SK12782001A3 - Protilátkové a chemokínové konštrukty a ich použitie pri liečbe autoimunitných chorôb - Google Patents
Protilátkové a chemokínové konštrukty a ich použitie pri liečbe autoimunitných chorôb Download PDFInfo
- Publication number
- SK12782001A3 SK12782001A3 SK1278-2001A SK12782001A SK12782001A3 SK 12782001 A3 SK12782001 A3 SK 12782001A3 SK 12782001 A SK12782001 A SK 12782001A SK 12782001 A3 SK12782001 A3 SK 12782001A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- chemokine
- antibody
- construct
- toxin
- chemokine receptor
- Prior art date
Links
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 title claims abstract description 58
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 title claims abstract description 57
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 63
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 claims abstract description 44
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 38
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 38
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 17
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 15
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 13
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 7
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 5
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 5
- 208000018937 joint inflammation Diseases 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims 2
- 108700011778 CCR5 Proteins 0.000 abstract description 9
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 abstract description 3
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 abstract 1
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 abstract 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 abstract 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 10
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 10
- 230000009471 action Effects 0.000 description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 6
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 6
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 4
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 206010023203 Joint destruction Diseases 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 102100032366 C-C motif chemokine 7 Human genes 0.000 description 2
- 101710155834 C-C motif chemokine 7 Proteins 0.000 description 2
- 102100034871 C-C motif chemokine 8 Human genes 0.000 description 2
- 101710155833 C-C motif chemokine 8 Proteins 0.000 description 2
- 102100031650 C-X-C chemokine receptor type 4 Human genes 0.000 description 2
- 101000922348 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003435 antirheumatic agent Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000011461 current therapy Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N mcp 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 102000001326 Chemokine CCL4 Human genes 0.000 description 1
- 108010055165 Chemokine CCL4 Proteins 0.000 description 1
- 208000014311 Cushing syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 101000946926 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 101710151805 Mitochondrial intermediate peptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 101150030083 PE38 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010036030 Polyarthritis Diseases 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 108700033844 Pseudomonas aeruginosa toxA Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002579 anti-swelling effect Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 102000048160 human CCR5 Human genes 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 231100001252 long-term toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- -1 pH adjusters Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 201000009395 primary hyperaldosteronism Diseases 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/642—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a cytokine, e.g. IL2, chemokine, growth factors or interferons being the inactive part of the conjugate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
PROTILÁTKOVÉ A CHEMOKÍNOVÉ KONŠTRUKTY A ICH POUŽITIE PRI LIEČBE AUTOIMUNITNÝCH CHORÔB
Oblasť techniky
Tento vynález sa týka protilátkových a chemokínových konštruktov pôsobiacich proti bunkám exprimujúcim chemokínreceptor, najmä proti monocytom/makrofágom exprimujúcim chemokínreceptor CCR5 a proti CCRS* T-bunkám. Ďalej sa tento vynález týka použitia protilátkových a chemokínových konštruktov na rozklad buniek exprimujúcich chemokínreceptor na liečenie autoimunitných chorôb a alergických ochorení, najmä na liečbu chronických zápalových kĺbových ochorení. Protilátkové a chemokínové konštrukty podľa tohto vynálezu umožňujú uskutočňovať cielené zničenie buniek, exprimujúcich chemokínreceptory a tým umožňujú uskutočnenie cielenej imunosupresívnej terapie autoimunitných chorôb.
Doterajší stav techniky
V Nemecku trpí asi 1 % obyvateľov reumatoidnou artritídou. K tomu pristupuje ešte rad ďalších ochorení reumatického typu, ktoré rovnako vedú k zápalu kĺbov. Pre liečbu zápalových kĺbových ochorení sa v súčasnej dobe používajú tri skupiny liečiv: nesterodiné antireumatiká, kortizónové preparáty, basisterapeutiká a TNFa-blokády. Ťažisko doterajšej terapie spočíva v lokálnych injekciách kortizónových preparátov spolu so systémovou dávkou antiflogistík a basisterapeutík.
Nesteroidné antireumatiká majú mierne účinky tíšiace bolesť a potláčajúce zápal, pri častom používaní sa však vyznačujú vysokým výskytom vedľajších účinkov (napríklad žalúdočné vredy, poškodenie obličiek). Kortizónové preparáty pôsobia pri vysokých dávkach silne proti opuchom a proti bolesti, po ich vysadení však nastáva rýchla recidíva. Okrem toho kortizónové preparáty nemôžu proces ochorenia kĺbu v žiadnom prípade zastaviť. Dlhodobá liečba kortizónom je spojená spravidla so závažnými ai7ft4/H T vedľajšími účinkami (infekcia, Cushingov syndróm, osteoporóza, pergamenová koža, poruchy látkovej výmeny a hormonálne poruchy). Rovnako lokálne kortizónové injekcie majú veľkú nevýhodu, pretože zachytené biele krvinky majú len zníženú aktivitu a nie sú zničené, preto dochádza po vysadení liečby k rýchlej recidíve, ako už bolo uvedené i u systémového použitia. Zriedka kedy dochádza po kortizónovej injekcii k vypuknutiu zápalu vyvolanému dráždivým pôsobením kryštálov kortizónov. Doba pôsobenia jednej kortizónovej injekcie sa veľmi odlišuje, od primárnej neúčinnosti až po niekoľkotýždňové pôsobenie.
Basisterapeutiká sa v reumatológii používajú na dlhodobé potlačenie zápalov a na zníženie dávky kortizónových preparátov. Vzhľadom k ich značnej toxicite (alergia, infekcia, malígne choroby, zhoršenie funkcie obličiek, problémy s krvným tlakom, pľúcne ochorenia) musí byť zaistená prísna kontrola pacienta u odborného lekára. So začiatkom účinnosti nie je možné počítať skôr ako za 3 mesiace po začatí liečenia. K dispozícii je v súčasnej dobe 4 až 5 rôznych basisterapeutík, ktoré je možné spočiatku používať samotné alebo pri zlyhaní tejto terapie je možné ich kombinovať. O mechanizme pôsobenia týchto basisterapeutík je väčšinou známe len málo. Nie je jednoznačne preukázané, či je možné použitím týchto basisterapeutík obmedziť deštrukciu kĺbu. V posledných rokoch bola do terapie reumatoidnej artritídy zavedená nová skupina látok, ktorá je založená na blokáde bunkových prenosových látok (najmä TNFa) prostredníctvom monoklonálnych protilátok alebo rozpustných receptorových konštruktov.
Okrem toho pacienti nebývajú spravidla spokojní s terapiou, ktorá je v súčasnej dobe k dispozícii; v iných prípadoch musí byť bežná liečba prerušená pre neprijateľné vedľajšie účinky.
To znamená, že je potrebné nájsť nový terapeutický princíp na liečbu chronických kĺbových zápalových ochorení resp. reumatických ochorení všeobecne a i na liečbu ďalších autoimunitných ochorení.
31784/H T
Podstata vynálezu
Cieľom tohto predkladaného vynálezu je preto zaistenie nových terapeutických účinných látok na liečbu kĺbových zápalových ochorení a ďalších autoimunitných ochorení, ktoré by prekonávali nevýhody súčasného stavu.
Riešenie tejto úlohy je uvedené vo významoch nezávislých nárokov.
Výhodné uskutočnenia sú definované v príslušných vedľajších nárokoch.
Vyššie uvedená úloha bola vyriešená pomocou protilátkových a chemokínových konštruktov, ktoré sú schopné sa viazať na chemokínreceptor na povrchu cielovej bunky, pričom väzba tohto konštruktu na chemokínreceptor spôsobí zničenie cieľovej bunky.
Protilátkové a chemokínové konštrukty podľa tohto vynálezu spôsobujú selektívne zničenie cieľových buniek exprimujúcich chemokínreceptor, najmä leukocytov. Konštrukty podľa tohto vynálezu zahrňujú bišpecifické protilátky, protilátkové konštrukty, chemokínové konštrukty, murín, chimérizované alebo humanizované protilátky a viažu sa buď na cieľové bunky exprimujúce chemokínreceptor a na antigén na povrchu efektorových buniek, najmä na CD3-antigén, alebo obsahujú toxín. U efektorových buniek ide predovšetkým o leukocyty, najmä monocyty/makrofáty alebo T-bunky alebo dendritické bunky.
V jednej štúdii uskutočnenej so 40 pacientmi s rôznymi kĺbovými ochoreniami bolo zistené, že v zápalovom kĺbe dochádza k veľmi vysokému zvýšeniu obsahu monocytov/makrofágov exprimujúcich chemokínreceptor CCR5 a T-lymfocytov. V kĺbe exprimuje viac ako 90 % monocytov a Tlymfocytov chemokínreceptor CCR5, zatiaľ čo v krvi je to len cca 10 až 20 %. Podľa tejto expresnej vzorky sú chemokínreceptor CCR5 respektíve chemokínreceptory všeobecne veľmi vhodné ako cieľ pri terapii využívajúcej ničenie buniek. Ničením CCR5 boli v kĺbe postihnuté takmer všetky monocyty a T-lymfocyty, zatiaľ čo v krvnom obehu bola zničená len malá časť týchto
31784/H T buniek. Monocyty a T-lymfocyty sú dominujúcimi bunkovými typmi u chronického zápalu kĺbov, deštrukciu kĺbu spôsobujú najmä monocyty.
Prekvapivo bolo teraz dokázané, že pomocou novo vyvinutých protilátkových a chemokínových konštruktov bolo možné cielene zničiť leukocyty exprimujúce chemokínreceptor, najmä leukocyty exprimujúce CCR5.
Zatiaľ čo súčasná stratégia liečby predstavuje v podstate symptomatickú terapiu, ktorá môže ochorenie kĺbu a jeho deštrukciu ovplyvniť len málo a napríklad basisterapeutiká rozvinú svoju účinnosť až po niekoľkých mesiacoch a pritom majú podobne ako ostatné lieky značnú toxicitu pri dlhodobom podávaní, spôsobia konštrukty podľa tohto vynálezu počas niekoľkých hodín v kĺbe takmer úplné zničenie monocytov/makrofágov exprimujúcich chemokínreceptor CCR5+ a T-lymfocytov. Tieto typy buniek spôsobujú chronické zápaly a vyvolávajú deštrukciu kĺbov. Vzhľadom k tomu, že je možné monocyty veľmi účinne odstrániť, má.použitie protilátok podľa tohto vynálezu priaznivý vplyv na deštrukciu kĺbu. Vzhľadom k neselektívnej inhibícii imunitného systému pri použití basisterapeutík a TNFa-blokády existuje podozrenie na zvýšenú tendenciu k výskytu infekcií a k tvorbe tumorov. Na základe rozloženia buniek exprimujúcich chemokínreceptory, najmä leukocytov exprimujúcich CCR5, sú naproti tomu odstraňované prevažne leukocytmi, ktoré sa podieľajú na zápalovom procese, bez toho, že by došlo k podstatnému ovplyvneniu imunitného obranného systému. Protilátky podľa tohto vynálezu umožňujú všeobecne terapiu s malým spektrom vedľajších účinkov pri súčasnom zlepšení priebehu ochorenia kĺbov a zabráneniu jeho deštrukcií.
Vo výhodnom uskutočnení ide o konštrukt bišpecifickej protilátky, ktorej špecifické pôsobenie je zamerané proti chemokínreceptoru, predovšetkým proti ľudskému chemokínreceptoru a najmä predovšetkým proti ľudskému chemokínreceptoru CCR5 a s odlišným špecifickým pôsobením proti antigénu na povrchu efektorovej bunky, najmä CD3 na povrchu T-bunky. Do tohto vynálezu sú zahrnuté i protilátkové konštrukty s identickou alebo podobnou epitopovou špecifičnosťou.
31784/H T
V obzvlášť výhodnej forme uskutočnenia tohto vynálezu ide u bišpecifických protilátok o jednoreťazcovú protilátku (single-chain-Antikôrper).
V ďalšom výhodnom uskutočnení pri protilátkovom konštrukte ide o bišpecifickú protilátku, ktorej špecifické pôsobenie je zamerané proti chemokínreceptoru, predovšetkým proti ľudskému chemokínreceptoru a najmä predovšetkým proti ľudskému chemokínreceptoru 5 (CCR5) a s odlišným špecifickým pôsobením proti toxínu. I v tomto prípade v zvlášť výhodnej forme uskutočnenia tohto vynálezu ide u bišpecifických protilátok o jednoreťazcovú protilátku.
V ďalšej výhodnej forme uskutočnenia tohto vynálezu ide pri konštrukte o chemokínový konštrukt vo forme chemokíntoxínu, ktorý vznikol fúziou modifikovaného alebo nemodifikovaného chemokínu s modifikovaným alebo nemodifikovaným toxínom. Obzvlášť sú preferované chemokíntoxíny viazané na CCR5, ako sú napr. konštrukty s MIP 1 β, MIP 1a, MCP-2, MCP-3 a RANTES.
U chemokínového konštruktu podľa tohto vynálezu môže byť chemokín viazaný s toxínom kovalentne, väzba medzi chemokínom a toxínom môže však vzniknúť aj iným spôsobom. Chemokín môže byť viazaný i cez multimerizačnú doménu na protilátku, ktorá okrem toho, že obsahuje kompatibilnú multimerizačnú doménu, vykazuje špecifické pôsobenie proti antigénu na povrchu efektorovej bunky, prednostne proti CD3 na povrchu T-bunky a/alebo proti toxínu. Rovnako tak môže byť chemokín viazaný cez multimerizačnú doménu s toxínom prostredníctvom kompatibilnej multimerizačnej domény viazanej na toxín. Toto spojenie cez multimerizačné domény môže prebiehať in vitro alebo in vivo.
V ďalšej forme uskutočnenia vynálezu ide pri protilátkovom konštrukte o protilátku proti chemokínreceptoru, prednostne proti CCR5, ktorý je s toxínom viazaný kovalentne. Pritom ide o takzvaný imunotoxín.
31784/H T
Ako toxíny sú vhodné najmä napojený (trunkiert) pseudomonastoxín, napojený difterotoxín a podobné toxíny.
Tento vynález zahrňuje rovnako protilátkové konštrukty, ktoré obsahujú protilátku proti chemokínreceptoru, predovšetkým proti CCR5, ktorá môže byť viazaná in vitro a/alebo in vivo cez multimerizačnú doménu v homo/heterodiméroch s druhou protilátkou pôsobiacou proti antigénu na efektorovej bunke, predovšetkým proti CD3 a/alebo proti toxínu.
Ďalej sú zahrnuté i protilátkové konštrukty, v ktorých môže byť viazaná protilátka proti chemokínreceptoru, obzvlášť proti CCR5 cez multimerizačnú doménu s toxínom s kompatibilnou multimerizačnou doménou in vitro a/alebo in vivo.
Všeobecne ide pri protilátkových konštruktoch, chemokínových konštruktoch a murínoch, chimérizovaných alebo humanizovaných protilátkach podľa tohto vynálezu, o látky, ktoré majú schopnosť ničiť bunky exprimujúce chemokínreceptory, najmä leukocyty, pričom toto selektívne ničenie sa používa na liečenie zápalových ochorení (autoimúnne ochorenie, alergické choroby, atď).
Pojem protilátka alebo protilátkový konštrukt zahŕňa v súvislosti s týmto vynálezom i fragmenty protilátok, ktoré vykazujú špecificitu protilátok respektíve konštruktov protilátok podľa tohto vynálezu, takzvané aktívne fragmenty.
Bišpecifické protilátky môžu byť pripravené spôsobom uvedeným ďalej alebo pomocou bežných metód; je možné uviesť napríklad chemicky viazané protilátky alebo fragmenty protilátok, ktorých príprava sa uskutočňuje pomocou techniky hybridhybridon, ako bišpecifické jednoreťazcové protilátky, diabodies a viazaním dvoch protilátok prostredníctvom multimerizačných domén.
Výhodne ide pri týchto bišpecifických protilátkach o jednoreťazcové protilátky. Pritom sa môžu rôzne čiastkové časti týchto protilátok spájať pri použití bežných metód, alebo pripravovať ako contiguous“ proteín pomocou technológie rekombinantnej DNA, napríklad tak, že sa exprimuje molekula
31784/H T nukleovej kyseliny kódujúcej chimérny reťazec alebo humanizovaný reťazec protilátky, aby vznikol contiguous proteín (pozri napr. Mack a spol. (1995) Proc.Natl.Acad.Sci USA, Vol. 92, str. 7021-7025).
V obzvlášť výhodnom uskutočnení tohto vynálezu ide o jednoreťazcovú protilátku s nasledujúcimi Fv-fragmentami: sc-Fv-fragment monoklonálnej protilátky proti chemokínovému receptoru, prednostne proti CCR5 a rovnako o sc-Fv-fragment monoklonálnej protilátky proti CD3. Pritom môže Fv-fragment proti chemokínovému receptoru a rovnako Fv-fragment proti CD3 byť umiestnený v N-terminálnej pozícii. Prednostne je Fv-fragment proti CCR5 v Nterminálnej pozícii. Usporiadanie VL a VH domén protilátok môže byť u obidvoch konštruktov rôzne, prednostne má Fv-fragment proti CCR5 usporiadanie VL-VH a Fv-fragment proti CD3 usporiadanie VH-VI. Spojovacie linkery medzi variabilnými doménami a rovnako medzi obidvoma Fc-fragmetami sa skladajú z peptidových linkerov, prednostne z hydrofilných flexibilných linkerov obsahujúcich glycín a serín s dĺžkou 0 až 25 aminokyselín. Pre ľahšie čistenie a detekciu môžu byť na C alebo N-terminálnej pozícii okrem toho i histidínové reťazce 6xHis.
Bišpecifické jednoreťazcové protilátky majú v porovnaní s bežnými bišpecifickými protilátkami tú výhodu, že sa skladajú len z jediného proteínového reťazca, takže je možné presne definovať ich zloženie. Majú nízku molekulovú hmotnosť, spravidla menšiu ako 60 kD a je možné ich ľahko pripraviť i vo veľkých množstvách rekombinantnými postupmi vo vhodných bunkových líniách, napr. v CHO-bunkách. Ich podstatnou výhodou je to, že neobsahujú žiadne trvalé protilátkové domény a tak môžu aktivovať len lézie Tlymfocytov, ak sú viazané na svoje cieľové bunky, to znamená bunky exprimujúce chemokínreceptory. Jednoreťazcovým protilátkam sa preto často dáva prednosť pred bežnými bišpecifickými protilátkami, pretože ich klinické použitie je spojené s menšími resp. veľmi malými vedľajšími účinkami.
31784/H T
Tento vynález sa ďalej týka bunky eukaryontického alebo prokaryontického pôvodu, ktorá produkuje protilátkový konštrukt podľa tohto vynálezu, najmä bišpecifickú protilátku podľa tohto vynálezu, alebo sa používa pre in vitro postup prípravy proteínu.
Chemokíntoxíny vzniknuté spojením chemokínu s toxínom podľa tohto vynálezu je možné pripraviť napr. chemickou väzbou, prípravou fúzneho proteínu z chemokínu a modifikovaného alebo nemodifikovaného prekaryontiockého alebo eukaryontického toxínu alebo naviazaním chemokínu a toxínu prostredníctvom multimerizačnej domény.
V obzvlášť výhodnej forme uskutočnenia ide o rekombinantne pripravený fúzny proteín, vytvorený z chemokínu viazaného na ľudský chemokínreceptor CCR5 (MIP 1β, MIP 1a, RANTES, MCP-2, MCP-3) a napojené verzie pseudomonasexotoxínu A (napr. PE38, PE40). Pritom je chemokín spojený s pseudomonas-toxínom prostredníctvom krátkeho peptidického linkera. Tento linker sa skladá prednostne z flexibilnej a hydrofilnej sekvencie aminokyselín, najmä z molekúl glycínu a serínu a má dĺžku 0 až 20 aminokyselín.
Ďalej bolo cieľom tohto vynálezu získať farmaceutický preparát, obsahujúci minimálne jeden protilátkový a chemokínový konštrukt podľa tohto vynálezu, najmä obsahujúci minimálne jednu bišpecifickú protilátku v dostatočnom množstve na to, aby bolo možné zničiť bunky exprimujúce chemokínreceptory, prípadne s použitím vhodného farmaceutického nosiča.
Farmaceutické preparáty, obsahujúce bišpecifické protilátky podľa tohto vynálezu, sú vhodné na parenterálnu aplikáciu, t.j. na subkutánne, intramuskulárne, intravenózne, intraartikulárne alebo intraperitoneálne podávanie, pričom preparáty na parenterálnu aplikáciu sa skladajú spravidla z roztoku protilátky alebo jej zmesi (Cocktail) rozpustené vo vhodnom prostredí, napr. vo vodnom prostredí. Ako vodné prostredie je vhodná napr. voda, roztok NaCI a glycínu. Tieto preparáty môžu okrem toho obsahovať i bežné farmaceutický prípustné pomocné látky, ako sú napríklad látky na nastavenie určitej hodnoty pH, pufry a podobne.
31784/H T
Koncentrácia bišpecifickej protilátky vo farmaceutickom preparáte sa môže veľmi líšiť, t.j., že sa môže pohybovať od menej ako cca 10'7 hmotn. % až do 1 hmotn. %. Preferované sú koncentrácie od 10'4 hmotn. % do 10'1 hmotn. %. Pri intraartikulárnej aplikácii by mala byť dávka bišpecifickej protilátky 1 mg až 0,001 mg, obzvlášť výhodne cca 0,02 mg bišpecifickej protilátky s jednoduchým reťazcom.
Farmaceutický preparát na intraartikulárnu aplikáciu, napríklad do kolenného kĺbu, by mal teda obsahovať cca 20 pg bišpecifickej protilátky alebo chemokíntoxínu podľa tohto vynálezu, rozpustenej v cca 2 - 5 ml sterilného roztoku chloridu sodného pufrovaného napr. fosfátovým pufrom alebo pufrom Tris. Podobné by malo byť i zloženie pre intravenózne aplikácie.
Ďalšia úloha tohto vynálezu spočíva v upozornení na nové aplikačné možnosti protilátok podľa tohto vynálezu.
Táto úloha bola vyriešená použitím minimálne jednej protilátky alebo chemokíntoxínu podľa tohto vynálezu na zničenie buniek exprimujúcich chemokínreceptor. V jednej preferovanej forme uskutočnenia boli použité protilátky podľa tohto vynálezu respektíve chemokíntoxín podľa tohto vynálezu na liečenie chronických zápalov kĺbov a iných autoimunitných ochorení alebo na liečbu alergických ochorení.
Selektívne ničenie (Depletion) chemokínových receptorov, najmä ničenie CCR5 má v porovnaní s doterajšími imunosupresívnymi terapiami dve podstatné výhody: jednak doterajšie terapie nie sú zamerané na ničenie infiltrujúcich leukocytov, ale spôsobujú len zníženie ich aktivity. To vedie k tomu, že po vysadení liečby dochádza skoro k recidíve a je nutné uskutočňovať neustálu imunosupresiu. Naproti tomu dáva zníženie príslušných leukocytov priamo v kĺbe nádej, že už po jednom alebo niekoľkých málo liečebných zákrokoch dôjde k dlhodobej remisii. Druhá výhoda ničenia chemokínreceptorov spočíva v tom, že podľa rozloženia buniek exprimujúcich chemokínreceptor, najmä CCR5, sú odstraňované len bunky, ktoré sa podieľajú na zápalovom procese a ostatné bunky zostávajú do značnej miery ušetrené.
Mechanizmus pôsobenia bišpecifických protilátok podľa tohto vynálezu, ktorých špecifické pôsobenie je zamerané proti chemokínreceptoru a ktoré
31784/H T majú iné špecifické pôsobenie proti antigénu na povrchu T-buniek ako efektorových buniek, je znázornený na obr. 1 (vyššie) a na obr. 2 podľa výhodnej formy uskutočnenia tohto vynálezu. Ako vyplýva z obr. 1 (vyššie), viaže sa bišpecifická protilátka obidvoma ramenami na dva rôzne antigény. Tými sú v jednom preferovanom uskutočnení chemokínreceptor CCR5 a povrchová molekula CD3 na T-lymfocytoch. Ako je uvedené na obr. 2, spôsobuje táto bišpecifická protilátka zosieťovanie T-lymfocytov a buniek exprimujúcich CCR5. Priečne zosieťovanie spôsobí, že u T-lymfocytov sa aktivuje lézia a lymfocyty s naviazanými bunkami CCR5 sa zničia. To znamená, že lézia CCR5+ buniek sa uskutočňuje len vtedy, ak sú prítomné i T-lymfocyty. Tie sa vyskytujú vo veľkom počte u všetkých foriem kĺbových zápalov. Preto je možné týmto spôsobom injikovaním bišpecifickej protilátky do zapáleného kĺbu cielene eliminovať bunky, ktoré tento zápal spôsobujú.
Ďalšie formy uskutočnenia tohto vynálezu a ich mechanizmus pôsobenia sú znázornené v priložených obrázkoch 1 až 9.
Na základe možnosti cieleného ničenia buniek, exprimujúcich chemokínreceptory, sa ponúka výhodná koncepcia liečenia nielen chronických zápalov kĺbov, ale i iných reumatických ochorení a autoimunitných chorôb, pri ktorých bolo zistené podobné zvýšenie počtu buniek exprimujúcich chemokínreceptory, najmä CCR5.
Potenciálne oblasti použitia bišpecifických protilátok v rámci terapie tumorov už boli opísané (napr. v Kroesen, B. J. a spol. (1993) Cancer Immunol. Immunother. 37:400-7; Nitta, T. a spol. (1990) Lancet 335:368-71; Bolhuis, R.L. a spol. (1992) Int.J.Cancer Suppl. 7:78-81; Canevari, S. a spol. (1995) J.Natl. Cancer Inst. 87:1463-9; De Gast, G. a spol. (1995) J. Hematother. 4:433-437; Kroesen, B. J. a spol. (1994) Br.J.Cancer, 70:652-61; Tibben, J.G. a spol. (1993) J.Natl.Cancer Inst. 85:1003-4), použitie bišpecifických protilátok pre imunopresiu však doposiaľ opísané nebolo.
31784/H T ŕ * « e • e
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1 znázorňuje protilátkové a chemokínové konštrukty podľa tohto vynálezu, ktoré spôsobujú zosieťovanie cieľových buniek (Targetzellen), v tomto prípade buniek exprimujúcich CCR5 a efektorových buniek, v tomto prípade T-buniek s CD3 na povrchu. Navrchu: Bišpecifická protilátka so špecifickým pôsobením tak proti CCR5 ako aj proti CD3; uprostred: chemokínový konštrukt skladajúci sa z chemokínu a protilátky proti CD3; dolu: chemokínový konštrukt, u ktorého je možné pripojiť chemokín s multimerizačnou doménou s protilátkou pôsobiacou proti CD3 prostredníctvom kompatibilnej multimerizačnej domény.
Priečne zosieťovanie vedie, ako je schematicky znázornené na obr. 2, k tomu, že T-lymfocyty sú aktivované pre lézie a tie lymfocyty, ktoré sú zosieťované s CCR5-pozitívnymi bunkami sú zničené.
Obr. 3 zachytáva protilátkové a chemokínové konštrukty podľa tohto vynálezu, ktoré vyvolávajú vznik väzby medzi cieľovými bunkami, v tomto prípade bunkami exprimujúcimi CCR5 a toxínom. Navrchu: bišpecifická protilátka sa špecifickým pôsobením tak proti CCR5 ako aj proti toxínu; dolu: chemokínový konštrukt skladajúci sa z chemokínu a protilátky proti toxínu.
Zosieťovanie cieľovej bunky a toxínu spôsobuje usmrtenie CCR5pozitívnej cieľovej bunky, ako je uvedené v obr. 4.
Na obr. 5 sú znázornené podobne ako na obr. 3 protilátkové a chemokínové konštrukty, ktoré vyvolávajú vznik väzby medzi cieľovými bunkami a toxínom, pričom však v tomto prípade toxín nie je viazaný cez špecifickú funkciu protilátky pôsobiacej proti toxínu, lebo je viazaný buď kovalentne s protilátkou pôsobiacou proti chemokínreceptoru, najmä proti CCR5 (obr. 5 navrchu) alebo s chemokínom (obr. 5 uprostred) alebo prostredníctvom multimerizačnej domény s jednou protilátkou pôsobiacou proti chemokínreceptoru s kompatibilnou multimerizačnou doménou (obr. 5 dolu).
31784/H T
Rovnako i v tomto prípade, ako je znázornené na obr. 6, vedie spojenie cieľovej bunky a toxínu k usmrteniu cieľovej bunky.
Obr. 7 zachytáva výsledok jednej FACS analýzy (uskutočnené postupom ktorý opísali Mack a spol. (1998) J.Exp.Med 187, str. 1215-1224), ktorá preukazuje zničenie CCR5-pozitívnych T-buniek a monocytov zo synoviálnej tekutiny zo zapáleného kolena jedného pacienta s chronickou polyartritídou resp. kultivovaných periférnych krvných leukocytov (PBMC).
Obr. 8 ukazuje cytotoxicitu chemokíntoxínu Ra-PE38, presnejšie povedané rozklad CHO-buniek exprimujúcich CCR5 chemokíntoxínom RaPE38 (10 ng/ml) po 24-hodinovej inkubácii (dolu vpravo). CHO-bunky, ktoré exprimovali namiesto CCR5 chemokínreceptor CXCR4, neboli pôsobením RaPE38 poškodené (vyššie), pretože RANTES nie je viazaný na CXCR4. Inkubácia s médiom ku zničeniu CHO-buniek nevedie. Ra-PE38 je fúzny proteín z RANTES a napojeného..pseudomonosexotoxínu s molekulovou hmotnosťou 38 kD.
Obr. 8 znázorňuje priebeh uvedený na obr. 5 uprostred.
Obr. 9 zachytáva inkubáciu synoviálnej tekutiny s CD3-CCR5 bišpecifickými protilátkami po dobu ďalších 48 hodín. Obr. 9 teda súvisí s obr. 7 vyššie. Dochádza tu ku koncentračné nezávislej likvidácii T-lymfocytov a monocytov. Pri koncentrácii protilátky 125 ng/l došlo ku zníženiu počtu monocytov a T-lymfocytov o 96 resp. 97,5 %.
31784/H T
Príklady uskutočnenia vynálezu
Ďalej uvedené príklady slúžia na ilustráciu tohto vynálezu a neznamenajú žiadne obmedzenie na určité formy uskutočnenia, resp. oblasti použitia. Skôr by bolo možné uviesť rad ďalších aplikačných možností tohto vynálezu
Príklad 1
Príprava bišpecifickej protilátky
Na prípravu bišpecifickej protilátky je možné použiť napr. jednoreťazcovú technológiu (Mack a spol. (1995) Proc.Nat.Acad.Sci. USA 92:7021-7025; Mack a spol. (1997) J.Immunol. 158:3965-3970). Pritom je možné, ako je schematicky znázornené na obr. 1 (navrchu) a 3 (navrchu), vzájomne spájať rôzne domény ľahkého (VL) a ťažkého (VH) imunoglobulínového reťazca dvoch rôznych protilátok do jedného sledu a prípadne je možné ešte privesiť histidínový reťazec zo 6xHis. Táto fúzia prebieha v DNA-rovine, takže po expresii vzniká proteínový reťazec so štyrmi rôznymi premennými doménami (pozri obr. 1 (navrchu) a 3 (dolu)). Pripojený histidínový reťazec umožňuje jednoduché a účinné čistenie v jednom kroku s použitím immobilizovaných Niiónov. Obr. 1 (dolu) ukazuje preferovanú formu bišpecifickej protilátky, viazanej na CD3-antigén na povrchu efektorovej bunky a na ľudský CCR5 na povrchu leukocytov ako cieľových buniek.
Rôzne protilátkové domény boli amplifikované pomocou RT-PCR z hybridomových buniek produkujúcich požadovanú protilátku. Takto získané PCR-fragmenty boli klonované a sekvencované vo vektore. Nakoniec bola pomocou fúzneho PCR generovaná jednoreťazcová protilátka s určitou špecificitou, pričom medzi obidve rôzne domény protilátky bol vsunutý linker tvorený (Gly4Ser-i)3. V ďalšom fúznom PCR bol fragment protilátky proti CCR5 fúzovaný s už publikovaným fragmentom protilátky CD3, pričom bol vsunutý
31784/H T linker skladajúci sa z Gly4Ser1 (pozri Mack a spol., pozri skôr). Usporiadanie domén bolo pritom nasledovné. VL(1)-VH(1)-VH(2)-VL(2), pričom (1) zodpovedá špecifickému pôsobeniu proti CCR5 a (2) zodpovedá špecifickému pôsobeniu proti CD3.
Príklad 2
Expresia a čistenie bišpecifickej protilátky z príkladu 1
Na expresiu bišpecifickej protilátky bola subklonovaná príslušná DNAsekvencia v eukaryontickom expresnom vektore (napr. PEF-DFHR, Mack a spol. (1995), PNAS, pozri skôr) a pomocou elektroporácie bola prenesená do DHFR-deficitných CHO-buniek Zo supernatantu stabilných transfikovaných CHO-buniek bola bišpecifická protilátka izolovaná pomocou afinitnej chromatografie na Ni-NTA. pričom elúcia sa uskutočňovala pri zníženom pH. Nakoniec bolo uskutočnené nastavenie hodnoty pH a koncentrácia proteínu bola upravená na požadovanú hodnotu.
Príklad 3
In vitro-testv krvných leukocytov a leukocytov v zápalových kĺboch
Pri in vitro-testoch bola inkubované kĺbová tekutina vrátane obsiahnutých buniek s bišpecifickou protilátkou po dobu jedného alebo niekoľkých dní. Už po 24 hodinách bolo možné pozorovať takmer úplné vymiznutie CCR5-pozitívnych lymfocytov a monocytov. Pri dlhšej inkubácii došlo u kontrolnej vzorky média k diferenciácii monocytov na makrofágy, ktoré sa usadzovali na dne kultivačnej nádoby. Pri inkubácii s bišpecifickou protilátkou neboli žiadne makrofágy vidieť.
31784/H T • · • · ·· · · r ŕ » · · · · e r f » e · e pf r r * » · r r .,
Podobný výsledok sa získal pri inkubácii PBMC s bišpecifickou protilátkou. Tu došlo k takmer úplnému zničeniu CCR5-pozitívnych monocytov a k rozsiahlemu zničeniu CCR5-pozitívnych T-lymfocytov. Zničenie CCR5pozitívnych T-buniek a monocytov je znázornené na obr. 7.
Tieto výsledky ukazujú, že konštrukt podľa tohto vynálezu podľa príkladu 1 má schopnosť úplne zničiť CCR5-pozitívne monocyty. To platí tak pre monocyty z kĺbového puktátu ako aj pre krvné monocyty, ktoré pri svojej diferenciácii na makrofágy exprimujú CCR5. Ku zničeniu monocytov/makrofágov dochádza počas niekoľkých hodín (menej ako 24 hod.). Veľký terapeutický význam má zničenie monocytov/makrofágov v kĺbe, pretože tieto bunky spôsobujú deštrukciu kĺbu. Okrem toho je i pre aktiváciu Tlymfocytov nevyhnutná interakcia s makrofágmi, takže súčasne dochádza k potlačeniu funkcie T-lymfocytov.
Okrem zničenia monocytov/makrofágov bolo možné pozorovať i výrazné zníženie počtu CCR5-pozitívnych T-lymfocytov.
Claims (17)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Protilátkový alebo chemokínový konštrukt, ktorý má schopnosť sa viazať na chemokínreceptor na povrchu cieľovej bunky, pričom táto väzba konštruktu na chemokínreceptor vedie ku zničeniu cieľovej bunky, a aktívne fragmenty tohto konštruktu.
- 2. Protilátkový alebo chemokínový konštrukt podľa nároku 1, pričom tento chemokínreceptor je ľudský chemokínreceptor.
- 3. Protilátkový alebo chemokínový konštrukt podľa nároku 1 alebo 2, pričom u tohto chemokínreceptora ide o chemokínreceptor 5 (CCR5).
- 4. Protilátkový konštrukt podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, pričom u tohto konštruktu ide o bišpecifickú protilátku, ktorá má schopnosť sa viazať na chemokínreceptor ako prvý antigén a na CD3-antigén na povrchu efektorovej bunky ako druhý antigén.
- 5. Protilátkový konštrukt podľa niektorého z nárokov 1 až 3, pričom u tohto konštruktu ide o bišpecifickú protilátku, ktorá má schopnosť sa viazať na chemokínreceptor ako prvý antigén a na toxín ako druhý antigén.
- 6. Protilátkový konštrukt podľa niektorého z nárokov 1 až 3, ktorý je kovalentne viazaný s toxínom31784,'H T
- 7. Protilátkový konštrukt podlá niektorého z nárokov 1 až 3, ktorý sa prostredníctvom multimerizačnej domény môže viazať s druhým protilátkovým konštruktom, ktorý má schopnosť sa viazať na CD3-antigén na povrchu efektorovej bunky a/alebo na toxín, alebo ktorý sa môže viazať na toxín prostredníctvom kompatibilnej multimerizačnej domény in vitro a/alebo in vivo.
- 8. Chemokínový konštrukt podľa niektorého z nárokov 1 až 3, pričom ide o fúzny konštrukt modifikovaného alebo nemodifikovaného chemokínu s modifikovaným alebo nemodifikovaným toxínom.
- 9. Chemokínový konštrukt podľa niektorého z nárokov 1 až 3, pričom tento chemokínový konštrukt sa môže viazať prostredníctvom multimerizačnej domény s protilátkovým konštruktom, ktorý má schopnosť sa viazať na CD3antigén na povrchu efektorovej bunky a/alebo na toxín, alebo ktorý sa môže viazať na toxín prostredníctvom kompatibilnej multimerizačnej domény in vitro a/alebo in vivo.
- 10. Chemokínový konštrukt podľa niektorého z nárokov 1 až 3, pričom je tento chemokín viazaný kovalentne s protilátkovým konštruktom, ktorý má schopnosť sa viazať na CD3-antigén na povrchu efektorovej bunky a/alebo na toxín.
- 11. Chemokínový alebo protilátkový konštrukt podľa niektorého z nárokov 4, 7, 9 alebo 10, pričom efektorovou bunkou je leukocyt, najmä monocyt/makrofág alebo T-bunka alebo dendritická bunka.
- 12. Protilátkový konštrukt podľa niektorého z nárokov 1 až 7 alebo 9 až 11, ktorý je jednoreťazcovým konštruktom.31784/H T
- 13. Bunka eukaryontického alebo prokaryontického pôvodu, ktorá produkuje protilátkový alebo chemokínový konštrukt podľa niektorého z predchádzajúcich patentových nárokov.
- 14. Farmaceutický preparát, zahŕňajúci minimálne jeden protilátkový alebo chemokínový konštrukt podľa niektorého z nárokov 1 až 12 v množstve dostatočnom na zničenie buniek exprimujúcich chemokínreceptor, a prípadne farmaceutický vhodný nosič
- 15. Použitie minimálne jedného protilátkového alebo chemokínového konštruktu podľa niektorého z nárokov 1 až 12 na zničenie buniek exprimujúcich chemokínreceptor
- 16. Použitie minimálne jedného ' protilátkového alebo chemokínového konštruktu podľa niektorého z nárokov 1 až 12 na liečbu chronických kĺbových zápalov a iných autoimunitných a alergických ochorení.
- 17. Použitie minimálne jedného protilátkového alebo chemokínového konštruktu podľa niektorého z nárokov 1 až 12 na prípravu farmaceutického preparátu na liečbu chronických kĺbových zápalov a iných autoimunitných a alergických ochorení.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19910891 | 1999-03-11 | ||
| PCT/EP2000/002154 WO2000053633A2 (de) | 1999-03-11 | 2000-03-10 | Antikörper- und chemokinkonstrukte, die gegen ccr5 gerichtet sind, und ihre verwendung in der behandlung von autoimmunkrankheiten |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK12782001A3 true SK12782001A3 (sk) | 2002-03-05 |
Family
ID=7900625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1278-2001A SK12782001A3 (sk) | 1999-03-11 | 2000-03-10 | Protilátkové a chemokínové konštrukty a ich použitie pri liečbe autoimunitných chorôb |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1161456B1 (sk) |
| JP (1) | JP2002540771A (sk) |
| CN (1) | CN1345336A (sk) |
| AT (1) | ATE286074T1 (sk) |
| AU (1) | AU4104700A (sk) |
| CA (1) | CA2366713A1 (sk) |
| CZ (1) | CZ20013270A3 (sk) |
| DE (1) | DE50009113D1 (sk) |
| ES (1) | ES2233359T3 (sk) |
| HU (1) | HUP0200484A2 (sk) |
| IL (1) | IL145335A0 (sk) |
| NO (1) | NO316916B1 (sk) |
| SK (1) | SK12782001A3 (sk) |
| TR (1) | TR200102779T2 (sk) |
| WO (1) | WO2000053633A2 (sk) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6528625B1 (en) | 1996-10-28 | 2003-03-04 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Anti-CCR5 antibodies and kits comprising same |
| WO2002020615A2 (en) * | 2000-09-08 | 2002-03-14 | Micromet Ag | Antibody and/or chemokine constructs which bind to a chemokine receptor and their use in immunological disorders |
| CA2471136A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-03 | Micromet Ag | Mono-and dual chemokine/cytokine constructs |
| TW200720289A (en) | 2005-04-01 | 2007-06-01 | Hoffmann La Roche | Antibodies against CCR5 and uses thereof |
| TW200817438A (en) | 2006-08-17 | 2008-04-16 | Hoffmann La Roche | A conjugate of an antibody against CCR5 and an antifusogenic peptide |
| JP2010500984A (ja) | 2006-08-17 | 2010-01-14 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | Ｃｃｒ５に対する抗体と抗膜融合ペプチドとの抱合体 |
| WO2008037419A1 (en) | 2006-09-29 | 2008-04-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antibodies against ccr5 and uses thereof |
| CL2008000707A1 (es) | 2007-03-13 | 2008-09-22 | Hoffmann La Roche | Conjugado de polipeptidos antifusogenicos y polipeptidos derivados de la cabeza globular del factor del complemento c1q; composicion farmaceutica que lo comprende; su uso para tratar infecciones viricas; y metodo de produccion. |
| FI3434767T3 (fi) | 2010-11-30 | 2026-02-12 | Chugai Seiyaku Kk | Sytotoksisuutta aiheuttava terapeuttinen aine |
| EP2741777B1 (en) | 2011-08-12 | 2017-01-18 | INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods and pharmaceutical compositions for treatment of pulmonary hypertension |
| TWI726842B (zh) | 2014-04-07 | 2021-05-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | 免疫活化抗原結合分子 |
| SG11201609370QA (en) * | 2014-05-13 | 2016-12-29 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | T cell-redirected antigen-binding molecule for cells having immunosuppression function |
| WO2017086419A1 (ja) | 2015-11-18 | 2017-05-26 | 中外製薬株式会社 | 液性免疫応答の増強方法 |
| JP6931329B2 (ja) | 2015-11-18 | 2021-09-01 | 中外製薬株式会社 | 免疫抑制機能を有する細胞に対するｔ細胞リダイレクト抗原結合分子を用いた併用療法 |
| US11629196B2 (en) | 2020-04-27 | 2023-04-18 | Incelldx, Inc. | Method of treating SARS-CoV-2-associated hypercytokinemia by administering a human monoclonal antibody (PRO-140) that inhibits CCR5/CCL5 binding interactions |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6428788B1 (en) * | 1995-03-15 | 2002-08-06 | Penn State University | Compositions and methods for specifically targeting tumors |
| US6528625B1 (en) * | 1996-10-28 | 2003-03-04 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Anti-CCR5 antibodies and kits comprising same |
| ZA985542B (en) * | 1997-07-03 | 1999-04-07 | Smithkline Beecham Corp | Substituted benzanilides as CCR5 receptor ligands antiinflammatory agents and antiviral agents |
| DE69934337T2 (de) * | 1998-07-22 | 2007-05-24 | Osprey Pharmaceuticals Ltd., Calgary | Konjugate zur Behandlung von Entzündungskrankheiten und von assozierter Gewebeschädigung |
-
2000
- 2000-03-10 SK SK1278-2001A patent/SK12782001A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2000-03-10 CN CN00804846A patent/CN1345336A/zh active Pending
- 2000-03-10 CA CA002366713A patent/CA2366713A1/en not_active Abandoned
- 2000-03-10 TR TR2001/02779T patent/TR200102779T2/xx unknown
- 2000-03-10 EP EP00920490A patent/EP1161456B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-10 JP JP2000604068A patent/JP2002540771A/ja active Pending
- 2000-03-10 ES ES00920490T patent/ES2233359T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-10 IL IL14533500A patent/IL145335A0/xx unknown
- 2000-03-10 AT AT00920490T patent/ATE286074T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-03-10 WO PCT/EP2000/002154 patent/WO2000053633A2/de not_active Ceased
- 2000-03-10 AU AU41047/00A patent/AU4104700A/en not_active Abandoned
- 2000-03-10 DE DE50009113T patent/DE50009113D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-10 HU HU0200484A patent/HUP0200484A2/hu unknown
- 2000-03-10 CZ CZ20013270A patent/CZ20013270A3/cs unknown
-
2001
- 2001-09-06 NO NO20014346A patent/NO316916B1/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO20014346D0 (no) | 2001-09-06 |
| EP1161456B1 (de) | 2004-12-29 |
| ES2233359T3 (es) | 2005-06-16 |
| WO2000053633A3 (de) | 2000-11-16 |
| CN1345336A (zh) | 2002-04-17 |
| CZ20013270A3 (cs) | 2002-02-13 |
| WO2000053633A2 (de) | 2000-09-14 |
| NO316916B1 (no) | 2004-06-21 |
| TR200102779T2 (tr) | 2002-03-21 |
| NO20014346L (no) | 2001-09-27 |
| HUP0200484A2 (en) | 2002-06-29 |
| JP2002540771A (ja) | 2002-12-03 |
| ATE286074T1 (de) | 2005-01-15 |
| AU4104700A (en) | 2000-09-28 |
| EP1161456A2 (de) | 2001-12-12 |
| CA2366713A1 (en) | 2000-09-14 |
| IL145335A0 (en) | 2002-06-30 |
| DE50009113D1 (de) | 2005-02-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US12121527B2 (en) | Anthracycline-based antibody drug conjugates having high in vivo tolerability | |
| JP3589459B2 (ja) | 生物応答調節物質の新規な抗体運送システム | |
| EP0510949B2 (en) | Cytomodulating conjugates of members of specific binding pairs | |
| SK12782001A3 (sk) | Protilátkové a chemokínové konštrukty a ich použitie pri liečbe autoimunitných chorôb | |
| IE66223B1 (en) | Recombinant pseudomonas exotoxin construction of an active immunotoxin with low side effects | |
| JPH10502544A (ja) | 膜結合ｃｄ３０抗原の蛋白質分解性開裂及び遊離を防ぐ抗ｃｄ３０抗体 | |
| BRPI0317376B1 (pt) | proteína de fusão de anticorpo-il2 designada como hu14.18-il2, usos da mesma, vetor e composição farmacêutica | |
| AU665763B2 (en) | Interleukin receptor targeted molecules for treatment of inflammatory arthritis | |
| CN105251004A (zh) | 在诊断和治疗类风湿性关节炎中使用的包含抗-cd6单克隆抗体的药物组合物 | |
| RU2007119989A (ru) | Композиции, слитые конструкции и конъюгаты plad домена | |
| Liu et al. | Recombinant single‐chain antibody fusion construct targeting human melanoma cells and containing tumor necrosis factor | |
| JPH0641423B2 (ja) | 細胞毒性薬剤組成物及び細胞毒性薬剤キット | |
| JP2002507967A (ja) | 疾病治療のための抗ｃｄ４０ｌイムノトキシン | |
| US20220280615A1 (en) | Immune tolerant elastin-like recombinant peptides and methods of use | |
| CN117715941A (zh) | 抗cd154抗体及其用途 | |
| JPWO2022068810A5 (sk) | ||
| WO2024000637A1 (zh) | 一种治疗肿瘤的联合用药物组合物及其用途 | |
| CN120917048A (zh) | 达雷妥尤单抗药物偶联物及其制备 | |
| WO2000009155A1 (en) | Methods and compositions for preventing anti-gal production in xenograft recipients | |
| Hemmerle | Targeted delivery of immunomodulators for the therapy of cancer and chronic inflammatory diseases | |
| JP2005529063A (ja) | 細胞毒性薬剤としての抗体‐アビジン融合タンパク質 | |
| Buyuktimkin | Utilizing Antigenic Peptide and Adhesion Molecule Conjugates to Suppress Autoimmune Disease in Animal Models |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FC9A | Refused patent application |