SE1350212A1

SE1350212A1 - Farmaceutisk kombinationskomposition och meto der för behandling av diabetes och metabola rubbningar

Info

Publication number: SE1350212A1
Application number: SE1350212A
Authority: SE
Inventors: Oleg Iliich Epshtein
Original assignee: Oleg Iliich Epshtein
Priority date: 2010-07-21
Filing date: 2011-07-15
Publication date: 2013-04-22
Also published as: GB2496799A; DE112011102396T5; JP2013533268A; PE20130815A1; EA029847B1; LT2013018A; GB201707872D0; AR082312A1; ES2445846R1; ITTO20110627A1; US8617555B2; WO2012010966A3; PH12013500140A1; AU2011281240B2; GB2496799B; EA201300124A1; EP3693018A1; BR112013001299A2; SG187578A1; EE05761B1

Abstract

Föreliggande uppfinning tillhandahåller en farmaceutisk composition för administrering till en patient som lider av diabetes och andra metabola rubbningar, där kompositionen innefattar a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO-syntas.

Description

När en insulinmolekyl frigörs av betacellerna i bukspottkörteln och når en cell, binder den till insulinreceptorn på ytan hos de flesta celler. Så snart insulinet binder, aktiveras den inneboende fosfotransferasfunktionen hos insulinreceptor- betasubenheten, vilket resulterar i tyrosinfosforylering av ett antal intracellulära proteiner. Så snart insulinreceptorn har aktiverats, leder fosforyleringen till en ökning av glukoslagring och följaktligen en minskning av blodglukosnivåer.

Effektiv kontroll av glukosnivå är svårt att åstadkomma under längre perioder även med den mest minutiösa formen för insulinbehandling i de mest motiverade patienterna. Därmed finns det ett fortsatt behov av nya läkemedelsprodukter med önskad terapeutisk effekt för behandling av sjukdomar och metabola rubbningar.

Kväveoxid (NO) är en gasformig molekyl som har visats vara verksam i olika biologiska processers signaliering. NO härrörande från endotelet är en nyckelmolekyl för att reglera blodkärlens tonus, och dess anknytning till kärlsjukdom är känd sedan länge.

NO hämmar många processer som man vet har att göra med uppkomsten av aterosklerotiskt plack, inbegripet monocytvidhäftning, blodplättsansamling och förökning av släta muskelceller i kärlen. En annan viktig roll för endotelt NO är att skydda kärlväggen från oxidativ belastning som orsakas av dess egna metabola produkter och av oxidationsprodukterna från lipider och lipoproteiner. Rubbningar i endotelets funktion uppstår i mycket tidiga stadier av ateroskleros. Det är därför möjligt att brist på lokalt tillgänglig NO skulle kunna vara en sista gemensam faktor som påskyndar aterogenes hos människor. Förutom den roll NO spelar för blodkärlens endotel, har tillgång till NO visat sig styra metabolismen hos lipoproteiner. En negativ korrelation har rapporterats mellan metabola NO-produkters plasmakoncentrationer och total plasma samt nivåerna av LDL-kolesterol, [Low Density Lipoprotein, LDL] medan HDL-kolesterol [High Density Lipoprotein, HDL] förbättrar kärlfunktionen hos hyperkolesterolemiska individer. Förlust av NO har betydande effekt på utveckling av sjukdomen. Diabetes mellitus associeras med ökad sjuklighet och dödlighet, i första hand orsakad av den accelererade utvecklingen av aterosklerotisk sjukdom. Dessutom visar rapporter att diabetiker har försämrad lungfunktion. Det har föreslagits att insulinresistens leder till inflammation i 10 15 20 25 30 Iuftvägarna. Habib et al., Nitric Oxide Measurement From Blood To Lungs, Is There A Link? Pak J Physiol 2007; 3(1).

I endotelet syntetiseras kväveoxid från L-arginin av kväveoxidsyntas (NO- syntas). NO-syntas förekommer i olika isoformer, inklusive en konstitutiv form (cNOS) (iNOS). endotelceller, neuroner och i vissa andra vävnader. och en inducerbar form Den konstitutiva formen föreligger i normala Den terapeutiska effekten av en extremt utspädd (eller ultralåg) form av antikroppar som potentierats genom homeopatisk teknik har upptäckts av uppfinnaren till föreliggande ansökan, Dr. Oleg l. Epshtein. US-patent nr 7,582,294 visar ett läkemedel för behandling av godartad prostatahyperplasi eller prostatit genom administrering av en homeopatiskt aktiverad form av antikroppar mot ett prostataspecifikt antigen (PSA). US-patent nr 7,700,096 visar en homeopatiskt potentierad form av antikroppar mot endotelt NO-syntas. Den homeopatiskt potentierade formen av antikroppar mot endotelt NO-syntas marknadsförs i Ryska Federationen och andra länder under namnet lmpaza®.

SAMMANFATTNING Enligt en aspekt tillhandahåller uppfinningen en farmaceutisk composition för administrering till en patient som lider av diabetessjukdomar och andra metabola rubbningar, där kompositionen innefattar a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO-syntas.

Enligt en aspekt tillhandahåller uppfinningen en farmaceutisk composition för administrering till en patient som lider av diabetessjukdomar och andra metabola rubbningar, där kompositionen innefattar a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO-syntas.

Enligt en variant innefattar den farmaceutiska kompositionen enligt denna aspekt av uppfinningen a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO- 3 10 15 20 25 syntas, där insulinreceptormolekylen innefattar minst en alfasubenhet och minst en betasubenhet.

Enligt en variant innefattar den farmaceutiska kompositionen enligt denna aspekt av uppfinningen en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor eller den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor i form av en blandning av C12-, C30-, och C200- homeopatiska spädningar impregnerade på en fast bärare. Den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot endotelt NO-syntas i form av blandning av C12-, C30-, och C200-homeopatiska spädningar kan därefter impregneras på den fasta bäraren.

Enligt en annan variant inkluderar den farmaceutiska kompositionen enligt denna aspekt av uppﬁnningen den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot endotelt NO-syntas är i form av blandning av G12-, C30-, och C200-homeopatiska spädningar impregnerade på en fast bärare. Den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor eller den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor är i form av blandning av C12-, C30-, och C200-homeopatiska spädningar kan därefter impregneras på den fasta bäraren.

Företrädesvis är den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot ett C- terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor eller den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor en monoklonal, polyklonal eller naturlig antikropp, mer föredraget en polyklonal antikropp. Enligt en variant av denna aspekt av uppfinningen framställs den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor eller den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor genom på varandra följande centesimala spädningar tillsammans med vertikal skakning av varje spädning.

Företrädesvis är den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot endotelt NO-syntas en monoklonal, polyklonal eller naturlig antikropp, mer föredraget en polyklonal antikropp. Enligt en variant av denna aspekt av uppfinningen framställs den aktiverade, 10 15 20 25 30 potentierade formen av en antikropp mot endotelt NO-syntas genom på varandra följande centesimala spädningar tillsammans med vertikal skakning av varje spädning.

Enligt en annan aspekt tillhandahåller uppfinningen en metod för att behandla en patient som lider av Typ l-diabetes, där metoden innefattar att till patienten administrera en kombination av a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO- syntas.

Enligt en annan aspekt tillhandahåller uppfinningen en metod för att behandla en patient som lider av Typ l-diabetes, där metoden innefattar att till patienten administrera en kombination av a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO-syntas.

Enligt en annan aspekt tillhandahåller uppfinningen en metod för att behandla en patient som lider av Typ ll-diabetes, där metoden innefattar att till patienten administrera en kombination av a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO- syntas.

Enligt en annan aspekt tillhandahåller uppfinningen en metod för att behandla en patient som lider av Typ ll-diabetes, där metoden innefattar att till patienten administrera en kombination av a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO-syntas.

Enligt en annan aspekt tillhandahåller uppfinningen en metod för att minska blodglukosnivån i ett däggdjur, där metoden innefattar att till däggdjuret administrera en kombination av a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO- syntas.

Enligt en annan aspekt tillhandahåller uppfinningen en metod för att minska blodglukosnivån i ett däggdjur, där metoden innefattar att till däggdjuret administrera en kombination av a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot ett C-terminalt 10 15 20 25 30 fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO-syntas.

Enligt en annan aspekt tillhandahåller uppfinningen en metod för att behandla insulinresistens i ett däggdjur, där metoden innefattar att till däggdjuret administrera en kombination av a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO- syntas.

Enligt en annan aspekt tillhandahåller uppfinningen en metod för att behandla insulinresistens i ett däggdjur, där metoden innefattar att till däggdjuret administrera en kombination av a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO-syntas.

Enligt en variant av denna aspekt av uppﬁnningen tillhandahålls administrering av från en till två endosberedningsformer av den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor eller en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor, och från en till två endosberedningsformer av den aktiverade, potentierade formen av en antikropp mot endotelt NO-syntas, där vardera dosberedningsformen administreras från en gång dagligen till fyra gånger dagligen. Företrädesvis administreras de en till två endosberedningsformerna av vardera av de aktiverade, potentierade formerna av antikroppar två gånger dagligen.

BESKRIVNING AV FIGURERNA Figur 1 - illustrerar effekten av de testade preparaten på blodplasmaglukosnivå i råttor med streptozotocin-inducerad diabetes mellitus.

Figur 2 - illustrerar effekten av de testade preparaten på injektionsdag 14 på indikatorer på area under koncentrationskurva (AUC) i glukostoleranstestet i råttor med streptozotocin-inducerad diabetes mellitus.

Figur 3 - illustrerar effekten av de testade preparaten på blodplasmaglukosnivå i råttor med spontan icke-insulinberoende diabetes mellitus. 10 15 20 25 30 Figur 4 - lllustrerar effekten av de testade preparaten på injektionsdag 28 på indikatorer på area under koncentrationskun/a (AUC) i glukostoleranstestet i råttor med spontan icke-insulinberoende diabetes mellitus.

Figur 5 - lllustrerar dynamiken i nivåer av glukos och glykosylerat hemoglobin i patienter med typ 1-diabetes mellitus mot bakgrund av intag av IR Ak + NOS Ak preparat.

Figur 6 - lllustrerar dynamiken i nivåer av glukos och glykosylerat hemoglobin i patienter med typ 2-diabetes mellitus mot bakgrund av intag av IR Ak + NOS Ak preparat.

DETALJERAD BESKRIVNING Uppfinningen definieras med hänvisning till de bifogade patentkraven. Med avseende på patentkraven, tillhandahåller följande ordlista de relevanta definitionerna." Termen "antikropp" såsom den används i denna text ska avse ett immunoglobulin som binder specifikt till, och därför definieras som komplementärt till, en särskild rumslig och polär organisering av en annan molekyl. Antikroppar, såsom de omnämns i patentkraven, kan innefatta ett komplett immunoglobulin eller ett fragment därav, kan vara naturliga, polyklonala eller monoklonala och kan innefatta olika klasser och isotyper, såsom lgA, lgD, lgE, lgG1, lgG2a, lgG2b och lgG3, lgl\/I etc. Fragment därav kan innefatta Fab, Fv och F(ab')2, Fab', och liknande. Singularformen "antikropp" inkluderar pluralformen "antikroppar." Termen "aktiverad, potentierad form" eller "potentierad form", används när den avser antikroppar som nämns i denna text för att beteckna en produkt av homeopatisk potentiering av vilken som helst stamberedning av antikroppar.

"Homeopatisk potentiering" betecknar användningen av homeopatiska förfaranden för att ge homeopatisk potens till en stamberedning av en relevant substans. Även om begreppet inte begränsas till detta, kan "homeopatisk potentiering" exempelvis beteckna successiva spädningar i kombination med extern bearbetning, särskilt (mekanisk) skakning. l\/led andra ord utsätts en stamberedning av en antikropp för upprepade spädningar och flerfaldig vertikal skakning av varje lösning som erhållits, i teknik. Den 7 enlighet med homeopatisk föredragna koncentrationen hos 10 15 20 25 30 stamberedningen av antikroppar i lösningsmedlet, företrädesvis vatten eller en vatten-etylalkoholblandning, sträcker sig från ungefär 0,5 till ungefär 5,0 mg/ml. Den föredragna proceduren för att framställa varje komponent, dvs. antikroppslösning, är att använda en blandning av tre vatten- eller vatten-alkohol-spädningar av den primära stamberedningen (modertinkturen) av antikroppar utspädda 10012, 10000 respektive 100200 gånger, vilket motsvarar centesimala homeopatiska spädningar (C12, C30 och C200) eller att använda en blandning av tre vatten- eller vatten- alkohol-spädningar av den primära stamberedningen (modertinkturen) av antikroppar utspädda 10012, 10000 respektive 10050 gånger, vilket motsvarar (C12, C30 och C50). homeopatisk potentiering beskrivs i US-patenten nr 7,572,441 and 7,582,294, vilka centesimala homeopatiska spädningar Exempel på inbegrips i denna text genom referens till dem i helhet och för deklarerat syfte.

Medan termen "aktiverad, potentierad form" används i patentkraven används termen "ultralåga doser" i exemplen. Termen "ultralåga doser" blev en term inom teknikområdet, vilken skapades genom studier och användning av homeopatiskt utspädda och potentierade former av ämnen. Termen "ultralåg dos" eller "ultralåga doser" avses helt och hållet stödja och vara huvudsakligen synonym med termen "aktiverad, potentierad" form som används i patentkraven.

Med andra ord är en antikropp i den "aktiverade, potentierade" formen när tre faktorer föreligger. För det första är den "aktiverade, potentierade" formen av antikroppen en produkt av en framställningsprocess som är vedertagen inom det homeopatiska området. För det andra måste den "aktiverade, potentierade" formen av en antikropp ha biologisk aktivitet bestämd genom metoder som är vedertagna inom modern farmakologi. Och för det tredje kan den biologiska aktiviteten hos den "aktiverade, potentierade" formen av antikroppen inte förklaras genom närvaron av antikroppens molekylform i den homeopatiska processens slutliga produkt.

Exempelvis kan den aktiverade, potentierade formen av antikroppar framställas genom att utsätta en initial, isolerad antikropp i en molekylform för ett flertal på varandra följande spädningar förenat med en yttre kraft, såsom mekanisk skakning. Den yttre behandlingen under processen att minska koncentrationen kan också åstadkommas till 10 15 20 25 30 exempel genom exponering för ultraljuds-, elektromagnetiska eller andra fysikaliska faktorer. V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, US-patent nr. 7229648 och 4311897, vilka i sin helhet och i deklarerat syfte inbegrips genom referens i denna text, beskriver sådana processer vilka är vedertagna metoder för homeopatisk potentiering inom det homeopatiska området. Denna procedur leder till en jämn minskning av molekylär koncentration av antikroppens initiala molekylform. Denna procedur upprepas till dess den önskade homeopatiska potensen uppnås. För den enskilda antikroppen kan den erfordrade homeopatiska potensen bestämmas genom att utsätta de mellanliggande spädningarna för biologisk testning enligt den önskade farmakologiska modellen. Även om begreppet inte begränsas till detta, kan "homeopatisk potentiering" exempelvis beteckna successiva spädningar i kombination med extern bearbetning, särskilt vertikal (mekanisk) skakning. Med andra ord utsätts en stamberedning av antikroppar för på varandra följande, upprepade spädningar och flerfaldigt vertikalt skakande av varje erhållen lösning i enlighet med homeopatisk teknik. Den föredragna koncentrationen av stamberedningen av antikroppar i lösningsmedlet, företrädesvis vatten eller en vatten-etylalkoholblandning, sträcker sig från ungefär 0,5 till ungefär 5,0 mg/ml. Den föredragna proceduren för att framställa varje komponent, dvs. antikroppslösning, är att använda en blandning av tre vatten- eller vatten-alkohol- spädningar av den primära stamberedningen (modertinkturen) av antikroppar utspädda 10012, 10000 respektive 100200 gånger, vilket motsvarar centesimala homeopatiska spädningar C12, C30 och C200 eller blandningen av tre vatten- eller vatten-alkohol- spädningar av den primära stamberedningen (modertinkturen) av antikroppar utspädda 10012, 10000 respektive 10000 gånger, vilket motsvarar centesimala homeopatiska spädningar C12, C30 och C50. Exempel på hur den önskade potensen kan uppnås tillhandahålls också, till exempel i US-patent nr. 7229648 och 4311897, vilka för deklarerat syfte inbegrips i denna text genom referens. Proceduren som är tillämplig för den "aktiverade, potentierade" formen av antikroppar beskrivna häri, beskrivs mer detaljerat nedan.

Det har funnits betydande kontroverser avseende homeopatisk behandling av mänskliga patienter. Även om den föreliggande uppfinningen är beroende av vedertagna homeopatiska processer för att erhålla den "aktiverade, potentierade" 10 15 20 25 30 formen av antikroppar, förlitar den sig inte enbart på homeopati i mänskliga patienter för bevis på aktivitet. Uppfinnaren till den föreliggande ansökan har överraskande upptäckt och rikligt visat i de vedertagna farmakologiska modellerna att lösningen som slutligen erhålls efter ett flertal på varandra följande spädningar av en antikropps inledande molekylform har en slutgiltig aktivitet som är orelaterad till närvaron av spår av antikroppens molekylform i den slutliga spädningen. Den "aktiverade, potentierade" formen av antikroppen som presenteras i denna text testas med avseende på biologisk aktivitet i vedertagna farmakologiska modeller för aktivitet, antingen i tillämpliga in vitro-experiment, eller in vivo i lämpliga djurmodeller. Experimenten som beskrivs nedan ger evidens för biologisk aktivitet i sådana modeller. De kliniska studier på människor, vilka också beskrivs nedan, tillhandahåller bland annat bevis för att aktiviteten som observerades i djurmodellen lämpar sig väl för att överföra på behandling av människor. Studien på människor påvisade också att de "aktiverade, potentierade" former som beskrivs i denna text är tillgängliga för behandling av specificerade mänskliga sjukdomar eller rubbningar, vilka är vedertagna patologiska tillstånd inom medicinsk vetenskap.

Den "aktiverade, potentierade" formen av antikropp enligt patentkraven omfattar vidare enbart lösningar eller fasta preparat vars biologiska aktivitet inte kan förklaras av närvaron av antikroppens molekylform som kvarstår från den initiala stamberedningen.

Med andra ord, även om det övervägs att den "aktiverade, potentierade" formen av antikroppen kan innehålla spår av antikroppens initiala molekylform, kan en fackman inte med någon grad av rimlighet tillskriva den observerade biologiska aktiviteten i de vedertagna farmakologiska modellerna till antikroppens återstående molekylform på grund av de extremt låga koncentrationerna av antikroppens molekylform som kvarstår efter de på varandra följande spädningarna. Även om uppfinningen inte begränsas av någon särskild teori, kan emellertid den biologiska aktiviteten hos den "aktiverade, potentierade" formen av antikropparna i den föreliggande uppfinningen inte tillskrivas antikroppens initiala molekylform. Föredragen är den "aktiverade, potentierade" formen av antikroppen i flytande eller fast form i vilken koncentrationen av antikroppens initiala molekylform är lägre än detektionsgränsen för vedertagna analytiska tekniker, såsom 10 10 15 20 25 30 kapillärelektrofores och högupplösande vätskekromatografi. Särskilt föredragen är den "aktiverade, potentierade" formen av antikroppen i flytande eller fast form i vilken koncentrationen av antikroppens initiala molekylform är lägre än Avogadros tal. inom farmakologi avseende terapeutiska substansers molekylformer är det vanligt att skapa en dos-responskurva i vilken nivån av den farmakologiska responsen avsätts gentemot koncentrationen hos det aktiva läkemedlet som administreras till patienten eller som testas in vitro. Det övervägs särskilt och är att föredra, att den "aktiverade, potentierade" formen av antikropparna innehåller molekylär antikropp, om överhuvudtaget, i en koncentration som är lägre än tröskeldosen för antikroppens molekylform i den givna biologiska modellen.

Föreliggande uppfinning tillhandahåller en farmaceutisk komposition för administrering till en patient som lider av diabetessjukdomar och andra metabola rubbningar, innefattande a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor eller en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO-syntas. Såsom angivet ovan, är varje individuell komponent i kombinationen allmänt känd för dess egen individuella medicinska Emellertid har överraskande upptäckt att administrering av kombinationen är användbar för behandling användning. uppfinnarna till den föreliggande patentansökan av patienter med diabetes och insulinresistens och vidare att den minskar blodglukosnivåer. Medan sökanden inte begränsas av följande teori, förutsätter "accelerator"-hypotesen att typ l-diabetes mellitus (DM) och typ ll-diabetes mellitus är samma sjukdom kännetecknad av insulinresistens, vars utveckling till typ I-DM och typ ll-DM bestäms av patientens genotyp. Denna hypotes förnekar inte betydelsen av autoimmuna processer, men den betvivlar dess primära roll. Acceleratorhypotesen delar in typ I- och typ ll-diabetes mellitus efter utvecklingshastighet: i typ l-diabetes mellitus bestämmer en snabb utveckling av patologiska förändringar den tidigare starten för manifestationerna av kliniska sjukdomssymptom. Hypotesen föreslogs för första gången 2001 och bekräftas för närvarande av resultaten från 6 oberoende kliniska studier (se Wilkin, T.J. The accelerator hypothesis: a review of the evidence for insulin 11 10 15 20 25 30 resistance as the basis for type [I] as well as type ll diabetes. // International Journal for Obesity. 2009: Vol. 33 - s. 716-726.). En nyckelroll i patogenesen hos båda typerna av diabetes spelas av insulinresistens, vars minskning leder till lindring av det kliniska förloppet i både typ l-diabetes och typ ll-diabetes (se Cellular mechanisms of insulin resistance. World Congress on Insulin Resistance Syndrome, 2009, Diabetes Care. 2010: Vol. 33, N8, s. 103-108.). lnsulinreceptorbetasubenhetens roll i insulinets signalväg är känd. Efter insulinbindning till receptorn och betasubenhetaktivering kan signalvägen gå i två olika riktningar: phosphatidylinositol-3-kinas (Pl 3-K) eller MAP- kinas (l\/IAP-K). majoriteten av insulinets metabola och antiapoptotiska effekter, och den alternativa Den första vägen verkar vara nödvändig för förverkligande av vägen förknippas med dess icke-metabola, proliferativa och mitogena effekter. Inom insulinresistens har det visats att endast metabol insulinresistens, förbunden med betasubenhetsaktiveringen längs P13-K-vägen, spelar en viktig roll för att bestämma utvecklingen av diabetes mellitus (se Muntoni, S, l\/|untoni, S. Insulin Resistance: Pathophysiology and Rationale for Treatment, Ann. Nutr. l\/letab. 2011: Vol. 58, N1, s. 25-36). Den farmaceutiska kompositionen enligt patentkraven säkerställer en effekt på metabol insulinresistens.

Den farmaceutiska kompositionen enligt denna aspekt av uppfinningen kan föreligga i flytande form eller i fast form. . Vardera av de aktiverade, potentierade formema av antikroppama inkluderade i den farmaceutiska kompositionen framställs av en initial molekylform av antikroppen via en process vedertagen inom det homeopatiska området. De initiala antikroppama kan vara monoklonala eller polyklonala antikroppar framställda i enlighet med kända processer, till exempel såsom beskrivs i lmmunotechniques, G. Frimel, l\/l., "l\/leditsyna", 1987, s. 9-33, och "Hum. Antibodies. l\/lonoclonal and recombinant antibodies, 30 years after" av Laffly E., Sodoyer R. - 2005 - Vol. 14. - N 1-2. S.33-55, båda inbegripna i denna text genom referens.

Monoklonala antikroppar kan erhållas t ex med hjälp av hybridomteknik.

Processens inledande steg inkluderar immunisering baserad på principer som redan utvecklats under framställning av polyklonala antisera. Fortsatta steg i arbetet innefattar produktion av hybridceller som genererar antikroppskloner med identisk 12 10 15 20 25 30 specificitet. Separat isolering av dem utförs genom användning av samma metoder som vid framställning av polyklonala antisera.

Polyklonala antikroppar kan erhållas via aktiv immunisering av djur. För detta ändamål får exempelvis lämpliga djur (t ex kaniner) en serie injektioner av avsett antigen, antingen endotelt NO-syntas och C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor eller endotelt NO-syntas och mänsklig insulinreceptor. Djurens immunsystem genererar motsvarande antikroppar vilka samlas in från djuren på känt vis. Denna procedur möjliggör framställning av ett serum rikt pä monospecifika antikroppar. Om så önskas kan serumet innehållande antikroppar renas, t ex genom användning av affinitetskromatografi, saltutfällningsfraktionering, eller jonbyteskromatografi. Det resulterande renade, antikroppsanrikade serumet kan användas som en stamberedning för framställning av den aktiverade, potentierade formen av antikropparna. Den föredragna koncentrationen hos den resulterande stamberedningen av antikroppar i lösningsmedlet, företrädesvis vatten eller en vatten-etylalkoholblandning, sträcker sig från ungefär 0,5 till ungefär 5,0 mg/ml.

Den föredragna proceduren för att framställa varje komponent är användning av blandningen av tre vatten-alkoholspädningar av den primära stamberedningen av antikroppar utspädda 10012, 10000 respektive 100200 gånger, vilket motsvarar centesimala homeopatiska spädningar C12, C30 och C200. För att framställa en fast beredningsform behandlas en fast bärare med den önskade spädningen erhällen genom den homeopatiska processen. För att erhålla en fast endosberedningsform av kombinationen enligt uppfinningen impregneras en bärarmassa med vardera spädning. Båda ordningsföljderna för impregnering är lämpliga för att framställa den önskade kombinationsberedningsformen.

Enligt en föredragen utföringsform är startmaterialet för framställningen av den aktiverade, potentierade formen som innefattar kombinationen enligt uppfinningen en i djur producerad polyklonal antikropp mot motsvarande antigen, dvs. det C-terminala fragmentet av betasubenheten av eller mänsklig insulinreceptor mänsklig insulinreceptor och endotelt NO-syntas. För att erhålla den aktiverade, potentierade 13 formen av polyklonala antikroppar mot det C-terminala fragmentet av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor kan det önskade antigenet injiceras som en immunogen i ett försöksdjur, företrädesvis kaniner. Peptider av särskilt intresse kan inkludera minst 3 aminosyror, vanligen minst ungefär 10 på vardera sidan om sekvensen, företrädesvis med minst 3 aminosyror pä den C-terminala sidan. De följande sekvenserna av mänsklig insulinreceptor är uttryckligen avsedda som lämpliga antigen: Hela alfasubenheten av mänsklig insulinreceptor: SEQ ID NO: 1 His Leu Tyr 28 30 Pro Gly Glu Val Cys Pro Gly Met Asp Ile Arg Asn Asn Leu Thr 31 35 40 45 Arg Leu His Glu Leu Glu Asn Cys Ser Val Ile Glu Gly His Leu 46 50 55 60 Gln Ile Leu Leu Met Phe Lys Thr Arg Pro Glu Asp Phe Arg Asp 61 65 70 75 Leu Ser Phe Pro Lys Leu Ile Met Ile Thr Asp Tyr Leu Leu Leu 76 80 85 90 Phe Arg Val Tyr Gly Leu Glu Ser Leu Lys Asp Leu Phe Pro Asn 91 95 100 105 Leu Thr Val Ile Arg Gly Ser Arg Leu Phe Phe Asn Tyr Ala Leu 106 110 115 120 Val Ile Phe Glu Met Val His Leu Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Asn 121 125 130 135 Leu Met Asn Ile Thr Arg Gly Ser Val Arg Ile Glu Lys Asn Asn 136 140 145 150 Glu Leu Cys Tyr Leu Ala Thr Ile Asp Trp Ser Arg Ile Leu Asp 151 155 160 165 Ser Val Glu Asp Asn Tyr Ile Val Leu Asn Lys Asp Asp Asn Glu 166 170 175 180 Glu Cys Gly Asp Ile Cys Pro Gly Thr Ala Lys Gly Lys Thr Asn 14 10 15 20 25 30 181 Cys 196 Thr 211 His 226 Gly 241 Arg 256 Pro 271 Cys 286 Cys 301 Pro 316 Cys 331 Lys 346 Thr 361 Asn 376 Ile 391 Leu 406 Glu Pro His Gly Asn Asn Tyr Gln His Ser Leu Thr Val Leu Ser Ser Ile Ala Ser Cys Cys Phe Tyr Asp Gln Gly Gly Ile Ile Ala Gly Phe Gly Thr His Thr Ser Tyr His Leu Tyr Tyr Pro Asp Asn Ala Tyr Phe Asn 185 Val 200 Cys 215 Ala 230 Gln 245 Leu 2 60 Phe 275 His 290 Val 305 Thr 320 Cys 335 Ser 350 Gly 365 Glu 380 Leu 395 Arg 410 Tyr Ile Gln Glu Pro Asp Gln His Ile Met Pro Val Ser Leu Lys Lys Ser Asn Lys Gly Asp Gly Asp Lys His Asn Lys Thr LSU Glu Ile Leu Phe Gly Val Leu Asp Arg Trp Cys Asn Ser Val Ser Ile Ala Arg Arg Tyr 15 Gln Cys Cys Pro Cys Arg Lys Asn Ser Cys Ala Ile Asn Arg Leu Ala 190 Phe 205 Pro 220 Cys 235 Thr 250 Val 265 Cys 280 Asn 295 Lys 310 Asn 325 His 340 Gln 355 Asn 370 Leu 385 Ser 400 Ile 415 Leu Val Thr His Lys Glu Val Ser Cys Leu Leu Glu Ile Gly Tyr Asp Glu Ile Ser Cys Thr Asn Arg Ile Leu Leu Leu Arg Leu Ala Gly Asn Arg Cys Glu Val Cys Phe Arg Pro Cys Glu Arg Gly Ile Leu Glu Gln Cys Lys Cys Ala Pro Ser Gln Glu Thr Gly Gly Gly Glu Val Thr Asn 195 Trp 210 Ser 225 Leu 240 Cys 255 Pro 270 Phe 285 Gly 300 Cys 315 Pro 330 Glu 345 Cys 360 Asn 375 Glu 390 Ser 405 Leu 420 Leu 10 15 20 25 30 421 Arg 436 Gly 451 Ile 466 481 Glu 496 Lys 511 Asp 526 Asn 541 Trp 556 Lys 571 Trp 586 Asp 601 Gln 616 Val 631 Ser 646 Arg Gln Lys His Asn Asn Ile Leu Val Thr Ser Thr Glu Thr Ser Asp Gln Leu Leu Lys Asp Glu Leu Leu Thr Val Gln Gln Arg Asp Asn Pro Ala Trp Phe Met Ile Leu Leu Gly Glu Val Asn Tyr Arg Ala Ser Asn Glu 425 Asp 440 Phe 455 Glu 470 Ala 485 Leu 500 Arg 515 Phe 530 Phe 545 Asp 560 His 575 Ala 590 Thr 605 Thr 620 Ser 635 Gly 650 Asp Trp His Glu Leu Lys Trp Met Asp Ile Pro Ile Tyr Asn Ser Asn Ser Ser Tyr Val Lys Phe Glu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Pro Gln Ile Glu Lys Asn Ser Thr Ser Pro Phe Gln Pro Trp Val Ala Ser Ile Thr LSU 16 His Pro Gly Asn Tyr Tyr Tyr Asp Pro Leu Lys Lys Val Ile His Phe 430 Asn 445 Lys 460 Thr 475 Gly 490 Ile 505 Trp 510 Lys 535 Ala 550 Leu 565 Met 580 Thr 595 Ser 610 Pro 625 Leu 640 Tyr 655 Glu Leu Leu Lys Asp Arg Pro Glu Cys Arg Arg Leu Asp Leu Lys Leu LSU Thr Cys Gly Gln Thr Pro Ala Gly Ser Gly Val Ile Asp Trp Val Asp Ile Leu Arg Ala Ser Asp Pro Ser Asn Leu Thr Ile Pro Lys Phe Tyr Thr Ser Gln Ser Phe Phe Tyr Asn Asp Lys Phe Tyr Ile Pro Trp Cys 435 Gln 450 Glu 465 Glu 480 Cys 495 Asp 510 Arg 525 Gln 540 Ser 555 Pro 570 Pro 585 Ser 600 Val 615 Ser 630 Pro 645 Glu 660 Leu 10 15 20 25 661 Lys 676 Ser 691 Ala 706 Lys 721 Leu 736 Gly 751 Fragment av alfasubenheten av mänsklig insulinreceptor: Gly Glu Gly Glu His Ala Leu Asp Glu Leu Asn Glu SEQ ID NO: 2 Lys Ser Cys Glu Val Asp 665 Leu 680 Gln 695 Cys 710 Glu 725 Val 740 Pro 755 Pro Lys Ser Ser Phe Arg Ser His Cys Ser Val Pro Arg Asn Pro Phe Pro Ser Thr Gln Lys Arg Arg Arg Leu Met Asn Ile Thr Arg Gly Ser Val 136 SEQ ID NO: 3 140 Cys Pro Ala Thr Val Ile Asn Gly 196 SEQ ID NO: 4 200 203 144 670 Trp 685 Ser 700 Thr 715 Lys 730 Lys 745 Lys 760 Ser Glu Asp Thr Thr Arg LSU 131 Lys 191 Pro Tyr Ser Phe Ser Arg 762 Gly Pro Phe Glu Asp Gln Ile Glu Asp Ser Gly Leu Tyr 675 Glu 690 Ser 705 Leu 720 Tyr 735 Thr 750 Asn 135 Gly Lys Thr Asn 195 Trp Ser Lys His Asn Leu Thr Ile Thr Gln 17 10 15 20 25 441 445 450 Gly Lys Leu 451 453 SEQIDIVOI5 Asn Val Thr Glu Phe Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser 541 545 Trp Thr Val Val Asp 550 555 556 560 SEQ ID NO: 6 Asp Ile Ile Tyr Val 611 615 Gln Thr Asp Ala Thr 616 620 SEQ ID NO: 7 Tyr Glu Asp Ser 702 705 Ala Gly Glu Cys Cys Ser Cys Pro Lys Thr Asp Ser Gln Ile 706 710 715 719 Hela betasubenheten av mänsklig insulinreceptor: SEQ ID NO: 8 Ser Leu Gly 763 765 Asp Val Gly Asn Val Thr Val Ala Val Pro Thr Val Ala Ala Phe 18 10 15 20 25 30 766 Pro 781 Arg 796 Gly 811 Asn 826 Ser 841 Pro 856 Trp 871 Val 886 Ser 901 Leu 916 Ala 931 Asp 946 Pro 961 Tyr 976 Leu 991 Phe Asn Pro Leu Gln Ala Val Gln Ser Arg Ser Gly Tyr Leu Leu Tyr Pro Thr Phe Asp Arg Thr Glu Tyr Lys Pro Asn Leu Ile Phe Ala Cys Ser Glu His Thr Thr His Pro Arg His Gly Gly Asp Phe Leu Ser Ser 770 Ser 785 Lys 800 Phe 815 Pro 830 Met 845 Glu 860 Lys 875 Arg 890 Phe 905 Asn 920 Ser 935 Val 950 Val 965 980 Ser 995 Val Thr Val Thr Glu Pro Ile Glu Tyr Ala Tyr Trp Pro Phe Lys Asn Tyr Ser Val Gly Glu Glu Phe Pro Gly Leu Ser Thr Ser Leu Arg Pro Val Val Asn Tyr Arg Ala Glu Asn Asp Glu Val Glu Asn Phe Gln Glu Pro 19 Pro Lys Arg Cys Lys Asn Gly Glu Arg Arg Pro Ile Ser Pro Tyr Asp 775 Thr 790 Glu 805 Ile 820 Ser 835 Ala 850 Asn 865 Leu 880 Glu 895 Gly 910 Ile 925 Thr 940 Ala 955 Val 970 Asp 985 Leu 1000 Glu Ser Ser Glu Val Asp Val Ile Leu Cys Arg Tyr Lys Val Gly Ser Trp Pro Leu Leu Ala Asp Val Val His Arg Ala Phe Ile Ile Pro Ala Glu Glu Val Gln Ala Ile His LSU Leu Leu Thr Tyr Ile Gly Leu Ser Val Glu Ile Ala Tyr Val Leu Tyr Cys Arg Ser Val Ile Ser Gly Asp Ser 780 His 795 Ser 810 Cys 825 Val 840 Gly 855 Met 870 Glu 885 Val 900 Gly 915 Leu 930 Thr 945 Gly 960 Ile 975 Pro 990 Val 1005 Arg 10 15 20 25 30 1006 Glu Lys 1021 Met Val 1036 Glu Thr 1051 Arg Glu 1066 Phe Thr 1081 Gly Gln 1096 Leu Lys 1111 Pro Gly 1126 Ala Glu 1141 Val His 1156 Phe Thr 1171 Glu Thr 1186 Arg Trp 1201 Ser Ser 1216 Ser Leu 1231 Leu Lys Ile Tyr Arg Cys Pro Ser Arg Ile Arg Val Asp Met Asp Ala Phe 1010 Thr Leu 1025 Glu Gly 1140 Val Ala 1155 Ile Glu 1170 His His 1185 Thr Leu 1100 Tyr Leu 1115 Pro Pro 1130 Ala Asp 1145 Asp Leu 1160 Lys Ile 1175 Tyr Tyr 1190 Ala Pro 1205 Met Trp 1220 Glu Gln 1235 Val Met Leu Asn Val Phe Val Val Arg Pro Gly Ala Gly Glu Ser Pro Asp Arg Ala Lys Leu Val Val Ser Thr Met Ala Asp Lys Ser Phe Tyr Gly Glu Arg Thr Asn Arg Met LSU Leu Ala Arg Phe Gly Leu Gly Gln Gly 20 1015 Leu Gly 1030 Asp Ile 1145 Val Asn 1160 Glu Ala 1175 Leu Leu 1190 Glu Leu 1105 Arg Pro 1120 Gln Glu 1135 Tyr Leu 1150 Asn Cys 1165 Gly Met 1180 Gly Lys 1195 Lys Asp 1210 Val Val 1225 Gly Leu 1240 Tyr Leu Gln Ile Glu Ser Gly Met Glu Met Asn Met Thr Gly Gly Leu Ser Asp Gly Lys Ser Val Val Ala Ala Ile Ala Val Arg Leu Val Trp Asn Gln Ser Gly Ala Met Val His Glu Gln Lys Ala Asp Leu Phe Glu Glu Pro 1020 Phe Gly 1035 Glu Ala 1050 Ser Leu 1065 Lys Gly 1080 Ser Lys 1095 Gly Asp 1110 Asn Asn 1125 Met Ala 1140 Lys Phe 1155 His Asp 1170 Ile Tyr 1185 Pro Val 1200 Thr Thr 1215 Ile Thr 1230 Gln Val 1245 Asp Asn 10 15 20 25 30 1246 Cys Pro 1261 Asn Pro 1276 Lys Asp 1291 Ser Glu 1306 Phe Glu 1321 Gln Arg 1336 Phe Lys 1351 Gly Gly 1366 Pro Ser 13811382 Glu Lys Asp Glu Asp Glu Arg Lys 1250 Arg Val 1265 Met Arg 1280 Leu His 1295 Asn Lys 1310 Met Glu 1325 Glu Ala 1340 Ser Tyr 1355 Lys Asn 1370 Thr Pro Pro Ala Asn Gly Glu Gly Asp Thr Ser Pro Val Gly Glu Arg Leu Phe Phe Glu Pro Arg His Ile 1255 Met Arg 1270 Leu Glu 1285 Pro Glu 1300 Ser Glu 1315 Leu Asp 1330 Asp Gly 1345 Ile Pro 1360 Leu Thr 1375 Met Ile Val Glu Arg Gly Tyr Leu Cys Val Ser Leu Ser Ser Thr Pro Trp Asn Phe Glu Ser Ser His Arg 1260 Gln Phe 1275 Leu Leu 1290 Phe His 1305 Met Glu 1320 His Cys 1335 Leu Gly 1350 Met Asn 1365 Ser Asn 1380 Fragment av C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor: SEQ ID NO: 9 Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro 1368 SEQ ID NO: 10 Pro Ser 13811382 1370 1372 1375 21 1377 1375 Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1380 10 15 20 25 SEQ|DI¶OI11 Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr 13691370 1375 SEQ ID NOI 12 Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1366 1370 1375 1380 Pro Ser 13811382 SEQ ID NO: 13 Asn 1365 Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1366 1370 1375 1380 Pro Ser 13811382 Användningen av mänsklig insulinreceptor som antigen övervägs också. lämpliga sekvensen för ett sådant antigen är såsom följer: SEQ ID NO: 14 Met Ala Thr Gly Gly Arg Arg Gly Ala Ala Ala Ala Pro Leu Leu 1 5 10 15 Val Ala Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ala Ala Gly His Leu Tyr 16 20 25 30 Pro Gly Glu Val Cys Pro Gly Met Asp Ile Arg Asn Asn Leu Thr 31 35 40 45 Arg Leu His Glu Leu Glu Asn Cys Ser Val Ile Glu Gly His Leu 22 Den 10 15 20 25 30 46 Gln 61 Leu 76 Phe 91 Leu 106 Val 121 Leu 136 Glu 151 Ser 166 Glu 181 Cys 196 Thr 211 His 226 Gly 241 Arg 256 Pro 271 Cys Ile Ser Arg Thr Ile Met LSU Val Cys Pro His Gly Asn Asn Tyr Gln Leu Phe Val Val Phe Asn Cys Glu Gly Ala Ser Cys Cys Phe Tyr Asp Leu Pro Ile Glu Ile Tyr Asp Asp Thr His Thr Ser Tyr His Leu 50 Met 65 Lys 80 Gly 95 110 Met 125 Thr 140 Leu 155 Asn 170 Ile 185 Val 200 Cys 215 Ala 230 Gln 245 Leu 260 Phe 275 His Phe Leu Leu Gly Val Arg Ala Tyr Cys Ile Gln Glu Pro Asp Gln His Lys Ile Glu Ser His Gly Thr Ile Pro Asn Lys Gly Asp Gly Asp Lys Thr Met Ser Arg Leu Ser Ile Val Gly Gly Val Leu Asp Arg Trp Cys 23 55 Arg Pro 70 Ile Thr 85 Leu Lys 100 Leu Phe 115 Lys Glu 130 Val Arg 145 Asp Trp 160 Leu Asn 175 Thr Ala 190 Gln Phe 205 Cys Pro 220 Cys Cys 235 Pro Thr 250 Cys Val 265 Arg Cys 280 Lys Asn Glu Asp Asp Phe Leu Ile Ser Lys Lys Val Thr His Lys Glu Val Ser Asp Tyr Leu Asn Gly Glu Arg Asp Gly Glu Ile Ser Cys Thr Asn Arg Phe Leu Phe Tyr Leu Lys Ile Asp Lys Arg Cys Glu Val Cys Phe Arg Arg Leu Pro Ala Tyr Asn LSU Asn Thr Cys Lys Cys Ala Pro Ser Gln 60 Asp 75 Leu 90 Asn 105 Leu 120 Asn 135 Asn 150 Asp 165 Glu 180 Asn 195 Trp 210 Ser 225 Leu 240 Cys 255 Pro 270 Phe 285 Gly 10 15 20 25 30 286 Cys 301 Pro 316 Cys 331 Lys 346 Thr 361 Asn 376 Ile 391 Leu 406 Glu 421 Arg 436 Gly 451 Ile 466 Arg 481 Glu 496 Lys 511 Asp His Ser Leu Thr Val Leu Ser Ser Ile Gln Lys His Asn Asn Ile Leu Gln Gly Gly Ile Ile Ala Gly Phe Gly Leu LSU Lys Asp Glu Leu Leu Tyr Tyr Pro Asp Asn Ala Phe Asn Trp Phe Met Ile Leu Leu Gly 290 Val 305 Thr 320 Cys 335 Ser 350 Gly 365 Glu 380 Leu 395 Arg 410 Tyr 425 Asp 440 Phe 455 Glu 470 Ala 485 Leu 500 515 Phe Ile Met Pro Val Ser Leu Lys Lys Ser Trp His Glu Leu Lys Trp Met His Asn Lys Thr Leu Glu Ile Leu Phe Ser Tyr Val Lys Phe Glu Leu Asn Ser Val Ser Ile Ala Arg Tyr Lys Asn Ser Thr Ser Pro Phe 24 Asn Ser Cys Ala Ile Asn Arg Leu Ala His Pro Gly Asn Tyr Tyr Tyr 295 Lys 310 Asn 325 His 340 Gln 355 Asn 370 Leu 385 Ser 400 Ile 415 Leu 430 Asn 445 Lys 460 Thr 475 Gly 490 Ile 505 Trp 510 Lys Cys Leu Leu Glu Ile Gly Tyr Arg Asp Leu LSU Lys Asp Arg Pro Glu Ile Leu Leu Leu Arg Leu Ala Gly Asn Thr Cys Gly Gln Thr Pro Ala Pro Cys Glu Arg Gly Ile Leu Glu Gln Ile LSU Arg Ala Ser Asp Pro Glu Thr Gly Gly Gly Glu Val Thr Asn Thr Ser Gln Ser Phe Phe Tyr 300 Cys 315 Pro 330 Glu 345 Cys 360 Asn 375 Glu 390 Ser 405 Leu 420 Leu 435 Gln 450 Glu 465 Glu 480 Cys 495 Asp 510 Arg 525 Gln 10 15 20 25 30 526 Asn 541 Trp 556 Lys 571 586 Asp 601 Gln 616 Val 631 Ser 646 Arg 661 Lys 676 Ser 691 Ala 706 Lys 721 Leu 736 Gly 751 Asp Val Thr Ser Thr Glu Thr Ser Asp Gln Gly Glu Gly Glu His Ala Val Thr Val Gln Gln Arg Asp Asn Pro Ala Leu Asp Glu Leu Asn Glu Gly Glu Val Asn Tyr Arg Ala Ser Asn Glu Lys Ser Cys Glu Val Asp Asn 530 Phe 545 Asp 560 His 575 Ala 590 Thr 605 Thr 620 Ser 635 Gly 650 Asp 665 Leu 680 Gln 695 Cys 710 Glu 725 Val 740 Pro 755 Val Asp Ile Pro Ile Tyr Asn Ser Asn Ser Pro Lys Ser Ser Phe Arg Thr Gly Asp Gly Phe Gly Pro Gln Ile Glu Ser His Cys Ser Val Pro Val Gln Pro Trp Val Ala Ser Ile Thr Leu Arg Asn Pro Phe Pro Ser Ala 25 Asp Pro Leu Lys Lys Val Ile His Phe Thr Gln Lys Arg Arg Arg Val 535 Ala 550 Leu 565 Met 580 Thr 595 Ser 610 Pro 625 Leu 640 Tyr 655 Glu 670 Trp 685 Ser 700 Thr 715 Lys 730 Lys 745 Lys 760 Pro Cys Arg Leu Asp Leu Lys Leu Leu Ser Glu Asp Thr Thr Thr Gly Ser Gly Val Ile Asp Trp Val Asp Pro Tyr Ser Phe Ser Arg Val Ser Asn Leu Thr Ile Pro Lys Phe Tyr Pro Glu Gln Glu Ser Ser Ala Asn Asp Lys Phe Tyr Ile Pro Trp Cys Phe Asp Ile Asp Gly Leu Ala 540 Ser 555 Pro 570 Pro 585 Ser 600 Val 615 Ser 630 Pro 645 Glu 660 Leu 675 Glu 690 Ser 705 Leu 720 Tyr 735 Thr 750 Gly 765 Phe 10 15 20 25 30 766 Pro 781 Arg 796 Gly 811 Asn 826 Ser 841 Pro 856 Trp 871 Val 886 Ser 901 Leu 916 Ala 931 Asp 946 Pro 961 Tyr 976 Leu 991 Phe Asn Pro Leu Gln Ala Val Gln Ser Arg Ser Gly Tyr Leu Leu Tyr Pro Thr Phe Arg Asp Arg Thr Glu Tyr Lys Pro Asn Leu Ile Phe Ala Cys Ser Glu His Thr Thr His Pro Arg His Gly Gly Asp Phe Leu Ser Ser 770 Ser 785 Lys 800 Phe 815 Pro 830 Met 845 Glu 860 Lys 875 Arg 890 Phe 905 Asn 920 Ser 935 Val 950 Val 965 980 Ser 995 Val Thr Val Thr Glu Pro Ile Glu Tyr Ala Tyr Trp Pro Phe Lys Asn Tyr Ser Val Gly Glu Glu Phe Pro Gly Leu Ser Thr Ser Leu Arg Pro Val Val Asn Tyr Arg Ala Glu Asn Asp Glu Val Glu Asn Phe Gln Glu Pro 26 Pro Lys Arg Cys Lys Asn Gly Glu Arg Arg Pro Ile Ser Pro Tyr Asp 775 Thr 790 Glu 805 Ile 820 Ser 835 Ala 850 Asn 865 Leu 880 Glu 895 Gly 910 Ile 925 Thr 940 Ala 955 Val 970 Asp 985 Leu 1000 Glu Ser Ser Glu Val Asp Val Ile Leu Cys Arg Tyr Lys Val Gly Ser Trp Pro Leu Leu Ala Asp Val Val His Arg Ala Phe Ile Ile Pro Ala Glu Glu Val Gln Ala Ile His LSU Leu Leu Thr Tyr Ile Gly Leu Ser Val Glu Ile Ala Tyr Val Leu Tyr Cys Arg Ser Val Ile Ser Gly Asp Ser 780 His 795 Ser 810 Cys 825 Val 840 Gly 855 Met 870 Glu 885 Val 900 Gly 915 Leu 930 Thr 945 Gly 960 Ile 975 Pro 990 Val 1005 Arg 10 15 20 25 30 1006 Glu Lys 1021 Met Val 1036 Glu Thr 1051 Arg Glu 1066 Phe Thr 1081 Gly Gln 1096 Leu Lys 1111 Pro Gly 1126 Ala Glu 1141 Val His 1156 Phe Thr 1171 Glu Thr 1186 Arg Trp 1201 Ser Ser 1216 Ser Leu 1231 Leu Lys Ile Tyr Arg Cys Pro Ser Arg Ile Arg Val Asp Met Asp Ala Phe 1010 Thr Leu 1025 Glu Gly 1140 Val Ala 1155 Ile Glu 1170 His His 1185 Thr Leu 1100 Tyr Leu 1115 Pro Pro 1130 Ala Asp 1145 Asp Leu 1160 Lys Ile 1175 Tyr Tyr 1190 Ala Pro 1205 Met Trp 1220 Glu Gln 1235 Val Met Leu Asn Val Phe Val Val Arg Pro Gly Ala Gly Arg Glu Ser Pro Asp Arg Ala Lys Leu Val Val Ser Thr Met Ala Asp Lys Ser Phe Tyr Gly Glu Arg Thr Asn Arg Met LSU Leu Ala Arg Phe Gly Leu Gly Gln Gly 27 1015 Leu Gly 1030 Asp Ile 1145 Val Asn 1160 Glu Ala 1175 Leu Leu 1190 Glu Leu 1105 Arg Pro 1120 Gln Glu 1135 Tyr Leu 1150 Asn Cys 1165 Gly Met 1180 Gly Lys 1195 Lys Asp 1210 Val Val 1225 Gly Leu 1240 Tyr Leu Gln Ile Glu Ser Gly Met Glu Met Asn Met Thr Gly Gly Leu Ser Asp Gly Lys Ser Val Val Ala Ala Ile Ala Val Arg Leu Val Trp Asn Gln Ser Gly Ala Met Val His Glu Gln Lys Ala Asp Leu Phe Glu Glu Pro 1020 Phe Gly 1035 Glu Ala 1050 Ser Leu 1065 Lys Gly 1080 Ser Lys 1095 Gly Asp 1110 Asn Asn 1125 Met Ala 1140 Lys Phe 1155 His Asp 1170 Ile Tyr 1185 Pro Val 1200 Thr Thr 1215 Ile Thr 1230 Gln Val 1245 Asp Asn 10 15 20 25 30 1246 1250 1255 Cys Pro Glu Arg Val Thr Asp Leu Met Arg Met Cys 1260 Trp Gln Phe 1261 1265 1270 1275 Asn Pro Lys Met Arg Pro Thr Phe Leu Glu Ile Val Asn Leu Leu 1276 1280 Lys Asp Asp Leu His 1285 Pro Glu Val 1290 Pro Ser Phe Ser Phe Phe His 1291 1295 Ser Glu Glu Asn Lys Ala Pro Glu 1300 1305 Ser Glu Glu Leu Glu Met Glu 1306 1310 Phe Glu Asp Met Glu Asn Val 1315 1320 Pro Leu Asp Arg Ser Ser His Cys 1321 1325 1330 1335 Gln Arg Glu Glu Ala Gly Gly Arg Asp Gly Gly Ser Ser Leu Gly 1336 1340 Phe Lys Arg Ser Tyr Glu Glu His 1345 1350 Ile Pro Tyr Thr His Met Asn 1351 1355 1360 1365 Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1366 1370 1375 1380 Pro Ser 13811382 Den typiska proceduren för framställning av de initiala polyklonala antikropparna mot C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor kan beskrivas som följer. 7-9 dagar före blodprovstagning ges 1-3 intravenösa injektioner av det önskade antigenet till kaninerna för att öka nivån av polyklonala antikroppar i kaninens blodflöde. Efter immunisering tas blodprover för att testa antikroppsnivån. Den maximala nivån av immunreaktion mot det lösliga antigenet uppnås typiskt sett inom 40 till 60 dagar efter den första injektionen av antigenet. Efter att den första immuniseringscykeln slutförts får kaniner en 30-dagars rehabiliteringsperiod, varpå återimmunisering utförs genom ytterligare 1-3 intravenösa injektioner.

För att erhålla antiserum innehållande de önskade antikropparna samlas de immuniserade kaninernas blod in och placeras i ett 50 ml centrifugrör. Blodkoagel som 28 10 15 20 25 bildas på rörets sidor avlägsnas med en träspatel, och en stav placeras i det koagulerade blodet i rörets mitt. Blodet placeras sedan i ett kylskåp över natt vid en temperatur om ungefär 40 °C. Följande dag avlägsnas blodkoaglet på spateln, och den återstående vätskan centrifugeras i 10 min vid 13 000 rpm. Supernatantvätska är sett gult. 20 % NaN3 (viktkoncentration) tillsätts i antiserumet för att få en slutlig koncentration om 0,02 % och målantiserumet. Det erhållna antiserumet är typiskt lagras före användning i fruset tillstånd vid en temperatur om -20°C eller utan NaN3 vid temperaturen -70°C. För att separera målantikropparna mot det C-terminala fragmentet av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor från antiserumet, är följande fastfasabsorptionsföljd lämplig: 10 ml av kaninantiserumet späds två gånger med 0,15 M NaCl, varpå 6,26 g Na2SO4 tillsätts, blandas och inkuberas i 12-16 timmar vid 4°C. Sedimentet avlägsnas genom centrifugering, späds i 10 ml fosfatbuffert och dialyseras mot samma buffert under en natt vid rumstemperatur. Efter att sedimentet har avlägsnats, appliceras fosfatbuffert.

Antikroppsfraktionen bestäms genom att mäta eluatets optiska densitet vid 280 nm. lösningen till en DEAE-cellulosakolonn balanserad med De isolerade obearbetade antikropparna renas genom användning av affinitetskromatografimetoden genom bindning av de erhållna antikropparna till ett C- terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor placerad på kromatografimediets olösliga matris, med efterföljande eluering med hjälp av koncentrerade vattenhaltiga saltlösningar.

Den resulterande buffertlösningen används som stamberedning för den homeopatiska spädningsprocessen som används för att framställa den aktiverade, potentierade formen av antikropparna. Den föredragna koncentrationen av stamberedningen av de med hjälp av antigen renade polyklonala kaninantikropparna till ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor är 0,5 till 5,0 mg/ml, företrädesvis 2,0 till 3,0 mg/ml.

De polyklonala antikropparna mot endotelt NO-syntas erhålls genom en liknande metodik genom användning av adjuvans. För att erhålla polyklonala antikroppar mot 29 endotelt NO-syntas är det möjligt att använda hela molekylen av bovint endotelt NO- syntas enligt den nedan beskrivna sekvensen som immunogen (antigen): SEQ ID NO: 15 Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Gly Gln Glu Pro Gly Pro Pro Cys 10 15 20 25 30 35 40 1 Gly 16 Pro 31 Thr 46 Leu 61 Trp 76 Gln 91 Val 106 Pro 121 Tyr 136 Arg 151 His 166 Arg 181 Gln 196 Thr 211 Leu 226 Gly 241 Tyr 256 Glu 271 Gly 286 Leu Ala Pro Thr Glu Gln Leu Ala Tyr Leu Leu Asn Val Tyr Arg Asp Arg Ile Arg Gly Ser His Arg Leu Asp Pro Glu Ser Gln Ala Phe Ile Ser Phe Gln Thr Phe Leu Pro Ala Pro 5 Gly 20 Ala 35 Pro 50 Pro 65 GLys er Gly Arg Gln Ser Glu Glu Pro Asp Cys Ala Arg Gln Glu Asp 80 Pro 95 Lys 110 Leu 125 Ile 140 Val 155 Ser 170 Arg 185 Ala 200 Asn 215 Ile 230 Ile 245 Asp 260 Leu 275 Val 290 Leu Pro Asp Glu Ile Cys Leu Leu Lys Glu Glu Cys Arg His Thr Trp Gly Glu His Gly Thr Thr Gln Ser Arg Ala Leu Val Asp Ile Val Asn GLys er Cys Leu Ile Pro Leu Pro Ser Pro Tyr Pro Thr Gln Ser Glu Val Gly Cys Lys Phe Ser Val Gln Leu 30 Gly Ser Pro Lys Asp Arg Arg Ala 10 Leu 25 Arg 40 Ala 55 Phe 70 Thr 85 Cys 100 Pro 115 Arg 130 GLys er Val Phe Arg Ser Tyr Pro Gln Arg His Leu 145 Ala 160 Gly 175 Ile 190 Ser 205 Ala 220 Gln 235 Leu 250 Gly 265 Gly 280 Leu 295 Cys Ala Pro Pro Leu Cys Ser Asp Gln Ser Ala Gln Ala Thr Arg Val Asp Trp Gln Gly Pro Asn Arg Cys Leu Pro Phe Ala Thr Lys Trp Gln Asn Ala Arg Pro Thr Ala Lys Ala Ser Val Ala Gln Pro Pro Lys Gln GLys er Gly Ile His Gly Gln Gly Glu Arg Pro Tyr Ala Pro Pro Pro Asn Glu Thr Ala Lys Met Gly Gly Ala Asn Gly Asp 15 Gly 30 Ala 45 Thr 60 Asn 75 Ser 90 Leu 105 Pro 120 Gln 135 Glu 150 Tyr 165 Trp 180 Leu 195 Phe 210 Asn 225 Arg 240 Gly 255 Val 270 Asn 285 Glu 300 10 15 20 25 30 35 40 45 Ala 301 Pro 316 Arg 331 Gly 346 Ser 361 Asn 376 Thr 391 Leu 406 Asp 421 Glu 436 Val 451 Met 466 Pro 481 Lys 496 Leu 511 Tyr 526 Gly 541 Asp 556 Val 571 Glu 586 Ser 601 Asn 616 Lys 631 Pro Leu Trp Gly Thr Ile Thr Ala His Gln Pro Val Trp Thr Met Ala Arg Glu Val Ser Ser Ser Glu Glu Tyr Leu Glu Leu Ser Val His Lys Pro Asn Lys Phe Gly Ser Leu Tyr Thr Phe Pro Val Lys Leu His Ala Glu Ile Glu Ser Leu Ala Ala Ile Tyr GLy Lys Thr Glu Phe Asp Ser Ala Ser Glu Phe 305 Pro 320 Leu 335 Phe 350 Gly 365 Asp 380 Leu 395 His 410 Ala 425 Arg 440 Ser 455 Ile 470 Ser 485 Glu 500 Leu 515 Thr 530 Arg 545 Val 560 Thr 575 Ala 590 Pro 605 Cys 620 Ser 635 Val Thr Pro Ser Thr Val Trp Ser Thr Gly Leu Leu Ala Ala Arg Ala Lys Phe Val Gly GLys er Leu Ala Val Met Gly Lys Val Phe Ala Glu Ser Ser Ser Thr Ala Ala Arg Ala Ser Gly Leu Gln Asp Asn Pro Glu Val Ala Asn Val Asp Gln Ser Cys Leu Pro Lys Asn Lys Ala Phe Leu Asn Met His Pro Thr 31 Pro Trp Ser Pro Leu Cys Lys Leu Phe Pro Thr Ala Gly Ala Arg Gln Asp Glu Gly Glu Lys Leu Asp Glu 310 Phe 325 Asn 340 Phe 355 Cys 370 Met 385 Ala 400 Ala 415 Met 430 Ala 445 Pro 460 Phe 475 Ala 490 Val 505 Val 510 Ser 535 Pro 550 His 565 Asp 580 Met 595 Ser 610 Val 625 Ser 640 Leu Ala Met Ser Asp Ala Lys Lys Asp Val Arg Gly Lys Lys Tyr Arg Glu Pro Ser Tyr Ser Ala Val Ala Leu Gly Pro Leu Val Val His Trp Phe Tyr Ile Ile Ala Ala Val Ala Pro Gly Lys Ser Gly Leu Leu Leu Trp His Asp Glu Thr Leu Ala His Gln Thr Ser Thr Gln Leu Leu Glu Pro Ile Trp Ala Glu Gly Glu Tyr Arg Thr Ile Ile Asp Trp Gln Pro Arg Ala Ile Gln Cys Val Asn Tyr Arg Leu Val 315 Leu 330 Ile 345 Met 360 Tyr 375 Arg 390 Asn 405 Val 420 Asn 435 Ile 450 Glu 465 Asp 480 Lys 495 Ser 510 Leu 525 Leu 540 Met 555 Leu 570 Gly 585 Asn 600 Phe 615 Arg 630 Gly 645 10 15 20 25 30 35 40 45 Thr 646 His 661 Leu 676 Cys 691 Gln 706 Ala 721 Arg 736 Gly 751 Leu 766 Ile 781 Gln 796 Leu 811 Thr 826 Gly 841 Thr 856 Pro 871 Pro 886 Arg 901 Val 916 Leu 931 Ser 946 Val 961 Gly 976 Leu Phe Gly Gly Ala Ala Tyr Leu Ser Leu Pro Val Glu Pro Leu Ser Ser Tyr Leu Thr Ala Leu Val Arg Cys Gly Gln Ser Gln Arg Ile Val Val Gly Glu Ser Pro Arg Pro Glu Glu Glu Gln Pro Ala Cys Phe Ala Glu Glu Cys Asp Leu His Glu Asp Ala Val Pro Gln Arg Gln Glu Gln Leu Asn Tyr Ser Cys 650 Phe 665 Arg 680 Glu 695 Glu 710 Ile 725 Ser 740 Val 755 Asn 770 Leu 785 His 800 Leu 815 Ala 830 Ser 845 Ala 860 Leu 875 Gln 890 Trp 905 Phe 920 Pro 935 Ala 950 Arg 965 Thr 980 Val Ala Leu Ala Thr Phe Thr His Leu Asp Ile Leu Val Trp Leu Leu Glu Lys Pro Leu His Thr Trp Phe Arg Leu Phe Phe Ser Gln Arg Gln Thr Gly Ser Glu Val Thr Arg Leu Trp Ser Leu Pro Gln Leu Gly Ala Gln Arg Cys Pro Ala Arg Ser Ala Ile Arg Gln Arg Phe Leu Glu Phe Val Gln Gly Asp Ser 32 Leu Val Leu Gly Val Lys Glu Lys Ser Gly Cys Val Leu Asp Phe Leu Thr Arg Ala Pro Glu Gly Gln GLy 655 Asp 670 Gly 685 Trp 700 Gly 715 Arg 730 Gly 745 Met 760 Lys 775 Gln 790 Pro 805 Glu 820 Glu 835 Pro 850 Leu 865 Ser 880 Leu 895 Cys 910 Leu 925 Arg 940 Val 955 Leu 970 Leu 985 Ser Thr Gln Ala Glu Ser Leu Phe Ser Glu Pro Asp Lys Arg Asp Thr Ser Pro Pro Tyr His Gly Lys Arg Arg Gly Lys Glu Trp Gln Gln Thr Gly Asn Pro Ala Leu Asp Ala Ala Lys Leu Ala Arg Leu Arg Pro GLys er Leu Ile Leu Gln Thr Ala Tyr Leu Pro Thr Pro Thr Ala Asp Leu Pro Ser Thr Leu Gly Tyr Glu Glu Ala Lys Arg Leu Thr Ala Gln Pro Pro Pro Pro Ser Glu Pro Leu Leu Val Val His Asp Pro 660 Glu 675 Leu 690 Phe 705 Ala 720 Gln 735 Pro 750 Val 765 Thr 780 Tyr 795 Gly 810 Pro 825 Gly 840 Cys 855 Pro 870 Glu 885 Arg 900 Glu 915 Leu 930 Ser 945 Ala 960 Tyr 975 Pro 990 10 15 20 25 30 35 Val Pro 991 Asp Pro 1006 Ala Pro 1021 Ser Lys 1036 Arg Cys 1051 Ala Gln 1066 Arg Glu 1081 Thr Glu 1096 Gly His 1111 Leu Gln 1126 Leu Asp 1141 Arg Tyr 1156 Val Thr 1171 His Leu 1186 Asp Thr 1201 Polyklonala antikroppar mot endotelt NO-syntas kan erhållas genom användning av Cys Tyr Phe Gly Ser Glu Pro Leu Met Thr Glu His Ser Arg Pro Phe Ile 995 Val Pro 1010 Arg Gly 1025 Leu Gln 1040 Gln Leu 1055 Arg Gly 1070 Asp Ser 1085 Ala Ala 1100 Phe Val 1115 Val Gln 1130 Ala Gly 1145 Glu Asp 1160 Arg Ile 1175 Gly Ala 1190 Gly Pro 1205 Arg Cys Phe Pro Asp Val Pro Glu Cys Arg Asp Ile Arg Val Gly Ile Trp Ala His Phe Lys Val Gly Ile Val Phe Thr Pro Ala Leu Gln Pro Leu Gly Thr His Asp Leu Ile Gly Gln Trp Pro Ser Phe 1000 Val Gly Pro 1015 Glu Arg 1030 Met Thr 1045 Tyr Arg 1060 Arg Val 1075 Tyr Val 1090 Arg Val 1105 Val Thr 1120 Ala Thr 1135 Gly Val 1150 Leu Thr 1165 Ser Phe 1180 Ala Phe 1195 Leu Leu Asp Leu Gln Leu Met Glu Leu Leu Ser Asp Arg Gly His Val Glu Thr Asp Cys Ala Gly Arg Leu Pro Leu Thr Asp Phe Val Ala Ile Leu Thr Asp Asp Thr Gln Pro hela molekylen av mänskligt endotelt NO-syntas enligt följande sekvens: SEQ ID NO:16 Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Ala 1 5 Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu 16 20 Pro Ala Thr Pro Ala Pro Glu Pro 33 Gln Glu 10 Gly Leu 25 Ser Arg Pro Pro 1005 Gly Ile 1020 Ile Glu 1035 Gly Cys 1050 Gln Asp 1065 Phe Ser 1080 Leu Arg 1095 Glu Arg 1110 Ser Val 1125 Met Glu 1140 Gln Gln 1155 Gln Glu 1170 Glu Arg 1185 Gly Pro 1200 Pro Gly Pro Pro Cys 15 Cys Gly Lys Gln Gly 30 Ala Pro Ala Ser Leu 10 15 20 25 31 Leu 46 Gln 61 Val 76 Asp 91 Pro 106 Glu 121 Ser 136 Gln 151 Arg 166 Ala 181 Phe 196 Ile 211 Pro Pro Pro Pro GLys er Pro Gly Lys Gln Leu Ile Ser Glu Val Glu Ser Pro Arg Ala Asp Cys Asn Ala Glu Ile Cys Leu Leu Lys Glu Glu Cys Arg His 35 Pro Glu 50 Gly Pro 65 Thr Tyr 80 Thr Pro 95 Gln Gly 110 Ser Gln 125 Ser 140 Ala Glu 155 Leu Val 170 Val Gly 185 Asp Cys 200 Ile Lys 215 His Lys Asp Arg Arg Ala Ser Phe Thr Arg Pro Arg GLys er Val Phe Arg Arg Tyr Ala Gly Ile Ser Ala 34 Pro Pro Leu Cys Ser Asp Gln Ala Ala Gln Ala Thr 40 Pro 55 Arg 70 Ser 85 Leu 100 Pro 115 Phe 130 Ala 145 Thr 160 Lys 175 Trp 190 Gln 205 Asn 220 Ser Val Ala Ser Lys Gln GLys er Gly Ile His Gly Gln Gly Glu Arg Pro Asn Glu Thr Ala Lys Met Gly Pro Asn Ala Leu Pro Gln Gln Tyr Trp Leu Phe Asn Leu Trp Gln Val Ala Tyr Arg Gln Arg Gln Thr Leu 45 Thr 60 Glu 75 Gln 90 Phe 105 Pro 120 Tyr 135 Leu 150 Leu 165 Asn 180 Val 195 Tyr 210 Arg 225 10 15 20 25 Ser 226 Phe 241 Gln 256 Thr 271 Phe 286 Glu 301 Glu 316 Tyr 331 Leu 346 Glu 361 Leu 376 Ser 391 Val Ala Arg Gln Glu Asp Leu His Ala Glu Ile Glu Ser LSU Ile Ile Asp Leu Val Phe Pro Leu Phe Gly Asp Leu His Thr Trp GLy Cys LSU Leu Thr Pro Pro Thr Val Trp Ser Val 230 Asn 245 Ser 260 Ile 275 Pro 290 Leu 305 Leu 320 Ala 335 Ala 350 Arg 365 Ala 380 Lys 395 Tyr Phe Ser Val Gln LSU Pro Glu Val Ala Asn Val Asp Gln Pro Gln Arg His LSU Pro Trp Ser Pro Leu Cys Lys LSU Gln Leu Gly Gly LSU Glu Phe Asn Phe Cys Met Ala Ala 35 Arg Val Asp Trp Gln Leu Ala Met Ser Asp Asp Ala Lys Cys 235 Arg 250 Pro 265 Thr 280 Ala 295 Val 310 Ala 325 Leu 340 Gly 355 Pro 370 Leu 385 Val 400 Val Pro Tyr Ala Pro Pro Leu Leu Leu Trp His Asp Glu Thr Gly Ala Asn Gly Asp Glu Gly Glu Tyr Arg Thr Ile Ile Arg Gly Val Asn Glu Val Leu Ile Met Tyr Arg Asn Val Gly Tyr Glu Gly Pro Pro Arg Gly Ser Asn Thr Val Asp Asp 240 Arg 255 Ile 270 Arg 285 Pro 300 Leu 315 Trp 330 Gly 345 Thr 360 Ile 375 Thr 390 Ala 405 His 10 15 20 25 406 His 421 Lys 436 Pro 451 Asn 466 Lys 481 Phe 496 Gly 511 Ser 526 Leu 541 Tyr 556 Thr 571 Phe 586 Ala Ala Ile Tyr Gly Lys Thr Glu Phe Asp Ser Ala Ala Arg Ser Phe Ser Glu Val Thr Arg Val Thr Ala 410 Thr Ala 425 Gly Gly 440 GLys er 455 Leu Ser 470 Ala Ala 485 Val Ala 500 Met Ala 515 Gly Arg 530 Lys Ala 545 Val Ser 560 Phe Gly 575 Ala Leu 590 Ser Cys Leu Pro Lys Asn Lys Ala Phe Leu Asn Met Phe Pro Thr Ala Gly Ala Arg Gln Asp Glu Gly Glu Met Ala Pro Phe Thr Val Val Ser Pro His Asp Met 36 Lys Asp Val Arg Gly Lys Lys Tyr Arg Glu Pro Ser 415 His 430 Trp 445 Phe 460 Tyr 475 Ile 490 Ile 505 Ala 510 Ala 535 Val 550 Thr 565 Pro 580 Gly 595 Leu Ala His Gln Thr Ser Thr Gln Leu Leu Glu Pro Glu Trp Gln Pro Ala Ile Gln Cys Val Asn Tyr Asn Ile Glu Asp Lys Ser Leu Leu Met Leu Gly Asn Glu Val Met Pro Lys Leu Tyr Gly Asp Val Glu Ser 420 Gln 435 Pro 450 Val 465 480 Thr 495 Met 510 Gly 525 Arg 540 Glu 555 Val 570 Ser 585 Ser 600 10 15 20 25 Pro 601 Ile 616 Lys 631 Arg 646 Cys 661 Gly 676 Gln 691 Ala 706 Arg 721 Arg 736 Ile 751 Val 766 Val Arg Ser Glu Phe Ala Glu Glu Cys Asp Leu His Glu Arg Pro Cys Ser Cys Phe Arg Glu Glu Ile Ser Val Asn LSU Glu Ser Ser Val Ala Leu Ala Thr Phe Ala His Leu Asp Gln 605 Asp 620 Asn 635 Phe 650 Arg 665 Leu 680 Phe 695 Phe 710 Ser 725 Gln 740 Arg 755 Gln 770 Thr His Pro Thr Gly Ala Gln Arg Cys Pro Ala Arg Ser Gly Lys Leu Asp Leu Val Leu Gly Val Lys Glu Lys Ser Gly Ser Val Ser Tyr Ser Ala GLys er Asp Gly Trp Gly Arg Gly Met Lys Gln 37 Thr Gln Ala Glu Ser Leu Phe Ser Glu Lys 610 Ser 625 Gly 640 655 Arg 670 Gly 685 Gln 700 Asp 715 Trp 730 Gln 745 Gln 760 Thr 775 Gly Ile Trp Ala Ala LSU Asp Ala Ala Lys Leu Ala Arg LSU Arg Arg Leu Tyr Glu Glu Ala Lys Arg Leu Thr Ala Gln Phe Arg Gly Pro Glu Leu Phe Ala Gln Pro Ile Thr Tyr Asn Lys Thr His LSU Cys Gln Ala Arg Gly Arg Ile Gln Ser 615 Arg 630 Leu 645 Phe 660 Gly 675 Gly 690 Ala 705 Ala 720 Tyr 735 Leu 750 Ser 765 Leu 780 Pro 10 15 20 25 781 Gly 796 Glu 811 Pro 826 Pro 841 856 Pro 871 Glu 886 Glu 901 Glu 916 Gln 931 Pro 946 Ala 961 Asp Ala Val Pro Gln Gln Gln Glu Gln Leu Ser Tyr His LSU Ala Gly Ala Leu Gln Trp Phe Pro Thr Arg Ile LSU Val Trp Leu Leu Glu Lys Pro Leu His Thr 785 Gly 800 Ser 815 Glu 830 Val 845 Thr 860 Arg 875 Leu 890 Trp 905 Ser 920 Leu 935 Pro 950 Gln 965 Val Arg Gln Arg Phe Leu Glu Phe Val Gln Gly Asp Cys Val Leu Asp Phe Leu Ala Arg Ala Pro Glu Gly Pro Glu Glu Pro Leu Ser Leu Cys Leu Arg Ile Leu 38 Pro Asp Lys Arg Asp Thr Ser Pro Pro Tyr His Gly 790 Asn 805 Pro 820 Gly 835 Leu 850 Ile 865 Leu 880 Gln 895 Thr 910 Ala 925 Tyr 940 Leu 955 Pro 970 Arg Pro Ser Pro Thr Ala Asp Leu Pro Ser Thr Leu Pro Ala Pro Pro Ser Glu Pro Leu Leu Val Val His Gly Pro Gly Cys Pro Glu Arg Glu Leu Ser Ala Tyr Leu Thr Gly Thr Pro Pro Arg Val Leu Ser Val Gly 795 Val 810 Glu 825 Pro 840 Leu 855 Ser 870 Arg 885 Tyr 900 Leu 915 Thr 930 Ala 945 Leu 960 Val 975 10 15 20 25 Cys Ser 976 Cys Phe 991 Ser Leu 1006 Phe Arg 1021 Gly Leu 1036 Ser Gln 1051 Gln Arg 1066 Pro Asp 1081 Leu Ala 1096 Met Phe 1111 Thr Val 1126 Glu Ala 1141 His Glu Thr Ile Pro Gly Gln Leu Gly Asn Ala Val Gln Gly Asp Trp Leu 980 Arg Gly 995 Cys Ile 1010 Phe Trp 1025 Pro Thr 1040 Asp His 1055 Val Phe 1070 Pro Lys 1085 Glu Val 1100 Cys Gly 1115 Arg Ile 1130 Asp Val 1145 Ile Phe Ser Ala Leu Gln Pro Leu Gly Thr His Asp Leu Ile Gly Gln Pro Val Glu Met Tyr Arg Tyr Arg Val Ala Gly LSU Leu Ser Gly Arg Thr Arg Val Val Val Thr Thr Val Thr 39 Lys Pro Gly 985 Phe Arg Leu 1000 Pro Gly Thr 1015 Leu His Asp 1030 Leu Val Phe 1045 Asp Glu Val 1060 Leu Thr Ala 1075 Gln Asp Ile 1090 Leu Cys Leu 1105 Met Ala Thr 1120 Glu Gly Asp 1135 Leu Arg Asp 1150 Leu Arg Thr Asp Pro Gly Ile Gly Gln Phe Leu Glu Asn Met Gln Gln Pro Pro Ile Glu Cys Asn Ser Arg Arg Val Glu Gln Glu Val Pro 990 Asp Pro 1005 Ala Pro 1020 Ser Lys 1035 Arg Cys 1050 Ala Gln 1065 Arg Glu 1080 Thr Glu 1095 Gly His 1110 Leu Gln 1125 Leu Asp 1140 Arg Tyr 1155 Val Thr 10 15 20 25 1156 1160 1165 1170 Ser Arg Ile Arg Thr Gln Ser Phe Ser Leu Gln Glu Arg Gln Leu 1171 1175 1180 1185 Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Ser Asp Thr 1186 1190 1195 1200 Asn Ser Pro 1201 1203 Följande sekvenser av det endotela NO-syntasfragmentet öven/ägs särskilt som lämpliga antigen: SEQ ID NO: 17 Pro Trp Ala Phe 1192 1195 SEQ ID NO: 18 Gly Ala Val Pro 1189 1192 SEQ ID NO: 19 Arg 1185 His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 1195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205 SEQ ID NO: 20 Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 40 10 15 20 25 30 11941195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205 SEQ ID NO: 21 His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp 1186 1190 11951196 SEQ ID NO: 22 His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 1195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205 Den aktiverade, potentierade formen av varje komponent i kombinationen kan framställas från en stamberedning genom homeopatisk potentiering, företrädesvis genom användning av metoden för proportionell koncentrationsminskning genom seriespädning av 1 del av varje föregående lösning (utgående ifrån stamberedningen) i 9 delar (för decimal spädning) eller i 99 delar (för centesimal spädning) eller i 999 delar (för tusendels spädning) av ett neutralt lösningsmedel, förenat med yttre påverkan. Den externa påverkan innefattar företrädesvis ett flertal vertikala skakningar (dynamisering) av varje spädning. Företrädesvis används separata behållare för varje efterföljande spädning upp till den erfordrade potensnivån eller spädningsfaktorn. Denna metod är vedertagen inom homeopati. Se t ex V. Schwabe "Homeopathic medicines", l\/I., 1967, s. 14-29, vilken inbegrips i denna text genom referens, för det angivna syftet.

Till exempel, för att framställa en 12-centesimal spädning (betecknad C12), späds en del av stamberedningen av antikroppar mot C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor med koncentrationen 3,0 mg/ml i 99 delar av neutralt vatten- eller vatten-alkohollösningsmedel (företrädesvis 15 % etylalkohol) och skakas sedan vertikalt många gånger (10 gånger eller mer) för att skapa den första centesimala spädningen (betecknad C1). Den andra centesimala 41 10 15 20 25 30 spädningen (C2) framställs från den första centesimala spädningen C1. Denna procedur upprepas 11 gånger för att framställa den 12:e centesimala spädningen C12. Därmed representerar den 12:e centesimala spädningen en lösning erhållen genom 12 seriespädningar av en del stamberedning av antikroppar mot C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor med koncentrationen 3,0 mg/ml i 99 delar neutralt lösningsmedel i olika behållare, vilket motsvarar den centesimala homeopatiska spädningen C12. Liknande procedurer med den relevanta spädningsfaktorn utförs för att erhålla spädningar C30 och C200. De mellanliggande spädningarna kan testas i en önskad biologisk modell för att kontrollera aktivitet. De föredragna aktiverade, potentierade formerna av båda antikropparna innefattande kombinationen enligt uppfinningen är en blandning av C12-, C30- spädningar (huvudsakligen centesimala) av den aktiva substansen såsom biologiskt och C200-spädningar. När blandningen av olika homeopatiska aktiv flytande komponent används, framställs varje komponent i kompositionen (t ex C12, C30, C200) separat enligt den ovan beskrivna proceduren till dess att den nästsista spädningen erhålls (t ex till C11, C29 respektive C199), och därefter tillsätts en del av varje komponent i en behållare enligt blandningskompositionen och blandas med den erfordrade mängden lösningsmedel (t ex med 97 delar för centesimal spädning).

Det är möjligt att använda den aktiva substansen som blandning av olika homeopatiska spädningar, t ex decimal och/eller centesimal (D20, C30, C100 eller C12, C30, C50 etc.), varvid dess effektivitet bestäms experimentellt genom att testa spädningen i en lämplig biologisk modell, t ex i modeller beskrivna i exemplen i denna text.

Under skakandet ersättas av yttre påverkan av ultraljud, elekotromagnetiskt fält eller någon potentieringen och koncentrationsminskningen kan det vertikala annan liknande yttre påverkansprocedur vedertagen inom det homeopatiska området.

Den farmaceutiska kompositionen enligt uppfinningen kan företrädesvis vara i form av en vätska eller i endosberedningsform. Den farmaceutiska kompositionens föredragna vätskeform är en blandning, företrädesvis i ett 1:1-förhållande mellan den 42 10 15 20 25 30 aktiverade, potentierade formen av antikroppar mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor och den aktiverade, potentierade formen av antikroppar mot endotelt NO-syntas. Den föredragna flytande bäraren är vatten eller en vatten-etylalkoholblandning.

Den fasta endosberedningsformen av den farmaceutiska kompositionen enligt uppfinningen kan framställas genom användning av impregnering av en fast, farmaceutiskt godtagbar bärare med blandningen av den aktiverade, potentierade formen av aktiva komponenter blandade i vatten- eller vatten-alkohollösningar, huvudsakligen i 1:1-förhå|lande och använd i flytande beredningsform. Alternativt kan bäraren impregneras med varje erforderlig spädning i följd. Båda ordningsföljderna är godtagbara vid impregnering.

Företrädesvis framställs den fasta endosberedningsformen av den farmaceutiska kompositionen från granuler av den farmaceutiskt godtagbara bäraren vilka tidigare mättats med vatten- eller vatten-alkoholspädningarna av den aktiverade, potentierade formen av antikroppar mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinrecptor och den aktiverade, potentierade formen av antikroppar mot endotelt NO- syntas. Den fasta beredningsformen kan vara i vilken form som helst som är känd inom det farmaceutiska området, inkluderande en tablett, en kapsel, en pastill, och andra.

Som inaktiva farmaceutiska ingredienser kan man använda glukos, sukros, maltos, stärkelse, isomaltos, isomalt och andra mono- oligo- och polysackarider använda inom framställning av läkemedel såväl som teknologiska blandningar av de ovan nämnda inaktiva farmaceutiska ingredienserna med andra farmaceutiskt godtagbara hjälpämnen, till exempel isomalt, crospovidone, natriumcyklamat, natriumsackarin, vattenfri sönderdelare, bindare, och citronsyra etc.), inkluderande smörjmedel, färgämnen. De föredragna bärarna är laktos och isomalt. Den farmaceutiska beredningsformen kan vidare inkludera standardmässiga farmaceutiska hjälpämnen, till exempel mikrokristallin cellulosa och magnesiumstearat.

För att framställa den fasta orala formen impregneras 100-300 pm laktosgranuler med vatten- eller vatten-alkohollösningar av den aktiverade, potentierade formen av antikroppar mot histamin, aktiverad. potentierad form av antikroppar mot C-terminalt 43 10 15 20 25 30 fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor och den aktiverade, potentierade formen av antikroppar mot endotelt NO-syntas i ett förhållande om 1 kg av antikroppslösning till 5 eller 10 kg av laktos (1:5 - 1:10). För att åstadkomma impregnering utsätts laktosgranulerna för satureringsirrigation i den kokande virvelbädden i en virvelbäddsanläggning (t ex "Hüttlin Pilotlab" av Hüttlin GmbH) med efterföljande torkning via upphettat luftflöde vid en temperatur under 40°C. Den uppskattade kvantiteten av de torkade granulerna (10 till 34 viktdelar) mättade med den aktiverade, potentierade formen av antikroppar placeras i mixern, och mixas med 25 till 45 viktdelar av icke-mättad ren laktos (som används för att minska kostnader och underlätta och skynda på den tekniska processen utan att minska behandlingseffektiviteten), tillsammans med 0,1 till 1 viktdelar magnesiumstearat, och 3 till 10 viktdelar mikrokristallin cellulosa. Den erhållna tablettmassan blandas jämnt och tabletter bildas genom direkt torrpressning (t ex i en Korsch - XL 400-tablettpress) för att forma runda piller om 150 till 500 mg, företrädesvis 300 mg. Efter tablettbildningen erhålls piller om 300 mg vilka är mättade med vatten-alkohollösning (3,0-6,0 mg/piller) av kombinationen av den aktiverade, potentierade formen av antikroppar mot C- terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor och den aktiverade, potentierade formen av antikroppar mot endotelt NO-syntas. Varje komponent i kombinationen som används för att impregnera bäraren föreligger i form av en blandning av centesimala homeopatiska spädningar C12, C30 och C50 eller en blandning av centesimala spädningar C12, C30 och C200. Även om uppfinningen inte begränsas till någon specifik teori förmodas det att den aktiverade, potentierade formen av antikropparna beskriven i denna text inte innehåller molekylformen av antikroppen i en tillräcklig mängd för att ha biologisk aktivitet hänförbar till den molekylformen. Den biologiska aktiviteten hos kombinationen enligt uppfinningen har rikligt visats i de bifogade exemplen.

Den farmaceutiska kompositionen enligt uppfinningen kan användas för administrering till patienter som har diabetes av vilken typ som helst.

Nämnda farmaceutiska komposition kan användas vid behandling av Diabetes Mellitus som monoterapi av hyperglykemi och i sammansatt terapi som ett tillägg till 44 10 15 20 25 30 insulinersättningsterapi, och/eller med orala hypoglykemiska medel såsom biguanider glipizide, glimepiride); tiazolidindioner (rosiglitazone); alfa-glukosidasinhibitorer (acarbose) etc; (metformin); sulfonylureider (glybenclamide, gliclazide, glicvidone, såväl som tillägg till åtföljande terapi av Diabetes Mellitus för att förhindra komplikationer av diabetes.

Såsom visas i de bifogade exemplen, förbättrar administrering av kombinationen enligt uppfinningen till sådana patienter deras blodglukosnivåer.

EXEMPEL Exempel 1.

De två experimentella studierna undersökte effekterna av antikroppar mot det C- terminala fragmentet av insulinreceptor-ß-subenheten, affinitetsrenade med hjälp av antigen, i ultralåg dos, erhållna genom extrem spädning av stamberedningen 10012, 1oo3°, 1oo2°° (ULD anti-lR), endotelt affinitetsrenade med hjälp av antigen, i ultralåg dos, erhållna genom hyperspädning av stamberedningen 10012, 1oo3°, 1oo2°° gånger (ULD anti-ULD anti-eNos), såväl som kombinationen av ultralåga doser av antikroppar mot det C-terminala fragmentet av gånger antikroppar mot NO-syntas, insulinreceptor-ß-subenheten och ultralåg dos av antikroppar mot endotelt NO-syntas (ULD anti-IR + ULD anti-eNOS).

Enligt Världshälsoorganisationens (WHO:s) kriterier kännetecknas diabetes mellitus (typ I och ll) av en ökning i blodglukosnivån (hyperglykemi) och av glukostoleransstörning. Den senare kan orsakas av onormal insulinutsöndring och/eller av minskad insulinsensitivitet i perifera vävnader. Glukostoleranstestet, baserat på dynamisk utvärdering av kroppsvävnaders förmåga att utnyttja glukos, är en känslig metod för att utvärdera störningari glukostolerans i kroppsvävnad.

Studie 1.

I studien användes 150 Wistar hanråttor (vikt vid studiens början 250-300 g, alder 3,5-4 månader). 10 råttor behölls oskadade. Resten injicerades intravenöst med 45 10 15 20 25 streptozotocin i en dos om 50 mg/kg (experimentell modell av diabetes mellitus). 72 timmar efter injektion av streptozotocin valde man ut råttor med en blodplasmaglukosnivå inte lägre än 12mmo|/|, delade dem i 7 grupper (20 råttor i varje), vilka under 21 dagar fick destillerat vatten (5 ml/kg/dag, en gång dagligen intragastriskt), insulin® (8 enheter/kg/dag, subkutant), Rosiglitazone® (8 mg/kg/dag, två gånger dagligen intragastriskt), ULD anti-IR (2.5 ml/kg/dag i en volym om 5 ml/kg/dag, en gång dagligen intragastriskt), ULD anti-IR + ULD anti-eNOS (5 ml/kg/dag, en gång dagligen intragastriskt), och även Rosiglitazone® och insulin® tillsammans eller ULD anti-IR + ULD anti-eNOS och insulin®, i enlighet med regimer överensstämmande med varje preparat (som ovan beskrivet). Oskadade råttor fick samma volym destillerat vatten. På dag 7, 14 och 21 av injektion av preparat i råttor mättes fastande blodplasmaglukosnivåer med enzymatisk metod (glukosoxidasmetod) med användning av "glukos FKD"-kit (Ryssland).

Oralt glukostoleranstest (OGTT) utfördes på dag 14 av studien (dag 14 av administrering av preparat) i enlighet med standardmetoden (Du Vigneaud and Karr, 1925). Råttorna hölls svältande på vatten under 18 timmar. 60 min före testet fick de för sista gången testsubstanserna. Oskadade råttor fick samma volym destillerat vatten.

Glukos administrerades per os 50 % vikt/vikt vatten-glukoslösning (1 g/kg av råttans vikt). Serumglukos i blodprov från svansvenen mättes genom användning av "Glukos FKD"-kit (OOO "Pharamaceutica| and clinical diagnostics, Ryssland, wvvw.fkd.ru) vid 0, 30, 60, 90, 120 min. Medelvärdet för area under kurvan (AUC)-koncentrationen av blodglukos över tid beräknades. injektion av streptozotocin ledde till en påtaglig ökning av blodplasmaglukos i råttor i jämförelse med oskadade djur (18 mmol/l mot 3.5 mmol/l, p<0.05). I ULD anti-IR- gruppen var glukosnivån på dag 7, 14 och 21 av preparatinjektion lägre än i kontrollgruppen med i genomsnitt 22-28 %, men skillnaderna nådde emellertid inte en statistiskt signifikant nivå. Kombinationen av ULD anti-IR och anti-eNOS var mer effektiv. Minskningen i glukosnivå på dag 14 och 21 av experimentet var 47 % respektive 42 % (p<0.05 mot kontroll). Referenspreparatet, Rosiglitazone, minskade 46 10 15 20 25 också glukosnivån på dag 14 och 21 av experimentet. Effekten nådde ändå statistisk signifikans först på dag 14 av experimentet (36 %, p<0.05 mot kontroll).

Insulin injicerad i form av halva den effektiva dosen (vald i den preliminära studien) sänkte glukosnivån mest effektivt under alla observationsperioderna (ned till den oskadade kontrollens nivå). (Figur 1). Det bör tas med i beräkningen att korttidsverkande insulin användes i studien och att blodplasmaglukos mättes 1 timme efter dess injektion, vilket även påverkade effekten av den halva insulindosen på blodglukosnivån. Mot denna bakgrund var det inte möjligt att fullt ut bestämma vad effekten är av den kombinerade användningen av insulin och rosiglitazone eller insulin och sammansatt anti-IR + anti-eNOS.

Glukostoleransstörning (minskning av kroppens glukosanvändning) är en av de viktigaste indikatorerna vid diagnos och behandling av diabetes mellitus. I oskadade djur, i det orala glukostoleranstestet (dag 14 av preparatinjektion) höjde sammansatt preparat av ULD anti-IR + ULD anti-eNOS och insulin glukostoleransen mest effektivt när de administrerades ensamt. Rosiglitazone minskade också area under koncentration över tid-kurvan (ökad glukostolerans). Dess effektivitet var dock inte statistiskt signifikantjämfört med kontrollgruppen (Figur 2).

Studie 2.

I studien användes 36 Goto-Kakizaki-hanråttor (vikt vid studiens början 250-280 g, ålder 10-12 veckor). Råttor av denna linje känntecknas av spontan utveckling av icke-insulinberoende diabetes. Djuren delades in i 3 grupper (12 råttor i varje) och fick antingen destillerat vatten (5 ml/kg en gång dagligen intragastriskt), eller ULD anti-IR (2.5 ml/kg en gång dagligen intragastriskt), eller ULD anti-IR + ULD anti-eNOS (5 ml/kg, en gång dagligen intragastriskt) i 28 dagar. Blodplasmaglukosnivå mättes med hjälp av en glukosanalysator (Beckman, Fullerton, California, USA) innan injektion av preparat påbörjades och på dag 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 av preparatinjektion. På dag 28 utfördes ett glukostoleranstest (glukos p.o., 1 g/kg). 47 10 15 20 25 30 lnjektion av ULD anti-IR ledde till blodplasmaglukosnivå i råttorna. Användningen av sammansatt ULD anti-IR + ULD anti- eNOS var dock mer effektiv (p<0,001 mot kontroll) (Figur 3).

Resultaten bekräftades av data från glukostoleranstest utförda på dag 28 av preparatinjektion (Figur 4). lnjektion av ULD anti-IR glukostolerans (statistiskt signifikant minskning om 44 % AUC mot kontroll). Samtidigt var minskningen av denna parameter (AUC) orsakad av injektion av sammansatt ULD anti-IR + ULD anti-eNOS 62 % och den var statistiskt signifikant jämfört med kontroll (p<0,05). en signifikant (p<0,05) minskning i ledde till en ökning av Exempel 2.

En klinisk studie gjordes på människor avseende kombinationen av ultralåga doser av antikroppar mot C-terminalt fragment av betasubenheten av insulinreceptorn (ULD anti-IR) och ultralåga doser av antikroppar mot endotelt NO-syntas (ULD anti- eNOS), vardera i form av en vatten-alkoholblandning av homeopatiska spädningar C12, C30 och C200 impregnerade på isomalt.

En oblindad ickekomparativ studie av effektiviteten och säkerheten hos ULD anti- IR + ULD anti-eNOS i patienter med typ 1-diabetes mellitus (DM) innefattade patienter med en DM typ 1-diagnos av mild till måttlig svårighetsgrad utan tecken på allvarlig makro- och mikrovaskulär patologi. Efter att ha fått patienternas informerade samtycke till deltagande i den kliniska studien utfördes en inledande undersökning med avsikt att bestämma om patienten uppfyllde kriterierna för medtagande/uteslutande. En 2-veckors "ursköljningsperiod" tillhandahölls innan studien började, under vilken en undersökning av patienterna genomfördes (klagomål, fastande glykemi, glykerat hemoglobin, daglig glykemisk profil och lipoproteinogram också och effektivitet och säkerhet hos aktuell behandling bedömdes). I en 12-veckorsstudie mättes de huvudsakliga ändpunkterna under "ursköljnings"-veckorna, och därefter i vecka 6 och 12 av behandlingen. I 4 patienter hade kontinuerlig övervakning av glykemisk nivå utförts med hjälp av CGMS- systemet under "ursköljnings"-perioden och i slutet av studien. Systemet för kontinuerlig glukosövervakning (CGMS) gör det möjligt att kontrollera glukosnivån under tre dagar. 48 10 15 20 25 Testresultaten visar hur glukosnivån ändras över 3 dagar, beroende på insulinterapi och livsstil. Dessa data hjälper till att urskilja perioder av hög och låg glukosnivå beroende av kost, intag av medicin eller fysisk belastning. Systemet visar i grafisk form minimumglukosnivå om 2,2 mmol/I, maximumvärden upp till 22,2 mmol/I, och även medelvärde för daglig glukosnivå. med DM typ 1, mild till dekompensationsstadiet, fick standardmässig insulinterapi före medtagande och under studien: 1. Långtidsverkande insulin (Protaphane®, Lantus®) i snittdoser från 12 till 26 U/dag. 2. Korttidsverkande insulin (Apidra®, Novorapid®, Aktropid®) i snittdoser: Patienter måttlig svårighetsgrad, i - morgon 8-10 U/dag - lunch 8-12 U/dag - kvällsmat 8-13 U/dag.

Efter bekräftelse på patientens förmåga att delta, inkluderades patienten i studien och fick, som ett tillägg till standardterapin för DM typ 1, ULD anti-IR + ULD anti- eNOS-preparatet. Administreringsregimen berodde på svårighetsgrad och kompensation hos DM typ 1. Patienter inkluderade i studien fick terapi i form av ULD anti-IR + ULD anti-eNOS-preparat i olika doseringar: 1. Fyra patienter- 1 tablett 4 gånger per dag kl 8:00, 12:00, 18:00, 22:00. 2. Två patienter- 1 tablett 2 gånger per dag kl 8:00, 18:00.

Vecka 3 och 8 kontrollerades också den dagliga glykemiska profilen (8-punkters telefon (telefon-"besök"). undersökningar gjordes varje vecka. Totalt hade patienterna observerats under 14 mätning) och patienter kontaktades per Kliniska veckon Sex patienter inkluderades i studien, varav fem slutförde i enlighet med studieprotokollet. Utvärdering av glykemi utfördes genom åtta-punkters daglig glukosprofil vid en baslinje och efter 3, 6 och 12 veckors behandling. Nivån av glykerat hemoglobin bestämdes vid en baslinje och efter 12 veckors terapi. 49 10 15 20 25 Alla DM typ 1-patienter inkluderade i studien noterade att daglig glykemi tenderade att falla efter 6 veckors terapi med de studerade läkemedlen. Enligt den åtta- punkters dagliga glukosprofilen, registrerades en snittminskning i glykemi om 20 % i patienter med DM typ 1. Efter 12 veckors terapi var glykerat hemoglobin i medel 10-15 % lägre ijämförelse med baslinjevärdet.

Enligt resultaten av kontinuerlig glukosövervakning med CGMS-systemet i alla patienter resulterade S-månadersterapin med ULD anti-IR + ULD anti-eNOS i en minskning av medelvärdet av daglig glykemi och minskade svängningari minimum- och maximumglykemi om 15-20 % av baslinjen.

I patient nr. 103 med DMd typ 1 i ett dekompensationsstadium, observerades oväntat en signifikant minskning av daglig glykemi om 48 % (1 vecka - 8,0 mmol/l, 12 veckor - 4,8 mmol/I), vilket krävde en korrigering av insulinterapin (minskning av daglig dos av korttidsverkande insulin ned till 8 U/d). Dynamiken i medelblodglukosnivä och glykerat hemoglobin visas i Fig. 5.

Under studiens gång registrerades inga kritiska, inkluderande betydande kritiska, händelser, vilket bestyrker preparatets säkerhet.

Exempel 3.

En klinisk studie gjordes på människor av en kombination av ultraläga doser av antikroppar mot det C-terminala fragmentet av betasubenheten av insulinreceptorn (ULD anti-IR) och ultra-låga doser av antikroppar mot endotelt NO-syntas (ULD anti- eNOS), vardera i form av en vatten-alkoholblandning av homeopatiska spädningar C12, C30 och C200 impregnerade på isomalt.

En oblindad ickekomparativ studie av effektiviteten och säkerheten hos ULD anti-IR + ULD anti-eNOS i patienter med typ 2-diabetes mellitus (DM) innefattade patienter med en DM typ 2-diagnos av mild till måttlig svårighetsgrad utan tecken på allvarlig makro- och mikrovaskulär patologi, vilka fick genomsnittliga terapeutiska doser av Metformin. Efter att ha fätt patientens informerade samtycke till deltagande i den kliniska studien utfördes en inledande undersökning med avsikt att bestämma om 50 10 15 20 25 patienten uppfyllde kriterierna för medtagande/uteslutande. Efter bekräftelse på möjligheten att delta, fick patienten 1 tablett Subbetta 4 gånger dagligen i tillägg till standardterapin för typ 2-Dl\/l. En 2-veckors "ursköljningsperiod" tillhandahölls innan studien började, under vilken en undersökning av patienterna genomfördes (klagomål, fastande glykemi, glykerat hemoglobin, daglig glykemisk profil och lipoproteinogram, insulinresistensindexindikatorer (HOMA-IR) också och effektivitet och säkerhet hos aktuell behandling bedömdes). I en 12-veckorsstudie mättes de huvudsakliga ändpunkterna under "ursköljnings"-veckorna, och därefter i vecka 6 och 12 av behandlingen. I 4 patienter hade kontinuerlig övervakning av glykemisk nivå utförts med hjälp av CGl\/IS-systemet under "ursköljnings"-perioden och i slutet av studien. Vecka 3 och 8 kontrollerades också den 8-punkters glykemiska profilen och telefon-"besök" Kliniskt tillstånd kontrollerades varje vecka. patienterna under 14 veckor. genomfördes. Totalt observerades Elva patienter med typ 2-DM i dekompensationsstadium inkluderades i studien.

En patient hoppade av studien frivilligt. De återstående patienterna fortsatte behandlingen. I Dl\/I typ 2-patienterna registrerades, enligt data från 8-punkters daglig profil, en snittminskning av glykemi om 20 % i vecka 6. Vecka 12 noterades en snittminskning i glykerat hemoglobin om 15-19 % av baslinjevärdet.

Under loppet av 12 veckor förblev blodtestparametrar (erytrocyter, hemoglobin, leukocyter, trombocyter, leukocytformel, ESR), lipoproteinogram, EKG, analys av hepatisk funktion (ALT, AST, bilirubin och dess fraktioner) inom normala nivåer i alla patienterna. lnsulinresistens, bestämd genom HOMA-IR-test, minskade i snitt med 17- 19 % av baslinjevärdet.

Under studiens 12 veckor registrerades inga kritiska, inkluderande betydande kritiska, händelser, vilket bestyrker preparatets säkerhet. Ingen abnormitet i leverns funktionella aktivitet uppenbarades heller.

Dynamiken i medelblodglukosnivä och glykerat hemoglobin visas i Fig. 6. 51 10 15 Exempel 4.

En patient X. (manlig, 74 år gammal) diagnostiserad med Diabetes typ ll har fått l\/laninil (Glibenclamide, Berlin - Chemie) i en dos om 5 mg två gånger dagligen. Ett djupt nekrotiskt fotsår vid hälbenet uppstod för 3 år sedan trots behandlingen han fick.

Patienten var inlagd på sjukhus två gånger, men behandlingen medförde emellertid ingen signifikant förbättring. En farmaceutisk komposition enligt patentkraven, en tablett om 250 mg, innefattande aktiverad, potentierad form (ultralåga doser) av antikroppar mot C-terminalen av insulinreceptorbetasubenheten (Ak RI) och endotelt NO-syntas (Ak NOS) impregnerade på isomalt i form av en vatten-etanolblandning av homeopatiska spädningar C12, C30, C200 ( Ak RI + Ak NOS) adderades till Maninilterapin. Som ett resultat av en månads behandling reducerades dosen av Manii|® till 5 mg dagligen (en tablett före sömn). Glukosblodnivån minskade till normala värden (från 8-10 mmol/l till 5-6 mmol/l). Den givna terapin vånde utvecklingen av fotsåret. Såret rensades från nekrotisk massa och täcktes av hud. Vid undersökning har såret försvunnit. Det finns en rund, vit yta (3,5 om i diameter) av flagnande hud vid hälbenet. 52

Claims

10 15 20 25 PATENTKRAV

1. Farmaceutisk komposition innefattande a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO-syntas.

2. Farmaceutisk komposition innefattande a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO- syntas.

3. Farmaceutisk komposition innefattande a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot mänsklig insulinreceptor, och b) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO-syntas, där insulinreceptormolekylen består av en alfasubenhet och en betasubenhet.

4. Farmaceutisk komposition innefattande farmaceutiskt godtagbar fast bärare, och a) en aktiverad, potentierad form av en antikropp mot ett C-terminalt fragment av betasubenheten av mänsklig insulinreceptor i form av en blandning av C12- , C30- och C200- homeopatiska spädningar impregnerade på den fasta bäraren, och b) aktiverad, potentierad form av en antikropp mot endotelt NO-syntas i form av blandning av C12-, C30- och C200- homeopatiska spädningar impregnerade på den fasta bäraren.

5. Den farmaceutiska kompositionen enligt något av patentkrav 1-4, där den aktiverade, potentierade formen av varje antikropp framställts genom på varandra följande centesimala spädningar tillsammans med vertikal skakning av varje spädning.

6. Den farmaceutiska kompositionen enligt patentkrav 1, där den mänskliga insulinreceptorn består av sekvensen enligt SEQ ID No: 1.

7. Den farmaceutiska kompositionen enligt patentkrav 1, där det endotela NO-syntaset består av sekvensen enligt SEQ ID No: 2.

8. Den farmaceutiska kompositionen enligt något av patentkraven 1-7 för användning vid förebyggande eller behandling av Typ l-diabetes i en mänsklig patient. 53 10 15 20

9. Den farmaceutiska kompositionen enligt något av patentkraven 1-7 för användning vid förebyggande eller behandling av Typ ll-diabetes i en mänsklig patient.

10. Den farmaceutiska kompositionen enligt något av patentkraven 1-7 för användning vid minskning av blodglukosnivåeri ett däggdjur.

11. Den farmaceutiska kompositionen enligt något av patentkraven 1-7 för användning vid behandling av insulinresistens i ett däggdjur.

12. Den farmaceutiska kompositionen för användning enligt något av patentkraven 8, 9, 10 och 11, där den farmaceutiska kompositionen administreras till en patient som en eller två endosberedningsformer.

13. Den dosberedningsformen/dosberedningsformerna administreras från en gång dagligen till farmaceutiska kompositionen enligt patentkrav 12, där fyra gånger dagligen.

14. Den farmaceutiska kompositionen enligt patentkrav 13, i beroende av patentkrav 10 eller 11, där dosberedningsformen/dosberedningsformerna administreras tre gånger dagligen.

15. Den farmaceutiska kompositionen enligt den insulin eller farmaceutiska medel lämpliga för att behandla Typ I-diabetes. patentkrav 8, där farmaceutiska kompositionen vidare innefattar andra ytterligare

16. Den farmaceutiska kompositionen enligt patentkrav 9, där den farmaceutiska kompositionen vidare innefattar ytterligare farmaceutiska medel lämpliga för att behandla Typ ll-diabetes. 54