[go: up one dir, main page]

SK141399A3 - Use of cartilage oligomeric matrix protein for the treatment of rheumatoid arthritis - Google Patents

Use of cartilage oligomeric matrix protein for the treatment of rheumatoid arthritis Download PDF

Info

Publication number
SK141399A3
SK141399A3 SK1413-99A SK141399A SK141399A3 SK 141399 A3 SK141399 A3 SK 141399A3 SK 141399 A SK141399 A SK 141399A SK 141399 A3 SK141399 A3 SK 141399A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
comp
arthritis
pharmaceutical composition
rats
rat
Prior art date
Application number
SK1413-99A
Other languages
English (en)
Inventor
Dick Heinegard
Johnny C Lorentzen
Lars Klareskog
Original Assignee
Astra Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astra Ab filed Critical Astra Ab
Publication of SK141399A3 publication Critical patent/SK141399A3/sk

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/39Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2013Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A61K9/2018Sugars, or sugar alcohols, e.g. lactose, mannitol; Derivatives thereof, e.g. polysorbates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/4841Filling excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/4866Organic macromolecular compounds

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Použitie oligomérneho'matrixového proteínu chrupavky (COMP) na liečenie reumatoidnej artritídy
Oblasť techniky
Predkladaný vynález sa týka použitia oligomérneho matrixového proteínu chrupavky, alebo· jeho fragmentov alebo
J analógov, na prípravu farmaceutického prípravku na prevenciu alebo liečenie artritídy u cicavcov.
Doterajší stav techniky
Artritída je všeobecné označenie pre ťažké zápalové ochorenia kĺbov, príkladom sú reumatoidná artritída, bakteriálna artritída, reaktívna artritída a artritída indukovaná kryštálmi. Termín reumatoidná artritída (RA) označuje velkú skupinu ochorení nebakteriálneho pôvodu. Klasická reumatoidná artritída zasahuje normálne niekoľko kĺbov (polyartritída) , ale môže byť obmedzená aj na jediný kĺb (monoartritída). Napadnutie chrupavky kĺbu je iba jedným z faktorov, ktoré spôsobujú degeneráciu chrupavky a kosti, a tým poškodenie funkcie kĺbu. Je pritom ovplyvnené tiež kĺbové puzdro, väzy a kostné tkanivo.
V súčasnosti sa môžu symptómy reumatoidnej artritídy u niektorých pacientov zmierniť a funkcie kĺbov sa môžu udržať alebo aj zlepšiť liečením, napr. kortikosteroidmi, metotrexátom, fyzioterapiou alebo chirurgickým zákrokom. Avšak u niektorých pacientov sa zlepšenie nemôže liečením dosiahnuť. Okrem toho doteraz neexistuje žiadny spôsob prevencie reumatoidnej artritídy.
Podstata vynálezu
Cieľom vynálezu je zabrániť alebo aspoň zmierniť symptómy ochorenia typu artritídy. Tento cieľ sa môže dosiahnuť použitím oligomérneho matrixového proteínu chrupavky (COMP), alebo jeho fragmentov či analógov, na prípravu farmaceutického prípravku na prevenciu alebo liečenie artritídy u cicavcov.
Vo výhodnom uskutočnení predkladaného vynálezu sa preventívnym ošetrením odstránili alebo zmiernili symptómy reumatoidnej artritídy.
Predkladaný vynález je založený na prekvapujúcom zistení autorov vynálezu, že COMP sa podiela na vzniku artritídy (je tzv. artritogénny). Reumatoidná artritída je autoimúnne ochorenie, t.j. predpokladá sa, že je u cicavcov spôsobená poruchou funkcie imunitného systému, keď imunitný systém zlyháva v rozlišovaní látok cudzorodých pre cicavca a látok cicavcovi vlastných a vytvára protilátky proti súčastiam vlastného tela.
Oligomérny matrixový proteín chrupavky (COMP) je oligomérny glykoproteín s veľkosťou 524 kDa a primárne sa vyskytuje v horných vrstvách kĺbovej chrupavky. Vo všetkých typoch chrupaviek sa syntetizuje v chondrocytoch. Glykoproteín sa skladá z piatich rovnakých podjednotiek spojených sulfidovou väzbou, každá podjednotka má relatívnu molekulovú hmotnosť 100 kDa. Má výrazne aniónový charakter, pravdepodobne vďaka vysokému obsahu cysteínu, čo umožňuje extenzívne disulfidové väzby.
COMP a jeho vlastnosti sú podrobne opísané v (1) . Navyše nukleotidová sekvencia COMP a odvodená aminokyselinové sekvencia boli publikované v (2) . Okrem toho model COMP bol uvedený v (8).
Keďže ' v COMP sa nenašiel hydroxyprolín, COMP neobsahuje žiadny kolagénový úsek. Zo zloženia sacharidov sa môže usudzovať prítomnosť N-viazaných oligosacharidov, nie však 0viazaných oligosacharidov. Prítomnosť xylózy spoločne s galaktózoamínom a kyselinou glukurónovou v tesnom ekvimolárnom pomere indikujú substitúciu chondroitinsulfátom. Hodnoty pre xylózu, galaktózoamín a kyselinu glukurónovú naznačujú, že každá podjednotka COMP nesie 3 až 4 reťazce chondroitinsulfátu zo 14 až 15 disacharidov.
i
Takže COMP je známa zlúčenina, a bola opísaná ako užitočná pri diagnostike na stanovenie stupňa degradácie chrupavky u pacientov s artritídou.
Je známe, že autoimúnne reakcie proti určitým antigénom chrupavky v kĺbovej chrupavke sa môžu použiť na vyvolanie reumatoidnej artritídy u zvieracieho modelu. U zvieracích modelov sa určili kolagény rôznych typov (II, IX a XI) a aggrecan ako chrupavkové autoantigény indukujúce autoimunitnú odpoveď. Tieto antigény sa tiež použili v pokusoch liečenia reumatoidnej artritídy.
Avšak nikdy predtým sa neukázalo, že COMP sa podiela na vzniku artritídy a teda je potenciálne využiteľný pri liečení reumatoidnej artritídy. Autori predkladaného vynálezu získali tieto výsledky počas experimentov, keď sa COMP podával potkanom, Tieto experimenty budú opísané ďalej.
Predkladaný vynález sa matrixového proteínu chrupavky alebo analógov, na prípravu týka použitia oligomérneho (COMP), alebo jeho fragmentov farmaceutického prípravku na prevenciu alebo liečenie artritídy u cicavcov, pričom farmaceutický prípravok sa podáva v množstve účinnom na prevenciu alebo liečenie artritídy.
V jednom uskutočnení predkladaného vynálezu farmaceutický prípravok obsahuje sekvencie RNA alebo DNA schopné exprimovať
COMP alebo jeho fragmenty či analógy, alebo obsahuje vektorové bunky obsahujúce uvedené sekvencie RNA alebo DNA.
Farmaceutický prípravok podía predkladaného vynálezu voliteľne tiež obsahuje jednu alebo niekoľko látok vybratých zo skupiny obsahujúcej kolagén II, kolagén IX, kolagén XI a aggrecan, alebo ich fragmenty či analógy.
COMP na použitie podľa predkladaného vynálezu je humánneho i
alebo hovädzieho pôvodu alebo pochádza z potkana, alebo je produkovaný mikroorganizmami, či je syntetizovaný chemicky.
Výraz fragment je v opise a nárokoch predkladaného vynálezu používaný v takom zmysle, že zahrnuje akúkoľvek čiastočnú aminokyselinovú sekvenciu alebo modifikovanú sekvenciu, t. j. kratší ako celý COMP a/alebo obsahujúci akúkoľvek deléciu/substitúciu alebo modifikáciu pôvodných aminokyselín, ktorá je schopná vyvolať biologickú odpoveď podobnú COMP, t. j. má schopnosť potlačiť alebo eliminovať autoimunitnú odpoveď sprostredkovanú T- alebo B-bunkami a/alebo závislú na T- alebo B-bunkách, alebo pôsobí takým spôsobom, že inhibuje artritogénny účinok COMP.
Výraz analóg COMP znamená v texte predkladané prihlášky zlúčeniny (tak peptidy, ako aj chemické zlúčeniny nepeptidovej povahy), ktoré majú podobnú biologickú aktivitu ako COMP, t. j. majú schopnosť potlačiť alebo eliminovať autoimunitnú odpoveď sprostredkovanú T- alebo B-bunkami a/alebo závislou na T- alebo B-bunkách, alebo pôsobí takým spôsobom, že inhibujú artritogénny účinok COMP. Takže tento termín zahrnuje aminokyselinové sekvencie, ktoré sa líšia od aminokyselinovej sekvencie COMP v jednej alebo niekoľkých aminokyselinách, pričom si uchovávajú v podstate rovnakú biologickú aktivitu, a tiež zahrnuje chemické zlúčeniny, ktoré majú v podstate rovnakú biologickú aktivitu, t.j. napodobňujú schopnosť COMP potlačiť alebo zmierniť symptómy reumatoidnej artritídy.
Farmaceutický prípravok obsahujúci COMP alebo jeho fragmenty či analógy sa môže podávať cicavcom, výhodne človeku, celým radom spôsobov známych v odbore, vrátane podávania perorálneho, mukozálneho, nazálneho, rektálneho, vaginálneho alebo inhaláciou či injekciou.
I
Na perorálne podávanie je farmaceutický prípravok napr. vo forme tabliet, piluliek, toboliek, sirupov, práškov, granulátov alebo roztokov.
J
Na perorálne podávanie sa účinná látka môže zmiešať s adjuvans alebo pomocou nosičovou látkou ako je napr. laktóza, sacharóza, sorbitol, manitol, škroby, ako je zemiakový alebo kukuričný škrob alebo amylopektín, deriváty celulózy, spájadlom je želatína alebo polyvinylpyrolidón a lubrikantom je stearan horečnatý, stearan vápenatý, polyetylénglykol, vosky, parafín a pod., a potom sa lisuje do tabliet. Pokiaľ sú potrebné obaľované tablety, jadro sa pripraví opísaným spôsobom a môže sa obaľovať v koncentrovanom roztoku cukru,. ktorý obsahuje napr. arabskú živicu, mastenec, oxid titaničitý a podobne. Alternatívne sa môžu tablety obaľovať vhodným polymérom rozpustným vo vysoko prchavých organických rozpúšťadlách.
Na prípravu mäkkých želatínových toboliek sa môže aktívna zlúčenina zmiešať napr. s rastlinným olejom alebo polyetylénglykolom. Tvrdé želatínové tobolky môžu obsahovať granulát alebo zlúčeninu s už uvedenými excipientmi pre tablety ako je laktóza, sacharóza, sorbitol, manitol, škroby, deriváty celulózy alebo želatína. Do tvrdých želatínových toboliek sa tiež môže plniť prípravok vo forme kvapalnej alebo polotuhej.
Kvapalné prípravky na perorálne podávanie môžu byť vo forme sirupov alebo suspenzií, napr. ako roztok obsahujúci aktívnu zlúčeninu, cukor, zmes etanolu, vody, glycerolu a propylénglykolu. Voliteľne takýto kvapalný prípravok obsahuje farbivá, príchute, sacharín, zahusťovadlá ako napr., karboxymetylcelulózu a ďalšie excipienty odborníkovi známe.
Farmaceutický prípravok môže obsahovať tiež farmaceutický prijateľný nosič, ako je napr. voda a suspendačné činidlo a emulgátory.
Farmaceutický prípravok môže tiež obsahovať zlúčeniny viažuce mukózu.
Presné dávkovanie účinnej zložky, t.j. COMP alebo jeho biologicky aktívnych fragmentov alebo analógov, je závislé od
J veku, pohlavia a fyzického stavu pacienta, t.j. závažnosti reumatoidnej artritídy, a prípadne od druhu sprievodnej liečby. Avšak všeobecne musí byť dávkovanie také, aby sa odstránili alebo zmiernili príznaky reumatoidnej artritídy.
V inom uskutočnení predkladaného vynálezu farmaceutický prípravok podľa vynálezu obsahuje COMP alebo jeho fragmenty alebo analógy v kombinácii s jednou alebo niekolkými artritogénnymi látkami vybratými zo skupiny obsahujúcej kolagén II, kolagén IX, kolagén XI a aggrecan, alebo ich fragmenty alebo analógy.
COMP, alebo jeho fragmenty či analógy, sa izolujú z prirodzene sa vyskytujúcich materiálov, ako sú opísané v (1) alebo sa môžu exprimovať z nukleotidovéj sekvencie pre COMP uvedenej v (2). Odborníkovi je jasné ako sa môže takáto expresia dosiahnuť, a ako sa môžu z nukleotidovej sekvencie pripraviť príslušné fragmenty či analógy. COMP alebo jeho fragmenty či analógy sa môžu tiež syntetizovať chemicky na základe odvodenej aminokyselinovej sekvencie uvedenej v (2) .
Predkladaný vynález sa preto tiež týka použitia COMP ako bolo opísané, keď farmaceutický prípravok obsahuje RNA alebo DNA sekvencie exprimujúce COMP alebo jeho fragmenty či analógy, alebo obsahuje vektorové bunky, ktoré obsahujú takéto RNA alebo DNA sekvencie. Takže sekvencie RNA alebo DNA sa podávajú cicavcovi buď priamo alebo prostredníctvom vektorových buniek.
COMP alebo jeho fragmenty či analógy môžu byť v podstate akéhokoľvek pôvodu, ale výhodne sú humánneho, hovädzieho alebo potkanieho pôvodu. Môžu sa pripraviť použitím štandardných metód v odbore z ktoréhokoľvek z týchto zdrojov. Môže sa tiež exprimovať mikroorganizmami alebo sa môže chemicky syntetizovať, ako už bolo uvedené.
Podľa predkladaného vynálezu sa COMP alebo jeho fragmenty či analógy môžu pridať do/k farmaceutickému prípravku, ktorý sa
J podáva cicavcovi na prevenciu alebo zmiernenie symptómov artritídy, výhodne reumatoidnej artritídy. Takže keď sa podá farmaceutický prípravok podľa predkladaného vynálezu cicavcovi, výhodne človeku, ktorý má reumatoidnú artritídu, COMP alebo jeho fragmenty či analógy pôsobia ako tzv. tolerogény a teda indukujú imunologickú toleranciu.
Okrem toho sa COMP alebo jeho fragmenty či analógy môžu použiť na prevenciu artritídy, výhodne reumatoidnej artritídy, podávaním zvieraťu, u ktorého máme podozrenie z vývoja takejto artritídy, napr., na základe genetickej predpovede. V takomto prípade sa nikdy neobjaví narušenie rovnováhy kvôli autoimunitnej odpovedi, a ani artritída.
Prehlad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 ukazuje humorálnu reaktivitu no hovädzí a potkaní COMP v sére potkanov imunizovaných hovädzím COMP. Na hodnotenie humorálnej reaktivity sa použil ELISA test pre sérum potkanov LEW.1AV1 (O) a F344 (·), 16 a 38 dní po imunizácii 50 až 150 μg hovädzieho COMP na potkana.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Kmene laboratórneho potkana LEW.lAVl(DA) a F344 pôvodne pochádzali z Zentralinstitute fúr Versuchstrierzucht, Hannover, Nemecko. Vlastnosti a genetika týchto kmeňov sú opísané v Genetic monitoring of inbred strains- of rats (3). Všetky kmene sa chovali v Centre Biomedicíny v Uppsale a umiestnili sa tu v nemocnici Karolínska pri špecifických podmienkach bez výskytu patogénov. Neprítomnosť patogénov sa zisťovala podľa kontrolného zdravotného programu pre potkany (november 1995) v Národnom veterinárnom inštitúte v Uppsale, Švédsko. Potkany sa chovali pri 12 hodinovom cykle svetlo/tma, umiestnené v polystyrénových škatuliach obsahujúcich drevené piliny a mali volný prístup k vode a potrave pre hlodavcov. Potkany používané v pokusoch boli samice staré 10-19 týždňov. Všetky postupy zahrnujúce zvieratá sa uskutočňovali podľa smerníc poskytnutých centrálnym výborom pre pokusy na zvieratách švédskeho ministerstva poľnohospodárstva. Pokusy boli schválené výborom pre pokusy na zvieratách pre Stockholm - Sever.
Indukcia artritídy hovädzím COMP a potkaním CII
Indukcia artritídy COMP sa uskutočňovala nasledujúcim spôsobom: hovädzí COMP, pripravený z chrupavky (1), sa rozpustil vo fyziologickom roztoku pufrovanom fosforečnanmi (PBS) pH 7,4, v koncentrácii 0,5 alebo 1,5 mg/ml. Tento roztok sa emulgoval s rovnakým objemom nekompletného Freundovho adjuvans (Difco, Detroit) a 200 μΐ emulzie sa injikovalo intradermálne do koreňa chvosta (50 alebo 150 gg/na potkana). Indukcia artritídy kolagénom sa uskutočňovala nasledovne: potkaní kolagén typu II (CII), pripravený z chondrosarkómu (4,5), sa rozpustil v 0,1 M kyseline octovej s koncentráciou
1,5 mg/ml. Tento sa emulgoval s rovnakým objemom nekompletného Freundovho adjuvans a 200 μΐ emulzie sa injikovalo intradermálne do koreňa chvosta (150 pg/na potkana).
Vyhodnotenie artritídy
Artritída sa vyhodnocovala pomocou stupnice 0 až 16, každá zo štyroch sa ohodnotila stupňom 0 ,áž 4, keď 0 = žiadna artritída, 1-3 = zhrnutie bodov, a to takto: opuch členka - 1 bod, opuch jedného alebo viacerých intratarzálnych a/alebo metatarzálnych kĺbov - 1 bod a opuch jedného alebo viacerých interfalangeálnych kĺbov - 1 bod, 4 = opuch všetkých kĺbov, t.j. celej labky. Potkany sa vyšetrovali každý druhý až štvrtý deň odo dňa 10 do dňa 30 po imunizácii.
Preparácia buniek drenážnych lymfatických uzlín
Bunky ingvinálnych lymfatických uzlín potkanov imunizovaných s COMP a neimunizovaných kontrolných potkanov sa získali disekciou lymafických uzlín a jemným pomletím cez čajové sitko. Bunkové suspenzie sa trikrát premyli v PBS pH 7,4.
Meranie bunkovej reaktivity na hovädzí COMP: proliferácia
Bunky ingvinálnych lymfatických uzlín sa suspendovali v množstve 1x10® buniek/ml v DMEM (X) doplnenom s 5% FCS (Hyclone, Logan, UK), penicilínom (100 pg/ml) , glutamínom (2nM) a streptomycínom (100 pg/ml) , všetko od firmy Sigma, St. Louis, MO. Bunky z jednotlivých zvierat sa vysiali na 96-jamkové doštičky pre tkanivové kultúry s guľatým dnom (Nunc, Roskilde, Dánsko), 0,2 ml na jamku. Antigény sa pridali s trojitým opakovaním do jamiek pre každé zviera, rozpustené v 10 μΐ PBS pH 7,4 tak, že vznikli konečné koncentrácie: COMP, 10 pg/ml a 50 pg/ml, alebo ConA 5 pg/ml. Ako kontrola sa do jamiek pridalo 10 pl PBS. Bunky sa inkubovali 96 hodín pri 37 °C a 5% CO2, a bunková proliferácia sa stanovovala značením proliferujúcich buniek v každej jamke s 1 pCi 3H-tymidínu po konečných 6 hodín pred tým ako sa bunky zozbierali. Inkorporácia značenia sa určovala zariadením na meranie scintilácie.
Purifikácia potkanieho COMP
Potkaní COMP sa pripravil zo Swarmovho potkanieho chondrosarkómu (6) . Stručne, zmrazený Swarmov potkaní chondrosarkóm sa homogenizoval v PBS obsahujúcom 1 mM fenylmetánsulfonylfluorid (PMSF) a 2 mM N-etylmaleimid (NEM), potom nasledovalo usadenie pri 15000 g 30 minút. Homogenizácia a centrifugácia sa dvakrát opakovali, nasledovala extrakcia COMP v tom istom pufri obsahujúcom prídavok 10 mM EDTA. EDTA extrakt sa nariedil 1+1 vodou a naniesol sa na aniónovú výmennú kolónu (20 x 1,6 cm) s DEAE-Sepharose CL-6B (Pharmacia LKB Biotechnology) ekvilibrovanú 10 mM Tris obsahujúcim 2 mM EDTA. Kolóna sa eluovala gradientom 0-1,0 M KCl v rovnakom pufri. Frakcie obsahujúce COMP sa koncentrovali ultrafiltráciou (YM-10 filter, Amicon) a naniesli sa na gélovú filtračnú kolónu (50 x
1,6 cm) so Superose 6 (Pharmacia LKB Biotechnology) a eluovali sa s PBS obsahujúcim 2 mM EDTA.
Kvantifikácia humorálnej anti-hovädzí COMP, anti-potkaní COMP a anti-potkaní CII imunity
IgG protilátkové titre na COMP alebo CII sa určovali s použitím ELISA testu (enzyme-linked immunosorbent assay). Mikrotitračné doštičky Maxisorp Micro-ELISA (Nunc, Roskilde, Dánsko) sa cez noc obaľovali pri 4 °C s 10 μρ/πιΐ potkanieho CII alebo 2-10 μς/πιΐ COMP v PBS pH 7,4. Jednotlivé séra sa nariedili, * pridaná a naviazaná protilátka sa detegovala inkubáciou s kozím anti-potkaním IgG s konjugovanou alkalickou fosfatázou, špecifickým pre ťažké a ľahké reťazce (Jackson Immunoresearch Laboratories, West Groove, PA) . Následná kvantifikácia naviazaného enzýmu sa uskutočňovala pufrom obsahujúcim substrát p-nitrofenyl na spektrofotometri E-max (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) . Dáta sú prezentované ako jednotky protilátky (AU) na ml, vyrátané porovnaním s lineárnou časťou štandardnej krivky s použitím ^pozitívneho a spojeného (pooled) séra anti-CII alebo anti-COMP z potkanov LEW.1AV1 s danými arbitrárnymi hodnotami 100 AU/ml. Každá doštička obsahovala v dvojitom opakovaní pozitívne referenčné sérum, vzorky séra, ktoré sa mali merať a negatívne sérové kontroly. Negatívne sérové kontroly boli jednotlivé séra z neimunizovaných potkanov LWE.1AV1.
Výsledky
Schopnosť hovädzieho COMP spôsobiť artritídu u potkanov LEW.1AV1 a F344
V prvom pokuse sa imunizovalo šesť potkanov LEW.1AV1 s 50 pg COMP/potkana (tabuľka 1) . (3/6) vyvinula artritída, zadných končatín. Choroba
15-19 dní neskôr sa u troch z nich ktorá zachvátila hlavne členky sa sama obmedzila, 38 dni po imunizácii sa nevyskytovali žiadne makroskopické príznaky artritídy alebo ankylózy. V druhom pokuse sa imunizovalo deväť potkanov LEW.1AV1 a 4 rovnako staré potkany F344 so 150 μ9 COMP/potkana (tabuľka 1). Následkom tejto vyššej dávky COMP bol podobný výskyt artritídy u potkanov LEW.1AV1 (5/11), ale choroba sa objavila skôr, 12-14 dní po imunizácii. Navyše artritída a metatarzálne kĺby zadných končatín bola vážnejšia a napadala typicky členkové a metatarzálne kĺby zadných končatín, pozorovala sa tiež artritída prstových kĺbov a predných končatín. Dva potkany sa sledovali klinicky až 38 dní po imunizácii,· keď mali príznaky ankylózy. Na rozdiel od potkanov kmeňa LEW.1AV1 boli potkany F344 menej vnímavé na artritídu vyvolanú COMP, pretože v neskorom časovom bode 25-29 dní po imunizácii sa detegovali u jedného zo štyroch potkanov iba minimálne príznaky choroby.
Humorálna reaktivita na hovädzí COMP u jednotlivých potkanov LEW.1AV1 a F344 16 dní po imunizácii hovädzím COMP i
Analýza jednotlivých sér dokázala humorálnu reaktivitu na COMP tak u potkanov F344, ako aj u potkanov LEW.1AV1 (tabuľka 1) . Nebola žiadna korelácia medzi výskytom protilátok a artritídou.
Humorálna skrížená reaktivita medzi hovädzím a potkaním COMP
Séra z potkanov LEW.1AV1 a F344 imunizovaných hovädzím COMP sa testovala na humorálnu reaktivitu na hovädzí a potkaní COMP (obrázok 1). Reaktivita na hovädzí COMP dobre korelovala s reaktivitou proti potkaniemu COMP u obidvoch kmeňov, čo dokazuje, že humorálna imunitná odpoveď indukovaná imunizáciou hovädzím COMP je autoimunitná.
Humorálna reaktivita na COMP a CII u potkanov LEW.1AV1 s artritídou vyvolanou imunizáciou s COMP alebo CII
Séra z potkanov LEW.1AV1 imunizovaných samotným nekompletným potkaním CII sa testovali na humorálnu reaktivitu tak na hovädzí COMP ako aj na potkaní CII. Výsledky uvedené v tabuľke 2 demonštrujú, že v LEW.1AV1 imunizovaných príslušnými antigénmi sa nevyskytuje skrížená reaktivita. Je zaujímavé, že u potkanov s artritídou vyvolanou COMP neboli žiadne príznaky reaktivity anti-CII. U potkanov s artritídou vyvolanou CII sa nedetegovala reaktivita na COMP, alebo bola minimálna.
V popredí záujmu boli dve význačné črty humorálnej a bunkovej imunitnej odpovede u artritických zvierat. Po prvé, humorálna reaktivita na COMP bola zjavne bez sprievodnej reaktivity na potkaní kolagén typ II (CII) . Teda nie je žiadny dôkaz pre imunologickú skríženú reaktivitu medzi týmito dvoma antigénmi vyvolávajúcimi artritídu, a nie je ani dôkaz pre šírenie humorálnej autoimúnnej odpovede na potkaní CII. PO druhé, bola zjavná proliferačná bunková imunitná odpoveď mierená na COMP. Z toho vyplýva, ,že charakter imunitných reakcií sprostredkovaných T-bunkami na COMP je štúdiu prístupnejší ako reakcia na skôr opísané chrupavkové autoantigény, ako je potkaní CII, ktorý indukuje malú alebo žiadnu proliferáciu T buniek in vitro (nepublikované výsledky).
V tejto štúdii sa tiež dokázalo, že zatial čo kmeň LEW.1AV1 bol permisívny pre artritídu vyvolanú COMP, potkany F344 sa javili rezistentné. To ukazuje, že vnímavosť je geneticky determinovaná.
COMP je v popredí záujmu ako antigén vyvolávajúci artritídu z niekoľkých dôvodov. Po prvé, COMP sa vyskytuje vo väčšine povrchových častí kĺbovej chrupavky, kde môže byť prístupný imunitným bunkám v kĺboch. Po druhé, COMP je uvoľňovaný do synoviálnych tekutín a séra pacientov so skorou deštruktívnou artritídou (7), čo znamená, že tento protein je tiež dostupný cirkulujúcim imunitným bunkám. Doteraz sa nepublikovalo, či indukovaná autoimunita proti COMP môže spôsobiť artritídu ako v predkladanej štúdii, alebo či u pacientov s artritídou sa vyskytujú autoimunitné reakcie proti COMP.
Hovädzí a potkaní COMP použité v týchto pokusoch sa purifikovali z chrupavky tak, že nebola detegovaná žiadna kontaminácia inými proteínmi, na géloch SDS-PAGE použitých na biochemickú charakterizáciu sa nepozorovala prítomnosť iných proteínov ako je COMP (údaje nie sú uvedené) . Napriek tomu existencia menšinových kontaminácií sa nemôže vylúčiť, ale je nepravdepodobné, že by takáto kontaminácia bol zodpovedná za vyvolanie artritídy, pretože jej koncentrácia by bola rádovo mnohonásobne nižšia ako koncentrácia iných antigénov vyvolávajúcich artritídu používaných u potkanov. To, že kontaminujúci kolagén typ II nie je zapojený do rozvoja artritídy, je tiež ukázané neprítomnosťou humorálnej imunitnej odpovede na potkaní CII u potkanov imunizovaných preparátom COMP.
Tabúlka 1
Rozvoj artritídy a humorálnej reaktivity na COMP u potkanov LEW.1AV1 a F34 4 po imunizácii s COMP.
Kmeň Číslo Dávka COMP Deň Maximálne Postihnú- a-COMP a-COMP
potkanov potkana (pg/potkan) vypuknu- tia choroby postihnutie 0-38 dpi* tie v 38 dpi (AU) 16 dpi (AU) 16 dpi
LEW.1AV1 al 50 15 1 . ' i 0 nd** 219
(6) a2 50 - 0 0 nd 153
a3 50 - 0 0 nd 213
a4 50 - 0 0 nd 114
a5 50 19 2 0 nd 215
a6 50 19 3 0 nd 326
LEW.1AV1 bl* 150 12-14 2 np 155 np
(11) b2* 150 12-14 5 np 152 np
b3 150 - 0 0 210 219
b4* 150 12-14 2 np 117 np
b5 150 - 0 0 148 168
b6 150 12-14 4 2 137 265
b7 150 12-14 7 6 142 483
b8 150 - 0 0 151 342
b9 150 - 0 0 85 178
blO* 150 - 0 np 136 np
bil* 150 - 0 np 170 np
F344 bl2 150 - 0 0 157 298
(4) bl3 150 - 0 0 199 300
bl4 150 - 0 0 160 361
b!5 150 26-29 1 0 118 453
Potkany LEW.1AV1 a F344 sa imunizovali s hovädzím COMP v nekompletnom Freundovom adjuvans, humorálna reaktivita sa testovala proti hovädziemu COMP ELISA testom.
dpi* = dni po imunizácii, * = tieto potkany sa usmrtili 16 dpi, nd** = neuskutočnené, np++ = neuskutočniteľné, pretože potkany sa usmrtili so 16 dpi.
Tabulka 2
Humorálna reaktivita na COMP a kolagén typ II (CII) u potkanov LEW.1AV1 imunizovaných so samotným nekompletným Freundovým adjuvans (IFA) alebo spoločne s COMP alebo CII.
Potkany imunizované s: maximálne postihnutie α-CII (AU) a-COMP (AU)
IFA (6) 0 0 0
CII + IFA (5) 7-12 61-223 0-2
COMP + IFA (5) 1-7 0 215-483
Séra sa získali z potkanov, u ktorých sa vyvinula artritída indukovaná hovädzím COMP (38 dní po imunizácii, dpi), artritída indukovaná potkaním kolagénom (28 dpi) alebo, ako kontrola, z potkanov imunizovaných s IFA (28 dpi) .
Tabulka 3
Proliferácia buniek lymfatických uzlín z potkanov LEW.1AV1 imunizovaných s COMP, porovnanie medzi nestimulovanými bunkami a bunkami stimulovanými COMP alebo ConA.
Počet Vážnosť Proliferácia (cpm) stimulovaná:
zvierat artritídy Kontroly COMP ConA
1 2 1506 12433 26315
2 5 2754 27014 37624
3 2 4541 25604 38135
4 0 3658 28820 40961
Bunky lymfatických uzlín sa pripravili zo štyroch samíc potkanov LEW.1AV1 16 dní po imunizácii so 150 pg/potkana emulgovaného v nekompletnom Freundovom sa buď nestimulovali (kontroly) alebo hovädzieho COMP adjuvans. Bunky stimulovali s hovädzím COMP (10 gg/ml) alebo s ConA (5 gg/ml).
ZOZNAM POUŽITEJ LITERATÚRY
Hedbom E, Antonsson P, Hjerpe A, Aeschlimann D, Paulsson M, Edson R-P, Sommarin Y, Wendel M, Oldberg Á, Heinegárd D: Cartlage matrix proteins. An acidic oligcmeric proteín (COMP) detected only in cartilage. J Biol Chem 267:6132-6136, 1992
Oldberg Á, Antonsson P, Lindblom K, Heinegárd D: COMP (cartilage oligomeric matrix protein) is structurally related to the thrombospondins. J Biol Chem 267:22346-22350, 1992
Hedrich HJ. (ed) Genetic monitoring of inbred strains of rats. Gustáv Fischer Verlag, New York, 1990
Smith BD, Martin GR, Miller EJ, Dorfman A, Swarm R: Náture of the collagen synthesized by a transplanted chondocarcoma. Árch Biochem Biophys 166:181-186, 1975
Andersson ME, Holmdahl R: Analysis of type II collagen-reactive T-cells in the mouse. 1 Different regulation of autoreactive versus non-autoreactive anti-type II collagen T-cells in the DBA/1 mouse. Eur J Immunol 20:1061-1066, 1990
Môrgelin M, Heinegárd. D, Engel J, Paulsson: Electron microscopy of native cartilage oligomeric matrix protein purified from the Swarm rat chondrocarcoma reveals a five-armed structure. J Biol Chem 267:6137-6141, 1992
Mánsson B, Carey D, Alini M, Ionescu M, Rosenberg LC, Poole AR, Heinegárd D, Saxne T: Cartilage and bone metabolism in rheumatoid arthritis. Differences between rapid and slow progression of disease identified by sérum markers of cartilage metabolism. Br J Rheum 34:306-310, 1995
Môrgelin M, Heinegárd D, Engel J, Paulsson M:
Electron microscopy of native cartilage oligomeric matrix protein purified from the swarm rat cnondrosarcoma reveals a five-armed structure, the Journal of Biological Chemistry, Vol. 267, No. 9, March 25, Fig. 7.
Mánsson B, Carey D, Alini M, Ionescu M, Rosenberg LC, Poole AR, Heinegárd D, Saxne T: Cartilage and bone metabolism in rheumatoid arthritis differences between rapid and slow progression of disease identified by sérum markers of cartilage metabolism. J Clin Invest, Vol. 95, 1995, p 1071-1077

Claims (7)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použitie oligomérneho matrixového proteínu chrupavky (COMP) alebo jeho fragmentov alebo analógov na výrobu farmaceutického prípravku na prevenciu alebo liečenie artritických stavov u cicavcov, pričom farmaceutický prípravok sa podáva v množstve, ktoré je účinné na prevenciu alebo liečenie artritických stavov.
  2. 2. Použitie podía nároku 1, keď farmaceutický prípravok obsahuje sekvencie RNA alebo DNA schopné exprimovať COMP alebo jeho fragmenty alebo analógy, alebo obsahuje vektorové bunky obsahujúce uvedené sekvencie RNA alebo DNA.
  3. 3. Použitie podía nároku 1 alebo 2, keď farmaceutický prípravok volitelne tiež obsahuje jednu alebo niekoľko látok vybratých zo skupiny obsahujúcej kolagén II, kolagén IX, kolagén XI, aggrecan alebo ich fragmenty alebo analógy
  4. 4. Použitie podľa nároku 1, keď COMP je humánneho, hovädzieho alebo potkanieho pôvodu, alebo sa produkoval mikroorganizmami alebo bol chemicky syntetizovaný.
  5. 5. Použitie podía ktoréhokolvek z predchádzajúcich nárokov, keď sa farmaceutický prípravok podáva perorálnou, mukozálnou, nazálnou, rektálnou aldbo vaginálnou cestou alebo inhaláciou či injekciou.
  6. 6. Použitie podľa nároku 1, keď cicavec je človek.
  7. 7. Použitie podľa nároku 1, keď artritický stav je reumatoidná artritída.
SK1413-99A 1997-04-15 1998-04-14 Use of cartilage oligomeric matrix protein for the treatment of rheumatoid arthritis SK141399A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE9701409A SE9701409D0 (sv) 1997-04-15 1997-04-15 Treatment of rheumatoid arthritis
PCT/SE1998/000682 WO1998046253A1 (en) 1997-04-15 1998-04-14 Use of cartilage oligomeric matrix protein for the treatment of rheumatoid arthritis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK141399A3 true SK141399A3 (en) 2000-08-14

Family

ID=20406587

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1413-99A SK141399A3 (en) 1997-04-15 1998-04-14 Use of cartilage oligomeric matrix protein for the treatment of rheumatoid arthritis

Country Status (21)

Country Link
EP (1) EP1019078B1 (sk)
JP (1) JP2001520647A (sk)
KR (1) KR20010006352A (sk)
CN (1) CN1260721A (sk)
AT (1) ATE245438T1 (sk)
AU (1) AU746221B2 (sk)
BR (1) BR9808591A (sk)
CA (1) CA2286791A1 (sk)
DE (1) DE69816634T2 (sk)
EE (1) EE9900464A (sk)
HU (1) HUP0002231A3 (sk)
ID (1) ID24561A (sk)
IL (1) IL132354A0 (sk)
IS (1) IS5210A (sk)
NO (1) NO995004L (sk)
NZ (1) NZ338084A (sk)
PL (1) PL336163A1 (sk)
SE (1) SE9701409D0 (sk)
SK (1) SK141399A3 (sk)
TR (1) TR199902564T2 (sk)
WO (1) WO1998046253A1 (sk)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6849594B1 (en) * 1999-06-30 2005-02-01 John Lawler Purification and use of human recombinant cartilage oligomeric matrix protein
SE9904236D0 (sv) 1999-11-22 1999-11-22 Ana Mar Diagnostics Ab Immunoassay
KR100429288B1 (ko) * 2001-11-23 2004-04-29 장오기계 주식회사 전사인쇄장치
CN100417415C (zh) * 2006-06-28 2008-09-10 文彦春 浸润治疗关节炎的药物
US9632097B2 (en) 2012-06-28 2017-04-25 Nordic Boiscience A/S Determining pathological cartilage turnover

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5192744A (en) * 1990-01-12 1993-03-09 Northwestern University Method of inhibiting angiogenesis of tumors
US5872094A (en) * 1993-01-06 1999-02-16 The General Hospital Corporation Method for attaching cartilaginous tissue, cartilage matrix protein or link protein to a surface

Also Published As

Publication number Publication date
ID24561A (id) 2000-07-27
NO995004D0 (no) 1999-10-14
WO1998046253A1 (en) 1998-10-22
NZ338084A (en) 2001-07-27
ATE245438T1 (de) 2003-08-15
TR199902564T2 (xx) 2000-02-21
HUP0002231A2 (hu) 2000-11-28
EP1019078A1 (en) 2000-07-19
HUP0002231A3 (en) 2002-09-30
CA2286791A1 (en) 1998-10-22
DE69816634T2 (de) 2004-06-03
AU746221B2 (en) 2002-04-18
PL336163A1 (en) 2000-06-05
AU7093898A (en) 1998-11-11
JP2001520647A (ja) 2001-10-30
IS5210A (is) 1999-10-12
DE69816634D1 (de) 2003-08-28
CN1260721A (zh) 2000-07-19
BR9808591A (pt) 2000-05-23
EP1019078B1 (en) 2003-07-23
NO995004L (no) 1999-10-14
SE9701409D0 (sv) 1997-04-15
IL132354A0 (en) 2001-03-19
KR20010006352A (ko) 2001-01-26
EE9900464A (et) 2000-04-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100234678B1 (ko) 비면역원성 담체에 결합된 면역원의 t세포 에피토프-결핍 유사체를 포함하는 면역원에 대한 체액성 아네르기를 유발하는 조성물
US11000566B2 (en) Compositions and methods for modulating the immune system
Thompson et al. Autoimmune reactions to heat‐shock proteins in pristane‐induced arthritis
Yoo et al. Induction of arthritis in monkeys by immunization with type II collagen.
JP2635444B2 (ja) 自己抗体の経口投与による自己免疫性疾患の治療
George et al. Smoking and immunity: an additional player in the mosaic of autoimmunity
NO315840B1 (no) Anvendelse av distrontiumsaltet av 2-[N,N- di(karboksymetyl)amino]-3-cyano-4-karboksymetyltiofen-5-karboksylsyre til fremstilling av etfarmasöytisk preparat for behandling av artrose
Zhang et al. Induction of arthritis in BALB/c mice by cartilage link protein: involvement of distinct regions recognized by T and B lymphocytes
Furuzawa-Carballeda et al. Cellular and humoral responses to collagen polyvinylpyrrolidone administered during short and long periods in humans
Larsson et al. Increased serum levels of cartilage oligomeric matrix protein and bone sialoprotein in rats with collagen arthritis.
US8883862B2 (en) Method for controlled release of parathyroid hormone from cross-linked hyaluronic acid hydrogel
BR112016018681B1 (pt) sistema de distribuição de substâncias que compreende pelo menos um material polimérico formador de uma matriz e um fármaco anabólico, processo de produção do mesmo e artigo de manufatura
SK141399A3 (en) Use of cartilage oligomeric matrix protein for the treatment of rheumatoid arthritis
US20010002392A1 (en) Treatment of rheumatoid arthritis
CZ360799A3 (cs) Použití oligomerního proteinu základní hmoty chrupavky (COMP) k léčení revmatoidní artritidy
Rowley et al. Antibodies to Collagen: Comparative Epitope Mapping in Women with Silicon Breast Implants, Systemic Lupus Erythematosus and Rheumatoid Arthritis
Skinner et al. Mapping of dominant B-cell epitopes of a human zona pellucida protein (ZP1)
Hayashi et al. Keratan sulfate suppresses cartilage damage and ameliorates inflammation in an experimental mice arthritis model
Petersen New aspects of cytosloic calcium signaling
KR100263164B1 (ko) Ii형 콜라겐의 펩티드를 유효성분으로 함유하는 콜라겐 관절염 치료제
SK102199A3 (en) Peptides comprising a t-cell epitope specific to collagen ii, their use and pharmaceutical compositions containing such peptides
Cannon et al. Effects of gold sodium thiomalate, cyclosporin A, cyclophosphamide, and placebo on collagen-induced arthritis in rats
WO2008122294A1 (en) Peptides, antibodies and fragments thereof for the treatment and diagnostic of celiac disease
Champion Immunity to homologous collagens and cartilage proteoglycans in rabbits with experimental arthritis
JP2585638B2 (ja) 関節強直症抑制用エトドラク