
Inventors: V�Ronique Barberousse; Christiane Legendre; Soth Samreth; Alan Dunlap Edgar
Original assignee: Fournier Industrie Et Sante
Priority date: 1998-06-24
Filing date: 1999-06-11
Publication date: 2001-07-10
Also published as: ID26806A; PL345068A1; WO1999067261A1; EP1090017B1; DE69903727D1; NO20005932D0; KR20010053038A; AU4049099A; CA2335799A1; AR019701A1; BR9911585A; EE200000752A; CN1305486A; IL140417A0; TR200003797T2; EP1090017A1; NO20005932L; JP2002518508A; HUP0102772A2; HK1039128A1

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka nových derivátov alfa-D-xylózy, definovaných ďalej uvedeným všeobecným vzorcom I, ktoré predstavujú nové priemyselne využiteľné produkty. Rovnako sa predmetný vynález týka spôsobu prípravy týchto zlúčenín, farmaceutického prostriedku a rovnako tak i terapeutického použitia, hlavne prostriedkov obsahujúcich tieto látky ako účinné zložky.

Doterajší stav techniky

Z doterajšieho stavu techniky sú už známe rôzne deriváty beta-D-xylózy, hlavne deriváty benzoyl- alebo alfa-hydroxy-benzyl-fenyl-beta-D-xylozidov, ktoré sú odporučené na použitie v liekoch na liečenie venóznej trombózy, napríklad podľa EP-A-0 051 023.

Rovnako sú z doterajšieho stavu techniky známe deriváty benzyl-fenylbeta-D-xylozidov, ktoré prejavujú hypocholesterolemickú a/alebo hypolipidemickú aktivitu, podľa EP-A-0 133 103.

Rovnako sú z doterajšieho stavu techniky známe deriváty typu beta-Dfenyltioxylozidov, používané kvôli svojej antitrombotickej aktivite, podľa EP-A-0 365 397, EP-A-0 290 321, EP-A-0 133 103 a EP-A-0 051 023.

Antitrombotická aktivita určitého počtu derivátov beta-D-xylózy bola tiež popísaná a študovaná v publikácii J. Med. Chem., 36, č. 7, 898 - 903, 1993. Výskum vykonávaný v laboratóriu preukázal, že tieto deriváty beta-D-xylózy sú dobrými substrátmi galaktozyltransferázy I. Z tohto dôvodu tieto zlúčeniny, aktívne pri perorálnej aplikácii, iniciujú syntézu glykózaminoglykánov (GAG). Po podávaní týchto zlúčenín perorálne sa badateľne zvýši cirkulujúci podiel GAG a približne 20 % tohto podielu prejavuje aktivitu dermatánsulfátového typu schopnú inhibovať trombín prostredníctvom HC II (kofaktor heparínu II), táto

31622 T ·· ·· • · · · · · · ······· • · ··· ··· ···· · • · ········ ·· ·· ·· ·· ·· ··· iniciácia biosyntézy GAG je pravdepodobne zodpovedná za antitrombotickú aktivitu pozorovanú experimentálne u zlúčenín prv uvedených. V korelácii s potenciálom týchto zlúčenín znižovať vytváranie venóznej trombózy, iba deriváty D-xylózy s konfiguráciou beta zvyšujú syntézu GAG. Okrem toho sa preukázalo, že ďalšie deriváty glykopyranozidového typu sú na tomto poli inaktívne, tak z hľadiska biologického, čo sa týka syntézy GAG, ako i z hľadiska farmakologického, čo sa týka redukcie alebo prevencie venóznej trombózy.

Aktivita určitých derivátov beta-D-xylózy, hlavne estradiol-beta-Dxylozidu, bola popísaná v publikácii Journal of Biological Chemistry, 1991, 266, č. 11, str. 6674 - 6677, pričom autori tohto článku zistili vzájomný vzťah medzi uvedenou zlúčeninou a biosyntézou heparansulfátu a rovnako tak iniciačnú úlohu beta-D-xylozidu pri syntéze chondroitínsulfátu. Tieto štúdie potvrdili prínos derivátov beta-D-xylózy pri liečení alebo prevencii venóznej trombózy.

Podstata vynálezu

Podľa predmetného vynálezu sa navrhlo nové technické riešenie, ktoré umožňuje dospieť k novým produktom, ktoré sú biologicky prínosné, čo sa týka arteriálnych ateromatóznych plátov.

Podľa tohto nového technického riešenia podľa vynálezu sa používajú produkty typu alfa-D-xylózy alebo alfa-D-tioxylózy.

Podľa predmetného vynálezu sa celkom nečakane zistilo, že deriváty Dxylózy alebo 5-tio-D-xylózy, ktoré už nevykazujú beta-konfiguráciu, ale alfakonfiguráciu na anomerizačnom uhlíku, prejavujú najmä priaznivý účinok čo sa týka prevencie alebo regresie arteriálnych ateromatóznych plátov.

Tieto nové produkty podľa predmetného vynálezu, ktoré predstavujú zlúčeniny typu alfa-D-xylózy, sú charakterizované tým, že sú zvolené zo súboru zlúčenín všeobecného vzorca I:

31622 T ·· 8··· • 8 88 ••88 88 « • 8 8 8 8 8 8 • í ·*! · * · 8 · 8 · • · · 8 8 8 8 8 8 ·· ·· 8· 88 ··

v ktorom:

X a Y predstavujú navzájom od seba nezávisle atóm kyslíka alebo síry,

Ri znamená skupinu CN, CF₃ alebo SO₂CH₃ a

R znamená atóm vodíka alebo alifatickú acylovú skupinu obsahujúcu 2 až 5 atómov uhlíka.

Podľa ďalšieho aspektu sa predmetný vynález týka prostriedku, ktorého podstata spočíva v tom, že obsahuje terapeuticky účinné množstvo prinajmenšom jednej zlúčeniny vyššie uvedeného všeobecného vzorca I v spojení s fyziologicky prijateľným excipientom.

Do rozsahu predmetného vynálezu rovnako patrí použitie zlúčeniny vyššie uvedeného všeobecného vzorca I ako antiateromatózneho lieku.

Ako je zrejmé z vyššie uvedeného všeobecného vzorca I, zlúčeniny podľa predmetného vynálezu predstavujú deriváty alfa-D-xylózy alebo alfa-Dtioxylózy, substituované na anomerizačnom uhlíku v alfa-polohe substituovanou benzofenónovou skupinou.

Hydroxylové funkcie D-xylózy alebo D-tioxylózy môžu byť voľné alebo substituované acylovou skupinou obsahujúcou 2 až 5 atómov uhlíka, vo výhodnom vyhotovení acetylovou skupinou.

V texte predmetného vynálezu sa alifatickou acylovou skupinou obsahujúcou 2 až 5 atómov uhlíka myslí acylová skupina s priamym, rozvetveným alebo cyklizovaným reťazcom, ako je najmä CH₃CO, CH₃CH₂CO, (CH₃)₂CHCO, (CH₃)₃CCO alebo cyklopropyl-karbonylová skupina.

31622 T

Tieto vyššie uvedené zlúčeniny všeobecného vzorca I možno, pripraviť postupmi, ktoré sú z doterajšieho stavu techniky v tomto odbore bežne známe a používané. Vo výhodnom vyhotovení sa benzofenón všeobecného vzorca II:

(II) v ktorom:

Y znamená atóm kyslíka alebo síry, a

Ri predstavuje skupinu CN, CF₃ alebo SO2CH₃, uvedie do reakcie (kopulačnej reakcie) s D-xylózovou zlúčeninou (alebo 5-tioD-xylózovou zlúčeninou) všeobecného vzorca III:

OAc | OAc v ktorom:

predstavuje väzbu neurčitej konfigurácie (alfa, beta alebo alfa/beta zmesi),

X znamená atóm kyslíka alebo síry,

Ac predstavuje acetylovú skupinu,

Z znamená acetylovú skupinu alebo trichlórmetylimínovú skupinu [-C(=NH)-CCI₃], pričom sa táto reakcia vykonáva v rozpúšťadle a v prítomnosti

Lewisovej kyseliny, pričom sa po vyčistení získa zlúčenina všeobecného vzorca I:

31622 T ·· ····

v ktorom:

X, Y a Ri majú rovnaký význam ako vo východiskových produktoch a

R znamená acetylovú skupinu.

Zlúčeniny vyššie uvedeného všeobecného vzorca I, v ktorom R znamená atóm vodíka, možno získať z pôvodných zlúčenín, v ktorých R znamená acetylovú skupinu, pôsobením bázickej látky, ako je napríklad metylát sodný alebo amoniak, ktorá má schopnosť nahradiť acetylovú skupinu atómom vodíka.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R znamená acylovú skupinu obsahujúcu 2 až 5 atómov uhlíka, ktoré sú definované vyššie, možno pripraviť zo zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorých R znamená atóm vodíka, účinkom chloridu alebo anhydridu kyseliny zodpovedajúcej požadovanej acylovej skupine obsahujúcej 2 až 5 atómov uhlíka, v prítomnosti aprotického bázického činidla, ako je napríklad trietylamín alebo pyridin, pričom sa táto reakcia vykonáva v rozpúšťadle, ako je napríklad dichlórmetán.

Stručne možno uviesť, že postup prípravy zlúčeniny podľa predmetného vynálezu zahrňuje:

a) kopulačnú reakciu zlúčeniny všeobecného vzorca II + zlúčeniny všeobecného vzorca III a vyčistenie takto získanej zlúčeniny všeobecného vzorca I (R znamená Ac),

b) v prípade potreby hydrolýzu (saponifikáciu) uvedenej zlúčeniny všeobecného vzorca I (R znamená Ac) za účelom získania deacetylovanej zlúčeniny všeobecného vzorca I (R znamená vodík) a

31622 T ·· ·· ·· ···· • · · · · · ·

6· · · · · ·· • · ··· · · ·· • · · · ·e · ·· ···· ··

c) v prípade potreby esterifikáciu uvedenej zlúčeniny všeobecného vzorca I (R znamená atóm vodíka) za účelom získania ľubovoľnej inej esterifikovanej zlúčeniny všeobecného vzorca I (R znamená acylovú skupinu, hlavne acylovú skupinu odlišnú od Ac).

Tieto zlúčeniny všeobecného vzorca I sú výhodne použiteľné v terapeutických prostriedkoch ako účinné zložky liekov určených na liečenie alebo prevenciu aterosklerózy.

Podľa predmetného vynálezu sa odporúča použitie produktu vybraného zo skupiny zahrňujúcej zlúčeniny vyššie uvedeného všeobecného vzorca I na prípravu antiateromatóznych liekov určených na použitie v terapeutických prostriedkoch súvisiacich s aterosklerózou.

Výhodné produkty podľa predmetného vynálezu, z hľadiska prínosných vlastností súvisiacich s aterosklerózou, sú zlúčeniny vyššie uvedeného všeobecného vzorca I, v ktorom Ri znamená skupinu CN a z tejto skupiny hlavne produkty, v ktorých X = Y = S alebo produkty, v ktorých X = Y = O.

Príklady uskutočnenia vynálezu

V nasledujúcich príkladoch je bližšie objasnený predmetný vynález, hlavne postup prípravy zlúčenín podľa vynálezu, z ktorých budú lepšie zrejmé výhody vynálezu, pričom však tieto príklady sú iba ilustratívne a nijako neobmedzujú rozsah vynálezu.

31622 T

• ·	• ·	• ·	····	··
• ·	• ·	• ·	•	• B	• e
• ·	8 B	• ·	•	• B
• ·	···	• · ·	• ·	• ·
• ·	•	• ·	• ·	• B
• ·	• B	• B	··	B·	• e

Príklad 1

Postup prípravy [4-(4-kyanobenzoyl)fenyl]-2,3,4-tri-O-acetyl-1,5-ditioalfa-D-xylopyranozidu

Podľa tohto príkladu sa použila suspenzia obsahujúca 5 g (15.10'³molov) tetra-O-acetyl-5-tio-D-xylopyranózy, 4,3 g (18.10’³ molov 4-(4merkaptobenzoyl) benzonitrilu a 5 g molekulového sita 4 A, ktorá bola pripravená v 100 ml acetonitrilu, pričom sa potom pridali 4 ml eterátu fluoridu boritého (48 %, d = 1,13) pri teplote 0 °C za súčasného premiešavania. Takto získaná reakčná zmes sa potom nechala tak, aby sa teplota opäť upravila na teplotu miestnosti a potom sa premiešavala po dobu jednu hodinu. Takto získaná zmes sa potom sfiltrovala, načo sa skoncentrovala za zníženého tlaku. Získaný zvyšok sa rozpustil vetylacetáte a tento roztok sa potom premyl zriedeným roztokom uhličitanu sodného a potom zriedeným roztokom kyseliny chlorovodíkovej a nakoniec vodou až do dosiahnutia neutrálneho stavu. Organická fáza sa potom usušila a skoncentrovala za zníženého tlaku. Tento zvyšok sa potom prečistil chromatograficky na silikagéli, načo sa tento produkt eluoval zmesou toluénu a etylacetátu (v objemovom pomere 6/1). Týmto spôsobom sa získalo 7 g požadovanej zlúčeniny v zmesi s beta-izomérom (tieto dva izoméry sú v pomere alfa/beta = 60/40). Táto zmes sa potom rozpustila v 15 ml etylacetátu, načo sa pridalo 15 ml etyléteru. Takto získané kryštáliky (v podstate beta-izomér) sa oddelili odfiltrovaním a filtrát sa skoncentroval za zníženého tlaku. Týmto spôsobom sa získalo 5,4 g požadovanej zlúčeniny obsahujúcej 20 % beta-izoméru (výťažok = 63 %). Táto požadovaná zlúčenina bola pripravená s čistotou 98 % vo forme alfa-izoméru po dvoch rekryštalizáciách z metanolu.

F = 144-146 °C.

[alfa]²⁴ _D = +328° (c = 0,42, CH₂CI₂).

31622 T ·· ····

Príklad 2

Postup prípravy [4-(4-kyanobenzoyl)fenyl]-1,5-ditio-alfa-D-xylopyranozidu

Podľa tohto postupu sa použil roztok obsahujúci 10,27 g (20.10'³ molov) zlúčeniny získanej postupom podľa príkladu 1 v 100 ml metanolu a 35 ml tetrahydrofuránu. Potom sa k tomuto roztoku pridalo 1,15 ml (4.10‘³ molov) roztoku metylátu sodného pri teplote v rozmedzí od 10 do 15 °C.

Po 20 minútach, pri ktorých prebiehalo premiešavanie pri teplote v rozmedzí od 10 do 15 °C, sa takto získaná reakčná zmes podrobila perkolácii na živici IR 120 (H* forma). Získaný roztok sa odfarbil za použitia aktívneho uhlíka, sfiltroval a skoncentroval za zníženého tlaku. Tento zvyšok sa potom podrobil kryštalizácii z metanolu. Po rekryštalizácii z metanolu sa získalo 5 g požadovaného produktu vo forme bielych kryštálikov.

Výťažok: 65 %.

F = 142 ’C.

[alfa]²⁰ _D = +508’ (c = 0,42, CH₃OH).

Príklad 3

Postup prípravy [4-(4-kyanobenzoyl)fenyl]-2,3,4-tri-O-acetyl-alfa-Dxylopyranozidu

Podľa tohto príkladu sa použila zmes obsahujúca 9 g (28,3.10'³ molov) tetra-O-acetyl-D-xylózy a 8 g (35,9.10³ molov) 4-(4hydroxybenzoyl)benzonitrilu, pričom táto zmes sa pripravila v 90 ml dichlórmetánu, potom sa po kvapkách pri teplote miestnosti pridalo 8 ml (68,4.10'³ molov) chloridu cíničitého, načo sa toto reakčné médium zahrialo na teplotu 45 ’C a pri tejto teplote sa premiešavalo po dobu 15 hodín. Získaná reakčná zmes sa potom naliala na ľad a zriedila kyselinou chlorovodíkovou, načo sa vykonala extrakcia etylacetátom v kyslom médiu, potom sa spojené organické fázy premyli zriedeným roztokom kyseliny chlorovodíkovej a potom

31622 T ·· ···· vodou, načo nasledovalo zriedenie roztokom hydrogénuhličitanu sodného a potom vodou. Organická fáza sa potom usušila síranom horečnatým a potom sa skoncentrovala za zníženého tlaku. Takto získaný surový produkt sa potom prečistil chromatografickou metódou na silikagéli, načo nasledovalo eluovanie s pomocou zmesi toluénu a etylacetátu (v objemovom pomere 5/1). Týmto spôsobom sa pripravilo 3,3 g požadovaného produktu vo forme bieleho prášku. Výťažok: 24 %.

F = 75 °C.

[alfa]²⁶ _D = +146,3’ (c = 0,36, CH₃0H).

Príklad 4

Postup prípravy [4-(4-kyanobenzoyl)fenyl]-alfa-D-xylopyranozidu

Podľa tohto príkladu sa 4,3 g (8,94.1 θ'³ molov) zlúčeniny pripravenej postupom podľa príkladu 3 pridalo do 50 ml nasýteného roztoku amoniaku v metanole pri teplote 0 ’C, načo sa takto získaná zmes udržiavala po dobu 2 hodiny pri teplote 0 ’C za miešania a potom po dobu 2 hodiny pri teplote miestnosti. Toto reakčné médium sa potom skoncentrovalo za zníženého tlaku a zvyšok sa prečistil chromatografickou metódou na silikagéli, pričom ako eluačné činidlo sa použila zmes dichlórmetánu a metanolu (v objemovom pomere 10/1). Takto získaná čistá frakcia sa skoncentrovala za účelom eliminovania rozpúšťadiel, načo sa tento produkt previedol do formy suspenzie v destilovanej vode, takto pripravená zmes sa stužila a vysušila vymrazovaním. Týmto spôsobom sa pripravilo 2,15 g požadovaného produktu vo forme rozdrveného bieleho prášku.

Výťažok: 67 %.

F = 186-187 ’C.

[alfa]²% = +155’ (c = 0,40, CH₃OH).

31622 T ·· ····

Príklad 5

Postup prípravy [4-(4-kyanobenzoyl)fenyl]-2,3,4-tri-O-acetyl-1 -tioalfa-xylopyranozidu

Postup podľa tohto príkladu sa vykonával podobným spôsobom ako postup v príklade 3, pričom sa ako východisková látka použil 4-(4merkaptobenzoyl) benzonitril a požadovaný produkt sa získal vo forme bielej pevnej látky.

Výťažok: 11 %.

F = 158-159 °C.

[alfa]²⁶ _D = +161° (c = 0,38, CH₃OH).

Príklad 6

Postup prípravy [4-(4-kyanobenzoyl)fenyl]-1 -tio-alfa-D-xylopyranozidu

Postup podľa tohto príkladu sa vykonával podobným spôsobom ako postup v príklade 4, pričom sa ako východisková látka použila zlúčenina podľa príkladu 5 a požadovaný produkt sa získal vo forme krémovo sfarbeného prášku.

Výťažok: 90 %.

F = 198 °C.

[alfa]²⁶ _D = +245° (c = 0,30, CH₃OH).

Príklad 7

Postup prípravy [4-(4-kyanobenzoyl)fenyl]-2,3₁4-tri-O-acetyl-5-tioalfa-D-xylopyranozidu

Podľa tohto príkladu sa použila suspenzia obsahujúca 2 g (9.10'³ molov)

4-(4-hydroxybenzoyl)benzonitrilu v 40 ml dichlórmetánu, načo sa pridal 1 g 4 A molekulového sita a táto zmes sa ochladila na teplotu -30 °C. V ďalšom postupe sa potom pomalým spôsobom pridalo 1,8 ml (8.10'³ molov)

31622 T ·· ···· trietylsilyltrifluórmetánsulfonátu za súčasného premiešavania tejto reakčnej zmesi a potom sa pridal roztok obsahujúci 3,9 g (9.10'³ molov) 2,3,4-tri-Oacetylo-5-tio-alfa-D-xylopyranozyltrichlóracetimidátu v 20 ml dichlórmetánu. Táto reakčná zmes sa potom premiešavala po dobu 4 hodiny pri teplote -30 °C a potom po dobu 16 hodín pri teplote 0 °C. Po neutralizácii, ktorá sa vykonala s pomocou kolodínového roztoku, sa toto reakčné médium sfiltrovalo. Oddelený filtrát sa zriedil 200 ml etylacetátu a získaná organická fáza sa premyla roztokom zriedeného uhličitanu sodného, potom vodou, potom sa použil zriedený roztok kyseliny chlorovodíkovej, potom sa vykonalo premytie vodou a produkt sa usušil síranom horečnatým. Po skoncentrovaní tohto roztoku za zníženého tlaku sa získaný zvyšok prečistil chromatografickým spôsobom na silikagéli, pričom ako eluačné činidlo sa použila zmes metylcyklohexánu a etylacetátu (v objemovom pomere 5/2). Týmto hore uvedeným postupom sa pripravilo 0,86 g požadovaného produktu vo forme béžovo sfarbeného prášku. Výťažok: 19 %.

F = 85 ^eC.

[alfa]²¹ _D = +366° (c = 0,3, CH₂CI₂).

Príklad 8

Postup prípravy [4-(4-kyanobenzoyl)fenyl]-5-tio-alfa-D-xylopyranozidu

Postup podľa tohto príkladu sa vykonával podobným spôsobom ako postup v príklade 4, pričom ako východisková látka sa použila zlúčenina podľa príkladu 7 a požadovaný produkt sa získal vo forme béžovo sfarbeného prášku. Výťažok: 73 %.

F = 180 °C.

[alfa]²⁶ _D = +476° (c = 0,32, CH₃OH).

31622 T ·· ····

Príklad 9

Postup prípravy [4-(4-(trifluórmetyl)benzoyl)fenyl]-2,3,4-tri-O-acetylalfa-D-xylopyranozidu

Podľa tohto príkladu sa použil roztok obsahujúci 2,5 g (čo je 9,4.10'³molov) (4-hydroxyfenyl)-[4-(trifluórmetyl)fenyl]metanónu a 3,5 g (11.10‘³ molov) tetra-O-acetyl-D-xylózy v 30 ml acetonitrilu, načo sa pridal 1 g molekulového sita 4 A. Táto zmes sa potom ochladila na teplotu 0 °C a potom sa pomalým spôsobom po kvapkách za súčasného premiešavania pridalo 7,2 ml (58.10³molov) eterátu fluoridu boritého. Táto reakčná zmes sa potom zriedila etylacetátom a organická fáza sa premyla roztokom zriedeného roztoku uhličitanu sodného, potom vodou, ďalej sa použil zriedený roztok kyseliny chlorovodíkovej a potom opäť voda. Po usušení takto získaného produktu na sírane horečnatom sa organická fáza skoncentrovala za zníženého tlaku a získaný zvyšok sa prečistil chromatografickým spôsobom na silikagéli, pričom sa ako eluačné činidlo použila zmes metylcyklohexánu a etylacetátu (v objemovom pomere 5/2). Týmto spôsobom sa získalo 0,46 g požadovaného produktu vo forme amorfnej béžovej pevnej látky.

Výťažok: 10 %.

F = 65 °C.

[alfa]²⁶o ~ +141° (c = 0,32, CH2CI2).

Príklad 10

Postup prípravy [4-(4-trifluórmetyl)benzoyl)fenyl]-alfa-D-xylopyranozidu

Podľa tohto príkladu sa použilo 0,370 g (0,7.10'³ molov) zlúčeniny získanej postupom podľa príkladu 9, pričom sa tento podiel rozpustil v 20 ml metanolu a potom sa pridalo 40 μΙ roztoku metylátu sodného v metanole s koncentráciou 25 %. Tento roztok sa potom uchovával po dobu dve hodiny za miešania, načo sa pridalo približne 0,5 g živice 120 HR v kyslej forme. Po sfiltrovaní sa získaný filtrát skoncentroval za zníženého tlaku. Týmto vyššie

31622 T ···· φ · ·· φ · ··

4» · ···· • ·· ···· ·· ···· • · · • · · • · · · • · · · ·· ··

··· popísaným spôsobom sa pripravilo 240 mg požadovaného produktu vo forme béžovej pevnej látky.

Výťažok: 85 %.

F = 188 °C.

[alfa]²⁶ ₀ = +165° (c = 0,27, CH₃OH).

Príklad 11

Postup prípravy [4-(4-trifluórmetyl)benzoyl)fenyl]-2,3,4-tri-O-acetyl-

5-tio-alfa-D-xylopyranozidu

Postup podľa tohto príkladu sa vykonával podobným spôsobom ako je postup v príklade 7, pričom sa ako východisková látka použil (4-hydroxyfenyl) [4-(trifluórmetyl)fenyl]metanol, pričom týmto spôsobom sa získala požadovaná zlúčenina vo forme béžovej amorfnej pevnej látky.

Výťažok: 101 %.

F = 188 °C.

[alfa]²⁶ _D = +165° (c = 0,27, CH₃OH).

Príklad 12

Postup prípravy [4-(4-trifluórmetyl)benzoyl)fenyl]-5-tioOalfa-D-xylopyranozidu

Postup podľa tohto príkladu sa vykonával podobným spôsobom ako postup v príklade 10, pričom ako východisková látka sa použila zlúčenina podľa príkladu 11 a požadovaný produkt sa získal vo forme amorfného bielo sfarbeného prášku.

Výťažok: 80 %.

F = 82 ’C.

[alfa]²² ₀ = +378° (c = 0,25, CH₃OH).

31622 T ·· ·· ·· 9999 99

9 9 9 ·· φ « · <*···«·· «· • · ··· · · · « « « • · · ···· · · ·· ·· ·· 99 99

Príprava I

Postup prípravy O-[4-(4-(trifluórmetyl)benzoyl)fenyl]esteru kyseliny dimetylkarbamotiovej

Podľa tohto postupu sa použil roztok obsahujúci 10 g (37,6.10'³ molov) (4-hydroxyfenyl)[4-(trifluórmetyl)fenyl]metanónu v 100 ml acetónu, pričom sa k tomuto roztoku pridal roztok obsahujúci 2,94 g (45.10‘³ molov) hydroxidu sodného (80 %) v 80 ml vody za súčasného premiešavania pri teplote miestnosti. Potom sa pridal roztok obsahujúci 5,11 g (41,3.10‘³ molov) dimetyltiokarbamoylchloridu v 70 ml acetónu. Táto reakčná zmes sa potom udržiavala pri teplote miestnosti po dobu 8 hodín za súčasného premiešavania, načo sa skoncentrovala za zníženého tlaku. Surový produkt sa potom umiestnil do suspenzie 60 ml 1 mól/1 liter roztoku hydroxidu draselného a tento produkt sa premiešaval po dobu 20 minút pri teplote v rozmedzí od 10 do 15 °C. Získaná pevná látka sa potom sfiltrovala, opláchla vo forme suspenzie vo vode do neutrálnej hodnoty pH, načo sa usušila v sušiarni. Týmto spôsobom sa pripravilo 10,3 g požadovaného produktu vo forme béžového prášku.

Výťažok: 78 %. F = 174 °C.

Príprava II

Postup prípravy S-[4-(4-(trifluórmetyl)benzoyl)fenylJesteru kyseliny dimetylkarbamotiovej

Podľa tohto postupu sa 10,3 g (29.10'³ molov) zlúčeniny získanej postupom podľa Prípravy I umiestnilo do nádoby pod atmosférou dusíka, načo sa tento produkt udržiaval pri teplote 250 až 260 °C po dobu 1 hodinu. Po ochladení sa pridalo približne 15 ml etylacetátu, načo sa táto zmes priviedla k miernemu refluxu, potom sa nechala ochladiť na teplotu 0 °C. Po približne 10 hodinách, kedy sa táto zmes udržiavala pri uvedenej teplote, sa

31622 T ·· ·· ·· ···· ·· • · · · ·· · · · • · · · ·· · ·· • · ··· · · · · · · · skryštalizovaná pevná látka sfiltrovala a pevný produkt sa potom opláchol približne 10 ml cyklohexánu. Po usušení v sušiarni sa získalo týmto hore popísaným spôsobom 6,2 g požadovaného produktu vo forme béžových kryštálikov.

Výťažok: 60 %. F = 140 °C.

Príprava III

Postup prípravy (4-merkaptofenyl)-[4-(trifluórmetyl)fenyl]metanónu

Podľa tohto postupu sa použila suspenzia obsahujúca 6,1 g (17,3.10³molov) zlúčeniny získanej postupom podľa Prípravy II v 65 ml metanolu. Po deoxygenácii tohto média prebublávaním dusíka týmto médiom sa pridalo 10 ml (34.10’³ molov) roztoku metylátu sodného v metanole. Potom sa teplota tejto reakčnej zmesi zvýšila na 40 °C za súčasného premiešavania a pri tejto teplote sa udržiavala po dobu tri hodiny. Potom sa vykonalo parciálne skoncentrovanie (odstránených bolo približne 25 ml metanolu), čo sa vykonalo za zníženého tlaku a takto získaný roztok sa nalial do zmesi ľadu a zriedenej kyseliny chlorovodíkovej. Požadovaný produkt sa týmto spôsobom vyzrážal. Tento pevný produkt sa oddelil odfiltrovaním a premyl vodou až do dosiahnutia neutrálnej hodnoty pH. Po usušení v sušiarni sa získalo 4,8 g požadovaného produktu vo forme čírej zelenej pevnej látky.

F = 150 ’C.

31622 T ·· ···· • · · · ·· · ··· « · · · ·· · ·· • · ··· · · · · · · ·

Príklad 13

Postup prípravy [4-(4-(trifluórmetyl)benzoyl)fenyIJ-1 -tio-2,3,4-tri-O-acetylalfa-D-xylopyranozidu

Pri vykonávaní postupu podľa tohto príkladu sa postupovalo podobným spôsobom ako v príklade 9, pričom ako východisková zlúčenina sa použila zlúčenina podľa Prípravy III a požadovaný produkt sa pripravil vo forme béžovej pevnej látky.

Výťažok: 27 %.

F = 60 °C.

[alfa]²² ₀ = +145° (c = 0,25, CH₂CI₂).

Príklad 14

Postup prípravy [4-(4-(trifluórmetyl)benzoyl)fenyl]-1-tioalfa-D-xylopyranozidu

Pri vykonávaní postupu podľa tohto príkladu sa postupovalo podobným spôsobom ako v príklade 10, pričom ako východisková zlúčenina sa použila zlúčenina podľa Príkladu 13 a požadovaný produkt sa pripravil vo forme krémovo sfarbenej amorfnej pevnej látky.

Výťažok: 95 %.

F = 172 °C.

[alfa]²⁴ _D = +211° (c = 0,35, CH₃OH).

Príklad 15

Postup prípravy [4-(4-(trifluórmetyl)benzoyl)fenyl]-2,3,4-tri-O-acetyl-

1,5-ditio-alfa-D-xylopyranozidu

Pri vykonávaní postupu podľa tohto príkladu sa postupovalo podobným spôsobom ako v príklade 9, pričom ako východisková zlúčenina sa použila

1,2,3-tetra-O-acetyl-5-tio-D-xylóza a zlúčenina získaná postupom podľa

31622 T

··	··	• ·	····	é· ·
•	•	•	•	•	• ·	• ·	• ·
•	•	•	•	•	• ·	• ·
•	•	• ·	• ·	•	• ·	• · ·
•
··		··		• ·	··	• ·	• · ·

Prípravy III, a požadovaný produkt sa pripravil vo forme bieleho pevného prášku.

Výťažok: 18 %.

F = 70 °C. [alfa]²⁴ _D = +215° (c = 0,45, CH₂CI₂).

Príklad 16

Postup prípravy [4-(4-(trifluórmetyl)benzoyl)fenyl]-1,5-ditioalfa-D-xylopyranozidu

Pri vykonávaní postupu podľa tohto príkladu sa postupovalo podobným spôsobom ako v príklade 10, pričom ako východisková zlúčenina sa použila zlúčenina získaná postupom podľa príkladu 15 a požadovaný produkt sa pripravil vo forme bielej práškovitej pevnej látky.

Výťažok: 84 %.

F = 104 °C.

[alfa]²⁵ _D = +399° (c = 0,50, DMSO).

Príprava IV

Postup prípravy (4-hydroxyfenyl) [4-(metylsulfinyl)fenyl]metanónu

Podľa tohto postupu sa použil roztok obsahujúci 15 g (61,4.10'³ molov) (4-hydroxyfenyl) [4-(metyltio)-fenyl]metanolu v 200 ml metanolu. Tento roztok sa ochladil na teplotu približne 5 °C s pomocou ľadového kúpeľa, načo sa pridalo 14,12 g (61,4.10^-3 molov) 3-chlór-benzénkarboperoxovej kyseliny (mCPBA), pričom tento prídavok sa vykonal po častiach stitráciou 75 %. Toto reakčné médium sa potom udržiavalo za miešania po dobu 15 minút po skončení vyššie uvedeného prídavku, načo sa vykonala hydrolýza s použitím zriedeného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Ďalej sa vykonala extrakcia s použitím etylacetátu, pričom získaná fáza s produktom sa premyla vodou až do neutrálneho stavu, potom sa usušila a skoncentrovala za zníženého tlaku.

31622 T ·· ····

Týmto spôsobom sa získalo 13,2 g bielej pevnej látky obsahujúcej požadovaný produkt v zmesi so (4-hydroxyfenyl)[4-(metylsulfonyl)-fenyl]metanolom.

Príprava V

Postup prípravy (4-hydroxyfenyl)-[4-(metylsulfonyl)fenyl]metanónu

Podľa tohto postupu sa použila suspenzia obsahujúca 13,2 g zlúčeniny získanej postupom podľa Prípravy IV v 150 ml metanolu, načo sa pridalo 11,7 g (50,8.10’³ molov) mCPBA, pričom tento prídavok sa vykonal po častiach za súčasného premiešavania (s titráciou 75 %). Táto reakčná zmes sa potom udržiavala za miešania po dobu 30 minút, načo sa vykonala hydrolýza s použitím chladného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. V ďalšom postupe sa vykonala extrakcia s použitím etylacetátu, pričom organická fáza sa premyla vodou až do neutrálneho stavu, potom sa usušila a skoncentrovala za zníženého tlaku. Týmto hore uvedeným postupom sa získalo 13,6 g požadovaného produktu vo forme bielej pevnej látky.

Výťažok: 97 %. F = 144 °C.

Príprava VI

Postup prípravy O-[4-[4-(metylsulfonyl)benzoyl]fenylJesteru kyseliny dimetylkarbamotiovej

Pri vykonávaní tohto postupu sa postupovalo podobným spôsobom ako v prípade Prípravy I, pričom ako východisková zlúčenina sa použila zlúčenina získaná postupom podľa Prípravy V, a požadovaný produkt sa pripravil vo forme béžovo sfarbenej pevnej látky.

Výťažok: 69 %.

F = 150 °C.

31622 T • · ·· ·· ··«· • · · · · · ·

Príprava VII

Postup prípravy S-[4-[4-(metylsulfonyl)benzoyl]fenyl] esteru kyseliny dimetylkarbamotiovej

Pri vykonávaní tohto postupu sa postupovalo podobným spôsobom ako v prípade Prípravy II, pričom ako východisková zlúčenina sa použila zlúčenina získaná postupom podľa Prípravy VI, a požadovaný produkt sa pripravil vo forme béžovo sfarbených kryštálov.

Výťažok: 91 %. F = 172 °C.

Príprava VIII

Postup prípravy (merkaptofenyl) [4-(metylsulfonyl)fenyl]metanónu

Pri vykonávaní tohto postupu sa postupovalo podobným spôsobom ako v prípade Prípravy III, pričom ako východisková zlúčenina sa použila zlúčenina získaná postupom podľa Prípravy VII (za použitia prídavku dimetylformamidu, kvôli rozpusteniu produktu) a požadovaný produkt sa pripravil vo forme krémovo sfarbenej pevnej látky.

Výťažok: 95 %.

F = 176 ’C.

Príklad 17

Postup prípravy [4-[4-(metylsulfonyl)benzoyl]fenyl]-2,3,4-tri-O-acetyl-

1,5-ditio-alfa-D-xylopyranozidu

Pri vykonávaní postupu podľa tohto príkladu sa postupovalo podobným spôsobom ako v prípade Príkladu 15, pričom ako východisková zlúčenina sa použila zlúčenina získaná postupom podľa Prípravy VIII, a požadovaný produkt sa pripravil vo forme béžovo sfarbenej pevnej látky.

31622 T

Výťažok: 31 %.

F = 86 °C.

[alfa]²¹ □ = +293° (c = 0,44, DMSO).

·· ·· ·· ···· ·· • · · · ·· · · · · • •••••e ·· • · ··· · · · · · · ·

Príklad 18

Postup prípravy [4-[4-(metylsulfonyl)benzoyl]fenyl]-

1,5-ditio-alfa-D-xylopyranozidu

Pri vykonávaní postupu podľa tohto príkladu sa postupovalo podobným spôsobom ako v prípade Príkladu 10, pričom ako východisková zlúčenina sa použila zlúčenina získaná postupom podľa Príkladu 17, a požadovaný produkt sa pripravil vo forme svetložltej pevnej látky.

Výťažok: 90,5 %.

F = 100 “C.

[alfa]²⁶ _D = +381’ (c = 0,58, DMSO).

Protiaterómová aktivita zlúčenín podľa vynálezu sa demonštrovala na myších samiciach s deficitom apolipoproteínu E (homozygóti). Podľa záznamu tohto testu sa testovaný produkt podával v potrave (štandardná diéta) po dobu 14 týždňov. Na konci pokusu myši podstúpili eutanáziu a zo srdca a oblúka aorty sa odobrali histologické rezy. Poškodené oblasti sa vyhodnocovali podľa spôsobu popísaného v časopise Arteriosclerosis, 10, 316 - 323, 1990).

Tabuľka I ukazuje výsledky získané podľa tohto testu vykonávaného so zlúčeninou z príkladu 2 v rôznych dávkach. Výsledky sú vyjadrené ako percento zmenšenia poškodenej oblasti aortického sínusu v porovnaní so skupinou neošetrovaných kontrolných myší.

31622 T

Tabuľka I

Podávaná dávka (mg/kg)	10	100	300
Redukcia (%)	-32	-51	-71

Kvôli porovnaniu sa tiež testovala zlúčenina [4-(4-kyanobenzoyl)fenylJ-

1,5-ditio-beta-D-xylopyranozid, uvádzaný vEP-A-0 290 321. V dávke 300 mg/kg táto zlúčenina zmenšuje poškodenú oblasť o 30 %. Ako bolo ukázané v tabuľke I, rovnaký biologický výsledok sa dosiahol dávkou iba 10 mg/kg zlúčeniny podľa príkladu 2. To dokazuje prevahu zlúčeniny podľa vynálezu v tejto aktivite v prípadoch, kedy je anomerizačný uhlík xylózy v konfigurácii alfa.

V priebehu 14 týždňov testu popísaného vyššie, cieleného na vyhodnotenie protiaterómových vlastností zlúčeniny, sa merala sérová hladina cholesterolu ošetrených a kontrolných myší a výsledok sa vyjadril vo forme oblasti pod krivkou (AUC) cholesterolu v priebehu celkového trvania testu. Výsledky dosiahnuté so zlúčeninou z príkladu 2 sú uvedené v tabuľke II, kde AUC predstavuje oblasť pod krivkou (vyjadrená vg.deň.ľ¹) a odchýlka (v percentách) sa vyhodnotila vo vzťahu ku kontrolnej skupine.

Tabuľka II

Dávka (mg/kg)	0 (kontrolná)	10	100	300
AUC	583 ± 23	585 ±15	507 ± 16	505 ± 20
Zmena (%)	-	0	-13	-13

Analýza pozorovaných hodnôt odhalila účinok na zníženie cholesterolu, ktorý sa v priebehu 14 týždňov objavil iba u dávky 100 mg/kg, zatiaľ čo protiaterómový účinok bol významný od dávky 10 mg/kg.

31622 T • <· ·· ·· ···· ·· ···· ·· · · · • · · · · · · φ φ • · ··· φ · φ φ φ ·

Avšak z hľadiska pravdepodobnosti korelácie medzi pozorovanou protiaterómovou aktivitou a kapacitou zlúčeniny znižovať hladinu sérového cholesterolu a v snahe získať čo najrýchlejšie výsledok testu, ako je to len možné, sa zlúčeniny podľa vynálezu vyhodnocovali podľa svojho potenciálu znížiť cholesterolémiu u myší vystavených diéte bohatej na tuk. Test sa » vykonával podávaním zlúčenín myším samiciam kmeňa C57BL/6J. Protokol bol tento: prvý deň (JO) myši hladovali od 9.00 do 17.00 hodiny, o 14.00 hodine sa odobrala vzorka krvi. O 17.00 hodine sa rozdalo určené množstvo potravy (tučná diéta obsahujúca 1,25 % cholesterolu a 0,5 % kyseliny cholovej). Druhý deň (J1) o 9.00 sa odvážili zvyšky jedla a myši hladovali od 9.00 do 14.00 hodiny. O 14.00 hodine sa odobrala vzorka krvi. Skupinám liečených myší sa zlúčenina podávala sondou v suspenzii roztoku arabskej gumy, v 3 %, druhý deň (J1) o 9.00 hodine. Kontrolná skupina dostala iba arabskú gumu.

Zlúčeniny sa testovali v dávke 100 mg/kg. Analyzoval sa celkový sérový cholesterol a výsledky sa vyjadrili ako percento inhibície zvýšenej cholesterolémie v porovnaní s kontrolnou skupinou. Získané výsledky sú zanesené do stĺpca Aktivita” v tabuľke III. Okrem toho je možné pozorovať, že analýza obsahu cholesterolu v rôznych triedach sérových lipoproteínov odhalila prospešný účinok produktu na pomer HDL-cholesterol/celkový cholesterol.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa predmetného vynálezu možno podávať výhodne perorálne vo forme tabliet alebo kapsúl, pričom každá z nich obsahuje 20 až 500 mg zlúčeniny podľa vynálezu všeobecného vzorca I ako * aktívny liek v spojení s excipientmi. Dávkovanie je asi 1 až 4 dávky za deň.

Tieto produkty možno predpisovať ako prevenciu alebo liečenie ateromatózneho rizika.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY t 1. Alfa-D-xylózová zlúčenina vybraná zo skupiny zlúčenín všeobecného vzorca I:

B v ktorom:

X a Y predstavujú navzájom od seba nezávisle atóm kyslíka alebo síry,

Rí znamená skupinu CN, CF₃ alebo SO₂CH₃ a

R znamená atóm vodíka alebo alifatickú acylovú skupinu obsahujúcu 2 až 5 atómov uhlíka.
2. Alfa-D-xylózová zlúčenina všeobecného vzorca I podľa nároku 1, v ktorej Ri znamená skupinu CN.
3. Alfa-D-xylózová zlúčenina všeobecného vzorca I podľa nároku 1, v ktorej X = Y = S a R, znamená skupinu CN.
4. Alfa-D-xylózová zlúčenina všeobecného vzorca I podľa nároku 1, v ktorej X = Y = O a R( znamená skupinu CN.
5. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že:

a) benzofenónová zlúčenina všeobecného vzorca II:

31622 T (II) • · ·· • · ·· • · ··· · • ·· ·· ·· ·· ···· • · · ·· • · · · · • · · · ·· • · · · ·· ·· ·· ·· v ktorej:

Y znamená atóm kyslíka alebo síry, a

R, znamená skupinu CN, CF₃ alebo SO₂CH₃, sa uvedie do reakcie s D-xylózovou zlúčeninou všeobecného vzorca III:

OAc j

OAc v ktorom:

X znamená atóm kyslíka alebo síry,

Ac znamená acetylovú skupinu, a

Z znamená acetylovú skupinu alebo trichlórmetylimínovú skupinu [-C(=NH)-CCI₃], pričom sa táto reakcia vykonáva v rozpúšťadle a v prítomnosti Lewisovej kyseliny a po vyčistení sa získa zlúčenina všeobecného vzorca I: v ktorom:

X, Y a Ri majú rovnaký význam ako vo východiskových produktoch a R znamená acetylovú skupinu,

31622 T

·· ·· ·· ···· ·· · • • • · • • · • · ·· • • • · • • · • · • • ··· • · • · · • · • • · • · ·· ·· ·· ··

b) v prípade potreby sa táto takto získaná zlúčenina všeobecného vzorca I, v ktorej R znamená acetylovú skupinu, uvedie do reakcie s bázickou látkou za účelom nahradenia acetylovej skupiny atómom vodíka, pričom sa získa zlúčenina všeobecného vzorca I, v ktorom R znamená atóm vodíka a

c) v prípade potreby sa takto získaná zlúčenina všeobecného vzorca I, v ktorej • * R znamená atóm vodíka, uvedie do reakcie s chloridom kyseliny obsahujúcej 2 až 5 atómov uhlíka alebo anhydridom alifatickej kyseliny obsahujúcej 2 až 5 atómov uhlíka v prítomnosti aprotickej bázickej látky v rozpúšťadle, za účelom získania zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorej R znamená acylovú skupinu.
6. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje v spojení s fyziologicky prijateľnou nosičovou látkou terapeuticky prijateľné množstvo prinajmenšom jednej zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1.
7. Použitie produktu vybraného zo skupiny zlúčenín všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na prípravu antiateromatózneho lieku určeného na použitie v terapeutických činidlách v súvislosti s aterosklerózou.