SK136693A3 - Therapeutic compositions for osteoinduction - Google Patents

Description

Liečebné prostriedky na osteoindukciu

Oblasť techniky

Vynález sa týka oblasti osteoindukcie (rastu kostí). Presnejšie sa týka prostriedkov, ktoré zahrnujú podávanie bielkovín kostnej morfogenézy a zlúčeniny zo skupiny vitamínu D a ktoré majú za výsledok synergistický rast kosti.

Doterajší stav techniky _g U normálnych jedincov rast kostí všeobecne prebieha normálne · a zlomeniny sa hojia bez potreby farmakologického zásahu. Napriek ý. tomu v istých prípadoch môžu byť kosti zoslabené lebo môžu nevykazovať riadne hojenie. Hojenie môže prebiehať pomaly napríklad u starších paciantov lebo pacientov liečených kortikosteroídmi, ako sú transplantační pacienti a pacienti liečení na chronické pľúcne ochorenia. Iný príklad je osteoporóza. Osteoporóza je abnormálna strata kostej tkáne vyskytujúca sa u žien po menopauze a u starších mužov. Táto porucha zvyšuje riziko malých kostných zlomenín, osobitne chrbticových. V . súčastnosti sa osteoporóza lieči dodávaním vápniku, vitamínu D, estrogénu lebo kalcitonínu, hormónu ktorý riadi telesné využívanie vápniku. Bohužiaľ, takéto liečby sú len prevenciou proti ďalším stratám kostnej hmoty. V obore existuje potreba liečby, ktorá by zachádzala za prevenciu straty kostnej

J* hmoty a podporovala tvorbu kostí lebo zvrátila stratu kostnej ; hmoty.

M (1989) Bielkoviny kostnej morfogenézy a vitamín D [Bone Morphogenic Proteins an Vitamín D], Nutrition Reviews, Vol. 47, pp. 364-366 uzaviera, že vitamín D vo strave bráni strate osteoinduktívnej aktivity v kostnej hmote [matrix].

Turner, R. T. , J. Farley, J. J. Vandersteenhoven, S. Epstein, N. H. Bell a D. J. Baylink (1988) Preukázanie znížených mitogenických a osteoinduktívnych aktivít v demineralizovanej alogénnej kostnej hmote z potkanov deficientných na vitamín D [Demonstration of Reduced Mitogenic and Osteoinductive Activities in Demineralized Allogeneic Bone Matrix from Vitamín D-deficient Rats], The Journal of Clinical Investigation, Inc., Vol. 82, pp. 212-217, uverejňuje implantáciu

I demineralizovanej kostnej hmoty z vitamín D - deficientných do normálnych potkanov. Demineralizovaná kostná hmota z vitamín D - deficientných potkanov nepodporovala osteoindukciu tak účinne ako demineralizovaná kostná hmota z normálnych potkanov.

Sampath, T. K., S. Weintraub a A. H. Reddi (1984) Extracelulárne matrixové bielkoviny zapojené do kostnej indukcie sú závislé na vitamíne D [Extracellular Matrix Proteins involved in bone Induction are Vitamín D dependent], Biochemical and Biophysical Research Comjnunications, Vol. 124, pp. 829-835 uverejňuje štúdiu zahrnujúcu implantáciu demineralizovanej kostnej hmoty z normálnych potkanov a demineralizovanej kostnej hmoty z rachitických potkanov, kde rachitickä kostná hmota neindukovala rast kosti zatial čo normálna kostná hmota ano. Štúdia uzatvára, že tieto výsledky ukazujú, že vitamín D je potrebný na tvorbu kostných induktívnych proteínov v kostnej hmote živého potkana.

U. S. Patent č, 4 761 471, Urist, pridelený správcom University of California, vydaný 2. augusta 1988, uverejňuje prostriedok s kostnou morfogénnou bielkovinou, obsahujúci BMP faktor a bielkovinu spojenú s BMP faktorom s molekulovou váhou 34 000 daltonov. Použitie takýchto faktorov a prostriedkov na indukciu tvorby kosti v cicavcoch sa tiež uverejňuje.

U. S. Patent č, 4 455 256, Urist, pridelený správcom University of California, vydaný 19. júla 1984, uverejňuje kostnú morfogénnu bielkovinu s molekulovou váhou v rozmedzí 1 000 až 100 000 daltonov.

Mnohé iné morfogénne bielkoviny/faktory, osteoinduktívne faktory, osteogénne faktory a iné bielkoviny/faktory spojené s rastom kosti sa uverejňujú v následujúcich publikáciách: U.S. Patent 4 963 590, Kubersampath a Rueger, vydaný 6. novembra 1990; U. S. Patent 4 698 328, Neer, Pots a Slovik, vydaný 6. októbra 1987; U.S. Patent 4 877 864, Wang, Wozney a Rosen, vydaný 31. októbra 1989; U.S. Patent 4 861 757, Antoniades, Lynch a Williams, vydaný 29. augusta 1989; U.S. Patent 4 810 691, Seyedin, Thomas, Bentz, Ellingswoth a Armstrong, vydaný 7. marca 1989; U.S. Patent 4 804 744, Sen, vydaný 14. februára 1989; U.S. Patent 4 795 804, Urist, vydaný 3. januára 1990; U. S. Patent £ 4 789 663, Wallace, Smestad, McPerson, Piez a Ross, vydaný 6. decembra 1988; U. S. Patent 4 789 732, Urist, vydaný

6. decembra 1988; U. S. Patent 4 774 322, Seyedin, Thomas, Bentz, Ellingswoth a Armstrong, vydaný 27. septembra 1988; U.S. Patent 4 698 328, Neer, Pots a Slovik, vydaný 6. októbra 1987; U. S. Patent 4 627 982, Seydin a Thomas, vydaný 9. decembra 1986; U.S. Patent 4 619 982, Urist, vydaný 28. októbra 1986; U. S. Patent 4 596 574, Urist, vydaný 24. júna 1986; U.S. Patent 4 563 489, Urist, vydaný 7. januára 1986; U.S. Patent 4 526 909, Urist, vydaný 2. júla 1985; U. S. Patent 4 434 894, Seydin a Thomas, vydaný 23. februára 1987; U.S. Patent 4 294 753, Urist, vydaný 13. októbra 1981; európska patentová prihláška 349 048, Bab, Muhlrad, Gazit a Shteyer, publikovaná 3. januára 1990; európska patentová prihláška 309 241, Chu, Nathan a Seyedin, publikovaná 29. marca 1989; európska patentová prihláška 336 760, Bentz, Nathan, Rosen, Dash a Seyedin, publikovaná 11. októbra 1989; európska patentová prihláška 145 155, Sen, publikovaná 10. júna 1985; svetová patentová prihláška 89/10934, Roos, Burns, Guy a McKnight, publikovaná 16. novembra 1989; svetové patentové prihlášky 89/09787 a 89/09788, Oppermann, Kubersampath, Rueger a Ozkaynak, publikované 19. októbra 1989; svetová patentová prihláška 88/00205, Wang Wozney a Rosen, publikovaná 14. januára 1988.

Podstata vynálezu

Predmetom predkladaného vynálezu je poskytnúť spôsob na generovanie nového rastu kosti v cicavcoch.

Ďalším predmetom predkladaného vynálezu je poskytnúť farmaceutické prostriedky, ktoré sa dajú použiť pri generovaní nového rastu kosti v cicavcoch.

Predkladaný vynález sa týka spôsobu generovania nového rastu kosti v cicavcoch zahrnujúceho podávanie kombinácie bezpečného a účinného množstva zlúčeniny zo skupiny vitamínu D a bezpečného a účinného množstva jednej lebo viac BMP lebo osteoinduktívneho extraktu zahrnujúceho jednu lebo viac BMP cicavcovi.

Predkladaný vynález sa týka prostiedkov na generovanie nového rastu kosti v cicavcoch zahrnujúceho bezpečné a účinné množstvo zlúčeniny zo skupiny vitamínu D a bezpečné a účinné množstvo BMP lebo osteoinduktívneho extraktu zahrnujúceho jednu lebo viac BMP a farmaceutický prijatelný nosič.

Podrobný popis vynálezu

Predkladaný vynález zahrnuje zahrnuje podávanie kombinácie bezpečného a účinného množstva zlúčeniny zo skupiny vitamínu D a bezpečného a účinného množstva jednej lebo viac BMP lebo osteoinduktívneho extraktu zahrnujúceho jednu lebo viac BMP cicavcovi. Bolo určené, že pôsobenia zlúčeniny zo skupiny vitamínu D, BMP alebo osteoinduktívneho extraktu jednotlivo zvyšujú rast kosti. Prekvapivo bolo ďalej zistené, že pôsobenie zlúčeniny zo skupiny vitamínu D v kombinácii s osteoinduktívnym extraktom lebo v kombinácii s najmenej jednou BMP vedie k hladine nového rastu kosti vyššej ako sa dosahuje podávaním BMP, osteoinduktívneho extraktu lebo zlúčeniny zo skupiny vitamínu D jednotlivo. Subjekty ktoré potrebujú takéto pôsobenie môžu trpieť radom porúch ktoré sa dajú liečiť touto procedúrou, vrátane ale nie výhradne, zlomenín kostí (uzatvorených a otvorených), nespojitých zlomenín, vrodených vád, vedlajších dôsledkov plastickej chirurgie, liečenia onkologických resekcií, všetkých chorôb klasifikovaných ako osteoporóza, reumatoidné artritída, osteoartritída, septická artritída, rachitis, organického zabudovania protetických kĺbov a dentálnych implantátov, ako aj osteopenických a osteomalačných stavov a ochorení.

Ako sa tu používa, bezpečná a účinná dávka znamená množstvo zlúčeniny lebo prostriedku postačujúce na významné vyvolanie pozitívnej zmeny v stave, ktorý sa má liečiť ale dostatočne nízke aby zabránilo vážnemu vedíajšiemu účinku (pri rozumnom pomere osohu a rizika), v rámci správneho lekárskeho posúdenia. Takáto bezpečná a účinná dávka sa bude meniť podía konkrétneho stavu čo sa má liečiť, veku a telesného stavu pacienta, ktorý má byť liečený, vážnosti [severity] stavu, dĺžky liečby, povahy sprievodnej terapie, špecifických použitých zlúčenín a prostriedkov, konkrétneho farmaceutický prijateíného použitého nosiča a podobných faktorov, v rámci znalostí a expertízy ošetrujúceho lekára.

Ako sa tu používa, redukcia zlomeniny znamená nápravu kostnej zlomeniny chirurgickými lebo manipulačnými prostriedkami do jej normálnej anatomickej polohy.

Ako sa tu používa, BMP znamená bielkovinu kostnej morfogenézy [bone morphogenetic protein].

Ako sa tu používa, q.s. znamená postačujúce množstvo [quantity sufficient].

Ako sa tu používajú, všetky percentá sú váhové, pokiaí nie je uvedené inak.

Ako sa tu používa, lokálna liečba zahrnuje liečbu zlomenín kostí (uzatvorených a otvorených), liečbu nespojitých zlomenín, liečbu vrodených vád, vedíajších dôsledkov plastickej chirurgie, liečbu onkologických resekcií, organické zabudovanie protetických kĺbov a organické zabudovanie dentálnych implantátov.

Ako sa tu používa, systémová liečba zahrnuje liečbu chorôb klasifikovaných ako osteoporóza, reumatoídna artritída, osteoartritída, septická artritída, rachitis a osteopenických a ochorení.

Ako sa tu používa, všetky rozsahy dávok pre systémovú liečbu sú uvádzané ako suchá váha aktívnych zložiek na kilogram telesnej váhy cicavca.

Ako sa tu používa, všetky rozsahy dávok pre lokálnu liečbu sa uvádzajú ako suchá váha aktívnych zložiek na cm² plochy povrchu mineralizovanej tkáne, na ktorú sa má pôsobiť.

Ako sa tu používa, mineralizovaná tkáň znamená kosť lebo zuby.

Zlúčeniny skupiny vitamínu D

Jednou zo zložiek vo spôsobe liečby podlá vynálezu je zlúčenina zo skupiny vitamínu D. Ako sa tu používa zlúčenina zo skupiny vitamínu D [a vitamín D compound] zahrnuje vitamín D, ergokalciferól (vitamín D₂), cbolekalciferól (vitamín D₃) a ich biologicky aktívne metabolity a prekurzory. Zlúčeniny zo skupiny vitamínu D ktorým sa dáva prednosť sú, ale bez obmedzenia na ne, vitamín D₂ (Sigma, St Louis, MO), vitamín D₃ (Sigma, St Louis, MO), 1-alfa-hydroxy vitamín D₃, 1-alfa-fluóro vitamín D₃, 3-deoxy-l,25-dihydroxy vitamín D₃, 25-hydroxy-5,6-trans vitamín D₃, 25-hydroxy vitamín D₂, 25-hydroxy vitamín D₃ (Hoffman La Roche), 1,25-dihydroxy vitamín D₂, 24,25-dihydroxy vitamín D₂, 24,25-dihydroxy vitamín D₃ (Hoffman La Roche), 1,25-dihydroxy vitamín D₃ (Duphar, Veenendaal, Holland). Prednostne je zlúčenina zo skupiny vitamínu D vybraná z 25-hydroxy vitamínu D₂,

25-hydroxy vitamínu D₃, 24,25-dihydroxy vitamínu väčšia prednosť sa dáva

1,25-dihydroxy vitamínu

D.

D₂ , 24,25-dihydroxy vitamínu D₃,

1,25-dihydroxy vitamínu D₃. Ďalšie zlúčeniny zo skupiny vitamínu D užitočné v predkladanom vynáleze sú dobre známe osobám zbehlým v obore a zahrnujú, ale bez obmedzenia na ne, tie, ktoré sú uverejnené v následujúcich U. S. patentoch, z ktorých každý sa tu zahrnuje odkazom: U. S. Patent

970 203, DeLuca Patent 4 927 815, mája 1990; U. S.

Schnoes, Sicinski Patent 4 755 329,

1988; U.

Patent

S. Patent 4 588 716, S. Patent 4 588 528, januára 1986; U. a Schnoes, vydaný 26 a Kwiecinski, vydaný 13. novembra 1990; U. S. DeLuca, Kutner, Perlman a Schnoes, vydaný 22. Patent 4 857 518, DeLuca, Ikekawa a Tanaka, vydaný 15. augusta 1989; U. S. Patent 4 851 400, DeLuca, Ikekawa a Tanaka, vydaný 25. júla 1989; U. S. Patent 4 847 012, DeLuca, Kutner, Perlman, Phelps, Schnoes a Sicinski, vydaný 11. júla 1989; U. S. Patent 4 816 417, Dáme, DeLuca a Pierce,. vydaný 28. marca 1989; U. S. Patent 4 769 181, DeLuca, a Tanaka, vydaný 6. septembra 1988; U. S DeLuca, Lee a Schnoes, vydaný 5. júla

719 205, DeLuca, Schnoes, Sicinski a Tanaka, vydaný 12. januára 1988; U. S. Patent 4 719 204, DeLuca, Schnoes, Sicinski a Tanaka, vydaný 12. januára 1988; U. S. Patent 4 717 721, DeLuca, Ikekawa, Ostrem a Schnoes, vydaný 5. januára 1988; U. S. Patent 4 689 180, DeLuca, Schnoes, Sicinski a Tanaka, vydaný 25. augusta 1987; U. S. Patent 4 619 920, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 28. októbra 1986; U. S. Patent 4 594 192, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 10. júna 1986; U.

DeLuca a Schnoes, vydaný 13. mája 1986; U.

DeLuca, Ikekawa a Tanaka, vydaný 13. mája 1986; U. S. Patent 4 564 474, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 14. S. Patent 4 555 364, novembra 1985; U. S.

DeLuca, Lee, Phelps a Schnoes, vydaný 19. novembra 1985; U. S. Patent 4 552 698, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 11. novembra 1985; U. S. Patent 4 512 925, DeLuca, Lee, a Schnoes, vydaný 23. apríla 1985; U. S. Patent 4 505 906, DeLuca, Schnoes, Sicinski a Tanaka, vydaný 19. marca 1985; U. S. Patent 4 502 991, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 5. marca 1985; U. S. Patent 4 500 460, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 19. februára 1985; U. S. Patent 4 481 198, Chu, DeLuca, Kabakoff a Schnoes, vydaný 6. novembra 1984; U. S. Patent 4 461 766, DeLuca, Hart, a Schnoes, vydaný 24. júla 1984; U. S.

DeLuca, Lee, Phelps Patent 4 554 106,

Patent 4 448 726, DeLuca, Paaren, Šchnoes, a Smith, vydaný 15.

mája 1984; vydaný 15. a Schnoes,

U. S. Patent mája 1984; U. vydaný 31.

448 721, DeLuca, Morzycki a Schnoes,

S. Patent 4 428 946, DeLuca, Jorgensen januára 1984; U. S. Patent 4 411 833,

DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 2.5. októbra 1983; U. S. Patent 4 367 177, DeLuca, Schnoes, a Wichman, vydaný 4. januára 1983; U. S, a Tanaka, vydaný DeLuca, Jorgensen

Patent 4 358 406, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi 9. novembra 1982; U. S. Patent 4 338 312, a Schnoes, vydaný 6. júla 1982; U. S. Patent

338 250, DeLuca, Hamer, Paaren a Schnoes, vydaný 6. júla 1982;

U. S. Patent 4 336 193, DeLuca, a Wichmann, vydaný 22. júna 1982; U. Frank, Paaren a Schnoes, vydaný 2.

Fivizanni, Paaren, Schnoes S. Patent 4 313 942, DeLuca, februára 1982; U. S

307 231, DeLuca, Paaren, Schnoes, Tanaka a Wichmann,

Patent vydaný

22. decembra 1981; U. Morisaki, Oshida, Shnoes U. S. Patent 4 305 880, septembra 1981; U. a Schnoes, vydaný 5,

S. Patent 4 307 025, DeLuca, Ikekawa, a Tanaka, vydaný 22. decembra 1981; DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 15. decembra 1982; U. S. Patent 4 297 289, DeLuca, Fivizanni, Paaren, Schnoes‘a Wichmann, vydaný 27. októbra 1981; U. S. Patent 4 292 250, DeLuca, Levan, a Schnoes, vydaný 29.

S. Patent 4 265 822, DeLuca, Hamer, Paaren mája 1981; U. S. Patent 4 264 513, DeLuca,

Fivizanni, Napoli a Schnoes, vydaný 28. apríla 1981; U. S. Patent 4 313 942, DeLuca, Napoli, Onisko a Schnoes, vydaný 21. apríla 1981; U. S. Patent 4 260 804, DeLuca, Esvelt a Schnoes, vydaný 7. apríla 1981; U. S. Patent 4 307 231, DeLuca, Hamer, Paaren a Schnoes, vydaný 7. apríla 1981; U. S. Patent 4 254 045, DeLuca, Ikekawa, Morisaki, Oshida a Tanaka, vydaný 3. marca 1981; U. S. Reissue Patent 30 538, DeLuca, Lam a Schnoes, vydaný 3. marca 1981; U. S. Patent 4 248 791, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi a Tanaka, vydaný 3. februára 1981; U. S. Patent 4 234 495, DeLuca, Hamer, Paaren, a Schnoes, vydaný 18. novembra 1980; U. S. Patent 4 230 627, DeLuca, Napoli, Onisko a Shnoes, vydaný 28.

októbra 1980; U. S. Patent 4 229 359, Alper, DeLuca, Schnoes a Tanaka, vydaný 21. októbra 1980; U. S. Patent 4 230 627, DeLuca, Napoli, Onisko a Shnoes, vydaný 28. októbra 1980; U. S. Patent 4 229 359, Alper, DeLuca, Shnoes a Tanaka, vydaný 21. októbra 1980; U. S. Patent 4 229 358, DeLuca, Napoli, Onisko a Shnoes, vydaný 21. októbra 1980; U. S. Patent 4 229 357, DeLuca, Napoli, Onisko a Shnoes, vydaný 21. októbra 1980; U. S. Patent 4 226 788, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi, Schnoes a Tanaka, vydaný 7. októbra 1980; U. S. Patent 4 226 787, DeLuca, Napoli, Onisko a Shnoes, vydaný 7. októbra 1980; U. S. Patent 4 224 231, Alper, DeLuca, Shnoes a Tanaka, vydaný 23. septembra 1980; U. S. Patent 4 224 230, DeLuca, Napoli, Onisko a Shnoes, vydaný 23. septembra 1980; U. S. Patent 4 223 131, DeLuca, Shnoes, a Wichman, vydaný 16. septembra 1980; U. S. Patent 4 217 288, DeLuca, Onisko a Shnoes, vydaný 12. augusta 1980; U. S. Patent 4 209 634, DeLuca, Elsvelt a Shnoes, vydaný 24. júna 1980; U. S. Patent 4 202 829, DeLuca, Hamer, Paaren a Shnoes, vydaný 13. mája 1980; U. S. Patent 4 201 881, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi, Shnoes a Tanaka, vydaný 6. mája 1980; U. S. Patent 4 196 133, DeLuca, Ikekawa, Kobayashi, Shnoes a Tanaka, vydaný 1. apríla 1980; U. S. Patent 4 195 027, DeLuca, Hamer, Paaren a Shnoes, vydaný 25. marca 1980; U. S. Patent 4 188 345, DeLuca, Napoli, Oniski a Shnoes, vydaný 12. februára 1980 a U. S. Patent 3 906 014, DeLuca, Lam a Schnoes, vydaný 16. septembra 1975. Ďalšie zlúčeniny zo skupiny vitamínu D užitočné podlá tohoto vynálezu zahrnujú, ale bez obmedzenia, hydroxylovaný 24-homo-vitamín D; cyklopentáno-vitamín D; hydroxylovaný 26-homo-vitamín D;

alfa-hydroxyvitamín D; 1-hydroxyvitamín D; 1 alfahydroxyvitamín D₂; 1 alfa,25-dihydroxy-22Z-dehydroxyvitamín D; 26,26,26,27,27-pentafluóro-1 alfa-hydroxy-27-metoxyvitamín D₃;

alfa-f luórovitamín D₃; 1,24-dihydroxy-delta 22-vitamín D;

23,23-difluóro-25-hydroxy-vitamín D₃; l-hydroxy-3,5-cyklovitamín D; 23,23-difluóro-1 alfa , 25-hydroxy-vitamín D₃;

1.23- dihydroxyvitamín D; hydroxyvitamín D₂;

23.23- difluóro-1 alfa,25-dihydroxy-vitamín D₃ ; 23,23-difluóro25-hydroxy-vitamín D₃; 26,26,26,27,27,27-hexafluóro-1 alfa,25dihydroxycholesterol; 23,25-dihydroxyvitamín D₃; 26,26,26,27,27,27-hexafluóro-1 alfa,25-dihydroxycholekalciferol;

alfa,25-dihydroxy-2 β-fluórovitamín D₃; 24-fluóro25-dihydroxy-cholekalciferol; 5,6-trans-vitamín D; 1 alfahydroxy-25-keto-27-nor-cholekalciferol; fluórovitamín D; 1 alfa-hydroxy-2 β-fluórocholekalciferol; 3-deoxy-l alfahydroxycholekalciferol; 25-hydroxy-26,26,26,27,27,27-hexafluórocholekalcif erol ; alfa-hydroxy-3,5-cyklovitamín D; 25-hydroxycholekalciferol; 24,24-difluóro-1 alfa,25-dihydroxy cholekalciferol; 25-dihydroxycholekalciferol-26,23-laktón;

24.24- difluóro-lalfa,25-dihydroxycholekalciferol;

24.24- difluóro-25-hydroxycholekalciferol; 3,5-cyklo-vitamín D; a 3-deoxy-alfa-hydroxycholekalciferol. Ďalšie zlúčeniny zo skupiny vitamínu D užitočné podlá tohoto vynálezu zahrnujú tie, čo sú uverejnené v Príručke vitamínov [The Handbook of Vitamins], L. J. Machlin, ed., Mercel Dekker, Inc. (1984) ako sa tu zahrnuje odkazom. Zlúčeniny zo skupiny vitamínu D užitočné podlá tohoto vynálezu uverejnené v tomto odkaze, zahrnujú, ale bez obmedzenia, 1,25-dihydroxy vitamín D; 3-deoxy-l,25-dihydroxy vitamín D; 27-nor-25-hydroxy vitamín D₃; 26,27-bis-nor25-hydroxy vitamín D₃; 24-nor-25-hydroxy vitamín D₃; 25-hydroxy vitamín D; 1,25-hydroxy vitamín D; lalfa-hydroxy vitamín D₃; 25-fluóro-lalfa-hydroxy vitamín D₃.

Bezpečné a účinné množstvo zlúčeniny zo skupiny vitamínu D sa dávkuje v kombinácii s najmenej jednou BMP lebo v kombinácii s osteoinduktívnym extraktom zahrnujúcim najmenej jednu BMP.

Prednostný rozsah dávok na podávanie zlúčeniny zo skupiny vitamínu D pre celkovú liečbu je od asi 1 ng po asi 1 mg, lepšie od asi 10 ng po asi 500 μς, ešte lepšie od asi 20 ng po asi 10 μg.

Pre účele lokálnej liečby, rozsah dávok zlúčeniny zo skupiny vitamínu D je s výhodou od asi 1 ng po asi 1 mg, lepšie od asi 10 ng po asi 500 ng, ešte lepšie od asi 10 ng po asi 50 ng a najlepšie od asi 20 ng po asi 30 ng.

Výhodne sa dávky podávajú behom obdobia 1 deň a 6 mesiacov, lepšie 1 týždeň až 1 mesiac. Výhodne sa dávky podávajú raz za mesiac až asi 5 razy denne, lepšie asi raz za týždeň až asi raz za deň.

Bielkoviny kostnej morfogenézy

V jednom prevedení tohoto vynálezu sa zlúčenina zo skupiny vitamínu D podáva v kombinácii s jednou lebo viac BMP na generovanie nového rastu kosti v cicavcovi. Tieto BMP sú s výhodou vybrané zo skupiny pozostávajúcej z BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6 a BMP-7.

Bezpečné a účinné množstvo BMP, s výhodou vybranej zo skupiny pozostávajúcej z BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6 a BMP-7, sa dávkuje v kombinácii zo zlúčeninou zo skupiny vitamínu D.

Prednostný rozsah dávok na podávanie BMP pre ceľkovú liečbu je od asi l pg po asi 100 μg, lepšie od asi 1 ng po asi 10 μg, ešte lepšie od asi 10 ng po asi 2.5 μg.

Pre účele lokálnej liečby, rozsah dávok pre BMP je s výhodou od asi 1 pg po asi 100 μg, lepšie od asi 1.5 μg po asi 90 μg, ešte lepšie od asi 1.8 μg po asi 75 μg, ešte lepšie od asi 2.0 μg po asi 50 μg, stále ešte lepšie od asi 2.2 μ9 po asi 25 μg, ešte lepšie od asi 2.3 μg po asi 10 μg, a najlepšie od asi 2.5 μg po asi 5 μg. S výhodou rozsah dávok je najmenej 2.5 μg.

Výhodne sa dávky podávajú behom obdobia 1 deň a 6 mesiacov, lepšie 1 týždeň až 1 mesiac. Výhodne sa dávky podávajú raz za mesiac až asi 5 razy denne, lepšie asi raz za týždeň až asi raz za deň.

Ako sa tu používa,

BMP-1 znamená peptid kódovaný

sekvenciou	DNA	zahrnujúcou SEKV. ID.	č.	1.
Ako	sa	tu používa, BMP-2	tl	znamená	peptid	kódovaný
sekvenciou	DNA	zahrnujúcou SEKV. ID.	č.	2 .
Ako	sa	tu používa, BMP-3	It	znamená	peptid	kódovaný
sekvenciou	DNA	zahrnujúcou SEKV. ID.	č.	3.
Ako	sa	tu používa, BMP-4	H	znamená	peptid	kódovaný
sekvenciou	DNA	zahrnujúcou SEKV. ID.	Č.	4.
Ako	sa	tu používa, BMP-5	tl	znamená	peptid	kódovaný
sekvenciou	DNA	zahrnujúcou SEKV. ID.	č.	5.
Ako	sa	tu používa, BMP-6	II	znamená	peptid	kódovaný
sekvenciou	DNA	zahrnujúcou SEKV. ID.	č.	6.
Ako	sa	tu používa, BMP-7	II	znamená	peptid	kódovaný
sekvenciou	DNA	zahrnujúcou SEKV. ID.	č.	7.
Ako	sa	tu používa, A,	n ip	II llQll	a C	odkazujú

na nukleotidy obsahujúce adenín, tymín, guanín a cytozín.

Osteoinduktívny extrakt

Iná zložka vynálezu je osteoinduktívny extrakt. Ako sa tu používa, osteoinduktívny extrakt znamená chemický extrakt kosti, zahrnujúci jeden lebo viac morfogénnych bielkovín, vrátane, ale bez obmedzenia, BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6 a BMP-7, kde každá BMP má molekulovú váhu od asi 28 000 do asi 40 000 daltonov.

Rozsah molekulovej 28 000 až 40 000 daltonov sa vzťahuje k váhe BMP diméru. S výhodou, molekulová váha diméru je od asi 38 000 do asi 34 000 daltonov. Dimér BMP sa skladá z dvoch monomérov, z ktorých každý má molekulovú váhu od asi 14 000 do asi 20 000 daltonov, s výhodou od asi 15 000 do asi 17 000 daltonov.

Prednostná metóda získávania osteoindktívneho extraktu je ako následuje:

Stiahni kožu od kolien 7 až 8-týždňových Long-Evansových potkanov (Charles River laboratories, Wilmington, MA). Vyber obe tíbie a umiestni do studenej vody. Umy kosť destilovanou vodou na odstránenie tkaní iných ako kosť. Nechaj kosť uschnúť na vzduchu. Zomel kosť umiestnením do Osterizer mixéru (Oster Commercial, Milwaukee, WI) s vodou a ladom. S mixérom nastaveným na stekuťovaciu [liguefy] rýchlosť pokračuj v pridávaní kostí. Nechaj rozmixovaný materiál usadiť sa po niekoľko minút. Dekantuj kvapalnú vrstvu. Umiestni pevnú vrstvu na miešačku a pridaj destilovanú vodu na premytie. Pokračuj s premývaním destilovanou vodou dokiaľ nie je čistá [clear]. Keď je voda z premývania čistá, pridaj ľad a začni miešať. Pridaj 1 ml lmM fenylmetyl sulfonyl floridu (PMSF). Premývaj po jednu hodinu s častým pridávaním ľadu. Opakuj s premývaním druhou vodou. Daj vzorku do lázne s ľadovou vodou na miešačke. Odmasti absolútnym etanolom, potom odmasti dva razy etyléterom. Rozprestri kostný materiál na sklenené Petriho misky. Nechaj kúsky [chips] kosti vyschnúť na vzduchu cez noc.

Zváž kúsky kosti po sušení cez noc. S použitím sít (Americká štandartná séria sít [U.S.A. Standard Sieve Šerieš], Newark Wire Cloth Co., Newark, N.J.; sito čís. 40 zadržiava častice väčšie ako 425 μπι a sito čís. 170 zadržiava častice väčšie ako 90 μπι) izoluj častice v rozsahu 90-425 μπι. Zomel všetky častice väčšie ako 425 μπι v prístroji MicroMill (Scienceware Bel-Art Products, Pequannock, NJ) po jednu minutu s pridaním ľadu k časticiam kosti na udržanie materiálu v chlade. Opakuje kroky presievania a MicroMill mletia častíc väčších ako 4 25 μτη dokiaľ množstvo celkového výťažku nie je väčšie ako 2/3 počiatočnej váhy kosti. Skladuj častice pri 4°C do ďalšieho kroku. Zváž častice z tohoto stupňa izolácie. Na každý gram častíc pridaj 25 ml 0.6 N HC1. Miešaj dôkladne 2 hodiny pri 4°C. Po dvoch hodinách zastav miešanie a nechaj častice usadiť. Dekantuj HC1. Pridaj novú 0.6 N HC1 a miešaj ďalšie 2 hodiny. Dekantuj HC1 a pridaj novú 0.6 N HCl tretí raz a miešaj 2 hodiny. Dekantuj HCl a premy destilovanou vodou. S použitím lakmusového papierika skúšaj pH

4°C miešania a nechaj usadiť. Odlej Extrahuj materiál druhý raz po vody na prítomnosť HC1. Pokračuj v premývaní destilovanou vodou dokial pH nie je medzi 5 a 5.5. Premy kostné čiastice tri razy etanolom. Rozmiešaj, nechaj usadiť a odstráň supernatant. Premy kostné čiastice tri razy etyléterom ako hore. Usuš cez noc na sklenených miskách. Usušené kostné čiastice sa označujú ako kyselinou demineralizované kostné čiastice.

Kyselinou demineralizované kostné čiastice sú deproteinované takto: Zváž materiál po usušení cez noc. Na každý gram materiálu pridaj roztok 30 ml 4 M guanidín-HCl, 10 mM Tris a 1.0 mM PMSF pH 6.4 ku kostnému materiálu v kadičke. Extrahuj po 16 hodín pri s dôkladným miešaním. Po 16 hodinách extrakcie ukonči guanidínový roztok a uschovaj.

6-7 hodín s čerstvým roztokom guanidín-HCl. Po extrakcii odlej roztok a spoj s predtým uschovaným roztokom. Kostné čiastice sú teraz demineralizované a deproteinované.

Dialýzuj uschovaný guanidín-HCl roztok proti destilovanej H₂O pri 4°C s použitím 50 mm dialyzačnej trubice (3 500 hranica [cutoff] molekulovej váhy). Pod dialýze materiál lyofilizuj a lyofilizovaný materiál resolubilizuj v 4 M močovine-0.05 M Tris0.1 M NaCl, pH 7.4. Zmiešaj solubilizovaný materiál v kónickej centrifigačnej skúmavke s Heparín-Agarózou a miešaj cez noc na otáčacom zariadení [rotator] pri 4°C. Nalej Heparín-Agarózovú kašu [slurry] do kolóny. Premy 1 objemom kolóny pufru 4 M močovina, 0.05 M Tris, 0.1 M NaCl, pH 7.4. Zbieraj frakcie. Premy tromi objemmi kolóny pufru 4 M močovina, 0.05 M Tris, 0.2 M NaCl, pH 7.4. Uvolni materiál tromi objemmi pufru 4 M močovina, 0.05 M Tris, 0.75 M NaCl, pH 7.4. Zakoncentruj túto vzorku v 50 ml Amiconovom koncentrátore (Amicon Corp., Danvers, MA) s filtrom (10 000 hranica molekulovej váhy) na asi 4-5 ml. Stanov koncentráciu bielkoviny s použitím BCA reagentu na stanovenie bielkovín [BCA (bicinchonicic acid) Protein Assay Reagent] (Pierce, Rockford, IL) a dialýzuj (dialyzačná trubica s 3 500 hranicou [cutoff] molekulovej váhy) v 4 M guanidíne-0.01 M Tris pH 7.4. Nanes materiál na kolónu Saphacrylu S 200 a zbieraj frakcie. Frakcie obsahujúce hlavný vrchol bielkoviny sa dialyzujú proti 1 M kyseline octovej a skúšajú na aktivitu.

Aktívne frakcie z gelovej filtrácie sa spoja a dialýzujú proti tri razy vymenenej 6 M močovine, 25 mM Na acetátu, pH 4.6. Dialyzát sa nanesie na kolónu karboxymetylsepharosy (CM-Sepharose) ekvilibrovanej tým istým pufrom. Kolóna sa premyje 6 M močovinou, 25 mM Na acetátom, pH 4.6. a aktivita sa eluuje s použitím gradientu 0 - 0.5 M NaCl. Frakcie sa analyzujú na koncentráciu bielkoviny a SDS gelovou elektroforézou. Aktivita lokalizovaná v siedmych frakciách pred a po hlavnom vrchole bielkoviny sa spojí na ďalšiu purifikáciu.

Spojene frakcie z CM-Sepharosy sa dialýzujú tri razy po 24 hodín proti 1% kyseline octovej. Dialyzát sa lyofilizuje do sucha a bielkovina sa rozpustí v 30 ml 6 M močoviny, 0.5 M NaCl a 25 mM Na fosfátu, pH 7.4. Vzorka sa aplikuje na kolónu chelatujúcej Sapharosy s naviazaným zinkom a ekvilibrovanú s pufrom ako je uvedený vyššie. Kolona sa týmto pufrom premyje a potom sa eluuje gradientom od 6 M močoviny, 0.5 M NaCl a 25 mM Na fosfátu, pH 7.4 do 6 M močoviny, 0.5 M NaCl a 25 mM Na acetátu, pH 4.6. Alikvóty z každej frakcie sa označia ¹²⁵I a analyzujú SDS gelovou elektroforézou. Alikvóty (100 μΐ) každej frakcie sa spojia s 400 μΐ elučného pufru, dialyzujú proti 1% kyseline octovej a testujú na aktivitu. Vysoko purifikované peptidy s rozsahom molekulovej váhy (M_r) 25-40 kD sa testujú v teste indukcie kosti.

Bezpečné a účinné množstvo osteoinduktívneho extraktu sa dávkuje v kombinácii zo zlúčeninou zo skupiny vitamínu D. Pre celkovú liečbu, dávkovaný osteoinduktívny extrakt prednostne obsahuje najmenej jednu BMP v množstve od asi 1 pg po asi 100 μg, lepšie od asi 1 ng po asi 10 μg, ešte lepšie od asi 10 ng po asi 2.5 μ9.

Pre účele lokálnej liečby, dávkovaný osteoinduktívny extrakt zahrnuje prednostne najmenej jednu BMP v množstve od asi 1 pg po asi 100 gg, lepšie od asi 1.5 ^g po asi 90 gg, ešte lepšie od asi 1.8 gg po asi 75 μ. g, ešte lepšie od asi 2.0 μg po asi 50 ^g, stále ešte lepšie od asi 2.2 ng po asi 25 ^g, ešte lepšie od asi 2.3 gg po asi 10 gg, a najlepšie od asi 2.5 μg po asi 5 μg. S výhodou rozsah dávok je najmenej 2.5 μg.

Výhodne sa dávky podávajú behom obdobia 1 deň a 6 mesiacov, lepšie 1 týždeň až 1 mesiac. Výhodne sa dávky podávajú raz za mesiac až asi 5 razy denne, lepšie asi raz za týždeň až asi raz za deň.

Farmaceutický prijateľný nosič

Zlúčenina zo skupiny vitámínu D, osteoinduktívny extrakt ‘JLebo BMP sa môžu podávať s pomocou farmaceutický prijateľného nosiča. Výraz farmaceutický prijateľný nosič ako sa tu používa znamená jednu lebo viac kompatibilných pevných lebo tekutých plniacich zrieďovacích lebo enkapsulujúcich látok vhodných na podávanie ľudom lebo nižším živočíchom. Výraz kompatibilný ako sa tu používa znamená, že zložka farmaceutického prostriedku je schopná zmiesenia so zložkou (zložkami) tohoto vynálezu a medzi sebou navzájom takým spôsobom, že nenastanú interakcie, ktoré by podstatne znížili farmaceutickú účinnosť farmaceutického prostriedku pri bežnej situácii používania. Farmaceutický prijateľné nosiče musia, samozrejme, mať dostatočne vysokú čistotu a nízku toxicitu na to, aby boli vhodné na podávanie liečeným ľuďom lebo nižším živočíchom.

Niektorými príkladmi látok, ktoré môžu slúžiť ako farmaceutický vhodné nosiče sú cukry ako laktóza, glukóza a sacharóza; škroby ako kukuričný a zemiakový škrob; celulóza a jej deriváty, ako karboxymetylcelulóza, etylcelulóza, acetát celulózy; práškový tragacanth; slad; želatína; mastenec; kyselina steárová; stearát horečnatý; síran vápenatý; rastlinné oleje, ako podzemnicový olej, olej z bavlníkového semena, sezamový olej, olivový olej a olej theobromový; polyóly ako propylén glykol, glycerol, sorbitol, manitol a polyetylén glykol; cukor; alginová kyselina; voda prostá pyrogénov; izotonická sol; fosfátové pufrovacie roztoky; kakaové maslo (základ čapíkov); emulgátory, ako Tween^R; ako aj iné netoxické kompatibilné látky používané vo farmaceutických prípravkoch. Zvlhčujúce a lubrikačné činidlá, ako laurylsulfát sodný, ako aj farbiace činidlá, ochucovače, zväčšovače objemu, tabletovacie substancie, stabilizátory, antioxidancia a konzervačné prostriedky môžu tiež byť prítomné. Ďalšie kompatibilné farmaceutické aditíva a aktívne zložky (napr. NSAI liečivá, prostriedky proti bolesti, svalové relaxanty) sa môžu zahrnúť do farmaceutický prijatelných nosičov na použitie v prostriedkoch podlá vynálezu. Napríklad, anestetiká známe v obore sa môžu zahrnúť do farmaceutický prijatelných nosičov (napr. benzylalkohól; Novokain^R; lidokaín).

Ďalšie príklady nosičov zahrnujú kolagén, demineralizované kostné čiastice, keramické a kovové implantačné materiály, kolagénové membrány a kostné implantáty (izogénne lebo alogénne).

Výber farmaceutický prijatelného nosiča na použitie vo spojitosti so zložkou podlá vynálezu je určený spôsobom, akým sa zložka podáva. Prednostné spôsoby podávania zložiek podlá vynálezu sú inekciami, orálne podávanie, miestne orálne podávanie a nasofaryngické podávanie, lebo ich kombinácia (t.j. osteoinduktívny extrakt inekčne a zlúčenina zo skupiny vitamínu D orálnym podávaním). Ak sa má zložka podávať inekčne, prednostným farmaceutický prijateľným nosičom je sterilný fyziologický roztok soli. Vhodné farmaceutický prijateľné nosiče na orálne podávanie zahrnujú tie, čo sú vhodné na tablety a kapsle. Vhodné farmaceutický prijateľné nosiče na miestne orálne podávanie zahrnujú tie, čo sú vhodné na pasty, gély a tekutiny. Vhodné farmaceutický prijateľné nosiče na nasofaryngické podávanie zahrnujú tie, čo sú vhodné na kvapky, spreje, aerosóly a púdre.

Osobitý farmaceutický prijateľný nosič môže byť použitý v spojitosti s každou aktívnou zložkou podľa vynálezu lebo jednotný farmaceutický prijateľný nosič môže byť použitý v spojitosti so zmesou aktívnych zložiek podľa vynálezu. V každom prípade, farmaceutický prijateľný nosič sa používa v koncentrácii dostatočnej a dávkovania zahrnovať od na zaistenie Farmaceutický asi 0.1% do asi praktického vzťahu veľkosti prijateľný nosič môže celkovo 99.99999% váhových farmaceutického prostriedku, prednostne od asi 50% do asi 99.999%, a najlepšie od asi 70% do asi 99.9%.

Konkrétne orálne a inekčné nosiče užitočné podľa vynálezu sú popísané v následujúcich amerických patentoch, čo sa tu všetky zahrnujú odkazom: U.S. Patent čís. 4 401 663, Buckwalter, et al, vydaný 30. augusta 1983; U.S. Patent čís. 4 424 205, LaHann, et al, vydaný 31. januára 1984; U.S. Patent čís. 4 443 473,

Buckwalter, et al, vydaný 12. apríla 1983; U.S. Patent čís.

493 848, LaHann, et al, vydaný

Reprezentatívne farmaceutické prostriedky poskytnuté v Príkladoch tu ďalej.

Farmaceutický prijateľné nosiče na prípravu jednotkových dávkovacích foriem na orálne podávanie, miestne orálne podávanie, nasofaryngické podávanie a inekcie sú v obore dobre známe. Ich výber bude závisieť na vedľajších úvahách ako sú chuť, cena a/lebo skladovatelnosť, ktoré nie sú rozhodujúce pre účele podľa vynálezu a dá sa bez ťažkostí vykonať osobou zbehlou v obore. Farmaceutický prijateľné nosiče užitočné podľa vynálezu sú širšie popísané tu ďalej.

A. Orálne dávkovacie formy

Prednostne je zlúčenina zo skupiny vitamínu D podávaná pomocou orálnych dávkovacích foriem. Rôzne orálne dávkovacie formy môžu byt použité, vrátane takých pevných foriem ako tablety, kapsle, granule, prášky a mikrokapsule lieku. Tieto formy obsahujú bezpečné a účinné množstvo, zvyčajne najmenej okolo 0.5%, prednostne okolo 1% až 10%, zložky podľa vynálezu.

15. januára 1984. podľa vynálezu sú

Tablety môžu byť komprimované, entericky potiahnuté, cukrom potiahnuté lebo filmom potiahnuté s vhodným viazacím činidlom, lubrikantom, povrchovo dezintegračným činidlom, konzervačným činidlom, činidlom, zried’ovadlom, činidlom, chuťovou látkou, stekutenie a látkou na aktívnym farbiacim látkou na roztavenie. Kvapalné orálne dávkovacie formy zahrnujú vodné a nevodné roztoky, emulzie, suspenzie, roztoky a suspenzie rekonštituované z neefervescentných granulí, obsahujúcich vhodné rozpustidlá, konzervačné činidlá, emulgátory, činidlá na tvorbu suspenzie, zrieďovadlá, sladidlá, farbiace látky a chuťové látky. Prednostné nosiče na orálne podávanie zahrnujú želatínu a propylén glykol. Konkrétne príklady farmaceutický prijateľných nosičov a látok na zväčšenie objemu [excipients], ktoré sa dajú používať vo formuláciách orálnych dávkovacích foriem podľa vynálezu sú popísané v U.S. Patent 3 903 297, Róbert, vydanom 2. septembra 1975, zahrnutom tu odkazom. Techniky a zloženia na prípravu pevných orálnych dávkovacích foriem sú popísané v Marshall, Orálne pevné dávkovacie formy [Solid Oral Dosage Forms], Modern Pharmaceuti.es, Vol. 7, (Banker a Rhodes, editori), 359-427 (1979), zahrnuté tu odkazom. Techniky a zloženia na prípravu tabliet (komprimovaných, zložených a tavených) , kapslí (mäkká a tvrdá želatína) a piluliek sú popísané v Pemington' s Pharmaceutical Sciences (Arthur Osol, ed.), 1553-1593 (1980), ako sa tu zahrnuje odkazom.

B. Miestne orálne dávkovacie formy

Miestne-orálny nosič ako sa tu používa, označuje nosič pre zložku záujmu, ktorá má za výsledok zmes, ktorá je podávaná miestne v ústnej dutine, podržaná tam po istý časový úsek a potom skôr vyvrhnutá ako zhlnutá. Takéto prostriedky zahrnujú zubné pasty, zubné gély, zubné prášky, ústne vody, ústne spreje, profylaktické pasty, roztoky na zubnú liečbu, produkty na udržované uvoľňovanie, a tak podobne.

Zložky miestne-orálneho nosiča sú vhodné biogely a iné na podávanie v ústnej dutine človeka lebo nižšieho živočícha a sú kompatibilné s jednou lebo viac inými zložkami, osobitne so zlúčeninou zo skupiny vitamínu D a osteoinduktívnym extraktom lebo BMP, používanými v ústnych prostriedkoch podlá vynálezu. Prednostné miestne-orálne nosiče takto poskytujú žiadané vlastnosti zubných pást, zubných gélov, zubných práškov, ústnej vody, ústnych sprejov, profylaktických pást, roztokov na zubnú liečbu, a tak podobne. Miestne-orálne nosiče podlá vynálezu zahrnujú zložky typicky používané v takýchto prostriedkoch, ktoré sú dobre známe skúseným praktikom. Takéto zložky zahrnujú, ale bez obmedzenia, prostriedky proti kazom, plakom a zubnému kameňu, zubné abrazíva, povrchovo aktívne látky, chuťové látky, sladidlá, viažúce látky, zvlhčovače, zahusťovače, pufrujúce činidlá, konzervačné farbiace látky a pigmenty, etanol a vodu.

Prednosť sa dáva prostriedkom vo forme zubnej pasty, takejto zubnej pasty všeobecne zahrnujú zubné abrazívum (od asi 10% do asi 50%), povrchovo aktívnu látku (od asi 0.5% do asi 10%), zahusťovadlo (od asi 0.1% do asi 5%), zvlhčovadlo (od asi 10% do asi 55%), chuťovú látku (od asi 0.04% do asi 2%), sladidlo (od asi 0.01% do asi 3%), do asi 0.5%) a vodu (od asi 2% do môžu osahovať jednu lebo viac látok asi 0.2%, ako fluoridový ión), látky,

Zložky farbiacu látku (od asi 0.01% asi 45%). Takéto zubné pasty proti kazom (od asi 0.05% do proti zubnému kameňu (od asi

0.1% do asi 13%), a proti plakom (od asi 0.1% do asi 5%).

Iné prostriedky podlá vynálezu, ktorým sa dáva prednosť sú ústne vody a ústne spreje. Zložky takejto ústnej vody a ústneho spreja zhrňujú vodu (od asi 45% do asi 95%), etanol (od asi 0% do asi 25%), zvlhčovadlo (od asi 0% do asi 50%), povrchovo aktívnu látku (od asi 0.01% do asi 7%), chuťovú látku (od asi 0.04% do asi 2%), sladidlo (od asi 0.01% do asi 3%), farbiacu látku (od asi 0.01% do asi 0.5%). Takéto ústne vody a ústne spreje môžu obsahovať jednu lebo viac látok proti kazom (od asi 0.05% do asi 0.3%, ako fluoridový ión), proti zubnému kameňu (od asi 0.01% do asi 3%), a proti plakom (od asi 0.1% do asi 5%).

Iné prostriedky podlá vynálezu, ktorým sa dáva prednosť sú dentálne roztoky. Zložky takýchto dentálnych roztokov všeobecne zhrňujú vodu (od asi 90% do asi 99%), konzervačnú látku (od asi 0.01% do asi 0.5%), zahusťovadlo (od asi 0% do asi 5%), chuťovú látku (od asi 0.04% do asi 2%), sladidlo (od asi 0.1% do asi 3%), povrchovo aktívnu látku (od asi 0% do asi 5%).

Mistne-orálny nosič ako sa tu používa, tiež označuje vlákna, prúžky a hadičky [tubes], ktoré múzu byt impregnované aktívnymi zložkami podlá vynálezu a zavedené lebo implantované do periodentálnej kapsy. Takéto prostriedky podlá vynálezu sa dajú lahko dosiahnúť tým, ktorí majú bežné schopnosti v obore používajúcom znalosti uverejnené skôr, v následujúcich odkazoch, zahrnutých tu odkazom, a príbuzných dobre známych technikách: U.S. Patent čís. 4 666 897 vydaný Golubovi, McNamarovi a Ramamurthymu 19. mája 1987; Európska patentová prihláška čís. 244 118 A1 na meno Baker, uverejnená 4. novembra 1987; Európska patentová prihláška čís. 286 802 A2 na meno Kametaka, Miyazaki, Hayashi, Handa a Kameda, uverejnená 19. októbra 1988; Addy, M.,

L. Ravle, R. Handley, H. Newman a J. Coventry, Vývoj a in vitro hodnotenie akrylových prúžkov a dialyzačných trubíc pre lokálne dodávanie liekov [The development and in vitro evaluation of acrylic strips and dialysis tubing for local drug delivery], Journal of Periodontology, Vol. 53 (1982), pp. 693-698; Godson J.

M. , A. D. Haffajee a S. S. Socransky, Periodentálna terapia miestnym dodávaním tetracyklínu [Periodontal therapy by local delivery of tetracycline], Journal of Clinical Periodontology, Vol. 6 (1979), pp. 83-92; Goodson, J., D. Holborow, R. Dunn, P. Hogan a S. Dunham, Monolitické vlákna obsahujúce tetracyklín na riadené dodávanie do periodentálnej kapsy [Monolithic tetracycline containing fibers for controlled delivery to periodontal pockets], Journal of Periodontology, Vol. 54 (1983), pp. 575-579; Dunn, R., J. Gibson, B. Perkins, J. Goodson a L.

pharmacokinetic model Pharmacokinetics and pp. 599-620; Elkayam, R. M. Sela a L. Golub,

Laufe, Vláknové dodávacie systémy na antimikrobiálne činidlá [Fibrous delivery systems for antimicrobial agents ] , Polymér Materiál Science Engineering, Vol. 51 (1984), pp. 28-31; Olanoff, L., a J. Anderson, Riadené uvoľňovanie tetracyklínu - III: Fyziologický farmakokinetický model potkana v pregnancii [Controlled release of tetracycline - III.: A physiological of the pregnat rat] , Journal o f Biopharmaceutics, Vol. 8 (1980),

M. Friedman, A. Stabholz, A. Soskolne, Zariadenie na udržované uvoľňovanie obsahujúce minocyklín na lokálnu liečbu periodentálnych chorôb [Sustained release device containing minocycline for local treatment of periodontal disease], Journal of Controlled Release, Vol. 7 (1988), pp. 231-236; a Goodson, J. Viac-centrové hodnotenie tetracyklínovej vláknovej liečby. I. Experimentálne usporiadanie [Multicenter evaluation of tetracycline fiber therapy], Journal of Dental research, Vol. 68 (1989), p. 197; a odkazy tam citované.

C. Inekčné dávkovacie formy:

Aktívne zložky podľa vynálezu sú užitočné tiež keď sa podávajú inekčne. Dávkovanie aktívnych zložiek podľa vynálezu, ktoré je bezpečné a účinné na poskytnutie aktivity k rastu kosti sa bude meniť podľa konkrétneho stavu čo sa má liečiť, vážnosti [severity) stavu, dĺžky liečby, špecifickej zmesi použitých zlúčenín a prostriedkov a ich použitej koncentrácie, a podobných faktorov, v rámci znalostí a expertízy ošetrujúceho lekára a primeranosti k rozumným pomerom osohu a rizika spojeného s použitím každej zložky lieku. Navyše, nižšie dávkovanie sa použije keď je žiaduci menší a lokálny rast kosti, zatiaľčo vyššie dávkovanie sa použije keď je žiaduci väčší a celkový rast kosti.

Metódy a materiály na výrobu inekčného materiálu sa nájdu v Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. vydanie, 1985,

- 23 kapitola 85, str. 1518, uverejnenie ktorého je tu zahrnuté odkazom na jeho celistvosť. Prednostne, inekčný prostriedok je vodný roztok.

Vodné roztoky prednostne pozostávajú z vody (prednostne od asi 80% do asi 99,999%), vhodného solubilizátoru, rôznych typov kyselín, a antimikrobiálneho činidla. Je známych niekolko solubilizátorov. Príklady solubilizátorov sú ako následuje: Zlúčeniny zo skupiny močoviny (napr. močovina, uretán); povrchovo aktívne látky (napr. Tween, Span, dezoxycholát sodný a Pluronic); celulotické činidlá (napr. karboxymetylcelulóza); cukry (napr. sorbitol, manitol); B vitamíny (napr. nikotínamid); deriváty (napr. benzylalkohol). Príklady kyselín na následujúce: Glukuronovú, galakturonovú, octovú, citrónovú a laktobiónovú. Typy ktoré sa dajú použiť sú následujúce: thimerosal; benzethonium chlorid;

xantínu; použitie fumárovú, a alkoholy zahrnujú gentizovú, antimikrobiálnych činidiel dusičnan fenylortuťnatý;

benzalkonium chlorid; fenol; krezol; a chlórbutanol. Lokálne anestetiká známe v obore se môžu tiež zahrnúť (napr. benzyl alkohol; Novocaine^R; lidokaín).

Prednostne, osteoinduktívny extrakt a BMP sú podávané inekčnou dávkovou formou.

Následujúce príklady ďalej popisujú a demonštrujú prednostné prevedenie v rámci vynálezu. Príklady sa uvádzajú len k ilustračným účelom a nemajú sa vysvetľovať ako obmedzenia vynálezu, pretože mnoho jeho obmien je možných bez odchýlenia sa od jeho ducha a rozsahu.

PRÍKLAD I

Inekčný prostriedok obsahujúci osteoinduktívny extrakt a orálny prípravok obsahujúci 1,25-dihydroxy vitamín D₃ na nápravu kostnej zlomeniny sa pripraví kombináciou následujúcich zložiek s použitím konvenčných miešacích techník.

BMP prostriedok

Váhových percent

Zložka prostriedku

BMP-1	0.04
NaCl	0.90
Sterilná voda	q.s.
	100.0
1,25-dihvdroxv vitamín D3 prostriedok
Zložka	Váhových percent prostriedku
1,25-dihydroxy vitamín D3	0.01
Kukuričný škrob	18.49
Laktóza	63.00
Mastenec	18.00
Kyselina steárová	0.50

100.0

0.1 cc BMP prostriedku sa dá inekčne do miesta zlomeniny v čase redukcie zlomeniny a raz denne potom. 100 μ9 1,25-dihydroxy vitamín D₃ prostriedku sa podá orálne 24 hodín pred redukciou zlomeniny a raz denne potom. BMP 1,25-dihydroxy vitamín D₃ sa podávajú dokial sa nedosiahne žiadaná náprava, s výhodou behom obdobia siedmych dní.

PRÍKLAD II

Inekčný prostriedok na nápravu kostnej zlomeniny sa pripraví kombináciou následujúcich zložiek s použitím konvenčných miešacích techník.

Váhových percent

Zložka prostriedku

BMP-2 0.04 25-hydroxy vitamín D₂ 0.01 NaCl 0.09 Sterilná voda na inekcie q.s.

100.0

0.1 cc prostriedku sa dá inekčne do miesta zlomeniny v čase redukcie zlomeniny a raz denne potom dokial sa nedosiahne žiadaná náprava.

PRÍKLAD III

Prostriedok na indukciu rastu kosti po rekonštrukčnom chirurgickom zákroku sa pripraví kombináciou následujúcich zložiek s použitím konvenčných miešacích techník.

Váhových percent

Zložka prostriedku

BMP-3	0.04
1,25-dihydroxy vitamín D3	0.01
NaCl	0.90
Sterilná voda	q.s. 100.0

n

0.1 cc prostriedku na cm povrchovej plochy chirurgicky rekonštruovanej kosti sa dá priamo na kostný povrch.

PRÍKLAD IV

Prostriedok na urýchlenie hojenia a zaistenie pevnejšej väzby medzi prirodzenou kosíou a umelou protézou sa pripraví kombináciou následujúcich zložiek s použitím konvenčných miešacích techník.

Váhových percent

Zložka prostriedku

BMP—1	0.04
BMP-2	0.04
BMP-4	0.04
24,25-dihydroxy vitamín D3	0.01
NaCl	0.90
Sterilná voda	q.s.

100.0

BMP-2 NaCl

Sterilná voda

0.1 cc prostriedku na cm² povrchovej plochy prirodzenej kosti blízko protézy sa dá priamo na prirodzenú kosé.

PRÍKLAD V

Prostriedok s miestne-orálnym nosičom na periodentálnu terapiu sa pripraví kombináciou následujúcich zložiek s použitím konvenčných miešacích techník.

Váhových percent

Zložka prostriedku

0.04 0.90

q.s.

100.0

Po príprave pacienta s použitím konvenčnej periodentálnej chirurgickej terapie 0.1 cc prostriedku na exponovaný zub sa dá na miesto zákroku. Mäkké látkové prekrytie sa potom prišije na uzavretie miesta zákroku. Táto liečba je užitočná na alveolárnu nápravu a nápravu podporujúcej kosti v perodonte stratenom chorobou.

PRÍKLAD VI

Inekčný prostriedok obsahujúci BMP 2, 3,4, a 5 a orálny prípravok obsahujúci 1,25-dihydroxy vitamín D₃ na liečbu osteoporózy sa pripraví kombináciou následujúcich zložiek s použitím konvenčných miešacích techník.

Prostriedok s osteoinduktívny extraktom

Váhových percent

Zložka prostriedku

BMP-2	0.001
BMP-3	0.001
BMP-4	0.001
BMP-5	0.001
NaCl	0.900
Sterilná voda	q.s. 100.000
1,25-dihydroxy vitamín D3 prostriedok
Zložka	Váhových percent prostriedku
1,25-dihydroxy vitamín D3	0.01
Kukuričný škrob	18.49
Laktóza	63.00
Mastenec	18.00
Kyselina steárová	0.50

100.0

0.1 cc BMP prostriedku sa podáva inekčne intravenózne raz denne. 50 mg 1,25-dihydroxy vitamín D₃ prostriedku sa podá orálne behom 1 hodiny po inekcii osteoinduktívneho extraktu a raz denne potom. BMP 1,25-dihydroxy vitamín D₃ sa podávajú v priebehu obdobia siedmych dní.

PRÍKLAD VII rastu kosti nespojitej následujúcich zložiek Ako sa tu používa, znamená zlomeninu,

Inekčný prostriedok na indukci zlomeniny sa pripraví kombináciou s použitím konvenčných miešacích techník, nespojitá zlomenina [non-union fracture] u ktorej neprebieha normálne hojenie.

Zložka	Váhových percent prostriedku
BMP-4	0.004
1,25-dihydroxy vitamín D3	0.01
Kyselinou demineralizované kostné čiastice	90.000
NaCl	0.900
Sterilná voda	q.s.

100.000

V čase redukcie zlomeniny sa dá dostatočné množstvo prostriedku popísaného hore priamo na miesto nespojitosti, zaplňujúc takto chýbajúcu kost.

ZOZNAM SEKVENCIÍ (1) OBECNÉ INFORMÁCIE:

(i) ŽIADATEÚ: STONE, ROGER L.

(ii) NÁZOV VYNÁLEZU: LIEČEBNÉ PROSTRIEDKY NA OSTEOINDUKCIU (iii) POČET SEKVENCIÍ: 7 (iv) KOREŠPONDENČNÁ ADRESA:

(A) ADRESÁT: The Procter & Gamble Company (B) ULICA: 1181 East Miami River Road (C) MESTO: Cincinnati (D) ŠTÁT: Ohio (E) ZEM: USA (F) POŠTOVNÉ SMEROVACIE ČÍSLO: 45239-8707 (v) POČÍTAČOVÁ ČÍTACIA FORMA:

(A) TYP MÉDIA: Floppy disk (B) POČÍTAČ: IBM kompatibilný PC (C) OPERAČNÝ SYSTÉM: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Release #1.0, versia #1.25 (vi) ÚDAJE O SÚČASNEJ PRIHLÁŠKE:

(A) ČÍSLO PRIHLÁŠKY:

(B) DÁTUM PODANIA:

(C) KLASIFIKÁCIA:

(viii) INFORMÁCIA O ZÁSTUPCOVI:

(A) MENO: Corstanje, Brahm J.

(B) ČÍSLO REGISTRÁCIE: 34,804 (ix) INFORMÁCIA O SPOJENÍ:

(A) TELEFÓN: 513-345-2858 (B) TELEFAX: 513-741-3012 (2) INFORMÁCIA O SEKVENCII ID. Č. 1:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 1728 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP -VLÁKNA: dvoj vláknová (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA

GCCGCTTCCC TCGCCGCCGC CCCGCCAGCA TGCCCGGCGT GGCCCGCCTG CCGCTGCTGC 60

TCGGGCTGCT GCTGCTCCCG CGTCCCGGCC GGCCGCTGGA CTTGGCCGAC TACACCTATG 120

ACCTGGCGGA GGAGGACGAC TCGGAGCCCC TCAACTACAA AGACCCCTGC AAGGCGGCTG 180

CCTTTCTTGG GGACATTGCC CTGGACGAAG AGGACCTGAG GGCCTľCCAG GTACAGCAGG 240

CTGTGGATCT CAGACGGCAC ACAGCTCGTA AGTCCTCCAT CAAAGCTGCA GTTCCAGGAA 300 »

ACACTTCTAC CCCCAGCTGC CAGAGCACCA ACGGGCAGCC TCAGAGGGGA GCCTGTGGGA 360

GATGGAGAGG TAGATCCCGT AGCCGGCGGG CGGCGACGTC CCGACCAGAG CGTGTGTGGC 420

CCGATGGGGT CATCCCCTTT GTCATTGGGG GAAACTTCAC TGGTAGCCAG AGGGCAGTCT 480

TCCGGCAGGC CATGAGGCAC TGGGAGAAGC ACACCTGTGT CACCTTCCTG GAGCGCACTG 540

ACGAGGACAG CTATATTGTG TTCACCTATC GACCHGCGG GTGCTGCTCC TACGTGGGTC 600

GCCGCGGCGG GGGCCCCCAG GCCATCTCCA TCGGCAAGAA CTGTGACAAG TTCGGCATTG 660

TGGTCCACGA GCTGGGCCAC GTCGTCGGCT TCTGGCACGA ACACACTCGG CCAGACCGGG 720

ACCGCCACGT TTCCATCGTT CGTGAGAACA TCCAGCCAGG GCAGGAGTAT AACTTCCTGA 780

AGATGGAGCC TCAGGAGGTG GAGTCCCIGG GGGAGACCTA TGACTTCGAC AGCATCATGC	840
ATTACGCTCG GAACACATTC TCCAGGGGCA TCTTCCTGGA TACCATTGTC CCCAAGTATG	900
AGGTGAACGG GGTGAAACCT CCCATTGGCC AAAGGACACG GCTCAGCAAG GGGGACATTG	960
CCCAAGCCCG CAAGCTTTAC AAGTGCCCAG CCTGTGGAGA GACCCTGCAA GACAGCACAG	1020
GCAACTTCTC CTCCCCTGAA TACCCCAATG GCTACTCTGC TCACATGCAC TGCGTGTGGC	1080
GCATCTCTGT CACACCCGGG GAGAAGATCA TCCTGAACTT CACGTCCCTG GACCTGTACC	1140
GCAGCCGCCT GTGCTGGTAC GACTATGTGG AGGTCCGAGA TGGCTTCTGG AGGAAGGCGC	1200
CCCTCCGAGG CCGCTTCTGC GGGTCCAAAC TCCCTGAGCC TATCGTCTCC ACTGACAGCC	1260
GCCTCTGGGT TGAATTCCGC AGCAGCAGCA ATTGGGTTGG AAAGGGCTTC TTTGCAGTCT	1320
ACGAAGCCAT CTGCGGGGGT GATGT6AAAA AGGACTATGG CCACATTCAA TCGCCCAACT	1380
ACCCAGACGA HACCGGCCC AGCAAAGTCT GCATCTGGCG GATCCAGGTG TCTGAGGGCT	1440
TCCACGTGGG CCTCACATTC CAGTCCTTTG AGATTGAGCG CCACGACAGC TGTGCCTACG	1500
ACTATCTGGA GGTGCGCGAC GGGCACAGTG AGAGCAGCAC CCTCATCGGG CGCTACTGTG	1560
GCTATGAGAA GCCTGATGAC ATCAAGAGCA CGTCCAGCCG CCTCTGGCTC AAGTTC'GTCT	1620
CTGACGGGTC CATTAACAAA GCGGGCTTTG CCGTCAACTT TTTCAAAGAG GTGGACGAGT	1680
GCTCTCGGCC CAACCGCGGG GGCTGTGAGC AGCGGTGCCT CAACACCCTG GGCAGCTACA	1740
AGTGCAGCTG TGACCCCGGG TACGAGCTGG CCCCAGACAA GCGCCGCTGT GAGGCTGCTT	1800
GTGGCGGATT CCTCACCAAG CTCAACGGCT CCATCACCAG CCCGGGCTGG CCCAAGGAGT	1860
ACCCCCCCAA CAAGAACTGC ATCIGGCAGC TGGTGGCCCC CACCCAGTAC CGCATCTCCC	1920
TGCAGTTTGA CTTCTTľGAG ACAGAGGGCA ATGATGTGTG CAAGTACGAC TTCGTGGAGG	1980

TGCGCAGTGG	ACTCACAGCT	GACTCCAAGC	- 32 - TGCATGGCAA	GTTCTGTGGT	TCTGAGAAGC	2040
CCGAGGTCAT	CACCTCCCAG	TACAACAACA	TGCGCGTGGA	GTTCAAGTCC	GACAACACCG	2100
TGTCCAAAAA	GGGCTTCAAG	GCCCACTTCT	TCTCA6AAAA	GAGGCCAGCT	CTGCAGCCCC	2160
CTCGGGGACG	CCCCCACCAG	CTCAAATTCC	GAGTGCAGAA	AAGAAACCGG	ACCCCCCAGT	2220
GAGGCCTGCC	AGGCCTCCCG	GACCCCTTGT	TACTCAGGAA	CCTCACCTTG	GACGGAATGG	2280
GATGGGGGCT	TCGGTGCCCA	CCAACCCCCC	ACCTCCACTC	TGCCATTCCG	GCCCACCTCC	2340
CTCTGGCCGG	ACAGAACTGG	TGCTCTCTTC	TCCCCACTGT	GCCCGTCCGC	GGACCGGGGA	2400
CCCTTCCCCG	TGCCCTACCC	CCTCCCATTT	TGATGGTGTC	TGT6ACATTT	CCTGTTGTGA	2460
AGTAAAAGAG	GGACCCCTGC	GTCCTGC				2487

(2) INFORMÁCIA O SEKVENCII ID. Č. 2:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DťiŽKA: 1547 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) POPIS SEKVENCIE: SEKVENCIA ID. Č. 2:

GGGGACTTCT T6AACTTGCA GGGAGAATAA CHGCGCACC CCACTTTGCG CCGGTGCCn 60

TGCCCCAGCG GAGCCTGCH CGCCATCTCC GAGCCCCACC GCCCCTCCAC TCCTCGGCCT 120

TGCCCGACAC TGAGACGCTG TTCCCAGCGT GAAAAGAGAG ACTGCGCGGC CGGCACCCGG ISO

GAGAAG6AGG AGGCAAAGAA AAGGAACGGA CATTCGGTCC TTGCGCCAGG TCCTTTGACC 240

AGAGTTTTTC	CATGTGGACG	CICTTTCAAT	GGACGTGTCC	CCGCGTGCTT	CHAGACGGA	300
CTGCGGTCTC	CTAAAGGTCG	ACCATGGTGG	CCGGGACCCG	CTGTCTTCTA	GCGTTGCTGC	360
TTCCCCAGGT	CCTCCTGGGC	GGCGCGGCTG	GCCTCGTTCC	GGAGCTGGGC	CGCAGGAAGT	420
TCGCGGCGGC	GTCGTCGGGC	CGCCCCTCAT	CCCAGCCCTC	TGACGAGGTC	CTGAGCGAGT	480
TCGAGHGCG	GCTGCTCAGC	ATGTTCGGCC	TGAAACAGAG	ACCCACCCCC	AGCAGGGACG	540
CCGTGGTGCC	CCCCTACATG	CTAGACCTGT	ATCGCAGGCA	CTCAGGTCAG	CCGGGCTCAC	600
CCGCCCCAGA	CCACCGGTTG	GAGAGGGCAG	CCAGCCGAGC	CAACACTGTG	CGCAGCTTCC	660
ACCATGAAGA	ATCTTTGGAA	GAACTACCAG	AAACGAGTGG	GAAAACAACC	CGGAGATTCT	720
tctttaattt	AAGTTCTATC	CCCACGGAGG	AGTTTATCAC	CTCAGCAGAG	CTTCAGGTTT	780
TCCGAGAACA	GATGCAAGAT	GCHTAGGAA	ACAATAGCAG	TTTCCATCAC	CGAATIAATA	840
nTATGAAAT	CATAAAACCT	GCAACAGCCA	ACTCGAAATT	CCCCGTGACC	AGACTTTTGG	900
ACACCAGGn	GGTGAATCAG	AATGCAAGCA	GGTGGGAAAG	TTTTGATGTC	ACCCCCGCTG	960
TGATGCGGTG	GACTGCACAG	GGACACGCCA	ACCATGGATT	CGTGGTGGAA	GTGGCCCACT	1020
TGGAGGAGAA	ACAAGGTGTC	TCCAAGAGAC	ATGHAGGAT	AAGCAGGTCT	TTGCACCAAG	1080
ATGAACACAG	CTGGTCACAG	ATAAGGCCAT	TGCTAGTAAC	TTTTGGCCAT	GATGGAAAAG	1140
GGCATCCTCT	CCACAAAAGA	GAAAAACGTC	AAGCCAAACA	CAAACAGCGG	AAACGCCHA	1200
AGTCCAGCTG	TAAGAGACAC	CCTTTGTACG	TGGACTTCAG	TGACGTGGGG	TGGAATGACT	1260
GGATTGTGGC	TCCCCCGGGG	TATCACGCCT	TnACTGCCA	CGGAGAATGC	CCTTTTCCTC	1320
TGGCTGATCA	TCTGAACTCC	ACTAATCATG	CCAnGTTCA	GACGTTGGTC	AACTCTGTTA	1380
ACTCTAAGAT	TCCTAAGGCA	TGCTGTGTCC	CGACAGAACT	CAGTGCTATC	TCGATGCTGT	1440

ACCnGACGA GAATGAAAAG GTTGTATTAA AGAACTATCA GGACATGGTT GTGGAGGGTT 1500

GTGGGTGTCG CTAGTACAGC AAAATTAAAT ACATAAATAT ATATATA 1547 (2) INFORMÁCIA O SEKVENCIÍ ID. Č. 3:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 1774 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) POPIS SEKVENCIE: SEKVENCIA ID. Č. 3:

AGATCTTGAA AACACCCGGG CCACACACGC CGCGACCTAC AGCTCTT7CT CAGCGTTGGA 60

GTGGAGACGG CGCCCGCAGC GCCCTGCGCG GGTGAGGTCC GCGCAGCTGC TGGGGAAGAG 120

CCCACCTGTC AGGCTGCGCT GGGTCAGCGC AGCAAGTGGG GCTGGCCGCT ATCTCGCTGC 180

ACCCGGCCGC GTCCCGGGCT CCGTGCGCCC TCGCCCCAGC TGGTTTGGAG TTCAACCCTC 240

GGCTCCGCCG CCGGCTCCn GCGCCTTCGG AGTGTCCCGC AGCGACGCCG GGAGCCGACG 300

CGCCGCGCGG GTACCTAGCC ATGGCTGGGG CGAGCAGGCT GCTCTTTCTG TGGCTGGGCT 360

GCTTCTGCGT GAGCCTGGCG CAGGGAGAGA GACC6AAGCC ACCTTTCCCG GAGCTCCGCA 420

AAGCTGTGCC AGGTGACCGC ACGGCAGGTG GTGGCCCGGA CTCCGAGCTG CAGCCGCAAG 480

ACAAGGTCTC TGAACACATG CTGCGGCTCT ATGACAGGTA CAGCACGGTC CAGGCGGCCC 540

GGACACCGGG CTCCCTGGAG GGAGGCTCGC AGCCCTGGCG CCCTCGGCTC CTGCGCGAAG 600

GCAACACGGT TCGCAGCTTT CGGGCGGCAG CAGCAGAAAC TCTTGAAAGA AAAGGACTGT 660

ATATCTTCAA	TCTGACATCG	CTAACCAAGT	CTGAAAACAT	TTTGTCTGCC	ACACTGTATT	720
TCTGTATTGG	AGAGCTAGGA	AACATCAGCC	TGAGTTGTCC	AGTGTCTGGA	GGATGCTCCC	780
ATCATGCTCA	GAGGAAACAC	ATTCAGATTG	ATCTTTCTGC	ATGGACCCTC	AAATTCAGCA	840
GAAACCAAAG	TCAACTCCTT	GGCCATCTGT	CAGTGGATAT	GGCCAAATCT	CATCGAGATA	900
TTATGTCCTG	GCTGTCTAAA	GATATCACTC	AATTCTTGAG	GAAGGCCAAA	GAAAATGAAG	960
AGTTCCTCAT	AGGATTTAAC	ATTACGTCCA	AGGGACGCCA	GCTGCCAAAG	AGGAGGTTAC	1020
CTTTTCCAGA	GCCTTATATC	TTGGTATATG	CCAATGATGC	CGCCATTTCT	GAGCCAGAAA	1080
GTGTGGTATC	AAGCTTACAG	GGACACCGGA	ATTTTCCCAC	TGGAACTGTT	CCCAAATGGG	1140
ATAGCCACAT	CAGAGCTGCC	CTTTCCATTG	AGCGGAGGAA	GAAGCGCTCT	ACTGGGGTCT	1200
TGCTGCCTCT	GCAGAACAAC	GAGCTTCCTG	GGGCAGAATA	CCAGTATAAA	AAGGATGAGG	1260
TGTGGGAGGA	GAGAAAGCCT	TACAAGACCC	TTCAGGCTCA	GGCCCCTGAA	AAGAGTAAGA	1320
ATAAAAAGAA	ACAGAGAAAG	GGGCCTCATC	GGAAGAGCCA	GACGCTCCAA	TTTGATGAGC	1380
AGACCCTGAA	AAAGGCAAGG	AGAAAGCAGT	GGATTGAACC	TCGGAATTGC	GCCAGGAGAT	1440
ACCTCAAGGT	A6ACTTTGCA	GATATTGGCT	GGAGTGAATG	GATTATCTCC	CCCAAGTCCT	1500
TTGATGCCTA	TTATTGCTCT	GGAGCATGCC	AGTTCCCCAT	GCCAAAGTCT	TTGAAGCCAT	1560
CAAATCATGG	TACCATCCAG	AGTATAGTGA	GAGCTGTGGG	GGTCGTTCCT	GGGATTCCTG	1620
AGCCTTGCTG	TGTACCAGAA	AAGATGTCCT	CACTCAGTAT	TTTATTCTTT	6AT6AAAATA	1680
AGAATGTAGT	GCTTAAAGTA	TACCCTAACA	TGACAGTAGA	GTCTTGCGCT	TGCAGATAAC	1740
CTGGCAAAGA	ACTCATTÍGA	ATGCTTAATT	CAAT			1774

(2) INFORMÁCIA O SEKVENCII ID. Č. 4 (i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 1751 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) POPIS SEKVENCIE: SEKVENCIA ID. Č. 4:

GGCAGAGGAG GAGGGAGGGA GGGAAGGAGC GCGGAGCCCG GCCCGGAAGC TAGGTGAGTG 60

TGGCATCCGA GCTGAGGGAC GCGAGCCTGA GACGCCGCTG CTGCTCCGGC TGAGTATCTA 120

GCTTGTCTCC CCGATGGGAT TCCCGTCCAA GCTATCTCGA GCCTGCAGCG CCACAGTCCC 180

CGGCCCTCGC CCAGGTTCAC TGCAACCGTT CAGAGGTCCC CAGGAGCTGC TGCTGGC6AG 240

CCCGCTACTG CAGGGACCTA TGGAGCCATT CCGTAGTGCC ATCCCGAGCA ACGCACTGCT 300

GCAGCTTCCC TGAGCCTTTC CAGCAAGTTT GTTCAAGATT GGCTGTCAAG AATCATGGAC 360

TGTTATTATA TGCCTTGTTT TCTGTCAA6A CACCATGATT CCTGGTAACC GAATGCTGAT 420

GGTCGTTTTA TTATGCCAAG TCCTGCTAGG AGGCGCGAGC CATGCTAGTT TGATACCTGA 480

GACGGGGAAG AAAAAAGTCG CC6A6ATTCA GGGCCACGCG GGAGGACGCC GCTCAGGGCA 540

GAGCCATGAG CTCCTGCGGG ACTTCGAGGC GACACTTCTG CAGATGTTTG GGCTGCGCCG 600

CCGCCCGCAG CCTAGCAAGA GTGCCGTCAT TCCGGACTAC ATGCGGGATC TTTACCGGCT 660

TCAGTCTGGG GAGGAGGAGG AAGAGCAGAT CCACAGCACT GGTCTTGAGT ATCCTGAGCG 720

CCCGGCCAGC CGGGCCAACA CCGTGAGGAG CTTCCACCAC GAAGAACATC TGGAGAACAT 780

CCCAGGGACC AGTGAAAACT CTGCTTTTCG TTTCCTCTTT AACCTCAGCA GCATCCCTGA 840

GAACGAGGTG ATCTCCTCTG CAGAGCTTCG GCTCTTCCGG GAGCAGGTGG ACCAGGGCCC	900
TGATTGGGAA AGGGGCTTCC ACCGTATAAA CATTTATGAG GTTATGAAGC CCCCAGCAGA	960
AGTGGTGCCT GGGCACCTCA TCACACGACT ACTGGACACG AGACTGGTCC ACCACAATGT	1020
6ACACGGTGG GAAACTTTTG ATGTGAGCCC TGCGGTCCTT CGCTGGACCC GGGAGAAGCA	1080
GCCAAACTAT GGGCTAGCCA nGAGGTGAC TCACCTCCAT CAGACTCGGA CCCACCAGGG í	1140
CCAGCATGTC AGGATTAGCC GATCGTTACC TCAAGGGAGT GGGAATTGGG CCCAGCTCCG	1200
GCCCCTCCTG GTCACCTTTG GCCATGATGG CCGGGGCCAT GCCTTGACCC GACGCCGGAG	1260
GGCCAAGCGT AGCCCTAAGC ATCACTCACA GCGGGCCAGG AAGAAGAATA AGAACTGCCG	1320
GCGCCACTCG CTCTATGTGG ACTTCAGCGA TGTGGGCTGG AATGACTGGA TTGTGGCCCC	1380
ACCAGGCTAC CAGGCCTTCT ACTGCCATGG GGACTGCCCC TTTCCACTGG CTGACCACCT	1440
CAACTCAACC AACCATGCCA TTGTGCA6AC CCTGGTCAAT TCTGTCAATT CCAGTATCCC	1500
CAAAGCCTGT TGTGTGCCCA CTGAACTGAG TGCCATCTCC ATGCTGTACC TGGATGAGTA	1560
• TGATAAGGTG GTACTGAAAA AHATCAGGA GATGGTAGTA GAGGGATGTG GGTGCCGCTG	1620
AGATCAGGCA GTCCHGAGG ATA6ACAGAT ATACACACCA CACACACACA CCACATACAC	1680
CACACACACA CGTTCCCATC CACTCACCCA CACACTACAC AGACTGCTTC CTTATAGCTG GACTTTTATT T	1740 1751

(2) INFORMÁCIA O SEKVENCII ID. Č. 5:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 2153 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) POPIS SEKVENCIE: SEKVENCIA ID. Č. 5:

CTGGTATATT TGTGCCTGCT GGAGGTGGAA TTAACAGTAA GAAGGAGAAA GGGATTGAAT 60

GGACTTACAG GAAGGATTTC AAGTAAATTC AGGGAAACAC ATTTACTTGA ATAGTACAAC 120

CTAGAGTATT ATTTTACACT AAGACGACAC AAAAGATGTT AAAGTTATCA CCAAGCTGCC 180

GGACAGATAT ATATTCCAAC ACCAAGGTGC AGATCAGCAT AGATCTGTGA TTCAGAAATC 240

AGGATTTGTT TTGGAAAGAG CTCAAGGGTT GAGAAGAACT CAAAAGCAAG TGAAGATTAC 300

TTTGGGAACT ACAGTTTATC AGAAGATCAA CTTTTGCTAA TTCAAATACC AAAGGCCTGA 360

TTATCATAAA TTCATATAGG AATGCATAGG TCATCTGATC AAATAATATT AGCCGTCTTC 420

TGCTACATCA ATGCAGCAAA AACTCTTAAC AACTGTGGAT AATTGGAAAT CTGAGTTTCA 480

GCTTTCTTAG AAATAACTAC TCTTGACATA TTCCAAAATA TTTAAAATAG GACAGGAAAA 540

TCGGTGAGGA TGTTGTGCTC AGAAATGTCA CTGTCATGAA AAATAGGTAA ATTTGTTTTT 600

TCAGCTACTG G6AAACTGTA CCTCCTAGAA CCTTAGGTTT TTTTTTTTTT AAGAGGACAA 660

GAAGGACTAA AAATATCAAC TTTTGCTTTT GGACAAAAAT GCATCTGACT GTATTTTľAC 720 • TTAAGGGTAT TGTGGGTTTC CTCTGGAGCT GCTGGGTTCT AGTGGGTTAT GCAAAAGGAG 780

GTTTGGGAGA CAATCATGTT CACTCCAGTT TTATTTATAG AAGACTACGG AACCAC6AAA 840

GACGGGAAAT ACAAAGGGAA ATTCTCTCTA TCTTGGGTTT GCCTCACAGA. CCCAGACCAT 900

TTTCACCTGG AAAACAAGCG TCCTCTGCAC CTCTCTTTAT GCTGGATCTC TACAATGCCA 960

T6ACCAATGA AGAAAATCCT GAAGAGTCGG AGTACTCAGT AAGGGCATCC TTGGCAGAAG 1020

AGACCAGAGG GGCAAGAAAG GGATACCCAG CCTCTCCCAA TGGGTATCCT CGTCGCATAC 1080

AGTTATCTCG GACGACTCCT CTGACCACCC AGAGTCCTCC TCTAGCCAGC CTCCATGATA 1140

CCAACTTTCT GAATGATGCT GACATGGTCA TGAGCTTTGT CAACTTAGTT GAAAGAGACA 1200

AGGATTTTTC TCACCAGCGA AGGCATTACA AAGAATTTCG ATTTGATCTT ACCCAAATTC 1260

CTCATGGAGA GGCAGTGACA GCAGCTGAAT TCCGGATATA CAAGGACCGG AGCAACAACC 1320

GATTTGAAAA TGAAACAATT AAGATTAGCA TATATCAAAT CATCAAGGAA TACACAAATA 1380

GGGATGCAGA TCTGTTCTTG TTAGACACAA GAAAGGCCCA AGCTTTAGAT GTGGGTTGGC 1440

TTGTCTTTGA TATCACTGTG ACCAGCAATC ATTGGGTGAT TAATCCCCAG AATAATTTGG 1500

GCTTACAGCT CTGTGCAGAA ACAGGGGATG GACGCAGTAT CAACGTAAAA TCTGCTGGTC 1560

TTGTGGGAAG ACAGGGACCT CAGTCAAAAC AACCATTCAT GGTGGCCTTC TTCAAGGCGA 1620

GTGAGGTACT TCTTC6ATCC GTGAGAGCAG CCAACAAACG AAAAAATCAA AACCGCAATA 1680

AATCCAGCTC TCATCAGGAC TCCTCCAGAA TGTCCAGTGT TGGAGATTAT AACACAAGTG 1740

AGCAAAAACA AGCCTGTAAG AAGCACGAAC TCTATGTGAG CTTCCGGGAT CTGGGATGGC 1800

AGGACTGGAT TATAGCACCA GAAGGATACG CTGCATTTTA TTGTGATGGA GAATGTTCTT 1860

TTCCACTTAA CGCCCATATG AATGCCACCA ACCACGCTAT AGTTCAGACT CTGGTTCATC 1920

TGATGTTTCC TGACCACGTA CCAAAGCCTT GTTGTGCTCC AACCAAATTA AATGCCATCT 1980

CTGTTCTGTA CTTTGATGAC AGCTCCAATG TCATTTTGAA AAAATATAGA AATATGGTAG 2040

TACGCTCATG TGGCTGCCAC ΤΑΑΤΑΠΑΑΑ TAATAHGAT AATAACA4AA AGATCTGTAT 2100

TAAGGTTTAT GGCTGCAATA AAAAGCATAC THCA6ACAA ACAGAAAAAA AAA

2153 . .. »r..

- 40 (2) INFORMÁCIA Ο SEKVENCII ID. Č. 6:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 2923 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) POPIS SEKVENCIE: SEKVENCIA ID. Č. 6:

CGACCATGAG	AGATAAGGAC	TGAGGGCCAG	GAAGGGGAAG	CGAGCCCGCC	GAGAGGTGGC	60
GGGGACTGCT	CACGCCAAGG	GCCACAGCGG	CCGCGCTCCG	GCCTCGCTCC	GCCGCTCCAC	120
''ľCGCGGG	ATCGGCGGGG	GCAGCCCGGC	CGGGCGGGGA	TGCCGGGGCT	GGGGCGGAGG	180
GCGCAGTGGC	TGTGCTGGTG	GTGGGGGCTG	CTGTGCAGCT	GCTGCGGGCC	CCCGCCGCTG	240
CGGCCGCCCT	TGCCCGCTGC	CGCGGCCGCC	GCCGCCGGGG	GGCAGCTGCT	GGGGGACGGC	300
GGGAGCCCCG	GCCGCACGGA	GCAGCCGCCG	CCGTCGCCGC	AGTCCTCCTC	GGGCTTCCTG	360
TACCGGCGGC	TCAAGACGCA	GGAGAAGCGG	GAGATGCAGA	AGGAGATCTT	GTCGGTGCTG	420
GGGCTCCCGC	ACCGGCCCCG	GCCCCTGCAC	GGCCTCCAAC	AGCCGCAGCC	CCCGGCGCTC	480
CGGCAGCAGG	AGGAGCAGCA	GCAGCAGCAG	CAGCTGCCTC	GCGGAGAGCC	CCCTCCCGGG	540
CGACTGAAGT	CCGCGCCCCT	CTTCATGCTG	GATCTGTACA	ACGCCCTGTC	CGCCGACAAC	600
GACGAGGACG	GGGCGTCGGA	GGGGGAGAGG	CAGCAGTCCT	GGCCCCACGA	AGCAGCCAGC	660
TCGTCCCAGC	GTCGGCAGCC	GCCCCCGGGC	GCCGCGCACC	CGCTCAACCG	CAAGAGCCTT	720
CTGGCCCCCG	GATCTGGCAG	CGGCGGCGCG	TCCCCACTGA	CCAGCGCGCA	GGACAGCGCC	780
TTCCTCAACG	ACGCGGACAT	GGTCATGAGC	TTTGTGAACC	TGGTGGAGTA	CGACAAGGAG	840

TTCTCCCCTC GTCAGCGACA CCACAAAGAG TTCAAGTTCA ACTTATCCCA GATTCCTGAG 900

GGTGAGGTGG TGACGGCTGC AGAATTCCGC ATCTACAAGG ACTGTGTTAT GGGGAGTTTT 950

AAAAACCAAA CTTTTCTTAT CAGCATTTAT CAAGTCTTAC AGGAGCATCA GCACAGAGAC 1020

TCTGACCTGT TTTTGTTGGA CACCCGTGTA GTATGGGCCT CAGAAGAAGG CTGGCTGGAA 1080

TTTGACATCA CGGCCACTAG CAATCTGTGG GTTGTGACTC CACAGCATAA CATGGGGCTT 1140

CAGCTGAGCG TGGTGACAAG GGATGGAGTC CACGTCCACC CCCGAGCCGC AGGCCTGGTG 1200

GGCAGAGACG GCCCTTACGA TAAGCAGCCC TTCATGGTGG CTTTCTTCAA AGTGAGTGAG 1260

GTČCACGTGC GCACCACCAG GTCAGCCTCC AGCCGGCGCC GACAACAGAG TCGTAATCGC' 1320

TCTACCCAGT CCCAGGACGT GGCGCGGGTC TCCAGTGCTT CAGATTACAA CAGCAGTGAA 1380

TT6AAAACAG CCTGCAGGAA GCATGAGCTG TATGTGAGTT TCCAAGACCT GGGATGGCAG 1440

GACTGGATCA TTGCACCCAA GGGCTATGCT GCCAATTACT GTGATGGA6A ATGCTCCTTC 1500

CCACTCAACG CACACATGAA TGCAACCAAC CACGCGATTG TGCAGACCTT GGTTCACCTT 1560

ATGAACCCCG AGTATGTCCC CAAACCGTGC TGTGCGCCAA CTAAGCTAAA TGCCATCTCG 1620

GTTCTT7ACT TTGATGACAA CTCCAATGTC ATTCTGAAAA AATACAGGAA TATGGTTGTA 1680

AGAGCTTGTG 6ATGCCACTA ACTCGAAACC AGATGCTGGG GACÄCACATT CTGCCTTGGA 1740

TTCCTAGAT7 ACATCTGCCT TAAAAAAACA CGGAAGCACA GTTGGAGGTG GGACGATGAG 1800

ACTTTGAAAC TATCTCATGC CAGTGCCHA TTACCCAGGA A6ATTTTAAA GGACCTCATT 1860

AATAATTTGC TCACTTGGTA AATGACGTGA GTAGTTGTTG GTCTGTAGCA AGCTGAGTTT 1920

GGATGTCTGT AGCATAAGGT CTGGTAACTG CAGAAACATA ACCGTGAAGC TCTTCCTACC 1980

CTCCTCCCCC AAAAACCCAC CAAAATTAGT TTTAGCTGTA GATCAAGCTA TTTGGGGTGT 2040

TTGTTAGTAA	ATAGGGAAAA	TAATCTCAAA	GGAGTTAAAT	GTATTCTTGG	CTAAAGGATC	2100
AGCTGGTTCA	GTACTGTCTA	TCAAAGGTAG	ATTTTACAGA	6AACAGAAAT	CGGGGAAGTG	216C
GGGGGAACGC	CTCTGTTCAG	TTCATTCCCA	GAAGTCCACA	GGACGCACAG	CCCAGGCCAC	2220
AGCCAGGGCT	CCACGGGGCG	CCCTTGTCTC	AGTCATTGCT	GTTGTATGTT	CGTGCTGGAG	2280
TTTTGTTGGT	GTGAAAATAC	ACTTATTTCA	GCCAAAACAT	ACCATTTCTA	CACCTCAATC	2340
CTCCATTTGC	TGTACTCTTT	GCTAGTACCA	AAAGTAGACT	GATTACACTG	AGGTGAGGCT	2400
ACAAGGGGTG	TGTAACCGTG	TAACACGTGA	AGGCAGTGCT	CACCTCTTCT	TTACCAGAAC	2460
GGTTCTTTGA	CCAGCACAT7	AACTTCTGGA	CTGCCGGCTC	TAGTACCTTT	TCAGTAAAGT	2520
GGTTCTCTGC	CTTTTTACTA	TACAGCATAC	CACGCCACAG	GGTTAGAACC	AACGAAGAAA	2580
ATAAAATGAG	GGTGCCCAGC	TTATAAGAAT	GGTGTTAGGG	GGATGAGCAT	GCTGTTTATG	2640
AACGGAAATC	ATGATTTCCC	TGTAGAAAGT	GAGGCTCAGA	TTAAATTTTA	GAATATTTTC	2700
TAAATGTCTT	TTTCACAATC	ATGTGACTGG	GAAGGCAATT	TCATACTAAA	CTGATTAAAT	2760
AATACATTTA	TAATCTACAA	CTGTTTGCAC	HACAGCTTr	TTTTGTAAAT	ATAAACTATA	2820
ATTTATTGTC	TATTTTATAT	CTGTTTTGCT	GTGGCGTTGG	GGGGGGGGCL	GGGCTTTTGG	288C
GGGGGGGGGT	TTGTTTGGGG	GGTGTCGTGG	TGTGGGCGGG	CGG		2923

• (2) INFORMÁCIA O SEKVENCIÍ ID. Č. 7:

(i) VLASTNOSTI SEKVENCIE:

(A) DĹŽKA: 1448 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: dvojvláknová (D) TOPOLÓC-IA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA

- 43 (Xi) POPIS SEKVENCIE: SEKVENCIA ID. Č. 7:

GTGACCGAGC GGCGCGGACG GCCGCCTGCC CCCTCTGCCA CCTGGGGCGG TGCGGGCCCG 60

GAGCCCGGAG CCCGGGTAGC GCGTAGAGCC GGCGCGATGC ACGTGCGCTC ACTGCGAGCT 120

GCGGCGCCGC ACAGCTTCGT GGCGCTCTGG GCACCCCTGT TCCTGCTGCG CTCCGCCCTG 180

GCCGACTTCA GCCTGGACAA CGAGGTGCAC TC6AGCTTCA TCCACCGGCG CCTCCGCAGC 240

CAGGAGCGGC GGGAGATGCA GCGCGAGATC CTCTCCATTT TGGGCITGCC CCACCGCCCG 300

CGCCCGCACC TCCAGGGCAA GCACAACTCG GCACCCATGT TCATGCTGGA CCTGTACAAC 360

GCCATGGCGG TGGAGGAGGG CGGGGGGCCC GGCGGCCAGG GCTTCTCCTA CCCCTACAAG 420

GCCGTCTTCA GTACCCAGGG CCCCCCTCTG GCCAGCCTGC AAGATÄGCCA TTTCCTCACC 480

GACGCCGACA TGGTCATGAG CTTCGTCAAC CTCGTGGAAC ATGACAAGGA ATTCTTCCAC 540

CCACGCTACC ACCATCGAGA GTTCCGGTTT GATCTTTCCA AGATCCCAGA AGGGGAAGCT 600

GTCACGGCAG CCGAATTCCG GATCTACAAG GACTACATCC GGGAACGCTT CGACAATGAG 660 w

ACGT7CCGGA TCAGCGTTTA TCAGGTGCTC CAGGAGCACT TGGGCAGGGA ATCGGATCTC 720

TTCCTGCTCG ACAGCCGTAC CCTCTGGGCC TCGGAGGAGG GCTGGCTGGT GTTT6ACATC 780

ACAGCCACCA GCAACCACTG GGTGGTCAAT CCGCGGCACA ACCTGGGCCT GCAGCTCTCG 840

GTGGAGACGC TGGATGGGCA GAGCATCAAC CCCAAGTTGG CGGGCCTGAT TGGGCGGCAC 900

GGGCCCCAGA ACAAGCAGCC CTTCATGGTG GCTTTCTICA AGGCCACGGA GGICCACHC 960

CGCAGCATCC GGTCCACGGG GAGCAAACAG CGCAGCCAGA ACCGCTCCAA 6ACGCCCAAG 1020

AACCAGGAAG CCCTGCGGAT GGCCAACGTG GCAGAGAACA GCAGCAGCGA CCAGAGGCAG 1080

GCCTGTAAGA AGCACGAGCT GTATGTCAGC TTCCGAGACC TGGGCTGGCA GGACTGGATC 1140

ATCGCGCCTG AAGGCTACGC CGCCTACTAC TGTGAGGGGG AGTGTGCCTT CCCTCTGAAC 1200

TCCTACATGA ACGCCACCAA CCACGCCATC GTGCAGACGC TGGTCCACTT CATCAACCCG 1260

GAAACGGTGC CCAAGCCCTG CTGTGCGCCC ACGCAGCTCA ATGCCATCTC CGTCCTCTAC 1320

TTCGATGACA GCTCCAACGT CATCCTGAAG AAATACAGAA ACATGGTGGT CCGGGCCTGT 1380

GGCTGCCACT AGCTCCTCCG A6AATTCAGA CCCTTTGGGG CCAAGTTTTT CTGGATCCTC 1440

CATTGCTC 1448

Vynález tu bol popísaný s odkazmi na prednostné prevedenia a príklady. Zrejmé variácie napadnú tých, čo sú skúsení v obore. Preto vynález sa nemá považovať za obmedzený týmto popisom, ale len nárokmi, ktoré následujú.

Claims (16)

1. Prostriedok^. na generovanie nového rastu kosti w cicavca' , ktorý potrebuje takú liečbu, vyznačujúci i sa t ý m, že obsahuje/:

a. bezpečné a účinné množstvo zlúčeniny zo skupiny vitamínu D;

b. bezpečné a účinné množstvo BMP [bone morphogenetic protein, bielkovina kostnej morfogenézy] vybranej zo skupiny pozostávajúcej z BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6 a BMP-7; a

c. bezpečné a účinné množstvo farmaceutický prijateľného nosiča.

2. Prostriedok podía nároku 2 vyznačujúci sa t ý m, že bezpečné a účinné množstvo zlúčeniny zo skupiny vitamínu D je od asi 30 ng to asi 10 μg pri najmenej 2.5 μg BMP.

3. Prostriedok podía nároku 2 vyznačujúci sa t ý m, že bezpečné a účinné množstvo zlúčeniny zo skupiny vitamínu.D je vybrané zo skupiny pozostávajúcej z vitamínu D₂; vitamínu D₃; 1 alfa-hydroxyvitamínu D₃; 1 alfa-fluórovitamínu D₃; 3-deoxy-l,25-dihydroxy vitamínu D₃; 25-hydroxy-5,6-trans vitamínu D₃; 25-hydroxy vitamínu D₂; 25-hydroxy vitamínu D₃;

1.25- dihydroxy vitamínu D₂; 24,25-dihydroxy vitamínu D₂;

24.25- dihydroxy vitamínu D₃ a

4. Prostriedok podía sa tým, že zlúčenina

1.25- dihydroxy vitamín D₃.

5. Prostriedok podía sa t ý m, že farmaceutický

1,25-dihydroxy vitamínu D₃.

nároku 3 vyznačujúci zo skupiny vitamínu D je nároku 4 vyznačujúci prijateľný nosič je injekčný nosič.

6 . Prostriedok podlá nároku 4 v y z načujúci sa t ý m, že farmaceutický prijateľný nosič je miestne-orálny nosič. 7. Prostriedok podlá ktoréhokoľvek z nárokov 2-7 v y z n a č u j ú c i s a tým, že BMP je zložkou

osteoinduktívneho extraktu a osteoinduktívny extrakt obsahuje jednu lebo viac BMP vybraných zo skupiny pozostávajúcej z BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-

6 a BMP-

7.

»

8. Spôsob generovania nového rastu kosti v cicavcovi, ktorý * potrebuje takú liečbu, vyznačujúci sa tým, že sa cicavcovi podáva bezpečné a účinné množstvo zlúčeniny zo skupiny vitamínu D v kombinácii s bezpečným a účinným množstvom BMP vybranej zo skupiny pozostávajúcej z BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6 a BMP-7; a

9. Spôsob podía nároku 8 vyznačujúci sa tým, že bezpečné a účinné množstvo zlúčeniny zo skupiny vitamínu D je od asi 1 ng to asi 1 mg a bezpečné a účinné množstvo BMP je od asi 1 pg do asi 100 ug.

10. Spôsob podlá nároku 9 vyznačujúci sa tým, že bezpečné a účinné množstvo zlúčeniny zo skupiny vitamínu D je a bezpečné a účinné množstvo BMP je nároku 10 vyznačujúci zo skupiny vitamínu D je vybraná zo z vitamínu D₂; vitamínu D₃; 1 alfa-fluórovitamínu D₃; 3-deoxy1,25-dihydroxy vitamínu D₃; 25-hydroxy-5,6-trans vitamínu D₃;

asi 30 ng to asi 10 μg najmenej asi 2.5 μg.

11. Spôsob podlá sa tým, že zlúčenina skupiny pozostávajúcej 1 alfa-hvdroxvvitamínu D-,;

25-hydroxy vitamínu D₃; 25-hydroxy vitamínu D₂; 1,25-dihydroxy vitamínu D₂; 24,25-dihydroxy vitamínu D₂; 24,25-dihydroxy vitamínu D₃ a 1,25-dihydroxy vitamínu D₃.

12. Spôsob podľa nároku sa tým, že zlúčenina zo

1,25-dihydroxy vitamín D₃.

11 vyznačujúci skupiny vitamínu D je nacujuci

13. Spôsob podlá nároku 11 vy sa t ý m, že podávanie zlúčeniny zo skupiny vitamínu D a BMP je inekčné.

14. Spôsob podľa nároku 11 vyznačujúci sa t ý m, že podávanie zlúčeniny zo skupiny vitamínu D a BMP je miestne-orálne.

15. Spôsob podľa nároku 11 vyznačujúci sa tým, že podávanie zlúčeniny zo skupiny vitamínu D je orálne a podávanie BMP je inekčné.

16. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 8-15 vyznačujúci sa tým, že BMP je zložkou osteoinduktívneho extraktu a osteoinduktívny extrakt obsahuje jednu lebo viac BMP vybraných zo skupiny pozostávajúcej z BMP-1, BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6 a BMP-7.